BR112019017862B1

BR112019017862B1 - Método de fabricação e composições de preenchimento dérmico contendo ácido hialurônico e hidroxiapatita

Info

Publication number: BR112019017862B1
Application number: BR112019017862-7A
Authority: BR
Inventors: Haim Dvir
Original assignee: E.N.A. Impeccable Skincare Solutions Ltd
Priority date: 2017-10-10
Filing date: 2018-10-09
Publication date: 2024-01-30
Also published as: CN110636870A; EP3694569A1; US20200038552A1; CA3052929A1; WO2019073386A1; IL268438A; KR20200099069A; BR112019017862A2; EA201991679A1; JP2020536592A

Abstract

composições baseadas em ha e hap no domínio dos produtos de enchimento de tecidos moles e respectivo método de fabricação dos mesmos. opcionalmente, os preenchimentos dérmicos são úteis para melhorar o aumento do tecido facial adicionando volume ao tecido facial, corrigir rugas e dobras e restaurar uma aparência suave ao rosto. opcionalmente, o preenchimento dérmico inclui ha não reticulado ou reticulado ligado quimicamente a hap.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A invenção diz geralmente respeito aos preenchimentos de tecidos moles e, especificamente, aos preenchimentos implantáveis dérmicos e subdérmicos à base de ácido hialurônico e hidroxiapatita, separadamente e em combinação.

ANTECEDENTES

[0002] A pele é composta por três camadas e cada camada realiza tarefas específicas. A camada exterior fina e dura é a epiderme. A epiderme varia em espessura de 0,05mm nas pálpebras a 0,8-1,5mm nas plantas dos pés e palmas das mãos. A maioria das células da epiderme são queratinócitos. Os queratinócitos novos originam-se das células na camada mais profunda da epiderme chamada camada basal e migram para a superfície da epiderme, substituindo as células antigas. O estrato córneo, a parte mais externa da epiderme, é uma barreira impermeável que impede que a maioria das bactérias, vírus e substâncias químicas entrem no corpo. Os melanócitos estão espalhados por toda a camada basal e produzem o pigmento melanina, que contribui para a cor da pele e filtra a radiação ultravioleta. A epiderme também contém células de Langerhans, que fazem parte do sistema imunitário da pele, defendendo o corpo contra infecções. Debaixo da epiderme está a derme. A espessura da derme varia de 0,6mm nas pálpebras a 3 -5mm nas plantas dos pés e palmas das mãos.

[0003] A derme é uma camada espessa de tecido fibroso e elástico feito principalmente de colágeno, elastina e fibrilina que dão à pele sua flexibilidade e força. As fibras de colágeno constituem 70% da derme, dando-lhe força e tenacidade, enquanto a elastina mantém a elasticidade e flexibilidade normais. Contém terminações nervosas que sentem dor, tato, pressão e temperatura. Contém glândulas sudoríparas que produzem suor em resposta ao calor e ao stress, ajudando a arrefecer o corpo. Contém glândulas oleosas (sebáceas) que depositam óleo (sebo) nos folículos pilosos, mantendo a pele úmida e macia. Contém folículos pilosos que ajudam a regular a temperatura do corpo, proporcionando proteção contra lesões e melhorando a sensação. Contém vasos sanguíneos que fornecem nutrientes à pele e ajudam a regular a temperatura corporal. Sob a derme está a hipoderme, também conhecida como camada de gordura subcutânea ou tecido subcutâneo. É uma camada de gordura, cerca de 50% de gordura corporal. A gordura está contida nas células vivas, chamadas células adiposas, mantidas juntas por tecido fibroso. A camada de gordura fixa a pele aos ossos e músculos e ajuda a isolar o corpo, fornecendo estofamento protetor e servindo como uma área de armazenamento de energia.

[0004] O envelhecimento facial é uma manifestação de um processo dinâmico que ocorre ao longo de nossa vida devido a efeitos cumulativos sobre a pele, tecidos moles e esqueleto craniofacial, resultando em rugas texturais superficiais da pele, mudanças na topografia e perda de volume facial. Os efeitos desse envelhecimento incluem força gravitacional, reabsorção óssea progressiva, diminuição da elasticidade tecidual e redistribuição da gordura subcutânea e perda de plenitude. Desequilíbrio hormonal, exposição ao sol, estresse mental, dieta, hábitos de trabalho, doenças, abuso de drogas e tabagismo também podem afetar a atratividade facial.

[0005] A atrofia óssea e a dinâmica de expansão óssea e de perda óssea são a causa do envelhecimento do esqueleto craniofacial. A reabsorção óssea pode levar à perda de volume biométrico e os tecidos moles e a pele sobrepostos podem sofrer alterações significativas sem o suporte estrutural do osso. Por exemplo, a reabsorção maxilar pode levar à perda de suporte no lábio superior e pode levar ao deslocamento do coxim adiposo malar, contribuindo, assim, para o enrugamento perioral e dobras nasolabiais, respectivamente. A face jovem é caracterizada por uma topografia facial arredondada devido à distribuição equilibrada da gordura superficial e profunda, dando plenitude aos tecidos moles. A redistribuição e perda de gordura causam perda gradual no suporte de tecido mole e da plenitude, resultando em descida de tecido mole, por exemplo, perda de gordura na testa, malar, etc. e ganho de gordura nas papadas, dobras nasolabiais, etc.

[0006] Ao considerar a aparência e a estrutura facial, é conveniente dividir a face em três áreas onde o terço superior inclui a testa e as sobrancelhas, o terço médio inclui a região média da face e o nariz e o terço inferior inclui o queixo, a linha da mandíbula e o pescoço. O terço médio da face inclui os olhos, nariz, lábios e ossos da face (triângulo facial central) que são os principais contribuintes da percepção da estética e atratividade facial.

[0007] A face superior, que inclui a testa, sobrancelha, têmpora e área da pálpebra superior, é afetada pela perda da plenitude subcutânea, dando origem a linhas na testa. A ação muscular nesta área é relativamente oculta na juventude pela plenitude subcutânea da testa. À medida que a pessoa envelhece, a perda de plenitude dá origem a rugas e dobras. A impressão de ptose da sobrancelha é um resultado da perda do suporte lateral da sobrancelha e da perda de plenitude na pálpebra superior.

[0008] O terço médio da face, que inclui os olhos, nariz, lábios e ossos da face (triângulo facial central), é afetada pela perda da plenitude subcutânea. "Pés de galinha" são o resultado da perda da plenitude subcutânea ao redor do músculo orbicular dos olhos. Também, a borda do músculo orbicular dos olhos torna-se evidente e contribui para o desenvolvimento de bolsas malares sobre a eminência zigomática e a prega nasojugal. A depressão da região lacrimal periorbital acontece com a idade à medida que a gordura armazenada nas pálpebras inferiores se esgota, dando origem a uma aparência irregular. Entre o músculo orbicular dos olhos e a pálpebra inferior, a perda de plenitude aproxima os tecidos, resultando numa coloração mais escura da pele e uma aparência de olho cansado e exausto, mesmo após uma noite boa de sono. A coloração escura pode também ser atribuída à deposição de melanina na derme. As dobras nasolabiais são causadas pela descida da gordura da bochecha ptótica. O nariz também está sujeito a efeitos de envelhecimento, como perda de plenitude na glabela, násio e dorso superior (nariz cefálico) e ptose da ponta do nariz, contribuindo para a impressão de aumento do comprimento nasal. O queixo ptótico também pode contribuir para a impressão de aumento do comprimento nasal. A face inferior, que inclui o queixo, a linha da mandíbula e o pescoço, apresenta acúmulo de gordura com o aumento da idade, resultando em relativo excesso de pele, levando à perda da definição da linha da mandíbula. A descida da gordura até a borda mandibular leva à formação de papadas faciais. A deformidade do "pescoço de peru" é o resultado da ptose da pele sem suporte, da almofada do queixo e da tração para baixo do músculo platisma lembrando o pescoço de um peru. Além disso, com a idade, a contração do músculo platisma provoca a aparição de bandas musculares verticais no pescoço.

[0009] O principal objetivo do rejuvenescimento facial é a restauração da topografia facial. O rejuvenescimento facial pode ser realizado por procedimentos cirúrgicos e não cirúrgicos. A cirurgia inclui uma vasta gama de procedimentos, desde liftings a lipoaspiração e transferência de gordura. Técnicas de esfoliação são usadas para modificar a superfície da pele, corrigindo os efeitos do fotoenvelhecimento, incluindo linhas finas, pigmentação irregular e manchas. A esfoliação é conseguida por meio de peelings químicos, microdermoabrasão e esfoliação a laser. Atualmente, os pacientes favorecem e buscam procedimentos não cirúrgicos que possam restaurar o volume facial, corrigir a assimetria facial ou mesmo melhorar as características faciais existentes, com resultados estéticos imediatos e curto tempo de recuperação. Isto é conseguido por meio de uma vasta gama de substâncias que são administradas por injeção. O principal uso é para o tratamento de linhas, rugas e dobras para compensar a perda de volume facial. Isso inclui injeções de neurotoxinas (a toxina botulínica é usada para enfraquecer os músculos e minimizar as linhas dinâmicas), preenchimentos de volume e estimuladores de colágeno.

[0010] O ácido hialurônico (HA) é um polissacarídeo linear de ocorrência natural composto por unidades repetidas de dissacarídeos de ácido glucurônico e N-acetilglucosamina alternadamente ligados por ligações glicosídicas β-1,3 e β- 1,4 com peso molecular (MW) até vários milhões de Daltons (Da). Em condições fisiológicas, o HA é encontrado em sua forma ionizada, hialuronato, com sódio, cálcio, etc. como o contra-íon, por exemplo: hialuronato de sódio (NaHA). No corpo humano, encontra-se em alta concentração na pele, cordão umbilical e humor vítreo. HA é uma molécula relativamente rígida devido à restrição da rotação da ligação glicosídica pelo grupo N-acetil volumoso adjacente à ligação glicosídica. A sua conformação natural é uma hélice e a conformação helicoidal é reforçada pelas ligações de hidrogênio formadas entre os diferentes grupos funcionais (por exemplo, amina, carbóxilo e hidroxilo). As principais fontes de HA para escalas industriais são provenientes de tecidos animais como o pente do galo, que requerem purificação extensiva, e de fermentação microbiana estreptocócica, como a fermentação de HA por bactérias Streptococcus zooepidemicus.

[0011] HA possui funções estruturais, reológicas, fisiológicas e biológicas significativas. HA tem a capacidade de absorver grandes quantidades de água e possui capacidade de retenção de umidade para formar uma substância altamente viscoelástica em solução aquosa. Devido à sua capacidade de absorção e natureza viscoelástica aliada à sua falta de imunogenicidade e toxicidade, pode preencher, revestir, lubrificar e sustentar tensões mecânicas nos tecidos. Assim, o HA encontra várias aplicações na indústria cosmética, biomédica, farmacêutica e alimentícia. Embora seja biocompatível, o HA é biodegradável e facilmente degradável por enzimas como a hialuronidase (degradação enzimática), apresentando um tempo de residência relativamente curto nos tecidos. A meia-vida é da ordem de menos de uma semana. Além disso, o HA não é capaz de suportar temperaturas elevadas durante períodos de tempo longos. É sensível a degradação térmica, o que significa que é degradado por radicais livres, por hidrólise. Por exemplo, HA em solução aquosa sob condições de autoclavagem a 121°C por vários minutos sofre uma redução substancial em MW. A diminuição dos MW é acelerada exponencialmente acima de 60°C. Além da degradação enzimática, térmica e radical, HA é sensível a degradação mecânica, por exemplo: degradação por forças de cisalhamento. Todos os tipos de degradação acima mencionados provocam um tempo de residência relativamente curto nos tecidos.

[0012] A modificação química, funcionalização ou derivatização do HA com grupos orgânicos permite a alteração das propriedades químicas e físicas do HA de forma controlada para obter novos biomateriais com novas propriedades desejadas e melhoradas. Dependendo do tipo e grau de modificação, o HA modificado é um produto químico diferente do HA nativo e, portanto, pode ser menos natural, biocompatível e até mesmo seu comportamento biológico pode resultar alterado. Apesar disso, deve-se medir o benefício e o resultado que a modificação leva ao seu serviço como uma aplicação médica. Por exemplo, o HA tem baixa solubilidade em solventes orgânicos. A reação com álcoois pode alterar sua natureza lipofóbica para uma natureza mais lipofílica, aumentando assim sua solubilidade em solventes orgânicos. Como o derivado de HA é menos solúvel em água, pode ter o tempo de residência in vivo aumentado. Adicionalmente, pode possuir melhor interação com moléculas tais como fármacos. Outro exemplo é o hidrogel de HA reticulado usado como um implante cosmético, preenchimento dérmico cosmético que é introduzido na pele para aumentar o tecido, adicionar volume e reduzir rugas tem a função de prolongar o tempo de residência do HA in vivo que é crucial para o seu sucesso clínico.

[0013] O MW da molécula de HA para fins cosméticos e de aumento é geralmente da ordem de centenas de milhares a vários milhões de Da. O HA não reticulado que pode ser utilizado como preenchimento dérmico tem um MW elevado para manter a estabilidade in vivo e é demasiado viscoso para ser injetado através de uma agulha de calibre fino (normalmente referido como agulhas na gama de 27G e superior, na prática até 30G), enquanto que o baixo teor de MW é facilmente injetado mas carece de estabilidade. Um dos métodos para contornar essa desvantagem é a modificação química como reticulação. A reticulação química de HA é alcançada pela reação de HA não reticulado com um agente reticulante para formar uma rede HA infinita 3-dimencional (3D) que não é mais solúvel em água nos meios aquosos que compõem os hidrogéis de HA que possuem melhor estabilidade in vivo. No entanto, esta etapa de reação química ou modificação acrescenta etapas adicionais de manuseio de reagentes químicos e purificação dos produtos de reação. Normalmente, os reagentes químicos são solúveis em água e as reações e purificações químicas são realizadas em meio aquoso. Como foi dito acima, deve-se medir o benefício e o resultado que a modificação leva ao seu serviço como uma aplicação médica. Seguindo essa afirmação, o gel de HA reticulado resolve as desvantagens do HA não reticulado e pode ser usado como preenchimento dérmico, aumento de tecido para fins cosméticos, como aumento de tecido facial, por meio da adição de volume ao tecido facial, correção de rugas e dobras e restauração de uma aparência suave para o rosto.

[0014] A hidroxiapatita(HAp) tem a seguinte fórmula química: Ca10 (P04)6(OH)2 (relação Ca/P=1,67). HAp é uma cerâmica particulada de Fosfato de Cálcio. HAp ocorre naturalmente como depósitos geológicos e em tecidos biológicos normais, como osso, cartilagem, esmalte, dentina e cimento de vertebrados e em muitos locais de calcificações patológicas, como vasos sanguíneos e pele. Um 75%w (todas as percentagens dadas no pedido são peso por peso, salvo indicação em contrário) do osso humano consiste em bioapatita para conferir ao osso a sua rigidez e resistência à carga mecânica. A morfologia da bioapatita é de grãos alongados planos com estrutura hexagonal.

[0015] HAp é um material implantável, termodinamicamente estável sob condições fisiológicas, que possui excelente biocompatibilidade (não tóxica, não imunológica) e bioatividade, possibilidade de estimular a formação de células e reparação de tecidos. Pode estimular a resposta celular, a síntese de colágeno, utilizada como veículo de transformação celular, veículo de entrega de genes, etc. As HAp são utilizadas em aplicações de engenharia de tecidos, tais como materiais substitutos de ossos e dentes para fins de reparação e substituição. Há um uma grande quantidade de métodos descritos para a síntese HAp, incluindo a pulverização de plasma, síntese hidrotérmica, secagem por congelamento, sol-gel, transformação de fase, síntese mecano-química, precipitação química, etc. A morfologia da HAp sintética divulgada é de cristais monoclínicos ou hexagonais e são fatores-chave para usos médicos a relação Ca/P e o tamanho de grão dos pós. Tipicamente, o pó de HAp tem um tamanho de partícula na faixa de 10μm e 100μm. Normalmente, a forma de nanopó de HAp tem um tamanho de partícula na faixa de 1nm a 100nm. Tipicamente, as partículas de HAp num preenchimento dérmico são redondas, uniformes, lisas e com baixa área de superfície. No entanto, as partículas de HAp podem ter forma irregular, podem ser porosas, ocas, microesferas ocas porosas semelhantes a flores, ou qualquer outra forma adequada com uma área de superfície elevada.

[0016] Geralmente, os preenchimentos dérmicos e subdérmicos baseados em HA compreendem HA na ordem de centenas de milhares a vários milhões de Da, opcionalmente com um reticulante bi ou poli funcional formando ligações covalentes com HA sob condições alcalinas ou ácidas. Por exemplo, diepóxidos como o de 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE) e o 1,2-etanodiol diglicidil éter (EDDE) em condições alcalinas reagem com o grupo hidroxil para formar uma ligação éter, enquanto em condições ácidas a reação que ocorre forma um éster. Os preenchimentos dérmicos mais comuns no mercado foram reticulados com reticulantes tais como BDDE e divinil sulfona (DVS). No entanto, qualquer outro reticulante bi ou polifuncional pode ser utilizado para reticulação, incluindo, mas não limitado a, compostos epóxi, DVS, formaldeído, poliaziridina, aminoácidos ou ésteres, carbodiimidas, etc. em reação direta com HA. O HA pode ser reticulado usando moléculas bi ou polifuncionais atuando como grupos laterais que, por um lado, se ligam ao HA e, por outro lado, um reticulante adicional único bi ou polifuncional ou vários reticulantes enfileirados são usados para ligar as extremidades de dois grupos laterais.

[0017] Adicionalmente, pode incluir HA não reticulado na ordem de centenas de milhares a vários milhões de Da, a fim de ajudar na extrusão através de uma agulha de calibre fino. Adicionalmente, pode incluir um ou mais suplementos ativos, cada um com sua própria propriedade única, como agentes anestésicos, antioxidantes, vitaminas, etc. Sem se limitar por eles, alguns exemplos são Lidocaína, Manitol, Vitamina C, etc. respectivamente. A concentração de HA no preenchimento dérmico de HA pode variar de 1mg/ml a 50mg/ml e mais especificamente a 15-30mg/ml onde cada concentração é mais adequada para uma área específica de enchimento e aumento de tecido.

[0018] A metodologia típica de preparação do preenchimento dérmico HA reticulado inclui várias etapas básicas conhecidas por aqueles de habilidade comum na arte. O primeiro passo é hidratar o HA seco. O passo seguinte é pôr em contato o HA com um reticulante para reticulação de HA em ambiente alcalino ou ácido. O passo seguinte inclui a remoção do reticulante residual, geralmente por meio de diálise e inchamento do HA reticulado usando água purificada ou solução tampão fosfato (PBS). Por exemplo, diálise num saco de diálise com um corte de MW de 12.000 por alguns dias até que a maior parte do reticulante residual é removida. O passo seguinte inclui a adição de suplementos ativos e adição de HA não reticulado e homogeneizar toda a composição. O passo seguinte inclui a esterilização para finalizar o preenchimento dérmico de HA com as propriedades adequadas para preenchimento dérmico, tais como propriedades reológicas, força de extrusão, pH, osmolaridade, etc.

[0019] Geralmente, os preenchimentos dérmicos de HAp incluem até 60%p/p de partículas microesféricas de HAp que estão suspensas homogeneamente num líquido ou gel de alta viscosidade que atua como um material portador. Tipicamente, as partículas de HAp num preenchimento dérmico são redondas, uniformes, lisas, de baixa superfície, com um diâmetro entre aproximadamente 10 e 100μ em diâmetro, preferencialmente entre 25 e 50μ em diâmetro. Num exemplo, as microesferas de HAp estão suspensas num veículo composto por carboximetilcelulose (CMC), glicerina e água. Em outro exemplo, as microesferas de HAp estão suspensas num veículo composto de HA e água. Em outro exemplo, as microesferas de HAp estão suspensas num veículo composto de HA reticulado conforme descrito acima, onde as microesferas de HAp são adicionadas durante ou após o processo de reticulação HA. Estas composições e concentração relativa de ingredientes são conhecidas por aquelas pessoas de qualificação comum na arte, por exemplo, a concentração comum de HAp em tais composições é de 55,7% p/p ou menos. Em todos os exemplos, as microesferas de HAp estão suspensas em líquido ou gel altamente viscoso e não existe uma ligação real entre as HA e HAp. O veículo serve como instrumento para transferir as microesferas de HAp para a área designada para enchimento e aumento de tecido e para prevenir a agregação das microesferas tanto na seringa como no corpo. Ele serve para evitar a sedimentação da HAp e a separação de fases. Adicionalmente, para manter as microesferas dentro do local desejado, evitando que elas se dispersem na área injetada.

SUMÁRIO

[0020] A invenção, em pelo menos algumas materializações, apresenta composições baseadas em HA e HAp no domínio dos preenchimentos de tecidos moles e um método de fabrico dos mesmos. Opcionalmente, os preenchimentos dérmicos são de utilidade para melhorar o aumento do tecido facial, adicionando volume ao tecido facial, corrigir rugas e dobras e restaurar uma aparência tersa no rosto. Opcionalmente, o preenchimento dérmico inclui HA, não reticulado ou reticulado, ligado quimicamente a HAp. A combinação de HA quimicamente ancorado à superfície de HAp tem um efeito sinérgico da duração do aumento de tecido devido à degradação mais lenta de ambos os componentes sem redução na sua capacidade intrínseca de funcionar como componentes de rejuvenescimento da pele. Estes e outros aspectos e vantagens da invenção podem ser mais facilmente compreendidos e apreciados na descrição detalhada.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DOS DESENHOS

[0021] A invenção é aqui descrita, apenas a título de exemplo, com referência aos desenhos que a acompanham. Com referência específica agora aos desenhos em detalhe, salienta-se que as particularidades apresentadas são apenas a título de exemplo e para efeitos de discussão ilustrativa das materializações da invenção, e são apresentadas de modo a fornecer a descrição que se crê ser a mais útil e facilmente compreensível dos princípios e aspectos conceptuais da invenção. A este respeito, não se pretende mostrar os pormenores estruturais da invenção com mais detalhe do que o necessário para uma compreensão fundamental da invenção, a descrição junto com os desenhos mostrando à pessoas qualificadas na arte como as várias formas da invenção podem ser materializadas na prática. Nos desenhos:

[0022] A Figura 1 mostra microesferas de HAp não tratadas observadas sob MEV;

[0023] A Figura 2 mostra as microesferas de HAp tratadas observadas sob MEV, após tratamento com 3- Glicidoxipropropiltrimetoxissilano.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0024] Conforme a técnica anterior, as microesferas de HAp são adicionadas a um veículo que é um líquido ou gel altamente viscoso. Num exemplo, as microesferas de HAp são adicionadas a HA reticulado, o qual também atua como veículo. A combinação de HA e HAp tem um efeito aditivo, não um efeito sinérgico. O efeito aditivo consiste no seguinte: as microesferas de HAp se degradam lentamente, sem reação de corpo estranho, servindo de plataforma para o crescimento natural dos tecidos e o HA atua como matriz extracelular de hidratação e de suporte. Um efeito sinérgico entre HA e HAp é bastante questionável, devido ao fato de a rede de HA reticulado e as microesferas de HAp formarnuma mistura simples, em que o gel de HA é a fase contínua e as microesferas de HAp são a fase dispersa. Numa mistura dessa simplicidade, cada componente mantém suas próprias propriedades sem ter um efeito sinérgico.

[0025] Adicionalmente, foi reivindicado que a adição de HAp à HA antes da reticulação pode formar uma estrutura encapsulada resultando numa estrutura de HAp encapsulada pelo HA. Foi reivindicado que esta estrutura encapsulada pode retardar a degradação da HAp até o HA se degradar, tendo servido de escudo que pode impedir a degradação da HAp. Mais uma vez isto é questionável, devido ao fato de não existir uma ligação real entre HAp e HA nestas composições na técnica anterior.

[0026] Primeiro, num estado ou sistema ideal de HAp encapsulado com HA, há algum mecanismo de proteção contra a degradação de HAp pelo encapsulamento de HA até que o encapsulamento seja violado. Este estado ideal ocorreria dependendo da espessura do encapsulamento. No entanto, mesmo nesse estado ideal, não há mecanismo de proteção contra a degradação do HA. E em segundo lugar, o sistema não é ideal, portanto, como consequência, uma grande parte das microesferas de HAp não são encapsuladas. O estado das microesferas varia desde a cobertura parcial com HA até o não encapsulamento com HA das microesferas de HAp. Sem pretender ficar limitado por uma única hipótese, isso é provável que seja devido ao fato de que as microesferas de HAp são várias ordens de grandeza maiores do que as cadeias HA (comprimento de extremo a extremo).

[0027] Nas composições da técnica anterior, essas cadeias curtas são agitadas formando microrredes tridimensionais locais que não necessariamente prendem as microesferas de HAp, resultando em algumas microesferas de HAp encapsuladas e algumas microesferas de HAp não encapsuladas. A maioria das microesferas de HAp encapsuladas provavelmente não estarão encapsuladas, devido ao seu tamanho relativo, conforme explicado acima. Novamente, o resultado pode ser considerado como simples mistura, e não como encapsulamento verdadeiro.

[0028] Assim, é possível injetar na mesma área diferentes preenchimentos dérmicos baseadas em HA e HAp separadamente, de modo a obter os mesmos benefícios que com a mistura, o que normalmente está sendo feito. Adicionalmente, a mera adição de uma alta concentração de microesferas de HAp em HA reticulado provoca um efeito prejudicial adicional de efeito viscoso e alta força de extrusão em relação ao portador de HA não reticulado. A solução simples para resolver este problema é reduzir a concentração de microesferas de HAp. No entanto, a utilização de diferentes tipos de preenchimentos dérmicos na mesma área pode ajudar a resolver o problema.

[0029] A fim de obter um efeito sinergético tanto de HA como de HAp, é desejável formar um compósito à base de HA que contenha HAp como aditivo. Um compósito é visto como uma mistura de vários aditivos que possuem funcionalidades diferentes e distintas e uma matriz de polímeros que os mantém juntos e os vincula com o objetivo de formar um material à base de polímeros com propriedades muito melhoradas respeito das propriedades intrínsecas do polímero ou de lhe conferir novas propriedades. As propriedades do material compósito de HA não dependem apenas da fração de volume das microesferas de HAp, mas também das interações químicas e físicas com o gel de HA, tais como a rede polimérica e os parâmetros interfaciais (compatibilidade, molhabilidade e fixação, descritos coletivamente aqui como "adesão"). A adesão é importante para alcançar uma melhoria nas propriedades do compósito. Adicionalmente, uma melhor adesão também ajudará a dispersar melhor o aditivo na rede.

[0030] Um agente de acoplamento é definido como um composto que fornece, numa visão clássica, uma ligação química entre dois materiais diferentes, geralmente um material inorgânico e um material orgânico, como no caso de HA e HAp. Os agentes de acoplamento podem também proporcionar outras interações para além da ligação química entre os dois materiais diferentes, como as interações iônicas, a ligação por hidrogênio, etc. até interações van der Waals (VDW) fracas. Por exemplo, podem ser aplicados agentes de acoplamento durante a mistura do polímero e do aditivo. Num outro exemplo, o agente de acoplamento pode ser aplicado como modificação da superfície do aditivo ou como um novo grupo funcional introduzido na cadeia polimérica, seguido de interação com o outro grupo, bem como as combinações destas. Todos os itens acima são considerados como caminhos para aumentar a adesão entre o polímero e o aditivo. O aumento das forças de adesão entre o aditivo e o polímero varia de ligações químicas fortes ou atração eléctrica a interações VDW fracas.

[0031] O uso de qualquer mecanismo de agente de acoplamento conforme explicado acima é possível, mas o mais favorável é o uso de modificação de superfície devido à sensibilidade do HA à degradação térmica, a degradação por cisalhamento, a degradação enzimática e assim por diante, conforme explicado acima. Adicionalmente, a utilização de um agente de acoplamento durante a mistura ou introduzido como grupo funcional pode interferir com a etapa de reticulação de HA para formar um gel reticulado no caso de um compósito contendo HA reticulado.

[0032] HA e HAp em contato podem ter interações da ordem de VDW, ligações de hidrogênio ou mesmo interações iônicas que não são consideradas permanentes. Ao passo que, criar uma ligação covalente entre HA e HAp que pode ser considerada permanente, resultará na formação de um verdadeiro material compósito com os benefícios de HA e HAp. A forma mais simples de obter uma ligação química entre a superfície HAp e as moléculas de HA é por meio da utilização de agentes de acoplamento e, em particular, do tratamento da superfície com silanos organofuncionais. O tipo de agente de acoplamento de silano, o tratamento de superfície com silano, é selecionado de acordo com a química de superfície do aditivo e do polímero. Outros tipos de agentes de acoplamento podem ser utilizados da mesma forma, por exemplo, zirconatos, titanatos, etc. Outros caminhos para alcançar uma ligação covalente entre HA e HAp que podem resultar no mesmo efeito de acoplamento químico podem incluir o uso de reticulantes, agentes quelantes ou mesmo o uso de múltiplos agentes de acoplamento enfileirados apontando para fora da superfície do aditivo o qual pode resultar no mesmo efeito da ligação química.

[0033] HAp tem uma tendência a formar agregados devido a interações VDW e ligações de hidrogênio. Outra vantagem do uso do Silano é a de ajudar a prevenir a agregação devido à eliminação dessas interações e, em certa medida, contribuir com um impedimento estérico.

[0034] A estrutura química mais comum do silano organofuncional é R-Si-X3 onde o X é um grupo alcóxi que pode hidrolisar a grupos reativos na superfície e R é um grupo organofuncional que pode reagir com a matriz polimérica. Outros tipos de silano organofuncional com menos de três grupos alcóxi também são adequados para reagir com a superfície. Alternativamente, X é um átomo de cloro. No entanto, o uso destes materiais está limitado comercialmente devido à dificuldade em manusear os subprodutos corrosivos, inflamáveis ou tóxicos associados à hidrólise.

[0035] Existem duas técnicas principais para a inserção do silano:1. Pré-tratamento — a aplicação direta ao aditivo do silano puro ou da sua solução num solvente orgânico diluído em água que acelera a reação. Normalmente, esta técnica é realizada por pulverização ou imersão do aditivo com o agente silano (acabamento superficial).2. Adição do silano ao polímero, seguida do aditivo não tratado. Esta técnica é considerada rara.

[0036] No caso de HA e HAp, o método preferido é o pré-tratamento no qual as partículas de HAp são revestidas com silano antes da introdução no HA.

[0037] O resultado do processo de pré-tratamento industrial é a formação de uma multicamada espessa reticulada tridimensionalmente de silano (retícula de polissiloxano). A monocamada de silano, que hoje em dia só pode ser obtida por técnicas de sililação de fase de vapor, geralmente está fora do âmbito da prática industrial.

[0038] O grupo organofuncional do silano é selecionado de acordo com o tipo de interação favorável entre o polímero e o aditivo. A interação pode ser na ordem de forças VDW fracas, interações hidrofílico-hidrofóbicas e até ligações químicas covalentes. Há uma grande variedade de grupos R possíveis e a espécie específica é selecionada por sua afinidade com a matriz polimérica. Note-se que mais de um tipo de silano pode ser utilizado eficazmente com um determinado polímero. Assim, para um polímero específico, o agente de acoplamento silano organofuncional mais adequado selecionado deve ter como resultado uma ligação química e interdifusão na matriz para formar uma rede com o polímero.

[0039] Por exemplo, tratamentos de superfície de silano como 3-glicidoxipropiltrimetoxissilano ou 3- glicidoxipropiltrietoxissilano ou outro silano com grupos funcionais epóxi os quais podem atuar do mesmo modo que o reticulante BDDE e participar na reação química que ocorre durante a cura do gel de HA, formando assim uma ligação entre a HAp com a superfície tratada e o HA.

[0040] O mecanismo habitual de cura com BDDE do HA inclui a reação com o BDDE, de fórmula química 1,4-butanodiol diglicidil éter, que tem dois grupos funcionais epóxi que, em condições alcalinas, produz uma ligação éter covalente estável entre o HA e o reticulante, do mesmo modo que o 3- glicidoxipropiltrimetoxissilano tem um grupo funcional epóxi capaz de formar ligações cruzadas de reticulação entre HAp e HA. O grupo R- do 3-glicidoxipropiltrimetoxissilano, o grupo epóxi, pode assumir o papel de BDDE e agir como um reticulante. Como foi dito acima, os reticulantes constituem também uma via para alcançar uma ligação covalente entre HA e HAp. Neste caso, o BDDE pode também ligar-se entre HA e HAp como uma ligação lateral a HA e, por outro lado, à superfície de HAp formando ligações éteres ou, em casos extremos, ligação a radicais na superfície de HAp. O problema em tal sistema é controlar o grau de reticulação em ambas as reticulações de HA, entre si e entre HA e HAp, devido à concorrência em sites de reticulação tanto no HA como na HAp. Seria necessária uma concentração mais elevada de BDDE para obter propriedades minimamente comparáveis as obtidas com o método de tratamento de superfície de HAp seguido de reticulação para formar o compósito de HA e HAp.

[0041] Outra possibilidade é o uso de viniltrimetoxissilano ou viniltrietoxissilano ou viniltriclorossilano como exemplo de clorossilano ou outro silano com grupo funcional vinil capaz de atuar de forma igual a um reticulante DVS e participar na reação química que ocorre durante a cura do gel de HA, formando assim uma ligação entre a HAp com a superfície tratada e o HA.

[0042] O mecanismo habitual de cura com DVS do HA inclui reação com a DVS, que tem dois grupos de funcionais vinil que, sob condições alcalinas, produznuma ligação éter covalente estável entre o HA e o reticulante, do mesmo modo que o viniltrimetoxissilano tem um grupo funcional vinil que pode formar ligações de reticulação entre a HAp e o HA. O grupo R- de viniltrimetoxissilano, o grupo vinil, pode assumir o papel da DVS e agir como um reticulante.

[0043] O número de possibilidades é enorme para reticular HA e HAp, outro exemplo é a di-hidrazida de ácido adípico (ADH) como reticulante e 3 - aminopropiltrietoxissilano ou 3- aminopropiltrimetoxissilano ou outro silano com grupos funcionais amino pode assumir o papel de ADH e agir como um reticulante. Mas, nem todas as reações são favoráveis devido à sensibilidade HA conforme explicado acima. Os exemplos de silano com grupos funcionais epóxi e silano e com grupos funcionais vinil imitam os procedimentos mais comuns de reticulação HA no mercado de preenchimentos dérmicos e podem ser facilmente implementados no compósito de HA e HAp, seja o HA na composição reticulado ou não. Como mencionado acima, uma multicamada reticulada tridimensionalmente de silano é formada durante a sililação na superfície da microesfera HAp. Não há cobertura total de silano colado na superfície devido à estrutura tridimensional. Assim, existem domínios na superfície que estão tratados com silano e domínios que estão livres de silano dando à superfície uma topografia de manchas tratadas isoladas ou interconectadas no meio uma área não tratada maior visualizadas como ilhas ou ilhas interconectadas (com pontes) dispersas no mar. Os domínios de silano acoplado à superfície são as ilhas espalhadas no mar de superfície de HAp livre. A textura da superfície das ilhas no mar pode ser modificada por ser dependente da concentração de silano utilizada.

[0044] Sem pretender se limitar à mudança de concentração, outros métodos podem ser aplicados para modificar a topografia e afinidade da superfície, como a técnica de partículas de Janus. Uma partícula de Janus é uma partícula antissimétrica com duas propriedades físicas distintas, por exemplo, uma partícula HAp com uma superfície hemisférica recoberta com silano e outra sem tratamento. A topografia da superfície e a afinidade são diferentes entre os dois hemisférios. Existem e podem ser aplicados diferentes métodos de formação de partículas de Janus, por exemplo, o método de mascaramento em que as partículas são aprisionadas na interface entre duas fases, permitindo que o hemisfério não tratado seja mascarado e o outro hemisfério receba um recobrimento, pelo que a modificação da superfície da partícula é feita apenas num lado.

[0045] Outro exemplo de um método deste tipo para modificar a topografia e afinidade da superfície é a utilização de uma mistura de reagentes de silano com diferentes funcionalidades, por exemplo, um silano que pode reagir com cadeias HA e o outro que não. Num caso extremo, formando uma partícula de Janus com uma superfície hemisférica recoberta com silano reativo e outra com silano não reativo. Em qualquer um dos exemplos citados, a área tratada com silano possui a topografia de manchas tratadas isoladas ou interconectadas no meio de uma área maior não tratada. O tratamento de superfície é na escala nanométrica sobre microesferas com dimensões na escala micrométrica. Este tipo de topografia de superfície permite a degradação lenta da HAp e serve como uma plataforma para o crescimento natural do tecido. É razoável supor que, em tal estrutura, a degradação pode ser mais lenta do que nas microesferas de HAp não tratadas.

[0046] As cadeias de HA são adsorvidas na superfície da HAp com a superfície tratada. Uma cadeia HA adsorvida na superfície forma trens (porções de cadeia que estão em contato com a superfície), loops (porções de cadeia que não estão em contato com a superfície e estão situadas entre dois trens) e duas caudas (porções de cadeia que não estão em contato com a superfície, estão unidas a outras porções só num lado a um trem e estão livres do outro lado). A adsorção envolve a formação de interações físicas e ligações químicas, denotadas como fisisorção e sorção química, respectivamente. Assim, é razoável supor que alguns dos trens das cadeias de HA estão covalentemente aderidos à superfície e a adsorção é irreversível e permanente. Esta estrutura implica que as microesferas de HAp também atuam como locais de reticulação no gel formado. É razoável assumir que a concentração de reticulante na presença de microesferas com a superfície tratada pode ser reduzida para ter o mesmo efeito de reticulação, assim, essas microesferas podem substituir, até certo ponto, o reticulante. Adicionalmente, ter uma microesfera como um local de reticulação tem como efeito o aumento da resistência mecânica local, um local de ancoragem que pode auxiliar na obtenção de um efeito de volume mais estável, especialmente em rugas profundas. Adicionalmente, as cadeias HA aderidas à superfície são menos susceptíveis à degradação enzimática. É razoável presumir que as partes da cadeia definidas como trens são menos propensas a degradação enzimática uma vez que estão ligadas à superfície. A degradação de parte da cadeia definida como loops e caudas depende do seu tamanho relativo e acessibilidade pelas enzimas. Assim, globalmente as cadeias de HA na proximidade de microesferas de HAp são menos propensas à degradação enzimática, o que pode auxiliar na obtenção de um efeito de volume mais robusto e numa maior furação do efeito na área injetada. Adicionalmente, a resistência mecânica melhorada do compósito de HA contendo HAp como elos na reticulação, ao passo que as microesferas atuam como pontos de ancoragem pode ajudar de forma substancial em áreas onde as rugas e dobras dinâmicas exigem maior resistência à ação muscular. A partir do acima mencionado, entende-se claramente que o HA contendo partículas de HAp ligadas quimicamente é considerado como um compósito, um gel reforçado com propriedades melhoradas, tais como resistência mecânica, resistência à degradação, etc. ou cujas propriedades podem ser modificadas sob medida, dependendo da aplicação requerida. Outros tipos de microesferas com a superfície tratada, biodegradáveis ou não, inertes ou estimulantes, podem ser usadas para o efeito de ancorar cadeias de HA, como as microesferas de ácido polilático.

[0047] Como mencionado acima, HA e HAp em contato numa mistura simples em vez de num compósito podem ter interações na ordem de VDW, ligações de hidrogênio ou mesmo interações iônicas que não são consideradas permanentes. Após a injeção, a mistura é exposta a tecidos e fluidos corporais que podem ter as mesmas interações na ordem de VDW, ligações de hidrogênio ou mesmo interações iônicas com HA e HAp, que podem resultar na perda de interação entre HA e HAp em oposição à interação covalente química permanente entre HA e HAp.

[0048] Assim, numa mistura, as cadeias HA e as microesferas de HAp irão degradar-se como se fossem injetadas individualmente enquanto que num compósito, o efeito sinérgico é que tanto as cadeias HA como as microesferas de HAp irão degradar-se muito mais lentamente, permitindo uma permanência maior no corpo, um tempo de residência in vivo mais prolongado, e como consequência um aumento de tecido mais duradouro. Como descrito acima, o uso de reticulantes é considerado uma modificação química ou estabilização de HA por reticulação, enquanto a adição de partículas que se acoplam quimicamente pode ser considerada como modificação física e química de HA por reticulação a partículas. Este último é também um método de estabilização de HA por partículas em geral e em particular de HAp, além da estabilização por reticulação.

[0049] Alguns benefícios adicionais que podem surgir com o uso do compósito de HA e HAp é evitar o efeito Tyndall, pois a HAp é opaca, ou reduzir a brancura em áreas finas uma vez que o HA é translúcido. Adicionalmente, a HAp é radiopaca e, portanto, toda a composição é facilmente detectável na radiografia durante ou após a injeção.

[0050] Em geral, ela pode ser vista como uma modificação química, funcionalização ou derivatização de HA com grupos inorgânicos, como a HAp cerâmica com a superfície tratada com silano, que permite alterar as propriedades químicas e físicas de HA de forma controlada para obter novos biomateriais com novas propriedades desejadas e melhoradas.

[0051] Como foi dito acima, HA e o reticulante bi ou poli funcional podem formar uma ligação covalente sob condições alcalinas ou ácidas. A adição de um reticulante polifuncional dendrímero pode representar as vantagens adicionais de viscosidade reduzida e maior longevidade no tecido. Um dendrímero é uma macromolécula com peso molecular preciso, estrutura altamente ramificada que define uma forma elipsoidal ou globular. Os dendrímeros estão constituídos por um núcleo central e uma série de camadas radialmente concêntricas nas ramificações chamadas "gerações" que definem sua forma. Normalmente, os grupos funcionais efetivos que podem reagir com outros grupos estão localizados na geração mais externa (ou seja, nas partes mais externas dos ramos). Por exemplo, a reação de HA tanto com BDDE (reticulante bi epóxi-funcional) como com uma molécula dendrítica epóxi-funcional podem resultar num gel de consistência mais macia e menor força de extrusão através de uma agulha de calibre fino e num gel com maior longevidade no tecido devido à estrutura dendrítica na retícula com dendrímero.

[0052] Alternativamente, os HA não reticulados, alguns ou todos, num preenchimento dérmico podem ser reticulados usando um dendrímero epóxi-funcional, mantendo assim baixa viscosidade que pode auxiliar na extrusão através de uma agulha de calibre fino e, até certo ponto, exibir maior longevidade no tecido do que os HA não reticulados. Uma agulha de calibre fino é, por exemplo, uma agulha com um calibre na faixa de 27G a 30G. Opcionalmente, a longevidade maior pode ser pelo menos 20% maior do que para a composição do preenchimento dérmico de HA, pelo menos 50% maior, pelo menos 100% maior, pelo menos 200% maior, pelo menos 500% maior ou qualquer valor intermédio integral. A maior longevidade é para o HA reticulado, que pode, por exemplo, estar reticulado com BDDE e dendrímero. O produto em gel,tal como o preenchimento dérmico final, pode, por exemplo, conter cerca de 90% de gel reticulado e 10% de HA não reticulado. A presença de HA não reticulado reduz a viscosidade do gel e o lubrifica para facilitar a extrusão da seringa.

[0053] Exemplos não limitantes de dendrímeros epóxi- funcionais podem ser encontrados em Multiply Functionalized Dendrimers: Protecting-Group-Free Synthesis through Sequential Thiol-Epoxy 'Click' Chemistry and Esterification Reaction (RSC Advances, apresentado 4 de Maio de 2015, Khan et al; ver, por exemplo, a molécula 8 como um exemplo não limitativo de um dendrímero epóxi).

[0054] Como foi dito acima, HA e o reticulante bi ou polifuncional podem formar uma ligação covalente sob condições alcalinas ou ácidas. A adição de uma molécula de gaiola POSS® (siglas em inglês de Silsesquioxano Oligomérico Poliédrico) como um reticulante polifuncional, como por exemplo um POSS® epóxi-funcional, como por exemplo o glicidil POSS® (silsesquioxano epóxi-funcional) pode apresentar várias vantagens de viscosidade reduzida e maior longevidade no tecido. Diferentes funcionalidades orgânicas podem ser adicionadas sob medida à estrutura de gaiola base, como, por exemplo, o grupo epóxi-funcional em glicidil POSS®. Por exemplo, a reação de HA com a molécula BDDE e glicidil POSS® pode resultar num gel de consistência mais macia e com menor força de extrusão através de uma agulha de calibre fino, e também num gel com maior longevidade no tecido devido à estrutura de gaiola do reticulado de glicidil POSS®. Alternativamente, o HA não reticulado, alguns ou todos, num preenchimento dérmico pode ser reticulado usando glicidil POSS®, mantendo assim baixa viscosidade que pode auxiliar na extrusão através de uma agulha de calibre fino e, até certo ponto, exibir maior longevidade no tecido do que o HA não reticulado.

[0055] A descrição acima de calibre fino e/ou maior longevidade também pode ser aplicada para esta materialização com POSS®.

[0056] O POSS® que está modificado com uma funcionalidade orgânica adequada também pode servir como um agente de acoplamento, por exemplo, no caso de estarem presentes na estrutura da gaiola base tanto a funcionalidade alcóxi de igual forma aos silanos como a funcionalidade epóxi. Tal estrutura POSS® pode acoplar ambos os extremos de HA e HAp do mesmo modo que o tratamento de superfície Silano. O procedimento de aplicação do POSS® como agente de acoplamento é semelhante ao descrito acima.

[0057] Embora o material acima descrito inclua um polissacarídeo, em especial o HÁ, ligado quimicamente a uma partícula de cerâmica de fosfato de cálcio, como por exemplo a HAp, por meio da utilização de um agente de acoplamento, não se pretende de forma alguma ser limitante. Outros polissacarídeos, como o heparosano, podem seguir o mesmo procedimento de acoplamento que o HA a HAp e outros tipos de microesferas com a superfície tratada, como as microesferas biodegradáveis de ácido polilático, podem assumir o papel de HAp na ancoragem superficial de cadeias HA.

[0058] Embora o descrito acima diga respeito a agentes de preenchimento dérmico, em especial a agentes de preenchimento dérmico facial, isto não implica, de modo algum, um uso limitado. Outras áreas anatômicas do corpo podem ser preenchidas ou aumentadas, como pescoço, nádegas, peito, mama, mão, panturrilha, etc. Adicionalmente, pode ser usado como uma alternativa não cirúrgica ou complemento à cirurgia em remodelação nasal, enxerto de ponta. Adicionalmente, ele pode ser usado em todo o corpo para dissimular marcas de pele como cicatrizes, cicatrizes de acne, estrias - estrias, etc. Adicionalmente, pode apresentar vantagens e ser utilizado em campos como a reconstrução de ossos e dentes, enquanto a HAp é o componente principal. Adicionalmente, pode apresentar vantagens e ser utilizado em campos, como a lubrificação de juntas para melhorar a mobilidade das juntas e a capacidade de absorção de choques.

[0059] Exemplo 1 - Tratamento de Superfície com silano

[0060] 1. Preparação da solução de silano para tratamento (2% de silano no volume total):

[0061] 93,25% vol. O metanol é misturado com 3,93% vol. de água destilada. 0,81% vol. Adiciona-se ácido acético para tamponar a solução a um pH de 4,5-5,5. 2% vol. do silano funcional é adicionado à solução. Uma concentração mais baixa de silano pode ser usada para modificar a cobertura de superfície de silano.

[0062] 2. Tratamento com silano:

[0063] A solução é agitada durante 1-10 min e, durante esse tempo, formam-se grupos de silanol na solução. As microesferas de HAp são introduzidas na solução durante aproximadamente 30min. Seguidamente, as microesferas de HAp são lavadas duas vezes em metanol puro. As microesferas de HAp são introduzidas num forno com temperatura entre 70°C e até 105°C por 1 a 24 horas para curar e finalizar o procedimento de formação da camada de silano ou são deixadas para curar durante a noite à temperatura ambiente. As durações de tempo e temperaturas indicadas dependem do tipo de silano, por exemplo: 70°C durante 24 horas é adequado para 3-glicidoxipropiltrimetoxissilano, a fim de evitar a degradação dos grupos epóxi-funcionais do silano.

[0064] Podem ser usados misturadores de alto cisalhamento, misturadores rotor estator, homogeneizadores ou dispositivos tipo sonda geradores de ultrassom a fim de evitar a aglomeração de microesferas.

[0065] Exemplo 2 - Formulação de preenchimento dérmico de HA não reticulado contendo microesferas de HAp

[0066] A matéria-prima NaHA, de por exemplo um MW de dois megadaltons (MDa), em qualquer forma de fibra ou pó, é introduzida numa solução alcalina. O NaHA é agitado, dissolvido e hidratado na solução alcalina à temperatura ambiente durante várias horas, até se formar um líquido viscoso de HA homogêneo.

[0067] A HAp com a superfície tratada com 3- Glicidoxipropiltrimetóxi silano é introduzida no líquido viscoso de HA sob agitação para formar uma dispersão. A dispersão é aquecida a 50°C por várias horas para permitir a formação de acoplamento entre HA e HAp com a superfície tratada. A reação pode ser levada a cabo sem agitação caso a dispersão seja altamente viscosa e as microesferas estejam imobilizadas na dispersão devido à alta viscosidade. Caso as microesferas sejam susceptíveis a afundamento, um misturador ou dispositivo gerador de ultrassom tipo sonda pode ser usado para evitar o afundamento e a aglomeração das microesferas. Seguidamente, a dispersão é resfriada de volta à temperatura ambiente. Seguidamente, a dispersão é inchada e dialisada com PBS no saco de diálise com um corte de MW de 12.000 durante alguns dias para remover resíduos de baixo peso molecular. O PBS é trocado regularmente para introduzir PBS na dispersão. Por exemplo, o grau de inchamento é definido para formar uma dispersão contendo 30%v/v de HAp ou menos. Devido ao efeito sinérgico, as concentrações de HA e HAp podem ser reduzidas e continuar a ter o mesmo efeito que os preenchimentos dérmicos comuns disponíveis no mercado. A dispersão é introduzida em seringas, esterilizada e fica pronta para uso. Alternativamente, as microesferas de HAp com HA acoplado à superfície podem ser incorporadas em outro suporte de gel composto por carboximetilcelulose (CMC), glicerina e água.

[0068] Exemplo 3 - Formulação de preenchimento dérmico de HA reticulado contendo microesferas de HAp

[0069] Os passos básicos do procedimento de reticulação são conhecidos pelas pessoas de habilidade comum na arte. A matéria-prima NaHA, de por exemplo dois megadaltons, em qualquer forma de fibra ou pó, é introduzida numa solução alcalina. O NaHA é agitado, dissolvido e hidratado na solução alcalina à temperatura ambiente durante várias horas, até se formar um líquido de HA viscoso e homogêneo.

[0070] BDDE e HAp com a superfície tratada com 3- Glicidoxipropiltrimetóxi silano são introduzidos no líquido viscoso de HA sob agitação para formar uma dispersão. A dispersão é aquecida a 50°C por várias horas para permitir a formação de acoplamento entre HA e HAp com a superfície tratada. A reação pode ser realizada sem agitação caso a dispersão seja altamente viscosa e as microesferas estejam imobilizadas na dispersão devido à alta viscosidade. Caso as microesferas sejam susceptíveis a afundamento, um misturador ou dispositivo gerador de ultrassom tipo sonda pode ser usado para evitar o afundamento e a aglomeração das microesferas. Seguidamente, o gel compósito é resfriado de volta à temperatura ambiente. Seguidamente, o gel compósito é inchado e dialisado com PBS num saco de diálise com um corte de MW de 12.000 durante alguns dias para remover resíduos de baixo peso molecular, incluindo o excesso de BDDE. O PBS é trocado regularmente para introduzir PBS fresco com o gel compósito. HA não reticulado é adicionado ao gel compósito para ajudar a reduzir a força de extrusão. Por exemplo, um gel compósito pode conter 30%v/v HAp. O gel compósito é introduzido em seringas, esterilizado e fica pronto para uso.

[0071] Exemplo 4 - Ensaios com partículas tratadas com silano

[0072] Foram preparadas microesferas de HAp de acordo com o Exemplo 1 acima.

[0073] Material utilizado: 3. Microesferas de HAp de grau médico, esféricas 15-60 mícrons, D50=35 mícrons. 4. 3-glicidoxipropiltrimetoxissilano>98% Sigma Aldrich 5. Metanol>99,9% grau HPLC Sigma Aldrich 6. Ácido acético>99,7% grau de reagente ACS Sigma Aldrich

[0074] MEV+EDS: Aparelho: Phenom ProX Desktop MEV

[0075] Análise MEV+EDS

[0076] Foi empregado um microscópio eletrônico de varredura (MEV) acoplado à técnica de espectroscopia dispersiva de energia (EDS) para obter análise química localizada, elementar de microesferas de HAp não tratadas e microesferas de HAp tratadas com 3-glicidoxipropiltrimetoxissilano. Foram obtidas micrografias MEV e análises quantitativas EDS das concentrações dos elementos na superfície.

[0077] As micrografias MEV apresentadas nas Figuras 1 e 2 mostram microesferas de HAp não tratadas e tratadas com 3-glicidoxipropiltrimetoxissilano, respectivamente. Ambos os conjuntos de microesferas apresentam semelhança na estrutura morfológica, indicando que a aplicação do tratamento de superfície de silano nas microesferas de HAp não deteriorou as microesferas.

[0078] A análise EDS da HAp não tratada revelou a presença de átomos de Ca, P e O, conforme esperado da HAp. Como pode ser observado na tabela 1, a relação atómica de Ca/P é de ~1,67 conforme esperado de HAp.

[0079] A análise EDS da HAp tratada com 3- glicidoxipropiltrimetoxissilano revelou, além dos átomos de Ca, P e O, a presença de átomos de Si indicando a presença de tratamento de superfície de silano. Como foi descrito acima, o resultado do processo industrial de pré-tratamento forma uma multicamada espessa reticulada tridimensionalmente de silano (retícula de polissiloxano) que, portanto, pode desviar a relação atômica de Ca/P de 1,67 valor teórico, como pode ser visto na tabela 2 e é indicativo da presença de tratamento de superfície de silano em relação à superfície não tratada.Tabela 1. Análise elementar da microesfera HAp não tratadaTabela 2. Análise elementar da microesfera de Hap tratada com 3-glicidoxipropiltrimetoxissilano

[0080] Embora a invenção tenha sido descrita em conjunto com materializações específicas, é evidente que muitas alternativas, modificações e variações serão aparentes para as pessoas especializadas na arte. Assim, pretende-se abranger todas as alternativas, modificações e variações que se enquadrem no espírito e no escopo amplo das reivindicações anexas. Todas as publicações, patentes, pedidos de patentes e sequências identificadas pelos seus números de acesso mencionados na presente especificação são aqui incorporados na íntegra por referência à especificação, do mesmo modo que se cada publicação individual, patente, pedido de patente ou sequência identificada pelo seu número de acesso fosse específica e individualmente indicada para ser aqui incorporada por referência. Adicionalmente, a citação ou identificação de qualquer referência no presente pedido não deve ser interpretada como uma admissão de que tal referência está disponível como estado da técnica anterior à invenção.

Claims

1. Composição caracterizada pelo fato de que compreende um Ácido Hialurônico (HA) ou Heparosano e Hidroxiapatita (HAp) particulada, em que o referido Ácido Hialurônico (HA) ou Heparosano é quimicamente ligado a HAp particulada,em que a ligação química é obtida com um agente de acoplamento, e em que a HAp particulada é pré-tratada com o agente de acoplamento.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o referido HA ou Heparosano permanece não reticulado antes da reação com a referida HAp particulada.

3. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um veículo adequado para inserção num mamífero como preenchimento dérmico.

4. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que é adaptada para melhorar o aumento do tecido facial.

5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a concentração do HA ou Heparosano está em uma faixa de 1 mg/ml a 50 mg/ml.

6. Composição, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que a concentração do HA ou Heparosano está em uma faixa de 15 a 30 mg/ml.

7. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que as cadeias do referido HA ou Heparosano são estabilizadas pela adição de partículas.

8. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um dendrímero usado como um reticulante polifuncional para reticulação de cadeias do HA ou Heparosano.

9. Composição, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que o dendrímero está presente em uma quantidade adequada para produzir uma composição compreendendo um gel de consistência mais macia com viscosidade reduzida e alta longevidade no tecido.

10. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 9, caracterizada pelo fato de que uma pluralidade de porções do HA ou Heparosano é isenta de reticulação e o dendrímero é usado como reticulante para reticulação de pelo menos uma porção do HA ou Heparosano isenta de reticulação, de modo que a viscosidade da composição seja reduzida para auxiliar na extrusão da composição através de uma agulha de calibre fino.

11. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, caracterizada pelo fato de que compreende ainda Silsesquioxano Oligomérico Poliédrico (POSS) usado como um reticulante polifuncional para reticular as cadeias de HA ou Heparosano.

12. Método de fabricação de uma composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 11 caracterizado pelo fato de que compreende: modificar uma superfície da HAp particulada com um agente de acoplamento; eligar o HA ou Heparosano ao agente de acoplamento que modificou a superfície da HAp particulada.

13. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o agente de acoplamento é silano.

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 13, caracterizado pelo fato de que a HAp particulada é curada em um forno com temperatura variando de 70°C a 105°C por 1 a 24 horas.

15. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o silano compreende 3- glicidoxipropiltrimetoxissilano e a cura é realizada a 70°C por 24 horas.

16. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que compreende a aplicação do silano à HAp particulada e a cura da HAp particulada em temperatura ambiente durante a noite.

17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 16, caracterizado pelo fato de que compreende o tratamento da HAp particulada de acordo com um método de mascaramento, compreendendo o aprisionamento da HAp particulada na interface entre duas fases, mascarando assim um hemisfério não tratado e modificando o outro hemisfério

18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 17, caracterizado pelo fato de que compreende o tratamento da HAp particulada com diferentes reagentes de silano com diferentes funcionalidades.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o tratamento compreende a preparação de partículas de Janus da HAp particulada com os diferentes reagentes de silano.