CN113227791B - 具有多个检查线的妊娠诊断用免疫色谱条及包含其的妊娠诊断试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有多个检查线的妊娠诊断用色谱条、具有上述色谱条的妊娠诊断试剂盒以及使用其来诊断是否妊娠的方法。本发明克服了人绒毛膜促性腺激素(hCG)变异体引起的假阴性的问题，由此，可通过肉眼更加准确且便利地诊断是否妊娠。进而，利用由多个检查线和对照线构成的妊娠诊断用色谱条，具有人绒毛膜促性腺激素或其变异体的浓度测定范围得到改善的效果。

Description

具有多个检查线的妊娠诊断用免疫色谱条及包含其的妊娠诊 断试剂盒
技术领域
本发明涉及如下的妊娠诊断试剂盒：在诊断妊娠的过程中，同时测定人绒毛膜促性腺激素(hCG)及其变异体，由此，可更准确地诊断妊娠。
背景技术
免疫色谱分析法为利用抗原-抗体反应，在短时间内定性及定量分析微量的靶向物质(analyte)的方法。在家庭及医院等广泛使用的妊娠诊断试剂盒使用上述免疫色谱分析法。在普通妊娠诊断试剂盒中所使用的免疫色谱条的情况下，当妊娠时，将在尿液及血清中的含量增加的人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，hCG)用作所要检测的靶向物质。将与人绒毛膜促性腺激素结合的抗体以线形固定在膜垫(检查线)，并且，将一个抗体与如金粒子等的标记物质结合并固定在接合物垫，之后，展开检测体。所展开的检测体经过接合物垫并形成检测体中的人绒毛膜促性腺激素-抗人绒毛膜促性腺激素抗体-金粒子的复合物来展开，上述复合物被固定在检查线的抗-人绒毛膜促性腺激素抗体捕获来形成“检查线固定的抗体-抗人绒毛膜促性腺激素抗体-金粒子”的结合物。将其称为“三明治(sandwich)反应”。在检测体中的人绒毛膜促性腺激素的浓度可确定为妊娠的情况下，上述检查线被金粒子显示为红色并确定为妊娠。并且，与检测体中的人绒毛膜促性腺激素的浓度无关地，对照线一直捕获金粒子抗体并被金粒子显示为红色，因此，可确认检查正常终止。可通过肉眼或利用传感器检测示出结果的分析条。
人绒毛膜促性腺激素是一种36.5kD的糖蛋白，由α和β两个亚基组成，具有卵巢的黄体形成、诱发排卵、睾丸的间质细胞中的促进雄激素分泌等与促黄体激素(luteinizinghormone，LH)类似的作用。在女性妊娠后，从胎盘的滋养层细胞生成、分泌人绒毛膜促性腺激素，并存在于母体的血液和尿液以及羊水中。除此之外，如所周知，人绒毛膜促性腺激素还在如水泡状胎块或绒毛膜癌的滋养细胞病以及各种胚芽细胞肿瘤患者中增加，正常男性和未妊娠的女性的血液和尿液中也存在非常少量的人绒毛膜促性腺激素。人绒毛膜促性腺激素从胎盘生成经由血液通过尿液排出，在经过这种阶段的过程中，生成各种分解产物和变异体，在胎盘和血液以及尿液中示出的人绒毛膜促性腺激素形态具有差异。α亚基具有两个N-切口寡糖侧链(N-nicked oligosa ccharaide side chain)，β亚基为在6个分支中具有145个氨基酸连接的独特的形态，用于区别人绒毛膜促性腺激素和其他乙二醇蛋白质。随着该氨基链的变化，在胎盘中示出大的游离α(large freeα)、没有切口的游离β(non-nicked freeβ)的形态，在血液中还具有规则的游离α(regular freeα)、有切口的游离β(nicked freeβ)的形态，尤其，尿液中还存在人绒毛膜促性腺激素β-核心片段(hCGβcorefrag ment，hCGβcf)的形态(韩国急诊医学学会杂志：2011年，第22卷，第5号503-507)。
在妊娠5周前的尿液中，存在相对少量的人绒毛膜促性腺激素β-核心片段，在妊娠6周后的尿液中，存在多于正常人绒毛膜促性腺激素(intact hCG，I-hCG)的人绒毛膜促性腺激素β-核心片段，尤其，在妊娠8周后，比正常人绒毛膜促性腺激素高3倍以上。这种高浓度的人绒毛膜促性腺激素β-核心片段妨碍正常人绒毛膜促性腺激素的测定，在诊断妊娠的过程中，可诱发假阴性的错误(J.Emergency Medi cine 2013,44:155)。
因此，本发明人持续研究不受以高浓度存在于尿液中的人绒毛膜促性腺激素β-核心片段的影响且准确地判断是否妊娠的妊娠诊断试剂盒的制造方法且不懈努力的结果确认了，若使用本发明的具有多个检查线的妊娠诊断用色谱条，则在人绒毛膜促性腺激素变异体以高浓度存在的情况下，也可准确地判断是否妊娠，从而完成了本发明。
发明内容
技术问题
因此，本发明的目的在于，提供通过排除以高浓度存在于尿液中的人绒毛膜促性腺激素变异体的干扰而具有高准确性的妊娠诊断用色谱条。
本发明的再一目的在于，提供包括上述色谱条的妊娠诊断试剂盒。
本发明的另一目的在于，提供通过使用上述色谱条或妊娠诊断试剂盒来诊断是否妊娠的方法。
技术方案
作为用于实现上述目的的一实施方式，本发明提供具有接合物垫及检测垫的妊娠诊断用色谱条。
在本发明的妊娠诊断用色谱条中，上述接合物垫包含第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体及信号检测标记物质，上述检测垫具有隔开的第一检查线及第二检查线，上述第一检查线包含第二抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体，上述第二检查线包含人绒毛膜促性腺激素。
上述“第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体”可与“第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体”混用，是指可识别人绒毛膜促性腺激素的β-核心片段部位的抗体。因此，本发明的第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体不仅可与正常人绒毛膜促性腺激素特异性结合，还可与包含人绒毛膜促性腺激素β-核心片段的人绒毛膜促性腺激素变异体特异性结合。
上述“第二抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体”可与“第二抗-人绒毛膜促性腺激素抗体”混用，是指识别不是人绒毛膜促性腺激素β-核心片段部位的人绒毛膜促性腺激素的其他部位来特异性结合的抗体。因此，本发明的第二抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体仅可与正常人绒毛膜促性腺激素特异性结合，无法与人绒毛膜促性腺激素β-核心片段结合。在本发明的优选一实施例中，上述人绒毛膜促性腺激素的其他部位可以为正常人绒毛膜促性腺激素β亚基(subunit)中的一部分部位。
在本发明的妊娠诊断用免疫色谱条中，在展开检测体前或当展开检测体时，上述第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体与信号检测标记物质相连接来形成第一接合物，在检测体中存在人绒毛膜促性腺激素或其变异体的情况下，形成第一接合物与人绒毛膜促性腺激素或其变异体结合的复合物，随着检测体中的人绒毛膜促性腺激素或其变异体的浓度增加，所形成的上述复合物的数量增加，相反，未与检测体中的人绒毛膜促性腺激素结合的裸(bare)接合物的数量减少。
上述第一接合物与正常人绒毛膜促性腺激素结合的复合物被第一检查线捕获而显示信号，第一接合物与变异体结合的复合物不被第一检查线捕获，未与上述检测体中的人绒毛膜促性腺激素或其变异体结合的裸接合物与以规定量固定在第二检查线的人绒毛膜促性腺激素进行反应，由此，可被第二检查线捕获并生成信号。
本发明的术语“接合物(conjugate)”是指上述标记物质与上述配体相连接而形成的结合物，上述接合物包含用于信号检测的标记物质与第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体相连接的第一接合物。上述标记物质与第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体可以物理连接或化学连接。即，可使标记物质与第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体通过被动吸附(p assiveadsorption)连接，对标记物质进行改性以具有反应性组，由此，可通过共价键与第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体连接，但并不局限于此，可利用普通技术人员公知的方法执行上述标记物质与第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体的连接。但是，上述标记物质和第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体可在向妊娠诊断用色谱条展开检测体之前开始以接合物的形态连接来存在于接合物垫，或者能够以未相连且分离的状态存在于接合物垫中，随着检测体的展开，它们可相连来形成接合物，或者能够以溶液相存在并在使用之前添加至接合物垫来使用。在任一情况下，当展开检测体时，标记物质和第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体能够以接合物的状态向检测垫移动，这是因为它们并未固定在接合物垫。
本发明的术语“标记物质”是指产生可通过肉眼或利用传感器感测到的信号的物质。作为上述标记物质可使用胶体金(金粒子)、乳胶粒子、有色聚苯乙烯微细粒子、酶、荧光性染料、导电性高分子、发光物质或磁性粒子等，但并不局限于此。并且，上述信号可以为如发光等因标记物质的内在特性而自主产生的，或者如荧光等因外部刺激产生的。
在本发明的妊娠诊断用色谱条中，上述接合物垫还可包含可用作内部对照组(internal control)的物质及信号检测标记物质。在展开检测体前或当展开检测体时，上述内部对照组物质与标记物质相连来形成第二接合物，上述第二接合物被对照线的配体捕获，由此，可确认检测体的展开。
在本发明中使用的术语“对照线(Control line)”是指与检测体或检测体中的人绒毛膜促性腺激素的浓度无关地释放规定信号的部分。上述对照线可利用与上述检查线及上述异种检查线相似的方法形成。但是，上述对照线可固定与额外的物质特异性或非特异性结合而能够捕获的物质来形成，上述物质不与人绒毛膜促性腺激素结合且通过流动相与检测体一同沿着检测垫移动，上述额外的物质作为第二接合物与金粒子结合。可将固定在上述对照线的物质称为配体。结果，固定与检测体中是否存在绒毛膜促性腺激素无关地释放规定信号的配体来形成。作为上述对照线可使用抗-兔IgG、抗-鸡IgY、链霉抗生素蛋白(streptavidin)、牛血清白蛋白等。上述对照线还可将所固定的配体的浓度设置得不同来以两个以上形成。若固定在上述对照线的配体的浓度越高，则对照线可恒定释放强信号。
在本发明的妊娠诊断用色谱条中，可根据所使用的抗原-抗体反应等适当选择检查线的位置及对照线的位置，并不局限于此。
本发明的特征在于，相比于使用具有仅形成检查线及能够确认检测体的展开的对照线的检测垫的以往的分析条的妊娠诊断试剂盒，具有由仅检测正常人绒毛膜促性腺激素的第一检查线及同时检测其变异体的第二检查线形成的两个检查线，可更可靠地诊断是否妊娠。
在本发明的一实施例中，当存在于上述接合物垫中的第一接合物和液相检测体(育龄妇女的尿液等)向检测垫移动展开时，与检测体中的人绒毛膜促性腺激素的β-核心片段位置结合来形成人绒毛膜促性腺激素-第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体-金粒子复合物。上述复合物在展开的过程中被固定在第一检查线的第二抗-人绒毛膜促性腺激素抗体捕获(三明治免疫反应，Sandwich immune reaction)，未与上述检测体中的人绒毛膜促性腺激素结合的第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体-金粒子接合物在展开的过程中被第二检查线捕获(竞争免疫反应，Compatitive immune reaction)。以特定量确定存在于上述接合物垫中的第一抗人绒毛膜促性腺激素抗体-金粒子接合物的量来使用，因此，示出如下的反比例关系，即，随着检测体中的人绒毛膜促性腺激素的浓度的增加，存在于接合物垫中的第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体-金粒子接合物与检测体中的人绒毛膜促性腺激素结合来形成的复合物的数量增加，相反，未与绒毛膜促性腺激素结合的裸接合物地数量减少。在第一检查线中，可通过三明治免疫方法测定正常的人绒毛膜促性腺激素β亚基，在第二检查线中，可通过竞争免疫方法同时测定人绒毛膜促性腺激素和其衍生物。
在本发明的一实施例中，检查线的信号强度随着检测体中的人绒毛膜促性腺激素的浓度增加而增加，若增加至规定浓度以上，则示出信号的强度减少的现象。从捕获裸接合物的第二检查线的信号强度示出随着人绒毛膜促性腺激素的浓度增加而减少的形态。尤其，在妊娠6周之后，受到大大增加的人绒毛膜促性腺激素β-核心片段浓度的影响而减少。结果，可通过从上述第一检查线及第二检查线上的标记物质的信号分析人绒毛膜促性腺激素。更具体地，在人绒毛膜促性腺激素β-核心片段的浓度低的情况下，不影响第一检查线的三明治免疫检查，由此，可仅通过第一检查线测定人绒毛膜促性腺激素来准确地诊断是否妊娠。即，若第一检查线发色，则可判断为妊娠阳性。但是，若含有大量的人绒毛膜促性腺激素β-核心片段，则可妨碍第一检查线的免疫检查，因此，可综合第一检查线和第二检查线来准确地诊断是否妊娠。即，即使第一检查线不发色，在第二检查线不可见或以对照线以下的强度显示的情况下，判断为妊娠阳性，由此，可更准确地诊断是否妊娠。
具体说明本发明的妊娠诊断用色谱条的结构。上述妊娠诊断用色谱条可包括：样品垫，导入用于确认是否包含靶向物质的检测体；接合物垫，一末端与上述样品垫连接；检测垫，一末端与上述接合物垫的另一末端连接；吸湿垫，一末端与上述检测垫的另一末端连接，提供用于从上述样品垫移送检测体的驱动力；以及固体支架，位于上述妊娠诊断用色谱条下部。在图1及图2示出与本发明的妊娠诊断用色谱条有关的结构图。
上述固体支架可通过选自由硝酸纤维素、尼龙、聚偏氟乙烯(P VDF)、玻璃及塑料组成的组中的材料形成。通过在上述固体支架上附着条来制造，由此，可提高条的耐久性，并容易处理及保存。并且，可容易安装额外的外部壳体。可用作上述固体支架的塑料材料可以为聚丙烯(polypropylene)膜、聚酯(polyester)膜、聚碳酸酯(polycarbonate)膜、丙烯酸(acrylic)膜等，但并不局限于此。
在另一方面，本发明为在壳体内追加固定上述妊娠诊断用色谱条的试剂盒，提供如下的诊断试剂盒，即，在下部壳体设置有导件及条支撑部，上部壳体包括：检测体投入口；以及结果确认窗，位于与多个检查线及对照线相应的位置。
上述妊娠诊断用色谱条可追加固定在壳体内。在下部壳体的内部可设置有将上述妊娠诊断用色谱条配置在适当位置并固定压接的多个导件和/或条支撑部。选择性地，导件及条支撑部还可设置于上部壳体的与设置于下部壳体的导件及条支撑部相应的位置。即，上述导件和/或条支撑部可根据需求形成于下部壳体或者形成于上部壳体及下部壳体两者。并且，在上部壳体中，在与检测体投入口及检查线、对照线相应的位置可设置用于检测从标记物质释放的信号的结果确认窗。上述检测体投入口能够以孔或缝隙等形态形成于检测垫的一末端，即，以检查线为基准为吸湿垫的相反侧末端，同时，以使检测体沿着薄膜展开的方式与检查线充分隔开的位置。上述结果确认窗能够以足以从外部通过肉眼或传感器识别检测垫上的多个检查线及对照线的大小形成。只要可确认上述多个检查线及对照线，就可不受限地形成其大小及形状。
上述上部壳体及下部壳体可利用常规塑料材料制造，例如，可利用聚碳酸酯、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(acrylonitrile butadiene styrene，ABS)等的材料，但并不局限于此。可分开制造上述上部壳体及下部壳体，并设置结合槽、结合突起等来通过常规手段相结合，根据情况，可制造为一体型。
如上所述，色谱法采用包含靶向物质的流动相沿着媒介物移动的色谱法的原理。因此，为了利用妊娠诊断用色谱条的分析，需要用于将包含靶向物质的检测体沿着条移动的流动相。由此，本发明的分析用试剂盒还可包含缓冲液。上述缓冲液不仅起到沿着妊娠诊断用色谱条移动检测体的流动相(mobile phase)的作用，还可起到溶解接合物的溶剂的作用，根据需求，还可起到用于稀释检测体的稀释液的作用。并且，例如，在进行全血分析的情况下，还可包含用于溶解(lysi s)红细胞等的血细胞成分的成分。作为上述缓冲液，可不受限地使用10mM至1M浓度磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution，PBS)、非离子性或两性表面活性剂或它们的混合物等常规缓冲液，可根据抗原-抗体反应等所要的反应的种类适当选择缓冲液的组成及使用比例。
在另一方面，本发明为通过使用上述妊娠诊断用色谱条来诊断是否妊娠的方法，提供包括如下的步骤来执行诊断是否妊娠的方法：向上述接合物垫或位于上述接合物垫之前的垫投入检测体并展开的步骤；以及从多个检查线和对照线确认是否具有标记物质的信号的步骤。
在执行具体分析方法的过程中，能够以下述顺序进行。首先，可向上述接合物垫或位于上述接合物垫之前的垫投入液相检测体。即，液相检测体直接投入至接合物垫来将检测体导入至条，但优选地，可向接合物垫之前的如样品垫投入来导入。并且，上述检测体可通过添加如磷酸缓冲液的缓冲液来均匀混合，并通过相同的方法向条导入其。
如上所述，当检测体加载(导入)至妊娠诊断用色谱条时，开始展开，之后，可通过对照线确认是否良好地展开检测体。若检测体良好地展开，则从多个检查线和对照线确认是否具有标记物质的信号。若与下述1)相对应，则诊断为未妊娠，若与下述2)至4)相对应，则可诊断为妊娠。
1)若显示对照线和第二检查线，则表示人绒毛膜促性腺激素或其变异体未包含在检测体中，可诊断为未妊娠。
2)若显示第一检查线、第二检查线及对照线三个线，则表示人绒毛膜促性腺激素或其变异体包含在检测体中，可诊断为妊娠。
3)若显示第一检查线及对照线，则表示人绒毛膜促性腺激素包含在检测体中，可诊断为妊娠。
4)若仅显示对照线，则表示人绒毛膜促性腺激素或其变异体以高浓度包含在检测体中，可诊断为妊娠。
本发明的用于分析的检测体不仅可以为普通水溶液，还可包括从哺乳类，优选地，从人类分离的全血、血细胞、血清、血浆、骨髓液、汗液、尿液、泪液、唾液、皮肤、黏膜、毛发等的生物试样，优选为尿液。
发明的效果
在本发明中，配对构成用于分别检测存在于孕妇的尿液中的正常人绒毛膜促性腺激素和其变异体的单克隆抗体，由此，克服人绒毛膜促性腺激素变异体引起的假阴性的问题，并且，可通过肉眼更准确且便利地诊断是否妊娠。
进而，利用由多个检查线和对照线构成的妊娠诊断用色谱条，由此，具有人绒毛膜促性腺激素或其变异体的浓度测定范围得到改善的效果。
附图说明
图1为示出用于常规妊娠诊断试剂盒的免疫色谱条的截面的简图。
图2为示出用于本发明的妊娠诊断试剂盒的具有多个检查线的妊娠诊断用免疫色谱条的简图。
图3为本发明一实施例的妊娠诊断用免疫色谱条的示意图。
图4为通过使用本发明的妊娠诊断试剂盒来分析各种浓度的人绒毛膜促性腺激素标准溶液的结果。
图5为通过使用本发明的妊娠诊断试剂盒分析包含各种浓度的人绒毛膜促性腺激素及人绒毛膜促性腺激素β-核心片段的检测体溶液的结果。
具体实施方式
以下，通过实例更详细地说明本发明。这些实施例用于更加具体地说明本发明，本发明的范围并不限定于这些实施例。
实施例1
免疫色谱条的制备
1-1.形成有检查线、异种检查线及对照线的检测垫的制备
向硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane)分注3个分析线。利用层压机(laminator)将硝酸纤维素膜层压(lamination)在塑料卡。之后，利用自动分注器分别对第一检查线分注作为第二抗-人绒毛膜促性腺激素抗体的单克隆抗-人绒毛膜促性腺激素抗体(monoclonal anti-hCG 5014,Medix,Finland)，对第二检查线分注人绒毛膜促性腺激素，作为对照线的配体利用山羊抗小鼠免疫球蛋白抗体(anti mouse antibody fromgoat,arista,USA)进行分注，之后，在25℃～30℃的温度下干燥2天(48小时)。
1-2.接合物垫(conjugate pad)的制备
利用包含0.5％的聚乙烯醇(PVA，polyvinylalcohol)的三羟甲基氨基甲烷缓冲液(10mM，pH 8.5)充分润湿垫，并在干燥器完全干燥，对接合物垫进行预处理。
准备了结合有作为直径约为40nm的胶体金粒子(colloidal gold particle)和作为第一抗-绒毛膜促性腺激素抗体的复合克隆抗-人绒毛膜促性腺激素抗体(monoclonalanti-hCG 5006,Medix,Finland)的第一接合物溶液，并且，准别了直径约为40nm的胶体金粒子与小鼠免疫球蛋白(mouse IgG,Arista,USA)结合的第二接合物溶液。向预处理的接合物垫分注上述第一接合物溶液及第二接合物溶液，完全干燥后，以适当大小切割其来准备。
1-3.样品垫(sample pad)的制备
在包含1％的Triton X-100、0.5％的NaN3、0.1％的牛血清蛋白(BSA)的0.08M的硼酸盐(borate)缓冲液充分润湿样品垫，在干燥器完全干燥后，以适当大小切割其来准备。
1-4.吸湿垫(absorbance pad)的制备
吸湿垫在干燥器中完全干燥水分的状态下，未经任何处理直接使用，以适当大小切割其来准备。
1-5.免疫色谱条的制备
通过图4所示的结构组装通过上述各个过程准备的检测垫、接合物垫、样品垫及吸湿垫。
即，将样品垫附着在接合物垫的一末端，使得样品垫与接合物垫的一末端相重叠，将检测垫的一末端附着在上述接合物垫的另一末端，使得检测垫的一末端与上述接合物垫的另一末端相重叠，将检测垫的另一末端附着在吸湿垫的一末端，使得检测垫的另一末端与吸湿垫的一末端相重叠。利用切割机将其切割为4±2.0mm左右的大小，从而制备如图4所示的条。
在图4中，各个附图标记的含义如下。
1：样品垫；16±4×4±2mm
2：第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体和金粒子的接合物垫；
6±1.0×4±2mm
3：硝酸纤维素检测垫；25±5×4±2mm
4：塑料固体支架
5：吸湿垫；18±4×4±2mm
6：固定有第二抗-人绒毛膜促性腺激素抗体的第一检查线
7：固定有抗小鼠免疫球蛋白的对照线
8：固定有人绒毛膜促性腺激素的第二检查线
1-6.壳体的组装
将所制造的妊娠诊断用免疫色谱条放入塑料下部壳体的条固定位置后，插入形成有检测体投入口和结果确认窗的上部壳体后，利用压接机按压并组装。
实验例1
利用人绒毛膜促性腺激素标准溶液的妊娠诊断用色谱条的评价
向未妊娠尿液掺入人绒毛膜促性腺激素标准物质来制备绒毛膜促性腺激素标准检测体，并进行定量及定性试验。向壳体的检测体投入口以100μl分注所制备的标准检测体溶液后，展开5分钟。准备正常人绒毛膜促性腺激素浓度分别为0mIU/ml、12.5mIU/ml、25mIU/ml、200mIU/ml、5000mIU/ml、50000mIU/ml、500000mIU/ml、1000000mIU/ml、2000000mIU/ml的检测体溶液。
图4为示出根据正常人绒毛膜促性腺激素的浓度的妊娠诊断用免疫色谱条的展开结果的图。进而，通过肉眼确认了在对照线、第一检查线及第二检查线显示的信号的强度，以++设定对照线强度基准，在下述表1示出反应后的检查线的生成强度。
表1
如表1及图4所示，当仅存在正常人绒毛膜促性腺激素时，从25mIU/ml以上的情况开始，示出明显的阳性反应，在200mIu/ml的情况下，示出++的高强度的反应。
实验例2
利用存在人绒毛膜促性腺激素及人绒毛膜促性腺激素核心片段的检测体溶液的妊娠诊断用色谱条的评价
之后，当利用包含β核心片段的尿液诊断妊娠时，为了确认本发明的分析方法的准确性，制备在未妊娠尿液掺入β核心片段和正常人绒毛膜促性腺激素标准物质的检测体溶液，以100μl分注后展开5分钟。通过如下述表2的方式制备检测体溶液。
图5为比较示出包含正常人绒毛膜促性腺激素及人绒毛膜促性腺激素核心片段两者的检测体中的根据浓度的分析结果的图。进而，通过肉眼确认了在对照线、第一检查线及第二检查线中显示的信号的强度，以++设定对照线强度基准，在下述表2示出反应后的检查线的生成强度。
表2
如表2及图5所示，与上述实验例1相同地，在仅包含人绒毛膜促性腺激素的检测体2中，在第一检查线中示出明显的阳性反应，但是，在包含人绒毛膜促性腺激素核心片段的检测体5及检测体6中，即使在人绒毛膜促性腺激素为200mIu/ml的情况下，也在第一检查线中几乎未发色。由此可确认，在具有仅一个检查线的以往的妊娠诊断试剂盒中，在存在人绒毛膜促性腺激素核心片段的情况下，存在假阴性的可能性。本发明的妊娠诊断试剂盒追加设置有检查线，因此，在包含人绒毛膜促性腺激素核心片段的情况下，可参照第二检查线的结果诊断是否妊娠，不仅在第一检查线发色的情况下，还在第二检查线不可见或以对照线以下的强度显示的情况下，判断为阳性，从而可更加准确地诊断是否妊娠。

Claims (6)

1.一种妊娠诊断用色谱条，具有接合物垫及检测垫，其特征在于，
上述接合物垫包含第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体及信号检测标记物质，
上述检测垫具有隔开的第一检查线及第二检查线，上述第一检查线包含第二抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体，上述第二检查线包含人绒毛膜促性腺激素，
其中上述第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体识别人绒毛膜促性腺激素的β-核心片段部位，
其中上述第二抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体识别并不是人绒毛膜促性腺激素的所述β-核心片段部位的人绒毛膜促性腺激素的其他部位，
其中在展开检测体前或当展开检测体时，上述第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体与所述信号检测标记物质相连来形成第一接合物，
其中在所述检测体中存在人绒毛膜促性腺激素或人绒毛膜促性腺激素β-核心片段的情况下，形成所述第一接合物与人绒毛膜促性腺激素或人绒毛膜促性腺激素β-核心片段结合的复合物，并且
其中随着检测体中的人绒毛膜促性腺激素或人绒毛膜促性腺激素β-核心片段的浓度增加，所形成的上述复合物的数量增加，相反，未与所述检测体中的人绒毛膜促性腺激素结合的裸接合物的数量减少，
其中上述第一接合物与正常人绒毛膜促性腺激素结合的复合物被第一检查线捕获而显示信号，第一接合物与人绒毛膜促性腺激素β-核心片段结合的复合物不被第一检查线捕获，并且
未与上述检测体中的人绒毛膜促性腺激素或人绒毛膜促性腺激素β-核心片段结合的裸接合物与以规定量固定在第二检查线的人绒毛膜促性腺激素进行反应，由此，被第二检查线捕获并显示信号。
2.根据权利要求1所述的妊娠诊断用色谱条，其特征在于，上述标记物质为胶体金、乳胶粒子、有色聚苯乙烯微细粒子、酶、荧光性染料、导电性高分子、发光物质或磁性粒子。
3.根据权利要求1所述的妊娠诊断用色谱条，其特征在于，上述检测垫还包括能够确认检测体是否展开的对照线。
4.一种诊断是否妊娠的方法，使用权利要求1至3中任一项所述的妊娠诊断用色谱条，其特征在于，包括：
向上述接合物垫或位于上述接合物垫之前的垫投入检测体并展开的步骤；以及
从第一检查线、第二检查线及对照线确认标记物质是否具有信号的步骤。
5.根据权利要求4所述的诊断是否妊娠的方法，其特征在于，
在未妊娠的情况下，显示对照线及第二检查线，
在妊娠的情况下，在低浓度的人绒毛膜促性腺激素中，显示第一检查线、第二检查线及对照线三个线，在高浓度的人绒毛膜促性腺激素中，显示第一检查线及对照线或者仅显示对照线。
6.一种妊娠诊断试剂盒，在壳体内追加固定权利要求1至3中任一项所述的妊娠诊断用色谱条，其特征在于，
在下部壳体设置有导件及条支撑部，
上部壳体包括：
检测体投入口；以及
结果确认窗，设置于与检查线或对照线相应的位置。
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