BRPI0713153A2 - fragmentos de peptìdeo para induzir a sìntese de proteìnas de matriz extracelular - Google Patents

Abstract

FRAGMENTOS DE PEPTìDEO PARA INDUZIR A SìNTESE DE PROTEìNAS DE MATRIZ EXTRACELULAR. São revelados tetrapeptídeos biologicamente ativos curtos que são compreendidos das seqüências GxxG e PxxP, onde G (glicina) e P (prolina) são mantidas e x é um aminoácido variável. Os peptídeos podem ser usados individualmente ou em combinação para estimular a produção de proteínas da matriz extracelular na pele. é revelado um método rápido e barato de produção de formulações heterogêneas de tetrapeptídeos.

Description

FRAGMENTOS DE PEPTIDEO PARA INDUZIR A SÍNTESE DE PROTEÍNAS DE MATRIZ EXTRACELULAR

Esse pedido reivindica o benefício de prioridade ao Pedido Provisório Americano No. de Série 60/813.284, depositado em 13 de junho de 2006, o qual é aqui incorporado por referência na sua totalidade.

CAMPO DA INVENÇÃO

A invenção se refere aos tetrapeptídeos com a porção aminoácido GxxG ou PxxP, onde G (glicina) e P (prolina) são mantidos e χ é um aminoácido variável. A invenção também se refere aos tetrapeptídeos de mudança de quadro ativos (frame shift), os quais são seqüências de tetrapeptídeos com uma estrutura alterada de um tetrapeptídeo GxG ou PxxP numa proteína ECM. Particularmente, a invenção se refere ao GxxG, PxxP ou aos peptídeos de mudança de quadro ativos que estimulam a produção de proteínas da matriz extracelular e intensificam o fechamento de ferimentos da monocamada de células epiteliais da pele humana ferida por raspagem. As composições peptídicas podem ser usadas em formulações para reparar a pele danificada ou na manutenção da pele saudável.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

O envelhecimento da pele é comumente visto como a formação de rugas e a cicatrização de ferimentos prejudicada. Um ferimento é definido como uma ruptura na integridade epitelial da pele. A cicatrização normal de feridas envolve uma série de eventos complexa e dinâmica, porém magnificamente orquestrada levando ao reparo de tecidos danificados. 0 maior componente da pele normal é a matriz extracelular (ECM), uma matriz tipo gel produzida pelas células que ela rodeia. A ECM é composta de duas classes principais, incluindo proteínas estruturais fibrosas e proteoglicanas. Alterações na composição e estado reticulado da ECM são conhecidas como estando associadas com o envelhecimento e numa faixa de distúrbios de pele adquiridos e hereditários. Tem sido bem documentado que ECM não somente fornece suporte estrutural como também influencia o comportamento celular, tal como a diferenciação e proliferação. Também cada vez mais grupos de pesquisa sugerem que os componentes da matriz podem ser uma fonte de sinais celulares para facilitar a proliferação de células epiteliais e a migração e, deste modo, aumentar a cicatrização de feridas.

A maior classe de moléculas ECM fibrosas é a família do colágeno, a qual inclui pelo menos 16 tipos diferentes de colágeno. Colágeno na matriz dérmica é composto primariamente dos colágenos tipo I (80 - 85%) e tipo III (8 - 11%), ambos sendo fibrilares, ou colágenos em forma de bastão. A força elástica da pele é originada predominantemente por essas moléculas de colágeno fibrilares, as quais se automontara em microfibrilas numa disposição cabeça-cauda e lateral lado a lado escalonada. Moléculas de colágeno se tornam reticuladas às moléculas de colágeno adjacentes, gerando força e estabilidade adicional nas fibras de colágeno. O dano à rede de colágeno (por exemplo, por enzimas ou destruição física) ou o seu total colapso faz com que a cicatrização ocorra por reparo.

Vários peptídeos bioativos que estimulam a produção de proteínas ECM foram reportados tanto na literatura científica quanto em patentes emitidas. Historicamente, peptídeos têm sido isolados a partir de fontes naturais e têm sido recentemente o assunto de estudos de relação estrutura-função. Peptídeos naturais também serviram como pontos de partida para o design de análogos de peptídeos sintéticos.

Seqüências específicas nas proteínas ECM podem estimular elementos úteis na pele, tais como colágeno tipo I, colágeno tipo III e fíbronectina (Katayama et. al. , J. Biol. Chem. 288: 9941 - 9944 (1983)). Katayama et al. identificaram o pentapeptídeo KTTKS (SEQ ID NO: 17) , no propeptídeo carboxiterminal (resíduos 197 - 241) do colágeno tipo I. O propeptídeo é clivado durante a produção da proteína de colágeno madura. O propeptídeo clivado pode participar na regulação da produção de colágeno através de um mecanismo de retroalimentação de biossíntese, com o segmento KTTKS desempenhando um papel ativo. Maquart et al. (J Soc Biol. 193: 423-28 (1999)) reportaram que os peptídeos GHK e CNYYSNS também estimulam a síntese de ECM.

Essas seqüências podem ser liberadas durante a renovação de ECM, deste modo sinalizando a necessidade por reparo de ECM. As seqüências de peptídeos curtos liberadas por qualquer mecanismo são geralmente chamadas de "matricinas" (Maquart et al., J. Soe. Biol. 193: 423-28 (1999)).

Apesar da existência de uma variedade de peptídeos naturais e sintéticos, existe uma necessidade por peptídeos biologicamente ativos melhorados e métodos para seus usos.

RESUMO DA INVENÇÃO

São revelados tetrapeptídeos que são caracterizados pela porção da seqüência de aminoácidos GxxG ou PxxP, onde os resíduos de G (glicina) e P (prolina) são mantidos e χ é um aminoácido variável. Os tetrapeptídeos são derivados das seqüências que ocorrem várias vezes por toda a seqüência primária da proteína ECM, colágeno tipo IV. As seqüências reveladas induzem a produção de todas as formas de colágeno maior do que as seqüências de peptídeos anteriormente conhecidas, incluindo KTTKS, vendida sob a marca comercial MATRIXYL™ por SEDERMA SAS (França). Além disso, uma composição compreendendo uma combinação de várias seqüências multiplicadoras-repetentes induz uma resposta produtora de colágeno ainda maior. Podem ser esperados benefícios adicionais a partir das combinações de peptídeos presentes numa variedade de proteínas ECM.

A produção de uma combinação específica de tetrapeptídeos para a reconstrução da ECM pode ser, sob um ponto de vista de custo, comercialmente proibitiva. É revelada uma forma relativamente simples e barata de produzir uma combinação diversa de tetrapeptídeos biologicamente ativos. Pela produção de uma biblioteca combinatorial de tetrapeptídeos com a porção GxxG ou PxxP, uma variedade de tetrapeptídeos biologicamente ativos pode ser gerada na mesma série de produção (por exemplo, GEPG, GPEG, GPPG e GEEG). A combinação dos tetrapeptídeos pode induzir uma maior formação de proteínas ECM do que os peptídeos individuais. As composições compreendendo os tetrapeptídeos revelados, sozinhas ou em combinação, são úteis nos mercados de cuidados com a pele incluindo, porém sem se limitar, àquelas que tratam de rugas, tônus, firmeza e perda de firmeza da pele. A estimulação do colágeno pelos tetrapeptídeos revelados pode melhorar significativamente a saúde e aparência da pele danificada e envelhecida. BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

FIG. 1 é a SEQ ID NO: 45, a qual é a seqüência de aminoácidos do colágeno IV ilustrando as ocorrências dos tetrapeptídeos GxxG. Todas as seqüências em negrito estão sublinhadas e as seqüências que se sobrepõem estão duplamente sublinhadas.

FIG. 2 é a SEQ ID NO: 46, a qual é a seqüência de aminoácidos do colágeno III ilustrando as ocorrências das mudanças de quadro ativas PGPR e GAGP. Todas as seqüências de mudança de quadro ativas estão em negrito e sublinhadas e as seqüências GxxG que ocorrem numa distância de uma mudança de quadro estão duplamente sublinhadas.

FIG. 3 também é a SEQ ID NO: 45, a seqüência de aminoácidos de colágeno IV, ilustrando as ocorrências do tetrapeptídeo PGPP.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A invenção é de um modo geral direcionada para tetrapeptídeos que estimulam a produção de proteínas ECM e modulam a cícatrização de feridas, e aos usos de tais tetrapeptídeos.

Peptídeos

Uma modalidade da invenção é direcionada para um tetrapeptídeo isolado compreendendo a porção GxxG ou PxxP. Nessa modalidade, G (glicina) ou P (prolina) é mantida e χ é um aminoácido variável. O peptídeo pode ser geralmente qualquer peptídeo que esteja dentro da descrição acima, e mais preferivelmente ser SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NQ: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO-.14, SEQ ID NO: 15 OU SEQ ID NO: 16. Outra modalidade da invenção é direcionada para um tetrapeptídeo isolado compreendendo a porção GxPG, onde χ é P em qualquer posição variável ou ambas. Nessa modalidade, G (glicina) e P (prolina) são mantidas e χ é um aminoácido variável. O peptideo pode ser geralmente qualquer peptideo que esteja dentro da descrição acima, e mais preferivelmente é a SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 ou SEQ ID NO: 7.

Outra modalidade da invenção é direcionada para um tetrapeptídeo isolado compreendendo a porção GExG. Nessa modalidade, G (glicina) e E (ácido glutâmico) são mantidos e χ é um aminoácido variável. O peptideo pode ser geralmente qualquer peptideo que esteja dentro da descrição acima, e mais preferivelmente ser SEQ ID NO: 5 ou SEQ ID NO: 8.

Outra modalidade da invenção é direcionada para um tetrapeptídeo isolado compreendendo a porção PGxP. Nessa modalidade, P (prolina) e G (glicina) são mantidas e χ é um aminoácido variável. 0 peptideo pode ser geralmente qualquer peptideo que esteja dentro da descrição acima, e mais pref erivelmente SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14 ou SEQ ID NO: 16.

Outra modalidade da invenção é direcionada para um tetrapeptídeo isolado compreendendo a porção PExP. Nessa modalidade, P (prolina) e E (ácido glutâmico) são mantidos e χ é um aminoácido variável. 0 peptideo pode ser geralmente qualquer peptideo que esteja dentro da descrição acima, e mais preferivelmente ser SEQ ID N0:1 ou SEQ ID NO: 9.

Outra modalidade da invenção é direcionada para um tetrapetídeo de mudança de quadro ativo. Nessa modalidade, o tetrapeptídeo ocorre numa mudança de quadro de um tetrapeptideo GxxG ou PxxP numa proteína ECM. 0 peptídeo pode ser de um modo geral qualquer peptídeo que esteja dentro da descrição acima, e mais preferivelmente ser SEQ ID NO: 4 ou SEQ ID NO: 6.

Cada um dos peptídeos acima descritos podem compreender D- ou L-aminoácidos. Os peptídeos podem compreender todos os D-aminoácidos ou L-aminoácidos. Os peptídeos podem ter um ácido C-terminal (-CO2H) ou, preferivelmente, uma amida C-terminal (-CONH2, -CONHR ou - CONR2). Os peptídeos podem ser ainda aumentados ou modificados, seja quimicamente ou enzimaticamente. Por exemplo, os peptídeos podem ser amidados (-NH2) no C- terminal, o que pode tornar o tetrapeptxdeo menos suscetível à degradação pela protease e aumentar as suas solubilidades em comparação com as formas de ácido livre. Os peptídeos também podem ser "lipidados", o que pode proporcionar uma maior penetração na pele.

Os peptídeos acima descritos podem conter os seguintes aminoácidos: R (arginina), L (Ieucina), P (prolina), F (fenilalanina), Q (glutamina), E (ácido glutâmico), I (isoleucina), K (Iisina), S (serina), V (valina), A (alanina), N (asparagina), D (ácido aspártico), T (treonina), Y (tirosina) e G (glicina). Os peptídeos acima descritos não incluem os seguintes: M (metionina), C (cisteína), H (histidina) ou W (triptofano). Concordantemente, numa modalidade, ? não é selecionado de (metionina), C (cisteína), H (histidina) ou W (triptofano).

Métodos de uso Uma modalidade adicional da invenção é direcionada para os métodos de uso dos peptídeos acima descritos. Os métodos de uso podem envolver o uso de um único peptídeo, ou podem envolver o uso de dois ou mais peptídeos em combinação.

Uma modalidade da invenção é um método de promoção de reparo da pele danificada e de manutenção da saúde da pele usando tetrapeptídeos que estimulam a produção de proteínas ECM. O método é geralmente direcionado para o contato das células da derme (pele) com uma composição contendo o peptídeo. As composições podem ser um aerossol, emulsão, líquido, loção, creme, pasta, ungüento, espuma ou outra formulação farmaceuticamente aceitável. Geralmente, uma formulação farmaceuticamente aceitável poderia incluir qualquer veículo aceitável adequado para uso na pele humana, por exemplo, um veículo cosmeticamente aceitável e um veículo dermatologicamente aceitável. As composições podem conter outros agentes biologicamente ativos, tais como retinóides ou outros peptídeos. As composições podem conter veículos ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis.

O passo de contato pode ser efetuado in vivo, in situ, in vitro ou por qualquer método conhecido pelas pessoas versadas na técnica. Mais preferivelmente, o passo de contato é para ser efetuado topicamente numa concentração suficiente para induzir uma resposta estimulatória. A concentração do peptídeo na composição pode ser de cerca de 0,01 μg/mL até cerca de 100 μg/mL, de cerca de 0,1 μg/mL até cerca de 50 μg/mL e de cerca de 0,1 μg/mL até cerca de 1 μg/mL. O passo de contato pode ser efetuado num mamífero, num gato, num cachorro, numa vaca, num cavalo, num porco ou num ser humano. Uma composição preferida para promover a produção da proteína ECM compreende a SEQ ID NO: 8; mais preferivelmente, a composição compreende SEQ ID NO: 8 numa mistura heterogênea com pelo menos um outro tetrapeptídeo.

Numa modalidade mais preferida, os tetrapeptídeos individuais na composição poderiam causar a produção de colágeno sustentada por um período de pelo menos 48 horas.

Uma modalidade adicional da invenção é direcionada para um método de promoção da cicatrização de feridas da pele danificada pelo envelhecimento normal, doenças, injúria, trauma ou por cirurgia ou outros procedimentos médicos. O método pode compreender a administração ã ferida de um animal de uma composição, em que a composição compreende qualquer um dos peptídeos acima descritos, individualmente ou em combinação. As composições podem ser um líquido, loção, creme, pasta, ungüento, espuma ou qualquer outra formulação farmaceuticamente aceitável. As composições podem conter veículos ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis. As composições podem conter outros agentes biologicamente ativos, tais como agentes antimicrobianos ou fatores de crescimento. As composições podem também ser usadas em combinação com outros agentes terapêuticos, tais como enxertos de tecido, produtos de cultura de tecido, oxigênio ou curativos. A concentração do peptídeo na composição pode ser de cerca de 0,01 ug/mL até cerca de 100 ug/mL, de cerca de 0,1 ng/mL até cerca de 50 ug/mL e de cerca de 0,1 μg/mL até cerca de 1 ug/mL. A composição pode ser administrada ao ferimento topicamente. O animal pode, de um modo geral, ser geralmente qualquer tipo de animal, e pref erivelmente é um mamífero, e mais preferivelmente é um ser humano, vaca, cavalo, gato, cachorro, porco, cabra ou ovelha. Uma composição preferida para aplicações de cicatrização de feridas nas quais a produção de proteína ECM é promovida compreende a SEQ ID NO: 8; mais preferivelmente a composição compreende SEQ ID NO: 8 numa mistura heterogênea com pelo menos um outro tetrapeptídeo. Numa modalidade mais preferida, os tetrapeptideos individuais na composição poderiam causar a produção de colágeno sustentada por um período de pelo menos 4 8 horas.

Uma modalidade adicional da invenção é direcionada para um método de redução da cicatriz da pele danificada pelo envelhecimento normal, doença, injúria, trauma ou por cirurgia ou outros procedimentos médicos. 0 método pode compreender a administração à ferida de um animal de uma composição, em que a composição compreende qualquer um dos peptídeos acima descritos, individualmente ou em combinação. As composições podem ser um líquido, loção, creme, pasta, ungüento, espuma ou outra formulação farmaceuticamente aceitável. As composições podem conter veículos ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis. As composições podem conter outros agentes biologicamente ativos, tais como agentes antimicrobianos ou fatores de crescimento. As composições podem também ser usadas em combinação com outros agentes terapêuticos, tais como enxertos de tecido, produtos de cultura de tecido, oxigênio ou curativos. A concentração do peptídeo na composição pode ser de cerca de 0,01 μg/mL até cerca de 100 μg/mL, de cerca de 0,1 μg/mL até cerca de 50 μg/mL e de cerca de 0,1 μg/mL até cerca de 1 μg/mL. A composição pode ser administrada ao ferimento topicamente. 0 animal pode ser geralmente qualquer tipo de animal, e preferivelmente é um mamífero, e mais preferivelmente é um ser humano, vaca, cavalo, gato, cachorro, porco, cabra ou ovelha. Uma composição preferida para aplicações de cicatrização de feridas nas quais a produção de proteína ECM é promovida compreende a SEQ ID NO: 8; mais preferivelmente a composição compreende SEQ ID NO: 8 numa mistura heterogênea com pelo menos um outro tetrapeptídeo. Numa modalidade mais preferida, os tetrapeptídeos individuais na composição poderiam causar a produção de colágeno sustentada por um período de pelo menos 48 horas.

Outra modalidade da invenção é direcionada para um método de produção dos tetrapeptídeos revelados em combinação. Os peptídeos podem ser produzidos usando qualquer método conhecido pelas pessoas versadas na técnica, tais como aqueles revelados em Merrifield, R. B., Solid Phase Peptide Synthesis I., J. Am. Chem. Soe. 85: 2149-2154 (1963); Carpino, L. A. et al., [(9- Fluorenylmethyl)oxy] Carbonyl (Fmoc) Amino Acid Chlorides: Synthesis, Characterization, And Application To The Rapid Synthesis Of Short Peptides, J. Org. Chem. 37:51:3732-3734; Merrifield, R. B. et al., Instrument For Automated Synthesis Of Peptides, Anal. Chem. 38: 1905-1914 (1966); ou Kent, S. Β. H. et al., High Yield Chemical Synthesis Of Biologically Active Peptides On An Automated Peptide Synthesizer Of Novel Design, em: PEPTIDES 1984 (Ragnarsson U., ed.) Almqvist e Wiksell Int., Estocolmo (Suécia), pp. 185-188, todos os quais são aqui incorporados por referência nas suas totalidades. Preferivelmente, os peptídeos serão produzidos por uma máquina capaz de efetuar a adição seqüencial dos aminoácidos numa cadeia peptídica em crescimento. Entretanto, os peptídeos também podem ser produzidos usando a metodologia da fase de solução padrão.

Tem sido observado que a adição de uma mistura de aminoácidos livres, ao invés de misturas de peptídeos homogêneas durante a síntese da cadeia peptídica, resulta na incorporação variada de aminoácidos livres, de modo que uma combinação de peptídeos resulta das reações de síntese.

A freqüência de incorporação relativa de um aminoácido particular incluído numa mistura de dois ou mais aminoácidos adicionados durante a síntese pode ser ajustada. O ajuste é tornado possível pela modificação da proporção de um aminoãcído livre disponibilizado durante o processo de síntese em relação aos outros aminoácidos na mistura (isso é chamado de uma mistura isocinêtica).

Os Exemplos a seguir são incluídos para demonstrar modalidades preferidas da invenção. Deve ser percebido pelas pessoas versadas na técnica que as técnicas reveladas nos exemplos que se seguem representam técnicas descobertas pelo inventor para funcionar bem na prática da invenção, e deste modo podem ser consideradas como constituintes de modos preferidos para a sua prática. Entretanto, as pessoas versadas na técnica deveriam, à luz da presente descoberta, perceber que muitas alterações podem ser feitas nas modalidades específicas, as quais são reveladas e ainda obter um resultado semelhante ou similar sem sair do espírito e escopo da invenção.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Identificação de repetições de seqüências tetrapeptídicas no colágeno

Uma proporção relativamente alta de seqüências de repetição do tetrapeptídeo de colágeno IV tem a porção GxxG (onde χ é qualquer aminoácido). Uma variedade dessas é mostrada in situ como parte da seqüência de colágeno IV completa ilustrada na Figura 1 como SEQ ID NO: 45. Colágeno IV foi examinado primeiramente devido ao seu papel de interação com outros componentes ECM especializados (ver Gregory Schultz et al., 2005). Existem onze seqüências com a porção GxxG no colágeno IV que aparecem mais de dez vezes (GxxG, onde xx é representado por: vp, ek, fp, Ip, pp, sp, ep, ip, pk, qp e tp). Dessas seqüências de tetrapeptideos, oito das onze seqüências contêm prolina na posição 3, duas das onze seqüências contêm P na posição 2, uma das onze seqüências contêm prolina nas posições 2 e 3, e uma das onze seqüências não contém prolina. As seqüências reveladas são referidas como REPLIKINES™. "REPLIKINE" é definido como uma seqüência curta nas proteínas ECM que ocorre várias vezes (isto é, é replicada). Essa seqüência pode estar presente numa proteína ECM (por exemplo, colágeno IV).

Preferivelmente, a seqüência está presente em múltiplas proteínas ECM (por exemplo, todos os colágenos, elastina, laminina, etc.). A presença da seqüência em várias proteínas ECM aumenta a probabilidade de que o fragmento possa ser capaz de promover a síntese ou reparo de ECM.

As onze seqüências GxxG aparecendo no colágeno IV listadas acima são destacadas na seqüência do colágeno IV humano ilustrada na Figura 1. Nessa figura, todas as seqüências em negrito estão sublinhadas e as seqüências que se sobrepõem estão duplamente sublinhadas. Todas, à exceção de uma dessas seqüências, também aparecem nos colágenos I, II, III e IV. Esse fato contribui para a capacidade dos peptídeos revelados de estimular a produção de todos os tipos de colágeno, particularmente quando os peptídeos são usados em combinação. Tabela 1 mostra a freqüência de várias repetições de tetrapeptídeo nas proteínas ECM. As seqüências em negrito na Tabela 1 são aquelas que aparecem no colágeno IV dez ou mais vezes.

Tabela 1: Freqüência dos tetrapeptídeos nas proteínas ECM

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Conforme é evidente a partir de uma revisão da seqüência de colágeno IV, SEQ ID NO: 45, também há muitas ocorrências das seqüências com a porção PxxP. Por exemplo, a seqüência PGPP ocorre não menos do que quinze vezes conforme ilustrado na Figura 3. Conseqüentemente, essa seqüência revelada também é referida como REPLIKINE™. Preferivelmente, essa seqüência está presente em várias proteínas ECM (por exemplo, em todos os colágenos, elastina, laminina, etc.) uma vez que a presença dessa seqüência em várias proteínas ECM aumenta a probabilidade de que o fragmento possa ser capaz de promover a síntese ou reparo de ECM. As quinze seqüências PGPP aparecendo no colágeno IV listadas acima estão destacadas e sublinhadas na seqüência do colágeno IV humano ilustrada na Figura 3. Exemplo 2: Identificação das mudanças de quadro ativas

Além da proporção relativamente alta das seqüências de repetições de tetrapeptideo de colágeno IV com a porção GxxG, outras seqüências de tetrapeptídeos ocorrendo numa mudança de quadro de aminoácido de distância de uma seqüência de tetrapeptideo GxxG ou PxxP foram identificadas. Essas seqüências podem se repetir ou ocorrer somente uma vez numa proteína ECM, e podem estar localizadas numa posição de aminoácido de distância de uma seqüência de tetrapeptideo GxxG ou PxxP, conforme aqui descrito. Essas seqüências de tetrapeptídeos são referidas como mudanças de quadro ativas. Tais mudanças de quadro ativas podem, concordantemente, conter qualquer um dentre G ou P em qualquer uma dentre a segunda ou terceira posição dependendo da direção da mudança de quadro. Foi ainda reconhecido que as mudanças de quadro ativas podem ser combinadas com outras seqüências de tetrapeptideo reveladas nesse pedido, formando uma combicina. Um exemplo de tal combicina é H06 e H15.

Um exemplo de uma mudança de quadro ativa é GAGP ou H12 (SEQ ID NO: 6). H12 (GAGP) aparece um resíduo (ou estrutura) modificado do tetrapeptideo GxxG GGAG no colágeno III (SEQ ID NO: 46) conforme ilustrado na Figura 2. Nessa figura, todas as seqüências de mudança de quadro ativas estão em negrito e sublinhadas e as seqüências GxxG ocorrendo a uma mudança de quadro de distância estão duplamente sublinhadas. Além disso, conforme mostrado na Tabela 5, esse tetrapeptideo (GAGP) alcança bons resultados para a produção de colágeno em 4 8 horas. Outro exemplo é a seqüência PGPR, a qual é HlO (SEQ ID NO: 4), a qual ocorre onze vezes nos colágenos I - IV. Uma vez que ela aparece várias vezes numa proteína ECM individual, esse tetrapeptídeo poderia ainda ser considerado uma REPLIKINE. Figura 2 (SEQ ID NO: 46) ilustra vários exemplos desse tetrapeptídeo com cada um ocorrendo uma mudança de quadro do tetrapeptídeo GxxG GPRG. Essa mudança de quadro ativa particular aparece em várias proteínas ECM e, deste modo, aumenta a probabilidade de que o fragmento possa ser capaz de promover a síntese ou reparo de ECM.

Exemplo 3 : Identificação de seqüências repetidas que estimulam a produção de colágeno

Várias seqüências identificadas nos Exemplos 1 e 2 foram sintetizadas usando química peptídica padrão e avaliadas quanto à estimulação de colágeno a partir de fibroblastos dérmicos. Os peptídeos sintetizados foram amidados no C-terminal, o que tornou os tetrapeptídeos menos suscetíveis à degradação pela protease e aumentou as suas solubilidades em comparação com as formas de ácido livre. Fibroblastos dérmicos humanos foram incubados em placas de 96 poços a 37°C e CO2 5% por 24 e 48 horas em 150 μl; de meio de cultura de células completo (Cascade Biologics, Portland, 0R; No. Cat. M-106-500), suplementado com Suplemento de Crescimento com Pouco Soro (Cascade Biologics, Portland, OR; No. Cat. S-003-10) contendo peptídeos de amostra numa concentração de peptídeo final de 50 μg/mL. Cada poço foi semeado com 10.000 células. Após a incubação, amostras de 100 μ11. de meio foram recuperadas de cada poço e avaliadas quanto à produção de colágeno.

Os ensaios foram efetuados pelos laboratórios Tebu-bio (França) usando o Kit de Ensaio de Colágeno SIRCOL™ (Biocolor Assays, Reino Unido) seguindo o protocolo do fabricante. O Ensaio de Colágeno SIRCOL™ é um método de ligação a corante quantitativo projetado para a análise de colágenos solúveis liberados em meio de cultura por células de mamíferos durante a cultura in vitro. O colágeno das amostras testadas se liga ao corante SIRCOL™ aniônico. Os complexos colágeno-corante precipitam para fora da solução e são peletizados por centrifugação. O pélete de colágeno- corante recuperado foi dissolvido numa solução alcalina antes das medições de absorvância. Medições em duplicata foram tomadas nos tempos de 24 e 48 horas a partir de duas amostras separadas. Foi feita uma média com as quatro medições para cada amostra. As absorvâncias dos brancos com reagente, padrões de colágeno e amostras foram medidas a 560 nm. A absorvância do branco do reagente foi subtraída a partir da absorvância de cada amostra em 24 e 48 horas.

Dois grupos de dados separados foram usados para gerar duas curvas de calibração de padrões de colágeno. A primeira curva de calibração foi gerada para propósitos do cálculo da quantidade de colágeno nas amostras H6 (combinação das SEQ ID NOS: 1-4), H7-H14 (SEQ ID NOs: 1 - 8, respectivamente) e H15 (combinação das SEQ ID NOs: 5 - 8). A segunda curva de calibração foi gerada para calcular a quantidade de colágeno nas amostras H16 (SEQ ID NO: 9) , H21-23 (SEQ ID NOs: 10 - 12, respectivamente), H25-26 (SEQ ID NOs: 13-14, respectivamente) ou H29-30 (SEQ ID NOs: 15 - 16, respectivamente), H32 (SEQ ID NQ: 17), H33 (combinação das SEQ ID NOs: 9-12), H34 (combinação das SEQ ID NOs: 11 - 14), H35 (combinação das SEQ ID NOs: 13-16), H36 (combinação das SEQ ID NOs: 1, 6, 5, 8), H3 7 (SEQ ID NO: 17) e Η38 (SEQ ID NO: 8) a partir das medições de absorvância e foi criada pela demarcação da Abs560 nm dos padrões de colágeno conhecidos versus as concentrações respectivas dos padrões de colágeno (em microgramas) cada vez que uma série de ensaios foi efetuada. Em relação a cada grupo de dados, a mesma curva de calibração foi usada para as amostras tomadas nos tempos de 24 e 48 horas (Tabelas 2A e 2B). Concordantemente, diferentes curtas de padrões foram preparadas imediatamente antes de efetuar cada série de ensaios.

Tabela 2A: Curva de calibração para avaliar a produção de colágeno pelos peptídeos HA-H15

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Tabela 2B: Curva de calibração para ensaiar a produção de colágeno pelos peptídeos H16, H21-23, H25-26 e H29-38.

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Foi efetuada uma regressão linear a partir da demarcação dos valores de Abs560 nm versus as concentrações dos respectivos padrões de colágeno usando MICROSOFT EXCEL™. A regressão resultou nas linhas descritas pela fórmula y = 0,013x para ambos os tempos de incubação verificados na Tabela 2A. Uma vez que os resultados foram idênticos, somente o período de tempo de 24 horas foi usado para a segunda série de curvas de calibração. A fórmula da linha obtida na data de ensaio 1 e na data de ensaio 2 da segunda série de amostras foi y = 0,0178x e y = 0,0162x, respectivamente. O peptideo LL-37 (SEQ ID NO: 18) foi usado como controle positivo, uma vez que ele foi amplamente reportado como tendo um impacto na cura de ferimentos em homens (Heilborn et al., The Cathelicidin Anti-Microbial Peptide LL-37 Is Involved In The Re-Epithelialization Of Human Skin Wounds And Is Lacking In Chronic Ulcer Epithelium, J. Invest. Dermato. 120: 379-89 (2003)). O limite de detecção do ensaio definido pelo fabricante é de 2,5 μg.

A quantidade total de colágeno produzida nas amostras contendo peptídeos foi calculada a partir da média dos valores de absorvância tomados em 24 horas (Tabela 3A) e 48 horas (Tabela 3B) usando a equação linear derivada da curva padrão. A quantidade total de colágeno produzido nas amostras contendo os peptídeos H16 (SEQ ID NO: 9) , H21-23 (SEQ ID NOs: 10 - 12, respectivamente), H25-26 (SEQ ID NOs: 13-14, respectivamente) ou H29-30 (SEQ ID NOs: 15 - 16, respectivamente) , H32 (SEQ ID NQ: 17) , H33 (combinação das SEQ ID NOs: 9-12), H34 (combinação das SEQ ID NOs: 11 - 14), H35 (combinação das SEQ ID NOs: 13-16), H36 (combinação das SEQ ID NOs: 1, 6, 5, 8), H3 7 (SEQ ID NO: 17) e H38 (SEQ ID NO: 8) foi calculada a partir dos valores de absorvância tomados em 24 horas (Tabela 4A) e 48 horas (Tabela 4B) usando a equação linear derivada da curva padrão. Esses valores foram comparados com o peptideo LL37 (SEQ ID NO: 18), um peptideo conhecido por estimular o colágeno. Em cada tabela, as amostras marcadas por um asterisco (*) podem não ser significativas, uma vez que o limite de detecção do ensaio é de 2,5 ug.

Tabela 3A: Medições de absorvância e quantificação do colágeno nas amostras de teste H6-H15 em 24 horas.

<table>table see original document page 22</column></row><table>

Tabela 3B: Medições de absorvância e quantificação do colágeno nas amostras de teste H6-H15 em 48 horas. <table>table see original document page 22</column></row><table> <table>table see original document page 23</column></row><table>

Tabela 4A: Medições de absorvância e quantificação do colãgeno em amostras de teste H16, H21-23, H25-26 ou H29-38 em 24 horas.

<table>table see original document page 23</column></row><table> <table>table see original document page 24</column></row><table>

Tabela 4B: Medições de absorvância e quantificação do colágeno em amostras de teste H16, H21-23, H25-26 ou H29-38 em 48 horas.

<table>table see original document page 24</column></row><table> <table>table see original document page 25</column></row><table>

Devido aos tamanhos das amostras serem de 100 μL, a concentração do colágeno produzido em cada amostra em microgramas por mililitro é determinada pela multiplicação da quantidade de colágeno detectada por dez. Os resultados de todas as amostras testadas estão resumidos na Tabela 5.

Tabela 5: Síntese de colágeno induzida por peptídeos.

<table>table see original document page 25</column></row><table> <table>table see original document page 26</column></row><table> <table>table see original document page 27</column></row><table>

Todos os tetrapeptideos testados estimularam a produção de colágeno solúvel. Das seqüências testadas, tetrapeptídeos GxxG com um ácido glutâmico na posição 2 melhor estimulam o colágeno em ambos os pontos de tempo de 24 e 48 horas. Essas seqüências são Hll (GEPG; SEQ ID NO: 5), H14 (GEKG; SEQ ID NO: 8) e H3 8 (GEKG; SEQ ID NO: 8). Os peptídeos foram inicialmente varridos usando uma concentração' peptídica de 50 μ9/ΓηΙ,. Para avaliar a concentração eficaz para estimular a produção de colágeno, H14 (SEQ ID NO: 8) também foi testada em 0,3 μg/mL como H38. Conforme demonstrado na Tabela 5, a estimulação de colágeno induzida por H38 não foi diminuída na concentração mais baixa, indicando que a concentração estimulatória máxima da SEQ ID NO: 8 está em ou abaixo de 0,3 μg/mL.

Para testar a sua eficácia, a SEQ ID NO: 8 (H14 e H38) foi comparada com o peptídeo LL37 (SEQ ID NO: 18), o qual é conhecido por estimular a produção de colágeno. Baseando-se na quantidade de colágeno liberada por fibroblastos em resposta ao LL3 7, 25 μ9/ηΛ foi considerada uma quantidade significativa de colágeno liberada devido ao contato com um tetrapeptídeo. SEQ ID NO: 8 induziu aproximadamente a mesma quantidade de colágeno que LL3 7 (SEQ ID NO: 18) em 24 horas. De um modo importante, o colágeno produzido como resultado do contato com a SEQ ID NO: 8 foi substancialmente mantido por pelo menos 48 horas. SEQ ID NO: 8 também foi comparada com um peptídeo de cuidado de pele principal conhecido por estimular a produção de colágeno, KTTKS (SEQ ID NO: 17) (Katayama et. al. , J. Biol. Chem. 288: 9941-9944 (1983)). KTTKS é um ingrediente no produto MATRIXYL™ (SEDERMA SAS, França). SEQ ID NO: 8 estimulou mais a produção de colágeno do que o peptídeo KTTKS (SEQ ID NO: 17) (Tabela 5) em 24 e 48 horas. Exemplo 4 : Identificação das combinações de peptídeos que intensificam sinergisticamente a estimulação de colágeno - COMBICINAS

Populações heterogêneas dos tetrapeptídeos ativos podem estimular a produção de colágeno num nível mais elevado do que as amostras homogêneas de tetrapeptídeos. Os componentes da composição heterogênea são chamados de COMBICINAS™. COMBICINAS é um grupo de REPLIKINES combinadas para produzir um efeito maior ou mais amplo em um ou mais tipos de células alvo. Os peptídeos Hll (SEQ ID NO: 5), H12 (SEQ ID NO: 6), H13 (SEQ ID NO: 7) e H14 (SEQ ID NO: 8) foram combinados até uma concentração final de 50 μg/mL e avaliados usando o mesmo protocolo dos peptídeos individuais. Conforme esperado, o resultado obtido no ponto de tempo de 24 horas se igualou à média das pontuações de indução individuais. A combinação de peptídeos em 48 horas, entretanto, induziu o colágeno até um nível de 43 μg/mL. Surpreendentemente, esta quantidade foi muito excessiva em relação à média antecipada (21 pig/mL) dos quatro peptídeos individuais (ver Tabela 5). Deste modo, combinações específicas dos peptídeos podem estimular a produção de colágeno até um grau maior do que os peptídeos individuais na mesma concentração. Além disso, os tetrapeptídeos de uma variedade de fontes ECM tais como colágeno, laminina e elastina podem produzir uma indução intensificada de uma variedade de proteínas ECM (ver Tabelas 1 e 5).

Exemplo 5: Produção de COMBICINA barata para intensificar a estimulação da produção de colágeno

0 alto custo da síntese de peptídeos limita a possibilidade de produção de composições heterogêneas dos peptídeos bioativos. A presente invenção abranda muito esta limitação. Devido ao fato das seqüências atualmente reveladas terem atributos comuns (por exemplo, uma glicina ou prolina em ambos os terminais), uma faixa de tetrapeptideos variados nas posições 2 e 3 podem ser sintetizados numa única série de produção. Os peptídeos sintéticos podem ser feitos por qualquer método conhecido na técnica. (Benoiton, N., Chewistry of Peptide Synthesis, CRC (2005)). Durante a produção dos peptídeos, misturas de aminoácidos são adicionadas ao invés das amostras homogêneas. A química para determinar as proporções corretas das concentrações de aminoácidos adicionados nas posições misturadas para obter a proporção desejada dos peptídeos resultantes foi anteriormente descrita (Greenbaum et al. , Molecular and Cellular Proteomics 1: 60-68, 2002; Krstenansky et al., Letters in Drug Design and Discovery 1: 6-13, 2004; ambas as referências são aqui incorporadas na sua totalidade). Usando esta metodologia, uma biblioteca de peptídeos heterogêneos pode ser feita por aproximadamente o mesmo custo da síntese de um peptídeo.

A aplicação deste processo de produção permite a produção barata de combicinas bioativas. Isso é possibilitado pela composição única dos tetrapeptideos revelados. As misturas de tetrapeptideos são mais bem adequadas para incorporação em formulações de uso tópico do que os peptídeos mais longos. Devido ao seu comprimento, os tetrapeptideos têm vantagens práticas e químicas em peptídeos mais longos, incluindo os seguintes: incorporação mais fácil e dissolução em formulações, maior permeabilidade na pele e nos poros e maiores rendimentos de produção com métodos mais fáceis de produzir combinações de peptídeos. Embora não seja requerido, as formulações ideais dos tetrapeptídeos, individualmente ou em combinação, são formulações que mantêm uma significativa produção de colágeno em 24 horas por até 48 horas. Mais preferivelmente, as formulações poderiam induzir a síntese de ECM por todo o período de 4 8 horas, de modo que mais colágeno seja produzido por 48 horas do que em 24 horas.

Embora dentro do escopo da atual invenção, os tetrapeptídeos que promovem a produção de proteínas ECM em 24 horas, porém apresentam produção diminuída em 4 8 horas, são menos favorecidos. Sob esse aspecto, Tabela 6 mostra os resultados dos peptídeos atualmente revelados. Os peptídeos preferidos estão em negrito.

Tabela 6: Peptídeos revelados

<table>table see original document page 31</column></row><table> <table>table see original document page 32</column></row><table>

Exemplo 6: Estimuladores de colágeno também servem como moléculas multiefetoras intensificando o fechamento das feridas das células epiteliais da pele Colágenos são componentes chave de todas as fases da cicatrização de feridas. A estimulação da produção de colágeno reflete que o dano ocorreu à rede de colágeno (por exemplo, por enzimas ou destruição física). Realmente, o colapso total da rede de colágeno de fato faz com que a cicatrização ocorra. Conseqüentemente, um estimulador de colágeno também pode servir como uma molécula multiefetora orquestrando certa remodelagem da matriz e intensificando a cicatrização de feridas.

Experimentos de cicatrização de feridas foram efetuados em monocamadas das células epiteliais da pele humana (CRL-2592) plaqueadas em placas de 12 poços. As células foram privadas de soro por 24 horas antes da experimentação. As monocamadas confluentes de CRL-2592 foram feridas usando uma ponta de pipeta P200 (200 μL) . As feridas foram lavadas e documentadas por fotografia antes do tratamento com peptídeo. Os peptídeos foram adicionados até uma concentração final de 20 a 40 μg/mL. As células foram mantidas num incubador a 37°C, CO2 5% e 92% de umidade, exceto quando as imagens foram sendo capturadas por um curto período em temperatura ambiente. 0 fechamento da ferida foi acompanhado nos pontos de tempo de 6 horas e 10 horas. Feridas tratadas com PBS foram usadas como controles negativos para propósitos de comparação.

Tabela 7: Efeito dos peptídeos no fechamento de

<table>table see original document page 33</column></row><table> <table>table see original document page 34</column></row><table>

O fechamento da ferida da monocamada in vitro é um resultado da migração celular, a qual é importante em muitos processos biológicos tais como embriogênese, angiogênese, reações inflamatórias e reparo de feridas.

Esses processos são considerados como sendo regulados pelas interações com outras células, citocinas e proteínas ECM. Conforme demonstrado na Tabela 7, SEQ ID NO: 14 induz significativamente o fechamento de feridas em comparação com os efeitos do PBS sozinho. Tal atividade é peptídeo- específica, assim como específica do tipo celular, uma vez que SEQ ID NO: 14 não induz o fechamento de ferida numa monocamada de fibroblasto de pele humana (dados não apresentados). SEQ ID NO: 5 também é uma indutora de colágeno, porém não intensifica o fechamento de feridas ou a migração de células epiteliais até qualquer grande extensão em comparação com os efeitos do PBS sozinho. 0 fato de que a SEQ ID NO: 14 induziu a migração celular ou o fechamento de feridas de um modo específico para as células epiteliais da pele (isto é, não recruta os fibroblastos) pode adicionar uma vantagem para o uso deste peptídeo para cuidados de pele, uma vez que se acredita que o recrutamento de grandes quantidades de fibroblastos ativos num sítio ferido resulte numa deposição excessiva e contração do tecido resultando em cicatrização.

Todas as composições ou métodos revelados e reivindicados aqui podem ser feitos e executados sem experimentação demasiada à luz da presente descoberta.

Enquanto as composições e métodos da invenção foram descritos em termos das modalidades preferidas, será aparente para as pessoas versadas na técnica que variações podem ser aplicadas às composições e/ou métodos e nos passos ou na seqüência de passos dos métodos aqui descritos sem sair do conceito, espírito e escopo da invenção. Mais especificamente, será aparente que certos agentes, os quais são tanto quimicamente quanto fisiologicamente relacionados podem ser substituídos para os agentes aqui descritos, enquanto os mesmos resultados ou similares poderiam ser alcançados. Todos os tais substitutos e modificações similares aparentes para as pessoas versadas na técnica são considerados como estando dentro do espírito, escopo e conceito da invenção. LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

Harris, Scott M. Falia, Timothy J. Zhang, Lijuan

FRAGMENTOS' DE PEPTÍDEOS PARA INDUZIR A SÍNTESE DE PROTEÍNAS DA MATRIZ EXTRACELULAR

Synthetic Peptide = Peptídeo Sintético

<130> 11181.0034.OOPCOO

<150> US 60/813,284 <151> 2006-06-13

<160> 46

<170> PatentIn version 3.4

<210> 1

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide H7

<400> 1

Pro Glu Gly Pro 1

<210> 2 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide H8 <400> 2

Gly Phe Pro Gly 1

<210> 3 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide H9 <400> 3

Gly Ser Pro Gly 1

<210> 4 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide HlO

<400> 4

Pro Gly Pro Arg 1

<210> 5 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide Hll

<400> 5

Gly Glu Pro Gly 1

<210> 6 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide HlZ

<400> 6

Gly Ala Gly Pro 1

<210> 7

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide Η13

<400> 1

Gly Pro Pro Gly 1

<210> 8

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetie Peptide Η14

<400> Gly Glu Lys Gly 1

<210> 9

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide Η16

<400> 9

Pro Glu Lys Pro 1

<210> 10

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide Η21

<400> 10

Pro Lys Gly Pro 1

<210> 11

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide Η22

<400> 11

Pro Gly Gln Pro 1

<210> 12

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide Η23

<400> 12

Pro Gly Thr Pro 1

<210> 13

<211> 4

<212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Synthetic Peptide Η25

<400> 13

Pro Met Gly Pro

1

<210> 14

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide Η26

<400> 14

Pro Gly Pro Pro 1

<210> 15

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetiç Peptide Η29

<400> 15

Pro Gln Gly Pro 1

<210> 16 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide Η30

<400> 16

Pro Gly Asn Pro 1

<210> <211> <212 > <213>

<220> <223>

17 5

PRT

Artificial

Synthetic Peptide Η32

<400>

17 Lys Thr Thx Lys Ser 1 5

<210> 18

<211> 36

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Peptide LL37

<400> 18

Leu Leu Gly Asp Phe Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Glu 1 5 10 15

Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val Pro 20 25 30

Arg Thr Glu Ser 35

19 4

PRT

Artificial

<210> <211> <212> <213>

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 19

Gly Ala Ala Gly 1

<210> 20 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 20

Gly Ala Lys Gly 1

<210> 21

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide <400> 21

Gly Ala Pro Gly <210> 22

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 22

Gly Asp Lys Gly 1

<210> 23

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 23

Gly Asp Arg Gly 1

<210> 21

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetie Peptide

<400> 24

Gly Glu Arg Gly 1

<210> 25

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 25

Gly Ile Pro Gly 1

<210> 26

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 26

Gly Lys Asp Gly 1

<210> 27

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 27

Gly Lys Pro Gly 1

<210> 28 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 28

Gly Leu Lys Gly 1

<210> 29 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 29

Gly Leu Pro Gly 1

<210> <211> <212> <213>

<220> <223>

<400>

30 4

PRT

Artificial

Synthetic Peptide 30

Gly Asn Pro Gly 1 <210> 31

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 31

Gly Pro Αία Gly 1

<210> 32

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide <400> 32

Gly Pro Lys Gly 1

<210> 33

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide <400> 33

Gly Pro Gln Gly 1

<210> 34

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide <400> 34

Gly Pro Arg Gly 1

<210> 35

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220> <223> Synthetic Peptide

<400> 35

Gly Pro Ser Gly 1

<210> 36 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 36

Gly Pro Thr Gly 1

<210> 37 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide <400> 37

Gly Pro Val Gly 1

<210> 38 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 38

Gly Gln Pro Gly 1

<210> <211> <2 12> <213>

<220> <223>

<400>

39 4

PRT

Artificial

Synthetic Peptide 39

Gly Arg Asp Gly 1 <210> 40

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 40

Gly Arg Pro Gly 1

<210> 41

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 41

Gly Thr Pro Gly

1

<210> 42

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide

<400> 42

Gly Val Lys Gly 1

<210> 43

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic peptide

<400> 43

Gly Val Pro Gly 1

<210> 44

<211> 4

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Synthetic Peptide <400> 44

Çly Tyr Pro Gly 1

<210> 45

<211> 1669

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 45

Met Gly Pro Arg Leu Ser Val Trp Leu Leu Leu Leu Pro Ala Ala Leu 1 5 10 15

Leu Leu His Glu Glu His Ser Arg Ala Ala Ala Lys Gly Gly Cys Ala 20 25 30

Gly Ser Gly Cys Gly Lys Cys Asp Cys His Gly Val Lys Gly Gln Lys 35 40 45

Gly Glu Arg Gly Leu Pro Gly Leu Gln Gly Val Ile Gly Phe Pro Gly 50 55 60

Met Gln Gly Pro Glu Gly Pro Gln Gly Pro Pro Gly Gln Lys Gly Asp 65 70 75 80

Thr Gly Glu Pro Gly Leu Pro Gly Thr Lys Gly Thr Arg Gly Pro Pro 85 90 95

Gly Ala Ser Gly Tyr Pro Gly Asn Pro Gly Leu Pro Gly Ile Pro Gly 100 105 110

Gln Asp Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ile Pro Gly Cys Asn Gly Thr 115 120 125

Lys Gly Glu Arg Gly Pro Leu Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Phe Ala 130 135 140

Gly Asn Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Met Lys Gly Asp Pro Gly 145 150 155 160

Glu Ile Leu Gly His Val Pro Gly Met Leu Leu Lys Gly Glu Arg Gly 165 170 175

Phe Pro Gly Ile Pro Gly Thr Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Leu 180 185 190

Gln Gly Pro Val Gly Pro Pro Gly Phe Thr Gly Pro Pro Gly Pro Pro 195 200 205

Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Glu Lys Gly Gln Met Gly Leu Ser Phe 210 215 220

Gln Gly Pro Lys Gly Asp Lys Gly Asp Gln Gly Val Ser Gly Pro Pro 225 230 235 240

Gly Val Pro Gly Gln Ala Gln Val Gln Glu Lys Gly Asp Phe Ala Thr Lys Gly

Gly Val

Pro Gly 290

Gly Glu 305

Glu Lys

Thr Gly

Gly Pro

Gln Pro 370

Gly Phe 385

Thr Ser

Gly Ser

Glu Cys

Gly Gln 4 50

Glu Ser 465

Pro Gln Lys Gly

Gly Pro

Glu Pro 530

Asp Pro 54 5

Glu Lys 260

Gly Glu 275

Lys Asp

Pro Gly

Gly Glu

Pro Leu 340

Arg Gly 355

Gly Pro

Pro Gly

Leu Pro

Pro Gly 420

Gln Pro 435

Pro Gly

Cys Leu

Gly Pro

Asp Arg 500

Gln Gly 515

Gly Glu Gly Phe

245

Gly Gln

Lys Gly

Gly Asp

Tyr Pro 310

Ala Gly 325

Gly Glu

GlU Pro

Pro Gly

Glu Arg 390

Gly Pro 405

Pro Pro

Gly Pro

Phe Ile

Ile Cys 470

Pro Gly 485

Gly Leu

Thr Pro

Phe Tyr

Pro Gly 550

Lys Gly

Glu Pro 280

Lys Gly 295

Gly Leu

Pro Pro

Lys Gly

Gly Pro 360

Leu Pro 375

Gly Glu

Ser Gly

Gly Gln

Pro Gly 440

Gly Glu 455

Asp Ile

Glu Ile

Pro Gly

Gly Leu 520

Phe Asp 535

Gln Pro

250

Glu Pro 265

Gly Lys

Glu Lys

Ile Gly

Gly Pro 330

Glu Arg 345

Lys Gly

Val Pro

Lys Gly

Arg Asp 410

Pro Gly 425

Asp Gln

Ile Gly

Asp Gly

Gly Phe 490

Arg Asp 505

Ile Gly Leu Arg Gly Met

Gly Phe

Pro Gly

Gly Ser 300

Arg Gln 315

Pro Gly

Gly Tyr

Phe Pro

Gly Gln 380

Asp Arg 395

Gly Leu

Tyr Thr

Gly Pro

Glu Lys 460

Tyr Arg 475

Pro Gly

Gly Val

Gln Pro

Leu Lys 540

Pro Gly 555

Gln Gly 270

Pro Arg 285

Pro Gly

Gly Pro

Ile Val

Pro Gly 35 0

Gly Leu 365

Ala Gly

Gly Phe

Pro Gly

Asn Gly 430

Pro Gly 445

Gly Gln

Gly Pro

Gln Pro

Ala Gly 510

Gly Ala 525

Gly Asp Arg Ala

255

Met Pro

Gly Lys

Phe Pro

Gln Gly 320

Ile Gly 335

Thr Pro

Pro Gly

Ala Pro

Pro Gly 400

Pro Pro 415

Ile Val

Ile Pro

Lys Gly

Pro Gly 480

Gly Ala 495

Val Pro

Lys Gly

Lys Gly

Gly Ser 560 Pro Gly Arg Asp

Gly Ser Val Gly 580

Phe Pro Gly Ser 595

Gly Pro Ala Gly 610

Gly Pro Gly Ser 625

Ile Val Pro Leu

Pro Gly Phe Pro 660

Gly Arg Pro Gly 675

Ile Gly Phe Pro 690

Gly Asp Met Gly 705

Leu Pro Gly Asn

Gly Leu Pro Gly 740

Thr Pro Gly Glu 755

His Gly Ala Ile 770

Gly Pro Pro Gly 785

Ile Gly Pro Pro

Gly Leu Ser Gly 820

Phe Pro Gly Leu 835

Gly Leu Pro Gly 850

Gln Gln Gly Ala 065

Gly His Pro Qly 565

Leu Lys Gly Glu

Arg Gly Asp Thr 600

Pro Ile Gly Asp 615

Pro Gly Leu Pro 630

Pro Gly Pro Pro 645

Gly Pro Gln Gly

Leu Pro Gly Glu 680

Gly Pro Pro Gly 695

Pro Pro Gly Thr 710

Pro Gly Val Gln 725

Leu Lys Gly Leu

Lys Gly Ser Ile 760

Gly Pro Pro Gly 775

Leu Pro Gly Ser 790

Gly Ala Arg Gly 805

Pro Pro Gly Ile

Asp Met Pro Gly 840

Ile Thr Gly Gln 855

Pro Gly Ile Pro 870

Leu Pro Gly Pro 570

Arg Gly Pro Pro 585

Gly Pro Pro Gly

Lys Gly Gln Ala 620

Gly Pro Lys Gly 635

Gly Ala Glu Gly 650

Asp Arg Gly Phe 665

Lys Gly Ala Val

Pro Lys Gly Val 700

Pro Gly Arg Pro 715

Gly Gln Lys Gly 730

Pro Gly Leu Pro 745

Gly Val Pro Gly

Leu Gln Gly Ile 780

Val Gly Ser Pro 795

Pro Pro Gly Gly 810

Lys Gly Glu Lys 825

Pro Lys Gly Asp

Ser Gly Leu Pro 860

Gly Phe Pro Gly 875

Lys Gly Ser Pro 575

Gly Gly Val Gly 590

Pro Pro Gly Tyr 605

Gly Phe Pro Gly

Glu Pro Gly Lys 640

Leu Pro Gly Ser 655

Pro Gly Thr Pro 670

Gly Gln Pro Gly 685

Asp Gly Leu Pro

Gly Phe Asn Gly 720

Glu Pro Gly Val 7 35

Gly Ile Pro Gly 750

Val Pro Gly Glu 7 65

Arg Gly Glu Pro

Gly Val Pro Gly 800

Gln Gly Pro Pro 815

Gly Phe Pro Gly 830

Lys Gly Ala Gln 845

Gly Leu Pro Gly

Ser Lys Gly Glu 880 Met Gly Val Met Gly Thr Pro Gly Gln Pro Gly Ser Pro Gly Pro Val 885 890 895

Gly Ala Pro Gly Leu Pro Gly Glu Lys Gly Asp His Gly Phe Pro Gly 900 905 910

Ser Ser Gly Pro Arg Gly Asp Pro Gly Leu Lys Gly Asp Lys Gly Asp 915 920 925

Val Gly Leu Pro Gly Lys Pro Gly Ser Met Asp Lys Val Asp Met Gly 930 935 940

Ser Met Lys Gly Gln Lys Gly Asp Gln Gly Glu Lys Gly Gln Ile Gly

945 950 955 960

Pro Ile Gly Glu Lys Gly Ser Arg Gly Asp Pro Gly Thr Pro Gly Val 965 970 975

Pro Gly Lys Asp Gly Gln Ala Gly Gln Pro Gly Gln Pro Gly Pro Lys 980 985 990

Gly Asp Pro Çly Ile Ser Gly Thr Pro Gly Ala Pro Gly Leu Pro Gly 995 1000 1005

Pro Lys Gly Ser Val Gly Gly Met Gly Leu Pro Gly Thr Pro Gly 1010 1015 1020

Glu Lys Gly Val Pro Gly Ile Pro Gly Pro Gln Gly Ser Pro Gly 1025 1030 1035

Leu Pro Gly Asp Lys Gly Ala Lys Gly Glu Lys Gly Gln Ala Gly 1040 1045 1050

Pro Pro Gly Ile Gly Ile Pro Gly Leu Arg Gly Glu Lys Gly Asp 1055 1060 1065

Gln Gly Ile Ala Gly Phe Pro Gly Ser Pro Gly Glu Lys Gly Glu 1070 1075 1080

Lys Gly Ser Ile Gly Ile Pro Gly Met Pro Gly Ser Pro Gly Leu 1085 1090 1095

Lys Gly Ser Pro Gly Ser Val Gly Tyr Pro Gly Ser Pro Gly Leu 1100 1105 1110

Pro Gly Glu Lys Gly Asp Lys Gly Leu Pro Gly Leu Asp Gly Ile 1115 1120 1125

Pro Gly Val Lys Gly Glu Ala Gly Leu Pro Gly Thr Pro Gly Pro 1130 1135 1140

Thr Gly Pro Ala Gly Gln Lys Gly Glu Pro Gly Ser Asp Gly Ile 1145 1150 1155

Pro Gly Ser Ala Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Leu Pro Gly Arg 1160 1165 1170

Gly Phe Pro Gly Phe Pro Gly Ala Lys Gly Asp Lys Gly Ser Lys 1175 1180 1185

Gly Glu Val Gly Phe Pro Gly Leu Ala Gly Ser Pro Gly Ile Pro

1190 1195 1200

Gly Ser Lys Gly Glu Gln Gly Phe Met Gly Pro Pro Gly Pro Glri

1205 1210 1215

Gly Gln Pro Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly His Ala Thr Glu Gly

1220 1225 1230

Pro Lys Gly Asp Arg Gly Pro Gln Gly Gln Pro Gly Leu Pro Gly

1235 1240 1245

Leu Pro Gly Pro Met Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Ile Asp Gly

1250 1255 1260

Val Lys Gly Asp Lys Gly Asn Pro Gly Trp Pro Gly Ala Pro Gly

1265 . 1270 1275

Val Pro Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly Phe Gln Gly Met Pro Gly

1280 1285 1290

Ile Gly Gly Ser Pro Gly Ile Thr Gly Ser Lys Gly Asp Met Gly

1295 1300 1305

Pro Pro Gly Val Pro Gly Phe Gln Gly Pro Lys Gly Leu Pro Gly

1310 1315 1320

Leu Gln Gly Ile Lys Gly Asp Gln Gly Asp Gln Gly Val Pro Gly

1325 1330 1335

Ala Lys Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Tyr Asp

1340 1345 1350

Ile Ile Lys Gly Glu Pro Gly Leu Pro Gly Pro Glu Gly Pro Pro

1355 1360 1365

Gly Leu Lys Gly Leu Gln Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Gln Gln

1370 1375 1380

Gly Val Thr Gly Leu Val Gly Ile Pro Gly Pro Pro Gly Ile Pro

1385 1390 1395

Gly Phe Asp Gly Ala Pro Gly Gln Lys Gly Glu Met Gly Pro Ala

1400 1405 1410

Gly Pro Thr Gly Pro Arg Gly Phe Pro Gly Pro Pro Gly Pro Asp.

1415 1420 1425

Gly Leu Pro Gly Ser Met Gly Pro Pro Gly Thr Pro Ser Val Asp

1430 1435 1440

His Gly Phe Leu Val Thr Arg His Ser Gln Thr Ile Asp Asp Pro

1-3 45 1450 1455

Gln Cys Pro Ser Gly Thr Lys Ile Leu Tyr His Gly Tyr Ser Leu

1460 1465 1470 Leu Tyr Val Glri Gly Asn Glu Arg Ala His Gly Gln Asp Leu Gly 1475 1480 1485

Thr Ala Gly Ser Cys Leu Arg Lys Phe Ser Thr Met Pro Phe Leu 1490 1495 1500

Phe Cys Asn Ile Asn Asn Val Cys Asn Phe Ala Ser Arg Asn Asp 1505 1510 1515

Tyr Ser Tyr Trp Leu Ser Thr Pro Glu Pro Met Pro Met Ser Met 1520 1525 1530

Ala Pro Ile Thr Gly Glu Asn Ile Arg Pro Phe Ile Ser Arg Cys 1535 1540 1545

Ala Val Cys Glu Ala Pro Ala Met Val Met Ala Val His Ser Gln 1550 1555 1560

Thr Ile Gln Ile Pro Pro Cys Pro Ser Gly Trp Ser Ser Leu Trp 1565 1570 1575

Ile Çly Tyr Ser Phe Val Met His Thr Ser Ala Gly Ala Glu Gly 1580 1585 1590

Ser Gly Gln Ala Leu Ala Ser Pro Gly Ser Cys Leu Glu Glu Phe 1595 1600 1605

Arg Ser Ala Pro Phe Ile Glu Cys His Gly Arg Gly Thr Cys Asn 1610 1615 1620

Tyr Tyr Ala Asn Ala Tyr Ser Phe Trp Leu Ala Thr Ile Glu Arg 1625 1630 1635

Ser Glu Met Phe Lys Lys Pro Thr Pro Ser Thr Leu Lys Ala Gly 1640 1645 1650

Glu Leu Arg Thr Hxs Val Ser Arg Cys Gln Val Cys Met Arg Arg 1655 1660 1665

Thr

<210> 46

<211> 1466

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 46

Met Met Ser Phe Val Gln Lys Gly Ser Trp Leu Leu Leu Ala Leu Leu 1 5 10 15

His Pro Thr Ile Ile Leu Ala Gln Gln Glu Ala Val Glu Gly Gly Cys 20 25 30

Ser His Leu Gly Gln Ser Tyr Ala Asp Arg Asp Val Trp Lys Pro Glu 35 40 45

Pro Cys

Gln Ile Cys Val Cys Asp Ser Gly Ser Val Leu Cys Asp Asp 50 55 60

Ile Ile Cys Asp Asp Gln Glu Leu Asp Cys Pro Asn Pro Glu Ile Pro 65 70 75 80

Phe Gly Glu Cys Cys Ala Val Cys Pro Gln Pro Pro Thr Ala Pro Thr 85 90 95

Arg Pro Pro Asn Gly Gln Gly Pro Gln Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly 100 105 110

Pro Pro Çly Ile Pro Gly Arg Asn Gly Asp Pro Gly Ile Pro Gly Gln 115 120 125

Pro Gly Ser Pro Gly Ser Pro Gly Pro Pro Gly Ile Cys Glu Ser Cys 130 135 140

Pro Thr Gly Pro Gln Asn Tyr Ser Pro Gln Tyr Asp Ser Tyr Asp Val 145 150 155 160

Lys Ser Gly Val Ala Val Gly Gly Leu Ala Gly Tyr Pro Gly Pro Ala 165 170 175

Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Thr Ser Gly His Pro Gly 180 185 190

Ser Pro Gly Ser Pro Gly Tyr Gln Gly Pro Pro Gly Glu Pro Gly Gln 195 200 205

Ala Gly Pro Ser Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ala Ile Gly Pro Ser 210 215 220

Gly Pro Ala Gly Lys Asp Gly Glu Ser Gly Ar^ Pro Gly Arg Pro Gly 225 230 235 240

Glu Arg Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Ile Lys Gly Pro Ala Gly Ile 245 250 255

Pro Gly Phe Pro Gly Met Lys Gly His Arg Gly Phe Asp Gly Arg Asn 260 265 270

Gly Glu Lys Gly Glu Thr Gly Ala Pro Gly Leu Lys Gly Glu Asn Gly 275 280 285

Leu Pro Gly Glu Asn Gly Ala Pro Gly Pro Met Gly Pro Arg Gly Ala 290 295 300

Pro Gly Glu Arg Gly Arg Pro Gly Leu Pro Gly Ala Ala Gly Ala Arg 305 310 315 320

Gly Asn Asp Gly Ala Arg Gly Ser Asp Gly Gln Pro Gly Pro Pro Gly 325 330 335

Pro Pro Gly Thr Ala Gly Phe Pro Gly Ser Pro Gly Ala Lys Gly Glu 340 345 350

Val Gly Pro Ala Gly Ser Pro Gly Ser Asn Gly Ala Pro Gly Gln Arg 355 360 365 Çly Glu Pro Gly Pro Gln Gly His Ala Gly Ala Gln Gly Pro Pro Gly 370 375 380

Pro Pro Gly Ile Asn Gly Ser Pro Gly Gly Lys Gly Glu Met Gly Pro 385 390 395 400

Ala Gly He Pro Gly Ala Pro Gly Leu Met Gly Ala Arg Gly Pro Pro 405 410 415

Gly Pro Ala Gly Ala Asn Gly Ala Pro Gly Leu Arg Gly Gly Ala Gly 420 425 430

Glu Pro Gly Lys Açrn Gly Ala Lys Gly Glu Pro Gly Pro Arg Gly Glu 435 440 445

Arg Gly Glu Ala Gly Ile Pro Gly Val Pro Gly Ala Lys Gly Glu Asp 450 455 460

Gly Lys Asp Çly Ser Pro Gly Glu Pro Gly Ala Asn Gly Leu Pro Gly 465 470 475 480

Ala Ala Çly Glu Arg Gly Ala Pro Gly Phe Arg Gly Pro Ala Gly Pro ■4 85 490 495

Asn Gly Ile Pro Çly Glu Lys Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Ala Pro 500 505 510

Gly Pro Ala Gly Pro Arg Gly Ala Ala Gly Glu Pro Gly Arg Asp Gly 515 520 525

Val Pro Gly Gly Pro Gly Met Arg Gly Met Pro Gly Ser Pro Gly Gly 530 535 540

Pro Gly Ser Asp Gly Lys Pro Gly Pro Pro Gly Ser Gln Gly Glu Ser 545 ' 550 555 560

Gly Arg Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ser Gly Pro Arg Gly Gln Pro Gly 565 570 575

Val Met Gly Phe Pro Gly Pro Lys Gly Asn Asp Gly Ala Pro Gly Lys 580 585 590

Asn Gly Glu Arg Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Pro Gln Gly Pro Pro 595 600 605

Gly Lys Asn Gly Glu Thr Gly Pro Gln Gly Pro Pro Gly Pro Thr Gly 610 615 620

Pro Gly Gly Asp Lys Gly Asp Thr Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Leu 625 630 635 640

Gln Gly Leu Pro Gly Thr Gly Gly Pro Pro Gly Glu Asn Gly Lys Pro 645 650 655

Gly Glu Pro Gly Pro Lys Gly Asp Ala Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly 660 665 670

Gly Lys Gly Asp Ala Gly Ala Pro Gly Glu Arg Gly Pro Pro Gly Leu 675 680 685 Ala Gly 690

Gly Gly 705

Thr Pro

Pro Gly

Gly Val

Pro Pro 770

Pro Gly 785

Gly Glu Gln Asn

Lys Gly

Gly Pro 850

Ser Pro 865

Pro Gly

Gly Ser

Ala Pro

Pro Gly 930

Gly Pro 915

Pro Pro Lys Gly

Ala Pro

Lys Gly

Gly Leu

Pro Lys 740

Pro Gly 755

Gly Pro

Leu Pro

Thr Gly

Gly Glu 820

Glu Gly 835

Ala Gly

Gly Gly

Pro Pro

Pro Gly 900

Gly Ser 915

Glu Lys

Leu Gly

Gly Met

Glu Ser 980

Gly Leu

Ala Ala 710

Gln Gly 725

Gly Asp

Lys Asp

Ala Gly

Gly Ile 790

Pro Pro 805

Pro Gly

Gly Pro

Pro Pro

Pxo Gly 870

Gly Ser 885

Lys Asp

Pro Gly

Gly Ser

Ile Ala 950

Pro Gly 965

Gly Lys

Arg Gly 695

Gly Pro

Met Pro

Lys Gly

Gly Pro 760

Gln Pro 775

Ala Gly

Gly Pro

Gly Lys

Pro Gly 840

Gly Pro 855

Ala Ala

Asn Gly

Gly Pro

Val Ser 920

Pro Gly 935

Gly Ile

Pro Arg

Pro Gly

Gly Ala

Pro Gly

Gly Glu 730

Glu Pro 74 5

Arg Gly

Gly Asp

Pro Arg

Ala Gly 810

Gly Glu 825

Val Ala

Gln Gly

Gly Phe

Asn Pro 890

Pro Gly 905

Gly Pro

Ala Gln

Thr Gly

Gly Ser 97 0

Ala Asn 985

Gly Pro 700

Pro Pro 715

Arg Gly

Gly Gly

Pro Thr

Lys Gly 7B0

Gly Ser 795

Phe Pro

Arg Gly

Gly Pro

Val Lys 860

Pro Gly 875

Gly Pro

Pro Ala

Lys Gly

Gly Pro 940

Ala Arg 955

Pro Gly Gly Leu

Pro Gly

Gly Ala

Gly Leu

Pro Gly 750

Gly Pro 765

Glu Gly

Pro Gly

Gly Ala

Ala Pro 830

Pro Gly 845

Gly Glu Ala Arg

Pro Gly

Gly Asn 910

Asp Ala 925

Pro Gly

Gly Leu

Pro Gln

Ser Gly 990

Pro Glu

Ala Gly 720

Gly Ser 735

Ala Asp

Ile Gly

Gly Ala

Glu Arg 800

Pro Gly 815

Gly Glu

Gly Ser

Arg Gly

Gly Leu 880

Pro Ser 895

Thr Gly

Gly Gln

Ala Pro

Ala Gly 9 60

Gly Val 975

Glu Arg

Gly

Pro Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Leu Ala Gly Thr Ala G.ly 995 1000 1005

Glu Pro Gly Arg Asp Gly Asn- Pro Gly Ser Asp Gly Leu Pro Gly

1010 1015 1020

Arg Asp Gly Ser Pro Gly Gly Lys Gly Asp Arg Gly Glu Asn Gly

1025 1030 1035

Ser Pro Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly His Pro Gly Pro Pro Gly

1040 1045 1050

Pro Val Gly Pro Ala Gly Lys Ser Gly Asp Arg Gly Glu Ser Gly

1055 1060 1065

Pro Ala Gly Pro Ala Gly Ala Pro Gly Pro Ala Gly Ser Arg Gly

1070 1075 1080

Ala Pro Gly Pro Gln Gly Pro Arg Gly Asp Lys Gly Glu Thr Gly

1085 1090 1095

Glu Arg Gly Ala Ala Gly Ile Lys Gly His Arg Gly Phe Pro Gly

1100 1105 1110

Asn Pro Gly Ala Pro Gly Ser Pro Gly Pro Ala Gly Gln Gln Gly

1115 1120 1125

Ala Ile Gly Ser Pro Gly Pro Ala Gly Pro Arg Gly Pro Val Gly

1130 1135 1140

Pro Ser Gly Pro Pro Gly Lys Asp Gly Thr Ser Gly His Pro Gly

1145 1150 1155

Pro Ile Gly Pro Pro Gly Pro Arg Gly Asn Arg Gly Glu Arg Gly

1160 1165 1170

Ser Glu Gly Ser Pro Gly His Pro Gly Gln Pro Gly Pro Pro Gly

1175 1180 1185

Pro Pro Gly Ala Pro Gly Pro Cys Cys Gly Gly Val Gly Ala Ala

1190 1195 1200

Ala Ile Ala Gly Ile Gly Gly Glu Lys Ala Gly Gly Phe Ala Pro

1205 1210 1215

Tyr Tyr Gly Asp Glu Pro Met Asp Phe Lys Ile Asn Thr Asp Glu

1220 1225 1230

Ile Met Thr Ser Leu Lys Ser Val Asn Gly Gln Ile Glu Ser Leu

1235 1240 1245

Ile Ser Pro Asp Gly Ser Arg Lys Asn Pro Ala Arg Asn Cys Arg

1250 1255 1260

Asp Leu Lys Phe Cys His Pro Glu Leu Lys Ser Gly Glu Tyr Trp

1265 1270 1275

Val Asp Pro Asn Gln Gly Cys Lys Leu Asp Ala Ile Lys Val Phe 1280 1285 1290 Cys Asn Met Glu Thr Gly Glu Thr Cys Ile Ser Ala Asn Pro Leu

1295 1300 1305

Asn Val Pro Arg Lys His Trp Trp Thr Asp Ser Ser Ala Glu Lys

1310 1315 1320

Lys His Val Trp Phe Gly Glu Ser Met Asp Gly Gly Phe Gln Phe

1325 1330 1335

Ser Tyr Gly Asn Pro Glu Leu Pro Glu Asp Val Leu Asp Val Gln

1340 1345 1350

Leu Ala Phe Leu Arg Leu Leu Ser Ser Arg Ala Ser Gln Asn Ile

1355 1360 1365

Thr Tyr His Cys Lys Asn Ser Ile Ala Tyr Met Asp Gln Ala Ser

1370 1375 1380

Gly Asn Val Lys Lys Ala Leu Lys Leu Met Gly Ser Asn Glu Gly

1385 1390 1395

Glu Phe Lys Ala Glu Gly Asn Ser Lys Phe Thr Tyr Thr Val Leu

1400 14 05 1410

Glu Asp Gly Cys Thr Lys His Thr Gly Glu Trp Ser Lys Thr Val

1415 1420 1425

Phe Glu Tyr Arg Thr Arg Lys Ala Val Arg Leu Pro Ile Val Asp

1430 1435 1440

Ile Ala Pro Tyr Asp Ile Gly Gly Pro Asp Gln Glu Phe Gly Val

1445 1450 1455

Asp Val Gly Pro Val Cys Phe Leu 1460 1465

Claims (31)

1. Tetrapeptídeo capaz de induzir a produção das proteínas da matriz extracelular, caracterizado pelo fato de compreender a fórmula GxxG, em que G é glicina e χ é um aminoácido variável.

2. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o tetrapeptídeo ainda compreende a fórmula GExG, em que E é ácido glutâmico.

3. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o tetrapeptídeo é a SEQ ID NO: 5 OU a SEQ ID NO: 8.

4. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o tetrapeptídeo ainda compreende a fórmula GxPG, em que P é prolina.

5. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o tetrapeptídeo é selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 7.

6. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o tetrapeptídeo é amidado nos terminais carbóxi.

7. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que χ é selecionado do grupo compreendendo R, L, P, F, Q, Ε, I, K, S, V, A, N, D, T, Y e G.

8. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a proteína da matriz extracelular é colágeno.

9. [Claim missing on original document]

10. Composição, caracterizada pelo fato de compreender pelo menos um tetrapeptídeo da Reivindicação 1 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

11. Composição, de acordo com a Reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o tetrapeptídeo está presente numa concentração eficaz variando de cerca de 0,01 μg/mL. até cerca de 100 μg/mL.

12. Composição, de acordo com a Reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o tetrapeptídeo está presente numa concentração eficaz variando de cerca de 0,1 ug/mL até cerca de 1 ug/mL.

13. Composição, de acordo com a Reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que a composição está na forma de um aerossol, emulsão, líquido, loção, creme, pasta, ungüento ou espuma.

14. Método para estimular a produção de colágeno em humanos, o método sendo caracterizado pelo fato de compreender a administração ao referido humano de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição da Reivindicação 9.

15. Método, de acordo com a Reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a concentração terapeuticamente eficaz está na faixa de cerca de 0,1 μg/mL até cerca de 50 μg/mL do tetrapeptídeo.

16. Método, de acordo com a Reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a administração ao referido humano de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição promove a cicatrização de feridas ou da pele danificada.

17. Tetrapeptídeo capaz de induzir a produção das proteínas da matriz extracelular, caracterizado pelo fato de compreender a fórmula PxxP, em que P é prolina e χ é um aminoácido variável.

18. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o tetrapeptídeo ainda compreende a fórmula PGxP, em que G é glicina.

19. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o tetrapeptídeo é selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14 e SEQ ID NO: 16.

20. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o tetrapeptídeo compreende ainda a fórmula PExP, em que E é ácido glutâmico.

21. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o tetrapeptídeo é a SEQ ID NO: 1 OU a SEQ ID NO: 9.

22. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o tetrapeptídeo é amidado no terminal carbõxi.

23. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que χ é selecionado do grupo compreendendo R, L, P, F, Q, Ε, I, K, S, V, A, N, D, Τ, Y e G.

24. Tetrapeptídeo, de acordo com a Reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a proteína da matriz extracelular é colágeno.

25. Composição, caracterizada pelo fato de compreender pelo menos um tetrapeptídeo de acordo com a Reivindicação 16 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

26. Composição, de acordo com a Reivindicação 24, caracterizada pelo fato de que o tetrapeptídeo está presente numa concentração eficaz variando de cerca de -0,1 μg/mL até cerca de 50 μ9/ιηΙ;.

27. Composição, de acordo com a Reivindicação 24, caracterizada pelo fato de que a composição está na forma de um aerossol, emulsão, liquido, loção, creme, pasta, ungüento ou espuma.

28. Método para estimular a produção de colágeno em humanos, o método sendo caracterizado pelo fato de compreender a administração ao referido humano de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição da reivindicação 24.

29. Método, de acordo com a Reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a concentração terapeuticamente eficaz está na faixa de cerca de 0,1 μg/mL até cerca de 5 0 μg/mL de tetrapeptideo.

30. Método, de acordo com a Reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a administração ao referido humano de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição promove a cicatrização de feridas da pele danificada.

31. Tetrapeptideo capaz de incluir a produção de proteínas de matriz extracelular, caracterizado pelo fato de compreender a fórmula PGPR ou GAGP.