CH666039A5

CH666039A5 - Isomere 0-phosphonylmethylderivate enantiomerer und racemischer vicinaler diole und verfahren zu ihrer herstellung.

Info

Publication number: CH666039A5
Application number: CH63/84A
Authority: CH
Inventors: Antonin Holy; Ivan Rosenberg; Karel Slama
Original assignee: Ceskoslovenska Akademie Ved
Priority date: 1983-01-06
Filing date: 1984-01-06
Publication date: 1988-06-30
Also published as: BE898620A; GB2134907B; SE8400039L; IT8419041A1; CS233665B1; GB8400168D0; SE8400039D0; IT8419041A0; DE3400278C2; US4659825A; FR2539132A1; FR2539132B1; GB2134907A; IT1174451B; DE3400278A1; SE454591B

Description

BESCHREIBUNG Die Erfindung betrifft isomere O-Phosphonylmethylderi-io vate enantiomerer und racemischer vicinaler Diole und ein Verfahren zu ihrer Herstellung.

Die Phosphorsäureester haben eine grundlegende Bedeutung in den Prozessen, die in der lebenden Masse verlaufen. Die isosterischen Analogen dieser Verbindungen können sich i5 als Inhibitoren der Metabolismusprozesse geltend machen und eine biologische Wirkung aufweisen. Eine wichtige Bedingung für ihre praktische Anwendung ist die Beständigkeit im Organismus, besonders gegen die Einwirkung von Enzymen, welche die Phosphomonoesterbindung spalten. 20 Diese Bedingung erfüllen die O-Phosphonylmethylderivate der organischen Alkohole, die in vielem den natürlichen Organophosphaten ähnlich sind, jedoch im Molekül eine Bindung des Phosphoratomes auf das Kohlenstoffatom enthalten, welche gegen die Einwirkung der Enzyme beständig ist. 25 Für die Herstellung solcher Verbindungen wurde bisher die Reaktion der Alkoholate mit den Estern der Chlormethan-phosphonsäure (S.N. Walsh, T.M. Beck, A.D.F. Toy: J. Amer. Chem. Soc. 78,4455 [1956]), die Reaktion des Phosphortri-chlorides mit Formalen (U.S. 2,500.022) oder die Reaktion 3o des Natriumalkoholates mit Diestern der p-Toluolsulfonyl-oxymethanphosphonsäure (Tschech. Pat. Nr. 220.713) angewendet. Alle diese Reaktionen erfordern die nachfolgende Hydrolyse der Phosphonsäureester, welche schwer verläuft. Die Bedingung der chemischen und enzymatischen 35 Beständigkeit erfüllen die neuen Verbindungen nach der Erfindung, d.h. die isomeren O-Phosphonylmethylderivative enantiomerer und racemischer vicinaler Diole der allgemeinen Formel I

und gleichzeitig mit 2 bis 62 Mol, bezogen auf die Verbindung der Formel III, einer tertiären Base in einem aprotischen organischen Lösungsmittel bei Temperaturen im Bereich von 0 °C bis 80 °C reagieren lässt, wonach man das Reaktionsgemisch mit einer wässerigen Lösung eines alkalischen Hydroxyds bei einer Temperatur im Bereich von 0 °C bis 100 °C reagieren lässt und die Verbindungen der Formel I durch Entsalzen isoliert.

4. Verfahren nach Anspruch 3 zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 2, wo R5 ein Adenin-9-ylrest ist, dadurch gekennzeichnet, dass man die enantiomere oder racemische Verbindung der allgemeinen Formel V

NR

R

R-

40

R - C - CH - OR

OR

45 in welcher R1 ein Wasserstoffatom, eine Alkylgruppe mit eins bis drei Kohlenstoffatomen, eine Hydroxyalkylgruppe oder eine Adenin-9-ylmethylgruppe bedeuten, R2 und R3 ein Wasserstoffatom sind oder beide zusammen einen Rest, der den Ribonucleosidring ergänzt, bedeuten, beide R4 abwechselnd so ein Wasserstoffatom und eine -CH2P(0)(0H)2 Gruppe sind, und die Konfiguration auf den Kohlenstoffatomen R, S oder RS ist.

Weiteres Wesen der Erfindung sind isomere O-Phosphonylmethylderivate der allgemeinen Formel IV

55

5

R - Cil CHCII OK

IV

OR

(V)

CH CH-CH OH 21 2

OH

in welcher R5 der Adenin-9-ylrest oder eine OH-Gruppe bedeutet, R4 die gleiche Bedeutung wie in der Formel I hat und die Konfiguration auf dem Kohlenstoffatom in der Posi-65 tion 2 S, R oder RS ist.

Das Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen besteht darin, dass man die Verbindungen der allgemeinen Formel II

3

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R2

R3

1

C -

1

CII - OH

II

1

OH

,

in welcher R1 bis R3 die gleiche Bedeutung wie in der Formel I haben, mit 1 bis 2 Mol des Chlormethanphosphonyldichlo-rids der allgemeinen Formel III

C1CH2 (PO)Cl2

III

und gleichzeitig mit 2 bis 62 Mol, bezogen auf die Verbindung der Formel III, einer tertiären Base in aprotischem organischen Lösungsmittel bei einer Temperatur im Bereich von 0 °C bis 80 °C reagieren lässt, wonach man das Reaktionsgemisch mit der wässrigen Lösung eines alkalischen Hydroxids bei einer Temperatur im Bereich von 0 °C bis 100 °C reagieren lässt und die Verbindung der Formel I durch Entsalzen isoliert.

Das Verfahren zur Herstellung der Verbindung nach der Formel IV, in der R5 das Adenin-9-ylrest bedeutet, besteht darin, dass man die enantiomere oder raeemische Verbindung der allgemeinen Formel V

NR,

OC>

CH_ - CH - CH„OH

OH

in welcher Rs ein Wasserstoffatom oder eine = CH-N(CH3_);>-Gruppe ist, mit dem Chlormethanphosphoriyldichlorid der allgemeinen Formel III reagieren lässt.

Das Prinzip der Reaktion beruht auf der Bildung des Monoesters der Chlormethanphosphonsäure, welcher isoliert werden kann oder direkt ohne Isolierung in stark alkalischem Medium durch intramolekulare Cyclisierungsreaktion in die Verbindungen der allgemeinen Formel I überführt werden kann.

Das für die Reaktion notwendige Chlormethanphosphon-ylchlorid der allgemeinen Formel III wird am besten hergestellt durch die Reaktion des Phosphortrichlorids mit Parafor-maldehyd (U.S. 2 874 184, N.I. Kabachnik, S.S. Shepeleva: Izv. Akad. Nauk SSSR Ser. Chim. 1951, 185; R.L. McCon-nell, M.A. McCall, H.W. Coover: J. Org. Chem. 22,462 [1957]), kann jedoch auch durch die Reaktion der Chlorme-thanphosphon- oder Hydroxymethanphosphonsäure mit Thionylchlorid (R.A.B. Bannard, J.R. Gilpin, C.R. Vavasour, A.F. McKay; Can. J. Chem. 31,976 [1953]), des Methylenchlorids mit Phosphortrichlorid in Gegenwart von Aluminiumchlorid (A.M. Kinnear, E.A. Perren: J. Chem. Soc. 1952, 3437) oder die Oxidation von Chlormethyldichlorphosphin mit den Stickstoffoxyden (AJ. Jakubovich, V.A. Ginsburg: Zh. obshch. Khim. 22,1534 [1952]) hergestellt werden. Die Reaktion verläuft gleich gut auch mit Brommethanphosphon-yldibromid, der jedoch schwerer zugänglich ist als die Verbindung der Formel III (J.A. Cade: J. Chem. Soc. 1959,2272).

Der Chlorwasserstoff, der bei der Reaktion der Verbindungen nach Formel II oder V mit dem Chlorderivaten der Formel III entsteht, wird mit tertiären Basen, z.B. Pyridin, seinen Alkylderivaten oder Triäthylamin gebunden. Die Reaktion kann entweder in einem inerten organischen Lösungsmittel (Äther, Dioxan) oder in chlorierten Kohlenwasserstoffen durchgeführt werden; dabei müssen die Ausgangsstoffe nicht unbedingt in den Lösungsmitteln ganz löslich sein; einfacher 5 ist es, direkt Pyridin als Lösungsmittel anzuwenden. Die Reaktion dauert gewöhnlich einige Stunden bei Raumtemperatur, kann jedoch auch bei erhöhter Temperatur durchgeführt werden. Zu ihrer Durchführung genügen übliche Reaktoren; die einzige Bedingung ist die Anwendung trockener 10 Reaktionskomponenten und Lösungsmittel und die Ausschliessung des Zutritts von Feuchtigkeit während der Reaktion mit der Verbindung der Formel III. Nach Abdampfen des Lösungsmittels bietet das Gemisch durch Aufarbeitung mit Wasser und die Einwirkung von wässrigen Alkalien, in 15 einer Endkonzentration von 0,5 bis 2,0 Mol-L-1 Lithium-, Natrium-, Kaliumhydroxyd bei üblicher Raumtemperatur während 24 Stunden oder bei erhöhter Temperatur in kürzerer Zeit das praktisch reine Endprodukt der allgemeinen Formel I. Zur Erhöhung der Löslichkeit der Zwischenprodukte 20 mit hydrophoben Gruppen wird empfohlen, wässrige alkalische Hydroxide im Gemisch mit Äthanol, Methanol oder Dioxan zu verwenden, wobei jedoch die oben erwähnte Endkonzentration der Hydroxide erhalten bleiben muss. Mit Vorteil wird für die Aufarbeitung des Reaktionsgemisches Lithi-25 umhydroxyd verwendet, dessen Überschuss mit einem Katex in saurem Cyclus oder durch Neutralisierung mit Chlorwasserstoffsäure entfernt werden kann, und die anorganischen Lithiumsalze aus dem Produkt durch Extraktion mit einem Gemisch von Aceton und Äthanol entfernt werden können. 30 Bei symmetrischen Diolen ist das Produkt der Reaktion ein einziges Isomeres der Formel I.

Bei unsymmetrischen Diolen werden beide isomere Produkte gewonnen. Sollen reine isomere Stoffe der Formel I hergestellt werden, muss ein spezifisch geschütztes Diol der 35 Formel VI verwendet werden, und nach der Reaktion mit der Verbindung III müssen die Schutzgruppen entweder in schwach saurem oder alkalischem Medium oder durch Hydrogenolyse entfernt werden. Nach der Einwirkung des alkalischen Hydroxyds auf das Reaktionsgemisch entsteht ein 40 einziges Isomer, und zwar dasjenige, in dem die Phosphonyl-methylgruppe auf die ursprünglich geschützte Hydroxylfunk-tion gebunden ist. Ansonsten kann die Trennung der Isomeren der Stoffe der Formel I z.B. durch Ionenaustauschchro-matographie durchgeführt werden.

45 Nachdem die Reaktion durch die Gegenwart der 1,2-Diol-Gruppierung bedingt ist, kann diese Reaktion auch für die Herstellung der Analoga der natürlichen Ribonukleotide und biologisch bedeutungsvoller Verbindungen angewendet werden. Beispiel der Anwendung ist die Reaktion der 5'-0- sub-50 stituierten Ribonucleoside der allgemeinen Formel VII

55

Rl00-

VII

in welcher R10 ein Acyl(Acetyl-, Benzoyl-) oder eine Triphe-nylmethylgruppe bedeutt und B ein Rest der Purin- oder Pyri-65 midinbase (Uracil, Cytosin, Adenin, Guanin) ist, mit der Verbindung der Formel III. In diesem Falle entstehen nach der Abspaltung der Schutzgruppe R10 die Analoga der Nukleotide der Formel VIII

666 039

4

IIO

VI IX

OCHZP(0)(OH)Z

(+31 - Isomof)

in der B die gleiche Bedeutung wie in der Formel VII hat, in welcher die Strukturgruppierung nach der Formel I enthalten ist.

Bei der Wahl der Schutzgruppen bei den unsymmetrischen Diolen oder der Herstellung der reinen Isomere der Verbindungen der Formel I muss die Beständigkeit der Bindung der Phosphonylmethylgruppe nicht in Erwägung gezogen werden, denn diese ist hoch und ermöglicht die Durchführung der weiteren Reaktion (alkalische und saure Hydrolyse, Äthanolyse, Hydrogenolyse usw.).

Die Verbindungen der Formel I sind als freie Säuren in einigen Fällen beschränkt in Wasser löslich. Deshalb können sie mit Vorteil in lösliche Lithium-, Natrium-, Kalium- oder Ammoniumsalze überführt werden.

Die Stoffe der Formel I haben eine chemosterilisierende Wirkung auf Insekten. Diese wird anhand des Ovicidtestes dokumentiert, welcher die Inhibition der Brutfähigkeit der Eier ausdrückt. Für diesen Test werden frisch gehäutete, erwachsene Wanzen der Pyrrhocoris apterus L. angewendet, denen die Stoffe, aufgelöst im Trinkwasser, verabreicht werden. Die Konzentration von 1 mg ml-1 entpricht der Dosis 1 mg/g/24 Stunden. In jedem Test wird eine Gruppe von 10 Männchen und 10 Weibchen verwendet, und dann wird die Toxizität und die Brutfähigkeit der Eier des ersten und zweiten Ertrages nach der Inkubation, notwendig für die Larven-ausbrütung, ausgewertet. Der Wirkungsgrad der Stoffe der Formel I ist durch Daten in der Tabelle I wiedergegeben.

Tabelle I.

Inhibition der Ausbrütung der Eier des 1. und 2. Ertrages der

Wanze Pyrrohocoris apterus L. nach oraler Verabreichung der Stoffe Erwachsenen beiden Geschlechtes (% im Vergleich zu der Brutfähigkeit der Kontrollen)

Konzentration mg-ml-1 Wasser 0,01 0,05 0,1 1,0

1 /RS/-IV/R5 = Adenin-9-yl/ 30 50 100 100 /2-Isomer/ - 27 /3-Isomer/ 61

2 /RS/-IV/R5 = OH/ - - - 100

3 /RS/-9-/2,3-Dihydroxypropyl/

adenin /V,R6 = H/ 0 10 37 100

(Bezugsstoff)

Im weiteren ist die Erfindung anhand von Beispielen erläutert, ohne sich auf diese zu beschränken.

Beispiel 1

Die Lösung von 10 mmol 1-O-Benzoyl-sn-glycerin in 100 ml 1,2-Dichloräthan wird stufenweise mit 60 mmol Pyridin und 20 mmol Chlormethanphosphonylchlorid versetzt. Das Gemisch wird 15 Stunden bei Raumtemperatur in geschlossenem Gefäss gerührt, dann werden 20 ml 50% wässrigen Pyridins hinzugefügt und nach 2 Stunden Rühren im Vakuum der Wasserstrahlpumpe bei 40 ° C bis zur Trockne abgedampft. Zu dem Abdampfrückstand werden 100 ml 2

Mol-L"1 Lithiumhydroxyds hinzugefügt und das Gemisch 16 Stunden auf 90 °C erwärmt. Dann wird es mit Dowex 50 x 8 (H+) neutralisiert, gefiltert und der wässrige Anteil mit Dowex bis zu einem pH 2 angesäuert. Nach der Filtration 5 wird das Gemisch mit Äther (3 x 50 ml) extrahiert, der wässrige Anteil mit Lithiumhydroxyd neutralisiert, im Vakuum zur Trockne abgedampft und der Rest mit einem Gemisch von Aceton-Äthanol (1:1) (100 ml) 1 Stunde unter Rühren extrahiert, abgesaugt und mit demselben Gemisch (100 ml) durch-io gewaschen. Der unlösliche Rest wird auf Kieselgelplatten (45 x 16 x 0,3 cm) im System 2-Propanol-Ammoniak-Wasser (7:1:2) chromatographiert, und die Produktstreifen werden auf dem beigelegten chromatographischen Papier mit Hilfe der Reagens auf Phosphor bestimmt. Das Kieselgel, das den 15 Stoff enthält, wird mit 500 ml Wasser eluiert, das Filtrat abgedampft, der Abdampfrückstand in 25 ml Wasser auf eine Säule von 20 ml Dowex 50 x 8 (Na+) aufgetragen und die Säule mit 100 ml Waser eluiert. Das Eluat wird im Vakuum abgedampft, mit Äthanol (2 x 50 ml) destilliert und aus 10 ml 20 Methanol mit 200 ml Äther ausgefällt. Nach der Filtration und dem Trocknen wird 1 g (43%) des Natirumdoppelsalzes des Gemisches der isomeren l/2/-0-Phosphonylmethyl-sn-glycerine (Verbindung der Formel IV, R5 = OH), Rf=0,18, gewonnen.

25

Beispiel 2

Das Gemisch von 10 mmol 1-O-Trityl-sn-glycerin in 100 ml Pyridin wird unter Rühren mit 20 mmol Chlormethan-phosphonyldichlorid versetzt und das Ganze in einem 30 geschlossenen Kolben 15 Stunden bei Raumtemperatur gemischt. Es werden 100 ml Wasser hinzugefügft und bei 40 °C im Vakuum einer Wasserstrahlpumpe abgedampft. Der Rest wird unter denselben Bedingungen zusammen mit 100 ml 1% wässerigem Ammoniak destilliert (kodestilliert) 35 und der Abdampfrückstand auf einer 200-g-Kieselgelsäule chromatographiert; das Produkt wird mit dem Gemisch Chloroform-Äthanol (95:5) eluiert. Der gewonnene Abdampfrückstand wird in 100 ml des Gemisches Dioxan-Wasser (1:1) mit 50 ml Dowex 50 x 8 (H+) 6 Stunden bei 40 °C gerührt, mit 40 100 ml Wasser durchgewaschen und das Filtrat im Vakuum zur Trockne abgedampft. Der Rest wird in 200 ml Wasser mit Äther (3 x 50 ml) extrahiert, die wässrige Phase wieder zur Trockne abgedampft und mit 50 ml 2 Mol-L-' Natriumhydroxyd erwärmt. Nach 16 Stunden bei 90 °C wird das pH 45 durch die Zugabe von Dowex 50 x 8 (H+) auf pH 7 eingestellt, das Gemisch filtriert, mit 50 ml Wasser gewaschen und das Filtrat zur Trockne abgedampft. Der Abdampfrückstand wird auf dieselbe Weise wie in Beispiel 1 in das Lithiumsalz überführt. Es werden 900 mg (45%) des Lithiumdoppelsalzes so der isomeren l/2/-0-Phosphonylmethyl-sn-glycerine (Stoff der Formel IV, R5 = OH) gewonnen. Rf= 0,18.

Beispiel 3

Die Lösung von 10 mmol l-Benzoyloxy-3,4-dihydroxybu-55 tan in 100 ml 1,2-Dichloräthan wird stufenweise unter Rühren mit 60 mmol Pyridin und 20 mmol Chlormethanphosphonyl-dichlorid versetzt. Das Gemisch wird ähnlich wie in Beispiel 2 verarbeitet. Es werden 40% des Natriumdoppelsalzes des Gemisches der isomeren l/2/-0-Phosphonylnmethylbutan-60 1,2,4-triolen (Verbindung der Formel I, R1 = CH1CH2OH, R2 = R3 = H) gewonnen. Rf= 0,20.

Beispiel 4

Die Lösung von 5 mmol l-O-Trityl-3-O-benzoyl-sn-glyce-65 rin in 50 ml 1,2-Dichloräthan wird mit 20 mmol Pyridin und 10 mmol Chlormethanphosphonyldichlorid versetzt. Das Gemisch wird in einem geschlossenen Kolben über Nacht bei Raumtemperatur gerührt, dann wird 10 ml Wasser hinzuge

5

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fügt, 1 Stunde gerührt, abgetrennt, die organische Schicht mit 3 x 25 ml Wasser gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet, gefiltert und zur Trockne abgedampft. Zu dem Abdampfrückstand werden 100 ml 1 Mol-L-' Lithiumhydroxyd hinzugesetzt, 12 Stunden auf 80 °C erwärmt, Dowex 50 x 8 (H+) bis zu einem pH von 2 hinzugegeben, 6 Stunden bei 80 °C gemischt, abgesaugt, mit Wasser gewaschen, das Filtrat mit Äther (3 x 50 ml) extrahiert, mit Lithiumhydroxyd neutralisiert und weiter auf die gleiche Weise wie in Beispiel 2 verarbeitet. Es werden 380 mg eines Lithiumdoppelsalzes des l-O-Phosphonylmethyl-sn-glycerins (Verbindung der Formel IV, R5 = OH) gewonnen. Rf=0,18.

Beispiel 5

Das Gemisch, bestehend aus 10 mmol 9-/RS/-/2,3-Di-hydroxypropyl/adenin, 25 ml Dimethylformamid und 10 ml Dimthylacetal des Dimethylformamids, wird über Nacht bei Raumtemperatur in geschlossenem Kolben gerührt, bei 40 "C/13 Pa abgedampft, der Rest abgedampft mit 50 ml 70% wässrigem Pyridin, kodestilliert mit 3 x 50 ml Pyridin und in 100 ml 1,2-Dichloräthan gelöst. Es werden 3,5 ml Pyridin und 3,34 g (20 mmol) Chlormethanphosphonyldichlorid hinzugefügt und das Gemisch über Nacht in geschlossenem Kolben gerührt. Dann erfolgt die Zugabe von 50 ml 0,2 Mol-L-' Tri-äthylaminhydrogenkarbonat pH 7,5, nach 2 Stunden wird das Ganze im Vakuum einer Wasserstrahlpumpe bei 40 °C bis zur Trockne abgedampft, mit 3 x 100 ml Äthanol kodestilliert, 100 ml 50% Essigsäure hinzugefügt und das Gemisch 15 Stunden auf 40 °C erwärmt. Nachher wird wieder das Ganze in Vakuum abgedampft, mit 3 x 50 ml Wasser kodestilliert und in 50 ml Wasser auf eine Säule von 300 ml Dowex 50 x 8 (H+) aufgetragen. Die Säule wird mit Wasser eluiert. Sukzessive werden aus den Abdampfrückständen des Eluats durch die Fällung aus Methanol mit Äthanol 650 mg (20%) des 3-Chlor-methanphosphonyl-, 900 mg (28%) des 2-Chlormethanphos-phonylderivats und 750 mg (23,5%) des Gemisches beider Isomere gewonnen. 1 mmol von jedem der Anteile wurde 8 Stunden auf 70 0 C erwärmt mit 10 ml 2 Mol • L-' Lithiumhydroxyd, das Gemisch wurde mit Chlorwasserstoffsäure neutralisiert, abgedampft und der Abdampfrückstand mit Äthanol und Azeton auf die gleiche Weise wie in Beispiel 2 verarbeitet. Die Ausbeute des isomer reinen Produktes oder des Isomerengemisches des Produktes (Verbindung der Formel IV, R5 = Adenin-9-yl) ist 80 bis 90% (Lithiumdoppelsalz), die Verbindungen sind chromatographisch rein Rf=0,18 und gemäss Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC -High Pressure Liquid Chromatography) auf C 18 Kieselgel homogen.

Beispiel 6

Zu der Lösung von 1,05 g 9-/S/-/2,3-Dihydroxypropyl/ adenin in 50 ml Pyridin werden 1,67 g Chlormethanphosphonyldichlorid beigesetzt und das Gemisch 15 Stunden bei Raumtemperatur in einem geschlossenen Kolben gerührt. Dann werden 10 ml Wasser zugefügt, das Gemisch wird im Vakuum zur Trockne abgedampft, 50 ml 2 Mol-L-' Lithiumhydroxid zugefügt,. 6 Stunden auf 80 °C erhitzt, mit Chlorwasserstoffsäure neutralisiert und im Vakuum zur Trockne abgedampft. Das Gemisch wird in 10 ml Wasser auf eine 150-ml-Säule Dowex 50x8 (H+) aufgetragen, welche vorerst mit 250 ml Wasser durchgewaschen wurde, und das Produkt wird mit 2% Ammoniak (500 ml) eluiert. Das ammoniakale Eluat wird im Vakuum abgedampft und der Abdampfrückstand in 10 ml Wasser auf eine Säule von 100 ml Dowey 1x2 (Acetat) aufgetragen, welche zuerst mit Wasser durchgewaschen wurde und nachher in linearem Gradient mit 21 Wasser und 210,5 N Essigsäure eluiert. Die UV-absorbierende Fraktion des Produktes wird abgedampft, mit Wasser (3 x 25 ml) code-stiliert und aus Wasser umkristallisiert. Die Ausbeute beträgt 50 bis 60% des Gemisches der isomeren 2'/3'/-0-Phosphonyl-methylderivate des 9-/S/-/2,3-Dihydroxypropyl/adenins (Verbindung der Formel IV, Rs = Adenin-9-yl). Das Produkt ist in Form der freien Säure und gemäss der Papierchromatographie Rf=0,18 und der Hochleistungsflüssigkeitschromato-graphie (HPLC - High Pressure Liquid Chromtography) auf C 18 Kieselgel homogen.

Beispiel 7

Das Gemisch von 10 mmol 5'-0-Trityluridin, 100 ml 1,2-Dichloräthan und 40 mmol Pyridin wird unter Rühren mit 20 mmol Chlormethanphosphonyldichlorid versetzt und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nachher werden 100 ml 5% wässriges Pyridin hinzugegeben, 1 Stunde gerührt und im Vakuum einer Wasserstrahlpumpe zur Trockne abgedampft. Der Abdampfrückstand wird mit 100 ml 1 Mol-L-' Schwefelsäure in 50%igem wässrigen Dioxan 24 Stunden auf 40 °C erwärmt, 200 ml Wasser hinzugefügt, im Vakuum auf 50 ml eingeengt, mit 200 ml Wasser verdünnt und mit Äther (3 x 50 ml) extrahiert. Die wässerige Schicht wird mit einer Lösung von Bariumhydroxyd neutralisiert, auf 80 °C erhitzt und über Kieselgur abgefiltert. Das Filtrat wird im Vakuum abgedampft und der Abdampfrückstand mit 100 ml 1 Mol-L-' Natriumhydroxyd 20 Stunden auf 40 °C erwärmt, mit Dowex 50 x 8 (H+) neutralisiert, abgefiltert und das Filtrat im Vakuum verdampft. Durch die Chromatographie auf einer 200-ml-Säule von DEAE-Sephadex A-25 (Formiat) im Gradient mit 21 Wasser und 212 Mol-L-' Ameisensäure wird (nach der Verdampfung im Vakuum, Kodestillation mit Äthanol und Ausfällung aus 10 ml Methanol mit 200 ml Äther) ein Gemisch der isomeren 2'/3'/-0-Phosphonylmethyluridine (der freien Säure) in einer Ausbeute von 60% gewonnen. Das Verhältnis der Isomeren ist 1:1. Das UV-Spektrum: Xmax 260 nm, 8max 10 000, Rf=0,20 (in dem System 2-PropanoI-Ammo-niak-Wasser /7:l/2/, EuP = 0,94 (pH 7,5). Berechnet: N/P=2, gefunden 1,97.

Beispiel 8

Das Gemisch von 10 mmol N2-Dimethylaminomethylen-5'-0-tritylguanosin, 10 ml Pyridin und 20 mmol Chlorme-thanphosphonylchlorid wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 8 verarbeitet. Es wurden 54% eines Gemisches der isomeren 2'/3'/-0-Phosphonylmethylguanosine (33:67) gewonnen; Ä.max 12 000 nm, £max 12 000, Rf=0,12, N/P = 4,90 (berechnet 5,0).

Beispiel 9

Die Reaktion wurde ähnlich wie in Beispiel 8 mit 10 mmol N6-Dimethylaminomethylen-5'-0-tritylcytidin durchgeführt. Es wurden 67% eines Gemisches der isomeren 2'/3'/-0-Phosphonylmethylcytidinen (1:1) gewonnen, X,max 281 nm, emax 10 000, Rf=0,18, EuP = 0,80.

Beispiel 10

Die Reaktion wird auf die gleiche Weise wie in Beispiel 8 mit 10 mmol N6-Dimethylaminomethylen-5'-0-trityladenosin durchgeführt. Es werden 72% eines Gemisches der isomeren 2'/3'/-0-Phosphonylmethyladenosine gewonnen, Xmax 258 nm, £max 14 000, RF = 0,18, EuP = 0,83, N/P =5,05 (berechnet 5,0).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

G

Claims

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2. Isomere O-Phosphonylmethylderivate nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel IV

5 4

R - CHgCHCIIgOR

IV

OR

in welcher R5 ein Adenin-9-ylrest oder eine OH-Gruppe bedeutet und die R4 die gleiche Bedeutung wie in der Formel I haben und die Konfiguration auf dem Kohlenstoffatom in der Position 2 S, R oder RS.

2

PATENTANSPRÜCHE 1. Isomere O-Phosphonylmethylderivate enantiomerer und racemischer vicinaler Diole der allgemeinen Formel I

in welcher R6 ein Wasserstoffatom oder eine = CH-N(CH3)2-Gruppe bedeutet, mit dem Chlormethanphosphonyldichlorid der Formel III reagieren lässt.

R

R1 - i -

OR

I

CH

- OR

(I)

in welcher R1 ein Wasserstoffatom, eine Alkylgruppe mit einem bis drei Kohlenstoffatomen, eine Hydroxyalkylgruppe oder eine Adenin-9-ylmethylgruppe ist, R2 und R3 ein Wasserstoffatom sind oder beide zusammen einen Rest der den Ribonucleosidring ergänzt, bedeuten, beide R4 abwechselnd ein Wasserstoffatom und eine -CH2P(0)(0H)2-Gruppe sind, und die Konfiguration auf den Kohlenstoffatomen R, S oder RS ist.
3. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel I nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Verbindung der allgemeinen Formel II

R

I

R I

OH

XX

R- C - CH

I

OH

in welcher R1, R2 und R3 die gleiche Bedeutung wie in der Formel I haben, mit 1 bis 2 Mol des Chlormethanphosphon-ylchlorids der Formel III

ClCH2P(0)Cl2

III