WO2024150477A1 - アミノ基含有化合物の製造方法、アミノ基含有化合物の分離方法、およびアミノ基含有化合物の製造装置 - Google Patents

アミノ基含有化合物の製造方法、アミノ基含有化合物の分離方法、およびアミノ基含有化合物の製造装置 Download PDF

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WO2024150477A1
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amino group
containing compound
group
hydrophobic
solution
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PCT/JP2023/035433
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上原 杏梨 本山
康嗣 下田
圭介 松浦
麻由 藤井
▲はお▼ 胡
健太郎 福田
Original Assignee
株式会社トクヤマ
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Publication date
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/02—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length in solution
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing an amino group-containing compound, a method for separating an amino group-containing compound, and an apparatus for producing an amino group-containing compound.
  • a known technology for mass-producing peptides is a method in which, in liquid phase, a peptide whose C-terminus is protected with a hydrophobic protecting group is condensed with an amino acid residue whose N-terminus is protected, thereby extending the peptide chain.
  • This method is also known as the liquid phase tagging method, as the hydrophobic protecting group is called a tag.
  • Patent Document 1 describes a method for producing a peptide, which includes a step of purifying the N-unprotected C-protected peptide by washing a reaction solution containing the N-unprotected C-protected peptide with water and/or a hydrophilic organic solvent in a flow reactor using a continuous flow, separating the liquid using an oil-water separation means using a continuous flow, and separating the organic layer containing the N-unprotected C-protected peptide.
  • One aspect of the present invention aims to provide a method for producing an amino group-containing compound that can more easily remove compounds derived from N-terminal protecting groups.
  • a method for producing an amino group-containing compound includes a slug flow formation step of forming a slug flow of a hydrophobic layer formed by a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered, an N-terminal protecting group-derived compound which is a compound derived from the N-terminal protecting group that protected the N-terminus of the amino group-containing compound, and an organic solvent, and a hydrophilic layer formed by an acidic aqueous solution, and a separation step of recovering a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered by separating the hydrophobic layer from the slug flow.
  • the method for separating an amino group-containing compound includes a slug flow formation step of forming a slug flow of a hydrophobic layer formed by a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered, an N-terminal protecting group-derived compound which is a compound derived from the N-terminal protecting group that protected the N-terminus of the amino group-containing compound, and an organic solvent, and a hydrophilic layer formed by an acidic aqueous solution, and a separation step of recovering a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered by separating the hydrophobic layer from the slug flow.
  • the apparatus for producing an amino group-containing compound includes a slug flow forming section that forms a slug flow of the amino group-containing compound to be recovered, an N-terminal protecting group-derived compound that is a compound derived from the N-terminal protecting group that protected the N-terminus of the amino group-containing compound, a hydrophobic layer formed by a hydrophobic solution containing an organic solvent, and a hydrophilic layer formed by an acidic aqueous solution, and a separation section that is connected to the slug flow forming section and recovers a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered by separating the hydrophobic layer from the slug flow.
  • One aspect of the present invention provides a method for producing an amino group-containing compound that can more easily remove compounds derived from N-terminal protecting groups.
  • FIG. 1 is a block diagram showing the configuration of an apparatus for producing an amino group-containing compound according to one embodiment of the present invention. 1 is a graph showing the results of HPLC of the hydrophilic layer obtained in Example 1-3.
  • N-terminal protecting group-derived compound which is a compound derived from the N-terminal protecting group and which may be produced by deprotection of the N-terminal protecting group after a condensation reaction, in a slug flow using an acidic aqueous solution
  • at least a portion of the N-terminal protecting group-derived compound can be easily removed into the acidic aqueous solution, thereby making it possible, for example, to improve the purity of the amino group-containing compound in the hydrophobic solution and to remove a larger amount of components that may be an obstacle when performing another step, such as a step of condensing an amino acid with the amino group-containing compound after washing, and thus completed the present invention.
  • the method for producing an amino group-containing compound according to one embodiment of the present invention includes a slug flow formation step of forming a slug flow of the amino group-containing compound to be recovered, an N-terminal protecting group-derived compound which is a compound derived from the N-terminal protecting group that protected the N-terminus of the amino group-containing compound, a hydrophobic layer formed by a hydrophobic solution containing an organic solvent, and a hydrophilic layer formed by an acidic aqueous solution, and a separation step of recovering a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered by separating the hydrophobic layer from the slug flow.
  • the method for producing an amino group-containing compound according to one embodiment of the present invention may be simply referred to as the "production method according to one embodiment of the present invention.”
  • the slug flow forming step is a step of forming a slug flow of a hydrophobic layer formed by a hydrophobic solution and a hydrophilic layer formed by an acidic aqueous solution.
  • a slug flow is formed in which the hydrophobic layer and the hydrophilic layer flow alternately along the flow direction.
  • at least a part of the N-terminal protecting group-derived compound contained in the hydrophobic layer moves to the hydrophilic layer adjacent to the hydrophobic layer, and the captured substance contained in the hydrophobic layer is reduced.
  • slug flow refers to a flow in which an alternating flow of hydrophobic layers and hydrophilic layers is formed along the flow direction in at least a part of the flow.
  • slug flow includes not only a flow in which an alternating flow of hydrophobic layers and hydrophilic layers is formed throughout the entire flow path in which the flow passes, but also a flow in which an alternating flow of hydrophobic layers and hydrophilic layers is formed only in a part of the flow path.
  • the term "slug flow” includes a flow in which an alternating flow of hydrophobic layers and hydrophilic layers is formed from the start point of the flow path where the hydrophobic layers and hydrophilic layers are mixed to the end point of the flow path, a flow in which an alternating flow of hydrophobic layers and hydrophilic layers is formed only in the vicinity of the start point, and a flow in which an alternating flow of hydrophobic layers and hydrophilic layers is formed intermittently in the flow path.
  • it is sufficient that an alternating flow of hydrophobic layers and hydrophilic layers is formed in at least a part of the flow path, and a parallel flow and turbulent flow formed by the hydrophobic layers and hydrophilic layers may be formed in a part of the flow path.
  • the hydrophobic solution contains the amino group-containing compound to be recovered, the N-terminal protecting group-derived compound, and an organic solvent.
  • the hydrophobic solution may further contain a capture agent for capturing the N-terminal protecting group-derived compound.
  • the reaction solution used in the condensation reaction for synthesizing the amino group-containing compound may be used as it is as the hydrophobic solution.
  • the amino group-containing compound is any compound having at least one of a primary amino group and a secondary amino group.
  • the amino group-containing compound include a single amino acid and a peptide formed by peptide bonds of two or more amino acids.
  • the peptide may have a substituent such as a protecting group at either the C-terminus or the side chain terminus of the peptide chain.
  • the amino group-containing compound to be recovered may be the same as or different from the amino group-containing compound produced as the target product in the production method according to one embodiment of the present invention.
  • the amino group-containing compound to be recovered may be a precursor of the amino group-containing compound of the target product, for example, a compound having a part of the peptide sequence of the amino group-containing compound of the target product.
  • the amino acid residue sequence of the peptide is not particularly limited, but the N-terminal residue of the peptide may be lysine (Lys) or proline (Pro).
  • the N-terminal residue is one of these amino acid residues
  • a conventional process for removing the capture body may result in the formation of an emulsion of a hydrophobic solution containing the capture body in the washing solution, which may require a long time for separation.
  • the formation of an emulsion during removal of the capture body is reduced, allowing separation to be performed in a shorter time.
  • the amino group-containing compound to be recovered may have its C-terminus protected with a C-terminus protecting group.
  • the C-terminus protecting group may be a C-terminus protecting group that can be used in the liquid-phase tagging method.
  • An example of the C-terminus protecting group is the C-terminus protecting group represented by the following formula (1).
  • m Q's each represent an oxygen atom.
  • m R 1 's each independently represent a group represented by the following formula (A).
  • k R 2 's each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group, a cycloalkyl group, an alkoxy group, an aryl group, an aralkyl group, or a halogen atom.
  • X represents a bonding position with the C-terminus of the amino group-containing compound.
  • m represents an integer of 2 or 3.
  • k represents an integer of 0 or more and (5-j) or less.
  • At least one of m [Q-R 1 ]'s is substituted at the meta position with respect to the substituent containing X.
  • the total carbon number of the C-terminal protecting group represented by formula (1) is 40 or more and 60 or less.
  • R 1a , R 1b , R 1c , R 1d and R 1e each independently indicate a hydrogen atom or an alkyl group.
  • n 1 indicates an integer of 0 to 6, and when n 1 is 1 or more, the repeating unit shown in the parentheses to which n 1 is added is an alkylene group.
  • n 2 indicates an integer of 0 to 6, and when n 2 is 1 or more, the repeating unit shown in the parentheses to which n 2 is added is an alkylene group.
  • at least two of R 1a , R 1b , R 1c and R 1d are hydrogen atoms.
  • C-terminal protecting groups include protecting groups represented by any of the following formulas, where X represents the bonding position with the C-terminus of the amino group-containing compound.
  • the C-terminal protecting group is not limited to the above-mentioned protecting groups, and any protecting group known in the art may be used.
  • the N-terminal protecting group-derived compound is a compound derived from an N-terminal protecting group that protected the N-terminus of an amino group-containing compound.
  • the N-terminal protecting group-derived compound include N A decomposition product generated by deprotecting the N-terminal protecting group of a terminal-protected amino group-containing compound, and a capture agent bound to the decomposition product (hereinafter, simply referred to as "capture body")
  • capture body a capture agent bound to the decomposition product
  • the decomposition products and the capture bodies are typically produced as by-products in the production method according to one embodiment of the present invention.
  • the decomposition products and the capture bodies are produced in one embodiment of the present invention, it may be desirable to remove at least a portion of the N-terminal protecting group-derived compound, since this may reduce the yield and purity of the resulting amino group-containing compound.
  • one aspect of the present invention is preferably applicable when the N-terminal protecting group-derived compound is a capture body.
  • one aspect of the present invention can more effectively wash the capture body.
  • the production method according to one aspect of the present invention can more easily remove the capture body, and can more effectively achieve reductions in costs and time required.
  • the N-terminal protecting group is not particularly limited as long as it is a functional group that can be used to protect at least one of the primary amino group and the secondary amino group of the amino group-containing compound.
  • N-terminal protecting groups include protecting groups having a fluorene skeleton, such as the 9-fluorenylmethyloxycarbonyl group (Fmoc group), the tert-butoxycarbonyl group (Boc group), the benzyloxycarbonyl group (Cbz group), the allyloxycarbonyl (Alloc) group, the acetyl (Ac) group, and the trichloroacetyl group.
  • the target to be removed may be a decomposition product.
  • the decomposition product is a compound generated by decomposing the N-terminal protecting group by deprotecting the N-terminal protecting group of the N-terminal protected amino group-containing compound.
  • decomposition products include: dibenzofulvene (DBF) from the Fmoc group; CO2 and isobutene from the Boc group; and toluene from the Cbz group.
  • DFS dibenzofulvene
  • CO2 and isobutene from the Boc group
  • toluene from the Cbz group.
  • the object to be removed may be a capture body.
  • the capture body is a compound in which a capture agent is bound to a decomposition product derived from an N-terminal protecting group that protected the N-terminus of the amino group-containing compound to be recovered.
  • the hydrophobic solution may contain, in addition to the capture body, the capture agent and the decomposition product derived from the N-terminal protecting group in a form that is not bound to each other.
  • the scavenger is a compound that forms a capture body by binding with the decomposition product.
  • the scavenger can be appropriately selected depending on the structure of the N-terminal protecting group and the structure of the decomposition product derived from the N-terminal protecting group.
  • Examples of the scavenger include secondary amines.
  • the scavenger is preferably a secondary amine from the viewpoint of capturing the decomposition product with high efficiency and removing the free decomposition product from the reaction system.
  • the scavenger is preferably at least one selected from the group consisting of morpholine, piperidine, 3-hydroxypiperidine, 4-hydroxypiperidine, thiomorpholine, thiomorpholine dioxide, 4-methylpiperazine, 4-aminopiperidine, diethylamine, and pyrrolidine.
  • the trap is formed by binding the decomposition product with a trapping agent.
  • the structure of the trap is determined according to the N-terminal protecting group and the structure of the trapping agent, and is not particularly limited.
  • Examples of traps include compounds represented by any of the following formulas. These compounds are traps formed by binding the decomposition product DBF with the trapping agent morpholine, piperidine, pyrrolidine, 4-methylpiperazine, or diethylamine.
  • the organic solvent is not particularly limited as long as it is capable of making a hydrophobic solution containing the organic solvent incompatible with an acidic aqueous solution.
  • the organic solvent may be a known hydrophobic organic solvent that can be used as a reaction solvent in a peptide condensation reaction.
  • the organic solvent in the slug flow formation step is the same as the reaction solvent in the condensation reaction, from the viewpoint of improving the ease of operation and reducing adverse effects that occur between the condensation reaction and the removal of the N-terminal protecting group-derived compound.
  • organic solvents include ethers, acetates, halogenated hydrocarbons, aromatic hydrocarbons, and hydrocarbons.
  • the organic solvent one type may be used alone, or multiple types may be used in combination. Since the organic solvent is easy to separate and low cost, it is preferable that the organic solvent contains at least one type selected from the group consisting of 4-methyltetrahydropyran (MTHP), cyclopentyl methyl ether (CPME), chloroform, diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, 1,4-dioxane, methyl-t-butyl ether, ethyl acetate, isopropyl acetate, dichloromethane, toluene, xylene, hexane, heptane, and cyclohexane, and it is even more preferable that the organic solvent contains at least one type selected from the group consisting of 4-methylte
  • the hydrophobic solution may contain other components in addition to the above-mentioned components.
  • the other components include a condensation agent, an activator, and a catalyst that can be used in the condensation reaction of the peptide, as well as a by-product of the condensation reaction, and a deprotection agent. Specific examples of the condensation agent, the activator, the catalyst, and the deprotection agent will be described later.
  • the hydrophobic solution contains any of the condensing agent, activating agent, and deprotecting agent as a component other than the N-terminal protecting group-derived compound, so separation washing can be performed in a short time. Furthermore, according to the production method of one aspect of the present invention, it is not necessary to perform preliminary separation washing, so the N-terminal protecting group-derived compound can be removed with fewer separation washings.
  • the acidic aqueous solution forms a hydrophilic layer in the slug flow, in which the N-terminal protecting group-derived compound is extracted from the hydrophobic layer.
  • the acidic aqueous solution may be any aqueous solution containing an acid, and is, for example, an aqueous solution containing a Bronsted acid.
  • the acidic aqueous solution is preferably an aqueous solution containing at least one Br ⁇ nsted acid selected from the group consisting of hydrochloric acid, sulfuric acid, acetic acid, phosphoric acid, and citric acid, from the viewpoint of more efficiently removing compounds derived from N-terminal protecting groups.
  • the concentration of the Br ⁇ nsted acid contained in the acidic aqueous solution is preferably 1.0 mol/L or more, more preferably 2.0 mol/L or more, from the viewpoint of more efficiently removing compounds derived from N-terminal protecting groups.
  • the concentration of the Br ⁇ nsted acid contained in the acidic aqueous solution is preferably 12.0 mol/L or less, more preferably 6.0 mol/L or less, and even more preferably 4.0 mol/L or less, from the viewpoint of reducing decomposition of the amino group-containing compound contained in the hydrophobic layer.
  • the pH of the acidic aqueous solution is not particularly limited, but may be, for example, less than 7.0.
  • the pH of the acidic aqueous solution is preferably less than 5.0, and more preferably less than 3.0.
  • the method for forming a slug flow of a hydrophobic layer formed by a hydrophobic solution and a hydrophilic layer formed by an acidic aqueous solution is not particularly limited, but examples include a method in which the hydrophobic solution and the acidic aqueous solution are introduced from separate flow paths into a confluence and mixed, and a method in which a slug flow is formed by external control such as an electromagnetic valve.
  • the inner diameters of the inlet passages for the hydrophobic solution and the acidic aqueous solution and the outlet passage for discharging the formed slag flow can be selected appropriately.
  • the inner diameter is preferably 0.4 mm or more, more preferably 0.6 mm or more, and is preferably 6.5 mm or less, more preferably 4.5 mm or less.
  • the flow rates of the hydrophobic solution and the acidic aqueous solution introduced into the confluence may be fixed, or may be variably controlled so that the two solutions are introduced alternately into the confluence. From the viewpoint of easily operating the slug flow formation process, it is preferable that the flow rates of the hydrophobic solution and the acidic aqueous solution are fixed.
  • the flow rate of the hydrophobic solution is preferably 0.3 mL/min or more, more preferably 1.0 mL/min or more, preferably 10 mL/min or less, and more preferably 6.0 mL/min or less, from the viewpoint of stabilizing the length of one hydrophobic layer in the slug flow in the flow direction, i.e., the slug length, and enhancing the reproducibility of the process.
  • the flow rate of the acidic aqueous solution is preferably 0.5 times or more, more preferably 1.0 times or more, of the flow rate of the hydrophobic solution, from the viewpoint of shortening the slug length and increasing the contact area with adjacent layers per volume of each layer to further promote the movement of the N-terminal protecting group-derived compound.
  • the flow rate of the acidic aqueous solution is preferably 10 times or less, and more preferably 4.0 times or less, the flow rate of the hydrophobic solution.
  • the slug flow forming step may include circulating the formed slug flow through a tube.
  • the length of the tube may be appropriately selected so that the residence time of the slug flow in the tube is the desired one.
  • the residence time is preferably 3 seconds or more, more preferably 5 seconds or more.
  • the residence time is preferably 500 seconds or less, more preferably 300 seconds or less.
  • the length of the tube is preferably 0.015 m or more, more preferably 0.1 m or more, preferably 20 m or less, more preferably 10 m or less, but is not limited thereto.
  • the inner diameter of the tube may be such that the slug flow is maintained within the tube.
  • the inner diameter of the tube is preferably 0.4 mm or more, more preferably 0.6 mm or more, preferably 6.5 mm or less, more preferably 4.5 mm or less, but is not limited thereto.
  • the separation step is a step of recovering a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered by separating the hydrophobic layer from the slag flow.
  • the slag flow from which the N-terminal protecting group-derived compound is removed is unlikely to produce fine emulsions, and the hydrophobic layer has a certain size, so that the hydrophobic layer can be easily separated from the slag flow.
  • the recovered hydrophobic solution contains the amino group-containing compound to be recovered, but does not contain the N-terminal protecting group-derived compound contained in the hydrophobic solution used in the slag flow formation step, or contains the compound in an amount reduced from that in the slag flow formation step.
  • the method for separating the hydrophobic layer is not particularly limited, and may be batch separation or continuous separation.
  • a known method may be used, for example, the slug flow introduced into a storage tank may be left to stand, and the hydrophobic layer may be recovered from the hydrophobic layer (hydrophobic solution) and hydrophilic layer (acidic aqueous solution) that have separated into upper and lower layers.
  • the slug flow may be introduced into an oil-water separation membrane, or the slug flow may be converted into a parallel flow in which the upper and lower layers flow parallel to the flow, and the layer corresponding to the hydrophobic layer may be recovered from the upper and lower layers.
  • the production method according to one aspect of the present invention may further include a deprotection step before the slug flow forming step.
  • the deprotection step is a step of contacting an N-terminal protected amino group-containing compound with a deprotecting agent and a capturing agent in an organic solvent before the slug flow forming step to form an amino group-containing compound to be recovered and a captured compound.
  • the deprotection step makes it possible to obtain a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound and the captured compound.
  • the N-terminal protected amino group-containing compound is a compound in which the N-terminus of the amino group-containing compound to be recovered is protected by an N-terminal protecting group.
  • the constitution of the N-terminal protected amino group-containing compound will be easily understood by a person skilled in the art who refers to the above description of the amino group-containing compound and the N-terminal protecting group.
  • the deprotecting agent is a compound that removes the N-terminal protecting group from the N-terminal protected amino group-containing compound.
  • the deprotecting agent can be appropriately selected depending on the N-terminal protecting group.
  • Examples of the deprotecting agent include, but are not limited to, 1,8-diazabicyclo[5.4.0]-7-undecene (DBU), 1.5-diazabicyclo[4.3.0]-5-nonene (DBN), 1,4-diazabicyclo[2.2.2]octane (DABCO), organic bases such as triethylamine and tributylamine; and inorganic bases such as potassium tert-butoxide and sodium tert-butoxide.
  • DBU 1,8-diazabicyclo[5.4.0]-7-undecene
  • DBN 1.5-diazabicyclo[4.3.0]-5-nonene
  • DABCO 1,4-diazabicyclo[2.2.2]octane
  • the method for contacting the N-terminal protected amino group-containing compound with the deprotecting agent and the scavenger in the organic solvent is not particularly limited.
  • the deprotecting agent and the scavenger may be added in any order to the reaction solution containing the N-terminal protected amino group-containing compound.
  • a scavenger may not be used in the deprotection step. That is, the deprotection step may be a step in which an N-terminal protected amino group-containing compound is contacted with a deprotection agent in an organic solvent prior to the slug flow formation step to form an amino group-containing compound to be recovered and a decomposition product.
  • the mode of the deprotection step may be appropriately selected depending on the type of N-terminal protecting group.
  • the manufacturing method according to one aspect of the present invention may further include a condensation step before the deprotection step.
  • the condensation step is a step of condensing an N-terminal protected amino acid to the N-terminus of the amino group-containing compound precursor before the deprotection step to obtain an N-terminal protected amino group-containing compound.
  • the amino group-containing compound precursor is a compound having a structure in which one N-terminal amino acid residue is removed from the amino group-containing compound.
  • the N-terminal protected amino acid is any amino acid having an N-terminal protecting group bonded to the amino group.
  • the condensation step can be carried out by adding an N-terminal protected amino acid and a condensation agent, and optionally an activator and a catalyst, to a reaction solution in which an amino group-containing compound precursor is dissolved in an organic solvent.
  • condensing agent known compounds that can be used in amidation reactions can be used.
  • condensing agents include 4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorphonium chloride (DMT-MM), O-(benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU), O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HATU), O-(6-chlorobenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU(6-Cl)), O-(benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU(6-Cl)), and O-(benzotriazol-1-yl)
  • TBTU uronium tetrafluoroborate
  • TCTU O-(6-chlorobenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate
  • DIPCCI diisopropylcarbodiimide
  • DCC dicyclohexylcarbodiimide
  • EDCI 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide
  • EDCI 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride
  • EDCI.HCl 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride
  • the activator may be a known compound that, in the presence of a condensing agent, induces an amino acid into a corresponding active ester or symmetrical acid anhydride, etc., to facilitate the amidation reaction.
  • activators include 1-hydroxybenzotriazole (HOBt), 1-hydroxy-7-azabenzotriazole (HOAt), 1-hydroxy-1H-1,2,3-triazole-4-ethyl carboxylate (HOCt), 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4(3H)-one (HOOBt), N-hydroxysuccinimide (HOSu), N-hydroxyphthalimide (HOPht), N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide (HONb), pentafluorophenol, and ethyl cyano(hydroxyimino)acetate (Oxyma).
  • the catalyst can be a compound known to catalyze amidation reactions.
  • An example of a catalyst is dimethylaminopyridine (DMAP).
  • morpholine (0.4 equiv) is added as a scavenger for the active ester Fmoc-AA 2 -Ox, and the mixture is stirred at room temperature for 30 minutes.
  • a scavenger morpholine (20.0 equiv) and a deprotecting agent DBU (7.0 equiv) are added and stirred at room temperature for 1 hour to carry out a deprotection reaction, thereby obtaining an amino group-containing compound H-AA 2 -AA 1 -OR.
  • the reaction solution may be subsequently transferred to a separatory funnel, and washed and separated by adding 10% saline (25-30 v/w, twice). Furthermore, the organic layer may be washed and separated by adding 2 M hydrochloric acid (25-30 v/w, twice), and further washed and separated with 0.5 M aqueous sodium bicarbonate solution (25-30 v/w). The organic layer may be dried with an appropriate amount of sodium sulfate, and then filtered while washing with an appropriate amount of MTHP to obtain an amino acid condensate as a solution.
  • the manufacturing method may further include a neutralization step after the separation step.
  • the neutralization step is a step of neutralizing the hydrophobic solution by contacting the hydrophobic solution recovered after the separation step with a base.
  • the neutralization step the hydrophobic solution having a low pH recovered in the separation step is neutralized, thereby making it possible to control the reactivity of the hydrophobic solution in the subsequent step.
  • the activator that may be contained in the hydrophobic solution can be easily removed.
  • the neutralization step may be carried out, for example, by forming a slug flow of a hydrophobic layer formed by the hydrophobic solution and a hydrophilic layer formed by the basic aqueous solution. This method allows the hydrophobic solution after neutralization to be easily separated from the slug flow, and allows the activator that may be contained in the hydrophobic solution to be removed into the basic aqueous solution.
  • the basic aqueous solution is not particularly limited as long as it is an aqueous solution containing a base, but for example, it is an aqueous solution containing a Bronsted base.
  • the basic aqueous solution is preferably an aqueous solution containing at least one Bronsted base selected from the group consisting of sodium hydrogen carbonate, sodium carbonate, potassium carbonate, and sodium hydroxide.
  • the concentration of the Bronsted base contained in the basic aqueous solution is preferably 0.1 mol/L or more, more preferably 0.5 mol/L or more, from the viewpoint of cleaning efficiency. Furthermore, the concentration of the Bronsted base contained in the basic aqueous solution is preferably 2.0 mol/L or less, more preferably 1.0 mol/L or less, from the viewpoint of suppressing peptide decomposition.
  • the pH of the basic aqueous solution may be, for example, 8 or more and 12 or less, but is not limited thereto.
  • the operating conditions may be the same as those in the slug flow formation process described above.
  • the neutralization step may also be carried out using a known method for neutralizing a hydrophobic solution.
  • the hydrophobic solution may be neutralized by contacting the hydrophobic solution with a base by adding a base to the hydrophobic solution or by introducing the hydrophobic solution into a basic column.
  • bases include tertiary amines such as triethylamine and diisopropylethylamine.
  • basic columns include columns packed with anion exchange resins such as DIAION TM (Mitsubishi Chemical Corporation) and columns packed with inorganic bases such as solid sodium bicarbonate.
  • the production method may include repeatedly performing a series of steps including, in this order, a condensation step, an optional deprotection step, a slug flow formation step, a separation step, and an optional neutralization step.
  • a series of steps including, in this order, a condensation step, an optional deprotection step, a slug flow formation step, a separation step, and an optional neutralization step.
  • an amino acid can be condensed to the N-terminus of the amino group-containing compound, thereby elongating the amino group-containing compound.
  • the number of times the series of steps is repeated is not particularly limited and may be determined according to the number of times the amino acid is condensed.
  • the amino group-containing compound to be recovered in one cycle may be subjected to a condensation step as an amino group-containing compound precursor in the next cycle.
  • the amino group-containing compound to be recovered in the last cycle may be the amino group-containing compound produced as the target product by the production method according to one aspect of the present invention.
  • the production method according to one aspect of the present invention may further include an extraction step after the separation step.
  • the extraction step is a step of extracting the amino group-containing compound to be recovered from the hydrophobic solution recovered in the separation step.
  • the method of extracting the amino group-containing compound can be performed using any method for isolating and producing the amino group-containing compound from the hydrophobic solution, for example, extraction washing, crystallization, and chromatography, but is not limited thereto.
  • the extraction step may include deprotecting the C-terminal protecting group of the amino group-containing compound.
  • the deprotection of the C-terminal protecting group may be carried out using a known method, such as a trifluoroacetic acid (TFA) treatment.
  • TFA trifluoroacetic acid
  • molecules such as water, thioanisole, 1,2-ethanedithiol, phenol, and triisopropylsilane may also be used.
  • the scope of the present invention also includes a method for separating an amino group-containing compound.
  • the method for separating an amino group-containing compound according to one embodiment of the present invention includes a slug flow forming step of forming a slug flow of a hydrophobic layer formed by a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered, an N-terminal protecting group-derived compound which is a compound derived from the N-terminal protecting group that protected the N-terminus of the amino group-containing compound, and an organic solvent, and a hydrophilic layer formed by an acidic aqueous solution, and a separation step of recovering a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered by separating the hydrophobic layer from the slug flow.
  • the method for separating an amino group-containing compound according to one embodiment of the present invention may further include any one of a deprotection step, a condensation step, a neutralization step, and an extraction step.
  • the apparatus for producing an amino group-containing compound includes an amino group-containing compound, an N-terminal protecting group-derived compound that is a compound derived from an N-terminal protecting group that has protected the N-terminal of the amino group-containing compound, and a slug flow forming section that forms a slug flow of a hydrophobic layer formed by a hydrophobic solution containing an organic solvent and a hydrophilic layer formed by an acidic aqueous solution, and a separation section that is connected to the slug flow forming section and separates the hydrophobic layer from the slug flow.
  • the apparatus for producing an amino group-containing compound may be simply referred to as a "production apparatus".
  • the manufacturing apparatus includes a slag flow forming section and a separation section.
  • the manufacturing apparatus may further include any one of a deprotection section, a condensation section, a neutralization section, and an extraction section.
  • the slag flow forming section, the separation section, the deprotection section, the condensation section, the neutralization section, and the extraction section are configured to carry out the above-mentioned slag flow forming process, the separation process, the deprotection process, the condensation process, and the extraction process, respectively.
  • FIG. 1 is a block diagram showing the configuration of an amino group-containing compound production apparatus 10 according to an embodiment of the present invention.
  • the production apparatus 10 includes a slug flow forming section 20 and a separation section 30.
  • the slug flow forming section 20 and the separation section 30 are connected to each other.
  • the slug flow forming section 20 is configured to form a slug flow of a hydrophobic layer formed by a hydrophobic solution containing an amino group-containing compound, an N-terminal protecting group-derived compound which is a compound derived from the N-terminal protecting group that protected the N-terminus of the amino group-containing compound, and an organic solvent, and a hydrophilic layer formed by an acidic aqueous solution.
  • the slug flow forming section 20 includes a hydrophobic solution tank 21, an acidic aqueous solution tank 22, a mixing section 23, and a circulation section 24.
  • the hydrophobic solution tank 21, the acidic aqueous solution tank 22, and the circulation section 24 are each connected to the mixing section 23.
  • the hydrophobic solution tank 21 is configured to store the hydrophobic solution and introduce the hydrophobic solution into the mixing section 23.
  • the hydrophobic solution tank 21 is a combination of a tank that stores the hydrophobic solution and a pump connected to the tank.
  • the acidic aqueous solution tank 22 is configured to store the acidic aqueous solution and introduce the acidic aqueous solution into the mixing section 23.
  • the acidic aqueous solution tank 22 is a combination of a tank that stores the acidic aqueous solution and a pump connected to the tank.
  • the hydrophobic solution tank 21 and the acidic aqueous solution tank 22 are controlled independently, and the stored solutions are introduced into the mixing section 23 at a constant flow rate.
  • the hydrophobic solution tank 21 and the acidic aqueous solution tank 22 may be controlled in conjunction with each other, and the stored solutions are introduced into the mixing section 23 at variable flow rates.
  • the mixing section 23 is configured to introduce a hydrophobic solution and an acidic aqueous solution to form a slug flow.
  • a T-shaped mixer is used as the mixing section 23.
  • the hydrophobic solution and the acidic aqueous solution are respectively introduced from two opposing inlet paths, and the slug flow is discharged from the remaining outlet path.
  • a circulating flow is formed inside the hydrophobic layer and the hydrophilic layer in the slug flow due to the frictional action of the inner wall of the T-shaped mixer and the inner wall of the tube, further promoting the movement of compounds derived from N-terminal protecting groups.
  • the mixing section 23 is not limited to a T-type mixer, and may be any member capable of forming a slug flow.
  • the mixing section 23 include a Y-type mixer, a helix type mixer, and a static type mixer.
  • a method of forming a slug flow by external control such as a solenoid valve can also be used.
  • the flow section 24 is a component for circulating the slag flow formed in the mixing section.
  • a PFA (tetrafluoroethylene-perfluoroalkyl vinyl ether copolymer) tube with an inner diameter of 1.59 mm and a length of 1 m is used as the flow section 24.
  • the flow section 24 is not limited to the PFA tube described above, and may be any member capable of circulating the slag flow.
  • the material, inner diameter, and length of the tube may be appropriately selected.
  • the separation section 30 is connected to the slag flow forming section and is configured to separate the hydrophobic layer from the slag flow.
  • a storage tank having a slag flow inlet connected to the flow section 24 and an outlet that can be opened and closed at the top and bottom is used as the separation section 30.
  • the slag flow is introduced into the storage tank from the inlet, and the introduction is stopped when a predetermined amount of the hydrophobic layer and hydrophilic layer is stored. After a certain settling time, the hydrophobic layer and hydrophilic layer are discharged from the outlet, achieving separation of the hydrophobic layer.
  • the separation unit 30 is not limited to the above-mentioned storage tank, but may be a component that utilizes either a batch separation method or a continuous separation method.
  • An example of the separation unit 30 is an oil-water separation membrane.
  • the method for producing an amino group-containing compound according to the first aspect of the present invention includes a slug flow formation step of forming a slug flow of a hydrophobic layer formed by a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered, an N-terminal protecting group-derived compound which is a compound derived from the N-terminal protecting group that has protected the N-terminus of the amino group-containing compound, and an organic solvent, and a hydrophilic layer formed by an acidic aqueous solution, and a separation step of recovering a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered by separating the hydrophobic layer from the slug flow.
  • the method for producing an amino group-containing compound according to the second aspect of the present invention has the same configuration as the method for producing an amino group-containing compound according to the first aspect described above, and in addition, the N-terminal protecting group-derived compound is a capture body in which a capture agent is bound to a decomposition product derived from the N-terminal protecting group.
  • the method for producing an amino group-containing compound according to the third aspect of the present invention has the same configuration as the method for producing an amino group-containing compound according to the first or second aspect described above, and further comprises the organic solvent comprising at least one selected from the group consisting of 4-methyltetrahydropyran, cyclopentyl methyl ether, chloroform, diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, 1,4-dioxane, methyl-t-butyl ether, ethyl acetate, isopropyl acetate, dichloromethane, toluene, xylene, hexane, heptane, and cyclohexane.
  • the organic solvent comprising at least one selected from the group consisting of 4-methyltetrahydropyran, cyclopentyl methyl ether, chloroform, diethyl ether, diisopropyl
  • the method for producing an amino group-containing compound according to the fourth aspect of the present invention has the same configuration as the method for producing an amino group-containing compound according to the first to third aspects described above, and further, the organic solvent includes at least one selected from the group consisting of 4-methyltetrahydropyran, cyclopentyl methyl ether, and chloroform.
  • the method for producing an amino group-containing compound according to the fifth aspect of the present invention has the same configuration as the method for producing an amino group-containing compound according to any one of the first to fourth aspects described above, and further, the acidic aqueous solution is an aqueous solution containing at least one Br ⁇ nsted acid selected from the group consisting of hydrochloric acid, sulfuric acid, acetic acid, phosphoric acid, and citric acid.
  • the method for producing an amino group-containing compound according to the sixth aspect of the present invention has the same configuration as the method for producing an amino group-containing compound according to any one of the first to fifth aspects described above, and further has a concentration of the Bronsted acid contained in the acidic aqueous solution of 1.0 mol/L or more and 12.0 mol/L or less.
  • the method for producing an amino group-containing compound according to the seventh aspect of the present invention includes the same configuration as the method for producing an amino group-containing compound according to any one of the first to sixth aspects described above, and in addition, the slug flow forming step includes mixing the hydrophobic solution having a flow rate of 0.3 mL/min or more with the acidic aqueous solution having a flow rate of 1.0 times or more and 10 times or less than the flow rate of the hydrophobic solution to form the slug flow.
  • the method for producing an amino group-containing compound according to the eighth aspect of the present invention includes, in addition to the configuration of the method for producing an amino group-containing compound according to the second aspect and any one of the third to seventh aspects that cite the second aspect described above, a deprotection step of contacting an N-terminal protected amino group-containing compound in which the N-terminus of the amino group-containing compound to be recovered is protected by the N-terminal protecting group, a deprotecting agent that deprotects the N-terminal protecting group from the N-terminal protected amino group-containing compound, and the capturing agent in the organic solvent prior to the slug flow formation step, to form the amino group-containing compound and the capturing body, the N-terminal protecting group being a protecting group having a fluorene skeleton, and the capturing agent being a secondary amine.
  • the method for producing an amino group-containing compound according to the ninth aspect of the present invention includes, in addition to the configuration of the method for producing an amino group-containing compound according to any one of the first to eighth aspects described above, a neutralization step in which the recovered hydrophobic solution is contacted with a base after the separation step to neutralize the hydrophobic solution.
  • the method for producing an amino group-containing compound according to the tenth aspect of the present invention has the same configuration as the method for producing an amino group-containing compound according to any one of the first to ninth aspects described above, but the amino group-containing compound to be recovered is a peptide in which two or more amino acids are bound.
  • the method for producing an amino group-containing compound according to an eleventh aspect of the present invention has the same configuration as the method for producing an amino group-containing compound according to any one of the first to tenth aspects described above, and further comprises the step of: [In the formula, m Q's each represent an oxygen atom, and m R 1 's each independently represent the following formula (A): (wherein * represents a bonding position, R 1a , R 1b , R 1c , R 1d and R 1e each independently represent a hydrogen atom or an alkyl group, n 1 represents an integer of 0 or more and 6 or less, and when n 1 is 1 or more, the repeating unit shown in the parentheses to which n 1 is added is an alkylene group, and n 2 represents an integer of 0 or more and 6 or less, and when n 2 is 1 or more, the repeating unit shown in the parentheses to which n 2 is added is an alkylene group, with the proviso that at least two of R 1a
  • the method for producing an amino group-containing compound according to the twelfth aspect of the present invention includes the configuration of the method for producing an amino group-containing compound according to any one of the first to eleventh aspects described above, and further includes, after the separation step, an extraction step of extracting the amino group-containing compound to be recovered from the recovered hydrophobic solution.
  • the method for separating an amino group-containing compound according to the thirteenth aspect of the present invention includes a slug flow forming step of forming a slug flow of a hydrophobic layer formed by a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered, an N-terminal protecting group-derived compound which is a compound derived from the N-terminal protecting group that protected the N-terminus of the amino group-containing compound, and an organic solvent, and a hydrophilic layer formed by an acidic aqueous solution, and a separation step of recovering a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered by separating the hydrophobic layer from the slug flow.
  • the apparatus for producing an amino group-containing compound according to a fourteenth aspect of the present invention includes a slug flow forming unit that forms a slug flow of the amino group-containing compound to be recovered, an N-terminal protecting group-derived compound which is a compound derived from the N-terminal protecting group that protected the N-terminus of the amino group-containing compound, and a hydrophobic layer formed by a hydrophobic solution containing an organic solvent, and a hydrophilic layer formed by an acidic aqueous solution, and a separation unit that is connected to the slug flow forming unit and recovers a hydrophobic solution containing the amino group-containing compound to be recovered by separating the hydrophobic layer from the slag flow.
  • Preparation Example 1 Synthesis of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX (1-4)
  • Preparation Example 1-1 Synthesis of H-Leu-OTagX (1-1) 5.62 g (6.78 mmol) of compound X was dissolved in 211.1 mL of a mixture of MTHP/acetonitrile (8/2), 3.35 g (9.49 mmol) of Fmoc-Leu-OH, 1.82 g (9.49 mmol) of EDCI.HCl, and 0.083 g (0.678 mmol) of DMAP were added, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours.
  • Production Example 1-3 Synthesis of H-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-3) The same operations as in Production Example 1-2 were carried out except that H-Ile-Leu-OTagX(1-2) was used as the amino acid condensate and Fmoc-Tyr(tBu)-OH was used as the amino acid to be condensed, to obtain the amino acid condensate H-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-3) as a solution.
  • Production Example 1-4 Synthesis of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-4)
  • the peptide (H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-4)) was obtained as a hydrophobic solution by the same procedure as in Production Example 1-2, except that H-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-3) was used as the amino acid condensate, Fmoc-Pro-OH was used as the amino acid to be condensed, and no separation procedure was performed.
  • the hydrophobic solution also contains a capture body formed by binding morpholine to dibenzofulvene (DBF) derived from Fmoc.
  • DPF dibenzofulvene
  • Preparation Example 2 Synthesis of H-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-7)
  • Preparation Example 2-1 Synthesis of H-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-5)
  • the hydrophobic solution obtained in Preparation Example 1-4 was washed twice with 10% saline, twice with 2 M hydrochloric acid, and once with 0.5 M aqueous sodium hydrogen carbonate solution to obtain a hydrophobic solution.
  • Production Example 2-2 Synthesis of H-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-6)
  • H-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-5) was used as the amino acid condensate
  • Fmoc-Arg(Pbf)-OH was used as the amino acid to be condensed, thereby obtaining the amino acid condensate H-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-6) as a solution.
  • Production Example 3 Synthesis of H-Tyr(tBu)-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-10)
  • Production Example 3-1 Synthesis of H-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-8)
  • the hydrophobic solution obtained in Production Example 2-3 was further washed twice with 2 M hydrochloric acid and once with 0.5 M aqueous sodium hydrogen carbonate solution to obtain a hydrophobic solution.
  • Production Example 3-2 Synthesis of H-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX (1-9)
  • H-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-8) was used as the amino acid condensate and Fmoc-Glu(OtBu)-OH was used as the amino acid to be condensed, thereby obtaining an amino acid condensate H-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-9) as
  • the same operations as in Production Example 1-2 were carried out to obtain the peptide H-Tyr(tBu)-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-10) as a hydrophobic solution.
  • the hydrophobic solution also contains a capture body formed by binding morpholine to dibenzofulvene (DBF) derived from Fmoc.
  • Production Example 4-3 Synthesis of H-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagY (4-3) The same operation as in Production Example 4-2 was carried out except that H-Ile-Leu-OTagY (4-2) was used as the amino acid condensate and Fmoc-Tyr(tBu)-OH was used as the amino acid to be condensed, thereby obtaining the amino acid condensate H-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagY (4-3) as a solution.
  • Production Example 4-4 Synthesis of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagY (4-4)
  • the peptide (H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagY (4-4)) was obtained as a hydrophobic solution by the same procedure as in Production Example 4-2, except that H-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagY (4-3) was used as the amino acid condensate, Fmoc-Pro-OH was used as the amino acid to be condensed, only 10% saline (60 mL) was used as the separation washing, and subsequent drying, washing and filtration were omitted.
  • the hydrophobic solution also contains a capture body formed by binding morpholine to dibenzofulvene (DBF) derived from Fmoc.
  • DPF dibenzofulvene
  • Preparation Example 5-2 Synthesis of H-Ile-Leu-OTagZ (5-2)
  • the above-obtained H-Leu-OTagZ (5-1) was dissolved in 48 mL of THF, and 12.0 mL of acetonitrile, 1.01 g (2.85 mmol) of Fmoc-Ile-OH, 0.546 g (2.85 mmol) of EDCI.HCl, and 0.093 g (0.657 mmol) of Oxyma were added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. Then, 0.076 mL (0.876 mmol) of morpholine was added, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Production Example 5-3 Synthesis of H-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagZ (5-3) The same procedure as in Production Example 5-2 was carried out except that H-Ile-Leu-OTagZ (5-2) was used as the amino acid condensate and Fmoc-Tyr(tBu)-OH was used as the amino acid to be condensed, thereby obtaining H-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagZ (5-3) as a solution.
  • Production Example 5-4 Synthesis of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagZ (5-4)
  • the peptide (H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagZ (5-4)) was obtained as a hydrophobic solution by the same procedure as in Production Example 5-3, except that H-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagZ (5-3) was used as the amino acid condensate, Fmoc-Pro-OH was used as the amino acid to be condensed, a mixed solution of MTHP/acetonitrile (8/2) was used as the solvent, 10% saline (60 mL) was used as the separation washing, and the subsequent solvent removal and filtration were omitted.
  • the hydrophobic solution also contains a capture body formed by binding morpholine to dibenzofulvene (DBF) derived from Fmoc.
  • DPF dibenzofulvene
  • Example ⁇ In the following Examples, the hydrophobic solutions obtained in the Production Examples were subjected to washing with slug flows formed under various conditions, and the removal rate of the captured substance in the hydrophobic layer after separation was measured.
  • Flow reactor a reactor connected to a PFA tube (inner diameter 1.59 mm, Fluoron Industries) and a PFA union "PFA-220-6" (outer diameter 1/8 inch, Swagelok)
  • T-shaped mixer PFA union tee "PFA-220-3" (outer diameter 1/8 inch, Swagelok), stainless steel union tee "SS-200-3” (outer diameter 1/8 inch, Swagelok)
  • Pump Diaphragm pump "QI-100-TT-P-S" (Takumina)
  • the removal rate of the capture body was calculated by using compound Y, which had been added in advance to the hydrophobic solution, as an internal standard substance and measuring the ratio of the area value of the capture body peak to the area value of the internal standard substance peak using HPLC before and after slug flow washing, using the following formula.
  • Example 1 Slug flow cleaning including preliminary cleaning (investigation of conditions for stable formation of slug flow)
  • Example 1-1 Washing with a chloroform solution The hydrophobic solution obtained in Production Example 1-4 was pre-washed twice with 10% saline and once with 2M hydrochloric acid to obtain a chloroform solution containing 0.04 mmol/mL of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-4).
  • the chloroform solution and the 2M hydrochloric acid solution were introduced into a T-shaped mixer (SS-200-3) at flow rates of 0.34 mL/min and 0.37 mL/min, respectively, using a diaphragm pump, and were joined to form a slug flow (a flow in which a hydrophobic layer formed by the chloroform solution and a hydrophilic layer formed by the hydrochloric acid aqueous solution flow alternately along the flow direction).
  • the slug flow discharged from the T-shaped mixer was passed through a PFA tube (inner diameter 1.59 mm, length 2 m, residence time 354 seconds) and discharged into a beaker.
  • the discharged slug quickly separated into two layers, a hydrophobic layer and a hydrophilic layer.
  • the hydrophobic layer was collected to give H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX (1-4) as a solution.
  • the slug length of the hydrophobic layer formed in the slug flow was in the range of 1 to 6 cm.
  • Example 1-2 Washing with MTHP solution
  • the hydrophobic solution obtained in Production Example 1-4 was pre-washed twice with 10% saline and once with 2M hydrochloric acid to obtain an MTHP solution containing 0.04 mmol/mL of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-4).
  • the same operation as in Example 1-1 was carried out except that the obtained MTHP solution was used instead of the chloroform solution, and H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-4) was obtained as a solution.
  • the slug flow discharged into the beaker quickly separated into two layers, a hydrophobic layer and a hydrophilic layer.
  • the slug length of the hydrophobic layer formed in the slug flow was in the range of 1 to 20 cm.
  • the hydrophobic solution obtained in Manufacturing Example 1-4 was pre-washed twice with 10% saline and once with 2M hydrochloric acid to obtain an MTHP solution containing 0.04 mmol/mL of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-4).
  • Example 1-1 The same operation as in Example 1-1 was performed except that the obtained MTHP solution was used instead of the chloroform solution, and the flow rates of the MTHP solution and the 2M hydrochloric acid aqueous solution were 3.0 mL/min and 3.0 mL/min, respectively (residence time of the slug flow in the PFA tube was 45 seconds), to obtain a solution of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-4).
  • the slug flow discharged into the beaker quickly separated into two layers, a hydrophobic layer and a hydrophilic layer.
  • the slug length of the hydrophobic layer formed in the slug flow was 1 cm and was stable.
  • Example 1 The results of Example 1 are shown in Table 2. As shown in Table 2, a slug flow of the hydrophobic solution and the acidic aqueous solution was stably formed in Examples 1-1 to 1-3, especially in Example 1-3.
  • the HPLC results of the hydrophilic layer obtained in Example 1-3 are shown in Figure 2.
  • the capture body peak (6.3 min) shown in Figure 2 also shows that the capture body was removed to the hydrophilic layer by washing the hydrophobic solution with the slug flow.
  • the absence of a peptide peak (17.6 min) in Figure 2 also shows that the target product, the peptide, does not move to the hydrophilic layer.
  • Example 2 Slug flow cleaning without preliminary cleaning
  • Example 2-1 The MTHP/acetonitrile (8/2) mixed solution containing 0.02 mmol/mL of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX (1-4) obtained in Production Example 1-4 and the 2 M hydrochloric acid aqueous solution were introduced into a T-shaped mixer (PFA-220-3) at flow rates of 3.0 mL/min and 3.0 mL/min, respectively, using a diaphragm pump, and were joined to form a slug flow.
  • PFA-220-3 T-shaped mixer
  • the slug flow discharged from the T-shaped mixer was passed through a PFA tube (inner diameter 1.59 mm, length 2 m, residence time 45 seconds) and discharged into a beaker.
  • the discharged slug flow was quickly separated into two layers, a hydrophobic layer and a hydrophilic layer.
  • the hydrophobic layer was collected, and H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX (1-4) was obtained as a solution.
  • the removal rate of the capture agent in the obtained solution was 89.16%.
  • the pH of the hydrophilic layer after washing was about 1, and the deprotecting agent DBU and the capture agent morpholine contained in the hydrophobic solution before washing were removed from the hydrophobic layer.
  • Example 2-2 The same procedure as in Example 2-1 was carried out except that the flow rate of the 2M hydrochloric acid aqueous solution was 4.5 mL/min, and H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX (1-4) was obtained as a solution. The removal rate of the captured substance was 90.16%.
  • Example 2-3 The same procedure as in Example 2-1 was carried out except that the flow rate of the 2M aqueous hydrochloric acid solution was 6.0 mL/min, and H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX (1-4) was obtained as a solution. The removal rate of the captured substance was 92.56%.
  • Example 2-4 The same procedure as in Example 2-1 was carried out except that the flow rate of the 2M aqueous hydrochloric acid solution was 10.0 mL/min, and H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX (1-4) was obtained as a solution. The removal rate of the captured substance was 96.71%.
  • Example 2-5 A solution of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTag (1-4) was obtained by the same procedure as in Example 2-3, except that the hydrochloric acid concentration was 4 M. The removal rate of the captured substance was 94.94%.
  • Example 2-6 A solution of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTag (1-4) was obtained by the same procedure as in Example 2-3, except that the hydrochloric acid concentration was 6 M. The removal rate of the captured substance was 97.38%.
  • Example 2-7 The same procedure as in Example 2-3 was carried out except that the length of the PFA tube was 4 m, and H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTag (1-4) was obtained as a solution. The removal rate of the captured substance was 93.69%.
  • Example 2-8 The same procedure as in Example 2-3 was carried out except that the length of the PFA tube was 1 m, and H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTag (1-4) was obtained as a solution. The removal rate of the captured substance was 96.14%.
  • Example 2-9 The same procedure as in Example 2-3 was carried out except that a chloroform/acetonitrile (8/2) mixed solution was used instead of a MTHP/acetonitrile (8/2) mixed solution as the organic solvent, and H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTag (1-4) was obtained as a solution.
  • the removal rate of the captured substance was 51.10%.
  • Example 2-10 The same procedure as in Example 2-3 was carried out except that a CPME/acetonitrile (8/2) mixed solution was used instead of a MTHP/acetonitrile (8/2) mixed solution as the organic solvent, and H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTag (1-4) was obtained as a solution.
  • the removal rate of the captured substance was 98.35%.
  • Example 2 The results of Example 2 are shown in Table 3. As shown in Table 2, by washing the hydrophobic solution with a slug flow of an acidic aqueous solution, the capture bodies could be removed with a high removal rate. Furthermore, the results of Example 2 show that even if the peptide solution obtained by the condensation reaction is subjected to slug flow washing with an acidic aqueous solution without preliminary washing, no emulsion is formed in the slug flow, and the discharged liquid quickly separates into two layers, a hydrophilic layer and a hydrophobic layer. This shows that by using the manufacturing method according to one embodiment of the present invention, the capture bodies can be removed with fewer separation washes.
  • Example 3 Slug flow washing of peptide solution containing tagX
  • the hydrophobic solution obtained in Production Example 1-4 was pre-washed once with 10% saline to obtain an MTHP solution containing 0.02 mmol/mL of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX (1-4).
  • a chloroform solution and a 2M aqueous hydrochloric acid solution were introduced into a T-shaped mixer (PFA-220-3) at flow rates of 3.0 mL/min and 6.0 mL/min, respectively, using a diaphragm pump, and were allowed to join to form a slug flow (a flow in which a hydrophobic layer formed by the chloroform solution and a hydrophilic layer formed by the aqueous hydrochloric acid solution flow alternately along the flow direction).
  • the slug flow discharged from the T-shaped mixer was passed through a PFA tube (inner diameter 1.59 mm, length 1 m) and discharged into a beaker.
  • the discharged slug flow was quickly separated into two layers, a hydrophobic layer and a hydrophilic layer.
  • the hydrophobic layer was collected to obtain H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX (1-4) as a solution.
  • the removal rate of the captured substance was 92.16%.
  • Example 4 Slug flow washing of peptide solution containing tag Y
  • the MTHP solution containing 0.02 mmol/mL of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagY (4-4) obtained in Production Example 4-4 and 2 M aqueous hydrochloric acid solution were introduced into a T-shaped mixer (PFA-220-3) at flow rates of 3.0 mL/min and 6.0 mL/min, respectively, using a diaphragm pump, and were joined to form a slug flow.
  • the slug flow discharged from the T-shaped mixer was passed through a PFA tube (inner diameter 1.59 mm, length 1 m) and discharged into a beaker.
  • the discharged slug flow was quickly separated into two layers, a hydrophobic layer and a hydrophilic layer.
  • the hydrophobic layer was collected, and H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagY (4-4) was obtained as a solution.
  • the removal rate of the captured substance was 91.66%.
  • Example 5 Slug flow washing of peptide solution containing tag Z
  • the MTHP solution containing 0.02 mmol/mL of H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagZ (5-4) obtained in Production Example 5-4 and 2 M aqueous hydrochloric acid solution were introduced into a T-shaped mixer (PFA-220-3) at flow rates of 3.0 mL/min and 6.0 mL/min, respectively, using a diaphragm pump, and were joined to form a slug flow.
  • the slug flow discharged from the T-shaped mixer was passed through a PFA tube (inner diameter 1.59 mm, length 1 m) and discharged into a beaker.
  • the discharged slug flow was quickly separated into two layers, a hydrophobic layer and a hydrophilic layer.
  • the hydrophobic layer was collected, and H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagZ (5-4) was obtained as a solution.
  • the removal rate of the captured substance was 88.22%.
  • Example 6 Study on the generation of peptide digests Incidentally, the tBu group contained as a Tyr side chain protecting group in the peptides used in Examples 3 to 5 may be deprotected under acidic conditions, and therefore, washing in a slug flow using an acidic aqueous solution may generate peptide digests in which the tBu group has been deprotected.
  • peptides H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX (1-4), H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagY (4-4), and H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagZ (5-4) bound with various tags (compounds X to Z) were subjected to slug flow washing and then quantitative analysis by HPLC.
  • the production rate of various peptide digests was calculated by calculating the ratio of the area of the peptide digests to the total area of the peptide H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTag and various peptide digests H-Pro-Tyr-Ile-Leu-OTag.
  • Example 7 Slug flow washing of a 7-residue peptide
  • the MTHP solution containing 0.02 mmol/mL of H-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-7) obtained in Production Example 2-3 and a 2M aqueous hydrochloric acid solution were introduced into a T-shaped mixer (PFA-220-3) at flow rates of 3.0 mL/min and 6.0 mL/min, respectively, using a diaphragm pump, and were joined to form a slug flow.
  • the slug flow discharged from the T-shaped mixer was passed through a PFA tube (inner diameter 1.59 mm, length 2 m) and discharged into a beaker.
  • the discharged slug flow was quickly separated into two layers, a hydrophobic layer and a hydrophilic layer.
  • the hydrophobic layer was collected to obtain H-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX (1-7) as a solution.
  • the removal rate of the captured substance was 83.86%.
  • Example 8 Slug flow washing of 10-residue peptide
  • the MTHP solution containing 0.02 mmol/mL of H-Tyr(tBu)-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-10) obtained in Production Example 3-3 and a 2M aqueous hydrochloric acid solution were introduced into a T-shaped mixer (PFA-220-3) at flow rates of 3.0 mL/min and 6.0 mL/min, respectively, using a diaphragm pump, and were joined to form a slug flow.
  • the slug flow discharged from the T-shaped mixer was passed through a PFA tube (inner diameter 1.59 mm, length 2 m) and discharged into a beaker.
  • the discharged slug flow was quickly separated into two layers, a hydrophobic layer and a hydrophilic layer.
  • the hydrophobic layer was collected to obtain H-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-10) as a solution.
  • the removal rate of the captured substance was 78.12%.
  • Example 9 Slug-flow washing with aqueous sodium bicarbonate solution after washing with aqueous hydrochloric acid solution
  • the hydrophobic solution pH 1.97) obtained by combining the hydrophobic layers containing the peptide H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-4) obtained in Examples 2-1 to 2-8, and 0.5 M aqueous sodium bicarbonate solution were introduced into a T-shaped mixer (PFA-220-3) at flow rates of 3.0 mL/min and 6.0 mL/min, respectively, using a diaphragm pump, and were joined to form a slug flow (a flow in which a hydrophobic layer formed by the hydrophobic solution and a hydrophilic layer formed by the aqueous sodium bicarbonate solution flow alternately along the flow direction).
  • the slug flow discharged from the T-shaped mixer was passed through a PFA tube (inner diameter 1.59 mm, length 2 m) and discharged into a beaker.
  • the discharged slug flow was quickly separated into two layers, a hydrophobic layer and a hydrophilic layer.
  • the hydrophobic layer was collected to obtain H-Pro-Tyr(tBu)-Ile-Leu-OTagX(1-4) as a solution (pH 8.15).
  • the removal rate of the activator Oxyma was measured in the same manner as for the capturer, and was found to be 85.20%.
  • the present invention can be used to produce amino group-containing compounds, such as peptides.
  • Reference Signs List 10 Manufacturing apparatus 20: Slug flow forming section 21: Hydrophobic solution tank 22: Acidic aqueous solution tank 23: Mixing section 24: Circulation section 30: Separation section

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Abstract

本発明の一態様は、より容易にＮ末端保護基由来化合物を除去できるアミノ基含有化合物の製造方法を提供することを目的とする。本発明の一態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、回収対象のアミノ基含有化合物、Ｎ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成工程と、スラグ流から疎水層を分離することによって、疎水性溶液を回収する分離工程と、を含む。

Description

アミノ基含有化合物の製造方法、アミノ基含有化合物の分離方法、およびアミノ基含有化合物の製造装置
　本発明は、アミノ基含有化合物の製造方法、アミノ基含有化合物の分離方法、およびアミノ基含有化合物の製造装置に関する。
　ペプチドなどのアミノ基含有化合物を化粧品および医薬品などの製品の材料として用いるために、アミノ基含有化合物を低コストで大量に製造する技術の開発が求められている。ペプチドを大量に製造する技術としては、液相中で、Ｃ末端が疎水性保護基で保護されたペプチドに対して、Ｎ末端が保護されたアミノ酸残基を縮合させることにより、ペプチド鎖を伸長していく方法が知られている。このような方法は、疎水性保護基がタグと呼ばれることから、液相タグ法とも呼ばれている。
　液相タグ法においては、アミノ酸残基１つの縮合反応ごとに、ペプチドから脱保護された保護基と当該保護基を捕捉する捕捉剤とが結合した捕捉体を分液洗浄により除去することがある。このような技術として、例えば特許文献１には、Ｎ無保護Ｃ保護ペプチドを含む反応液を、フローリアクター中で水および／または親水性有機溶媒により連続的流れで洗浄後、連続的流れで油水分離手段により分液して、当該Ｎ無保護Ｃ保護ペプチドを含有する有機層を分層することにより当該Ｎ無保護Ｃ保護ペプチドを精製する工程を含む、ペプチドの製造方法が記載されている。
国際公開第２０２０／２１８４９７号
　捕捉体等のＮ末端保護基由来化合物を除去する処理は、アミノ基含有化合物の製造方法においてコストおよび時間を費やす処理となっている。特許文献１に記載の技術は、捕捉体の除去率に関する検討が十分とは言えず、したがって、より容易にＮ末端保護基由来化合物を除去できる技術の開発が求められている。
　本発明の一態様は、より容易にＮ末端保護基由来化合物を除去できるアミノ基含有化合物の製造方法を提供することを目的とする。
　上記の課題を解決するために、本発明の一態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、回収対象のアミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成工程と、前記スラグ流から前記疎水層を分離することによって、前記回収対象のアミノ基含有化合物を含む疎水性溶液を回収する分離工程と、を含む。
　また、本発明の一態様に係るアミノ基含有化合物の分離方法は、回収対象のアミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成工程と、前記スラグ流から前記疎水層を分離することによって、前記回収対象のアミノ基含有化合物を含む疎水性溶液を回収する分離工程と、を含む。
　また、本発明の一態様に係るアミノ基含有化合物の製造装置は、回収対象のアミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成部と、前記スラグ流形成部と連結しており、前記スラグ流から前記疎水層を分離することによって、前記回収対象のアミノ基含有化合物を含む疎水性溶液を回収する分離部と、を含む。
　本発明の一態様によれば、より容易にＮ末端保護基由来化合物を除去できるアミノ基含有化合物の製造方法を提供できる。
本発明の一実施形態に係るアミノ基含有化合物の製造装置の構成を示すブロック図である。 実施例１－３において得られた親水層のＨＰＬＣの結果を示すグラフである。
　〔アミノ基含有化合物の製造方法〕
　本発明者らは、縮合反応後のＮ末端保護基の脱保護により生じ得る、Ｎ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物を含む疎水性溶液を、酸性水溶液を用いたスラグ流中で洗浄することにより、Ｎ末端保護基由来化合物の少なくとも一部を容易に酸性水溶液へと除去することによって、例えば、疎水性溶液中のアミノ基含有化合物の純度を向上させたり、洗浄後にアミノ基含有化合物に対してさらにアミノ酸を縮合させる工程などの別の工程を行なう際に支障となり得る成分をより多く除去したりできることを見出し、本発明を完成させた。
　すなわち、本発明の一態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、回収対象のアミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成工程と、スラグ流から疎水層を分離することによって、回収対象のアミノ基含有化合物を含む疎水性溶液を回収する分離工程と、を含む。以下、本発明の一態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法を、単に「本発明の一態様に係る製造方法」と呼ぶことがある。
　（スラグ流形成工程）
　スラグ流形成工程は、疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成する工程である。スラグ流形成工程によれば、流れ方向に沿って疎水層と親水層とが交互に流れるスラグ流が形成される。スラグ流においては、疎水層に含まれるＮ末端保護基由来化合物の少なくとも一部が当該疎水層に隣接する親水層へと移動し、疎水層に含まれる捕捉体が減じられる。
　本明細書において、「スラグ流」とは、流れの少なくとも一部において、疎水層と親水層との交互の流れが流れ方向に沿って形成された流れを指す。「スラグ流」は、当該流れが流れる流路の全体に亘って疎水層と親水層との交互の流れが形成されたもののみならず、流路の一部のみに疎水層と親水層との交互の流れが形成されたものも含む。例えば、「スラグ流」は、疎水層と親水層とが混合される流路の開始点から流路の終点に亘って疎水層と親水層との交互の流れが形成されたもの、前記開始点の近傍のみに疎水層と親水層との交互の流れが形成されたもの、および、流路中で断続的に疎水層と親水層との交互の流れが形成されたものも含む。「スラグ流」においては、その少なくとも一部に疎水層と親水層との交互の流れが形成されていればよく、一部において疎水層および親水層が形成する平行流及び乱流が形成されていてもよい。
　（疎水性溶液）
　疎水性溶液は、回収対象のアミノ基含有化合物、Ｎ末端保護基由来化合物および有機溶媒を含む。疎水性溶液は、Ｎ末端保護基由来化合物を捕捉する捕捉剤をさらに含んでもよい。限定するものではないが、疎水性溶液としては、アミノ基含有化合物を合成するための縮合反応において用いられた反応溶液がそのまま用いられてもよい。
　（アミノ基含有化合物）
　本発明の一態様において、アミノ基含有化合物は、第１級アミノ基および第２級アミノ基のうち少なくとも一方を有する任意の化合物である。アミノ基含有化合物の例としては、単体のアミノ酸、および２個以上のアミノ酸がペプチド結合して形成されるペプチドが挙げられる。ペプチドは、ペプチド鎖のＣ末端および側鎖末端のいずれかに、保護基などの置換基を有していてもよい。
　回収対象のアミノ基含有化合物は、本発明の一態様に係る製造方法において目的生成物として製造されるアミノ基含有化合物と同一であってもよく、異なっていてもよい。限定するものではないが、回収対象のアミノ基含有化合物は、目的生成物のアミノ基含有化合物の前駆体、例えば目的生成物のアミノ基含有化合物のペプチド配列の一部を有する化合物であってもよい。
　本発明の一態様に係る製造方法において製造される、または回収対象となるアミノ基含有化合物は、ペプチドであり得る。ペプチドを構成するアミノ酸の数は、製造するペプチドの用途に応じて適宜設定すればよく、例えば、２個以上である。また、本発明の一態様に係る製造方法は、より多くのアミノ酸から構成されるペプチドの製造に好適に適用することができ、より好ましくは３個以上、さらに好ましくは５個以上のアミノ酸が結合しているアミノ基含有化合物の製造に適用できる。
　ペプチドのアミノ酸残基配列は、特に限定されないが、ペプチドのＮ末端残基がリシン（Ｌｙｓ）、またはプロリン（Ｐｒｏ）であってもよい。Ｎ末端残基がこれらのアミノ酸残基である場合、捕捉体の従来の除去処理を行うと、洗浄溶液中で捕捉体を含む疎水性溶液のエマルジョンが形成され、分液に長時間を要することがある。しかしながら、本発明の一態様によれば、捕捉体の除去におけるエマルジョンの形成が減じられるため、より短時間で分液を行うことができる。
　回収対象のアミノ基含有化合物は、そのＣ末端がＣ末端保護基で保護されていてもよい。Ｃ末端保護基は、液相タグ法において用いられ得るＣ末端保護基であり得る。Ｃ末端保護基の例としては、下記式（１）で表されるＣ末端保護基が挙げられる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
　式（１）中、ｍ個のＱは、それぞれ酸素原子を表す。ｍ個のＲ１は、それぞれ独立して、下記式（Ａ）で表わされる基である。ｋ個のＲ２は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アリール基、アラルキル基またはハロゲン原子を表す。Ｘは、アミノ基含有化合物のＣ末端との結合位置を表す。ｍは、２または３の整数を表す。ｋは、０以上（５－ｊ）以下の整数を示す。ｍ個の［Ｑ－Ｒ１］のうち少なくとも１つは、Ｘを含む置換基に対してメタ位に置換されている。式（１）で表されるＣ末端保護基の総炭素数は、４０以上、６０以下である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
　式（Ａ）中、＊は、結合位置を示す。Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄおよびＲ１ｅは、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基を示す。ｎ１は、０以上６以下の整数を示し、該ｎ１が１以上の場合、該ｎ１が付された括弧内に示される繰り返し単位は、アルキレン基である。ｎ２は、０以上６以下の整数を示し、該ｎ２が１以上の場合、該ｎ２が付された括弧内に示される繰り返し単位は、アルキレン基である。但し、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄのうち少なくとも２つ以上は水素原子である。
　Ｃ末端保護基の例としては、下記式のうちいずれかで表される保護基も挙げられる。式中、Ｘはアミノ基含有化合物のＣ末端との結合位置を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
　Ｃ末端保護基は、上述した保護基に限定されず、当技術分野で公知の保護基を用いてもよい。
　（Ｎ末端保護基由来化合物）
　本発明の一態様において、Ｎ末端保護基由来化合物は、アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物である。Ｎ末端保護基由来化合物の例としては、Ｎ末端保護アミノ基含有化合物のＮ末端保護基を脱保護することによってＮ末端保護基が分解して生じる分解生成物、および当該分解生成物に対して捕捉剤が結合した捕捉体（以下、単に「捕捉体」という。）が挙げられる。分解生成物および捕捉体は、典型的には、本発明の一態様に係る製造方法において副生成物として生じ得る。分解生成物および捕捉体は、製造されるアミノ基含有化合物の収率および純度を減少させることがあるため、その少なくとも一部を除去することが所望されることがある。本発明の一態様において、Ｎ末端保護基由来化合物の少なくとも一部を容易に除去することによって、本発明の一態様に係る製造方法におけるコストおよび所要時間の削減を達成することができる。Ｎ末端保護基由来化合物は、１種であってもよく、複数種類の組合せであってもよい。
　なかでも、本発明の一態様は、Ｎ末端保護基由来化合物が捕捉体である場合に、好適に適用できる。つまり、本発明の一態様は、捕捉体をより好適に洗浄できる。本発明の一態様に係る製造方法は、捕捉体をより容易に除去することができ、より効果的にコストおよび所要時間の削減を達成することができる。
　Ｎ末端保護基は、アミノ基含有化合物が有する第１級アミノ基および第２級アミノ基のうち少なくとも一方を保護するために使用され得る官能基であればよく、特に限定されない。Ｎ末端保護基の例としては、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ基）などのフルオレン骨格を有する保護基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ基）、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ基）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）基、アセチル（Ａｃ）基およびトリクロロアセチル基が挙げられる。
　（分解生成物）
　本発明の一態様において、除去の対象は、分解生成物であってもよい。分解生成物は、Ｎ末端保護アミノ基含有化合物のＮ末端保護基を脱保護することによってＮ末端保護基が分解して生じる化合物である。
　分解生成物の例としては：Ｆｍｏｃ基由来のジベンゾフルベン（ＤＢＦ）；Ｂｏｃ基由来のＣＯ２およびイソブテン；ならびに、Ｃｂｚ基由来のトルエンが挙げられる。
　（捕捉体）
　本発明の一態様において、除去の対象は、捕捉体であってもよい。捕捉体は、回収対象のアミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する分解生成物に捕捉剤が結合した化合物である。なお、疎水性溶液には、捕捉体に加えて、捕捉剤、およびＮ末端保護基に由来する分解生成物それぞれが、互いに結合していない形態で含まれてもよい。
　捕捉剤は、分解生成物と結合することにより捕捉体を形成する化合物である。捕捉剤は、Ｎ末端保護基の構造、および当該Ｎ末端保護基に由来する分解生成物の構造に応じて、適宜に選択され得る。捕捉剤の例としては、２級アミンが挙げられる。例えば、Ｎ末端保護基がフルオレン骨格を有する保護基であり、したがって分解生成物がフルベン骨格を有する場合、高い効率で分解生成物を捕捉し、遊離している分解生成物を反応系から除去する観点から、捕捉剤は２級アミンであることが好ましい。捕捉剤は、２級アミンのなかでも、モルホリン、ピペリジン、３－ヒドロキシピペリジン、４－ヒドロキシピペリジン、チオモルホリン、チオモルホリンジオキシド、４－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチルアミン、およびピロリジンからなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。
　捕捉体は、分解生成物と捕捉剤とが結合することにより形成される。捕捉体の構造は、Ｎ末端保護基および捕捉剤の構造に応じて決定され、特に限定されない。捕捉体の例としては、下記式のうちいずれかで表される化合物が挙げられる。これらの化合物は、分解生成物ＤＢＦと、捕捉剤モルホリン、ピペリジン、ピロリジン、４－メチルピペラジン、またはジエチルアミンとが結合して形成される捕捉体である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
　（有機溶媒）
　本発明の一態様において、有機溶媒は、当該有機溶媒を含む疎水性溶液を酸性水溶液に対して非相溶性とするものであればよく、特に限定されない。有機溶媒は、ペプチドの縮合反応において反応溶媒として用いられ得る公知の疎水性有機溶媒であってもよい。本発明の一態様に係る製造方法において縮合反応とＮ末端保護基由来化合物の除去とを繰り返し行う場合には、操作の簡便性を向上させ、また縮合反応とＮ末端保護基由来化合物の除去との間に生じる悪影響を低減する観点から、スラグ流形成工程における有機溶媒は縮合反応における反応溶媒と同一であることが好ましい。
　有機溶媒の例としては、エーテル類、酢酸エステル類、ハロゲン化炭化水素類、芳香族炭化水素類および炭化水素類が挙げられる。有機溶媒としては、１種を単独でも用いてもよく、複数種類を混合して用いてもよい。有機溶媒は、分液が容易であり且つ低コストであるため、４－メチルテトラヒドロピラン（ＭＴＨＰ）、シクロペンチルメチルエーテル（ＣＰＭＥ）、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、２－メチルテトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、メチル－ｔ－ブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ジクロロメタン、トルエン、キシレン、ヘキサン、ヘプタンおよびシクロヘキサンからなる群より選ばれる少なくとも１種を含むことが好ましく、４－メチルテトラヒドロピラン、シクロペンチルメチルエーテルおよびクロロホルムからなる群より選ばれる少なくとも１種を含むことがさらに好ましい。
　（疎水性溶液の他の成分）
　疎水性溶液は、上述した成分以外の他の成分を含んでもよい。他の成分の例としては、ペプチドの縮合反応において用いられ得る縮合剤、活性化剤および触媒、ならびに縮合反応の副生成物、ならびに脱保護剤が挙げられる。縮合剤、活性化剤、触媒および脱保護剤の具体例は、後述する。
　従来技術において、Ｎ末端保護基由来化合物、縮合剤、活性化剤および脱保護剤を含む反応溶液を、Ｎ末端保護基由来化合物の除去のための分液洗浄に供すると、エマルジョンが形成されて分液洗浄に時間を要することがあり、したがって当該分液洗浄の前に、縮合剤、活性化剤および脱保護剤それぞれの除去のための予備的な分液洗浄が必要とされることがあった。しかしながら、本発明の一態様に係る製造方法によれば、Ｎ末端保護基由来化合物以外の成分として縮合剤、活性化剤および脱保護剤のいずれかが疎水性溶液に含まれる場合であっても、エマルジョンの形成が減じられるため、短時間で分液洗浄を行える。また、本発明の一態様に係る製造方法によれば、予備的な分液洗浄を行わずともよいため、より少ない回数の分液洗浄でＮ末端保護基由来化合物を除去することができる。
　（酸性水溶液）
　酸性水溶液は、スラグ流中で、Ｎ末端保護基由来化合物が疎水層から抽出される親水層を形成する。酸性水溶液は、酸を含む水溶液であればよく、特に限定されないが、例えばブレンステッド酸を含む水溶液である。
　酸性水溶液は、Ｎ末端保護基由来化合物をより高い効率で除去する観点から、塩酸、硫酸、酢酸、リン酸およびクエン酸からなる群より選ばれる少なくとも１種のブレンステッド酸を含む水溶液であることが好ましい。酸性水溶液に含まれるブレンステッド酸の濃度は、Ｎ末端保護基由来化合物をより高い効率で除去する観点から、好ましくは１．０モル／Ｌ以上であり、より好ましくは２．０モル／Ｌ以上である。また、酸性水溶液に含まれるブレンステッド酸の濃度は、疎水層に含まれるアミノ基含有化合物の分解を減じる観点から、好ましくは１２．０モル／Ｌ以下であり、より好ましくは６．０モル／Ｌ以下であり、さらに好ましくは４．０モル／Ｌ以下である。
　酸性水溶液のｐＨは、特に限定されないが、例えば７．０未満であってもよい。酸性水溶液のｐＨは、好ましくは５．０未満であり、より好ましくは３．０未満である。
　（スラグ流形成工程の運転条件）
　疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成する方法は、特に限定されないが、例えば、疎水性溶液および酸性水溶液を別々の流路から合流部へと導入して混合する方法、ならびに電磁弁などの外部制御によりスラグ流を形成する方法が挙げられる。
　合流部で混合する方法においては、疎水性溶液および酸性水溶液の導入路、ならびに形成されたスラグ流が排出される排出路の内径は、適宜に選択され得る。内径は、親水層と疎水層とが安定して形成されるスラグ流を得る観点から、好ましくは０．４ｍｍ以上であり、より好ましくは０．６ｍｍ以上であり、好ましくは６．５ｍｍ以下であり、より好ましくは４．５ｍｍ以下である。
　合流部へ導入される疎水性溶液および酸性水溶液それぞれの流量は、固定されていてもよく、２つの溶液が交互に合流部へと導入されるように可変的に制御されてもよい。スラグ流形成工程を簡便に運転する観点から、疎水性溶液および酸性水溶液それぞれの流量は、固定されていることが好ましい。疎水性溶液の流量は、スラグ流における疎水層１層の流れ方向の長さ、すなわちスラグ長を安定させ、処理の再現性を高める観点から、好ましくは０．３ｍＬ／ｍｉｎ以上であり、より好ましくは１．０ｍＬ／ｍｉｎ以上であり、好ましくは１０ｍＬ／ｍｉｎ以下であり、より好ましくは６．０ｍＬ／ｍｉｎ以下である。酸性水溶液の流量は、スラグ長を短くして、各層の体積当たりの隣接する層との接触面積を増加させてＮ末端保護基由来化合物の移動をより促進する観点から、疎水性溶液の流量の、０．５倍以上であることが好ましく、１．０倍以上であることがより好ましい。また、酸性水溶液の流量は、廃液を減じる観点から、疎水性溶液の流量の、１０倍以下であることが好ましく、４．０倍以下であることがより好ましい。
　スラグ流形成工程は、形成されたスラグ流をチューブ内に流通させることを含んでもよい。チューブの長さは、チューブ中でのスラグ流の滞留時間が所望のものとなるように、適宜選択され得る。Ｎ末端保護基由来化合物の親水層への移動を十分に進行させる観点から、滞留時間は、好ましくは３秒以上であり、より好ましくは５秒以上である。Ｎ末端保護基由来化合物を十分に除去しつつ、本発明の一態様に係る製造方法をより短時間で完了させる観点から、滞留時間は、好ましくは５００秒以下であり、より好ましくは３００秒以下である。例えば、チューブの長さは、好ましくは０．０１５ｍ以上であり、より好ましくは０．１ｍ以上であり、好ましくは２０ｍ以下であり、より好ましくは１０ｍ以下であるが、これらに限定されない。チューブの内径は、チューブ内でスラグ流が維持される程度であればよい。チューブの内径は、好ましくは０．４ｍｍ以上であり、より好ましくは０．６ｍｍ以上であり、好ましくは６．５ｍｍ以下であり、より好ましくは４．５ｍｍ以下であるが、これらに限定されない。
　（分離工程）
　分離工程は、スラグ流から疎水層を分離することによって、回収対象のアミノ基含有化合物を含む疎水性溶液を回収する工程である。本発明の一態様に係る製造方法においてＮ末端保護基由来化合物の除去が起こるスラグ流は微細なエマルジョンを生じにくく、疎水層がある程度の大きさを有するため、スラグ流から疎水層を容易に分離することができる。回収される疎水性溶液は、回収対象のアミノ基含有化合物を含むが、スラグ流形成工程において用いられた疎水性溶液が含んでいたＮ末端保護基由来化合物を含まないか、スラグ流形成工程における量よりも減じられた量で含んでいる。
　疎水層を分離する方法は、特に限定されず、バッチ式分離であってもよく、連続式分離であってもよい。バッチ式分離を行う場合には、公知の方法を用いることができ、例えば貯留槽に導入したスラグ流を静置して、上層および下層に分離した疎水層（疎水性溶液）および親水層（酸性水溶液）のうち疎水層を回収してもよい。連続式分離を行う場合には、公知の方法を用いることができ、例えばスラグ流を油水分離膜に導入してもよく、また例えば上層および下層が流れに沿って平行に流れる平行流にスラグ流を変換して、上層および下層のうち疎水層に対応する層を回収してもよい。
　（脱保護工程）
　本発明の一態様に係る製造方法は、スラグ流形成工程の前に、脱保護工程をさらに含んでもよい。脱保護工程は、スラグ流形成工程の前に、有機溶媒中で、Ｎ末端保護アミノ基含有化合物と脱保護剤と捕捉剤とを接触させて、回収対象のアミノ基含有化合物および捕捉体を形成させる工程である。脱保護工程によれば、アミノ基含有化合物および捕捉体を含む疎水性溶液を得ることができる。
　脱保護工程において有機溶媒および捕捉剤は、スラグ流形成工程について上述したものを用いることができるため、その説明を繰り返さない。Ｎ末端保護アミノ基含有化合物は、回収対象のアミノ基含有化合物のＮ末端がＮ末端保護基により保護されている化合物である。Ｎ末端保護アミノ基含有化合物の構成は、アミノ基含有化合物およびＮ末端保護基に関する上記説明を参照する当業者であれば、容易に理解するであろう。
　脱保護剤は、Ｎ末端保護アミノ基含有化合物からＮ末端保護基を脱保護する化合物である。脱保護剤は、Ｎ末端保護基に応じて適宜選択され得る。脱保護剤の例としては：１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）、１．５－ジアザビシクロ［４．３．０］－５－ノネン（ＤＢＮ）、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）トリエチルアミンおよびトリブチルアミンなどの有機塩基；ならびに、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドおよびナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシドなどの無機塩基が挙げられるが、これに限定されない。脱保護剤は、ＤＢＵ、ＤＢＮおよびＤＡＢＣＯからなる群から選択される少なくとも１種であることが好ましく、ＤＢＵであることがさらに好ましい。
　有機溶媒中でＮ末端保護アミノ基含有化合物と脱保護剤と捕捉剤とを接触させる方法は特に限定されない。例えば、Ｎ末端保護アミノ基含有化合物を含む反応溶液に対して脱保護剤および捕捉剤を任意の順番で加えてもよい。
　また、本発明の別の一態様においては、脱保護工程において捕捉剤が用いられなくともよい。すなわち、脱保護工程は、スラグ流形成工程の前に、有機溶媒中で、Ｎ末端保護アミノ基含有化合物と脱保護剤とを接触させて、回収対象のアミノ基含有化合物および分解生成物を形成させる工程であってもよい。脱保護工程の態様は、Ｎ末端保護基の種類に応じて適宜に選択され得る。
　（縮合工程）
　また、本発明の一態様に係る製造方法は、脱保護工程の前に、縮合工程をさらに含んでもよい。縮合工程は、脱保護工程の前に、アミノ基含有化合物前駆体のＮ末端に対して、Ｎ末端保護アミノ酸を縮合させて、Ｎ末端保護アミノ基含有化合物を得る工程である。アミノ基含有化合物前駆体は、アミノ基含有化合物においてＮ末端アミノ酸１残基が除去された構造を有する化合物である。また、Ｎ末端保護アミノ酸は、アミノ基にＮ末端保護基が結合している任意のアミノ酸である。
　縮合工程は、アミノ基含有化合物前駆体を有機溶媒に溶解した反応溶液に、Ｎ末端保護アミノ酸および縮合剤、ならびに任意に活性化剤および触媒に添加することにより実行することができる。
　縮合剤としては、アミド化反応において用いられ得る公知の化合物を用いることができる。縮合剤の例としては、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ（６－Ｃｌ））、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）、（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ）および１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ・ＨＣｌ）が挙げられる。
　活性化剤は、縮合剤との共存下で、アミノ酸を、対応する活性エステルまたは対称酸無水物などに誘導して、アミド化反応させやすくする公知の化合物であり得る。活性化剤の例としては、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、１－ヒドロキシ－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－カルボン酸エチル（ＨＯＣｔ）３－ヒドロキシ－１，２，３－ベンゾトリアジン－４（３Ｈ）－オン（ＨＯＯＢｔ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、Ｎ－ヒドロキシフタルイミド（ＨＯＰｈｔ）、Ｎ－ヒドロキシ－５－ノルボルネン－２，３－ジカルボキシイミド（ＨＯＮｂ）、ペンタフルオロフェノールおよびシアノ（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（Ｏｘｙｍａ）が挙げられる。
　触媒は、アミド化反応を触媒する公知の化合物であり得る。触媒の例としては、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）が挙げられる。
　（縮合工程および脱保護工程の一例）
　縮合工程および脱保護工程のスキームの一例を以下に示す。下記スキームでは、縮合工程として、Ｃ末端がＲ基で保護されているアミノ基含有化合物前駆体Ｈ－ＡＡ１－ＯＲをＭＴＨＰ／ＤＭＦ（８／２）の混合液に３０～４０ｖ／ｗになるよう溶解し、Ｎ末端保護アミノ酸Ｆｍｏｃ－ＡＡ２－ＯＨ（１．３ｅｑｕｉｖ）、縮合剤ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（１．３ｅｑｕｉｖ）および活性化剤Ｏｘｙｍａ（０．１ｅｑｕｉｖ）を加え、室温で１時間攪拌する。縮合反応の終了をＨＰＬＣで確認した後、活性エステルＦｍｏｃ－ＡＡ２－Ｏｘの捕捉剤としてモルホリン（０．４ｅｑｕｉｖ）を加え室温で３０分間攪拌する。次いで、脱保護工程として、捕捉剤モルホリン（２０．０ｅｑｕｉｖ）および脱保護剤ＤＢＵ（７．０ｅｑｕｉｖ）を加えて室温で１時間攪拌し、脱保護反応を行い、アミノ基含有化合物Ｈ－ＡＡ２－ＡＡ１－ＯＲを得る。限定するものではないが、続けて、反応溶液を分液ロートに移し、１０％食塩水（２５～３０ｖ／ｗ、２回）を加えて洗浄、分液してもよい。さらに、有機層に２Ｍ塩酸（２５～３０ｖ／ｗ、２回）を加えて洗浄、分液を行い、さらに０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液（２５～３０ｖ／ｗ）で洗浄、分液し、有機層を適量の硫酸ナトリウムで乾燥後、適量のＭＴＨＰで洗いこみを行いながら、ろ過し、アミノ酸縮合物を溶液として得てもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　（中和工程）
　また、本発明の一態様に係る製造方法は、分離工程の後に、中和工程をさらに含んでもよい。中和工程は、分離工程の後に、回収された疎水性溶液と塩基とを接触させて、疎水性溶液を中和する工程である。中和工程によれば、分離工程において回収された、低ｐＨを有する疎水性溶液を中和することにより、続く工程における、疎水性溶液の反応性を制御することができる。また、中和工程によれば、疎水性溶液に含まれ得る活性化剤を容易に除去することができる。
　中和工程は、例えば疎水性溶液が形成する疎水層と、塩基性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成することにより、実行してもよい。このような方法によれば、中和後の疎水性溶液をスラグ流から容易に分離できると共に、疎水性溶液に含まれ得る活性化剤を塩基性水溶液へと除去することができる。
　塩基性水溶液は、塩基を含む水溶液であれば特に限定されないが、例えばブレンステッド塩基を含む水溶液である。塩基性水溶液は、疎水性水溶液のｐＨを好適な値へ変化させる観点から、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムおよび水酸化ナトリウムからなる群から選ばれる少なくとも１種のブレンステッド塩基を含む水溶液であることが好ましい。
　塩基性水溶液に含まれるブレンステッド塩基の濃度は、洗浄効率の観点から、好ましくは０．１モル／Ｌ以上であり、より好ましくは０．５モル／Ｌ以上である。また、塩基性水溶液に含まれるブレンステッド塩基の濃度は、ペプチド分解抑制の観点から、好ましくは２．０モル／Ｌ以下であり、より好ましくは１．０モル／Ｌ以下である。塩基性水溶液のｐＨは、例えば８以上、１２以下であってもよいが、これに限定されない。
　中和工程において、疎水層と親水層とのスラグ流を形成する場合、運転条件は、上述したスラグ流形成工程と同様の条件を採用してもよい。
　また、中和工程は、疎水性溶液を中和するための公知の方法を用いて実行してもよい。例えば、疎水性溶液に塩基を添加するか、または疎水性溶液を塩基性カラムに導入することにより、疎水性溶液と塩基とを接触させて中和してもよい。塩基の例としては、トリエチルアミンおよびジイソプロピルエチルアミンなどの三級アミンが挙げられる。塩基性カラムの例としては、ＤＩＡＩＯＮＴＭ（三菱ケミカル株式会社）などの陰イオン交換樹脂を充填したカラム、および、固体の炭酸水素ナトリウムなどの無機塩基などを充填したカラムが挙げられる。
　（一連の工程の繰り返し）
　本発明の一態様に係る製造方法は、任意に縮合工程と、任意に脱保護工程と、スラグ流形成工程と、分離工程と、任意に中和工程とをこの順番で含む一連の工程を、繰り返し実行することを含んでもよい。一連の工程を繰り返し実行することにより、アミノ基含有化合物のＮ末端に対してアミノ酸を縮合させて、当該アミノ基含有化合物を伸長させることができる。一連の工程を繰り返す回数は、特に限定されず、アミノ酸を縮合させる回数に応じて定めればよい。
　一連の工程を繰り返し実行する場合、１サイクルにおける回収対象のアミノ基含有化合物は、続く１サイクルにおいては、アミノ基含有化合物前駆体として縮合工程に供されてもよい。また、一連の工程を繰り返し実行する場合には、最後の１サイクルにおける回収対象のアミノ基含有化合物が、本発明の一態様に係る製造方法によって目的生成物として製造されるアミノ基含有化合物であり得る。
　（抽出工程）
　本発明の一態様に係る製造方法は、分離工程の後に、抽出工程をさらに含んでもよい。抽出工程は、分離工程で回収された疎水性溶液から回収対象のアミノ基含有化合物を抽出する工程である。アミノ基含有化合物を抽出する方法は、疎水性溶液からアミノ基含有化合物を単離生成するための任意の方法を用いて行うことができ、例えば抽出洗浄、晶析およびクロマトグラフィーが挙げられるが、これらに限定されない。
　抽出工程は、アミノ基含有化合物が有するＣ末端保護基を脱保護することを含んでもよい。Ｃ末端保護基の脱保護は、公知の方法を用いて行うことができ、例えばトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）処理が挙げられる。ＴＦＡ処理においては、水、チオアニソール、１，２－エタンジチオール、フェノールおよびトリイソプロピルシランなどの分子をさらに用いてもよい。
　〔アミノ基含有化合物の分離方法〕
　本発明の他の態様について、以下に説明する。なお、説明の便宜上、上記にて説明した工程または部材と同じ機能を有する工程または部材については、その説明を繰り返さない。
　本発明の範疇には、アミノ基含有化合物の分離方法も含まれる。本発明の一態様に係るアミノ基含有化合物の分離方法は、回収対象のアミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成工程と、スラグ流から疎水層を分離することによって、回収対象のアミノ基含有化合物を含む疎水性溶液を回収する分離工程と、を含む。また、本発明の一態様に係るアミノ基含有化合物の分離方法は、脱保護工程、縮合工程、中和工程および抽出工程のうちいずれかをさらに含んでもよい。
　〔アミノ基含有化合物の製造装置〕
　本発明の一態様は、アミノ基含有化合物の製造装置に関する。本発明の一態様に係るアミノ基含有化合物の製造装置は、アミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成部と、スラグ流形成部と連結しており、スラグ流から疎水層を分離する分離部と、を含む。以下、アミノ基含有化合物の製造装置を、単に「製造装置」と呼ぶことがある。
　本製造装置は、スラグ流形成部と、分離部とを含む。また、本製造装置は、脱保護部、縮合部、中和部および抽出部のうちいずれかをさらに含んでもよい。スラグ流形成部、分離部、脱保護部、縮合部、中和部および抽出部はそれぞれ、上述したスラグ流形成工程、分離工程、脱保護工程、縮合工程および抽出工程を実施するための構成である。
　（本製造装置の一実施形態）
　本製造装置の一実施形態について、図１を参照して説明する。図１は、本発明の一実施形態に係るアミノ基含有化合物の製造装置１０の構成を示すブロック図である。図１に示すように、製造装置１０は、スラグ流形成部２０と、分離部３０とを含む。スラグ流形成部２０と分離部３０とは連結している。
　スラグ流形成部２０は、アミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するための構成である。スラグ流形成部２０は、疎水性溶液槽２１と、酸性水溶液槽２２と、混合部２３と、流通部２４とを含む。疎水性溶液槽２１、酸性水溶液槽２２および流通部２４は、それぞれ混合部２３と連結している。
　疎水性溶液槽２１は、疎水性溶液を貯留すると共に、当該疎水性溶液を混合部２３へと導入するための構成である。本実施形態において、疎水性溶液槽２１としては、疎水性溶液を貯留する槽と、当該槽と連結したポンプとの組合せが用いられる。
　酸性水溶液槽２２は、酸性水溶液を貯留すると共に、当該酸性水溶液を混合部２３へと導入するための構成である。本実施形態において、酸性水溶液槽２２としては、酸性水溶液を貯留する槽と、当該槽と連結したポンプとの組合せが用いられる。
　本実施形態において、疎水性溶液槽２１と酸性水溶液槽２２とは、独立して制御され、それぞれ一定の流量で貯留された溶液を混合部２３へ導入する。しかしながら、本発明の一態様においては、疎水性溶液槽２１と酸性水溶液槽２２とは、連動して制御され、それぞれ可変流量で貯留された溶液を混合部２３へ導入してもよい。
　混合部２３は、疎水性溶液および酸性水溶液を導入してスラグ流を形成させるための構成である。本実施形態において、混合部２３としては、Ｔ字型ミキサーが用いられる。Ｔ字型ミキサーにおいては、互いに対向する２つの導入路から疎水性溶液および酸性水溶液それぞれが導入され、残る排出路からスラグ流が排出される。このような構成によれば、Ｔ字型ミキサーの内壁およびチューブ内壁の摩擦作用によってスラグ流中の疎水層および親水層それぞれの内部に循環流が形成され、Ｎ末端保護基由来化合物の移動がより促進される。
　本発明の一態様において、混合部２３は、Ｔ字型ミキサーに限定されず、スラグ流を形成することができる部材であればよい。混合部２３の例としては、Ｙ字型ミキサー、ヘリックス型ミキサーおよびスタティック型ミキサーが挙げられる。なお、上述のように電磁弁などの外部制御によりスラグ流を形成する方法も挙げられる。
　流通部２４は、混合部において形成されたスラグ流を流通させるための構成である。本実施形態において、流通部２４として、内径１．５９ｍｍおよび長さ１ｍを有するＰＦＡ（テトラフルオロエチレン・パーフルオロアルキルビニルエーテル共重合体）チューブが用いられる。
　本発明の一態様において、流通部２４は、上述のＰＦＡチューブに限定されず、スラグ流を流通させることができる部材であればよい。流通部２４としてチューブを用いる場合には、当該チューブの材質、内径および長さは、適宜選択され得る。
　分離部３０は、スラグ流形成部と連結しており、スラグ流から疎水層を分離するための構成である。本実施形態において、分離部３０としては、流通部２４と連結したスラグ流の導入口と、上部および下部それぞれに開閉可能な排出口とを有する貯留槽が用いられる。本実施形態においては、上部および下部の排出口が閉鎖された状態で、導入口からスラグ流が貯留槽へと導入され、疎水層および親水層が所定量貯留した時点で導入が停止されて、一定の静置時間を経た後、排出口から疎水層および親水層が排出されて、疎水層の分離が達成される。
　本発明の一態様において、分離部３０は、上述の貯留槽に限定されず、バッチ式分離および連続式分離のうちいずれの方式を利用する部材であってもよい。分離部３０の例としては、油水分離膜が挙げられる。
　〔まとめ〕
　上記の説明から理解されるように、本発明の第１の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、回収対象のアミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成工程と、前記スラグ流から前記疎水層を分離することによって、前記回収対象のアミノ基含有化合物を含む疎水性溶液を回収する分離工程と、を含む。
　本発明の第２の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、上述した第１の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法の構成に加えて、前記Ｎ末端保護基由来化合物は、前記Ｎ末端保護基に由来する分解生成物に捕捉剤が結合した捕捉体である。
　本発明の第３の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、上述した第１の態様または第２の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法の構成に加えて、前記有機溶媒は、４－メチルテトラヒドロピラン、シクロペンチルメチルエーテル、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、２－メチルテトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、メチル－ｔ－ブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ジクロロメタン、トルエン、キシレン、ヘキサン、ヘプタンおよびシクロヘキサンからなる群より選ばれる少なくとも１種を含む。
　本発明の第４の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、上述した第１の態様～第３の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法の構成に加えて、前記有機溶媒は、４－メチルテトラヒドロピラン、シクロペンチルメチルエーテルおよびクロロホルムからなる群より選ばれる少なくとも１種を含む。
　本発明の第５の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、上述した第１の態様～第４の態様のいずれか一態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法の構成に加えて、前記酸性水溶液は、塩酸、硫酸、酢酸、リン酸およびクエン酸からなる群より選ばれる少なくとも１種のブレンステッド酸を含む水溶液である。
　本発明の第６の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、上述した第１の態様～第５の態様のいずれか一態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法の構成に加えて、前記酸性水溶液に含まれるブレンステッド酸の濃度は、１．０モル／Ｌ以上、１２．０モル／Ｌ以下である。
　本発明の第７の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、上述した第１の態様～第６の態様のいずれか一態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法の構成に加えて、前記スラグ流形成工程は、０．３ｍＬ／ｍｉｎ以上の流量を有する前記疎水性溶液と、前記疎水性溶液の流量の１．０倍以上、１０倍以下の流量を有する前記酸性水溶液とを混合して、前記スラグ流を形成することを含む。
　本発明の第８の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、上述した第２の態様および第２の態様を引用する第３の態様～第７の態様のいずれか一態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法の構成に加えて、前記スラグ流形成工程の前に、前記有機溶媒中で、前記回収対象のアミノ基含有化合物のＮ末端が前記Ｎ末端保護基により保護されているＮ末端保護アミノ基含有化合物と、当該Ｎ末端保護アミノ基含有化合物から前記Ｎ末端保護基を脱保護する脱保護剤と、前記捕捉剤と、を接触させて、当該アミノ基含有化合物および前記捕捉体を形成させる、脱保護工程をさらに含み、前記Ｎ末端保護基は、フルオレン骨格を有する保護基であり、前記捕捉剤は、２級アミンである。
　本発明の第９の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、上述した第１の態様～第８の態様のいずれか一態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法の構成に加えて、前記分離工程の後に、回収された前記疎水性溶液と塩基とを接触させて、前記疎水性溶液を中和する、中和工程をさらに含む。
　本発明の第１０の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、上述した第１の態様～第９の態様のいずれか一態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法の構成に加えて、前記回収対象のアミノ基含有化合物は、２個以上のアミノ酸が結合したペプチドである。
　本発明の第１１の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、上述した第１の態様～第１０の態様のいずれか一態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法の構成に加えて、前記回収対象のアミノ基含有化合物は、そのＣ末端が下記式（１）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
 　［式中、ｍ個のＱは、それぞれ酸素原子を表し、ｍ個のＲ１は、それぞれ独立して、下記式（Ａ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
 　（式中、＊は、結合位置を示し、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄおよびＲ１ｅは、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基を示し、ｎ１は、０以上６以下の整数を示し、該ｎ１が１以上の場合、該ｎ１が付された括弧内に示される繰り返し単位は、アルキレン基であり、ｎ２は、０以上６以下の整数を示し、該ｎ２が１以上の場合、該ｎ２が付された括弧内に示される繰り返し単位は、アルキレン基であり、但し、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄのうち少なくとも２つ以上は水素原子である）で表わされる基であり、ｋ個のＲ２は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アリール基、アラルキル基またはハロゲン原子を表し、Ｘは、前記アミノ基含有化合物のＣ末端との結合位置を表し、ｍは、２または３の整数を表し、ｋは、０以上（５－ｊ）以下の整数を示し、ｍ個の［Ｑ－Ｒ１］のうち少なくとも１つは、前記Ｘを含む置換基に対してメタ位に置換されており、総炭素数は、４０以上、６０以下である］で表されるＣ末端保護基で保護されている。
　本発明の第１２の態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法は、上述した第１の態様～第１１の態様のいずれか一態様に係るアミノ基含有化合物の製造方法の構成に加えて、前記分離工程の後に、回収された前記疎水性溶液から前記回収対象のアミノ基含有化合物を抽出する抽出工程をさらに含む。
　本発明の第１３の態様に係るアミノ基含有化合物の分離方法は、回収対象のアミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成工程と、前記スラグ流から前記疎水層を分離することによって、前記回収対象のアミノ基含有化合物を含む疎水性溶液を回収する分離工程と、を含む。
　本発明の第１４の態様に係るアミノ基含有化合物の製造装置は、回収対象のアミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成部と、前記スラグ流形成部と連結しており、前記スラグ流から前記疎水層を分離することによって、前記回収対象のアミノ基含有化合物を含む疎水性溶液を回収する分離部と、を含む。
　〔付記事項〕
　本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
　次に実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、これら実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
　〔製造例〕
　以下の製造例では、続く実施例において用いる、ペプチドおよび捕捉体を含む疎水性溶液を製造した。製造例においては、それぞれ下記式（Ｘ）、（Ｙ）および（Ｚ）で表される化合物Ｘ、ＹおよびＺをアミノ基含有化合物のＣ末端保護基（タグ）として用いた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
　＜製造例１＞Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）の合成
　製造例１－１：Ｈ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－１）の合成
　化合物Ｘ５．６２ｇ（６．７８ｍｍｏｌ）をＭＴＨＰ／アセトニトリル（８／２）の混合液２１１．１ｍＬに溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ３．３５ｇ（９．４９ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ１．８２ｇ（９．４９ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ０．０８３ｇ（０．６７８ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。次いで、モルホリン０．２３６ｍＬ（２．７１ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間攪拌した。次いで、モルホリン１１．８ｍＬ（１３６ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ７．０８ｍＬ（４７．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。反応溶液を分液ロートに移し、１０％食塩水（１４０ｍＬ×２回）を加えて分液洗浄した。さらに、有機層に２Ｍ塩酸（１４０ｍＬ×２回）を加えて分液洗浄を行い、さらに０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液（１４０ｍＬ）で分液洗浄した。有機層を適量の硫酸ナトリウムで乾燥した後、適量のＭＴＨＰで洗いこみを行いながら、ろ過し、アミノ酸縮合物Ｈ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－１）を溶液として得た。
　製造例１－２：Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－２）の合成
　上記で得られたＨ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－１）の溶液にアセトニトリル４２．１ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ３．１１ｇ（８．８１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ１．６９ｇ（８．８１ｍｍｏｌ）およびＯｘｙｍａ０．２８９ｇ（２．０３ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。次いで、モルホリン０．２３６ｍＬ（２．７１ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間攪拌した。次いで、モルホリン１１．８ｍＬ（１３６ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ７．０８ｍＬ（４７．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。反応溶液を分液ロートに移し、１０％食塩水（１４０ｍＬ×２回）を加えて分液洗浄した。さらに、有機層に２Ｍ塩酸（１４０ｍＬ×２回）を加えて分液洗浄を行い、さらに０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液（１４０ｍＬ）で分液洗浄した。有機層を適量の硫酸ナトリウムで乾燥した後、適量のＭＴＨＰで洗いこみを行いながら、ろ過し、アミノ酸縮合物Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－２）を溶液として得た。
　製造例１－３：Ｈ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－３）の合成
　アミノ酸縮合物としてＨ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－２）を用い、縮合するアミノ酸としてＦｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨを用いたこと以外は製造例１－２と同様の操作を行い、アミノ酸縮合物Ｈ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－３）を溶液として得た。
　製造例１－４：Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）の合成
　アミノ酸縮合物としてＨ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－３）を用い、縮合するアミノ酸としてＦｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨを用い、分液操作を行わなかったこと以外は製造例１－２と同様の操作を行い、ペプチド（Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４））を疎水性溶液として得た。当該疎水性溶液には、Ｆｍｏｃに由来するジベンゾフルベン（ＤＢＦ）にモルホリンが結合して形成された捕捉体も含まれる。
　＜製造例２＞Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－７）の合成
　製造例２－１：Ｈ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－５）の合成
　製造例１－４で得た疎水性溶液を１０％食塩水で２回、２Ｍ塩酸で２回、０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液で１回洗浄して、疎水性溶液を得た。次いで、アミノ酸縮合物溶液の代わりに得られた疎水性溶液を用い、縮合するアミノ酸としてＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨを用いたこと以外は製造例１－２と同様の操作を行い、アミノ酸縮合物Ｈ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－５）を溶液として得た。
　製造例２－２：Ｈ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－６）の合成
　アミノ酸縮合物としてＨ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－５）を用い、縮合するアミノ酸としてＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨを用いたこと以外は製造例１－２と同様の操作を行い、アミノ酸縮合物Ｈ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－６）を溶液として得た。
　製造例２－３：Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－７）の合成
　アミノ酸縮合物としてＨ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－６）を用い、縮合するアミノ酸としてＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨを用い、分液洗浄として１０％食塩水（６０ｍＬ）のみを行い、続く乾燥、洗いこみおよびろ過を省略したこと以外は製造例１－２と同様の操作を行い、ペプチドＨ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－７）を疎水性溶液として得た。当該疎水性溶液には、Ｆｍｏｃに由来するジベンゾフルベン（ＤＢＦ）にモルホリンが結合して形成された捕捉体も含まれる。
　＜製造例３＞Ｈ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－１０）の合成
　製造例３－１：Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－８）の合成
　製造例２－３で得た疎水性溶液をさらに２Ｍ塩酸で２回、０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液で１回洗浄して、疎水性溶液を得た。次いで、アミノ酸縮合物溶液の代わりに得られた疎水性溶液を用い、縮合するアミノ酸としてＦｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨを用いたこと以外は製造例１－２と同様の操作を行い、アミノ酸縮合物Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－８）を溶液として得た。
　製造例３－２：Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－９）の合成
　アミノ酸縮合物としてＨ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－８）を用い、縮合するアミノ酸としてＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨを用いたこと以外は製造例１－２と同様の操作を行い、アミノ酸縮合物Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－９）を溶液として得た。
　製造例３－３：Ｈ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－１０）の合成
　アミノ酸縮合物としてＨ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－９）を用い、縮合するアミノ酸としてＦｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨを用い、分液洗浄として１０％食塩水（６０ｍＬ）のみを行い、続く乾燥、洗いこみおよびろ過を省略したこと以外は製造例１－２と同様の操作を行い、ペプチドＨ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－１０）を疎水性溶液として得た。当該疎水性溶液には、Ｆｍｏｃに由来するジベンゾフルベン（ＤＢＦ）にモルホリンが結合して形成された捕捉体も含まれる。
　＜製造例４＞Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－４）の合成
　製造例４－１：Ｈ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－１）の合成
　化合物Ｙ２．００ｇ（３．０３ｍｍｏｌ）をＭＴＨＰ／アセトニトリル（８／２）の混合液６０．０ｍＬに溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ１．６０ｇ（４．５４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ０．８７ｇ（４．５４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ０．０３７ｇ（０．３０３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。次いで、モルホリン０．１５８ｍＬ（１．８２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間攪拌した。次いで、モルホリン５．２７ｍＬ（６０．５ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ３．１６ｍＬ（２１．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。反応溶液を分液ロートに移し、１０％食塩水（６０ｍＬ）を加えて分液洗浄した。さらに、有機層に２Ｍ塩酸（６０ｍＬ×２回）を加えて分液洗浄を行い、さらに０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液（６０ｍＬ）で分液洗浄した。有機層を適量の硫酸ナトリウムで乾燥した後、適量のＭＴＨＰで洗いこみを行いながら、ろ過し、アミノ酸縮合物Ｈ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－１）を溶液として得た。
　製造例４－２：Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－２）の合成
　上記で得られたＨ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－１）の溶液にアセトニトリル１２．０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ１．３９ｇ（３．９３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ０．７５４ｇ（３．９３ｍｍｏｌ）およびＯｘｙｍａ０．１２９ｇ（０．９０８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。次いで、モルホリン０．１０５ｍＬ（１．２１ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間攪拌した。次いで、モルホリン５．２７ｍＬ（６０．５ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ３．１６ｍＬ（２１．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。反応溶液を分液ロートに移し、１０％食塩水（６０ｍＬ）を加えて分液洗浄した。さらに、有機層に２Ｍ塩酸（６０ｍＬ×２回）を加えて分液洗浄を行い、さらに０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液（６０ｍＬ）で分液洗浄した。有機層を適量の硫酸ナトリウムで乾燥した後、適量のＭＴＨＰで洗いこみを行いながら、ろ過し、アミノ酸縮合物Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－２）を溶液として得た。
　製造例４－３：Ｈ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－３）の合成
　アミノ酸縮合物としてＨ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－２）を用い、縮合するアミノ酸としてＦｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨを用いたこと以外は製造例４－２と同様の操作を行い、アミノ酸縮合物Ｈ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－３）を溶液として得た。
　製造例４－４：Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－４）の合成
　アミノ酸縮合物としてＨ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－３）を用い、縮合するアミノ酸としてＦｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨを用い、分液洗浄として１０％食塩水（６０ｍＬ）のみを行い、続く乾燥、洗いこみおよびろ過を省略したこと以外は製造例４－２と同様の操作を行い、ペプチド（Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－４））を疎水性溶液として得た。当該疎水性溶液には、Ｆｍｏｃに由来するジベンゾフルベン（ＤＢＦ）にモルホリンが結合して形成された捕捉体も含まれる。
　＜製造例５＞Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－４）の合成
　製造例５－１：Ｈ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－１）の合成
　化合物Ｚ２．００ｇ（２．１９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／アセトニトリル（８／２）の混合液７０ｍＬに溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ１．１６ｇ（３．２８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ０．６３ｇ（３．２８ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ０．０２７ｇ（０．２１９ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。次いで、モルホリン０．１１４ｍＬ（１．３１ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間攪拌した。次いで、モルホリン３．８１ｍＬ（４３．８ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ２．２９ｍＬ（１５．３ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。エバポレーターを用いて反応溶液から溶媒を除去した後、アセトニトリル１００ｍＬを追加し、３０分間攪拌した。析出した固体をろ取し、アミノ酸縮合物Ｈ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－１）を固体として得た。
　製造例５－２：Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－２）の合成
　上記で得られたＨ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－１）をＴＨＦ４８ｍＬに溶解させ、アセトニトリル１２．０ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ１．０１ｇ（２．８５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ０．５４６ｇ（２．８５ｍｍｏｌ）およびＯｘｙｍａ０．０９３ｇ（０．６５７ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。次いで、モルホリン０．０７６ｍＬ（０．８７６ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間攪拌した。次いで、モルホリン３．８１ｍＬ（４３．８ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ２．２９ｍＬ（１５．３ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。エバポレーターを用いて反応溶液から溶媒を除去した後、アセトニトリル１００ｍＬを追加し、３０分間攪拌した。析出した固体をろ取し、アミノ酸縮合物Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－２）を固体として得た。
　製造例５－３：Ｈ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－３）の合成
　アミノ酸縮合物としてＨ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－２）を用い、縮合するアミノ酸としてＦｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨを用いたこと以外は製造例５－２と同様の操作を行い、Ｈ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－３）を溶液として得た。
　製造例５－４：Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－４）の合成
　アミノ酸縮合物としてＨ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－３）を用い、縮合するアミノ酸としてＦｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨを用い、溶媒としてＭＴＨＰ／アセトニトリル（８／２）の混合溶液を用い、分液洗浄として１０％食塩水（６０ｍＬ）を行い、続く溶媒除去およびろ取を省略したこと以外は製造例５－３と同様の操作を行い、ペプチド（Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－４））を疎水性溶液として得た。当該疎水性溶液には、Ｆｍｏｃに由来するジベンゾフルベン（ＤＢＦ）にモルホリンが結合して形成された捕捉体も含まれる。
　〔実施例〕
　以下の実施例では、製造例で得た疎水性溶液を、種々の条件で形成したスラグ流による洗浄に供し、分離後の疎水層における捕捉体の除去率を測定した。
　＜装置＞
　実施例では、以下の装置を使用した。
・フローリアクター：ＰＦＡチューブ（内径１．５９ｍｍ、フロン工業社）とＰＦＡユニオン「ＰＦＡ－２２０－６」（外径１／８インチ、Ｓｗａｇｅｌｏｋ社）とを連結したリアクター
・Ｔ字型ミキサー：ＰＦＡユニオンティー「ＰＦＡ－２２０－３」（外径１／８インチ、Ｓｗａｇｅｌｏｋ社）、ステンレスユニオンティー「ＳＳ－２００－３」（外径１／８インチ、Ｓｗａｇｅｌｏｋ社）
・ポンプ：ダイヤフラムポンプ「ＱＩ－１００－ＴＴ－Ｐ－Ｓ」（タクミナ社）
　＜除去率の測定方法＞
　捕捉体の除去率は、疎水性溶液にあらかじめ加えた化合物Ｙを内部標準物質とし、捕捉体ピークの面積値の、内部標準物質ピークの面積値に対する比率をスラグ流洗浄前後でＨＰＬＣを用いて測定し、下記式を用いて求めた。
　残存率（％）＝洗浄後の比率／洗浄前の比率×１００
　除去率（％）＝１００－残存率（％）
　液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）条件：
カラム：ＩｎｅｒｔＳｕｓｔａｉｎＣ１８（３μｍ、４．６×１２５ｍｍ）
移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液、移動相Ｂ：ＴＨＦ
溶出液：移動相Ａ／移動相Ｂ：表１に示すグラジエント条件にて測定を実施した。
流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出器：紫外可視分光検出器（λ＝２２０ｎｍ）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　＜実施例１＞予備的な洗浄を含むスラグ流洗浄（安定してスラグ流が形成される条件の検討）
　実施例１－１：クロロホルム溶液を用いた洗浄
　製造例１－４で得た疎水性溶液を、１０％食塩水で２回、２Ｍ塩酸で１回予備洗浄して、０．０４ｍｍｏｌ／ｍＬのＨ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を含むクロロホルム溶液を得た。クロロホルム溶液および２Ｍ塩酸水溶液を、ダイヤフラムポンプを用いてそれぞれ０．３４ｍＬ／ｍｉｎおよび０．３７ｍＬ／ｍｉｎの流量でＴ字型ミキサー（ＳＳ－２００－３）に導入して合流させ、スラグ流（流れ方向に沿って、クロロホルム溶液が形成する疎水層と、塩酸水溶液が形成する親水層とが交互に流れる流れ）を形成した。Ｔ字型ミキサーから排出されたスラグ流をＰＦＡチューブ（内径１．５９ｍｍ、長さ２ｍ、滞留時間３５４秒）中に流通させて、ビーカーに排出した。排出されたスラグ流は、速やかに疎水層と親水層との２層に分離した。疎水層を回収し、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を溶液として得た。
　スラグ流において形成された疎水層のスラグ長は、１～６ｃｍの範囲内であった。
　実施例１－２：ＭＴＨＰ溶液を用いた洗浄
　製造例１－４で得た疎水性溶液を、１０％食塩水で２回、２Ｍ塩酸で１回予備洗浄して、０．０４ｍｍｏｌ／ｍＬのＨ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を含むＭＴＨＰ溶液を得た。クロロホルム溶液の代わりに得られたＭＴＨＰ溶液を用いたこと以外は実施例１－１と同様の操作を行い、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を溶液として得た。本実施例においてビーカーに排出されたスラグ流は、速やかに疎水層と親水層との２層に分離した。
　スラグ流において形成された疎水層のスラグ長は、１～２０ｃｍの範囲内であった。
　製造例１－４で得た疎水性溶液を、１０％食塩水で２回、２Ｍ塩酸で１回予備洗浄して、０．０４ｍｍｏｌ／ｍＬのＨ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を含むＭＴＨＰ溶液を得た。クロロホルム溶液の代わりに得られたＭＴＨＰ溶液を用い、ＭＴＨＰ溶液および２Ｍ塩酸水溶液の流量をそれぞれ３．０ｍＬ／ｍｉｎおよび３．０ｍＬ／ｍｉｎ（スラグ流のＰＦＡチューブ内での滞留時間４５秒）としたこと以外は実施例１－１と同様の操作を行い、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を溶液として得た。本実施例においてビーカーに排出されたスラグ流は、速やかに疎水層と親水層との２層に分離した。
　スラグ流において形成された疎水層のスラグ長は、１ｃｍであり、安定していた。
　実施例１の結果を表２に示す。表２に示すように、実施例１－１～１－３において、特には実施例１－３において、疎水性溶液と酸性水溶液とのスラグ流が安定して形成された。また、実施例１－３において得られた親水層のＨＰＬＣの結果を図２に示す。図２に示される捕捉体ピーク（６．３ｍｉｎ）からも、スラグ流を用いて疎水性溶液を洗浄することにより、捕捉体が親水層へと除去されたことが分かる。また、図２において、ペプチドピーク（１７．６ｍｉｎ）が無いことから、目的生成物であるペプチドは親水層へは移動しないことも分かる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
　＜実施例２＞予備的な洗浄を含まないスラグ流洗浄
　実施例２－１：
　製造例１－４で得られた０．０２ｍｍｏｌ／ｍＬのＨ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を含むＭＴＨＰ／アセトニトリル（８／２）混合溶液および２Ｍ塩酸水溶液を、ダイヤフラムポンプを用いてそれぞれ３．０ｍＬ／ｍｉｎおよび３．０ｍＬ／ｍｉｎの流量でＴ字型ミキサー（ＰＦＡ－２２０－３）に導入して合流させ、スラグ流を形成した。Ｔ字型ミキサーから排出されたスラグ流をＰＦＡチューブ（内径１．５９ｍｍ、長さ２ｍ、滞留時間４５秒）中に流通させて、ビーカーに排出した。排出されたスラグ流は、速やかに疎水層と親水層との２層に分離した。疎水層を回収し、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を溶液として得た。
　得られた溶液における捕捉体の除去率は８９．１６％であった。また、洗浄後の親水層のｐＨは１程度であり、洗浄前の疎水性溶液に含まれていた脱保護剤ＤＢＵおよび捕捉剤モルホリンが疎水層から除去された。
　実施例２－２：
　２Ｍ塩酸水溶液の流量を４．５ｍＬ／ｍｉｎとしたこと以外は、実施例２－１と同様の操作を行い、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を溶液として得た。捕捉体の除去率は９０．１６％であった。
　実施例２－３：
　２Ｍ塩酸水溶液の流量を６．０ｍＬ／ｍｉｎとしたこと以外は、実施例２－１と同様の操作を行い、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を溶液として得た。捕捉体の除去率は９２．５６％であった。
　実施例２－４：
　２Ｍ塩酸水溶液の流量を１０．０ｍＬ／ｍｉｎとしたこと以外は、実施例２－１と同様の操作を行い、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を溶液として得た。捕捉体の除去率は９６．７１％であった。
　実施例２－５：
　塩酸濃度を４Ｍとしたこと以外は、実施例２－３と同様の操作を行い、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇ（１－４）を溶液として得た。捕捉体の除去率は９４．９４％であった。
　実施例２－６：
　塩酸濃度を６Ｍとしたこと以外は、実施例２－３と同様の操作を行い、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇ（１－４）を溶液として得た。捕捉体の除去率は９７．３８％であった。
　実施例２－７：
　ＰＦＡチューブの長さを４ｍとしたこと以外は、実施例２－３と同様の操作を行い、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇ（１－４）を溶液として得た。捕捉体の除去率は９３．６９％であった。
　実施例２－８：
　ＰＦＡチューブの長さを１ｍとしたこと以外は、実施例２－３と同様の操作を行い、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇ（１－４）を溶液として得た。捕捉体の除去率は９６．１４％であった。
　実施例２－９：
　有機溶媒としてＭＴＨＰ／アセトニトリル（８／２）混合溶液の代わりにクロロホルム／アセトニトリル（８／２）混合溶液を用いたこと以外は、実施例２－３と同様の操作を行い、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇ（１－４）を溶液として得た。捕捉体の除去率は５１．１０％であった。
　実施例２－１０：
　有機溶媒としてＭＴＨＰ／アセトニトリル（８／２）混合溶液の代わりにＣＰＭＥ／アセトニトリル（８／２）混合溶液を用いたこと以外は、実施例２－３と同様の操作を行い、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇ（１－４）を溶液として得た。捕捉体の除去率は９８．３５％であった。
　実施例２の結果を表３に示す。表２に示すように、疎水性溶液を酸性水溶液とのスラグ流を用いて洗浄することにより、高い除去率で捕捉体を除去できた。また、実施例２の結果からは、縮合反応によって得られたペプチド溶液を、予備的な洗浄無しに酸性水溶液を用いたスラグ流洗浄に供しても、スラグ流中でエマルジョンが形成されずに、排出液が速やかに親水層と疎水層との２層に分離することが分かる。このことから、本発明の一態様に係る製造方法を用いることにより、少ない回数の分液洗浄で捕捉体を除去することができることが分かる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
　＜実施例３＞タグＸを含むペプチド溶液のスラグ流洗浄
　製造例１－４で得た疎水性溶液を、１０％食塩水で１回予備洗浄して、０．０２ｍｍｏｌ／ｍＬのＨ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を含むＭＴＨＰ溶液を得た。クロロホルム溶液および２Ｍ塩酸水溶液を、ダイヤフラムポンプを用いてそれぞれ３．０ｍＬ／ｍｉｎおよび６．０ｍＬ／ｍｉｎの流量でＴ字型ミキサー（ＰＦＡ－２２０－３）に導入して合流させ、スラグ流（流れ方向に沿って、クロロホルム溶液が形成する疎水層と、塩酸水溶液が形成する親水層とが交互に流れる流れ）を形成した。Ｔ字型ミキサーから排出されたスラグ流をＰＦＡチューブ（内径１．５９ｍｍ、長さ１ｍ）中に流通させて、ビーカーに排出した。排出されたスラグ流は、速やかに疎水層と親水層との２層に分離した。疎水層を回収し、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を溶液として得た。捕捉体の除去率は９２．１６％であった。
　＜実施例４＞タグＹを含むペプチド溶液のスラグ流洗浄
　製造例４－４で得た０．０２ｍｍｏｌ／ｍＬのＨ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－４）を含むＭＴＨＰ溶液および２Ｍ塩酸水溶液を、ダイヤフラムポンプを用いてそれぞれ３．０ｍＬ／ｍｉｎおよび６．０ｍＬ／ｍｉｎの流量でＴ字型ミキサー（ＰＦＡ－２２０－３）に導入して合流させ、スラグ流を形成した。Ｔ字型ミキサーから排出されたスラグ流をＰＦＡチューブ（内径１．５９ｍｍ、長さ１ｍ）中に流通させて、ビーカーに排出した。排出されたスラグ流は、速やかに疎水層と親水層との２層に分離した。疎水層を回収し、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－４）を溶液として得た。捕捉体の除去率は９１．６６％であった。
　＜実施例５＞タグＺを含むペプチド溶液のスラグ流洗浄
　製造例５－４で得た０．０２ｍｍｏｌ／ｍＬのＨ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－４）を含むＭＴＨＰ溶液および２Ｍ塩酸水溶液を、ダイヤフラムポンプを用いてそれぞれ３．０ｍＬ／ｍｉｎおよび６．０ｍＬ／ｍｉｎの流量でＴ字型ミキサー（ＰＦＡ－２２０－３）に導入して合流させ、スラグ流を形成した。Ｔ字型ミキサーから排出されたスラグ流をＰＦＡチューブ（内径１．５９ｍｍ、長さ１ｍ）中に流通させて、ビーカーに排出した。排出されたスラグ流は、速やかに疎水層と親水層との２層に分離した。疎水層を回収し、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－４）を溶液として得た。捕捉体の除去率は８８．２２％であった。
　＜実施例６＞ペプチド分解物生成の検討
　ところで、実施例３～５で用いたペプチドにＴｙｒ側鎖保護基として含まれるｔＢｕ基は、酸性条件下で脱保護されることがある。そのため、酸性水溶液を用いたスラグ流中での洗浄により、ｔＢｕ基が脱保護されたペプチド分解物が生成することがある。
　そこで、各種タグ（化合物Ｘ～Ｚ）が結合した、ペプチドＨ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＹ（４－４）およびＨ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＺ（５－４）それぞれについてスラグ流洗浄を実施した後、ＨＰＬＣによる定量分析を行った。各種ペプチド分解物の生成率は、ペプチドＨ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇおよび各種ペプチド分解物Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇの合計面積に対する、ペプチド分解物の面積の割合を算出することにより求めた。
　〔実験結果〕
　ペプチド分解物生成の実験結果を表４に示す。表４に示すように、タグ化合物ＸまたはＹが結合したペプチドを、酸性水溶液を用いたスラグ流中での洗浄に供した場合、化合物Ｚが結合したペプチドと比較して、ペプチド分解物の生成が減じられることが分かった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
　＜実施例７＞７残基ペプチドについてのスラグ流洗浄
　製造例２－３で得られた０．０２ｍｍｏｌ／ｍＬのＨ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－７）を含むＭＴＨＰ溶液および２Ｍ塩酸水溶液を、ダイヤフラムポンプを用いてそれぞれ３．０ｍＬ／ｍｉｎおよび６．０ｍＬ／ｍｉｎの流量でＴ字型ミキサー（ＰＦＡ－２２０－３）に導入して合流させ、スラグ流を形成した。Ｔ字型ミキサーから排出されたスラグ流をＰＦＡチューブ（内径１．５９ｍｍ、長さ２ｍ）中に流通させて、ビーカーに排出した。排出されたスラグ流は、速やかに疎水層と親水層との２層に分離した。疎水層を回収し、Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－７）を溶液として得た。捕捉体の除去率は８３．８６％であった。
　＜実施例８＞１０残基ペプチドについてのスラグ流洗浄
　製造例３－３で得られた０．０２ｍｍｏｌ／ｍＬのＨ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－１０）を含むＭＴＨＰ溶液および２Ｍ塩酸水溶液を、ダイヤフラムポンプを用いてそれぞれ３．０ｍＬ／ｍｉｎおよび６．０ｍＬ／ｍｉｎの流量でＴ字型ミキサー（ＰＦＡ－２２０－３）に導入して合流させ、スラグ流を形成した。Ｔ字型ミキサーから排出されたスラグ流をＰＦＡチューブ（内径１．５９ｍｍ、長さ２ｍ）中に流通させて、ビーカーに排出した。排出されたスラグ流は、速やかに疎水層と親水層との２層に分離した。疎水層を回収し、Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－１０）を溶液として得た。捕捉体の除去率は７８．１２％であった。
　＜実施例９＞塩酸水溶液洗浄後の炭酸水素ナトリウム水溶液によるスラグ流洗浄
　実施例２－１～２－８で得られたペプチドＨ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を含む疎水層を合わせて得られた疎水性溶液（ｐＨ１．９７）、および０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液を、ダイヤフラムポンプを用いてそれぞれ３．０ｍＬ／ｍｉｎおよび６．０ｍＬ／ｍｉｎの流量でＴ字型ミキサー（ＰＦＡ－２２０－３）に導入して合流させ、スラグ流（流れ方向に沿って、疎水性溶液が形成する疎水層と、炭酸水素ナトリウム水溶液が形成する親水層とが交互に流れる流れ）を形成した。Ｔ字型ミキサーから排出されたスラグ流をＰＦＡチューブ（内径１．５９ｍｍ、長さ２ｍ）中に流通させて、ビーカーに排出した。排出されたスラグ流は、速やかに疎水層と親水層との２層に分離した。疎水層を回収し、Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＴａｇＸ（１－４）を溶液（ｐＨ８．１５）として得た。活性化剤Ｏｘｙｍａの除去率を捕捉体と同様に測定したところ、活性化剤の除去率は８５．２０％であった。
　本発明は、例えばペプチドなどのアミノ基含有化合物の製造のために利用することができる。
　１０　製造装置
　２０　スラグ流形成部
　２１　疎水性溶液槽
　２２　酸性水溶液槽
　２３　混合部
　２４　流通部
　３０　分離部

Claims (14)

  1. 　回収対象のアミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成工程と、
    　前記スラグ流から前記疎水層を分離することによって、前記回収対象のアミノ基含有化合物を含む疎水性溶液を回収する分離工程と、を含む、
    　アミノ基含有化合物の製造方法。
  2. 　前記Ｎ末端保護基由来化合物は、前記Ｎ末端保護基に由来する分解生成物に捕捉剤が結合した捕捉体である、
    　請求項１に記載のアミノ基含有化合物の製造方法。
  3. 　前記有機溶媒は、４－メチルテトラヒドロピラン、シクロペンチルメチルエーテル、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、２－メチルテトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、メチル－ｔ－ブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ジクロロメタン、トルエン、キシレン、ヘキサン、ヘプタンおよびシクロヘキサンからなる群より選ばれる少なくとも１種を含む、
    　請求項１または２に記載のアミノ基含有化合物の製造方法。
  4. 　前記有機溶媒は、４－メチルテトラヒドロピラン、シクロペンチルメチルエーテルおよびクロロホルムからなる群より選ばれる少なくとも１種を含む、
    　請求項１または２に記載のアミノ基含有化合物の製造方法。
  5. 　前記酸性水溶液は、塩酸、硫酸、酢酸、リン酸およびクエン酸からなる群より選ばれる少なくとも１種のブレンステッド酸を含む水溶液である、
    　請求項１または２に記載のアミノ基含有化合物の製造方法。
  6. 　前記酸性水溶液に含まれるブレンステッド酸の濃度は、１．０モル／Ｌ以上、１２．０モル／Ｌ以下である、
    　請求項１または２に記載のアミノ基含有化合物の製造方法。
  7. 　前記スラグ流形成工程は、０．３ｍＬ／ｍｉｎ以上の流量を有する前記疎水性溶液と、前記疎水性溶液の流量の１．０倍以上、１０倍以下の流量を有する前記酸性水溶液とを混合して、前記スラグ流を形成することを含む、
    　請求項１または２に記載のアミノ基含有化合物の製造方法。
  8. 　前記スラグ流形成工程の前に、前記有機溶媒中で、前記回収対象のアミノ基含有化合物のＮ末端が前記Ｎ末端保護基により保護されているＮ末端保護アミノ基含有化合物と、当該Ｎ末端保護アミノ基含有化合物から前記Ｎ末端保護基を脱保護する脱保護剤と、前記捕捉剤と、を接触させて、当該アミノ基含有化合物および前記捕捉体を形成させる、脱保護工程をさらに含み、
    　前記Ｎ末端保護基は、フルオレン骨格を有する保護基であり、
    　前記捕捉剤は、２級アミンである、
    　請求項２に記載のアミノ基含有化合物の製造方法。
  9. 　前記分離工程の後に、回収された前記疎水性溶液と塩基とを接触させて、前記疎水性溶液を中和する、中和工程をさらに含む、
    　請求項１、２および８のいずれか１項に記載のアミノ基含有化合物の製造方法。
  10. 　前記回収対象のアミノ基含有化合物は、２個以上のアミノ酸が結合したペプチドである、
    　請求項１、２および８のいずれか１項に記載のアミノ基含有化合物の製造方法。
  11. 　前記回収対象のアミノ基含有化合物は、そのＣ末端が下記式（１）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     　［式中、
    　ｍ個のＱは、それぞれ酸素原子を表し、
    　ｍ個のＲ１は、それぞれ独立して、下記式（Ａ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     　（式中、
    　＊は、結合位置を示し、
    　Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄおよびＲ１ｅは、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基を示し、
    　ｎ１は、０以上６以下の整数を示し、該ｎ１が１以上の場合、該ｎ１が付された括弧内に示される繰り返し単位は、アルキレン基であり、
    　ｎ２は、０以上６以下の整数を示し、該ｎ２が１以上の場合、該ｎ２が付された括弧内に示される繰り返し単位は、アルキレン基であり、
    　但し、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄのうち少なくとも２つ以上は水素原子である）で表わされる基であり、
    　ｋ個のＲ２は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アリール基、アラルキル基またはハロゲン原子を表し、
    　Ｘは、前記アミノ基含有化合物のＣ末端との結合位置を表し、
    　ｍは、２または３の整数を表し、
    　ｋは、０以上（５－ｊ）以下の整数を示し、
    　ｍ個の［Ｑ－Ｒ１］のうち少なくとも１つは、前記Ｘを含む置換基に対してメタ位に置換されており、
    　総炭素数は、４０以上、６０以下である］
    　で表されるＣ末端保護基で保護されている、
    　請求項１、２および８のいずれか１項に記載のアミノ基含有化合物の製造方法。
  12. 　前記分離工程の後に、回収された前記疎水性溶液から前記回収対象のアミノ基含有化合物を抽出する抽出工程をさらに含む、
    　請求項１、２および８のいずれか１項に記載のアミノ基含有化合物の製造方法。
  13. 　回収対象のアミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成工程と、
    　前記スラグ流から前記疎水層を分離することによって、前記回収対象のアミノ基含有化合物を含む疎水性溶液を回収する分離工程と、を含む、
    　アミノ基含有化合物の分離方法。
  14. 　回収対象のアミノ基含有化合物、当該アミノ基含有化合物のＮ末端を保護していたＮ末端保護基に由来する化合物であるＮ末端保護基由来化合物、および有機溶媒を含む疎水性溶液が形成する疎水層と、酸性水溶液が形成する親水層とのスラグ流を形成するスラグ流形成部と、
    　前記スラグ流形成部と連結しており、前記スラグ流から前記疎水層を分離することによって、前記回収対象のアミノ基含有化合物を含む疎水性溶液を回収する分離部と、を含む、
    　アミノ基含有化合物の製造装置。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016140232A1 (ja) * 2015-03-04 2016-09-09 Jitsubo株式会社 ペプチド合成方法
WO2019198833A1 (ja) * 2018-04-13 2019-10-17 Jitsubo株式会社 ペプチド合成方法
WO2020218497A1 (ja) * 2019-04-25 2020-10-29 味の素株式会社 ペプチドの連続的製造方法
WO2021059628A1 (ja) * 2019-09-24 2021-04-01 富士フイルム株式会社 スラグ流の形成方法、有機化合物の製造方法、粒子の製造方法、及び抽出方法
JP2022536775A (ja) * 2019-06-14 2022-08-18 マイタイド・セラピューティクス・インコーポレーテッド ペプチド及びタンパク質生産のための製造プロセス
JP2022183588A (ja) * 2021-05-31 2022-12-13 国立研究開発法人産業技術総合研究所 スラグ流の生成デバイス、前記生成デバイスを備えた化学物質の処理装置、スラグ流の生成方法、及びスラグ流を用いた化学物質の処理方法
JP7260725B1 (ja) * 2021-12-27 2023-04-18 株式会社トクヤマ ペプチド製造方法、保護基の除去方法、及び除去剤

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016140232A1 (ja) * 2015-03-04 2016-09-09 Jitsubo株式会社 ペプチド合成方法
WO2019198833A1 (ja) * 2018-04-13 2019-10-17 Jitsubo株式会社 ペプチド合成方法
WO2020218497A1 (ja) * 2019-04-25 2020-10-29 味の素株式会社 ペプチドの連続的製造方法
JP2022536775A (ja) * 2019-06-14 2022-08-18 マイタイド・セラピューティクス・インコーポレーテッド ペプチド及びタンパク質生産のための製造プロセス
WO2021059628A1 (ja) * 2019-09-24 2021-04-01 富士フイルム株式会社 スラグ流の形成方法、有機化合物の製造方法、粒子の製造方法、及び抽出方法
JP2022183588A (ja) * 2021-05-31 2022-12-13 国立研究開発法人産業技術総合研究所 スラグ流の生成デバイス、前記生成デバイスを備えた化学物質の処理装置、スラグ流の生成方法、及びスラグ流を用いた化学物質の処理方法
JP7260725B1 (ja) * 2021-12-27 2023-04-18 株式会社トクヤマ ペプチド製造方法、保護基の除去方法、及び除去剤

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