RU2441877C2 - Тетрапептид, композиция (варианты) и способ стимуляции продукции коллагена фибробластом - Google Patents
Тетрапептид, композиция (варианты) и способ стимуляции продукции коллагена фибробластом Download PDFInfo
- Publication number
- RU2441877C2 RU2441877C2 RU2009100884/10A RU2009100884A RU2441877C2 RU 2441877 C2 RU2441877 C2 RU 2441877C2 RU 2009100884/10 A RU2009100884/10 A RU 2009100884/10A RU 2009100884 A RU2009100884 A RU 2009100884A RU 2441877 C2 RU2441877 C2 RU 2441877C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tetrapeptide
- seq
- collagen
- peptides
- composition
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 230000037319 collagen production Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 title claims abstract description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 66
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 title abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 18
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 85
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 85
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 84
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 claims description 18
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 18
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 4
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 239000006210 lotion Substances 0.000 claims description 4
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 4
- 239000006072 paste Substances 0.000 claims description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 103
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 67
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 abstract description 44
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 abstract description 44
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 26
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 21
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 20
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 18
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 11
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 10
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 8
- 101000741320 Homo sapiens Cathelicidin antimicrobial peptide Proteins 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 102100038608 Cathelicidin antimicrobial peptide Human genes 0.000 description 7
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 5
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 5
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 4
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 4
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 3
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 3
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- -1 but not limited to Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 3
- 235000010958 polyglycerol polyricinoleate Nutrition 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 3
- WSGCRSMLXFHGRM-DEVHWETNSA-N (2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s,3r)-2-[[(2s,3r)-2-[[(2s)-6-amino-2-(hexadecanoylamino)hexanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WSGCRSMLXFHGRM-DEVHWETNSA-N 0.000 description 2
- SCAKQYSGEIHPLV-IUCAKERBSA-N (4S)-4-[(2-aminoacetyl)amino]-5-[(2S)-2-(carboxymethylcarbamoyl)pyrrolidin-1-yl]-5-oxopentanoic acid Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O SCAKQYSGEIHPLV-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- CUVSTAMIHSSVKL-UWVGGRQHSA-N (4s)-4-[(2-aminoacetyl)amino]-5-[[(2s)-6-amino-1-(carboxymethylamino)-1-oxohexan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CN CUVSTAMIHSSVKL-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 208000035874 Excoriation Diseases 0.000 description 2
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- POIUWJQBRNEFGX-XAMSXPGMSA-N cathelicidin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C1=CC=CC=C1 POIUWJQBRNEFGX-XAMSXPGMSA-N 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000004920 epithelial cell of skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000036074 healthy skin Effects 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 238000000424 optical density measurement Methods 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 2
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 2
- LDWBQGACJJOIKA-RHEFHGCGSA-N (2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s,3r)-2-[[(2s,3r)-2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical class NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LDWBQGACJJOIKA-RHEFHGCGSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710140438 Cathelicidin antimicrobial peptide Proteins 0.000 description 1
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 description 1
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 description 1
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 1
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005299 abrasion Methods 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000008713 feedback mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 108060002894 fibrillar collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000013373 fibrillar collagen Human genes 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003189 isokinetic effect Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 108010028869 lysyl-threonyl-threonyl-lysyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000001724 microfibril Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000007665 sagging Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000037314 wound repair Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
- A61K8/65—Collagen; Gelatin; Keratin; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/1008—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1024—Tetrapeptides with the first amino acid being heterocyclic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/07—Tetrapeptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Birds (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению коротких пептидов - стимуляторов продукции белков внеклеточного матрикса в коже, и может быть использовано в медицине. Получены пептиды, состоящие из четырех аминокислотных остатков, которые используются по отдельности или в комбинации в способе стимуляции продукции коллагена фибробластом. Изобретение позволяет эффективно стимулировать коллагенез в фибробластных клетках. 4 н. и 21 з.п. ф-лы, 3 ил., 7 табл.
Description
По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки США с порядковым номером 60/813284, поданной 13 июня 2006 года, которая включена в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к тетрапептидам с аминокислотным мотивом GxxG или PxxP, где G (глицин) и Р (пролин) сохраняются, а х обозначает вариабельную аминокислоту. Настоящее изобретение относится также к активным тетрапептидам со сдвигом рамки, которые являются тетрапептидными последовательностями, сдвинутыми на одну рамку считывания от тетрапептида GxxG или PxxP в белке ЕСМ. В частности, настоящее изобретение относится к GxxG, PxxP или активным пептидам сдвига рамки, которые стимулируют продукцию белков внеклеточного матрикса и усиливают закрытие раны монослоя эпителиальных клеток имеющей экскориации (ссадины, царапины) кожи человека. Эти пептидные композиции могут быть использованы в составах для заживления поврежденной кожи или поддержания здоровой кожи.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Старение кожи рассматривается как образование морщин и ослабленное заживление ран. Рана определяется как разрыв в целостности эпителия кожи. Нормальное заживление ран включает сложную и динамичную, но прекрасно организованную серию событий, приводящих к заживлению поврежденных тканей. Преобладающим компонентом нормальной кожи является внеклеточный матрикс (ЕСМ), гелеподобный матрикс, продуцируемый клетками, которые он окружает. Этот ЕСМ состоит из двух основных классов, включающих фиброзные структурные белки и протеогликаны. Известно, что изменения в составе и состоянии сшивания ЕСМ ассоциированы со старением и диапазоном приобретенных и наследуемых нарушений кожи. Хорошо описано, что ЕСМ не только обеспечивает структурную поддержку, но также влияет на клеточное поведение, такое как дифференцировка и пролиферация. Кроме того, все большее и большее количество исследований предполагают, что компоненты матрикса могут быть источником клеточных сигналов для облегчения пролиферации и миграции эпителиальных клеток и усиления таким образом заживления ран.
Самым большим классом фиброзных молекул ЕСМ является семейство коллагенов, которое включает по меньшей мере 16 различных типов коллагена. Коллаген в дермальном матриксе состоит прежде всего из коллагенов типа I (80-85%) и типа III (8-11%), оба из которых являются фибриллярными или палочкообразными коллагенами. Предел прочности кожи при растяжении обусловлен преимущественно этими фибриллярными молекулами коллагена, которые самособираются в микрофибриллы с размещением голова к хвосту и латерально ступенчатым образом. Молекулы коллагена становятся сшитыми с соседними молекулами коллагена, создавая дополнительную прочность и стабильность в волокнах коллагена. Повреждение в коллагеновой сети (например, ферментами или физическим разрушением) или ее общий коллапс вызывает заживление посредством репарации.
Различные биологически активные пептиды, которые стимулируют продукцию белков ЕСМ, описаны как в научной литературе, так и в выданных патентах. Пептиды исторически были выделены из природных источников и недавно были предметом исследований взаимосвязи структуры и функции. Природные пептиды служили также в качестве исходных точек для коструирования синтетических пептидных аналогов.
Специфические последовательности в белках ЕСМ могут стимулировать полезные элементы в коже, такие как коллаген типа I, коллаген типа III и фибронектин (Katayama et. al., J. Biol. Chem. 288:9941-9944 (1983)). Katayama et al. идентифицировали пентапептид, KTTKS (SEQ ID NO:17), в карбоксиконцевом пропептиде (остатки 197-241) коллагена типа I. Этот пропептид отщепляется во время продукции зрелого белка коллагена. Этот отщепленный пропептид может участвовать в регуляции продукции коллагена посредством биосинтетического механизма обратной связи, причем сегмент KTTKS играет активную роль. Maquart et al. (J Soc Biol. 193:423-28 (1999)) сообщали, что пептиды GHK и CNYYSNS также стимулируют синтез ECM. Эти последовательности могут высвобождаться во время метаболизма ЕСМ, передавая посредством этого сигнал о необходимости репарации ЕСМ. Короткие пептидные последовательности, высвобождаемые любым механизмом, часто называют “матрикинами” (Maquart et al., J. Soc. Biol. 193:423-28 (1999)).
Хотя существует ряд природных и синтетических пептидов, существует потребность в улучшенных биологически активных пептидах и способах их применения.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Описаны тетрапептиды, которые характеризуются мотивом аминокислотной последовательности GxxG или PxxP, где остатки G (глицин) и P (пролин) сохраняются, а x является вариабельной аминокислотой. Эти тетрапептиды происходят из последовательностей, которые встречаются многократно по всей первичной последовательности белка ЕСМ, коллагена типа IV. Описанные последовательности индуцируют продукцию всех форм коллагена в большей степени, чем ранее известные пептидные последовательности, в том числе KTTKS, продаваемый под товарным названием MATRIXYL™ SEDERMA SAS (Франция). Кроме того, композиция, содержащая комбинацию различных многократно повторяющихся последовательностей, вызывает даже более высокую продуцирующую коллаген реакцию. Дополнительные преимущества могут ожидаться от комбинаций пептидов, присутствующих в различных белках ЕСМ.
Получение специфической комбинации тетрапептидов для восстановления ЕСМ может быть коммерчески чрезмерно затратным. Описаны относительно простые и экономичные средства получения отличающейся комбинации биологически активных тетрапептидов. Посредством получения комбинаторной библиотеки тетрапептидов с мотивом GxxG или PxxP может быть генерировано множество биологически активных тетрапептидов в одном и том же цикле получения (например, GEPG, GPEG, GPPG и GEEG). Комбинация тетрапептидов может индуцировать большее образование белков ЕСМ, чем отдельные пептиды. Композиции, содержащие описанные тетрапептиды, отдельно или в комбинации, применимы на рынках средств для ухода за кожей, в том числе, но не только, средств, которые предназначены для воздействия на появление морщин, тонус кожи, плотность кожи или обвисание кожи. Стимуляция коллагена описанными тетрапептидами может значительно улучшать здоровье и вид поврежденной и постаревшей кожи.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
Фиг.1 представляет собой SEQ ID NO:45, которая является аминокислотной последовательностью коллагена IV, иллюстрирующей местонахождения тетрапептидов GxxG. Все последовательности, напечатанные жирным шрифтом, подчеркнуты, а перекрывающиеся последовательности подчеркнуты дважды.
Фиг.2 представляет собой SEQ ID NO:46, которая является аминокислотной последовательностью коллагена III, иллюстрирующей местонахождения активных сегментов со сдвигом рамки PGPR и GAGP. Все активные последовательности со сдвигом рамки напечатаны жирным шрифтом и подчеркнуты, а последовательности GxxG, имеющие один сдвиг рамки, подчеркнуты дважды.
Фиг.3 также представляет собой SEQ ID NO:45, аминокислотную последовательность коллагена IV, иллюстрирующую местонахождения тетрапептида PGPP.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Это изобретение относится в общем к тетрапептидам, которые стимулируют продукцию белков ЕСМ и модулируют заживление ран, и применениям таких тетрапептидов.
Пептиды
Один вариант осуществления изобретения относится к выделенному тетрапептиду, содержащему мотив GxxG или PxxP. В этом варианте осуществления G (глицин) или P (пролин) сохраняются, а х обозначает вариабельную аминокислоту. Этим пептидом может быть обычно любой пептид, попадающий в объем вышеуказанного описания, и, более предпочтительно, он представляет собой SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 или SEQ ID NO:16.
Другой вариант осуществления изобретения относится к выделенному тетрапептиду, содержащему мотив GxPG, где x обозначает P в любом вариабельном положении или в обоих. В этом варианте осуществления G (глицин) и P (пpолин) сохраняются, а х обозначает вариабельную аминокислоту. Этим пептидом может быть обычно любой пептид, попадающий в объем вышеуказанного описания, и, более предпочтительно, он представляет собой SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO:7.
Другой вариант осуществления изобретения относится к выделенному тетрапептиду, содержащему мотив GЕxG. В этом варианте осуществления G (глицин) и Е (глутаминовая кислота) сохраняются, а х обозначает вариабельную аминокислоту. Этим пептидом может быть обычно любой пептид, попадающий в объем вышеуказанного описания, и, более предпочтительно, он представляет собой SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO:8.
Другой вариант осуществления изобретения относится к выделенному тетрапептиду, содержащему мотив PGxP. В этом варианте осуществления P (пролин) и G (глицин) сохраняются, а х обозначает вариабельную аминокислоту. Этим пептидом может быть обычно любой пептид, попадающий в объем вышеуказанного описания, и, более предпочтительно, он представляет собой SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14 или SEQ ID NO:16.
Другой вариант осуществления изобретения относится к выделенному тетрапептиду, содержащему мотив PExP. В этом варианте осуществления Р (пролин) и Е (глутаминовая кислота) сохраняются, а х обозначает вариабельную аминокислоту. Этим пептидом может быть обычно любой пептид, попадающий в объем вышеуказанного описания, и, более предпочтительно, он представляет собой SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:9.
Другой вариант осуществления изобретения относится к активному тетрапептиду со сдвигом рамки. В этом варианте осуществления этот тетрапептид находится в одном сдвиге рамки либо от тетрапептида GxxG, либо от тетрапептида PххР в белке ECM. Этим пептидом может быть обычно любой пептид, попадающий в объем вышеуказанного описания, и, более предпочтительно, он представляет собой SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:6.
Каждый из вышеописанных пептидов может содержать D- или L-аминокислоты. Эти пептиды могут содержать все D-аминокислоты или L-аминокислоты. Эти пептиды могут иметь кислотный C-конец (-CO2H) или, предпочтительно, амидный C-конец (-CОNH2, -CONHR или -CОNR2). Эти пептиды могут быть дополнительно увеличены или модифицированы либо химически, либо ферментативно. Например, эти пептиды могут быть амидированы (-NH2) на С-конце, что может делать этот тетрапептид менее чувствительным к протеазной деградации и увеличивать их растворимость в сравнении с формами свободных кислот. Эти пептиды могут быть также липидированы, что может обеспечивать улучшенное проникновение в кожу.
Вышеописанные пептиды могут содержать следующие аминокислоты: R (аргинин), L (лейцин), P (пролин), F (фенилаланин), Q (глутамин), E (глутаминовую кислоту), I (изолейцин), K (лизин), S (серин), V (валин), A (аланин), N (аспарагин), D (аспарагиновую кислоту), T (треонин), Y (тирозин) и G (глицин). Вышеописанные пептиды не включают в себя следующие аминокислоты: M (метионин), C (цистеин), H (гистидин) или W (триптофан). Таким образом, в одном варианте осуществления x не выбран из М (метионина), C (цистеина), H (гистидина) или W (триптофана).
Способы применения
Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способам применения вышеописанных пептидов. Эти способы применения могут включать применение одного пептида или могут включать применение двух или более пептидов в комбинации.
Одним вариантом осуществления настоящего изобретения является способ активации заживления поврежденной кожи и поддержания здоровой кожи с использованием тетрапептидов, которые стимулируют продукцию белков ЕСМ. Этот способ обычно относится к контактированию дермальных (кожных) клеток с композицией, содержащей этот пептид. Эти композиции могут быть аэрозолем, эмульсией, жидкостью, лосьоном, кремом, пастой, мазью, пенкой или другим фармацевтически приемлемым составом. Обычно фармацевтически приемлемый состав может включать любой приемлемый носитель, подходящий для применения на коже человека, например косметически приемлемый носитель и дерматологически приемлемый носитель. Композиции могут содержать другие активные средства, такие как ретиноиды или другие пептиды. Эти композиции могут содержать фармацевтически приемлемые носители или адъюванты. Стадия контактирования может выполняться in vivo, in situ, in vitro или любым способом, известным квалифицированным в данной области специалистам. Наиболее предпочтительно, стадия контактирования должна выполняться местно в концентрации, достаточной для индукции стимулирующей реакции. Концентрация этого пептида в данной композиции может быть равна приблизительно 0,01 мкг/мл - приблизительно 100 мкг/мл, приблизительно 0,1 мкг/мл - приблизительно 50 мкг/мл и приблизительно 0,1 мкг/мл - приблизительно 1 мкг/мл. Стадия контактирования может выполняться на млекопитающем, кошке, собаке, корове, лошади, свинье или человеке. Предпочтительная композиция для стимуляции продукции белка ECM содержит SEQ ID NO:8; более предпочтительно, эта композиция содержит SEQ ID NO:8 в гетерогенной смеси по меньшей мере с одним другим тетрапептидом. В наиболее предпочтительном варианте осуществления отдельные тетрапептиды в этой композиции могли бы вызывать устойчивую продукцию коллагена на протяжении периода по меньшей мере 48 часов.
Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу активации заживления кожи, поврежденной естественным старением, заболеванием, повреждением, травмой или хирургическим вмешательством или другими медицинскими процедурами. Этот способ может предусматривать введение в рану животного композиции, где эта композиция содержит любой из вышеуказанных пептидов, отдельно или в комбинации. Эти композиции могут быть жидкостью, лосьоном, кремом, пастой, мазью, пенкой или любым другим фармацевтически приемлемым составом. Эти композиции могут содержать фармацевтически приемлемые носители или адъюванты. Эти композиции могут содержать другие биологически активные агенты, такие как антимикробные агенты или факторы роста. Эти композиции могут быть также использованы в комбинации с другими терапевтическими агентами, такими как трансплантаты ткани, продукты культуры ткани, кислород или перевязочные материалы. Концентрация пептида в этой композиции может быть равна приблизительно 0,01 мкг/мл - приблизительно 100 мкг/мл, приблизительно 0,1 мкг/мл - приблизительно 50 мкг/мл и приблизительно 0,1 мкг/мл - приблизительно 1 мкг/мл. Композиция может вводиться в рану местно. Животное обычно может быть животным любого типа и предпочтительно является млекопитающим и более предпочтительно человеком, коровой, лошадью, кошкой, собакой, свиньей, козой или овцой. Предпочтительная композиция для применений в заживлении ран, в которых стимулируется продукция белка ЕСМ, содержит SEQ ID NO:8; более предпочтительно эта композиция содержит SEQ ID NO:8 в гетерогенной смеси по меньшей мере с одним другим тетрапептидом. В наиболее предпочтительном варианте осуществления отдельные тетрапептиды в этой композиции могли бы вызывать длительную продукцию коллагена на протяжении периода по меньшей мере 48 часов.
Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу уменьшения рубцевания кожи, поврежденной нормальным старением, заболеванием, повреждением, травмой или хирургическим вмешательством или другими медицинскими процедурами. Этот способ может предусматривать введение в рану животного композиции, причем эта композиция содержит любой из вышеописанных пептидов, по отдельности или в комбинации. Эти композиции могут быть жидкостью, лосьоном, кремом, пастой, мазью, пенкой или любым другим фармацевтически приемлемым составом. Эти композиции могут содержать фармацевтически приемлемые носители или адъюванты. Эти композиции могут содержать другие биологически активные агенты, такие как антимикробные агенты или факторы роста. Эти композиции могут быть также использованы в комбинации с другими терапевтическими агентами, такими как трансплантаты ткани, продукты культуры ткани, кислород или перевязочные материалы. Концентрация пептида в этой композиции может быть равна приблизительно 0,01 мкг/мл - приблизительно 100 мкг/мл, приблизительно 0,1 мкг/мл - приблизительно 50 мкг/мл и приблизительно 0,1 мкг/мл - приблизительно 1 мкг/мл. Композиция может вводиться в рану местно. Животное обычно может быть животным любого типа и предпочтительно является млекопитающим и более предпочтительно человеком, коровой, лошадью, кошкой, собакой, свиньей, козой или овцой. Предпочтительная композиция для применений в заживлении ран, в которых стимулируется продукция белка ЕСМ, содержит SEQ ID NO:8; более предпочтительно эта композиция содержит SEQ ID NO:8 в гетерогенной смеси по меньшей мере с одним другим тетрапептидом. В наиболее предпочтительном варианте осуществления отдельные тетрапептиды в этой композиции могли бы вызывать длительную продукцию коллагена на протяжении периода по меньшей мере 48 часов.
Следующий вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу получения описанных тетрапептидов в комбинации. Эти пептиды могут быть получены с использованием любого способа, известного квалифицированным в данной области специалистам, такого как способы, описанные в Merrifield, R.B., Solid Phase Peptide Synthesis I., J. AM. CHEM. SOC. 85:2149-2154 (1963); Carpino, L.A. et al., [(9-Fluorenylmethyl)Qxy] Carbonyl (Fmoc) Amino Acid Chlorides: Synthesis, Characterization and Application to the Rapid Synthesis of Short Peptides, J. Org. Chem. 37:51:3732-3734; Merrifield, R.B. et al. Instrument for Automated Synthesis of Peptides, Anal. Chem. 38:1905-1914 (1966) или Kent, S.B.H. et al. High Yield Chemical Synthesis of Biologically Active Peptides on an Automated Peptide Synthesizer of Novel Design, In: PEPTIDES 1984 (Ragnarsson U., ed.) Almqvist and Wiksell Int., Stockholm (Sweden), pp. 185-188, все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. Предпочтительно, эти пептиды будут получаться в устройстве, способном к последовательному присоединению аминокислот к растущей пептидной цепи. Однако эти пептиды могут быть получены с использованием стандартной твердофазной методологии.
Наблюдали, что добавление смеси свободных аминокислот вместо гомогенных пептидных смесей во время синтеза пептидных цепей приводит к отличающемуся включению свободных аминокислот, такому как комбинация пептидов, получающаяся в реакциях синтеза. Относительная частота включения конкретной аминокислоты, включенной в смесь из двух или более аминокислот, добавляемую во время синтеза, может корректироваться. Эта коррекция становится возможной посредством модификации отношения свободной аминокислоты, сделанной доступной во время процесса синтеза, относительно других аминокислот в этой смеси (называемой изокинетической смесью).
Следующие примеры включены для иллюстрации предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения. Специалистам с квалификацией в данной области должно быть понятно, что способы, описанные в этих примерах, представляют способы, обнаруженные авторами изобретения как способы, которые хорошо функционируют в применении на практике настоящего изобретения, и следовательно, могут рассматриваться в качестве предпочтительных способов для применения на практике. Однако квалифицированным в данной области специалистам должно быть, в свете данного описания, понятно, что могут быть произведены многочисленные изменения в конкретных вариантах осуществления, которые описаны, и все еще может быть получен подобный или сходный результат без отклонения от идеи и объема настоящего изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Идентификация повторяющихся тетрапептидных последовательностей в коллагене
Относительно высокая доля повторяющихся последовательностей тетрапептида коллагена IV имеет мотив GxxG (где x обозначает любую аминокислоту). Некоторое количество из них показаны in situ как часть полной последовательности коллагена IV, показанной на фиг.1 в виде SEQ ID NO:45. Коллаген IV исследовали сначала в отношении его роли во взаимодействии с другими специализированными компонентами ECM (см. Gregory Schultz et al., 2005). Имеются одиннадцать последовательностей с мотивом GxxG в коллагене IV, которые появляются более десяти раз (GxxG, где xx представлен: vp, ek, fp, lp, pp, sp, ep, ip, pk, qp и tp). Среди этих тетрапептидных последовательностей восемь из одиннадцати последовательностей содержат пролин в положении 3, две из одиннадцати последовательностей содержат Р в положении 2, одна из одиннадцати последовательностей содержит пролин в положениях 2 и 3 и одна из одиннадцати последовательностей не содержит пролина. Описанные последовательности называют репликинами (REPLIKIN™). "РЕПЛИКИН" определяется как короткая последовательность в белках ЕСМ, которая встречается много раз (т.е. является реплицированной). Эта последовательность может присутствовать в одном белке ЕСМ (например, коллагене IV). Предпочтительно, эта последовательность присутствует во многих белках ЕСМ (например, во всех коллагенах, эластине, ламинине и т.д.). Присутствие этой последовательности во множественных белках ЕСМ увеличивает вероятность того, что этот фрагмент способен стимулировать синтез или репарацию ЕСМ.
Эти одиннадцать последовательностей GxxG, обнаруживаемых в коллагене IV, перечисленных выше, выделены в последовательности коллагена IV человека, показанной на фиг.1. На этой фигуре все напечатанные жирным шрифтом последовательности являются подчеркнутыми, а перекрывающиеся последовательности подчеркнуты дважды. Все, кроме одной из этих последовательностей, обнаруживаются также в коллагенах I, II, III и V. Этот факт способствует способности описанных пептидов стимулировать продукцию всех типов коллагенов, в частности, когда эти пептиды используются в комбинации. Таблица 1 показывает встречаемость нескольких тетрапептидных повторов в белках ЕСМ. Выделенные жирным шрифтом последовательности в таблице 1 являются последовательностями, которые встречаются в коллагене IV десять или более раз.
| Таблица 1 | ||||||||
| Встречаемость тетрапептидов в белках ЕСМ | ||||||||
| SEQ. ID NO | Последовательность | Коллаген I | Коллаген II | Коллаген III | Коллаген IV | Коллаген V | Эластин | Предшественник эластина |
| 19 | GAAG | 10 | 5 | 7 | 2 | 4 | 5 | |
| 20 | GAKG | 3 | 4 | 3 | 5 | 5 | ||
| 21 | GAPG | 13 | 21 | 25 | 6 | 9 | ||
| 22 | GDKG | 2 | 2 | 4 | 9 | 3 | ||
| 23 | GDRG | 2 | 5 | 2 | 4 | 1 | ||
| 8 | GEKG | 3 | 5 | 4 | 22 | 15 | ||
| 5 | GEPG | 11 | 15 | 10 | 11 | 4 | ||
| 24 | GERG | 10 | 11 | 14 | 6 | 7 | ||
| 2 | GFPG | 4 | 8 | 6 | 22 | 5 | 1 | 1 |
| 25 | GIPG | 2 | 2 | 6 | 14 | 6 | 5 | 5 |
| 26 | GKDG | 1 | 4 | 5 | 2 | 2 | ||
| 27 | GКPG | 2 | 3 | 3 | 4 | 1 | ||
| 28 | GLKG | 2 | 1 | 1 | 5 | 4 | ||
| 29 | GLPG | 15 | 10 | 9 | 42 | 15 | 1 | 1 |
| 30 | GNPG | 3 | 5 | 3 | 2 | 1 | ||
| 31 | GPAG | 16 | 20 | 20 | 3 | 6 | ||
| 32 | GPKG | 3 | 11 | 4 | 12 | 9 | ||
| 7 | GPPG | 33 | 40 | 40 | 46 | 43 | ||
| 33 | GPQG | 7 | 11 | 9 | 7 | 5 | ||
| 34 | GPRG | 11 | 13 | 10 | 4 | 7 | ||
| 35 | GPSG | 10 | 11 | 5 | 1 | 5 | ||
| 36 | GPTG | 4 | 3 | 2 | 2 | 6 | ||
| 37 | GPVG | 9 | 3 | 3 | 2 | 5 | ||
| 38 | GQPG | 3 | 4 | 6 | 12 | 7 | ||
| 39 | GRDG | 4 | 2 | 3 | 3 | |||
| 40 | GRPG | 3 | 3 | 4 | 2 | 5 | ||
| 3 | GSPG | 4 | 6 | 21 | 16 | 3 | ||
| 41 | GTPG | 3 | 4 | 2 | 11 | 2 | ||
| 42 | GVKG | 1 | 3 | 2 | 3 | 1 | ||
| 43 | GVPG | 1 | 3 | 10 | 1 | 14 | 15 | |
| 44 | GYPG | 1 | 1 | 1 | 4 | 2 |
Как также очевидно из рассмотрения последовательности коллагена IV, SEQ ID NO:45, имеются также много случаев встречаемости последовательностей, имеющих мотив PxxP. Например, последовательность PGPP встречается не менее пятнадцати раз, как показано на фиг.3. Таким образом, эту описанную последовательность также называют репликином (REPLIKINE™). Предпочтительно, эта последовательность присутствует во множественных белках ЕСМ (например, во всех коллагенах, эластине, ламинине и т.д.), так как присутствие этой последовательности во множественных белках ЕСМ увеличивает вероятность того, что этот фрагмент может быть способен стимулировать синтез или репарацию ЕСМ. Эти пятнадцать последовательностей PGPP, встречающихся в коллагене IV, перечисленных выше, выделены жирным шрифтом и подчеркнуты в последовательности коллагена, иллюстрированной на фиг.3.
Пример 2
Идентификация активных сегментов со сдвигом рамки
Кроме относительно высокой доли тетрапептидных повторяющихся последовательностей коллагена IV с мотивом GxxG, были идентифицированы другие тетрапептидные последовательности, имеющие сдвиг рамки на одну аминокислоту от тетрапептидной последовательности либо GxxG, либо PxxP. Эти последовательности могут повторяться или встречаются только один раз в белке ЕСМ и могут быть расположены со сдвигом на одно положение аминокислоты от тетрапептидной последовательности либо GxxG, либо PxxP, как описано здесь. Эти тетрапептидные последовательности называют активными последовательностями сдвига рамки. Такие активные последовательности сдвига рамки могут, соответственно, содержать либо G, либо Р либо во втором, либо в третьем положении в зависимости от направления сдвига рамки. Кроме того, было обнаружено, что эти активные последовательности сдвига рамки могут быть объединены с другими тетрапептидными последовательностями, описанными в этой заявке, с образованием комбикина. Примером такого комбикина является Н06 и Н15.
Одним примером активной последовательности сдвига рамки является GAGP или H12 (SEQ ID NO:6). H12 (GAGP) предстает как сдвиг на один остаток (или одну рамку) от GxxG-тетрапептида GGAG в коллагене III (SEQ ID NO:46), как показано на фиг.2. На этой фигуре все активные последовательности сдвига рамки изображены жирным шрифтом и подчеркнуты, а GxxG-последовательности, имеющие один сдвиг рамки, подчеркнуты дважды. Кроме того, как показано в таблице 5, этот тетрапептид (GAGP) достигает хороших результатов в отношении продукции коллагена через 48 часов. Другим примером является последовательность PGPR, которая является Н10 (SEQ ID NO:4), которая встречается одиннадцать раз в коллагенах I-IV. Поскольку она предстает множественное число раз в отдельном белке ЕСМ, этот тетрапептид может быть дополнительно рассматриваться как репликин (REPLIKINE). На фиг.2 (SEQ ID NO:46) показано несколько случаев этого тетрапептида, в каждом из которых встречается один сдвиг рамки от GxxG-тетрапептида GPRG. Эта конкретная активная последовательность сдвига рамки имеется во множественных белках ЕСМ и, следовательно, увеличивает вероятность того, что этот фрагмент может быть способен стимулировать синтез или репарацию ЕСМ.
Пример 3
Идентификация повторяющихся последовательностей, которые стимулируют продукцию коллагена
Несколько последовательностей, идентифицированных в примерах 1 и 2, синтезировали с использованием стандартного способа синтеза пептидов и анализировали на стимуляцию коллагена из дермальных фибробластов. Эти синтезированные пептиды амидировали на С-конце, что делало эти тетрапептиды менее чувствительными к протеазной деградации и увеличивало их растворимость в сравнении с формами свободной кислоты. Дермальные фибробласты человека инкубировали в 96-луночных планшетах при 37°С и 5% CO2 в течение 24 и 48 часов в 150 мкл полной среды для культуры клеток (Cascade Biologies, Portland, OR; Cat. No. M-106-500), дополненной добавкой для роста с низким содержанием сыворотки (Cascade Biologies, Portland, OR; Cat. No. S-003-10), содержащих пептиды проб в конечной концентрации 50 мкг/мл. В каждую лунку засевали 10000 клеток. После инкубации из каждой лунки извлекали пробы 100 мкл среды и их анализировали на продукцию коллагена.
Эти анализы выполнялись Tebu-bio Laboratories (Франция) с использованием набора для анализа коллагена SIRCOL™ (Biocolor Assays, UK) в соответствии с протоколом изготовителя. Анализ коллагена SIRCOL™ является количественным способом со связыванием красителя, предназначенным для анализа растворимых коллагенов, выделяемых в культуральную среду клетками млекопитающих во время культивирования in vitro. Коллаген тестируемых проб связывается с анионным красителем SIRCOL™. Комплексы коллаген-краситель осаждаются из раствора и осадки собирают центрифугированием. Извлеченный осадок коллаген-краситель растворяли в щелочном растворе перед измерениями оптической плотности. Измерения в двух повторностях выполняли через 24 и 48 часов для двух отдельных проб. Среднее рассчитывали из этих четырех измерений для каждой пробы. Оптическую плотность слепых проб (реагентов), стандартов коллагена и проб измеряли при 560 нм. Оптическую плотность слепой пробы (реагентов) вычитали из оптической плотности для каждой пробы через 24 и 48 часа.
Два отдельных набора данных использовали для получения двух калибровочных кривых стандартов. Первую калибровочную кривую получали для целей расчета количества коллагена в пробах Н6 (комбинации SEQ ID NO:1-4), H7-H14 (SEQ ID NO:1-8 соответственно) и H15 (комбинации SEQ ID NO:5-8). Вторую калибровочную кривую получали расчетом количества коллагена в пробах H16 (SEQ ID NO:9), H21-23 (SEQ ID NO:10-12 соответственно), H25-26 (SEQ ID NO:13-14 соответственно) или H29-30 (SEQ ID NO:15-16 соответственно), H32 (SEQ ID NO:17), H33 (комбинации SEQ ID NO:9-12), H34 (комбинации SEQ ID NO:11-14), H35 (комбинации SEQ ID NO:13-16), H36 (комбинации SEQ ID NO:l, 6, 5, 8), H37 (SEQ ID NO:17) и H38 (SEQ ID NO:8) из измерений оптической плотности и построением кривой зависимости Abs560 нм от соответствующих концентраций стандартов коллагена (в микрограммах) каждый раз, когда выполняли серию анализов. В отношении каждой серии данных одну и ту же калибровочную кривую использовали для проб, взятых через 24 и 48 часа (таблицы 2А и 2В). Таким образом, разные кривые стандартов получали непосредственно перед выполнением каждой серии анализов.
| Таблица 2A | ||
| Калибровочная кривая для анализа продукции коллагена пептидами H6-H15 | ||
| Стандарты коллагена (мкг) | 24 ч А560 нм тест | 48 ч А560 нм тест |
| 0 | 0,00 | 0,00 |
| 5 | 0,08 | 0,10 |
| 10 | 0,11 | 0,15 |
| 25 | 0,32 | 0,35 |
| 50 | 0,66 | 0,65 |
| Таблица 2B | ||
| Калибровочная кривая для анализа продукции коллагена пептидами H16, H21-23, H25-26 и H29-38 | ||
| Стандарты коллагена (мкг) | А560 нм тест день 1 | А560 нм тест день 2 |
| 0 | 0,00 | 0,00 |
| 5 | 0,12 | 0,09 |
| 10 | 0,14 | 0,15 |
| 25 | 0,48 | 0,42 |
| 50 | 0,88 | 0,80 |
Линейную регрессию выполняли построением величин Abs560нм в зависимости от концентраций соответствующих стандартов коллагенов с использованием MICROSOFT EXCEL™. Регрессия приводила к линиям, описываемым формулой y=0,013x для обоих периодов инкубации, указанных в таблице 2А. Поскольку эти результаты были идентичными, для второй серии калибровочных кривых использовали только 24-часовой период времени. Формула линии, полученной в день анализа 1 и день анализа 2 второй серии проб, была y=0,0178x и y=0,0162x соответственно. Пептид LL-37 (SEQ ID NO:18) использовали в качестве положительного контроля, так как широко сообщалось, что он оказывает действие при заживлении ран у человека (Heilborn et al. The Cathelicidin Anti-Microbial Peptide LL-37 is Involved in The Re-Epithelialization of Human Skin Wounds and is Lacking in Chronic Ulcer Epithelium, J. Invest. Dermato. 120:379-89 (2003)). Предел детектирования этого анализа, определенный изготовителем, равен 2,5 мкг.
Общее количество коллагена, продуцированного в пробах, содержащих пептиды, рассчитывали из средних величин оптической плотности, полученных через 24 часа (таблица 3А) и 48 часов (таблица 3В), с использованием линейного уравнения, произведенного из этой стандартной кривой. Общее количество коллагена, продуцированного в пробах, содержащих пептиды H16 (SEQ ID NO:9), H21-23 (SEQ ID NO:10-12 соответственно), H25-26 (SEQ ID NO:13-14 соответственно) или H29-30 (SEQ ID NO:15-16 соответственно), H32 (SEQ ID NO:17), H33 (комбинации SEQ ID NO:9-12), H34 (комбинации SEQ ID NO:11-14), H35 (комбинации SEQ ID NO:13-16), H36 (комбинации SEQ ID NO:1, 6, 5, 8), H37 (SEQ ID NO:17) и H38 (SEQ ID NO:8), рассчитывали из величин оптической плотности, измеренных через 24 часа (таблица 4А) и 48 часов (таблица 4В), с использованием линейного уравнения, полученного из этой стандартной кривой. Эти величины сравнивали с величинами пептида LL37 (SEQ ID NO:18), пептида, о котором известно, что он стимулирует коллаген. В каждой таблице пробы, отмеченные звездочкой (*), могут не быть значимыми, так как предел детектирования этого анализа равен 2,5 мкг.
| Таблица 3A | ||||||
| Измерения оптической плотности и количественное измерение коллагена в тест-пробах H6-H15 через 24 часа | ||||||
| SEQ ID NО | Пептиды | А560нм | Среднее | Среднее минус слепой опыт | Коллаген (мкг) | |
| 18 | LL37 | 0,102 | 0,136 | 0,12 | 0,04 | 3,0 |
| - | H6 | 0,084 | 0,140 | 0,11 | 0,03 | 2,5 |
| 1 | H7 | 0,098 | 0,063 | 0,08 | 0,00 | 0,0* |
| 2 | H8 | 0,122 | 0,078 | 0,10 | 0,02 | 1,5* |
| 3 | H9 | 0,147 | 0,104 | 0,13 | 0,05 | 3,5 |
| 4 | H10 | 0,103 | 0,146 | 0,12 | 0,04 | 3,4 |
| 5 | H11 | 6,110 | 0,168 | 0,14 | 0,06 | 4,5 |
| 6 | H12 | 0,063 | 0,101 | 0,08 | 0,00 | 0,2* |
| 7 | H13 | 0,114 | 0,093 | 0,10 | 0,02 | 1,8* |
| 8 | H14 | 0,115 | 0,122 | 0,12 | 0,04 | 3,0 |
| - | H15 | 0,132 | 0,093 | 0,11 | 0,03 | 2,5 |
| - | Слепой опыт | 0,074 | 0,076 | 0,08 | 0,00 | 0,0 |
| Таблица 3В | ||||||
| Измерения оптической плотности и количественное измерение коллагена в тест-пробах H6-H15 через 48 часа | ||||||
| SEQID NO | Пептиды | А560нм | Среднее | Среднее минус слепой опыт | Коллаген (мкг) | |
| 18 | LL37 | 0,262 | 0,113 | 0,19 | 0,07 | 5,2 |
| - | H6 | 0,086 | 0,189 | 0,14 | 0,02 | 1,3* |
| 1 | H7 | 0,192 | 0,189 | 0,19 | 0,07 | 5,4 |
| 2 | H8 | 0,137 | 0,126 | 0,13 | 0,01 | 0,9* |
| 3 | H9 | 0,117 | 0,061 | 0,09 | 0,00 | 0,0* |
| 4 | H10 | 0,136 | 0,085 | 0,11 | 0,00 | 0,0* |
| 5 | H11 | 0,113 | 0,181 | 0,15 | 0,03 | 2,1* |
| 6 | H12 | 0,106 | 0,231 | 0,17 | 0,05 | 3,7 |
| 7 | H13 | 0,100 | 0,145 | 0,12 | 0,00 | 0,2* |
| 8 | H14 | 0,132 | 0,176 | 0,15 | 0,03 | 2,6 |
| - | H15 | 0,177 | 0,174 | 0,18 | 0,06 | 4,3 |
| - | Слепой опыт | 0,120 | 0,115 | 0,12 | 0,00 | 0,0 |
| Таблица 4A | ||||||
| Измерения оптической плотности и количественное измерение коллагена в тест-пробах Н16, Н21-23, Н25-26 или Н29-38 через 24 часа | ||||||
| SEQ ID NO | Пептиды | А560нм | Среднее | Среднее минус слепой опыт | Коллаген (мкг) | |
| 9 | H16 | 0,133 | 0,137 | 0,14 | 0,06 | 3,1 |
| 10 | H21 | 0,129 | 0,119 | 0,12 | 0,04 | 2,5 |
| 11 | H22 | 0,192 | 0,085 | 0,14 | 0,06 | 3,3 |
| 12 | H23 | 0,090 | 0,073 | 0,08 | 0,00 | 0,1* |
| 13 | H25 | 0,129 | 0,076 | 0,00 | 0,02 | 1,3* |
| 14 | H26 | 0,114 | 0,149 | 0,13 | 0,05 | 2,9 |
| 15 | H29 | 0,111 | 0,063 | 0,09 | 0,01 | 0,4* |
| 16 | H30 | 0,099 | 0,092 | 0,10 | 0,02 | 0,9* |
| 17 | H32 (кристаллы и клеточная токсичность) | 0,087 | 0,055 | 0,07 | -0,01 | -0,5* |
| - | H33 | 0,086 | 0,125 | 0,11 | 0,03 | 1,4* |
| - | H34 | 0,117 | 0,120 | 0,12 | 0,04 | 2,2* |
| - | H35 | 0,103 | 0,090 | 0,10 | 0,02 | 0,9* |
| - | H36 | 0,105 | 0,128 | 0,12 | 0,04 | 2,1* |
| 17 | H37 | 0,099 | 0,100 | 0,10 | 0,02 | 1,1* |
| 8 | H38 | 0,103 | 0,159 | 0,13 | 0,05 | 2,9 |
| - | Слепой опыт | 0,072 | 0,086 | 0,08 | 0,00 | 0,0 |
| Таблица 4В | ||||||
| Измерения оптической плотности и количественное измерение коллагена в тест-пробах Н16, Н21-23, Н25-26 или Н29-38 через 48 часа | ||||||
| SEQ ID NO | Пептиды | А560нм | Среднее | Среднее минус слепой опыт | Слепой опыт | |
| 9 | H16 | 0,065 | 0,064 | 0,06 | 0,00 | 0,3* |
| 10 | H21 | 0,089 | 0,126 | 0,11 | 0,05 | 2,9 |
| 11 | H22 | 0,102 | 0,087 | 0,09 | 0,03 | 2,1* |
| 12 | H23 | 0,093 | 0,082 | 0,09 | 0,03 | 1,7* |
| 13 | H25 | 0,059 | 0,084 | 0,07 | 0,01 | 0,7* |
| 14 | H26 | 0,081 | 0,153 | 0,12 | 0,06 | 3,5 |
| 15 | H29 | 0,086 | 0,094 | 0,09 | 0,03 | 1,9* |
| 16 | H30 | 0,083 | 0,101 | 0,09 | 0,03 | 2,0* |
| 17 | H32 (кристаллы и клеточная токсичность) | 0,088 | 0,072 | 0,08 | 0,02 | 1,2* |
| - | H33 | 0,096 | 0,092 | 0,09 | 0,03 | 2,1* |
| - | H34 | 0,076 | 0,155 | 0,12 | 0,06 | 3,4 |
| - | H35 | 0,120 | 0,074 | 0,10 | 0,04 | 2,3* |
| - | H36 | 0,154 | 0,082 | 0,12 | 0,06 | 3,6 |
| 17 | H37 | 0,078 | 0,114 | 0,10 | 0,04 | 2,2* |
| 8 | H38 | 0,123 | 0,089 | 0,11 | 0,05 | 2,8 |
| - | Слепой опыт | 0,106 | 0,0106 | 0,06 | 0,00 | 0,0 |
Поскольку размеры проб были равны 100 мкл, концентрацию коллагена, продуцируемого в каждой пробе, в микрограммах на миллилитр определяли умножением детектированного количества коллагена на десять. Результаты всех тестированных проб суммированы в таблице 5.
| Таблица 5 | |||||
| Синтез коллагена, индуцированный пептидами | |||||
| Продуцированный коллаген (мкг/мл) | |||||
| SEQ ID NO | Название | Первичная последовательность | [Пептид] (мкг/мл) | 24 ч | 48 ч |
| 1 | H07 | PEGP | 50 | 0 | 54 |
| 2 | H08 | GFPG | 50 | 15 | 9 |
| 3 | H09 | GSPG | 50 | 35 | 0 |
| 4 | H10 | PGPR | 50 | 34 | 0 |
| - | H06 | H7, H8, H9, H10 (SEQ ID NO:1, 2, 3, 4) | 50 | 25 | 13 |
| 5 | H11 | GEPG | 50 | 45 | 21 |
| 6 | H12 | GAGP | 50 | 2 | 37 |
| 7 | H13 | GPPG | 50 | 18 | 2 |
| 8 | H14 | GEKG | 50 | 30 | 26 |
| 8 | H38 | GEKG | 0,3 | 29 | 28 |
| - | H15 | H11, H12, H13, H14 (SEQ ID NO:5, 6, 7, 8) | 50 | 25 | 43 |
| 9 | H16 | PEKP | 50 | 31 | 3 |
| 10 | H21 | PKGP | 50 | 25 | 29 |
| 11 | H22 | PGQP | 50 | 33 | 21 |
| 12 | H23 | PGTP | 50 | 1 | 17 |
| 13 | H25 | PMGP | 50 | 13 | 7 |
| 14 | H26 | PGPP | 50 | 29 | 35 |
| 15 | H29 | PQGP | 50 | 4 | 19 |
| 16 | H30 | PGNP | 50 | 9 | 20 |
| 17 | H32 | KTTKS (пептид SEDERMA™) | 50 | na | 12 |
| 17 | H37 | KTTKS (пептид SEDERMA™) | 0,3 | 11 | 22 |
| - | H33 | H16, H21, H22, H23 (SEQ ID NO:9, 10, 11, 12) | 50 | 14 | 21 |
| - | H34 | H22, H23, H25, H26 (SEQ ID NO: 11, 12, 13, 14) | 50 | 22 | 34 |
| - | H35 | H25, H26, H29, H30 (SEQ ID NO: 13, 14, 15, 16) | 50 | 9 | 23 |
| - | H36 | H7, H12, H11, H14 (SEQ ID NO: 1, 6, 5, 8) | 50 | 21 | 36 |
| 18 | LL37 | LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIDFLRNLVPRTES | 50 | 30 | 52 |
Все тестированные тетрапептиды стимулировали продукцию растворимого коллагена. Из тестированных последовательностей тетрапептиды GxxG с глутаминовой кислотой в положении 2 наилучшим образом стимулируют коллаген как при 24-часовых, так и при 48-часовых временных точках. Этими последовательностями являются H11 (GEPG; SEQ ID NO:5), H14 (GEKG; SEQ ID NO:8) и H38 (GEKG; SEQ ID NO:8). Эти пептиды сначала подвергали скринингу с использованием концентрации пептидов 50 мкг/мл. Для нахождения концентрации, эффективной для стимуляции продукции коллагена, H14 (SEQ ID NO:8) тестировали также при 0,3 мкг/мл, как и Н38. Как показано в таблице 5, H38-индуцированная стимуляция коллагена не уменьшалась при более низкой концентрации, что указывает на то, что максимальная стимулирующая концентрация SEQ ID NO:8 равна или ниже 0,3 мкг/мл.
Для тестирования эффективности SEQ ID NO:8 (H14 и H38) сравнивали с пептидом LL37 (SEQ ID NO:18), о котором известно, что он стимулирует продукцию коллагена. На основе количества коллагена, высвобождаемого фибробластами в ответ на LL37, 25 мкг/мл считали значимым количеством коллагена, высвобождаемого вследствие контакта с тетрапептидом. SEQ ID NO:8 индуцировала приблизительно то же самое количество коллагена, что и LL37 (SEQ ID NO:18), через 24 часа. Важно, что коллаген, продуцированный в результате контакта с SEQ ID NO:8, по существу сохранялся в течение по меньшей мере 48 часов. SEQ ID NO:8 сравнивали также с основным пептидом для ухода за кожей, о котором известно, что он стимулирует продукцию коллагена, KTTKS (SEQ ID NO:17) (Katayama et al., J. Biol. Chem. 288:9941-9944 (1983)). KTTKS является ингредиентом в продукте MATRIXYL™ (SEDERMA SAS, Франция). SEQ ID NO:8 больше стимулировала продукцию коллагена, чем этот пептид KTTKS (SEQ ID NO:17) (таблица 5) через 24 и 48 часов.
Пример 4
Идентификация комбинаций пептидов, которые синергически усиливают стимуляцию коллагена - КОМБИКИНЫ
Гетерогенные популяции активных тетрапептидов могут стимулировать продукцию коллагена на более высоком уровне, чем гомогенные пробы тетрапептидов. Компоненты этой гетерогенной композиции называют комбикинами (COMBIKINE™). Комбикины являются группой репликинов, объединенных для получения более высокого или более широкого действия на одном или нескольких типах клеток-мишеней. Пептиды H11 (SEQ ID NO:5), H12 (SEQ ID NO:6), H13 (SEQ ID NO:7) и H14 (SEQ ID NO:8) объединяли до конечной концентрации 50 мкг/мл и анализировали с использованием того же самого протокола, который использовали для отдельных пептидов. Как и ожидалось, полученный результат во временной точке 24 часа был равен среднему отдельных оценок индукции. Однако эта комбинация пептидов при 48 часах индуцировала коллаген до уровня 43 мкг/мл. Неожиданно это количество было выше признанного среднего (21 мкг/мл) этих четырех отдельных пептидов (см. таблицу 5). Таким образом, конкретные комбинации пептидов могут стимулировать продукцию коллагена до большей степени, чем эти отдельные пептиды при той же самой концентрации. Кроме того, тетрапептиды из различных источников ЕСМ, такие как коллаген, ламинин и эластин, могут продуцировать увеличенную индукцию различных белков ЕСМ (см. таблицы 1 и 5).
Пример 5
Экономичное получение КОМБИКИНА для увеличенной стимуляции продукции коллагена
Высокая стоимость пептидного синтеза ограничивает возможность получения гетерогенных композиций биологически активных пептидов. Данное изобретение в значительной степени уменьшает это ограничение. Поскольку описанные теперь последовательности имеют общий признак (например, глицин или пролин на обоих концах), некоторый диапазон тетрапептидов, варьируемых в положениях 2 и 3, может быть синтезирован в едином цикле получения. Эти синтетические пептиды могут быть получены любым способом, известным в данной области (Benoiton, N., Chemistry of Peptide Synthesis, CRC (2005)). Во время получения этих пептидов вместо гомогенных проб добавляют смеси аминокислот. Химический способ определения правильных соотношений концентраций аминокислот, добавляемых в смешанных положениях, был описан ранее (Greenbaum et al. Molecular and Cellular Proteomics 1:60-68, 2002; Krstenansky et al. Letters in Drug Design and Discovery 1:6-13, 2004; обе эти ссылки включены здесь в их полном виде). С использованием этой методологии может быть получена библиотека гетерогенных пептидов с почти теми же затратами, которые нужны для синтеза одного пептида.
Применение этого процесса производства делает возможным экономичное получение биологически активных комбикинов. Это становится возможным вследствие уникального состава описанных тетрапептидов. Смеси тетрапептидов являются более подходящими для включения в препараты для местного применения, чем более длинные пептиды. Вследствие их длины тетрапептиды имеют практические и химические преимущества над более длинными пептидами, включающие следующее: более легкое включение и растворение в препаратах, более высокую проницаемость кожи и пор и более высокие выходы получения более легкими способами приготовления комбинаций пептидов. Хотя это и не требуется, идеальные препараты тетрапептидов, по отдельности или в комбинации, являются препаратами, которые поддерживают значительную продукцию коллагена в течение 24 часов и до 48 часов. Более предпочтительно, эти препараты могут индуцировать синтез ЕСМ в течение всего периода 48 часов, так что больше коллагена продуцируется через 48 часов, чем через 24 часа. Хотя в объеме данного изобретения тетрапептиды, которые стимулируют продукцию белков ЕСМ в течение 24 часов, но обнаруживают уменьшенную продукцию на протяжении 48 часов, являются менее предпочтительными. В этой связи таблица 6 показывает результаты описанных в настоящее время пептидов. Предпочтительные пептиды представлены жирным шрифтом.
| Таблица 6 | ||||||
| Описанные пептиды | ||||||
| SEQ ID NO | Пептиды | Высвобожденный коллаген (мкг/мл) 24 ч | Высвобожденный коллаген (мкг/мл) 48 ч | Значительное высвобождение коллагена через 24 ч и 48 ч | Увеличение высвобождения коллагена через 48 ч в сравнении с 24 ч | Уменьшение высвобождения коллагена через 48 ч в сравнении с 24 ч |
| 18 | LL37 | 30 | 52 | √ | √ | |
| - | H6 | 25 | 13 | |||
| 1 | H7 | 0 | 54 | √ | ||
| 2 | H8 | 15 | 9 | |||
| 3 | H9 | 35 | 0 | √ | ||
| 4 | H10 | 34 | 0 | √ | ||
| 5 | H11 | 45 | 21 | √ | ||
| 6 | H12 | 2 | 37 | √ | ||
| 7 | H13 | 18 | 2 | |||
| 8 | H14 | 30 | 26 | √ | ||
| 8 | H38 | 29 | 28 | √ | ||
| - | H15 | 25 | 43 | √ | √ | |
| 9 | H16 | 31 | 3 | √ | ||
| 10 | H21 | 25 | 29 | √ | ||
| 11 | H22 | 33 | 21 | √ | ||
| 12 | H23 | 1 | 17 | √ | ||
| 13 | H25 | 13 | 7 | √ | ||
| 14 | H26 | 29 | 35 | √ | ||
| 15 | H29 | 4 | 19 | √ | ||
| 16 | H30 | 9 | 20 | √ | ||
| 17 | H32 (кристаллы и клеточная токсичность) | NA | 12 | |||
| 17 | H37 | 11 | 22 | √ | ||
| - | H33 | 14 | 21 | √ | ||
| - | H34 | 22 | 34 | √ | ||
| - | H35 | 9 | 23 | √ | ||
| - | H36 | 21 | 36 | √ | ||
Пример 6
Стимуляторы коллагена также служат в качестве мультиэффекторных молекул, усиливающих закрытие ран эпителиальных клеток
Коллагены являются ключевыми компонентами всех фаз заживления ран. Стимуляция продукции коллагена отражает то, что повреждение происходит в коллагеновой сети (например, под действием ферментов или вследствие физического разрушения). Действительно, общий коллапс коллагеновой сети фактически вызывает появление заживления. Таким образом, коллагеновый стимулятор может также служить в качестве мультиэффекторной молекулы, организующей определенное ремоделирование матрикса и усиление заживления ран.
Эксперименты по заживлению ран выполняли на монослоях эпителиальных клеток кожи человека (CRL-2592), посеянных на 12-луночные чашки. Клетки голодали в отношении сыворотки в течение 24 часов перед экспериментированием. На конфлюэнтные монослои CRL-2592 наносили поранения кончиком пипетки P200 (200-мкл). Эти раны промывали и документировали в виде рисунка перед обработкой пептидами. Пептиды добавляли до конечной концентрации 20-40 мкг/мл. Клетки выдерживали в термостате при 37°С, 5% CO2 и влажности 92% за исключением короткого времени получения изображений при комнатной температуре. Закрытие ран наблюдали при 6-часовой и 10-часовой временных точках. ЗФР-обработанные раны использовали в качестве отрицательного контроля для целей сравнения.
| Таблица 7 | |||||
| Действие пептидов на закрытие ран эпителия кожи человека in vitro | |||||
| 0 ч | 6 ч | 10 ч | |||
| Соединение | Размер W* | Размер W | % закрытия | Размер W | % закрытия |
| ЗФР-1 | 36 | 29 | 19,40% | 21 | 41,70% |
| ЗФР-2 | 52 | 42 | 19,20% | 30 | 42,30% |
| SEQ ID NO:14 | 25 | 12 | 52% | 2,75 | 89% |
| SEQ ID NO:5 | 48 | 39 | 19% | 30 | 37,50% |
| *Размер W: размер раны (относительный) | |||||
Закрытие раны монослоя in vitro является результатом клеточной миграции, которая является важной во многих биологических процессах, таких как эмбриогенез, ангиогенез, воспалительные реакции и репарация (заживление) ран. Считается, что эти процессы регулируются взаимодействием с другими клетками, цитокинами и белками ЕСМ. Как показано в таблице 7, SEQ ID NO:14 значимо индуцирует закрытие ран в сравнении с действиями одного ЗФР. Такая активность является пептид-специфической, а также специфической в отношении типа клеток, так как SEQ ID NO:14 не индуцирует закрытие ран в монослое фибробластов кожи человека (данные не показаны). SEQ ID NO:5 также является индуктором коллагена, но не усиливает закрытие ран или миграцию эпителиальных клеток до какой-либо большой степени в сравнении с действиями одного ЗФР. Тот факт, что SEQ ID NO:14 индуцировала миграцию клеток или закрытие ран специфическим в отношении эпителиальных клеток кожи образом (т.е. без рекрутинга фибробластов), может быть дополнительным преимуществом использования этого пептида для ухода за кожей, так как считается, что рекрутинг большого количества активных фибробластов к месту повреждения приводит к избыточному отложению и сморщиванию ткани, приводя к рубцеванию.
Все из описанных и заявленных здесь композиций или способов могут быть приготовлены или выполнены без излишнего экспериментирования в свете данного описания. Хотя композиции и способы настоящего изобретения были описаны в виде предпочтительных вариантов осуществления, специалисту с квалификацией в данной области будет очевидно, что могут быть использованы вариации в отношении этих композиций и/или способов и в стадиях или последовательности стадий описанных здесь способов без отклонения от концепции, идеи и объема настоящего изобретения. Более конкретно, будет очевидно, что некоторые агенты, которые являются как химически, так и физиологически сходными, могут заменять описанные здесь агенты с получением тех же самых или аналогичных результатов. Предполагается, что все такие подобные заместители и модификации, очевидные для квалифицированных в данной области специалистов, находятся в пределах идеи, объема и концепции настоящего изобретения.
Claims (25)
1. Тетрапептид, характеризующийся формулой SEQ ID NO: 1, 3, 4, 5, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 15 или 16, где указанный тетрапептид стимулирует продукцию коллагена фибробластами.
2. Тетрапептид по п.1, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 5.
3. Тетрапептид по п.1, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 3.
4. Тетрапептид по п.1, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 8.
5. Тетрапептид по п.1, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 16.
6. Тетрапептид по п.1, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 1.
7. Тетрапептид по п.1, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 9.
8. Тетрапептид по п.1, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 4.
9. Тетрапептид по п.1, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 11.
10. Тетрапептид по любому из пп.1-9, где тетрапептид амидирован на карбоксиконце.
11. Композиция, содержащая тетрапептид по любому из пп.1-10 и фармацевтически приемлемый носитель, где указанная композиция стимулирует продукцию коллагена фибробластами.
12. Композиция по п.11, где тетрапептид присутствует в эффективной концентрации в диапазоне от приблизительно 0,01 мкг/мл до приблизительно 100 мкг/мл.
13. Композиция по п.11, где тетрапептид присутствует в эффективной концентрации в диапазоне от приблизительно 0,1 мкг/мл до приблизительно 1 мкг/мл.
14. Композиция по п.11, где композиция находится в форме аэрозоля, эмульсии, жидкости, лосьона, крема, пасты, мази или пенки.
15. Композиция, содержащая смесь тетрапептидов SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 и фармацевтически приемлемый носитель, где указанная композиция стимулирует продукцию коллагена фибробластами.
16. Композиция по п.11, в которой указанный тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 5.
17. Композиция по п.11, в которой указанный тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 8.
18. Композиция по любому из пп.11-17 для использования в средстве для ухода за кожей.
19. Композиция по любому из пп.11-17 для использования при лечении ран на коже.
20. Способ стимуляции продукции коллагена фибробластом, предусматривающий воздействие на фибробласт тетрапептидом, характеризующимся любой из формул SEQ ID NO: 1-16, с индуцированием посредством этого продукции коллагена фибробластом.
21. Способ по п.20, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 5.
22. Способ по п.20, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 7.
23. Способ по п.20, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 6.
24. Способ по п.20, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 8.
25. Способ по п.20, где тетрапептид характеризуется формулой SEQ ID NO: 14.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US81328406P | 2006-06-13 | 2006-06-13 | |
| US60/813,284 | 2006-06-13 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011141572/10A Division RU2501807C2 (ru) | 2006-06-13 | 2007-06-12 | Пептидные фрагменты для индукции синтеза белков внеклеточного матрикса |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2009100884A RU2009100884A (ru) | 2010-07-20 |
| RU2441877C2 true RU2441877C2 (ru) | 2012-02-10 |
Family
ID=38664422
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009100884/10A RU2441877C2 (ru) | 2006-06-13 | 2007-06-12 | Тетрапептид, композиция (варианты) и способ стимуляции продукции коллагена фибробластом |
| RU2011141572/10A RU2501807C2 (ru) | 2006-06-13 | 2007-06-12 | Пептидные фрагменты для индукции синтеза белков внеклеточного матрикса |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011141572/10A RU2501807C2 (ru) | 2006-06-13 | 2007-06-12 | Пептидные фрагменты для индукции синтеза белков внеклеточного матрикса |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US8110658B2 (ru) |
| EP (5) | EP2402369B1 (ru) |
| JP (2) | JP5535620B2 (ru) |
| CN (2) | CN104017071B (ru) |
| AT (1) | ATE533785T1 (ru) |
| AU (1) | AU2007258387B2 (ru) |
| BR (2) | BRPI0713153B8 (ru) |
| CA (4) | CA2835369C (ru) |
| CY (1) | CY1112241T1 (ru) |
| DK (3) | DK2027152T3 (ru) |
| ES (4) | ES2545219T3 (ru) |
| HK (5) | HK1128700A1 (ru) |
| HU (2) | HUE026698T2 (ru) |
| MX (2) | MX361694B (ru) |
| PL (4) | PL2409988T3 (ru) |
| PT (2) | PT2402369E (ru) |
| RU (2) | RU2441877C2 (ru) |
| SI (2) | SI2409988T1 (ru) |
| WO (1) | WO2007146269A2 (ru) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BRPI0713153B8 (pt) * | 2006-06-13 | 2021-05-25 | Helix Biomedix Inc | tetrapeptídeo capaz de induzir a produção das proteínas da matriz extracelular e composição o compreendendo |
| EP2065029B1 (en) * | 2007-11-30 | 2013-04-17 | Evonik Goldschmidt GmbH | Personal care and cosmetic composition containing tetrapeptides with the motifs GX1X2G, PX1X2P, or PX1X2K |
| WO2009111471A2 (en) * | 2008-03-03 | 2009-09-11 | Henry Ford Health System | Collagen-derived peptide as biomarker, therapeutic agent and target |
| US9850274B2 (en) * | 2008-12-30 | 2017-12-26 | Gkl-Biotec Ag | Peptide combination |
| WO2011044443A2 (en) | 2009-10-09 | 2011-04-14 | University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Matricryptic ecm peptides for tissue reconstruction |
| WO2014004719A2 (en) | 2012-06-26 | 2014-01-03 | Worcester Polytechnic Institute | Matrix scaffold with antimicrobial activity |
| CN105120884B (zh) * | 2013-02-14 | 2017-08-29 | 赫里克斯生物医疗公司 | 用于促进伤口愈合的短生物活性肽 |
| WO2014140890A2 (en) * | 2013-03-13 | 2014-09-18 | Neocutis Sa | Peptides for skin rejuvenation and methods of using the same |
| US10392611B2 (en) | 2013-05-30 | 2019-08-27 | Duke University | Polymer conjugates having reduced antigenicity and methods of using the same |
| US10364451B2 (en) | 2013-05-30 | 2019-07-30 | Duke University | Polymer conjugates having reduced antigenicity and methods of using the same |
| SI3007716T1 (sl) | 2013-06-14 | 2017-09-29 | Helix Biomedix Inc. | Tetrapeptidi, pridobljeni iz humanih kemokinov c-x-c, uporabni za zdravljenje različnih kožnih stanj |
| US10385115B2 (en) | 2015-03-26 | 2019-08-20 | Duke University | Fibronectin type III domain-based fusion proteins |
| JP6882782B2 (ja) | 2015-08-04 | 2021-06-02 | デューク ユニバーシティ | 遺伝子コードされた本質的に無秩序な送達用ステルスポリマーおよびその使用方法 |
| KR101916522B1 (ko) | 2015-09-25 | 2018-11-08 | 경상대학교산학협력단 | 굴 가수분해물의 제조방법 및 이로부터 분리된 펩타이드 |
| US11752213B2 (en) | 2015-12-21 | 2023-09-12 | Duke University | Surfaces having reduced non-specific binding and antigenicity |
| US11467156B2 (en) | 2016-06-01 | 2022-10-11 | Duke University | Nonfouling biosensors |
| RU2019110848A (ru) * | 2016-09-14 | 2020-10-15 | Дьюк Юниверсити | Наночастицы на основе триблочных полипептидов для доставки гидрофильных лекарственных средств |
| WO2018057847A1 (en) | 2016-09-23 | 2018-03-29 | Duke University | Unstructured non-repetitive polypeptides having lcst behavior |
| WO2018132732A1 (en) | 2017-01-12 | 2018-07-19 | Duke University | Genetically encoded lipid-polypeptide hybrid biomaterials that exhibit temperature triggered hierarchical self-assembly |
| JP6489487B2 (ja) * | 2017-01-20 | 2019-03-27 | 富比積生物科技股▲分▼有限公司 | テトラペプチド−３ ｇｅｋｇまたはペンタペプチド−３ ｇｅｋｇｆにより変形性関節症を治療するための新規用途 |
| JP6489486B2 (ja) * | 2017-01-20 | 2019-03-27 | 富比積生物科技股▲分▼有限公司 | ペンタペプチド／ヘキサペプチドにより変形性関節症を治療するための新規用途 |
| WO2018213320A1 (en) | 2017-05-15 | 2018-11-22 | Duke University | Recombinant production of hybrid lipid-biopolymer materials that self-assemble and encapsulate agents |
| WO2019006374A1 (en) | 2017-06-30 | 2019-01-03 | Duke University | ORDER AND DISORDER AS A DESIGN PRINCIPLE FOR STIMULI-SENSITIVE BIOPOLYMER NETWORKS |
| EP3829622A4 (en) | 2018-08-02 | 2022-05-11 | Duke University | DUAL AGONIST FUSION PROTEINS |
| US11512314B2 (en) | 2019-07-12 | 2022-11-29 | Duke University | Amphiphilic polynucleotides |
| EP4000595A1 (en) * | 2020-11-17 | 2022-05-25 | The Boots Company plc | Tetrapeptide and compositions comprising tetrapeptides |
| EP4000597A1 (en) * | 2020-11-17 | 2022-05-25 | The Boots Company plc | Tetrapeptide and compositions comprising tetrapeptides |
| EP4000596A1 (en) * | 2020-11-17 | 2022-05-25 | The Boots Company plc | Tetrapeptide and compositions comprising tetrapeptides |
| EP4000598A1 (en) * | 2020-11-17 | 2022-05-25 | The Boots Company plc | Tetrapeptide and compositions comprising tetrapeptides |
| EP4140473A1 (en) * | 2021-08-27 | 2023-03-01 | The Boots Company plc | Cosmetic compositions |
| CN114437238B (zh) * | 2022-01-26 | 2024-03-26 | 浙江工业大学 | 胶原蛋白肽-牛乳铁蛋白肽融合蛋白、基因及其表达方法 |
Family Cites Families (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU466760B2 (en) * | 1972-03-14 | 1975-11-06 | Takeda Chemical Industries Ltd. | Process for producing peptide |
| US5064430A (en) * | 1985-10-31 | 1991-11-12 | Uab Research Foundation | Polynonapeptide bioelastomers having an increased elastic modulus |
| JP2573006B2 (ja) * | 1987-12-17 | 1997-01-16 | 富士薬品工業株式会社 | 新規なヒドロキサム酸誘導体 |
| EP0365655B1 (en) | 1988-04-21 | 1994-09-21 | Uab Research Foundation | Bioelastomeric materials suitable for the protection of wound repair sites from the occurrence of adhesions |
| AU5433190A (en) | 1989-04-10 | 1990-11-16 | Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Lytic peptides, use for growth, infection and cancer |
| US5679770A (en) * | 1991-11-08 | 1997-10-21 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Polypeptide, DNA fragment encoding the same, drug composition containing the same and process for producing the same |
| JP3100005B2 (ja) * | 1992-07-28 | 2000-10-16 | 雪印乳業株式会社 | ヒト免疫不全ウィルス感染・増殖抑制剤 |
| US6132976A (en) * | 1992-12-04 | 2000-10-17 | Shriners Hospitals For Children | Immunoassays for the measurement of collagen denaturation and cleavage in cartilage |
| IL104954A (en) * | 1993-03-04 | 2006-08-01 | Yissum Res Dev Co | Use of osteogenic oligopeptides in the preparation of pharmaceutical compositions for the treatment of bone diseases and some such novel oligopeptides, pharmaceutical compositions containing them and their preparation |
| US5561107A (en) | 1993-06-04 | 1996-10-01 | Demeter Biotechnologies, Ltd. | Method of enhancing wound healing by stimulating fibroblast and keratinocyte growth in vivo, utilizing amphipathic peptides |
| JPH07227281A (ja) * | 1994-02-15 | 1995-08-29 | Agency Of Ind Science & Technol | ペプチダーゼ及びその製造法 |
| US5763576A (en) * | 1995-10-06 | 1998-06-09 | Georgia Tech Research Corp. | Tetrapeptide α-ketoamides |
| US6159940A (en) * | 1996-02-28 | 2000-12-12 | Immunotech Developments Inc. | Method for modulating hemopoiesis |
| DE19651099A1 (de) * | 1996-12-09 | 1998-06-10 | Consortium Elektrochem Ind | Mehrkomponentensystem zum Verändern, Abbau oder Bleichen von Lignin, ligninhaltigen Materialien oder ähnlichen Stoffen sowie Verfahren zu seiner Anwendung |
| EP1074620A1 (en) * | 1999-08-06 | 2001-02-07 | HyGene AG | Monomeric protein of the TGF-beta family |
| EP0858808B1 (en) | 1997-01-17 | 2003-04-02 | Johnson & Johnson Medical Ltd. | Peptides for use in wound treatment |
| US6639050B1 (en) * | 1997-07-21 | 2003-10-28 | Ohio University | Synthetic genes for plant gums and other hydroxyproline-rich glycoproteins |
| GB2341182A (en) * | 1998-09-01 | 2000-03-08 | Yamanouchi Uk Ltd | Protein comprising amino acid sequences having SH3 domain binding activity and nuclear localisation activity |
| US6747135B1 (en) * | 1998-10-16 | 2004-06-08 | The Board Of Trustees For The Leland Stanford Junior University | Fluorescent dye binding peptides |
| US6492326B1 (en) * | 1999-04-19 | 2002-12-10 | The Procter & Gamble Company | Skin care compositions containing combination of skin care actives |
| CA2276542C (en) | 1999-06-28 | 2013-07-30 | Vladislav I. Deigin | Novel peptide, a method for its preparation and a pharmaceutical composition containing the peptide |
| CN1280983A (zh) * | 1999-07-16 | 2001-01-24 | 王革 | 白细胞介素－11的衍生物及其制备方法 |
| US6627785B1 (en) * | 2000-02-29 | 2003-09-30 | Virginia Commwealth University | Wound dressings with protease-lowering activity |
| WO2001079561A2 (en) * | 2000-04-17 | 2001-10-25 | Liggett Stephen B | Alpha-2 adrenergic receptor polymorphisms |
| US20030166510A1 (en) * | 2000-10-11 | 2003-09-04 | Pickart Loren R. | Methods and compositions for increasing skin remodeling |
| GB0029777D0 (en) * | 2000-12-06 | 2001-01-17 | Regen Therapeutics Plc | Peptides |
| JP4310107B2 (ja) | 2001-03-28 | 2009-08-05 | ヘリックス バイオメディックス，インコーポレイテッド | 生物活性を有する短ペプチド及び該ペプチドの使用方法 |
| US7186693B2 (en) * | 2001-08-16 | 2007-03-06 | Kimberly - Clark Worldwide, Inc. | Metalloproteinase inhibitors for wound healing |
| US7041506B2 (en) * | 2001-11-19 | 2006-05-09 | Becton Dickinson And Company | Peptides promoting cell adherence, growth and secretion |
| CA2468187A1 (en) * | 2001-11-28 | 2003-06-05 | Becton, Dickinson And Company | Peptides with growth inhibitory action |
| US20040009911A1 (en) * | 2002-01-31 | 2004-01-15 | Irm, Llc | Hepsin substrates and prodrugs |
| US7491691B2 (en) * | 2002-05-03 | 2009-02-17 | Sindrey Dennis R | Connective tissue stimulating peptides |
| US7642052B2 (en) * | 2002-09-09 | 2010-01-05 | University Of Cincinnati | Heart failure assessment based on alpha-2C adrenergic receptor polymorphisms |
| US7541440B2 (en) * | 2002-09-30 | 2009-06-02 | Immunomedics, Inc. | Chimeric, human and humanized anti-granulocyte antibodies and methods of use |
| TWI256893B (en) * | 2003-03-25 | 2006-06-21 | Fancl Corp | Composition for promoting production of type I collagen and/or elastin |
| DE10339180A1 (de) * | 2003-08-21 | 2005-03-24 | Deutsche Gelatine-Fabriken Stoess Ag | Kollagenhydrolysat |
| US7638318B2 (en) | 2003-09-26 | 2009-12-29 | Norvartis Ag | Seneca Valley virus based compositions and methods for treating disease |
| EP1686957B1 (en) | 2003-11-17 | 2012-03-07 | Sederma | Compositions containing mixtures of tetrapeptides and tripeptides |
| JP2005245285A (ja) * | 2004-03-03 | 2005-09-15 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | コラーゲン分解物の製造方法 |
| DE102004050563A1 (de) * | 2004-10-15 | 2006-04-20 | Henkel Kgaa | Kosmetische und der dermatologische Zusammensetzungen mit Wirkstoffen für einen verbesserten Hautkomfort |
| DE202004012807U1 (de) * | 2004-08-13 | 2004-10-21 | Henkel Kgaa | Kosmetische und dermatologische Zusammensetzungen mit DNA-Reparaturenzymen und Oligopeptiden |
| DE102004055541A1 (de) * | 2004-11-17 | 2006-05-18 | Henkel Kgaa | Kosmetische und dermatologische Zusammensetzungen zur Behandlung reifer Haut |
| DE102005000868A1 (de) * | 2004-10-15 | 2006-04-20 | Henkel Kgaa | Zusammensetzungen mit Inhibitoren der Prostaglandin- und/oder Leukotrien-Synthese in Kombination mit Stimulatoren der Freisetzung kutaner Neuromediatoren |
| US20060046271A1 (en) * | 2004-09-02 | 2006-03-02 | Vanderbilt University | Assessment of cancer susceptibility to molecular targeted therapy by use of recombinant peptides |
| CA2897112A1 (en) * | 2004-10-05 | 2006-04-20 | Fvg Limited | Compositions comprising an antigen and a promiscuous t-cell epitope |
| ES2426441T3 (es) * | 2004-10-18 | 2013-10-23 | Basf Beauty Care Solutions France S.A.S. | Oligopéptidos y su uso en cosméticos |
| WO2006048339A2 (en) * | 2004-11-04 | 2006-05-11 | L'oréal | Cosmetic composition comrising an active agent and a urea compound |
| US20070224150A1 (en) * | 2005-03-24 | 2007-09-27 | Yongji Chung | Growth factor for hair and skin treatment |
| FR2884418B1 (fr) * | 2005-04-15 | 2008-11-21 | Soc Extraction Principes Actif | Utilisation d'un peptide comme principe actif amincissant |
| WO2007004869A2 (en) * | 2005-07-05 | 2007-01-11 | Biotempt B.V. | Treatment of tumors |
| DE102005063062A1 (de) * | 2005-12-29 | 2007-07-05 | Henkel Kgaa | Synergistische Proteinhydrolysat-Kombinationen zur Behandlung reifer Haut |
| US7807625B2 (en) * | 2006-01-18 | 2010-10-05 | Grant Industries, Inc | Anti-wrinkle composition |
| BRPI0713153B8 (pt) * | 2006-06-13 | 2021-05-25 | Helix Biomedix Inc | tetrapeptídeo capaz de induzir a produção das proteínas da matriz extracelular e composição o compreendendo |
-
2007
- 2007-06-12 BR BRPI0713153A patent/BRPI0713153B8/pt active IP Right Grant
- 2007-06-12 PL PL11175263T patent/PL2409988T3/pl unknown
- 2007-06-12 US US11/811,876 patent/US8110658B2/en active Active
- 2007-06-12 PL PL07796001T patent/PL2027152T3/pl unknown
- 2007-06-12 MX MX2012002629A patent/MX361694B/es unknown
- 2007-06-12 HU HUE11175264A patent/HUE026698T2/en unknown
- 2007-06-12 DK DK07796001.1T patent/DK2027152T3/da active
- 2007-06-12 HU HUE11175263A patent/HUE027273T2/en unknown
- 2007-06-12 CA CA2835369A patent/CA2835369C/en active Active
- 2007-06-12 CA CA2947349A patent/CA2947349A1/en not_active Abandoned
- 2007-06-12 PT PT111752648T patent/PT2402369E/pt unknown
- 2007-06-12 AT AT07796001T patent/ATE533785T1/de active
- 2007-06-12 CA CA2655116A patent/CA2655116C/en active Active
- 2007-06-12 EP EP11175264.8A patent/EP2402369B1/en active Active
- 2007-06-12 ES ES11175263.0T patent/ES2545219T3/es active Active
- 2007-06-12 PL PL15188894T patent/PL3002294T3/pl unknown
- 2007-06-12 RU RU2009100884/10A patent/RU2441877C2/ru active
- 2007-06-12 RU RU2011141572/10A patent/RU2501807C2/ru active
- 2007-06-12 ES ES15188894.8T patent/ES2680022T3/es active Active
- 2007-06-12 CN CN201410160286.XA patent/CN104017071B/zh active Active
- 2007-06-12 PL PL11175264T patent/PL2402369T3/pl unknown
- 2007-06-12 DK DK11175264.8T patent/DK2402369T3/en active
- 2007-06-12 CN CN200780021825.XA patent/CN101472944B/zh active Active
- 2007-06-12 AU AU2007258387A patent/AU2007258387B2/en active Active
- 2007-06-12 EP EP15188894.8A patent/EP3002294B8/en active Active
- 2007-06-12 BR BR122018002612A patent/BR122018002612B8/pt active IP Right Grant
- 2007-06-12 CA CA2947353A patent/CA2947353A1/en not_active Abandoned
- 2007-06-12 EP EP07796001A patent/EP2027152B1/en active Active
- 2007-06-12 DK DK11175263.0T patent/DK2409988T3/en active
- 2007-06-12 JP JP2009515450A patent/JP5535620B2/ja active Active
- 2007-06-12 SI SI200731682T patent/SI2409988T1/sl unknown
- 2007-06-12 MX MX2008016011A patent/MX2008016011A/es active IP Right Grant
- 2007-06-12 ES ES07796001T patent/ES2375413T3/es active Active
- 2007-06-12 SI SI200730836T patent/SI2027152T1/sl unknown
- 2007-06-12 WO PCT/US2007/013748 patent/WO2007146269A2/en active Application Filing
- 2007-06-12 PT PT111752630T patent/PT2409988E/pt unknown
- 2007-06-12 ES ES11175264.8T patent/ES2557402T3/es active Active
- 2007-06-12 EP EP15167681.4A patent/EP2940042A3/en not_active Withdrawn
- 2007-06-12 EP EP11175263.0A patent/EP2409988B1/en active Active
-
2009
- 2009-08-21 HK HK09107721.2A patent/HK1128700A1/xx unknown
- 2009-08-21 HK HK15111547.8A patent/HK1210791A1/xx unknown
- 2009-08-21 HK HK12101687.2A patent/HK1161599A1/xx unknown
- 2009-08-21 HK HK12101688.1A patent/HK1161600A1/zh unknown
- 2009-08-21 HK HK16105897.5A patent/HK1217346A1/zh unknown
-
2011
- 2011-12-29 US US13/339,606 patent/US8658764B2/en active Active
-
2012
- 2012-01-16 CY CY20121100042T patent/CY1112241T1/el unknown
-
2013
- 2013-08-07 US US13/961,782 patent/US8962798B2/en active Active
-
2014
- 2014-02-13 JP JP2014025001A patent/JP5844834B2/ja active Active
- 2014-11-03 US US14/531,081 patent/US9447143B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2016
- 2016-08-17 US US15/239,708 patent/US10376557B2/en active Active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KATAYAMA K. et al., A pentapeptide from type I procollagen promotes extracellular matrix production, J. Biol. Chem., 1993, v.268, №14, p.9941-9944. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2441877C2 (ru) | Тетрапептид, композиция (варианты) и способ стимуляции продукции коллагена фибробластом | |
| AU2012216555B2 (en) | Peptide fragments for inducing synthesis of extracellular matrix proteins | |
| RU2065445C1 (ru) | Пептиды, обладающие регенеративно-репаративным действием |