WO2018212152A1 - 近視予防用組成物及び機能性食品 - Google Patents

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一男 坪田
俊英 栗原
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    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing

Definitions

  • the present invention relates to a composition and a functional food used for the prevention or treatment of myopia or eye disease. More specifically, the present invention is effective for an age group in which myopia develops or progresses myopia, in particular, a composition effective for growing children and young people, and also effective for middle-aged and elderly people with an increased risk of eye disease.
  • the present invention relates to a composition and a functional food containing the composition.
  • Non-Patent Document 1 There is a racial difference in the frequency of myopia. In particular, it is abundant in Asians, especially Japanese people, who have a lot of myopia, and a high percentage of myopia of -5D or higher. In recent years, myopia has been increasing worldwide, and the percentage of children with naked eyesight less than 1.0 is increasing year by year in Japan. It is also known that myopia rapidly progresses from 7 to 12 years of school age (see Non-Patent Document 1).
  • Myopia is classified into refractive myopia, regulatory myopia (pseudomyopia), and axial myopia depending on the onset mechanism, but myopia progression in schoolchildhood is mainly axial myopia.
  • the human eye is hyperopic immediately after birth, and the degree of hyperopia is reduced by the extension of the eye axis during the growth period, and becomes normal when entering the school age.
  • the extension of the eye axis after this normalization phenomenon leads to myopia as it is, and the length of the eye axis once extended cannot be restored. Therefore, it is considered that the suppression of the extension of the eye axis during the period from the growth period to the schoolchildhood is effective for the prevention or treatment of myopia (see Non-Patent Document 2).
  • the eye axis is extended not only in the growth period but also in adults, and it is said that adult eye axis extension is a risk factor for various eye diseases, and intense myopia, which is the result of excessive eye extension.
  • eye diseases such as cataract, glaucoma, retinal detachment, retinopathy, macular disease, choroidal neovascularization, posterior staphyloma and optic neuropathy is increased (see Non-Patent Document 2). Therefore, suppression of axial extension can not only lead to QOL improvement by preventing myopia, but can also lead to prevention of serious eye diseases that lead to blindness.
  • Non-Patent Document 4 In addition, research on the risk factors of this myopia progression (axial extension) is progressing, and it is said that age, sex, heredity, society and living environment, etc. are correlated with axial extension (see Non-Patent Document 4). reference).
  • the increase in short-term work (reading and writing, VDT (Visual Display Terminals) work) and the accompanying lack of exposure to sunlight (especially 360-400 nm violet light) is attracting attention as a risk factor for eye extension (Non-Patent Document 5). See).
  • Non-Patent Document 6 Non-Patent Document 6
  • other animals such as tree shrew and picken
  • myopic animal models have been studied (see Non-Patent Documents 7 and 8).
  • EGR-1 / ZENK1 EGR-1 / ZENK1 is one of them.
  • EGR-1 knockout mice axial extension and myopia were observed, suggesting that EGR-1 is involved in axial extension (see Non-Patent Document 9).
  • EGR-1 was knocked out in mice, the extension of the axial axis and progression of myopia were observed, but EGR-1, which is only one of a plurality of myopia-related genes, was enhanced in vitro. It has not been confirmed whether or not the drug can actually suppress the axial extension and suppress myopia progression in vivo.
  • the EGR-1 gene is involved in eye axis extension
  • a substance that induces the expression of the EGR-1 gene is screened, and the substance is taken into the body by food, medicine, or other methods. If it is possible, it will lead to effective prevention of myopia and eye diseases.
  • An object of the present invention is to provide a composition effective for the prevention or treatment of myopia or eye diseases.
  • eye diseases such as cataracts, glaucoma, retinal detachment, retinopathy, macular disease, choroidal neovascularization, posterior staphylococci, and optic neuropathy is increased, especially in growing children and young people with myopia.
  • the composition according to the present invention can be suitably used for the prevention or treatment of myopia or eye diseases in which axial extension is involved. That is, the gist of the present invention is as described below.
  • the ophthalmic composition according to [6] or [7], wherein the eye diseases are cataracts and posterior eye diseases.
  • the posterior eye disease is at least selected from the group consisting of glaucoma, retinal detachment, macular hole, foveal sequestration, choroidal neovascularization, posterior staphyloma, myopic macular degeneration, and myopic neuropathy
  • the ophthalmic composition according to any one of [1] to [10] which is for enhancing EGR-1 expression.
  • a functional food for the prevention or treatment of myopia or eye disease comprising at least one component selected from the group consisting of crocetin and pharmaceutically acceptable salts thereof and ginkgo biloba extract.
  • a functional food comprising the ophthalmic composition according to any one of [1] to [11].
  • a screening method for a substance effective for the prevention or treatment of myopia or eye disease characterized by the presence or absence of an effect of enhancing EGR-1 expression.
  • An ophthalmic composition comprising an EGR-1 expression enhancer.
  • An ophthalmic composition comprising an ocular axial stretch inhibitor.
  • the ophthalmic composition according to [21] which is for children.
  • the present invention it is possible to provide an ophthalmic composition effective for the prevention or treatment of myopia or eye disease, a functional food containing the composition, and a screening method capable of searching for them.
  • the ophthalmic composition of the present invention is a growing child or younger group in which myopia is likely to develop and progress, and further, cataract, glaucoma, retinal detachment, retinopathy, maculopathy, choroidal neovascularization, posterior staphylococci and It is suitably used for the prevention or treatment of each symptom / disease for middle-aged and elderly people with an increased risk of eye diseases such as optic neuropathy.
  • the screening method of the present invention enables the acquisition of a substance capable of improving the effect of suppressing the extension of the axial axis or the expression of EGR-1, and the development of an ophthalmic composition or functional food that can effectively improve myopia or eye disease. Useful for.
  • the first embodiment of the ophthalmic composition of the present invention contains an antioxidant plant extract or a component derived therefrom, preferably carotenoids, polyphenols. These components have a function of regulating the expression of a gene (EGR-1) involved in axial extension that can cause axial myopia and various eye diseases. Therefore, an ophthalmic composition containing these components has an effect of maintaining visual acuity and is particularly effective for an age group (growth child, younger group, etc.) in which myopia is likely to develop and progress.
  • EGR-1 a gene involved in axial extension that can cause axial myopia and various eye diseases. Therefore, an ophthalmic composition containing these components has an effect of maintaining visual acuity and is particularly effective for an age group (growth child, younger group, etc.) in which myopia is likely to develop and progress.
  • This ophthalmic composition may contain other components in addition to the antioxidant plant extract, which is an essential component, or components derived therefrom, as long as the effects of the present invention are not impaired. Below, the component which the ophthalmic composition of this invention contains is demonstrated in detail.
  • the carotenoids contained in the ophthalmic composition of the present invention include crocetin, pharmaceutically acceptable salt of crocetin, gardenia extract (Yamako), gardenia pigment, saffron extract, germinated broccoli extract, broccoli sprout extract, paprika extract, Examples include ⁇ -carotene, lutein, zeaxanthin, astaxanthin, marigold extract, red paprika, paprika pigment, ginseng extract, pepper extract, eucommia leaf extract, safflower extract, and luffa extract.
  • the parentheses are aliases.
  • Polyphenols like carotenoids, have an antioxidant effect and are a general term for compounds having bitter, astringent, and pigment components contained in plants.
  • the polyphenols contained in the ophthalmic composition of the present invention include ginkgo biloba extract, mangosteen extract, strawberry seed extract, walnut polyphenol, guarana extract, Java ginger extract, nobiletin, blueberry leaf extract, melinjo extract, grape resveratrol, Lingonberry extract, Cowberry extract, Gnetin C, ⁇ -Viniferin, Resveratrol, Grape seed extract, Black soybean seed coat polyphenol, Black bean seed coat polyphenol, Cassis extract, Curcumin, White curcuminoid, Polymethoxyflavonoid (PMF), Dihydroquercetin, Maria Thistle extract, silymarin, silibinin, ⁇ G hesperidin, hesperidin, methyl hesperidin, orange-derived rutinoside, hesperetin, pycn
  • carotenoids and polyphenols those that are excellent in the action of suppressing the extension of the axial length and that exhibit additional properties (for example, maintainability, stability, etc.) are preferable.
  • crocetin in carotenoids, crocetin, pharmaceutically acceptable salt of crocetin, gardenia extract (Yamakiko), gardenia pigment, saffron extract, ⁇ -carotene, lutein, zeaxanthin, astaxanthin, marigold extract, red paprika, Paprika pigment, safflower extract, and rafma extract are preferable, crocetin, pharmaceutically acceptable salt of crocetin, gardenia extract (Yamako), gardenia pigment, saffron extract are more preferable, crocetin, pharmaceutically acceptable salt of crocetin Further preferred.
  • ginkgo biloba extract in polyphenols, ginkgo biloba extract, mangosteen extract, strawberry seed extract, walnut polyphenol, guarana extract, Java ginger extract, nobiletin, blueberry leaf extract, cassis extract, curcumin, white curcuminoid, parsley extract, maquiberry extract, Polymethoxyflavonoids (PMF) are preferred, ginkgo biloba extract, mangosteen extract, strawberry seed extract, walnut polyphenol, guarana extract, and Java ginger extract are more preferred, and ginkgo biloba extract is more preferred.
  • PMF Polymethoxyflavonoids
  • myopia is axial myopia and refers to myopia caused by axial extension.
  • Axial extension can be detected using an adjustment paralytic agent or a mydriatic agent. That is, myopia mentioned here is caused by a shift in the focus of the naked eye excluding the amount of focus adjustment by the crystalline lens or ciliary body, and temporary eyesight such as accommodative myopia (pseudomyopia). It is different from myopia that returns when fatigue (ciliary muscle fatigue) is removed.
  • myopia refers to “decreased visual function”, “decreased ability to see”, “decreased ability to see far away”, “decreased ability to see far away”, “decreased basic eye performance” , Can also be defined as “original visual loss” or "focus shift”.
  • myopia is a symptom in which an image is formed in front of the retina and the object is far out of focus, and is caused by an increase in the axial length.
  • Such myopia is a symptom that occurs when the ciliary body is temporarily paralyzed due to eye fatigue (eye strain), accommodation cramps, accommodation tension, etc. (hereinafter referred to as “regulatory dysfunction” for convenience). Unlike, it is irreversible and cannot be restored.
  • the regulatory dysfunction was conventionally called pseudomyopia or accommodative tension myopia, but these are dysfunctions based on transient accommodative spasm and accommodative tension, not myopia.
  • Regulating dysfunction does not shift to myopia just because the symptom is neglected, but it can be improved by resting the eyes or by stopping the ciliary spasm with eye drops to relieve the tension of the lens.
  • myopia is not cured by these means of improvement.
  • what is advertised as myopia recovery or the like is intended for accommodation disorders and not for myopia. Therefore, when coordinating dysfunction and myopia coexist, resting eyes restores only coordinating dysfunction.
  • the present invention is for the prevention or treatment of myopia or mainly an eye disease that develops due to myopia.
  • the present invention temporarily causes eye fatigue (eye strain), accommodation spasm, accommodation tension, etc. It is characterized in that it is fundamentally and fundamentally different from that which improves the regulatory dysfunction caused by paralysis of the ciliary body and worsening lens movement.
  • the “eye disease” refers to an eye disease, particularly an eye disease that develops due to myopia, and specifically includes cataracts and posterior eye diseases.
  • posterior ocular disease refers to a disease in the vitreous, retina, choroid, sclera or optic nerve, specifically glaucoma, retinal detachment, macular hole, foveal sequestration, choroidal neoplasia. Includes blood vessels, posterior staphylocoma, myopic macular degeneration, myopic neuropathy.
  • the present embodiment is not limited to these definitions, and can be widely applied to symptoms, diseases, and the like related to eye axis extension.
  • the prevention or treatment of myopia or eye disease referred to here is suppression of myopia progression (axial extension), which is an abnormality that is different from normal axial extension (normal normalization) from infancy to school age. It is to prevent and treat complications that accompany it by suppressing the extension of the eye axis. That is, the prevention or treatment of myopia or eye disease referred to here is not only the prevention or treatment of myopia described in the previous paragraph (paragraph 0022), but also “normalization of refraction change or corneal curvature radius change due to eye axis extension” It can also be defined as "healthy eye growth support", “growth eye support”, “visual function maintenance” or "eye anti-aging”.
  • crocetin a pharmaceutically acceptable salt of crocetin, and a ginkgo biloba extract that are particularly preferably contained in the first embodiment of the ophthalmic composition of the present invention will be described in detail.
  • Crocetin is a group of natural pigments and one of the components classified as carotenoids. Crocetin is a component having a strong antioxidant action, and is a fruit of gardenia (Rubiaceae, Gardenia augusta MERRIL var., Grandiflora HORT., Gardenia jasminoides ELLIS), saffron (Circus genus crocus; It can be extracted with high purity.
  • This crocetin is usually obtained by hydrolyzing crocin (a digentiobiose ester of crocetin), which is a carotenoid yellow pigment. Crocin is contained in gardenia fruit, dried saffron stigma, etc., but gardenia fruit is preferably used as an industrial raw material for obtaining crocin.
  • crocin a digentiobiose ester of crocetin
  • the method for extracting crocin from the plant base is not particularly limited.
  • the crocin is extracted from pulverized dried fruit of gardenia using water, alcohol (eg, methanol, ethanol, etc.), or a mixture thereof.
  • the method is used.
  • the extraction conditions are preferably 1 to 18 hours at 0 to 50 ° C., more preferably 2 to 4 hours at 30 to 40 ° C.
  • the extraction operation is usually repeated several times.
  • the hydrolysis of crocin is preferably hydrolysis with alkali.
  • the hydrolysis may be performed with stirring and / or heating.
  • Hydrolysis is preferably performed at 20 to 70 ° C. with stirring, and is performed at 40 to 60 ° C. for 1 to 24 hours, preferably 3 to 5 hours.
  • crocetin When hydrolysis of crocin is hydrolysis with alkali, usually, after completion of hydrolysis, an appropriate amount of an aqueous solution of an inorganic acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid or phosphoric acid, or an organic acid such as citric acid is added to the reaction solution to a pH of 4.0.
  • an inorganic acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid or phosphoric acid, or an organic acid such as citric acid
  • crocetin can be precipitated preferably by adjusting the pH to 1.0 to 3.0. Then, the crocetin can be collected as a paste-like solid by centrifuging or filtering the mixed liquid in which crocetin is precipitated.
  • the obtained crocetin usually has an acid, a neutralized salt, and impurities derived from the raw material attached to the solid surface, it is subjected to a washing treatment for the purpose of removing the impurities.
  • the treatment may be performed using a known method such as washing the pasty solid with a sufficient amount of water.
  • the solid material washed with water for example, is dried at a temperature not exceeding about 50 ° C. in an atmosphere of nitrogen gas, and water remaining in the solid material is dried. Can be removed.
  • Crocetin is preferably 50% by mass or more in terms of purity, but is not limited to purity as long as crocetin content can be obtained.
  • the purity of crocetin can be calculated based on the color value of pure crocetin.
  • the color value can be calculated according to a conventional method with reference to “Food Additives Other than Chemically Synthetic Products, Voluntary Standard (Second Edition)”, edited by Japan Food Additives Association, “Kuchinashi Ajirin”.
  • crocetin can be obtained by hydrolyzing crocin contained in natural products such as plants as described above, or chemically synthesized crocetin. Moreover, you may use what is contained in natural products, such as gardenia fruit, gardenia extract, and saffron extract. From the viewpoint of safety and purity, it is more desirable to obtain crocetin from gardenia yellow (food labeling example).
  • alkali metal salts such as sodium and potassium
  • alkaline earth metal salts such as magnesium and calcium
  • pharmaceutically acceptable salts such as pyridine, dimethylamine, diethylamine and ethanolamine And salts of organic amino compounds to be prepared.
  • crocetin preparations examples include clobit (registered trademark) manufactured by Riken Vitamin Co., Ltd. “Crobit P (trade name)” is a powder property having a crocetin content of 75% or more, and “Crobit 2.5WD (trade name)” is a water-dispersible preparation having a crocetin content of 2.5% or more.
  • the qualitative / quantitative method for crocetin or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the ophthalmic composition of the present invention is not particularly limited as long as it is a scientifically valid method.
  • an ODS column and a concentration gradient mobile phase (TFA) The sample is separated by high-performance liquid chromatography using an aqueous solution ⁇ TFA water-methanol solution), and all-trans-crocetin, 13-cis-crocetin, etc. are used as standard materials. It can be quantified.
  • Ginkgo biloba extract is a plant extract based on terpene lactones represented by many flavonoids such as quercetin, kaempferol, and proanthocyanidins and ginkgolides, and has an effect of improving blood flow. It can be extracted from Ginkgo biloba.
  • Examples of commercially available ginkgo biloba extracts include Ginkgo biloba extract (manufactured by Indena Japan), Ginkgo biloba extract BG-50 (manufactured by Koei Kogyo Co., Ltd.), Ginkgo biloba extract-FM (manufactured by Tama Biochemical Co., Ltd.), Examples include Ginkgo biloba extract-F (manufactured by Tama Seikagaku Co., Ltd.) and Ginkgo biloba extract C (manufactured by Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.).
  • the ophthalmic composition of the present invention contains crocetin, pharmaceutically acceptable salts of crocetin, antioxidant plant extracts such as ginkgo biloba extract or components derived therefrom, the content is not particularly limited per day
  • the blending amount is 0.001 to 5000 mg / day, preferably 0.01 to 1000 mg / day, and more preferably 0.01 to 500 mg / day.
  • the ophthalmic composition of the present invention contains the above-mentioned component having an effect of enhancing the expression of the EGR-1 gene related to the suppression of the axial extension, it is used for enhancing the expression of EGR-1 and also for suppressing the axial extension. It is preferably used as an application.
  • the ophthalmic composition of the present invention is a myopia (especially axial myopia) or eye disease (especially glaucoma, retinal detachment, macular hole, foveal sequestration, choroidal neovascularization, posterior staphyloma) involving axial extension.
  • at least one kind of posterior ocular disease which is at least one selected from the group consisting of myopic macular degeneration and myopic neuropathy. The medicine and food which are preferable embodiments of such an ophthalmic composition will be described in detail below.
  • a pharmaceutical preparation can be obtained by adding a pharmaceutically acceptable excipient or the like.
  • the medicament of the present invention is not particularly limited as long as it can be used for the prevention or treatment of myopia or eye disease, but eye drops, oral preparations (tablets, capsules, granules, fine granules, powders, chewable, troches Solid preparations such as liquid preparations such as liquids and syrups), injections and the like. Of these, eye drops and oral preparations are preferable from the viewpoint that the effects of the present invention are easily achieved.
  • the ophthalmic composition of the present invention can contain other additives other than the above-described components in accordance with the properties, applications, and the like.
  • the target symptom / disease is not particularly limited as long as it is considered to be caused by extension of the axial axis, but myopia and eye disease are preferable.
  • myopia axial myopia is preferable, and axial myopia of a growing child and a younger group who are more likely to develop and progress axial myopia is more preferable.
  • cataract, glaucoma, retinal detachment, retinopathy, macular disease, choroidal neovascularization, posterior staphyloma and optic neuropathy are preferable, especially cataract, glaucoma, retinal detachment, macular hole, foveal sequestration, choroidal neoplasia More preferred are blood vessels, posterior staphylocoma, myopic macular degeneration, and myopic neuropathy.
  • the subject is a person who needs prevention or treatment of myopia or eye disease, and particularly, growth that is likely to cause myopia, especially axial myopia Children and young people, especially children younger than 20 years and young people in their 20s to 30s, preferably from 2 to 15 years, more preferably from 6 to 12 years Of children.
  • cataract glaucoma, retinal detachment, macular hole, foveal segregation, retinal edema, diabetic retinopathy, retinitis pigmentosa, macular edema, diabetic macular disease, myopic macular degeneration, age-related macular degeneration, myopic nerve It is also preferably used for middle-aged and elderly people who have a high risk of age-related eye diseases such as disability according to their symptoms.
  • the ophthalmic composition of the present invention is used for a near-work worker and / or an indoor worker, it is not particularly limited as long as it is a person having a risk factor of eye axis extension, but the target is mainly indoors.
  • violet light 360 to 400 nm visible light
  • children and school children who spend a relatively long time studying, reading, personal computers, television, and video games are preferred, and elderly people who tend to have less outdoor activities are also preferred.
  • ophthalmic composition of the present invention When the ophthalmic composition of the present invention is used as an eye drop, the solubility and stability in water of at least an antioxidant plant extract such as crocetin or a pharmaceutically acceptable salt thereof or components derived therefrom are considered.
  • an antioxidant plant extract such as crocetin or a pharmaceutically acceptable salt thereof or components derived therefrom.
  • Aqueous eye drops, in-use eye drops, suspension eye drops, oily eye drops, eye ointments and the like For example, since crocetin is a water-soluble carotenoid that has both a structure that is compatible with water and a structure that is compatible with oil, the dosage form of the ophthalmic composition of the present invention is usually an aqueous eye drop or suspension eye drop. Can do.
  • active ingredients can be added to the eye drops.
  • active ingredients such as decongestants, ocular muscle modulators, anti-inflammatory components, astringents, antihistamines, antiallergic agents, vitamins, amino acids, antibacterials.
  • examples thereof include medicinal components, saccharides, polymer compounds or derivatives thereof, cellulose or derivatives thereof, local anesthetic components, glaucoma treatment components other than the above components, and cataract treatment components other than the above components.
  • various components and additives are appropriately selected according to conventional methods according to the use and form within a range not impairing the effects of the present invention, and one or more of them may be contained in combination.
  • Can do for example, carriers generally used in the preparation of liquids, fragrances or refreshing agents, preservatives, bactericides or antibacterial agents, pH regulators, chelating agents, stabilizers, etc.
  • Various additives such as a tonicity agent, a buffering agent, a thickening agent, can be mentioned.
  • the typical component used for an eye drop below is illustrated, it is not limited to these.
  • the carrier examples include aqueous solvents such as water and hydrous ethanol.
  • a solubilizer may be used.
  • the solubilizer include polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyoxyl 40 stearate, povidone, polysorbate 80 and the like.
  • fragrance for example, terpenes (specifically, anethole, eugenol, camphor, geraniol, cineol, borneol, menthol, limonene, rhubarb, etc ..
  • terpenes specifically, anethole, eugenol, camphor, geraniol, cineol, borneol, menthol, limonene, rhubarb, etc .
  • These can be any of d-form, l-form or dl-form.
  • Good oils eg fennel oil, cool mint oil, cinnamon oil, spearmint oil, mint water, mint oil, peppermint oil, bergamot oil, eucalyptus oil, rose oil, etc.).
  • antiseptics, bactericides or antibacterial agents examples include polydronium chloride, alkyldiaminoethylglycine hydrochloride, sodium benzoate, ethanol, benzalkonium chloride, benzethonium chloride, chlorhexidine gluconate, chlorobutanol, sorbic acid, potassium sorbate, Sodium dehydroacetate, methyl paraoxybenzoate, ethyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, butyl paraoxybenzoate, oxyquinoline sulfate, phenethyl alcohol, benzyl alcohol, biguanide compounds (specifically, polyhexamethylene biguanide or its hydrochloride) Etc.), Glow Kill (trade name, manufactured by Rhodia) and the like.
  • polydronium chloride alkyldiaminoethylglycine hydrochloride
  • sodium benzoate ethanol
  • benzalkonium chloride benzethon
  • pH regulator examples include hydrochloric acid, sodium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide, magnesium hydroxide, triethanolamine, monoethanolamine, diisopropanolamine, sulfuric acid, phosphoric acid and the like.
  • chelating agents examples include ascorbic acid, tetrasodium edetate, sodium edetate, and citric acid.
  • the stabilizer examples include sodium edetate hydrate, povidone, polysorbate 80, dibutylhydroxytoluene, trometamol, sodium formaldehyde sulfoxylate (Longalite), tocopherol, sodium pyrosulfite, monoethanolamine, aluminum monostearate, Examples thereof include glyceryl monostearate.
  • tonicity agents examples include potassium chloride, sodium chloride, concentrated glycerin, glucose, D-mannitol and the like.
  • buffer examples include sodium citrate hydrate, sodium acetate hydrate, sodium hydrogen carbonate, trometamol, boric acid, borax, sodium hydrogen phosphate hydrate, sodium dihydrogen phosphate, and the like.
  • thickening agent examples include carboxyvinyl polymer, povidone, polyvinyl alcohol (partially saponified product), hydroxyethyl cellulose, hypromellose, methyl cellulose, glycerin and the like.
  • the eye drop of the present invention preferably contains 0.001 to 1% by mass of an antioxidant plant extract such as crocetin or a pharmaceutically acceptable salt thereof or a component derived therefrom. It is more preferable to contain by mass.
  • other additives can be blended in the range not expecting the effects of the present invention or inhibiting the effects of the present invention.
  • the content is not particularly limited, but the content in the composition is preferably about 0.001 to 1% by mass.
  • the pH of the eye drop may be 3 to 10, 4 to 9 is preferable from the viewpoint of use feeling, and 5 to 8.5 is more preferable from the viewpoint of use feeling.
  • known eye drop containers can be used without limitation.
  • an eye drop container a shape that can drop an eye drop into the eye, for example, a shape that includes a nozzle and a container mouth at the tip of the nozzle can be used.
  • the eye drop container for containing the eye drop of the present invention has a structure in which a nozzle formed separately from the container is attached to the container, and the nozzle part (liquid pouring part) and the container main body are integrally molded. Any of those having a structure (for example, a single-use type eye drop) may be used.
  • the container for storing the eye drops of the present invention may be usually made of plastic.
  • the constituent material of the plastic container is not particularly limited, but for example, any one of polyethylene terephthalate, polyarylate, polyethylene naphthalate, polycarbonate, polyethylene, polypropylene, polyimide, a copolymer thereof, or two of these The above mixture is mentioned.
  • polyethylene terephthalate, polyarylate, polyethylene naphthalate, a copolymer thereof, or a mixture of two or more of these is preferable from the viewpoint that the effects of the present invention can be easily exerted by adjusting the extrusion.
  • the eye drop of the present invention may be filled in a transparent container (a container having transparency that does not interfere with the observation of foreign matter) containing such a material as a main material, or in a light-shielded container. May be.
  • the light shielding may be performed, for example, by adding a colorant to the transparent container material, or may be shielded by covering the container with a shrink film, an outer box, or the like.
  • the capacity of the container is preferably about 0.5 to 50 mL, more preferably about 3 to 20 mL in order to make the effects of the present invention easier to exhibit by adjusting the extrusion.
  • the structure and constituent materials of the nozzle provided in the container for storing the eye drop of the present invention are not particularly limited.
  • a nozzle containing polyethylene or polypropylene as a constituent material is suitable.
  • the type of polyethylene include high-density polyethylene and low-density polyethylene. Among them, a nozzle including low-density polyethylene as a constituent material is preferable.
  • the eye drops of the present invention can be prepared by methods commonly used and known to those skilled in the art. For example, after each component is dispersed in a carrier such as water, a solubilizer is added if necessary, heated as necessary, and homogenized with a homogenizer, dissolved or emulsified, and a pH adjuster The pH may be adjusted by adjusting the pH.
  • a solubilizer is added if necessary, heated as necessary, and homogenized with a homogenizer, dissolved or emulsified, and a pH adjuster The pH may be adjusted by adjusting the pH.
  • methods for sterilizing the preparation methods such as autoclave sterilization and filter sterilization can be selected.
  • the dosage and administration of the eye drops of the present invention vary depending on the patient's symptoms, age, etc., but usually about 1 to 6 drops a day, about 1 to 2 drops at a time.
  • Oral preparation solid preparation
  • the ophthalmic composition of the present invention can be made into solid preparations such as tablets, capsules, granules, powders and the like.
  • An oral preparation has the advantage that it is excellent in portability and can be easily taken from the mouth.
  • the shape, weight, size, color, etc. of the oral preparation are designed in consideration of ease of handling and ease of ingestion.
  • various components and additives can be appropriately selected according to a conventional method according to the use and form, and one or more can be used in combination.
  • components such as the above-mentioned antioxidant plant extracts such as crocetin or a pharmaceutically acceptable salt thereof or components derived therefrom, carotenoids, polyphenols, etc.
  • Lubricants, binders, disintegrants and the like can be blended. If necessary, additives such as preservatives, antioxidants, colorants, sweeteners and the like can be used. Although the typical component used for a solid formulation is illustrated below, it is not limited to these.
  • excipients include sugar alcohols such as D-sorbitol, mannitol, and xylitol, sugars such as glucose, sucrose, lactose, and fructose, crystalline cellulose, carmellose sodium, croscarmellose sodium, calcium hydrogen phosphate, wheat starch , Rice starch, corn starch, potato starch, dextrin, ⁇ -cyclodextrin, light anhydrous silicic acid, titanium oxide, magnesium aluminate metasilicate, talc, kaolin, olive oil and the like.
  • sugar alcohols such as D-sorbitol, mannitol, and xylitol
  • sugars such as glucose, sucrose, lactose, and fructose
  • crystalline cellulose carmellose sodium, croscarmellose sodium
  • calcium hydrogen phosphate wheat starch
  • Rice starch corn starch, potato starch, dextrin, ⁇ -cyclodextrin
  • binder examples include cellulose derivatives such as methyl cellulose, ethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, polyvinyl pyrrolidone, polyvinyl alcohol, acrylic polymer, gelatin, gum arabic, pullulan, pregelatinized starch, agar, tragacanth, Examples include sodium alginate and propylene glycol ester alginate.
  • disintegrant examples include starch, low-substituted hydroxypropylcellulose, carboxymethylcellulose calcium, croscarmellose sodium, hydroxypropyl starch, and partially pregelatinized starch.
  • lubricant examples include stearic acid, magnesium stearate, calcium stearate, polyoxyl stearate, cetanol, talc, hydrogenated oil, sucrose fatty acid ester, dimethylpolysiloxane, beeswax, beeswax and the like.
  • additives can be blended within a range that does not impair the effects of the present invention.
  • the ophthalmic composition of the present invention can be prepared by methods known to those skilled in the art.
  • a method of pulverizing and sizing the extruded granulated product that is molded by kneading the composition and passing through a screen, and stirring granulation by adding kneading water to the composition and molding by a vertical granulator examples include a method of pulverizing and sieving using a comil, a method of compressing the preparation composition with a roller compactor, pulverizing and sieving with a roll granulator, and a method of drying a fluidized bed after stirring granulation Is done.
  • a method of pulverizing and sieving using a comil a method of compressing the preparation composition with a roller compactor, pulverizing and sieving with a roll granulator, and a method of drying a fluidized bed after stirring granulation Is done.
  • the ophthalmic composition of the present invention may be a liquid preparation such as a syrup or a drink.
  • a solvent such as a syrup or a drink.
  • a solubilizing agent such as a solubilizing agent, a suspending agent, a tonicity agent, a buffering agent, a soothing agent and the like can be added to the liquid preparation.
  • additives such as preservatives, antioxidants, colorant sweeteners and the like can also be used. These additives can be mix
  • solvent examples include water, alcohol, propylene glycol, macrogol, sesame oil, corn oil and the like.
  • solubilizer examples include polyethylene glycol, propylene glycol, D-mannitol, benzyl benzoate, ethanol, trisaminomethane, cholesterol, triethanolamine, sodium carbonate, sodium citrate and the like.
  • suspending agent / emulsifier examples include surfactants such as stearyltriethanolamine, sodium lauryl sulfate, laurylaminopropionic acid, lecithin, benzalkonium chloride, benzethonium chloride, and glyceryl monostearate; Hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone, sodium carboxymethylcellulose, methylcellulose, hydroxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose, hydroxypropylcellulose; for example, shellac wax, beeswax, carnauba wax, whale wax, lanolin, liquid lanolin, reduced lanolin, hard lanolin, cyclic lanolin And waxes such as lanolin wax, candelilla wax, mole, montan wax, shellac wax and rice wax.
  • surfactants such as stearyltriethanolamine, sodium lauryl sulfate, laurylaminopropionic acid, lecithin, benzalkonium chlor
  • Examples of the isotonic agent include sodium chloride, glycerin, D-mannitol and the like.
  • examples of the buffer include buffer solutions of phosphate, acetate, carbonate, citrate and the like.
  • soothing agents include benzyl alcohol.
  • examples of the preservative include p-hydroxybenzoates, chlorobutanol, benzyl alcohol, phenethyl alcohol, dehydroacetic acid, sorbic acid, and the like.
  • Examples of the antioxidant include sulfite and ascorbic acid.
  • the ophthalmic composition of the present invention is a liquid preparation
  • a usual method can be used.
  • an antioxidant plant extract such as crocetin or a pharmaceutically acceptable salt thereof or components derived therefrom in water are considered.
  • crocetin is a water-soluble carotenoid that has a structure that is compatible with water and a structure that is compatible with oil
  • the dosage form of the ophthalmic composition of the present invention can usually be an aqueous preparation or a suspension preparation. .
  • the dose of the oral preparation (solid preparation, liquid preparation) of the present invention can be appropriately set according to the target disease and condition, the degree of the disease, the age, weight, etc. of the subject.
  • the amount of crocetin is 0.075 to 75 mg / day per day, more preferably 0.1 to 25 mg / day, and still more preferably 0.25 to 10 mg / day.
  • the amount of extract other than crocetin is 0.1 to 5000 mg / day per day, more preferably 1 to 1000 mg / day, and still more preferably 10 to 300 mg / day.
  • the number of administrations may be once per day or multiple times.
  • the ophthalmic composition of the present invention can be provided by being contained in food.
  • functional foods include health foods, functional labeling foods, health supplement foods, nutritional functional foods, special-purpose foods, foods for specific insurance, and ordinary foods. Since these foods contain the ophthalmic composition of the present invention, those who need prevention or treatment of myopia or eye diseases, especially children with childhood or young age who are prone to develop or progress myopia, especially axial myopia.
  • middle-aged and elderly people who are at increased risk of age-related eye diseases such as strata, cataract, glaucoma, retinal detachment, retinopathy, macular disease, choroidal neovascularization, posterior staphyloma and optic neuropathy Can be suitably ingested. In addition to these, it can be widely ingested with the expectation of an improvement effect and the like for the suppression of the extension of the axial axis for the symptoms and diseases caused by the extension of the axial axis.
  • These foods are in the form of liquids such as juices, soft drinks, drinks and teas, solids such as biscuits, tablets, granule powders, powders and capsules, semi-fluid forms such as pastes, jellies, soups, seasonings and dressings. Etc.
  • cooked rice various breads including pizza, scones, biscuits, bagels, focaccia, croissants; various noodles including buckwheat, udon, harusame, Chinese noodles, instant noodles, cup noodles; spaghetti, macaroni, penne , Various pastas including lasagna; soft drinks, carbonated drinks, nutritive drinks, fruit drinks, lactic acid drinks, sports drinks, etc .; carreru, stews, various soups; ice cream, ice sherbet, shaved ice, etc .; Cookies, candy, gum, chocolate, tablet confectionery, snack confectionery, biscuits, jelly, jam, cream, other baked confectionery, etc .; processed fishery products such as kamaboko, hampen, ham, sausage; processed milk, fermentation Dairy products such as milk; salad oil, tempura oil, margarine, mayonnaise, short Fats and oils processed foods such as salmon, whipped cream and dressings; seasonings such as sauces, dressings, miso, soy sauce,
  • foods that can be provided by containing the ophthalmic composition of the present invention include supplements (powder, granules, soft capsules, hard capsules, tablets, chewable tablets, quick-disintegrating tablets, syrups, liquids, etc.).
  • the ophthalmic composition of the present invention can be contained in animal food such as pets.
  • These foods can be produced by adding crocetin or a pharmaceutically acceptable salt thereof by a method known to those skilled in the art.
  • Additives are added to food as needed.
  • additives include glucose, fructose, sucrose, maltose, sorbitol, stevioside, rubusoside, corn syrup, lactose, mannitol, dextrin, citric acid, sodium citrate, tartaric acid, malic acid, succinic acid, lactic acid L-ascorbic acid, dl- ⁇ -tocopherol, sodium erythorbate, glycerol, propylene glycol, glycerol fatty acid ester, polyglycerol fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, gum arabic, carrageenan, casein, gelatin, pectin, Agar, vitamin C, vitamin B, vitamin E, nicotinamide, calcium pantothenate, amino acids, calcium salts, surfactant, pigment, fragrance, preservative and the like can be mentioned.
  • the food in the present invention is myopia or eye disease (for example, cataract, glaucoma, retinal detachment, macular hole, foveal sequestration, retinal edema, diabetic retinopathy, retinitis pigmentosa, macular edema, diabetic macular disease, myopia It may be provided with a display indicating that it has a preventive action, an improvement action, etc. of posterior eye diseases such as macular degeneration, age-related macular degeneration, and myopic neuropathy.
  • myopia or eye disease for example, cataract, glaucoma, retinal detachment, macular hole, foveal sequestration, retinal edema, diabetic retinopathy, retinitis pigmentosa, macular edema, diabetic macular disease, myopia It may be provided with a display indicating that it has a preventive action, an improvement action, etc. of posterior eye diseases such as macular degeneration, age-related macular degeneration, and myo
  • the food according to the present invention is for growing children who are prone to develop or progress myopia (especially axial myopia); age-related posterior eye such as cataract, retinal detachment, glaucoma, macular degeneration, choroidal neovascularization, etc. It may be provided with indications such as for middle-aged and elderly people who are at high risk of cervical disease; for symptoms / diseases caused by axial extension; for suppressing axial extension.
  • myopia especially axial myopia
  • age-related posterior eye such as cataract, retinal detachment, glaucoma, macular degeneration, choroidal neovascularization, etc. It may be provided with indications such as for middle-aged and elderly people who are at high risk of cervical disease; for symptoms / diseases caused by axial extension; for suppressing axial extension.
  • ophthalmic compositions, pharmaceuticals (eye drops, oral preparations, etc.) and foods (functional foods, foods for specified health use, etc.) according to the present invention, especially the age when myopia develops or myopia progresses, especially growth It is effective for young children and young people.
  • it can suppress vision loss (onset of myopia, progression of myopia), mainly children under 20 years old and young people in their 20s to 30s, preferably 2 to 15 years, more preferably Has the effect of suppressing the extension of the axial length that is likely to occur in children aged 6-12 years.
  • posterior ocular diseases such as cataract, glaucoma, retinal detachment, retinopathy, macular disease, choroidal neovascularization, posterior staphyloma and optic neuropathy .
  • the second embodiment of the ophthalmic composition of the present invention is an ophthalmic composition containing an EGR-1 expression enhancer.
  • the EGR-1 expression enhancer refers to a substance capable of enhancing the expression intensity of the EGR-1 gene, which is known to be involved in the suppression of eye axis extension.
  • the ophthalmic composition of the present invention can be suitably used for the prevention or treatment of myopia and eye diseases considered to be one of the causes of ocular axial extension.
  • the ophthalmic composition of the present invention has an effect of maintaining visual acuity, and is particularly effective for an age group (such as a growing child and a younger group) in which myopia easily develops and progresses. It is also effective against posterior ocular diseases such as cataract, retinal detachment, glaucoma, macular degeneration, and choroidal neovascularization, which are considered to be caused by axial extension.
  • the EGR-1 expression enhancer preferably contains an antioxidant plant extract.
  • Preferred examples of the antioxidant plant extract include plant extracts containing carotenoids and polyphenols.
  • carotenoids and polyphenols those exemplified in the first embodiment of the present invention can be similarly exemplified here.
  • crocetin pharmaceutically acceptable salt of crocetin, gardenia extract (Yamakiko), gardenia pigment, saffron extract from the viewpoint of being superior in EGR-1 expression enhancing effect (inhibition effect of extension of the axial length) , ⁇ -carotene, lutein, zeaxanthin, astaxanthin, marigold extract, red paprika, paprika pigment, safflower extract, raffma extract, crocetin, pharmaceutically acceptable salt of crocetin, gardenia extract (mountain eggplant), gardenia pigment Saffron extract is more preferable, and pharmaceutically acceptable salts of crocetin and crocetin are more preferable.
  • ginkgo biloba extract In terms of polyphenols, which are superior in enhancing EGR-1 expression (inhibition of extension of axial length), ginkgo biloba extract, mangosteen extract, strawberry seed extract, walnut polyphenol, guarana extract, Java ginger extract, nobiletin, blueberry leaf Extract, cassis extract, curcumin, white curcuminoid, parsley extract, maquiberry extract, polymethoxyflavonoid (PMF) is preferred, ginkgo biloba extract, mangosteen extract, strawberry seed extract, walnut polyphenol, guarana extract, Java ginger extract, Ginkgo biloba extract is more preferred.
  • PMF polymethoxyflavonoid
  • the content of the EGR-1 expression enhancer in the ophthalmic composition of the present invention is not particularly limited as long as the effect of the present invention can be obtained, but is 0.001 to 20% by mass, for example, 0.01 It is preferably ⁇ 10% by mass, more preferably 0.1 to 5% by mass.
  • Preferred embodiments of the ophthalmic composition of the present invention containing an EGR-1 expression enhancer include pharmaceuticals and foods.
  • the description in the first embodiment can be applied to the specific description of other components that may be included when the ophthalmic composition of the present invention is used as a medicine or food.
  • the place described as an antioxidant plant extract or a component derived from it in the first embodiment can be understood by replacing it with “EGR-1 expression enhancer”.
  • the third embodiment of the ophthalmic composition of the present invention is an ophthalmic composition containing an axial extension inhibitor.
  • the axial extension inhibitor refers to a substance that has the effect of suppressing axial extension, and the ophthalmic composition containing this prevents myopia and eye diseases that are considered to be caused by axial extension. Or it can use suitably for a treatment.
  • the ophthalmic composition of the present invention has an effect of maintaining visual acuity, and is particularly effective for an age group (such as a growing child and a younger group) in which myopia easily develops and progresses. It is also effective against posterior ocular diseases such as cataract, retinal detachment, glaucoma, macular degeneration, and choroidal neovascularization, which are considered to be caused by axial extension.
  • the ocular axial stretch inhibitor examples include the above-mentioned EGR-1 expression enhancer, specifically antioxidant plant extracts, preferably carotenoids, polyphenols, etc., more preferably crocetin, crocetin and pharmaceutically acceptable. Salt, ginkgo biloba extract, mangosteen extract, strawberry seed extract, walnut polyphenol, guarana extract, Java ginger extract, more preferably crocetin, pharmaceutically acceptable salt of crocetin, ginkgo biloba extract, particularly preferably crocetin, And a pharmaceutically acceptable salt of crocetin.
  • the present invention also includes a case where an ophthalmic composition containing an axial extension inhibitor is used as a medicine or food. The description in the first embodiment can be applied to specific descriptions of other components. In addition, the location described as an antioxidant plant extract or a component derived therefrom in the first embodiment can be understood by replacing it with an “ocular extension inhibitor”.
  • Substances effective for the prevention or treatment of myopia or eye diseases can be screened using the EGR-1 gene expression intensity, which is known to be involved in ocular axial extension, as an index.
  • the EGR-1 gene is known to be involved in the development of the axial length, and it can be said that a substance having an effect of enhancing the gene expression has an effect of suppressing the extension of the axial axis.
  • the screening method of the present invention comprises (1) a step of treating cells, tissues, individuals, etc. with a test substance or negative control substance (hereinafter also referred to as “treatment step”), (2) cells or tissues, or cells of a subject. Alternatively, it includes at least a step of measuring the expression level of the EGR-1 gene in the tissue (hereinafter also referred to as “measurement step”).
  • the test substance is preferably at least one selected from the group consisting of carotenoids, polyphenols, and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • crocetin among carotenoids and ginkgo biloba extract among polyphenols are preferably used, but are not limited thereto.
  • one of them is crocetin or a ginkgo biloba extract.
  • the substance other than crocetin or ginkgo biloba extract is preferably a substance that promotes an increase in EGR-1 by a synergistic effect with crocetin or ginkgo biloba extract, but is not limited thereto.
  • the test substance can be crocetin alone, or crocetin and ginkgo biloba extract.
  • a cell or tissue when a cell or tissue is treated with a test substance or the like, it can be performed by a method well known to those skilled in the art.
  • the above-mentioned test substance or the like may be added to the culture medium of cultured cells and cultured for a certain time (eg, 1 to 72 hours).
  • EGR-1 gene expression in cells or tissues can be measured by methods well known to those skilled in the art.
  • the expression of EGR-1 mRNA in cells or tissues may be measured by a quantitative RT-PCR method.
  • the EGR-1 gene expression level may be measured by a luciferase reporter gene assay according to a conventional method.
  • the screening method of the present invention has an effect of suppressing the extension of the axial axis produced by containing at least one selected from the group consisting of carotenoids, polyphenols, and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • a method for screening a substance having an EGR-1 expression effect comprising: (a) at least one test substance selected from the group consisting of carotenoids, polyphenols, and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • a step of preparing the added specimen (referred to as (a) step), (b) a step of measuring EGR-1 expression of the specimen (referred to as (b) step), and (c) EGR-1 expression effect Selecting a test body that is recognized as a test substance, and selecting a test substance contained in the test body as an ocular extension inhibitor or EGR-1 expression enhancing substance (step (c)) Say.), It can be said that the screening method, including.
  • a nucleic acid containing a reporter gene linked to an EGR-1 gene is introduced into a cell used for screening, and into the cell, carotenoids, polyphenols, and pharmaceutically acceptable products thereof.
  • At least one test substance selected from the group consisting of a salt is introduced into a test body.
  • the reporter gene for example, a green fluorescent protein (GFP) gene, a luciferase gene and the like can be used, and those skilled in the art can easily select them.
  • the nucleic acid containing the reporter gene may be any nucleic acid that can express the reporter gene in the cell for performing the screening method of the present invention, and examples thereof include a plasmid vector and a virus vector. it can.
  • the cell used for the screening of the present invention may be any cell as long as it has a functioning EGR-1 gene and can express (can function) the reporter gene, and may be derived from any species. May be.
  • mammalian cells mammalian cells (mouse, rat, human, etc.) or avian cells (chicken chick, etc.) may be used.
  • the concentration may be diluted stepwise to prepare a test specimen containing a plurality of test substance concentrations.
  • a control experiment including a negative control substance can be prepared in the same manner as the test sample except that a negative control substance is included.
  • the step (b) is a step of measuring EGR-1 expression of the specimen.
  • it is a step of measuring EGR-1 expression by expression of the reporter gene.
  • changes in the expression of the reporter gene can be easily detected and measured by those skilled in the art.
  • a gene for a luminescent protein such as GFP or luciferase
  • the cells are lysed, and the lysate is transferred to a plate suitable for measuring luminescence to emit light.
  • the luminescence from the cultured cells may be measured directly.
  • a known luminometer can be used as a device used for measurement.
  • a test specimen in which the EGR-1 expression level measured in the step (b) is larger than that in the control experiment You can choose. That is, when a gene of a luminescent protein is used as a reporter gene, a test specimen having a large luminescence amount may be selected.
  • the substance for suppressing axial extension or the substance for enhancing EGR-1 expression obtained by the screening method of the present invention is for the purpose of improving the effect of suppressing axial extension or the effect of increasing EGR-1, or effectively improves myopia or eye diseases.
  • it can be blended into ophthalmic compositions, functional foods and the like.
  • Example 1 (Production of stable expression strain) An experiment for confirming the EGR-1 induction effect was conducted. First, a human fetal kidney cell line (HEK293T) and a lentiviral vector into which EGR-1 gene was introduced (product name “Signal Lenti EGR-1 Reporter (luc)”, Qiagen) were prepared. On day 1, human fetal kidney cell lines were seeded in 24-well plates and grown for 24 hours at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator. On day 2, lentivirus 150 ⁇ L / well was transduced, 12 ⁇ L SureENTRY transduction reagent (Qiagen) was added and placed at 37 ° C. overnight in a 5% CO 2 incubator.
  • a human fetal kidney cell line HEK293T
  • a lentiviral vector into which EGR-1 gene was introduced product name “Signal Lenti EGR-1 Reporter (luc)”, Qiagen
  • the lentivirus was then removed together with Medium (media) and screened with puromycin (1 ⁇ g / mL). Through these procedures, a HEK293T cell line (stable expression line) into which EGR-1 activity-dependent-Firefly-Luciferase was introduced was prepared.
  • HEK293T cell line obtained by gene transfer of EGR-1 activity-dependent Firefly-Luciferase was seeded at 1 ⁇ 10 4 cells / well in a 96-well plate. After the cells were engrafted on the bottom of the plate, a test reagent was added, and after 24 hours, the luminescence intensity was measured using a Luciferase assay system manufactured by Promega.
  • crocetin (Crobit P, manufactured by Riken Vitamin Co., Ltd.), Ginkgo biloba extract (Ginkgo biloba extract, manufactured by Indena Japan Co., Ltd.), walnut polyphenol (walnut polyphenol-P10, manufactured by Oriza Oil Chemical Co., Ltd.), mangosteen Extract (Mangosteen Aqua, manufactured by Nippon Shinyaku Co., Ltd.), Strawberry Seed Extract (Strawberry Seed Extract-P, manufactured by Oriza Oil Co., Ltd.), Guarana Extract (Garana Extract Powder, manufactured by Nippon Powder Co., Ltd.), Java Ginger Extract (Java Ginger) Extract powder (manufactured by Hosoda SHC Co., Ltd.) and PMA (12-millistart 13-acetate, abcam), which is a positive control for EGR-1 expression, were used.
  • test reagent is dissolved in DMSO (dimethyl sulfoxide) so that the final concentration is 0.25 mg / mL, and is allowed to stand overnight at room temperature (about 20 ° C.). 0.25 mg / mL test reagent was added to the solution.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • clobit P was used.
  • the clobit P is a powder having a crocetin content of 75% or more, and the crobit P was dissolved in DMSO (dimethyl sulfoxide) so as to be 100 mg / mL and left overnight at room temperature (about 20 ° C.). Thereafter, the supernatant was centrifuged and the supernatant was added to the cell culture medium to obtain 0.125 mg / mL test reagent and 0.25 mg / mL test reagent.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • FIG. 1 is a graph showing the results of EGR-1 expression induction with and without the addition of the various test reagents described above.
  • FIG. 2 is a graph showing the results when the concentration of crocetin (clobit P) used as a test reagent was changed.
  • crocetin clobit P
  • FIG. 1 compared to the case where only DMSO not containing the test reagent is added, the result of adding 0.25 mg / mL of crocetin (Crobit P) is 5.7 times higher in luminescence intensity.
  • a significant difference was also seen when compared with the control PMA. That is, the remarkable EGR-1 induction effect by crocetin was confirmed.
  • the luminescence intensity of the ginkgo biloba extract was about 3.8 times, and it was confirmed that the other test reagents had the same luminescence intensity as the positive control PMA.
  • the results of adding 0.125 mg / mL of clobit P and the results of adding 0.25 mg / mL of clobit P are obtained when only DMSO not containing a test reagent is added. It was remarkably enhanced compared to. That is, when the Dunnett test with DMSO was performed, it was 5.0 times (P ⁇ 0.01) at 0.125 mg / mL, and 5.2 times (P ⁇ 0.005) at a 0.25 mg / mL double concentration. And EGR-1 expression was significantly enhanced by crocetin in vitro.
  • Non-Patent Documents 9 and 10 are research papers reporting the relationship between the EGR-1 inducing effect and the axial length, and that the extension of the axial axis is observed in mice knocked out of EGR-1 (Non-patent Document 9). It has been verified that EGR-1 expression is enhanced when the axial extension is artificially suppressed (Non-patent Document 10). However, it has not yet been verified whether a drug capable of enhancing EGR-1 expression at the cellular level suppresses axial extension at the individual level and, as a result, suppresses myopia progression. Then, next, the verification test of the axial extension in a myopic model animal was carried out.
  • Experiment 2 a verification test of axial extension in a myopic model animal was performed. As the mouse, C57BL / 6J mouse (male 3 weeks old) was used. Control mice (MF, Oriental Yeast Industry Co., Ltd.) or 0.003% clobit P mixed diet (Oriental Yeast Industry Co., Ltd.) from 3 weeks to 6 weeks in a light environment (12 hours / 12 hours) Continued to give.
  • MF Oriental Yeast Industry Co., Ltd.
  • clobit P mixed diet Oriental Yeast Industry Co., Ltd.
  • Spectral domain optical coherence tomography (Envisu R4310, manufactured by Leica), an infrared photoreflector for mouse (Version, 0.15b3, manufactured by Horiuchi Electric Manufacturing Co., Ltd.) were used as measurement devices.
  • the infrared photoreflector for mice is Prof. F Schaeffel (Steinbeis Transfer Center, Germany) is an improved device that recognizes the eyes of the mouse, using infrared LEDs to illuminate the eyes of the mouse, and at the same time using infrared cameras to reflect infrared light from the eyes. Is a device that determines the degree of myopia from the shape and intensity of the reflected light.
  • This device is widely used in myopia research areas, and it is also possible to compare data across laboratories.
  • the refraction was averaged 100 times after a stable value was obtained. For each group, a welch-t test was performed. P value of 0.05 or less was significant (displayed in a graph as “*”), and 0.01 or less was highly significant (displayed in a graph as “**”). did.
  • Midrin P registered trademark, Santen Pharmaceutical Co., Ltd.
  • Three types of mixed anesthesia (medetomidine hydrochloride (Dmitor / registered trademark, Nippon Zenyaku Kogyo Co., Ltd.), mitazolam (Dormicum / registered trademark, Astellas Pharma Inc.), butorphanol tartrate (Betlfal / registered trademark, Meiji Seika Co., Ltd.),
  • atipamezole hydrochloride Antisedan / registered trademark, Nippon Zenyaku Kogyo Co., Ltd.
  • sodium pentobarbital Somnopentyl / registered trademark, Kyoritsu Pharmaceutical Co., Ltd.
  • glasses were attached to the mouse. Specifically, the skin at the top of the head was excised with a scissors, a post for eyeglasses made with a 3D printer was bonded onto the skull with a dental super bond (4-META / MMA-TBB resin), and a 0 Diopter lens on the left eye A -30 Diopter lens was attached to the right eye.
  • a dental super bond (4-META / MMA-TBB resin)
  • FIG. 3 shows the result of the axial length measurement
  • FIG. 4 shows the result of the refraction measurement. From the results shown in FIG. 3, in myopia-induced mice (0.003% in the graph) fed with 0.003% mixed diet of clobit P whose EGR-1 expression enhancing effect was confirmed in vitro [Experiment 1]. Ocular extension was significantly suppressed (p ⁇ 0.05) compared to mice fed food (control in the graph). Further, from the result of FIG. 4, the refraction (Diopter) is significantly (P ⁇ 0.01) by the myopia induction ( ⁇ 30D control in the graph) compared to the mouse not induced myopia (0D control in the graph). And myopia was induced in mice.
  • mice fed with clobit P diet 0.003% of ⁇ 30D in the graph
  • refraction was significant compared to mice fed control diet ( ⁇ 30D control in the graph) ( P ⁇ 0.05)
  • myopia induction was significantly suppressed by crocetin. That is, crocetin significantly prevented myopia progression in vivo. It was also confirmed that screening for drugs that suppress EGR-1 expression in vitro can efficiently screen for components that suppress the extension of the axial axis in an actual living body.

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Abstract

【課題】近視若しくは眼疾患の予防又は処置のために有効な眼科用組成物を提供する。特に、近視が発症・進行する成長期の子供や若年層、さらには、白内障、緑内障、網膜剥離、網膜症、黄斑症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫及び視神経症等の加齢性の眼疾患が発症してくる中高年層に効果的な眼科用組成物、その眼科用組成物を含む機能性食品、及びそれらを探索できるスクリーニング方法を提供する。 【解決手段】クロセチン及びその薬学的に許容される塩、並びにイチョウ葉エキスからなる群より選択される少なくとも１種の成分を含有する眼科用組成物又は機能性食品により上記課題を解決する。

Description

近視予防用組成物及び機能性食品
　本発明は、近視若しくは眼疾患の予防又は処置のために用いられる組成物及び機能性食品に関する。さらに詳しくは、本発明は、近視が発症したり近視が進行したりする年齢層、特に成長期の子供や若年層に効果的な組成物、眼疾患のリスクが高まる中高年層にも効果的な組成物、及びその組成物を含む機能性食品に関する。
　近視の頻度には人種差がある。特にアジア人に多く、中でも日本人は近視の多い人種であり、－５Ｄ以上の強度近視の割合も高い。また近年、近視は世界的に増加の一途をたどっており、日本でも裸眼視力１．０未満の児童の割合が年々増加している。また近視は７歳から１２歳の学童期に急激に進行することも知られている（非特許文献１を参照）。
　近視はその発症機序により屈折性近視、調節性近視（仮性近視）及び軸性近視に分類されるが、学童期における近視進行は主として軸性近視である。人間の眼は、誕生直後は遠視であり、成長期の眼軸伸展により遠視の程度が小さくなり、学童期に入ると正視化する。この正視化現象後の眼軸伸展はそのまま近視化に繋がり、そして一度伸展した眼軸長をもとに戻すことはできない。したがって、成長期から学童期に渡る期間の眼軸伸展の抑制が近視予防又は処置のために有効であると考えられている（非特許文献２を参照）。また、成長期だけでなく成人においても眼軸は伸展し、成人の眼軸伸展は様々な眼疾患のリスクファクターであると言われており、過度の眼軸伸展の結果である強度近視は、合併症として白内障、緑内障、網膜剥離、網膜症、黄斑症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫及び視神経症等の眼疾患の危険性を高める（非特許文献２を参照）。したがって、眼軸伸展の抑制は近視予防によるＱＯＬ改善をもたらすだけでなく、失明に至る重篤な眼疾患の予防に繋がり得る。
　この近視進行（過度の眼軸伸展）に対する抑制について、様々な方法が検討されている。これらの眼軸伸展抑制に関する過去の臨床研究結果をメタ解析したところ、アトロピン点眼、ピレンゼピン眼軟膏、オルソケラトロジー、周辺部デフォーカス型ソフトコンタクトレンズ、累進多焦点眼鏡の順で眼軸長において統計的に有意な抑制効果を示した。しかしながら、アトロピン点眼にみられる副作用や、オルソケラトロジー等における費用負担の問題や手段の煩雑さ、そして眼鏡装用では効果が限定的である等、解決しなければいけない点が残されている（非特許文献３を参照）。
　また、この近視進行（眼軸伸展）のリスクファクターに関する研究が進んでおり、年齢、性別、遺伝、社会・生活環境等が眼軸伸展と相関があると言われている（非特許文献４を参照）。特に近業作業（読み書き、ＶＤＴ（Ｖｉｓｕａｌ　Ｄｉｓｐｌａｙ　Ｔｅｒｍｉｎａｌｓ）作業）の増加とそれに伴う日光（特に３６０～４００ｎｍのバイオレットライト）暴露不足が、眼軸伸展のリスクファクターとして注目されつつある（非特許文献５を参照）。とは言え、現代日本社会において、勉強、読書、ＶＤＴ作業等の屋内が主のライフスタイルを改めさせることは非現実的であり、そのような近業作業が多く、バイオレットライト暴露に乏しい生活環境下でも近視進行を抑制する方法が求められている。
　一方、近視に関する研究として、動物を用いた眼軸伸展のメカニズムを解明する試みは１９７０年代より始まり、ＷｉｅｓｅｌとＲａｖｉｏｌａは近視と眼軸伸展との関連をｒｈｅｓｕｓ　ｍｏｎｋｅｙで実証した（非特許文献６を参照）。その後、ｔｒｅｅ　ｓｈｒｅｗ，　ｃｈｉｃｋｅｎ等の他の動物でも行われ、近視動物モデルが検討されてきた（非特許文献７，８を参照）。眼軸伸展、近視発症に関わる遺伝子は多数報告されており、ＥＧＲ－１／ＺＥＮＫ１もその一つである。ＥＧＲ－１ノックアウトマウスにおいて眼軸伸展と近視化が認められ、ＥＧＲ－１が眼軸伸展に関与していることが示唆されている（非特許文献９を参照）。しかしながら、ＥＧＲ－１がノックアウトされたマウスで眼軸伸展と近視の進行が認められたとは言え、複数存在する近視関連遺伝子の一つに過ぎないＥＧＲ－１について、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでその発現を増強する薬剤がｉｎ　ｖｉｖｏで実際に眼軸伸展を抑制し近視進行を抑制できるか否かは確かめられていない。
医学のあゆみ、Ｖｏｌ．２５３、Ｎｏ．２、２０１５年． 眼科、第５８巻６号、６３５－６４１、２０１６年． 医学のあゆみ、Ｖｏｌ．２４５、Ｎｏ．１０、２０１３年． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｉｃａ，Ｖｏｌ．２３５，７８－８６，２０１６． 坪田一男著、「あなたのこども、そのままだと近視になります。」ＩＳＢＮ９７８－４－７９９３－２０４１－９（出版社：ディスカヴァー・トゥエンティワン、発行年月：２０１７年２月）． Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．２６６，６６－６８，Ｍａｒｃｈ　１９７７． Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ，Ｖｏｌ．１２４，１５４－１５７，１９７７． Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２０１，１２４９－１２５１，１９７８． Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ　＆　Ｖｉｓｕａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．４８，１１－１７，Ｊａｎｕａｒｙ　２００７． Ｎａｔ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、Ｖｏ．２，７０５－７１２，１９９９．
　一般に、近視の発症には環境因子と遺伝的要因が関連することは広く知られている。最近では、屋外での生活や活動が減少し、室内での生活や活動が増えていることや、スマートフォン、ゲーム機、パーソナルコンピューター、液晶テレビ等の普及により子供から高齢者まで幅広い年齢層でそれらを長時間使用する生活環境になっており、近視化をもたらす近業作業の増加と屋内作業によるバイオレットライト暴露不足は悪化の一途を辿っている。このような背景から、近視予防に繋がる方法や組成物、あるいはそれらを探索できるスクリーニング方法が強く求められている。特に、上記ＥＧＲ－１遺伝子が眼軸伸展に関与していることに鑑み、ＥＧＲ－１遺伝子の発現を誘導する物質をスクリーニングし、当該物質を食品、医薬品、又はその他の方法で体内に取り込むことができれば、近視や眼疾患を有効に予防できることにつながる。
　本発明の目的は、近視若しくは眼疾患の予防又は処置のために有効な組成物を提供することである。特に、近視が発症・進行する成長期の子供や若年層、さらには、白内障、緑内障、網膜剥離、網膜症、黄斑症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫及び視神経症等の眼疾患のリスクが高まる中高年層に効果的である眼科用組成物、その眼科用組成物を含む機能性食品、及びそれらを探索できるスクリーニング方法を提供することである。
　上記課題を解決するために、本発明者等が種々検討した結果、眼軸伸展に関連するＥＧＲ－１遺伝子の発現を増強させる効果を有する成分を見出し、同時に、近視動物モデルにおいて眼軸伸展を抑制し、かつ近視進行を予防する成分を見出し、本発明を完成するに至った。したがって、本発明に係る組成物は、眼軸伸展が関与する近視若しくは眼疾患の予防又は処置に好適に用いることができる。即ち、本発明の要旨は、以下に記載する通りである。
［１］近視若しくは眼疾患の予防又は処置のために用いられる、クロセチン及びその薬学的に許容される塩、並びにイチョウ葉エキスからなる群より選択される少なくとも１種の成分を含有する、眼科用組成物。
［２］クロセチン及びその薬学的に許容される塩、並びにイチョウ葉エキス以外のカロテノイド類及び／又はポリフェノール類をさらに含有する、［１］に記載の眼科用組成物。
［３］前記近視が、軸性近視である、［１］又は［２］に記載の眼科用組成物。
［４］成長期の小児用である、［１］から［３］のいずれかに記載の眼科用組成物。
［５］前記近視が、強度近視である、［１］から［４］のいずれかに記載の眼科用組成物。
［６］前記眼疾患が、加齢による眼疾患である、［１］又は［２］に記載の眼科用組成物。
［７］前記眼疾患が、強度近視による合併症である、［１］又は［２］に記載の眼科用組成物。
［８］前記眼疾患が、白内障及び後眼部疾患である、［６］又は［７］に記載の眼科用組成物。
［９］前記後眼部疾患が、緑内障、網膜剥離、黄斑円孔、中心窩分離症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫、近視性黄斑変性、及び近視性神経障害からなる群より選択される少なくとも一種である、［８］に記載の眼科用組成物。
［１０］眼軸伸展抑制用である、［１］から［９］のいずれかに記載の眼科用組成物。
［１１］ＥＧＲ－１発現増強用である、［１］から［１０］のいずれかに記載の眼科用組成物。
［１２］クロセチン及びその薬学的に許容される塩、並びにイチョウ葉エキスからなる群より選択される少なくとも１種の成分を含有する、近視若しくは眼疾患の予防又は処置のための機能性食品。
［１３］［１］から［１１］のいずれかに記載の眼科用組成物を含む、機能性食品。
［１４］ＥＧＲ－１発現の増強効果の有無を指標とすることを特徴とする、近視若しくは眼疾患の予防又は処置に有効な物質のスクリーニング方法。
［１５］ＥＧＲ－１発現増強剤を含有する、眼科用組成物。
［１６］前記ＥＧＲ－１発現増強剤が、抗酸化性植物エキスを含む、［１５］に記載の眼科用組成物。
［１７］眼軸伸展抑制用である、［１５］又は［１６］に記載の眼科用組成物。
［１８］眼軸伸展抑制剤を含有する、眼科用組成物。
［１９］眼軸伸展抑制剤が、抗酸化性植物エキスを含む、［１８］に記載の眼科用組成物。
［２０］近視若しくは眼疾患の予防又は処置用である、［１５］から［１９］に記載の眼科用組成物。
［２１］近業作業者用及び／若しくは屋内作業者用である、クロセチン及びその薬学的に許容される塩、並びにイチョウ葉エキスからなる群より選択される少なくとも１種の成分を含有する眼科用組成物。
［２２］小児用である、［２１］に記載の眼科用組成物。
　本発明によれば、近視若しくは眼疾患の予防又は処置のために有効な眼科用組成物、それを含む機能性食品、及びそれらを探索できるスクリーニング方法を提供することができる。特に、本発明の眼科用組成物は、近視が発症・進行し易い成長期の子供や若年層、さらには、白内障、緑内障、網膜剥離、網膜症、黄斑症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫及び視神経症等の眼疾患のリスクが高まる中高年層に対して、各症状・疾患の予防又は処置のために好適に用いられる。
　また、本発明のスクリーニング方法は、眼軸伸展抑制効果又はＥＧＲ－１発現を向上させ得る物質の取得を可能とし、近視又は眼疾患を有効に改善できる眼科用組成物や機能性食品等の開発に有用である。
本発明の眼科用組成物に含まれる成分のＥＧＲ－１遺伝子発現に対する効果を示すグラフである。 本発明の眼科用組成物に含まれる試験試薬の含量を変えたときのＥＧＲ－１遺伝子発現に対する効果を示すグラフである。 実験２で得られた眼軸長測定の結果である。 実験２で得られた屈折測定の結果である。
　本発明に係る眼科用組成物、機能性食品及びスクリーニング方法について、以下に詳しく説明する。本発明は、その要旨を含めば、以下の実施形態に限定されず、変形例や応用例を包含する。
＜眼科用組成物／第１の実施形態＞
　本発明の眼科用組成物の第１の実施形態は、抗酸化性植物エキス又はそれ由来の成分、好ましくはカロテノイド類、ポリフェノール類を含有する。これらの成分は、軸性近視や種々の眼疾患の原因となり得る眼軸伸展に関与する遺伝子（ＥＧＲ－１）発現を調節する機能を有する。そのため、これらの成分を含有する眼科用組成物は、視力を維持する効果を奏し、近視が発症・進行し易い年齢層（成長期の子供、若年層等）に特に効果的である。また、眼軸伸展が原因のひとつと考えられている白内障、緑内障、網膜剥離、網膜症、黄斑症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫及び視神経症等の眼疾患に対しても効果的である。この眼科用組成物は、必須成分である抗酸化性植物エキス又はそれ由来の成分に加えて、本発明の効果を損なわない範囲で、その他の成分を含んでもよい。以下に、本発明の眼科用組成物が含有する成分について詳細に説明する。
　本発明の眼科用組成物が含有するカロテノイド類としては、クロセチン、クロセチンの薬学的に許容される塩、クチナシエキス（山梔子）、クチナシ色素、サフランエキス、発芽ブロッコリーエキス、ブロッコリースプラウトエキス、パプリカエキス、β－カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、アスタキサンチン、マリーゴールド抽出物、赤パプリカ、パプリカ色素、西洋人参エキス、トウガラシ抽出液、トチュウ葉エキス、ベニバナエキス、ラフマエキス等を挙げることができる。なお、括弧内は別名である。
　ポリフェノール類は、カロテノイド類と同様に抗酸化作用を有し、植物に含まれる苦み、渋み、色素の成分を有する化合物の総称である。本発明の眼科用組成物が含有するポリフェノールとしては、イチョウ葉エキス、マンゴスチンエキス、イチゴ種子エキス、クルミポリフェノール、ガラナエキス、ジャワショウガエキス、ノビレチン、ブルーベリー葉エキス、メリンジョエキス、ブドウレスベラトロール、リンゴンベリーエキス、コケモモエキス、グネチンＣ、ε－ビニフェリン、レスベラトロール、ブドウ種子エキス、黒大豆種皮ポリフェノール、黒豆種皮ポリフェノール、カシスエキス、クルクミン、ホワイトクルクミノイド、ポリメトキシフラボノイド（ＰＭＦ）、ジヒドロケルセチン、マリアアザミエキス、シリマリン、シリビニン、αＧヘスペリジン、ヘスペリジン、メチルヘスペリジン、オレンジ由来ルチノシド、ヘスペレチン、ピクノジェノール、オリゴノール、アマニリグナン、パセリエキス、マキベリーエキス、キウイ種子エキス、シソの実エキス、アカジソエキス、紫蘇葉、アロニアエキス、ハスカップエキス、シアニジン－３－グルコシド、ウラジロガシ抽出エキス、アサイーエキス、カムカムエキス、マロンポリフェノール、大豆イソフラボン、柑橘フルーツエキス、海藻ポリフェノール、パミスエキス、オリーブ果実エキス、スダチ果皮エキス、レンコンエキス、ウコンエキス、エキナケア（エキナセア）、荷葉エキス（ハスの葉）、カンカニクジュヨウ、グアバ葉エキス、クワ葉エキス、ベニバナエキス、コーンシルクエキス、サラシアエキス、シャゼンソウエキス（オオバコ）、セイヨウサンザシエキス、チンピエキス、田七人参エキス、甜茶エキス、トウヒ抽出液、ドクダミエキス、ヤーコンエキス、ラフマエキス、緑茶エキス等を挙げることができる。なお、括弧内は別名である。
　上記カロテノイド類やポリフェノール類としては、眼軸長の伸展を抑制する作用に優れると共に、付加的な特性（例えば保全性、安定性等）等を奏するものが好ましい。
　上記観点から、カロテノイド類では、クロセチン、クロセチンの薬学的に許容される塩、クチナシエキス（山梔子）、クチナシ色素、サフランエキス、β－カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、アスタキサンチン、マリーゴールド抽出物、赤パプリカ、パプリカ色素、ベニバナエキス、ラフマエキスが好ましく、クロセチン、クロセチンの薬学的に許容される塩、クチナシエキス（山梔子）、クチナシ色素、サフランエキスがより好ましく、クロセチン、クロセチンの薬学的に許容される塩がさらに好ましい。
　上記観点から、ポリフェノール類では、イチョウ葉エキス、マンゴスチンエキス、イチゴ種子エキス、クルミポリフェノール、ガラナエキス、ジャワショウガエキス、ノビレチン、ブルーベリー葉エキス、カシスエキス、クルクミン、ホワイトクルクミノイド、パセリエキス、マキベリーエキス、ポリメトキシフラボノイド（ＰＭＦ）が好ましく、イチョウ葉エキス、マンゴスチンエキス、イチゴ種子エキス、クルミポリフェノール、ガラナエキス、ジャワショウガエキスがより好ましく、イチョウ葉エキスがさらに好ましい。
　なお、本明細書において「近視」とは、軸性近視であり、眼軸伸展が原因となって起こる近視を指す。眼軸伸展は、調節麻痺剤や散瞳剤を用いて検出することができる。すなわち、ここで言う近視とは、水晶体や毛様体によってピント調節される分を除いた裸眼本来の焦点のズレによって起こるものであり、調節性近視（仮性近視）のように一時的な目の疲れ（毛様体筋の疲労）を除去すると元に戻る近視とは異なる。したがって、ここで言う近視は、“視機能の低下”、“見る力の低下”、“遠くを見る力の低下”、“遠くのものを見る力の低下”、“目の基本性能の低下”、“本来の視力の低下”あるいは“焦点のズレ”とも定義できる。
　より詳しくは、近視とは、網膜よりも前方で像が結ばれて遠くのものにピントが合わなくなる症状であり、眼軸長が長くなることによって生じる。こうした近視は、眼の疲労（眼精疲労）、調節痙攣、調節緊張等により一時的に毛様体が麻痺して水晶体の動きが悪化して起こる症状（以下、便宜的に「調節機能障害」という。）とは異なり、不可逆的で元には戻らない。調節機能障害は、従来、仮性近視や調節緊張性近視とも呼ばれていたが、これらは一過性の調節痙攣や調節緊張に基づく機能障害であり、近視ではない。調節機能障害は、その症状を放置したからといって近視に移行することはなく、目を休ませて改善したり、点眼液で毛様体の痙攣を止めて水晶体の緊張をほぐす等で改善したりする症状であるが、こうした改善手段では近視が治ることはない。例えば、一般に、近視回復等と宣伝されるのは調節機能障害を対象としたものであり、近視に対するものではない。したがって、調節機能障害と近視とが併存している場合は、目を休ませることにより調節機能障害だけが回復することになる。
　したがって、本発明は、近視若しくは主にその近視が原因で発症する眼疾患の予防又は処置のためのものであり、例えば眼の疲労（眼精疲労）、調節痙攣、調節緊張等により一時的に毛様体が麻痺して水晶体の動きが悪化して起こる調節機能障害を改善させるものとは本質的且つ根本的に異なる点に特徴がある。
　また、本明細書において「眼疾患」とは、眼に関する疾患、特に近視が原因で発症する眼疾患を言い、具体的には、白内障や後眼部疾患を挙げることができる。本明細書において「後眼部疾患」とは、硝子体、網膜、脈絡膜、強膜又は視神経における疾患を言い、具体的には、緑内障、網膜剥離、黄斑円孔、中心窩分離症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫、近視性黄斑変性、近視性神経障害を含む。しかしながら、本実施形態はこれらの定義に制限されることはなく、広く眼軸伸展が関連する症状・疾患等に適用可能である。
　また、ここで言う近視若しくは眼疾患の予防又は処置とは、近視進行（眼軸伸展）の抑制であり、乳児期から学童期にかけての正常な眼軸伸展（正常な正視化）とは異なる異常な眼軸伸展を抑制し、それに付随して発症する合併症を予防、治療することである。すなわち、ここで言う近視若しくは眼疾患の予防又は処置とは、前段落（第００２２段落）に言う近視を予防又は処置するだけでなく、“眼軸伸展による屈折変化あるいは角膜曲率半径変化の正常化”、“健やかな目の成長サポート”、“成長期の目のサポート”、“視機能の維持”あるいは“目のアンチエージング”とも定義できる。
　以下に、本発明の眼科用組成物の第１の実施形態が特に好ましく含有するクロセチン、クロセチンの薬学的に許容される塩、イチョウ葉エキスについて詳細に説明する。
　クロセチンは、天然色素の一群であり、カロテノイドに分類される成分の一つである。クロセチンは、強い抗酸化作用を持つ成分であり、クチナシ（アカネ科クチナシ属；Ｇａｒｄｅｎｉａ　ａｕｇｕｓｔａ　ＭＥＲＲＩＬ　ｖａｒ．、ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒａ　ＨＯＲＴ．、Ｇａｒｄｅｎｉａ　ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ　ＥＬＬＩＳ）の果実、サフラン（アヤメ科クロッカス属；Ｃｒｏｃｕｓ　ｓａｔｉｖｕｓ）の柱頭から高純度に抽出することができる。
　このクロセチンは、通常、カロテノイド系の黄色色素であるクロシン（クロセチンのジゲンチオビオースエステル）を加水分解することにより得られる。クロシンは、クチナシの果実、サフランの柱頭の乾燥物等に含まれるが、クロシンを得るための工業的原料としてはクチナシの果実が好ましく用いられる。
　植物基原からクロシンを抽出する方法は特に限定されず、例えば、粉砕されたクチナシの乾燥果実から水又はアルコール（例えば、メタノール、エタノール等）、又はそれらの混合液を用いて抽出する等の公知の方法が用いられる。抽出条件は、例えば水・アルコール混合液を用いた場合、０～５０℃で１～１８時間が好ましく、３０～４０℃で２～４時間がより好ましい。抽出操作は通常複数回繰り返される。
　工業的には、クロシンの加水分解はアルカリによる加水分解であるのが好ましい。また、加水分解は、攪拌及び／又は加熱下で行われてもよい。攪拌下、２０～７０℃で加水分解を行うことが好ましく、４０～６０℃で１～２４時間、好ましくは３～５時間行われる。
　クロシンの加水分解がアルカリによる加水分解である場合、通常、加水分解終了後、反応液に塩酸、硫酸、リン酸等の無機酸、又はクエン酸等の有機酸の水溶液を適量加え、ｐＨ４．０以下、好ましくはｐＨ１．０～３．０にすることで、クロセチンを析出させることができる。その後、クロセチンを析出させた混合液を、遠心分離、又はろ過することにより、クロセチンをペースト状の固形物として回収できる。
　得られたクロセチンには、通常、酸、中和塩及び原料由来の不純物が固形物表面に付着しているため、該不純物を除去する目的で、洗浄処理が行われる。該処理は、例えば、ペースト状の固形物を十分量の水を用いて水洗する等、公知の方法を用いて行ってよい。次に、例えば棚式の通風乾燥機又は真空乾燥機等を用いて、好ましくは窒素ガスの雰囲気下約５０℃を超えない温度で、例えば水洗した固形物を乾燥し、固形物に残留する水を除去することができる。
　クロセチンは、純度５０質量％以上であることが不純物が少ないという観点から好ましいが、有効性を発揮し得るクロセチン含量さえ得られるなら純度に限定されない。なお、クロセチンの純度は、純品のクロセチンの色価を基準として算出できる。色価は、常法に従って、「化学的合成品以外の食品添加物　自主規格（第二版）」、日本食品添加物協会編、「クチナシ黄色素」を参考にして算出することができる。
　クロセチンとしては、上述のように植物等の天然物に含まれるクロシンを加水分解することによって得ることもできるし、化学的に合成したものを用いてもよい。また、クチナシ果実、クチナシエキス、サフランエキス等の天然物に含まれているものを用いてもよい。安全性や純度の観点からは、クロセチンをクチナシ黄色素（食品表示例）から得ることがより望ましい。
　クロセチンの薬理学的に許容される塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩；マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属塩；ピリジン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン等の医薬的に許容される有機アミノ化合物の塩等が挙げられる。
　市販のクロセチン製剤としては、例えば理研ビタミン株式会社製のクロビット（登録商標）を例示できる。「クロビットＰ（商品名）」は、クロセチン含量７５％以上の粉末性状であり、「クロビット２．５ＷＤ（商品名）」は、クロセチン含量２．５％以上の水分散性製剤である。
　本発明の眼科用組成物中のクロセチン又はその薬学的に許容される塩の定性・定量方法は、科学的に妥当な方法であれば特に限定されないが、例えばＯＤＳカラムと濃度勾配移動相（ＴＦＡ水溶液→ＴＦＡ水－メタノール溶液）を用いた高速液体クロマトグラフィー法で試料を分離し、all-trans-クロセチンや13-cis-クロセチン等を標準物資とし、フォトダイオードアレイ検出器で被験物質を定性・定量することができる。
　イチョウ葉エキスは、ケルセチンやケンフェロール、プロアントシアニジンといった多数のフラボノイドとギンコライドに代表されるテルペンラクトンを主成分とした植物エキスで、血流改善の効果を持つエキスであり、乾燥したイチョウの葉（Ｇｉｎｋｇｏ　ｂｉｌｏｂａ．　Ｌ．）から常法により抽出することができる。
　市販のイチョウ葉エキスとしては、例えば、イチョウハカンソウエキス（インデナジャパン株式会社製）、イチョウ抽出液ＢＧ－５０（香栄興業株式会社製）、イチョウエキス－ＦＭ（タマ生化学株式会社製）、イチョウエキス－Ｆ（タマ生化学株式会社製）、イチョウ葉エキスＣ（丸善製薬株式会社製）を例示できる。
　本発明の眼科用組成物が含有する、クロセチン、クロセチンの薬学的に許容される塩、イチョウ葉エキス等の抗酸化性植物エキス又はそれ由来の成分の含有量は特に限定されないが、１日あたりの配合量として、０．００１～５０００ｍｇ／ｄａｙであり、０．０１～１０００ｍｇ／ｄａｙであることが好ましく、０．０１～５００ｍｇ／ｄａｙであることがより好ましい。
　本発明の眼科用組成物は、眼軸伸展抑制に関連するＥＧＲ－１遺伝子の発現を増強させる効果を有する上記成分を含有することから、ＥＧＲ－１発現増強用として、また、眼軸伸展抑制用として好適に用いられる。さらに、本発明の眼科用組成物は、眼軸伸展が関与する近視（特に軸性近視）若しくは眼疾患（特に緑内障、網膜剥離、黄斑円孔、中心窩分離症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫、近視性黄斑変性、及び近視性神経障害からなる群より選択される少なくとも一種である後眼部疾患）の予防又は処置のために好適に用いられる。このような眼科用組成物の好ましい実施形態である医薬及び食品について、以下に詳細に説明する。
　＜医薬＞
　本発明の眼科用組成物を医薬とする場合、薬学的に許容可能な賦形剤等を添加して医薬製剤とすることができる。本発明の医薬は、近視若しくは眼疾患の予防又は処置のために用いることができれば、特に限定されないが、点眼剤、経口剤（錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、チュアブル、トローチ等の固形製剤や、液剤、シロップ剤等の液体製剤）、注射剤等とすることができる。これらのうち、本発明の効果を奏し易いという観点から、点眼剤、経口剤が好ましい。本発明の眼科用組成物は、それぞれの性状、用途等に合わせて、上述した成分以外のその他の添加剤を含むことができる。
　本発明の眼科用組成物を医薬として用いる場合、対象とする症状・疾患は、眼軸伸展が原因のひとつと考えられるものであれば特に限定されないが、近視、眼疾患が好ましい。近視としては、軸性近視が好ましく、特に軸性近視の発症・進行が起こり易い成長期の小児、若年層の軸性近視がより好ましい。眼疾患としては、白内障、緑内障、網膜剥離、網膜症、黄斑症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫及び視神経症が好ましく、特に白内障、緑内障、網膜剥離、黄斑円孔、中心窩分離症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫、近視性黄斑変性、近視性神経障害がより好ましい。
　本発明の眼科用組成物を医薬として用いる場合、対象となるのは、近視若しくは眼疾患の予防又は処置を必要とする人であり、特に近視、中でも軸性近視の発症・進行が起こり易い成長期の小児や若年層、具体的には、主に２０歳未満の小児及び２０歳代～３０歳代の若年層、好ましくは２歳～１５歳、より好ましくは６歳～１２歳の成長期の小児である。また、白内障、緑内障、網膜剥離、黄斑円孔、中心窩分離症、網膜浮腫、糖尿病網膜症、網膜色素変性症、黄斑浮腫、糖尿病黄斑症、近視性黄斑変性、加齢黄斑変性、近視性神経障害等の加齢性の眼疾患リスクが高くなる中高年層に対しても、それぞれの症状に合わせて、好適に用いられる。
　本発明の眼科用組成物を近業作業者用及び／若しくは屋内作業者用として用いる場合、眼軸伸展のリスクファクターを有する人であれば特に限定されないが、対象となるのは、主に屋内の近業作業が多い人、あるいは主に屋外でのバイオレットライト（３６０～４００ｎｍの可視光）暴露が少ない人である。特に、勉強、読書、パーソナルコンピューター、テレビ、テレビゲームに費やす時間が比較的長い小児や学童が好ましく、屋外での活動が少なくなりがちな高齢者も好ましい。
（点眼剤）
　本発明の眼科用組成物を点眼剤として用いる場合には、少なくともクロセチン又はその薬学的に許容される塩等の抗酸化性植物エキス又はそれ由来の成分の水に対する溶解性及び安定性が考慮され、水性点眼剤、用時溶解点眼剤、懸濁性点眼剤、油性点眼剤、眼軟膏剤等から選ばれる。例えばクロセチンは、水になじむ構造と油になじむ構造とを併せもつカロテノイド水溶性であるので、本発明の眼科用組成物の剤形は、通常、水性点眼剤又は懸濁性点眼剤とすることができる。
　点眼剤には、上述の成分に加えて、その他の有効成分（薬理活性成分、生理活性成分等）を配合することができる。このような成分の種類は特に制限されず、例えば、充血除去成分、眼筋調節薬成分、抗炎症薬成分、収斂薬成分、抗ヒスタミン薬成分、抗アレルギー薬成分、ビタミン類、アミノ酸類、抗菌薬成分、糖類、高分子化合物又はその誘導体、セルロース又はその誘導体、局所麻酔薬成分、上記成分以外の緑内障治療成分、上記成分以外の白内障治療成分等が例示できる。
　点眼剤には、さらに本発明の効果を損なわない範囲で、その用途や形態に応じて、常法に従い、様々な成分や添加物を適宜選択し、一種又はそれ以上を併用して含有させることができる。それらの成分又は添加物として、例えば、液剤等の調製に一般的に使用される担体、香料又は清涼化剤、防腐剤、殺菌剤又は抗菌剤、ｐＨ調節剤、キレート剤、安定化剤、等張化剤、緩衝剤、粘稠化剤等の各種添加剤を挙げることができる。以下に、点眼剤に使用される代表的な成分を例示するが、これらに限定されない。
　担体としては、例えば、水、含水エタノール等の水性溶媒が挙げられる。なお、各種成分が水性溶媒に溶けにくい場合には、可溶化剤を用いてもよい。可溶化剤としては、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポビドン、ポリソルベート８０等が挙げられる。
　香料又は清涼化剤としては、例えば、テルペン類（具体的には、アネトール、オイゲノール、カンフル、ゲラニオール、シネオール、ボルネオール、メントール、リモネン、リュウノウ等。これらはｄ体、ｌ体又はｄｌ体のいずれでもよい。）、精油（ウイキョウ油、クールミント油、ケイヒ油、スペアミント油、ハッカ水、ハッカ油、ペパーミント油、ベルガモット油、ユーカリ油、ローズ油等）等が挙げられる。
　防腐剤、殺菌剤又は抗菌剤としては、例えば、塩化ポリドロニウム、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン、安息香酸ナトリウム、エタノール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン、クロロブタノール、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル、硫酸オキシキノリン、フェネチルアルコール、ベンジルアルコール、ビグアニド化合物（具体的には、ポリヘキサメチレンビグアニド又はその塩酸塩等）、グローキル（ローディア社製の商品名）等が挙げられる。
　ｐＨ調節剤としては、例えば、塩酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、トリエタノールアミン、モノエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン、硫酸、リン酸等が挙げられる。
　キレート剤としては、例えば、アスコルビン酸、エデト酸四ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸等が挙げられる。
　安定化剤としては、例えば、エデト酸ナトリウム水和物、ポビドン、ポリソルベート８０、ジブチルヒドロキシトルエン、トロメタモール、ナトリウムホルムアルデヒドスルホキシレート（ロンガリット）、トコフェロール、ピロ亜硫酸ナトリウム、モノエタノールアミン、モノステアリン酸アルミニウム、モノステアリン酸グリセリン等が挙げられる。
　等張化剤としては、例えば、塩化カリウム、塩化ナトリウム、濃グリセリン、ブドウ糖、Ｄ－マンニトール等が挙げられる。
　緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム水和物、酢酸ナトリウム水和物、炭酸水素ナトリウム、トロメタモール、ホウ酸、ホウ砂、リン酸水素ナトリウム水和物、リン酸二水素ナトリウム等が挙げられる。
　粘稠化剤としては、例えば、カルボキシビニルポリマー、ポビドン、ポリビニルアルコール（部分けん化物）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒプロメロース、メチルセルロース、グリセリン等が挙げられる。
　本発明の点眼剤は、クロセチン又はその薬学的に許容される塩等の抗酸化性植物エキス又はそれ由来の成分を０．００１～１質量％含有することが好ましく、０．０１～０．１質量％含有することがより好ましい。また、その他の添加剤は、本発明の効果を期待して、又は本発明の効果を阻害しない範囲内で配合することができる。その含有量は特に限定されないが、組成物中の含有量で０．００１～１質量％程度であることが好ましい。
　点眼剤のｐＨは、３～１０とすればよく、４～９が使用感の観点から好ましく、５～８．５が使用感の観点からより好ましい。
　本発明の点眼剤を充填する容器としては、公知の点眼容器を制限なく使用できる。点眼容器としては、通常、眼に点眼剤を滴下できる形状、例えばノズルを備え、ノズルの先に容器口を備える形状のものを使用することができる。また、本発明の点眼剤を収容する点眼容器としては、容器にそれとは別成形されたノズルが装着されている構造のもの、及びノズル部（液の注出部）と容器本体とが一体成型された構造のもの（例えば、１回使い切りタイプの点眼剤等）のいずれであってもよい。
　本発明の点眼剤を収容する容器は、通常プラスチック製とすればよい。該プラスチック容器の構成材質については、特に制限されないが、例えば、ポリエチレンテレフタレート、ポリアリレート、ポリエチレンナフタレート、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリイミドのいずれか１種、これらの共重合体、又はこれらの２種以上の混合体が挙げられる。特に押出の加減等で本願発明の効果を発揮し易い点から、ポリエチレンテレフタレート、ポリアリレート、ポリエチレンナフタレート又はこれらの共重合体、又はこれらの２種以上の混合体が好ましい。
　本発明の点眼剤は、このような材料を主材料とする透明容器（異物を観察するのに差し支えない程度の透明性を備えた容器）に充填されてもよいし、遮光された容器に充填されてもよい。遮光は、例えば透明容器材料に着色剤を添加することにより行ってもよいし、容器をシュリンクフィルムや外箱等で覆うことにより、遮光してもよい。また、容器の容量は、押出の加減等で本発明の効果をより一層発揮し易くするために、０．５～５０ｍＬ程度が好ましく、３～２０ｍＬ程度がより好ましい。
　また、本発明の点眼剤を収容する容器に備えられているノズルについても、その構造や構成素材については特に制限されるものではない。ノズルの構造については、点眼剤容器のノズルとして一般的に採用されている構造であればよく、またノズルの構成素材については、例えば、上記プラスチック容器の構成素材と同様のものが例示される。本発明の点眼剤の液切れを一層良好にさせ、滴下量のバラツキも抑えるという観点からは、ポリエチレン、又はポリプロピレンを構成素材として含むノズルが好適である。ポリエチレンの種類としては、高密度ポリエチレン、低密度ポリエチレン等が挙げられるが、中でも低密度ポリエチレンを構成素材として含むノズルが好適である。
　（点眼剤の製造方法）
　本発明の点眼剤は、当業者に慣用・公知の方法で調製できる。例えば、各成分を水等の担体に分散させた後、必要であれば可溶化剤を添加し、必要に応じて加温し、ホモジナイザー等を用いて均一化、溶解又は乳化させ、ｐＨ調整剤でｐＨを調整することにより調製すればよい。また、製剤の滅菌方法としては、オートクレーブ滅菌、ろ過滅菌等の方法を選択することができる。
（使用方法）
　本発明の点眼剤の用法・用量は、患者の症状、年齢等により変動するが、通常、１日約１～６回、１回約１～２滴を点眼すればよい。
（経口剤：固形製剤）
　本発明の眼科用組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の固形製剤とすることができる。経口剤は、携帯性に優れ、口から容易に一定量を取ることができるという利点がある。経口剤の形状は、取り扱い易さや摂取のし易さを考慮して、形状、重さ、大きさ、色等が設計される。固形製剤には、その用途や形態に応じて、常法に従い、様々な成分や添加物を適宜選択し、一種又はそれ以上を併用して含有させることができる。それらの成分又は添加物として、例えば、上述のクロセチン又はその薬学的に許容される塩等の抗酸化性植物エキス又はそれ由来の成分、カロテノイド類、ポリフェノール類等の成分以外に、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等を配合することができる。また必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤等の添加物を用いることもできる。以下に、固形製剤に使用される代表的な成分を例示するが、これらに限定されない。
　賦形剤としては、例えば、Ｄ－ソルビトール、マンニトール、キシリトール等の糖アルコール、ブドウ糖、白糖、乳糖、果糖等の糖類、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、リン酸水素カルシウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、β－シクロデキストリン、軽質無水ケイ酸、酸化チタン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、タルク、カオリン、オリーブ油等が挙げられる。
　結合剤としては、例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等のセルロース誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、アクリル酸系高分子、ゼラチン、アラビアゴム、プルラン、アルファー化デンプン、カンテン、トラガント、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル等が挙げられる。
　崩壊剤としては、例えば、デンプン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、部分アルファー化デンプン等が挙げられる。
　滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ポリオキシル、セタノール、タルク、硬化油、ショ糖脂肪酸エステル、ジメチルポリシロキサン、ミツロウ、サラシミツロウ等が挙げられる。
　これらの添加剤は、本発明の効果を阻害しない範囲内で配合することができる。
　（経口剤（固形製剤）の製造方法）
　本発明の眼科用組成物を固形製剤とする場合、当業者に慣用・公知の方法で調製できる。例えば、組成物を練合し、スクリーンを通過させることで成型する押出造粒物を、粉砕し、整粒する方法、前記組成物に練合水を加えバーチカルグラニュレーターによって成型する攪拌造粒の後に、コーミルを用いて粉砕・篩過する方法、及び前記製剤組成物をローラーコンパクターで圧縮した後、ロールグラニュレーターで粉砕し篩過する方法、撹拌造粒の後に、流動層乾燥する方法が例示される。また、例えば、直打により製造する場合には、組成物を混合した後、直接、打錠機に投入して打錠すればよい。
（経口剤：液状製剤）
　本発明の眼科用組成物は、例えば、シロップ剤、ドリンク剤等の液状製剤とすることもできる。液状製剤には、上述の成分以外に、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤等を配合することができる。また必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤甘味剤等の添加物を用いることもできる。これらの添加剤は、本発明の効果を阻害しない範囲内で配合することができる。
　溶剤としては、例えば、水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油等が挙げられる。
　溶解補助剤としては、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ－マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。
　懸濁化剤・乳化剤としては、例えば、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤；例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子；例えば、シェラックロウ、ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、環状ラノリン、ラノリンワックス、キャンデリラロウ、モクロウ、モンタンロウ、セラックロウ、ライスワックス等ワックス類等が挙げられる。
　等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ－マンニトール等が挙げられる。緩衝剤としては、例えば、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩等の緩衝液等が挙げられる。無痛化剤としては、例えば、ベンジルアルコール等が挙げられる。防腐剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸等が挙げられる。抗酸化剤としては、例えば、亜硫酸塩、アスコルビン酸等が挙げられる。
　本発明の眼科用組成物を液状製剤とする場合、通常の方法を使用することができる。液状製剤とする場合には、少なくともクロセチン又はその薬学的に許容し得る塩等の抗酸化性植物エキス又はそれ由来の成分の水に対する溶解性及び安定性が考慮される。例えばクロセチンは、水になじむ構造と油になじむ構造とを併せもつカロテノイド水溶性であるので、本発明の眼科用組成物の剤形は、通常、水性製剤又は懸濁性製剤とすることができる。
　本発明の経口剤（固形製剤、液状製剤）の投与量は、対象疾患及び状態、疾患の程度、対象者の年齢、体重等に応じて適宜設定することができる。クロセチン量としては、１日当たり０．０７５～７５ｍｇ／ｄａｙであり、０．１～２５ｍｇ／ｄａｙがより好ましく、０．２５～１０ｍｇ／ｄａｙがさらに好ましい。クロセチン以外のエキス量としては、１日当たり０．１～５０００ｍｇ／ｄａｙであり、１～１０００ｍｇ／ｄａｙがより好ましく、１０～３００ｍｇ／ｄａｙがさらに好ましい。投与回数としては、１日あたり１回でもよいし、複数回でもよい。
＜食品＞
　本発明の眼科用組成物は、食品に含有させて提供され得る。このような機能性食品としては、健康食品、機能性表示食品、健康補助食品、栄養機能食品、特別用途食品、特定保険用食品又は通常の食品等が挙げられる。これらの食品は、本発明の眼科用組成物を含むため、近視若しくは眼疾患の予防又は処置を必要とする人、特に近視、中でも軸性近視の発症・進行が起こり易い成長期の小児や若年層、白内障、緑内障、網膜剥離、網膜症、黄斑症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫及び視神経症等の加齢性の眼疾患のリスクが高くなる中高年層に対して、それぞれの症状に合わせて、好適に摂取され得る。また、これら以外であっても、眼軸伸展が原因で起こる症状・疾患に対して、眼軸伸展抑制用として改善効果等を期待して広く摂取され得る。
　これらの食品の形状としては、ジュース、清涼飲料、ドリンク剤、茶等の液状、ビスケット、タブレット、顆粒粉末、粉末、カプセル等の固形、ペースト、ゼリー、スープ、調味料、ドレッシング等の半流動状等が挙げられる。
　具体的には、米飯；ピザ、スコーン、ビスケット、ベーグル、フォカッチャ、クロワッサンを含む各種のパン類；そば、うどん、はるさめ、中華麺、即席麺、カップ麺を含む各種の麺類；スパゲッティ、マカロニ、ペンネ、ラザニアを含む各種のパスタ類；清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料、スポーツ飲料等の飲料；カレールー、シチュー、各種スープ類；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；飴、クッキー、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、その他の焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、はんぺん、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、ドレッシング、味噌、醤油、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、ふりかけ、漬物；その他種々の形態の健康・栄養補助食品等が例示される。
　さらに、本発明の眼科用組成物を含有させて提供され得る食品にはサプリメント（散剤、顆粒剤、ソフトカプセル、ハードカプセル、錠剤、チュアブル錠、速崩錠、シロップ、液剤等）も含まれる。
　また、ペット等の動物用の餌に対して本発明の眼科用組成物を含有させることもできる。
　これらの食品は、いずれも当業者に公知の方法によって、クロセチン又はその薬学的に許容される塩を添加して製造することができる。
　食品には、必要に応じて、添加物が加えられる。このような添加物としては、例えばブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、マンニット、デキストリン、クエン酸、クエン酸ソーダ、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ－アスコルビン酸、ｄｌ－α－トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＣ、ビタミンＢ類、ビタミンＥ、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、界面活性剤、色素、香料、保存剤等が挙げられる。
　本発明における食品は、近視若しくは眼疾患（例えば、白内障、緑内障、網膜剥離、黄斑円孔、中心窩分離症、網膜浮腫、糖尿病網膜症、網膜色素変性症、黄斑浮腫、糖尿病黄斑症、近視性黄斑変性、加齢黄斑変性、近視性神経障害等の後眼部疾患）の予防作用、同改善作用等を有する旨の表示を付したものであってもよい。また、本発明における食品は、近視（中でも軸性近視）の発症・進行が起こり易い、成長期の小児用；白内障、網膜剥離、緑内障、黄斑変性、脈絡膜新生血管等の加齢性の後眼部疾患のリスクが高くなる中高年層用；眼軸伸展が原因で起こる症状・疾患用；眼軸伸展抑制用等の表示を付したものであってもよい。
　以上、本発明に係る眼科用組成物、医薬（点眼剤、経口剤等）、食品（機能性食品、特定保健用食品等）は、近視が発症したり近視が進行したりする年代、特に成長期の子供や若年層に対して効果的である。特に、視力低下（近視の発症、近視の進行）を抑制することができ、主に、２０歳未満の小児及び２０歳代～３０歳代の若年層、好ましくは２歳～１５歳、より好ましくは６歳～１２歳の成長期の子供で起こり易い眼軸長の伸展を抑える作用効果を奏する。また、白内障、緑内障、網膜剥離、網膜症、黄斑症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫及び視神経症等の加齢性の後眼部疾患のリスクが高くなる中高年層に対しても効果的である。
＜眼科用組成物／第２の実施形態＞
　本発明の眼科用組成物の第２の実施形態は、ＥＧＲ－１発現増強剤を含有する眼科用組成物である。ここで、ＥＧＲ－１発現増強剤とは、眼軸伸展抑制に関与していることが知られているＥＧＲ－１遺伝子の発現強度を増強することができる物質をいう。本発明の眼科用組成物は、このＥＧＲ－１発現増強剤を含むことで、眼軸伸展が原因のひとつと考えられる近視や眼疾患の予防又は処置のために好適に用いることができる。本発明の眼科用組成物は、視力を維持する効果を奏し、特に近視が発症・進行し易い年齢層（成長期の子供、若年層等）に効果的である。また、眼軸伸展が原因のひとつと考えられている白内障、網膜剥離、緑内障、黄斑変性、脈絡膜新生血管等の後眼部疾患に対しても効果的である。
　ＥＧＲ－１発現増強剤は、抗酸化性植物エキスを含むことが好ましい。この抗酸化性植物エキスとしては、カロテノイド類、ポリフェノール類を含む植物エキスが好ましい例として挙げられる。なお、カロテノイド類、ポリフェノール類としては、本発明の第１の実施形態において例示したものをここでも同様に例示できる。
　上記カロテノイド類のうち、ＥＧＲ－１発現増強効果（眼軸長の伸展抑制効果）により優れるという観点から、クロセチン、クロセチンの薬学的に許容される塩、クチナシエキス（山梔子）、クチナシ色素、サフランエキス、β－カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、アスタキサンチン、マリーゴールド抽出物、赤パプリカ、パプリカ色素、ベニバナエキス、ラフマエキスが好ましく、クロセチン、クロセチンの薬学的に許容される塩、クチナシエキス（山梔子）、クチナシ色素、サフランエキスがより好ましく、クロセチン、クロセチンの薬学的に許容される塩がさらに好ましい。
　ポリフェノール類では、ＥＧＲ－１発現増強効果（眼軸長の伸展抑制効果）により優れるという観点から、イチョウ葉エキス、マンゴスチンエキス、イチゴ種子エキス、クルミポリフェノール、ガラナエキス、ジャワショウガエキス、ノビレチン、ブルーベリー葉エキス、カシスエキス、クルクミン、ホワイトクルクミノイド、パセリエキス、マキベリーエキス、ポリメトキシフラボノイド（ＰＭＦ）が好ましく、イチョウ葉エキス、マンゴスチンエキス、イチゴ種子エキス、クルミポリフェノール、ガラナエキス、ジャワショウガエキスがより好ましく、イチョウ葉エキスがさらに好ましい。
　本発明の眼科用組成物中のＥＧＲ－１発現増強剤の含有量は、本発明の効果が得られる範囲であれば特に限定されないが、例えば０．００１～２０質量％であり、０．０１～１０質量％であることが好ましく、０．１～５質量％であることがより好ましい。
　ＥＧＲ－１発現増強剤を含有する本発明の眼科用組成物の好ましい実施形態としては医薬、食品が挙げられる。本発明の眼科用組成物を医薬、食品とする場合に含んでもよいその他の成分等の具体的な説明は、第１の実施形態における説明を適用できる。なお、第１の実施形態において抗酸化性植物エキス又はそれ由来の成分として記載されている箇所は「ＥＧＲ－１発現増強剤」と置き換えて理解することができる。
＜眼科用組成物／第３の実施形態＞
　本発明の眼科用組成物の第３の実施形態は、眼軸伸展抑制剤を含有する眼科用組成物である。ここで、眼軸伸展抑制剤とは、眼軸伸展を抑制する効果がある物質を言い、これを含有する眼科用組成物は、眼軸伸展が原因のひとつと考えられる近視や眼疾患の予防又は処置のために好適に用いることができる。本発明の眼科用組成物は、視力を維持する効果を奏し、特に近視が発症・進行し易い年齢層（成長期の子供、若年層等）に効果的である。また、眼軸伸展が原因のひとつと考えられている白内障、網膜剥離、緑内障、黄斑変性、脈絡膜新生血管等の後眼部疾患に対しても効果的である。
　眼軸伸展抑制剤としては、例えば上述したＥＧＲ－１発現増強剤、具体的には抗酸化性植物エキス、好ましくはカロテノイド類、ポリフェノール類等、より好ましくはクロセチン、クロセチンの薬学的に許容される塩、イチョウ葉エキス、マンゴスチンエキス、イチゴ種子エキス、クルミポリフェノール、ガラナエキス、ジャワショウガエキス、さらに好ましくはクロセチン、クロセチンの薬学的に許容される塩、イチョウ葉エキスが挙げられ、特に好ましくはクロセチン、クロセチンの薬学的に許容される塩が挙げられる。眼軸伸展抑制剤を含有する眼科用組成物を医薬、食品とする場合も本発明に含まれる。その他の成分等の具体的説明は、第１の実施形態における説明を適用できる。なお、第１の実施形態において抗酸化性植物エキス又はそれ由来の成分として記載されている箇所は、「眼軸伸展抑制剤」と置き換えて理解することができる。
　＜近視若しくは眼疾患の予防又は処置に有効な物質のスクリーニング方法＞
　眼軸伸展に関与していることが知られているＥＧＲ－１遺伝子発現強度を指標として、近視若しくは眼疾患の予防又は処置に有効な物質をスクリーニングすることができる。ＥＧＲ－１遺伝子は眼軸長の進展に関与することが知られており、この遺伝子発現を増強させる効果を有する物質は、眼軸伸展を抑制する効果があると言える。
　本発明のスクリーニング方法は、（１）試験物質又は陰性対照物質で細胞、組織、個体等を処理する工程（以下、「処理工程」ともいう）、（２）細胞若しくは組織、又は被験体の細胞若しくは組織におけるＥＧＲ－１遺伝子の発現量を測定する工程（以下、「測定工程」ともいう）、を少なくとも含む。
　上記試験物質としては、カロテノイド類、ポリフェノール類、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。特に、カロテノイド類のうちクロセチン、ポリフェノール類のうちイチョウ葉エキスが好ましく用いられるが、これに限られるものではない。また、上記群より選択される２種以上の物質を試験物質とする場合には、そのうちの１種がクロセチン又はイチョウ葉エキスであることが好ましい。この場合、クロセチン又はイチョウ葉エキス以外の物質としては、クロセチン又はイチョウ葉エキスとの相乗効果でＥＧＲ－１の上昇を促す物質であることが好ましいが、これに限られるものではない。具体的には、試験物質をクロセチンのみとすることもできるし、クロセチン及びイチョウ葉エキスとすることも可能である。
　上記処理工程において、細胞又は組織を試験物質等で処理する場合は、当業者に周知の方法により行うことができる。例えば、培養細胞の培地中に上記試験物質等を添加し、一定時間（例えば１～７２時間）培養してもよい。また、被験体（ヒト又はその他の動物）に試験物質等を含む組成物を１回又は複数回摂取させてもよい。
　上記測定工程においては、細胞又は組織におけるＥＧＲ－１遺伝子発現を、当業者に周知の方法により測定することができる。例えば定量ＲＴ－ＰＣＲ法により、細胞又は組織におけるＥＧＲ－１ｍＲＮＡの発現を測定してもよい。また、ルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイにより、常法に従ってＥＧＲ－１遺伝子発現レベルを測定してもよい。
　すなわち、詳細には、本発明のスクリーニング方法は、カロテノイド類、ポリフェノール類、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種を含有させることにより生じる眼軸伸展抑制効果又はＥＧＲ－１発現効果を有する物質をスクリーニングする方法であって、（ａ）カロテノイド類、ポリフェノール類、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種の試験物質を添加した試験体を準備する工程（（ａ）工程という。）、（ｂ）上記試験体のＥＧＲ－１発現を測定する工程（（ｂ）工程という。）、及び（ｃ）ＥＧＲ－１発現効果が認められる試験体を選び、該試験体に含まれる試験物質を眼軸伸展抑制物質又はＥＧＲ－１発現増強物質として選択する工程（（ｃ）工程という。）、を含むスクリーニング方法と言える。
　上記（ａ）工程において、ＥＧＲ－１遺伝子が連結されたレポーター遺伝子を含む核酸が、スクリーニングに使用する細胞内に導入され、当該細胞に、カロテノイド類、ポリフェノール類、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種の試験物質を導入して試験体とする。
　レポーター遺伝子としては、例えば緑色蛍光蛋白質（ＧＦＰ）遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子などが利用可能であり、当業者であれば容易に選択することが可能である。また、レポーター遺伝子を含む核酸は、本発明のスクリーニング方法を実施する細胞内において、レポーター遺伝子を発現させるものであればいかなるものであってもよく、例えばプラスミドベクター、ウイルスベクター、等を挙げることができる。
　本発明のスクリーニングに使用する細胞は、ＥＧＲ－１遺伝子が機能し、且つ上記レポーター遺伝子が発現可能な（機能しうる）細胞であればいかなる細胞であってもよく、また、いかなる種由来であってもよい。例えば、ほ乳類細胞（マウス、ラット、ヒトなど）や、鳥類の細胞（ニワトリ雛など）を使用してもよい。
　ここで、試験体に添加する試験物質としては、その濃度を段階的に希釈しておき、複数の濃度の試験物質を含む試験体を調整してもよい。また、陰性対照物質を含む対照実験は、陰性対照物質を含む以外は、試験体と同様に準備することもできる。
　このようにして調整した試験体を用いて、次の（ｂ）工程に供する。
　上記（ｂ）工程は、上記試験体のＥＧＲ－１発現を測定する工程である。例えば、上記レポーター遺伝子の発現により、ＥＧＲ－１発現を測定する工程である。この場合、レポーター遺伝子の発現の変化は当業者であれば容易に検出・測定することが可能である。例えば、ＧＦＰやルシフェラーゼのように発光性の蛋白質の遺伝子をレポーター遺伝子として使用する場合には、細胞を培養後、細胞を溶解し、発光を測定するのに適したプレートに溶解物を移し発光を測定してもよく、あるいは、培養した細胞からの発光を直接測定してもよい。測定に使用する機器としては、例えば公知のルミノメーター等を使用することができる。
　上記（ｃ）工程において、眼軸伸展抑制作用又はＥＧＲ－１発現させる作用が強い物質を選択するには、上記（ｂ）工程において測定されたＥＧＲ－１発現量が対照実験よりも大きい試験体を選べばよい。すなわち、発光性の蛋白質の遺伝子をレポーター遺伝子として使用する場合には、発光量の大きい試験体を選べばよい。
　本発明のスクリーニング方法により得られる眼軸伸展抑制物質又はＥＧＲ－１発現増強物質は、眼軸伸展抑制効果又はＥＧＲ－１上昇効果を向上させることを目的として、あるいは近視もしくは眼疾患を有効に改善することを目的として、眼科用組成物や機能性食品等に配合することができる。
　本発明を実施例と比較例によりさらに詳しく説明する。
［実験１］
（安定発現株の作製）
　ＥＧＲ－１誘導効果の確認実験を行った。先ず、ヒト胎児腎細胞株（ＨＥＫ２９３Ｔ）と、ＥＧＲ－１遺伝子導入されたレンチウイルスベクター（製品名「Ｃｉｇｎａｌ　Ｌｅｎｔｉ　ＥＧＲ－１　Ｒｅｐｏｒｔｅｒ（ｌｕｃ）」、Ｑｕｉａｇｅｎ社）とを準備した。１日目、２４ウエルプレートにヒト胎児腎細胞株を播き、５％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃で２４時間増殖させた。２日目、レンチウイルス１５０μＬ／ウエルを形質導入し、さらに１２μＬのＳｕｒｅＥＮＴＲＹ形質導入試薬（Ｑｕｉａｇｅｎ社）を加え、５％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃で一晩置いた。その後、レンチウイルスをＭｅｄｉｕｍ（媒体）と一緒に除去し、ピューロマイシン（１μｇ／ｍＬ）を用いて選別した。こうした手順により、ＥＧＲ－１活性依存的－Ｆｉｒｅｆｌｙ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅを遺伝子導入してなるＨＥＫ２９３Ｔ細胞株（安定発現株）を作製した。
（遺伝子発現解析）
　次に、ルシフェラーゼを用いた遺伝子発現解析を行った。解析には、マルチモードプレートリーダー（製品名「Ｓｙｎｅｒｇｙ　ＨＴＸ」、ＢｉｏＴｅｋ社）を用いた。ＥＧＲ－１活性依存的－Ｆｉｒｅｆｌｙ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅを遺伝子導入してなるＨＥＫ２９３Ｔ細胞株を、９６ウエルプレートへ１×１０４個／ウエルを播種した。細胞がプレート底面へ生着した後に、試験試薬を添加し、２４時間後にＰｒｏｍｅｇａ社製のＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ａｓｓａｙ　ｓｙｓｔｅｍを用いて発光強度の測定を行なった。
　試験試薬としては、クロセチン（クロビットＰ、理研ビタミン株式会社製）、イチョウ葉エキス（イチョウハカンソウエキス、インデナジャパン株式会社製）、クルミポリフェノール（クルミポリフェノール－Ｐ１０、オリザ油化株式会社製）、マンゴスチンエキス（マンゴスチンアクア、日本新薬株式会社製）、イチゴ種子エキス（イチゴ種子エキス－Ｐ、オリザ油化株式会社製）、ガラナエキス（ガラナエキスパウダー、日本粉末株式会社製）、ジャワショウガエキス（ジャワしょうがエキス粉末、株式会社ホソダＳＨＣ製）、またＥＧＲ－１発現の陽性対照であるＰＭＡ（１２－ミリスタート　１３－アセタート、ａｂｃａｍ社製）を用いた。濃度が最終的に０．２５ｍｇ／ｍＬとなるように、上記の試験試薬をＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）に溶解し、一晩常温（約２０℃）に放置し、その後、遠心して上清を細胞培養液に添加し、０．２５ｍｇ／ｍＬの試験試薬を得た。
　なお、濃度を変えた試験では、クロビットＰを用いた。クロビットＰはクロセチン含量７５％以上の粉末であり、そのクロビットＰをＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）に１００ｍｇ／ｍＬとなるように溶解し、一晩常温（約２０℃）に放置した。その後、遠心して上清を細胞培養液に添加して、０．１２５ｍｇ／ｍＬの試験試薬と、０．２５ｍｇ／ｍＬの試験試薬を得た。
（結果）
　図１は、上記した種々の試験試薬を添加した場合と添加しない場合のＥＧＲ－１発現誘導の結果を示すグラフである。図２は、試験試薬として用いたクロセチン（クロビットＰ）の濃度を変えた場合の結果を示すグラフである。図１からわかるように、試験試薬を含まないＤＭＳＯだけを添加した場合に比べ、クロセチン（クロビットＰ）を０．２５ｍｇ／ｍＬ添加した場合の結果は、発光強度が５．７倍になり、陽性対照であるＰＭＡと比較しても顕著な差が見られた。すなわち、クロセチンによる顕著なＥＧＲ－１誘導効果が確認された。また、イチョウ葉エキスの発光強度も３．８倍程度になっているとともに、他の試験試薬も陽性対照であるＰＭＡと同等の発光強度になっているのが確認された。
　また、図２からわかるように、クロビットＰを０．１２５ｍｇ／ｍＬ添加した場合の結果と、クロビットＰを０．２５ｍｇ／ｍＬ添加した場合の結果は、試験試薬を含まないＤＭＳＯだけを添加した場合に比べ顕著に増強された。つまり、ＤＭＳＯとのＤｕｎｎｅｔｔ検定を実施したところ、０．１２５ｍｇ／ｍＬで５．０倍（Ｐ＜０．０１）、倍濃度の０．２５ｍｇ／ｍＬで５．２倍（Ｐ＜０．００５）と、それぞれ高度に有意であり、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいてクロセチンによりＥＧＲ－１発現が顕著に増強された。
　非特許文献９、１０は、ＥＧＲ－１誘導効果と眼軸長との関係を報告している研究論文であり、ＥＧＲ－１をノックアウトしたマウスで眼軸伸展が認められること（非特許文献９）と、眼軸伸展を人為的に抑制するとＥＧＲ－１発現が増強されること（非特許文献１０）が検証されている。しかし、細胞レベルでＥＧＲ－１発現を増強できる薬剤が、個体レベルで眼軸伸展を抑制し、その結果として近視進行が抑制されるか否かは未だ検証されていない。そこで、次に、近視モデル動物における眼軸伸展の検証試験を実施した。
［実験２］
　実験２では、近視モデル動物における眼軸伸展の検証試験を行った。マウスは、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（オス３週令）を使用した。マウスを光環境（１２時間／１２時間）下で、コントロール餌群（ＭＦ、オリエンタル酵母工業株式会社）又は０．００３％クロビットＰ混合餌（オリエンタル酵母工業株式会社）を３週令から６週令まで与え続けた。
（測定装置、測定手順）
　測定装置として、スペクトラルドメイン光コヒーレンストモグラフィー（Ｅｎｖｉｓｕ　Ｒ４３１０、Ｌｅｉｃａ社製）と、マウス用赤外線フォトリフレクター（Ｉｎｆｒａｒｅｄ　ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｏｒ　ｆｏｒ　ｍｉｃｅ）と、Ｖｅｒｓｉｏｎ　１．０．１５ｂ３、株式会社堀内電機製作所製）を用いた。なお、マウス用赤外線フォトリフレクターは、Ｐｒｏｆ．Ｆ　Ｓｃｈａｅｆｆｅｌ氏（Ｓｔｅｉｎｂｅｉｓ　Ｔｒａｎｓｆｅｒ　Ｃｅｎｔｅｒ、Ｇｅｒｍａｎｙ）作製のマウスの眼を認識可能に改良された装置であり、赤外線ＬＥＤを使ってマウスの目を照らし、それと同時に赤外線カメラを使って目からの赤外線反射光を感知し、反射光の形状と強度から近視度を判断する装置である。この装置は、近視研究領域において広く使われており、研究室を渡ってデータを比較することも可能である。屈折は、安定した値を得られてから１００回を平均した値を採用した。各群について、ｗｅｌｃｈ－ｔ検定を実施し、Ｐ値が０．０５以下を有意（”＊”としてグラフに表示）、０．０１以下を高度に有意（”＊＊”としてグラフに表示）とした。
　試験試薬として、測定時瞳孔を安定させるためにミドリンＰ（登録商標、参天製薬株式会社）を使用した。また、三種混合麻酔（塩酸メデトミジン（ドミトール／登録商標、日本全薬工業株式会社）、ミタゾラム（ドルミカム／登録商標、アステラス製薬株式会社）、酒石酸ブトルファノール（ベトルファール／登録商標、Ｍｅｉｊｉ　Ｓｅｉｋａ株式会社））、麻酔を覚ますために塩酸アチパメゾール（アンチセダン／登録商標、日本全薬工業株式会社）、ペントバルビタールナトリウム（ソムノペンチル／登録商標、共立製薬株式会社）を使用した。
　試験は、先ず、眼パラメーターを測定した。この測定は、(1)ミドリンＰ（登録商標）を点眼して両眼散瞳し、(2)三種混合麻酔を腹腔内に投与して麻酔をかけ、(3)マウス用赤外線フォトリフレクターで屈折を測り、(4)スペクトラルドメイン光コヒーレンストモグラフィーで眼軸長を測定した。
　次に、マウスに眼鏡を取り付けた。具体的には、頭頂部の皮膚を剪刀で切除し、歯科用スーパーボンド（４－ＭＥＴＡ／ＭＭＡ－ＴＢＢレジン）で頭蓋骨上に３Ｄプリンターで作成した眼鏡用支柱を接着し、左眼に０Ｄｉｏｐｔｅｒレンズ、右眼に－３０Ｄｉｏｐｔｅｒレンズを取り付けた。
　次いで、(a)アンチセダン（登録商標）を使って麻酔から覚まし、(b)各餌群に分けて飼育し（この際、眼鏡のレンズが汚れたときには随時クリーニングした）、(c)６週令になったら再度上記した眼パラメーターを測定した。
（結果）
　図３は眼軸長測定の結果であり、図４は屈折測定の結果である。図３の結果より、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［実験１］でＥＧＲ－１発現増強作用が確認されたクロビットＰの０．００３％混合餌を与えた近視誘導マウス（グラフ中の０．００３％）において、コントロール餌を与えたマウス（グラフ中のｃｏｎｔｒｏｌ）に比較して眼軸伸展が有意（ｐ＜０．０５）に抑制された。また図４の結果より、近視誘導していないマウス（グラフ中の０Ｄのｃｏｎｔｒｏｌ）と比較して近視誘導（グラフ中の－３０Ｄのｃｏｎｔｒｏｌ）により屈折（Ｄｉｏｐｔｅｒ）が有意（Ｐ＜０．０１）に低下し、マウスに顕著な近視が誘導された。また、同様にクロビットＰ餌を与えた近視誘導マウス（グラフ中の－３０Ｄの０．００３％）において、コントロール餌を与えたマウス（グラフ中の－３０Ｄのｃｏｎｔｒｏｌ）に比較して屈折が有意（Ｐ＜０．０５）に高く、近視誘導がクロセチンにより顕著に抑制された。つまり、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいてクロセチンが近視進行を顕著に予防した。また、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでＥＧＲ－１発現増強作用を有する薬物をスクリーニングすることで、効率よく実際の生体における眼軸伸展抑制成分をスクリーニングできることが確認された。
 

Claims (22)

  1. 　近視若しくは眼疾患の予防又は処置のために用いられる、クロセチン及びその薬学的に許容される塩、並びにイチョウ葉エキスからなる群より選択される少なくとも１種の成分を含有する、眼科用組成物。
  2. 　クロセチン及びその薬学的に許容される塩、並びにイチョウ葉エキス以外のカロテノイド類及び／又はポリフェノール類をさらに含有する、請求項１に記載の眼科用組成物。
  3. 　前記近視が、軸性近視である、請求項１又は２に記載の眼科用組成物。
  4. 　成長期の小児用である、請求項１から３のいずれか１項に記載の眼科用組成物。
  5. 　前記近視が、強度近視である、請求項１から４のいずれか１項に記載の眼科用組成物。
  6. 　前記眼疾患が、加齢による眼疾患である、請求項１又は２に記載の眼科用組成物。
  7. 　前記眼疾患が、強度近視による合併症である、請求項１又は２に記載の眼科用組成物。
  8. 　前記眼疾患が、白内障及び後眼部疾患である、請求項６又は７に記載の眼科用組成物。
  9. 　前記後眼部疾患が、緑内障、網膜剥離、黄斑円孔、中心窩分離症、脈絡膜新生血管、後部ぶどう腫、近視性黄斑変性、及び近視性神経障害からなる群より選択される少なくとも一種である、請求項８に記載の眼科用組成物。
  10. 　眼軸伸展抑制用である、請求項１から９のいずれか１項に記載の眼科用組成物。
  11. 　ＥＧＲ－１発現増強用である、請求項１から１０のいずれか１項に記載の眼科用組成物。
  12. 　クロセチン及びその薬学的に許容される塩、並びにイチョウ葉エキスからなる群より選択される少なくとも１種の成分を含有する、近視若しくは眼疾患の予防又は処置のための機能性食品。
  13. 　請求項１から１１のいずれか１項に記載の眼科用組成物を含む、機能性食品。
  14. 　ＥＧＲ－１発現の増強効果の有無を指標とすることを特徴とする、近視若しくは眼疾患の予防又は処置に有効な物質のスクリーニング方法。
  15. 　ＥＧＲ－１発現増強剤を含有する、眼科用組成物。
  16. 　ＥＧＲ－１発現増強剤が、抗酸化性植物エキスを含む、請求項１５に記載の眼科用組成物。
  17. 　眼軸伸展抑制用である、請求項１５又は１６に記載の眼科用組成物。
  18. 　眼軸伸展抑制剤を含有する、眼科用組成物。
  19. 　眼軸伸展抑制剤が、抗酸化性植物エキスを含む、請求項１８に記載の眼科用組成物。
  20. 　近視若しくは眼疾患の予防又は処置のために用いられる、請求項１５から１９のいずれか１項に記載の眼科用組成物。
  21. 　近業作業者用及び／若しくは屋内作業者用である、クロセチン及びその薬学的に許容される塩、並びにイチョウ葉エキスからなる群より選択される少なくとも１種の成分を含有する眼科用組成物。
  22. 　小児用である、請求項２１に記載の眼科用組成物。
     
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