BR112017025975B1 - Composto, composição, método in vitro para induzir degradação de uma proteína alvo em uma célula, e, uso de uma composição - Google Patents

Composto, composição, método in vitro para induzir degradação de uma proteína alvo em uma célula, e, uso de uma composição Download PDF

Info

Publication number
BR112017025975B1
BR112017025975B1 BR112017025975-3A BR112017025975A BR112017025975B1 BR 112017025975 B1 BR112017025975 B1 BR 112017025975B1 BR 112017025975 A BR112017025975 A BR 112017025975A BR 112017025975 B1 BR112017025975 B1 BR 112017025975B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
ethoxy
group
amine
dihydro
chlorophenyl
Prior art date
Application number
BR112017025975-3A
Other languages
English (en)
Other versions
BR112017025975A2 (pt
Inventor
Craig M. Crews
Andrew P. Crew
Hanqing Dong
Jing Wang
Yimin Qian
Kam Siu
Meizhong Jin
Original Assignee
Arvinas Operations, Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=57441827&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=BR112017025975(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US14/792,414 external-priority patent/US20160058872A1/en
Application filed by Arvinas Operations, Inc filed Critical Arvinas Operations, Inc
Publication of BR112017025975A2 publication Critical patent/BR112017025975A2/pt
Publication of BR112017025975B1 publication Critical patent/BR112017025975B1/pt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/66—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid the modifying agent being a pre-targeting system involving a peptide or protein for targeting specific cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D495/14—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Abstract

COMPOSTO, COMPOSIÇÃO, E, MÉTODO PARA INDUZIR DEGRADAÇÃO DE UMA PROTEÍNA ALVO EM UMA CÉLULA. A descrição se refere a compostos à base de imida, incluindo compostos bifuncionais compreendendo o mesmo, o qual encontram utilidade como moduladores de ubiquitinação alvo, especialmente inibidores de uma variedade de polipetídeos e outras proteínas que são degradadas e/ou inibidas de outra forma por compostos bifuncionais de acordo com a presente invenção. Em particular, a descrição provê compostos que contém em uma extremidade um ligante quando se liga à ligase ubiquitina de cereblon E3 e na outra extremidade uma porção que se liga a uma proteína alvo de modo que a proteína alvo seja colocada em proximidade à ligase ubiquitina para efetuar degradação (e inibição) daquela proteína. Compostos podem ser sintetizados de modo que exibam uma ampla gama de atividades farmacológicas consistentes com a degradação/inibição de polipetídeos alvos de aproximadamente qualquer tipo.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente U.S N°. de Série 14/792,414, depositado em 6 de julho de 2015 e um Pedido de Patente Provisório de N° de Série 62/171.090, depositado em 4 de junho de 2015, que reivindica o benefício do Pedido de Patente não provisório de N° de Série 14/686.640, depositado em 14 de abril de 2015, que reivindica o benefício e a prioridade do Pedido de Patente Provisório de N° de Série 61/979.351, depositado em 14 de abril de 2014, intitulado “IMIDE-BASED MODULATORS OF PROTEOLYSIS AND ASSOCIATED METHODS OF USE”, e também reivindica o benefício e a prioridade do Pedido de Patente Provisório de N° de Série 62/171.090, depositado em 4 de junho de 2015, intitulado “IMIDE-BASED MODULATORS OF PROTEOLYSIS AND ASSOCIATED METHODS OF USE”, dos quais todos são incorporados para referência nas suas totalidades.
CAMPO DA INVENÇÃO
[002] A descrição provê compostos à base de imida, incluindo compostos bifuncionais do mesmo, e métodos de uso associados. Os compostos bifuncionais são úteis como moduladores de ubiquitinação alvejada, especialmente em relação a uma variedade de polipeptídeos e outras proteínas, que são degradadas e/ou, de outra forma, inibidas por compostos bifuncionais de acordo com a presente invenção.
FUNDAMENTOS
[003] A maioria das drogas de molécula pequena ligam enzimas ou receptores em cavidades justas e bem definidas. Por outro lado, interações proteína-proteína são notoriamente difíceis de alvejar usando moléculas pequenas devido às suas grandes superfícies de contato e as ranhuras superficiais ou interfaces planas envolvidas. Ubiquitinas ligases E3 (das quais centenas são conhecidas em humanos) conferem especificidade de substrato para ubiquitinação, e, assim, são alvos terapêuticos mais atrativos do que inibidores de proteassoma gerais devido as suas especificidades para certos substratos de proteína. O desenvolvimento de ligantes de ligases E3 se provou desafiante, em parte devido ao fato que eles devem romper interações proteína-proteína. No entanto, desenvolvimentos recentes proveram ligantes específicos que se ligam à essas ligases. Por exemplo, desde a descoberta de nutlinas, os primeiros inibidores de ligase E3 de molécula pequena, compostos adicionais foram reportados de alvejamento de ligases E3, mas o campo continua subdesenvolvido.
[004] Uma ligase E3 com potencial terapêutico é o supressor de tumor von Hipgel-Lindau (VHL). VHL compreende a subunidade de reconhecimento de substrato/ligase E3 de complexo VCB, que inclui enlonginas B e C, e um complexo que inclui Cullin-2 e Rbx1. O substrato primário de VHL é Fator Induzível por Hipóxia 1α (HIF-1α), um fator de transcrição que regula por regulação positiva genes tais como o fator de crescimento pró-angiogênico VEGF e eritropoietina citocina indutora de células sanguíneas vermelhas em resposta a níveis de oxigênio baixos. Foram gerados os primeiros ligantes de células pequenas de Von Hipgel Lindau (VHL) para a subunidade de reconhecimento de substrato da ligase E3, VCB, um importante alvo no câncer, anemia crônica, isquemia, e obtivemos estruturas de cristal confirmando que o composto imita o modo de ligação da transcrição fator HIF-1α, o substrato principal do VHL.
[005] Cereblon é uma proteína que em humanos é codificada pelo gene CRBN. CRBN ortólogos são altamente conservados de plantas para humanos, que ressalta a sua importância fisiológica. Cereblon forma um complexo de ubiquitina ligase E3 com DNA danificado ligando proteína 1 (DDB1), Cullin-4A (CUL4A), e reguladores de culinas 1 (ROC1). Esse complexo ubiquitina um número de outras proteínas. Através de um mecanismo que não foi completamente elucidado, ubiquitinação de cereblon de proteínas alvo resulta em níveis aumentados do fator de crescimento de fibroblasto 8 (FGF8) e fator de crescimento de fibroblasto 10 (FGF10). FGF8 por sua vez regula um número de processos de desenvolvimento, tais como formação de membro e de vesícula auditiva. O resultado líquido é que esse complexo de ubiquitina ligase é importante para o crescimento de membro em embriões. Na ausência de cereblon, DDB1 forma um complexo com DDB2 que funciona como uma proteína de ligação de danos de DNA.
[006] Talidomida, que foi aprovada para o tratamento de um número de indicações imunológicas, também foi aprovada para o tratamento de certas doenças neoplásticas, incluindo mieloma múltiplo. Em adição ao mieloma múltiplo, talidomida e vários dos seus análogos estão também atualmente sob investigação para uso no tratamento de uma variedade de outros tipos de câncer. Enquanto o mecanismo preciso da atividade antitumoral da talidomida ainda está emergindo, é conhecido para a inibição de angiogênese. Literatura recente discutindo a biologia das imidas inclui Lu et al Science 343, 305 (2014) e Kronke et al Science 343, 301 (2014).
[007] Significativamente, talidomida e seus análogos, por exemplo, pomolinamioda e lenalinomida, são conhecidos por ligar-se ao cereblon. Esses agentes se ligam ao cereblon, alterando a especificidade do complexo para influenciar a ubiquitinação e degradação de Ikaros (IKZF1) e Aiolos (IKZF3), fatores de transcrição essenciais para o crescimento do mieloma múltiplo. De fato, a expressão mais alta do cereblon foi ligada a um aumento na eficiência das drogas de imida no tratamento de mieloma múltiplo.
[008] BRD4 capturou atenção considerável da academia e da indústria farmacêutica devido ao seu grande potencial como um novo alvo em múltiplas caraterísticas de doenças, particularmente em câncer. BRD4 pertence à família do bomodomínio e domínio extraterminal (BET), que é distinguido por dois bromodomínios (domínio BD) no N-terminal e um domínio extraterminal (domínio ET) no C-terminal (J. Shi, et al. Molecular cell, 54 (2014) 728-736 e A.C. Belkina, et al., Nat. Rev. Cancer, 12 (2012) 465-477). Os dois domínios BD reconhecem e interagem com resíduos de lisina acetilados na extremidade do N- terminal da proteína histona; o domínio ET ainda não está totalmente caracterizado, e é amplamente considerado para servir como uma função de suporte no recrutamento de diversos reguladores transcricionais. Assim, BRD4 desempenha um papel principal na expressão de gene de regulação pelo recrutamento de moduladores de transcrição relevantes à loci genômicos específicos. Vários estudos estabeleceram que BRD4 é preferencialmente localizado nas regiões superintesificadoras, as quais frequentemente residem a montante de oncogenes, tais como c-MYC, Bcl-xL e BCL-6, e desempenham um papel fundamental na regulação das suas expressões (J. Loven, et al., Cell, 153 (2013) 320-334 and B. Chapuy, et al., Cancer Cell, 24 (2013) 777-790.). Devido à sua função central em modular a expressão de oncogenes essenciais, BRD4 emerge como um alvo terapêutico promissor em múltiplos tipos de câncer, incluindo carcinoma da linha média, AML, MM, BL e câncer de próstata (J. Loven, et al., Cell, 153 (2013) 320-334; J. Zuber, et al., Nature, 478 (2011) 524528; J.E. Delmore, et al., Cell, 146 (2011) 904-917; J.A. Metaz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674; A. Wyce, et al., Oncotarget, 4 (2013) 2419-2429; I.A. Asangani, et al., Nature, 510 (2014) 278-282; and C.A. French, et al., Oncogene, 27 (2008) 2237-2242). A distinta alta ocupação de BRD4 do loci genômico proximal aos oncogenes específicos provê uma janela terapêutica potencial que irá permitir alvejamento específico de células tumorais enquanto poupando os tecidos normais. Particularmente, BRD4 pode funcionar como uma estratégia alternativa para alvejar o c-MYC, que contribui para o desenvolvimento e manutenção da maioria dos cânceres humanos mas continuam sem tratamento com drogas (J.E. Delmore, et al., Cell, 146 (2011) 904-917; J.A. Metaz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674; M.G. Baratta, et al., PNAS, 112 (2015) 232-237; and M. Gabay, et al., Cold Spring Harb Perspect Med. (2014) 4:a014241).
[009] O desenvolvimento de inibidores de BRD4 de pequenas moléculas, tais como JQ1, iBET, e OTX15, tem demonstrado um potencial terapêutico promissor em modelos pré-clinicos de vários cânceres, incluindo o BL (J. Loven, et al., Cell, 153 (2013) 320-334; B. Chapuy, et al., Cancer Cell, 24 (2013) 777-790; J.E. Delmore, et al., Cell, 146 (2011) 904-917; J.A. Metaz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674; I.A. Asangani, et al., Nature, 510 (2014) 278-282; M.G. Baratta, et al., PNAS, 112 (2015) 232-237; M. Boi, et al., Clin. Cancer Res., (2015) 21(7):1628-38; and A. Puissant, et al., Cancer discovery, 3 (2013) 308323). Realmente, os inibidores de BRD4 tem apresentado várias atividades antitumorais com boa tolerância em diferentes modelos de tumor em camundongos, e, previsivelmente, uma alta sensibilidade aos inibidores de BRD4, tais como JQ1, tem sido associada a um alto nível de c-MYC e N-MYC em diferentes tipos de tumor, incluindo o c-MYC causado pelo BL. Quase todos os casos de BL contêm uma translocação do gene c-myc que o coloca sob controle de um superintesificador localizado a montante do IgH, desta forma conduzindo um nível alto anormal da expressão do c-MYC, do desenvolvimento e da manutenção do tumor (K. Klapgroth, et al., British s of haematology, 149 (2010) 484-497).
[0010] Atualmente, quatro inibidores de BET Brodomínio estão na fase 1 do estudo clínico com um foco principal no carcinoma microcítico e malignidades hematológicas (CPI-0610, NCT01949883; GSK525762, NCT01587703; OTX015, NCT01713582; TEN-010, NCT01987362). Os estudos pré-clínicos com inibidores de BRD4 demonstram sua capacidade de suprimir o c-MYc e a proliferação das linhas de células BL, embora com valores de IC50 geralmente na faixa de 100nM a 1uM (J.A. Metaz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674 and M. Ceribelli, et al., PNAS, 111 (2014) 11365-11370). Portanto, apesar do rápido progresso dos inibidores de BRD4, o efeito da inibição do BRD4 tem sido encorajador, mas menor do que o ideal, uma vez que o efeito é principalmente citostático e requer uma concentração relativamente alta de inibidores.
[0011] Há uma necessidade contínua na técnica de tratamentos eficazes para as doenças, especialmente hiperplasias e cânceres, tais como o mieloma múltiplo. No entanto, efeitos não específicos, e a incapacidade de alvejar e modular certas classes de proteína completamente, tais como fatores de transcrição, continuam sendo obstáculos para o desenvolvimento de agentes anticancerígenos eficazes. Assim sendo, agentes terapêuticos com moléculas pequenas que nivelam ou potencializam a especificidade do substrato do cereblon e, ao mesmo tempo, são “ajustáveis” de tal modo que uma ampla variedade de classes de proteínas possa ser atingida e modulada de forma específica, seriam muito úteis terapeuticamente.
BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0012] A presente descrição descreve os compostos bifuncionais que agem para captar proteínas endógenas para uma ubiquitina ligase E3 para a degradação, e métodos para a utilização do mesmo. Particularmente, a presente descrição apresenta compostos quiméricos de alvejamento bifuncionais ou proteólises (PROTAC), que tem utilidade como moduladores da ubiquitinação alvejada de uma série de polipeptídios e outras proteínas, que são então degradadas e/ou, de outra forma, inibidas pelos compostos bifuncionais como descritos aqui. Uma vantagem dos compostos providos aqui é que uma grande variedade de atividades farmacológicas é possível, condizentes com a degradação/inibição dos polipeptídios alvo de virtualmente qualquer classe ou família de proteína. Além disso, a descrição oferece métodos para usar uma quantidade eficaz dos compostos como descritos abaixo para o tratamento ou melhoria de uma condição de doença, tal como câncer, por exemplo o mieloma múltiplo.
[0013] Deste modo, em um aspecto a descrição oferece novos compostos à base de imida como descritos aqui.
[0014] Em um aspecto adicional, a descrição oferece compostos PROTAC ou bifuncionais, que compreendem uma porção de ligação à Ubiquitina Ligase E3 (isto é, um ligante para uma ubiquitina ligase ou grupo “ULM”) e uma porção que liga uma proteína alvo (isto é, uma ligante que alveja proteína/polipeptídio ou grupo “PTM”) de modo que a proteína/polipeptídio alvo seja colocada em proximidade com a ubiquitina ligase para efetuar degradação (e inibição) daquela proteína. Em uma forma de realização preferida, o ULM é uma porção de ligação à ubiquitina ligase E3 cereblon (isto é, um “CLM”) Por exemplo, a estrutura do composto bifuncional pode ser descrita como:
[0015] As respectivas posições das porções PTM e CLM assim como seus números são ilustrados aqui são providos somente a título de exemplo e não são destinadas a limitar os compostos em qualquer modo. Como seria entendido pelos versados na técnica, os compostos bifuncionais como descritos aqui podem ser sintetizados de modo que o número e a posição das porções funcionais respectivas possam ser variados como desejado.
[0016] Em certas formas de realização, o composto bifuncional compreende adicionalmente um ligante químico (“L”) Neste exemplo, a estrutura do composto bifuncional pode ser retratada como:onde PTM é uma porção alvo de proteína/polipeptídio, L é um ligante, e CLM é uma porção de ligação à Ubiquitina Ligase E3 cereblon.
[0017] Em uma certa forma de realização preferida, a Ubiqutina Ligase E3 é cereblon. Assim sendo, em certas formas de realização adicionais, a CLM do composto bifuncional compreende produtos químicos como porções derivadas de imida, amida, tioamida, tioimida. Em formas de realização adicionais, a CLM compreende um grupo ftalimida ou um análogo ou derivados do mesmo. Em formas de realização ainda adicionais, a CLM compreende um grupo ftalimido- glutarimida ou um análogo ou derivados do mesmo. Em ainda outras formas de realização, a CLM compreende um membro do grupo que consiste em talidomida, lenalidomida, pomalidomida e análogos ou derivados do mesmo.
[0018] Em certas formas de realização, os compostos como descritos aqui compreendem múltiplas CLMs, múltiplas PTMs, múltiplos ligantes químicos ou uma combinação dos mesmos.
[0019] Em um aspecto adicional, a descrição provê composições terapêuticas compreendendo uma quantidade eficaz de um composto como descrito aqui ou forma de sal do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável. As composições terapêuticas modulam a degradação de proteína em um paciente ou indivíduo, por exemplo um animal tal como um humano, e podem ser usadas para tratamento ou melhoramento de estados ou condições de doenças que são moduladas através da proteína degradada. Em certas formas de realização, as composições terapêuticas como descritas aqui podem ser usadas para efetuar a degradação de proteínas de interesse para o tratamento ou melhoramento de uma doença, por exemplo, câncer. Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê um método de ubiquitinação/degradação de uma proteína alvo em uma célula. Em certas formas de realização, o método compreende administrar um composto bifuncional como descrito aqui compreendendo uma CLM e uma PTM, preferencialmente ligadas através de uma porção de ligante, como de outra maneira descrita aqui, em que a CLM é acoplada à PTM e em que a CLM reconhece uma proteína de através de ubiquitina (por exemplo, uma ubiquitina ligase, preferencialmente uma ubiquitina ligase E3 tal como, por exemplo, cereblon) e a PTM reconhece a proteína alvo de modo que a degradação da proteína alvo vai ocorrer quando a proteína alvo é colocada em proximidade com a ubiquitina ligase, assim resultando na degradação/inibição dos efeitos da proteína alvo e o controle dos níveis de proteína. O controle dos níveis de proteína proporcionado pela presente invenção provê o tratamento de um estado ou uma condição de uma doença, que é modulada através da proteína alvo pela diminuição do nível da proteína nas células de um paciente.
[0020] Em um aspecto adicional, a descrição provê um método para avaliar (isto é, determinar e/ou medir) uma afinidade de ligação de CLM. Em certas formas de realização, o método compreende prover um agente de teste ou composto de interesse, por exemplo um agente ou composto tendo uma parte de imida, por exemplo, um grupo ftalimida, um grupo ftalimido-glitarimida, talidomida derivada, lenalidomida derivada ou pomalidomida derivada, e comparar a afinidade de ligação do cereblon e/ou atividade inibitória do agente de teste ou composto como em comparação com um agente ou composto conhecido por ligar e/ou inibir a atividade do cereblon.
[0021] Ainda em outro aspecto, a descrição provê métodos para tratamento ou melhoramento da doença, distúrbio ou sintoma em um sujeito ou paciente, por exemplo, tanto em um animal quanto em um humano, compreendendo em administrar em um indivíduo que precise do mesmo, uma composição compreendendo uma quantidade específica, por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz, de um composto como o descrito aqui ou uma forma salina do mesmo, e um carreador aceitável farmaceuticamente, aqui a composição é eficaz para tratar ou melhorar a doença ou distúrbio ou sintoma do mesmo no indivíduo.
[0022] Em outro aspecto, a descrição provê métodos para identificar os efeitos da degradação das proteínas de interesse em um sistema biológico usando os compostos de acordo a presente invenção.
[0023] As áreas de utilidade precedentes gerais são dadas por meio de exemplos somente e não têm a intenção de serem limitantes do escopo da presente descrição reivindicações anexas. Objetivos adicionais e vantagens associadas com as composições, métodos e processos da presente invenção serão apreciados por um versado na técnica à vista das reivindicações instantâneas, descrição e exemplos. Por exemplo, os vários aspectos e formas de realização da invenção podem ser utilizados em inúmeras combinações, todas das quais são expressamente contempladas pela presente descrição. Essas objetivos e formas de realização adicionais, são expressamente incluídas no escopo da presente invenção. As publicações e outros materiais usados aqui para ilustrar os fundamentos da invenção, e em casos particulares, para prover detalhes adicionais em relação à prática, são incorporados por referência.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0024] Os desenhos em anexo, que são incorporados e formam uma parte do relatório, ilustram várias formas de realização da presente invenção e, junto com a descrição, servem para explicar os princípios da invenção. Os desenhos são somente para o propósito de ilustrar a forma de realização da invenção e não são construídas como limitantes da invenção. Objetivos adicionais, características e vantagens da invenção vão se tornar aparentes a partir da seguinte descrição detalhada tomada em conjunto com as figuras anexas mostrando formas de realização ilustrativas da invenção, nas quais: Figuras 1A e 1B. Ilustração do princípio geral para a função do PROTAC (A) PROTACs exemplificativos compreendem uma porção alvo de proteína (PTM; retângulo sombreado escuro), uma porção de ligação à ubiquitina ligase (ULM; triângulo sombreado claro) e uma porção de ligante opcional (L; linha preta) pareando ou conectando o PTM ao ULM. (B) Ilustra o uso funcional do PROTACs com descrito aqui. Brevemente, a ULM reconhece e liga a uma ligase ubiqutina E3 específica, e a PTM liga e captura uma proteína alvo trazendo em proximidade com a ubiquitina ligase E3. Tipicamente, a Ubiquitina Ligase E3 é complexada com a proteína de conjugação de ubiquitina E2, e ou sozinha ou através da proteína alvo catalisa a ligação da ubiquitina (círculos escuro) a uma lisina ou à proteína através de uma ligação isopeptídica. A proteína poli- ubiquitinada (extrema direita) é então alvejada para degradação pelo maquinário protessoma da célula. Figura 2. Composto quimérico, A825, projetado utilizando a tecnologia PROTAC A825 contém uma porção de ligação a BRD4 (um derivado do OTX-15) que é ligada a uma parte de recrutamento de ubiquitina ligase E3 Cereblon (um derivado da pomalidomida) através de um ligante tetraoxatetradecano. Figuras 3A, 3B, 3C, 3D, 3E, 3F, 3G, 3H e 3I. Imagens do Western blot mostrando os efeitos celulares inibidores BRD4 de molécula pequena nas linhas de células de BL. JQ1 e OTX-15 levam o BRD4 nas células NAMALWA (A) e Ramos (B) de uma forma dependendo de dose. OTX-15 leva a acúmulo de BRD4 em células CA-46 (C) e células DAUDI (D) de um modo dependendo de dose. JQ1 e OTX-15 leva a uma significativa, mas incompleta, supressão do c-Myc em células NAMALWA (E) e células Ramos (F). (G) O efeito de supressão do c-Myc pelo JQ1 é reversível. O efeito de supressão do c- Myc pelo JQ1 e OTX-15 em células NAMALWA (H) e Ramos (I) é reversível. Figuras 4A, 4B, 4C, 4D, 4E, 4F e 4G. Imagens de Western blot mostrando os efeitos celulares do A825 nas linhas de células BL. A degradação de BRD4 pelo A825 ocorre de modo dependente de dosagem, e em formiato de sino nas células NAMALWA (A) e CA-46 (B). A degradação de BRD4 (C) e (D) ocorrem rapidamente. A degradação do BRD4 (E) e (F) induzida pelo tratamento A825 é dependente do Cereblon. A degradação do BRD4 (G) por A825 é mediada pelo proteassoma. Figuras 5A, 5B, 5C, 5D, 5E e 5F. Comparação dos efeitos celulares pelo tratamento com A825, JQ1, e OTX-15. A supressão do c-Myc (A) e (B) pelo A825 é mais significativa do que pelo JQ1 e OTX-15. Os níveis de proteína c-Myc (C) são suprimidos mais seguindo o tratamento com A825 em comparação com JQ1 e OTX-15. A função da proteína c-Myc (D), (E) e (F) (como avaliada pela expressão do gene SLC19A1) é suprimida mais seguindo o tratamento com A825, em comparação com JQ1 e OTX-15. Figura 6A, 6B, 6C, 6D, 6E, 6F, 6G e 6H. Comparação do efeito antiproliferação das linhas de células BL com A825, JQ1, e OTX-15. A825 (A)- (D) tem um efeito antiproliferação superior em linhas BL em comparação com JQ1 e OTX-15. (E) A825 leva a uma supressão de proliferação de duração mais longa em comparação com JQ1 e OTX-15. (G) Pomalidomida resgata as células dos efeitos de antiproliferação do tratamento com baixa dose de A825. (G) Pomalidomida resgata parcialmente as células dos efeitos de antiproliferação do tratamento com alta dose de A825. (H) Polidamida sozinha não tem um efeito signficativo na proliferação de célula BL. Figuras 7A e 7B. Comparação dos efeitos de apoptose em células BL pelo tratamento com A825, JQ1, e OTX-15. (A) A825 leva à indução de apoptoses em células BL (como monitorado pela atividade de caspase) mais significativas em comparação com JQ1 e OTX-15. (A) A825 leva à indução de apoptoses em células BL (como monitorado pela clivagem PARP) mais significativas em comparação com JQ1 e OTX-15. Figuras 8A e 8B. Esquema mostrando o mecanismo de modelo de ação para a degradação do BRD4 pelo tratamento com A825. (a) Células tratadas com baixas concentrações de A825 ligando eficazmente o BRD4 e Cereblon formando complexo trímero “BRD4-A825-Cereblon”, que conduz a degradação eficaz do BRD4 na célula. (B) Células tratadas com altas concentrações de A825 formam dímeros “BRD4-A825” e “A825-Cereblon” e que impedem a formação ideal do trímero e da degradação de BRD4.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0025] A seguir há uma descrição detalhada provida para auxiliar aqueles versados na técnica a executar esta invenção. Aqueles versado na técnica podem fazer modificações e variações nas formas de realização descritas aqui partindo do espírito ou do escopo da presente descrição. Todas as publicações, pedidos de patente, patentes, figuras e outras referências mencionadas aqui são expressamente incorporadas pela referência em sua totalidade.
[0026] Aqui são descritos composições e métodos que se relacionam com a surpreendente e inesperada descoberta de que uma proteína Ubiquitina Ligase E3, por exemplo, cereblon, ubiquitina a proteína alvo uma vez que esta e a proteína alvo são colocadas em proximidade por um construto bifuncional ou quimérico que liga a proteína Ubiquitina Ligase E3 e a proteína alvo. Adequadamente, a presente invenção provê tais compostos e composições compreendendo uma porção de ligação à Ubiquitina Ligase E3 (“ULM”) acoplada a uma porção de ligação alvo de proteína (“PTM”), que resulta na unbiquitinação de uma proteína alvo escolhida, que leva à degradação da proteína alvo pela proteassoma (ver Figura 1). A presente invenção também provê uma biblioteca de composições e o uso das mesmas.
[0027] A não ser que de outra maneira definido, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado como comumente entendido por um versado na técnica a qual essa invenção pertence. A terminologia usada na descrição é para descrever somente formas de realização particulares e não é destinada a limitar a invenção.
[0028] Onde uma faixa de valores é provida, é entendido que cada valor interveniente, até um décimo da unidade limite mais baixa, a menos que o contexto claramente determine em contrário, (como no caso de um grupo contendo um número de átomos no qual cada número de átomo de carbono esteja dentro da faixa seja provido), entre o limite mais alto e o mais baixo desta faixa ou qualquer outro valor declarado interveniente na faixa determinada seja abrangido por esta invenção. Os limites superiores e inferiores dessas faixas menores podem ser independentemente incluídos nas faixas menores também fazem parte da abrangência dessa invenção, sujeitos a qualquer limite excluído na faixa indicada. Onde a faixa indicada inclui um ou ambos os limites, faixas excluindo qualquer um de ambos desses limites incluídos são também incluídos na invenção.
[0029] Os seguintes termos são usados para descrever a presente invenção. Nos casos em que um termo não está especificamente definido aqui, aquele termo recebe um significado de reconhecimento da técnica por aqueles versados na técnica, utilizando aquele termo no contexto de seu uso para descrever a presente invenção.
[0030] Os artigos “um” e “uma” como usados aqui e nas reivindicações em anexo são usados para referir a um ou mais de um (isto é, pelo menos um) do objeto gramatical do artigo, a menos que o contexto indique claramente o contrário. A título de exemplo, “um elemento” significa ou elemento ou mais de um elemento.
[0031] A expressão “e/ou” como aqui usada no relatório e nas reivindicações, deve ser entendida significando “um ou ambos” dos elementos então combinados, isto é, elementos que estão conjuntamente presentes em alguns casos e disjuntamente presente em outros casos. Múltiplos elementos listados com “e/ou” devem ser interpretados da mesma forma, isto é, “um ou mais” dos elementos então combinados. Outros elementos podem opcionalmente estar presentes além dos elementos especificamente identificados pela cláusula “e/ou”, seja relacionado ou não relacionado aos elementos especificamente identificados. Assim, como um exemplo não limitante, uma referência a “A e/ou B”, quando usada em conjunto com linguagem aberta tal como “compreendendo” pode se referir, em uma forma de realização, a somente A (opcionalmente incluindo elementos diferentes de B); em outra forma de realização, a somente B (opcionalmente incluindo elementos diferentes de A); em ainda outra forma de realização, a ambos A e B (opcionalmente incluindo outros elementos); etc.
[0032] Como usado aqui no relatório e nas reivindicações, “ou” deve ser entendido tendo o mesmo significado de “e/ou” como definido acima. Por exemplo, quando separando itens em uma lista, “ou” ou “e/ou” devem ser interpretados como sendo inclusivos, isto é, a inclusão de pelo menos um, mas também incluindo mais de um, de um número ou lista de elementos, e, opcionalmente, itens adicionais não listados. Apenas termos claramente indicados em contrário, tais como “somente um dos” ou “exatamente um dos”, quando usado nas reivindicações, “consistindo em”, se referirá à inclusão de exatamente um elemento ou uma lista de elementos. Em geral, o termo “ou” como usado aqui somente será interpretado como indicando alternativas excludentes (por exemplo, “um ou outro, mas não ambos”) quando precedido por termos de exclusividade, tais como “ou”, “um dos”, somente um dos” ou “exatamente um dos”.
[0033] Nas reivindicações, assim como no relatório acima, todas as expressões transicionais, tais como “compreendendo”, “incluindo”, “carregando”, “tendo”, “contendo”, “envolvendo”, “abrangendo”, “composto de”, e outros semelhantes devem ser entendidos como abertos, isto é, significam incluindo mas não limitado a. Apenas as expressões transicionais “consistindo de” e “consistindo essencialmente” devem ser expressões fechadas ou semifechadas, respectivamente, como determinado no Manual de Procedimentos para Examinar Patentes do Escritório de Patentes dos Estados Unidos.
[0034] Como usado aqui no relatório e nas reivindicações, a expressão “pelo menos um”, em referência a uma lista de um ou mais elementos, deve ser entendido como significando pelo menos um elemento selecionado de qualquer um ou mais elementos, mas não necessariamente incluindo pelo menos um de cada e todo elemento especificamente pertencente à lista de elementos e não excluindo quaisquer combinações de elementos na lista de elementos. Essa definição também permite que os elementos podem opcionalmente estar presente além dos elementos especificamente identificados dentro da lista de elementos ao qual a expressão “pelo menos um” se refere, seja relacionada ou não àqueles elementos especificamente identificados. Portanto, como um exemplo não limitante, “pelo menos um da e B (ou equivalentemente, “pelo menos um da ou B) pode se referir, em uma forma de realização, a pelo menos um, opcionalmente incluindo mais de um, A, com nenhum B presente (e opcionalmente, incluindo outros elementos além de B), em outra forma de realização, a pelo menos um, opcionalmente incluindo mais de um; B, com nenhum A presente (e opcionalmente incluindo outros elementos além de A; ainda em uma outra forma de realização, a pelo menos um, opcionalmente incluindo mais de um, e pelo menos um, opcionalmente incluindo mais de um, B (e opcionalmente incluindo outros elementos), etc.
[0035] Também deve ser entendido que, em certos métodos descritos aqui que incluem mais de uma etapa ou ato, a ordem de etapas ou atos do método não é necessariamente limitada à ordem na qual as etapas ou ações do método são citadas a menos que o contexto indique ao contrário.
[0036] Os termos “coadministração” e “coadministrar” ou “terapia de combinação” se referem a ambas administração concorrente (administração de uma ou mais agentes terapêuticos ao mesmo tempo) e administração em tempos variados (administração de um ou mais agentes terapêuticos em um tempo diferente da administração de um agente ou agentes terapêuticos adicionais), contanto que os agentes terapêuticos estejam presentes no paciente em alguma extensão, preferencialmente em quantidades eficazes, ao mesmo tempo. Em alguns aspectos preferenciais, um ou mais compostos presentes descritos aqui, são coadministrados em combinação com pelo menos um agente bioativo adicional, especialmente incluindo um agente anticancerígeno. Em aspectos particularmente preferidos, a coadministração de compostos resulta em atividade e/ou terapia sinérgica, incluindo atividade anticancerígeno.
[0037] O termo “composto”, como usado aqui, a não ser que de outra maneira indicado, se refere a qualquer composto químico específico descrito aqui e inclui tautômeros, regioisômeros, isômeros geométricos e, se for caso disso, estereoisômeros, incluindo isômeros ópticos (enantiômeros) e outros estereoisômeros (diastereômeros) dos mesmos, assim como sais farmaceuticamente aceitáveis e derivados (incluindo formas de pró-drogas) do mesmo quando aplicáveis no contexto. Dentro deste uso no contexto, o termo composto geralmente se refere a um único composto, mas também pode incluir outros compostos tais como estereoisômeros, regioisômeros e/ou isômeros ópticos (incluindo misturas racémicas), bem como enantiômeros específicos ou misturas enantiomericamente enriquecidas dos compostos descritos. O termo também se refere, no contexto de formas de pró-drogas de compostos que foram modificados para facilitar a administração e distribuição de compostos a um local de atividade. É notado que na descrição dos compostos presentes, inúmeros substituintes e variáveis associadas com os mesmos, entre outros são descritos. É entendido por aqueles versados na técnica que moléculas que são descritas aqui são compostos estáveis como geralmente descritos abaixo. Quando a ligação é mostrada, ambas as ligações duplas e únicas são representadas dentro do contexto do composto mostrado.
[0038] O termo “Ubiquitina Ligase” se refere a uma família de proteínas que facilita a transferência de ubiquitina a uma proteína de substrato específica, alvejando a proteína de substrato para degradação. Por exemplo, cereblon é uma proteína Ubiquitina Ligase E3 que sozinha ou em combinação com uma enzima de conjugação de ubiquitina causa a ligação da ubiquitina a uma lisina em uma proteína alvo, e subsequentemente alveja substratos de proteína específicos para degradação pela proteassoma. Assim, a ubiquitina ligase E3 sozinha, ou em complexo com uma enzima de conjugação de ubiquitina E2, é responsável pela transferência de ubiquitina para proteínas alvejadas. Em geral, a ubiquitina ligase está envolvida na poliubiquitinação de modo que uma segunda ubiquitina é acoplada à primeira; uma terceira é acoplada à segunda, e assim por diante. Poliubiquitinação marca proteínas para degradação pela proteassoma. Entretanto, existem alguns eventos de ubiquitinação que são limitados à monoubiquitinação, na qual somente uma única ubiquitina é adicionada pela ubiquitina ligase a uma molécula de substrato. Proteínas monoubiquitinizadas não são alvejadas pela proteassoma para degradação, não podem, em vez disso, ser alteradas nas suas localizações ou funções celulares, por exemplo, através da ligação de outras proteínas que têm domínios capazes de ligar ubiquitina. Para complicar a questão ainda mais, diferentes lisinas em ubiquitina podem ser alvejadas por uma E3 para preparar cadeias. A lisina mais comum é Lys48 na cadeia de ubiquitina. Essa é a lisina usada para fazer poliubiquitina, que é reconhecida pela proteassoma.
[0039] O termo “paciente” ou “indivíduo” é usado ao longo do relatório para descrever um animal, preferencialmente um humano ou um animal domesticado, para quem o tratamento, incluindo tratamento profilático, com as composições de acordo com a presente invenção é provido. Para o tratamento desses estados de infecções, condições ou doenças que são específicos para um animal específico tal como um paciente humano, o termo paciente se refere aquele animal específico, incluindo um animal domesticado como um cachorro ou gato ou um animal de fazenda como um cavalo, vaca, ovelha, etc. No geral, na presente invenção, o termo paciente se refere a um paciente humano a não ser que de outra maneira indicado ou implícito a partir do contexto do uso do termo.
[0040] O termo “eficaz” é usado para descrever uma quantidade de um composto, composição ou componente que, quando usado dentro do contexto do seu uso pretendido, efetua um resultado pretendido. O termo eficaz classifica todos os outros termos de quantidade eficaz ou concentração eficaz, que são de outra maneira descritos ou usados na presente aplicação.
Compostos e Composições
[0041] Em um aspecto, a descrição provê compostos compreendendo uma porção de ligação à Ubiquitina Ligase E3 (“ULM”) que é um cereblon de ligação à Ubiquitina Ligase E3 (“CLM”). Em uma forma de realização, o CLM é ligado a um ligante químico (L) de acordo com a estrutura:(I) L-CLM em que L é um grupo de ligantes químicos e CLM é um cereblon de ligação à Ubiquitina Ligase E3. O número e/ou posições relativas das partes nos compostos ilustrados aqui é somente provido a título de exemplo. Como seria entendido pelos versados na técnica, os compostos como descritos aqui podem ser sintetizados com qualquer número e/ou posição relativo(a) das respectivas porções funcionais.
[0042] Os termos ULM e CLM são usados nos seus sentidos inclusivos a não ser que o contexto indique o contrário. Por exemplo, o termo ULM é inclusivo de todos os ULMs, incluindo aqueles que ligam cereblon (isto é, CLMs). Adicionalmente, o termo CLM é inclusivo de todas as possíveis porções de ligação de cereblons Ubiquitinas ligases cereblon.
[0043] Em outro aspecto, a presente invenção prove compostos PROTAC bifuncionais ou multifuncionais úteis para regular atividade de proteína pela inclusão da degradação da proteína alvo. Em certas formas de realização, o composto compreende, um CLM ligado, por exemplo, ligado covalentemente, diretamente ou indiretamente, a uma porção que liga uma proteína alvo (isto é, porção alvejadora de proteínas ou “PTM”). Em certas formas de realização, as CLM e PTM são unidas ou acopladas através de um ligante químico (L). O CLM reconhece a ubiquitina ligase cereblon E3 e o PTM reconhece a proteína alvo e a interação dessas respectivas porções com seus alvos facilita a degradação da proteína alvo ao colocar a proteína alvo na proximidade da proteína ubiquitina ligase. Um exemplo de composto bifuncional pode ser descrito como (II) PTM-CLM
[0044] Em certas formas de realização, o composto bifuncional compreende adicionalmente um ligante químico (“L”) Por exemplo, a estrutura do composto bifuncional pode ser retratada como: (III) PTM-L-CLM onde PTM é uma porção alvo de proteína/polipeptídio, L é um ligante, e CLM é uma porção de ligação ligase E3 cereblon.
[0045] Em certas formas de realização, os compostos como descritos aqui compreendem múltiplas PTMs (alvejando os mesmos ou diferentes alvos de proteínas), múltiplas CLMs, uma ou mais ULMs (isto é, porções que se ligam especificamente à outra Ubiquitina Ligase E3, por exemplo, VHL) ou uma combinação das mesmas. Em quaisquer outros aspectos das formas de realização descritas aqui, as PTMs, CLMs e ULMs podem ser acopladas diretamente ou através de um ou mais ligantes químicos, ou uma combinação dos mesmos. Em formas de realização adicionais, onde um composto tem múltiplas ULMs, as ULMs podem ser as mesmas Ubiquitina Ligases E3 ou cada respectiva ULM pode se ligar especificamente a uma Ubiquitina Ligase E3 diferente. Em ainda formas de realização adicionais, onde um composto tem múltiplas PTMs, as PTMs podem se ligar as mesmas proteínas alvo ou cada respectiva PTM pode se ligar respectivamente a uma proteína alvo diferente.
[0046] Em outra forma de realização, a descrição provê um composto que compreende uma pluralidade de CLMs acopladas diretamente ou através de porção de ligante químico (L). Por exemplo, um composto tendo duas CLMs pode ser retratado como: (IV) CLM-CLM ou (V) CLM-L-CLM
[0047] Em certas formas de realização, onde o composto compreende múltiplas CLMs, as CLM são idênticas. Em formas de realização adicionais, o composto compreendendo uma pluralidade de CLMs compreende adicionalmente pelo menos uma PTM acoplada a uma CLM diretamente ou através de um ligante químico (L) ou ambos. Em certas formas de realização adicionais, o composto compreendendo uma pluralidade de CLMs compreende adicionalmente múltiplas PTMs. Em ainda formas de realização adicionais, as PTMs são as mesmas ou, opcionalmente, diferentes. Em ainda forma de realização adicionais, em que as PTMs são diferentes das respectivas PTMs podem se ligar às mesmas proteínas alvo ou cada se ligar respectivamente a uma proteína alvo diferente.
[0048] Em formas de realização adicionais, a descrição provê um composto compreendendo pelo menos duas CLMs diferentes acopladas diretamente ou através de ligantes químicos (L) ou ambos. Por exemplo, um tal composto tendo duas CLMs diferentes pode ser retratado como: (VI) CLM-CLM’ ou (VII) CLM-L-CLM’ em que CML indica uma porção de ligação à ubiquitina ligase E3 cereblon que é estruturalmente diferente de CLM. Em certas formas de realização, o composto pode compreender uma pluralidade de CLMs e/ou uma pluralidade de CLM’s. Em formas de realização adicionais, o composto compreendendo pelo menos duas CLMs diferentes, uma pluralidade de CLMs e/ou uma pluralidade de CLM’s compreende adicionalmente pelo menos uma PTM acoplada a uma CLM ou uma CLM’ diretamente ou através de um ligante químico ou ambos. Em qualquer uma das formas de realização descritas aqui, um composto compreendendo pelo menos duas CLMs podem adicionalmente compreender múltiplas PTMs. Em ainda formas de realização adicionais, as PTMs são as mesmas ou, opcionalmente, diferentes. Em ainda forma de realização adicionais, em que as PTMs são diferentes das respectivas PTMs podem se ligar às mesmas proteínas alvo ou se ligar especificamente a uma proteína alvo diferente. Em ainda outras formas de realização, a própria PTM é uma ULM ou CLM (ou ULM’ ou CLM’).
[0049] Em uma forma de realização preferida, a CLM compreende uma porção que é um ligante da Ubiquitina Ligase E3 cerebron (CRBN). Em certas formas de realização, a CLM compreende um quimiotipo da classe de moléculas “imida”. Em formas de realização adicionais, a CLM compreende um grupo ftalimida ou um análogo ou derivado do mesmo. Em formas de realização ainda adicionais, a CLM compreende um grupo ftalimida-glutarimida ou um análogo ou derivado do mesmo. Em ainda outras formas de realização, a CLM compreende um membro do grupo que consiste em talidomida, lenalidomida, pomalidomida e análogos ou derivados do mesmo.
[0050] Em formas de realização adicionais, a descrição provê os compostos como descritos aqui incluindo enantiômeros, diastereômeros, solvatos e polimorfos, incluindo formas salinas farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo formas salinas de ácido e base.
Compostos neo-imidas
[0051] Em um aspecto a descrição provê compostos úteis para ligar e/ou inibir o cereblon. Em certas formas de realização, o composto é selecionado de um grupo consistindo de estruturas químicas: em que W é independentemente selecionado do grupo CH2, CHR, C=O, SO2, NH, e N-alquila; X é independentemente selecionado do grupo O, S e H2; Y é independentemente selecionado do grupo NH, N-alquila, N- arila, N-hetarila, N-cicloalquila, N-heterociclila, O e S; Z é selecionado independentemente do grupo O, e S ou H2 exceto que ambos X e Z não podem ser H2; G e G’ são selecionados independentemente do grupo H, alquila, OH, CH2-heterociclila opcionalmente substituído por R’, e benzila opcionalmente substituído por R’; Q1-Q4 representam um carbono C substituído por um grupo independentemente selecionado de R’, N ou N-óxido; A é independentemente selecionado do grupo alquila, cicloalquila, Cl e F; R compreende, mas não é limitado a: CONR’R”, -OR’, -NR’R”, - SR’, -SO2R’, -SO2NR’R”, -CR’R”-, -CR’NR’R”-, -arila, -hetarila, -alquila, - cicloalquila, -heterociclila, -P(O)(OR’)R”, -P(O)R’R”, -OP(O)(OR’)R”, - OP(O)R’R”, -Cl, -F, -Br, -I, -CF3, -CN, -NR’SO2NR’R”, -NR’CONR’R”, - CONR’COR”, -NR’C(=N-CN)NR’R”, -C(=N-CN)NR’R”, -NR’C(=N-CN)R”, - NR’C(=C-NO2)NR’R”, -SO2NR’COR”, -NO2, -CO2R’, -C(C=N-OR’)R”, - CR’=CR’R”, -CCR’, -S(C=O)(C=N-R’)R”, -SF5 e-OCF3 R’ e R” são selecionados independentemente de uma ligação, H, alquila, cicloalquila, arila, hetarila, heterociclila n é um valor inteiro de 1 a 4 repr representa uma ligação que pode ser esteroespecífica ((R) ou (S)) ou não esteroespecífica; e Rn compreende de 1 a 4 grupos ou átomos independentes e funcionais
CLMs Exemplificativas
[0052] Em qualquer um dos compostos descritos aqui, a CLM compreende uma estrutura química selecionada do grupo de: em que W é independentemente selecionado do grupo CH2, CHR, C=O, SO2, NH, e N-alquila; X é independentemente selecionado do grupo O, S e H2; Y é independentemente selecionado do grupo NH, N-alquila, N- arila, N-hetarila, N-cicloalquila, N-heterociclila, O e S; Z é independentemente selecionado do grupo O, e S ou H2 exceto que ambos X e Z não podem ser H2; G e G’ são independentemente selecionados do grupo H, alquila, OH, CH2-heterociclila opcionalmente substituído por R’, e benzila opcionalmente substituído por R’; Q1-Q4 representam um carbono C substituído por um grupo independentemente selecionado de R’, N ou N-óxido; A é independentemente selecionado do grupo alquila, cicloalquila, Cl e F; R compreende, mas não é limitado a: CONR’R”, -OR’, -NR’R”, - SR’, -SO2R’, -SO2NR’R”, -CR’R”-, -CR’NR’R”-, -arila, -hetarila, -alquila, - cicloalquila, -heterociclila, -P(O)(OR’)R”, -P(O)R’R”, -OP(O)(OR’)R”, - OP(O)R’R”, -Cl, -F, -Br, -I, -CF3, -CN, -NR’SO2NR’R”, -NR’CONR’R”, - CONR’COR”, -NR’C(=N-CN)NR’R”, -C(=N-CN)NR’R”, -NR’C(=N-CN)R”, - NR’C(=C-NO2)NR’R”, -SO2NR’COR”, -NO2, -CO2R’, -C(C=N-OR’)R”, - CR’=CR’R”, -CCR’, -S(C=O)(C=N-R’)R”, -SF5 e-OCF3 R e R’ são selecionados independentemente de uma ligação, H, alquila, cicloalquila, arila, hetarila, heterociclila n é um valor inteiro de 1 a 4 repr representa uma ligação que pode ser esteroespecífica ((R) ou (S)) ou não esteroespecífica; e Rn compreende 1 a 4 grupos ou átomos independentes e funcionais, e opcionalmente, um dos quais é modificado para ser ligado covalentemente ao PTM, um grupo ligante químico (L), um ULM, CLM (ou CLM’) ou combinação do mesmo.
[0053] O termo “independentemente” é usado aqui para indicar a variável, que é aplicada independentemente, varia independentemente de aplicação para aplicação.
[0054] O termo “alquila” pode significar dentro do seu contexto um grupo alquila ou radical hidrocarboneto totalmente saturado linear, de cadeia ramificada ou cíclico, preferencialmente um C1-C10, mais preferencialmente um C1-C6, alternativamente, um grupo alquila C1-C3, que pode ser opcionalmente substituído. Exemplos de grupos alquila são metila, etila, n-butila, sec-butila, n- hexila, n-heptila, n-octila, n-nonila, n-decila, isopropila, 2-metilpropila, ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclobutila, ciclopentila, ciclopentil etila, ciclo- hexiletila e ciclohexila, entre outros. Em certas formas de realização, o grupo alquila é capeado na extremidade com um grupo halogênio (At, Br, Cl, F ou I). Em certas formas de realização preferidas, compostos de acordo com a presente invenção, que podem ser usados para ligar covalentemente para ligar enzimas desalogenase. Estes compostos geralmente contém uma cadeia lateral (geralmente ligada por um grupo polietileno glicol) que termina em um grupo alquila que tem um substituinte halogênio (geralmente cloro ou bromo) na sua extremidade distal que resulta em uma ligação covalente do composto que contém tal porção da proteína.
[0055] O termo “alquenila” se refere aos radicais de hidrocarbonetos lineares, de cadeia ramificada ou cíclicos C2-C10 (preferencialmente C2-C6) contendo pelo menos uma ligação C=C.
[0056] O termo “alquinila” se refere aos radicais de hidrocarbonetos lineares, de cadeia ramificada ou cíclicos C2-C10 (preferencialmente C2-C6) contendo pelo menos uma ligação C=C.
[0057] O termo “alquileno” quando usado, se refere a um grupo-(CH2) (n é um número inteiro geralmente de 0 a 6), que pode ser opcionalmente substituído. Quando substituído, o grupo alquileno é preferencialmente substituído em um ou mais dos grupos metilenos com um grupo alquila C1-C6 (incluindo um grupo ciclopropila ou grupo t-butila), mas pode ser também substituído por um ou mais grupos halo, preferencialmente de 1 a 3 grupos halo ou um ou dois grupos hidroxila, grupos O-(C1-C6) ou cadeias laterais de aminoácidos como descritos aqui. Em algumas formas de realização, o grupo alquileno pode ser substituído por um grupo uretano ou grupo alcóxi (ou outro grupo) que é depois substituído por uma cadeia de polietileno glicol (de 1 a 10, preferencialmente de 1 a 6, geralmente de 1 a 4 unidades de etileno glicol) que é substituído (preferencialmente, mas não exclusivamente na extremidade distal da cadeia de polietileno glicol) uma cadeia alquila substituído por um único grupo halogênio, preferencialmente um grupo cloro. Ainda em outras formas de realização, o grupo alquileno (geralmente um metileno), pode ser substituído com um grupo de cadeia lateral de aminoácido tais como um grupo de cadeia lateral de um aminoácido natural ou artificial, por exemplo, alanina, β-alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutâmico, glutamina, glicina, fenilalanina, histidina, isoleucina, lisina, leucina, metionina, serina, treonina, valina, triptofano ou tirosina.
[0058] O termo “não substituído” pode significar substituído somente com átomos de hidrogênio. Uma faixa de átomos de carbono que inclui C0 significa que o carbono está ausente e é substituído com H. Portanto, uma faixa de átomos de carbono que é de C0-C6 inclui átomos de carbono de 1, 2, 3, 4, 5 e 6 e para C0, o H fica no lugar do carbono.
[0059] O termo “substituído” ou “opcionalmente substituído” significa independentemente (isto é, onde mais de um substituinte ocorre, cada substituinte é independente do outro substituinte) um ou mais substituintes (independentemente até cinco substituintes, preferencialmente até três substituintes, geralmente de 1 a 2 substituintes em uma porção em um composto de acordo com a presente invenção e podem incluir substituintes que podem eles mesmos mais tarde serem substituídos) em uma posição de carbono (ou nitrogênio) em qualquer lugar em uma molécula dentro do contexto, e inclui como substituintes hidroxila, tiol, carboxila, ciano (C=N), nitro (NO2), halogênio (preferencialmente 1, 2 ou 3 halogênios, especialmente em uma alquila, especialmente um grupo metil como triflurometil), um grupo alquila (preferencialmente, C1-C10, mais preferencialmente, C1-C6) arila (especialmente fenila, e fenila substituído, por exemplo benzil ou benzoil), grupo alcóxi (preferencialmente, alquila C1-C6 ou arila, incluindo fenil e fenil substituído) tioéter (alquila C1-C6 ou arila), acila (preferencialmente acila C1-C6) éster ou tioéster (preferencialmente, alquila C1-C6 ou arila) incluindo alqueno éster (de tal modo que a ligação seja uma do grupo alquileno, em vez da função éster que é preferencialmente substituído com um grupo alquila C1-C6 ou arila, preferencialmente, alquila C1-C6 ou arila, halogênio, (preferencialmente, F ou Cl), amina (incluindo um alquileno amina cíclico de 5 ou 6 membros, depois incluindo uma alquil C1-C6 amina ou uma dialquil amina cujos grupos alquila podem ser substituídos com um ou dois grupos hidroxila) ou um grupo opcionalmente substituído -N(alquila C0-C6)C(O)(O-alquila C1-C6) (que pode ser opcionalmente substituído por uma cadeia de polietileno glicol ao qual é posteriormente ligado um grupo alquila contendo um único halogênio, preferencialmente um substituinte cloro), hidrazina, amida, que é preferencialmente substituído por um ou dois grupos alquila C1-C6 (incluindo um carboxamida que é opcionalmente substituído por um ou dois grupos alquila C1-C6) alcanol (preferencialmente, alquila C1-C6ou arila), ou ácido alcanóico (preferencialmente alquila C1-C6 ou arila). Substituintes de acordo com a presente invenção podem incluir, por exemplo grupos-SiR1R2R3 onde cada um do R1 e R2 é descrito aqui e R3 é H ou um grupo alquila C1-C6, preferencialmente R1, R2, R3 neste contexto é um grupo alquila C1-C3 (incluindo um grupo isopropil ou t-butil). Cada um dos grupos descritos acima pode ser ligado diretamente à porção substituída ou alternativamente, o substituinte pode ser ligado à porção substituída (preferencialmente no caso de uma porção arila ou heterarila) através de um -(CH2)m opcionalmente substituído ou alternativamente um grupo - (OCH2)m ou -(CH2CH2O)m opcionalmente substituído, que pode ser substituído por qualquer um dos substituintes descritos acima. Grupos alquilenos -(CH2)m- ou grupos-(CH2)n- ou outras cadeias como cadeias de etileno glicol, como identificadas acima, podem ser substituídos em qualquer lugar da cadeia. Substituintes preferenciais ou grupos alquilenos incluem halogênios ou grupos alquila C1-C6 (preferencialmente C1-C3), que podem ser opcionalmente substituídos por um ou dois grupos hidroxila, um ou dois grupos éter (O- gruposC1-C6), até três grupos halo (preferencialmente F), ou uma cadeia lateral de aminoácidos como descrito aqui e um amida opcionalmente substituído (preferencialmente carboxamida substituído como descrito acima) ou grupos uretano (geralmente com um ou dois substituintes alquila C0-C6, cujo(s) grupo(s) pode(m) ser posteriormente substituídos. Em certas formas de realização, o grupo alquileno (geralmente um único grupo metileno) é substituído por um ou dois grupos alquila C1-C6 opcionalmente substituídos, preferencialmente grupo alquila C1-C4, mais frequentemente grupos metila ou O-metila ou uma cadeia lateral de aminoácido com descrito acima. Na presente invenção, uma porção em uma molécula pode ser opcionalmente substituída com até cinco substituintes, preferencialmente até três substituintes. Mais frequentemente, na presente invenção porções que são substituídas com um ou dois substituintes.
[0060] O termo “substituído” (cada substituinte sendo independente de qualquer outro substituinte) também significa dentro de seu contexto de uso de alquila C1-C6, alcóxi C1-C6, halogênio, amida, carboxamida, sulfona, incluindo sulfonamida, ceto, carboxi, éster C1-C6 (oxiéster ou carboniléster), ceto C1-C6, uretano -O-C(O)-NR1R2 ou -N(R1)-C(O)-O-R1, nitro, ciano e amina (especialmente incluindo um alquileno C1-C6-NR1R2, um mono- ou di-alquil C1C6 aminas substituídos que podem ser opcionalmente substituídos com um ou dois grupos hidroxila). Cada um desses grupos contém, a menos que indicado em contrário, dentro do contexto, entre 1 e 6 átomos de carbono. Em certas formas de realização, os substituintes preferenciais incluem por exemplo, NH-, -NHC(O)-, - O-, =O, -(CH2)m-(aqui, m e n estão em contexto, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6), -S-, -S(O)-, SO2- ou -NH-C(O)-NH-, -(CH2)nOH, -(CH2)nSH, -(CH2)nCOOH, alquila C1-C6, - (CH2)nO-(alquila C1-C6), -(CH2)nC(O)-(alquila C1-C6), -(CH2)nOC(O)-(alquila C1C6), -(CH2)nC(O)O-(alquila C1-C6), -(CH2)nNHC(O)-R1, -(CH2)nC(O)-NR1R2, - (OCH2)nOH, -(CH2O)nCOOH, alquila C1-C6, -(OCH2)nO-(alquila C1-C6), - (CH2O)nC(O)-(alquila C1-C6), -(OCH2)nNHC(O)-R1, -(CH2O)nC(O)-NR1R2, - S(O)2-RS, -S(O)-RS (RS é um grupo alquila C1-C6 ou-(CH2)m—NRiR2), NO2, CN ou halogênio (F, Cl, Br, I, preferencialmente F ou Cl), dependendo do contexto de uso do substituinte. cada um de R1 e R2é, dentro do contexto, H ou um grupo alquila C1-C6 (que pode ser opcionalmente substituído com um ou dois grupos hidroxila ou até três grupos halogênios, preferencialmente flúor) O termo “substituído” também significará, dentro do contexto químico do composto definido e substituinte usado, um grupo arila ou heteroarila opcionalmente substituído ou um grupo heterocíclico opcionalmente substituído como de outra maneira descrito aqui. Grupos alquileno podem também ser substituídos como de outra maneira descrito aqui, preferencialmente com grupos alquila C1-C6 opcionalmente substituídos (metila, etila, hidroximetila ou hidroxietila são preferidos, assim provendo um centro quiral), uma cadeia lateral de um grupo aminoácido como de outra maneira descrito aqui, um grupo amina como de outra maneira descrito aqui, um grupo amida como descrito acima ou um grupo uretano grupo O-C(O)-NR1R2 onde R1 e R2 são como de outra maneira descritos aqui, apesar de inúmeros outros grupos possam ser usados como substituintes. Várias porções opcionalmente substituídas podem ser substituídas com 3 ou mais substituintes, preferencialmente não mais que 3 substituintes e preferencialmente com 1 ou 2 substituintes. É percebido que em casos onde, em um composto em uma posição particular da substituição da molécula é necessária (principalmente por causa da valência), mas nenhuma substituição é indicada, então aquele substituinte é interpretado ou entendido como H, a não ser que o contexto da substituição sugira o contrário.
[0061] O termo “arila” ou “aromático”, no contexto, se refere a um radical aromático monovalente substituído ou não substituído (como de outra maneira descrito aqui) tendo um único anel (por exemplo, benzeno, fenila, benzila) ou anéis condensados (por exemplo, naftila, antracenial, fenatrenila, etc.) e pode ser ligado ao composto de acordo com a presente invenção em qualquer posição estável disponível no(s) anel/anéis ou como de outra maneira indicado na estrutura química apresentada. Outros exemplos de grupos arila, no contexto, podem incluir sistemas de anel aromático heterociclo, grupos “heteroarila” tendo um ou mais átomos de nitrogênio, oxigênio ou enxofre no anel (monocíclico) tais como imidazol, furila, pirrol, furanila, tieno, tiazol, piridina, pirimidina, pirazina, triazol, oxazol, ou sistemas de anel fundido tais como indol, quiolina, indolizina, azaindolizina, benzofurazano, etc., entre outros que podem ser opcionalmente substituídos como descrito acima. Entre os grupos heteroarila que podem ser mencionados, inclui-se grupos heteroarila contendo nitrogênio como pirrol, piridina, piridona, piridazina, pirimidina, pirazina, pirazol, imadazol, triazol, triazina, tetrazol, indol, isoindol, indolizina, aziandolizina, purina, indazol, quinolina, di-hidroquinolina, tetra-hidroquinolina, isoquinolina, di- hidroisoquinolina, tetra-hidroisoquinolina, quinolizina, ftalazina, naftiridina, quinoxalina, quinazolina, cinolina, pteridina, imidazopiritidina, imidazontriazina, pirazinopiridazina, acridina, fenantridina, carbazol, carbazolina, pirimidina, fenantorilina, fenacena, oxadiazol, benzimidazol, pirrolpiridina, pirrolpirimidina, e piridopirinidina; heterociclos aromáticos contendo enxofre tais como tiofeno e benzotiofeno; heterociclos aromáticos contendo oxigênio tais como furano, pirano, ciclopentnapirano, benzofurano e isobenzofurano; e heterociclos aromáticos compreendendo dois ou mais heteroátomos selecionados dentre nitrogênio, enxofre e oxigênio tais como tiazol, tiadiazol, isotiazol, benzoxazol, benzotiazol, benzotiadiazol, fenotiazina, isoxazol, furazan, fenoxazina, pirazolxazol, imidazotiazol, tienofurano, furopirrol, piridoxazina, furopiridina, furopirimidina, tienopirimidina e oxazol, entre outro, todos os quais podendo ser opcionalmente substituídos.
[0062] O termo “arila substituído” se refere a um grupo carbocíclico aromático compreendendo pelo menos um anel aromático ou múltiplos anéis condensados em quais pelo menos um é aromático, em que o(s) anel/anéis são substituídos por um ou mais substituintes. Por exemplo, um grupo arila pode compreender um substituinte(s) selecionado de:-(CH2)nOH, -(CH2)n-Oalquila(C1- C6), -(CH2)n-O-(CH2)n-alquila(C1-C6), -(CH2)n-C(O)alquila(C1-C6), -(CH2)n- C(O)Oalquila(C0-C6), -(CH2)n-OC(O)alquila(C0-C6), amina, mono ou di-(alquil C1-C6)amina, em que o grupo alquila da amina é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos hidroxi ou até três grupos halo (preferencialmente F, Cl) OH, COOH, alquila C1-C6, preferencialmente, grupo CH3, CF3, OMe, OCF3, NO2 ou CN (cada um dos quais pode ser substituído por posições orto, meta e/ou para do anel fenila, preferivelmente para-), um grupo fenil opcionalmente substituído (o grupo fenil em si é preferencialmente substituído por um grupo ligante acoplado a um grupo PTM, incluindo um grupo ULM), e/ou pelo menos um do grupo de F, Cl, OH, COOH, CH3, CF3, OMe, OCF3, NO2 ou CN (em posição orto, meta e/ou para no anel fenila, preferencialmente para-) um grupo naftila, que pode ser opcionalmente substituído, uma heteroarila opcionalmente substituído, preferencialmente um isoxazol incluindo isoxazol metil substituído, um oxazol opcionalmente substituído incluindo um oxazol metil substituído, um tiazol opcionalmente substituído incluindo um tiazol substituído por metila, um isotiazol opcionalmente substituído incluindo um isotiazol substituído por metila, um pirrol opcionalmente substituído incluindo um pirrol metil substituído, um imidazol opcionalmente substituído incluindo metilimidazol, um benzimidazol opcionalmente substituído ou metoxibenzilimidazol, um oximidazol opcionalmente substituído ou metilaximidazol, um grupo diazol opcionalmente substituído, incluindo um grupo metildiazol, um grupo triazol opcionalmente substituído, incluindo um gruo triazol metil substituído, um grupo piridina, incluindo um halo-(preferencialmente F) ou grupo peridina metil substituído ou um grupo oxipiridina (onde o grupo piridina é ligado ao grupo fenil por um oxigênio, um furano opcionalmente substituído, um benzofurano opcionalmente substituído, um di-hidrobenzofurano opcionalmente substituído, um indol opcionalmente substituído, indolizina ou azaindolizina (2, 3, ou 4-azaindolizina), uma quinolina opcionalmente substituído e combinações dos mesmos.
[0063] “Carboxila” denota o grupo -C(O)OR, onde R é hidrogênio, alquila, alquila substituído, arila, arila substituído, heteroarila ou heteroarila substituído, enquanto esses substituintes genéricos têm significados que são idênticos às definições dos grupos correspondentes definidos aqui.
[0064] O termo “heteroarila” ou “hetarila” pode significar, mas não é de nenhum jeito limitado à, uma quinolina opcionalmente substituído (que pode ser acoplada ao farmacóforo ou substituído em qualquer átomo de carbono dentro do anel de quinolina), um indol opcionalmente substituído (incluindo di-hidroindol), uma indozilina opcionalmente substituído, uma azaindolizina opcionalmente substituído (2, 3, 4-azaindolizina), um benzimidazol opcionalmente substituído, benzodiazol, benzoxofurano, um imidazol opcionalmente substituído, um isoxazol opcionalmente substituído, um oxazol opcionalmente substituído (preferencialmente substituído por metil), um diazol opcionalmente substituído, um triazol opcionalmente substituído, um tetrazol, um benzofurano opcionalmente substituído (preferencialmente substituído por metila e/ou tiol), um isotiazol opcionalmente substituído, um triazol opcionalmente substituído (preferencialmente um 1,2,3-triazol substituído por um grupo metila, um grupo tri-isopropilsilila, um grupo-(CH2)m-O-alquila C1-C6 opcionalmente substituído, ou um grupo-(CH2)m-C(O)-O-alquila C1-C6 opcionalmente substituído), um piridina (2-, 3, ou 4-piridina) ou um grupo de acordo com a estrutura química: em que Sc é CHRSS, NRURE ou O; RHET é H, CN, NO2, halo (preferencialmente Cl ou F), alquila C1 C6 opcionalmente substituído (preferencialmente substituído por um ou dois grupos hidroxi ou até três grupos halo (por exemplo CF3), O(alquila C1-C6) opcionalmente substituído (preferencialmente substituído por um ou dois grupos hidroxila ou até três grupos halo) ou um grupo acetilênico -C=C-Ra opcionalmente substituído onde Ra é H ou um grupo alquila C1-C6 (preferencialmente alquila C1-C3); RSS é H, CN, NO2, halo (preferencialmente F ou Cl, alquila C1-C6 opcionalmente substituído (preferencialmente substituído por um ou dois grupos hidroxi ou até três grupos halo), O(alquila C1-C6) opcionalmente substituído (preferencialmente substituído por um ou dois grupos hidroxila ou até três grupos halo) ou uma -C(O)(alquila C1-C6) opcionalmente substituído (preferencialmente substituído por um ou dois grupos hidroxila ou até três grupos halo); RURE é H, um alquilaC1-C6 (preferencialmente H ou alquila C1-C3) ou uma -C(O)(alquila C1-C6), cada um dos grupos é opcionalmente substituído por um ou dois grupos hidroxila ou até três halogênios, preferencialmente grupos flúor ou um heterociclo opcionalmente substituído, por exemplo piperidina, morfolina, pirrolidina, tetra-hidrofurano, tetra-hidrotiofeno, piperidina, piperazina, cada um dos quais é opcionalmente substituído, e YC é N ou C-RYC, onde RYC é H, OH, CN, NO2, halo (preferencialmente Cl ou F), alquila C1-C6 opcionalmente substituído (preferencialmente substituído por um ou dois grupos hidroxi ou até três grupos halo (por exemplo CF3), O(alquila C1-C6) opcionalmente substituído (preferencialmente substituído por um ou dois grupos hidroxila ou até três grupos halo) ou um grupo acetilênico -C=C-Ra opcionalmente substituído onde Ra é H ou um grupo alquila C1-C6 (preferencialmente alquila C1-C3);
[0065] Os termos “aralquila” e “heteroaralquila” se referem a grupos que compreendem ambos arila ou, respectivamente heteroarila assim como sistemas alquila e/ou heteroalquila e/ou carbocíclicos e/ou de anel heterocicloalquila de acordo com as definições acima.
[0066] O termo “arilalquila” como usado aqui se refere a um grupo arila como definido acima, anexo a um grupo alquila definido acima. O grupo arilalquila é ligado à porção precursora através de um grupo alquila em que o grupo alquila tem um a seis átomos de carbono. O grupo arila no grupo arilalquila pode ser substituído como definido acima.
[0067] O termo “heterociclo” se refere a um cíclico que contém pelo menos um heteroátomo, por exemplo, N, O ou S, e pode ser aromático (heteroarila) ou não aromático. Assim, as porções heterolarila são incluídas sob a definição de heterociclo, dependendo do contexto do seu uso. Grupos heteroarila exemplificativos são descritos acima.
[0068] Heterociclos exemplificativos incluem: azetidinila,benzimadazolila, 1,4-benzodioxanila, 1,3-benzodioxolila, benzoxazolila, benzotiazolila, benzotienila, di-hidropiranila, di-hidrofuranila, dioxanila, dioxolanil etilenureia, 1,3-dioxolano, 1,3-dioxano, 1,4-dioxano, furila, homopiperidinila, imidazolila, imidazolinila, imidazolidinila, indolinila, indolila, isoquinolinila, isotiazolidinila, isotiazolila, isoxazolidinila, isoxazolila, morfolinila, naftiridinila, oxazolidinila, oxazolila, piridona, 2-pirrolidona, piridina, piperazinila, N-metilpiperazinila, piperidinila, ftalimida, succinimida, pirazinila, pirazolinila, piridila, pirimidinila, pirrolidinila, pirrolinila, pirrolila, quinolinila, tetra-hidropiranila, tetra-hidroquinolina, tiazolidinila, tiazolila, tienila, tetra-hidrotiofeno, oxano, oxetanila, oxariolanila, tiano entre outros.
[0069] Grupos heterocíclicos podem ser opcionalmente substituídos por um membro selecionado do grupo consistindo em alcóxi, cicloalquila, cicloalquila substituído, cicloalquileno, cocloalquileno substituído, acila, acilamina, acilóxi, amina, amina substituído, aminoacila, amicoacilóxi, oxiaminoacila, azida, ciano, halogênio, hidroxila, ceto, tioceto, carboxila, carboxialquila, tioarilaxila, tioheteroailaxila, tioheterociclooxila, tiol, tioalcóxi, tioalcóxi substituído, arila, arilaxi, heteroarila, heteroarilaxi, heterociclo, heterociclooxi, hidroxiamina, alcoxiamina, nitro, —SO-alquila, —SO-alquila substituído, —SOarila, —SO-heteroarila, —SO2-alquila, —SO2-alquila substituído, —SO2-arila, oxo (=O), e -SO2-heteroarila. Tais grupos heterocíclicos podem ter um anel único ou múltiplos anéis condensados. Exemplos de heterociclos de nitroênio e heteroarilas incluem, mas não são limitados à, pirrol, imidazol, pirazol, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, indolinia, isoindol, indol, indazol, purina, quinolizina, isoquinolina, quinolina, falazina, naftilpiridina, quinoxalina, quinozolina, cinolina, pteridina, carbazol, carbolina, fenantiridina, acridina, fenantrolina, isotiazol, fenazina, isoxazol, fenoxazina, fenotiazina, imidazolidina, imidazolina, piperidina, piperazina, indolina, morfolina, piperidinila, tetra-hidrofuranila, e semelhantes, assim como N-alcóxi- nitrogênio contendo heterociclos. O termo “heterociclo” também inclui grupos bicíclicos, nos quais qualquer um dos anéis heterociclos é fundido a um anel benzeno ou um anel ciclohexano ou outro anel heterociclo (por exemplo indolila, quinolila, isoquinolila, tetra-hidroquinolil e semelhantes).
[0070] O termo “cicloalquila” pode significar, mas não é em nenhuma maneira limitado à, grupos univalentes derivados de grupos alquila policíclicos ou monocíclicos ou cicloalcanos, como definidos aqui, por exemplo, grupos hidrocarbonetos monocíclicos saturados, tendo de três a vinte átomos de carbono no anel, incluindo, mas não limitado à, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila e semelhantes. O termo “cicloalquila substituído” pode significar, mas não é em nenhuma maneira limitado a, grupos alquila monocíclicos ou policíclicos, e sendo substituídos por um ou mais substituintes, por exemplo, amina, halogênio, alquila, alquila substituído, carbilóxi, carbilmercapto, arila, nitro, mercapto ou sulfo, sendo que esses grupos substituintes genéricos tem significados que são idênticos às definições dos grupos correspondentes como definidos nessa legenda.
[0071] “Heterocicloalquila” se refere a um grupo alquila monocíclico ou policíclico no qual pelo menos um átomo de carbono de anel da sua estrutura cíclica é substituído por um heteroátomo selecionado do grupo consistindo em N, O, S ou P. “Heterocicloalquila se refere a um grupo alquila monocíclico ou policíclico no qual pelo menos um átomo de carbono de anel da sua estrutura cíclica é substituído por um heteroátomo selecionado do grupo que consiste em N, O, S ou P e o grupo contém um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em halogênio, alquila, alquila substituído, carbilóxi, carvilmercapto, arila, nitro, mercapto ou sulfo, sendo que esses grupos de substituintes genéricos tem significados que são idênticos às definições dos grupos correspondentes como definidos nessa legenda.
[0072] O termo “hidrocarbila” significará um composto que contém carbono e hidrogênio e que pode ser completamente saturado, parcialmente insaturado ou aromático e inclui grupos arila, grupos alquila, grupos alquileno e grupos alcino.
[0073] Em qualquer uma das formas de realização descritas aqui, os W, X, Y, Z, G, G’, R, R’, R’’, Q1-Q4, A, e Rn podem independentemente serem ligados de maneira covalente a um ligante e/ou um ligante ao qual é ligado um ou mais grupos PTM, ULM, CLM OU CLM’
[0074] Mais especificamente, exemplos não limitantes de CLMs incluem aqueles mostrados abaixo assim como aquelas moléculas ‘híbridas’ que resultam da combinação de 1 ou mais das diferentes características mostradas nas moléculas abaixo.
[0075] Em certos casos, “CLM” pode ser imidas que se ligam à ligase E3 cereblon. Essa imida e esse ponto de acoplamento de ligante e pode ser, mas não é, limitado às seguintes estruturas:
Ligantes exemplificativos
[0076] Em certas formas de realização, os compostos como descritos aqui podem ser quimicamente ligados ou acoplados através de um ligante químico (L). Em certas formas de realização, o grupo ligante L é um grupo composto por um ou mais unidades estruturais da ligadas covalentemente (por exemplo, -A1_Aq- ), onde A1 é um grupo ligado por pelo menos uma ULM, um PTM ou a combinação dos mesmos. Em certas formas de realização, A1 liga uma ULM, um PTM, ou uma combinação dos mesmos diretamente a uma outra ULM, PTM ou combinação dos mesmos. Em certas formas de realização, A1 liga uma ULM, um PTM, ou uma combinação dos mesmos diretamente a uma outra ULM, PTM ou combinação dos mesmos.
[0077] Em certas formas de realização, cada um de A1 a Aq é independentemente, uma ligação; CRL1RL2, O, S, SO, SO2, RL1, SO2RL1, SORL1, L1 L1 L4 L1 L4 L1 L2 L1 L2 L1 COR , R CONR , R SO2NR , CO, CR =CR , C—C, SiR R , P(O)R , P(O)ORL1, RL1C(=NCN)NRL4, RL1C(=NCN), RL1C(=CNO2)NRL4, cicloalquilaC3- 11 opcionalmente substituído por 0-6 RL1 e/ou grupos RL2, heteociclila C3-11 opcionalmente substituído por 0-6 RL1 e/ou grupos RL2, arila opcionalmente substituído por 0-6 RL1 e/ e/ou grupos RL2, heteroarila opcionalmente substituído por 0-6 RL1 e/ou grupos RL2, onde RL1 ou RL2, cada um independentemente, pode ser ligado a outros grupos A para formar cicloalquila e/ou porção heterociclila que pode depois ser substituído por 0-4 grupos RL5 onde cada um de RL1, RL2, RL3, RL4 e RL5 é independentemente H, halo, alquila C1-8, Oalquila C1-8, Salquila C1-8, NHalquila C1-8, N(alquila C1-8)2, cicloalquila C3-11, arila, heteroarila, heterociclila C3-11, Ocicloalquila C1-8, Scicloalquila C1-8, NHcicloalquila C1-8, N(cicloalquila C1-8)2, N(C1-8 cicloalquil)(alquila C1-8), OH, NH2, SH, SO2alquila C1-8, P(O)(OC1-8 alquil)(alquila C1-8), P(O)(Oalquila C1-8)2, CC-alquila C1-8, CCH, CH=CH(alquila C1-8), C(C1-8 alquil)=CH(alquila C1-8), C(C1-8 alquil)=C(alquila C1-8)2, Si(OH)3, Si(alquila C1-8)3, Si(OH)(alquila C1-8)2, COalquila C1-8, CO2H, halogênio, CN, CF3, CHF2, CH2F, NO2, SF5, SO2NHalquila C1-8, SO2N(alquila C1-8)2, SONHalquila C1-8, SON(alquila C1-8)2, CONHalquila C1-8, CON(alquila C1-8)2, N(C1-8 alquil)CONH(alquila C1-8), N(C1-8 alquil)CON(alquila C1-8)2, NHCONH(alquila C1-8), NHCON(alquila C1-8)2, NHCONH2, N(alquila C1- 8)SO2NH(alquila C1-8), N(alquila C1-8) SO2N(alquila C1-8)2, NHSO2NH(alquila C18), NHSO2N(alquila C1-8)2, NHSO2NH2.
[0078] Em certas formas de realização, q é um número inteiro maior que ou igual a 0. Em certas formas de realização, q é um número inteiro maior que ou igual a 1.
[0079] Em certas formas de realização, por exemplo, onde q é maior que 2, Aq é um grupo que é ligado a uma porção ULM ou ULM’ e A1 e Aq são ligados através de unidades estruturais A (número de tais unidades estruturais de A: q-2).
[0080] Em certas formas de realização, por exemplo, onde q é 2, Aq é um grupo que é ligado à A1 e a uma porção ULM ou ULM’.
[0081] Em certas formas de realização, por exemplo onde q é 1, a estrutura do grupo ligante L é -A1-, e A1 é um grupo que é ligado a uma porção ULM ou ULM’ e uma porção PTM.
[0082] Em formas de realização adicionais, q é um número inteiro de 1 a 100, 1 a 90, 1 a 80, 1 a 70, 1 a 60, 1 a 50, 1 a 40, 1 a 30, 1 a 20 ou 1 a 10.
[0083] Em certas formas de realização, o ligante (L) é selecionado do grupo que consiste em:
[0084] Em formas de realização adicionais, o grupo ligante é (poli)etilenoglicol opcionalmente substituído tendo entre 1 e cerca de 100 unidades de etileno glicol, entre 1 e cerca de 50 unidades de etileno glicol, entre 1 e cerca de 25 unidades de etileno glicol, entre 1 e cerca de 10 unidades de etileno glicol, entre 1 e cerca de 8 unidades de etileno glicol e 1 e 6 unidades de etileno glicol, entre 2 e 4unidades de etileno glicol ou opcionalmente grupos alquila opcionalmente substituídos interdispersos com átomos de O, N, S P ou Si opcionalmente substituídos. Em certas formas de realização, o ligante é substituído por uma arila, fenila, benzila, alquila, alquileno ou grupo heterocíclico. Em certas formas de realização, o ligante pode ser assimétrico ou simétrico.
[0085] Em qualquer uma das formas de realização dos compostos descritos aqui, o grupo ligante pode ser qualquer porção adequada como descrito aqui. Em uma forma de realização, o ligante é um grupo glicol polietileno substituído ou não substituído variando em tamanho de cerca de 1 a cerca de 12 unidades de etileno glicol, entre 1 e cerca de 10 unidades de etileno glicol, cerca de 2 a cerca de 6 unidades de etileno glicol, cerca de 2 e 5 unidades de etileno glicol, entre cerca de 2 e 4 unidades de etileno glicol.
[0086] Apesar do grupo CLM (ou ULM) e grupo PTM poderem ser ligados covalentemente ao grupo ligante através de qualquer grupo que seja apropriado e estável para a química do ligante, em aspectos preferidos da presente invenção, o ligante é independentemente ligado de maneira covalente ao grupo CLM e ao grupo PTM preferencialmente através de uma amida, éster tioéster, grupo ceto, carbamato (uretano), carbono ou éter, cada um dos grupos pode ser inserido em qualquer lugar no grupo CLM e grupo PTM para prover ligação máxima do grupo CLM e a ubiquitina ligase e o grupo PTM na proteína alvo a ser degradada. (É percebido que em certos aspectos onde o grupo PTM é um grupo ULM, a proteína alvo para degradação pode ser a própria ubiquitina ligase). Em certos aspectos preferenciais, o ligante pode ser ligado a um opcionalmente substituído grupo alquila, alquileno, alqueno ou alquino, um grupo arila ou um grupo heterocíclico no grupo CLM e/ou PTM.
[0087] Em certas formas de realização, “L” pode ser cadeias lineares com átomos lineares de 4 a 24, o átomo de carbono na cadeia linear pode ser substituído por oxigênio, nitrogênio, amida, carbono fluorado, etc., tais como:
[0088] Em certas formas de realização, “L” pode ser cadeias não lineares, e pode ser porções cíclicas alifáticas ou aromáticas ou heteroaromáticas, alguns exemplos de “L” incluem, mas não estão limitadas aos seguintes: onde “X” nas estruturas acima podem ser uma cadeia linear com átomos variando de 2 a 14, e a cadeia mencionada pode conter heteroátomos, tais como oxigênio e “Y” nas estruturas acima pode ser O, N, S(O)n (n=0, 1, 2).
PTMs Exemplificativos
[0089] Em aspectos preferenciais da invenção, o grupo PTM é um grupo, de ligação a proteínas alvo. Alvos do grupo PTM são numerosos em tipo e são selecionados das proteínas que são expressas em uma célula para que pelo menos uma porção das sequências seja encontrada na célula e seja ligada a um grupo PTM. O termo “proteína” inclui oligopeptídeos e sequências de polipeptídios de tamanho suficiente para que eles se liguem ao grupo PTM de acordo com a presente invenção. Qualquer proteína em um sistema eucariótico ou sistema microbiais, incluindo um vírus, bactérias ou fungos, como descritos aqui, são alvos para ubiquitinação mediada pelos compostos de acordo com a presente invenção. Preferencialmente, a proteína alvo é uma proteína eucariótica. Em certos aspectos, a porção de ligação a proteína é um haloalcano (preferencialmente um grupo alquila C1-C10 que é substituído por pelo menos um grupo halo, preferencialmente um grupo halo na extremidade distal do grupo alquila (isto é, distante do ligante ou grupo CLM), que pode covalententemente ligar à enzima desalogenase em um paciente ou indivíduo ou em um ensaio diagnóstico.
[0090] Grupos PTM de acordo com a presente invenção incluem, por exemplo, qualquer porção que se ligue a uma proteína especificamente (se liga a uma proteína alvo) e que inclui os seguintes exemplos não limitantes de porções de proteína alvo de molécula pequena: Inibidores Hsp90, inibidores quinase, inibidores HDM2 & MDM2 compostos de alvejamento de proteínas Humanas BET contendo Bromodomínio, inibidores de HDAC, inibidores de lisina humana metiltransferase, inibidores de angiogênese, compostos receptores de hormônio nuclear, compostos imunodepressivos, e compostos de alvejamento do Receptor de aril hidrocarboneto (AHR), entre vários outros. As composições descritas abaixo exemplificam alguns dos membros destes nove tipos de porções de ligação a proteína alvo de pequenas moléculas. Tais porções de ligação a proteína alvo de pequenas moléculas também incluem sais farmaceuticamente aceitáveis, enantiômeros, solvatos e polimorfos dessas composições, assim como outras moléculas pequenas que podem alvejar a proteína de interesse. Essas porções de ligação são ligadas à porção de ligação à ubiquitina ligase preferencialmente através de um ligante para apresentar a proteína alvo (para qual a porção da proteína alvo está ligada) na proximidade da ubiquitina ligase para ubiquitinação e degradação.
[0091] Qualquer proteína, que pode ligar a uma porção da proteína alvo ou grupo PTM e atuado sobre ou degredado por uma proteína ubiquitina ligase de acordo com a presente invenção. Em geral, proteínas alvo podem incluir, por exemplo, proteínas estruturais, receptores, enzimas, proteínas da superfície celular, proteínas pertinentes à função integrada de uma célula, incluindo proteínas envolvidas na atividade catalisadora, atividade de aromatase, atividade motora, atividade de helicase, processos metabólicos (anabolismo e catabolismo), atividade antioxidante, proteólise, biossíntese, proteínas com atividade quinase, atividade oxidoredutase, atividade de transferase, atividade de hidrolase, atividade liase, atividade isomerase, atividade ligase, atividade reguladora de enzima, atividade transdutora de sinal, atividade de molécula estrutural, atividade de ligação (proteína, lipídio, carboidrato), atividade receptora, motilidade da célula, fusão da membrana, comunicação celular, regulação do desenvolvimento dos processos biológicos, diferenciação celular, resposta a estímulo, proteínas comportamentais, proteínas de aderência celular, proteínas envolvidas na morte celular, proteínas envolvida no transporte (incluindo atividade do carreador de proteína, transporte nuclear, atividade de carreador de íon, atividade de carreador de canal, atividade de carreador, atividade de permeasse, atividade de secreção, atividade de carreador de elétrons, patogênese, atividade reguladora de chaperona, organização extracelular e atividade de biogênese, atividade de regulador de tradução. Proteínas de interesse podem incluir proteínas eucariontes procariontes incluindo humanas como alvo para terapia com drogas, outros animais, incluindo animais domésticos, micróbios para a determinação de alvos para antibióticos e outros antimicróbios e plantas, e até vírus, entre várias outras.
[0092] Em ainda outras formas de realização, o grupo PTM é um grupo haloalquila, em que o dito grupo alquila geralmente varia em tamanho de cerca de 1 ou dois carbonos a cerca de 12 carbonos de comprimento, frequentemente cerca de 2 a 10 carbonos de comprimento, frequentemente cerca de 3 carbonos a cerca de 8 carbonos de comprimento, mais frequentemente cerca de 4 carbonos a cerca de 6 carbonos de comprimento. Os grupos haloalquila são geralmente grupos alquila lineares (apesar de grupos alquila de cadeia ramificada também serem usados) e são protegidos na extremidade com pelo menos um grupo halogênio, preferencialmente um único grupo halogênio, frequentemente um único grupo cloreto. PT Haloalquila, grupos para uso na presente invenção são preferencialmente representados pela estrutura química -(CH2)v-Halo, onde v é qualquer inteiro de 2 a cerca de 12, frequentemente cerca de 3 a cerca de 8, mais frequentemente cerca de 4 a cerca de 6. Halo pode ser qualquer halogênio, mas é preferencialmente Cl ou Br, mais frequentemente Cl.
[0093] Em outra forma de realização, a presente invenção provê uma biblioteca de compostos. A biblioteca compreende mais de um composto em que cada composição tem uma fórmula de A-B, em que A é uma porção de ligação a proteína de via de ubiquitina (preferencialmente, uma porção de ubiquitina ligase E3 como de outra maneira descrito aqui) e B é um membro de ligação a proteína de uma biblioteca molecular, e em que A é acoplado (preferencialmente, através de uma porção de ligante) a B, e em que a porção de ligação a proteína de via da ubitiquina reconhece uma proteína de via de ubiquitina, em particular uma ubiquitina ligase E3, tal como cereblon. Em uma forma de realização particular, a biblioteca contém uma porção de ligação à ubiquitina ligase E3 cereblon ligada a elementos de ligação a proteína alvo aleatórios (por exemplo, uma biblioteca de composto químico). Assim sendo, a proteína alvo não é determinada com antecedência e o método pode ser usado para determinar a atividade de um elemento de ligação a proteína putativa e seu valor farmacológico como um alvo após a degradação por ubiquitina ligase.
[0094] A presente invenção pode ser usada para tratar vários estados de doença e/ou condições, incluindo qualquer estado ou condição da doença no(a) qual proteínas são desreguladas e onde um paciente seria beneficiado pela degradação de proteínas.
[0095] Em um aspecto adicional, a descrição provê composições terapêuticas compreendendo uma quantidade eficaz de um composto como descrito aqui ou forma de sal do mesmo, e um carreador, aditivo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, e opcionalmente um agente bioativo adicional. As composições terapêuticas modulam a degradação de proteína em um paciente ou indivíduo, por exemplo um animal tal como um humano, e podem ser usadas para tratamento ou no melhoramento de estados ou condições de doenças que são moduladas através da proteína degradada. Em certas formas de realização, as composições terapêuticas como descritas aqui podem ser usadas para efetuar a degradação de proteínas de interesse para o tratamento ou melhoramento de uma doença, por exemplo, câncer. Em certas formas de realização adicionais, a doença é mieloma múltiplo.
[0096] Em aspectos alternativos, a presente invenção se refere a um método para tratar um estado de doença ou melhorar os sintomas de uma doença ou condição em um indivíduo em necessidade do mesmo pela degradação de uma proteína ou polipeptídio através do qual um estado ou condição da doença é modulado(a) compreendendo a administração ao dito paciente ou individuo de uma quantidade eficaz, por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto como descrito acima, opcionalmente em combinação com um carreador, aditivo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, e opcionalmente um agente bioativo adicional, em que a composição é eficaz no tratamento ou melhoramento da doença, distúrbio ou sintoma do mesmo no indivíduo. O método de acordo com a presente invenção pode ser usado para tratar um grande número de estados ou condições da doença, incluindo câncer, por virtude da administração de quantidades eficazes de pelo menos um composto descrito aqui. O estado ou condição da doença pode ser uma doença causada por um agente microbial ou outro agente exógeno como um vírus, bactéria, fungo, protozoário ou outro micróbio ou pode ser um estado de doença, que é causado pela superexpressão de uma proteína, que pode levar a um estado de doença e/ou condição.
[0097] Em outro aspecto, a descrição provê métodos para identificar os efeitos da degradação das proteínas de interesse em um sistema biológico usando os compostos de acordo a presente invenção.
[0098] O termo “proteína alvo” é usado para descrever uma proteína ou polipeptídio, que é um alvo para a ligação a um composto de acordo com a presente invenção e a degradação por ubiquitina ligase abaixo. Tais moléculas de ligação de moléculas pequenas também incluem sais farmaceuticamente aceitáveis, enantiômeros, solvatos e polimorfos dessas composições, assim como outras moléculas pequenas que podem alvejar a proteína de interesse. Essas porções de ligação são ligadas a grupos CLM ou ULM através de grupos ligantes L.
[0099] Proteínas alvo que podem ser ligadas às porções alvejadas de proteína e degradadas pela ligase para a qual a porção de ligação à ubiquitina ligase é ligada inclui qualquer proteína ou peptídeo, incluindo fragmentos dos mesmos, análogos do mesmos e/ou homólogos dos mesmos. Proteínas alvo incluem proteínas e peptídeos tendo qualquer função ou atividade biológica incluindo estrutural, reguladora, hormonal, enzimática, genética, imunológica, contrátil, de armazenamento, de transporte e transdução de sinal. Em certas formas de realização, as proteínas alvo incluem, proteínas estruturais, receptores, enzimas, proteínas da superfície celular, proteínas pertinentes à função integrada de uma célula, incluindo proteínas envolvidas na atividade catalisadora, atividade de aromatase, atividade motora, atividade de helicase, processos metabólicos (anabolismo e catabolismo), atividade antioxidante, proteólise, biossíntese, proteínas com atividade quinase, atividade oxidoredutase, atividade de transferase, atividade de hidrolase, atividade de liase, atividade de isomerase, atividade de ligase, atividade reguladora de enzima, atividade transdutora de sinal, atividade de molécula estrutural, atividade de ligação (proteína, lipídio, carboidrato), atividade receptora, motilidade da célula, fusão da membrana, comunicação celular, regulação do desenvolvimento dos processos biológicos, diferenciação celular, resposta a estímulo, proteínas comportamentais, proteínas de aderência celular, proteínas envolvidas na morte celular, proteínas envolvida no transporte (incluindo atividade do transportador de proteína, transporte nuclear, atividade de transportador de íon, atividade de transportador de canal, atividade de carreador, atividade de permeasse, atividade de secreção, atividade de transportador de elétrons, patogênese, atividade reguladora de chaperona, organização extracelular e atividade de biogênese, atividade de regulador de tradução. Proteínas de interesse podem incluir proteínas eucariontes procariontes incluindo micróbios, vírus, fungos, incluindo humanas micróbios, vírus, fungos e parasitas, entre vários outros, como alvo para terapia com drogas, outros animais, incluindo animais domésticos, micróbios para a determinação de alvos para antibióticos e outros antimicróbios e plantas, e até vírus, entre várias outras.
[00100] Mais especificamente, um número de drogas alvo para terapias humanas representa proteína alvo para qual a porção da proteína alvo pode ser ligada e incorporada em compostos de acordo com a presente invenção. Estes incluem proteínas que podem ser usadas para restaurar a função em várias doenças poligênicas, incluindo, por exemplo, B7.1 e B7, TINFRlm, TNFR2, NADPH oxidase, BclIBax e outros parceiros no caminho da apoptose, receptor C5a, HMG-CoA redutase, PDE V tipo fosfodiesterase, PDE IV tipo fosfodiesterase 4, PDE I, PDEII, PDEIII, inibidor de esqualeno ciclase, CXCR1, CXCR2, óxido nítrico (NO) sintase, ciclo-oxigenase 1, ciclo-oxigenase 2, receptores 5HT, receptores dopamina, Proteínas G, isto é, Gq, receptores de histamina, 5-lipoxigenase, triptase serina protease, timidilato sintase, purina nucleosídeo fosforilase, GAPDH tripanossomal, glicogênio fosforilase, anidrase carbônica, receptores quimioquina, JAW STAT, RXR e similar, HIV 1 protease, HIV 1 integrase, influenza, neuramimidase, trascriptase reversa de hepatite B, canal de sódio, resistência a multidrogas (MDR), proteína P-glicoproteína (e MRP), tirosina quinases, CD23, CD124, tirosina quinase p56 lck, CD4, CD5, receptor IL-2, receptor IL-1, TNF-alfaR, ICAM1, canais Cat+, VCAM, VLA-4 integrina, seletinas, CD40/CD40L, neuroquinina e receptores, inosina monofosfato desidrogenase, p38 MAP Quinase, via RaslRaflMEWERK, enzima conversora interleucina 1, caspase, HCV, NS3 protease, HCV NS3 RNA helicase, glicinamida ribonucleotídeo formil transferase, rinovírus 3C protease, virús-1 da herpes simplex (HSV-I), protease, citomegalovírus (CMV) protease, poli (ADP- ribose) polimerase, quinases dependentes de ciclina, fator de crescimento endotelial vascular, receptor de oxitocina, inibidor de transferência de proteína microssomal, inibidor de transporte de ácido biliar, inibidores de 5 alfa redutases, angiotensina 11, receptor de glicina, receptor de recaptação de noradrenalina, receptores de endotelina, neuropeptídeo Y e receptor, receptores de estrogênio, receptores andrógenos, receptores de adenosina, adenosina quinase e AMP desaminase, receptores purinérgicos (P2Y1, P2Y2, P2Y4, P2Y6, P2X1-7), farnesiltransferases, geranil transferase, um receptor kA para NGF, beta-amiloide, tirosina quinase Flk-IIKDR, receptor de vitronectina, receptor de integrina, Her- 21 neu, inibição de telomerase, fosfolipase citosólica A2 e receptor EGF de tirosina quinase. Proteínas alvo adicionais incluem, por exemplo ecdisona 20- monooxigenase, canal de íon do canal clorídrico de entrada GABA, acetilcolinesterase, proteína de canal de sódio sensível a voltagem, canal de liberação de cálcio, e canal de cloro. Ainda outras proteínas alvo incluem Acetil- CoA carboxilase, adenilssuccinato sintetase, fotoporfirinogênio oxidase, e enolpiruvil-xikimato-fosfato sintase.
[00101] Enzimas de haloalcano desalogenase são outros compostos alvo ou específicos de acordo com a presente invenção. Compostos de acordo com a presente invenção contendo porções de ligação de cloroalcano peptídeo (C1-C12 frequentemente por grupos halo de alquila C2-C10) podem ser usados para inibir e/ou degradar enzimas de haloalcano desalogenase que são usadas em fusão de proteínas ou proteínas de diagnóstico relacionado como descrito em PCT/US2012/063401 arquivado em 6 de dezembro de 2011 e publicação como WO 2012/078559 em 14 de junho de 2012, cujo conteúdo é aqui incorporado por referência.
[00102] Essas várias proteínas alvo podem ser usadas em monitores que identificam porções de compostos que ligam à proteína e por incorporação da porção em compostos de acordo com a presente invenção, o nível de atividade da proteína pode ser alterado para resultado de fins terapêuticos.
[00103] O termo “porção alvo de proteína” ou PTM é usado para descrever uma pequena molécula que liga a uma proteína alvo ou outra proteína ou polipeptídio de interesse e coloca/apresenta aquela proteína ou polipeptídio em proximidade com uma ubiquitina ligase para que a degradação da proteína ou polipeptídio pela ubiquitina ligase possa ocorrer. Exemplos não limitantes de porções de ligação de pequenas moléculas de proteína alvo incluem inibidores Hsp90, inibidores de quinase, inibidores MDM2, compostos alvejando proteínas contendo Bromodomínio BET humanas, inibidores de HDAC, inibidores de lisina metiltransferase humana, inibidores de angiogênese, compostos imunossupressores, e composto de alvejamento do receptor de aril hidrocarboneto (AHR), entre vários outros. As composições descritas abaixo exemplificam alguns dos membros dos nove tipos de molécula pequena da proteína alvo.
[00104] Porções alvo de proteína exemplificativas de acordo com a presente descrição incluem inibidores Hsp90, inibidores de quinase, inibidores MDM2, compostos alvejando proteínas contendo Bromodomínio BET humanas, inibidores de HDAC, inibidores de lisina metiltransferase humana, inibidores de angiogênese, compostos imunossupressores, e composto de alvejamento do receptor de aril hidrocarboneto (AHR), entre vários outros.
[00105] As composições descritas abaixo exemplificam alguns dos membros dos nove tipos de molécula pequena da proteína alvo. Tais moléculas de ligação de moléculas pequenas também incluem sais farmaceuticamente aceitáveis, enantiômeros, solvatos e polimorfos dessas composições, assim como outras moléculas pequenas que podem alvejar a proteína de interesse. Referências que serão citadas a seguir são incorporadas por referência aqui inteiramente.
Inibidores da Proteína de choque de calor 90 (HSP90)
[00106] Inibidores HSP90 como usados aqui incluem, mas não são limitados a: 1. Os inibidores HSP90 identificados em Vallee, et al., “Tricyclic Series of Heat Shock Protein 90 (HSP90) Inhibitors Part I: Discovery of Tricyclic Imidazo[4,5-C]Pyridines as Potent Inhibitors of the HSP90 Molecular Chaperone (2011) J.Med.Chem. 54: 7206, incluindo YKB (N-[4-(3H-imidazo[4,5-C]Piridin- 2-il)-9H-Fluoreno-9-il]-succinamida): derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através o grupo amida terminal. 2. O inibidor HSP90 p54 (modificado) (8-[(2,4-dimetifenil)sulfanil]-3]pent-4-in-1-il-3H-purin-6-amina derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através o grupo acetileno terminal. 3. Os inibidores HSP90 (modificados) identificados em Brough, et al., “4,5-Diarylisoxazole HSP90 Chaperone Inhibitors: Potential Therapeutic Agents for the Treatment of Cancer”, J.MED.CHEM. vol: 51, pag:196 (2008), incluindo o composto 2GJ (5-[2,4-di-hidroxi-5-(1-metiletil)fenil]-n-etil-4-[4- (morfolin-4-ilmetil)fenil]isoxazol-3-carboxamida) tendo a estrutura: derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através o grupo amida terminal. 4. Os inibidores HSP90 (modificados) identificados em Wright, et al., Structure-Activity Relationships in Purine-Based Inhibitor Binding to HSP90 Isoforms, Chem Biol. 2004 Jun;11(6):775-85, incluindo o inibidor HSP90 PU3 tendo a estrutura: derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através o grupo butila. 5. O inibidor HSP90 geldanamicina ((4E,6Z,8S,9S,10E,12S,13R,14S,16R)-13-hidroxi-8,14,19-trimetoxi-4,10,12,16- tetrametil-3,20,22-trioxo-2-azabiciclo[16.3.1] (derivado) ou qualquer um dos derivados (ex. 17-alquilamino-17-desmetoxigeldanamicina (“17-AAG”) ou 17- (2-dimetilaminoetil)amino-17-desmetoxigeldanamicina ("17-DMAG")) (derivado, onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é ligado, por exemplo, através grupo amida).
II. Inibidores de quinase e fosfatase:
[00107] Inibidores de quinase como usados aqui incluem, mas não são limitados a: 1. Inibidor de tirosina quinase de derivado de erlotinibe onde R é um grupo ligante L ou um grupo -(L-CM) ligado, por exemplo, através do grupo éter 2. O inibidor de quinase sunitinib (derivado): derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, à porção pirrol. 3. Sorafenibe inibidor de quinase (derivado): derivado onde um grupo ligante L ou um grupo acoplado, por exemplo, à porção amida; 4. O inibidor de quinase desatinibe (derivado): derivado onde um grupo ligante L ou um grupo acoplado, por exemplo, à piradimina. 5. O inibidor de quinase lapatinibe (derivado): derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através o grupo metil terminal ou o grupo sulfonil metil; 6. O inibidor de quinase U09-CX-5279 (derivado): derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através da amina (anilina), ácido carboxílico ou amina alfa a um grupo ciclopropila, ou um grupo ciclopropila; 7. Os inibidores de quinase identificados em Millan, et al., Design and Synthesis of Inhaled P38 Inhibitors for the Treatment of Chronic Obstructive Pulmonary Disease, J.MED.CHEM. vol:54, pag:7797 (2011) incluindo os inibidores quinase Y1W and Y1X (Derivado) tendo as estruturas: YIX(1-etil-3-(2-{[3-(1-metiletil)[1,2,4]triazol[4,3-a]piridin-6- il]sulfanil}benzil)ureia, derivado onde o grupo ligante L ou um -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através grupo ipropila; (1-terc-butil-1-fenil-1H-pirazol-5il)-3-(2-{[3-(1-metiletil)[1,2,4]triazol[4,3- a]piridin-6-il]sulfanil}benzil)ureia derivado onde o grupo ligante L ou um -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, preferencialmente através ou grupo ipropil ou grupo t-butil; 8. Os inibidores quinase identificados em Schenkel, et al., Discovery of Potent and Highly Selective Thienopyridine Janus Kinase 2 Inhibitors J. Med. Chem., 2011, 54 (24), pg 8440-8450, incluindo os compostos 6TP e 0TP (Derivado) tendo as estruturas: 4-amino-2-[4-(terc-butilssulfamoil-fenil]-N-metiltieno[3,2- c]piridin-7-carboxamida Tienopiridina 19 derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através o grupo metil terminal ligado à porção amida. 4-amino-N-metil-2-[4-(morfolin-4-il)fenil]tieno[3,2-c]piridin-7-carboxamida Tienopiridina 8 derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através o grupo metil terminal ligado à porção amida. 9. Os inibidores quinase identificados em Van Eis, et al., "2,6- Naphthyridines as potent and selective inhibitors of the novel protein kinase C isozymes”, Biorg. Med. Chem. Lett.2011, 15 de Dez; 21(24):7367-72, incluindo o inibidor de quinase 07U tendo a estrutura: 2-metil-N~1~-[3-(piridin-4-il)-2,6-naftiridin-1-il]propano-1,2-diamina derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através a amina secundária ou grupo amino terminal. 10. Os inibidores de quinase identificados em Lountos, et al., "Structural Characterization of Inhibitor Complexes with Checkpoint Kinase 2 (Chk2), a Drug Target for Cancer Therapy", J.STRUCT.BIOL. vol:176, pag:292 (2011), incluindo o inibidor de quinase YCF tendo a estrutura: derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através de qualquer um dos grupos hidroxila terminais. 11. Os inibidores de quinase identificados em Lountos, et al., "Structural Characterization of Inhibitor Complexes with Checkpoint Kinase 2 (Chk2), a Drug Target for Cancer Therapy", J.STRUCT.BIOL. vol:176, pag:292 (2011), incluindo o inibidor de quinase XK9 e NXP (derivado) tendo as estruturas: N-{4-[(1E)-N-(N-hidroxicarbamimidoil)etano-hidrazonoil]fenil}- 7-nitro-1H-indol-2-carboxamida; N-{4-[(1E)-N-CARBAMIMIDOILETANO- HIDRAZONOIL]FENIL}-1H-INDOL-3-CARBOXAMIDA derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através do grupo hidroxila terminal (XK9) ou o grupo hidrazona (NXP). 12. O inibidor de quinase afatinibe (derivado) (N-[4-[(3-cloro-4- fluorofnil)amino]-7-[[(3S)-tetra-hidro-3-furanil]oxi]-6-quinazolinil]- 4(dimetilamino)-2-butenamida) (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo - (L-CM) é ligado, por exemplo, através do grupo amina alifático); 13. O inibidor de quinase fostamatinibe (derivado) ([6-({5-fluoro- 2-[(3,4,5-trimetoxifenil)amino]pirimidin-4-il}amino)-2,2-dimetil-3-oxo-2,3-di- hidro-4H-pirido[3,2-b]-1,4-oxazin-4-il]metil dissódio fosfato hexahidrato) (Derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através de um grupo metoxil); 14. Os inibidores de quinase gefitinibe (N-(3-cloro-4-fluoro-feni)- 7-metoxi-6-(3-morfolin-4-ilpropoxi)quinazolin-4-amina): derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, via o grupo metoxi ou etér; 15. O inibidor de quinase lenvatinibe (derivado) (4-[3-cloro-4- (ciclopropilcarbamoilamino)fenoxi]-7-metoxi-quinolina-6-carboxamida) (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através do grupo cicloproil); 16. O inibidor de quinase vanderanibe (derivado) (N-(4-bromo-2- fluorofenil)-6-metoxi-7-[(1-metilpiperidin-4-il)metoxi]quinazolin-4-amina) (derivado onde um grupo ligante ou um grupo-(L-CLM_ é ligado, por exemplo, através do grupo metoxila ou hidroxil); 17. O inibidor de quinase vemurafenibe (N-(4-bromo-2- fluoropfenil)-6-metoxi-7-[(1-metilpiperidin-4-il)metoxi]quinazolin-4-amina) (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é ligado, por exemplo, através do grupo sulfonil propil; 18. O inibidor de quinase Gleevec (derivado): derivado onde R como um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através do grupo amida ou através do grupo amina anilina; 19. O inibidor de quinase pazopanibe (derivado) (inibidor VEGFR3): derivado onde R como um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, à porção fenila ou através do grupo amina anilina; 20. O inibidor de quinase AT-9283 (derivado) Inibidor de Quinase Aurora onde R é um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) acoplado, por exemplo, à parte fenil); 21. O inibidor de quinase TAE 684 (derivado) inibidor de ALK onde R é um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) acoplado, por exemplo, à porção fenila); 22. O inibidor de quinase nilotanibe (derivado) inibidor de Abl derivado onde R como um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, à porção fenila ou ao grupo amina anilina; 23. Inibidor de quinase NVP-BSK805 (derivado) inibidor de JAK2 derivado onde R como um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, à porção fenila ou ao grupo diazol; 24. Inibidor de ALK derivado de inibidor de quinase crizotinibe derivado onde R é um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) acoplado, por exemplo, à porção fenila ou ao grupo diazol; 25. Inibidor (derivado) FMS de inibidor de quinase JNJ derivado onde R é um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) acoplado, por exemplo, à porção fenila; 26. O inibidor de quinase foretinibe (derivado) inibidor de Met derivado onde R é um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) acoplado, por exemplo, à porção fenila ou ao grupo hidroxila ou éter na porção quinolina; 27. O Inibidor de Proteína Tiosina Fosfatase alostérico PTP1B (derivado): derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, à R, como indicado; 28. O inibidor de Domínio SHP-2 de tirosina fosfatase de (derivado): derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, à R; 29. O inibidor (derivado) de BRAF (BRAFV600E)/MEK: derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, à R; 30. Inibidor (derivado) de Tirosina quinase ABL derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, à R; 31. O inibidor de quinase OSI-027 (derivado) inibidor de mTORC1/2 derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, em R; 32. O inibidor de quinase OSI-930 (derivado) inibidor de c-Kit/KDR derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, à R; e 33. O inibidor de IGF1R/IR (derivado) de inibidor de quinase OSI-906 derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, à R.
[00108] Em que, em qualquer uma das formas de realização descritas nas seções I-XVII, “R” designa um local para o acoplamento de um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) na porção piperazina.
III. Inibidores HDM2/MDM2:
[00109] Inibidores HDM2/MDM2 como usados aqui incluem, mas não são limitados a:
[00110] 1. Os inibidores H2M2/MDM2 identificados em Vassilev, et al., In vivo activation of the p53 pathway by small-molecule antagonists of MDM2, SCIENCE vol:303, pag:844-848 (2004), e Schneekloth, et al., Targeted intracellular protein degradation induced by a small molecule: En route to chemical proteomics, Bioorg. Med. Chem Lett. 18 (2008) 5904-5908, incluindo (ou adicionalmente) os compostos nutlin-3, nutlin-2 e nutlin-1 (derivados) como descritos abaixo, assim como todos os derivados e análogos dos mesmos: (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, no grupo metoxi ou grupo hidroxila); (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, no grupo metoxi ou grupo hidroxila); (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através do grupo metoxi ou como um grupo hidroxila); e
[00111] 2.Trans-4-Iodo-4'-Boranil-Calcona (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através de um grupo hidroxila).
IV. Compostos que alvejam Proteínas contendo bromodomínio BET:
[00112] Em certas formas de realização, “PTM pode ser ligantes se ligando a proteínas Bromo- e Extra-terminais (BET) BRD2, BRD3 e BRD4. Compostos que alvejam proteínas contendo bromodomínio BET Humano incluem, mas não são limitadas a compostos associados aos alvos como descrito abaixo, onde “R” ou “ligante” designam um local para o acoplamento do grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM), por exemplo: 1. JQ1, Filipgakopoulos et al. Selective inhibition of BET bromodomains. Nature (2010): 2. I-BET, Nicodeme et al. Supression of Inflammation by a Synthetic Histone Mimic. Nature (2010). Chung et al. Discovery and Characterization of Small Molecule Inhibitors of the BET Family Bromodomínios. J. Med Chem. (2011): 3. Compostos descritos em Hewings et al. 3,5- Dimethylisoxazoles Act as Acetil-lysine Bromodomain Ligands. J. Med. Chem. (2011) 54 6761-6770. 4. I-BET151, Dawson et al. Inhibition of BET Recruitment to Chromatin as an Efective Treatment for MLL-fusion Leukemia. Nature (2010): 5. Tipo carbazol (US 2015/0256700) 6. Tipo pirrolpiridona (US 2015/0148342) 7. Tipo tetra-hidroquinolina (WO 2015/074064) 8. Tipo triazolpirazina (WO 2015/067770) 9. Tipo piridona (WO 2015/022332) 10. Tipo quinazolinona (WO 2015/015318) 11. Tipo di-hidropiridopirazinona (WO 2015/011084) (Onde R ou L ou ligante, em cada caso, designa um local para ligação, por exemplo, um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM)).
[00113] As seguintes moléculas quiméricas usando ligantes cereblon são representativas do BET PROTAC. A metodologia descrita nessa invenção não é limitada a esses exemplos.
V. Inibidores HDAC:
[00114] Inibidores HDAC (derivados) incluem, mas não são limitados a: 1. Finnin, M. S. et al. Structures of Histone Deacetilase Homologue Bound to the TSA and SAHA Inhibitors. Nature 40, 188-193 (1999). (Derivados onde “R” designa um local para acoplamento, por exemplo, de um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM)); e 2. Compostos como definidos pela fórmula (I) do PCT WO0222577 (“DEACETYLASE INHIBITORS”) (Derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através do grupo hidroxila);
VI. Inibidores Metiltranferase Lisina Humana
[00115] Inibidores Metiltranferase Lisina Humana incluem, mas não são limitados a: 1. Chang et al. Structural Basis for G9a-Like protein Lysine Methyltransferase Inhibition by BIX-1294. Nat. Struct. Biol. (2009) 16(3) 312. (Derivados onde “R” designa um local para acoplamento, por exemplo, de um grupo ligante L ou um um grupo -(L-CLM)); 2. Liu, F. et al Discovery of a 2,4-Diamino-7- aminoalkóxiquinazoline as a Potent and Selective Inhibitor of Histone Methyltransferase G9a. J. Med. Chem. (2009) 52(24) 7950. (Derivados onde “R” designa um local potencial para acoplamento, por exemplo, de um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM)); 3. Azacitidina (derivada) (4-amino-1-β-D-ribofuranosil-1,3,5- triazin-2(1H)-ona) (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo, através dos grupos hidroxila ou amina); e 4. Decitabina (derivado) (4-amino-1-(2-deoxi-b-D-eritro- pentofuranosil)-1, 3, 5-triazin-2(1H)-ona) (Derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é acoplado, por exemplo através dos grupos hidroxila ou nos grupos amina).
VII. Inibidores de Angiogênese:
[00116] Inibidores de angiogênese incluem, mas não estão limitados a:
[00117] 1. GA-1 (derivado) e derivados e análogos do mesmo, tendo a(s) estrutura(s) e ligando aos ligantes como descrito em Sakamoto, et al., Development of Protacs to target cancer-promoting proteins for ubiquitination and degradation, Mol Cell Proteomics 2003 Dec;2(12):1350-8;
[00118] 2. Estradiol (derivado), que pode ser ligado a um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) como é geralmente descrito em Rodriguez-Gonzalez, et al., Targeting steroid hormone receptors for ubiquitination and degradation in breast and prostate cancer, Oncogene (2008) 27, 7201-7211;
[00119] 3. Estradiol, testosterona (derivado) e derivados relativos, incluindo, mas não limitando a, DHT e derivados e análogos dos mesmos, tendo a(s) estrutura(s) e ligando a um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) como geralmente descrito em Sakamoto, et al., Development of Protacs to target cancer-promoting proteins for ubiquitination and degradation, Mol Cell Proteomics Dez de 2003; 2(12):1350-8; e
[00120] 4. Ovalicilina, fumagilina (derivado), e derivados e análogos do mesmo, tendo estruturas e ligando com um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) como geralmente descrito em Sakamoto, et al., Protacs: moléculas quiméricas de alvejamento de proteínas para o complexo Skp1-Cullin-F-box para ubiquitinação e degradação Proc Natl Acad Sci USA. 2001 Jul 17; 98(15):8554-9 e Patente dos Estados Unidos No. 7.208.157.
VIII. Compostos Imunossupressivos:
[00121] Compostos imunosupressivos incluem, mas não são limitados a: 1. AP21998 (derivado), tendo a(s) estrutura(s) e ligados a um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) como é geralmente descrito em Schneekloth, et al., Chemical Genetic Control of Protein Levels: Selective in vivo Targeted Degradation, J. AM. Chem SOC. 2004, 126, 3748-3754; 2. Glucocorticoides (ex. hidrocotaisona, prednisona, prednisolona e metilprednisolona) (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) é ligado, por exemplo, a qualquer de hidroxilas) e beclometasona deipropianato (derivado onde um grupo ligante L ou um-(L-CLM) é ligado, por exemplo, a um proprionato). 3. Metotrexato (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo - (L-CLM) pode ser ligado, por exemplo, a qualquer de hidroxilas terminais); 4. Ciclosporin (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo - (L-CLM) pode ser ligado, por exemplo, a qualquer um dos grupos butil). 5. Tracomilus (FK-506) e rapamicina (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) pode ser ligado, por exemplo, a um dos grupos metoxi; e 6. Actinomicinas (derivado onde um grupo ligante L ou um grupo -(L-CLM) pode ser ligado, por exemplo, a qualquer um dos grupos isopropil).
IX. Compostos de alvejamento do receptor arila hidrocarboneto.
[00122] Compostos de alvejamento do receptor arila hidrocarboneto (AHR) incluem, mas não são limitados a: 1. Apigenina (derivada de modo de ligação ao grupo ligante L ou a um grupo -(L-CLM) como geralmente ilustrado em in Lee, et al., Degradação alvejada do receptor arila hidrocarboneto pela abordagem PROTAC: Uma ferramenta química genética, ChemBioChem Volume 8, Volume 17, páginas 2058-2062, 23 de novembro, 2007); e 2. SR1 e LGC006 (derivado de modo que um grupo ligante L ou um grupo ligante -(L-LCM) é ligado), como descrito em Boitano, et al., Aril Hydrocarbon Receptor Antagonists Promote the Expansion of Human Hematopoietic Stem Cells, Science, 10 de setembro, 2010: Vol. 329 no. 5997 pp. 1345-1348. X. Compostos de alvejamento do Receptor RAF (Quinase): (Derivados onde “R” designa um local para um grupo ligante L ou, -(L-CLM), de ligação de grupo por exemplo); XI. Composto de alvejamento de FKBP:
[00123] (Derivados onde “R” designa um local para um grupo ligante L ou,-(L-CLM), de ligação de grupo por exemplo);
XII. Compostos de alvejamento do Receptor de Andrógeno.
[00124] 1. Ligante RU59063 (derivado) do Receptor Andrógeno (Derivados onde “R” designa um local para um grupo ligante L ou,-(L-CLM), de ligação de grupo por exemplo);
[00125] 2. Ligante SARM (derivado) do Receptor Andrógeno(Derivados onde “R” designa um local para um grupo ligante L ou,-(L-CLM), de ligação de grupo por exemplo);
[00126] 3. Ligante DHT (derivado) do Receptor Andrógeno (Derivados onde “R” designa um local para um grupo ligante L ou, -(L-CLM), de ligação de grupo por exemplo); 4. Ligante MDV3100 (derivado) 5. Ligante RNA-509 (derivado) 6. Hexa-hidrobenzisoxazóis 7. Tetrametilciclobutanos
XIII. Compostos de alvejamento do Receptor Estrogênio (ER) ICI-182780
[00127] 1. Ligante de Receptor de Estrogênio
[00128] (Derivados onde “R” designa um local para um grupo ligante L ou, - (L-CLM), de ligação de grupo por exemplo);
XIII. Compostos de alvejamento do Receptor de Hormônio da Tireoide (TR)
[00129] 1.Ligante de Receptor de hormônio da Tireoide (derivado)
[00130] (Derivados onde “R” designa um local para um grupo ligante L ou, - (L-CLM), de ligação de grupo e MOMO indica um grupo metoximetoxi;
XV. Compostos de alvejamento da Protease de HIV
[00131] 1. Inibidor da Protease de HIV (derivado)
[00132] (Derivados onde “R” designa um local para um grupo ligante L ou, - (L-CLM), de ligação de grupo). Ver, J. Med. Chem 2010, 53, 521-538.
[00133] 2. Inibidor da Protease de HIV(Derivados onde “R” designa um potencial local para um grupo ligante L ou, -(L-CLM), de ligação de grupo); Ver, J. Med. Chem 2010, 53, 521538.
XVI. Compostos de alvejamento da Integrase de HIV
[00134] 1. Inibidor da Integrase de HIV (derivado)(Derivados onde “R” designa um local para um grupo ligante L ou, -(L-CLM), de ligação de grupo); Ver, J. Med. Chem2010, 53, 6466. 2. Inibidor da Integrase de HIV (derivado) 3. Inibidor da Integrase de HIV Isetntress (derivado) (Derivados onde “R” designa um local para um grupo ligante L ou, -(L-CLM), de ligação de grupo); Ver, J. Med. Chem2010, 53, 6466.
XVII. Compostos de alvejamento da Protease de HCV
[00135] 1. Inibidores da Protease de HCV(derivado) (Derivados onde “R” designa um local para um grupo ligante L ou, -(L-CLM), de ligação de grupo);
XVIII. Compostos de alvejamento da proteína Acil Tioesterase 1 e 2 (APT1 e APT2)
[00136] 1. Inibidor de APT1 e APT2 (derivado) (Derivados onde “R” designa um local para um grupo ligante L ou, -(L-CLM), de ligação de grupo); Cer, Angew. Chem Int Ed. 2011, 50, 9838 - 9842, onde L é um grupo ligante como descrito aqui e dito que o grupo CLM é mencionado aqui de modo que o grupo -(L-CLM) ligue o grupo CLM a um grupo PTM como descrito aqui.
Composições terapêuticas
[00137] As composições farmacêuticas que compreendem combinações para uma quantidade eficaz de pelo menos um composto bifuncional como descrito acima, e um ou mais desses compostos descritos acima, todos em quantidades eficazes, em combinação com a quantidade eficaz farmaceuticamente, aditiva ou excipiente, representa um aspecto adicional à presente descrição.
[00138] A presente descrição inclui, quando aplicável, as composições compreendendo sais farmaceuticamente aceitáveis, em particular, sais de adição ácidos ou sais dos compostos como descritos aqui. Os ácidos que são usados para preparar os sais de adição ácida aceitáveis farmaceuticamente dos compostos base mencionados anteriormente úteis de acordo com este aspecto são aqueles que formam sais de adição não tóxicos, isto é, sais contendo ânions farmacologicamente aceitáveis, tais como sais de cloridrato, bromidrato, iodidrato, nitrato, sulfato, bissulfato, fosfato, fosfato ácido, acetato, lactato, citrato, citrato ácido, tatarato, bitatartarato, succinato, mareato, fumarato, gluconato, sacarato, benzoato, metanossulfonato, etanossulfonato, benzenossulfonato, p- toluenossulfonato e pamoato [isto é, 1,1'-metileno-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)], dentre inúmeros outros.
[00139] Sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis podem também ser usados para produzir formas farmaceuticamente de sais dos compostos ou derivados de acordo com a presente descrição. As bases químicas que podem ser usadas como reagentes para preparar sais de base farmaceuticamente aceitáveis dos presentes compostos que são ácidos na natureza são aqueles que formam sais de base não tóxicos com tais compostos. Tais sais de base não tóxicos incluem, mas não são limitados àqueles derivados de cátions farmacologicamente aceitáveis tais como cátions de metais alcalinos (ex. potássio e sódio) e cátions de metais alcalinos terrosos (ex. cálcio, zinco e magnésio), amônio ou sais amina solúveis em água tais como N-metilglucamina- (meglumina) e a mais sais alcanolmônios e outros sais base de aminas orgânicas farmaceuticamente aceitáveis, entre outras.
[00140] Os compostos descritos aqui podem, de acordo com a descrição, ser administrados em doses únicas ou divididas vias oral, parenteral ou tópica. A administração do composto ativo pode variar de contínua (intravenosa) a várias administrações orais por dia (por exemplo, Q.I.D) e podem incluir administração oral, tópica, perenteral, intramuscular, intravenosa, subcutânea, transdérmica (que podem incluir um agente facilitador da penetração), bucal, sublingual, ou de supositório, entre outras vias de administração. Comprimidos orais de revestimento entérico também podem ser usados para intensificar a biodisponibilidade dos compostos de uma via oral de administração. A forma de dosagem mais eficaz vai depender da farmacocinética do agente particular escolhido assim como a gravidade da doença no paciente. A administração de compostos de acordo com a presente descrição como sprays, névoa ou aerossóis para administração intranasal, intratraqueal ou pulmonar pode ser usada. A presente descrição da mesma é também direcionada a composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade eficaz de composto como descrito aqui, opcionalmente em combinação com um carreador, aditivo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Compostos de acordo com a presente descrição podem ser administrados em forma de liberação imediata, liberação intermediária ou prolongada ou controlada. Formas de liberação prolongadas ou controladas são preferencialmente administradas oralmente, mas também em formas de supositório ou transdérmica ou outras formas tópicas. Injeções intramusculares em forma lipossomal também podem ser usadas para controlar ou prolongar a liberação do composto em um local de injeção.
[00141] As composições como descritas aqui podem ser formuladas de forma convencional usando um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis e podem também ser administradas em formulações de liberação controlada. Carreadores farmaceuticamente aceitáveis que podem ser usados nessas composições incluem, mas não são limitadas a, trocadores de íons, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas de soro, tais como, albumina de soro humana, substâncias tampão, tais como, fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, misturas parciais de glicerídeos de ácidos graxos saturados de vegetais, água, sais ou eletrólitos, como sulfato de prolamina, hidrogeno fosfato dissódico, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polivinil pirrolidona, substâncias à base de celulose, polietileno glicol, carboximetilcelulose de sódio, poliacrilatos, ceras, polímeros em bloco de polietileno-polioxipropileno, polietileno glicol e gorduras de lã.
[00142] As composições como descritas acima podem ser administradas oralmente, parenteralmente, por spray de inalação, topicamente, retalmente, nasalmente, pela boca, pela vagina, ou através de um reservatório implantado. O termo “parenteral” como usado aqui inclui subcutâneo, intravenoso, intramuscular, intra-articular, intrassinovial, intraesternal, intratecal, intra- hepática, intralesional e intracraniana ou técnicas de infusão. Preferencialmente, as composições são administradas oralmente, intraperitonealmente ou intravenosamente.
[00143] Formas estéreis injetáveis como descritas aqui podem ser suspensão aquosa ou oleaginosa. Estas suspensões podem ser formuladas de acordo com as técnicas conhecidas usando agentes dispersantes ou umectantes ou agentes de suspensão. A preparação estéril injetável também pode ser uma solução estéril injetável ou suspensão em um diluente ou solvente não tóxico parenteralmente estéril, por exemplo como uma solução em 1, 3-butanediol. Entre os veículos e solventes adequados que podem ser empregados estão água, solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotônico. Adicionalmente, óleos, estéreis e fixos são convencionalmente empregados como meio solvente ou de suspensão. Para este propósito, qualquer óleo fixo brando pode ser empregado incluindo mono ou di-glicerídeos sintéticos. Ácidos graxos, como ácido oleico e seus derivados de glicerídeos são úteis na preparação de injetáveis, como são os óleos farmaceuticamente aceitáveis. Essas soluções ou suspensões oleosas também podem conter um diluente ou dispersante de álcool de longa cadeia, tais como Ph. Helv ou álcool similar.
[00144] As composições farmacêuticas como descritas aqui podem ser oralmente administradas em qualquer dosagem aceitável oralmente dos seguintes mas não limitados a, cápsulas, comprimidos, suspensões aquosas ou soluções. No caso de comprimidos para uso oral, carreadores que são comumente usados incluem lactose e amido de milho. Agentes lubrificantes como estearato de magnésio também são tipicamente adicionados. Para administração oral na forma de cápsula, diluentes úteis incluem lactose e amido de milho seco. Quando suspenções aquosas são exigidas para uso oral, o ingrediente ativo é combinado com agentes de emulsificação e de suspensão. Se desejado, certos agentes edulcorantes, aromatizantes ou colorantes podem também ser adicionados.
[00145] Alternativamente, as composições farmacêuticas como descritas aqui podem ser administradas na forma de supositórios para administração retal. Essas podem ser preparadas pela mistura do agente com um excipiente não irritante adequado, que pode ser sólido em temperatura ambiente, mas líquido em temperatura retal e assim irá derrete no reto para liberar a droga. Tais materiais incluem manteiga de cacau, cera de abelha e polietileno glicóis.
[00146] As composições farmaceuticamente como descritas aqui podem também ser administradas topicamente. Formulações tópicas adequadas são prontamente preparadas para cada uma dessas áreas ou órgãos. Aplicação tópica para o trato intestinal inferior pode ser efetuada em uma formulação de supositório retal (ver acima) ou em uma formulação de enema adequada. Emplastros trandérmicos topicamente aceitáveis também podem ser usados.
[00147] Para aplicações tópicas, as composições farmacêuticas podem ser formuladas em uma pomada adequada contendo o componente ativo em suspensão ou dissolvido em um ou mais carreadores. Carreadores para administração tópica dos compostos nesta invenção incluem, mas não são limitados a, óleos minerais, petrolato líquido, petrolato branco, propileno glicol, polioxietileno, composto de polioxipropileno, cera emulsificante e água. Em certos aspectos preferenciais da invenção, os compostos podem ser revestidos por um stent que deve ser implantado cirurgicamente em um paciente para inibir ou reduzir a probabilidade de oclusão que ocorre no stent no paciente.
[00148] Alternativamente, as composições farmacêuticas podem ser formuladas em uma loção ou creme adequados contendo os componentes ativos em suspensão ou dissolvido em um ou mais carreadores farmacêuticos aceitáveis. Carreadores adequados incluem, mas não são limitados a, óleo mineral, monoestearato de sorbitano, polissorbato 60, cera de ésteres de cetila, álcool cetearílico, 2-octildodecanol, álcool benzílico e água.
[00149] Para um uso oftálmico, as composições farmacêuticas podem ser formuladas como suspensões micronizadas em solução salina estéril com pH ajustado isotônico, ou preferivelmente, como soluções salinas estéreis com pH ajustado isotônico, com ou sem um conservante, tal como cloreto de benzilalcônio. Alternativamente, para usos oftálmicos, as composições farmacêuticas podem ser formuladas como uma pomada como petrolato.
[00150] As composições farmacêuticas como descritas aqui podem também ser administradas por aerossol nasal ou inalação. Tais composições são preparadas de acordo com técnicas conhecidas nas técnicas da formulação farmacêutico e podem ser preparadas como soluções salinas, empregando álcool benzílico ou outro conservante adequado, promotores de absorção para melhorar a biodisponibilidade, fluorcarbonetos, e/ou solubilizantes convencionais ou agentes dispersantes.
[00151] A quantidade de composto em uma composição farmacêutica como descrita acima pode ser combinada com materiais carreadores para produzir uma forma de dosagem única que varia dependendo do hospedeiro ou a doença tratada, o modo particular de administração. Preferencialmente, as composições devem ser formuladas para conter entre cerca de 0,05 miligramas até cerca de 750 miligramas ou mais, mais preferencialmente cerca de 1 miligrama a cerca de 600 miligramas, e ainda mais preferencialmente cerca de 10 miligramas a cerca de 500 miligramas do ingrediente ativo, sozinho ou em combinação de pelo menos um outro composto de acordo com a presente invenção.
[00152] Deve ser entendido também que uma dosagem específica e regime de tratamento para qualquer paciente em particular dependerá de uma variedade de fatores, incluindo a atividade do composto específico empregado, a idade, peso corporal, saúde em geral, sexo, dieta, tempo de administração, taxa de excreção, combinação de drogas, e o parecer do médico atendente e a severidade da doença ou condição em particular que está sendo tratada.
[00153] Um paciente ou indivíduo que necessite de terapia usando compostos de acordo com os métodos descritos aqui pode ser tratado administrando ao paciente (indivíduo) uma quantidade eficaz do composto de acordo com a presente invenção incluindo sais, solvatos ou polimorfos farmaceuticamente aceitáveis, opcionalmente do mesmo em um carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável, ou sozinho, ou em combinação com outros agentes estimulantes de eritopoiese como identificado aqui.
[00154] Esses compostos podem ser administrados por qualquer modo apropriado, por exemplo, oralmente, parenteralmente, intravenosamente, intradermicamente, subcutaneamente, ou topicamente, incluindo transdermicamente, em líquido, creme, gel, ou forma sólida, ou em forma de aerossol.
[00155] O composto ativo é incluído no carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável em quantidade suficiente para ministrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz para a indicação desejada, sem causar efeitos tóxicos sérios no paciente tratado. Uma dose preferencial do composto ativo para todas as condições os aqui mencionadas está em uma faixa de cerca de 10 ng/kg a 300 mg/kg, preferencialmente 0,1 a 100 mg/kg por dia, mais geralmente 0,5 a cerca de 25 mg por quilo do peso corporal do recipiente/paciente por dia. Uma dosagem tópica típica varia de 0,01-5% p/p em um carreador adequado.
[00156] O composto é convenientemente administrado em qualquer forma de unidade de dosagem adequada, incluindo, mas não limitado a, um contendo menos de 1mg, 1mg a 3000 mg, preferencialmente de 5 a 500mg por um ingrediente ativo por forma unidade de dosagem. Uma dose oral de cerca de 25250 mg é geralmente conveniente.
[00157] O ingrediente ativo é preferencialmente administrado para alcançar concentrações pico de plasma do ativo composto de cerca de 0,0000130mM, preferencialmente cerca de 0,1-30 μM. Isso pode ser alcançado, por exemplo, pela injeção intravenosa de uma solução ou formulação do ingrediente ativo, opcionalmente em solução salina ou um meio aquoso ou administrado como um bolus do ingrediente ativo. Administração oral também é apropriada para gerar concentrações de plasma eficazes do agente ativo.
[00158] A concentração do composto ativo na composição da droga vai depender da taxa de absorção, distribuição, inativação e excreção da droga assim como outros fatores conhecidos para aqueles versados na técnica. Deve-se ser notado que os valores da dosagem também irão variar com a gravidade da condição a ser aliviada. Deve-se ser entendido adicionalmente que para qualquer indivíduo particular, regimes de dosagem específicos devem ser ajustados com o tempo de acordo com a necessidade individual e o parecer profissional da pessoa administrando ou supervisionando a administração das composições, e que as faixas de concentração aqui estabelecidas são somente exemplificativas e não são destinadas a limitar o escopo ou a prática da composição reivindicada. O ingrediente ativo pode ser administrado de uma vez, ou pode ser dividido em várias doses menores para ser administrado em intervalos variáveis de tempo.
[00159] Composições orais geralmente incluem um diluente inerte ou um carreador comestível. Eles podem ser encerrados em cápsulas de gelatina ou prensados em comprimidos. Para o propósito de administração terapêutica oral, o composto ativo ou seu derivado de pró-droga pode ser incorporado com excipientes e usado na forma de comprimidos, pastilhas ou cápsulas. Agentes de ligação farmaceuticamente compatíveis e/ou materiais adjuvantes podem ser incluídos como parte da composição.
[00160] Os comprimidos, pílulas, cápsulas, trociscos e semelhantes podem conter qualquer dos seguintes ingredientes ou compostos de uma natureza similar: um ligante tal como celulose microcristalina, goma de tragacanto ou gelatina; um excipiente tal como amido ou lactose, um agente de dispersão tal como ácido algínico, Primogel, ou amido de milho; um lubrificante tal como estearato ou asterotes de magnésio; um agente de deslizamento tal como dióxido de silicone coloidal: um agente edulcorante tal como sacarose ou sacarina; ou um agente aromatizante tal como hortelã, salicilato de metila ou aromatizante de laranja. Quando a forma de unidade de dosagem é uma cápsula, pode conter, adicionalmente ao material do tipo acima, um carreador líquido tal como ácido graxo. Adicionalmente, formas de unidade de dosagem podem conter vários outros materiais que modificam a forma física da unidade de dosagem, por exemplo, revestimento de açúcar, goma-laca ou agentes entéricos.
[00161] O composto ativo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser administrado como um componente de um elixir, suspensão, xarope, pastilha, goma de mascar ou semelhantes. Um xarope pode conter, em adição aos compostos ativos, sacarose como um agente edulcorante e certos conservantes, corantes e colorantes e aromas.
[00162] O composto aditivo ou sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo podem também ser misturados com outros materiais ativos que não prejudicam a ação desejada, ou com materiais que complementem a ação desejada, tais como agentes estimulantes de eritropoietina, incluindo EPO e alfa darbapoietina, entre outros. Em certos aspectos preferidos da invenção, um ou mais compostos de acordo com a presente invenção são coadministrados com outro agente bioativo, tal como um agente estimulante de eritropoietina ou um agente curativo de ferimento, incluindo um antibiótico como de outra maneira descrito aqui.
[00163] Soluções ou suspenções usadas para aplicação parenteral, intradérmica, subcutânea ou tópica pode incluir os seguintes componentes: um diluente estéril tal como água para injeção, solução salina, óleos essenciais, polietilenoglicóis, glicerina, propilenoglicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacterianos tais como álcool benzílico ou metilparabeno; antioxidantes como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes como ácido etilenodiamino tetra-acético; tampões como como acetato, citrato ou fosfatos e agentes para o ajuste da tonicidade como cloreto de sódio ou dextrose. A preparação parental pode ser encerrada em ampolas, seringas descartáveis ou frascos de múltiplas doses feitos de vidro ou plástico.
[00164] Se administrado de maneira intravenosa, carreadores preferidos são solução salina fisiológica ou tampão fosfato-salino (PBS).
[00165] Em uma forma de realização, os compostos ativos são preparados com carreadores que irão proteger o composto contra eliminação rápida do corpo, como uma formulação de liberação controlada, incluindo implantes e sistemas de ministração microencapsulados. Polímeros biocompatíveis biodegradáveis podem ser usados, como acetato de vinila e etileno, polianidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres e ácido polilático. Métodos para preparação de tais formulações serão aparentes para aqueles versados na técnica.
[00166] Suspenções lipossomais também podem ser carreadores farmaceuticamente aceitáveis. Essas podem ser preparadas de acordo com o método conhecido por aqueles versados na técnica, por exemplo, como descrito na Pat. U.S. No. 4.522.811 (que é incorporado aqui por referência na sua totalidade). Por exemplo, formulações de lipossomas podem ser preparadas pela dissolução apropriada de lipídeo(s) (tais como fosfatidil estearoil etanolamina, colina fosfatidil estearoil, fosfatidil colina e colesterol) em um solvente inorgânico que é então evaporado, deixando para trás somente uma película fina de lipídeo seco na superfície do recipiente. Uma solução aquosa do composto ativo é então introduzida no recipiente. O recipiente é então girado à mão para liberar material de lipídeo dos lados do recipiente e para dispersar agregados de lipídeo, assim formando a suspensão lipossomal.
Métodos Terapêuticos
[00167] Em um aspecto adicional, a descrição provê composições terapêuticas compreendendo uma quantidade eficaz de um composto como descrito aqui ou forma de sal do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável. As composições terapêuticas modulam a degradação de proteína em um paciente ou indivíduo, por exemplo um animal tal como um humano, e podem ser usadas para tratamento ou melhoramento de estados ou condições de doenças que são moduladas através da proteína degradada.
[00168] Os termos “tratar”, “tratando”, e “tratamento”, etc., como usados aqui, se referem a qualquer ação que provê um benefício a um paciente para qual os presentes compostos podem ser administrados, incluindo o tratamento de qualquer estado ou condição da doença que é modulado(a) através da proteína que os presentes compostos se ligam. Estados ou condições da doença, incluindo câncer, que podem ser tratados usando compostos de acordo com a presente invenção são apresentados acima.
[00169] A descrição provê composições terapêuticas como descritas aqui para efetuar a degradação de proteínas de interesse para o tratamento ou melhoramento de uma doença, por exemplo, câncer. Em certas formas de realização adicionais, a doença é mieloma múltiplo. Assim sendo, em outro aspecto, a descrição provê um método para a ubiquitinação/degradação de uma proteína alvo em uma célula. Em certas formas de realização, o método compreende a administração de um composto bifuncional como descrito aqui compreendendo, por exemplo, uma CLM e uma PTM, preferencialmente ligadas através de uma porção de ligante, como de outra maneira descrito aqui, em que a CLM é acoplada ao PTM e em que a CLM reconhece uma proteína de via de ubiquitina (por exemplo, uma ubiquitina ligase, preferencialmente uma ubiquitina ligase E3 tal como, por exemplo, cereblon) e o PTM reconhece a proteína alvo de maneira que a degradação da proteína alvo irá ocorrer quando a proteína alvo for colocada na proximidade da ubiquitina ligase, assim resultando na degradação/inibição dos efeitos da proteína alvo e o controle dos níveis de proteína. O controle dos níveis de proteína proporcionados pela presente invenção provê tratamento de um estado ou condição da doença, que é modulado através da proteína alvo pela diminuição do nível daquela proteína na célula, por exemplo, célula de um paciente. Em certas formas de realização, o método compreende a administração de uma quantidade eficaz de um composto como descrito aqui, opcionalmente incluindo um excipiente, carreador, adjuvante ou outro agente bioativo farmaceuticamente aceitável ou uma combinação dos mesmos.
[00170] Em formas de realização adicionais, a descrição provê métodos para o tratamento ou melhoramento de uma doença, distúrbio ou sintoma do mesmo em um indivíduo ou um paciente, por exemplo, um animal, tal como um humano, compreendendo a administração, a um indivíduo em necessidade do mesmo, uma composição compreendendo uma quantidade eficaz, por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz, de um composto, como descrito aqui, ou forma de sal do mesmo, e um excipiente, carreador, adjuvante ou outro agente bioativo farmaceuticamente aceitável ou uma combinação dos mesmos, em que a composição é eficaz para o tratamento ou melhoramento de uma doença ou um distúrbio ou sintoma da mesma(o) em um indivíduo.
[00171] Em outro aspecto, a descrição provê métodos para identificar os efeitos da degradação das proteínas de interesse em um sistema biológico usando os compostos de acordo a presente invenção.
[00172] Em uma forma de realização, a presente invenção é direcionada a um método para o tratamento de um paciente humano em necessidade para um estado ou condição da doença modulado(a) através de uma proteína onde a degradação dessa proteína irá produzir um efeito terapêutico naquele paciente, o método compreendendo a administração, a um paciente em necessidade, uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a presente invenção, opcionalmente em combinação com outro agente bioativo. O estado de doença ou condição pode ser uma doença causada por um agente microbial ou outro agente exógeno, tal como um vírus, bactéria, fungo, protozoário ou outro agente microbiano ou pode ser um estado de doença, que é causado pela superexpressão de uma proteína, que leva a um estado de doença e/ou uma condição.
[00173] O termo “estado ou condição da doença” é usado para descrever qualquer estado de doença e condição em que a desregularização de proteína (isto é, a quantidade de proteína expressada em um paciente é elevada) ocorre e onde a degradação de uma ou mais proteínas em um paciente pode prover terapia benéfica ou alívio dos sintomas a um paciente em necessidade do mesmo. Em certos casos, o estado ou condição da doença pode ser curado(a).
[00174] Estados ou condições da doença que podem ser tratado(a)s usando compostos de acordo com a presente invenção incluem, por exemplo, asma, doenças autoimunes tais como esclerose múltipla, vários cânceres, ciliopatias, palato fendido, diabetes, doenças cardíacas, hipertensão, doença inflamatória intestinal, retardo mental, transtorno do humor, obesidade, erro refrativo, infertilidade, síndrome de Angelman, doença de Canavan, doença celíaca, doença de Charcot-Marie-Tooth, fibrose cística, distrofia muscular de Duchenne, Hemocromatose, Hemofilia, síndrome de Klinefelter, Neurofibromatose, Fenilcetonúria, doença renal policística, (PKD1) ou 4 (PKD2) Síndrome de Prader-Willi, doença falciforme, doença de Tay-Sachs, síndrome de Turner.
[00175] Estados ou condições da doença adicionais que podem ser tratado(a)s por compostos de acordo com a presente invenção incluem Doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica (doença de Lou Gehrig), anorexia nervosa, transtorno de ansiedade, aterosclerose, transtorno de déficit de atenção e hiperatividade, autismo, transtorno bipolar, síndrome da fadiga crônica, doença pulmonar obstrutiva crônica, doença de Crohn, doença cardíaca coronária, demência, depressão, Diabetes mellitus tipo 1, Diabetes mellitus tipo 2, Epilepsia, síndrome de Guillain-Barré, Síndrome do intestino irritável, Lúpus, síndrome metabólica, esclerose múltipla, infarto do miocárdio, obesidade, transtorno obsessivo-compulsivo, transtorno de pânico, doença de Parkinson, psoríase, atarite reumatoide, Sarcoidose, esquizofrenia, acidente vascular cerebral, tromboangiite obliterante, síndrome de Tourette, vasculite.
[00176] Estados ou condições da doença adicionais que podem ser tratado(a)s por compostos de acordo com a presente invenção incluem Aceruloplasminemia, Acondrogênese tipo II, acondroplasia, Acrocefalia, doença de Gaucher tipo 2, porfiria aguda intermitente, doença de Canavan, Polipose adenomatosa coli, deficiência de ALA-desidratase, deficiência de adenilsuccinato liase, síndrome adrenogenital, adrenoleucodistrofia, porfiria ALA-D, deficiência de ALA-desidratase, alcaptonúria, Doença de Alexander, ocronose de alcaptonúria, deficiência de alfa 1-antitripsina, inibidor alfa-1 proteinase, enfisema, esclerose lateral amiotrófica, síndrome de Alstrom, doença de Alexander, Amelogênese imperfeita, deficiência de ALA desidratase, doença de Anderson-Fabry, síndrome de insensibilidade a andrógenos, anemia Angioqueratoma Corporis Diffusum, angiomatose retiniana (doença de von Hipgel-Lindau) síndrome de Apeta, Aracnodactilia (síndrome de Marfan), Síndrome de Stickler, arthrochalasia multiplex congênita (síndrome de Ehlers- Danlos # tipo de arthrochalasia) ataxia telangiectasia, síndrome de Rett, hipertensão pulmonar primária, doença de Sandhoff, neurofibromatose tipo II, síndrome de cutis gyrata de Beare-Stevenson, febre mediterrânea familiar, síndrome de Benjamin, beta-talassemia, Neurofibromatose Acústica Bilateral (neurofibromatose tipo II), trombofilia de Fator V de Leiden, síndrome de Bloch- Sulzberger (incontinência pigmentar), síndrome de Bloom, anemia sideroblástica ligada ao X, síndrome de Bonnevie-Ullrich (síndrome de Turner), doença de Bourneville (esclerose tuberosa), doença priônica, síndrome de Birt-Hogg-Dubé, doença de ossos de vidro (osteogênese imperfeita), síndrome de Hallux- dedão grande-(síndrome de Rubinstein-Taybi), Diabetes de bronze/cirrose brônquica (hemocromatose), atrofia muscular de Bulboespinhal (doença de Kennedy), síndrome de Burger-Grutz (deficiência de lipoproteína lipase), Transtorno granulomatoso crônico CGD, displasia campomélica, deficiência de biotinidase, cardiomiopatia (Síndrome de Noonan), Cri du chat, CAVD (ausência congênita do canal deferente), síndrome cardiofacial Caylor (CBAVD), CEP (porfiria eritropoiética congênita), fibrose cística, hipotireoidismo congênito, síndrome de condrodistrofia (acondroplasia), displasia otospondilomegaepifiseal, síndrome de Lesch-Nyhan, galactosemia, síndrome de Ehlers-Danlos, displasia tanatofórica, síndrome de Coffin-Lowry, síndrome de Cockayne (polipose adenomatosa familiar) porfiria eritropoiética congênita, Doença cardíaca congênita, metemoglobinemia/metemoglobinemia congênita, acondroplasia, anemia sideroblástica ligada a X, Doença do tecido conjuntivo, síndrome anomalia facial e conotruncal, Anemia de Cooley (beta-talassemia), Doença de armazenamento de cobre (doença de Wilson), Doença do transporte de cobre (Doença de Menkes), coproporfiria hereditária, síndrome de Cowden, diartrose craniofacial (síndrome de Crouzon), doença de Creutzfeldt-Jakob (doença priônica), síndrome de Cockayne, síndrome de Cowden, síndrome de Curschmann-Batten-Steinert (distrofia miotônica), síndrome de cutis gyrata de Bears-Stevenson, hiperoxalúria primária, displasia de espondiloepimetafiseal (tipo de Strudwick), distrofia muscular, tipos de Duchenne e Becker (DBMD), síndrome de Usher, doenças dos nervos degenerativos, incluindo síndrome de Grouchy e síndrome de Dejerine- Sottas, deficiências de desenvolvimento, atrofia muscular espinhal distal, tipo V, síndrome de insensibilidade androgênica, esclerose corporal globular difusa (Doença de Krabbe), síndrome de Di George, deficiência do receptor de di- hidrotestosterona, síndrome da insensibilidade a andrógeno, síndrome de Down, nanismo, porfiria eritropoiética, protoporfiria eritropoiética, deficiência eritoide de 5-aminolevulinato sintetase, porfiria eritropoiética, protoporfiria eritropoiética, uroporfiria eritropoiética, ataxia de Friedreich, olisserosite familiar paroxística, porfiria cutânea tardia, neuropatia sensível à pressão familiar, hipertensão pulmonar primária (PGH), doença fibrocística do pâncreas, síndrome do X frágil, galactosemia, distúrbios cerebrais genéticos, hepatite de células gigante (hemocromatose neonatal), síndrome de Gronblad-Strandberg (pseudoxantoma elástico), doença de Gunther (porfiria eritropoética congênita), hemocromatose, síndrome de Hallgren, anemia falciforme, hemofilia, porfiria hepatoerotropoiética (HEP), doença de Hipgel-Lindau (doença de von Hipgel-Lindau), doença de Huntington, síndrome de progeria de Hutchinson-Gilford (progeria), hiperandrogenismo, hipocondroplasia, anemia hipocrômica, distúrbios do sistema imune, incluindo imunodeficiência combinada grave ligada a X, síndrome de Insley-Astley, síndrome de Jackson-Weiss, síndrome de Joubert, síndrome de Lesch-Nyhan, síndrome de Jackson-Weiss, doenças renais, incluindo hiperoxalúria, síndrome de Klinefelter, displasia de Kniest, Demência lacunar, acondrogênese de Langer-Saldino, ataxia telangiectasia, síndrome de Lynch, deficiência de lisil-hidroxilase, doença de Machado-Joseph, distúrbios metabólicos, incluindo displasia Kniest, síndrome de Marfan, distúrbios do movimento, síndrome de Mowat-Wilson, fibrose cística, síndrome de Muenke, neurofibromatose múltipla, Síndrome de Nance-Insley, condrodisplasia de Nance-Sweeney, doença de Niemann-Pick, síndrome de Noack (síndrome Pfeiffer), Doença de Osler-Weber-Rendu, síndrome de Peutz-Jeghers, doença renal policística, displasia fibrosa poliostótica (síndrome de McCune-Albright), síndrome de Peutz-Jeghers, síndrome de Prader-Labhata-Willi, hemocromatose, síndrome de hiperuricemia primária (síndrome de Lesch-Nyhan), hipertensão pulmonar primária, demência degenerativa senil primária, doença priônica, progeria (síndrome de Progeria de Hutchinson Gilford), coreia progressiva, (doença de Huntington) hereditária crônica (Huntington), atrofia muscular progressiva, atrofia muscular espinhal, acidemia propiônica, protoporfiria, distrofia miotônica proximal, hipertensão arterial pulmonar, PXE (pseudoxantoma elástico), Rb (retinoblastoma), doença de Recklinghausen (neurofibromatose tipo I), poliserosite recorrente, distúrbios da retina, retinoblastoma, síndrome de Rett, RFALS tipo 3, síndrome de Ricker, síndrome de Riley-Day, síndrome de Roussy-Levy, achondroplasia grave com atraso no desenvolvimento e acantose nigricans (SADDAN), síndrome de Li-Fraumeni, sarcoma, mama, leucemia e síndrome da glândula adrenal (SBLA), esclerose tuberosa (esclerose tuberosa), SDAT, SED congênita (displasia Espôndilo- Epifisária), (displasia Espôndilo-Epifisária, tipo Strudwick) SED Strudwick, SEDc (displasia congenita Espôndilo-Epifisária), SEMD (displasia Espôndilo- Epifisária, Tipo Strudwick) tipo Strudwick, síndrome de Shprintzen, distúrbios da pigmentação da pele, síndrome de Smith-Lemli-Opitz, porfiria genética sul- africana (porfiria variada), paralisia espástica hereditária ascendente de início na infância, distúrbios da fala e comunicação, esfingolipidose, doença de Tay-Sachs, ataxia espinocerebelosa, síndrome de Stickler, acidente vascular cerebral, síndrome de insensibilidade a andrógenos, deficiência de tetra-hidrobiopterina, beta-talassemia, doença de tireoide, neuropatia de Tomaculous (neuropatia hereditária com responsabilidade contra paralisias de pressão), síndrome de Treacher Collins, síndrome de Triplo X (síndrome de triplo X), trissomia 21 (síndrome de Down), Trissomia X, síndrome de VHL (doença de von Hipgel- Lindau), comprometimento da visão e cegueira (síndrome de Alstrom), doença de Vrolik, síndrome de Waardenburg, síndrome de Warburg Sjo Fledelius, síndrome de Weissenbacher-Zweymüller, síndrome de Wolf-Hirschhorn, doença periódica de Wolff, síndrome de Weissenbacher-Zweymüller e Xeroderma pigmentoso, entre outros.
[00177] O termo “neoplasia” ou “câncer” é usado ao longo do relatório para se referir ao processo patológico que resulta na formação e crescimento de um neoplasma canceroso ou maligno, isto é, tecido anormal que cresce pela proliferação celular, geralmente mais rápido do que o normal e continua a crescer após os estímulos que iniciaram o novo crescimento cessam. Neoplasmas malignos apresentam falta de organização estrutural parcial ou completa e coordenação funcional com o tecido normal e a maioria invade os tecidos circundantes, metastizando vários locais, e são prováveis de recorrerem após a tentativa de remoção e causam a morte do paciente a não ser que adequadamente tratados. Como usado aqui o termo neoplasia é usado para descrever todos os estados de doença cancerosos e abrange ou engloba o processo patológico associado com tumores hematógenos, astíticos e sólidos malignos. Cânceres exemplificativos que podem ser tratados pelos presentes compostos ou sozinhos ou em combinação com pelo menos um agente anticâncer adicional inclui carcinoma de células escamosas, carcinoma basocelular, adenocarcinoma, carcinomas hepatocelulares e carcinomas de células renais, câncer de bexiga, intestino, mama, colo do útero, cólon, esôfago, cabeça, rim, fígado, pulmão, pescoço, ovário, pâncreas, próstata, e estômago; leucemias; linfomas benignos e malignos, particularmente linfoma de Burkitt e linfoma não Hodgkin; melanomas benignos e malignos; doenças mieloproliferativas; sarcomas de Ewing, hemangiosarcoma, sarcoma de Kaposi, lipossarcoma, miossarcomas, neuroepitelioma periférico, sarcoma sinovial, gliomas, astrocitomas, oligodendrogliomas, ependimomas, gliobastomas, neuroblastomas, ganglutiuromas, gangliogliomas, meduloblastomas, tumores de células pineais, meningiomas, sarcomas meníngeos, neurofibromas, e Schwannomas; câncer de intestino, câncer de mama, câncer de próstata, câncer cervical, câncer de útero, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer testicular, câncer de tireoide, astrocitoma, câncer de esôfago, câncer de pâncreas, câncer de estômago, câncer de fígado, câncer de cólon, melanoma; carcinosarcoma, doença de Hodgkin, tumor de Wilms e teratocarcinomas. Cânceres adicionais que podem ser tratados usando compostos de acordo com a presente invenção incluem, por exemplo, Leucemia linfoblástica aguda de linhagem T (T-ALL), linfoma linfoblástico de linhagem T (T-LL), linfoma de células T periféricas, leucemia de células T adultas, ALL pré-B, linfomas pré-B, linfoma de células B grande, linfoma Burkitts, ALL de células B, Cromossomo Filadélfia positivo de ALL e cromossomo Filadélfia positivo de CML.
[00178] O termo “agente bioativo” é usado para descrever um agente, diferente de um composto de acordo com a presente invenção, que é usado em combinação com os presentes compostos como uma agente com atividade biológica para auxiliar na realização de uma terapia pretendida, inibição e/ou prevenção/profilaxia para qual os presentes compostos são usados. Agentes bioativos preferidos para uso aqui incluem aqueles agentes que tem atividade farmacológica similar àquela pela qual os presentes compostos são usados ou administrados e incluem por exemplo, agentes anti-cânceres, agentes antivirais, especialmente incluindo agentes anti-HIV e agentes anti-HCV, agentes antimicrobiais, agentes antifúngicos, etc.
[00179] O termo “agente anti-câncer adicional” é usado para descrever um agente anti-câncer, que pode ser usado para combinado com compostos de acordo com a presente invenção para tratar câncer. Esses agentes incluem, por exemplo everolimo, trabectedina, abraxano, TLK 286, AV-299, DN-101, pazopanibe, GSK690693, RTA 744, ON 0910.Na, AZD 6244 (ARRY-142886), AMN-107, TKI-258, GSK461364, AZD 1152, enzastaurina, vandetanibe, ARQ-197, MK- 0457, MLN8054, PHA-739358, R-763, AT-9263, um inibidor de FLT-3, um inibidor de VEGFR, um inibidor de EGF TK, um inibidor de aurora-quinase, um modulador de PIK-1, um inibidor de Bcl-2, um inibidor de HDAC, um inibidor de c-MET, um inibidor de PARP, um inibidor de Cdk, um inibidor de EGFR TK, um inibidor de IGFR-TK, um anticorpo anti-HGF, um inibidor de PI3 quinase, um inibidor de AKT, um inibidor de mTORC1/2, um inibidor de JAK/STAT, um inibidor de checkpoint 1 ou 2, um inibidor de quinase de aderência focal, um inibidor de quinase Map quinase (mek), um anticorpo de captura de VEGF, pemetrexede, erlotinibe, dasatanibe, nilatinibe, decatanibe, panitumumabe, amrubicina, oregovomabe, Lep-etu, nolatrexede, azd2171, batabulina, ofatumumabe, zanolimumabe, edotecarina, tetrandrina, rubitecano, tesmilifeno, oblimerseno, ticilimumabe, ipilimumabe, gossipol, Bio 111, 131-I-TM-601, A LT-110, BIO 140, CC 8490, cilengitida, gimatecano, IL13-PE38QQR, INO 1001, IPdR1 KRX-0402, lucantona, LY317615, neuradiabe, vitespan, RTA 744, Sdx 102, talampanel, atrasentana, Xr 311, romidepsina, ADS-100380, sunitinib, 5- fluorouracila, vorinostat, etoposido, gemcitabina, doxorrubicina, doxorrubicina lipossomal, 5'-desoxi-5-fluorouridina, vincristina, temozolmida, ZK-304709, seliciclibe; PD0325901, AZD-6244, capecitabina, ácido L-glutâmico, sal dissódico de N-[4-[2-(2-amino-4,7-di-hidro-4-oxo-1H-pirrol[2,3-d]pirimidin-5- il)etil]benzoil], heptahidrato, camptotecina, irinotecano rotulado com PEG, tamoxifeno, citrato de toremifeno, anastrazol, exemestano, letrozol, DES (dietilstilbestrol), estradiol, estrogênio, estrogênio conjugado, bevacizumabe, IMC-1C11, CHIR-258); 3-[5-(metilsulfonilpiperadinometil)-indolil-quinolona, vatalanibe, AG-013736, AVE-0005, acetato de goserelina, acetato de leuprolida, pamoato de triptorelina, acetato de medroxiprogesterona, caproato de hidroxiprogesterona, acetato de megestrol, raloxifeno, bicalutamida, flutamida, nilutamida, megestrol acetato, CP-724714; TAK-165, HKI-272, erlotinibe, lapatanibe, canetainibe, anticorpo ABX-EGF, erbitux, EKB-569, PKI-166, GW- 572016, Ionafarnibe, BMS-214662, tipifarnibe; amifostina, NVP-LAQ824, ácido sulfato de suberoílo hidroxâmico, ácido valproico, tricostatina A, FK-228, SU11248, sorafenibe, KRN951, aminoglutetimida, arnsacrina, anagrelida, L- asparaginase, vacina Bacilo Calmette-Guerin (BCG), adriamicina, bleomicina, buserelin, bussulfano, carboplatina, carmustina, clorambucila, cisplatina, cladribina, clodronato, ciproterona, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, daunorubicina, dietilesttilbestrol, epirrubicina, fludarabina, fludrocotaisona, fluoximeterona, flutamida, gleevec, gemcitabina, hidroxiureia, idarubicina, ifosfamida, imatinibe, leuprolide, levamisol, lomustina, mectlorometamina, melfalana, 6-mercaptopurina, mesna, metotrexato, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, nilutamida, octreotida, oxaliplatina, pamidronato, pentostatina, plicamicina, porfimer, procarbazina, raltitrexed, rituximabe, estreptozocina, tenipósido, testosterona, talidomida, tioguanina, tiotepa, tretinoína, vindesina, ácido 13-cis-retinoico, fenilalanina mostarda, mostarda de uracila, estramustina, altretamina, floxuridina, 5-deooxiridina, arabinosídeo citosina, 6-mecaptopurina, desoxicomicina, calcitriol, valrubicina, mitramicina, vinblastina, vinorelbina, topotecano, razoxina, marimastat, COL-3, neovastat, BMS-275291, esqualamina, endostatina, SU5416, SU6668 EMD121974, interleucina 12, IM862, angiostatina, vitaxina, droloxifeno, idoxifeno, espironolactona, finasterida, cimitidina, trastuzumabe, denileucina diftox, gefitinibe, botaezimibe, paclitaxel, paclitaxel livre de cremóforo, docetaxel, epitilona B, BMS-247550, BMS- 310705, droloxifeno, 4-hidroxitoxifeno, pipendoxifeno, ERA-923, arzoxifeno, fulvestrant, acolbifeno, lasofoxifeno, idoxifeno, TSE-424, HMR-3339, ZK186619, topotecano, PTK787/ZK 222584, VX-745, PD 184352, rapamicina, 40-O-(2- hidroxietil)-rapamicina, temsirolimus, AP-23573, RAD001, ABT-578, BC-210, LY294002, LY292223, LY292696, LY293684, LY293646, wortmanina, ZM336372, L-779,450, PEG-filgrastim, darbepoetina, eritropoietina, fator estimulante das colônias de granulócitos, zolendronato e, prednisona, cetuximabe, fator de estimulação de colônias de granulócitos macrófagos, histrelina, interferon alfa-2a peguilado, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b peguilado, interferon alfa- 2b, azacitidina, PEG-L-asparaginase, lenalidomida, gemtuzumabe, hidrocotaisona interleucina 11, dexrazoxano, alemtuzumabe, ácido todo transretinoico, cetoconazol, interleucina 2, megestrol, imunoglobulina, mostarda de nitrogênio, metilprednisolona, ibritgumomabe tiuxetano, andrógenos, decitabina, hexametilmelamina, bexaroteno, tositumomabe, trióxido de arsênio, cotaisona, editronato, mitotano, ciclosporina, daunorubicina lipossomal, Edwina- asparaginase, estrôncio 89, casopitante, netupitante, antagonista do receptor NK-1, palonosetrona, aprepitante, difenidramina, hidroxizina, metoclopramida, lorazepam, alprazolam, haloperidol, droperidol, dronabinol, dexametasona, metilprednisolona, proclorperazina, granisetrona, ondansetrona, dolasetrona, tropisetrona, pegfilgrastim, eritropoietina, epoetina alfa, darbepoetina alfa e misturas dos mesmos.
[00180] O termo “agente anti-HIV” ou “agente anti-HIV adicional inclui, por exemplo, inibidores nucleócidos de transcriptase reversa (NtaI), outros inibidores não nucleócidos de transcriptase reversa (isto é, aqueles que não são representativos da presente invenção), inibidores de protease, inibidores de fusão, entre outros, compostos exemplares dos quais pode incluir, por exemplo, 3TC (Lavimudina), AZT (Ziduvulina), (-)-FTC, ddl (Didanosina), ddC (Stavudina), avacavir (ABC), tenofivir (PMPA), D-D4FC (Reverset), D4T (Stavudina), Recivir, L-FddC, L-FD4C, NVP (Nevirapina), DLV (Delaviridina), EFV (Efavirenz), SQVM (Mesilato de saquinavir), taV (Ritonavir), IDV (Indinavir), SQV (Saquinavir), NFV (Nelfinavir), APV (Amprenavir), LPV (Lopinavir), inibidores de fusão tais como T20, entre outros, fuseon e misturas dos mesmos, incluindo compostos anti-HIV presentes em testes químicos ou em desenvolvimento.
[00181] Outros agentes anti-HIV que podem ser usados na coadministração com compostos de acordo com a presente invenção incluem, por exemplo, outros NNtaI (isto é, outros que não o NNtaI de acordo com a presente invenção) podem ser selecionados do grupo consistindo em nevirapina (BI-R6- 587), delavirdina (U-90152S/T), favirenz (DMP-266), UC-781 (N-[4-cloro-3-(3- metil-2-buteniloxi)fenil]-2metil-3-furancarbotiamida), etravirine (TMC125), Trovirdine (Ly300046.HCl), MKC-442 (emivirine, coactinon), HI-236, HI-240, HI-280, HI-281, rilpivirina (TMC-278), MSC-127, HBY 097, DMP266, Baicalina (TJN-151) ADAM-II (Metil 3’,3’-dicloro-4’,4”-dimetoxi-5’,5”- bis(metoxicarbonil)-6,6-difenilhexenoato), 3-Bromo-5-(1-5-bromo-4-metoxi-3- (metoxicarbonil)fenil)hept-1-enil)-2-metoxibenzoato de metila (Alkenildiarilmetano análogo, Adam análogo), (5-cloro-3-(fenilsulfinil)-2’- indolcarboxamida), AAP-BHAP (U-104489 ou PNU-104489), Capravirine (AG- 1549, S-1153), atevirdine (U-87201E), ácido tricarboxílico aurina (SD-095345), 1-[(6-ciano-2-indolil)carbonil]-4-[3-(isopropilamina)-2-piridinil]piperazina, 1-[5- [[N-(metil)metilsulfonilamina]-2-indolilcarbonil-4-[3-(isopropilamina)-2- piridinil]piperazina, 1-[3-(Etilamina)-2-[piridinil]-4-[(5-hidroxi2- indolil)carbonil]piperazina, 1-[(6-Formil-2-indolil)carbonil]-4-[3- (isopropilamina)-2-piridinil]piperazina, 1-[[5-(Metilsulfoniloxi)-2- indoili)carbonil]-4-[3-(isopropilamina)-2-piridinil]piperazina, U88204E, Bis(2- nitrofenil)sulfona (NSC 633001), Calanolide A (NSC675451), Calanolide B, 6- Benzil-5-metil-2-(ciclohexiloxi)pirimidin-4-ona (DABO-546), DPC 961, E-EBU, E-EBU-dm, E-EPSeU, E-EPU, Foscarnet (Foscavir), HEPT (1-[(2- Hidroxietoxi)metil]-6-(feniltio)timina), HEPT-M (1-[(2-Hidroxietoxi)metil]-6-(3- metilfenil)tio)timine), HEPT-S (1-[(2-Hidroxietoxi)metil]-6-(feniltio)-2- tiotimina), Inophillum P, L-737,126, Michellamine A (NSC650898), Michellamine B (NSC649324), Michellamine F, 6-(3,5-Dimetilbenzil)-1-[(2- hidroxietoxi)metil]-5-isopropiluracila, 6-(3,5-Dimetilbenzil)-1-(etioximetil)-5- isopropiluracila, NPGS, E-BPTU (NSC 648400), Oltipraz (4-Metil-5-(pirazinil)- 3H-1,2-ditiole-3-tiona), N-{2-(2-Cloro-6-fluorofenetil]-N’-(2-tiazolil)tioureia (derivado de PETT Cl, F), N-{2-(2,6-Difluorofenetil]-N’-[2-(5- bromopiridil)]tioureia {derivado de PETT), N-{2-(2,6-Difluorofenetil]-N’-[2-(5- metilpiridil)]tioureia {derivado de PETT Piridil), N-[2-(3-Fluorofuranil)etil]-N’- [2-(5-cloropiridil)]tioureia, N-[2-(2-Fluoro-6-etoxifenetil)]-N’-[2-(5- bromopiridil)]tioureia, N-(2-fenetil)-N'-(2-tiazolil)tioureia (LY-73497), L- 697,639, L-697,593, L-697,661, 3-[2-(4,7-Difluorobenzoxazol-2-il)etil}-5-etil-6- metil(pipridin-2(1H)-tiona (Derivado de 2-Piridinona), 3-[[(2-Metoxi-5,6-dimetil- 3-piridil)metil]amina]-5-etil-6-metil(pipridin-2(1H)-tiona, R82150, R82913, R87232, R88703, R89439 (Loviride), R90385, S-2720, Suramin de sódio, TBZ (Tiazolbenzimidazol, NSC 625487), Tiazolisoindol-5-ona, (+)(R)-9b-(3,5- Dimetilfenil-2,3-di-hidrotiazol[2,3-a]isoindol-5(9bH)-ona, Tivirapine (R86183), UC-38 e UC-84, entre outros.
[00182] O termo “sal farmaceuticamente aceitável” é usado ao longo do relatório para descrever, onde aplicável, uma forma de sal de um ou mais dos compostos descritos aqui, que são apresentados para aumentar a solubilidade do composto nos sucos gástricos do trato gastrointestinal do paciente de modo a promover a dissolução e a bioatividade dos compostos. Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles derivados de bases e ácidos orgânicos ou inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis, onde aplicável. Sais apropriados incluem aqueles derivados de metais alcalinos tais como potássio e sódio, metais alcalinos terrosos tais como cálcio, magnésio e sais de amônio, entre vários outros ácidos e bases bem conhecidos na técnica farmacêutica. Sais de potássio e sódio são particularmente preferidos como sais de neutralização de fosfatos de acordo com a presente invenção.
[00183] O termo “derivado farmaceuticamente aceitável” é usado ao longo da descrição para descrever qualquer forma de pró-droga farmaceuticamente aceitável (tais como um éster, amida outro grupo pró-droga), que, sob administração a um paciente, provê diretamente ou indiretamente o presente composto ou um metabólito ativo da presente invenção.
Abordagem Sintética Geral
[00184] A realização sintética e otimização das moléculas bifuncionais como descrito aqui pode ser abordada em uma maneira modular ou por etapas. Por exemplo, a identificação de compostos que se ligam a moléculas alvo pode envolver campanhas de triagem de alto ou médio alcance se nenhum ligante adequado estiver imediatamente disponível. Não é incomum que ligantes iniciais requeiram projetos iterativos e ciclos de otimização para melhorar aspectos subótimos como identificados por dados de ensaios in vitro e farmacológicos e/ou ADMET adequados. Parte da campanha de otimização/SAR seria para posições de teste do ligante que é tolerante à substituição e que podem ser lugares adequados nos quais fixar o ligante químico previamente referido aqui. Quando dados estruturais NMR ou cristalográficos estão disponíveis, esses podem ser usados para focar tal esforço sintético.
[00185] De forma muito análoga, pode-se identificar e otimizar ligantes para uma Ligase E3, isto é, ULMs/CLMs.
[00186] Com PTMs e ULMs (por exemplo, CLMs) nas mãos de uma pessoa versada na técnica pode-se usar métodos sintéticos conhecidos para a sua combinação com ou sem uma porção de ligante. Porções de ligante podem ser sintetizadas com uma faixa de composições, comprimento e flexibilidade e funcionalizadas de maneira que os grupos PTM e ULM podem ser ligados sequencialmente a extremidades distais do ligante. Assim uma biblioteca de moléculas bifuncionais pode ser realizada e perfilada em estudos farmacológicos in vitro e in vivo e ADMET/PK. Assim como os grupos PTM e ULM, as moléculas bifuncionais finais podem ser submetidas a projetos interativos e ciclos de optimização para identificar moléculas como propriedades desejáveis.
[00187] Alguns métodos exemplificativos não limitantes para gerar as CLMs como descritas aqui são resumidas como mostrado abaixo.
[00188] Como mostrado na reação representativa 1, derivados de ftalato de dimetila podem ser condensados com glutamina (racemato ou enantiômero) ou análogos de glutamina então adicionalmente reagidos com agentes tais como carbonil di-imidazol para formar derivados de 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-2,3-di- hidro-1H-isoindol-1,3-diona.
[00189] Alternativamente como mostrado na reação representativa 2, a ftalimida intermediaria produzida na condensação inicial descrita acima pode ser separadamente preparada e/ou isolada e então reagida com agentes desidratantes tais como trifluoroacetamida, POCl3 ou anidrido acético para formar o derivado de 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona desejado. O mesmo tipo de ftalimida intermediária desejada também pode ser reagida com reagente de Lawesson anteriormente à etapa de desidratação para prover análogos de tio tais como são mostrados nas reações representativas 8 e 9.
[00190] Exemplos protegidos de derivado de 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)- 2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona tais como as espécies de N1-BOC mostradas no exemplo representativo 3 podem ser desprotegidas para revelar o 2-(2,6- dioxopiperidin-3-il)-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona alvo usando, nesse caso, reagentes tais como TFA ou sílica.
[00191] Anidridos ftálicos, tais como aqueles mostrados no exemplo representativo 4, podem ter o anel aberto pela reação com aminas tais como 3- aminopiperidina-2,6-diona para formar uma espécie de caboxilato intermediário, que no tratamento com carbonidi-imidazol e benzotriazol irá formar os derivados de 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona alvo. Alternativamente os dois componentes podem ser combinados na presença de ácido acético para prover o produto desejado como mostrado na reação representativa 13.
[00192] Em uma reação análoga, derivados de anidrido como aqueles mostrados na reação representativa 5 podem ser reagidos com aminas (amônia no exemplo mostrado) e então carbonildi-imidazoleto forma os derivados desejados de 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona.
[00193] Quando cloretos de ftaloila estão disponíveis, condensação direta com glutamina (racemato ou enantiômero) ou análogos de glutamina é possível, seguida pela reação adicional com agentes como carbonil di-imidazol para formar derivados de 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona como mostrado na reação representativa 6.
[00194] o-Bromobenzamidas podem ser reagidas com uma fonte de CO como cloreto de acila mostrado na reação representativa 7 na presença de um catalisador de paládio e ligante de fosfina associado para produzir os derivados de 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona desejados. Alternativamente, gás CO em si pode ser usado em conjunto com catalisador de ródio (II) e carbonato de prata para prover os produtos desejados.
[00195] Derivados de 2-(2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-5-il)-2,3- di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona, e 5-(1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-2-il)- 1,3-diazinana-2,4,6-triona podem ser preparados pelos meios análogos para alguns dos métodos descritos acima para derivados de 2-(2,6-dioxopiperidin-3- il)-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona. Nas reações representativas 20 e 21, um anidrido ftálico pode ser reagido com derivados de 5-amino-1,2,3,4-tetra- hidropirimidina-2,4-diona or 5-amino-1,3-diazinana-2,4,6-triona, respectivamente, na presença de ácido acético para formar os produtos desejados.
[00196] Alternativamente, derivados de 5-(1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H- isoindol-2-il)-1,3-diazinano-2,4,6-triona podem ser preparados pela reação de derivados de 5-amino-1,3-diazinano-2,4,6-triona com ésteres de mono-terc-butila do ácido ftálico na presença da base de Hünig, uma carbodi-imida e benzotriazol como mostrado na reação representativa 12. Condições similares podem ser empregadas para a preparação de derivados de 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-2,3-di- hidro-1H-isoindol-1,3-diona de ésteres de mono-terc-butila do ácido ftálico como mostrados na reação representativa 14.
[00197] Compostos como 3-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,2,3,4-tetra- hidroquinazolina-2,4-diona podem ser preparados a partir de derivados de ácido antranílico pela reação de 3-aminopiperidina-2,6-dionas com carbodi-imida como na reação representativa 16. O produto de benzamida intermediária pode ser isolado (ou separadamente produzido) e adicionalmente reagido com uma carbodi-imida para produzir derivados de 3-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,2,3,4- tetra-hidroquinazolina-2,4-diona como mostrado na reação representativa 15.
[00198] Análogos de 3-(2,6-Dioxopiperidin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-1,3- benzoxazina-2,4-diona podem ser preparados pela ativação de ácidos salicílicos com cloroformiatos e então condensação com 3-aminopiperidina-2,6-dionas como mostrado na reação representativa 17.
[00199] 3,3-Dicloro-2,1X6-benzoxatiol-1,1-dionas como mostradas nareação representativa 18 podem ser preparadas pela reação de ácidos 2- sulfobenzóicos com POCl3 e PCl5. Esses compostos podem ser reagidos com derivados de aminas para produzir, por exemplo, derivados de 2-(2,6- dioxopiperidin-3-il)-2,3-di-hidro-1X6,2-benzotiazol-1,1,3-triona desejados.
[00200] Como mostrado na reação representativa 19, ânions de derivados de sacarina podem ser alquilados com eletrófilos como a 3-bromo-3- metilpiperidin-2-ona para produzir derivados de 2-(3-metil-2-oxopiperidin-3-il)- 2,3-di-hidro-1 X6,2-benzotiazol-1,1,3-triona alvej ados.
[00201] Análogos de 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-2,3-di-hidro-1X6,2- benzotiazol-1,1,3-triona podem também ser preparados pela reação de metil 2- [(2,6-dioxopiperidin-3-il)sulfamoil]benzoato com bases fortes tais como hidrato de sódio (ver reação representativa 20).
[00202] Desprotonação de derivados de 2-metil-2,3-di-hidro-1H-indeno- 1,3,diona com etóxido de sódio e então reação com eletrófílos como 3- bromopiperidin-2,6-diona oferece 3-(2-metil-1,3-dioxo-1H-inden-2-il)piperidina- 2,6-diona como mostrado na reação representativa 21.
[00203] Preparação de compostos N1-substituídos como 2-[1-(benziloxi)- 2,6-dioxopiperidin-3-il]-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,4-diona (reação representativa 22) pode ser alcançada pela reação de ácido 2-(1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-2-il)pentanedióico com N-benzilhidroxilamina e com anidrido trifluroacético.
[00204] Por sua vez, moléculas 2-[1-(benziloxi)-2,6-dioxopiperidin-3-il]- 2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,4-diona (reação representativa 23) talvez sejam sujeitas à remoção de benzil sob condições de hidrogenação para render análogos de N1-hidroxi tais como 2-(1-hidroxi-2,6-dioxopiperidin-3-il)-2,3-di-hidro-1H- isoindol-1,3-diona.
[00205] Na reação representativa 24, 1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol- 2-carboxilato de metila (e análogos) é reagido com 3-aminopiperidin-2-ona para prover 2-(2-oxopiperidin-3-il)-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-dionas.
[00206] A mesma amina pode também ser reagida com derivados de anidrido ftálico na presença de ácido de Lewis tais como brometo de zinco e éter trimetilsilil para render o mesmo tipo de produto mostrado na reação representativa 25. Produtos imediatos desta reação, se isolados ou de outra maneira preparados (reação representativa 26) podem ser impulsionados à cristalização total através do uso de um agente de desidratação.
[00207] Os derivados isoméricos tais como 2-(6-oxopiperidin-3-il)-2,3-di- hidro-1H-isoindol-1,3-diona mostrados na reação representativa 27 são obteníveis através da reação de ácido ftálico com 5-aminopiperidin-2-ona.
[00208] A preparação de compostos N1-substituídos tais como 2-(1-benzil- 2,6-dioxopiperidin-3-il)-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,4-diona (reações representativas 28 e 29) podem ser alcançados através de múltiplas rotas. Por exemplo, o anidrido (2-(2,6-dioxo-oxan-3-il)-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona) pode ser condensado com 3-aminopiperidine-2,6-diona na presença de DMAP e carbonildi-imidazol (reação representativa 28), ou derivados de 2-(2,6- dioxopiperidin-3-il)-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona podem ser alquilados com elétrofilos como brometo de benzila na presença de base como mostrado na reação representativa 29.
[00209] Em alguns casos, estratégias de grupo de proteção e/ou interconversões de grupo funcional (FGIs) podem ser requeridos para facilitar a preparação dos materiais desejados. Tais processos químicos são bem conhecidos ao químico orgânico sintético e muitos podem ser encontrados em textos como “Greene's Protective Groups in Organic Synthesis” Peter G. M. Wuts e Theodora W. Greene (Wiley), e “Organic Synthesis: The Disconnection Apgroach” Stuata Warren e Paul Wyatt (Wiley).
Controle de Nível de Proteína
[00210] Essa descrição também provê métodos para o controle de níveis de proteína com uma célula. Isso é baseado no uso de compostos como descrito aqui, que são conhecidos por interagir com uma proteína alvo específica de modo que a degradação de uma proteína alvo in vitro irá resultar no controle da quantidade de proteína em um sistema biológico, preferencialmente para um benefício terapêutico particular.
[00211] Os seguintes exemplos são usados para ajudar na descrição da presente invenção, mas não devem ser vistos como limitando a presente invenção em nenhuma maneira.
Formas de realização Exemplificativas da Presente Descrição
[00212] A presente descrição engloba as seguintes formas de realização específicas. Essas seguintes formas de realização podem incluir todas as características citadas em uma forma de realização a seguir, como especificado. Quando aplicável, as seguintes formas de realização podem também incluir as características citadas em qualquer uma das seguintes formas de realização inclusive ou em alternativa
[00213] Um aspecto descreve o composto tendo a estrutura química: PTM-L-CLM, em que CLM é uma porção de ligação à ubiquitina ligase E3 cereblon; PTM é uma porção alvo de proteína; L é um ligante selecionado a partir do grupo consistindo em uma ligação (ausente) ou um grupo de ligante químico; em que a PTM é acoplada covalentemente à CLM através do ligante.
[00214] Em qualquer um dos aspectos ou das formas de realização descrito(a)s aqui, a PTM é uma porção que liga uma proteína contendo bromodomínio, por exemplo, Brd4.
[00215] Em qualquer um dos aspectos ou das formas de realização descrito(a)s aqui, os compostos descritos aqui adicionalmente compreendem uma segunda porção de ligação à ubiquitina ligase E3 acoplada através de um grupo ligante.
[00216] Em qualquer um dos aspectos ou das formas de realização descrito(a)s aqui, a CLM compreende um grupo químico derivado de uma imida, um grupo ftalimida, talidomida, lenalidomida, pomalidomida, ou análogo dos mesmos, isoésteres dos mesmos ou derivados dos mesmos, em que a CLM é representada por uma estrutura química: em que W é selecionado a partir do grupo que consiste em CH2, CHR, C=O, SO2, NH e N-alquila; cada X é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em O, S e H2; Y é selecionado a partir do grupo que consiste em NH, N-alquila, N-arila, N-hetarila, N-cicloalquila, N-heterociclila, O e S; Z é selecionado a partir do grupo que consiste em O, S e H2; G e G’ são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H, alquila, OH, CH2-heterociclila opcionalmente substituído com R’, e benzila opcionalmente substituído com R’; Q1, Q2, Q3 e Q4 representam um carbono C substituído com um grupo independentemente selecionado a partir de R’, N ou N-óxido; A é independentemente selecionado do grupo alquila, cicloalquila, Cl e F; R compreende -CONR’R”, -OR’, -NR’R”, -SR’, -SO2R’, - SO2NR’R”, -CR’R”-, -CR’NR’R”-, arila, -hetarila, -alquila, -cicloalquila, - heterociclila, -P(O)(OR’)R”, -P(O)R’R”, -OP(O)(OR’)R”, -OP(O)R’R”, -Cl, -F, - Br, -I, -CF3, -CN, -NR’SO2NR’R”, -NR’CONR’R”, -CONR’COR”, NR’C(=N- CN)NR’R”, -C(=N-CN)NR’R”, -NR’C(=N-CN)R”, -NR’C(=C-NO2)NR’R”, SO2NR’COR”, -NO2, -CO2R’, -C(C=N-OR’)R”, -CR’=CR’R”, -CCR’, -S(C=O)(C=N-R’)R”, -SF5 e -OCF3; R’ e R” são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em uma ligação, H, alquila, cicloalquila, arila, hetarila, heterociclila; repr representa uma ligação que pode ser esteroespecífica ((R) ou (S)) ou não esteroespecífica; e Rn compreende um grupo funcional ou um átomo, em que n é um número inteiro de 1-4, e em que quando n é 1, Rn é modificado para unir-se de forma covalente ao grupo ligante (L), e quando n é 2, 3, ou 4, então um Rn é modificado para unir-se de forma covalente ao grupo ligante (L), e qualquer outro Rn é opcionalmente modificado para unir-se de forma covalente a uma PTM, uma ULM, uma segunda CLM tendo a mesma estrutura química que a CLM, uma CLM’, um segundo ligante, ou qualquer múltiplo ou combinação dos mesmos.
[00217] Em qualquer um dos aspectos ou das formas de realização descrito(a)s aqui, a CLM tem uma estrutura química representada por: em que W é selecionado a partir do grupo que consiste em CH2, C=O, SO2 e NH; cada X é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em O, H2; G é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em H, alquila, OH; A e A’ são independentemente selecionados a partir do grupo alquila, cicloalquila, Cl e F; Rn compreende um grupo funcional ou um átomo, em que n é um número inteiro de 1-4, e em que quando n é 1, Rn é modificado para unir-se de forma covalente ao grupo ligante (L), e quando n é 2, 3, ou 4, então um Rn é modificado para unir-se de forma covalente ao grupo ligante (L), e qualquer outro Rn é opcionalmente modificado para unir-se de forma covalente a uma PTM, uma ULM, uma segunda CLM tendo a mesma estrutura química que a CLM, uma CLM’, um segundo ligante, ou qualquer múltiplo ou combinação dos mesmos.
[00218] Em outro aspecto, a descrição provê um composto selecionado do grupo consistindo em: 2-[(9R)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetila-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[4-({1-[2-(2,6- dioxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-il]-4,7,10-trioxa-1- azadodecano-12-il}oxi)fenil]acetamida; 2- [(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca- 2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1S)-1-(4-{5-[2-(2-{[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il )-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1 H-isoindol-4-il] amina} etoxi)etóxi]pirimidina-2-il} fenil)etil] acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-{2-[2-(2-{[2-(2,6-di oxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1 H-isoindol-4-il] amina} etoxi)etóxi]etil} acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1R)-1-{4-[2-(2-{[2 -(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)etóxi]fenil}etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[2-(2-{[2-(2,6-dioxo piperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1S)-1-{4-[5-(3-{[2 -(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}propoxi)pirimidina-2-il]fenil}etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1S)-1-{4-[3-(2-{[2 -(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)propóxióxi]fenil}etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1S)-1-{4-[2-(2-{[2 -(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)etóxi]fenil}etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(4-{[2-(2,6-dioxopip eridina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-il]amina}butil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(2-{[2-(2,6-dioxopip eridina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriddo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(5-{[2-(2,6-dioxopip eridina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-il]amina}pentil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(3-{[2-(2,6-dioxopip eridina-3-il)-1-oxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-il]amina}propil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(4-{[2-(2,6-dioxopip eridina-3-il)-1-oxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-il]amina}butil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1S)-1-{4-[2-(2-{[2 -(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)etóxi]-3-fluorofenil}etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[4-({1-[2-(3-metil-2, 6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]-4,7,10-trioxa-1-azadodecano-12-il}oxi)fenil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetraazatric iclo[8.3.0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaen-9-il]-N-[4-({1-[2-(1-metil-2,6-dioxo piperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]-4,7,10-trioxa-1-azadodecan-12-il}oxi)fenil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1R)-1-[3-(3-{[2-(2 ,6-dioxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}propoxi)fenil]etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(3S)-1-{4-[(2-{[2-( 2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etil)amina]benzoil}pirrolidina-3-il]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatricido[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[2-(2-{[3-(2,6-dioxo piperidina-3-il)-2-metil-4-oxo-3,4-di- hidroquinazolina-5-il] amina} etoxi)etil] acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[3-(3-{[2-(2,6-dioxo piperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}propoxi)propil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(3S)-1-[4-(2-{[2-(2, 6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)benzoil]pirrolidina-3-il]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(4-{2-[2-(2-{[3-(2,6 -dioxopiperidina-3-il)-2-metil-4-oxo-3,4-di- hidroquinazolina-5-il]amina}etoxi)etóxi]etóxi}fenil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(5-{[2-(2,6-dioxopip eridina-3-il)-1-oxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-il]amina}pentil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[3-(3-{[3-(2,6-dioxo piperidina-3-il)-2-metil-4-oxo-3,4-di- hidroquinazolina-5-il]amina}propoxi)propil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(3S)-1-[4-(2-{[2-(2, 6-dioxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)benzoil]pirrolidina-3-il]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1R)-1-[3-(2-{[2-(2 ,6-dioxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amma}etoxi)feml]etil]acetamida; 4-(4-{[(5Z)-3-{1-[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1 H-isoindol-4-il] -4,7,10,13 -tetraoxa-1 -azapentadecano- 15-il} -2,4-dioxo-1, 3-tiazolidina-5-ilideno]metil}-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila; 4-(4-{[(5Z)-3-{1-[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]-4,7,10-trioxa-1-azadodecano-12-il}-2,4-dioxo-1,3-tiazoli dina-5-ilideno]metil}-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila; 4-(4-{[(5Z)-3-{1-[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]-4,7,10,13,16-pentaoxa-1-azaoctadecano-18-il}-2,4-dioxo- 1,3-tiazolidina-5-ilideno]metil}-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila; e 4-(4-{[(5Z)-3-{1-[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]-4,7,10,13,16,19-hexaoxa-1-azahenicosano-21-il}-2,4-dio xo-1,3-tiazolidina-5-ilideno]metil}-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila, incluindo formas de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[00219] Em qualquer um dos aspectos ou das formas de realização descrito(a)s aqui, o ligante (L) compreende uma unidade estrutural química representada pela fórmula: -Aq- em que, q é um número inteiro maior do que 1; e A é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste L1 L2 L1 L1 L1 L1 em uma ligação, CR R , O, S, SO, SO2, R , SO2R , SOR , COR , RL1 L4 L1 L4 L1 L2 L1 L2 L1 L1 CONR , R SO2NR , CO, CR =CR , C—C, SiR R , P(O)R , P(O)OR , RL1C(=NCN)NRL4, RL1C(=NCN), RL1C(=CNO2)NRL4, C3-11 cicloalquila opcionalmente substituído com grupos 0-6 RL1 e/ou RL2, heterociclila C3-11 opcionalmente substituído com grupos 0-6 RL1 e/ou RL2, arila opcionalmente substituído com grupos 0-6 RL1 e/ou RL2, heteroarila opcionalmente substituído com grupos 0-6 RL1 e/ou RL2; RL1, RL2, RL3, RL4 e RL5 são, cada um, independentemente, selecionados a partir do grupo que consiste em H, halo, alquila C1-8, Oalquila C1-8, Salquila C1-8, NHalquila C1-8, N(alquila C1-8)2, C3-11 cicloalquila, arila, heteroarila, heterociclila C3-11, Ocicloalquila C1-8, Scicloalquila C1-8, NHcicloalquila C1-8, N(cicloalquila C1-8)2, N(C1-8 cicloalquil)(alquila C1-8), OH, NH2, SH, SO2alquila C1-8, P(O)(OC1-8 alquil)(alquila C1-8), P(O)(Oalquila C1-8)2, CC-alquila C1-8, CCH, CH=CH(alquila C1-8), C(C1-8 alquil)=CH(alquila C1-8), C(C1-8 alquil)=C(alquila C1-8)2, Si(OH)3, Si(alquila C1-8)3, Si(OH)(alquila C1-8)2, COalquila C1-8, CO2H, halogênio, CN, CF3, CHF2, CH2F, NO2, SF5, SO2NHalquila C1-8, SO2N(alquila C1-8)2, SONHalquila C1-8, SON(alquila C1-8)2, CONHalquila C1-8, CON(alquila C1- 8)2, N(C1-8 alquil)CONH(alquila C1-8), N(C1-8 alquil)CON(alquila C1-8)2, NHCONH(alquila C1-8), NHCON(alquila C1-8)2, NHCONH2, N(alquila C1- 8)SO2NH(alquila C1-8), N(alquila C1-8) SO2N(alquila C1-8)2, NH SO2NH(alquila C1-8), NH SO2N(alquila C1-8)2, e NH SO2NH2; e quando q é maior do que 1, RL1 ou RL2 cada, independentemente, pode ser ligado a um outro grupo para formar porção de cicloalquila e/ou heterociclila que pode ser substituído adicionalmente com 0-4 grupos RL5.
[00220] Em qualquer um dos aspectos ou das formas de realização descrito(a)s aqui, L compreende cadeias não lineares, porções cíclicas heteroaromáticas ou aromáticas ou alifáticas.
[00221] Em qualquer um dos aspectos ou das formas de realização descrito(a)s aqui, L é selecionado de um grupo consistindo em: em que “X” é uma cadeia linear com átomos na faixa de 2 a 14 opcionalmente substituídos para conter heteroátomos; e “Y” é independentemente selecionado do grupo consistindo em O, N, S(O)n (n=0, 1, 2).
[00222] Em um aspecto adicional, a descrição provê composições compreendendo uma quantidade eficaz de um composto como descrito aqui.
[00223] Em aspectos adicionais, a descrição provê composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade eficaz de um composto como descrito aqui, e um carreador, aditivo e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00224] Em qualquer um dos aspectos ou das formas de realização descrito(a)s aqui, a composição farmacêutica pode adicionalmente compreender um agente bioativo adicional.
[00225] Em qualquer um dos aspectos ou das formas de realização descrito(a)s aqui, o agente bioativo adicional é um agente anticancerígeno.
[00226] Em qualquer um dos aspectos ou das formas de realização descrito(a)s aqui, o agente anticancerígeno é selecionado a partir do grupo consistindo em everolimus, trabectedina, abraxano, TLK 286, AV-299, DN-101, pazopanibe, GSK690693, RTA 744, ON 0910.Na, AZD 6244 (ARRY-142886), AMN-107, TKI-258, GSK461364, AZD 1152, enzastaurina, vandetanibe, ARQ- 197, MK-0457, MLN8054, PHA-739358, R-763, AT-9263, um inibidor de FLT- 3, um inibidor de VEGFR, um inibidor de EGF TK, um inibidor de aurora- quinase, um PIK-1 modulador, um inibidor de Bcl-2, um inibidor de HDAC, um inibidor de c-MET, um inibidor de PARP, um inibidor de Cdk, um inibidor de EGFR TK, um inibidor de IGFR-TK, um anticorpo anti-HGF, inibidores de PI3 quinase, um AKT inibidor, um inibidor de mTORC1/2, um inibidor de JAK/STAT, um inibidor de checkpoint 1 ou 2, um inibidor de quinase de aderência focal, um inibidor de quinase Map quinase (mek), um anticorpo de captura de VEGF, pemetrexede, erlotinibe, dasatanibe, nilatinibe, decatanibe, panitumumabe, amrubicina, oregovomabe, Lep-etu, nolatrexede, azd2171, batabulin, ofatumumabe, zanolimumabe, edotecarin, tetrandrine, rubitecano, tesmilifene, oblimerseno, ticilimumabe, ipilimumabe, gossipol, Bio 111, 131-I- TM-601, ALT-110, BIO 140, CC 8490, cilengitida, gimatecano, IL13-PE38QQR, INO 1001, IPdR1 KRX-0402, lucantona, LY 317615, neuradiabe, vitespan, RTA 744, Sdx 102, talampanel, atrasentana, Xr 311, romidepsina, ADS-100380, sunitinib, 5-fluorouracila, vorinostat, etoposido, gemcitabina, doxorrubicina, doxorrubicina lipossomal, 5'-desoxi-5-fluorouridina, vincristina, temozolmida, ZK-304709, seliciclibe; PD0325901, AZD-6244, capecitabina, ácido L-glutâmico, sal dissódico de N-[4-[2-(2-amino-4,7-di-hidro-4-oxo-1H-pirrol [2,3-d]pirimidin- 5-il)etil]benzoil], heptahidrato, camptotecina, irinotecano marcado com PEG, tamoxifeno, citrato de toremifeno, anastrazol, exemestano, letrozol, DES (dietilstilbestrol), estradiol, estrogênio, estrogênio conjugado, bevacizumabe, IMC-1C11, CHIR-258,); 3-[5-(metilsulfonilpiperadinometil)-indolil-quinolona, vatalanibe, AG-013736, AVE-0005, o sal acetato de [D-Ser (Bu t) 6, Azgli 10] (piro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (Bu t)-Leu-Arg-Pro- Azgli-NH2acetato [C59H84 N18Oi4-(C2H4O2)X onde x = 1 a 2,4], acetato de goserelina, acetato de leuprolida, pamoato de triptorelina, acetato de medroxiprogesterona, caproato de hidroxiprogesterona, acetato de megestrol, raloxifeno, bicalutamida, flutamida, nilutamida, acetato de megestrol, CP-724714; TAK-165, HKI-272, erlotinibe, lapatanibe, canetainibe, anticorpo ABX-EGF, erbitu x, EKB-569, PKI-166, GW- 572016, Ionafarnibe, BMS-214662, tipifarnibe; amifostina, NVP-LAQ824, ácido sulfato de suberoílo hidroxâmico, ácido valproico, tricostatina A, FK-228, SU11248, sorafenibe, KRN951, aminoglutetimida, arnsacrina, anagrelida, L- asparaginase, vacina Bacilo Calmette-Guerin (BCG), adriamicina, bleomicina, buserelin, bussulfano, carboplatina, carmustina, clorambucile, cisplatina, cladribina, clodronato, ciproterona, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, daunorubicina, dietilstilbestrol, epirrubicina, fludarabina, fludrocotaisona, fluoximeterona, flutamida, gleevac, gemcitabina, hidroxiureia, idarubicina, ifosfamida, imatinibe, leuprolide, levamisol, lomustina, mectlorometamina, melfalana, 6-mercaptopurina, mesna, metotrexato, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, nilutamida, octreotida, oxaliplatina, pamidronato, pentostatina, plicamicina, porfimer, procarbazina, raltitrexed, rituximabe, estreptozocina, tenipósido, testosterona, talidomida, tioguanina, tiotepa, tretinoína, vindesina, ácido 13-cis-retinoico, fenilalanina mostarda, mostarda de uracila, estramustina, altretamina, floxuridina, 5-deooxiridina, arabinosídeo de citosina, 6- mecaptopurina, desoxicomicina, calcitriol, valrubicina, mitramicina, vinblastina, vinorelbina, topotecano, razoxina, marimastat, COL-3, neovastat, BMS-275291, esqualamina, endostatina, SU5416, SU6668 EMD121974, interleucina 12, IM862, angiostatina, vitaxina, droloxifeno, idoxifeno, espironolactona, finasterida, cimitidina, trastuzumabe, dendileucina diftox, gefitinibe, botaezimibe, paclitaxel, paclitaxel livre de cremóforo, docetaxel, epitilona B, BMS-247550, BMS- 310705, droloxifeno, 4-hidroxitoxifeno, pipendoxifeno, ERA-923, arzoxifeno, fulvestrant, acolbifeno, lasofoxifeno, idoxifeno, TSE-424, HMR- 3339, ZK186619, topotecano, PTK787/ZK 222584, VX-745, PD 184352, rapamicina, 40-O-(2-hidroxietil)-rapamicina, temsirolimus, AP-23573, RAD001, ABT-578, BC-210, LY294002, LY292223, LY292696, LY293684, LY293646, wortmanina, ZM336372, L-779,450, PEG-filgrastim, darbepoetina, eritropoietina, fator estimulante das colônias de granulócitos, zolendronato, prednisona, cetuximabe, fator estimulante de colônias de macrófagos de granulócitos, histrelina, interferon alfa peguilado-2a, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b peguilado, interferon alfa- 2b, azacitidina, PEG-L-asparaginase, lenalidomida, gemtuzumabe, hidrocotaisona, interleucina 11, dexrazoxano, alemtuzumabe, ácido todo transretinoico, cetoconazol, interleucina 2, megestrol, imunoglobulina, mostarda de nitrogênio, metilprednisolona, ibritgumomabe tiuxetano, andrógenos, decitabina, hexametilmelamina, bexaroteno, tositumomabe, trióxido de arsênio, cotaisona, editronato, mitotano, ciclosporina, daunorubicina lipossomal, Edwina- asparaginase, estrôncio 89, casopitante, netupitante, antagonistas do receptor NK- 1, palonosetrona, aprepitant, difenidramina, hidroxibina, metoclopramida, lorazepam, alprazolam, haloperidol, droperidol, dronabinol, dexametasona, metilprednisolona, proclorperazina, granisetrona, ondansetrona, dolasetrona, tropisetrona, pegfilgrastim, eritropoietina, epoetina alfa, darbepoetina alfa e misturas dos mesmos.
[00227] Em um aspecto adicional, a descrição provê métodos para induzir a degradação de uma proteína alvo em uma célula compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um composto como descrito aqui à célula, em que o composto efetua a degradação de uma proteína alvo.
[00228] Em ainda aspectos adicionais, a descrição provê composições compreendendo uma quantidade eficaz de um composto como descrito aqui para uso em um método para tratar câncer, o dito método compreendendo a administração da composição a um paciente em necessidade da mesma, em que a composição é efetuada para o tratamento ou alívio de pelo menos um sintoma do câncer no paciente.
[00229] Em qualquer um dos aspectos ou das formas de realização descrito(a)s aqui, o câncer é carcinoma de células escamosas, carcinoma basocelular, adenocarcinoma, carcinomas hepatocelulares e carcinomas de células renais, câncer de bexiga, intestino, mama, colo do útero, cólon, esôfago, cabeça, rim, fígado, pulmão, pescoço, ovário, pâncreas, próstata, e estômago; leucemias; linfomas benignos e malignos, particularmente linfoma de Burkitt e linfoma não Hodgkin; melanomas benignos e malignos; doenças mieloproliferativas; mieloma múltiplo, sarcomas, incluindo sarcoma de Ewing, hemangiossarcoma, sarcoma de Kaposi, lipossarcoma, miossarcomas, neuroepitelioma periférico, sarcoma sinovial, gliomas, astrocitomas, oligodendrogliomas, ependimomas, gliobastomas, neuroblastomas, ganglutiromas, gangliogliomas, meduloblastomas, tumores de células pineal, meningiomas, sarcomas meníngeos, neurofibromas e Schwannomas; câncer de intestino, câncer de mama, câncer de próstata, câncer cervical, câncer de útero, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer testicular, câncer de tireoide, astrocitoma, câncer de esôfago, câncer de pâncreas, câncer de estômago, câncer de fígado, câncer de cólon, melanoma; carcinossarcoma, doença de Hodgkin, tumor ou teratocarcinomas de Wilms, leucemia linfoblástica aguda de linhagem T (T-ALL), linfoma linfoblástico de linhagem T (T-LL), linfoma periférico de células T, leucemia de células T adultas, ALL Pré-B, Linfomas pré-b, linfoma de células B grandes, linfoma de Burkitts, ALL células B, ALL cromossomo Filadélfia positivo e CML cromossomo Filadélfia positivo.
[00230]
[00231] Em qualquer um dos aspectos ou das formas de realização descrito(a)s aqui, a CLM é acoplada a uma PTM tendo uma estrutura selecionado de um grupo consistindo em: em que R ou Ligante é uma ligação ou uma porção de ligante químico que acopla a CLM à PTM, incluindo formas de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
Exemplos A. Clonagem, expressão e purificação de CRBM e DDB1 humanos.
[00232] O procedimento é padrão para alguém versado na técnica, como tipificado pela descrição em Lopez-Girona et al. (Cereblon is a direct protein target for immunomodulatory and antiproliferative activities of lenalidomide and pomalidomide, A Lopez-Girona, D Mendy, T Ito, K Miller, A K Gandhi, J Kang, S Karasawa, G Carmel, P Jackson, M Abbasian, A Mahmoudi, B Cathers, E Rychak, S Gaidarova, R Chen, P H Schafer, H Handa, T O Daniel, J F Evans and R Chopra, Leukemia 26: 2326-2335, 2012).
[00233] Os cDNAs para os genes CRBN e DDB1 podem ser amplificados por PCR usando fusão (NEB) como a polimerase e as seguintes sequências de iniciador:
[00234] CRBN pode ser clonado em pBV-ZZ-HT-LIC, pBV-GST-LIC, pMA-HT-LIC, e DDB1 em pBV-notag-LIC, usando clonagem de ligação independente 26. Para clonar o vetor de mamífero o pMA-HT-LIC, o oligo CRBN-Indicador-Reverso adiciona uma etiqueta INDICADORA C-terminal para imunodetecção. O DDB1-Rev adiciona uma Etiqueta Strep 27. A etiqueta-ZZ é necessária para alcançar altas expressões de CRBN solúvel; sem ela, o His- CRBBn expresso em um nível baixo, enquanto um GST-CRBN resulta em proteína agregada. Baculovírus recombinantes de ZZ-His-CRBN e DDB1- Etiqueta Strep (ST) são gerados e amplificados usando sistema de expressão de expressão de baculovírus Bac-a-Bac da Invitrogen em células de insetos Sf9. ZZ- His-CRBN e DDB1-STsão coexpressados em insetos High FIve (Tin) em bolsas de onda de 10L à 27°C usando meio ESF921 não suplementado a partir dos Sistemas de Expressão. Células são colhidas 48 horas após a infecção por centrifugação e colam rescolocados em suspensão em coquitel inibidor de Protease plus5X PBS (Roche, Indianapolis, IN).
[00235] Todas as etapas de purificação de proteína subsequentes são realizadas à 4°C. Células congeladas são descongeladas, recolocadas em suspensão em 5 volumes de tampão de Lise (50 mM Tris HCl pH 8,0, 0,5 M NaCl, 10% glicerol, 2 mM DTT) mais 20 mM imidazol e inibidores de protease, lisados e centrifugados para render um sobrenadante claro. O CRBN-DDB1 é purificado em um sistema ÀKTA-xpress (GE Healthcare) usando níquel-sefarose e cromatografia Sefacril S200. O complexo é então adicionalmente purificado usando cromatografia de troca de ânion em uma coluna MonoQ de 8 ml r um segundo passe em uma filtração por gel S-200. CRBN-DDB1é identificado por SDS-PAGE e a CRBN-DDB1 contendo frações foram reunidos e armazenados à -70°C.
2. Ensaio de fusão térmica de fluorescência para medir a ligação de compostos ao CRBN recombinante
[00236] O ensaio é padrão para alguém versado na técnica, como tipificado pela descrição em Lopez-Girona et al. (Cereblon is a direct protein target for immunomodulatory and antiproliferative activities of lenalidomide and pomalidomide, A Lopez-Girona, D Mendy, T Ito, K Miller, A K Gandhi, J Kang, S Karasawa, G Carmel, P Jackson, M Abbasian, A Mahmoudi, B Cathers, E Rychak, S Gaidarova, R Chen, P H Schafer, H Handa, T O Daniel, J F Evans and R Chopra, Leukemia 26: 2326-2335, 2012).
[00237] Estabilidades térmicas de CRBN-DDB1 na presença ou ausência de compostos de teste são feitos na presença de Sypro Orange em um formiato de microplaca de acordo com Pantoliano et al. (Pantoliano MW, Petrella EC, Kwasnoski JD, Lobanov VS, Myslik J, Graf E et al. High-density miniaturized thermal shift assays as a general strategy for drug discovery. J Biomol Screen 2001; 6: 429-440.) Dois mg de proteína em 20 ml de tampão de ensaio (25 mM Tris HCl, pH 8,0, 150 mM NaCl, 2 uM Sypro Orange) são submetidos a um aumento gradual de temperature de 20 a 70°C e a fluorescência lida a cada 1°C em um ABIPrism 7900HT (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA). Compostos são dissolvidos em DMSO (1% final no ensaio) e testados em quadruplicado em uma faixa de concentração entre 30nM à 1000 uM; controles contendo somente 1% de DMSO.
3. Método LCMS
[00238] A análise é conduzida em uma coluna C18 EC 120 Poroshell (diâmetro interno 50mm x 3,0mm diâmetro da embalagem 2,7 μm|) em 45oC.
[00239] Os solventes empregados são: A = 0,1% v/v de solução de ácido fórmico em água. B = 0,1% v/v de solução de ácido fórmico em acetonitrila.
[00240] Os gradientes empregados são como a seguir:
[00241] A detecção UV é um sinal médio de comprimento de onda de 210nm para 350nm e espectros de massa são gravados em um espectrômetro de massa usando ionização de eletrospray de modo positivo.
[00242] A seguir são ilustradas as fases e gradientes móveis usados quando compostos passam por purificação pelo HPLC preparativo.
4. HPLC Preparativo (Modificados de Ácido Fórmico)
[00243] A análise de HPLC é conduzida em uma coluna OBD RP18 X Bridge (diâmetro interno 150mm x 19mm, diâmetro de embalagem 5μm) em temperatura ambiente.
[00244] Os solventes empregados são: A = 0,1 v/v de solução de ácido fórmico em água. B = acetonitrila.
5. HPLC Preparativo (Modificador de Bicarbonato de Amônia)
[00245] A análise de HPLC é conduzida em uma coluna OBD RP18 X Bridge (diâmetro interno 150mm x 19mm, diâmetro de embalagem 5μm) em temperatura ambiente.
[00246] Os solventes empregados são:A = 10 mM de bicarbonato de amônia em água. B = acetonitrila.
[00247] Para cada uma das purificações preparativas, independentemente do modificador usado, o gradiente empregado é dependente do tempo de retenção de cada composto particular passando pela purificação como gravado no LCMS analítico. A taxa de fluxo é de 20 mL/min.
[00248] A detecção de UV é um sinal de comprimento de onda de 254nm ou 2200nm.
[00249] Enquanto formas de realização preferidas da invenção têm sido mostradas e descritas aqui, será entendido que tais formas de realização são providas somente a título de exemplo. Várias variações, mudanças e substuições irão ocorrer para aqueles versados na técnica sem se afastar do espírito da invenção. Consequentemente, é pretendido que as reivindicações anexas cobrem tais variações estão dentro do espírito e escopo da invenção.
B. Síntese
[00250] Os detalhes sintéticos para os exemplos incluídos abaixo são representativos dos procedimentos gerais que que informam sobre a síntese do conjunto de exemplos mais amplo. 1. 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-fluoro-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-dionaEtapa 1: 4-fluoroisobenzofuran-1,3-diona
[00251] Uma mistura de ácido 3-fluoroftálico (50g, 271,7 mmol) em anidrido acético (400mL) foi refluxado por 2h. Os voláteis foram removidos por aspiração, e os resíduos foram cristalizados em anidrido acético para proporcionar 4-fluoroisobenzofuran-1,3-diona (40 g, em bruto) como um sólido marrom. LC- MS: 167,1 [MH]+. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 7,58 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,92-7,97 (m, 1H).
[00252] Etapa 2: Ácido 5-amino-2-(4-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-2-il)-5- oxopentanoico.
[00253] Uma mistura do 4-fluoroisobenzofuran-1,3-diona (40 g, em bruto) acima e L-glutamina (35 g, 239 mmol em DMF seco (200mL) foi misturado à 90°C por 8 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi redissolvido em 4N HCl (200 mL) e mexido por 8 h adicionais. A precipitação resultante foi coletada por filtração, lavada com água, e secada para proporcionar ácido 5-amino-2-(4-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-2-il)-5-oxopentanoico (37 g, em bruto) como um sólido esbranquiçado. LC-MS: 295.2 [MH]+. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,16-2,20 (m. 2H), 2,31-2,43 (m, 2H), 4,79-4,83 (m, 1H), 6,79 (br, 1H), 7,26(br, 1H), 7,77-7,85 (m, 2H), 7,98-8,03 (m, 1H), 13,32(br, 1H).Etapa 3: 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-fluoro-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3- diona
[00254] Uma mistura do ácido 5-amino-2-(4-fluoro-1,3-dioxoisoindolin-2- il)-5-oxopentanoico (37 g, em bruto) acima, 1,1'-carbonildi-imidazol (CID) (24,2 g, 149,4 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (DMAP (1,3g, 11,5 mmol) em acetonitrila (80 mL) foi refluxado por 5 h. A mistura reacional foi resfriada até a temperatura ambiente. O sólido resultante foi coletado por filtração e lavado com acetonitrila (100mL) para proporcionar o produto em bruto, que foi purificado por cromatografia de gel de sílica usando 1 a 10% de MeOH em DCM como eluente para proporcionar 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-fluoroisoindol-1,3-diona (9,0 g, 12% de rendimento em três etapas) como um sólido amarelo claro. LC- MS: 277,2 [MH]+. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,14-2,19 (m, 1H), 2,75-2,95 (m, 3H), 4,97-5,01 (m, 1H), 7,43 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,10-7,81 (m, 2H), 8,08 (br, 1H).2. N-(3-(5-bromo-2-cloropirimidin-4-ilamina)propil)-N-metilciclobutano carboxamidaEtapa 1: N-{3-[(5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)amino]propil}-N-metilcarbamato de terc-butila
[00255] Uma mistura de N-(3-aminopropil)-N-metilcarbamato (826 mg, 4,40mmol) de terc-butila e 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (400 mg, 1,76 mmol) em MeOH (10 mL) foi misturada em ta por 1 h. A mistura reacional foi então concentrada in vacuo, e o resíduo foi purificado usando Cromatografia ISCO Teledyne [0^35% EtOAc/Heptanos] para proporcionar N-{3-[(5-bromo-2- cloropirimidin-4-il)amino]propil}-N-metilcarbamato de terc-butila (615 mg, 92% de rendimento). LC-MS (ES+): m/z = 381,05/383,05 [MH+], tR = 2,55 min.Etapa 2: {3-[(5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)amino]propil}(metil)amina
[00256] A uma solução de N-{3-[(5-bromo-2-cloropirimidin-4- il)amino]propil}-N-metilcarbamato de terc-butila (615 mg, 1.62 mmoL) em DCM (5 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (0,54 mL, 6,5 mmol) em ta. Após a mistura ser misturada por 1h, ela foi concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado usando Cromatografia ISCO Teledyne [0 -> 15% metanol em DCM] para proporcionar {3-[(5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)amino]propil}(metil)amina (371 mg, 82% de rendimento). LC-MS (ES+): m/z = 280,99/282,99 [MH+], tR = 1,13 min.
[00257] Etapa 3: N-{3-[(5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)amino]propil}-N- metilciclobutanecarboxamida
[00258] Para a solução de {3-[(5-bromo-2-cloropirimidin-4- il)amino]propil}(metil)amina (371 mg, 1,33 mmol) e cloreto de ciclobutanecarbonil (188 mg, 1,60 mmol em DCM (10 mL) a ta foi adicionado trietil amima (0,41 mL, 2,92 mmol). A mistura reacional foi deixada em agitação em ta por 16h, e então concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado usando Cromatografia ISCO Teledyne [035% EtOAc/Heptanes] para proporcionar N-{3- [(5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)amino]propil}-N-metilcarbamato (268 mg, 56%). LC-MS (ES+): m/z = 363,04/365,04 [MH+], tR = 2,18 min.3. Ácido (S)-2-(4-(4-clorofenil)-2,3,9-trimetil-6H-tieno [3,2-f] [1,2,4]triazol[4,3-a][1,4]diazepin-6-il)acético
[00259] O composto do título foi preparado de acordo com os procedimentos descritos em WO2011/143660 4. (Z)-4-(4-((2,4-dioxotiazolidin-5-ilideno)metil)-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila
[00260] O composto do título foi preparado de acordo com os procedimentos descritos em Patch, R. J. et al J. Med. Chem. 2011, 54, 788-808.5. 4-[3-(4-hidroxifenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-sulfanilidenoimidazolidin-1-il]-2- (trifluorometil)benzonitrila
[00261] O composto do título foi preparado de acordo com os procedimentos descritos em Jung, M. E. et al J. Med. Chem. 2010, 53, 2779-2796.2-cloro-4-(TRANS-3-amino-2,2,4,4-tetrametilciclobutoxi)benzonitrila
[00262] O composto do procedimentos descritos em Guo, C. et al J. Med. Chem. 2011, 54, 7693-7704. 7. [N-(3-(5-bromo-2-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxoisoindolin-4-ilamino)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)fenilamino)pirimidin-4- ilamino)propil)-N-metilciclobutanecarboxamida](Estrutura de Composto #17 mostrada na Tabela 1) Etapa 1: 2-(2-(2-(2-(4-nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil 4-metilbenzenesulfonato
[00263] Uma mistura de 2,2’-(2,2’-oxibis(etano-2,1-di- il)bis(oxi))bis(etano-2,1-di-il) bis(4-metilbenzenosulfonato) (3 g, 5,96 mmol), 4- nitrofenol (813 mg, 5, 84 mmol) e carbonato de potássio (1,65 g, 11,94 mmol) em N,N-dimetilformamida seco (20 mL) foi misturado à 50°C durante a noite. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente e derramado em água (60 mL), e então extraído com acetato de etila (80 mL x 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL) e salmoura (50 mL), seco sobre sulfato de sódio anidro, e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi então purificado por cromatografia de coluna de flash de gel de sílica (eluído com 10 a 20% de acetato de etila em hexano) para proporcionar 2-(2-(2-(2-(4- nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil 4-metilbenzenosulfonato (2,65 g, 95% de rendimento) como um óleo amarelo. LC-MS (ES+): m/z 470,2 [MH+] (tR = 2,83 min)Etapa 2: [1-(2-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etoxi)etoxi)-4-nitrobenzeno]
[00264] A mistura de 2-(2-(2-(2-(4-nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil 4- metilbenzenosulfonato (2,65 g, 5,64 mmol) e azida de sódio (735 mg, 11,29 mmol em etanol (30 mL) foi refluxado por 16 h. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente resfriado bruscamente com água (50 mL) e extraído com diclorometano (50 mL x 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL) e salmoura (40 mL), secadas sob sulfato de sódio anidro, e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o bruto de 1-(2-(2-(2-(2- azidoetoxi)etoxi)etoxi)etoxi)-4-nitrobenzeno (865 mg) como um óleo amarelo. Etapa 3: [2-(2-(2-(2-(4-nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etanamina]
[00265] A mistura do 1-(2-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etoxi)etoxi)-4- nitrobenzeno (865 mg, 2.54 mmol) acima, trifenilfosfina (999 mg, 3, 81 mmol) e água (69 mg, 3,83 mmol) em tetra-hidrofurano (10 mL) foi misturada à temperatura ambiente por 14 h sob atmosfera de nitrogênio. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para proporcionar um resíduo em bruto, que foi purificado por cromatografia de coluna de flash de gel de sílica (eluído com 3 a 5% de metanol em diclorometano) para proporcionar 2-(2-(2-(2-(4- nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etanamina (661 mg, 83% de rendimento) como um óleo amarelo. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,86 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,51 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,63-3,75 (m, 8H), 3,90 (t, J = 4,4 Hz, 2H), 4,23 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 6,97-6,99 (m, 2H), 8,18-8,22 (m, 2H).Etapa 4: terc-butil 2-(2-(2-(2-(4-nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato
[00266] Uma mistura de 2-(2-(2-(2-(4-nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etanamina (661 mg, 2,1 mmol), trietilamina (449 mg, 4,43 mmol e di-terc-butil dicarbonato (505 mg, 2,31 mmol) em diclorometano (25 mL) foi misturado à temperatura ambiente por 2 h. A mistura foi diluída com diclorometano (100 mL), lavada com água (30 mL x 2) e salmoura (30 mL), seco sob sulfato de sódio anidro e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de flash de gel de sílica (eluído com 20 a 40% de acetato de etila em hexano) para proporcionar terc-butil 2-(2-(2-(2-(4-nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato (818 mg, 94% de rendimento) como um óleo amarelo. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,44 (s, 9H), 3,37 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 3,54 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,62-3,70 (m, 6H), 3,733,76 (m, 2H), 3,90 (t, J = 4,4 Hz, 2H), 4,23 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 5,01(br, 1H), 6,967,00 (m, 2H), 8,18-8,22 (m, 2H).Etapa 5: terc-butil 2-(2-(2-(2-(4-aminofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato
[00267] Uma mistura de 2-(2-(2-(2-(4-nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato (818 mg, 1,97 mmol), pó de ferro (1,1 g, 0,65 mmol, e cloreto de amônia (528 mg, 9,87 mmol) em etanol (20 mL) e água foi misturada à 80°C por 1 h. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, o precipitado de sódio foi removido por filtração e lavado com acetato de etila (20 mL x 2). O filtrado foi dividido entre acetato etila (120 mL) e água (30 mL). As fases orgânicas foram lavadas salmoura (50 mL), seco sobre sulfato de sódio anidro, e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de gel de sílica (eluído com 30 a 40% de acetato de etila em hexano) para proporcionar 2-(2-(2-(2-(4- aminofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato de terc-butila (512 mg, 67% de rendimento) como um óleo amarelo.Etapa 6: 2-(2-(2-(2-(4-(5-bromo-4-(3-(N-metilciclobutanocarboxamido)propilamino)pirimidin2- ilamino)fenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato de terc-butila
[00268] Uma mistura de 2-(2-(2-(2-(4-aminofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil carbamato de terc-butila (130 mg, 0,34 mmol), N-(3-(5-bromo-2-cloropirimidin- 4-ilamino)propil)-N-metilciclobutanocarboxamida (24 mg, 0,06 mmol) e ácido p- toluenossulfônico (11,6 mg, 0,07 mmol) em dioxano (1,5 mL) foi submetida a refluxo durante 16 h. A mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente, arrefecido com solução aquosa de bicarbonato de sódio (1,0 N, 30 mL) e extraído com acetato de etila (30 mL x 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (30 mL) e salmoura (30 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de flash de gel de sílica (eluído com 20 a 40% de acetato de etila em hexano) para proporcionar 2-(2-(2-(2-(4- 5 5-bromo-4-(3-(N- metilciclobutanocarboxamido)propilamino)pirimidin-2-ilamino)fenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato de terc-butila (40 mg, 17% de rendimento) como um óleo amarelo.Etapa 7: N-(3-(2-(4-(2-(2-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)etoxi)etoxi)fenilamino)-5- bromopirimidina-4-ilamino)propil)-N-metilciclobutanocarboxamida
[00269] Uma mistura de 2-(2-(2-(2-(4-(5-bromo-4-(3-(N- metilciclobutanocarboxamido)propilamino)pirimidin-2-ilamino)fenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato de terc-butila (40 mg, 0,06 mmol) em ácido 2,2,2-trifluoroacético (1 mL) e diclorometano (1 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 2 h. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi fracionado entre diclorometano (60ml) e solução aquosa de bicarbonato de sódio (2,0N, 30 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (20 mL), seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar N-(3-(2-(4-(2-(2-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)etoxi)etoxi)fenilamino)-5-bromopirimidin-4-ilamino)propil)-N- metilciclobutanocarboxamida (18 mg, 52% de rendimento) como um óleo amarelo.Etapa 8: [N-(3-(5-bromo-2-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxoisoindolin-4ilamino)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)fenilamino)pirimidina-4-ilamino)propil)-N-metilciclobutanecarboxamida]
[00270] Uma mistura de N-(3-(2-(4-(2-(2-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)etoxi)etoxi)fenilamino)-5-bromopirimidin-4-ilamino)propil)-N- metilciclobutano carboxamida (130 mg, 0,03 mmol), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)- 4-fluoro-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona (8,2 mg, 0,03 mmol) e N-etil-N- isopropilpropan-2-amina (7,6 mg, 0,06 mmol) em N, N-dimetilformamida seca (1 mL) foi agitada a 90oC por 12 h. A mistura reacional foi resfriada par a temperatura ambiente, fracionada entre acetato de etila (100ml) e água (30mL). As fases orgânicas foram lavadas salmoura (30 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado pelo prep- TLC para conseguir [N-(3-(5-bromo-2-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3- il)-1,3-dioxoisoindolin-4-ilamino)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)fenilamino)pirimidin-4- ilamino)propil)-N-metilciclobutanecarboxamida (10,2 mg, 40% de rendimento) como um sólido amarelo. LC-MS (ES+): m/z = 865.27/867.27 (1:1) [MH]+. tR = 2.06 min. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): δ 1.68-1.77 (m, 3H), 1.89-1.92 (m, 3H), 2.08-2.15 (m, 3H), 2.60-2.79 (m, 7H), 3.28-3.35 (m, 6H), 3.55-3.61 (m, 10H), 3.69-3.72 (m, 2H), 3.96-3.99 (m, 2H), 4.91-4.95 (m, 1H), 6.75-6.78 (m, 2H), 6.91-6.94 (m, 2H), 7.34-7.42 (m, 3H), 7.76 (d, J = 12.8 Hz, 1H). 8. 2-((S)-4-(4-clorofenil)-2,3,9-trimetil-6H-tieno [3,2-f] [1,2,4] triazol [4,3-a] [1,4]diazepin-6-il)-N-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxoisoindolin-4- ilamino)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)fenil)acetamida (Estrutura de Composto #14 mostrada na Tabela 1) Etapa 1: (2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-4-(2-(2-(2-(2-(4-nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilamina)isoindol-1,3-diona
[00271] Uma mistura de 2-(2-(2-(2-(4-nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi) etanamina (128 mg, 0,41 mmol), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4- Fluoro-2,3-di- hidro-1H-isoindol-1,3-diona (112,5 mg, 0,41 mmol) e N-etil-N-isopropilpropan- 2-amina (105 mg, 0,81 mmol) em N, N-dimetilformamida seca (2 mL) foi agitada a 90oC por 12 h. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente e derramada em água (60 mL), e então extraída com acetato de etila (35 mL x 2). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (30 mL) e salmoura (30 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por pré-TLC para resultar em 2-(2,6- dioxopiperidin-3-il)-4-(2-(2-(2-(2-(4- nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilamino)isoindol-1,3-diona (73 mg, rendimento de 31%) como um sólido amarelo. LC-MS (ES+): m/z 571,3 [MH+] (tR = 2,46 min) Etapa 2: (4-(2-(2-(2-(2-(4-aminofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilamino)-2-(2,6- dioxopiperidin-3-il)isoindol-1,3-diona)
[00272] 408/5000 A uma suspensão de 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-(2-(2- (2-(2-(4-nitrofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilamino)isoindol-1,3-diona (73 mg, 0,128 mmol) e pó de ferro (71,6 mg, 1,28 mmol) em etanol (2 mL) adicionou-se uma solução de cloreto de amônio (68 mg, 1,26 mmol) em água (0,5 mL) à temperatura ambiente, a mistura resultante foi agitada a 80oC por 1 h. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, o precipitado de sódio foi removido por filtração e lavado com acetato de etila (10 mL x 2). O filtrado foi dividido entre acetato etila (60 mL) e água (30 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (30 mL), seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar N-4-(2-(4-(2-(2-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)etoxi)etoxi)fenilamino)-2(2,6-dioxopiperidina-3-il)isoidolin- 1,3-diona (66,5mg bruto) como um óleo amarelo. LC-MS (ES+): m/z 541,5 [MH+] tR = 1,593 min) Etapa 3: 2-((S)-4-(4-clorofenil)-2,3,9-trimetil-6H-tieno [3,2-f] [1,2,4] triazol [4,3- a] [1,4]diazepin-6-il)-N-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxoisoindolin-4-ilamino)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)fenil)acetamida
[00273] A uma solução agitada de 4-(2-(2-(2-(2-(4- aminofenoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etilamino)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)isoindol-1, 3-diona (58,4 mg, 0,11 mmol), ácido (S)-2-(4-(4-clorofenil)-2,3,9-trimetil-6H- tieno [3,2-f][1,2,4]triazol[4,3-a][1,4]diazepin-6-il) acético (43,3 mg, 0,11 mmol) e N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (41,8 mg, 0,32 mmol) em seco N, N- dimetilformamida (1 mL) foi adicionado (2-(7-aza-1H-benzotriazola-1-il)- 1,1,3,3-tetrametilurôniotetraxifluorofosfato) (82 mg, 0,21 mmol) a 0°C. A mistura resultante foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada à temperatura ambiente durante 20 min. A mistura foi vertida em água (25 mL), extraída com acetato de etila (35 ml x 2). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (20 mL) e salmoura (30 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por pré-TLC para proporcionar 2-((S)-4-(4-clorofenil)-2,3,9-trimetil-6H-tieno[3,2-f] [1,2,4]triazol [4,3-a][1,4]diazepin-6-il)-N-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin- 3-il)-1,3-dioxoisoindolin-4-ilamino)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)fenil)acetamida (52 mg, 52% de rendimento) como um sólido amarelo. LC-MS (ES+): m/z 923.29/925.29 (3:1) [MH+], tR = 2.689 min. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1.67 (s, 3H), 2.05-2.12 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2.65-2.85 (m, 6H), 3.41-3.54 (m, 4H), 3.65-3.74 (m, 10H), 3.81-3.85 (m, 2H), 4.06-4.11 (m, 2H), 4.63-4.69 (m, 1H), 4.85-4.93 (m, 1H), 6.38-6.55 (m, 1H), 6.83 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.39-7.51 (m, 5H), 8.59 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.77 (d, J = 3.2 Hz, 1H).9. (Z)-4-(4-((3-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxoisoindolin-4- ilamino)etoxi)etoxi)etil)-2,4-dioxotiazolidin-5-ilideno)metil)-2-metoxifenoxi )- 3-(trifluorometil)benzonitrila (Estrutura de Composto #22 mostrada na Tabela 1) Etapa 1: 4-metilbenzenossulfonato de (Z)-2-(2-(2-(5-(4-(4-ciano-2- (trifluorometil)fenoxi)-3-metoxibenzilideno)-2,4-dioxotiazolidin-3-il)etoxi)etoxi)etila
[00274] Uma mistura de (Z)-4-(4-((2,4-dioxotiazolidin-5-ilideno)metil)-2- metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila (1,0 g, 2,3 mmol), carbonato de potássio (1,0 g, 6,9 mmol) e bis(4-metilbenzenossulfonato) de 2,2’-(etano-1,2-di- ilbis(oxi))bis(etano-2,1-di-ila) (1,3 g, 2,7 mmol) em N, N-dimetilformamida (10 mL) foi agitada a 80oC por 16 h. A mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente, arrefecida com solução aquosa de bicarbonato de sódio (10 mL) e extraída com acetato de etila (40 mL x 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL) e salmoura (50 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluída com 10-30% de acetato de etila em hexano) para se obter 4-metilbenzenossulfonato de (Z)-2-(2-(2-(5-(4-(4-ciano- 2-(trifluorometil)fenoxi)-3-metoxibenzilideno)-2,4-dioxotiazolidin-3- il)etoxi)etoxi)etila (1,0 g, 61% de rendimento) como um sólido amarelo claro.Etapa 2: (Z)-4-(4-((3-(2-(2-(2--azidoetoxi)etoxi)etil)-2,4-dioxotiazolidin-5- ilideno)metil)-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila
[00275] Uma mistura de 4-metilbenzenossulfonato de (Z)-2-(2-(2-(5-(4-(4- ciano-2-(trifluorometil)fenoxi)-3-metoxibenzilideno)-2,4-dioxotiazolidin-3- il)etoxi)etoxi)etila (1,0 g, 1,4 mmol) e azida de sódio (185 mg, 2,8 mmol) em etanol (20 mL) foi submetida a refluxo durante 16 h. A mistura reacional foi resfriada par a temperatura ambiente, fracionada entre acetato de etila (100ml) e água (20mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (30 ml), seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para se obter (Z)-4-(4- ((3-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etil)-2,4-dioxotiazolidin-5-ilideno)metil)-2- metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila (130 mg, em bruto) como um óleo amarelo claro, que foi utilizado no Etapa seguinte sem purificação adicional.Etapa 3: (Z)-4-(4-((3-(2-(2-(2--azidoetoxi)etoxi)etil)-2,4-dioxotiazolidin-5-ilideno)metil)-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila
[00276] Uma mistura do (Z)-4-(4-((3-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etil)-2,4- dioxotiazolidin-5-ilideno)metil)-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila) (130 mg, em bruto), trifenilfosfina (100 mg, 0,34 mmol) em água (0,2 mL) e tetra-hidrofurano (20 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluída com 3-5% de metanol em diclorometano) para resultar em (Z)-4-(4-((3-(2-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)etil)-2,4- dioxotiazolidin-5-ilideno)metil)-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila (60 mg, rendimento de 8% em duas etapas) como um óleo amarelo. LC-MS (ES+): m/z 552,1 [MH+] tR = 2,15 min Etapa 4: (Z)-4-(4-((3-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxoisoindolin-4- ilamino)etoxi)etoxi)etil)-2,4-dioxotiazolidin-5-ilideno)metil)-2-metoxifenoxi)-3- (trifluorometil)benzonitrila
[00277] Uma mistura de (Z)-4-(4-((3-(2-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)etil)-2,4- dioxotiazolidin-5-ilideno)metil)-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila) (60 mg, 0,10 mmol), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-fluoro-2,3-di-hidro-1H- isoindol-1,3-diona (30 mg, 0,13 mmol) e N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (50 mg, 0,39 mmol) em 1-metilpirrolidin-2-ona (1 mL) foi agitada a 90 o C por 16 h. A mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente, arrefecida com solução aquosa de bicarbonato de sódio (5 mL) e extraída com acetato de etila (20 mL x 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (10mL x 2)) e salmoura (10 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por pré-TLC para proporcionar (Z)-4-(4-((3-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3- dioxoisoindolin-4-ilamino)etoxi)etoxi)etil)-2,4-dioxotiazolidin-5-ilideno)metil)- 2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila (9,5 mg, 11,8% de rendimento) como um amarelo sólido. LC-MS (ES+): m/z 808.19 [MH+], tR = 3.022 min. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2.12-2.16 (m, 1H), 2.73-2.91 (m, 3H), 3.42 (s, 2H), 3.67-3.80 (m, 11H), 3.99 (s, 2H), 4.91-4.95 (m, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.76-6.86 (m, 2H), 7.02-7.19 (m, 4H), 7.43 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.85-8.12 (m, 3H).
[00278] 10. 4-(3-(4-(3-(2-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxoisoindolin-4-il)amino)etoxi)etoxi)etoxi)propoxi)fenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2- tioxoimidazolidin-1-il)-2-(trifluorometil)benzonitrila (Estrutura de Composto #1 mostrada na Tabela 1)Etapa 1 b: 1,1,1,16-tetrafenil-2,5,8,11,15-pentaoxahexadecano
[00279] A uma solução de 2-(2-(2-(tritiloxi)etoxi)etoxi)etanol (7 g, 17,7 mmol) em N, N-dimetilformamida (50 mL) foi "> adicionou lentamente hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 707 mg, 17,7 mmol) em 0 o C. Após a mistura ter sido agitada à temperatura ambiente durante 30 min, adicionou-se 4- metilbenzenossulfonato de 3-(benziloxi)propila (5,8 g 18,0 mmol) em uma porção a 0°C, a mistura resultante foi deixada a agitar a 70°C durante a noite. Após a mistura ter sido arrefecida até à temperatura ambiente, foi cuidadosamente temperada com água (40 mL), extraída com acetato de etila (60 mL x 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas salmoura (80 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash de sílica gel (eluída com 5-10% de acetato de etila em hexano) para resultar em 1,1,1,16-tetrafenil-2,5,8,11,15- pentaoxahexadecano (4,8 g, 50 % de rendimento) como um óleo incolor. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1.85-1.92 (m, 2H), 3.23 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.53-3.59 (m, 6H), 3.64-3.68 (m, 8H), 4.47 (s, 2H), 7.19-7.33 (m, 15H), 7.45-7.47 (m, 5H). Etapa 2 b: 1-fenil-2,6,9,12-tetraoxatetradecano-14-ol
[00280] A uma solução de 1,1,1,16-tetrafenil-2,5,8,11,15-pentaoxa- hexadecano (4,8 g 8,8 mmol) em dicloreto de metileno (10 mL) e metanol (10 mL) adicionou-se ácido clorídrico aquoso (37%, 2,5 mL) a 0°C. A mistura reacional foi mexida a rt por 2 horas. A mistura reacional foi vertida em água (30 mL), e extraída com diclorometano (20ml x 3) As fases orgânicas combinadas foram lavadas com bicarbonato de sódio aquoso (1N, 50ml) salmoura e secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash de sílica gel (eluída com 20-40% de acetato de etila em hexano) para resultar em 1-fenil-2,6,9,12-tetraoxatetradecano- 14-ol (1,9 g, 73% de rendimento) como um óleo incolor.Etapa 3 b: 1-fenil-2,6,9,12-tetraoxatetradecano-14-ila 4- metilbenzenossulfonato
[00281] Uma mistura de 1-fenil-2,7,10,13-tetraoxapentadecano-15-ol (1,9 g, 6,3 mmol), trietilamina (1,3 mL, 9,5 mmol), N, N-dimetilpiridin-4-amina (75 mg, 0,63 mmol) e cloreto de 4-metilbenzeno-1-sulfonila (1,45 g, 7,65 mmol) em diclorometano (20 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Adicionou-se água (20 mL) para extinguir a reação, e o produto foi extraído com diclorometano (40 mL x 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash de sílica gel (eluída com 10-30% de acetato de etila em hexano) para resultar em 1-fenil- 2,6,9,12-tetraoxatetradecano-14-ol (2,2 g, 78% de rendimento) como um óleo incolor. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1.87-1.92 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 3.54- 3.60 (m, 12H), 3.67 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 4.48 (s, 2H), 7.27-7.33 (m, 7H), 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 2H).Etapa 4: 14-azido-1-fenil-2,6,9,12-tetraoxatetradecano
[00282] Uma mistura de 4-metilbenzenossulfonato de 1-fenil-2,6,9,12- tetraoxatetradecano-14-ila (2,2 g, 4,9 mmol) e azida de sódio (420 mg, 6,3 mmol) em etanol (10 mL) foi submetida a refluxo durante 5 h. A mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente, vertida em água (10 mL), e extraída com diclorometano (50ml x 3) As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para resultar em 14-azido-1-fenil-2,6,9,12-tetraoxatetradecano (1,4 g, em bruto) como um óleo incolor, que foi usado no próximo Etapa sem purificação adicional.Etapa 5: (1-fenil-2,6,9,12-tetraoxatetradecano-14-il)carbamato de terc-butila
[00283] Uma mistura do 14-azido-1-fenil-2,6,9,12-tetraoxatetradecano acima (1,4 g, bruto) e trifenilfosfina (1,7 g, 6,5 mmol) em tetra-hidrofurano (15 mL) e água (0,5 mL) foi agitou-se à temperatura ambiente durante a noite sob atmosfera de azoto. Na mistura reacional foram adicionados trietilamina (0,9 mL, 6,5 mmol) e dicarbonato de terc-butila (1,1 g, 5,2 mmol) a 0oC. A mistura que resultou foi aquecida e mexida à temperatura ambiente por 2h. Os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida, e o resíduo foi repartido entre diclorometano (100 mL) e água (50 mL). As fases orgânicas foram lavadas salmoura (30 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia flash de sílica gel (eluída com 3050% de acetato de etila em hexano) para resultar em 1-fenil-2,6,9,12- tetraoxatetradecano-14-ol (1,2 g, 50% de rendimento por duas etapas) como um óleo incolor.Etapa 6: 2-(2-(2-(3-hidroxipropoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato de terc-butila
[00284] Uma mistura de (1-fenil-2,6,9,12-tetraoxatetradecan-14-il) carbamato de terc-butila (1,2 g, 3 mmol) e paládio sobre carbono (10%, 200 mg) em etanol (50 mL) foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogênio (balão de hidrogênio) O paládio sobre carbono foi removido por filtração e lavado com etanol (20 mL). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar 2-(2-(2-(3-hidroxipropoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato de terc-butila (900 mg, bruto) como um óleo incolor, que foi usado no próximo Etapa sem mais purificação.Etapa 7: 2,2-dimetil-4-oxo-3,8,11,14-tetraoxa-5-azaeptadecano-17-il 4-metilbenzenesulfonato
[00285] A mistura acima Uma mistura do acima 2-(2-(2-(3- hidroxipropoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato de terc-butila (900 mg, bruto), adicionou-se trietilamina (0,6 mL, 4,35 mmol), N, N-dimetilpiridin-4-amina (16 mg, 0,14 mmol) e cloreto de 4-metilbenzeno-1-sulfonila (660 mg, 3,5 mmol) em diclorometano anidro (15 mL) na temperatura ambiente por 3 h. Adicionou-se água (20 mL) para extinguir a reação, e o produto foi extraído com diclorometano (50 mL x 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash de sílica gel (eluída com 20-30% de acetato de etila em hexano) para resultar em 2,2-dimetil-4-oxo- 3,8,11,14-tetraoxa-5-azaheptadecan-17-ila 4-metilbenzenossulfonato (650 mg, 77% de rendimento) como um óleo amarelo claro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1.44 (s, 9H), 1.88-1.95 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 3.29-3.33 (m, 2H), 3.48-3.61 (m, 12H), 4.09-4.15 (m, 2H), 5.04 (brs, 1H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.79 (d, J = 8.0 Hz, 2H).Etapa 8: (2-(2-(2-(3-(4-(3-(4-ciano-3-(trifluorometil)fenil)-5,5-dimetil-4-oxo-2- tioxoimidazolidin-1-il)fenoxi)propoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamato de terc-butila
[00286] Uma mistura de 4-metilbenzenossulfonato de 2,2-dimetil-4-oxo- 3,8,11,14-tetraoxa-5-azaheptadecan-17-ila (115 mg, 0,25 mmol), carbonato de potássio (69 mg, 0,50 mmol) e 4-(3-(4-hidroxifenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2- tioxoimidazolidin-1-il)-2-(trifluorometil)benzonitrila (100 mg, 0,25 mmol) em acetonitrila (5 mL) foi agitado a 80oC por 16 h. A mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente, arrefecida com água(30 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL x 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (30 mL) e salmoura (30 mL), secas sobre sulfato de magnésio, e evapodas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de flash de gel de sílica (eluído com 10 a 30% de acetato de etila em hexano) para proporcionar 2-(2-(2-(3-(4-(3-(4-ciano-3-(trifluorometil)fenil)-5,5-dimetil-4-oxo- 2-tioxoimidazolidin-1-il)fenoxi)propoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato de terc-butila (150 mg, 82% de rendimento) como um óleo amarelo. LC-MS (ES+): m/z 695.40 [MH+], tR = 2.79 min.Etapa 9: 4-(3-(4-(3-(2-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)etoxi) propoxi)fenil)-4,4-dimetil- 5-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il)-2-(trifluorometil)benzonitrila
[00287] Uma mistura de 2-(2-(2-(3-(4-(3-(4-Ciano-3-(trifluorometil)fenil)- 5,5-dimetil-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il)fenoxi)propoxi)etoxi)etoxi)etilcarbamato de terc-butila (150 mg, 0,21 mmol) em diclorometano anidro (2 mL) e ácido 2,2,2-trifluoroacético (1 mL) foi agitado à temperatura ambiente durante 1 h. Os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida, o resíduo foi vertido em bicarbonato de sódio aquoso (1N, 20 mL) e extraído com diclorometano (50 mL x 3). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura (50 ml), secas sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para se obter 4-(3-(4-(3-(2-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)etoxi) propoxi)fenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il)-2-(trifluorometil)benzonitrila (115 mg, em bruto) como um óleo castanho, que foi utilizado no Etapa seguinte sem purificação adicional.Etapa 10. 4-(3-(4-(3-(2-(2-(2-((2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxoisoindolin-4-il)amino)etoxi)etoxi)etoxi)propoxi)fenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il)-2-(trifluorometil)benzonitrila
[00288] Uma solução da 4-(3-(4-(3-(2-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)etoxi) propoxi)fenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il)-2-(trifluorometil)benzonitrila (115 mg, em bruto), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4- fluoro-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3-diona (41 mg, 0,15 mmol) e N-etil-N- isopropilpropan-2-amina (58 mg, 0,44 mmol) em N, N-dimetilformamida (2 mL) foi agitada a 90oC por 16 h. A mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente, arrefecida com água (3 mL) e extraída com acetato de etila (30 mL x 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (30mL x 2)) e salmoura (20 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por pré-TLC para proporcionar 4-(3-(4-(3-(2- (2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxoisoindolin-4-il)amino)etoxi)etoxi)etoxi) propoxi)fenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il)-2- (trifluorometil)benzonitrila (34,5 mg, 27% de rendimento) como um amarelo sólido. LC-MS (ES+): m/z 851.25 [MH+], tR = 2.652 min. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): δ 1.57 (s, 6H), 2.07-2.11 (m, 3H), 2.70-2.90 (m, 3H), 3.46-3.72 (m, 14H), 4.10 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 4.88-4.92 (m, 1H), 6.48-6.49 (m, 1H), 6.91-7.26 (m, 6H), 7.49 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.83-7.85(m, 1H), 7.97-8.02 (m, 3H).
[00289] 11. 4-{[5-(3-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-il]amino}propoxi)pentil]oxi}-N-[trans-3-(3-cloro-4-cianofenoxi)- 2,2,4,4-tetrametilciclobutil]benzamidaEtapa 1: 3-[(5-hidroxipentil)oxi]propanonitrila
[00290] Adicionou-se pentano-1,5-diol (2,98 g, 28,6 mmol) a uma suspensão de hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral, 820 mg, 34,2 mmol) em THF (50 mL). Após a mistura ter sido agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos, foi arrefecida até 0oC, e adicionou-se gota a gota acrilonitrila (1,20 g, 22,8 mmol). A mistura reacional foi mexida a rt por 10 horas. Parte do solvente foi removida sob vácuo e o resíduo foi vertido em água. A mistura foi extraída com DCM (3x). A camada orgânica foi filtrada através de um Biotage Universal Phase Separator e concentrou-se em vácuo. O material em bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica em Teledyne Combiflash ISCO eluindo com MeOH/DCM (0:100 a 3:97) para se obter 3-[(5- hidroxipentil)oxi]propanonitrila (635 mg, 18% de rendimento). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 3.60-3.73 (m, 4H), 3.45-3.55 (m, 2H), 2.60 (dt, J = 4.1, 6.4 Hz, 2H), 2.06 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 1.57-1.69 (m, 4H), 1.43-1.50 (m, 2H).Etapa 2: N-{3-[(5-hidroxipentil)oxi]propil}carbamato de terc-butila
[00291] A uma solução de-[(5-hidroxipentil)oxi]propanonitrila (400 mg, 2,54 mmol) em MeOH (12 mL) em H2O (2,0 mL) foi adicionado Cloreto de Níquel(II) (360 mg, 9,52 mmol) em porção. A mistura foi misturada em ta por 3 h, e então resfriada bruscamente com MeOH (12 mL). A mistura foi filtrada através de celite e lavada com MeOH. O filtrado foi concentrado in vacuo. Para uma solução do produto em bruto acima em THF (5 mL) foram adicionados 6 Ma aq NaOH (9,5 mL) e bicarbonato di-tect-butil (831 mg, 3,81 mmol), a mistura resultante foi misturada à ta por 3 h, e então concentrada in vacuo. O material em bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica em Teledyne Combiflash ISCO eluindo com MeOH /DCM (0:100 a 4:96) para render N-{3-[(5- hidroxipentil)oxi]propil}carbamato de terc-butila (366 mg, 55% de rendimento). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 4,91 (br. s., 1H), 3,66 (br. s., 2H), 3,49 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 3,43 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,24 (q, J = 5,9 Hz, 2H), 1,75 (quin, J = 6,2 Hz, 2H), 1,57-1,65 (m, 5H), 1,41-1,52 (m, 11H).Etapa 3: N-[3-({5-[(4-metilbenzenosulfonil)oxi]pentil}oxi)propil]carbamato de terc-butila
[00292] A uma solução de (3-((5-hidroxipentil)oxi)propil)carbamato de terc-butila (300 mg, 3,88 mmol) em DCM (10 mL) foram adicionados DIPEA (599,3 μL, 3,44 mmol) cloreto de tosil (262,3 mg, 1,38 mmol) e 4- dimetilaminopiridina (14,0 mg, 0,115 mmol). A mistura reacional foi mexida a rt por 20 horas. A reação foi resfriada bruscamente com um bicarbonato de sódio semi-saturado extraído com DCM (2x), filtrado através de um Separador de Fase Universal Biotage, e concentrado em vacuo. O material em bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica em Teledyne Combiflash ISCO eluindo com EtOAc/Heptano (0:100 a 30:70) para obter N-[3-({5-[(4- metilbenzenosulfonil)oxi]pentil}oxi)propil]carbamato de terc-butila (914 mg, 26% de rendimento). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,78 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 4,02 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 3,44 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,35 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,19 (q, J = 5,9 Hz, 2H), 2,44 (s, 3H), 1,64-1,74 (m, 5H), 1,491,54 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,33-1,40 (m, 2H). LC-MS (ES+): m/z 438,19 [MNa+], tR = 2,65 min.Etapa 4: 4-{[5-(3-{[(terc-butoxi)carbonil]amina}propoxi)pentil]oxi}benzoato de metila
[00293] Uma mistura de N-[3-({5-[(4-metibenzenosulfonil)oxi]pentil}oxi)propil]carbamato de terc-butila (340 mg, 0,82 mmol), 4-hidroxibenzoato de metila (117 mg, 0.77 mmol), carbonato de potássio (203 mg, 1.47 mmol) em MeCN (10 mL) foi agitada a 80°C por 24 h. A mistura reacional foi diluída com EtOAc, lavada com uma solução de bicarbonato de sódio semi-satudada (1x), água (2x), salmoura (1x) e então filtrada através do Separador de Fase Universal Biotage. O filtrado foi concentrado em vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica em Teledyne Combiflash ISCO eluindo com EtOAc/Heptano (0: 100 a 50:50) para produzir 4- {[5-(3-{[(terc-butoxi)carbonil]amino}propoxi)pentil]oxi}benzoato de metila (300 mg, 93% de rendimento). LC-MS (ES+): m/z 418,21 [MNa+], tR = 2,74 min.Etapa 5: 4-{[5-(3-{[(terc-butoxi)carbonil]amina}propoxi)pentil]oxi}benzoato de metila
[00294] A uma solução de 4-{[5-(3-{[(terc-butoxi)carbonil]amino}propoxi)pentil]oxi}benzoato (150 mg, 0,38 mmol) em 1: 1 THF/Água/MeOH (6,0 mL, v/v/v) foi adicionado hidróxido de lítio (81,6 mg, 3,41 mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, depois acidificada até um pH 2-3 com HC1 aquoso 6N. A mistura foi concentrada in vacuo para remover a maioria dos solventes, depois diluída com EtOAc, lavada com água (2 x), salmoura (2 x), filtrada através de Biotage Universal Phase Separator, e concentrada in vacuo. O produto em bruto foi levado a um outro nível sem maiores purificações (123mf) LC-MS (ES+): m/z 404,20 [MNa+], tR = 2,40 min.Etapa 6: N-(3-{[5-(4-{[trans-3-(3-cloro-4-cianofenoxi)-2,2,4,4-tetrametilciclobutil]carbamoil}fenoxi)pentil]oxi}propil)carbamato de terc-butila
[00295] A uma solução de ácido 4-{[5-(3-{[(terc- butoxi)carbonil]amino}propoxi)pentil]oxi}benzóico (124 mg, 0,322 mmol), 2- cloro-4-(trans-3-amino-2,2,4,4-tetrametilciclobutoxi)benzonitrila (89,8 mg, 0,322 mmol) em DMF (5 mL) foram adicionados DIPEA (112 μL, 0,65 mmol) e TBTU (155 mg, 0,48 mmol). A mistura resultante for refluxada por 1 hora, então diluída com EtOAc, lavada com água (3x), salmoura (x), filtrada através do Separador de Fase Universal Biotage e concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica em Teledyne Combiflash ISCO eluindo com MeOH/DCM (0: 100 a 5:95) para produzir N-(3-{[5-(3-cloro-4-cianofenoxi)- 2,2,4,4-tetrametilciclobutil]carbamoil}fenoxi)pentil]oxi}propil)carbamato de terc-butila (169 mg, 82% de rendimento). LC-MS (ES+): m/z = 643,32/645,31 [MH+], tR =3,04 min.12. 4-{[5-(3-aminopropoxi)pentil]oxi}-N-[trans-3-(3-cloro-4-cianofenoxi)- 2,2,4,4-tetrametilciclobutil]benzamida
[00296] Para uma solução de carbamato N-(3-{[5-(4-{[trans-3-(3-cloro-4- cianofenoxi )-2,2,4,4-tetrametilciclobutil]carbamoil}fenoxi)pentil]oxi}propil) terc-butílico (124 mg, 0,192 mmol) em DCM (5 mL) adicionou-se ácido trifluoroacético (372 μL, 4,86 mmol) e aqueceu-se a 45o por 1h até a conclusão. A. reação foi então concentrada em vácuo para um sólido e carreada para o próximo etapa sem purificação adicional (104 mg, 99% de rendimento). LC-MS (ES+): m/z = 543,27/545,26 [MH+], tR =2,26 min.13. 4-{[5-(3-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol- 4-il]amino}propoxi)pentil]oxi}-N-[trans-3-(3-cloro-4-cianofenoxi)-2,2,4,4- tetrametilciclobutil]benzamida(Estrutura de Composto #11 mostrada na Tabela 1)
[00297] Para uma solução de 4-{[5-(3-aminopropoxi)pentil]oxi}-N-[trans- 3-(3-cloro-4-cianofenoxi)-2,2,4,4-tetrametilciclobutil]benzamida (30,0 mg, 0,553 mmol) em 1,4-dioxano (2 mL) foram adicionados di-isopropiletilamina (384 μL, 2.21 mmol), 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-fluoro-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1,3- diona (18.3 mg, 0.0664 mmol). A mistura resultante for refluxada por 16 horas, depois diluída com EtOAc, lavada com solução de salmoura semi-saturada (2 x), filtrada através do Separador de Fase Universal Biotage e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica em Teledyne Combiflash ISCO eluindo com MeOH/DCM (0:100 a 7:93) para obter-se 4-{[5- (3-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4- il]amino}propoxi)pentil]oxi}-N-[trans-3-(3-cloro-4-cianofenoxi)-2,2,4,4-tetrametilciclobutil]benzamida (12 mg, 28% de rendimento). LC-MS (ES+): m/z 799,31/801,31 (3:1) [MH+], tR = 2,97 min. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,03 (s, 1H), 7,72 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,58 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7,48 (dd, J = 7,2, 8,4 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,89-6.96 (m, 3H), 6,82 (dd, J = 2.5, 8.8 Hz, 1H), 6,18 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,89 (dd, J = 5,1, 12,1 Hz, 1H), 4,16 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,06 (s, 1H), 4,02 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 3,56 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 3,50 (s, 2H), 3,46-3,48 (m, 1H), 3,41 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,82-2,90 (m, 1H), 2,76-2,81 (m, 1H), 2,67-2,75 (m, 1H), 2,07-2,14 (m, 1H), 1,94 (quin, J = 6,1 Hz, 2H), 1,82-1,87 (m, 2H), 1,67-1,73 (m, 2H), 1,53-1,59 (m, 2H), 1,28 (s, 6H), 1,201,25 (m, 6H).14. 2-((S)-4-(4-clorofenil)-2,3,9-trimetil-6H-tieno [3,2-f] [1,2,4] triazol[4,3- a][1,4]diazepin-6-il)-N-((1S)-1-(4-(5-(3-(2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3- dioxoisoindolin-4-ilamino)propoxi)pirimidina-2-il)fenil)etil)acetamida a.k.a 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra-azatriciclo[8.3.0.02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaena-9-il]-N-[(1S)-1-{4-[5-(3-{ [2-(2,6-dioxopiperidma-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-il]amina}propoxi)pirimidina-2-il]fenil}etil]acetamida
[00298] O composto 40 pode ser preparado pelo esquema de exemplo a seguir:Etapa 1: Preparação de 1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano-2- il)fenil)etilcarbamato de (S)-terc-butila
[00299] A uma solução agitada de 1-(4-bromofenil)etilcarbamato de (S)- terc-butila (6 g, 20,0 mmol), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-octametil-2,2’-bi(1,3,2- dioxaborolano) (7,6 g, 29,9 mmol) e acetato de potássio (5,9 mg, 60,1 mmol) em dioxano (50 mL) adicionou-se [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno dicloropaládio (II) (440 mg, 0,60 mmol) em temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi desgaseificadada e depois reenchida novamente com nitrogênio três vezes. A mistura reacional foi agitada a 90oC durante a noite. Após a refrigeração em temperatura, a mistura reacional foi dividida entre acetato de etila (100ml) e água (50mL). A camada aquosa foi separada e extraída com acetato de etila (50ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para resultar em um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de flash de sílica em gel (eluída com 5-10% de acetato de etila em hexano) para obter 1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)etilcarbamato de (S)- terc-butila (7,4 g, 98% de rendimento) como um óleo amarelo LC/MS (ES+): m/z 370,0 [M+Na+]; tR = 3,165 min; RMN 1H (400MHz, CDCl3): δ 1,26 (s, 12H), 1,34 (s, 12H), 4,78 (br, 1H), 7,30 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7,78 (d, J = 8,0 Hz, 2H); fórmula química: C19H30BNO4; peso molecular: 347,26 Etapa 2: Preparação de benzil 3-hidroxipropilcarbamato
[00300] A uma solução agitada de 3-aminopropan-1-ol (20 g, 266 mmol) e carbonato de potássio (73 g, 529 mmol) em uma mistura de água (50 mL) e tetra- hidrofurano (100 mL) foi adicionado cloroformiato de benzila (68 g, 398 mmol) a 0°C. A mistura foi deixada aquecer em uma temperatura ambiente e agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila (200ml) e água (100mL). A camada orgânica foi coletada, lavada com salmoura (100 mL), seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para resultar em um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de flash em gel de sílica (eluída com 20-50% de acetato de etila em hexano) para resultar em 3-hidroxipropilcarbamato de benzila (26,9 g, 52% de rendimento) como um óleo incolor. LC/MS (ES+): m/z 232,1 [M+Na+]; tR = 1,697 min; RMN 1H (400MHz, CDCl3): δ 1,67-1,73 (m, 2H), 2,56 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 3,33-3,38 (m, 2H), 3,65-3,70 (m, 2H), 5,06 (br, 1H), 5,11 (s, 2H), 7,297,36 (m, 5H); fórmula química: C11H15NO3; peso molecular: 209.24 Etapa 3: Preparação de 3-(benzilaxicarbonilamina)propil 4- metilbenzenesulfonato
[00301] A uma solução agitada de 3-hidroxipropilcarbamato de benzila (26,9 g, 128,6 mmol) em piridina (40 mL) adicionou-se cloreto de 4- toluenossulfonila (73 g, 384 mmol) a 0°C. A mistura foi deixada aquecer em temperatura ambiente e agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila (120ml) e água (80mL). A camada orgânica foi coletada, lavada com ácido hidroclorídrico (1N, 480 mL) salmoura (100 mL), seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para resultar em um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de flash em gel de sílica (eluído com 10-20% de acetato de etila em hexano) para resultar em 3-(benzilaxicarbonilamino)propil-4- metilbenzenossulfonato (38,5 g, rendimento de 82%) como um óleo amarelo. LC/MS (ES+): m/z 386,2 [M+Na+]; tR = 2,582 min; RMN 1H (400MHz, CDCl3): δ 1,85-1,91 (m, 2H), 2,43 (s, 3H), 3,25 (m, 2H), 4,09 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,83 (br, 1H), 5,07 (s, 2H), 7,26-7,39 (m, 7H), 7,78 (d, J = 8,4 Hz, 2H); fórmula química: C18H21NO5S; peso molecular: 363.43 Etapa 4: Preparação de 2-bromopirimidina-5-ol
[00302] A uma solução agitada de 2-cloro-5-metoxipirimidina (10 g, 69,1 mmol) em diclorometano anidro (60 mL) adicionou-se uma solução de tribrometo de boro (34,7 g, 138,5 mmol) em diclorometano (100 mL) a -78°C. A mistura foi deixada aquecer em temperatura ambiente e agitada em temperatura ambiente durante a noite. A reação foi extinta por adição de metanol (80 mL) a gota a - 78°C. O solvente foi removido sob pressão reduzida para resultar em um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de flash em gel de sílica (eluído com 2-5% de metanol em diclorometano anidro) para obter 2- bromopirimidina-5-ol (6,5 g, rendimento de 54%) como um sólido amarelo. RMN 1H (400MHz, DMSO-d6): δ 8.26(s, 2H), 8.49 (s, 1H); fórmula química: C4H3BrN2O; peso molecular: 174,98 Etapa 5: Preparação de benzil 3-(2-bromopirimidina-5- ilaxi)propilcarbamato
[00303] Uma mistura de 2-bromopirimidina-5-ol (5 g, 38,3 mmol), 4- metilbenzenossulfonato de 3-(benzilaxicarbonilamino)propila (13,9 g, 38,2 mmol) e carbonato de potássio (10,6 g, 76,8 mmol) em N,N-dimetilformamida (30 mL) foi agitada a 80°C durante a noite. A mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente, dividida entre acetato de etila (50ml) e água (30mL). A camada aquosa foi separada e extraída com acetato de etila (50ml x 2). A camada orgânica foi lavada com salmoura (80 mL), seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para resultar em um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de flash em gel de sílica (eluída com 2050% de acetato de etila em hexano) para resultar em 3-hidroxipropilcarbamato de benzila (26,9 g, rendimento 52%) como um óleo incolor. LC/MS (ES+): m/z 232,1 [M+Na+]; tR = 1,697 min; RMN 1H (400MHz, CDCl3): δ 1,67-1,73 (m, 2H), 2,56 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 3,33-3,38 (m, 2H), 3,65-3,70 (m, 2H), 5,06 (br, 1H), 5,11 (s, 2H), 7,29-7,36 (m, 5H); fórmula química: C15H16BrN3O3; peso molecular: 366.21 Etapa 6: Preparação de terc-butil (S)-(1-(4-(5-(3- (((benzilaxi)carbonil)amina)propoxi)pirimidina-2-il)fenil)etil)carbamato
[00304] A uma solução agitada de 3-(2-bromopirimidin-5- ilaxi)propilcarbamato de benzila (2,4 g, 6,6 mmol), 1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)etilcarbamato de (S)-terc-butila (2,3 g, 6,6 mmol) e fosfato de potássio tri-hidrato tribásico (3,5 g, 13,3 mmol) em N,N- dimetilformamida (30 mL) e água (5 mL) foi adicionado cloreto de bis (trifenilfosfina) paládio (II) (766 mg, 0,66 mmol) a temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi desgaseificada e depois enchida novamente com nitrogênio três vezes. A mistura reacional foi agitada a 80°C por 4 horas. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila (70ml) e água (30mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (30 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para resultar em um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de flash em gel de sílica (eluída com 5-10% de acetato de etila em hexano) para obter (S)-(1-(4-(5-(3-(((benziloxi)carbonil)amino)propoxi)pirimidin-2- il)fenil)etil)carbamato de terc-butila (7,4 g, rendimento 98%) como um sólido branco LC/MS (ES+): m/z 507,5 [M+H+]; tR = 2,841 min; fórmula química: C28H34N4O5; peso molecular: 506.59 Etapa 7: Preparação de (1S)-1-(4-(5-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3- dioxoisoindolin-4-ilamino)propoxi)pirimidin-2-il)fenil)etilcarbamato de terc- butila
[00305] Uma mistura de (S)-1-(4-(5-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3- dioxoisoindolin-4-ilamino)propoxi)pirimidin-2-il)fenil)etilcarbamato de terc-butila (2,2 g, 4,4 mmol) e hidróxido de paládio sobre carbono (10%, 200 mg) em metanol (5 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante a noite sob atmosfera de hidrogênio (balão de hidrogênio). O catalisador foi removido através de filtração e lavado com metanol (50ml) e então o filtrado combinado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi redissolvido em 1-metil-2- pirrolidinona (20 mL), seguido de adição sequencial de 2-(2,6-dioxopiperidin-3- il)-4-fluoroisoindol-1,3-diona (1,2 g, 4,3 mmol) e N-etil-N-isopropilpropan-2- amina (2,3 g, 17,4 mmol). A mistura reacional foi agitada a 80°C por 2 horas. A mistura reacional foi partilhada entre acetato de etila (30 mL) e água (15 mL). A camada aquosa foi separada e extraída com acetato de etila (25ml x2). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (30 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para resultar em um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de flash em gel de sílica (eluída com 1-2% de metanol em diclorometano) para prover (1S)-1-(4-(5-(3-(2-(2,6- dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxoisoindol-4-ilamina)propoxi)pirimidina-2- il)fenil)etilcarbamato de terc-butila (710 mg, rendimento de 26%) como um óleo amarelo. LC/MS (ES+): m/z 629.3 [M+H+]; tR = 2,660 min; RMN 1H (400MHz, CDCl3): δ1,42-1.48(m, 12H), 2,04-2,07 (m, 2H), 2,11-2,26 (m, 4H), 3,54-3,59 (m, 2H), 4,24-4,26 (m, 2H), 4,90-4,94 (m, 1H), 6,50-6,53 (m, 1H), 6,93-6,95 (m, 1H), 7,11-7,12 (m, 1H), 7,39-7,41 (m, 2H), 7,43-7,48 (m, 3H), 8,08 (br, 1H), 8,28-8,32 (m, 2H), 8,51 (s, 2H); fórmula química: C33H36N6O7 peso molecular: 628.67; Etapa 8: Preparação do 2-((S)-4-(4-clorofenil)-2,3,9-trimetil-6H-tieno [3,2- f][1,2,4]triazol[4,3-a][1,4]diazepin-6-il)-N-((1S)-1-(4-(5-(3-(2-(2,6- dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxoisoindol-4-ilamino)propoxi)pirimidina-2- il)fenil)etil)acetamida a.k.a 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8.3.0.02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1S)-1-{4-[5-(3-{ [2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-il]amino}propoxi)pirimidina-2-il]fenil}etil]acetamida
[00306] Uma mistura de (1S)-1-(4-(5-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3- dioxoisoindol-4-ilamino)propoxi)pirimidina-2-il)fenil)etilcarbamato de terc-butila (710 mg, 1.1 mmol) e ácido 2,2,2-trifluoroacético (7 mL) em diclorometano (7 mL) foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. Os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida. O resíduo foi novamente dissolvido em N,N-dimetilformamida seca (10 mL), seguido de adição sequencial de ácido (S)-2-(4-(4-clorofenil)-2,3,9-trimetil-6H-tieno[3,2-f][1,2,4]triazol[4,3- a][1,4]diazepin-6-il)acético (407 mg, 1,0 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2- amina (730 mg, 5,6 mmol) e HATU (hexafluorofosfato de 2-(7-aza-1H- benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio) (1,3 g, 3,3 mmol) a 0°C. A mistura resultante foi deixada para aquecer em temperatura ambiente e agitada em temperatura ambiente durante 30 min. A mistura reacional foi partilhada entre acetato de etila (40 mL) e água (20 mL). A camada aquosa foi separada e extraída com acetato de etila (25ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (30 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para resultar em um resíduo cru que foi purificado por TLC preparativa (eluída com 7% de metanol em diclorometano) para obter 2-((S)-4-(4- clorofenil)-2,3,9-trimetil-6H-tieno[3,2-f][1,2,4]triazol[4,3-a][1,4]diazepin-6-il)- N-((1S)-1-(4-(5-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-isoindolin-4- ilamino)propoxi)pirimidin-2-il)fenil)etil)acetamida (160 mg, 15,5% de rendimento após duas etapas) como um sólido amarelo. LC/MS (ES+): m/z 911,3 [M+H+]; tR = 2,666 min; RMN 1H (400MHz, CDCl3): δ 1,58 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,66 (s, 3H), 1,94-2,01 (m, 1H), 2,11-2,14 (m, 1H), 2,22-2,23 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,66 (s, 3H), 2,75-2,90 (m, 2H), 3,38-3,43 (m, 1H), 3,55-3,62 (m, 3H), 4,24- 4,26 (m, 2H), 4,58-4,61 (m, 1H), 4,89-4,93 (m, 1H), 5,18-5,22 (m, 1H), 6,48-6,55 (m, 1H), 6,89-6,94 (m, 2H), 7,10-7,12 (m, 1H), 7,32-7,41 (m, 6H), 7,50 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 8.26-8.28 (m, 3H), 8.51 (s, 2H); fórmula química: C47H43ClN10O6S; peso molecular: 911.43
C. Bioensaios de Degradação da Proteína
[00307] Os seguintes bioensaios foram executados para avaliar o nível de degradação de proteína observados em vários tipos de célula usando compostos representativos descritos aqui.
[00308] Em cada bioensaio, as células foram tratadas com quantidades variáveis de compostos abrangidos pela presente descrição, como mostrado na tabela 1. A degradação das seguintes proteínas foi avaliada neste estudo: quinase ligante de TANK 1 (TBK1), receptor de estrogênio α (ERα), bromodomínio contendo a proteína 4 (BRD4), receptor de andrógeno (AR) e c-Myc.
1. Protocolo Ocidental TBK1
[00309] As células Panc02.13 foram adquiridas da ATCC e cultivadas em RPMI-1640 (Gibco), suplementadas com 15% de FBS (ATCC) e 10Units/mL de insulina humana recombinante (Gibco). O controle DMSO e os tratamentos compostos(0.1μM, 0.3μM, e 1μM) foram executados em placas de 12-wells por 16 horas. O agonista de TLR3 Poly I: C (Invivogen; tlrl-pic) foi adicionado para as 3h finais. Células foram colhidas e lisado em tampão RIPA (Tris 50 mM Tris pH8, 150 mM de NaCl, 1% Tx-100, 0,1% de SDS, 0,5% de desoxicolato de sódio) suplementado com inibidores de protease e fosfatase. Lisantes foram clareados em 16.000g por 10 minutos e, sobrenadantes foram separados por SDS- PAGE. O imunoblot foi realizado utilizando protocolos padrão. Os anticorpos usados foram TBK1 (Sinalização de Célula #3504), pIRF3 (abcam #ab76493), e GAPDH (Sinalização de Célula #5174). As bandas foram quantificadas usando um sistema de imagem Biorad ChemiDoc MP.
2. Protocolo Ocidental ERRa
[00310] Células NAMALWAS (ATCC) foram cultivadas em RPMI-1640 (Life Technologies) suplementadas com15% de FBS (Life Technologies). O controle DMSO e as incubações compostas (0.1μM, 0.3μM, e 1μM) foram executados em placas de 24-wells por 16 horas. As células foram colhidas e lisadas com tampão de lise celular (Sinalização de Célula Technologies) contendo inibidores de protease (Thermo Scientific). Lisantes foram clareados em 16.000g por 10 minutos e, sobrenadantes foram separados por SDS-PAGE. O imunoblot foi realizado utilizando protocolos padrão. Os anticorpos usados foram ERRAa (Sinalização de Célula #3504) e GAPDH (Sinalização de Célula #5174). As bandas foram quantificadas usando um sistema de imagem Biorad ChemiDoc MP. 3. Protocolo Ocidental BRD4
[00311] As células VCaP foram adquiridas da ATCC e cultivadas no Meio de Eagle Modificado da Dulbecco (ATCC), suplementado com 10% de FBS (ATCC) e Penicillin/Streptomycin (Life Technologies). O controle DMSO e os tratamentos compostos(0.1μM, 0.3μM, e 1μM) foram executados em placas de 12-wells por 16 horas. Células foram colhidas e lisado em tampão RIPA (Tris 50 mM Tris pH8, 150 mM de NaCl, 1% Tx-100, 0,1% de SDS, 0,5% de desoxicolato de sódio) suplementado com inibidores de protease e fosfatase. Lisantes foram clarificados a 16.000g, e a concentração de proteína foram determinados. A quantidade igual de proteína (20 ug) foi submetida a análise de SDS-PAGE e seguida por imunoblot de acordo com protocolos padrão. Os anticorpos utilizados foram BRD4 (Sinalização de Célula # 13440) e Actina (Sigma # 5441). Os reagentes de detecção foram o substrato Clarity Western ECL (Bio-rad # 170-5060).
4. Protocolo AR ELISA
[00312] As células VCaP foram adquiridas da ATCC e cultivadas no Meio de Eagle Modificado da Dulbecco (ATCC), suplementado com 10% de FBS (ATCC) e Penicillin/Streptomycin (Life Technologies). O controle de DMSO e tratamentos compostos (0,0001 μM-1 μM) foram realizados em placas de 96 WELLS durante 16 h. As células foram colhidas e lisadas com Tampão de Lise celular (Catálogo # 9803) (20 mM Tris-HCL (pH 7,5), 150 mM NaCl, 1 mM Na 2 EDTA, 1 mM de EGTA, 1% de Triton, 2,5 mM de pirofosfato de sódio, 1 mM de B-glicerofosfato, 1 mM de Na3VO4 1 ug/ml leupeptina. Os lisados foram clarificados em 16.000 g por 10 minutos e carregados no PathScan AR ELISA (Sinalização de Célula Catálogo # 12850). O PathScan® Total Androgen Receptor Sandwich ELISA Kit é um ensaio imunoenzimático com enzima em fase sólida (ELISA) que detecta níveis endógenos de proteína receptora total de andrógenos. Um receptor de andrógeno O mAb de coelho foi revestido nos micropoços. Após a incubação com células lisados, o receptor de proteína andrógena é capturado pelo anticorpo revestido. Após a lavagem extensiva, um mAb de detecção de mouse de receptor de androgênio é adicionado para detectar a proteína receptora de androgênio capturada. IgG anti-camundongo, anticorpo ligado a HRP é então utilizado para reconhecer o anticorpo de detecção ligado. O substrato HRP, TMB, é adicionado para desenvolver cor. A magnitude a absorção para o desenvolvimento da cor é proporcional à quantidade do receptor de proteína de androgênio total.
[00313] Os anticorpos no kit são formulações personalizadas específicas para o kit.
5. Ensaio de Protocolo c-Myc ELISA
[00314] Os anticorpos não incluem soluções para formulários personalizados para o kit. As células foram colhidas utilizando tripsina (Gibco # 25200-114), contadas e semeadas a 30 000 células/poço a um volume de 75 μL/poço em RPMI + 10% de FBS em placas de 96 poços. As células foram dosadas com compostos diluídos em 0,1% de DMSO, incubados durante 18 h, depois lavados e lisados em 50 uL de tampão RIPA (Tris 50 mM Tris pH8, 150 mM de NaCl, 1% de Tx-100, 0,1% de SDS, 0,5% de desoxicolato de sódio) suplementado com protease e inibidores da fosfatase. Os lisados foram clarificados a 4000 rpm a 4°C por 10 minutos, em seguida, foram adicionadas alíquotas em uma placa de ELISA de 96 poços de kit ELISA de Novex Human c- myc da Life Technologies Catálogo # KHO2041. Adicionou-se 50 ul de anticorpo de detecção c-Myc em cada poço, as placas foram incubadas em temperatura ambiente durante 3 horas, depois lavadas com tampão de lavagem ELISA. Adicionou-se 100uL do anticorpo secundário IgG-HRP anti-coelho a cada poço e incubou-se em temperatura ambiente durante 30 minutos. As placas foram lavadas com tampão de lavagem ELISA, 100 μL de TMB adicionado a cada poço e depois monitorados a cada 5 minutos para uma mudança de cor. São adicionados 100 μL de solução de parada e as placas são lidas a 450 nm.
D. Resultados
[00315] A tabela 1 fornece os resultados dos dados coletados obtidos de um número representativo de compostos abrangidos pela presente descrição. Em particular, vários tipos de células foram tratados com os compostos listados na tabela 1, que são identificados pela estrutura química, caracterização da espectrometria da massa e nome do composto.
[00316] A Tabela 1 mostra que (A) 10-30% de degradação foi conseguida em células tratadas com 1 uM de Compostos 1, 6-9, 12 e 17; (B) 31-50% de degradação foi conseguida em células tratadas com 1 uM dos Compostos 2-5, 10 e 20; e (C) > 50% de degradação foi alcançado em células tratadas com 1 uM de Compostos 11, 13-16, 18-19, 21 e 22. A Tabela 1 também mostra que (D) Os compostos 24 e 26-35 possuem um valor IC 50 < 50nM, enquanto que (E) Os compostos 23 e 25 possuem um IC 50 sub de > 50nM.
EXEMPLO 2
[00317] Os inibidores de pequenas moléculas têm sido a pedra angular do desenvolvimento de drogas oncológicas e geralmente funcionam inibindo a atividade enzimática (como os inibidores da quinase) ou interferindo nas interações proteína-proteína (como os inibidores de BRD4). Dada a ligação reversível da maioria dos inibidores de pequenas moléculas, muitas vezes são necessárias grandes concentrações sistêmicas de drogas para garantir uma inibição funcional suficiente. Além disso, alcançar e manter um alto nível sistêmico de drogas que é necessário para a eficácia in vivo provou ser desafiador para vários alvos.
[00318] BRD4, um membro da família Bromodomínio e domínio extraterminal (BET), é uma proteína caracterizada por dois bromodomínios (domínio BD) no N-terminal e um domínio extraterminal (domínio ET) no terminal C. Os dois domínios BD reconhecem e interagem com resíduos de acetila-lisina na cauda N-terminal da proteína das histonas. O domínio ET é considerado como servindo como uma função de andaime para recrutar diversos reguladores transcricionais, mas ainda não foi totalmente caracterizado. O BRD4 mostrou estar localizado em regiões super-intensificadoras, que geralmente residem a montante de oncogenes importantes, como c-MYC, Bcl-xL e BCL-6, e desempenham um papel fundamental na regulação de suas expressões. Com base no seu papel na regulação da expressão gênica ao recrutar moduladores de transcrição relevantes para loci genômicos específicos, o BRD4 é uma droga alvo candidato para tratar e/ou prevenir uma série de cânceres humanos, como carcinoma da linha média, leucemia mieloide aguda (AML), mieloma múltiplo (MM), linfoma de Burkitt (BL) e câncer de próstata.
[00319] Foram desenvolvidos vários inibidores de bromodomínio de pequena molécula BET, como JQ1, iBET e OTX15, que mostraram potencial terapêutico em certos modelos pré-clínicos de vários tipos de câncer, incluindo BL. Quase todos os casos BL contêm translocação do gene c-myc que o coloca sob controle de um super-intensificador localizado a montante de IgH, conduzindo assim um nível anormalmente alto de expressão de c-MYC, desenvolvimento e manutenção de tumores. Estudos pré-clínicos com inibidores de BRD4 demonstram sua habilidade para suprimir c-MYC e a proliferação da linha de células BL, os valores IC50 desses inibidores geralmente estão na faixa de 100nM a 1μM.
Materiais e métodos
[00320] Os detalhes do desenho experimental e procedimentos desse estudo são apresentados a seguir:
1. Compostos
[00321] Composto No 14 (Tabela 1) foi sintetizado de acordo com o procedimento discutido acima no Exemplo 1, Síntese #8., este composto, referido como “A825” neste exemplo, tem o seguinte nome e a seguinte estrutura.2-((S)-4-(4-clorofenil)-2,3,9-trimetil-6H-tieno[3,2-f][1,2,4]triazol[4,3-a][1,4]diazepina-6-il)-N-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxoisoindol-4-ilamina)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)fenil)acetamida
[00322] Como mostrado na Figura 2, A825 contém uma porção de ligação BRD4 (um derivado de OTX-15) que é conectada a porção recrutadora de uma ubiquitina ligase E3 (um derivado de pomalidomida) através de um ligante tetraoxatetradecano.
[00323] Os efeitos celulares do A825 foram avaliados em várias linhas de células, e esses efeitos foram comparados a dois conhecidos inibidores de domínio BET, JQ1 e OTX-15. JQ1 é o inibidor de domínio BET mais utilizado em estudos publicados, e OTX-15 é um inibidor de domínio BET em estágios avançados de desenvolvimento clínico.
[00324] A fração de recrutamento Cereblon de A825 também foi avaliada em várias linhas de células e comparada com pomalidomida.
[00325] Inibidores JQ1, OTX-15, e pomalidomida foram sintetizados de acordo com os métodos publicados.
2. Células e Reagentes
[00326] As células NAMALWA, Ramos, CA-46 e DAUDI foram compradas da ATCC e mantidas conforme instruído. Anticorpos contra BRD4 (# E2A7X), c-MYC (# D84C12), PARP (# 46D11) foram adquiridos da Sinalização de Célula Technology. O anticorpo de Actina (# A5441) foi adquirido da SigmaAldrich. Anticorpos secundários (#7074, #7076) foram adquiridos da Sinalização de Célula Technology. MG132 (# M7449) foi adquirido da SigmaAldrich. Carfizomib (#S2853) foi adquirido da Selleck.
3. Análise de Western Blot
[00327] As células cultivadas foram coletadas em tampão de lise contendo HEPES 40 mM (pH 7,4), NaCl 140 mM, EDTA 2,5 mM, 1% NP-40, SDS a 0,1% e coquetel inibidor de protease. Após 10 minutos de centrifugação (14000 rpm), o sobrenadante foi coletado para a determinação da concentração de proteína pelo método BCA e submetido para imunoblot por protocolo padrão. Os resultados de Western blot foram visualizados usando o Substrato de Blot Western ECL da Bio-Rad Clarity no sistema de formação de imagem de Bio-Rad ChemiDocTM MP.
4. RT-PCR
[00328] A extração de RNA foi realizada com Mini Kit de RNA Total Aurum™ (# 732-6820) de Bio-Rad. O cDNA de primeira cadeia do RNA total foi sintetizado com o Kit de Transcrição Reversa de cDNA de Alta Capacidade (# 4368813) da Life Technologies de acordo com as instruções do fabricante. A PCR quantitativa foi realizada usando o Supermix Verde SYBR® Green Universal Bio-rad SsoAdvanced™ (# 172-5271). Os seguintes iniciadores foram usados:5. Ensaio de Proliferação
[00329] Para avaliar o efeito dos inibidores em proliferação, células (50.000/100μl) foram plantadas em placas de cultura de 96 alvéolos seguido pela adição do composto na concentração indicada. Após 72 horas, 100 μL por alvéolo de reagente CellTiter-Glo (CTG) (#G7572 de Promega) foi adicionado e lido no leitor de imagem Cytation 3 da Bio Tek. Crescimento de células relativo foi determinado pelas leituras de ensaio comparativo das células tratadas com células tratadas com DMSO de controle.
6. Determinação de Kd
[00330] Afinidade dos compostos com Bromodomínio 1&2 de BRD4 foi determinada com BROMOscan™ por DiscoverX.
B. Resultados
[00331] Os efeitos celulares de JQ1, OTX-15 e A825 foram avaliados e comparados nos seguintes experimentos.
1. Inibidores de domínio BET de moléculas pequenas levam ao acúmulo significante de proteína BRD4 e supressão de c-MYC ineficaz. a. Acúmulo dependente de dose de BRD4 com tratamento de JQ1 e OTX-15
[00332] Estudos mostraram que as linhas de células do linfoma de Burkitt (BL) respondem aos inibidores BRD4 devido à dependência das linhas de células em oncogene c-myc que é translocalizado e trazido sob controle de super- intensificadores a jusante do BRD4.
[00333] Em um experimento inicial, linhas de células BL variadas (células NAMALWA, Ramos, CA-46 e Daudi) foram tratados com dois inibidores de domínio BET conhecidos (JQ1 e OTX-15) em concentrações variadas para confirmar que esses inibidores foram eficazes na redução e/ou prevenção da degradação de BRD4. Especificamente, células NAMALWA e Ramos foram tratadas com concentrações variadas de JQ1 e OTX-15 (3nm, 10nM, 100nM, 300nM, 1000nM e 3000nM); e células CA-46 e Daudi foram tratadas com 100nM e 300nM de JQ1 e OTX-15. Um conjunto separado de células foram tratadas da mesma maneira, exceto que DMSO foi usado no lugar do inibidor.Todas as células foram tratadas de um dia para o outro com doses crescentes de JQ1 e OTX15. Seguindo o tratamento, lisados celulares foram coletados e analisados por imunoblot por BRD4 e Actina.
[00334] Esses efeitos desses tratamentos foram determinados pela avaliação da quantidade de BRD4 presente nas células dela análise Western blot após tratamento (Figuras 3A, 3B, 3C e 3D).
[00335] Figuras 3A-3D mostram que ambos JQ1 e OTX-15 levam a acúmulo significativo de proteínas BRD4 em uma maneira dependente de dose em todas as linhas de células testados. Esses resultados são consistentes com as observações que resultados de tratamento de JQ1 na regulação de BRD4 em algumas linhas de células de câncer de pulmão Shimamura, T., Chen, Z., Soucheray, M., Carretero, J., Kikuchi, E., Tchaicha, J.H., Gao, Y., Cheng, K.A., Cohoon, T.J., Qi, J., et al. (2013). (J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 1666916674; and K. Klapgroth, et al., British journal of haematology, 149 (2010) 484497).
b. Taxa de acúmulo BRD4 com tratamento de JQ1 e OTX-15
[00336] A taxa na qual BRD4 acumula em linhas de células BL após tratamento com JQ1 e OTX-15 foi também determinada. Especificamente, células NAMALWA e Ramos foram tratadas com 300 nM de cada inibidor por 0 h, 0,5 h, 1,0 h, 2,0 h, 4,0 h, 7,0 h, 24 h, e 48,0 h. Seguindo o tratamento, lisados celulares foram coletados e analisados por imunoblot por BRD4 e Actina.
[00337] A figura 3E mostra que células NAMALWA contêm um nível detectável de BRD4 anterior ao tratamento com qualquer inibidor (0 h).A quantidade de BRD4 presente em células NAMALWA aumentou notavelmente dentro de 30 minutos de tratamento com JQ1 ou OTX-15 e a quantidade de BRD4 continua a aumentar com tempo de tratamento longo (0,5 a 48,0 h).
[00338] A figura 3F mostra que, similares as células NAMALWA, células Ramos também contêm um nível detectável de BRD4 anterior ao tratamento com qualquer inibidor (0 h). Entretanto, BRD4 é acumulado em uma taxa mais devagar em células Ramos em comparação com células NAMALWA. Especificamente, um aumento notável na quantidade de BRD4 foi observado entre cerca de 4,0 horas a cerca de 7,0 horas de tratamento com JQ1 ou OTX-15. Um aumento notável na quantidade de BRD4 em células Ramos foi observado após 24,0 horas de tratamento com ambos inibidores.
[00339] Seletivamente, os resultados mostrados nas Figuras 3E e 3F demonstram que inibidores de BRD4 de moléculas pequenas levam à acúmulo de BRD4 rápida em várias linhas de células de BL com 0.3μm de JQ1 ou OTX15.
c. JQ1 e OTX-15 levam a supressão de c-Myc a jusante
[00340] Como discutido, BRD4 mostrou estar localizado em regiões super-intensificadoras, que geralmente residem a montante de oncogenes importantes, como c-Myc, Bcl-xL e BCL-6. Para determinar se inibidores de domínio BET podem impactar a expressão de oncogenes a jusante, células NAMALWA foram tratadas com concentrações crescentes (3nM, 10nM, 100nM, 300nM, 1000nM e 3000nM) de JQ1 ou OTX-15 de um dia para o outro. Um conjunto separado de células foi tratado da mesma maneira, exceto que DMSO foi usado no lugar do inibidor. Seguindo o tratamento, lisados celulares foram coletados e analisados por imunoblot para c-Myc e Actina.
[00341] A Figura 3G mostra que tratar células com inibidores de domínio BET podem levar à supressão a jusante de c-Myc até certo ponto mas, até em concentrações altas, os inibidores não são capazes de inibir completamente a expressão c-Myc. Especificamente, a Figura mostra que concentrações baixas (3nM to 30nM), os inibidores não têm impacto notável no nível de c-Myc presente nas células. Entretanto, a quantidade de c-Myc foi notavelmente reduzida em células tratadas com 100nM de JQ1 ou OTX-15 e foi reduzido ainda mais em células tratadas com 300nM e 1000nM de JQ1 ou OTX-15. Apesar de ambos JQ1 ou OTX-15 reprimiram níveis de c-Myc significativamente em concentrações entre 100nM a 1000nM, os resultados mostram que doses maiores de qualquer um dos inibidores não parece resultar em redução adicional de c-Myc (Figura 3G, comparar 1000nM com 3000nM).
[00342] Baseado nesses resultados, o tratamento de células com os inibidores de domínio BET JQ1 e OTX-15 levam a uma supressão significativa da proteína a jusante de BRD4 c-Myc em concentrações entre 100nM e 1000nM. Entretanto, maiores concentrações de JQ1 e OTX-15 (acima 1000nM) não levou a supressão adicional da proteína c-Myc além do efeito visto com 1000nM de inibidor. Além disso, nem JQ1 nem OTX-15 foram capazes de suprimir completamente a expressão de c-My, mesmo em concentrações de 3000nM.
d. A supressão de c-Myc por JQ1 e OTX-15 é reversível
[00343] O seguinte estudo foi realizado para determinar se o efeito supressivo da expressão de c-Myc por JQ1 e OTX-15 foi reversível.
[00344] Nesse estudo, células NAMALWA foram tradadas com JQ1 (1000nM) por 24 horas, seguido por três lavagem para remover o inibidor. Células foram ressemeadas e incubadas sem inibidores por 0h, 0,5 h, 1,0 h, 2,0 h, 3,0 h, 4,0 h e 6,0 h. Lisados celulares foram coletadas em pontos no tempo variados e analisados por imunoblot e Actina. Em um experimento de controle paralelo, células NAMALWA foram tratadas na mesma maneira, exceto que DMSO foi usado no lugar de JQ1.
[00345] A Figura 3H mostra que 1000nM de níveis de proteína de c-Myc suprimidos significantemente JQ1 em células NAMALWA (comparar a faixa 0 h da células tratadas com JQ1 com a faixa de 0 h do controle de DMSO), que é consistente com os resultados mostrados nas Figuras 3A a 3D. Figuras 3H também mostra que a supressão de c-Myc por JQ1 foi rapidamente reversível já que os níveis de proteína c-Myc significantemente aumentado entre 1,0 e 2,0 horas após a remoção do inibidor, dentro de 3,0 horas após a remoção do inibidor, a proteína c-Myc retornou ao nível do da amostra de controle.
[00346] Em outro experimento, células Ramos foram tratadas com JQ1 (1000nM), OTX-15 (1000nM) ou DMSO (controle) por 24 horas. Após o tratamento, células foram ou lisadas (para avaliar a supressão c-Myc pelos inibidores) ou lavados para remover o inibidor, replantado, e incubado sem inibidor por 4,0 horas (para avaliar a reversibilidade da supressão de c-Myc). Lisados celulares foram coletados e analisados por imunoblot para c-Myc e Actina.
[00347] Os resultados das células Ramos foram consistentes com aqueles observados nas células NAMALWA. Especificamente, a Figura 3I (painel de baixo) mostra que células Ramos em c-Myc supressor JQ1 e OTX-15 (pistas “JQ1” e “OTX15”), mas esse efeito supressivo foi reversível, como os níveis de c-Myc aumentaram significantemente dentro de 4,0 horas após os inibidores serem removidos (pistas “4Hr após lavagem JQ1” e “4Hr após lavagem OTX- 15”)
[00348] Os resultados desse estudo demonstram que os inibidores BRD4 de molécula pequena (JQ1 e OTX-15) levam a supressão de c-Myc a jusante em linhas de células BL. Entretanto, os inibidores não foram capazes de suprimir completamente a expressão de c-Myc nas células, mesmo em concentrações altas. Adicionalmente, o efeito supressivo da expressão de c-Myc por esses inibidores foi descoberta ser rapidamente reversível, com níveis de proteína aumentando cerca de 2,0 a 4,0 horas após a remoção dos inibidores. Os resultados obtidos nesses estudos são consistentes com descobertas anteriores em AML que c-MYC é reprimido pelo tratamento de JQ1, mas retorna rapidamente sob a remoção de JQ1 (J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674).
2. Sequestro de Ubiquitina Ligase E3 cereblon para criar PROTAC para degradar eficazmente BRD4
[00349] O acúmulo rápido e robusto de BRD4 pelo tratamento por JQ1 e OTX-15, junto com a natureza reversível do inibidor se ligando à BRD4 observado no estudo anterior, pode explicar os efeitos moderados na supressão de c-Myc a jusante e inibição de proliferação observadas em BL e outros cânceres. Para contornar as limitações dos inibidores de BRD4 de molécula pequena, um composto quimera, A825, foi projetado utilizando tecnologia PROTACs (discutido acima e mostrado na Figura 2).
a. Afinidade de ligação de inibidores para bromodomínios de BRD4
[00350] A afinidade de ligação do A825 com bromodomínio 1 (BD1) e bromodomínio 2 (BD2) e BRD4 foi avaliado e comparado às afinidades de ligação de JQ1 e OTX-15 dos mesmos domínios. As afinidades de ligação de cada um desses componentes são resumidas na tabela abaixo.
[00351] Os estudos de afinidade de ligação mostraram que A825 tem uma afinidade de ligação ligeiramente reduzida para BD1 e BD2 de BRD4 em comparação com as de JQ1 e OTX-15.
b. A825 leva à degradação eficaz de BRD4
[00352] O efeito de A825 nos níveis de proteína BRD4 em cultivos celulares de BL foi avaliado.
[00353] Especificamente, células NAMALWA e CA-46 foram tratadas de um dia para o outro com concentrações crescentes (0,3nM, 1,0nM, 3,0nM, 10mM, 30nM, 100nM, 300nM e 1000nM) de A825. Seguindo o tratamento, lisados celulares foram coletados e analisados por imunoblot por BRD4 e Actina.
[00354] As Figuras 4as e 4B mostram que o tratamento de linhas de células de BL com A825 induz degradação de proteína BRD4 completa em concentrações baixas desse composto. Em particular, baseado nos dados mostrados nessa figura, o DC50 (50% de degradação máxima) de BRD4 em células NAMALWA parecem ser alcançadas pelo tratamento de células com 1,0nM ou menos de A825 (4A). Similarmente, o DC50 de BRD4 em células CA- 46 parece ser alcançado pelo tratamento de células com 0,3nM a 1,0nm ou menos de A825 (4B).
[00355] Também, BRD4 parecer ser completamente degradado com ambas linhas de células de BL tratadas com A825 em concentrações variando entre cerca de 3,0nM a cerca de 300nM, como evidenciado pela falta de qualquer banda de proteína notável para BRD4 nessas concentrações de tratamento. Interessantemente, uma quantidade pequena de BRD4 foi observada na faixa contendo os lisados de ambas as linhas de células de BL tratadas com 1000nM de A825, indicando que a degradação de BRD4 por A825 ocorre em uma maneira dependente de dose conformada em sino. Isto é, a degradação completa de BRD4 ocorre dento de uma faixa de concentração crítica de A825, por que a degradação de BRD4 incompleta é observada quando A825 está presente acima ou abaixo dessa faixa crítica.
[00356] Considerando o fato que porções de ligação de BRD4 e Cereblon em A825 tem Kd de 28-90nM e 3 uM dos seus respectivos alvos, isso sugere que A825 age cataliticamente na mediação da degradação de BRD4.
c. A825 leva à degradação rápida de BRD4
[00357] A taxa de degradação de BRD4 em linhas de células após o tratamento com A825 também foi determinado. Neste estudo, células NAMALWA e Ramos foram tratadas com A825 (100nM) por 0 h, 0,5 h, 1,0 h, 2,0 h, 4,0 h, 7,0 h e 24 h. Seguindo o tratamento, lisados celulares foram coletados e analisados por imunoblot por BRD4 e Actina.
[00358] As Figuras 4C e 4D mostram que BRD4 está presente em ambas linhas de células de BL anteriores ao tratamento com A825 (0 h). Níveis de proteína BRD4 diminuem notavelmente dentro de uma hora de tratamento com A825 e os níveis de proteína continuaram a diminuir de forma constante durante o ao longo do período de tratamento de 24 horas. Essa figura também mostra que a degradação de BRD4 por A825 ocorre rapidamente, resultando em mais de 50% de perda de proteína dentro de 2 horas de tratamento de A825.
d. Degradação de BRD4 por A825 é dependente de Cereblon
[00359] Para confirmar que a degradação de BRD4 induzida pelo tratamento de A825 é dependente de Cereblon, um experimento de inibição competitiva foi realizado no qual culturas de células BL foram tratadas com qualquer um de A825, pomalidomida ou uma combinação dos dois compostos. Como discutido acima e mostrado na Figura 2, A825 contém uma parte de recrutamento de Ubiquitina Ligase E3 cereblon, que é um derivado de pomalidomida e, assim sendo, pomalidomida e A825 competem pela ligação de Cereblon. Assim, se a degradação de BRD4pelo tratamento de A825 é dependente de Cereblon, então células tratadas com uma combinação de A825 e pomalidomida devem mostrar uma redução na degradação de BRD4 comparadas com células tratadas com somente A825.
[00360] Neste estudo, células NAMALWA e Ramos foram tratadas de um dia para o outro com várias concentrações de somente A825 (10nM, 100nM e 1000nM), somente pomalidomida (10μM) ou uma combinação de A825 e pomalidomida. Seguindo o tratamento, lisados celulares foram coletados e analisados por imunoblot por BRD4 e Actina.
[00361] As Figuras 4E e 4F mostram degradação de BRD4 completa em células tratadas com 10nM e 100nM de A825, enquanto uma pequena quantidade de BRD4 está presente nas células tratadas com 1000nM de A825, que é consistente com os resultados mostrados nas Figuras 4A e 4B. As Figuras 4E e 4F também mostram que níveis de BRD4 não foram afetados em células tratadas com somente pomalidomina, que foi esperado já que pomalidomida não alveja BRD4 para degradação. Finalmente, as Figuras 4E e 4F mostram que os níveis de proteína BRD4 foram parcialmente resgatados da degradação em células tratadas com uma concentração de A825 e pomalidomida.
[00362] O resultado desse estudo confirma que a degradação de BRD4 por A825 é mediada por Cereblon.
e. Inibidores de Proteassoma previnem a degradação de BRD4 por A825
[00363] Cereblon é uma proteína Ubiquitina Ligase E3 que, sozinha ou em combinação com uma enzima de conjugação de ubiquitina E2, causa o acoplamento de ubiquitina a uma lisina ou uma proteína alvo, e subsequentemente alveja os substratos da proteína específica para degradação pelo proteassoma. Para confirmar que a degradação de BRD4 por A825 ocorre através da via de proteassoma, linhas de células de BL foram tratadas com A825 com e sem inibidores de proteassoma.
[00364] Especificamente, células NAMALWA foram tratadas de um dia para o outro com somente A825 (10nM e 100nM); somente MG132 (5μM); ou somente Carfizomib (5μM); ou uma combinação de A825 com MG132 ou com Carfizomib. Seguindo o tratamento, lisados celulares foram coletados e analisados por imunoblot por BRD4 e Actina.
[00365] A Figura 4G mostra que BRD4 foi completamente degradado com células tratadas com 10nM ou 100nM de somente A825, que é consistente com os resultados mostrados nas Figuras 4A e 4B. As Figuras 4E e 4F também mostram que ambos MG132 e Carfizomib preveniram completamente a degradação de BRD4 induzida por 10nM ou 100nM. Esses resultados confirmam que a degradação de BRD4 por A825 procede de acordo com a via de Cereblon normal, através das proteasomas.
f. Sumário e Discussão
[00366] Tomados juntos, os dados obtidos a partir dos experimentos (a) a (f) acima demonstram que A825 leva à degradação rápida e eficaz de BRD4 em um mecanismo dependente de proteasoma e mediado por Cereblon.
[00367] O perfil de degradação de BRD4 observado nesse estudo apoia o seguinte mecanismo ou modelo de ação, que é ilustrado na Figura 8. Especificamente, em células não tratadas, a expressão de BRD4 não é inibido e funciona sob controle celular regular. Entretanto, quando células são tratadas com concentrações baixas de A825, A825 suficiente está presente na célula para eficazmente se ligarem ao BRD4 em uma extremidade da molécula e Cereblon na outra extremidade para formar um complexo trímero “BRD4-A825-Cereblon” (Figura 8A). Esse complexo trímero “BRD4-A825-Cereblon” impulsiona a degradação de BRD4 eficaz na célula. O complexo trímero é capaz de se formar em células tratadas com A825 dentro de faixa de concentração particular e pode levar a uma depleção completa de BRD4 na célula (Figura 8A). Entretanto, quando as células são tratadas com altas concentrações de A825, formam-se dímeros "BRD4-A825" e "A825-Cereblon" que impedem a formação ideal de trímero, o que resulta em uma degradação de BRD4 menos eficaz (Figura 8B).
3. A825 leva a uma supressão c-MYC mais significativa e duradoura do que os inibidores de moléculas pequenas
[00368] Como discutido acima, o tratamento de células com 100 nM ou mais de inibidores do domínio BET de molécula pequena JQ1 e OTX-15 resultou em uma supressão significativa, mas incompleta, da proteína c-Myc a jusante e que concentrações superiores a 1000 nM não resultaram em uma supressão adicional de c-Myc. Nos estudos a seguir, os efeitos a jusante de A825 na expressão de c-Myc foram comparados com os inibidores de molécula pequena, JQ1 e OTX15.
a. A825 suprime c-Myc em maior extensão do que JQ1 e OTX-15
[00369] Neste estudo, a supressão de c-Myc por A825 foi comparada com JQ1 e OTX-15.
[00370] Especificamente, as células NAMALWA e Ramos foram tratadas durante a noite com várias concentrações de A825 (100 nM, 300 nM e 1000 nM), ou JQ1 (100 nM, 300 nM, 1000 nM, 3000 nM e 10000nM), ou OTX15 (100nM, 300 nM, 1000nM, 3000nM e 10000nM). Seguindo o tratamento, lisados celulares foram coletados e analisados por imunoblot para BRD4 e Actina.
[00371] As Figuras 5A e 5B mostram que JQ1 e OTX-15 conduzem a acúmulo BRD4 robusta e supressão c-Myc significativa, mas incompleta, em ambas as culturas celulares de BL (consistente com a Figura 3G). As Figuras 5A e 5B também mostram que A825 resultou em uma degradação de BRD4 significantes (consistente com as Figuras 4A a 4G) e uma regulação negativa muito mais pronunciada de c-Myc em comparação com JQ1 e OTX-15 em ambas as linhas de células de BL. Notavelmente, A825 conseguiu minimizar a expressão de c-Myc em uma extensão muito maior do que JQ1 e OTX-15 com uma concentração muito menor do composto.
b. A825 suprime a expressão de c-Myc mais que JQ1 e OTX-15
[00372] O seguinte estudo foi realizado para comparar a duração da supressão de c-Myc por A825, JQ1 e OTX-15.
[00373] Especificamente, as células NAMALWA foram tratadas durante 24 horas com A825 (0,1 μM), JQ1 (1,0 uM) e OTX-15 (1,0 uM), seguido de três lavagens para remover os compostos. As células foram ressemeadas em meio fresco e incubadas sem nenhum composto durante 0 h, 2,0 h, 4,0 h, 6,0 h e 24,0 h. Em um experimento de controle paralelo, células foram tratadas da mesma maneira, exceto que DMSO foi usado no lugar do inibidor. Lisados celulares foram coletados e analisados por imunoblot para BRD4, c-Myc e Actina.
[00374] A Figura 5C mostra que o efeito pós-tratamento no BRD4 por A825 (degradação de BRD4) é mantido por muito mais tempo do que o efeito pós-tratamento por JQ1 e OTX- 15 (acúmulo de BRD4). Além disso, o efeito de supressão a jusante pós-tratamento em c-Myc por A825 também é mantido por muito mais tempo com A825 em comparação com JQ1 e OTX-15.Em particular, a Figura mostra que nenhuma proteína BRD4 detectável foi observada nas células 6 horas pós-tratamento com A825.
[00375] Além disso, mesmo 24 horas após o tratamento com A825, apenas uma pequena quantidade de BRD4 foi observada no Western blot, que estava bem abaixo do BRD4 observado na amostra de controle. Em contraste, o acúmulo de BRD4 por JQ1 e OTX-15 foi de curta duração, com o nível de proteína de BRD4 nestas amostras retornando ao nível da amostra de controle em aproximadamente 4 horas após o tratamento. A Figura também mostra que apenas um pequeno nível de proteína c-Myc foi detectado entre 2 horas e 6 horas pós-tratamento com A825 e, mesmo 24 horas pós-tratamento, o nível de c-Myc estava bem abaixo da amostra de controle. Em contraste, a Figura mostra que os níveis de proteína c-Myc se recuperam no nível de controle dentro de cerca de 4 horas após a remoção de JQ1 e OTX15.Portanto, esses resultados demonstram que os efeitos pós-tratamento em BRD4 e c-Myc por A825 são mantidos durante um período de tempo mais longo em comparação com JQ1 e OTX-15.c. A825 suprime a função c-Myc mais longa do que JQ1 e OTX-15. A proteína c-Myc é um fator de transcrição que ativa a expressão de muitos genes, incluindo SLC19A1, que é uma proteína de membrana que é um carreador de folato e está envolvida na regulação das concentrações intracelulares de folato. Nos experimentos anteriores, mostrou-se que A825, JQ1 e OTX-15 suprimem a expressão de c-Myc, e o efeito por A825 foi mais forte e duradouro em comparação com JQ1 e OTX-15. Para investigar ainda mais como A825, JQ1 e OTX-15 podem impactar vias e eventos a jusante de BRD4, as células foram tratadas com cada composto e a expressão do gene SLC19A1 foi avaliada em vários períodos pós-tratamento.
[00376] Especificamente, as células NAMALWA foram tratadas durante 24 horas com A825 (0,1 μM), JQ1 (1,0 uM) e OTX-15 (1,0 uM), seguido de três lavagens para remover os compostos. As células foram ressemeadas em meio fresco e incubadas sem nenhum inibidor durante 0 h, 6,0 h e 24,0 h. Em um experimento de controle paralelo, células foram tratadas da mesma maneira, exceto que DMSO foi usado no lugar do inibidor. Em cada ponto do tempo, o RNA foi extraído dos lisados, transcritos de forma reversa para o cDNA e quantificados por QPCR com iniciadores específicos de SLC19A1. GAPDH também foi quantificado pelo QPCR como um controle interno.
[00377] Consistentes com os resultados para a supressão de proteína c- Myc (mostrado na Figura 5C), as Figuras 5D a 5F mostram que o tratamento com A825 resulta em uma supressão mais substancial e mais duradoura da função c- Myc, conforme determinado pela expressão do gene SLC19A1, em comparação com JQ1 e OTX-15. Em particular, a Figura mostra que a expressão do gene SLC19A1 é significativamente reduzida pelo A825 e que mesmo após 24 horas após o tratamento, a expressão do gene SLC19A1 é muito reduzida em comparação com a amostra de controle. Em contraste, a Figura mostra que a expressão do gene SLC19A1 é reduzida por JQ1 e OTX-15, mas retorna ao nível de tratamento de controle dentro de 6,0 a 24,0 horas.
4. A825 possui supressão de proliferação celular superior em comparação com inibidores de molécula pequena
[00378] As células BL são conhecidas por serem sensíveis aos inibidores BRD4, que suprimem a sinalização c-Myc e induzem a inibição da proliferação celular (JA Mertz, et al., PNAS 108 (2011) 16669-16674). Os efeitos do tratamento A825, JQ1 e OTX-15 sobre a proliferação celular foram avaliados nos seguintes experimentos.
a. A825 suprime a proliferação celular em maior extensão que JQ1 e OTX-15
[00379] Neste estudo, a proliferação de várias linhas de células de BL foi avaliada após o tratamento com A825, JQ1 e OTX-15.
[00380] Especificamente, as linhas de células NAMALWA, Ramos, CA- 46 e Daudi foram semeadas a 50.000 células/100 μl em placas de 96 alvéolos. As células foram tratadas com concentrações crescentes de A825 (100 pM, 300 pM, 1 nM, 3 nM, 10 nM, 30 nM, 100 nM, 300 nM, 1 μM) JQ1 e OTX15 (1 nM, 3 nM, 10 nM, 30 nM, 100 nM, 300 nM, 1 μM, 3 μM, para NAMALWA, JQ1 e OTX-15 foram usados até 10uM) como mostrado em Figuras 6A-6D). Após o tratamento, a proliferação relativa das amostras foi determinada pelo ensaio CTG 72 horas após o tratamento.
[00381] Figuras 6A a 6D mostram que o tratamento de A825 resultou em uma supressão mais pronunciada de proliferação em comparação com JQ1 ou OTX15 em todas as linhas de células de BL testadas e que esse efeito foi alcançado usando concentrações significativamente menores do composto.Interessantemente, o crescimento relativo nas linhas de células Ramos e Daudi tratadas com maiores concentrações de A825 foi próximo a 0,0.
b. A825 suprime a proliferação celular mais que JQ1 e OTX-15
[00382] Neste estudo, a duração do efeito antiproliferação em células NAMALWA foi avaliada após o tratamento com e remoção de A825, JQ1 e OTX-15.
[00383] Especificamente, as células NAMALWA foram tratadas durante 24 horas com A825 (0,1 μM), JQ1 (1,0 uM) e OTX15 (1,0 uM), seguido de três lavagens para remover os compostos. As células foram ressemeadas em meio fresco e incubadas sem nenhum composto durante 0 h, 24,0 h, e 48,0 h. Em um experimento de controle paralelo, células foram tratadas da mesma maneira, exceto que DMSO foi usado no lugar do inibidor. Após o tratamento, a proliferação relativa das amostras foi determinada pelo ensaio CTG.
[00384] A Figura 6E mostra que o efeito de supressão de proliferação por A825 foi mantido por mais de 48 horas após o tratamento em comparação com o de JQ1 ou OTX15. Este resultado é consistente com os resultados experimentais discutidos acima, onde A825 provê efeito duradouro sobre a degradação de BRD4 e repressão de sinalização a jusante (por exemplo, Figuras 5A a 5F).
c. Pomalidomida reduz o efeito antiproliferativo causado pela A825
[00385] Como discutido acima, os resultados em Figura 4C demonstraram que os níveis de proteína BRD4 foram parcialmente resgatados da degradação quando a pomalidomida estava presente durante o tratamento com A825, devido à inibição competitiva de ligação de Cereblon. O seguinte experimento foi realizado para determinar se a pomalidomida pode também prevenir, ou pelo menos, reduzir o efeito antiproliferativo em várias linhas de células de BL por A825.
[00386] Especificamente, as células NAMALWA, CA-46 e Daudi foram tratadas com A825 (10 nM ou 100 nM) sozinhas, ou em combinação com pomalidomida (1,0 uM ou 10,0 uM) durante 72 horas. Em um experimento de controle paralelo, células foram tratadas da mesma maneira, exceto que DMSO foi usado no lugar do inibidor. Após o tratamento, a proliferação relativa das amostras foi determinada pelo ensaio CTG.
[00387] O tratamento de células com 10nM de somente A825 resultou na supressão de proliferação significativa em comparação com as células de controle (Figura 6F), o que é consistente com os resultados apresentados em Figuras 6A a 6E. A Figura 6F mostra que o tratamento com 10nM de somente A825 reduziu o crescimento celular para aproximadamente 40% em células NAMALWA e CA- 46 e para aproximadamente 65% em células Daudi, em relação ao crescimento das células de controle. A pomalidomida reduziu o efeito de antiproliferação causado por 10 nM de A825 de uma maneira dependente da dose. Em particular, o tratamento com pomalidomida 1,0 μM em combinação com 10 nM de A825 resultou em uma redução menos dramática no crescimento celular em relação à amostra de controle (cerca de 80% em células NAMALWA, cerca de 90% em células CA-46 e cerca de 95% em células Daudi). O aumento da concentração de pomalidomida para 10,0 uM durante o tratamento com 10 nM de A825 impediu o efeito antiproliferação em todas as linhas de células testadas em relação à amostra de controle.
[00388] O tratamento de células com 100nM de somente A825 eliminou a proliferação de todos os tipos de células testados em maior medida em comparação com o tratamento com 10nM de somente A825 ( comparar Figura 6G com Figura 6F), o que é consistente com os resultados apresentados nas Figuras 6A a 66E. A Figura 6G mostra que o tratamento com 10nM de somente A825 reduziu o crescimento celular para aproximadamente 25% a 27% em células NAMALWA e Daudi e para aproximadamente 33% em células Daudi, em relação ao crescimento das células de controle. A pomalidomida reduziu o efeito de antiproliferação causado por 100nM de A825 de uma maneira dependente da dose. Em particular, o tratamento com pomalidomida 1,0 μM em combinação com 100nM de A825 resultou em uma redução menos dramática no crescimento celular em relação à amostra de controle (cerca de 55% em todas as linhas de células). O aumento da concentração de pomalidomida para 10,0μM durante o tratamento com 100nM de A825 reduziu adicionalmente o efeito antiproliferação em todas as linhas de células (entre cerca de 70% e cerca de 80% em todas as linhas de células em relação à amostra de controle).
[00389] Como controle adicional, as células BL foram tratadas com pomalidomida para determinar se somente pomalidomida, sem A825, tem efeito sobre a proliferação celular. Especificamente, as células BL foram tratadas com várias concentrações de somente pomalidomida (0,001uM, 0,003uM, 0,01uM 0,03μM, 0,1μM, 0,3μM, 1μM, 3μM, 10μM, como mostrado na Figura 6H) por 72 horas. Em um experimento de controle paralelo, células foram tratadas da mesma maneira, exceto que DMSO foi usado no lugar da pomalidomida. Após o tratamento, a proliferação relativa das amostras tratadas foi determinada pelo ensaio CTG e comparada com o controle DMSO.
[00390] A Figura 6H mostra que tratar células com somente pomalidomida não resultou em um efeito significativo na proliferação dessas linhas de células.
5. A825 possui indução de apoptose superior em comparação com inibidores de molécula pequena
[00391] c-Myc é uma oncoproteína pleiotrópica envolvida em muitas características do câncer, incluindo o ciclo celular, a senescência, a proliferação e a apoptose, dependendo de diferentes entidades tumorais (M. Gabay, et al., Cold Spring Harb Perspect Med. I (2014) 4: a014241). Os experimentos anteriores demonstram um efeito universal na supressão da proliferação em todas as culturas BL testadas após o tratamento com inibidores da molécula pequena BRD4 (JQ1 e OTX-15), bem como A825. Os seguintes experimentos avaliam a extensão em que JQ1, OTX-15 e A825 podem induzir apoptose em linhas de células de BL.
a. A825 leva a um aumento mais significativo na atividade da caspase em comparação com JQ1 e OTX-15
[00392] Várias linhas de células BL foram tratadas com ARV-825 (0,1 μM), ou JQ1 (1,0 μM) ou OTX015 (1,0 μM) ou puromicina (10 mg/ml) como controle positivo da indução da apoptose, durante 24 horas, a atividade da caspase 3/7 foi medida pelo ensaio Caspase 3/7- Glow.
[00393] A Figura 7A mostra que a atividade da caspase varia acentuadamente dependendo tanto da cultura celular BL testada quanto do inibidor utilizado no tratamento. Especificamente, o tratamento de células BL com 100nM de A825 resultou em um aumento estatisticamente significativo na atividade da caspase em comparação às células BL tratadas com JQ1 e OTX-15. O aumento da atividade da caspase foi ainda mais significativo nas células Daudi e NAMALWA em comparação com as células Ramos e CA-56.
[00394] Foi observado aumento da atividade de caspases 3/7 após 24 horas de tratamento de todas as linhas de células de BL com A825, mas não pela dose mais alta de JQ1 e OTX15 (Figura 5A).
b. A825 leva a um aumento mais significativo na clivagem PARP em comparação com JQ1 e OTX-15
[00395] As células Ramos e CA-46 foram tratadas com doses crescentes de ARV-825 (até 1,0 μM), ou JQ1 e OTX015 (até 10,0 μM) durante 48 horas. Os lisados foram coletados e analisados por imunoblot para clivagem PARP com a actina como controle de carga.
[00396] A Figura 7B mostra que nas 48 horas, as células de Ramos demonstraram apoptose significativa com 0,1 uM de tratamento com A825, como evidenciado na clivagem PARP proeminente. Em contraste, doses significativamente maiores de inibidores, JQ1 e OTX15, são necessárias para provocar níveis semelhantes de apoptose nas linhas de células correspondentes. A necessidade de concentrações mais elevadas de JQ1 e OTX-15 é provavelmente devido a estes inibidores que têm uma inibição de BRD4 ineficaz e uma repressão c-Myc a jusante.
[00397] Tomadas em conjunto, essas descobertas proveem evidências fortes de que a degradação de BRD4 mediada por PROTAC é uma estratégia mais eficaz no alvejamento de BRD4 em BLs em comparação à inibidores de pequenas moléculas.
6. Sumário e Discussão
[00398] As células BL são conhecidas por serem sensíveis aos inibidores BRD4, que suprimem a sinalização c-Myc e induzem a inibição da proliferação celular (JA Mertz, et al., PNAS 108 (2011) 16669-16674). Recentemente, houve um progresso significativo no projeto de compostos que eficazmente inibem o BRD4 nas células. No entanto, apesar deste progresso recente, os inibidores de BRD4 que têm benefícios clínicos e funcionais significativos ainda não foram descobertos, o que pode ser parcialmente explicado pelo acumulo pronunciado de BRD4 observada durante o tratamento com inibidores e a natureza reversível/transitória da inibição observada após o tratamento, após o inibidor ser removido.
[00399] Os experimentos realizados neste exemplo demonstram que os inibidores da molécula pequena BRD4, JQ1 e OTX15, levam ao acúmulo significativo de proteína BRD4 em todas as linhas de células de BL testadas. Embora ambos os inibidores tenham suprimido o nível de c-Myc a jusante, a supressão requer alta concentração dos compostos. Além disso, mesmo com altas concentrações desses inibidores, a supressão de c-Myc não estava completa. Os resultados observados neste Exemplo para JQ1 e OTX-15 são consistentes com os resultados obtidos por outros em um painel de linhas de células de câncer de pulmão e próstata (Shimamura, T., Chen, Z., Soucheray, M., Carretero, J., Kikuchi, E., Tchaicha, JH, Gao, Y., Cheng, KA, Cohoon, TJ, Qi, J., et al. (2013). e dados não mostrados). Os resultados obtidos acima sugerem que o acumulo robusto de BRD4, juntamente com a natureza reversível da ligação do inibidor ao BRD4, pode explicar o efeito moderado na supressão de c-Myc a jusante e a inibição de proliferação limitada associada a inibidores de molécula pequena.
[00400] Uma possível explicação para os dados JQ1 e OTX-15 é que a ligação do inibidor com BRD4 resulta em uma mudança conformacional que leva a aumentar sua estabilidade ou dificulta sua acessibilidade à sua maquinaria de degradação natural. Alternativamente, os inibidores de BRD4 podem estar suprimindo um loop de respostas negativas mediado por BRD4 que regula os níveis de proteína BRD4. No entanto, o aumento proeminente do nível de BRD4, juntamente com a natureza reversível da ligação de inibidores, pode explicar parcialmente a ineficiência da inibição de BRD4 e a supressão de MYC a jusante.
[00401] Ambos estudos pré-clínicos e clínicos mostraram que os efeitos dos inibidores de BRD4 foram em grande parte citostáticos, com apoptose limitada a poucas linhas de células e pacientes de fase I. Isso poderia limitar significativamente o benefício potencial de futuros pacientes em concentrações clinicamente possíveis de inibidores de BRD4.
[00402] Outro fenômeno recorrente do desenvolvimento de drogas inibidoras de molécula pequena é o surgimento de mutações em proteínas alvo para mediar resistência ou mesmo para converter de um antagonista para um agonista. Por exemplo, embora a enzalutamida seja eficaz no tratamento do câncer de próstata por inibição do receptor de andrógenos, torna-se um agonista em células tumorais com receptor de androgênio que contém a mutação F876L. Assim, os pacientes com câncer de próstata cujos tumores contêm ARF876L pré- existente ou induzido pelo tratamento não se beneficiarão com o tratamento com enzalutamida. Em contraste, a degradação de alvo mediada por PROTAC irá evitar essas armadilhas e fornecer uma estratégia poderosa de alvejamento eficaz.
[00403] Para contornar as limitações de inibidores de BRD4 de molécula pequena, uma molécula de quimera, A825, foi projetada contactando uma porção de ligação de BRD4 de molécula pequena a uma porção de ligação de Cereblon de ligase E3 através da tecnologia PROTAC.
[00404] Os experimentos acima mostram que o A825 induziu a degradação de BRD4 rápida e eficaz ao recrutar ativamente o Cereblon ligase E3 para BRD4, que direciona o BRD4 para a maquinaria de degradação do proteasoma. Estes resultados também demonstram que A825 leva a uma supressão mais pronunciada na expressão e função c-Myc a jusante, proliferação celular e indução de apoptose em comparação aos inibidores da molécula pequena BRD4.
[00405] Os efeitos funcionais melhorados do degradador de BRD4 sobre inibidores podem ser parcialmente atribuídos à supressão mais completa e prolongada em c-MYC, uma oncoproteína acionadora em BLs. Também é possível que o BRD4 possua funções "chaperona", pois é uma proteína grande com muitos parceiros de ligação que ainda precisam ser identificados e elucidados. Compreensivelmente, a eliminação do BRD4 provocaria um efeito mais profundo do que a simples inibição da sua ligação aos parceiros que contêm a acetil-lisina. Uma comparação de fenótipos de BRD4 nocaute ou knockdown (como por CRISPR e shRNAs) com a inibição de BRD4 por inibidores resolveria esta questão, no entanto, está fora do escopo deste estudo.
[00406] A afinidade de ligação de OTX15 e Pomalidomida ao seu respectivo alvo, BRD4 e Cereblon, são ~ 10 nM e ~ 3 uM, respectivamente. A825, que é baseado nestes dois ligantes, atinge um DC50 para BRD4 abaixo de 1 nM. Isso sugere fortemente que o BRD4 PROTAC possui características catalíticas e abre enormes oportunidades no desenvolvimento de degradadores funcionais que consistem em ligantes alvo com afinidade subótima, sem função conhecida. Portanto, muitos alvos "difíceis", que geralmente não possuem cavidades de ligantes naturais, podem tornar-se “submetida à formação de droga” com degradação mediada por PROTAC.
[00407] Em resumo, a presente descrição provê uma nova estratégia para alvejar eficazmente o BRD4 criando o degradador de BRD4 potente através da tecnologia PROTAC. Além disso, abre espaço para uma nova classe de moléculas de drogas que recrutam ativamente a ligase E3 para alvejar a proteína patológica específica para a degradação, tornando assim muitos alvos “difíceis” através de abordagens tradicionais de molécula pequena “submetida à formação de droga”.
7. Aplicabilidade Industrial
[00408] Uma nova molécula bifuncional, que contém uma porção de recrutamento de BRD4 e uma porção de recrutamento de Ligase Cereblon E3, através da tecnologia PROTAC, é descrita. O A825 degrada ativamente o BRD4, levando a supressão de MYC a jusante significativa e persistente e a supressão robusta de proliferação celular e a indução de apoptose em BLs. A825 representa uma nova estratégia para alvejar eficazmente o BRD4, que surge como um alvo promissor em múltiplos cânceres. O A825 representa um exemplo de que a degradação da proteína mediada por PROTAC provê uma estratégia promissora para alvejar as proteínas patológicas "não submetidas à formação de droga" pelas abordagens tradicionais.
[00409] O teor de todas as referências, patentes, pedidos de patentes pendentes e patentes publicadas, citados ao longo deste pedido são expressamente incorporados por referência.
[00410] Aqueles versados na técnica reconhecerão, ou serão capazes de verificar usando não mais que experimentação de rotina, muitas equivalentes às formas de realização específicas da invenção aqui descritas. Tais equivalentes pretendem ser abrangidas pelas seguintes reivindicações. Entende-se que os exemplos e formas de realização detalhadas aqui descritas são fornecidas a título de exemplo apenas para fins ilustrativos e, de modo algum, são consideradas como limitativas para a invenção. Várias modificações ou alterações à luz das mesmas serão sugeridas aos versados na técnica e estão incluídas no espírito e no âmbito desta aplicação e são consideradas dentro do escopo das reivindicações anexas. Por exemplo, as quantidades relativas dos ingredientes podem ser variadas para otimizar os efeitos desejados, podem ser adicionados ingredientes adicionais e/ou ingredientes similares podem ser substituídos por um ou mais dos ingredientes descritos. Características vantajosas adicionais e funcionalidades associadas aos sistemas, métodos e processos da presente invenção serão evidentes a partir das reivindicações anexas. Além disso, os versados na técnica reconhecerão, ou serão capazes de verificar usando não mais que experimentação de rotina, muitas equivalentes às formas de realizações específicas da invenção aqui descritas. Tais equivalentes pretendem ser abrangidos pelas seguintes reivindicações.

Claims (7)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir do grupo que consiste em: 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca- 2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1S)-1-(4-{5-[2-(2-{[2-(2,6-dioxopiperidina- 3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)etóxi]pirimidina-2-il}fenil)etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-{2-[2-(2-{[2-(2, 6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)etóxi]etil}acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1R)-1-{4-[2-(2 -{[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)etóxi]fenil}etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[2-(2-{[2-(2,6-di oxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1S)-1-{4-[5-(3 -{[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}propoxi)pirimidina-2-il]fenil}etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1S)-1-{4-[3-(2 -{[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)propóxi]fenil}etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1S)-1-{4-[2-(2 -{[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1 H-isoindol-4-il] amina} etoxi)etóxi] fenil} etil] acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-tiimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(4-{[2-(2,6-diox opiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}butil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(2-{[2-(2,6-diox opiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(5-{[2-(2,6-diox opiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}pentil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(3-{[2-(2,6-diox opiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}propil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(4-{[2-(2,6-diox opiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-il]amina}butil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1S)-1-{4-[2-(2 -{[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)etóxi]-3-fluorofenil}etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[4-({1-[2-(3-met il-2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]-4,7,10-trioxa-1-azadodecano-12-il}oxi)fenil]acetamid a; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[4-({1-[2-(1-met il-2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]-4,7,10-trioxa-1-azadodecano-12-il}oxi)fenil]acetamid a; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1R)-1-[3-(3-{[ 2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}propoxi)fenil]etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(3S)-1-{4-[(2-{ [2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etil)amina]benzoil}pirrolidina-3-il]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[2-(2-{[3-(2,6-di oxopiperidina-3-il)-2-metil-4-oxo-3,4-di- hidroquinazolina-5-il]amina}etoxi)etil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[3-(3-{[2-(2,6-di oxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}propoxi)propil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(3S)-1-[4-(2-{[ 2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)benzoil]pirrolidina-3-il]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(4-{2-[2-(2-{[3- (2,6-dioxopiperidina-3-il)-2-metil-4-oxo-3,4-di- hidroquinazolina-5-il]amina}etoxi)etóxi]etóxi}fenil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-tiimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-(5-{[2-(2,6-diox opiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}pentil)acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[3-(3-{[3-(2,6-di oxopiperidina-3-il)-2-metil-4-oxo-3,4-di- hidroquinazolina-5-il]amina}propoxi)propil]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(3S)-1-[4-(2-{[ 2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)benzoil]pirrolidina-3-il]acetamida; 2-[(9S)-7-(4-clorofenil)-4,5,13-trimetil-3-tia-1,8,11,12-tetra- azatriciclo[8,3,0,02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaeno-9-il]-N-[(1R)-1-[3-(2-{[ 2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1-oxo-2,3-di- hidro-1H-isoindol-4-il]amina}etoxi)fenil]etil]acetamida; 4-(4-{[(5Z)-3-{1-[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-d i- hidro-1H-isoindol-4-il]-4,7,10,13-tetraoxa-1-azapentadecano-15-il}-2,4-dioxo -1,3-tiazolidina-5-ilideno]metil}-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitril a; 4-(4-{[(5Z)-3-{1-[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-d i- hidro-1H-isoindol-4-il]-4,7,10-trioxa-1-azadodecano-12-il}-2,4-dioxo-1,3-tiaz olidina-5-ilideno]metil}-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrila; 4-(4- {[(5Z)-3- {1 - [2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3 -d i- hidro-1H-isoindol-4-il]-4,7,10,13,16-pentaoxa-1-azaoctadecano-18-il}-2,4-di oxo-1,3-tiazolidina-5-ilideno]metil}-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benzon itrila; e 4-(4-{[(5Z)-3-{1-[2-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1,3-dioxo-2,3-d i- hidro-1H-isoindol-4-il]-4,7,10,13,16,19-hexaoxa-1-azahenicosano-21-il}-2,4- dioxo-1,3-tiazolidina-5-ilideno]metil}-2-metoxifenoxi)-3-(trifluorometil)benz onitrila, incluindo formas de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
2. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade eficaz de um composto como definido na reivindicação 1.
3. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade eficaz de um composto como definido na reivindicação 1, e um carreador farmaceuticamente aceitável, aditivo e/ou excipiente.
4. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um agente bioativo adicional, preferencialmente um agente anticancerígeno, mais preferencialmente um agente anticancerígeno selecionado a partir do grupo que consiste em everolimus, trabectedina, abraxano, pazopanibe, enzastaurina, vandetanibe, um inibidor de aurora quinase, um inibidor da checkpoint 1 ou 2, um inibidor de quinase de aderência focal, pemetrexede, erlotinibe, dasatanibe, nilatinibe, decatanibe, panitumumabe, amrubicina, oregovomabe, nolatrexede, batabulina, ofatumumabe, zanolimumabe, edotecarina, tetrandrina, rubitecano, tesmilifeno, oblimerseno, ticilimumabe, ipilimumabe, gossipol, cilengitida, gimatecano, lucantona, neuradiabe, vitespan, talampanel, atrasentana, romidepsina, sunitinib, 5-fluorouracila, vorinostato, etoposido, gemcitabina, doxorubicina, doxorrubicina lipossomal, 5'-deoxi-5-fluorouridina, vincristina, temozolmida, seliciclibe, capecitabina, L-Ácido glutâmico, N-[4-[2-(2-amina- 4,7-di-hidro-4-oxo-1H-pirrol[2,3- d ]pirimidina-5-il)etil]benzoil]-, sal dissódico, heptahidrato, camptotecina, tamoxifeno, citrato de toremifeno, anastrazol, exemestano, letrozol, DES(dietilstilbestrol), estradiol, estrogênio, estrogênio conjugado, bevacizumabe, 3-[5-(metilssulfonilapiperadinemetil)- indolilj-quinolona, vatalanibe, o sal acetato de [D- Ser(Bu t ) 6,Azgli 10 ] (piro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro- Azgli-NH2 acetato [C59H84N18Oi4-(C2H4O2)X onde x = 1 a 2,4], acetato de goserelina, acetato de leuprolida, pamoato de triptorelina, acetato de medroxiprogesterona, caproato de hidroxiprogesterona, acetato de megestrol, raloxifeno, bicalutamida, flutamida, nilutamida, acetato de megestrol, erlotinibe, lapatanibe, canertinibe, erbitux, Ionafarnibe, tipifarnibe, amifostina, ácido hidroxâmico analítico de suberoíla, ácido valproico, tricostatina A, sorafenibe, aminaglutetimida, arnsacrina, anagrelida, L-asparaginase, vacina de Bacilo Calmette-Guerin (BCG), adriamicina, bleomicina, buserelina, busulfano, carboplatina, carmustina, clorambucila, cisplatina, cladribina, clodronato, ciproterona, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, daunorubicina, dietilstilbestrol, epirubicina, fludarabina, fludrocortisona, fluoximesterona, flutamida, gleevac, gemcitabina, hidroxiureia, idarubicina, ifosfamida, imatiniba, leuprolida, levamisol, lomustina, mecloretamina, melfalana, 6-mercaptopurina, mesna, metotrexato, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, nilutamida, octreotida, oxaliplatina, pamidronato, pentostatina, plicamicina, porfimer, procarbazina, raltitrexed, rituximabe, streptozocina, teniposida, testosterona, talidomida, tioguanina, tiotepa, tretinoina, vindesina, 13-cis-ácido retinoico, fenilalanina mostarda, mostarda de uracila, estramustina, altretamina, floxuridina, 5- deoxiuridina, arabinosídeo de citosina, 6-mecaptopurina, deoxicoformicina, calcitriol, valrubicina, mitramicina, vinblastina, vinorelbina, topotecano, razoxina, marimastat, neovastat, squalamina, endostatina, interleucina 12, angiostatina, vitaxina, droloxifeno, idoxifeno, espironolactona, finasterida, cimitidina, trastuzumabe, denileucina diftóxica, gefitinibe, bortezimibe, paclitaxel, paclitaxel livre de cremóforo, docetaxel, epitilona B, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifena, pipendoxifeno, arzoxifeno, fulvestrant, acolbifeno, lasofoxifeno, idoxifeno, topotecano, rapamicina, 40-O-(2-hidroxietil)- rapamicina, temsirolimus, wortmanina, darbepoetina, eritropoietina, fator estimulante de colônia de granulócitos, zolndronato, prednisona, cetuximabe, fator estimulante de colônia de macrofaga de granulócitos, histrelina, interferona pegilada alfa-2a, interferona alfa-2a, interferona pegilada alfa-2b, interferona alfa-2b, azacitidina, lenalidomida, gemtuzumabe, hidrocortisona, interleucina 11, dexrazoxano, alemtuzumabe, todo-trans-ácido retinoico, cetoconazol, interleucina 2, megestrol, globulina imunológica, mostarda de nitrogênio, metilprednisolona, ibritgumomabe tiuxetano, andrógenos, decitabina, hexametilmelamina, bexaroteno, tositumomabe, trióxido de arsênio, cortisona, editronato, mitotano, ciclosporina, lipossomal daunorubicina, Edwina-asparaginase, strontium 89, casopitante, netupitante, palonosetrona, aprepitante, difen-hidramina, hidroxizina, metoclopramida, lorazepam, alprazolam, haloperidol, droperidol, dronabinol, dexametasona, metilprednisolona, proclorperazina, granisetrona, ondansetrona, dolasetrona, tropisetrona, pegfilgrastim, eritropoietina, epoetina alfa, darbepoetina alfa e misturas dos mesmos.
5. Método IN VITRO para induzir degradação de uma proteína alvo em uma célula, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma quantidade eficaz de um composto como definido na reivindicação 1 à célula, em que o composto efetua degradação da proteína alvo.
6. Uso de uma composição como definida na reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que é para manufatura de um medicamento para o tratamento ou alívio de pelo menos um sintoma de câncer em um paciente em necessidade do mesmo.
7. Uso de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o câncer é carcinoma de célula escamosa, carcinoma basocelular, adenocarcinoma, carcinomas hepatocelulares, e carcinomas de células renais, câncer de bexiga, intestino, mama, colo do útero, cólon, esôfago, cabeça, rim, fígado, pulmão, pescoço, ovário, pâncreas, próstata e estômago; leucemias; linfomas benignos e malignos, particularmente linfoma de Burkitt e linfoma de não Hodgkin; melanomas benignos e malignos; doenças mieloproliferativas; mieloma múltiplo, sarcomas, incluindo sarcoma de Ewing, hemangiossarcoma, sarcoma de Kaposi, lipossarcoma, miossarcomas, neuroepitelioma periférico, sarcoma sinovial, gliomas, astrocitomas, oligodendrogliomas, ependimomas, gliobastomas, neuroblastomas, ganglutiromas, gangliogliomas, meduloblastomas, tumores de células pineal, meningiomas, sarcomas meníngeos, neurofibromas, e Schwannomas; câncer de intestino, câncer de mama, câncer de próstata, câncer cervical, câncer de útero, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer testicular, câncer de tireoide, astrocitoma, câncer de esôfago, câncer de pâncreas, câncer de estômago, câncer de fígado, câncer de cólon, melanoma; carcinossarcoma, doença de Hodgkin, tumores ou teratocarcinomas de Wilms, Leucemia Linfoblástica Aguda de Linhagem T (T-ALL), Linfoma Linfoblástico de Linhagem T (T- LL), Linfoma Periférico de Célula T, Leucemia de Célula T Adulta, Leucemia Linfoblástica Aguda de Célula B Precursora, Linfomas de Célula B Precursora, Linfoma de Célula B Grande, Linfoma de Burkitts, Leucemia Linfoblástica Aguda de Célula B, Leucemia Linfoblástica Aguda cromossomo Filadélfia positivo e Leucemia Mielóide Mrônica cromossomo Filadélfia positivo.
BR112017025975-3A 2015-06-04 2016-06-03 Composto, composição, método in vitro para induzir degradação de uma proteína alvo em uma célula, e, uso de uma composição BR112017025975B1 (pt)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562171090P 2015-06-04 2015-06-04
US62/171,090 2015-06-04
US14/792,414 2015-07-06
US14/792,414 US20160058872A1 (en) 2014-04-14 2015-07-06 Imide-based modulators of proteolysis and associated methods of use
PCT/US2016/035874 WO2016197032A1 (en) 2015-06-04 2016-06-03 Imide-based modulators of proteolysis and associated methods of use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BR112017025975A2 BR112017025975A2 (pt) 2018-08-14
BR112017025975B1 true BR112017025975B1 (pt) 2023-12-12

Family

ID=57441827

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112017025975-3A BR112017025975B1 (pt) 2015-06-04 2016-06-03 Composto, composição, método in vitro para induzir degradação de uma proteína alvo em uma célula, e, uso de uma composição

Country Status (12)

Country Link
EP (1) EP3302572B3 (pt)
JP (1) JP6873433B2 (pt)
KR (2) KR20240119196A (pt)
CN (1) CN108136044B (pt)
AU (2) AU2016270442C1 (pt)
BR (1) BR112017025975B1 (pt)
CA (1) CA2988414C (pt)
ES (1) ES2862469T3 (pt)
HU (1) HUE054149T2 (pt)
MX (1) MX2017015605A (pt)
RU (1) RU2704807C9 (pt)
WO (1) WO2016197032A1 (pt)

Families Citing this family (116)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180035828A (ko) * 2015-07-10 2018-04-06 아비나스 인코포레이티드 단백질 분해의 mdm2계 조절인자 및 관련된 이용 방법
EP3892272B1 (en) 2016-04-22 2024-07-24 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bifunctional molecules for degradation of egfr and methods of use
CN109153675B (zh) * 2016-04-22 2023-05-02 达纳－法伯癌症研究所公司 细胞周期蛋白依赖性激酶9通过cdk9抑制剂与e3连接酶配体的缀合的降解及使用方法
CN109562107A (zh) 2016-05-10 2019-04-02 C4医药公司 用于靶蛋白降解的杂环降解决定子体
CN109641874A (zh) 2016-05-10 2019-04-16 C4医药公司 用于靶蛋白降解的c3-碳连接的戊二酰亚胺降解决定子体
WO2017197036A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 C4 Therapeutics, Inc. Spirocyclic degronimers for target protein degradation
CN109790143A (zh) 2016-05-10 2019-05-21 C4医药公司 用于靶蛋白降解的胺连接的c3-戊二酰亚胺降解决定子体
CN110087680B (zh) 2016-08-19 2024-03-19 百济神州有限公司 使用包含btk抑制剂的组合产品治疗癌症
PL3660004T3 (pl) 2016-10-11 2023-10-02 Arvinas Operations, Inc. Związki i sposoby do ukierunkowanej degradacji receptora androgenowego
JP2020505327A (ja) * 2016-12-23 2020-02-20 アルビナス・オペレーションズ・インコーポレイテッドＡｒｖｉｎａｓ Ｏｐｅｒａｔｉｏｎｓ， Ｉｎｃ． Ｅｇｆｒタンパク質分解標的化キメラ分子およびその関連する使用方法
EP3558994A4 (en) * 2016-12-23 2021-05-12 Arvinas Operations, Inc. COMPOUNDS AND METHODS FOR TARGETED DEGRADATION OF RAPIDLY ACCELERATED FIBROSARCOMA POLYPEPTIDES
CN107056772A (zh) * 2017-01-23 2017-08-18 中国药科大学 基于cereblon配体诱导BET降解的双功能分子及其制备和应用
CN107056771A (zh) * 2017-01-23 2017-08-18 中国药科大学 Bromodomain蛋白二价抑制剂及其制备方法和应用
CN106749513A (zh) * 2017-01-23 2017-05-31 中国药科大学 基于vhl配体诱导bet降解的双功能分子及其制备和应用
AU2018211975B2 (en) * 2017-01-26 2022-05-26 Arvinas Operations, Inc. Modulators of estrogen receptor proteolysis and associated methods of use
KR20190116315A (ko) * 2017-01-31 2019-10-14 아비나스 오퍼레이션스, 인코포레이티드 세레블론 리간드 및 이를 포함하는 이작용성 화합물
JP7273713B2 (ja) 2017-02-08 2023-05-15 ダナ－ファーバー キャンサー インスティテュート，インコーポレイテッド ヘテロ二官能性化合物を用いた調整可能な内因性タンパク質分解
US10787443B2 (en) 2017-04-28 2020-09-29 Zamboni Chem Solutions Inc. RAF-degrading conjugate compounds
WO2018237026A1 (en) 2017-06-20 2018-12-27 C4 Therapeutics, Inc. N / O-LINKED DEGRONS AND DEGRONIMERS FOR DEGRADATION OF PROTEINS
WO2019001417A1 (en) 2017-06-26 2019-01-03 Beigene, Ltd. IMMUNOTHERAPY FOR HEPATOCELLULAR CARCINOMA
CA3069181A1 (en) * 2017-07-12 2019-01-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compounds for tau protein degradation
EP3679027A1 (en) 2017-09-04 2020-07-15 C4 Therapeutics, Inc. Dihydrobenzimidazolones
EP3679028A1 (en) 2017-09-04 2020-07-15 C4 Therapeutics, Inc. Dihydroquinolinones
CN118108706A (zh) 2017-09-04 2024-05-31 C4医药公司 戊二酰亚胺
US11358948B2 (en) 2017-09-22 2022-06-14 Kymera Therapeutics, Inc. CRBN ligands and uses thereof
IL295603B2 (en) 2017-09-22 2024-03-01 Kymera Therapeutics Inc Protein compounds and their uses
WO2019099868A2 (en) 2017-11-16 2019-05-23 C4 Therapeutics, Inc. Degraders and degrons for targeted protein degradation
CN111801334B (zh) 2017-11-29 2023-06-09 百济神州瑞士有限责任公司 使用包含btk抑制剂的组合治疗惰性或侵袭性b-细胞淋巴瘤
AU2018396142A1 (en) 2017-12-26 2020-07-16 Kymera Therapeutics, Inc. IRAK degraders and uses thereof
EP3737666A4 (en) * 2018-01-12 2022-01-05 Kymera Therapeutics, Inc. PROTEIN DEGRADANTS AND USES THEREOF
EP3737675A4 (en) 2018-01-12 2022-01-05 Kymera Therapeutics, Inc. CRBN LIGANDS AND THEIR USES
US11472799B2 (en) * 2018-03-06 2022-10-18 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Serine threonine kinase (AKT) degradation / disruption compounds and methods of use
EP3773576A4 (en) 2018-03-26 2021-12-29 C4 Therapeutics, Inc. Cereblon binders for the degradation of ikaros
CN110317192A (zh) * 2018-03-28 2019-10-11 上海美志医药科技有限公司 一类具有降解雄激素受体活性的化合物
CN110357889B (zh) * 2018-04-09 2022-03-15 上海科技大学 蛋白降解靶向化合物、其抗肿瘤应用、其中间体及中间体应用
CN118480030A (zh) * 2018-04-13 2024-08-13 阿尔维纳斯运营股份有限公司 小脑蛋白配体和包括其的双官能化合物
WO2019204354A1 (en) 2018-04-16 2019-10-24 C4 Therapeutics, Inc. Spirocyclic compounds
EP3578561A1 (en) 2018-06-04 2019-12-11 F. Hoffmann-La Roche AG Spiro compounds
CN112533918A (zh) * 2018-06-13 2021-03-19 安菲斯塔治疗有限责任公司 用于靶向Rpn11的双功能分子
WO2019241766A1 (en) * 2018-06-15 2019-12-19 City Of Hope Oligonucleotide-based proteolysis targeting chimera
WO2019242625A1 (zh) * 2018-06-20 2019-12-26 上海科技大学 制备来那度胺衍生物的方法
AU2019288740A1 (en) * 2018-06-21 2021-01-14 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai WD40 repeat domain protein 5 (WDR5) degradation / disruption compounds and methods of use
EP3817745A4 (en) * 2018-07-05 2022-04-06 Icahn School of Medicine at Mount Sinai PROTEIN TYROSINE KINASE 6 (PTK6) DEGRADATION/DISPUTED COMPOUNDS AND METHODS OF USE
WO2020010177A1 (en) 2018-07-06 2020-01-09 Kymera Therapeutics, Inc. Tricyclic crbn ligands and uses thereof
US20220348556A1 (en) * 2018-07-06 2022-11-03 Kymera Therapeutics, Inc. Protein degraders and uses thereof
CR20210001A (es) 2018-07-10 2021-04-19 Novartis Ag Derivados de 3-(5-hidroxi-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y su uso en el tratamiento de trastornos dependientes de la proteina con dedos de zinc 2 de la familia ikaros (1kzf2)
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
WO2020014489A2 (en) * 2018-07-11 2020-01-16 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Dimeric immuno-modulatory compounds against cereblon-based mechanisms
JP7515175B2 (ja) 2018-07-31 2024-07-12 ファイメクス株式会社 複素環化合物
WO2020051235A1 (en) 2018-09-04 2020-03-12 C4 Therapeutics, Inc. Compounds for the degradation of brd9 or mth1
CN111018857B (zh) * 2018-10-09 2023-06-02 嘉兴优博生物技术有限公司 靶向蛋白酶降解平台(ted)
EP3867263B1 (en) * 2018-10-16 2023-03-08 Boehringer Ingelheim International GmbH Proteolysis targeting chimera (protacs) as degraders of smarca2 and/or smarca4
CN111233661B (zh) * 2018-11-29 2023-03-31 暨南大学 靶向泛素化降解ERRα蛋白的化合物及其药用组合物和应用
CA3119773A1 (en) 2018-11-30 2020-06-04 Kymera Therapeutics, Inc. Irak degraders and uses thereof
WO2020132561A1 (en) 2018-12-20 2020-06-25 C4 Therapeutics, Inc. Targeted protein degradation
JP7394140B2 (ja) * 2019-02-02 2023-12-07 シーエスピーシー ゾンチー ファーマシューティカル テクノロジー（シージアチュアン）カンパニー，リミテッド 標的ユビキチン化分解ｂｒｄ４タンパク質化合物、その調製方法および応用
US20220125936A1 (en) * 2019-03-01 2022-04-28 Ontario Institute For Cancer Research (Oicr) Amide-based proteolysis modulators of b-rapidly accelerated fibrosarcoma (braf) and associated uses
CN113710661B (zh) * 2019-04-02 2022-11-22 上海睿跃生物科技有限公司 治疗癌症的化合物和方法
CA3135802A1 (en) 2019-04-05 2020-10-08 Kymera Therapeutics, Inc. Stat degraders and uses thereof
US20220241424A1 (en) 2019-04-16 2022-08-04 Northwestern University Treatment of cancer
JP2022532342A (ja) 2019-05-14 2022-07-14 ニューベイション・バイオ・インコーポレイテッド 抗がん核内ホルモン受容体標的化化合物
CN110372669B (zh) * 2019-06-19 2020-11-24 浙江省医学科学院 一种基于crbn配体诱导egfr降解的化合物及其制备方法、药物组合物和应用
CN112125885A (zh) * 2019-06-25 2020-12-25 中国药科大学 苯并吲哚类双功能分子衍生物及其制备方法与应用
WO2020264499A1 (en) 2019-06-28 2020-12-30 Kymera Therapeutics, Inc. Irak degraders and uses thereof
WO2021018018A1 (en) * 2019-07-26 2021-02-04 Beigene, Ltd. Degradation of bruton's tyrosine kinase (btk) by conjugation of btk inidbitors with e3 ligase ligand and methods of use
US20220313829A1 (en) * 2019-08-05 2022-10-06 Shanghaitech University Egfr protein degradant and anti-tumor application thereof
IL291590B2 (en) * 2019-09-23 2023-11-01 Accutar Biotechnology Inc Novel modified quinoline-8-carbonitrile compounds with androgen receptor unblocking activity and their uses
CN110734426B (zh) * 2019-10-28 2021-02-05 浙江省医学科学院 乙酰胆碱酯酶降解化合物及其制备方法和应用
CN110790750B (zh) * 2019-11-07 2021-09-21 郑州大学 一种邻苯二甲酰亚胺类选择性雄激素受体降解剂及其制备方法和用途
CN110746400B (zh) * 2019-11-07 2021-12-17 郑州大学 一种靶向雄激素受体的荧光探针及其制备方法
US11952349B2 (en) 2019-11-13 2024-04-09 Nuvation Bio Inc. Anti-cancer nuclear hormone receptor-targeting compounds
KR20220103753A (ko) 2019-11-19 2022-07-22 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 헬리오스 단백질의 억제제로서 유용한 화합물
JP2023509366A (ja) 2019-12-17 2023-03-08 カイメラ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｉｒａｋ分解剤およびそれらの使用
WO2021127283A2 (en) 2019-12-17 2021-06-24 Kymera Therapeutics, Inc. Irak degraders and uses thereof
TW202136240A (zh) 2019-12-19 2021-10-01 美商亞文納營運公司 用於靶向降解雄激素受體之化合物及方法
BR112022011827A2 (pt) 2019-12-20 2022-08-30 C4 Therapeutics Inc Composto, composição farmacêutica, uso de um composto, métodos para tratamento ou profilaxia de câncer e para tratar um paciente com um distúrbio mediado por receptor do fator de crescimento epidérmico, e, invenção
CA3162502A1 (en) 2019-12-23 2021-07-01 Yi Zhang Smarca degraders and uses thereof
CN110927297A (zh) * 2019-12-25 2020-03-27 山东英盛生物技术有限公司 一种同时检测血液样品中多种抗肿瘤药物的方法
IL295709A (en) 2020-03-05 2022-10-01 C4 Therapeutics Inc Compounds for targeted knockdown of brd9
CN113387930B (zh) * 2020-03-11 2022-07-12 苏州开拓药业股份有限公司 一种双官能化合物及其制备方法和用途
BR112022018678A2 (pt) 2020-03-19 2022-11-01 Kymera Therapeutics Inc Degradadores de mdm2 e usos dos mesmos
KR102337040B1 (ko) * 2020-03-30 2021-12-09 (주) 업테라 HMG-CoA 환원효소 분해 유도 화합물
CN113509557A (zh) * 2020-04-09 2021-10-19 嘉兴优博生物技术有限公司 靶向蛋白酶降解平台(ted)
CN113563414B (zh) * 2020-04-29 2022-08-12 泰比棣医药科技(石家庄)有限公司 一种组织靶向的蛋白靶向降解化合物及其用途
TW202208381A (zh) * 2020-05-06 2022-03-01 美商紐力克斯醫療股份有限公司 造血前驅細胞激酶之雙官能降解劑及其治療用途
CA3181782A1 (en) 2020-05-09 2021-11-18 Arvinas Operations, Inc. Methods of manufacturing a bifunctional compound, ultrapure forms of the bifunctional compound, and dosage forms comprising the same
TW202210483A (zh) 2020-06-03 2022-03-16 美商凱麥拉醫療公司 Irak降解劑之結晶型
KR20220014952A (ko) * 2020-07-29 2022-02-08 한국화학연구원 안드로겐 수용체의 저해 또는 분해용 화합물 및 이들의 의약 용도
CN114163444B (zh) * 2020-09-11 2023-07-14 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种用于雄激素受体蛋白靶向降解的嵌合体化合物、其制备方法及其在医药上的应用
CN116323570A (zh) * 2020-09-30 2023-06-23 上海睿跃生物科技有限公司 治疗疾病的化合物和方法
WO2022120355A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Ikena Oncology, Inc. Tead degraders and uses thereof
CN112608302B (zh) * 2020-12-28 2022-05-24 郑州大学第一附属医院 低氧还原激活靶向泛素化降解egfr蛋白的喹唑啉类衍生物及其应用
MX2023008296A (es) 2021-01-13 2023-09-29 Monte Rosa Therapeutics Inc Compuestos de isoindolinona.
JP2024510792A (ja) 2021-03-23 2024-03-11 ニューベイション・バイオ・インコーポレイテッド 抗がん核内ホルモン受容体標的化化合物
CN113105431B (zh) * 2021-03-24 2022-10-28 河北康泰药业有限公司 一种蛋白水解靶向嵌合体及其应用
EP4317146A1 (en) 2021-03-29 2024-02-07 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Tetrahydronaphthalene compound, and preparation method therefor and use thereof in medicine
AU2022253242A1 (en) 2021-04-06 2023-11-23 Bristol-Myers Squibb Company Pyridinyl substituted oxoisoindoline compounds
CA3218577A1 (en) 2021-05-03 2022-11-10 Nuvation Bio Inc. Anti-cancer nuclear hormone receptor-targeting compounds
AU2022268977A1 (en) 2021-05-05 2023-11-30 Biogen Ma Inc. Compounds for targeting degradation of bruton's tyrosine kinase
WO2023283130A1 (en) 2021-07-04 2023-01-12 Newave Pharmaceutical Inc. Isoquinoline derivatives as mutant egfr modulators and uses thereof
WO2023283372A1 (en) 2021-07-07 2023-01-12 Biogen Ma Inc. Compounds for targeting degradation of irak4 proteins
TW202321236A (zh) 2021-07-07 2023-06-01 美商百健Ｍａ公司 用於靶向ｉｒａｋ４蛋白降解之化合物
WO2023034411A1 (en) 2021-09-01 2023-03-09 Oerth Bio Llc Compositions and methods for targeted degradation of proteins in a plant cell
CA3236262A1 (en) 2021-10-25 2023-05-04 Isaac Marx Tyk2 degraders and uses thereof
TW202329950A (zh) 2021-11-25 2023-08-01 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 一種用於雄激素受體蛋白靶向降解的嵌合體化合物、其製備方法及其在醫藥上的應用
IL314437A (en) 2022-01-31 2024-09-01 Kymera Therapeutics Inc IRAK joints and their uses
CN114853751B (zh) * 2022-05-13 2024-01-16 郑州大学第一附属医院 一组吩噻嗪类衍生物及其应用
WO2024006776A1 (en) 2022-06-27 2024-01-04 Relay Therapeutics, Inc. Estrogen receptor alpha degraders and medical use thereof
WO2024006781A1 (en) 2022-06-27 2024-01-04 Relay Therapeutics, Inc. Estrogen receptor alpha degraders and use thereof
WO2024002206A1 (en) * 2022-06-30 2024-01-04 Anhorn Medicines Co., Ltd. Bifunctional compound and pharmaceutical composition comprising the bifunctional compound, and method for treating androgen receptor related diseases by using the same
WO2024050016A1 (en) 2022-08-31 2024-03-07 Oerth Bio Llc Compositions and methods for targeted inhibition and degradation of proteins in an insect cell
WO2024064358A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 Ifm Due, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with sting activity
CN115636815B (zh) * 2022-10-24 2023-10-27 新乡学院 一种泊马度胺连接脲类化合物的制备方法和应用
CN115557936A (zh) * 2022-10-24 2023-01-03 河南湾流生物科技有限公司 一种可作为饲料添加剂的泊马度胺衍生物的制备方法和应用
CN115624554A (zh) * 2022-10-31 2023-01-20 鲲石生物科技(深圳)有限公司 化合物arv-825在治疗nut癌中的应用
CN116178681B (zh) * 2023-02-01 2024-07-16 珠海金发生物材料有限公司 一种聚丁二酸丁二醇酯树脂及其制备方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100383139C (zh) * 2005-04-07 2008-04-23 天津和美生物技术有限公司 可抑制细胞释放肿瘤坏死因子的哌啶-2，6-二酮衍生物
FR2885904B1 (fr) * 2005-05-19 2007-07-06 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives du fluorene, compositions les contenant et utilisation
PT2571503E (pt) * 2010-05-14 2015-04-29 Dana Farber Cancer Inst Inc Composições e a sua utilização no tratamento de neoplasia, doença inflamatória e outros distúrbios
EP2619184B1 (en) * 2010-09-24 2018-05-23 The Regents of the University of Michigan Deubiquitinase inhibitors and methods for use of the same
CN103502275A (zh) 2010-12-07 2014-01-08 耶鲁大学 融合蛋白的小分子疏水性标记和引起的其降解
US20140243282A1 (en) * 2010-12-31 2014-08-28 Satish Reddy Kallam Methods and compositions for designing novel conjugate therapeutics
EP3608317A1 (en) * 2012-01-12 2020-02-12 Yale University Compounds & methods for the enhanced degradation of targeted proteins & other polypeptides by an e3 ubiquitin ligase
KR20240038809A (ko) * 2014-04-14 2024-03-25 아비나스 오퍼레이션스, 인코포레이티드 단백질분해의 이미드-기초된 조절인자 및 연관된 이용 방법
US9694084B2 (en) * 2014-12-23 2017-07-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods to induce targeted protein degradation through bifunctional molecules
CN108601764A (zh) * 2015-03-18 2018-09-28 阿尔维纳斯股份有限公司 用于靶蛋白的增强降解的化合物和方法

Also Published As

Publication number Publication date
AU2020294327A1 (en) 2021-02-11
HUE054149T2 (hu) 2021-08-30
AU2016270442A1 (en) 2017-12-07
KR20180035779A (ko) 2018-04-06
AU2016270442B2 (en) 2020-10-01
EP3302572B8 (en) 2021-03-24
JP2018526429A (ja) 2018-09-13
WO2016197032A1 (en) 2016-12-08
EP3302572A1 (en) 2018-04-11
RU2704807C9 (ru) 2021-02-24
ES2862469T3 (es) 2021-10-07
CN108136044B (zh) 2021-08-10
KR102691931B1 (ko) 2024-08-05
CA2988414A1 (en) 2016-12-08
BR112017025975A2 (pt) 2018-08-14
CA2988414C (en) 2023-09-26
EP3302572A4 (en) 2018-10-31
RU2017145267A (ru) 2019-07-16
EP3302572B1 (en) 2021-01-06
RU2704807C2 (ru) 2019-10-31
RU2017145267A3 (pt) 2019-07-17
KR20240119196A (ko) 2024-08-06
AU2016270442C1 (en) 2022-06-02
EP3302572B3 (en) 2024-07-24
MX2017015605A (es) 2018-06-06
CN108136044A (zh) 2018-06-08
JP6873433B2 (ja) 2021-05-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240299366A1 (en) Imide-based modulators of proteolysis and associated methods of use
US20220089570A1 (en) Imide-based modulators of proteolysis and associated methods of use
US11834460B2 (en) Imide-based modulators of proteolysis and associated methods of use
AU2016270442B2 (en) Imide-based modulators of proteolysis and associated methods of use
US20220127279A1 (en) Mdm2-based modulators of proteolysis and associated methods of use
BR112016024016B1 (pt) Moduladores de proteólise baseados em imida, composição farmacêutica e uso dos mesmos

Legal Events

Date Code Title Description
B07D Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette]

Free format text: DE ACORDO COM O ARTIGO 229-C DA LEI NO 10196/2001, QUE MODIFICOU A LEI NO 9279/96, A CONCESSAO DA PATENTE ESTA CONDICIONADA A ANUENCIA PREVIA DA ANVISA. CONSIDERANDO A APROVACAO DOS TERMOS DO PARECER NO 337/PGF/EA/2010, BEM COMO A PORTARIA INTERMINISTERIAL NO 1065 DE 24/05/2012, ENCAMINHA-SE O PRESENTE PEDIDO PARA AS PROVIDENCIAS CABIVEIS.

B25D Requested change of name of applicant approved

Owner name: ARVINAS OPERATIONS, INC. (US)

B350 Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette]
B07G Grant request does not fulfill article 229-c lpi (prior consent of anvisa) [chapter 7.7 patent gazette]

Free format text: NOTIFICACAO DE DEVOLUCAO DO PEDIDO EM FUNCAO DA REVOGACAO DO ART. 229-C DA LEI NO 9.279, DE 1996, POR FORCA DA LEI NO 14.195, DE 2021

B06U Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette]
B06A Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette]
B06A Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette]
B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 03/06/2016, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS