WO2016140232A1 - ペプチド合成方法 - Google Patents

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WO2016140232A1
WO2016140232A1 PCT/JP2016/056319 JP2016056319W WO2016140232A1 WO 2016140232 A1 WO2016140232 A1 WO 2016140232A1 JP 2016056319 W JP2016056319 W JP 2016056319W WO 2016140232 A1 WO2016140232 A1 WO 2016140232A1
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peptide
compound
mmol
amino acid
group
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PCT/JP2016/056319
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悠介 河野
鈴木　秀明
武藤　進
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Jitsubo株式会社
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    • C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
    • C07K1/306—Extraction; Separation; Purification by precipitation by crystallization

Definitions

  • the present invention relates to a novel peptide synthesis method, and more specifically, to a peptide synthesis method capable of easily performing an accurate peptide elongation reaction.
  • liquid phase separation a method of realizing separation from other components by selectively dissolving (selective distribution) a specific component dissolved in a specific phase is also used. Yes. According to this method, a specific component can be separated without accompanying solidification (crystallization), which can contribute to speeding up and simplification of the process.
  • Such solidification (crystallization) of a specific component dissolved in a solution or selective dissolution (selective distribution) of a specific component in a specific phase of a liquid may cause the chemical properties, physical properties, and This is realized by satisfying certain conditions in relation to the solvent.
  • the conditions for solidification (crystallization) and selective dissolution (selective distribution) often have to be empirically searched by trial and error.
  • a carrier molecule having a linker that is selectively dissolved in a high concentration (selective distribution) has been proposed.
  • Various compounds can be bound to such a carrier molecule via a linker. For this reason, the bound compound can easily change its state from the dissolved state to the insolubilized (crystallized) state or vice versa with the carrier molecule.
  • the compound bound to the carrier molecule can be selectively dissolved at a high concentration (selective distribution) in a specific phase of the liquid separated into multiple phases.
  • such a carrier molecule can be reversibly repeated in a dissolved state and an insolubilized (crystallized) state under almost the same conditions, even when the chemical structure of the compound bonded by sequential chemical reaction changes.
  • it can be selectively dissolved at a high concentration (selective distribution) in a specific phase of the liquid separated into multiple phases.
  • a carrier molecule that reversibly changes between a dissolved state and an insolubilized (crystallized) state or that can induce a selective distribution state
  • a general liquid phase reaction in organic chemistry can be performed.
  • the compound to be separated can be selectively separated from the uniform solution state while using the knowledge as it is. That is, after the liquid phase reaction, it is possible to separate a specific compound while leaving other soluble components in the solution.
  • Patent Documents 1 to 4 benzyl alcohol compound introduced with a long-chain fatty acid proposed by the present inventors
  • Patent Document 5 a fluorene compound introduced with a long-chain fatty acid
  • Patent Document 6 a diphenylmethane compound
  • Peptide synthesis techniques include a solid phase peptide synthesis method (SPPS method) and a liquid phase peptide synthesis method (LPPS method).
  • SPPS method solid phase peptide synthesis method
  • LPPS method liquid phase peptide synthesis method
  • the solid phase peptide synthesis method cannot be purified at each stage of the amino acid extension reaction.
  • the synthesis cost is high, so it is suitable for small-scale production.
  • the liquid phase peptide synthesis method is widely used for mass production.
  • the peptide chain becomes long, the peptide elongation reaction becomes difficult, and there is a problem in the synthesis of the long chain peptide. Therefore, it has been proposed to synthesize peptides using the above-mentioned carrier capable of reversibly repeating a dissolved state and an insolubilized state (Patent Documents 1 to 6).
  • the amino acid active species are removed from the reaction system by washing before deprotection.
  • the following methods have been proposed.
  • a liquid phase peptide synthesis method using a benzyloxycarbonyl group (Cbz or Z) or a t-butyloxycarbonyl group (Boc) as a protecting group in order to remove the active ester of an amino acid remaining in the reaction system, ⁇ - A method of adding an amine having an anion component such as alanine-OBz as a scavenger has been proposed (Patent Document 7).
  • the anionic component protecting group of the scavenge is also removed at the same time and becomes water-soluble. Thereafter, liquid-liquid extraction is performed with an alkaline water-organic solvent, and then the condensing agent and the amino acid component are removed with water.
  • Cbz is used as a protecting group
  • the deprotection catalyst is deactivated and cannot be applied. In this method, dibenzofulvene cannot be removed, so that fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) cannot be used as a protecting group.
  • the active ester is hydrolyzed with alkaline water (for example, 5% aqueous sodium carbonate solution) in order to remove the active ester of the amino acid remaining in the reaction system.
  • alkaline water for example, 5% aqueous sodium carbonate solution
  • a method for removing amino acid components by liquid-liquid extraction has been proposed (Patent Document 8).
  • dibenzofulvene cannot be removed, fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) cannot be used as a protecting group.
  • Non-patent Document 1 As a method for removing the Fmoc group in peptide synthesis, after deprotecting Fmoc from the N-terminus, an alkylthiol or a solid phase thiol is allowed to coexist to produce dibenzofulvene, and after concentration, the peptide component with ether Although a method for removing the dibenzofulvene adduct by crystallization and solid-liquid separation has been reported, there is no description about the removal of the amino acid active ester (Non-patent Document 1).
  • the present invention can easily solve the problem of amino acid active species present in the reaction system during the deprotection reaction in a peptide synthesis reaction using a carrier capable of reversibly repeating a dissolved state and an insolubilized state.
  • An object is to provide a peptide synthesis method.
  • the present invention includes the following.
  • the carrier is A compound having the following structure (sometimes referred to as “Ka” in the present specification):
  • R 1 and R 5 are hydrogen atoms, and R 2 , R 3 and R 4 are alkoxyl groups having 8 to 30 carbon atoms, preferably 12 to 22 carbon atoms. Is a group represented by the following formula and bonded to the C-terminus of an amino acid or peptide:
  • R 7 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, a benzyl group, or an alkoxy-substituted benzyl group
  • R 6 represents a hydrogen atom, a phenyl group, or an alkoxy-substituted phenyl group
  • R 2 , R 4 and R 5 are hydrogen atoms, and R 1 and R 3 are alkoxyl groups having 12 to 30 carbon atoms, preferably 18 to 22 carbon atoms. Is a group represented by the following formula and bonded to the C-terminus of an amino acid or peptide:
  • R 7 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, a benzyl group, or an alkoxy-substituted benzyl group
  • R 6 represents a hydrogen atom, a phenyl group, or an alkoxy-substituted phenyl group
  • R 1 , R 3 and R 5 are hydrogen atoms, and R 2 and R 4 are alkoxyl groups having 12 to 30 carbon atoms, preferably 18 to 22 carbon atoms. Is a group represented by the following formula and bonded to the C-terminus of an amino acid or peptide:
  • R 7 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, a benzyl group, or an alkoxy-substituted benzyl group
  • R 6 represents a hydrogen atom, a phenyl group, or an alkoxy-substituted phenyl group
  • the peptide synthesis method according to (1) above which is a compound selected from the group consisting of: (5) The peptide synthesis method according to any one of (1) to (4), wherein the amine is an alkylamine or hydroxylamine having 1 to 10 carbon atoms. (6) The peptide synthesis method according to any one of (1) to (5) above, wherein the amine is an alkylamine having 3 or 4 carbon atoms.
  • the amine equivalent in step b is 1 to 30 times the theoretically remaining amino acid equivalent after the condensation reaction in step a, according to any one of the above (1) to (6) Peptide synthesis method.
  • the composition changing means for changing the solvent composition in which the obtained C-carrier-protected peptide is dissolved is obtained by concentrating the solvent in the solution and then adding a poor solvent and solidifying the solution.
  • the peptide synthesis method according to (8), wherein the poor solvent is a solvent selected from the group consisting of acetonitrile, water-containing acetonitrile, methanol in any proportion, water-containing methanol in any proportion, and water.
  • the peptide synthesis method of the present invention is excellent in versatility because it can solve the problem of amino acid active species present in the reaction system during the deprotection reaction by a simple means.
  • the peptide synthesized according to the present invention has few problems of amino acid omission and double hit, and according to the method of the present invention, a peptide with high yield and high quality can be synthesized.
  • N-Fmoc-protected amino acid and an amino acid whose N-terminus is protected with peptide fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) means that the amino group of the amino acid is protected with Fmoc, whereas the carbonyl group is By amino acids that are unprotected and reactive.
  • a peptide in which the N-terminus is protected with fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) (N-Fmoc-protected peptide) is a peptide chain in which the N-terminal amino group is protected with Fmoc, while the C-terminal carbonyl group is protected.
  • N-Fmoc-protected amino acid or N-Fmoc-protected peptide has a functional group rich in reactivity such as a hydroxyl group, amino group, guanidyl group, carboxyl group, sulfhydryl group, etc.
  • these functional groups are generally used in peptide chemistry.
  • a protective group may be introduced, and the target compound can be obtained by removing the protective group as necessary after completion of the reaction.
  • Examples of the protecting group for the hydroxyl group include tBu group, Trt group, Bz group, acetyl group, silyl group and the like, and examples of the protecting group for amino group include Boc group, Fmoc group, Cbz group, Trt group, Mmt group, ivDde group.
  • Examples of protecting groups for guanidyl groups include Pbf, Pmc, and nitro groups.
  • Examples of protecting groups for carboxyl groups include tBu, methyl, ethyl, and Bz.
  • Examples of the protecting group include a Trt group, an Acm group, a tBu group, and an S-tBu group.
  • C-carrier protected amino acids Amino acids whose C-terminal is protected by a carrier that is crystallized as the solvent dissolves (C-carrier protected amino acids) It means an amino acid that is protected with the described carrier, while the amino group is unprotected and reactive.
  • a peptide in which the C-terminus is protected by a carrier that is crystallized as the composition of the dissolved solvent changes (C-carrier-protected peptide) means that the C-terminal carboxyl group of the peptide chain is protected by the carrier described below.
  • the N-terminal amino group means a peptide that is not protected and is reactive.
  • An amino acid amide in which the C-terminal is protected with a carrier that is crystallized with a change in the composition of the dissolved solvent means that the carboxyl group of the amino acid is protected with the carrier described below, On the other hand, an amino group means an amino acid amide that is not protected and is reactive.
  • the C-carrier protected amino acid has a reactive functional group such as a hydroxyl group, an amino group, a guanidyl group, a carboxyl group, a sulfhydryl group, etc.
  • a general protecting group used in peptide chemistry may be introduced, and the target compound can be obtained by removing the protecting group as necessary after the completion of the reaction.
  • Examples of the protecting group for the hydroxyl group include tBu group, Trt group, Bz group, acetyl group, silyl group and the like, and examples of the protecting group for amino group include Boc group, Fmoc group, Cbz group, Trt group, Mmt group, ivDde group.
  • Examples of protecting groups for guanidyl groups include Pbf, Pmc, and nitro groups.
  • Examples of protecting groups for carboxyl groups include tBu, methyl, ethyl, and Bz.
  • Examples of the protecting group include a Trt group, an Acm group, a tBu group, and an S-tBu group.
  • a carrier that crystallizes with a change in the dissolved solvent composition is a solution state and solidification due to a composition change of the solvent in which the carrier is dissolved
  • a carrier in which the (crystallized) state reversibly changes.
  • Specific examples include, but are not limited to, for example, the following compounds, and the C-terminus used in the present invention is protected with a carrier by binding these compounds to the C-terminus of an amino acid or peptide.
  • C-carrier protected amino acids, C-carrier protected peptides, or C-carrier protected amino acid amides can be made.
  • Carrier A A compound having the following structure (sometimes referred to as “Ka” in the present specification):
  • R 1 and R 5 are hydrogen atoms
  • R 2 , R 3 and R 4 are alkoxyl groups having 8 to 30 carbon atoms.
  • RX is represented by the following formula: A group that binds to the C-terminus of an amino acid or peptide
  • R 7 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, a benzyl group, or an alkoxy-substituted benzyl group
  • R 6 represents a hydrogen atom, a phenyl group, or an alkoxy-substituted phenyl group
  • R 2 , R 3 and R 4 have more preferably 8 to 22 carbon atoms, and still more preferably 12 to 18 carbon atoms.
  • RX is more preferably a hydroxymethyl group, an aminomethyl group, or a mercaptomethyl group, and even more preferably a hydroxymethyl group.
  • 3,4,5-trioctadecylbenzyl alcohol 3,4,5-trioctadecylbenzylamine, 3,4,5-trioctadecylbenzylthiol, and more preferred 3,4,5-trioctadecylbenzyl alcohol and 3,4,5-trioctadecylbenzylamine, and most preferred is 3,4,5-trioctadecylbenzyl alcohol represented by the following formula.
  • a method generally used in peptide synthesis can be used without limitation in the present invention for binding of the above compound to the C-terminal of an amino acid or peptide, for example, by esterification using DIPCI.
  • Carrier B A compound having the following structure (sometimes referred to as “Kb” in the present specification):
  • R 2 , R 4 and R 5 are hydrogen atoms, and R 1 and R 3 are alkoxyl groups having 12 to 30 carbon atoms.
  • RY is represented by the following formula: A group that binds to the C-terminus of an amino acid or peptide,
  • R 7 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, a benzyl group, or an alkoxy-substituted benzyl group
  • R 6 represents a hydrogen atom, a phenyl group, or an alkoxy-substituted phenyl group
  • R 1 and R 3 more preferably have 18 to 22 carbon atoms.
  • RX is more preferably a hydroxymethyl group, an aminomethyl group, or a mercaptomethyl group, and even more preferably a hydroxymethyl group.
  • 2,4-didocosyloxybenzyl alcohol preferred are 2,4-didocosyloxybenzyl alcohol, 2,4-didocosyloxybenzylamine, 2,4-didocosyloxybenzylthiol, and more preferred are 2,4 -Didocosyloxybenzyl alcohol and 2,4-didocosyloxybenzylamine, and most preferred is 2,4-didocosyloxybenzyl alcohol represented by the following formula.
  • a method generally used in peptide synthesis can be used without limitation in the present invention for binding of the above compound to the C-terminal of an amino acid or peptide, for example, by esterification using DIPCI.
  • Carrier C A compound having the following structure (sometimes referred to as “Kc” in the present specification):
  • R 1 , R 3 and R 5 are hydrogen atoms, and R 2 and R 4 are alkoxyl groups having 12 to 30 carbon atoms.
  • RZ is represented by the following formula: A group attached to the C-terminus of an amino acid or peptide,
  • R 7 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, a benzyl group, or an alkoxy-substituted benzyl group
  • R 6 represents a hydrogen atom, a phenyl group, or an alkoxy-substituted phenyl group
  • R 2 and R 4 more preferably have 18 to 22 carbon atoms.
  • RX is more preferably a hydroxymethyl group, an aminomethyl group, or a mercaptomethyl group, and even more preferably a hydroxymethyl group.
  • 3,5-didocosyloxybenzyl alcohol 3,5-didocosyloxybenzylamine, 3,5-didocosyloxybenzylthiol
  • 3,5 -Didocosyloxybenzyl alcohol and 3,5-didocosyloxybenzylamine 3,5-didocosyloxybenzyl alcohol represented by the following formula.
  • a method generally used in peptide synthesis can be used without limitation in the present invention for binding of the above compound to the C-terminal of an amino acid or peptide, for example, by esterification with DIPCI.
  • Carrier D A compound having the following structure:
  • X is a halogen
  • Y is an integer of 8 to 12
  • Z is an integer of 17 to 29.
  • X is preferably F or Cl, more preferably F.
  • the most preferable one is represented by the following formula.
  • X is F or Cl.
  • a method generally used in peptide synthesis can be used without limitation in the present invention for binding of the above compound to the C-terminal of an amino acid or peptide, for example, by esterification with a base catalyst.
  • Carrier E A compound having the following structure:
  • each X is independently an integer of 7 to 21.
  • (2- (3,4,5-trioctadecyloxybenzyl) -4-methoxybenzyl alcohol represented by the following formula.
  • a method generally used in peptide synthesis can be used without limitation in the present invention for binding of the above compound to the C-terminal of an amino acid or peptide, for example, by esterification with DIPCI.
  • Carrier F A compound having the following structure:
  • each X is independently an integer of 11 to 29.
  • Most preferred is Bis- (4-docosyloxyphenyl) -methylamine represented by the following formula.
  • a method generally used in peptide synthesis can be used without limitation in the present invention for binding the amino acid or peptide to the C-terminus of the above compound, and can be performed, for example, by amidation with DICPI / HOBt.
  • the peptide synthesis method of the present invention can be suitably used for a peptide production method using a carrier that can reversibly repeat a dissolved state and an insolubilized state.
  • Examples of the peptide production method including the peptide synthesis method of the present invention include the following steps.
  • step (iv) washing the crystallized / separated C-carrier protected peptide with an organic solvent, Can be added, thereby more complete removal of impurities including scavenges of amino acid active esters.
  • steps (Vii) washing the crystallized / separated C-carrier protected peptide with an organic solvent, Can be added, thereby more complete removal of impurities including scavenges of amino acid active esters.
  • N-Fmoc-protected amino acid for example, in a solvent, N-Fmoc-protected amino acid, C-carrier-protected peptide, C-carrier-protected amino acid or C-carrier-protected amino acid amide, condensing agent (preferably condensing agent and activating agent) N-Fmoc-C-carrier-protected peptide in which one amino acid residue has been extended is obtained.
  • condensing agent preferably condensing agent and activating agent
  • N-Fmoc-C-carrier-protected peptide in which one amino acid residue has been extended is obtained.
  • an N-Fmoc protected peptide is used instead of the N-Fmoc protected amino acid
  • an N-Fmoc-C-carrier protected peptide in which amino acid residues are extended by the number of amino acid residues of the N-Fmoc peptide can be obtained.
  • the method and order of adding each component can be performed without any particular limitation, and a method usually used in a coupling step in peptide synthesis can be used.
  • the amount of N-Fmoc-protected amino acid or N-Fmoc-protected peptide used relative to the C-protected carrier peptide is usually 1.03-8 equivalents, preferably 1.01-4 equivalents, relative to the C-carrier-protected peptide, etc. More preferably, it is 1.05 to 2 equivalents, and still more preferably 1.1 to 1.5 equivalents. When the amount is less than this range, unreacted C-protected peptide or the like is likely to remain, and amino acid deletion is likely to occur.
  • an active ester of an unreacted amino acid is scavenged (captured) with an amine scavenger to which an N-Fmoc-C-carrier-protected peptide is deprotected, followed by organic protection. They can be easily removed using a solvent. Therefore, even if more N-Fmoc-protected amino acid or N-Fmoc-protected peptide is used, there is no problem of remaining compared with the conventional method.
  • a condensing agent generally used in peptide synthesis can be used without limitation in the present invention.
  • DMT-MM 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5 -Triazin-2-yl) -4-methylmorphonium chloride
  • HBTU O- (benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate
  • HATU 7-azabenzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate
  • HBTU 7-azabenzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate
  • HBTU (6-chlorobenzotriazol-1-yl) -1, 1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate
  • TBTU O- (6-chlorobenzotriazol
  • an activator is preferably added to accelerate the reaction and suppress side reactions such as racemization.
  • the activator is a reagent that facilitates the formation of a peptide bond (amide bond) by introducing an amino acid to a corresponding active ester, a symmetric acid anhydride or the like by coexistence with a condensing agent.
  • an activator generally used in peptide synthesis can be used without limitation in the present invention.
  • Preferred are HOBt, HOOBt, HOCt, HOAt, HONb, and HOSu.
  • the amount of the activator used is usually 0 to 4.0 equivalents, preferably 0.1 to 1.5 equivalents, relative to the N-Fmoc amino acid.
  • a solvent generally used in peptide synthesis can be used without limitation in the present invention, but is not limited thereto.
  • DMF, NMP, ethyl acetate, THF, acetonitrile, Examples include chloroform, methylene chloride, or a mixed solvent thereof, preferably THF, DMF, or a mixture thereof.
  • the amount of the solvent used is such an amount that the concentration in which the C-carrier-protected peptide or the like is dissolved is usually 0.3 M to 0.1 mM, preferably 0.2 M to 1 mM.
  • reaction temperature a temperature generally used in peptide synthesis is also used in the present invention.
  • it is usually in the range of ⁇ 20 to 40 ° C., preferably 0 to 30 ° C.
  • the reaction time (one cycle) is usually 0.5 to 30 hours.
  • an amine scavenger is added to the reaction system after the amino acid coupling step to scavenge (capture unreacted amino acid active ester). ).
  • Amine scavengers that can be used in the present invention include primary or secondary alkyl amines, or primary or secondary aromatic amines, or hydroxylamines.
  • examples of the alkylamine that can be used in the present invention include alkylamines having 1 to 14 carbon atoms, preferably alkylamines having 2 to 10 carbon atoms, more preferably carbon atoms. It is an alkylamine having 2 to 8 carbon atoms, more preferably an alkylamine having 3 to 4 carbon atoms.
  • aromatic amines examples include aromatic amines having 1 to 14 carbon atoms, preferably aromatic amines having 6 to 10 carbon atoms.
  • Specific amine scavengers include, but are not limited to, propylamine, methylamine, hexylamine, aniline, toluidine, 2,4,6-trimethylaniline, anisidine, phenetidine, hydroxylamine, Particularly preferred is propylamine.
  • the addition amount of the amine scavenger is usually 1 to 30 equivalents, preferably 1 to 15 equivalents, more preferably 2 to 6 equivalents, and further preferably 3 to 4 equivalents with respect to the theoretically remaining amino acid equivalent.
  • the amount of amine scavenger added is less than this range, the scavenge (capture) of the amino acid active ester becomes insufficient, making it difficult to remove the N-Fmoc-protected amino acid or peptide in a later step, while if it exceeds this range, Removal of unreacted amine scavenger becomes difficult.
  • N-terminal deprotection step In the peptide production method using the method of the present invention, the Fmoc group is removed from the N-Fmoc-C-carrier-protected peptide, and the amino acid active ester in the reaction system is scavenged (captured) by an amine scavenger. Then, after the scavenge body is formed.
  • a removal method generally used in peptide synthesis can be used without limitation in the present invention. Although not limited thereto, for example, it can be performed using DBU and piperidine. Further, this may be followed by washing with an aqueous ammonium chloride solution, an aqueous sodium chloride solution, or both.
  • the C-carrier-protected peptide from which the Fmoc group has been removed can be insolubilized (crystallized) and separated.
  • Insolubilization can be performed, for example, by changing the composition of the solution in which the C-carrier-protected peptide is dissolved.
  • the conditions for insolubilization (crystallization) can be appropriately selected according to the type of carrier used and the type and length of the synthesized C-carrier-protected peptide. For example, although not limited to this, the following means can be mentioned.
  • the separated crystals are preferably washed with an organic solvent to completely remove impurities and the like separated together with the crystals from the crystallized C-carrier protected peptide.
  • the poor solvent in the present invention refers to a solvent in which the C-protected amino acid amide is poorly soluble, that is, the C-protected amino acid amide is difficult to dissolve or does not dissolve.
  • the C-protected amino acid amide is difficult to dissolve or does not dissolve as long as it is a liquid solvent at room temperature where the solubility of the C-protected amino acid amide is less than 1% by mass at 25 ° C., acetonitrile, water-containing acetonitrile in any proportion , Methanol, water-containing methanol in any proportion, and water are preferable.
  • the condensation reaction (coupling reaction) to the deprotection reaction can be carried out by one-pot synthesis.
  • Final deprotection step by removing the C-terminal carrier of the C-carrier-protected peptide having the desired number of amino acid residues, the peptide that is the final object can be obtained.
  • the method for removing the C-terminal carrier is not particularly limited, and a known deprotection method may be used.
  • a deprotection method using TFA can be used. More specifically, 50 to 100% trifluoroacetic acid is used when Ka is used, and 1 to 100% trifluoroacetic acid is used when Kb is used.
  • Kc When Kc is used, it is 95 to 100% trifluoroacetic acid, when carrier D and carrier E are used, it is 1 to 100% trifluoroacetic acid, and when carrier F is used, it is 95 to 100% trifluoroacetic acid. Deprotection is preferred.
  • the obtained peptide, which is the final target product can be isolated and purified according to a method commonly used in peptide chemistry.
  • the peptide which is the final target product can be isolated and purified by subjecting the reaction mixture to extraction washing, crystallization, chromatography and the like.
  • the type of peptide produced by the peptide synthesis method of the present invention is not particularly limited, but the number of amino acid residues of the peptide is preferably about several tens or less, for example.
  • the peptide obtained by the peptide synthesis method of the present invention is used in various fields, such as, but not limited to, pharmaceuticals, foods, cosmetics, electronic materials, etc., as with existing or unknown synthetic peptides and natural peptides. it can.
  • AAs any amino acid residue of 1 or more AAx : any amino acid residue
  • Boc tert-butoxycarbonyl
  • COMU (1-cyano-2-ethoxy-2- oxoethylideneaminooxy ) dimethylamino-morpholino-carbenium hexafluorophosphate
  • CPME cyclopentyl methyl ether
  • DBU 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -7-undecene
  • DCM dichloromethane
  • DIPCI Diisopropylcarbodiimide
  • DMAP N, N-dimethyl-4-aminopyridine
  • DMF N, N-dimethylformamide
  • DMT-MM 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl) -4-methylmorphonium chloride
  • EDT 1,2-ethanedithiol HATU : O
  • the starting material was dissolved in a mixture of THF: DMF (9/1) to 0.05 M, and Fmoc-AAx-OH (1.3 equiv), DMT-MM (1.13 equiv), and DIPEA (1. 2equiv) was added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • the solvent was distilled off under reduced pressure, acetonitrile was added to the residue, the deposited precipitate was filtered, acetonitrile was washed twice, and the obtained solid was dried under reduced pressure to obtain an amino acid condensate.
  • the starting material was dissolved in a mixture of THF: DMF (9/1) to 0.05 M, and Fmoc-AAx-OH (1.3 equiv), DMT-MM (1.13 equiv), and DIPEA (1. 13 equiv) was added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Propylamine 1.2equiv was added as an amine scavenger and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • HOBT (1equiv), piperidine (1.5equiv) and DBU (8equiv) were added and stirred at room temperature for 10 minutes. Concentrated hydrochloric acid was added until the pH of the reaction solution reached around 6, and the solvent was distilled off under reduced pressure.
  • the starting material was dissolved in a mixture of THF: DMF (9/1) to 0.05 M, and Fmoc-AAx-OH (1.3 equiv), DMT-MM (1.13 equiv), and DIPEA (1. 13 equiv) was added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Propylamine 1.2equiv was added as an amine scavenger and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • HOBT (1equiv), piperidine (1.5equiv) and DBU (8equiv) were added and stirred at room temperature for 10 minutes. Concentrated hydrochloric acid was added until the pH of the reaction solution reached around 6.
  • the raw material was dissolved in DCM to 0.01M, 1/10 amount of DCM of TFE was added, and 1/100 amount of TFA of DCM was further added, followed by stirring at room temperature for 30 minutes.
  • Example 7 Synthesis of H-Lys (Boc) Ala-OKb (Compound 4) with addition of an amine scavenger (5)
  • Compound 2 (86 mg, 0.1 mmol) obtained in Example 1 was dissolved in a mixture of THF (2 mL) and DMF (0.1 ml), and Fmoc-Lys (Boc) -OH (61 mg, 0.13 mmol, 1.3equiv), DMT-MM (32mg, 0.113mmol, 1.13equiv), and DIPEA (21 ⁇ L, 0.12mmol, 1.2equiv) were added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Example 8 Synthesis of H-Lys (Boc) Ala-OKb (Compound 4) with addition of an amine scavenger (6)
  • Compound 2 (86 mg, 0.1 mmol) obtained in Example 1 was dissolved in a mixture of THF (2 mL) and DMF (0.1 ml), and Fmoc-Lys (Boc) -OH (61 mg, 0.13 mmol, 1.3equiv), DMT-MM (32mg, 0.113mmol, 1.13equiv), and DIPEA (21 ⁇ L, 0.12mmol, 1.2equiv) were added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Example 9 Synthesis of H-Lys (Boc) Ala-OKb (Compound 4) with addition of an amine scavenger (7)
  • Compound 2 (86 mg, 0.1 mmol) obtained in Example 1 was dissolved in a mixture of THF (2 mL) and DMF (0.1 ml), and Fmoc-Lys (Boc) -OH (61 mg, 0.13 mmol, 1.3equiv), DMT-MM (32mg, 0.113mmol, 1.13equiv), and DIPEA (21 ⁇ L, 0.12mmol, 1.2equiv) were added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Example 10 Synthesis of H-Lys (Boc) Ala-OKb (Compound 4) with addition of an amine scavenger (8)
  • Compound 2 (86 mg, 0.1 mmol) obtained in Example 1 was dissolved in a mixture of THF (2 mL) and DMF (0.1 ml), and Fmoc-Lys (Boc) -OH (61 mg, 0.13 mmol) was dissolved.
  • 1.3equiv DMT-MM (32mg, 0.113mmol, 1.13equiv), and DIPEA (21 ⁇ L, 0.12mmol, 1.2equiv) were added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Example 11 Synthesis of H-Lys (Boc) Ala-OKb (Compound 4) with Addition of Amine Scavenger (9)
  • Compound 2 (86 mg, 0.1 mmol) obtained in Example 1 was dissolved in a mixture of THF (2 mL) and DMF (0.1 ml), and Fmoc-Lys (Boc) -OH (61 mg, 0.13 mmol, 1.3equiv), DMT-MM (32mg, 0.113mmol, 1.13equiv), and DIPEA (21 ⁇ L, 0.12mmol, 1.2equiv) were added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Example 12 Synthesis of H-Lys (Boc) Ala-OKb (Compound 4) with Addition of Amine Scavenger (10) Compound 2 (86 mg, 0.1 mmol) obtained in Example 1 was dissolved in a mixture of THF (2 mL) and DMF (0.1 ml), and Fmoc-Lys (Boc) -OH (61 mg, 0.13 mmol, 1.3equiv), DMT-MM (32mg, 0.113mmol, 1.13equiv), and DIPEA (21 ⁇ L, 0.12mmol, 1.2equiv) were added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Example 13 Synthesis of H-Lys (Boc) Ala-OKb (Compound 4) with Addition of Amine Scavenger (11)
  • Compound 2 (86 mg, 0.1 mmol) obtained in Example 1 was dissolved in a mixture of THF (2 mL) and DMF (0.1 ml), and Fmoc-Lys (Boc) -OH (61 mg, 0.13 mmol, 1.3equiv), DMT-MM (32mg, 0.113mmol, 1.13equiv), and DIPEA (21 ⁇ L, 0.12mmol, 1.2equiv) were added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Hexylamine (15.9 ⁇ L, 0.12 mmol, 1.2 equiv) was added as an amine scavenger and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • HOBT (30.6 mg, 0.26 mmol, 1 equiv)
  • piperidine (30 ⁇ L, 0.3 mmol, 1.5 equiv)
  • DBU (239 ⁇ L, 1.6 mmol, 8 equiv) were added and stirred at room temperature for 10 minutes. Thereafter, Compound 4 (104.6 mg, 95.7%) was obtained in the same manner as Example 2.
  • Example 14 Synthesis of H-Lys (Boc) Ala-OKb (Compound 4) with Amine Scavenger (12)
  • Compound 2 (86 mg, 0.1 mmol) obtained in Example 1 was dissolved in a mixture of THF (2 mL) and DMF (0.1 ml), and Fmoc-Lys (Boc) -OH (61 mg, 0.13 mmol, 1.3equiv), DMT-MM (32mg, 0.113mmol, 1.13equiv), and DIPEA (21 ⁇ L, 0.12mmol, 1.2equiv) were added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Decylamine (15.9 ⁇ L, 0.12 mmol, 1.2 equiv) was added as an amine scavenger, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes.
  • HOBT (30.6 mg, 0.26 mmol, 1 equiv)
  • piperidine (30 ⁇ L, 0.3 mmol, 1.5 equiv)
  • DBU (239 ⁇ L, 1.6 mmol, 8 equiv) were added and stirred at room temperature for 10 minutes. Thereafter, Compound 4 (107.5 mg, 98.4%) was obtained in the same manner as in Example 2.
  • Example 15 Synthesis of H-Lys (Boc) Ala-OKb (Compound 4) with Addition of Amine Scavenger (14)
  • Compound 2 (86 mg, 0.1 mmol) obtained in Example 1 was dissolved in a mixture of THF (2 mL) and DMF (0.1 ml), and Fmoc-Lys (Boc) -OH (187 mg, 0.4 mmol, 4.0 equiv), DMT-MM (100 mg, 0.36 mmol, 3.6 equiv), and DIPEA (21 ⁇ L, 0.12 mmol, 1.2 equiv) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Example 16 Purity of H-Ala-OKb (Compound 2), H-Lys (Boc) Ala-OKb (Compound 4), H-Lys (Boc) Lys (Boc) Ala-OKb (Compound 5) by HPLC Measurement (1) Sample creation (common) 1 mg of the compound obtained in each of the above Examples and Comparative Examples was weighed and dissolved in 0.5 mL of THF, and 0.1 M Fmoc-OSu THF solution (20 ⁇ L, 0.02 mmol, about 2 equiv) and 0.2 M DIPEA THF The solution (10 ⁇ L, 0.02 mmol, about 2 equiv) was added and stirred at room temperature for 1 hour.
  • KbOH 2,4-didocosyloxybenzyl alcohol
  • Example 18 Synthesis of Fmoc-Gly-Arg (Pbf) -Met-Asp (OtBu) -Arg (Pbf) -Ile-Gly-OKb (Compound 10) by 1-pot condensation deprotection method with addition of amine scavenger
  • Example 18 The following amino acids were introduced into compound 9 obtained in 1 above by a method of repeating 1-pot condensation deprotection method in which an amine scavenger was added to obtain compound 10.
  • Example 19 Synthesis of Fmoc-Gly-Arg (Pbf) -Met-Asp (OtBu) -Arg (Pbf) -Ile-Gly-OH (Compound 11)
  • the deKb operation was performed to obtain Compound 11.
  • the obtained compound was measured by LC-MS and found to be 1643.7 [M + Gly + H + ], 195.2 [M + Arg (Pbf) + H + ], 1758.1 [M + Asp (OtBu) + H + ], 1718.0 [M + Met + H + ] Was not observed.
  • Propylamine (728 ⁇ L, 8.86 mmol, 2 equiv) was added as an amine scavenger and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Piperidine (658 ⁇ L, 6.65 mmol, 1.5 equiv) and DBU (4.64 ml, 31.0 mmol, 7 equiv) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes.
  • Concentrated hydrochloric acid was added until the pH of the reaction solution reached around 6.
  • a solution of a saturated ammonium chloride aqueous solution: water 1: 2 that was double the amount of the reaction solvent was added to the reaction solution, washed and separated, and the aqueous layer was discarded.
  • Example 24 H-Gln (Trt) -Ser ( ⁇ Me, Me Pro) -Gly-Leu-Gly-Cys (Trt) -Asn (Trt) -Ser (tBu) -Phe Synthesis of —Arg (Pbf) -Tyr (tBu) —Okb (Compound 17) Compound 16 (10.68 g, 4.06 mmol) obtained in Example 23 was added to a THF: DMF (9/1) mixed solution.
  • Compound 20 (24.31 g, 81.6%) was obtained by repeatedly using the following method for compound 19 (13.52 g, 9.95 mmol).
  • the starting material was dissolved in a mixed solution of THF: DMF (9/1) so as to have a concentration of 0.05 M, Fmoc-AAx-OH (equivalents are shown as AA equivalents in the reaction conditions table), and condensing agents shown in the following table ( Equivalent is shown in condensing agent equivalent of reaction condition table), condensation assistant shown in the following table (equivalent is shown in condensing agent equivalent of reaction condition table), and DIPEA (equivalent is shown in base equivalent of reaction condition table) Then, the condensation reaction was carried out as shown in the reaction condition table.
  • the second washing solution shown in the washing condition table was added in double the amount of the reaction solvent, washed and separated, and the aqueous layer was discarded. Further, a saturated saline solution twice the amount of the reaction solvent was added, washed and separated, and the aqueous layer was discarded. The obtained organic layer was evaporated under reduced pressure. The poor solvent shown in the washing condition table is added to the residue, the deposited precipitate is filtered, the hanging solvent shown in the washing condition table is added to carry out washing, and the resulting solid is dried under reduced pressure, and the amino acid condensate Got.
  • Example 26 H-Ala-Gln (Trt) -Ser ( ⁇ Me, Me Pro) -Gly-Leu-Gly-Cys (Trt) -Asn (Trt) -Ser (tBu) -Phe-Arg (Pbf) Synthesis of -Tyr (tBu) -OKb (Compound 22)
  • Fmoc-Ala-OH is added to the compound 17 obtained in Example 24, an amine scavenger is added, and the mixture is washed with an aqueous ammonium chloride solution. This was introduced to obtain Compound 22 (12.42 g, Quant%).
  • Example 19 Compound 11 (11.33 g, 5.8 mmol, 1.5 equiv) obtained in Example 19 was dissolved in DMF (38.7 ml), diluted with THF (348 mL), and the compound obtained in Example 26 22 (12.42 g, 3.87 mmol, 1.0 equiv), HATU (1.99 g, 5.22 mmol, 1.35 equiv), HOAt (711 mg, 5.22 mmol, 1.35 equiv), and DIPEA (3369 ⁇ L, 19 .3 mmol, 5.0 equiv) was added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • HOBt (1equiv) (only the second residue), piperidine (1.5equiv) and DBU (7equiv, only the second residue 8equiv) were added and stirred at room temperature for 10 minutes.
  • Concentrated hydrochloric acid was added until the pH of the reaction solution reached around 6.
  • a solution of saturated saline: water 1: 2 that was twice the amount of the reaction solvent, washed and separated, and the aqueous layer was discarded.
  • a saturated saline solution twice the amount of the reaction solvent was added, washed and separated, and the aqueous layer was discarded.
  • the obtained organic layer was evaporated under reduced pressure.
  • Acetonitrile was added to the residue, the deposited precipitate was filtered, washed with acetonitrile, and the obtained solid was dried under reduced pressure to obtain an amino acid condensate.
  • compound 36 (7.05 g, 90.8%) was obtained in the same manner as the synthesis of compound 20 according to the reaction condition table and the washing condition table shown below. It was.
  • compound 50 (6.02 g, 79.9%) was obtained in the same manner as the synthesis of compound 20 according to the reaction condition table and washing condition table shown below. It was.
  • compound 53 (4.38 g, 78.2%) was obtained in the same manner as the synthesis of compound 20 according to the reaction condition table and washing condition table shown below. It was.
  • Example 35 Compound 50 (251 mg, 0.1 mmol) obtained in Example 35 was dissolved in a mixture of THF (9 mL) and DMF (1.0 ml), and Compound 61 (443 mg, 0.15 mmol) obtained in Example 36 was dissolved. , 1.5 equiv), DMT-MM (40.0 mg, 0.405 mmol, 1.45 equiv), and DIPEA (63 ⁇ L, 0.36 mmol, 3.6 equiv) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. Propylamine (25.0 ⁇ L, 0.3 mmol, 3 equiv) was added as an amine scavenger, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes.
  • the amino acid active species are inactivated using a specific scavenger before deprotection of the N-terminus, so that double hits of amino acids can be performed during deprotection without removing them from the reaction system. Can be prevented.
  • the method of the present invention can solve the problem of amino acid active species present in the reaction system during the deprotection reaction by simple means, and is excellent in versatility and useful.
  • the peptide synthesized according to the present invention has few problems of amino acid omission and double hit, and according to the method of the present invention, a peptide with high yield and high quality can be synthesized.

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Abstract

　本発明は、溶解状態と不溶化状態を可逆的に繰り返すことができる担体を用いたペプチド合成反応において、脱保護反応時における反応系中に存在するアミノ酸活性種の問題を容易に解決することができるペプチド合成方法を提供することを目的とする。本発明により、（１）以下の工程：縮合剤の存在下で、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸と、溶解している溶媒の組成変化に伴い晶析される担体でＣ末端が保護されたペプチドとを縮合させて、Ｎ－Ｆｍｏｃ－Ｃ－担体保護ペプチドを得る工程、反応系に、炭素数が１～１４であるアルキルアミンまたはヒドロキシルアミンを添加する工程、Ｎ末端を脱保護する工程、およびＣ－担体保護ペプチドが溶解している溶媒組成を変化させることにより該ペプチドを晶析させて分離する工程、を含むペプチドの合成方法が提供された。

Description

ペプチド合成方法
　本発明は、新規なペプチド合成方法に関し、具体的には、正確なペプチド伸長反応を容易に行うことができるペプチド合成方法に関する。
　従来より、化学プロセスにおいては、液体に溶解した特定成分を固体として分離する方法が広く用いられている。特定成分のみを固体化（結晶化）することにより、反応後の分離・精製が容易となるためである。この方法によれば、例えば、近年の医薬品の開発研究等で用いられている化合物ライブラリー合成等の逐次多段階合成において、各反応の終了毎に、必要又は不要な化合物を固体化（結晶化）させることにより、固体化（結晶化）した物質の分離・精製を容易に実施できる。したがって、従来問題となってきた工程の煩雑さを解消することができる。
　また、液体の相分離に伴って、溶解している特定成分を、特定の相に選択的に溶解（選択的な分配）させることにより、他の成分との分離を実現する方法も用いられている。この方法によれば、固体化（結晶化）を伴うことなく特定成分を分離することができるため、工程の迅速化、簡便化に寄与することができる。
　このような、溶液に溶解した特定成分の固体化（結晶化）あるいは、液体の特定の相への特定成分の選択的な溶解（選択的な分配）は、化合物の化学的性質、物性、及び溶媒との関係において、一定の条件を満たすことにより実現される。しかしながら、固体化（結晶化）や選択的な溶解（選択的な分配）の条件は、多くの場合、試行錯誤を行い、経験的に探索せねばならない。特に、逐次多段階合成においては、それぞれの段階において合成された化合物に特有な性質に基づいて、それぞれの段階の条件の検討が必要となるため、プロセス開発に多大なコストと時間を要していた。
　そこで、溶媒組成の変化を敏感に感知して、溶解状態と不溶化（結晶化）状態とが可逆的に変化する、あるいは、液体の相分離に伴って、溶解している特定成分を特定の相に選択的に高濃度に溶解（選択的な分配）させる、リンカーを有する担体分子が提案されている。このような担体分子には、リンカーを介して種々の化合物を結合させることができる。このため、結合された化合物は、担体分子に伴って、溶解状態から不溶化（結晶化）状態又はその逆に、容易に状態変化することができる。あるいは、担体分子と結合した化合物を、複相に分離した液体の特定の相に、選択的に高濃度に溶解（選択的な分配）させることができる。
　また、このような担体分子は、逐次化学反応によって結合した化合物の化学構造が変化した場合であっても、ほぼ同一の条件により、溶解状態と不溶化（結晶化）状態を可逆的に繰り返したり、あるいは、複相に分離した液体の特定の相に、選択的に高濃度に溶解（選択的な分配）することができる。このような、溶解状態と不溶化（結晶化）状態とが可逆的に変化する、あるいは、選択的な分配状態を誘導することのできる担体分子を用いれば、有機化学の一般的な液相反応の知見をそのまま利用しつつ、均一な溶液状態から分離対象となる化合物を選択的に分離することができる。すなわち、液相反応の後に、他の可溶性成分を溶液に残したままで、特定の化合物を分離することが可能となる。
　溶解状態と不溶化状態を可逆的に繰り返すことができる担体としては、様々な化合物が提案されている。例えば、本発明者らにより提案されている長鎖脂肪酸を導入したベンジルアルコール化合物（特許文献１～４）、あるいは、長鎖脂肪酸を導入したフルオレン化合物（特許文献５）や長鎖脂肪酸を導入したジフェニルメタン化合物（特許文献６）がある。
　ペプチド合成技術には、固相ペプチド合成法（ＳＰＰＳ法）と液相ペプチド合成法（ＬＰＰＳ法）がある。固相ペプチド合成法は、原理的に、アミノ酸伸長反応の各段階で精製することができない。また、合成コストが高く、そのため、少量生産に向いている。一方、液相ペプチド合成法は、大量生産に汎用されているが、ペプチド鎖が長くなると、ペプチド伸長反応が難しくなり、長鎖のペプチド合成に課題がある。
　そこで、溶解状態と不溶化状態を可逆的に繰り返すことができる上記の担体を用いてペプチド合成を行うことが提案されている（特許文献１～６）。
　ペプチド合成では、ペプチド伸長反応においてアミノ酸残基の欠落が起こるという問題があり、上記の担体を用いた場合においても問題となっている。アミノ酸残基の欠落の解決策として、アミノ酸および縮合剤の当量を増やすということが行われている。しかしながら、その結果として、反応液中に過剰アミノ酸活性種が残っていると、Ｎ末端の脱保護時にダブルヒットが起こるという新たな問題が生じている。それにより、目的のアミノ酸の収率が落ちるという問題がある。ここでダブルヒットとは、目的のペプチドにさらにアミノ酸残基が一つ余分に挿入されることを意味する。
　この解決手段としては、脱保護前に、洗浄によりアミノ酸活性種を反応系から取り除くということが行われている。例えば、以下のような方法が提案されている。保護基としてベンジルオキシカルボニル基（ＣｂｚまたはＺ）またはｔ－ブチルオキシカルボニル基（Ｂｏｃ）を用いた液相ペプチド合成法において、反応系中に残存するアミノ酸の活性エステルを除去するために、β－アラニン－ＯＢｚなどのアニオン成分をもつアミンをスカベンジャーとして添加する方法が提案されている（特許文献７）。この方法においては、保護基をＮ末端から脱保護する際に、スカベンジ体のアニオン成分保護基も同時に脱離され、水溶性となる。その後、アルカリ性水－有機溶媒で液－液抽出を行い、次いで、水で縮合剤およびアミノ酸成分を除去する。しかしながら、保護基としてＣｂｚを用いた場合は、ペプチド配列にＭｅｔやＣｙｓがあると、脱保護触媒が失活してしまい適用できない。また、この方法では、ジベンゾフルベンは取り除けないため、保護基としてフルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を用いることはできない。
　また、保護基としてＢｏｃを用いた液相ペプチド合成法において、反応系中に残存するアミノ酸の活性エステルを除去するために、アルカリ水（例えば、５％炭酸ナトリウム水溶液）で活性エステルを加水分解しながら液－液抽出でアミノ酸成分を取り除く方法が提案されている（特許文献８）。しかしながらこの方法では、ｐＨ＝１１以上のアルカリが強い条件では、エピマー化が起こる恐れがある。また、ジベンゾフルベンは取り除けないため、保護基としてフルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を用いることはできない。
　上記の溶解状態と不溶化状態を可逆的に繰り返すことができる担体を用いたペプチド合成においても、過剰アミノ酸活性種によるダブルヒットの問題の解決のために、脱保護前に、洗浄によりアミノ酸活性種を反応系から取り除くということを行うことができる。しかしながら、担体を不溶化するための晶析操作ではアミノ酸活性種が洗浄で完全に除去できない場合があり、また、縮合反応後と脱保護後の２回の洗浄が必要となり、大量の洗浄溶媒を必要とするという問題がある。
　また、ペプチド合成におけるＦｍｏｃ基の除去方法として、ＦｍｏｃをＮ末端から脱保護した後、チオールカルボン酸を共存させて、ジベンゾフルベンを生成させ、その後、アルカリ性水－有機溶媒で液－液抽出を行い、次いで、水で縮合剤、アミノ酸成分およびジベンゾフルベンを除去することによりアミノ酸活性エステルを取り除く方法が報告されている（特許文献８）。また、Ｆｍｏｃを脱保護する前に、活性エステルを、チオールシリカで除去またはアルカリ水で分解してもよいと開示されており、アミノ酸の活性エステルを水溶性の生成物として除去することが示唆されている。
　他に、ペプチド合成におけるＦｍｏｃ基の除去方法として、ＦｍｏｃをＮ末端から脱保護した後、アルキルチオールまたは固相チオールを共存させて、ジベンゾフルベンを生成させて、次いで、濃縮後、エーテルでペプチド成分を晶析、固液分離することにより、ジベンゾフルベン付加物を取り除く方法が報告されているが、アミノ酸活性エステルの除去については、記載がない（非特許文献１）。
特開２００３－１８３２９８号公報 特開２００４－０５９５０９号公報 ＷＯ２００７／０３４８１２号公報 ＷＯ２００７／１２２８４７号公報 ＷＯ２０１０／１０４１６９号公報 ＷＯ２０１０／１１３９３９号公報 特開２００３－５５３９６号公報 ＷＯ２００７／０９９６５６号公報
James E. Sheppeck II ら, Tetrahedorn Letters 41 (2000)
　本発明は、溶解状態と不溶化状態を可逆的に繰り返すことができる担体を用いたペプチド合成反応において、脱保護反応時における反応系中に存在するアミノ酸活性種の問題を容易に解決することができるペプチド合成方法を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題に鑑み、鋭意検討を行った結果、脱保護反応前に、特定のスカベンジャーによりアミノ酸活性種を不活性化することにより、Ｎ末端の脱保護前にそれらを反応系から取り除かなくても脱保護時にアミノ酸のダブルヒットが防げることを見出し、本発明を完成した。本発明は以下のものを含む。
（１）以下の工程ａ～ｄ：
ａ．縮合剤の存在下で、フルオレニルメトキシカルボニルでＮ末端が保護された（Ｎ－Ｆｍｏｃ保護）アミノ酸またはＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドと、溶解している溶媒の組成変化に伴い晶析される担体でＣ末端が保護された（Ｃ－担体保護）アミノ酸、Ｃ－担体保護ペプチドまたはＣ－担体保護アミノ酸アミドとを縮合させて、Ｎ－Ｆｍｏｃ－Ｃ－担体保護ペプチドを得る工程、
ｂ．反応系に、炭素数が１～１４であるアルキルアミン、炭素数が１～１４である芳香族アミン、ヒドロキシルアミンからなる群より選ばれる少なくとも一つのアミンを添加する工程、（ここで、アルキルアミンまたは芳香族アミンは、第一級または第二級アミンである）
ｃ．Ｎ末端を脱保護する工程、および
ｄ．得られたＣ－担体保護ペプチドが溶解している溶媒組成を変化させることにより該Ｃ－担体保護ペプチドを晶析させて分離する工程、
を含むペプチド合成方法。
（２）前記担体が、
下記の構造を有する化合物（本願明細書中では「Ｋａ」という場合がある）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
 （式中、Ｒ１およびＲ５は、水素原子であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、炭素数が８～３０、好ましくは１２～２２のアルコキシル基である。また、式中、ＲＸは、下記式で表され、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する基である、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
 （ここでＲ７は水素原子、炭素数１～６のアルキル基、ベンジル基、またはアルコキシ置換ベンジル基を表し、Ｒ６は水素原子、フェニル基、またはアルコキシ置換フェニル基を表す）
なお、上記式は、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する前の状態で示している）、
下記の構造を有する化合物（本願明細書中では「Ｋｂ」という場合がある）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
 （式中、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、水素原子であり、Ｒ１およびＲ３は、炭素数が１２～３０、好ましくは１８～２２のアルコキシル基である。また、式中、ＲＹは、下記式で表され、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する基である、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
 （ここでＲ７は水素原子、炭素数１～６のアルキル基、ベンジル基、またはアルコキシ置換ベンジル基を表し、Ｒ６は水素原子、フェニル基、またはアルコキシ置換フェニル基を表す）
なお、上記式は、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する前の状態で示している）、および
下記の構造を有する化合物（本願明細書中では「Ｋｃ」という場合がある）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
 （式中、Ｒ１、Ｒ３およびＲ５は、水素原子であり、Ｒ２およびＲ４は、炭素数が１２～３０、好ましくは１８～２２のアルコキシル基である。また、式中、ＲＺは、下記式で表され、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する基である、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
 （ここでＲ７は水素原子、炭素数１～６のアルキル基、ベンジル基、またはアルコキシ置換ベンジル基を表し、Ｒ６は水素原子、フェニル基、またはアルコキシ置換フェニル基を表す）
なお、上記式は、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する前の状態で示している）、
からなる群より選ばれる化合物である、前記（１）に記載のペプチド合成方法。
（３）前記担体が、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
 （式中、Ｘはハロゲンであり、Ｙは８～１２の整数であり、Ｚは１７～２９の整数である。）、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
 （式中、Ｘは、それぞれ独立に７～２１の整数である。）、および
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
 （式中、Ｘは、それぞれ独立に１１～２９の整数である。）、
（なお、上記各式は、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する前の状態で示している）、
からなる群より選ばれる化合物である、前記（１）に記載のペプチド合成方法。
（４）前記担体が、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
 （３，４，５－トリオクタデシルベンジルアルコール）、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
 （２，４－ジドコシロキシベンジルアルコール）、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
 （３，５－ジドコシロキシベンジルアルコール）、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
 （式中、Ｘは、ＦまたはＣｌである。）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
 （２－（３，４，５－トリオクタデシロキシベンジル）－４－メトキシベンジルアルコール）、および、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
 （Ｂｉｓ－（４－ドコシロキシフェニル）－メチルアミン）、
（なお、上記各式は、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する前の状態で示している）
からなる群より選ばれる化合物である、前記（１）に記載のペプチド合成方法。
（５）前記アミンが炭素数１～１０のアルキルアミンまたはヒドロキシルアミンである上記（１）～（４）のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
（６）前記アミンが炭素数３または４のアルキルアミンである上記（１）～（５）のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
（７）工程ｂにおけるアミン当量が、工程ａの縮合反応後に理論上残存するアミノ酸当量に対して１～３０倍の量である、上記（１）～（６）のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
（８）前記得られたＣ－担体保護ペプチドが溶解している溶媒組成を変化させる組成変化手段が、溶液の溶媒を濃縮し、その後、貧溶媒を加え固化することによりなされる、上記（１）～（７）のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
（９）前記貧溶媒が、アセトニトリル、任意割合の含水アセトニトリル、メタノール、任意割合の含水メタノール、および水からなる群より選ばれる溶媒ある前記（８）に記載のペプチド合成方法。
（１０）工程ｄで晶析分離されたＣ－担体保護ペプチドを用いて、工程ａ～工程ｄの繰り返しを１回以上行うことを含む、前記（１）～（９）のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
（１１）さらに以下の工程、
ｅ．晶析分離されたＣ－担体保護ペプチドの結晶を、有機溶媒で洗浄する工程を含む前記（１）～（１０）に記載のペプチド合成方法。
（１２）前記ａ～ｃの工程をワンポット合成で行う、前記（１）～（１１）のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
　本発明のペプチド合成方法は、簡便な手段で脱保護反応時における反応系中に存在するアミノ酸活性種の問題を解決することができ汎用性に優れている。本発明により合成されたペプチドはアミノ酸の欠落やダブルヒットの問題が少なく、本発明の方法によれば高収率・高品質のペプチドを合成できる。
　以下、本発明を、例示的な実施態様を例として、本発明の実施において使用することができる好ましい方法および材料とともに説明する。
　なお、文中で特に断らない限り、本明細書で用いるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるのと同じ意味をもつ。また、本明細書に記載されたものと同等または同様の任意の材料および方法は、本発明の実施において同様に使用することができる。
　また、本明細書に記載された発明に関連して本明細書中で引用されるすべての刊行物および特許は、例えば、本発明で使用できる方法や材料その他を示すものとして、本明細書の一部を構成するものである。
　本明細書において使用する用語を以下に説明する。
１．Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸およびペプチド
　フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）でＮ末端が保護されたアミノ酸（Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸）とは、アミノ酸のアミノ基がＦｍｏｃで保護されており、一方、カルボニル基は保護されておらず反応性であるアミノ酸を意味する。
　フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）でＮ末端が保護されたペプチド（Ｎ－Ｆｍｏｃ保護ペプチド）とは、ペプチド鎖のＮ末端のアミノ基がＦｍｏｃで保護され、一方、Ｃ末端のカルボニル基は保護されておらず反応性であるペプチドを意味する。
　なお、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸またはＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドが水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルボキシル基、スルフヒドリル基等の反応性に富む官能基を有する場合、これらの官能基にペプチド化学で用いられる一般的な保護基が導入されていてもよく、反応終了後に、必要に応じて保護基を除去することで目的化合物を得ることができる。
　水酸基の保護基としてはｔＢｕ基、Ｔｒｔ基、Ｂｚ基、アセチル基、シリル基等があげられ、アミノ基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｆｍｏｃ基、Ｃｂｚ基、Ｔｒｔ基、Ｍｍｔ基、ｉｖＤｄｅ基等があげられ、グアニジル基の保護基としては、Ｐｂｆ基、Ｐｍｃ基、ニトロ基等があげられ、カルボキシル基の保護基としてはｔＢｕ基、メチル基、エチル基、Ｂｚ基等があげられ、スルフヒドリル基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ａｃｍ基、ｔＢｕ基、Ｓ－ｔＢｕ基等を上げることができる。
２．Ｃ－担体保護アミノ酸、ペプチドおよびアミノ酸アミド
　溶解している溶媒の組成変化に伴い晶析される担体でＣ末端が保護されたアミノ酸（Ｃ－担体保護アミノ酸）とは、アミノ酸のカルボキシル基が以下に記載の担体で保護され、一方、アミノ基は保護されておらず反応性であるアミノ酸を意味する。
　溶解している溶媒の組成変化に伴い晶析される担体でＣ末端が保護されたペプチド（Ｃ－担体保護ペプチド）とは、ペプチド鎖のＣ末端のカルボキシル基が以下に記載の担体で保護され、一方、Ｎ末端のアミノ基は保護されておらず反応性であるペプチドを意味する。
　溶解している溶媒の組成変化に伴い晶析される担体でＣ末端が保護されたアミノ酸アミド（Ｃ－担体保護アミノ酸アミド）とは、アミノ酸のカルボキシル基は以下に記載の担体で保護されて、一方、アミノ基は保護されておらず反応性であるアミノ酸アミドを意味する。
　なお、Ｃ－担体保護アミノ酸またはＣ－担体保護ペプチドまたはＣ－担体アミノ酸アミドが水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルボキシル基、スルフヒドリル基等の反応性に富む官能基を有する場合、これらの官能基にペプチド化学で用いられる一般的な保護基が導入されていてもよく、反応終了後に、必要に応じて保護基を除去することで目的化合物を得ることができる。
　水酸基の保護基としてはｔＢｕ基、Ｔｒｔ基、Ｂｚ基、アセチル基、シリル基等があげられ、アミノ基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｆｍｏｃ基、Ｃｂｚ基、Ｔｒｔ基、Ｍｍｔ基、ｉｖＤｄｅ基等があげられ、グアニジル基の保護基としては、Ｐｂｆ基、Ｐｍｃ基、ニトロ基等があげられ、カルボキシル基の保護基としてはｔＢｕ基、メチル基、エチル基、Ｂｚ基等があげられ、スルフヒドリル基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ａｃｍ基、ｔＢｕ基、Ｓ－ｔＢｕ基等を上げることができる。
３．溶解している溶媒組成の変化に伴い晶析される担体
　溶解している溶媒組成の変化に伴い晶析される担体とは、担体が溶解している溶媒の組成変化により、溶解状態と固体化（結晶化）状態とが可逆的に変化する担体をいう。具体的には、これに限定されないが、例えば以下の化合物をあげることができ、これらの化合物を、アミノ酸またはペプチドのＣ末端と結合させることにより、本発明で用いる、Ｃ末端が担体で保護された、Ｃ－担体保護アミノ酸、Ｃ－担体保護ペプチド、またはＣ－担体保護アミノ酸アミドを作ることができる。
３－１．担体Ａ
　下記の構造を有する化合物（本願明細書中では「Ｋａ」という場合がある）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
 （式中、Ｒ１およびＲ５は、水素原子であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、炭素数が８～３０のアルコキシル基である。また、式中、ＲＸは、下記式で表され、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する基である、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
 （ここでＲ７は水素原子、炭素数１～６のアルキル基、ベンジル基、またはアルコキシ置換ベンジル基を表し、Ｒ６は水素原子、フェニル基、またはアルコキシ置換フェニル基を表す））。
　上記式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、より好ましくは炭素数が８～２２、さらに好ましくは炭素数が１２～１８である。
　上記式中、ＲＸは、より好ましくはヒドロキシメチル基、アミノメチル基、メルカプトメチル基であり、さらに好ましくはヒドロキシメチル基である。
　上記式に含まれる化合物で、好ましいものは３，４，５－トリオクタデシルベンジルアルコール、３，４，５－トリオクタデシルベンジルアミン、３，４，５－トリオクタデシルベンジルチオールであり、さらに好ましいものは３，４，５－トリオクタデシルベンジルアルコール、３，４，５－トリオクタデシルベンジルアミンであり、最も好ましいものは下記式で表される３，４，５－トリオクタデシルベンジルアルコールである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
 　上記化合物のアミノ酸またはペプチドのＣ末端への結合は、ペプチド合成において一般的に用いられる方法を本発明においても制限なく用いることができ、例えば、ＤＩＰＣＩを用いたエステル化により行うことができる。
３－２．担体Ｂ
　下記の構造を有する化合物（本願明細書中では「Ｋｂ」という場合がある）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
 （式中、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、水素原子であり、Ｒ１およびＲ３は、炭素数が１２～３０のアルコキシル基である。また、式中、ＲＹは、下記式で表され、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する基である、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
 （ここでＲ７は水素原子、炭素数１～６のアルキル基、ベンジル基、またはアルコキシ置換ベンジル基を表し、Ｒ６は水素原子、フェニル基、またはアルコキシ置換フェニル基を表す））。
　上記式中、Ｒ１およびＲ３は、より好ましくは炭素数が１８～２２である。
　上記式中、ＲＸは、より好ましくはヒドロキシメチル基、アミノメチル基、メルカプトメチル基であり、さらに好ましくはヒドロキシメチル基である。
　上記式に含まれる化合物で、好ましいものは２，４－ジドコシロキシベンジルアルコール、２，４－ジドコシロキシベンジルアミン、２，４－ジドコシロキシベンジルチオールであり、さらに好ましいものは２，４－ジドコシロキシベンジルアルコール、２，４－ジドコシロキシベンジルアミンであり、最も好ましいものは下記式で表される２，４－ジドコシロキシベンジルアルコールである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
 　上記化合物のアミノ酸またはペプチドのＣ末端への結合は、ペプチド合成において一般的に用いられる方法を本発明においても制限なく用いることができ、例えば、ＤＩＰＣＩを用いたエステル化により行うことができる。
３－３．担体Ｃ
　下記の構造を有する化合物（本願明細書中では「Ｋｃ」という場合がある）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
 （式中、Ｒ１、Ｒ３およびＲ５は、水素原子であり、Ｒ２およびＲ４は、炭素数が１２～３０のアルコキシル基である。また、式中、ＲＺは、下記式で表され、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する基である、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
 （ここでＲ７は水素原子、炭素数１～６のアルキル基、ベンジル基、またはアルコキシ置換ベンジル基を表し、Ｒ６は水素原子、フェニル基、またはアルコキシ置換フェニル基を表す））、
　上記式中、Ｒ２およびＲ４は、より好ましくは炭素数が１８～２２である。
　上記式中、ＲＸは、より好ましくはヒドロキシメチル基、アミノメチル基、メルカプトメチル基であり、さらに好ましくはヒドロキシメチル基である。
　上記式に含まれる化合物で、好ましいものは３，５－ジドコシロキシベンジルアルコール、３，５－ジドコシロキシベンジルアミン、３，５－ジドコシロキシベンジルチオールであり、さらに好ましいものは３，５－ジドコシロキシベンジルアルコール、３，５－ジドコシロキシベンジルアミンであり、最も好ましいものは下記式で表される３，５－ジドコシロキシベンジルアルコールである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
 　上記化合物のアミノ酸またはペプチドのＣ末端への結合は、ペプチド合成において一般的に用いられる方法を本発明においても制限なく用いることができ、例えば、ＤＩＰＣＩによるエステル化により行うことができる。
３－４．担体Ｄ
　下記の構造を有する化合物：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
 （式中、Ｘはハロゲンであり、Ｙは８～１２の整数であり、Ｚは１７～２９の整数である。）。
　上記式中、Ｘは、好ましくはＦまたはＣｌであり、より好ましくはＦである。
　最も好ましいものは下記式で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
 （式中、ＸはＦまたはＣｌである。）
　上記化合物のアミノ酸またはペプチドのＣ末端への結合は、ペプチド合成において一般的に用いられる方法を本発明においても制限なく用いることができ、例えば、塩基触媒によるエステル化により行うことができる。
３－５．担体Ｅ
　下記の構造を有する化合物：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
 （式中、Ｘは、それぞれ独立に７～２１の整数である。）
　最も好ましいものは下記式で表される、（２－（３，４，５－トリオクタデシロキシベンジル）－４－メトキシベンジルアルコールである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
 　上記化合物のアミノ酸またはペプチドのＣ末端への結合は、ペプチド合成において一般的に用いられる方法を本発明においても制限なく用いることができ、例えば、ＤＩＰＣＩによるエステル化により行うことができる。
３－６．担体Ｆ
　下記の構造を有する化合物：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
 （式中、Ｘは、それぞれ独立に１１～２９の整数である。）
　最も好ましいものは下記式で表される、Ｂｉｓ－（４－ドコシロキシフェニル）－メチルアミンである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
 　上記化合物のアミノ酸またはペプチドのＣ末端への結合は、ペプチド合成において一般的に用いられる方法を本発明においても制限なく用いることができ、例えば、ＤＩＣＰＩ／ＨＯＢｔによるアミド化により行うことができる。
４．ペプチドの製造方法
　本発明のペプチド合成方法は、溶解状態と不溶化状態を可逆的に繰り返すことができる担体を用いたペプチド製造方法に好適に使用することができる。
　本発明のペプチド合成方法を含んだペプチド製造方法としては、例えば、以下のような工程を例示することができる。
（ｉ）カップリング工程
　縮合剤の存在下、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸またはペプチドと、Ｃ－担体保護アミノ酸またはペプチドを縮合させて、Ｎ－Ｆｍｏｃ－Ｃ－担体保護ペプチドを得る工程、
（ｉｉ）炭素数が１～１４である第一級または第二級のアルキルアミンまたは炭素数が１～１４である第一級または第二級の芳香族アミンまたはヒドロキシルアミン（以下アミンスカベンジャーと呼ぶ）を用いて、アミノ酸活性エステルのスカベンジ体を形成する工程、
（ｉｉｉ）ペプチドのＮ末端からＦｍｏｃ基を除去してＮ末端を脱保護する工程、
（ｉｖ）貧溶媒を用いて、ペプチドが結合した担体（Ｃ－担体保護ペプチド）を晶析・分離する工程、
（ｖ）上記工程（ｉ）～（ｖ）を、必要回数繰り返す工程、および
（ｖｉ）ペプチドから担体を除去して最終脱保護を行う工程。
　さらに前記工程（ｉｖ）の後に以下の工程、
（ｖｉｉ）晶析・分離したＣ－担体保護ペプチドを有機溶媒で洗浄する工程、
を加えることもでき、それにより、アミノ酸活性エステルのスカベンジ体を含む不純物の除去がより完全となる。
　以下、それぞれの工程について説明する。
４－１．カップリング工程
　本工程では、例えば、溶媒中において、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸と、Ｃ－担体保護ペプチド、Ｃ－担体保護アミノ酸またはＣ－担体保護アミノ酸アミドと、縮合剤（好ましくは縮合剤および活性化剤）とを混合することによって、アミノ酸残基が一つ伸長したＮ－Ｆｍｏｃ－Ｃ－担体保護ペプチドが得られる。また、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸に替えてＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドを用いれば、Ｎ－Ｆｍｏｃペプチドのアミノ酸残基の数だけアミノ酸残基が伸長したＮ－Ｆｍｏｃ－Ｃ－担体保護ペプチドが得られる。
　各成分の添加の方法や順序は、特に制限なく行うことができ、ペプチド合成におけるカップリング工程において通常用いられている方法を用いることができる。
　Ｃ－保護担体ペプチドに対する、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸またはＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドの使用量は、Ｃ－担体保護ペプチド等に対して、通常１．０３～８当量、好ましくは１．０１～４当量、より好ましくは１．０５～２当量、さらに好ましくは１．１～１．５当量である。この範囲より少ないと、未反応のＣ－保護ペプチド等が残りやすく、アミノ酸の欠落を起こし易くなる。本発明のペプチド合成方法では、未反応のアミノ酸の活性エステルをその後に添加するアミンスカベンジャーでスカベンジして（捕獲して）、Ｎ－Ｆｍｏｃ－Ｃ－担体保護ペプチドのＮ末端の脱保護後に、有機溶媒を用いてそれらを容易に取り除くことができる。そのため、より多くのＮ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸またはＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドを用いても、従来の方法に比べ残存の問題が生じない。
　縮合剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる縮合剤が、本発明においても制限なく用いることができ、これに限定されないが、例えば、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ（６－Ｃｌ））、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）、（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、および１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）をあげることができ、好ましくは、ＤＭＴ－ＭＭ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、またはＣＯＭＵである。縮合剤の使用量は、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸に対して、通常０．７～１．５当量、好ましくは０．８５～１．０当量である。
　カップリング工程において、反応を促進し、ラセミ化などの副反応を抑制するために、好ましくは、活性化剤が添加される。ここで活性化剤とは、縮合剤との共存化で、アミノ酸を、対応する活性エステル、対称酸無水物などに導いて、ペプチド結合（アミド結合）を形成させやすくする試薬である。活性化剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる活性化剤が、本発明においても制限なく用いることができ、例えば、ＨＯＢｔ、ＨＯＣｔ、ＨＯＡｔ、ＨＯＯＢｔ、ＨＯＳｕ、ＨＯＰｈｔ、ＨＯＮｂ、ペンタフルオロフェノール等をあげることができ、好ましくは、ＨＯＢｔ、ＨＯＯＢｔ、ＨＯＣｔ、ＨＯＡｔ、ＨＯＮｂ、ＨＯＳｕである。活性化剤の使用量は、Ｎ－Ｆｍｏｃアミノ酸に対して、通常０～４．０当量、好ましくは０．１～１．５当量である。
　カップリング工程で使用する溶媒は、ペプチド合成において一般的に用いられる溶媒が、本発明においても制限なく用いることができ、これに限定されないが、例えば、ＤＭＦ、ＮＭＰ、酢酸エチル、ＴＨＦ、アセトニトリル、クロロホルム、塩化メチレンまたはこれらの混合溶媒等が挙げられ、好ましくは、ＴＨＦ、ＤＭＦまたはそれらの混合物である。溶媒の使用量は、Ｃ－担体保護ペプチド等を溶解した濃度が、通常０．３Ｍ～０．１ｍＭとなる量であり、好ましくは０．２Ｍ～１ｍＭとなる量である。
　反応温度は、ペプチド合成において一般的に用いられる温度が、本発明においても用いられ、例えば、通常－２０～４０℃、好ましくは０～３０℃の範囲内である。反応時（１サイクル）間は、通常０．５～３０時間である。
４－２．アミンスカベンジャーによるアミノ酸活性エステルのスカベンジ体形成工程
　本発明を用いたペプチド製造方法においては、アミノ酸のカップリング工程の後に、アミンスカベンジャーを反応系に添加して、未反応のアミノ酸活性エステルをスカベンジ（捕獲）することを特徴とする。
　本発明において用いることができるアミンスカベンジャーとしては、第一級または第二級のアルキルアミン、または第一級または第二級芳香族アミン、またはヒドロキシルアミンをあげることができる。これに限定されないが、本発明で用いることができるアルキルアミンとしては、例えば、炭素数１～１４のアルキルアミンをあげることができ、好ましくは炭素数２～１０のアルキルアミン、より好ましくは炭素数２～８のアルキルアミン、さらに好ましくは炭素数３～４のアルキルアミンである。また本発明で用いることができる芳香族アミンとしては、たとえば炭素数１～１４の芳香族アミンをあげることができ、好ましくは炭素数６～１０の芳香族アミンである。具体的なアミンスカベンジャーとしては、これに限定されないが、例えば、プロピルアミン、メチルアミン、ヘキシルアミン、アニリン、トルイジン、２，４，６－トリメチルアニリン、アニシジン、フェネチジン、ヒドロキシルアミンをあげることができ、特に好ましくは、プロピルアミンである。
　アミンスカベンジャーの添加量は、理論上残存するアミノ酸当量に対して、通常１～３０当量、好ましくは１～１５当量、より好ましくは２～６当量、さらに好ましくは３～４当量である。アミンスカベンジャーの添加量がこの範囲より少ないと、アミノ酸活性エステルのスカベンジ（捕獲）が不充分となり、Ｎ－Ｆｍｏｃ保護アミノ酸またはペプチドを後の工程で除去しにくくなり、一方、この範囲より多いと、未反応アミンスカベンジャーの除去が困難になる。
４－３．Ｎ末端脱保護工程
　本発明の方法を用いたペプチド製造方法においては、Ｎ－Ｆｍｏｃ－Ｃ－担体保護ペプチドからのＦｍｏｃ基の除去を、反応系中のアミノ酸活性エステルをアミンスカベンジャーによりスカベンジ（捕獲）してスカベンジ体を形成させた後に行う。Ｎ末端からのＦｍｏｃ基の除去は、ペプチド合成において一般的に用いられる除去方法が、本発明においても制限なく用いることができる。これに制限されないが、例えば、ＤＢＵ及びピペリジンを用いて行うことができる。また、この後に塩化アンモニウム水溶液、塩化ナトリウム水溶液、またはその両方を用いる水洗を行ってもよい。
４－４．担体保護ペプチドの晶析・分離工程
　本発明の方法を用いたペプチド製造方法においては、Ｆｍｏｃ基を除去したＣ－担体保護ペプチドを不溶化して（結晶させ）分離することができる。不溶化は、例えば、Ｃ－担体保護ペプチドが溶解している溶液の組成を変化させることにより行うことができる。不溶化（晶析）させるための条件は、用いる担体の種類や合成されたＣ－担体保護ペプチドの種類や長さに応じて、適宜選択できる。例えば、これに限定されないが、以下のような手段をあげることができる。
（組成変化手段）
　本発明の方法において好ましく用いられる溶液組成を変化させる手段としては、Ｃ－担体保護ペプチドが溶解している溶液の組成を変化させることのできる手段であれば、特に制限されるものではない。溶液組成を変化させる好ましい手段としては、例えば、Ｃ－担体保護ペプチドが溶解している溶液にそのまま、または溶液の溶媒を濃縮した後、貧溶媒を加えて晶析する手段が挙げられる。ここで、濃縮とは、溶媒の一部または全部を留去することをいう。その後、析出した結晶を、例えばろ過や遠心分離により分離することができる。分離した結晶は、好ましくは、有機溶媒で洗浄することにより、結晶と一緒に分離された不純物等を結晶化したＣ－担体保護ペプチドから完全に除去できる。
　本発明における貧溶媒は、Ｃ－保護アミノ酸アミドが貧溶、すなわち、Ｃ－保護アミノ酸アミドが溶解しにくい、または溶解しない溶媒をいう。Ｃ－保護アミノ酸アミドが溶解しにくい、又は溶解しないとは、Ｃ－保護アミノ酸アミドの溶解度が２５℃において１質量％未満となる常温で液状の溶媒であればよく、アセトニトリル、任意割合の含水アセトニトリル、メタノール、任意割合の含水メタノール、水であることが好ましい。
　以上のように、本発明の方法を用いれば、縮合反応（カップリング反応）から脱保護反応までをワンポット合成で行うことができる。
４－５．最終脱保護工程
　最終脱保護工程で、所望のアミノ酸残基数を有するＣ－担体保護ペプチドのＣ末端の担体を除去することによって、最終目的物であるペプチドを得ることができる。
　Ｃ末端の担体の除去の方法には特に限定は無く、自体公知の脱保護法を使用すればよい。
　例えば、ＴＦＡを用いた脱保護法を用いることができ、より具体的には、Ｋａを用いた場合は５０～１００％トリフルオロ酢酸で、Ｋｂを用いた場合は１～１００％トリフルオロ酢酸で、Ｋｃを用いた場合は９５～１００％トリフルオロ酢酸で、担体Ｄ及び担体Ｅを用いた場合は１～１００％トリフルオロ酢酸で、担体Ｆを用いた場合は９５～１００％トリフルオロ酢酸で脱保護するのが好ましい。
　得られた最終目的物であるペプチドは、ペプチド化学で常用される方法に従って、単離精製することができる。例えば、反応混合物を抽出洗浄、晶析、クロマトグラフィーなどによって、最終目的物であるペプチドを単離精製することができる。
　本発明のペプチド合成方法により製造されるペプチドの種類は特に限定されないが、ペプチドのアミノ酸残基数が、例えば、数十以下程度であることが好ましい。本発明のペプチド合成方法によって得られるペプチドは、既存のまたは未知の合成ペプチドや天然ペプチドと同様に、様々な分野、例えばこれに限定されないが、医薬、食品、化粧品、電子材料等の分野に利用できる。
　以下、下記に示された配列のペプチドを例として合成方法を示すが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（ペプチドＡ）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ
（ペプチドＢ）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｍｅｔ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－ＯＨ
（ペプチドＣ）Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ψＭｅ，Ｍｅ Ｐｒｏ）－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＫｂ
（ペプチドＤ）Ｈ-Ｄ-Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｔｈｉ－Ｓｅｒ－Ｄ-Ｔｉｃ－Ｏｉｃ－Ａｒｇ－ＯＨ
（ペプチドＥ）Ｈ－Ａｌａ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ψＭｅ，Ｍｅ Ｐｒｏ）－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－ＯＫｂ
（ペプチドＦ）Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－ＯＨ
（ペプチドＧ）ＨＣｌ・Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｍｅｔ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ψＭｅ，Ｍｅ Ｐｒｏ）－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＫｂ
（ペプチドＨ）Ｈ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Gｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ａｒｇ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ－ＯＨ（７Ｃｙｓ－２３Ｃｙｓ，ＳＳ結合）
（ペプチドＩ）Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－ＯＫｂ
（ペプチドＪ）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ
（ペプチドＫ）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨ
（ペプチドＬ）Ｈ－Ｄ-Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－ＯＫｂ
（ペプチドＭ）Ｈ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－ＯＨ
（ペプチドＮ）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＫｂ
（ペプチドＯ）Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ
（ペプチドＰ）Ｂｏｃ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｎ－Ｏｃｔａｎｏｙｌ）－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ
（ペプチドＱ）Ｂｏｃ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｎ－Ｏｃｔａｎｏｙｌ）－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＫｂ
（ペプチドＲ）Ｈ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ（ｎ－Ｏｃｔａｎｏｙｌ）－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＯＨ
　本明細書中および以下の実施例においては、下記の略号を用いた。
ＡＡｓ：１以上の任意のアミノ酸残基
ＡＡｘ：任意のアミノ酸残基
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル
ＣＯＭＵ：（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩
ＣＰＭＥ：シクロペンチルメチルエーテル
ＤＢＵ：１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＰＣＩ：ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＭＡＰ：Ｎ，Ｎ－ジメチル－４－アミノピリジン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＴ－ＭＭ：４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホニウムクロリド
ＥＤＴ：１，２－エタンジチオール
ＨＡＴＵ：Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＴＵ：Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＡｔ：１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ：１－ヒドロキシベンゾトリアゾール
Ｋａ：３，４，５－トリオクタデシロキシベンジル
Ｋｂ：２，４－ジドコシロキシベンジル
Ｋｃ：３，５－ジドコシロキシベンジル
Ｍｅ：メチル
Ｏｘｙｍａ：シアノ（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル
Ｐｂｆ：２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル
Ｓｕ：スクシンイミドイル
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ－ブチル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＦＥ：２，２，２－トリフルオロエタノール
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
ＷＳＣ・ＨＣｌ：１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
（一般合成法）
　以下に本実施例で用いた一般合成法を示す。
（１）脱－Ｆｍｏｃ一般合成法
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
 　出発原料をＴＨＦ：ＤＭＦ（９／１）の混合液に０．０５Ｍになるよう溶解し、ピペリジン（１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（１ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えて減圧下溶媒を留去した。残渣にアセトニトリル：水＝９：１の混合液を加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル：水＝９：１の混合液で懸洗し、さらにアセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、脱Ｆｍｏｃ体を得た。
（２）アミノ酸縮合一般合成法
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
 　出発原料をＴＨＦ：ＤＭＦ（９／１）の混合液に０．０５Ｍになるように溶解し、Ｆｍｏｃ－ＡＡｘ－ＯＨ（１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。溶媒を減圧下留去し、残渣にアセトニトリルを加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル懸洗２回を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、アミノ酸縮合物を得た。
　以下は、本発明の実施例で用いた、本発明の方法の特徴であるアミンスカベンジャー存在下での脱保護法を示す。アミンスカベンジャーの例として、プロピルアミンを用いた例を示す。
（３）アミンスカベンジャーを加える１ｐｏｔ縮合脱保護法
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
 　出発原料をＴＨＦ：ＤＭＦ（９／１）の混合液に０．０５Ｍになるように溶解し、Ｆｍｏｃ－ＡＡｘ－ＯＨ（１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（１．１３ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えて減圧下溶媒を留去した。残渣にアセトニトリル：水＝１：１の混合液を加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル：水＝９：１の混合液で懸洗し、さらにアセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、アミノ酸縮合物を得た。
（４）アミンスカベンジャーを加え、塩化アンモニウム水溶液で洗浄を行う１ｐｏｔ縮合脱保護法
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
出発原料をＴＨＦ：ＤＭＦ（９／１）の混合液に０．０５Ｍになるように溶解し、Ｆｍｏｃ－ＡＡｘ－ＯＨ（１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（１．１３ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えた。反応液に反応溶媒の倍量の飽和塩化アンモニウム水溶液：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに反応溶媒の倍量の飽和食塩水：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに、反応溶媒の倍量の飽和食塩水を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。得られた有機層を減圧下で溶媒留去した。残渣にアセトニトリル：水＝１：１の混合液を加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル：水＝９：１の混合液で懸洗し、さらにアセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、アミノ酸縮合物を得た。
　次いで、本発明で用いた担体をペプチドから脱保護する（切り離す）方法を示す。
（５）Ｋｂ保護基一般脱保護法
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
 　原料をＤＣＭに０．０１Ｍになるように溶解し、そのＤＣＭの１／１０量のＴＦＥを加え、更にそのＤＣＭ量の１／１００量のＴＦＡを加えて室温で３０分間攪拌した。沈殿物をろ過し、ろ液をＤＩＰＥＡでｐＨ＝９になるように調整し、溶媒を減圧下留去した。残渣に水を加えて析出した沈殿物をろ過し、得られた固形物をＴＨＦ及びトルエンに溶解後、減圧下留去した。得られた固形物にジイソプロピルエーテルを加える懸洗を３回行い、得られた固形物を減圧乾燥し、脱Ｋｂ保護体を得た。
　以下、本発明の方法を用いたペプチド合成を示す。
（実施例１）中間体（化合物２）の合成
化合物１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
 　２，４－ジドコシロキシベンジルアルコール（「Ｋｂ－ＯＨ」と表記する）（３．７９ｇ，５．００ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ（２．３４ｇ，７．５０ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）、ＤＩＰＣＩ（１１６９μＬ，７．５０ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）、およびＤＭＡＰ（３１ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ，０．０５ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。プロピルアミン（４１１μＬ，５．００ｍｍｏｌ，１．０ｅｑｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。沈殿物をろ過し、ろ液を減圧下留去した。残渣にＭｅＯＨを加えて析出した沈殿物をろ過し、ＭｅＯＨ懸洗を２回、アセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物１（５．０２ｇ，９５．５％）を得た。
化合物２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000052
　化合物１（５．００ｇ，４．７６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８６ｍＬ）とＤＭＦ（１０ｍｌ）の混合液に溶解し、ピペリジン（７０７μＬ，７．１４ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（７１２μＬ，４．７６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えて減圧下溶媒を留去した。残渣にアセトニトリル：水＝９：１の混合液を加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル：水＝９：１の混合液で懸洗し、さらにアセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物２（４．０５ｇ，９８．３％）を得た。
（比較例１）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）の２段階合成
化合物３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000053
 　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．２ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（３２ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。溶媒を減圧下留去し、残渣にアセトニトリルを加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル懸洗２回を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物３（１２８．５ｍｇ，ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
 　化合物３（１１９ｍｇ，０．０９３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．２ｍｌ）の混合液に溶解し、ピペリジン（１４μＬ，０．１４ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（２８μＬ，０．２８ｍｍｏｌ，２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えて減圧下溶媒を留去した。残渣にアセトニトリル：水＝１：１の混合液を加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル：水＝９：１の混合液で懸洗し、さらにアセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物４（９２．５ｍｇ，９０．７％）を得た。
（実施例２）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（１）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000055
 　実施例１で得られた化合物２（１７３ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４ｍＬ）とＤＭＦ（０．４ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（１２２ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（６５ｍｇ，０．２２６ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（４２μＬ，０．２４ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（１９．７μＬ，０．２４ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（３０．６ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（３０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（２３９μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えて減圧下溶媒を留去した。残渣にアセトニトリル：水＝１：１の混合液を加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル：水＝９：１の混合液で懸洗し、さらにアセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物４（９２．５ｍｇ，９０．７％）を得た。
（実施例３）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物５）のアミンスカベンジャーを加えた合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056
 　実施例２で得られた化合物４（１０９ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．２ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（３２ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（９．９μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ピペリジン（１５μＬ，０．１５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（１０５μＬ，１．４ｍｍｏｌ，７ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物５（１１５．２ｍｇ，８７．２％）を得た。
（実施例４）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（２）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057
 　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．２ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＨＢＴＵ（４４ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、ＨＯＢｔ（１８ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）およびＤＩＰＥＡ（８７μＬ，０．５ｍｍｏｌ，５ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（９．９μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ピペリジン（１５μＬ，０．１５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（１２０μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０９．２ｍｇ，９９．９％）を得た。
（実施例５）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（３）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000058
 　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．２ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＨＡＴＵ（４４ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、ＨＯＡｔ（１６ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）およびＤＩＰＥＡ（８７μＬ，０．５ｍｍｏｌ，５ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（９．９μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ピペリジン（１５μＬ，０．１５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（１２０μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０３．５ｍｇ，９４．７％）を得た。
（実施例６）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（４）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000059
 　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．２ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＣＯＭＵ（５０ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、Ｏｘｙｍａ（１７ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）およびＤＩＰＥＡ（８７μＬ，０．５ｍｍｏｌ，５ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（９．９μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ピペリジン（１５μＬ，０．１５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（１２０μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０５．７ｍｇ，９６．７％）を得た。
（実施例７）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（５）
　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（３２ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（２．５μＬ，０．０３ｍｍｏｌ，０．３ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（３０．６ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（３０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（２３９μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０５．３ｍｇ，９６．３％）を得た。
（実施例８）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（６）
　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（３２ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（４．９μＬ，０．０６ｍｍｏｌ，０．６ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（３０．６ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（３０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（２３９μＬ，１．６　ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０５．６ｍｇ，９６．６％）を得た。
（実施例９）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（７）
　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（３２ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（１９．７μＬ，０．２４ｍｍｏｌ，２．４ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（３０．６ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（３０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（２３９μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）　を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０５．６ｍｇ，９６．６％）を得た。
（実施例１０）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（８）
　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１　ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（３２ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（３７μＬ，０．４５ｍｍｏｌ，４．５ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（３０．６ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（３０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（２３９μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０５．２ｍｇ，９６．２％）を得た。
（実施例１１）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（９）
　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（３２ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとして４０％のメチルアミン水溶液（１０．３μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（３０．６ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（３０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（２３９μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）　を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０１．６ｍｇ，９３．０％）を得た。
（実施例１２）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（１０）
　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（３２ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとして５０％のヒドロキシルアミン水溶液（７．１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（３０．６ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（３０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（２３９μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０４．１ｍｇ，９５．２％）を得た。
（実施例１３）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（１１）
　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（３２ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてヘキシルアミン（１５．９μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（３０．６ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（３０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（２３９μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）　を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０４．６ｍｇ，９５．７％）を得た。
（実施例１４）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（１２）
　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（３２ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてデシルアミン（１５．９μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（３０．６ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（３０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（２３９μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）　を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０７．５ｍｇ，９８．４％）を得た。
（比較例２）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）の本発明以外のアミンスカベンジャーを加えた合成（１３）
　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（６１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（３２ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとして２－アミノエタノール（７．２μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（３０．６ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（３０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（２３９μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）　を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０３．６ｍｇ，９４．８％）を得た。
（実施例１５）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４）のアミンスカベンジャーを加えた合成（１４）
　実施例１で得られた化合物２（８６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（１８７ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ，４．０ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（１００ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ，３．６ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（９９μＬ，１．２ｍｍｏｌ，１２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢＴ（３０．６ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（３０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（２３９μＬ，１．６ｍｍｏｌ，８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。以下、実施例２と同様にして、化合物４（１０４．２ｍｇ，９５．３％）を得た。
（実施例１６）Ｈ－Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物２），Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物４），Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ａｌａ－ＯＫｂ（化合物５）のＨＰＬＣによる純度測定
（１）サンプル作成（共通）
　上記各実施例および比較例で得られた化合物１ｍｇを量りとり、０．５ｍＬのＴＨＦに溶解し、０．１Ｍ　Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ　ＴＨＦ溶液（２０μＬ，０．０２ｍｍｏｌ，約２ｅｑｕｉｖ）及び０．２Ｍ　ＤＩＰＥＡ　ＴＨＦ溶液（１０μＬ，０．０２ｍｍｏｌ，約２ｅｑｕｉｖ）を加え室温で１時間撹拌した。風乾後、アセトニトリルで３回懸洗し、減圧乾燥した。得られた固形物にＨＰＬＣ用ＴＨＦ（安定剤不含有）を１ｍｌ加え溶解し、０．２μｍのメンブレンフィルターでろ過を行い、得られたろ液をＨＰＬＣ用サンプルとし、ＨＰＬＣ測定に供した。
（２）ＨＰＬＣ測定
以下の条件でＨＰＬＣ測定を行った。
＜逆相ＨＰＬＣ＞
カラム：逆相Ｃ４カラム
移動相Ａ：ＴＨＦ：ＣＨ３ＣＮ＝８：２混合液
移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有水
流速：０．２ｍｌ／分
グラジエント：Ａ　７０％から１００％３０分
検出波長：２５４ｎｍ
＜順相ＨＰＬＣ＞
カラム：順相シリカゲルカラム
移動相Ａ：Ｅｔｈｙｌ　Ａｃｅｔａｔｅ
移動相Ｂ：ｎ－Ｈｅｘａｎｅ
流速：０．２ｍｌ／分
グラジエント：移動相Ａ　０％から１００％３０分
検出波長：２８０ｎｍ
　結果を以下の表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000060
（実施例１７）ＨＣｌ・Ｈ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－ＯＫｂ（化合物１４）の合成
化合物６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
 　２，４－ジドコシロキシベンジルアルコール（「ＫｂＯＨ」と表記する）（１．５１ｇ，２．００ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（８９２ｍｇ，３．０ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）、ＤＩＰＣＩ（４６７μＬ，３．０ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）、およびＤＭＡＰ（１２ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ，０．０５ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。沈殿物をろ過し、ろ液を減圧下留去した。残渣にＭｅＯＨを加えて析出した沈殿物をろ過し、ＭｅＯＨ懸洗を２回、アセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物６（２．０１ｇ，９７．１％）を得た。
化合物７の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000062
 　得られた化合物６（２．０１ｇ，０．１ｍｍｏｌ）を脱－Ｆｍｏｃ一般合成法に従って、脱Ｆｍｏｃ操作を行い、化合物７（１．８４ｇ，ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物８の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000063
 　得られた化合物７（１．８４ｇ，０．１ｍｍｏｌ）にアミノ酸一般縮合法に従って、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨを縮合し、化合物８（１．９９ｇ，８８．９％）を得た。
化合物９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000064
 　得られた化合物８（６６２ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）を脱－Ｆｍｏｃ一般合成法に従って、脱Ｆｍｏｃ操作を行い、化合物９（５０５ｍｇ，９１％）を得た。
（比較例３）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｍｅｔ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－ＯＫｂ（化合物１０）の合成
　実施例１７で得られた化合物９に対し以下のアミノ酸をアミノ酸一般縮合法及び脱－Ｆｍｏｃ一般合成法を繰り返す方法で導入し、化合物１０を得た。
３残基目：Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ
４残基目：Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ
５残基目：Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ
６残基目：Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ
７残基目：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ
（比較例４）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｍｅｔ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－ＯＨ（化合物１１）の合成
　比較例２で得られた化合物１０に対し、Ｋｂ保護基一般脱保護法に従って脱Ｋｂ操作を行い、化合物１１を得た。得られた化合物をＬＣ－ＭＳで測定したところ、１６４３．７［Ｍ＋Ｇｌｙ＋Ｈ＋］，１９９５．２［Ｍ＋Ａｒｇ（Ｐｂｆ）＋Ｈ＋］，１７５８．１［Ｍ＋Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）＋Ｈ＋］，１７１８．０［Ｍ＋Ｍｅｔ＋Ｈ＋］が観測された。
（実施例１８）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｍｅｔ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－ＯＫｂ（化合物１０）のアミンスカベンジャーを加える１ｐｏｔ縮合脱保護法による合成
　実施例１８で得られた化合物９に対し以下のアミノ酸を、アミンスカベンジャーを加える１ｐｏｔ縮合脱保護法を繰り返す方法で導入し、化合物１０を得た。
３残基目：Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ
４残基目：Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ
５残基目：Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ
６残基目：Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ
７残基目：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨの導入はアミノ酸一般縮合法に従って行った。
（実施例１９）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｍｅｔ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－ＯＨ（化合物１１）の合成
　実施例１８で得られた化合物１０に対し、Ｋｂ保護基一般脱保護法に従って脱Ｋｂ操作を行い、化合物１１を得た。得られた化合物をＬＣ－ＭＳで測定したところ、１６４３．７［Ｍ＋Ｇｌｙ＋Ｈ＋］，１９９５．２［Ｍ＋Ａｒｇ（Ｐｂｆ）＋Ｈ＋］，１７５８．１［Ｍ＋Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）＋Ｈ＋］，１７１８．０［Ｍ＋Ｍｅｔ＋Ｈ＋］は観測されなかった。
（実施例２０）Ｈ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｏｋｂ（化合物１４）の合成
化合物１２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000065
 　２，４－ジドコシロキシベンジルアルコール（「Ｋｂ－ＯＨ」と表記する）（３．７９ｇ，５．００ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ（３．４５ｇ，７．５０ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）、ＤＩＰＣＩ（１１６９μＬ，７．５０ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）、およびＤＭＡＰ（３１ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ，０．０５ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。プロピルアミン（８１１μＬ，１０．０ｍｍｏｌ，２．０ｅｑｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。沈殿物をろ過し、ろ液を減圧下留去した。残渣にＭｅＯＨを加えて析出した沈殿物をろ過し、ＭｅＯＨ懸洗を２回、アセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物１２（６．０６ｇ，ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物１３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000066
 　化合物１２（６．０６ｇ，５．００ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８６ｍＬ）とＤＭＦ（１０ｍｌ）の混合液に溶解し、ピペリジン（７４３μＬ，７．５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（７４８μＬ，５．００ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えた。反応液に反応溶媒の倍量の飽和食塩水：水＝２：１の溶液を加えて洗浄し、分液後水層を廃棄し、さらに反応溶媒の倍量の飽和食塩水で洗浄し分液後水層を廃棄した。得られた有機層を減圧下で溶媒を留去した。残渣にアセトニトリル：水＝９：１の混合液を加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル：水＝９：１の混合液で懸洗し、さらにアセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物１３（４．７０ｇ，９２．９％）を得た。
（実施例２１）Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｏｋｂ（化合物１４）の合成
　化合物１３に対し以下のアミノ酸を、アミンスカベンジャーを加え、塩化アンモニウム水溶液で洗浄を行う１ｐｏｔ縮合脱保護法を繰り返す方法で導入し、化合物１４を得た。
１残基目：Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ
２残基目：Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ
３残基目：Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ
（実施例２２）Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｏｋｂ（化合物１５）の合成
　得られた化合物１４（７．５８ｇ，４．４３ｍｍｏｌ）をＴＨＦに０．０５Ｍになるように溶解し、ＤＩＰＥＡ（１．９３ｍｌ，１１．１ｍｍｏｌ，２．５ｅｑｕｉｖ）を加えた。Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ（３．４４ｇ，５．７６ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＣＯＭＵ（２．２８ｇ，５．３２ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、Ｏｘｙｍａ（０．７６ｇ，５．３２ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）をＤＭＦ８．９ｍｌに溶解しＤＩＰＥＡ（１．９３ｍｌ，１１．１ｍｍｏｌ，２．５ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で２分間撹拌した。得られた混合液を化合物１４のＴＨＦ溶液に加え室温で１０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（７２８μＬ，８．８６ｍｍｏｌ，２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ピペリジン（６５８μＬ，６．６５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（４．６４ｍｌ，３１．０ｍｍｏｌ，７ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えた。反応液に反応溶媒の倍量の飽和塩化アンモニウム水溶液：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに反応溶媒の倍量の飽和食塩水：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに、反応溶媒の倍量の飽和食塩水を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。得られた有機層を減圧下で溶媒留去した。残渣にアセトニトリル：水＝９：１の混合液を加えて析出した沈殿物をろ過し、さらにアセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物１５（８．７４ｇ，９５．４％）を得た。
（実施例２３）Ｈ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｏｋｂ（化合物１６）の合成
　得られた化合物１５に対し以下のアミノ酸を、アミンスカベンジャーを加え、塩化アンモニウム水溶液で洗浄を行う１ｐｏｔ縮合脱保護法を繰り返す方法で導入し、化合物１６を得た。
６残基目：Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ
７残基目：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ
８残基目：Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ
９残基目：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ
（実施例２４）Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ψＭｅ，ＭｅＰｒｏ）－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ
－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｏｋｂ（化合物１７）の合成
　実施例２３で得られた化合物１６（１０．６８ｇ，４．０６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ：ＤＭＦ（９／１）の混合液に０．０５Ｍになるように溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ψＭｅ，Ｍｅ　Ｐｒｏ）－ＯＨ（３．８８ｇ，５．２８ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（１．３０ｇ，４．５９ｍｍｏｌ，１．１３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（８４５μＬ，４．８７ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）　を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（６６５μＬ，８．１２ｍｍｏｌ，２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ピペリジン（６０１μＬ，６．０９ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（６．０５ｍｌ，４０．６ｍｍｏｌ，１０ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えた。反応液に反応溶媒の倍量の飽和塩化アンモニウム水溶液：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに反応溶媒の倍量の飽和食塩水：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに、反応溶媒の倍量の飽和食塩水を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。得られた有機層を減圧下で溶媒留去した。残渣に水を加えて析出した沈殿物をろ過し、ｎ－ヘキサンで懸洗し、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物１７（１２．８５ｇ，１００．０％）を得た。得られた化合物１７をＴＬＣ（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）にて分析を行ったところ、ジベンゾフルベンの存在を認めなかった。
（実施例２５）Ｈ-Ｄ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｔｈｉ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｉｃ－Ｏｉｃ－Ａｒｇ－ＯＨ（化合物２１）の合成
化合物１８の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000067
 　３,４,５－トリオクタデシロキシベンジルアルコール（「Ｋa－ＯＨ」と表記する）（９．１４ｇ，１０．００ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ（９．７３ｇ，１５．００ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）、ＤＩＰＣＩ（２３３７μＬ，１５．００ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）、およびＤＭＡＰ（６１ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ，０．０５ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。プロピルアミン（１６４４μＬ，２０．０ｍｍｏｌ，２．０ｅｑｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。沈殿物をろ過し、ろ液を減圧下留去した。残渣にＭｅＯＨを加えて析出した沈殿物をろ過し、ＭｅＯＨ懸洗を行い、さらにアセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物１８（１５．４０ｇ，９９．７％）を得た。
化合物１９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000068
 　化合物１８（１５．４０ｇ，１０．００ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１７９ｍＬ）とＤＭＦ（２０ｍｌ）の混合液に溶解し、ピペリジン（１４８０μＬ，１４．９ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（１４９０μＬ，９．９６ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えた。反応液に反応溶媒の倍量の飽和食塩水：水＝２：１の溶液を加えて洗浄し、分液後水層を廃棄し、さらに反応溶媒の倍量の飽和食塩水で洗浄し分液後水層を廃棄した。得られた有機層を減圧下で溶媒を留去した。残渣にアセトニトリルを加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリルで懸洗し、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物１９（１４．３９ｇ，ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物２０（ＨＣｌ・Ｈ－Ｄ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｔｈｉ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｄ－Ｔｉｃ－Ｏｉｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＫａ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000069
 化合物１９（１３．５２ｇ，９．９５ｍｍｏｌ）に対し、以下の方法を繰り返し用いることで化合物２０（２４．３１ｇ，８１．６％）を得た。
出発原料をＴＨＦ：ＤＭＦ（９／１）の混合液に０．０５Ｍになるように溶解し、Ｆｍｏｃ－ＡＡｘ－ＯＨ（当量を反応条件表のＡＡ当量に示す）、下表に示す縮合剤（当量を反応条件表の縮合剤当量に示す）、下表に示す縮合助剤（当量を反応条件表の縮合剤当量に示す）、およびＤＩＰＥＡ（当量を反応条件表の塩基当量に示す）を加えて縮合反応を反応条件表に示すように行った。次に、アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（当量を反応条件表のスカベンジャー当量に示す）を加えて室温で３０分間撹拌した。その後、ＨＯＢｔ（当量を反応条件表のＨＯＢｔ当量に示す）、ピペリジン（１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（当量を反応条件表のＤＢＵ当量に示す）を加えて室温で１０分間攪拌した。次に、反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えた。
反応液に、洗浄条件表に示す１回目洗浄液を反応溶媒の倍量加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。必要に応じ、洗浄条件表に示す２回目洗浄液を反応溶媒の倍量加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに、反応溶媒の倍量の飽和食塩水を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。得られた有機層を減圧下で溶媒留去した。残渣に洗浄条件表に示す貧溶媒を加えて析出した沈殿物をろ過し、さらに洗浄条件表に示す懸洗溶媒を加えて懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、アミノ酸縮合物を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000070
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000071
化合物２１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000072
 化合物２０（１０．０ｇ、３．１ｍｍｏｌ）をＴＦＡ：ＴＩＳ：水＝９０：２．５：７．５の混合液１５５ｍｌに溶解し、４時間室温で撹拌した。反応液をセライトを用いて濾過し、ろ過残渣を３０ｍｌのＴＦＡで洗浄、ろ過し、得られたろ液と合わせて、１．８５Ｌの冷イソプロピルエーテル中に撹拌しながら投入した。得られた固形物をろ過し、ろ過残渣をさらに２回冷イソプロピルエーテルで懸洗、ろ過した。得られた固形物を乾燥し、化合物２１（５．１７ｇ，Ｑｕａｎｔ％、ＨＰＬＣ純度７７．３６％）を得た。得られた化合物をＬＣ－ＭＳで測定したところ、６５２．９［Ｍ＋２Ｈ＋］／２が観測された。
（実施例２６）Ｈ－Ａｌａ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ψＭｅ，ＭｅＰｒｏ）－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＫｂ（化合物２２）の合成
　実施例２４で得られた化合物１７に対し、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨを、アミンスカベンジャーを加え、塩化アンモニウム水溶液で洗浄を行う１ｐｏｔ縮合脱保護法で導入し、化合物２２（１２．４２ｇ，Ｑｕａｎｔ％）を得た。
（実施例２７）Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－ＯＨ（化合物２６の合成）の合成
化合物２３（ＨＣｌ・Ｈ－Ｇｌｙ－ＯＫｂ）の合成
Ｋｂ－ＯＨ（７．５７ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）に対しＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを実施例１７と同様に用いて化合物２３（７．９０ｇ，９３．１％）を得た。
化合物２４（ＨＣｌ・Ｈ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000073
 ２残基目Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ
３残基目Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ
４残基目Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ
５残基目Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ
６残基目Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ
７残基目Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ
８残基目Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨの導入
　化合物２３（７．８９ｇ，９．２５ｍｍｏｌ）に対し以下の方法を繰り返すことでアミノ酸を順次導入し、化合物２４（２０．２７ｇ，８５．５％）を得た。
　出発原料を、アミンスカベンジャーを加え、塩化アンモニウム水溶液で洗浄を行う１ｐｏｔ縮合脱保護法（ただし、Ｆｍｏｃ－アミノ酸（１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（１．１３ｅｑｕｉｖ）を用い、塩化アンモニウム水洗浄を省く方法）を用いて、アミノ酸縮合物を得た。
化合物２５（Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－ＯＫｂ）の合成
　化合物２４（２０．２６ｇ，７．９１ｍｍｏｌ）に対し、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨをアミノ酸縮合一般合成法によって導入し化合物２５（２２．５６ｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物２６（Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－ＯＨ）の合成
　化合物２５（２２．５６ｇ，７．８０ｍｍｏｌ）に対しＫｂ保護基一般脱保護法を用いることで化合物２６（２２．５６ｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
（実施例２８）ＨＣｌ・Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｐｈｅ－Gｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｍｅｔ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ψＭｅ，Ｍｅ Ｐｒｏ）－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＫｂ（化合物２８）の合成
化合物２７（ＨＣｌ・Ｈ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｍｅｔ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ψ Ｍｅ，Ｍｅ 　Ｐｒｏ）－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000074
 　実施例１９で得られた化合物１１（１１．３３ｇ，５．８ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）をＤＭＦ（３８．７ｍｌ）に溶解し、ＴＨＦ（３４８ｍＬ）を加え希釈し、実施例２６で得られた化合物２２（１２．４２ｇ，３．８７ｍｍｏｌ，１．０ｅｑｕｉｖ）に、ＨＡＴＵ（１．９９ｇ，５．２２ｍｍｏｌ，１．３５ｅｑｕｉｖ）、ＨＯＡｔ（７１１ｍｇ，５．２２ｍｍｏｌ，１．３５ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（３３６９μＬ，１９．３ｍｍｏｌ，５．０ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（３１８μＬ，３．８７ｍｍｏｌ，１ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。さらに、ピペリジン（５７５μＬ，５．８０ｍｍｏｌ，１．０ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（５．７９ｍＬ，３８．７ｍｍｏｌ，１０ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えた。反応液に反応溶媒の倍量の飽和塩化アンモニウム水溶液：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに反応溶媒の倍量の飽和食塩水：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに、反応溶媒の倍量の飽和食塩水を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。得られた有機層を減圧下で溶媒留去した。残渣にアセトニトリル：水＝９：１の混合液を加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物２７（１５．２９ｇ，ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物２８（ＨＣｌ・Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｍｅｔ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ψ Ｍｅ，Ｍｅ 　Ｐｒｏ）－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000075
 化合物２７（１７．６３ｇ，３．８７ｍｍｏｌ）に対し、実施例２７で得られた化合物２６（１２．４７ｇ，５．８０ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）を用いて化合物２７の合成と同様に反応を行い、化合物２８（２６．８３ｇ，ｑｕａｎｔ）を得た。
（実施例２９）Ｈ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ａｒｇ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ－ＯＨ（７Ｃｙｓ－２３Ｃｙｓ，ＳＳ結合）（化合物３０）の合成

化合物２９の合成（Ｈ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ａｒｇ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ－ＯＨ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000076
 化合物２８（６．９３ｇ、１．０ｍｍｏｌ）をＴＦＡ：ＴＩＳ：水：ＥＤＴ＝８０：５：１０：５の混合液２００ｍｌに溶解し、４時間室温で撹拌した。反応液を、セライトを用いて濾過し、ろ過残渣を１００ｍｌのＴＦＡで洗浄、ろ過し、得られたろ液と合わせて、３．０Ｌの冷イソプロピルエーテル中に撹拌しながら投入した。得られた固形物をろ過し、ろ過残渣をさらに２回冷イソプロピルエーテルで懸洗、ろ過した。得られた固形物を乾燥し、化合物２９（３．９０ｇ，Ｑｕａｎｔ、ＨＰＬＣ純度５５．２２％）を得た。
化合物３０（Ｈ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ａｒｇ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ－ＯＨ（７Ｃｙｓ－２３Ｃｙｓ，ＳＳ結合））の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000077
 化合物２９（３．９０ｇ，１．０ｍｍｏｌ）を水３．７７Ｌに溶解し、ピリジンでｐＨ７．１に調整し、一晩撹拌した。得られた反応液を凍結乾燥し、化合物３０（３．４７ｇ、９２．２％、ＨＰＬＣ純度６５．０７％）を得た。得られた化合物をＬＣ－ＭＳで測定したところ、１０２７．２［Ｍ＋３Ｈ＋］／３が観測された。
（実施例３０）Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－ＯＫｂ（化合物３３）の合成
化合物３１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000078
 　Ｋｂ－ＯＨ（２．２７ｇ，３．００ｍｍｏｌ）に対し、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨを実施例１８と同様に用いて、化合物３１（３．２６ｇ，９９．６％）を得た。
化合物３２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000079
 　化合物３１（３．２６ｇ，２．９８ｍｍｏｌ）に対し、脱－Ｆｍｏｃ一般合成法を用いて、化合物３２（２．７２ｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物３３（Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000080
 ２残基目Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ
３残基目Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ
４残基目Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ
５残基目Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ
６残基目Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ
７残基目Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨの導入
化合物３２（２．７０ｇ，２．９８ｍｍｏｌ）に対し以下の方法を繰り返すことでアミノ酸を順次導入し化合物３３（４．４０ｇ，７７．７％）を得た。
出発原料をＴＨＦ：ＤＭＦ（９／１）の混合液に０．０５Ｍになるように溶解し、Ｆｍｏｃ－アミノ酸（１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（１．２ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢｔ（１ｅｑｕｉｖ）（２残基目のみ）、ピペリジン（１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（７ｅｑｕｉｖ、２残基目のみ８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えた。反応液に反応溶媒の倍量の飽和食塩水：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに、反応溶媒の倍量の飽和食塩水を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。得られた有機層を減圧下で溶媒留去した。残渣にアセトニトリルを加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリルで懸洗し、得られた固形物を減圧乾燥し、アミノ酸縮合物を得た。
（実施例３１）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ（化合物３８）の合成
化合物３４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000081
 　Ｋｂ－ＯＨ（３．４１ｇ，４．５０ｍｍｏｌ）に対し、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨを実施例１８と同様に用いて、化合物３４（５．０５ｇ，９６．３％）を得た。
化合物３５の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000082
 　化合物３４（５．０４ｇ，４．３３ｍｍｏｌ）に対して、脱－Ｆｍｏｃ一般合成法を用いて、化合物３５（４．２４ｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物３６（ＨＣｌ・Ｈ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000083
 化合物３５（４．２３ｇ，４．３３ｍｍｏｌ）に対し、下に示す反応条件表、及び洗浄条件表に従って、化合物２０の合成と同様の方法で化合物３６（７．０５ｇ，９０．８％）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000084
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000085
 化合物３７の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000086
 化合物３６（７．０４ｇ，３．９０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６５ｍＬ）とＤＭＦ（７．２ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（１．３９ｇ，４．６８ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（１．２０ｇ，４．３２ｍｍｏｌ，１．１１ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（７５３μＬ，４．３２ｍｍｏｌ，１．１１ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（８８８μＬ，１０．８ｍｍｏｌ，２．７７ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。得られた有機層を減圧下で溶媒留去した。残渣にアセトニトリル：水＝９：１の溶液を加えて冷却し、析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル懸洗を行い、さらにアセトニトリル懸洗を行い得られた固形物を減圧乾燥し、化合物３７（７．１６ｇ，９０．４％）を得た。
化合物３８（Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ）の合成
　化合物３７（２．２０ｇ，１．０９ｍｍｏｌ）に対しＫｂ保護基一般脱保護法を用いることで化合物３８（１．２１ｇ，８３．０％）を得た。
（実施例３２）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨ（化合物４２の合成）の合成
化合物３９（ＨＣｌ・Ｈ－Ｇｌｙ－ＯＫｂ）の合成
　Ｋｂ－ＯＨ（３．４１ｇ，４．５ｍｍｏｌ）に対しＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを実施例１７と同様に用いて、化合物３９（３．５８ｇ，９０．２％）を得た。
化合物４０（ＨＣｌ・Ｈ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000087
 ２残基目Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ
３残基目Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ
４残基目Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ
５残基目Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨの導入
　化合物３９（３．３３ｇ，３．９１ｍｍｏｌ）に対し、以下の方法を繰り返すことでアミノ酸を順次導入し化合物４０（５．１１ｇ，８５．７％）を得た。
　出発原料をＴＨＦ：ＤＭＦ（９／１）の混合液に０．０５Ｍになるように溶解し、Ｆｍｏｃ－アミノ酸（１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（１．２ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ＨＯＢｔ（１ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（７ｅｑｕｉｖ、２残基目のみ８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えた。反応液に反応溶媒の倍量の飽和食塩水：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに、反応溶媒の倍量の飽和食塩水を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。得られた有機層を減圧下で溶媒留去した。残渣にアセトニトリルを加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリルで懸洗し、得られた固形物を減圧乾燥し、アミノ酸縮合物を得た。
化合物４１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000088
 　化合物４０（５．１０ｇ，３．３８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６１ｍＬ）とＤＭＦ（６．７ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－ＯＨ（１．７０ｇ，４．３９ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（１．１２ｇ，４．０５ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（７０５μＬ，４．０５ｍｍｏｌ，１．２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（５５５μＬ，６．７５ｍｍｏｌ，２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。得られた有機層を減圧下で溶媒留去した。残渣にアセトニトリル：水＝９：１の溶液を加えて冷却し、析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル懸洗を行い、さらにアセトニトリル懸洗を行い得られた固形物を減圧乾燥し、化合物４１（５．９２ｇ，９５．２％）を得た。
化合物４２（Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨ）の合成
　合物４１（１．８４ｇ，１．０ｍｍｏｌ）に対しＫｂ保護基一般脱保護法を用いることで化合物４２（０．９４２ｇ，８５．３％）を得た。
（実施例３３）Ｈ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－ＯＫｂ（化合物４４）の合成
化合物４３（ＨＣｌ・Ｈ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000089
 　実施例３０で得られた化合物３３（５６８ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）に対し、実施例３１で得られた化合物３８（５７３ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）を用い、化合物２７の合成と同様に反応、液々洗浄を行い、濃縮残渣にアセトニトリル：水＝９：１の混合液を加えて析出した沈殿物を遠心分離し、メタノールで懸洗し、更にアセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物４３（７２５ｍｇ，８２．６％）を得た。
化合物４４（ＨＣｌ・Ｈ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000090
 　化合物４３（７１５ｍｇ，０．２４５ｍｍｏｌ）に対し、実施例３２で得られた化合物４２（４０５ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）を用いて、化合物３２の合成と同様の操作を行い、化合物４４（８６３ｍｇ，９３．２％）を得た。
（実施例３４）Ｈ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－ＯＨ（化合物４５）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000091
 　化合物４４（３００ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）をＴＦＡ：ＴＩＳ：水＝９５：２．５：２．５の混合液８ｍｌに溶解し、３時間室温で撹拌した。反応液を、セライトを用いて濾過し、ろ過残渣を３ｍｌのＴＦＡで洗浄、ろ過し、得られたろ液と合わせて、１２０ｍＬの冷イソプロピルエーテル中に撹拌しながら投入した。得られた固形物を遠心分離し、ろ過残渣をさらに４回冷イソプロピルエーテルで懸洗、遠心分離した。得られた固形物を乾燥し、化合物４５（１４７．７ｍｇ，７７．４％，ＨＰＬＣ純度７４．４９％）を得た。
（実施例３５）Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＫｂ（化合物５０）の合成
化合物４６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000092
 　Ｋｂ－ＯＨ（２．２７ｇ，３．０ｍｍｏｌ）に対し、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ（２．９２ｇ，４．５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）を実施例１７と同様に用いて、化合物４６（４．２０ｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物４７の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000093
 　化合物４６（４．１５ｇ，２．９９ｍｍｏｌ）に対し、脱－Ｆｍｏｃ一般合成法を用いて、化合物４７（３．５１ｇ，９７．６％）を得た。
化合物４８の合成
　化合物４７（３．５ｇ，２．９１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５２ｍＬ）とＤＭＦ（５．８ｍｌ）の混合液に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ（１．２８ｇ，３．７８ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（９４３ｍｇ，３．４１ｍｍｏｌ，１．１７ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（９１３μＬ，５．２４ｍｍｏｌ，１．８ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（４７９μＬ，５．８２ｍｍｏｌ，２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。得られた反応液を減圧下で溶媒留去した。残渣にアセトニトリルを加えて析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物４８（４．２４ｇ，９８．０％）を得た。
化合物４９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000095
 　化合物４８（４．２３ｇ，２．８５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５１ｍＬ）とＤＭＦ（６ｍｌ）の混合液に溶解し、ＨＯＢｔ（３８８ｍｇ，２．８５ｍｍｏｌ，１．０ｅｑｕｉｖ）、ピペリジン（４２３μＬ，４．２７ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（８５２μＬ，５．６９ｍｍｏｌ，２ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えた。反応液に反応溶媒の倍量の飽和塩化アンモニウム水溶液：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに反応溶媒の倍量の飽和食塩水：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに、反応溶媒の倍量の飽和食塩水を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。減圧下溶媒を留去した。残渣にアセトニトリルを加えて析出した沈殿物をろ過し、さらにアセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物４９（３．７５ｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物５０（Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000096
 　化合物４９（３．６９ｇ，２．８４ｍｍｏｌ）に対し、下に示す反応条件表、及び洗浄条件表に従って、化合物２０の合成と同様の方法で化合物５０（６．０２ｇ，７９．９％）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000097
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000098
（実施例３６）Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（化合物５５）の合成
化合物５１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000099
 　Ｋｂ－ＯＨ（１．５２ｇ，２．０ｍｍｏｌ）に対して、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨを実施例１８と同様に用いて、化合物５１（２．４８ｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物５２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000100
 　化合物５１（２．４１ｇ，１．９９ｍｍｏｌ）に対し、脱－Ｆｍｏｃ一般合成法を用いて、化合物５２（２．０１ｇ，９８．９％）を得た。
化合物５３（ＨＣｌ・Ｈ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000101
 　化合物５２（２．０１ｇ，１．９６ｍｍｏｌ）に対し、下に示す反応条件表、及び洗浄条件表に従って、化合物２０の合成と同様の方法で化合物５３（４．３８ｇ，７８．２％）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000102
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000103
 化合物５４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000104
 　化合物５３（４．３６ｇ，１．５３ｍｍｏｌ）に対して、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（９３４ｍｇ，１．９９ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（４８１μＬ，２．７６ｍｍｏｌ，１．８ｅｑｕｉｖ）を用いて、化合物４８と同様の操作を行い、化合物５４（５．１１ｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物５５（Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ）の合成
　化合物５４（２．５５ｇ，０．７６４ｍｍｏｌ）に対しＫｂ保護基一般脱保護法を用いることで化合物５５（２．２６ｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
（実施例３７）Ｂｏｃ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｎ－ｏｃｔａｎｏｙｌ）－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ（化合物６１）の合成
化合物５６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000105
 　Ｋｂ－ＯＨ（２．２７ｇ，３．０ｍｍｏｌ）に対して、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨを実施例１８と同様に用いて、化合物５６（４．２１ｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物５７の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000106
 化合物５６（４．０４ｇ，２．９９ｍｍｏｌ）脱－Ｆｍｏｃ一般合成法を用いて、化合物５７（３．６２ｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物５８（ＨＣｌ・Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000107
 　化合物５７（３．４８ｇ，２．９９ｍｍｏｌ）に対し、下に示す反応条件表、及び洗浄条件表に従って、化合物２０の合成と同様の方法で化合物５８（４．６０ｇ，７２．１％）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000108
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000109
 化合物５９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000110
 　化合物５８（４．５９ｇ，１．８７ｍｍｏｌ）に対し、Ｂｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（４２５ｍｇ，２．４３ｍｍｏｌ，１．３ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（１１７０μＬ，６．７２ｍｍｏｌ，３．６ｅｑｕｉｖ）を用いて、化合物４８と同様の操作を行い、化合物５９（４．５５ｇ，９４．５％）を得た。
化合物６０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000111
 化合物５９（４．５５ｇ，１．７６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３５ｍｌ）に溶解し、カプリル酸（６２８ｍｇ，３．９６ｍｍｏｌ，２．２５ｅｑｕｉｖ）、ＷＳＣ・ＨＣｌ（７６０ｍｇ，３．９６ｍｍｏｌ，２．２ｇｅｑｕｉｖ）、およびＤＭＡＰ（１１ｍｇ，０．０８８ｍｍｏｌ，０．０５ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間、４０℃で１時間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（１０８６μＬ，１３．２ｍｍｏｌ，７．５ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。反応液に反応溶媒の倍量の飽和塩化アンモニウム水溶液：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに反応溶媒の倍量の飽和食塩水：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに、反応溶媒の倍量の飽和食塩水を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。得られた有機層を減圧下で溶媒留去した。残渣にアセトニトリルを加えて、析出した沈殿物をろ過し、アセトニトリル懸洗を行い得られた固形物を減圧乾燥し、化合物６０（４．４８ｇ，９４．１％）を得た。
化合物６１（Ｂｏｃ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｎ－Ｏｃｔａｎｏｙｌ）－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ）の合成
　化合物６０（４．４７ｇ，１．６５ｍｍｏｌ）に対しＫｂ保護基一般脱保護法を用いることで化合物６１（３．２６ｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
（実施例３８）Ｂｏｃ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｎ－Ｏｃｔａｎｏｙｌ）－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＫｂ（化合物６３）の合成
化合物６２（ＨＣｌ・Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000112
 　実施例３５で得られた化合物５０（２５１ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（９ｍＬ）とＤＭＦ（１．０ｍｌ）の混合液に溶解し、実施例３６で得られた化合物６１（４４３ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（４０．０ｍｇ，０．４０５ｍｍｏｌ，１．４５ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（６３μＬ，０．３６ｍｍｏｌ，３．６ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（２５．０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，３ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。ピペリジン（１５μＬ，０．４５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）およびＤＢＵ（１５０μＬ，３．０ｍｍｏｌ，１０ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１０分間攪拌した。反応液のｐＨが６前後になるまで濃塩酸を加えた。反応液に反応溶媒の倍量の飽和食塩水：水＝１：２の溶液を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。さらに、反応溶媒の倍量の飽和食塩水を加え、洗浄、分液し、水層を廃棄した。得られた有機層を減圧下で溶媒留去した。残渣に冷アセトニトリルを加えて析出した沈殿物をろ過し、更に冷アセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物６２（４８５ｍｇ，Ｑｕａｎｔ）を得た。
化合物６３（Ｂｏｃ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｎ－Ｏｃｔａｎｏｙｌ）－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＫｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000113
 　化合物６２（２５１ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．２ｍｌ）の混合液に溶解し、実施例３７で得られた化合物６１（２９５ｇ，０．１５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑｕｉｖ）、ＤＭＴ－ＭＭ（４０．０ｍｇ，０．４０５ｍｍｏｌ，１．４５ｅｑｕｉｖ）、およびＤＩＰＥＡ（６２μＬ，０．３６ｍｍｏｌ，３．６ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間攪拌した。アミンスカベンジャーとしてプロピルアミン（２５．０μＬ，０．３ｍｍｏｌ，３ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で３０分間撹拌した。反応液を減圧下で溶媒留去した。残渣に冷アセトニトリルを加えて析出した沈殿物をろ過し、更に冷アセトニトリル懸洗を行い、得られた固形物を減圧乾燥し、化合物６３（５６２ｍｇ，８４．４％）を得た。
（実施例３９）Ｈ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ（ｎ－Ｏｃｔａｎｏｙｌ）－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＯＨ（化合物６４）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000114
 　実施例３８で得られた化合物６３（５５５ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）をＴＦＡ：ＴＩＳ：水：ＥＤＴ＝９５：２．５：２．５の混合液８ｍｌに溶解し、３時間室温で撹拌した。反応液をセライトを用いて濾過し、ろ過残渣を３ｍｌのＴＦＡで洗浄、ろ過し、得られたろ液と合わせて、室温で４．５ｍｌになるまで減圧濃縮した。残渣に４５ｍＬの冷イソプロピルエーテル中に撹拌しながら投入した。得られた固形物を遠心分離し、ろ過残渣をさらに２回冷イソプロピルエーテルで懸洗、遠心分離した。得られた固形物を乾燥し、化合物６４（３５１ｍｇ，Ｑｕａｎｔ，ＨＰＬＣ純度６８．９２％）を得た。得られた化合物をＬＣ－ＭＳで測定したところ、１１１９．３［Ｍ＋３Ｈ＋］／３が観測された。
　上記の詳細な記載は、本発明の目的及び対象を単に説明するものであり、添付の特許請求の範囲を限定するものではない。添付の特許請求の範囲から離れることなしに、記載された実施態様に対しての、種々の変更及び置換は、本明細書に記載された教示より当業者にとって明らかである。
　本発明のペプチド合成方法を用いると、Ｎ末端の脱保護前に特定のスカベンジャーを用いてアミノ酸活性種を不活性化することにより、それらを反応系から取り除かなくても脱保護時にアミノ酸のダブルヒットが防げる。本発明の方法は、簡便な手段により、脱保護反応時における反応系中に存在するアミノ酸活性種の問題を解決することができ汎用性に優れ有用である。また、本発明により合成されたペプチドはアミノ酸の欠落やダブルヒットの問題が少なく、本発明の方法によれば高収率・高品質のペプチドを合成できる。

Claims (12)

  1. 　以下の工程ａ～ｄ：
    ａ．縮合剤の存在下で、フルオレニルメトキシカルボニルでＮ末端が保護された（Ｎ－Ｆｍｏｃ保護）アミノ酸またはＮ－Ｆｍｏｃ保護ペプチドと、溶解している溶媒の組成変化に伴い晶析される担体でＣ末端が保護された（Ｃ－担体保護）アミノ酸、Ｃ－担体保護ペプチドまたはＣ－担体保護アミノ酸アミドとを縮合させて、Ｎ－Ｆｍｏｃ－Ｃ－担体保護ペプチドを得る工程、
    ｂ．反応系に、炭素数が１～１４であるアルキルアミン、炭素数が１～１４である芳香族アミン、ヒドロキシルアミンからなる群より選ばれる少なくとも一つのアミンを添加する工程、（ここで、アルキルアミンまたは芳香族アミンは、第一級または第二級アミンである）
    ｃ．Ｎ末端を脱保護する工程、および
    ｄ．得られたＣ－担体保護ペプチドが溶解している溶媒組成を変化させることにより該Ｃ－担体保護ペプチドを晶析させて分離する工程、
    を含むペプチド合成方法。
  2. 　前記担体が、
    下記の構造を有する化合物：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式中、Ｒ１およびＲ５は、水素原子であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、炭素数が８～３０のアルコキシル基である。また、式中、ＲＸは、下記式で表され、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する基である、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     （ここでＲ７は水素原子、炭素数１～６のアルキル基、ベンジル基、またはアルコキシ置換ベンジル基を表し、Ｒ６は水素原子、フェニル基、またはアルコキシ置換フェニル基を表す）
    なお、上記式は、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する前の状態で示している）、
    下記の構造を有する化合物：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     （式中、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、水素原子であり、Ｒ１およびＲ３は、炭素数が１２～３０のアルコキシル基である。また、式中、ＲＹは、下記式で表され、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する基である、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     （ここでＲ７は水素原子、炭素数１～６のアルキル基、ベンジル基、またはアルコキシ置換ベンジル基を表し、Ｒ６は水素原子、フェニル基、またはアルコキシ置換フェニル基を表す）
    なお、上記式は、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する前の状態で示している）、および
    下記の構造を有する化合物：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
     （式中、Ｒ１、Ｒ３およびＲ５は、水素原子であり、Ｒ２およびＲ４は、炭素数が１２～３０のアルコキシル基である。また、式中、ＲＺは、下記式で表され、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する基である、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     （ここでＲ７は水素原子、炭素数１～６のアルキル基、ベンジル基、またはアルコキシ置換ベンジル基を表し、Ｒ６は水素原子、フェニル基、またはアルコキシ置換フェニル基を表す）
    なお、上記式は、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する前の状態で示している）、
    からなる群より選ばれる化合物である、請求項１に記載のペプチド合成方法。
  3. 　前記担体が、
    （３）前記担体が、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
     （式中、Ｘはハロゲンであり、Ｙは８～１２の整数であり、Ｚは１７～２９の整数である。）、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
     （式中、Ｘは、それぞれ独立に７～２１の整数である。）、および
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
     （式中、Ｘは、それぞれ独立に１１～２９の整数である。）、
    （なお、上記各式は、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する前の状態で示している）、
    からなる群より選ばれる化合物である、請求項１に記載のペプチド合成方法。
  4. 　前記担体が、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
     （式中、Ｘは、ＦまたはＣｌである。）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
    （なお、上記各式は、アミノ酸またはペプチドのＣ末端に結合する前の状態で示している）
    からなる群より選ばれる化合物である、請求項１に記載のペプチド合成方法。
  5. 　前記アミンが炭素数１～１０のアルキルアミンまたはヒドロキシルアミンである請求項１～４のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
  6. 　前記アミンが炭素数３または４のアルキルアミンである請求項１～５のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
  7. 　工程ｂにおけるアミン当量が、工程ａの縮合反応後に理論上残存するアミノ酸当量に対して１～３０倍の量である、請求項１～６のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
  8. 　前記得られたＣ－担体保護ペプチドが溶解している溶媒組成を変化させる組成変化手段が、溶液の溶媒を濃縮し、その後、貧溶媒を加え固化することによりなされる、請求項１～７のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
  9. 　前記貧溶媒が、アセトニトリル、含水アセトニトリル、メタノール、含水メタノール、および水からなる群より選ばれる溶媒ある請求項８に記載のペプチド合成方法。
  10. 　工程ｄで晶析分離されたＣ－担体保護ペプチドを用いて、工程ａ～工程ｄの繰り返しを１回以上行うことを含む、請求項１～９のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
  11. 　さらに以下の工程、
    ｅ．晶析分離されたＣ－担体保護ペプチドの結晶を、有機溶媒で洗浄する工程を含む請求項１～１０のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
  12. 　前記ａ～ｃの工程をワンポット合成で行う、請求項１～１１のいずれか一つに記載のペプチド合成方法。
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