JP2020518660A - Ｒａｆ分解性結合体化合物 - Google Patents

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Abstract

本開示は、特に、癌及び他のＲＡＦ関連疾患の治療に有用なＲＡＦ分解性結合体化合物を提供する。また、ＲＡＦ分解性結合体化合物を含む医薬組成物、治療方法、及びキットも提供される。

Description

関連出願への相互参照
本出願は、２０１７年４月２８日出願の米国仮特許出願第６２／４９１，９２５号及び２０１７年１１月３日出願の米国仮特許出願第６２／５８１，４６４号に対して、３５ ＵＳＣ §１１９（ｅ）に基づく優先権の利益を主張する。これらのそれぞれの開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
連邦政府による資金提供を受けた研究開発のもとでなされた発明に対する権利に関する声明
該当なし。
コンパクトディスクで提出された「配列表」、表、又はコンピュータープログラムリスト添付書類の参照
該当なし。
発明の背景
ＫＲＡＳは、標準的なＭＡＰＫシグナル伝達経路の重要な構成要素であり、すべてのヒトの癌で最も頻繁に変異している癌遺伝子である。ＫＲＡＳを直接標的とする承認された治療法はなく、これらの癌の治療は依然として大きな満たされていない医学的ニーズである。ＫＲＡＳは、小分子の結合に適した既知の結合ポケットと、その天然の基質であるＧＴＰに対するｐＭ親和性とが欠如しているため、薬剤化が困難である。また、ＭＡＰＫ経路の他の構成要素で突然変異が発生することが多く、これが癌やＲＡＳ病（RASopathies）として知られる他のＲＡＳ関連疾患につながる。
ＲＡＡＦ、ＢＲＡＦ、及びＣＲＡＦを含むキナーゼのＲＡＦファミリーは、癌細胞中で下流の腫瘍形成シグナルを伝播するすぐ下流のＫＲＡＳエフェクターである。ＫＲＡＳ駆動腫瘍に対するＲＡＦ阻害剤の開発が試みられたが、それらの化合物は、ＲＡＦホモダイマー及びヘテロダイマーのアロステリック活性化により、ＲＡＦキナーゼの逆説的な活性化を引き起こすことが発見された。従って、非活性化ＲＡＦ阻害剤の開発は、異常なＭＡＰＫシグナル伝達をブロックする魅力的な戦略である。
この標的への関心にもかかわらず、ＭＡＰＫシグナル伝達を効果的に不活性化又は排除するＲＡＦの強力かつ特異的な阻害剤に対する技術的必要性が当該分野にいまだに残っている。本開示はこの必要性に対処し、関連する利点も提供する。
発明の簡単な概要
本明細書では、リンカー成分を介して分解認識物質に共有結合したＲＡＦのリガンドを含むＲＡＦ分解性結合体化合物（RAF-Degrading Conjugate Compound）が提供される。
さらに他の態様において、記載されるＲＡＦ分解性結合体化合物を使用する、疾患を治療するための医薬組成物、方法、及びキットが提供される。
化合物２．００３（白丸）、化合物２．００１（白三角）、化合物２．００２（白四角）、及び化合物２．００４（白逆三角）について、化合物とタンパク質の比率を変えて測定された相対的なＢＲＡＦ＋ＶＨＬダイマー化を示す。 化合物２．０１４（白菱形）、化合物２．０１６（「ｘ」）、化合物２．０１５（白逆三角）、化合物２．０１２（白丸）、化合物２．０２１（白四角）、及び化合物１．００９（白三角）について、化合物とタンパク質の比率を変えて測定された相対的ＢＲＡＦ＋ＣＲＢＮダイマー化を示す。 １．５μＭの化合物２．００４の添加後の、Ｃａｌｕ６細胞中の経時的なＣＲＡＦ分解を示す。ｙ軸の値は、蛍光／コンフルエンスの尺度として表示される。データ分析のさらなる情報については、実施例１０２を参照されたい。 ３μＭの化合物２．０１２の添加後の、Ｃａｌｕ６細胞中の経時的なＣＲＡＦ分解を示す。ｙ軸の値は、蛍光／コンフルエンスの尺度として表示される。データ分析のさらなる情報については、実施例１０２を参照されたい。 １μＭの化合物２．００２の添加後の、Ｃａｌｕ６細胞中の経時的なＣＲＡＦ分解を示す。ｙ軸の値は、蛍光／コンフルエンスの尺度として表示される。データ分析のさらなる情報については、実施例１０２を参照されたい。 １５μＭの化合物２．０２１の添加後の、Ｃａｌｕ６細胞中の経時的なＣＲＡＦ分解を示す。ｙ軸の値は、蛍光／コンフルエンスの尺度として表示される。データ分析のさらなる情報については、実施例１０２を参照されたい。 １２．５μＭの化合物２．０１４の添加後の、Ｃａｌｕ６細胞中の経時的なＣＲＡＦ分解を示す。ｙ軸の値は、蛍光／コンフルエンスの尺度として表示される。データ分析のさらなる情報については、実施例１０２を参照されたい。 ３μＭの化合物１．００９の添加後の、Ｃａｌｕ６細胞中の経時的なＣＲＡＦ分解を示す。ｙ軸の値は、蛍光／コンフルエンスの尺度として表示される。データ分析のさらなる情報については、実施例１０２を参照されたい。 ３μＭの化合物２．００１の添加後の、Ｃａｌｕ６細胞中の経時的なＣＲＡＦ分解を示す。ｙ軸の値は、蛍光／コンフルエンスの尺度として表示される。データ分析のさらなる情報については、実施例１０２を参照されたい。 ２μＭの化合物２．０１５の添加後の、Ｃａｌｕ６細胞中の経時的なＣＲＡＦ分解を示す。ｙ軸の値は、蛍光／コンフルエンスの尺度として表示される。データ分析のさらなる情報については、実施例１０２を参照されたい。 ５μＭの化合物２．０１６の添加後の、Ｃａｌｕ６細胞中の経時的なＣＲＡＦ分解を示す。ｙ軸の値は、蛍光／コンフルエンスの尺度として表示される。データ分析のさらなる情報については、実施例１０２を参照されたい。 様々な濃度の、化合物２．００３（白丸）、化合物２．０１０（白四角）、及びＲＡＦ７０９（白三角）について測定された相対的なＢＲＡＦ＋ＶＨＬダイマー化を示す。化合物２．０１０は化合物２．００３のジアステレオマーである。変化した立体構造はＶＨＬリガンドを不活性化し、従ってＶＨＬに結合しなくなる。このデータは、ＶＨＬ結合活性の除去がダイマー化を排除することを示す。 １．６７μＭの化合物２．００３の添加後の、Ｃａｌｕ６細胞中の経時的なＣＲＡＦ分解を示す。ｙ軸の値は、蛍光／コンフルエンスの尺度として表示される。データ分析のさらなる情報については、実施例１０２を参照されたい。 １．６７μＭの化合物２．０１０の添加後の、Ｃａｌｕ６細胞中で経時的なＣＲＡＦ分解がないことを示す。化合物２．０１０は、化合物２．００３のジアステレオマーである。変化した立体構造はＶＨＬリガンドを不活性化し、従ってＶＨＬに結合しなくなる。ｙ軸の値は、蛍光／コンフルエンスの尺度として表示される。データ分析のさらなる情報については、実施例１０２を参照されたい。
発明の詳細な説明
Ｉ．はじめに
本開示は、特に、癌及び他のＲＡＦ関連疾患の治療に有用なＲＡＦ分解性結合体化合物を提供する。特定の理論に拘束されるつもりは無いが、ここに記載されている結合体は、細胞内のＲＡＦタンパク質の相対量を低下させることにより、癌及び他のＲＡＦ関連疾患を治療するのに有用であると考えられる。
いくつかの実施態様において本開示の結合体化合物は、Ｅ３ユビキチンリガーゼの動員を介する破壊のためにＲＡＦを標的とし、こうしてユビキチン化及びプロテアソーム分解を引き起こす。
定義
特に他に言及しない場合、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。さらに、本明細書に記載の方法又は材料と類似又は同等の任意の方法又は材料を、本発明の実施に使用することができる。本発明の目的のために、以下の用語が定義される。
「アルキル」という用語は、それ自体又は別の置換基の一部として、特に明記しない限り、指定された数の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖炭化水素基を意味する（すなわち、Ｃ１−８は１〜８個の炭素を意味する）。アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルなどが含まれる。
本明細書で使用される用語「ａ」、「ａｎ」、又は「ｔｈｅ」は、１つのメンバーの態様を含むだけでなく、２つ以上のメンバーの態様も含む。例えば、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、文脈から特に他に明記されない限り、複数の指示物が含まれる。従って、例えば「細胞」への言及には複数のそのような細胞が含まれ、「物質（agent）」への言及は、当業者に公知の１つ以上の物質への言及、などが含まれる。
用語「被験体」、「患者」、又は「個体」は、本明細書では、ヒト又は動物を含むように同義で使用される。例えば動物被験体は、哺乳動物、霊長類（例えば、サル）、家畜動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、又はヤギ）、ペット動物（例えば、犬、猫）、実験動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、トリ）、獣医学的に重要な動物、又は経済的に重要な動物であり得る。
本明細書で使用される用語「選択的ＣＲＡＦ阻害剤」は、ＲＡＦファミリーの他のメンバー（ＡＲＡＦ及びＢＲＡＦを含む）よりも、ＣＲＡＦに優先的に結合するＣＲＡＦ阻害剤を示す。選択的ＣＲＡＦ阻害剤は、ＡＲＡＦ又はＢＲＡＦへの結合と比較して、ＣＲＡＦを結合する場合、少なくとも５倍、１０倍、２０倍、５０倍、又は１００倍低いＩＣ５０値を有する。本明細書に記載のこの倍率差は、結合成分に共有結合していない場合、又はＲＡＦ分解性結合体化合物の一部である場合の阻害剤化合物に関するものである。
ＩＩ．実施態様の説明
Ａ．ＲＡＦ分解性結合体化合物
特定の態様において本開示は、リンカー成分を介して分解シグナル伝達物質（Degradation SIgnaling Agent）に共有結合したＲＡＦのリガンドを含むＲＡＦ分解性結合体化合物を提供する。
１．ＲＡＦのリガンド
ＲＡＦのリガンドは、ＲＡＦタンパク質に効果的に結合する任意の化合物である。従ってＲＡＦのリガンドには、特に限定されるものではないが、ソラフェニブ（sorafenib）、Ｈａｈ １０ｄ、ＰＦ−０４８８０５９４、ＬＹ３００９１２０、ＰＬＸ４７２０、ＲＡＦ７０９、ベムラフェニブ（Vemurafenib）、ＭＬＮ２４８０、及びＬＨＸ２５４の修飾物が含まれる。表１に示される化合物の選択位置は、リンカー成分との共有結合に対応するが、ＲＡＦのリガンドの標的結合を妨害しないように修飾され得る。リンカー成分に共有結合している場合、ＲＡＦのリガンドはその標的に対して十分な親和性を維持する。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦのリガンドは選択的ＣＲＡＦ阻害剤である。選択的ＣＲＡＦ阻害剤は、ソラフェニブ及びＨａｈ ｅｔ ａｌ．１０ｄを含む。
いくつかの実施態様において、選択的ＣＲＡＦ阻害剤は、同じ条件下で測定した場合、ＢＲＡＦ ＩＣ５０値よりも少なくとも５倍、１０倍、２０倍、５０倍、又は１００倍低いＣＲＡＦ ＩＣ５０値を有する化合物である。いくつかの実施態様において、選択的ＣＲＡＦ阻害剤は、同じ条件下で測定した場合、ＡＲＡＦ ＩＣ５０値より少なくとも５倍、１０倍、２０倍、５０倍、又は１００倍低いＣＲＡＦ ＩＣ５０値を有する化合物である。いくつかの実施態様において、選択的ＣＲＡＦ阻害剤は、同じ条件下で測定した場合に、ＢＲＡＦ ＩＣ５０値よりも少なくとも１０倍低いＣＲＡＦ ＩＣ５０値を有する化合物である。いくつかの実施態様において、選択的ＣＲＡＦ阻害剤は、同じ条件下で測定した場合、ＡＲＡＦ ＩＣ５０値よりも少なくとも１０倍低いＣＲＡＦ ＩＣ５０値を有する化合物である。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦのリガンドは選択的Ｂ／Ｃ ＲＡＦ阻害剤である。選択的Ｂ／Ｃ ＲＡＦ阻害剤はＲＡＦ７０９を含む。いくつかの実施態様において、選択的Ｂ／Ｃ ＲＡＦ阻害剤は以下に示す式
［式中、ＸはＮ又はＣＨである］。上述したように、上記の式の選択位置は、リンカー成分との共有結合に対応するが、ＲＡＦのリガンドの標的結合を妨害しないように修飾され得る。例えば、いくつかの実施態様においてＢ／Ｃ ＲＡＦ阻害剤は、以下に示されるようにリンカー成分
（式中、ＸはＮ又はＣＨであり、波線はリンカー成分の結合部位を示す）との共有結合に適応するように修飾される。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ７０９は、以下に示されるようにリンカー成分
（式中、ＸはＮ又はＣＨであり、波線はリンカー成分の結合部位を示す）との共有結合に適応するように修飾される。
いくつかの実施態様において、ＬＸＨ２５４は、以下に示されるようにリンカー成分
（式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す）との共有結合に適応するように修飾される。
いくつかの実施態様において、ソラフェニブは、以下に示されるようにリンカー成分
（式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す）との共有結合に適応するように修飾される。
いくつかの実施態様において、ＬＹ３００９１２０は、以下に示されるようにリンカー成分
（式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す）との共有結合に適応するように修飾される。
いくつかの実施態様において、ＬＹ３００９１２０は、以下に示されるようにリンカー成分
（式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す）との共有結合に適応するように修飾される。
いくつかの実施態様において、ＭＬＮ２４８０は、以下に示されるようにリンカー成分
（式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す）との共有結合に適応するように修飾される。
いくつかの実施態様において、ＰＦ−０４８８０５９４は、以下に示されるようにリンカー成分
（式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す）との共有結合に適応するように修飾される。
いくつかの実施態様において、ＰＦ−０４８８０５９４は、以下に示されるようにリンカー成分
（式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す）との共有結合に適応するように修飾される。
いくつかの実施態様において、ＰＦ−０４８８０５９４は、以下に示されるようにリンカー成分
（式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す）との共有結合に適応するように修飾される。
ＲＡＦ分解性結合体化合物の調製
ＲＡＦ分解性結合体化合物を調製する場合、ＲＡＦのリガンドは、ＲＡＦのリガンドとリンカー成分との間に適切なリンカー化学を提供するように修飾され得る。適切なリンカー化学には、特に限定されるものではないが、求核置換、アミド形成、及びクリック化学が含まれる。従っていくつかの実施態様において、ＲＡＦのリガンドは、リンカー成分とＲＡＦのリガンドとの間の結合を促進する官能基を含むように修飾される。結合を促進する官能基には、特に限定されるものではないが、ハロゲン、アミン、ヒドロキシル、カルボン酸、エステル、アルキン、及びアジドが含まれる。ＲＡＦに対する修飾リガンドに含まれる官能基は、それが反応するリンカー成分の反応性基の特性に依存することが理解される。本明細書で提供される開示に基づいて、当業者は望ましい官能基を適切に選択することができる。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦのリガンドの作製は、既存のリガンドの合成前駆体を使用することを含む。例えば、ソラフェニブの合成前駆体には、ピリジンの２位に末端カルボン酸部分を含む（ソラフェニブ酸）。ソラフェニブは、この位置に末端Ｎ−メチルを有する。いくつかの実施態様において、ソラフェニブの合成前駆体であるソラフェニブ酸（sorafenib acid）は、リンカー成分との適切なリンカー化学を提供する。非限定的な例として、ソラフェニブの合成前駆体（ソラフェニブ酸）は、アミン又はヒドロキシルなどのリンカー化合物の反応性基と反応して、本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物を生成することができる。本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物で使用される合成前駆体は、目的の標的に対して十分な親和性を維持する。本明細書で提供される開示に基づいて、当業者は、リンカー成分との共有結合を促進するが、その標的に対して十分な親和性を維持する、ＲＡＦに対する上記リガンドの合成前駆体を容易に調製することができるであろう。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦのリガンドの作製は、ＲＡＦのリガンドに官能基を付加することを含む。いくつかの実施態様において官能基は、ＲＡＦのリガンドの芳香環に付加される。いくつかの実施態様において官能基は、ＲＡＦのリガンドのアルキル部分に付加される。ＲＡＦのリガンドに官能基が付加されると、ＲＡＦのリガンドはその標的に対して十分な親和性を維持する。
いくつかの実施態様において、ソラフェニブは以下に示されるように修飾されて、リンカー成分との適切なリンカー化学に適応し、ここでＺはリンカー成分の残りである
いくつかの実施態様において、Ｈａｈ ｅｔ ａｌ． １０ｄは以下に示されるように修飾されて、リンカー成分との適切なリンカー化学に適応し、ここでＺはリンカー成分の残りの部分である
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ７０９は以下に示されるように修飾されて、リンカー成分との適切なリンカー化学に適応し、ここでＺはリンカー成分の残りである
いくつかの実施態様において、以下に示す式の選択的Ｂ／Ｃ ＲＡＦ阻害剤は修飾されて、リンカー成分との適切なリンカー化学に適応し、ここでＺはリンカー成分の残りの部分であり、ＸはＮ又はＣＨである
２．分解シグナル伝達物質
本開示の分解シグナル伝達物質は、標的化ＲＡＦタンパク質の分解を誘導する化合物又はペプチドを含む。一般的に分解シグナル伝達物質は、１つ以上の分解タンパク質に結合するか又はこれを補充することによりＲＡＦを分解する。分解タンパク質は通常、プロテアソーム、ユビキチン−プロテアソーム経路、又はリソソームタンパク質分解に関連している。従って分解シグナル伝達物質は、特に限定されるものではないが、Ｅ３リガーゼ認識物質、疎水性タグ付け物質、プロテアソーム認識物質、及びリソソーム認識ペプチドを含む。
いくつかの実施態様において、分解シグナル伝達物質は、分解タンパク質又は分解タンパク質複合体の成分に結合する。いくつかの実施態様において、結合した分解シグナル伝達物質は、分解タンパク質又は分解タンパク質複合体を活性化する。いくつかの実施態様において、結合した分解シグナル伝達物質は、分解タンパク質又は分解タンパク質複合体の活性を大きくは変化させない。
いくつかの実施態様において、分解タンパク質又は分解タンパク質複合体は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ又はＥ３ユビキチンリガーゼ複合体である。いくつかの実施態様において、標的とするＥ３ユビキチンリガーゼ又はＥ３ユビキチンリガーゼ複合体の成分は、ＭＤＭ２、ｃＩＡＰ１、ＶＨＬタンパク質、ＣＢＲＮ、又はＳＣＦβ−ＴＲＣＰである。
いくつかの実施態様において、分解シグナル伝達物質は、ＲＡＦタンパク質に結合又は会合してＲＡＦタンパク質の折り畳みミスを引き起こすことにより、分解タンパク質又は分解タンパク質複合体を補充する。いくつかの態様において、分解シグナル伝達物質は、ＲＡＦタンパク質を折り畳みミスすることなく、分解タンパク質又は分解タンパク質複合体を補充する。
いくつかの実施態様において、分解タンパク質又は分解タンパク質複合体はプロテアソームである。いくつかの実施態様において、分解タンパク質又は分解タンパク質複合体はシャペロンタンパク質である。いくつかの実施態様において、シャペロンタンパク質はｈｓｃ７０である。
ｉ）Ｅ３リガーゼ認識物質
Ｅ３リガーゼ認識物質は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ又はＥ３ユビキチンリガーゼ複合体に効果的に結合する任意の化合物又はペプチドである。いくつかの実施態様において、Ｅ３リガーゼ認識物質はＥ３ユビキチンリガーゼリガンドである。いくつかの実施態様において、Ｅ３ユビキチンリガーゼリガンドは、ポマリドミド（pomaridomide）の修飾体、ナトリン−３、ＶＨＬリガンド、メチルベスタチン、ＶＨＬ結合ペプチド、又はＳＣＦβ−ＴＲＣＰ標的化ペプチドである。いくつかの実施態様において、ＶＨＬ結合ペプチドは、ＨＩＦ−１α−ＶＨＬ結合ペプチド又はヒドロキシプロリン−ＨＩＦ−１α−ＶＨＬ結合ペプチドである。表２に示す化合物の選択位置は、リンカー成分との共有結合に適応するように修飾することができ、Ｅ３リガーゼ認識物質の標的結合を妨害しない。リンカー成分に共有結合すると、Ｅ３リガーゼ認識物質はその標的に対して十分な親和性を維持する。
特定の理論に拘束されるつもりは無いが、ＲＡＦタンパク質とＥ３ユビキチンリガーゼ又はＥ３ユビキチンリガーゼ複合体を近接させると、ＲＡＦ分解の速度が上昇すると考えられる。
最後の３つのエントリーの文字（ペプチド配列）はアミノ酸を表す。
いくつかの実施態様において、ポマリドミドは、以下に示されるようにリンカー成分との共有結合に適応するように修飾される
［式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、ポマリドミドは、以下に示されるようにリンカー成分との共有結合に適応するように修飾される
［式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、ＶＨＬリガンドは、以下に示されるようにリンカー成分との共有結合に適応するように修飾される
［式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、ＶＨＬリガンドは、以下に示されるように 、リンカー成分との共有結合に適応するように修飾される
［式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す］。
ｉｉ）疎水性タグ付け物質
疎水性タグ付けは、疎水性タグ付け物質をタンパク質と接触させることにより、タンパク質の折り畳みを操作して折り畳みミスを引き起こすプロセスである。折り畳みミスが起きたタンパク質は細胞によって認識され、選択的に分解の標的となる。疎水性タグ付け物質が本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物に組み込まれる場合、ＲＡＦのリガンドは、疎水性タグ付け物質を標的ＲＡＦに近接させ、ＲＡＦ−疎水性タグ付け物質の相対濃度を増加させる。特定の理論に拘束されるつもりは無いが、折り畳みミスが起きたタンパク質−疎水性タグ付け物質複合体は、分解のためにタンパク質を標的とする分子シャペロンによって認識されると考えられる。
いくつかの実施態様において、疎水性タグ付け物質は一般に、タンパク質の疎水性表面と会合する小分子である。一般に疎水性タグ付け物質は、１つ以上のアルキル部分及び／又は１つ以上のポリエチレングリコール単位、アミド基、及び任意の末端アダマンタン基を含む。いくつかの実施態様において、疎水性タグ付け物質はＨｙＴ３６又はＨｙＴ１３であり、その構造を以下の表３に示す。表３に示される化合物の選択位置は、リンカー成分との共有結合に適応し、疎水性タグ付け物質の標的結合を妨害しないように修飾することができる。リンカー成分に共有結合している場合、疎水性タグ付け物質はその標的に対して十分な親和性を維持する。
適切な疎水性タグ付け物質には、米国特許出願公開第２０１４／０３０２５２３号に記載されているものが含まれ、その内容は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
ｉｉｉ）プロテアソーム認識物質
いくつかの実施態様において、分解シグナル伝達物質はプロテアソーム認識物質である。プロテアソーム認識物質は、プロテアソームに結合又はこれを補充する化合物である。プロテアソーム認識物質が本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物に含まれる場合、それらは標的タンパク質をプロテアソームに局在化させる。特定の理論に拘束されるつもりは無いが、プロテアソーム認識物質は、直接的なプロテアソームの補充を介して標的タンパク質の分解を誘発し、ユビキチン化ステップを含まないと考えられる。
いくつかの実施態様において、プロテアソーム認識物質はＢｏｃ３アルギニンである。
ｉｖ）リソソーム認識ペプチド
リソソーム認識ペプチドは、標的化リソソーム分解のためのシグナル伝達モチーフを含むペプチドである。特定の理論に拘束されるつもりは無いが、リソソーム認識ペプチドは、本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物に組み込まれると、シャペロン媒介オートファジーを介する分解のために標的化ＲＡＦタンパク質にマークをすると考えられる。
いくつかの実施態様において、リソソーム認識ペプチドは、アミノ酸モチーフＫＦＥＲＱ（各文字はアミノ酸である）を含む。いくつかの実施態様において、リソソーム認識ペプチドは表４に示される配列である。
ｖ）ＲＡＦ分解性結合体化合物の調製
ＲＡＦ分解性結合体化合物を調製する場合、分解シグナル伝達物質は、分解シグナル伝達物質とリンカー成分との間に適切なリンカー化学を提供するように修飾され得る。セクションＡで前述したように、適切なリンカー化学には、特に限定されるものではないが、求核置換、アミド形成、クリック化学（click chemistry）が含まれる。従って、いくつかの実施態様において分解シグナル伝達物質は、リンカー成分と分解シグナル伝達物質との間の結合を促進する官能基を含むように修飾される。結合を促進する官能基には、特に限定されるものではないが、ハロゲン、アミン、ヒドロキシル、カルボン酸、エステル、アルキン、及びアジドが含まれる。修飾された分解シグナル伝達物質に含まれる官能基は、それが反応するリンカー成分の反応性基の特性に依存することが理解される。本明細書で提供される開示に基づいて、当業者は望ましい官能基を適切に選択することができる。
いくつかの実施態様において、分解シグナル伝達物質の作製は、合成前駆体を使用することを含む。例えば、ポマリドミドの合成前駆体は、イソインドリン環の４位にフルオロ置換基を含む（フルオロポマリドミド）。ポマリドミドはこの位置にアミン基を持っている。いくつかの実施態様において、ポマリドミドの合成前駆体であるフルオロポマリドミドは、リンカー成分との適切なリンカー化学を提供する。非限定的な例として、ポマリドミドの合成前駆体（フルオロポマリドミド）は、アミン又はヒドロキシルなどのリンカー化合物の反応性基と反応して、本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物を形成することができる。本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物で使用される合成前駆体は、目的の標的への結合に対する親和性を実質的に維持する。本明細書で提供される開示に基づいて、当業者は、リンカー成分との共有結合を容易に促進し、その標的に対する十分な親和性を維持する上記分解シグナル伝達物質の合成前駆体を調製するための合成スキームを容易に考案することができるであろう。
いくつかの実施態様において、分解シグナル伝達物質の作製は、官能基を分解シグナル伝達物質に付加することを含む。いくつかの実施態様において、官能基は、分解シグナル伝達物質の芳香環に付加される。いくつかの実施態様において、官能基は分解シグナル伝達物質のアルキル部分に付加される。官能基が分解シグナル伝達物質に追加され、その後、分解シグナル伝達物質がリンカー成分又はＲＡＦ分解性結合体化合物に共有結合されると、分解シグナル伝達物質はその標的に対して十分な親和性を維持する。
いくつかの実施態様において、分解シグナル伝達物質がペプチドである場合、分解シグナル伝達物質は、ペプチド配列のＮ末端又はＣ末端でのアミド形成によりリンカー成分に共有結合される。例えば、ＨＩＦ−１α−ＶＨＬ結合ペプチドは、以下に示すようにリンカー成分に結合されることができ。ここで、Ｚはリンカー成分の残りの部分である
いくつかの実施態様において、分解シグナル伝達物質がペプチドである場合、分解シグナル伝達物質は、側鎖でライナー（Liner）成分に共有結合している。
いくつかの実施態様において、ナトリン−３（nutlin-3）は、以下に示されるようにリンカー成分との適切なリンカー化学に適応するように修飾され、ここでＺはリンカー成分の残りである
いくつかの実施態様において、メチルベスタチンは、以下に示されるようにリンカー成分との適切なリンカー化学に適応するように修飾され、ここでＺはリンカー成分の残りである
いくつかの実施態様において、ＨｙＴ１３又はＨｙＴ３６のクロロ置換基は求核置換反応で使用されて、以下に示されるようにリンカー成分と分解シグナル伝達物質を共有結合させ、ここでＺはリンカー成分の残りである
いくつかの実施態様において、分解シグナル伝達物質とリンカー成分との適切なリンカー化学は既に存在しており、分解シグナル伝達物質は修飾されない。
いくつかの実施態様において、Ｂｏｃ３アルギニンのカルボン酸は、リンカー成分と共有結合を形成するために使用され、ここでＺはリンカー成分の残りである
３．リンカー成分
本開示のリンカー成分は、以下の特徴を含む：（１）リンカー成分へのＲＡＦのリガンドの共有結合を促進する第１の反応性基；（２）リンカー成分への分解シグナル伝達物質の共有結合を促進する第２の反応性基；（３）第１の反応性基と第２の反応性基を連結する連結ユニット。
リンカー成分を用いてＲＡＦ分解性結合体化合物を作製する方法は以下で議論されるが、当業者は、様々な合成スキームが使用され得ることを容易に認識するであろう。例えば、いくつかの実施態様においてリンカー成分は、ＲＡＦのリガンド及び分解シグナル伝達物質に（同時に、又は合成に最も便利な順序で）共有結合される単一の合成前の分子実体である。いくつかの実施態様において、リンカー成分は、ＲＡＦのリガンド又は分解シグナル伝達物質に共有結合される別個の分子実体（リンカー成分のセグメント）から作製される。リンカー成分の各セグメントがＲＡＦのリガンド及び分解シグナル伝達物質のそれぞれに共有結合した後、追加の反応が実行されて、リンカー成分の２つのセグメントが共有結合されて、ＲＡＦ分解性結合体化合物が形成される。リンカー成分のセグメントが、ＲＡＦのリガンド又は分解シグナル伝達物質のそれぞれに事前に結合された後に共有結合される場合、リンカー成分の各セグメントは、リンカー成分の２つのセグメント間の共有結合を促進する追加の反応性基を有するであろう。
ＲＡＦのリガンド及び分解シグナル伝達物質への共有結合を促進する反応性基は、使用される特定のＲＡＦのリガンド及び分解シグナル伝達物質に依存するが、上述したように、適切な共有結合化学には、特に限定されるものではないが、求核置換、アミド形成、クリック化学が含まれる。例示的なリンカー化学は、以下の表５に示される。以下の表で、Ｒ１はＲＡＦのリガンド又は分解シグナル伝達物質であり、Ｒ２はリンカー成分の残りの部分である。当業者は、本開示の範囲から逸脱することなく、Ｒ１及びＲ２の官能基を切り替え得ることを認識するであろう。
いくつかの実施態様において、第１及び第２の反応性基は異なる官能基である。いくつかの実施態様において、第１及び第２の反応性基は同じ官能基である。
表５は、アミンとヨウ素による求核置換反応を示しているが、追加の求核物質及び脱離基を求核置換反応に使用できることが理解される。適切な求核物質には、特に限定されるものではないが、ヒドロキシル及びチオール基が含まれる。適切な脱離基には、特に限定されるものではないが、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＯＴｓが含まれる。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦのリガンド又は分解シグナル伝達物質は、リンカー成分への共有結合を容易に促進する反応性基を含む。いくつかの実施態様において、ＲＡＦのリガンド及び／又は分解シグナル伝達物質は、共有結合を容易に促進する適切な官能基を含むように修飾される。上述したように、いくつかの実施態様において、ソラフェニブ成分（ソラフェニブ酸）は、アミド形成を介してリンカー成分に共有結合する。これは、ソラフェニブ酸（ピリジン環の２位にカルボン酸を含む）をリンカー成分のアミン基と反応させることで達成される。本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物において、ＲＡＦのリガンド及び分解シグナル伝達物質へのリンカー成分の結合後、ＲＡＦのリガンド及び分解シグナル伝達物質の両方は、所望の作用を実行するためにそれらの標的に対して十分な親和性を維持する。
いくつかの実施態様において、上述したようにリンカー成分は、ＲＡＦのリガンド又は分解シグナル伝達物質に最初に共有結合される別個の分子実体から作製される。そのような実施態様において、リンカー成分の２つのセグメントは、各実体がＲＡＦのリガンド又は分解シグナル伝達物質のそれぞれに事前に付着された後に、共有結合される。分子実体の共有結合を促進する適切な官能基には、表５に示される例示的なリンカー化学及び上記で議論された基が含まれる。いくつかの実施態様において、リンカー成分の２つのセグメントは、アジド−アルキン環状付加を使用して共有結合される。いくつかの実施態様において、リンカー成分の２つのセグメントは、アミド形成化学を使用して共有結合される。
リンカー成分の連結単位は、一般に、アルキル基などの非反応性部分である。いくつかの実施態様において、アルキル基は１つ以上のエーテル結合を含む。いくつかの実施態様において、アルキル基は線状である。いくつかの実施態様において、アルキル基は分岐している。いくつかの実施態様において、第１の反応性基はアミン基であり、第２の反応性基はカルボン酸基である。いくつかの実施態様において、リンカー成分はトリアジンを含む。
いくつかの実施態様において、リンカー成分はポリエチレングリコールを含む。
いくつかの実施態様において、リンカー成分は、以下からなる群から選択される式を有する：
［式中、下付き文字ｍは１〜２４の整数であり、下付き文字ｎは１〜１４の整数であり、各下付き文字ｐは独立して０〜６の整数であり、下付き文字ｑは０〜８の整数であり、下付き文字ｖは１〜１０の整数であり、波線は、ＲＡＦのリガンドと分解シグナル伝達物質との結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、リンカー成分は以下の式を有する：
いくつかの実施態様において、リンカー成分は以下の式を有する：
いくつかの実施態様において、リンカー成分は以下からなる群から選択される式を有する：
［式中、各下付き文字ｐは独立して０〜６の整数であり、下付き文字ｑは０〜８の整数であり、下付き文字ｖは１〜１０の整数であり、波線はＲＡＦのリガンド及び分解シグナル伝達物質の結合部位を示す］。
上記のリンカー成分構造において、末端ヘテロ原子は、存在する場合、ＲＡＦに対する元々のリガンド又は分解シグナル伝達物質構造の一部であってもよく、又はヘテロ原子が、ＲＡＦのリガンド又は分解シグナル伝達物質のアルキル部分に付加されてもよい。当業者は、酸素に共有結合した酸素などの２つの後続のヘテロ原子が特に安定な化合物ではないことを認識するであろう。従って、リンカー成分に末端ヘテロ原子があり、ＲＡＦのリガンド又は分解シグナル伝達因子への共有結合の点がヘテロ原子である場合、単一のヘテロ原子のみが意図されていることが理解される。例えば、分解シグナル伝達物質は以下の構造：
（式中、波線はリンカー成分への結合点を示す）を有し、リンカー成分は以下の構造：
（式中、構造体の右側の波線は、分解シグナル伝達物質への結合点を示す）を有する。当業者は、アシルヒドラジン結合ではなくアミド結合が意図されていることを認識するであろう。
さらに、上記リンカー成分の構造は、末端２級アミン（すなわち、ＲＡＦのリガンド又は分解シグナル伝達物質、及びリンカー成分の残りに共有結合しているアミン基）を示す。いくつかの実施態様において、末端アミンは、ＲＡＦのリガンド又は分解シグナル伝達物質からのアミン基に応じて、３級アミンでもよい。例えば、修飾されたＰＦ−０４８８０５９４のピラゾール環のアミン基又は修飾されたＲＡＦ７０９のピペラジン環のアミン（下図参照）は、リンカー成分の構造に示される末端アミン基であり得る：
いくつかの実施態様において、下付き文字ｍは、１〜６、１〜８、１〜１０、１〜１２、１〜１４、１〜１６、１〜１８、１〜２０、又は１〜２４の整数である。いくつかの実施態様において、下付き文字ｍは１〜６である。いくつかの実施態様において、下付き文字ｍは１〜１２である。
いくつかの実施態様において、下付き文字ｎは１〜４、１〜６、１〜８、１〜１０、又は１〜１２の整数である。いくつかの実施態様において、下付き文字ｎは１〜６である。いくつかの実施態様において、下付き文字ｎは１〜１０である。
いくつかの実施態様において、下付き文字ｐは０〜２、０〜３、０〜４、又は０〜５の整数である。いくつかの実施態様において、下付き文字ｐは１である。いくつかの実施態様において、下付き文字ｐは０〜４である。
いくつかの実施態様において、下付き文字ｑは、０〜２、０〜４、０〜６、０〜８、０〜１０、又は０〜１２の整数である。いくつかの実施態様において、下付き文字ｑは０〜６である。いくつかの実施態様において、下付き文字ｑは１〜１０である。
いくつかの実施態様において、下付き文字ｖは１〜２、１〜４、１〜６、１〜８、１〜１０、又は１〜１２の整数である。いくつかの実施態様において、下付き文字ｖは１〜６である。いくつかの実施態様において、下付き文字ｖは１〜１０である。いくつかの実施態様において、下付き文字ｖは５である。
４．本開示の具体的な実施態様
以下に、具体的に企図される実施態様が提供される。提供される開示は、企図される実施態様を例示することを意図しており、包括的又は限定的なリストであることを意図していない。ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＲＡＦのリガンド、分解シグナル伝達物質、及びリンカー成分を共有結合させることにより生成される。各成分間の共有結合は、リンカー化学と、前のセクションで説明したＲＡＦのリガンド及び分解シグナル伝達物質の修飾を使用して、達成することができる。共有結合されたＲＡＦのリガンドと分解シグナル伝達物質は、所望の作用を実行するために、それらの標的に対して十分な結合親和性を維持する。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ソラフェニブであるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ａ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ソラフェニブであるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｂ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ソラフェニブであるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｃ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ソラフェニブであるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｄ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、Ｈａｈ １０ｄであるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ａ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、Ｈａｈ １０ｄであるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｂ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、Ｈａｈ １０ｄであるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｃ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、Ｈａｈ １０ｄであるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｄ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＰＦ−０４８８０５９４であるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ａ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＰＦ−０４８８０５９４であるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｂ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＰＦ−０４８８０５９４であるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｃ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＰＦ−０４８８０５９４であるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｄ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＬＹ３００９１２０であるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ａ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＬＹ３００９１２０であるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｂ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＬＹ３００９１２０であるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｃ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＬＹ３００９１２０であるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｄ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＰＬＸ４７２０であるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ａ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＰＬＸ４７２０であるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｂ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＰＬＸ４７２０であるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｃ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＰＬＸ４７２０であるＲＡＦのリガンド、ポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質、及び式（ｄ）のリンカー成分を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＲＡＦ７０９であるＲＡＦのリガンド、及びポマリドミドである分解シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＲＡＦ７０９であるＲＡＦのリガンド、及びＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ソラフェニブであるＲＡＦのリガンド、及びポマリドミドである分解シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ソラフェニブであるＲＡＦのリガンド、及びＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＬＹ３００９１２０であるＲＡＦのリガンド、及びポマリドミドである分解シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＬＹ３００９１２０であるＲＡＦのリガンド、及びＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＭＬＮ２４８０であるＲＡＦのリガンド、及びポマリドミドである分解シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＭＬＮ２４８０であるＲＡＦのリガンド、及びＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＰＦ−０４８８０５９４であるＲＡＦのリガンド、及びポマリドミドである分解シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＰＦ−０４８８０５９４であるＲＡＦのリガンド、及びＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＬＸＨ２５４であるＲＡＦのリガンド、及びポマリドミドである分解シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ＬＸＨ２５４であるＲＡＦのリガンド、及びＶＨＬリガンドである分解シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ７０９は、以下からなる群から選択される構造を有する：
［式中、各ＸはＮ又はＣＨであり、波線はリンカー成分の結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、ソラフェニブは以下の構造を有する：
［式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、ＬＹ３００９１２０は、以下からなる群から選択される構造を有する：
［式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、ＭＬＮ２４８００は以下の構造を有する：
［式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、ＰＦ−０４８８０５９４は以下からなる群から選択される構造を有する：
［式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、ＬＸＨ２５４は以下の構造を有する：
［式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、ポマリドミドは以下からなる群から選択される構造を有する：
［式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、ＶＨＬリガンドは以下からなる群から選択される構造を有する：
［式中、波線はリンカー成分の結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、リンカー成分は以下からなる群から選択される式を有する：
［式中、下付き文字ｐは０〜４であり、下付き文字ｑは０〜６であり、下付き文字ｖは１〜６であり、前記構造体の左側の波線はＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は分解シグナル伝達物質への結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、リンカー成分は以下からなる群から選択される式を有する：
［式中、下付き文字ｐは０〜４であり、下付き文字ｑは０〜６であり、下付き文字ｖは１〜６であり、前記構造体の左側の波線はＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は分解シグナル伝達物質への結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、リンカー成分は以下からなる群から選択される式を有する：
［式中、下付き文字ｐは０〜４であり、下付き文字ｑは０〜６であり、下付き文字ｖは１〜６であり、前記構造体の左側の波線はＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は分解シグナル伝達物質への結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、リンカー成分は以下からなる群から選択される式を有する：
［式中、下付き文字ｐは０〜４であり、下付き文字ｑは０〜６であり、下付き文字ｖは１〜６であり、前記構造体の左側の波線はＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は分解シグナル伝達物質への結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、リンカー成分は以下からなる群から選択される式を有する：
［式中、下付き文字ｐは０〜４であり、下付き文字ｑは０〜６であり、下付き文字ｖは１〜６であり、前記構造体の左側の波線はＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は分解シグナル伝達物質への結合部位を示す］。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性コンジュゲート化合物はＲＡＦのリガンドを含み、前記リガンドは、構造：
（式中、ＸはＮ又はＣＨであり、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）を有し；
前記分解シグナル伝達物質は、以下：
（式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）から成る群から選択され；そして
前記リンカー成分は、以下：
（式中、各下付き文字ｐは独立して０〜６の整数であり、下付き文字ｑは０〜８の整数であり、下付き文字ｖは１〜１０の整数であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す）から成る群から選択される。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性コンジュゲート化合物はＲＡＦのリガンドを含み、前記リガンドは、構造：
（式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）を有し；
前記分解シグナル伝達物質は、以下：
（式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）から成る群から選択され；そして
前記リンカー成分は、以下：
（式中、各下付き文字ｐは独立して０〜６の整数であり、下付き文字ｑは０〜８の整数であり、下付き文字ｖは１〜１０の整数であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す）から成る群から選択される。
いくつかの実施態様において、各下付き文字ｐは独立して０〜５の整数であり、下付き文字ｑは０〜３の整数であり、下付き文字ｖは１〜７の整数であり、前記構造体の左側の波線はＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は分解シグナル伝達物質への結合部位を示す。
いくつかの実施態様において、前記分解シグナル伝達物質は、以下：
（式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）であり、そして
前記リンカー成分は、以下：
（式中、各下付き文字ｐは独立して０〜３の整数であり、下付き文字ｑは０〜３の整数であり、下付き文字ｖは１〜７の整数であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す）から成る群から選択される。
いくつかの実施態様において、前記分解シグナル伝達物質は、以下：
（式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）であり、そして
前記リンカー成分は、以下：
（式中、各下付き文字ｐは独立して０〜３の整数であり、下付き文字ｑは０〜３の整数であり、下付き文字ｖは１〜７の整数であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す）から成る群から選択される。
いくつかの実施態様において、前記分解シグナル伝達物質は、以下：
（式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）であり、そして
前記リンカー成分は、以下：
（式中、各下付き文字ｐは独立して０〜５の整数であり、下付き文字ｖは１〜７の整数であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す）から成る群から選択される。
いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、表６、表６Ａ、表７、表８、表８Ａ、表９、表１０、表１１、表１２、表１３、又は表１４中の化合物である。
Ｂ．医薬組成物
上記で提供された結合体化合物に加えて、ヒト及び動物においてＲＡＦを分解するための組成物は、典型的には薬学的担体又は希釈剤を含む。
本明細書で使用される「組成物」という用語は、特定の量の特定の成分を含む生成物、ならびに特定の量の特定の成分の組み合わせから、直接又は間接的に生じる任意の生成物を包含することが企図される。「医薬的に許容し得る」とは、担体、希釈剤、又は賦形剤が製剤の他の成分と適合性でなければならず、その受容体に有害であってはならないことを意味する。
本発明の化合物を投与するための医薬組成物は、単位剤形で便利に提供することができ、薬学及び薬物送達の分野で公知の方法のいずれかによって調製することができる。すべての方法には、有効成分を１つ以上の補助成分を構成する担体と結合させるステップが含まれている。一般に医薬組成物は、有効成分を、液体担体又は微粉化した固体担体又は両方と均一かつ密接に結合させ、次に、必要に応じて生成物を所望の製剤に成形することにより調製される。医薬組成物において、活性の目的化合物は、疾患の過程又は状態に対して所望の効果をもたらすのに十分な量で含まれる。
有効成分を含有する医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性又は油性懸濁液、分散性粉末又は顆粒、エマルジョン及び自己乳化物（米国特許第６，４５１，３３９号に記載されている）、硬カプセル又は軟カプセル、シロップ、エリキシル、溶液、頬パッチ、経口ジェル、チューインガム、チュアブル錠、発泡性粉末、発泡性錠剤などの経口使用に適した形態であり得る。経口使用を意図した組成物は、医薬組成物の製造のための当該分野で公知の任意の方法に従って調製することができ、そのような組成物は、医薬的に優れており美味な製剤を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤、抗酸化剤、及び保存剤からなる群から選択される１つ以上の薬剤を含むことができる。錠剤は、錠剤の製造に適した非毒性の医薬的に許容し得る賦形剤と混合した有効成分を含む。これらの賦形剤は、不活性希釈剤、例えばセルロース、二酸化ケイ素、酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、グルコース、マンニトール、ソルビトール、乳糖、リン酸カルシウム、又はリン酸ナトリウム；造粒及び崩壊剤、例えばコーンスターチ、又はアルギン酸；結合剤、例えばＰＶＰ、セルロース、ＰＥＧ、デンプン、ゼラチン、又はアカシア；及び滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、又はタルクであり得る。錠剤は、胃腸管での崩壊及び吸収を遅らせ、それにより長期間にわたって持続作用を提供するために、腸溶的に又はその他の方法でコーティングされていても、又はコーティングされていなくてもよい。例えば、グリセリルモノステアレート又はグリセリルジステアレートなどの時間遅延物質を使用してもよい。これらはまた、制御放出のための浸透圧治療錠剤を形成するために、米国特許第４，２５６，１０８号、４，１６６，４５２号、及び４，２６５，８７４号に記載された技術により被覆されてもよい。
経口使用のための製剤は、有効成分が不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、又はカオリンと混合された硬ゼラチンカプセルとして、又は有効成分が、水又は油媒体、例えば落花生油、流動パラフィン、又はオリーブ油と混合された軟ゼラチンカプセルとしても提示され得る。さらに、油などの非水混和性成分を用いてエマルジョンを調製し、モノジグリセリド、ＰＥＧエステルなどの界面活性剤で安定化することができる。
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合された活性物質を含む。そのような賦形剤は、懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、及びアカシアゴムであり、分散剤又は湿潤剤は、天然に存在するホスファチド、例えばレシチン、又はアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えばポリオキシエチレンステアレート、又はエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、又はエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール由来の部分エステルとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、又はエチレンオキシドと、脂肪酸及びヘキシトール無水物由来の部分エステルとの縮合生成物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。水性懸濁液はまた、１つ以上の防腐剤、例えばエチル、又はｎ−プロピル、ｐ−ヒドロキシベンゾエート、１つ以上の着色剤、１つ以上の香味剤、及び１つ以上の甘味剤、例えばショ糖又はサッカリンを含んでもよい。
油性懸濁液は、有効成分を、植物油、例えば落花生油、オリーブ油、ゴマ油、又はココナッツ油、又は鉱油、例えば流動パラフィンに懸濁することによって製剤化することができる。油性懸濁液は、蜜蝋、固形パラフィン、又はセチルアルコールなどの増粘剤を含んでもよい。口当たりの良い経口製剤を提供するために、上記のような甘味剤、及び香味剤を加えてもよい。これらの組成物は、アスコルビン酸などの酸化防止剤を添加することで保存し得る。
水の添加による水性懸濁液の調製に適した分散性粉末及び顆粒は、分散剤又は湿潤剤、懸濁剤、及び１つ以上の防腐剤と混合した有効成分を提供する。適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤は、すでに上述したものによって例示されている。追加の賦形剤、例えば甘味剤、香味剤、及び着色剤が存在してもよい。
本発明の医薬組成物はまた、水中油型エマルジョンの形態であってもよい。油相は、植物油、例えばオリーブ油又は落花生油、又は鉱油、例えば流動パラフィン、又はこれらの混合物であり得る。適切な乳化剤は、天然のゴム、例えばアカシアゴム又はトラガカントゴム、天然のホスファチド、例えば大豆、レシチン、及び脂肪酸やヘキシトール無水物に由来するエステル又は部分エステル、例えばソルビタンモノオレエート、及び前記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。エマルジョンはまた、甘味剤及び香味剤を含んでもよい。
シロップ及びエリキシル剤は、甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、又はスクロースとともに製剤化されてもよい。そのような製剤は、粘滑剤、防腐剤、香味剤、及び着色剤を含んでもよい。経口液剤は、例えば、シクロデキストリン、ＰＥＧ、界面活性剤と組み合わせて調製することができる。
医薬組成物は、無菌の注射可能な水性又は油性の懸濁液の形態であってもよい。この懸濁液は、上記の適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を使用して、公知の技術に従って製剤化され得る。無菌の注射可能な調製物はまた、例えば１，３−ブタンジオールの溶液のような、非毒性の非経口的に許容される希釈剤又は溶媒中の無菌の注射可能な溶液又は懸濁液であってもよい。使用可能な許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、リンゲル液、及び等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の固定油が溶媒又は懸濁媒体として従来から使用されている。この目的のために、合成モノ又はジグリセリドを含む刺激の少ない固定油を使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射剤の調製に使用される。
本発明の化合物は、薬物の直腸投与用の坐剤の形態で投与することもできる。これらの組成物は、薬物を、常温では固体であるが直腸温度では液体であり、従って直腸で溶けて薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤と混合することにより調製できる。そのような材料には、カカオ脂とポリエチレングリコールが含まれる。さらに化合物は、溶液又は軟膏による眼内送達を介して投与することができる。さらに対象化合物の経皮送達は、イオン導入パッチなどの手段によって達成することができる。局所使用のために、本発明の化合物を含むクリーム、軟膏、ゼリー、溶液、又は懸濁液などが使用される。本明細書で使用される局所適用は、洗口液及びうがい薬の使用も含むことを意味する。
本発明の化合物は、医療器具中に堆積するように製剤化することができ、医療器具には、様々な従来の移植片、ステント移植片を含むステント、カテーテル、バルーン、バスケット、又は体腔内に展開又は永久的に移植できる他の装置を含み得る。具体的な例として、介入技術により治療された身体の領域に本発明の化合物を送達することができる器具及び方法を有することが望ましいだろう。
例示的な実施態様において、本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物は、ステントなどの医療器具内に堆積され、身体の一部の治療のために治療部位に送達され得る。
ステントは、治療薬（すなわち薬物）の送達ビヒクルとして使用されてきた。血管内ステントは一般的に、冠状血管又は末梢血管に永久的に埋め込まれる。ステントのデザインには、米国特許第４，７３３，６５５号（Palmaz）、４，８００，８８２号（Gianturco）、又は４，８８６，０６２号（Wiktor）のものが含まれる。そのようなデザインには、金属ステントとポリマーステントの両方、ならびに自己拡張型及びバルーン拡張型ステントが含まれる。ステントはまた、例えば、米国特許第５，１０２，４１７号（Palmaz）及び国際特許出願番号ＷＯ９１／１２７７９（Medtronic、Inc.）及びＷＯ９０／１３３３２（Cedars-Sanai Medical Center）、米国特許第５，４１９，７６０号（Narciso, Jr.）、及び米国特許第５，４２９，６３４号（Narciso, Jr.）に開示されているように、脈管構造との接触部位に薬物を送達するために使用されてもよい。米国特許第５，８３３，６５１号（Donovan et al.）に開示されているように、遺伝子送達のために内腔の壁にウイルスを送達するために使用されている。
「堆積される」という用語は、ＲＡＦ分解性結合体化合物が、当該分野で知られている方法により、器具内にコーティング、吸着、配置、又は組み込まれることを意味する。例えば結合体は、医療器具をコーティング又はこれにまたがるポリマー材料内に埋め込まれて放出されても（「マトリックスタイプ」）、又は囲まれて放出されても（「リザーバータイプ」）よい。後の例では、結合体を、当該技術分野で知られている材料を生成するための１つ以上の技術を使用して、ポリマー材料内に閉じ込めるか、ここに結合させることができる。他の製剤では結合体は、取り外し可能な結合及び時間の経過による放出によるコーティングを必要とせずに、医療器具の表面に結合することができ、能動的な機械的又は化学的プロセスによって除去することができ、又は移植部位に結合体を提示する永久的に固定化された形態である。
１つの実施態様において、ステントなどの医療器具用の生体適合性コーティングの形成中に、ＲＡＦ分解性結合体化合物をポリマー組成物に組み込むことができる。これらの成分から生成されるコーティングは、通常均一であり、移植用に設計された多くの器具のコーティングに有用である。
ポリマーは、所望の放出速度又は所望のポリマー安定性に応じて、生体安定性又は生体吸収性ポリマーのいずれでもよいが、生体吸収性ポリマーは生体安定性ポリマーとは異なり、移植後に長期間、有害で慢性的な局所反応を引き起こさないため、この実施態様には生体吸収性ポリマーが好ましい。使用できる生体吸収性ポリマーには、特に限定されるものではないが、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリカプロラクトン、ポリグリコリド（ＰＧＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＬＡ／ＰＧＡ）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（ヒドロキシブチレート−コ−バレレート）、ポリジオキサノン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリ（グリコール酸）、ポリ（Ｄ−乳酸）、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸−コ−トリメチレンカーボネート）（ＰＧＡ／ＰＴＭＣ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリジオキサノン（ＰＤＳ）、ポリホスホエステル、ポリホスホエステルウレタン、ポリ（アミノ酸）、シアノアクリレート、ポリ（トリメチレンカーボネート）、ポリ（イミノカーボネート）、コポリ（エーテル−エステル）（例、ＰＥＯ／ＰＬＡ）、ポリアルキレンシュウ酸塩、ポリホスファゼン、及び生体分子、例えばフィブリン、フィブリノゲン、セルロース、デンプン、コラーゲン、及びヒアルロン酸、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、ヒドロゲルの架橋又は両親媒性ブロック共重合体、及び当該分野で公知の他の適切な生体吸収性ポプラマーが含まれる。また、ポリウレタン、シリコン、ポリエステルなどの慢性組織反応が比較的低い生体安定性ポリマーを使用でき、また、医療器具上で溶解及び硬化又は重合できる場合、ポリオレフィン、ポリイソブチレン、エチレン−アルファオレフィン共重合体；アクリルポリマー及びコポリマー、ハロゲン化ビニルポリマー及びコポリマー、例えばポリ塩化ビニル；ポリビニルピロリドン；ポリビニルエーテル、例えばポリビニルメチルエーテル；ハロゲン化ポリビニリデン、例えばポリフッ化ビニリデンやポリ塩化ビニリデン；ポリアクリロニトリル、ポリビニルケトン；ポリビニル芳香族、例えばポリスチレン；ポリビニルエステル、例えばポリ酢酸ビニル；ビニルモノマー同士及びオレフィンとの共重合体、例えばエチレン−メチルメタクリレート共重合体、アクリロニトリル−スチレン共重合体、ＡＢＳ樹脂、エチレン−酢酸ビニル共重合体；ピラン共重合体；ポリヒドロキシ−プロピル−メタクリルアミド−フェノール：ポリヒドロキシエチル−アスパルタミド−フェノール；パルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド−ポリリジン；ポリアミド、例えばナイロン６６及びポリカプロラクタム；アルキド樹脂、ポリカーボネート；ポリオキシメチレン；ポリイミド；ポリエーテル；エポキシ樹脂、ポリウレタン；レーヨン−トリアセテート；セルロース、酢酸セルロース、酪酸セルロース；酢酸酪酸セルロース；セロハン；硝酸セルロース；プロピオン酸セルロース；セルロースエーテル；及びカルボキシメチルセルロースなどの他のポリマーも使用することができる。
ポリマー及び半透性ポリマーマトリックスは、バルブ、ステント、チューブ、人工装具などの成形品に形成されてもよい。
本発明の１つの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、ステント又はステントグラフト器具として形成されるポリマー又は半透性ポリマーマトリックスに結合される。
典型的にはポリマーは、スピンコーティング、浸漬、又は噴霧により、移植可能な器具の表面に適用される。この目的のために、当該分野で知られている追加の方法も利用することができる。噴霧方法には、従来の方法と、インクジェットタイプのディスペンサーを使用する微量堆積技術が含まれる。さらに、ポリマーを器具の特定の部分のみに配置するために、光パターン化を使用してポリマーを埋め込み型器具に堆積させることができる。器具のこのコーティングは、器具の周りに均一な層を提供し、これは器具コーティングを介する種々の分析物の拡散を可能にする。
好適な実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物は、医療器具が配置される環境へのポリマーコーティングからの放出のために製剤化される。好ましくは結合体は、溶出を制御するためのポリマー担体又は層を含むいくつかの公知の技術の少なくとも１つを使用して、長期間（例えば数ヶ月）にわたって制御された方法で放出される。これらの手法のいくつかは、すでに米国特許出願２００４０２４３２２５Ａ１に記載された。
さらに、例えば米国特許第６，７７０，７２９号に記載されていように、ポリマー組成物の試薬及び反応条件を操作して、ポリマーコーティングからのＲＡＦ分解性結合体化合物の放出を制御することができる。例えば、１つ以上のポリマーコーティングの拡散係数を調節して、ポリマーコーティングからの結合体の放出を制御することができる。このテーマの変法では、１つ以上のポリマーコーティングの拡散係数を制御して、医療器具が配置されている環境中に存在する分析物（例えば、ポリマーの一部の分解又は加水分解を促進する分析物）が、ポリマー組成物内の１つ以上の成分にアクセスする能力を調節することができる（及び、例えばそれにより、ポリマーコーティングからの結合体の放出を調節する）。本発明のさらに別の実施態様は、それぞれが複数の拡散係数を有する複数のポリマーコーティングを有する器具を含む。本発明のこのような実施態様において、ポリマーコーティングからの結合体の放出は、複数のポリマーコーティングによって調節することができる。
さらに別の実施態様において、ポリマーコーティングからのＲＡＦ分解性結合体化合物の放出は、ポリマー組成物の１つ以上の特性、例えば１つ以上の内因性又は外因性化合物の存在、あるいは、ポリマー組成物のｐＨを調節することにより制御される。例えば、特定のポリマー組成物は、ポリマー組成物のｐＨの低下に応答して結合体を放出するように設計することができる。あるいは、特定のポリマー組成物は、過酸化水素の存在に応答して結合体を放出するように設計することができる。
Ｃ．治療方法
本明細書に開示されるＲＡＦ分解性結合体化合物は、特に限定されるものではないが、癌及びＲＡＳ病（RASopathies）を含む多くの疾患又は状態を治療又は予防するのに有用である。
いくつかの実施態様において、疾患又は状態は、少なくとも部分的にはＲＡＦによって媒介される。
１．癌
特定の態様において、癌は、１つ以上のＲＡＦ分解性結合体化合物を投与することにより治療又は予防することができる。癌には一般に、周囲の組織に侵入して新しい身体部位に転移する傾向がある未分化細胞の増殖を特徴とするさまざまな悪性新生物のいずれかが含まれる。本発明の組成物を使用する治療に適した異なるタイプの癌の非限定的な例には、卵巣癌、乳癌、肺癌（例えば非小細胞肺癌）、膀胱癌、甲状腺癌、肝臓癌、胸膜癌、膵臓癌、子宮頸癌、前立腺癌、精巣癌、大腸癌、肛門癌、結腸直腸癌、胆管癌、胃腸カルチノイド腫瘍、食道癌、胆嚢癌、直腸癌、虫垂癌、小腸癌、胃癌、腎癌（すなわち腎細胞癌）、中枢神経系癌、皮膚癌、絨毛癌、頭頸部癌、骨癌、骨原性肉腫、線維肉腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、黒色腫、白血病（例えば急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、又は有毛細胞白血病）、リンパ腫（例えば非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、又はバーキットリンパ腫）、及び多発性骨髄腫が含まれる。
いくつかの実施態様において、癌は、黒色腫、上皮癌（例えば前立腺癌、卵巣癌、乳癌）、又は血液癌（例えば、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫）である。
いくつかの実施態様において、癌は黒色腫又は結腸直腸癌である。
いくつかの実施態様において、本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物は、組織起源に関係なく、遺伝的に定義された癌の治療に有用である。遺伝的に定義された癌には、特に限定されるものではないが、少なくとも部分的に変異体ＫＲＡＳ、ＨＲＡＳ、又はＮＲＡＳタンパク質によって媒介されるものが含まれる。いくつかの実施態様において、これらのタンパク質の突然変異には、特に限定されるものではないが、２０個の天然アミノ酸のいずれかに対するミスセンス突然変異を含むコドン１２、１３、及び６１が含まれる。いくつかの実施態様において、ＫＲＡＳ突然変異には、特に限定されるものではないが、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、及びＧ１３Ｃが含まれる。ＨＲＡＳ変異には、特に限定されるものではないが、Ｇ１２Ｖ、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｌ、及びＧ１３Ｒが含まれる。ＮＲＡＳ変異には、特に限定されるものではないが、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１３Ｄが含まれる。遺伝的に定義された癌には、特に限定されるものではないが、少なくとも部分的に、突然変異ＲＡＦタンパク質によって媒介される癌も含まれる。いくつかの実施態様において、変異したＲＡＦタンパク質はＢＲＡＦである。いくつかの実施態様において、ＢＲＡＦ変異はＶ６００Ｅである。
２．ＲＡＳ病
特定の他の態様において、ＲＡＳ病は、１つ以上のＲＡＦ分解性結合体化合物を投与することにより治療又は予防することができる。ＲＡＳ病は、ＲＡＳ／ＭＰＡＫ経路の調節異常を伴う発達症候群である。ＲＡＳ病の非限定的な例には、神経線維腫症１型、毛細血管奇形−動静脈奇形症候群、自己免疫リンパ増殖性症候群、心臓・顔・皮膚症候群、遺伝性歯肉線維腫症、神経線維腫症１型、ヌーナン症候群、コステロ症候群、レギウス症候群、レオパード（LEOPARD）症候群が含まれる。
いくつかの実施態様において、ＲＡＳ病は、ヌーナン症候群、コステロ症候群、レギウス症候群、レオパード症候群である。
いくつかの実施態様において、ＲＡＳ病はヌーナン症候群又はレオパード症候群である。
Ｄ．併用療法
本明細書に開示されるＲＡＦ分解性結合体化合物は、他の癌治療薬と組み合わせて使用して様々なタイプの癌を治療することができる。従っていくつかの態様において本開示は、治療有効量のＲＡＦ分解性結合体化合物及び追加の癌治療薬を、それを必要とする被験体に投与することを含む癌の治療方法を含む。癌治療薬には、特に限定されるものではないが、化学療法剤、放射線治療薬、及び内分泌療法が含まれる。
上記の癌のいずれも、本明細書に記載の併用療法で使用できると考えられる。
併用療法が使用される実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物及び追加の癌治療薬は、同時に又は連続して投与される。いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物及び追加の癌治療薬は同時に投与される。いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物及び追加の癌治療薬は連続的に投与される。いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物及び追加の治療薬は、同時に投与される場合、単一の医薬組成物に製剤化される。いくつかの実施態様において、ＲＡＦ分解性結合体化合物及び追加の治療薬は、同時に投与される場合、２つの別個の組成物である。
１．化学療法剤
化学療法剤（例えば抗癌剤）は当該分野で公知であり、特に限定されるものではないが、アントラセンジオン（アントラキノン）、例えばアントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（ダウノマイシン、ルビドマイシン）、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、及びバルルビシン）、ミトキサントロン、及びピキサントロン；白金ベースの薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、トリプラチン、及びリポプラチン）；タモキシフェン及びその代謝産物、例えば４−ヒドロキシタモキシフェン（アフィモキシフェン）及びＮ−デスメチル−４−ヒドロキシタモキシフェン（エンドキシフェン）；タキサン、例えばパクリタキセル（タキソール）及びドセタキセル；アルキル化剤（ナイトロジェンマスタード、例えばメクロレタミン（ＨＮ２）、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン（Ｌ−サルコリシン）、クロラムブシル）；エチレンイミン及びメチルメラミン（例えば、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、ブスルファンなどのアルキルスルホン酸塩、ニトロソ尿素、例えばカルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＬＪ）、セムスチン（メチル−ＣＣＮ−Ｕ）、及びストレプトゾイン（ストレプトゾトシン）、及びデカルバジンなどのトリアゼン（ＤＴＩＣ；ジメチルトリアゼノイミダゾールカルボキサミド））；代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート（アメトプテリン）などの葉酸類似体、ピリミジン類似体、例えばフルオロウラシル（５−フルオロウラシル；５−ＦＵ）、フロクスウリジン（フルオロデオキシウリジン；ＦＵｄＲ）、及びシタラビン（シトシンアラビノシド）、及びプリン類似体、及び関連阻害剤、例えばメルカプトプリン（６−メルカプトプリン；６−ＭＰ）、チオグアニン（６−チオグアニン；６−ＴＧ）、ペントスタチン（２’−デオキシコフォニシン））；天然物（例えば、ビンブラスチン（ＶＬＢ）やビンクリスチンなどのビンカアルカロイド、エトポシドやテニポシドなどのエピポドフィロトキシン、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、及びマイトマイシン（マイトマイシンＱ）などの抗生物質；Ｌ−アスパラギナーゼなどの酵素；インターフェロンアルファなどの生物学的応答調節剤）；ヒドロキシ尿素などの置換尿素；プロカルバジン（Ｎ−メチルヒドラジン；ＭＩＨ）などのメチルヒドラジン誘導体；ミトタン（ｏ，ｐ’−ＤＤＤ）やアミノグルテチミドなどの副腎皮質抑制剤；その類似体；その誘導体；及びこれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施態様において、化学療法剤はＭＥＫ阻害剤である。ＭＥＫ阻害剤は、ＭＥＫタンパク質に結合し、ＭＥＫタンパク質の正常な機能を阻害又は減少させる小分子又は生物製剤である。ＭＥＫ阻害は、黒色腫並びにＲＡＳ及びＲＡＦを介した癌で特に有用である。任意の既知のＭＥＫ阻害剤は、本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物と組み合わせて使用することができる。
いくつかの実施態様において、ＭＥＫ阻害剤は、ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、又はＭＥＫ１と２の両方を標的とする。いくつかの実施態様において、ＭＥＫ阻害剤は小分子である。
いくつかの実施態様において、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、ピマセルチブ、セルメルチニブ、ＰＤ−０３２５９０１、レファメチニブ、ＴＡＫ７３３、ＭＥＫ１６２、ＲＯ５１２６７６６、ＷＸ−５５４、ＲＯ４９８７６５５、ＣＤ−０９３１、又はＡＺＤ８３３０である。
２．放射線治療薬
放射線治療薬は当該分野で公知であり、外部ビーム放射線療法及び／又は内部放射線療法を含むことができる。外照ビーム放射線療法は高エネルギーＸ線やガンマ線の放射性ビームを患者の腫瘍に照射するが、内部放射線療法は放射性原子を患者の腫瘍に照射する。外部ビーム放射線療法と内部放射線療法の両方を使用して、十分な量の放射能を標的部位に送達することにより、腫瘍の成長を抑制するか又は癌細胞を死滅させる。いくつかの実施態様において、放射線治療薬は放射性原子を含み、生物学的薬剤又は合成薬剤と複合体を形成することにより標的部位への送達が増加する。このような生物学的薬剤又は合成薬剤は、当該分野で公知である。本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物と共に使用するのに適した放射性原子には、本明細書に記載の放射性核種のいずれか、又は標的組織若しくは細胞を破壊するのに十分なエネルギーを放出する他の同位体が含まれる。いくつかの実施態様において、放射線治療薬を抗体などの標的化部分に結合させて、癌細胞又は感染細胞への放射線治療薬の局在化を改善することができる。
「放射性核種」という用語は、放射活性を示すあらゆる核種を含むことを意図している。「核種」とは、炭素１４（１４Ｃ）のように、原子番号、原子質量、エネルギー状態で特定される原子の種類を指す。「放射能」とは、放射性物質から放出されるアルファ粒子、ベータ粒子、核子、電子、陽電子、ニュートリノ、ガンマ線などの放射線を指す。本発明での使用に適した放射性核種の例には、特に限定されるものではないが、フッ素１８（１８Ｆ）、フッ素１９（１９Ｆ）、リン３２（３２Ｐ）、スカンジウム４７（４７Ｓｃ）、コバルト５５（５５Ｃｏ）、銅６０（６０Ｃｕ）、銅６１（６１Ｃｕ）、銅６２（６２Ｃｕ）、銅６４（６４Ｃｕ）、ガリウム６６（６６Ｇａ）、銅６７（６７Ｃｕ）、ガリウム６７（６７Ｇａ）、ガリウム６８（６８Ｇａ）、ルビジウム８２（８２Ｒｂ）、イットリウム８６（８６Ｙ）、イットリウム８７（８７Ｙ）、ストロンチウム８９（８９Ｓｒ）、イットリウム９０（９０Ｙ）、ロジウム１０５（１０５Ｒｈ）、銀１１１（１１１Ａｇ）、インジウム１１１（１１１Ｉｎ）、ヨウ素１２４（１２４Ｉ）、ヨウ素１２５（１２５Ｉ）、ヨウ素１３１（１３１Ｉ）、スズ１１７ｍ（１１７ｍＳｎ）、テクネチウム９９ｍ（９９ｍＴｃ）、プロメチウム１４９（１４９Ｐｍ）、サマリウム１５３（１５３Ｓｍ）、ホルミウム１６６（１６６Ｈｏ）、ルテチウム１７７（１７７Ｌｕ）、レニウム１８６（１８６Ｒｅ）、レニウム１８８（１８８Ｒｅ）、タリウム２０１（２０１Ｔｌ）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、及びビスマス２１２（２１２Ｂｉ）が含まれる。本明細書で使用される１１７ｍＳｎ及び９９ｍＴｃの「ｍ」はメタ状態を表す。さらに、典型的には放射性同位体の混合物であるウラニウム、ラジウム、トリウムなどの天然に存在する放射性元素は、放射性核種の適切な例である。６７Ｃｕ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、及び１８６Ｒｅは、ベータ及びガンマ放出性の放射性核種である。２１２Ｂｉはアルファ線及びベータ線放出性の放射性核種である。２１１Ａｔはアルファ線放出性の放射性核種である。３２Ｐ、４７Ｓｃ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、１１７ｍＳｎ、１４９Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、及び１８８Ｒｅは、ベータ線放出性の放射性核種の例である。６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃ、及び２０１Ｔｌはガンマ線放出性の放射性核種の例である。５５Ｃｏ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６６Ｇａ、６８Ｇａ、８２Ｒｂ、及び８６Ｙは、陽電子放出性の放射性核種の例である。６４Ｃｕは、ベータ線及びポジトロン放出性の放射性核種である。
３．内分泌療法
内分泌療法は、標的ホルモンの産生又は活性を阻害又は減少させるか、標的細胞の遺伝子発現パターンを変更する特定のホルモン又は薬物の投与による内分泌系の操作である。内分泌療法は、乳癌を含む特定の種類の癌で特に有用である。任意の既知のホルモンアンタゴニスト又はモジュレーターは、本開示のＲＡＦ分解性結合体化合物と組み合わせて使用し得る。有用な内分泌療法には、特に限定されるものではないが、アロマターゼ阻害剤（例えばレトロゾール）、酢酸メゲストロール、フルタミド、タモキシフェン、ラロキシフェン、ラソフォキシフェン、バゼドキシフェン、バゼドキシフェン／共役エストロゲン、及びこれらの組み合わせが含まれる。
Ｅ．キット、容器、器具、及びシステム
キット及びシステムの意図するユーザー及びユーザーの特定のニーズに応じて、本発明に従って多種多様なキット及びシステムを調製することができる。いくつかの態様において本開示は、１つ以上のＲＡＦ分解性結合体化合物を含むキットを提供する。他の態様において本開示は、１つ以上のＲＡＦ分解性結合体化合物と、化学療法剤、放射線治療薬、内分泌療法から選択される１つ以上の治療薬とを含むキットを提供する。
本明細書に記載のキットのいくつかは、本明細書に記載の１つ以上のＲＡＦ分解性結合体化合物及び／又は１つ以上の追加の癌治療薬を投与する方法を説明するラベルを含む。本明細書に記載のキットのいくつかは、本明細書に記載の疾患又は障害を治療する方法を説明するラベルを含む。
特に限定されるものではないが、本明細書に記載の１つ以上のＲＡＦ分解性結合体化合物及び１つ以上の追加の癌治療薬を含む組成物を含む本発明の組成物は、必要に応じて、食品医薬品局（ＦＤＡ）又は他の規制機関によって承認された瓶、ジャー、バイアル、アンプル、チューブ、又は他の容器閉鎖システムに入れることができ、これは、化合物を含む１つ以上の投与量を提供できる。パッケージ又はディスペンサーには、医薬品の製造、使用、又は販売を規制する政府機関によって規定された形式の容器に関連する通知を添付することもでき、この通知は政府機関による認可を示す。特定の態様において、キットは、本明細書に記載の製剤又は組成物、製剤又は製剤を含む単回投与剤型を含む容器閉鎖システム、及び本明細書に記載の使用方法を説明する通知又は説明書を含み得る。
いくつかの実施態様において、キットは、製剤の様々な要素（例えば、乾燥成分及び液体成分）又は組成物、製剤又は組成物を作製するための説明書、及び製剤又は組成物を被験者に投与するための説明書、を保持するために仕切られる容器を含む。
特定の実施態様において、キットは、その再水和（又は復元）及び投与のための説明書を伴う、脱水又は乾燥形態の医薬調製物を含み得る。
本明細書に記載の化合物の単位用量、例えば経口、直腸、経皮、又は注射可能な用量（例えば、筋肉内、静脈内、又は皮下注射用）を含むキットが提供される。そのようなキットでは、単位用量を含む容器に加えて、組成物の使用及び付随する利点を説明する情報添付文書を含めることができる。
本発明のいくつかの実施態様は、１つ以上のＲＡＦ分解性結合体化合物及び本明細書に記載の１つ以上の追加の癌治療薬を含むパッケージを含む。
ＩＩＩ．実施例
以下の実施例は、説明のために提供されるものであり、特許請求される本発明を限定するものではない。
実験の詳細
以下の例では、以下の略語が使用される：
ａｑ 水性
ＣＨ３ＣＮ アセトニトリル
ＣＤ３ＯＤ メタノール−Ｄ４
ＣＤＣｌ３ クロロホルム−Ｄ
ｃｏｎｃ 濃縮
ＣｕＳＯ４ 硫酸銅（ＩＩ）
ＣＶ カラム量
ＤＣＭ 塩化メチレン又はジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
Ｅｑ． 当量
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＨＡＴＵ Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）、Ｎ、Ｎ、Ｎ”、Ｎ”−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ｈ 時間
Ｈｅｘ ヘキサン
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＬＲＭＳ 低分解能質量分析
Ｍ モル
ＭｅＯＨ メタノール
ｍｉｎ 分
ＮａＣｌ 塩化ナトリウム
ＮａＮ３ アジ化ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４ 硫酸ナトリウム
ｒｔ 室温
ｔＲ 保持時間
ＳｉＯ２ シリカゲル
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
本発明の化合物は、当業者に一般的に知られているステップを使用して、明細書を参照して調製することができる。これらの化合物は、特に限定されるものではないが、ＬＣ−ＭＳ（液体クロマトグラフィー質量分析）、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）、及びＮＭＲ（核磁気共鳴）を含む既知の方法により分析することができる。以下に示される特定の条件は単なる例であり、本発明の化合物を作製するために使用できる条件の範囲を限定することを意味しないことを理解されたい。代わりに、本発明は、本発明の化合物を製造するための本明細書を参照して、当業者に明らかとなる条件も含む。特に他に明記されない限り、以下の実施例におけるすべての変数は本明細書で定義されているとおりである。
ＬＲＭＳ値は、メタノール又はアセトニトリル中の試料の直接注入を使用して、Watersmicromass ZQで記録された。分析ＨＰＬＣは、Agilent, Zorbax-SB-CN、３．５μｍ、４．６ｘ１５０ｍｍ、移動相、酢酸アンモニウム緩衝液を含む水中アセトニトリル（０〜１００％）；流速、１．５ｍＬ／分、実行時間、２０分］を使用して、Waters allianceで実行した。
ＨＰＬＣ方法Ａ：カラム、Agilent、Zorbax Eclipse XDB-C8、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相、酢酸アンモニウム緩衝液を含む水中アセトニトリル（０〜１００％）；流速、１．５ｍＬ／分、実行時間、２０分。
ＨＰＬＣ方法Ｂ：カラム、Agilent, Zorbax Eclipse SB-CN、３．５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相、酢酸アンモニウム緩衝液を含む水中アセトニトリル（０〜１００％）；流速、０．１ｍＬ／分、実行時間、２０分。
すべての反応は、Ｎ２又はＡｒのいずれかの不活性雰囲気下で実施した。
調製ＨＰＬＣ法：カラム、Phenomenex, Synergi、４μ、Max-RP 80A, AX；２５０ｘ２１．２ｍｍ、移動相、水中アセトニトリル（１０〜１００％、２５分、水は０．２％ＨＣＯ２Ｈ緩衝液を含む）；流速、１５ｍＬ／分。
実施例１
ソラフェニブと酸前駆体の合成
ステップ０１：４−クロロピコリン酸エチル（０２）の合成
エタノール（２２５．０ｍＬ、１５．０体積当量）中の４−クロロピコリン酸（１５．０ｇ、９５．２０ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、硫酸（３４．４ｍＬ、６１９ｍｍｏｌ、６．５当量）を加えた。得られた混合物を還流しながら２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。溶媒を減圧下で除去した。残渣をＤＭ水（５００．０ｍＬ）で処理し、ＥｔＯＡｃ（２ｘ５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（２００．０ｍＬ）、重炭酸ナトリウムの飽和溶液（５００．０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、標題化合物（９．８４ｇ、５５．７％）を淡褐色の油状塊として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.70-8.69 (d, 1H), 8.08-8.07 (d, 1H), 7.83-7.81 (m, 1H), 4.39-4.31 (m, 2H), 1.35-1.29 (m, 3H). MS (ES+): 186.0 (M+1)。
ステップ０２：４−（４−ニトロフェノキシ）ピコリン酸エチル（０４）の合成
クロロベンゼン（９８．３ｍＬ、１０．０体積当量）中の４−ニトロフェノール（０３）（７．３７ｇ、５３．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、４−クロロピコリン酸エチル（０２）（９．８３ｇ、５３．０ｍｍｏｌ、１．０当量））を加えた。得られた混合物を１２０℃で６５時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭ水（５００．０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２ｘ５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（２００．０ｍＬ）、重炭酸ナトリウムの飽和溶液（５００．０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮し、ｎ−ヘキサン中の酢酸エチル（２０〜４０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（３．３５ｇ、２１．９％）を黄色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.70-8.68 (t, 1H), 8.36-8.33 (m, 2H), 7.66-7.65 (d, 1H), 7.47-7.44 (m, 2H), 7.40-7.37 (m, 1H), 4.37-4.30 (m, 2H), 1.33-1.29 (t, 3H). MS (ES+): 289.0 (M+1)。
ステップ０３：４−（４−アミノフェノキシ）ピコリン酸エチル（０５）の合成
４−（４−ニトロフェノキシ）ピコリン酸エチル（０４）（３．３５ｇ、１１．６０ｍｍｏｌ、１．０当量）をＭｅＯＨ（８３．８０ｍＬ）に溶解し、触媒量のＰｄ／Ｃ（６１８．０ｍｇ、 ０．５８ｍｍｏｌ、０．０５当量）の存在下で、バルーンを２．５時間使用して水素化した。ＴＬＣをモニターして、反応の完了を確認した。セライトベッドでの濾過によりＰｄ／Ｃを除去し、濾液を減圧下で蒸発乾固して、所望の化合物（０５）（２．９７ｇ、９８．９％）を褐色の棒状塊として得た。MS (ES+): 259.0 (M+1)。
ステップ０４Ａ：（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）カルバミン酸フェニル（０６）の合成
アセトニトリル（５０．０ｍＬ、１０．０体積当量）中の４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）アニリン（０６Ａ）（５．０ｇ、２５．６ｍｍｏｌ、１．００当量）の攪拌溶液に、ピリジン（２．０２ｇ、２５．６０ｍｍｏｌ、１．００当量）及びクロロギ酸フェニル（４．０ｇ、２５．６０ｍｍｏｌ、１．００当量）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＴＬＣをチェックして、反応の進行をチェックした。反応混合物を水（３００．０ｍＬ）でクエンチして、白色沈殿物を得た。沈殿物を濾過し、水（５０．０ｍＬ）、次にｎ−ヘキサン（５０．０ｍＬ）で洗浄し、沈殿物を乾燥して、所望の生成物（０６）（７．５ｇ、９２．９０％）を白色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10.72 (s, 1H), 8.06-8.05 (d, 1H), 7.78-7.74 (m, 2H), 7.70-7.42 (m, 2H), 7.31-7.24 (m, 3H). MS (ES-): 314.0 (M-1)。
ステップ０４：（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）カルバミン酸フェニル（０７）の合成
ＤＭＳＯ（２９．５ｍＬ、１０．０体積当量）中の４−（４−アミノフェノキシ）ピコリン酸エチル（０５）（２．９５ｇ、１１．４ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）カルバミン酸フェニル（３．６１ｇ、１１．４ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリエチルアミン（１．７３ｇ、１７．１０ｍｍｏｌ、１．５当量）を室温で加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（１００．０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３ｘ３５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（３５０．０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、標題化合物（５．４０ｇ、９８．５％）を淡褐色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.23 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.64-7.57 (m, 4H), 7.44-7.43 (d, 1H), 7.19-7.16 (m, 3H), 4.32-4.30 (d, 2H), 1.31-1.27 (t, 3H). MS (ES+): 480.0 (M+1); MS (ES-): 478.0 (M-1)。
ステップ０５：４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリン酸（０８）の合成
（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）カルバミン酸フェニル（０７）（５．４０ｇ、１１．３０ｍｍｏｌ、１．０当量）、水（５４．００ｍＬ、１０体積当量）、テトラヒドロフラン（４３．２０ｍＬ、８．０体積当量）、及びメタノール（８１ｍＬ、１５体積当量））の混合物に、水酸化リチウム一水和物（１．４２ｇ、３３．８０ｍｍｏｌ、３．０当量）を少しずつ加えた。反応混合物を周囲温度で７２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。溶媒を蒸発乾固し、１Ｍ水酸化ナトリウム溶液（１５．０ｍＬ）を残渣に加えた（ｐＨ＝１４）。水相をジエチルエーテル（２ｘ１００．０ｍＬ）で抽出し、水層を１Ｍ塩酸でｐＨ＝４に酸性化した。こうして得られた固体を濾過し、５０℃の通常のオーブンで乾燥して、標題化合物（０８）（４．５０ｇ、８８．５０％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10.58 (s, 1H), 10.35 (s, 1H), 8.49-8.47 (d, 1H), 8.23-8.22 (d, 1H), 7.74-7.71 (d, 1H), 7.60-7.56 (m, 3H), 7.39-7.38 (d, 1H), 7.18-7.11 (m, 3H). MS (ES+): 452.0 (M+1); MS (ES-): 450.0 (M-1)。
ステップ０６：４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（０９）の合成
ＤＭＦ中（４．０ｍＬ、２０．０体積当量）中の４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリン酸（０８）（２００．０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌懸濁液に、メチルアミン塩酸塩（１４９．０ｍｇ、２．２１ｍｍｏｌ、５．０当量）、ＰｙＢＯＰ（２３０．０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、１．０当量）、及びトリエチルアミン（４４８．０ｍｇ、２．２１ｍｍｏｌ、１０．０当量）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（１００．０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３ｘ１００．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１００．０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、ｎ−ヘキサン中の酢酸エチル（４０〜６０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（０９）（１３０．０ｍｇ、６３．２０％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.22 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.79-8.77 (d, 1H), 8.51-8.49 (d, 1H), 8.13-8.12 (d, 1H), 7.65-7.57 (m, 4H), 7.38-7.37 (d, 1H), 7.19-7.13 (m, 3H). MS (ES+): 465.0 (M+1); MS (ES-): 463.0 (M-1). HPLC: 97.99%。
実施例２
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（３−（（（Ｒ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミド（化合物１．０１４）の合成
ステップ０６：３−（２−（２−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド）エトキシ）エトキシ）プロパン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１１）の合成
ＤＭＦ（５．０ｍＬ、２５．０体積当量）中の４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリン酸（０８）（２００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロパン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０）（１２４ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＨＡＴＵ（５０５ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、３．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（６８．５ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、１．２０当量）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、所望の化合物（１１）（２９０ｍｇ、９８．２０％）を褐色のゴムとして得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.22 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.52-8.51 (d, 1H), 8.13-8.12 (d, 1H), 7.65-7.64 (d, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.61-7.60 (d, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.39-7.38 (d, 1H), 7.19-7.16 (m, 3H), 3.59-3.41 (m, 16H), 2.89 (s, 2H), 2.41-2.39 (d, 2H) 1.40-1.37 (t, 9H). MS (ES+): 755.0 (M+1); MS (ES-): 753.2 (M-1)。
ステップ０７：３−（２−（２−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−ピコリンアミド）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（１２）の合成
ＤＣＭ（５．８０ｍＬ、２０．０体積当量）中の２−（３−（２−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド）エトキシ）プロポキシ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１１）（２９０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、冷却したトリフルオロ酢酸（５．８０ｍＬ、２０体積当量）に注いだ。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物を採取し、真空下で濃縮して、標題化合物（１２）（２２０ｍｇ、８２．８％）を褐色のゴムとして得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.29 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.52-8.51 (d, 1H), 8.13-8.12 (d, 1H), 7.65-7.64 (d, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.61-7.60 (d, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.39-7.38 (d, 1H), 7.19-7.16 (m, 3H), 3.59-3.55 (t, 3H), 3.52-3.49 (m, 7H), 3.45-3.41 (m, 2H). MS (ES-): 609.2 (M-1)
ステップ０８：４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（３−（（（Ｒ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミド（１４）の合成
ＤＭＦ（２．８０ｍＬ、４０．０体積当量）中の３−（２−（２−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（１２）（７０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（１３）（５０．９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＨＡＴＵ（１３１ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、３．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（３１７ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、１０．０当量）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬｘ３）で抽出した。反応抽出物を食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、ＤＣＭ中のメタノール（０〜５％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１４）（３０ｍｇ、２５．２０％）を褐色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.52-8.50 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.87-7.84 (d, 1H), 7.62-7.57 (t, 4H), 7.41-7.38 (d, 5H), 7.18-7.16 (d, 3H), 5.10 (s, 1H), 4.53-4.50 (d, 1H), 4.41 (s, 2H), 4.27 (s, 1H), 3.58-3.50 (m, 12H), 2.44 (s, 2H), 2.0 (s, 1H), 1.85 (s, 1H), 1.37-1.35 (s, 3H),1.10-1.06 (s, 3H), 0.92 (s, 9H). MS (ES+): 1037 (M+1); MS (ES-): 1035.2 (M-1). HPLC: 93.47%。
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４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（３−（（（Ｒ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミド（１４）の合成
ＤＭＦ（２０ｍＬ、４０．０体積当量）中の３−（２−（２−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（１２）（５００ｍｇ、０．８１８ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（３６４ｍｇ、０．８１８ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｔ３Ｐ（１．３０ｇ、４．０９ｍｍｏｌ、５．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（１．０６ｇ、８．１８ｍｍｏｌ、１０．０当量）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物を採取し、ＤＭＷ（１００ｍＬ）を加え、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬｘ３）で抽出した。反応抽出物を食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、ＤＣＭ中のメタノール（０〜５％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１４）（５１０ｍｇ、６０．１０％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.52-8.50 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.87-7.84 (d, 1H), 7.62-7.57 (t, 4H), 7.41-7.38 (d, 5H), 7.18-7.16 (d, 3H), 5.10 (s, 1H), 4.53-4.50 (d, 1H), 4.41 (s, 2H), 4.27 (s, 1H), 3.58-3.50 (m, 12H), 2.44 (s, 2H), 2.0 (s, 1H), 1.85 (s, 1H), 1.37-1.35 (s, 3H),1.10-1.06 (s, 3H), 0.92 (s, 9H). MS (ES+): 1037.9 (M+1); MS (ES-): 1035.1 (M-1). HPLC: 93.32%。
実施例３
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（３−（（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミドの合成
ＤＭＦ（５．６０ｍＬ、４０．０体積当量）中の３−（２−（２−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（１４０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、（２Ｒ，４Ｓ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（１５３ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＴＢＴＵ（２２１ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ、３．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（２９６ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ、１０．０当量）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（１５０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、ＤＣＭ中の０〜５％ＭｅＯＨを使用するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（６５ｍｇ、２８．７％）を淡灰色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.52-8.50 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.87-7.84 (d, 1H), 7.62-7.57 (t, 4H), 7.41-7.38 (d, 5H), 7.18-7.16 (d, 3H), 5.10 (s, 1H), 4.53-4.50 (d, 1H), 4.41 (s, 2H), 4.27 (s, 1H), 3.58-3.50 (m, 12H), 2.44 (s, 2H), 2.0 (s, 1H), 1.85 (s, 1H), 1.37-1.35 (s, 3H),1.10-1.06 (s, 3H), 0.92 (s, 9H). MS (ES+): 1037.2 (M+1); MS (ES-): 1035.1 (M-1). HPLC: 94.65%。
実施例４
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（１７−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボニル）−１８，１８−ジメチル−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１６−アザノナデシル）ピコリンアミド（化合物１．０１５）の合成
ステップ０９：１−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピリジン−２−イル）−１−オキソ−５，８，１１，１４−テトラオキサ−２−アザヘプタデカン−１７−酸ｔｅｒｔ−ブチル（１６）の合成
ＤＭＦ中５．０ｍＬ、２５．０体積当量）の４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−ピコリン酸（０８）（２００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、１−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−酸ｔｅｒｔ−ブチル（１６５（１７１．０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＨＡＴＵ（５０５ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、３．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（６８．５０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、１．２０当量）を加えた。反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、標題化合物（１６）（１６０ｍｇ、４７．９０％）を褐色がかったガムとして得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.23 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.52-8.51 (d, 1H), 8.13-8.12 (d, 1H), 7.64-7.63 (d, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.38-7.37 (d, 1H), 7.19-7.16 (m, 3H), 3.58-3.44 (m, 18H), 2.51-2.49 (t, 2H), 1.38 (s, 9H). MS (ES+): 755.0 (M+1);
MS (ES-): 753.3 (M-1). HPLC: 97.56%。
ステップ１０：１−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−ピリジン−２−イル）−１−オキソ−５，８，１１，１４−テトラオキサ−２−アザヘプタデカン−１７−酸（１７）の合成
ＤＣＭ（３．１０ｍＬ、２０．０体積当量）中の１−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピリジン−２−イル）−１−オキソ−５，８，１１，１４−テトラオキサ−２−アザヘプタデカン−１７−酸ｔｅｒｔ−ブチル（１６）（１５５ｍｇ、０．２０５ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、冷却したトリフルオロ酢酸（３．１０ｍＬ、２０体積当量）を注いだ。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物を採取し、真空下で濃縮して、標題化合物（１７）（２６０ｍｇ）を淡褐色のゴムとして得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) ? 9.35 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.60-8.58 (d, 1H), 8.20 (d, 1H), 7.68-7.58 (m, 4H), 7.41-7.40 (d, 1H), 7.19-7.16 (t, 3H), 3.76-3.71 (t, 2H), 3.60-3.42 (m, 14H), 2.68 (s, 2H) 2.50-2.42 (m, 2H). MS (ES+): 699.0 (M+1); MS (ES-): 697.1 (M-1)。
ステップ１１：４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（１７−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボニル）−１８，１８−ジメチル−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１６−アザノナデシル）ピコリンアミド（１８）の合成
ＤＭＦ（１０．０ｍＬ、４０．０体積当量）中の１−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピリジン−２−イル）−１−オキソ−５，８，１１，１４−テトラオキサ−２−アザヘプタデカン−１７−酸（１７）（１５０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（１３）（１４３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＴＢＴＵ（２０７ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ、３．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（２７７ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ、１０．０当量）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（１５０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬｘ３）で抽出した。反応抽出物を食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物をＤＣＭ中のメタノール（０〜１０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１８）（７３ｍｇ、３０．２０％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.52-8.50 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.87-7.84 (d, 1H), 7.62-7.57 (t, 4H), 7.41-7.38 (d, 5H), 7.18-7.16 (d, 3H), 5.10 (s, 1H), 4.53-4.50 (d, 1H), 4.41 (s, 2H), 4.27 (s, 1H), 3.58-3.50 (m, 20H), 2.44 (s, 2H), 2.0 (s, 1H), 1.85 (s, 1H), 1.37-1.35 (s, 3H),1.10-1.06 (s, 3H), 0.92 (s, 9H). MS (ES+): 1026.1 (M+1); MS (ES-): 1125.1 (M-1). HPLC: 90.88%。
実施例５
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（（Ｒ）−２３−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボニル）−２４，２４−ジメチル−２１−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサ−２２−アザペンタコシル）ピコリンアミド（化合物１．０１６）の合成
ステップ１２：１−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピリジン−２−イル）−１−オキソ−５，８，１１，１４，１７，２０−ヘキサオキサ−２−アザトリコサン−２３−酸ｔｅｒｔ−ブチル（２０）の合成
ＤＭＦ（５．０ｍＬ、２５．０体積当量）中の４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−ピコリン酸（０８）（２００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、２−（３−（２−アミノエトキシ）プロポキシ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１９）（２１８．０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＨＡＴＵ（５０５ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、３．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（６８．５０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、１．２０当量）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、標題化合物（２０）（３５０ｍｇ、９３．８０％）を褐色がかったガムとして得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.30 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.60 (d, 1H), 8.13-8.12 (d, 1H), 7.70-7.65 (m, 4H), 7.50 (s, 1H), 7.21-7.18 (m, 3H), 3.58-3.44 (m, 26H), 2.51-2.49 (t, 2H). MS (ES+): 843 (M+1); MS (ES-): 841.2 (M-1)。
ステップ１３：１−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピリジン−２−イル）−１−オキソ−５，８，１１，１４，１７，２０−ヘキサオキサ−２−アザトリコサン−２３−酸（２１）の合成
ＤＣＭ（７．００ｍＬ、２０．０体積当量）中の１−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピリジン−２−イル）−１−オキソ−５，８，１１，１４，１７，２０−ヘキサオキサ−２−アザトリコサン−２３−酸ｔｅｒｔ−ブチル（２０）（３５０ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、冷却したトリフルオロ酢酸（７．００ｍＬ、２０．０体積当量）を注いだ。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物を採取し、真空下で濃縮して、標題化合物（２１）（３２０ｍｇ、９７．９％）を褐色がかったゴムとして得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 9.40 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.60-8.58 (d, 1H), 8.20 (d, 1H), 7.68-7.58 (m, 4H), 7.41-7.40 (d, 1H), 7.19-7.16 (t, 3H), 3.76-3.71 (t, 2H), 3.60-3.42 (m, 22H), 2.68 (s, 2H) 2.50-2.42 (m, 2H). MS (ES+): 787.3.0 (M+1); MS (ES-): 785 (M-1)。
ステップ１４：４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（（Ｒ）−２３−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ− ２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボニル）−２４，２４−ジメチル−２１−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサ−２２−アザペンタコシル）ピコリンアミド（２２）の合成
ＤＭＦ（１２．４０ｍＬ、４０．０体積当量）中の１−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピリジン−２−イル）−１−オキソ−５，８，１１，１４，１７，２０−ヘキサオキサ−２−アザトリコサン−２３−酸（２１）（１５０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（１３）（１２７ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、１．５当量）、ＴＢＴＵ（０．１８ｇ、０．５７ｍｍｏｌ、３．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（２４６ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ、１０．０当量）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、ＤＣＭ中のメタノール（０〜５％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（８５ｍｇ、３６．８％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.50 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.63-7.58 (t, 4H), 7.41-7.38 (d, 5H), 7.18-7.16 (d, 2H), 5.10 (s, 1H), 4.53-4.50 (d, 1H), 4.41 (s, 2H), 4.27 (s, 1H), 3.58-3.50 (m, 28H), 2.44 (s, 2H), 2.0 (s, 1H), 1.85 (s, 1H), 1.37-1.35 (s, 3H),1.10-1.06 (s, 3H), 0.92 (s, 9H). MS (ES+): 1213.1 (M+1); MS (ES-): 1211.3 (M-1). HPLC: 78.83%。
実施例６
Ｎ−（（２Ｓ，１５Ｒ）−１５−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボニル）−１６，１６−ジメチル−３，１３−ジオキソ−７，１０−ジオキサ−４，１４−ジアザヘプタデカン−２−イル）−６−（（３−（３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）ベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミドの合成
ステップ０１：２−メチル−５−ニトロアニリン（０２）の合成
硫酸（７５０．０ｍＬ、１５．０体積当量）の撹拌溶液に、ｏ−トルイジン（０１）（５０．０ｇ、４６７．０ｍｍｏｌ、１．０当量）を−５℃で加えた。次に、混酸（６５％硝酸５５．６ｍＬと硫酸２５０．０ｍＬ）を−５℃で２時間かけて滴加した。得られた混合物を０℃で１時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。次に、混合物を砕いた氷に注ぎ、水酸化ナトリウム水溶液でアルカリ性にした。生成した沈殿物を濾過により採取し、乾燥して、標題化合物（０２）（５５．４ｇ、７８．０％）を黄色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7.45-7.44 (d, 1H), 7.31-7.27 (m, 1H), 7.17-7.14 (d, 1H), 5.55 (s, 2H), 2.14 (s, 3H)。
ステップ０２：６−ニトロ−２Ｈ−インダゾール（０３）の合成
酢酸（１００．０ｍＬ、５．０体積当量）中の亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル（０２）（２０．３ｇ、１９７．０ｍｍｏｌ、１．５０当量）の撹拌溶液に、酢酸（４００ｍＬ、２０．０体積当量）中の２−メチル−５−ニトロアニリン（２０．０ｇ、１３１．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を室温で滴加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。ＴＬＣ（Ｍｆ：ｎ−ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ：０．４）により反応の完了をモニターした。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣を酢酸エチル（５００．０ｍＬ）に溶解した。次に、残渣を重炭酸ナトリウム溶液（１５０．０ｍＬ）、食塩水（１００．０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、標題化合物（０３）（１８．２ｇ、８４．９％）を赤みがかった固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.80 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.01 (s, 1H). MS (ES-): 162.20 (M-1)。
ステップ０３：３ーヨード−６−ニトロ−２Ｈ−インダゾール（０４）の合成
ＤＭＦ（７２０．０ｍＬ、１５．０体積当量）中の６−ニトロ−２Ｈ−インダゾール（０３）（４８．０ｇ、２９４．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、室温でＮ−ヨードスクシンイミド（９９．３ｇ、４４１．０ｍｍｏｌ、１．５０当量）、炭酸カリウム（１０２．０ｇ、７３６．０ｍｍｏｌ、２．５０当量）を加えた。得られた混合物を室温で５時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣ（Ｍｆ：ｎ−ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ：０．６）によりモニターした。反応混合物をＤＭＷでクエンチし、ＥｔＯＡｃ（４ｘ３００．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をチオ硫酸ナトリウム溶液（３００．０ｍＬ）、食塩水（３００．０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、ｎ−ヘキサン中のＥｔＯＡｃ（０〜２０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（０４）（３２．５ｇ、３８．２％）を黄色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.2 (s, 1H), 8.48-8.47 (d, 1H), 8.01-7.97 (m, 1H), 7.70-7.68 (d, 1H). MS (ES-): 287.9 (M-1)。
ステップ０４：６−ニトロ−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル（０５）の合成
Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１００．０ｍＬ、１０．０体積当量）中の３−ヨード−６−ニトロ−２Ｈ−インダゾール（０４）（１０．０ｇ、３４．６ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、室温でシアン化亜鉛（１６．３ｇ、１３８．０ｍｍｏｌ、４．０当量）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１０．０ｇ、８．６５ｍｍｏｌ、０．２５当量）を加えた。得られた混合物を１００℃で４時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣ（Ｍ．Ｐｈ．：ｎ−ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、次に濾液を酢酸エチル（３ｘ２００．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１５０．０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して、標題化合物（０５）（３．５ｇ、５３．８％）を黄色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.30 (s, 1H), 8.65-8.64 (t, 1H), 8.15-8.14 (d, 2H). MS (ES-): 187.40 (M-1)。
ステップ０５：６−ニトロ−２Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（０６）の合成
１０Ｎ水酸化カリウム（４５．０ｍＬ、１８．０体積当量）溶液中の６−ニトロ−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル（０５）（２．５ｇ、１３．３ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、室温で水（２５．０ｍＬ、１０．０体積当量）、水酸化カリウム（２．２４ｇ、３９．９ｍｍｏｌ、３．０当量）を加えた。得られた混合物を９５℃で２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣ（Ｍｆ：ＤＣＭ中２０％ＭｅＯＨ、Ｒｆ：０．３）によりモニターした。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣を水に溶解し、２Ｎ ＨＣｌでｐＨを酸性に調整し、５℃に冷却し、濾過して、標題化合物（０６）（２．１ｇ、７６．３％）を赤みがかった固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.51 (s, 1H), 8.55-8.48 (m, 1H), 8.28-8.25 (d, 1H), 8.11-8.01 (m, 1H). MS (ES-): 206.3 (M-1)。
ステップ０６：（６−ニトロ−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニル）−Ｌ−アラニン酸メチル（０８）の合成
アセトニトリル（５４．０ｍＬ、３０．０体積当量）中の６−ニトロ−２Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（０６）（１．８０ｇ、８．６９ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、Ｄ−アラニン酸メチル塩酸塩（１．３３ｇ、９．５６ｍｍｏｌ、１．１０当量）、ＴＢＴＵ（４．１９ｇ、１３．０ｍｍｏｌ、１．５０当量）、及びＤＩＰＥＡ（４．４９ｇ、４．８３ｍｍｏｌ、４．０当量）を室温で加えた。得られた混合物を室温で１５時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣ（Ｍ．Ｐｈ．：ＤＣＭ中２０％ＭｅＯＨ、Ｒｆ：０．７）によりモニターした。反応混合物を水でクエンチし、酢酸エチル（３ｘ１００．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を食塩水（１００．０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、ｎ−ヘキサン中の酢酸エチル（０〜２０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．５ｇ、５９．１％）を黄色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.90-8.88 (d, 1H), 8.55-8.54 (d, 1H), 8.35-8.32 (d, 1H), 8.09-8.05 (m, 1H), 4.61-4.56 (t, 1H), 3.65 (s, 3H), 1.45-1.43 (d, 3H). MS (ES+): 293.1 (M+1); MS (ES-): 291.0 (M-1)。
ステップ０７：（６−アミノ−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニル）−Ｌ−アラニン酸メチル（０９）の合成
エタノール（５０．０ｍＬ、５０．０体積当量）中の（６−ニトロ−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニル）−Ｌ−アラニン酸メチル（０８）（１．０ｇ、３．４２ｍｍｏｌ、１． ０当量）の攪拌溶液に、塩化アンモニウム（９１５．０ｍｇ、１７．１ｍｍｏｌ、５．０当量）、鉄粉（９５６．０ｍｇ、１７．１ｍｍｏｌ、５．０当量）、及び水（３０．０ｍＬ、３０．０体積当量）を室温で加えた。得られた混合物を還流下で２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣ（Ｍｆ：ｎ−ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ：０．４）によりモニターした。反応混合物をセライトパッドで濾過し、次に濾液を酢酸エチル（３ｘ１００．０ｍＬ）で抽出し、食塩水（１００．０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、ｎ−ヘキサン中の酢酸エチル（０〜３０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（０９）（６８０．０ｍｇ、７５．８％）を褐色がかった固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.8 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 6.54 (s, 2H), 5.39 (s, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.64 (s, 3H), 1.40 (d, 3H). MS (ES+): 263.4 (M+1); MS (ES-): 261.3 (M-1)。
ステップ０８：（６−（（３−ニトロベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニル）−Ｌ−アラニン酸メチル（１１）の合成
ＤＣＭ（２９．４ｍＬ、３０．０体積当量）中の（６−アミノ−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニル）−Ｌ−アラニン酸メチル（０９）（９８０．０ｍｇ、３．７４ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、３−ニトロベンズアルデヒド（１０）（５６５．０ｍｇ、３．７４ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１．１９ｇ、５．６０ｍｍｏｌ、１．５０当量）、及び酢酸（２２４．０ｍｇ、３．７４ｍｍｏｌ、１．０当量）を室温で加えた。得られた混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣ（Ｍ．Ｐｈ．：ｎ−ヘキサン中６０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ：０．４）によりモニターした。反応混合物を水でクエンチし、酢酸エチル（３ｘ１００．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１００．０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、ｎ−ヘキサン中の酢酸エチル（０〜４０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１１）（８００．０ｍｇ、５３．９％）を黄色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.83 (s, 1H), 8.41-8.39 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.80-7.77 (d, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 6.87 (s, 2H), 6.30 (d, 1H), 4.51-4.49 (t, 3H), 3.64 (s, 3H), 1.41-1.39 (d, 3H). MS (ES+): 398.10 (M+1); MS (ES-): 396.4 (M-1)。
ステップ０９：（６−（（３−アミノベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニル）−Ｌ−アラニン酸メチル（１２）の合成
エタノール（３９．０ｍＬ、５０．０体積当量）中の（６−（（３−ニトロベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニル）−Ｌ−アラニン酸メチル（１１）（７８０．０ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、塩化アンモニウム（５２５．０ｍｇ、９．８１ｍｍｏｌ、５．０当量）、鉄粉（５４８．０ｍｇ、９．８１ｍｍｏｌ、５．０当量）、及び水（２３．４ｍＬ、３０．０体積当量）を室温で加えた。得られた混合物を還流下で２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣ（Ｍｆ：ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ、Ｒｆ：０．５）によりモニターした。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、次に濾液を酢酸エチル（３ｘ１００．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１００．０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、ｎ−ヘキサン中の酢酸エチル（０〜３０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（６５０．０ｍｇ、９０．１％）を褐色がかった固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.83 (s, 1H), 8.41-8.39 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.80-7.77 (d, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 6.87 (s, 2H), 6.30 (d, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.51-4.49 (t, 3H), 3.64 (s, 3H), 1.41-1.39 (d, 3H). MS (ES+): 368.4 (M+1); MS (ES-): 366.3 (M-1)。
ステップ１０：（６−（（３−（３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）ベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニル）−Ｌ−アラニン酸メチル（１４）の合成
ＤＭＦ（４５．９ｍＬ、４５．０体積当量）中の３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）安息香酸（１３）（１．０２ｇ、３．７７ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、（６−（（３−アミノベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニル）−Ｌ−アラニン酸メチル（１２）（１．２５ｇ、３．４０ｍｍｏｌ、０．９当量）、Ｔ３Ｐ（６．０１ｇ、１８．９ｍｍｏｌ、５．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（１．９５ｇ、１５．１ｍｍｏｌ、４．０当量）を室温で加えた。得られた混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣ（Ｍ．Ｐｈ．：ＥｔＯＡＣ中５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ：０．６）によりモニターした。反応混合物を水でクエンチし、酢酸エチル（３ｘ１００．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１００．０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して、標題化合物（１４）（６３０．０ｍｇ、２６．９％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.85-12.84 (d, 1H), 10.52 (s, 1H), 8.42-8.39 (d, 3H), 8.23 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.79-7.75 (t, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.25-7.19 (m, 2H), 6.76-6.74 (d, 1H), 6.30 (s, 1H), 4.51 (s, 1H),4.36-4.35 (d, 2H), 3.63 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 1.41-1.39 (d, 3H) MS (ES+): 620.0 (M+1); MS (ES-): 618.30 (M-1)。
ステップ１１：（６−（（３−（３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）ベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニル）−Ｌ−アラニン（１５）の合成
メタノール（１５．５ｍＬ、２５．０体積当量）中の６ −（（３−ニトロベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸メチル（１４）（６２０．０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、水酸化リチウム（２１０．０ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ、５．０当量）、水（１５．５ｍＬ、２５．０体積当量）を室温で加えた。得られた混合物を９５℃で５時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣ（Ｍ．Ｐｈ：ＤＣＭ中２０％ＭｅＯＨ、Ｒｆ：０．２）によりモニターした。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣を水に溶解し、２Ｎ ＨＣｌでｐＨを酸性に調整し、５℃に冷却した後、沈殿物を濾過して、標題化合物（１５）（２８０．０ｍｇ、４６．２％）を褐色がかった固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.83 (s, 1H), 10.54 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.26-8.13 (m, 3H), 7.79-7.69 (m, 4H), 7.39-7.34 (t, 1H), 7.21-7.19 (d, 1H), 6.76-6.74 (d, 2H), 6.30 (s, 1H), 4.46-4.36 (m, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.45-1.38 (t, 3H). MS (ES+): 606 (M+1); MS (ES-): 604.3 (M-1)。
ステップ１１Ａ：（Ｓ）−Ｎ−（１−アミノ−１−オキソプロパン−２−イル）−６−（（３−（３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）ベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド（１５Ａ）の合成
ＤＭＦ（２．５０ｍＬ、２５．０体積当量）中の（６−（（３−（３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）ベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニル）−Ｌ−アラニン（１５）（１００ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、塩化アンモニウム（２６．５０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ、３．０当量）、ＴＢＴＵ（１０６ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、２．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（６３．９０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ、３．０当量）を加えた。反応混合物を室温で８時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬｘ５）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、所望の化合物の粗製物を得た。粗製物をＤＣＭ中のメタノール（０〜２０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１５Ａ）（６０ｍｇ、７０．１０％）を淡オレンジ色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.80 (s, 1H), 10.53 (s, 1H), 8.45-8.43 (m, 2H), 8.20 (s, 1H), 8.00-7.90 (m, 2H), 7.80-7.70 (m, 5H), 7.55 (s, 1H), 7.44-7.40 (d, 2H), 7.10 (s, 2H), 6.80 (s, 1H), 4.30 (m, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.10 (s, 3H). MS (ES+): 605 (M+1); MS (ES-): 603.2 (M-1)。
ステップ１２：３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１３Ｃ）の合成
Ｎ、Ｎ−ジメチルアセトアミド（５０．０ｍＬ、５．０体積当量）中の３−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１３Ａ）（１０．０ｇ、５２．９ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、５−メチル−１Ｈ−イミダゾール（１３Ｂ）（１３．５ｇ、１６４．０ｍｍｏｌ、３．１当量）を室温で加えた。得られた混合物を１４５℃で３時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物を水でクエンチし、酢酸エチル（３ｘ２００．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（２００．０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、ｎ−ヘキサン中の酢酸エチル（０〜４０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１３Ｃ）（１２．７ｇ、９５．６％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.28-8.24 (t, 3H), 8.05-7.99 (d, 2H), 2.49-2.37 (m, 3H). MS (ES+): 252.2 (M+1); MS (ES-): 250.4 (M-1)。
ステップ１３：３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１３Ｃ）の合成
１，４−ジオキサン（２５２．０ｍＬ、２０．０体積当量）中の３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１３Ｃ）（１２．６ｇ、５０．２ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、水（３１５．０ｍＬ、２５．０体積当量）中の水酸化ナトリウム（１０．０ｇ、２５１．０ｍｍｏｌ、５．０当量）の溶液を室温で加えた。得られた混合物を９５℃で１５時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣を水に溶解し、２Ｎ ＨＣｌでｐＨを酸性に調整し、酢酸エチル（３ｘ１５０．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１５０．０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して、標題化合物（１３）（６．４５ｇ、４７．６％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.28-8.24 (t, 3H), 8.05-7.99 (d, 2H), 7.59 (s, 1H), 2.49-2.37 (m, 3H). MS (ES+): 271 (M+1); MS (ES-): 269.3 (M-1)。
ステップ１４：（Ｓ）−３−メチル−１−（６−（（３−（３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）ベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４−ジオキソ−８，１１−ジオキサ−２，５−ジアザテトラデカン−１４−酸ｔｅｒｔ−ブチル（１７）の合成
ＤＭＦ（６．８．０ｍＬ、４０．０体積当量）中の（６−（（３−（３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）ベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−カルボニル）−Ｌ−アラニン（１５）（１７０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロパン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１６）（７８．６０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＨＡＴＵ（３２０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ、３．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（４３．５ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、１．２０当量）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、所望の化合物の粗製物を得た。粗製物をＤＣＭ中のメタノール（０〜１０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１７）（２２０ｍｇ、９５．５％）を淡褐色のゴムとして得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.90 (s, 1H), 10.59 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.32-8.16 (m, 4H), 7.79-7.69 (m, 4H), 7.39-7.34 (t, 1H), 7.21-7.19 (d, 1H), 6.76-6.8 (s, 2H), 6.35 (s, 1H), 4.46-4.36 (m, 3H), 4.12-4.00 (t, 2H), 3.63-3.41 (m, 8H), 2.94 (s, 2H)2.21 (s, 3H), 1.45-1.38 (m, 12H). MS (ES+): 821.3 (M+1); MS (ES-): 819.5 (M-1)。
ステップ１５：（Ｓ）−３−メチル−１−（６−（（３−（３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）ベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４−ジオキソ−８，１１−ジオキサ−２，５−ジアザテトラデカン−１４−酸（１８）の合成
ＤＣＭ（４．４０ｍＬ、２０．０体積当量）中の（Ｓ）−３−メチル−１−（６−（（３−（３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル））−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）ベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４−ジオキソ−８，１２−ジオキサ−２，５−ジアザテトラデカン−１４−酸ｔｅｒｔ−ブチル（１７）（２２０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、冷却したトリフルオロ酢酸（４．４０ｍＬ、２０体積当量）を注いだ。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物を採取し、真空下で濃縮して、標題化合物（１８）（１６０ｍｇ、７８．１０％）を褐色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.80 (s, 1H), 10.55 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.29-8.14 (m, 4H), 7.78-7.69 (m, 4H), 7.39-7.34 (t, 1H), 7.21-7.19 (d, 1H), 6.76-6.8 (m, 2H), 6.35 (s, 1H), 4.46-4.36 (m, 3H), 4.12-4.00 (t, 2H), 3.63-3.41 (m, 8H), 2.94 (s, 2H)2.21 (s, 3H), 1.45-1.38 (t, 3H). MS (ES+): 764.9 (M+1); MS (ES-): 763.2 (M-1)。
ステップ１６：Ｎ−（（２Ｓ，１５Ｒ）−１５−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル））エチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボニル）−１６，１６−ジメチル−３，１３−ジオキソ−７，１０−ジオキサ−４，１４−ジアザヘプタデカン−２−イル）−６−（（３−（３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）ベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド（２０）の合成
ＤＭＦ（４．８０ｍＬ、４０．０体積当量）中の（Ｓ）−３−メチル−１−（６−（（３−（３−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）ベンジル）アミノ）−２Ｈ−インダゾール−３−イル）−１，４−ジオキソ−８，１２−ジオキサ−２，５−ジアザテトラデカン−１４−酸（１８）（１２０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（９１．１０ｍｇ、０．１１９ｍｍｏｌ、１．２０当量）、Ｔ３Ｐ（１８９．０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、３．０当量）及びＤＩＰＥＡ（１２８ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ、１０．０当量）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（５０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物をＤＣＭ中のメタノール（０〜１０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（２０）（４５ｍｇ、３８．１０％）を淡オレンジ色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.84 (s, 1H), 10.56 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.44-8.40 (d, 3H), 8.23 (d, 2H), 8.15 (d, 1H), 7.80-7.76 (t, 4H), 7.70 (s, 2H), 7.43-7.35 (m, 5H), 7.20 (s, 1H), 6.76-6.74 (d, 2H), 6.29 (s, 1H), 5.12-5.11 (d, 1H), 4.51 (s, 1H), 4.42 (s, 2H), 4.36-4.34 (d, 4H), 3.59-3.57 (d, 4H), 3.47-3.39 (m, 4H), 3.24-3.15 (m, 3H), 2.85 (d, 2H), 2.78-2.72 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.68 (m, 2H), 1.45-1.40 (m, 6H), 1.20-1.15 (s, 3H), 1.10 (d, 3H). MS (ES+): 1191.2 (M+1); MS (ES-): 1189.4 (M-1)。
実施例７
Ｎ−（４−（２−（２−（２−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）−４−（４−（３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミドの合成
ステップ０１：４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（１０）の合成
無水酢酸（４０ｍＬ、４．０体積当量）中の３−フルオロフタル酸（１０．０ｇ、５４．３ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を１４０°で２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。揮発物を真空により除去し、残渣を無水酢酸で結晶化して、標題化合物（５．１０ｇ、５６．５％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.07-8.01 (m, 1H), 7.94-7.88 (t, 1H), 7.85-7.82 (d, 1H), 7.59-7.54 (m, 1H). MS (ES+): 167.10 (M+1); MS (ES-): - (M-1)。
ステップ０２：５−アミノ−２−（４−フルオロ−１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸の合成
ＤＭＦ（２５．０ｍＬ、５．０体積当量）中の４−フルオロイソベンゾフラン−１，３−ジオン（５．０ｇ、３０．１０ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、Ｌ−グルタミン（４．４０ｇ、３０．１ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、得られた混合物を９０°で８時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。溶媒を減圧下で除去した。残渣を４Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬ）に再溶解し、さらに８時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過により採取し、水で洗浄し、乾燥して、標題化合物（５．７０ｇ、６４．４０％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7.99-7.90 (s, 1H), 7.8-7.65 (m, 2H), 4.86-4.71 (m, 1H), 2.40-2.25 (m, 4H), 3.40 (br, 3H). MS (ES+): 295.9 (M+1); MS (ES-): 294.1 (M-1)。
ステップ０３：２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（１３）の合成
無水酢酸（４４．８０ｍＬ、８．０体積当量）中の５−アミノ−２−（４−フルオロ−１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）−５−オキソペンタン酸（５．６０ｇ、１９．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を１４０°で４時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。得られた固体を濾過により採取し、アセトニトリル（１００ｍＬ）で洗浄して粗製物を得て、これをＤＣＭ中の１〜１０％ＭｅＯＨを溶離液として使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．６５ｇ、３１．４０％）を淡黄色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.16 (s, 1H), 7.96-7.91(m, 1H), 7.80-7.71(m, 2H), 5.19-5.13 (m, 1H), 2.90-2.70 (m, 1H), 2.63 (s, 1H), 2.57-2.49 (m, 1H), 2.19 (m, 1H). MS (ES+): 276.90 (M+1); MS (ES-): 275.3 (M-1)。
ステップ０４：２−（２−（２−（２−（４−（ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）４−メチルベンゼンスルホネート（１６）の合成
ＤＭＦ（４９ｍＬ、７．０体積当量）中の（（オキシビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（オキシ））ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（４−メチルベンゼンスルホネート）（７．０ｇ、１３．９０ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、４−ニトロフェノール（１．９４ｇ、１３．９０ｍｍｏｌ、１．００当量）及び炭酸カリウム（４．８１ｇ、３４．８０ｍｍｏｌ、２．５０当量）を加え、得られた混合物を５０で１２時間攪拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。混合物を室温に冷却し、水（１００ｍＬ）に注ぎ、次に酢酸エチル（１００ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機相を水（１５０ｍＬ）及び食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して、標題化合物（６．４５ｇ、９８．６０％）を淡黄色の油状物として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.18-8.16 (t, 2H), 7.79-7.76 (d, 2H), 7.48-7.45 (d, 2H), 7.17-7.12 (m, 2H), 4.26-4.22 (m, 2H), 4.11-4.01 (m, 2H), 3.78-3.75 (t, 2H), 3.59-3.42 (m, 10H), 1.25 (s, 3H)。
ステップ０５：１−（２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−４−ニトロベンゼン（１７）の合成
ＤＭＳＯ（３４．０ｍＬ、７．５容量）中の２−（２−（２−（２−（４−（ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）４−メチルベンゼンスルホネート（４．５０ｇ、９．５８ｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、ＮａＮ３（２．１８ｇ、３３．５ｍｍｏｌ、３．５０当量）を加えた。得られた混合物を８０℃で４．０時間撹拌した。ＴＬＣをチェックして、反応の完了を確認した（溶出：ｎ−ヘキサン中６０％ＥｔＯＡｃ）。反応塊を水（２５０．０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３ｘ１５０Ｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を水（２ｘ１００ｍＬ）、食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を濃縮乾固して、所望の化合物（３．１０ｇ、９５％）を油性塊として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.21-8.16 (m, 2H), 7.17-7.12 (m, 2H), 4.26-4.22 (t, 2H), 3.79-3.75 (m, 2H), 3.61-3.50 (m, 10H), 3.40-3.34 (m, 2H). MS (ES+): 341 (M+1); MS (ES-): 339.4 (M-1)。
ステップ０６：２−（２−（２−（２−（４−（ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（１８）の合成
ＴＨＦ（３７．２０ｍＬ、１２．０体積当量）中の１−（２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−４−ニトロベンゼン（３．１０ｇ、９．１１ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、トリフェニルホスフィン（４．７８ｇ、１８．２０ｍｍｏｌ、２．００当量）、ＤＭＷ（９．３０ｍＬ、３．０体積当量）を加え、得られた混合物を室温で３．０時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。溶媒（ＴＨＦ）を真空下で除去し、水（１００．０ｍＬ）で希釈した。６Ｎ ＨＣｌ（４０ｍＬ）を加えてｐＨを２に調整した。固体（トリフェニルホスフィン及びトリフェニルホスフェート）を濾過により除去した。濾液を１０％ＮａＯＨ（４０ｍＬ）を使用して塩基性化し、ＥｔＯＡｃ（２ｘ２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を濃縮乾固して、所望の粗化合物を得た。粗製物を、溶媒（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）の溶出を使用するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（９８０ｍｇ、３４．２０％）を淡褐色のゴムとして得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.10 (s, 2H), 6.94-6.89 (m, 2H), 4.17-4.14 (t, 2H), 3.84-3.81 (t,2H), 3.85-3.52 (m, 12H), 1.90 (t, 2H). MS (ES+): 315.1 (M+1)。
ステップ０７：２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−（（２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）イソインドリン−１，３−ジオン（１９）の合成
ＤＭＦ（２４．０ｍＬ、２０．０体積当量）中の２−（２−（２−（２−（４−（ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（１．２０ｇ、４．３２ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（１．０５ｇ、３．８２ｍｍｏｌ、１．００当量）、ＤＩＰＥＡ（１．２３ｇ、９．５４ｍｍｏｌ、２．５０当量）を加え、得られた混合物を９０℃で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。次に、反応混合物を室温で冷却し、ＤＭＷ（１００ｍＬ）を加え、ＥｔＯＡｃ（２ｘ２５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を採取し、食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を濃縮乾固し、ｎ−ヘキサン中の３０〜１００％酢酸エチル（０．８３ｇ、３８．１０％）の溶出を使用するカラムクロマトグラフィーにより、所望の化合物を油性の緑色がかった塊として得た。NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ＮＭＲは明瞭ではなかった。 MS (ES+): 571.1 (M+1); MS (ES-): 569.3 (M-1)。
ステップ０８：４−（（２−（２−（２−（２−（４−アミノフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（２０）の合成
酢酸（１６．４０ｍＬ、２０．０体積当量）中の２−（２−（２−（２−（４−ニトロフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（８２０ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、鉄（２８１ｍｇ、５．０３ｍｍｏｌ、３．５０当量）、エタノール（１６．４０ｍＬ、２０．０体積当量）、及びＤＭＷ（８．２０ｍｇ、１０．０体積当量）を加え、得られた混合物を１００℃で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物を室温に冷却した後、ＤＭＷ（１００ｍＬ）を加え、ＥｔＯＡｃ（３ｘ１５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を濃縮乾固して、所望の化合物（５９０ｍｇ、７５．９０％）を油状塊として得た。NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.10 (s, 1H), 7.62-7.55 (m, 3H), 7.14-7.02 (m, 1H), 7.04-7.02 (d, 1H), 6.64-6.61 (d, 2H), 6.49-6.47 (d, 2H), 5.08-5.02 (m, 1H), 4.61 (s, 1H), 4.06-4.00 (m, 2H), 3.90 (s, 1H), 3.64-3.59 (m, 5H), 3.56-3.45 (m, 10H), 2.92 (s, 1H). MS (ES+): 541.3 (M+1); MS (ES-): 539.2 (M-1)。
ステップ０９：Ｎ−（４−（２−（２−（２−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）−４−（４−（３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド（２１）の合成
ＤＭＦ（５．０ｍＬ、２５．０体積当量）中の４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリン酸（２００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、４−（（２−（２−（２−（２−（４−アミノフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（２８７．０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、１．２当量）、Ｔ３Ｐ（４２３ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、３．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（６８．５ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、１．２０当量）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣによりモニターした。反応混合物をＤＭＷ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬｘ３）で抽出した。反応抽出物を食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、ＤＣＭ中の０〜４％ＭｅＯＨの溶出を使用するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１８０ｍｇ、４１．７０％）を黄色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.10 (s, 1H), 10.53 (s, 1H), 9.29 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.60-8.58 (d, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.78-7.75 (d, 2H), 7.78-7.58 (m, 5H), 7.49-7.45 (d, 1H), 7.22-7.19 (t, 3H), 7.13-7.10 (d, 1H), 7.03-7.01 (d, 1H), 6.92 (s, 2H), 6.61-6.59 (d, 1H) 5.10 (m, 1H), 4.53-4.50 (t, 1H), 4.41 (s, 2H), 3.58-3.50 (m, 12H), 2.88 (s, 2H), 2.72 (s, 2H), 2.59 (s, 1H). MS (ES+): 973.8 (M+1); MS (ES-): 972.1 (M-1). HPLC: 91.27%
以下の実施例は、（１）リンカー成分のセグメントを用いるＲＡＦのリガンドの調製、（２）リンカー成分のセグメントを用いる分解シグナル伝達物質の調製、及び（３）リンカー成分の２つのセグメントを共有結合することによる、以下の一般式のＲＡＦ分解性結合体化合物の調製、を記載する。
（１）リンカー成分のセグメントを用いる分解シグナル伝達物質の調製
実施例８
６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミドの合成
ステップ１：塩化チオニル（４０ｍＬ、０．５５ｍｏｌ）及びＤＭＦ（２．０１ｇ、２７．４０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３００ｍＬ）中の６−ブロモヘキサン酸（１２．８０ｇ、６５．９０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。得られた反応混合物を７０℃で２時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ｎ−ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ）によりモニターして確認した。溶媒を減圧下で蒸発させた。ＴＨＦ（３００ｍＬ）中の４−アミノ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（１５．０ｇ、５４．９０ｍｍｏｌ）の溶液を、反応混合物に加えた。この反応混合物を還流下で１２時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）によりモニターして反応の完了を確認した。溶媒を減圧下で留去した。残渣に水（７００ｍＬ）を加え、生成物をＥｔＯＡｃ（２×７５０ｍＬ）で抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物を食塩水（７５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して６−ブロモ−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（１７．８０ｇ、７２．０％）をオフホワイトの固体として得た。1HNMR (300 MHz, DMSO-d6):δ11.15(s, 1H), 9.71 (s, 1H), 8.47 (d, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 5.15 (m, 1H), 3.58 (m, 2H), 2.90 (m, 2H), 2.60 (m, 2H), 2.47 (d, 2H), 2.07 (m, 1H), 1.84 (m, 2H), 1.66 (m, 2H), 1.47 (m, 2H) ppm. MS (ESI): C19H20BrN3O5の計算値, 449.06, 実測値, 449.80 (M-H)-。
ステップ２：アジ化ナトリウム（６．１５ｇ、９４．７０ｍｍｏｌ）及び１８−クラウン−６（７７３．０ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２３３ｍＬ、３０体積当量）中の６−ブロモ−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（７．７５ｇ、１７．２０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に加えた。反応混合物を７０℃で８．０時間撹拌し、室温に冷却し、水（８００ｍＬ）を加え、ＥｔＯＡｃ（３×５５０ｍＬ）で抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物を食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して粗製物を得た。粗製物を、溶離液としてヘキサン中の酢酸エチルの勾配（４０〜９０％）を使用するシリカゲル（２３０〜４００メッシュサイズ）のカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（４．５０ｇ、６３．４％）をオフホワイトの固体として得た。1HNMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 11.15 (s, 1H), 9.71 (s, 1H), 8.47 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.83 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.15 (dd, J = 12.8, 5.4 Hz, 1H), 3.00 - 2.81 (m, 1H), 2.7 - 2.4 (m, 6H), 2.20 - 2.0 (m, 1H), 1.64 - 1.30 (m, 6H). MS (ESI): C19H20N6O5の計算値, 412.15, 実測値, 413.0 (M+H)+, 411 (M-H)-。
（２）リンカー成分のセグメントを用いるＲＡＦのリガンドの調製
実施例９
Ｎ−（６’−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００２用）の合成
１，４−ジオキサン（１．５ｍＬ）中のブタ−３−イン−１−オール（１１４ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、６０％水素化ナトリウム（６５．２ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間撹拌後、Ｎ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１５０ｍｇ、０．３２６ｍｍｏｌ）を一度に加え、これを、８０℃で予熱した油浴に３０分間入れた。反応混合物を室温に冷却し、水（１０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（５０％〜１００％、３．５ＣＶ；１００％、１２ＣＶ）を使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（６０ｍｇ、５４．１％）を白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．３８（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.55 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.09 - 8.05 (m, 2H), 8.04 - 7.99 (m, 2H), 7.77 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.48 (t, J =6.5 Hz, 2H), 3.87 - 3.80 (m, 4H), 3.15 - 3.07 (m, 4H), 2.70 (td, J = 6.5, 2.6 Hz, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.95 (t, J = 2.6 Hz, 1H)。
実施例１０
Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００１用）の合成
標題化合物（１３ｍｇ、１２％）を、実施例９に記載のように、ＤＭＦ中のＮ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２１７ｍｍｏｌ）及びプロパルギルアルコール（６０．９ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）から、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．３（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.61 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.16 - 8.13 (m, 2H), 8.09 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.02(s, 1H), 7.84 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.66 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 2.1 Hz,1H), 5.10 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.93 - 3.87 (m, 4H), 3.19 - 3.12 (m, 4H), 2.50 (s, 3H), 2.48 (t, J = 2.4 Hz,1H). LRMS, m/z, C26H23F3N4O3の計算値 , 496.17, 実測値, 497.03 (M+H+), 519.04 (M+Na)+。
実施例１１
Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（ペンタ−４−イン−１−イルオキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００３用）の合成
標題化合物（２５ｍｇ、２１．９％）を、Ｎ−（６’−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドについて記載したように、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のペンタ−４−イン−１−オール（７６．１ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）及びＮ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２１７ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．３（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.62 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.17 - 8.12 (m, 2H), 8.10 (d, J = 7.8Hz, 1H), 7.81 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 2.1 Hz,1H), 4.51 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.91 - 3.84 (m, 4H), 3.16 - 3.08 (m, 4H), 2.48 (s, 3H), 2.41 (dt, J = 7.0,3.6 Hz, 2H), 2.12 - 2.04 (m, 2H), 1.99 (t, J = 2.6 Hz, 1H).LRMS, m/z, C28H27F3N4O3の計算値, 524.2; 実測値, 547.14 (M+Na)+。
実施例１２
Ｎ−（６’−（ヘキサ−５−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００４用）の合成
標題化合物（１１８．７ｍｇ、９４．９％）を、Ｎ−（６’−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドについて記載したように、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のヘキサ−５−イン−１−オール（１１２．２ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）及びＮ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１０７ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．３２（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.61 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.12 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.50 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.92 - 3.85 (m, 4H), 3.18 - 3.08 (m, 4H), 2.50 (s, 3H), 2.38 - 2.32 (m, 1H), 2.08 - 1.99 (m, 2H), 1.78 (t, J = 2.5 Hz, 2H), 1.66 (s, 2H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.16 (s). LRMS, m/z, C29H29F3N4O3の計算値: 538.22; 実測値, 561.15 (M+Na)+。
実施例１３
Ｎ−（６’−（ヘプタ−６−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００５用）の合成
標題化合物（１１０ｍｇ、９０．７％）を、Ｎ−（６’−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドについて記載したように、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のヘプタ−６−イン−１−オール（１６１．２ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）及びＮ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１０１ｍｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．３３（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.62 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.09 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.84 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 4.43 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.90 (s, 4H), 3.15 (s, 4H), 2.51 (s, 3H), 2.25 (s, 2H), 2.12 (s, 1H), 1.97 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 1.89 (s, 1H), 1.79 (s, 1H), 1.67 (dd, J = 20.9, 6.2 Hz, 3H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.17 (s). LRMS, m/z, C30H31F3N4O3 の計算値: 552.23; 実測値, 575.23 (M+Na)+。
実施例１４
Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（オクタ−７−イン−１−イルオキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００６用）の合成
標題化合物（８８．９ｍｇ、６８．７％）を、Ｎ−（６’−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドについて記載したように、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のオクタ−７−イン−１−オール（１４１．３ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）及びＮ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１０５ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．２８（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.62 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.09 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 12.7 Hz, 2H), 7.78 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.42 (s, 2H), 3.90 (s, 4H), 3.15 (s, 4H), 2.51 (s, 3H), 2.25 - 2.14 (m, 1H), 2.12 - 2.01 (m, 1H), 1.91 - 1.83 (m, 2H), 1.79 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 1.60 (dd, J = 6.3, 4.5 Hz, 2H), 1.45 - 1.40 (m, 1H), 1.26 (dd, J = 8.5, 3.8 Hz, 1H), 0.83 (ddd, J = 12.7, 10.3, 6.4 Hz, 2H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.17 (s). LRMS, m/z, C31H33F3N4O3の計算値: 566.25; 実測値,589.18 (M+Na)+。
実施例１５
Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００７用）の合成
ステップ１：５００ｍＬの丸底フラスコ中で、無水ＤＭＦ（４０ｍＬ）中のトリエチレングリコール（１４．２５ｍＬ、１０７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、水素化ナトリウム（１．０５５２ｇ、２７．５４ｍｍｏｌ、油中６０％）を３回に分けて加えた。得られた懸濁液を０℃で３０分間撹拌し、臭化プロパルギル（３ｍＬ、２６．９ｍｍｏｌ、トルエン中８０％）を滴加した。反応混合物は透明な黄色から透明な褐色に変わり、ゆっくりと室温まで温め、週末（７０時間）にわたって撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、水（５０ｍＬ）で洗浄し、食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮した。化合物のほとんどは水溶液中に残った。水溶液をＮａＣｌで飽和させ、１６時間撹拌し、クロロホルム（３×５０ｍＬ）で抽出し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。１００ｇのＳｉＯ２カートリッジによりヘキサン中の酢酸エチルの勾配（５０％〜１００％、４ＣＶ、１００％）を使用して、残渣を精製して、２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール（１．００ｇ、９．２８％））を淡黄色の油状物として得た。溶媒を減圧下で除去し、シリカゲルカラムで精製して、目的の２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール（１．００ｇ、９．８％）を淡黄色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．２６（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.20 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.76 - 3.71 (m, 3H), 3.68 (tt, J = 5.6, 3.0 Hz, 7H),3.64 - 3.59 (m, 3H), 2.43 (t, J = 2.4 Hz, 1H). Percec, V. et.al. PCT, WO2014/190024 A1 及びAhmed et al., JOC, 2006, 71, pp.9884-9886。
ステップ２：標題化合物（８０ｍｇ、６８．６％）を、実施例９に記載のように、１，４−ジオキサン（１．５ｍＬ）中の２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール（２６１．１ｍｇ、０．６４５ｍｍｏｌ）及びＮ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１００．０ｍｇ、０．２１７ｍｍｏｌ）から油状物として調製した。Ｒｆ＝０．２６（５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.63 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.12 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H),7.93 (s, 1H), 7.85 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 2.0Hz, 1H), 4.61 - 4.56 (m, 2H), 4.20 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.88 (d, J = 4.5 Hz, 4H), 3.75 - 3.65 (m, 10H),3.18 - 3.13 (m, 4H), 2.51 (s, 3H), 2.43 (t, J = 2.4 Hz, 1H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.11 (s). LRMS, m/z, C32H35F3N4O6の計算値, 628.25; 実測値, 627.17 (M-H)-。
実施例１６
Ｎ−（６’−（３，６，９，１２，１５−ペンタオキサオクタデカ−１７−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００８用）の合成
標題化合物（１７０ｍｇ、５３．３％）を、実施例９に記載のように、１，４−ジオキサン（３．０ｍＬ）中の３，６，９，１２，１５−ペンタオキサオクタデカ−１７−イン−１−オール（７８０．０ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）（Parthi, A.K. et. al. Tetrahedron Letters, 2008, 49, 3395-3399）及びＮ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（２０４．９ｍｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）から、油状物として調製した。Ｒｆ＝０．２７（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.68 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.12 (t, J = 6.0 Hz, 2H),7.84 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.66 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.61- 4.56 (m, 2H), 4.19 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.90 - 3.86 (m, 6H), 3.65 (dd, J = 5.8, 3.1 Hz, 16H), 3.54 (dd,J = 5.8, 3.5 Hz, 1H), 3.19 - 3.12 (m, 4H), 2.51 (s, 3H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.11 (s). LRMS, m/z, C36H43F3N4O8の計算値, 716.30; 実測値, 715.35 (M-H)-。
実施例１７
Ｎ−（３−（６−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−ベンズアミド（化合物１．００９用）の合成
標題化合物（５２ｍｇ、４６．９％）を、Ｎ−（６’−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドについて記載のように、１，４−ジオキサン（３．０ｍＬ）中のブタ−３−イン−１−オール（１１４ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）及びＮ−（３−（６−フルオロ−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２１８ｍｍｏｌ）（化合物１４について記載のように。Nishiguchi, et. al. JMC 2017, 60, 4869を参照）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．４２（５０％ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 1H), 8.06 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.84 - 7.79 (m, 2H), 7.75 (d, J = 2.1Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.30 (d, J =8.3 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.55 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.93 - 3.85 (m, 4H), 3.20 - 3.13 (m, 4H),2.76 (td, J = 6.5, 2.6 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.01 (t, J = 2.6 Hz, 1H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.15 (s). LRMS, m/z, C28H26F3N3O3の計算値, 509.19, 実測値, 532.10 (M+Na)+, 508.10 (M-H)-。
実施例１８
（±）−Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（ペンタ−４−イン−２−イルオキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．０１０用）の合成
標題化合物（８６．２ｍｇ、５０．２％）を、Ｎ−（６’−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドについて記載のように、１，４−ジオキサン（２．３ｍＬ）中の（±）−ペンタ−４−イン−２−オール（０．２７ｍＬ、２．８７ｍｍｏｌ）及びＮ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１５０．６ｍｇ、０．３２７ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．２１（ＥｔＯＡｃ）。NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.61 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.12 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.85 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 7.8 Hz, 1H),7.04 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 11.0, 6.1 Hz, 1H), 3.89 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.29 - 3.20 (m, 2H), 3.13 - 3.05 (m, 2H), 2.72 - 2.67 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.03 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 1.54 (d, J = 6.2 Hz, 3H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.17 (s). LRMS, m/z C28H27F3N4O3の計算値, 524.2; 実測値, 525.06 (M+H)+ 及び 547.07 (M+Na)+。
実施例１９
（±）−Ｎ−（４−メチル−３−（５−モルホリノ−６−（ペンタ−４−イン−２−イルオキシ）ピリジン−３−イル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．０１１用）の合成
標題化合物（８６．９ｍｇ、４９．７％）を、Ｎ−（６’−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドについて記載のように、１，４−ジオキサン（２．３ｍＬ）中の（±）−ペンタ−４−イン−２−オール（０．２７ｍＬ、２．８７ｍｍｏｌ）及びＮ−（３−（６−フルオロ−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１５３．５ｍｇ、０．３３４ｍｍｏｌ）から、淡黄色の油状物として調製した。Ｒｆ＝０．６７（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 1H), 8.07 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H),7.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.30 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.03 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.43 (dd, J = 11.2, 5.9 Hz, 1H), 3.88 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.23 (d, J =11.7 Hz, 2H), 3.13 - 3.02 (m, 2H), 2.72 - 2.67 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.02 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 1.53 (s,3H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.15 (s). LRMS, m/z C29H28F3N3O3の計算値, 523.21; 実測値, 524.03 (M+H)+ , 545.98 (M+Na)+。
実施例２０
（±）−Ｎ−（６’−（ヘキサ−５−イン−３−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．０１２用）の合成
標題化合物（７３ｍｇ、４０．８％）を、Ｎ−（６’−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドについて記載のように、１，４−ジオキサン（２．３ｍＬ）中の（±）−ヘキサ−５−イン−３−オール（０．３１ｍＬ、２．８０ｍｍｏｌ）及びＮ−（６’−フルオロ−２−メチル）−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１５３．１ｍｇ、０．３３３ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．２３（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.61 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.12 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.09 (d, J =7.9 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.85 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.33 - 5.24 (m, 1H), 3.87 (dd, J = 10.9, 6.3 Hz, 4H), 3.32 - 3.19 (m, 2H), 3.12- 3.01 (m, 2H), 2.72 (dt, J = 4.8, 2.8 Hz, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.01 - 1.93 (m, 2H), 1.04 (t, J = 7.5 Hz,3H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.17 (s). LRMS, m/z C29H29F3N4O3の計算値, 538.22; 実測値, 539.07 (M+H)+, 561.09 (M+Na)+。
実施例２１
Ｎ−（３−（６−（ヘキサ−５−イン−１−イルオキシ）−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例３４用）の合成
標題化合物（１６９．４ｍｇ、９５．６％）を、Ｎ−（６’−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドについて記載のように、１，４−ジオキサン（２．３ｍＬ）中のヘキサ−５−イン−１−オール（０．１８ｍＬ、１．６３ｍｍｏｌ）及びＮ−（３−（６−フルオロ−５−モルホリノピリジン）−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１５１．４１ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）から、淡黄色の油状物として調製した。Ｒｆ＝０．６３（ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ）NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.81 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 7.76 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.30 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.92 - 3.86 (m, 4H), 3.72 - 3.65 (m, 2H), 3.16 - 3.10 (m, 4H), 2.32 (td, J = 7.0, 2.7 Hz, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.24 (dd, J = 6.7, 2.6 Hz, 2H), 1.97 - 1.95 (m, 1H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.15 (s). LRMS, m/z, C30H30F3N3O3の計算値, 537.22; 実測値, 560.11 (M+Na)+。
（３）ＲＡＦ分解性結合体化合物の調製
実施例２２
Ｎ−（６’−（２−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）エトキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００２）の合成
丸底フラスコ中で、Ｎ−（６’−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例９）（５０．０ｍｇ、０．０９７９ｍｍｏｌ）、６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（４８．５ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）、硫酸銅５水和物（５．３８ｍｇ、０．０１０５ｍｍｏｌ）、及びアスコルビン酸ナトリウム（７．７６ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）に、ＴＨＦ（２．０ｍＬ）び水（２００μＬ）を加え、窒素でパージし、週末（６０時間）にわたって室温で撹拌すると、硫酸銅が析出し、溶媒の半分が蒸発し、ＴＬＣが５０％超の変換を示した。反応混合物を水（５ｍＬ）で希釈し、塩化メチレン（２×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を濃縮し、塩化メチレン中のメタノールの勾配（０〜１５％）を使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、Ｎ−（６’−（２−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソ−ヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）エトキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（８０ｍｇ、８８．５％）を白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．１４（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.30 (s, 1H), 8.70 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H),8.23 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.05 - 8.00 (m, 2H), 7.76 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.64 -7.54 (m, 2H), 7.48 - 7.43 (m, 2H), 6.98 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 4.87 (dd, J = 12.4, 5.5 Hz, 1H), 4.64 (t, J =6.5 Hz, 2H), 4.29 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.81 - 3.72 (m, 4H), 3.21 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.99 (s, 4H), 2.86 -2.64 (m, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.37 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.13 - 2.04 (m, 1H), 1.95 - 1.83 (m, 2H), 1.77 -1.65 (m, 2H), 1.41 - 1.28 (m, 2H). LRMS, m/z C46H45F3N10O8の計算値, 922.34; 実測値, 945.42 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.29 分 (純度, 98.74%)。ＨＰＬＣ方法：カラム、Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｚｏｒｂａｘ−ＳＢ−ＣＮ、３．５μｍ、４．６ｘ１５０ｍｍ、移動相、水中のアセトニトリル（０〜１００％）は酢酸アンモニウム緩衝液を含む；流速１．５ｍＬ／分、実行時間、２０分。
実施例２３
Ｎ−（６’−（（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００１）の合成
標題化合物（９ｍｇ、３７．８％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例１０）（１３ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（１１．６ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．１４（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.34 (s, 1H), 8.75 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 8.63 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.15 (s,2H), 8.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.84 - 7.77 (m, 2H), 7.72 (s, 1H), 7.69 - 7.60 (m, 2H), 7.50 (d, J = 7.2Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 5.62 (s, 2H), 4.95 (s, 1H), 4.39 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.85 (s, 4H), 3.11 (s, 4H), 2.94- 2.71 (m, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.44 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.20 - 2.11 (m, 1H), 2.01 - 1.92 (m, 2H), 1.84 -1.73 (m, 2H), 1.47 - 1.34 (m, 2H).LRMS, m/z, C45H43F3N10O8の計算値, 908.32, 実測値, 931.34 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.1 分 (純度, 98.35%)。
実施例２４
Ｎ−（６’−（３−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）プロポキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００３）の合成
標題化合物（２０ｍｇ、４４．８％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（ペンタ−４−イン−１−イルオキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例１１）（２５．０ｍｇ、０．０４７７ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（２１ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．１４（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.37 (s, 1H), 8.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.12 - 8.06 (m, 2H), 7.82 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.71 - 7.60 (m, 2H), 7.52 (dd, J = 7.3, 0.6 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.05 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.93 (dd, J = 12.6, 5.3 Hz, 1H), 4.45 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 4.34 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.94 - 3.86 (m, 4H), 3.18 - 3.10 (m, 4H),2.94 - 2.87 (m, 3H), 2.83 - 2.70 (m, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.44 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.29 - 2.11 (m, 2H), 1.99 - 1.89 (m, 2H), 1.83 - 1.73 (m, 2H), 1.46 - 1.35 (m, 2H). LRMS, C47H47F3N10O8の計算値, 936.35, 実測値, 959.43 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.29 分 (純度, 95.9%)。
実施例２５
Ｎ−（６’−（４−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ブトキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００４）の合成
標題化合物（１８．１ｍｇ、８．３９％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（６’−（ヘキサ−５−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例１２）（１１８．７ｍｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（１０２．０ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．１１（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.38 (s, 1H), 8.78 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.40 (s,1H), 8.17 (s, 1H), 8.11 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.82 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.72 - 7.67(m, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.04 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 4.95(dd, J = 12.3, 5.3 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 4.34 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.91 - 3.82 (m, 4H), 3.12(s, 4H), 2.79 (dd, J = 15.0, 8.1 Hz, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.45 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.93 (ddd, J = 21.5, 15.5,7.0 Hz, 7H), 1.79 (dt, J = 15.3, 7.5 Hz, 3H), 1.41 (dt, J = 16.7, 8.2 Hz, 3H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.11 (s).LRMS, m/z: C48H49F3N10O8の計算値, 950.37; 実測値, 973.32 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.36 分 (純度, >99%)。
実施例２６
Ｎ−（６’−（（５−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ペンチル）オキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００５）の合成
標題化合物（３４ｍｇ、１７．７％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（６’−（ヘプタ−６−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例１３）（５０．０ｍｇ、０．０８８２ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（４１．３ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．２１（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.37 (s, 1H), 8.77 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 8.65 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.10 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 7.80 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.71 - 7.65 (m, 1H), 7.62 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.03 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 4.94 (dd, J = 12.3, 5.3 Hz, 1H), 4.39 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 4.32 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.92 - 3.81 (m, 4H), 3.11 (s, 4H), 2.75 - 2.68 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.45 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.16 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 1.95 (dd, J = 15.1, 7.5 Hz, 2H), 1.87 (dd, J = 14.6, 7.2 Hz, 2H), 1.83 - 1.70 (m, 7H), 1.54 (dd, J = 15.2, 8.1 Hz, 2H), 1.45 - 1.34 (m, 2H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.10 (s). LRMS: m/z, C49H51F3N10O8の計算値: 964.99; 実測値, 987.45 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.62 分 (純度, >99%)。
実施例２７
Ｎ−（６’−（（６−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ヘキシル）オキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００６）の合成
標題化合物（１９．４ｍｇ、１０．６％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（オクタ−７−イン−１−イルオキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例１４）（１０８．９ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（８７．６ｍｇ、０．２１２ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．１３（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.37 (s, 1H), 8.93 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.76 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.12 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.78 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.67 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.38 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 4.30 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.87 (s, 4H), 3.71 (dd, J = 13.8, 6.8 Hz, 1H), 3.11(s, 4H), 2.68 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.43 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.97 - 1.88 (m, 2H), 1.87 - 1.79(m, 2H), 1.79 - 1.72 (m, 2H), 1.72 - 1.61 (m, 2H), 1.42 (dd, J = 18.3, 10.3 Hz, 7H), 1.23 (q, J = 7.2 Hz,2H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.09 (s). LRMS, m/z: C50H53F3N10O8の計算値, 978.4; 実測値 979.39 (M+H)+. HPLC, tR = 10.6 分 (純度,>99%)。
実施例２８
Ｎ−（６’−（２−（２−（２−（（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００７）の合成
標題化合物（５３．９ｍｇ、４０．７％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例１５）（８０．０ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（５８．５ｍｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．１０（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.38 (s, 1H), 8.76 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 8.62 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.12 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.53 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.94 (dd, J = 12.5, 5.3 Hz, 1H), 4.61 - 4.56 (m, 2H), 4.32 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.93 - 3.84 (m, 6H), 3.75 - 3.61 (m, 10H), 3.15 (d, J = 4.3 Hz, 4H), 2.77 (dd, J = 19.8, 8.7 Hz, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.44 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.94 (dt, J = 15.0, 7.4 Hz, 2H), 1.82 - 1.72 (m, 2H), 1.64 (s, 4H), 1.45 - 1.35 (m, 2H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.13 (d, J = 16.2 Hz). LRMS, m/z, C51H55F3N10O11の計算値, 1040.4; 実測値, 1063.37 (M+Na)+. HPLC, TR = 9.89 分 (純度, >95.9%)。
実施例２９
Ｎ−（６’−（（１−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−２，５，８，１１，１４−ペンタオキサヘキサデカン−１６−イル）オキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００８用）の合成
標題化合物（５９．９ｍｇ、４４．７％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（６’−（３，６，９，１２，１５−ペンタオキサオクタデカ−１７−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例１６）（８５．０ｍｇ、０．１１９ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（５８．２ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．０８（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.39 (s, 1H), 8.77 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.51 (s,1H), 8.18 (s, 1H), 8.13 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.81 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 1.9 Hz,1H), 7.73 - 7.67 (m, 1H), 7.63 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.53 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 1.9Hz, 1H), 4.98 - 4.92 (m, 1H), 4.62 (s, 2H), 4.60 - 4.55 (m, 2H), 4.32 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.89 (dd, J =9.4, 7.1 Hz, 6H), 3.72 - 3.59 (m, 16H), 3.15 (d, J = 4.3 Hz, 4H), 2.78 (t, J = 11.9 Hz, 2H), 2.45 (t, J =7.3 Hz, 2H), 1.94 (dt, J = 14.9, 7.3 Hz, 2H), 1.82 - 1.73 (m, 3H), 1.65 (s, 4H), 1.45 - 1.35 (m, 2H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.07 (d, J = 11.6 Hz). LRMS, m/z, C55H63F3N10NO13の計算値, 1128.45; 実測値, 1151.40 (M+Na)+. HPLC, tR = 9.86 分 (純度, 99%)。
実施例３０
（±）−Ｎ−（６’−（（１−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−５−イル）プロパン−２−イル）オキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．０１０）の合成
標題化合物（１０３．４ｍｇ、６７．２％）を、実施例２２に記載のように、（±）−Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（ペンタ−４−イン−２−イルオキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例１８）（８６．２ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（７６．９ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）から、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．１７（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3, ジアステレオ異性体の１：１混合物) δ 9.31 (s, 1H), 8.71 (dd, J = 8.3, 2.1 Hz, 1H), 8.64 (dd, J = 4.7, 2.5 Hz, 1H), 8.51 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 8.38 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.10 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.06 (dd, J = 6.5, 2.5 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.64 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.59 (dd, J = 12.2, 6.2 Hz, 1H), 4.91 (dd, J = 12.4, 5.0 Hz, 1H), 4.40 - 4.26 (m, 2H), 3.86 (t, J = 4.5 Hz, 4H), 3.25 - 3.09 (m, 4H), 3.04 (d, J = 15.9 Hz, 2H), 2.91 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 2.76 (dd, J = 19.5, 7.8 Hz, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.39 (dd, J = 13.6, 7.4 Hz, 2H), 2.16 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 1.91 (dd, J = 15.2, 7.6 Hz, 2H), 1.77 - 1.68 (m, 2H), 1.46 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.34 (s, 2H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.10 (s). LRMS, m/z, C47H47F3N10O8の計算値, 936.35; 実測値, 959.51 (M+Na)+. HPLC, tR = 9.99 分 (純度, >99.9%)。
実施例３１
（±）−Ｎ−（６’−（（１−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル））アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−５−イル）ブタン−２−イル）オキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．０１２）の合成
標題化合物（１０３．４ｍｇ、８０．２％）を、実施例２２に記載のように、（±）−Ｎ−（６’−（ヘキサ−５−イン−３−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例２０）（７３．０ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（６２．７ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．２３（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3, ジアステレオ異性体の１：１混合物) δ 9.29 (s, 1H), 8.70 (dd, J = 8.4, 2.5 Hz, 1H), 8.64 (dd, J = 6.0, 2.4 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.12 - 8.04 (m, 2H), 7.81 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.67 - 7.59 (m, 2H), 7.55 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 5.54 - 5.45 (m, 1H), 4.91 (dd, J = 12.3, 5.0 Hz, 1H), 4.33 (dd, J = 8.6, 4.6 Hz, 2H), 3.86 (s, 4H), 3.18 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.14 (s, 2H), 3.05 (d, J =16.0 Hz, 2H), 2.91 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 2.76 (t, J = 11.5 Hz, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.38 (dd, J = 13.6, 7.3Hz, 2H), 2.15 (s, 1H), 1.89 (dd, J = 14.6, 6.9 Hz, 2H), 1.82 (dd, J = 14.7, 7.3 Hz, 2H), 1.71 (dt, J = 15.4,7.6 Hz, 2H), 1.32 (s, 2H), 1.04 (t, J = 7.4 Hz, 3H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.09 (s).LRMS, m/z, C48H49F3N10O8の計算値, 950.37; 実測値, 973.32 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.23 分 (純度, >99.9%)。
実施例３２
Ｎ−（３−（６−（２−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）エトキシ）−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．００９）の合成
標題化合物（３４ｍｇ、３６．８％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（３−（６−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例１７）（５１ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（４９．５ｍｇ、０．１２０ｍｍｏｌ）から、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．２５（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.37 (s, 1H), 8.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.13 (s, 2H), 8.08 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.70 - 7.56 (m, 3H), 7.54 - 7.50 (m,2H), 7.47 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.05 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.93 (dd, J = 12.3, 5.4 Hz, 1H), 4.70(t, J = 6.6 Hz, 2H), 4.35 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.86 - 3.78 (m, 4H), 3.27 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.09 - 3.01(m, 4H), 2.92 - 2.69 (m, 3H), 2.44 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.20 - 2.11 (m, 1H), 2.00 - 1.90(m, 2H), 1.84 - 1.73 (m, 2H), 1.46 - 1.34 (m, 2H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.09 (s).LRMS, m/z, C47H46F3N9O8の計算値, 921.34; 実測値, 920.30 (M-H)-, 944.23 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.35 分 ( 純度, >99.9%)。
実施例３３
（±）−Ｎ−（３−（６−（（１−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−５−イル）プロパン−２−イル）オキシ）−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物１．０１１）の合成
標題化合物（９１．３ｍｇ、５８．８％）を、実施例２２に記載のように、（±）−Ｎ−（４−メチル−３−（５−モルホリノ−６−（ペンタ−４−イン−２−イルオキシ）ピリジン−３−イル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例１９）（８６．９ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（７８．５ｍｇ、０．１９０ｍｍｏｌ）から、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．３１（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3, ジアステレオ異性体の１：１混合物) δ 9.30 (s, 1H), 8.70 (dd, J = 8.4, 3.8 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 18.6 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.08 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.63 (dt, J = 15.7, 5.0 Hz, 2H), 7.57 - 7.44 (m, 4H), 7.21 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.05 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 5.58 (dd, J = 11.1, 5.0 Hz, 1H), 4.95 - 4.87 (m, 1H), 4.41 - 4.25 (m, 2H), 3.85 (dd, J = 10.7, 6.3 Hz, 4H), 3.25 - 3.16 (m, 2H), 3.13 (d, J = 3.3 Hz, 2H), 3.03 (dd, J = 11.2, 4.6 Hz, 2H), 2.90 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 2.80 - 2.71 (m, 2H), 2.38 (dt, J = 15.2, 5.8 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.15 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 1.90 (dt, J = 14.2, 7.1 Hz, 2H), 1.72 (dt, J = 14.9, 7.3 Hz, 2H), 1.46 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.37 - 1.28 (m, 2H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.08 (s). LRMS, m/z, C48H48F3N9O8の計算値, 935.36; 実測値, 958.45 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.4 分 (純度,>99.9%)。
実施例３４
Ｎ−（３−（６−（４−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ブトキシ）−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドの合成
標題化合物（５７．３ｍｇ、３７．１％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（３−（６−（ヘキサ−５−イン−１−イルオキシ）−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（実施例２１）（８７．４ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（実施例８）（７２．３ｍｇ、０．１７５ｍｍｏｌ）から、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．２６（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.38 (s, 1H), 8.78 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.80 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.72 - 7.67 (m, 1H), 7.62 (dd, J = 16.9, 9.1 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.28 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.94 (dd, J = 12.3, 5.4 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 4.34 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.90 - 3.84 (m, 4H), 3.12 (d, J = 4.3 Hz, 4H), 2.91 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 2.81 (dd, J = 12.6, 5.7 Hz, 2H), 2.45 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.20 - 2.13 (m, 1H), 1.94 (dt, J = 25.5, 11.0 Hz, 6H), 1.79 (dt, J = 14.9, 7.3 Hz, 2H), 1.42 (dd, J = 15.7, 8.1 Hz, 2H), 1.26 (t, J = 7.2 Hz, 2H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.12 (s). LRMS, m/z, C49H50F3N9O8の計算値, 949.37; 実測値, 972.45 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.61 分 (純度,>99.9%)。
以下の実施例は、（１）リンカー成分を用いるＲＡＦのリガンドの調製、及び（２）以下の一般式のＲＡＦ分解性結合体化合物の調製、を記載する：
（１）リンカー成分を用いるＲＡＦのリガンドの調製
実施例３５
２−（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸（化合物１．０１３用）の合成
ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の２−（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（２８７ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、水素化ナトリウム（４３．４ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ、油中６０％分散液）を加え、３０分間撹拌後、Ｎ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２１７ｍｍｏｌ）を加え、８０℃の予熱した油浴上に置き、１時間攪拌すると、ＴＬＣはほとんど出発物質を示し、追加量の水素化ナトリウム（４３．４ｍｇ）を加え、１時間加熱すると、出発物質はなくなり、ほとんど極性生成物が形成された。反応混合物を室温に冷却し、１Ｎ ＨＣｌ水溶液で酸性化し、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。ＬＲＭＳは、所望の質量の存在を示した。残渣を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配を使用する１２ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（２８ｍｇ、１９．９％）をベージュ色の固体として得た。この生成物は、少量の２−（２−（２−（２−（ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸を含む。この物質を、さらに精製することなく次のステップでそのまま使用した。LRMS, m/z, C31H35F3N4O8の計算値, 648.24, 実測値, 647.17 (M-H)-。
（２）ＲＡＦ分解性結合体化合物の調製
実施例３６
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−４−オキソ−６，９，１２−トリオキサ−３−アザテトラデカン−１−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物１．０１３）の合成
ＤＭＦ（０．８ｍＬ）中の２−（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸（実施例３５）（２５ｍｇ、０．０３８５ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（１７．１ｍｇ、０．０３８５ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（４４ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）の冷（０℃）攪拌溶液に、そのままのＤＩＰＥＡ（３３．６μＬ、０．１９３ｍｍｏｌ）を加え、室温までゆっくりと温め、週末（７２時間）にわたって攪拌し、水（３ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×５ｍＬ）抽出し、合わせた抽出物を飽和重炭酸塩溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を２ｇのセライトに吸収させ、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配（０〜２０％）を使用する１２ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（１８ｍｇ、４３．４％）を白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．４５（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.10 (s, 1H), 8.81 - 8.77 (m, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.57 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.36 - 7.28 (m, J = 8.3 Hz, 5H), 7.09 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 5.06 - 4.95 (m, 1H), 4.78 - 4.65 (m, 2H), 4.62 - 4.53 (m, 2H), 4.46 (s, 1H), 4.06 - 3.84 (m, 8H), 3.79 - 3.51 (m, 10H), 3.21 - 3.10 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.40 - 2.31 (m, 1H), 2.18 - 2.05 (m, 1H), 1.44 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.97 (s, 9H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.01 (s). LRMS, m/z, C54H65F3N8O10Sの計算値, 1074.45; 実測値, 1073.43 (M-H)-; 1097.42 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.14 分 (純度, 98.69%)。
実施例３７から実施例５３は、化合物２．００１から２．００９の合成を記載しており、これらの結合体のそれぞれは、以下の式に包含される
実施例３７
１７−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−酸（化合物２．００１用）の合成
ステップＩ：１７−ヒドロキシ−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル
ＤＭＳＯ（５０．０ｍＬ）中の２−ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．４ｍＬ、３６．６ｍｍｏｌ）及び３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１，１４−ジオール（２７．０ｍＬ、１２８ｍｍｏｌ）の冷（０℃）撹拌溶液に、ＮａＨ（１．６０３３ｇ、４０．１ｍｍｏｌ、油中６０％）を２回に分けて加えた。反応混合物を室温まで暖め、２０時間撹拌し、水（５０ｍＬ）で希釈し、ＮａＣｌ（６０ｇ）で飽和させ、エーテル（３ｘ１００ｍＬ）で抽出し［水溶液を酢酸エチル（４×５０ｍＬ）により再抽出して、ＰＥＧ、ＤＭＳＯを含む７．５ｇ＊を得た］、有機抽出物を乾燥して粗製物（８．０ｇ）を得た［１Ｈ ＮＭＲはＰＥＧ、ＤＭＳＯ、及び油の存在を含む］。残渣（８．０ｇ）をエーテル（５０ｍＬ）に溶解し、水（５ｘ５ｍＬ）で洗浄し、相分離器を通過させ、濃縮して生成物１．７５ｇを得た。１Ｈ ＮＭＲは少量の油を示し、これをピペットで取り除いて、標題化合物（１．１ｇ、８．５％）を油状物として得た。水溶液を濃縮して、標題生成物（４．８５ｇ、３７．６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲは少量のＤＭＳＯ、ＰＥＧを示した。＊残渣（７．５ｇ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、水（５０ｍＬ）で希釈し、相分離器を通過させ、有機溶液を水（２０ｍＬ）で希釈し、５分間撹拌し、相分離器を通過させ、濃縮して標題生成物を得た（２．７ｇ、２１％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.02 (s, 2H), 3.75 - 3.58 (m, 20H), 1.47 (s, 9H). LRMS (ESI) m/z: C16H32O8の計算値, 352.21; 実測値 374.83 (M+Na)+。
ステップＩＩ、１７−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−酸
１，４−ジオキサン（４．２ｍＬ）中の１７−ヒドロキシ−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．０５ｇ、２．９９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、６０％水素化ナトリウム（２５１ｍｇ、６．２７ｍｍｏｌ、油中６０％）を加え、室温で３０分間攪拌した後、ＰＥＧを粉砕して球形にして、超音波処理したが役に立たず、ＤＭＦ（１ｍＬ）を加え、超音波処理し、得られた懸濁液に、Ｎ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（２７５ｍｇ、０．５９７ｍｍｏｌ）を一度に加え、これを８０℃に予熱した油浴上に４５分間置き、室温まで冷却し、水と１Ｎ ＨＣｌ水溶液を加え（ｐＨ４〜５に調整）、濃縮し、粗残渣を水中のアセトニトリル（５〜１００％）を使用する逆相ＳｉＯ２カートリッジ（８６ｇ）により２回のバッチで精製して、標題化合物（１３０ｍｇ、２９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲはいくらかのＰＥＧ酸の存在を示し、この物質を、さらに精製することなく次のステップで使用した。Ｒｆ＝０．３（ＤＣＭ中３０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.59 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.35 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 8.13 (s,1H), 7.76 - 7.68 (m, 2H), 7.56 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 4.60 - 4.44 (m, 2H), 3.98 - 3.53 (m,24H), 3.18 - 3.01 (m, 4H), 2.47 (s, 3H).LRMS, m/z, C35H43F3N4O10の計算値, 736.29; 実測値, 735.17 (M-H)-; 759.05 (M+Na)+。
実施例３８
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−２０−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−４−オキソ−６，９，１２，１５，１８−ペンタオキサ−３−アザイコサン−１−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．００１）の合成
ＤＭＦ（０．８ｍＬ）中の１７−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−酸（１３０ｍｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３、３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（１７．１ｍｇ、０．０３８５ｍｍｏｌ）、及びＨＡＴＵ（４４ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）の冷（０℃）撹拌溶液に、そのままのＤＩＰＥＡ（３３．６μＬ、０．１９３ｍｍｏｌ）を加え、室温までゆっくり温め、週末（７２時間）にわたって攪拌し、水（４ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３ｘ５ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜２０％）を使用する２４ｇの金ＳｉＯ２カートリッジ（Isco）により精製して、標題化合物（４８ｍｇ、２３．４％）を白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．３６（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.24 (s, 1H), 8.78 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.22 -8.14 (m, 2H), 7.80 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 7.8Hz, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 5H), 7.04 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 5.08 - 4.98 (m, 1H), 4.74 (t, J = 7.8 Hz, 1H),4.62 - 4.54 (m, 3H), 4.49 (s, 1H), 4.05 - 3.83 (m, 10H), 3.74 - 3.55 (m, 16H), 3.18 - 3.10 (m, 4H), 2.50 (s, 6H), 2.47 - 2.41 (m, 1H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.45 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.03 (s, 9H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.04 (s).LRMS, m/z, C58H73F3N8O12Sの計算値, 1162.5; 実測値, 1161.33 (M-H)-; 1185.2 (M+Na)+; HPLC, tR = 9.94 分 (純度, 98%)。
実施例３９
１４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−酸（化合物２．００２用）の合成
ステップＩ、１４−ヒドロキシ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル
ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の２−ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．４ｍＬ、３６．６ｍｍｏｌ）及び２，２’−（（オキシビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（オキシ）ジエタノール（３５．０ｍＬ、２０３ｍｍｏｌ）の冷（０℃）撹拌溶液に、ＮａＨ（１．６２１７ｇ、４０．６ｍｍｏｌ、油中６０％）を２回に分けて加えた。反応混合物をゆっくりと室温まで温め、２３時間撹拌し、水（５０ｍＬ）で希釈し、ＮａＣｌ（５０ｇ）で飽和させ、５分間撹拌し、Ｅｔ２Ｏ（３×１００ｍＬ）で抽出し、濃縮した。残渣をＤＣＭ（５０ｍＬ）及び水（２５ｍＬ）に取り、５分間撹拌した。有機溶液を相分離器に通し、濃縮し、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（５０〜１００％）を使用する８０ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（８．２ｇ、収率７２．７％）を淡黄色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．０８（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.02 (d, J = 1.0 Hz, 2H), 3.75 - 3.60 (m, 12H), 1.47 (s, 9H) ppm.LRMS (ESI) m/z: C14H28O7の計算値 308.3679; 実測値 330.95 (M+Na)+; 実測値 347.01 (M+K)+。
ステップＩＩ、１４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−酸
ジオキサン（４．５ｍＬ）中の１４−ヒドロキシ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（９８３．６ｍｇ、３．１９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、水素化ナトリウム（２８０．１ｍｇ、７．０２ｍｍｏｌ、鉱油中６０％）を室温で加え、３０分間撹拌した。反応混合物は淡い無色からベージュ色に変化し、ここに、Ｎ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（３００．５ｍｇ、０．６３５ｍｍｏｌ）を加えると、１５分後、ベージュ色の沈殿物が形成され、塊になり、ＤＭＦ（１ｍＬ）を加えて塊を破壊した。反応混合物を８０℃で１時間加熱し、室温まで冷却し、１Ｍ ＨＣｌ水溶液（約０．１ｍＬ）で酸性化し、得られた混合物を室温で５分間撹拌し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配（０〜１０％）を使用する４０ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（７０ｍｇ、収率１５．５％）を黄色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．１５（ＤＣＭ中２０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.44 (s, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.31 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 2H), 7.56 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.84 (m, 6H), 3.75 - 3.48 (m, 14H), 3.08 (s, 4H), 2.45 (s, 3H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -62.95 (s) ppm. LRMS (ESI) m/z: C33H39F3N4O9の計算値, 692.27; 実測値 691.07 (M-H)-。
実施例４０
Ｎ−（６’−（（（１６Ｒ）−１６−（（２Ｒ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）カルバモイル）シクロペンタンカルボニル）−１７，１７−ジメチル−１４−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１５−アザオクタデシル）オキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．００２）の合成
標題化合物（１９．２ｍｇ、２８．３％）を、実施例３８に記載のように、１４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−酸（４２．０ｍｇ、６０．６μｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（３５ｍｇ、０．０７８９ｍｍｏｌ）から、オフホワイトの固体として調製した。Ｒｆ＝０．２５（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.27 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.26 - 8.19 (m, 2H), 8.15 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.07 (m, 1H), 4.75 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 4.63 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.59 - 4.53 (m, 2H), 4.48 (bs, 1H), 4.02 - 3.85 (m, 10H), 3.74 - 3.53 (m, 14H), 3.21 - 3.09 (m, 4H), 2.51 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.07 (dd, J = 13.4, 8.3 Hz, 1H), 1.47 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.04 (s, 9H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -62.97 (s) ppm.LRMS (ESI) m/z: C57H70F3N7O11Sの計算値, 1117.48; 実測値 1119.22 (M+H)+; 実測値 1141.15 (M+Na)+; 実測値 1157.15 (M+K)+. HPLC, tR = 9.99 分 (純度, >99%)。ＨＰＬＣ方法：カートリッジ、Agilent、Zorbax-SB-CN、３．５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相、水中アセトニトリル（０〜１００％）は酢酸アンモニウム緩衝液を含む；流速、１．５ｍＬ／分、実行時間、２０分。
実施例４１
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−ブロモヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド、方法Ａ（化合物２．００３用）の合成
ステップＩ、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−ブロモヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（３−メチルチオフェン−２−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド
ＤＭＦ（８．０ｍＬ）中の６−ブロモヘキサン酸（４００．５ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（９１２．７ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（８５９．２ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ）、次にＤＩＰＥＡ（０．７２ｍＬ、４．１３ｍｍｏｌ）を連続して加えた。反応混合物を室温で５３時間撹拌し、水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（６ｘ２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、１Ｍ ＨＣｌ（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜１０％）を使用する８０ｇの金ＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（７８０．０ｍｇ、６１．１％）を白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．４４（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.68 (s, 1H), 7.45 - 7.34 (m, 4H), 6.09 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.08 (p, J = 7.1Hz, 1H), 4.74 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.13 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.60 (dd, J = 11.5,3.4 Hz, 1H), 3.40 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 2.78 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 2.63 - 2.54 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.23 (t,J = 7.5 Hz, 2H), 2.12 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.83 (m, 1H), 1.82 - 1.73 (m, 2H), 1.70 - 1.59 (m, 2H),1.47 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.05 (s, 9H). LRMS, m/z, C29H41BrN4O0Sの計算値, 620.20; 実測値, 643.07 (M+Na)+。
ステップＩＩ、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−アジドヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド
ＤＭＳＯ（１５．０ｍＬ）中の（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−ブロモヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（７８０．０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ヨウ化カリウム（２１２．７ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）及びアジ化ナトリウム（３２６．５ｍｇ、５．０２ｍｍｏｌ）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、水（５０ｍＬ）で希釈し、Ｅｔ２Ｏ（４ｘ２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜１５％）を使用する４０ｇの金ＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（６００ｍｇ、８１．９％）を白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．５１（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.68 (s, 1H), 7.44 - 7.35 (m, 5H), 6.13 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.08 (p, J = 7.0 Hz, 1H), 4.73 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.61 (dd, J = 11.3, 3.7 Hz, 1H), 3.53 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.26 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.06 (bs, 1H), 2.62 (s, 1H), 2.57 (dd, J = 8.0, 5.2 Hz, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.22 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.10 - 2.01 (m, 1H), 1.83 (s, 1H), 1.81 - 1.72 (m, 1H), 1.69 - 1.54 (m, 3H), 1.47 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 1.45 - 1.35 (m, 2H), 1.05 (s, 9H). LRMS, m/z, (for C29H41N7O4S) の計算値, 583.29; 実測値, 606.14 (M+Na)+; 実測値, 581.95 (M-H)-。
実施例４２
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−３，３−ジメチル−２−（６−（４−（（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）ブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．００３）の合成
標題化合物（３４．９ｍｇ、５１．７％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（３５．０ｍｇ、０．０５５７ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−アジドヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（３５．８ｍｇ、０．０６１２ｍｍｏｌ）から、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．１７（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.51 (s, 1H), 8.66 (s, 2H), 8.26 (d, J = 13.8 Hz, 2H), 8.18 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.61 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.36 (q, J = 8.1 Hz, 5H), 7.02 (s, 1H), 6.33 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.11 - 5.02 (m, 1H), 4.77 - 4.64 (m, 3H), 4.63 - 4.54 (m, 4H), 4.52 (s, 1H), 4.19 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.88 (dd, J = 9.4, 4.3 Hz, 6H), 3.69 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 3.61 (s, 6H), 3.13 (s, 4H), 2.49 (d, J = 9.6 Hz, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.24 - 2.06 (m, 4H), 1.73 (dtd, J = 21.1, 14.0, 7.1 Hz, 2H), 1.60 - 1.50 (m, 2H), 1.47 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.21 (dd, J = 15.5, 7.9 Hz, 2H), 1.02 (s, 9H) ppm.19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.01 (s) ppm. LRMS, m/z, C61H76F3N11O9の計算値, 1211.54; 実測値, 1234.25 (M+Na)+. HPLC, tR = 9.91 分 (純度, >99%)。
実施例４３
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−ブロモヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド、方法Ａ（化合物２．００４用）の合成
ステップＩ、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−ブロモヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（３−メチルチオフェン−２−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド
ＤＭＦ（８．０ｍＬ）中の６−ブロモヘキサン酸（４００．５ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（９１２．７ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（８５９．２ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ）、次にＤＩＰＥＡ（０．７２ｍＬ、４．１３ｍｍｏｌ）を連続して加えた。反応混合物を室温で５３時間撹拌し、水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（６ｘ２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を水で洗浄した。１Ｍ ＨＣｌ水溶液（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜１０％）を使用する８０ｇの金ＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（７８０．０ｍｇ、６１．１％）を白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．４４（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.68 (s, 1H), 7.45 - 7.34 (m, 4H), 6.09 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.08 (p, J = 7.1Hz, 1H), 4.74 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.13 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.60 (dd, J = 11.5,3.4 Hz, 1H), 3.40 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 2.78 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 2.63 - 2.54 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.23 (t,J = 7.5 Hz, 2H), 2.12 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.83 (m, 1H), 1.82 - 1.73 (m, 2H), 1.70 - 1.59 (m, 2H),1.47 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.05 (s, 9H). LRMS, m/z, C29H41BrN4O0Sの計算値, 620.20; 実測値, 643.07 (M+Na)+。
ステップＩＩ、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−アジドヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド
ＤＭＳＯ（１５．０ｍＬ）中の（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−ブロモヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（７８０．０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ヨウ化カリウム（２１２．７ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）及びアジ化ナトリウム（３２６．５ｍｇ、５．０２ｍｍｏｌ）を連続して加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、水（５０ｍＬ）で希釈し、Ｅｔ２Ｏ（４ｘ２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜１５％）を使用する４０ｇの金ＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（６００ｍｇ、８１．９％）を白い固体として得た。Ｒｆ＝０．５１（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.68 (s, 1H), 7.44 - 7.35 (m, 5H), 6.13 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.08 (p, J = 7.0 Hz, 1H), 4.73 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.61 (dd, J = 11.3, 3.7 Hz, 1H), 3.53 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.26 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.06 (bs, 1H), 2.62 (s, 1H), 2.57 (dd, J = 8.0, 5.2 Hz, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.22 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.10 - 2.01 (m, 1H), 1.83 (s, 1H), 1.81 - 1.72 (m, 1H), 1.69 - 1.54 (m, 3H), 1.47 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 1.45 - 1.35 (m, 2H), 1.05 (s, 9H). LRMS, m/z, (for C29H41N7O4S) の計算値, 583.29; 実測値, 606.14 (M+Na)+; 実測値, 581.95 (M-H)-。
実施例４４
（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（（２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．００４用）の合成
ステップＩ、４−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−メチル：
アルゴンガスを、メタノール（１００ｍＬ）中の粗製４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−カルボン酸メチル（５ｇ、３２．４ｍｍｏｌ）（参照：ＷＯ２０１５／１５８４２７、ｐ−３４）の溶液に５分間バブリングし、１０％Ｐｄ担持活性炭（１．５９ｇ）を加え、水素雰囲気下でバルーン（２つのバルーンを互いに挿入）を使用して４０時間攪拌し、触媒を濾別し、メタノール（５０ｍＬ）ですすぎ、濾液を濃縮した。残渣を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（０〜１００％）を使用する２ｘ１００ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、４−オキソテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸メチル（１．５６ｇ、３０．４％）及び標題化合物（３．０３ｇ、５８．３％）無色の油状物として得た。４−オキソテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸メチル。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.41 (ddd, J = 11.7, 7.0, 2.5 Hz, 1H), 4.32 (dd, J = 10.8, 3.9 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.78 (dd, J = 11.6, 3.4 Hz, 1H), 2.77 - 2.60 (m, 3H), 2.46 - 2.38 (m, 1H)。４−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−メチル。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.18 (ddd, J = 11.9, 4.7, 2.5 Hz, 1H), 4.00 (dd, J = 11.3, 2.6 Hz, 1H), 3.94 -3.84 (m, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.48 (td, J = 11.9, 2.4 Hz, 1H), 2.35 - 2.27 (m, 1H), 1.97 - 1.87 (m, 1H),1.73 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 1.66 - 1.52 (m, 2H)。ヒドロキシル基の相対的な立体構造は、暫定的にシスとして割り当てられた。
ステップＩＩ、４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−メチル：
ＤＣＭ（３２ｍＬ）中の４−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−メチル（３．０４ｇ、１９ｍｍｏｌ）及びイミダゾール（１．９４ｇ、２０．９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（３．１５ｇ、２０．９ｍｍｏｌ）を室温で加え、２時間撹拌した後、固体を濾別し、エーテルですすぎ、合わせた濾液を濃縮した。残渣をエーテル（１００ｍＬ）に取り、水（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮して、標題化合物（５．２ｇ、９９．８％）を無色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．６（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.14 (ddd, J = 11.8, 4.5, 3.0 Hz, 1H), 3.98 (dd, J = 11.0, 2.8 Hz, 1H), 3.88 - 3.78 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.44 (td, J = 11.7, 2.5 Hz, 1H), 2.18 - 2.09 (m, 1H), 1.80 - 1.71 (m, 1H), 1.65 - 1.53 (m, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.06 (s, 6H)。
ステップＩＩＩ、（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）メタノール：
ＴＨＦ（２８．４ｍＬ、５６．８ｍｍｏｌ）中のＬｉＡｌＨ４の冷（０℃）撹拌溶液に、ＴＨＦ（４ｍＬ）中の４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−メチル（５．２ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）の溶液を加え、２時間撹拌し（浴温は１０℃に達した）、冷却浴を取り外し、１時間撹拌し、氷浴、水（２．０６ｍＬ）で冷却し、１５％ＮａＯＨ水溶液（２．０６ｍＬ）を滴加し（細心の注意）、得られた白色の固体に水（６．９ｍＬ）を加え、１０分間撹拌し、エーテル（１００ｍＬ）で希釈し、濾別し、エーテル（１００ｍＬ）ですすぎ、合わせた濾液を乾燥し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（０〜１００％）を使用する４０ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（４．０８ｇ、８７．４％）を無色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．４２（ヘキサン中６０％ＥｔＯＡｃ）。NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.01 (ddd, J = 11.7, 4.7, 1.6 Hz, 1H), 3.83 - 3.73 (m, 1H), 3.63 - 3.51 (m,2H), 3.46 - 3.38 (m, 2H), 1.98 (dd, J = 7.7, 4.8 Hz, 1H), 1.80 - 1.69 (m, 2H), 1.61 - 1.50 (m, 1H), 1.37- 1.25 (m, 1H), 0.88 (s, 9H), 0.06 (s, 6H)。
ステップＩＶ、（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチル（（２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）シラン：
ＴＨＦ（９ｍＬ）中の水素化ナトリウム（３１２ｍｇ、７．７９ｍｍｏｌ、油中６０％）の冷（氷）撹拌懸濁液に、ＴＨＦ（３ｍＬ）中の（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）メタノール（９６０ｍｇ、３．９ｍｍｏｌ）の溶液を加え、５０分間攪拌後、ＴＢＡＩ（１２６ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）及び臭化プロパルギルの溶液（１．１６ｍＬ、７．７９ｍｍｏｌ、８０％トルエン溶液）を加え、室温まで温め、３時間撹拌し、５０℃で３時間加熱し、週末にわたって撹拌し（変換率は８５％超である）、氷浴で冷却し、冷飽和塩化アンモニウム溶液に注ぎ、酢酸エチル（３ｘ３０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（０〜５０％及び１００％）を使用する４０ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（６００ｍｇ、５４．１％）を無色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．４５（ヘキサン中２０％酢酸エチル）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.24 (dd, J = 15.9, 2.4 Hz, 1H), 4.18 (dd, J = 15.9, 2.4 Hz, 1H), 4.05 - 3.98(m, 1H), 3.81 - 3.71 (m, 1H), 3.58 - 3.48 (m, 3H), 3.41 (td, J = 12.3, 2.1 Hz, 1H), 2.43 (t, J = 2.4 Hz,1H), 1.82 - 1.70 (m, 2H), 1.63 - 1.46 (m, 1H), 1.40 - 1.24 (m, 1H), 0.88 (s, 9H), 0.06 (s, 6H)。
ステップＶ、（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−オール：
ＴＨＦ中のＴＢＡＦの溶液（３．１６ｍＬ、３．１６ｍｍｏｌ）を、（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチル（（２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）シラン（６００ｍｇ、２．１１ｍｍｏｌ）に加え、５０℃で２時間加熱し、室温に冷却し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（０〜１００％）を使用する４０ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（３５５ｍｇ、９９％）を無色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．３９（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.24 (dd, J = 15.9, 2.4 Hz, 1H), 4.19 (dd, J = 15.9, 2.4 Hz, 1H), 4.07 (ddd, J= 11.8, 4.8, 1.6 Hz, 1H), 3.87 - 3.77 (m, 1H), 3.59 - 3.52 (m, 3H), 3.44 (td, J = 12.2, 2.0 Hz, 1H), 2.44(t, J = 2.4 Hz, 1H), 1.98 - 1.86 (m, 2H), 1.61 - 1.46 (m, 2H), 1.38 - 1.23 (m, 1H)。
ステップＶＩ、（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（（２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）−ベンズアミド：
１，４−ジオキサン（１．２ｍＬ）中の（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−オール（１２１ｍｇ、０．７１３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、水素化ナトリウム（２８．５ｍｇ、０．７１３ｍｍｏｌ、油中６０％）を加え、室温で３０分間撹拌した後、Ｎ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（７３ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ）を一度に加え、これを、８０℃の予熱した油浴に２時間１５分間入れた。反応混合物を室温に冷却し、水（１０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３ｘ１０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、塩化メチレン中のメタノールの勾配（０〜１５％）を使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（４４ｍｇ、４５．４％）を無色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．２（５０％ＥｔＯＡｃ）。NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.67 - 8.58 (m, 2H), 8.20 - 8.14 (m, 2H), 8.11 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.86 -7.79 (m, 1H), 7.74 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.43 - 5.28 (m,1H), 4.28 - 4.02 (m, 3H), 3.92 - 3.85 (m, 4H), 3.83 - 3.69 (m, 1H), 3.67 - 3.50 (m, 3H), 3.18 - 3.06(m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.46 - 2.40 (m, 1H), 2.32 - 2.17 (m, 2H), 1.96 - 1.74 (m, 2H), 1.65 - 1.50 (m,1H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.10 (s).LRMS, m/z, C32H33F3N4O5の計算値, 610.24, 実測値, 609.02 (M-H)-。
実施例４５
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−３，３−ジメチル−２−（６−（４−（（（（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）メトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）ブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．００４）の合成
丸底フラスコ中で、ＴＨＦ（１．２ｍＬ）中のラセミ体−Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（（（２Ｒ＊，４Ｓ＊）−２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）−ベンズアミド（４４ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−アジドヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（５０．５ｍｇ、０．０８６５ｍｍｏｌ）に、水（０．３ｍＬ）中の硫酸銅５水和物（３．６ｍｇ、０．０１４４ｍｍｏｌ）及び水（０．３ｍＬ）中のアスコルビン酸ナトリウム（２．８６ｍｇ、０．０１４４ｍｍｏｌ）の溶液を加え、アルゴンでパージし、４２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨを使用してCelite（登録商標）に吸収させ、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜１５％）を使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物のジアステレオマー混合物（２８．５ｍｇ、３３．１％）を淡黄色の固体として得た。Ｒｆ＝０．１５（ＤＣＭ中の１０％メタノール）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.39 - 9.20 (m, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.64 - 8.59 (m, 1H), 8.29 - 8.22 (m, 2H),8.17 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.62 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 2.4Hz, 1H), 7.44 - 7.32 (m, 5H), 7.06 - 7.00 (m, 1H), 6.34 - 6.26 (m, 1H), 5.39 - 5.31 (m, 1H), 5.13 -5.02 (m, 1H), 4.78 - 4.63 (m, 4H), 4.52 (s, 1H), 4.32 - 4.24 (m, 2H), 4.16 - 4.07 (m, 1H), 4.00 (d, J =11.2 Hz, 1H), 3.91 - 3.82 (m, 4H), 3.77 - 3.68 (m, 1H), 3.65 - 3.53 (m, 4H), 3.16 - 3.04 (m, 4H), 2.55- 2.45 (m, 6H), 2.31 - 2.06 (m, 5H), 1.86 - 1.73 (m, 3H), 1.64 - 1.51 (m, 3H), 1.48 (d, J = 6.9 Hz, 3H),1.31 - 1.22 (m, 3H), 1.03 (s, 9H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.01 (s).LRMS, m/z, C61H74F3N11O9Sの計算値, 1193.53; 実測値, 1194.16 (M+H)+; 1216.91 (M+Na)+;1192.01 (M-H)-. HPLC, tR = 9.997 分 (純度, 97%)。
実施例４６
（±）−Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（（（２Ｓ＊，４Ｓ＊）−２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．００５用））の合成
ステップＩ、（±）−（２Ｓ＊，４Ｓ＊）−２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルベンゾエート：
ＴＨＦ（９ｍＬ）中のラセミ体（２Ｓ＊，４Ｒ＊）−２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−オール（３５５ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、トリフェニルホスフィン（８２１ｍｇ、３．１３ｍｍｏｌ）及び安息香酸（３８２ｍｇ、３．１３ｍｍｏｌ）を連続して加えた。得られた溶液に、純粋なジイソプロピルアゾジカルボキシレート（０．６１５μＬ、３．１３ｍｍｏｌ）［わずかに発熱性］を加え、室温で２４時間撹拌し、溶媒を除去し、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（０〜７０％）を使用する４０ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（７２０ｍｇ、定量的、純度７９．５％）を無色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．２８（ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.61 - 7.38 (m, 5H), 5.51 - 5.43 (m, 1H), 4.25 (dd, J = 15.9, 2.4 Hz, 1H),4.20 (dd, J = 15.9, 2.4 Hz, 1H), 4.08 - 4.00 (m, 1H), 4.00 - 3.90 (m, 2H), 3.62 - 3.51 (m, 2H), 2.43 (t, J= 2.4 Hz, 1H), 2.03 - 1.73 (m, 4H)。
ステップＩＩ、（±）−（２Ｓ＊，４Ｓ＊）−２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−オール：
メタノール（７ｍＬ）中の（±）−（２Ｓ＊，４Ｓ＊）−２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルベンゾエート（７２０ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ、純度７９．５％）に、ＬｉＯＨ水溶液（４．２ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ）を室温で加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌し、メタノールを蒸発させ、水（５ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（０〜１００％）を使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（２９０ｍｇ、２段階の全収率８１．７％）を無色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．４（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.31 - 4.26 (m, 1H), 4.21 (t, J = 2.1 Hz, 2H), 4.05 - 3.97 (m, 1H), 3.96 -3.88 (m, 1H), 3.84 (dd, J = 11.6, 4.2 Hz, 1H), 3.55 (dd, J = 10.2, 3.5 Hz, 1H), 3.51 (dd, J = 10.2, 6.2 Hz,1H), 2.43 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 1.88 (dddd, J = 14.0, 12.7, 5.5, 2.8 Hz, 1H), 1.73 - 1.54 (m, 3H), 1.41(brs, 1H).LRMS, m/z, C9H14O3の計算値, 170.09; 実測値, 192.93 (M+Na)+。
ステップＩＩＩ、（±）−Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（（（２Ｓ＊，４Ｓ＊）−２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル））テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド：
１，４−ジオキサン（１．２ｍＬ）中の（±）−（２Ｓ＊，４Ｓ＊）−２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−オール（２８６ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、水素化ナトリウム（２８．５ｍｇ、０．７１３ｍｍｏｌ、油中６０％）を加え、室温で３０分間撹拌した後、Ｎ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１５５ｍｇ、０．３３７ｍｍｏｌ）を一度に加え、これを８０℃の予熱した油浴上に２時間１５分置いた。反応混合物を室温に冷却し、水（１０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３ｘ１０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、塩化メチレン中のメタノールの勾配（０〜１５％）を使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（８０ｍｇ、３８．９％）を無色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．２（ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.60 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.20 - 8.12 (m, 2H), 8.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H),7.83 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 5.68 - 5.62 (m,1H), 5.47 - 5.39 (m, 1H), 4.27 - 4.18 (m, 1H), 4.07 - 3.92 (m, 2H), 3.92 - 3.84 (m, 4H), 3.64 - 3.49(m, 2H), 3.23 - 3.12 (m, 4H), 2.51 (s, 3H), 2.43 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 2.09 - 1.94 (m, 3H), 1.85 - 1.73(m, 1H).LRMS, m/z, C32H33F3N4O5の計算値, 610.24, 実測値, 633.09 (M+Na)+; 608.96 (M-H)-。
実施例４７
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−３，３−ジメチル−２−（６−（４−（（（（２Ｒ，４Ｒ）−４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）メトキシ）メチル）−１Ｈ−１ ２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）ブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド、及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−３，３−ジメチル−２−（６−（４−（（（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）メトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）ブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．００５）の合成：
標題化合物のジアステレオマー混合物（２８ｍｇ、１７．９％）を、２．００４に記載のように、Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（（（２Ｒ，４Ｒ）−２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、及びＮ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（（（２Ｓ，４Ｓ）−２−（（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（８０ｍｇ、０．１３１ｍｍｏｌ）、及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−アジドヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（９１．８ｍｇ、０．１５７ｍｍｏｌ）から、淡黄色の固体として調製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3; ~1:1 ジアステレオ異性体混合物) δ 9.40 - 9.31 (m, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.61 (s,1H), 8.30 - 8.23 (m, 2H), 8.17 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 - 7.70 (m, 1H), 7.62(t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.32 (m, 5H), 7.07 - 7.01 (m, 1H), 6.31 (d, J = 8.7Hz, 1H), 5.60 (brs, 1H), 5.12 - 5.02 (m, 1H), 4.77 - 4.70 (m, 1H), 4.69 - 4.65 (m, 3H), 4.52 (brs, 1H),4.32 - 4.19 (m, 2H), 4.03 - 3.91 (m, 3H), 3.88 - 3.82 (m, 4H), 3.68 - 3.45 (m, 4H), 3.20 - 3.08 (m,3H), 2.51 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.26 - 1.90 (m, 6H), 1.85 - 1.67 (m, 3H), 1.64 - 1.50 (m, 3H), 1.48 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.30 - 1.21 (m, 2H), 1.03 (s, 9H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.01 (s). LRMS, m/z, C61H74F3N11O9Sの計算値, 1193.53; 実測値, 1217.1 (M+Na)+;1192.23 (M-H)-. HPLC, tR = 10.04 分 (純度, 98.7%)。
実施例４８
Ｎ−（６’−（２−（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（２．００６用）の合成
標題化合物（１１５ｍｇ、３３．４％）を、実施例９に記載のように、２，２’−（（オキシビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（オキシ））ジエタノール（１．０５ｇ、５．４３ｍｍｏｌ）、水素化ナトリウム（５．４３ｍｍｏｌ）、及びＮ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（２５０ｍｇ、０．５４３ｍｍｏｌ）からガムとして調製した。Ｒｆ＝０．３（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.77 (s, 1H), 8.67 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.13 (d, J = 7.8 Hz, 1H),8.09 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.02(d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.58 - 4.50 (m, 2H), 3.92 - 3.87 (m, 2H), 3.87 - 3.81 (m, 4H), 3.74 - 3.68 (m, 4H),3.68 - 3.61 (m, 6H), 3.58 - 3.53 (m, 2H), 3.16 - 3.08 (m, 4H), 2.47 (s, 3H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.05 (s).19F NMR (376 MHz, CDCl3). LRMS, m/z, C31H37F3N4O7の計算値, 634.26, 実測値, 657 (M+Na)+, 633 (M-H)-。
実施例４９
（Ｒ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）カルバモイル）−ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−Ｎ−（２−（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１−オキソブタン−２−アミニウムホルメート（化合物２．００６）の合成
ステップＩ、Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（２−（２−（２−（２−オキソエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
ＤＣＭ（２ｍＬ）中の塩化オキサリル（２１μＬ、０．２４５ｍｍｏｌ）の冷（−７０℃）撹拌溶液に、ＤＣＭ（１ｍＬ）中のＤＭＳＯ（３７μＬ、０．５２１ｍｍｏｌ）の溶液を加え、３０分間撹拌した後、ＤＣＭ（２ｍＬ）中のＮ−（６’−（２−（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１１５ｍｇ、０．１８１ｍｍｏｌ）の溶液を加え、同じ温度で３０分間攪拌した後、トリエチルアミン（７８μＬ、０．５５６ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌し、水（１ｍＬ）でクエンチした。反応混合物を酢酸エチル（３ｘ１０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を食塩水で再洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮して、Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（２−（２−（２−（２−オキソエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１２０ｍｇ）をＳＭとともに無色の油状物として得た。この物質を、さらに精製することなく次のステップでそのまま使用した。LRMS m/z, C31H35F3N4O7の計算値, 632.25; 実測値, 656.96 (M+Na)+。
ステップＩＩ、（Ｒ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−Ｎ−（２−（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１−オキソブタン−２−アミニウムホルメート
ＤＣＥ（３ｍＬ）中の、ステップＩからのＮ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（２−（２−（２−（２−オキソエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１２０ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）、及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（８１ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（７７ｍｇ、０．３６４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌し、水（５ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３ｘ１０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣をCelite（登録商標）に吸収させ、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜３０％）を使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−６，９，１２−トリオキサ−３−アザテトラデカン−１−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（２５ｍｇ、１２．９％）をガムとして得た。この化合物の純度は約８５％であり、これを逆相分取ＨＰＬＣにより再精製して、標題化合物（２０ｍｇ、９．９２％）を白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．１５（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.33 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.25 (s, 2H), 8.16 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.88 - 7.76 (m, 4H), 7.72 (s, 1H), 7.60 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.27 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.03 (s, 1H), 5.00 - 4.90 (m, 1H), 4.84 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.59 (brs, 2H), 4.39(s, 1H), 3.99 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 3.95 - 3.83 (m, 6H), 3.76 - 3.55 (m, 10H), 3.38 (d, J = 9.3 Hz, 1H),3.19 - 3.08 (m, 4H), 3.03 - 2.91 (m, 1H), 2.87 - 2.73 (m, 1H), 2.63 (s, 2H), 2.49 (s, 6H), 2.44 - 2.33(m, 1H), 2.08 - 1.97 (m, 1H), 1.41 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.05 (s, 9H)。これはギ酸塩である。LRMS, m/z,親C54H67F3N8O9Sの計算値, 1060.47, 実測値, 1059.09 (M-H)-; 1061.1 (M+H)+;1083.03 (M+Na)+. HPLC, tR = 9.77 分 (純度, >95%)。ＨＰＬＣ、ｔＲ＝９．７７分（純度＞９５％）。分取ＨＰＬＣ方法：カラム、Phenomenex、Synergi、4μ、Max-RP 80A、AX；２５０ｘ２１．２ｍｍ、移動相、水中０．２％ギ酸緩衝液を使用した水中アセトニトリル（１０％〜１００％、２５分）；流速、１５ｍＬ／分。ＨＰＬＣ方法：カラム、Agilent、Zorbax Eclipse XDB-C8、５μｍ、４．６ｘ１５０ｍｍ、移動相、水中アセトニトリル（５〜１００％）には酢酸アンモニウム緩衝液（０．５ｇ／Ｌ）を含む；流速、１．５ｍＬ／分、実行時間、２０分。
実施例５０
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−アミノヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．００７用）の合成
酢酸エチル（３ｍＬ）中の（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−アジドヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（１１５ｍｇ、０．１９７ｍｍｏｌ）及びメタノール（０．５ｍＬ）の脱気した攪拌溶液に、１０％パラジウム担持活性炭（２１ｍｇ）を加え、水素ガスでパージし、バルーンを使用して水素雰囲気下で１６時間撹拌し、Celite（登録商標）のパッドで濾過し、メタノール−酢酸エチル（１：１、５０ｍＬ）ですすぎ、濾液を濃縮して、標題化合物（８５ｍｇ、７７．４％）を白色の固体として得た。この粗物質を、さらに精製することなく次のステップでそのまま使用した。LRMS, m/z, C29H43N5O4Sの計算値, 557.30; 実測値, 580.09 (M+Na)+, 555.9 (M-H)-。
実施例５１
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２０−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−１１，１８−ジオキソ−３，６，９−トリオキサ−１２，１９−ジアザヘニコサン−２１−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．００７）の合成
標題化合物（１２．１ｍｇ、１３．２％）を、実施例３６に記載のように、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の２−（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸（５０ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−アミノヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（４３ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）から、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．２５（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.31 (s, 1H), 8.79 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.20 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J =7.8 Hz, 1H), 7.42 - 7.31 (m, 5H), 7.07 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.89 - 6.83 (m, 1H), 6.33 (d, J = 8.5 Hz, 1H),5.09 - 5.01 (m, 1H), 4.71 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 4.64 - 4.55 (m, 3H), 4.48 (brs, 1H), 4.00 (d, J = 11.2 Hz,1H), 3.96 - 3.83 (m, 7H), 3.77 - 3.54 (m, 11H), 3.17 - 3.07 (m, 5H), 2.51 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.44 -2.34 (m, 1H), 2.21 - 2.06 (m, 3H), 1.88 - 1.75 (m, 2H), 1.46 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.5-1.1 (m, 4H), 1.00(s, 9H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.02 (s).LRMS, m/z, C60H76F3N9O11Sの計算値, 1187.53; 実測値, 1210.16 (M+Na)+. HPLC, tR = 9.35 分 (純度, 94% @254 nM; 95.5% @ 234 nM)。ＨＰＬＣ方法：カラム、Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ−Ｃ８、５μｍ、４．６ｘ１５０ｍｍ、移動相、水中アセトニトリル（５〜１００％）は酢酸アンモニウム緩衝液（０．５ｇ／Ｌ）を含む；流速、１．５ｍＬ／分、実行時間、２０分。
実施例５２
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−３，３−ジメチル−２−（６−（４−（１６−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−２，５，８，１１，１４−ペンタオキサヘキサデシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）ブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．００８）の合成
標題化合物（２９．９ｍｇ、１６．５％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（６’−（３，６，９，１２，１５−ペンタオキサオクタデカ−１７−イン−１−イルオキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（９９．６ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−アジドヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（９０．０ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．２５（１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.73 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.62 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.33 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.20 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.38 (m, 5H), 7.05 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 14.3, 7.1 Hz, 1H), 4.74 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 4.62 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.60 - 4.57 (m, 2H), 4.54 (s, 1H), 4.21 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.98 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.89 (t, J = 8.4 Hz, 6H), 3.70 (dd, J = 5.7, 3.1 Hz, 2H), 3.66 - 3.57 (m, 16H), 3.16 (d, J = 4.2 Hz, 4H), 2.52 (s, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.25 - 2.08 (m, 4H), 1.80 - 1.67 (m, 2H), 1.60 - 1.51 (m, 2H), 1.49 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.27 - 1.16 (m, 2H), 1.04 (s, 9H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -62.97 (s) ppm.LRMS (ESI) m/z: C65H84F3N11O12Sの計算値, 1299.60; 実測値 1322.09 (M+Na)+; 実測値 1298.06 (MH)-. HPLC, tR = 9.76 分 (純度, >99%)。ＨＰＬＣ方法：カートリッジ、Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｚｏｒｂａｘ−ＳＢ−ＣＮ、３．５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相、水中のアセトニトリル（０〜１００％）は酢酸アンモニウム緩衝液を含む；流速、０．１ｍＬ／分、実行時間、２０分。
実施例５３
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−３，３−ジメチル−２−（５−（４−（（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ペンタンアミド）ブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．００９）の合成
標題化合物（３２．８ｍｇ、収率３３．６％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（５１．２ｍｇ、０．０８１４ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（５−アジドペンタンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（８４．９ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）から、白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．３１（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.25 (s, 1H), 8.71 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.18 - 8.16 (m k, 2H), 7.81 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.40 - 7.38 (m , 2H), 7.35 (s, 2H), 7.34 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.10 - 5.01 (m, 1H), 4.70 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.62 - 4.57 (m, 4H), 4.50 (bs, 1H), 4.31 (bs, 1H), 4.21 (td, J = 7.0, 2.3 Hz, 2H), 3.99 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 3.92 - 3.83 (m, 6H), 3.71 - 3.69 (m, 2H), 3.64 - 3.61 (m, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.17 - 3.10 (m, 4H), 2.51 (s, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.21 (ddd, J = 23.7, 14.9, 7.4 Hz, 2H), 2.10 (dd, J = 13.8, 8.5 Hz, 1H), 1.88 (s, 1H), 1.88 - 1.78 (m, 2H), 1.59 - 1.50 (m, 2H), 1.47 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.02 (s, 9H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.01 (s) ppm. LRMS (ESI) m/z: C60H74F3N11O10Sの計算値, 1197.53; 実測値 1220.03 (M+H)+; 実測値 1196.91 (M-H)-. HPLC 純度 (>99% @ 254 nm; >99% @ 234 nm; 9.719 分)。ＨＰＬＣ純度（２５４ｎｍで＞９９％、２３４ｎｍで＞９９％、９．７１９分）。ＨＰＬＣ方法：カートリッジ、Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｚｏｒｂａｘ−ＳＢ−ＣＮ、３．５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相、水中アセトニトリル（０〜１００％）は酢酸アンモニウム緩衝液を含む；流速０．１ｍＬ／分、実行時間、２０分。
実施例５４及び実施例５５は、化合物２．０１１の合成を記載し、この結合体は、以下の式に包含される
実施例５４
Ｎ−（３−（６−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０１１用）の合成
標題化合物（１４０ｍｇ、４４．６％）を、実施例９に記載のように、２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール（４７１ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）及びＮ−（３−（６−フルオロ−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（２３０ｍｇ、０．５０１ｍｍｏｌ）から、無色の油状物として調製した。Ｒｆ＝０．５（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.06 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1H),7.72 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.64 - 7.56 (m, 2H), 7.48 (brs, 1H), 7.29 - 7.24 (m, 1H), 7.03 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 4.59 - 4.52 (m, 2H), 4.19 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.94 - 3.84 (m, 6H), 3.75 - 3.64 (m, 8H), 3.14 (d, J= 4.1 Hz, 4H), 2.42 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 2.25 (s, 3H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.09 (s).LRMS, m/z, C33H36F3N3O6の計算値, 627.26, 実測値, 649.987 (M+H)+, 626.11 (M-H)-。
実施例５５
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−３，３−ジメチル−２−（６−（４−（（２−（２−（２−（（５−（２−メチル−５−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）フェニル）−３−モルホリノピリジン−２−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）ブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．０１１）の合成
標題化合物（３０ｍｇ、３４．５％）を、２．００４に記載のように、Ｎ−（４−メチル−３−（５−モルホリノ−６−（２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン−３−イル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（４５ｍｇ、０．０７１７ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−アジドヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（５０．２ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）から、次に、逆相分取ＨＰＬＣにより水中のアセトニトリルの勾配（１０〜１００％、０．２％ギ酸緩衝液を使用）を使用して、白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．４５（ＤＣＭ中１０％メタノール）。NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.67 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.11 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 2H), 7.63 - 7.58 (m, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.42 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.40 -7.36 (m, 3H), 7.34 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.28 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.21 (d, J =8.7 Hz, 1H), 5.05 (p, J = 7.0 Hz, 1H), 4.69 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 4.58 - 4.51 (m,3H), 4.47 (brs, 1H), 4.28 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.99 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 3.92 - 3.84 (m, 6H), 3.73 - 3.68(m, 2H), 3.66 - 3.61 (m, 6H), 3.57 (dd, J = 11.2, 3.7 Hz, 1H), 3.17 - 3.08 (m, 4H), 2.51 (s, 3H), 2.49 -2.41 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.23 - 2.10 (m, 2H), 2.10 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.77 (m, 2H), 1.69 - 1.55(m, 2H), 1.46 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.33 - 1.22 (m, 2H), 1.00 (s, 9H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.05 (s).LRMS, m/z, C62H77F3N10O10Sの計算値, 1210.55; 実測値, 1211.23 (M+H)+; 1210.22 (M-H)-.HPLC, tR = 10.47 分 (純度, >99.5%@254 及び 234 nM)。ＨＰＬＣ、ｔＲ＝１０．４７分（純度＞９９．５％＠２５４及び２３４ ｎＭ）。ＨＰＬＣ方法：カラム、Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ−Ｃ８、５μｍ、４．６ｘ１５０ｍｍ、移動相、水中アセトニトリル（５〜１００％）には酢酸アンモニウム緩衝液が含まれている流速、１．５ｍＬ／分、実行時間、２０分。分取ＨＰＬＣ方法：カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｓｙｎｅｒｇｉ、４μ、Ｍａｘ−ＲＰ ８０Ａ、ＡＸ；２５０ｘ２１．２ｍｍ、移動相、水中０．２％ギ酸緩衝液を使用した水中アセトニトリル（１０％〜１００％、２５分）；流速、１５ｍＬ／分。
実施例５６から実施例５９は、化合物２．０１２及び２．０１３の合成を記載しており、これらの結合体のそれぞれは、以下の式に包含される
実施例５６
Ｎ−（４−メチル−３−（５−モルホリノ−６−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）ピリジン−３−イル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０１２用）の合成
標題化合物（１００ｍｇ、８２．１％）を、実施例９に記載のように、１，４−ジオキサン（１．５ｍＬ）中の２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エタノール（１１０．５ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）（Aeschi et al., Eur. J. Org. Chem, 2017, pp. 4091-4103）及びＮ−（３−（６−フルオロ−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１０３．７ｍｇ、０．２２６ｍｍｏｌ）から、淡黄色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．６４（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 1H), 8.06 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 7.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 8.2, 2.2 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.62 - 4.57 (m, 2H), 4.27 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.99 - 3.94 (m, 2H), 3.93 - 3.86 (m, 4H), 3.19 - 3.09 (m, 4H), 2.45 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 2.26 (s, 3H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.15 (s) ppm. LRMS, m/z, C29H28F3N3O4の計算値, 539.20; 実測値, 537.98 (M-H)-。
実施例５７
Ｎ−（３−（６−（２−（（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）エトキシ）−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０１２）の合成
標題化合物（２７．３ｍｇ、３０．９％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（４−メチル−３−（５−モルホリノ−６−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）ピリジン−３−イル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−ベンズアミド（５０．０ｍｇ、０．０９２７ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（４３．２ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）から、薄いオレンジ色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．２５（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.39 (s, 1H), 8.78 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.08 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.81 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.72 - 7.67 (m, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.53 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.28 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 4.93 (dd, J = 12.1, 5.4 Hz, 1H), 4.75 (s, 2H), 4.63 - 4.56 (m, 2H), 4.37 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.99 - 3.93 (m, 2H), 3.88 - 3.82 (m, 4H), 3.13 (s, 4H), 2.91 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 2.77 (dd, J = 17.0, 12.9 Hz, 2H), 2.45 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.15 (s, 1H), 2.01 - 1.92 (m, 2H), 1.83 - 1.73 (m, 2H), 1.42 (s, 2H) ppm.19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.11 (s) ppm. LRMS, m/z, C48H48F3N9O9の計算値, 951.35; 実測値, 974.32 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.22 分 (純度, >99.9%)。
実施例５８
Ｎ−（３−（６−（ヘキサ−５−イン−１−イルオキシ）−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物ＳＲ−２．０１３用）の合成
標題化合物（１６９．４ｍｇ、９５．６％）を、実施例９に記載のように、１，４−ジオキサン（２．３ｍＬ）中のヘキサ−５−イン−１−オール（０．１８ｍＬ、１．６３ｍｍｏｌ）及びＮ−（３−（６−フルオロ−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１５１．４１ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ））から、淡黄色の油状物として調製した。Ｒｆ＝０．６３（ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.81 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 7.76 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.30 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.92 - 3.86 (m, 4H), 3.72 - 3.65 (m, 2H), 3.16 - 3.10 (m, 4H), 2.32 (td, J = 7.0, 2.7 Hz, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.24 (dd, J = 6.7, 2.6 Hz, 2H), 1.97 - 1.95 (m, 1H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.15 (s). LRMS, m/z, C30H30F3N3O3の計算値, 537.22; 実測値, 560.11 (M+Na)+。
実施例５９
Ｎ−（３−（６−（４−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ブトキシ）−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０１３）の合成
標題化合物（５７．３ｍｇ、３７．１％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（３−（６−（ヘキサ−５−イン−１−イルオキシ）−５−モルホリノピリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（８７．４ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ）、及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（７２．３ｍｇ、０．１７５ｍｍｏｌ）から、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．２６（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.38 (s, 1H), 8.78 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.80 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.72 - 7.67 (m, 1H), 7.62 (dd, J = 16.9, 9.1 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.28 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.94 (dd, J = 12.3, 5.4 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 4.34 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.90 - 3.84 (m, 4H), 3.12 (d, J = 4.3 Hz, 4H), 2.91 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 2.81 (dd, J = 12.6, 5.7 Hz, 2H), 2.45 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.20 - 2.13 (m, 1H), 1.94 (dt, J = 25.5, 11.0 Hz, 6H), 1.79 (dt, J = 14.9, 7.3 Hz, 2H), 1.42 (dd, J = 15.7, 8.1 Hz, 2H), 1.26 (t, J = 7.2 Hz, 2H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.12 (s) ppm. LRMS, m/z, C49H50F3N9O8の計算値, 949.37; 実測値, 972.45 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.61 分 (純度,>99.9%)。
実施例６０から実施例６８は、化合物２．０１４から２．０２０の合成を記載しており、これらの結合体のそれぞれは、以下の式に包含される
実施例６０
１４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−酸（化合物２．０１４用）の合成
ステップＩ、１４−ヒドロキシ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル
ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の２−ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．４ｍＬ、３６．６ｍｍｏｌ）及び２，２’−（（オキシビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（オキシ））ジエタノール（３５．０ｍＬ、２０３ｍｍｏｌ）の冷（０℃）撹拌溶液に、ＮａＨ（１．６２１７ｇ、４０．６ｍｍｏｌ、油中６０％）を２回に分けて加えた。反応混合物をゆっくりと室温まで温め、２３時間撹拌し、水（５０ｍＬ）で希釈し、ＮａＣｌ（５０ｇ）で飽和させ、５分間撹拌し、Ｅｔ２Ｏ（３×１００ｍＬ）で抽出し、濃縮した。残渣をＤＣＭ（５０ｍＬ）及び水（２５ｍＬ）に取り、５分間撹拌した。有機溶液を相分離器に通し、濃縮し、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（５０〜１００％）を使用する８０ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（８．２ｇ、収率７２．７％）を淡黄色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．０８（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.02 (d, J = 1.0 Hz, 2H), 3.75 - 3.60 (m, 12H), 1.47 (s, 9H) ppm.LRMS (ESI) m/z: C14H28O7の計算値 308.3679; 実測値 330.95 (M+Na)+; 実測値 347.01 (M+K)+。
ステップＩＩ、１４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−酸
ジオキサン（４．５ｍＬ）中の１４−ヒドロキシ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（９８３．６ｍｇ、３．１９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、水素化ナトリウム（２８０．１ｍｇ、７．０２ｍｍｏｌ、鉱油中６０％）を室温で加、室温で３０分間撹拌した。反応混合物は薄い無色からベージュ色に変化し、ここにＮ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（３００．５ｍｇ、０．６３５ｍｍｏｌ）を加え、１５分後、ベージュ色の沈殿物が形成され、塊になり、ＤＭＦ（１ｍＬ）を加えて塊を破壊した。反応混合物を８０℃で１時間加熱し、室温に冷却し、水性１Ｍ ＨＣｌ（約０．１ｍＬ）で酸性化し、得られた混合物を室温で５分間撹拌し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配（０〜１０％）を使用する４０ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（７０ｍｇ、収率１５．５％）を黄色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．１５（ＤＣＭ中２０％ＭｅＯＨ）。NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.44 (s, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.31 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 2H), 7.56 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.84 (m, 6H), 3.75 - 3.48 (m, 14H), 3.08 (s, 4H), 2.45 (s, 3H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -62.95 (s) ppm. LRMS (ESI) m/z: C33H39F3N4O9の計算値, 692.27; 実測値 691.07 (M-H)-。
実施例６１
Ｎ−（５−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）ペンチル）−１４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−アミド（化合物２．０１４））の合成
標題化合物（７．９ｍｇ、９％）を、実施例３６に記載のように、２−（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸（６０．６ｍｇ、０．０８７５ｍｍｏｌ）及び３−（４−（５−アミノペンチル）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（３２．１ｍｇ、０．０９７４ｍｍｏｌ）（Zhou et. al. J. Med. Chem. 2018, 61 (2), 462-481）から、白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．４１（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.04 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.71 (bs, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.19 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.79 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.62 (m, 2H), 7.36 (m, 2H), 7.05 (m, 1H), 7.03 (s, 1H), 5.19 (dd, J = 13.3, 5.1 Hz, 1H), 4.56 (m, 2H), 4.41 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 3.93 - 3.82 (m, 9H), 3.72 - 3.57 (m, 12H), 3.22 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 3.13 (s, 4H), 2.95 - 2.85 (m, 1H), 2.84 - 2.72 (m, 1H), 2.59 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.40 (ddd, J = 17.8, 13.3, 5.2 Hz, 1H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 1.81 (bs, 1H), 1.63 (dt, J = 15.1, 7.7 Hz, 2H), 1.53 (dt, J = 14.6, 7.3 Hz, 2H), 1.39 - 1.29 (m, 2H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.01 (s) ppm. LRMS (ESI) m/z: C51H60F3N7O11の計算値, 1003.43; 実測値 1026.06 (M+Na)+; 実測値 1002.19 (M-H)-. HPLC, tR = 9.35 分 (純度, 95%)。ＨＰＬＣ方法：カートリッジ、Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｚｏｒｂａｘ−ＳＢ−ＣＮ、３．５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相、水中アセトニトリル（０〜１００％）は酢酸アンモニウム緩衝液を含む；流速、０．１ｍＬ／分、実行時間、２０分。
実施例６２
２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸（化合物２．０１５用）の合成
ジオキサン（５．０ｍＬ）中の２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（３５０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、水素化ナトリウム（３３４ｍｇ、７．９８ｍｍｏｌ、油中６０％）を加え、３０分間攪拌した後、Ｎ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（３５０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を加え、これを、８０℃で予熱した油浴上に５分間置き、ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、３時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、水（１５ｍＬ）で希釈し、水性１Ｎ ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチル（４×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配（０〜２０％）を使用する４０ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（１８０ｍｇ、３９．２％）を褐色の固体として得た。Ｒｆ＝０．３（ＤＣＭ中３０％ＭｅＯＨ）。NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.83 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.24 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.10 (s,1H), 7.91 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.81 - 7.69 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 4.62 - 4.52 (m, 2H), 4.03 - 3.63 (m,10H), 3.21 - 3.09 (m, 4H), 2.48 (s, 3H). 19F NMR (376 MHz, CD3OD) δ -60.66 (d, J = 19.9 Hz).LRMS, m/z, C29H31F3N4O7の計算値, 604.21; 実測値, 602.94 (M-H)-。
実施例６３
Ｎ−（６’−（２−（２−（２−（（６−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）ヘキシル）アミノ−２−オキソエトキシ）エトキシ）エトキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０１５）の合成
ＤＭＦ中の２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸（６５ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）及び３−（４−（６−アミノヘキシル）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（３７．１ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）（Zhou et. al. J. Med. Chem. 2018, 61 (2), 462-481）の冷（０℃）撹拌溶液に、無水プロピルホスホン酸の５０％ＤＭＦ溶液（１２３μＬ、０．２６９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（９４μＬ、０．５３８ｍｍｏｌ）を連続して加え、２０時間攪拌し、水（５ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（４ｘ１０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を重炭酸塩溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣をＤＣＭを使用して３ｇCelite（登録商標）に吸収させ、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜２０％）を使用する２４ｇの金ＳｉＯ２カートリッジ（Isco）により精製して、２８ｍｇの生成物（９０％）を得た。この生成物を、水中のアセトニトリルの勾配（２５分間で１０〜１００％、緩衝液なし）を使用して逆相分取カラムで再精製し（３回注入）、標題化合物（２４ｍｇ、３１．２％）を白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．４５（１０％ＭｅＯＨ−ＤＣＭ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.82 (s, 1H), 8.77 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.14 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J =7.8 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 6.5, 2.0 Hz, 1H), 7.37 - 7.29 (m, 2H), 7.06 - 7.00 (m, 2H), 5.18 (dd, J = 13.3,5.1 Hz, 1H), 4.62 - 4.54 (m, 2H), 4.37 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.25 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.96 (s, 2H), 3.94- 3.90 (m, 2H), 3.88 - 3.81 (m, 4H), 3.76 - 3.70 (m, 2H), 3.70 - 3.64 (m, 2H), 3.25 - 3.15 (m, 2H),3.15 - 3.08 (m, 4H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.83 - 2.72 (m, 1H), 2.59 - 2.52 (m, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.44 -2.31 (m, 1H), 2.24 - 2.13 (m, 1H), 1.64 - 1.55 (m, 2H), 1.49 - 1.39 (m, 2H), 1.35 - 1.23 (m, 4H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.06 (s). LRMS, m/z, C48H54F3N7O9の計算値, 929.39; 実測値, 928.09 (M-H)-; 930.27 (M+H)+ ; 952.24 (M+Na)+.HPLC, tR = 9.56 分 (純度, >99.5%)。ＨＰＬＣ分取方法：カラム、Phenomenex, Synergi, 4μ, Max-RP 80A, AX; 250 x 21.2 mm, 移動相水中のアセトニトリル (10% 〜 100%, 25 分); 流速, 15 mL/分。
実施例６４
Ｎ−（２−（３−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）プロポキシ）エチル）−１４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−アミド（化合物２．０１６）の合成
標題化合物（４．４ｍｇ、４．６％）を、実施例６２に記載のように、１４−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−酸（実施例３９に記載のように調製）（６５ｍｇ、０．９３８ｍｍｏｌ）及び３−（４−（３−（２−アミノエトキシ）プロピル）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（３２．４ｍｇ、０．９３８ｍｍｏｌ）（Zhou et. al. J. Med. Chem. 2018, 61 (2), 462-481）から出発して。固体として調製した。Ｒｆ＝０．４５（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.92 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.19 (d, J = 7.8 Hz,1H), 7.94 (s, 1H), 7.81 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.65 - 7.60 (m, 2H), 7.42 - 7.33(m, 2H), 7.18 (brs, 1H), 7.03 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.20 (dd, J = 13.4, 5.1 Hz, 1H), 4.62 - 4.54 (m, 2H),4.43 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 3.94 (s, 2H), 3.92 - 3.83 (m, 6H), 3.73 - 3.67 (m,2H), 3.67 - 3.58 (m, 10H), 3.50 - 3.35 (m, 6H), 3.17 - 3.09 (m, 4H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.84 - 2.74(m, 1H), 2.69 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.45 - 2.32 (m, 1H), 2.23 - 2.14 (m, 1H), 1.96 - 1.82 (m, 2H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.04 (s). LRMS, m/z, C51H60F3N7O12の計算値, 1019.43; 実測値, 1018.25 (M-H)-; 1042.19 (M+Na)+. HPLC, RT = 9.1 分 (純度, 97%)。分取ＨＰＬＣ方法：カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｓｙｎｅｒｇｉ、４μ、Ｍａｘ−ＲＰ ８０Ａ、ＡＸ；２５０ｘ２１．２ｍｍ、移動相、水中アセトニトリル（１０％〜１００％、２５分）；流速、１５ｍＬ／分。
実施例６５
Ｎ−（６’−（２−（２−（２−（（５−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）ペンチル）アミノ−２−オキソエトキシ）エトキシ）エトキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０１７）の合成
標題化合物（６ｍｇ、６．０９％）を、２．０１５に記載のように、２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸（６５ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）及び３−（４−（５−アミノペンチル）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（３５．４ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）から、次に、水中のアセトニトリルの勾配（１０〜１００％、２５分、水中０．２％ギ酸緩衝液）を使用する逆相分取ＨＰＬＣにより、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．４４（１０％ＭｅＯＨ−ＤＣＭ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.78 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.68 (brs, 1H), 8.41 (brs, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.16(d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.82 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.68 - 7.55 (m, 3H), 7.37 - 7.31 (m, 2H),7.10 - 7.04 (m, 1H), 7.03 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.17 (dd, J = 13.2, 5.1 Hz, 1H), 4.62 - 4.56 (m, 2H), 4.37(d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.26 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.96 (s, 2H), 3.92 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.89 - 3.81 (m,4H), 3.76 - 3.70 (m, 2H), 3.69 - 3.64 (m, 2H), 3.26 - 3.16 (m, 2H), 3.16 - 3.09 (m, 4H), 2.93 - 2.85(m, 1H), 2.84 - 2.71 (m, 1H), 2.59 - 2.53 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.43 - 2.31 (m, 1H), 2.25 - 2.13 (m,1H), 1.66 - 1.55 (m, 3H), 1.54 - 1.45 (m, 2H), 1.37 - 1.23 (m, 2H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.05 (s).LRMS, m/z, C47H52F3N7O9の計算値, 915.38; 実測値, 913.77 (M-H)-; 916.14 (M+Na).HPLC, tR = 9.29 分 (純度, >95%)。分取ＨＰＬＣ方法：カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｓｙｎｅｒｇｉ、４μ、Ｍａｘ−ＲＰ ８０Ａ、ＡＸ；２５０ｘ２１．２ｍｍ、移動相、水中０．２％ギ酸緩衝液を使用した水中アセトニトリル（１０％〜１００％、２５分）；流速、１５ｍＬ／分。
実施例６６
Ｎ−（６’−（（１８−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）−１１−オキソ−３，６，９−トリオキサ−１２−アザオクタデシル）オキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０１８）の合成
標題化合物（１５．２ｍｇ、１６．４％）を、２．０１６に記載のように、２−（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸（８２．０ｍｇ、０．４２０ｍｍｏｌ）及び３−（４−（６−アミノヘキシル）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（２０２．１ｍｇ、０．４５５ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．３９（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.18 (s, 1H), 8.93 (bs, 1H), 8.82 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.17 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.60 (m, 2H), 7.36 (m, 2H), 7.03 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.19 (dd, J = 13.3, 5.1 Hz, 1H), 4.61 - 4.54 (m, 2H), 4.40 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.27 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.93 (s, 2H), 3.91 - 3.88 (m, 2H), 3.88 - 3.84 (m, 4H), 3.72 (m, 2H), 3.68 - 3.61 (m, 6H), 3.23 (dd, J = 13.8, 6.6 Hz, 2H), 3.13 (m, 4H), 2.91 - 2.83 (m, 1H), 2.84 - 2.72 (m, 1H), 2.59 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.38 (ddd, J = 26.4, 13.3, 5.0 Hz, 1H), 2.23 - 2.13 (m, 1H), 1.60 (m, 2H), 1.53 - 1.44 (m, 2H), 1.33 (m, 4H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.02 (s) ppm. LRMS (ESI) m/z: C50H58F3N7O10の計算値, 973.42; 実測値 996.19 (M+Na)+; 実測値 972.14 (M-H)-. HPLC, tR = 9.60 分 (純度, >99%)。ＨＰＬＣ方法：カートリッジ、Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｚｏｒｂａｘ−ＳＢ−ＣＮ、３．５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相、水中アセトニトリル（０〜１００％）は酢酸アンモニウム緩衝液を含む；流速、０．１ｍＬ／分、実行時間、２０分。
実施例６７
Ｎ−（６’−（（１５−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）−８−オキソ−３，６，１２−トリオキサ−９−アザペンタデシル）オキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０１９）の合成
標題化合物（３３．８ｍｇ、３３．７％）を、２．０１５に記載のように、２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸（６５ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）及び３−（４−（３−（２−アミノエトキシ）プロピル）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（３７．１ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．４４（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.93 (s, 1H), 8.86 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.19 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.66 - 7.56 (m, 3H), 7.35 (d, J = 4.0Hz, 2H), 7.21 - 7.13 (m, 1H), 7.02 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.16 (dd, J = 13.4, 5.1 Hz, 1H), 4.63 - 4.53 (m,2H), 4.41 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 3.99 (s, 2H), 3.93 - 3.87 (m, 2H), 3.88 - 3.81(m, 4H), 3.76 - 3.65 (m, 4H), 3.52 - 3.33 (m, 6H), 3.15 - 3.07 (m, 4H), 2.92 - 2.73 (m, 2H), 2.69 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.44 - 2.29 (m, 1H), 2.20 - 2.09 (m, 1H), 1.96 - 1.82 (m, 2H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.04 (s). LRMS, m/z, C47H52F3N7O10の計算値, 931.37; 実測値, 930.19 (M-H)-; 954.18 (M+Na)+. HPLC, tR = 9.07 分 (純度, 96.4%)。
実施例６８
Ｎ−（６’−（（１８−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）−１１−オキソ−３，６，９，１５−テトラオキサ−１２−アザオクタデシル）オキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０２０）の合成
標題化合物（１６ｍｇ、１７．７％）を、２．０１５に記載のように、２−（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸（６０ｍｇ）及び３−（４−（３−（２−アミノエトキシ）プロピル）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（３８．３ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ））から、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．３６（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.03 (s, 1H), 8.92 - 8.84 (m, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.19 (d, J = 7.8 Hz, 1H),7.96 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.65 - 7.58 (m, 2H), 7.37 -7.33 (m, 2H), 7.19 - 7.12 (m, 1H), 7.02 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.18 (dd, J = 13.3, 5.1 Hz, 1H), 4.62 - 4.54(m, 2H), 4.43 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 3.96 (s, 2H), 3.93 - 3.81 (m, 6H), 3.74 -3.68 (m, 2H), 3.67 - 3.61 (m, 5H), 3.51 - 3.36 (m, 7H), 3.17 - 3.07 (m, 4H), 2.93 - 2.65 (m, 4H), 2.48(s, 3H), 2.45 - 2.30 (m, 1H), 2.24 - 2.13 (m, 1H), 1.96 - 1.85 (m, 2H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.04 (s).LRMS, m/z, C49H56F3N7O11の計算値, 975.4; 実測値, 974.07 (M-H)-; 998.26 (M+Na)+. HPLC, tR = 9.1 分 (純度, 95%)。
実施例６９及び実施例１００は、化合物２．０２１〜２．０２３の合成を記載しており、これらの結合体のそれぞれは、以下の式に包含される
実施例６９
２−（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（化合物２．０２１用）の合成
ＤＭＳＯ（５０．０ｍＬ）中の２−ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．４ｍＬ、３６．６ｍｍｏｌ）及び２，２’−（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ジエタノール（２２．０ｍＬ、１６４ｍｍｏｌ）の冷（０℃）攪拌溶液に、６０％ＮａＨ（１．６０３３ｇ、４０．１ｍｍｏｌ）を２回に分けて加えた。反応混合物を室温までゆっくり温め、２４時間撹拌し、水（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（５０〜１００％）を使用する８０ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（３．３５ｇ、収率３４．７％）を、無色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．１８（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.02 (s, 2H), 3.71 (qd, J = 4.9, 2.9 Hz, 6H), 3.68 - 3.66 (m, 4H), 3.63 -3.59 (m, 2H), 1.47 (s, 9H) ppm. LRMS (ESI) m/z: C12H24O6の計算値 264.16; 実測値 287.02 (M+Na)+。
実施例７０
Ｎ−（６’−（（１８−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）−１１−オキソ−３，６，９，１５−テトラオキサ−１２−アザオクタデシル）オキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０２１）の合成
標題化合物（２２．４ｍｇ、２３．９％）を、実施例３６に記載のように、２−（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸（６１．３ｍｇ、０．０９４５ｍｍｏｌ）及び４−（３−（２−アミノエトキシ）プロピル）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（１４９．６ｍｇ、０．４１６ｍｍｏｌ）（Zhou et. al. J. Med. Chem. 2018, 61 (2), 462-481））から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．４５（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.79 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.76 - 8.68 (bs, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.14 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.05 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.95 (dd, J = 12.2, 5.3 Hz, 1H), 4.62 - 4.55 (m, 2H), 3.96 (s, 2H), 3.93 - 3.83 (m, 6H), 3.75 - 3.68 (m, 2H), 3.68 - 3.59 (m, 6H), 3.45 (t, J = 5.3 Hz, 5H), 3.18 - 3.09 (m, 6H), 2.88 (dd, J = 13.8, 3.7 Hz, 1H), 2.80 (dd, J = 12.5, 3.7 Hz, 1H), 2.77 - 2.70 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.13 (dd, J = 11.4, 6.1 Hz, 1H), 1.96 - 1.87 (m, 2H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.07 (s) ppm. LRMS (ESI) m/z: C49H54F3N7O12の計算値, 989.38; 実測値 990.26 (M+H)+; 実測値 1011.94 (M+Na)+; 実測値 988.38 (M-H)-. HPLC, tR = 9.60 分 (純度, >99%)。ＨＰＬＣ方法：カートリッジ、Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｚｏｒｂａｘ−ＳＢ−ＣＮ、３．５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相、水中アセトニトリル（０〜１００％）は酢酸アンモニウム緩衝液を含む；流速、０．１ｍＬ／分、実行時間、２０分。
実施例７１
Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０２２用）の合成
標題化合物（８１．９ｍｇ、６７％）を、実施例９に記載のように、１，４−ジオキサン（１．５ｍＬ）中の２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エタノール（１０９．６ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）及びＮ−（６’−フルオロ−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１０４．２ｍｇ、０．２２６ｍｍｏｌ））から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．１８（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.62 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.13 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.90 - 7.82 (m, 2H), 7.77 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.63 - 4.58 (m, 2H), 4.27 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.99 - 3.95 (m, 2H), 3.93 - 3.87 (m, 4H), 3.20 - 3.13 (m, 4H), 2.51 (s, 3H), 2.46 (t, J = 2.4 Hz, 1H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.16 (s) ppm. LRMS, m/z, C28H27F3N4O4の計算値, 540.2; 実測値, 539.01 (M-H)-。
実施例７２
Ｎ−（６’−（２−（（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）エトキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０２２）の合成
標題化合物（４５．５ｍｇ、５１．６％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（５０．０ｍｇ、０．０９２５ｍｍｏｌ）から、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．１４（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.38 (s, 1H), 8.77 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.25 (s,1H), 8.16 (s, 1H), 8.10 (d, J = 2.9 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.72 - 7.67(m, 1H), 7.65 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 4.94 (dd, J = 12.3,5.5 Hz, 1H), 4.74 (s, 2H), 4.63 - 4.55 (m, 2H), 4.36 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.98 - 3.93 (m, 2H), 3.87 - 3.82(m, 4H), 3.13 (s, 4H), 2.94 - 2.82 (m, 1H), 2.86 - 2.72 (m, 2H), 2.50 (d, J = 4.5 Hz, 3H), 2.45 (t, J =7.3 Hz, 2H), 2.16 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 1.95 (dd, J = 15.1, 7.3 Hz, 2H), 1.78 (dt, J = 15.0, 7.4 Hz, 2H),1.43 (dd, J = 15.6, 8.3 Hz, 2H) ppm.19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.11 (s) ppm. LRMS, m/z, C47H47F3N10O9の計算値, 952.35; 実測値, 975.32 (M+Na)+. HPLC, tR = 9.83 分 (純度, 95.3%)。
実施例７３
Ｎ−（６’−（（１５−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）−８−オキソ−３，６，１２−トリオキサ−９−アザペンタデシル）オキシ）−２−メチル−５’−モルホリノ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０２３）の合成
標題化合物（１６ｍｇ、１５．７％）を、ＴＪ−１８３に記載のように、２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸（６５ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）及び４−（３−（２−アミノエトキシ）プロピル）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（３８．６ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．４５（ＤＣＭ中の１０％メタノール）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.71 (d, J = 2.2 Hz, 2H), 8.46 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H),8.04 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.67 - 7.63 (m, 2H), 7.60 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.19 (brs, 1H), 7.06 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.93 (dd, J = 12.1, 5.3Hz, 1H), 4.63 - 4.57 (m, 2H), 3.99 (s, 2H), 3.95 - 3.89 (m, 2H), 3.89 - 3.83 (m, 4H), 3.75 - 3.70 (m,2H), 3.70 - 3.65 (m, 2H), 3.49 - 3.40 (m, 6H), 3.18 - 3.05 (m, 6H), 2.91 - 2.69 (m, 3H), 2.50 (s, 3H),2.17 - 2.08 (m, 1H), 1.94 - 1.85 (m, 2H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.08 (s).LRMS, m/z, C47H50F3N7O11の計算値, 945.35; 実測値, 943.89 (M-H)-; 968.07 (M+Na)+. HPLC, tR = 9.6 分 (>99.5%)。分取ＨＰＬＣ方法：カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｓｙｎｅｒｇｉ、４μ、Ｍａｘ−ＲＰ ８０Ａ、ＡＸ；２５０ｘ２１．２ｍｍ、移動相、水中アセトニトリル（１０％〜１００％、２５分）；流速、１５ｍＬ／分。
実施例７４から実施例８４は、化合物２．０２４から２．０３４の合成を記載しており、これらの結合体のそれぞれは、以下の式に包含される
実施例７４
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）ピコリンアミド（化合物２．０２４）の合成：
ステップＩ、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（プロパ−２−イン−１−イル）ピコリンアミドの合成
ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリン酸（１３２ｍｇ、０．２９２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、プロパルギルアミン（２０μＬ、０．３１３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１６７ｍｇ、０．４３８ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（４０３μＬ、２．３４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ及び水で希釈した。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮乾固した。残渣を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（０〜１００％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１０１ｍｇ、７１％）を得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.53 - 8.44 (m, 2H), 7.79 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.39 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.23 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 2.26 (s, 1H). LRMS (m/z) 計算値, 488.09; 実測値, 490.7 (M+H)+。
ステップＩＩ、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）ピコリンアミドの合成
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（プロパ−２−イン−１−イル）ピコリンアミド（３５ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（２．８ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）、硫酸銅（ＩＩ）５水和物（３．５ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）、及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（３１ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）（実施例８）の混合物に、ＴＨＦ（１．０ｍＬ）及び水（２０μＬ）を加えた。フラスコの上部空間をアルゴンで短時間パージし、室温で１８時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ及び水で希釈した。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、濃縮した。粗製物を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物を得た。生成物をＤＭＳＯに溶解し、水中のアセトニトリルの勾配を使用する逆相クロマトグラフィーにより精製し、次に凍結乾燥して、標題化合物（２２ｍｇ、３２％）を白色の固体として得た。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.14 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 9.28 - 9.13 (m, 2H), 9.00 (s, 1H), 8.51 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.81 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.69 - 7.55 (m, 5H), 7.40 (s, 1H), 7.17 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 5.14 (dd, J = 12.7, 5.0 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.31 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.88 (dd, J = 22.0, 9.0 Hz, 1H), 2.65 - 2.53 (m, 2H), 2.45 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.10 - 2.01 (m, 1H), 1.86 - 1.77 (m, 2H), 1.69 - 1.57 (m, 2H), 1.33 - 1.26 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 900.236; 実測値, 924.736 (M+Na)+. HPLC, tR = 11.82 分 (純度: 94%)。
実施例７５
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）エチル）ピコリンアミド（化合物２．０２５）の合成
ステップＩ、Ｎ−（ブタ−３−イン−１−イル）−４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミドの合成
ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリン酸（１７５ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、１−アミノ−３−ブチン（３４μＬ、０．４１４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２２１ｍｇ、０．５８１ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（５３４μＬ、３．１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ及び水で希釈した。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮乾固した。残渣を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１５７ｍｇ、８１％）を白色の固体として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.63 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.69 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.62 (dd, J = 8.7, 2.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.16 (dd, J = 5.6, 2.5 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 3.63 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 2.52 (td, J = 6.6, 2.6 Hz, 2H), 2.03 (t, J = 2.6 Hz, 1H). LRMS (m/z) 計算値, 502.1; 実測値, 504.9 (M+H)+。
ステップＩＩ、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）エチル）ピコリンアミドの合成
Ｎ−（ブタ−３−イン−１−イル）−４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド（１５５ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（１２ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）、硫酸銅（ＩＩ）５水和物（１５ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）、及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（１３６ｍｇ、０．３３０ｍｍｏｌ）の混合物に、ＴＨＦ（３．０ｍＬ）及び水（３００μＬ）を加えた。フラスコの上部空間をアルゴンで短時間パージし、混合物を室温で７時間撹拌した後、ＴＨＦ及び水で希釈した。相を分離し、水層をＴＨＦで２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製物は、週末にわたって冷凍庫に保管された。粗製物をＤＣＭ中のメタノールを使用してCelite（登録商標）に吸収させ、ＤＣＭ中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を使用、次にＤＣＭ中のＭｅＯＨ（０〜１５％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１２０ｍｇ、収率４１％）を白色の固体として得た。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.14 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.95 - 8.86 (m, 1H), 8.50 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.45 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.81 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.69 - 7.50 (m, 5H), 7.38 (s, 1H), 7.16 (d, J = 8.9 Hz, 3H), 5.14 (dd, J = 12.7, 5.1 Hz, 1H), 4.30 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.54 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.96 - 2.78 (m, 3H), 2.66 - 2.53 (m, 2H), 2.43 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.12 - 1.97 (m, 1H), 1.91 - 1.72 (m, 2H), 1.68 - 1.55 (m, 2H), 1.33 - 1.16 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 914.251; 実測値, 939.275 (M+Na)+. HPLC, tR = 11.7 分 (純度: 97%)。
実施例７６
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（４−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ブチル）ピコリンアミド（化合物２．０２６）の合成
化合物２．０２５に記載のように、ステップＩ、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（ヘキサ−５−イン−１−イル）ピコリンアミド（１４７ｍｇ、７２％）の合成。NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.47 - 8.36 (m, 3H), 8.15 (s, 1H), 7.65 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 8.7, 2.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.11 (dd, J = 5.6, 2.5 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.47 (dd, J = 13.4, 6.8 Hz, 2H), 2.20 (td, J = 6.9, 2.6 Hz, 2H), 1.92 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 1.80 - 1.70 (m, 2H), 1.61 - 1.50 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 530.13; 実測値, 533.0 (M+H)+。
ステップＩＩ、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（４−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ブチル）ピコリンアミド（１８０ｍｇ、６２％）の合成。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 9.36 (s, 1H), 8.82 - 8.69 (m, 2H), 8.42 (s, 1H), 8.37 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.29 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.72 - 7.61 (m, 3H), 7.55 - 7.47 (m, 2H), 7.41 - 7.30 (m, 3H), 7.28 (s, 1H), 7.03 (dd, J = 5.5, 2.3 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.02 - 4.90 (m, 1H), 4.30 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.45 (q, J = 6.3 Hz, 2H), 2.94 - 2.83 (m, 1H), 2.82 - 2.74 (m, 2H), 2.71 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.43 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.18 - 2.13 (m, 1H), 1.97 - 1.88 (m, 2H), 1.81 - 1.69 (m, 6H), 1.45 - 1.34 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 942.282; 実測値, 944.602 (M+H)+. HPLC, tR = 12.1 分 (純度: 98%)。
実施例７７
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（２−（（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミド（化合物２．０２７）の合成
ステップＩ、２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エタノールの合成
無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）中のｔＢｕＯＫ（７４７ｍｇ、６．６６ｍｍｏｌ）の冷（０℃）撹拌懸濁液に、トリエチレングリコール（１．７８ｍＬ、１３．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、臭化プロパルギル（７４２μＬ、６．６６ｍｍｏｌ、トルエン中８０重量％）を滴加した。得られた混合物を室温で２１時間撹拌した。混合物をガラスフリットを使用して減圧下で濾過した。濾液を濃縮し、残渣を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を使用するシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（８２３ｍｇ、３３％）を黄色の油状物として得た。NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.21 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.78 - 3.64 (m, 10H), 3.63 - 3.59 (m, 2H), 2.43 (t, J = 2.4 Hz, 1H). LRMS (m/z) 計算値, 188.10; 実測値, 188.3 (M+H)+。
ステップＩＩ、２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネートの合成
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール（８２３ｍｇ、４．３７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ピリジン（１．０６ｍＬ、１３．１ｍｍｏｌ）及び塩化トシル（１．２５ｇ、６．５６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１８時間撹拌し（ＴＬＣにより完了は観察されなかった）、追加量のピリジン（１．０６ｍＬ、１３．１ｍｍｏｌ）及び塩化トシル（１．２５ｇ、６．５６ｍｍｏｌ）を加えた。１８時間後、反応混合物をＤＣＭで希釈し、水に注いだ。相を分離し、水層をＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．１７ｇ、７８％）を無色の油状物として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.19 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.18 - 4.15 (m, 2H), 3.71 - 3.66 (m, 4H), 3.66 - 3.62 (m, 2H), 3.59 (s, 4H), 2.45 (s, 3H), 2.42 (t, J = 2.4 Hz, 1H). LRMS (m/z) 計算値, 342.113; 実測値, 343.3 (M+H)+。
ステップＩＩＩ、３−（２−（２−（２−（アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパ−１−インの合成
２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネート（１．１７ｇ、３．４２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（８８９ｍｇ、１３．７ｍｍｏｌ））を加え、次にヨウ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＩ）（１２６ｍｇ、０．３４２ｍｍｏｌ）を加えた。次に、混合物を４５℃で一晩激しく撹拌した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ及び水で希釈した。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（６１９ｍｇ、８５％）を無色の油状物として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.20 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.71 - 3.65 (m, 10H), 3.39 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 2.42 (t, J = 2.4 Hz, 1H)。
ステップＩＶ、２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エタンアミンの合成
トリフェニルホスフィン（７７７ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の３−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパ−１−イン（６１９ｍｇ、２．９０ｍｍｏｌ）及び水（２００μＬ）の攪拌溶液に室温で加えた。混合物を２４時間攪拌し（ＳＭの完全な消費がＴＬＣにより観察された）、ＤＣＭ（５ｍＬ）で希釈し、減圧下で濃縮乾固した。粗製物を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配（０〜３０％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（４５ｍｇ、８．３％）をベージュ色のゴムとして得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.27 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 3.75 - 3.65 (m, 10H), 3.13 - 3.09 (m, 2H), 2.49 (t, J = 2.3 Hz, 1H)。
ステップＶ、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（２−（プロパ−２−イン）−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミドの合成
ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリン酸（９０．０ｍｇ、０．１９９ｍｍｏｌ）及び２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エタンアミン（４４．８ｍｇ、０．２３９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（１１４ｍｇ、０．２９９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２７５μＬ、１．５９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した（ＳＭの完全な消費がＴＬＣにより観察された）。混合物をＥｔＯＡｃで希釈した後、水と少量の食塩水を加えた。相を分離し、次に水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃ混合物（ＥｔＯＡｃ中のＭｅＯＨの２０％ｖ／ｖ）の勾配（０〜５０％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１０４ｍｇ、８４％）を淡黄色の残渣として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.63 - 8.53 (m, 1H), 8.48 - 8.40 (m, 1H), 8.30 - 8.16 (m, 1H), 7.72 - 7.65 (m, 2H), 7.55 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.41 - 7.33 (m, 3H), 7.13 - 7.07 (m, 1H), 7.02 - 6.94 (m, 2H), 4.18 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 3.74 - 3.61 (m, 12H), 2.85 - 2.81 (m, 2H), 2.41 (t, J = 2.3 Hz, 1H). LRMS (m/z) 計算値, 620.165; 実測値, 623.3 (M+H)+。
ステップＶＩ、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（２−（（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミド（化合物２．０２７）の合成
アルゴン雰囲気下で、ＴＨＦ（２．０ｍＬ）及び水（２００μＬ）を、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミド（１０４ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）に加えた。次に、６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（７３．９ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ）を加え、次にアスコルビン酸ナトリウム（６．６ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）及び硫酸銅（ＩＩ）５水和物（８．３ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を約１５秒間超音波処理し、混合物を室温で２時間撹拌した（ＴＬＣにより完了が観察された）。次に、ＥｔＯＡｃ、水及び食塩水を加えた。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。生成物のＥｔＯＡｃへの溶解性が非常に悪かったため、生成物は有機相から粉砕し／有機相から緑がかった固体としてオイルアウトし、これは分液漏斗のガラス製品に付着した。抽出後、この緑色の固体（ＴＬＣ分析によると望ましい生成物）を、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、アセトニトリル、少量のアセトンを含む溶媒混合物を使用して分液漏斗から回収した。これにより、最終的に残留固形物が溶液になり、次にこれを元のＥｔＯＡｃ抽出物と一緒にした。後者をＮａ２ＳＯ４で直接乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をCelite（登録商標）に吸収させ、ＤＣＭ中のＥｔＯＡ（０〜１００％）及びＤＣＭ中のＭｅＯＨ（０〜１０％）の勾配を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、次にアセトニトリル及び水で凍結乾燥して、標題化合物（１０６ｍｇ、５９％）を白色の固体として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 9.36 (s, J = 23.9 Hz, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.74 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.65 - 8.00 (m, 4H), 7.73 (s, J = 15.6 Hz, 1H), 7.69 - 7.60 (m, 2H), 7.60 - 7.45 (m, 3H), 7.44 - 7.28 (m, 3H), 7.12 - 6.74 (m, 3H), 4.95 (dd, J = 12.2, 5.4 Hz, 1H), 4.65 (s, J = 26.5 Hz, 2H), 4.32 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.74 - 3.53 (m, 12H), 2.94 - 2.82 (m, 1H), 2.82 - 2.68 (m, 2H), 2.42 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.19 - 2.11 (m, 1H), 1.92 (dt, J = 14.8, 7.3 Hz, 2H), 1.76 (dt, J = 15.1, 7.4 Hz, 2H), 1.46 - 1.32 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 1032.314; 実測値,1058.541 (M+Na)+. HPLC, tR = 11.7 分 (純度: 97%)。
実施例７８
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（１−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−２，５，８，１１，１４−ペンタオキサヘキサデカン−１６−イル）ピコリンアミド（化合物２．０２８）の合成
化合物２．０２７に記載のように、３，６，９，１２，１５−ペンタオキサオクタデカ−１７−イン−１−オールから、同じ反応シーケンスを使用して、標題化合物を調製した。
ステップＩ、３，６，９，１２，１５−ペンタオキサオクタデカ−１７−イン−１−オール（収率３０％）の合成。NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.20 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.72 - 3.66 (m, 18H), 3.62 - 3.60 (m, 2H), 2.69 (s, 1H), 2.42 (t, J = 2.4 Hz, 1H). LRMS (m/z) 計算値, 276.16; 実測値, 277.1 (M+H)+。
ステップＩＩ、３，６，９，１２，１５−ペンタオキサオクタデカ−１７−イン−１−イル４−メチルベンゼンスルホネート（収率７８％）の合成。NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 4.20 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.17 - 4.15 (m, 2H), 3.70 - 3.61 (m, 14H), 3.58 (s, 4H), 2.45 (s, 3H), 2.42 (t, J = 2.4 Hz, 1H). LRMS (m/z) 計算値, 430.166; 実測値, 455.6 (M+Na)+。
ステップＩＩＩ、１−アジド−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサオクタデカ−１７−イン（収率８２％）の合成。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.20 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.71 - 3.65 (m, 18H), 3.39 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 2.42 (t, J = 2.4 Hz, 1H)。
ステップＩＶ、３，６，９，１２，１５−ペンタオキサオクタデカ−１７−イン−１−アミン（収率８．４％）の合成。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.27 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.96 - 3.93 (m, 2H), 3.80 - 3.76 (m, 2H), 3.75 - 3.65 (m, 14H), 3.19 - 3.12 (m, 2H), 2.48 (t, J = 2.4 Hz, 1H)。
ステップＶ、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（３，６，９，１２，１５−ペンタオキサオクタデカ−１７−イン−１−イル）ピコリンアミド（収率８４％）の合成。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.52 - 8.46 (m, 1H), 8.40 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.72 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.43 - 7.35 (m, 3H), 7.04 (dd, J = 5.5, 2.4 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 4.16 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 3.70 - 3.60 (m, 18H), 2.83 (s, 2H), 2.41 (t, J = 1.9 Hz, 1H). LRMS (m/z) 計算値, 708.217; 実測値, 712.3 (M+H)+。
ステップＶＩ、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（１−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−２，５，８，１１，１４−ペンタオキサヘキサデカン−１６−イル）ピコリンアミド（収率６０％）の合成。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 9.37 (s, 1H), 8.76 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.38 (s, 4H), 7.77 (s, 1H), 7.71 - 7.65 (m, 2H), 7.58 (s, J = 28.0 Hz, 2H), 7.52 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.46 (s, 2H), 7.35 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 5.01 - 4.89 (m, 1H), 4.65 (s, 2H), 4.34 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.69 - 3.55 (m, 20H), 2.93 - 2.84 (m, 1H), 2.81 - 2.71 (m, 2H), 2.44 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.19 - 2.13 (m, 1H), 1.99 - 1.89 (m, 2H), 1.78 - 1.77 (m, 2H), 1.47 - 1.35 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 1120.366; 実測値, 1145.417 (M+Na)+. HPLC, tR = 11.7 分 (純度: 96%)。
実施例７９
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（３−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）プロポキシ）エチル）ピコリンアミド（化合物２．０２９）の合成
実施例２に記載のように、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−ピコリン酸及び４−（３−（２−アミノエトキシ）プロピル）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Zhou et. al. J. Med. Chem. 2018, 61 (2), 462-481）から、ＨＡＴＵを使用して調製した。NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.62 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 8.45 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.72 - 7.67 (m, 2H), 7.65 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.14 (dd, J = 5.4, 2.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 4.95 (dd, J = 12.4, 5.3 Hz, 1H), 3.69 - 3.61 (m, 2H), 3.59 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.53 - 3.44 (m, 2H), 3.21 - 3.13 (m, 1H), 3.12 - 3.05 (m, 1H), 2.88 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 2.85 - 2.67 (m, 2H), 2.16 - 2.10 (m, 1H), 1.96 - 1.87 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 792.192; 実測値, 793.987 (M+H)+. HPLC, tR = 12.5 分 (純度: 99%)。
実施例８０
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（３−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）プロポキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミド（化合物２．０３０）の合成
実施例２に記載のように、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−ピコリン酸及び４−（３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロピル）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオンから、ＨＡＴＵを使用して調製した。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.58 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.39 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 2H), 7.64 - 7.57 (m, 2H), 7.53 - 7.49 (m, 2H), 7.36 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.08 (dd, J = 5.5, 2.5 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.96 (dd, J = 12.4, 5.4 Hz, 1H), 3.75 - 3.40 (m, 10H), 3.15 - 3.03 (m, 2H), 2.91 - 2.85 (m, 1H), 2.84 - 2.69 (m, 2H), 2.16 - 2.09 (m, 1H), 1.94 - 1.86 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 836.218; 実測値, 860.527 (M+Na)+. HPLC, tR = 12.4 分 (純度: 98%)。
実施例８１
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（６−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）ヘキシル）ピコリンアミド（化合物２．０３１）の合成
実施例２に記載のように、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−ピコリン酸及び３−（４−（６−アミノヘキシル）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（Zhou et. al. J. Med. Chem. 2018, 61 (2), 462-481）から、ＨＡＴＵを使用して調製した。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.52 - 8.40 (m, 2H), 8.33 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.76 - 7.68 (m, 2H), 7.65 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.43 - 7.32 (m, 5H), 7.15 (dd, J = 5.5, 2.0 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.23 (dd, J = 13.3, 4.9 Hz, 1H), 4.41 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 3.51 - 3.34 (m, 2H), 2.92 - 2.74 (m, 2H), 2.56 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.46 - 2.35 (m, 1H), 2.24 - 2.15 (m, 1H), 1.63 - 1.55 (m, 4H), 1.35 (s, 4H). LRMS (m/z) 計算値, 776.233; 実測値, 800.495 (M+Na)+. HPLC, tR = 12.7 分 (純度: 83%)。
実施例８２
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（３−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−）イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）プロポキシ）エチル）ピコリンアミド（化合物２．０３２）の合成
実施例２に記載のように、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−ピコリン酸及び３−（４−（３−（２−アミノエトキシ）プロピル）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（Zhou et. al. J. Med. Chem. 2018, 61 (2), 462-481）から、ＨＡＴＵを使用して調製した。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.69 (s, 1H), 8.47 - 8.39 (m, 2H), 8.08 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.75 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.42 (dd, J = 12.6, 5.1 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.12 - 7.06 (m, 1H), 6.95 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.12 (dd, J = 13.4, 5.0 Hz, 1H), 4.43 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 4.33 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 3.73 - 3.64 (m, 1H), 3.62 - 3.52 (m, 3H), 3.48 - 3.37 (m, 2H), 2.83 - 2.65 (m, 4H), 2.38 - 2.27 (m, 1H), 2.14 - 2.07 (m, 1H), 1.94 - 1.82 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 778.213; 実測値, 779.573 (M+H)+. HPLC, tR = 11.9 分 (純度: 98%)。
実施例８３
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（３−（２−（２，６−ジオキソピペリジン）−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）プロポキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミド（化合物２．０３３）の合成
実施例２に記載のように、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−ピコリン酸及び３−（４−（３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロピル）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンから、ＨＡＴＵを使用して調製した。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.82 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.38 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.78 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.44 - 7.40 (m, 1H), 7.39 - 7.36 (m, 2H), 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.07 (dd, J = 5.6, 2.3 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.20 (dd, J = 13.2, 5.1 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 3.69 - 3.34 (m, 12H), 2.90 - 2.77 (m, 2H), 2.67 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.45 - 2.36 (m, 1H), 2.22 - 2.15 (m, 1H). LRMS (m/z) 計算値, 822.239; 実測値, 846.556 (M+Na)+. HPLC, tR = 11.8 分 (純度: 97%)。
実施例８４
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（（６−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）ヘキシル）オキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミド（化合物２．０３４）の合成
ステップＩ、ヘキサ−５−イン−１−イル４−メチルベンゼンスルホネートの合成
トリエチルアミン（２１．３０ｍＬ、１５３．０ｍｍｏｌ、３．０当量）を、ＤＣＭ（１５０．０ｍＬ、３０．０体積当量）中のヘキサ−５−イン−１−オール（５．０ｇ、５０．９０ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に室温で加え、次にＴｓＣｌ（１１．７ｇ、６１．１ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。反応混合物を室温で１５時間撹拌した。ＴＬＣ（ｎ−ヘキサン中２０％ＥｔＯＡｃ）により反応の進行をモニターして、反応の完了を確認し、水（１００．０ｍＬ）を加え、水層をＤＣＭ（３ｘ２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（ｎ−ヘキサン中５〜３０％ＥｔＯＡｃ）を使用するシリカゲル（２３０〜４００メッシュサイズ）のカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１１．２ｇ、８７．１％）を無色の油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.79 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 2H), 7.40 - 7.25 (m, 2H), 4.19 - 4.00 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.16 (td, J = 6.9, 2.7 Hz, 2H), 1.94 (q, J = 3.7, 2.6 Hz, 1H), 1.86 - 1.70 (m, 2H), 1.64 - 1.47 (m, 2H), 1.12 (t, J = 7.1 Hz, 1H)。
ステップＩＩ、（２−（２−（ヘキサ−５−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
水素化ナトリウム（０．０９６ｇ、２．４ｍｍｏｌ、１．０当量、油中６０％）を、ＤＭＦ（１０．０ｍＬ、２０．０体積当量）中の（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．５０ｇ、２．４ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に０℃で加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。ヘキサ−５−イン−１−イル４−メチルベンゼンスルホネート（０．６２ｇ、２．４ｍｍｏｌ、１．０当量）を反応混合物に０℃で加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌し、水（５０．０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ７５．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（１０〜６０％）を使用するシリカゲル（２３０〜４００メッシュサイズ）のカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（２７０．０ｍｇ、３８．８％）を無色の油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 4.95 (s, 1H), 3.68 - 3.38 (m, 8H), 3.25 (q, J = 5.4 Hz, 2H), 2.16 (td, J = 6.9, 2.6 Hz, 2H), 1.88 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 1.73 - 1.47 (m, 5H), 1.38 (s, 9H)。
ステップＩＩＩ、（２−（２−（（６−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）ヘキサ−５−イン−１−イル）オキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
（２−（２−（ヘキサ−５−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．２６ｇ、０．９２ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＣｕＩ（３５．０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、０．２０当量）及びＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（６４．５０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、０．１０当量）を、ＤＭＦ（６．０ｍＬ、２０．０体積当量）中の３−（４−ブロモ−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（０．３０ｇ、０．９２ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に加えた。溶液を窒素でパージし３回再充填した後、ジイソプロピルエチルアミン（４．０１ｍＬ、２３．０ｍｍｏｌ）を加え、真空と窒素を交互に入れて溶液を再度２回脱気した。反応混合物を７０℃で１３時間加熱した。ＴＬＣ（ｎ−ヘキサン中８０％ＥｔＯＡｃ）により反応の進行をモニターして、反応の完了を確認した。反応混合物を室温に冷却し、水（１００．０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２ｘ２００．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（４０〜９０％）を使用するシリカゲル（２３０〜４００メッシュサイズ）のカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（２００．０ｍｇ、４１．２０％）を淡褐色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.67 - 7.55 (m, 2H), 7.54 - 7.45 (m, 2H), 7.45 - 7.33 (m, 3H), 5.27 - 5.11 (m, 1H), 4.91 (d, J = 40.2 Hz, 1H), 4.50 - 4.19 (m, 2H), 3.61 - 3.36 (m, 6H), 3.25 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 2.93 - 2.69 (m, 2H), 2.48 - 2.23 (m, 2H), 2.23 - 2.05 (m, 1H), 1.67 (ddp, J = 21.0, 11.8, 4.2 Hz, 3H), 1.37 (s, 8H), 1.26 - 1.14 (m, 2H); LRMS (m/z) 計算値, 527.26; 実測値, 526.1(M-H)-。
ステップＩＶ：（２−（２−（（６−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）ヘキシル）オキシ）エトキシエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％湿潤、３７．９０ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ、０．０４８当量）を、エタノール（３．８０ｍＬ、２０．０体積当量）中の（２−（２−（（６−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）ヘキサ−５−イン−１−イル）オキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１９０．０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に加えた。真空と水素を交互に使用して溶液を３回脱気した後、得られた反応混合物を水素雰囲気下、室温で２．５時間撹拌した。ＴＬＣ（ｎ−ヘキサン中の８０％酢酸エチル）により反応の進行をモニターし、反応の完了を確認した。反応混合物をＨｙｆｌｏパッド（Celite（登録商標）に類似）を通して濾過した。濾液を濃縮して、標題化合物（１８５．０ｍｇ、９７．６０％）を淡褐色のゴムとして得た。この生成物を次のステップでそのまま使用した。
ステップＶ、３−（４−（６−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）ヘキシル）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンの合成
１，４−ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌ（３．６０ｍＬ）中の（２−（２−（（６−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）ヘキシル）オキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１８０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を、室温で１２時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）によりモニターして、反応の完了を確認した。反応混合物を濃縮し、水で希釈し、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液で中和した。生成物をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、標題化合物（１３０ｍｇ、８９．２％）を淡褐色のゴムとして得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.02 (s, 1H), 7.96 (s, 3H), 7.74 (d, J = 7.6 Hz, 0H), 7.64 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.65 - 7.42 (m, 6H), 5.14 (dd, J = 13.6, 4.9 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 4.32 (dd, J = 17.4, 10.0 Hz, 1H), 3.65 - 3.46 (m, 6H), 3.01 - 2.85 (m, 3H), 2.63 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 2.42 (s, 1H), 2.01 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 1.91 (s, 0H), 1.60 (s, 2H), 1.48 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 1.39 - 1.20 (m, 6H) ppm. LRMS (m/z) 計算値, 431.24, 実測値, 432 (M+H)+。
ステップＶＩ：４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（（６−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）ヘキシル）オキシ）エトキシ）エチル）−ピコリンアミドの合成
実施例２に記載のように、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリン酸及び３−（４−（６−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）ヘキシル）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンから、ＨＡＴＵを使用した調製した。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.86 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.43 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.83 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.13 (dd, J = 5.9, 2.5 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.22 (dd, J = 13.4, 5.1 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 3.67 - 3.51 (m, 9H), 3.47 - 3.37 (m, 2H), 2.95 - 2.74 (m, 2H), 2.58 (dd, J = 8.3, 5.3 Hz, 2H), 2.24 - 2.21 (m, 1H), 1.62 - 1.55 (m, 2H), 1.54 - 1.48 (m, 2H), 1.34 - 1.29 (m, 4H). LRMS (m/z) 計算値, 864.286; 実測値, 888.663 (M+Na)+. HPLC, tR = 12.8 分 (純度: 95%)。
実施例８５
４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（３−（２−（（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−１−（（Ｓ）−３−メチル−２−（１−オキソイソインドリン−２−イル）ブタノイル）ピロリジン−２−カルボキサミド）メチル）−５−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェノキシ）プロポキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミド（化合物２．０３５）の合成
ステップＩ、３−（２−（２−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド）エトキシ）エトキシプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
ＤＭＦ（４０．０ｍＬ、４０．０体積当量）中の４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリン酸（１．０ｇ、２．２１ｍｍｏｌ、１．０当量）の攪拌溶液に、３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロパン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．５６８ｇ、２．４３ｍｍｏｌ、１．１０当量）、ＨＡＴＵ（１．２６ｇ、３．３２ｍｍｏｌ、１．５０当量）、及びＤＩＰＥＡ（２．３１ｍＬ、１３．３ｍｍｏｌ、６．０当量）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、水（２００ｍＬ）でクエンチし、水層をＥｔＯＡｃ（３ｘ３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ｎ−ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（５０〜１００％）を使用するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．３４ｇ、９０．８％）を淡黄色のゴムとして得た。LRMS (m/z) 計算値, 666.21; 実測値, 667.3 (M+H)+。
ステップＩＩ、３−（２−（２−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド）エトキシ）エトキシ）プロパン酸の合成
ＤＣＭ（２６．８ｍＬ）中の３−（２−（２−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド）エトキシ）エトキシ）プロパン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．３４ｇ、２．０１ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１３．４ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、濃縮して、標題化合物（８３０ｍｇ、６７．６％）をオフホワイトの固体として得た。LRMS (m/z) 計算値, 610.14; 実測値, 609.2 (M-H)-。
ステップＩＩＩ、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（３−ヒドロキシプロポキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミドの合成
ＴＨＦ（１２．０ｍＬ）中の３−（２−（２−（２−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（０．６００ｇ、０．９８２ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、Ｎ−メチルモルホリン（１０９ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）を加え、次に−１０℃でクロロギ酸イソブチル（１４８ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を同じ温度で１０分間撹拌した。反応混合物をＨｙｆｌｏパッド（Celite（登録商標）パッドと同様）を通して濾過し、ＴＨＦで２回すすいだ。濾液を０℃に冷却した後、水（０．７８ｍＬ）中のＮａＢＨ４溶液（５５．７ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、水（１００ｍＬ）でクエンチし、水層を酢酸エチル（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配（０〜５％）を使用するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（０．５ｇ、８５．３％）をオフホワイトの粘着性固体として得た。LRMS (m/z) 計算値, 596.16; 実測値, 596.8 (M+H)+, 595.0 (M-H)-。
ステップＩＶ、３−（２−（２−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド）エトキシ）エトキシ）プロピル４−メチルベンゼンスルホネートの合成
ＤＣＭ（２５．０ｍＬ）中の４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（３−ヒドロキシプロポキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミド（０．５００ｇ、０．８３８ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でトリエチルアミン（３３９ｍｇ、３．３５ｍｍｏｌ）及びＴｓＣｌ（１９２ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応物を室温で２時間撹拌し、水でクエンチし、水層を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を真空下で除去して、標題化合物（２６０ｍｇ、４１．３％）をオフホワイトの粘着性固体として得た。LRMS (m/z) 計算値, 750.17; 実測値, 749 (M-H)-。
ステップＶ、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−（２−（２−（３−（２−（（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−１−（（Ｓ）−３−メチル−２−（１−オキソイソインドリン−２−イル）ブタノイル）ピロリジン−２−カルボキサミド）メチル）−５−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェノキシ）プロポキシ）エトキシ）エチル）ピコリンアミドの合成
ＤＭＦ（８．０ｍＬ）中の３−（２−（２−（４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド）エトキシ）エトキシ）プロピル４−メチルベンゼンスルホネート（０．１６０ｇ、０．２１３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシ−４−（４−メチルチアゾール−５−イル）ベンジル）−１−（（Ｓ）−３−メチル−２−（１−オキソイソインドリン−２−イル）ブタノイル）ピロリジン−２−カルボキサミド（１０５．０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１４７．０ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）（ＷＯ２０１７／３０８１３，２０１７）を加えた。反応混合物を８０℃で２０時間撹拌し、室温に冷却し、水（２００ｍＬ）でクエンチし、水層をＥｔＯＡｃ（４ｘ１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（２ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配（０〜５％）を使用するカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（６０ｍｇ、２５．０％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.44 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.69 (m, 1H), 8.48 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.40 (m, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.78 - 7.3 (m, 10 H), 7.2 - 7.1 (m, 3H), 7.05 - 6.95 (m, 2H), 5.11 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 4.60 - 3.5 (m, 20 H), 2.45 (s, 3H), 2.4 - 1.7 (m, 5H), 0.96 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.73 (d, J = 6.6 Hz, 3H). LRMS (m/z) 計算値, 1126.36; 実測値, 1127.10 (M+H)+, 1125.0 (M-H)-. HPLC, tR = 11.1 分 (純度: 94.5%)。
実施例８６
Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）−６−（４−（４−（（６−（４−フルオロ−５−（３−ヘキシルウレイド）−２−メチルフェニル）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）ブチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド（化合物２．０３６）の合成
ステップＩ、２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルチオ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）アニリン
ＴＨＦ（２５ｍＬ、２５体積当量）中の７−メチル−２−（メチルチオ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イルトリフルオロメタンスルホネート（１．０ｇ、２．９５ｍｍｏｌ、１．０当量）（Henry et. al. J. Med. Chem. 2015, 58 (10), 4165-4179）の攪拌溶液に、２−フルオロ−４−メチル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アニリン（８８８ｍｇ、３．５４ｍｍｏｌ、１．０当量）（Henry et. al. J. Med. Chem. 2015, 58 (10), 4165-4179）、炭酸カリウム炭酸（１．２２ｇ、８．８４ｍｍｏｌ、３．０当量）、水（２ｍＬ、２体積当量）、及びＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）ＤＣＭ付加物（２４１ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ、０．１当量）を加えた。反応混合物を、真空と窒素を交互に使用して３回脱気した。得られた反応混合物を７０℃で２．０時間加熱した。ＴＬＣ（ｎ−ヘキサン中７０％ＥｔＯＡｃ）により反応の進行をモニターして、反応の完了を確認した。反応混合物をCelite（登録商標）パッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃですすいだ。水（５０ｍＬ）を濾液に加え、生成物をＥｔＯＡｃ（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を水及び食塩水（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（１０〜７０％）を使用するＳｉＯ２カートリッジ（８０ｇ）で精製して、標題化合物（５６３ｍｇ、６０．８％）を黄色の固体として得た。生成物をエーテル（１０ｍＬ）及びヘキサン（２５ｍＬ）で粉砕して、標題化合物を得た。Ｒｆ＝０．４８（ヘキサン中７０％ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.11 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 6.96 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.71 (s, 2H), 2.77 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.94 (s, 3H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -135.85 (dd, J = 11.7, 9.0 Hz). LRMS (m/z) C16H15FN4Sの計算値, 314.10; 実測値 336.90 (M+Na)+, 314.96 (M+H)+。
ステップＩＩ、６−（５−アミノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−Ｎ−（ヘキサ−５−イン−１−イル）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン
３−クロロペルオキシ安息香酸（６５２ｍｇ、３．７８ｍｍｏｌ、２．０当量）を、ＤＣＭ（１２ｍＬ、２０．８体積当量）中の２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルチオ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）アニリン（５９４ｍｇ、３１．８９ｍｍｏｌ、１．０当量））の冷（氷＋塩、＜０℃）攪拌溶液に加えた。反応混合物を０℃で２．０時間撹拌した。ＴＬＣ（ｎ−ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ）により反応の進行をモニターして、反応の完了を確認した。次に、ヘキサ−５−イン−１−アミン（４５９ｍｇ、３．７８ｍｍｏｌ）を加え、同じ温度で２時間撹拌した［反応の進行をＴＬＣでモニターした］。反応混合物を水（５ｍＬ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した。合わせたＤＣＭ抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜５％）を使用するＳｉＯ２カートリッジ（２４ｇ）で精製して、標題化合物（８９ｍｇ、１３％）をオフホワイトの固体として得た。Ｒｆ＝０．４８（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）、０．３（ヘキサン中７０％ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.89 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 6.93 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.50 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 3.73 - 3.61 (m, 4H), 2.45 (s, 3H), 2.31 - 2.24 (m, 2H), 1.99 - 1.95 (m, 1H), 1.94 (s, 3H), 1.88 - 1.77 (m, 2H), 1.73 - 1.64 (m, 2H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -136.52 (dd, J = 11.7, 9.1 Hz). LRMS (m/z) C21H22FN5の計算値, 363.186, 実測値 364.03 (M+H)+。
ステップＩＩＩ、１−（２−フルオロ−５−（２−（ヘキサ−５−イン−１−イルアミノ）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−４−メチルフェニル）−３−ヘキシル尿素
ピリジン（０．０２０５ｍＬ、０．２５３ｍｍｏｌ、１．０当量）及びクロロギ酸フェニル（０．０３１ｍＬ、０．２３５ｍｍｏｌ、１．０当量）を、アセトニトリル（２０ｍＬ、２０体積当量）中の６−（５−アミノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−Ｎ−（ヘキサ−５−イン−１−イル）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン（９２ｍｇ、０．２５３ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に加えた。得られた反応混合物を室温で２．５時間撹拌した。反応の進行を、ＴＬＣ（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）によりモニターして、反応の完了を確認した。反応混合物を濃縮して、粗製物（（２−フルオロ−５−（２−（ヘキサ−５−イン−１−イルアミノ）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−４−メチルフェニル）カルバミン酸フェニル）を得て、これを次のステップに使用した。Ｒｆ＝０．５（７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；LRMS (m/z) C28H26FN5O2の計算値, 483.21; 実測値 438.98 (M+H)+。ＤＭＦ（２．８ｍｌ）中の（２−フルオロ−５−（２−（ヘキサ−５−イン−１−イルアミノ）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−４−メチルフェニル）カルバミン酸フェニル（１２２ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、室温でＤＭＡＰ（１２３ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）及びｎ−ヘキシルアミン（０．０６６７ｍＬ、０．５０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を週末にかけて室温で撹拌した。反応混合物を、水性ＨＣｌ（０．２５Ｍ、２０ｍＬ）を含む氷冷水に注ぎ、沈殿物を濾過し、乾燥して生成物を得て、ヘキサン中のＥｔＯＡｃのの勾配（１０〜１００％）、次にＤＣＭ中のＭｅＯＨのの勾配（０〜１０％）を使用するＳｉＯ２カートリッジ（２５ｇ）により精製して、標題化合物（３５ｍｇ、２８％）を得た。Ｒｆ＝０．２（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）及びＲｆ＝０．３（ヘキサン中７０％ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.88 (s, 1H), 7.95 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.94 (d, J= 11.9 Hz, 1H), 5.59 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 5.40 (s, 1H), 3.74 - 3.59 (m, 2H), 3.23 (dd, J = 12.9, 6.7 Hz, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.25 (m, 2H), 2.02 - 1.93 (m, 4H), 1.88 - 1.75 (m, 2H), 1.73 - 1.60 (m, 2H), 1.55 -1.44 (m, 2H), 1.37 - 1.23 (m, 6H), 0.85 (t, J = 6.3 Hz, 3H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -133.15 (s). LRMS (m/z) 計算値, 490.258; 実測値, 490.95 (M+H)+, 489.04 (M-H)-; HPLC, tR = 11.4 分 (純度: 96.03%)。ＨＰＬＣ方法Ａ。
ステップＩＶ、Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）−６−（４−（４−（（６−（４−フルオロ−５−（３−ヘキシルウレイド）−２−メチルフェニル）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）ブチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド
ＴＨＦ（１ｍＬ）中の１−（２−フルオロ−５−（２−（ヘキサ−５−イン−１−イルアミノ）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−４−メチルフェニル）−３−ヘキシル尿素（２８ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）及び６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（２８．２ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、水（０．２５ｍＬ）中のＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（２．８５ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）の溶液と水（０．２５ｍＬ）中のアスコルビン酸ナトリウム（２．２６ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、Ｎａ２ＳＯ４を加えて反応混合物中の水を吸収させ、固体を濾別し、ＥｔＯＡｃですすいだ。濾液を濃縮し、粗製物を、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜２０％）を使用するＳｉＯ２金カートリッジ（２４ｇ、Isco）により精製して、標題化合物（１５ｍｇ、２９％）を得た。Ｒｆ＝０．４８（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.74 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.79 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.55 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.95 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.23 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 5.04 - 4.92 (m, 1H), 4.33 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.71 - 3.57 (m, 2H), 3.27 - 3.16 (m, 2H), 3.00 - 2.85 (m, 1H), 2.86 - 2.70 (m, 3H), 2.52 - 2.37 (m, 4H), 2.23 - 2.13 (m, 1H), 1.97 (s, 3H), 1.96 - 1.89 (m, 1H), 1.85 - 1.72 (m, 5H), 1.56 - 1.46 (m, 2H), 1.45 - 1.35 (m, 2H), 1.36 - 1.16 (m, 10H), 0.85 (t, J = 6.6 Hz, 3H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -133.31 (br s). LRMS (m/z) 計算値, 902.44; 実測値, 901.21 (M-H)-, 925.15 (M+Na)+; HPLC, tR = 10.5 分 (純度: 97.6%)。
実施例８７から実施例８９は、化合物２．０２４から２．０３４の合成を記載しており、これらの結合体のそれぞれは、以下の式に包含される。
実施例８７
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−（４−（４−（（６−（４−フルオロ−５−（３−ヘキシルウレイド）−２−メチルフェニル）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）ブチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．０３７）の合成
標題化合物（９．１ｍｇ、１８％）を、化合物２．０３６に記載のように、１−（２−フルオロ−５−（２−（ヘキサ−５−イン−１−イルアミノ）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−４−メチルフェニル）−３−ヘキシル尿素（２２．５ｍｇ、４５．９ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−アジドヘキサアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（３３ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）から、淡黄色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．２４（１０％ＭｅＯＨ−ＤＣＭ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.84 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 7.95 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.63 - 7.57 (m, 1H), 7.47 - 7.32 (m, 4H), 7.15 - 6.97 (m, 1H), 6.94 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 6.74 - 6.61 (m, 1H), 6.21 (s, 1H), 6.03 (bs, 1H), 5.56 - 5.33 (m, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.18 - 5.01 (m, 1H), 4.75 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.61 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.54 (bs, 1H), 4.37 - 4.20 (m, 2H), 4.07 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.71 - 3.51 (m, 3H), 3.48 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.21 (dd, J = 13.0, 6.7 Hz, 2H), 2.75 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.48 - 2.36 (m, 3H), 2.30 - 2.07 (m, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.88 - 1.68 (m, 6H), 1.68 - 1.54 (m, 2H), 1.49 (d, J = 7.0 Hz, 4H), 1.22 (dd, J = 16.8, 9.8 Hz, 9H), 1.03 (s, 9H), 0.84 (t, J = 6.6 Hz, 3H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -133.17 (s). LRMs (m/z) 計算値, 1073.580; 実測値, 1074.37 (M+H)+, 1072.42 (M-H)-. HPLC, tR = 10.5 分 (純度 >99.9%)。ＨＰＬＣ方法Ｂ。
実施例８８
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（５−（４−（４−（（６−（４−フルオロ−５−（３−ヘキシルウレイド）−２−メチルフェニル）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）ブチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ペンタンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．０２８）の合成
標題化合物（１０．９ｍｇ、２１．９％）を、化合物２．０３６に記載のように、１−（２−フルオロ−５−（２−（ヘキサ−５−イン−１−イルアミノ）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−４−メチルフェニル）−３−ヘキシル尿素（２３．０ｍｇ、０．０４６９ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（５−アジドペンタンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（２７．８ｍｇ、０．０４８８ｍｍｏｌ）から、オフホワイトの固体として調製した。Ｒｆ＝０．２４（１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.82 (bs, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.49 (bs, 1H), 8.12 (bs, 1H), 7.97 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 7.64 (m, 2H), 7.43 - 7.33 (m, 5H), 7.12 (m, 1H), 6.92 (dd, J = 11.8, 7.1 Hz, 2H), 6.47 (bs, 1H), 5.74 (bs, 1H), 5.56 (bs, 1H), 5.17 - 5.06 (m, 1H), 4.77 - 4.62 (m, 2H), 4.56 (bs, 1H), 4.37 - 4.20 (m, 2H), 4.12 - 4.03 (bs, 1H), 3.66 (m, 4H), 3.21 (dd, J = 12.7, 6.3 Hz, 4H), 2.75 (bs, 2H), 2.63 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.41 (bs, 2H), 1.94 (d, J = 14.1 Hz, 3H), 1.80 (m, 6H), 1.61 - 1.53 (m, 2H), 1.52 - 1.48 (m, 4H), 1.29 - 1.22 (m, 6H), 1.06 (s, 9H), 0.84 (t, J = 6.5 Hz, 3H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -133.15 (s) ppm. LRMS (m/z) C56H74FN13O5Sの計算値, 1059.56; 実測値 1082.29 (M+Na)+; 実測値 1058.19 (M-H)-. HPLC, tR = 10.3 分 (純度: >95%)。ＨＰＬＣ方法Ｂ。
実施例８９
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−（４−（（２−（２−（（６−（４−フルオロ−５−（３−ヘキシルウレイド）−）２−メチルフェニル）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．０３９））の合成
ステップＩ、２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エチル）イソインドリン−１，３−ジオン
ＴＨＦ（９．０ｍＬ）中のフタルイミド（１．０７３ｇ、７．２９ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（１．９２ｇ、７．３０ｍｍｏｌ）の低温（０℃）撹拌溶液に、ＴＨＦ（９．０ｍＬ）中の２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エタノール（７０６ｍｇ、４．９０ｍｍｏｌ）及びアゾジカルボン酸ジイソプロピル（１．８ｍＬ、９．１５ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。反応混合物をゆっくりと室温まで温め、４日間撹拌し、濃縮した。残渣を水（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮し、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（１０〜３０％）を使用する８０ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（純度８７．２％で１．０８ｇ、７０．４％）を白い固体として得た。Ｒｆ＝０．１６（ヘキサン中２０％ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.87 - 7.83 (m, 2H), 7.75 - 7.68 (m, 2H), 4.13 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 3.91 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.75 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.70 - 3.62 (m, 4H), 2.38 (t, J = 2.3 Hz, 1H). LRMS (m/z) 計算値, 273.10; 実測値 295.91 (M+Na)+。
ステップＩＩ、２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エタンアミン
ＴＨＦ（７１．０ｍＬ）中の２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エチル）イソインドリン−１，３−ジオン（純度８７．２％で１．０８ｇ、３．４５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ヒドラジン水和物（３．１ｍＬ、６３．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物（２５１．３ｍｇ、５０．９％）を得た。Ｒｆ＝０．１２（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.21 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 3.72 - 3.70 (m, 2H), 3.66 - 3.64 (m, 2H), 3.53 (t,J = 5.2 Hz, 2H), 2.89 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 2.44 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 1.87 (m, 2H), 1.84 (bs, 1H) ppm. LRMS (m/z) 計算値, 143.09; 実測値 143.95 (M+H)+。
ステップＩＩＩ、１−（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エチル）−アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）−３−ヘキシル尿素
ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中の１−（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルチオ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）−３−ヘキシル尿素（２０３．０ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）の冷（０℃）撹拌溶液に、ｍ−ＣＰＢＡ（純度７７％で２２６．６ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した。２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エタンアミン（５１．５ｍｇ、０．５２０ｍｍｏｌ）を加え、ゆっくりと室温まで温め、１５時間撹拌した。反応混合物を水（５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜１０％）を使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、１−（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルスルホニル）ピリド［２、３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）−３−ヘキシル尿素（１００ｍｇ、４５．９％）を得た。Ｒｆ＝０．２０（ＤＣＭ中７０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.61 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.04 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.05 (bs, 1H), 6.96 (d, J= 11.8 Hz, 1H), 5.42 (m, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.22 (dd, J = 12.8, 7.0 Hz, 2H), 2.63 (s, 3H), 1.97 (s, 3H),1.54 - 1.44 (m, 2H), 1.33 - 1.22 (m, 6H), 0.85 (t, J = 6.8 Hz, 3H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -131.92 (t, J = 9.3 Hz). LRMS (m/z) 計算値, 473.19; 実測値, 473.84 (M+H)+。ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中の１−（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルスルホニル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）−３−ヘキシル尿素（１００ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エタンアミン（３４．７ｍｇ、０．２４２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌し、２回目の２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エタンアミン（３０．３ｍｇ、０．２１２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１９時間撹拌し、水（５ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜１５％）を使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（５８．４ｍｇ、５１．５％）を黄色の固体として得た。Ｒｆ＝０．２４（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.90 (s, 1H), 7.93 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 6.99 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.96 (bs, 1H), 4.82 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.88 - 3.85 (m, 2H), 3.78 - 3.74 (m, 2H), 3.74 - 3.66 (m, 4H), 3.24 (dd, J = 12.9, 7.1 Hz, 2H), 2.46 - 2.43 (m, 4H), 2.00 (s, 3H), 1.57 - 1.47 (m, 2H), 1.36 - 1.25 (m, 6H), 0.87 (t, J = 6.9 Hz, 3H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -133.57 (s) ppm. LRMS (m/z) 計算値, 536.29; 実測値 537.02 (M+H)+。
ステップＩＶ、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−（４−（（２−（２−（（６−（４−フルオロ−５−（３−ヘキシルウレイド）−２−メチルフェニル）−７−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド
標題化合物（１３．２ｍｇ、１０．８％）を、化合物２．０３６に記載のように、１−（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エチル）アミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）−３−ヘキシル尿素（５８．４ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（６−アジドヘキサンアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（７２．６ｍｇ、０．１２４ｍｍｏｌ）から、淡橙色の固体として得た。Ｒｆ＝０．１６（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.90 (bs, 1H), 8.67 (s, 1H), 7.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.66 (bs, 1H), 7.45 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.41 (m, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.00 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 6.52 (bs, 1H), 6.28 (bs, 1H), 6.16 (bs, 1H), 5.14 - 5.04 (m, 1H), 4.83 (bs, 1H), 4.71 (d, J = 2.9 Hz, 2H), 4.57 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.54 (bs, 1H), 4.32 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.10 - 4.04 (m, 1H), 3.83 (bs, 2H), 3.76 - 3.65 (m, 6H), 3.62 (dd, J = 11.2, 3.7 Hz, 1H), 3.48 (bs, 1H), 3.23 (dd, J = 13.0, 7.1 Hz, 2H), 2.57 - 2.50 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.27 - 2.21 (m, 1H), 2.20 - 2.13 (m, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.86 (m, 2H), 1.61 (s, 3H), 1.52 (m, 2H), 1.48 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.27 (m, 8H), 1.03 (s, 9H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -133.15 (s) ppm. LRMS (m/z) 計算値, 1119.59; 実測値 1142.27 (M+Na)+; 1118.29 (M-H)-. HPLC, tR =10.1 分 (純度: >99%)。ＨＰＬＣ方法Ｂ。
実施例９０から実施例９３は、化合物２．０２４から２．０３４の合成を記載しており、これらの結合体のそれぞれは、以下の式に包含される
実施例９０
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１，１９−ジオキソ−５，８，１１，１４，１７−ペンタオキサ−２，２０−ジアザドコサン−２２−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．０４０））の合成
ステップＩ、１７−（トシルオキシ）−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１７−ヒドロキシ−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（８２７ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ピリジン（５６９μＬ、７．０４ｍｍｏｌ）、次に塩化トシル（６７１ｍｇ、３．５２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１８時間撹拌し、ＤＣＭ及び水で希釈した。相を分離し、水層をＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を，ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（８７０ｍｇ、７３％）を得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.18 - 4.14 (m, 2H), 4.01 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 3.72 - 3.60 (m, 14H), 3.58 (s, 4H), 2.45 (s, 3H), 1.47 (s, 9H)。
ステップＩＩ、１７−アジド−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
ＤＭＦ（７．０ｍＬ）中の１７−（トシルオキシ）−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（８７０ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、アジ化ナトリウム（４３５ｍｇ、６．６９ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を１８時間撹拌し、水及びＥｔＯＡｃで希釈した。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製物を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（５２０ｍｇ、８０％）を無色の油状物として得た。NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.01 (s, 2H), 3.71 - 3.62 (m, 18H), 3.38 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H)。
ステップＩＩＩ、１７−アミノ−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
ＴＨＦ（５．０ｍＬ）中の１７−アジド−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（５２０ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、１０％パラジウム担持活性炭（６０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を加えた。アルゴン雰囲気を水素で置き換え（溶液中に少なくとも２分間泡立てた）、混合物を水素雰囲気下で室温で２０時間撹拌した後、水素をアルゴンで置き換えた。次に、混合物をCelite（登録商標）プラグで濾過した。Celite（登録商標）プラグをＥｔＯＡｃで２回すすいだ。濾液を濃縮乾固して、標題化合物（４９０ｍｇ、収率９６％、純度約９５％ｗ／ｗ）を褐色の油状物として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.02 (s, 2H), 3.73 - 3.59 (m, 17H), 3.53 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.88 (t, J = 4.7 Hz, 1H), 1.48 (d, J = 12.7 Hz, 9H). LRMS (m/z) 計算値, 351.23; 実測値, 352.4 (M+H)+。
ステップＩＶ、１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５，８，１１，１４，１７−ペンタオキサ−２−アザノナデカン−１９−酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
ＤＭＳＯ（２．０ｍＬ）中の１７−アミノ−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（４８９ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＳＯ（２．０ｍＬ）中の（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）カルバミン酸フェニル（２３５ｍｇ、０．５６３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に加えた。混合物を室温で１８時間撹拌し、水に注いだ。ＤＣＭを加えて、相を分離した。水層をＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配（０〜２０％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（３８０ｍｇ、収率７０％、計算純度７０％ｗ／ｗ）を黄色の油状物として得た。LRMS (m/z) 計算値, 674.34; 実測値,678.1 (M+H)+。
ステップＶ、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１，１９−ジオキソ−５，８，１１，１４，１７−ペンタオキサ−２，２０−ジアザドコサン−２２−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド）の合成
ＴＦＡ（４００μＬ、５．３９ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（３．０ｍＬ）中の１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５，８，１１，１４，１７−ペンタオキサ−２−アザノナデカン−１９−酸ｔｅｒｔ−ブチル（２５８ｍｇ、０．３８２ｍｍｏｌ）の冷（０℃）攪拌溶液に加え、５分後、氷浴を取り外し、５時間撹拌した。混合物を氷冷水（１０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３．０ｍＬ、ｐＨ約５）の混合物に注いだ。混合物を１８時間かけて凍結乾燥した。得られた黄色の固体をアセトンに懸濁し、溶液をデカントした。溶液を濃縮し、ＤＣＭ及びアセトンを使用してCelite（登録商標）に吸着させ、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配（０〜１００％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５，８，１１，１４，１７−ペンタオキサ−２−アザノナデカン−１９−酸（１４５ｍｇ、収率４６％、純度７５％）を得た。ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の前記カルボン酸（１４５ｍｇ、０．１７６ｍｍｏｌ、純度７５％ｗ／ｗ）の攪拌溶液に、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（９３．８ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１００ｍｇ，０．２６４ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（２４２μＬ、１．４１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ及び水で希釈した。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。次に、水層をＤＣＭで３回抽出し、有機抽出物（ＥｔＯＡｃ及びＤＣＭ）を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配（０〜２０％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、ゴム状固体を得、これを水中のアセトニトリルに溶解し、凍結乾燥して、標題化合物（９４ｍｇ、５０％）を淡黄色のふわふわした固体として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.88 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.03 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.81 - 7.58 (m, 2H), 7.38 (d, J = 14.2 Hz, 5H), 6.95 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 6.28 (s, 1H), 5.51 (s, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.81 - 4.65 (m, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.12 - 3.90 (m, 3H), 3.73 - 3.55 (m, 20H), 3.48 - 3.33 (m, 3H), 3.18 (s, 3H), 2.59 - 2.39 (m, 7H), 2.14 - 2.04 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.05 (s, 9H). LRMS (m/z) 計算値, 1044.49; 実測値,1069.626 (M+Na)+. HPLC, tR = 8.3 分 (純度: 98%)。
実施例９１
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−１５−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１，１３−ジオキソ−５，８，１１−トリオキサ−２，１４−ジアザヘキサデカン−１６−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．０４１）の合成
ステップＩ、１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−酸ｔｅｒｔ−ブチル
ＤＭＳＯ中の２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０６ｍｇ、０．４０３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、（２−フルオロ−４−メチル）−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）カルバミン酸フェニル（８６ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）を加え、１６時間撹拌し、酢酸エチル（１０ｍＬで希釈）で希釈し、１０ｍＬの水で洗浄し、水溶液を酢酸エチル（２ｘ１０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した．残渣を、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（５〜１５％、１５ＣＶ、１５％、１０ＣＶ）を溶離液として使用する２４ｇのシリカゲルカートリッジにより精製して、標題化合物（２６ｍｇ）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.87 (s, 1H), 8.04 (d, J = 8.4 Hz,1H), 7.71 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 6.94 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 6.21 (s, 1H), 5.55 (s, 1H), 4.09 (s, 2H), 3.79 -3.69 (m, 4H), 3.68 - 3.57 (m, 6H), 3.48 - 3.38 (m, 2H), 3.19 (d, J = 5.1 Hz, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.98 (s,3H), 1.48 (s, 9H)。
ステップＩＩ、１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−酸
ＤＣＭ（０．７５ｍＬ）中の１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−酸ｔｅｒｔ−ブチル（３６ｍｇ、０．０６１４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＦＡ（０．２５ｍＬ）を加え、５時間撹拌した後、これを濃縮し、過剰のＴＦＡをロタバップ上でトルエンと５回共蒸発させ（ＴＦＡが完全に除去されたことを確認）、粗酸（３２ｍｇ、定量的）を得た。この物質を次のステップでそのまま使用した。
ステップＩＩＩ、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−１５−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１，１３−ジオキソ−５，８，１１−トリオキサ−２，１４−ジアザヘキサデカン−１６−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−酸（３２．４ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（２７．１ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）、及びＨＡＴＵ（６９．６ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）の冷（氷）攪拌溶液に、そのままのＤＩＰＥＡ（０．１０６ｍｍｏｌ、０．６１０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１６時間で室温までゆっくり温め、酢酸エチル（１０ｍＬ）及び水（５ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、オレンジ色の生成物を有機溶液から粉砕し、水溶液を分離し、有機溶液を水（２ｘ５ｍＬ）で洗浄し、合わせた水溶液を酢酸エチル中の５％ＭｅＯＨで抽出し、合わせた有機溶液をメタノールで希釈し、濃縮し、塩化メチレン中のメタノールに再溶解し、Celite（登録商標）に吸収させ、塩化メチレン中のメタノールの勾配（０〜２０％）を溶離液として使用する２４ｇのシリカゲルカートリッジにより精製して、標題化合物（１７ｍｇ、２９．１％）を白色の固体として得た。Ｒｆ＝０．４５（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.83 (bs, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 1H), 7.44 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.31 (q, J = 8.5 Hz, 4H), 6.93 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 6.43 - 6.34 (m, 1H), 5.05 - 4.94 (m, 1H), 4.64 - 4.52 (m, 2H), 4.42 (brs, 1H), 4.16 - 3.97 (m, 2H), 3.88 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.70 - 3.31 (m, 13H), 3.10 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 2.21 - 2.02 (m, 2H), 1.93 (s, 3H), 1.43 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.00 (s, 9H). LRMS (m/z) 計算値, 957.14; 実測値, 958.62 (M+H)+; 980.73 (M+Na)+. HPLC, tR = 11.2 分。
実施例９２
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−１２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１，１０−ジオキソ−５，８−ジオキサ−２，１１−ジアザトリデカン−１３−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．０４２））の合成
標題化合物（１０．９）を、化合物２．０４１のステップＩ〜ＩＩＩに記載のように、（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）カルバミン酸フェニル及び２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチルから調製した。1H NMR (600 MHz, MeOD) δ 9.16 - 8.92 (m, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.51 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.95 - 7.88 (m, 1H), 7.84 - 7.70 (m, 2H), 7.60 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 7.46 - 7.33 (m, 4H), 7.17 - 7.05 (m, 1H), 6.98 - 6.92 (m, 1H), 6.89 - 6.80 (m, 1H), 5.06 - 4.91 (m, 1H), 4.76 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.66 - 4.54 (m, 1H), 4.48 - 4.35 (m, 1H), 4.12 - 4.00 (m, 2H), 3.88 - 3.82 (m, 1H), 3.80 - 3.56 (m, 8H), 3.56 - 3.38 (m, 2H), 3.12 - 3.04 (m, 3H), 2.51 - 2.44 (m, 3H), 2.41 (d, J = 3.9 Hz, 3H), 2.25 - 2.18 (m, 1H), 2.07 - 2.01 (m, 3H), 1.97 (t, J = 11.2 Hz, 1H), 1.59 - 1.42 (m, 3H), 1.06 (s, 9H). LRMS (m/z) 計算値, 912.411; 実測値, 917.9 (M+H)+。
実施例９３
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ））ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１，２０−ジオキソ−９，１２，１５，１８−テトラオキサ−２，２１−ジアザトリコサン−２３−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．０４３）の合成
ステップＩ、１８−アジド−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル
ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中の１８−ブロモ−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（３０５ｍｇ、０．７１３ｍｍｏｌ）の冷（０℃）撹拌溶液に、アジ化ナトリウム（９７．１ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）及びヨウ化カリウム（１２２ｍｇ、０．７３５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温まで温め、４時間撹拌した。反応混合物を水（１５ｍＬ）で希釈し、Ｅｔ２Ｏ（３ｘ１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を溶離液として使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（１８１．６．ｍｇ、６５．４％）を無色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．４２（ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ）。1H NMR (400 MHz, acetone) δ 3.99 (s, 2H), 3.67 - 3.60 (m, 4H), 3.58 (s, 4H), 3.57 - 3.50 (m, 4H), 3.44 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.33 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 1.63 - 1.53 (m, 4H), 1.46 (s, 9H), 1.42 - 1.37 (m, 4H)。
ステップＩＩ、１８−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル
ＥｔＯＨ（４．５ｍＬ）中の１８−アジド−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（１８１．６ｍｇ、０．４６６ｍｍｏｌ）及び少量のＥｔＯＡｃの溶液に、１０％パラジウム担持活性炭（２０８ｍｇ）をアルゴン雰囲気下で加えた。得られた懸濁液を水素雰囲気下で室温で６時間撹拌した。反応混合物をアルゴンでパージした後、Celiteのパッドで濾過した。濾液を濃縮し、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜２０％）を溶離液として使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（１４９．５ｍｇ、収率８８．２％）を淡黄色の油状物として得た。Ｒｆ＝０．６９（１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。NMR (400 MHz, DMSO) δ 3.98 (s, 2H), 3.58 - 3.55 (m, 2H), 3.54 - 3.52 (m, 2H), 3.50 - 3.34 (m, 8H), 1.57 - 1.46 (m, 4H), 1.42 (s, 9H), 1.40 - 1.30 (m, 2H), 1.28 - 1.22 (m, 4H), 1.05 (t, J = 7.0 Hz, 2H)。
ステップＩＩＩ、１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−９，１２，１５，１８−テトラオキサ−２−アザイコサン−２０−酸ｔｅｒｔ−ブチル
標題化合物（５０ｍｇ、２１％）を、化合物２．０４１のステップＩに記載されているように調製した。Ｒｆ＝０．１３（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）。NMR (400 MHz, Acetone-D6) d 9.05 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.09 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 6.76 (bs, 1H), 6.20 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.98 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.66 - 3.58 (m, 4H), 3.57 (s, 3H), 3.56 - 3.48 (m, 4H), 3.42 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.23 - 3.15 (m, 2H), 3.08 (d, J = 4.6 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 1.55 - 1.49 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.38 - 1.35 (m, 4H), 1.29 (s, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 687.39; 実測値, 687.50 (M+H)+。
ステップＩＶ、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ））ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１，２０−ジオキソ−９，１２，１５，１８−テトラオキサ−２，２１−ジアザトリコサン−２３−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド
標題化合物（８．５ｍｇ、２３．５％）を、化合物２．０４１のステップＩＩ〜ＩＩＩに記載のように、１−（（２−フルオロ−４−メチル−５−（７−メチル−２−（メチルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−９，１２，１５，１８−テトラオキサ−２−アザイコサン−２０−酸ｔｅｒｔ−ブチルから調製した。Ｒｆ＝０．２９（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.01 (bs, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.60 - 8.55 (m, 1H), 7.89 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.44 - 7.34 (m, 5H), 7.08 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 6.52 - 6.44 (m, 1H), 4.99 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.59 - 4.51 (m, 1H), 4.03 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.64 (s, 4H), 3.62 - 3.59 (m, 2H), 3.56 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.46 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.17 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.06 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.22 - 2.16 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.97 - 1.91 (m, 2H), 1.61 - 1.53 (m, 4H), 1.49 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.39 - 1.35 (m, 5H), 1.33 - 1.26 (m, 6H), 1.03 (s, 9H), 0.91 - 0.84 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 1056.53; 実測値, 1057.65 (M+H)+. HPLC, tR = 12.0 分 (純度: 99%)。
実施例９４
Ｎ−（５−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−２−（１−（５−クロロ−６−（（（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）ピリミジン−４−カルボキサミド）エチル）チアゾール−５−カルボキサミド（化合物２．０４４）の合成：
ステップＩ、５−クロロ−６−（プロパ−２−イン−１−イルアミノ）ピリミジン−４−カルボン酸エチルの合成
ＤＣＭ（９００μＬ）中の５，６−ジクロロピリミジン−４−カルボン酸エチル（１５０ｍｇ、０．６４５ｍｍｏｌ、純度９５％ｗ／ｗ）の攪拌溶液に、プロパルギルアミン（４０μＬ、０．６２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２２０μＬ、１．２８ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、水性１Ｎ ＨＣｌ、食塩水で２回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を少量のＤＣＭに取り、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（０〜５０％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１２４ｍｇ、８０％）を得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.56 (s, 1H), 5.92 (s, 1H), 4.44 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.33 (dd, J = 5.1, 2.3 Hz, 2H), 2.28 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 1.40 (t, J = 7.1 Hz, 3H). LRMS (m/z) 計算値, 239.046; 実測値, 239.6 (M+H)+。
ステップＩＩ、５−クロロ−６−（プロパ−２−イン−１−イルアミノ）ピリミジン−４−カルボン酸の合成
１Ｎ ＮａＯＨの水溶液（１．０ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２．５ｍＬ）中の５−クロロ−６−（プロパ−２−イン−１−イルアミノ）ピリミジン−４−カルボン酸エチル（１２４ｍｇ、０．５１７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に加えた。混合物を室温で１８時間撹拌した後、氷水浴で０℃に冷却した。混合物を水性１Ｎ ＨＣｌ（１．０ｍＬ）で酸性化し、０℃で１０分間攪拌した。混合物をＥｔＯＡｃ及び水で希釈した。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで５回抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、所望の生成物（９６ｍｇ、８８％）を固体として得た。1H NMR (600 MHz, Acetone-D6) δ 8.85 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 4.37 (dd, J = 5.6, 2.2 Hz, 2H), 2.64 (t, J = 2.2 Hz, 1H). LRMS (m/z) 計算値, 211.015; 実測値, 211.5 (M+H)+。
ステップＩＩＩ、２−アセチル−Ｎ−（５−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）チアゾール−５−カルボキサミドの合成
ＤＭＥ（３．０ｍＬ）中の２−アセチルチアゾール−５−カルボン酸（１．６４ｇ、９．１０ｍｍｏｌ）の攪拌混合物に、アルゴン雰囲気下で触媒量のＤＭＦ（３．２μＬ、０．０４１ｍｍｏｌ、１滴）を加えた。ここに、塩化オキサリル（７５９μＬ、８．８４ｍｍｏｌ）を室温で１５分かけて滴加し、３時間撹拌した。得られた酸塩化物を、アセトニトリル（６．０ｍＬ）中の５−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−アミン塩酸塩（２．００ｇ、８．５８ｍｍｏｌ）及びピリジン（２．０８ｍＬ、２５．７ｍｍｏｌ）の冷（５℃）攪拌混合物に１０分かけて加え、室温までゆっくり温め、２０時間撹拌した。水とＥｔＯＡｃを加え、相を分離した。水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。ＤＣＭ：ＭｅＯＨの５：１混合物を使用して、残渣をCelite（登録商標）に吸収させ、ＤＣＭ中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を使用するシリカゲルカートリッジのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、白色の固体を得て、これを水（３Ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥して、標題化合物（２．４４ｇ、７３％、推定純度９０％）を白色の固体として得た。1H NMR (600 MHz, MeOD) δ 8.77 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 2.77 (s, 3H). LRMS (m/z) 計算値, 348.99; 実測値 350.5 (M+H)+。
ステップＩＶ、（Ｅ）−Ｎ−（５−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−２−（１−（ヒドロキシイミノ）エチル）チアゾール−５−カルボキサミドの合成
ＤＭＥ（４．０ｍＬ）中の２−アセチル−Ｎ−（５−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）チアゾール−５−カルボキサミド（７００ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ、純度９０％ｗ／ｗ）、アセトニトリル（８．０ｍＬ）、及び水（１．０ｍＬ）の混合物を６０℃で２０分間加熱し、塩酸ヒドロキシルアミン（４００ｍｇ、５．７６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を６０℃で５時間加熱し、室温に冷却し、溶媒を蒸発させた。得られたスラリーを水とＡＣＮの混合物（３：１、１０ｍＬ）に懸濁し、固体を濾別した。固体をＡＣＮ（３：１、１０ｍＬ）、１０ｍＬの水ですすぎ、真空下で乾燥して、標題化合物（６８８ｍｇ、９９％）をベージュ色の固体として得た。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 12.20 (s, 1H), 11.78 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 2.25 (s, 3H). LRMS (m/z) 計算値, 364.001; 実測値 365.6 (M+H)+。
ステップＶ、２−（１−アミノエチル）−Ｎ−（５−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）チアゾール−５−カルボキサミドの合成
（Ｅ）−Ｎ−（５−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−２−（１−（ヒドロキシイミノ）エチル）チアゾール−５−カルボキサミド（２６９ｍｇ、０．７３８ｍｍｏｌ）、水（７００μＬ）中の亜鉛末（７５．３ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）、及びｎ−ＢｕＯＨ（１．０ｍＬ）の混合物を激しく撹拌し、０〜５℃に冷却した。冷混合物に酢酸（１７７μＬ、３．１０ｍｍｏｌ）を同じ温度で滴加し、次に室温までゆっくり温め、３時間撹拌した。混合物を約５℃に冷却し、ＮＨ４ＯＨ水溶液（１７７μＬ、２．７１ｍｍｏｌ、２９％ＮＨ３基準）を滴加し、反応を５℃未満に維持した。混合物を室温まで温め、水とＥｔＯＡｃを加え、相を分離した（エマルジョンが観察された）。分離を容易にするために、少量の食塩水を加えた。水層を除去し、有機相を食塩水で洗浄し、固体がフラスコの底に押しつぶされるまで（乾燥しないように）ロタバップで濃縮した。得られた固体を濾過し、真空下で一晩乾燥して、標題化合物（３５０ｍｇ、収率９５％、純度約７０％ｗ／ｗ）をベージュ色の固体として得た。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 12.16 (s, 1H), 11.61 (s, 1H), 9.03 - 8.27 (m, 4H), 4.27 - 4.16 (m, 1H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LRMS (m/z) 計算値, 350.022; 実測値, 351.4 (M+H)+。
ステップＶＩ、Ｎ−（５−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−２−（１−（５−クロロ−６−（プロパ−２−イン−１−イルアミノ）ピリミジン−４−カルボキサミド）エチル）チアゾール−５−カルボキサミドの合成
ＤＭＦ（２．５ｍＬ）中の２−（１−アミノエチル）−Ｎ−（５−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）チアゾール−５−カルボキサミド（２０７ｍｇ、０．４１３ｍｍｏｌ、純度約７０％ｗ／ｗ）の撹拌溶液に、５−クロロ−６−（プロパ−２−イン−１−イルアミノ）ピリミジン−４−カルボン酸（９６．２ｍｇ、０．４５４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１８８ｍｇ、０．４９６ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（３５６μＬ、２．０７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ及び水で希釈した。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を、ＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、化合物（１００ｍｇ、４５％）を固体として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.65 (s, 1H), 8.63 - 8.59 (m, 2H), 8.50 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 6.12 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 5.58 - 5.49 (m, 1H), 4.39 - 4.30 (m, 2H), 2.29 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 1.76 (d, J = 7.0 Hz, 3H). LRMS (m/z) 計算値, 543.026; 実測値, 545.8 (M+H)+。
ステップＶＩＩ、Ｎ−（５−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−２−（１−（５−クロロ−６−（（（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）ピリミジン−４−カルボキサミド）エチル）チアゾール−５−カルボキサミドの合成
ＴＨＦ（２．０ｍＬ）中のＮ−（５−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−２−（１−（５−クロロ−６−（プロパ−２−イン−１−イルアミノ）ピリミジン−４−カルボキサミド）エチル）チアゾール−５−カルボキサミド（１００ｍｇ、０．１８４ｍｍｏｌ）及び水（２００μＬ）の攪拌混合物に、６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（７６．９ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（７．２８ｍｇ、３６．７ｕｍｏｌ）、及び硫酸銅（ＩＩ）５水和物（９．１７ｍｇ、３６．７ｕｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で加えた。得られた混合物を約３分間超音波処理し、混合物を室温で２時間激しく撹拌し（ＴＬＣにより完了が観察された）、ＥｔＯＡｃで希釈した。反応混合物を０〜５℃に冷却し、減圧下で濾過した。得られた濾液を濃縮し、ＤＣＭ−ＭｅＯＨに溶解し、Celite（登録商標）に吸収させ、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配を使用するシリカゲルカートリッジのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１Ｈ ＮＭＲにより、未同定の不純物とともに所望の生成物を得た。生成物を、ＥｔＯＡｃ中のメタノールの勾配（０〜２０％）を使用するシリカゲルカートリッジ（Isco gold）によりさらに精製し、次に凍結乾燥して、標題化合物（８５ｍｇ、４８％）を白色の固体として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 9.38 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 9.25 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 8.88 (d, J = 17.9 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.57 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.31 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.72 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.59 - 7.51 (m, 2H), 6.57 (s, 1H), 5.56 - 5.46 (m, 1H), 5.01 - 4.93 (m, 1H), 4.89 (dd, J = 15.2, 3.2 Hz, 1H), 4.76 (dd, J = 15.0, 2.7 Hz, 1H), 4.41 - 4.30 (m, 2H), 2.93 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.85 - 2.71 (m, 2H), 2.49 - 2.39 (m, 2H), 2.18 (s, 1H), 2.02 - 1.89 (m, 2H), 1.82 - 1.69 (m, 5H), 1.44 - 1.36 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 955.175; 実測値, 979.527 (M+Na)+. HPLC, tR = 11.0 分 (純度: 97%)。
実施例９５から実施例９７は、化合物２．０４５から２．０４７の合成を記載しており、これらの結合体のそれぞれはＰＦ−０４８８０５９４とＶＨＬリガンドを連結している。
実施例９５
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−２１−（４−（２−（（２−シアノエチル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−４−オキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザヘニコサン−１−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．０４５）の合成
ステップＩ、１８−ヨード−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル
アセトン（３．０ｍＬ、モレキュラーシーブ上で保存）中の１８−ブロモ−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（３６０ｍｇ、０．８４２ｍｍｏｌ）の溶液に、ヨウ化ナトリウム（２５３ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を加え、密閉バイアル中で７０℃で１時間加熱し、室温に冷却し、Celite（登録商標）パッドで濾過し、アセトンで洗浄し、濾液を濃縮し、乾燥した。残渣をＤＣＭ及びエーテルに懸濁し、０．４５μフィルターで濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物（４００ｍｇ、定量的）を黄色の油状物として得た。この物質を次のステップでそのまま使用した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.11 (s, 2H), 3.78 - 3.62 (m, 14H), 3.19 (dd, J = 8.8, 5.0 Hz, 2H), 1.88 - 1.77 (m, 2H), 1.74 - 1.65 (m, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.47 - 1.29 (m, 4H)。
ステップＩＩ、１８−（４−（２−（メチルチオ）ピリミジン−４−イル）−３−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル
ＤＭＦ中の５−（４−（２−（メチルチオ）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（２００ｍｇ、０．４４６ｍｍｏｌ）（ＷＯ２００９／１６４６０に記載されているものと同様の手順に従って調製）氷冷攪拌溶液に、水素化ナトリウム（３０．３ｍｇ、０．７５８ｍｍｏｌ、油中６０％）を一度に加え、同じ温度で３５分間攪拌し、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の１８−ヨード−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（２５４ｍｇ、０．５３５ｍｍｏｌ）の溶液を加え、ゆっくりと室温まで６時間暖め、ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、酢酸エチル（３ｘ１５ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、濃縮した。残渣を塩化メチレンに溶解し、Celite（登録商標）に吸収させ、塩化メチレン中のメタノールの勾配（０〜１５％）を使用する４０ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（１１０ｍｇ、３１％）及び６７ｍｇのわずかに不純な化合物（これは再精製して、追加の生成物（２６ｍｇ、７．６％）を淡黄色の油状物として得た）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.56 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 8.1 Hz, 2H),8.06 (s, 1H), 8.01 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 7.7Hz, 2H), 6.71 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.17 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.74 -3.54 (m, 12H), 3.44 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.99 - 1.90 (m, 2H), 1.70 - 1.54 (m, 2H), 1.47 (s,9H), 1.42 - 1.36 (m, 4H). Rf = 0.25 (EtOAc). LRMS (m/z) 計算値, 794.99; 実測値, 817.36 (M+Na)+。
ステップＩＩＩ、１８−（４−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−４−イル）−３−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＨＦ−水（１：１、４００μＬ）中の１８−（４−（２−（メチルチオ）ピリミジン−４−イル）−３−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（１１０ｍｇ、０．１３８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、オキソン（１２８ｍｇ、３当量）を一度に加え、室温で１６時間攪拌し、ＴＬＣ及び質量がモノ及びジスルホキシドの存在を示し、追加量のオキソン（４２ｍｇ）、ＴＨＦ／水（１：１、１ｍＬ）を加え、６時間撹拌し、溶媒をロタバップで除去し、水で希釈し、塩化メチレン（３ｘ１０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を相分離器に通し、濃縮し、Celite（登録商標）に吸収させ、塩化メチレン中のメタノールの勾配（０〜２０％）を使用する２５ｇのＳｉＯ２カラムによりで精製して、標題化合物（７４ｍｇ、６４．７％）をガムとして得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.59 - 8.53 (m, 2H), 8.26 (s, 1H), 8.22 - 8.17 (m, 2H), 8.07 (d, J = 2.0 Hz,1H), 7.81 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 5.4 Hz, 1H),6.66 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.20 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.02 (s, 2H), 3.74 - 3.53 (m, 14H), 3.45 (t, J = 6.5 Hz,2H), 3.10 (s, 3H), 2.01 - 1.91 (m, 2H), 1.64 - 1.55 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.44 - 1.33 (m, 4H). LRMS (m/z) 計算値, 826.98; 実測値, 849.36 (M+Na)+。
ステップＩＶ、１８−（４−（２−（（２−シアノエチル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−３−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル
３−アミノプロピオニトリル（１．５７ｍＬ）中の１８−（４−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−４−イル）−３−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（７４ｍｇ、０．０８９５ｍｍｏｌ）の溶液を、密封管内で８０℃で２３時間加熱した。得られた暗黄色の固体を室温に冷却し、水及び酢酸エチルに溶解し、水溶液を酢酸エチル（３ｘ２０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を水、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、溶離液として塩化メチレン中のメタノールの勾配（０〜３０％、２０ＣＶ）を使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、標題化合物（３５ｍｇ、４８％）を油状物として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.59 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.21 - 8.16 (m, 2H), 8.10 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.02(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.77 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz,2H), 6.63 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.47 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.41 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.17 (t, J = 7.2 Hz, 2H),4.02 (s, 2H), 3.76 - 3.40 (m, 18H), 2.01 - 1.89 (m, 2H), 1.64 - 1.54 (m, 3H), 1.47 (s, 9H), 1.43 - 1.35(m, 4H). Rf = 0.15 (5%MeOH in DCM). LRMS (m/z) 計算値, 816.98; 実測値, 839.36 (M+Na)+。
ステップＶ、１８−（４−（２−（（２−シアノエチル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸
メタノール中のＮａＯＨの溶液（１６６μＬ中に１．６６ｍｇ；濃度１０ｍｇ／ｍＬ）を、冷（０℃）１８−（４−（２−（（２−シアノエチル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−３−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸ｔｅｒｔ−ブチル（１７ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ））に加え、１５分後に冷却浴を取り外し、２時間攪拌（ＴＬＣが、わずかに極性の高い化合物とベースライン化合物の生成を示した）し、１Ｍ ＮａＯＨ水溶液（０．２ｍＬ）を加え、さらに１．５時間攪拌し、ＴＬＣには、より極性の高い化合物（ベースライン）の生成を示し、水性１Ｎ ＨＣｌ（０．２５ｍＬ）で酸性化し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中の約１０％ＭｅＯＨに溶解し、固体（ＮａＣｌ）を濾別し、濃縮して、標題化合物（１８ｍｇ、＞定量的）をフェニルスルホン酸を含む白色の固体として得た。この物質を、さらに精製することなく次のステップでそのまま使用した。Ｒｆ＝０．３５（ＤＣＭ中３０％ＭｅＯＨ）。LRMS (m/z) 計算値, 620.26; 実測値, 621.26 (M+H)+; 643.32 (M+Na)+。
ステップＶＩ、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−２１−（４−（２−（（２−シアノエチル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−４−オキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザヘニコサン−１−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の粗製１８−（４−（２−（（２−シアノエチル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸（２５．８ｍｇ、０．０４１６ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（１８．５ｍｇ、０．０４１６ｍｍｏｌ）、及び（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルホリノ−カルベニウムヘキサフルオロリン酸（ＣＯＭＵ）（５３．４ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＩＰＥＡ（４０μＬ、０．２２９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で７時間攪拌し、水（３ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（５ｘ５ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を乾燥し、濃縮した。残渣をメタノール−塩化メチレンに溶解し、Celite（登録商標）に吸収させ、塩化メチレン中のメタノールの勾配（０〜５０％）を溶離液として使用する２５ｇのＳｉＯ２カートリッジにより精製して、回収された１８−（４−（２−（（２−シアノエチル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサオクタデカン−１−酸（１１．４ｍｇ）を得た。Ｒｆ＝０．３５（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.35 - 8.29 (m,2H), 8.12 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.55 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 4.25 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 4.13 (s, 2H), 3.72 - 3.52 (m, 14H), 3.48 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.42- 2.20 (m, 2H), 2.03 - 1.90 (m, 2H), 1.67 - 1.55 (m, 2H), 1.51 - 1.35 (m, 4H).HPLC 純度 (93%), 及び標題化合物(5.7 mg, 13.1%) as solid. Rf = 0.2 (10% MeOH in DCM). 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.86 (s, 1H), 8.35 - 8.28 (m, 2H), 8.12 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.07 (d, J =5.2 Hz, 1H), 7.46 - 7.34 (m, 5H), 6.63 (s, 1H), 6.54 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 5.04 - 4.93 (m, J = 7.0 Hz, 1H),4.67 (s, 1H), 4.60 - 4.50 (m, 1H), 4.42 (s, 1H), 4.25 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 4.04 (s, 2H), 3.83 (d, J = 11.3Hz, 1H), 3.73 (dd, J = 11.0, 3.6 Hz, 1H), 3.69 - 3.53 (m, 12H), 3.48 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.47 (d, J = 4.9Hz, 3H), 2.38 - 2.15 (m, 4H), 1.99 - 1.93 (m, 2H), 1.65 - 1.57 (m, 2H), 1.49 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.36(d, J = 49.4 Hz, 6H), 1.02 (s, 9H). LRMS (m/z) 計算値, 1046.61; 実測値, 1047.61 (M+H)+; 1069.68 (M+Na)+. HPLC, tR = 10.3 分 (純度: 96%)。
実施例９６
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１５−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）アミノ）−４，１３−ジオキソ−６，９−ジオキサ−３，１２−ジアザペンタデカン−１−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．０４６）の合成：
ステップＩ、３−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）アミノ）プロパン酸の合成
ＴＨＦ（２．０ｍＬ）中の市販の３−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）アミノ）プロパンニトリル（６０．０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）の溶液に、新たに調製した５Ｎ ＮａＯＨ水溶液（２．０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を６５℃で１６時間加熱し、０℃に冷却した後、水性１Ｎ ＨＣｌで注意深く中和し、固体を濾別し、１ｍＬの冷水で２回洗浄し、減圧下で乾燥して、標題化合物（６０ｍｇ、９５％）をベージュ色の固体として得た。ＬＲＭＳ、LRMS (m/z) 計算値, 413.141; 実測値, 414.2 (M+H)+。
ステップＩＩ、２−（２−（２−（３−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］）ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）アミノ）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
ＤＭＦ（２．５ｍＬ）中の３−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）アミノ）プロパン酸（６０．０ｍｇ、０．１４５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８２．７ｍｇ、０．３７７ｍｍｏｌ）、次にＨＡＴＵ（７５．０ｍｇ、０．１９７ｍｍｏｌ）及びＮ−メチルモルホリン（１００μＬ、０．９１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２０時間撹拌し、水に注いだ。相が分離した。水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を水、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨの勾配（０〜２０％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、未同定の不純物を含む標題化合物（６０ｍｇ、６７％）を得た。この物質を、さらに精製することなく次のステップでそのまま使用した。
ステップＩＩＩ、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１５−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）アミノ）−４，１３−ジオキソ−６，９−ジオキサ−３，１２−ジアザペンタデカン−１−オイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミドの合成
ＴＦＡ（２００μＬ、２．６９ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１．０ｍＬ）中の２−（２−（２−（３−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）アミノ）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（６０ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に０℃で滴加した。混合物を０℃で５分間撹拌し、氷浴を取り除いた。混合物を室温まで温め、２時間撹拌し、減圧下で濃縮した。微量のＴＦＡをトルエンを使用して数回共沸除去し、高真空ポンプで一晩乾燥して、２−（２−（２−（３−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）アミノ）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）酢酸（６０ｍｇ、収率８８％）を得て、これを次のステップでそのまま使用した。ＤＭＦ（１．０ｍＬ）２−（２−（２−（３−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）アミノ）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）酢酸（３７ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、化合物に記載されているように、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（２５ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（６０ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（１００μＬ、０．５８３ｍｍｏｌ）を室温で加えて、ジアステレオマー不純物を伴う白色の固体として、４：１の比率の標題化合物（１９ｍｇ、収率３０％、推定純度８０〜９０％）を得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 10.35 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.10 - 8.03 (m, 1H), 8.03 - 7.87 (m, 2H), 7.76 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 7.66 - 7.57 (m, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 5H), 7.18 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.61 - 6.32 (m, 2H), 6.18 (t, J = 55.4 Hz, 1H), 5.97 - 5.78 (m, 1H), 5.13 (s, 1H), 4.75 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.64 (s, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 2H), 4.07 - 3.92 (m, 3H), 3.73 - 3.45 (m, 10H), 3.25 (s, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.23 (s, J = 34.9 Hz, 2H), 2.13 - 2.01 (m, 1H), 1.43 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 1.06 (s, 9H). LRMS (m/z) 計算値, 984.424; 実測値, 991.4 (M+H)+。
実施例９７
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（２−（２−（２−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．０４７）の合成
ステップＩ、２−（２−（２−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−（１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル
マイクロ波バイアル中で、ＤＭＦ（０．３ｍＬ）中の酢酸５−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−４−（２−（メチルスルホニル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（２０ｍｇ、０．０３６７ｍｍｏｌ）（ＷＯ２００９／１６４６０に記載されているものと同様の手順に従って調製）及び２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０．１ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（５．１ｍｇ、０．０３６７ｍｍｏｌ）を一度に加え、反応混合物を９０℃に予熱した油浴に置き、１．５時間撹拌し（ＴＬＣは、低極性スポットへの約４０％の変換を示した）、さらに３時間加熱し、アリコートの１Ｈ ＮＭＲは約６０％の変換を示し、反応混合物を酢酸エチル（５ｍＬ）で希釈し、０．４μミクロンフィルターで濾過し、濃縮した。残渣を、溶離液としてＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜２０％）を使用する１２ｇのＳｉＯ２により精製して、標題化合物（１１ｍｇ、４３．７％）を油状物として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.57 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.21 - 8.17 (m, 3H), 8.02 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 6.65 (dd, J = 9.3, 4.6 Hz, 2H), 6.34 - 6.00 (m, 1H), 4.53 (td, J = 13.4, 4.2 Hz, 2H), 4.44 - 4.36 (m, 2H), 4.02 (s, 2H), 3.84 - 3.79 (m, 2H), 3.76 - 3.70 (m, 4H), 1.47 (s, 9H). LRMS (m/z) 計算値, 684.22; 実測値, 685.2 (M+H)+; 707.26 (M+Na)+。
ステップＩＩ、２−（２−（２−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）酢酸
化合物２．０４５のステップＶに記載されているように、標題化合物を調製した。収率（５０％）。LRMS (m/z) 計算値, 488.16; 実測値, 489.06 (M+H)+。
ステップＩＩＩ、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−（２−（２−（２−（（４−（１−（２，２−ジフルオロエチル）−３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリミジン−２−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド
化合物２．０４５のステップＶＩに記載されているように、標題化合物を調製した。収率（２６．７％）。Ｒｆ＝０．２５（１０％ＭｅＯＨ−ＤＣＭ）。(m/z) 計算値, 914.37; 実測値, 915.53 (M+H)+, 937.52 (M+Na)+。
実施例９８及び実施例９９は、化合物２．０４８及び２．０４９の合成を記載し、これらの結合体のそれぞれは、以下の式に包含される
実施例９８
Ｎ−（５’−（４−（４−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ブチル）ピペラジン−１−イル）−２−メチル−６’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０４８）の合成
ステップＩ、５−ブロモ−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）ピリジン−３−アミンの合成
水素化ナトリウム（９９．３ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ、鉱油中６０％ｗ／ｗ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）でスラリー化した。スラリーを氷水浴を使用して冷却し、市販のテトラヒドロ−４−ピラノール（３００μＬ、３．１４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１０分間撹拌した後、氷浴を取り外し、３−アミノ−５−ブロモ−２−フルオロピリジン（３００ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を９０℃まで加熱し、２時間撹拌した。次に、混合物を室温に冷却し、水に注いだ。ＥｔＯＡｃを加え、相を分離した。水層をＥｔＯＡｃで３回抽出し、合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を溶離液として使用するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（２７８ｍｇ、６５％）を暗赤色の残渣として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.53 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 5.22 (tt, J = 8.5, 4.1 Hz, 1H), 3.97 (dt, J = 9.4, 4.5 Hz, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.64 - 3.58 (m, 2H), 2.13 - 2.01 (m, 2H), 1.83 - 1.74 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 272.016; 実測値, 274.9 (M+H)+。
ステップＩＩ、５−ブロモ−３−ヨード−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）ピリジンの合成
濃厚塩酸（１．３ｍＬ、４２．８ｍｍｏｌ、３７％ｗ／ｗ）及び水（１．７ｍＬ）の冷（０℃）混合物に、５−ブロモ−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）ピリジン−３−アミン（５７ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を加えた。ここに亜硝酸ナトリウム（１６ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、３０分間撹拌した後、水（３．０ｍＬ）中のＫＩ（１０４ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくり加えた。混合物を室温に到達させ、３０分間撹拌した。次に、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水を加えた。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機物をチオ硫酸ナトリウム、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で１回洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。得られた残渣をＤＣＭに取り、溶離液としてＤＣＭ中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１０％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（５１ｍｇ、６４％）を得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 5.28 - 5.20 (m, 1H), 4.05 - 3.95 (m, 2H), 3.72 - 3.61 (m, 2H), 2.06 - 2.00 (m, 2H), 1.86 - 1.78 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 382.90; 実測値, 384.4 (M+H)+。
ステップＩＩＩ、４−（５−ブロモ−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）ピリジン−３−イル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成：
トルエン（１５ｍＬ）中の５−ブロモ−３−ヨード−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）ピリジン（７８０ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−Ｂｏｃピペラジン（４１６ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）、ＮａＯｔＢｕ（５８６ｍｇ、６．０９ｍｍｏｌ）、及びキサントホス（１１８ｍｇ、０．２０３ｍｍｏｌ）を加え、混合物をアルゴン（ｇ）で２分間脱気した。次に、Ｐｄ（ｄｂａ）２（６０．０ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物をアルゴン（ｇ）で再び脱気し、９０℃で５０分間加熱した（ＴＬＣにより完了が観察された）。混合物を室温に冷却し、水及び飽和塩化アンモニウム水溶液で処理した。ＥｔＯＡｃを加え、相を分離した。水層をＥｔＯＡｃで２回抽出し、合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製物を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を溶離液として使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（８５２ｍｇ、９５％）を暗赤色の残渣として得た。NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.78 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 5.31 - 5.28 (m, 1H), 3.98 - 3.89 (m, 2H), 3.69 - 3.60 (m, 2H), 3.58 (s, 4H), 3.03 (s, 4H), 2.12 - 2.06 (m, 2H), 1.86 - 1.76 (m, 2H), 1.49 (s, 9H). LRMS (m/z) 計算値, 441.126; 実測値,443.0 (M+H)+。
ステップＩＶ、４−（２’−メチル−６−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
ＤＭＥ（４．０ｍＬ）中の４−（５−ブロモ−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）ピリジン−３−イル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２００ｍｇ、０．４５２ｍｍｏｌ））及びＮ−（６−メチル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−３−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（２０２ｍｇ ０．４９７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）．ＣＨ２Ｃｌ２（２０．０ｍｇ、２４．５μｍｏｌ）及び２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（７０１μＬ、１．４０ｍｍｏｌ、２Ｍ）を加えた。混合物をアルゴンで２分間脱気した後、９０℃で９０分間加熱した後、室温まで冷却した。混合物をＥｔＯＡｃ及び水で希釈し、次に飽和塩化アンモニウム水溶液で希釈した。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）を溶離液として使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（２５８ｍｇ、８９％）を少量のＤＭＦ及びＥｔＯＡｃと共に得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.60 (s, 1H), 8.15 (s, 2H), 8.09 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.85 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.67 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.03 - 3.94 (m, 2H), 3.70 (t, J = 9.5 Hz, 2H), 3.61 (s, 4H), 3.09 (s, 4H), 2.52 (s, J = 10.1 Hz, 3H), 2.16 (d, J = 10.6 Hz, 2H), 1.92 - 1.85 (m, 2H), 1.49 (s, 9H). LRMS (m/z) 計算値, 641.282; 実測値, 644.8 (M+H)+。
ステップＶ、Ｎ−（２−メチル−５’−（ピペラジン−１−イル）−６’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドの合成。
トリフルオロ酢酸（５００μＬ、６．７３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の４−（２’−メチル−６−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２５８ｍｇ、０．４０２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に加えた。混合物を３時間撹拌した後、０℃に冷却した。混合物を重炭酸ナトリウムの飽和水溶液でゆっくり処理した。氷浴を取り外し、混合物を２０分間撹拌し、相を分離した。水層をＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮して、標題化合物（１６７ｍｇ、７７％）をベージュ色の固体として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.62 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.09 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.85 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.67 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.03 - 3.96 (m, 2H), 3.70 (t, J = 9.4 Hz, 2H), 3.14 (s, 4H), 3.09 (s, 4H), 2.52 (s, 3H), 2.19 - 2.12 (m, 2H), 1.92 - 1.86 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 541.230; 実測値, 544.1 (M+H)+。
ステップＶＩ、Ｎ−（５’−（４−（ヘキサ−５−イン−１−イル）ピペラジン−１−イル）−２−メチル−６’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドの合成
ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＮ−（２−メチル−５’−（ピペラジン−１−イル）−６’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（２２ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、炭酸カリウム（８．４ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１０分間撹拌した。次に、６−ヨード−１−ヘキシン（７．５μＬ、０．０５７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で６５時間撹拌し、水及び飽和塩化アンモニウム水溶液で希釈した。５分間撹拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈した。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機物を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜１５％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１６ｍｇ、６３％）を白色の固体として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.63 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.12 - 8.07 (m, 2H), 7.82 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 5.44 - 5.36 (m, 1H), 4.03 - 3.92 (m, 2H), 3.75 - 3.63 (m, 2H), 3.19 (s, 4H), 2.66 (s, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.47 - 2.41 (m, 2H), 2.27 - 2.21 (m, 2H), 2.18 - 2.11 (m, 2H), 1.93 - 1.83 (m, 3H), 1.72 - 1.63 (m, 2H), 1.61 - 1.54 (m, 2H). LRMS (m/z) 計算値, 621.292; 実測値, 624.8 (M+H)+。
ステップＶＩＩ、Ｎ−（５’−（４−（４−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ブチル）ピペラジン−１−イル）−２−メチル−６’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミドの合成
アルゴン雰囲気下で、ＴＨＦ（８００μＬ）及び水（８０μＬ）を、Ｎ−（５’−（４−（ヘキサ−５−イン−１−イル）ピペラジン−１−イル）−２−メチル−６’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１６ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）に加えた。次に、６−アジド−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）ヘキサンアミド（１１ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を加え、次にアスコルビン酸ナトリウム（１．０ｍｇ、５．１μｍｏｌ）及び硫酸銅（ＩＩ）５水和物（１．３ｍｇ、５．１μｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を約１５秒間超音波処理し、混合物を室温で２時間撹拌した（ＴＬＣにより完了が観察された）。次に、ＥｔＯＡｃと水を加えた。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機物を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のＥｔＯＡｃの勾配（０〜１００％）及びＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜２０％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（２４ｍｇ、収率８８％）を白色の固体として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 9.39 (s, 1H), 8.96 (brs, 1H), 8.78 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.13 - 8.05 (m, 3H), 7.83 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.70 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.07 - 7.03 (m, 1H), 5.44 - 5.37 (m, 1H), 4.98 - 4.91 (m, 1H), 4.34 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 4.02 - 3.96 (m, 2H), 3.72 - 3.66 (m, 2H), 3.26 (brs, 4H), 2.96 - 2.68 (m, 9H), 2.51 (s, 3H), 2.45 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.18 - 2.12 (m, 3H), 1.99 - 1.94 (m, 2H), 1.89 - 1.84 (m, 2H), 1.81 - 1.77 (m, 3H), 1.42 (dt, J = 15.3, 7.8 Hz, 2H), 1.30 - 1.23 (m, 5H). LRMS (m/z) 計算値, 1033.442; 実測値, 1035.704 (M+H)+. HPLC, tR = 8.5 分 (純度: 98%)。
実施例９９
Ｎ−（５’−（４−（４−（１−（６−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ−６−オキソヘキシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ブタノイル）ピペラジン−１−イル）−２−メチル−６’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（化合物２．０４９）の合成
ステップＩ、Ｎ−（５’−（４−（ヘキサ−５−イノイル）ピペラジン−１−イル）−２−メチル−６’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（ＭＡＢ−００２４８）の合成
ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中のＮ−（２−メチル−５’−（ピペラジン−１−イル）−６’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）オキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（７８ｍｇ、０．１４４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、５−ヘキシン酸（１９μＬ、０．１７２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（７１．２ｍｇ、０．１８７ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（１２４μＬ、０．７２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２０分間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ及び水で希釈し、次に１．０ｍＬの飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で希釈した。相を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機抽出物を合わせ、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中のメタノールの勾配（０〜２０％）を使用するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（７６ｍｇ、８３％）を黄色の残渣として得た。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 9.77 - 9.37 (m, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.24 (s, 2H), 8.16 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.80 - 7.72 (m, 2H), 7.63 - 7.54 (m, 1H), 7.02 (s, 1H), 5.39 (s, 1H), 3.97 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.76 (s, 2H), 3.66 (s, 4H), 3.13 (s, 2H), 3.06 (s, 2H), 2.77 - 2.74 (m, 5H), 2.50 - 2.45 (m, 4H), 2.27 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 2.12 (s, 2H), 1.96 (s, 1H). LRMS (m/z) 計算値, 635.272; 実測値, 638.9 (M+H)+。
実施例１００は、ＶＨＬリガンドの反転立体構造の点を含有する結合体の合成を記載する。
実施例１００
（２Ｒ，４Ｓ）−１−（（Ｒ）−３，３−ジメチル−２−（６−（４−（（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）ブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物２．０１０）の合成
ステップＩ、６−（４−（（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサン酸
標題化合物（４８．２ｍｇ、７７．１％）を、実施例２２に記載のように、Ｎ−（２−メチル−５’−モルホリノ−６’−（２−（２−（２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド及び６−アジドヘキサン酸（１５．２ｍｇ、０．０９６７ｍｍｏｌ）から、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．３４（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.31 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.15 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.60 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 4.59 (s, 2H), 4.57 - 4.52 (m, 2H), 4.32 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.91 - 3.83 (m, 6H), 3.72 - 3.70 (m Hz, 2H), 3.66 - 3.57 (m, 6H), 3.13 (bs, 4H), 2.36 (s, 3H), 2.33 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 1.94 - 1.85 (m, 2H), 1.71 - 1.61 (m, 2H), 1.37 - 1.30 (m, 2H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.07 (s) ppm. LRMS (ESI) m/z: C38H46F3N7O8の計算値, 785.34; 実測値 785.93 (M+H)+; 実測値 808.07 (M+Na)+; 実測値 824.07 (M+K)+; 実測値 784.14 (M-H)-。
ステップＩＩ：（２Ｒ，４Ｓ）−１−（（Ｒ）−３，３−ジメチル−２−（６−（４−（（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）ブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド
標題化合物（１２．５ｍｇ、１６．８％）を、実施例３６に記載のように、ＤＭＦ（１．３ｍＬ）中の６−（４−（（２−（２−（２−（（２’−メチル−５−モルホリノ−５’−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−［３，３’−ビピリジン］−６−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサン酸（４８．２ｍｇ、０．０６１３ｍｍｏｌ）からＨＡＴＵ（４５．２ｍｇ、０．１１９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３３μＬ、０．０６２５ｍｍｏｌ）を使用して、（２Ｒ，４Ｓ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（４−メチルチアゾール−５−イル）フェニル）エチル）ピロリジン−２−カルボキサミド（３１．５ｍｇ、０．６５６ｍｍｏｌ）を使用して、白色の固体として調製した。Ｒｆ＝０．１８（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.19 (s, 1H), 8.81 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.32 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 (s, 4H), 6.97 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 6.21 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 4.97 - 4.89 (m, 1H), 4.66 - 4.59 (m, 3H), 4.56 - 4.55 (m, 2H), 4.52 - 4.47 (m, 1H), 4.32 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.22 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 4.06 (dd, J = 10.4, 6.3 Hz, 1H), 3.92 - 3.82 (m, 6H), 3.71 - 3.69 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.64 - 3.62 (m, 6H), 3.56 (dd, J = 10.4, 5.5 Hz, 1H), 3.11 - 3.10 (m, 4H), 2.61 (s, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.43 - 2.36 (m, 1H), 2.12 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.07 - 2.02 (m, 1H), 1.82 - 1.74 (m, 2H), 1.62 - 1.51 (m, 2H), 1.34 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.27 - 1.18 (m, 2H), 1.05 (s, 9H) ppm. 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -63.03 (s) ppm. LRMS, m/z, C61H76F3N11O10Sの計算値, 1211.5449; 実測値 1212.22 (M+H)+; 実測値 1234.07 (M+Na)+. HPLC 純度 (>99% @ 254 nm; >99% @ 234 nm; 9.10 分)。ＨＰＬＣ方法：カラム、Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｚｏｒｂａｘ−ＳＢ−ＣＮ、３．５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相、水中アセトニトリル（０〜１００％）酢酸アンモニウム緩衝液を含む；流速、０．１ｍＬ／分、実行時間、２０分。
生化学的及び生物学的データ
実施例１０１
ダイマー化アッセイ
アルファスクリーン（Alpha Screen）緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．１％ｖ／ｖ ツイーン２０、２％ｖ／ｖ ＤＭＳＯ）を使用して、アッセイのためのすべての希釈物を作製した。ＧＳＴ−Ｂｒａｆのストックは、６８０ｎＭの精製ＧＳＴ−Ｂｒａｆキナーゼドメインを１００μｇ／ｍＬのアルファリサ（AlphaLisa）グルタチオンアクセプタービーズ（Perkin Elmer）と、４℃で３０分間インキュベートすることにより調製した。Ｅ３基質アダプターのストックは、６８０ｎＭの精製ビオチン化Ｅ３基質アダプター（ＶＨＬ／ＥｌｏＢ／ＥｌｏＣ複合体又はＣＲＢＮ３１８−４２５）を１００μｇ／ｍＬのアルファリサストレプトアビジンドナービーズ（Perkin Elmer）と４℃で３０分間インキュベートすることにより調製した。３０分後、未結合のストレプトアビジンビーズを２００μＭのビオシチンでブロックし、４℃でさらに３０分間インキュベートした。ＧＳＴ−Ｂｒａｆ及びＥ３基質アダプターストックを１：１の比率で合わせた。化合物は、２０μＭから４倍連続希釈して調製した。１０μＬのアルファリサ混合物を１２μＬの化合物に加え、室温で３０分間インキュベートした。エンスパイア（Enspire）プレートリーダー（Perkin Elmer）でアルファスクリーン方法を使用して、白色の９６ウェルのオプティプレート（Optiplates）（Perkin Elmer）で、アッセイの読み取りを行った。
結果
図１及び図２は、化合物とタンパク質の比率を変えて特定の化合物について測定した相対的ダイマー化を示す。以下の表１５、表１６、及び表１７は、特定の化合物のダイマー化データをまとめたものである。
表１５、表１６、及び表１７に報告されている相対値は以下の通りである。
「＋＋＋＋＋」 ＲＡＦ／Ｅ３ダイマー化≧７５％；
「＋＋＋＋」 ７５％＞ＲＡＦ／Ｅ３ダイマー化≧５０％；
「＋＋＋」 ５０％＞ＲＡＦ／Ｅ３ダイマー化≧２５％；
「＋＋」 ２５％＞ＲＡＦ／Ｅ３ダイマー化≧５％；
「＋」 ５％＞ＲＡＦ／Ｅ３ダイマー化。
実施例１０２
分解アッセイ
蛍光を介してタンパク質レベルをモニターするために、ＣＲＡＦのＣ末端に蛍光タンパク質を付着させたＣＲＡＦ融合タンパク質を用いて、Ｃａｌｕ−６細胞に安定的にトランスフェクトした。細胞を９６ウェルプレートに播種し、一晩接着させた。翌日、以下の表に示す用量の化合物で細胞を処理し、経時的に分析した。IncuCyte S3生細胞分析システム（Essen BioScience）で蛍光ＣＲＡＦタンパク質レベルをモニターすることにより、データを採取した。蛍光ＣＲＡＦ融合タンパク質は４４０〜４８０ｎｍで励起され、発光は５０４〜５４４ｎｍで測定された。
Ｃａｌｕ６＿ＣＲＡＦ融合タンパク質細胞は、Incucyte S3生細胞分析システム（Essen Biosciences）を使用して画像化及び分析される。蛍光シグナルは、ＣＲＡＦのＣ末端に共有的に融合した蛍光タンパク質の発現によるものであり、分解は、本開示の化合物で処理した後の蛍光／コンフルエンス（ほぼ細胞数）を測定することにより評価される。
位相差画像は、Incucyte S3ソフトウェアを使用して分析される。位相差マスクを使用して、コンフルエンス率を計算して、Ｃａｌｕ６＿ＣＲＡＦ融合タンパク質細胞が占める画像の面積を定量化される。
蛍光画像は、Incucyte S3ソフトウェアを使用して分析される。緑色補正単位（ＧＣＵ）は蛍光マスクを使用して、緑色蛍光信号が占める画像の領域と信号の強度を定量化することにより計算される。
図３〜図１１は、示された化合物の添加後の経時的なＣＲＡＦ分解を示す。前述のように、分解は蛍光／コンフルエンスの関数として測定される。以下の表１８は、リストされた化合物の指定濃度で測定された最大相対的ＣＲＡＦ分解を示す。
表１８に報告されている相対値は以下の通りである：
「＋＋＋」 最大ＣＲＡＦ分解％≧２２．５％；
「＋＋」 ２２．５％＞最大ＣＲＡＦ分解％≧１０％；
「＋」 １０％＞最大ＣＲＡＦ分解％。
実施例１０３
２重標的結合は活性を付与する
ＶＨＬリガンドは、ＶＨＬ結合のためにヒドロキシプロリン残基を必要とする。このリガンドの立体構造の２点を変更すると、ＶＨＬ結合活性が除去されることが知られている。
一対のＲＡＦ分解性結合体化合物［一方はＶＨＬリガンド（化合物２．００３）、他方はＶＨＬリガンドの不活性異性体（化合物２．０１０）である］を、上記のダイマー化アッセイ及び分解アッセイにおける活性について試験した。
ダイマー化アッセイは、化合物２．００３（活性化合物）の導入がＢＲＡＦ／ＶＨＬダイマー化をうまく引き起こすが、化合物２．０１０（不活性立体異性体）の導入はダイマー化を引き起さないことを示す（図１２）。ＲＡＦ７０９のダイマー化データもこの図に含まれており、ＲＡＦ阻害剤単独ではダイマー化を引き起こさないことを示す。
同様に、分解アッセイは、化合物２．００３（活性化合物）が１．６７μＭでＣＲＡＦ分解をうまく引き起こす（図１３）が、同じ濃度の化合物２．０１０（不活性立体異性体）は、ＣＲＡＦの相対量を有意に減少させない（蛍光が維持される）（図１４）ことを示す。
上記発明は、理解を明確にするために、例示及び実施例によってある程度詳細に説明されているが、添付の特許請求の範囲内で特定の変更及び修飾を実施できることを当業者は理解するであろう。さらに、本明細書で提供される各参考文献は、あたかも各参考文献が個別に参照により組み込まれたかのように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (88)

  1. リンカー成分を介して分解シグナル伝達物質に共有結合したＲＡＦのリガンドを含む、ＲＡＦ分解性結合体化合物。
  2. 前記ＲＡＦのリガンドが選択的ＣＲＡＦ阻害剤である、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  3. 前記ＲＡＦのリガンドがソラフェニブである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  4. 前記ＲＡＦのリガンドがＲＡＦ７０９である、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  5. 前記ＲＡＦのリガンドがＬＨＸ２５４である、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  6. 前記ＲＡＦのリガンドがＨａｈ １０ｄである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  7. 前記ＲＡＦのリガンドがＰＦ−０４８８０５９４である、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  8. 前記ＲＡＦのリガンドがＬＹ３００９１２０である、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  9. 前記ＲＡＦのリガンドがＰＬＸ４７２０である、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  10. 前記分解シグナル伝達物質がＥ３リガーゼ認識物質である、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  11. 前記Ｅ３リガーゼ認識物質がポマリドミドである、請求項１０に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  12. 前記Ｅ３リガーゼ認識物質が小分子ＶＨＬリガンドである、請求項１０に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  13. 前記リンカー成分がポリエチレングリコールを含む、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  14. 前記リンカー成分が以下からなる群から選択される式を有する、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、下付き文字ｍは１〜２４の整数であり、下付き文字ｎは１〜１４の整数であり、各下付き文字ｐは独立して０〜６の整数であり、下付き文字ｑは０〜８の整数であり、下付き文字ｖは１〜１０の整数であり、波線は前記ＲＡＦのリガンドと前記分解シグナル伝達物質との結合部位を示す］。
  15. 前記リガンドがソラフェニブであり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ａ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  16. 前記リガンドがソラフェニブであり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｂ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  17. 前記リガンドがソラフェニブであり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｃ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  18. 前記リガンドがソラフェニブであり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｄ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  19. 前記ＲＡＦのリガンドがＨａｈ １０ｄであり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ａ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  20. 前記ＲＡＦのリガンドがＨａｈ １０ｄであり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｂ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  21. 前記ＲＡＦのリガンドがＨａｈ １０ｄであり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｃ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  22. 前記ＲＡＦのリガンドがＨａｈ １０ｄであり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｄ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  23. 前記ＲＡＦのリガンドがＰＦ−０４８８０５９４であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ａ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  24. 前記ＲＡＦのリガンドがＰＦ−０４８８０５９４であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｂ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  25. 前記ＲＡＦのリガンドがＰＦ−０４８８０５９４であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｃ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  26. 前記ＲＡＦのリガンドがＰＦ−０４８８０５９４であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｄ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  27. 前記ＲＡＦのリガンドがＬＹ３００９１２０であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ａ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  28. 前記ＲＡＦのリガンドがＬＹ３００９１２０であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｂ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  29. 前記ＲＡＦのリガンドがＬＹ３００９１２０であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｃ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  30. 前記ＲＡＦのリガンドがＬＹ３００９１２０であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｄ）を有する、請求項１３に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  31. 前記ＲＡＦのリガンドがＰＬＸ４７２０であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ａ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  32. 前記ＲＡＦのリガンドがＰＬＸ４７２０であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｂ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  33. 前記ＲＡＦのリガンドがＰＬＸ４７２０であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｃ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  34. 前記ＲＡＦのリガンドがＰＬＸ４７２０であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミド又は小分子ＶＨＬリガンドであり、前記リンカー成分が式（ｄ）を有する、請求項１４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  35. 前記ＲＡＦのリガンドがＲＡＦ７０９であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミドである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  36. 前記ＲＡＦのリガンドがＲＡＦ７０９であり、前記分解シグナル伝達物質がＶＨＬリガンドである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  37. ＲＡＦ７０９が、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項３５又は請求項３６に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、各ＸはＮ又はＣＨであり、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す］。
  38. ポマリドミドが、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項３５又は請求項３７に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す］。
  39. ＶＨＬリガンドが、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項３６又は請求項３７に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す］。
  40. 前記リンカー成分が、以下からなる群から選択される式を有する、請求項３６〜３９のいずれか１項に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
    ［式中、下付き文字ｐは０〜４であり、下付き文字ｑは０〜６であり、下付き文字ｖは１〜６であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す］。
  41. 前記ＲＡＦのリガンドがソラフェニブであり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミドである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  42. 前記ＲＡＦのリガンドがソラフェニブであり、前記分解シグナル伝達物質がＶＨＬリガンドである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  43. ソラフェニブが以下の構造を有する、請求項４１又は請求項４２に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す］。
  44. ポマリドミドが、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項４１又は請求項４３に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す］。
  45. ＶＨＬリガンドが、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項４２又は請求項４３に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す］。
  46. 前記リンカー成分が、以下からなる群から選択される式を有する、請求項４１〜４５のいずれか１項に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、下付き文字ｐは０〜４であり、下付き文字ｑは０〜６であり、下付き文字ｖは１〜６であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す］。
  47. 前記ＲＡＦのリガンドがＬＹ３００９１２０であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミドである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  48. 前記ＲＡＦのリガンドがＬＹ３００９１２０であり、前記分解シグナル伝達物質がＶＨＬリガンドである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  49. ＬＹ３００９１２０が、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項４７又は請求項４８に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す］。
  50. ポマリドミドが、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項４７又は請求項４９に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
  51. ＶＨＬリガンドが、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項４８又は請求項４９に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
  52. 前記リンカー成分が、以下からなる群から選択される式を有する、請求項４７〜５１のいずれか１項に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、下付き文字ｐは０〜４であり、下付き文字ｑは０〜６であり、下付き文字ｖは１〜６である］。
  53. 前記ＲＡＦのリガンドがＭＬＮ２４８０であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミドである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  54. 前記ＲＡＦのリガンドがＭＬＮ２４８０であり、前記分解シグナル伝達物質がＶＨＬリガンドである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  55. ＭＬＮ２４８００が以下の構造を有する、請求項５３又は請求項５４に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す］。
  56. ポマリドミドが、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項５３又は請求項５５に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
  57. ＶＨＬリガンドが、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項５４又は請求項５５に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
  58. 前記リンカー成分が、以下からなる群から選択される式を有する、請求項５５〜５７のいずれか１項に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、下付き文字ｐは０〜４であり、下付き文字ｑは０〜６であり、下付き文字ｖは１〜６であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す］。
  59. 前記ＲＡＦのリガンドがＰＦ−０４８８０５９４であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミドである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  60. 前記ＲＡＦのリガンドがＰＦ−０４８８０５９４であり、前記分解シグナル伝達物質がＶＨＬリガンドである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  61. ＰＦ−０４８８０５９４が、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項５９又は請求項６０に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す］。
  62. ポマリドミドが、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項５９又は請求項６１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
  63. ＶＨＬリガンドが、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項６０又は請求項６１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
  64. 前記リンカー成分が、以下からなる群から選択される式を有する、請求項５９〜６３のいずれか１項に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、下付き文字ｐは０〜４であり、下付き文字ｑは０〜６であり、下付き文字ｖは１〜６であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す］。
  65. 前記ＲＡＦのリガンドがＬＸＨ２５４であり、前記分解シグナル伝達物質がポマリドミドである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  66. 前記ＲＡＦのリガンドがＬＸＨ２５４であり、前記分解シグナル伝達物質がＶＨＬリガンドである、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  67. ＬＸＨ２５４が以下の構造を有する、請求項６５又は請求項６６に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す］。
  68. ポマリドミドが、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項６５又は請求項６７に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す］。
  69. ＶＨＬリガンドが、以下からなる群から選択される構造を有する、請求項６６又は請求項６７に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す］。
  70. 前記リンカー成分が、以下からなる群から選択される式を有する、請求項６５〜６９のいずれか１項に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物：
    ［式中、下付き文字ｐは０〜４であり、下付き文字ｑは０〜６であり、下付き文字ｖは１〜６であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す］。
  71. 請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物であって、
    前記ＲＡＦのリガンドは、構造：
    （式中、ＸはＮ又はＣＨであり、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）を有し；
    前記分解シグナル伝達物質は、以下：
    （式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）から成る群から選択され；そして
    前記リンカー成分は、以下：
    及び（ｏ）と（ｏ１）の混合物
    （式中、各下付き文字ｐは独立して０〜６の整数であり、下付き文字ｑは０〜８の整数であり、下付き文字ｖは１〜１０の整数であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す）から成る群から選択される、上記化合物。
  72. 請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物であって、
    前記ＲＡＦのリガンドは、構造：
    （式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）を有し；
    前記分解シグナル伝達物質は、以下：
    （式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）から成る群から選択され；そして
    前記リンカー成分は、以下：
    及び（ｏ）と（ｏ１）の混合物
    （式中、各下付き文字ｐは独立して０〜６の整数であり、下付き文字ｑは０〜８の整数であり、下付き文字ｖは１〜１０の整数であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す）から成る群から選択される、上記化合物。
  73. 請求項７１又は７２に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物であって、各下付き文字ｐは独立して０〜５の整数であり、下付き文字ｑは０〜３の整数であり、下付き文字ｖは１〜７の整数であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す、上記化合物。
  74. 請求項７１又は７２に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物であって、
    前記分解シグナル伝達物質は、以下：
    （式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）であり、そして
    前記リンカー成分は、以下：
    （式中、各下付き文字ｐは独立して０〜３の整数であり、下付き文字ｑは０〜３の整数であり、下付き文字ｖは１〜７の整数であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す）から成る群から選択される、上記化合物。
  75. 請求項７１又は７２に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物であって、
    前記分解シグナル伝達物質は、以下：
    （式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）であり、そして
    前記リンカー成分は、以下：
    （式中、各下付き文字ｐは独立して０〜３の整数であり、下付き文字ｑは０〜３の整数であり、下付き文字ｖは１〜７の整数であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す）から成る群から選択される、上記化合物。
  76. 請求項７１又は７２に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物であって、
    前記分解シグナル伝達物質は、以下：
    （式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）であり、そして
    前記リンカー成分は、以下：
    及び（ｏ）と（ｏ１）の混合物
    （式中、各下付き文字ｐは独立して０〜５の整数であり、下付き文字ｖは１〜７の整数であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す）から成る群から選択される、上記化合物。
  77. 請求項７１又は７２に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物であって、
    前記分解シグナル伝達物質は、以下：
    （式中、波線は前記リンカー成分の結合部位を示す）であり、そして
    前記リンカー成分は、以下：
    （式中、下付き文字ｖは１〜７の整数であり、前記構造体の左側の波線は前記ＲＡＦのリガンドへの結合部位を示し、右側の波線は前記分解シグナル伝達物質への結合部位を示す）である、上記化合物。
  78. 前記実施例及び表から選択される、請求項１に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物。
  79. 請求項１〜７８のいずれか１項に記載の前記化合物と医薬的に許容し得る賦形剤又は担体とを含む、医薬組成物。
  80. 癌及びＲＡＳ病（RASopathy）からなる群から選択される疾患又は障害を治療する方法であって、治療有効量の請求項１〜７８のいずれか１項に記載のＲＡＦ分解性結合体化合物を、それを必要とする被験体に投与することを含む上記方法。
  81. 前記疾患又は状態が癌である、請求項８０に記載の方法。
  82. 前記癌が、メラノーマ、上皮癌（例えば、前立腺癌、卵巣癌、乳癌）、又は血液癌（例えば、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫）からなる群から選択される、請求項８１に記載の方法。
  83. 前記疾患又は状態がＲＡＳ病である、請求項８２に記載の方法。
  84. 前記ＲＡＳ病が、ヌーナン症候群、コステロ症候群、レギウス症候群、及びレオパード症候群からなる群から選択される、請求項８３に記載の方法。
  85. 追加の癌治療薬を投与することをさらに含む、請求項８１又は８２に記載の方法。
  86. 前記追加の癌治療薬が、化学療法剤、放射線治療薬、及び内分泌療法からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。
  87. ＲＡＦ分解性結合体化合物を含むキット。
  88. 使用説明書を有するラベルをさらに含む、請求項８７に記載のキット。
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