JP6873433B2 - タンパク質分解のイミド系修飾因子および関連の使用方法 - Google Patents

タンパク質分解のイミド系修飾因子および関連の使用方法 Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、「ＩＭＩＤＥ−ＢＡＳＥＤ ＭＯＤＵＬＡＴＯＲＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＯＬＹＳＩＳ ＡＮＤ ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤ ＭＥＴＨＯＤＳ ＯＦ ＵＳＥ（タンパク質分解のイミド系修飾因子および関連の使用方法）」という表題の２０１４年４月１４日に出願された米国特許仮出願番号第６１／９７９３５１号の利益と優先権を請求し、「ＩＭＩＤＥ−ＢＡＳＥＤ ＭＯＤＵＬＡＴＯＲＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＯＬＹＳＩＳ ＡＮＤ ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤ ＭＥＴＨＯＤＳ ＯＦ ＵＳＥ（タンパク質分解のイミド系修飾因子および関連の使用方法）」という表題の２０１５年６月４日に出願された米国特許仮出願番号第６２／１７１０９０号の利益と優先権も請求する２０１５年４月１４日に出願された米国特許非仮出願番号第１４／６８６６４０号の利益を請求する２０１５年７月６日に出願された米国特許出願番号第１４／７９２４１４号と２０１５年６月４日に出願された米国特許仮出願番号第６２／１７１０９０号の利益を請求するものである。それらの全ての特許文献の全体を参照により援用する。
本明細書は、イミド系化合物であって、同化合物から構成される二官能性化合物を含む前記イミド系化合物、および関連の使用方法を提供する。それらの二官能性化合物は標的型ユビキチン化の修飾因子として有用であり、特に本発明の二官能性化合物によって分解されるか、そうでなければ阻害される様々なポリペプチドおよび他のタンパク質に関しての標的型ユビキチン化の修飾因子として有用である。
ほとんどの低分子薬剤がきっちりと納まるポケットの中で酵素または受容体に結合する。他方、低分子を使用してタンパク質間相互作用を標的にすることは、それらの広い接触面、および関与する浅い溝、または平坦な接触面のために困難であることで有名である。Ｅ３ユビキチンリガーゼ（ヒトでは数百が知られている）によってユビキチン化の基質特異性が生じるため、Ｅ３ユビキチンリガーゼはある特定のタンパク質基質に対する特異性のために一般的なプロテアソーム阻害剤よりも魅力的な治療標的である。部分的にはＥ３リガーゼのリガンドはタンパク質間相互作用を破壊するに違いないため、それらの開発は困難であることがわかってきた。しかしながら、これらのリガーゼに結合する特異的なリガンドが最近の開発により提供されている。例えば、最初の低分子Ｅ３リガーゼ阻害剤であるナトリン（ｎｕｔｌｉｎ）類の発見以来、Ｅ３リガーゼを標的とするその他の化合物が報告されているが、依然としてこの分野は発展途上である。
治療能力を有する１つのＥ３リガーゼは、フォン・ヒッペル・リンドウ（ＶＨＬ）腫瘍抑制因子である。ＶＨＬは基質認識サブユニット／Ｅ３リガーゼ複合体ＶＣＢから構成され、その複合体はエロンギンＢとエロンギンＣ、およびクリン−２とＲｂｘ１を含む複合体を包含する。ＶＨＬの一次基質は低酸素誘導因子１α（ＨＩＦ−１α）であり、それは低酸素レベルに応答して血管新生促進因子のＶＥＧＦや赤血球誘導サイトカインのエリスロポエチンなどの遺伝子を上方制御する転写因子である。我々は、癌、慢性貧血、および虚血の重要な標的であるＥ３リガーゼＶＣＢの基質認識サブユニットに対する初めてのフォン・ヒッペル・リンドウ（ＶＨＬ）の低分子リガンドを作製し、その化合物がＶＨＬの主要な基質である転写因子ＨＩＦ−１αの結合様式を模倣することを確認する結晶構造を得た。
セレブロンは、ヒトではＣＲＢＮ遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＣＲＢＮオーソログは植物からヒトまでよく保存されており、このことがＣＲＢＮの生理学的重要性を強調している。セレブロンは損傷ＤＮＡ結合タンパク質１（ＤＤＢ１）、クリン−４Ａ（ＣＵＬ４Ａ）、およびクリン調節因子１（ＲＯＣ１）とＥ３ユビキチンリガーゼ複合体を形成する。この複合体は他の多数のタンパク質をユビキチン化する。完全には解明されていないメカニズムを介し、標的タンパク質のセレブロンによるユビキチン化によって線維芽細胞増殖因子８（ＦＧＦ８）および線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ１０）のレベルが上昇する。ＦＧＦ８は次に四肢および耳包形成などの多数の発生過程を調節する。このユビキチンリガーゼ複合体は胚における四肢の伸長にとって重要であることが最終的な結果である。セレブロンが存在しない場合、ＤＤＢ１はＤＮＡ損傷結合タンパク質として機能するＤＤＢ２と複合体を形成する。
サリドマイドは多数の免疫学的適応症の治療に対して認可されており、多発性骨髄腫をはじとする特定の新生物疾患の治療にも認可されている。サリドマイドおよびその類似体の幾つかは現在のところ多発性骨髄腫に加えて他の様々な種類の癌の治療に使用することについても研究中である。サリドマイドの抗腫瘍活性の正確なメカニズムはまだ明らかになりつつあるところであるが、それは血管形成を阻害することがわかっている。それらのイミドの生物学について考察する近年の文献にはLu et al Science 343, 305 (2014) および Kronke et al Science 343, 301 (2014)が含まれる。
重要なことに、サリドマイドおよびその類似体、例えばポモリナミオド（ｐｏｍｏｌｉｎａｍｉｏｄｅ）およびレナリノミド（ｌｅｎａｌｉｎｏｍｉｄｅ）はセレブロンに結合することが知られている。これらの薬剤はセレブロンに結合し、前記複合体の特異性を改変して多発性骨髄腫の増殖に必須の転写因子であるイカロス（ＩＫＺＦ１）とアイオロス（ＩＫＺＦ３）のユビキチン化と分解を誘導する。実際に、セレブロンのより高い発現と多発性骨髄腫の治療におけるイミド薬剤の効力の増大が関連づけられている。
ＢＲＤ４は複数の疾患設定、特に癌における新しい標的としてのその大きな可能性のために学会から、そして同様に製薬産業からもかなりの注目を集めている。ＢＲＤ４は、Ｎ末端の２つのブロモドメイン（ＢＤドメイン）とＣ末端のエクストラターミナルドメイン（ＥＴドメイン）を特徴とするブロモドメインおよびエクストラターミナルドメイン（ＢＥＴ）ファミリー（J. Shi, et al. Molecular cell, 54 (2014) 728-736 および A.C. Belkina, et al., Nat. Rev. Cancer, 12 (2012) 465-477）に属する。それらの２つのＢＤドメインがヒストンタンパク質のＮ末端テールにあるアセチル化リシン残基を認識してそれらの残基と相互作用する。ＥＴドメインは、その特徴はまだ完全に明らかにされていないが、多様な転写調節因子の動員に関してスキャフォールド機能を果たすと概ね考えられている。したがって、ＢＲＤ４は特定のゲノム座位への適切な転写修飾因子の動員による遺伝子発現の調節に重要な役割を果たす。ＢＲＤ４はｃ−ＭＹＣ、Ｂｃｌ−ｘＬおよびＢＣＬ−６などの重要な癌遺伝子の上流に存在することが多いスーパーエンハンサー領域に主に局在し、それらの遺伝子の発現の調節に重要な役割を果たすことが幾つかの研究から確証されている（J. Loven, et al., Cell, 153 (2013) 320-334 および B. Chapuy, et al., Cancer Cell, 24 (2013) 777-790.）。重要な癌遺伝子の発現の調節におけるその重要な役割のため、ＢＲＤ４は正中線癌、ＡＭＬ、ＭＭ、ＢＬ、および前立腺癌を含む複数の癌種における有望な治療標的として出現している（J. Loven, et al., Cell, 153 (2013) 320-334、J. Zuber, et al., Nature, 478 (2011) 524-528、J.E. Delmore, et al., Cell, 146 (2011) 904-917、J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674、A. Wyce, et al., Oncotarget, 4 (2013) 2419-2429、I.A. Asangani, et al., Nature, 510 (2014) 278-282、および C.A. French, et al., Oncogene, 27 (2008) 2237-2242）。ＢＲＤ４が特定の癌遺伝子の近傍にあるゲノム座位を明らかに高頻度で占有することから正常組織に危害を与えずに腫瘍細胞を特異的に標的とすることを可能にする有望な治療ウインドウが提供される。特に、ＢＲＤ４は、大多数のヒト癌の発生と維持に寄与するが、創薬が困難な遺伝子であるｃ−ＭＹＣのターゲティングの代替的戦略としての役割を果たし得る（J.E. Delmore, et al., Cell, 146 (2011) 904-917、J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674、M.G. Baratta, et al., PNAS, 112 (2015) 232-237、およびM. Gabay, et al., Cold Spring Harb Perspect Med. (2014) 4:a014241）。
ＪＱ１、ｉＢＥＴ、およびＯＴＸ１５などの低分子ＢＲＤ４阻害剤の開発により、ＢＬをはじめとする様々な癌の臨床前モデルにおいて有望な治療能力が示された（J. Loven, et al., Cell, 153 (2013) 320-334、B. Chapuy, et al., Cancer Cell, 24 (2013) 777-790、J.E. Delmore, et al., Cell, 146 (2011) 904-917、J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674、I.A. Asangani, et al., Nature, 510 (2014) 278-282、M.G. Baratta, et al., PNAS, 112 (2015) 232-237、M. Boi, et al., Clin. Cancer Res., (2015) 21(7):1628-38、およびA. Puissant, et al., Cancer discovery, 3 (2013) 308-323）。実際に、ＢＲＤ４阻害剤は様々なマウス腫瘍モデルにおいて良好な忍容性と共に様々な抗腫瘍活性を示しており、ＪＱ１などのＢＲＤ４阻害剤への高感受性がｃ−ＭＹＣ由来ＢＬをはじめとする異なる腫瘍種における高レベルのｃ−ＭＹＣとＮ−ＭＹＣのどちらかと関連づけられていることは驚くべきことではない。ほとんど全てのＢＬ症例がｃ−ｍｙｃ遺伝子をＩｇＨの上流に位置するスーパーエンハンサーの制御下に置くその遺伝子の転座を含み、そうして異常に高レベルのｃ−ＭＹＣ発現、腫瘍発生、および腫瘍維持が誘導される（K. Klapproth, et al., British journal of haematology, 149 (2010) 484-497）。
現在、正中線癌および血液系腫瘍に大きく焦点を合わせている４種類のＢＥＴブロモドメイン阻害剤が第Ｉ相治験中である（ＣＰＩ−０６１０、ＮＣＴ０１９４９８８３；ＧＳＫ５２５７６２、ＮＣＴ０１５８７７０３；ＯＴＸ０１５、ＮＣＴ０１７１３５８２；ＴＥＮ−０１０、ＮＣＴ０１９８７３６２）。ＢＲＤ４阻害剤を使用する臨床前研究からＢＬ細胞株におけるｃ−ＭＹＣと増殖の抑制に関してのそれらの阻害剤の価値が示されているが、多くの場合にＩＣ５０値が１００ｎＭ〜１ｕＭの範囲である（J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674およびM. Ceribelli, et al., PNAS, 111 (2014) 11365-11370）。したがって、ＢＲＤ４阻害剤の急速な進歩にもかかわらずＢＲＤ４阻害の効果はほとんどの場合で細胞増殖抑制性であり、比較的に高濃度の阻害剤を必要とするので、その効果は希望を与えるものであるが、理想的とは言えないでいる。
米国特許仮出願番号第６１／９７９３５１号 米国特許仮出願番号第６２／１７１０９０号 米国特許非仮出願番号第１４／６８６６４０号 米国特許出願番号第１４／７９２４１４号 米国特許仮出願番号第６２／１７１０９０号
Lu et al Science 343, 305 (2014) Kronke et al Science 343, 301 (2014) J. Shi, et al. Molecular cell, 54 (2014) 728-736 A.C. Belkina, et al., Nat. Rev. Cancer, 12 (2012) 465-477 J. Loven, et al., Cell, 153 (2013) 320-334 B. Chapuy, et al., Cancer Cell, 24 (2013) 777-790 J. Zuber, et al., Nature, 478 (2011) 524-528 J.E. Delmore, et al., Cell, 146 (2011) 904-917 J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674 A. Wyce, et al., Oncotarget, 4 (2013) 2419-2429 I.A. Asangani, et al., Nature, 510 (2014) 278-282 C.A. French, et al., Oncogene, 27 (2008) 2237-2242 M.G. Baratta, et al., PNAS, 112 (2015) 232-237 M. Gabay, et al., Cold Spring Harb Perspect Med. (2014) 4:a014241 M. Boi, et al., Clin. Cancer Res., (2015) 21(7):1628-38 A. Puissant, et al., Cancer discovery, 3 (2013) 308-323 K. Klapproth, et al., British journal of haematology, 149 (2010) 484-497 M. Ceribelli, et al., PNAS, 111 (2014) 11365-11370
疾患、特に過形成および癌、例えば多発性骨髄腫の有効な治療法の継続的な必要性が当技術分野に存在する。しかしながら、非特異的効果、および転写因子などのある特定のクラスのタンパク質をまとめて標的とし、調節することができないことが、有効な抗癌剤の開発に対する障害として残っている。したがって、セレブロンの基質特異性にてこ入れするか、またはセレブロンの基質特異性を増強する低分子治療薬であって、そして同時に広範囲のタンパク質クラスが標的とされ、特異的に調節され得るように「調整可能」である低分子治療薬が治療薬として非常に有用であるだろう。
本開示は、内在性タンパク質を分解のためにＥ３ユビキチンリガーゼまで動員するように機能する二官能性化合物、および同化合物の使用方法を説明する。特に本開示は、本明細書に記載される二官能性化合物によって後で分解されるか、そうでなければ阻害される様々なポリペプチドおよび他のタンパク質の標的型ユビキチン化の修飾因子としての有用性が見出される二官能性またはタンパク質分解標的化キメラ（ＰＲＯＴＡＣ）化合物を提供する。広範囲の薬理学的活性があり得、実質的にあらゆるタンパク質クラスまたはファミリーの標的ポリペプチドの分解／阻害に合致することが本明細書において提供されるそれらの化合物の利点である。さらに、本明細書は、癌、例えば、多発性骨髄腫などの疾患状態の治療または改善のために本明細書に記載される化合物の有効量を使用する方法を提供する。
したがって、１つの態様において、本開示は本明細書に記載される新規イミド系化合物を提供する。
追加の態様において本開示は、その標的タンパク質／ポリペプチドをユビキチンリガーゼの近傍に配置してその標的タンパク質の分解（および阻害）を達成するようにＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分（すなわち、Ｅ３ユビキチンリガーゼのリガンドまたは「ＵＬＭ」基）と標的タンパク質結合部分（すなわち、タンパク質／ポリペプチド標的化リガンドまたは「ＰＴＭ」基）を備える二官能性またはＰＲＯＴＡＣ化合物を提供する。好ましい実施形態ではそのＵＬＭはセレブロンＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分（すなわち、「ＣＬＭ」）である。例えば、その二官能性化合物の構造を以下のように表示することができる。
Figure 0006873433
本明細書において例示されるＰＴＭ部分とＣＬＭ部分のそれぞれの位置、ならびにそれらの数は例示のためだけに提供されており、多少なりとも本化合物を限定することを意図してはいない。当業者によって理解されるように、本明細書に記載される二官能性化合物は、望み通りにそれらの各官能性部分の数と位置を変更することができるように合成され得る。
ある特定の実施形態では本二官能性化合物は化学リンカー（「Ｌ」）をさらに含む。この例ではその二官能性化合物の構造を次のように示すことができ、
Figure 0006873433
 そこではＰＴＭはタンパク質／ポリペプチド標的化部分であり、Ｌはリンカーであり、ＣＬＭはセレブロンＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分である。
ある特定の好ましい実施形態ではＥ３ユビキチンリガーゼはセレブロンである。したがって、ある特定の追加の実施形態では本二官能性化合物のＣＬＭはイミド由来部分、アミド由来部分、チオアミド由来部分、チオイミド由来部分などの化学を含む。追加の実施形態ではそのＣＬＭはフタルイミド基またはその類似体もしくは誘導体を含む。さらに追加の実施形態ではそのＣＬＭはフタルイミド−グルタルイミド基またはその類似体もしくは誘導体を含む。さらに他の実施形態ではそのＣＬＭは、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、およびそれらの類似体または誘導体からなる群のメンバーを含む。
ある特定の実施形態では本明細書に記載される化合物は複数のＣＬＭ、複数のＰＴＭ、複数の化学リンカー、またはそれらの組合せを含む。
追加の態様において、本明細書は、本明細書に記載される化合物またはその塩形態の有効量、および薬学的に許容可能な担体を含む治療組成物を提供する。それらの治療組成物は患者または対象、例えば、ヒトなどの動物においてタンパク質分解を調節し、その分解タンパク質を介して調節される疾患状態または病状の治療または改善のために使用可能である。ある特定の実施形態では本明細書に記載される治療組成物は、疾患、例えば、癌の治療または改善のために目的のタンパク質の分解を達成するために使用され得る。さらに別の態様において、本発明は細胞中の標的タンパク質をユビキチン化／分解する方法を提供する。ある特定の実施形態ではその方法は、本明細書における別段の記載のようにリンカー部分を介して連結されていることが好ましいＣＬＭとＰＴＭを備える本明細書に記載される二官能性化合物を投与することを含み、その方法では、そのＣＬＭがそのＰＴＭに結合しており、そのＣＬＭがユビキチン経路タンパク質（例えば、ユビキチンリガーゼ、好ましくはＥ３ユビキチンリガーゼ、例えば、セレブロンなど）を認識し、且つ、そのユビキチンリガーゼの近傍に標的タンパク質が配置されるとその標的タンパク質の分解が生じ、それによりその標的タンパク質の分解、その効果の阻害、およびタンパク質レベルの制御が起きるようにそのＰＴＭが標的タンパク質を認識する。本発明によって加えられるタンパク質レベルの制御により疾患状態または病状が治療され、その疾患状態または病状は患者の細胞中の標的タンパク質のレベル低下によりそのタンパク質を介して調節される。
追加の態様において、本明細書はＣＬＭの結合親和性を評価（すなわち、決定および／または測定）するための方法を提供する。ある特定の実施形態ではその方法は、目的の検査薬または検査化合物、例えば、イミド部分を有する薬剤または化合物、例えば、フタルイミド基、フタルイミド−グルタルイミド基誘導体化サリドマイド、誘導体化レナリドミド、または誘導体化ポマリドミドを提供すること、ならびにセレブロンに結合すること、および／またはセレブロンの活性を阻害することが知られている薬剤または化合物と比較してその検査薬または化合物のセレブロン結合親和性および／またはセレブロン阻害活性を比較することを含む。
さらに別の態様において、本明細書は、対象または患者、例えば、ヒトなどの動物において疾患、障害、またはその症状を治療または改善するための方法であって、本明細書に記載される化合物またはその塩形態の有効量、例えば、治療有効量と薬学的に許容可能な担体を含み、その対象の疾患または障害またはその症状を治療または改善するために有効である組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む前記方法を提供する。
別の態様において、本明細書は本発明による化合物を使用した生体系における目的のタンパク質の分解の効果を特定するための方法を提供する。
前述の一般的使用分野は例示のためだけに提示されており、本開示および添付されている「特許請求の範囲」の範囲を限定することを意図してはいない。本発明の組成物、方法、および工程に関連する追加の課題および利点は、本特許請求の範囲、明細書、および実施例を参照して当業者によって理解される。例えば、全てが本明細書によって明示的に企図されている本発明の様々な態様および実施形態を様々に組み合わせて利用してよい。これらの追加の利点、課題、および実施形態が本発明の範囲内に含まれることは明らかである。本発明の背景を明らかにするために、特に、実施に関する追加の詳細を提供するために本明細書において使用される刊行物および他の材料は参照により援用される。
添付図面は本明細書に援用され、その一部分を形成しており、本発明の幾つかの実施形態を例示し、本発明の原理を本明細書と共に説明することに役立つ。本図面は本発明の実施形態を例示することだけを目的としており、本発明を限定するものと解釈されてはならない。本発明の他の課題、特徴および利点は、本発明の例示的実施形態を示す添付図面と併せて下記の「発明を実施するための形態」から明らかになる。
図１Ａおよび１ＢはＰＲＯＴＡＣ機能の一般的原理を例示する図である。（Ａ）例となるＰＲＯＴＡＣにタンパク質標的化部分（ＰＴＭ、濃い斜線の四角）、ユビキチンリガーゼ結合部分（ＵＬＭ、薄い斜線の四角）、および所望によりＰＴＭをＵＬＭに結合するか、またはつなげるリンカー部分（Ｌ、黒線）が含まれる。（Ｂ）本明細書に記載されるＰＲＯＴＡＣの機能的使用を例示する図である。簡単に説明すると、ＵＬＭが特定のＥ３ユビキチンリガーゼを認識してそれに結合し、ＰＴＭが標的タンパク質を認識および動員してそれをＥ３ユビキチンリガーゼの極近傍に持ってくる。典型的には、Ｅ３ユビキチンリガーゼはＥ２ユビキチン結合タンパク質と複合体を形成し、単独か、またはＥ２タンパク質を介して標的タンパク質上のリシンへのイソペプチド結合を介したユビキチン（黒丸）の結合を触媒する。その後、ポリユビキチン化タンパク質（右奥）が細胞のプロテアソーム機構による分解の標的とされる。 同上。 図２はＰＲＯＴＡＣテクノロジーを利用して設計されたキメラ化合物Ａ８２５を示す図である。Ａ８２５はテトラオキサテトラデカンリンカーを介してＥ３ユビキチンリガーゼセレブロン動員部分（ポマリドミドの誘導体）に連結されているＢＲＤ４結合部分（ＯＴＸ−１５の誘導体）を含有する。 図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ、３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ、３Ｈ、および３ＩはＢＬ細胞株に対する低分子ＢＲＤ４阻害剤（ＪＱ１およびＯＴＸ−１５）の細胞性効果を示すウエスタンブロット像を示す図である。ＪＱ１およびＯＴＸ−１５は用量依存的にＮＡＭＡＬＷＡ細胞（Ａ）およびＲａｍｏｓ細胞（Ｂ）においてＢＲＤ４を誘導する。ＯＴＸ−１５は用量依存的にＣＡ−４６細胞（Ｃ）およびＤＡＵＤＩ細胞（Ｄ）においてＢＲＤ４の蓄積を誘導する。ＪＱ１およびＯＴＸ−１５はＮＡＭＡＬＷＡ細胞（Ｅ）およびＲａｍｏｓ細胞（Ｆ）において顕著であるが不完全なｃ−Ｍｙｃの抑制を誘導する。（Ｇ）ＪＱ１によるｃ−Ｍｙｃ抑制効果は可逆的である。ＮＡＭＡＬＷＡ細胞（Ｈ）およびＲａｍｏｓ細胞（Ｉ）におけるＪＱ１およびＯＴＸ−１５によるｃ−Ｍｙｃ抑制効果は可逆的である。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ、および４ＧはＢＬ細胞株に対するＡ８２５の細胞性効果を示すウエスタンブロット像を示す図である。Ａ８２５によるＢＲＤ４の分解はＮＡＭＡＬＷＡ細胞（Ａ）およびＣＡ−４６細胞（Ｂ）においてベル型用量依存的に起こる。（Ｃ）および（Ｄ）Ａ８２５によるＢＲＤ４の分解は急速に起こる。（Ｅ）および（Ｆ）Ａ８２５処理によって誘導されるＢＲＤ４の分解はセレブロン依存的である。（Ｇ）Ａ８２５によるＢＲＤ４の分解はプロテアソームによって媒介される。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、および５ＦはＡ８２５処理、ＪＱ１処理、およびＯＴＸ−１５処理による細胞性効果の比較を示す図である。（Ａ）および（Ｂ）Ａ８２５によるｃ−Ｍｙｃの抑制はＪＱ１およびＯＴＸ−１５よりも顕著である。（Ｃ）ＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較してＡ８２５での処理後により長くｃ−Ｍｙｃタンパク質レベルが抑制される。（Ｄ）、（Ｅ）および（Ｆ）ＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較してＡ８２５での処理後により長くｃ−Ｍｙｃタンパク質機能（ＳＬＣ１９Ａ１遺伝子発現により評価される）が抑制される。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅ、６Ｆ、６Ｇ、および６ＨはＡ８２５、ＪＱ１、およびＯＴＸ−１５を用いたＢＬ細胞株に対する抗増殖効果の比較を示す図である。（Ａ）〜（Ｄ）Ａ８２５はＢＬ株に対してＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較して優れた抗増殖効果を有する。（Ｅ）Ａ８２５はＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較してより長く持続する増殖抑制を引き起こす。（Ｇ）ポマリドミドは低用量Ａ８２５処理の抗増殖効果から細胞を救出する。（Ｇ）ポマリドミドは高用量Ａ８２５処理の抗増殖効果から細胞を部分的に救出する。（Ｈ）ポマリドミド単独ではＢＬ細胞の増殖に対して顕著な効果が無い。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 図７Ａおよび７ＢはＡ８２５処理、ＪＱ１処理、およびＯＴＸ−１５処理を用いたＢＬ細胞に対するアポトーシス効果の比較を示す図である。（Ａ）Ａ８２５はＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較してより顕著なアポトーシス誘導（カスパーゼ活性によりモニターされる）をＢＬ細胞において引き起こす。（Ｂ）Ａ８２５はＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較してより顕著なアポトーシス誘導（ＰＡＲＰ切断によってモニターされる）をＢＬ細胞において引き起こす。 同上。 図８Ａおよび８ＢはＡ８２５処理によるＢＲＤ４の分解の作用機序モデルを示す模式図である。（Ａ）低濃度のＡ８２５で処理された細胞は効果的にＢＲＤ４とセレブロンに結合して「ＢＲＤ４−Ａ８２５−セレブロン」三量体複合体を形成し、その複合体が細胞内で効率的なＢＤＲ４分解を誘導する。（Ｂ）高濃度のＡ８２５で処理された細胞は「ＢＲＤ４−Ａ８２５」二量体および「Ａ８２５−セレブロン」二量体を形成し、それらの二量体が最適な三量体形成とＢＲＤ４分解を妨害する。 同上。
以下は、当業者による本発明の実施を支援するために提供される発明を実施するための形態である。当業者は、本開示の主旨または範囲から逸脱することなく本明細書に記載される実施形態に改変および変更を行うことができる。本明細書において言及される全ての刊行物、特許出願、特許、図面、および他の参照文献は、それらの全体が参照により明示的に援用される。
Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質、例えば、セレブロンと標的タンパク質がそのＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質とその標的タンパク質に結合する二官能性またはキメラコンストラクトによって近傍に配置されるとそのユビキチンリガーゼによってその標的タンパク質がユビキチン化されるという驚くべき、且つ、予期せぬ発見に関連する組成物と方法をここに説明する。したがって、本発明は、タンパク質標的結合部分（「ＰＴＭ」）に結合したＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分（「ＵＬＭ」）を含み、選択された標的タンパク質のユビキチン化がそれにより生じ、それによりプロテアソームによるその標的タンパク質の分解を引き起こすそのような化合物および組成物を提供する（図１参照）。本発明は組成物のライブラリーおよびその使用も提供する。
別段の定義が無い限り、本明細書において使用される全ての技術用語と科学用語は、この発明が属する分野の当業者が共通して理解する意味と同じ意味を有する。本明細書において使用される用語は特定の実施形態を説明するためだけのものであり、本発明を限定するようには意図されていない。
ある範囲の値が提供される場合、別途文脈から明確に指示されない限り、その範囲の上限と下限の間にあるその下限の単位の小数第一位までの各中間値（例えば、ある数の炭素原子を含有する基の場合では、その場合にその範囲内にある各炭素原子数が提供される）、およびその表示範囲の中にある他のあらゆる表示値または中間値が本発明に含まれることが理解される。いずれかの具体的に除外される限界が表示範囲に存在するが、これらのより小さな範囲の上限と下限がそれぞれそれらのより小さな範囲内に含まれてよく、それらも本発明に包含される。その表示範囲がそれらの限界のうちの一方または両方を含む場合、それらの含まれている限界のうちのどちらかを、または両方を除外する範囲も本開示に含まれる。
本発明を説明するために次の用語を使用する。本明細書において用語が具体的に定義されていない場合、本発明の説明にその用語を使用する文脈の中でその用語に当てはまる、当業者によって理解される意味がその用語に与えられる。
本明細書および添付されている特許請求の範囲において使用される冠詞「ａ」および「ａｎ」は、文脈から別途明確に指示されない限り、その冠詞の文法上の目的語の１つ、または１つより多く（すなわち、少なくとも１つ）を指すために本明細書において使用される。例として、「要素」は１つの要素、または１つより多くの要素を意味する。
本明細書および特許請求の範囲において使用される「および／または」という語句は、そのようにして結合された要素の「どちらか、または両方」を意味する、すなわち、ある場合は接続的に存在し、他の場合では離接的に存在する要素を意味すると理解されるべきである。「および／または」を用いて記載された複数の要素も同様に、すなわち、そのようにして結合された要素のうちの「１つ以上」を意味する解釈されるべきである。「および／または」節によって具体的に特定された要素以外の他の要素も、具体的に特定されたそれらの要素に関係するにしても、無関係であるにしても、所望により存在してもよい。したがって、非限定的な例として、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような非制限言語と併用されるとき、「Ａおよび／またはＢ」への参照は、１つの実施形態ではＡのみ（所望によりＢ以外の要素を含んでもよい）、別の実施形態ではＢのみ（所望により以外の要素を含んでもよいＡ）、さらに別の実施形態、ではＡとＢの両方（所望により他の要素を含んでもよい）、等を意味することができる。
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、「または」は上で定義された「および／または」と同じ意味を有すると理解されるべきである。例えば、リスト中の項目を分断する場合、「または」または「および／または」は非制限的であると、すなわち、多数の要素または列挙された要素のうちの少なくとも１つばかりか、そのうちの１つ以上、および所望により、リストに挙げられていない追加の項目を含むと解釈される。逆の意味を明確に示す「ただ１つ（ｏｎｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」または「正に１つ（ｅｘａｃｔｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」、または、特許請求の範囲において使用される場合、「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」といった用語だけが、多数の要素または列挙された要素のうちの正に１つの要素を含むことを意味する。概して、本明細書において使用される「または」という用語は「どちらか（ｅｉｔｈｅｒ）」、「１つ（ｏｎｅ ｏｆ）」、「ただ１つ（ｏｎｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」、または「正に１つ（ｅｘａｃｔｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」といった排他的な用語が前に来たときにだけ排他的選択肢（すなわち、「一方または他方であるが、両方ではない」）を表すと解釈される。
本明細書ならびに特許請求の範囲において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「担持する（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「伴う（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」、「保持する（ｈｏｌｄｉｎｇ）」、「から構成される（ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ）」等といった全ての移行句は非制限的であると、すなわち、「を含むが限定されない」を意味すると理解されるべきである。「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および「から基本的に成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という移行句だけが米国特許庁特許審査手順マニュアル第２１１１．０３節に記載されているようにそれぞれ制限的または半制限的移行句である。
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、「少なくとも１つ」という語句は１つ以上の要素を参照するときに要素リストの中の要素のうちのいずれか１つ以上から選択される少なくとも１つの要素を意味すると理解されるべきであるが、それはその要素リスト内に具体的に挙げられた少なくとも１つのそれぞれ個々の要素を必ず含むということではなく、その要素リスト内の要素のあらゆる組合せを除外しない。「少なくとも１つ」という語句が指すその要素リスト内で具体的に特定された要素以外の要素も、具体的に特定された要素に関係するにしても、無関係であるにしても、所望により存在し得ることもこの定義により許される。したがって、非限定的な例として、「ＡおよびＢのうちの少なくとも１つ」（または、同様に「ＡまたはＢのうちの少なくとも１つ」、または、同様に「Ａおよび／またはＢのうちの少なくとも１つ」）は、１つの実施形態ではＢが存在せずに（所望によりＢ以外の要素を含んでもよい）所望により１つより多くのＡを含む少なくとも１つのＡ、別の実施形態ではＡが存在せずに（所望によりＡ以外の要素を含んでもよい）所望により１つより多くのＢを含む少なくとも１つのＢ、さらに別の実施形態では所望により１つより多くのＡを含む少なくとも１つのＡ、および少なくとも１つ、所望により１つより多くのＢを含む少なくとも１つのＢ（所望により他の要素を含んでもよい）、等を意味することができる。
１つより多くの工程または作業を含む本明細書に記載されるある特定の方法では、文脈から別途指示されない限り、その方法の工程または作業の順序は必ずしもその方法の工程または作業が挙げられている順番に限定されないことも理解されるべきである。
「共投与」および「共投与する」または「併用治療」という用語は、複数の治療薬が同時点である程度、好ましくは有効量で患者内に存在する限り、同時投与（同時点での２つ以上の治療薬の投与）と時間差投与（１つ以上の治療薬の投与であって、追加の治療薬または治療薬剤の投与の時点とは異なる時点での投与）の両方を指す。ある特定の好ましい態様において、本明細書に記載される本化合物のうちの１つ以上が少なくとも１つの追加の生体活性剤、特に抗癌剤を含む生体活性剤と併せて共投与される。特に好ましい態様において、化合物の共投与によって抗癌活性をはじめとする相乗的活性および／または相乗的治療が生じる。
本明細書において使用される場合、「化合物」という用語は、別途指示されない限り、本明細書において開示されるあらゆる特定の化学化合物を指し、互変異性体、位置異性体、幾何異性体、ならびに該当する場合は光学異性体（エナンチオマー）および他の立体異性体（ジアステレオマー）をはじめとする立体異性体を含み、同様に文脈の中で該当する場合はその薬学的に許容可能な塩および誘導体（プロドラッグ形態を含む）を含む。文脈内で使用されるとき、化合物という用語は一般的に単一の化合物を指すが、開示された化合物の立体異性体、位置異性体、および／または光学異性体（ラセミ混合物を含む）ならびに特定のエナンチオマーまたはエナンチオマー富化混合物などの他の化合物を含んでもよい。その用語は、活性部位への化合物の投与および送達を容易にするように改変されたプロドラッグ形態の化合物も文脈の中で指す。本化合物の説明の中で何よりもそれに関連する多数の置換基および変数が説明されることが特筆される。当業者は、本明細書に記載される分子が以下に一般的に記載されるように安定な化合物であることを理解する。結合が示されるとき、二重結合と一重結合の両方が示された化合物の文脈の中に表される。
「ユビキチンリガーゼ」という用語は、特定の基質タンパク質へのユビキチンの転移を促進し、その基質タンパク質を分解の標的とするタンパク質のファミリーを指す。例えば、セレブロンは、単独で、またはＥ２ユビキチン結合酵素と組み合わさって標的タンパク質上のリシンへのユビキチンの結合を引き起こし、後にその特定のタンパク質基質をプロテアソームによる分解の標的とするＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質である。したがって、Ｅ３ユビキチンリガーゼは単独で、またはＥ２ユビキチン結合酵素との複合体として標的タンパク質へのユビキチンの転移に関与する。一般に、ユビキチンリガーゼは第２のユビキチンが第の１ユビキチンに結合し、第３のユビキチンが第２のユビキチンに結合するようなポリユビキチン化に関与する。ポリユビキチン化はプロテアソームによる分解に向けてタンパク質を標識する。しかしながら、モノユビキチン化に限定されるユビキチン化事象も存在し、それらの事象ではユビキチンリガーゼは単一のユビキチンを基質分子に付加する。モノユビキチン化タンパク質は分解のためのプロテアソームの標的とされず、代わりに、例えば、ユビキチンに結合可能であるドメインを有する他のタンパク質への結合を介して細胞局在または機能が改変される場合がある。さらに複雑にする問題として、ユビキチン上の異なるリシンが鎖を作製するためにＥ３の標的とされ得る。最も共通したリシンはユビキチン鎖上のＬｙｓ４８である。これは、プロテアソームによって認識されるポリユビキチンを作製するために使用されるリシンである。
「患者」または「対象」という用語は、本発明による組成物を用いる予防的治療を含む治療が提供される動物、好ましくはヒトまたは家畜化動物を説明するために本明細書を通して使用される。ヒト患者などの特定の動物に特異的である感染症、病状、または疾患状態の治療について、患者という用語はその特定の動物を指し、その動物にはイヌもしくはネコ、またはウマ、ウシ、ヒツジ等の農場動物のような家畜化動物が含まれる。概して本発明では患者という用語は別段の表示が無いか、またはその用語の使用文脈から暗に示されない限りヒト患者を指す。
「有効な」という用語は、化合物、組成物、または構成成分の量であって、その使用目的の文脈の中で使用されるときに意図した結果を達成するその量を説明するために使用される。「有効な」という用語は他の全ての有効量または有効濃度といった用語を包含し、それらの用語は他には本願書において記載または使用される。
化合物および組成物
１つの態様において、本明細書は、セレブロンＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分（「ＣＬＭ」）であるＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分（「ＵＬＭ」）を含む化合物を提供する。１つの実施形態ではそのＣＬＭは次の構造に従う化学リンカー（Ｌ）に結合しており、
（Ｉ） Ｌ−ＣＬＭ
式中、Ｌは化学リンカー基であり、ＣＬＭはセレブロンＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分である。本明細書において例示される化合物中のその部分の数および／または相対的位置は例としてのみ提示される。当業者によって理解されるように、本明細書に記載される化合物は各官能性部分の数および／または相対的位置を望み通りにして合成され得る。
ＵＬＭおよびＣＬＭという用語は文脈から別途指示されない限りそれらの非制限的意味で使用される。例えば、ＵＬＭという用語はセレブロンに結合するもの（すなわち、ＣＬＭ）を含む全てのＵＬＭを含む。さらに、ＣＬＭという用語は全ての可能なセレブロンＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分を含む。
別の態様において、本発明は標的タンパク質の分解誘導によるタンパク質活性の調節に有用な二官能性または多官能性ＰＲＯＴＡＣ化合物を提供する。ある特定の実施形態ではその化合物は標的タンパク質結合部分（すなわち、タンパク質標的化部分または「ＰＴＭ」）に対して直接的または間接的に結合した、例えば共有結合したＣＬＭを含む。ある特定の実施形態ではそのＣＬＭとＰＴＭは化学リンカー（Ｌ）を介して連結または結合している。そのＣＬＭはセレブロンＥ３ユビキチンリガーゼを認識し、そのＰＴＭは標的タンパク質を認識し、各部分のそれらの標的との相互作用はそのユビキチンリガーゼタンパク質の近傍にその標的タンパク質を配置することによりその標的タンパク質の分解を促進する。例となる二官能性化合物は次のように示され得る。
（ＩＩ） ＰＴＭ−ＣＬＭ
ある特定の実施形態では本二官能性化合物は化学リンカー（「Ｌ」）をさらに含む。例えば、本二官能性化合物を次のように示すことができ、
（ＩＩＩ） ＰＴＭ−Ｌ−ＣＬＭ
式中、ＰＴＭはタンパク質／ポリペプチド標的化部分であり、Ｌはリンカーであり、ＣＬＭはセレブロンＥ３リガーゼ結合部分である。
ある特定の実施形態では本明細書に記載される化合物は複数のＰＴＭ（同一または異なるタンパク質標的を標的とする）、複数のＣＬＭ、１つ以上のＵＬＭ（すなわち、別のＥ３ユビキチンリガーゼ、例えば、ＶＨＬに対して特異的に結合する部分）またはそれらの組合せを含む。本明細書に記載される実施形態の態様のいずれにおいても、それらのＰＴＭ、ＣＬＭ、およびＵＬＭを直接的に、または１つ以上の化学リンカーを介して、またはそれらの組合せで結合することができる。追加の実施形態では、化合物が複数のＵＬＭを有する場合、それらのＵＬＭは同じＥ３ユビキチンリガーゼ向けのものであり得、またはそれぞれのＵＬＭが異なるＥ３ユビキチンリガーゼに特異的に結合し得る。さらの追加の実施形態では、化合物が複数のＰＴＭを有する場合、それらのＰＴＭは同じ標的タンパク質に結合することができ、またはそれぞれのＰＴＭが異なる標的タンパク質に特異的に結合することができる。
別の実施形態では本明細書は、直接的に、または化学リンカー部分（Ｌ）を介して結合した複数のＣＬＭを含む化合物を提供する。例えば、２つのＣＬＭを有する化合物は次のように示され得る。
（ＩＶ） ＣＬＭ−ＣＬＭ または
（Ｖ） ＣＬＭ−Ｌ−ＣＬＭ
ある特定の実施形態では、前記化合物が複数のＣＬＭを含む場合、それらのＣＬＭは同一である。追加の実施形態では複数のＣＬＭを含む前記化合物は直接的に、または化学リンカー（Ｌ）を介して、または両方でＣＬＭに結合した少なくとも１つのＰＴＭを含む。ある特定の追加の実施形態では複数のＣＬＭを含む前記化合物は複数のＰＴＭをさらに含む。さらに追加の実施形態ではそれらのＰＴＭは同一であり、所望により異なっていてもよい。さらの追加の実施形態では、それらのＰＴＭが異なる場合、それぞれのＰＴＭは同じタンパク質標的に結合するか、または異なるタンパク質標的に特異的に結合してよい。
追加の実施形態では本明細書は、直接的に、または化学リンカー（Ｌ）を介して、または両方で結合した少なくとも２つの異なるＣＬＭを含む化合物を提供する。例えば、２つの異なるＣＬＭを有するそのような化合物を次のように示すことができ、
（ＶＩ） ＣＬＭ−ＣＬＭ’または
（ＶＩＩ） ＣＬＭ−Ｌ−ＣＬＭ’
式中、ＣＬＭ’はＣＬＭと構造的に異なるセレブロンＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分を表す。ある特定の実施形態ではその化合物は複数のＣＬＭおよび／または複数のＣＬＭ’を含んでよい。追加の実施形態では少なくとも２つの異なるＣＬＭ、複数のＣＬＭ、および／または複数のＣＬＭ’を含むその化合物は直接的にまたは化学リンカーを介して、または両方でＣＬＭまたはＣＬＭ’に結合した少なくとも１つのＰＴＭをさらに含む。本明細書に記載される実施形態のいずれにおいても、少なくとも２つの異なるＣＬＭを含む化合物は複数のＰＴＭをさらに含むことができる。さらに追加の実施形態ではそれらのＰＴＭは同一であり、所望により異なっていてもよい。さらの追加の実施形態では、それらのＰＴＭが異なる場合、それぞれのＰＴＭは同じタンパク質標的に結合するか、または異なるタンパク質標的に特異的に結合してよい。さらの追加の実施形態ではそのＰＴＭ自体がＵＬＭまたはＣＬＭ（またはＵＬＭ’またはＣＬＭ’）である。
好ましい実施形態ではそのＣＬＭはセレブロンＥ３ユビキチンリガーゼ（ＣＲＢＮ）のリガンドである部分を含む。ある特定の実施形態ではそのＣＬＭは「イミド」クラスの分子に由来するケモタイプを含む。ある特定の追加の実施形態ではそのＣＬＭはフタルイミド基またはその類似体もしくは誘導体を含む。さらに追加の実施形態ではそのＣＬＭはフタルイミド−グルタルイミド基またはその類似体もしくは誘導体を含む。さらに他の実施形態ではそのＣＬＭは、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、およびそれらの類似体または誘導体からなる群のメンバーを含む。
追加の実施形態では本明細書は本明細書に記載される化合物のエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和化合物、および多形体を含む化合物を提供し、それらには薬学的に許容可能なそれらの塩形態、例えば、酸塩形態および塩基塩形態が含まれる。
ネオイミド化合物
１つの態様において、本明細書はセレブロンとの結合、および／またはセレブロンの阻害に有用な化合物を提供する。ある特定の実施形態ではその化合物は次の化学構造からなる群より選択され、
Figure 0006873433
 式中、
Ｗは独立してＣＨ２、ＣＨＲ、Ｃ＝Ｏ、ＳＯ２、ＮＨ、およびＮ−アルキルの群より選択され、
Ｘは独立してＯ、ＳおよびＨ２の群より選択され、
Ｙは独立してＮＨ、Ｎ−アルキル、Ｎ−アリール、Ｎ−ヘタリール、Ｎ−シクロアルキル、Ｎ−ヘテロシクリル、Ｏ、およびＳの群より選択され、
Ｚは、ＸとＺの両方がＨ２ではあり得ないことを例外として、独立してＯ、およびＳまたはＨ２の群より選択され、
ＧおよびＧ’は独立してＨ、アルキル、ＯＨ、所望によりＲ’で置換されていてもよいＣＨ２−ヘテロシクリル、および所望によりＲ’で置換されていてもよいベンジルの群より選択され、
Ｑ１〜Ｑ４はＲ’、Ｎ、またはＮ−オキシドから独立して選択される基で置換された炭素Ｃを表し、
Ａは独立してアルキル、シクロアルキル、Ｃｌ、およびＦの群より選択され、
Ｒは、限定されないが、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＳＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＣＲ’Ｒ”−、−ＣＲ’ＮＲ’Ｒ”−、−アリール、−ヘタリール、−アルキル、−シクロアルキル、−ヘテロシクリル、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｒ”、−Ｐ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｒ”、−ＯＰ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＲ’ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＮＲ’ＣＯＲ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）ＮＲ’Ｒ”、−Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｃ−ＮＯ２）ＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２ＮＲ’ＣＯＲ”、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｒ’、−Ｃ（Ｃ＝Ｎ−ＯＲ’）Ｒ”、−ＣＲ’＝ＣＲ’Ｒ”、−ＣＣＲ’、−Ｓ（Ｃ＝Ｏ）（Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）Ｒ”、−ＳＦ５、および−ＯＣＦ３を含み、
Ｒ’およびＲ”は独立して結合、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘタリール、ヘテロシクリルより選択され、
ｎは１〜４までの整数であり、
Figure 0006873433
 は立体特異的（（Ｒ）または（Ｓ））でも非立体特異的でもよい結合を表し、
Ｒｎは１〜４個の独立した官能基または原子を含む。
例となるＣＬＭ
本明細書に記載される化合物のどれでもＣＬＭは次の群から選択される化学構造を含み、
Figure 0006873433
 式中、
Ｗは独立してＣＨ２、ＣＨＲ、Ｃ＝Ｏ、ＳＯ２、ＮＨ、およびＮ−アルキルの群より選択され、
Ｘは独立してＯ、ＳおよびＨ２の群より選択され、
Ｙは独立してＮＨ、Ｎ−アルキル、Ｎ−アリール、Ｎ−ヘタリール、Ｎ−シクロアルキル、Ｎ−ヘテロシクリル、Ｏ、およびＳの群より選択され、
Ｚは、ＸとＺの両方がＨ２ではあり得ないことを例外として、独立してＯ、およびＳまたはＨ２の群より選択され、
ＧおよびＧ’は独立してＨ、アルキル、ＯＨ、所望によりＲ’で置換されていてもよいＣＨ２−ヘテロシクリル、および所望によりＲ’で置換されていてもよいベンジルの群より選択され、
Ｑ１〜Ｑ４はＲ’、Ｎ、またはＮ−オキシドから独立して選択される基で置換された炭素Ｃを表し、
Ａは独立してアルキル、シクロアルキル、Ｃｌ、およびＦの群より選択され、
Ｒは、限定されないが、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＳＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＣＲ’Ｒ”−、−ＣＲ’ＮＲ’Ｒ”−、−アリール、−ヘタリール、−アルキル、−シクロアルキル、−ヘテロシクリル、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｒ”、−Ｐ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｒ”、−ＯＰ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＲ’ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＮＲ’ＣＯＲ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）ＮＲ’Ｒ”、−Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｃ−ＮＯ２）ＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２ＮＲ’ＣＯＲ”、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｒ’、−Ｃ（Ｃ＝Ｎ−ＯＲ’）Ｒ”、−ＣＲ’＝ＣＲ’Ｒ”、−ＣＣＲ’、−Ｓ（Ｃ＝Ｏ）（Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）Ｒ”、−ＳＦ５、および−ＯＣＦ３を含み、
Ｒ’およびＲ”は独立して結合、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘタリール、ヘテロシクリルより選択され、
ｎは１〜４までの整数であり、
Figure 0006873433
 は立体特異的（（Ｒ）または（Ｓ））でも非立体特異的でもよい結合を表し、
Ｒｎは１〜４個の独立した官能基または原子を含み、且つ、所望によりそれらのうちの１つがＰＴＭ、化学リンカー基（Ｌ）、ＵＬＭ、ＣＬＭ（またはＣＬＭ’）、またはそれらの組合せに共有結合するように改変されてもよい。
「独立して」という用語は、独立して適用される変数が適用毎に独立して変化することを表すために本明細書において使用される。
「アルキル」という用語は、直鎖、分岐鎖、または環状の完全飽和炭化水素ラジカルまたはアルキル基、好ましくはＣ１−Ｃ１０、より好ましくはＣ１−Ｃ６、あるいはＣ１−Ｃ３のアルキル基であって、所望により置換されていてもよいアルキル基をその文脈内で意味するものとする。アルキル基の例は何よりもメチル、エチル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル、イソプロピル、２−メチル−プロピル、シクロプロピル、シクロ−プロピル−メチル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンチルエチル、シクロヘキシルエチルおよびシクロヘキシルである。ある特定の実施形態ではそのアルキル基はハロゲン基（Ａｔ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、またはＩ）で末端封止されている。ある特定の好ましい実施形態では、脱ハロゲン酵素に共有結合してもよい本発明による化合物。これらの化合物は、概して、遠位末端にハロゲン置換基（塩素または臭素の場合が多い）を有するアルキル基で終止する側鎖であって、そのような部分を有する化合物をタンパク質に共有結合させることになる前記側鎖を含有する（ポリエチレングリコール基を介して結合されていることが多い）。
「アルケニル」という用語は少なくとも１つのＣ＝Ｃ結合を含有する直鎖、分岐鎖、または環状のＣ２−Ｃ１０（好ましくはＣ２−Ｃ６）炭化水素ラジカルを指す。
「アルキニル」という用語は少なくとも１つの
Figure 0006873433
 結合を含有する直鎖、分岐鎖、または環状のＣ２−Ｃ１０（好ましくはＣ２−Ｃ６）炭化水素ラジカルを指す。
「アルキレン」という用語が使用されるとき、それは所望により置換されていてもよい−（ＣＨ２）ｎ−基（ｎは概して０〜６までの整数）を指す。置換される場合、そのアルキレン基はメチレン基のうちの１つ以上がＣ１−Ｃ６アルキル基（シクロプロピル基またはｔ−ブチル基を含む）によって置換されることが好ましく、しかしながら本明細書における別段の開示のように１つ以上のハロ基、好ましくは１〜３個までのハロ基または１個もしくは２個のヒドロキシル基、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）基、もしくはアミノ酸側鎖で置換されてもよい。ある特定の実施形態ではアルキレン基は、単一のハロゲン基、好ましくは塩素基で置換されたアルキル鎖が置換している（ポリエチレングリコール鎖の遠位末端上であることが好ましいが、それに限定されない）ポリエチレングリコール鎖（１〜１０単位までの、好ましくは１〜６単位までの、多くの場合に１〜４単位までのエチレングリコール単位のもの）でさらに置換されているウレタン基またはアルコキシ基（または他の基）で置換されてもよい。さらに他の実施形態ではそのアルキレン（多くの場合、メチレン）基は、天然アミノ酸または非天然アミノ酸、例えば、アラニン、β−アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、フェニルアラニン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、またはチロシンの側鎖基などのアミノ酸側鎖基で置換されてもよい。
「非置換」という用語は水素原子だけでの置換を意味するものとする。一連のＣ０を含む炭素原子は、炭素が存在せず、且つ、Ｈで置換されていることを意味する。したがって、ある範囲のＣ０−Ｃ６である炭素原子には１個、２個、３個、４個、５個、および６個の炭素原子が含まれ、Ｃ０についてはＨが炭素の代わりになっている。
「置換された」または「所望により置換されていてもよい」という用語は、文脈において、分子上のどこかの炭素（または窒素）位に１つ以上の置換基（本発明による化合物ではある部分上に独立して最大で５置換基まで、好ましくは最大で３置換基まで、多くの場合に１または２置換基が存在し、且つ、さらに置換されていてもよい置換基がそれらの置換基に含まれる場合がある）が独立して（すなわち、多くの置換基が存在する場合、各置換基が別の置換基から独立している）存在することを意味するものとし、その用語には置換基としてヒドロキシル、チオール、カルボキシル、
Figure 0006873433
 ニトロ（ＮＯ２）、ハロゲン（好ましくは１個、２個、または３個のハロゲン、特にアルキル上、特にトリフルオロメチルなどのメチル基上に）、アルキル基（好ましくはＣ１−Ｃ１０、より好ましくはＣ１−Ｃ６）、アリール（特にフェニルおよび置換フェニル、例えばベンジルまたはベンゾイル）、アルコキシ基（好ましくはフェニルおよび置換フェニルを含むＣ１−Ｃ６アルキルまたはアリール）、チオエーテル（Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはアリール）、アシル（好ましくはＣ１−Ｃ６アシル）、アルキレンエステルを含むエステルまたはチオエステル（好ましくはＣ１−Ｃ６アルキルまたはアリール）（それにより、Ｃ１−Ｃ６アルキル基またはアリール基で置換されていることが好ましいエステル官能基よりもむしろアルキレン基において結合が起こる）が含まれ、好ましくは、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはアリール、ハロゲン（好ましくはＦまたはＣｌ）、アミン（５員または６員の環状アルキレンアミンを含み、１個または２個のヒドロキシル基でアルキル基が置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルアミンまたはＣ１−Ｃ６ジアルキルアミンをさらに含む）、または所望により置換されていてもよい−Ｎ（Ｃ０−Ｃ６アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキル）基（単一のハロゲン置換基、好ましくは塩素置換基を含有するアルキル基がさらに結合しているポリエチレングリコール鎖で所望により置換されていてもよい）、ヒドラジン、アミド、好ましくは１個または２個のＣ１−Ｃ６アルキル基で置換されているアミド（所望により１個または２個のＣ１−Ｃ６アルキル基で置換されていてもよいカルボキサミドを含む）、アルカノール（好ましくはＣ１−Ｃ６アルキルまたはアリール）、またはアルカン酸（好ましくはＣ１−Ｃ６アルキルまたはアリール）が含まれる。本発明に従う置換基には、例えば、Ｒ１およびＲ２の各々が本明細書において別途記載されている通りであり、且つ、Ｒ３がＨまたはＣ１−Ｃ６アルキル基であり、この文脈ではＲ１、Ｒ２、Ｒ３がＣ１−Ｃ３アルキル基（イソプロピル基またはｔ−ブチル基を含む）であることが好ましい−ＳｉＲ１Ｒ２Ｒ３基が含まれ得る。上記の基の各々が直接的に置換部分に結合されてよく、あるいは、置換基は、所望により置換されていてもよい−（ＣＨ２）ｍ−あるいは所望により置換されていてもよい−（ＯＣＨ２）ｍ−、上記の置換基のうちのいずれか１つ以上で置換されていてもよい−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−基を介して置換部分に結合されてよい（好ましくはアリール部分またはヘテラリール部分の場合）。上で特定されたアルキレン基−（ＣＨ２）ｍ−または−（ＣＨ２）ｎ−基、またはエチレングリコール鎖などの他の鎖は鎖上のどの位置で置換されてもよい。アルキレン基上の好ましい置換基にはハロゲンまたはＣ１−Ｃ６（好ましくはＣ１−Ｃ３）アルキル基が含まれ、それらは所望により１個もしくは２個のヒドロキシル基、１個もしくは２個のエーテル基（Ｏ−Ｃ１−Ｃ６基）、最大で３個のハロ基（好ましくはＦ）、または本明細書において別途記載されたアミノ酸の側鎖、および所望により置換されていてもよいアミド基（好ましくは上記のように置換されたカルボキサミド）、またはウレタン基（さらに置換されていてもよい１個または２個のＣ０−Ｃ６アルキル置換基を有することが多い）で置換されてもよい。ある特定の実施形態ではそのアルキレン基（単一のメチレン基であることが多い）は、１個または２個の所望により置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基、最も多くの場合にメチルもしくはＯ−メチル基、または本明細書において別途記載されたアミノ酸側鎖で置換される。本発明では分子中の部分は所望により最大で５個までの置換基、好ましくは最大で３個までの置換基で置換されていてもよい。本発明では置換される部分は１個または２個の置換基で置換されることが最も多い。
「置換された」（各置換基他のあらゆる置換基から独立している）という用語は、その文脈においてＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロゲン、アミド、カルボキサミド、スルホンアミドを含むスルホン、ケト、カルボキシ、Ｃ１−Ｃ６エステル（オキシエステルまたはカルボニルエステル）、Ｃ１−Ｃ６ケト、ウレタン−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ１Ｒ２、または−Ｎ（Ｒ１）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ１、ニトロ、シアノおよびアミン（特に所望により１個または２個のヒドロキシル基で置換されてもよいＣ１−Ｃ６アルキレン−ＮＲ１Ｒ２、モノまたはジ−Ｃ１−Ｃ６アルキル置換アミンを含む）の使用も意味するものとする。これらの基のそれぞれが、文脈内で別途指示されない限り、１個と６個の間の炭素原子を含む。ある特定の実施形態では好ましい置換基には、置換基を使用する文脈に応じて、例えば、−ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、＝Ｏ、−（ＣＨ２）ｍ−（ここでｍおよびｎは文脈内で１、２、３、４、５、または６である）、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、ＳＯ２−、または−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎＯＨ、−（ＣＨ２）ｎＳＨ、−（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｎＯ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）ｎＯＣ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（Ｏ）−Ｒ１、−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−ＮＲ１Ｒ２、−（ＯＣＨ２）ｎＯＨ、−（ＣＨ２Ｏ）ｎＣＯＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−（ＯＣＨ２）ｎＯ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２Ｏ）ｎＣ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＯＣＨ２）ｎＮＨＣ（Ｏ）−Ｒ１、−（ＣＨ２Ｏ）ｎＣ（Ｏ）−ＮＲ１Ｒ２、−Ｓ（Ｏ）２−ＲＳ、−Ｓ（Ｏ）−ＲＳ（ＲＳはＣ１−Ｃ６アルキル基または−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１Ｒ２基である）、ＮＯ２、ＣＮ、またはハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、好ましくはＦまたはＣｌ）が含まれる。Ｒ１およびＲ２はそれぞれ文脈において、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキル基（所望により１個または２個のヒドロキシル基、または最大で３個までのハロゲン基、好ましくはフッ素で置換されてもよい）である。「置換された」という用語は、規定された化合物および使用される置換基の化学背景において、所望により置換されていてもよいアリール基もしくはヘテロアリール基、または本明細書において別途記載された所望により置換されていてもよい複素環基も意味するものとする。アルキレン基は、好ましくは、所望により置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基（メチル、エチル、またはヒドロキシメチル、またはヒドロキシエチルが好ましく、そうしてキラル中心が提供される）、本明細書において別途記載されたアミノ酸基の側鎖、本明細書において上で記載されたアミド基、またはＲ１とＲ２が本明細書において別途記載された通りであるウレタン基Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ１Ｒ２基で本明細書における別段の開示のように置換されてもよいが、他の多数の基を置換基として使用してもよい。所望により置換されていてもよい様々な部分は、３個以上の置換基、好ましくはせいぜい３個の置換基、および好ましくは１個または２個の置換基で置換されてよい。分子の特定の位置で化合物が置換されることが（原子価のために原則的に）必要であるが、置換が表示されていない場合、その置換基は別途その置換の内容が示唆されていない限りＨであると解釈または理解されることに留意されたい。
「アリール」または「芳香族」という用語は、文脈において、単環（例えば、ベンゼン、フェニル、ベンジル）または縮合環（例えば、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル等）を有する置換（本明細書において別途記載されたような置換）または非置換一価芳香族ラジカルを指し、環上のあらゆる利用可能な安定な位置において、他には提示された化学構造の中で示されるように本発明の化合物に結合し得る。アリール基の他の例は、文脈において、何よりも、複素環状芳香族環系、１個以上の窒素原子、酸素原子、またはイオウ原子を環（単環）の中に有する「ヘテロアリール」基、例えば、イミダゾール、フリル、ピロール、フラニル、チエン、チアゾール、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、トリアゾール、オキサゾール等、または融合環系、例えば、インドール、キノリン、インドリジン、アザインドリジン、ベンゾフラザン等を含み、それらは所望により上記のように置換されてもよい。言及することができるヘテロアリール基の中には、ピロール、ピリジン、ピリドン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、トリアジン、テトラゾール、インドール、イソインドール、インドリジン、アザインドリジン、プリン、インダゾール、キノリン、ジヒドロキノリン、テトラヒドロキノリン、イソキノリン、ジヒドロイソキノリン、テトラヒドロイソキノリン、キノリジン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、イミダゾピリジン、イミダゾトリアジン、ピラジノピリダジン、アクリジン、フェナントリジン、カルバゾール、カルバゾリン、ピリミジン、フェナントロリン、フェナセン、オキサジアゾール、ベンズイミダゾール、ピロロピリジン、ピロロピリミジンおよびピリドピリミジンなどの窒素含有ヘテロアリール基；チオフェンおよびベンゾチオフェンなどのイオウ含有芳香族複素環；フラン、ピラン、シクロペンタピラン、ベンゾフランおよびイソベンゾフランなどの酸素含有芳香族複素環；および何よりも、全てが所望により置換されていてもよい、チアゾール、チアジゾール、イソチアゾール、ベンズオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾチアジアゾール、フェノチアジン、イソオキサゾール、フラザン、フェノキサジン、ピラゾロオキサゾール、イミダゾチアゾール、チエノフラン、フロピロール、ピリドキサジン、フロピリジン、フロピリミジン、チエノピリミジンおよびオキサゾールなどの窒素、イオウ、および酸素の中から選択される２個以上のヘテロ原子を含む芳香族複素環が含まれる。
「置換アリール」という用語は少なくとも１つの芳香環、または少なくとも１つが芳香環である複数の縮合環より構成され、その環が１つ以上の置換基で置換されている芳香族炭素環基を指す。例えば、アリール基は次のものより選択される置換基を含み得る：−（ＣＨ２）ｎＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ０−Ｃ６）アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ０−Ｃ６）アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ０−Ｃ６）アルキル、アミン、アミン上のアルキル基が所望により１個または２個のヒドロキシル基、または最大で３個のハロ（好ましくはＦ、Ｃｌ）基で置換されていてもよいモノまたはジ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、好ましくはＣＨ３基、ＣＦ３基、ＯＭｅ基、ＯＣＦ３基、ＮＯ２基、またはＣＮ基（それらの各々がフェニル環のオルト位、メタ位、および／またはパラ位において、好ましくはパラ位において置換される可能性がある）、所望により置換されていてもよいフェニル基（フェニル基自体がＵＬＭ基を含むＰＴＭ基に結合したリンカー基で置換されていることが好ましい）、および／またはＦ基、Ｃｌ基、ＯＨ基、ＣＯＯＨ基、ＣＨ３基、ＣＦ３基、ＯＭｅ基、ＯＣＦ３基、ＮＯ２基、もしくはＣＮ基のうちの少なくとも１つ（フェニル環のオルト位、メタ位、および／またはパラ位において、好ましくはパラ位において）、所望により置換されていてもよいナフチル基、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、好ましくはメチル置換イソオキサゾールを含む所望により置換されていてもよいイソオキサゾール、所望により置換されていてもよいオキサゾールを含むメチル置換オキサゾール、所望により置換されていてもよいチアゾールを含むメチル置換チアゾール、所望により置換されていてもよいイソチアゾールを含むメチル置換イソチアゾール、所望により置換されていてもよいピロールを含むメチル置換ピロール、所望により置換されていてもよいイミダゾールを含むメチルイミダゾール、所望により置換されていてもよいベンズイミダゾールまたはメトキシベンジルイミダゾール、所望により置換されていてもよいオキシイミダゾールまたはメチルオキシイミダゾール、メチルジアゾール基を含む所望により置換されていてもよいジアゾール基、メチル置換トリアゾール基を含む所望により置換されていてもよいトリアゾール基、ハロ置換（好ましくはＦ）またはメチル置換ピリジン基またはオキサピリジン基（酸素によってピリジン基がフェニル基に結合されている場合）を含む所望により置換されていてもよいピリジン基、所望により置換されていてもよいフラン、所望により置換されていてもよいベンゾフラン、所望により置換されていてもよいジヒドロベンゾフラン、所望により置換されていてもよいインドール、インドリジンまたはアザインドリジン（２、３、または４−アザインドリジン）、所望により置換されていてもよいキノリン、およびそれらの組合せ。
「カルボキシル」はＲが水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールである−Ｃ（Ｏ）ＯＲ基を表し、一方でこれらの一般的な置換基は、本明細書において定義される対応する基の定義と同一の意味を有する。
「ヘテロアリール」または「ヘタリール」という用語は、決して限定されないが、所望により置換されていてもよいキノリン（ファルマコフォアに結合しているか、またはキノリン環内のいずれかの炭素原子上で置換されていてよい）、所望により置換されていてもよいインドール（ジヒドロインドールを含む）、所望により置換されていてもよいインドリジン、所望により置換されていてもよいアザインドリジン（２、３または４−アザインドリジン）、所望により置換されていてもよいベンズイミダゾール、ベンゾジアゾール、ベンゾキソフラン、所望により置換されていてもよいイミダゾール、所望により置換されていてもよいイソオキサゾール、所望により置換されていてもよいオキサゾール（好ましくはメチル置換）、所望により置換されていてもよいジアゾール、所望により置換されていてもよいトリアゾール、テトラゾール、所望により置換されていてもよいベンゾフラン、所望により置換されていてもよいチオフェン、所望により置換されていてもよいチアゾール（好ましくはメチルおよび／またはチオール置換）、所望により置換されていてもよいイソチアゾール、所望により置換されていてもよいトリアゾール（好ましくはメチル基、トリイソプロピルシリル基、所望により置換されていてもよい−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキル基、または所望により置換されていてもよい−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキル基で置換された１，２，３−トリアゾール）、所望により置換されていてもよいピリジン（２−、３、または４−ピリジン）、または次の化学構造に従う基を意味することができ、
Figure 0006873433
 式中、
ＳｃはＣＨＲＳＳ、ＮＲＵＲＥ、またはＯであり、
ＲＨＥＴはＨ、ＣＮ、ＮＯ２、ハロ（好ましくはＣｌまたはＦ）、所望により置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル（１個または２個のヒドロキシル基、または最大で３個のハロ基（例えばＣＦ３）で置換されることが好ましい、所望により置換されていてもよいＯ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（１個または２個のヒドロキシル基、または最大で３個のハロ基で置換されることが好ましい）、または所望により置換されていてもよいアセチレン基であって、ＲａがＨまたはＣ１−Ｃ６アルキル基（好ましくはＣ１−Ｃ３アルキル）であるアセチレン基
Figure 0006873433
 であり、
ＲＳＳはＨ、ＣＮ、ＮＯ２、ハロ（好ましくはＦまたはＣｌ）、所望により置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル（１個または２個のヒドロキシル基、または最大で３個のハロ基で置換されることが好ましい）、所望により置換されていてもよいＯ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（１個または２個のヒドロキシル基、または最大で３個のハロ基で置換されることが好ましい）、または所望により置換されていてもよい−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（１個または２個のヒドロキシル基、または最大で３個のハロ基で置換されることが好ましい）であり、
ＲＵＲＥはＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル（好ましくはＨまたはＣ１−Ｃ３アルキル）、または-Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、それらの基の各々が所望により１個または２個のヒドロキシル基、または最大で３個のハロゲン、好ましくはフッ素基で置換されていてもよく、または所望により置換されていてもよい複素環、例えば、それぞれ所望により置換されていてよいピペリジン、モルホリン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピペリジン、ピペラジンで置換されていてもよく、且つ、
ＹＣはＮまたはＣ−ＲＹＣであり、式中、ＲＹＣはＨ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、ハロ（好ましくはＣｌまたはＦ）、所望により置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル（１個または２個のヒドロキシル基、または最大で３個のハロ基（例えばＣＦ３）で置換されることが好ましい、所望により置換されていてもよいＯ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（１個または２個のヒドロキシル基、または最大で３個のハロ基で置換されることが好ましい）、または所望により置換されていてもよいアセチレン基であって、ＲａがＨまたはＣ１−Ｃ６アルキル基（好ましくはＣ１−Ｃ３アルキル）であるアセチレン基
Figure 0006873433
 である。
「アラルキル」および「ヘテロアリールアルキル」という用語は、アリールとヘテロアリールの両方またはそれぞれ、ならびに上の定義に従うアルキルおよび／またはヘテロアルキルおよび／または炭素環系および／またはヘテロシクロアルキル環系を含む基を指す。
本明細書において使用される「アリールアルキル」という用語は、上で定義したアルキル基に付加された上で定義されたアリール基を指す。アリールアルキル基は１〜６個の炭素原子のアルキル基を介してその親部分に結合している。アリールアルキル基中のアリール基は上で定義されたように置換され得る。
「複素環」という用語は少なくとも１つのヘテロ原子、例えば、Ｎ、ＯまたはＳを含有する環状基を指し、それは芳香族（ヘテロアリール）または非芳香族であってよい。したがって、そのヘテロアリール部分はその使用背景に応じて複素環の定義に入る。例となるヘテロアリール基は本明細書において上に記載されている。
例となる複素環状には何よりもアゼチジニル、ベンズイミダゾリル、１，４−ベンゾジオキサニル、１，３−ベンゾジオキソリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロピラニル、ジヒドロフラニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、エチレンウレア、１，３−ジオキソラン、１，３−ジオキサン、１，４−ジオキサン、フリル、ホモピペリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、インドリニル、インドリル、イソキノリニル、イソチアゾリジニル、イソチアゾリル、イソキサゾリジニル、イソキサゾリル、モルホリニル、ナフチリジニル、オキサゾリジニル、オキサゾリル、ピリドン、２−ピロリドン、ピリジン、ピペラジニル、、Ｎ−メチルピペラジニル、ピペリジニル、フタルイミド、スクシンイミド、ピラジニル、ピラゾリニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、ピロリル、キノリニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリン、チアゾリジニル、チアゾリル、チエニル、テトラヒドロチオフェン、オキサン、オキセタニル、オキサチオラニル、チアンが含まれる。
複素環基は所望により、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、チオケト、カルボキシ、カルボキシアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、複素環、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯアリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、オキソ（＝Ｏ）、および−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群より選択されるメンバーで置換され得る。そのような複素環基は単環または複数の縮合環を有し得る。窒素複素環およびヘテロアリールの例にはピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソオキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、モルホリノ、ピペリジニル、テトラヒドロフラニル等、ならびにＮ−アルコキシ−窒素含有複素環が挙げられるがこれらに限定されない。「複素環」という用語には複素環のいずれかがベンゼン環またはシクロヘキサン環または別の複素環（例えば、インドリル、キノリル、イソキノリル、テトラヒドロキノリル等）に融合している二環式基も含まれる。
「シクロアルキル」という用語は、本明細書において定義される単環式または多環式のアルキル基またはシクロアルカン、例えば、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル等を含む、環の中に３個から２０個までの炭素原子を有する飽和単環式炭化水素基に由来する一価の基を意味し得るが、決してこれに限定されない。「置換シクロアルキル」という用語は、決して限定されないが、単環式または多環式アルキル基であって、１つ以上の置換基、例えば、アミノ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、カルビルオキシ、カルビルメルカプト、アリール、ニトロ、メルカプト、またはスルホによって置換されている前記アルキル基を意味することができ、一方でこれらの一般的な置換基は、本レジェンドにおいて定義される対応する基の定義と同一の意味を有する。
「ヘテロシクロアルキル」は、環状構造の少なくとも１つの環炭素原子がＮ、Ｏ、Ｓ、またはＰからなる群より選択されるヘテロ原子で置換されている単環式または多環式アルキル基を指す。「置換ヘテロシクロアルキル」は、環状構造の少なくとも１つの環炭素原子がＮ、Ｏ、Ｓ、またはＰからなる群より選択されるヘテロ原子で置換されている単環式または多環式アルキル基であって、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、カルビルオキシ、カルビルメルカプト、アリール、ニトロ、メルカプト、またはスルホからなる群より選択される１つ以上の置換基を含有する基を指し、一方でこれらの一般的な置換基は、本レジェンドにおいて定義される対応する基の定義と同一の意味を有する。
「ヒドロカルビル」という用語は炭素と水素を含有し、且つ、完全飽和、部分不飽和、または芳香族であってよい化合物を意味するものとし、それにはアリール基、アルキル基、アルケニル基、およびアルキニル基が含まれる。
本明細書に記載される実施形態のいずれにおいても、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｇ、Ｇ’、Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、Ｑ１〜Ｑ４、Ａ、およびＲｎは独立してリンカーに共有結合してよく、および/または１つ以上のＰＴＭ基、ＵＬＭ基、ＣＬＭ基、またはＣＬＭ’基が結合しているリンカーに共有結合してよい。
より具体的には、ＣＬＭの非限定的な例には下に示すもの、ならびに下の分子に示される様々な特徴のうちの１つ以上の組合せから生じる「ハイブリッド」分子が含まれる。
Figure 0006873433
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Figure 0006873433
ある特定の事例では、「ＣＬＭ」はセレブロンＥ３リガーゼに結合するイミドであり得る。これらのイミドおよびリンカー結合点は、限定されないが、下記の構造であり得る。
Figure 0006873433
例となるリンカー
ある特定の実施形態では本明細書に記載される化合物は化学リンカー（Ｌ）を介して化学的に連結または結合され得る。ある特定の実施形態ではそのリンカー基Ｌは、１つ以上の共有結合したＡ構造単位（例えば、−Ａ１…Ａｑ−）を含む基であって、Ａ１がＵＬＭ、ＰＴＭ、またはそれらの組合せのうちの少なくとも１つに結合した基であることを特徴とする。ある特定の実施形態ではＡ１はＵＬＭ、ＰＴＭ、またはそれらの組合せを直接的に別のＵＬＭ、ＰＴＭ、またはそれらの組合せに連結する。他の実施形態ではＡ１はＡｑを介してＵＬＭ、ＰＴＭ、またはそれらの組合せを間接的に別のＵＬＭ、ＰＴＭ、またはそれらの組合せに連結する。
ある特定の実施形態ではＡ１〜Ａｑはそれぞれ独立して結合、ＣＲＬ１ＲＬ２、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲＬ３、ＳＯ２ＮＲＬ３、ＳＯＮＲＬ３、ＣＯＮＲＬ３、ＮＲＬ３ＣＯＮＲＬ４、ＮＲＬ３ＳＯ２ＮＲＬ４、ＣＯ、ＣＲＬ１＝ＣＲＬ２、
Figure 0006873433
 ＳｉＲＬ１ＲＬ２、Ｐ（Ｏ）ＲＬ１、Ｐ（Ｏ）ＯＲＬ１、ＮＲＬ３Ｃ（＝ＮＣＮ）ＮＲＬ４、ＮＲＬ３Ｃ（＝ＮＣＮ）、ＮＲＬ３Ｃ（＝ＣＮＯ２）ＮＲＬ４、Ｃ３−１１シクロアルキルであって所望により０〜６個のＲＬ１基および／またはＲＬ２基で置換されていてもよいもの、Ｃ３−１１ヘテロシクリルであって所望により０〜６個のＲＬ１基および／またはＲＬ２基で置換されていてもよいもの、アリールであって所望により０〜６個のＲＬ１基および／またはＲＬ２基で置換されていてもよいもの、ヘテロアリールであって所望により０〜６個のＲＬ１基および／またはＲＬ２基で置換されていてもよいものであり、その場合にＲＬ１またはＲＬ２はそれぞれ独立して他のＡ基に結合して０〜４個のＲＬ５基でさらに置換され得るシクロアルキルおよび／またはヘテロシクリルを形成することができ、式中、
ＲＬ１、ＲＬ２、ＲＬ３、ＲＬ４およびＲＬ５はそれぞれ独立してＨ、ハロ、Ｃ１−８アルキル、ＯＣ１−８アルキル、ＳＣ１−８アルキル、ＮＨＣ１−８アルキル、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）２、Ｃ３−１１シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３−１１ヘテロシクリル、ＯＣ１−８シクロアルキル、ＳＣ１−８シクロアルキル、ＮＨＣ１−８シクロアルキル、Ｎ（Ｃ１−８シクロアルキル）２、Ｎ（Ｃ１−８シクロアルキル）（Ｃ１−８アルキル）、ＯＨ、ＮＨ２、ＳＨ、ＳＯ２Ｃ１−８アルキル、Ｐ（Ｏ）（ＯＣ１−８アルキル）（Ｃ１−８アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＣ１−８アルキル）２、ＣＣ−Ｃ１−８アルキル、ＣＣＨ、ＣＨ＝ＣＨ（Ｃ１−８アルキル）、Ｃ（Ｃ１−８アルキル）＝ＣＨ（Ｃ１−８アルキル）、Ｃ（Ｃ１−８アルキル）＝Ｃ（Ｃ１−８アルキル）２、Ｓｉ（ＯＨ）３、Ｓｉ（Ｃ１−８アルキル）３、Ｓｉ（ＯＨ）（Ｃ１−８アルキル）２、ＣＯＣ１−８アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＮＯ２、ＳＦ５、ＳＯ２ＮＨＣ１−８アルキル、ＳＯ２Ｎ（Ｃ１−８アルキル）２、ＳＯＮＨＣ１−８アルキル、ＳＯＮ（Ｃ１−８アルキル）２、ＣＯＮＨＣ１−８アルキル、ＣＯＮ（Ｃ１−８アルキル）２、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）ＣＯＮＨ（Ｃ１−８アルキル）、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）ＣＯＮ（Ｃ１−８アルキル）２、ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ１−８アルキル）、ＮＨＣＯＮ（Ｃ１−８アルキル）２、ＮＨＣＯＮＨ２、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−８アルキル）、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）ＳＯ２Ｎ（Ｃ１−８アルキル）２、ＮＨＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−８アルキル）、ＮＨＳＯ２Ｎ（Ｃ１−８アルキル）２、ＮＨＳＯ２ＮＨ２である。
ある特定の実施形態ではｑは０以上の整数である。ある特定の実施形態ではｑは１以上の整数である。
ある特定の実施形態では、例えば、ｑが２より大きい場合、ＡｑはＵＬＭ部分またはＵＬＭ’部分に結合している基であり、Ａ１およびＡｑはＡ構造単位を介して連結されている（そのようなＡ構造単位の数はｑ−２である）。
ある特定の実施形態では、例えば、ｑが２である場合、ＡｑはＡ１とＵＬＭ部分またはＵＬＭ’部分に結合している基である。
ある特定の実施形態では、例えば、ｑが１である場合、リンカー基Ｌの構造は−Ａ１−であり、Ａ１はＵＬＭ部分またはＵＬＭ’部分とＰＴＭ部分に結合している基である。
追加の実施形態ではｑは１から１００まで、１から９０まで、１から８０まで、１から７０まで、１から６０まで、１から５０まで、１から４０まで、１から３０まで、１から２０まで、または１から１０までの整数である。
ある特定の実施形態ではリンカー（Ｌ）は次のものからなる群より選択される：
Figure 0006873433
追加の実施形態ではリンカー基は、１単位と約１００単位の間のエチレングリコール単位、約１単位と約５０単位の間のエチレングリコール単位、１単位と約２５単位の間のエチレングリコール単位、約１単位と１０単位の間のエチレングリコール単位、１単位と約８単位の間のエチレングリコール単位、および１単位と６単位の間のエチレングリコール単位、２単位と４単位の間のエチレングリコール単位を有する所望により置換されていてもよい（ポリ）エチレングリコールであるか、または所望により置換基を有していてもよいＯ原子、Ｎ原子、Ｓ原子、Ｐ原子、もしくはＳｉ原子が中間に散在する、所望により置換されていてもよいアルキル基である。ある特定の実施形態ではリンカーはアリール、フェニル、ベンジル、アルキル、アルキレン、または複素環基で置換される。ある特定の実施形態ではリンカーは非対称的または対称的であり得る。
本明細書に記載される化合物の実施形態のいずれにおいても、リンカー基は本明細書に記載されるあらゆる適切な部分であり得る。１つの実施形態ではリンカーは、約１〜約１２エチレングリコール単位、１単位と約１０単位の間のエチレングリコール単位、約２〜約６エチレングリコール単位、約２単位と５単位の間のエチレングリコール単位、約２単位と４単位の間のエチレングリコール単位のサイズ範囲にわたる置換または非置換ポリエチレングリコール基である。
ＣＬＭ（またはＵＬＭ）基およびＰＴＭ基はリンカー化学にとって適切であり、且つ、安定したあらゆる基を介してリンカー基に共有結合してもよいが、本発明の好ましい態様において、リンカーは好ましくはアミド、エステル、チオエステル、ケト基、カルバメート（ウレタン）、炭素、またはエーテルを介してＣＬＭ基およびＰＴＭ基に独立して共有結合しており、それらの基の各々はそのＣＬＭ基のユビキチンリガーゼに対する結合、およびそのＰＴＭ基の分解標的タンパク質に対する結合を最大にするためにそのＣＬＭ基およびＰＴＭ基のどこかに挿入されてよい。（ＰＴＭ基がＵＬＭ基である特定の態様においてはユビキチンリガーゼ自体が分解標的タンパク質であり得ることに留意されたい）。ある特定の好ましい態様において、リンカーはＣＬＭ基および／またはＰＴＭ基上の所望により置換されていてもよいアルキル基、アルキレン基、アルケン基、またはアルキン基、アリール基、または複素環基に結合され得る。
ある特定の実施形態では「Ｌ」は次のような４個から２４個までの直鎖原子を有する直鎖であって、その直鎖の炭素原子が酸素、窒素、アミド、フッ化炭素などで置換されてよい直鎖であり得る：
Figure 0006873433
ある特定の実施形態では「Ｌ」は非直鎖であり得、且つ、脂肪族部分、または芳香族部分、または複素芳香族環状部分であり得、「Ｌ」の幾つかの例には、限定されないが、次のものが含まれ、
Figure 0006873433
式中、上記構造中の「Ｘ」は２個から１４個までの範囲の原子を有する直鎖であり得、およびその前述の鎖は酸素などのヘテロ原子を含有してよく、且つ、
上記構造中の「Ｙ」はＯ、Ｎ、Ｓ（Ｏ）ｎ（ｎ＝０、１、２）であり得る。
例となるＰＴＭ
本発明の好ましい態様において、ＰＴＭ基は標的タンパク質に結合する基である。ＰＴＭ基の標的は多種多様であり、それらは、少なくとも配列の一部が細胞内に見出され、且つ、ＰＴＭ基に結合し得るような細胞内で発現されるタンパク質から選択される。「タンパク質」という用語は、本発明のＰＴＭ基に結合し得る充分な長さのオリゴペプチド配列およびポリペプチド配列を含む。真核生物系またはウイルス、細菌、もしくは真菌を含む微生物系のあらゆるタンパク質が本明細書において別途記載されるように本発明による化合物が媒介するユビキチン化の標的である。それらの標的タンパク質は真核生物のタンパク質であることが好ましい。ある特定の態様において、前記タンパク質結合部分はハロアルカンであり（少なくとも１つのハロ基で、好ましくはアルキル基の遠位末端に（すなわち、リンカーまたはＣＬＭ基から離れて）ハロ基で置換されているＣ１−Ｃ１０アルキル基であることが好ましい）、そのハロアルカンが患者または対象中の脱ハロゲン酵素、または診断アッセイ中の脱ハロゲン酵素に共有結合し得る。
本発明のＰＴＭ基は、例えば、特異的にタンパク質に結合する（標的タンパク質に結合する）あらゆる部分を含み、多数の中でも次の非限定的な例の低分子標的タンパク質部分を含む：Ｈｓｐ９０阻害剤、キナーゼ阻害剤、ＨＤＭ２およびＭＤＭ２阻害剤、ヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質標的化合物、ＨＤＡＣ阻害剤、ヒトリシンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、核内ホルモン受容体化合物、免疫抑制剤化合物、およびアリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）標的化合物。以下に記載される組成物はこれらの９種類の低分子標的タンパク質結合部分のメンバーの幾つかを例示する。そのような低分子標的タンパク質結合部分にはこれらの組成物の薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、溶媒和化合物、および多形体、ならびに目的のタンパク質を標的とし得る他の低分子も含まれる。これらの結合部分は、ユビキチン化と分解のためにユビキチンリガーゼの近傍に標的タンパク質（これにタンパク質標的部分が結合する）を提供するために好ましくはリンカーを介してユビキチンリガーゼ結合部分に結合される。
タンパク質標的部分またはＰＴＭ基に結合することができ、且つ、ユビキチンリガーゼが作用するか、またはユビキチンリガーゼによって分解されるあらゆるタンパク質が本発明による標的タンパク質である。概して、標的タンパク質は、例えば、構造タンパク質、受容体、酵素、細胞表面タンパク質、細胞の統合的機能に関連するタンパク質を含んでよく、それらには触媒活性、アロマターゼ活性、運動活性、ヘリケース活性、代謝過程（同化作用と異化作用）、抗酸化剤活性、タンパク質分解、生合成に関わるタンパク質；キナーゼ活性、酸化還元酵素活性、転移酵素活性、加水分解酵素活性、脱離酵素活性、異性化酵素活性、連結酵素活性、酵素調節因子活性、シグナル伝達酵素活性、構造分子活性、結合活性（タンパク質、脂質、炭水化物）、受容体活性、細胞運動性、膜融合、細胞間コミュニケーション、生物学的プロセスの調節、発生、細胞分化、刺激への応答を有するタンパク質；挙動関連タンパク質、細胞接着タンパク質、細胞死に関与するタンパク質、輸送に関与するタンパク質（タンパク質トランスポーター活性、核内輸送、イオントランスポーター活性、チャネルトランスポーター活性、担体活性、透過酵素活性、分泌活性、電子伝達体活性を含む）、発病、シャペロン調節因子活性、核酸結合活性、転写調節因子活性、細胞外構成および生合成活性、翻訳調節因子活性を有するタンパク質が含まれる。目的のタンパク質は、多くの中でも、薬物治療の標的としてのヒト、家畜化動物を含む他の動物、抗生物質および他の抗微生物剤の標的を決定するための微生物、および植物を含み、甚だしきはウイルスまでも含む真核生物および原核生物に由来するタンパク質を含むことができる。
さらに他の実施形態ではＰＴＭ基は、概してサイズが約１または２炭素長から約１２炭素長、多くの場合に約２〜１０炭素長、多くの場合に約３炭素長〜約８炭素長、より多くの場合に約４炭素長〜約６炭素長までの範囲にあるハロアルキル基である。それらのハロアルキル基は（分岐鎖アルキル基も使用され得るが）概して直鎖アルキル基であり、少なくとも１つのハロゲン基、好ましくは単一のハロゲン基、多くの場合に単一のクロリド基で末端封止されている。本発明において使用される基であるハロアルキルＰＴは、ｖが２から約１２、多くの場合に約３から約８、より多くの場合に約４から約６までのあらゆる整数である化学構造−（ＣＨ２）ｖ−ハロによって表されることが好ましい。ハロはあらゆるハロゲンであってよいが、好ましくはＣｌまたはＢｒであり、より多くの場合にＣｌである。
別の実施形態では本発明は化合物のライブラリーを提供する。そのライブラリーは、各組成がＡ−Ｂの式を有する化合物であって、式中、Ａがユビキチン経路タンパク質結合部分（好ましくは本明細書における別段の開示のようなＥ３ユビキチンリガーゼ部分）であり、且つ、Ｂが分子ライブラリーのタンパク質結合メンバーであり、Ａが（好ましくはリンカー部分を介して）Ｂに結合しており、そのユビキチン経路タンパク質結合部分がユビキチン経路タンパク質、特にセレブロンなどのＥ３ユビキチンリガーゼを認識する１種類より多くの化合物を含む。特定の実施形態ではそのライブラリーはランダムな標的タンパク質結合要素に結合した特異的セレブロンＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分を含む（例えば、化学化合物ライブラリー）。したがって、標的タンパク質は前もって決定されておらず、推定上のタンパク質結合要素の活性とユビキチンリガーゼによる分解時の標的としてのその薬理学的値を決定するためにその方法を用いることができる。
本発明は、タンパク質が異常調節されており、且つ、タンパク質の分解から患者が利益を得るだろうあらゆる疾患状態および／または病状を含む多数の疾患状態および／または病状を治療するために用いられ得る。
追加の態様において、本明細書は、本明細書に記載される化合物またはその塩形態の有効量と薬学的に許容可能な担体、添加物または賦形剤、および所望により追加の生体活性剤を含む治療組成物を提供する。それらの治療組成物は患者または対象、例えば、ヒトなどの動物においてタンパク質分解を調節し、その分解タンパク質を介して調節される疾患状態または病状の治療または改善のために使用可能である。ある特定の実施形態では本明細書に記載される治療組成物は、疾患、例えば、癌の治療または改善のために目的のタンパク質の分解を達成するために使用され得る。ある特定の追加の実施形態ではその疾患は多発性骨髄腫である。
代替的態様において、本発明は、疾患状態または病状を調節するタンパク質またはポリペプチドの分解により、治療または改善を必要とする対象の疾患状態を治療するための、または疾患もしくは病気の症状を改善するための方法であって、本明細書において上に記載された少なくとも１つの化合物の有効量、例えば、治療有効量を薬学的に許容可能な担体、添加物、または賦形剤、および所望により追加の生体活性剤と組み合わせて投与することを含む方法であり、その組成物が前記対象の疾患または障害またはその症状の治療または改善に有効であることを特徴とする前記方法に関する。本発明によるその方法は、本明細書に記載される少なくとも１つの化合物の有効量の投与によって癌を含む非常に多くの疾患状態または病状を治療するために用いられ得る。その疾患状態または病状はウイルス、細菌、真菌、原生動物、または他の微生物などの微生物因子または他の外来性因子によって引き起こされる疾患であり得、または疾患状態および／または病状につながるタンパク質の過剰発現によって引き起こされる疾患状態であり得る。
別の態様において、本明細書は本発明による化合物を使用した生体系における目的のタンパク質の分解の効果を特定するための方法を提供する。
「標的タンパク質」という用語は、本発明の化合物への結合、およびその下でのユビキチンリガーゼによる分解の標的であるタンパク質またはポリペプチドを説明するために用いられる。そのような低分子標的タンパク質結合部分にはこれらの組成物の薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、溶媒和化合物、および多形体、ならびに目的のタンパク質を標的とし得る他の低分子も含まれる。これらの結合部分はリンカー基Ｌを介してＣＬＭ基またはＵＬＭ基に連結される。
タンパク質標的部分が結合し、且つ、ユビキチンリガーゼ結合部分に結合しているリガーゼによって分解され得る標的タンパク質にはあらゆるタンパク質またはペプチドが含まれ、それらの断片、それらの類似体、および／またはそれらの相同体が含まれる。標的タンパク質には、構造的機能または活性、調節的機能または活性、ホルモン機能または活性、酵素的機能または活性、遺伝学的機能または活性、免疫学的機能または活性、収縮、貯蔵、輸送、およびシグナル伝達を含むあらゆる生物学的機能または活性を有するタンパク質およびペプチドが含まれる。ある特定の実施形態ではそれらの標的タンパク質は構造タンパク質、受容体、酵素、細胞表面タンパク質、細胞の統合的機能に関連するタンパク質を含み、それらには触媒活性、アロマターゼ活性、運動活性、ヘリケース活性、代謝過程（同化作用と異化作用）、抗酸化剤活性、タンパク質分解、生合成に関わるタンパク質；キナーゼ活性、酸化還元酵素活性、転移酵素活性、加水分解酵素活性、脱離酵素活性、異性化酵素活性、連結酵素活性、酵素調節因子活性、シグナル伝達酵素活性、構造分子活性、結合活性（タンパク質、脂質、炭水化物）、受容体活性、細胞運動性、膜融合、細胞間コミュニケーション、生物学的プロセスの調節、発生、細胞分化、刺激への応答を有するタンパク質；挙動関連タンパク質、細胞接着タンパク質、細胞死に関与するタンパク質、輸送に関与するタンパク質（タンパク質トランスポーター活性、核内輸送、イオントランスポーター活性、チャネルトランスポーター活性、担体活性、透過酵素活性、分泌活性、電子伝達体活性を含む）、発病、シャペロン調節因子活性、核酸結合活性、転写調節因子活性、細胞外構成および生合成活性、翻訳調節因子活性を有するタンパク質が含まれる。目的のタンパク質は、多くの中でも、薬物治療の標的としてのヒト、微生物、ウイルス、真菌、および寄生生物を含む微生物、ウイルス、真菌、および寄生生物、家畜化動物を含む他の動物、抗生物質および他の抗微生物剤の標的を決定するための微生物、および植物を含み、甚だしきはウイルスまでも含む真核生物および原核生物に由来するタンパク質を含むことができる。
より具体的には、ヒト用治療薬の多数の薬品標的が、タンパク質標的部分が結合し得る、且つ、本発明による化合物に合体し得るタンパク質標的である。これらには多数の多遺伝子性疾患において機能を回復するために使用され得るタンパク質が含まれ、それらには、例えば、Ｂ７．１およびＢ７、ＴＩＮＦＲｌｍ、ＴＮＦＲ２、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ、ＢｃｌＩＢａｘおよびアポトーシス経路の他のパートナー、Ｃ５ａ受容体、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ、Ｖ型ＰＤＥホスホジエステラーゼ、４型ホスホジエステラーゼＰＤＥ ＩＶ、ＰＤＥ Ｉ、ＰＤＥＩＩ、ＰＤＥＩＩＩ、スクアレンサイクラーゼ阻害剤、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、一酸化窒素（ＮＯ）シンターゼ、シクロオキシゲナーゼ１、シクロオキシゲナーゼ２、５ＨＴ受容体、ドーパミン受容体、Ｇタンパク質すなわちＧｑ、ヒスタミン受容体、５−リポオキシゲナーゼ、トリプターゼ・セリンプロテアーゼ、チミジル酸シンターゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、トリパノソーマＧＡＰＤＨ、グリコーゲンホスホリラーゼ、炭酸脱水素酵素、ケモカイン受容体、ＪＡＷ ＳＴＡＴ、ＲＸＲおよび類似体、ＨＩＶ １プロテアーゼ、ＨＩＶ １インテグレース、インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼ、Ｂ型肝炎ウイルス・リバーストランスクリプターゼ、ナトリウムチャネル、多剤耐性（ＭＤＲ）タンパク質、Ｐ糖タンパク質（およびＭＲＰ）、チロシンキナーゼ、ＣＤ２３、ＣＤ１２４、チロシンキナーゼｐ５６ ｌｃｋ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−１受容体、ＴＮＦ−αＲ、ＩＣＡＭ１、Ｃａｔ＋チャネル、ＶＣＡＭ、ＶＬＡ−４インテグリン、セレクチン、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ、ノイロキニンおよび受容体、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼ、ＲａｓｌＲａｆｌＭＥＷＥＲＫ経路、インターロイキン−１変換酵素、カスパーゼ、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ、ＨＣＶ ＮＳ３ ＲＮＡヘリケース、グリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼ、単純ヘルペスウイルス−１（ＨＳＶ−Ｉ）プロテアーゼ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロテアーゼ、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ、サイクリン依存的キナーゼ、血管内皮細胞増殖因子、オキシトシン受容体、ミクロソーム転移タンパク質阻害剤、胆汁酸輸送阻害剤、５αレダクターゼ阻害剤、アンギオテンシン１１、グリシン受容体、ノルアドレナリン再摂取受容体、エンドセリン受容体、ニューロペプチドＹおよび受容体、エストロゲン受容体、アンドロゲン受容体、アデノシン受容体、アデノシンキナーゼおよびＡＭＰデアミナーゼ、プリン作動性受容体（Ｐ２Ｙ１、Ｐ２Ｙ２、Ｐ２Ｙ４、Ｐ２Ｙ６、Ｐ２Ｘ１−７）、ファルネシルトランスフェラーゼ、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ、ＮＧＦのＴｒｋＡ受容体、β−アミロイド、チロシンキナーゼＦｌｋ−ＩＩＫＤＲ、ビトロネクチン受容体、インテグリン受容体、Ｈｅｒ−２１ ｎｅｕ、テロメラーゼ阻害、細胞質ホスホリパーゼＡ２、およびＥＧＦ受容体チロシンキナーゼが含まれる。追加のタンパク質標的には、例えば、エクダイソン２０−モノオキシゲナーゼ、ＧＡＢＡ作動性塩素チャネルのイオンチャネル、アセチルコリンエステラーゼ、電位感受性ナトリウムチャネルタンパク質、カルシウム放出チャネル、および塩素チャネルが含まれる。さらにその他の標的タンパク質にはアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ、アデニロコハク酸シンテターゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、およびエノールピルビルシキミ酸−リン酸シンターゼが含まれる。
ハロアルカン脱ハロゲン酵素は本発明による特定の化合物の別の標的である。クロロアルカンペプチド結合部分（Ｃ１−Ｃ１２、多くの場合に約Ｃ２−Ｃ１０のアルキルハロ基）を含有する本発明による化合物は、内容が参照により本明細書に援用される２０１２年６月１４日に国際公開第２０１２／０７８５５９号パンフレットとして公開された２０１１年１２月６日に提出された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６３４０１号明細書に記載されるような融合タンパク質または関連の診断用タンパク質に使用されるハロアルカン脱ハロゲン酵素を阻害および／または分解するために使用され得る。
これらの様々なタンパク質標的は、そのタンパク質に結合する化合物部分を特定するためのスクリーニングにおいて使用されてよく、本発明による化合物へのその部分の合体によりそのタンパク質の活性レベルが変化して治療最終結果に適したものになり得る。
「タンパク質標的部分」またはＰＴＭという用語は、標的タンパク質または他の目的のタンパク質もしくはポリペプチドに結合し、ユビキチンリガーゼによるそのタンパク質またはポリペプチドの分解が起きるようにそのタンパク質またはポリペプチドをユビキチンリガーゼの近傍に配置／提供する低分子を説明するために使用される。低分子標的タンパク質結合部分の非限定的な例には、多くの中でも、Ｈｓｐ９０阻害剤、キナーゼ阻害剤、ＭＤＭ２阻害剤、ヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質標的化合物、ＨＤＡＣ阻害剤、ヒトリシンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、免疫抑制剤化合物、およびアリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）標的化合物が含まれる。以下に記載される組成物はこれらの９種類の低分子標的タンパク質のメンバーの幾つかを例示する。
例となる本開示によるタンパク質標的部分にはハロアルカンハロゲナーゼ阻害剤、Ｈｓｐ９０阻害剤、キナーゼ阻害剤、ＭＤＭ２阻害剤、ヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質標的化合物、ＨＤＡＣ阻害剤、ヒトリシンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、免疫抑制剤化合物、およびアリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）標的化合物が含まれる。
以下に記載される組成物はこれらの種類の低分子標的タンパク質結合部分のメンバーの幾つかを例示する。そのような低分子標的タンパク質結合部分にはこれらの組成物の薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、溶媒和化合物、および多形体、ならびに目的のタンパク質を標的とし得る他の低分子も含まれる。本明細書において下で引用される参考文献は、それらの全体が参照により本明細書に援用される。
Ｉ．ヒートショックプロテイン９０（ＨＳＰ９０）阻害剤
本明細書において使用されるＨＳＰ９０阻害剤には、限定されないが、次のものが含まれる。
１．Vallee, et al., 「Tricyclic Series of Heat Shock Protein 90 (HSP90) Inhibitors Part I: Discovery of Tricyclic Imidazo[4,5-C]Pyridines as Potent Inhibitors of the HSP90 Molecular Chaperone (2011) J.Med.Chem. 54: 7206」において特定されたものであって、ＹＫＢ（Ｎ−［４−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｃ］ピリジン−２−イル）−９Ｈ−フルオレン−９−イル］−スクシンアミド）を含み、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えば末端アミド基を介して結合しているＨＳＰ９０阻害剤。
２．ＨＳＰ９０阻害剤ｐ５４（改変型）（８−［（２，４−ジメチルフェニル）スルファニル］−３］ペント−４−イン−１−イル−３Ｈ−プリン−６−アミン）であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えば末端アセチレン基を介して結合しているもの。
３．Brough, et al., 「4,5-Diarylisoxazole HSP90 Chaperone Inhibitors: Potential Therapeutic Agents for the Treatment of Cancer", J.MED.CHEM. vol: 51, pag:196 (2008)」において特定されたものであって、次の構造を有する化合物２ＧＪ（５−［２，４−ジヒドロキシ−５−（１−メチルエチル）フェニル］−ｎ−エチル−４−［４−（モルホリン−４−イルメチル）フェニル］イソオキサゾール−３−カルボキサミド）を含み、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えば（アミンにおいて、またはアミン上のアルキル基において）アミド基を介して結合しているＨＳＰ９０阻害剤（改変型）。
４．Wright, et al., Structure-Activity Relationships in Purine-Based Inhibitor Binding to HSP90 Isoforms, Chem Biol. 2004 Jun;11(6):775-85において特定されたものであって、次の構造を有するＨＳＰ９０阻害剤ＰＵ３を含み、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）が例えば、ブチル基を介して結合しているＨＳＰ９０阻害剤（改変型）。および
５．ＨＳＰ９０阻害剤ゲルダナマイシン（（４Ｅ，６Ｚ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｅ，１２Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１６Ｒ）−１３−ヒドロキシ−８，１４，１９−トリメトキシ−４，１０，１２，１６−テトラメチル−３，２０，２２−トリオキソ−２−アザビシクロ［１６．３．１］（誘導体化）またはあらゆるその誘導体（例えば１７−アルキルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン（「１７−ＡＡＧ」）または１７−（２−ジメチルアミノエチル）アミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン（「１７−ＤＭＡＧ」））（誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばアミド基を介して結合している）。
ＩＩ．キナーゼおよびホスファターゼの阻害剤
本明細書において使用されるキナーゼ阻害剤には、限定されないが、次のものが含まれる。
１．エルロチニブ誘導体チロシンキナーゼ阻害剤であって、
Figure 0006873433
 Ｒが例えばエーテル基を介して結合しているリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基であるもの。
２．キナーゼ阻害剤スニチニブ（誘導体化）であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてＲが例えばピロール部分に結合しているリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基であるもの。
３．キナーゼ阻害剤ソラフェニブ（誘導体化）であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてＲが例えばアミド部分に結合しているリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基であるもの。
４．キナーゼ阻害剤デサチニブ（誘導体化）であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてＲが例えばピリミジンに結合しているリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）であるもの。
５．キナーゼ阻害剤ラパチニブ（誘導体化）であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばスルホニルメチル基の末端メチルを介して結合しているもの。
６．キナーゼ阻害剤Ｕ０９−ＣＸ−５２７９（誘導体化）であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばアミン（アニリン）、カルボン酸またはアミンαを介してシクロプロピル基に、またはシクロプロピル基に結合しているもの。
７．Millan, et al., Design and Synthesis of Inhaled P38 Inhibitors for the Treatment of Chronic Obstructive Pulmonary Disease, J.MED.CHEM. vol:54, pag:7797 (2011)において特定されたキナーゼ阻害剤であって、次の構造を有するキナーゼ阻害剤Ｙ１ＷおよびＹ１Ｘ（誘導体化）を含み、
Figure 0006873433
ＹＩＸ（１−エチル−３−（２−｛［３−（１−メチルエチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル］スルファニル｝ベンジル）ウレア、誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばｉプロピル基を介して結合しており、
Figure 0006873433
 ＹＩＷ
１−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾル−５−イル）−３−（２−｛［３−（１−メチルエチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル］スルファニル｝ベンジル）ウレア
誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えば、好ましくはｉ−プロピル基またはｔ−ブチル基のどちらかを介して結合しているもの。
８．Schenkel, et al., Discovery of Potent and Highly Selective Thienopyridine Janus Kinase 2 Inhibitors J. Med. Chem., 2011, 54 (24), pp 8440-8450において特定されたキナーゼ阻害剤であって、次の構造を有する化合物６ＴＰおよび０ＴＰ（誘導体化）を含み、
Figure 0006873433
 ６ＴＰ
４−アミノ−２−［４−（ｔｅｒｔ−ブチルスルファモイル）フェニル］−Ｎ−メチルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド
チエノピリジン１９
誘導体化されてリンカー基Ｌまたは-（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばアミド部分に結合した末端メチル基を介して結合しており、
Figure 0006873433
 ０ＴＰ
４−アミノ−Ｎ−メチル−２−［４−（モルホリン−４−イル）フェニル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド
チエノピリジン８
誘導体化されてリンカー基Ｌまたは-（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばアミド部分に結合した末端メチル基を介して結合しているキナーゼ阻害剤。
９．Van Eis, et al., 「2,6-Naphthyridines as potent and selective inhibitors of the novel protein kinase C isozymes」, Biorg. Med. Chem. Lett.2011 Dec 15;21(24):7367-72において特定されたキナーゼ阻害剤であって、次の構造を有するキナーゼ阻害剤０７Ｕを含み、
Figure 0006873433
 ０７Ｕ
２−メチル−Ｎ〜１〜−［３−（ピリジン−４−イル）−２，６−ナフチリジン−１−イル］プロパン−１，２−ジアミン
誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えば第二級アミンまたは末端アミノ基を介して結合しているキナーゼ阻害剤。
１０．Lountos, et al., 「Structural Characterization of Inhibitor Complexes with Checkpoint Kinase 2 (Chk2), a Drug Target for Cancer Therapy」, J.STRUCT.BIOL. vol:176, pag:292 (2011)において特定されたキナーゼ阻害剤であって、次の構造を有するキナーゼ阻害剤ＹＣＦを含み、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えば末端ヒドロキシル基のどちらかを介して結合しているキナーゼ阻害剤。
１１．Lountos, et al., 「Structural Characterization of Inhibitor Complexes with Checkpoint Kinase 2 (Chk2), a Drug Target for Cancer Therapy」, J.STRUCT.BIOL. vol:176, pag:292 (2011)において特定されたキナーゼ阻害剤であって、次の構造を有するキナーゼ阻害剤ＸＫ９およびＮＸＰ（誘導体化）を含み、
Figure 0006873433
 ＸＫ９
Ｎ−｛４−［（１Ｅ）−Ｎ−（Ｎ−ヒドロキシカルバミミドイル）エタンヒドラゾノイル］フェニル｝−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド;
Figure 0006873433
 ＮＸＰ
Ｎ−｛４−［（１Ｅ）−Ｎ−カルバミミドイルエタンヒドラゾノイル］フェニル｝−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド
誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えば末端ヒドロキシル基（ＸＫ９）またはヒドラゾン基（ＮＸＰ）を介して結合しているキナーゼ阻害剤。
１２．キナーゼ阻害剤アファチニブ（誘導体化）（Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［［（３Ｓ）−テトラヒドロ−３−フラニル］オキシ］−６−キナゾリニル］−４（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド）（誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えば脂肪族アミン基を介して結合している）。
１３．キナーゼ阻害剤ホスタマチニブ（誘導体化）（［６−（｛５−フルオロ−２−［（３，４，５−トリメトキシフェニル）アミノ］ピリミジン−４−イル｝アミノ）−２，２−ジメチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−４Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］−１，４−オキサジン−４−イル］メチルリン酸二ナトリウム六水和物）（誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばメトキシ基を介して結合している）。
１４．キナーゼ阻害剤ゲフィチニブ（誘導体化）（Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリン−４−イルプロポキシ）キナゾリン−４−アミン）であって、
誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えば、メトキシ基またはエーテル基を介して結合しているもの。
Figure 0006873433
１５．キナーゼ阻害剤レンバチニブ（誘導体化）（４−［３−クロロ−４−（シクロプロピルカルバモイルアミノ）フェノキシ］−７−メトキシ−キノリン−６−カルボキサミド）（誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばシクロプロピル基を介して結合している）。
１６．キナーゼ阻害剤バンデタニブ（誘導体化）（Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キナゾリン−４−アミン）（誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばメトキシ基またはヒドロキシル基を介して結合している）。
１７．キナーゼ阻害剤ベムラフェニブ（誘導体化）（プロパン−１−スルホン酸｛３−［５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル］−２，４−ジフルオロ−フェニル｝−アミド）、誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばスルホニルプロピル基を介して結合している。
１８．キナーゼ阻害剤グリベック（誘導体化）であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基としてのＲが例えばアミド基を介して、またはアニリンアミン基を介して結合しているもの。
１９．キナーゼ阻害剤パゾパニブ（誘導体化）（ＶＥＧＦＲ３阻害剤）であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてＲが例えばフェニル部分に、またはアニリンアミン基を介して結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基であるもの。
２０．キナーゼ阻害剤ＡＴ−９２８３（誘導体化）オーロラキナーゼ阻害剤であって、
Figure 0006873433
 Ｒが例えばフェニル部分に結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基であるもの。
２１．キナーゼ阻害剤ＴＡＥ６８４（誘導体化）ＡＬＫ阻害剤であって、
Figure 0006873433
 Ｒが例えばフェニル部分に結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基であるもの。
２２．キナーゼ阻害剤ニロタニブ（誘導体化）Ａｂｌ阻害剤であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてＲが例えばフェニル部分またはアニリンアミン基に結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基であるもの。
２３．キナーゼ阻害剤ＮＶＰ−ＢＳＫ８０５（誘導体化）ＪＡＫ２阻害剤であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてＲが例えばフェニル部分またはジアゾール基に結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基であるもの。
２４．キナーゼ阻害剤クリゾチニブ誘導体化Ａｌｋ阻害剤であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてＲが例えばフェニル部分またはジアゾール基に結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基であるもの。
２５．キナーゼ阻害剤ＪＮＪ ＦＭＳ（誘導体化）阻害剤であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてＲが例えばフェニル部分に結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基であるもの。
２６．キナーゼ阻害剤フォレチニブ（誘導体化）Ｍｅｔ阻害剤であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてＲが例えばフェニル部分またはキノリン部分上のヒドロキシル基もしくはエーテル基に結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基であるもの。
２７．アロステリックプロテインチロシンホスファターゼ阻害剤ＰＴＰ１Ｂ（誘導体化）であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が、例えば、表示されているようにＲにおいて結合しているもの。
２８．チロシンホスファターゼのＳＨＰ−２ドメインの阻害剤（誘導体化）であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばＲにおいて結合しているもの。
２９．ＢＲＡＦ（ＢＲＡＦＶ６００Ｅ）／ＭＥＫの阻害剤（誘導体化）であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばＲにおいて結合しているもの。
３０．チロシンキナーゼＡＢＬの阻害剤（誘導体化）であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばＲにおいて結合しているもの。
３１．キナーゼ阻害剤ＯＳＩ−０２７（誘導体化）ｍＴＯＲＣ１／２阻害剤であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばＲにおいて結合しているもの。
３２．キナーゼ阻害剤ＯＳＩ−９３０（誘導体化）ｃ−Ｋｉｔ／ＫＤＲ阻害剤であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばＲにおいて結合しているもの。および
３３．キナーゼ阻害剤ＯＳＩ−９０６（誘導体化）ＩＧＦ１Ｒ／ＩＲ阻害剤であって、
Figure 0006873433
 誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばＲにおいて結合しているもの。
第Ｉ節〜第ＸＶＩＩ節に記載されている実施形態のいずれにおいても「Ｒ」はピペラジン部分上でのリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す。
ＩＩＩ．ＨＤＭ２／ＭＤＭ２阻害剤
本明細書において使用されるＨＤＭ２／ＭＤＭ２阻害剤には、限定されないが、次のものが含まれる。
１．Vassilev, et al., In vivo activation of the p53 pathway by small-molecule antagonists of MDM2, SCIENCE vol:303, pag:844-848 (2004)、およびSchneekloth, et al., Targeted intracellular protein degradation induced by a small molecule: En route to chemical proteomics, Bioorg. Med. Chem. Lett. 18 (2008) 5904-5908において特定されたＨＤＭ２／ＭＤＭ２阻害剤であって、以下に記載される化合物ナトリン−３、ナトリン−２、およびナトリン−１（誘導体化）、ならびにそれらの全ての誘導体および類似体を（追加的に）含む前記阻害剤。
Figure 0006873433
 （誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばメトキシ基において、またはヒドロキシル基として結合している）、
Figure 0006873433
 （誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばメトキシ基またはヒドロキシル基において結合している）、
Figure 0006873433
 （誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばメトキシ基を介して、またはヒドロキシル基として結合している）。および
２．トランス−４−ヨード−４’−ボラニル−カルコン
Figure 0006873433
（誘導体化されてリンカー基Ｌまたはリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばヒドロキシ基を介して結合している）。
ＩＶ．ヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質を標的とする化合物
ある特定の実施形態では「ＰＴＭ」はブロモおよびエクストラターミナル（ＢＥＴ）タンパク質ＢＲＤ２、ＢＲＤ３およびＢＲＤ４に結合するリガンドであり得る。ヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質標的化合物の例には、限定されないが、それらの標的と結合する以下に記載されるような化合物が含まれ、式中、「Ｒ」または「リンカー」はリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す。
１．Filippakopoulos et al. Selective inhibition of BET bromodomains. Nature (2010)に記載のＪＱ１。
Figure 0006873433
２．Nicodeme et al. Supression of Inflammation by a Synthetic Histone Mimic. Nature (2010)、およびChung et al. Discovery and Characterization of Small Molecule Inhibitors of the BET Family Bromodomains. J. Med Chem. (2011)に記載のＩ−ＢＥＴ。
Figure 0006873433
３．Hewings et al. 3,5-Dimethylisoxazoles Act as Acetyl-lysine Bromodomain Ligands. J. Med. Chem. (2011) 54 6761-6770に記載の化合物。
Figure 0006873433
４．Dawson et al. Inhibition of BET Recruitment to Chromatin as an Efective Treatment for MLL-fusion Leukemia. Nature (2011)に記載のＩ−ＢＥＴ１５１。
Figure 0006873433
５．カルバゾール型化合物（米国特許出願公開第２０１５／０２５６７００号）。
Figure 0006873433
６．ピロロピリドン型化合物（米国特許出願公開第２０１５／０１４８３４２号）。
Figure 0006873433
７．テトラヒドロキノリン型化合物（国際公開第２０１５／０７４０６４号）。
Figure 0006873433
８．トリアゾロピラジン型化合物（国際公開第２０１５／０６７７７０号）。
Figure 0006873433
９．ピリドン型化合物（国際公開第２０１５／０２２３３２号）。
Figure 0006873433
１０．キナゾリン型化合物（国際公開第２０１５／０１５３１８号）。
Figure 0006873433
１１．ジヒドロピリドピラジノン型化合物（国際公開第２０１５／０１１０８４号）。
Figure 0006873433
（各例においてＲまたはＬまたはリンカーは、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。
セレブロンリガンドを使用する次のキメラ分子はＢＥＴ ＰＲＯＴＡＣの代表例である。本発明において説明される方法は、これらの例に限定されない。
Figure 0006873433
Figure 0006873433
Figure 0006873433
Figure 0006873433
Figure 0006873433
Figure 0006873433
Figure 0006873433
 Ｖ． ＨＤＡＣ阻害剤
ＨＤＡＣ阻害剤（誘導体化）には、限定されないが、次のものが含まれる。
１．Finnin, M. S. et al. Structures of Histone Deacetylase Homologue Bound to the TSA and SAHA Inhibitors. Nature 40, 188-193 (1999)に記載のもの。
Figure 0006873433
 （誘導体化されて「Ｒ」は、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。および
２．ＰＣＴ国際公開第０２２２５７７号パンフレット（「ＤＥＡＣＥＴＹＬＡＳＥ ＩＮＨＩＢＩＴＯＲＳ」）の式（Ｉ）によって規定される化合物（誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばヒドロキシル基を介して結合しているもの）。
ＶＩ．ヒトリシンメチルトランスフェラーゼ阻害剤
ヒトリシンメチルトランスフェラーゼ阻害剤には、限定されないが、次のものが含まれる。
１．Chang et al. Structural Basis for G9a-Like protein Lysine Methyltransferase Inhibition by BIX-1294. Nat. Struct. Biol. (2009) 16(3) 312に記載のもの。
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」は、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。
２．Liu, F. et al Discovery of a 2,4-Diamino-7-aminoalkoxyquinazoline as a Potent and Selective Inhibitor of Histone Methyltransferase G9a. J. Med. Chem. (2009) 52(24) 7950に記載のもの。
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」は、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の潜在的な結合部位を示す）。
３．アザシチジン（誘導体化）（４−アミノ−１−β−Ｄ−リボフラノシル−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オン）（誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばヒドロキシ基またはアミノ基を介して結合している）。および
４．デシタビン（誘導体化）（４−アミノ−１−（２−デオキシ−ｂ−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オン）（誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばどちらかのヒドロキシ基を介して、またはアミノ基において結合している）。
ＶＩＩ．血管新生阻害剤
血管新生阻害剤には、限定されないが、次のものが含まれる。
１．Sakamoto, et al., Development of Protacs to target cancer-promoting proteins for ubiquitination and degradation, Mol Cell Proteomics 2003 Dec;2(12):1350-8に記載される構造を有し、且つ、リンカーに結合するＧＡ−１（誘導体化）ならびにその誘導体および類似体。
２．Rodriguez-Gonzalez, et al., Targeting steroid hormone receptors for ubiquitination and degradation in breast and prostate cancer, Oncogene (2008) 27, 7201-7211に概ね記載される通りのエストラジオール（誘導体化）であって、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基に結合し得るもの。
３．Sakamoto, et al., Development of Protacs to target cancer-promoting proteins for ubiquitination and degradation, Mol Cell Proteomics 2003 Dec; 2(12):1350-8に概ね記載される構造を有し、且つ、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基に結合するＤＨＴならびにその誘導体および類似体を含むがこれらに限定されないエストラジオール、テストステロン（誘導体化）、および関連の誘導体。および
４．Sakamoto, et al., Protacs: chimeric molecules that target proteins to the Skp1-Cullin-F box complex for ubiquitination and degradation Proc Natl Acad Sci USA. 2001 Jul 17;98(15):8554-9および米国特許第７２０８１５７号明細書に概ね記載される構造を有し、且つ、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基に結合するオバリシン、フマギリン（誘導体化）、ならびにその誘導体および類似体。
ＶＩＩＩ．免疫抑制剤化合物
免疫抑制剤化合物には、限定されないが、次のものが含まれる。
１．Schneekloth, et al., Chemical Genetic Control of Protein Levels: Selective in Vivo Targeted Degradation, J. AM. CHEM. SOC. 2004, 126, 3748-3754に概ね記載される構造を有し、且つ、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基に結合するＡＰ２１９９８（誘導体化）。
２．グルココルチコイド（例えば、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニソロン、およびメチルプレドニソロン）（誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばヒドロキシルのいずれかに結合している）およびベクトメタゾンジプロピオネート（誘導体化されてリンカー基または−（Ｌ−ＣＬＭ）が例えばプロピオネートに結合している）。
３．メトトレキサート（誘導体化されてリンカー基または−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばどちらかの末端ヒドロキシルに結合され得る）。
４．シクロスポリン（誘導体化されてリンカー基または−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばブチル基のいずれかにおいて結合され得る）。
５．タクロリムス（ＦＫ−５０６）およびラパマイシン（誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばメトキシ基のうちの１つにおいて結合され得る）。および
６．アクチノマイシン類（誘導体化されてリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基が例えばイソプロピル基のうちの１つにおいてに結合され得る）。
ＩＸ．アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）標的化合物
アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）標的化合物には、限定されないが、次のものが含まれる。
１． アピゲニン（Lee, et al., Targeted Degradation of the Aryl Hydrocarbon Receptor by the PROTAC Approach: A Useful Chemical Genetic Tool, ChemBioChem Volume 8, Issue 17, pages 2058-2062, November 23, 2007において概ね例示されているようにリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基に結合するように誘導体化されている）。および
２．Boitano, et al., Aryl Hydrocarbon Receptor Antagonists Promote the Expansion of Human Hematopoietic Stem Cells, Science 10 September 2010: Vol. 329 no. 5997 pp. 1345-1348に記載されるＳＲ１およびＬＧＣ００６（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）を結合するように誘導体化されている）。
Ｘ．ＲＡＦ（キナーゼ）受容体を標的とする化合物
Figure 0006873433
ＰＬＸ４０３２
（誘導体化されて「Ｒ」は、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。
ＸＩ．ＦＫＢＰを標的とする化合物
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」は、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。
ＸＩＩ．アンドロゲン受容体（ＡＲ）を標的とする化合物
１．アンドロゲン受容体のＲＵ５９０６３リガンド（誘導体化）
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」は、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。
２．アンドロゲン受容体のＳＡＲＭリガンド（誘導体化）
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」は、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。
３．アンドロゲン受容体リガンドＤＨＴ（誘導体化）
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」は、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。
４．ＭＤＶ３１００リガンド（誘導体化）
Figure 0006873433
５．ＡＲＮ−５０９リガンド（誘導体化）
Figure 0006873433
６．ヘキサヒドロベンズイソオキサゾール類
Figure 0006873433
７．テトラメチルシクロブタン類
Figure 0006873433
ＸＩＩＩ．エストロゲン受容体（ＥＲ）を標的とする化合物ＩＣＩ−１８２７８０
１．エストロゲン受容体リガンド
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」はリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。
ＸＩＶ．甲状腺ホルモン受容体（ＴＲ）を標的とする化合物
１．甲状腺ホルモン受容体リガンド（誘導体化）
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」はリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示し、ＭＯＭＯはメトキシメトキシ基を示す）。
ＸＶ．ＨＩＶプロテアーゼを標的とする化合物
１．ＨＩＶプロテアーゼの阻害剤（誘導体化）
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」はリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。J. Med. Chem. 2010, 53, 521-538を参照されたい。
２．ＨＩＶプロテアーゼの阻害剤
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」はリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の潜在的な結合部位を示す）。J. Med. Chem. 2010, 53, 521-538を参照されたい。
ＸＶＩ．ＨＩＶインテグレースを標的とする化合物
１．ＨＩＶインテグレースの阻害剤（誘導体化）
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」はリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。J. Med. Chem. 2010, 53, 6466を参照されたい。
２．ＨＩＶインテグレースの阻害剤（誘導体化）
Figure 0006873433
３．ＨＩＶインテグレースの阻害剤アイセントレス（誘導体化）
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」はリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。J. Med. Chem. 2010, 53, 6466を参照されたい。
ＸＶＩＩ．ＨＣＶプロテアーゼを標的とする化合物
１．ＨＣＶプロテアーゼの阻害剤（誘導体化）
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」はリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。
ＸＶＩＩＩ．アシルプロテインチオエステラーゼ−１および−２（ＡＰＴ１およびＡＰＴ２）を標的とする化合物
１．ＡＰＴ１およびＡＰＴ２の阻害剤（誘導体化）
Figure 0006873433
（誘導体化されて「Ｒ」はリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＣＬＭ）基の結合部位を示す）。Angew. Chem. Int. Ed. 2011, 50, 9838 -9842を参照されたい。本明細書において別途記載されるように−（Ｌ−ＣＬＭ）がＣＬＭ基をＰＴＭ基に結合するように、Ｌは本明細書において別途記載されたリンカー基であり、ＣＬＭ基は本明細書において別途記載されている通りである。
治療組成物
本開示の追加の態様は、少なくとも１つの本明細書に記載される二官能性化合物の有効量および別途本明細書に記載される化合物のうちの全て有効量である１つ以上の混合物を薬学的に有効量の担体、添加物または賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物である。
本開示には、該当する場合は本明細書に記載される化合物の薬学的に許容可能な塩、特に、酸付加塩または塩基付加塩を含む組成物が含まれる。この態様によると有用である前述の塩基化合物の薬理学的に許容可能な酸付加塩を調製するために使用される酸は、無毒の酸付加塩、すなわち、多くの中でも、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、重酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、糖酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩［すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３ナフトエート）塩］などの薬理的に許容可能なアニオンを含む塩を形成する酸である。
薬学的に許容可能な塩基付加塩も薬学的に許容可能な塩形態の本開示による化合物または誘導体を作製するために用いられ得る。もともと酸性である本化合物の薬学的に許容可能な塩基塩を調製するための試薬として使用され得る化学塩基は、そのような化合物と無毒の塩基塩を形成する塩基である。そのような無毒の塩基塩には、何よりも、アルカリ金属カチオン（例えば、カリウムおよびナトリウム）およびアルカリ土類金属カチオン（例えば、カルシウム、亜鉛、およびマグネシウム）、Ｎ−メチルグルカミン−（メグルミン）などのアンモニウムまたは水溶性アミン付加塩、および低級アルカノールアンモニウムおよび薬学的に許容可能な有機アミンの他の塩基塩などの薬学的に許容可能なカチオンに由来する塩基塩が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書に記載される化合物は、本開示に従うと、経口経路、非経口経路、または局所経路によって単回用量または分割用量で投与されてよい。その活性化合物の投与は連続的投与（静脈持続注入）から１日に数回の（例えば１日に４回の）経口投与まで変化してよく、それには数ある投与経路の中でも経口投与、局所投与、非経口投与、筋肉内投与、静脈内投与、皮下投与、経皮投与（透過性増強剤が含まれ得る）、バッカル投与、舌下投与、および坐剤投与が含まれ得る。経口投与経路からの本化合物の生物学的利用率を向上させるために腸溶性コーティング経口錠剤を使用してもよい。最も有効な剤形は選択した特定の薬剤の薬物動態学ならびに患者の疾患の重症度に依存する。鼻内投与、気管内投与、または肺内投与のためのスプレー剤、ミスト剤、またはエアロゾル剤としての本開示の化合物の投与を用いてもよい。したがって、本開示は所望により薬学的に許容可能な担体、添加物、または賦形剤と組み合わせて本明細書に記載される化合物の有効量を含む医薬組成物にも関する。本開示の化合物は即放剤形、中間放出剤形、または持続もしくは制御放出剤形で投与されてよい。持続または制御放出剤形は経口投与されることが好ましいが、坐剤および経皮または他の局所剤形でも投与される。化合物の放出を注射部位において制御する、または持続させるためにリポソーム剤形での筋肉内注射を用いてもよい。
本明細書に記載される組成物は１つ以上の薬学的に許容可能な担体を使用して従来的に製剤されてよく、制御放出製剤として投与されてもよい。これらの医薬組成物に使用され得る薬学的に許容可能な担体にはイオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝性物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水；硫酸プロラミン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩などの塩または電解質；コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書に記載される組成物は経口投与により、非経口投与により、吸入スプレーによる投与により、局所投与により、直腸投与により、鼻噴投与により、バッカル投与により、膣内投与により、または埋め込み式リザーバーを介して投与され得る。本明細書において使用される「非経口」という用語には皮下、静脈内、筋肉内、関節内、関節滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、傷害内、および頭蓋内の注射または点滴技術が含まれる。本組成物は経口投与、腹腔内投与、または静脈内投与により投与されることが好ましい。
本明細書に記載される組成物の無菌注射剤形は水性懸濁液でも油性懸濁液でもよい。これらの懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して当技術分野において知られている技術に従って製剤され得る。その無菌注射調製物は無毒で非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒の中の、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液としての無菌注射溶液または懸濁液であってもよい。許容可能なベヒクルおよび溶媒の中でも水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液が使用可能である。さらに、無菌不揮発性油が溶媒または懸濁媒体として従来的に使用される。この目的のため、合成モノまたはジ−グリセリドを含むあらゆるブランドの不揮発性油を使用してもよい。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、オリーブ油またはひまし油などの天然の薬学的に許容可能な油が特にそれらのポリオキシエチル化型であるときにそうであるように、注射可能物の調製に有用である。これらの油性溶液または懸濁液はスイス薬局方または類似のアルコールなどの長鎖アルコール希釈剤または分散剤を含有してもよい。
本明細書に記載される医薬組成物は、限定されないが、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤、または水剤を含むあらゆる経口的に許容可能な剤形で経口投与され得る。経口使用向けの錠剤の場合、一般的に使用される担体にはラクトースおよびコーンスターチが含まれる。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も一般的に添加される。カプセル剤形での経口投与ために有用な希釈剤にはラクトースおよび乾燥コーンスターチが含まれる。水性懸濁剤が経口使用に要求される場合、その活性成分は乳化剤および懸濁剤と混合される。希望に応じてある特定の甘味剤、芳香剤、または着色剤を添加してもよい。
あるいは、本明細書に記載される医薬組成物は直腸内投与向けの坐剤の形態で投与され得る。これらは、室温では固体であるが、直腸温度では液体であり、したがって、直腸内で融解してその薬品を放出する適切な非刺激性賦形剤とその薬剤を混合することにより調製され得る。そのような材料にはココアバター、蜜蝋、およびポリエチレングリコールが含まれる。
本明細書に記載される医薬組成物は局所投与されてもよい。適切な局所製剤はこれらの領域または器官の各々に向けて容易に調製される。下部腸管への局所適用は直腸坐剤製剤（上を参照）または適切な直腸投与製剤で達成され得る。局所的に許容可能な経皮パッチを使用してもよい。
局所適用のために本医薬組成物は、１つ以上の担体中に懸濁または溶解された活性成分を含有する適切な軟膏に製剤され得る。本発明の化合物の局所投与のための担体には鉱物油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、および水が含まれるが、これらに限定されない。本発明のある特定の好ましい態様において、本化合物は、患者内のステントに閉塞が起こる可能性を阻害する、または減少させるために患者に外科的に移植される予定のステント上に被覆されてよい。
あるいは、本医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体中に懸濁または溶解された活性成分を含有する適切なローションまたはクリームに製剤され得る。適切な担体には鉱物油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、および水が含まれるが、これらに限定されない。
眼科使用のため、本医薬組成物は、ベンジルアルコニウムクロリドなどの保存料を含むか、または含まない等張性ｐＨ調節済み無菌生理食塩水中の微粒子懸濁剤として、または好ましくは等張性ｐＨ調節済み無菌生理食塩水中の水剤として製剤され得る。あるいは、眼科使用のため、本医薬組成物はワセリンなどの軟膏状に製剤され得る。
本明細書に記載される医薬組成物は鼻エアロゾルまたは吸入によって投与されてもよい。そのような組成物は医薬製剤の技術分野においてよく知られている技術に従って調製され、それらはベンジルアルコールまたは他の適切な保存料、生物学的利用率を向上させるための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を使用して生理食塩中の溶液として調製され得る。
単一の剤形を作製するために担体材料と混合され得る本明細書に記載される医薬組成物中の化合物の量は治療を受ける宿主および疾患、特定の投与モードに応じて変化する。好ましくは、それらの組成物は約０．０５ミリグラム〜約７５０ミリグラムの間またはそれ以上、より好ましくは約１ミリグラム〜約６００ミリグラムの間、およびさらにより好ましくは約１０ミリグラム〜約５００ミリグラムの間の活性成分を単独で、または少なくとも１つの本発明に従う他の化合物と組み合わせて含有するように製剤される必要がある。
どの特定の患者向けの特定の投与量および治療計画も、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、一般健康状態、性別、食事、投与時間、排泄率、薬品の組合せ、および治療担当医の判断、および治療を受けている特定の疾患または病気の重症度を含む様々な因子に左右されることも理解する必要がある。
本明細書に記載される方法による化合物を使用する治療を必要とする患者または対象は、所望により薬学的に許容可能な担体または希釈剤中の本発明による化合物の薬学的に許容可能な塩、溶媒和化合物、または多形体を含むその化合物の有効量を単独で、または本明細書において別途特定される他の公知の赤血球生成刺激剤と組み合わせてその患者（対象）に投与することにより治療され得る。
これらの化合物は、液体剤形、クリーム剤形、ゲル剤形、または固体剤形で、またはエアロゾル剤形によりあらゆる適切な経路で、例えば、経口投与により、非経口投与により、静脈内投与により、皮内投与により、皮下投与により、または経皮投与を含む局所投与により投与され得る。
本活性化合物は、治療を受ける患者に重篤な毒性効果を引き起こさずに所望の適応症の治療有効量をその患者に送達するために充分な量で薬学的に許容可能な担体または希釈剤に含まれる。本明細書において言及された病状の全てのための本活性化合物の好ましい用量は約１０ｎｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは一日当たり０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より一般的には一日に受容者／患者の体重１キログラム当たり０．５〜約２５ｍｇの範囲にある。典型的な局所投与量は適切な担体中に０．０１〜５％（重量／重量）までの範囲になる。
本化合物は従来、単位剤形当たり１ｍｇ未満、１ｍｇ〜３０００ｍｇ、好ましくは５〜５００ｍｇの活性成分を含有する単位剤形を含むあらゆる適切な単位剤形で投与される。約２５〜２５０ｍｇの経口投与量が多くの場合に利用しやすい。
本活性成分は約０．００００１〜３０ｍＭ、好ましくは約０．１〜３０μＭのその活性化合物のピーク血漿濃度を達成するように投与されることが好ましい。これは、例えば、所望により生理食塩水または水性媒体中の本活性成分の溶液または製剤の静脈内注射によるか、またはその活性成分のボーラスとして投与されて達成され得る。経口投与は活性薬剤の血漿濃度を有効にするためにも適切である。
薬品組成物中の活性化合物の濃度はその薬品の吸収、分布、不活化、および排出率、ならびに当業者に知られている他の因子によって左右される。投与量の値も緩和される症状の重症度によって変化することに留意されたい。あらゆる特定の対象にとって、個々の要求と本組成物を投与する、またはその投与を監督する専門家による判断によって経時的に特定の投与計画を調節する必要があること、および本明細書において示される濃度範囲は例示だけを目的としており、本請求の組成物の範囲または実施を限定することを意図していないことがさらに理解される必要がある。本活性成分は一度に投与されてもよく、または多数のより小さい用量に分割して様々な投与間隔で投与されてもよい。
経口組成物は概ね不活性希釈剤または食用担体を含むことになる。それらはゼラチンカプセルに封入されても錠剤に圧縮されてもよい。経口治療投与の目的のため、本活性化合物またはそのプロドラッグ誘導体を賦形剤と混合し、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用することができる。薬学的に適合可能な結合剤および／またはアジュバント材を本組成物の一部として含めることができる。
その錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤等は次の成分、または類似の性質を持つ化合物のうちのいずれかを含有することができる：ミクロクリスタリンセルロース、トラガカントガム、またはゼラチンなどの結合剤；デンプンまたはラクトースなどの賦形剤；アルギン酸、プリモゲル、またはコーンスターチなどの分散剤；ステアリン酸マグネシウムまたはステローテなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤；ショ糖またはサッカリンなどの甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料などの芳香剤。投薬単位剤形がカプセルであるとき、それは上記の種類の物質に加えて脂肪油などの液体担体を含有することができる。さらに、投薬単位剤形はその投薬単位の物理的形態を改変する様々な他の材料、例えば、糖衣、シェラック、または腸溶剤を含有することができる。
本活性化合物または薬学的に許容可能なその塩はエリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウェハー剤、チューインガム剤などの成分として投与され得る。シロップ剤は本活性化合物に加えて甘味剤としてのショ糖およびある特定の保存料、色素、および着色剤と芳香剤を含有してよい。
本活性化合物または薬学的に許容可能なその塩は、何よりもＥＰＯおよびダルベポエチンαを含むエリスロポエチン刺激剤などの所望の作用を損なうことが無い他の活性物質と、または所望の作用を追加する材料と混合されてもよい。本発明のある特定の好ましい態様において、１つ以上の本発明による化合物が本明細書において別途記載されるようにエリスロポエチン刺激剤または抗生物質を含む創傷治癒剤などの別の生体活性剤と共投与される。
非経口適用、皮内適用、皮下適用、または局所適用のために使用される水剤または懸濁剤は次の成分を含むことができる：注射用水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗細菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミンテトラ酢酸などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩などの緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはブドウ糖などの等張性調節剤。非経口調製物はガラス製またはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器、または複数投与用バイアルに封入され得る。
静脈内投与される場合、好ましい担体は生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。
１つの実施形態では本活性化合物は、移植物およびマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤など、体からの急速な排出からその化合物を守る担体と共に調製される。エチレンビニル酢酸、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生物分解性生体適合性高分子を使用することができる。そのような製剤の調製方法は当業者に明らかになる。
リポソーム懸濁系も薬学的に許容可能な担体であり得る。これらは当業者に知られている方法に従って、例えば、米国特許第４５２２８１１号明細書（その全体が参照により本明細書に援用される）に記載されるように調製され得る。例えば、リポソーム製剤は、適切な脂質（ステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイルホスファチジルコリン、およびコレステロールなど）を無機溶媒に溶解し、次にその無機溶媒を蒸発させ、容器の表面に乾燥した脂質の薄膜を残すことにより調製され得る。次に本活性化合物の水性溶液をその容器に導入する。次にその容器を手でぐるぐる回してその容器の側面から脂質材料を解放し、脂質凝集物を分散し、それによりリポソーム懸濁系を形成する。
治療方法
追加の態様において、本明細書は、本明細書に記載される化合物またはその塩形態の有効量と薬学的に許容可能な担体を含む治療組成物を提供する。それらの治療組成物は患者または対象、例えば、ヒトなどの動物においてタンパク質分解を調節し、その分解タンパク質を介して調節される疾患状態または病状の治療または改善のために使用可能である。
「治療する」、「治療すること」、および「治療」等の用語は、本明細書において使用される場合、本化合物が結合するタンパク質を介して調節されるあらゆる疾患状態または病状の治療を含む、本化合物を投与する場合があるその利益を患者に与えるあらゆる活動を指す。本発明による化合物を使用して治療される場合がある癌を含む疾患状態または病状は本明細書において上で示されている。
本明細書は疾患、例えば、癌の治療または改善のために目的のタンパク質の分解を達成するための本明細書に記載される治療組成物を提供する。ある特定の追加の実施形態ではその疾患は多発性骨髄腫である。したがって、別の態様において、本明細書は細胞中の標的タンパク質をユビキチン化／分解する方法を提供する。ある特定の実施形態ではその方法は、本明細書における別段の記載のようにリンカー部分を介して連結されていることが好ましいＣＬＭとＰＴＭを例えば備える本明細書に記載される二官能性化合物を投与することを含み、その化合物ではそのＣＬＭがそのＰＴＭに結合しており、その方法ではそのＣＬＭがユビキチン経路タンパク質（例えば、ユビキチンリガーゼ、好ましくはＥ３ユビキチンリガーゼ、例えば、セレブロンなど）を認識し、そのユビキチンリガーゼの近傍に標的タンパク質が配置されるとその標的タンパク質の分解が生じるようにそのＰＴＭが標的タンパク質を認識し、それによりその標的タンパク質が分解され、その効果が阻害され、タンパク質レベルが制御される。本発明によって加えられるタンパク質レベルの制御により疾患状態または病状が治療され、その疾患状態または病状は細胞、例えば患者の細胞中の標的タンパク質のレベル低下によりそのタンパク質を介して調節される。ある特定の実施形態ではその方法は、所望により薬学的に許容可能な賦形剤、担体、アジュバント、別の生体活性剤、またはそれらの組合せを含む本明細書に記載される化合物の有効量を投与することを含む。
追加の実施形態では本明細書は、対象または患者、例えば、ヒトなどの動物において疾患、障害またはその症状を治療または改善するための方法であって、本明細書に記載される化合物またはその塩形態の有効量、例えば、治療有効量と薬学的に許容可能な賦形剤、担体、アジュバント、別の生体活性剤、またはそれらの組合せを含み、その対象の疾患または障害またはその症状を治療または改善するために有効である組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む前記方法を提供する。
別の態様において、本明細書は本発明による化合物を使用した生体系における目的のタンパク質の分解の効果を特定するための方法を提供する。
別の実施形態では本発明は、タンパク質を介して調節され、そのタンパク質の分解によって治療効果が治療を必要とするヒト患者に生じる疾患状態または病状について治療するための方法であって、本発明の化合物の有効量を所望により別の生体活性剤と組み合わせて必要な患者に投与することを含む前記方法に関する。その疾患状態または病状はウイルス、細菌、真菌、原生動物、または他の微生物などの微生物因子または他の外来性因子によって引き起こされる疾患であり得、または疾患状態および／または病状につながるタンパク質の過剰発現によって引き起こされる疾患状態であり得る。
「疾患状態または病状」という用語は、タンパク質の異常調節（すなわち、患者において発現されるタンパク質の量が増加している）が起きており、且つ、患者での１つ以上のタンパク質の分解により必要とする患者に有益な治療または症状からの解放を与えることができるあらゆる疾患状態または病状を説明するために使用される。ある特定の例ではその疾患状態または病状は治癒可能である。
本発明による化合物を使用して治療され得る病状の疾患状態には、例えば、喘息、多発性硬化症などの自己免疫疾患、様々な癌、繊毛関連疾患、口蓋裂、糖尿病、心臓病、高血圧、炎症性腸疾患、知的障害、気分障害、肥満、屈折異常症、不稔、エンジェルマン症候群、カナバン病、セリアック病、シャルコー・マリー・トゥース病、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ヘモクロマトーシス、血友病、クラインフェルター症候群、神経線維腫症、フェニルケトン尿症、多発性嚢胞腎（ＰＫＤ１）または４（ＰＫＤ２）、プラダー・ウィリ症候群、鎌状赤血球症、テイ・サックス病、ターナー症候群が含まれる。
本発明による化合物を使用して治療され得るその他の疾患状態または病状にはアルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリッグ病）、神経性無食欲症、不安障害、アテローム性動脈硬化症、注意欠陥多動性障害、自閉症、双極性障害、慢性疲労症候群、慢性閉塞性肺疾患、クローン病、冠動脈疾患、認知症、鬱、１型糖尿病、２型糖尿病、てんかん、ギラン・バレー症候群、過敏性腸症候群、狼瘡、メタボリックシンドローム、多発性硬化症、心筋梗塞、肥満、強迫性障害、パニック障害、パーキンソン病、乾癬、リウマチ性関節炎、サルコイドーシス、精神分裂病、脳卒中、閉塞性血栓性血管炎、トゥレット症候群、脈管炎が含まれる。
本発明による化合物によって治療され得るさらに追加の疾患状態または病状には、何よりも、無セルロプラスミン血症、軟骨無発生症２型、軟骨発育不全症、尖頭症、２型ゴーシェ病、急性間欠性ポルフィリア、カナバン病、大腸腺腫性ポリポーシス、ＡＬＡ脱水酵素欠損症、アデニロコハク酸リアーゼ欠損症、副腎性器症候群、副腎白質ジストロフィー、ＡＬＡ−Ｄポルフィリン症、ＡＬＡ脱水酵素欠損症、アルカプトン尿症、アレキサンダー病、アルカプトン尿性組織褐変症、α１−アンチトリプシン欠乏症、α−１プロテイナーゼインヒビトー、肺気腫、筋萎縮性側索硬化症アルストレム症候群、アレキサンダー病、エナメル質形成不全症、ＡＬＡ脱水酵素欠損症、アンダーソン・ファブリー病、アンドロゲン不感性症候群、びまん性体幹被角血管腫性貧血、網膜血管腫症（フォン・ヒッペル・リンドウ病）アペール症候群、クモ状指趾症（マルファン症候群）、スティックラー症候群、先天性多発性関節弛緩症（エーラス・ダンロス症候群関節弛緩型）毛細血管拡張性運動失調症、レット症候群、原発性肺高血圧、サンドホフ病、神経線維腫症２型、ベーレ・スティーブンソン脳回状頭皮症候群、地中海熱、家族性、ベンジャミン症候群、ベータサラセミア、両側性聴神経腫瘍（神経線維腫症２型）、第Ｖ因子ライデン栓友病、ブロッホ・サルツバーガー症候群（色素失調症）、ブルーム症候群、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血、ボンネヴィー・ウルリッヒ症候群（ターナー症候群）、ボンネビル病（結節性硬化症）、プリオン病、バート・ホッグ・デュベ症候群、脆弱骨病（骨形成不全症）、幅広母指／母趾症候群（ルビンシュタイン・テイビ症候群）、青銅色糖尿病／青銅色肝硬変（ヘモクロマトーシス）、球脊髄性筋萎縮症（ケネディ病）、ビュルガー・グリュッツ症候群（リポタンパク質リパーゼ欠損症）、ＣＧＤ慢性肉芽腫症、屈曲肢異形成症、ビオチナーゼ欠損症、心筋症（ヌーナン症候群）、猫鳴き症、ＣＡＶＤ（先天性輸精管欠損）、カイラー心臓顔面症候群（ＣＢＡＶＤ）、ＣＥＰ（先天性造血性ポルフィリン症）、嚢胞性線維症、先天性甲状腺機能低下症、軟骨形成異常症症候群（軟骨発育不全症）、常染色体優性耳脊椎巨大骨端異形成症、レッシュ・ナイハン症候群、ガラクトース血症、エーラス・ダンロス症候群、致死性骨異形成症、コフィン・ローリー症候群、コケイン症候群、（家族性腺腫性ポリポーシス）、先天性造血性ポルフィリン症、先天性心臓疾患、メトヘモグロビン血症／先天性メトヘモグロビン血症、軟骨発育不全症、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血、結合組織病、円錐動脈幹異常顔貌症候群、クーリー貧血症（ベータサラセミア）、銅蓄積病（ウィルソン病）、銅輸送病（メンケス病）、遺伝性コプロポルフィリン症、カウデン症候群、頭蓋顔面関節異常症（クルーゾン症候群）、クロイツフェルト・ヤコブ病（プリオン病）、コケイン症候群、カウデン症候群、クルシュマン・バッテン・スタイナート症候群（筋強直性ジストロフィー）、ベーレ・スティーブンソン脳回状頭皮症候群、原発性高シュウ酸尿症、脊椎骨端骨幹端異形成症（ストラドウィック型）、デュシェンヌ型およびベッカー型（ＤＢＭＤ）の筋ジストロフィー、アッシャー症候群、ド・グルーシー症候群とデジェリン・ソッタス症候群を含む神経変性疾患、発達障害、遠位型脊髄性筋萎縮症Ｖ型、アンドロゲン不感性症候群、びまん性グロボイドボディ性硬化症（クラッベ病）、ディ・ジョージ症候群、ジヒドロテストステロン受容体欠損症、アンドロゲン不感性症候群、ダウン症、小人症、赤血球産生性プロトポルフィリン症エリスロイド５−アミノレブリン合成酵素欠損症、赤血球産生性ポルフィリン症、赤血球産生性プロトポルフィリン症、赤血球産生性ウロポルフィリン症、フリードライヒ運動失調症、、家族性発作性多漿膜炎、晩発性皮膚ポルフィリン症、家族性圧脆弱性ニューロパチー、原発性肺高血圧（ＰＰＨ）、膵臓線維性嚢胞、脆弱Ｘ症候群、ガラクトース血症、遺伝的脳障害、巨細胞肝炎（新生児ヘモクロマトーシス）、グレンブラット・ストランドベルク症候群（弾力繊維性仮性黄色腫）、グンター病（先天性造血性ポルフィリン症）、ヘモクロマトーシス、ハルグレン症候群、鎌状赤血球貧血、血友病、肝骨髄性ポルフィリン症（ＨＥＰ）、ヒッペル・リンドウ症候群（フォン・ヒッペル・リンドウ病）、ハンチントン病、ハッチソン・ギルフォード早期老化症候群（早老症）、アンドロゲン過多症、低軟骨形成症、低色素性貧血、Ｘ連鎖重症複合免疫不全を含む免疫系障害、インスリー・アストリー症候群、ジャクソン・ワイス症候群、ジュベール症候群、レッシュ・ナイハン症候群、ジャクソン・ワイス症候群、高シュウ酸尿症を含む腎臓病、クラインフェルター症候群、クニースト骨異形成症、ラクナ梗塞型認知症、ランガー・サルディーノ軟骨無形性症、毛細血管拡張性運動失調症、リンチ症候群、リシルヒドロキシラーゼ欠損症、マチャド・ジョゼフ病、クニースト骨異形成症を含む代謝障害、マルファン症候群、運動障害、モワット・ウィルソン症候群、嚢胞性線維症、ミュンケ（Ｍｕｅｎｋｅ）症候群、多発性神経線維腫症、ナンス・インスリー症候群、ナンス・スウィーニー軟骨異形成症、ニーマン・ピック病、ノアック（Ｎｏａｃｋ）症候群（ファイファー症候群）、オスラー・ウェーバー・ランデュ病、ポイツ・ジェガーズ症候群、多発性嚢胞腎、多骨性線維性骨異形成症（マッキューン・オルブライト症候群）、ポイツ・ジェガーズ症候群、プラダー・ラブハート・ウィリ症候群、ヘモクロマトーシス、原発性高尿酸血症候群（レッシュ・ナイハン症候群）、原発性肺高血圧、原発性老年期変性性認知症、プリオン病、早老症（ハッチソン・ギルフォード早期老化症候群）、慢性遺伝性（ハンチントン）進行性舞踏病（ハンチントン病）、進行性筋萎縮症、脊髄性筋萎縮症、プロピオン酸血症、プロトポルフィリン症、近位型筋強直性ジストロフィー、肺動脈性肺高血圧症、ＰＸＥ（弾力繊維性仮性黄色腫）、Ｒｂ（網膜芽細胞腫）、レックリングハウゼン病（神経線維腫症１型）、再発性多漿膜炎、網膜疾患、網膜芽細胞腫、レット症候群、３型ＲＦＡＬＳ、リッカー（Ｒｉｃｋｅｒ）症候群、ライリー・デイ症候群、ルシー・レヴィー症候群、発育遅延と黒色表皮症を伴う重度軟骨発育不全症（ＳＡＤＤＡＮ）、リ・フラウメニ症候群とそれによる乳房肉腫、白血病、および副腎（ＳＢＬＡ）症候群、結節性硬化症（結節性硬化症）、ＳＤＡＴ、先天性ＳＥＤ（先天性脊椎骨端異形成症）、ストラドウィック型ＳＥＤ（脊椎骨端骨幹端異形成症、ストラドウィック型）、ＳＥＤｃ（先天性脊椎骨端異形成症）、ストラドウィック型ＳＥＭＤ（脊椎骨端骨幹端異形成症、ストラドウィック型）、シュプリンツェン症候群、皮膚色素障害、スミス・レムリ・オピッツ症候群、南アフリカ遺伝性ポルフィリン症（異型ポルフィリン症）、乳児発症上行性遺伝性痙性麻痺、会話音声障害、スフィンゴリピドーシス、テイ・サックス病、脊髄小脳失調症、スティックラー症候群、脳卒中、アンドロゲン不感性症候群、テトラヒドロビオプテリン欠乏症、ベータサラセミア、甲状腺疾患、ソーセージ様ニューロパチー（遺伝性圧脆弱性ニューロパチー）、トーチャー・コリンズ症候群、トリプルＸ症候群（トリプルＸ症候群）、２１番染色体トリソミー（ダウン症）、Ｘ染色体トリソミー、ＶＨＬ症候群（フォン・ヒッペル・リンドウ病）、視力障害（アルストレム症候群）、フロリク病、ワールデンブルグ症候群、ワールブルグ・ショー・フレデリウス症候群、ワイゼンバッハー・ツヴァイミュラー症候群、ウォルフ・ヒルシュホーン症候群、ウォルフ周期性疾患、ワイゼンバッハー・ツヴァイミュラー症候群および色素性乾皮症が含まれる。
「新形成」または「癌」という用語は、癌性または悪性の新生物、すなわち、細胞増殖によって通常よりも急速に成長することが多く、且つ、新たな増殖を開始させた刺激が停止した後にも成長し続ける異常な組織を形成し、増殖させることになる病理過程を指すために本明細書を通して使用される。悪性新生物は構造的構成と機能についての正常組織との調整を部分的、または完全に欠いており、大半が周囲の組織に浸潤し、幾つかの部位に転移し、そして除去の試みの後に再発し、且つ、適切に治療されない限り患者を殺す可能性がある。本明細書において使用される場合、新形成という用語は全ての癌疾患状態を説明するために使用され、その用語は悪性造血性腫瘍、腹水腫瘍、および固形腫瘍と関連する病理過程を内包または包含する。単独で、または少なくとも１つの追加の抗癌剤と組み合わせて本化合物によって治療され得る例となる癌には扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、膀胱癌、大腸癌、乳癌、子宮頸部癌、結腸癌、食道癌、頭部癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、頚部癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、胃癌、白血病、良性および悪性リンパ腫、特にバーキットリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、良性および悪性黒色腫、骨髄増殖性疾患、ユーイング肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、脂肪肉腫、筋肉腫、末梢性神経上皮腫、滑膜肉腫、膠腫、星状細胞腫、希突起神経膠腫、上衣腫、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、神経節細胞腫、神経節膠腫、髄芽腫、松果体細胞腫、髄膜腫、髄膜肉腫、神経線維腫、およびシュワン細胞腫を含む肉腫、大腸癌、乳癌、前立腺癌、子宮頚部癌、子宮癌、肺癌、卵巣癌、精巣癌、甲状腺癌、星状細胞腫、食道癌、膵臓癌、胃癌、肝臓癌、大腸癌、黒色腫；癌肉腫、ホジキン病、ウィルムス腫瘍および奇形癌腫が挙げられる。本発明による化合物を使用して治療され得るその他の癌には、例えば、Ｔ系列急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、Ｔ系列リンパ芽球性リンパ腫（Ｔ−ＬＬ）、末梢Ｔ細胞リンパ腫、成人性Ｔ細胞白血病、前駆Ｂ細胞ＡＬＬ、前駆Ｂ細胞リンパ腫、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞ＡＬＬ、フィラデルフィア染色体陽性ＡＬＬ、およびフィラデルフィア染色体陽性ＣＭＬが含まれる。
「生体活性剤」という用語は、本発明の化合物の使用目的である意図された治療、抑制、および／または防止／予防の達成を支援する生物活性を有する薬剤としてその化合物と併用される本発明の化合物以外の薬剤を説明するために使用される。本明細書において使用される好ましい生体活性剤には本化合物の使用目的または投与目的である薬理学的活性と類似のものを有する薬剤が含まれ、例えば、抗癌剤、抗ウイルス剤が含まれ、特に抗ＨＩＶ剤および抗ＨＣＶ剤、抗微生物剤、抗真菌剤等が含まれる。
「追加の抗癌剤」という用語は癌治療のために本発明による化合物と組み合わせられる場合がある抗癌剤を説明するために使用される。これらの薬剤には、例えば、エベロリムス、トラベクテジン、アブラキサン、ＴＬＫ２８６、ＡＶ−２９９、ＤＮ−１０１、パゾパニブ、ＧＳＫ６９０６９３、ＲＴＡ７４４、ＯＮ ０９１０．Ｎａ、ＡＺＤ６２４４（ＡＲＲＹ−１４２８８６）、ＡＭＮ−１０７、ＴＫＩ−２５８、ＧＳＫ４６１３６４、ＡＺＤ１１５２、エンザスタウリン、バンデタニブ、ＡＲＱ−１９７、ＭＫ−０４５７、ＭＬＮ８０５４、ＰＨＡ−７３９３５８、Ｒ−７６３、ＡＴ−９２６３、ＦＬＴ−３阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦＲ ＴＫ阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、ＰＩＫ−１修飾因子、Ｂｃｌ−２阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ｃ−ＭＥＴ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、Ｃｄｋ阻害剤、ＥＧＦＲ ＴＫ阻害剤、ＩＧＦＲ−ＴＫ阻害剤、抗ＨＧＦ抗体、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ｍＴＯＲＣ１／２阻害剤、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、チェックポイント−１または２阻害剤、フォーカル・アドヒージョンキナーゼ阻害剤、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ｍｅｋ）阻害剤、ＶＥＧＦ ｔｒａｐ抗体、ペメトレキセド、エルロチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、デカタニブ、パニツムマブ、アムルビシン、オレゴボマブ、Ｌｅｐ−ｅｔｕ、ノラトレキシド、ａｚｄ２１７１、バタブリン、オファツムマブ、ザノリムマブ、エドテカリン、テトランドリン、ルビテカン、テスミリフェン、オブリメルセン、チシリムマブ、イピリムマブ、ゴシポール、Ｂｉｏ１１１、１３１−Ｉ−ＴＭ−６０１、ＡＬＴ−１１０、ＢＩＯ１４０、ＣＣ８４９０、シレンギチド、ジャイマテカン、ＩＬ１３−ＰＥ３８ＱＱＲ、ＩＮＯ１００１、ＩＰｄＲ１ＫＲＸ−０４０２、ルカントン、ＬＹ３１７６１５、ノイラジアブ、ビテスパン、Ｒｔａ７４４、Ｓｄｘ１０２、タランパネル、アトラセンタン、Ｘｒ３１１、ロミデプシン、ＡＤＳ−１００３８０、スニチニブ、５−フルオロウラシル、ボリノスタット、エトポシド、ゲムシタビン、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、ビンクリスチン、テモゾロミド、ＺＫ−３０４７０９、セリシクリブ；ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ−６２４４、カペシタビン、Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−［４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル］２ナトリウム塩７水和物、カンプトテシン、ＰＥＧ標識イリノテカン、タモキシフェン、クエン酸トレミフェン、アナストラゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ＤＥＳ（ジエチルスチルベストロール）、エストラジオール、エストロゲン、結合型エストロゲン、ベバシズマブ、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＣＨＩＲ−２５８）；３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル］−キノロン、バタラニブ、ＡＧ−０１３７３６、ＡＶＥ−０００５、ゴセレリン酢酸、ロイプロリド酢酸、パモ酸トリプトレリン、メドロキシプロゲステロン酢酸、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、メゲストロール酢酸、ラロキシフェン、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、メゲストロール酢酸、ＣＰ−７２４７１４；ＴＡＫ−１６５、ＨＫＩ−２７２、エルロチニブ、ラパタニブ、カネルチニブ、ＡＢＸ−ＥＧＦ抗体、エルビタックス、ＥＫＢ−５６９、ＰＫＩ−１６６、ＧＷ−５７２０１６、ロナファルニブ、ＢＭＳ−２１４６６２、ティピファルニブ；アミホスチン、ＮＶＰ−ＬＡＱ８２４、ヒドロキサミン酸サブエロイルアナリド、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、ＦＫ−２２８、ＳＵ１１２４８、ソラフェニブ、ＫＲＮ９５１、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナグレリド、Ｌ−アスパラギナーゼ、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブチル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、エピルビシン、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、フルタミド、グリベック、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、オクトレオチド、オキサリプラチン、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、テニポシド、テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トレチノイン、ビンデシン、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、フェニルアラニンマスタード、ウラシルマスタード、エストラムスチン、アルトレタミン、フロクスウリジン、５−デオキシウリジン、シトシンアラビノシド、６−メルカプトプリン、デオキシコホルマイシン、カルシトリオール、バルルビシン、ミトラマイシン、ビンブラスチン、ビノレルビン、トポテカン、ラゾキシン、マリマスタット、ＣＯＬ−３、ネオバスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、スクワラミン、エンドスタチン、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＥＭＤ１２１９７４、インターロイキン−１２、ＩＭ８６２、アンギオスタチン、ビタキシン、ドロロキシフェン、イドキシフェン、スピロノラクトン、フィナステリド、シミチジン、トラスツズマブ、デニロイキンジフチトクス、ゲフィチニブ、ボルテジミブ、パクリタキセル、非クレモフォール含有パクリタキセル、ドセタキセル、エピチロンＢ、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−３１０７０５、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、ピペンドキシフェン、ＥＲＡ−９２３、アルゾキシフェン、フルベストラント、アコルビフェン、ラソフォキシフェン、イドキシフェン、ＴＳＥ−４２４、ＨＭＲ−３３３９、ＺＫ１８６６１９、トポテカン、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、ＶＸ−７４５、ＰＤ１８４３５２、ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、テムシロリムス、ＡＰ−２３５７３、ＲＡＤ００１、ＡＢＴ−５７８、ＢＣ−２１０、ＬＹ２９４００２、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９３６４６、ウォルトマンニン、ＺＭ３３６３７２、Ｌ−７７９，４５０、ＰＥＧ−フィルグラスチム、ダルベポエチン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、ゾレンドロネート、プレドニゾン、セツキシマブ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヒストレリン、ペグ化インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ａ、ペグ化インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−２ｂ、アザシチジン、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、レナリドミド、ゲムツズマブ、ヒドロコルチゾン、インターロイキン−１１、デクスラゾキサン、アレムツズマブ、全トランス型レチノイン酸、ケトコナゾール、インターロイキン−２、メゲストロール、免疫グロブリン、ナイトロジェンマスタード、メチルプレドニソロン、イブリツモマブチウキセタン、アンドロゲン類、デシタビン、ヘキサメチルメラミン、ベキサロテン、トシツモマブ、三酸化ヒ素、コルチゾン、エチドロン酸、ミトタン、サイクロスポリン、リポソームダウノルビシン、エドウィナ−アスパラギナーゼ、ストロンチウム８９、カソピタント、ネツピタント、ＮＫ−１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン、アプレピタント、ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、メトクロプラミド、ロラゼパム、アルプラゾラム、ハロペリドール、ドロペリドール、ドロナビノール、デキサメタゾン、メチルプレドニソロン、プロクロルペラジン、グラニセトロン、オンダンセトロン、ドラセトロン、トロピセトロン、ＰＥＧフィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチンα、ダルベポエチンα、およびそれらの混合物が含まれる。
「抗ＨＩＶ薬剤」または「追加の抗ＨＩＶ薬剤」という用語には何よりも、例えば、ヌクレオシドリバーストランスクリプターゼ阻害剤（ＮＲＴＩ）、他の非ヌクレオシドリバーストランスクリプターゼ阻害剤（すなわち、本発明を代表しない薬剤）、プロテアーゼ阻害剤、融合阻害剤が含まれ、それらのうちの例となる化合物は、例えば、３ＴＣ（ラミブジン）、ＡＺＴ（ジドブジン）、（−）−ＦＴＣ、ｄｄＩ（ジダノシン）、ｄｄＣ（ザルシタビン）、アバカビル（ＡＢＣ）、テノホビル（ＰＭＰＡ）、Ｄ−Ｄ４ＦＣ（リバーセット）、Ｄ４Ｔ（スタブジン）、ラシビル、Ｌ−ＦｄｄＣ、Ｌ−ＦＤ４Ｃ、ＮＶＰ（ネビラピン）、ＤＬＶ（デラビルジン）、ＥＦＶ（エファビレンツ）、ＳＱＶＭ（メシル酸サクイナビル）、ＲＴＶ（リトナビル）、ＩＤＶ（インジナビル）、ＳＱＶ（サクイナビル）、ＮＦＶ（ネルフィナビル）、ＡＰＶ（アンプレナビル）、ＬＰＶ（ロピナビル）、Ｔ２０のような融合阻害剤、何よりも、ヒューゼオン（ｆｕｓｅｏｎ）、およびそれらの混合物を含み、現在治験中または開発中である抗ＨＩＶ化合物を含む。
本発明による化合物との共投与に使用され得る他の抗ＨＩＶ薬には、例えば、何よりも、ネビラピン（ＢＩ−Ｒ６−５８７）、デラビルジン（Ｕ−９０１５２Ｓ／Ｔ）、エファビレンツ（ＤＭＰ−２６６）、ＵＣ−７８１（Ｎ−［４−クロロ−３−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］−２メチル３−フランカルボチアミド）、エントラビリン（ＴＭＣ１２５）、トロビルジン（Ｌｙ３０００４６．ＨＣｌ）、ＭＫＣ−４４２（エミビリン、コアクチノン）、ＨＩ−２３６、ＨＩ−２４０、ＨＩ−２８０、ＨＩ−２８１、リルピビリン（ＴＭＣ−２７８）、ＭＳＣ−１２７、ＨＢＹ０９７、ＤＭＰ２６６、バイカリン（ＴＪＮ−１５１）、ＡＤＡＭ−ＩＩ（メチル３’，３’−ジクロロ−４’，４”−ジメトキシ−５’，５”−ビス（メトキシカルボニル）−６，６−ジフェニルヘキサノエート）、メチル３−ブロモ−５−（１−５−ブロモ−４−メトキシ−３−（メトキシカルボニル）フェニル）ヘプト−１−エニル）−２−メトキシベンゾエート（アルケニルジアリールメタン類似体、Ａｄａｍ類似体）、（５−クロロ−３−（フェニルスルフィニル）−２’−インドールカルボキサミド）、ＡＡＰ−ＢＨＡＰ（Ｕ−１０４４８９またはＰＮＵ−１０４４８９）、カプラビリン（ＡＧ−１５４９、Ｓ−１１５３）、アテビルジン（Ｕ−８７２０１Ｅ）、アウリントリカルボン酸（ＳＤ−０９５３４５）、１−［（６−シアノ−２−インドリル）カルボニル］−４−［３−（イソプロピルアミノ）−２−ピリジニル］ピペラジン、１−［５−［［Ｎ−（メチル）メチルスルホニルアミノ］−２−インドリルカルボニル−４−［３−（イソプロピルアミノ）−２−ピリジニル］ピペラジン、１−［３−（エチルアミノ）−２−［ピリジニル］−４−［（５−ヒドロキシ−２−インドリル）カルボニル］ピペラジン、１−［（６−ホルミル−２−インドリル）カルボニル］−４−［３−（イソプロピルアミノ）−２−ピリジニル］ピペラジン、１−［［５−（メチルスルホニルオキシ）−２−インドイルイ）カルボニル］−４−［３−（イソプロピルアミノ）−２−ピリジニル］ピペラジン、Ｕ８８２０４Ｅ、ビス（２−ニトロフェニル）スルホン（ＮＳＣ６３３００１）、カラノリドＡ（ＮＳＣ６７５４５１）、カラノリドＢ、６−ベンジル−５−メチル−２−（シクロヘキシルオキシ）ピリミジン−４−オン（ＤＡＢＯ−５４６）、ＤＰＣ９６１、Ｅ−ＥＢＵ、Ｅ−ＥＢＵ−ｄｍ、Ｅ−ＥＰＳｅＵ、Ｅ−ＥＰＵ、ホスカルネット（ホスカビル）、ＨＥＰＴ（１−［（２−ヒドロキシエトキシ）メチル］−６−（フェニルチオ）チミン）、ＨＥＰＴ−Ｍ（１−［（２−ヒドロキシエトキシ）メチル］−６−（３−メチルフェニル）チオ）チミン）、ＨＥＰＴ−Ｓ（１−［（２−ヒドロキシエトキシ）メチル］−６−（フェニルチオ）−２−チオチミン）、イノフィラムＰ、Ｌ−７３７，１２６、ミケラミンＡ（ＮＳＣ６５０８９８）、ミケラミンＢ（ＮＳＣ６４９３２４）、ミケラミンＦ、６−（３，５−ジメチルベンジル）−１−［（２−ヒドロキシエトキシ）メチル］−５−イソプロピルウラシル、６−（３，５−ジメチルベンジル）−１−（エチオキシメチル）−５−イソプロピルウラシル、ＮＰＰＳ、Ｅ−ＢＰＴＵ（ＮＳＣ６４８４００）、オルチプラズ（４−メチル−５−（ピラジニル）−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオン）、Ｎ−｛２−（２−クロロ−６−フルオロフェネチル］−Ｎ’−（２−チアゾリル）チオウレア（ＰＥＴＴ Ｃｌ、Ｆ誘導体）、Ｎ−｛２−（２，６−ジフルオロフェネチル］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル）］チオウレア｛ＰＥＴＴ誘導体）、Ｎ−｛２−（２，６−ジフルオロフェネチル］−Ｎ’−［２−（５−メチルピリジル）］チオウレア｛ＰＥＴＴピリジル誘導体）、Ｎ−［２−（３−フルオロフラニル）エチル］−Ｎ’−［２−（５−クロロピリジル）］チオウレア、Ｎ−［２−（２−フルオロ−６−エトキシフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル）］チオウレア、Ｎ−（２−フェネチル）−Ｎ’−（２−チアゾリル）チオウレア（ＬＹ−７３４９７）、Ｌ−６９７，６３９、Ｌ−６９７，５９３、Ｌ−６９７，６６１，３−［２−（４，７−ジフルオロベンゾオキサゾール−２−イル）エチル｝−５−エチル−６−メチル（ピプリジン−２（１Ｈ）−チオン（２−ピリジノン誘導体）、３−［［（２−メトキシ−５，６−ジメチル−３−ピリジル）メチル］アミン］−５−エチル−６−メチル（ピプリジン−２（１Ｈ）−チオン、Ｒ８２１５０、Ｒ８２９１３、Ｒ８７２３２、Ｒ８８７０３、Ｒ８９４３９（ロビリド）、Ｒ９０３８５、Ｓ−２７２０、スラミンナトリウム、ＴＢＺ（チアゾロベンズイミダゾール、ＮＳＣ６２５４８７）、チアゾロイソインドール−５−オン、（＋）（Ｒ）−９ｂ−（３，５−ジメチルフェニル−２，３−ジヒドロチアゾロ［２，３−ａ］イソインドール−５（９ｂＨ）−オン、チビラピン（Ｒ８６１８３）、ＵＣ−３８およびＵＣ−８４からなる群より選択され得る他のＮＮＲＴＩ類（すなわち、本発明のＮＮＲＴＩ類以外）が含まれる。
「薬学的に許容可能な塩」という用語は、該当する場合は、本明細書に記載される化合物のうちの１つ以上の塩形態であって、それらの化合物の溶解および生物学的利用率を向上するために患者の胃腸管の胃酸中でその化合物の溶解性を高めるように提供されるものを説明するために本明細書を通して使用される。薬学的に許容可能な塩には薬学的に許容可能な無機または有機の塩基および酸に由来する塩が該当する場合に含まれる。適切な塩には、製薬分野においてよく知られている多数の酸および塩基の中でもカリウムおよびナトリウムなどのアルカリ金属に由来する塩、カルシウム、マグネシウムおよびアンモニウム塩などのアルカリ土類金属に由来する塩が含まれる。ナトリウム塩およびカリウム塩は本発明によるホスフェートの中和塩として特に好ましい。
「薬学的に許容可能な誘導体」という用語は、患者に投与されると本化合物または本化合物の活性代謝物を直接的または間接的に提供するあらゆる薬学的に許容可能なプロドラッグ形態（エステル、アミド、他のプロドラッググループなど）を説明するために本明細書を通して使用される。
全般的な合成アプローチ
本明細書に記載される二官能性分子の合成および最適化は段階的に、またはモジュール式で達成され得る。例えば、標的分子に結合する化合物の特定はハイスループットスクリーニングキャンペーンを、または適切なリガンドが直ぐに利用可能ではない場合はミディアムスループットスクリーニングキャンペーンを含むことができる。適切なインビトロの薬理学的および／またはＡＤＭＥＴアッセイのデータによって特定される次善の態様を改善するために最初のリガンドが繰り返し設計および最適化サイクルを必要とすることはよくあることである。そのリガンドの置換を許容する位置であって、本明細書においてこれまでに参照されたリンカー化学を取り付けるために適切な場所であり得る位置が、その最適化／ＳＡＲキャンペーンの一部によって探し出される。結晶学データまたはＮＭＲ構造データが利用可能である場合、そのような合成作業に集中するためにこれらを使用することができる。
非常に類似した方法でＥ３リガーゼのリガンド、すなわちＵＬＭ／ＣＬＭを特定および最適化することができる。
ＰＴＭおよびＵＬＭ（例えばＣＬＭ）について、当業者はリンカー部分を含む、または含まないそれらの組合せについて公知の合成方法を使用することができる。ある範囲の組成、長さ、および柔軟性を持つようにリン化部分を合成することができ、且つ、そのリンカーの遠位末端にＰＴＭ基とＵＬＭ基を連続的に結合することができるようにそのリンカーを官能化することができる。そうして二官能性分子のライブラリーを実現し、インビトロおよびインビボでの薬理学的およびＡＤＭＥＴ／ＰＫ試験においてそのプロファイルを明らかにすることができる。そのＰＴＭ基およびＵＬＭ基と同様に、望ましい特性を有する分子を特定するためにそれらの最終的な二官能性分子を繰り返し設計および最適化サイクルの対象とすることができる。
本明細書に記載されるＣＬＭを生成するための幾つかの非限定的な例となる方法を以下に示すようにまとめる。
Figure 0006873433
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代表的反応１において示されているように、フタル酸ジメチル誘導体をグルタミン（ラセミ体またはエナンチオマー）またはグルタミン類似体と縮合し、さらにカルボニルジイミダゾールなどの薬剤と反応させて２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体を形成することができる。
あるいは代表的反応２において示されているように上記の最初の縮合において作製されたフタルイミド中間体を別個に調製および／または単離し、次にトリフルオロアセトアミド、ＰＯＣｌ３、または無水酢酸などの脱水剤と反応させて所望の２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体を形成してもよい。同じ種類のフタルイミド中間体を脱水工程の前にローソン試薬と反応させて代表的反応８および９において示されているチオ類似体のようなものを提供することもできる。
代表例３に示されているＮ１−ＢＯＣ種のような２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体の保護例は、この事例ではＴＦＡまたはシリカなどの試薬を使用することにより脱保護されて標的である２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体を提示することができる。
３−アミノピペリジン−２，６−ジオンなどのアミンを使用する反応により代表例４に示されているもののようなフタル酸無水物を開環してカルボキシレート種中間体を形成することができ、カルボニルジイミダゾールおよびベンゾトリアゾールを使用する処理で標的２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体が形成される。あるいは、それらの２つの成分を酢酸の存在下で混合して代表的反応１３において示されている所望の産物を提供してもよい。
類似の反応において、代表的反応５に示されているもののような無水物誘導体をアミン（示されている例ではアンモニア）と、次にカルボニルジイミダゾールと反応させて所望の２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体を形成してもよい。
フタロイルクロリドが利用可能である場合、代表的反応６において示されているようにグルタミン（ラセミ体またはエナンチオマー）またはグルタミン類似体との直接的な縮合が可能であり、カルボニルジイミダゾールなどの薬剤との反応がさらにそれに続いて２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体を形成する。
ｏ−ブロモベンズアミドをパラジウム触媒および関連のホスフィンリガンドの存在下で代表的反応７に示される酸塩化物のようなＣＯ源と反応させて所望の２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体を形成することができる。あるいはＣＯガス自体をロジウム（ＩＩ）触媒および炭酸銀と併用して所望の産物を提供してもよい。
２−（２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオンおよび５−（１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−２−イル）−１，３−ジアジナン−２，４，６−トリオン誘導体を２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体についての上記の方法のうちの幾つかに類似する手法によって調製することができる。代表的反応２０および２１ではフタル酸無水物を酢酸の存在下で５−アミノ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−２，４−ジオンまたは５−アミノ−１，３−ジアジナン−２，４，６−トリオン誘導体とそれぞれ反応させて所望の産物を形成することができる。
あるいは、５−（１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−２−イル）−１，３−ジアジナン−２，４，６−トリオン誘導体は、代表的反応１２において示されているようにヒューニッヒ塩基、カルボジイミド、およびベンゾトリアゾールの存在下での５−アミノ−１，３−ジアジナン−２，４，６−トリオン誘導体のフタル酸モノｔｅｒｔ−ブチルエステルとの反応により調製可能である。代表的反応１４において示されているようなフタル酸モノｔｅｒｔ−ブチルエステルからの２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体の調製のために同用の条件を用いることができる。
代表的反応１６に示されているように３−アミノピペリジン−２，６−ジオンのカルボジイミドとの反応によるアントラニル酸誘導体から３−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロキナゾリン−２，４−ジオンなどの化合物を調製することができる。代表的反応１５において示されているようにベンズアミド中間産物を単離し（または別個に作製し）、カルボジイミドとさらに反応させて３−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロキナゾリン−２，４−ジオン誘導体を作製してもよい。
代表的反応１７において示されているようにサリチル酸をクロロホルマートで活性化し、次に３−アミノピペリジン−２，６−ジオンと縮合することにより３−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，３−ベンゾオキサジン−２，４−ジオン類似体を調製することができる。
代表的反応１８において示されているように３，３−ジクロロ−２，１λ６−ベンゾオキサチオール−１，１−ジオンを２−スルホ安息香酸のＰＯＣｌ３およびＰＣｌ５との反応により調製することができる。これらの化合物の反応物を例えばアミノ誘導体と反応させて所望の２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１λ６，２−ベンゾチアゾール−１，１，３−トリオン誘導体を作製することができる。
代表的反応１９において示されているように、サッカリン誘導体のアニオンを３−ブロモ−３−メチルピペリジン−２−オンなどの求電子試薬でアルキル化して標的の２−（３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１λ６，２−ベンゾチアゾール−１，１，３−トリオン誘導体を作製することができる。
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１λ６，２−ベンゾチアゾール−１，１，３−トリオンの類似体をメチル２−［（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）スルファモイル］安息香酸の水素化ナトリウムなどの強塩基との反応により調製してもよい（代表的反応２０を参照されたい）。
代表的反応２１において示されているように２−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１，３，ジオン誘導体のナトリウムエトキシドでの脱プロトン反応とその後の３−ブロモピペリジン−２，６−ジオンなどの求電子試薬との反応により３−（２−メチル−１，３−ジオキソ−１Ｈ−インデン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンが生じる。
２−（１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−２−イル）ペンタン二酸のＮ−ベンジルヒドロキシルアミンおよび無水トリフルオロ酢酸との反応により２−［１−（ベンジルオキシ）−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，４−ジオンなどのＮ１−置換化合物の調製を達成することができる（代表的反応２２）。
次に、２−［１−（ベンジルオキシ）−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，４−ジオンなどの分子を（代表的反応２３）を水素添加条件下でのベンジル基除去の対象として２−（１−ヒドロキシ−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオンなどのＮ１−ヒドロキシ類似体を産出してもよい。
代表的反応２４ではメチル１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−２−カルボキシレート（および類似体）を３−アミノピペリジン−２−オンと反応させて２−（２−オキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオンを提供する。
代表的反応２５において示されているように同アミンを臭化亜鉛およびトリメチルシリルエーテルなどのルイス酸の存在下でフタル酸無水物誘導体と反応させて同じ種類の産物を産出することもできる。この反応の中間製品が単離されるか、または別途調製される場合（代表的反応２６）、脱水剤を使用してそれは完全に閉環化され得る。
代表的反応２７に示されている２−（６−オキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオンなどの異性体誘導体はフタル酸の５−アミノピペリジン−２−オンとの反応によって獲得可能である。
２−（１−ベンジル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，４−ジオンなどのＮ１−置換化合物の調製（代表的反応２８および２９）は複数の経路によって達成可能である。例えば、（２−（２，６−ジオキソオキサン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン）無水物をＤＭＡＰおよびカルボニルジイミダゾールの存在下で３−アミノピペリジン−２，６−ジオンと縮合することができ（代表的反応２８）、または代表的反応２９において示されているように塩基の存在下でベンジルブロミドなどの求電子試薬で２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体をアルキル化することができる。
幾つかの例では所望の物質の調製を容易にするために保護基ストラテジーおよび／または官能基相互転換（ＦＧＩ）が必要とされる場合がある。そのような化学過程は合成有機化学者にとってよく知られており、これらの多くを「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」Ｐｅｔｅｒ Ｇ． Ｍ． ＷｕｔｓおよびＴｈｅｏｄｏｒａ Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ著、（Ｗｉｌｅｙ）、および「Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： Ｔｈｅ Ｄｉｓｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ ａｐｐｒｏａｃｈ」Ｓｔｕａｒｔ ＷａｒｒｅｎおよびＰａｕｌ Ｗｙａｔｔ著、（Ｗｉｌｅｙ）などの教科書に見出すことができる。
タンパク質レベルの制御
本明細書は細胞でのタンパク質レベル制御のための方法も提供する。これは、好ましくは標的タンパク質のインビボの分解により生体系においてあるタンパク質の量が制御されて特定の治療利益になるような、特定の標的タンパク質と相互作用することが知られている本明細書に記載される化合物に基づいている。
本発明を多少なりとも限定するものとして見るべきではないが、本発明の説明を補足するために次の例を使用する。
本開示の例となる実施形態
本開示は次の特定の実施形態を包含する。これらの実施形態は先行実施形態において列挙された特徴の全てを規定された通りに含んでよい。該当する場合は、次の実施形態はどの先行実施形態において列挙された特徴も包括的または選択的に含んでもよい。
１つの態様はＰＴＭ-Ｌ-ＣＬＭの化学構造を有する化合物を開示し、式中、ＣＬＭはセレブロンＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分であり、ＰＴＭはタンパク質標的化部分であり、Ｌは結合（存在しない場合）または化学リンカー基からなる群より選択されるリンカーであり、ＰＴＭがリンカーを介してＣＬＭに共有結合する。
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいても前記ＰＴＭはブロモドメイン含有タンパク質、例えば、Ｂｒｄ４に結合する部分である。
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいても本明細書に記載される化合物はリンカー基を介して結合した第２のＥ３ユビキチンリガーゼ結合部分をさらに含む。
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいてもＣＬＭはイミド、フタルイミド基、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、またはそれらの類似体、それらの等価体、もしくはそれらの誘導体に由来する化学基を含み、その場合に前記ＣＬＭが次の化学構造によって表され、
Figure 0006873433
 式中、
ＷはＣＨ２、ＣＨＲ、Ｃ＝Ｏ、ＳＯ２、ＮＨ、およびＮ−アルキルからなる群より選択され、
Ｘはそれぞれ独立してＯ、Ｓ、およびＨ２からなる群より選択され、
ＹはＮＨ、Ｎ−アルキル、Ｎ−アリール、Ｎ−ヘタリール、Ｎ−シクロアルキル、Ｎ−ヘテロシクリル、Ｏ、およびＳからなる群より選択され、
ＺはＯ、Ｓ、およびＨ２からなる群より選択され、
ＧおよびＧ’は独立してＨ、アルキル、ＯＨ、所望によりＲ’で置換されていてもよいＣＨ２−ヘテロシクリル、および所望によりＲ’で置換されていてもよいベンジルからなる群より選択され、
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４はＲ’、Ｎ、またはＮ−オキシドから独立して選択される基で置換された炭素Ｃを表し、
Ａは独立してアルキル、シクロアルキル、Ｃｌ、およびＦの群より選択され、
Ｒは−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＳＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＣＲ’Ｒ”−、−ＣＲ’ＮＲ’Ｒ”−、−アリール、−ヘタリール、−アルキル、−シクロアルキル、−ヘテロシクリル、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｒ”、−Ｐ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｒ”、−ＯＰ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＲ’ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＮＲ’ＣＯＲ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）ＮＲ’Ｒ”、−Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｃ−ＮＯ２）ＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２ＮＲ’ＣＯＲ”、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｒ’、−Ｃ（Ｃ＝Ｎ−ＯＲ’）Ｒ”、−ＣＲ’＝ＣＲ’Ｒ”、−ＣＣＲ’、−Ｓ（Ｃ＝Ｏ）（Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）Ｒ”、−ＳＦ５、および−ＯＣＦ３を含み、
Ｒ’およびＲ”は独立して結合、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘタリール、ヘテロシクリルからなる群より選択され、
Figure 0006873433
 は立体特異的（（Ｒ）または（Ｓ））でも非立体特異的でもよい結合を表し、
Ｒｎは官能基または原子を含み、
その場合にｎは１〜４の整数であり、
ｎが１であるときにＲｎは前記リンカー基（Ｌ）に共有結合するように改変され、
ｎが２、３、または４であるときに１つのＲｎが前記リンカー基（Ｌ）に共有結合するように改変され、且つ、他のあらゆるＲｎは所望によりＰＴＭ、ＵＬＭ、前記ＣＬＭと同じ化学構造を有する第２ＣＬＭ、ＣＬＭ’、第２リンカー、またはそれらのうちのあらゆる複数のもの、またはそれらのあらゆる組合せに共有結合するように改変されてもよい。
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいても前記ＣＬＭは次式によって表される化学構造を有し、
Figure 0006873433
 式中、
ＷはＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、ＳＯ２、およびＮＨからなる群より選択され、
Ｘはそれぞれ独立してＯ、Ｈ２からなる群より選択され、
Ｇは独立してＨ、アルキル、ＯＨからなる群より選択され、
ＡおよびＡ’は独立してアルキル基、シクロアルキル基、Ｃｌ、およびＦより選択され、
Ｒｎは官能基または原子を含み、
その場合にｎは１〜４の整数であり、
ｎが１であるときにＲｎは前記リンカー基（Ｌ）に共有結合するように改変され、
ｎが２、３、または４であるときに１つのＲｎが前記リンカー基（Ｌ）に共有結合するように改変され、且つ、他のあらゆるＲｎは所望によりＰＴＭ、ＵＬＭ、前記ＣＬＭと同じ化学構造を有する第２ＣＬＭ、ＣＬＭ’、第２リンカー、またはそれらのうちのあらゆる複数のもの、またはそれらのあらゆる組合せに共有結合するように改変されてもよい。
別の態様において、本開示は、
２−［（９Ｒ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［４−（｛１−［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０−トリオキサ−１−アザドデカン−１２−イル｝オキシ）フェニル］アセトアミド、
２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−（４−｛５−［２−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝フェニル）エチル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−｛２−［２−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−｛４−［２−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニル｝エチル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［２−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）エチル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−｛４−［５−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロポキシ）ピリミジン−２−イル］フェニル｝エチル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−｛４−［３−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）プロポキシ］フェニル｝エチル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−｛４−［２−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニル｝エチル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（４−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝ブチル）アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エチル）アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（５−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝ペンチル）アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロピル）アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（４−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝ブチル）アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−｛４−［２−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］−３−フルオロフェニル｝エチル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［４−（｛１−［２−（３−メチル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０−トリオキサ−１−アザドデカン−１２−イル｝オキシ）フェニル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［４−（｛１−［２−（１−メチル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０−トリオキサ−１−アザドデカン−１２−イル｝オキシ）フェニル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−［３−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロポキシ）フェニル］エチル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（３Ｓ）−１−｛４−［（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ベンゾイル｝ピロリジン−３−イル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［２−（２−｛［３−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロキナゾリン−５−イル］アミノ｝エトキシ）エチル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［３−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロポキシ）プロピル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（３Ｓ）−１−［４−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）ベンゾイル］ピロリジン−３−イル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（４−｛２−［２−（２−｛［３−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロキナゾリン−５−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エトキシ｝フェニル）アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（５−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝ペンチル）アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［３−（３−｛［３−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロキナゾリン−５−イル］アミノ｝プロポキシ）プロピル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（３Ｓ）−１−［４−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）ベンゾイル］ピロリジン−３−イル］アセトアミド、

２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−［３−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）フェニル］エチル］アセトアミド、

４−（４−｛［（５Ｚ）−３−｛１−［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１−アザペンタデカン−１５−イル｝−２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イリデン］メチル｝−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル、

４−（４−｛［（５Ｚ）−３−｛１−［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０−トリオキサ−１−アザドデカン−１２−イル｝−２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イリデン］メチル｝−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル、

４−（４−｛［（５Ｚ）−３−｛１−［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０，１３，１６−ペンタオキサ−１−アザオクタデカン−１８−イル｝−２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イリデン］メチル｝−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル、および

４−（４−｛［（５Ｚ）−３−｛１−［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−１−アザヘンイコサン−２１−イル｝−２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イリデン］メチル｝−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル、からなる群であって、薬学的に許容可能なそれらの塩形態を含む前記群より選択される化合物を提供する。
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいても前記リンカー（Ｌ）は次式によって表される化学構造単位を含み、
−Ａｑ−
式中、
ｑは１より大きい整数であり、且つ、
Ａは独立して結合、ＣＲＬ１ＲＬ２、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲＬ３、ＳＯ２ＮＲＬ３、ＳＯＮＲＬ３、ＣＯＮＲＬ３、ＮＲＬ３ＣＯＮＲＬ４、ＮＲＬ３ＳＯ２ＮＲＬ４、ＣＯ、ＣＲＬ１＝ＣＲＬ２、
Figure 0006873433
 ＳｉＲＬ１ＲＬ２、Ｐ（Ｏ）ＲＬ１、Ｐ（Ｏ）ＯＲＬ１、ＮＲＬ３Ｃ（＝ＮＣＮ）ＮＲＬ４、ＮＲＬ３Ｃ（＝ＮＣＮ）、ＮＲＬ３Ｃ（＝ＣＮＯ２）ＮＲＬ４、所望により０〜６個のＲＬ１基および／またはＲＬ２基で置換されていてもよいＣ３−１１シクロアルキル、所望により０〜６個のＲＬ１基および／またはＲＬ２基で置換されていてもよいＣ３−１１ヘテロシクリル、所望により０〜６個のＲＬ１基および／またはＲＬ２基で置換されていてもよいアリール、所望により０〜６個のＲＬ１基および／またはＲＬ２基で置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され、
ＲＬ１、ＲＬ２、ＲＬ３、ＲＬ４、およびＲＬ５はそれぞれ独立してＨ、ハロ、Ｃ１−８アルキル、ＯＣ１−８アルキル、ＳＣ１−８アルキル、ＮＨＣ１−８アルキル、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）２、Ｃ３−１１シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３−１１ヘテロシクリル、ＯＣ１−８シクロアルキル、ＳＣ１−８シクロアルキル、ＮＨＣ１−８シクロアルキル、Ｎ（Ｃ１−８シクロアルキル）２、Ｎ（Ｃ１−８シクロアルキル）（Ｃ１−８アルキル）、ＯＨ、ＮＨ２、ＳＨ、ＳＯ２Ｃ１−８アルキル、Ｐ（Ｏ）（ＯＣ１−８アルキル）（Ｃ１−８アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＣ１−８アルキル）２、ＣＣ−Ｃ１−８アルキル、ＣＣＨ、ＣＨ＝ＣＨ（Ｃ１−８アルキル）、Ｃ（Ｃ１−８アルキル）＝ＣＨ（Ｃ１−８アルキル）、Ｃ（Ｃ１−８アルキル）＝Ｃ（Ｃ１−８アルキル）２、Ｓｉ（ＯＨ）３、Ｓｉ（Ｃ１−８アルキル）３、Ｓｉ（ＯＨ）（Ｃ１−８アルキル）２、ＣＯＣ１−８アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＮＯ２、ＳＦ５、ＳＯ２ＮＨＣ１−８アルキル、ＳＯ２Ｎ（Ｃ１−８アルキル）２、ＳＯＮＨＣ１−８アルキル、ＳＯＮ（Ｃ１−８アルキル）２、ＣＯＮＨＣ１−８アルキル、ＣＯＮ（Ｃ１−８アルキル）２、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）ＣＯＮＨ（Ｃ１−８アルキル）、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）ＣＯＮ（Ｃ１−８アルキル）２、ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ１−８アルキル）、ＮＨＣＯＮ（Ｃ１−８アルキル）２、ＮＨＣＯＮＨ２、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−８アルキル）、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）ＳＯ２Ｎ（Ｃ１−８アルキル）２、ＮＨＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−８アルキル）、ＮＨＳＯ２Ｎ（Ｃ１−８アルキル）２、およびＮＨＳＯ２ＮＨ２からなる群より選択され、且つ、
ｑが１よりも大きいときにＲＬ１またはＲＬ２がそれぞれ独立して別のＡ基に結合して０〜４個のＲＬ５基でさらに置換することができるシクロアルキル部分および／またはヘテロシクリル部分を形成することができる。
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいてもＬは非直鎖の脂肪族、または芳香族、または複素芳香族の環状部分を含む。
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいてもＬは、
Figure 0006873433
Figure 0006873433
 からなる群より選択され、式中、「Ｘ」は所望によりヘテロ原子を含有するように置換されていてもよい２〜１４までの範囲の原子を含む直鎖であり、且つ、
「Ｙ」は独立してＯ、Ｎ、Ｓ（Ｏ）ｎ（ｎ＝０、１、２）からなる群より選択される。
追加の態様において、本開示は本明細書に記載される化合物の有効量を含む組成物を提供する。
その他の態様において、本開示は本明細書に記載される化合物の有効量と薬学的に許容可能な担体、添加物、および／または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいても本医薬組成物は追加の生体活性剤をさらに含むことができる。
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいても前記追加の生体活性剤は抗癌剤である。
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいても前記抗癌剤は、エベロリムス、トラベクテジン、アブラキサン、ＴＬＫ２８６、ＡＶ−２９９、ＤＮ−１０１、パゾパニブ、ＧＳＫ６９０６９３、ＲＴＡ７４４、ＯＮ ０９１０．Ｎａ、ＡＺＤ６２４４（ＡＲＲＹ−１４２８８６）、ＡＭＮ−１０７、ＴＫＩ−２５８、ＧＳＫ４６１３６４、ＡＺＤ１１５２、エンザスタウリン、バンデタニブ、ＡＲＱ−１９７、ＭＫ−０４５７、ＭＬＮ８０５４、ＰＨＡ−７３９３５８、Ｒ−７６３、ＡＴ−９２６３、ＦＬＴ−３阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦＲ ＴＫ阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、ＰＩＫ−１修飾因子、Ｂｃｌ−２阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ｃ−ＭＥＴ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、Ｃｄｋ阻害剤、ＥＧＦＲ ＴＫ阻害剤、ＩＧＦＲ−ＴＫ阻害剤、抗ＨＧＦ抗体、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ｍＴＯＲＣ１／２阻害剤、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、チェックポイント−１または２阻害剤、フォーカル・アドヒージョンキナーゼ阻害剤、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ｍｅｋ）阻害剤、ＶＥＧＦ ｔｒａｐ抗体、ペメトレキセド、エルロチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、デカタニブ、パニツムマブ、アムルビシン、オレゴボマブ、Ｌｅｐ−ｅｔｕ、ノラトレキシド、ａｚｄ２１７１、バタブリン、オファツムマブ、ザノリムマブ、エドテカリン、テトランドリン、ルビテカン、テスミリフェン、オブリメルセン、チシリムマブ、イピリムマブ、ゴシポール、Ｂｉｏ１１１、１３１−Ｉ−ＴＭ−６０１、ＡＬＴ−１１０、ＢＩＯ１４０、ＣＣ８４９０、シレンギチド、ジャイマテカン、ＩＬ１３−ＰＥ３８ＱＱＲ、ＩＮＯ１００１、ＩＰｄＲ１ＫＲＸ−０４０２、ルカントン、ＬＹ３１７６１５、ノイラジアブ、ビテスパン、Ｒｔａ７４４、Ｓｄｘ１０２、タランパネル、アトラセンタン、Ｘｒ３１１、ロミデプシン、ＡＤＳ−１００３８０、スニチニブ、５−フルオロウラシル、ボリノスタット、エトポシド、ゲムシタビン、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、ビンクリスチン、テモゾロミド、ＺＫ−３０４７０９、セリシクリブ；ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ−６２４４、カペシタビン、Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−［４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル］２ナトリウム塩７水和物、カンプトテシン、ＰＥＧ標識イリノテカン、タモキシフェン、クエン酸トレミフェン、アナストラゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ＤＥＳ（ジエチルスチルベストロール）、エストラジオール、エストロゲン、結合型エストロゲン、ベバシズマブ、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＣＨＩＲ−２５８，）、３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル］−キノロン、バタラニブ、ＡＧ−０１３７３６、ＡＶＥ−０００５、［Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕ ｔ）６，Ａｚｇｌｙ１０］の酢酸塩（ピロ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕ ｔ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｚｇｌｙ−ＮＨ２酢酸［Ｃ５９Ｈ８４Ｎ１８Ｏｉ４−（Ｃ２Ｈ４Ｏ２）Ｘ、ｘ＝１〜２．４］、ゴセレリン酢酸、ロイプロリド酢酸、パモ酸トリプトレリン、メドロキシプロゲステロン酢酸、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、メゲストロール酢酸、ラロキシフェン、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、メゲストロール酢酸、ＣＰ−７２４７１４；ＴＡＫ−１６５、ＨＫＩ−２７２、エルロチニブ、ラパタニブ、カネルチニブ、ＡＢＸ−ＥＧＦ抗体、エルビタックス、ＥＫＢ−５６９、ＰＫＩ−１６６、ＧＷ−５７２０１６、ロナファルニブ、ＢＭＳ−２１４６６２、ティピファルニブ；アミホスチン、ＮＶＰ−ＬＡＱ８２４、ヒドロキサミン酸サブエロイルアナリド、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、ＦＫ−２２８、ＳＵ１１２４８、ソラフェニブ、ＫＲＮ９５１、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナグレリド、Ｌ−アスパラギナーゼ、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブチル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、エピルビシン、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、フルタミド、グリベック、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、オクトレオチド、オキサリプラチン、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、テニポシド、テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トレチノイン、ビンデシン、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、フェニルアラニンマスタード、ウラシルマスタード、エストラムスチン、アルトレタミン、フロクスウリジン、５−デオキシウリジン、シトシンアラビノシド、６−メルカプトプリン、デオキシコホルマイシン、カルシトリオール、バルルビシン、ミトラマイシン、ビンブラスチン、ビノレルビン、トポテカン、ラゾキシン、マリマスタット、ＣＯＬ−３、ネオバスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、スクワラミン、エンドスタチン、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＥＭＤ１２１９７４、インターロイキン−１２、ＩＭ８６２、アンギオスタチン、ビタキシン、ドロロキシフェン、イドキシフェン、スピロノラクトン、フィナステリド、シミチジン、トラスツズマブ、デニロイキンジフチトクス、ゲフィチニブ、ボルテジミブ、パクリタキセル、非クレモフォール含有パクリタキセル、ドセタキセル、エピチロンＢ、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−３１０７０５、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、ピペンドキシフェン、ＥＲＡ−９２３、アルゾキシフェン、フルベストラント、アコルビフェン、ラソフォキシフェン、イドキシフェン、ＴＳＥ−４２４、ＨＭＲ−３３３９、ＺＫ１８６６１９、トポテカン、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、ＶＸ−７４５、ＰＤ１８４３５２、ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、テムシロリムス、ＡＰ−２３５７３、ＲＡＤ００１、ＡＢＴ−５７８、ＢＣ−２１０、ＬＹ２９４００２、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９３６４６、ウォルトマンニン、ＺＭ３３６３７２、Ｌ−７７９，４５０、ＰＥＧ−フィルグラスチム、ダルベポエチン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、ゾレンドロネート、プレドニゾン、セツキシマブ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヒストレリン、ペグ化インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ａ、ペグ化インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−２ｂ、アザシチジン、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、レナリドミド、ゲムツズマブ、ヒドロコルチゾン、インターロイキン−１１、デクスラゾキサン、アレムツズマブ、全トランス型レチノイン酸、ケトコナゾール、インターロイキン−２、メゲストロール、免疫グロブリン、ナイトロジェンマスタード、メチルプレドニソロン、イブリツモマブチウキセタン、アンドロゲン類、デシタビン、ヘキサメチルメラミン、ベキサロテン、トシツモマブ、三酸化ヒ素、コルチゾン、エチドロン酸、ミトタン、サイクロスポリン、リポソームダウノルビシン、エドウィナ−アスパラギナーゼ、ストロンチウム８９、カソピタント、ネツピタント、ＮＫ−１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン、アプレピタント、ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、メトクロプラミド、ロラゼパム、アルプラゾラム、ハロペリドール、ドロペリドール、ドロナビノール、デキサメタゾン、メチルプレドニソロン、プロクロルペラジン、グラニセトロン、オンダンセトロン、ドラセトロン、トロピセトロン、ＰＥＧフィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチンα、ダルベポエチンα、およびそれらの混合物からなる群より選択される。
追加の態様において、本開示は、細胞中の標的タンパク質の分解を誘導するための方法であって、本明細書に記載される化合物の有効量を前記細胞に投与することを含む方法であり、前記化合物により前記標的タンパク質の分解が達成されることを特徴とする方法を提供する。
さらに追加の態様において、本開示は、必要とする患者への組成物の投与を含む方法であって、癌を治療するための前記方法に使用される本明細書に記載される化合物の有効量を含む組成物であって、前記患者における癌の少なくとも１つの症状の治療または緩和に有効である前記組成物を提供する。
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいても前記癌は扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、膀胱癌、大腸癌、乳癌、子宮頸部癌、結腸癌、食道癌、頭部癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、頚部癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、胃癌、白血病、良性および悪性リンパ腫、特にバーキットリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、良性および悪性黒色腫、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、ユーイング肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、脂肪肉腫、筋肉腫、末梢性神経上皮腫、滑膜肉腫、膠腫、星状細胞腫、希突起神経膠腫、上衣腫、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、神経節細胞腫、神経節膠腫、髄芽腫、松果体細胞腫、髄膜腫、髄膜肉腫、神経線維腫、およびシュワン細胞腫を含む肉腫、大腸癌、乳癌、前立腺癌、子宮頚部癌、子宮癌、肺癌、卵巣癌、精巣癌、甲状腺癌、星状細胞腫、食道癌、膵臓癌、胃癌、肝臓癌、大腸癌、黒色腫；癌肉腫、ホジキン病、ウィルムス腫瘍または奇形癌腫、Ｔ系列急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、Ｔ系列リンパ芽球性リンパ腫（Ｔ−ＬＬ）、末梢Ｔ細胞リンパ腫、成人性Ｔ細胞白血病、前駆Ｂ細胞ＡＬＬ、前駆Ｂ細胞リンパ腫、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞ＡＬＬ、フィラデルフィア染色体陽性ＡＬＬ、およびフィラデルフィア染色体陽性ＣＭＬである。
本明細書に記載される態様または実施形態のいずれにおいても前記ＣＬＭは、薬学的に許容可能な塩形態を含む以下のものからなる群より選択される構造を有するＰＴＭに結合しており、
Figure 0006873433
Figure 0006873433
Figure 0006873433
 式中、Ｒまたはリンカーが結合または前記ＣＬＭを前記ＰＴＭに結合する化学リンカー部分である。
Ａ．ヒトＣＲＢＮおよびＤＤＢ１のクローニング、発現および精製。本手法は、Lopez-Girona et al. (Cereblon is a direct protein target for immunomodulatory and antiproliferative activities of lenalidomide and pomalidomide, A Lopez-Girona, D Mendy, T Ito, K Miller, A K Gandhi, J Kang, S Karasawa, G Carmel, P Jackson, M Abbasian, A Mahmoudi, B Cathers, E Rychak, S Gaidarova, R Chen, P H Schafer, H Handa, T O Daniel, J F Evans and R Chopra, Leukemia 26: 2326-2335, 2012)中の記載によって典型的に表されるように当業者にとって標準的なものである。
ポリメラーゼとしてのＰｆｕｓｉｏｎ（ＮＥＢ）および次のプライマー配列を使用するＰＣＲによりＣＲＢＮ遺伝子とＤＤＢ１遺伝子のｃＤＮＡを増幅することができる。
Figure 0006873433
ライゲーション非依存性クローニング２６を用いてＣＲＢＮをｐＢＶ−ＺＺ−ＨＴ−ＬＩＣ、ｐＢＶ−ＧＳＴ−ＬＩＣ、ｐＭＡ−ＨＴ−ＬＩＣにクローン化し、ＤＤＢ１をｐＢＶ−ｎｏｔａｇ−ＬＩＣにクローン化することができる。哺乳類用ベクターｐＭＡ−ＨＴ−ＬＩＣへのクローニングのため、ＣＲＢＮ−Ｆｌａｇ−Ｒｅｖｅｒｓｅオリゴは免疫検出用のＣ−末端ＦＬＡＧタグを付加する。ＤＤＢ１−ＲｅｖはＳｔｒｅｐＴａｇ２７を付加する。ＺＺタグ２８は可溶性ＣＲＢＮの高発現を達成するために必要であり、それが無いとＨｉｓ−ＣＲＢＮの発現は低レベルであり、一方でＧＳＴ−ＣＲＢＮは凝集タンパク質になる。ＺＺ−Ｈｉｓ−ＣＲＢＮおよびＤＤＢ１−ＳｔｒｅｐＴａｇ（ＳＴ）の組換えバキュロウイルスを作製し、Ｓｆ９昆虫細胞内でＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＢａｃ−ｔｏ−Ｂａｃバキュロウイルス発現システムを使用してそれらを増幅する。Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓの無添加ＥＳＦ９２１培地を使用して２７℃で１０Ｌのウェーブバッグ中のＨｉｇｈ Ｆｉｖｅ（Ｔｎｉ）昆虫においてＺＺ−Ｈｉｓ−ＣＲＢＮおよびＤＤＢ１−ＳＴを共発現する。感染から４８時間後に遠心分離により細胞を回収し、ペーストを５×プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ、インディアナポリス、インディアナ州）添加ＰＢＳ中に再懸濁した。
その後の全てのタンパク質精製工程は４℃で実施する。凍結細胞を融かし、２０ｍＭのイミダゾールおよびプロテアーゼ阻害剤を添加した５倍の体積の溶解緩衝液（５０ｍＭのトリス塩酸ｐＨ８．０、０．５ＭのＮａＣｌ、１０％グリセロール、２ｍＭのＤＴＴ）に再懸濁し、溶解し、遠心分離して透明上清を産出する。ニッケルセファロースおよびＳ２００セファクリルクロマトグラフィーを使用するAＫＴＡ−ｘｐｒｅｓｓシステム（ＧＥヘルスケア）上でＣＲＢＮ−ＤＤＢ１を精製する。次に８ｍｌのＭｏｎｏＱカラム上での陰イオン交換クロマトグラフィーと２回目のＳ−２００ゲルでの濾過を用いてその複合体をさらに精製する。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＣＲＢＮ−ＤＤＢ１を特定し、ＣＲＢＮ−ＤＤＢ１含有画分をまとめ、−７０℃で貯蔵した。
２．組換えＣＲＢＮへの化合物の結合を測定する蛍光熱融解アッセイ
本アッセイは、Lopez-Girona et al. (Cereblon is a direct protein target for immunomodulatory and antiproliferative activities of lenalidomide and pomalidomide, A Lopez-Girona, D Mendy, T Ito, K Miller, A K Gandhi, J Kang, S Karasawa, G Carmel, P Jackson, M Abbasian, A Mahmoudi, B Cathers, E Rychak, S Gaidarova, R Chen, P H Schafer, H Handa, T O Daniel, J F Evans and R Chopra, Leukemia 26: 2326-2335, 2012)中の記載によって典型的に表されるように当業者にとって標準的なものである。
Pantoliano et al. (Pantoliano MW, Petrella EC, Kwasnoski JD, Lobanov VS, Myslik J, Graf E et al. High-density miniaturized thermal shift assays as a general strategy for drug discovery. J Biomol Screen 2001; 6: 429-440)に従ってマイクロプレート形式で試験化合物が存在するとき、または存在しないときのＣＲＢＮ−ＤＤＢ１の熱安定性をＳｙｐｒｏオレンジの存在下で測定する。２０ｍｌのアッセイ緩衝液（２５ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｕＭのＳｙｐｒｏオレンジ）中の２ｍｇのタンパク質をＡＢＩＰｒｉｓｍ ７９００ＨＴ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カールスバッド、カリフォルニア州、米国）での２０〜７０℃までの段階的温度上昇と１℃ごとの蛍光読み出しの対象とする。化合物をＤＭＳＯ中に溶解し（アッセイでは１％の最終濃度）、３０ｎＭ〜１０００ｕＭの間の濃度範囲で四度検査する。対照は１％ＤＭＳＯのみを含有した。
３．ＬＣＭＳの方法
Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＥＣ Ｃ１８カラム（５０ｍｍ×３．０ｍｍの内径２．７μｍのパッキング径）上で分析を４５℃において実施する。
使用した溶媒は次のものである。
Ａ＝０．１％（体積／体積）ギ酸水溶液。
Ｂ＝０．１％（体積／体積）ギ酸アセトニトリル溶液。
使用した濃度勾配は次の通りである。
Figure 0006873433
ＵＶ検出は２１０ｎｍ〜３５０ｎｍの波長に由来する平均シグナルであり、ポジティブモードのエレクトロスプレーイオン化を用いてマススペクトルをマススペクトロメーター上で記録する。
化合物が分取ＨＰＬＣにより精製されるときの移動相と濃度勾配を次に例示する。
４．分取ＨＰＬＣ（ギ酸修飾剤）
Ｘ Ｂｒｉｄｇｅ ＲＰ１８ ＯＢＤカラム（１５０ｍｍ×１９ｍｍの内径、５μｍのパッキング径）上でＨＰＬＣ分析を外界温度において実施する。
使用した溶媒は次のものである。
Ａ＝０．１％（体積／体積）ギ酸水溶液。
Ｂ＝アセトニトリル。
５．分取ＨＰＬＣ（炭酸水素アンモニウム修飾剤）
Ｘ Ｂｒｉｄｇｅ ＲＰ１８ ＯＢＤカラム（１５０ｍｍ×１９ｍｍの内径、５μｍのパッキング径）上でＨＰＬＣ分析を外界温度において実施する。
使用した溶媒は次のものである。
Ａ＝１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液。
Ｂ＝アセトニトリル。
分取的精製のそれぞれについて、使用される濃度勾配は、使用される修飾剤と無関係に、精製される特定の化合物の分析ＬＣＭＳにおいて記録された保持時間に依存する。流速は２０ｍＬ／分である。
ＵＶ検出は２５４ｎｍまたは２２０ｎｍの波長に由来するシグナルである。
本発明の好ましい実施形態を本明細書において示し、説明してきたが、そのような実施形態は例示のために提供されているだけであることを理解されたい。当業者は本発明の主旨から逸脱することなく多数の変形、変更、および置換を思いつく。したがって、本発明の主旨と範囲の中に含まれる全てのそのような変形は添付されている特許請求の範囲に含まれるものとする。
Ｂ．合成
以下に含まれる例の合成の詳細はより広範な例の合成についての情報を与える一般的な手法である。
１．２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン
Figure 0006873433
ステップ１：４−フルオロイソベンゾフラン−１，３−ジオン
Figure 0006873433
無水酢酸（４００ｍＬ）中の３−フルオロフタル酸（５０ｇ、２７１．７ｍｍｏｌ）の混合物を２時間にわたって還流した。真空により揮発成分を除去し、無水酢酸中で残留物を結晶化して４−フルオロイソベンゾフラン−１，３−ジオン（４０ｇ、粗生成物）を褐色の固形物として得た。LC-MS: 167.1 [MH]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.92-7.97 (m, 1H).
ステップ２：５−アミノ−２−（４−フルオロ−１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸
Figure 0006873433
乾燥ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の上の４−フルオロイソベンゾフラン−１，３−ジオン（４０ｇ、粗生成物）およびＬ−グルタミン（３５ｇ、２３９ｍｍｏｌ）の混合物を９０℃で８時間にわたって撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残留物を４ＮのＨＣｌ（２００ｍＬ）中に再溶解し、さらに８時間にわたって撹拌した。生じた沈殿を濾過により回収し、水で洗浄し、乾燥して５−アミノ−２−（４−フルオロ−１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸（３７ｇ、粗生成物）を灰色がかった白色の固形物として得た。LC-MS: 295.2 [MH]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.16-2.20 (m. 2H), 2.31-2.43 (m, 2H), 4.79-4.83 (m, 1H), 6.79 (br, 1H), 7.26(br, 1H), 7.77-7.85 (m, 2H), 7.98-8.03 (m, 1H), 13.32(br, 1H).
ステップ３：２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン
Figure 0006873433
アセトニトリル（８０ｍＬ）中の上の５−アミノ−２−（４−フルオロ−１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸（３７ｇ、粗生成物）、１，１’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）（２４．２ｇ、１４９．４ｍｍｏｌ）、および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（１．３ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）の混合物を５時間にわたって還流した。その反応混合物を室温まで冷却した。生じた固形物を濾過により回収し、アセトニトリル（１００ｍＬ）で洗浄して粗生成物を供給し、溶出液としてＤＣＭ中の１〜１０％のＭｅＯＨを使用するシリカゲルクロマトグラフィーによりその粗生成物を精製して２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（９．０ｇ、１２％の３ステップでの収量収率）を明るい黄色の固形物として得た。LC-MS: 277.2 [MH]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.14-2.19 (m, 1H), 2.75-2.95 (m, 3H), 4.97-5.01 (m, 1H), 7.43 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.10-7.81 (m, 2H), 8.08 (br, 1H).
２．Ｎ−（３−（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イルアミノ）プロピル）−Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド
Figure 0006873433
ステップ１： ｔｅｒｔ−ブチルＮ−｛３−［（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］プロピル｝−Ｎ−メチルカルバメート
Figure 0006873433
ＭｅＯＨ中（１０ｍＬ）のｔｅｒｔ−ブチルＮ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−メチルカルバメート（８２６ｍｇ、４．４０ｍｍｏｌ）および５−ブロモ−２，４−ジクロロピリミジン（４００ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１時間にわたって撹拌した。次に真空中でその反応混合物を濃縮し、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ ＩＳＣＯクロマトグラフィー［０→３５％の酢酸エチル／ヘプタン］を使用して残留物を精製してｔｅｒｔ−ブチルＮ−｛３−［（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］プロピル｝−Ｎ−メチルカルバメート（６１５ｍｇ、９２％の収量収率）を得た。LC-MS (ES+): m/z = 381.05/383.05 [MH+], tR = 2.55分。
ステップ２：｛３−［（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］プロピル｝（メチル）アミン
Figure 0006873433
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−｛３−［（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］プロピル｝−Ｎ−メチルカルバメート（６１５ｍｇ、１．６２ｍｍｏＬ）の溶液に室温でトリフルオロ酢酸（０．５４ｍＬ、６．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１時間にわたって撹拌した後にそれを真空中で濃縮した。Ｔｅｌｅｄｙｎｅ ＩＳＣＯクロマトグラフィー［ＤＣＭ中の０→１５％メタノール］を使用して残留物を精製して｛３−［（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］プロピル｝（メチル）アミン（３７１ｍｇ、８２％の収量収率）を得た。LC-MS (ES+): m/z = 280.99/282.99 [MH+], tR = 1.13分。
ステップ３：Ｎ−｛３−［（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］プロピル｝−Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド
Figure 0006873433
室温のＤＣＭ（１０ｍＬ）中の｛３−［（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］プロピル｝（メチル）アミン（３７１ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）およびシクロブタンカルボニルクロリド（１８８ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（０．４１ｍＬ、２．９２ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を室温で１６時間にわたって撹拌しながら放置し、その後に真空中で濃縮した。Ｔｅｌｅｄｙｎｅ ＩＳＣＯクロマトグラフィー［０→１００％酢酸エチル／ヘプタン］を使用して残留物を精製してＮ−｛３−［（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イル）アミノ］プロピル｝−Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド（２６８ｍｇ、５６％）を得た。LC-MS (ES+): m/z = 363.04/365.04 [MH+], tR = 2.18分。
３．（Ｓ）−２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）酢酸
Figure 0006873433
国際公開第２０１１／１４３６６０号パンフレットに記載の手順に従って表題の化合物を調製した。
４．（Ｚ）−４−（４−（（２，４−ジオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
Figure 0006873433
Patch, R. J. et al J. Med. Chem. 2011, 54, 788-808に記載されている手法に従って表題化合物を調製した。
５．４−［３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−スルファニリデンイミダゾリジン−１−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
Figure 0006873433
Jung, M. E. et al J. Med. Chem. 2010, 53, 2779-2796に記載されている手法に従って表題化合物を調製した。
６．２−クロロ−４−（ｔｒａｎｓ−３−アミノ−２，２，４，４−テトラメチルシクロブトキシ）ベンゾニトリル塩酸塩
Figure 0006873433
Guo, C. et al J. Med. Chem. 2011, 54, 7693-7704に記載されている手法に従って表題化合物を調製した。
７．［Ｎ−（３−（５−ブロモ−２−（４−（２−（２−（２−（２−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）プロピル）−Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド］
Figure 0006873433
（表１に示されている第１７化合物構造）
ステップ１：２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホン酸
Figure 0006873433
乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中の２，２’−（２，２’−オキシビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（４−メチルベンゼンスルホン酸）（３ｇ、５．９６ｍｍｏｌ）、４−ニトロフェノール（８１３ｍｇ、５．８４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．６５ｇ、１１．９４ｍｍｏｌ）の混合物を５０℃で一晩にわたって撹拌した。その混合物を室温まで冷却し、水（６０ｍＬ）に投入し、その後に酢酸エチルで抽出した（８０ｍＬ×３）。混合した有機相を水（５０ｍＬ）と塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の１０〜２０％酢酸エチルで溶出）により残留物を精製して２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホン酸（２．６５ｇ、９５％の収量収率）黄色の油として得た。LC-MS (ES+): m/z 470.2 [MH+] (tR = 2.83分)
ステップ２：［１−（２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−４−ニトロベンゼン］
Figure 0006873433
エタノール（３０ｍＬ）中の２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホン酸（２．６５ｇ、５．６４ｍｍｏｌ）およびアジ化ナトリウム（７３４ｍｇ、１１．２９ｍｍｏｌ）の混合物を１６時間にわたって還流した。その混合物を室温まで冷却し、水（５０ｍＬ）で反応停止し、そしてジクロロメタンで抽出した（５０ｍＬ×３）。混合した有機相を水（５０ｍＬ）と塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して粗生成物１−（２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−４−ニトロベンゼン（８６５ｍｇ）を黄色の油として得た。
ステップ３：［２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタンアミン］
Figure 0006873433
テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中の上の１−（２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−４−ニトロベンゼン（８６５ｍｇ、２．５４ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（９９９ｍｇ、３．８１ｍｍｏｌ）および水（６９ｍｇ、３．８３ｍｍｏｌ）の混合物を窒素雰囲気下、室温で１４時間にわたって撹拌した。揮発成分を減圧下で除去して粗残留物を供給し、その粗残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン中の３〜５％メタノールで溶出）により精製して２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタンアミン（６６１ｍｇ、８３％の収量収率）を黄色の油として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.86 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.51 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.63-3.75 (m, 8H), 3.90 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 4.23 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 6.97-6.99 (m, 2H), 8.18-8.22 (m, 2H).
ステップ４： ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート
Figure 0006873433
ジクロロメタン（２５ｍＬ）中の２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタンアミン（６６１ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４４９ｍｇ、４．４３ｍｍｏｌ）および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５０５ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）の混合物を室温で２時間にわたって撹拌した。その混合物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、水（３０ｍＬ×２）と塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の２０〜４０％酢酸エチルで溶出）により残留物を精製してｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート（８１８ｍｇ、９４％の収量収率）を黄色の油として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.44 (s, 9H), 3.37 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.54 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.62-3.70 (m, 6H), 3.73-3.76 (m, 2H), 3.90 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 4.23 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 5.01(br, 1H), 6.96-7.00 (m, 2H), 8.18-8.22 (m, 2H).
ステップ５： ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（２−（４−アミノフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート
Figure 0006873433
エタノール（２０ｍＬ）および水（５ｍＬ）中の２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート（８１８ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）、鉄粉（１．１ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、および塩化アンモニウム（５２８ｍｇ、９．８７ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で１時間にわたって撹拌した。その混合物を室温まで冷却し、固形沈殿物を濾過により除去し、そして酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で洗浄した。その濾液を酢酸エチル（１２０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配した。有機相を塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の３０〜４０％酢酸エチルで溶出）により残留物を精製してｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（２−（４−アミノフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート（５１２ｍｇ、６７％の収量収率）を黄色の油として得た。
ステップ６： ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（２−（４−（５−ブロモ−４−（３−（Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド）プロピルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート
Figure 0006873433
ジオキサン（１．５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（２−（４−アミノフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート（１３０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イルアミノ）プロピル）−Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド（２４ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸（１１．６ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）の混合物を１６時間にわたって還流した。その反応混合物を室温まで冷却し、炭酸水素ナトリウム水溶液（１．０Ｎ、３０ｍＬ）で反応停止し、そして酢酸エチルで抽出した（３０ｍＬ×３）。混合した有機相を水（３０ｍＬ）と塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の５０％酢酸エチルで溶出）により粗残留物を精製してｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（２−（４−（５−ブロモ−４−（３−（Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド）プロピルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート（４０ｍｇ、１７％の収量収率）を黄色の油として得た。
ステップ７：Ｎ−（３−（２−（４−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニルアミノ）−５−ブロモピリミジン−４−イルアミノ）プロピル）−Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド
Figure 0006873433
２，２，２−トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）およびジクロロメタン（１ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（２−（４−（５−ブロモ−４−（３−（Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド）プロピルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート（４０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の混合物を室温で２時間にわたって撹拌した。揮発成分を減圧下で除去した。残留物をジクロロメタン（６０ｍＬ）と炭酸水素ナトリウム水溶液（２．０Ｎ、３０ｍＬ）との間で分配した。有機層を塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮してＮ−（３−（２−（４−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニルアミノ）−５−ブロモピリミジン−４−イルアミノ）プロピル）−Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド（１８ｍｇ、５２％の収量収率）を黄色の油として得た。
ステップ８：Ｎ−（３−（５−ブロモ−２−（４−（２−（２−（２−（２−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）プロピル）−Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド
Figure 0006873433
乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中のＮ−（３−（２−（４−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニルアミノ）−５−ブロモピリミジン−４−イルアミノ）プロピル）−Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド（１３０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン（８．２ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（７．６ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の混合物を９０℃で１２時間にわたって撹拌した。その反応混合物を室温まで冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配した。有機相を塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。分取ＴＬＣにより残留物を精製してＮ−（３−（５−ブロモ−２−（４−（２−（２−（２−（２−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）プロピル）−Ｎ−メチルシクロブタンカルボキサミド（１０．２ｍｇ、４０％の収量収率）を黄色の固形物として得た。LC-MS (ES+): m/z = 865.27/867.27 (1:1) [MH]+. tR = 2.06分。 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.68-1.77 (m, 3H), 1.89-1.92 (m, 3H), 2.08-2.15 (m, 3H), 2.60-2.79 (m, 7H), 3.28-3.35 (m, 6H), 3.55-3.61 (m, 10H), 3.69-3.72 (m, 2H), 3.96-3.99 (m, 2H), 4.91-4.95 (m, 1H), 6.75-6.78 (m, 2H), 6.91-6.94 (m, 2H), 7.34-7.42 (m, 3H), 7.76 (d, J = 12.8 Hz, 1H).
８．２−（（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）−Ｎ−（４−（２−（２−（２−（２−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）アセトアミド
Figure 0006873433
（表１に示されている第１４化合物構造）
ステップ１：（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−（２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルアミノ）イソインドリン−１，３−ジオン
Figure 0006873433
乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中の２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタンアミン（１２８ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン（１１２．５ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（１０５ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）の混合物を９０℃で１２時間にわたって撹拌した。その混合物を室温まで冷却し、水（２０ｍＬ）に投入し、そして酢酸エチルで抽出した（３５ｍＬ×２）。混合した有機相を水（３０ｍＬ）と塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。分取ＴＬＣにより粗残留物を精製して２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−（２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルアミノ）イソインドリン−１，３−ジオン（７３ｍｇ、３１％の収量収率）を黄色の固形物として得た。LC-MS (ES+): m/z 571.3 [MH+], tR = 2.46分。
ステップ２：（４−（２−（２−（２−（２−（４−アミノフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルアミノ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン）
Figure 0006873433
エタノール（２ｍＬ）中の２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−（２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルアミノ）イソインドリン−１，３−ジオン（７３ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）および鉄粉（７１．６ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）の懸濁液に室温の塩化アンモニウム（６８ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）の水溶液（０．５ｍＬ）を添加し、生じた混合物を８０℃で１時間にわたって撹拌した。その混合物を室温まで冷却した後、固形沈殿物を濾過により除去し、そして酢酸エチル（１０ｍＬ×２）で洗浄した。その濾液を酢酸エチル（６０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配した。有機層を塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して４−（２−（２−（２−（２−（４−アミノフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルアミノ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（６６．５ｍｇ、粗生成物）を黄色の油として得た。LC-MS (ES+): m/z 541.5 [MH+], tR = 1.593分。
ステップ３：２−（（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）−Ｎ−（４−（２−（２−（２−（２−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）アセトアミド
Figure 0006873433
乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中の４−（２−（２−（２−（２−（４−アミノフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルアミノ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（５８．４ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）酢酸（４３．３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（４１．８ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に０℃で（２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）（８２ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。生じた混合物を室温まで温め、そして室温で２０分間にわたって撹拌した。その混合物を水（２５ｍＬ）に投入し、酢酸エチルで抽出した（３５ｍｌ×２）。混合した有機相を水（２０ｍＬ）と塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。分取ＴＬＣにより粗残留物を精製して２−（（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）−Ｎ−（４−（２−（２−（２−（２−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）アセトアミド（５２ｍｇ、５２％の収量収率）を黄色の固形物として得た。LC-MS (ES+): m/z 923.29/925.29 (3:1) [MH+], tR = 2.689分。 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.67 (s, 3H), 2.05-2.12 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.65-2.85 (m, 6H), 3.41-3.54 (m, 4H), 3.65-3.74 (m, 10H), 3.81-3.85 (m, 2H), 4.06-4.11 (m, 2H), 4.63-4.69 (m, 1H), 4.85-4.93 (m, 1H), 6.38-6.55 (m, 1H), 6.8
3 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.39-7.51 (m, 5H), 8.59 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.77 (d, J = 3.2 Hz, 1H).
９．（Ｚ）−４−（４−（（３−（２−（２−（２−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）−２，４−ジオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
Figure 0006873433
（表１に示されている第２２化合物構造）
ステップ１：（Ｚ）−２−（２−（２−（５−（４−（４−シアノ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−３−メトキシベンジリデン）−２，４−ジオキソチアゾリジン−３−イル）エトキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホン酸）
Figure 0006873433
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の（Ｚ）−４−（４−（（２，４−ジオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１．０ｇ、２．３ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．０ｇ、６．９ｍｍｏｌ）および２，２’−（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（４−メチルベンゼンスルホン酸）（１．３ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で１６時間にわたって撹拌した。その反応混合物を室温まで冷却し、水（１０ｍＬ）で反応停止し、そして酢酸エチルで抽出した（４０ｍＬ×３）。混合した有機相を水（５０ｍＬ）と塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で蒸発させた。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の１０〜３０％酢酸エチルで溶出）により粗残留物を精製して（Ｚ）−２−（２−（２−（５−（４−（４−シアノ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−３−メトキシベンジリデン）−２，４−ジオキソチアゾリジン−３−イル）エトキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホン酸（１．０ｇ、６１％の収量収率）を明るい黄色の固形物として得た。
ステップ２：（Ｚ）−４−（４−（（３−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エチル）−２，４−ジオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
Figure 0006873433
エタノール（２０ｍＬ）中の（Ｚ）−２−（２−（２−（５−（４−（４−シアノ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−３−メトキシベンジリデン）−２，４−ジオキソチアゾリジン−３−イル）エトキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホン酸（１．０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）およびアジ化ナトリウム（１８５ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）の混合物を１６時間にわたって還流した。その反応混合物を室温まで冷却し、そして酢酸エチル（１００ｍＬ）と水（２０ｍＬ）との間で分配した。有機層を塩水（３０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して（Ｚ）−４−（４−（（３−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エチル）−２，４−ジオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１３０ｍｇ、粗生成物）を明るい黄色の油として供給し、それをさらに精製せずに次のステップにおいて使用した。
ステップ３：（Ｚ）−４−（４−（（３−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２，４−ジオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
Figure 0006873433
上の（Ｚ）−４−（４−（（３−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エチル）−２，４−ジオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル）（１３０ｍｇ、粗生成物）、水（０．２ｍＬ）中のトリフェニルホスフィン（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、およびテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）の混合物を室温で１４時間にわたって撹拌した。その混合物を減圧下で濃縮した。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン中の３〜５％メタノールで溶出）により粗残留物を精製して（Ｚ）−４−（４−（（３−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２，４−ジオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（６０ｍｇ、８％の２ステップでの収量収率）を黄色の油として得た。LC-MS (ES+): m/z 552.1 [MH+], tR = 2.15分。
ステップ４：（Ｚ）−４−（４−（（３−（２−（２−（２−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）−２，４−ジオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
Figure 0006873433
１−メチルピロリジン−２−オン（１ｍＬ）中の（Ｚ）−４−（４−（（３−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２，４−ジオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル）（６０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン（３０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の混合物を９０℃で１６時間にわたって撹拌した。その反応混合物を室温まで冷却し、水（５ｍＬ）で反応停止し、そして酢酸エチルで抽出した（２０ｍＬ×３）。混合した有機層を水（１０ｍＬ×２）と塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。分取ＴＬＣにより粗残留物を精製して（Ｚ）−４−（４−（（３−（２−（２−（２−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）−２，４−ジオキソチアゾリジン−５−イリデン）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（９．５ｍｇ、１１．８％の収量収率）を黄色の固形物として得た。LC-MS (ES+): m/z 808.19 [MH+], tR = 3.022分。 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.12-2.16 (m, 1H), 2.73-2.91 (m, 3H), 3.42 (s, 2H), 3.67-3.80 (m, 11H), 3.99 (s, 2H), 4.91-4.95 (m, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.76-6.86 (m, 2H), 7.02-7.19 (m, 4H), 7.43 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.85-8.12 (m, 3H).
１０．４−（３−（４−（３−（２−（２−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロポキシ）フェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−チオキソイミダゾリジン−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
Figure 0006873433
 （表１に示されている第１化合物構造）
ステップ１：１，１，１，１６−テトラフェニル−２，５，８，１１，１５−ペンタオキサヘキサデカン
Figure 0006873433
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中の２−（２−（２−（トリチルオキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール（７ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）の溶液に水素化ナトリウム（鉱物油中に６０％、７０７ｍｇ、１７．７ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくりと添加した。混合物を室温で３０分間にわたって撹拌した後に３−（ベンジルオキシ）プロピル４−メチルベンゼンスルホン酸（５．８ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）を０℃で一度に添加し、生じた混合物を７０℃で一晩にわたって撹拌させた。その混合物を室温まで冷却した後にそれを注意深く水（４０ｍＬ）で反応停止し、酢酸エチルで抽出した（６０ｍＬ×３）。混合した有機相を塩水（８０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の５〜１０％酢酸エチルで溶出）により粗残留物を精製して１，１，１，１６−テトラフェニル−２，５，８，１１，１５−ペンタオキサヘキサデカン（４．８ｇ、５０％の収量収率）を無色油として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.85-1.92 (m, 2H), 3.23 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.53-3.59 (m, 6H), 3.64-3.68 (m, 8H), 4.47 (s, 2H), 7.19-7.33 (m, 15H), 7.45-7.47 (m, 5H).
ステップ２：１−フェニル−２，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１４−オール
Figure 0006873433
メチレンジクロリド（１０ｍＬ）およびメタノール（１０ｍＬ）中の１，１，１，１６−テトラフェニル−２，５，８，１１，１５−ペンタオキサヘキサデカン（４．８ｇ、８．８ｍｍｏｌ）の溶液に塩酸（３７％、２．５ｍＬ）を０℃で添加した。その反応混合物を室温で２時間にわたって撹拌した。その反応混合物を水（３０ｍＬ）に投入し、そしてジクロロメタンで抽出した（２０ｍＬ×３）。混合した有機相を炭酸水素ナトリウム水溶液（１Ｎ、５０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）、塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の２０〜４０％酢酸エチルで溶出）により粗残留物を精製して１−フェニル−２，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１４−オール（１．９ｇ、７３％の収量収率）を無色油として得た。
ステップ３：１−フェニル−２，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１４−イル４−メチルベンゼンスルホン酸
Figure 0006873433
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の１−フェニル−２，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１５−オール（１．９ｇ、６．３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．３ｍＬ、９．５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（７５ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）および４−メチルベンゼン−１−スルホニルクロリド（１．４５ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）の混合物を室温で３時間にわたって撹拌した。水（２０ｍＬ）を添加して反応を停止し、生成物をジクロロメタンで抽出した（４０ｍＬ×３）。混合した有機相を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で蒸発させた。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の１０〜３０％酢酸エチルで溶出）により粗残留物を精製して１−フェニル−２，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１４−イル４−メチルベンゼンスルホン酸（２．２ｇ、７８％の収量収率）を無色油として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.87-1.92 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 3.54-3.60 (m, 12H), 3.67 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 4.48 (s, 2H), 7.27-7.33 (m, 7H), 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 2H).
ステップ４：１４−アジド−１−フェニル−２，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン
Figure 0006873433
エタノール（１０ｍＬ）中の１−フェニル−２，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１４−イル４−メチルベンゼンスルホン酸（２．２ｇ、４．９ｍｍｏｌ）およびアジ化ナトリウム（４２０ｍｇ、６．３ｍｍｏｌ）の混合物を５時間にわたって還流した。その反応混合物を室温まで冷却し、水に投入し（１０ｍＬ）、そしてジクロロメタンで抽出した（５０ｍＬ×３）。混合した有機層を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して１４−アジド−１−フェニル−２，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン（１．４ｇ、粗生成物）を無色の油として獲得し、それをさらに精製せずに次のステップにおいて使用した。
ステップ５： ｔｅｒｔ−ブチル（１−フェニル−２，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１４−イル）カルバメート
Figure 0006873433
テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）中の上の１４−アジド−１−フェニル−２，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン（１．４ｇ、粗生成物）およびトリフェニルホスフィン（１．７ｇ、６．５ｍｍｏｌ）の混合物を窒素雰囲気下、室温で一晩にわたって撹拌した。その反応混合物に０℃でトリエチルアミン（０．９ｍＬ、６．５ｍｍｏｌ）と二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１．１ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を添加した。生じた混合物を室温まで温め、そして室温で２時間にわたって撹拌した。揮発成分を減圧下で蒸発させ、残留物をジクロロメタン（１００ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間で分配した。有機相を塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の３０〜５０％酢酸エチルで溶出）により粗残留物を精製してｔｅｒｔ−ブチル（１−フェニル−２，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１４−イル）カルバメート（１．２ｇ、５０％の２ステップでの収量収率）を無色油として得た。
ステップ６： ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（３−ヒドロキシプロポキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート
Figure 0006873433
エタノール（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（１−フェニル−２，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１４−イル）カルバメート（１．２ｇ、３ｍｍｏｌ）およびパラジウム炭素（１０％、２００ｍｇ）の混合物を水素雰囲気下（水素バルーン）、室温で撹拌した。パラジウム炭素を濾過により除去し、そしてエタノール（２０ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮してｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（３−ヒドロキシプロポキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート（９００ｍｇ、粗生成物）を無色の油として獲得し、それをさらに精製せずに次のステップにおいて使用した。
ステップ７：２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１，１４−テトラオキサ−５−アザヘプタデカン−１７−イル４−メチルベンゼンスルホン酸
Figure 0006873433
無水ジクロロメタン（１５ｍＬ）中の上のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（３−ヒドロキシプロポキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート（９００ｍｇ、粗生成物）、トリエチルアミン（０．６ｍＬ、４．３５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（１６ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）および４−メチルベンゼン−１−スルホニルクロリド（６６０ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）の混合物を室温で３時間にわたって撹拌した。水（２０ｍＬ）を添加して反応を停止し、生成物をジクロロメタンで抽出した（５０ｍＬ×３）。混合した有機相を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で蒸発させた。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の２０〜３０％酢酸エチルで溶出）により粗残留物を精製して２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１，１４−テトラオキサ−５−アザヘプタデカン−１７−イル４−メチルベンゼンスルホン酸（６５０ｍｇ、７７％の収量収率）を明るい黄色の油として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.44 (s, 9H), 1.88-1.95 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 3.29-3.33 (m, 2H), 3.48-3.61 (m, 12H), 4.09-4.15 (m, 2H), 5.04 (brs, 1H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.79 (d, J = 8.0 Hz, 2H).
ステップ８： ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（３−（４−（３−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−５，５−ジメチル−４−オキソ−２−チオキソイミダゾリジン−１−イル）フェノキシ）プロポキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート
Figure 0006873433
アセトニトリル（５ｍＬ）中の２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１，１４−テトラオキサ−５−アザヘプタデカン−１７−イル４−メチルベンゼンスルホン酸（１１５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（６９ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）および４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−チオキソイミダゾリジン−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で１６時間にわたって撹拌した。その反応混合物を室温まで冷却し、水（３０ｍＬ）で反応停止し、そして酢酸エチルで抽出した（３０ｍＬ×３）。混合した有機相を水（３０ｍＬ）と塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして減圧下で蒸発させた。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフ（ヘキサン中の１０〜３０％酢酸エチルで溶出）により粗残留物を精製してｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（３−（４−（３−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−５，５−ジメチル−４−オキソ−２−チオキソイミダゾリジン−１−イル）フェノキシ）プロポキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート（１５０ｍｇ、８２％の収量収率）を黄色の油として得た。LC-MS (ES+): m/z 695.40 [MH+], tR = 2.79分。
ステップ９：４−（３−（４−（３−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）プロポキシ）フェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−チオキソイミダゾリジン−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
Figure 0006873433
無水ジクロロメタン（２ｍＬ）および２，２，２−トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（３−（４−（３−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−５，５−ジメチル−４−オキソ−２−チオキソイミダゾリジン−１−イル）フェノキシ）プロポキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバメート（１５０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１時間にわたって撹拌した。揮発成分を減圧下で蒸発させ、残留物を炭酸水素ナトリウム水溶液（１Ｎ、２０ｍＬ）に投入し、ジクロロメタン（５０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機相を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して４−（３−（４−（３−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）プロポキシ）フェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−チオキソイミダゾリジン−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１１５ｍｇ、粗生成物）を褐色の油として獲得し、それをさらに精製せずに次のステップにおいて使用した。
ステップ１０：４−（３−（４−（３−（２−（２−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロポキシ）フェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−チオキソイミダゾリジン−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
Figure 0006873433
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中の上の４−（３−（４−（３−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）プロポキシ）フェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−チオキソイミダゾリジン−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１１５ｍｇ、粗生成物）、２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン（４１ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（５８ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）の溶液を９０℃で１６時間にわたって撹拌した。その反応混合物を室温まで冷却し、水（３ｍＬ）で反応停止し、そして酢酸エチルで抽出した（３０ｍＬ×３）。混合した有機層を水（３０ｍＬ×２）と塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。分取ＴＬＣにより粗残留物を精製して４−（３−（４−（３−（２−（２−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロポキシ）フェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−チオキソイミダゾリジン−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（３４．５ｍｇ、２７％の収量収率）を黄色の固形物として得た。LC-MS (ES+): m/z 851.25 [MH+], tR = 2.652分。 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.57 (s, 6H), 2.07-2.11 (m, 3H), 2.70-2.90 (m, 3H), 3.46-3.72 (m, 14H), 4.10 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 4.88-4.92 (m, 1H), 6.48-6.49 (m, 1H), 6.91-7.26 (m, 6H), 7.49 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.83-7.85(m, 1H), 7.97-8.02 (m, 3H).
１１．４−｛［５−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロポキシ）ペンチル］オキシ｝−Ｎ−［ｔｒａｎｓ−３−（３−クロロ−４−シアノフェノキシ）−２，２，４，４−テトラメチルシクロブチル］ベンズアミド
Figure 0006873433
ステップ１：３−［（５−ヒドロキシペンチル）オキシ］プロパンニトリル
Figure 0006873433
ペンタン−１，５−ジオール（２．９８ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（鉱物油中に６０％分散度、８２０ｍｇ、３４．２ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。混合物を室温で２０分間にわたって撹拌した後にそれを０℃まで冷却し、アクリロニトリル（１．２０ｇ、２２．８ｍｍｏｌ）を滴下しながら添加した。生じた混合物を室温で１０時間にわたって撹拌した。溶媒部分を真空下で除去し、残留物を水に投入した。その混合物をＤＣＭで抽出した（３×）。有機層をＢｉｏｔａｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｈａｓｅ Ｓｅｐａｒａｔｏｒに通して濾過し、そして真空中で濃縮した。粗製品をＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０：１００〜３：９７）で溶出するＴｅｌｅｄｙｎｅ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ ＩＳＣＯでのシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して３−［（５−ヒドロキシペンチル）オキシ］プロパンニトリル（６３５ｍｇ、１８％の収量収率）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.60-3.73 (m, 4H), 3.45-3.55 (m, 2H), 2.60 (dt, J = 4.1, 6.4 Hz, 2H), 2.06 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 1.57-1.69 (m, 4H), 1.43-1.50 (m, 2H).
ステップ２： ｔｅｒｔ−ブチルＮ−｛３−［（５−ヒドロキシペンチル）オキシ］プロピル｝カルバメート
Figure 0006873433
ＭｅＯＨ（１２ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２．０ｍＬ）中の３−［（５−ヒドロキシペンチル）オキシ］プロパンニトリル（４００ｍｇ、２．５４ｍｍｏｌ）の溶液に塩化ニッケル（ＩＩ）（３９３ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）を添加し、続いて水素化ホウ素ナトリウム（３６０ｍｇ、９．５２ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。混合物を室温で３時間にわたって撹拌し、その後にＭｅＯＨ（１２ｍＬ）で反応停止した。その混合物をセライトに通して濾過し、そしてＭｅＯＨで洗浄した。濾液を真空中で濃縮した。ＴＨＦ（５ｍＬ）中の上の粗生成物の溶液に６ＭのＮａＯＨ水溶液（０．５ｍＬ）と二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（８３１ｍｇ、３．８１ｍｍｏｌ）を添加し、生じた混合物を室温で３時間にわたって撹拌し、その後に真空中で濃縮した。粗製品をＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０：１００〜４：９６）で溶出するＴｅｌｅｄｙｎｅ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ ＩＳＣＯでのシリカゲルクロマトグラフィーにより精製してｔｅｒｔ−ブチルＮ−｛３−［（５−ヒドロキシペンチル）オキシ］プロピル｝カルバメート（３６６ｍｇ、５５％の収量収率）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.91 (br. s., 1H), 3.66 (br. s., 2H), 3.49 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.43 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.24 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 1.75 (quin, J = 6.2 Hz, 2H), 1.57-1.65 (m, 5H), 1.41-1.52 (m, 11H).
ステップ３： ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［３−（｛５−［（４−メチルベンゼンスルホニル）オキシ］ペンチル｝オキシ）プロピル］カルバメート
Figure 0006873433
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（３−（（５−ヒドロキシペンチル）オキシ）プロピル）カルバメート（３００ｍｇ、３．８８ｍｍｏｌ）の溶液にＤＩＰＥＡ（５９９．３μＬ、３．４４ｍｍｏｌ）、塩化トシル（２６２．３ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（１４．０ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）を添加した。生じた混合物を室温で２０時間にわたって撹拌した。その反応を半飽和炭酸水素ナトリウムで反応停止し、ＤＣＭで抽出し（２×）、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｈａｓｅ Ｓｅｐａｒａｔｏｒに通して濾過し、そして真空中で濃縮した。粗製品を酢酸エチル／ヘプタン（０：１００〜３０：７０）で溶出するＴｅｌｅｄｙｎｅ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ ＩＳＣＯでのシリカゲルクロマトグラフィーにより精製してｔｅｒｔ−ブチルＮ−［３−（｛５−［（４−メチルベンゼンスルホニル）オキシ］ペンチル｝オキシ）プロピル］カルバメート（９１４ｍｇ、２６％の収量収率）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.78 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 4.02 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.44 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.35 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.19 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.64-1.74 (m, 5H), 1.49-1.54 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.33-1.40 (m, 2H). LC-MS (ES+): m/z 438.19 [MNa+], tR = 2.65分。
ステップ４： メチル４−｛［５−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ｝プロポキシ）ペンチル］オキシ｝ベンゾエート
Figure 0006873433
ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［３−（｛５−［（４−メチルベンゼンスルホニル）オキシ］ペンチル｝オキシ）プロピル］カルバメート（３４０ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）、メチル４−ヒドロキシベンゾエート（１１７ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２０３ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で２４時間にわたって撹拌した。その反応混合物を酢酸エチルで希釈し、半飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１×）、水（２×）、塩水（１×）で洗浄し、その後でＢｉｏｔａｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｈａｓｅ Ｓｅｐａｒａｔｏｒに通して濾過した。濾液を真空中で濃縮し、残留物を酢酸エチル／ヘプタン（０：１００〜５０：５０）で溶出するＴｅｌｅｄｙｎｅ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ ＩＳＣＯでのシリカゲルクロマトグラフィーにより精製してメチル４−｛［５−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ｝プロポキシ）ペンチル］オキシ｝ベンゾエート（３００ｍｇ、９３％の収量収率）を得た。LC-MS (ES+): m/z 418.21 [MNa+], tR = 2.74分。
ステップ５：４−｛［５−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ｝プロポキシ）ペンチル］オキシ｝安息香酸
Figure 0006873433
１：１：１のＴＨＦ／水／ＭｅＯＨ（６．０ｍＬ、体積／体積／体積）中の４−｛［５−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ｝プロポキシ）ペンチル］オキシ｝ベンゾエート（１５０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の溶液に水酸化リチウム（８１．６ｍｇ、３．４１ｍｍｏｌ）を添加した。生じた混合物を室温で一晩にわたって撹拌し、その後に６ＮのＨＣｌ水溶液でｐＨ２〜３まで酸性にした。その混合物を真空中で濃縮して大半の溶媒を除去し、その後に酢酸エチルで希釈し、水（２×）、塩水（２×）で洗浄し、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｈａｓｅ Ｓｅｐａｒａｔｏｒに通して濾過し、そして真空中で濃縮した。粗生成物（１２３ｍｇ）をさらに精製せずに次のステップに持ち込んだ。LC-MS (ES+): m/z 404.20 [MNa+], tR = 2.40分。
ステップ６： ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（３−｛［５−（４−｛［ｔｒａｎｓ−３−（３−クロロ−４−シアノフェノキシ）−２，２，４，４−テトラメチルシクロブチル］カルバモイル｝フェノキシ）ペンチル］オキシ｝プロピル）カルバメート
Figure 0006873433
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の４−｛［５−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ｝プロポキシ）ペンチル］オキシ｝安息香酸（１２４ｍｇ、０．３２２ｍｍｏｌ）、２−クロロ−４−（ｔｒａｎｓ−３−アミノ−２，２，４，４−テトラメチルシクロブトキシ）ベンゾニトリル（８９．８ｍｇ、０．３２２ｍｍｏｌ）の溶液にＤＩＰＥＡ（１１２μＬ、０．６５ｍｍｏｌ）とＴＢＴＵ（１５５ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を添加した。生じた混合物を室温で１時間にわたって撹拌し、その後に酢酸エチルで希釈し、水（３×）、塩水（１×）で洗浄し、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｈａｓｅ Ｓｅｐａｒａｔｏｒに通して濾過し、そして真空中で濃縮した。残留物をＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０：１００〜５：９５）で溶出するＴｅｌｅｄｙｎｅ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ ＩＳＣＯでのシリカゲルクロマトグラフィーにより精製してｔｅｒｔ−ブチルＮ−（３−｛［５−（４−｛［ｔｒａｎｓ−３−（３−クロロ−４−シアノフェノキシ）−２，２，４，４−テトラメチルシクロブチル］カルバモイル｝フェノキシ）ペンチル］オキシ｝プロピル）カルバメート（１６９ｍｇ、８２％の収量収率）を得た。LC-MS (ES+): m/z 643.32/645.31 (3:1) [MH+], tR = 3.04分。
１２．４−｛［５−（３−アミノプロポキシ）ペンチル］オキシ｝−Ｎ−［ｔｒａｎｓ−３−（３−クロロ−４−シアノフェノキシ）−２，２，４，４−テトラメチルシクロブチル］ベンズアミド
Figure 0006873433
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−（３−｛［５−（４−｛［ｔｒａｎｓ−３−（３−クロロ−４−シアノフェノキシ）−２，２，４，４−テトラメチルシクロブチル］カルバモイル｝フェノキシ）ペンチル］オキシ｝プロピル）カルバメート（１２４ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）の溶液にトリフルオロ酢酸（３７２μＬ、４．８６ｍｍｏｌ）を添加し、そして反応完了まで４５℃で１時間にわたって加熱した。その後、その反応を固形物になるまで真空中で濃縮し、そしてさらに精製せずに次のステップに持ち込んだ（１０４ｍｇ、９９％の収量収率）。LC-MS (ES+): m/z 543.27/545.26 (3:1) [MH+], tR = 2.26分。
１３．４−｛［５−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロポキシ）ペンチル］オキシ｝−Ｎ−［ｔｒａｎｓ−３−（３−クロロ−４−シアノフェノキシ）−２，２，４，４−テトラメチルシクロブチル］ベンズアミド
Figure 0006873433
（表１に示されている第１１化合物構造）
１，４−ジオキサン（２ｍＬ）中の４−｛［５−（３−アミノプロポキシ）ペンチル］オキシ｝−Ｎ−［ｔｒａｎｓ−３−（３−クロロ−４−シアノフェノキシ）−２，２，４，４−テトラメチルシクロブチル］ベンズアミド（３０．０ｍｇ、０．０５５３ｍｍｏｌ）の溶液にジイソプロピルエチルアミン（３８４μＬ、２．２１ｍｍｏｌ）、２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン（１８．３ｍｇ、０．０６６４ｍｍｏｌ）を添加した。生じた混合物を１６時間にわたって還流し、その後に酢酸エチルで希釈し、半飽和塩水溶液（２×）で洗浄し、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｈａｓｅ Ｓｅｐａｒａｔｏｒに通して濾過し、そして真空中で濃縮した。残留物をＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０：１００〜７：９３）で溶出するＴｅｌｅｄｙｎｅ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ ＩＳＣＯでのシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して４−｛［５−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロポキシ）ペンチル］オキシ｝−Ｎ−［ｔｒａｎｓ−３−（３−クロロ−４−シアノフェノキシ）−２，２，４，４−テトラメチルシクロブチル］ベンズアミド（１２ｍｇ、２８％の収量収率）を得た。LC-MS (ES+): m/z 799.31/801.31 (3:1) [MH+], tR = 2.97分。 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.03 (s, 1H), 7.72 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 7.2, 8.4 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.89-6.96 (m, 3H), 6.82 (dd, J = 2.5, 8.8 Hz, 1H), 6.18 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.89 (dd, J = 5.1, 12.1 Hz, 1H), 4.16 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.06 (s, 1H), 4.02 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.46-3.48 (m, 1H), 3.41 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.82-2.90 (m, 1H), 2.76-2.81 (m, 1H), 2.67-2.75 (m, 1H), 2.07-2.14 (m, 1H), 1.94 (quin, J = 6.1 Hz, 2H), 1.82-1.87 (m, 2H), 1.67-1.73 (m, 2H), 1.53-1.59 (m, 2H), 1.28 (s, 6H), 1.20-1.25 (m, 6H).
１４．２−（（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（４−（５−（３−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）プロポキシ）ピリミジン−２−イル）フェニル）エチル）アセトアミド、またの名を ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−｛４−［５−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロポキシ）ピリミジン−２−イル］フェニル｝エチル］アセトアミド
Figure 0006873433
 （第４０化合物、表１）
次の例となるスキームにより化合物４０を調製することができる。
Figure 0006873433
ステップ１：（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）エチルカルバメートの調製
Figure 0006873433
ジオキサン（５０ｍＬ）中の（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１−（４−ブロモフェニル）エチルカルバメート（６ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（７．６ｇ、２９．９ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（５．９ｍｇ、６０．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）（４４０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、室温で添加した。その混合物からガスを抜き、そして窒素で３回にわたり再充填した。生じた混合物を９０℃で一晩にわたって撹拌した。室温まで冷却した後にその反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間で分配した。水層を分離し、そして酢酸エチルで抽出した（５０ｍＬ×２）。混合した有機層を塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して粗残留物を供給し、それをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の５〜１０％酢酸エチルで溶出）により精製して（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）エチルカルバメート（７．４ｇ、９８％の収率）を黄色の油として得た。LC/MS (ES+): m/z 370.0 [M+Na+]; tR = 3.165分; 1HNMR (400MHz, CDCl3): δ 1.26 (s, 12H), 1.34 (s, 12H), 4.78 (br, 1H), 7.30 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.78 (d, J = 8.0 Hz, 2H); 化学式: C19H30BNO4; 分子量: 347.26
ステップ２：ベンジル３−ヒドロキシプロピルカルバメートの調製
Figure 0006873433
水（５０ｍＬ）とテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）の混合液中の３−アミノプロパン−１−オール（２０ｇ、２６６ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（７３ｇ、５２９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にベンジルクロロホルマート（６８ｇ、３９８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。その混合物を室温まで温め、そして室温で一晩にわたって撹拌した。その反応混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で分配した。有機層を回収し、塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して粗残留物を供給し、それをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の２０〜５０％酢酸エチルで溶出）により精製してベンジル３−ヒドロキシプロピルカルバメート（２６．９ｇ、５２％の収率）を無色油として得た。LC/MS (ES+): m/z 232.1 [M+Na+]; tR = 1.697 分; 1HNMR (400MHz, CDCl3): δ 1.67-1.73 (m, 2H), 2.56 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 3.33-3.38 (m, 2H), 3.65-3.70 (m, 2H), 5.06 (br, 1H), 5.11 (s, 2H), 7.29-7.36 (m, 5H); 化学式: C11H15NO3; 分子量: 209.24
ステップ３：３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピル４−メチルベンゼンスルホン酸の調製
Figure 0006873433
ピリジン（４０ｍＬ）中のベンジル３−ヒドロキシプロピルカルバメート（２６．９ｇ、１２８．６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に４−トルエンスルホニルクロリド（７３ｇ、３８４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。その混合物を室温まで温め、そして室温で２時間にわたって撹拌した。その反応混合物を酢酸エチル（１２０ｍＬ）と水（８０ｍＬ）との間で分配した。有機層を回収し、塩酸（１Ｎ、４８０ｍＬ）と塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して粗残留物を供給し、それをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の１０〜２０％酢酸エチルで溶出）により精製して３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピル４−メチルベンゼンスルホン酸（３８．５ｇ、８２％の収率）を黄色の油として得た。LC/MS (ES+): m/z 386.2 [M+Na+]; tR = 2.582 分; 1HNMR (400MHz, CDCl3): δ 1.85-1.91 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 3.25 (m, 2H), 4.09 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.83 (br, 1H), 5.07 (s, 2H), 7.26-7.39 (m, 7H), 7.78 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 化学式: C18H21NO5S; 分子量: 363.43
ステップ４：２−ブロモピリミジン−５−オールの調製
Figure 0006873433
無水ジクロロメタン（６０ｍＬ）中の２−クロロ−５−メトキシピリミジン（１０ｇ、６９．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にジクロロメタン（１００ｍＬ）中の三臭化ホウ素（３４．７ｇ、１３８．５ｍｍｏｌ）の溶液を−７８℃で添加した。その混合物を室温まで温め、そして室温で一晩にわたって撹拌した。その反応を−７８℃でメタノール（８０ｍＬ）の滴下による添加により停止した。溶媒を減圧下で除去して粗残留物を供給し、それをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（無水ジクロロメタン中の２〜５％メタノールで溶出）により精製して２−ブロモピリミジン−５−オール（６．５ｇ、５４％の収率）を黄色の固形物として得た。1HNMR (400MHz, DMSO-d6): δ 8.26(s, 2H), 8.49 (s, 1H); 化学式: C4H3BrN2O; 分子量: 174.98
ステップ５：ベンジル３−（２−ブロモピリミジン−５−イルオキシ）プロピルカルバメートの調製
Figure 0006873433
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中の２−ブロモピリミジン−５−オール（５ｇ、３８．３ｍｍｏｌ）、３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピル４−メチルベンゼンスルホン酸（１３．９ｇ、３８．２ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１０．６ｇ、７６．８ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で一晩にわたって撹拌した。室温まで冷却した後にその反応混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配した。水層を分離し、そして酢酸エチルで抽出した（５０ｍＬ×２）。混合した有機層を塩水（８０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して粗残留物を供給し、それをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の２０〜４０％酢酸エチルで溶出）により精製してベンジル３−（２−ブロモピリミジン−５−イルオキシ）プロピルカルバメート（２．４ｇ、２３％の収率）を無色油として得た。LC/MS (ES+): m/z 367.9 [M+1] for Br81; tR = 2.375 分; 1HNMR (400MHz, CDCl3): δ 2.04-2.08 (m, 2H), 3.39-3.43 (m, 2H), 4.08-4.13 (m, 2H), 5.09 (s, 2H), 7.34-7.36 (m, 5H), 8.22 (s, 2H); 化学式: C15H16BrN3O3; 分子量: 366.21
ステップ６：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（１−（４−（５−（３−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロポキシ）ピリミジン−２−イル）フェニル）エチル）カルバメートの調製
Figure 0006873433
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）および水（５ｍＬ）中のベンジル３−（２−ブロモピリミジン−５−イルオキシ）プロピルカルバメート（２．４ｇ、６．６ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）エチルカルバメート（２．３ｇ、６．６ｍｍｏｌ）および第三リン酸化カリウム三水和物（３．５ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（７６６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、室温で添加した。その混合物からガスを抜き、そして窒素で３回にわたり再充填した。生じた混合物を８０℃で４時間にわたって撹拌した。その反応混合物を酢酸エチル（７０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配した。有機層を回収し、塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して粗残留物を供給し、それをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の１０〜５０％酢酸エチルで溶出）により精製してｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（１−（４−（５−（３−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロポキシ）ピリミジン−２−イル）フェニル）エチル）カルバメート（２．２ｇ、６７％の収率）を白色の固形物として得た。LC/MS (ES+): m/z 507.5 [M+H+]; tR = 2.841分; 化学式: C28H34N4O5; 分子量: 506.59
ステップ７：ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ）−１−（４−（５−（３−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）プロポキシ）ピリミジン−２−イル）フェニル）エチルカルバメートの調製
Figure 0006873433
メタノール（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（１−（４−（５−（３−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロポキシ）ピリミジン−２−イル）フェニル）エチル）カルバメート（２．２ｇ、４．４ｍｍｏｌ）および水酸化パラジウム炭素（１０％、２００ｍｇ）の混合物を水素雰囲気下（水素バルーン）、室温で一晩にわたって撹拌した。その触媒を濾過により除去し、そしてメタノール（５０ｍＬ）で洗浄し、混合した濾液を減圧下で濃縮した。残留物を１−メチル−２−ピロリジノン（２０ｍＬ）に再溶解し、続いて２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（１．２ｇ、４．３ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（２．３ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）を連続てきに添加した。生じた混合物を８０℃で２時間にわたって撹拌した。その反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）と水（１５ｍＬ）との間で分配した。水層を分離し、そして酢酸エチルで抽出した（２５ｍＬ×２）。混合した有機層を塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して粗残留物を供給し、それをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン中の１〜２％メタノールで溶出）により精製してｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ）−１−（４−（５−（３−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）プロポキシ）ピリミジン−２−イル）フェニル）エチルカルバメート（７１０ｍｇ、２６％の収率）を黄色の油として得た。LC/MS (ES+): m/z 629.3 [M+H+]; tR = 2.660 分; 1HNMR (400MHz, CDCl3): δ1.42-1.48(m, 12H), 2.04-2.07 (m, 2H), 2.11-2.26 (m, 4H), 3.54-3.59 (m, 2H), 4.24-4.26 (m, 2H), 4.90-4.94 (m, 1H), 6.50-6.53 (m, 1H), 6.93-6.95 (m, 1H), 7.11-7.12 (m, 1H), 7.39-7.41 (m, 2H), 7.43-7.48 (m, 3H), 8.08 (br, 1H), 8.28-8.32 (m, 2H), 8.51
(s, 2H); 化学式: C33H36N6O7; 分子量: 628.67;
ステップ８：２−（（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（４−（５−（３−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）プロポキシ）ピリミジン−２−イル）フェニル）エチル）アセトアミド、またの名を ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−｛４−［５−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロポキシ）ピリミジン−２−イル］フェニル｝エチル］アセトアミドの調製
Figure 0006873433
ジクロロメタン（７ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ）−１−（４−（５−（３−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）プロポキシ）ピリミジン−２−イル）フェニル）エチルカルバメート（７１０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ酢酸（７ｍＬ）の混合物を室温で１時間にわたって撹拌した。揮発成分を減圧下で蒸発させた。残留物を乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に再溶解し、続いて（Ｓ）−２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）酢酸（４０７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（７３０ｍｇ、５．６ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）（１．３ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を０℃で連続的に添加した。生じた混合物を室温まで温め、そして室温で３０分間にわたって撹拌した。その反応混合物を酢酸エチル（４０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）との間で分配した。水層を分離し、そして酢酸エチルで抽出した（２５ｍＬ×２）。混合した有機層を塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮して粗残留物を供給し、それを分取ＴＬＣ（ジクロロメタン中の７％メタノールで溶出）により精製して２−（（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（４−（５−（３−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）プロポキシ）ピリミジン−２−イル）フェニル）エチル）アセトアミド（１６０ｍｇ、１５．５％の２ステップでの収量収率）を黄色の固形物として得た。LC/MS (ES+): m/z 911.3 [M+H+]; tR = 2.666 分; 1HNMR (400MHz, CDCl3): δ 1.58 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.66 (s, 3H), 1.94-2.01 (m, 1H), 2.11-2.14 (m, 1H), 2.22-2.23 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.66 (s, 3H), 2.75-2.90 (m, 2H), 3.38-3.43 (m, 1H), 3.55-3.62 (m, 3H), 4.24-4.26 (m, 2H), 4.58-4.61 (m, 1H), 4.89-4.93 (m, 1H), 5.18-5.22 (m, 1H), 6.48-6.55 (m, 1H), 6.89-6.94 (m, 2H), 7.10-7.12 (m, 1H), 7.32-7.41 (m, 6H), 7.50 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 8.26-8.28 (m, 3H), 8.51 (s, 2H); 化学式: C47H43ClN10O6S; 分子量: 911.43
Ｃ．タンパク質分解バイオアッセイ
本明細書において開示される代表的化合物を使用して様々な細胞種において観察されるタンパク質分解レベルを評価するために次のバイオアッセイを実施した。
各バイオアッセイにおいて本開示によって包含される表１に示される化合物の量を変えて細胞を処理した。次のタンパク質、すなわち、ＴＡＮＫ結合キナーゼ１（ＴＢＫ１）、エストロゲン受容体α（ＥＲα）、ブロモドメイン含有タンパク質４（ＢＲＤ４）、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、およびｃ−Ｍｙｃの分解をこの試験研究で評価した。
１．ＴＢＫ１ウエスタンプロトコル
Ｐａｎｃ０２．１３細胞をＡＴＣＣより購入し、１５％のＦＢＳ（ＡＴＣＣ）と１０単位／ｍＬのヒト組換えインスリン（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＲＰＭＩ−１６４０（Ｇｉｂｃｏ）中に培養した。ＤＭＳＯ対照処理と化合物処理（０．１μＭ、０．３μＭ、および１μＭ）を１２ウェルプレート内で１６時間にわたって実施した。ＴＬＲ３アゴニストであるポリＩ：Ｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ；ｔｌｒｌ−ｐｉｃ）を最後の３時間にわたって添加した。細胞を回収し、そしてプロテアーゼ阻害剤とホスファターゼ阻害剤を添加したＲＩＰＡ緩衝液（５０ｍＭのトリスｐＨ８、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のＴｘ−１００、０．１％のＳＤＳ、０．５％のデオキシコール酸ナトリウム）中で溶解した。溶解液を１６，０００ｇで１０分間にわたって清澄化し、上清をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離した。標準的プロトコルを使用してイムノブロッティングを実施した。使用した抗体はＴＢＫ１（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ番号３５０４）、ｐＩＲＦ３（ａｂｃａｍ番号ａｂ７６４９３）、およびＧＡＰＤＨ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ番号５１７４）であった。Ｂｉｏｒａｄ ＣｈｅｍｉＤｏｃ ＭＰイメージングシステムを使用してバンドを定量した。
２．ＥＲＲαウエスタンプロトコル
ＮＡＭＡＬＷＡ細胞（ＡＴＣＣ）を１５％ＦＢＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）添加ＲＰＭＩ−１６４０（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に培養した。ＤＭＳＯ対照インキュベーションと化合物インキュベーション（０．１μＭ、０．３μＭ、および１μＭ）を２４ウェルプレート内で１６時間にわたって実施した。細胞を回収し、プロテアーゼ阻害剤（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）含有細胞溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で溶解した。溶解液を１６，０００ｇで１０分間にわたって清澄化し、上清をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離した。標準的プロトコルを使用してイムノブロッティングを実施した。使用した抗体はＥＲＲα（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ番号８６４４）およびＧＡＰＤＨ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ番号５１７４）であった。Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＣｈｅｍｉＤｏｃ ＭＰイメージングシステムを使用してバンドを定量した。
３．ＢＲＤ４ウエスタンプロトコル
ＶＣａＰ細胞をＡＴＣＣより購入し、１０％のＦＢＳ（ＡＴＣＣ）とペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＡＴＣＣ）中に培養した。ＤＭＳＯ対照処理と化合物処理（０．００３μＭ、０．０１μＭ、０．０３μＭのおよび０．１μＭ）を１２ウェルプレート内で１６時間にわたって実施した。細胞を回収し、そしてプロテアーゼ阻害剤とホスファターゼ阻害剤を添加したＲＩＰＡ緩衝液（５０ｍＭのトリスｐＨ８、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のＴｘ−１００、０．１％のＳＤＳ、０．５％のデオキシコール酸ナトリウム）中で溶解した。溶解液を１６，０００ｇで１０分間にわたって清澄化し、タンパク質濃度を決定した。等量のタンパク質（２０μｇ）を標準的プロトコルに従ってＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析とそれに続くイムノブロッティングの対象とした。使用した抗体はＢＲＤ４（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ番号１３４４０）およびアクチン（Ｓｉｇｍａ番号５４４１）であった。検出試薬はＣｌａｒｉｔｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ＥＣＬ基質（Ｂｉｏ−ｒａｄ番号１７０−５０６０）であった。
４．ＡＲ ＥＬＩＳＡプロトコル
ＶＣａＰ細胞をＡＴＣＣより購入し、１０％のＦＢＳ（ＡＴＣＣ）とペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＡＴＣＣ）中に培養した。ＤＭＳＯ対照処理と化合物処理（０．０００１μＭ〜１μＭ）を９６ウェルプレート内で１６時間にわたって実施した。細胞を回収し、細胞溶解緩衝液（カタログ番号９８０３）（２０ｍＭのトリス塩酸（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＮａ２ＥＤＴＡ、１ｍＭのＥＧＴＡ、１％のＴｒｉｔｏｎ、２．５ｍＭのピロリン酸ナトリウム、１ｍＭのＢ−グリセロリン酸、１ｍＭのＮａ３ＶＯ４、１ｕｇ／ｍｌのロイペプチン）で溶解した。溶解液を１６，０００ｇで１０分間にわたって清澄化し、そしてＰａｔｈＳｃａｎ ＡＲ ＥＬＩＳＡ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇカタログ番号１２８５０）に負荷した。ＰａｔｈＳｃａｎ（登録商標）総アンドロゲン受容体サンドイッチＥＬＩＳＡキットは総アンドロゲン受容体タンパク質の内在性レベルを検出する固相サンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）である。アンドロゲン受容体ウサギｍＡｂがマイクロウェルに被覆されている。細胞溶解液とのインキュベーション後にその被覆抗体によってアンドロゲン受容体タンパク質が捕捉される。念入りの洗浄に続いてその捕捉アンドロゲン受容体タンパク質を検出するためにアンドロゲン受容体マウス検出ｍＡｂを添加する。次にＨＲＰ結合抗マウスＩｇＧ抗体を使用してその結合検出抗体を認識する。ＨＲＰ基質であるＴＭＢを添加して発色させる。その発色の吸光度の程度は総アンドロゲン受容体タンパク質の量に比例する。
キット内の抗体はキット特異的なカスタム製剤である。
５．ｃ−Ｍｙｃ ＥＬＩＳＡアッセイプロトコル
２２ＲＶ−１細胞をＡＴＣＣより購入し、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地中に培養した。トリプシン（Ｇｉｂｃｏ番号２５２００−１１４）を使用して細胞を回収し、計数し、そして９６ウェルプレート内に７５μＬ／ウェルの体積のＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地中に３０，０００細胞／ウェルの割合で播種した。０．１％のＤＭＳＯ中に希釈した化合物をそれらの細胞に投与し、１８時間にわたって培養し、その後で洗浄し、そしてプロテアーゼ阻害剤とホスファターゼ阻害剤を添加した５０ｕＬのＲＩＰＡ緩衝液（５０ｍＭのトリスｐＨ８、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のＴｘ−１００、０．１％のＳＤＳ、０．５％のデオキシコール酸ナトリウム）で溶解した。溶解液を４０００ｒｐｍ、４℃で１０分間にわたって清澄化し、その後でＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号ＫＨＯ２０４１のＮｏｖｅｘ Ｈｕｍａｎ ｃ−ｍｙｃ ＥＬＩＳＡキットの９６ウェルＥＬＩＳＡプレートにアリコットを添加した。５０ｕｌのｃ−Ｍｙｃ検出抗体を各ウェルに添加し、それらのプレートを室温で３時間にわたってインキュベートし、その後にＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で洗浄した。１００ｕＬの抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ二次抗体を各ウェルに添加し、室温で３０分間にわたってインキュベートした。それらのプレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で洗浄し、１００μＬのＴＭＢを各ウェルに添加し、その後に色の変化を５分毎にモニターした。１００μＬの停止溶液を添加し、プレートを４５０ｎｍで読み取る。
Ｄ．結果
表１は本開示に包含される代表的な数の化合物から得られた実験データの結果を提供している。具体的には、化学構造、マススペクトロメトリー特性解析、および化合物名によって特定される表１に挙げられた化合物で様々な細胞種を処理した。
表１は、（Ａ）１ｕＭの化合物１、６〜９、１２、および１７で処理された細胞において１０〜３０％の分解が達成され、（Ｂ）１ｕＭの化合物２〜５、１０、および２０で処理された細胞において３１−５０％の分解が達成され、および（Ｃ）１ｕＭの化合物１１、１３〜１６、１８〜１９、２１および２２で処理された細胞において５０％を超える分解が達成されたことを示している。表１は、（Ｄ）化合物２４および２６〜３５は５０ｎＭ未満のＩＣ５０を有し、一方で（Ｅ）化合物２３および２５は５０ｎＭを超えるＩＣ５０を有することも示している。
実施例２
低分子阻害剤は腫瘍学薬品開発の基礎であり、概して酵素活性を阻害すること（キナーゼ阻害剤など）、またはタンパク質間相互作用に干渉すること（ＢＲＤ４阻害剤など）によって作用する。大半の低分子阻害剤の可逆的結合を考慮すると、全身薬品濃度によって充分な機能阻害を確実にすることが多くの場合に要求される。加えて、インビボでの効果に要求される高い全身薬品レベルを達成および維持することが多くの標的にとって困難であることが示されている。
ＢＲＤ４はブロモドメインおよびエクストラターミナルドメイン（ＢＥＴ）ファミリーのメンバーであり、Ｎ末端の２つのブロモドメイン（ＢＤドメイン）とＣ末端のエクストラターミナルドメイン（ＥＴドメイン）を特徴とするタンパク質である。それらの２つのＢＤドメインがヒストンタンパク質のＮ末端テールにあるアセチル化リシン残基を認識してそれらの残基と相互作用する。ＥＴドメインは多様な転写調節因子の動員に関してスキャフォールド機能を果たすと考えられているが、その特徴はまだ完全に明らかにされていない。ＢＲＤ４はｃ−ＭＹＣ、Ｂｃｌ−ｘＬおよびＢＣＬ−６などの重要な癌遺伝子の上流に存在することが多いスーパーエンハンサー領域に局在し、それらの遺伝子の発現の調節に重要な役割を果たすことが示されている。特定のゲノム座位への適切な転写修飾因子の動員による遺伝子発現の調節における役割に基づき、ＢＲＤ４は正中線癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、および前立腺癌などの多数のヒト癌の治療および／または予防のための候補薬品標的である。
ＪＱ１、ｉＢＥＴ、およびＯＴＸ１５などの幾つかの低分子ＢＥＴブロモドメイン阻害剤が開発されており、それらはＢＬを含む様々な癌の特定の前臨床モデルにおいて治療能力があることが示されている。ほとんど全てのＢＬ症例がｃ−ｍｙｃ遺伝子をＩｇＨの上流に位置するスーパーエンハンサーの制御下に置くその遺伝子の転座を含み、そうして異常に高レベルのｃ−ＭＹＣ発現、腫瘍発生、および腫瘍維持が誘導される。ＢＲＤ４阻害剤を使用する前臨床研究によりＢＬ細胞株においてｃ−ＭＹＣおよび増殖を抑制するそれらの能力が実証されているが、しかしながらこれらの阻害剤のＩＣ５０値は１００ｎＭ〜１μＭの範囲内であることが多い。
材料と方法
この研究の実験デザインおよび実験法の詳細を以下に提供する。
１．化合物
第１４化合物（表１）を上の実施例１の合成法第８番において考察した方法に従って合成した。本実施例を通して「Ａ８２５」と呼ぶこの化合物は次の名称および構造を有する。
２−（（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）−Ｎ−（４−（２−（２−（２−（２−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）アセトアミド
Figure 0006873433
図２に示されるように、Ａ８２５はテトラオキサテトラデカンリンカーを介してＥ３ユビキチンリガーゼセレブロン動員部分（ポマリドミドの誘導体）に連結されているＢＲＤ４結合部分（ＯＴＸ−１５の誘導体）を含有する。
Ａ８２５の細胞効果を様々な細胞株において評価し、これらの効果を２種類の公知のＢＥＴドメイン阻害剤であるＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較した。ＪＱ１は公開されている研究において最も頻繁に使用されるＢＥＴドメイン阻害剤であり、ＯＴＸ−１５は臨床開発が進展した段階にあるＢＥＴドメイン阻害剤である。
Ａ８２５のセレブロン動員部分も様々な細胞株において評価し、ポマリドミドと比較した。
阻害剤ＪＱ１、ＯＴＸ−１５、およびポマリドミドを公開されている方法に従って合成した。
２．細胞と試薬
ＮＡＭＡＬＷＡ細胞、Ｒａｍｏｓ細胞、ＣＡ−４６細胞、およびＤＡＵＤＩ細胞をＡＴＣＣより購入し、指示通りに維持した。抗ＢＲＤ４抗体（番号Ｅ２Ａ７Ｘ）、抗ｃ−ＭＹＣ抗体（番号Ｄ８４Ｃ１２）、抗ＰＡＲＰ抗体（番号４６Ｄ１１）をＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙより購入した。抗アクチン（番号Ａ５４４１）抗体をＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈより購入した。二次抗体（番号７０７４、番号７０７６）をＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙより購入した。ＭＧ１３２（番号Ｍ７４４９）をＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈより購入した。カルフィルゾミブ（番号Ｓ２８５３）をＳｅｌｌｅｃｋより購入した。
３．ウエスタンブロット分析
４０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１４０ｍＭのＮａＣｌ、２．５ｍＭのＥＤＴＡ、１％のＮＰ−４０、０．１％のＳＤＳおよびプロテアーゼ阻害剤カクテルを含有する溶解緩衝液中に培養細胞を収集した。１０分間の遠心分離（１４０００ｒｐｍ）の後に上清をＢＣＡ法によるタンパク質濃度決定のために回収し、そして標準的プロトコルによるイムノブロッティングの対象とした。Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＣｈｅｍｉＤｏｃ（商標）ＭＰイメージングシステム上でＢｉｏ−Ｒａｄ Ｃｌａｒｉｔｙ ＥＣＬウエスタンブロッティング基質を使用してウエスタンブロットの結果を視覚化した。
４．ＲＴ−ＰＣＲ
Ｂｉｏ−ＲａｄのＡｕｒｕｍ（商標）トータルＲＮＡミニキット（番号７３２−６８２０）でＲＮＡ抽出を実施した。Ｌｉｆｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのハイキャパシティーｃＤＮＡリバーストランスクリプションキット（番号４３６８８１３）を製造業者の指示に従って用いて全ＲＮＡのファーストストランドｃＤＮＡを合成した。Ｂｉｏ−ｒａｄ ＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄ（商標）ユニバーサルＳＹＢＲ（登録商標）グリーンスーパーミックス（番号１７２−５２７１）を使用して定量的ＰＣＲを実施した。次のプライマーを使用した。
５．増殖アッセイ
Figure 0006873433
 増殖に対する前記阻害剤の効果を評価するため、９６ウェル組織培養プレート中に細胞（５０，０００細胞／１００μｌ）を播種し、続いて化合物を表示濃度で添加した。７２時間後にウェル当たり１００μＬの再構成ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（ＣＴＧ）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ番号Ｇ７５７２）を添加し、ＢｉｏＴｅｋのＣｙｔａｔｉｏｎ３イメージングリーダー上で読み取りを行った。処理細胞のアッセイ読み取り値を対照ＤＭＳＯ処理細胞と比較することにより相対的細胞増殖を決定した。
６．Ｋｄ決定
ＢＲＤ４のブロモドメイン１と２との化合物の親和性をＤｉｓｃｏｖｅｒＸによるＢｒｏｍｏｓｃａｎ（商標）で決定した。
Ｂ．結果
次の実験においてＪＱ１、ＯＴＸ−１５、およびＡ８２５の細胞効果を評価および比較した。
１．低分子ＢＥＴドメイン阻害剤は著しいＢＲＤ４タンパク質蓄積と非効率的なｃ−ＭＹＣ抑制を引き起こす
ａ．ＪＱ１処理およびＯＴＸ−１５処理によるＢＲＤ４の用量依存的蓄積
バーキットリンパ腫（ＢＬ）細胞株は、転座してＢＲＤ４の下流にあるＩｇＨスーパーエンハンサーの制御下に入ったｃ−ｍｙｃ癌遺伝子へのそれらの細胞株の依存性のため、ＢＲＤ４阻害剤に応答することが研究より示されている。
最初の実験では様々なＢＬ細胞株（ＮＡＭＡＬＷＡ細胞、Ｒａｍｏｓ細胞、ＣＡ−４６細胞、およびＤａｕｄｉ細胞）を様々な濃度の２種類の公知のＢＥＴドメイン阻害剤（ＪＱ１およびＯＴＸ−１５）で処理してこれらの阻害剤がＢＲＤ４の分解の減少および／または防止に有効であることを確認した。具体的には、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞とＲａｍｏｓ細胞を様々な濃度のＪＱ１およびＯＴＸ−１５（３ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ、１０００ｎＭ、および３０００ｎＭ）で処理し、ＣＡ−４６細胞とＤａｕｄｉ細胞を１００ｎＭおよび３００ｎＭのＪＱ１およびＯＴＸ−１５で処理した。阻害剤の代わりにＤＭＳＯを使用したことを除いて同じように別のセットの細胞を処理した。ＪＱ１およびＯＴＸ１５の用量を増加させてそれらの細胞の全てを一晩にわたって処理した。処理後、細胞溶解液を収集し、ＢＲＤ４およびアクチンについてのイムノブロットにより分析した。
細胞中に存在するＢＲＤ４の量を処理後のウエスタンブロット分析により評価することによってこれらの処理の効果を決定した（図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、および３Ｄ）。
図３Ａ〜３Ｄは、検査した全ての細胞株において用量依存的なＢＲＤ４タンパク質の著しい蓄積がＪＱ１とＯＴＸ−１５の両方により引き起こされることを示している。これらの結果は幾つかの肺癌細胞株におけるＢＲＤ４の上方制御がＪＱ１処理により生じるという以前の観察（Shimamura, T., Chen, Z., Soucheray, M., Carretero, J., Kikuchi, E., Tchaicha, J.H., Gao, Y., Cheng, K.A., Cohoon, T.J., Qi, J., et al. (2013)、J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674、および K. Klapproth, et al., British journal of haematology, 149 (2010) 484-497）と一致する。
ｂ．ＪＱ１処理およびＯＴＸ−１５処理によるＢＲＤ４の蓄積速度
ＪＱ１およびＯＴＸ−１５での処理後にＢＬ細胞株においてＢＲＤ４が蓄積する速度も決定した。具体的には、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞とＲａｍｏｓ細胞を３００ｎＭの各阻害剤で０時間、０．５時間、１．０時間、２．０時間、４．０時間、７．０時間、２４時間、および４８．０時間にわたって処理した。処理後、細胞溶解液を収集し、ＢＲＤ４およびアクチンについてのイムノブロットにより分析した。
図３Ｅは、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞がどの阻害剤でも処理前（０時間）に検出可能レベルのＢＲＤ４を含有することを示している。ＮＡＭＡＬＷＡ細胞中に存在するＢＲＤ４の量はＪＱ１またはＯＴＸ−１５のどちらかでの処理から３０分以内に顕著に増加し、ＢＲＤ４量はより長い処理時間（０．５時間〜４８．０時間）と共に増加し続けた。
図３Ｆは、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞と同様に、Ｒａｍｏｓ細胞もどの阻害剤でも処理前（０時間）に検出可能レベルのＢＲＤ４を含有することを示している。しかしながら、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞と比較してＲａｍｏｓ細胞ではＢＲＤ４はより遅い速度で蓄積する。具体的には、ＪＱ１またはＯＴＸ−１５のどちらかでの処理から約４．０時間と約７．０時間の間にＢＲＤ４量の顕著な増加が観察された。Ｒａｍｏｓ細胞におけるＢＲＤ４量の顕著な増加は両方の阻害剤での処理から２４．０時間後に観察された。
まとめると、図３Ｅおよび３Ｆに示されている結果は、低分子ＢＲＤ４阻害剤が様々なＢＬ細胞株における急速なＢＲＤ４蓄積を０．３μｍのＪＱ１またはＯＴＸ１５で引き起こすことを示している。
ｃ．ＪＱ１およびＯＴＸ−１５は下流ｃ−Ｍｙｃの抑制を引き起こす
上で考察したように、ＢＲＤ４はｃ−Ｍｙｃ、Ｂｃｌ−ｘＬおよびＢＣＬ−６などの重要な癌遺伝子の上流に存在することが多いスーパーエンハンサー領域に局在することが示されている。ＢＥＴドメイン阻害剤が下流癌遺伝子の発現に影響を与えることができるか決定するため、ＪＱ１またはＯＴＸ−１５のどちらかの濃度を上昇させて（３ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ、１０００ｎＭ、および３０００ｎＭ）ＮＡＭＡＬＷＡ細胞を一晩にわたって処理した。阻害剤の代わりにＤＭＳＯを使用したことを除いて同じように別のセットの細胞を処理した。処理後、細胞溶解液を収集し、ｃ−Ｍｙｃおよびアクチンについてのイムノブロットにより分析した。
図３Ｇは、ＢＥＴドメイン阻害剤での細胞の処理によりｃ−Ｍｙｃの下流抑制をある特定の程度まで引き起こすことが可能であるが、高濃度であってもそれらの阻害剤はｃ−Ｍｙｃの発現を完全に阻害することができないことを示している。具体的には、低濃度（３ｎＭ〜３０ｎＭ）ではそれらの阻害剤は細胞内に存在するｃ−Ｍｙｃのレベルに対して顕著な影響を有しなかったことをその図は示している。しかしながら、ｃ−Ｍｙｃの量は１００ｎＭのＪＱ１またはＯＴＸ−１５のどちらかで処理された細胞では顕著に減少し、３００ｎＭおよび１０００ｎＭのＪＱ１またはＯＴＸ−１５で処理された細胞ではさらに減少した。ＪＱ１とＯＴＸ−１５の両方が１００ｎＭから１０００ｎＭの間の濃度でｃ−Ｍｙｃレベルを著しく抑制したが、より高い用量のどちらの阻害剤もｃ−Ｍｙｃをさらに減少させることはないようであった（図３Ｇ、１０００ｎＭを３０００ｎＭと比較されたい）ことが結果より示されている。
これらの結果より、ＢＥＴドメイン阻害剤ＪＱ１およびＯＴＸ−１５での細胞の処理により１００ｎＭと１０００ｎＭの間の濃度でＢＲＤ４下流タンパク質ｃ−Ｍｙｃの著しい抑制が引き起こされる。しかしながら、より高い濃度のＪＱ１およびＯＴＸ−１５（１０００ｎＭより上）によって１０００ｎＭの阻害剤で見られる効果を超えてｃ−Ｍｙｃタンパク質がさらに抑制されることはなかった。また、ＪＱ１とＯＴＸ−１５のどちらも３０００ｎＭの濃度であってもｃ−Ｍｙｃ発現を完全に抑制することができなかった。
ｄ．ＪＱ１およびＯＴＸ−１５によるｃ−Ｍｙｃの抑制は可逆的である
ＪＱ１およびＯＴＸ−１５によるｃ−Ｍｙｃ発現の抑制効果が可逆的であるか決定するために次の研究を実施した。
この研究ではＮＡＭＡＬＷＡ細胞を２４時間にわたってＪＱ１（１０００ｎＭ）で処理し、続いて３回洗浄してその阻害剤を除去した。細胞を再播種し、阻害剤を含まずに０時間、０．５時間、１．０時間、２．０時間、３．０時間、４．０時間、および６．０時間にわたって培養した。その後、細胞溶解液を様々な時点で収集し、ｃ−Ｍｙｃおよびアクチンについてのイムノブロットにより分析した。並行対照実験ではＪＱ１の代わりにＤＭＳＯを使用したことを除いて同じようにＮＡＭＡＬＷＡ細胞を処理した。
図３Ｈは１０００ｎＭのＪＱ１によりＮＡＭＡＬＷＡ細胞においてｃ−Ｍｙｃタンパク質レベルが顕著に抑制された（ＪＱ１処理細胞の０時間のレーンをＤＭＳＯ対照の０時間のレーンと比較されたい）ことを示しており、それは図３Ａ〜３Ｄにおいて示されている結果と一致する。図３Ｈは、阻害剤の除去から１．０〜２．０時間の間にｃ−Ｍｙｃタンパク質レベルが顕著に上昇すること、および阻害剤の除去から３．０時間以内に、ｃ−Ｍｙｃタンパク質が対照試料のレベルまで戻ることからＪＱ１によるｃ−Ｍｙｃの抑制は急速に反転可能であったことも示している。
別の実験ではＪＱ１（１０００ｎＭ）、ＯＴＸ−１５（１０００ｎＭ）、またはＤＭＳＯ（対照）のいずれかでＲａｍｏｓ細胞を２４時間にわたって処理した。処理後、細胞を（阻害剤によるｃ−Ｍｙｃの抑制を評価するために）溶解するか、または（ｃ−Ｍｙｃ抑制の可逆性を評価するために）洗浄して阻害剤を除去し、再播種し、そして阻害剤を含まずに４．０時間にわたって培養した。細胞溶解液を収集し、ｃ−Ｍｙｃおよびアクチンについてのイムノブロットにより分析した。
Ｒａｍｏｓ細胞に由来する結果はＮＡＭＡＬＷＡ細胞において観察された結果と一致した。具体的には、図３Ｉ（下のパネル）は、ＪＱ１およびＯＴＸ−１５によりＲａｍｏｓ細胞においてｃ−Ｍｙｃが抑制されたが（「ＪＱ１」レーンと「ＯＴＸ１５」レーン）、阻害剤を除去した後の４．０時間以内にｃ−Ｍｙｃレベルが顕著に上昇した（「ＪＱ１洗い流しから４時間後」レーンおよび「ＯＴＸ１５洗い流しから４時間後」レーン）ことからこの抑制効果は可逆的であってことを示している。
この研究の結果は低分子ＢＲＤ４阻害剤（ＪＱ１およびＯＴＸ−１５）がＢＬ細胞株において下流ｃ−Ｍｙｃの抑制を引き起こすことを示している。しかしながら、それらの阻害剤はそれらの細胞において高濃度であってもｃ−Ｍｙｃの発現を完全に抑制することができなかった。さらに、これらの阻害剤によるｃ−Ｍｙｃ発現の抑制効果は急速に反転可能であり、ｃ−Ｍｙｃタンパク質レベルはそれらの阻害剤の除去から約２．０〜４．０時間の後に上昇することが分かった。この研究いおいて得られた結果は、ｃ−ＭＹＣはＪＱ１処理によって抑制されるが、ＪＱ１が除去されると急速に反発するというＡＭＬにおける以前の発見（J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674）と一致する。
２．ＢＲＤ４を効率的に分解するためのＰＲＯＴＡＣを作製するためのＥ３ユビキチンリガーゼセレブロンのハイジャック
ＪＱ１処理とＯＴＸ−１５処理によるＢＲＤ４の急速で確固とした蓄積は、これまでの研究において観察されたＢＲＤ４への阻害剤の結合の可逆性と併せて、ＢＬおよび他の癌において観察される下流ｃ−Ｍｙｃの抑制および増殖阻害に対する適度の効果を説明し得る。低分子ＢＲＤ４阻害剤の限界を回避するため、（上で考察され、図２において示されている）ＰＲＯＴＡＣテクノロジーを利用してキメラ化合物であるＡ８２５を設計した。
ａ．ＢＲＤ４のブロモドメインへの阻害剤の結合親和性
ＢＲＤ４のブロモドメイン１（ＢＤ１）およびブロモドメイン２（ＢＤ２）へのＡ８２５の結合親和性を評価し、ＪＱ１およびＯＴＸ−１５の同ドメインへの結合親和性と比較した。これらの化合物のそれぞれの結合親和性が下の表にまとめられている。
Figure 0006873433
結合親和性研究よりＡ８２５はＪＱ１およびＯＴＸ−１５のものと比較してわずかに低下したＢＲＤ４のＢＤ１およびＢＤ２に対する結合親和性を有することが示された。
ｂ．Ａ８２５はＢＲＤ４の効率的な分解を引き起こす
ＢＬ細胞株におけるＢＲＤ４タンパク質レベルに対するＡ８２５の効果を評価した。
具体的には、Ａ８２５の濃度を上昇させて（０．３ｎＭ、１．０ｎＭ、３．０ｎＭ、１０ｍＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ、および１０００ｎＭ）ＮＡＭＡＬＷＡ細胞とＣＡ−４６細胞を一晩にわたって処理した。処理後、細胞溶解液を収集し、ＢＲＤ４およびアクチンについてのイムノブロットにより分析した。
図４Ａおよび４ＢはＡ８２５でのＢＬ細胞株の処理により低濃度のこの化合物で完全なＢＲＤ４タンパク質分解が誘導されることを示している。特に、この図において示されるデータに基づくと、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞におけるＢＲＤ４のＤＣ５０（最大分解の５０％）は１．０ｎＭ以下のＡ８２５で細胞を処理することにより達成されるようである（４Ａ）。同様に、ＣＡ−４６細胞におけるＢＲＤ４のＤＣ５０は０．３ｎＭ〜１．０ｎＭまたはそれ以下のＡ８２５で細胞を処理することにより達成されるようである（４Ｂ）。
また、ＢＲＤ４は約３．０ｎＭ〜約３００ｎＭの間の範囲の濃度のＡ８２５で処理された両方のＢＬ細胞株では、これらの処理濃度でＢＲＤ４の目立ったタンパク質バンドば全く無いことによって明らかであるように、完全に分解されるようである。興味深いことに、１０００ｎＭのＡ８２５で処理された両方のＢＬ細胞株の溶解液を含むレーンで少量のＢＲＤ４タンパク質が観察されたが、これはＡ８２５によるＢＲＤ４の分解がベル型用量依存的に起こることを示している。すなわち、Ａ８２５の臨界濃度範囲より上、または下でＡ８２５が存在するときに不完全なＢＲＤ４分解が観察されるので、ＢＲＤ４の完全な分解はこの臨界範囲内で起こる。
Ａ８２５内のＢＲＤ４およびセレブロン結合部分はそれらのそれぞれの標的に対して２８〜９０ｎＭおよび３ｕＭというＫｄを有するという事実を考慮すると、Ａ８２５は媒介するＢＲＤ４分解において触媒的に作用することがこれにより示唆される。
ｃ．Ａ８２５はＢＲＤ４の急速な分解を引き起こす
Ａ８２５での処理後のＢＬ細胞株におけるＢＲＤ４の分解速度も決定した。この研究ではＮＡＭＡＬＷＡ細胞とＲａｍｏｓ細胞をＡ８２５（１００ｎＭ）で０時間、０．５時間、１．０時間、２．０時間、４．０時間、７．０時間、および２４時間にわたって処理した。処理後、細胞溶解液を収集し、ＢＲＤ４およびアクチンについてのイムノブロットにより分析した。
図４Ｃおよび４Ｄは、Ａ８２５での処理前（０時間）に両方のＢＬ細胞株においてＢＲＤ４が存在することを示している。Ａ８２５での処理から１時間以内にＢＲＤ４タンパク質レベルが顕著に低下し、そのタンパク質レベルが２４．０時間の処理期間にわたって着実に低下し続けた。この図は、Ａ８２５によるＢＲＤ４の分解が急速に起こり、Ａ８２５処理から２時間以内に５０％を超えるタンパク質が失われることも示している。
ｄ．Ａ８２５によるＢＲＤ４の分解はセレブロン依存的である
Ａ８２５処理によって誘導されるＢＲＤ４分解はセレブロン依存的であることを確認するため、ＢＬ細胞株をＡ８２５、ポマリドミド、またはそれらの２種類の化合物の組合せのいずれかで処理する競合阻害実験を実施した。上で考察したように、且つ、図２に示されるように、Ａ８２５はＥ３ユビキチンリガーゼセレブロン動員部分を含有し、それはポマリドミドの誘導体でり、したがってポマリドミドとＡ８２５はセレブロンへの結合について競合する。したがって、Ａ８２５処理によるＢＲＤ４の分解がセレブロン依存的である場合、Ａ８２５とポマリドミドの組合せで処理された細胞はＡ８２５単独で処理された細胞と比較してＢＲＤ４分解の減少を示すはずである。
この研究ではＮＡＭＡＬＷＡ細胞とＲａｍｏｓ細胞を様々な濃度のＡ８２５のみ（１０ｎＭ、１００ｎＭ、および１０００ｎＭ）、ポマリドミドのみ（１０μＭ）、またはＡ８２５とポマリドミドの組合せで一晩にわたって処理した。処理後、細胞溶解液を収集し、ＢＲＤ４およびアクチンについてのイムノブロットにより分析した。
図４Ｅおよび４Ｆは１０ｎＭおよび１００ｎＭのＡ８２５で処理された細胞における完全なＢＲＤ４分解を示しており、一方で少量のＢＲＤ４が１０００ｎＭのＡ８２５で処理された細胞中に存在し、このことは図４Ａおよび４Ｂにおいて示されている結果と一致する。図４Ｅおよび４Ｆはポマリドミドのみで処理された細胞ではＢＲＤ４レベルが影響を受けなかったことも示しており、ポマリドミドはＢＲＤ４を分解の標的としないのでこのことは予期されていた。最後に、図４Ｅおよび４ＦはＡ８２５とポマリドミドの組合せで処理された細胞ではＢＲＤ４タンパク質レベルが分解から部分的にレスキューされたことを示している。
この研究の結果はＡ８２５によるＢＲＤ４の分解にセレブロンが介在することを確証している。
ｅ．プロテアソーム阻害剤はＡ８２５によるＢＲＤ４の分解を妨げる
セレブロンは、単独で、またはＥ２ユビキチン結合酵素と組み合わさって標的タンパク質上のリシンへのユビキチンの結合を引き起こし、後にその特定のタンパク質基質をプロテアソームによる分解の標的とするＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質である。プロテアソーム経路を介してＡ８２５によるＢＲＤ４の分解が生じることを確認するため、プロテアソーム阻害剤を含めて、および含まずにＡ８２５でＢＬ細胞株を処理した。
具体的には、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞をＡ８２５のみ（１０ｎＭおよび１００ｎＭ）、ＭＧ１３２のみ（５μＭ）、またはカルフィルゾミブのみ（５μＭ）、またはＡ８２５とＭＧ１３２またはカルフィルゾミブとの組合せで一晩にわたって処理した。処理後、細胞溶解液を収集し、ＢＲＤ４およびアクチンについてのイムノブロットにより分析した。
図４Ｇは１０ｎＭまたは１００ｎＭのどちらかのＡ８２５のみで処理された細胞においてＢＲＤ４が完全に分解されたことを示しており、それは図４Ａおよび４Ｂにおいて示されている結果と一致する。図４Ｅおよび４ＦはＭＧ１３２とカルフィルゾミブの両方が１０ｎＭまたは１００ｎＭのどちらかのＡ８２５によって誘導されるＢＲＤ４分解を完全に防止したことも示している。これらの結果はＡ８２５によるＢＲＤ４の分解がプロテアソームを介する通常のセレブロン経路に従って進行することを確証する。
ｅ．要約と考察
まとめると、上の実験（ａ）〜（ｆ）より得られたデータはセレブロン介在性およびプロテアソーム依存性機序における迅速で効率的なＢＲＤ４分解がＡ８２５により引き起こされることを示している。
この研究において観察されたＢＲＤ４分解プロファイルは図８において例示されている次の作用機序モデルを裏付けている。具体的に言うと、未処理細胞ではＢＲＤ４発現は阻害されておらず、通常の細胞制御下で機能する。しかしながら、低濃度のＡ８２５で細胞が処理されるとき、その分子の一端でＢＲＤ４に効果的に結合し、且つ、他方の末端でセレブロンに効果的に結合して「ＢＲＤ４−Ａ８２５−セレブロン」三量体複合体（図８Ａ）を形成するために充分なＡ８２５がそれらの細胞中に存在する。この「ＢＲＤ４−Ａ８２５−セレブロン」三量体複合体はそれらの細胞において効率的なＢＲＤ４分解を引き起こす。その三量体複合体は特定の濃度範囲内のＡ８２５で処理された細胞中で生じることができ、細胞内でのＢＲＤ４の完全な枯渇を引き起こすことができる（図８Ａ）。しかしながら、細胞が高濃度のＡ８２５で処理されるとき、最適な三量体形成を妨害する「ＢＲＤ４−Ａ８２５」二量体と「Ａ８２５−セレブロン」二量体が形成され、それによりＢＲＤ４分解があまり有効ではなくなる（図８Ｂ）。
３．Ａ８２５は低分子阻害剤よりも顕著で長く持続するｃ−ＭＹＣ抑制を引き起こす
上で考察したように、１００ｎＭ以上の低分子ＢＥＴドメイン阻害剤ＪＱ１およびＯＴＸ−１５での細胞の処理により下流タンパク質ｃ−Ｍｙｃの顕著であるが不完全な抑制が生じ、１０００ｎＭより上のそれらの濃度によりｃ−Ｍｙｃがさらに抑制されることはなかった。次の研究ではｃ−Ｍｙｃ発現に対するＡ８２５の下流効果を低分子阻害剤、ＪＱ１およびＯＴＸ１５と比較した。
ａ．Ａ８２５はＪＱ１およびＯＴＸ−１５よりも高い程度までｃ−Ｍｙｃを抑制する
この研究ではＡ８２５によるｃ−Ｍｙｃの抑制をＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較した。
具体的には、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞とＲａｍｏｓ細胞を様々な濃度のＡ８２５（１００ｎＭ、３００ｎＭ、および１０００ｎＭ）、またはＪＱ１（１００ｎＭ、３００ｎＭ、１０００ｎＭ、３０００ｎＭ、および１００００ｎＭ）、またはＯＴＸ１５（１００ｎＭ、３００ｎＭ、１０００ｎＭ、３０００ｎＭ、および１００００ｎＭ）で一晩にわたって処理した。処理後、細胞溶解液を収集し、ＢＲＤ４、ｃ−Ｍｙｃおよびアクチンについてのイムノブロットにより分析した。
図５Ａおよび５ＢはＪＱ１およびＯＴＸ−１５により両方のＢＬ細胞株において確固としたＢＲＤ４蓄積とｃ−Ｍｙｃの顕著であるが不完全な抑制が生じる（図３Ｇと一致）ことを示している。図５Ａおよび５Ｂは、Ａ８２５により両方のＢＬ細胞株においてＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較して著しいＢＲＤ４分解（図４Ａ〜４Ｇと一致）とｃ−Ｍｙｃのさらにより顕著な下方制御が生じたことも示している。特筆すべきことに、Ａ８２５はＪＱ１およびＯＴＸ−１５よりもずっと低い濃度のその化合物でずっとより高い程度までｃ−Ｍｙｃ発現を下方制御することができた。
ｂ．Ａ８２５はＪＱ１およびＯＴＸ−１５よりも長くｃ−Ｍｙｃ発現を抑制する
Ａ８２５、ＪＱ１、およびＯＴＸ−１５によるｃ−Ｍｙｃの抑制期間を比較するために次の研究を実施した。
具体的には、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞をＡ８２５（０．１μＭ）、ＪＱ１（１．０μＭ）およびＯＴＸ−１５（１．０μＭ）で２４時間にわたって処理し、その後に３回洗浄してそれらの化合物を除去した。細胞を新しい培地に再播種し、そしてどの化合物も含まずに０時間、２．０時間、４．０時間、６．０時間、および２４．０時間にわたって培養した。並行対照実験では阻害剤の代わりにＤＭＳＯを使用したことを除いて同じように細胞を処理した。溶解液を回収し、ＢＲＤ４、ｃ−Ｍｙｃ、およびアクチンについてのイムノブロットにより分析した。
図５ＣはＡ８２５によるＢＲＤ４に対する処理後効果（ＢＲＤ４分解）がＪＱ１およびＯＴＸ−１５による処理後効果（ＢＲＤ４蓄積）よりもずっと長く維持されることを示している。加えて、Ａ８２５によるｃ−Ｍｙｃに対する処理後下流抑制効果もＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較してＡ８２５によってずっと長く維持される。特に、その図はＡ８２５での処理から６時間後の細胞において検出可能なＢＲＤ４タンパク質が観察されなかったことも示している。
加えて、Ａ８２５での処理から２４時間後であってもウエスタンブロットにおいて少量のＢＲＤ４しか観察されず、それは対照試料において観察されたＢＲＤ４レベルのかなり下であった。対照的に、ＪＱ１およびＯＴＸ−１５によるＢＲＤ４の蓄積は長続きせず、これらの試料でのＢＲＤ４のタンパク質レベルは処理後約４時間以内に対照試料のレベルまで戻った。その図はＡ８２５での処理後２時間から６時間の間に低レベルのｃ−Ｍｙｃタンパク質しか検出されず、処理後２４時間であってもｃ−Ｍｙｃレベルが対照試料をかなり下回ったことも示している。対照的に、その図はＪＱ１およびＯＴＸ１５の除去後約４時間以内にｃ−Ｍｙｃタンパク質レベルが対照レベルまで回復することを示している。したがって、これらの結果はＡ８２５によるＢＲＤ４およびｃ−Ｍｙｃに対する処理後効果がＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較してより長い期間にわたって持続されることを示している。
ｃ．Ａ８２５はＪＱ１およびＯＴＸ−１５よりも長くｃ−Ｍｙｃ機能を抑制する
ｃ−Ｍｙｃタンパク質は多数の遺伝子の発現を活性化する転写因子であり、それらの遺伝子には、葉酸のトランスポーターであり、且つ、葉酸の細胞内濃度の調節に関与する膜タンパク質であるＳＬＣ１９Ａ１が含まれる。前述の実験において、Ａ８２５、ＪＱ１、およびＯＴＸ−１５によってｃ−Ｍｙｃ発現が抑制され、且つ、Ａ８２５による効果はＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較してより強くてより長く持続することが示された。Ａ８２５、ＪＱ１、およびＯＴＸ−１５がどのようにＢＲＤ４の下流にある経路とイベントに影響することができるのかさらに調査するため、各化合物で細胞を処理し、ＳＬＣ１９Ａ１遺伝子の発現を処理後の様々な時点で評価した。
具体的には、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞をＡ８２５（０．１μＭ）、ＪＱ１（１．０μＭ）およびＯＴＸ−１５（１．０μＭ）で２４時間にわたって処理し、その後に３回洗浄してそれらの化合物を除去した。細胞を新しい培地に再播種し、そしてどの阻害剤も含まずに０時間、６．０時間、および２４．０時間にわたって培養した。並行対照実験では阻害剤の代わりにＤＭＳＯを使用したことを除いて同じように細胞を処理した。各時点においてＲＮＡを溶解液より抽出し、ｃＤＮＡに逆転写し、そしてＳＬＣ１９Ａ１特異的プライマーを用いるＱＰＣＲにより定量した。ＧＡＰＤＨも内部対照としてＱＰＣＲにより定量した。
ｃ−Ｍｙｃタンパク質抑制についての結果（図５Ｃにおいて示される）と一致して、図５Ｄ〜５Ｆは、ＳＬＣ１９Ａ１遺伝子発現によって決定される場合、ＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較してより高い程度でより長く持続するｃ−Ｍｙｃ機能の抑制がＡ８２５処理により生じることを示している。特に、その図はＳＬＣ１９Ａ１遺伝子発現がＡ８２５により顕著に低下すること、および処理から２４時間後であってもＳＬＣ１９Ａ１遺伝子発現が対照試料と比較してかなり低下していることを示している。対照的に、その図はＳＬＣ１９Ａ１遺伝子発現がＪＱ１およびＯＴＸ−１５によって低下するが、６．０〜２４．０時間以内に対照処理レベルまで戻ることを示している。
４．Ａ８２５は低分子阻害剤と比較して優れた細胞増殖抑制を有する
ＢＬ細胞はＢＲＤ４阻害剤に対して感受性を有することが知られており、それらの阻害剤はｃ−Ｍｙｃシグナル伝達を抑制し、細胞増殖の阻害を誘導する(J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674)。Ａ８２５処理、ＪＱ１処理、およびＯＴＸ−１５処理の細胞増殖に対する効果を次の実験において評価した。
ａ．Ａ８２５はＪＱ１およびＯＴＸ−１５よりも高い程度まで細胞増殖を抑制する
この研究では様々なＢＬ細胞株の増殖をＡ８２５、ＪＱ１、およびＯＴＸ−１５での処理の後に評価した。
具体的には、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞株、Ｒａｍｏｓ細胞株、ＣＡ−４６細胞株、およびＤａｕｄｉ細胞株を９６ウェルプレート内に５０，０００細胞／１００μｌの割合で播種した。Ａ８２５（１００ｐＭ、３００ｐＭ、１ｎＭ、３ｎＭ、１０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ、１μＭ）、ＪＱ１およびＯＴＸ１５（１ｎＭ、３ｎＭ、１０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ、１μＭ、３μＭ；ＮＡＭＡＬＷＡについては図６Ａ〜６Ｄにおいて示されるようにＪＱ１およびＯＴＸ−１５を最大で１０ｕＭまで使用した）の濃度を上昇させてそれらの細胞を処理した。処理後、試料の相対的増殖を処理から７２時間後にＣＴＧアッセイによって決定した。
図６Ａ〜６Ｄは、検査した全てのＢＬ細胞株においてＪＱ１またはＯＴＸ１５と比較してより顕著な増殖抑制がＡ８２５処理により生じたこと、および著しくより低い濃度のその化合物を使用してこの効果が達成されたことを示している。興味深いことに、より高い濃度のＡ８２５で処理されたＲａｍｏｓ細胞株とＤａｕｄｉ細胞株の相対的増殖は０．０に近かった。
ｂ．Ａ８２５はＪＱ１およびＯＴＸ−１５よりも長く細胞増殖を抑制する
この研究ではＮＡＭＡＬＷＡ細胞における抗増殖効果の持続期間をＡ８２５、ＪＱ１、およびＯＴＸ−１５での処理とそれらの除去の後に評価した。
具体的には、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞をＡ８２５（０．１μＭ）、ＪＱ１（１．０μＭ）およびＯＴＸ１５（１．０μＭ）で２４時間にわたって処理し、その後に３回洗浄してそれらの化合物を除去した。細胞を新しい培地に再播種し、そしてどの化合物も含まずに０時間、２４．０時間、および４８．０時間にわたって培養した。並行対照実験では阻害剤の代わりにＤＭＳＯを使用したことを除いて同じように細胞を処理した。処理後、試料の相対的増殖をＣＴＧアッセイによって決定した。
図６Ｅは、Ａ８２５による増殖抑制効果がＪＱ１またはＯＴＸ１５のものと比較して処理後４８時間を超える期間にわたって持続されたことを示している。この結果は、ＢＲＤ４分解および下流シグナル伝達抑制（例えば、図５Ａ〜５Ｆ）に対する長期持続効果がＡ８２５により提供されるという上で考察した実験結果と一致する。
ｃ．ポマリドミドはＡ８２５によって引き起こされる抗増殖効果を減少させる
上で考察したように、図４Ｃの結果はＡ８２５処理の間にポマリドミドが存在すると、セレブロンへの結合についての競合阻害のため、ＢＲＤ４タンパク質レベルが分解から部分的にレスキューされることを示した。Ａ８２５による様々なＢＬ細胞株における抗増殖効果もポマリドミドによって妨害することができるか、または少なくとも減少させることができるか決定するために次の実験を実施した。
具体的には、ＮＡＭＡＬＷＡ細胞、ＣＡ−４６細胞、およびＤａｕｄｉ細胞をＡ８２５のみ（１０ｎＭまたは１００ｎＭ）で、またはポマリドミド（１．０μＭまたは１０．０μＭ）と組み合わせて７２時間にわたって処理した。並行対照実験では阻害剤の代わりにＤＭＳＯを使用したことを除いて同じように細胞を処理した。処理後、試料の相対的増殖をＣＴＧアッセイによって決定した。
１０ｎＭのＡ８２５のみで細胞を処理することによって対照細胞と比較して著しい増殖抑制が生じたが（図６Ｆ）、このことは図６Ａ〜６Ｅにおいて示されている結果と一致する。図６Ｆは１０ｎＭのＡ８２５のみでの処理によって対照細胞の増殖と比べて細胞増殖がＮＡＭＡＬＷＡ細胞とＣＡ−４６細胞において約４０％まで減少し、Ｄａｕｄｉ細胞において約６５％まで減少したことを示している。ポマリドミドは１０ｎＭのＡ８２５によって引き起こされる抗増殖効果を用量依存的に減少させた。特に、１０ｎＭのＡ８２５と組み合わせた１．０μＭポマリドミドでの処理は対照試料と比べて細胞増殖をあまり劇的に低下させなかった（ＮＡＭＡＬＷＡ細胞では約８０％、ＣＡ−４６細胞では約９０％、およびＤａｕｄｉ細胞では約９５％）。１０ｎＭのＡ８２５での処理時のポマリドミド濃度の１０．０μＭへの上昇によって、対照試料との関連で検査した全ての細胞株において抗増殖効果が抑止された。
１００ｎＭのＡ８２５のみで細胞を処理することによって検査した全ての細胞種の増殖が１０ｎＭのＡ８２５のみでの処理と比較してより高い程度まで抑制されたが（図６Ｇを図６Ｆと比較されたい）、このことは図６Ａ〜６６Ｅにおいて示されている結果と一致する。図６Ｇは１００ｎＭのＡ８２５のみでの処理によって対照細胞の増殖と比べて細胞増殖がＮＡＭＡＬＷＡ細胞とＤａｕｄｉ細胞において約２５％〜２７％まで減少し、Ｄａｕｄｉ細胞において約３３％まで減少したことを示している。ポマリドミドは１００ｎＭのＡ８２５によって引き起こされる抗増殖効果を用量依存的に減少させた。特に、１００ｎＭのＡ８２５と組み合わせた１．０μＭポマリドミドでの処理は対照試料と比べて細胞増殖をあまり劇的に低下させなかった（全ての細胞株において約５５％）。１００ｎＭのＡ８２５での処理時のポマリドミド濃度の１０．０μＭへの上昇によって抗増殖効果が全ての細胞株においてさらに減少した（対照試料と比べて全ての細胞株において約７０％〜約８０％の間）。
追加の対照としてＢＬ細胞をポマリドミドで処理してＡ８２５を含まないポマリドミドのみが細胞増殖に対する効果を有するか決定した。具体的には、ＢＬ細胞を様々な濃度のポマリドミドのみ（図６Ｈにおいて示されるように０．００１ｕＭ、０．００３ｕＭ、０．０１ｕＭ、０．０３μＭ、０．１μＭ、０．３μＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭ）で７２時間にわたって処理した。並行実験ではポマリドミドの代わりにＤＭＳＯを使用したことを除いて同じように細胞を処理した。処理後、ポマリドミドで処理した試料の相対的増殖をＣＴＧアッセイにより決定し、ＤＭＳＯ対照と比較した。
図６Ｈはポマリドミドのみで細胞を処理することによって著しい効果がこれらの細胞株の増殖に対して生じなかったことを示している。
５．Ａ８２５は低分子阻害剤と比較して優れたアポトーシス誘導を有する
ｃ−Ｍｙｃは、様々な腫瘍実体に応じた細胞周期、老化、増殖、およびアポトーシスを含む癌の多数の特徴に関わる多面的癌タンパク質である（M. Gabay, et al., Cold Spring Harb Perspect Med. (2014) 4:a014241）。これまでの実験は、低分子ＢＲＤ４阻害剤（ＪＱ１およびＯＴＸ−１５）ならびにＡ８２５での処理後の検査した全てのＢＬ株における増殖抑制に対する普遍的効果を示している。次の実験はＪＱ１、ＯＴＸ−１５、およびＡ８２５がどの程度ＢＬ細胞株においてアポトーシスを誘導することができるか評価する。
ａ．Ａ８２５はＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較してカスパーゼ活性をより顕著に増加させる
様々なＢＬ細胞株をＡＲＶ−８２５（０．１μＭ）、またはＪＱ１（１．０μＭ）、またはＯＴＸ０１５（１．０μＭ）、またはアポトーシス誘導の正の対照としてのピューロマイシン（１０ｍｇ／ｍｌ）で２４時間にわたって処理し、カスパーゼ３／７−Ｇｌｏｗアッセイによってカスパーゼ３／７活性を測定した。
図７Ａはカスパーゼ活性が検査したＢＬ細胞株と処理に使用した阻害剤の両方に応じて著しく変化することを示している。具体的には、１００ｎＭのＡ８２５でのＢＬ細胞の処理によってＪＱ１およびＯＴＸ−１５で処理されたＢＬ細胞と比較して統計学的に有意なカスパーゼ活性の増加が生じた。そのカスパーゼ活性の増加はＲａｍｏｓ細胞およびＣＡ−５６細胞と比較してＤａｕｄｉ細胞およびＮＡＭＡＬＷＡ細胞においてずっとより顕著であった。
我々はＡ８２５で全てのＢＬ細胞株を２４時間にわたって処理した後にカスパーゼ３／７活性の増加を観察したが、より高い用量のＪＱ１およびＯＴＸ１５では観察しなかった（図５Ａ）。
ｂ．Ａ８２５はＪＱ１およびＯＴＸ−１５と比較してＰＡＲＰ切断をより顕著に増加させる
ＡＲＶ−８２５（最大で１．０μＭ）、またはＪＱ１およびＯＴＸ０１５（最大で１０．０μＭ）の用量を増加させてＲａｍｏｓ細胞とＣＡ−４６細胞を４８時間にわたって処理した。溶解液を回収し、アクチンを負荷対照としてＰＡＲＰ切断についてイムノブロットにより分析した。
図７Ｂは、顕著なＰＡＲＰ切断によって明らかになっているようにＲａｍｏｓ細胞が０．１ｕＭのＡ８２５処理で４８時間までに著しいアポトーシスを示したことを示している。対照的に、著しくより高い用量の阻害剤ＪＱ１およびＯＴＸ１５が類似レベルのアポトーシスを対応する細胞株において誘発するために必要とされる。より高濃度のＪＱ１およびＯＴＸ−１５の必要性はこれらの阻害剤が非効率的なＢＲＤ４阻害および下流ｃ−Ｍｙｃ抑制を有していることに起因する可能性がある。
まとめると、これらの発見は、ＰＲＯＴＡＣ媒介性ＢＲＤ４分解は低分子阻害剤と比較してＢＬにおいてＢＲＤ４を標的とするより有効な戦略であることの強力な証拠を提供する。
６．要約と考察
ＢＬ細胞はＢＲＤ４阻害剤に対して感受性を有することが知られており、それらの阻害剤はｃ−Ｍｙｃシグナル伝達を抑制し、細胞増殖の阻害を誘導する(J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674)。近年、細胞内のＢＲＤ４を効果的に阻害する化合物の設計には著しい進歩があった。しかしながら、この最近の進歩にもかかわらず、顕著な機能的および臨床的利益を有するＢＲＤ４阻害剤は未だに開発されておらず、阻害剤処理時に観察された顕著なＢＲＤ４蓄積とおよび阻害剤が除去された後の処理後に観察される阻害の可逆性／一過性によってこれを部分的に説明することができる。
本実施例において実施された実験から、低分子ＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１およびＯＴＸ１５によって著しいＢＲＤ４タンパク質蓄積が検査した全てのＢＬ細胞株において生じることが示されている。両方の阻害剤によって下流ｃ−Ｍｙｃレベルが抑制されたが、その抑制は高濃度のそれらの化合物を必要とした。また、高濃度のこれらの阻害剤を用いてもｃ−Ｍｙｃの抑制は完全ではなかった。ＪＱ１およびＯＴＸ−１５について本実施例において観察された結果は一群の肺癌細胞株および前立腺癌細胞株において他者によって得られた結果と一致する（Shimamura, T., Chen, Z., Soucheray, M., Carretero, J., Kikuchi, E., Tchaicha, J.H., Gao, Y., Cheng, K.A., Cohoon, T.J., Qi, J., et al. (2013). データを示さず）。上で得られた結果は、ＢＲＤ４に結合する阻害剤の可逆性と共にＢＲＤ４の確固とした蓄積が低分子阻害剤による下流ｃ−Ｍｙｃの抑制における適度の効果と関連の限定的な増殖阻害の原因である可能性があることを示唆している。ＪＱ１およびＯＴＸ−１５のデータについての１つのあり得る説明は、ＢＲＤ４との阻害剤の結合によって立体構造が変化し、それによってその安定性が増大するか、または天然のその分解機構への接近可能性が損なわれるというものである。あるいは、ＢＲＤ４阻害剤はＢＲＤ４タンパク質レベルを調節するＢＲＤ４介在性ネガティブフィードバックループを抑制している可能性がある。それにもかかわらず、阻害剤結合の可逆性と共にＢＲＤ４レベルの顕著な上昇がＢＲＤ４阻害および下流ＭＹＣ抑制の非効率性の部分的な原因となる可能性がある。
前臨床研究と臨床研究の両方によってＢＲＤ４阻害剤の効果は大部分が細胞増殖抑制性の効果であり、アポトーシスは数種類の細胞株および第Ｉ期の患者に限定されたことが示されている。このことは、ＢＲＤ４阻害剤の臨床的に達成可能な濃度では将来の患者の潜在的な利益が著しく限定される可能性がある。
低分子阻害剤薬品開発の別の繰り返される現象は、耐性を媒介するか、またはアンタゴニストからアゴニストへの転換さえも行う標的タンパク質突然変異の出現である。例えば、エンザルタミドはアンドロゲン受容体を阻害することによる前立腺癌の治療に有効であるが、Ｆ８７６Ｌ突然変異を含むアンドロゲン受容体を有する腫瘍細胞ではそれはアゴニストになる。したがって、既存の、または治療誘導性のＡＲＦ８７６Ｌを含有する腫瘍を有する前立腺癌患者はエンザルタミド治療から利益を得ることがない。対照的に、ＰＲＯＴＡＣ媒介性標的分解はこれらの落とし穴を回避し、効率的なターゲティングの強力なストラテジーを提供する。
低分子ＢＲＤ４阻害剤の限界を回避するため、ＰＲＯＴＡＣテクノロジーを介して低分子ＢＲＤ４結合部分をＥ３リガーゼセレブロン結合部分に接続することによりキメラ分子であるＡ８２５を設計した。
上の実験はＡ８２５がＥ３リガーゼセレブロンをＢＲＤ４まで能動的に動員し、それによってＢＲＤ４をプロテアソーム分解機構に導くことで迅速で効率的なＢＲＤ４分解を誘導することを示している。これらの結果はＡ８２５が低分子ＢＲＤ４阻害剤と比較してより顕著な下流ｃ−Ｍｙｃ発現および機能の抑制、細胞増殖の抑制、およびアポトーシス誘導を引き起こすことも示している。
阻害剤に対して改善されたＢＲＤ４分解因子の機能的効果は部分的にはＢＬにおける促進性癌タンパク質であるｃ−ＭＹＣに対するより完全で持続的な抑制に帰するところがあると考えられる。ＢＲＤ４は、特定および解明されずに残っている多数の結合パートナーを含む大型のタンパク質であるので「シャペロン」機能を有する可能性もある。当然のことながら、ＢＲＤ４の除去はアセチル−リシン含有パートナーへのその結合の阻害どころではない顕著な効果を誘発することになる。阻害剤によるＢＲＤ４阻害の表現型と（ＣＲＩＳＰＲおよびｓｈＲＮＡなどによる）ＢＲＤ４ノックアウトまたはノックダウンの表現型の比較がこの質問に答えることになるが、しかしながらそれはこの研究の範囲外である。
ＯＴＸ１５およびポマリドミドのそれぞれの標的であるＢＲＤ４およびセレブロンへの結合親和性はそれぞれ約１０ｎＭおよび約３ｕＭである。Ａ８２５はこれらの２種類のリガンドに基づいており、１ｎＭより下のＤＣ５０をＢＲＤ４について達成している。このことは、ＢＲＤ４ ＰＲＯＴＡＣが触媒的特徴を有しており、準最適な親和性を有し、機能が知られていない標的リガンドから構成される機能的分解因子の開発に多大な機会を開くことを強力に示唆している。したがって、通常は天然のリガンド結合部位を有していない多数の「困難な」標的がＰＲＯＴＡＣ媒介性分解によって「新薬の開発につながる」可能性がある。
まとめると、本開示は、ＰＲＯＴＡＣテクノロジーを介した強力なＢＲＤ４分解因子を作製することによって効率的にＢＲＤ４を標的とする新しい戦略を提供する。また、それは、特定の病理的タンパク質を分解の標的とするために能動的にＥ３リガーゼを動員し、そうして従来の低分子アプローチによって「困難な」多数の標的を「新薬の開発につながる」ようにする新しいクラスの薬品分子の地平を切り開く。
７．産業上の利用可能性
ＰＲＯＴＡＣテクノロジーを介してＢＲＤ４動員部分とＥ３リガーゼセレブロン動員部分を含有する新規二官能性分子が説明されている。Ａ８２５は能動的にＢＲＤ４を分解し、顕著で持続的な下流ＭＹＣ抑制および確固とした細胞増殖抑制とアポトーシス誘導をＢＬにおいて誘導する。Ａ８２５は、複数の癌における有望な標的として現れるＢＲＤ４を効率的に標的とするための新しいストラテジーである。Ａ８２５は、ＰＲＯＴＡＣ媒介性タンパク質分解が従来のアプローチによる「創薬が困難な」病理的タンパク質のターゲティングに有望なストラテジーを提供する一例である。
本願を通して引用された全ての参考文献、特許、係属中の特許出願、および公開特許の内容は参照により明示的に本明細書に援用される。
当業者は本明細書に記載される本発明の特定の実施形態との多数の等価物を単なる日常的な実験を用いて理解し、または確認することができる。そのような等価物は以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。本明細書に記載される詳細な例および実施形態は例示を目的とした例として提供されているだけであり、決して本発明を限定していると考えられてはならないことが理解される。それらの視点からの様々な改変または変更が当業者に提案され、それらは本願の主旨と範囲内に含まれ、そして添付されている特許請求の範囲の範囲内にあると考えられる。例えば、成分の相対的な量を所望の効果の最適化のために変更してよく、追加の成分を加えてよく、且つ／または記載の成分のうちの１つ以上について類似の成分で置換してよい。本発明の系、方法、および過程に付随する追加の有利な特徴および機能性は添付されている特許請求の範囲から明らかになる。また、当業者は本明細書に記載される本発明の特定の実施形態との多数の等価物を単なる日常的な実験を用いて理解し、または確認することができる。そのような等価物は以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
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Claims (8)

  1. 以下の
    ２−［（９Ｒ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチルー３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［４−（｛１−［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０−トリオキサ−１−アザドデカン−１２−イル｝オキシ）フェニル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−（４−｛５−［２−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝フェニル）エチル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−{２−［２−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−｛４−［２−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニル｝エチル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［２−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）エチル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−｛４−［５−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロポキシ）ピリミジン−２−イル］フェニル｝エチル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−｛４−［３−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）プロポキシ］フェニル｝エチル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−｛４−［２−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニル｝エチル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（４−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝ブチル）アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エチル）アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（５−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝ペンチル）アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロピル）アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（４−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝ブチル）アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−｛４−［２−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］−３−フルオロフェニル｝エチル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［４−（｛１−［２−（３−メチル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０−トリオキサ−１−アザドデカン−１２−イル｝オキシ）フェニル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［４−（｛１−［２−（１−メチル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０−トリオキサ−１−アザドデカン−１２−イル｝オキシ）フェニル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−［３−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロポキシ）フェニル］エチル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（３Ｓ）−１−｛４−［（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エチル）アミノ］ベンゾイル｝ピロリジン−３−イル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［２−（２−｛［３−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロキナゾリン−５−イル］アミノ｝エトキシ）エチル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［３−（３−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝プロポキシ）プロピル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（３Ｓ）−１−［４−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）ベンゾイル］ピロリジン−３−イル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（４−{２−［２−（２−｛［３−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロキナゾリン−５−イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エトキシ｝フェニル）アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−（５−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝ペンチル）アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［３−（３−｛［３−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロキナゾリン−５−イル］アミノ｝プロポキシ）プロピル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（３Ｓ）−１−［４−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）ベンゾイル］ピロリジン−３−イル］アセトアミド、
    ２−［（９Ｓ）−７−（４−クロロフェニル）−４，５，１３−トリメチル−３−チア−１，８，１１，１２−テトラアザトリシクロ［８．３．０．０２，６］トリデカ−２（６），４，７，１０，１２−ペンタエン−９−イル］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−［３−（２−｛［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］アミノ｝エトキシ）フェニル］エチル］アセトアミド、
    ４−（４−｛［（５Ｚ）−３−｛１−［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１−アザペンタデカン−１５−イル｝−２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イリデン］メチル｝−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル、
    ４−（４−｛［（５Ｚ）−３−｛１−［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０−トリオキサ−１−アザドデカン−１２−イル｝−２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イリデン］メチル｝−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル、
    ４−（４−｛［（５Ｚ）−３−｛１−［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０，１３，１６−ペンタオキサ−１−アザオクタデカン−１８−イル｝−２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イリデン］メチル｝−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル、および
    ４−（４−｛［（５Ｚ）−３−｛１−［２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−４−イル］−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−１−アザヘンイコサン−２１−イル｝−２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イリデン］メチル｝−２−メトキシフェノキシ）−３−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリルからなる群であって、薬学的に許容可能なそれらの塩形態を含む前記群より選択される化合物。
  2. 請求項１に記載の化合物の有効量を含む組成物。
  3. 請求項１に記載の化合物の有効量と薬学的に許容可能な担体、添加物、および／または賦形剤を含む医薬組成物。
  4. 追加の生体活性剤をさらに含む請求項３に記載の医薬組成物。
  5. 前記追加の生体活性剤が抗癌剤である請求項４に記載の医薬組成物。
  6. 細胞中の標的タンパク質の分解を誘導するための方法であって、請求項１に記載の化合物の有効量を前記細胞に投与することを含み、前記化合物により前記標的タンパク質の分解が達成される前記方法。
  7. 必要とする患者への組成物の投与を含む方法であって、癌を治療するための前記方法に使用するための、請求項１に記載の化合物の有効量を含む組成物であって、前記患者における癌の少なくとも１つの症状の治療または緩和に有効であり、前記癌が、リンパ腫、前立腺癌、大腸癌、卵巣癌、乳癌及び多発性骨髄腫である前記組成物。
  8. 前記癌が、大腸癌または乳癌である、請求項７に記載の組成物。
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