CH634103A5

CH634103A5 - Verfahren zur herstellung des neuen antibiotikums am-2282.

Info

Publication number: CH634103A5
Application number: CH1523477A
Authority: CH
Inventors: Satoshi Omura; Yuzuru Iwai; Atsushi Hirano
Original assignee: Kitasato Inst
Priority date: 1976-12-11
Filing date: 1977-12-12
Publication date: 1983-01-14
Also published as: FR2373556A1; GB1542995A; JPS5753076B2; DE2754326C2; FR2373556B1; DE2754326A1; US4107297A; JPS5373501A

Description

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist das im Patentanspruch 1 definierte Verfahren zur Herstellung des neuen Antibiotikums AM-2282.

Unter den verschiedenen, im Anspruch 1 aufgeführten 60 Parametern wird das UV-Absorptionsspektrum in erster Linie zur Identifizierung der Verbindung verwendet. Verschiedene bekannte Antibiotika mit ähnlichen Eigenschaften, wie Oxamicetin (J. Antibiotics, Bd. 26 (1973), S. 752,757 und 765) und U-24544 (Appi. Microbiol., Bd. 15 (1967), S. 1142) haben ein UV- 65 Absorptionsmaximum bei 280 bis 310 nm. Das UV-Maximum von Oxamicetin bei 305 nm liegt im alkalischen pH-Bereich bei 322 nm und im sauren pH-Bereich bei 316 nm. Ausser dem

Dosis, Ausmass der Hypertension (%)

mg/kg nach lh 3h 5h

Hydrochlorid

0,16

-2

1

von AM-2282

0,16

2

0,3

6

13

12

0,3

17

23

11

0,63

13

25

0,63

17

24

1,25

15

23

31

1,25

18

25

39

a-Methyl-DOPA

100

7

13

634103

Aus der Tabelle ist ersichtlich, dass bei einer Dosis von 0,3 mg/kg eine hypotensive Wirkung eintritt.

Weitere Versuche an Ratten haben ergeben, dass die Verbindung zur Bekämpfung von Ödemen und Ulcus geeignet ist. Die minimale wirksame Konzentration beträgt 1,0 mg/kg.

Die akute Toxizität von AM-2282 bei intraperitonealer Verabreichung an Mäuse, berechnet nach der Methode von Behrens und Kärber, beträgt 6,6 mg/kg.

Das neue Antibiotikum AM-2282 wird erfindungsgemäss durch aerobe Züchtung eines das Antibiotikum bildenden Mikroorganismus der Gattung Streptomyces und Isolierung des Antibiotikums aus der Gärmaische hergestellt. Im erfin-dungsgemässen Verfahren können nach üblichen Methoden erhaltene Mutanten und Varianten von das Antibiotikum bildenden Mikroorganismen der Gattung Streptomyces eingesetzt werden.

Vorzugsweise wird im erfindungsgemässen Verfahren ein Mikroorganismus der Art Streptomyces staurosporeus eingesetzt. Ein bevorzugter Mikroorganismus ist Streptomyces sp.

AM-2282 (FERM-P Nr. 3725; NRRL11184). Dieser Stamm hat folgende Eigenschaften:

1. Morphologische Eigenschaften:

Auf Malzagar-Medium bildet sich Substratmycel mit einfa-s eher Verzweigung. Auf Malzagar-Medium, ausgenommen verschiedene synthetische Medien, bildet sich ein Luftmycel. Die Sporenkettenmorphologie wird zur Sektion Rechiflexibiles gerechnet. Sporangien und begeiselte Sporen werden nicht beobachtet. Die Sporen sind zylindrisch oder länglich mit den to Abmessungen 0,4 bis 0,6 x 1,8 bis 2,4 (im, mit glatter Oberfläche. Auf einigen organischen Agarmedien, wie Hefe-Malz-agar, werden sclerotische Granulate gebildet, deren Durchmesser 10 bis 30 um beträgt.

2. Kulturcharakteristika in verschiedenen Medien:

15 In Tabelle III sind die Kulturcharakteristika nach 10- bis 14tägiger Züchtung bei 27 °C zusammengestellt. Die Farbwerte wurden durch Vergleich mit dem Color Harmony Manual (Container Corporation of America, Chicago, 1958) bestimmt.

Tabelle III

Nährmedium

Wachstum

Unterseite

Luftmycel

Bildung von löslichem Pigment

Sucrose-Nitrat-Agar

Glucose-Nitrat-Agar

Glycerin-Calciummalat-Agar

Glucose-Asparagin-Agar (ISP)

Glycerin-Asparagin-Agar (ISP)

anorganische Salze-Stärke-Agar (ISP) Tyrosin-Agar (ISP)

Nähragar

Glucose-Pepton-Agar

Hefeextrakt-Malzextrakt-AgarCISP) Hafermehl-Agar (ISP)

Pepton-Hefe-Extrakt-Eisen-Agar (ISP)

T rypton-Hefeextraktbrühe (ISP)

gut, melonengelb (3ga)

gut, gerunzelt, melonengelb (3ga) gut, hellmelonengelb (3ea)

gut, aprikosenfarben (4ga)

gut, hellmelonengelb (3ea)

gut, bambusfarben (2fb)

mässig, gerunzelt, hellmaisgelb (2ea) gut, bernsteinfarben (3pc)

gut, hellmelonengelb (3ea)

gut, elfenbeinfarben (2db)

Oberflächenwachstum hellelfenbein (2ca)

hellmelonengelb (3ea) dito rosa (3ca)

hellaprikosenfarben (4ea)

hellmelonengelb (3ea) rosa bis hellgelb (3gc) hellelfenbeinfarben (2ca) maisgelb (2hb)

melonengelb (3ga) melonengelb (3ia) hellmelonengelb (3ea) maisgelb (2hb)

hellmelonengelb

(3ea)

dito schlecht, samtartig, hellmelonengelb (3ea) dito mässig, samtartig, rosa (3ca)

mässig, samtartig, rosa (4ca)

mässig, samtartig, weiss kräftig, samtartig, weiss bis rosa (3ca)

mässig, samtartig, rosa,

(3ca)

gering, samtartig, bambusfarben elfenbeinfarben (2cb) bis (2fb)

rosa (3ca)

mässig, samtartig, rosa,

(4ca)

mässig, samtartig, weiss bis perlfarben (3ba)

mässig, samtartig, weiss bis rosa (3ca)

hellelfenbeinfarben (2ca) gelb (2ga)

ISP: Vom International Streptomyces Project empfohlenes Nährmedium

3. Physiologische Eigenschaften:

1)

Wachstumstemperaturbereich:

2) Bildung von melanoiden Pigmenten:

3) Gelatineverflüssigung:

4) Stärkehydrolyse:

20 bis 40 °C

(Hefeextrakt-Malzagar-Medium)

negativ (Trypton-Hefeextrakt,

Pepton-Hefeextrakt-Eisen-

Agar,

Tyrosin-Agar)

positiv positiv

5) Coagulierung von vermutlich positiv 6o Magermilch:

6) Peptonisierung von positiv Magermilch:

7) Schwefelwasserstoffbildung:negativ

8) Bildung von salpetriger negativ 65 Säure:

9) Hydrolyse von Cellulose: vermutlich positiv

4. Verwertung von Kohlenstoffquellen im Pridham-Gottlief-Medium: Verwertbar: D-Glucose, L-Arabinose, Sucrose,

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L-Inosit und D-Mannit; Mehr oder weniger verwertbar: Kohlenstoffquellen sind Glucose, Maltose, Lactose, Saccha-

D-Fructose, D-Xylose, L-Rhamnose und Cellulose. rose, Stärke, Dextrin, Glycerin und Melasse.

Die morphologischen und physiologischen Eigenschaften Als Stickstoffquellen kommen verschiedene Substanzen in des Stammes AM-2282 lassen sich wie folgt zusammenfassen: Frage, die assimilierbaren Stickstoff enthalten. Bevorzugte Die Kultur ist von braunstichig-weisser bis hellgelbstichig-oran- 5 Stickstoffquellen sind Sojabohnenmehl, Maisquellwasser, ger oder rotstichig-gelber Farbe. Die Farbe des Luftmycels ist Baumwollsamenkuchen, Pepton, Fleischextrakt, Hefeextrakt, je nach den Agarmedien weiss, gelb oder rosa. Auf Pepton- Hefe, Caseinhydrolysat, Ammoniumsalze und Salze der Sal-

Hefe-Eisen-Agar, Tyrosin-Agar und Trypton-Hefebrühe wer- petersäure.

den keine melanoiden Pigmente gebildet. Beim Vergleich die- Beispiele für verwendbare anorganische Salze sind Phos-

ser Eigenschaften mit denen der bekannten Stämme von Strep-10 phate und Sulfate von Calcium, Natrium, Eisen und Mangan, tomyces, die in Bergey's Manual of Determinative Bacterio- Zur Produktion grosser Mengen an Antibiotikum AM-2282

logy, 8. Auflage und in anderen Veröffentlichungen beschrie- wird die Züchtung vorzugsweise in einem flüssigen Nährboden ben sind, besteht Übereinstimmung mit folgenden fünf Arten: durchgeführt, doch können auch feste Nährböden verwendet Streptomyces roseofulvus Pridham et al. 1958, Streptomyces werden. Vorzugsweise hat das Einsaatmedium die gleiche pluricolorescens Okami and Umezawa 1961, Streptomyces 15 Zusammensetzung wie das Hauptfermentationsmedium. Die moderatus Reusser 1967, Streptomyces baarnensis Pridham et Einsaatkultur wird vorzugsweise durch 24- bis 48stündige Züch-al. 1958 und Streptomyces tolypophorus Shibata et al. 1971. tung unter aeroben Bedingungen bei Temperaturen von etwa Diese Stämme unterscheiden sich jedoch vom Stamm AM- 27 °C unter Verwendung eines Sakaguchi-Kolbens hergestellt. 2282 hinsichtlich folgender morphologischer und physiologi- Die Hauptfermentation wird vorzugsweise während 50 bis scher Eigenschaften. 20 120 Stunden unter aeroben Bedingungen und unter Schütteln

Die Sporen von S. roseofulvus haben eine Grösse von etwa bei einer Temperatur von 15 bis 40 °C, insbesondere 25 bis 1 Mikron und in Hefeextrakt-Malzextrakt-Agar, Hafermehl- 30 °C> und bei einem pH-Wert von 6 bis 10, insbesondere 6 bis 7, Agar und anorganische Salze-Stärke-Agar wird ein hellgrau- durchgeführt. Nach beendeter Züchtung hat sich eine grosse stichiggelbes oder hellbraunstichig-graues Pigment gebildet. Menge Antibiotikum AM-2282 in der Gärmaische und den Zel-Dieser Stamm verwertet D-Xylose, D-Fructose und Rhamnose.25 'en angesammelt. Das Antibiotikum wird in an sich bekannter Die Sporen von S. pluricolorescens sind ebenfalls kurz (etwa 1 Weise aus der Gärmaische und den Zellen isoliert. Beispiels-Mikron) und die Unterseite der Kolonie ist von graustichig-gel- weise werden die Zellen von der Flüssigkeit durch Filtration ber oder gelbstichig-brauner Farbe auf Hefe-Malz-Agar, Hafer- getrennt. Das Antibiotikum kann auch unmittelbar aus der Gär-mehl-Agar, anorganische Salze-Stärke-Agar und Glycerin- maische isoliert werden, da es lipoidlöslich ist. Zu diesem Asparagin-Agar. Das Luftmycel von S. moderatus ist auf Hefe- 30 Zweck wird die Gärmaische einer Lösungsmittelextraktion Malz-Agar, Hafermehl-Agar und anorganische Salze-Stärke- unterworfen.

Agar graustichig-gelbrosa, und es bildet ein purpurfarbenes lös- Ein bevorzugtes Verfahren zur Isolierung und Reinigung liches Pigment. S. baarnensis und S. tolypophorus haben ähn- des Antibiotikums aus der Gärmaische wird nachstehend erläu-lich wie Streptomyces sp. AM-2282 lange Sporen. S. baarnensis tert-

bildet jedoch ein spärliches Luftmycel, seine Farbe ist auf ver- 35 Die Gärmaische wird mit wässriger Ammoniaklösung auf schiedenen organischen Medien weiss bis grau und die Unter- einen pH-Wert von etwa 10 eingestellt und sodann mit einem seite der Kolonie ist hellelfenbeinfarben. S. tolypophorus bildet organischen Lösungsmitel, wie n-Butylacetat, extrahiert. Der spärliches Luftmycel von weisser Farbe, und die Unterseite der erhaltene Extrakt wird unter vermindertem Druck stark einKolonie bildet kein erkennbares Pigment auf anorganische geengt und sodann mit 0,1 n Salzsäure versetzt. Die wässrige Salze-Stärke-Agar und es bildet ein orange-gelbes Pigment auf 40 phase wird hierauf mit wässriger Ammoniaklösung auf einen Glycerin-Calciummalat-Agar. Der Stamm verwertet Fructose, pH-Wert von 10 eingestellt und mit Ethylacetat extrahiert. Der Xylose und Rhamnose als Kohlenstoffquelle. erhaltene Extrakt wird unter vermindertem Druck zur Trok-

Aufgrund der vorstehend angegebenen Eigenschaften kann ^ene eingedampft. Sodann wird der Rückstand an Kieselgel mit man schliessen, dass der Stamm AM-2282 eine neue Art von emem Gemisch von Chloroform und Methanol (60:1 V/V) chro-Streptomyces ist, für die der Name Streptomyces staurospo- 45 matographiert. Die das Antibiotikum enthaltenden Fraktionen, reus nov. sp. vorgeschlagen wird. Der Stamm wurde als Strep- die en}e P°slt}ve Dragendorff-Reaktion zeigen, und deren Rf-tomyces sp. AM-2282 am 27. September 1976 beim Fermenta- Wert bei der Dünnschichtchromatographie an Kieselge und tion Research Institute, Agency of Industriai Science and Tech- mit System Chloroform-Methanol (10.1 V/V) einen Wert nology, Chiba-ken, Japan unter der Hinterlegungsbezeichnung ™n 0.55 ergeben, werden vereinigt und unter vermindertem FERM-P Nr. 3725 sowie bei der ARS-Kultursammlung in Peo- 50 Druck eingedampft. Das erhaltene gelbliche Pulver wird aus ria, USA unter der Hinterlegungsbezeichnung NRRL11 184 einfm Gemisch von Chloroform und Methanol (100:2 V/V) hinterlegt umkristalhsiert. Das Antibiotikum AM-2282 kristallisiert in hell-

i , v,. v gelben Nadeln aus.

Aus diesem Stamm können nach üblichen Methoden bei- Die Bestimmung des Antibiotikums erfolgt durch den Präci-

spielsweise durch Bestrahlung mit UV-Licht, Röntgenstrahlen 55 pjtationstest mit Dragendorff-Reagens und die Messung der bzw. anderen Strahlen oder chemischen Mutagenen Mutanten Absorption bei 292 nm hergestellt werden. Eine durch Bestrahlung mit UV-Licht her- Die Beispiele erläutern die Erfindung.

gestellte Mutante zeichnet sich durch besonders hohe Produktivität aus. Der Stamm AM-2282 bildet das Antibiotikum AM- Beispiel 1

2282 sowohl intrazellulär als auch extrazellulär. 60 jn ejnen Sakaguchi-Kolben werden 500 ml eines Nährmedi-

Im erfindungsgemässen Verfahren kann jedes synthetische ums (pn 7,0) mit 2,0 Gewichtsprozent/Volumen Glucose, 0,5 oder organische Nährmedium verwendet werden, das Kohlen- Gewichtsprozent/Volumen Pepton, 0,5 Gewichtsprozent/Volu-stoff- und Stickstoffquellen sowie anorganische Salze enthält. men Fleischextrakt, 0,3 Gewichtsprozent/Volumen Trocken-Gegebenenfalls können dem Nährmedium noch andere übliche hefe, 0,5 Gewichtsprozent/Volumen Natriumchlorid und 0,3 Nährstoffe zur Züchtung von Mikroorganismen der Gattung 65 Gewichtsprozent/Volumen Calciumcarbonat vorgelegt. Das Streptomyces einverleibt werden. Nährmedium wird 15 Minuten lang bei 120 °C sterilisiert.

Als Kohlenstoffquelle kommen verschiedene Substanzen in Sodann wird aus einer Schrägkultur mit einer Platinöse Strep-Frage, die assimilierbaren Kohlenstoff enthalten. Bevorzugte tomyces sp. AM-2282 (FERM-P Nr. 3725; NRRL 11 184) in das

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Nährmedium überimpft und 48 Stunden auf einer Drehschüttel- form gelöst. In die Chloroformlösung wird gasförmiger Chlormaschine bei 110 U/min und 27 °C gezüchtet. Wasserstoff eingeleitet. Nach dem Aufarbeiten werden 42 mg

Die erhaltene Einsaatkultur wird in 20 Liter eines Produk- des Antibiotikums AM-2282 als Hydrochlorid erhalten, tionsmediums (pH 7,0), das 2,0 Gewichtsprozent/V olumen

Stärke, 1,0 Gewichtsprozent/Volumen Glucose, 0,5 Ge- 5 Beispiel 2

wichtsprozent/Volumen Pepton, 0,5 Gewichtsprozent/Volu- Gemäss Beispiel 1 wird eine Einsaatkultur von Streptomy-men Hefeextrakt und 0,4 Gewichtsprozent/V olumen Calcium- ces staurosporeus FERM-P Nr. 3725, NRRL 11 184 hergestellt, carbonat enthält, in einen 30 Liter fassenden Fermenter über- 600 ml der erhaltenen Einsaatkultur werden gemäss Beispiel 1 impft. Die Fermentation wird 75 Stunden lang unter Schütteln in 70 Liter eines Produktionsmediums in einen 100 Liter fassen-(250 U/min) bei 27 °C und einer Belüftungsgeschwindigkeit von io den Fermenter überimpft. Die Fermentation wird 68 Stunden 10 Liter/min durchgeführt. Nach beendeter Züchtung wird die lang bei 27 °C unter Schütteln (200 U/min) und einer Belüf-Gärmaische ( 17 Liter) mit wässriger Ammoniaklösung auf tungsgeschwindigkeit von 30 Liter/min durchgeführt. Nach einen pH-Wert von 10 eingestellt, mit 8 Liter n-Butylacetat ver- beendeter Fermentation wird die Gärmaische (63 Liter) mit setzt und 30 bis 60 Minuten lang bei Zimmertemperatur ausge- 28prozentiger wässriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert schüttelt. Sodann wird der n-Butylacetatextrakt abgetrennt und 15 von 10 eingestellt und mit 30 Liter n-Butylacetat extrahiert. Der in 2 Liter 1 n Salzsäure gegossen. Die wässrige Phase wird n-Butylacetatextrakt wird abgetrennt und in 8 Liter 0,1 n Salzabgetrennt, mit 28prozentiger wässriger Ammoniaklösung auf säure gegossen. Die wässrige Phase wird mit 28prozentiger einen pH-Wert von 10 eingestellt und zweimal mit jeweils 1 wässriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 10 einge-Liter Ethylacetat extrahiert. Der Ethylacetatextrakt wird unter stellt und erneut zweimal mit jeweils 4 Liter Ethylacetat extravermindertem Druck eingedampft. Es hinterbleiben etwa 1,3 g 20 hiert.

eines bräunlich gefärbten Rückstands, der mit 50 ml Diethyl- Der Ethylacetatextrakt wird unter vermindertem Druck ether zur Abtrennung fettartiger Verunreinigungen gewaschen eingedampft. Es werden 1,4 g eines bräunlichen Rückstandes wird. Die getrocknete Substanz wird sodann auf eine mit 12 g erhalten, der mit 100 ml Diethylether zur Abtrennung fettarti-Kieselgel 60 gefüllte Säule aufgesetzt und mit 400 ml einen ger Verunreinigungen gewaschen wird. Die getrocknete SubGemisches von Chloroform und Methanol (60:1 V/V) entwik- 25 stanz wird gemäss Beispiel 1 chromatographisch gereinigt. Es kelt. Das Eluat wird in Fraktionen von jeweils 2,5 ml unterteilt. werden Fraktionen von jeweils 15 ml aufgefangen. Die Fraktio-Jede Fraktion wird mittels Dragendorff-Reagens und dünn- nen 41 bis 80 énthalten das Antibiotikum, und sie ergeben eine schichtchromatographisch an 0,3 mm Kieselgel G mit dem positive Dragendorff-Reaktion und bei der Dünnschichtchro-Lösungsmittelsystem Chloroform-Methanol (10:1 V/V)unter- matographie gemäss Beispiel 1 wird ein RrWert von 0,55 erhal-sucht. Die Fraktionen Nr. 61 bis 140 werden als aktive Fraktio- 30 ten.

nen vereinigt und unter vermindertem Druck zur Trockene ein- Die aktiven Fraktionen werden vereinigt und unter vermingedampft. Es hinterbleiben 170 mg eines gelben Pulvers. Das dertem Druck eingedampft. Es werden 520 mg eines gelben Pulver*wird in 7 ml eines Gemisches von Chloroform und Pulvers erhalten, das in einer geringen Menge Chloroform Methanol (98:2 V/V) gelöst und 15 Stunden lang im Kühl- gelöst und 15 Stunden im Kühlschrank stehengelassen wird, schrank stehengelassen. Die Kristalle werden abfiltriert. Es 35 Die entstandenen Kristalle werden abfiltriert. Es werden 370 werden 110 mg hellgelbe Nadeln in einer Reinheit von ober- mg des Antibiotikums AM-2282 in hellgelben Nadeln und mit halb 99 % erhalten. Diese Nadeln haben die vorstehend angege- einer Reinheit von mehr als 99 % erhalten. Das Produkt hat die benen Eigenschaften. gleichen Eigenschaften wie das in Beispiel 1 hergestellte Pro-50 mg der erhaltenen hellgelben Nadeln werden in Chloro- dukt.

G

1 Blatt Zeichnungen

Claims

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2

PATENTANSPRÜCHE

1. Verfahren zur Herstellung des neuen Antibiotikums AM-2282, das die folgenden Parameter aufweist:

a) Elementaranalyse gef.: C 70,03 Gew.-%, H 6,03 Gew.-%, N 11,21 Gew.-%; 5

b) Molekulargewicht, bestimmt durch Massenspektroskopie (m/e), 466;

c) Summenformel: C28H26N4O3; Mgw. ber.: 466,2

d) spezifischer Drehwert: [a] = +35,0 (c = 1,0 in Methanol);

e) Schmelzpunkt: kein scharfer Schmelzpunkt, die Verbin- 10 dung färbt sich bei 208 °C braun und verwandelt sich bei 260 °C in ein teeriges Produkt;

0 UV-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 1 :

/.™Hnm (E,S: 243 (537), 267 (Schulter 552), 292 (1228), 322 (Schulter 537), 335 (313), 356 (220), 372 (254), diese Maxima wer-15 den weder im alkalischen noch im sauren pH-Bereich verschoben;

g) IR-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 2 als Kaliumbro-mid-Pressling: 3450 cm-1 (Amin-und Hydroxy-Gruppen), 2960 cm-1 (Methyl- und Methylengruppen), 1675 cm-1 (Carbonyl- 20 und Doppelbindungs-Gruppen), 1588,1460,1356,1322,1285, 1230,1123, und 752 cm-';

h) Farbreaktionen: positive Dragendorff-, Molisch-, Rydon-Smith- und Ninhydrin-Reaktion; negative Beilstein-, Eisen (III)-chlorid- und Anilinphthalat-Reaktion;

i) Löslichkeit in verschiedenen Lösungsmitteln: löslich in Dimethylsulfoxid und Dimethylformamid; schwer löslich in Chloroform, Ethylacetat, n-Butylacetat und Methanol; unlöslich in Petrolether, n-Hexan und Wasser;

k) Rf-Werte bei der Dünnschichtchromatographie an Kieselgel (Kieselgel G, 0,3 mm):

Chloroform-Methanol (10:1 VA') 0,55

Benzol-Aceton ( 1:2 V/V) 0,43

n-Butanol-Essigsäure-Wasser (8:1:0,5 V/V) 0,24

dadurch gekennzeichnet, dass man einen das Antibiotikum AM-2282 bildenden Mikroorganismus der Gattung Streptomy-ces unter aeroben Bedingungen in einem Nährmedium züchtet und aus der Gärmaische das Antibiotikum isoliert.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,

dass man einen Mikroorganismus der Art Streptomyces stauro sporeus einsetzt.
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet,

dass man als Mikroorganismus Streptomyces sp. AM-2282 FERM-P Nr. 3725 einsetzt.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass man ein Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie anorganische Salze enthaltendes Nährmedium einsetzt.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass man die Züchtung 50 bis 120 Stunden bei Temperaturen von 25 bis 30 °C und einem pH-Wert von 6 bis 7 durchführt.

Maximum bei 322 nm hat Oxamicetin im alkalischen pH-Bereich ein weiteres Maximum bei 265 nm.

U-24544 hat ein Absorptionsmaximum bei 303 nm, das im alkalischen pH-Bereich bei 331 nm liegt.

Das IR-Absorptionsspektrum von AM-2282 ist verschieden von dem des Oxamicetins und U-24544. Daraus folgt, dass Oxamicetin und U-24544 nicht identisch mit dem Antibiotikum AM-2282 sind.

In Tabelle I ist die minimale Hemmkonzentration (MHK) des Antibiotikums AM-2282 gegenüber verschiedenen Bakterien und Pilzen zusammengestellt. Die Werte wurden nach der Agar-Verdünnungsmethode bestimmt.

Tabelle I

25

30

35

Testkeim

MHK, y/ml

Medium*

Staphylococcus aureus FDA 209P

>200

N

Bacillus subtilis PCI 219

>200

N

Sarcina lutea PCI 1001

25

N

Mycobacterium smegmatis ATCC 607

50

N

Escherichia coli NIJH

> 200

N

Pseudomonas aeruginosa P-3

>200

N

Proteus vulgaris IFO 3167

>200

N

Xanthomonas oryzae

200

N

Candida albicans

6,25
P .

Candida pseudotropicalis

3,12

P

Saccharomyces sake

3,12

P

Aspergillus niger

25

P

Aspergillus brevipus

3,12

P

Aspergillus fumigatus

12,5

P

Trichophyton rubrum

6,25

P

Trichophyton mentagrophytes

25

P

Cryptococcus neoformans

50

P

Microsporum gipseum

> 100

P

Sclerotinia cinerea

0,78

P

Piricularia oryzae

0,78

P

45

50

* N: 0,5 % Gew/Vol., Fleischextrakt 0,5 % Gew/Vol., Agar 1,2 % Gew/Vol., pH-Wert 7,0.

P: Kartoffelextrakt mit 1,0 % Gew/Vol. Glucose und 1,2 % Gew/Vol. Agar, pH-Wert 6,8.

Die Bestimmung der blutdrucksenkenden Wirkung wurde beispielsweise folgendermassen durchgeführt:

Weiblichen Ratten mit einem Körpergewicht von 200 bis 250 g, die zur Erzeugung von spontanem Hochdruck unter bestimmten Bedingungen gezüchtet wurden, wird das Hydrochlorid von AM-2282 oral in den in Tabelle II angegebenen Dosen gegeben. Im Verlauf von 1,3 und 5 Stunden nach Verabreichung der Verbindung wird in der Schwanzarterie der systolische Blutdruck bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengefasst.

Tabelle II

55