CN114315538B - 一种作为多肽液相合成载体的苄醇酚醚类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
一种作为多肽液相合成载体的苄醇酚醚类化合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种作为多肽液相合成载体的苄醇酚醚类化合物及其制备方法与应用，包括该化合物的合成方法、其作为起始模板试剂依次偶联氨基酸构建多肽链的方法和最终温和条件下脱除该模板而不脱除肽链上其他保护基的方法。本发明设计合成的起始模板通过向苄醇的苄位引入其他基团，从而使其在最终脱除时可以采用更温和的脱保护条件。在温和的脱保护条件下，多肽链上的其他保护基团得以保留，最终获得全保护的多肽链分子。本发明开发的这种含有长链烷烃基取代的化合物，具有合成方法简单、操作方便、成本低、易于储存和易于脱除的特点，很适合作为起始模板应用于全保护多肽链的液相合成，也有望实现大规模工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及多肽合成领域，特别涉及苄醇酚醚类化合物以及它的制备方法和在多肽液相合成中的应用。
背景技术
索玛鲁肽是由丹麦诺和诺德公司(NovoNordisk)开发的新一代GLP-1(胰高血糖素样肽-1)类似物，是基于利拉鲁肽基本结构而开发的长效剂型，其治疗2型糖尿病的效果更好。索玛鲁肽的结构信息如下：化学名：索玛鲁肽Sermaglutide，结构式如式Ⅱ所示：
分子式：C187H291N45O59；分子量：4113.58；CAS登记号：910463-68-2。
目前多采用Fmoc策略进行固相合成索玛鲁肽，固相合成在反应的后处理方面具有一定的优势，但缺点也比较明显：1.需要2～5倍甚至更高倍数的Fmoc-保护氨基酸投料。2.在偶联一个氨基酸后，需要大量的溶剂DMF进行洗涤(一般4～6次洗涤)。3.反应属于非均相反应。对于固相成环，偶联疏水性氨基酸等，由于位阻大，偶联效果欠佳，需要二次甚至三次投料。4.由于树脂体积较大，溶剂用量较大，导致反应釜效较低，一批次产量较低。
因此，提供一种操作简便、收率较高的索玛鲁肽的液相合成方法具有重要的现实意义。
此外，在目前所报道的绝大多数固相合成策略中，最后一步脱除固相合成模板物质需要用到较强的酸，如：较高浓度的三氟醋酸。脱除该模板物的同时，多肽链上的保护基也会相应地脱除。全保护的多肽链合成方法相对较少。因此，提供一种操作简便、收率较高的全保护多肽链的合成方法，同样具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的第一个目的在于为了解决现有Fmoc策略进行固相合成多肽的方法具有较多缺点，而提供了一种作为多肽液相合成载体的苄醇酚醚类化合物，使用其作为载体起始端合成多肽链，有利于困难氨基酸的偶联及成环，脱保护方便，产量高。
本发明第二个目的是为了提供上述的苄醇酚醚类化合物的制备方法，原料简单易得，制备条件温和，步骤简单，易于实现，成本低。
本发明第三个目的是为了提供上述的苄醇酚醚类化合物的应用，苄醇酚醚类化合物作为疏水载体在液相中合成全保护多肽或全脱保护多肽。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了化合物，结构如式Ⅰ：
R选自C12～C22脂肪链。
在本发明的一些具体实施方案中，化合物结构如式Ⅲ所示：
该载体式Ⅲ所示化合物，分子式为：C69H124O6，Mol.wt：1049.75，暂时命名为HO-TAG1a。
本发明的一些具体实施方案中，所述多肽为索玛鲁肽。
本发明还提供上述化合物的制备方法，以结构如式1所示的化合物为原料，经酯化反应，取代反应，还原反应，取代反应，还原反应等步骤制得。
式1所示的化合物，分子式为C7H6O5，Mol.wt：170.12。
式Ⅰ所示的化合物的合成路线如图5所示。
包括以下步骤：
a)式(1)所示的物质溶解在甲醇中，通过滴加乙酰氯进行酯化反应，生成化合物2即式(2)表示的化合物；其中反应温度为25℃～35℃；
所述步骤(a)的后处理工艺为：将反应得到的式(2)表示的化合物经脱甲醇，乙酸乙酯萃取、碳酸氢钠水溶液洗涤、干燥、过滤，脱溶后用溶剂重结晶即得。
b)将式(2)所示的物质、碳酸钾和1-溴十八烷加入溶剂DMF中，进行升温反应后生成化合物3即式(3)表示的化合物；其中反应温度为85℃～90℃；
所述步骤(b)的后处理工艺为：将反应得到的式(3)表示的化合物经加入甲苯进行热过滤，得到粗品再用溶剂重结晶即得。
c)将式(3)所示的物质溶解在甲苯中，滴加70％红铝甲苯溶液，进行还原反应后生成化合物4即式(4)表示的化合物；其中反应温度为20℃～30℃；
所述步骤(c)的后处理工艺为：将反应得到的式(4)表示的化合物经稀盐酸水溶液淬灭反应后，水溶液洗涤、干燥、过滤，脱溶后用溶剂重结晶即得。
d)将式(4)所示的物质溶解在甲苯中，滴加二氯亚砜，进行氯取代反应后生成化合物5即式(5)表示的化合物；其中反应温度为20℃～30℃；
所述步骤(d)的后处理工艺为：将反应得到的式(5)表示的化合物加入水淬灭反应后，饱和盐水溶液洗涤、干燥、过滤，加入甲醇析出固体即得。
e)将式(5)所示的物质、碳酸钾和4-羟基-2-甲氧基苯甲醛加入溶剂DMF中，进行升温反应后生成化合物6即式(6)表示的化合物；其中反应温度为80℃～90℃；
所述步骤(e)的后处理工艺为：将反应得到的式(6)表示的化合物经加入甲苯进行热过滤，得到粗品再用溶剂重结晶即得。
f)将式(6)所示的物质溶解在2-甲基四氢呋喃和甲醇中，分批加入硼氢化钠，进行还原反应后生成式Ⅰ表示的化合物；其中反应温度为20℃～30℃；
所述步骤(f)的后处理工艺为：将反应得到的式Ⅰ表示的化合物加入水进行淬灭反应，饱和盐水溶液洗涤、干燥、过滤，脱溶后再用溶剂重结晶即得。
作为本发明的一种优选方案，步骤a)中，所述的酯化试剂包括乙酰氯、二氯亚砜或浓硫酸，酯化反应的温度为20～60℃，式1所示的物质与酯化试剂的摩尔比为1：1.5～3.0。
作为本发明的一种优选方案，步骤b)中，所述的缚酸剂包括碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化钠、二异丙基乙胺、三乙胺中的一种或两者以上的混合物；所述的取代反应试剂包括卤代烷烃RX中的一种或两者以上的混合物，R是C12～C22脂肪链，X是卤素；所述的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)、二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、1，4-二氧六环(1，4-Dioxane)、乙腈、甲苯中的一种或两种以上的混合物；
步骤b)中，式2所示的物质、取代反应试剂与缚酸剂的摩尔比为1.0：3.2～4.0：8.0～10.0，取代反应的温度为70～100℃，取代反应的时间为14～18小时。
作为本发明的一种优选方案，步骤c)中，还原剂a包括红铝或氢化铝锂，式3所示的物质与还原剂a的摩尔比为1：2.5～4.0，还原反应的温度为20～55℃。
作为本发明的一种优选方案，步骤d)中，式4所示的物质与二氯亚砜的摩尔比为1：2.0～3.0，氯取代反应的温度为20～55℃。
作为本发明的一种优选方案，步骤e)中，所述的缚酸剂包括碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化钠、二异丙基乙胺、三乙胺中的一种或两者以上的混合物；所述的取代反应试剂包括卤代烷烃RX中的一种或两者以上的混合物，R是C12～C22脂肪链，X是卤素；所述的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)、二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、1，4-二氧六环(1，4-Dioxane)、乙腈、甲苯中的一种或两种以上的混合物；
步骤e)中，式5所示的物质、4-羟基-2-甲氧基苯甲醛与缚酸剂的摩尔比为1.0：1.2～2.0：4.0～6.0，取代反应的温度为70～100℃，取代反应的时间为8～15小时。
作为本发明的一种优选方案，步骤f)中，还原剂b包括硼氢化钠、氰基硼氢化钠中的一种或两者的混合物，式6所示的物质与还原剂b的摩尔比为1：2.0～3.0，还原反应的温度为20～55℃。
本发明还提供了索玛鲁肽的液相合成方法，以式I为原料，依次偶联氨基酸，脱保护，制得索玛鲁肽粗肽，裂解。
合成路线如图6所示。
索玛鲁肽的合成包括如下步骤：
1)偶联氨基酸：式Ⅰ所示的物质和氨基酸的摩尔比为1：1.1～1.5，偶联试剂为HOBt/DIC(1.1～1.5equiv),HOBt/DCC(1.1～1.5equiv)HOBt/EDC.HCl(1.1～1.5equiv),其中HOBt/DIC作为优选。所用溶剂为三氯甲烷或二氯甲烷或四氢呋喃，其中二氯甲烷作为优选。
2)脱Fmoc：脱Fmoc的试剂为DBU或哌啶，其中DBU作为优选；所用溶剂为三氯甲烷或二氯甲烷或四氢呋喃，其中二氯甲烷作为优选。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1)到目前为止,利用式Ⅰ所示的化合物作为原料，液相合成方法制备索马鲁肽，国内外资料还没有详细报道，本发明首次详细描述了该化合物的制备；
2)本发明所用的原料简单易得，成本低；
3)本发明中的合成步骤操作简单，易于实现。
附图说明
图1为按照实施例1的方法制备的式Ⅲ1H NMR图谱。
图2为按照实施例1的方法制备的全保护六肽的HPLC图谱。
图3为按照实施例1的方法制备的全保护十肽的HPLC图谱。
图4为按照实施例1的方法制备的索玛鲁肽的HPLC图谱。
图5为本发明式Ⅰ所示的化合物的合成路线。
图6是本发明索马鲁肽的合成路线。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
在氮气保护下，往2L三口反应瓶中加入1264.0mL MeOH，再加入216.0g三羟基苯甲酸，搅拌溶清，再降温至15℃以下。滴加180.5mL乙酰氯，滴加完反应控测。在35℃以下保温反应6小时；保温反应结束后脱溶剂。再加入2.0L EA溶清，加入水500.0mL萃取一次。EA相用15％NaHCO3水溶液萃取2次，合并水相用300mL EA萃取3次；合并EA相用300mL饱和氯化钠水溶液洗涤一次，加100.0g无水硫酸钠干燥，过滤，脱溶剂得粗品230.0g，用240.0mL乙酸乙酯先升温溶清，再滴加840.0mL石油醚，降温至10～15℃，过滤，烘干得式2产品212.8g，收率91.0％。
在氮气保护下，往3.0L三口烧瓶中，加入DMF1056.0mL和49.0g化合物式(2)，搅拌溶清，加入K2CO3 293.8g，白色浑浊，加入1-溴十八烷310.5g升温90℃以上反应16h。加入甲苯1300mL，升温70℃溶清，趁热过滤，滤液升温70℃，机械搅拌下慢慢降温，固体析出。过滤，烘干得式3产品204.8g，收率81.8％。
在氮气保护下，往3L的三口反应瓶中，加入2500.0mL甲苯和500.0g化合物式3，升温至45℃以上溶清，降温至25℃以下，分批加入70％红铝甲苯溶液306.8g，保温反应1h。保温结束后滴加1000.0mL水淬灭，再用浓盐酸调节PH＝4-5；分层，有机相用400.0mL饱和食盐水洗涤。100.0g无水硫酸钠干燥，过滤，脱溶剂，至剩余1000.0mL左右时，加入乙腈1500.0mL，固体析出，慢慢降温至5～10℃左右，搅拌20min，过滤，烘干得式4产品422.0g，收率87.0％。
在氮气保护下，往3L三口反应瓶中加入1735.0mL甲苯和347.0g化合物式4，在35℃以下，加入SOCl2 55.2mL，保温反应2h。保温结束后滴加500.0mL水淬灭反应；分层，有机相用500.0mL饱和食盐水洗一次，有机相升温60～65℃，慢慢加入MeOH 694.0mL，白色固体析出，降温5～10℃，搅拌20min。过滤，烘干得式5产品311.6g，收率88.0％。
在氮气保护下，往2L三口反应瓶中，加入DMF 1367.0mL,273.4g化合物式5，K2CO3162.0g，4-羟基-2-甲氧基苯甲醛53.6g，升温至80℃以上保温反应9小时。保温反应结束后加入甲苯1640.0mL，控制温度在70～75℃，热过滤，滤液再缓慢降温至5～10℃，过滤，烘干得式6产品241.6g，收率78.6％。
在氮气保护下，往2L三口烧瓶中，加入2-MeTHF1200.0mL，241.6g化合物式6，升温至45℃以上溶清，再降至30℃以下，17.4g NaBH4用120.0mLMeOH溶清(加入少量甲醇钠)，将其滴加至反应瓶中，产生大量气泡。保温反应1h；滴加600.0mL水淬灭反应，搅拌后分层；有机相再用600.0mL水洗一次，再用200.0mL饱和食盐水洗2次，100.0g无水硫酸钠干燥，过滤；脱溶剂；加入正庚烷1200.0mL，升温至70～75℃溶清，再缓慢降温5～10℃，固体析出，过滤，烘干得式Ⅲ产品198.3g，收率82.0％，1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ(ppm)：7.17(1H),6.55(4H)，4.93(2H)，4.62(2H)，3.97(6H)，3.83(3H)，1.78(6H)，1.46(6H)，1.30(84H)，0.87(9H)，见附图1。
索马鲁肽的合成：
1)Fmoc-Gly-O-TAGa(第一个氨基酸的偶联)：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0ml、0.43gDMAP和15.0g化合物式(Ⅲ)，搅拌固体溶清。加入5.1gFmoc-Gly-OH，分批加入4.3g DCC。控制温度在30℃以下。保温反应5小时，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应；过滤。脱溶剂至剩余80.0g左右时，停止脱溶剂，升至40～45℃，固体溶清后，滴加甲醇180.0mL。再慢慢降温至10～15、℃。过滤，烘干后得Fmoc-Gly-O-TAGa产品18.8g。收率99.0％。
2)H-Gly-O-TAGa(脱Fmoc)：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷148.0ml和18.5g Fmoc-Gly-TAGa，搅拌固体溶清。加入44.4mL DMF，将体系降温至15℃以下，加入2.56gDBU。在10～15℃反应30分钟，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应。加入60.0mL5％柠檬酸水溶液，洗涤，分层。再用60.0mL水洗涤，60.0mL5％碳酸氢钠水溶液洗涤。60.0mL水洗涤，60.0mL饱和食盐水洗涤。
3)Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa(第二个氨基酸的偶联)：
在氮气保护下，往上述三口反应瓶中，加入10.8g Fmoc-Arg(Pbf)-OH和2.27gHOBt，搅拌固体溶清，再加入2.5g DIC。控制温度在30℃以下。保温反应3小时。脱溶剂至粘稠状，停止脱溶剂，加甲醇180.0mL。搅拌30分钟。过滤，烘干后得Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa产品23.7g。收率98.0％。
4)重复2～3进行第3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14个氨基酸的偶联和脱保护至第15个氨基酸Fmoc-Gln(Trt)-OH的偶联，Fmoc-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa。
5)全保护六肽片段(Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-OH)的合成：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0ml、0.43gDMAP和15.0g化合物式(Ⅲ)，搅拌固体溶清。加入5.1gFmoc-Gly-OH，分批加入4.3g DCC。控制温度在30℃以下。保温反应5小时，过滤。脱溶剂至剩余80.0g左右时，停止脱溶剂，升至40～45℃，固体溶清后，滴加甲醇180.0mL。再慢慢降温至10～15、℃。过滤，烘干后得18.8g。收率99.0％。重复2～3进行第2、3、4、5个氨基酸的偶联和脱保护至第6个氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH的偶联，得Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-O-TAGa；在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0mL，15.0g上述含有载体的全保护六肽，搅拌固体溶清，再降温至15℃以下。加入3.0g三氟乙酸，保温反应5小时，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应；加入80.0mL 6％碳酸氢钠水溶液洗涤，分层；有机相再加入80.0mL5％柠檬酸水溶液洗涤，分层；有机相再用50.0mL饱和食盐水洗涤，分层。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤；有机相减压浓缩至固体。加入200.0mL甲醇，搅拌30分钟，过滤。母液再减压浓缩至固体，加入60.0mL正庚烷，搅拌30分钟。过滤，烘干得全保护的六肽产品Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-OH 7.3g，收率94.3％，HPLC液相纯度(出峰时间：3.9min)96.2％，见附图2。
6)全保护十肽片段(Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-OH)的合成：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0ml、0.43gDMAP和15.0g化合物式(Ⅲ)，搅拌固体溶清。加入5.8gFmoc-Val-OH，分批加入4.3g DCC。控制温度在30℃以下。保温反应5小时，过滤。脱溶剂至剩余80.0g左右时，停止脱溶剂，升至40～45℃，固体溶清后，滴加甲醇180.0mL。再慢慢降温至10～15、℃。过滤，烘干后得产品19.4g。收率99.0％。重复2～3进行第2、3、4、5、6、7、8、9个氨基酸的偶联和脱保护至第10个氨基酸Boc-His(Trt)-OH的偶联，得Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-O-TAGa；在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0mL，15.0g上述含有载体的全保护十肽，搅拌固体溶清，再降温至15℃以下。加入3.0g三氟乙酸，保温反应5小时，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应；加入80.0mL 6％碳酸氢钠水溶液洗涤，分层；有机相再加入80.0mL 5％柠檬酸水溶液洗涤，分层；有机相再用50.0mL饱和食盐水洗涤，分层。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤；有机相减压浓缩至固体。加入200.0mL甲醇，搅拌30分钟，过滤。母液再减压浓缩至固体，加入60.0mL正庚烷，搅拌30分钟。过滤，烘干得全保护的十肽产品Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-OH 8.6g，收率92.2％，HPLC液相纯度(出峰时间：3.4min)84.8％，见附图3。
7)二十一肽的合成，Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷148.0ml和18.5g上述含有载体的全保护十五肽，搅拌固体溶清。加入44.4mL DMF，将体系降温至15℃以下，加入0.72gDBU。在15℃以下反应30分钟，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应。加入60.0mL5％柠檬酸水溶液，洗涤，分层。再用60.0mL水洗涤，60.0mL5％碳酸氢钠水溶液洗涤。60.0mL水洗涤，60.0mL饱和食盐水洗涤。
往上述三口反应瓶中，加入5.5g上述全保护六肽和0.68gHOBt，搅拌固体溶清，再加入0.77g DIC。控制温度在30℃以下。保温反应3小时。脱溶剂至粘稠状，停止脱溶剂，加甲醇180.0mL。搅拌30分钟。过滤，烘干后得产品Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa 20.8g。收率95.0％。
8)三十一肽的合成：Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷166.0mL和20.8g上述含有载体的全保护二十一肽，搅拌固体溶清。加入44.4mL DMF，将体系降温至15℃以下，加入0.85gDBU。在15℃以下反应30分钟，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应。加入60.0mL5％柠檬酸水溶液，洗涤，分层。再用60.0mL水洗涤，60.0mL5％碳酸氢钠水溶液洗涤。60.0mL水洗涤，60.0mL饱和食盐水洗涤。
往上述三口反应瓶中，加入7.6g上述全保护的十肽和0.61gHOBt，搅拌固体溶清，再加入0.97g DIC。控制温度在30℃以下。保温反应3小时。脱溶剂至粘稠状，停止脱溶剂，加甲醇180.0mL。搅拌30分钟。过滤，烘干后得产品Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa 24.4g。收率92.9％。
9)裂解：Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa 24.4g，加入250.0mL三口反应瓶内，再加入146.4g配方为TFA：EDT：Tis＝90:5:5(体积比)的裂解液，在30℃以下裂解2小时，滴加至500.0g异丙醚中，沉淀，过滤。滤饼再用250.0g乙腈：水＝2：1(体积比)混合溶剂，进行洗涤，过滤，粗肽在母液中，进行过柱纯化。得索玛鲁肽9.3g，收率65.0％，HPLC液相纯度(出峰时间：21.1min)99.9％，见附图4。
实施例2：
在氮气保护下，往2L三口反应瓶中加入1264.0mL MeOH，再加入216.0g三羟基苯甲酸，搅拌溶清，再降温至5～10℃。滴加180.5mL乙酰氯，滴加完反应控测。在25～35℃保温反应6小时；保温反应结束后脱溶剂。再加入2.0L EA溶清，加入水500.0mL萃取一次。EA相用15％NaHCO3水溶液萃取2次，合并水相用300mL EA萃取3次；合并EA相用300mL饱和氯化钠水溶液洗涤一次，加100.0g无水硫酸钠干燥，过滤，脱溶剂得粗品230.0g，用240.0mL乙酸乙酯先升温溶清，再滴加840.0mL石油醚，降温至10～15℃，过滤，烘干得式2产品215.1g，收率92.0％。
在氮气保护下，往3.0L三口烧瓶中，加入DMF1056.0mL和49.0g化合物式(2)，搅拌溶清，加入K2CO3 293.8g，白色浑浊，加入1-溴十八烷310.5g升温90℃反应16h。加入甲苯1300mL，升温70℃溶清，趁热过滤，滤液升温70℃，机械搅拌下慢慢降温，固体析出。过滤，烘干得式3产品200.3g，收率80.0％。
在氮气保护下，往3L的三口反应瓶中，加入2500.0mL甲苯和500.0g化合物式3，升温至45℃溶清，降温至25℃，分批加入70％红铝甲苯溶液306.8g，保温反应1h。保温结束后滴加1000.0mL水淬灭，再用浓盐酸调节PH＝4-5；分层，有机相用400.0mL饱和食盐水洗涤。100.0g无水硫酸钠干燥，过滤，脱溶剂，至剩余1000.0mL左右时，加入乙腈1500.0mL，固体析出，慢慢降温至5～10℃左右，搅拌20min，过滤，烘干得式4产品417.1g，收率86.0％。
在氮气保护下，往3L三口反应瓶中加入1735.0mL甲苯和347.0g化合物式4，在25～30℃，加入SOCl2 55.2mL，保温反应2h。保温结束后滴加500.0mL水淬灭反应；分层，有机相用500.0mL饱和食盐水洗一次，有机相升温60～65℃，慢慢加入MeOH 694.0mL，白色固体析出，降温5～10℃，搅拌20min。过滤，烘干得式5产品309.8g，收率87.5％。
在氮气保护下，往2L三口反应瓶中，加入DMF 1367.0mL,273.4g化合物式5，K2CO3162.0g，4-羟基-2-甲氧基苯甲醛53.6g，升温至80～85℃保温反应9小时。保温反应结束后加入甲苯1640.0mL，控制温度在70～75℃，热过滤，滤液再缓慢降温至5～10℃，过滤，烘干得式6产品243.8g，收率79.3％。
在氮气保护下，往2L三口烧瓶中，加入2-MeTHF1200.0mL，241.6g化合物式6，升温至45℃溶清，再降至25～30℃，17.4g NaBH4用120.0mLMeOH溶清(加入少量甲醇钠)，将其滴加至反应瓶中，产生大量气泡。保温反应1h；滴加600.0mL水淬灭反应，搅拌后分层；有机相再用600.0mL水洗一次，再用200.0mL饱和食盐水洗2次，100.0g无水硫酸钠干燥，过滤；脱溶剂；加入正庚烷1200.0mL，升温至70～75℃溶清，再缓慢降温5～10℃，固体析出，过滤，烘干得式Ⅲ产品197.3g，收率81.6％，1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ(ppm)：7.17(1H),6.55(4H)，4.93(2H)，4.62(2H)，3.97(6H)，3.83(3H)，1.78(6H)，1.46(6H)，1.30(84H)，0.87(9H)。
索马鲁肽的合成：
1)Fmoc-Gly-O-TAGa(第一个氨基酸的偶联)：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0ml、0.43gDMAP和15.0g化合物式(Ⅲ)，搅拌固体溶清。加入5.1gFmoc-Gly-OH，分批加入2.6g DIC。控制温度在25～30℃。保温反应5小时，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应；过滤。脱溶剂至剩余80.0g左右时，停止脱溶剂，升至40～45℃，固体溶清后，滴加甲醇180.0mL。再慢慢降温至10～15、℃。过滤，烘干后得产品Fmoc-Gly-O-TAGa 18.7g。收率98.7％。
2)H-Gly-O-TAGa(脱Fmoc)：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷148.0ml和18.5g Fmoc-Gly-TAGa，搅拌固体溶清。加入44.4mL DMF，将体系降温至10～15℃，加入14.8g哌啶。在10～15℃反应30分钟，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应。加入60.0mL5％柠檬酸水溶液，洗涤，分层。再用60.0mL水洗涤，60.0mL5％碳酸氢钠水溶液洗涤。60.0mL水洗涤，60.0mL饱和食盐水洗涤。
3)Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa(第二个氨基酸的偶联)：
在氮气保护下，往上述三口反应瓶中，加入10.8g Fmoc-Arg(Pbf)-OH和2.27gHOBt，搅拌固体溶清，再加入4.1g DCC。控制温度在30℃以下。保温反应3小时。脱溶剂至粘稠状，停止脱溶剂，加甲醇180.0mL。搅拌30分钟。过滤，烘干后得产品Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa 23.9g。收率99.0％。
4)重复2～3进行第3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14个氨基酸的偶联和脱保护至第15个氨基酸Fmoc-Gln(Trt)-OH的偶联，得Fmoc-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa。
5)全保护六肽片段(Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-OH)的合成：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0ml、0.43gDMAP和15.0g化合物式(Ⅲ)，搅拌固体溶清。加入5.1gFmoc-Gly-OH，分批加入2.6g DIC。控制温度在25～30℃。保温反应5小时，过滤。脱溶剂至剩余80.0g左右时，停止脱溶剂，升至40～45℃，固体溶清后，滴加甲醇180.0mL。再慢慢降温至10～15℃。过滤，烘干后得产品18.7g。收率98.5％。重复2～3进行第2、3、4、5个氨基酸的偶联和脱保护至第6个氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH的偶联，得Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-O-TAGa；在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0mL，15.0g上述含有载体的全保护六肽，搅拌固体溶清，再降温至10～15℃。加入3.0g三氟乙酸，保温反应5小时，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应；加入80.0mL 6％碳酸氢钠水溶液洗涤，分层；有机相再加入80.0mL5％柠檬酸水溶液洗涤，分层；有机相再用50.0mL饱和食盐水洗涤，分层。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤；有机相减压浓缩至固体。加入200.0mL甲醇，搅拌30分钟，过滤。母液再减压浓缩至固体，加入60.0mL正庚烷，搅拌30分钟。过滤，烘干得全保护的六肽产品Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-OH 7.35g，收率95.0％。
6)全保护十肽片段(Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-OH)的合成：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0ml、0.43gDMAP和15.0g化合物式(Ⅲ)，搅拌固体溶清。加入5.8gFmoc-Val-OH，分批加入2.6g DIC。控制温度在25～30℃。保温反应5小时，过滤。脱溶剂至剩余80.0g左右时，停止脱溶剂，升至40～45℃，固体溶清后，滴加甲醇180.0mL。再慢慢降温至10～15℃。过滤，烘干后得产品19.3g。收率98.5％。重复2～3进行第2、3、4、5、6、7、8、9个氨基酸的偶联和脱保护至第10个氨基酸Boc-His(Trt)-OH的偶联，得Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-O-TAGa；在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0mL，15.0g上述含有载体的全保护十肽，搅拌固体溶清，再降温至10～15℃。加入3.0g三氟乙酸，保温反应5小时，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应；加入80.0mL 6％碳酸氢钠水溶液洗涤，分层；有机相再加入80.0mL 5％柠檬酸水溶液洗涤，分层；有机相再用50.0mL饱和食盐水洗涤，分层。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤；有机相减压浓缩至固体。加入200.0mL甲醇，搅拌30分钟，过滤。母液再减压浓缩至固体，加入60.0mL正庚烷，搅拌30分钟。过滤，烘干得全保护的十肽产品Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-OH 8.5g，收率91.1％。
7)二十一肽的合成，Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷148.0ml和18.5g上述含有载体的全保护十五肽，搅拌固体溶清。加入44.4mL DMF，将体系降温至10～15℃，加入14.8g哌啶。在10～15℃反应30分钟，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应。加入60.0mL5％柠檬酸水溶液，洗涤，分层。再用60.0mL水洗涤，60.0mL5％碳酸氢钠水溶液洗涤。60.0mL水洗涤，60.0mL饱和食盐水洗涤。
往上述三口反应瓶中，加入5.5g上述全保护六肽和0.68gHOBt，搅拌固体溶清，再加入1.26g DCC。控制温度在25～30℃。保温反应3小时。脱溶剂至粘稠状，停止脱溶剂，加甲醇180.0mL。搅拌30分钟。过滤，烘干后得产品Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa 21.0g。收率95.9％。
8)三十一肽的合成，Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷166.0mL和20.8g上述含有载体的全保护二十一肽，搅拌固体溶清。加入44.4mL DMF，将体系降温至10～15℃，加入0.85gDBU。在10～15℃反应30分钟，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应。加入60.0mL5％柠檬酸水溶液，洗涤，分层。再用60.0mL水洗涤，60.0mL5％碳酸氢钠水溶液洗涤。60.0mL水洗涤，60.0mL饱和食盐水洗涤。
往上述三口反应瓶中，加入7.6g上述全保护的十肽和0.61gHOBt，搅拌固体溶清，再加入1.59g DCC。控制温度在25～30℃。保温反应3小时。脱溶剂至粘稠状，停止脱溶剂，加甲醇180.0mL。搅拌30分钟。过滤，烘干后得产品Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa 24.6g。收率93.7％。
9)裂解：Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa 24.4g，加入250.0mL三口反应瓶内，再加入146.4g配方为TFA：EDT：Tis＝90:5:5(体积比)的裂解液，在25～30℃裂解2小时，滴加至500.0g异丙醚中，沉淀，过滤。滤饼再用250.0g乙腈：水＝2：1(体积比)混合溶剂，进行洗涤，过滤，粗肽在母液中，进行过柱纯化。得索玛鲁肽9.4g，收率65.7％。
实施例3：
在氮气保护下，往2L三口反应瓶中加入1264.0mL MeOH，再加入216.0g三羟基苯甲酸，搅拌溶清，再降温至0～5℃。滴加180.5mL乙酰氯，滴加完反应控测。在20～30℃保温反应6小时；保温反应结束后脱溶剂。再加入2.0L EA溶清，加入水500.0mL萃取一次。EA相用15％NaHCO3水溶液萃取2次，合并水相用300mL EA萃取3次；合并EA相用300mL饱和氯化钠水溶液洗涤一次，加100.0g无水硫酸钠干燥，过滤，脱溶剂得粗品230.0g，用240.0mL乙酸乙酯先升温溶清，再滴加840.0mL石油醚，降温至10～15℃，过滤，烘干得式2产品213.2g，收率91.2％。
在氮气保护下，往3.0L三口烧瓶中，加入DMF1056.0mL和49.0g化合物式(2)，搅拌溶清，加入K2CO3 293.8g，白色浑浊，加入1-溴十八烷310.5g升温100℃反应16h。加入甲苯1300mL，升温70℃溶清，趁热过滤，滤液升温70℃，机械搅拌下慢慢降温，固体析出。过滤，烘干得式3产品203.5g，收率81.3％。
在氮气保护下，往3L的三口反应瓶中，加入2500.0mL甲苯和500.0g化合物式3，升温至50℃溶清，降温至20℃，分批加入70％红铝甲苯溶液306.8g，保温反应1h。保温结束后滴加1000.0mL水淬灭，再用浓盐酸调节PH＝4-5；分层，有机相用400.0mL饱和食盐水洗涤。100.0g无水硫酸钠干燥，过滤，脱溶剂，至剩余1000.0mL左右时，加入乙腈1500.0mL，固体析出，慢慢降温至5～10℃，搅拌20min，过滤，烘干得式4产品421.0g，收率86.8％。
在氮气保护下，往3L三口反应瓶中加入1735.0mL甲苯和347.0g化合物式4，在20～25℃，加入SOCl2 55.2mL，保温反应2h。保温结束后滴加500.0mL水淬灭反应；分层，有机相用500.0mL饱和食盐水洗一次，有机相升温60～65℃，慢慢加入MeOH 694.0mL，白色固体析出，降温5～10℃，搅拌20min。过滤，烘干得式5产品312.0g，收率88.1％。
在氮气保护下，往2L三口反应瓶中，加入DMF 1367.0mL,273.4g化合物式5，K2CO3162.0g，4-羟基-2-甲氧基苯甲醛53.6g，升温至90～95℃保温反应9小时。保温反应结束后加入甲苯1640.0mL，控制温度在70～75℃，热过滤，滤液再缓慢降温至5～10℃，过滤，烘干得式6产品242.0g，收率78.7％。
在氮气保护下，往2L三口烧瓶中，加入THF1200.0mL，241.6g化合物式6，升温至50℃溶清，再降至20～25℃，17.4g NaBH4用120.0mLMeOH溶清(加入少量甲醇钠)，将其滴加至反应瓶中，产生大量气泡。保温反应1h；滴加600.0mL水淬灭反应，搅拌后分层；有机相再用600.0mL水洗一次，再用200.0mL饱和食盐水洗2次，100.0g无水硫酸钠干燥，过滤；脱溶剂；加入正庚烷1200.0mL，升温至70～75℃溶清，再缓慢降温5～10℃，固体析出，过滤，烘干得式Ⅲ产品199.0g，收率82.3％，1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ(ppm)：7.17(1H),6.55(4H)，4.93(2H)，4.62(2H)，3.97(6H)，3.83(3H)，1.78(6H)，1.46(6H)，1.30(84H)，0.87(9H)。
索马鲁肽的合成：
1)Fmoc-Gly-O-TAGa(第一个氨基酸的偶联)：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0ml、0.43gDMAP和15.0g化合物式(Ⅲ)，搅拌固体溶清。加入5.3gFmoc-Gly-OH，分批加入4.4g DIC。控制温度在20～25℃。保温反应5小时，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应；过滤。脱溶剂至剩余80.0g左右时，停止脱溶剂，升至40～45℃，固体溶清后，滴加甲醇180.0mL。再慢慢降温至10～15℃。过滤，烘干后得产品Fmoc-Gly-O-TAGa 18.4g。收率97.1％。
2)H-Gly-O-TAGa(脱Fmoc)：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入2-MeTHF 148.0ml和18.5g Fmoc-Gly-TAGa，搅拌固体溶清。加入44.4mL DMF，将体系降温至10～15℃，加入14.8g哌啶。在10～15℃反应30分钟，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应。加入60.0mL5％柠檬酸水溶液，洗涤，分层。再用60.0mL水洗涤，60.0mL5％碳酸氢钠水溶液洗涤。60.0mL水洗涤，60.0mL饱和食盐水洗涤。
3)Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa(第二个氨基酸的偶联)：
在氮气保护下，往上述三口反应瓶中，加入10.8g Fmoc-Arg(Pbf)-OH和2.27gHOBt，搅拌固体溶清，再加入4.1g DCC。控制温度在30℃以下。保温反应3小时。脱溶剂至粘稠状，停止脱溶剂，加甲醇180.0mL。搅拌30分钟。过滤，烘干后得产品Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa 23.9g。收率99.0％。
4)重复2～3进行第3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14个氨基酸的偶联和脱保护至第15个氨基酸Fmoc-Gln(Trt)-OH的偶联，得Fmoc-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa。
5)全保护六肽片段(Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-OH)的合成：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0ml、0.43gDMAP和15.0g化合物式(Ⅲ)，搅拌固体溶清。加入5.1gFmoc-Gly-OH，分批加入4.3g DCC。控制温度在20～25℃。保温反应5小时，过滤。脱溶剂至剩余80.0g左右时，停止脱溶剂，升至40～45℃，固体溶清后，滴加甲醇180.0mL。再慢慢降温至10～15℃。过滤，烘干后得产品18.5g。收率97.5％。重复2～3进行第2、3、4、5个氨基酸的偶联和脱保护至第6个氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH的偶联，得Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-O-TAGa；在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0mL，15.0g上述含有载体的全保护六肽，搅拌固体溶清，再降温至0～5℃。加入3.0g三氟乙酸，保温反应5小时，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应；加入80.0mL 6％碳酸氢钠水溶液洗涤，分层；有机相再加入80.0mL5％柠檬酸水溶液洗涤，分层；有机相再用50.0mL饱和食盐水洗涤，分层。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤；有机相减压浓缩至固体。加入200.0mL甲醇，搅拌30分钟，过滤。母液再减压浓缩至固体，加入60.0mL正庚烷，搅拌30分钟。过滤，烘干得全保护的六肽产品Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-OH 7.42g，收率95.9％。
6)全保护十肽片段(Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-OH)的合成：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0ml、0.43gDMAP和15.0g化合物式(Ⅲ)，搅拌固体溶清。加入5.8gFmoc-Val-OH，分批加入2.6g DIC。控制温度在20～25℃。保温反应5小时，过滤。脱溶剂至剩余80.0g左右时，停止脱溶剂，升至40～45℃，固体溶清后，滴加甲醇180.0mL。再慢慢降温至10～15℃。过滤，烘干后得产品19.0g。收率96.9％。重复2～3进行第2、3、4、5、6、7、8、9个氨基酸的偶联和脱保护至第10个氨基酸Boc-His(Trt)-OH的偶联，得Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-O-TAGa；
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷150.0mL，15.0g上述含有载体的全保护十肽，搅拌固体溶清，再降温至0～5℃。加入3.0g三氟乙酸，保温反应5小时，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应；加入80.0mL 6％碳酸氢钠水溶液洗涤，分层；有机相再加入80.0mL5％柠檬酸水溶液洗涤，分层；有机相再用50.0mL饱和食盐水洗涤，分层。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤；有机相减压浓缩至固体。加入200.0mL甲醇，搅拌30分钟，过滤。母液再减压浓缩至固体，加入60.0mL正庚烷，搅拌30分钟。过滤，烘干得全保护的十肽产品Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-OH8.6g，收率92.2％。
7)二十一肽的合成，Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入2-MeTHF 148.0ml和18.5g上述含有载体的全保护十五肽，搅拌固体溶清。加入44.4mL DMF，将体系降温至5～10℃，加入14.8g哌啶。在5～10℃反应30分钟，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应。加入60.0mL5％柠檬酸水溶液，洗涤，分层。再用60.0mL水洗涤，60.0mL5％碳酸氢钠水溶液洗涤。60.0mL水洗涤，60.0mL饱和食盐水洗涤。
往上述三口反应瓶中，加入5.5g上述全保护六肽和0.68gHOBt，搅拌固体溶清，再加入1.26g DCC。控制温度在20～25℃。保温反应3小时。脱溶剂至粘稠状，停止脱溶剂，加甲醇180.0mL。搅拌30分钟。过滤，烘干后得产品Fmoc-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa 21.2g。收率96.8％。
8)三十一肽的合成，Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa：
在氮气保护下，往250mL三口反应瓶中，加入二氯甲烷166.0mL和20.8g上述含有载体的全保护二十一肽，搅拌固体溶清。加入44.4mL DMF，将体系降温至10～15℃，加入0.85gDBU。在0～5℃反应30分钟，TLC(EA：PE＝1:4)监控反应。加入60.0mL5％柠檬酸水溶液，洗涤，分层。再用60.0mL水洗涤，60.0mL5％碳酸氢钠水溶液洗涤。60.0mL水洗涤，60.0mL饱和食盐水洗涤。
往上述三口反应瓶中，加入7.6g上述全保护的十肽和0.61gHOBt，搅拌固体溶清，再加入1.59g DCC。控制温度在20～25℃。保温反应3小时。脱溶剂至粘稠状，停止脱溶剂，加甲醇180.0mL。搅拌30分钟。过滤，烘干后得产品Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa 24.0g。收率91.4％。
9)裂解：
Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(OtBu)-Phe-Thr(OtBu)-Ser(OtBu)-Gln(OtBu)-Val-Ser(OtBu)-Ser(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Oct(OtBu)-Glu(AEEA-AEEA)-OtBu]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-O-TAGa 24.4g，加入250.0mL三口反应瓶内，再加入146.4g配方为TFA：EDT：Tis＝90:5:5(体积比)的裂解液，在15～20℃裂解2小时，滴加至500.0g异丙醚中，沉淀，过滤。滤饼再用250.0g乙腈：水＝2：1(体积比)混合溶剂，进行洗涤，过滤，粗肽在母液中，进行过柱纯化。得索玛鲁肽9.6g，收率67.1％。
本发明中，所涉及的多肽的氨基酸序列见表1。
表1：氨基酸序列表
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。
Claims (10)
1.一种作为多肽液相合成载体的苄醇酚醚类化合物，其特征在于，所述的苄醇酚醚类化合物结构如式Ⅰ所示：其中，R选自C12～C22脂肪链。
2.根据权利要求1所述的一种作为多肽液相合成载体的苄醇酚醚类化合物，其特征在于，所述的苄醇酚醚类化合物结构如式Ⅲ所示：
3.权利要求1所述的苄醇酚醚类化合物的制备方法，其特征在于，以结构如式1所示的化合物为原料，经酯化反应、取代反应、还原反应、氯化反应、取代反应，再经还原反应制得式Ⅰ所示的化合物；
4.根据权利要求3所述的苄醇酚醚类化合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
a)式1所示的物质溶解，加入酯化试剂进行酯化反应，生成化合物2；
b)将化合物2、缚酸剂和取代反应试剂加入溶剂中，进行取代反应后生成化合物3；
c)将化合物3溶解，加入还原剂a，进行还原反应后生成化合物4；
d)将化合物4溶解，滴加二氯亚砜，进行氯取代反应后生成化合物5；
e)将化合物5、缚酸剂和4-羟基-2-甲氧基苯甲醛加入溶剂，进行取代反应后生成化合物6；
f)将化合物6溶解，加入还原剂b，进行还原反应后生成式Ⅰ表示的化合物。
5.根据权利要求4所述的苄醇酚醚类化合物的制备方法，其特征在于，步骤a)中，所述的酯化试剂包括乙酰氯、二氯亚砜或浓硫酸，酯化反应的温度为20～60℃，式1所示的物质与酯化试剂的摩尔比为1：1.5～3.0。
6.根据权利要求4所述的苄醇酚醚类化合物的制备方法，其特征在于，步骤b)中，所述的缚酸剂包括碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化钠、二异丙基乙胺、三乙胺中的一种或两者以上的混合物；所述的取代反应试剂包括卤代烷烃RX中的一种或两者以上的混合物，R是C12～C22脂肪链，X是卤素；所述的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、1，4-二氧六环、乙腈、甲苯中的一种或两种以上的混合物；步骤b)中，化合物2、取代反应试剂与缚酸剂的摩尔比为1.0：3.2～4.0：8.0～10.0，取代反应的温度为70～100℃，取代反应的时间为14～18小时。
7.根据权利要求4所述的苄醇酚醚类化合物的制备方法，其特征在于，步骤c)中，还原剂a包括红铝或氢化铝锂，化合物3与还原剂a的摩尔比为1：2.5～4.0，还原反应的温度为20～55℃；步骤d)中，化合物4与二氯亚砜的摩尔比为1：2.0～3.0，氯取代反应的温度为20～55℃。
8.根据权利要求4所述的苄醇酚醚类化合物的制备方法，其特征在于，步骤e)中，所述的缚酸剂包括碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化钠、二异丙基乙胺、三乙胺中的一种或两者以上的混合物；所述的取代反应试剂包括卤代烷烃RX中的一种或两者以上的混合物，R是C12～C22脂肪链，X是卤素；所述的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、1，4-二氧六环、乙腈、甲苯中的一种或两种以上的混合物；
步骤e)中，化合物5、4-羟基-2-甲氧基苯甲醛与缚酸剂的摩尔比为1.0：1.2～2.0：4.0～6.0，取代反应的温度为70～100℃，取代反应的时间为8～15小时；步骤f)中，还原剂b包括硼氢化钠、氰基硼氢化钠中的一种或两者的混合物，化合物6与还原剂b的摩尔比为1：2.0～3.0，还原反应的温度为20～55℃。
9.权利要求1所述的苄醇酚醚类化合物的应用，其特征在于，权利要求1所述的化合物作为疏水载体在液相中合成全保护多肽或全脱保护多肽的应用。
10.根据权利要求9所述的苄醇酚醚类化合物的应用，其特征在于，以式I所示的化合物为疏水载体，通过缩合反应依次偶联氨基酸，制得含有起始端载体的权保护多肽链，再经过脱保护，制得不含起始端载体的多肽链；其中，当使用1-2％三氟乙酸作为脱保护试剂时，制备全保护的多肽链；当使用90-100％三氟乙酸作为脱保护试剂时，制得无保护基的多肽链。
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