PT2402369E - Fragmentos peptídicos para induzir a síntese de proteínas da matriz extracelular - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

"FRAGMENTOS PEPTÍDICOS PARA INDUZIR A SÍNTESE DE PROTEÍNAS DA MATRIZ EXTRACELULAR"

Este pedido reivindica o beneficio de prioridade sobre o Pedido Provisório U.S. com o N.° de Série 60/813.284, depositado em 13 de junho, 2006.

CAMPO DA DIVULGAÇÃO

A presente divulgação refere-se a tetrapéptidos com o motivo de aminoácidos GxxG ou PxxP, onde G (glicina) e P (prolina) são mantidos e x é um aminoácido variável. A presente divulgação também se refere a tetrapéptidos de deslocamento de quadro ativos que são sequências de tetrapéptidos deslocadas à distância de um quadro de um tetrapéptido GxxG ou PxxP numa proteína da ECM. Em particular, a presente divulgação refere-se a GxxG, PxxP ou péptidos de deslocamento de quadro ativos que estimulam a produção de proteínas da matriz extracelular e melhoram a cicatrização de feridas da monocamada de células epiteliais da pele humana danificada por arranhões. As composições de péptidos podem ser utilizadas em formulações para reparar a pele danificada ou manter uma pele saudável. ANTECEDENTES O envelhecimento da pele é frequentemente visto como a formação de rugas e cicatrização celular comprometida. Uma ferida é definida como uma quebra na integridade epitelial da pele. A cicatrização normal de feridas envolve uma série de eventos complexa e dinâmica mas soberbamente orquestrada conduzindo à reparação de tecidos lesionados. O maior componente da pele normal é a matriz extracelular (ECM), uma matriz tipo gel produzida pelas células que rodeia. A ECM é composta por duas classes principais incluindo proteínas e proteoglicanos estruturais fibrosos. Sabe-se que alterações na composição e estado reticulado da ECM estão associadas com o envelhecimento e uma gama de distúrbios de pele adquiridos e hereditários. Tem sido bem documentado que a ECM não só proporciona suporte estrutural, mas também influencia o comportamento celular tal como diferenciação e proliferação. Também, cada vez mais investigação sugere que os componentes da matriz podem ser uma fonte de sinais celulares para facilitar a proliferação e migração de células epiteliais e que, portanto, melhoram a cicatrização de feridas. A maior classe de moléculas da ECM fibrosas é a família do colagénio, que inclui pelo menos 16 tipos diferentes de colagénio. 0 colagénio na matriz dérmica é composto primariamente de colagénios tipo I (80-85%) e tipo III (8-11%), ambos os quais são colagénios fibrilares, ou em forma de cilindro. A força tênsil da pele deve-se, predominantemente, a estas moléculas de colagénio fibrilares, que se auto-organizam em miofibrilas numa disposição empilhada de cabeça-com-cauda e lado-a-lado. As moléculas de colagénio tornam-se reticuladas com moléculas de colagénio adjacentes, criando uma resistência e estabilidade adicionais nas fibras de colagénio. Os danos na rede de colagénio (por exemplo, por enzimas ou destruição física), ou o seu colapso total faz com que a cicatrização ocorra por reparação. Vários péptidos bioativos que estimulam a produção das proteínas da ECM foram relatados tanto em literatura científica como em patentes emitidas. Historicamente, os péptidos têm sido isolados a partir de fontes naturais e têm sido recentemente o objeto de estudos de relações entre estrutura e função. Os péptidos naturais também serviram como pontos de partida para a conceção de análogos de péptidos sintéticos.

Sequências específicas dentro das proteínas da ECM podem estimular elementos úteis na pele, tal como colagénio de tipo I, colagénio de tipo III e fibronectina (Katayama et al.r J. BIOL. CHEM. 288:9941-9944 (1983)). Katayama et al. identificaram o pentapéptido, KTTKS (SEQ ID NO:17), dentro do pró-péptido no terminal carboxilo (resíduos 197-241) do colagénio de tipo I. O pró-péptido é clivado durante a produção da proteína de colagénio madura. 0 pró-péptido clivado pode participar na regulação da produção de colagénio através de um mecanismo de feedback de biossíntese, com o segmento KTTKS desempenhando um papel ativo. Maquart et al. (J Soc BIOL. 193:423-28 (1999)) relataram que os péptidos GHK e CNYYSNS também estimulam a síntese de ECM. Estas sequências podem ser libertadas durante a renovação da ECM, sinalizando, desta forma, a necessidade de reparação da ECM. As sequências peptídicas curtas libertadas por qualquer dos mecanismos são normalmente designadas "matrikines" (Maquart et al. , J. SOC. BIOL. 193 : 423-28 (1999)) .

Enquanto um número de péptidos naturais e sintéticos existem, existe uma necessidade de péptidos biologicamente ativos melhorados e métodos para a sua utilização.

SUMARIO São divulgados tetrapéptidos que são caracterizados pelo motivo da sequência de aminoácidos GxxG ou PxxP, onde os resíduos G (glicina) e P (prolina) são mantidos e x é um aminoácido variável. Os tetrapéptidos são derivados a partir de sequências que ocorrem várias vezes ao longo da sequência primária da proteína da ECM, colagénio de tipo IV. As sequências divulgadas induzem a produção de todas as formas de colagénio mais do que as sequências peptídicas conhecidas anteriormente, incluindo KTTKS, vendida sob o nome comercial MATRIXYL™ por SEDERMA SAS (França) . Além disso, uma composição que compreende uma combinação de várias sequências de repetição de multiplicação desencadeia uma resposta de produção de colagénio ainda maior. Os benefícios adicionais podem ser esperados a partir de combinações de péptidos presentes numa variedade de proteínas da ECM. A produção de uma combinação específica de tetrapéptidos para a reconstrução da ECM pode ter um custo comercial proibitivo. É divulgado um meio relativamente simples e rentável de produzir uma combinação diversificada de tetrapéptidos biologicamente ativos. Através da produção de uma biblioteca combinatória de tetrapéptidos com o motivo GxxG ou PxxP, uma variedade de tetrapéptidos biologicamente ativos podem ser gerados na mesma corrida de produção (por exemplo, GEPG, GPEG, GPPG, e GEEG). A combinação de tetrapéptidos pode induzir mais formação de proteínas da ECM do que péptidos únicos. As composições que compreendem os tetrapéptidos divulgados, isolados ou em combinação, são úteis nos mercados de cuidados de pele incluindo, mas não limitado a, aqueles que abordam o enrugamento da pele, tonificação, firmeza ou flacidez da pele. A estimulação do colagénio pelos tetrapéptidos divulgados pode melhorar significativamente a saúde e aspeto da pele danificada e envelhecida.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A FIG. 1 é a SEQ ID NO:45 que é a sequência de aminoácidos de Colagénio IV ilustrando as ocorrências dos tetrapéptidos GxxG. Todas as sequências a negrito estão sublinhadas e as sequências sobrepostas estão sublinhadas duas vezes. A FIG. 2 é a SEQ ID NO:46 que é a sequência de aminoácidos de Colagénio III ilustrando as ocorrências de PGPR e GAGP ativos de deslocamento de quadro. Todas as sequências ativas de deslocamento de quadro estão a negrito e sublinhadas e as sequências GxxG que ocorrem à distância de um deslocamento de quadro estão sublinhadas duas vezes. A FIG. 3 também é a SEQ ID NO: 45, a sequência de aminoácidos de Colagénio IV, ilustrando as ocorrências do tetrapéptido PGPP.

DESCRIÇÃO DETALHADA A invenção está dirigida, no geral, a tetrapéptidos que estimulam a produção de proteínas da ECM e modulam a cicatrização celular, e a utilizações de tais tetrapéptidos. Péptidos

Uma forma de realização da presente divulgação está dirigida a um tetrapéptido isolado que compreende o motivo GxxG ou PxxP. Nesta forma de realização G (glicina) ou P (prolina) são mantidos e x é um aminoácido variável. 0 péptido é a SEQ ID NO :1 (PEGP) . Outros péptidos divulgados no presente documento incluem a SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO: 7 , SEQ ID NO: 8 , SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO:ll, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, ou SEQ ID NO:16.

De acordo com um aspeto da presente invenção, é proporcionado um tetrapéptido que compreende a SEQ ID NO:l (PEGP) para utilização como um medicamento.

Noutro aspeto, a invenção proporciona uma composição farmacêutica para utilização como um medicamento que compreende a SEQ ID NO:l (PEGP) e um veiculo farmaceuticamente aceitável. A invenção também proporciona uma composição da invenção para utilização no tratamento de cuidados da pele.

Num aspeto adicional, é proporcionado um método in vitro para estimular a produção de colagénio por uma célula, o método que compreende expor uma célula a um tetrapéptido que compreende a SEQ ID NO: (PEGP) induzindo assim a produção de colagénio pela célula. O documento EP 0858808 divulga péptidos para a utilização no tratamento de feridas. São divulgadas composições para tratamento de feridas que compreendem desde 10~6 % a 1,0 % p/p de um ou mais péptidos, em que os péptidos têm desde 3 a 30 resíduos de aminoácidos de comprimento e compreendem a sequência Gly-Pro-Ala.

Katayama K et al. J. Biol. Chem., 1993, 268(14), 9941-9944 divulga um pentapéptido de pró-colagénio tipo I que promove a produção da matriz extracelular.

Heyns K et al. Hoppe-Seyler' s Zeitschrift fur physiologische Chemie. 321(1), 161-183, 2 de dezembro de 1960, Walter de Gruyter, Berlim, Alemanha, divulga a síntese de derivados de tri e tetrapéptidos a partir de prolina e hidroxiprolina, incluindo a síntese de carbobenzoxi-PEGP.

Outra forma de realização da presente divulgação está dirigida a um tetrapéptido isolado que compreende o motivo

GxPG, onde x é P em qualquer posição variável, ou ambos. Nesta forma de realização, G (glicina) e P (prolina) são mantidos e x é um aminoácido variável. 0 péptido pode, geralmente, ser qualquer péptido que se inclui dentro da descrição anterior, e mais preferentemente é a SEQ IDN0:2, SEQ IDN0:3, SEQ IDN0:5, ou SEQ ID NO:7.

Outra forma de realização da presente divulgação está dirigida a um tetrapéptido isolado que compreende o motivo GExG. Nesta forma de realização, G (glicina) e E (ácido glutâmico) são mantidos e x é um aminoácido variável. 0 péptido pode, geralmente, ser qualquer péptido que se inclui dentro da descrição anterior, e mais preferentemente é a SEQ ID NO: 5 SEQ ID NO:8.

Outra forma de realização da presente divulgação está dirigida a um tetrapéptido isolado que compreende o motivo PGxP. Nesta forma de realização, P (prolina) e G (glicina) são mantidos e x é um aminoácido variável. 0 péptido pode, geralmente, ser qualquer péptido que se inclui dentro da descrição anterior, e mais preferentemente é a SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID N0:14, ou SEQ ID NO:16.

Outra forma de realização da presente divulgação está dirigida a um tetrapéptido isolado que compreende o motivo PExP. Nesta forma de realização, P (prolina) e E (ácido glutâmico) são mantidos e x é um aminoácido variável. 0 péptido pode, geralmente, ser qualquer péptido que se inclui dentro da descrição anterior, e mais preferentemente é a SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO:9.

Outra forma de realização da presente divulgação está dirigida a um tetrapéptido ativo de deslocamento de quadro. Nesta forma de realização, o tetrapéptido ocorre à distância de um deslocamento de quadro de um tetrapéptido GxxG ou PxxP numa proteína da ECM. 0 péptido pode, geralmente, ser qualquer péptido que se inclui dentro da descrição anterior, e mais preferentemente é a SEQ ID NO:4 SEQ ID NO:6.

Cada um dos péptidos descritos acima pode compreender aminoácidos D ou L. Os péptidos podem compreender todos os D-aminoácidos ou L-aminoácidos. Os péptidos podem ter um terminal-C ácido (-CO2H) ou, preferentemente, um terminal-C amida (-CONH2, -CONHR, ou -CONR2) . Os péptidos podem ser adicionalmente aumentados ou modificados, seja química ou enzimaticamente. Por exemplo, os péptidos podem ser amidados (-NH2) no terminal-C, o que pode tornar os tetrapéptidos menos suscetíveis à degradação pelas protéases e aumenta a sua solubilidade em comparação com as formas de ácido livre. Os péptidos também podem ser lipidados, o que pode proporcionar uma penetração cutânea aumentada.

Os péptidos descritos acima podem conter os seguintes aminoácidos: R (arginina), L (leucina) , P (prolina), F (fenilalanina), Q (glutamina), E (ácido glutâmico), I (isoleucina), K (lisina), S (serina), V (valina), A (alanina), N (asparagina), D (ácido aspártico), T (treonina) , Y (tirosina) e G (glicina). Os péptidos descritos acima não incluem os seguintes M (metionina), C (cisteína), H (histidina) ou W (triptofano) . Consequentemente, numa forma de realização, x não é selecionado a partir de (metionina), C (cisteína), H (histidina) ou W (triptofano). Métodos de Utilização

Uma forma de realização adicional da presente divulgação é direcionada a métodos de utilização dos péptidos descritos acima. Os métodos de utilização podem envolver a utilização de um único péptido, ou podem envolver a utilização de dois ou mais péptidos em combinação.

Uma forma de realização da presente divulgação é um método de promoção da reparação da pele danificada e a manutenção de pele saudável utilizando tetrapéptidos que estimulam a produção de proteínas da ECM. 0 método está, geralmente, direcionado ao contacto de células dérmicas (da pele) com uma composição que contém o péptido. As composições podem ser um aerossol, emulsão, líquido, loção, creme, pasta, pomada, espuma, ou outra formulação farmaceuticamente aceitável. Geralmente, uma formulação farmaceuticamente aceitável incluiria qualquer veículo adequado para utilização na pele humana, por exemplo, veículo cosmeticamente adequado e veículo dermatologicamente aceitável. As composições podem conter outros agentes biologicamente ativos tais como retinoides ou outros péptidos. As composições podem conter veículos ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis. A etapa de contacto pode ser realizada in vivo, in situ, in vitro, ou através de qualquer método conhecido para os peritos na especialidade. Mais preferentemente, a etapa de contacto deverá ser realizada topicamente numa concentração suficiente para desencadear uma resposta estimulatória. A concentração do péptido na composição pode ser de cerca de 0,01 yg/ml até cerca de 100 yg/ml, cerca de 0,1 yg/ml até cerca de 50 yg/ml, e cerca de 0,1 yg/ml até cerca de 1 yg/ml. A etapa de contacto pode ser realizada num mamífero, um gato, um cão, uma vaca, um cavalo, um porco, ou um ser humano. Uma composição preferida para promover a produção de proteínas da ECM compreende a SEQ ID NO: 8; mais preferentemente, a composição compreende a SEQ ID NO: 8 numa mistura heterogénea com pelo menos um outro tetrapéptido. Numa forma de realização ainda mais preferida, os tetrapéptidos individuais na composição poderiam causar a produção de colagénio sustentada ao longo de um período de pelo menos 48 horas.

Uma forma de realização adicional da presente divulgação está dirigida a um método para promover a cicatrização de feridas de pele danificada pelo envelhecimento normal, doença, lesão, trauma, ou por cirurgia ou outros procedimentos médicos . O método pode compreender a administração de uma composição à ferida de um animal, em que a composição compreende qualquer um dos péptidos descritos acima, singularmente ou em combinação. As composições podem ser um líquido, loção, creme, pasta, pomada, espuma, ou qualquer outra formulação farmaceuticamente aceitável. As composições podem conter veículos ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis. As composições podem conter outros agentes biologicamente ativos tais como agentes antimicrobianos ou fatores de crescimento. As composições também podem ser utilizadas em combinação com outros agentes terapêuticos tais como enxertos teciduais, produtos de cultura tecidual, oxigénio ou curativos. A concentração do péptido na composição pode ser de cerca de 0, 01 yg/ml até cerca de 100 yg/ml, cerca de 0,1 yg/ml até cerca de 50 yg/ml, e cerca de 0, 1 yg/ml até cerca de 1 yg/ml. A composição pode ser administrada à ferida topicamente. O animal pode ser, no geral, qualquer tipo de animal, e preferentemente é um mamífero, e mais preferentemente é um ser humano, vaca, cavalo, gato, cão, porco, cabra, ou ovelha. Uma composição preferida para aplicações de cicatrização celular nas quais a produção de proteínas da ECM é promovida compreende a SEQ ID NO: 8; mais preferentemente, a composição compreende a SEQ ID NO:8 numa mistura heterogénea com pelo menos um outro tetrapéptido. Numa forma de realização ainda mais preferida, os tetrapéptidos individuais na composição poderiam causar a produção de colagénio sustentada ao longo de um período de pelo menos 48 horas.

Uma forma de realização adicional da presente divulgação está dirigida a um método para reduzir a formação de cicatrizes da pele danificada pelo envelhecimento normal, doença, lesão, trauma, ou por cirurgia ou outros procedimentos médicos. O método pode compreender a administração de uma composição à ferida de um animal, em que a composição compreende qualquer um dos péptidos descritos acima, singularmente ou em combinação. As composições podem ser um líquido, loção, creme, pasta, pomada, espuma, ou outra formulação farmaceuticamente aceitável. As composições podem conter veículos ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis. As composições podem conter outros agentes biologicamente ativos tais como agentes antimicrobianos ou fatores de crescimento. As composições também podem ser utilizadas em combinação com outros agentes terapêuticos tais como enxertos teciduais, produtos de cultura tecidual, oxigénio ou curativos. A concentração do péptido na composição pode ser de cerca de 0,01 yg/ml até cerca de 100 pg/ml, cerca de 0,1 pg/ml até cerca de 50 pg/ml, e cerca de 0,1 yg/ml até cerca de 1 yg/ml. A composição pode ser administrada à ferida topicamente. O animal pode ser, no geral, qualquer tipo de animal, e preferentemente é um mamífero, e mais preferentemente é um ser humano, vaca, cavalo, gato, cão, porco, cabra, ou ovelha. Uma composição preferida para aplicações de cicatrização celular nas quais a produção de proteínas da ECM é promovida compreende a SEQ ID NO:8; mais preferentemente, a composição compreende a SEQ ID NO:8 numa mistura heterogénea com pelo menos um outro tetrapéptido. Numa forma de realização ainda mais preferida, os tetrapéptidos individuais na composição poderiam causar a produção de colagénio sustentada ao longo de um período de pelo menos 48 horas.

Uma forma de realização adicional da presente divulgação está direcionada a métodos para a produção dos tetrapéptidos divulgados em combinação. Os péptidos podem ser produzidos utilizando qualquer método conhecido para os peritos na especialidade tal como aqueles divulgados em Merrifield, R.B., Solid Phase Peptide Synthesis I., J. AM. CHEM. SOC. 85:2149-2154 (1963); Carpino, L.A. et al. , [(9-Fluorenylmethyl)Oxy] Carbonyl (Fmoc) Amino Acid Chlorides: Synthesis, Characterization, And Application To The Rapid Synthesis Of Short Peptides, J. ORG. CHEM. 37:51:3732-3734; Merrifield, R.B. et al., Instrument For Automated Synthesis Of Peptides, ANAL. CHEM. 38:1905-1914 (1966); ou Kent, S.B.H. et al. , High Yield Chemical Synthesis Of Biologically Active Peptides On An Automated Peptide Synthesizer Of Novel Design, IN: PEPTIDES 1984 (Ragnarsson U., ed.) Almqvist and Wiksell Int., Stockholm (Suécia), pp. 185-188. Preferentemente, os péptidos serão produzidos por uma máquina capaz da adição sequencial de aminoácidos a uma cadeia de péptido em crescimento. Contudo, os péptidos também podem ser fabricados utilizando metodologia de fase de solução padrão.

Foi observado que a adição de uma mistura de aminoácidos livres em vez de misturas de péptidos homogéneas durante a síntese da cadeia peptídica resulta na incorporação variada de aminoácidos livres de modo que uma combinação de péptidos resulta a partir das reações de síntese. A frequência de incorporação relativa de um aminoácido particular incluído numa mistura de dois ou mais aminoácidos durante a síntese, pode ser ajustada. 0 ajuste é possível através da modificação da razão de um aminoácido tornado disponível durante o processo de síntese em relação aos outros aminoácidos na mistura (isto designa-se uma mistura isocinética).

Os seguintes exemplos são incluídos para demonstrar formas de realização preferidas da presente divulgação. Deverá ser apreciado pelos peritos na especialidade que as técnicas divulgadas nos exemplos que se seguem representam técnicas descobertas pelo inventor como funcionando bem na prática da invenção, e assim podem ser consideradas como constituindo modos preferidos para a sua prática. No entanto, os peritos na especialidade devem, à luz da presente divulgação, apreciar que muitas alterações podem ser feitas nas formas de realização específicas que são divulgadas e ainda assim obter um resultado igual ou semelhante sem se afastar do âmbito da invenção. EXEMPLOS

Exemplo 1: Identificação das sequências de tetrapéptido de repetição no colagénio

Uma proporção relativamente elevada de sequências de repetição de tetrapéptido de colagénio IV têm o motivo GxxG (onde x é um aminoácido) . Um número destas é mostrado in situ como parte da sequência de colagénio IV completa ilustrada na Figura 1 como a SEQ ID NO: 45. 0 colagénio IV foi examinado primeiramente devido ao seu papel na interação com outros componentes da ECM especializados (Veja-se Gregory Schultz et al., 2005) . Existem onze sequências com o motivo GxxG no colagénio IV que aparecem mais do que dez vezes (GxxG onde xx é representado por: vp, ek, fp, lp, pp, sp, ep, ip, pk, qp e tp) . Destas sequências de tetrapéptido, oito de onze sequências contêm prolina na posição 3, duas de onze sequências contêm P na posição 2, uma de onze sequências contêm prolina nas posições 2 e 3, e uma de onze sequências não contém prolina. As sequências divulgadas são referidas como REPLIKINES™. "REPLIKINE" é definida como uma sequência curta entre as proteínas da ECM que ocorre múltiplas vezes (ou seja, é replicada) . Esta sequência pode estar presente numa proteína da ECM (por exemplo, colagénio IV). Preferentemente, a sequência está presente em múltiplas proteínas da ECM (por exemplo, todos os colagénios, elastina, laminina, etc.)· A presença da sequência em múltiplas proteínas da ECM aumenta a probabilidade de que o fragmento possa ser capaz de promover a síntese ou a reparação da ECM.

As onze sequências GxxG que aparecem no colagénio IV listado acima estão realçadas na sequência de colagénio IV humano ilustrada na Figura 1. Nesta figura, todas as sequências a negrito estão sublinhadas e as sequências sobrepostas estão sublinhadas duas vezes. Todas menos uma destas sequências também aparece nos colagénios I, II, III, e V. Este facto contribui para a capacidade dos péptidos divulgados para estimular a produção de todos os tipos de colagénio, particularmente quando os péptidos são utilizados em combinação. O Quadro 1 mostra a frequência de várias repetições de tetrapéptidos nas proteínas da ECM. As sequências a negrito no Quadro 1 são aquelas que aparecem no colagénio IV dez ou mais vezes.

Tal como é evidente a partir de uma revisão da sequência de colagénio IV, SEQ ID NO:45, também existem muitas ocorrências de sequências que têm o motivo PxxP. Por exemplo, a sequência PGPP ocorre não menos do que quinze vezes como ilustrado na Figura 3. Portanto, esta sequência divulgada também é referida como REPLIKINE™. Preferentemente, esta sequência está presente em múltiplas proteínas da ECM (por exemplo, todos os colagénios, elastina, laminina, etc.) uma vez que a presença desta sequência em múltiplas proteínas da ECM aumenta a probabilidade de que o fragmento possa ser capaz de promover a síntese ou a reparação da ECM. As quinze sequências PGPP que aparecem no colagénio IV listado acima estão realçadas e sublinhadas na sequência de colagénio IV humano ilustrada na Figura 3 .

Exemplo 2: Identificação dos ativos de deslocamento de quadro

Em adição à proporção relativamente elevada de sequências de repetição do tetrapéptido de colagénio de tipo IV com o motivo GxxG, outras sequências de tetrapéptido que ocorrem à distância de um deslocamento de quadro de uma sequência de tetrapéptido de GxxG ou PxxP foram identificadas. Estas sequências podem repetir-se ou ocorrer apenas uma vez dentro de uma proteína da ECM e podem estar localizadas à distância de uma posição de um aminoácido a partir de uma sequência de tetrapéptido GxxG ou PxxP como descrito no presente documento. Estas sequências de tetrapéptido são referidas como ativos de deslocamento de quadro. Tais ativos de deslocamento de quadro podem conter consequentemente uma G ou P na segunda ou terceira posição dependendo da direção do deslocamento de quadro. Foi adicionalmente reconhecido que os ativos de deslocamento de quadro podem ser combinados com outras sequências de tetrapéptido divulgadas neste pedido formando uma combikine. Um exemplo de uma tal combikine é HO6 e H15.

Um exemplo de um ativo de deslocamento de quadro é GAGP ou H12 (SEQ ID NO:6). H12 (GAGP) aparece à distância de um deslocamento de resíduo (ou quadro) a partir do tetrapéptido de GxxG, GGAG, no Colagénio III (SEQ ID NO:46) como ilustrado na Figura 2. Nesta figura, todas as sequências ativas de deslocamento de quadro estão a negrito e sublinhadas e as sequências GxxG que ocorrem à distância de um deslocamento de quadro estão sublinhadas duas vezes. Além disso, conforme mostrado no Quadro 5, este tetrapéptido (GAGP) alcança bons resultados para a produção de colagénio às 48 horas. Outro exemplo é a sequência PGPR, que é H10 (SEQ ID NO: 4) que ocorre onze vezes nos Colagénios I-IV. Como aparece múltiplas vezes numa proteína da ECM individual, este tetrapéptido seria adicionalmente considerado uma REPLIKINE. A Figura 2 (SEQ ID NO:46) ilustra vários casos deste tetrapéptido com cada um ocorrendo à distância de um deslocamento de quadro a partir do tetrapéptido de GxxG, GPRG. Este ativo de deslocamento de quadro particular aparece em múltiplas proteínas da ECM e portanto aumenta a probabilidade de que o fragmento possa ser capaz de promover a síntese ou reparação da ECM.

Exemplo 3: Identificação de sequências de repetição que estimulam a produção de colagénio Várias sequências identificadas nos Exemplos 1 e 2 foram sintetizadas utilizando química de péptidos padrão e testadas quanto à estimulação do colagénio a partir de fibroblastos dérmicos. Os péptidos sintetizados foram amidados no terminal-C, o que tornou os tetrapéptidos menos suscetíveis à degradação pelas protéases e aumentou a sua solubilidade em comparação com as formas de ácido livre. Fibroblastos dérmicos humanos foram incubados em placas de 96 poços a 37 °C e CO2 a 5% durante 24 e 48 horas em 150 μΐ de meio de cultura celular completo (Cascade Biologies, Portland, OR; Cat. N.° M-106-500), suplementado com Suplemento de Crescimento de Baixo Soro (Cascade Biologies, Portland, OR; Cat. N.° S-003-10) contendo péptidos de amostra a uma concentração peptídica final de 50 pg/ml. Cada poço foi semeado com 10.000 células. Após a incubação, amostras de meio de 100 μΐ foram recuperadas a partir de cada poço e testadas quanto à produção de colagénio.

Os ensaios foram realizados por Tebu-bio Laboratories (França) utilizando o Kit de Ensaio de Colagénio SIRCOL™ (Biocolor Assays, UK) seguindo o protocolo do fabricante. O Ensaio de Colagénio SIRCOL™ é um método de ligação ao corante concebido para a análise de colagénios solúveis libertados para o meio de cultura pelas células de mamífero durante a cultura in vitro. 0 colagénio das amostras testadas liga-se ao corante SIRCOL™ aniónico. Os complexos de colagénio-corante são separados por precipitação da solução e são sedimentados por centrifugação. 0 sedimento de colagénio-corante recuperado foi dissolvido numa solução alcalina antes das medições de absorvância. Medições duplicadas foram tomadas nos tempos de 24 e 48 horas a partir de duas amostras separadas. Foi realizada a média das quatros medições para cada amostra. A absorvância dos brancos de reagente, padrões de colagénio, e amostras foram medidas a 560 nm. A absorvância do branco de reagente foi subtraída da absorvância a partir de cada amostra às 24 e 48 horas.

Dois conjuntos de dados separados foram utilizados para gerar duas curvas de calibração padrão de colagénio. A primeira curva de calibração foi gerada para propósitos de cálculo da quantidade de colagénio nas amostras H6 (combinação das SEQ ID NOs:l-4), H7-H14 (SEQ ID NOs:l-8, respetivamente) e H15 (combinação das SEQ ID NOs:5-8). A segunda curva de calibração foi gerada para cálculo da quantidade de colagénio nas amostras Hl6 (SEQ ID NO:9), H21-23 (SEQ ID NOs:10-12, respetivamente), H25-26 (SEQ ID NOs:13-14, respetivamente), ou H29-30 (SEQ ID NOs:15-16, respetivamente), H32 (SEQ ID NO:17), H33 (combinação das SEQ ID NOs:9-12), H34 (combinação das SEQ ID NOs:ll-14), H35 (combinação das SEQ ID NOs:13-16), H36 (combinação da SEQ ID NOs: 1, 6, 5, 8), H37 (SEQIDNO:17) e H38 (SEQ ID NO:8) a partir das medições de absorvância foi criada traçando a Abs560nm dos padrões de colagénio conhecidos frente às respetivas concentrações dos padrões de colagénio (em microgramas) cada vez que uma série de ensaios é realizada. Em relação a cada conjunto de dados, a mesma curva de calibração foi utilizada para amostras tomadas nos tempos de 24 e 48 horas (Quadros 2A e 2B) . Consequentemente, curvas padrão diferentes foram preparadas imediatamente antes da realização de cada série de ensaios.

Uma regressão linear foi realizada a partir do traçado dos valores de Abss60nm frente a concentrações dos respetivos padrões de colagénio utilizando o MICROSOFT EXCEL™. A regressão resultou numa linha descrita pela fórmula y = 0,013x para ambos os tempos de incubação indicados no Quadro 2A. Como os resultados são idênticos, apenas o período de tempo de 24 horas foi utilizado para curvas de calibração da segunda série. A fórmula da linha obtida na data 1 do ensaio e na data 2 do ensaio da segunda série de amostras foi y = 0,0178x e y = 0,0162x, respetivamente. O péptido LL-37 (SEQ ID NO:18) foi utilizado como um controlo positivo já que foi amplamente relatado que possuía um impacto na cicatrização de feridas num homem (Heilbom et ai., The Cathelicidin Anti-Microbial Peptide LL-37

Is Involved In The Re-Epithelialization Of Human Skin Wounds And Is Lacking In Chronic Ulcer Epithelium, J. Invest. Dermato. 120:379-89 (2003)). O limite de deteção do ensaio definido pelo fabricante é 2,5 pg. A quantidade total de colagénio produzido nas amostras contendo péptidos foi calculada a partir valores de absorvância médios tomados às 24 horas (Quadro 3A) e 48 horas (Quadro 3B) utilizando a equação linear derivada a partir da curva padrão. A quantidade total de colagénio produzido nas amostras contendo péptidos Hl 6 (SEQ ID NO:9), H21-23 (SEQ ID NOs:10-12, respetivamente), H25-26 (SEQ ID NOs:13-14, respetivamente), ou H29-30 (SEQ IDNOs:15-16, respetivamente), H32 (SEQ IDNO:17), H33 (combinação das SEQ ID NOs:9-12), H34 (combinação das SEQ ID NOs:ll-14), H35 (combinação das SEQ ID NOs:13-16), H36 (combinação da SEQ ID NOs: 1, 6, 5, 8), H37 (SEQIDNO:17) e H38 (SEQ ID NO:8) foi calculada a partir valores de absorvância médios tomados às 24 horas (Quadro 4A) e 48 horas (Quadro 4B) utilizando a equação linear derivada a partir da curva padrão. Estes valores foram comparados com o péptido LL37 (SEQ ID NO: 18), um péptido conhecido por estimular o colagénio. Em cada quadro, as amostras marcadas com um asterisco (*) podem não ser significativas já que o limite de deteção do ensaio é 2,5 pg.

Uma vez que os tamanhos da amostra eram de 100 μΐ, a concentração de colagénio produzida em cada amostra em microgramas por mililitro é determinada pela multiplicação da quantidade de colagénio detetada por dez. Os resultados para todas as amostras testadas estão resumidos no Quadro 5.

Todos os tetrapéptidos testados estimularam a produção do colagénio solúvel. Das sequências testadas, os tetrapéptidos GxxG com um ácido glutâmico na posição 2 estimulam melhor o colagénio em ambos os pontos de tempo de 24 e 48 horas. Estas sequências são Hll (GEPG; SEQ ID N0:5) , H14 (GEKG; SEQ ID NO:8) e H38 (GEKG; SEQ ID NO:8). Os péptidos foram inicialmente rastreados utilizando uma concentração peptídica de 50 pg/ml. Para examinar a concentração eficaz para estimular a produção de colagénio, H14 (SEQ ID NO: 8) foi também testada a 0,3 pg/ml como H38. Como mostrado no Quadro 5, a estimulação de colagénio induzida por H38 não foi diminuída na concentração mais baixa, indicando que a concentração de estimulação máxima da SEQ ID NO:8 é igual a, ou inferior a 0,3 pg/ml.

Para testar a sua eficácia, a SEQ ID NO:8 (H14 e H38) foi comparada com o péptido, LL37, (SEQ ID NO:18) que se conhece por estimular a produção de colagénio. Com base na quantidade de colagénio libertada pelos fibroblastos em resposta a LL37, 25 pg/ml foi considerada uma quantidade significativa de colagénio libertada devido ao contacto com um tetrapéptido. A SEQ ID NO: 8 induziu aproximadamente a mesma quantidade de colagénio que LL37 (SEQ ID NO: 18) às 24 horas. De maneira importante, o colagénio produzido como um resultado do contacto com a SEQ ID NO:8 foi substancialmente mantido durante pelo menos 48 horas. ASEQ IDN0:8 também foi comparada com um péptido líder no cuidado da pele conhecido por estimular a produção de colagénio, KTTKS (SEQIDN0:17) (Katayama et al. , J.BIOL.CHEM. 288:9941-9944 (1983)). KTTKS é um ingrediente no produto MATRIXYL™ (SEDERMA SAS, França) . A SEQ ID NO: 8 estimulou mais produção de colagénio do que o péptido KTTKS (SEQ ID NO:17) (Quadro 5) às 24 e 48 horas.

Exemplo 4: Identificação de combinações de péptidos que

melhoram sinergicamente a estimulação de colagénio COMBIKINES

Populações heterogéneas de tetrapéptidos ativos podem estimular a produção de colagénio a um nível mais elevado do que amostras homogéneas de tetrapéptidos. Os componentes da composição heterogénea são chamados COMBIKINES™. As COMBIKINES são um grupo de REPLIKINES combinadas para produzir um efeito mais amplo sobre um ou mais tipos celulares alvo. Os péptidos Hl1 (SEQ ID NO: 5) , H12 (SEQ ID NO:6) , Hl 3 (SEQ ID NO:7) , e Hl 4 (SEQ ID NO:8) quando combinados até uma concentração final de 50 pg/ml e testados utilizando o mesmo protocolo que para os péptidos individuais. Conforme esperado, o resultado obtido no ponto de tempo de 24 horas igualou a média das pontuações de indução individual. A combinação de péptidos às 48 horas, no entanto, induziu o colagénio até um nível de 43 pg/ml. Surpreendentemente, esta quantidade estava muito acima da média antecipada (21 pg/ml) dos quatro péptidos individuais (veja-se o Quadro 5). Assim, as combinações específicas dos péptidos pode estimular a produção de colagénio até um grau maior do que os péptidos individuais na mesma concentração. Além disso, os tetrapéptidos a partir de uma variedade de fontes de ECM tais como colagénio, laminina, e elastina podem produzir a indução melhorada de uma variedade de proteínas da ECM (vejam-se os Quadros 1 e 5) .

Exemplo 5: Produção rentável de COMBIKINE para melhorar a estimulação da produção de colagénio O custo elevado da síntese peptídica limita a viabilidade da produção de composições heterogéneas de péptidos bioativos. A presente invenção mitiga grandemente esta limitação. Uma vez que as sequências presentemente divulgadas têm algo em comum (por exemplo, uma glicina ou prolina em ambos os terminais), uma gama de tetrapéptidos que variam nas posições 2 e 3 podem ser sintetizados numa única corrida de produção. Os péptidos sintéticos podem ser feitos através de qualquer método conhecido na técnica. (Benoiton, N., Chemistry of Peptide Synthesis, CRC (2005)) . Durante a produção dos péptidos, as misturas de aminoácidos são adicionadas em vez de amostras homogéneas. A química para determinação das razões corretas de concentrações de aminoácidos adicionadas nas posições mistas para ganhar a razão desejada de péptidos resultantes foi descrita anteriormente (Greenbaum et al., Molecular and Cellular Proteomics 1:60-68, 2002; Krstenansky et al., Letters in Drug Design and Discovery 1:6-13, 2004) . Utilizando esta metodologia, uma biblioteca de péptidos heterogéneos pode ser feita por aproximadamente o mesmo custo de síntese de um péptido. A aplicação deste processo de produção permite a produção rentável de combikines bioativas. Isto é possível através da composição única dos tetrapéptidos divulgados. As misturas de tetrapéptidos estão melhor adequadas para a incorporação em formulações de utilização tópica do que péptidos mais longos. Dado o seu comprimento, os tetrapéptidos têm vantagens práticas e químicas em relação a péptidos mais longos, incluindo os seguintes: incorporação mais fácil e dissolução em formulações, maior permeabilidade na pele e poros, e rendimentos de produção mais elevados com métodos mais fáceis de produção de combinações de péptidos. Embora não seja necessário, as formulações ideais de tetrapéptidos, isoladamente ou em combinação, e formulações que mantêm uma produção de colagénio significativa a 24 horas até 48 horas. Mais preferentemente, as formulações poderiam induzir a síntese da ECM durante todo o período de 48 horas de modo que mais colagénio seja produzido em 48 horas do que 24 horas. Embora esteja dentro do âmbito da presente invenção, os tetrapéptidos que promovem a produção de proteínas da ECM às 24 horas, mas que demonstram uma produção diminuída às 48 horas, são menos favorecidos. A este respeito, o Quadro 6 mostra os resultados dos péptidos atualmente divulgados. Os péptidos preferidos estão a negrito.

Exemplo 6: Os estimuladores de colagénio também servem como moléculas muitiefetoras que potenciam o encerramento de feridas das células epiteliais da pele

Os colagénios são componentes chave de todas as fases da cicatrização de feridas. A estimulação da produção de colagénio reflete que ocorreu um dano na rede de colagénio (por exemplo, por enzimas ou destruição física) . Com efeito, o colapso total da rede de colagénio faz com que, de facto, ocorra a cicatrização. Portanto, um estimulador de colagénio também pode servir como uma molécula multiefetora que orquestra certa remodelação da matriz e potência a cicatrização de feridas.

As experiências de cicatrização de feridas foram realizadas em monocamadas de células epiteliais da pele humana (CRL-2592) colocadas em placas de 12 poços. As células foram privadas de soro durante 24 horas antes da experimentação. As monocamadas confluentes de CRL-2592 foram lesionadas utilizando uma ponta de pipeta P200 (200 μΐ) . As feridas foram lavadas e documentadas com fotografia antes do tratamento com péptidos. Os péptidos foram adicionados até uma concentração final desde 20 até 40 pg/ml. As células foram mantidas numa incubadora a 37 °C, 5% de CO2 e 92% de humidade, exceto durante o momento de captura das imagens durante um curto período à temperatura ambiente. O encerramento da ferida foi seguido nos pontos de tempo de 6 horas e 10 horas. As feridas tratadas com PBS foram utilizadas como controlos negativos para fins comparativos .

0 encerramento de feridas de monocamada in vitro é um resultado da migração celular, que é importante em muitos processos biológicos tais como a embriogénese, angiogénese, reações inflamatórias e reparação de feridas. Considera-se que estes processos são regulados por interações com outras células, citocinas e proteínas da ECM Como mostrado no Quadro 7, a SEQ ID NO: 14 induz significativamente o encerramento de feridas em comparação com os efeitos de PBS sozinho. Tal atividade é específica de péptidos bem como específica de tipo celular uma vez que a SEQ ID NO: 14 não induz o encerramento de feridas numa monocamada de fibroblastos da pele humana (dados não mostrados) . A SEQ ID NO:5 também é indutora de colagénio, mas não potência o encerramento de feridas ou migração de células epiteliais em qualquer grande medida em comparação com os efeitos do PBS sozinho. 0 facto de que a SEQ ID NO: 14 induziu a migração celular ou encerramento de feridas de um modo específico para célula epiteliais da pele (ou seja, não recruta fibroblastos) pode adicionar uma vantagem à utilização deste péptido para o cuidado da pele, já que se acredita que o recrutamento de grandes números de fibroblastos ativos para um local de ferida resulta na deposição excessiva e contração de tecido resultando em formação de cicatriz.

Todas as composições ou métodos divulgados e reivindicados no presente documento podem ser feitos e executados sem experimentação indevida à luz da presente divulgação. Enquanto as composições e métodos desta invenção foram descritos em termos de formas de realização preferidas, será aparente para os peritos na especialidade que variações podem ser aplicadas às composições e/ou métodos e nas etapas ou na sequência de etapas dos métodos descritos no presente documento sem se afastar do âmbito da invenção. Mais especificamente, será aparente que determinados agentes que estão tanto química como fisiologicamente relacionados podem ser substituídos para os agentes descritos no presente documento alcançando-se, da mesma forma, resultados iguais ou semelhantes. Todos os tais substituintes e modificações semelhantes, aparentes para os peritos na especialidade são considerados como estando dentro do âmbito da invenção.

LISTA DE SEQUÊNCIAS <110> Harris, Scott M. Falla, Timothy J. Zhang, Lijuan

<12 0> FRAGMENTOS PEPTÍDICOS PARA INDUZIR A SÍNTESE DE

PROTEÍNAS DA MATRIZ EXTRACELULAR

<130> 11181.0034.NPUSOO <150> US 60/813.284 <151> 13-06-2006 < 16 0 > 4 6 <170> Patentln versão 3.4 <210> 1 <211> 4

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H7 <400> 1

Pro Glu Gly Pro 1 <210> 2 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H8 <400> 2

Gly Phe Pro Gly 1 <210> 3 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H9 <400> 3

Gly Ser Pro Gly 1 <210> 4 <211> 4

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H10 <400> 4

Pro Gly Pro Arg 1 <210> 5 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético Hll <400> 5

Gly Glu Pro Gly 1 <210> 6 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H12 <400> 6

Gly Ala Gly Pro 1 <210> 7 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H13 <400> 7

Gly Pro Pro Gly 1 <210> 8 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H14 <400> 8

Gly Glu Lys Gly 1 <210> 9 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H16 <4 Ο Ο> 9

Pro Glu Lys Pro 1 <210> 10 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H21 <400> 10

Pro Lys Gly Pro 1 <210> 11 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H22 <400> 11

Pro Gly Gin Pro 1 <210> 12 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H23 <400> 12

Pro Gly Thr Pro 1 <210> 13 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H25 <400> 13

Pro Met Gly Pro 1 <210> 14 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H26 <400> 14

Pro Gly Pro Pro 1 <210> 15 <211> 4

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H29 <400> 15

Pro Gin Gly Pro 1 <210> 16 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H30 <400> 16

Pro Gly Asn Pro 1 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético H32 <400> 17

Lys Thr Thr Lys Ser 1 5 <210> 18 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Peptide LL37 <400> 18

Leu Leu Gly Asp Phe Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys lie Gly Lys Glu 15 10 15

Phe Lys Arg lie Val Gin Arg lie Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val Pro 20 25 30

Arg Thr Glu Ser 35 <210> 19 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 19

Gly Ala Ala Gly 1 <210> 20 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 20

Gly Ala Lys Gly 1 <210> 21 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 21

Gly Ala Pro Gly 1 <210> 22 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 22

Gly Asp Lys Gly 1

<210> 23 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 23

Gly Asp Arg Gly 1 <210> 24 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 24

Gly Glu Arg Gly 1 <210> 25 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 25

Gly lie Pro Gly 1 <210> 26 <211> 4

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 26

Gly Lys Asp Gly 1 <210> 27 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 27

Gly Lys Pro Gly 1 <210> 28 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 28

Gly Leu Lys Gly 1 <210> 29 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 29

Gly Leu Pro Gly 1 <210> 30 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 30

Gly Asn Pro Gly 1 <210> 31 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 31

Gly Pro Ala Gly 1 <210> 32 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 32

Gly Pro Lys Gly 1 <210> 33 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 33

Gly Pro Gin Gly 1 <210> 34 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 34

Gly Pro Arg Giy 1 <210> 35 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 35

Gly Pro Ser Gly 1 <210> 36 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 36

Gly Pro Thr Gly 1

<210> 37 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 37

Gly Pro Val Gly 1 <210> 38 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 38

Gly Gin Pro Gly 1 <210> 39 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 39

Gly Arg Asp Gly 1 <210> 40 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 40

Gly Arg Pro Gly 1 <210> 41 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 41

Gly Thr Pro Gly 1 <210> 42 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 42

Gly Vai Lys Gly 1 <210> 43 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 43

Gly Val Pro Gly 1 <210> 44 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 44

Gly Tyr Pro Gly 1

<210> 45 <211> 1669 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45

Met Gly Pro Arg Leu Ser Val Trp Leu Leu Leu Leu Pro Ala Ala Leu 15 10 15

Leu Leu His Glu Glu His Ser Arg Ala Ala Ala Lys Gly Gly Cys Ala 20 25 30

Gly Ser Gly Cys Gly Lys Cys Asp Cys His Gly Val Lys Gly Gin Lys 35 40 45

Gly Glu Arg Gly Leu Pro Gly Leu Gin Gly Val lie Gly Phe Pro Gly 50 55 60

Met Gin Gly Pro Glu Gly Pro Gin Gly Pro Pro Gly Gin Lys Gly Asp 65 70 75 80

Thr Gly Glu Pro Gly Leu Pro Gly Thr Lys Gly Thr Arg Gly Pro Pro 85 90 95

Gly Ala Ser Gly Tyr Pro Gly Asn Pro Gly Leu Pro Gly lie Pro Gly 100 105 110

Gin Asp Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly lie Pro Gly Cys Asn Gly Thr 115 120 125

Lys Gly Glu Arg Gly Pro Leu Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Phe Ala 130 135 140

Gly Asn Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Met Lys Gly Asp Pro Gly 145 150 155 160

Glu lie Leu Gly His Val Pro Gly Met Leu Leu Lys Gly Glu Arg Gly 165 170 175

Phe Pro Gly lie Pro Gly Thr Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Leu 180 185 190

Gin Gly Pro val Gly Pro Pro Gly Phe Thr Gly Pro Pro Gly Pro Pro 195 200 205

Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Glu Lys Gly Gin Met Gly Leu Ser Phe 210 215 220

Gin Gly Pro Lys Gly Asp Lys Gly Asp Gin Gly Val Ser Gly Pro Pro 225 230 235 240

Osiy Val Pro Gly Gin Ala Gin Val Gin Glu Lys Gly Asp Phe Ala Thr 245 250 255

Lys Gly Glu Lys Gly Gift Lys Gly Glu Pro Gly Phe Gin Gly Met Pro 260 265 270

Gly Val Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Lys Pro Gly Pro Arg Gly Lys 275 280 285

Pro Gly Lys Asp Gly Asp Lys Gly Glu Lys Gly Ser Pro Gly Phe Pro 290 295 300

Gly Glu Pro Gly Tyr Pro Gly Leu lie Gly Arg Gin Gly Pro Gin Gly 305 310 315 320

Glu Lys Gly Glu Ala Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly He Val He Gly 325 330 335

Thr Gly Pro Leu Gly Glu Lys Gly Glu Arg Gly Tyr Pro Gly Thr Pro 340 345 350

Gly Pro Arg Gly Glu Pro Gly Pro Lys Gly Phe Pro Gly Leu Pro Gly 355 360 365

Gin Pro Gly Pro Pro Gly Leu Pro Val Pro Gly Gin Ala Gly Ala Pro 370 375 380

Gly Phe Pro Gly Glu Arg Gly Glu Lys Gly Asp Arg Gly Phe Pro Gly 385 390 395 400

Thr Ser Leu Pro Gly Pro Ser Gly Arg Asp Gly Leu Pro Gly Pro Pro 405 410 415

Gly Ser Pro Gly Pro Pro Gly Gin Pro Gly Tyr Thr Asn Gly He Val 420 425 430

Glu Cys Gin Pro Gly Pro Pro Gly Asp Gin Gly Pro Pro Gly He Pro 435 440 445

Gly Gin Pro Gly Phe lie Gly Glu lie Gly Glu Lys Gly Gin Lys Gly 450 455 460

Glu Ser Cys Leu lie Cys Asp lie Asp Gly Tyr Arg Gly Pro Pro Gly 465 470 475 480

Pro Gin Gly Pro Pro Gly Glu lie Gly Phe Pro Gly Gin Pro Gly Ala 485 490 495

Lys Gly Asp Arg Gly Leu Pro Gly Arg Asp Gly Val Ala Gly Val Pro 500 505 510

Gly Pro Gin Gly Thr Pro Gly Leu lie Gly Gin Pro Gly Ala Lys Gly 515 520 525

Glu Pro Gly Glu Phe Tyr Phe Asp Leu Arg Leu Lys Gly Asp Lys Gly 530 535 540

Asp Pro Gly Phe Pro Gly Gin Pro Gly Met Pro Gly Arg Ala Gly Ser 545 550 555 560

Pro Gly Arg Asp Gly His Pro Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Ser Pro 565 570 575

Gly Ser Val Gly Leu Lys Gly Glu Arg Gly Pro Pro Gly Gly Val Gly 580 585 590 n

Phe Pro Gly Ser Arg Gly Asp Thr Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Tyr 595 SOO 605

Gly Pro Ala Gly Pro lie Gly Asp Lys Gly Gin Ala Gly Phe Pro Gly 610 615 620

Gly Pro Gly Ser Pro Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Glu Pro Gly Lys 625 630 635 640 lie Val Pro Leu Pro Gly Pro Pro Gly Ala Glu Gly Leu Pro Gly Ser 645 650 655

Pro Gly Phe Pro Gly Pro Gin Gly Asp Arg Gly Phe Pro Gly Thr Pro 660 665 670

Gly Arg Pro Gly Leu Pro Gly Glu Lys Gly Ala Val Gly Gin Pro Gly 675 680 6B5 lie Gly Phe Pro Gly Pro Pro Gly Pro Lys Gly Val Asp Gly Leu Pro 690 695 700

Gly Asp Met Gly Pro Pro Gly ihr Pro Gly Arg Pro Gly Phe Asn Gly 705 710 715 720

Leu Pro Gly Asn Pro Gly val Gin Gly Gin Lys Gly Glu Pro Gly val 725 730 735

Gly Leu Pro Gly Leu Lys Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly lie Pro Gly 740 745 750

Thr Pro Gly Glu Lys Gly Ser He Gly Val Pro Gly Val Pro Gly Glu 755 760 765

His Gly Ala lie Gly Pro Pro Gly Leu Gin Gly lie Arg Gly Glu Pro 770 775 780

Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Ser Val Gly Ser Pro Gly Val Pro Gly 785 790 795 800

He Gly Pro Pro Gly Ala Arg Gly Pro Pro Gly Gly Gin Gly Pro Pro 805 BIO 815

Gly Leu Ser Gly Pro Pro Gly lie Lys Gly Glu Lys Gly Phe Pro Gly 820 825 830

Phe Pro Gly Leu Asp Met Pro Gly Pro Lys Gly Asp Lys Gly Ala Gin 835 840 845

Gly Leu Pro Gly lie Thr Gly Gin Set Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly 350 855 860

Gin Gin Gly Ala Pro Gly lie Pro Gly Phe Pro Gly Ser Lys Gly Glu 865 870 875 880

Met Gly Val Met Gly Thr Pro Gly Gin Pro Gly Ser Pro Gly Pro Val 885 890 895

Gly Ala Pro Gly Leu Pro Gly Glu Lys Gly Asp His Gly Phe Pro Gly 900 905 910

Ser Ser Gly Pro Arg Gly Asp Pro Gly Leu Lys Gly Asp Lys Gly Asp 915 920 925

Oval Gly Leu Pro Gly Lys Pro Gly Ser Met Asp Lys Val Asp Met Gly 930 935 940

Ser Met Lys Gly Gin Lys Gly Asp Gin Gly Glu Lys Gly Gin lie Gly 945 950 955 960

Pro lie Gly Glu Lys Gly Ser Arg Gly Asp Pro Gly Thr Pro Gly Val 965 970 975

Pro Gly Lys Asp Gly Gin Ala Gly Gin Pro Gly Gin Pro Gly Pro Lys 980 985 990

Gly Asp Pro Gly lie Ser Gly Thr Pro Gly Ala Pro Gly Leu Pro G] 995 1000 1005

Pro Lys Gly Ser Val Gly Gly Met Gly Leu Pro Gly Thr Pro Gly 1010 1015 1020

Glu Lys Gly Val Pro Gly lie Pro Gly Pro Gin Gly Ser Pro Gly 1025 1030 1035

Leu Pro Gly Asp Lys Gly Ala Lys Gly Glu Lys Gly Gin Ala Gly 1040 1045 1050

Pro Pro Gly lie Gly lie Pro Gly Leu Arg Gly Glu Lys Gly Asp 1055 1060 1065

Gin Gly lie Ala Gly Phe Pro Gly Ser Pro Gly Glu Lys Gly Glu 1070 1075 1080

Lys Gly Ser lie Gly lie Pro Gly Met Pro Gly Ser Pro Gly Leu 1085 1090 1095

Lys Gly Ser Pro Gly Ser Val Gly Tyr Pro Gly Ser Pro Gly Leu 1100 1105 1110

Pro Gly Glu Lys Gly Asp Lys Gly Leu Pro Gly Leu Asp Gly lie 1115 1120 1125

Pro Gly Val Lys Gly Glu Ala Gly Leu Pro Gly Thr Pro Gly Pro 1130 1135 1140

Thr Gly Pro Ala Gly Gin Lys Gly Glu Pro Gly Ser Asp Gly lie 1145 1150 1155

Pro Gly Ser Ala Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Leu Pro Gly Arg 1160 1165 1170

Gly Phe Pro Gly Phe Pro Gly Ala Lys Gly Asp Lys Gly Ser Lys 1175 1180 1185

Gly Glu Val Gly Phe Pro Gly Leu Ala Gly Ser Pro Gly lie Pro 1190 1195 1200

Gly Ser Lys Gly Glu Gin Gly Phe Met Gly Pro Pro Gly Pro Gin 1205 1210 1215

Gly Gin Pro Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly His Ala Thr Glu Gly 1220 1225 1230

Pro Lys Gly Asp Arg Gly Pro Gin Gly Gin Pro Gly Leu Pro Gly 1235 1240 1245

Leu Pro Gly Pro Met Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly He Asp Gly 1250 1255 1260

Vai Lys Gly Asp Lys Gly Asn Pro Gly Trp Pro Gly Ala Pro Gly 1265 1270 1275

Val Pro Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly Phe Gin Gly Met Pro Gly 1280 1285 1290 lie Gly Gly Eer Pro Gly He Thr Gly Ser Lys Gly Asp Met Gly 1295 1300 1305

Pro Pro Gly Val Pro Gly Phe Gin Gly Pro Lys Gly Leu Pro Gly 1310 1315 1320

Leu Gin Gly lie Lys Gly Asp Gin Gly Asp Gin Gly Val Pro Gly 1325 1330 1335

Ala Lys Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Tyr Asp 1340 1345 1350 lie He Lys Gly Glu Pro Gly Leu Pro Gly Pro Glu Gly Pro Pro 1355 1360 1365

Gly Leu Lys Gly Leu Gin Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Gin Gin 1370 1375 1380

Gly Val Thr Gly Leu Val Gly He Pro Gly Pro Pro Gly He Pro 1385 1390 1395

Gly Phe Asp Gly Ala Pro Gly Gin Lys Gly Glu Met Gly Pro Ala 1400 1405 1410

Gly Pro Thr Gly Pro Arg Gly Phe Pro Gly Pro Pro Gly Pro Asp 1415 1420 1425

Gly Leu Pro Gly Ser Met Gly Pro Pro Gly The Pro Ser Val Asp 1430 1435 1440

His Gly Phe Leu Val Thr Arg His Ser Gin Thr He Asp Asp Pro 1445 1450 1455

Gin Cys Pro Ser Gly Thr Lys He Leu Tyr his Gly Tyr Ser Leu 1460 1465 1470

Leu Tyr Val Gin Gly Asn Glu Arg Ala His Gly Gin Asp Leu Gly 1475 1480 1485

Thr Ala Gly Ser Cys Leu Arg Lys Phe Ser Thr Met Pro Phe Leu 1490 1495 1500

Phe Cys Asn lie Asn Asn Val Cys Asn Phe Ala Ser Arg Asn Asp 1505 1510 1515

Tyr Ser Tyr Trp Leu Ser Thr Pro Glu Pro Met Pro Met Ser Met 1520 1525 1530

Ala Pro He Thr Gly Glu Asn He Arg Pro Phe He Ser Arg Cys 1535 1540 1545

Ala Val Cys Glu Ala Pro Ala Met Val Met Ala Val His Ser Gin 1550 1555 1560

Thr lie Gin lie Pro Pro Cys Pro Ser Gly Trp Ser Ser Leu Trp 1565 1570 1575

Olle Gly Tyr Ser Phe Val Met His Thr Ser Ala Gly Ala Glu Gly 1580 1585 1590

Ser Gly Gin Ala Leu Ala Ser Pro Gly Ser Cys Leu Glu Glu Phe 1595 1600 1605

Arg Ser Ala Pro Phe Ile Glu Cys His Gly Arg Gly Thr Cys Asn 1610 1615 1620

Tyr Tyr Ala Asn Ala Tyr Ser Phe Trp Leu Ala Thr Ile Glu Arg 1625 1630 1635

Ser Glu Met Phe Lys Lys Pro Thr Pro Ser Thr Leu Lys Ala Gly 1640 1645 1650

Glu Leu Arg Thr His Vai Ser Arg Cys Gin Vai Cys Met Arg Arg 1655 1660 1665

Thr

<210> 46 <211> 1466 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 6

Met Met Ser Phe Val Gin Lys Gly Ser Trp Leu Leu Leu Ala Leu Leu 15 10 15

His Pro Thr lie lie Leu Ala Gin Gin Glu Ala Val Glu Gly Gly Cys 20 25 30

Ser His Leu Gly Gin Ser Tyr Ala Asp Arg Asp Val Trp Lys Pro Glu 35 40 45

Pro Cys Gin lie Cys Val Cys Asp Ser Gly Ser Val Leu Cys Asp Asp 50 55 60 lie lie Cys Asp Asp Gin Glu Leu Asp Cys Pro Asn Pro Glu lie Pro 65 70 75 80

Phe Gly Glu Cys Cys Ala Val Cys Pro Gin Pro Pro Thr Ala Pro Thr 85 90 95

Arg Pro Pro Asn Gly Gin Gly Pro Gin Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly 100 105 110

Pro Pro Gly He Pro Gly Arg Asn Gly Asp Pro Gly lie Pro Gly Gin 115 120 125

Pro Gly Ser Pro Gly Ser Pro Gly Pro Pro Gly lie Cys Glu Ser Cys 130 135 140

Pro Thr Gly Pro Gin Asn Tyr Ser Pro Gin Tyr Asp Ser Tyr Asp Val 145 150 155 160

Lys Ser Gly Val Ala Val Gly Gly Leu Ala Gly Tyr Pro Gly Pro Ala 165 170 175

Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Thr Ser Gly His Pro Gly 180 185 190

Ser Pro Gly Ser Pro Gly Tyr Gin Gly Pro Pro Gly Glu Pro Gly Gin 195 200 205

Ala Gly Pro Ser Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ala lie Gly Pro Ser 210 215 220

Gly Pro Ala Gly Lys Asp Gly Glu Ser Gly Arg Pro Gly Arg Pro Gly 225 230 235 240

Glu Arg Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly lie Lys Gly Pro Ala Gly lie 245 250 255

Pro Gly Phe Pro Gly Met Lys Gly His Arg Gly Phe Asp Gly Arg Asn 250 265 270

Gly Glu Lys Gly Glu Thr Gly Ala Pro Gly Leu Lys Gly Glu Asn Gly 275 280 285

Leu Pro Gly Glu Asn Gly Ala Pro Gly Pro Met Gly Pro Arg Gly Ala 290 295 300

Pro Gly Glu Arg Gly Arg Pro Gly Leu Pro Gly Ala Ala Gly Ala Arg 305 310 315 320

Gly Asn Asp Gly Ala Arg Gly Ser Asp Gly Gin Pro Gly Pro Pro Gly 325 330 335

Pro Pro Gly Thr Ala Gly Phe Pro Gly Ser Pro Gly Ala Lys Gly Glu 340 345 350

Val Gly Pro Ala Gly Ser Pro Gly Ser Asn Gly Ala Pro Gly Gin Arg 355 360 365

Gly Glu Pro Gly Pro Gin Gly His Ala Gly Ala Gin Gly Pro Pro Gly 370 375 380

Pro Pro Gly lie Asn Gly Ser Pro Gly Gly Lys Gly Glu Met Gly Pro 385 390 395 400

Ala Gly lie Pro Gly Ala Pro Gly Leu Met Gly Ala Arg Gly Pro Pro 405 410 415

Gly Pro Ala Gly Ala Asn Gly Ala Pro Gly Leu Arg Gly Gly Ala Gly 420 425 430

Glu Pro Gly Lys Asn Gly Ala Lys Gly Glu Pro Gly Pro Arg Gly Glu 435 440 445

Arg Gly Glu Ala Gly lie Pro Gly Val Pro Gly Ala Lys Gly Glu Asp 450 455 460

Gly Lys Asp Gly Ser Pro Gly Glu Pro Gly Ala Asn Gly Leu Pro Gly 465 470 475 480

Ala Ala Gly Glu Arg Gly Ala Pro Gly Phe Arg Gly Pro Ala Gly Pro 485 490 495

Asn Gly He Pro Gly Glu Lys Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Ala Fro 500 505 510

Gly Pro Ala Gly Pro Arg Gly Ala Ala Gly Glu Pro Gly Arg Asp Gly 515 520 525

Val Fro Gly Gly Pro Gly Met Arg Gly Met Pro Gly Ser Pro Gly Gly 530 535 540

Pro Gly Ser Asp Gly Lys Pro Gly Pro Pro Gly Ser Gin Gly Glu Ser 545 550 555 560

Gly Arg Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ser Gly Pro Arg Gly Gin Pro Gly 565 510 575 val Met Gly Phe Pro Gly Pro Lys Gly Asn Asp Gly Ala Pro Gly Lys S80 585 590

Asn Gly Glu Arg Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Pro Gin Gly Pro Pro 595 600 605

Gly Lys Asn Gly Glu Thr Gly Pro Gin Gly Pro Pro Gly Pro Thr Gly 610 615 620

Pro Gly Gly Asp Lys Gly Asp Thr Gly Pro Pro Gly Pro Gin Gly Leu 625 630 635 640

Gin Gly Leu Pro Gly Thr Gly Gly Pro Pro Gly Glu Asn Gly Lys Pro 645 650 655

Gly Glu Pro Gly Pro Lys Gly Asp Ala Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly 660 665 670

Gly Lys Gly Asp Ala Gly Ala Pro Gly Glu Arg Gly Pro Pro Gly Leu 675 680 685

Ala Gly Ala Pro Gly Leu Arg Gly Gly Ala Gly Pro Pro Gly Pro Glu 690 695 700

Gly Gly Lys Gly Ala Ala Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ala Ala Gly 705 710 715 720

Thr Pro Gly Leu Gin Gly Met Pro Gly Glu Arg Gly Gly Leu Gly Ser 725 730 735

Pro Gly Pro Lys Gly Asp Lys Gly Glu Pro Gly Gly Pro Gly Ala Asp 740 745 750

Gly Val Pro Gly Lys Asp Gly Pro Arg Gly Pro Thr Gly Pro lie Gly 755 760 765

Pro Pro Gly Pro Ala Gly Gin pro Gly Asp Lys Gly Glu Gly Gly Ala 770 775 780

Pro Gly Leu Pro Gly lie Ala Gly Pro Arg Gly Ser Pro Gly Glu Arg 785 790 795 800

Gly Glu Thr Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Phe Pro Gly Ala Pro Gly 805 810 815

Gin Asn Gly Glu Pro Gly Gly Lys Gly Glu Arg Gly Ala Pro Gly Glu 820 825 830

Lys Gly Glu Gly Gly Pro Pro Gly Val Ala Gly Pro Pro Gly Gly Ser 835 840 845

Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Pro Gin Gly val Lys Gly Glu Arg Gly 850 855 860

Ser Pro Gly Gly Pro Gly Ala Ala Gly Phe Pro Gly Ala Arg Gly Leu 865 870 875 880 'Pro Gly Pro Pro Gly Ser Asn Gly Asn Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ser 885 890 895

Gly Ser Pro Gly Lys Asp Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Asn Thr Gly 900 905 910

Ala Pro Gly Ser Pro Gly Val Ser Gly Pro Lys Gly Asp Ala Gly Gin 915 920 925

Pro Gly Glu Lys Gly Ser Pro Gly Ala Gin Gly Pro Pro Gly Ala Pro 930 935 940

Gly Pro Leu Gly lie Ala Gly He Thr Gly Ala Arg Gly Leu Ala Gly 945 9S0 955 960

Pro Pro Gly Met Pro Gly Pro Arg Gly Ser Pro Gly Pro Gin Gly Val 955 970 975

Lys Gly Glu Ser Gly Lys Pro Gly Ala Asn Gly Leu Ser Gly Glu Arg 980 985 990

Gly Pro Pro Gly Pro Gin Gly Leu Pro Gly Leu Ala Gly Thr Ala Gl; 995 1000 1005

Glu Pro Gly Arg Asp Gly Asn Pro Gly Ser Asp Gly Leu Pro Gly 1010 1015 1020

Arg Asp Gly Ser Pro Gly Gly Lys Gly Asp Arg Gly Glu Asn Gly 1025 1030 1035

Ser Pro Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly His Pro Gly Pro Pro Gly 1040 1045 1050

Pro Val Gly Pro Ala Gly Lys Ser Gly Asp Arg Gly Glu Ser Gly 1055 1060 1065

Pro Ala Gly Pro Ala Gly Ala Pro Gly Pro Ala Gly Ser Arg Gly 1070 1075 1080

Ala Pro Gly Pro Gin Gly Pro Arg Gly Asp Lys Gly Glu Thr Gly 1085 1090 1095

Glu Arg Gly Ala Ala Gly lie Lys Gly His Arg Gly Phe Pro Gly 1100 1105 1110

Asn Pro Gly Ala Pro Gly Ser Pro Gly Pro Ala Gly Gin Gin Gly 1115 1120 1125

Ala He Gly Ser Pro Gly Pro Ala Gly Pro Arg Gly Pro Val Gly 1130 1135 1140

Pro Ser Gly Pro Pro Gly Lys Asp Gly Thr Ser Gly His Pro Gly 1145 1150 1155

Pro lie Gly Pro Pro Gly Pro Arg Gly Asn Arg Gly Glu Arg Gly 1160 1165 1170

Ser Glu Gly Ser Pro Gly His Pro Gly Gin Pro Gly Pro Pro Gly 1175 1180 1185

Pro Pro Gly Ala Pro Gly Pro Cys Cys Gly Gly Val Gly Ala Ala 1190 1195 1200

Ala He Ala Gly He Gly Gly Glu Lys Ala Gly Gly Phe Ala Pro 1205 1210 1215

Tyr Tyr Gly Asp Glu Pro Met Asp Phe Lys lie Asn Thr Asp Glu 1220 1225 1230 lie Met Thr Ser Leu Lys Ser val Asn Gly Gin lie Glu Ser Leu 1235 1240 1245 lie Ser Pro Asp Gly Ser Arg Lys Asn Pro Ala Arg Asn Cys Arg 1250 1255 1260

Asp Leu Lys Phe Cys His Pro Glu Leu Lys Ser Gly Glu Tyr Trp 1265 1270 1275

Val Asp Pro Asn Gin Gly Cys Lys Leu Asp Ala lie Lys Val Phe 1280 1285 1290

Cys Asn Met Glu Thr Gly Glu Thr Cys lie Ser Ala Asn Pro Leu 1295 1300 1305

Asn Val Pro Arg Lys His Trp Trp Thr Asp Ser Ser Ala Glu Lys 1310 1315 1320

Lys His Val Trp Phe Gly Glu Ser Met Asp Gly Gly Phe Gin Phe 1325 1330 1335

Ser Tyr Gly Asn Pro Glu Leu Pro Glu Asp Val Leu Asp Val Gin 1340 1345 1350

Leu Ala Phe Leu Arg Leu Leu Ser Ser Arg Ala Ser Gin Asn lie 1355 1360 1365

Thr Tyr His Cys Lys Asn Ser lie Ala Tyr Met Asp Gin Ala Ser 1370 1375 1380

Gly Asn Val Lys Lys Ala Leu Lys Leu Met Gly Ser Asn Glu Gly 1385 1390 1395

Glu Phe Lys Ala Glu Gly Asn Ser Lys Phe Thr Tyr Thr Val Leu 1400 1405 1410

Glu Asp Gly Cys Thr Lys His Thr Gly Glu Trp Ser Lys Thr Val 1415 1420 1425

Phe Glu Tyr Arg Thr Arg Lys Ala Val Arg Leu Pro lie Val Asp 1430 1435 1440 lie Ala Pro Tyr Asp lie Gly Gly Pro Asp Gin Glu Phe Gly Val 1445 1450 1455

Asp Val Gly Pro Val Cys Phe Leu 1460 1465 DM_US:205068 93_1

FRAGMENTOS PEPTÍDICOS PARA INDUZIRA SÍNTESE DE PROTEÍNAS DA MATRIZ EXTRACELULAR 11181.0034.NPUSOO DNA Seq. ver. 3.4 ?? ?? ?? ?? 1

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • US 81328406 P [0001] • EP 0858808 A [0017] • US 60813284 B [0055] • US 20506893 B [0055]

Documentos de não patente citados na descrição • KATAYAMA. J. BIOL. CHEM., 1983, vol. 288, 9941-9944 [0006] [0047] • MAQUART et al. J Soc BIOL., 1999, vol. 193, 423-28 [0006] • MAQUART et al. J. SOC. BIOL, 1999, vol. 193, 423-28 [0006] • KATAYAMA K et al. J. Biol. Chem., 19 93, vol. 268 (14), 9941-9944 [0018] • HEYNS K et al. Hoppe-Seyler' s Zeitschrift fur physiologische Chemie. Walter de Gruyter, 02 December 1960, vol. 321, 161-183 [0019] • MERRIFIELD, R.B. Solid Phase Peptide Synthesis I. J. AM. CHEM. SOC., 1963, vol. 85, 2149-2154 [0032] • CARPINO, L.A. et al. [(9-Fluorenylmethyl)Oxy] Carbonyl (Fmoc) Amino Acid Chlorides: Synthesis, Characterization, And Application To The Rapid Synthesis Of Short Peptides. J. ORG. CHEM., vol. 37 (51), 3732-3734 [0032] • MERRIFIELD, R.B. et al. Instrument For Automated Synthesis Of Peptides. ANAL. CHEM, 1966, vol. 38, 1905-1914 [0032] • High Yield Chemical Synthesis Of Biologically Active Peptides

On An Automated Peptide Synthesizer Of Novel Design. KENT, S.B.H. et al. PEPTIDES . Almqvist and Wiksell Int, 1984, 185-188 [0032] • HEILBOM et al. The Cathelicidin Anti-Microbial Peptide LL-37 Is Involved In The Re-Epithelialization Of Human Skin Wounds And Is Lacking In Chronic Ulcer Epithelium. J. Invest. Dermato, 2003, vol. 120, 379-89 [0043] • BENOITON, N. Chemistry of Peptide Synthesis. CRC, 2005 [0049] • GREENBAUM et al. Molecular and Cellular Proteomics, 2002, vol. 1, 60-68 [0049] • KRSTENANSKY et al. Letters in Drug Design and Discovery, 2004, vol. 1, 6-13 [0049]

Claims (14)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Um tetrapéptido que compreende a SEQ ID N0:1 (PEGP) para utilização como um medicamento.
2. 2. Um tetrapéptido que compreende a SEQ ID N0:1 (PEGP) para utilização como um medicamento para o tratamento da pele danificada ou na manutenção de uma pele saudável.
3. 3 . Utilização de um tetrapéptido que compreende a SEQ ID NO: 1 (PEGP) como um produto cosmético.
4. 4. Um tetrapéptido de acordo com a reivindicação 1-2 ou utilização de um tetrapéptido de acordo com a reivindicação 3, em que o tetrapéptido é amidado no terminal carboxilo.
5. 5. Uma composição farmacêutica para utilização como um medicamento que compreende um tetrapéptido compreendendo a SEQ ID NO:1 (PEGP) e um veiculo farmaceuticamente aceitável.
6. 6. A composição para utilização de acordo com a reivindicação 5, em que o tetrapéptido está presente numa concentração eficaz que varia desde cerca de 0,01 pg/ml até cerca de 100 pg/ml, e mais preferentemente que varia desde cerca de 0,1 pg/ml até cerca de 1 pg/ml.
7. 7 . A composição para utilização de acordo com a reivindicação 5 ou 6, em que a composição está sob a forma de um aerossol, emulsão, liquido, loção, creme, pasta, pomada ou espuma.
8. 8. A composição para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 7 para utilização no tratamento de cuidados da pele.
9. 9. Um método in vitro para estimulação da produção de colagénio por uma célula, compreendendo o método expor uma célula a um tetrapéptido que compreende a SEQ ID N0:1 (PEGP) induzindo assim a produção de colagénio pela célula.
10. 10. O método da reivindicação 9, em que a célula é uma célula de fibroblasto.
11. 11. A composição para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 8, em que o tetrapéptido é útil para estimular a produção e colagénio quando aplicado na pele.
12. 12 . A composição para utilização de acordo com a reivindicação 8, em que o dito tratamento de cuidado da pele aborda o enrugamento, tonificação, firmeza e flacidez da pele.
13. 13. A composição para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 8 para utilização na redução da formação de cicatrizes da pele danificada pelo envelhecimento normal, doença, lesão, trauma ou cirurgia.
14. 14 . A composição para utilização de acordo com a reivindicação 13, em que a dita utilização compreende administrar a composição à ferida de um animal.