BR112017010074B1

BR112017010074B1 - preenchimento dérmico a base de ácido hialurônico reticulado e lubrificante de carboximetilcelulose, método de preparação e seus usos

Info

Publication number: BR112017010074B1
Application number: BR112017010074-6A
Authority: BR
Inventors: Nadine Hagedorn; Roland Stragies; Franck Villain; Lubin BELKOVI; Radia El-Banna
Original assignee: Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa
Priority date: 2014-11-13
Filing date: 2015-11-12
Publication date: 2021-05-04
Also published as: RU2017119805A3; KR102483607B1; JP6721584B2; AU2015345523B2; MX2017006232A; CN106999625B; US20170333596A1; JP2017533785A; BR112017010074A2; CN106999625A; TW201625276A; AU2015345523A1; CA2967699C; TWI716365B; RU2017119805A; IL252265B; EP3218023B1; LT3218023T; RU2712641C2; ZA201703351B

Abstract

A presente invenção refere-se a composições injetáveis para preenchimento dérmico sob a forma de um gel, compreendendo ácido hialurônico (HA), carboximetilcelulose (CMC), e, opcionalmente, micropartículas, como micropartículas de hidroxiapatita cálcica (CaHAP). As composições injetáveis para preenchimento dérmico tem propriedades reológicas aprimoradas e, ao mesmo tempo, tem forças de extrusão baixas. A presente invenção refere-se, ainda, a um método para preparação dessas composições injetáveis para preenchimento dérmico e seus usos para fins terapêuticos e cosméticos.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção se refere a composiões injetáveis para preenchimento dérmico sob a forma de um gel, compreendendo ácido hialurônico (HA) reticulado, carboximetilcelulose (CMC), e, opcionalmente, micropartículas, como micropartículas de hidroxiapatita cálcica (CaHAP). As composições injetáveis para preenchimento dérmico têm propriedades reológicas aprimoradas e, ao mesmo tempo, têm forças de extrusão baixas. A presente invenção refere-se, ainda, a um método para a preparação dessas composições injetáveis para preenchimento dérmico e seus usos para fins terapêuticos e cosméticos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[002] É um desejo comum alcançar e manter uma aparência jo vem como um denominador comum de beleza. Ao longo do tempo, no entanto, a pele começa a perder sua aparência jovial, especialmente na face. Os sinais estéticos de envelhecimento facial mais comuns incluem visibilidade de rugas na pele, dobras nasolabiais profundas, linhas glabelares, linhas de marionete, comissuras bucais e rugas perio- rais.

[003] Essas alterações do envelhecimento são, frequentemente, tratadas por meio da injeção de preenchimentos dérmicos para aumentar o volume de tecido. Atualmente, existem inúmeros preenche- dores dérmicos disponíveis, que podem ser classificados, de forma ampla, em duas categorias. A primeira categoria dos preenchimentos proporciona um efeito de Iongo prazo, ou criar volume e inclui preenchimentos, com preenchimentos de ácido hialurônico (HA) reticulados. A segunda categoria de preenchimentos proporciona um efeito de Ion- go prazo por induzir neocolagenese. O exemplo conhecido e amplamente utilizado e o Radiesse®, que compreende microesferas de hi- droxiapatita cálcica, um veículo de gel de carboximetilcelulose (CMC) e glicerina.

[004] Os preenchimentos dérmicos ideais devem ser biocompatí- veis, ter um perfil de baixo efeito adverso e proporcionar uma persistência (longevidade) razoavelmente duradoura, uma capacidade de volumização eficaz e facilidade de injeção. Preenchimentos à base HA oferecem muitas destas propriedades desejáveis de preenchimentos dérmicos. Uma vez que o HA é encontrado em quase todas as espécies, ele não tern nenhuma antigenicidade e apresenta excelente tolerância. Além disso, a permite a produção de produtos de HA reticulados que têrn uma boa capacidade de lifting, e são estáveis por mais de 12 meses até dois anos.

[005] Uma grande desvantagem de preenchimentos à base de HA e, no entanto, que eles muitas vezes são difíceis de injetar. Por esta razão, HA não reticulado (HA "livre") a comumente adicionado como um lubrificante para facilitar a injeção. Infelizmente, a redução desejada da forma de extrusão que é causada pela adição de HA livre compromete outras propriedades físicas desejáveis do gel. Em particular, o parâmetro de módulo de armazenamento G' (G') é reduzido, resultando, assim, em um efeito de volumização reduzido, e a viscosidade dinâmica é reduzida.

[006] Radiesse® é um preenchimento dérmico que também pro porciona características desejáveis de um preenchimento dérmico, incluindo longevidade aceitável, biocompatibilidade e uma boa capacidade para criar volume. Quando injetadas, as pequenas microesferas de hidroxiapatita cálcica agem como uma armação que promove a formação de tecido novo, similar ao seu ambiente circundante. No entanto, uma vez que o veículo de CMC de Radiesse® é rapidamente absorvido in vivo (em cerca de 3 meses), ha uma redução transitória e potencial do efeito de preenchimento, pois a neocolagenese pode não ser sincronizada com a eliminação da CMC. Além disso, não existe nenhum antídoto (agente de reverso) disponível para CMC que permitiria uma correção parcial após a aplicação do preenchimento.

[007] A patente europeia n° 1 080 698, depositada em 1993, re vela um material para aumento de tecido mole compreendendo partículas de cerâmicas finamente divididas (por exemplo, CaHA) e abrange, inter al/a, Radiesse©. Além disso, WO 2014/056723 descreve um gel viscoelástico compreendendo HA reticulado em uma concentração entre 1% e (p/v) e partículas de hidroxiapatita em concentração entre 10% e 70% (p/v).

OBJETIVO DA INVENÇÃO

[008] Em vista do acima exposto, o objetivo da presente invenção é fornecer uma composição para preenchimento dérmico duradouro tendo propriedades reológicas aprimoradas e, que e, ao mesmo tempo, facilmente injetável.

SUMARIO DA INVENÇÃO

[009] O objetivo acima é resolvido pelo fornecimento de uma composição injetável para preenchimento dérmico sob a forma de um gel que faz uso de carboximetilcelulose como um lubrificante. Um novo tipo de preenchimento dérmico oferece boa longevidade, é facilmente injetável e tem propriedades reológicas aprimoradas (isto é, um módulo de armazenamento G (G') e viscosidade dinâmica), resultando em uma capacidade excelente para gerar volume.

[0010] Em um primeiro aspecto, a presente invenção fornece uma composição injetável para preenchimento dérmico sob a forma de um gel, compreendendo ácido hialurônico (HA) reticulado (por exempla, reticulado com BDDE) e carboximetilcelulose (CMC).

[0011] O HA reticulado, geralmente, está presente em uma con- centração de 0,1% a 4,0% peso/volume (por exemplo, 0,5% a 4,0% ou 1,0% a 4,0% peso/volume) e fornece uma matriz reticulada, enquanto a CMC, geralmente, está presente em uma concentração de 1,0% a 25% volume/ volume, e é adicionada como uma fase de lubrifican- te/lubrificante. Em uma modalidade preferencial, a composição injetável para preenchimento dérmico compreende, adicionalmente, micro- partículas biocompatíveis reabsorvíveis, especificamente, micropartí- culas de hidroxiapatita cálcica.

[0012] Em um segundo aspecto, a presente invenção fornece um kit compreendendo a composição injetável para preenchimento dérmi- co de acordo com o primeiro aspecto da invenção.

[0013] Em um terceiro aspecto, a presente invenção fornece um método para preparação de uma composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com o primeiro aspecto da invenção, compreendendo as seguintes etapas: (a) fornecer um gel de ácido hialurônico reticulado, (b) fornecer um gel de carboximetilcelulose, (c) misturar o gel de ácido hialurônico reticulado e o gel de carboximetilcelulose.

[0014] Em um quarto aspecto, a presente invenção se refere ao uso de uma composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com o primeiro aspecto da invenção ou do kit de acordo com o segundo aspecto da invenção para aplicações cosméticas como tratamento de linhas faciais.

[0015] Um quinto aspecto, a presente invenção fornece uma com posição injetável para preenchimento dérmico de acordo com o primeiro aspecto da invenção ou um kit de acordo com o segundo aspecto da invenção para uso em terapia, especificamente, para uso no tratamento de incontinência urinária, refluxo vesico-ureteral, insuficiência da prega vocal e medialização de prega vocal.

[0016] Em um sexto aspecto, a presente invenção fornece um mé todo para substituição ou preenchimento de um tecido biológico ou aumento do volume de um tecido biológico, compreendendo a administração a um individuo que precisa do mesmo de uma quantidade eficaz da composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com o primeiro aspecto da invenção.

[0017] Modalidades especificas da presente invenção são apre sentadas nas reivindicações em anexo.

[0018] Objetivos, vantagens e características adicionais da pre sente invenção se tornarão evidentes para os versados na técnica em vista da seguinte descrição detalhada da invenção, desenhos e exemplos.

BREVE DESCRICÃO DOS DESENHOS

[0019] A FIGURA 1 mostra a força de extrusão de uma composi ção para preenchimento dérmico de HA/CMC de acordo com a presente invenção (gel de MHAG com 15% (v/v) de CMC; barra cinza) e uma composição para preenchimento dérmico de HA/HA livre (isenta de gel de MHAG com 15% (v/v) de HA livre; barra hachurada) em comparação com um gel somente com HA (gel de MHAG; barra preta).

[0020] A FIGURA 2 mostra o módulo da elasticidade (G') de uma composição para preenchimento dérmico de HA/CMC de acordo com a presente invenção (gel de MHAG com 15% (v/v) de CMC; barra cinza) e uma composição para preenchimento dérmico de HA/HA livre (gel de MHAG com 15% (v/v) de HA livre; barra hachurada) em comparação com um gel somente com HA (gel de MHAG; barra preta).

[0021] A FIGURA 3 mostra a viscosidade de uma composição pa ra preenchimento dérmico de HNCMC de acordo com a presente invenção (gel de MHAG com 15% (v/v) de CMC; barra cinza) e uma composição para preenchimento dérmico de HA/HA Iivre (isenta de gel de MHAG com 15% (v/v) de HA Iivre; barra hachurada) em compara- ção com um gel somente com HA (gel de MHAG; barra preta).

[0022] A FIGURA 4 mostra a forga de extrusão de uma composi ção para preenchimento dérmico de HNCaHAP/CMC de acordo com a presente invenção (MHAI com 10% (v/v) de CMC; barra preta) em comparação com um gel de HA/CaHAP (MHAI; barra cinza), um gel de HA/CaHAP/ HA Iivre (MHAI com 10% de HA livre; barra hachurada), e uma diluição do gel de MHAI (MHAI com HA diluído (15 mg/mL de HA); barra sem preenchimento).

[0023] A FIGURA 5 mostra o módulo de elasticidade (G') de uma composição para preenchimento dérmico de HNCaHAP/CMC de acordo com a presente invenção (MHAI com 10% (v/v) de CMC; barra preta) em comparação com um gel de HA/CaHAP (MHAI; barra cinza), um gel de HA/CaHAP/ HA Iivre (MHAI com 10% de HA Iivre; barra ha- churada), e uma diluição do gel de MHAI (MHAI com HA diluído (15 mg/mL de HA); barra sem preenchimento).

[0024] A FIGURA 6 mostra a viscosidade de uma composição pa ra preenchirnento dérmico de HA/CaHAP/CMC de acordo com a presente invenção (MHAI com 10% (v/v) de CMC; barra preta) em comparação com um gel de HA/CaHAP (MHAI; barra cinza), um gel de HA/CaHAP/ HA Iivre (MHAI com 10% de HA Iivre; barra hachurada), e uma diluição do gel de MHAI (MHAI com HA diluído (15 mg/mL de HA); barra sem preenchimento).

[0025] A FIGURA 7 mostra a influencia de diferentes concentra ções de CMC sobre a força de extrusão de um preenchimento dérmico de HA/CaHAP (MHAI; barra preta), um gel de HA/CaHAP com 5% de CMC (MHAI com 5% de CMC; barra cinza), um gel de HA/CaHAP com 10% de CMC (MHAI com 10% de CMC; barra hachurada), e gel de HA/CaHAP com 15% de CMC (MHAI com 15% de CMC; barra sem preenchirnento).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0026] O preenchimento dérmico injetável da presente invenção proporciona várias vantagens em relação aos preenchimentos conhecidos, incluindo excelente biocompatibilidade, persistência aprimorada, retenção de umidade elevada, nenhuma imunogenicidade e absorção segura pelo organismo, enquanto se mantêm as propriedades reológi- cas e mecânicas desejáveis para uso como um preenchirnento dérmi- co.

[0027] Em particular, os inventores da presente invenção verifica ram que a adição de uma pequena quantidade de carboximetilcelulose (CMC) em um gel de HA reticulado leve, surpreendentemente, a uma composição para preenchimento dérmico de longa duração, exibindo uma baixa força de extrusão, enquanto tem propriedades mecânicas aprimoradas (isto e, alto módulo de elasticidade (G') e alta viscosidade dinâmica) proporcionando alta capacidade de volumização. Em outras palavras, verificou-se que o preenchimento dérmico de acordo com a presente invenção, inesperadamente, proporciona um equilíbrio ideal de longevidade, capacidade de lifting e facilidade de injeção.

[0028] Além disso, em uma modalidade preferencial da presente invenção, onde a composição para preenchimento dérmico contém, adicionalmente, micropartículas (por exemplo, micropartículas de hi- droxiapatita cálcica (CaHAP)), as vantagens de Radiesse® (isto é, o neocolagenese devido a partículas de hidroxiapatita cálcica) podem ser combinadas com a vantagem de uma reversibilidade parci- al/possibilidade de correção devido a possibilidade do uso de uma enzima hialuronidase para degradar e dissolver o veículo de HA reticulado. Uma outra vantagem que o veículo de HA reticulado durará mais do que o atual veículo de CMC não reticulado usado, por exemplo, em Radiesse®. Isto evitará a lacuna conhecida de desempenho/efeito de volumização, que e visto entre o tempo de dissolução da CMC e a indução de neocolagenese pelas micropartículas.

[0029] Em um primeiro aspecto, a presente invenção se refere a uma composição injetável de preenchimento dérmico na forma de um gel, compreendendo ácido hialurônico reticulado e carboximetilcelulo- se.

[0030] Como usado aqui, o termo "preenchimento dérmico" refere- se, amplamente, a um material ou composição projetada para adicionar volume a áreas de deficiência de tecido mole. O termo "preenchimento dérmico", como usado aqui tem o mesmo significado, e é usado de forma intercambiável, com o termo "preenchimento de tecido mole". Isto é, o termo "preenchimento dérmico" não deve ser interpretado como impondo quaisquer limitações quanto a localização e tipo de injeção, e, geralmente, abrange usos em vários níveis abaixo da derme, por exemplo, sub-muscularmente acima do periósteo e no piano subcutâneo. Dentro do significado da presente invenção, o termo "tecido mole" refere-se, geralmente, a tecidos que conectam, sustentam, ou circundarn outras estruturas e órgãos do corpo. Na presente invenção, tecidos moles incluem, por exemplo, músculos, tendões (bandas de fibras que conectam os músculos aos ossos), tecidos fibrosos, gordura, vasos sanguíneos, nervos e tecidos sinoviais (tecidos ao redor de articulações).

[0031] De acordo com a presente invenção, a composição injetá vel para preenchimento dérmico a um gel. O termo "gel", como usado aqui, geralmente se refere a um material tendo uma fluidez a temperatura ambiente entre a de um liquido e a de um sólido. Além disso, o termo "gel" se destina a significar um material capaz de absorver água (ou seja, um "hidrogel"). No ââmbito presente invenção, a composição injetável para preenchimento dérmico compreende, geralmente, um veículo fluido fisiologicamente aceitável, como um tampão isotônico não pirogênico, em particular, uma solução salina fisiológica que é, de preferência, tamponada.

[0032] Além disso, a composição dérmica da presente invenção e "injetável". Isto significa que a composição para preenchimento dérmi- co e adequada para injeção na pele ou outro tecido, a fim de trazer a composição para preenchimento dérmico para o sítio-alvo desejado. Uma composição "injetável", dentro do significado da presente invenção pode ser dispensada de seringas sob condições normais, sob pressão normal.

[0033] De acordo com a presente invenção, a concentração da car- boximetilcelulose a de preferência entre 1,0 e 25,0%, com mais preferência entre 5,0% e 20%, e com a máxima preferência, entre 10% e 15% volume/ volume. No ââmbito da presente invenção, ela é geralmente usada como um lubrificante ou fase de lubrificação. Uma carbo- ximetilcelulose adequada para use na presente invenção pode ter um peso molecular na faixa de 5,0 x 10' Da (CMC de baixa viscosidade) a 1,5 x 106 Da (CMC de alta viscosidade), par exempla, na faixa de 9,0 x 10' a 7,0 x 105 Da, em particular, na faixa de 1,5 x 1 o5 a 5,0 x 105 Da.

[0034] Além disso, uma carboximetilcelulose adequada para use na presente invenção pode ser selecionada dentre uma carboximetil- celulose de baixa viscosidade, com uma viscosidade de 75 mPa.s a 750 mPa.s, coma medido com um viscosímetro com fuso de Brookfield (modelo LW) a 25°C e uma velocidade de rotação de 60 rpm com fusos de tamanho No. 1 ou No. 2 usando uma solução aquosa a 2%, uma carboximetilcelulose de viscosidade media, tendo uma viscosidade de 750 mPa.s a 4.000 mPa.s, coma medido com um viscosímetro de fuso de Brookfield (modelo LVT) a 25°C e uma velocidade de rota- cao de 30 rpm com fusos de tamanho No. 2 ou No. 3 usando uma solução aquosa a 2%, e uma carboximetilcelulose de alta viscosidade, tendo uma viscosidade de 4.000 mPa.s a 25.000 mPa.s, medido com um viscosímetro de fuso de Brookfield (modelo LVT) a 25°C e uma velocidade de rotação de 30 rpm com fusos de tamanho No. 3 ou 4, usando uma solução aquosa a 1%.

[0035] Além disso, a carboximetilcelulose tem, tipicamente, um grau de substituição de 0,20 a 1,50, de preferência, 0,40 a 1,10, com mais preferência, 0,60 a 0,95, e com máxima preferência, 0,70 a 0,90. Como usado aqui, o "grau de substituição" (grau de eterificação), como usado aqui, e definido a seguir: [C6H7O2(OH)x(OCH2COOm)y]n, onde n o grau de polimerização (por exemplo, 450 a 4.000) e x + y = 3, onde yea grau de substituição. O grau de substituição pode ser determinado conforme conhecido na teonica (por exemploo, de acordo com o método descrito no Codex Oenological Internacional COEI-1-C MC:2009).

[0036] O tecidoo hialurônico está presente na composição em uma concentração de preferência de 0,1% a 5,0% ou 0,2% a 4,5% ou 0,3% a 4,0% ou 0,4% a 4,0% ou 0,5% a 4,0% ou 0,7% a 4,0% ou 1,0% a 4,0%, com mais preferência, 0,5% a 3,0% ou 1,0% a 3,0% ou 1,5% a 3,0% ou 2,0% a 3,0%, com máxima preferência 1,0% a 2,5% ou 2,0% a 2,5% peso/volume. No ââmbito da presente invenção, o HA reticulado forma uma "matriz". Como usado aqui, o termo "matriz" se destina a significar uma rede de polissacarídeos, tanto reticulados quanta não reticulados, sob a forma de uma solução ou gel. Além disso, o termo "ácido hialurônico" ou "HA", como usado aqui, significa ácido hialurôni- co, hialuronato, e qualquer sal de hialuronato, como hialuronato de sódio.

[0037] No contexto da presente invenção, o ácido hialurônico reti culado não e limitado, de forma alguma, e inclui ácido hialurônico reticulado, preparado a partir de um único ácido hialurônico ou dois ou mais ácidos hialurônico que diferem em seu peso molecular (consulte, por exemplo, US 2010/0316683 Al ou WO 2013/185934 Al, que são aqui incorporados a título de referência). Também, no ââmbito do escopo da presente invenção, o ácido hialurônico reticulado pode formar um gel "polidensificado", que é caracterizado por uma variação do grau de reticulação dentro do gel, ou seja, um gel "polidensificado" tem (pelo menos) dois níveis de densidade diferentes, com partes mais densas (maior grau de reticulação) e partes menos densas (menor grau de reticulação).

[0038] Géis polidensificados podem ser preparados, por exemplo, por uma primeira reação de reticulação para reticular o(s) primeiro(s) polissacarídeo(s), seguido por uma segunda reação de reticulação para reticular o(s) segundo(s) polissacarídeo(s) para formar um gel duplamente reticulado. O dito primeiro e dito segundo polissacarídeo(s) podem, por exemplo, ser independentemente o mesmo ácido hialurô- nico ou dois ácidos hialurônicos diferentes que diferem em seu peso molecular media (por exemplo, um ácido hialurônico de baixo peso molecular e um ácido hialurônico de alto peso molecular). O processo de dupla-reticulação (tecnologia de reticulação dinamica) a conhecido na técnica, e é descrito, por exemplo, em EP 1 711 552 B1, que está aqui incorporado a título de referência.

[0039] No âmbito da presente invenção, o ácido hialurônico reticu lado pode ser preparado pela reticulação de um único ácido hialurôni- co, ou pela reticulação de um primeiro ácido hialurônico e um segundo ácido hialurônico e, opcionalmente, pelo menos um ácido hialurônico adicional, em que o primeiro, segundo e pelo menos um ácido hialurô- nico adicional diferem em seus pesos moleculares medios.

[0040] De preferência, o ácido hialurônico tem um peso molecular médio de 0,1 x 106 a 4,0 x 106 Da ou 0,3 x 106 a 4,0 x 106 Da ou 0,5 x 106 a 4,0 x 106 Da, em particular, 1,0 x 106 a 3,0 x 106 Da ou 1,5 x 106 a 2,5 x 106 Da. O dito primeiro ácido hialurônico tern um peso molecular médio de 1,0 x 106 Da a menos do que 1,0 x 106 Da, com rnais preferência, 3,0 x 105 Da a 9,0 x 105 Da, e com máxima preferência 5,0 x 105 Da a 8,0 x 105 o5 Da. O dito segundo ácido hialurônico tern, geralmente, um peso molecular médio maior que 1,0 x 106 Da a 5,0 x 106 Da, em particular entre 1,5 x 106 Da e 4,0 x 106 Da, e de preferência, entre 2,0 x 106 Da e 3,0 x 106 Da. A razão entre o peso do primeiro HA e o peso do segundo HA na composição injetável para preenchimento dérmico da presente invenção no e limitada, de forma alguma, e pode, por exemplo, variar de 0,001:99,999 a 99,999:0,001, de preferência de cerca de 70:30 a cerca de 99,9:0,1, e, com máxima preferência de cerca de 90:10 a cerca de 99,0:1,0.

[0041] Vários métodos podem ser aplicados na presente invenção para determinar o peso molecular de HA, como medições de viscosidade intrínseca (por exemplo, de acordo com a Farmacopeia Chinesa, 2a revisão, 2006), eletroforese capilar (OE) (por exemplo, de acordo com Kinoshita et aL, Biomed. Chromatogr., 2002, 16:141-45), croma- tografia de permeação com gel de alta performance (HPGPC) (por exemplo, de acordo com Kim et aL, Food Chem., 2008, 109: 63-770), e espalhamento de luz laser de mOltiplos angulos combinado com cromatografia de exclusão de tamanho (SEC-MALLS) (por exemplo, de acordo com Hokputsa et al., Eur. Biophys. J. Biophys. Lett., 2003, 32:450-456).

[0042] De preferência, a composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com a presente invenção é reticulada com BDDE (título 1,4-butanodiol diglicidílico). O ácido hialurônico reticulado com BDDE pode ter um grau de modificação, expresso como a razão entre a soma de reticuladores de BDDE com ligações simples e duplas e a soma das unidades dissacarídicas do ácido hialurônico, de 0,5% a 25%, de preferência 1,0% a 15%, com mais de preferência 2,0 a 10%, e com máxima preferência 3,0% a 8,0% ou 4,0% a 7%.

[0043] O grau de modificação pode ser determinado por RMN, de acordo com métodos conhecidos na técnica (Edsman et al.., Gel Properties of Hyaluronic Acid Dermal Fillers, Dermatol. Surg. 2012, 38:1170-1179; Guarise et al. , SEC determination of cross-link efficien- cy in hyaluronan fillers, Carbohydrate Polymers 2012, 88:428-434; Kenne et al., Modification and cross-linking parameters in hyaluronic acid hydrogels -Definitions and analytical methods, Carbohydrate Polymers 2013, 91:410-418).

[0044] Em resumo, os géis dialisados e esterilizados são degrada dos antes de realizar a medição por RMN. A degradação pode ser executada por condroitinase AC (Edsman et al., supra; Kenne et al. , supra), NaOH (Guarise et al. , supra), adição de hialuronidase (por exemplo, 150 U hialuronidase de ovino a 1 g de gel) ou por incubação a 90 °C, durante pelo menos 35 h. As soluções obtidas são então, liofi- lizadas, dissolvidas em D2O, e bem homogeneizadas.

[0045] A medição por RMN pode ser realizada em, por exemplo, 500 MHz, em um pulso de 20 graus com várias repetições a temperatura ambiente para receber um espectro com resolução adequada. De acordo com a literatura, o grau de modificação (MoD) a avaliado pelo calculo da razão entre os sinais de N-acetil do HA e os sinais de meti- leno do BDDE. Para o N-acetil do HA, os sinais críticos estão localizados em cerca de 2,0 ppm, e em cerca de 1,6 ppm para BDDE quando solubilizado em D2O. Para calcular o grau de modificação, os valores inteiros foram identificados e a razão de prótons de 3H de N-acetil (CH3) para 4H de metileno (CH2CH2) precisa ser 1evado em consideração, de acordo com a literatura (Edsman et al., supra, e Kenne et al., supra).

[0046] De acordo com uma modalidade preferência) da presente invenção, a composição injetávelpara preenchirnento dérmico compreende, adicionalmente, microparticulas biocompativeis reabsorviveis. 0 termo "microparticulas", como usado aqui, geralmente, se refere a partículas substancialmente arredondadas ou esfericas. Além disso, as micropartículas de preferência têm um diâmetro médio de 5 pm a 500 pm, com mais preferência de 10 pm a 200 pm, com particular prefe- rência, 15 pm a 100 pm ou 20 pm a 75 pm, e, com máxima preferência 25 pm a 45 pm. No contexto da presente invenção, o termo "reabsor- vível", se refere, geralmente, a um material que pode ser decomposto e absorvido em um tecido e/ ou fluido corporal.

[0047] As micropartículas estão, de preferência, presentes na composição em uma concentração de 0,5% a 50%, ou 1,0% a 50%, com mais de preferência 1,0% a 40%, com particular preferência 5,0% a 35%, em particular 15,0% a 30% ou 20% a 25%, e com máxima preferência 25,0% a 35% volume/ volume.

[0048] No âmbito do contexto da presente invenção, as micropartí- culas biocompatíveis reabsorvíveis podem consistir em materiais a base de fosfato de cálcio, materiais à base de alumina, um polissacarí- deo biodegradável natural ou um derivado do mesmo, ou um poliéster biodegradável, poliortoéster ou polimero sintético de polianidrido.

[0049] O termo "polissacarídeo natural", como usado aqui, geral mente, se refere a um polissacarídeo que ocorre na natureza. Como usado aqui, um "deriva do", quando usado em relação a um polissaca- rídeo natural, refere-se a um polissacarídeo que é derivado do polis- sacarídeo natural ou modificação química como carboxilação, eterifi- cação, metilaçao, sulfonação e similares. O termo "biodegradavel", como usado aqui, refere-se, de forma ampla, aos materiais que são capazes de serem decompostos in vivo ou seres humanos vivos e não deve ser interpretada no sentido de ser restrito a um tempo ou duração de decomposição especifico.

[0050] Os materiais à base de fosfato de cálcio podem ser seleci onados dentre apatita cálcica, fosfato de tetracálcio, pirofosfato de cal- cio, fosfato de tricalcio, e fosfato de octacalcio. De preferência, o material a base de fosfato de cálcio a hidroxiapatita cálcica.

[0051] O polímero sintético de poliéster, poliortoester ou polianidri- do pode ser um homopolímero ou copolímero de glicolídeo, lactídeo, caprolactona e p-dioxanona, ou a um polímero de carbonato de trimeti- leno, ou um poli(hidroxibutirato) ou poli(hidroxivalerato). De preferência, o polimero sintetico de poliéster, poliortoester ou polianidrido bio- degradavel a selecionado dentre poli-E-caprolactona, poliglicolídeos, polilactideos, polidioxanona, poli(láctico-coácido glicólico), po- li(glicolídeo-co-caprolactona) e poli (glicolídeo-co-carbonato de trimeti- leno), e e o mais preferencial poli-E-caprolactona ou polidioxanona.

[0052] De acordo com a presente invenção, a composição injetá vel para preenchimento dérmico pode compreender, adicionalmente, um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em polióis, vitaminas, aminoácidos, metais, antioxidantes e sais minerais. Poliois adequados para uso na presente invenção incluem, mas não se limitam a, glicerina, manitol, sorbitol, propileno glicol, eritritol, xilitol, malti- tol, e lactitol. Particularmente adequado para uso na presente invenção a manitol e glicerina. Além disso, o poliol) e, de preferência, glicol, opcionalmente, em combinação com um ou mais dos compostos de poli- ol anteriormente mencionados, especificamente, manitol. O(s) poli- ol(óis) pode(m), por exemplo, ser incluídos na composição injetável para preenchimento dérmico em uma concentração de 1% a 25% ou 2% a 17% ou 3% a 13% volume/volume, especificamente, em uma concentração de 5% a 11% ou 7% a 10% volume/volume.

[0053] As vitaminas adequadas incluem a vitamina C, vitamina E e vitaminas do grupo B, isto 6, um ou mais de vitaminas B1, B2, B3, B5, B6, B7, B9 e B12. A concentração de vitamina C ou vitamina E, e, de preferência, de cerca de 0,01 mg/mL a cerca de 10,0 mg/ml, com mais preferência de cerca de 0,1 mg/mL a cerca de 5,0 mg/mL, a concentração total das vitaminas do grupo B e, de preferência, de cerca de 0,01 mg/mL a cerca de 10,0 mg/mL, com mais preferência de cerca de 0,1 mg/mL a cerca de 5,0 mg/mL. As vitaminas podem estar presentes para estimular e manter o metabolismo celular e, portanto, para pro mover a produção de colágeno. De particular preferência para uso na presente invenção a vitamina C, vitamina E e vitamina B6.

[0054] Além disso, a composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com a presente invenção pode compreender adici-onalmente um anestésico, especificamente, um anestésico local, de preferência, a lidocaína, em uma concentração de, por exempla, 0,05% em peso a 5,0% em peso, 0,1% em peso a 4,0% em peso, 0,2 % em peso a 3,0% em peso, 0,3% em peso a 2,0 0/0 em peso, ou 0,4% em peso a 1,0 % em peso.

[0055] Ainda contemplado na presente invenção que a composi ção injetável para preenchimento dérmico possa incluir polímeros reti-culados e não reticulados além de HA reticulado e CMC. Especificamente, a composição injetável para preenchimento dérmico pode compreender, adicionalmente, 0,001% a 15%, especificamente, 1% a 10% volume/ volume de ácido hialurônico não reticulado. O peso molecular do ácido hialurônico do dito ácido hialurônico não reticulado, 6, de preferência, entre 3,0 x 105 Da e 4,0 x 106 Da, especificamente, entre 1,0 x 106 Da e 3,0 x 106 Da.

[0056] Outros polímeros reticulados ou não reticulados, como o sulfato de condroitina, queratan, queratan sulfato, heparina, sulfato de heparina, celulose e seus derivados, quitosana, carragenina, goma xantana e alginato ou um dos seus sais, também podem ser incluídos na composição injetável para preenchimento dérmico da presente invenção em pequenas quantidades (por exemplo, menos que 10%, geralmente, menos que 5% ou menos que 1% volume/volume). Entretanto, é também contemplado na presente invenção que a composição injetável para preenchimento dérmico não contenha polímeros reticulados além do HA reticulado aqui descrito, e/ ou não contenha os polímeros não reticulados além da CMC aqui descrita. Neste contexto, o termo "polímero", como usado aqui, refere-se a qualquer composto polimérico natural ou sintético com unidades estruturais repetitivas, incluindo polissacarídeos como HA.

[0057] Em uma modalidade preferencial da presente invenção, a composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com a presente invenção, incluindo a composição que compreende micropar- tículas (por exemplo, micropartículas de hidroxiapatita cálcica), compreende, adicionalmente, um anestésico, de preferência, lidocaína, e/ou um ou mais polióis descritos anteriormente. De forma particularmente preferida, a composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com a presente invenção, incluindo a composição que compreende micropartículas de CaHAP, compreende, adicionalmente, li- docaína e glicerina.

[0058] Além disso, de acordo com a presente invenção, a compo sição injetável para preenchimento dérmico pode ter uma ou mais das seguintes propriedades: (i) um módulo elástico G' em uma frequência (f) de 0,4 Hz e 25°C de 50 Pa a 4500 Pa, de preferência, 100 Pa a 4000 Pa, com mais preferência, 150 Pa a 2500 Pa; (ii) uma viscosidade em uma frequência de 0,4 Hz e 25°C de 20 Pa.s a 1400 Pa.s, de preferência, de 25 Pa.s a 1000 Pa.s, com mais preferência, 30 Pa.s a 900 Pa.s; e (iii) uma tangente Delta (G"/G') em uma frequência de 0,4 Hz e 25°C de 0,20 a 0,8, de preferência, 0,25 a 0,6.

[0059] Além disso, a força de extrusão para uma composicão inje tável para preenchimento dérmico de acordo com a presente invenção que não contém quaisquer micropartículas (por exemplo, micropartícu- las de hidroxiapatita cálcica) é geralmente, na faixa de 10 N a 30 N, conforme medido através de uma agulha (por exemplo, Neoject) de 25G x 1,6 cm (5/8") a uma velocidade de extrusão de cerca de 50 mm/min, usando uma seringa de 1 mL padrão (por exemplo, uma se- ringa de 1,0 mL BD). A força de extrusão para uma composicão injetável para preenchimento dérmico de acordo com a presente invenção com micropartículas (por exemplo, micropartículas de hidroxiapatita cálcica) é geralmente, na faixa de 35 N a 70 N, conforme medido através de uma agulha (por exemplo, Terumo K pack II) de 25G TW 3/4 a uma velocidade de extrusão de cerca de 50 mm/min, usando uma seringa de 1,5 mL padrão (por exemplo, uma seringa plástica de 1,5 mL).

[0060] Além disso, a composição injetável para preenchimento dérmico, geralmente, compreende um tampão, por exemplo, um tampão de fosfato, para ajustar o pH. Uma vez que a composição injetável para preenchimento dérmico da presente invenção destina-se à inserção no corpo humano, o pH é geralmente na faixa de 6,5 a 7,5, de preferência na faixa de 6,8 para 7,4. Além disso, a osmolalidade é de preferência, cerca de 200 mOsmol/L para cerca de 400 mOsmol/L, com- mais preferência cerca de 280 mOsmol/L a cerca de 330 mOsmol/L.

[0061] Em um segundo aspecto, a presente invenção se refere a um kit compreendendo a composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção. O kit pode compreender também instruções para uso.

[0062] Em um terceiro aspecto, a presente invenção se refere a um método para preparação de uma composição injetável para preen-chimento dérmico de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção, compreendendo as seguintes etapas; (a) fornecer um gel de ácido hialurônico reticulado, (b) fornecer um gel de carboximetilcelulose, (c) misturar o gel de ácido hialurônico reticulado e o gel de carboximetilcelulose.

[0063] O gel de ácido hialurônico reticulado fornecido na etapa (a) e/ou o gel de carboximetilcelulose fornecida na etapa (b) compreende, de preferência, um ou mais dos polióis anteriormente mencionados, especificamente, glicerina. Além disso ou, alternativamente, um ou mais dos polióis mencionados anteriormente, especificamente, glicerina, podem também ser adicionados na etapa (c) ou após a etapa (c). Além disso, no âmbito da presente invenção, as micropartículas podem ser suspensas no gel de carboximetilcelulose fornecido na etapa (b) ou, alternativamente, as micropartículas podem ser misturadas juntas com o gel de ácido hialurônico reticulado e o gel de carboximetilce- lulose na etapa (c). Também, as micropartículas podem ser adicionadas à mistura obtida na etapa (c).

[0064] De preferência, o gel de ácido hialurônico reticulado da eta pa (a) e/ ou o gel de carboximetilcelulose da etapa (b) compreende um anestésico, por exemplo, lidocaína. Com mais preferência, o anestésico (por exemplo, lidocaína) é adicionado na etapa (c), ou após a etapa (c), à mistura obtida na etapa (c).

[0065] Em um quarto aspecto, a presente invenção se refere ao uso de uma composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção ou um kit de acordo com o segundo aspecto da presente invenção para aplicações cosméticas.

[0066] O uso de acordo com o quarto aspecto inclui, de preferên cia, o tratamento cosmético de rugas e linhas da pele (por exemplo, linhas faciais e rugas faciais), linhas glabelares, dobras nasolabiais, dobras de queixo, linhas de marionete, comissuras bucais, rugas peri- orais, pés de galinha, depressões cutâneas, cicatrizes, têmporas, suporte subdérmico das sobrancelhas, coxins de gordura malares e bucais, calhas lacrimais, nariz, lábios, bochechas, região perioral, região infraorbital, assimetrias faciais, linhas do maxilar e queixo.

[0067] Em um quinto aspecto, a presente invenção se refere a uma composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção, para uso em terapia. Especi- ficamente, composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção pode ser usada no tratamento de incontinência urinária por estresse, refluxo vesicoureteral, insuficiência de prega vocal, medialização da prega vocal.

[0068] Em um sexto aspecto, a presente invenção se refere a um método para substituição ou preenchimento de um tecido biológico ou aumento do volume do tecido biológico, compreendendo a administração a um indivíduo que precisa do mesmo de uma quantidade eficaz da composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção.

[0069] Tipicamente, a composição injetável para preenchimento dérmico é administrada por injeção como por injeção subcutânea ou intradérmica,. por exemplo, a composição pode ser injetada intrader- micamente ou subcutaneamente usando a técnica de peuração serial. O termo "quantidade eficaz" se refere à quantidade da composição injetável para preenchimento dérmico suficiente para produzir resultados benéficos ou cosméticos (estéticos) desejados ou terapêuticos. Um "indivíduo" no sentido da presente invenção é qualquer indivíduo ou paciente que necessite do tratamento de uma condição ou doença específica. No âmbito da presente invenção, o indivíduo é, geralmente, um ser humano.

[0070] A composição é, de preferência, administrada para o tratamento de uma condição cosmética,tal como o tratamento de rugas e linhas da pele (por exemplo, linhas faciais e rugas faciais), linhas glabelares, dobras nasolabiais, dobras de queixo, linhas de marionete, comissuras bucais, rugas periorais, pés de galinha, depressões cutâneas, cicatrizes, têmporas, suporte subdérmico das soibracelhas, toxinas de gordura malares e bucais, calhas lacri- mais, nariz, lábios, bochechas, região perioral, região infraorbital, assimetrias faciais, linhas do maxilar e queixo. Entretanto, a com- posição pode também ser administrada para o tratamento de uma indicação terapêutica, como incontinência urinária por estresse, refluxo vesico-ureteral, insuficiência da prega vocal, e medialização das pregas vocais.

[0071] Todas as explicações e comentários dispostos anteriormen te em relação ao primeiro aspecto da invenção (por exemplo, com relação aos ingredientes ou substâncias compreendidas na composição injetável para preenchimento dérmico, seu método de fabricação e as definições de alguns termos técnicos) também se aplicam ao método de acordo com o sexto aspecto da invenção.

[0072] A presente invenção será agora ilustrada, adicionalmente, pelos seguintes exemplos não limitadores.

Exemplos

[0073] Os exemplos a seguir demonstram que a composição para preenchimento dérmico de acordo com a presente invenção tem uma força de extrusão significativamente reduzida, enquanto suas propriedades mecânicas (ou seja, o módulo de elasticidade (G') e viscosidade) são, inesperadamente, mantidos ou mesmo melhorados.

Medida da força de extrusão

[0074] A força de extrusão de géis de HA (com ou sem CMC ou isentos de fase de lubrificação) foi determinada com uma seringa BD de 1,0 mL e agulhas Neoject 25G x 1,6 cm (5/8"). Para esta finalidade, um analisador de textura TA.XTPLUS foi usado. O teste foi conduzido usando uma pré-carga de 0,500 N e uma velocidade de teste de 5 cm/min (2 pol/min).

[0075] A força de extrusão de géis de HA/CaHAP (com ou sem CMC ou isentos de fase de lubrificação) foi determinada com uma seringa plástica de 1,5 mL e agulhas Terumo K pack II 27G TW 3/4. Para esta finalidade, um Analisador de textura TA.XTPLUS usado. O teste foi conduzido usando uma pré-carga de 0,500 N e uma velocidade de teste de 5 cm/min (2 pol/min). Medida do módulo de elasticidade (G') e viscosidade dinâmica

[0076] O módulo de elasticidade (G') e a viscosidade dinâmica fo ram medidos usando um reômetro Anton Paw MCR 302 equipado com um sistema placa-placa com um diâmetro de 20 mm.

[0077] No caso dos géis de HA (com ou sem CMC ou isento de fase de lubrificação de HA livre), o G' e a viscosidade foram determinados usando as seguintes configurações:

[0078] No caso dos géis de HA (com ou sem CMC ou isento de fase de lubrificação de HA livre), o G' e a viscosidade foram determinados usando as seguintes configurações:

Exemplo 1 Preparação de géis de HA sem fase de lubrificação, e com ou sem partículas de hidroxiapatita cálcica (gel de MHAG e gel de MHAI) (Géis comparativos) Preparação de soluções reticuladas

[0079] Uma "torta" de HA foi preparada dissolvendo 43 g de hialu- ronato de sódio (peso molecular médio de cerca de 2,8 MDa) em 270,35 g de tampão de fosfato. A torta de HA obtida pode ser armaze- nada em um refrigerador até que seja necessário. Além disso, uma solução alcalina foi preparada dissolvendo 3,31 g de hidróxido de sódio sólido em 10 mL de tampão. Além disso, foi preparada uma solução BDDE misturando 12,5 g de solução de NaOH 2M com 88,5 g de tampão de fosfato e, em seguida, misturando 8,21 mL desta solução e 3,395 ml de BDDE. Reticulação

[0080] A torta de HA foi quebrada manualmente em pedaços pe quenos, a solução alcalina na íntegra foi adicionada a uma tigela, seguida pela mistura por 30 a 40 minutos a 12 rpm. Então, a solução BDDE foi adicionada dentro da tigela e a mistura foi continuada por 10 a 15 minutos a 25 rpm. O ponto de ajuste de temperatura foi mudado para 33,33°C, e a mistura foi deixada por 4 horas a esta temperatura. Neutralização e Purificação

[0081] Uma solução de neutralização foi preparada pela adição de 920,99 g de tampão a 84,62 g de HCI 1 M. A solução de neutralização total foi, então, adicionada na tigela e agitada durante 2 horas a 5°C. Depois disso, o gel foi purificado de acordo com os métodos conhecidos pelos versados na técnica. O gel resultante (o "gel de MHA") foi, então, usado para preparar as formulações de gel de MHAG (sem CaHAP) e MHAI (com CaHAP) descritas a seguir. Gel de MHAG

[0082] A fim de preparar o gel de MHAG, uma solução concentra da de lidocaína "LS1" foi preparada pela adição de 2 g de lidocaína a 2 g de tampão de fosfato, seguido por agitação suave usando um agitador magnético até dissolução completa. Em seguida, 467 g do gel de MHA preparado no Exemplo 1 foi misturado com 2116 μl da solução de "LS1" durante 15 minutos, usando um misturador apropriado. Depois, 33 g de glicerina foram adicionadas e os compostos foram misturados moderadamente durante 1,5 hora. Após uma etapa adicional de desgaseificação, seringas de 1 mL foram enchidas e esterilizadas a 127°C durante 4 minutos. Gel de MHAI

[0083] Além disso, um gel que corresponde ao gel de MHAG, mas contém, adicionalmente, partículas de CaHAP na mesma quantidade que os géis preparados nos Exemplos 4 a 6 foram preparados de acordo com o procedimento descrito acima para o gel de MHAG. O gel de HA reticulado com CaHAP foi denominado "MHAI" a seguir. Exemplo 2 Preparação de um gel de HA com 15% de CMC como fase de lubrificação (Gel inventivo)

[0084] Uma solução de "LB1" foi preparada pela adição de 62,75 g de glicerina a 2,150 g de lidocaína HCI, e dissolução desta mistura em 135,142 g de tampão de fosfato. Uma agitação suave usando um agitador magnético foi então executada até completa dissolução.

[0085] A seguir, 2,764 g de NaCMC foram misturados vigorosa mente durante 1 hora em uma tigela com 105,24 g de LB1. Após a desgaseificação, 392,025 g do gel de MHAG preparados no Exemplo 1 foram adicionados e misturados moderadamente durante 1,5 hora. Após uma etapa adicional de desgaseificação, seringas de 1 mL foram enchidas e esterilizadas a 127°C durante 4 minutos. Exemplo 3 Preparação de um gel de HA com 15% (v/v) de HA Iivre como fase de lubrificação (Gel Comparativo)

[0086] Uma solução "LB2" foi preparada dissolvendo 1,131 g de lidocaína HCI em 72,743 g de tampão fosfato. Então, 1,170 g de hialu- ronato de sódio (2,5 a 3,0 MDa) foram adicionados. Após dissolução completa, 33,005 g de glicerina foram adicionadas. A mistura foi, então, agitada em uma velocidade moderada durante 1 hora e 30 minutos e mantida a 5°C antes do uso.

[0087] Um gel de HA com 15% (v/v) de lubrificante de HA Iivre foi preparado pela mistura de 106,721 g de LB2 com 387,357 g do gel MHAG preparado no Exemplo 1. Uma mistura moderada foi mantida durante 2 horas. Após a desgaseificação, seringas de 1 mL foram enchidas e esterilizadas a 127°C durante 4 minutos. Exemplo 4 Preparação de um gel de HA/CaHAP com 5% (v/v) de CMC como fase de lubrificação (Gel inventivo)

[0088] Uma solução "LB3" foi preparada da mesma maneira como para LB1, exceto que os seguintes materiais e quantidades foram usados: 4,633 g de NaCMC, 274,16 g de glicerina e 121,3 g de tampão de fosfato.

[0089] Um gel de HA/CaHAP com lubrificante de CMC a 5% (v/v) foi preparado pela colocação 280,02 g de CaHAP (25 μm a 45 μm), 48,22 g de LB3 e 171,84 g do gel MHAG preparado no Exemplo 1 em uma tigela de mistura. Então, 2,120 mL de uma solução de lidocaína (2 g de lidocaína em 2 g de tampão de fosfato) foram adicionados. A mistura foi agitada em velocidade moderada durante 1,5 hora. Após desgaseificação sob vácuo, seringas de 1 mL foram enchidas e esterilizadas a 121°C durante 20 minutos. Exemplo 5 Preparação de um gel de HA/CaHAP com 10% (v/v) de CMC como fase de lubrificação (Gel inventivo)

[0090] Uma solução "LB4" foi preparada da mesma maneira como para LB1, exceto que os seguintes materiais e quantidades foram usados: 7,039 g de NaCMC, 208,527 g de glicerina e 184,46 g de tampão de fosfato.

[0091] Um gel de HA/CaHAPcom 10% (v/v) de lubrificação de CMC foi preparado conforme descrito no Exemplo 4, exceto que as seguintes quantidades foram usadas: 280,02 g de CaHAP (25 μm a 45 μm), 63,29 g de LB4 e 156,79 g do gel de MHAG preparado no Exemplo 1. Exemplo 6 Preparação de um gel de HA/CaHAP com 15% (v/v) de CMC com a fase de lubrificação (Gel inventivo)

[0092] Uma solução "LB5" foi preparada da mesma maneira como para

[0093] LB1, exceto que os seguintes materiais e quantidades fo ram usados: 8,529 g de NaCMC, 168,266 de glicerina e 223,29 de tampão de fosfato.

[0094] Um gel de HA/CaHAP com 15% (v/v) de lubrificante de CMC foi preparado conforme descrito no Exemplo 4, exceto que as seguintes quantidades foram usadas: 280,02 g de CaHAP (25 μm a 45 μm), 78,46 de LB5 141,562 g do gel de MHAG preparados no Exemplo 1. Exemplo 7 Preparação de um gel de HA/CaHAP com 10% (v/v) de HA livre como fase de lubrificação (Gel Comparativo)

[0095] Uma solução "LB6" foi preparada da mesma maneira como para LB2, exceto que os seguintes materiais e quantidades foram usados: 208,548 de glicerina, 3,108 g de hialuronato de sódio e 188,581 g de tampão de fosfato.

[0096] Um gel de HA/CaHAP com lubrificante de HA livre 10% (v/v) foi preparado pela mistura de 156,781 g do gel de MHAG preparado no Exemplo 1 com 63,32 g de LB6 e 2120 μL de solução de lido- caína (2 g de lidocaína em 2 g de tampão de fosfato). Em seguida, 280,02 g de CaHAP (25 μm a 45 μm) foram adicionados e misturados moderadamente durante 1,5 hora. Após a desgaseificação, seringas de 1 mL foram enchidas e esterilizadas a 121°C durante 20 minutos. Exemplo 8 Efeito do lubrificante de CMC ou do lubrificante de HA livre sobre a força de extrusão de um gel de HA reticulado

[0097] Neste exemplo, examinou-se o efeito da adição de CMC ou HA livre como lubrificante sobre a força de extrusão de um gel de HA. Para esta finalidade, a força de extrusão dos seguintes géis foi medida: gel de MHAG (Exemplo 1), gel de MHAG com 15% de CMC (Exemplo 2) e gel de MHAG com 15% de HA livre (Exemplo 3).

[0098] Verificou-se que o use de CMC como lubrificante reduziu significativamente a força de extrusão. A redução foi semelhante a ob-servada com HA livre (consulte a FIGURA 1). Exemplo 9 Impacto do lubrificante de CMC ou do lubrificante de HA livre sobre o módulo de elasticidade (G') de um gel de HA reticulado

[0099] Neste exemplo, examinou-se o impacto do lubrificante de CMC e HA livre sobre o módulo de elasticidade (G') de um gel. Para esta finalidade, o G' (a 1 Hz, 25°C) dos mesmos géis do Exemplo 8 foi medido.

[00100] Verificou-se que a adição de CMC aumentou discretamente o G', enquanto a adição de HA livre reduziu o G' (consulte a FIGURA 2). A preservação de G' é importante uma vez que este parâmetro influencia a capacidade de levantamento de um preenchimento. Deste modo, uma vez que um aumento mesmo discreto foi observado com CMC, espera-se que o gel de MHAG com CMC a 15% (v/v) seja menos propenso a se deslocar uma vez que esteja sob a pele, resultando, assim, em mais "elevação". Exemplo 10 Influência do lubrificante de CMC ou do lubrificante de HA Iivre sobre a viscosidade de um gel de HA reticulado

[00101] Neste exemplo, examinou-se a influência do lubrificante de CMC e do lubrificante de HA Iivre sobre a viscosidade. Para esta finalidade, a viscosidade (a 0,4 Hz, 25°C) foi determinada para os mesmos géis do Exemplo 8.

[00102] Verificou-se que a adição de CMC aumentou a viscosidade, enquanto a adição de HA Iivre reduziu discretamente a viscosidade (consulte a FIGURA 3). A viscosidade também é um parâmetro importante de uma composição de preenchimento, uma vez que uma viscosidade aumentada limitará o espalhamento do gel no tecido mole, e contribuirá também para o efeito volumizador. Exemplo 11 Efeito do lubrificante de CMC ou do lubrificante de HA livre sobre a força de extrusão de um gel de HA/CaHAP reticulado

[00103] De modo a estudar se a adição de partículas de hidroxiapa- tita cálcica (CaHAP) altera os resultados obtidos acima para a adição de CMC ou HA Iivre a um gel de HA reticulado, foram preparados os seguintes géis: MHAI (compreende HA reticulado e partículas de CaHAP e HA; consulte o Exemplo 1), MHAI com 10% de CMC (Exemplo 5) e MHAI com 10% HA Iivre (Exemplo 7). Além disso, um gel de "MHAI diluído" foi preparado, que corresponde ao gel de MHAI, exceto que o gel de MHAI diluído tem uma concentração de HA de 15 mg/g. A força de extrusão dos géis mencionados anteriormente foi, então, medida.

[00104] Verificou-se que a adição de 10% de lubrificante de CMC reduziu significativamente a força de extrusão. A redução foi levemente maior do que a observada com HA Iivre. Além disso, deve ser notado que o uso de CMC ou de lubrificante de HA Iivre proporciona uma diminuição da força de extrusão semelhante a observada com o "gel de MHAI diluído" tendo uma matriz de HA menos concentrada (consulte a FIGURA 4).

[00105] Deste modo, a incorporação de partículas de CaHAP em um gel de HA reticulado não altera os resultados básicos observados para um gel de HA reticulado sem partículas de CaHAP; contudo, a diminuição na força de extrusão foi ainda mais pronunciada no caso de um gel de HA com partículas de CaHAP. Exemplo 12 Impacto do lubrificante de CMC ou do lubrificante de HA livre sobre o módulo de elasticidade (G') de um gel de HA/CaHAP reticulado

[00106] Neste exemplo, o impacto do lubrificante de CMC ou do lubrificante de HA livre sobre o módulo de elasticidade (G') de um gel de HA/CaHAP reticulado foi examinado. Para esta finalidade, o G' (a 1 Hz, 25°C) foi determinado para os mesmos géis do Exemplo 11.

[00107] Verificou-se que a adição de 10% de lubrificante de CMC resulta em um aumento extraordinário de G'. Em contraste, a adição de 10% de HA livre é acompanhada por uma ligeira redução de G', e a diluição da matriz HA leva a uma forte queda do módulo de elasticidade, o que altera drasticamente as propriedades do gel e os resultados clínicos (consulte a FIGURA 5).

[00108] Conforme mencionado anteriormente, um gel como G' resultará em um melhor efeito de volumização. Consequentemente, este exemplo mostra que a adição de um lubrificante de CMC a um gel HA/CaHAP reticulado resulta em capacidade de levantamento superior. Exemplo 13 Influência do lubrificante de CMC ou do lubrificante de HA livre sobre a viscosidade de um gel de HA/CaHAP reticulado

[00109] Neste exemplo, a influência do lubrificante de CMC ou do lubrificante de HA livre sobre a viscosidade de um gel de HA/CaHAP reticulado foi examinada. Para esta finalidade, a viscosidade (a 0,4 Hz, 25°C) foi determinada para os mesmos géis do Exemplo 11.

[00110] Verificou-se que a adição de 10% de lubrificante de CMC resulta em uma forte aumento da viscosidade, enquanto a adição de HA tem somente um impacto mínimo. Como esperado, a diluição da matriz de HA resulta em uma perda de viscosidade que não é inferior a cerca de 75%.

[00111] Nesse aspecto, deve ser indicado que a concentração do lubrificante de CMC adicionado pode ser ajustada dependendo da força de extrusão necessária, conforme mostrado no Exemplo 14 a seguir. Exemplo 14 Influência das concentrações de lubrificante de CMC variáveis sobre a força de extrusão de um gel de HA/CaHAP reticulado

[00112] Neste exemplo, examinou-se a correlação entre concentrações variadas de lubrificante de CMC adicionadas e a força de extru- são. Para esta finalidade, a força de extrusão foi medida para os seguintes géis. MHAI (gel de HA/CaHAP reticulado; Exemplo 1); MHAI com 5% de CMC (Exemplo 4), MHA1 com 10% de CMC (Exemplo 5), e MHAI com 15% de CMC (Exemplo 6).

[00113] Verificou-se que a adição de apenas 5% de CMC leva a uma redução significativa da força de extrusão, que pode ser ainda mais reduzida pela adição de 10% de CMC, e ainda pela adição de 15% de CMC (consulte a Figura 7).

[00114] Em geral, os Exemplos 1 a 14 acima mostram que a diluição de um gel de HA leva a uma redução da força de extrusão, mas também está associada com uma forte redução do módulo de elasticidade (G') e a viscosidade que prejudicará drasticamente os resultados clínicos do preenchimento. Os experimentos mostram, ainda, que, se HA Iivre for adicionado como um Iubrificante, a força a extrusão é reduzida, mas, infelizmente, há também uma redução ligeira a moderada de G’ e da viscosidade.

[00115] Em contrapartida, se o CMC for usado como um lubrificante de acordo com a presente invenção, verificou-se, surpreendentemente, que isto não só leva a uma força de extrusão fortemente reduzida, mas também a um aumento de G' e da viscosidade, especialmente, no caso de um gel de HA reticulado com partículas dispersas (partículas de CaHAP). Tanto o aumento em G' quanto o aumento na viscosidade resulta em um efeito de levantamento aprimorado da composição de preenchimento dérmico após a injeção. Além disso, devido a natureza da reticulação do gel de HA, uma persistência de longa duração no corpo humano será obtida.

[00116] Deste modo, os experimentos apresentados acima fornecem evidências de que a composição para preenchimento dérmico de acordo com a presente invenção fornece um equilíbrio ótimo de longevidade, capacidade de levantamento e facilidade de injeção.

Claims

1. Composição injetável para preenchimento dérmico sob a forma de um gel, caracterizada pelo fato de que compreende ácido hialurônico reticulado e carboximetilcelulose, em que a carboximetilcelulose está presente em uma con-centração de 1,0% a 25,0% volume/ volume.

2. Composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o ácido hialurônico reticulado está presente em uma concentração de 1,0% a 4,0% peso/volume.

3. Composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o ácido hialurônico é reticulado com BDDE (1,4-butanodiol éter diglicidí- lico), e, de preferência tem um grau de modificação, expresso como a razão entre a soma de reticuladores de BDDE com ligações simples e duplas e a soma de unidades de dissacarídicas de ácido hialurônico, de 0,5% a 25%.

4. Composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que a composição compreende, adicionalmente, micropartícu- las biocompatíveis reabsorvíveis em uma concentração de 1% a 50% volume/ volume.

5. Composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que as mi- cropartículas biocompatíveis reabsorvíveis consistem em materiais a base de fosfato de cálcio, materiais a base de óxido de alumínio, um polissacarídeo biodegradável natural ou um derivado do mesmo, ou um poliéster biodegradável, um polímero sintético de poliortoester ou de polianidrido, sendo que os materiais a base de fosfato de cálcio incluem hidroxiapatita cálcica, fluorapatita cálcica, cloroapatita cálcica, apatita de carbonato cálcico, fosfato de tetracálcio, pirofosfato de cálcio, fosfato de tricálcio, e fosfato de octacálcio.

6. Composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que compreende, adicionalmente, um ou mais compostos selecionados do grupo que consiste em anestésicos, polióis, vitaminas, aminoácidos, metais, antioxidantes e sais minerais.

7. Composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que a composição compreende, um poliol, por exemplo, glicerina, e/ ou uma anestésico, por exemplo, lidocaína.

8. Composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que a composição apresenta uma ou mais das seguintes propriedades: (i) um módulo elástico G' em uma frequência (f) de 0,4 Hz e 25°C de 100 Pa a 4000 Pa; (ii) uma viscosidade em uma frequência de 0,4 Hz e 25°C de 20 Pa.s a 1000 Pa.s; (iii) uma tangente Delta (G"/G') em uma frequência de 0,4 Hz e 25°C de 0,25 a 0,6; e (iv) um pH de 6,5 e 7,5.

9. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende a composição injetável para preenchimento dérmico como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 8.

10. Composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou kit de acordo com a reivindicação 9, caracterizada(o) pelo fato de que é para uso em terapia.

11. Composição injetável para preenchimento dérmico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou kit de acordo com a reivindicação 9, caracterizada(o) pelo fato de que é para uso no tratamento de incontinência urinária ou estresse, refluxo vesico-uretral, insuficiência da prega vocal, e medialização da prega oral.

12. Uso de uma composição injetável para preenchimento dérmico como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou de um kit como definido na reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que é para aplicações cosméticas, incluindo tratamento cosmético de rugas e linhas da pele, linhas glabelares, dobras nasolabiais, dobras de queixo, linhas de marionete, linhas maxilares, comissuras bucais, rugas periorais, pés de galinha, depressões cutâneas, cicatrizes, têmporas, suporte subdérmico das sobrancelhas, coxins de gordura malares e bucais, canais lacrimais, nariz, Iábios, bochechas, queixo, região perioral, região infraorbital e assimetrias faciais.

13. Uso de composição injetável para preenchimento dér- mico como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado por ser para preparar um kit como definido na reivindicação 9 para tratamento de incontinência urinária ou estresse, refluxo vesico- uretral, insuficiência da prega vocal, e medialização da prega oral.

14. Método para preparação de uma composição injetável para preenchimento dérmico como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que compreende as seguintes etapas: (a) fornecer um gel de ácido hialurônico reticulado, (b) fornecer um gel de carboximetilcelulose, (c) misturar o gel de ácido hialurônico reticulado e o gel de carboximetilcelulose.