PT2070536E

PT2070536E - Composição farmacêutica que contém um derivado de fenilamidina e processo para utilização dessa composição farmacêutica em associação com um agente antifúngico

Info

Publication number: PT2070536E
Application number: PT07829080T
Authority: PT
Inventors: Hiroshi Nishikawa
Original assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Priority date: 2006-10-06
Filing date: 2007-10-03
Publication date: 2012-03-06
Also published as: DK2070536T3; CN101522195B; EP2070536B1; EP2070536A4; ZA200902053B; RU2429843C2; RU2009117207A; BRPI0719157A2; CA2664915C; SI2070536T1; JP5132569B2; CA2664915A1; NO20091101L; ATE538789T1; NZ575714A; JPWO2008044562A1; US8173157B2; CN101522195A; KR20090069317A; MX2009003533A

Description

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DESCRIÇÃO "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA QUE CONTÉM UM DERIVADO DE FENILAMIDINA E PROCESSO PARA UTILIZAÇÃO DESSA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA EM ASSOCIAÇÃO COM UM AGENTE ANTIFÚNGICO"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica que é útil no tratamento de infecções fúngicas causadas por agentes patogénicos fúngicos e que compreende um novo derivado de fenilamidina ou um seu sal, e um ou mais agente(s) tal como definido(s) na reivindicação 1.. Descreve--se também um processo de utilização do novo derivado de fenilamidina ou de um seu sal em associação com os agentes destinados ao tratamento de infecções fúngicas.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

As micoses profundas graves tais como candidiase invasiva podem muitas vezes ser uma doença fatal. No passado, considerou-se que o principal mecanismo protector por parte de um organismo hospedeiro contra fungos como os da espécie Cândida é a imunização não especifica por neutrófilos. Quando esse mecanismo protector actua normalmente há um escasso risco de ficar infectado com fungos. No entanto, nos últimos anos, o risco de padecer de micose profunda agravou-se devido ao elevado número de pacientes com doenças subjacentes que reduzem a função imunológica do organismo, tais como tumores malignos (em especial, tumores malignos hematopoiéticos como leucemia aguda ou linfoma maligno) e SIDA [Sindrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS)], à utilização frequente de agentes anticancerigenos ou imunossupressores, à utilização de grande quantidade de antibióticos antibacterianos ou de 2 hormonas esteróides, à utilização a longo prazo de hiperalimentação venosa central ou cateterização venosa e assim por diante (Documento 1 sobre Não Patente).

Os agentes utilizados para o tratamento de micoses profundas são muito poucos, quando comparados com os agentes antibacterianos utilizados, e incluem apenas anfotericina B, flucitosina, miconazol, fluconazol, fosfluconazol, itraconazol, voriconazol, micafungina e assim por diante.

Por outro lado, há uma necessidade crescente de agentes seguros e eficazes contra infecções fúngicas oportunistas causadas por agentes patogénicos fúngicos tais como Candida, Cryptococcus e Aspergillus.

Ao mesmo tempo que os agentes que se utilizam actualmente, por exemplo, a anfotericina B, apresentam uma acção fungicida extremamente acentuada, eles representam um problema em relação aos efeitos colaterais como a nefrotoxicidade, de tal modo que a sua utilização clinica é limitada. A flucitosina apresenta problemas de desenvolvimento de resistência. A micafungina apresenta actividade limitada contra o Cryptococcus. Actualmente utilizam-se mais frequentemente agentes azólicos como o fluconazol e o voriconazol devido ao seu equilíbrio entre eficácia e segurança, embora a sua acção fungicida seja inferior à da anfotericina B (Documentos 2 e 3 sobre Não Patentes).

Com objectivos como o de estimular os efeitos do tratamento utilizam-se processos para utilização em associação de agentes antifúngicos ou antimicóticos (Documento 4 sobre Não Patentes). A pesquisa está também a progredir na associação de agentes antifúngicos (Documentos 3 1, 2 e 3 sobre Patentes) . No entanto, o número de agentes a associar é limitado, o que significa que não se podem garantir os efeitos satisfatórios do tratamento.

Além disso, conhecem-se as actividades antifúngicas dos derivados de fenilamidina, (Documento 4 sobre Patentes).

Documento 1 sobre Patentes: Patente Japonesa No. 3288051 Documento 2 sobre Patentes: JP-A-11-504931 Documento 3 sobre Patentes: JP-A-2003-527314 Documento 4 sobre Patentes: Publicação da Patente de Invenção Internacional N°. W02006/003881 A Patente de invenção europeia EP 1 481 966 AI descreve derivados de arilamidina e agentes antifúngicos que os contêm.

Documento 1 sobre Não Patentes: Rinsho to Biseibutsu (Clinics and Microorganisms), Vol. 17, p. 265-266, 1990 Documento 2 sobre Não Patentes: Rinsho to Biseibutsu (Clinics and Microorganisms), Vol. 21, pp 277-283, 1994 Documento 3: Rinsho to Biseibutsu (Clinics and Microorganisms), Vol. 30, pp 595-614, 2003 Documento 4 sobre Não Patentes: Diagnóstico e guideline do tratamento de micose profunda, PP. 20, 29, Ishiyaku Publishers, Inc., 2003 M.H. Beers: "The Manual Merck" 1999, Merck and Co., N.J. (USA), páginas 1209-1213 relata doenças fúngicas sistémicas e menciona inter alia os agentes antifúngicos itraconazol, fluconazol e voriconazol. 4

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

PROBLEMA A SER ESCLARECIDO PELA INVENÇÃO Úteis são uma composição farmacêutica que seja eficaz no tratamento de infecções por fungos e que apresente uma forte actividade antifúngica não obstante alguns efeitos secundários, e um processo para utilização de agentes antifúngicos em associação.

MEIOS PARA RESOLVER 0 PROBLEMA

Nessa situação, como resultado de estudo intensivo, os presentes inventores observaram que uma composição farmacêutica que compreenda um derivado de fenilamidina ou um seu sal, representado pela fórmula geral [1] que é um novo composto: [Fórmula Química 1]

na qual os símbolos R1 e R2 são iguais, e representam um grupo n-butilo; e um ou mais agente (s) escolhido(s) entre agentes antifúngicos triazólicos, o agente antifúngico polieno anfotericina B, o agente antifúngico equinocandina micafungina e a flucitosina o agente antifúngico derivado da fluoropirimidina exibe uma intensa actividade antifúngica e é útil no tratamento de infecções fúngicas, e que um processo para utilização em associação desses agentes antifúngicos é útil no tratamento de infecções fúngicas, chegando assim à presente invenção. 5

EFICÁCIA DA INVENÇÃO A composição farmacêutica que compreende o novo derivado de fenilamidina ou um seu sal, e um ou mais agentes escolhidos entre agentes antifúngicos azólicos, agentes antifúngicos polienos, agentes antifúngicos equinocandinas e agentes antifúngicos fluoropirimidinas, exibe intensa actividade antifúngica e é útil no tratamento de infecções fúngicas. 0 processo para utilização em associação desses agentes antifúngicos é útil como um excelente processo de tratamento de infecções fúngicas.

MELHOR FORMA DE REALIZAR A INVENÇÃO

Seguidamente descrever-se-á a presente invenção mais pormenorizadamente.

Na presente memória descritiva, salvo referência contrária, um átomo de halogéneo refere-se a um átomo de flúor, um átomo de cloro, um átomo de bromo, ou um átomo de iodo; e um grupo alquilo C3-4 significa propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo e t-butilo.

Os exemplos dos sais do composto representado pela fórmula geral [1] incluem os sais de ácidos minerais, tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico e ácido sulfúrico; os sais de ácidos carboxílicos orgânicos, tais como ácido succínico, ácido maleico e ácido fumárico; os sais de ácidos sulfónicos como ácido metanossulfónico, ácido benzenossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácido mesitilenossulfónico e ácido naftalenossulfónico. 6

Os sais preferidos do composto representado pela fórmula geral [1] incluem sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacológico.

Nos compostos da fórmula geral [1] utilizados na presente invenção, os compostos preferidos são os compostos em que o símbolo R1 representa um grupo n-butilo e em que o símbolo R2 representa um grupo n-butilo.

Especificamente, para o composto da fórmula geral [1], utiliza-se o seguinte composto.

[Fórmula Química 2]

Seguidamente, apresentam-se os processos de fabrico dos compostos da presente invenção.

Os compostos da presente invenção fabricam-se mediante a associação de processos convencionais per se, por exemplo, podem fabricar-se pelos processos apresentados seguidamente.

[Processo de fabrico]

em que os símbolos R1 e R2 têm os significados definidos antes. 7 0 composto da fórmula geral [1] pode fabricar-se submetendo o composto de fórmula [2] e o derivado reactivo a reacção de alcoxicarbonilação na presença ou ausência de uma base.

No que respeita ao solvente utilizado nessa reacção, não limitado contanto que não influencie desfavoravelmente a reacção, são permitidos por exemplo amidas como a N,N-dime-tilformamida, a N,N-dimetilacetamida e a l-metil-2-pirrolido-na; hidrocarbonetos halogenados como diclorometano, clorofórmio e dicloroetano; hidrocarbonetos aromáticos como benzeno, tolueno e xileno; éteres como dioxano, tetra-hidro-furano, anisol, éter di(etilenoglicol)dimetilico, éter di(etilenoglicol)dietilico e éter etilenoglicol monometílico; nitrilos como acetonitrilo; sulfóxidos como sulfóxido de dimetilo; cetonas como acetona e 2-butanona; ésteres como acetato de etilo, ácidos carboxilicos como ácido acético; heteroaromáticos como piridina e água, podendo esses serem mistos utilizando-se a mistura.

No que respeita ao derivado reactivo utilizado nessa reacção, são permitidos por exemplo, ésteres clorocarbónicos como cloroformato de propilo, cloroformato de isopropilo, cloroformato de butilo e cloroformato de isobutilo; ésteres activos como propilcarbonato de 4-nitrofenilo, isopropilcarbonato de 4-nitrofenilo, 4-nitrofenilcarbonato de butilo e 4-nitrofenilcarbonato de isobutilo. Esses derivados reactivos podem utilizar-se após a preparação in situ sem isolamento.

No que respeita à base utilizada nessa reacção por opção, são permitidas por exemplo, alcóxidos de metais como metóxido de sódio, etóxido de sódio, ter-butóxido de potássio e ter-butóxido de sódio; bases inorgânicas como hidróxido de 8 sódio, hidróxido de potássio, bicarbonato de sódio, carbonato de sódio, carbonato de potássio, hidreto de sódio e hidreto de potássio e bases orgânicas como trietilamina, N,N-diiso-propiletilamina, 1, 8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) e piridina. As quantidades utilizadas do derivado reactivo e da base são 2 a 100 vezes a quantidade molar do composto da fórmula [2], e são de preferência 2 a 10 vezes a quantidade molar.

Essa reacção pode realizar-se a uma temperatura entre -20 e 100 °C, de preferência entre 0 e 50 °C durante um período de 1 minuto a 24 horas.

Para um composto obtido pelo processo de fabricação descrito antes, podem utilizar-se solvatos, hidratos e diversos tipos de cristais. O composto de fórmula [2], que constitui a matéria-prima da produção da presente invenção fabrica-se mediante uma associação de processos convencionais per se, por exemplo, pode fabricar-se pelos processos descritos no Documento 4 sobre Patente.

Exemplos de agentes antifúngicos triazólicos são fluconazol, fosfluconazol, itraconazol, voriconazol, posaconazol, ravuconazol, BMS-379224, BAL-8557 e CS-758.

Preferem-se o fluconazol, o fosfluconazol, o voriconazol e o itraconazol, preferindo-se mais o fluconazol e o voriconazol.

Os agentes antifúngicos polienos utilizados na presente invenção são a anfotericina B e suas formulações lipossomais 9 (por exemplo, Abelcet (nome comercial) ou AmBisome (nome comercial)). 0 Agente antifúngico ou antimicótico das equinocandinas utilizado na presente invenção é a micafungina. 0 agente antifúngico fluoropirimidina utilizado na presente invenção é a flucitosina. A via de administração do derivado de fenilamidina ou do seu sal representado pela fórmula geral [1] não é especialmente restrita, podendo o derivado de fenilamidina ou o seu sal administrar-se por via intravenosa, oral, intramuscular, subcutânea ou por alguma outra via de administração. Além disso, o derivado de fenilamidina ou o seu sal representado pela fórmula geral [1] pode também administrar-se simultaneamente, separadamente, ou em uma ordem especifica, com os agentes antifúngicos azólicos, os agentes antifúngicos polienos, os agentes antifúngicos equinocandinas e os agentes antifúngicos fluoropirimidina. A composição farmacêutica da presente invenção apresenta uma excelente acção contra fungos como Candida, Cryptococcus e Aspergillus. A composição farmacêutica da presente invenção apresenta especialmente excelente acção contra Candida como Candida albicans, Candida glabrata, Candida guilliermondii, Candida kefir, Candida krusei, Candida parapsilosis, Candida stellatoidea, Candida tropicalis e Candida lusitaniae; Cryptococcus como Cryptococcus neoformans; Aspergillus como Aspergillus clavatus, Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus terreus, Aspergillus versicolor e Aspergillus restrictus. 10 A composição farmacêutica da presente invenção é eficaz na prevenção e no tratamento de diversas infecções fúngicas, como candidiase, criptococose e aspergilose.

Com a composição farmacêutica da presente invenção, podem tratar-se mais infecções fúngicas graves. Além disso podem reduzir-se os efeitos secundários dos respectivos agentes, visto que exibe uma forte acção antifúngica mesmo que a quantidade administrada de cada um dos agentes seja reduzida.

Quando se utilizam as composições farmacêuticas da presente invenção, podem misturar-se normalmente de um modo adequado adjuvantes farmacêuticos como excipientes, veículos e diluentes, os quais se utilizam nas preparações farmacêuticas, podendo esses adjuvantes administrar-se por processos convencionais destinados à via oral ou parentérica sob a forma de comprimidos ou cápsulas ("tablets" ou "encapsulated formulations" ou "pills") , pós, xaropes, granulados, agentes de suspensão, emulsões, medicamentos líquidos, formulações em pó, supositórios, medicamentos para lavagens oculares, gotas nasais, gotas para utilização nos ouvidos, adesivos, pomadas ou injecções. Além disso, podem escolher-se adequadamente métodos de tratamento médico, doses e o número de tratamentos de acordo com a idade, o peso corporal e os sintomas do paciente. Normalmente, para um adulto, a dosagem de 0,01 a 1000 mg/kg pode dividir-se em várias porções e administrar-se de uma vez por dia a várias vezes por administração oral ou parentérica (por exemplo, injecção, perfusão contínua e administração rectal). 11

EXEMPLO A presente invenção descrever-se-á agora mais detalhadamente com Exemplos de ensaios. No entanto, a presente invenção não se limita a esses exemplos.

As abreviaturas respectivas têm o seguinte significado. FLCZ: fluconazol; MCFG: micafungina; AMPH-B: anfotericina B, 5-FC: flucitosina; Vez: voriconazol

Como composto de ensaio escolheu-se o composto seguinte. Seguidamente esclarece-se a fórmula química desse composto.

[Fórmula Química 3]

Como agentes escolheram-se fluconazol, micafungina, anfotericina B, voriconazol e flucitosina.

Exemplo de ensaio 1: ensaio in vivo (Candida) A actividade in vivo avaliou-se em infecção sistémica murina causada por Candida albicans.

Por via intraperitoneal administraram-se a murganhos (murganhos ICR machos de quatro semanas (no momento da infecção), 5 murganhos por grupo) 200 mg/kg de ciclofosfamida 4 dias antes da infecção e 100 mg/kg no dia seguinte após a infecção. Em uma solução estéril de soro fisiológico suspenderam-se Estirpes Candida albicans TIMM1623, que se prepararam a partir de uma cultura nocturna em uma placa 12 contendo o meio Agar Sabouraud Dextrose à temperatura de 35 °C. Após a contagem do número de células da suspensão com um microscópio biológico diluiu-se a suspensão com uma solução estéril de soro fisiológico para se obter a solução inoculo. Induziu-se a infecção sistémica em murganhos por inoculação endovenosa de 0,2 ml da solução de inoculo na veia da cauda (2,6 x 104 UFC/murganho).Dissolveu-se o composto em ensaio em uma pequena quantidade de ácido clorídrico 0,1 mol/1, e diluiu-se a solução com água esterilizada para preparar concentrações pré-determinadas.

Diluiu-se Fluconazol (nome comercial: FLANOS solução intravenosa gota a gota a lOOmg, fabricado por Toyama Chemical Co., Ltd.) com água esterilizada para preparar soluções de fluconazol de concentrações pré-determinadas.

Em uma solução estéril de soro fisiológico dissolveu-se Micafungina sódica (nome comercial: Funguard 50mg para perfusão, fabricado por Astellas Pharma Inc.) para preparar soluções de micafungina de concentrações pré-determinadas.

Em glucose a 5% dissolveu-se Anfotericina B injectável (nome comercial: Fungizone, fabricado por Bristol pharmaceutical Ltd.) para preparar uma solução de anfotericina B de uma concentração pré-determinada. O composto em ensaio (0,25 e 0,5 mg/kg) e fluconazol (0,25 e 0,5mg/kg) administraram-se por via oral. A Micafungina (0,125 e 0,25 mg/kg) e a anfotericina B (0,1 mg/kg) administraram-se por via subcutânea. Essas administrações realizaram-se uma vez duas horas após a infecção e depois uma vez por dia nos seis dias seguintes, em um total de 7 vezes. 13

Por um lado administrou-se cada um dos agentes isoladamente, e por outro lado administrou-se cada um dos agentes imediatamente após a administração do composto em ensaio. A eficácia avaliou-se com base na taxa de sobrevivência aos 21 dias após a infecção.

No Quadro 1 apresentam-se os resultados da terapia de associação do composto em ensaio e do fluconazol contra a infecção por Candida albicans, no Quadro 2 apresentam-se os resultados da terapia de associação do composto em ensaio e da micafungina e no Quadro 3 apresentam-se os resultados da terapia de associação do composto em ensaio e da anfotericina B.

[Quadro 1] Composição Composto em FLCZ 0,25 mg/Kg FLCZ 0,5 mg/Kg Composto em para ensaio ensaio administração 0,5 mg/Kg 0,25 mg/Kg FLCZ 0,25 mg/Kg Taxa de 0 20 40 60 sobrevivência [Quadro 2]

Composição Composto em MCFG 0,125 mg/Kg MCFG 0,25 mg/Kg Composto em para ensaio ensaio administração 0,5 mg/Kg 0,5 mg/Kg MCFG 0,125 mg/Kg Taxa de sobrevivência 0 0 40 80 [Quadro 3]

Composição para administração Composto em ensaio 0,5 mg/Kg AMPH-B 0,1 mg/Kg Composto em ensaio 0,25 mg/Kg AMPH-B 0,1 mg/Kg Taxa de sobrevivência 0 20 80

Na infecção sistémica murina causada por Candida albicans, a administração associada do composto em ensaio e 14 do fluconazol, do composto em ensaio e da micafungina, e do composto em ensaio e da anfotericina B apresentaram excelentes efeitos terapêuticos.

Exemplo de ensaio 2: ensaio in vivo (Aspergillus) A actividade in vivo avaliou-se em infecções sistémicas murinas causadas por Aspergillus fumigatus.

Por via intraperitoneal administraram-se a murganhos (murganhos ICR machos com 4 semanas (na infecção), 5 murganhos por grupo) 200 mg/kg de ciclofosfamida 4 dias antes da infecção e 100 mg/kg no dia seguinte após a infecção. Diluiu-se uma suspensão de conídia (esporos assexuados) de Aspergillus fumigatus IFM46895 com uma solução estéril de soro fisiológico contendo 0,05% de Tween 80 (fabricado por Difco Laboratories) em uma solução estéril de soro fisiológico para se obter a solução que contém o inoculo. Induziu-se a infecção sistémica em murganhos por inoculação endovenosa de 0,2 ml da solução inoculo na veia da cauda (1,6 x 105 CFU/murganho). Dissolveu-se o composto em ensaio em uma pequena quantidade de ácido clorídrico a 0,1 mol/1, e diluiu--se a solução com água esterilizada para preparar concentrações pré-determinadas.

Suspendeu-se flucitosina (fabricada por Sigma Company) em um líquido contendo 0,5% de metilcelulose para preparar concentrações pré-determinadas para administração.

Diluiu-se voriconazol (nome comercial: Vfend 200 mg para utilização endovenosa, fabricado pela Pfizer Inc.) com água esterilizada para preparar soluções de voriconazol com concentrações pré-determinadas para administração. 15 0 composto em ensaio (1 e 3 mg/kg), flucitosina (50 e 250 mg/kg) e voriconazol (5 e 10 mg/kg) administraram-se por via oral. As administrações realizaram-se uma vez 2 horas após a infecção e em seguida uma vez por dia para os 6 dias seguintes, em um total de 7 vezes.

Por um lado administrou-se cada um dos agentes isoladamente e por outro lado administrou-se cada um dos agentes imediatamente após ter-se administrado o composto em ensaio. A eficácia avaliou-se com base na taxa de sobrevivência 21 dias após a infecção.

No Quadro 4 apresentam-se os resultados da terapia de associação do composto em ensaio e da flucitosina contra uma infecção por Aspergillus fumigatus, e no Quadro 5 apresentam--se os resultados da terapia de associação do composto em ensaio e do voriconazol.

[Quadro 4]

Composição para administração Composto em ensaio 3 mg/Kg 5-FC 250 mg/Kg Composto em ensaio 3 mg/Kg 5-FC 50 mg/Kg Taxa de sobrevivência 20 0 80 [Quadro 5]

Composição Composto em Composto em VCZ 10 mg/Kg Composto em para ensaio ensaio 3 mg/Kg ensaio administração 1 mg/Kg 1 mg/Kg VCZ 5 mg/Kg Taxa de sobrevivência 0 20 0 40 [0041] Na infecção sistémica murina causada por Aspergillus fumigatus, a administração associada do composto em ensaio e da flucitosina, do composto em ensaio e do voriconazol, exibiram excelentes efeitos terapêuticos. Como de costume, especialmente, a flucitosina, quase não apresenta qualquer efeito contra o Aspergillus fumigatus. No ensaio 16 anterior, a administração de 250 mg/kg de flucitosina não apresentou nenhum efeito terapêutico. No entanto, a administração em associação de 1/5 de 250 mg/kg de flucitosina e do composto em ensaio apresentou um consideravelmente elevado efeito antifúngico.

Exemplo de Ensaio 3: ensaio in vivo (Cryptococcus) A actividade in vivo avaliou-se no decurso de uma infecção sistémica murina causada por Criptococcus neoformans. A murganhos (murganhos ICR machos com 4 semanas de idade (no momento da infecção), 5 murganhos por grupo) administraram-se por via intraperitoneal 200 mg/kg de ciclofosfamida 4 dias antes da infecção e 100 mg/kg no dia a seguir à infecção. Em uma solução estéril de soro fisiológico suspenderam-se células de Cryptococcus neoformans ATCC90112, que se prepararam a partir de uma cultura nocturna em uma placa com meio Sabouraud Dextrose Agar à temperatura de 35 °C. Após a contagem do número de células da suspensão com um microscópio biológico, diluiu-se a suspensão com uma solução estéril de soro fisiológico para se obter a solução contendo o inoculo. Induziu-se a infecção sistémica em murganhos por injecção intravenosa de 0,2 ml da solução contendo o inocula na veia da cauda (8,5 x 104 CFU/murganho). O composto em ensaio dissolveu-se em uma pequena quantidade de ácido clorídrico 0,1 mol/1, e diluiu-se a solução com água esterilizada para preparar concentrações pré-determinadas.

Diluiu-se fluconazol (nome comercial: FLANOS solução intravenosa para administração gota a gota a lOOmg, fabricado 17 por Toyama Chemical Co., Ltd.) com água esterilizada para preparar soluções de fluconazol de concentrações pré-determinadas . 0 composto em ensaio (0,5 e 1 mg/kg) e o fluconazol (20 mg/kg) administraram-se por via oral. As administrações realizaram-se uma vez 2 horas após a infecção e depois uma vez por dia durante os 6 dias seguintes, em um total de 7 vezes.

Por um lado administrou-se cada um dos agentes separadamente, e por outro lado administrou-se cada um dos agentes imediatamente após a administração do composto em ensaio. Avaliou-se a eficácia com base na taxa de sobrevivência no 21° dia após a infecção.

No Quadro 6 apresentam-se os resultados da associação do composto em ensaio e do fluconazol contra a infecção causada por Cryptococcus neoformans.

[Quadro 6]

Composição para administração Composto em ensaio 1 mg/Kg FLCZ 20 mg/Kg Composto em ensaio 0,5 mg/Kg FLCZ 20 mg/Kg Taxa de sobrevivência 0 20 60

Na infecção sistémica murina causada por Cryptococcus neoformans, a administração em associação do composto em ensaio e do fluconazol apresentou excelentes efeitos terapêuticos.

Além disso, o composto em ensaio não apresentou qualquer toxicidade quando se administrou por via oral sucessivamente a murganhos, que se utilizaram em ensaios anteriores, na dose 18 de 25 mg/kg durante 2 semanas, tendo o composto em ensaio apresentado elevada segurança. É evidente a partir dos resultados anteriores que a associação do derivado de fenilamidina ou de um seu sal, representado pela fórmula geral [1] com diversos agentes antifúngicos ou similares apresenta actividade antifúngica sinérgica e efeitos terapêuticos, e é eficaz no tratamento de infecções fúngicas provocadas por fungos patogénicos.

[Preparação]

Seguidamente, a presente invenção descrever-se-á realmente mais detalhadamente com os Exemplos de referência e Exemplos. No entanto, a presente invenção não se limita a esses exemplos. A proporção da mistura no eluente está relacionada com o factor de capacidade sendo o suporte da cromatografia em coluna de gele de sílica gele de sílica B.W., BW-127ZH (Fujisilysia Chemical Ltd).

Exemplo de referência 1

A uma solução de 0,75g de propanol e de 1,90 ml de trietilamina em lOml de tetra-hidrofurano adicionou-se gota a gota uma solução de 2,50g de cloroformato de 4-nitrofenilo em 15ml de tetra-hidrofurano sob arrefecimento com gelo. À mistura reaccional adicionou-se acetato de etilo e água após agitação durante 20 minutos à temperatura ambiente. Após a separação da camada orgânica, procedeu-se à sua recolha e lavagem com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio sequencialmente, secou-se a camada orgânica sobre 19 sulfato de magnésio anidro, tendo-se seguido a eliminação do solvente por destilação. Depois da adição de hexano ao resíduo, filtração de produtos insolúveis e eliminação do solvente sob pressão reduzida obtiveram-se 2,59 g de propilcarbonato de 4-nitrof enilo sob a forma de um óleo amarelo claro. RMN de XH (CDC13) valor δ: 1,03 (3H,t,J=7,4Hz) , 1,71-1,85(2H,m), 4,26(2H,t,J=6,7Hz), 7,39(2H,d,J=9,0Hz), 8,28 (2H, d, J=9, 0Hz)

Exemplo de referência 2

A uma solução de 3,00 g de 4-nitrofenol e de 3,31 ml de trietilamina em 30 ml de tetra-hidrofurano, adicionaram-se gota a gota 2,46 ml de cloroformato de isopropilo sob arrefecimento com gelo. À mistura reaccional adicionaram-se acetato de etilo e água após agitação durante 10 minutos à mesma temperatura. Seguidamente separou-se a camada orgânica, procedeu-se à sua recolha e lavou-se com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, seguindo-se a eliminação do solvente por destilação sob pressão reduzida. Seguidamente dissolveu-se o resíduo em 50 ml de acetato de etilo e lavou--se com uma solução aquosa a 5% de carbonato de potássio e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio sequencialmente, secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro e eliminou-se depois o solvente por destilação sob pressão reduzida para se obterem 3, 00 g de isopropilcarbonato de 4-nitrofenil sob a forma de um sólido amarelo claro. RMN de 1H (CDCI3) valor δ: 1,41(6H,d,J=6,3Hz), 4,96-5, 07 (lH,m) ,7,3 6-7,41 (2H,m) , 8,25-8,30 (2H,m) 20

Exemplo de referência 3

A uma solução de 3,00 g de 4-nitrofenol e de 3,31 ml de trietilamina em 30 ml de tetra-hidrofurano, adicionaram-se gota a gota 2,75 ml de cloroformato de butilo sob arrefecimento com gelo. À mistura reaccional adicionaram-se acetato de etilo e água após agitação durante 10 minutos à mesma temperatura. Seguidamente separou-se a camada orgânica, depois do que se procedeu à sua recolha e lavagem com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secando-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro eliminando--se seguidamente o solvente por destilação para se obterem 4,60g de butilcarbonato de 4-nitrofenilo sob a forma de um óleo amarelo claro. RMN de 1H (CDC13) valor δ: 0, 99 (3H, t, J=7, 4Hz) , 1,41-1,52- (2H,m), 1,70-1,80(2H,m), 4,30(2H,t,J=6,6Hz), 7,36-7,41(2H,m), 8,26-8,31 (2H,m)

Exemplo de referência 4

De forma semelhante ao Exemplo de referência 3, obtiveram-se 5, 63 g de carbonato de isobutilo-4-nitrofenilo sob a forma de um óleo amarelo claro a partir de 3,00 g de 4--nitrofenol e de 2,80 ml de cloroformato de isobutilo. RMN de 1H (CDC13) valor δ: 1,02(6H,d,J=6,6Hz), 2,02-2,13-(lH,m), 4,08(2H,d,J=6,6Hz), 7,39(2H,d,J=9,1Hz), 8,28(2H,d,J=9,1Hz) 21

Exemplo 1 (referência)

A uma solução de 1,71 g de carbonato de 4-nitrofenilpro-pilo em 15 ml de N,N-dimetilformamida, adicionaram-se 1,50 g de 4—{3—[4—(3—{4—[amino(imino)metil]fenoxi jpropil)-1-piperi-dinil]propoxi}benzamidina à temperatura ambiente, e agitou-se a solução durante 4 horas à mesma temperatura. À mistura reaccional adicionaram-se clorofórmio e água. Seguidamente separou-se a camada orgânica, procedeu-se à sua recolha e lavagem sequencial com água, uma solução aquosa a 5% de carbonato de potássio duas vezes e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, e eliminou-se o solvente por destilação. Purificou-se o resíduo obtido por cromatografia em coluna de gele de sílica [eluente, clorofórmio:metanol = 4:1]. Dissolveu-se o sólido obtido em clorofórmio, depois do que sequencialmente se lavou a solução com uma solução aquosa a 5% de carbonato de sódio e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se a solução sobre sulfato de magnésio anidro, e eliminou-se depois o solvente por destilação para se obterem 1,25 g de 4 —{3 —[4-(3 —{4 —[amino(propoxicarbonilimino)metil)fenoxi}pro-pil)-1-piperidinil]propoxi}-Ν' -(propoxicarboni1)benzamidina sob a forma de um sólido branco. RMN de 1H (CDCI3) valor δ: 0,99(6H,t,J=7,4Hz), 1,22-1,45(5H,m), 1,66-1,86(8H,m), 1,90--2,04(4H,m), 2,46-2,54(2H,m), 2,90-2,98(2H,m), 3,99(2H,t,J=6,5Hz), 4,06(2H, t, J=6, 3Hz) , 4,11(4H, t, J=7,0Hz), 6,88-6,96(4H,m), 7,82-7,88(4H,m) 22

Exemplo 2 (referência)

De um modo semelhante ao do exemplo 1, obtiveram-se 1,35 g de 4 —{3—(4-(3—{4—[amino(isopropoxicarbonilimino)metil]feno-xi}-propil)-1-piperidinil]propoxi}-Ν' -(isopropoxicarbonil)-benzamidina sob a forma de um sólido branco a partir de 1,71 g de isopropilcarbonato de 4-nitrofenilo e 1,50 g de 4—{3— [4 — -(3-{4-[amino(imino)metil]fenoxi}-propil)-1-piperidinil]propoxi [benzamidina. RMN de 1H (CDC13) valor δ: 1,20-1,46 (5H,m) , 1,34(12H,d,J=6,3Hz), 1,56-1,86(4H,m), 1,88-2,04(4H,m), 2,46- -2,54(2H,m), 2,90-2,98(2H,m), 3,99(2H,t,J=6,5Hz), 4,06(2H,t,J=6,3Hz), 4,94-5,04(2H,m), 6,88-6,96(4H,m), 7,80- -7,88(4H,m)

Exemplo 3 WH, H,« \~s NHs

De um modo semelhante ao do exemplo 1, obtiveram-se 1,39 g de 4-{3-[4-(3-{4-[amino(butoxicarbonilimino)metil]fenoxi}-propil)-1-piperidinil]propoxi}-Ν' -(butoxicarbonil)benzamidina sob a forma de um sólido branco a partir de 1,82 g de carbonato de butil-4-nitrofenilo e de 1,50 g de 4—{3— [4—(3 — {4-[amino(imino)metil]fenoxi[propil)-1-piperidinil]propoxi}-benzamidina. RMN de XH (CDCI3) valor δ: 0,95(6H,t,J=7,3Hz) , 1,20-1,50- (9H,m), 1,60-2,05(12H,m), 2,45-2,54(2H,m), 2,90-3,00(2H,m), 3, 99(2H, t, J=6, 6Hz), 4,06(2H, t, J=6, 3Hz) , 4,16(4H,t,J=6,8Hz), 6,88-6,96(4H,m), 7,82-7,88(4H,m) 23

Exemplo 4 (referência) 23

"o· A uma solução de 1,82 g de carbonato de isobutil-4-ni-trofenilo em 15 ml de N,N-dimetilformamida, adicionaram-se 1,50 g de 4-{3-[4-(3-{4-[ amino(imino) metil]fenoxi}-propil)--1-piperidinil]propoxi}benzamidina à temperatura ambiente, e fez-se reagir a solução durante 17 horas à mesma temperatura. Adicionaram-se clorofórmio e água à mistura reaccional. Seguidamente separou-se a camada orgânica, depois do que se recolheu e lavou sequencialmente com água, uma solução aquosa a 5% de carbonato de potássio e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, se secou a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, e se eliminou o solvente por destilação. Purificou-se o resíduo obtido por cromatografia em coluna de gele de sílica [eluente, clorofórmiormetanol = 4:1].

Dissolveu-se o resíduo obtido em clorofórmio, depois do que sequencialmente se lavou a solução com uma solução aquosa a 5% de carbonato de potássio e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, se secou a solução sobre sulfato de magnésio anidro, e se eliminou o solvente por destilação para se obterem 1,43 g de 4-{3-[4-(3-{4[amino(isobutoxicarbonili-mino)metil]fenoxi}propil)-1-piperidinil]propoxi}-Ν' -(isobuto-xicarbonil)benzamidina sob a forma de um sólido branco. RMN ^ (CDC13) valor δ: 0,99(12H,d,J=6,8Hz), 1,20-1,45(5H,m), 1,55-2,12(1 OH,m) , 2,46-2,53 (2H,m) , 2,90-3,00(2H,m), 3,94(4H,d,J=6,8Hz), 3,99(2H,t,J=6,5Hz), 4,06(2H,t,J=6,3Hz), 6,88-6,96(4H,m), 7,80-7,90(4H,m). 24

Exemplo farmacêutico 1

Adicionaram-se 100 mg do composto obtido no exemplo 3 e 18 g de cloreto de sódio a 1.8 1 de água para injectáveis. Ajustou-se o pH até 4 com ácido clorídrico, dissolveram-se e diluiu-se até 2 1 de volume total com água para injectáveis. Filtrou-se a solução dissolvida através de um filtro de membrana de 0,22 pm, e acondicionaram-se hermeticamente 100 ml da solução farmacêutica obtida o que corresponde a inj ectáveis.

Exemplo farmacêutico 2

Misturaram-se 500 mg do composto obtido no exemplo 3, 350 mg de lactose, 250 mg de amido de milho e 400 mg celulose cristalina [Nome comercial: CEOLUS PH101: Asahi Kasei Chemicals Corporation], adicionaram-se à mistura 0, 6 ml de uma solução aquosa de hidroxipropilcelulose a 5% e água, e amassou-se a mistura. Secou-se depois a mistura obtida à temperatura de 60 °C, adicionaram-se à mesma mistura lOOmg de crospovidona [nome comercial: Kollidon CL, BASF], lOOmg de ácido silícico anidro leve e 20mg de estearato de magnésio e agitou-se a citada mistura. Comprimiram-se cada 175 mg da mistura obtendo-se comprimidos circulares com um diâmetro de 8 mm.

Exemplo farmacêutico 3

Misturaram-se 500 mg do composto obtido no exemplo 3, 200 mg de lactose e 530 mg de amido de milho, à mistura adicionaram-se 0, 6 ml de uma solução aquosa a 5% de hidroxipropilcelulose e água e amassou-se a referida mistura.

Concluída a mistura secou-se à temperatura de 60 °C, adicionaram-se 70 mg de crospovidona [nome comercial: 25

Kollidon CL, BASF], 180 mg de celulose cristalina [nome comercial: CEOLUS PH302, Asahi Kasei Chemicals Corporation] e 20mg de estearato de magnésio, e misturou-se a mistura resultante. Acondicionaram-se cada 150mg da mistura em cápsulas de gelatina do tipo 3.

[Aplicabilidade industrial] A composição farmacêutica que compreende o novo derivado de fenilamidina ou um seu sal, e um ou mais agentes antifúngicos escolhidos entre agentes antifúngicos azólicos, agentes antifúngicos de polieno, agentes antifúngicos das equinocandinas e agentes antifúngicos de fluoropirimidina, apresenta intensa actividade antifúngica, sendo útil no tratamento de infecções fúngicas. O processo para utilização da associação desses agentes antifúngicos é útil como um excelente processo de tratamento de infecções fúngicas.

Lisboa, 27 de Fevereiro de 2012.

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composição farmacêutica para utilização em um processo de tratamento de infecções fúngicas, que compreende um derivado de fenilamidina ou um seu sal, representado pela fórmula [FÓRMULA QUÍMICA 1]

na qual os simbolos R1 e R2 são iguais e representam um grupo n-butilo; e um ou mais agentes escolhidos entre agentes antifúngicos da classe triazol, anfotericina B, micafungina e flucitosina.

2. Composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 1., em que o agente antifúngico da classe triazol é o fluconazol, o fosfluconazol, o voriconazol ou o itraconazol.

3. Composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 1. ou 2. , em que a infecção fúngica é causada por um agente patogénico fúngico escolhido entre Candida, Cryptococcus e Aspergillus.

4. Derivado de fenilamidina, ou um seu sal representado pela fórmula: [FÓRMULA QUÍMICA 2]

na qual os simbolos R1 e R2 são iguais e representam um grupo n-butilo; em associação com um ou mais agentes escolhidos entre os agentes antifúngicos da classe triazol, a anfotericina B, a 2 micafungina e a flucitosina, para utilização em um processo de tratamento de infecções fúngicas causadas por agentes patogénicos fúngicos.

5. Derivado de fenilamidina para utilização de acordo com a reivindicação 4., em que o agente antifúngico da classe triazol é o fluconazol, o fosfluconazol, o voriconazol ou o itraconazol.

6. Derivado de fenilamidina para utilização de acordo com a reivindicação 4. ou 5., em que a infecção fúngica é causada por um agente patogénico fúngico escolhido entre Candida, Cryptococcus e Aspergillus. Lisboa, 27 de Fevereiro de 2012.