TWI612964B

TWI612964B - 包含玻尿酸之組成物及其製造方法

Info

Publication number: TWI612964B
Application number: TW104136659A
Authority: TW
Inventors: 鄭洙賢; 徐晙赫; 柳昡丞; 張學洙
Original assignee: Ｃｇ生物技術有限公司; 韓國帝恩斯股份有限公司
Priority date: 2015-09-01
Filing date: 2015-11-06
Publication date: 2018-02-01
Also published as: BR112018003864A2; AU2015407889A1; AU2015407889B2; US11541147B2; WO2017039030A1; KR20170027090A; BR112018003864B1; TW201709914A; US20180344896A1; KR101720426B1

Abstract

本發明提供具優異黏彈性且容易注射之玻尿酸組成物，及其製造方法。

Description

包含玻尿酸之組成物及其製造方法

本揭示內容係有關玻尿酸組成物及其製造方法。

玻尿酸為透明、黏性凝膠型產物，具有高生物相容性與親水性。由於1分子玻尿酸吸引214個水分子，因而玻尿酸於維持皮膚水分及皮膚豐盈性(volume)與彈性上扮演重要角色。因此，含玻尿酸成分之皮膚填充劑往往被用來緊實臉部皮膚、改善臉部輪廓與臉部皺紋、及塑造臉部輪廓。

然而，天然玻尿酸之半衰期僅1天至2天，因此，填充劑中所用玻尿酸之長期持久性係經由交聯達成。玻尿酸之交聯避免酵素降解及增加黏性以使皮膚得到豐盈性[Yi Seop Song,et al.,Korean Journal of Dermatology 2014；52(2)：100-105]。

目前可用之玻尿酸填充劑具單相或雙相性質。單相性填充劑完全由均一凝膠組成，因此高度黏稠，容易注入，適用於塑造精細部位。雙相性填充劑係使凝膠團過篩製成粒子，因此具高度彈性，有利於維持形狀及改善豐盈性。

舉例而言，美國專利案第8,357,795號敘述可通過細號針頭擠壓出之注射用單相性玻尿酸填充劑；美國專利案第5,827,937號敘述雙相性玻尿酸填充劑。

同時，研究已持續進行以開發具有理想體內性質以及理想外科可用性之填充劑。然而，顯現優異體內安定性之玻尿酸填充劑具有高度剛性與黏性，因而難以通過細號針頭注射。反之，容易通過細號針頭注射之玻尿酸填充劑可能具低體內安定性之間題。因此，對於黏性與彈性二者皆優異之玻尿酸填充劑仍有所需求。

於此背景下，本發明人等研究開發具有最佳黏彈性與外科可用性之玻尿酸填充劑，結果發現，利用於特定速度下之公轉(revolution)/自轉(rotation)，使具有不同相之兩種或兩種以上玻尿酸凝膠混合，以製造兼具單相性與雙相性特徵之交聯玻尿酸組成物，從而完成本發明。

發明概述

本發明之目的在於提供用於組織修復之玻尿酸組成物之製造方法，該方法包括利用於公轉速度100rpm至400rpm及自轉速度100rpm至400rpm之公轉/自轉，使兩種或兩種以上玻尿酸凝膠混合之步驟。

本發明之另一目的在於提供用於組織修復之兼具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物，其係利用公轉/自轉黏性模數與彈性模數彼此不同的兩種或兩種以上玻尿酸凝膠之混合物所製造。

本發明之又另一目的在於提供修復組織之方法，該方法包括投予個體(subject)用於組織修復之兼具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物之步驟。

本發明之又另一目的在於提供用於組織修復之包含兼具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物之準藥物(quasi-drug)組成物。

第1a圖顯示根據本發明例示具體實例製造之單相性玻尿酸，及第1b圖顯示根據本發明例示具體實例製造之雙相性玻尿酸。

第2a圖係單相性玻尿酸與雙相性玻尿酸之單純混合物之影像，及第2b圖係根據本發明例示具體實例所製造兼具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物之影像。

第3a圖係於皮內注射玻尿酸入小鼠後立即拍攝之影像，及第3b圖係於皮內注射玻尿酸入小鼠10週後之影像，其中A表示根據本發明例示具體實例製造之單相性玻尿酸，B表示根據本發明例示具體實例製造之雙相性玻尿酸，及C表示根據本發明例示具體實例製造之兼具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物(下文中，與上述相同)。

第4圖顯示於皮內注射玻尿酸入小鼠1天後(左側)與 10週後(右側)，該組織垂直高度之變化。

第5圖顯示於皮內注射玻尿酸入小鼠後之初始膨脹與降解(殘留量)。

第6圖顯示根據例示具體實例之兼具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物，及雙相性與單相性填充劑間，黏性模數之比較。

較佳具體實例之詳細說明

為了達成上述目的，一態樣提供製造用於組織修復之玻尿酸組成物之方法，該方法包括利用公轉/自轉使兩種或兩種以上玻尿酸凝膠混合之步驟。

另一態樣提供製造用於組織修復之玻尿酸組成物之方法，該方法包括利用於公轉速度100rpm至400rpm及自轉速度100rpm至400rpm之公轉/自轉，使兩種或兩種以上玻尿酸凝膠混合之步驟。

本發明人等首次證明，為了改善已知交聯玻尿酸組成物之黏彈性與外科可用性，將具有期望黏性模數之玻尿酸凝膠與具有期望彈性模數之玻尿酸凝膠，於特定公轉速度與特定自轉速度進行公轉/自轉時，可製造兼具單相性與雙相性特徵之交聯玻尿酸組成物。

下文中，將詳細敘述本發明之製造方法。

玻尿酸係β-D-N-乙醯葡萄糖胺與β-D-葡萄糖醛酸彼此交替連接之直鏈聚合物。於本發明中，玻尿酸可包括所有玻尿酸本身、其鹽類、及其組合物。玻尿酸可具100,000Da至5,000,000Da之分子量，惟不在此限。玻尿酸之鹽類可包括無機鹽類例如玻尿酸鈉、玻尿酸鉀、玻尿酸鈣、玻尿酸鎂、玻尿酸鋅、玻尿酸鈷等；及有機鹽類例如玻尿酸四丁銨等。於本發明中，玻尿酸可單獨呈玻尿酸本身或其鹽，或呈兩種或兩種以上玻尿酸本身或其鹽之組合物使用。玻尿酸或其鹽可從微生物單離，或合成或購買，惟不在此限。舉例而言，玻尿酸可從屬於鏈球菌屬(Streptococcus)之微生物物種[馬鏈球菌(Streptococcus equi)、動物流行性鏈球菌(Streptococcus zooepidemicus)]單離及純化。

玻尿酸凝膠可意指具有凝膠相之玻尿酸，且可具有與玻尿酸水凝膠(hydrogel)或水合凝膠(hydrated gel)相同之意義。舉例而言，玻尿酸凝膠意指經由羥基基團共價交聯之玻尿酸。玻尿酸之水含量或交聯比率可利用此項技術中所用之一般方法控制。

玻尿酸凝膠可利用交聯劑交聯；該交聯劑可為，惟不限於，乙二醇二縮水甘油醚(EGDGE)、1,4-丁二醇二縮水甘油醚(BDDE)、1,6-己二醇二縮水甘油醚、丙二醇二縮水甘油醚、聚丙二醇二縮水甘油醚、二甘油聚縮水甘油醚、EDC(1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳化二亞胺)、DVS(雙乙烯碸)、BCDI(雙碳化二亞胺)、或其組合物。

於本發明中，玻尿酸凝膠之混合物可利用混合玻尿酸凝膠而製造，所述混合可意指兩種或兩種以上物料利用此項技術中所用一般方法之簡單、均勻或非均勻之混合、摻合或攪拌。

兩種或兩種以上玻尿酸凝膠之混合物可意指就黏性模數與彈性模數而言彼此不同之兩種或兩種以上玻尿酸凝膠之混合物。

本文所用之"黏性模數"一詞表示黏性之程度，界定為流體流動之抗性，及可具有與黏性度(viscosity degree)或黏性相同之意義。黏性模數可以G”表示。當玻尿酸凝膠具有高黏性模數時，其外科可用性增加，可用於塑造精細部位。舉例而言，單相性玻尿酸填充劑具高黏性模數，因此容易注射及適用於塑造精細部位。

本文所用之"彈性模數"一詞界定為於彈性極限內之應力與彈性物料變形之比率。彈性模數可以G’表示。當玻尿酸凝膠具有高彈性模數時，則為堅硬且對變形具高度抗性。舉例而言，雙相性玻尿酸填充劑具高彈性模數，因此有利於維持形狀及改善豐盈性。

於本發明中，交聯玻尿酸組成物之黏性模數與彈性模數可使用流變計測量，惟不在此限。流變計係利用將試樣置於平行板間，並測量對振盪平行板自轉之抗性與消散(dissipation)，用以測定試樣之黏彈性質(黏性模數與彈性模數)。

就黏性模數與彈性模數而言彼此不同的兩種或兩種以上玻尿酸凝膠之混合物可意指單相性玻尿酸凝膠與雙相性玻尿酸凝膠之混合物。

於本發明中，單相性玻尿酸意指主要呈凝膠存在之玻尿酸，其物理性質視玻尿酸之交聯比率而定。單相性玻尿酸比雙相性玻尿酸彈性較小而黏著性(cohesive)較高。“單相性”一詞可具有與單一相相同之意義。舉例而言，於頻率0.01Hz至1Hz時，單相性玻尿酸可具有低於300Pa之G’值及0.3或更高之tan δ值。

tan δ值係G’/G”值(阻尼因數)，指示物料之表現係像固體或像液體。於頻率0.01Hz至1Hz之tan δ值接近1時，該物料可能呈液體狀態(彈性較小)；當頻率0.01Hz至1Hz之tan δ值接近0時，該物料可界定為係彈性物料。再者，據報導，當tan δ值較低及百分比彈性[100x G’/(G’+G”)]較高時，填充劑持續較長時間。

於本發明中，雙相性玻尿酸為玻尿酸之粒子與凝膠之混合形式，其物理性質視粒子大小而定。"雙相性"一詞可具有與雙相或二相相同之意義。單相性玻尿酸具高黏性，惟彈性低，雙相性玻尿酸則具高彈性，惟黏性低。舉例而言，於頻率0.01Hz至1Hz時，雙相性玻尿酸可具有300Pa或更高之G’值及低於0.3之tan δ值。

根據利用本發明製造方法所製造用於組織修復之玻尿酸組成物之期望性質(黏性、彈性、交聯程度、凝膠硬度、組織修復程度、分子量、外觀、pH、玻尿酸含量等)，可選擇具特定特徵之兩種或兩種以上玻尿酸凝膠。

於本發明中，公轉/自轉步驟意指公轉與自轉同時進行。舉例而言，公轉/自轉可意指混合物係於公轉速度100rpm至400rpm與自轉速度為100rpm至400rpm，進行公轉/自轉。

例如，公轉速度可設定為等於自轉速度；又例如，公轉速度及/或自轉速度可維持於100rpm至400rpm範圍內之速度(rpm)一段預定時間，或可減少/增加。

若公轉速度或/及自轉速度小於100rpm，則於反應產物中產生氣泡使外觀劣化，黏性模數成為小於20,000cP；因此，難以提供兼具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物(表3與5)。再者，若公轉速度或/及自轉速度超過400rpm，則經由公轉或/及自轉產生熱。此時，由於玻尿酸抗熱性差，反應產物品質劣化；因此，產物不適用於組織修復。

公轉速度之非限制性實例可為100rpm至400rpm、150rpm至300rpm、或180rpm至230rpm。

自轉速度之非限制性實例可為100rpm至400rpm、150rpm至300rpm、或180rpm至230rpm。

公轉/自轉可使用此項技術中一般使用之公轉/自轉混合機進行。

該步驟可於真空條件下進行。真空條件可意指小於25托之壓力條件。於真空條件下進行公轉/自轉，可移除既有之氣泡，亦可避免於混合期間產生氣泡，從而增強就黏性模數與彈性模數而言彼此不同的兩種或兩種以上玻尿酸凝膠之結合。

該步驟可進行7分鐘至30分鐘。於根據本發明之例示具體實例中，當公轉/自轉進行少於7分鐘時，觀察到氣泡產生，因而未能符合物理化學標準(表3)。再者，當公轉/自轉進行超過30分鐘時，產生過多熱而引起玻尿酸變性，導致操作成本增加。

舉例而言，該步驟可進行10分鐘至25分鐘。

利用公轉/自轉製造之用於組織修復之玻尿酸組成物可兼具單相性與雙相性之特徵。頃發現於本發明例示具體實例中製造之玻尿酸組成物具有高彈性模數，以致與雙相性玻尿酸相較下，顯現維持形狀與增加豐盈性(雙相性特徵，第3a、3b圖、與第4圖)，及長時間維持豐盈性等優點，顯示其於體內之安定性(單相性特徵，第5圖)。因此，可進行本發明之製造方法以提供用於組織修復之兼具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物。

再者，又發現本發明用於組織修復之玻尿酸組成物具有介於單相性玻尿酸組成物之黏性模數與雙相性玻尿酸組成物之黏性模數間之黏性模數，從而展現兼有單相性與雙相性之特徵(第6圖)。

再者，具有不同相(亦即，黏性模數與彈性模數)之兩種或兩種以上玻尿酸凝膠，可利用本發明製造方法彼此混合，從而於符合物理化學標準(組成物之外觀、pH、黏性模數、滲透壓等)之同時，予以均勻混合。因此，利用挑選欲混合之玻尿酸凝膠，可能提供用於組織修復之具期望特徵之玻尿酸組成物。

同時，組織修復意指利用注射組成物，暫時或半永久性改善或修復臉部或身體皺紋、改善臉部輪廓、使組織豐盈化、或組織再生例如疤痕治療。該組織可為臉或身體之一部分。

可將用於組織修復之玻尿酸組成物裝填於欲注射入皮膚層之注射器中。

舉例而言，於製造方法中，兩種或兩種以上玻尿酸凝膠之混合物可包含50重量份至70重量份之單相性玻尿酸凝膠與50重量份至30重量份之雙相性玻尿酸凝膠。例如，該混合物可包含50重量份至60重量份之單相性玻尿酸凝膠與50重量份至40重量份之雙相性玻尿酸凝膠。又例如，該混合物可包含比率為1：0.8至1.2重量份(0.8或0.8以上及低於1.2)之單相性玻尿酸凝膠與雙相性玻尿酸凝膠。將使用根據本發明混合物所製造用於組織修復之該玻尿酸組成物注射入身體內時，可維持組織修復能力達6個月至9個月。

又舉例而言，於製造方法中，兩種或兩種以上玻尿酸凝膠之混合物可包含30重量份至60重量份之單相性玻尿酸凝膠與70重量份至40重量份之雙相性玻尿酸凝膠。例如，該混合物可包含40重量份至50重量份之單相性玻尿酸凝膠與60重量份至50重量份之雙相性玻尿酸凝膠。又例如，該混合物可包含比率為1：1.2至2重量份(1.2或1.2以上及低於2)之單相性玻尿酸凝膠與雙相性玻尿酸凝膠。將使用根據本發明混合物所製造用於組織修復之該玻尿酸組成物注射入身體內時，可維持組織修復能力達9個月至12個月。

再舉例而言，於製造方法中，兩種或兩種以上玻尿酸凝膠之混合物可包含20重量份至50重量份之單相性玻尿酸凝膠與80重量份至50重量份之雙相性玻尿酸凝膠。例如，該混合物可包含30重量份至40重量份之單相性玻尿酸凝膠與70重量份至60重量份之雙相性玻尿酸凝膠。又例如，該混合物可包含比率為1：2至4重量份(2或2以上及低於4)之單相性玻尿酸凝膠與雙相性玻尿酸凝膠。將使用根據本發明混合物所製造用於組織修復之該玻尿酸組成物注射入身體內時，可維持組織修復能力達12個月至15個月。

因此，於本發明製造方法中，利用挑選兩種或兩種以上期望之玻尿酸凝膠，可能提供具有期望特徵之用於組織修復之玻尿酸組成物。

該組成物可利用上述製造方法製造。

詳言之，該組成物可利用包括下述步驟之製造方法製造：於公轉速度100rpm至400rpm及自轉速度100rpm至400rpm，公轉/自轉黏性模數與彈性模數彼此不同的兩種或兩種以上玻尿酸凝膠混合物。舉例而言，該黏性模數與彈性模數彼此不同的兩種或兩種以上玻尿酸凝膠之混合物可為單相性玻尿酸凝膠與雙相性玻尿酸凝膠之混合物。單相性、雙相性、組織修復、及玻尿酸與上文所述相同。

用於組織修復之玻尿酸組成物，可利用均勻或非均勻混合黏性模數與彈性模數彼此不同的兩種或兩種以上玻尿酸凝膠予以製造。

根據本發明之例示具體實例，證實用於組織修復之該玻尿酸組成物具有(a)無明顯氣泡，且無色透明；(b)pH為7±1；(c)黏性模數為20,000cP至50,000cP；及(d)平均滲透壓為0.325滲摩(Osmol)/kg±10%等物理化學性質，符合醫療器材之規格。

若需要，則該組成物可與其他一般添加劑例如抗氧化劑、緩衝劑、及/或抑菌劑、稀釋劑、分散劑、界面活性劑、黏合劑、潤滑劑、局部麻醉劑等一起裝填。

本發明之又另一態樣提供修復組織之方法，該方法包括投予個體用於組織修復之兼具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物之步驟。

給藥意指利用任何適當方法，特別是經由非經腸途徑，例如注射，將本發明組成物引入個體中。本發明組成物之給藥頻率可為，惟不限於，一天一次或分割劑量一天數次。

個體意指包括人類之任何動物；其可為需要組織修復之人類以及哺乳動物例如乳牛、馬、綿羊、豬、山羊、駱駝、羚羊、狗、或貓，惟不在此限。

本發明之又另一態樣提供包含用於組織修復之兼具單相性與雙相性特徵玻尿酸組成物之準藥物(quasi-drug)組成物。

準藥物可被界定為具個體組織修復用途之產物，不被列入醫療器材或機械等；例如，係意指用於診斷、醫療照護、減輕、治療或預防人類或動物疾病為目的之除了裝置(appliance)、機械及設備以外之產物；係用於發揮人類或動物組織或功能上之藥理作用為目的之除了器具、機械或設備以外之產物。

根據本發明之組成物作為準藥物添加劑用時，可適當地就其原樣、或根據一般方法與其他準藥物或準藥物成分一起使用。擬混合之活性成分量，可視使用之目的而定。

下文中，將參照下述實施例更具細節地說明本發明。然而，該等實施例僅供說明用途，本發明不擬受該等實施例所侷限。

實施例1至3及製造例1至3 實施例1. 單相性玻尿酸凝膠之製造

真空下，以400rpm攪拌10g玻尿酸鈉、81g純水、與9g 1M NaOH(1M氫氧化鈉)，直到混合物變成無粒子之透明凝膠。其後，添加0.5g交聯劑(BDDE、丁二醇二縮水甘油醚)，隨後予以攪拌。完成攪拌後，密封容器，使混合物於80rpm與50℃進行交聯反應1小時。然後，將容器放置於27℃ 16小時以製造凝膠。

為了移除剩餘試劑，將所得凝膠添加至30L 0.9X PBS(磷酸鹽緩衝鹽液)溶液中，每3小時以新鮮溶液予以替換(每天3次，為時5天)。其後，使此溶液通過研缽研磨機(RS 200、Retsch)40分鐘，以製造單相性玻尿酸凝膠。

第1a圖為該單相性玻尿酸凝膠之光學顯微鏡影像。

實施例2. 雙相性玻尿酸凝膠之製造

真空下，以400rpm攪拌20g玻尿酸鈉、117g純水、與13g 1M NaOH(1M氫氧化鈉)，直到混合物變成無粒子之透明凝膠。其後，添加1g交聯劑(BDDE、丁二醇二縮水甘油醚)，隨後予以攪拌。完成攪拌後，密封容器，使混合物於80rpm與50℃進行交聯反應1小時。然後，將容器放置於27℃ 16小時以製造凝膠。

為了移除剩餘試劑，將所得凝膠添加至30L 0.9X PBS(磷酸鹽緩衝鹽液)溶液中，每3小時以新鮮溶液予以替換(每天3次，為時5天)。其後，使此溶液通過1000μm標準測試篩以製造雙相性玻尿酸凝膠(第2a圖)。

第1b圖為該雙相性玻尿酸凝膠之光學顯微鏡影像。

實施例3. 具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物之製造

以下文表1中之混合比率，使實施例1製造之單相性玻尿酸凝膠與實施例2製造之雙相性玻尿酸凝膠混合，將該混合物(第2a圖)注入公轉/自轉糊料混合機(paste mixer)(Daehwa Tech Co.,Ltd.)中，然後分別設定公轉速度與自轉速度於200rpm。真空(3.5托)下，使該混合物進行公轉/自轉20分鐘，以製造具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物(第2b圖)。

第2a圖為公轉/自轉前之混合物影像，顯示凝膠與粒子之非均質混合物。第2b圖為公轉/自轉後之混合物影像，顯示無碎屑之無色、透明外觀。

製造例1至製造例3. 注射器之包裝與滅菌

以等量將實施例1、2、與3製造之各產物裝填入注射器中，利用高壓滅菌法滅菌，分別製造出含有20mg/mL玻尿酸之調配物(下文中之製造例1、製造例2、與製造例3)。

實驗例1至5 實驗例1. 玻尿酸組成物組織修復能力之測試 1-1. 豐盈化之測試

將製造例1、製造例2、與製造例3之調配物皮內注射至小鼠中。第3a圖為製造例1至3之調配物皮內注射至小鼠後之影像，第3b圖為製造例1至3之調配物皮內注射至小鼠10週後之影像。

結果，如第4圖所示，發現相較於製造例1之單相性調配物(第4圖之A)與製造例2之雙相性調配物(第4圖之B)，以製造例3調配物注射之組織(第4圖之C)垂直高度較高。於注射10週後，亦發現以製造例3調配物注射之組織(第4圖之C)，其垂直高度較製造例1之單相性調配物(第4圖之A)與製造例2之雙相性調配物(第4圖之B)者高。

此等結果表明，製造例3之調配物具高彈性模數而展現維持形狀及增加豐盈性之優點，從而亦具雙相性特徵。

1-2. 初始膨脹與降解之測試

如第5圖所示，皮內注射製造例1、製造例2、與製造例3之調配物至小鼠中之結果為製造例2之雙相性調配物(-●-B)顯示非常高之降解率，因此於5小時後幾乎無殘留；而相較於製造例2之雙相性調配物(-●-B)，製造例3調配物之殘留量很大(-■-C)。增加注射用豐盈化填充劑之持續時間是重要的。

再者，相較於製造例1(-▲-A)之單相性調配物與製造例2(-●-B)之雙相性調配物，製造例3(-■-C)之調配物顯示初始膨脹低。因此，製造例3之調配物於填充劑注射後之復原時間縮短。

相較於雙相性調配物，製造例3之調配物具有高彈性模數，亦提供持久之豐盈性，從而顯示體內安定性；且相較於單相性或雙相性調配物，亦顯示初始膨脹低，表示其兼具單相性與雙相性特徵之優點。

實驗例2. 安全性測試

由韓國試驗研究院(Korea Testing & Research Institute)進行實施例3所製造玻尿酸組成物之安全性測試，如下文表1所示，其顯示出比參考值低之毒性、溶劑殘留量、pH、與滲透壓，表示該組成物具體內安全性。

實驗例3. 根據公轉/自轉速度之物理化學測試結果

實施例3中，於速度分別為50rpm、100rpm、或200rpm，分別維持公轉/自轉5分鐘、10分鐘、或20分鐘，以製造玻尿酸組成物。根據表2之方法，測試各組成物之外觀、藥液pH、黏性模數、與滲透壓，以檢驗其是否符合下述標準。

3-1. 總體外觀之觀察

利用表2之方法測試外觀，結果，以速度200rpm，10分鐘與20分鐘操作時間進行公轉/自轉時，外觀可接受；然而，以100rpm或更低速度，或以5分鐘或更短操作時間進行轉/自轉時，於組成物中看到氣泡，表示產物品質不可接受。

3-2. 藥液pH之測量

利用表2之方法測量pH，結果，如下文表4所示，公轉/自轉速度與操作時間幾乎不影響pH值。

3-3. 黏性模數之測量

利用表2之方法測量黏性模數，結果，如下文表5所示，公轉/自轉速度為200rpm，得到最可接受之黏性模數；然而，公轉/自轉速度為100rpm或更低，組成物具有不可接受之黏性模數。

3-4. 滲透壓之測量

利用表2之方法測量滲透壓，結果，如下文表6所示，公轉/自轉速度與操作時間幾乎不影響滲透壓。

此等結果表示，當於公轉速度150rpm至250rpm及自轉速度150rpm至250rpm，使具有不同相的兩種或兩種以上玻尿酸凝膠之混合物進行公轉/自轉時，可製造符合製造標準之填充劑。

實驗例4. 根據實施例1與實施例2之混合比率持續時間之比較

以下文表7之混合比率使實施例1製造之單相性玻尿酸凝膠與實施例2製造之雙相性玻尿酸凝膠混合，於如製造例3之相同條件下，使該混合物進行公轉/自轉。其後，將該產物裝入注射器中，利用高壓滅菌法滅菌以製造製造例4至製造例6之組成物。

將製造例4至製造例6之玻尿酸組成物以皮內注射至人體，以進行臨床試驗，結果，製造例4之組成物顯現6個月至9個月之持續時間，製造例5之組成物顯現9個月至12個月之持續時間，及製造例6之組成物顯現12個月至15個月之持續時間。

因此，組織修復能力之持續時間，可藉由使用期望比率之單相性玻尿酸凝膠與雙相性玻尿酸凝膠予以控制。

實驗例5. 實施例3黏性模數之測量

使用流變計測量實施例3所製造兼具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物之黏性模數(第6圖，以DN表示)，並與市售可得之雙相性填充劑與單相性填充劑進行比較。結果示於第6圖與下文表8。

R：瑞絲朗(Restylane)；RL：瑞絲朗利多卡因(Restylane lidocaine)；RP：瑞絲朗玻麗朗(Restylane perlane)；RPL：瑞絲朗玻麗朗利多卡因(Restylane perlane lidocaine)；RSQ：瑞絲朗深層型(Restylane subq)；RV：瑞絲朗活力型(Restylane vital)； PD：裴腓它地(Perfecta deep)；PSQ：裴腓它地深層型(Perfecta subq)；IC：伊芙瑞皮下填補劑(Yvorie classic)；JV：喬雅登豐顏(juvederm voluma)；JVL：喬雅登豐顏利多卡因(juvederm voluma lidocaine)，JU：喬雅登雅漾(juvederm ultra)；JUP：喬雅登極緻(Juvederm utra plus)；JVPxc：含麻藥喬雅登極緻(juvederm ultra plus xc)

亦即，本發明用於組織修復之玻尿酸組成物具有介於單相性玻尿酸組成物黏性模數與雙相性玻尿酸組成物黏性模數間之黏性模數，表示本發明之組成物兼具有單相性與雙相性之特徵。

根據以上敘述，熟習此項技術者將理解，本發明可於不改變其技術精神或必要特徵下，以不同具體形式進行。因此，應理解的是，上述具體實例不具限制性，而係就各方面之說明。本發明之範圍由隨附申請專利範圍而非由先前說明所界定，因此隸屬該等申請專利範圍之界限或等同此等界限內之所有改變與修飾亦擬涵蓋於該等申請專利範圍中。

本發明之功效

根據本發明製造方法所製造用於組織修復之兼具單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物具有優異之黏彈性與組織修復能力、係持久，且顯現低初始膨脹而具快速恢復時間，亦具有優異之體內安全性與安定性。

Claims

一種製造用於組織修復之玻尿酸組成物之方法，該方法包括利用以公轉(revolution)速度150rpm至400rpm及自轉(rotation)速度150rpm至400rpm之公轉/自轉，使就黏性模數與彈性模數而言彼此不同的兩種或兩種以上玻尿酸凝膠混合，其中，該就黏性模數與彈性模數而言彼此不同的兩種或兩種以上玻尿酸凝膠之混合物係單相性玻尿酸凝膠與雙相性玻尿酸凝膠之混合物，且其中，該步驟進行7分鐘至30分鐘。
如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，該用於組織修復之玻尿酸組成物兼具有單相性與雙相性之特徵。
如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，該步驟於真空下進行。
如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，該混合物包含50重量份至70重量份之單相性玻尿酸凝膠與50重量份至30重量份之雙相性玻尿酸凝膠。
如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，該混合物包含30重量份至60重量份之單相性玻尿酸凝膠與70重量份至40重量份之雙相性玻尿酸凝膠。
如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，該混合物包含20重量份至50重量份之單相性玻尿酸凝膠與80重量份至50重量份之雙相性玻尿酸凝膠。
一種用於組織修復之兼具有單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物，其係利用公轉/自轉黏性模數與彈性模數彼此不同的兩種或兩種以上玻尿酸凝膠之混合物所製造，其中，該組成物係利用如申請專利範圍第1至6項中任一項所述之製造方法製造。
如申請專利範圍第7項所述之組成物，其中，該用於組織修復之玻尿酸組成物具有下述物理化學性質：(a)不具明顯氣泡，且無色透明；(b)具有pH 7±1；(c)具有黏性模數20,000cP至50,000cP；及(d)具有平均滲透壓0.325Osmol/kg±10%。
一種如申請專利範圍第7項所述之用於組織修復之兼具有單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物用於製備修復組織之藥物之用途。
一種準藥物(quasi-drug)組成物，其包含如申請專利範圍第7項所述之用於組織修復之兼具有單相性與雙相性特徵之玻尿酸組成物。