WO2020138614A1 - 다수 개의 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 임신진단키트 - Google Patents

다수 개의 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 임신진단키트 Download PDF

Info

Publication number
WO2020138614A1
WO2020138614A1 PCT/KR2019/008465 KR2019008465W WO2020138614A1 WO 2020138614 A1 WO2020138614 A1 WO 2020138614A1 KR 2019008465 W KR2019008465 W KR 2019008465W WO 2020138614 A1 WO2020138614 A1 WO 2020138614A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
hcg
pregnancy
sample
test line
conjugate
Prior art date
Application number
PCT/KR2019/008465
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
임국진
김태형
박동석
최동섭
김미정
박영우
Original Assignee
(주)프로테옴텍
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)프로테옴텍 filed Critical (주)프로테옴텍
Priority to CN201980086858.5A priority Critical patent/CN113227791B/zh
Priority to US17/419,260 priority patent/US20220146509A1/en
Priority to EP19902777.2A priority patent/EP3904878B1/en
Publication of WO2020138614A1 publication Critical patent/WO2020138614A1/ko

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
    • G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
    • G01N33/54389—Immunochromatographic test strips based on lateral flow with bidirectional or multidirectional lateral flow, e.g. wherein the sample flows from a single, common sample application point into multiple strips, lanes or zones
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5302—Apparatus specially adapted for immunological test procedures
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
    • G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/36—Gynecology or obstetrics

Definitions

  • the present invention relates to a pregnancy diagnostic kit for more accurately diagnosing pregnancy by measuring human chorionic gonadotropin (hCG) as well as variants thereof in pregnancy diagnosis.
  • hCG human chorionic gonadotropin
  • the immunochromatographic assay is a method capable of quantitatively and quantitatively analyzing a small amount of analyte in a short time using an antigen-antibody reaction.
  • Pregnancy diagnostic kits which are widely used in homes and hospitals, use this immunochromatographic assay.
  • it is used as a target material to detect human chorionic gonadotropin (hCG), which increases in urine and serum during pregnancy.
  • hCG human chorionic gonadotropin
  • the antibody binding to hCG is immobilized in line form on the membrane pad (inspection line), and the other antibody is bound to a labeling material such as gold particles and the like and fixed to the conjugate pad, and then the sample is developed.
  • the unfolded sample is developed by forming a complex of hCG-anti-hCG antibody-gold particles in the sample while passing through the conjugate pad, and the complex is captured by an anti-hCG antibody immobilized on a test line and is a'antibody immobilized- Anti-hCG antibody-gold particles' conjugates are formed.
  • This is called the "sandwich reaction".
  • the test line appears red by gold particles and is judged to be pregnant.
  • the control line always captures the gold particle antibody regardless of the concentration of hCG in the sample, and the red color appears by the gold particle, so the normal termination of the test can be confirmed.
  • the resulting analysis strip can be detected with the naked eye or using a sensor.
  • Human chorionic gonadotropin is a 36.5 kD glycoprotein, composed of two subunits, alpha ( ⁇ ) and beta ( ⁇ ), ovarian luteinization, ovulation, and testicular epilepsy It functions similarly to luteinizing hormone (LH), such as promoting androgen secretion in cells.
  • LH luteinizing hormone
  • hCG is produced and secreted by the placental trophoblast cells when a woman becomes pregnant and is present in the mother's blood, urine and amniotic fluid.
  • hCG is produced in the placenta and is excreted through the blood into the urine.
  • various decomposition products and variants are generated, and there is a difference in hCG form in the placenta, blood, and urine.
  • the alpha subunit has two N-nicked oligosaccharaide side chains, and the beta subunit distinguishes hCG from other glycol proteins in a unique form with 145 amino acid linkages on six legs.
  • the placenta Depending on the change of the amino chain, the placenta exhibits the form of large free ⁇ , non-nicked free ⁇ , and regular free ⁇ in the blood and nicked ⁇ .
  • the form of free ⁇ ) is added, and in the urine in particular, the form of hCG ⁇ core fragment (hCG ⁇ cf) also exists (Korean Journal of Emergency Medicine: 2011, Vol. 22, No. 5, 503-507).
  • hCG ⁇ core fragment In urine before 5 weeks of pregnancy, there are relatively few hCG ⁇ core fragments (hCG ⁇ core fragment; hCG ⁇ cf), but in urine after 6 weeks of pregnancy, there is more hCG ⁇ cf than normal hCG (intact hCG; I-hCG), Especially after 8 weeks, it is 3 times or more than normal hCG. This high concentration of hCG ⁇ cf can interfere with the measurement of normal hCG and cause false negatives in pregnancy diagnosis ( J. Emergency Medicine 2013, 44:155 ).
  • the present inventors continuously researched on a method of manufacturing a pregnancy diagnostic kit capable of accurately determining whether or not to be pregnant without being affected by hCG ⁇ cf, which is present in a high concentration in urine.
  • a pregnancy diagnostic kit capable of accurately determining whether or not to be pregnant without being affected by hCG ⁇ cf, which is present in a high concentration in urine.
  • pregnancy with multiple test lines of the present invention When the diagnostic chromatography strip was used, the present invention was completed by confirming that it was possible to accurately determine whether a hCG variant was present even in a high concentration.
  • an object of the present invention is to provide a chromatographic strip for accurate pregnancy diagnosis by excluding interference of hCG variants present in a high concentration in urine.
  • Another object of the present invention is to provide a pregnancy diagnostic kit comprising the strip for chromatography.
  • Another object of the present invention is to provide a method for diagnosing pregnancy using the chromatographic strip or the diagnostic kit.
  • the present invention provides a chromatographic strip for pregnancy diagnosis having a conjugate pad and a detection pad.
  • the conjugate pad includes a first anti-hCG (human chorionic gonadotropin) monoclonal antibody and a signal detection marker, and the detection pad is isolated from the test line 1 and the test line 2 Equipped, the test line 1 includes a second anti-hCG monoclonal antibody, and the test line 2 includes a human chorionic gonadotropin (hCG).
  • hCG human chorionic gonadotropin
  • the "first anti-hCG monoclonal antibody” can be used in combination with the “first anti-hCG antibody” and recognizes the site of the beta-core fragment (hCG ⁇ -core fragment; hCG ⁇ cf) of human chorionic gonadotropin. Means an antibody that can. Therefore, the first anti-hCG monoclonal antibody of the present invention can specifically bind to hCG variants including hCG ⁇ cf as well as normal hCG.
  • the "second anti-hCG monoclonal antibody” may be used in combination with the "second anti-hCG antibody”, and refers to an antibody capable of specifically binding by recognizing other portions of hCG other than the hCG ⁇ cf region. Therefore, the second anti-hCG monoclonal antibody of the present invention can specifically bind to normal hCG and not to hCG ⁇ cf.
  • the other part of the hCG may be a part of the normal hCG ⁇ subunit.
  • the first anti-hCG monoclonal antibody is linked to each other before and during the development of the signal detection marker and the sample to form a first conjugate, hCG in the sample or a variant thereof If is present to form a complex with hCG or a variant thereof bound to the first conjugate, the number of complexes formed increases as the concentration of hCG or a variant thereof in the sample increases, and conversely, a bear that is not associated with hCG in the sample ( bare) The number of conjugates is reduced.
  • the complex in which the normal hCG is bound to the first conjugate is captured by the test line 1 to indicate a signal, and the complex in which the variant is bound to the first conjugate is not captured by the test line 1, and is not bound to the hCG or the variant in the sample.
  • the unconjugated bare conjugate can be captured on the inspection line 2 to generate a signal by reacting with hCG fixed in a certain amount on the inspection line 2.
  • conjugate (conjugate) of the present invention refers to a conjugate formed by connecting the labeling material and the ligand to each other, wherein the conjugate is a first conjugate in which a marker for signal detection and a first anti-hCG antibody are connected to each other It includes.
  • the labeling material and the first anti-hCG antibody may be physically or chemically linked. That is, the labeling material and the first anti-hCG antibody can be linked by passive adsorption, and the labeling material can be modified to have a reactive group to be covalently linked to the first anti-hCG antibody.
  • the linking of the labeling material and the first anti-hCG antibody may be performed using methods known to those skilled in the art.
  • the labeling material and the first anti-hCG antibody may be present in the conjugate pad by being connected in the form of a conjugate before developing the sample on the chromatography strip for pregnancy diagnosis, or present in the conjugate pad in a separated state without being connected to each other. Meanwhile, as the specimens develop, they may be connected to each other to form a conjugate, or may exist as a solution and be added to the conjugate pad before use. In either case, during sample development, the labeling material and the first anti-hCG antibody can move to the detection pad in the state of the conjugate, because they are not fixed to the conjugate pad.
  • labeling material means a material that generates a signal that can be detected using the naked eye or a sensor.
  • the labeling material gold colloid (gold particles), latex particles, colored polystyrene microparticles, enzymes, fluorescent dyes, conductive polymers, light emitting materials, or magnetic particles may be used, but are not limited thereto.
  • the signal may be generated by itself due to the inherent characteristics of the labeling material, such as light emission, or may be caused by an external stimulus such as fluorescence.
  • the conjugate pad may further include a substance and a signal detection label that can be used as an internal control.
  • the internal control material and the labeling material are connected to each other before or during sample development to form a second conjugate, and the second conjugate is captured by a ligand of the control line, thereby confirming the development of the sample.
  • control line used in the present invention means a portion that emits a constant signal regardless of the concentration of hCG in the sample or the sample.
  • the control line may be formed using a method similar to the inspection line and the heterogeneous inspection line. However, the control line does not bind to hCG, and moves along the detection pad by the mobile phase together with the sample, as a second conjugate, a substance capable of specific or non-specific binding and capture with a separate substance bound to gold particles It can be formed by fixing.
  • a substance immobilized on the control line may be referred to as a ligand. As a result, it is formed by fixing a ligand capable of emitting a constant signal regardless of the presence or absence of chorionic gonadotropin in the sample.
  • control line anti-rabbit IgG, anti-chicken IgY, streptavidin, bovine serum albumin, and the like can be used.
  • the control line may be formed in two or more by varying the concentration of the ligand to be fixed. The higher the concentration of the ligand immobilized on the control line, the more the control line can emit a strong signal.
  • the position of the test line and the position of the control line may be appropriately selected depending on the antigen-antibody reaction used, and the like, but is not limited thereto.
  • a test line 1 that detects only normal hCG and a variant thereof simultaneously It has a feature that it is possible to carry out the judgment on pregnancy more reliably by having two test lines consisting of two.
  • the first conjugate present in the conjugate pad moves to a liquid sample (eg, urine of a woman of childbearing potential) and a detection pad, and binds to the ⁇ -core fragment position of hCG in the sample when deployed to hCG-agent. 1 to form an anti-hCG antibody-gold particle complex.
  • the complex is captured by a second anti-hCG antibody fixed to test line 1 during development (sandwich immune reaction), and the first anti-hCG antibody-gold particle conjugate that is not bound to hCG in the sample is During development, it is captured on test line 2 (competitive immune reaction).
  • the amount of the first anti-hCG antibody-gold particle conjugate present in the conjugate pad is determined and used in a specific amount, as the concentration of hCG in the sample increases, the anti-hCG antibody-gold particle conjugate and sample present in the conjugate pad
  • the number of complexes formed when hCG is bound increases, and on the contrary, the number of bare conjugates not bound to chorionic gonadotropin decreases, which may show an inversely proportional relationship.
  • the normal hCG ⁇ subunit can be measured by the sandwich immunization method
  • the hCG and its derivatives can be simultaneously measured by the competitive immunization method.
  • the signal intensity of the test line increases as the concentration of hCG in the sample increases, but when it increases above a certain concentration, the signal intensity decreases.
  • the signal intensity from the inspection line 2 where the bare conjugate is captured shows a decreasing pattern as the concentration of hCG increases. In particular, it decreases due to the influence of hCG ⁇ cf concentration, which increases significantly after 6 weeks of pregnancy.
  • analysis of hCG is possible through signals from the markers on the inspection line 1 and inspection line 2. More specifically, when the concentration of hCG ⁇ cf is low, it cannot affect the sandwich immunoassay of test line 1, so it is possible to accurately diagnose whether pregnancy is by measuring hCG with only test line 1.
  • test line 1 shows color development, it can be judged to be pregnant.
  • test line 1 and the test line 2 can be combined to accurately diagnose pregnancy. That is, even if the test line 1 does not show color development, if the test line 2 is not visible or the intensity is below the control line, it can be judged as positive for pregnancy and diagnose the pregnancy more accurately.
  • the configuration of the chromatographic strip for pregnancy diagnosis of the present invention will be described in more detail.
  • the chromatographic strip for pregnancy diagnosis includes: a sample pad into which a sample to check whether a target substance is included is introduced; A conjugate pad having one end connected to the sample pad; A detection pad having one end connected to the other end of the conjugate pad; A hygroscopic pad having one end connected to the other end of the detection pad and providing a driving force for transporting the sample from the sample pad; And it may include a solid support located under the chromatography strip for pregnancy diagnosis.
  • the configuration diagrams for the chromatographic strip for pregnancy diagnosis of the present invention are shown in [FIG. 1] and [FIG. 2].
  • the solid support may be formed of a material selected from the group consisting of nitrocellulose, nylon, fivdf (PVDF), glass and plastic.
  • PVDF fivdf
  • plastic material a polypropylene film, a polyester film, a polycarbonate film, an acrylic film, etc. may be used, but is not limited thereto.
  • the present invention is a kit in which the chromatographic strip for pregnancy diagnosis is additionally fixed in the case, the lower case is provided with a guide and a strip support, the upper case has a sample inlet; And it provides a diagnostic kit that is equipped with a result confirmation window at a position corresponding to a number of test lines and control lines.
  • the chromatographic strip for pregnancy diagnosis may additionally be fixed in a case.
  • the inside of the lower case may be provided with a plurality of guides and/or strip supports for positioning and fixing or compressing the chromatographic strip for pregnancy diagnosis in an appropriate position.
  • the guide and the strip support may be provided in the upper case at positions corresponding to the guide and strip support provided in the lower case. That is, the guide and/or strip support may be formed in the lower case, or in both the upper case and the lower case, if necessary.
  • the upper case may be provided with a result confirmation window for detecting a signal from the labeling substance at a position corresponding to the sample input port, the inspection line, and the control line.
  • the sample inlet is formed at the end of the detection pad, that is, at the opposite end of the moisture absorption pad based on the inspection line, and at the same time, at a point sufficiently spaced from the inspection line to allow the sample to develop along the membrane, in the form of holes or slits.
  • the result confirmation window may include a plurality of inspection lines and control lines on the detection pad, and may be formed to a size large enough to be discernable from the outside through the naked eye or a sensor. As long as the plurality of inspection lines and control lines can be identified, the size and shape may be formed without limitation.
  • the upper and lower cases may be manufactured using a conventional plastic material, for example, polycarbonate, acrylonitrile butadiene styrene (ABS), and the like may be used, but is not limited thereto.
  • the upper and lower cases may be separately manufactured and provided with engaging grooves, engaging projections, or the like, and combined with conventional means, and in some cases, may be integrally manufactured.
  • the analysis kit of the present invention may further include a buffer solution.
  • the buffer not only acts as a mobile phase for moving the sample along the chromatographic strip for pregnancy diagnosis, but also can act as a solvent for dissolving the conjugate, and can also serve as a diluent for diluting the sample if necessary.
  • a component for dissolving (lysis) blood cell components such as red blood cells may be further included.
  • a conventional buffer such as a phosphate buffered solution (PBS) having a concentration of 10 mM to 1 M, a nonionic or amphoteric surfactant, or a mixture thereof can be used without limitation, and desired reactions such as antigen-antibody reaction Depending on the type of composition, the composition and use ratio of the buffer may be appropriately selected.
  • PBS phosphate buffered solution
  • the present invention is a method for diagnosing pregnancy using the chromatographic strip for pregnancy diagnosis, comprising: developing a sample by introducing it into the conjugate pad or a previously positioned pad; And it provides a method for diagnosing whether the pregnancy is performed, including; checking the presence or absence of the signal of the marker from a plurality of test lines and control lines.
  • a liquid sample may be introduced into the conjugate pad or a pad positioned before it. That is, the liquid sample may be introduced directly into the conjugate pad, and the sample may be introduced into the strip, but preferably, before the conjugate pad, for example, introduced into the sample pad.
  • the sample can be uniformly mixed by adding a buffer solution such as PBS, and introduced into the strip in the same manner.
  • the sample when the sample is loaded (introduced) onto the chromatographic strip for pregnancy diagnosis, development starts, and then, through the control line, it can be confirmed whether the sample is well developed. If the sample is well developed, check for the presence or absence of the signal of the labeling material from several test and control lines. If it falls under 1), it can be diagnosed as non-pregnant, and falls under 2) to 4), which can be diagnosed as pregnancy.
  • test line 1 If test line 1, test line 2, and control lines are all present, this indicates that hCG or a variant thereof is included in the sample, and can be diagnosed as a pregnancy.
  • test line 1 and control line appear, it indicates that hCG is included in the sample, and can be diagnosed as pregnancy.
  • control line If only the control line appears, it indicates that hCG or its variants are contained in a high concentration in the sample, and can be diagnosed as pregnancy.
  • sample for analysis of the present invention not only a general aqueous solution, but also all living organisms such as whole blood, blood cells, blood cells, serum, plasma, bone marrow, sweat, urine, tears, saliva, skin, mucous membranes, and hair separated from humans, preferably humans. It may include a sample, preferably urine.
  • the present invention configures the monoclonal antibody for detecting normal hCG and its variants present in the urine of pregnant women to be paired with each other, thereby overcoming the problem of false negative due to the hCG variant, making it more accurate and convenient for pregnant women with the naked eye. Can be done.
  • the concentration measurement range of hCG or its variants is improved by using a chromatographic strip for pregnancy diagnosis composed of a plurality of test lines and control lines.
  • FIG. 1 is a schematic view showing a cross section of an immunochromatography strip used in a conventional pregnancy diagnostic kit.
  • Figure 2 is a schematic diagram showing an immunochromatography strip for pregnancy diagnosis with a number of test lines used in the pregnancy diagnostic kit of the present invention.
  • FIG. 3 is a schematic diagram of an immunochromatography strip for diagnosis of pregnancy according to an embodiment of the present invention.
  • test line 1 Three analysis lines were dispensed on a nitrocellulose membrane.
  • the nitrocellulose film was laminated to a plastic card using a laminator. Thereafter, as the second anti-human chorionic stimulating hormone antibody of test line 1, monoclonal anti-human chorionic stimulating hormone antibody (monoclonal anti-hCG 5014, Medix, Finland) was used, and test line 2 was human chorionic Gonadotropin (hCG) is used as a ligand for the control line, and anti-mouse immunoglobulin antibody (anti mouse antibody from goat, arista, USA) is used. Dry at 2° C. for 2 days (48 hours).
  • hCG human chorionic Gonadotropin
  • the pads were pre-treated by thoroughly moistening the pads with Tris buffer (10 mM, pH 8.5) containing 0.5% PVA (polyvinylalcohol) and drying in a dryer.
  • Tris buffer (10 mM, pH 8.5
  • PVA polyvinylalcohol
  • Colloidal gold particles with a diameter of about 40 nm are combined with a first anti- chorionic gonadotropin antibody as a complex clone anti-human chorionic gonadotropin antibody (monoclonal anti-hCG 5006, Medix, Finland).
  • the prepared first conjugate solution was prepared, and a second conjugate solution in which colloidal gold particles having a diameter of about 40 nm and murine immunoglobulins (mouse IgG, Arista, USA) were combined was prepared.
  • the first conjugate solution and the second conjugate solution were dispensed on a pre-treated conjugate pad, dried completely, and then cut to an appropriate size to prepare.
  • sample pad was sufficiently wetted in a 0.08 M borate buffer containing 1% Triton X-100, 0.5% NaN3, and 0.1% BSA, dried completely in a dryer, and then cut to an appropriate size to prepare.
  • the moisture-absorbing pad was used as it was without drying and dried completely in a dryer, and it was prepared by cutting it to an appropriate size.
  • the detection pad, the conjugate pad, the sample pad and the moisture absorption pad prepared through each of the above processes were assembled as shown in FIG. 4.
  • the sample pad is attached so as to overlap with one end of the conjugate pad
  • one end of the detection pad is attached so as to overlap with the other end of the conjugate pad
  • the other end of the detection pad and one end of the moisture absorption pad overlap each other. Attached as much as possible. This was cut to about 4 ⁇ 2.0 mm using a cutter to prepare a strip as shown in FIG. 4.
  • the human hCG standard was spiked into non-pregnant urine to prepare a standard sample of chorionic gonadotropin and subjected to quantitative and qualitative tests.
  • the prepared standard sample solution was dispensed 100 ⁇ l into the sample inlet of the case and then developed for 5 minutes.
  • the sample solution was prepared to have normal human chorionic gonadotropin concentrations of 0, 12.5, 25, 200, 5000, 50000, 500000, 1000000, and 2000000 mIU/ml, respectively.
  • Figure 4 is a view showing the development of the immunochromatography strip for pregnancy diagnosis according to the concentration of normal human chorionic gonadotropin (hCG). Furthermore, the intensity of signals appearing on the control line, the inspection line 1 and the inspection line 2 was visually confirmed, and the intensity of the control line was set to ++, and the intensity of generation of the inspection line after the reaction was shown in [Table 1] below.
  • hCG normal human chorionic gonadotropin
  • a sample solution is prepared by spiked with a ⁇ -core fragment and a normal hCG standard in non-pregnant urine 100 It was developed for 5 minutes after each aliquot. Sample solution was prepared as shown in [Table 2] below.
  • FIG. 5 is a diagram showing comparison of analysis results according to concentration in a sample in which both normal hCG and hCGcf are present. Furthermore, the intensity of signals appearing on the control line, the inspection line 1 and the inspection line 2 was visually confirmed, and the intensity of the control line was set to ++, and the intensity of generation of the test line after the reaction was shown in [Table 2] below.
  • the pregnancy diagnosis kit of the present invention further includes a test line, when hCGcf is present, Pregnancy can be diagnosed by referring to the results of the test line 2, and if the test line 1 does not show color, or if the test line 2 is invisible or below the control line, it is judged as positive and diagnoses the pregnancy more accurately. can do.

Abstract

본 발명은 다수 개의 검사선을 구비한 임신진단용 크로마토그래피용 스트립, 상기 크로마토그래피용 스트립을 구비한 임신진단키트 및 이를 사용하여 임신여부를 진단하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 hCG 변이체로 인한 위음성의 문제를 극복함으로써, 육안으로 임신여부를 보다 정확하고 편리하게 수행할 수 있다. 나아가, 다수 개의 검사선과 대조선으로 구성된 임신진단용 크로마토그래피 스트립을 이용하여 hCG 또는 그 변이체의 농도 측정 범위가 개선된 효과가 있다.

Description

다수 개의 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 임신진단키트
본 발명은 임신진단에서 인간 융모성 성선자극호르몬(hCG)뿐 아니라 그 변이체를 함께 측정하여 보다 정확하게 임신을 진단하기 위한 임신진단키트에 관한 것이다.
면역크로마토그래피 분석법은 항원-항체 반응을 이용하여, 미량의 표적물질(analyte)을 단시간에 정성 및 정량적으로 분석할 수 있는 방법이다. 가정 및 병원등에서 널리 이용되는 임신진단키트는 이러한 면역크로마토그래피 분석법을 사용하고 있다. 일반적인 임신진단키트에 사용되는 면역크로마토그래피 스트립의 경우 임신시 소변 및 혈청에서 그 양이 증가하는 인간 융모성 성선 자극호르몬(human chorionic gonadotropin; hCG)을 검출하고자 하는 표적물질로 사용한다. hCG에 결합하는 항체를 맴브레인 패드에 라인형으로 고정시키고(검사선), 또 하나의 항체는 골드입자 등과 같은 표지물질에 결합시키고 접합체 패드에 고정시킨 후, 검체를 전개시킨다. 전개되는 검체는 접합체 패드를 거치면서, 검체 내의 hCG-항 hCG 항체-골드입자의 복합체를 형성하여 전개되고, 상기 복합체는 검사선에 고정된 항-hCG 항체에 포획되어 '검사선 고정된 항체-항 hCG 항체-골드입자'의 결합체가 형성된다. 이를 "샌드위치 (sandwich) 반응"이라 한다. 검체 내에 임신으로 판정할 수 있는 농도로 hCG가 존재할 경우 상기 검사선은 골드입자에 의하여 붉은 색으로 나타나게 되며 임신으로 판정한다. 또한 대조선은 검체 내의 hCG의 농도와 상관없이 항상 골드 입자 항체를 포획하여 골드입자에 의하여 붉은색이 나타나므로 검사의 정상적인 종료를 확인할 수 있다. 결과가 나타난 분석스트립을 육안으로 또는 센서를 이용하여 감지할 수 있다.
인간 융모성 성선 자극호르몬(human chorionic gonadotropin; hCG)은 36.5 kD의 당단백질로, 알파(α)와 베타(β), 두개의 소단위로 구성되어 있으며, 난소의 황체형성, 배란유발, 정소의 간질세포에 있어서의 안드로겐분비 촉진 등, 황체혈성호르몬 (luteinizing hormone, LH)과 유사작용을 한다. hCG는 여성이 임신하게 되면 태반의 영양막세포로부터 생산, 분비되며 모체의 혈액과 소변 그리고 양수에 존재한다. 이밖에도 포상기태나 융모막암종과 같은 영양막질환, 그리고 여러가지 배아세포 종양환자에서도 증가하는 것으로 알려져 있으며, 정상적인 남성과 임신하지 않은 여성의 혈액과 소변에도 매우 소량 존재 한다. hCG는 태반에서 생성되어 혈액을 거쳐 소변으로 배출되게 되는데, 이러한 단계를 거치는 동안 여러 가지 분해 산물과 변이체가 생성되며, 태반과 혈액, 그리고 소변에서 나타나는 hCG 형태에 차이가 있다. 알파 소단위는 두개의 N-틈새올리고당곁가(N-nicked oligosaccharaide side chain)를 가지며, 베타 소단위는 145개의 아미노산 연결이 6개의 다리에 있는 독특한 형태로 hCG를 다른 글리콜 단백질과 구별한다. 이 아미노체인의 변화에 따라 태반에서는 큰 자유 α(large free α), 비틈새 자유 β(non-nicked free β)의 형태를 보이며, 혈액에서는 정규 자유 α(regular free α), 틈새 자유 β(nicked free β)의 형태가 추가되고, 특히 소변에서는 hCG 베타코어절편(hCG β core fragment; hCGβcf)의 형태도 존재하게 된다(대한응급의학회지: 2011, 제 22 권 제5호 503-507).
임신 5주 이전의 소변에는 hCG 베타코어절편(hCG β core fragment; hCGβcf)이 상대적으로 적게 존재하지만, 임신 6주 이후의 소변에는 hCGβcf가 정상 hCG(intact hCG; I-hCG) 보다 많이 존재하며, 특히 8주 후에는 정상 hCG 보다 3배 이상 존재한다. 이러한 높은 농도의 hCGβcf는 정상 hCG의 측정을 방해하여 임신진단에서 위음성의 오류를 유발 시킬 수 있다(J. Emergency Medicine 2013, 44:155).
이에 본 발명자들은 소변에 높은 농도로 존재하는 hCGβcf의 영향을 받지 않고 정확하게 임신여부를 판단할 수 있는 임신진단키트의 제조방법에 관하여 지속적으로 연구 노력한 결과, 본 발명의 다수 개의 검사선을 구비한 임신진단용 크로마토그래피 스트립을 사용하면, hCG 변이체가 고농도로 존재하는 경우에도 정확하게 임신여부를 판단할 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 소변에 높은 농도로 존재하는 hCG 변이체의 간섭을 배제하여 정확성이 높은 임신진단용 크로마토그래피 스트립을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은, 상기 크로마토그래피용 스트립을 포함하는 임신진단키트를 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 크로마토그래피용 스트립 또는 임심진단키트를 사용하여 임신여부를 진단하는 방법을 제공하는 데 있다.
상기 과제를 해결하기 위한 일 양태로서, 본 발명은 접합체 패드 및 검출패드를 구비한 임신진단용 크로마토그래피 스트립을 제공한다.
본 발명의 임신진단용 크로마토그래피 스트립에 있어서, 상기 접합체 패드는 제1 항-hCG(human chorionic gonadotropin) 단일클론항체 및 신호검출 표지물질를 포함하고, 상기 검출패드는 검사선 1 및 검사선 2가 격리되어 구비되어 있고, 상기 검사선 1은 제2 항-hCG 단일클론항체를 포함하고, 상기 검사선 2는 인간 융모성 성선자극 호르몬(human chorionic gonadotropin; hCG)를 포함한다.
상기 "제1 항-hCG 단일클론항체"는 "제1 항-hCG 항체"와 혼용하여 사용할 수 있으며, 인간 융모성 성선자극 호르몬의 베타코어 절편(hCG β-core fragment; hCGβcf) 부위를 인지할 수 있는 항체를 의미한다. 따라서, 본 발명의 제1 항-hCG 단일클론항체는 정상 hCG 뿐 아니라 hCGβcf를 포함하는 hCG 변이체에도 특이적으로 결합할 수 있다.
상기 "제2 항-hCG 단일클론항체"는 "제2 항-hCG 항체"와 혼용하여 사용할 수 있으며, hCGβcf 부위가 아닌 hCG의 다른 부위를 인지하여 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 의미한다. 따라서, 본 발명의 제2 항-hCG 단일클론항체는 정상 hCG에만 특이적으로 결합할 수 있고, hCGβcf에는 결합할 수 없다. 본 발명의 바람직한 일실시예에서, 상기 hCG의 다른 부위는 정상 hCG β subunit 중 일부 부위일 수 있다.
본 발명의 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립에 있어서, 상기 제1 항-hCG 단일클론항체는 신호검출 표지물질과 검체 전개 전 또는 검체 전개 시 서로 연결되어 제1 접합체를 형성하고, 검체 내 hCG 또는 그 변이체가 존재하는 경우 제1 접합체에 hCG 또는 그 변이체가 결합된 복합체를 형성하고, 검체 내 hCG 또는 그 변이체의 농도가 증가할수록 상기 형성된 복합체의 개수는 증가하며, 반대로 검체 내 hCG와 결합되지 않은 베어(bare) 접합체의 개수는 감소하게 된다.
상기 제1 접합체에 정상 hCG가 결합된 복합체는 검사선 1에 포획되어 신호를 나타내고, 제1 접합체에 변이체가 결합된 복합체는 검사선 1에 포획되지 않으며, 상기 검체 내 hCG 또는 그 변이체와 결합되지 않은 베어 접합체는 검사선 2에 일정량으로 고정되어 있는 hCG와 반응함으로써 검사선 2에 포획되어 신호를 생성할 수 있다.
본 발명의 용어 "접합체 (conjugate)"는 상기 표지물질과 상기 리간드가 서로 연결되어 형성된 결합체를 의미하는 것으로, 상기 접합체는 신호검출을 위한 표지물질과 제1 항-hCG 항체가 서로 연결된 제1 접합체를 포함한다. 상기 표지물질과 제1 항-hCG 항체는 물리적 또는 화학적으로 연결시킬 수 있다. 즉, 표지물질과 제1 항-hCG 항체가 수동 흡착 (passive adsorption)에 의해 연결되도록 할 수 있고, 반응성 그룹을 가지도록 표지물질을 개질시켜 제1 항-hCG 항체와 공유결합으로 연결되도록 할 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 상기 표지물질과 제1 항-hCG 항체의 연결은 당업자에 공지된 방법을 이용하여 수행될 수 있다. 단, 상기 표지물질과 제1 항-hCG 항체는 임신진단용 크로마토그래피 스트립에 검체를 전개시키기 전부터 접합체의 형태로 연결되어 접합체 패드에 존재할 수 있고, 또는 서로 연결되지 않고 분리된 상태로 접합체 패드에 존재하다가, 검체가 전개되면서 이들이 서로 연결되어 접합체를 형성할 수 있으며, 또는 용액상으로 존재하여 사용 전 접합체 패드에 첨가하여 사용할 수 있다. 어느 경우이던, 검체 전개 시 표지물질과 제1 항-hCG 항체는 접합체의 상태로 검출패드로 이동할 수 있으며, 이는 이들이 접합체 패드에 고정되어 있는 것이 아니기 때문이다.
본 발명의 용어 "표지물질"은 육안 또는 센서를 이용하여 감지할 수 있는 신호를 발생시키는 물질을 의미한다. 상기 표지물질로는 금콜로이드 (골드 입자), 라텍스 입자, 유색 폴리스티렌 미세입자, 효소, 형광성 염료, 전도성 고분자, 발광 물질 또는 자성입자 등을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한 상기 신호는 발광 등과 같이 표지물질의 내재적 특성에 의해 자체적으로 발생할 수 있는 것이거나, 형광 등과 같이 외부의 자극에 의해 발생하는 것일 수 있다.
본 발명의 임신진단용 크로마토그래피 스트립에 있어서, 상기 접합체 패드는 내부대조군(internal control)으로 이용할 수 있는 물질 및 신호검출 표지물질을 추가로 포함할 수 있다. 상기 내부대조군 물질과 표지물질은 검체 전개 전 또는 검체 전개 시 서로 연결되어 제2 접합체를 형성하고, 상기 제2 접합체는 대조선의 리간드에 의해 포획됨으로써, 검체의 전개를 확인할 수 있다.
본 발명에서 사용하는 용어 "대조선(Control line)"은 검체 또는 검체 중 hCG의 농도와 관계없이 일정한 신호를 내는 부분을 의미한다. 상기 대조선은 상기 검사선 및 상기 이종 검사선과 유사한 방법을 이용하여 형성할 수 있다. 다만, 상기 대조선은 hCG와는 결합하지 않으면서, 검체와 함께 이동상에 의해 검출패드를 따라 이동하는, 제2 접합체로서 골드입자와 결합된 별도의 물질과 특이적 또는 비특이적으로 결합하여 포획할 수 있는 물질을 고정시켜 형성할 수 있다. 상기 대조선에 고정시키는 물질을 리간드라 할 수 있다. 결과적으로, 검체 중의 융모성성선자극호르몬의 존재 유무와 무관하게 일정한 신호를 방출할 수 있는 리간드를 고정시켜 형성되는 것이다. 상기 대조선으로서 항-래빗 IgG, 항-치킨 IgY, 스트렙트아비딘(streptavidin), 소혈청알부민 등이 사용될 수 있다. 상기 대조선은 고정되는 리간드의 농도를 달리하여 두 개 이상으로도 형성될 수 있다. 상기 대조선에 고정된 리간드의 농도가 높을수록, 대조선은 강한 신호를 일정하게 방출할 수 있다.
본 발명의 임신진단용 크로마토그래피 스트립에 있어서, 검사선의 위치 및 대조선의 위치는 사용되는 항원-항체 반응 등에 따라 적절히 선택될 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명은, 검사선 및 검체의 전개를 확인할 수 있는 대조선만 형성된 검출패드를 구비한 종래의 분석스트립을 사용한 임신진단키트와 달리 정상 hCG만을 검출하는 검사선 1 및 그 변이체를 동시에 검출하는 검사선 2로 이루어진 2개의 검사선을 보유함으로서 보다 신뢰성 높게 임신에 대한 판정을 수행할 수 있는 특징이 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 접합체 패드 내에 존재하는 제1 접합체는 액상 검체(가임기 여성의 소변 등)와 검출패드로 이동 전개시 검체 내 hCG의 β-core fragment 위치에 결합하여 hCG-제1 항-hCG 항체-골드입자 복합체를 형성하게 된다. 상기 복합체는 전개되는 중 검사선 1에 고정된 제2 항-hCG 항체에 포획되고 (샌드위치 면역반응, Sandwich immune reaction), 상기 검체 내 hCG와 결합되지 않은 제1 항-hCG 항체-골드입자 접합체는 전개되는 중 검사선 2에 포획된다(경쟁 면역반응, Compatitive immune reaction). 상기 접합체 패드 내에 존재하는 제1 항 hCG 항체-골드입자 접합체의 양은 특정량으로 정하여 사용하므로, 검체 내 hCG의 농도가 증가할수록, 접합체 패드 내에 존재하는 제1항-hCG 항체-골드입자 접합체와 검체 내 hCG가 결합하면서 형성된 복합체의 갯수는 증가하게 되며, 반대로 융모성성선자극호르몬과 결합되지 않은 베어 접합체의 갯수는 감소하게 되는, 반비례적 관계를 보일 수 있다. 검사선 1에서는 샌드위치 면역 방법에 의하여 정상적인 hCG β subunit을 측정 할 수 있으며, 검사선 2에서는 경쟁적 면역 방법으로 hCG와 그 유도체를 동시에 측정할 수 있다.
본 발명의 일실시예에서, 검사선의 신호의 세기는 검체 내의 hCG의 농도가 증가함에 따라 증가하지만, 일정 농도 이상으로 증가하면 오히려 신호의 세기가 감소하는 현상을 보인다. 베어 접합체가 포획되는 검사선 2로부터의 신호 세기는 hCG의 농도가 증가할수록 감소하는 양상을 보이게 된다. 특히 임신 6주 이후에 크게 증가하는 hCGβcf 농도에 영향을 받아 감소하게 된다. 결과적으로 상기 검사선 1 및 검사선 2 상의 표지물질로부터의 신호를 통해 hCG에 대한 분석이 가능하다. 보다 구체적으로, hCGβcf의 농도가 낮은 경우에는 검사선 1의 샌드위치 면역검사에 영향을 미치지 못하여 검사선 1 만으로도 hCG를 측정하여 임신여부를 정확하게 진단할 수 있다. 즉, 검사선 1이 발색을 보이면 임신 양성으로 판단할 수 있다. 그러나 hCGβcf를 다량으로 함유하게 되면, 검사선 1의 면역 검사를 방해할 수 있으므로, 검사선 1과 검사선 2를 종합하여 임신여부를 정확하게 진단할 수 있다. 즉, 검사선 1이 발색을 보이지 않더라도 검사선 2가 보이지 않거나 대조선 이하의 강도로 보일 경우 임신 양성으로 판단하여 보다 정확하게 임신여부를 진단할 수 있다.
본 발명의 임신진단용 크로마토그래피 스트립의 구성에 대하여 보다 구체적으로 설명한다. 상기 임신진단용 크로마토그래피 스트립은, 표적물질 포함여부를 확인하고자 하는 검체가 도입되는 샘플패드; 일 말단이 상기 샘플패드와 연결되는 접합체 패드; 일 말단이 상기 접합체 패드의 다른 일 말단과 연결되는 검출 패드; 일 말단이 상기 검출 패드의 다른 일 말단과 연결되고, 상기 샘플패드로부터 검체 이송을 위한 구동력을 제공하는 흡습패드; 및 상기 임신진단용 크로마토그래피 스트립 하부에 위치하는 고체 지지대를 포함할 수 있다. 본 발명의 임신진단용 크로마토그래피 스트립에 대한 구성도를 [도 1] 및 [도 2]에 나타내었다.
상기 고체 지지대는 니트로셀룰로스, 나일론, 피브이디에프 (PVDF), 유리 및 플라스틱으로 이루어진 군에서 선택된 재료로 형성된 것일 수 있다. 상기 고체 지지대 상에 스트립을 부착하여 제조함으로, 스트립의 내구성을 높일 수 있고, 취급 및 보관을 용이하게 할 수 있다. 또한, 추가적인 외부 케이스 장착을 용이하게 할 수 있다. 상기 고체 지지대로 사용될 수 있는 플라스틱 재질로는 폴리프로필렌 (polypropylene) 필름, 폴리에스테르 (polyester) 필름, 폴리카보네이트 (polycarbonate) 필름, 아크릴 (acrylic) 필름 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
다른 측면에서, 본 발명은 상기 임신진단용 크로마토그래피 스트립이 추가적으로 케이스 내에 고정되는 것인 키트로서, 하부 케이스에는 가이드 및 스트립 지지부가 구비되어 있고, 상부 케이스에는 검체 투입구; 및 여러 개의 검사선 및 대조선에 상응하는 위치에 결과 확인창이 구비된 것인 진단 키트를 제공한다.
상기 임신진단용 크로마토그래피 스트립은 추가적으로 케이스 내에 고정될 수 있다. 하부 케이스의 내부에는 상기 임신진단용 크로마토그래피 스트립을 적절한 위치에 배치시키고 고정 또는 압착시키기 위한 다수 개의 가이드 및/또는 스트립 지지부가 구비될 수 있다. 선택적으로 하부 케이스에 구비된 가이드 및 스트립 지지부에 대응되는 위치에 가이드 및 스트립 지지부가 상부 케이스에도 구비된 것일 수 있다. 즉, 상기 가이드 및/또는 스트립 지지부는 필요에 따라 하부 케이스에 형성되거나, 또는 상부 케이스 및 하부 케이스 모두에 형성될 수 있다. 또한, 상부 케이스에는 검체 투입구 및 검사선, 대조선에 상응하는 위치에 표지물질로부터의 신호를 검출하기 위한 결과 확인창을 구비할 수 있다. 상기 검체 투입구는 검출패드의 일 말단에 즉, 검사선을 기준으로 흡습패드의 반대편 말단이면서, 동시에 검체가 멤브레인을 따라 전개될 수 있도록 검사선과 충분히 이격된 지점에 홀 또는 슬릿 등의 형태로 형성될 수 있다. 상기 결과 확인창은 검출패드 상에 다수 개의 검사선 및 대조선까지 포함하여 외부로부터 육안 또는 센서를 통해 식별 가능하기에 충분한 크기로 형성될 수 있다. 상기 다수 개의 검사선 및 대조선을 확인할 수 있는 한 그 크기 및 모양은 제한없이 형성될 수 있다.
상기 상부 및 하부 케이스는 통상의 플라스틱 소재를 이용하여 제조될 수 있으며, 예를 들어 폴리카보네이트, 아크릴로니트릴부타디엔스티렌 (acrylonitrile butadiene styrene; ABS) 등의 소재가 이용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 상부 및 하부 케이스는 별도로 제작하여 결합 홈, 결합 돌기 등을 구비하여 통상의 수단으로 결합될 수 있고, 경우에 따라서는 일체형으로 제조될 수 있다.
상기한 바와 같이 크로마토그래피는 매질을 따라 표적물질을 포함하는 이동상이 이동하는 크로마토그래피의 원리를 이용한다. 따라서, 임신진단용 크로마토그래피 스트립을 이용한 분석을 위해서는 표적물질을 포함하는 검체를 스트립을 따라 이동시키기 위한 이동상을 필요로 한다. 이에 따라, 본 발명의 분석용 키트는 완충액을 추가로 포함할 수 있다. 상기 완충액은 임신진단용 크로마토그래피 스트립을 따라 검체를 이동시키는 이동상 (mobile phase)으로서 작용할 뿐만 아니라, 접합체를 용해시키는 용매로 작용할 수 있으며, 필요에 따라서는 검체를 희석시키기 위한 희석액으로서의 역할도 겸할 수 있다. 또한, 예를 들어 전혈 분석을 하는 경우, 적혈구 등의 혈구성분을 용해 (lysis)시키기 위한 성분을 추가로 포함할 수 있다. 상기 완충액으로는 10 mM 내지 1 M 농도의 인산염 완충액 (phosphate buffered solution; PBS), 비이온성 또는 양쪽성 계면활성제 또는 이들의 혼합물 등 통상의 완충액을 제한없이 사용할 수 있으며, 항원-항체 반응 등 원하는 반응의 종류에 따라 완충액의 조성 및 사용 비율은 적절히 선택될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 임신진단용 크로마토그래피 스트립을 사용하여 임신여부를 진단하는 방법으로서, 검체를 상기 접합체 패드 또는 그 이전에 위치한 패드에 투입하여 전개시키는 단계; 및 다수 개의 검사선과 대조선으로부터 표지물질의 신호 유무를 확인하는 단계;를 포함하여 수행되는 임신여부를 진단하는 방법을 제공한다.
구체적인 분석 방법을 수행함에 있어서, 하기의 순서로 진행할 수 있다. 먼저, 액상 검체를 상기 접합체 패드 또는 그 이전에 위치한 패드에 투입할 수 있다. 즉, 액상 검체는 바로 접합체 패드에 투입하여 검체가 스트립에 도입될 수 있지만, 바람직하기로 접합체 패드 이전, 예를 들어 샘플패드에 투입하여 도입될 수 있다. 또한 상기 검체는 PBS와 같은 완충액을 가하여 균일하게 혼합하고, 이를 동일한 방법으로 스트립에 도입시킬 수 있다.
상기와 같이 검체가 임신진단용 크로마토그래피 스트립에 로딩(도입)되면 전개가 시작되고, 그 후 대조선을 통해 검체의 전개가 잘 이루어졌는지 확인할 수 있다. 검체의 전개가 잘 이루어 졌다면, 여러 개의 검사선과 대조선으로부터 표지물질의 신호 유무를 확인한다. 하기 1)에 해당되면, 비임신으로 진단하고, 하기 2) 내지 4)에 해당되면 임신으로 진단할 수 있다.
1) 대조선과 검사선 2가 나타났다면, 이는 hCG 또는 그 변이체가 검체 내에 포함되어 있지 않음을 나타내며, 비임신으로 진단될 수 있다.
2) 검사선 1, 검사선 2 및 대조선이 모두 나타났다면, 이는 hCG 또는 그 변이체가 검체 내에 포함되어 있음을 나타내며, 임신으로 진단될 수 있다.
3) 검사선 1 및 대조선이 나타났다면, hCG가 검체 내에 포함되어 있음을 나타내며, 임신으로 진단될 수 있다.
4) 대조선만 나타났다면, hCG 또는 그 변이체가 검체 내에 고농도로 포함되어 있음을 나타내며, 임신으로 진단될 수 있다.
본 발명의 분석을 위한 검체로는 일반 수용액뿐만 아니라 포유류, 바람직하게는 인간으로부터 분리된 전혈, 혈구, 혈청, 혈장, 골수액, 땀, 오줌, 눈물, 침, 피부, 점막, 모발 등의 모든 생체시료를 포함할 수 있고, 바람직하게는 소변일 수 있다.
본 발명은 임산부의 소변 중에 존재하는 정상 hCG와 그 변이체를 각각 감지하기 위한 단일클론항체를 서로 짝이 되도록 구성하여, hCG 변이체로 인한 위음성의 문제를 극복함으로써, 육안으로 임신여부를 보다 정확하고 편리하게 수행할 수 있다.
나아가, 다수 개의 검사선과 대조선으로 구성된 임신진단용 크로마토그래피 스트립을 이용하여 hCG 또는 그 변이체의 농도 측정 범위가 개선된 효과가 있다.
도 1은 통상적인 임신진단키트에 사용되는 면역 크로마토그래피 스트립의 단면을 나타낸 개요도이다.
도 2는 본 발명의 임신진단키트에 사용되는 다수 개의 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립을 나타낸 개요도이다.
도 3는 본 발명의 일 실시예에 따른 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립의 모식도이다.
도 4는 다양한 농도의 hCG 표준용액을 본 발명의 임신진단키트를 사용하여 분석한 결과이다.
도 5는 다양한 농도의 hCG 및 hCGβcf가 존재하는 검체 용액을 본 발명의 임신진단키트를 사용하여 분석한 결과이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1]
면역크로마토그래피 스트립의 제조
1-1. 검사선, 이종 검사선 및 대조선이 형성된 검출패드의 제작
3개의 분석선을 니트로셀룰로오스막(nitrocellulose membrane)에 분주하였다. 라미네이터기(laminator)를 이용하여 니트로셀룰로오스막을 플라스틱카드에 라미네이션(lamination)하였다. 그 후, 검사선 1의 제2 항-인간융모성성선자극호르몬 항체로서 단일클론 항-인간융모성성선자극호르몬 항체 (monoclonal anti-hCG 5014, Medix, Finland)를, 검사선 2에는 인간융모성성선자극호르몬(hCG)을, 대조선의 리간드로는 산양 항 쥐이뮤노글로불린 항체(anti mouse antibody from goat, arista, USA)를 이용하여, 이들 각각을 자동분주기를 이용하여 분주한 후, 25~30℃에서 2일 (48시간) 동안 건조시켰다.
1-2. 접합체 패드(conjugate pad)의 제작
0.5% PVA (polyvinylalcohol)가 함유된 트리스완충액(10mM, pH 8.5)으로 패드를 충분히 적셔 건조기에서 완전히 건조시켜 접합체 패드를 전처리하였다.
직경이 약 40nm인 콜로이드성 골드입자(colloidal gold particle)와 제1 항- 융모성성선자극호르몬 항체로서 복합클론 항-인간융모성성선자극호르몬 항체 (monoclonal anti-hCG 5006, Medix, Finland)가 결합된 제1 접합체 용액을 준비하였고, 또한 직경이 약 40nm인 콜로이드성 골드입자와 쥐이뮤노글로불린(mouse IgG, Arista, USA)이 결합된 제2 접합체 용액을 준비하였다. 상기 제1 접합체 용액 및 제2 접합체 용액을 전처리된 접합체 패드에 분주하고, 완전히 건조시킨 후, 이를 적절한 크기로 절단하여 준비하였다.
1-3. 샘플패드(sample pad)의 제작
1% Triton X-100, 0.5% NaN3, 0.1% BSA가 함유된 0.08 M borate 완충액에 샘플패드를 충분히 적시고, 건조기에서 완전히 건조시킨 후, 이를 적절한 크기로 절단하여 준비하였다.
1-4. 흡습패드(absorbance pad)의 제작
흡습패드는 건조기에서 수분을 완전히 건조시킨 상태로 아무런 처리없이 그대로 사용하며, 이를 적절한 크기로 절단하여 준비하였다.
1-5. 면역크로마토그래피 스트립의 제작
위의 각 과정을 통해 준비된 검출패드, 접합체 패드, 샘플패드 및 흡습패드를 도 4에 나타난 구조대로 조립하였다.
즉, 샘플패드를 접합체 패드의 일 말단과 중첩되도록 부착하고, 검출패드의 일 말단을 상기 접합체 패드의 다른 일 말단과 중첩되도록 부착하고, 검출패드의 다른 일 말단과 흡습패드의 일 말단을 서로 중첩되도록 부착하였다. 이를 절단기를 이용하여 4 ± 2.0 mm 정도로 절단하여 도 4와 같은 스트립을 제조하였다.
도 4에 있어서, 각각의 도면 부호가 의미하는 바는 아래와 같다.
1: 샘플패드; 16±4Х4±2 mm
2: 제1 항-hCG 항체와 골드입자의 접합체 패드;
6±1.0Х4±2 mm
3: 니트로셀룰로오스 검출패드; 25±5Х4±2 mm
4: 플라스틱 고체 지지체
5: 흡습패드; 18±4Х4±2 mm
6: 제2 항-hCG 항체가 고정된 검사선 1
7: 항 쥐이뮤노글로불린이 고정된 대조선
8: hCG가 고정된 검사선 2
1-6. 케이스의 조립
제조된 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립을 플라스틱 하부 케이스의 스트립 고정 위치에 넣은 후 검체 투입구와 결과 확인창이 있는 상부 케이스를 끼운 후 압착기로 눌러 조립하였다.
[실험예 1]
hCG 표준용액을 이용한 임신진단용 크로마토그래피 스트립의 평가
비임신 소변에 인간 hCG 표준물질을 스파이킹하여 융모성성선자극호르몬 표준검체를 제조하여 정량 및 정성 시험을 실시하였다. 제조된 표준검체 용액을 케이스의 검체 투입구에 100㎕씩 분주 후 5분 간 전개시켰다. 검체 용액에는 정상적인 인간융모성성선자극호르몬 농도가 각각 0, 12.5, 25, 200, 5000, 50000, 500000, 1000000, 2000000 mIU/ml 가 되도록 준비하였다.
도 4는 정상적인 인간융모성선자극호르몬(hCG)의 농도에 따른 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립의 전개 결과를 나타낸 도면이다. 나아가, 대조선, 검사선 1 및 검사선 2에서 나타나는 신호의 세기를 육안으로 확인하였으며, 대조선 강도를 ++로 기준을 정하고, 반응 후 검사선의 생성 강도를 아래 [표 1]에 나타내었다.
검체 번호 1 2 3 4 5 6 7 8 9
정상 hCG 농도 (mIu/ml) 0 12.5 25 200 5000 50000 500000 1000000 2000000
검사선 1 강도 - +/- + ++ +++ +++ ++ + +/-
검사선 2 강도 +++ +++ +++ +++ + +/- - - -
대조선 강도 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++
[표 1] 및 [도 4]에 나타난 바와 같이, 정상 hCG만 존재 할 때 25 mIU/ml 이상인 경우부터 뚜렷하게 양성 반응을 보였으며 200mIu/ml 인 경우 ++의 높은 강도의 반응을 보였다.
[실험예 2]
hCG 및 hCGcf가 존재하는 검체 용액을 이용한 임신진단용 크로마토그래피 스트립의 평가
다음으로, β-core fragment가 포함된 소변으로 임신진단을 하였을 때 본 발명의 분석방법의 정확성을 확인하기 위하여 비임신 소변에 β-core fragment와 정상 hCG 표준물질을 스파이킹한 검체 용액을 만들어 100㎕씩 분주 후 5분간 전개시켰다. 검체 용액은 아래 [표 2]와 같이 제조하였다.
[도 5]는 정상 hCG 및 hCGcf가 모두 존재하는 검체에서 농도에 따른 분석 결과를 비교하여 나타낸 도면이다. 나아가, 대조선, 검사선 1 및 검사선 2에서 나타나는 신호의 세기를 육안으로 확인하였으며, 대조선 강도를 ++로 기준을 정하고, 반응 후 검사선의 생성 강도를 아래 [표 2]에 나타내었다.
검체 1 2 3 4 5 6
정상 hCG 농도 (mIu/ml) 0 200 0 0 200 200
β-core fragment(pmol/ml) 0 0 30 250 30 125
검사선 1 강도 - ++ - - +/- -
검사선 2 강도 +++ +++ +/- - +/- -
대조선 강도 ++ ++ ++ ++ ++ ++
[표 2] 및 [도 5]에 나타난 바와 같이, hCG만 존재하는 검체 2에서는 상기 실험예 1과 마찬가지로 검사선 1에서 뚜렷하게 양성반응을 보였으나, hCGcf가 존재하는 검체 5 및 검체 6에서는 hCG가 200 mIu/ml 인 경우에도 검사선 1에서 거의 발색을 하지 못하였다. 이로부터, 검사선이 하나만 존재하는 종래 임신진단키트에서는 hCGcf가 존재할 경우 위음성의 소지가 있음을 확인할 수 있다.본 발명의 임신진단키트는 검사선을 추가로 구비하고 있으므로, hCGcf가 존재하는 경우에는 검사선 2의 결과를 참고하여 임신여부를 진단할 수 있으며, 검사선 1이 발색을 보인 경우뿐 아니라, 검사선 2가 보이지 않거나 대조선 이하의 강도로 보일 경우 양성으로 판단하여 보다 정확하게 임신여부를 진단할 수 있다.

Claims (10)

  1. 접합체 패드 및 검출패드를 구비한 임신진단용 크로마토그래피 스트립에 있어서,
    상기 접합체 패드는 제1 항-hCG(human chorionic gonadotropin) 단일클론항체 및 신호검출 표지물질를 포함하고,
    상기 검출패드는 검사선 1 및 검사선 2가 격리되어 구비되어 있고, 상기 검사선 1은 제2 항-hCG 단일클론항체를 포함하고, 상기 검사선 2는 인간 융모성 성선자극 호르몬(human chorionic gonadotropin; hCG)를 포함하는 임신진단용 크로마토그래피 스트립.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 제1 항-hCG 단일클론항체는 인간 융모성 성선자극 호르몬(human chorionic gonadotropin; hCG)의 베타코어 절편(β-core fragment) 부위를 인지하고,
    상기 제2 항-hCG 단일클론항체는 hCG의 베타코어 절편 부위가 아닌 hCG의 다른 부위를 인지하는 것인 임신진단용 크로마토그래피 스트립.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 제1 항-hCG 단일클론항체는 신호검출 표지물질과 검체 전개 전 또는 검체 전개 시 서로 연결되어 제1 접합체를 형성하고,
    검체 내 hCG 또는 그 변이체가 존재하는 경우 제1 접합체에 hCG 또는 그 변이체가 결합된 복합체를 형성하고,
    검체 내 hCG 또는 그 변이체의 농도가 증가할수록 상기 형성된 복합체의 개수는 증가하고, 반대로 검체 내 hCG와 결합되지 않은 베어(bare) 접합체의 개수는 감소하는 것인 임신진단용 크로마토그래피 스트립.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 제1 접합체에 정상 hCG가 결합된 복합체는 검사선 1에 포획되어 신호를 나타내고, 제1 접합체에 변이체가 결합된 복합체는 검사선 1에 포획되지 않으며,
    상기 검체 내 hCG 또는 그 변이체와 결합되지 않은 베어 접합체는 검사선 2에 일정량으로 고정되어 있는 hCG와 반응함으로써 검사선 2에 포획되어 신호를 나타내는 임신진단용 크로마토그래피 스트립.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 변이체는 hCG 베타코어 절편(hCG β core fragment; hCGβcf)을 포함하는 것인 임신진단용 크로마토그래피 스트립.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 표지물질은 금콜로이드(colloidal gold), 라텍스 입자, 유색 폴리스티렌 미세입자, 효소, 형광성 염료, 전도성 고분자, 발광 물질, 또는 자성입자인 것인 임신진단용 크로마토그래피 스트립.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 검출패드는 검체의 전개여부를 확인할 수 있는 대조선을 추가로 포함하는 것인 임신진단용 크로마토그래피 스트립.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 임신진단용 크로마토그래피 스트립을 사용하여 임신 여부를 진단하는 방법으로서,
    검체를 상기 접합체 패드 또는 그 이전에 위치한 패드에 투입하여 전개시키는 단계; 및
    검사선 1, 검사선 2 및 대조선으로부터 표지물질의 신호 유무를 확인하는 단계;를 포함하는 임신 여부를 진단하는 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    비임신의 경우 대조선 및 검사선 2가 나타나고,
    임신일 경우 저농도의 hCG에서는 검사선 1, 검사선 2 및 대조선이 모두 나타나고, 고농도의 hCG에서는 검사선 1 및 대조선이 나타나거나, 대조선만 나타나는 것을 특징으로 하는 임신 여부를 진단하는 방법.
  10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 임신진단용 크로마토그래피 스트립이 추가적으로 케이스 내에 고정되는 것인 임신진단키트로서,
    하부 케이스에는 가이드 및 스트립 지지부가 구비되어 있고,
    상부 케이스에는 검체 투입구; 및
    검사선 또는 대조선에 상응하는 위치에 결과 확인창이 구비된 것인 임신진단키트.
PCT/KR2019/008465 2018-12-28 2019-07-10 다수 개의 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 임신진단키트 WO2020138614A1 (ko)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201980086858.5A CN113227791B (zh) 2018-12-28 2019-07-10 具有多个检查线的妊娠诊断用免疫色谱条及包含其的妊娠诊断试剂盒
US17/419,260 US20220146509A1 (en) 2018-12-28 2019-07-10 Immunochromatography strip for pregnancy diagnosis with multiple test lines, and pregnancy diagnosis kit comprising same
EP19902777.2A EP3904878B1 (en) 2018-12-28 2019-07-10 Immunochromatography strip for pregnancy diagnosis with multiple test lines, and pregnancy diagnosis kit comprising same

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2018-0172576 2018-12-28
KR1020180172576A KR102138192B1 (ko) 2018-12-28 2018-12-28 다수 개의 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 임신진단키트

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2020138614A1 true WO2020138614A1 (ko) 2020-07-02

Family

ID=71127045

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2019/008465 WO2020138614A1 (ko) 2018-12-28 2019-07-10 다수 개의 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 임신진단키트

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20220146509A1 (ko)
EP (1) EP3904878B1 (ko)
KR (1) KR102138192B1 (ko)
CN (1) CN113227791B (ko)
WO (1) WO2020138614A1 (ko)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102594836B1 (ko) * 2020-07-09 2023-10-27 인텔로스 주식회사 라텍스 비드, 링커 및 항체를 포함하는 면역 크로마토그래피용 시약 및 이를 포함하는 래피드 키트
KR20220015595A (ko) 2020-07-31 2022-02-08 인텔로스 주식회사 하우징 홈의 형태로 검사선이 표시되는 래피드 키트
KR102281805B1 (ko) * 2021-04-22 2021-07-26 주식회사 제트바이오텍 형광염료를 이용한 건식 타입 형광 정량분석 체외 진단키트 및 그 제조방법
KR102561290B1 (ko) * 2021-06-04 2023-07-28 주식회사 필메디 측방유동분석 검출 스트립으로 정량분석을 위한 시료의 정량주입 방법
KR20230094050A (ko) * 2021-12-20 2023-06-27 주식회사 큐에스택 진단 스트립
KR102653571B1 (ko) * 2021-12-20 2024-04-02 주식회사 큐에스택 진단 스트립
KR102631747B1 (ko) * 2023-08-17 2024-01-31 에이디텍 주식회사 베타 코어 단편 hCG 분포비를 측정하여 정상 및 비정상임신을 판별하는 신규 면역 진단 장치

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20020014004A (ko) * 2000-08-12 2002-02-25 장진동 정상 임신과 자궁외 임신을 진단하는 장치 및 이의제조방법
CN102890157A (zh) * 2011-07-20 2013-01-23 天津中新科炬生物制药有限公司 一种快速定量检测hcg的试纸条及检测方法
CN103777002A (zh) * 2014-01-15 2014-05-07 南通市伊士生物技术有限责任公司 一种早孕多功能检测试纸的制备方法
KR20160108695A (ko) * 2015-03-05 2016-09-20 (주)프로테옴텍 이종 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 구비한 임신 진단 키트

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2062473C1 (ru) * 1991-12-17 1996-06-20 Акционерное общество закрытого типа "Вектор-БиоПродукт" Иммунометрический способ определения хорионического гонадотропина человека
US8101429B2 (en) * 2003-06-03 2012-01-24 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Native analyte as a reference in lateral flow assays
WO2016115608A1 (en) * 2015-01-22 2016-07-28 Ellume Pty Ltd Diagnostic devices and methods for mitigating hook effect and use thereof
CN106053794A (zh) * 2016-06-30 2016-10-26 厦门宝太生物科技有限公司 一种用于准确检测待测物的试剂卡、试剂盒和用途
CA3053267A1 (en) 2017-02-10 2018-08-16 Vivibaba, Inc Compositions and methods for recombinant nerve growth factor
CN108931654A (zh) * 2018-07-05 2018-12-04 重庆早柒天生物科技股份有限公司 以尿液为检测样本的早孕检测试剂盒、其生产方法及用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20020014004A (ko) * 2000-08-12 2002-02-25 장진동 정상 임신과 자궁외 임신을 진단하는 장치 및 이의제조방법
CN102890157A (zh) * 2011-07-20 2013-01-23 天津中新科炬生物制药有限公司 一种快速定量检测hcg的试纸条及检测方法
CN103777002A (zh) * 2014-01-15 2014-05-07 南通市伊士生物技术有限责任公司 一种早孕多功能检测试纸的制备方法
KR20160108695A (ko) * 2015-03-05 2016-09-20 (주)프로테옴텍 이종 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 구비한 임신 진단 키트

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J. EMERGENCY MEDICINE, vol. 44, 2013, pages 155
JOURNAL OF THE KOREAN SOCIETY OF EMERGENCY MEDICINE, vol. 22, no. 5, 2011, pages 503 - 507
NERENZ, R. D.: "Characterizing urinary hCGbeta cf patterns during pregnancy", CLINICAL BIOCHEMISTRY, 2016, pages 777 - 781, XP029617201, DOI: 10.1016/j.clinbiochem.2016.04.006 *
See also references of EP3904878A4

Also Published As

Publication number Publication date
KR102138192B1 (ko) 2020-07-27
CN113227791A (zh) 2021-08-06
EP3904878B1 (en) 2024-02-21
EP3904878A1 (en) 2021-11-03
CN113227791B (zh) 2024-03-22
KR20200082208A (ko) 2020-07-08
US20220146509A1 (en) 2022-05-12
EP3904878A4 (en) 2022-09-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2020138614A1 (ko) 다수 개의 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 임신진단키트
WO2014196803A1 (en) A strip for rapid testing having a variable control line and a diagnosis kit using the same
WO2013133675A1 (ko) 유방암 진단용 다중 바이오마커 세트, 이의 검출 방법 및 이에 대한 항체를 포함하는 유방암 진단키트
PT92828B (pt) Metodo de ensaio relativo a receptores de ligandos limite
US20140322724A1 (en) Homogeneous competitive lateral flow assay
KR20160108695A (ko) 이종 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 구비한 임신 진단 키트
WO2015119386A1 (ko) 효소 모방 무기 나노입자를 이용한 고감도 측면유동 면역 발색칩 및 이를 이용한 검출 방법
EP3646009B1 (en) Sandwich-type assays using decreasing signal portions of dose response curve to measure analytes, including analytes at high concentration
WO2021125785A2 (ko) 면역 크로마토그래피용 스트립, 키트 및 이를 이용하는 경쟁적 면역 크로마토그래피 분석 방법
WO2021002528A1 (ko) 베타 코어 단편 hcg를 표지자로 포함하는 신규 임신 진단 장치
DE19806185A1 (de) Immunoassay und Testkit zur Bestimmung von fucosyliertem Protein in einer biologischen Probe
WO2019050321A1 (ko) 다수의 검사선을 구비한 크로마토그래피용 스트립, 이를 포함하는 진단 키트 및 다수의 경쟁적 반응 측정 단계를 포함하는 정성, 반정량, 정량 분석방법
CN116047062A (zh) 一种多联检量子点定量检测卡及其制备方法
US20040043510A1 (en) Particle-labeled protein and immuno-chromatograph using the same
WO2018052176A1 (ko) 생화학검사와 면역반응검사를 수행하는 멀티유닛 및 이를 이용한 검사방법
KR102594836B1 (ko) 라텍스 비드, 링커 및 항체를 포함하는 면역 크로마토그래피용 시약 및 이를 포함하는 래피드 키트
KR102339013B1 (ko) 양수 검체 내 mmp-8 정량화가 가능한 체외 진단 키트
US20210263026A1 (en) Lateral flow assay systems and methods for the quantification of a biological sample
US20200348298A1 (en) Multiplex lateral flow assay for differentiating bacterial infections from viral infections
CN114019158A (zh) 联检试纸条和检测试剂盒
KR20220047198A (ko) 면역크로마토그래피용 스트립, 키트 및 이를 이용하여 트립타제를 측정하는 샌드위치 면역크로마토그래피 분석 방법
KR920002311B1 (ko) 융모성질병(Trophoblastic Diseases)의 감별 진단용 시약의 제조 및 측정방법
CN117269503A (zh) 可溶性生长刺激表达基因2蛋白（st2） 检测试剂盒
CA3088124A1 (en) Multiplex lateral flow assay for differentiating bacterial infections from viral infections
DE3924239A1 (de) Verfahren zur bestimmung von immunologisch nachweisbaren substanzen

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19902777

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2019902777

Country of ref document: EP

Effective date: 20210728