ES2969063T3

ES2969063T3 - Composiciones de polisacáridos reticulables in situ y usos de las mismas

Info

Publication number: ES2969063T3
Application number: ES16784397T
Authority: ES
Inventors: Andreas Krause
Original assignee: Merz Pharma GmbH and Co KGaA
Current assignee: Merz Pharma GmbH and Co KGaA
Priority date: 2015-10-16
Filing date: 2016-10-14
Publication date: 2024-05-16
Anticipated expiration: 2036-10-14
Also published as: CA3000588A1; IL258205A; WO2017063749A1; RU2018109536A; US11000467B2; RU2018109536A3; JP2022136103A; EP3156044A1; HK1254733A1; US20180318203A1; AU2016338072B2; EP3324931A1; BR112018007683A2; JP2018530547A; RU2734419C2; AR106367A1; TWI789338B; IL258205B; KR20180064390A; TW201718035A

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones de polisacáridos reticulables in situ estériles para aumentar, rellenar o reemplazar tejidos blandos en diversas aplicaciones cosméticas y terapéuticas. La composición comprende un primer derivado de polisacárido funcionalizado con un grupo nucleofílico y un segundo derivado de polisacárido funcionalizado con un grupo electrófilo. Dichos grupos funcionales nucleofílicos y electrófilos forman espontáneamente enlaces covalentes in situ después de la coinyección en el cuerpo de un paciente, dando como resultado la formación de un hidrogel reticulado en el sitio de la coinyección. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones de polisacáridos reticulablesin situy usos de las mismas

Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones de polisacáridos reticulablesin situestériles para aumentar, rellenar o reemplazar tejidos blandos en diversas aplicaciones cosméticas y terapéuticas. La composición comprende un primer derivado de polisacárido y un segundo derivado de polisacárido, en donde el primer y el segundo derivado de polisacárido son como se definen en el presente documento. Dichos grupos funcionales nucleófilos y electrófilos formanin situespontáneamente enlaces covalentes después de una inyección conjunta en el cuerpo de un paciente, dando como resultado la formación de un hidrogel reticulado en el sitio de la coinyección.

Antecedentes de la invención

Los rellenos inyectables se utilizan hoy en día en numerosas aplicaciones terapéuticas y cosméticas para añadir volumen a tejidos blandos. En la medicina estética, los rellenos dérmicos se utilizan cada vez más para el rejuvenecimiento del rostro y zonas seleccionadas del cuerpo. Permiten mejorar los rasgos faciales (p. ej., mejillas y labios), reducir las arrugas (p. ej., pliegues nasolabiales) y las líneas de expresión, y pueden restaurar parte del volumen y la elasticidad perdidos de la piel y los tejidos subyacentes que se producen con el envejecimiento. Esto hace que la piel luzca más tersa y con más volumen y, por lo tanto, proporciona una apariencia más juvenil.

Se conoce una amplia variedad de materiales para uso en rellenos de tejidos blandos. La mayoría de esos materiales tienen un efecto temporal (alrededor de tres a dieciocho meses) porque se reabsorben en el cuerpo (por ejemplo, colágeno, ácido hialurónico (HA), hidroxiapatita de calcio (CaHA) y poli(ácido L-láctico) (PLLA)). También existen algunos rellenos permanentes (es decir, no absorbibles), como un material de relleno aprobado por la FDA que se basa en perlas de polimetilmetacrilato (microesferas de PMMA). Algunos rellenos de tejidos blandos también contienen lidocaína (un agente anestésico local), cuyo objetivo es disminuir el dolor o las molestias relacionadas con la inyección. Hoy en día, el material más utilizado en rellenos de tejidos blandos a nivel mundial es el ácido hialurónico (HA, por sus siglas en inglés). Esto se debe a su excelente capacidad para crear volumen y a su perfil de seguridad favorable. El HA es un glicosaminoglicano natural presente en la matriz extracelular de, por ejemplo, la dermis y está compuesto por residuos alternos de ácido p-D-(1^-3)glucurónico (GlcUA) y p-D-(1^-4)-N-acetilglucosamina (GlcNAc). El HA puede combinarse con agua e hincharse cuando está en forma de gel, provocando un efecto suavizante/relleno. En la mayoría de los casos, el HA utilizado en los rellenos dérmicos está reticulado para que permanezca más tiempo en el cuerpo (entre seis y dieciocho meses).

En la técnica se conocen varios enfoques de reticulación para unir covalentemente las cadenas poliméricas de moléculas de polisacáridos (por ejemplo, HA) para formar una matriz de material de relleno con reticulaciones intermoleculares e intramoleculares. Un enfoque ampliamente utilizado es la reticulación química con agentes químicos. Esos agentes comúnmente reaccionan con los grupos funcionales hidroxilo y/o carboxilo del polisacárido. Los agentes reticulantes comúnmente utilizados incluyen, sin limitación, DVS (divinilsulfona), epóxidos di- o multifuncionales (p. ej., 1,4-butanodiol diglicidil éter (BODE)), 1,2-bis(2,3-epoxipropoxi)etileno (EGdGe) y 1,2,7,8-diepoxioctano (DEO)), agentes reticulantes basados en PEG (p. ej., pentaeritritol tetraglicidil éter (PETGE)), biscarbodiimidas (BCDI) (p. ej., fenilenbis-(etil)-carbodiimida y 1,6-hexametilenbis-(etilcarbodiimida)), reticulantes de diamina o multiamina (p. ej., hexametilendiamina (HMDA) y 3-[3-(3-aminopropoxi)-2,2-bis(3-amino-propoximetil)-propoxi]-propilamina (4 AA)), suberato de bis(sulfosuccinimidilo) (BS), 1-(2,3-epoxipropil)-2,3-epoxiciclohexano, epiclorhidrina, aldehídos (p. ej., formaldehído y glutaraldehído) e hidrazidas (compuestos de hidrazida bis, tris y polivalentes, por ejemplo, dihidrazida adípica (ADH)).

Otros métodos que se han empleado para la reticulación de hidrogeles de polisacáridos inyectables incluyen la reticulación fotoquímica de polímeros metacrilados (Moller et al., Int. J. Artif. Organs 2011,34:93-102), reticulación por adición de Michael (Shu et al., Biomacromolecules 2002, 3:1304-1311), reticulación por la reacción de bases de Schiff (Tan et al., Biomaterials 2009, 30:2499-2506), enfoques de química de tipo "click" que utilizan reacciones como la reacción tiol-eno o la cicloadición azida-alquino (Hoyle et al., Chem. Soc. Rev. 2010, 39:1355-1387; van Dijk et al., Bioconjug. Chem. 2009, 20:2001-2016). También se conocen en la técnica los rellenos fotorreticulados a base de polisacáridos para aumentar el tejido blando (véase, por ejemplo, el documento US 2011/069475). Además, la esterificación de funciones carboxilo de polisacáridos ácidos con grupos hidroxilo de la misma molécula de polisacárido o de una diferente, formando de ese modo reticulaciones "internas" inter y/o intramoleculares basadas en ésteres (denominado "polímero autorreticulado" o “ACP”) se ha investigado en la técnica. Además, el documento US 2006/0084759 describe un material de hidrogel de HA reticulado y modificado con tiramina, en donde la reticulación se logra mediante enlaces de ditiramina mediados por peroxidasa que se pueden realizarin vivo.

Sin embargo, los hidrogeles preformados convencionales a menudo adolecen del inconveniente de que son demasiado viscosos para inyectarlos a través de agujas finas. Por lo tanto, se han hecho muchos esfuerzos para desarrollar composiciones de hidrogeles gelificantes insitu,adecuadas para diferentes aplicaciones. Esas composiciones se inyectan en el tejido en forma líquida en lugar de en forma de gel preformado. Por ejemplo, el documento WO 95/15168 describe la síntesis de derivados de hidrazida y HA empleando química de acoplamiento EDC (1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida). La hidrazida-HA puede reticularse con agentes reticulantes homo o heterodifuncionales o de Traut para formar un hidrogel para la administración de fármacos. El documento WO 00/016818 describe la formaciónin situde un hidrogel mediante la reticulación de un derivado de HA funcionalizado con aldehído o amina (p. ej., dihidrazido-HA adípico) con un agente reticulante homo o heterobifuncional (p. ej., un agente reticulante bifuncional de éster de N-hidroxisuccinimida, tal como (SPA)<1>-PEG).

Además, el documento WO 01/40314 describe una composición de hidrogel que comprende un polisacárido oxidado, por ejemplo, un polímero de alginato con grupos aldehído (PAG), y al menos un agente reticulante que tiene dos o más grupos funcionales capaces de reticular de forma reversible el polisacárido en el sistema de hidrogel, tal como un agente reticulante de dihidrazida de ácido adípico (ADH). Además, el documento WO 2011/100469 describe un hidrogel de HA reticulado para uso como biomaterial sustituto vítreo, elaborado haciendo reaccionar HA oxidado que es portador de grupos funcionales aldehído (oxi-HA) con un agente reticulante de dihidrazida, por ejemplo, dihidrazida de ácido adípico (ADH).

Además, el documento WO 2009/108100 describe un hidrogel a base de HA preparado insitumezclando HA modificado con aldehído y un reactivo de reticulación de poli(alcohol vinílico) (PVAH), modificado con hidrazida para formar una estructura de reticulación que muestra una pluralidad de grupos hidroxilo. El documento WO 2011/069475 describe un método para preparar un derivado de aldehído-HA que contiene un grupo aldehído mediante oxidación del grupo hidroxilo primario en C6 de la unidad repetida de glucosamina, usando un sistema TEMPO (2,2,6,6-tetrametil-piperidiniloxilo)/cooxidante, y el uso de dicho derivado de aldehído-HA para preparar hidrogeles de HA reticulados mediante reacción con un compuesto de diamina (por ejemplo, hexanodiamina) o amina-HA (por ejemplo, HA sustituido con hexanodiamina).

Dahlmann et al. (Biomaterials 2013, 34:940-951) describen hidrogeles completamente definidos reticulables insitude alginato y HA para ingeniería de tejido miocárdico. Los hidrogeles se preparan haciendo reaccionar alginato y HA funcionalizado con aldehído e hidrazida en presencia de colágeno humano de tipo I y células cardíacas de rata neonata (NRHC) para proporcionar un tejido cardíaco bioartificial a base de un hidrogel reticulado de hidrazona.

Ossipov et al. (Biomacromolecules 2010, 11:2247-2254) describen la síntesis de HA funcionalizado con hidrazida utilizando un reactivo difuncional simétrico específico que tiene un grupo protector divalente central que puede sufrir una reacción de tipo amida con el residuo carboxilato de HA en solución acuosa. El HA funcionalizado con hidrazida se puede utilizar para la formaciónin situde un hidrogel de HA e hidrazona mezclando con un derivado de aldehído HA. El hidrogel resultante es adecuado para uso como vehículo de administración de factor de crecimiento para aplicaciones de ingeniería de tejidos.

Varghese et al. (J. Am. Chem. Soc. 2009, 131:8781-8783) informan sobre un derivado de HA que está doblemente funcionalizado con un grupo hidrazida y un grupo bifosfonato de aminometileno capaz de unirse covalentemente a bifosfonato (BP; un fármaco antiosteoclástico y antineoplásico de molécula pequeña). La mezcla de dicho HA doblemente funcionalizado con HA funcionalizado con aldehído da como resultado la formaciónin situde un hidrogel de HA inyectable para la liberación controlada del fármaco BP en el sitio de la implantación.

Oommen et al. (Adv. Funct. Mater 2013, 323:1273-1280) describen un hidrogel de HA preparado mezclando un derivado de aldehído y HA con un derivado de HA funcionalizado con carbodihidrazida (CDH) para obtener un hidrogel de HA con enlaces de hidrazona. Se describe además que la formaciónin situde un hidrogel de HA en presencia de una proteína terapéutica (por ejemplo, el factor de crecimiento humano recombinante BMP-2) proporciona un hidrogel para aplicacionesin vivoque es capaz de entregar factores de crecimiento para la regeneración del tejido óseo.

El documento US 2014/105960 se refiere a hidrogeles y composiciones formadoras de hidrogeles que son útiles para, entre otros, la regeneración de tejidosin vivo.También se describen métodos para generar esos hidrogeles, por ejemplo, a partir de esas composiciones formadoras de hidrogeles.

Para muchos usos clínicos, los hidrogeles de polisacáridos reticulablesin situson deseables ya que pueden inyectarse fácilmente incluso a través de una aguja fina, lo que ayuda a controlar mejor la tasa de inyección y mejora el manejo de la jeringa. Además, los hidrogeles de polisacáridos reticulablesin situpueden formarse en cualquier forma compleja y luego reticularse posteriormente, se pueden mezclar fácilmente con agentes bioactivos y/o células y se adhieren a un tejido dado durante la formación del gel.

Sin embargo, las composiciones de hidrogeles reticulablesin situexistentes no son satisfactorias porque no muestran una o más propiedades deseadas o requeridas para el fin previsto. Generalmente, una composición de hidrogel reticulable insitudebe ser biocompatible, no inmunogénica, no inflamatoria y segura. No debe reaccionar con los componentes biológicos de los tejidos circundantes ni generar subproductos dañinos, y reticularse eficientementein situdespués de la administración. Además, debería ser biodegradable pero al mismo tiempo proporcionar una persistenciain vivosuficientemente larga. Además, y lo que es más importante, un hidrogel reticulablein situse debe poder inyectar a través de una aguja fina lo que, sin embargo, requiere que la viscosidad de la composición de hidrogel reticulablein situinyectada sea suficientemente baja.

Objeto de la invención

En vista de lo anterior, el objeto de la presente invención es proporcionar una composición reticulablein situ,que se pueda extruir fácilmente a través de agujas finas y que después de la de administración formein situun hidrogel reticulado con las propiedades deseadas (por ejemplo, en términos de propiedades mecánicas, químicas, reológicas, biológicas e inmunológicas) para aumentar, rellenar o reemplazar tejidos blandos en diversas aplicaciones cosméticas y terapéuticas.

Compendio de la invención

El objetivo anterior se resuelve proporcionando dos derivados de polisacáridos funcionalizados, que forman espontáneamente reticulaciones covalentes después de la inyección en el cuerpo de un paciente (es decir, en condicionesin vivo).Los derivados de polisacáridos son como se definen en las reivindicaciones. La red de polisacáridos reticuladosin situformada de ese modo en forma de hidrogel, actúa como relleno de tejidos blandos, p. ej., un relleno dérmico. La composición de polisacáridos reticulablein situde la presente invención es ventajosa porque los dos derivados de polisacáridos funcionalizados se pueden coinyectar en forma líquida, permitiendo así una coinyección con bajas fuerzas de extrusión incluso a través de agujas finas. Deseablemente, la formación de gelin situno genera subproductos nocivos. El único subproducto es agua que es fácilmente absorbida por el hidrogel formado y/o los tejidos circundantes. además, el hidrogel formadoin situtiene las propiedades deseadas en términos de integración tisular, mejora de la piel, capacidad de dar forma al tejido y capacidad de dar volumen.

En un primer aspecto, la presente invención se refiere al uso no terapéutico de un primer derivado de polisacárido y un segundo derivado de polisacárido para la formaciónin situde un hidrogel reticulado en aplicaciones cosméticas, en donde el primer derivado de polisacárido y el segundo derivado de polisacárido son como se definen en las reivindicaciones.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un primer derivado de polisacárido tal y como se define en las reivindicaciones, preferiblemente en forma de una primera solución precursora, y un segundo derivado de polisacárido tal y como se define en las reivindicaciones, preferiblemente en forma de una segunda solución precursora, tal y como se define en este documento para la formaciónin situde un hidrogel reticulado en aplicaciones terapéuticas. Las aplicaciones o indicaciones terapéuticas incluyen, pero no se limitan a, incontinencia urinaria por estrés, sequedad vaginal, reflujo vesico-ureteral, insuficiencia de las cuerdas vocales y medialización de las cuerdas vocales.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una combinación de un primer derivado de ácido hialurónico (HA) y un segundo derivado de ácido hialurónico (HA) tal y como se definen en el presente documento, preferiblemente en forma de una primera solución precursora que comprende el primer derivado de ácido hialurónico (HA) y una segunda solución precursora que comprende el segundo derivado de ácido hialurónico (HA).

En otro aspecto adicional, la presente invención proporciona un sistema de jeringa de múltiples cilindros cargado previamente con al menos (a) una primera solución precursora, que comprende un primer derivado de polisacárido tal y como se define en el presente documento, en un cilindro y (b) una segunda solución precursora, que comprende un segundo derivado de polisacárido tal y como se define en el presente documento, en otro cilindro.

Aún en otro aspecto, la presente invención proporciona un kit para la formaciónin situde un hidrogel de polisacárido reticulado, que comprende (i) un primer recipiente que comprende una primera solución precursora de un primer derivado de polisacárido tal y como se define en el presente documento y (ii) un segundo recipiente que comprende una segunda solución precursora de un segundo derivado de polisacárido tal y como se define en el presente documento y, opcionalmente, (iii) instrucciones para el uso.

En otro aspecto adicional, la presente invención proporciona un método no terapéutico para la formaciónin situde un hidrogel de polisacárido reticulado en aplicaciones cosméticas, que comprende las etapas de:

(a) proporcionar una primera solución precursora de un primer derivado de polisacárido y, por separado, una segunda solución precursora de un segundo derivado de polisacárido, en donde el primer derivado de polisacárido está funcionalizado con un grupo nucleófilo y el segundo derivado de polisacárido está funcionalizado con un grupo electrófilo y tanto la primera como la segunda solución precursora están esterilizadas, en donde el primer y el segundo derivado de polisacárido son como se definen en las reivindicaciones,

(b) mezclar la primera solución precursora y la segunda solución precursora en una solución mixta reticulablein situ,e

(c) inyectar la solución mixta en un sitio diana en el cuerpo de un paciente, en donde el grupo nucleófilo del primer derivado de polisacárido y el grupo electrófilo del segundo derivado de polisacárido forman un enlace covalente insitupara dar como resultado la formación de un hidrogel reticulado en el sitio diana.

En otro aspecto adicional, la presente invención proporciona una combinación de un primer derivado de polisacárido y un segundo derivado de polisacárido para uso en un método para la formaciónin situde un hidrogel reticulado en aplicaciones terapéuticas, siendo el método y los derivados de polisacárido primero y segundo tal y como se definen en las reivindicaciones.

Realizaciones particulares de la presente invención se exponen en las reivindicaciones adjuntas.

Breve descripción de los dibujos

Para una comprensión más completa de la presente invención, se hace referencia a la siguiente descripción y a los dibujos acompañantes, en donde:

la FIG. 1 es una imagen que muestra el relleno masivo trapezoidal en la piel de un conejo de prueba 1 formado por el artículo de prueba 1 gelificadoin vivoen t = 0 h, después de la inyección intradérmica de 200 pL en forma de un túnel (sitio D; parte superior izquierda), dos túneles (sitio I; parte superior derecha) y en forma de cuatro bolos (sitio J; parte inferior derecha). El control de PBS (200 pL) se inyecta en el sitio E (parte inferior izquierda); y

la FIG. 2 es una imagen macroscópica que muestra la protuberancia formada por el artículo de prueba 2 en t = 4 h, después de una inyección subdérmica de 1000 pL en el conejo 2 después de la apertura de la piel.

Descripción detallada de la invención

La composición de polisacárido reticulablein situestéril de la presente invención es fácilmente inyectable a través de agujas finas con fuerzas de inyección bajas y proporciona una mejoría de la piel, un efecto de modelado de la piel o un buen efecto voluminizador. Más específicamente, la composición reticulablein situse puede aplicar convenientemente al tejido diana mediante inyección en forma de una mezcla líquida estéril de baja viscosidad generada de forma concomitante con la inyección mediante una mezcla física simple de dos soluciones precursoras estériles, conteniendo cada solución precursora un derivado de polisacárido funcionalizado diferente. Esto permite ventajosamente el uso de agujas finas, lo que a su vez mejora la conformidad del paciente (reducción del dolor tras la inyección, reducción de la contrapresión) y además permite al médico inyectar con precisión y seguridad (sin obstrucción de los vasos) el hidrogel en los sitios diana deseados, tales como diversas capas de la piel.

Además, la mezcla inyectada de las soluciones precursoras se retícula rápida y eficientementein situpara formar un hidrogel reticulado covalentemente en el sitio diana del cuerpo. No se requieren aditivos, catalizadores, cambios de pH, radiación UV ni ningún otro estímulo externo (o "desencadenante") para inducir la reacción de reticulación. En particular, no se utiliza ni se requiere ningún agente reticulante. El único subproducto generado por la reacción de reticulación suele ser agua, que el hidrogel y/o los tejidos circundantes absorben fácilmente. Además, los derivados de polisacáridos funcionalizados de la presente invención se pueden sintetizar de una manera relativamente sencilla, normalmente en una reacción de un solo paso y, ventajosamente, se pueden esterilizar convenientemente mediante esterilización por calor húmedo (por ejemplo, esterilización con vapor, preferiblemente autoclave).

Además, el hidrogel reticulado formadoin situmuestra propiedades mecánicas, químicas y reológicas favorables para un uso como material de relleno de tejido blando. En particular, tiene una alta capacidad para crear volumen. También el hidrogel reticuladoin situdel presente documento tiene un tiempo de residenciain situprolongado, sin dejar de ser biodegradable. Además, deseablemente puede incluir anestésicos (por ejemplo, lidocaína) y una variedad de otros componentes (por ejemplo, células, incluyendo células madre y adipocitos, grasas, lípidos, factores de crecimiento y vitaminas). Por lo tanto, la composición reticulablein situde la presente invención es particularmente adecuada para un uso como relleno dérmico con fines cosméticos (estéticos).

En un primer aspecto, la presente invención se refiere al uso de un primer derivado de polisacárido y un segundo derivado de polisacárido para la formaciónin situde un hidrogel reticulado en aplicaciones cosméticas. El primer derivado de polisacárido está funcionalizado con un grupo nucleófilo y el segundo derivado de polisacárido está funcionalizado con un grupo electrófilo. Además, tanto el primer como el segundo derivado de polisacárido se esterilizan. El grupo nucleófilo y el grupo electrófilo forman un enlace covalentein situdespués de la coinyección del primer y el segundo derivado de polisacárido en un sitio diana en el cuerpo de un paciente, dando como resultado la formación de un hidrogel reticulado en el sitio diana.

Tal y como se utiliza en este documento, la expresión"in situ"significa en el sitio de la administración. Por lo tanto, para formar un hidrogel en el sitio de administración, el primer y el segundo derivado de polisacárido generalmente se coinyectan o se aplican juntos de otro modo en un sitio específico (sitio diana) dentro del cuerpo de un paciente, por ejemplo, un sitio que necesita un aumento de tejido por razones estéticas, y se permite que se reticulen covalentemente en el sitio de la coinyección. Dentro de la presente invención, las expresiones "insitu"e"in vivo"pueden usarse indistintamente. Un "paciente" en el sentido de la presente invención puede ser cualquier individuo o sujeto, por ejemplo, un mamífero y, preferiblemente, un ser humano, que necesite un tratamiento de una afección, estado o enfermedad particular, por ejemplo, con fines cosméticos (estéticos) o fines terapéuticos.

Dentro del contexto de la presente invención, el término "coinyección" generalmente significa que el primer derivado de polisacárido y el segundo derivado de polisacárido se inyectan juntos como una única composición líquida, por ejemplo, una solución, en un sitio diana en el cuerpo de un paciente. El término "inyectable" o "inyección", tal como se utiliza en el presente documento, indica que la composición formadora de hidrogel insituse puede dispensar desde una jeringa o un sistema de jeringas. En particular, el término "coinyección" significa preferiblemente que el primer derivado de polisacárido y el segundo derivado de polisacárido se mezclan, en particular se mezclan de manera homogénea, antes de salir por la punta de la aguja y entrar en el sitio diana en el cuerpo de un paciente y luego se inyectan como una mezcla en un sitio diana del cuerpo de un paciente. Dentro de la presente invención, los términos "inyección" o "coinyección" pueden referirse a una inyección intradérmica, interdérmica o subdérmica o a una inyección subcutánea. Además, el término "aguja", tal como se utiliza en el presente documento, se entiende que comprende o es sinónimo de una "cánula" o cualquier otro objeto similar a una aguja adecuada para inyección.

El término "hidrogel", tal como se utiliza en el presente documento, significa una red tridimensional hinchada con agua que consiste en cadenas poliméricas reticuladas covalentemente. Preferiblemente, el hidrogel reticulado (o "gelificado")in situes cohesivo. El término "cohesivo" o "cohesividad" en el sentido de la presente invención se define como la capacidad de un material (por ejemplo, de un hidrogel) de no disociarse, debido a la afinidad de sus moléculas entre sí. La cohesividad es una característica clave de los implantes de gel (p. ej., los hidrogeles gelificados insitudescritos en el presente documento) y se considera necesaria para que la fase sólida y fluida de un gel permanezcan intactas y, por tanto, para la integridad del gel. En el contexto de la presente invención, la cohesividad de un hidrogel de polisacárido, en particular de un hidrogel basado en HA, se puede determinar usando la escala de cohesividad de Gavard-Sundaram (Sundaram et al., Plast. Reconstr. Surg. 136:678-686, 2015).

El término "espontáneo" o "espontáneamente", tal y como se usa en el presente documento, se entiende que se refiere al hecho de que el grupo nucleófilo del primer derivado de polisacárido y el grupo electrófilo del segundo derivado de polisacárido forman un enlace covalente bajo condicionesin vivo,es decir, después de la coinyección en un sitio diana del cuerpo de un paciente, sin ningún estímulo externo (también denominados "desencadenantes") como el calor o la luz ultravioleta, lo que da como resultado la formaciónin situde un hidrogel de polisacárido reticulado en el sitio diana.

Dentro de la presente invención, un hidrogel formadoin situ(oin vivo)es generalmente adecuado para, se utiliza como y/o funciona como relleno de tejido blando. La expresión "relleno de tejido blando", tal y como se usa en el presente documento, generalmente se refiere a un material diseñado para añadir volumen a áreas con falta de tejido blando. Esto incluye, p. ej., aumentar, rellenar o reemplazar tejidos blandos. En el presente documento, la expresión "tejido blando" se refiere generalmente a tejidos que conectan, sostienen o rodean otras estructuras y órganos del cuerpo. Los tejidos blandos incluyen, por ejemplo, músculos, tendones (bandas de fibra que conectan los músculos con los huesos), tejidos fibrosos, grasa, vasos sanguíneos, nervios y tejidos sinoviales (tejidos alrededor de las articulaciones). En el contexto de la presente invención, el relleno de tejido blando es preferiblemente un relleno dérmico.

El término "derivado", tal y como se usa en el presente documento, se refiere preferiblemente a un polisacárido que se ha funcionalizado con un grupo nucleófilo o un grupo electrófilo y es adecuado para la finalidad de formaciónin situ(oin vivo)de un hidrogel de polisacárido reticulado en el sitio de la administración en el cuerpo de un paciente. Preferiblemente, los derivados de polisacáridos funcionalizados de la presente invención no contienen ninguna otra modificación química aparte de un grupo nucleófilo o un grupo electrófilo.

Habitualmente, tanto el primer como el segundo derivado de polisacárido están esterilizados. El término "esterilizado" o "estéril", tal y como se usa en el presente documento, se entiende que se refiere a una esterilización térmica, en particular esterilización por calor húmedo (por ejemplo, esterilización con vapor), y preferiblemente se refiere a una esterilización en autoclave. La esterilización en autoclave se puede realizar a una temperatura de 120°C a 132°C durante 0,3 min a 20 min, o de 121°C a 130°C durante 0,5 min a 10 min, p. ej., a 121°C durante 0,5 min a 2 min.

Preferiblemente, el primer derivado de polisacárido está presente en forma de una primera solución precursora estéril y el segundo derivado de polisacárido está presente preferiblemente en forma de una segunda solución precursora estéril.

La primera y la segunda solución precursora estéril normalmente tienen una viscosidad compleja baja de 0,001 Pas a 5,0 Pas, en particular de 0,005 Pas a 3,0 Pas, preferiblemente de 0,001 P as a 1,0 Pas, más preferiblemente de 0,001 Pas a 0,1 Pas, según lo determinado por mediciones reológicas oscilatorias a 1 Hz y 25°C. Además, la primera y la segunda solución precursora pueden caracterizarse ambas por una fuerza de extrusión baja de 0,01 N a 15 N, preferiblemente de 0,1 N a 10 N, más preferiblemente de 0,5 N a 7,5 N y lo más preferiblemente de 0,01 N a 50 N o 1,0 N a 5,0 N, medida a través de una aguja de 30G (Laboratorio TSK) con una tasa de extrusión de aproximadamente 0,21 mm/s usando una jeringa de vidrio estándar de 1,0 ml (BD Hypak SCF, RF-PRTC de 1 ml de longitud, ISO 11040, diámetro interno de 6,35 mm).

Según la presente invención, el primer y el segundo derivado de polisacárido se mezclan en el curso de la coinyección para formar una composición reticulablein situlíquida que comprende una mezcla del primer y del segundo derivado de polisacárido. Normalmente, tanto el primer derivado de polisacárido como el segundo derivado de polisacárido están presentes por separado como una primera solución precursora y una segunda solución precursora, respectivamente. La mezcla de esas dos soluciones precursoras durante la inyección (o "coinyección") produce la composición reticulablein situlíquida que finalmente sale de la aguja y se implanta en el cuerpo.

La composición reticulable insitulíquida tiene preferiblemente una viscosidad compleja de 0,1 Pas a 100 Pas o de 0,1 Pas a 75 Pas o de 1,0 Pas a 75 Pas, más preferiblemente de 1 Pas a 50 Pas o de 5 Pas a 50 Pas, cuando se mide como se ha descrito anteriormente. Además, la fuerza de inyección de la composición es preferiblemente de 0,01 N a 20 N o de 0,01 a 10 N, más preferiblemente de 0,1 N a 10 N y lo más preferiblemente de 1,0 N a 5,0 N, cuando se mide como se ha descrito anteriormente.

La mezcla y la inyección (o "coinyección") se pueden lograr usando una jeringa de doble cilindro como se describe a continuación en el presente documento o cualquier otro sistema de jeringa adecuado, en donde el primer y el segundo derivado de polisacárido están separados físicamente antes de la extrusión simultánea y la mezcla concomitante y la coinyección del primer y el segundo derivado de polisacárido mezclados a través de una aguja (cánula) en el cuerpo de un paciente. Por tanto, la coinyección debe ser lo suficientemente rápida como para evitar una reticulación preliminar antes del depósito del primer y el segundo derivado de polisacárido en el sitio diana del cuerpo. Por otra parte, el tiempo de gelificación debe ser razonablemente corto para evitar una propagación del material coinyectado a los tejidos circundantes.

La cantidad del primer derivado de polisacárido presente en la primera solución precursora puede ser de 0,1% en peso a 5,0% en peso, preferiblemente de 0,5% en peso a 4,0% en peso, más preferiblemente de 1,0% en peso a 3,0% en peso y lo más preferiblemente de 1,5% en peso a 2,5% en peso, y la cantidad del segundo derivado de polisacárido presente en la segunda solución precursora puede ser de 0,1% en peso a 5,0% en peso, preferiblemente de 0,5% en peso a 4,0% en peso, más preferiblemente de 1,0% en peso a 3,0% en peso, y lo más preferiblemente de 1,5% en peso a 2,5% en peso. Además, la relación en peso entre el primer y el segundo derivado de polisacárido coinyectados es preferiblemente de 15:85 a 85:15, más preferiblemente de 30:70 a 70:30, y lo más preferiblemente de 40:60 a 60:40 o 50:50 (primer derivado a segundo derivado).

Además, la primera y/o la segunda solución precursora pueden comprender sustancias adicionales tales como células, incluidas células madre y adipocitos, grasas, lípidos, factores de crecimiento, citocinas, fármacos y agentes bioactivos. Más específicamente, la primera y/o la segunda solución precursora pueden comprender agentes anestésicos locales, polialcoholes, vitaminas, sales de metales alcalinos y alcalinotérreos, metales, antioxidantes, aminoácidos y partículas cerámicas.

Dentro del contexto de la presente invención, la adición de un anestésico local es particularmente deseable en vista de su capacidad para mitigar el dolor tras una inyección. Los agentes anestésicos locales ejemplares incluyen, pero no se limitan a, ambucaína, amolanona, amilocaína, benoxinato, benzocaína, betoxicaína, bifenamina, bupivacaína, butacaína, butamben, butanilicaína, butetamina, butoxicaína, carticaína, cloroprocaína, cocaetileno, cocaína, ciclometicaína, dibucaína, dimetisoquina, dimetocaína, diperodón, diciclomina, ecgonidina, ecgonina, cloruro de etilo, etidocaína, beta-eucaína, euprocina, fenalcomina, formocaína, hexilcaína, hidroxitetracaína, p-aminobenzoato de isobutilo, mesilato de leucinocaína, levoxadrol, lidocaína, mepivacaína, meprilcaína, metabutoxicaína, cloruro de metilo, mirtecaína, naepaína, octocaína, ortocaína, oxetazaína, paretoxicaína, fenacaína, fenol, piperocaína, piridocaína, polidocanol, pramoxina, prilocaína, procaína, propanocaína, proparacaína, propipocaína, propoxicaína, pseudococaína, pirrocaína, ropivacaína, alcohol salicílico, tetracaína, tolicaína, trimecaína, zolamina y sus sales.

Preferiblemente, el agente anestésico es lidocaína, tal como en forma de lidocaína HCl. La primera y/o la segunda solución precursora pueden tener una concentración de lidocaína, por ejemplo, del 0,05% en peso al 8,0% en peso, del 0,1% en peso al 4,0% en peso, del 0,2% en peso al 3,0% en peso, del 0,3% en peso al 2,0% en peso o del 0,4% en peso al 1,0% en peso.

Los polioles adecuados para uso en el presente documento incluyen, pero sin estar limitados a, glicerol, manitol, sorbitol, propilenglicol, eritritol, xilitol, maltitol y lactitol. Particularmente adecuados para uso en la presente invención son el manitol y el glicerol. Además, el poliol es preferiblemente glicol, opcionalmente en combinación con uno o más de los compuestos de poliol antes mencionados, en particular manitol. Las vitaminas adecuadas incluyen vitamina C, vitamina E y vitaminas del grupo B, es decir, una o varias de las vitaminas B<1>, B<2>, B<3>, B<5>, B<6>, B<7>, B<9>y B<12>. Las vitaminas pueden estar presentes para estimular y mantener el metabolismo celular y, por tanto, promover la producción de colágeno. Particularmente preferidas para uso en este documento son la vitamina C, la vitamina E y la vitamina B<6>. Una sal preferida para uso en la composición de relleno de tejido blando es una sal de zinc. Las partículas cerámicas son preferentemente partículas de hidroxiapatita, por ejemplo, partículas de hidroxilapatita de calcio (CaHA).

Dentro de la presente invención, el grupo electrófilo es un resto aldehido y el grupo nucleófilo es un resto hidrazida. La expresión "resto aldehído", tal y como se usa en el presente documento, incluye un grupo funcional aldehído (es decir, -CHO es "formilo") o cualquier grupo o residuo que tenga un grupo funcional -CHO colgante, en particular un grupo terminado en aldehído (es decir, -CHO) (por ejemplo, un grupo alquilo o alquenilo C<1>- C<6>lineal o ramificado con un grupo -CHO terminal).

El derivado de polisacárido funcionalizado con aldehído para uso en la presente invención tiene anillos de polisacárido cíclicos intactos. Esto significa que el derivado de polisacárido funcionalizado con aldehído no tiene ningún anillo abierto oxidado de las unidades de sacáridos dentro del polisacárido (también denominadas unidades de sacáridos "linealizadas"). Por tanto, cualquier método para preparar un derivado de polisacárido funcionalizado con aldehído es adecuado para uso en el presente documento, siempre que no conduzca a la apertura del anillo de las unidades de sacáridos cíclicas de los polisacáridos. Por consiguiente, el método frecuentemente utilizado de la técnica anterior para introducir grupos aldehído en polisacáridos mediante oxidación de dioles vecinales dentro de las unidades de sacáridos monoméricas mediante el uso de periodato (por ejemplo, NaIO<4>), no se utiliza y está excluido de la presente invención.

La expresión "resto hidrazida", tal y como se usa en el presente documento, incluye un grupo funcional hidrazida y grupos o residuos terminados en hidrazida, que generalmente no tienen un número total de átomos de carbono superior a 15, 10, 5, 4, 3 o 2. El resto hidrazida es preferiblemente hidrazida (es decir, [polisacárido]-C(O)-NH-NH<2>) o un resto dihidrazida, particularmente un resto dihidrazida de fórmula general

[polisacárido]-C(=O)-NH-NH-R<1>-C(=O)-NH-NH<2>

en donde R<1>= un enlace covalente, C(=O), C(=O)-O-R<2>, (C=O)-R<2>, en donde R<2>= grupo alquilo o alquenilo C<1>, C<2>, C<3>, C<4>, C<5>o C<6>lineal o ramificado. Particularmente preferida para uso en este documento es la carbodihidrazida (CDH). Si se usa CDH como resto hidrazida y se acopla con el grupo carboxilo de un polisacárido, el polisacárido modificado resultante tiene el siguiente resto colgante terminado en hidrazida: polisacárido-C(=O)-R, en donde R es NH-NH-C(=O)-NH-NH<2>.

Tanto el primer derivado de polisacárido como el segundo derivado de polisacárido están basados en ácido hialurónico.

Según la presente invención, el primer derivado de polisacárido es un (primer) derivado de ácido hialurónico (HA) funcionalizado con hidrazida y el segundo derivado de polisacárido es un (segundo) derivado de ácido hialurónico (HA) funcionalizado con aldehído. Después de la reticulaciónin situ,el derivado de HA funcionalizado con hidrazida y el derivado de HA funcionalizado con hidrazida forman un hidrogel de ácido hialurónico (HA) reticulado de hidrazona.

Todas las definiciones, explicaciones y descripciones proporcionadas anteriormente con respecto al uso del primer y del segundo derivado de "polisacárido" también se aplican al primer y al segundo derivado de ácido hialurónico (HA), a menos que se indique lo contrario. Además, cualquier referencia específica al ácido hialurónico o HA también puede incluir heparosano. En otras palabras, a lo largo de la presente solicitud, la expresión "ácido hialurónico" o "HA" puede incluir "heparosano" o puede sustituirse por "heparosano".

El resto hidrazida del derivado de ácido hialurónico (HA) funcionalizado con hidrazida y el resto aldehído del derivado de ácido hialurónico (HA) funcionalizado con aldehído se definen preferiblemente como anteriormente en el presente documento. Por tanto, el resto hidrazida es preferiblemente hidrazida o un grupo o residuo dihidrazida, en particular una carbodihidrazida (CDH) como se ha definido anteriormente. Preferiblemente, el primer derivado de HA está funcionalizado con un resto hidrazida en un grupo carboxilo de una unidad de sacárido de HA.

La modificación de los grupos carboxilo se puede llevar a cabo mediante cualquier método conocido en la técnica, usando un reactivo de acoplamiento soluble en agua. Por ejemplo, un método adecuado implica el uso de química de carbodiimida estándar, tal como el uso de EDC (1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida) como reactivo de acoplamiento, para acoplar el resto terminado en hidrazida con el grupo carboxilo para formar las correspondientes acil hidrazidas de HA (véase, por ejemplo, el documento WO 95/15168). Otros reactivos de acoplamiento utilizables son compuestos de triazina tales como DMTMM (cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolinio; véase, por ejemplo, el documento WO 2016/097211), ésteres activos tales como carbonato de N,N'-disuccinimidilo y sales de tetrametilamonio (por ejemplo, HATU).

El segundo derivado de HA se funcionaliza con un resto aldehído sin romper los anillos de sacárido cíclicos, p. ej., sin linealizar la cadena principal del HA. Tales unidades de sacárido linealizadas se generan, por ejemplo, mediante oxidación clásica de peryodato, que da como resultado la introducción de grupos aldehído en la estructura del anillo cíclico de las unidades de sacárido de HA y, por lo tanto, da como resultado de forma concomitante la rotura y la<"linealización" de la cadena principal de>H<a>.<Para más detalles, se hace referencia a las explicaciones>correspondientes expuestas anteriormente, que también se aplican en este caso.

El segundo derivado de HA se obtiene mediante la conversión de un grupo -CH<2>OH en un grupo -CHO y, particularmente, el derivado de HA funcionalizado con aldehído se modifica preferiblemente porque el grupo hidroxilo en C6 de la unidad de N-acetilglucosamina de HA se oxida para dar como resultado un grupo funcional formilo (-CHO).

Un método adecuado para la modificación posterior se describe, por ejemplo, en el documento WO 2011/069475 usando TEMPO (2,2,6,6-tetrametil-1-piperidiniloxi) como oxidante para convertir un grupo alcohol primario en un aldehído.

La composición de HA reticulable¡n situlíquida que entra en el cuerpo de un paciente, es decir, la mezcla de las dos soluciones precursoras, contiene preferiblemente una cantidad total de derivados de HA funcionalizados con hidrazida y aldehído desde 0,1% en peso a 5,0% en peso, y/o la relación en peso entre el derivado de HA funcionalizado con hidrazida y el derivado de HA funcionalizado con aldehído está preferiblemente en el intervalo de 15:85 a 85:15. Con respecto a los intervalos preferidos de dicha cantidad total y dicha relación en peso, se hace referencia a los comentarios expuestos anteriormente con respecto a los polisacáridos, que se aplican igualmente al ácido hialurónico como polisacárido preferido.

Según la presente invención, la cantidad total de derivados de HA funcionalizados con hidrazida y aldehído presentes en la composición líquida es preferiblemente de 0,1% en peso a 5,0% en peso, en particular de 0,5% en peso a 4,0% en peso, más preferiblemente de 1,0% en peso a 3,0% en peso y lo más preferiblemente de 1,5% en peso a 2,5% en peso. Además, la relación en peso entre el derivado de HA funcionalizado con hidrazida y el derivado de HA funcionalizado con aldehído es preferiblemente de 15:85 a 75:25, más preferiblemente de 25:75 a 60:40, particularmente preferible de 40:60 a 60:40 y lo más preferiblemente de 50:50.

El derivado de HA funcionalizado con hidrazida y el derivado de HA funcionalizado con aldehído, independientemente cada uno, están preparados o basados en un material de partida de HA que tiene un peso molecular promedio de 3,0 x 104 a 5,0 x 106 Da, más preferiblemente de 0,1 x 106 a 4,0 x 106 Da, y lo más preferiblemente de 0,3 x 106 a 3,0 x 106 Da o de 0,5 x 106 a 2,0 x 106 Da. Tal como se utiliza en el presente documento, la expresión "ácido hialurónico" o "HA" incluye ácido hialurónico, hialuronato y cualquier sal hialuronato tal como hialuronato de sodio.

La primera y/o la segunda solución precursora pueden comprender además HA no reticulado, teniendo el HA no reticulado preferentemente un peso molecular de entre 5,0 x 105 y 4,0 x 106 Da, preferiblemente entre 1,0 x 106 Da y 3,0 x 106 Da. La relación en peso entre el HA reticulado y el hA no reticulado puede estar entre 1:1 y 1:0,001, en particular entre 1:0,5 y 1:0,005 o entre 1:0,1 y 1:0,01.

El grado de modificación del derivado de HA funcionalizado con hidrazida y el derivado de HA funcionalizado con aldehído, expresado como la relación entre la suma de restos hidrazida o de restos aldehído y la suma de unidades de disacárido de HA puede estar, independientemente uno de otro, en el intervalo desde el 0,1% al 50%, preferentemente del 0,5% al 25%, del 0,5% al 15% o del 0,5% al 5,0%. El grado de modificación se puede determinar mediante métodos analíticos de espectrometría y/o espectroscopía, tales como RMN, UV-VIS e RI, titulación, HPLC, SEC, viscosidad, entre otros. Convenientemente, el grado de modificación puede determinarse mediante 1H-RMN.

Todas las cantidades en este documento que expresan "peso molecular", "masa molecular", "peso molecular medio" o "masa molecular media" de polisacáridos (por ejemplo, HA) deben entenderse que indican la masa molar promedio en masa (o masa molecular promedio en masa) o M(p es para peso; también denominado peso molecular promedio ponderado (PMPP)) en Daltons (Da). La masa molar promedio (M<m>) se define de la siguiente manera: M<m>= ZNM<i2>/ZNM, en donde Nes el número de moléculas de masa molecular M.

Se pueden aplicar diversos métodos en el presente documento para determinar el peso molecular de HA, tales como mediciones de la viscosidad intrínseca (p. ej., European Pharmacopoeia 7.0 - Hyaluronic Acid monograph núm. 1472, 01/2011), electroforesis capilar (CE) (p. ej., según Kinoshita et al., Biomed. Chromatogr., 2002, 16:141-45), cromatografía de permeación en gel (GPC) (p. ej., según Kim et al., Food Chem., 2008, 109:63-770) y dispersión de luz láser de múltiples ángulos combinada con cromatografía de exclusión por tamaño (SEC-MALLS) (p. ej., según Hokputsa et al., Eur. Biophys. J. Biophys. Lett., 2003, 32:450-456).

En el marco de la presente invención, la masa molar promedio (M) de los polímeros de HA se determina preferentemente mediante cromatografía de permeación en gel (GPC) o viscometría mediante la ecuación de Mark-Houwink. La técnica de GPC implica forzar una solución polimérica a través de una matriz de partículas poliméricas reticuladas a una presión de hasta varios cientos de bares. Como bien sabe un experto, el uso de estándares de baja dispersidad permite correlacionar el tiempo de retención con la masa molecular.

La masa molar promedio (M) determinada mediante la ecuación de Mark-Houwink también puede referirse a la masa molar promedio de viscosidad o M<v>. La ecuación de Mark-Houwink proporciona una relación entre la viscosidad intrínseca (n) y el peso molecular M y permite la determinación del peso molecular de un polímero a partir de datos sobre la viscosidad intrínseca y viceversa. En el contexto de la presente invención, la viscosidad intrínseca se mide preferiblemente según el procedimiento definido en European Pharmacopoeia 7.0 (Hyaluronic Acid monograph núm.

1472, 01/2011). Para calcular el peso molecular del HA a partir de los datos de viscosidad intrínseca, en el presente documento se utiliza la siguiente ecuación de Mark-Houwink:

en donde [r|] = viscosidad intrínseca en m3/kg, M = peso molecular, K = 2,26 x 10-5 y a = 0,796.

Según la presente invención, las aplicaciones cosméticas pueden incluir, pero sin estar limitadas a, el tratamiento de arrugas y líneas de expresión de la piel, líneas glabelares, pliegues nasolabiales, pliegues del mentón, líneas de marioneta, líneas mandibulares, comisuras bucales, arrugas periorales, patas de gallo, depresiones cutáneas, cicatrices, sienes, soporte subdérmico de las cejas, almohadillas de grasa malar y bucal, surcos lagrimales, nariz, labios, mejillas, mentón, región perioral, región infraorbitaria y asimetrías faciales.

Las aplicaciones terapéuticas a las que se dirige la presente invención incluyen, pero sin estar limitadas a, el tratamiento de la incontinencia urinaria por estrés, la sequedad vaginal, el reflujo vesicoureteral, la insuficiencia de las cuerdas vocales y la medialización de las cuerdas vocales.

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a una combinación de un primer derivado de ácido hialurónico (HA) y un segundo derivado de ácido hialurónico (HA) tal y como se definen en el presente documento, en donde el primer derivado de HA está funcionalizado con un resto hidrazida y el segundo derivado de HA está funcionalizado con un resto aldehído, y en donde dicho resto hidrazida y dicho resto aldehído son capaces de formar un enlace covalentein situ,p. ej., en condicionesin vivo.

Preferiblemente, el primer derivado de ácido hialurónico (HA) está en forma de una primera solución precursora y el segundo derivado de ácido hialurónico (HA) está en forma de una segunda solución precursora.

El derivado de HA funcionalizado con hidrazida, el HA funcionalizado con aldehído, la primera y la segunda solución precursora estéril, y la formación insitude un hidrogel de ácido hialurónico (HA) reticulado de hidrazona pueden definirse además como se han definido anteriormente en el presente documento.

En otro aspecto adicional, la presente invención se refiere a un sistema de jeringa de múltiples cilindros para la formación insitude un hidrogel de polisacárido reticulado, en donde la jeringa de múltiples cilindros está precargada con al menos (a) una primera solución precursora de un primer derivado de polisacárido funcionalizado con un grupo nucleófilo como se describe en el presente documento en un cilindro y (b) una segunda solución precursora de un segundo derivado de polisacárido funcionalizado con un grupo electrófilo como se describe en el presente documento en otro cilindro (es decir, separado). Tanto la primera como la segunda solución precursora son, como se han descrito anteriormente, estériles.

Específicamente, la presente invención se refiere a un sistema de jeringa de múltiples cilindros, preferiblemente un sistema de doble o triple cilindro, precargado con al menos (a) una primera solución precursora (estéril) de un primer derivado de polisacárido funcionalizado con un grupo nucleófilo tal y como se ha definido en el presente documento en un cilindro y (b) una segunda solución precursora (estéril) de un segundo derivado de polisacárido funcionalizado con un grupo electrófilo tal y como se ha definido en el presente documento en otro cilindro (separado), y opcionalmente, una solución con componentes adicionales (por ejemplo, grasa, ácidos grasos, células madre, vitaminas, polioles, sales minerales, agentes anestésicos como lidocaína, antioxidantes, aminoácidos, sales de metales alcalinos y alcalinotérreos) en un tercer cilindro opcionalmente presente. Preferiblemente, el sistema de jeringa es un sistema de jeringa de doble cilindro precargado con (a) una primera solución precursora tal y como se ha definido en el presente documento y (b) una segunda solución precursora tal y como se ha definido en el presente documento en el otro cilindro.

El primer y el segundo derivado de polisacárido, los grupos nucleófilos y electrófilos, la primera y la segunda solución precursora estéril y el hidrogel de polisacárido reticulado formado insitu,pueden definirse además como se han definido anteriormente en el presente documento. Además, el sistema de jeringa de varios cilindros, incluido el sistema de jeringa de dos cilindros, es adecuado para uso en aplicaciones cosméticas o terapéuticas, en particular para reemplazar o rellenar un tejido biológico o aumentar el volumen de un tejido biológico con el fin de aplicaciones cosméticas o terapéuticas, como se ha definido en el presente documento o, particularmente preferido, para uso como relleno dérmico en usos estéticos.

La expresión "sistema de múltiples cilindros", tal y como se usa en el presente documento, se entiende que significa cualquier sistema o dispositivo, generalmente una jeringa, que comprende al menos dos cilindros separados y puede tener dos o más émbolos. La expresión "sistema de jeringa de doble cilindro", tal y como se usa en el presente documento, se entiende que significa cualquier sistema o dispositivo, generalmente una jeringa, que comprende dos cilindros separados y puede tener uno o dos émbolos. Además, el multicilindro, p. ej., el sistema de jeringa de doble cilindro, generalmente comprende una tapa de la punta, o una aguja o cánula con o sin protector de aguja, para sellar el o los extremos del sistema de jeringa. Los cilindros generalmente tienen capacidad de almacenamiento para contener una cantidad suficiente de las soluciones precursoras primera y segunda. Los cilindros pueden estar producidos a base de vidrio, plástico o cualquier otro material adecuado y pueden tener diferentes geometrías, diámetros internos, composiciones de materiales, claridad, etc. Además, el sistema de jeringa de múltiples cilindros puede ser un sistema de jeringa de doble cilindro en forma de una jeringa que tiene dos jeringas conectadas integralmente, es decir, dos cilindros conectados integralmente, y un conjunto de émbolo mono o doble para dispensar el contenido de los cilindros. Además, el sistema de jeringa puede incluir dos cilindros conectados de forma desmontable y uno o dos émbolos conectados de forma desmontable.

Además, el sistema de jeringa también puede incluir medios (por ejemplo, una punta aplicadora) configurados para mezclar completamente los componentes contenidos en los cilindros antes de dispensarlos a través de la punta aplicadora. Por lo tanto, los cilindros generalmente están conectados, y el conjunto de émbolos generalmente está configurado para dispensar el contenido de los cilindros simultáneamente, de modo que se conserven las proporciones de mezcla apropiadas de las soluciones precursoras.

Preferiblemente, el sistema de jeringa de múltiples cilindros, incluido el sistema de jeringa de doble cilindro, es para la formaciónin situde un hidrogel de ácido hialurónico (HA) reticulado de hidrazona, en donde la jeringa de doble cilindro está precargada con (a) una primera solución precursora de un derivado de ácido hialurónico (HA) funcionalizado con hidrazida en un cilindro y (b) una segunda solución precursora de un derivado de HA funcionalizado con aldehido en otro cilindro por separado. El derivado de HA funcionalizado con hidrazida, el derivado de HA funcionalizado con aldehido, la primera y la segunda solución precursora estéril, y la formaciónin situde un hidrogel de ácido hialurónico (HA) reticulado de hidrazona son preferiblemente como se han definido anteriormente en el presente documento.

Aún en otro aspecto, la presente invención se refiere a un kit para la formaciónin situde un hidrogel de polisacárido reticulado, que comprende (i) un primer recipiente que comprende una primera solución precursora estéril de un primer derivado de polisacárido como se ha definido en el presente documento que está funcionalizado con un grupo nucleófilo y (ii) un segundo recipiente que comprende una segunda solución precursora estéril de un segundo derivado de polisacárido como se ha definido en el presente documento que está funcionalizado con un grupo electrófilo y, opcionalmente, (iii) instrucciones de uso.

El primer y el segundo derivado de polisacárido, los grupos nucleófilos y electrófilos, la primera y la segunda solución precursora estéril y el hidrogel de polisacárido reticulado formadoin situpueden definirse además tal y como se han definido anteriormente en el presente documento. El término "recipiente", tal y como se utiliza en el presente documento, no está particularmente limitado e incluye, por ejemplo, botellas, viales, cárpulas o cualquier otro recipiente sellado de vidrio o plástico.

Las "instrucciones de uso" son preferiblemente instrucciones de uso en aplicaciones cosméticas o terapéuticas, en particular para reemplazo o relleno de un tejido biológico o el aumento del volumen de un tejido biológico con fines de aplicaciones cosméticas o terapéuticas, tal y como se define en el presente documento o, particularmente preferido, instrucciones de uso como relleno dérmico en usos estéticos.

Preferiblemente, el kit es para la formaciónin situde un hidrogel de ácido hialurónico (HA) reticulado de hidrazona, que comprende (i) un primer recipiente que comprende una primera solución precursora estéril de un derivado de HA funcionalizado con hidrazida y (ii) un segundo recipiente que comprende una segunda solución precursora estéril de un HA funcionalizado con aldehido y, opcionalmente, (iii) instrucciones de uso. El derivado de HA funcionalizado con hidrazida, el derivado de HA funcionalizado con aldehido, la primera y la segunda solución precursora estéril, la formaciónin situde un hidrogel de ácido hialurónico (HA) reticulado de hidrazona, puede definirse además como se han definido anteriormente en este documento, particularmente tal y como se han definido en relación con el primer aspecto de la presente invención. Opcionalmente, el kit puede comprender una tercera solución estéril que comprende componentes adicionales como los mencionados en relación con el sistema de jeringa de múltiples cilindros.

En otro aspecto adicional, la presente invención proporciona un método no terapéutico para la formaciónin situde un hidrogel reticulado en aplicaciones cosméticas, que comprende las etapas de:

(a) proporcionar una primera solución precursora de un primer derivado de polisacárido y, por separado, una segunda solución precursora de un segundo derivado de polisacárido, en donde el primer derivado de polisacárido está funcionalizado con un grupo nucleófilo y el segundo derivado de polisacárido está funcionalizado con un grupo electrófilo, y tanto la primera como la segunda solución precursora están esterilizadas,

(c) inyectar la solución mixta en un sitio diana en el cuerpo de un paciente, en donde el grupo nucleófilo del primer derivado de polisacárido y el grupo electrófilo del segundo derivado de polisacárido forman un enlace covalentein situpara dar como resultado la formación de un hidrogel reticulado en el sitio diana.

La mezcla y la inyección se pueden llevar a cabo usando un sistema de jeringa tal y como se ha definido en el presente documento, que generalmente permite mezclar física, de forma preferible homogéneamente, ambos componentes (es decir, la primera y la segunda composición precursora) antes de dispensarlos desde la aguja (cánula). El término "homogéneo", tal y como se usa en el presente documento, significa mezclado, dispersado o diluido uniformemente en toda la mezcla, dispersión o solución, o se refiere a un material con estructura y/o composición uniforme en toda su extensión.

En otro aspecto más, la presente invención proporciona una combinación de un primer derivado de polisacárido y un segundo derivado de polisacárido para uso en un método para la formaciónin situde un hidrogel reticulado en aplicaciones terapéuticas, siendo el método y los derivados de polisacárido primero y segundo tal y como se definen en las reivindicaciones.

La presente invención se ilustrará ahora con más detalle mediante los siguientes ejemplos no limitantes.

Ejemplos

Los ejemplos proporcionados a continuación ilustran la preparación de un hidrogel de ácido hialurónico (HA) reticulable insituy muestran en pruebas con animales que el hidrogel es un material de relleno prometedor para diversas aplicaciones cosméticas y terapéuticas. Además, los ejemplos muestran que la composición de HA reticulablein situse puede inyectar fácilmente a través de agujas finas sin ejercer una fuerza indebida, al mismo tiempo que proporciona las propiedades mecánicas y reológicas deseables (es decir, viscosidad compleja (n*), módulo de almacenamiento (G'), módulo de pérdida (G") y tangente de pérdida (tan8)) para aumentar los tejidos biológicos.

Medición de la fuerza de extrusión

La fuerza de extrusión (fuerza de inyección) se midió por medio de un analizador de textura (TA.XTP/us, Texture Technologies, Corp.) equipado con una jeringa de vidrio de 1,0 ml (BD Hypak SCF, RF-PRTC de 1 ml de longitud, ISO 11040, diámetro interno de 6,35 mm) y una aguja de 30G (Laboratorio<t>S<k>). La fuerza de extrusión se midió utilizando una velocidad de prueba de 0,21 mm/s en una distancia de 25 mm (modo objetivo: distancia; fuerza: 100,0 g). Las velocidades antes y después de la prueba eran 0,21 mm/s y 10,0 mm/s, respectivamente. La fuerza desencadenante era de 2,0 g (tipo de desencadenante: automático (fuerza)) y la tensión era del 10,0%. La fuerza promedio después de alcanzar una meseta se tomó como fuerza de extrusión.

Medición de la viscosidad compleja (q*) y los módulos de almacenamiento y pérdida (G' y G")

La viscosidad compleja (n*) y los módulos de almacenamiento y pérdida (G' y G") se midieron a 25°C utilizando un reómetro (Anton Paar Physica MCR 302 Rheometer, Anton Paar GmbH) equipado con una geometría de placa cónica (50 mm de diámetro, ángulo de 0,1°, CP50-1, tamaño de hueco 0,1 mm). Las muestras se hicieron oscilar con una tensión de 1 Pa y la frecuencia de oscilación variaba de 0,1 a 10 Hz.

En los ejemplos siguientes, el término "equivalente" o "eq." tal y como se usa en el presente documento, se refiere a unidades repetidas de disacárido de ácido hialurónico, a menos que se indique lo contrario. Los porcentajes son porcentajes en peso, salvo que se indique lo contrario.

Ejemplo 1

Síntesis del derivado de HA-aldehído (HA-Ald)

El derivado de HA funcionalizado con aldehido se preparó mediante oxidación selectiva del grupo hidroxilo C6 primario de la unidad de N-acetilglucosamina (GlcNAc) de HA según el método descrito en el documento WO 2011/069475 (véase, por ejemplo, el Ejemplo 1). Resumiendo, el ácido hialurónico (HA) (PM = 1,0 x 106 Da) se oxidó usando el sistema TEMPO/co-oxidante (TEMPO, 2,2,6,6-tetrametil-1 -piperidiniloxi). Después de una diálisis, la solución se liofilizó para proporcionar HA funcionalizado con aldehido (en lo sucesivo denominado "HA-Ald").

Ejemplo 2

Síntesis del derivado de HA-hidrazida (HA-Hid)

Se disolvió HA (6000,0 mg, 14,9 mmol de unidades repetidas de disacárido) en 700,0 ml de agua desionizada a temperatura ambiente durante 12 h. Se añadió HOBt (2289,3 mg, 14,9 mmol) y después se añadió EDC (1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida sólida (1428,9 mg, 7,84 mmol). El pH se ajustó a 5,5 - 6,5 y la solución se agitó durante 1 h. A continuación, se añadió carbohidrazida (CDH; 4043,5 mg, 44,88 mmol) y se continuó la agitación durante 10 h a temperatura ambiente.

Después, la solución precipitó en 5,0 L de isopropanol y el precipitado se recogió, se solubilizó en solución salina y se cargó en una bolsa de diálisis (Spectra Por-6, MWCO 3500). El precipitado se dializó frente a agua destilada que contenía NaCl 0,1 M (2 x 2 L, 48 h), luego se dializó frente a solución salina (2 x 2 L, 24 h). Finalmente, la solución se liofilizó para proporcionar de 5000 mg a 5500 mg de derivado de HA-hidrazida (en lo sucesivo denominado "HA-Hid").

Ejemplo 3

Formación y caracterización de un hidrogel de HA

Se prepararon hidrogeles de HA a temperatura ambiente (aproximadamente 25°C) mezclando cantidades iguales de derivado de HA-aldehído esterilizado con vapor (131°C, 0,7 min) del Ejemplo 1 ("HA-Ald") y derivado de HA-hidrazina del Ejemplo 2 ("HA-Hid") esterilizado con vapor (131°C, 0,7 min). Los derivados de HA-Ald y HA-Hid se disolvieron por separado en PBS estéril, pH de 6,5 a 7,5, cada uno a una concentración de 15 mg/ml y 24,5 mg/ml, respectivamente. Luego, se cargó 1,0 ml de cada una de las soluciones precursoras de HA-Ald y HA-Hid (por separado para cada una de las concentraciones de 15 mg/ml y 24,5 mg/ml) en una jeringa Luer-lock de 1 ml con una relación en volumen de 1:1. Cada una de las dos jeringas utilizadas estaba conectada en cada punta a un conector en Y para permitir una mezcla eficaz de las dos soluciones precursoras simultáneamente con la extrusión a través de la aguja.

La fuerza de extrusión promedio medida y las propiedades reológicas (n*,G', G" y tan(8)) de las soluciones precursoras estériles y de la mezcla de las soluciones precursoras estériles se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1. Fuerza de extrusión y propiedades reológicas (n*,G', G" y tan(S)) de las soluciones precursoras estériles y de la mezcla de soluciones precursoras

Como se puede observar en la T abla 1, la fuerza de extrusión y la viscosidad compleja tanto de la solución precursora de HA-Hid como de la solución precursora de HA-Ald son muy bajas, lo que indica el estado líquido (no gel) de las soluciones precursoras. Además, se encontró que la mezcla de las dos soluciones precursoras tenía una fuerza de extrusión de solo aproximadamente 5 N, que es aproximadamente la suma de cada solución precursora (15 mg/ml) inmediatamente después de la extrusión desde jeringas separadas a través de una aguja fina de 30G. En consecuencia, la solución precursora mixta se inyecta mucho más fácilmente que en comparación con una composición de relleno dérmico en forma de un hidrogel preformado.

Se prepararon hidrogeles de HA reticulados¡n situen placas de Petri a partir de las soluciones precursoras de 15 mg/ml y 24,5 mg/ml, respectivamente, indicadas en la Tabla 1. Como duración adecuada y suficiente de la reticulación para obtener el estado de gel final, un período de aproximadamente 30 min se determinó mediante reología. Las propiedades reológicas (n*, G', G" y tan(S)) de los hidrogeles se evaluaron 30 minutos después de mezclar las dos soluciones precursoras, usando un reómetro Anton Paar como se ha descrito anteriormente. Los resultados se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2. Propiedades reológicas (n*, G', G" y tan(S)) de dos hidrogeles de HA que varían en sus concentraciones de HA-Hid y HA-Ald

Como se muestra en la Tabla 2, el hidrogel reticulablein situmuestra propiedades reológicas que son comparables a otros rellenos disponibles comercialmente que se preforman y luego se inyectan a un paciente. Además, los hidrogeles reticulables insitusometidos a ensayo son ambos cohesivos, como lo indica una puntuación igual o superior a 3 en la escala de cohesividad de Gavard-Sundaram.

Ejemplo 4

Pruebas con animales para establecer una prueba de concepto

Estudio preliminar en animales

Las dos formulaciones proporcionadas en la Tabla 2 se usaron para la formaciónin vivode hidrogeles en conejos. El primer hidrogel ("Artículo de prueba 1") se generó mediante la coinyección (1:1 v/v) de solución precursora de HA-Hid (15 mg/ml) y solución precursora de HA-Ald (15 mg/ml) en la piel del conejo. El segundo hidrogel ("Artículo de prueba 2") se generó mediante la coinyección (1:1 v/v) de solución precursora de HA-Hid (24,5 mg/ml) y solución precursora de HA-Ald (24,5 mg/ml) en la piel del conejo.

Dependiendo de la profundidad de la inyección, se inyectó un volumen de 100 pL a 1000 pL en diferentes capas de la piel de los conejos mediante inyecciones intradérmicas (ID) y subdérmicas (SD), y se compararon con dos rellenos dérmicos comercializados (Artículo de control 1: Belotero Balance; Artículo de control 2: Belotero Volume). Se utilizó solución salina tamponada con fosfato (PBS) como control negativo. Los resultados son visibles en las FIGs. 1 y 2.

Como se puede observar en la FIG. 1, el artículo de prueba 1 aparece como una masa irregular trapezoidal en la dermis después de la inyección intradérmica, tal y como se encuentra clásicamente con los rellenos a base de HA. Además, como también se puede observar, el tipo de inyección (es decir, inyecciones en bolo, en un túnel y en dos túneles) no produce ninguna diferencia morfológica. Se encontraron esencialmente los mismos resultados para el artículo de prueba 2. Además, pruebas adicionales han mostrado que una inyección intradérmica de diferentes volúmenes de los artículos de prueba 1 y 2 no conduce a diferencias relevantes en la distribución del artículo de prueba (resultados no mostrados).

La FIG. 2 es una imagen macroscópica de un "bulto" o "protuberancia" formada por el artículo de prueba 2 reticuladoin vivoen t = 4 h. Como se puede observar, el artículo de prueba 2 proporciona un efecto de estiramiento varias horas después de la inyección. En comparación, una solución salina desaparece por completo en ese tiempo. Lo mismo se observó con el artículo de prueba 1. La protuberancia obtenida después de la reticulaciónin vivoes similar a la protuberancia obtenida después de la inyección de rellenos que tienen perfiles reológicos similares a los de rellenos comerciales preformados (por ejemplo, la gama de rellenos de Belotero® (Merz Aesthetics)).

En conclusión, las inyecciones intradérmicas y subdérmicas de cantidades variables de los artículos de prueba 1 y 2 proporcionaban el efecto de estiramiento deseado y no se asociaban con ningún efecto histopatológico adverso en la piel del conejo.

Estudio de seguimiento de 12 semanas en animales

Se llevó a cabo un estudio de 12 semanas en conejos para determinar la gravedad de las reacciones cutáneas después de la inyección intradérmica (ID) del artículo de prueba 1 mencionado anteriormente y la inyección subcutánea (SC) del artículo de prueba 2 mencionado anteriormente. Se compararon las respuestas frente al artículo de control 1 inyectado ID (Belotero Balance) y al artículo de control 2 inyectado SC (Belotero Volume Lidocaína). Cuatro semanas después de las inyecciones, los sitios se observaron macroscópicamente y se analizaron histopatológicamente para evaluar las reacciones cutáneas de cada artículo. Todos los sitios se observaron macroscópicamente después de la inyección, después diariamente durante cinco días y luego semanalmente hasta la finalización.

Sorprendentemente se encontró que los dos artículos de prueba (relleno de HAin vivo)formaban gránulos y espículas muy pequeños que se infiltraban entre las fibras de colágeno dérmico. Los artículos de control (Belotero Balance y Belotero Balance Lidocaína) formaban gránulos y lagos más grandes que llenaban grandes espacios en la dermis y no infiltraban el colágeno dérmico. En otras palabras, el relleno de HAin vivolograba una infiltración del tejido sustancialmente mejor que Belotero Balance (integración tisular completa frente a relleno local) aunque Belotero Balance es conocido por su excelente capacidad de integración tisular (Flynn et al., Comparative histology of intradermal implantation of mono and biphasic hyaluronic acid fillers, Dermatol Surg. 2011, 37:637-643; y Micheels et al., Superficial dermal injection of hyaluronic acid soft tissue fillers: comparative ultrasound study, Dermatol Surg. 2012, 38:1162-1169).

En resumen, el estudio de 12 semanas en conejos mostraba la capacidad para comparar el relleno de HAin vivode la presente invención frente a rellenos dérmicos comerciales. Mostraba además que el relleno de HA in vivo proporciona características únicas, como una infiltración tisular mejorada que da como resultado una integración tisular completa en lugar de un relleno local. Estos resultados indican firmemente el potencial del relleno de HAin vivode la presente invención para aumentar, rellenar o reemplazar tejidos blandos en diversas aplicaciones cosméticas y terapéuticas.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Uso no terapéutico de un primer derivado de polisacárido y un segundo derivado de polisacárido para la formaciónin situde un hidrogel reticulado en aplicaciones cosméticas, en donde el primer derivado de polisacárido está funcionalizado con un grupo nucleófilo y el segundo derivado de polisacárido está funcionalizado con un grupo electrófilo, y tanto el primer como el segundo derivado de polisacárido están esterilizados, y en donde el grupo nucleófilo y el grupo electrófilo forman un enlace covalentein situdespués de una coinyección del primer y del segundo derivado de polisacárido en un sitio diana en el cuerpo de un paciente, dando como resultado la formación de un hidrogel reticulado en el sitio diana, en donde el primer derivado de polisacárido es un primer derivado de ácido hialurónico (HA) funcionalizado con hidrazida y el segundo derivado de polisacárido es un segundo derivado de ácido hialurónico (HA) funcionalizado con aldehído, y en donde el segundo derivado de HA está funcionalizado con un resto aldehído preparado mediante conversión de un grupo -CH<2>OH en un grupo -CHO.

2. El uso según la reivindicación 1, en donde la formaciónin situde un enlace covalente se produce espontáneamente tras una coinyección y/o en donde la formaciónin situde un enlace covalente no da como resultado la liberación de ningún otro subproducto salvo agua.

3. El uso según la reivindicación 1 o 2, en donde el primer derivado de polisacárido está presente en forma de una primera solución precursora estéril y el segundo derivado de polisacárido está presente en forma de una segunda solución precursora estéril.

4. El uso según la reivindicación 3, en donde la primera y la segunda solución precursora estéril cada una tiene una viscosidad compleja de 0,001 P as a 5,0 Pas, según se determina mediante mediciones reológicas oscilatorias a 1 Hz y 25°C, o cada una tiene una fuerza de inyección de 0,01 N a 15 N, tal y como se mide a través de una aguja de 30G con una tasa de extrusión de 0,21 mm/s usando una jeringa de vidrio de 1,0 ml, o ambas.

5. El uso según la reivindicación 3 o 4, en donde la primera solución precursora y la segunda solución precursora se mezclan durante la coinyección pero antes de entrar en el cuerpo del paciente para formar una composición reticulablein situlíquida, y en donde dicha composición reticulablein situlíquida tiene preferiblemente una viscosidad compleja de 0,1 Pas a 100 Pas, tal y como se determina mediante mediciones reológicas oscilatorias a 1 Hz y 25°C, o tiene una fuerza de inyección de 0,01 N a 20 N, tal y como se mide a través de una aguja de 30G con una tasa de extrusión de 0,21 mm/s usando una jeringa de vidrio de 1,0 ml, o ambas.

6. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, en donde la concentración del primer derivado de polisacárido presente en la primera solución precursora es de 0,1% en peso a 5,0% en peso, y la concentración del segundo derivado de polisacárido presente en la segunda solución precursora es de 0,1% en peso a 5,0% en peso, y/o en donde la relación en peso entre el primer derivado de polisacárido y el segundo derivado de polisacárido comprendidos en la composición reticulablein situlíquida que se inyecta en un sitio diana en el cuerpo de un paciente, es de 15:85 a 85:15.

7. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el primer derivado de HA está funcionalizado con un resto hidrazida en un grupo carboxilo de una unidad de sacárido de HA.

8. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la composición reticulablein situse utiliza en el tratamiento de arrugas y líneas de expresión de la piel, líneas glabelares, pliegues nasolabiales, pliegues del mentón, líneas de marioneta, líneas mandibulares, comisuras bucales, arrugas periorales, patas de gallo, depresiones cutáneas, cicatrices, sienes, soporte subdérmico de las cejas, almohadillas de grasa malar y bucal, surcos lagrimales, nariz, labios, mejillas, mentón, región perioral, región infraorbitaria y asimetrías faciales.

9. Un primer derivado de polisacárido y un segundo derivado de polisacárido según se definen en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para uso en la formaciónin situde un hidrogel reticulado en aplicaciones terapéuticas, en particular para uso en el tratamiento de la incontinencia urinaria por estrés, sequedad vaginal, reflujo vesicoureteral, insuficiencia de las cuerdas vocales y medialización de las cuerdas vocales.

10. Una combinación de un primer derivado de ácido hialurónico (HA) y un segundo derivado de ácido hialurónico (HA) tal y como se definen en la reivindicación 1.

11. La combinación según la reivindicación 10, en donde el primer derivado de HA está funcionalizado con un resto hidrazida en un grupo carboxilo de una unidad de sacárido de HA.

12. Un sistema de jeringa de múltiples cilindros precargado con al menos (a) una primera solución precursora tal y como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7 en un cilindro y (b) una segunda solución precursora tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7 en otro cilindro.

13. Un kit para la formaciónin situde un hidrogel de polisacárido reticulado, que comprende (i) un primer recipiente que comprende una primera solución precursora tal y como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7 y (ii) un segundo recipiente que comprende una segunda solución precursora tal y como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7 y, opcionalmente, (iii) instrucciones de uso.

14. Un método no terapéutico para la formaciónin situde un hidrogel reticulado en aplicaciones cosméticas, que comprende las etapas de:

(c) inyectar la solución mixta en un sitio diana en el cuerpo de un paciente, en donde el grupo nucleófilo del primer derivado de polisacárido y el grupo electrófilo del segundo derivado de polisacárido forman un enlace covalente insitupara dar como resultado la formación de un hidrogel reticulado en el sitio diana,

en donde el primer derivado de polisacárido es un primer derivado de ácido hialurónico (HA) funcionalizado con hidrazida y el segundo derivado de polisacárido es un segundo derivado de ácido hialurónico (HA) funcionalizado con aldehído, y en donde el segundo derivado de HA está funcionalizado con un resto aldehído preparado mediante la conversión de un grupo -CH<2>OH en un grupo -CHO.

15. Una combinación de un primer derivado de polisacárido y un segundo derivado de polisacárido para uso en un método para la formaciónin situde un hidrogel reticulado en aplicaciones terapéuticas, comprendiendo el método las etapas de:

(c) inyectar la solución mixta en un sitio diana en el cuerpo de un paciente, en donde el grupo nucleófilo del primer derivado de polisacárido y el grupo electrófilo del segundo derivado de polisacárido forman un enlace covalentein situpara dar como resultado la formación de un hidrogel reticulado en el sitio diana,