BR112018003864B1

BR112018003864B1 - Método para preparação de uma composição de ácido hialurônico, e, composição

Info

Publication number: BR112018003864B1
Application number: BR112018003864-4A
Authority: BR
Inventors: Su Hyun Jung; Jun Hyuk Seo; Hyun Seung Ryu; Hak Su Jang
Original assignee: Cg Bio Co., Ltd
Priority date: 2015-09-01
Filing date: 2015-09-02
Publication date: 2021-03-30
Also published as: BR112018003864A2; AU2015407889A1; AU2015407889B2; US11541147B2; WO2017039030A1; KR20170027090A; TWI612964B; TW201709914A; US20180344896A1; KR101720426B1

Abstract

a presente invenção se refere a uma composição de ácido hialurônico que tem uma excelente viscoelasticidade e facilidade de injeção e a um método de preparação da mesma.

Description

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO 1. CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente descrição refere-se a uma composição de ácidohialurônico e a um método de preparação da mesma.

2. DESCRIÇÃO DA TÉCNICA RELACIONADA

[002] O ácido hialurônico é um produto do tipo gel viscoso etransparente e tem uma alta biocompatibilidade e hidrofilicidade. Visto que 1 molécula de ácido hialurônico atrai 214 moléculas de água, o ácido hialurônico desempenha um papel importante na manutenção da umidificação da pele e volume e elasticidade da pele. Portanto, os preenchimentos cutâneos que contêm ácido hialurônico como um componente tendem a serem usados para esticar pele facial, melhorar os contornos faciais e rugas faciais e modelar contornos faciais.

[003] Contudo, o ácido hialurônico natural tem uma meia-vida deapenas 1 dia a 2 dias e, portanto, a persistência em longo prazo de ácido hialurônico usado em preenchimentos é atingida por reticulação. A reticulação de ácido hialurônico impede a degradação enzimática e aumenta a viscosidade para fornecer volume à pele (Yi Seop Song, et al., Korean Journal of Dermatology 2014; 52(2): 100 a 105).

[004] Atualmente, os preenchimentos de ácido hialurônicodisponíveis têm uma natureza monofásica ou bifásica. Os preenchimentos monofásicos são compostos inteiramente de gel homogêneo e, portanto, altamente viscosos e são fáceis de injetar e adequados para modelar áreas delicadas. Os preenchimentos bifásicos são preparados como partículas passando-se a massa de gel através de uma peneira e, desse modo, são altamente elásticos e vantajosos para manter o formato e aperfeiçoar o volume.

[005] Por exemplo, a Patente Número de Série U.S. 8.357.795descreve um preenchimento de ácido hialurônico monofásico injetável que é passível de extrusão através de um calibre de agulha fino. A Patente Número de Série U.S. 5.827.937 descreve um preenchimento de ácido hialurônico bifásico.

[006] Entretanto, estudos tem continuado a desenvolverpreenchimentos que apresentam propriedades ideais in vivo, bem como uma usabilidade cirúrgica ideal. Contudo, os preenchimentos de ácido hialurônico que apresentam excelente estabilidade in vivo têm alta rigidez e viscosidade e, portanto, são difíceis de injetar através de um calibre de agulha fino. Em contraste, os preenchimentos de ácido hialurônico que são injetáveis facilmente através de um calibre de agulha fino podem ter um problema de baixa estabilidade in vivo. Consequentemente, existe uma necessidade de preenchimentos de ácido hialurônico que sejam excelentes tanto em viscosidade quanto em elasticidade.

[007] Com esses fundamentos, os presentes inventores estudarampara desenvolver preenchimentos de ácido hialurônico com viscoelasticidade e usabilidade cirúrgica ideais e, como resultado, constataram que dois ou mais géis de ácido hialurônico que têm fases diferentes são misturados por revolução/rotação a uma velocidade em particular para preparar uma composição reticulada de ácido hialurônico que tem características tanto monofásicas quanto bifásicas, completando assim a presente invenção.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[008] Um objetivo da presente invenção é fornecer um método parapreparação de uma composição de ácido hialurônico para restauração de tecido, sendo que o método inclui a etapa de misturar dois ou mais géis de ácido hialurônico por revolução/rotação a uma velocidade de revolução de 100 rpm a 400 rpm e uma velocidade de rotação de 100 rpm a 400 rpm.

[009] Um outro objetivo da presente invenção é fornecer uma composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas para restauração de tecido, que é preparada por revolução/rotação de uma mistura de dois ou mais géis de ácido hialurônico que são diferentes entre si em módulo de viscosidade e em módulo de elasticidade.

[0010] Ainda um outro objetivo da presente invenção é fornecer um método para restauração de um tecido, sendo que o método inclui a etapa de administrar a composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas para restauração de tecido a um indivíduo.

[0011] Ainda um outro objetivo da presente invenção é fornecer uma composição de quase-fármaco que inclui a composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas para restauração de tecido.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0012] A Figura 1a mostra um ácido hialurônico monofásico preparado de acordo com uma modalidade exemplificativa da presente invenção e a Figura 1b mostra um ácido hialurônico bifásico preparado de acordo com uma modalidade exemplificativa da presente invenção;a Figura 2a é uma imagem de uma mistura simples de ácidohialurônico monofásico e de ácido hialurônico bifásico e a Figura 2b é uma imagem de uma composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas, preparada de acordo com uma modalidade exemplificativa da presente invenção;a Figura 3a é uma imagem tomada imediatamente após injeçãointradérmica de ácido hialurônico em um camundongo e a Figura 3b é uma imagem de 10 semanas após injeção intradérmica de ácido hialurônico em um camundongo, na qual A representa o ácido hialurônico monofásico preparado de acordo com uma modalidade exemplificativa da presente invenção, B representa o ácido hialurônico bifásico preparado de acordo com uma modalidade exemplificativa da presente invenção e C representa uma composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas preparada de acordo com uma modalidade exemplificativa da presente invenção (doravante, a mesma que acima);a Figura 4 mostra mudanças na altura vertical do tecido em 1 dia (esquerda) e 10 semanas (direita) após injeção intradérmica de ácido hialurônico em um camundongo;a Figura 5 mostra a inchação e a degradação iniciais (quantidade residual) após injeção intradérmica de ácido hialurônico em um camundongo; ea Figura 6 mostra uma comparação de viscosidade entre uma composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas, de acordo com uma modalidade exemplificativa e os preenchimentos bifásicos e preenchimentos monofásicos.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERENCIAIS

[0013] Para atingir os objetivos acima, um aspecto fornece um método para preparação de uma composição de ácido hialurônico para restauração de tecido, sendo que o método inclui a etapa de misturar dois ou mais géis de ácido hialurônico por revolução/rotação.

[0014] Outro aspecto fornece um método para preparação de uma composição de ácido hialurônico para restauração de tecido, sendo que o método inclui a etapa de misturar dois ou mais géis de ácido hialurônico por revolução/rotação a uma velocidade de revolução de 100 rpm a 400 rpm e uma velocidade de rotação de 100 rpm a 400 rpm.

[0015] Os presentes inventores demostraram pela primeira vez que quando um gel de ácido hialurônico que tem um módulo de viscosidade desejado e um gel de ácido hialurônico que tem um módulo de elasticidade desejado são submetidos à revolução/rotação a uma velocidade de revolução em particular e a uma velocidade de rotação em particular a fim de aperfeiçoar a viscoelasticidade e a usabilidade cirúrgica da composição reticulada de ácido hialurônico conhecida, pode ser preparada a composição reticulada de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas.

[0016] Daqui em diante, o método de preparação da presente invenção será descrito em detalhes.

[0017] O ácido hialurônico é um polímero de cadeia reta em que a β- D-N-acetilglucosamina e o ácido β-D-glicur0nico são ligados alternativamente entre si. Na presente invenção, o ácido hialurônico pode incluir todos dentre oácido hialurônico em si, os sais do mesmo e combinações do mesmo. O ácido hialurônico pode ter um peso molecular de 100.000 Da a 5.000.000 Da, porém, não se limita ao mesmo. Os sais de ácido hialurônico podem incluir sais inorgânicos tais como hialuronato de sódio, hialuronato de potássio, hialuronato de cálcio, hialuronato de magnésio, hialuronato de zinco, hialuronato de cobalto, etc., e sais orgânicos tais como hialuronato de tetrabutilamônio, etc. Na presente invenção, o ácido hialurônico pode ser usado como ácido hialurônico em si ou como um sal do mesmo sozinho, ou por combinação de dois ou mais dentre o ácido hialurônico em si ou um sal do mesmo. O ácido hialurônico ou o sal do mesmo pode ser isolado a partir de microrganismos, ou sintetizado ou comprado, porém, não se limita a esses. Por exemplo, o ácido hialurônico pode ser isolado e purificado a partir de um microrganismo que pertence à espécie Streptococcus (Streptococcus equi, Streptococcus zooepidemicus).

[0018] O gel de ácido hialurônico pode significar um ácido hialurônico que tem uma fase de gel e pode ter os mesmos significados que o hidrogel de ácido hialurônico ou o gel hidratado. Por exemplo, o gel de ácido hialurônico significa ácidos hialurônicos reticulados de modo covalente através de grupos hidroxila. O teor de água ou a razão de reticulação de ácido hialurônico pode ser controlado por um método geral usado na técnica.

[0019] O gel de ácido hialurônico pode ser reticulado por um agente de reticulação. O agente de reticulação pode ser, porém, sem limitação, etilenoglicol diglicidil éter (EGDGE), 1,4-butandiol diglicidil éter (BDDE), 1,6-hexanediol diglicidil éter, propilenoglicol diglicidil éter, polipropilenoglicol diglicidil éter, diglicerol poliglicidil éter, EDC (1-etil-3- (3-dimetilaminopropil)carbodi-imida), DVS (divinil sulfona), BCDI (biscarbodi-imida), ou uma combinação dos mesmos.

[0020] Na presente invenção, uma mistura de géis de ácido hialurônico pode ser preparada misturando-se os géis de ácido hialurônico e, a mistura pode significar uma mistura, combinação ou agitação homogênea ou heterogênea simples de dois ou mais materiais por um método usado geralmente na técnica.

[0021] A mistura de dois ou mais géis de ácido hialurônico pode significar uma mistura de dois ou mais géis de ácido hialurônico que são diferentes entre si em termos de módulo de viscosidade e de módulo de elasticidade.

[0022] Como usado no presente documento, o termo “módulo de viscosidade” representa o ponto de viscosidade, que é definido como a resistência de um fluido para fluir e pode ter o mesmo significado que o grau de viscosidade ou a viscosidade. O módulo de viscosidade pode ser expressado como G”. Visto que um gel de ácido hialurônico tem um módulo de viscosidade alto, sua usabilidade cirúrgica aumenta e é útil para modelar áreas delicadas. Por exemplo, os preenchimentos monofásicos de ácido hialurônico têm um módulo de viscosidade alto e, desse modo, são fáceis de injetar e adequados para modelar áreas delicadas.

[0023] Como usado no presente documento, o termo “módulo de elasticidade” é definido como a razão de tensão para a deformação de um material elástico dentro do limite elástico. O módulo de elasticidade pode ser expressado como G’. Visto que um gel de ácido hialurônico tem um módulo de elasticidade alto, é difícil e tem alta resistência à deformação. Por exemplo, os preenchimentos bifásicos de ácido hialurônico têm módulo de elasticidade alto e, desse modo, são vantajosos para manter o formato e para aperfeiçoar o volume.

[0024] Na presente invenção, o módulo de viscosidade e o módulo de elasticidade da composição reticulada de ácido hialurônico podem ser medidos usando um reômetro, porém, não se limita a esse. O reômetro é usado para determinar as propriedades viscoelásticas (módulo de viscosidade e módulo de elasticidade) de uma amostra colocando-se a amostra entre placas paralelas e medindo-se a resistência e dissipação à rotação da placa paralela oscilante.

[0025] A mistura de dois ou mais géis de ácido hialurônico que são diferentes entre si em termos de módulo de viscosidade e de módulo de elasticidade pode se referir a uma mistura de um gel de ácido hialurônico monofásico e um gel de ácido hialurônico bifásico.

[0026] Na presente invenção, o ácido hialurônico monofásico significa um ácido hialurônico que existe principalmente como um gel e suas propriedades físicas dependem da razão de reticulação de ácido hialurônico. O ácido hialurônico monofásico é menos elástico e mais coeso que o ácido hialurônico bifásico. O termo “monofásico” pode ter o mesmo significado que uma fase única. Por exemplo, o ácido hialurônico monofásico pode ter um valor de G’ menor que 300 Pa e um valor de tanδ de 0,3 ou superior a uma frequência de 0,01 Hz a 1 Hz.

[0027] O valor de tanδ é um valor de G”/G’ (fator de amortecimento) e indica se um material se comporta como um sólido ou como um líquido. Quando o valor de tanδ a uma frequência de 0,01 Hz a 1 Hz é próximo de 1, o material pode estar no estado líquido (menos elástico) e quando o valor de tanδ a uma frequência de 0,01 Hz a 1 Hz é próximo de 0, o material pode ser definido como um material elástico. Adicionalmente, foi relatado que a medida que o valor de tanδ é inferior e que a elasticidade percentual (100x G’/(G’+G”)) é superior, os preenchimentos duram mais.

[0028] Na presente invenção, o ácido hialurônico bifásico é uma forma misturada de partículas e um gel de ácido hialurônico e suas propriedades físicas dependem do tamanho de partícula. O termo “bifásico” pode ter o mesmo significado que fase dual ou fase dupla. O ácido hialurônico monofásico tem uma viscosidade alta, porém, uma elasticidade baixa e o ácido hialurônico bifásico tem elasticidade alta, porém, uma viscosidade baixa. Por exemplo, o ácido hialurônico bifásico pode ter um valor de G’ de 300 Pa ou mais e um valor de tanδ menor que 0,3 a uma frequência de 0,01 Hz a 1 Hz.

[0029] De acordo com as propriedades desejadas (viscosidade, elasticidade, grau de reticulação, dureza de gel, grau de restauração de tecido, peso molecular, aparência, pH, teor de ácido hialurônico, etc.) da composição de ácido hialurônico para restauração de tecido preparado pelo método de preparação da presente invenção, dois ou mais géis de ácido hialurônico que têm características em particular podem ser selecionados.

[0030] Na presente invenção, a etapa de revolução/rotação significa que a revolução e a rotação são realizadas ao mesmo tempo. Por exemplo, a revolução/rotação pode significar que a mistura é submetida à revolução/rotação a uma velocidade de revolução de 100 rpm a 400 rpm e uma velocidade de rotação de 100 rpm a 400 rpm.

[0031] Por exemplo, a velocidade de revolução pode ser configurada para que seja igual à velocidade de rotação. Para outro exemplo, a velocidade de revolução e/ou a velocidade de rotação podem ser mantidas a uma velocidade (rpm) dentro da faixa de 100 rpm a 400 rpm para um tempo predeterminado ou podem ser diminuídas/aumentadas.

[0032] Se a velocidade de revolução ou/e a velocidade de rotação é (ou são) menor que 100 rpm, são formadas bolhas no produto de reação para deteriorar a aparência e a viscosidade se torna menor que 20 Pa.s (20.000 cP). Portanto, é difícil fornecer uma composição de ácido hialurônico que tenha características tanto monofásicas quanto bifásicas (Tabelas 3 e 5). Adicionalmente, se a velocidade de revolução ou/e a velocidade de rotação excede (ou excedem) 400 rpm, é gerado calor por revolução ou/e rotação. Nesse momento, o produto de reação é deteriorado devido ao fato de que o ácido hialurônico tem uma resistência ao calor deficiente. Portanto, o produto não é adequado para restauração de tecido.

[0033] Como um exemplo não limitativo, a velocidade de revolução pode ser de 100 rpm a 400 rpm, de 150 rpm a 300 rpm ou de 180 rpm a 230 rpm.

[0034] Como um exemplo não limitativo, a velocidade de rotação pode ser de 100 rpm a 400 rpm, de 150 rpm a 300 rpm ou de 180 rpm a 230 rpm.

[0035] A revolução/rotação pode ser realizada usando a misturadora de revolução/rotação usada geralmente na técnica.

[0036] A etapa pode ser realizada sob estados de vácuo. Os estados de vácuo podem significar um estado de pressão menor que 3.333,06 MPa (25 Torr). As bolhas existentes podem ser removidas e a geração de bolhas durante a mixagem pode ser impedida realizando-se a revolução/rotação sob estados de vácuo aumentando, desse modo, a ligação de dois ou mais géis de ácido hialurônico que são diferentes entre si em termos de módulo de viscosidade e de módulo de elasticidade.

[0037] A etapa pode ser realizada durante 7 minutos a 30 minutos. Em uma modalidade exemplificativa, de acordo com a presente invenção, quando a revolução/rotação foi realizada durante menos de 7 minutos, foi observada a geração de bolhas e, portanto, não foram atendidos os padrões físicoquímicos (Tabela 3). Adicionalmente, quando a revolução/rotação foi realizada durante mais de 30 minutos, foi gerado calor excessivo para provocar a desnaturação de ácido hialurônico, resultando em um aumento de custos operativos.

[0038] Por exemplo, a etapa pode ser realizada durante 10 minutos a 25 minutos.

[0039] A composição de ácido hialurônico para restauração de tecido que é preparada pela revolução/rotação pode ter características tanto monofásicas quanto bifásicas. Foi constatado que a composição de ácido hialurônico preparada em uma modalidade exemplificativa da presente invenção tem um módulo de elasticidade alto para mostrar vantagens de manter o formato e aumentar o volume (característica bifásica; Figuras 3a, 3b e 4), e manter o volume durante muito tempo, em comparação com o ácido hialurônico bifásico, indicando sua estabilidade in vivo (característica monofásica; Figura 5). Consequentemente, o método de preparação da presente invenção pode ser realizado para fornecer a composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas para restauração de tecido.

[0040] Adicionalmente, foi constatado que a composição de ácido hialurônico para restauração de tecido da presente invenção tem uma viscosidade entre uma viscosidade de uma composição de ácido hialurônico monofásico e uma viscosidade de uma composição de ácido hialurônico bifásico apresentando, desse modo, características tanto monofásicas quanto bifásicas (Figura 6).

[0041] Adicionalmente, dois ou mais géis de ácido hialurônico que têm fases diferentes, ou seja, o módulo de viscosidade e o módulo de elasticidade, podem ser misturados entre si pelo método de preparação da presente invenção, misturando-os homogeneamente desse modo enquanto são atendidos os padrões físicoquímicos (aparência, pH, viscosidade, pressão osmótica, etc. da composição). Portanto, selecionando-se os géis de ácido hialurônico a serem misturados, é possível fornecer uma composição de ácido hialurônico que tem características desejadas para restauração de tecido.

[0042] Entretanto, a restauração de tecido significa um aperfeiçoamento ou restauração temporal ou semipermanente de rugas faciais ou corporais, ou o aperfeiçoamento de contornos faciais, a volumização de tecido ou a regeneração de tecido tal como um tratamento de cicatriz por injeção da composição. O tecido pode ser uma parte da face ou do corpo.

[0043] A composição de ácido hialurônico para restauração de tecido pode ser preenchida em uma seringa a ser injetada na camada de pele.

[0044] Por exemplo, no método de preparação, uma mistura de dois ou mais géis de ácido hialurônico pode incluir de 50 partes em peso a 70 partes em peso de um gel de ácido hialurônico monofásico e, de 50 partes em peso a 30 partes em peso de um gel de ácido hialurônico bifásico. Por exemplo, a mistura pode incluir de 50 partes em peso a 60 partes em peso de um gel de ácido hialurônico monofásico e, de 50 partes em peso a 40 partes em peso de um gel de ácido hialurônico bifásico. Por exemplo, a mistura pode incluir um gel de ácido hialurônico monofásico e um gel de ácido hialurônico bifásico a uma razão de 1: 0,8 a 1,2 partes em peso (0,8 ou mais e menor que 1,2). Quando a composição de ácido hialurônico para restauração de tecido que é preparada usando-se a mistura, de acordo com a presente invenção, é injetada no corpo, pode manter a restaurabilidade de tecido durante 6 meses a 9 meses.

[0045] Para outro exemplo, no método de preparação, uma mistura de dois ou mais géis de ácido hialurônico pode incluir de 30 partes em peso a 60 partes em peso de um gel de ácido hialurônico monofásico e, de 70 partes em peso a 40 partes em peso de um gel de ácido hialurônico bifásico. Por exemplo, a mistura pode incluir de 40 partes em peso a 50 partes em peso de um gel de ácido hialurônico monofásico e, de 60 partes em peso a 50 partes em peso de um gel de ácido hialurônico bifásico. Por exemplo, a mistura pode incluir um gel de ácido hialurônico monofásico e um gel de ácido hialurônico bifásico a uma razão de 1: 1,2 a 2 partes em peso (1,2 ou mais e menor que 2). Quando a composição de ácido hialurônico para restauração de tecido que é preparada usando-se a mistura, de acordo com a presente invenção, é injetada no corpo, pode manter a restaurabilidade de tecido durante 9 meses a 12 meses.

[0046] Ainda para outro exemplo, no método de preparação, uma mistura de dois ou mais géis de ácido hialurônico pode incluir de 20 partes em peso a 50 partes em peso de um gel de ácido hialurônico monofásico e, de 80 partes em peso a 50 partes em peso de um gel de ácido hialurônico bifásico. Por exemplo, a mistura pode incluir de 30 partes em peso a 40 partes em peso de um gel de ácido hialurônico monofásico e, de 70 partes em peso a 60 partes em peso de um gel de ácido hialurônico bifásico. Por exemplo, a mistura pode incluir um gel de ácido hialurônico monofásico e um gel de ácido hialurônico bifásico a uma razão de 1: 2 a 4 partes em peso (2 ou mais e menor que 4). Quando a composição de ácido hialurônico para restauração de tecido que é preparada usando-se a mistura, de acordo com a presente invenção, é injetada no corpo, pode manter a restaurabilidade de tecido durante 12 meses a 15 meses.

[0047] Portanto, selecionando-se dois ou mais géis de ácido hialurônico desejados no método de preparação da presente invenção, é possível fornecer uma composição de ácido hialurônico para restauração de tecido que tem as características desejadas.

[0048] Outro aspecto fornece uma composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas para restauração de tecido, que é preparada por revolução/rotação de uma mistura de dois ou mais géis de ácido hialurônico que são diferentes entre si em módulo de viscosidade e em módulo de elasticidade.

[0049] A composição pode ser preparada pelo método de preparação acima.

[0050] Em detalhes, a composição pode ser preparada por um método de preparação que inclui a etapa de revolução/rotação da mistura de dois ou mais géis de ácido hialurônico que são diferentes entre si em módulo de viscosidade e em módulo de elasticidade, a uma velocidade de revolução de 100 rpm a 400 rpm e uma velocidade de rotação de 100 rpm a 400 rpm. Por exemplo, a mistura de dois ou mais géis de ácido hialurônico que são diferentes entre si em módulo de viscosidade e em módulo de elasticidade pode ser uma mistura de um gel de ácido hialurônico monofásico e um gel de ácido hialurônico bifásico. O monofásico, o bifásico, a restauração de tecido e o ácido hialurônico são os mesmos que os descritos acima.

[0051] A composição de ácido hialurônico para restauração de tecido pode ser preparada misturando-se homogeneamente ou heterogeneamente dois ou mais géis de ácido hialurônico que são diferentes entre si em módulo de viscosidade e em módulo de elasticidade.

[0052] De acordo com uma modalidade exemplificativa da presente invenção, foi confirmado que a composição de ácido hialurônico para restauração de tecido tem as propriedades físicoquímicas de (a) não ter bolhas evidentes, e ser incolor e transparente; (b) ter um pH de 7 ± 1; (c) ter uma viscosidade de 20 Pa.s (20.000 cP) a 50 Pa.s (50.000 cP); e (d) ter uma pressão osmótica de 0,325 Osmol/kg ± 10% na média, atendendo os requisitos para um dispositivo médico.

[0053] Se necessário, a composição pode ser carregada com outros aditivos gerais tais como um antioxidante, um tampão e/ou um agente bacteriostático, um diluente, um agente dispersante, um tensoativo, um ligante, um lubrificante, um anestésico tópico, etc.

[0054] Ainda outro aspecto da presente invenção fornece um método para restauração de um tecido, sendo que o método inclui a etapa de administrar a composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas para restauração de tecido a um indivíduo.

[0055] A administração significa a introdução da composição da presente invenção a um indivíduo por qualquer método apropriado, em particular, através de uma via parenteral tal como injeção. A frequência de administração da composição da presente invenção pode ser, porém, sem limitação, uma vez por dia ou várias vezes por dia em doses divididas.

[0056] O indivíduo significa qualquer animal incluindo seres humanos. O animal pode ser um humano bem como um mamífero tal como uma vaca, cavalo, ovelha, porco, bode, camelo, antílope, cachorro ou gato que precise de restauração de tecido, porém, não se limita a esses.

[0057] Ainda outro aspecto da presente invenção fornece uma composição de quase-fármaco que inclui a composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas para restauração de tecido.

[0058] O quase-fármaco pode ser definido como um produto com o fim de restaurar o tecido de um indivíduo, que não é categorizado como um dispositivo ou máquina médica ou semelhantes. Por exemplo, significa um produto que é usado para o fim de diagnóstico, cuidados médicos, alívio, tratamento ou prevenção de doenças em seres humanos ou animais, excluindo aparelhos, maquinaria e equipamento e um produto diferente de um aparelho, maquinaria ou equipamento que seja usado com o fim de exercer efeitos farmacológicos na estrutura ou funções de seres humanos ou animais.

[0059] Quando a composição de acordo com a presente invenção é usada como um aditivo quase-fármaco, a composição pode ser usada apropriadamente tal como é, ou junto com outros componentes de quase- fármacos ou de quase-fármaco de acordo com um método geral. A quantidade do ingrediente ativo a ser misturado pode ser determinada dependendo do propósito de uso.

[0060] Daqui em diante, a presente invenção será descrita em mais detalhes com referência aos exemplos a seguir. Contudo, esses exemplos são apenas para fins ilustrativos e não se destina que a invenção seja limitada por esses exemplos.

EXEMPLOS 1 A 3 E EXEMPLOS DE PREPARAÇÃO 1 A 3 EXEMPLO 1. PREPARAÇÃO DE GEL DE ÁCIDO HIALURÔNICO MONOFÁSICO

[0061] 10 g de hialuronato de sódio, 81 g de água purificada e 9 g de1 M de NaOH (1 M de hidróxido de sódio) foram agitados sob vácuo a 400 rpm até que a mistura se tornou um gel transparente sem partículas. Depois disso, 0,5 g de um agente de reticulação (BDDE, butanodiol diglicidil éter) foram adicionados, seguido por agitação. Após a completação da agitação, o recipiente foi vedado e a mistura foi permitida de passar por uma reação de reticulação durante 1 hora a 80 rpm e a 50 °C. Depois, o recipiente foi deixado a 27 °C durante 16 horas para preparar um gel.

[0062] Para remover o reagente remanescente, o gel obtido foi adicionado a 30 l de 0,9X de solução de PBS (salina tamponada com fosfato), que foi substituída com uma solução nova a cada 3 horas (três vezes por dia durante 5 dias). Depois disso, essa solução foi passada através de um moinho de tipo argamassa (RS 200, Retsch) durante 40 minutos para preparar um gel de ácido hialurônico monofásico.

[0063] A Figura 1a é uma imagem de microscópio óptico do gel de ácido hialurônico monofásico.EXEMPLO 2. PREPARAÇÃO DE GEL DE ÁCIDO HIALURÔNICO BIFÁSICO

[0064] 20 g de hialuronato de sódio, 117 g de água purificada e 13 gde 1 M de NaOH (1 M de hidróxido de sódio) foram agitados sob vácuo a 400 rpm até que a mistura se tornou um gel transparente sem partículas. Depois disso, 1 g de um agente de reticulação (BDDE, butanodiol diglicidil éter) foram adicionados, seguido por agitação. Após a completação da agitação, o recipiente foi vedado e a mistura foi permitida de passar por uma reação de reticulação durante 1 hora a 80 rpm e a 50 °C. Depois, o recipiente foi deixado a 27 °C durante 16 horas para preparar um gel.

[0065] Para remover o reagente remanescente, o gel obtido foi adicionado a 30 l de 0,9X de solução de PBS (salina tamponada com fosfato), que foi substituída com uma solução nova a cada 3 horas (três vezes por dia durante 5 dias). Depois disso, essa solução foi passada através de uma peneira de teste padrão de 1.000 μm para preparar um gel de ácido hialurônico bifásico (Figura 2a).

[0066] A Figura 1b é uma imagem de microscópio óptico do gel de ácido hialurônico bifásico.

EXEMPLO 3. PREPARAÇÃO DE COMPOSIÇÃO DE ÁCIDO HIALURÔNICO COM CARACTERÍSTICAS MONOFÁSICAS E BIFÁSICAS

[0067] O gel de ácido hialurônico monofásico preparado no Exemplo 1 e o gel de ácido hialurônico bifásico preparado no Exemplo 2 foram misturados a uma razão de mixagem da Tabela 1 a seguir, e a mistura (Figura 2a) foi injetada em uma misturadora de massa de revolução/rotação (Daehwa Tech Co., Ltd.), e depois uma velocidade de revolução e uma velocidade de rotação foram configuradas a 200 rpm, respectivamente. A mistura foi submetida à revolução/rotação durante 20 minutos sob vácuo (466,63 MPa (3,5 Torr)) para preparar uma composição de ácido hialurônico com características monofásicas e bifásicas (Figura 2b).

[0068] A Figura 2a é uma imagem da mistura antes da revolução/rotação, que mostra uma mistura heterogênea de um gel e de partículas. A Figura 2b é uma imagem de uma mistura após revolução/rotação, que mostra uma aparência sem cor, transparente sem restos.

EXEMPLO DE PREPARAÇÃO 1 A EXEMPLO DE PREPARAÇÃO 3. EMBALAGEM E ESTERILIZAÇÃO DE SERINGA

[0069] Cada um dos resultantes preparados nos Exemplos 1, 2 e 3 foi embalado em uma seringa em uma quantidade igual e esterilizado por autoclavagem para preparar uma formulação que contém 20 mg/ml de ácido hialurônico (no Exemplo de Preparação 1, no Exemplo de Preparação 2 e no Exemplo de Preparação 3 a seguir), respectivamente.

EXEMPLOS EXPERIMENTAIS 1 A 5EXEMPLO EXPERIMENTAL 1. TESTE DE RESTAURABILIDADE DE TECIDO DE COMPOSIÇÃO DE ÁCIDO HIALURÔNICO 1-1. TESTE DE VOLUMIZAÇÃO

[0070] As formulações do Exemplo de Preparação 1, do Exemplo de Preparação 2 e do Exemplo de Preparação 3 foram injetadas intradermicamente em um camundongo. A Figura 3a é uma imagem após injeção intradérmica das formulações dos Exemplos de Preparação 1 a 3 em um camundongo e, a Figura 3b é uma imagem de 10 semanas após injeção intradérmica das formulações dos Exemplos de Preparação 1 a 3 em um camundongo.

[0071] Como resultado, como mostrado na Figura 4, foi constatado que a altura vertical do tecido injetado com a formulação do Exemplo de Preparação 3 (C da Figura 4) é superior que aquelas da formulação monofásica do Exemplo de Preparação 1 (A da Figura 4) e da formulação bifásica do Exemplo de Preparação 2 (B da Figura 4). Em 10 semanas após injeção, também foi constatado que a altura vertical do tecido injetado com a formulação do Exemplo de Preparação 3 (C da Figura 4) é superior que aquelas da formulação monofásica do Exemplo de Preparação 1 (A da Figura 4) e da formulação bifásica do Exemplo de Preparação 2 (B da Figura 4).

[0072] Esses resultados sugerem que a formulação do Exemplo de Preparação 3 tem um módulo de elasticidade alto para apresentar as vantagens para manter o formato e aumentar o volume tendo também, desse modo, a característica bifásica.1-2. TESTE DE INCHAÇÃO E DEGRADAÇÃO INICIAIS

[0073] Como resultado da injeção intradérmica das formulações do Exemplo de Preparação 1, do Exemplo de Preparação 2 e do Exemplo de Preparação 3 em um camundongo, como mostrado na Figura 5, a formulação bifásica do Exemplo de Preparação 2 (-•- B) mostrou uma taxa de degradação muito alta e, desse modo, dificilmente permaneceu após 5 horas, enquanto a quantidade residual da formulação do Exemplo de Preparação 3 (-■- C) foi grande, em comparação com o da formulação bifásica do Exemplo de Preparação 2 (-•- B). É importante aumentar a duração do preenchimento volumizável passível de injeção.

[0074] Adicionalmente, a formulação do Exemplo de Preparação 3 (-■- C) mostrou uma inchação inicial baixa, em comparação com a formulação monofásica do Exemplo de Preparação 1 (-▲- A) e a formulação bifásica do Exemplo de Preparação 2 (-•- B). Portanto, a formulação do Exemplo de Preparação 3 reduz um tempo de recuperação após injeção do preenchimento.

[0075] A formulação do Exemplo de Preparação 3 tem um módulo de elasticidade alto e também oferece um volume duradouro em comparação com a formulação bifásica, que mostra, desse modo, estabilidade in vivo e também mostra uma inchação inicial baixa em comparação com a formulação monofásica ou bifásica, indicando uma vantagem de ter características tanto monofásicas quanto bifásicas.

EXEMPLO EXPERIMENTAL 2. TESTE DE SEGURANÇA

[0076] Um teste de segurança da composição de ácido hialurônico preparado no Exemplo 3 foi realizado (pelo Korea Testing & Research Institute (KTR)) e, como mostrado na Tabela 1 a seguir, mostrou toxicidade, quantidade residual de solventes, pH e pressão osmótica inferiores do que os valores de referência, indicando que a composição tem segurança in vivo.[TABELA 1]

EXEMPLO EXPERIMENTAL 3. RESULTADOS DE TESTE FÍSICOQUÍMICO DE ACORDO COM A VELOCIDADE DE REVOLUÇÃO/ROTAÇÃO

[0077] No exemplo 3, a revolução/rotação foi mantida durante 5 minutos, 10 minutos ou 20 minutos, respectivamente, e a uma velocidade de 50 rpm, 100 rpm ou 200 rpm, respectivamente, para preparar composições de ácido hialurônico. A aparência, o pH de líquido medicinal, o módulo de viscosidade e a pressão osmótica de cada composição foram testados de acordo com o método da Tabela 2 para examinar se atendem os critérios a seguir.[TABELA 2]

3-1. OBSERVAÇÃO DE APARÊNCIA GERAL

[0078] A aparência foi testada pelo método da Tabela 2 e, como resultado, a aparência foi aceitável quando a revolução/rotação foi realizada a uma velocidade de 200 rpm durante um tempo de funcionamento de 10 minutos e 20 minutos. Contudo, quando a revolução/rotação foi realizada a uma velocidade de 100 rpm ou inferior, ou durante um tempo de funcionamento de 5 minutos ou mais curto, foram observadas bolhas na composição, indicando que a qualidade do produto é inaceitável.[TABELA 3]

3-2. MEDIÇÃO DE PH DE LÍQUIDO MEDICINAL

[0079] O pH foi medido pelo método da Tabela 2 e, como resultado, a velocidade de revolução/rotação e o tempo de funcionamento dificilmente afetam os valores de pH, como mostrado na seguinte Tabela 4.[TABELA 4]

3-3. MEDIÇÃO DE VISCOSIDADE

[0080] A viscosidade foi medida pelo método da Tabela 2 e, como resultado, a viscosidade mais aceitável foi obtida a uma velocidade de revolução/rotação de 200 rpm, como mostrado na seguinte Tabela 5. Contudo, a composição tem uma viscosidade inaceitável a uma velocidade de revolução/rotação de 100 rpm ou inferior. [TABELA 5]

3-4. MEDIÇÃO DE PRESSÃO OSMÓTICA

[0081] A pressão osmótica foi medida pelo método da Tabela 2 e,como resultado, a velocidade de revolução/rotação e o tempo de funcionamento dificilmente afetam a pressão osmótica, como mostrado naseguinte Tabela 6.[TABELA 6]

[0082] Esses resultados indicam que quando uma mistura de dois oumais géis de ácido hialurônico que têm fases diferentes é submetida à revolução/rotação a uma velocidade de revolução de 150 rpm a 250 rpm e uma velocidade de rotação de 150 rpm a 250 rpm, é preparado um preenchimento que atende os padrões de preparação.

EXEMPLO EXPERIMENTAL 4. COMPARAÇÃO DE DURAÇÃO DE ACORDO COM AS RAZÕES DE MIXAGEM DO EXEMPLO 1 E DOEXEMPLO 2

[0083] O gel de ácido hialurônico monofásico preparado no Exemplo 1 e o gel de ácido hialurônico bifásico preparado no Exemplo 2 foram misturados a uma razão de mixagem da Tabela 7 a seguir, e a mistura foi submetida à revolução/rotação sob os mesmos estados como o Exemplo de Preparação 3. Depois disso, o produto foi embalado em uma seringa e esterilizado por autoclavagem para preparar as composições do Exemplo de Preparação 4 a Exemplo de Preparação 6.[TABELA 7]

[0084] Um teste clínico foi realizado por injeção intradérmica das composições de ácido hialurônico do Exemplo de Preparação 4 a Exemplo de Preparação 6 para o corpo humano e, como resultado, a composição do Exemplo de Preparação 4 mostrou uma duração de 6 meses a 9 meses, a composição do Exemplo de Preparação 5 mostrou uma duração de 9 meses a 12 meses e a composição do Exemplo de Preparação 6 mostrou uma duração de 12 meses a 15 meses.

[0085] Portanto, a duração de restaurabilidade de tecido pode ser controlada usando-se o gel de ácido hialurônico monofásico e o gel de ácido hialurônico bifásico a uma razão desejada.

EXEMPLO EXPERIMENTAL 5. MEDIÇÃO DE VISCOSIDADE DO EXEMPLO 3

[0086] A viscosidade da composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas (representada por DN na Figura 6), que foi preparada no exemplo 3, foi medida usando um reômetro e comparada com o preenchimento bifásico e o preenchimento monofásico disponíveis comercialmente. Os resultados são mostrados na Figura 6 e na Tabela 8 a seguir.

R: Restylane, RL: Restylane lidocaína, RP: Restylane perlane, RPL: Restylane perlane lidocaína, RSQ: Restylane subq, RV: Restylane vital, PD: Perfecta deep, PSQ: Perfecta subq, IC: Yvoire classic,JV: juvederm voluma,JVL: juvederm voluma lidocaína, JU: juvederm ultra, JUP: juvederm ultra plus, JUPxc: juvederm ultra plus xc

[0087] Ou seja, a composição de ácido hialurônico para restauração de tecido da presente invenção tem uma viscosidade entre a viscosidade da composição de ácido hialurônico monofásico e a viscosidade da composição de ácido hialurônico bifásico, indicando que a composição da presente invenção tem características tanto monofásicas quanto bifásicas.

[0088] Com base na descrição acima, será entendido por aqueles que são versados na técnica que a presente invenção pode ser implantada em uma forma específica diferente sem mudar o espírito técnico ou as características essenciais da mesma. Portanto, deve-se entender que a modalidade acima não é limitativa, porém, ilustrativa em todos os aspectos. O escopo da invenção é definido pelas reivindicações anexas em vez de pela descrição que as precede e, portanto, todas as mudanças e modificações abrangidas dentro dos marcos e limites das reivindicações, ou os equivalentes de tais marcos e limites são, portanto, destinados a serem abrangidos pelas reivindicações.

EFEITO DA INVENÇÃO

[0089] Uma composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas para restauração de tecido que é preparada de acordo com um método de preparação da presente invenção tem excelente viscoelasticidade e restaurabilidade de tecido, é duradoura e mostra inchação inicial baixa para ter um tempo de recuperação rápido e também tem excelente segurança e estabilidade in vivo.

Claims

1. Método para preparação de uma composição de ácido hialurônico para restauração de tecido, caracterizado pelo fato de que compreende misturar dois ou mais géis de ácido hialurônico que são diferentes entre si em termos de módulo de viscosidade e de módulo de elasticidade por revolução/rotação a uma velocidade de revolução de 100 rpm a 400 rpm e uma velocidade de rotação de 100 rpm a 400 rpm,em que a mistura de dois ou mais géis de ácido hialurônico que são diferentes entre si em termos de módulo de viscosidade e de módulo de elasticidade é uma mistura de um gel de ácido hialurônico monofásico e um gel de ácido hialurônico bifásico,em que a mistura compreende de 50 partes em peso a 70 partes em peso de um gel de ácido hialurônico monofásico e, de 50 partes em peso a 30 partes em peso de um gel de ácido hialurônico bifásico, ouque a mistura compreende de 30 partes em peso a 60 partes em peso de um gel de ácido hialurônico monofásico e, de 70 partes em peso a 40 partes em peso de um gel de ácido hialurônico bifásico, ouem que a mistura compreende de 20 partes em peso a 50 partes em peso de um gel de ácido hialurônico monofásico e, de 80 partes em peso a 50 partes em peso de um gel de ácido hialurônico bifásico,em que a etapa é realizada durante 7 minutos a 30 minutos.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição de ácido hialurônico para restauração de tecido tem características tanto monofásicas quanto bifásicas.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa é realizada sob vácuo.

4. Composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas para restauração de tecido para uso no método como definido na reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que é preparada por revolução/rotação de uma mistura de dois ou mais géis de ácido hialurônico que são diferentes entre si em módulo de viscosidade e em módulo de elasticidade.

5. Composição de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que a composição de ácido hialurônico para restauração de tecido tem as propriedades físicoquímicas de:(a) não ter bolhas evidentes, e ser incolor e transparente;(b) ter um pH de 7 ± 1;(c) ter uma viscosidade de 20 Pa.s (20.000 cP) a 50 Pa.s (50.000 cP); e(d) ter uma pressão osmótica de 0,325 Osmol/kg ± 10% na média.

6. Composição de quase-fármaco, caracterizada pelo fato de que compreende a composição de ácido hialurônico com características tanto monofásicas quanto bifásicas para restauração de tecido como definida na reivindicação 4.