ES2210262T3 - Procedimiento que permite activar un glucido soluble con la ayuda de nuevos reactivos cianilantes para producir estructuras inmunogenas. - Google Patents
Procedimiento que permite activar un glucido soluble con la ayuda de nuevos reactivos cianilantes para producir estructuras inmunogenas.Info
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Abstract
UN PROCESO PARA LA PRODUCCION DE UNA ESTRUCTURA INMUNOGENICA QUE CONSISTE EN ACTIVAR AL MENOS UNA PRIMERA UNIDAD QUE CONTIENE CARBOHIDRATOS CON UN NUEVO AGENTE CIANILANTE Y UNIR COVALENTEMENTE DICHA PRIMERA UNIDAD ACTIVADA A UNA SEGUNDA UNIDAD. SE PUEDEN PREPARAR ESTRUCTURAS INMUNOGENICAS SEGUN ESTE PROCESO LLEVANDO A CABO BIEN UNA CONJUGACION DIRECTA DE UNA PRIMERA Y UNA SEGUNDA UNIDADES O BIEN LLEVANDO A CABO UNA CONJUGACION INDIRECTA CON UN REACTIVO BIFUNCIONAL.
Description
Procedimiento que permite activar un glúcido
soluble con la ayuda de nuevos reactivos cianilantes para producir
estructuras inmunógenas.
Esta invención se refiere a métodos mejorados
para hacer constructos inmunogénicos.
En el método de vacunación, la ciencia médica
utiliza la capacidad innata del cuerpo humano para autoprotegerse
frente a agentes invasivos por inmunización del cuerpo con antígenos
que no causarán la enfermedad sino que estimularán la formación de
anticuerpos que protegerán frente a la enfermedad. Por ejemplo, se
inyectan organismos muertos para protección frente a enfermedades
bacterianas tales como fiebres tifoideas y tosferina, se inyectan
toxinas para protección frente al tétanos y botulismo, y se inyectan
organismos atenuados para protección frente a enfermedades virales
tales como poliomielitis y sarampión.
No siempre es posible, sin embargo, estimular
formación de anticuerpo simplemente por inyección del agente
extraño. La preparación de la vacuna debe ser inmunogénica, es
decir, debe ser capaz de inducir una respuesta inmune. La respuesta
inmune es una serie compleja de reacciones que se pueden describir
en general como sigue:
- 1.
- El antígeno entra en el cuerpo y encuentra células que presentan el antígeno que procesan el antígeno y retienen fragmentos del antígeno en sus superficies;
- 2.
- Los fragmentos de antígeno retenidos sobre las células que presentan el antígeno son reconocidos por células T que proporcionan ayuda a células B; y
- 3.
- Las células B son estimuladas a proliferar y dividirse en células que forman anticuerpo que secretan anticuerpo frente al antígeno.
Ciertos agentes, tales como el toxoide del
tétanos puede desencadenar de manera innata la respuesta inmune, y
puede administrarse en vacunas sin modificación. Otros agentes
importantes no son inmunogénicos, sin embargo, y deben convertirse
en moléculas inmunogénicas antes de poder inducir la respuesta
inmune.
Un método de producir moléculas inmunogénicas es
el proporcionado en la Patente estadounidense relacionada No.
5.585.100. Esta patente describe el constructo inmunogénico portador
dual, un constructo inmunogénico muy deseable.
En la preparación de moléculas inmunogénicas
tales como el constructo inmunogénico portador dual de la patente
estadounidense antes mencionada y los demás constructos
inmunogénicos, el método utilizado deberá ser lo suficientemente
suave para retener sedes antigénicas importantes, es decir, epitopos
sobre las moléculas. Según esto, es deseable mantener la integridad
de la estructura y conservar epitopos en estos compuestos.
Desgraciadamente, las etapas de preparación utilizadas normalmente
en técnicas anteriores frecuentemente no son suaves y pueden
destruir la estructura natural de hidratos de carbono y/o proteínas.
Además, la mayor parte de estas técnicas para modificación de
hidratos de carbono requieren condiciones anhidras pero,
desgraciadamente, los hidratos de carbono son frecuentemente
insolubles en disolventes orgánicos. Marburg y col., J. Amer.
Chem. Soc. 108:5282 (1986).
Existen dos métodos generales para producir
constructos inmunogénicos:
(1) conjugación directa de hidrato de carbono y
proteína; o
(2) conjugación de hidratos de carbono y proteína
a través de un ligando bifuncional o reactivo espaciador.
Generalmente, ambos tipos de conjugación
requieren activación química de la fracción hidrato de carbono antes
de su derivación. La activación química se refiere a la conversión
de un grupo funcional a una forma que puede sufrir reacciones
químicas adicionales, por ejemplo, la adición de un grupo funcional
o adición de una fracción grande tal como una proteína. La
derivación es la adición de grupo(s) químico(s)
funcional(es) o reactivo(s) espaciador(es) a
una proteína.
Ciertos hidratos de carbono contienen grupos,
tales como amino o carboxilo, que se pueden activar fácilmente o
derivar antes de la conjugación. Por ejemplo, los grupos amino en
Pseudomonas Fisher Tipo I se pueden derivar fácilmente con
grupos yodoacetilo y unirse a proteína tiolada. Los grupos carboxilo
en hidratos de carbono tales como Tipo III de Pneumococci se
pueden activar fácilmente con carbodiimidas
hidro-solubles tales como EDC, y pueden copularse
entonces directamente a proteína. Desgraciadamente, sin embargo,
este grupo de hidratos de carbono es limitado.
Otros hidratos de carbono tienen grupos aldehido
en el extremo reductor terminal que puede aprovecharse para
derivación y conjugación. También es posible crear grupos aldehido
en el extremo reductor terminal por tratamiento con peryodato de
sodio. La presencia de grupos aldehido puede ser beneficiosa debido
a que la activación de hidratos de carbono puede no ser necesaria si
se utilizan grupos aldehido.
Estos grupos aldehido se pueden condensar con
grupos amino de proteína o con reactivo de ligando bifuncional. Esta
reacción de condensación, especialmente con el extremo reductor
terminal, procede frecuentemente sin embargo bastante lenta e
ineficazmente. Esto queda exacerbado cuando se conjugan directamente
los aldehidos de hidratos de carbono a proteínas. Los rendimientos
con este método son por eso frecuentemente muy bajos. Además, el
peryodato de sodio puede romper los hidratos de carbono en
fragmentos más pequeños y/o desorganizar los epitopos, lo que puede
ser indeseable.
La mayor parte de los hidratos de carbono, sin
embargo, deben activarse antes de la conjugación y el bromuro de
cianógeno es frecuentemente el agente activante de elección. Véase,
por ejemplo, Chu y col. Inf. & Imm., 40:245 (1983). En
resumen, se hace reaccionar el bromuro de cianógeno con el hidrato
de carbono a un pH alto, típicamente pH 10 a 12. A este pH, se
forman ésteres cianato con los grupos hidroxilo del hidrato de
carbono. Estos, a su vez, reaccionan con un reactivo bifuncional,
comúnmente una diamina o una dihidrazida. Estos hidratos de carbono
derivados se pueden conjugar a través del grupo bifuncional. Los
ésteres cianato pueden reaccionar también directamente con
proteína.
Es necesario un pH alto para ionizar el grupo
hidroxilo debido a que la reacción requiere el ataque nucleófilo
del ión hidroxilo sobre el ión cianato (CN^{-}). Como resultado
de ello, el bromuro de cianógeno produce muchas reacciones
secundarias, algunas de las cuales añaden grupos cargados y
neo-antígenos a los polisacáridos. M. Wilchek y
col., Affinity Chromatography. Meth. Enzymol.,
104C:3-55. Más importante es, sin embargo, que
muchos hidratos de carbono se pueden hidrolizar o degradarse por el
pH elevado que es necesario para realizar la activación del bromuro
de cianógeno.
Además, el éster cianato formado después de la
activación con bromuro de cianógeno es inestable a pH alto y se
hidroliza rápidamente, lo que reduce el rendimiento de hidrato de
carbono derivado y, de aquí, el rendimiento global de hidrato de
carbono conjugado a proteína. Muchas otras reacciones secundarias no
productivas, tales como las que producen carbamatos e
imidocarbonatos lineales, son promovidas por el pH alto. Kohn y
col., Anal. Biochem., 115:375 (1981). Además, el propio
bromuro de cianógeno es muy inestable y se hidroliza espontáneamente
a pH elevado, reduciendo más el rendimiento global.
Además, la activación de bromuro de cianógeno es
difícil de realizar y no es fiable. El bromuro de cianógeno es muy
tóxico y potencialmente explosivo. Todas las operaciones deben
llevarse a cabo en una campana de humos adecuada. Es también
conocido por los especialistas en la técnica que la activación no es
fácilmente reproducible debido a que hay unas partidas de bromuro
de cianógeno que trabajan bien y otras que no. El bromuro de
cianógeno es además muy poco soluble en agua, lo que hace difícil el
control de la cantidad de bromuro de cianógeno soluble disponible
para reaccionar con el hidrato de carbono. Incluso la utilización de
la misma partida de bromuro de cianógeno y condiciones de reacción
aparentemente idénticas no siempre conducen a los mismos
resultados.
La Patente
DE-A-1815332 describe un método para
la conjugación covalente de compuestos orgánicos con polímeros, en
el que el polímero se activa utilizando cianato de
p-nitrofenilo (pNPC) antes de reaccionar con el
compuesto orgánico.
La Patente
EP-A-0186576 discute conjugados
divalentes de polisacáridos bacterianos neutros unidos por un
espaciador bi-genérico con una membrana bacteriana
inmunogénica u otras proteinas, conjugados que son componentes
útiles de vacunas bacterianas.
Hay otro documento (Infection and
Immunity, vol. 40, No. 1, 1983, páginas 245-256)
que describe el uso del constructo Pn6A-TT
(conjugado de polisacáridos neumocócicos 6 A con toxoide de tétanos)
para preparar sustancias inmunogénicas.
Además de estas desventajas, es muy difícil
controlar el grado de activación del hidrato de carbono alcanzado
por la utilización de bromuro de cianógeno. Es muy difícil también
alcanzar un alto nivel de activación de hidratos de carbono
utilizando este método. El incremento de la cantidad de bromuro de
cianógeno presente es ineficaz y solamente conduce a un aumento de
reacciones secundarias sin incremento de la activación. Kohn y col.
Applied Biochem. and Biotech., 9:285 (1984). Según esto,
existe la necesidad en la técnica de un método para producir
constructos inmunogénicos que sea suave, mantenga la integridad de
la estructura de los hidratos de carbono y proteínas, conserve los
epitopos en los compuestos, sea fácil de realizar, sea fiable, y sea
fácilmente reproducible.
La presente invención resuelve los problemas y
desventajas de los métodos de técnicas anteriores para producir
constructos inmunogénicos proporcionando un método de conjugación
que emplea un método de activación de hidratos de carbono que es
seguro, fácil, barato, y suave para los hidratos de carbono.
El método de la presente invención utiliza nuevos
reactivos de cianilación para activar antígenos que contienen
hidratos de carbono. Debido a que las condiciones de reacción del
reactivo de cianilación son tan suaves, el riesgo de destrucción de
la estructura de los hidratos de carbono, y por tanto de la
destrucción de los epitopos naturales, disminuye en gran medida.
Este método es aplicable a una amplia variedad de hidratos de
carbono solubles y los hidratos de carbono activados utilizando el
método de la invención pueden conjugarse directamente a proteínas o
conjugarse indirectamente a proteínas a través de la utilización de
un espaciador o un ligando. Este método permitirá además producir
constructos inmunogénicos más efectivos de una manera más eficaz y
más barata que los constructos inmunogénicos preparados utilizando
los métodos de técnicas anteriores. Como se señala en la Tabla 1 que
se da a continuación, este método es más ventajoso que el del
bromuro de cianógeno utilizado hasta
ahora.
ahora.
| Bromuro de cianógeno | Nuevos reactivos de cianilación |
| pH alto (10-12) | pH suave (7,0) |
| Destruye muchos epitopos de CHO | No hay alteración de epitopos de CHO |
| Tóxico (requiere campana de humos) | No tóxico |
| Peligroso en grandes cantidades | Seguro |
| Bajo rendimiento | Alto rendimiento |
| Reacciones secundarias múltiples | Reacciones secundarias mínimas o inexistentes |
| No permite fácilmente una conjugación | Permite la conjugación directa a proteína y permite |
| directa a proteína | la recuperación de la proteína sin conjugar |
| Variación de partida a partida | Reproducible |
| Dificultad para trabajar con | Fácil de trabajar con pequeñas |
| pequeñas cantidades | cantidades |
En un modo de realización preferido la presente
invención se refiere a un método para preparar una vacuna que
comprende un constructo inmunogénico y un vehículo farmacéuticamente
aceptable, que comprende la producción del constructo inmunogénico
por un procedimiento que consiste en:
(a) activación de al menos una primera fracción
que contiene hidrato de carbono con un reactivo orgánico de
cianilación, donde dicho reactivo orgánico de cianilación se
selecciona entre tetrafluoroborato de
1-ciano-4-(dimetilamino)-piridinio
(CDAP) y tetrafluoroborato N-cianotrietilamonio
(CTEA); y
(b) unión covalente de la citada fracción que
contiene hidrato de carbono activada a una segunda fracción.
En otro modo de realización preferido, la
presente invención se refiere a un método para preparar una vacuna
que comprende un constructo inmunogénico y un vehículo
farmacéuticamente aceptable, que comprende la producción del
constructo inmunogénico por un procedimiento que consiste en:
(a) activación de al menos una primera fracción
que contiene hidrato de carbono con un reactivo orgánico de
cianilación, donde dicho reactivo orgánico de cianilación se
selecciona entre tetrafluoroborato de
1-ciano-4-(dimetilamino)-piridinio
(CDAP) y tetrafluoroborato de N-cianotrietilamonio
(CTEA);
(b) unión covalente de dicha primera fracción a
un reactivo espaciador bifuncional; y
(c) unión covalente de una segunda fracción al
reactivo espaciador bifuncional de la etapa (b).
Las ventajas adicionales de la utilización de
CDAP son: (1) el reactivo se puede hacer por anticipado y
almacenarse en solución durante varios meses; y (2) la concentración
de reactivo activo se puede determinar fácilmente a partir de su
absorbancia a 301 nm (Kohn y col., Anal. Biochem. 115:375
(1981)). Esto permite normalizar la concentración de reactivo y hace
más reproducible la derivación de hidratos de carbono, lo cual es
importante para su utilización en la preparación de vacunas.
Todas las ventajas antes mencionadas se aplican
tanto a la conjugación directa de proteínas al hidrato de carbono
como a la conjugación indirecta a través de un espaciador.
Objetos y ventajas adicionales de la invención
quedarán en parte señaladas en la descripción que sigue y, en parte,
quedarán de manifiesto por la propia descripción, o se pueden
aprender en la práctica de la invención. Los objetos y ventajas de
la invención se obtendrán mediante los elementos y combinaciones
señaladas en particular en las reivindicaciones adjuntas.
Habrá de entenderse que tanto la anterior
descripción general como la siguiente descripción detallada son
solamente ilustrativas y explicativas y no limitan la invención, tal
como se reivindica.
Los dibujos que acompañan, que se incorporan a
ella y constituyen una parte de esta memoria descriptiva, ilustran
varios modos de realización de la invención y junto con la
descripción sirven para explicar los principios de la
invención.
La Figura 1 representa un esquema general de la
activación de hidratos de carbono utilizando agentes de
cianilación.
La Figura 2 muestra esquemas de conjugación
directa de un hidrato de carbono a una proteína (lado izquierdo de
la figura) y de conjugación indirecta de un hidrato de carbono
activado a una proteína utilizando un reactivo bifuncional (lado
derecho de la figura).
La Figura 3 ilustra un modelo de un constructo
inmunogénico.
La Figura 4 ilustra la incorporación de grupos
NH_{2} a dextrano frente a las moles de CDAP añadido/mol de
dextrano.
La Figura 5 ilustra el perfil de elución de un
conjugado ^{3}H-BSA-dextrano
desde una columna de filtración de gel S400SF.
La Figura 6 ilustra la absorbancia OD280 de
constructos inmunogénicos preparados según el método de la
invención, eluidos desde la columna de filtración de gel S400SF. A,
PT-PRP; B,
P28-PT-Pn14.
La Figura 7 ilustra el perfil de elución de
H\deltaª/1-(CDAP)-dextrano desde columna de
filtración de gel S400SF.
La Figura 8 ilustra valores OD280 y OD430 de
muestras de columna eluidas desde columna de filtración de gel
S400SF cargadas con
H\deltaª/NH_{2}-(CDAP)-dextrano.
La Figura 9 ilustra la inmunoreactividad de
constructos inmunogénicos preparados por utilización de los métodos
de la invención.
A continuación se hace referencia con detalle a
los modos de realización preferidos de la invención, ejemplos de los
cuales se ilustran con los dibujos adjuntos.
La invención se refiere a un método para la
activación de antígenos que contienen hidrato de carbono para su
utilización en la preparación de constructos inmunogénicos. La
invención se refiere además a un método para la preparación de
constructos inmunogénicos que comprende la activación de la fracción
que contiene hidratos de carbono con un agente de cianilación. En la
Figura 1 se muestra un esquema general de la activación de hidratos
de carbono utilizando agentes de cianilación. La Figura 2 ilustra la
utilización de un hidrato de carbono activado para su conjugación
directa a proteína o su conjugación indirecta por empleo de un
reactivo ligando bifuncional.
Tal como aquí se emplea, el constructo
inmunogénico se refiere a una entidad que puede estimular la
respuesta inmune. En un modo de realización preferido, es al menos
una fracción que contiene hidrato de carbono conjugada a al menos
una segunda fracción que es una proteína. Tal como aquí se emplea,
"hidrato de carbono" significa cualquier monosacárido,
disacárido, oligosacárido o polisacárido, soluble. Entre los
polisacáridos se incluyen, sin que quede limitado solo a ellos,
almidones, celulosas, y pectinas. En otro modo de realización
preferido, la segunda fracción es un antígeno dependiente de T,
conjugado al anterior , como se representa en la Figura 3.
Tal como aquí se emplea, una fracción es una
substancia que incluye, sin que quede limitado solo a ellas,
substancias que se pueden utilizar para estimular el sistema inmune
bien por si mismas o una vez copuladas. Las fracciones incluyen
hidratos de carbono, proteínas, péptidos, otros antígenos, moléculas
auxiliares, haptenos, o combinaciones de ellos. Los haptenos se
refieren a pequeñas moléculas, tales como productos químicos, polvo,
y alergenos, que no son capaces por si mismos de provocar una
respuesta de anticuerpo, pero pueden hacerlo una vez copulados a un
vehículo. Un antígeno es una molécula que, en circunstancias
adecuadas, puede inducir la formación de anticuerpos. Estos haptenos
y antígenos pueden derivar, sin que se limite solo a ellos, de
bacterias, rickettsiáceas, hongos, virus, parásitos, fármacos, o
productos químicos. Pueden incluir, por ejemplo, pequeñas moléculas
tales como péptidos, oligosacáridos (por ejemplo el fosfato de
poliribosil ribitol de H. influenzae), toxinas, endotoxina,
etc.
El proceso de síntesis del constructo de la
invención permite un ventajoso control de las propiedades físicas y
químicas del producto final. Las propiedades que se pueden
controlar incluyen modificación de la carga sobre las fracciones
primera y segunda (una ventaja a la luz de la evidencia de que las
proteínas cationizadas pueden ser inmunogénicas), variando el tamaño
del constructo por variación del tamaño de la fracción que contiene
hidrato de carbono, seleccionando el grado de reticulación del
constructo (para obtener una variación de tamaño), seleccionando el
número de copias de la segunda fracción conjugada a fracciones que
contienen hidrato de carbono, e insertando dirigidamente a
poblaciones de células seleccionadas (tales como a macrofagos para
potenciar la presentación de antígenos). Dick & Beurret,
"Glyco-conjugates of Bacterial Carbohidrate
Antigens", Conjugate Vaccines, J. M. Cruse & R. E.
Lewis (eds.), Vol 10, páginas 48-114 (1989).
La respuesta inmune al constructo de la invención
puede potenciarse además por adición de inmunomoduladores y/o
fracciones de inserción dirigida a células. Estas entidades
incluyen, por ejemplo, (1) lipopolisacáridos destoxificados o
derivados, (2) dipéptidos muramílicos, (3) hidratos de carbono,
lípidos y péptidos que pueden interactuar con determinantes de
superficie de células para insertar dirigidamente el constructo en
células inmunológicamente pertinentes, (4) interleucinas, y (5)
anticuerpos.
La fracción que contiene hidratos de carbono
puede ser una molécula natural de elevado peso molecular, o una
semisintética o totalmente sintética. En un modo de realización
preferido, al menos una fracción que contiene hidrato de carbono es
un hidrato de carbono seleccionado del grupo que consiste en
polisacáridos de E. coli, polisacáridos de S. aureus,
dextrano, carboximetil celulosa, agarosa, polisacáridos de
Pneumococos, Ficol, criptococcus
neo-formans, PRP de haemophilus
inflluenzae, lipopolisacáridos de P. aeruginosa, S.
pneumoniae, y combinaciones de ellos.
En el modo de realización preferido en primer
lugar, la fracción que contiene un hidrato de carbono es un
dextrano. Tal como aquí se emplea se refiere a un polisacárido
compuesto de un azúcar sencillo y se puede obtener a partir de una
serie de fuentes incluida Pharmacia. El Ficoll, un ejemplo de
polímero semisintético, es un polímero de alto peso molecular
no-ionizado, inerte, sintético. Un ejemplo de
polímero sintético es un alcohol polivinílico. Todos ellos son
ejemplos de fracción que contiene hidrato de carbono.
En un modo de realización preferido, la segunda
fracción es albúmina, un toxoide, una proteína, un péptido, célula T
o auxiliar de célula B o cualquier otro compuesto capaz de activar
y reclutar ayuda de células T. La proteína se puede seleccionar de
un grupo que consiste, sin que quede limitado solo a ellas,
proteínas virales, bacterianas, de parásitos, animales y hongos. En
un modo de realización preferido, la segunda fracción es albúmina de
suero bovino, toxoide de tétanos, toxoide de tosferina, toxoide de
difteria, proteína del choque de calor, superantígenos de células
T, o proteína de membrana bacteriana exterior, todos los cuales se
pueden obtener de compañías de suministros bioquímicos y
farmacéuticos o prepararse por metodología convencional (J.M. Cruse
& R.E. Lewis, (eds.), Conjugate Vaccines in Contributions to
Microbiology and Immunology, Vol 10 (1989)). Los especialistas
en la técnica de inmunología pueden conocer también otras
proteínas.
Las fracciones segundas según la invención pueden
ser conjugadas a al menos una fracción que contiene hidrato de
carbono. Las fracciones segundas pueden contener o bien grupos
funcionales que pueden reaccionar con la fracción que contiene
hidrato de carbono o la fracción segunda se puede manipular
químicamente para que pueda reaccionar con la fracción que contiene
hidrato de carbono antes discutida.
A la fracción que contiene hidrato de carbono se
pueden conjugar numerosas copias de fracciones secundarias
específicas así como una diversidad de fracciones segundas. La
copulación de copias múltiples de la fracción secundaria a la
fracción primera aumenta significativamente la producción de
anticuerpos para la fracción segunda.
En otro modo de realización, se pueden conjugar
además fracciones terciarias a una o más fracciones primera y/o
segunda. Como se señala en las aplicaciones relacionadas, esta
conjugación promueve respuestas de anticuerpo a la fracción
terciaria potenciadas. Las técnicas para conjugar varias fracciones
a la fracción primaria o a la secundaria son muy conocidas para los
especialistas, e incluyen, en parte, la copulación a través de
grupos funcionales disponibles (tales como grupos amino, carboxilo,
tio y aldehido). Véase S.S. Wong, Chemistry Protein Conjugate
and Crosslinking CRC Press (1991), y Brenkeley y col. "Breve
serie de Métodos para la Preparación de Conjugados de proteína con
Colorantes, Haptenos, y Agentes de reticulación" Bioconjugate
Chemistry, 3:1 (enero de 1992).
En el método de la invención, la fracción que
contiene hidrato de carbono se activa utilizando un agente de
cianilación. Los reactivos de cianilación aumentan la
electrofilicidad del cianato y, cuando reaccionan con fracciones que
contienen hidrato de carbono, los reactivos de cianilación pueden
transferir un grupo ciano a los grupos hidroxilo del hidrato de
carbono, preparándolo así para posterior reacción, es decir,
conjugación directa o indirecta a proteína. La reacción de
activación se puede llevar a cabo a pH neutro, lo que mejora la
estabilidad e integridad del polisacárido.
Se conocen una serie de agentes de cianilación,
tales como tetrafluoroborato de N-cianotrietilamonio
(CTEA), tetrafluoroborato de
1-ciano-4-(dimetilamino)-piridinio
(CDAP), p-nitrofenilcianato (p-NPC).
Wakselman y col., han informado que el CDAP es un reactivo suave
que se puede utilizar para modificación de grupos cisteína de
proteínas. J. C. S. Chem. Comm., 1976:21 (1976). De estos
reactivos, el CDAP es el más preferido debido a que es el más
estable y se puede utilizar sin campana de humos, pero CTEA y pNPC
son parte también de la invención reivindicada. Otros complejos de
aminas terciarias con el grupo cianato con diversidad de
contra-iones entran dentro del marco de esta
invención. Son particularmente útiles los
contra-iones no-nucleófilos tales
como tetrafluoroborato.
Kohn y col. han comparado CDAP, CTEA y pNPC como
agentes activantes para agarosa, una resina de polisacárido
insoluble. Kohn y col., Anal. Biochem., 115:375 (1981).
Otros investigadores han utilizado CDAP para activar otros tipos de
partículas insolubles, tales como Sepharosa y vidrio poroso
controlado con glicerilo. A. Carpenter y col., Journal of
Chromatography, 573:132-135 (1992). Lejos de la
producción constructos inmunogénicos reivindicada, estos
documentos describen la utilización de partículas insolubles
activadas para preparar geles para cromatografía de afinidad.
En el único trabajo en el que se utiliza CDAP
para activar un polisacárido soluble antes de la conjugación con
proteína (Anderson y col., International Journal of Cancer,
47: 439-444 (1991)) Anderson y col. han conjugado
directamente el factor de crecimiento epidérmico (EGF) a dextrano de
bajo peso molecular, de 40 kDa, activado con cianato. Utilizaron
dextrano muy alto a relaciones de EGF de aproximadamente 50:1
(peso/peso) para producir conjugados de dextrano-EGF
y estudiaron la unión de este conjugado a células cultivadas, pero
no utilizaron el conjugado como inmunógeno. De hecho, se sabe que la
conjugación de proteínas a dextranos de bajo peso molecular es pobre
o no-inmunogénica. T.E. Wileman, J. Pharm.
Pharmacology, 38:264 (1985).
En el método preferido, se realiza una activación
empleando el reactivo de cianilación a pH 6-8 en
tampón no-nucleófilo. El método de activación de
reactivo de cianilación se puede llevar a cabo en un intervalo de pH
de 6 a 8 en diversidad de agentes tampón adecuados conocidos en la
especialidad. Entre los ejemplos de agentes tampón
no-clucleófilos adecuados se incluyen, sin que quede
limitado solo a ellos, solución salina, HEPES, fosfato, agua y
algunos disolventes orgánicos.
En el modo de realización preferido de la
invención, se disuelve CDAP en una solución de reserva a una
concentración de 100 mg/ml en acetonitrilo seco. Las concentraciones
de CDAP de 0,1 a 10 mg/ml son adecuadas para utilizarlas en el
método de la presente invención. Dependiendo de la naturaleza de la
fracción que contiene hidrato de carbono utilizada y del grado de
activación deseado, pueden resultar óptimas diferentes
concentraciones.
En el modo de realización preferido, la
concentración de la fracción que contiene hidrato de carbono está,
óptimamente, entre 1 y 15 mg/ml. La reacción de activación se puede
llevar a cabo con éxito con concentraciones de fracción que contiene
hidrato de carbono de hasta aproximadamente 100 mg/ml.
En un modo de realización preferido, la relación
de CDAP a fracción que contiene hidrato de carbono para conjugación
directa de proteína está entre 1:100 y 1:500 por 100 kDa de la
fracción que contiene hidrato de carbono. En otro modo de
realización preferido, la relación de CDAP a fracción que contiene
hidrato de carbono para conjugación indirecta de proteína utilizando
un espaciador está entre 1:10 y 1:500 por 100 kDa de fracción que
contiene hidrato de carbono. Dependiendo de la naturaleza de las
fracciones y las condiciones utilizadas, pueden resultar óptimas
diferentes relaciones de las fracciones.
En un modo de realización preferido, una fracción
que contiene hidrato de carbono que ha sido activada utilizando un
reactivo de cianilación se conjuga directamente a la fracción
segunda para producir un constructo inmunogénico. En otro modo de
realización preferido de la invención, la fracción que contiene
hidrato de carbono que ha sido activada con reactivo de cianilación
se une covalentemente a un reactivo bifuncional adecuado. Entre los
ejemplos de reactivos bifuncionales adecuados se incluyen, sin que
quede limitado solo a ellos, etilen diamina,
1,6-hexano diamina, dihidrazida adípica, cistamina,
y lisina, ácido glutámico, tiol aminas, tiol hidrazidas. Véase,
Wong y col., "Química de Conjugado de Proteína y
Reticulación", CRC Press (1991). La fracción segunda se
une entonces covalentemente al reactivo bifuncional que ha sido ya
enlazado covalentemente en su otro extremo a la fracción que
contiene hidrato de carbono.
En un modo de realización preferido, la
trietilamina (TEA) se utiliza para facilitar la reacción de
cianilación por la formación de un complejo de Van Braun
intermediario. La trietilamina (TEA) se puede reemplazar por otras
aminas terciarias capaces de formar un complejo de Von Braun. J.
Von Braun, Chem. Ber. 33:1438 (1900).
Para ciertas reacciones de conjugación directas,
para apagar la reacción se puede emplear glicino amino etanol u
otros reactivos que contienen amino.
En otro modo de realización, la invención se
refiere a vacunas que se hacen de un constructo inmunogénico junto
con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Estas vacunas
contendrán una cantidad terapéutica eficaz del constructo
inmunogénico junto con una cantidad adecuada de vehículo de manera
que proporcione la forma de administración adecuada al paciente.
Estas vacunas pueden comprender alumbre u otras sustancias
auxiliares.
Los vehículos farmacéuticamente aceptables pueden
ser líquidos estériles, tales como agua y aceites, incluyendo los de
petróleo, los de origen animal, vegetal o sintético, tales como
aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de
sésamo y similares. El agua es un vehículo preferido cuando la
composición farmacéutica se administra por vía intravenosa. También
se pueden emplear como vehículos líquidos soluciones salinas y
soluciones acuosas de dextrosa y glicerina, en particular para
soluciones inyectables. Los vehículos farmacéuticos adecuados están
descritos en E. W. Martin, Remington's Pharmaceutical
Sciences, que se incorpora aquí específicamente como
referencia.
Las vacunas que se pueden construir a partir de
los constructos inmunogénicos de la invención pueden incluir, pero
no se limita solo a ellas, las vacunas se dan en el siguiente
listado 1.
Lista
1
Vacuna de la difteria
Vacuna de la tosferina (subunidad)
Vacuna del tétanos
H. influenza, tipo b (poli fosfato de
ribosa)
S. pneumoniae, todos los serotipos
E. coli, endotoxina o antígeno J5 (LPS,
Lípido A, y gentabiosa)
E. coli, O polisacáridos (serotipo
específico)
Klebsiella, polisacáridos (serotipo
específico)
S. aureus, tipos 5 y 8 (serotipo
específico y antígenos protectores comunes)
S. epidermidis, polisacárido de serotipo
I, II y III (y antígenos protectores comunes)
N. meningiditis, serotipo específico o
antígenos de proteína
Vacuna de polio
Vacuna de paperas, sarampión y rubeola
Virus sincitial respiratorio
Rabia
Hepatitis A, B, C, y otras
Virus de inmunodeficiencia humana I y II (GP120,
GP41, GP160, p24, otros)
Herpes simplex tipos 1 y 2
CMV
EBV
Varicella/Zoster
Malaria
Tuberculosis
Candida albicans, otros candida
Micoplasma
Virus de influenzae A y B
Adenovirus
Streptococcus Grupo A
Streptococcus Grupo B, serotipos Ia, Ib, II y
III
Pseudomonas aeruginosa (específico de
serotipo)
Rinovirus
Parainfluenza, tipos 1, 2 y 3
Coronavirus
Salmonella
Shigella
Rotavirus
Enterovirus
Chlamydia trachomatis y pneumoniae
(TWAR)
Glicoproteinas
Criptococcus neo-formans
Las vacunas son útiles para el tratamiento de un
paciente por administración de una cantidad inmunoestimulante de la
vacuna. El término "paciente" se refiere a un sujeto para quien
el tratamiento puede ser beneficioso e incluye mamíferos,
especialmente humanos, caballos, vacas, perros y gatos así como
otros animales, tales como pollos. Una cantidad inmunoestimulante se
refiere a la cantidad de vacuna que puede estimular la respuesta
inmune del paciente para la prevención, mejoría o tratamiento de la
enfermedad. La vacuna de la invención se puede administrar por
cualquier vía, pero es preferible administrarla por inyección
intramuscular y subcutánea.
La invención se refiere también a un método de
preparación de un agente inmunoterapéutico frente a infecciones
causadas por bacterias, virus, parásitos, hongos o compuestos
químicos por inmunización de un paciente con la vacuna antes
descrita de manera que el donante produce anticuerpos dirigidos
contra la vacuna. Se pueden aislar los anticuerpos o se pueden
aislar células B para fundirlas más tarde con células de mieloma
para obtener anticuerpos monoclonales. El método para hacer
anticuerpos monoclonales es muy conocido en la especialidad, Kohler
y col., Nature, 256:495 (1975), que se incorpora aquí
especíificamente como referencia, y no necesita describirse por
tanto con más detalle. Tal como aquí se emplea, el agente
inmunoterapéutico se refiere a una composición de anticuerpos que
van dirigidos contra inmunógenos específicos para utilizarlos en
tratamiento pasivo de pacientes. Un donante de plasma es cualquier
sujeto que recibe la inyección de la vacuna para la producción de
anticuerpos frente a los inmunógenos contenidos en la vacuna.
Se adquirieron en Aldrich (Milwaukee, Wisconsin)
CDAP, piridina, hexano diamina, borato de sodio, HEPES, y
trietilenamina (TEA). La fracción que contiene hidrato de carbono,
dextrano T2000, con un peso molecular medio de 2000 kDa, se obtuvo
de Pharmacia (Piscataway, Nueva Jersey).
Se almacenó a -20ºC un material de CDAP en
acetonitrilo seco a 100 mg/ml y se mantuvo sobre hielo al
utilizarlo. El dextrano T2000® se llevó a 10,5 mg/ml en solución
salina + 0,02% de azida. El material de reserva acuoso de
trietilamina se llevó a 0,2 M y se mantuvo sobre hielo durante el
uso.
La hexano diamina se llevó a 0,5 M en borato de
sodio 0,1 M.
Se hizo la determinación del grupo amino
utilizando sulfonato de trinitrobenceno (TNBS) y un coeficiente de
extinción de 11.000 m^{-1} a 366 nm. Franci y col. J. Imm.
Methods, 86:155 (1986). El hidrato de carbono se ensayó por el
método de M. Monsigny y col. Anal. Chem., 175:525 (1988)
utilizando dextrano T2000 como patrón.
Los siguientes experimentos demuestran que todos
los componentes utilizados en la reacción de derivación de la
invención son importantes y que los grupos amino en el conjugado
final se unen covalentemente al hidrato de carbono y su presencia no
se debe a un "arrastre" del reactivo al producto final. Las
reacciones se llevan a cabo sobre hielo. Para las pruebas
realizadas, la omisión o substitución de reactivos es tal como se
indica en la Tabla 2.
En el procedimiento que utiliza todos los
reactivos, fila 1 de la Tabla 2, se añadió CDAP a una solución
agitada con varilla de 300 \mul de dextrano (3,1 mg) y se retornó
al cubo de hielo. Treinta segundos más tarde, se añadió TEA a la
solución agitada. Dos minutos después de añadir el CDAP, se
añadieron 200 \mul de la diamina y la solución se mantuvo sobre
hielo durante otra hora. Las muestras se dializaron durante toda la
noche, se filtraron con un filtro Millex GV y se desalinificaron en
columna P6DG de 1 x 15 cm (BioRad).
Como se muestra en la Tabla 2 abajo, la
incorporación de grupos amino al dextrano requería la presencia de
dextrano, CDAP, TEA y hexano diamina. Los datos de la Tabla 2
demuestran además que los grupos amino detectados no son debidos a
arrastre de reactivos sin conjugar a los productos finales. Sin TEA
(reactivo de transferencia) presente, existe solo una formación
mínima de derivado.
Este experimento demuestra que se puede utilizar
CDAP para derivar hidratos de carbono para introducir grupos amino a
relaciones altas y a relaciones bajas. Se utilizó dextrano T2000
como modelo de hidrato de carbono. El dextrano es un polímero hecho
de monómeros de glucosa.
La primera etapa de la preparación de muchas
vacunas de conjugados consiste en la adición de un espaciador (Dick
& Beurret, "Glicoconjugados de Antígenos de Hidratos de
Carbono Bacterianos", Conjugate Vaccines, J. M. Cruse
& R.E. Lewis (editores), Vol. 10, páginas 48-114
(1989)). Esta serie de experimentos, recogidos en la Tabla 3,
destaca la facilidad con que se puede añadir un espaciador a
polisacáridos.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
* \+ Moles de NH _{2} por 2000 kDa de dextrano\cr ** \+ Para
calcular este valor, se dividen los valores de NH _{2} /dextrano por
los valores de mol de CDAP/mol\cr \+ dextrano y se multiplica por
100%.\cr *** \+ Porcentaje de unidades de glucosa dentro del
dextrano unidas a un grupo NH _{2} \cr **** \+ Experimento llevado
a cabo a temperatura
ambiente\cr}
El experimento se llevó a cabo a dos
temperaturas. En las filas 1-7 y 11, todos los
reactivos se mantuvieron sobre hielo y en las filas
8-10 a temperatura ambiente. Se utilizaron
procedimientos y reactivos como los descritos antes para la Tabla 2
y las cantidades de reactivo añadidas son las indicadas en la Tabla
3. En la fila 11, se añadió diamina en HEPES 0,15 M. La reacción era
ligeramente menos eficaz a pH más bajo. En otro modo de realización,
la hexano diamina se llevó a borato 0,1 M, pH 9.
La eficacia se define como el número de moles de
grupos de espaciador incorporados por mol de CDAP utilizado,
expresado como porcentaje. La última columna, "% derivado") es
el porcentaje de unidades de monómero glucosa del dextrano que han
sido modificadas con un espaciador.
Los resultados se ilustran además en la Figura 4,
que muestra el número total de grupos amino (por ejemplo, el
reactivo espaciador añadido) incorporado frente a las moles de CDAP
añadidas por moles de unidad de dextrano. Cuando este dato se
convierte en incorporación de NH_{2} frente a moles de CDAP/ mol
de dextrano, es evidente que la relación CDAP: glucosa inferior a
uno es suficiente para altos niveles de incorporación de NH_{2}.
Según esto, es necesaria una modificación mínima de polisacárido
dextrano para alta incorporación de grupo NH_{2}.
Además, dado que se hidroliza una cantidad
indeterminada del éster cianato activo sin añadir espaciador, la
relación CDAP/glucosa es en realidad una sobreestimación del grado
de modificación del polímero. Según esto, el grado real de
modificación es inferior a la relación CDAP/glucosa calculada.
El grado de incorporación de grupos espaciadores
a la dosis de reactivo más baja ensayada (fila 1), 3,1%, es
comparable al utilizado para la síntesis de vacunas de conjugado
(Chu y col. Inf. & Imm., 40:245 (1983); Dick &
Beurret, "Glicoconjugados de Antígenos de Hidratos de Carbono
Bacterianos", Conjugate Vaccines, J.M. Cruse & R.E.
Lewis (editores), Vol. 10, páginas 48-114
(1989).
La Tabla y la Figura demuestran la alta eficacia
de la reacción de CDAP para adición de reactivos espaciadores.
Además, la optimización de las condiciones de reacción puede
incrementar la eficacia. También se ilustra el muy alto nivel de
incorporación de grupos espaciadores al polisacárido que es posible
utilizando CDAP. A la cantidad más alta de CDAP añadido (fila 7) se
modificaban aproximadamente 1 de 5 de las unidades de glucosa (20%)
con el espaciador. No se puede obtener este grado de incorporación
de espaciador con bromuro de cianógeno (Kagedal & Akerstrom,
Acta Chimica Scan., 25:1855 (1971)).
Durante las reacciones, no había precipitación
evidente del polisacárido dextrano. Por el contrario, la agregación
y precipitación del polisacárido puede representar un problema en el
método de bromuro de cianógeno (Kagedal & Akerstrom, Acta
Chimica Scan., 25:1855 (1971)).
Estas reacciones se hicieron a pequeño volumen
(< 1 ml), lo que permitió realizar convenientemente muchos de los
experimentos del ensayo. Esto es importante para la optimización del
procedimiento con el fin de no desperdiciar hidratos de carbono
valiosos. En contraste con esto, es difícil trabajar
convenientemente con muy pequeñas cantidades de bromuro de cianógeno
debido a su baja hidrosolubilidad, potencia incierta, y
toxicidad.
Además, comparando las filas 8-10
de la Tabla 3 con las filas 1-7 y 11, se ve que el
nivel de incorporación de grupos amino al dextrano era
aproximadamente el mismo cuando la reacción de copulación se
realizaba a 0ºC ó a temperatura ambiente.
Dado que la reacción de conjugación empleando
CDAP causaba algo de absorbancia a 280 nm, la longitud de onda
empleada normalmente para calcular concentraciones de proteína, se
conjugó directamente a dextrano la proteina marcada
radiactivamente. Esto permitía la determinación independiente de la
concentración de proteína a partir de su actividad específica. Se
determinaron los rendimientos y recuperaciones de proteína.
1. Se marcó radiactivamente ligeramente BSA con
(^{3}H-2,3)propionato de
N-hidroxisuccinimida (Amersham), esencialmente como
ha sido descrito por Brunswick y col. Se dializó exhaustivamente la
BSA marcada radiactivamente en PBS + 0,02% de azida y se sometió a
cromatografía de filtración de gel sobre una columna S100HR
(Pharmacia) para separar agregados y se concentró por
ultrafiltración utilizando un filtro YM30 (Amicon). La concentración
de BSA era de 21 mg/ml, determinada por su coeficiente de extinción
a 280 nm (44.000 M^{-1}). La actividad específica de la solución
de reserva determinada por conteo de centelleo de líquidos era 5,48
x 10^{12} cpm/mol.
2. Otros reactivos fueron como sigue: dextrano
T2000 (aproximadamente 2000 kDa) (Pharmacia) disuelto en agua a
10,5/ml. El CDAP se llevó a 100 mg/ml en acetonitrilo seco, la
trietanolamina (TEA) se añadió a agua hasta 0,2 M. La glicina (pH
5,0) se preparó con agua a 1 M.
3. Protocolo: Se mantuvieron los reactivos sobre
hielo y todas las reacciones se llevaron a cabo sobre hielo. La
mezcla de reacción se agitó con varilla durante cada adición. Se
añadieron 25 \mul de CDAP a 0,5 ml de dextrano (5,25 mg) y 30
segundos después se añadieron 25 \mul de TEA. . Después de un
total de 2,5 minutos, se añadieron 5,25 mg de BSA radiactiva.
Treinta minutos más tarde, se apagó la reacción por la adición de
100 \mu de solución de glicina y se dejó toda la noche a 4ºC. Se
filtró entonces una parte alícuota de 0,6 ml utilizando membrana
Spin-X (COSTAR). La comparación de las partes
alícuotas de radiactividad antes y después de la filtración demostró
que esencialmente el 100% de la radiactividad se había recuperado
en el filtrato.
Se aplicaron 500 \mul del filtrato a una
columna de filtración de gel de 1 x 57 cm S400SF (Pharmacia) que
se equilibró con solución salina más azida al 0,02%, y se hicieron
pasar a 0,2 ml/min. Se recogieron fracciones de 0,89 ml y se
analizaron. Las concentraciones de dextrano se determinaron por el
método de Monsigny y col. utilizando absorbancia a 480 nm. Se
determinó la radiactividad de partes alícuotas de 50 \mul de cada
tubo por conteo de centelleo de líquidos y se calcularon las
concentraciones de (^{3}H)BSA utilizando su actividad
específica. La posición de BSA sin conjugar en la elución de la
columna se determinó trabajando en una columna independiente.
4. Como muestra la Figura 5, una gran porción de
BSA, representada por el cpm, está en una forma de peso molecular
alto que corre en idéntica posición que el dextrano, representado
por OD480. Hay un pequeño pico residual de BSA que representa
proteína sin conjugar. La Tabla 4 contiene los datos de la
purificación.
| Total de proteína recuperada: | 3,0 mg | |
| Proteína aplicada a la columna: | 2,9 mg | |
| Recuperación: | 103% | |
| Proteína en forma de alto MW | ||
| (tubos 15-23) | > 2,0 mg (68%) |
Relación de BSA : Dextrano para dextrano de 2000
kDa : 26
La columna no separaba limpiamente el conjugado
dextrano-BSA de la proteína sin conjugar. Esto no es
inusual ya que los polímeros de alto peso molecular frecuentemente
dan lugar a colas en las columnas de filtración de gel. Además, al
estar el dextrano T2000 sin fraccionar, contenía un espectro de
tamaños. Para calcular la cantidad de BSA conjugada en la región
donde se solapan BSA libre y unida, los autores de la presente
invención suponen una relación constante de BSA unida a dextrano. La
BSA total conjugada, calculada por multiplicación de la relación
BSA: dextrano x la cantidad molar total de dextrano, se determinó
como 2,55 mg. Esto indica que el 87% de la proteína estaba
convertida a la forma conjugada.
| moles de CDAP/moles | moles TEA/moles | BSA/dextrano | % de BSA conjugada |
| glucosa | CDAP | ||
| 0,39 | 1:2 | 26 | 88 |
| 0,39 | 2:1 | 10 | 34 |
| 0,16 | 1:2 | 9 | 28 |
| 0,16 | 5:1 | 1 | 3 |
Los resultados de este experimento de
BSA-dextrano se recogen en la Tabla 5 (fila 1)
junto con otras tres pruebas utilizando diferentes cantidades de
CDAP y TEA (filas 2-4). Tanto la cantidad de TEA
como la cantidad de CDAP son críticas para alcanzar altas
relaciones de proteína a polisacárido a través de conjugación
directa. Las cantidades óptimas de reactivo se pueden determinar
fácilmente ya que el método permite una experimentación conveniente
con pequeñas cantidades.
Debe hacerse notar que la reacción de conjugación
directa no modifica la proteína sin conjugar, a diferencia de los
métodos de copulación de carbodiimida o heteroligado, ni utiliza
condiciones rigurosas. De esta forma, se puede recuperar la
proteína sin conjugar para posterior uso. Dado que muchos antígenos
de proteína son valiosos, esta es una ventaja importante del método
de conjugación directa.
El propósito de estos experimentos es (1) el de
demostrar que la transformación de la proteína de una forma de bajo
peso molecular a una forma de alto peso molecular era el resultado
de conjugación directa de la proteína al hidrato de carbono y (2)
determinar, bajo un conjunto de condiciones particular, la cantidad
mínima de reactivo de cianilación necesario para conjugar la
proteína.
Se disolvió toxoide de tosferina (PT) (de
Mass. Public Health Biol. Labs, Boston, MA) a 0,289 mg/ml en
NaCl 0,5 M, fosfato de Na 0,02 M, pH 8,8. Se añadió 0,1 ml de
borato de sodio 0,1 M, pH 9,1, ó HEPES 0,75 M, pH 7,5, por ml de PT.
Se disolvió tipo neumocócico 14 (Pn14) (lote ATTC 83909) a 5 mg/ml
en solución salina 0,15 M con azida al 0,02%. Se disolvió
trietilamina (TEA) en agua para dar 0,2 M. Se disolvió a 100 mg/ml
ó 10 mg/ml CDAP en acetonitrilo (obtenido y almacenado a -20ºC) Se
llevó glicina a 1,0 M, pH 5,0. El amino etanol u otros reactivos
amino pueden sustituir a la glicina/HCl.
Experimento
1
Cada tubo contenía 250 \mug de Pn14 (50
\mul) sobre hielo. En el tiempo cero, se añadieron las diversas
cantidades de CDAP indicadas en la tabla y 30 segundos después se
añadieron 25 \mul de TEA. Dos minutos más tarde se añadió 1 ml de
PT. Al cabo de 1 hora, se añadieron 100 \mul de solución de
glicina.
Las muestras se mantuvieron a 4ºC durante toda la
noche. Al día siguiente, se filtraron con un filtro spin Costar de
0,45 micras y se hicieron pasar por una columna de filtración de
gel TSK de cromatografía HPLC en KCl 0,2 M. El porcentaje de HMW
(forma de alto peso molecula) es el área del pico de conjugado OD280
peso molecular alto frente al pico OD280 que indica la fracción sin
conjugar. Se define como (% área pico de volumen desocupado/(% área
pico de vol. desocupado + % área pico de la fracción sin conjugar).
Los porcentajes de áreas obtenidas en las operaciones de HPLC eran
los siguientes:
| # | \mumoles de CDAP/Pn14 de 100 kDa | % HMW |
| 1 | 1720 | 100,0 |
| 2 | 520 | 52,3 |
| 3 | 172 | 32,8 |
| 4 | 51 | 31,0 |
| 5 | 17 | 28,1 |
| 6 | 0 (PT control) | 22,0 |
| 7 | 0; sin TEA, sin PT, (Pn14 control) | \hskip0,5cm - - |
| 8 | 0; sin TEA, sin Pn14; PT sin borato | 11,3 |
Debido a que el control PT tiene un % de HMW
(alto peso molecular) de 22%, puede haber una pequeña cantidad de
agregación del PT causada por las condiciones de reacción. Este
conjunto de datos indica también que por variación de la relación
CDAP a proteína, es posible controlar la relación de proteína a
hidrato de carbono en el conjugado
final.
final.
Experimento
2
En esta serie, el polisacárido de Pn14 fue
sustituido por 150 \mul de una solución de 10 mg/ml de glucosa,
que es monomérica. Se utilizaron condiciones similares a las del
Experimento 1 excepto en que el PT se introdujo en tampón HEPES (pH
7,5, 0,075 M) en lugar de borato. Se utilizaron además 20 \mul en
lugar de 25 \mul de TEA. Estas condiciones produjeron lo
siguiente:
| # | Condición | % en forma de HMW |
| 1 | PT solamente, sin CDAP ó TEA | <20% |
| 2 | CDAP, TEA (sin glucosa); + PT | -0 |
| 3 | Glucosa, CDAP, TEA; + PT | -0 |
Los números 2 y 3 indican que CDAP no polimeriza
el propio toxoide de tosferina y que, por lo tanto, la conversión
del PT a la forma de alto peso molecular es debida a su copulación
al polisacárido de alto peso molecular y no debida a la
polimerización de la proteína. Es evidente, por la HPLC, que la
glucosa se conjugaba a PT debido a que había un ligero incremento en
el peso molecular de PT.
Experimento
3
Se preparó derivado-P14 con
hexano diamina como sigue. Se añadieron 10 \mul de CDAP (100 mg/ml
en acetonitrilo) (193 moles de CDAP por 100 kDa de polisacárido).
Treinta segundos después se añadieron 20 \mul de TEA (0,2 M).
Pasados un total de 2,5 minutos, se añadieron 300 \mul de hexano
diamina 0,5 M en borato de sodio 0,1 M (pH 9,1). Al cabo de una
hora, la solución se dializó en agua, se filtró, y se desalinificó
en solución salina sobre una columna P6DG (BioRad). Se reunió el
volumen desocupado y se concentró con un dispositivo Centricon 30
(Amicon). Se determinó la existencia de 33 grupos amino por 100 kDa
de polisacárido de Pn14.
El toxoide de tosferina se conjugó a
amino-Pn14 utilizando química de heteroligado
(Brunswick y col.). Se añadieron 50 \mul de tampón HEPES 0,75 M
(pH 7,5) a 0,44 ml del amino-Pn14. Este se
yodoacetiló con 10 \mul de yodoacetil propionato
N-hidroxi succinimida (SIAP). Se trató con tiol el
toxoide de tosferina empleando un exceso 20 veces molar de SATA
(Calbiochem, La Jolla, CA). Se desalinificó cada vez en solución
salina, se mezcló, y se añadió 1/9 del volumen de agente tampón que
contenía HEPES 0,75 M, EDTA 10 mM, e hidroxilamina 0,5 M. El volumen
final era de 1,1 ml. Después de una noche de incubación, se dejó en
solución 0,2 mM en mercaptoetanol durante 1 hora y luego 10 mM en
yodoacetamida durante 10 minutos, después de lo cual se fraccionó
sobre columna de fltración de gel S400SF (Pharmacia) (véase Figura
6). Se reunió el pico de volumen desocupado y se concentró por
filtración a presión sobre membrana PM10 (Amicon). Aproximadamente
se recuperó un 50% del toxoide de tosferina en forma de conjugado.
El conjugado final contenía 0,7 moles de PT por 100 kDa de
polisacárido de Pn14. La concentración de proteína en el conjugado
se determinó por ensayo Bradford (BioRad) utilizando PT como patrón.
Las concentraciones de polisacárido se determinaron por el método de
Monsigny y col. utilizando Pn14 como patrón.
El CTEA presenta la ventaja de tener menos
reacciones secundarias que el CDAP y conduce a productos más puros,
como se ha descrito en Kohn y col. Anal. Biochem. 115:375
(1981). Su desventaja es que es sensible a la humedad, debe pesarse
en un recipiente cerrado, y no se puede preparar fácilmente como una
solución de reserva.
Se mantiene a 0ºC 1 ml de polisacárido 14 tipo
pneumocócico (Pn 14) (5 mg/ml en solución salina). Se almacena CTEA
(comercializada por Aldrich Chemical, Milwaukee, WI) bajo nitrógeno
seco. Se pesan 2 mg de CTEA en una vasija cerrada de pesada y se
añade al Pn14 enfriado, mezclado vigorosamente. Se añaden
inmediatamente 20 \mul de TEA (0,2 M en agua) mientras se continúa
mezclando. Sesenta segundos después, se añaden 5 mg de toxoide de
tosferina (1,5 mg/ml) a la solución agitada. Media hora más tarde,
se apaga la reacción con 200 \mul de glicina 1 M (pH 5,0).
Después de una hora adicional, se filtra la solución y se pasa por
columna de filtración de gel S400SF, equilibrada con solución
salina. Se recoge el pico de volumen desocupado y se filtra
estérilmente. Se produce un conju-
gado 1:1.
gado 1:1.
Se mantiene 1 ml de Pn14 (5 mg/ml en solución
salina) a 0ºC. Se almacena CTEA (comercializada por Aldrich
Chemical, Milwaukee, WI) bajo nitrógeno seco. Se pesa 1 mg CTEA en
una vasija de pesada cerrada y se añade al Pn14 enfriado y mezclado
vigorosamente. Se añaden inmediatamente 20 \mul a TEA (0,2 M en
agua) mientras se mezcla. Sesenta segundos más tarde, se añaden,
mientras se mezcla, 300 \mul de hexano diamina 0,5 M en borato 0,1
M (pH 9). Al cabo de 1 hora, la solución se dializa exhaustivamente
en solución salina y se filtra en condiciones estériles. Dado que se
utiliza una relación de 187 moles de CTEA por 100 kDa de Pn14, se
produce un conjugado con aproximadamente 18 aminas por 100 kDa de
Pn14.
Se obtuvo PRP, peso molecular (MW) medio 350 kDa,
obtenido del Massachusetts Public Health Biological Laboratory. El
toxoide de tosferina era de la misma fuente. Se añadieron 15 \mul
de CDAP (100 mg/ml) a 100 \mul (2 mg) de PRP sobre hielo. Treinta
segundos más tarde, se añadieron 30 \mul de TEA. Esto representaba
319 moles de CDAP por 100 kDa de PRP. Después de otros dos minutos,
se añadieron 0,75 ml de toxoide de tosferina (1,1 mg). Cuarenta
minutos más tarde, se añadieron 200 \mul de glicina 1 M (pH 5,0)
para apagar la reacción. Después de 1 hora adicional, la solución
se hizo pasar sobre columna de filtración de gel S400SF equilibrada
con solución salina (véase Figura 7). El volumen desocupado se
reunió y se filtró en condiciones estériles. El producto se
determinó como 1,1 PT por 100 kDa de PRP con un rendimiento global
de 68%.
La vacuna preparada por Chu y col. , Inf. &
Imm. , 40:245 (1983) utilizó 377 moles de bromuro de cianógeno por
100 kDa de PRP y tenia relaciones de 1,4 a 2,1 PT por 100 kDa de PRP
con rendimientos de menos del 50%. Según esto, el método de
conjugación directa de la invención producía un conjugado similar
pero con menos trabajo, mayores rendimientos y sin empleo de
reactivos tóxicos.
Dado que muchos protocolos publicados para
preparar conjugados de PRP comienzan por formar el derivado de PRP
con un espaciador (Chu y col., Schneerson y col. J. Exp.
Med., 152:361 (1980); Dick & Beurret, "Glicoconjugados de
Antígenos de Hidratos de Carbono Bacterianos", Conjugate
Vaccines, J.M. Cruse & R.E. Lewis (eds.), Vol. 10, páginas
48-114 (1989), se utilizó también CDAP para añadir
un espaciador a PRP.
Las condiciones utilizadas fueron como las
descritas antes pero se añadieron 100 \mul de hexano diamina 0,1 M
en borato 0,1 M en lugar de toxoide de tosferina. El producto se
dializó en solución salina. Se determinó la existencia de 102
grupos amino por 100 kDa de PRP. Dado que esta es una relación más
alta que la utilizada en los procedimientos publicados, se podría
haber utilizado incluso menos CDAP.
Brevemente, el péptido derivado de malaria P28,
CNIGKPNVQDDQNK, de la proteína específica de gametos pfs25, se
conjugó a toxoide de tétanos (TT). Se ha demostrado que el P28
induce anticuerpos que bloquean la transmisión de malaria. Se
utilizó entonces CDAP para copular p28-TT a
polisacárido tipo neumocócico 14 (Pn14).
El toxoide de tétanos aprobado por la FDA se
dializó durante toda la noche en tampón HEPES y se hizo reaccionar
con un exceso molar de 30 veces del agente yodoacetilante (SIAP). Al
cabo de 3 horas, se eliminaron los reactivos por ultrafiltración
utilizando un Macrosep 30 (Filtron Technology) y se lavó en agente
tampón HEPES fresco, 0,15 M, pH 7,5. Se añadió P28 marcado con
tritio como sólido al TT derivado mientras se mezclaba suavemente.
Después de reacción durante toda la noche a 4ºC, la mezcla se trató
con mercaptoetanol 0,2 mM para bloquear cualquier grupo activo
remanente y luego se desalinificó sobre columna P6DG equilibrada con
agente tampón HEPES. A partir de la actividad específica del
péptido, se determinó que el producto contenía 20 moles de péptidos
de P28/mol de TT. El conjugado se dializó en solución salina y se
filtró en condiciones estériles.
El Pn14 (obtenido de American Tissue Type
Collection) tiene un alto peso molecular (c.a. 10^{6} daltons). El
P28-TT se conjugó directamente a Pn14 como sigue. Se
añadió CDAP (10 \mul de una solución de reserva de 100 mg/ml en
acetonitrilo) a Pn14 (1,1 mg en 150 \mul de solución salina).
Treinta segundos después, se añadieron 20 ml de trietilamina (0,2
M). Dos minutos más tarde, se añadieron 0,55 mg (en 0,8 ml de
solución salina) de P28-TT y una hora más tarde, la
reacción se apagó durante otra hora con 200 \mul de glicina 1,0 M
(pH 5). Se hizo pasar entonces el conjugado sobre una columna de
filtración de gel S400 SF equilibrada con solución salina y se
reunió el volumen desocupado que contenía el conjugado.
La Figura 9 indica que virtualmente todo el
P28-TT se encontraba en el volumen vacío en la forma
de conjugado.
Se inmunizaron grupos de 5 de ratones DBA/2 por
inyección intravenosa de 10 \mug de conjugado
P28-TT ó
(P28-TT)-Pn14, en solución salina,
se sangraron tres semanas después y los sueros se ensayaron por
ELISA en cuanto a reactividad frente a proteína pfs25 recombinante.
El péptido p28 es derivado de pfs25. Otra serie de ratones se
inmunizó con los mismos antígenos precipitados con el auxiliar,
alumbre (Imject, Pierce Chemical Co., Rockford, IL).
La Tabla 7, de manera consistente con las
aplicaciones asociadas, muestra que solamente el conjugado de alto
peso molecular provoca buenas concentraciones de
anti-proteína.
| Antígeno | i.v. (solución salina) | s. c. (alumbre) |
| (P28-TT)-Pn14 | 36 | 346 |
| P28-TT | <10 | <10 |
Esto demuestra que el método de CDAP se puede
utilizar para preparar constructos de vacuna útiles. Ilustra también
la facilidad con la que pueden prepararse conjugados útiles.
Para demostrar que los conjugados preparados
utilizando CDAP para copular directamente proteínas a polisacáridos
podían producir un producto multivalente (que como se indica en las
aplicaciones asociadas ha potenciado la inmunogenicidad) y que el
proceso podía ser lo bastante suave para conservar la actividad
biológica, se prepararon varios conjugados de un anticuerpo
monoclonal con dextrano. Estos experimentos utilizaron anticuerpo
monoclonal H\deltaª/1 con un anticuerpo anti-IgD
que reticula la IgD de membrana sobre linfocitos B e induce
proliferación (Brunswick y col., Journal of Immunol., 140:3364
(1988)). Como describen Brunswick y col., la conjugación de copias
múltiples de H\deltaª/1 a un polímero de alto peso molecular tal
como dextrano de 2000 kDa (H\deltaª/1-dextrano
AECM) inducía proliferación de células B a concentraciones
inferiores a 1000 veces e inducía niveles más altos de
proliferación que H\deltaª/1 sin conjugar. En el trabajo de
Brunswick y col. se requería un procedimiento directo, simple, pero
de múltiples etapas y de varios días para preparar el conjugado. Se
preparaba primero aminoetil carboximetil dextrano
(AECM-dextrano) como han descrito Brunswick y col. y
después se utilizaba la química de heteroligado para copular el
H\deltaª/1 al hidrato de carbono.
El H\deltaª/1-dextrano se
preparó tanto por conjugación directa utilizando CDAP como por
conjugación indirecta utilizando un espaciador y CDAP como
sigue.
Conjugación directa: A una solución agitada con
varilla de 3,2 mg de dextrano T2000 (Pharmacia) en 0,3 ml de
solución salina, se añadieron 15 \mul de CDAP (a partir de un
material de reserva de 100 mg/ml en acetonitrilo). Treinta segundo
más tarde, se añadieron 15 \mul de TEA 0,2 M mientras se agitaba
con varilla. Después de 2 minutos adicionales, se añadieron 6 mg de
H\deltaª/1 (en 362 \mul de borato de sodio 0,05 M y NaCl 0,075
M) mientras se agitaba con varilla suavemente. Al cabo de 15
minutos, se apagó la mezcla de reacción por adición de 100 \mul
de glicina 1,0 M, pH 5,0, y se hizo pasar por columna de filtración
de gel S400SF (1 x 59 cm) equilibrada con solución salina. La
elución de la columna se muestra en la Figura 9. Se reunió el pico
del volumen desocupado y se esterilizó con un filtro Millex GV. El
producto se designa como
H\deltaª/1-(CDAP)-dextrano. Este procedimiento
llevó aproximadamente 3
horas.
horas.
Espaciador: Se activó dextrano con CDAP como
antes (31,5 mg de dextrano T2000 en 3 ml de solución salina y 25
\mul de CDAP seguido de 25 \mul de TEA, 1 mol de CDAP/0,6 moles
de monómeros glucosa). Se añadieron 3 ml de
1,6-diaminohexano 0,5 M en borato de sodio 0,1 M. La
solución se dializó exhaustivamente en agua y después se fraccionó
sobre columna de filtración de gel S400HR. El volumen desocupado se
reunió y concentró. Se determinó que este
amino-dextrano tenía 147 grupos amino por 2000 kDa
de dextrano. El producto se designa como
NH_{2}-(CDAP)-dextrano. Incluyendo diálisis, este
procedimiento llevó dos días. A diferencia de ésto, en la
preparación de dextrano-AECM se tardaba una semana
utilizando el método de Brunswick y col.
Se conjugó H\deltaª/1 a
dextrano-AECM y
NH_{2}-(CDAP)-dextrano utilizando las técnicas de
heteroligado descritas en Brunswick y col. Los conjugados se
designan como
H\deltaª/1-dextrano-AECM y
H\deltaª/1-NH_{2}-(CDAP)-dextrano,
respectivamente. La conjugación utilizando
dextrano-AECM era un proceso de dos días.
Se hicieron ensayos de proliferación de células B
utilizando 10.000 células/pocillo como describen Brunswick y col. La
Tabla 8 proporciona los resultados de estos ensayos, indicando
específicamente la incorporación de timidina tritiada a células B
como conteos por minuto/pocillo.
| Concentración de H\deltaª/1 (\mug/ml) | |||
| Mitógeno | 1 | 0,1 | 0,01 |
| H\deltaª/1-dextrano-AECM | 16.045 | 25.774 | 25.850 |
| (preparación 1) | |||
| H\deltaª/1-dextrano-AECM | 21.685 | 29.280 | 34.969 |
| (preparación 2) | |||
| H\deltaª/1-(CDAP)-dextrano | 16.497 | 23.654 | 19.779 |
| H\deltaª/1-NH_{2}-(CDAP)-dextrano | 19.353 | 28.343 | 25.879 |
| Medio (control) | 760 | 725 | 760 |
Lo que no se muestra: Como señalan Brunswick y
col., H\deltaª/1 en solitario no da lugar a incorporación a estas
concentraciones. La incorporación máxima, a 10-100
\mug/ml de H\deltaª/1 es aproximadamente 3000 cpm.
Estos datos indican que los conjugados preparados
utilizando CDAP, con o sin espaciador, son esencialmente
equivalentes a
H\deltaª/1-dextrano-AECM en
cuanto a sus capacidades para inducir proliferación. Ya que
solamente el anticuerpo multivalente induce altos niveles de
proliferación a dosis bajas, todos los conjugados deben ser
multivalentes. Según esto, la conjugación directa con CDAP no
afecta la actividad biológica del anticuerpo. El procedimiento de
conjugación directa era marcadamente más rápido de preparar que los
conjugados preparados con un espaciador. Además, la adición de
espaciador y conjugación utilizando CDAP era mucho más rápida que la
preparación de dextrano AECM.
Este experimento, por lo tanto, ilustra (1) el
alto rendimiento de un constructo multivalente utilizando CDAP y
(2) la facilidad y rapidez de la preparación de conjugados,
especialmente conjugados directos. La conjugación utilizando CDAP y
un reactivo bifuncional lleva un tiempo por debajo de 48 horas y la
conjugación directa lleva menos de tres horas.
A los especialistas en esta técnica les quedará
claro que se pueden hacer varias modificaciones y variaciones en los
métodos de la presente invención para la construcción de constructos
inmunogénicos sin separarse del marco o espíritu de la
invención.
Otros modos de realización de la invención
quedaran de manifiesto para los especialistas a partir de la
consideración de la memoria descriptiva y la práctica de la
invención aquí descrita. Ha de entenderse que la memoria
descriptiva y los ejemplos se consideran únicamente ilustrativos,
estando indicado el verdadero marco y espíritu de la invención por
las siguientes reivindicaciones.
Claims (6)
1. Método de preparación de una vacuna que
comprende un constructo inmunogénico y un vehículo farmacéuticamente
aceptable, que comprende la producción del constructo inmunogénico
por un procedimiento que consiste en:
(a) activación de al menos una primera fracción
que contiene hidrato de carbono con un reactivo orgánico de
cianilación, donde el citado reactivo orgánico de cianilación se
selecciona entre tetrafluoroborato de
1-ciano-4-(dimetilami-
no)-piridinio (CDAP) y tetrafluoroborato de N-cianotrietilamonio (CTEA); y
no)-piridinio (CDAP) y tetrafluoroborato de N-cianotrietilamonio (CTEA); y
b) unión covalente de la citada fracción activada
que contiene hidrato de carbono a una segunda fracción.
2. Método de preparación de una vacuna que
comprende un constructo inmunogénico y un vehículo farmacéuticamente
aceptable, que comprende la producción del constructo inmunogénico
por un procedimiento que consiste en:
(a) activación de al menos una primera fracción
que contiene hidrato de carbono con un reactivo orgánico de
cianilación, donde el citado reactivo orgánico de cianilación se
selecciona entre tetrafluoroborato de
1-ciano-4-(dimetilami-
no)piridinio (CDAP) y tetrafluoroborato de N-cianotrietilamonio (CTEA):
no)piridinio (CDAP) y tetrafluoroborato de N-cianotrietilamonio (CTEA):
b) unión covalente de la citada primera fracción
a un reactivo espaciador bifuncional; y
c) unión covalente de una segunda fracción al
reactivo espaciador bifuncional de la etapa (b).
3. El método según la reivindicación 1 o la
reivindicación 2, donde el constructo inmunogénico es un constructo
de vehículo dual.
4. El método según la reivindicación 2, donde el
citado reactivo bifuncional se selecciona del grupo consistente en
etilen diamina, 1,6-hexano diamina, dihidrazida
adípica, cistamina, glicina y lisina.
5. El método según la reivindicación 1 o la
reivindicación 2, donde la primera fracción se selecciona del grupo
que consiste en dextrano, polisacárido pneumocócico, polisacárido de
Haemophylus influenza, un polisacárido viral, y un
polisacárido bacteriano.
6. El método según la reivindicación 1 o la
reivindicación 2, donde la segunda fracción se selecciona del grupo
que consiste en BSA, toxoide de tosferina (PT), toxoide de tétanos
(TT), péptido derivado de malaria P28 (P28), un anticuerpo, un
toxoide, y una toxina.
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|---|---|---|---|
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| ES94929273T Expired - Lifetime ES2210262T3 (es) | 1993-09-22 | 1994-09-21 | Procedimiento que permite activar un glucido soluble con la ayuda de nuevos reactivos cianilantes para producir estructuras inmunogenas. |
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Families Citing this family (173)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1262896B (it) * | 1992-03-06 | 1996-07-22 | Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini. | |
| JP3828145B2 (ja) * | 1993-09-22 | 2006-10-04 | ヘンリー エム．ジャクソン ファウンデイション フォー ザ アドバンスメント オブ ミリタリー メディスン | 免疫原性構成物の製造のための新規シアン化試薬を使った可溶性炭水化物の活性化方法 |
| US5849301A (en) * | 1993-09-22 | 1998-12-15 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Producing immunogenic constructs using soluable carbohydrates activated via organic cyanylating reagents |
| NZ304715A (en) * | 1995-03-22 | 1999-07-29 | Jackson H M Found Military Med | Production of immunogenic constructs using organic cyanylating reagents to activate carbohydrates and then coupling the carbohydrate to a protein, peptide or hapten |
| JPH11508225A (ja) * | 1995-04-17 | 1999-07-21 | ヘンリー エム．ジャクソン ファンデーション フォー ザ アドバンスメント オブ ミリタリー メディシン | 細菌のリポ蛋白質を用いた多糖類に対する免疫応答の誘導および増強 |
| US20030157129A1 (en) * | 1995-06-23 | 2003-08-21 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Vaccine comprising a polysaccharide antigen - carrier protein conjugate and free carrier protein |
| WO1997036614A1 (en) * | 1996-03-29 | 1997-10-09 | Terman David S | Polymerized staphylococcal protein a for treatment of diseases |
| US6309646B1 (en) | 1996-05-09 | 2001-10-30 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Protein-polysaccharide conjugate vaccines and other immunological reagents prepared using homobifunctional and heterobifunctional vinylsulfones, and processes for preparing the conjugates |
| NZ333562A (en) | 1996-06-25 | 2001-04-27 | Stichting Inst Voor Dierhouder | Vaccine comprising antigens bound by thioester or disulphide bonds to fatty acid carriers such palmitic acid, antigens bound in reversible and labile way |
| US6248334B1 (en) | 1997-01-08 | 2001-06-19 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Process for preparing conjugate vaccines including free protein and the conjugate vaccines, immunogens, and immunogenic reagents produced by this process |
| US6299881B1 (en) | 1997-03-24 | 2001-10-09 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts |
| ATE278418T1 (de) * | 1997-04-24 | 2004-10-15 | Jackson H M Found Military Med | Kopplung unmodifizierter proteinen an haloacyl- oder dihaloacyl-derivatisierten polysacchariden zur herstellung von protein-polysaccharide impfstoffen |
| US5929049A (en) * | 1997-08-08 | 1999-07-27 | Dade Behring Marburg Gmbh | Polysaccharide conjugates of biomolecules |
| EP1053021B1 (en) * | 1998-02-05 | 2009-01-21 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Simplified method for removing free protein during preparation of protein-polysaccharide conjugates and vaccines using restricted-access media |
| AU3005499A (en) * | 1998-03-16 | 1999-10-11 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Induction and enhancement of the immune response to type-2 cell-independent antigens conjugated to lipid or lipid-containing moieties |
| EP1069909B1 (en) * | 1998-04-10 | 2007-06-13 | Andrew Lees | Conjugate vaccines for the prevention of dental caries |
| GB9808932D0 (en) * | 1998-04-27 | 1998-06-24 | Chiron Spa | Polyepitope carrier protein |
| JP5138844B2 (ja) | 1998-06-12 | 2013-02-06 | ザ・ヘンリー・エム・ジャクソン・ファンデイション・フォー・ジ・アドヴァンスメント・オヴ・ミリタリー・メディシン、インコーポレイテッド | 抗原およびＥＢＶＧｐ３５０／２２０の受容体の同時刺激によるＢ細胞活性化および免疫グロブリン分泌の増強 |
| AU767047B2 (en) * | 1998-07-20 | 2003-10-30 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Vaccines against (escherichia coli) O157 infection |
| US6858211B1 (en) * | 1998-07-20 | 2005-02-22 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vaccines against Escherichia coli O157 infection |
| US6585973B1 (en) | 1998-10-29 | 2003-07-01 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Method for preparing solid phase conjugated vaccine |
| US6797275B1 (en) * | 1998-12-04 | 2004-09-28 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method of immunizing humans against Salmonella typhi using a Vi-rEPA conjugate vaccine |
| GB9909077D0 (en) | 1999-04-20 | 1999-06-16 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compositions |
| HU228499B1 (en) | 1999-03-19 | 2013-03-28 | Smithkline Beecham Biolog | Streptococcus vaccine |
| GB0108364D0 (en) | 2001-04-03 | 2001-05-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine composition |
| AP1695A (en) | 2000-06-29 | 2006-12-17 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Multivalent vaccine composition. |
| GB0022742D0 (en) | 2000-09-15 | 2000-11-01 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| US7534442B2 (en) * | 2001-08-21 | 2009-05-19 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Immunogenic compositions comprising covalently bound polysaccharides, antigen, and bacterial toxoid |
| WO2004011027A1 (en) * | 2002-07-30 | 2004-02-05 | Baxter International Inc. | Chimeric multivalent polysaccharide conjugate vaccines |
| CA2501812C (en) | 2002-10-11 | 2012-07-10 | Mariagrazia Pizza | Polypeptide-vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages |
| GB0227346D0 (en) | 2002-11-22 | 2002-12-31 | Chiron Spa | 741 |
| ES2411080T3 (es) | 2003-01-30 | 2013-07-04 | Novartis Ag | Vacunas inyectables contra múltiples serogrupos de meningococos |
| CN1787839B (zh) | 2003-03-07 | 2011-09-28 | 惠氏控股公司 | 用于抗医院内感染的免疫的多糖-葡萄球菌表面粘附素载体蛋白缀合物 |
| GB0323103D0 (en) | 2003-10-02 | 2003-11-05 | Chiron Srl | De-acetylated saccharides |
| RU2378010C2 (ru) | 2003-10-02 | 2010-01-10 | Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс С.Р.Л. | Жидкие вакцины для множественных серогрупп менингококков |
| JP2007519746A (ja) * | 2004-01-29 | 2007-07-19 | バイオシネクサス インコーポレーティッド | ワクチン調製におけるアミノ−オキシ官能基の使用 |
| GB0409745D0 (en) | 2004-04-30 | 2004-06-09 | Chiron Srl | Compositions including unconjugated carrier proteins |
| BRPI0510315A (pt) | 2004-04-30 | 2007-10-16 | Chiron Srl | integração de vacinação com conjugado meningocócico |
| GB0500787D0 (en) | 2005-01-14 | 2005-02-23 | Chiron Srl | Integration of meningococcal conjugate vaccination |
| US7456000B2 (en) * | 2004-08-26 | 2008-11-25 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Deactivation of linking moieties in antibody-enzyme conjugates |
| EP2305294B1 (en) | 2004-09-22 | 2015-04-01 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Immunogenic composition for use in vaccination against staphylococcei |
| GB0505518D0 (en) | 2005-03-17 | 2005-04-27 | Chiron Srl | Combination vaccines with whole cell pertussis antigen |
| EP2425855A1 (en) | 2005-04-08 | 2012-03-07 | Wyeth LLC | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| PT2351578T (pt) | 2005-06-27 | 2017-04-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Processo para o fabrico de vacinas |
| GB0524066D0 (en) | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
| TWI457133B (zh) | 2005-12-13 | 2014-10-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 新穎組合物 |
| LT3017827T (lt) | 2005-12-22 | 2019-01-10 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Pneumokokinė polisacharidinė konjuguota vakcina |
| GB0607088D0 (en) | 2006-04-07 | 2006-05-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| KR101711903B1 (ko) | 2006-03-17 | 2017-03-03 | 더 거버먼트 오브 더 유나이티드 스테이츠 오브 아메리카 에즈 레프리젠티드 바이 더 세크러테리 오브 더 디파트먼트 오브 헬스 앤드 휴먼 서비시즈 | 복합 다가 면역원성 콘쥬게이트의 제조 방법 |
| SI2004225T1 (sl) | 2006-03-22 | 2012-08-31 | Novartis Ag | Reĺ˝imi za imunizacijo z meningokoknimi konjugati |
| KR101541383B1 (ko) | 2006-03-30 | 2015-08-03 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 면역원성 조성물 |
| MX2009002560A (es) | 2006-09-07 | 2009-03-20 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna. |
| US9481912B2 (en) | 2006-09-12 | 2016-11-01 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences in biological samples |
| US8080645B2 (en) | 2007-10-01 | 2011-12-20 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Biological specimen collection/transport compositions and methods |
| US8097419B2 (en) | 2006-09-12 | 2012-01-17 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Compositions and method for rapid, real-time detection of influenza A virus (H1N1) swine 2009 |
| GB0700136D0 (en) | 2007-01-04 | 2007-02-14 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Process for manufacturing vaccines |
| EA201490303A1 (ru) | 2007-05-02 | 2014-05-30 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Вакцина |
| KR20100045445A (ko) | 2007-06-26 | 2010-05-03 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 스트렙토코쿠스 뉴모니애 캡슐 다당류 컨쥬게이트를 포함하는 백신 |
| GB0713880D0 (en) | 2007-07-17 | 2007-08-29 | Novartis Ag | Conjugate purification |
| US11041215B2 (en) | 2007-08-24 | 2021-06-22 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | PCR ready compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences |
| EP2772267B1 (en) | 2007-08-27 | 2016-04-27 | Longhorn Vaccines and Diagnostics, LLC | Immunogenic compositions and methods |
| US10004799B2 (en) | 2007-08-27 | 2018-06-26 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Composite antigenic sequences and vaccines |
| GB0818453D0 (en) | 2008-10-08 | 2008-11-12 | Novartis Ag | Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom |
| EP2245048B1 (en) | 2008-02-21 | 2014-12-31 | Novartis AG | Meningococcal fhbp polypeptides |
| AU2009302582A1 (en) | 2008-10-06 | 2010-04-15 | University Of Chicago | Compositions and methods related to bacterial Eap, Emp, and/or AdsA proteins |
| GB0822633D0 (en) | 2008-12-11 | 2009-01-21 | Novartis Ag | Formulation |
| GB0822634D0 (en) | 2008-12-11 | 2009-01-21 | Novartis Ag | Meningitis vaccines |
| KR101773368B1 (ko) | 2009-04-03 | 2017-08-31 | 유니버시티 오브 시카고 | 단백질 Ａ(ＳｐＡ) 변이체와 관련된 조성물 및 방법 |
| WO2010135714A2 (en) | 2009-05-22 | 2010-11-25 | The Methodist Hospital Research Institute | Methods for modulating adipocyte expression using microrna compositions |
| WO2010141312A2 (en) | 2009-06-01 | 2010-12-09 | Wake Forest University Health Sciences | Flagellin fusion proteins and conjugates comprising pneumococcus antigens and methods of using the same |
| TWI469789B (zh) | 2009-06-22 | 2015-01-21 | Wyeth Llc | 金黃色葡萄球菌抗原之免疫原性組合物 |
| RU2531234C2 (ru) | 2009-06-22 | 2014-10-20 | ВАЙЕТ ЭлЭлСи | КОНЪЮГАТ ПОЛИСАХАРИД-БЕЛОК ДЛЯ ИНДУЦИРОВАНИЯ ИММУННОГО ОТВЕТА И ЗАЩИТЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИИ Staphylococcus aureus, СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЪЮГАТА (ВАРИАНТЫ), КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ КОНЪЮГАТ И СПОСОБЫ ИНДУЦИРОВАНИЯ ИММУННОГО ОТВЕТА И ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ИНФЕКЦИИ Staphylococcus aureus |
| WO2011017101A2 (en) | 2009-07-27 | 2011-02-10 | Fina Biosolutions, Llc | Method for producing protein-carbohydrate vaccines reduced in free carbohydrate |
| GB0913680D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| GB0913681D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| AU2010288240B2 (en) | 2009-08-27 | 2014-03-27 | Novartis Ag | Hybrid polypeptides including meningococcal fHBP sequences |
| WO2011036560A2 (en) | 2009-09-23 | 2011-03-31 | Novartis Ag | Glycoconjugate compositions and methods for treatment of hiv |
| WO2011039631A2 (en) | 2009-09-30 | 2011-04-07 | Novartis Ag | Expression of meningococcal fhbp polypeptides |
| GB0917647D0 (en) | 2009-10-08 | 2009-11-25 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Expression system |
| AU2010310985B2 (en) | 2009-10-27 | 2014-11-06 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Modified meningococcal fHBP polypeptides |
| BR122022002136B1 (pt) | 2009-12-17 | 2022-08-23 | Fina Biosolutions, Llc | Processo de conjugação de carboidratos na preparação de vacinas conjugadas e suas respectivas vacinas |
| GB201003924D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| GB201003922D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Conjugation process |
| JP2013523818A (ja) | 2010-04-05 | 2013-06-17 | ザ・ユニバーシティー・オブ・シカゴ | 免疫反応のエンハンサーとしてのプロテインＡ（ＳｐＡ）抗体に関連する組成物および方法 |
| US8383783B2 (en) | 2010-04-23 | 2013-02-26 | Serum Institute Of India, Ltd. | Simple method for simultaneous removal of multiple impurities from culture supernatants to ultralow levels |
| CN103037885B (zh) | 2010-07-02 | 2015-08-26 | 芝加哥大学 | 与蛋白A(SpA)变体相关的组合物和方法 |
| JP5793194B2 (ja) | 2010-09-09 | 2015-10-14 | ザ・ユニバーシティ・オブ・シカゴＴｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｃｈｉｃａｇｏ | 感染防御ブドウ球菌抗原が関与する方法および組成物 |
| GB201106225D0 (en) | 2011-04-13 | 2011-05-25 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Fermentation process |
| US8945588B2 (en) | 2011-05-06 | 2015-02-03 | The University Of Chicago | Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens, such as EBH polypeptides |
| CA2854934A1 (en) | 2011-11-07 | 2013-05-16 | Novartis Ag | Carrier molecule comprising a spr0096 and a spr2021 antigen |
| GB201121301D0 (en) | 2011-12-12 | 2012-01-25 | Novartis Ag | Method |
| SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
| EP2844275B1 (en) | 2012-04-26 | 2020-05-13 | University of Chicago | Staphylococcal coagulase antigens and methods of their use |
| EP3620172A1 (en) | 2012-10-12 | 2020-03-11 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Non-cross-linked acellular pertussis antigens for use in combination vaccines |
| EP2938363B1 (en) | 2012-12-27 | 2019-08-21 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Methods and compositions relating to crm197 |
| US8916173B2 (en) | 2013-03-08 | 2014-12-23 | Crucell Holland B.V. | Acellular pertussis vaccine |
| GB201310008D0 (en) | 2013-06-05 | 2013-07-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition for use in therapy |
| EP3041502A2 (en) | 2013-09-08 | 2016-07-13 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| WO2015052684A2 (en) * | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Msd Wellcome Trust Hilleman Laboratories Pvt. Ltd. | Polysaccharide-protein conjugates with enhanced immunogenicity and rapid high yielding process thereof |
| US11708411B2 (en) | 2013-12-20 | 2023-07-25 | Wake Forest University Health Sciences | Methods and compositions for increasing protective antibody levels induced by pneumococcal polysaccharide vaccines |
| EP3096785B1 (en) | 2014-01-21 | 2020-09-09 | Pfizer Inc | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| US11160855B2 (en) | 2014-01-21 | 2021-11-02 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| EP3583947B1 (en) | 2014-01-21 | 2023-10-11 | Pfizer Inc. | Streptococcus pneumoniae capsular polysaccharides and conjugates thereof |
| US10093704B2 (en) | 2014-01-31 | 2018-10-09 | Fina Biosolutions, Llc | Expression and purification of CRM197 and related proteins |
| CA2940447C (en) | 2014-02-28 | 2023-07-11 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modified meningococcal fhbp polypeptides |
| EP2921856B1 (en) | 2014-03-18 | 2016-09-14 | Serum Institute Of India Private Limited | A quantitative assay for 4-pyrrolidinopyridine (4-ppy) in polysaccharide-protein conjugate vaccines |
| US9107906B1 (en) | 2014-10-28 | 2015-08-18 | Adma Biologics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency |
| BE1023004A1 (fr) | 2014-12-10 | 2016-10-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Procede de traitement |
| EP3034516A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-22 | Novartis AG | Purification of streptococcal capsular polysaccharide |
| DK3244917T5 (da) | 2015-01-15 | 2024-10-14 | Pfizer Inc | Immunogene sammensætninger til anvendelse i pneumokokvacciner |
| JP2018511655A (ja) | 2015-03-20 | 2018-04-26 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | ボルデテラ属に対するワクチン接種における使用のための免疫原性組成物 |
| IL297740A (en) | 2015-05-04 | 2022-12-01 | Pfizer | Protein-polysaccharide conjugates of group b streptococcus, methods for preparing the conjugates, immunogenic preparations containing conjugates and their uses |
| PL3313436T3 (pl) | 2015-06-23 | 2021-06-14 | Biological E Limited | Wielowartościowa skoniugowana szczepionka przeciw pneumokokom |
| PE20180657A1 (es) | 2015-07-21 | 2018-04-17 | Pfizer | Composiciones inmunogenas que comprenden antigenos de sacarido capsular conjugados, kits que las comprenden y sus usos |
| GB201518684D0 (en) | 2015-10-21 | 2015-12-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| CA3005524C (en) | 2015-11-20 | 2023-10-10 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines |
| GB201610599D0 (en) | 2016-06-17 | 2016-08-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic Composition |
| EP3269385A1 (en) | 2016-07-12 | 2018-01-17 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| US11191822B2 (en) | 2016-06-22 | 2021-12-07 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| EA039427B1 (ru) | 2016-08-05 | 2022-01-26 | Санофи Пастер Инк. | Поливалентная пневмококковая полисахаридно-белковая конъюгатная композиция |
| SG11201900794PA (en) | 2016-08-05 | 2019-02-27 | Sanofi Pasteur Inc | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| US12109259B2 (en) | 2016-09-02 | 2024-10-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccines for Neisseria gonorrhoeae |
| WO2018048141A1 (ko) * | 2016-09-06 | 2018-03-15 | 주식회사 엘지화학 | 다가 협막 다당류-운반 단백질을 포함하는 조성물 및 이의 용도 |
| CA3037056A1 (en) | 2016-09-30 | 2018-04-05 | Biological E Limited | Multivalent pneumococcal vaccine compositions comprising polysaccharide-protein conjugates |
| US10751402B2 (en) | 2016-11-09 | 2020-08-25 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions and uses thereof |
| WO2018104889A1 (en) | 2016-12-06 | 2018-06-14 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Purification process for capsular polysaccharide |
| SI3570879T1 (sl) | 2017-01-20 | 2022-06-30 | Pfizer Inc. | Imunogenska kompozicija za uporabo v pnevmokoknih cepivih |
| KR102650073B1 (ko) | 2017-01-31 | 2024-03-20 | 머크 샤프 앤드 돔 엘엘씨 | 스트렙토코커스 뉴모니아 혈청형 19f 유래의 협막 다당류 단백질 접합체의 제조 방법 |
| IL267733B2 (en) | 2017-01-31 | 2023-10-01 | Pfizer | NEISSERIA MENINGITIDIS preparations and methods therefor |
| US10259865B2 (en) | 2017-03-15 | 2019-04-16 | Adma Biologics, Inc. | Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection |
| DK3678654T3 (da) | 2017-09-07 | 2024-09-02 | Merck Sharp & Dohme Llc | Pneumokokpolysaccharider og anvendelse deraf i immunogene polysaccharid-bærerprotein-konjugater |
| TWI725359B (zh) | 2017-12-06 | 2021-04-21 | 美商默沙東藥廠 | 包含肺炎鏈球菌多醣-蛋白結合物之組合物及其使用方法 |
| GB201721576D0 (en) | 2017-12-21 | 2018-02-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hla antigens and glycoconjugates thereof |
| GB201721582D0 (en) | 2017-12-21 | 2018-02-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | S aureus antigens and immunogenic compositions |
| WO2020016322A1 (en) | 2018-07-19 | 2020-01-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Processes for preparing dried polysaccharides |
| EP3607967A1 (en) | 2018-08-09 | 2020-02-12 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Modified meningococcal fhbp polypeptides |
| KR20210062669A (ko) | 2018-09-23 | 2021-05-31 | 바이오로지칼 이 리미티드 | 스트렙토코쿠스 뉴모니아에의 정제된 협막 다당류 |
| CA3120926A1 (en) | 2018-10-12 | 2020-04-16 | Biological E Limited | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine |
| JP2022512345A (ja) | 2018-12-12 | 2022-02-03 | ファイザー・インク | 免疫原性多重ヘテロ抗原多糖－タンパク質コンジュゲートおよびその使用 |
| EP3894431A2 (en) | 2018-12-12 | 2021-10-20 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Modified carrier proteins for o-linked glycosylation |
| JOP20210148A1 (ar) | 2018-12-19 | 2023-01-30 | Merck Sharp & Dohme | تركيبات تشتمل على متقارنات بولي سكاريد-بروتين للمكورات العقدية الرئوية وطرق استخدامها |
| EP3923982A1 (en) | 2019-02-11 | 2021-12-22 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidiscompositions and methods thereof |
| JP7239509B6 (ja) | 2019-02-22 | 2023-03-28 | ファイザー・インク | 細菌多糖類を精製するための方法 |
| US20220184199A1 (en) | 2019-04-10 | 2022-06-16 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof |
| CN113966234A (zh) | 2019-05-10 | 2022-01-21 | 葛兰素史克生物有限公司 | 缀合物的产生 |
| EP3757217A1 (en) | 2019-06-27 | 2020-12-30 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Methods for protein purification |
| MX2022001241A (es) | 2019-07-31 | 2022-04-20 | Sanofi Pasteur Inc | Composiciones de conjugados neumococicos multivalentes polisacarido - proteina y metodos para usar los mismos. |
| EP3777884A1 (en) | 2019-08-15 | 2021-02-17 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
| EP4034157A1 (en) | 2019-09-27 | 2022-08-03 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| EP3799884A1 (en) | 2019-10-01 | 2021-04-07 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Immunogenic compositions |
| CN114728051A (zh) | 2019-11-22 | 2022-07-08 | 葛兰素史克生物有限公司 | 细菌糖糖缀合物疫苗的剂量和施用 |
| WO2021165847A1 (en) | 2020-02-21 | 2021-08-26 | Pfizer Inc. | Purification of saccharides |
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| DE3540076A1 (de) * | 1985-11-12 | 1987-05-14 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur stabilisierung von creatinkinase |
| DE3541186A1 (de) * | 1985-11-21 | 1987-05-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | Wasserloesliche, stabilisierte peroxidasederivate, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung zur bestimmung von wasserstoffperoxid |
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| NZ249704A (en) * | 1992-02-11 | 1996-11-26 | Jackson H M Found Military Med | A two carrier immunogenic construct comprising a 70+ kd molecule conjugated to at least 1 t-dependent antigen, preparation, compositions containing the construct |
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