CN1303052C - 一种丹参素的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种丹参素的制备方法，工艺过程如下：以丹参为原料获得含有丹参素及丹参素前体的水或醇的提取液；用稀碱将上述提取液中的丹参素前体转化为丹参素；用超滤膜将上述转化后的提取液超滤除去大分子物质；自上述超滤后的提取液中将丹参素萃出；用正相色谱方法分离出上述萃取获得的丹参素。本发明所述萃取与色谱联用制备丹参素的方法，基本解决了药用丹参素制备中纯度、收率和处理量三个相互矛盾的根本问题，为高纯度药用丹参素的制备提供了一种简单、方便、回收率高、成本低的批量制备方法。使用本方法制备的丹参素含量≥95%，回收率≥70%。

Description

一种丹参素的制备方法

技术领域：

本发明涉及药用丹参素的制备方法，特别是工艺顺序为提取→稀碱转化→超滤→萃取→正相色谱的制备方法。

背景技术：

丹参具有扩张动脉、增加冠状动脉流量、提高心肌抗缺氧能力，抑制血小板凝集、抗凝、改善血液循环，抗氧化、抑制内原性胆固醇合成、抗动脉粥样硬化和增强学习记忆等作用，临床上广泛用于预防和治疗冠心病、中风、高血脂症和消化性溃疡等疾病。研究表明水溶性成分丹参素是其主要有效成分，临床制剂是以丹参素为主成分的注射液。

目前丹参注射液为棕色澄明液体，临床应用时，除了疗效差异大外，不良反应(皮肤反应、药物热、过敏性休克、过敏性哮喘、局部红肿疼痛、球结膜出血、血管性水肿、腹剧痛、腹泻、心动过速、剧烈头疼、肌肉震颤、肝肾功能损害、药物性肝炎、心脏停跳等)时有发生。因而，人们一直重视丹参素的分离制备技术。研究表明，丹参及复方丹参注射液的不良反应主要由鞣质引起，鞣质为多羟基芳香酸类大分子化合物，进入机体后，可与血浆蛋白、血细胞膜蛋白、组织细胞膜蛋白结合，一方面形成全抗原，引发机体变态反应，一方面导致蛋白变性沉淀、细胞变形破裂。

经检测，市售丹参注射液中丹参素含量为0.7716～2.301mg/mL，原儿茶醛含量为0.1586～0.688mg/mL(张翠莲，中国药学杂志，2003，38(1)：56～58；张建华，浙江中医学院学报，2001，25(4)：646～65)，有效成分批间差和厂间差很大，并且杂质含量高达药液干重的80％，鞣质检测均为阳性(袁璐，中草药，1994，25(6)：2996～301)。

由于丹参素水溶性高，与水溶性杂质分离的难度大，目前丹参注射液的制备大多采用水提加二次醇沉工艺，产品质量难以保证。文献还报道了丹参水提液醇沉后进一步经过聚酰胺层析(CN1242364A)、硅胶层析(CN1153778A，CN1380295A)、大孔吸附树脂(CN1247855A，CN1384090A)或强碱离子交换树脂+萃取(CN1342638A)纯化的技术。吸附树脂和离子交换树脂法产品质量较好(纯度在80％以上)，但是收率仅为30％左右了。因水溶性杂质的性质与丹参素相近，而且量大，硅胶层析法纯化丹参注射液时收率低、处理量低、成本高。总之，上述方法均没有同时解决纯度、收率和处理量相互矛盾的三个问题。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种萃取与色谱联用制备丹参素的方法，该方法简单、方便、回收率高、成本低。

本发明提供了一种丹参素的制备方法，工艺过程如下：

——提取，以丹参为原料获得含有丹参素及丹参素前体的水或醇的提取液；

——转化，用稀碱将上述提取液中的丹参素前体转化为丹参素；

——超滤，用超滤膜将上述转化后的提取液超滤除去大分子物质；

——萃取，自上述超滤后的提取液中将丹参素萃出；

——分离，用正相色谱方法分离出上述萃取获得的丹参素。

本发明丹参素的制备方法中，转化过程在稀碱、抗氧保护剂和惰性气体保护的室温条件下进行，转化时间为0.5～2小时；

所述碱为碱金属、碱金属氧化物、碱金属氢氧化物、或低碳醇钠，用量为0.01～0.2mol/L，使溶液pH为9～10；

所述抗氧保护剂为抗坏血酸、亚硫酸氢钠、或没食子酸，用量为1～10g/L；

所述惰性气体指氮气、二氧化碳、氦气、氩气、或氖气。

本发明丹参素的制备方法中，超滤过程的滤膜为亲水膜，为板式或者中空纤维，截留分子量中心为1000～10000。

本发明丹参素的制备方法中，萃取过程的萃取剂为正丁醇、乙酸乙酯或乙醚，用量为提取液1g生药/mL的1～2倍，pH 3.0、室温萃取3～6次。

本发明丹参素的制备方法中，分离过程的正相色谱填料为硅胶，硅胶粒度为10～63微米，用量为样品量的20～60倍。最好采用将正相色谱样品溶于少量甲醇后，与1～3倍的硅藻土混匀，经减压干燥制成粉未后，固体上样。可以将乙酸乙酯用于洗脱低极性杂质，乙醚/乙酸乙酯/甲醇混合液6∶20∶4用于洗脱原茶醛和丹参素，甲醇用于洗脱水溶性杂质以再生硅胶。

本发明所述萃取与色谱联用制备丹参素的方法具有如下优点：

1、用超滤解决了萃取工段的乳化问题、降低了其溶剂损耗，并大幅度提高了丹参素的萃取率；

2、用萃取除去了绝大部分杂质，确保了硅胶色谱的分离能，并提高了其处理能力和丹参素收率；

3、采用稀碱将大量丹参素前体转化为丹参素。

本发明所述萃取与色谱联用制备丹参素的方法，基本解决了药用丹参素制备中纯度、收率和处理量三个相互矛盾的根本问题，为高纯度药用丹参素的制备提供了一种简单、方便、回收率高、成本低的批量制备方法。使用本方法制备的丹参素含量≥95％，回收率≥70％。

具体实施方式：

用去离子水或50％的乙醇80℃提取丹参粉三次，每次2小时，料液比分别为1∶8、1∶6和1∶4，第二三次提取液可与第一次提取液合并，也可用作第二批丹参的提取液。

将提取液超滤除去大分子物质，以避免后续萃取工艺发生严重乳化。超滤膜为亲水膜，可为板式，也可为中空纤维，截留分子量中心为1000～10000。

将丹参提取液浓缩至1g生药/mL，加入适量碱使溶液pH为9～10，在室温、抗氧保护剂和惰性气体保护下转化0.5～2h。碱为碱金属、碱金属氧化物、碱金属氢氧化物、或低碳醇钠，如金属钠、金属钾、氧化钠、氧化钾、氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、乙醇钠等，用量约为0.01～0.2mol/L；抗氧保护剂为还原性性化合物如抗坏血酸、亚硫酸氢钠、没食子酸等，用量为1～10g/L；惰性气体指氮气、二氧化碳、氦气、氩气、氖气等。

加入适量2mol.L^-1的HCl将上述20％的NaCl洗脱液调至pH3.0后，用萃取剂萃取该洗脱液。萃取剂为正丁醇、乙酸乙酯或乙醚，以乙酸乙酯最佳。萃取剂的用量为提取液(1g生药/mL)的1～2倍，分3～6次室温萃取。有机萃取相经减压回收溶剂后获丹参素粗品。

丹参素粗品溶于少量甲醇后，与1～3倍的硅藻土混匀，经减压干燥制成粉未后，置于硅胶色谱柱头，进行色谱分离。硅胶粒度以10～40微米或40～63微米为佳，硅胶用量为样品量的20～60倍。乙酸乙酯用于洗脱低极性杂质，乙醚/乙酸乙酯/甲醇混合液(6∶20∶4)用于洗脱原茶醛和丹参素，甲醇用于洗脱水溶性杂质并再生硅胶。

经TLC和HPLC检测，合并含丹参素的洗脱液。丹参素的洗脱液经减压浓缩干燥后获丹参素产品。

实施例1

1、粉碎、脱脂

丹参根2公斤→粉碎(1～3mm)→石油醚脱脂(4L×3)→干燥→脱脂丹参粉。

2：提取、超滤、浓缩

脱脂丹参粉→16L去离子水提取(80℃、2小时)→12L去离子水提取(80℃、2小时)→8L去离子水提取(80℃、2小时)→合并→超滤→减压浓缩至2L。

3：转化

丹参浓缩液→加入亚硫酸氢钠(10g)、饱和NaOH调至pH9～10→氮气保护下搅拌2小时→加入2mol.L^-1的HCl调pH至3.0。

4：萃取

经酸化的丹参转化液→乙酸乙酯萃取(600mL×5)→减压回收乙酸乙酯→丹参素粗品(18g，浅黄色粉末、丹参素纯度65％，原儿茶醛16％)，。

5：硅胶色谱

丹参素粗品(18g)→加入硅藻土(45g)混匀→真空干燥→固体粉未→上于不锈钢柱(硅胶400g，φ50×500)→分步洗脱(乙酸乙酯3L，乙醚/乙酸乙酯/甲醇混合液(6∶20∶4)6L，甲醇3L；流速流速10～20mL/min)→分段收集(每段100～150mL)→分部合并(经TLC和HPL检测后按丹参素和原儿茶醛二个部分合并)→丹参素部分→真空浓缩回收溶剂→丹参素(11.5g)。

实施例2

1：提取、超滤、浓缩

丹参根100公斤→粉碎(1～3mm)→800L去离子水提取(80℃、2小时)→600L去离子水提取(80℃、2小时)→400L去离子水提取(80℃、2小时)→合并→超滤→减压浓缩至100L。

2：转化

丹参浓缩液→加入亚硫酸氢钠(500g)、饱和NaOH调至pH9～10→氮气保护下搅拌2h→加入2mol.L^-1的HCl调pH至3.0。

3：萃取

经酸化的丹参转化液→乙酸乙酯萃取(30L×5)→减压回收乙酸乙酯→丹参素粗品(920g，浅黄色粉末、丹参素纯度67％，原儿茶醛14％)，。

4：硅胶色谱

丹参素粗品(920g)→加入硅藻土(2.5kg)混匀→真空干燥→固体粉未→上于不锈钢柱(硅胶20kg，φ200×1500)→分步洗脱(乙酸乙酯150L，乙醚/乙酸乙酯/甲醇混合液(6∶20∶4)300L，甲醇150L；流速流速400～450mL/min)→分段收集(每段4～5L)→分部合并(经TLC和HPL检测后按丹参素和原儿茶醛二个部分合并)→丹参素部分→真空浓缩回收溶剂→丹参素(487g)。

Claims (7)

1、一种丹参素的制备方法，工艺过程如下：

——提取，以丹参为原料获得含有丹参素及丹参素前体的水或醇的提取液；

——转化，用稀碱将上述提取液中的丹参素前体转化为丹参素；

——超滤，用超滤膜将上述转化后的提取液超滤除去大分子物质；

——萃取，自上述超滤后的提取液中将丹参素萃出；

——分离，用正相色谱方法分离出上述萃取获得的丹参素。

2、按照权利要求1所述丹参素的制备方法，其特征在于：所述转化过程在稀碱、抗氧保护剂和惰性气体保护的室温条件下进行，转化时间为0.5～2小时；

所述碱为碱金属、碱金属氧化物、碱金属氢氧化物、或低碳醇钠，用量为0.01～0.2mol/L，使溶液pH为9～10；

所述抗氧保护剂为抗坏血酸、亚硫酸氢钠、或没食子酸，用量为1～10g/L；

所述惰性气体指氮气、二氧化碳、氦气、氩气、或氖气。

3、按照权利要求1所述丹参素的制备方法，其特征在于：所述超滤过程中，滤膜为亲水膜，为板式或者中空纤维，截留分子量中心为1000～10000。

4、按照权利要求1所述丹参素的制备方法，其特征在于：所述萃取过程中，萃取剂为正丁醇、乙酸乙酯或乙醚，用量为提取液1g生药/mL的1～2倍，pH 3.0、室温萃取3～6次。

5、按照权利要求1所述丹参素的制备方法，其特征在于：所述分离过中，正相色谱填料为硅胶，硅胶粒度为10～63微米，用量为样品量的20～60倍。

6、按照权利要求5所述丹参素的制备方法，其特征在于：所述分离过程中，正相色谱样品溶于少量甲醇后，与1～3倍的硅藻土混匀，经减压干燥制成粉未后，固体上样。

7、按照权利要求6所述萃取与色谱联用制备丹参素的方法，其特征在于：所述分离过程中，乙酸乙酯用于洗脱低极性杂质，乙醚/乙酸乙酯/甲醇混合液6∶20∶4用于洗脱原茶醛和丹参素，甲醇用于洗脱水溶性杂质以再生硅胶。