CN110636870A - 制备包含透明质酸和羟基磷灰石的真皮填充物组合物的方法以及包含透明质酸和羟基磷灰石的真皮填充物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了在软组织填充物领域中基于HA和HAp的组合物及其制备方法。可任选地,真皮填充物用于通过向面部组织中加入容量,纠正皱纹和法令纹,并且恢复面部的光滑外观而增加面部组织隆起。可任选地,真皮填充物包括与HAp化学键合的未交联的或者交联的HA。
Description
技术领域
本发明总体而言涉及软组织填充物,具体而言,本发明涉及分别和组合地基于透明质酸和羟基磷灰石的真皮和真皮下可移植填充物。
背景技术
皮肤包含三层,每层均执行特定的任务。最外部的薄且硬的层为表皮。表皮的厚度为0.05mm(眼睑)至0.8-1.5mm(在脚底和手掌)。大部分的表皮细胞为角质形成细胞。新的角质形成细胞来源于表皮最深层被称为基底层的细胞,并且向表皮的表面迁移,从而替代老的细胞。角质层(表皮的最外层部分)为防止大部分的细菌、真菌和化学物质进入肌体的防水屏障。黑素细胞散布于整个基底层中,并且产生黑色素,其有助于皮肤的颜色并过滤紫外线辐射。表皮还包含郎格罕细胞,其为皮肤免疫系统的一部分,从而使肌体抵抗感染。在表皮下方为真皮。表皮的厚度为0.6mm(眼睑)至3-5mm(在脚底和手掌)。
真皮为大部分由胶原蛋白、弹性蛋白和原纤维蛋白(其给予皮肤以挠性和强度)构成的纤维和弹性组织的厚层。胶原蛋白纤维构成真皮的70%,使得其具有强度和韧性,而弹性蛋白保持正常的弹性和挠性。其包含感知疼痛、触摸、压力和温度的神经末端。其包含响应于热和应激而产生汗的汗腺,从而有助于冷却肌体。其包含将油脂(皮脂)收入毛囊中的油脂(皮脂的)腺,从而保持皮肤湿润和柔软。其包含有助于调节体温的毛囊,从而提供保护而免于损伤,并增强感知。其包含向皮肤提供营养物的血管,并有助于调节体温。在真皮下方为皮下组织,还称为皮下脂肪层或皮下组织。其为一层脂肪,大约50%的肌体脂肪。脂肪被包含在活细胞中,称为脂肪细胞,与纤维组织保持在一起。脂肪层将皮肤附着在骨骼和肌肉上,并有助于隔离肌体,从而提供保护垫并起到能量储存区的作用。
面部老化是动态过程的迹象,由于在皮肤、软组织和颅面骨骼上的累积作用,导致皮肤表面构造起皱纹、形貌和面部轮廓的消失,所以所述的动态过程发生在我们的整个生命中。这种老化作用包括重力、进行性骨吸收、组织弹性降低、皮下脂肪再分布和饱满度丧失。激素失衡、太阳暴露、精神紧张、饮食、工作习惯、疾病、药物滥用和吸烟也可以影响面部吸引力。
骨萎缩以及骨膨胀和骨质疏松的动态是颅面骨骼老化的原因。骨质吸收可以导致生物特征体积损失和覆盖软组织,并且皮肤在没有骨骼的结构支撑的情况下发生显著的改变。例如上颌吸收可以导致上唇支撑丧失,并且可以导致颧骨脂肪垫移位,由此分别有助于口周起皱和法令纹。年轻的脸庞表征为圆形面部形貌,这是由于表面和深层脂肪的平衡分布,从而给予软组织以饱满度。脂肪的再分布和丧失导致软组织支撑和饱满度逐渐丧失,从而导致软组织下降,例如在前额、颧骨等的脂肪丧失,以及在下颌、法令纹等的脂肪获得。
在考虑面部外观和结构时,方便的是将面部分成三个区域,其中上方三分之一包括前额和额头,中间三分之一包括面中部和鼻子,下方三分之一包括下颚、下颌的轮廓和颈部。面中部包括眼睛、鼻子、嘴唇和颧骨(中央面部三角区),其最有助于察觉面部美感和吸引力。
面上部(其包括前额、额头、颞颥和上眼睑区)受到皮下饱满度丧失的影响,从而产生前额线条。这个区域的肌肉作用在年轻时通过前额皮下饱满度而相对隐藏。随着其变老,饱满度丧失产生皱纹和法令纹。眉毛下垂的效果是侧眉支撑丧失和上眼睑饱满度丧失的结果。
面中部(其包括眼睛、鼻子、嘴唇和颧骨(中央面部三角区))受到皮下饱满度丧失的影响。“鱼尾纹”是眼轮匝肌周围的皮下饱满度丧失的结果。此外,眼轮匝肌的边界是明显的,并且有助于在颧骨突出和泪沟线上形成颧骨新月(malar crescent)。眶周泪槽凹陷是随着变老,脂肪储存在下眼睑萎缩处而形成,从而形成憔悴的外观。在眼轮匝肌和下眼睑之间,饱满度丧失使得组织更加接近,导致更暗淡的皮肤颜色,甚至在良好的夜间睡眠后,仍具有劳累的、疲劳的眼睛外观。暗淡的颜色还有助于皮肤黑色素沉积。法令纹是由于下垂的面颊脂肪下降引起的。鼻子也经历老化作用,例如眉间、鼻根和鼻上背(鼻头)的饱满度丧失,和鼻尖下垂,而有助于鼻子长度增加的错觉。下垂的下巴也可以有助于鼻子长度增加的外观。面下部(其包括下部、下颌和颈部)随着年龄的增加展现出脂肪积累,导致相对过多的皮肤,而导致下颌清晰度丧失。脂肪下降至下颌边缘导致面部下巴垂肉形成。“火鸡脖”畸形是未支撑的皮肤、下巴垫下垂,以及颈阔肌下拉,从而看起来像火鸡喉部的红色垂肉。除了这些以外,随着变老,颈阔肌收缩导致颈部垂直纤维带。
面部年轻化的主要目标是面部形貌的修复。面部年轻化可以通过手术和非手术过程取得。手术包括由提升到脂肪抽吸、到脂肪转移的多种过程。面部重塑技术用于改造皮肤的表面、纠正光老化的作用,包括细线、不规则的色素沉着和斑点。面部重塑是通过化学剥离、微晶磨皮术和激光面部重塑完成的。如今,患者喜欢并寻找非手术过程,其可以修复面部轮廓、纠正面部不对称或者甚至增强存在的面部特征(具有即刻的美容效果和短的恢复时间)。这是通过多种物质(通过注射给予)实现的。主要的用途是治疗线、皱纹、法令纹,从而补偿面部轮廓的丧失。这包括注射神经毒素(肉毒杆菌毒素用于弱化肌肉并减少动态线)、轮廓填充物和胶原蛋白刺激物。
透明质酸(HA)是天然形成的线性多糖,其由葡萄糖醛酸和N-乙酰基葡糖胺通过β-1,3和β-1,4糖苷键的交替连接而形成的重复的二糖单位,其分子量(MW)高达几百万道尔顿(Da)。在生理学条件下,发现HA为其离子化形式,即,透明质酸盐,具有钠、钙等作为平衡离子,例如透明质酸钠(NaHA)。在人类肌体中,在皮肤、脐带和玻璃体液中发现高浓度。HA由于与糖苷键相邻的庞大的N-乙酰基基团对糖苷键旋转的限制,而是相对刚性的分子。其天然形成的构造为螺旋形,螺旋行构造通过不同官能团(例如胺、羧基和羟基)之间形成的氢键而进一步增强。工业级别的HA的主要来源是得自动物组织,例如鸡冠,其需要大范围的纯化;以及得自微生物链球菌发酵,例如得自兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)的HA发酵。
HA具有显著的结构、流变、生理学和生物学功能。HA具有吸附大量的水的能力,并且具有水份保持能力,从而在水性溶液中形成高度的粘弹性物质。由于其吸附能力和粘弹性,同时偶联缺乏免疫原性和毒性,所以其可以填充、润滑并保持组织中的机械应激。因此,HA在美容、生物医学、药物和食品工业具有多种用途。尽管HA是生物相容性的,但是其是可生物降解的,并且容易通过诸如透明质酸酶之类的酶降解(酶降解),从而在组织中具有相对短的停留时间。其半衰期的数量级小于一周。此外,HA在任何相当长的时间内不能耐受升高的温度。其经历热降解,这意味着其通过自由基、通过水解而降解。例如HA在水性溶液中在121℃高压灭菌几分钟的条件下,其MW会大幅降低。MW降低在高于60℃时呈指数加速。除了酶、热和自由基降解以外,HA经历机械降解,例如由于剪切力降解。上文提及的所有类型的降解在组织中都具有相对短的停留时间。
使用有机基团对HA进行化学改性、官能化或衍生化都能够以可控的方式改变HA的化学和物理性质,从而得到具有新的所需的且改进的性质的新生物材料。根据改性的类型和程度,改性的HA与天然HA是不同的化学品,因此可以是不太天然的,生物相容性、甚至其生物行为都可以改变。尽管人们应该测量益处和结果,但是改性导致其用于医学用途。例如HA在有机溶剂中具有低的溶解性。
与醇反应可以使其疏脂性变成更加的亲脂性,因此增加其在有机溶剂中的溶解性。当HA衍生物不太溶解于水时,其可以具有增加的体内停留时间。此外,其可以与诸如药品之类的分子具有改进的相互作用。另一个实例为用作美容移植物的交联的HA水凝胶,被引入皮肤以填充组织、加入轮廓并减少皱纹的美容皮肤填充物预计会延长HA的体内停留时间,这对于其临床成功是重要的。
美容和填充目的的HA的MW通常为几十万至几百万Da的数量级。可以用作真皮填充物的未交联的HA具有高的MW,从而保持体内溶解性,并且太粘,以至于不能注射通过精细规格的针(通常称为27G及以上、实际上直到30G的针),其中低MW容易注射,但是缺乏溶解性。克服这种缺点的方法之一是如同交联的化学改性方法。HA化学交联是通过将未交联的HA与交联试剂反应而实现的,从而形成HA无限3维(3D)网络,其在构成HA水凝胶(其具有改进的体内溶解性)的水性介质中不再是水溶性的。然而,这步化学反应或改性加入了化学试剂处理和反应产物纯化的其他步骤。通常,化学试剂是水溶性的,并且化学反应和纯化在水性介质中进行。如上文所述,人们应该测量益处和结果,改性导致其用于医学用途。在该陈述后,交联的HA凝胶克服了未交联的HA的缺点,并且可以用作皮肤填充剂、用于美容目的的组织填充,例如通过向面部组织加入轮廓、纠正皱纹和法令纹、并对面部修复光滑的外观而使面部组织隆起。
羟基磷灰石(HAp)具有以下化学式:Ca10(PO4)6(OH)2(Ca/P ratio=1.67)。HAp是颗粒状磷酸钙陶瓷。HAp天然形成地质沉积物,以及在正常的生物组织(例如脊椎动物的骨骼、软骨、珐琅质、象牙质和牙骨质)中和病理性钙化的许多位点(例如血管和皮肤)中。人类骨骼的75%w(所有的百分率均以重量/重量给出,除非另外说明)构成了生物磷灰石,从而赋予骨骼硬度以及抗机械负荷。生物磷灰石的形态学是具有六角形结构的扁平细长的颗粒。
HAp为可移植的材料,其在生理学条件下是热力学稳定的,其具有优异的生物相容性(无毒无免疫原性)和生物活性,能够刺激细胞形成和组织修复。其可以刺激细胞应答、胶原蛋白合成、用作转化媒介、基因传递媒介等。Hap在组织工程应用中具有用途,例如用于修复和替换目的的骨骼和牙齿替代材料。已经报道多种方法用于HAp的合成,包括等离子喷涂、水热合成、冷冻干燥、溶胶-凝胶、相转变、机械化学合成、化学沉淀等。所报道的合成HAp的形态学为单斜微晶或六方微晶,医学目的的重要因素是Ca/P比例和粉末颗粒的尺寸。通常,HAp粉末的粒径范围为10μm至100μm。通常,HAp的纳米粉末形式的粒径范围为100μm。通常,真皮填充物中HAp颗粒是圆的、均匀的、光滑的,并且具有低的表面积。但是,HAp颗粒可以具有不规则的形状,可以是多孔的、中空的、花朵样多孔中空的微球形,或者具有高表面积的任何其他合适的形状。
通常,HA基真皮和皮下填充物包含几十万至几百万Da数量级的HA,可任选地,具有在碱性或酸性条件下与HA形成共价键的双或多官能交联剂。例如在碱性条件下与羟基基团反应而形成醚键而在酸性条件下方式反应反而形成酯的诸如1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)和1,2-乙二醇二缩水甘油醚(EDDE)之类的双环氧化合物。市场上最普通的真皮填充物与诸如BDDE和二乙烯基砜(DVS)之类的交联剂交联。然而,任何其他的双或多官能交联剂可以用于交联,包括但不限于与HA直接反应的环氧化合物、DVS、甲醛、氮丙啶、氨基酸、酯、碳二亚胺等。HA可以通过使用双或多官能分子作为侧基而交联,其中一方面与HA键合,另一方面与其他的单、双或多官能交联剂或多种交联剂键合的分子在原始状态下用于键合侧基的两个末端。
此外,其可以包含几十万至几百万Da数量级的未交联的HA,从而有助于通过精细规格的针挤出。此外,其可以包含一种或多种活性补充剂,每一种补充剂都具有其自身独特的性质,例如麻醉试剂、抗氧化剂、维生素等。一些实例分别为但不限于利多卡因、甘露醇、维生素C等。在HA真皮填充物中HA的浓度范围可以为lmg/ml至50mg/ml,更具体为15-30mg/ml,其中各种浓度最适用于组织填充和隆起的特定区域。
制备交联的HA真皮填充物的典型方法包括本领域那些普通技术人员已知的多个基础步骤。第一步骤是水合干燥的HA。下一步骤是将HA引入交联剂中,从而在碱性或酸性环境下交联HA。下一步骤包括通常使用纯化水或磷酸盐缓冲剂溶剂(PBS)通过透析和膨胀交联的HA而剥离残余的交联剂。例如在临界值为12,000MW的透析袋中透析几天,直到的部分残余的交联剂被除去。下一步骤包括加入活性补充剂,加入未交联的HA,均化整个组合物。下一步骤包括灭菌处理,从而完成具有合适的真皮填充物性质(例如流变性质、挤出力、pH、渗透压等)的HA真皮填充物。
通常,HAp真皮填充物包含高达60%w/w的HAp微球形颗粒,其均以地悬浮在作为载体材料的高粘度液体或凝胶中。通常,真皮填充物中的HAp颗粒是圆形的、均匀的、光滑的、直径为大约10至100μ、最优选的是直径为25至50μ的低表面积。在一个实例中,HAp微球悬浮于由羧甲基纤维素(CMC)、甘油和水构成的载体中。在另一个实例中,HAp微球悬浮于由HA和水构成的载体中。在另一个实例中,HAp微球悬浮于由上文所述的交联的HA构成的载体中,其中HAp微球是在HA交联过程中或之后加入的。这些组合物和相关组分的浓度是本领域那些普通技术人员已知的,例如此类组合物中普通的HAp浓度为55.7%或更低。在所有的实例中,HAp微球悬浮于高粘度的液体或凝胶中,并且在HA和HAp之间不存在真是的键。载体作为将HAp微球转移至指定区域的工具,从而用于组织填充和隆起,并防止微球在注射器和肌体内聚集。其起到防止HAp沉积和相分离的作用。此外,将微球保持在它们所需的位置,防止它们分散在注射区域中。
发明概述
在至少一些实施方案中,本发明的特征在于在软组织填充物领域中基于HA和HAp的组合物,以及制备该组合物的方法。可任选地,真皮填充物可以通过加入一定体积的面部组织、纠正皱纹和法令纹以及恢复面部的光滑外观从而增强面部组织隆起。可任选地,真皮填充物包含与HAp化学键合的未交联的或交联的HA。化学锚定的HA与HAp表面的结合具有延长组织隆起的协同作用,这是由于两种成分降解较慢,不会降低它们发挥皮肤更新成分作用的固有能力。本发明的这些和其他方法、以及益处可以在发明详述中更容易地理解和领会。
附图简述
本文参照附图,仅通过实例描述本发明。现在详细地具体地参照附图,强调的是,所示的具体情况为实例,其目的仅是示意性地讨论本发明的实施方案,并且被呈现出来以提供据信是最有用的且容易理解的本发明的原理和概念方面的描述。就此而言,尚未尝试显示比基本地理解本发明所需的更详细的本发明的结构细节,说明书与附图一起使得本领域那些技术人员对于本发明的多种形式可以体现在实践中的方式是显而易见的。在附图中:
图1示出在SEM下未处理的HAp微球;
图2示出在使用3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷处理后,在SEM下经处理的HAp微球。
发明详述
根据背景技术,将HAp微球加入载体中,该载体为高粘度液体或凝胶。在一个实例中,将HAp微球加入交联的HA中,其中其再次起到载体的作用。HA和HAp的具有累加效应,不是协同作用。累加效应如下:HAp微球在不具有异物反应的情况下缓慢降解,从而起到天然组织生长的支架的作用,以及HA水合和支撑细胞外基质。HA和HAp之间的协同作用是很有问题的,这是由于交联的HA网络和HAp微球形成简单的混合物的事实,其中HA凝胶为连续相,而HAp微球为分散相。在这种简单的混合物中,各种成分保持其自身的性质,而不具有协同作用。
此外,声称在交联之前向HA中加入HAp可以形成HAp被HA囊封的以下结构的囊封的结构。声称这种囊封的结构可以延长HAp随着HA的降解,直到HA降解,从而起到可以防止HAp降解的屏障的作用。而且这也是有问题的,这是由于在这些现有技术的组合物中,HAp和HA之间不存在真实的键合的事实。
首先,在使用HA的囊封的HAp的理想状态或系统中,存在一些通过HA囊封而保护HAp免于降解的机制,直到囊封打开缺口。这种理想状态取决于囊封的厚度而发生。然而,即使在这种理想状态下,不存在保护HA免于降解的机制。其次,所述的系统并非理想的,因此结果是大部分的HAp微球没有被囊封。微球的状态由部分HA覆盖至没有HA囊封HAp微球。不希望被单一的假设所限制,这可能是由于HAp微球比HA链大几个数量级(末端至末端的距离)的事实。
在现有技术的组合物中,这种短链被搅动,从而形成局部微3D网络,其并不一定能诱陷HAp微球,由此得到一些囊封的HAp微球和一些未囊封的HAp微球。大部分囊封的HAp微球可能是未囊封的,这是由于它们的相对尺寸,如上文说明的那样。而且,结果可以被认为是简单的混合,而不是真正的囊封。
因此,人们可以基于HA和HAp分别注射相同面积的不同真皮填充物,从而通过混合取得相同的增益,这通常正在实施。此外,仅向交联的HA中加入高浓度的HAp微球会对粘性作用产生其他的损害作用,以及相对于未交联的HA载体产生高挤出力。克服该问题的简单的解决方法是降低HAp微球的浓度。然而,在相同的区域再次使用不同类型的真皮填充物可以有助于克服所述的问题。
为了取得HA和HAp的协同作用,理想的是形成包含HAp作为添加剂的HA基复合物。该复合物被认为是多种添加剂和聚合物基质的共混物,其中所述的添加剂具有不同的且清晰的官能性,其中为了形成聚合物基材料,所述的聚合物基质结合并连接在一起,其中所述的聚合物基材料具有好于聚合物固有性质的改进的性质或者赋予其新的性质。HA复合物材料的性质并非单独地取决于HAp微球的体积份数,还取决于与HA凝胶的化学和物理相互作用,例如聚合物网络和界面参数(相容性、润湿性和粘结性,在本发明中统称为“粘附性”)。粘附性对于取得复合物性质的改进是重要的。此外,改进的粘附性还有助于将添加剂良好地分散于网络中。
偶联试剂定义为以下化合物,就传统观点而言,该化合物提供两种不同材料之间的化学键合,在HA和HAp情况下通常为无机材料和有机材料。偶联试剂在两种不同材料之间还可以提供除了化学键合以外的其他相互作用,例如离子相互作用、氢键等,直至弱的范德华(VDW)相互作用。作为一个实例,偶联试剂可以在聚合物和添加剂混合过程中加入。在另一个实例中,偶联试剂可以作为添加剂的表面改性和/或新的官能团(其被引入在聚合物链上,然后与其他部分相互作用)加入。所有上文所述均被认为是增加聚合物和添加剂之间的粘附性的途径。添加剂和聚合物之间的增加的粘附力由强的化学键或静电引力,至弱的VDW相互作用。
上文所述的偶联试剂的任何使用机制是可行的,但是最有利的是使用表面改性,这是由于HA的敏感性,例如上文所述的热、剪切、酶降解等。此外,在混合或作为官能团引入的偶联试剂的使用可以干扰HA的交联阶段,从而在包含交联的HA的复合物的情况下,形成交联的凝胶。
相关联的HA和HAp可以具有VDW数量级的相互作用、氢键或者甚至离子相互作用,其被认为不是永久的。然而,在HA和HAp之间创建共价键(其可以被认为是永久的)将形成具有HA和HAp的益处的真实的复合材料。在HAp表面与HA分子之间形成化学键的最简单的方式是使用偶联试剂,具体而言是使用有机官能硅烷的表面处理。根据添加剂和聚合物的表面化学性,选择硅烷偶联试剂的类型、硅烷表面处理。可以以相同的方式使用其他类型的偶联试剂,例如锆酸酯、钛酸酯等。在HA和HAp之间形成共价键的其他途径可以包括使用交联剂、螯合试剂,或者甚至在指向添加剂表面的一排中使用多种偶联试剂(其可以得到相同的化学键合的作用)。
HAp由于VDW和氢键相互作用而具有聚集的趋势。使用硅烷的另一种益处在于有助于预防聚集,这是由于消除了这些相互作用,并且在一定程度上归因于空间位阻。
有机官能硅烷的最普通的化学结构为R-S1-X3,其中X为烷氧基基团,其可以水解表面上的反应性基团,并且R为可以与聚合物基质反应的有机官能团。少于3个烷氧基基团的其他类型的有机官能硅烷也适用于与表面反应。备选地,X为氯原子。然而,这些材料的使用在商业上是有限的,这是由于难以处理与水解有关的腐蚀性、可燃性或毒性副产物。
存在两种主要的用于插入硅烷的技术:
a.预处理—将处于用水稀释的有机溶剂(其会加速反应)中的纯硅烷或其溶液直接加入添加剂中。通常,该技术是通过使用硅烷试剂喷洒或浸渍添加剂(表面抛光)而完成的。
b.将硅烷加入聚合物中,然后加入未处理的添加剂。该技术被认为是少见的。
在HA和HAp的情况下,优选的方法是预处理,其中HAp颗粒是在被引入HA中之前涂敷的硅烷。
工业预处理工艺的结果是形成厚的三维交联的硅烷多层(聚硅氧烷网络)。硅烷单层(其目前只能通过气相硅化技术获得)通常超出工业实践的范围。
根据在聚合物和添加剂之间有利的相互作用的类型来选择硅烷的有机官能团。所述的相互作用可以是弱的VDW力、亲水性-疏水性相互作用、直至化学共价键数量级的。存在大量可行的R基团,并且通过其对聚合物基质的亲和性来选择特定的种类。应该注意的是超过一种类型的硅烷可以与给定的聚合物有效地使用。因此,对于特定的聚合物而言,所选的最合适的有机官能硅烷偶联试剂应该得到化学键合,以及穿过基质的相互扩散,从而与聚合物形成网络。
例如诸如3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷或3-环氧丙氧基丙基三乙氧基硅烷或其他环氧官能偶联的硅烷之类的硅烷表面处理可以起到BDDE交联剂的作用,并且参与在HA凝胶固化过程中发生的化学反应,由此在表面处理的HAp和HA之间形成键。
HA的普通的BDDE固化机制包括与BDDE(化学式为1,4-丁二醇二缩水甘油醚)反应,其具有两个官能环氧基团,该基团在碱性条件下在HA和交联剂之间产生稳定的共价醚键,正如同3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷具有可以将HAp与HA交联的官能环氧基团。3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷的R基团、环氧基团可以起到BDDE的作用,并且用作交联剂。如上文所述,交联剂还是在HA和HAp之间形成共价键的途径。在这种情况下,BDDE还可以在HA和HAp之间键合,其中一方面与HA键合,另一方面与HAp的表面键合,从而形成醚键,或者在极端的条件下,在HAp的表面上发生自由基猝灭。该系统中的问题是由于在HA和HAp上交联位点的竞争,需要控制两方面的交联程度,即,它们本身之间的HA链的交联,以及HA和HAp的交联。需要更高浓度的BDDE以取得相当的情况,或者是否具有HAp表面处理方法后通过交联以形成HA和HAp复合物的任何性质。
另一种可能性是乙烯基三甲氧基硅烷、乙烯基三乙氧基硅烷或乙烯基三氯硅烷作为氯代硅烷或其他的乙烯基官能团化的硅烷的实例,其可以起到DVS交联剂的作用,并参与在HA凝胶固化过程中形成的化学反应,并由此在表面处理的HAp和HA之间形成键。
HA的普通的DVS固化机制包括与DVS反应,其具有两个官能乙烯基基团,该基团在碱性条件下在HA和交联剂之间产生稳定的共价醚键,正如同乙烯基三甲氧基硅烷具有可以将HAp与HA交联的官能乙烯基基团。乙烯基三甲氧基硅烷的R基团、乙烯基基团可以起到DVS的作用,并且用作交联剂。
多种可能性成功地将HA与HAp交联,另一个实例是己二酸二酰肼(ADH)作为交联剂,并且3-氨基丙氧基丙基三乙氧基硅烷、3-氨基丙氧基丙基三甲氧基硅烷或其他的氨基官能集团化的硅烷可以起到ADH的作用,并用作交联剂。但是,由于上文所述的HA的敏感性,并非所有的反压都是有利的。环氧官能基团化的硅烷和乙烯基官能基团化的硅烷的硅烷实例是模拟在真皮填充物市场中出现的HA交联的最普通的过程,并且可以在交联的HA组合物或其他物质中在HA和HAp复合物中容易地实施。如上文所述,三维交联的硅烷多层是在硅烷化的过程中在HAp微球表面上形成的。由于三维结构,键合的硅烷并非完全覆盖在表面上。因此,在表面上存在硅烷处理的区域,和不具有硅烷的区域,从而得到在较大的未处理的区域上具有分离的或相互连接的处理区块的表面形貌,其可以视为海洋上的岛或相互连接的(桥接的)岛。表面键合的硅烷区域是在不具有HAp表面的海洋上分散开的岛。海洋中岛的表面质地可以根据所用的硅烷的浓度而制作。
不希望被浓度变化所限定,可以使用其他方法来制作表面形貌和亲和性,例如Janus颗粒技术。Janus颗粒是具有两种不同的物理性质的不对称颗粒,例如HAp颗粒,其具有由硅烷标定尺寸的一个半球表面和另一个未处理的半球。在两个半球之间,表面形貌和亲和性是不同的。存在形成Janus颗粒的不同方法,并且可以使用,例如掩蔽方法,其中颗粒诱陷在两相之间的界面上,从而允许未处理的半球被掩蔽,而另一个半球被标定尺寸,由此仅在一侧上对颗粒表面进行改性。
制作表面形貌和亲和性的此类方法的另一个实例是使用硅烷试剂与不同官能性的混合物,例如可以与HA链反应的一种硅烷,以及不与HA链反应的硅烷。在极端情况下,形成Janus颗粒,其具有使用反应性硅烷标定尺寸的一个半球表面以及使用非反应性硅烷的另一个半球。在所提及的任意一个实例中,硅烷处理的区域在较大的未处理的区域上具有分离的或相互连接的处理区块的形貌。表面处理是在微米规模标定尺寸的微球上纳米规模数量级的。这种表面形貌可以使HAp缓慢降解,并且起到天然组织生长的支架的作用。合理地假设在这种结构中,降解可以比未处理的HAp微球更慢。
HA链可以吸附在表面处理的HAp的表面上。表面上的吸附的HA链形成列(与表面接触的链的一部分),环(不与表面接触但是通过两个列键合的链的一部分)以及两个尾(不与表面接触,但是通过在列的一侧上键合,而在另一侧上游离的链的一部分)。吸附涉及物理相互作用和化学键的形成,分别注释为物理吸附和化学吸附。因此,合理地假设HA链的一些列共价附着在表面上,并且吸附是不可逆的且是永久的。这种结构暗示HAp微球在所形成的凝胶中还起到交联位点的作用。合理地假设在表面处理的微球存在下交联剂的浓度可以较低,而具有相同的交联作用,因此这些微球在一定程度上可以取代交联剂。此外,微球作为交联位点的作用为局部增加的机械强度,锚定位点,特别在深皱纹处其可以有助于更稳定的容量作用(volume effect)。此外,附着在表面上的HA链不易于酶降解。合理地假设,定义为列的这部分链由于与表面键合,所以很少倾向于酶降解。定义为环和尾的这部分链的降解取决于它们的相对尺寸和酶的可接近性。因此,在HAp微球附近的整个HA链很少倾向于酶降解,这可以有助于更强效的容量作用以及在注射区域的持久用途。此外,包含HAp的HA复合物在交联时具有改进的机械强度,而发挥锚定点的微球可以很大程度上有助于以下区域,其中动态皱纹和法令纹需要对肌肉的作用具有更高的耐性。由上文提及来看,清楚地理解到包含化学键合的HAp颗粒的HA被视为复合物,具有改进性质的加强凝胶,例如机械性质、耐降解等,或者可以根据所需的用途制作多种性质。其他类型的表面处理的微球(可生物降解的或不可降解的、惰性的或刺激性的)可以用于锚定HA链的作用,例如聚乳酸微球。
如上文提及,在简单的混合物而非复合物中,接触中的HA和HAp可以具有VDW、氢键或者甚至离子相互作用数量级的相互作用,其并非被视为是永久的。在注射时,混合物暴露于肌体组织和体液,其与HA和HAp可以具有VDW、氢键或者甚至离子相互作用数量级的相同的相互作用,这可以导致HA和HAp之间的相互作用丧失,其与HA和HAp之间的永久的化学共价相互作用相反。
因此,在混合物中,HA链和HAp微球如同它们是单独注射的那样而降解,而在复合物中,协同作用在于HA链和HAp微球更缓慢地降解,从而更长时间地用于肌体中,更长的体内停留时间,因此延长的组织隆起。如上文所述,使用交联剂被认为是HA的化学改性或交联稳定作用,而加入化学键合的颗粒可以被认为是通过与颗粒交联而对HA的物理和化学改性。除了交联稳定性以外,后者也是通过一般的及特别的HAp颗粒而进行HA稳定的方法。
通过使用HA和HAp复合物可以产生的一些其他的益处是避免Tyndall效应,这是由于HAp是不透明的或者在薄的区域会降低白度,而HA是半透明的。此外,HAp是不透光的,因此整个组合物在注射过程中或注射后在射线照相中容易检测。
总体而言,其可以视为使用无机基团对HA的化学改性、官能化或衍生化,例如硅烷表面处理的陶瓷HAp,其允许以可控的方式改变HA的化学和物理性质,从而得到具有新的理想的且改进性质的新生物材料。
如上文所述,HA和双或多官能交联剂可以在碱性或酸性条件下形成共价键。加入树枝状多官能交联剂可以提供在组织中降低的粘度和更长持久性的另一个益处。树枝状分子为具有精确分子量、超支化结构(其定义椭球形或球形形状)的大分子。树枝状分子形成中心核和一系列分支的径向同心层(称为“代”)(其定义其形状)。通常,可以与其他分子反应的有效的官能团位于最外代(其为分支的最外部分)。例如HA与BDDE(双环氧官能交联剂)和环氧官能树枝状分子的反应可以得到更软的凝胶,以及通过精细规格的针的较低的挤出力,以及在组织中具有较长的持久性的凝胶(这是由于树枝状分子交联的树枝状结构)。
备选地,真皮填充物中的未交联的HA(一部分或全部)可以使用环氧官能的树枝状分子交联,由此保持低粘性,其可以有助于通过精细规格的针的挤出,以及在组织中在一定程度上比未交联的HA展现出更长的持久性。精细规格的针为例如规格范围为27G至30G的针。可任选地,所述的较长的持久性可以比HA真皮填充物组合物长至少20%、长至少50%、长至少100%、长至少200%、长至少500%或者它们之间的任何整数值。较长的持久性用于交联的HA,其可以为例如与BDDE和树枝状分子交联。诸如最终的真皮填充物之类的凝胶产物可以例如包含大约90%交联的凝胶和10%未交联的HA。未交联的HA的存在可以降低凝胶的粘性,并将其润滑,从而易于由注射器中挤出。
这种环氧官能树枝状分子的非限定性实例可以在Multiply FunctionalizedDendrimers:Protecting-Group-Free Synthesis through Sequential Thiol-Epoxy'Click'Chemistry and Esterification Reaction(RSC Advances,submitted May 42015,Khan et al;例如参见作为环氧树枝状分子的非限定性实例的分子8)中找到。
如上文所述,HA和双或多官能交联剂在碱性或酸性条件下可以形成共价键。加入(Polyhedral Oligomeric倍半硅氧烷)笼形分子作为多官能交联剂(例如环氧官能例如环氧丙基(环氧官能倍半硅氧烷))在组织中可以提供降低的粘性和较高的持久性的多种益处。不同的有机官能性可以制作成基础笼形结构,例如环氧丙基中的环氧官能团。例如HA与BDDE和环氧丙基分子反应可以得到更软的凝胶以及通过精细规格的针的较低的挤出力,并且还得到在组织中具有较高持久性的凝胶,这是由于环氧丙基交联的笼形结构。备选地,真皮填充物中的未交联的HA(一部分或全部)可以使用环氧丙基交联,由此保持较低的粘性,其可以有助于通过精细规格的针的挤出,并且在组织中展现在一定程度上比未交联的HA更长的持久性。
上文中精细规格和/或较高持久性的描述还适用于使用的这种实施方案。
使用合适的有机官能性制作的还可以用作交联试剂,例如在硅烷中烷氧官能性和环氧官能性均存在于基础笼形结构中的情况。这种结构可以偶联HA和HAp的末端,真如同硅烷表面处理那样。将用作偶联试剂的过程类似于上文所述。
尽管上文所述的材料的特征在于多糖,特别是与颗粒状磷酸钙陶瓷化学键合的HA,例如通过使用偶联试剂的HAp,但是其无意于以任何方式进行限定。诸如肝素前体之类的其他多糖可以按照如同HA与HAp以及其他类型的表面处理微球相同的键合过程,例如可生物降解的聚乳酸微球在表面锚定HA链中可以起到HAp的作用。
尽管上文所述涉及真皮填充物,特别是面部真皮填充物,但是其绝无意于暗示限定的情况。肌体中其他的解剖区域可以填充或隆起,例如颈部、臀部、胸部、乳腺、手、小腿肚等。此外,其可以用作非手术备选物或者鼻整形、鼻尖移植中手术的补充剂。此外,在整个肌体中,其可以用于模糊皮肤标记,例如伤疤、痘疤、条沟-妊娠纹等。此外,其在诸如骨骼和牙齿重建(其中HAp为主要成分)之类的领域中具有益处并使用。此外,其可以在诸如关节润滑之类的领域中具有益处并使用(用于改进关节灵活性和减震能力)。
实施例
实施例1-硅烷表面处理
1.硅烷处理溶液的制备(总体积中2%硅烷):
将93.25%vol甲醇与3.93%vol蒸馏水混合。加入0.81%vol乙酸,将溶液缓冲至pH 4.5-5.5。将2%vol官能硅烷加入溶液中。可以使用较低浓度的硅烷,从而制作硅烷的表面覆盖。
2.硅烷处理
将溶液搅拌1-10min,期间,在溶液中形成硅烷醇基团。在大约30min内将HAp微球引入溶液中。接着,在纯的甲醇中两次漂洗HAp微球。将HAp微球插入(insert)温度为70℃至105℃的烤箱中1至24小时,以便进行固化,并完成所述的过程,从而形成硅烷层,或者在室温下过夜固化。所给出的持续时间和温度是硅烷类型依赖性的,例如70℃、24小时适用于3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷,从而防止硅烷环氧官能团的降解。
可以使用高剪切混合器、转子定子混合器、均化器或探针型超声波生成设备以防止微球聚集。
实施例2-包含HAp微球的未交联的HA真皮填充物配制物
将纤维或粉末的任意形式的原材料NaHA(例如MW为二百万Da)引入碱性溶液中。搅拌NaHA,溶解,并在室温下在碱性溶液中水合几个小时,直至形成均匀的HA粘性液体。
在搅拌下,将3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷表面处理的HAp引入HA粘性液体中,从而形成分散液。将分散液加热至50℃,持续几个小时,由此可以在HA和表面处理的HAp之间形成键。可以在其中分散液是高度粘性的情况下在未搅拌下使用反应物,并将微球固定于分散液中,这是由于分散液的高粘性。在微球易于下沉的情况下,可以使用混合器或探针型超声波生成设备,从而防止微球下沉和聚集。接着,将分散液冷却回室温。然后,分散液膨胀,并在临界值为12,000MW的透析袋中使用PBS透析几天,由此除去低分子量的残余物。规律地更换PBS,从而将新鲜的PBS引入分散液中。例如测定膨胀程度,由此形成包含30%v/vHAp或更低的分散液。由于协同作用,HA和HAp的浓度可以降低,并且仍具有市场上可利用的普通真皮填充物的相同的作用。将分散液填充至注射器中,灭菌并准备使用。备选地,可以在由羧甲基纤维素(CMC)、甘油和水构成的其他凝胶载体中引入HA表面键合的HAp微球。
实施例3-包含HAp微球的交联的HA真皮填充物配制物
交联过程的基本步骤是本领域那些普通技术人员已知的。纤维或粉末的任何形式的原材料NaHA(例如二百万Da)可以被引入碱性溶液中。搅拌NaHA,溶解,并在室温下在碱性溶液中水合几个小时,直至形成均匀的HA粘性液体。
在搅拌下,将BDDE和3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷表面处理的HAp引入HA粘性液体中,从而形成分散液。将分散液加热至50℃,持续几个小时,由此可以在HA和表面处理的HAp之间形成键。可以在其中分散液是高度粘性的情况下在未搅拌下使用反应物,并将微球固定于分散液中,这是由于分散液的高粘性。在微球易于下沉的情况下,可以使用混合器或探针型超声波生成设备,从而防止微球下沉和聚集。接着,将复合物凝胶冷却回室温。然后,复合物凝胶膨胀,并在临界值为12,000MW的透析袋中使用PBS透析几天,由此除去低分子量的残余物,包括过量的BDDE。规律地更换PBS,从而将新鲜的PBS引入复合物凝胶中。将未交联的HA加入复合物凝胶中,从而有助于降低挤出力。例如复合物凝胶可以包含30%v/vHAp。将复合物凝胶填充至注射器中,灭菌并准备使用。
实施例4-硅烷处理的颗粒的测试
根据上文所述的实施例1制备HAp微球。
使用的材料:
1.HAp微球医学级,球形15-60微米,D50=35微米。
2. 3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷>98%Sigma Aldrich
3.甲醇>99.9%HPLC级Sigma Aldrich
4.乙酸>99.7%ACS试剂级Sigma Aldrich
SEM+EDS:
设备:Phenom ProX Desktop SEM
SEM+EDS分析
使用扫描电子显微镜(SEM),并偶联能量色散谱仪(EDS)技术来获得未处理的HAp微球和3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷处理的HAp微球的局部化学元素分析。获得表面上元素浓度的SEM显微照片和EDS定量分析。
图1和2中描绘的SEM显微照片分别显示未处理的和3-环氧丙氧基三甲氧基硅烷处理的HAp微球。两组微球均显示形态结构的相似性,表明在HAp微球上应用硅烷表面处理不会损害微球。
未处理的HAp的EDS分析表明,如HAp预计的那样,存在Ca、P和O原子。由表1可以看出,Ca/P的原子比如HAp预计的那样,为1.67。
3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷处理的HAp的EDS分析表明,除了Ca、P和O原子以外,存在Si原子,说明存在硅烷表面处理。如上文所述,工业预处理工艺的结果,是形成厚的三维交联的硅烷多层(聚硅氧烷网络),因此其Ca/P的原子比偏离1.67的理论值(如表2可见),并且表明相对于未处理的表面,存在硅烷表面处理。
元素序号 | 元素符号 | 元素名称 | 原子浓度 | 重量浓度 |
8 | O | 氧 | 68.28 | 48.43 |
20 | Ca | 钙 | 19.82 | 35.22 |
15 | P | 磷 | 11.90 | 16.35 |
表1.未处理的HAp微球的元素分析
元素序号 | 元素符号 | 元素名称 | 原子浓度 | 重量浓度 |
8 | O | 氧 | 58.88 | 38.46 |
20 | Ca | 钙 | 25.75 | 42.13 |
15 | P | 磷 | 15.22 | 19.24 |
14 | Si | 硅 | 0.15 | 0.18 |
表2. 3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷处理的HAp微球的元素分析
尽管与本发明的具体实施方案相关联描述了本发明,但是显而易见的是许多备选物、修改和改变对于本领域那些技术人员而言是显而易见的。因此,应该注意的是涵盖所有这些落入所附权利要求的精神和广泛范围内的备选物、修改和改变。所有出版物、专利、专利申请以及通过本说明书提及的编号所鉴定的序列均通过参照本说明书全文并入本文,如同每一份单独的出版物、专利、专利申请或者通过编号鉴定的序列明确地且单独地表明以引用方式并入本文。此外,本申请中的任何参照的引述或鉴定都不应该解释为承认该参照可以作为本发明的现有技术进行利用。
Claims (63)
1.一种包含多糖和HAp的组合物,其中所述的多糖与HAp化学键合。
2.权利要求1所述的组合物,其中所述的多糖为HA或肝素前体。
3.权利要求1或2所述的组合物,其中所述的化学键是使用偶联试剂获得的,并且所述的多糖包括HA。
4.权利要求3所述的组合物,其中所述的偶联试剂选自BDDE、有机官能硅烷、锆酸酯、钛酸酯、环氧化合物、二乙烯基砜(DVS)、甲醛、氮丙啶、氨基酸或酯、碳二亚胺、树枝状分子、和己二酸二酰肼(ADH)。
5.权利要求4所述的组合物,其中所述的有机官能硅烷具有至少一个烷氧基基团或至少一个氯原子。
6.权利要求5所述的组合物,其中所述的有机官能硅烷具有式R-Si-X3,其中X为可以水解所述的表面上的反应性基团的烷氧基基团,而R为能够与HAp反应的有机官能团。
7.权利要求4-6的任意一项所述的组合物,其中所述的有机官能硅烷选自环氧官能基团化的硅烷、乙烯基官能基团化的硅烷、或者特征在于氨基官能团的硅烷。
8.权利要求7所述的组合物,其中所述的环氧官能基团化的硅烷包括3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷或3-环氧丙氧基丙基三乙氧基硅烷的一种或多种。
9.权利要求7所述的组合物,其中所述的乙烯基官能基团化的硅烷包括乙烯基三甲氧基硅烷、乙烯基三乙氧基硅烷或乙烯基三氯硅烷的一种或多种。
10.权利要求7所述的组合物,其中所述的氨基官能基团化的硅烷包括3-氨基丙氧基丙基三乙氧基硅烷或3-氨基丙氧基丙基三甲氧基硅烷的一种或多种。
11.权利要求4-10的任意一项所述的组合物,其中所述的HAp是使用所述的有机官能硅烷预处理的。
12.权利要求11所述的组合物,其中所述的HAp为被引入HA中之前使用所述的有机官能硅烷涂敷的微球形式。
13.上述权利要求的任意一项所述的组合物,其中所述的HAp为粒径为1nm至100nm的纳米粉末形式。
14.上述权利要求的任意一项所述的组合物,其中所述的HA在与所述的HAp反应之前保持未交联的。
15.上述权利要求的任意一项所述的组合物,其中所述的HAp以微球形式存在。
16.上述权利要求的任意一项所述的组合物,其中所述的HAp以粒径为10μm至100μm的颗粒形式存在。
17.上述权利要求的任意一项所述的组合物,其中所述的HAp以颗粒形式存在,其具有圆形、均匀的或光滑的形状,并且具有低的表面积,或者备选地,具有不规则的、多孔的、中空的、花朵样多孔中空微球形状,或者具有高的表面积。
18.上述权利要求的任意一项所述的组合物,进一步包括适用于作为真皮填充物插入哺乳动物受试者中的载体。
19.权利要求18所述的组合物,其中所述的哺乳动物受试者为人类受试者。
20.权利要求19所述的组合物,其适用于增强面部组织隆起。
21.上述权利要求的任意一项所述的组合物,其中所述的HA的浓度为lmg/ml至50mg/ml。
22.权利要求21所述的组合物,其中所述的HA的浓度为15-30mg/ml。
23.上述权利要求的任意一项所述的组合物,进一步包含麻醉试剂、抗氧化剂或维生素的一种或多种。
24.上述权利要求的任意一项所述的组合物,进一步包含用作多官能交联剂以交联HA链的树枝状分子。
25.权利要求24所述的组合物,其中所述的树枝状分子以适于产生组合物的量存在,其中所述的组合物表征为具有更软的凝胶,并且在组织中具有降低的粘性和较高的持久性。
26.权利要求24或25所述的组合物,其中所述的HA的多个部分是未交联的,并且所述的树枝状分子用作交联剂,从而与所述的未交联的HA的至少一个部分交联,使得所述的组合物的粘性降低,由此有助于所述的组合物通过精细规格的针挤出。
27.权利要求26所述的组合物,其中所述的精细规格的针的规格为27G至30G。
28.权利要求24-27的任意一项所述的组合物,其中所述的树枝状分子包括环氧官能树枝状分子。
29.权利要求24-28的任意一项所述的组合物,其中所述的较长的持久性为比HA真皮填充物长至少20%至至少500%。
30.上述权利要求的任意一项所述的组合物,进一步包含用作多官能交联剂以交联HA链的
31.权利要求30所述的组合物,其中所述的以提供组合物的量存在,其中所述的组合物表征为更软的凝胶,并且在组织中具有降低的粘性和较长的持久性。
32.权利要求30或31所述的组合物,其中所述的HA的一部分是未交联的,并且所述的用作交联剂,以交联所述的未交联的HA的部分,使得所述的组合物的粘性降低,从而有助于所述的组合物通过精细规格的针挤出。
33.上述权利要求的任意一项所述的组合物,其中所述的是使用合适的有机官能性制作的,从而起到交联所述的HA和所述的HAp的交联试剂的作用。
34.权利要求33所述的组合物,其中所述的有机官能性包括烷氧基官能性和环氧官能性。
35.上述权利要求的任意一项所述的组合物,其中所述的HAp的特征在于具有多个区域的三维交联的硅烷多层,其中所述的至少一个区域是硅烷处理的,并且至少一个区域是不具有硅烷的。
36.上述权利要求的任意一项所述的组合物,其中所述的HAp在形成Janus颗粒后为颗粒形式,其中所述的颗粒包含由硅烷标定尺寸的一个半球表面,以及另一个未处理的半球。
37.上述权利要求的任意一项所述的组合物,其中所述的HAp在施加不同的硅烷试剂形成Janus颗粒后,以及使用不同的试剂部分处理不同的区域或颗粒的一半后,以颗粒形式存在。
38.上述权利要求的任意一项所述的组合物,其中所述的HA链是通过加入颗粒而稳定的。
39.权利要求38所述的组合物,其中所述的颗粒包括化学键合的HAp颗粒。
40.制造上述权利要求的任意一项所述的组合物的方法,其中所述的HA使用偶联试剂与所述的HAp偶联。
41.权利要求40所述的方法,其中所述的HAp为微颗粒形式,并且所述的偶联试剂作为所述的微粒的表面改性而施加。
42.权利要求41所述的方法,进一步包括向所述的微颗粒施加硅烷,并且在温度为70℃至105℃的烤箱中将所述的HAp微球固化1至24小时。
43.权利要求42所述的方法,其中所述的硅烷包括3-环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷,并且所述的固化是在70℃下实施24小时。
44.权利要求41所述的方法,其进一步包括向所述的微颗粒施加硅烷,并且在室温下过夜固化所述的HAp微球。
45.上述权利要求的任意一项所述的方法,其包括根据掩蔽方法处理HAp颗粒,包括在两项之间的界面上诱陷所述的颗粒,由此掩蔽未处理的半球,并改性另一个半球。
46.权利要求45所述的方法,其中所述的处理项是通过硅烷化工艺处理的。
47.上述权利要求的任意一项所述的方法,其包括使用具有不同官能性的不同的硅烷试剂处理HAp颗粒。
48.权利要求47所述的方法,其中所述的处理包括使用所述的不同的硅烷试剂制备所述的HAp颗粒的Janus颗粒。
49.一种根据上述权利要求的任意一项所述的方法制备的组合物。
50.一种包含HA、HAp和树枝状分子的组合物,其中所述的树枝状分子用作多官能交联剂以交联HA链。
51.权利要求50所述的组合物,其中所述的HA的一部分是未交联的,并且其中所述的树枝状分子用作交联剂以交联所加入的所述的未交联的HA的一部分,从而有助于通过精细规格的针挤出。
52.权利要求50或51所述的组合物,其中所述的树枝状分子包括环氧官能树枝状分子。
53.一种包含HA、HAp和的组合物,其中所述的用作多官能交联剂以交联HA链。
54.权利要求53所述的组合物,其中所述的HA的一部分是未交联的,并且其中所述的用作交联剂以交联所加入的所述的未交联的HA的一部分,从而有助于通过精细规格的针挤出。
55.权利要求54所述的组合物,其中所述的以提供组合物的量存在,其中所述的组合物表征为较软的凝胶,并且在组织中具有降低的粘性和较长的持久性。
56.权利要求50-55的任意一项所述的组合物,进一步包含其是使用合适的有机官能性制作的,从而起到偶联所述的HA和所述的HAp的偶联试剂的作用。
57.权利要求56所述的组合物,其中所述的有机官能性包括烷氧官能性和环氧官能性。
58.一种用于面部组织隆起的方法,包括将上述权利要求的任意一项所述的组合物插入受试者的面部组织中。
59.权利要求58所述的方法,进一步包括实施以下的一种或多种:将容量加入面部组织中、纠正皱纹和法令纹、或者恢复面部的光滑外观或它们的组合。
60.权利要求58或59所述的方法,其中所述的组合物进一步包括树枝状分子,其用作多官能交联剂以交联HA链,使得所述的组合物为较软的凝胶,并且在所述的组织中具有降低的粘性和较高的持久性。
61.权利要求58或59所述的方法,其中所述的组合物进一步包括其用作多官能交联剂以交联HA链,使得所述的组合物为较软的凝胶,并且在所述的组织中具有降低的粘性和较高的持久性。
62.权利要求58-61的任意一项所述的方法,进一步包括施加用于鼻整形和/或鼻尖移植的组合物。
63.权利要求68-62的任意一项所述的方法,包括施加用于关节润滑的组合物。
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