BRPI0719157A2

BRPI0719157A2 - Composição farmacêutica para o tratamento de infecções fúngicas, e, método de uso combinado para o tratamento de infecções fúngicas causadas por patógenos fúngicos.

Info

Publication number: BRPI0719157A2
Application number: BRPI0719157-0A
Authority: BR
Inventors: Hiroshi Nishikawa
Original assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Priority date: 2006-10-06
Filing date: 2007-10-03
Publication date: 2014-02-04
Also published as: ATE538789T1; KR101409258B1; AU2007305626B2; NO20091101L; CA2664915A1; EP2070536B1; ZA200902053B; US8173157B2; KR20090069317A; ES2376130T3; RU2009117207A; EP2070536A4; WO2008044562A1; CY1112617T1; CN101522195A; JPWO2008044562A1; AU2007305626A1; CN101522195B; NZ575714A; CA2664915C

Description

"COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA O TRATAMENTO DE INFECÇÕES FÚNGICAS, E, MÉTODO DE USO COMBINADO PARA O TRATAMENTO DE INFECÇÕES FÚNGICAS CAUSADAS POR PATÓGENOS FÚNGICOS"

DESCRIÇÃO

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica, que é útil para o tratamento de infecções fúngicas causadas por patógenos füngicos e que compreende um novo derivado de fenilamidina ou um sal do mesmo, e um ou mais agentes selecionados a partir de agentes antifungicos azol, agentes antifungicos polieno, agentes antifungicos candina, e agentes antifungicos fluoropirimidina. A presente invenção também refere-se a um método de uso do novo derivado de fenilamidina ou um sal, em combinação com os agentes para o tratamento de infecções füngicas. ARTE ANTECEDENTE

As micoses profundas sérias, tais que a candidíase invasiva, podem ser, muitas vezes, uma doença fatal. No passado, foi considerado que o principal mecanismo protetor ao lado de um organismo hospedeiro contra fungos, tais que a Cândida, é a imunização não- específica através de neutrófilos. Quando este mecanismo protetor funciona, existe normalmente pouco risco de que se torne infectado com os fungos. No entanto, em anos recentes, o risco de contrair a micose profunda tem sido reforçado, devido ao número de pacientes com doenças subjacentes que diminuem a função imunológica do corpo, tais que tumores malignos (em particular, tumores malignos hemapoiéticos, tais que a leucemia aguda ou o linfoma maligno), e AIDS, o uso freqüente de agentes anticâncer ou de imunossupressores, o uso pesado de antibióticos antibacterianos ou de hormônios esteróides, o uso a longo termo de hiperalimentação venosa central ou de cateterização venosa, e os similares (Documento Não- Patente 1). Os agentes usados para o tratamento de tal micose profunda são muito poucos, quando comparados a agentes antibacterianos usados, e incluem apenas anfotericina B, flucitosina, miconazol, fluconazol, fosfluconazol, itraconazol, voriconazol, micafungina e os similares.

Por um outro lado, existe uma necessidade crescente quando a

agentes seguros e eficazes contra infecções fungicas oportunísticas causadas por patógenos fungicos, tais que Candida, Cryptococcus e Aspergillus.

Embora os agentes que são presentemente usados, por exemplo, a anfotericina B, possuam uma ação fungicida extremamente forte, eles apresentam um problema com relação a efeitos colaterais, tais que nefrotoxicidade, de tal modo que o seu uso clínico é limitado. A flucitosina apresenta problemas no que se refere ao desenvolvimento de resistência. A micafungina apresenta uma baixa atividade contra o Cryptococcus. Azóis, tais que o fluconazol e o voriconazol são usados de um modo mais freqüente devido a seu equilíbrio entre a eficácia e a segurança, embora a sua ação fungicida seja inferior àquela de anfotericina B (Documentos Não- Patente 2 e

3)·

Os métodos para o uso combinado de agentes antifúngicos estão sendo usados para propósitos, tais que os efeitos de tratamento de reforço (Documento Não- Patente 4). A pesquisa está também progredindo para a combinação de agentes antifúngicos (Documentos de Patente 1, 2 e 3). No entanto, o número de agentes que são combinados é limitado, significando que os efeitos de um tratamento satisfatório não podem ser garantidos.

Além disso, derivados de fenilamidina tendo atividade antifungica são conhecidos (Documento de Patente 4)

Documento de Patente 1: Patente Japonesa N0 3288051 Documento de Patente 2: JP- A-11- 504 Documento de Patente 3: JP- A- 2003- 527314 Documento de Patente 4: Publicação de Patente Internacional N0WO 2006/ 003881

Documento Não- Patente 1: Rinsho to Biseibutsu (Clinics and Microorganisms), Vol. 17, págs. 265- 266, 1990.

Documento Não- Patente 2: Rinsho to Biseibutsu (Clinics and Microorganisms), Vol. 21, págs. 277 - 283, 1994.

Documento Não- Patente 3: Rinsho to Biseibutsu (Clinics and Microorganisms), Vol. 30, págs. 596 - 614, 2003.

Documento Não- Patente 4: Dignosis and treatment guideline of deep mycosis, Pp. 20, 29, Ishiyaku Publishers, Inc. 2003. EXPOSIÇÃO DA INVENÇÃO

PROBLEMA A SER SOLUCIONADO PELA INVENÇÃO

São desejáveis uma composição farmacêutica que seja útil para o tratamento de infecções fungicas e que possua forte atividade antifungica e que contudo apresente poucos efeitos colaterais, e um método para o uso combinado de agentes antifungicos.

MEIOS PARA SOLUCIONAR O PROBLEMA

Sob certas circunstâncias, como um resultado de um estudo intensivo, os presentes inventores descobriram que uma composição farmacêutica, que compreende um derivado de fenil amidina ou um sal do mesmo, representada pela fórmula [1], que é um novo composto: [Fórmula Química 1]

0 0

ci]

em que R1 e R2 podem ser o mesmo ou diferentes, e representam um grupo alquila C3.4 opcionalmente substituído; e

um ou mais agentes selecionados a partir de agentes antifungicos azol, agentes antifungicos polieno, agentes antifungicos candina e agentes antifungicos fluoropirimidina, possui uma forte atividade antifungica e é útil para o tratamento de infecções fungicas, e que um método para o uso combinado destes agentes antifungicos é útil para o tratamento de infecções fungicas, destes modo sendo alcançada a presente invenção. EFEITO DA INVENÇÃO

A composição farmacêutica, que compreende um derivado fenilamidina ou um sal do mesmo, e um ou mais agentes selecionados a partir de agentes antifungicos, agentes antifungicos polieno, agentes antifungicos candina e agentes antifungicos fluoropirimidina, possui forte atividade antifüngica e é útil para o tratamento de infecções füngicas. MELHOR MODO DE EXECUTAR A INVENÇÃO A presente invenção será agora descrita em maiores detalhes.

No presente relatório, a não ser que mencionado de um outro modo, um átomo de halogênio refere-se a um átomo de flúor, um átomo de cloro, um átomo de bromo, ou um átomo de iodo; um grupo alquila C3.4 significa propila, isopropila, n-butila, sec-butila, isobutila e terc-butila. Exemplos dos sais do composto representado pela fórmula [1]

incluem os sais de ácidos minerais, tais que o ácido clorídrico, o ácido bromídrico, o ácido fosfórico e o ácido sulfürico; os sais de ácidos carboxílicos orgânicos, tais que ácido succínico, o ácido maléico e o ácido fumárico; os sais de ácidos sulfônicos, tais que o ácido metanossulfônico, o ácido benzenossulfônico, o ácido p-toluenossulfônico, o ácido mesitilenossulfônio e o ácido naftalenossulfônico.

Os sais preferidos do composto representado pela fórmula [1] incluem os sais farmacologicamente aceitáveis.

Para o substituinte do grupo alquila C3.4 substituído ou não- substituído em R1 e R2, são considerados átomo de halogênio, grupo hidroxila e grupo carboxila.

Nos compostos da fórmula geral [1] usados para a presente invenção, os compostos preferidos são os compostos citados abaixo.

Compostos, nos quais R1 é um grupo alquila C3.4 são preferidos, compostos, nos quais R1 é propila, isopropila ou n-butila são mais preferidos, e compostos, nos quais R1 é um grupo n- butila são ainda mais preferidos.

Compostos, nos quais R2 é um grupo alquila C3.4 são preferidos, compostos, nos quais R2 é propila, isopropila ou n-butila são mais preferidos, e compostos, nos quais R2 é um grupo n-butila são ainda mais preferidos.

Compostos, nos quais R1 e R2 são um mesmo grupo são

preferidos.

De um modo concreto, para o composto da fórmula geral [1], o

composto que se segue é preferido. [Fórmula Química 2]

^O"0' ^ Xvr v

H2N N—' ^jf

A seguir, os métodos de manufatura dos compostos da presente invenção são explicados. Os compostos da presente invenção são produzidos através da

combinação de métodos convencionais per se, por exemplo, podem ser manufaturados através dos métodos expostos a seguir. [Método de Manufatura]

HH yr-Λ ^ ^ / y _ _ /=V HH HJf x^7 v^ ^ HH,

O

^ H L2

em que R1 e R2 possuem os mesmos significados que acima. Composto da fórmula geral [1] pode ser manufaturado

submetendo-se o composto da fórmula [2] e o derivado reativo para a reação de alcoxicarbonilação, na presença ou ausência de base. Para um solvente usado nesta reação, ele não está limitado, de um modo particular, desde que ele não afete a reação de um modo adverso, por exemplo, amidas, tais que N, N-dimetilformamida, N, N- dimetilacetamida e l-metil-2- pirrolidona; hidrocarbonetos halogenados, tais que diclorometano, clorofórmio e dicloroetano; hidrocarbonetos aromáticos, tais que benzeno, tolueno e xileno; éteres, tais que dioxano, tetraidrofurano, anisol, éter dimetílico de di(etileno glicol), éter dietílico de di(etileno glicol) e éter monometílico de etileno glicol; nitrilas, tais que acetonitrila; sulfóxidos, tais que sulfóxido de dimetila; cetonas, tais que acetona e 2-butanona; ésteres, tais que acetato de etila; ácidos carboxílicos, tais que o ácido acético; heteroaromáticos, tais que piridina e água, são considerados, e estes podem ser misturados e a mistura pode ser usada.

Para um derivado reativo usado nesta reação, por exemplo, ésteres clorocarbônicos, tais que cloroformato de propila, cloroformato de isopropila, cloroformato de butila e cloroformato de isobutila; ésteres ativos, tais que propil carbonato de 4-nitrofenila, isopropil carbonato de 4-nitrofenila, 4-nitrofenilcarbonato de butila e 4-nitrofenilcarbonato de isobutila sã fornecidos. Estes derivados reativos podem ser usados após a preparação in situ, sem isolamento. Para uma base usada nesta reação, se for desejado, por

exemplo, alcóxidos metálicos, tais que metóxido de sódio, etóxido de sódio, terc-butóxido de potássio e terc-butóxido de sódio; bases inorgânicas, tais que hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidrogeno carbonato de sódio, carbonato de sódio, carbonato de potássio, hidreto de sódio e hidreto de potássio e bases orgânicas, tais que trietil amina, N,N-diisopropiletilamina, 1, 8-diazabiciclo [5.4.0]undec-7-eno (DBU) e piridina podem ser considerados.

A quantidade do derivado reativo e da base usada é de 2-100 vezes mol por aquela do composto da fórmula [2] e, de um modo preferido, de 2-10 vezes mol. Esta reação pode ser executada em de -20 a 100°C, de um modo preferido em de 0 a 50°C, durante de 1 minuto a 24 horas.

Para um composto no processo de manufatura acima descrito, solvatos, hidratos, e vários tipos de cristais podem ser usados.

O composto da fórmula [2], que uma matéria prima de

produção da presente invenção, é manufaturado através da combinação de métodos convencionais per se, por exemplo, ele pode ser manufaturado através dos métodos como descritos no Documento de Patente 4.

Exemplos dos agentes antifungicos azol, usados na presente invenção, incluem os agentes antifungicos triazol, tais que fluconazol, fosfluconazol, itraconazol, voriconazol, posaconazol, ravuconazol, BMS- 379224, BAL- 8557 e CS - 758, assim como agentes antifungicos imidazol, tais que cetoconazol, miconazol, bifonazol, lanoconazol e luliconazol.

Exemplos preferidos dos agentes antifungicos incluem os agentes antifungicos triazol, tais que fluconazol, fosfluconazol, itraconazol, voriconazol, posaconazol, ravuconazol, BMS - 379224, BAL -8557 e CS - 758. São mais preferidos fluconazol, fosfluconazol, voriconazol e itraconazol, e são ainda mais preferidos fluconazol e voriconazol.

Exemplos dos agentes antifungicos polieno, usados na presente invenção, incluem, por exemplo, anfotericina B e as formulações lipossômicas dos mesmos (por exemplo, Abelcet (marca registrada) ou Ambisome (marca registrada)), nistatina, tricomicina, SPK- 843 e pimaricina.

Exemplos preferidos dos agentes antifungicos polieno incluem anfotericina B e as formulações lipossômicas dos mesmos. Exemplos dos agentes antifungicos candina, usados na

presente invenção, incluem, por exemplo, micafungina, caspofungina, anidulafungina e aminocandina.

Exemplos preferidos dos agentes antifungicos candina usados incluem micafungina. Exemplos dos agentes antifungicos fluoropirimidina, usados na presente invenção, incluem, por exemplo, flucitosina.

A via de administração do derivado fenilamidina ou do sal do mesmo representado pela fórmula [1] não está limitada de um modo especial, e o derivado de fenilamidina ou o sal do mesmo podem ser administrados através de via intravenosa, oral, intramuscular, subcutânea ou através de alguma outra via de administração. Além disso, o derivado fenilamidina ou o sal do mesmo, representado pela fórmula geral [1] pode ser também administrado de um modo simultâneo, separado, ou em uma ordem específica, com os agentes antifungicos azol, agentes antifungicos polieno, agentes antifungicos candina e agentes antifungicos fluoropirimidina.

A composição farmacêutica da presente invenção exibe uma excelente ação contra fungos, tais que Candida, Cryptococcus e Aspergillus. A composição farmacêutica da presente invenção exibe, de um modo especial, uma ação excelente contra Candida, tal que Candida albicans, Candida glabrata, Candida guilliermondii, Candida Kefyr, Candida Krusei, Candida parapsilosis, Candida Stellatoidea, Candida tropicalis e Candida lusitaniea; Cryptococcus, tais que Cryptococcus neoformans; Aspergillus, tal que Aspergillus clavatus, Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus terreus, Aspergillus versicolor e Aspergillus resrictus.

A composição farmacêutica da presente invenção é efetiva na prevenção e no tratamento de uma variedade de infecções fungicas, tais que candidose, cryptoccosis e aspergilosis. Com a composição farmacêutica da presente invenção,

infecções fungicas mais sérias podem ser tratadas. Em adição, como uma ação antifungica forte é exibida, mesmo se a quantidade de cada um dos agentes que são administrados for reduzida, os efeitos colaterais dos respectivos agentes podem ser reduzidos. Quando as composições farmacêuticas da presente invenção forem usadas, auxiliares farmacêuticos, tais que excipientes, veículos e agentes de diluição, os quais são usados pelas preparações farmacêuticas, podem ser misturados usualmente de um modo apropriado, e estes podem ser administrados, através de métodos convencionais em morfologia oral ou parenteral, tais que comprimidos, formulações encapsuladas, pós, xaropes, grânulos, pílulas, agentes de suspensão, emulsões, drogas líquidas, formulações de pó, supositórios, lavagens oftálmicas, gotas nasais, gotas otológicas, adesivos, unguentos ou injeções. Em adição, métodos de medicação, as dosagens e a quantidade de medicação podem ser selecionados, de um modo apropriado, de acordo a idade, o peso corpóreo e os sintomas de um paciente. De um modo usual, para um adulto, uma dosagem de 0,01 a 1000 mg/ kg pode ser dividida em várias porções e administrada, uma vez ao dia, de uma a várias vezes, através de administração oral ou parenteral (por exemplo, injeção, infusão contínua e administração ao reto local). EXEMPLO

A presente invenção será agora descrita, em maiores detalhes, através dos Exemplos de Teste. No entanto, a presente invenção não está limitada a estes exemplos. As respectivas abreviações possuem os significados que se

seguem.

FLCZ: fluconazol; MCFG; micafungina; AMPH- B: anfotericina B; 5 -FC; flucitosina; VCZ; voriconazol.

O composto que se segue foi selecionado como o composto de teste. A fórmula estrutural química deste composto é ilustrada abaixo. [Fórmula Química 3]

Como agentes, foram selecionados fluconazol, micafungina, anfotericina Β, voriconazol e flucitosina. Exemplo de Teste 1: Teste in vivo (Candida)

A atividade in vivo foi avaliada em infecção sistêmica de murino causada por Candida albicans.

Camundongos (camundongos ICR machos de 4 semanas de

idade (em infecção) 5 camundongos por grupo) receberam, por via intraperitonial, 200 mg/ kg de ciclofosfamida 4 dias antes da infecção e 100 mg/ kg no dia seguinte, após a infecção. Candida albicans TIMM 1623, que foram preparadas a partir de uma cultura noturna em uma placa de Dextrose Agar Sabouraud a 35°C, foram suspensos em solução salina fisiológica estéril. Após a contagem do número de células da suspensão com um microscópio biológico, a suspensão foi diluída com uma solução salina fisiológica estéril, de um modo a fornecer a solução de inóculo.

A infecção sistêmica foi induzida em camundongos através de inoculação intravenosa de 0,2 ml da solução do inóculo ao interior da veia da cauda (2,6 χ 104 CFU/ camundongo).

O composto de teste foi dissolvido em uma pequena quantidade de 0,1 mol/1 de ácido clorídrico, e a solução foi diluída com água esterilizada, de modo a preparar concentrações predeterminadas. Fluconazol (uma marca comercial: FLANOS, solução para

gotejamento intravenoso, 100 mg, produzida por Toyama Chemical Co., Ltd.) foi diluída com água esterilizada, de um modo a preparar soluções de fluconazol de concentrações predeterminadas.

Micafungina sódica (um nome comercial: Funguard, 50 mg para infusão, produzida por Astellas Pharma Inc.) foi dissolvida em solução salina fisiológica estéril, de um modo a preparar soluções de micafungina de concentrações predeterminadas.

Anfotericina B para a injeção (uma marca comercial: FUNGIZONE, produzida por Bristol Pharmaceutical Ltd. foi dissolvida em 5% de glicose, de modo a preparar uma solução de anfotericina B de uma concentração predeterminada.

O composto de teste (0,25 e 0,5 mg/ kg) e fluconazol (0,25 e 0,5 mg/ kg) foram administrados por via oral. Micafungina (0,125 e 0,25 mg/ kg) e anfotericina B (0,1 mg/ kg) foram administrados por via subcutânea. Estas administrações foram conduzidas uma vez, 2 horas após a infecção, e então uma vez ao dia durante os 6 dias seguintes, totalizando 7 vezes.

Por um lado, cada um dos agentes foi administrado isoladamente, por outro lado, cada um dos agentes foi administrado após o composto de teste ter sido administrado.

A eficácia foi avaliada com base na taxa de sobrevivência no 21° dia após a infecção.

Os resultados da terapia combinada do composto de teste e de fluconazol contra a infecção de Candida albicans são apresentados na Tabela 1, e os resultados da terapia combinada do composto de teste e de micafungina são apresentados na Tabela 2 e os resultados da terapia combinada do composto de teste e de anfotericina B são apresentados na

Tabela 3. [TABELA 1]

Composição de administração Composto de teste 0,5mg/kg FLCZ 0,25mg/kg FLCZ 0,5mg/kg Composto de teste 0,25mg/kg FLCZ 0,25 mg/kg Taxa de sobrevivência 0 20 40 60 [TABELA 2] Composição de administração Composto de teste 0,5 mg/kg MCFG 0,125mg/kg MCFG 0,25mg/kg Composto de teste 0, 5 mg/kg MCFG 0,125mg/kg Taxa de sobrevivência 0 20 40 80 [TABELA 3] Composição de administração Composto de teste 0,5mg/kg MCFG 0,125mg/kg Composto de teste 0, 25 mg/kg AMPH-B 0,1 mg/kg Taxa de sobrevivência 0 20 80

Na infecção sistêmica de murino causada por Candida albicans, a administração combinada do composto de teste e fluconazol, composto de teste e micafiingina, e o composto de teste e anfotericina B, exibiu efeitos terapêuticos excelentes. Exemplo de Teste 2: Teste in vivo (Aspergillus) A atividade in vivo foi avaliada em infecção sistêmica de

murino, causada por Aspergillus fumigatus.

Camundongos (camundongos ICR machos de 4 semanas de idade (em infecção), 5 camundongos por grupo), receberam, através de via intraperitonial, 200 mg/ kg de ciclofosfamida 4 dias antes da infecção e 100 mg/ kg no dia seguinte após a infecção. A suspensão de conídeos de Aspergillus fumigatus IFM 46895 foi diluída com solução salina fisiológica estéril, com tendo 0,05% de Tween 80 (manufaturado por Difco Laboratories) em solução salina estéril, de um modo a fornecer a solução de inóculo. A infecção sistêmica foi induzida em camundongos através de inoculação intravenosa de 0,2 ml da solução de inóculo ao interior da veia da cauda (1,6 χ 105 CFU/ camundongo).

O composto de teste foi dissolvido em uma pequena quantidade de 0,1 mol/ 1 de ácido clorídrico, e a solução foi diluída com água esterilizada, de um modo a preparar as concentrações predeterminadas. Flucitosina (produzida por Sigma Company) foi suspensa em

0,5% de metil celulose líquida, de um modo a preparar as concentrações predeterminadas para a administração.

Voriconazol (um nome comercial: Vfend, 200 mg para o uso intravenoso, produzido por Pfizer Inc.) foi diluído com água esterilizada de um modo a preparar soluções de voriconazol de concentrações predeterminadas para a administração.

O composto de teste (1 e 3 mg/ kg), flucitosina (50 a 250 mg/ kg e voriconazol (5 e 10 mg/ kg) foram administrados por via oral. As administrações foram conduzidas uma vez 2 horas após a infecção e então uma vez ao dia durante os 6 dias seguintes, totalizando 7 vezes.

Por um lado, cada um dos agentes foi administrado isoladamente, por outro lado, cada um dos agentes foi administrado imediatamente a pós o composto de teste ter sido administrado. A eficácia foi avaliada com base na taxa de sobrevivência no 21° dia após a infecção.

Os resultados da terapia combinada do composto de teste e de flucitosina contra a infecção de Aspergillus fumigatus são apresentados na Tabela 4, e os resultados da terapia combinada do composto de teste e de voriconazol são apresentados na Tabela 5.

[TABELA 4]

Composição de Composto de teste 5 -FC Composto de teste administração 0,3mg/kg 0, 250mg/kg 0, 5 mg/kg MCFG 0,125 mg/kg Taxa de 20 0 80 sobrevivência [TABELA 5] Composição de Composto de teste MCFG MCFG Composto de teste 1 mg/kg administração 1 mg/kg 3mg/kg lOmg/kg VCZ 5mg/kg Taxa de 0 20 0 40 sobrevivência

Em uma infecção sistema de murino causada por Aspergillus

fumigatus, a administração combinada do composto de teste e flucitosina, do composto de teste e voriconazol exibiu excelentes e feitos terapêuticos. De um modo especial, flucitosina, como usual, não possui quase efeito contra Aspergillus fumigatus. No teste acima, 250 mg/ kg de administração de flucitoisina não tiveram efeito terapêutico. No entanto, a administração combinada de um quinto de 250 mg/kg de flucitosina e do composto de teste apresentaram um efeito antifungicida notavelmente excelente. Exemplo de Teste 3: Teste in vivo (Cryptococcus)

A atividade in vitro foi avaliada em infecção sistemática de murino, causada por Cryptococcus neoformans.

Camundongos (camundongos ICR machos de 4 semanas de idade (em infecção), 5 camundongos por grupo) receberam, por via intraperitonial, 200 mg/ kg de ciclofosfamida 4 dias antes da infecção e 100 mg/ kg no dia seguinte após infecção. Células de Crytococcus neoformans ATCC90112, que foram preparadas a partir de uma cultura noturna em uma placa de Dextrose Agar Sabouraud a 35°C, foram suspensas em uma solução salina fisiológica estéril. Após a contagem do número de células da suspensão com um microscópio biológico, a suspensão foi diluída com solução salina fisiológica estéril, de um modo a fornecer uma solução de inóculo. A infecção sistemática foi induzida em camundongos, através de injeção intravenosa de 0,2 ml da solução de inóculo ao interior da veia da cauda (8,5 χ IO4 CFU/ camundongo).

O composto de teste foi dissolvido em uma pequena quantidade de 0,1 mol/ 1 de ácido clorídrico, e a solução foi diluída com água esterilizada de um modo a preparar as concentrações predeterminadas.

Fluconazol (um nome comercial: FLANOS, solução de gotejamento intravenosa, 100 mg, produzida por Toyama Chemical Co., Ltd.) foi diluída com água esterilizada de um modo a preparar soluções de fluconazol de concentrações predeterminadas.

O composto de teste (0,5 e 1 mg/ kg) e fluconazol (20 mg/ kg) foram administrados por via oral. As administrações foram conduzidas uma vez 2 horas após a infecção e então uma vez ao dia durante os 6 dias seguintes, totalizando 7 vezes.

Por um lado, cada um dos agentes foi administrado isoladamente, por outro lado cada um dos agentes foi administrado imediatamente após o composto de teste ter sido administrado. A eficácia foi avaliada com base na taxa de sobrevivência no 21° dia após a infecção.

Os resultados da combinação do composto de teste e de fluconazol contra a infecção causada por Cryptococcus neoformans são conhecidos na Tabela 6. [TABELA 6]

Composição de Composto de teste FLCZ Composto de teste 0, 5 mg/kg administração 1 mg/kg 20mg/kg FCZ 20mg/kg Taxa de 0 20 60 sobrevivência

Em infecção sistemática de murino causada por Cryptococcus

neoformans, a administração combinada do composto de teste e de fluconazol exibiriam excelentes efeitos terapêuticos.

Em adição, o composto de teste não apresentou toxicidade de

modo algum quando ele foi administrado, por via oral de um modo consecutivo, a camundongos, que foram usados nos testes acima, a 25 mg/ kg durante 2 semanas, e o composto de teste demonstrou alta segurança.

Fica evidente a partir dos resultados acima, que a combinação do derivado de fenilamidina ou do sal do mesmo representado pela fórmula geral [1] com vários agentes antifungicos ou os similares, exibe atividade antifungica sinérgica e efeitos de tratamento, e é efetivo no tratamento de infecções fungicas causadas por fungos patógenos. [Preparação]

A seguir, a presente invenção será agora descrita, em maiores

detalhes, com Exemplos de Referência e Exemplos. No entanto, a presente invenção não está limitada a estes exemplos.

A razão de mistura no eluente é através da razão de capacidade e o veículo para a cromatografia de coluna de sílica gel é B. W, sílica gel, BW- 127ZH (Fujisilysia Chemical Ltd). Exemplo de Referência 1

A uma solução de 10 ml de tetraidrofurano 0,75 g de propanol g e 1,90 ml de trietilamina, foi adicionada, em gotas, uma solução de 15 ml de tetraidrofurano de 2,50 g de cloroformato de 4-nitrofenila, sob resfriamento com gelo. Acetato de etila e água foram adicionados à mistura da reação, após a agitação em temperatura ambiente durante 20 minutos. Após a camada orgânica ter sido separada, coletada e lavada com água e uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada de um modo seqüencial, a camada orgânica foi secada com sulfato de sódio, e isto seguido por destilação do solvente.

Após o hexano ter sido adicionado ao resíduo, a filtração de substâncias insolúveis e a remoção de solvente, sob pressão reduzida, forneceu propil 2, 58 g de carbonato de 4-nitrofenila como um óleo amarelo claro.

RMN 1H (CDCl3) valor δ: 1,03 (3 Η, t, J = 7, 4 Hz), 1,71 - 1,85 (2 Η, m), 4,26 (2H, t, J= 7,4 Hz), 1, 71 - 1, 85 (2 H, m), 4,26 (2 H, t, J = 6, 7 Hz), 7,39 (2 H, d, J = 9,0 Hz), 8, 28 (2 H, d, J = 9, 0 Hz) Exemplo de Referência 2

A uma solução de 30 ml de tetraidrofurano de 3,00 g de 4- nitrofenol e 3,31 ml de trietilamina, cloroformato de isopropila 2, 46 ml foi adicionado, em gotas, sob resfriamento com gelo. Acetato de etila e água foram adicionados à mistura da reação, após agitação na mesma temperatura durante 10 minutos. Após a camada orgânica ter sido separada, coletada e lavada com uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada, a camada orgânica foi secada com sulfato de magnésio anidro, seguido pela destilação do solvente sob pressão reduzida. Após o resíduo ter sido dissolvido em 50 ml de acetato de etila e lavado com 5% de solução aquosa de carbonato de potássio e uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada de um modo seqüencial, a camada orgânica foi secada com sulfato de magnésio anidro e isto foi seguido pela destilação do solvente, sob pressão reduzida, de um modo a fornecer 3,00 g de isopropil carbonato de 4-nitrofenila, como um sólido amarelo.

RMN 1 H (CDCl3) valor δ: 1, 41 (6H, d, J = 6, 3 Hz), 4, 96 - 5,07 (1 H, m), 7,36 - 7, 41 (2 H, m), 8,25 - 8,30 (2 H, m). Exemplo de Referência 3 l _^ 1 /=\

-NO2

A uma solução de 30 ml de tetraidrofurano de 3,00 g de 4- nitrofenol e 3,31 ml de trietilamina, 2, 75 ml de cloroformato de butila foram adicionado, em gotas, sob resfriamento com gelo. Acetato de etila e água foram adicionados à mistura da reação, após a agitação na mesma temperatura durante 10 minutos. Após a camada orgânica ter sido separada, coletada e lavada com uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada, a camada orgânica foi secada com sulfato de magnésio anidro e isto foi seguido pela destilação do solvente, de modo a fornecer 4,60 g de butil carbonato de 4- nitrofenila como um óleo amarelo claro. RMN 1H (CDCl3) valor δ: 0,99 (3 Η, t, J = 7, 4 Hz), 1,41 - 1,

52 (2H, m), 1, 70 - 1, 80 (2 H, m), 4, 30 (2H< t, J = 6, 6 Hz), 7,3 6 - 7,41 (2 H, m), 8, 26-8,31 (2H, m). Exemplo de Referência 4

^^cAci ** ^0XOHQkno2

De um modo similar ao exemplo de referência 3, 5,63 g de carbonato de 4-nitrofenila foram obtidos como um óleo amarelo claro, a partir de 3,00 g de 4-nitrofenol e 2, 80 ml de cloroformato de isobutila.

RMN Ή (CDCl3) valor δ: 1,02 (6H, d, J = 6, 6 Hz), 2,02 - 2,13 (1 H, m), 4,08 (2H, d, J = 6, 6 Hz), 7, 39 (2 H, d, J= 9,1 Hz), 8, 28 (2 H, d, J = 9,1 Hz). Exemplo 1

jo—o—

A uma solução de 15 ml de N, N-dimetil formamida de 1, 71 g de carbonato de 4-nitrofenilpropila, foram adicionados 1, 50 g de 4-{3-[4- (3- {4-[amino (imino) metil] fenóxi} propil)-l-piperidinil] propóxi}benzamidina

,NH

κ

NH„ em temperatura ambiente, e a solução foi agitada na mesma temperatura durante 4 horas. Clorofórmio e água foram adicionados à mistura da reação. Após a camada orgânica ter sido separada, coletada e lavada com água, 5% de solução aquosa de carbonato de potássio duas vezes e uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada de um modo seqüencial, a camada orgânica foi secada com sulfato de magnésio anidro, e isto foi seguido pela destilação do solvente. O resíduo obtido foi purificado com cromatografia de coluna de sílica gel [eluente, clorofórmio: metanol = 4: 1], O sólido obtido foi dissolvido em clorofórmio após a solução ter sido lavada com uma solução aquosa a 5% de carbonato de potássio uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada de um modo seqüencial, a solução foi secada com sulfato de magnésio anidro, e isto foi seguido pela destilação do solvente, de um modo a prover 1,25 g de 4-{3-[4-(3-{4-[amino (propóxicarbonilimino) metil)fenóxi}propil)-l- piperidinil] propóxi}-N'-(propoxicarbonil) benzamidina como um sólido branco.

RMN 1H (CDCl3) valor δ: 0, 99 (6H, t, J = 7,4 Hz), 1,22-1, 45 (5H, m), 1, 66 - 1, 86 (8H, m), 1,90 -2,04 (4H, m), 2, 46 -2, 54 (2 H, m), 2, 90 - 2,98 (2 H, m), 3, 99 (2 H, t, J = 6, 5 Hz), 4, 06 (2 H, t, J = 6, 3 GHz), 4,11 (4 H t, J = 7,0 Hz), 6,88 - 6,96 (4 H, m), 7,82 - 7, 88 (4 H, m). Exemplo 2

jo-^-o—ο-ς

De um modo similar ao Exemplo 1, 4-{3-[4-(3-{4- [amino(isopropóxicarbonilimino) metil] fenóxi} propil)-1-piperidinil] propóxi}-N'-(isopropoxicarbonil) benzamidina, 1,35 g de um sólido branco, foram obtidos a partir de 1,71 g de isopropil carbonato de 4-nitrofenila e 1,50 g de 4-{3-[4-(3-{4[amino(imino)metil] fenóxi}propil)-1 -piperidinil] propóxi} benzamidina. RMN 1H (CDCl3) valor δ: 1,20 -1,46 (5H, m), 1,34 (12 Η, d, J = 6,3 Hz), 1,56 -1,86 (4 Η, m), 1,88 - 2,04 (4 Η, m), 2,46 - 2,54 (2 Η, m), 2,90 - 2,98 (2 Η, m), 3,99 (2 Η, t, J = 6, 5 Hz), 4,06 (2 Η, t, J = 6,3 Hz), 4,94 - 5,04 (2 Η, m), 6,88 - 6, 96 (4 Η, m), 7, 80 - 7, 88 (4 Η, m). Exemplo 3

De um modo similar ao Exemplo 1, 4-{3-[4-(3-{4-{4-[amino (butoxicarbonilimino)metil]fenóxi}propil) -1- npiperidinil}propóxi}-N'- (butoxicarbonil)benzamidina, 1,39 g de um sólido branco, foram obtidos a partir de 1,82 g de butil 4-carbonato de nitrofenila de 4-nitrofenila e 1,50 g de 4-{3-[4-(3-{4-[amino(imino)metil] fenóxi} propil)-l-piperidinil] propóxi} benzamidina.

RMN 1H (CDCl3) valor δ: 0, 95 (6H, t, J = 7,3 Hz), 1,20 - 1,50 (9H, m), 1,60 - 2,05 (1 H, m), 2,45 - 2,54 (2 H, m),

2,90 -3,00 (2 H, m), 3,99 (2H, t, J = 6, 6 Hz), 4, 06 (2 H, t, J = 6, 3 Hz), 4, 16 (4 H, t, J = 6, 8 Hz), 6,88 - 6, 96 (4 H, m), 7,82 - 7,88 (4H, m). Exemplo 4

A uma solução de 15 ml de Ν,Ν-dimetilformamida de 1,82 g isobutil carbonato de 4-nitrofenila, foram adicionados 4-{3-[4-(3-{4- [amino(imino)metil] fenóxi }propil)-1 -piperidiniljpropóxi} benzamidina foram adicionados em temperatura ambiente, e a solução foi reagida na mesma temperatura durante 127 horas. Clorofórmio e água foram adicionados à mistura da reação. Após a camada orgânica ter sido separada, coletada e lavada com água, 5% de solução aquosa de carbonato de potássio e uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada de um modo seqüencial, a camada orgânica foi secada com sulfato de magnésio anidro, e isto foi seguido pela destilação do solvente. O resíduo obtido foi purificado com cromatografia de coluna em sílica gel [eluente, clorofórmio: metanol = 4: 1]. O resíduo obtido foi dissolvido em clorofórmio, após a solução ter sido lavada com 5% de solução aquosa de carbonato de potássio e uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada de um modo seqüencial, a solução foi secada com sulfato de magnésio anidro, e isto foi seguido pela destilação do solvente para prover 4-{3-[4-(3-{4-[amino (isobutoxicarbonilimino) metil]fenóxi} propil)- 1- piperidinil] propóxi} - N'- (isobutoxicarbonil) benzamidina, 1,43 g como um sólido branco.

RMN 1H (CDCl3) valor δ: 0,99 (1 Η, d, J = 6,8 Hz), 1,20-1, 45 (5H, m), 1,55 - 2,12 (10 H, m) 2, 46 - 2, 53 (2 H, m), 2,90 - 3,00 (2H, m), 3, 94 (4H, d, J = 6,8 Hz), 3,99 (2H, t, J = 6,5 Hz), 4, 06 (2 H, t, J = 6, 3 Hz), 6, 88 - 6, 96 (4 H, m), 7,80 - 7,90 (4 H,m). Exemplo Farmacêutico 1

100 mg do composto obtido no Exemplo 3 e 18 g de cloreto de sódio foram adicionados a 1, 8 1 de água para injeção. Ele foi ajustado para o pH 4 com ácido clorídrico e dissolvido, e diluído até 2 1 do volume total com água para a injeção. A solução dissolvida foi filtrada através de um filtro de membrana de 0,22 μπι, e 100 ml da solução farmacêutica obtida foram compactados e vedados no interior de uma ampola para fornecer injeções. Exemplo Farmacêutico 2

500 mg do composto obtidos no Exemplo 3, 350 mg de lactose, 250 mg de amido de milho e 400 mg de celulose cristalina [uma marca comercial: CEOLUS PH101: Asahi Kasei Chemicals Corporation] foram misturados, 0,6 ml de solução aquosa de hidroxipropil celulose a 5% e água foram adicionados à mistura e a mistura foi amassada. Após a mistura obtida ter sido secada a 60°C, 100 mg de povidona cruzada [um nome comercial: Kollidon CL, BASF], 100 mg de ácido silícico anidro leve e 20 mg de estearato de magnésio foram adicionados à mistura e a mistura foi misturada. 175 mg da mistura foram formulados sob a forma de comprimidos circulares tendo um diâmetro de 8 mm, de um modo a fornecer comprimidos. Exemplo Farmacêutico 3

500 mg do composto obtido no Exemplo 3, 200 mg de lactose e 530 mg de amido de milho foram misturados, 0,6 ml de solução aquosa de hidroxipropil celulose a 5% e água foram adicionados à mistura e a mistura foi amassada. Após a mistura obtida ter sido secada a 60°, 70 mg de povidona cruzada [um nome comercial: Kollidon Cl, BASF], 180 mg de celulose cristalina [um nome comercial: CEOLUS PH302, Asahi Kasei Chemicals Corporation e 20 mg de estearato de magnésio foram adicionados à mistura, e a mistura resultante foi misturada. 150 mg da mistura foram compactados em uma cápsula de gelatina do tipo 3, de um modo a fornecer cápsulas. [Aplicabilidade Industrial]

A composição farmacêutica, que compreende o novo derivado de fenilamidina ou um sal do mesmo, e um ou mais agentes antifüngicos selecionados a partir de agentes antifungicos azol, agentes antifungicos polieno, agentes antifungicos candina, e agentes antifungicos fluoropirimidina, possui uma forte atividade antifúngica e é útil para o tratamento de infecções fungicas. O método para a combinação deste agentes antifungicos é útil como um excelente método de tratamento de infecções füngicas.

Claims

1. Composição farmacêutica para o tratamento de infecções fungicas, caracterizada pelo fato de que compreende um derivado de fenilamidina ou um sal do mesmo, representado por uma fórmula geral, [FÓRMULA QUÍMICA 1] <formula>formula see original document page 23</formula> em que R1 e R2 podem ser o mesmo ou diferentes, e representam um grupo alquila C3.4 opcionalmente substituído; e um ou mais agentes selecionados a partir de agentes antifungicos azol, agentes antifungicos polieno, agentes antifungicos candina, e agentes antifungicos fluoropirimidina.

2. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que R1 e R2 são os mesmos, e são um grupo alquila C3-4.

3. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que os agentes são um ou mais agentes selecionados a partir dos agentes antifungicos azol.

4. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que os agentes são um ou mais agentes selecionados a partir dos agentes antifungicos polieno.

5. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que os agentes são um ou mais agentes selecionados a partir de agentes antifungicos candina.

6. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que os agentes são um ou mais agentes selecionados a partir de agentes antifungicos fluoropirimidina.

7. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o agente antifungico azol é um agente antifungico triazol.

8. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que o agente antifungico triazol é fluconazol, fosfluconazol, voriconazol ou itraconazol.

9. Composição farmacêutica de acordo com as reivindicações 1, 2 ou 4, caracterizada pelo fato de que o agente antifungico polieno é anfotericina B ou formulações lipossômicas dos mesmos.

10. Composição farmacêutica de acordo com as reivindicações1, 2 ou 5, caracterizada pelo fato de que o agente antifungico candina é micafungina.

11. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que a infecção fungica é causada por um patógeno fungico selecionado a partir de Candida, Cryptococcus e Aspergillus.

12. Método de uso combinado para o tratamento de infecções fungicas causadas por patógenos fungicos, caracterizado pelo fato de que compreendem um derivado de fenilamidina ou um sal do mesmo, representado pela fórmula geral, [FÓRMULA QUÍMICA 2] <formula>formula see original document page 24</formula> em que R1 e R2 podem ser o mesmo ou diferentes, e representam um grupo alquila C3.4 opcionalmente substituído; e um ou mais agentes selecionados a partir de agentes antifungicos azol, agentes antifungicos polieno, agentes antifungicos candina e agentes antifungicos fluoropirimidina.

13. Método de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que R1 e R2 são o mesmo, e são um grupo alquila C3_4.

14. Método de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que os agentes são um ou mais agentes selecionados a partir de agentes antifungicos azol.

15. Método de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que os agentes são um ou mais agentes selecionados a partir de agentes antifungicos polieno.

16. Método de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que os agentes são um ou mais agentes selecionados a partir de agentes antifungicos candina.

17. Método de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que os agentes são um ou mais agentes selecionados a partir de agentes antifungicos fluoropirimidina.

18. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações12 a 14, caracterizado pelo fato de que o agente antifungico azol é um agente antifungico triazol.

19. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o agente antifungicida triazol é fluconazol, fosfluconazol, voriconazol ou itraconazol.

20. Método de acordo com as reivindicações 12, 13 ou 15, caracterizado pelo fato de que o agente antifungico polieno é anfotericina B ou formulações lipossômicas do mesmo.

21. Método de acordo com as reivindicações 12, 13 ou 16, caracterizado pelo fato de que o agente antifúngico candina é micafungina.

22. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações12 a 21, caracterizado pelo fato de que a infecção fungica é causada por um patógeno fungico selecionado a partir de Candida, Ciyptococcus e Aspergillus.