BR112012022358B1 - Processo para conjugar um sacarídeo bacteriano e reduzir o efeito de dimensionamento no sacarídeo bacteriano - Google Patents
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Abstract
processo para conjugar um sacarídeo bacteriano, conjugado, composição imunogênica, uso da composição imunogênica, e, método para prevenir ou tratar infecção bacteriana. processo para conjugação de sacarídeos bacterianos que incluem sacarídeos de streptococcus pneumonice e haemophilus influenzae pela aminação redutiva é aqui fornecido.
Description
[0001] A presente invenção diz respeito a um processo para a conjugação. Em particular, a mesma diz respeito à conjugação de sacarídeos e proteínas usando a aminação redutiva.
[0002] Os polissacarídeos capsulares bacterianos foram amplamente usados na imunologia por muitos anos para a prevenção de doença bacteriana. Um problema com tal uso, entretanto, é a natureza independente de T da resposta imune. Estes antígenos são assim deficientemente imunogênicos em crianças jovens. Este problema foi superado através da conjugação dos antígenos de polissacarídeo a uma proteína carreadora (uma fonte de epítopos auxiliares T) que pode ser depois usada para evocar uma resposta imune dependente de T, mesmo no primeiro ano de vida.
[0003] Várias técnicas de conjugação são conhecidas no ramo. Os conjugados podem ser preparados pelos métodos diretos de aminação redutiva como descrito na US200710184072 (Hausdorff), US 4365170 (Jennings) e US 4673574 (Anderson). Outros métodos são descritos na EP-0-161-188, EP-208375 e EP-0-477508. O método de conjugação pode alternativamente contar com a ativação de grupos hidroxila do sacarídeo com tetrafluoroborato de 1-ciano-4-dimetilamino piridínio (CDAP) para formar um éster de cianato. Tais conjugados são descritos no pedido publicado PCT WO 93/15760 Uniformed Services University e WO 95/08348 e WO 96/29094. Ver também Chu C. et al Infect. Immunity, 1983 245 256.
[0004] A aminação redutiva envolve duas etapas, (1) oxidação do antígeno, (2) redução do antígeno e uma proteína carreadora para formar um conjugado. A etapa de oxidação pode envolver a reação com periodato, entretanto a oxidação pelo periodato pode levar à redução de tamanho (WO94/05325).
[0005] Os inventores surpreendentemente descobriram que usando concentrações mais baixas de periodato na presença de fosfato baixo pode levar à retenção do tamanho e/ou a retenção de epítopos.
[0006] Em um primeiro aspecto da invenção é fornecido um processo para conjugar um sacarídeo(s) bacteriano que compreende as etapas de a) reagir o sacarídeo bacteriano com 0,001 a 0,7, 0,005 a 0,5, 0,01 a 0,5, 0,1 a 1,2, 0,1 a 0,5, 0,1 a 0,2, 0,5 a 0,8, 0,1 a 0,8, 0,3 a 1,0 ou 0,4 a 0,9 molar equivalente de periodato para formar um sacarídeo bacteriano ativado; b) misturar o sacarídeo bacteriano ativado com uma proteína carreadora; c) reagir o sacarídeo bacteriano ativado e a proteína carreadora com um agente redutor para formar um conjugado; ou a) reagir o sacarídeo bacteriano com 0,001 a 0,7, 0,005 a 0,5, 0,01 a 0,5, 0,1 a 1,2, 0,1 a 0,5, 0,1 a 0,2, 0,5 a 0,8, 0,1 a 0,8, 0,3 a 1,0 ou 0,4 a 0,9 molar equivalente de periodato para formar um sacarídeo bacteriano ativado; b) misturar o sacarídeo bacteriano ativado com um ligante; c’) reagir o sacarídeo bacteriano ativado com o ligante usando um agente redutor para formar um sacarídeo bacteriano-ligante; d) reagir o sacarídeo bacteriano-ligante com uma proteína carreadora para formar um conjugado; em que etapa a) ocorre em um tampão que não contém um grupo amina, e o tampão tem uma concentração entre 1 a 100 mM.
[0007] Em um segundo aspecto da invenção é fornecido um conjugado obtenível pelo processo da invenção.
[0008] Em um terceiro aspecto da invenção é fornecido um conjugado obtido pelo processo da invenção.
[0009] Em um quarto aspecto da invenção é fornecido uma composição imunogênica que compreende o conjugado da invenção e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0010] Em um quinto aspecto da invenção é fornecida uma vacina que compreende a composição imunogênica da invenção.
[0011] Em um sexto aspecto da invenção é fornecido um uso da composição imunogênica da invenção ou a vacina da invenção na prevenção ou tratamento de doença bacteriana.
[0012] Em um sétimo aspecto da invenção é fornecido um uso da composição imunogênica da invenção ou da vacina da invenção na preparação de um medicamento para a prevenção ou tratamento de doença bacteriana.
[0013] Em um oitavo aspecto da invenção é fornecido um método de prevenir ou tratar a infecção bacteriana que compreende a administração da composição imunogênica da invenção ou da vacina da invenção a um paciente.
[0014] Em um nono aspecto da invenção é fornecido um sacarídeo bacteriano ativado, em que o sacarídeo bacteriano ativado compreende uma unidade de repetição da Fórmula (I):
em que o sacarídeo bacteriano ativado compreende n unidades de repetição e n está entre 2 e 2400, entre 500 e 2000, entre 750 e 1500, entre 1000 e 2000 ou entre 1500 e 2300. em que pelo menos 0,001 %, 0,01 %, 0,1 %, 0,5 %, 1 %, 2 %, 5 %, 10 % ou 30 % mas menos do que 0,001 %, 0,01 %, 0,1 %, 0,5 %, 1 %, 2 
[0015] Figura 1. Tamanho dos polissacarídeos 23F e 6B a seguir do tratamento com periodato. A linha marcada com triângulos mostra o tamanho de 6B em 10 mM de tampão de fosfato, a linha marcada com diamantes mostra o tamanho de 23F em 10 mM de tampão de fosfato e a linha marcada com quadrados mostra o tamanho de 23F em 100 mM de tampão de fosfato.
[0016] Figura 2. Comparação de imunogenicidade de conjugados 23F usando CDAP ou a conjugação de aminação redutiva. O Gráfico a) descreve os resultados de um ensaio de ELISA. O Gráfico b) descreve os resultados de um ensaio de opsonofagocitose.
[0017] Figura 3. Avaliação da imunogenicidade de PS06B-CRM conjugado usando os métodos de conjugação descrito no exemplo 4 em um modelo de camundongo Balb/c.
[0018] Figura 4. Avaliação da imunogenicidade de PS06B-CRM conjugado usando os métodos de conjugação descritos no exemplo 4 em um modelo de porquinho da Índia.
[0019] A invenção diz respeito a um processo melhorado para conjugar um antígeno a uma proteína carreadora. Em particular, a invenção fornece um processo para conjugar um sacarídeo(s) bacteriano(s) que compreende(m) as etapas de a) reagir o sacarídeo bacteriano com 0,001 a 0,7, 0,005 a 0,5, 0,01 a 0,5, 0,1 a 1,2, 0,1 a 0,5, 0,1 a 0,2, 0,5 a 0,8, 0,1 a 0,8, 0,3 a 1,0 ou 0,4 a 0,9 molar equivalente de periodato para formar um sacarídeo bacteriano ativado; b) misturar o sacarídeo bacteriano ativado com uma proteína carreadora; c) reagir o sacarídeo bacteriano ativado e a proteína carreadora com um agente redutor para formar um conjugado; ou a) reagir o sacarídeo bacteriano com 0,001 a 0,7, 0,005 a 0,5, 0,01 a 0,5, 0,1 a 1,2, 0,1 a 0,5, 0,1 a 0,2, 0,5 a 0,8, 0,1 a 0,8, 0,3 a 1,0 ou 0,4 a 0,9 molar equivalente de periodato para formar um sacarídeo bacteriano ativado; b) misturar o sacarídeo bacteriano ativado com um ligante; c’) reagir o sacarídeo bacteriano ativado com o ligante usando um agente redutor para formar um sacarídeo bacteriano-ligante; d) reagir o sacarídeo bacteriano-ligante com uma proteína carreadora para formar um conjugado; em que a etapa a) ocorre em um tampão que não contém um grupo amina, e o tampão tem uma concentração entre 1 e 100 mM.
[0020] O termo ‘periodato’ inclui tanto periodato quanto ácido periódico. Este termo também inclui tanto metaperiodato (IO4-) quanto ortoperiodato (IO65-), entretanto em uma forma de realização particular o periodato usado no método da invenção é o metaperiodato. O termo ‘periodato’ também inclui os vários sais de periodato incluindo periodato de sódio e periodato de potássio. Em uma forma de realização o periodato usado é metaperiodato de sódio. Quando um antígeno reage com periodato, o periodato oxida grupos hidroxila vicinais para formar grupos carbonila ou aldeído e causa a clivagem de uma ligação C-C. Por esta razão o termo ‘reagir um antígeno com periodato’ inclui oxidação de grupos hidroxila vicinais pelo periodato.
[0021] Para os propósitos da invenção um ‘sacarídeo bacteriano ativado’ é um sacarídeo bacteriano que foi ativado pela etapa a) do processo da invenção.
[0022] Para os propósitos da invenção o termo ‘conjugado’ indica um sacarídeo bacteriano covalentemente ligado a uma proteína carreadora. Em uma forma de realização um sacarídeo bacteriano é ligado diretamente a uma proteína carreadora. Em uma segunda forma de realização um sacarídeo bacteriano é ligado a uma proteína através de um espaçador/ligante.
[0023] O tampão usado na etapa a) é um tampão que não contém um grupo amina. Em uma forma de realização o tampão é selecionado da lista que consiste de tampão de fosfato, tampão de borato, tampão de acetato, tampão de carbonato, tampão de maleato e tampão de citrato. Em uma segunda forma de realização o tampão é um tampão inorgânico. O termo tampão inorgânico inclui qualquer solução tampão em que a capacidade de tamponamento é devida à presença de um composto que não contém carbono. Os tampões inorgânicos da invenção incluem tampão de fosfato e tampão de borato. Em uma forma de realização o tampão é tampão de fosfato.
[0024] Em uma forma de realização o tampão tem uma concentração entre 1 e 100 mM, 5 e 80 mM, 1 e 50 mM, 1 e 25 mM, 10 e 40 mM, 1 e 10 mM, 5 e 15 mM, 8 e 12 mM, 10 e 20 mM, 5 e 20 mM, 10 e 50 mM, em torno de 10 mM ou em torno de 20 mM. Em uma outra forma de realização o pH na etapa a) é o pH de 2,5 a 8,0, pH de 5,0 a 7,0, pH de 5,5 a 6,5, pH de 5,8 a 6,3 ou em torno do pH 6,0.
[0025] O termo “sacarídeo” por todo este relatório descritivo pode indicar polissacarídeo, ácido tecoico ou oligossacarídeo e inclui todos os três. O mesmo pode indicar lipopolissacarídeo (LPS) ou lipooliogossacarídeo (LOS). Antes do uso os polissacarídeos podem ser isolados a partir de uma cepa fonte ou isolados da cepa fonte e classificados de acordo com o tamanho em algum grau pelos métodos conhecidos (ver, por exemplo, EP497524 e EP497525; Shousun Chen Szu et al. - Carbohydrate Research Vol 152 p7-20 (1986)), por exemplo, pela microfluidização. Os oligossacarídeos têm um número baixo de unidades de repetição (tipicamente de 5 a 30 unidades de repetição) e são tipicamente polissacarídeos hidrolisados.
[0026] Em uma forma de realização o sacarídeo bacteriano é um sacarídeo capsular bacteriano. Em uma forma de realização da presente invenção o sacarídeo bacteriano origina-se dos Estreptococos do Grupo B, Vibrio cholera, Streptococus pneumoniae (S. pneumoniae), Haemophilus influenzae (H. influenzae), Neisseria meningitidis (N. meningitidis), Staphilococcus aureus (S. aureus), enterococos, Salmonella Vi ou Staphilococcus epidermidis (S. epidermidis). Em uma outra forma de realização o sacarídeo bacteriano origina-se de S. pneumoniae, H. influenzae, N. meningitidis, S. aureus, enterococos, Salmonella Vi ou S. epidermidis. já em uma outra forma de realização o sacarídeo bacteriano é um sacarídeo capsular bacteriano selecionado de uma lista que consiste de: N. meningitidis sorogrupo A (MenA), B (MenB), C (MenC), W135 (MenW) ou Y (MenY), Estreptococos do Grupo B grupo Ia, Ib, II, III, IV, V, VI ou VII, Staphilococcus aureus tipo 5, Staphilococcus aureus tipo 8, Salmonella typhi (sacarídeo Vi), Vibrio cholerae ou H. influenzae tipo b. Em uma forma de realização o sacarídeo bacteriano é um sacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F ou 33F. Em uma outra forma de realização o sacarídeo bacteriano é um sacarídeo capsular de S. pneumoniae selecionado do grupo que consiste de 5, 6B, 6A, 7F, 9V, 14 ou 23F. Opcionalmente o sacarídeo bacteriano da invenção é um sacarídeo capsular de S. pneumoniae 23F, 6B ou 6A. Em uma forma de realização o sacarídeo bacteriano é um sacarídeo capsular de S. pneumoniae 23F. Em uma forma de realização o sacarídeo bacteriano é um sacarídeo capsular de S. pneumoniae 6B. Em uma forma de realização o sacarídeo bacteriano é um sacarídeo capsular de S. pneumoniae 6A. já em uma outra forma de realização o sacarídeo bacteriano é polissacarídeo ou oligossacarídeo de Haemophilus influenzae b (Hib). Em uma forma de realização o sacarídeo bacteriano contém anti diois vicinais.
[0027] O sacarídeo bacteriano pode ser um polissacarídeo nativo ou pode ter sido reduzido no tamanho por um fator de não mais do que x2, x4, x6, x8, x10 ou x20 (por exemplo, pela microfluidização [por exemplo, pelo aparelho Emulsiflex C-50] ou outra técnica conhecida [por exemplo, métodos térmicos, químicos, de oxidação, de sonificação]). Em uma forma de realização o sacarídeo bacteriano é microfluidizado antes da etapa a). Os oligossacarídeos podem ter sido reduzidos ainda mais em tamanho de modo substancial [por exemplo, pelos métodos térmicos, químicos ou de oxidação conhecidos].
[0028] Para os propósitos da invenção, “polissacarídeo nativo” refere-se a um sacarídeo bacteriano que não foi submetido a um processo, o propósito do qual é reduzir o tamanho do sacarídeo. Um polissacarídeo pode se tornar levemente reduzido no tamanho durante os procedimentos de purificação normais. Um tal sacarídeo é ainda nativo. Apenas se o polissacarídeo fosse submetido às técnicas que reduzem um sacarídeo em tamanho o polissacarídeo não seria considerado nativo.
[0029] O peso molecular médio ponderado de um sacarídeo bacteriano adequado para a conjugação pelo processo da invenção pode estar entre 20 kDa e 2000 kDa, entre 30 kDa e 1000 kDa, entre 40 kDa e 500 kDa, entre 50 kDa e 400 kDa, entre 75 kDa e 300 kDa ou entre 1000 kDa e 2000 kDa. No caso do sacarídeo capsular 23F nativo de S. pneumoniae, o peso molecular médio do polissacarídeo nativo está entre 750 e 1500 kDa ou 1200 e 1300 kDa. No caso do sacarídeo Hib nativo, o peso molecular médio do polissacarídeo nativo está entre 100 e 250 kDa. O peso molecular ou peso molecular médio de um sacarídeo aqui refere-se ao peso molecular médio ponderado (Mw) do sacarídeo bacteriano medido antes da conjugação e é medido por MALLS. A técnica de MALLS é bem conhecida no ramo. Para análise de MALLS de sacarídeos, duas colunas (TSKG6000 e 5000PWxl) podem ser usadas em combinação e os sacarídeos são eluídos em água. Os sacarídeos são detectados usando um detector de dispersão de luz (por exemplo, Wyatt Dawn DSP equipado com um laser de argônio de 10 mW a 488 nm) e um refratômetro inferométrico (por exemplo, Wyatt Otilab DSP equipado com uma célula P100 e um filtro vermelho a 498 nm). As análises de MALLS podem ser realizadas usando um TSKGMPwxl e 50 mM de Na/K PO4, 200 mM de NaCl pH 7,0 como tampão de elução com 0,75 ml/min usando o detector de RI/DAWN-EOS. Em uma forma de realização, a polidispersividade do sacarídeo é de 1 a 1,5, 1 a 1,3, 1 a 1,2, 1 a 1,1 ou 1 a 1,05 e depois da conjugação a uma proteína carreadora, a polidispersividade do conjugado é de 1,0 a 2,5, 1,0 a 2,0. 1,0 a 1,5, 1,0 a 1,2, 1,5 a 2,5, 1,7 a 2,2 ou 1,5 a 2,0. Todas as medições de polidispersividade são geradas por MALLS.
[0030] O tratamento com periodato pode levar a uma redução no tamanho do sacarídeo bacteriano (efeito de classificação de acordo com o tamanho). Em uma forma de realização o processo da invenção reduz este efeito de classificação de acordo com o tamanho. Isto é observado para o sacarídeo bacteriano 23F de Streptococcus pneumoniae (como no exemplo 1). Por esta razão, em uma forma de realização o peso molecular médio de um sacarídeo bacteriano da invenção está entre 1 e 1100 kDa, 100 e 470 kDa, 200 e 300 kDa, 600 e 1100 kDa ou 800 e 1000 kDa depois da etapa a) (medido por MALLS como descrito acima). Em uma forma de realização o peso molecular médio do sacarídeo 23F está entre 100 e 470 kDa ou 200 e 300 kDa depois da etapa a). Em uma forma de realização o peso molecular médio do sacarídeo bacteriano de Hib está entre 1 e 50 kDa ou entre 5 e 10 kDa depois da etapa a).
[0031] O termo “proteína carreadora” é intencionado a abranger tanto peptídeos pequenos quanto polipeptídeos grandes (>10 kDa). A proteína carreadora pode ser qualquer peptídeo ou proteína. O mesmo pode compreender um ou mais epítopos auxiliares T. A proteína carreadora pode ser o toxoide do tétano (TT), fragmento C do toxoide do tétano, mutantes não tóxicos da toxina do tétano [observe que todas de tais variantes de TT são consideradas ser o mesmo tipo de proteína carreadora para os propósitos desta invenção], polipeptídeos que compreende os epítopos de célula T da toxina do tétano tais como N19 (WO2006/067632), toxoide da difteria (DT), CRM197, outros mutantes não tóxicos da toxina da difteria [tais como CRM176, CRM197, CRM228, CRM45 (Uchida et al J. Biol. Chem. 218; 3838-3844, 1973); CRM9, CRM45, CRM102, CRM103 e CRM107 e outras mutações descritas por Nicholls e Youle em Genetically Engineered Toxins, Ed: Frankel, Maecel Dekker Inc, 1992; a deleção ou mutação de Glu-148 para Asp, Gln ou Ser e/ou Ala 158 para Gly e outras mutações divulgadas na US 4709017 ou US 4950740; mutação de pelo menos um ou mais resíduos Lys 516, Lys 526, Phe 530 e/ou Lys 534 e outras mutações divulgadas na US 5917017 ou US 6455673; ou fragmento divulgado na US 5843711] (observe que todas de tais variantes de DT são consideradas ser do mesmo tipo de proteína carreadora para os propósitos desta invenção), pneumolisina pneumocócica (Kuo et al (1995) Infect Immun 63; 2706-13), OMPC (proteína da membrana externa meningocócica - usualmente extraída de N. meningitidis sorogrupo B - EP0372501), peptídeos sintéticos (EP0378881, EP0427347), proteínas de choque térmico (WO 93/17712, WO 94/03208), proteínas da coqueluche (WO 98/58668, EP0471177), citocinas, linfocinas, fatores de crescimento ou hormônios (WO 91/01146), proteínas artificiais que compreendem epítopos de célula CD4+ T humano múltiplos de vários antígenos derivados de patógeno (Falugi et al (2001) Eur J Immunol 31; 3816-3824) tais como a proteína N19 (Baraldoi et al (2004) Infect Immun 72; 4884-7) proteína de superfície pneumocócica PspA (WO 02/091998), proteínas de captação de ferro (WO 01/72337), toxina A ou B de C. difficile (WO 00/61761), Proteína D de H. influenzae (EP594610 e WO 00/56360), PhtA pneumocócica (WO 98/18930, também aludida como Sp36), PhtD pneumocócica (divulgada na WO 00/37105, e também é aludida como Sp036D), PhtB pneumocócica (divulgada na WO 00/37105, e também é aludida como Sp036B) ou PhtE (divulgada na WO00/30299 e é aludida como BVH-3).
[0032] Em uma forma de realização da invenção a proteína carreadora é selecionada do grupo que consiste de: toxoide do tétano (TT), fragmento C do toxoide do tétano, toxoide da difteria (DT), CRM197, Pneumolisina (Ply), proteína D, PhtD, PhtDE e N19. Em uma outra forma de realização a proteína carreadora é CRM197. Ainda em uma outra forma de realização a proteína carreadora é o toxoide do tétano (TT).
[0033] Em uma forma de realização a etapa a) é realizada no escuro.
[0034] Quando um antígeno reage com periodato, o periodato oxida grupos hidroxila vicinais para formar grupos carbonila ou aldeído e causa a clivagem de uma ligação C-C. A etapa de oxidação (etapa a)) pode ocorrer
como descrito abaixo:
[0035] Quando concentrações baixas de tampão, em particular tampão de fosfato e quantidades baixas de periodato são usadas, isto pode reduzir o efeito de classificação por tamanho descrito acima.
[0036] Os sacarídeos capsulares de Streptococcus pneumoniae contêm grupos hidroxila vicinais que são capazes de ser oxidado por periodato como pode ser observado a partir das a estruturas das regiões repetidas mostradas abaixo:
[0037] Em uma forma de realização menos do que 0,001 %, 0,01 %, 0,1 %, 0,5 %, 1 %, 2 %, 5 %, 10 %, 30 % ou 50 % dos diois vicinais do sacarídeo bacteriano torna-se oxidado durante a etapa a).
[0038] Em uma forma de realização o grupo carbonila produzido na etapa a) reage com um grupo amina na proteína carreadora na etapa c). Isto pode ocorrer de acordo com o seguinte esquema de reação:
[0039] Em uma forma de realização o sacarídeo bacteriano está presente em uma concentração dentre 0,2 g/l e 14 g/l, 8 g/l e 12 g/l, 10 g/l e 12 g/l, 1 g/l e 4 g/l, 0,2 g/l e 1 g/l ou entre 0,4 g/l e 0,6 g/l ou em torno de 11 g/l ou em torno de 0,5 g/l na etapa a). Em uma forma de realização a concentração inicial de proteína carreadora na etapa b) está entre 0,5 g/l e 35 g/l, 25 g/l e 35 g/l, 0,5 g/l e 5 g/l ou entre 0,8 g/l e 2 g/l ou em torno de 32 g/l ou 1 g/l. Em uma outra forma de realização a concentração inicial de sacarídeo bacteriano ativado na etapa b) está entre 0,2 g/l e 20 g/l, 10 g/l e 28 g/l ou 0,2 g/l e 4 g/l ou entre 1 g/l e 2 g/l ou em torno de 15 g/l ou 1,6 g/l. Em uma outra forma de realização a razão inicial de sacarídeo bacteriano ativado para proteína carreadora na etapa b) é de 2,0:1 a 0,1:1, 1,8:1 a 0,4:1, 1,4:1 a 1,6:1, 1:1 a 1,4:1, 1,8:1 a 1,6:1, 0,8:1 a 0,4:1, 0,7:1 a 0,5:1 ou 0,7:1 a 0,6:1 (p/p). Em uma outra forma de realização a razão final de proteína carreadora para sacarídeo bacteriano depois da etapa c) ou c’) é de 0,5:1 a 4:1, 0,8:1 a 3,2:1, 0,5:1 a 1,8:1, 1,4:1 a 1,8:1, 1:1 a 1,2:1 ou 2,5:1 a 3,5:1.
[0040] Em uma forma de realização a temperatura da reação na etapa a) é de 4 a 40° C, de 10 a 32° C, de 17 a 30° C ou de 22 a 27° C. Tipicamente esta temperatura é mantida através da etapa a). A temperatura de reação durante a etapa c) é de 4 a 40° C, de 10 a 32° C, de 17 a 30° C ou de 22 a 27° C. Tipicamente esta temperatura é mantida através da etapa c).
[0041] Em uma forma de realização a etapa a) do processo da invenção ocorre em menos do que 30 horas, entre 5 e 25 horas, entre 15 e 25 horas, entre 30 minutos e 25 horas, entre 1 hora e 35 horas, entre 10 e 20 horas ou entre 15 e 20 horas em torno de 18 horas ou em torno de 1 hora. Em uma forma de realização da etapa c) do processo da invenção ocorre entre 10 e 60 horas, 10 e 20 horas, 20 e 60 horas, entre 30 e 50 horas ou entre 35 e 45 horas.
[0042] A conjugação também pode ocorrer através da adição de um ligante hetero- ou homo-bifuncional usando a química da invenção. Uma extremidade do ligante reagirá com o antígeno ativado pela aminação redutiva, entretanto a outra extremidade do ligante pode reagir com a proteína carreadora usando qualquer tipo de química. Por esta razão o ligante conterá pelo menos um grupo amino reativo, se o ligante é homo-bifuncional o mesmo conterá dois grupos amino reativos, se o ligante é hetero-bifuncional o mesmo conterá um grupo amino reativo e um grupo reativo diferente, em uma forma de realização este segundo grupo reativo é um grupo carbonila reativo. Em uma forma de realização o ligante está entre 1 e 20 Ângstroms no comprimento. Em uma outra forma de realização o ligante tem entre 4 e 20, 4 e 12 ou 5 e 10 átomos de carbono. Um ligante possível é a diidrazida do ácido adípico (ADH). Outros ligantes incluem B-propionamido (WO 00/10599), nitrofenil-etilamina (Gever et al (1979) Med. Microbiol. Immunol. 165; 171- 288), haletos de haloalquila (US4057685), ligações glicosídicas (US4673574, US4808700), hexano diamina e ácido 6-aminocaproico (US4459286).
[0043] No geral os seguintes tipos de grupos químicos na proteína carreadora podem ser usados para a ligação / conjugação como o segundo grupo reativo:
[0044] A) Carboxila (por exemplo, por intermédio do ácido aspártico ou ácido glutâmico). Em uma forma de realização este grupo é ligado a um grupo amino em um ligante com a química da carbodiimida, por exemplo, com EDAC (1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida)).
[0045] Nota: ao invés de EDAC acima, qualquer carbodiimida adequada pode ser usada.
[0046] B) Grupo amino (por exemplo, por intermédio da lisina). Em uma forma de realização este grupo está ligado a um grupo carboxila em um ligante com a química da carbodiimida, por exemplo, com EDAC. Em uma outra forma de realização este grupo está ligado aos grupos hidroxila ativados com CDAP ou CNBr em um ligante; aos ligantes tendo um grupo aldeído; aos ligantes tendo um grupo de éster de succinimida.
[0047] C) Sulfidrila (por exemplo, por intermédio da cisteína). Em uma forma de realização este grupo é ligado a um ligante acetilado de bromo ou cloro com a química da maleimida. Em uma forma de realização este grupo é ativado/ modificado com bis diazobenzidina.
[0048] D) A proteína pode ser modificada para conter um grupo alquinila ou azida, este seria conjugado ao ligante usando a química ‘click’ (descrita em Tetrahedron letters (Junho 2005) 46: 4479-4482).
[0049] Nota: ao invés de EDAC acima, qualquer carbodiimida adequada pode ser usada.
[0050] Os agentes redutores que são adequados para o uso no processo da invenção incluem os cianoboroidretos, tais como cianoboroidreto de sódio, borano-piridina ou resina de troca de boroidreto. Em uma forma de realização o agente redutor é cianoboroidreto de sódio. Em uma forma de realização entre 0,5 e 2, 0,6 e 1,5 ou 0,8 e 1,2 ou em torno de 1,0 molar equivalente de cianoboroidreto de sódio é usado na etapa c). Em uma outra forma de realização o agente redutor compreende triacetoxiboroidreto de sódio, em uma outra forma de realização entre 2 e 10 ou entre 3 e 9 equivalentes molares ou em torno de 2,5 equivalentes molares de triacetoxiboroidreto de sódio são usados na etapa c).
[0051] Antes da etapa c) o sacarídeo bacteriano ativado e a proteína carreadora pode ser liofilizado. Em uma forma de realização o sacarídeo bacteriano ativado e a proteína carreadora são liofilizados juntos. Isto pode ocorrer antes da etapa b) ou depois da etapa b). Em uma forma de realização a liofilização ocorre na presença de um açúcar não redutor, os açúcares não redutores possíveis incluem sacarose, trealose, rafinose, estaquiose, melezitose, dextrano, manitol, lactitol e palatinit. Em uma outra forma de realização o açúcar não redutor é selecionado do grupo que consiste de sacarose, trealose ou manitol.
[0052] Em uma forma de realização as etapas b) e/ou c) são realizadas em solvente de DMSO (sulfóxido de dimetila). Em uma outra forma de realização as etapas b) e/ou c) são realizadas em solvente de DMF (dimetilformamida). Os solventes DMSO ou DMF podem ser usados para reconstituir o sacarídeo bacteriano ativado e a proteína carreadora que foram liofilizados.
[0053] Na extremidade da etapa c) pode haver grupos carbonila não reagidos que permanecem nos conjugados, estes podem ser tampados usando um agente de encapuzamento adequado. Em uma forma de realização este agente de encapuzamento é boroidreto de sódio (NaBH4), por exemplo, o produto da etapa c) pode ser reagido com boroidreto de sódio por 15 mins a 15 horas, 15 mins a 45 mins, 2 a 10 horas ou 3 a 5 horas, em torno de 30 mins ou em torno de 4 horas. Em uma outra forma de realização o encapuzamento é obtido misturando-se o produto da etapa c) com em torno de 2 equivalentes molares ou entre 1,5 e 10 equivalentes molares de NaBH4.
[0054] A invenção também fornece uma outra etapa e) de purificar o conjugado, a etapa e) pode compreender diafiltração, por exemplo, diafiltração com um corte de 100 kDa. Além disso, ou alternativamente a etapa e) pode compreender cromatografia de troca iônica. Em uma outra forma de realização a etapa e) pode compreender cromatografia de exclusão de tamanho. Em uma forma de realização o processo de acordo com as reivindicações de 1 a 51 compreende uma outra etapa f), em que o conjugado é filtrado estéril.
[0055] O conjugado também pode ser misturado com antígenos adicionais. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem pelo menos 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 sacarídeos de S. pneumoniae selecionados do grupo que consiste de 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F e 33F. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem os sacarídeos de S. pneumoniae 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23F. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem os sacarídeos de S. pneumoniae 4, 6B, 9V, 14, 18C e 19F. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem os sacarídeos de S. pneumoniae 4, 9V, 14, 18C, 19F e 23F. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem os sacarídeos de S. pneumoniae 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F e 23F. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem os sacarídeos de S. pneumoniae 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, e 19F. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem os sacarídeos de S. pneumoniae 1, 4, 5, 7F, 9V, 14, 18C, 19F e 23F. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem os sacarídeos de S. pneumoniae 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem os sacarídeos de S. pneumoniae 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A e 19F. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem os sacarídeos de S. pneumoniae 1, 3, 4, 5, 6A, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem os sacarídeos de S. pneumoniae 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem os sacarídeos de S. pneumoniae 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A e 19F. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem os sacarídeos de S. pneumoniae 1, 4, 5, 6A, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F.
[0056] Qualquer um dos sacarídeos listados como ‘antígenos adicionais’ são opcionalmente conjugados a uma proteína carreadora pelo processo da invenção ou por um processo diferente. Opcionalmente estes antígenos adicionais são conjugados às proteínas carreadoras listadas acima.
[0057] Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 1 conjugado à proteína D ou CRM197. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 3 conjugado à proteína D, CRM197, pneumolisina ou PhtD ou fragmento ou proteína de fusão desta. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 4 conjugado à proteína D ou CRM197. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 5 conjugado à proteína D ou CRM197. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 6B conjugado à proteína D ou CRM197. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 7F conjugado à proteína D ou CRM197. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 9V conjugado à proteína D ou CRM197. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 14 conjugado à proteína D ou CRM197. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 23F conjugado à proteína D ou CRM197. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 18C conjugado ao toxoide do tétano ou CRM197. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 19A conjugado à pneumolisina ou CRM197. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 22F conjugado à CRM197 ou PhtD ou fragmento de proteína de fusão deste. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 6A conjugado à pneumolisina ou uma proteína de H. influenzae, opcionalmente proteína D ou PhtD ou proteína de fusão desta ou CRM197. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 6C conjugado à pneumolisina ou uma proteína de H. influenzae, opcionalmente proteína D ou PhtD ou proteína de fusão desta ou CRM197. Em uma forma de realização, os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular de S. pneumoniae 19F conjugado ao toxoide da difteria (DT).
[0058] Os antígenos adicionais também podem compreender proteínas de Streptococcus pneumoniae. Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem pelo menos 1 proteína selecionada do grupo que consiste da família da Tríade da Poli Histidina (PhtX), família da proteína de Ligação de Colina (CbpX), truncados de CbpX, família LytX, truncados de LytX, proteínas quiméricas de truncado de CbpX-truncado de LytX (ou fusões), pneumolisina (Ply), PspA, PsaA, Sp128, Sp101, Sp130, Sp125 e Sp133.
[0059] Os antígenos adicionais também podem compreender antígenos de outra espécie bacteriana. Em uma forma de realização a vacina ou composição imunogênica compreende antígenos que se originam de S. pneumoniae (S. pneumoniae), Haemophilus influenzae (H. Influenzae), Neisseria meningitidis (N. Meningitidis), Escherichia coli (E. coli), Moraxella cattharlis (M. cattarhalis), tétano, difteria, coqueluche, Staphilococcus epidermidis (S. epidermidis), enterococos, Pseudomonas ou Staphilococcus aureus (S. aureus).
[0060] Em uma forma de realização os antígenos adicionais compreendem antígenos de M. cattarhalis, os antígenos de M. cattarhalis preferidos são: OMP106 [WO 97/41731 (Antex) & WO 96/34960 (PMC)]; OMP21; LbpA & LbpB [WO 98/55606 (PMC)]; TbpA & TbpB [WO 97/13785 & WO 97/32980 (PMC)]; CopB [Helminen ME, et al. (1993) Infect. Immun. 61: 2003-2010]; UspA1/2 [WO 93/03761 (University of Texas)]; e OmpCD. Os exemplos de antígenos de Haemophilus influenzae não tipáveis que podem ser incluídos em uma vacina de combinação (especialmente para a prevenção de otite média) incluem: Proteína de Fimbrina [(US 5766608 - Ohio State Research Foundation)] e fusões que compreendem peptídeos destes [por exemplo, fusões de peptídeo LB1(f); US 5843464 (OSU) ou WO 99/64067]; OMP26 [WO 97/01638 (Cortecs)]; P6 [EP 281673 (State University of New York)]; TbpA e TbpB; Hia; Hmw1,2; Hap; e D15.
[0061] Em uma outra forma de realização os antígenos adicionais compreendem toxoide da difteria (DT), toxoide do tétano (TT), e componentes da coqueluche [tipicamente toxoide da coqueluche destoxificado (PT) e hemaglutinina filamentosa (FHA) com pertactina opcional (PRN) e/ou aglutinina 1+2], por exemplo a vacina comercializada INFANRIX-DTPaTM (SmithKlineBeecham Biologicals) que contém antígenos DT, TT, PT, FHA e PRN ou com um componente da coqueluche de célula inteira por exemplo como comercializado pela SmithKlineBeecham Biologicals s.a., como Tritanrix®. Em uma outra forma de realização os antígenos adicionais compreendem antígeno de superfície da Hepatite B (HepB).
[0062] Em uma outra forma de realização os antígenos adicionais compreendem o sacarídeo capsular PRP de H. influenzae (Hib).
[0063] Em uma outra forma de realização os antígenos adicionais compreendem pelo menos um sacarídeo capsular de N. meningitidis A, C, W ou Y. Em uma outra forma de realização os antígenos adicionais compreendem pelo menos um conjugado de um sacarídeo capsular de N. meningitidis A, C, W ou Y.
[0064] O conjugado também pode ser misturado com um adjuvante. Os adjuvantes adequados incluem, mas não são limitados a, sais de alumínio (fosfato de alumínio ou hidróxido de alumínio), monofosforil lipídeo A (por exemplo 3D-MPL), saponinas (por exemplo QS21), emulsões de óleo em água, vesículas ou preparações de vesícula de membrana externa de cepas bacterianas Gram negativas (tais como aquelas divulgadas pela WO02/09746), lipídeo A ou seus derivados, fosfatos de alquil glicosamida ou combinações de dois ou mais destes adjuvantes.
[0065] Em uma outra forma de realização o conjugado da invenção é misturado com um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0066] Em um outro aspecto da invenção é fornecido um conjugado obtenível pelo processo da invenção. Em um outro aspecto da invenção é fornecido um conjugado obtido pelo processo da invenção. A invenção também fornece uma composição imunogênica que compreende o conjugado da invenção e um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em uma forma de realização o excipiente farmacêutico aceitável não contém um sal de cloreto, em uma outra forma de realização o excipiente farmacêutico não contém cloreto de sódio. Em uma forma de realização o excipiente farmacêutico compreende um tampão selecionado do grupo que consiste de maleato, tris ou citrato. Em uma outra forma de realização o tampão é tampão de maleato.
[0067] A composição imunogênica da invenção pode compreender antígenos adicionais, em particular aqueles descritos como ‘antígenos adicionais’ acima. A composição imunogênica pode compreender um adjuvante, particularmente aqueles descritos acima.
[0068] A invenção também fornece uma vacina que compreende a composição imunogênica da invenção.
[0069] As preparações de vacina que contêm composições imunogênicas da presente invenção podem ser usadas para proteger ou tratar um mamífero suscetível à infecção, por meio de administrar a dita vacina por intermédio da via sistêmica ou mucósica. Estas administrações podem incluir injeção por intermédio das vias intramuscular, intraperitoneal, intradérmica ou subcutânea; ou por intermédio da administração mucósica aos tratos oral/alimentar, respiratório, genitourinário. A administração intranasal de vacinas para o tratamento de pneumonia ou otite média é possível (visto que a portabilidade nasofaríngea de pneumococos pode ser mais eficazmente prevenida, atenuando assim a infecção no seu estágio mais inicial). Embora a vacina da invenção possa ser administrada como uma dose única, seus componentes também podem ser coadministrados juntos ao mesmo tempo ou em tempos diferentes (por exemplo, sacarídeos pneumocócicos conjugados podem ser administrados separadamente, ao mesmo tempo ou de 1 a 2 semanas depois da administração de qualquer componente de proteína bacteriana da vacina para coordenação ótima das respostas imunes com respeito uma à outra). Além disso, a uma via única de administração, 2 vias diferentes de administração podem ser usadas. Por exemplo, sacarídeos ou conjugados de sacarídeo podem ser administrados IM (ou ID) e proteínas bacterianas podem ser administradas IN (ou ID). Além disso, as vacinas da invenção podem ser administradas IM para as doses de imprimação e IN para as doses de reforço.
[0070] O teor de antígenos de proteína na vacina tipicamente estará na faixa de 1 a 100 μg, opcionalmente de 5 a 50 μg, o mais tipicamente na faixa de 5 a 25 μg. A seguir de uma vacinação inicial, os indivíduos podem receber uma ou várias imunizações de reforço adequadamente espaçadas.
[0071] A preparação de vacina é no geral descrita em Vaccine Design (“The subunit and adjuvant approach” (eds Powell M. F. & Newman M. J.) (1995) Plenum Press Nova Iorque). A encapsulação dentro de lipossomas é descrita por Fullerton, Patente US 4.235.877.
[0072] Embora as vacinas da presente invenção possam ser administradas por qualquer via, a administração das vacinas descritas na pele (ID) forma uma forma de realização da presente invenção. A pele humana compreende uma cutícula externa “córnea”, camada de estrato córneo, que se sobrepõem à epiderme. Por debaixo desta epiderme está uma camada chamada de derme, que por sua vez sobrepõem o tecido cutâneo. Os pesquisadores têm mostrado que a injeção de uma vacina na pele, e em particular na derme, estimula uma resposta imune, que também pode estar associada com várias vantagens adicionais. A vacinação intradérmica com as vacinas aqui descritas forma uma característica opcional da presente invenção.
[0073] A técnica convencional da injeção intradérmica, o “procedimento mantoux”, compreende as etapas de limpar a pele, e depois esfregar com uma mão, e com o chanfro de uma agulha de calibre estreito (calibre 26 a 31) voltada para cima a agulha é inserida em um ângulo dentre 10 e 15°. Uma vez que o chanfro da agulha é inserido, o corpo da agulha é abaixado e avançado ainda mais enquanto se fornece uma leve pressão para elevá-la sob a pele. O líquido é depois injetado muito lentamente formando deste modo uma vesícula ou inchaço na superfície da pele, seguido pela retirada lenta da agulha.
[0074] Mais recentemente, dispositivos que são especificamente designados para administra agentes líquidos dentro ou através da pele foram descritos, por exemplo os dispositivos descritos na WO 99/34850 e EP 1092444, também os dispositivos de injeção a jato descritos por exemplo na WO 01/13977; US 5.480.381, US 5.599.302, US 5.334.144, US 5.993.412, US 5.649.912, US 5.569.189, US 5.704.911, US 5.383.851, US 5.893.397, US 5.466.220, US 5.339.163, US 5.312.335, US 5.503.627, US 5.064.413, US 5.520, 639, US 4.596.556, US 4.790.824, US 4.941.880, US 4.940.460, WO 97/37705 e WO 97/13537. Os métodos alternativos de administração intradérmica das preparações de vacina podem incluir seringas e agulhas convencionais ou dispositivos designados para a liberação balística de vacinas sólidas (WO 99/27961) ou emplastros transdérmicos (WO 97/48440; WO 98/28037); ou aplicados à superfície da pele (liberação transdérmica ou transcutânea WO 98/20734; WO 98/28037).
[0075] Quando as vacinas da presente invenção devam ser administradas à pele ou mais especificamente dentro da derme, a vacina está em um volume líquido baixo, particularmente um volume entre cerca de 0,05 ml e 0,2 ml.
[0076] Os conteúdos de antígenos nas vacinas de pele ou intradérmicas da presente invenção podem ser similares às doses convencionais como encontrado nas vacinas intramusculares (ver acima). Entretanto, é uma característica das vacinas de pele ou intradérmicas que as formulações podem ser de “dose baixa”. Consequentemente os antígenos de proteína em vacinas de “dose baixa” são opcionalmente presentes em tão pouco como 0,1 a 10 μg ou de 0,1 a 5 μg por dose; e os antígenos de sacarídeo (opcionalmente conjugados) podem estar presentes na faixa de 0,01 a 1 μg ou entre 0,01 a 0,5 μg de sacarídeo por dose.
[0077] Como aqui usado, o termo “liberação intradérmica” significa a liberação da vacina à região da derme na pele. Entretanto, a vacina não estará necessariamente localizada exclusivamente na derme. A derme é a camada na pele localizada entre cerca de 1,0 e cerca de 2,0 mm a partir da superfície na pele humana, mas existe uma certa quantidade de variação entre indivíduos e em partes diferentes do corpo. No geral, pode ser esperado atingir a derme avançando-se 1,5 mm abaixo da superfície da pele. A derme está localizada entre o estrato córneo e a epiderme na superfície e a camada subcutânea abaixo. Dependendo do modo de liberação, a vacina pode por fim estar localizada única ou primariamente dentro da derme ou a mesma pode por fim estar distribuída dentro da epiderme e da derme.
[0078] Em um aspecto da invenção é fornecida um kit de vacina, que compreende um frasco contendo uma composição imunogênica da invenção, opcionalmente na forma liofilizada, e compreendendo ainda um frasco contendo um adjuvante como aqui descrito. É previsto que neste aspecto da invenção, o adjuvant será usado para reconstituir a composição imunogênica liofilizada.
[0079] Um outro aspecto da invenção é um método de imunizar um hospedeiro humano contra a infecção de doença bacteriana que compreende administrar ao hospedeiro uma dose imunoprotetiva da composição imunogênica ou vacina ou kit da invenção. Um outro aspecto da invenção é um método de imunizar um hospedeiro humano contra a infecção causada pelo S. pneumoniae e/ou Haemophilus influenzae que compreende administrar ao hospedeiro uma dose imunoprotetiva da composição imunogênica ou vacina ou kit da invenção.
[0080] Um outro aspecto da invenção é uma composição imunogênica da invenção para o uso no tratamento ou prevenção de doença bacteriana. Um outro aspecto da invenção é uma composição imunogênica da invenção para o uso no tratamento ou prevenção de doença causada pela infecção de S. pneumoniae e/ou Haemophilus influenzae.
[0081] Um outro aspecto da invenção é o uso da composição imunogênica ou vacina ou kit da invenção na fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças bacterianas. Um outro aspecto da invenção é o uso da composição imunogênica ou vacina ou kit da invenção na fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças causadas pela infecção de S. pneumoniae e/ou Haemophilus influenzae.
[0082] A invenção também fornece um sacarídeo bacteriano ativado, em que o sacarídeo bacteriano ativado compreende uma unidade de repetição da Fórmula (I):
em que o sacarídeo bacteriano ativado compreende n unidades de repetição e n é entre 2 e 2400, entre 20 e 2000, entre 50 e 1500, entre 1000 e 2000, entre 1000 e 2500 ou entre 1500 e 2300. em que pelo menos 0,001 %, 0,01 %, 0,1 %, 0,5 %, 1 %, 2 %, 5 %, 10 % ou 30 % mas menos do que 0,001 %, 0,01 %, 0,1 %, 0,5 %, 1 %, 2 %, 5 %, 10 %, 30 % ou 50 % of S1 é 
[0083] Em uma forma de realização menos do que 0,001 %, 0,1 %, 0,5 % 1 %, 2 %, 3 %, 5 %, 10 %, 30 % ou 50 % de S2 é
[0084] EHm uma de realização menos do que 0,1 %, 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 5 %, 10 %,θ-% ou 50 % of S3 é
[0085] CH3
[0086] “Em torno” ou “aproximadamente” são definidos como dentro de 10 % mais ou menos da figura dada para os propósitos da invenção.
[0087] Os termos “que compreende”, “compreendem” e “compreende” aqui são intencionados pelos inventores com sendo opcionalmente substituíveis com os termos “que consiste de”, “consistem de” e “consiste de”, respectivamente, em cada caso.
[0088] As formas de realização aqui que dizem respeito às “composições de vacina” da invenção também são aplicáveis para as formas de realização que dizem respeito às “composições imunogênicas” da invenção, e vice e versa.
[0089] Todas as referências ou pedidos de patente citadas dentro deste relatório descritivo de patente são aqui incorporados por referência.
[0090] De modo que esta invenção possa ser melhor entendida, os seguintes exemplos são apresentados. Estes exemplos são apenas para o propósito de ilustração, e não devem ser interpretados como limitando o escopo da invenção de nenhuma maneira.
[0091] Os polissacarídeos (PS) 23F ou 6B foram dissolvidos em 100 mM de KH2PO4 (pH 7,4), 10 mM de KH2PO4 ou WFI, para formar soluções de 2 mg de PS/ml. A solução foi incubada por 2 horas sob agitação na temperatura ambiente. Depois deste tempo o pH foi ajustado ao pH 6,0 com HCl 1 N. Periodato foi adicionado como um pó ou na forma líquida (10 mg/ml em WFI) em várias quantidades para se obter uma faixa de razões molares (tabela 1). As soluções foram incubadas por 17 horas na temperatura ambiente (20 a 25° C), tempo depois do qual as amostras foram dializadas ou diafiltradas contra WFI.
[0092] A cromatografia de filtração em gel de alto desempenho ligada com índice refrativo e detectores de dispersão de luz de laser de ângulo múltiplo (MALLS-) foi usada para medir o peso molecular. Meios de exclusão por tamanho (TSK5000PWXL-Tosoh) foram usados para traçar o perfil da distribuição do peso molecular do polissacarídeo (elução 0,5 ml/min em NaCl 0,2 M a NaN3 0,02 %).
[0093] A Tabela 1 e a figura 1 descrevem os resultados destes experimentos. Estes demonstram que para o sacarídeo 23F classificação por tamanho substancial ocorre na oxidação usando molar equivalente de periodato alto em 100 mM de tampão de fosfato. Este efeito de classificação pelo tamanho pode ser reduzido pela redução da concentração do tampão de fosfato ou do molar equivalente de periodato usado. Tabela 1:
[0094] 1 g de PS23F foi dissolvido em 500 ml de KH2PO4 10 mM, pH 7,15. Esta solução foi incubada na temperatura ambiente por duas horas. O pH foi ajustado a 6,0 N com HCl 1 M. 111 mg de periodato (NaIO4, 0,4 molar equivalente de periodato) foram adicionados à solução de PS23F, e a solução foi incubada por 17 horas no escuro na temperatura ambiente para oxidar PS23F. A solução foi depois diafiltrada contra WFI.
[0095] O PS23F ativado foi liofilizado com a proteína CRM197 (a uma razão de CRM/PS (p/p): 0,625) na presença de um agente de estabilização.
[0096] 900 mg da mistura de PS23F/CRM197 liofilizada foi solubilizada pela adição de 350 ml de solvente de DMSO e incubando por 2 horas na temperatura ambiente. Para reduzir a mistura de PS23F/CRM197 1 molar equivalente de NaBH3CN foi adicionado (735 μl de uma solução de 100 mg/ml em WFI). A solução foi incubada por mais 40 horas na temperatura ambiente (15° C a 25° C) sob agitação. Depois deste tempo 2 equivalentes molares de NaBH4 (100 mg/ml em WFI) foram adicionados e a solução incubada por 4 horas na temperatura ambiente. 2200 ml de NaCl a 150 mM foram adicionados antes da diafiltração (corte de 100 kDa) e purificação pela DEAE. As frações de interesse foram reunidas e filtradas através de um filtro de 0,22 μm.
[0097] 200 mg de PS23F microfluidizado foram dissolvidos em água até que uma concentração de 10 mg/ml fosse obtida. NaCl foi adicionado a esta solução a uma concentração final de 2 M.
[0098] Solução de CDAP suficiente (100 mg/ml recém preparados em 5/50 v/v de acetonitrila/WFI) foi adicionada para atingir uma razão de CDAP:PS de 0,75 mg/mg de PS.
[0099] Depois de 90 segundos, o pH foi elevado até o pH 9,5 pela adição de NaOH 0,1 N.
[00100] 3 minutos mais tarde CRM197 suficiente (10 mg/ml em 0,15 M de NaCl) foi adicionado para atingir uma razão de 1,5 (CRM197:PS (p/p)), o pH foi mantido no pH 9,5. Esta solução foi incubada por 1 hora no pH 9,5.
[00101] Depois desta etapa de ligação, 10 ml de solução de glicina 2 M foram adicionados à mistura e o pH foi ajustado para o pH 9,0 (o pH de extinção). A solução foi agitada por 30 minutos na temperatura ambiente. O conjugado foi purificado usando um filtro de 5 μm seguido por Sephacril S400HR (XK50/100) que remove moléculas pequenas e polissacarídeos e proteína não conjugados. A taxa de fluxo foi fixada a 150 ml/hora. A elução foi obtida usando 150 mM de NaCl. As frações de interesse foram reunidas e filtradas usando Milipack 20. O conjugado resultante teve uma razão de CRM197/PS final (p/p) de 1,35/p.
[00102] Os conjugados foram fabricados usando os métodos descritos no exemplo 2. Porquinhos da Índia fêmeas foram imunizados intramuscularmente três vezes (nos dias 0, 14 e 28) com 0,25 μg dos conjugados PS23F-CRM197. Os animais foram sangrados no dia 42 e a resposta de anticorpo direcionada contra PS23F foi medida pelo ELISA e OPA.
[00103] Microplacas foram revestidas com polissacarídeo pneumocócico purificado em tampão de PBS. As placas foram lavadas quatro vezes com 0,9 % de NaCl e 0,05 % de Tween 20. Os soros foram incubados por 1 hora a 37° C com CPS (V/V) em PBS 0,05 % de Tween 20. Os soros foram adicionados aos microrreservatórios e diluídos em série (etapa de diluição de duas vezes) em PBS- 0,05 % e Tween. As placas foram incubadas sob agitação por 30 minutos na temperatura ambiente. As placas foram lavadas como acima e um conjugado de peroxidase de anticorpos IgG antiporquinho da Índia foi adicionado, as placas foram depois incubadas por 30 minutos na temperatura ambiente. Depois da lavagem, o substrato (4 mg de OPDA em 10 ml de citrato 0,1 M pH 4,5 e 5 μl de H2O2) foi adicionado a cada reservatório por 15 minutos. A reação foi interrompida pela adição de HCl 1N. A absorbância foi lida de 490 a 620 nm usando um espectrofotômetro. A cor desenvolvida é diretamente proporcional à quantidade de anticorpo presente no soro. O nível de IgG anti-PS presente nos soros é determinado pela comparação com o soro da curva de referência adicionado em cada placa e expressado em μg/ml.
[00104] Os resultados foram analisados estatisticamente depois de assumir a homogeneidade de variação (checada pelo teste C de Cochrans) e normalidade (checada usando o teste de Shapiro-Wilk). Todas as estatísticas foram realizadas usando Anova (Tukey-HSD) na transformação em log da concentração de IgG.
[00105] Amostras de soro foram aquecidas por 45 min a 56° C para inativar qualquer complemento endógeno remanescente. Alíquotas de vinte e cinco microlitros de cada amostra de soro diluído 1:2 foram diluídas em série (duas vezes) em 25 μl de tampão OPA (HBSS-14,4 % de FBS inativado) por reservatório de uma placa de microtítulo de fundo redondo de 96 reservatórios. Subsequentemente, 25 μl de uma mistura de células HL-60 ativadas (1 x 107células/ml), sementes de trabalho pneumocócicas recém descongeladas e complemento de coelho bebê recém descongelado em uma razão por exemplo de 4/2/1 (v/v/v) foram adicionados aos soros diluídos para produzir um volume final de 50 μl. A placa de ensaio foi incubada por 2 h a 37° C com agitação orbital (210 rpm) para promover o processo de fagocitose. A reação foi interrompida colocando-se a microplaca em gelo por pelo menos 1 min. Uma alíquota de 20 μl de cada reservatório da placa foi depois transferida para dentro do reservatório correspondente de uma microplaca de fundo redondo de 96 reservatório e 50 μl de Caldo de Todd- Hewitt - 0,9 % de ágar foram adicionados a cada reservatório. Depois da incubação durante a noite a 37° C e 5 % de CO2, as colônias pneumocócicas que aparecem no ágar foram contados usando um sistema de análise de imagem automatizada (KS 400, Zeiss, Oberkochen, Alemanha). Oito reservatórios sem amostra de soro foram usados como controles bacterianos para determinar o número de pneumococos por reservatório. O número médio de CFU dos reservatórios de controle foi determinado e usado para o cálculo da atividade de morte para cada amostra de soro. O título de OPA para as amostras de soro foi determinado pela diluição recíproca de soro capaz de facilitar 50 % da morte dos pneumococos. O título opsonofagocítico foi calculado usando-se uma análise de ajuste de curva de 4 parâmetros.
[00106] Os resultados foram analisados estatisticamente depois de assumir a homogeneidade de variação (checado pelo teste C de Cochrans) e normalidade (checada usando o teste de Shapiro-Wilk). Todas as estatísticas foram realizadas pelo Anova (Tukey-HSD) na transformação log da concentração de IgG para o ELISA e Kruskal-Wallis na diluição log para OPA.
[00107] Uma resposta de anticorpo significantemente mais alta foi induzida nos porquinhos da Índia depois da imunização com PS23F-CRM197 conjugado pela aminação redutiva do que a PS23F-CRM197 conjugada pela química CDAP como observado na figura 2.
Tabela 2
[00108] 150 mg de PS23F nativa (PS23FP114) foram dissolvidos em uma concentração de 2 mg/ml em 10 mM de tampão de fosfato (pH 7,2) por 4 horas. Depois da dissolução, o pH foi ajustado ao pH 6,0 com HCl 1 N. Depois 0,4 molar equivalente de periodato (Na IO4) foi adicionado à solução de PS e incubada por 17 horas no escuro a 25° C. A solução é depois diafiltrada (corte de 30 kDa) contra WFI e o PS oxidado foi filtrado em membrana de 0,22 μm.
[00109] 50 mg de PS oxidado e 75 mg de CRM197 foram liofilizados juntos (razão CRM/PS (p/p): 1,5/1) na presença de um agente de estabilização. PS liofilizado + CRM197 foram solubilizados com 20 ml de DMSO por 2 horas na temperatura ambiente (15 a 25° C). 1 molar equivalente de TAB (Triacetoxiboroidreto de sódio) foi depois adicionado (13,7 mg) e depois 17 horas sob agitação, 2 equivalentes molares de NaBH4 (100 mg/ml em 0,1 M de NaOH) foram adicionados seguidos por uma incubação na temperatura ambiente por 30 minutos. A solução foi diluída 5x pela adição de WFI seguida por uma diafiltração (corte de 30 kDa) contra tampão de fosfato a 10 mM, 150 mM de NaCl pH 7,2. O conjugado foi depois carregado sobre resina DEAE e eluído em tampão de fosfato a 10 mM, 500 mM de NaCl pH 7,2. O conjugado foi finalmente filtrado em 0,22 μm. O conjugado resultante tem uma razão de CRM/PS final (p/p) de 2,3/1.
[00110] Para outros conjugados, uma segunda etapa de diafiltração foi adicionada depois da coluna de DEAE de modo a mudar o tampão (150 mM de NaCl como tampão final).
[00111] 200 mg de PS6B microfluidizado (84 kDa, 11,7 mg/ml) foi diluído a 2 mg/ml em tampão de fosfato a 10 mM (pH 7,2). O pH foi ajustado ao pH 6,0 com HCl 1 N. Depois 0,1 molar equivalente de periodato (Na IO4) foi adicionado à solução de PS e incubados por 17 horas no escuro na temperatura ambiente. A solução é depois diafiltrada (corte de 30 kDa) contra WFI. 50 mg de PS e 30 mg de CRM197 foram liofilizados juntos (razão CRM/PS (p/p): 0,6/1) na presença de um agente de estabilização. PS liofilizado + CRM197 foram solubilizados com 20 ml de DMSO por 3 horas na temperatura ambiente. Depois 2,5 equivalentes molares de TAB (Triacetoxiboroidreto de sódio) foram adicionados (38,7 mg) e depois de 16 horas sob agitação, 2 equivalentes molares de NaBH4 (100 mg/ml em 0,1 M de NaOH) foi adicionado seguido por uma incubação na temperatura ambiente por 30 minutos. A solução foi diluída 4x pela adição de WFI seguida por uma diafiltração (corte de 100 kDa). O conjugado foi depois filtrado em 0,22 μm. O conjugado resultante tem uma razão de CRM/PS final (p/p) de 1,1/1. 6B-CRM-RA-123:
[00112] PS6B microfluidizado (84 kDa) foi conjugado à CRM197 como descrito para 6B-CRM-RA-122 exceto que a etapa de secagem por congelamento foi realizada usando uma razão de CRM197/PS inicial (p/p) de 2/1 e 30 ml de DMSO foram usados para a dissolução na etapa de DMSO (ao invés de 20 ml). O conjugado resultante teve uma razão de CRM/PS final (p/p) de 3,0/1. 6B-CRM-RA-124:
[00113] 200 mg de PS6B microfluidizado (350 kDa, 11,7 mg/ml) tendo um peso molecular de 350 kDa foi diluído a 2 mg/ml em 10 mM de tampão de fosfato (pH 7,2). O pH foi ajustado para o pH 6,0 com HCl 1 N. Depois 0,1 molar equivalente de periodato (Na IO4) foi adicionado à solução de PS e incubados por 17 horas no escuro na temperatura ambiente. A solução é depois diafiltrada (corte de 100 kDa) contra WFI. 50 mg de PS e 60 mg de CRM197 foram liofilizados juntos (razão de CRM/PS (p/p): 1,2/1) na presença de um agente de estabilização. PS + CRM197 liofilizados foram solubilizados com 20 ml de DMSO por 5 horas na temperatura ambiente. 2,5 equivalentes molares de TAB (Triacetoxiboroidreto de sódio) foram depois adicionados (38,7 mg) e depois de 16 horas sob agitação, 2 equivalentes molares de NaBH4 (100 mg/ml em NaOH 0,1 M) foram adicionados seguidos pela incubação por 30 min na temperatura ambiente. A solução foi diluída 4x pela adição de WFI seguido por uma diafiltração (corte de 100 kDa). O conjugado foi depois filtrado em 0,22 μm. O conjugado resultante tem uma razão de CRM/PS final (p/p) de 1,6/1. 6B-CRM-RA-125:
[00114] PS6B microfluidizado (350 kDa) foi conjugado à CRM197 como descrito para 6B-CRM-RA-124 exceto que a etapa de secagem por congelamento foi realizada usando uma razão de CRM197/PS inicial (p/p) de 2/1 e a dissolução em DMSO foi realizada usando 33 ml (ao invés de 20 ml). O conjugado resultante teve uma razão de CRM/PS final (p/p) de 2,9/1.
[00115] 50 mg de PS6B microfluidizado foram diluídos a 10 mg/ml em água (10 mg/ml). NaCl na forma sólida foi adicionado para atingir uma concentração final de 2 M. A solução de CDAP (100 mg/ml recém preparados em 50/50 v/v acetonitrila/WFI) foi adicionada para atingir a razão CDAP/PS apropriada (1,5 mg/mg de PS). Depois de 1,5 minuto, o pH foi elevado até o pH de ativação de 9,5 pela adição de NaOH 0,1 N e foi estabilizada neste pH até a adição de CRM197. Depois de 3 minutos, CRM197 (10 mg/ml em NaCl 0,15 M) foi adicionado para atingir uma razão de CRM197/PS (p/p) de 2; o pH foi mantido no pH de ligação de 9,5. A solução foi deixada por 2 horas sob regulagem do pH.
[00116] Depois da etapa de ligação, 2,5 ml de solução de glicina de 2 M foram adicionados à mistura. O pH foi ajustado até o pH de extinção (pH 9,0). A solução foi agitada por 30 min na temperatura ambiente. Depois o conjugado foi filtrado usando um filtro de 5 μm e injetado em coluna Sephacril S400HR (XK26/100) para remover moléculas pequenas (incluindo DMAP) e PS e proteína não conjugados. A taxa de fluxo foi fixada em 30 ml/h. A elução foi realizada em NaCl 150 mM. As frações de interesse foram reunidas e filtradas em Millipack 20. O conjugado resultante teve uma razão CRM197/PS final (p/p) de 1,5/1. 6B-CRM-RA-144
[00117] 1 g de PS6B microfluidizado (245 kDa, 9,47 mg/ml) foi diluído a 2 mg/ml em tampão de fosfato a 10 mM (pH 7,2). O pH foi ajustado ao pH 6,0 com HCl 1 N. 0,1 molar equivalente de periodato (NaIO4) foi depois adicionado à solução de PS e incubados por 18 horas no escuro na temperatura ambiente. A solução foi depois diafiltradas contra WFI (Sartocon Slice200 Hydrosart 100 kDa). 200 mg de PS oxidado e 240 mg de CRM197 foram liofilizados juntos (razão de CRM/PS (p/p): 1,2/1) na presença de um agente de estabilização. PS + CRM197 liofilizados foram solubilizados com 80 ml de DMSO por 6 horas a 25° C. Depois 2,5 equivalentes molares de TAB (Triacetoxiboroidreto de sódio) foram adicionados (154,9 mg) e depois de 16 horas sob agitação a 25° C, 2 equivalentes molares de NaBH4 (100 mg/ml em NaOH 0,1 M) foram adicionados e incubados por 30 min. A solução foi diluída 5x em WFI e depois de 30 min foi diafiltrada 10x com 150 mM de NaCl e depois 5x com PO4 (K/K2) 10 mM pH 7,2 + NaCl 150 mM (Sartorius Sartocon Slice 200 Hydrosart 100 kDa). Depois o retido foi carregado em uma coluna DEAE (XK26/40). A coluna foi lavada com tampão de PO4 (K/K2) 10 mM pH 7,2 /NaCl 150 mM. O conjugado foi eluído com tampão de PO4 (K/K2) 10 mM pH 7,2 /NaCl 500 mM. O eluído foi concentrado e diafiltrado com 5 volumes de NaCl 150 mM e depois filtrado em filtro de 0,22 μm. O conjugado resultante tem uma razão de CRM/PS final (p/p) de 1,6/1.
[00118] Grupos de 40 camundongos Balb/c fêmeas (4 semanas de idade) foram imunizados intramuscularmente três vezes nos dias 0, 14 e 28 com 0,1 μg de conjugados de PS6B produzidos pela aminação redutiva ou química de CDAP formulados em AlPO4. PS6B-PD foi usado como marca de referência. Os camundongos foram sangrados no dia 42 e a resposta de anticorpo direcionada contra cada antígeno foi medida pelo ELISA e OPA.
[00119] Grupos de 20 porquinhos da Índia fêmeas (150 g da Hartley) foram imunizados intramuscularmente três vezes nos dias 0, 14 e 28 com 0,25 μg de conjugado de PS6B produzido pela aminação redutiva ou química de CDAP adjuvantado com AlPO4. PS6B-PD foi usado como marca de referência. Os porquinhos da Índia foram sangrados no dia 42 e a resposta de anticorpo direcionada contra cada antígeno foi medida pelo ELISA e OPA. OPA de Camundongo e Porquinho da Índia
[00120] As amostras de soro foram aquecidas por 45 min a 56° C para inativar qualquer complemento endógeno remanescente. Alíquotas de vinte e cinco microlitros de cada amostra de soro diluída 1:2 foi diluída em série duas vezes em 25 μl de tampão de OPA (HBSS-14,4 % de FBS inativado) por reservatório de uma placa microtituladora de fundo redondo de 96 reservatórios. Subsequentemente, 25 μl de uma mistura de células HL-60 ativadas (1 x 107 células/ml), semente de trabalho pneumocócica recém descongeladas e complemento de coelho bebê recém descongelado em uma razão por exemplo de 4/2/1 (v/v/v) foram adicionados aos soros diluídos para produzir um volume final de 50 μl. A placa de ensaio foi incubada por 2 h a 37° C com agitação orbital (210 rpm) para promover o processo fagocítico. a reação foi interrompida colocando-se a microplaca sobre gelo por pelo menos 1 min. Uma alíquota de 20 μl de cada reservatório da placa foi depois transferida para dentro do reservatório correspondente de uma microplaca de fundo chato de 96 reservatórios e 50 μl de Caldo de Todd-Hewitt - 0,9 % de ágar foram adicionados a cada reservatório. Depois da incubação durante a noite a 37° C e 5 % de CO2, as colônias pneumocócicas que aparecem no ágar foram contadas usando um sistema de análise de imagem automatizado (KS 400, Zeiss, Oberkochen, Alemanha). Oito reservatórios sem amostra de soro foram usados como controles bacterianos para determinar o número de pneumococos por reservatório. O número médio de CFU dos reservatórios de controle foi determinado e usado para o cálculo da atividade de morte para cada amostra de soro. O título de OPA para as amostras de soro foi determinado pela diluição recíproca de soro capaz de facilitar 50 % da morte dos pneumococos. O título opsonofagocítico foi calculado usando-se uma análise de ajuste de curva de 4 parâmetros. A Tabela 3 descreve os níveis de GMC obtidos pela imunização de camundongos balb/c com os conjugados fabricados usando os métodos do exemplo 4.
Tabela 3
[00121] A imunogenicidade destes conjugados em camundongos balb/c é descrita na figura 3. Juntas a figura 3, e a tabela 3 demonstram que no modelo de camundongo os conjugados produzidos pela aminação redutiva foram comparáveis com aqueles produzidos usando a química de CDAP. Em particular a figura 3 demonstra que as imunogenicidades dos conjugados produzidos usando a aminação redutiva foram mais altas do que a imunogenicidade do conjugado fabricado usando a química de CDAP.
[00122] A Tabela 4 descreve os níveis de GMC obtidos pela imunização de porquinhos da Índia com os conjugados fabricados usando os métodos do exemplo 4.
Tabela 4 
[00123] A imunogenicidade destes conjugados em porquinhos da Índia é descrita na figura 4. Similar aos experimentos realizados no modelo de camundongo, os resultados na tabela 4 e figura 4 mostram que os conjugados produzidos pela aminação redutiva foram comparáveis com aqueles produzidos usando a química de CDAP, em particular PS06B-CRM125 demonstrou níveis de GMC e imunogenicidades significantemente mais altos do que o conjugado produzido usando CDAP.
[00124] 2,9 g de PS (dosagem de orcinol, lote AHIBCPA007) foram dissolvidos em 260 ml de tampão de fosfato 10 mM (Na/K2) pH 6,2 por 4 h 30 minutos na temperatura ambiente e depois durante a noite a +4° C. O acompanhamento da viscosidade foi feito durante a dissolução. Depois de 4 horas de dissolução a viscosidade pareceu estar estável. O PS foi diluído a 10 mg/ml com tampão de fosfato e depois oxidado no escuro com 0,07 molar equivalente de NaIO4 durante 60 minutos. O PS oxidado foi diafiltrado (Sartorius Hydrosart 2 kDa) contra 3,5 volumes de tampão de fosfato e depois filtrado em um filtro de 0,22 μm. O número de unidades de repetição obtido depois da oxidação foi estimado pela 1H-RMN e foi descoberta estar em torno de 21. Hib-TT-LS210, 212 e 213
[00125] 200 mg de PS oxidado (14,56 mg/ml) foram misturados com 300 mg de TT (31,18 mg/ml, razão TT/PS (p/p): 1,5/1) e diluídos a 4 mg/ml com 36,64 ml de tampão de fosfato 10 mM (Na/K2) pH 6,2. A solução foi liofilizada na presença de um agente de estabilização. O PS + TT liofilizados foram solubilizados com 20 ml de DMSO por 6 horas a 25° C. depois 10 Meq de TAB (Triacetoxiboroidreto de sódio) foram adicionados (38,7 mg) e depois de 16 horas sob agitação, 2 equivalentes molares de NaBH4 (100 mg/ml em NaOH 0,1 M) foram adicionados seguido por uma incubação por 30 min na temperatura ambiente. A solução foi diluída 3x pela adição de WFI seguida por uma etapa de diafiltração (5 volumes de WFI seguidos por 5 volumes de tampão de acetato 10 mM NaCl 150 mM pH 6,2, 100 kDa MWCO). A amostra foi depois carregada em resina Sephacril S300HR. A elução foi realizada em tampão de acetato a 10 mM usando NaCl 150 mM (pH 6,2). As frações de interesse foram reunidas e filtradas em um filtro de 0,22 μm. Os conjugados resultantes tiveram uma razão de TT/PS final (p/p) de 2,1/1.
Claims (28)
1. Processo para conjugar um sacarídeo bacteriano e reduzir o efeito de dimensionamento no sacarídeo bacteriano, caracterizadopelo fato de que compreende as etapas de: a) reagir o sacarídeo bacteriano com 0,001 a 0,7 equivalentes molar de periodato para formar um sacarídeo bacteriano ativado; b) misturar o sacarídeo bacteriano ativado com uma proteína carreadora; e c) reagir o sacarídeo bacteriano ativado e a proteína carreadora com um agente redutor para formar um conjugado; em que a etapa a) ocorre em um tampão que não contém um grupo amina, e o tampão tem uma concentração entre 1-100 mM e em que o sacarídeo bacteriano é o sacarídeo capsular de S. PNEUMONIAE 23F ou 6B.
2. Processo para conjugar um sacarídeo bacteriano e reduzir o efeito de dimensionamento no sacarídeo bacteriano, caracterizadopelo fato de que compreende as etapas de: a) reagir o sacarídeo bacteriano com 0,001 a 0,7 equivalentes molar de periodato para formar um sacarídeo bacteriano ativado; b) misturar o sacarídeo bacteriano ativado com um ligante; c’) reagir o sacarídeo bacteriano ativado com o ligante usando um agente redutor para formar um sacarídeo bacteriano-ligante; e c’’) reagir o sacarídeo bacteriano-ligante com uma proteína carreadora para formar um conjugado; em que a etapa a) ocorre em um tampão que não contém um grupo amina, e o tampão tem uma concentração entre 1 a 100 mM e em que o sacarídeo bacteriano é o sacarídeo capsular de S. PNEUMONIAE 23F ou 6B.
3. Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizadopelo fato de que o tampão é selecionado do grupo que consiste de tampão de fosfato, tampão de borato, tampão de acetato, tampão de carbonato e tampão de citrato.
4. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o tampão tem uma concentração entre 1 e 50 mM.
5. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o tampão tem uma concentração entre 1 e 25 mM.
6. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o tampão tem uma concentração entre 1 e 10 mM.
7. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o tampão tem uma concentração entre 5 e 15 mM.
8. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o tampão tem uma concentração entre 8 e 12 mM.
9. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o tampão tem uma concentração entre 10 e 50 mM.
10. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o tampão tem uma concentração em torno de 10 mM.
11. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o pH na etapa a) é o pH de 3,5 a 8,0.
12. Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o pH na etapa a) é o pH de 5,0 a 7,0.
13. Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o pH na etapa a) é pH de 5,5 a 6,5.
14. Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o pH na etapa a) é em torno do pH 6,0.
15. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o peso molecular médio do sacarídeo bacteriano está entre 1 e 1100 kDa depois da etapa a).
16. Processo de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o peso molecular médio do sacarídeo bacteriano está entre 100 e 470 kD depois da etapa a).
17. Processo de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o peso molecular médio do sacarídeo bacteriano está entre 200 e 300 kDa depois da etapa a).
18. Processo de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o peso molecular médio do sacarídeo bacteriano está entre 600 e 1100 kDa depois da etapa a).
19. Processo de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o peso molecular médio do sacarídeo bacteriano está entre 800 e 1000 kDa depois da etapa a).
20. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o peso molecular médio do sacarídeo 23F está entre 100 e 470 kDa depois da etapa a).
21. Processo de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o peso molecular médio do sacarídeo bacteriano está entre 200 e 300 kDa depois da etapa a).
22. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 21, caracterizado pelo fato de que a proteína carreadora é selecionada do grupo que consiste de toxoide do tétano, fragmento C do toxoide do tétano, toxoide da difteria, CRM197, Pneumolisina, proteína D, PhtD, PhtDE e N19.
23. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 22, caracterizado pelo fato de que o agente redutor compreende cianoboroidreto de sódio ou triacetoxiboroidreto de sódio.
24. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 23, caracterizado pelo fato de que compreende uma etapa adicional d) de purificar o conjugado.
25. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 24, caracterizado pelo fato de que contém uma etapa adicional de misturar o conjugado com antígenos adicionais
26. Processo de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que os antígenos adicionais compreendem pelo menos 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 sacarídeos de S. PNEUMONIAE selecionado do grupo que consiste de 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F e 33F.
27. Processo de acordo com a reivindicações 25, caracterizado pelo fato de que os antígenos adicionais compreendem uma ou mais proteínas de S. PNEUMONIAE selecionadas do grupo que consiste da família da Tríade de Poli Histidina (PhtX), família da proteína de Ligação de Colina (CbpX), truncados de CbpX, família LytX, truncados de LytX, proteínas quiméricas do truncado de CbpX-truncado de LytX (ou fusões), pneumolisina (Ply), PspA, PsaA, Sp128, Sp101, Sp130, Sp125 e Sp133.
28. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 27, caracterizado pelo fato de que o conjugado é misturado com um adjuvante ou um excipiente farmaceuticamente aceitável.
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|---|---|---|---|---|
| MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
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| PT3246044T (pt) | 2010-08-23 | 2021-02-15 | Wyeth Llc | Formulações estáveis de antigénios de rlp2086 de neisseria meningitidis |
| MX362802B (es) | 2010-09-10 | 2019-02-13 | Wyeth Llc Star | Variantes no lipidadas de antigenos orf2086 de neisseria meningitidis. |
| GB201103836D0 (en) * | 2011-03-07 | 2011-04-20 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Conjugation process |
| SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
| CA2865745C (en) | 2012-03-09 | 2018-01-09 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| CN104736180A (zh) * | 2012-05-22 | 2015-06-24 | 诺华股份有限公司 | 脑膜炎球菌血清组x偶联物 |
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| MX369534B (es) | 2013-09-08 | 2019-11-11 | Pfizer | Composiciones de neisseria meningitidis y sus metodos. |
| PL3096783T3 (pl) | 2014-01-21 | 2021-12-13 | Pfizer Inc. | Polisacharydy otoczkowe streptococcus pneumoniae i ich koniugaty |
| US11160855B2 (en) | 2014-01-21 | 2021-11-02 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| SG11201604728XA (en) | 2014-01-21 | 2016-08-30 | Pfizer | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| KR102049825B1 (ko) * | 2014-01-21 | 2019-12-03 | 화이자 인코포레이티드 | 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 피막 폴리사카라이드 및 그의 접합체 |
| US9107906B1 (en) | 2014-10-28 | 2015-08-18 | Adma Biologics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency |
| RU2723045C2 (ru) | 2015-02-19 | 2020-06-08 | Пфайзер Инк. | Композиции neisseria meningitidis и способы их получения |
| JP7164200B2 (ja) | 2016-03-31 | 2022-11-01 | ポゴナ， エルエルシー | サッカライド－ポリペプチドコンジュゲートの組成物およびその使用の方法 |
| SG11201901394XA (en) | 2016-09-02 | 2019-03-28 | Sanofi Pasteur Inc | Neisseria meningitidis vaccine |
| WO2018126229A2 (en) | 2016-12-30 | 2018-07-05 | Sutrovax, Inc. | Polypeptide-antigen conjugates with non-natural amino acids |
| US11951165B2 (en) | 2016-12-30 | 2024-04-09 | Vaxcyte, Inc. | Conjugated vaccine carrier proteins |
| WO2018144438A1 (en) | 2017-01-31 | 2018-08-09 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Methods for production of capsular polysaccharide protein conjugates from streptococcus pneumoniae serotype 19f |
| US10183070B2 (en) | 2017-01-31 | 2019-01-22 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| US10259865B2 (en) | 2017-03-15 | 2019-04-16 | Adma Biologics, Inc. | Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection |
| PE20201338A1 (es) | 2017-12-06 | 2020-11-25 | Merck Sharp & Dohme | Composiciones que comprenden conjugados de polisacarido de streptococcus pneumoniae con proteina y metodos de uso de estos |
| WO2020010016A1 (en) | 2018-07-04 | 2020-01-09 | Sutrovax, Inc. | Self-adjuvanted immunogenic conjugates |
| WO2020010000A1 (en) | 2018-07-04 | 2020-01-09 | Sutrovax, Inc. | Improved methods for the preparation of immunogenic conjugates |
| BR112020026899A2 (pt) | 2018-07-04 | 2021-03-30 | Vaxcyte, Inc. | Melhorias em conjugados imunogênicos |
| CN113453708A (zh) | 2018-12-19 | 2021-09-28 | 默沙东公司 | 包含肺炎链球菌多糖-蛋白缀合物的组合物及其使用方法 |
| US20230405137A1 (en) | 2020-11-10 | 2023-12-21 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
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Family Cites Families (93)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4057685A (en) | 1972-02-02 | 1977-11-08 | Abbott Laboratories | Chemically modified endotoxin immunizing agent |
| US4235877A (en) | 1979-06-27 | 1980-11-25 | Merck & Co., Inc. | Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit |
| DE3071552D1 (en) | 1979-09-21 | 1986-05-22 | Hitachi Ltd | Semiconductor switch |
| US4356170A (en) | 1981-05-27 | 1982-10-26 | Canadian Patents & Development Ltd. | Immunogenic polysaccharide-protein conjugates |
| US4902506A (en) | 1983-07-05 | 1990-02-20 | The University Of Rochester | Immunogenic conjugates |
| US4673574A (en) | 1981-08-31 | 1987-06-16 | Anderson Porter W | Immunogenic conjugates |
| US4459286A (en) | 1983-01-31 | 1984-07-10 | Merck & Co., Inc. | Coupled H. influenzae type B vaccine |
| US4695624A (en) | 1984-05-10 | 1987-09-22 | Merck & Co., Inc. | Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency |
| US4808700A (en) | 1984-07-09 | 1989-02-28 | Praxis Biologics, Inc. | Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers |
| US4596556A (en) | 1985-03-25 | 1986-06-24 | Bioject, Inc. | Hypodermic injection apparatus |
| US4709017A (en) | 1985-06-07 | 1987-11-24 | President And Fellows Of Harvard College | Modified toxic vaccines |
| IT1187753B (it) | 1985-07-05 | 1987-12-23 | Sclavo Spa | Coniugati glicoproteici ad attivita' immunogenica trivalente |
| US5173294A (en) | 1986-11-18 | 1992-12-22 | Research Foundation Of State University Of New York | Dna probe for the identification of haemophilus influenzae |
| US4950740A (en) | 1987-03-17 | 1990-08-21 | Cetus Corporation | Recombinant diphtheria vaccines |
| US4941880A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-17 | Bioject, Inc. | Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly |
| US4790824A (en) | 1987-06-19 | 1988-12-13 | Bioject, Inc. | Non-invasive hypodermic injection device |
| US4940460A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-10 | Bioject, Inc. | Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly |
| US5339163A (en) | 1988-03-16 | 1994-08-16 | Canon Kabushiki Kaisha | Automatic exposure control device using plural image plane detection areas |
| DE3841091A1 (de) | 1988-12-07 | 1990-06-13 | Behringwerke Ag | Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| CA2006700A1 (en) | 1989-01-17 | 1990-07-17 | Antonello Pessi | Synthetic peptides and their use as universal carriers for the preparation of immunogenic conjugates suitable for the development of synthetic vaccines |
| AU651949B2 (en) | 1989-07-14 | 1994-08-11 | American Cyanamid Company | Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines |
| US5064413A (en) | 1989-11-09 | 1991-11-12 | Bioject, Inc. | Needleless hypodermic injection device |
| US5312335A (en) | 1989-11-09 | 1994-05-17 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
| IT1237764B (it) | 1989-11-10 | 1993-06-17 | Eniricerche Spa | Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici. |
| SE466259B (sv) | 1990-05-31 | 1992-01-20 | Arne Forsgren | Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal |
| EP0471177B1 (en) | 1990-08-13 | 1995-10-04 | American Cyanamid Company | Filamentous hemagglutinin of bordetella pertussis as a carrier molecule for conjugate vaccines |
| US5153312A (en) | 1990-09-28 | 1992-10-06 | American Cyanamid Company | Oligosaccharide conjugate vaccines |
| CA2059692C (en) | 1991-01-28 | 2004-11-16 | Peter J. Kniskern | Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine |
| CA2059693C (en) | 1991-01-28 | 2003-08-19 | Peter J. Kniskern | Polysaccharide antigens from streptococcus pneumoniae |
| US5552146A (en) | 1991-08-15 | 1996-09-03 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions relating to useful antigens of Moraxella catarrhalis |
| GB9118204D0 (en) | 1991-08-23 | 1991-10-09 | Weston Terence E | Needle-less injector |
| NZ249704A (en) | 1992-02-11 | 1996-11-26 | Jackson H M Found Military Med | A two carrier immunogenic construct comprising a 70+ kd molecule conjugated to at least 1 t-dependent antigen, preparation, compositions containing the construct |
| IT1262896B (it) | 1992-03-06 | 1996-07-22 | Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini. | |
| CA2135052A1 (en) | 1992-05-06 | 1993-11-11 | R. John Collier | Diphtheria toxin receptor-binding region |
| US5383851A (en) | 1992-07-24 | 1995-01-24 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
| IL102687A (en) | 1992-07-30 | 1997-06-10 | Yeda Res & Dev | Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them |
| DK0658118T3 (da) | 1992-08-31 | 2002-05-06 | Baxter Healthcare Sa | Vaccine mod Neisseria meningitidis, gruppe C |
| US5569189A (en) | 1992-09-28 | 1996-10-29 | Equidyne Systems, Inc. | hypodermic jet injector |
| US5334144A (en) | 1992-10-30 | 1994-08-02 | Becton, Dickinson And Company | Single use disposable needleless injector |
| DE69431624T2 (de) | 1993-05-18 | 2003-07-10 | Univ Ohio State Res Found | Impfstoff gegen mittelohrentzündung |
| ES2210262T3 (es) | 1993-09-22 | 2004-07-01 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Procedimiento que permite activar un glucido soluble con la ayuda de nuevos reactivos cianilantes para producir estructuras inmunogenas. |
| WO1995024176A1 (en) | 1994-03-07 | 1995-09-14 | Bioject, Inc. | Ampule filling device |
| US5466220A (en) | 1994-03-08 | 1995-11-14 | Bioject, Inc. | Drug vial mixing and transfer device |
| US6455673B1 (en) | 1994-06-08 | 2002-09-24 | President And Fellows Of Harvard College | Multi-mutant diphtheria toxin vaccines |
| US5917017A (en) | 1994-06-08 | 1999-06-29 | President And Fellows Of Harvard College | Diphtheria toxin vaccines bearing a mutated R domain |
| US5565204A (en) | 1994-08-24 | 1996-10-15 | American Cyanamid Company | Pneumococcal polysaccharide-recombinant pneumolysin conjugate vaccines for immunization against pneumococcal infections |
| US5599302A (en) | 1995-01-09 | 1997-02-04 | Medi-Ject Corporation | Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring |
| WO1996029094A1 (en) | 1995-03-22 | 1996-09-26 | Andrew Lees | Producing immunogenic constructs using soluble carbohydrates activated via organic cyanylating reagents |
| US6440425B1 (en) | 1995-05-01 | 2002-08-27 | Aventis Pasteur Limited | High molecular weight major outer membrane protein of moraxella |
| US5730723A (en) | 1995-10-10 | 1998-03-24 | Visionary Medical Products Corporation, Inc. | Gas pressured needle-less injection device and method |
| US5843464A (en) | 1995-06-02 | 1998-12-01 | The Ohio State University | Synthetic chimeric fimbrin peptides |
| GB9513074D0 (en) | 1995-06-27 | 1995-08-30 | Cortecs Ltd | Novel anigen |
| US6290970B1 (en) | 1995-10-11 | 2001-09-18 | Aventis Pasteur Limited | Transferrin receptor protein of Moraxella |
| US5893397A (en) | 1996-01-12 | 1999-04-13 | Bioject Inc. | Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus |
| US6090576A (en) | 1996-03-08 | 2000-07-18 | Connaught Laboratories Limited | DNA encoding a transferrin receptor of Moraxella |
| GB9607549D0 (en) | 1996-04-11 | 1996-06-12 | Weston Medical Ltd | Spring-powered dispensing device |
| US7341727B1 (en) | 1996-05-03 | 2008-03-11 | Emergent Product Development Gaithersburg Inc. | M. catarrhalis outer membrane protein-106 polypeptide, methods of eliciting an immune response comprising same |
| JP4012252B2 (ja) | 1996-06-18 | 2007-11-21 | アルザ コーポレイション | 薬剤の経皮放出又はサンプリングを高めるための装置 |
| WO1998018930A2 (en) | 1996-10-31 | 1998-05-07 | Human Genome Sciences, Inc. | Streptococcus pneumoniae antigens and vaccines |
| US5980898A (en) | 1996-11-14 | 1999-11-09 | The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command | Adjuvant for transcutaneous immunization |
| CA2271167C (en) | 1996-12-20 | 2007-01-09 | Alza Corporation | Device and method for enhancing transdermal agent flux |
| DK0959905T3 (da) | 1997-01-21 | 2010-04-06 | Sanofi Pasteur | Polysaccharid-peptid-konjugater |
| US5993412A (en) | 1997-05-19 | 1999-11-30 | Bioject, Inc. | Injection apparatus |
| WO1998055606A2 (en) | 1997-06-03 | 1998-12-10 | Connaught Laboratories Limited | Lactoferrin receptor genes of moraxella |
| GB9713156D0 (en) | 1997-06-20 | 1997-08-27 | Microbiological Res Authority | Vaccines |
| CA2312900A1 (en) | 1997-12-02 | 1999-06-10 | Powderject Vaccines, Inc. | Transdermal delivery of particulate vaccine compositions |
| IT1298087B1 (it) | 1998-01-08 | 1999-12-20 | Fiderm S R L | Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni |
| US7018637B2 (en) | 1998-02-23 | 2006-03-28 | Aventis Pasteur, Inc | Multi-oligosaccharide glycoconjugate bacterial meningitis vaccines |
| GB9812613D0 (en) | 1998-06-11 | 1998-08-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| KR100704826B1 (ko) | 1998-08-19 | 2007-04-09 | 박스터 헬쓰케어 에스.에이. | Ｎ-아크릴로일화된 폴리사카라이드를 사용하여 제조된백신으로서 사용하기에 적합한 면역원성β-프로피온아미도-결합 폴리사카라이드 단백질 컨쥬게이트 |
| JP4689044B2 (ja) | 1998-12-21 | 2011-05-25 | メディミューン，インコーポレーテッド | ワクチン用の肺炎連鎖球菌タンパク質と免疫原断片 |
| EP1163000B1 (en) | 1999-03-19 | 2008-02-27 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine against antigens from bacteriae |
| JP2002541808A (ja) | 1999-04-09 | 2002-12-10 | テクラブ， インコーポレイテッド | ポリサッカリド結合体ワクチンのための組換えトキシンａタンパク質キャリア |
| US6319224B1 (en) | 1999-08-20 | 2001-11-20 | Bioject Medical Technologies Inc. | Intradermal injection system for injecting DNA-based injectables into humans |
| US6494865B1 (en) | 1999-10-14 | 2002-12-17 | Becton Dickinson And Company | Intradermal delivery device including a needle assembly |
| GB0007432D0 (en) | 2000-03-27 | 2000-05-17 | Microbiological Res Authority | Proteins for use as carriers in conjugate vaccines |
| GB0103170D0 (en) | 2001-02-08 | 2001-03-28 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine composition |
| GB0022742D0 (en) | 2000-09-15 | 2000-11-01 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| AU2002309706A1 (en) | 2001-05-11 | 2002-11-25 | Aventis Pasteur, Inc. | Novel meningitis conjugate vaccine |
| KR20050086427A (ko) | 2002-11-07 | 2005-08-30 | 시너지 아메리카 인코포레이티드 | 폐렴균의 감염 치료 또는 예방용 조성물 및 방법 |
| CN1798563A (zh) | 2003-05-15 | 2006-07-05 | 独立行政法人科学技术振兴机构 | 免疫刺激剂 |
| US8048432B2 (en) | 2003-08-06 | 2011-11-01 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Polysaccharide-protein conjugate vaccines |
| BRPI0413309B8 (pt) | 2003-08-06 | 2021-05-25 | The Government Of The Us Secretary Department Of Health And Human Services | método para a preparação de uma vacina conjugada de polissacarídeo-proteína |
| GB0428394D0 (en) | 2004-12-24 | 2005-02-02 | Chiron Srl | Saccharide conjugate vaccines |
| GB0502095D0 (en) | 2005-02-01 | 2005-03-09 | Chiron Srl | Conjugation of streptococcal capsular saccharides |
| US7955605B2 (en) * | 2005-04-08 | 2011-06-07 | Wyeth Llc | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| TWI445545B (zh) | 2005-04-08 | 2014-07-21 | Wyeth Corp | 多價肺炎球菌多醣-蛋白質共軛物組合物 |
| US20070184072A1 (en) * | 2005-04-08 | 2007-08-09 | Wyeth | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| BRPI0612669B8 (pt) * | 2005-06-27 | 2021-05-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | composição imunogênica, vacina, composição, e composição liofilizada |
| US20090010959A1 (en) | 2005-12-22 | 2009-01-08 | Ralph Leon Biemans | Pneumococcal Polysaccharide Conjugate Vaccine |
| CN105267974A (zh) | 2007-06-20 | 2016-01-27 | 辉瑞爱尔兰制药公司 | 用于缀合疫苗的经过修饰的多糖 |
| BRPI0813307C1 (pt) | 2007-06-26 | 2021-05-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | composição imunogênica, vacina, e, processo para fabricar a vacina |
| GB201003922D0 (en) * | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Conjugation process |
-
2010
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