JP5670332B2 - ピペコリン酸リンカーおよび固体支持体についての化学へのその使用 - Google Patents

Description

発明の背景

本発明は、ピペコリン酸リンカー(pipecolic linker)および有機合成における固相リンカーとしてのその使用に関する。前記ピペコリン酸固相リンカーは、第一級アミン、第二級アミン、芳香族アミン、アルコール、フェノールおよびチオールの間で選択された官能基のカップリングのために使用することができる。特に、前記ピペコリン酸固相リンカーは、ペプチド合成、例えば、逆方向のＮからＣへのペプチド合成もしくはＣからＮへのペプチド合成など、擬ペプチド合成、例えば、レトロインベルソ型ペプチド合成など、または小有機分子の合成のために使用することができる。

１９６３年の導入以降、固体支持体はペプチドおよび擬ペプチド合成の日常的なツールとなった。その後、小有機分子の固相合成は集中的化合物ライブラリーの作成に重要なツールとなってきている。それゆえに、製薬会社および学究的な世界においてこの戦略を適用することで、創薬プロセス内での同定達成または最適化誘導が一般的に加速した。

ライブラリー作成に関して固相担持化学の利点が数多くあるにもかかわらず、合成ステップの間の決定的な障害の１つは、第１の構成単位を固体支持体と連結する官能基の安定性である。このアンカーは、脱保護後に所定の官能性（すなわち、カルボン酸、第一級アミン、アルデヒド．．．）または関連官能基のファミリーを提供するように設計されたリンカーによって果たされる。保護基として、リンカーは合成戦略の選択において重要な役割を果たし、行われる化学の条件だけでなくアンカリングのためおよび固体支持体からの生成物の解離のための条件も決定する。これらの要件は、多様な有機化合物の合成のための固相戦略の幅広い適用に対する主要な障害であるように思われる。このような状況において、堅牢で用途の広いリンカーシステムの開発は、ライブラリーの作成を迅速化し促進するために非常に重要である。

固体支持体アンカリングのために選択される対象の官能性の間では、アミンおよびアルコールが非常に興味深いものである。それは、生物学的に活性な化合物の構造においてこれらの官能性が一般的に存在することからである(Boschi et al., 2006; Nam et al., 2003; Stromgaard et al., 2001)。さらに、擬ペプチドおよびペプチド化学の分野では、これらの部分は特別の重要性を表す。標準的なＳＰＰＳ戦略は、エピマー化現象を最小限に抑えるために、カルボン酸のＣ末端のアンカリング、その後のＣからＮへのペプチド伸長に依存する。しかしながら、バイオコンジュゲーションまたは連結のいずれかのための新規の有力な化合物ならびに合成中間体の探索への関心事には、多くの場合、アルコール、エーテル、エステル、チオエステル、Ｎ−アルキルアミド、ヒドラジド、アルデヒドのような官能性を導入するためまたは環状ペプチドを得るためにＣ末端に修飾を必要とする。このような修飾は、得られた化合物の酵素安定性および溶解度を高くするだけでなく、生物学的障害を克服する能力も高め得る。固体支持体上での別のアンカリングは、さらなる化学修飾のためにペプチドＣ末端を自由な状態に維持することができる。

これらの目的を達成するために、３つの主要な戦略が有名である：二次アミド結合による主鎖アンカリング、特定の残基の側鎖アンカリングおよび固体支持体へのＮ末端アンカリング。

主鎖アンカリングに最も重要なリンカーは、アルデヒド官能基化リンカー、例えば、ＢＡＬ（主鎖アミドリンカー(backbone amide linker)）である。このハンドルは、Ｃ末端修飾ペプチド(Albericio et al., 1999a; Alsina et al., 1999)および環状ペプチド(Jensen et al., 1998)の合成にだけでなく、小ヘテロ環式化合物(Albericio et al., 1999b)の作製にも広く用いられている。

第２の戦略は、側鎖アミノ酸残基、例えば、アルギニンのグアニジン基(Hamze et al., 2004)、セリンおよびトレオニンのアルコール(Subra et al., 2002)、オルニチンおよびリジンのアミンならびにアスパラギン酸およびグルタミン酸のカルボン酸をアンカリングするようになっている特異的リンカーを必要とする。注目すべきは、このアプローチはＮ末端およびＣ末端におけるペプチドの同時修飾を可能にすることである。

最後に、Ｎ末端アンカリング戦略は、主として、ＳＰＰＳを逆方向に実施する必要がある場合に進められる。この戦略は、ペプチド模倣薬合成のために関心が高まりつつあり、カルボン酸官能基を、化学変換を受けることができる状態にする。この目的で、Ｎ末端アミンを固体支持体へ取り付けるために便宜なリンカーが必要である(Cantel et al., 2004; Cantel et al., 2003)。

これらの理由から、本発明者らは、固相有機化学ならびに側鎖またはＮ末端アンカリングによるペプチドおよび擬ペプチド化学に適用することができるアミンおよびアルコールを含む電子が豊富な部分の固定化に好適な用途の広いリンカーを開発する考えに及んだ。

リンカーの間では、ＴＦＡに不安定なハンドルがコンビナトリアルライブラリーの作成にとりわけ有用である。実際には、その方法論を用いることにより、開裂および開裂後後処理は簡単であり、真空セントリフュゲーター(vacuum centrifugator)または不活性ガスバブリングを用いて並行して行うことができるＴＦＡの簡単な蒸発だけで済むことが多い。

市販の、酸に不安定なリンカーは、効率的なアンカリングおよびアミンまたはアルコール基を含有する化合物の解離にはそれほど一般的ではない。ヒンダードトリチル関連リンカー、例えば、２−クロロクロロトリチルリンカーまたは４−カルボキシクロロトリチルリンカーなどは、様々な求核試薬のアンカリングへの直接経路を提供する。しかしながら、芳香族アミンまたはアルコールなどの嵩高いまたは非反応性の求核試薬を用いる場合には担持効率は大幅に低下する。さらに、トリチルに基づくリンカーは酸処理に対して感受性が高く、これは大きな利点ではあるが、目的化合物の固相担持合成経路の間に弱酸性条件が必要である場合には欠点となる。アミンまたはアルコールの直接固定化の主要な代替手段は、酸に不安定なヒドロキシメチルフェノキシリンカー（例としてワング樹脂）、ＨＭＢＡリンカーまたは単にＨＦに不安定なだけのヒドロキシメチルポリスチレン支持体などのアルコール官能基化樹脂上で構築されるカルバメートまたはカルボネート結合の使用である。しかしながら、この戦略では、第１の構成単位の固定化の前に、ｐ−ニトロフェニルカルボネートまたはイミダゾールカルボネートのような活性化中間体としてアルコールリンカーの誘導体化を必要とし、担持率は通常非常に低い。この欠点に加え、この種の結合は求核攻撃に対して常に安定していない(Cantel et al., 2004)。

本発明は、ピペコリン酸スキャフォールドに基づく新規の酸不安定リンカーの設計および使用に関する。このリンカーのカルボキシル官能基は、アミンまたはアルコールなどの求核試薬をそれぞれアミドまたはエステル結合によってアンカリングするために容易に活性化することができる（実施例のパートＩＩＩ、合成スキーム番号２参照）。そのリンカーは幅広い構成単位に適応させることができ、その使用はペプチドおよび擬ペプチドの側鎖およびＮ末端アンカリングについて立証されている。ペプチドまたは擬ペプチドは、その後、酸加水分解によりピペコリン酸リンカー固体支持体から解離することができる。前記酸加水分解は、ピペコリン酸リンカーの空間特性によって有利に働きＲ_１置換基の性質によって強化されると考えられる。

第１の態様において、本発明は、下記式：

［式中、

は、有機合成において用いられる固体支持体を表し、
Ｘは、存在しないか、または、−ＮＲ_２−、−ＮＲ_２−ＣＯ−、−Ｓ−ＣＯ−、−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ_２−、−Ｓ−、−ＣＯ−Ｓ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＳＯ_２−ＮＲ_２−、もしくは−ＮＲ_２ＳＯ_２−（ここで、Ｒ_２は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、有利にはＨを表す）を表し（Ｘはスペーサーによって固体支持体から分離することができると理解される）、および
Ｒ_１は、分枝（Ｃ_３−Ｃ_３０）アルキル基、分枝（Ｃ_３−Ｃ_３０）アルケニル基、分枝（Ｃ_３−Ｃ_３０）アルキニル基、（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式もしくは多環式炭化水素基、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式もしくは多環式炭化水素基、（Ｃ_２−Ｃ_６）アルケニル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式もしくは多環式炭化水素基、または（Ｃ_２−Ｃ_６）アルキニル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式もしくは多環式炭化水素基を表す］
を有する固相−リンカー組合せ(solid phase-linker combination)に関する。

本発明において、式（Ｉ）の固相−リンカー組合せは、「ピペコリン酸リンカー固体支持体」ということもある。

用語「固体支持体（solid support）」、「固相(solid phase)」、「マトリックス」および「樹脂」は、本発明においては区別せずに、有機化学において、特にペプチド合成において通常に用いられる支持体を意味する。有利には、固体支持体は、ポリスチレン支持体、ポリアミド支持体、ポリエチレングリコール支持体、ポリアクリル系支持体、複合支持体およびそのコポリマー、例えば、ポリアクリル系／β−アラニンコポリマー支持体、ポリアクリルアミド／ポリスチレンコポリマー支持体、ポリアクリルアミド／ポルエチレングリコールコポリマー支持体、およびポルエチレングリコール／ポリスチレンコポリマー支持体などの間で選択され、前記支持体がビーズの形態、リングまたはランタンなどのフィルムコーティング支持体の形態、プラグの形態、または非架橋可溶性支持体の形態であることも可能である。

より有利には、固体支持体は、
（ｉ）ポリスチレン（ＰＳ）ベースを含むマトリックスを有する、またはポリアミド（ＰＬ）もしくはポリエチレングリコールベース（ＰＥＧ）を含むマトリックスを有する、ゼラチン状またはマクロ多孔性樹脂のビーズ、あるいはポリエチレングリコール−ポリスチレン（ＰＥＧ−ＰＳ）またはポリエチレングリコール−ジメチルアクリルアミド（ＰＥＧＡ）タイプの複合支持体、および
（ｉｉ）ＳｙｎＰｈａｓｅ Ｌａｎｔｅｒｎｓ（登録商標）(Mimotopes, Australia)（硬質非反応性ベースポリマー上へグラフト化された移動可能な表面ポリマーにより構成される、最大限の表面積、反応物の自由流動および洗浄液の迅速な排水を提供する独特の「ランタン」形状物）などのフィルムコーティング支持体
から選択される。

本発明において、Ｘが存在しない場合、基Ｒ_１は固体支持体と直接連結される。

また、Ｘが存在する場合、Ｘは、下に開示される式（ＸＩ）のピペコリン酸リンカーの官能基化固体支持体へのアンカリングによって得られる。本発明の固体支持体は、前記ピペコリン酸リンカー（式中、Ｒ_１は当業者に周知のプロセスにより官能基Ｙで官能基化されている）と反応することが可能な官能基ｐｒｅＸで官能基化される。例えば、官能基−ＮＨ_２を担持する支持体は式（ＸＩ）のピペコリン酸リンカー（式中、Ｒ_１はＹ＝−ＣＯＯＨで官能基化されている）と反応し、その結果、Ｘは−ＮＨ−ＣＯ−となるであろう（実施例のパートＩ、合成スキーム番号１参照、この場合、Ｒ_１はシクロヘキシル基である）。もう１つの例において、官能基−ＣＯＯＨを担持する支持体は式（ＸＩ）のピペコリン酸リンカー（式中、Ｒ_１はＹ＝−ＮＨ_２で官能基化されている）と反応し、その結果、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−となるであろう。官能基化ピペコリン酸リンカーのＹと反応する固体支持体の官能基は、より理解するために本明細書において「ｐｒｅＸ」という（合成スキーム番号１では、ｐｒｅＸ＝ＮＨ_２）。従って、ｐｒｅＸとＹとの反応により、Ｘは得られる。

好ましくは、Ｘは、−Ｏ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、または−ＣＯ−ＮＨ−、より好ましくは、−Ｏ−ＣＯ−または−ＮＨ−ＣＯ−、さらに好ましくは、−ＮＨ−ＣＯ−を表す。

有利には、官能基ｐｒｅＸで官能基化された固体支持体は、官能基ｐｒｅＸがＣｌ−ＣＨ_２−であるクロロメチルポリスチレン樹脂、官能基ｐｒｅＸがＨＯ−であるベンジルオキシベンジルアルコールポリスチレン樹脂、官能基ｐｒｅＸがＮＨ_２−であるアミノメチルポリスチレン（ＡＭ−ＰＳ）樹脂、または官能基ｐｒｅＸがＮＨ_２−である、４−メチルベンズヒドリルアミンポリスチレン樹脂などのメチルベンズヒドリルアミンポリスチレン樹脂である。より有利には、官能基ｐｒｅＸで官能基化された固体支持体は、アミノメチルポリスチレン（ＡＭ−ＰＳ）樹脂または４−メチルベンズヒドリルアミンポリスチレン樹脂である。

本発明において、Ｘはスペーサーによって固体支持体から分離することもできる。用語「アーム」および「スペーサー」は、本発明においては区別せずに用いられ、固体支持体へグラフト化することができる、当業者には周知でよく用いられる任意のフラグメント、特にペプチド合成に用いられるものを意味する。Ｘがスペーサーによって固体支持体から分離されている場合、Ｘは、スペーサー中に含まれる官能基ｐｒｅＸによってもたらされると理解されるべきである。有利には、前記フラグメントは、官能基ｐｒｅＸ＝ＮＨ_２−を含有するＲｉｎｋアミド（Ｒｉｎｋは４−［２’，４’−ジメトキシフェニル−（９−フルオロメチルオキシカルボニル）アミノメチル］フェノキシ−を意味する）、官能基ｐｒｅＸ＝Ｃｌ−Ｃを含有するクロロトリチル、官能基ｐｒｅＸ＝ＨＯ−を含有するヒドロキシメチルベンジルアセトアミド、官能基ｐｒｅＸ＝ＮＨ_２−を含有するＳｉｅｂｅｒアミド（Ｓｉｅｂｅｒは９−アミノキサンテン−３−イルオキシ−を意味する）、官能基ｐｒｅＸ＝ＮＨ_２−を含有するアミノメチル−３，５−ジメトキシフェノキシアルキル、官能基ｐｒｅＸ＝ＮＨ_２−を含有するアミノメチル−３−ジメトキシフェノキシアルキル、官能基ｐｒｅＸ＝ＯＨ−を含有するヒドロキシメチル−３，５−ジメトキシフェノキシアルキル、および官能基ｐｒｅＸ＝ＯＨ−を含有するヒドロキシメチル−３−ジメトキシフェノキシアルキルの間で選択される。

本発明の観点から、「（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル」とは、１〜６個の炭素原子を有する任意の直鎖または分枝飽和炭化水素基を意味する。（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基の例としては、限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、１−エチルプロピル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどが挙げられる。

本発明の観点から、「分枝（Ｃ_３−Ｃ_３０）アルキル基」とは、３〜３０個の炭素原子を有する任意の分枝飽和炭化水素基を意味する。分枝（Ｃ_３−Ｃ_３０）アルキル基の例としては、限定されるものではないが、イソプロピル、１−エチルプロピル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒ−ブチル、イソヘキサデシルなどが挙げられる。

本発明の観点から、「分枝（Ｃ_３−Ｃ_３０）アルケニル基」とは、３〜３０個の炭素原子を有する任意の分枝炭化水素アルケニル基を意味する。分枝（Ｃ_３−Ｃ_３０）アルケニル基の例としては、限定されるものではないが、イソプロペニル、イソブテニル、ｓｅｃ−ブテニル、ｔｅｒｔ−ブテニル、イソペンテニルなどが挙げられる。

本発明の観点から、「分枝（Ｃ_３−Ｃ_３０）アルキニル基」とは、３〜３０個の炭素原子を有する任意の分枝炭化水素アルキニル基を意味する。分枝（Ｃ_３−Ｃ_３０）アルキニル基の例としては、限定されるものではないが、イソブチニル、イソペンチニルなどが挙げられる。

本発明において、表現「単環式または多環式炭化水素基」、「単環式またはポリシクロアルキル基」および「単環式または多環式シクロアルキル基」は区別せずに用いられる。

「（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基」は、「（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式またはポリシクロアルキル基」ともいい、本発明においては区別せずに、１以上の環、有利には１環、２環、３環、４環、５環または６環、有利には１環、２環または３環（各環は４−、５−、６−または７−員環、より有利には５−または６−員環である）からなる飽和炭化水素基を指す。前記多環式基が２環で存在する場合、前記環は縮合もしくはブリッジされていてよく、またはスピロ接合によって連結されていることもあること、あるいは（Ｃ_４−Ｃ_１２）多環式炭化水素基の１つの環の炭素原子はその（Ｃ_４−Ｃ_１２）多環式炭化水素基のもう１つの環の炭素原子と共有結合を形成することも理解されるべきである。

例えば、各環が６−員環である二環式炭化水素基は、
縮合された

、ブリッジされた

、スピロ接合点を有する

、Ｃ−Ｃ結合を有する

であり得る。

前記多環式基が２環以上で存在する場合、当業者ならばこれらの環構成の組合せがあるかもしれないことは分かるであろう。

（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基の前記環の１以上が複素環であってよく、それは、前記環が１個以上、有利には１個または２個のヘテロ原子（有利には窒素、酸素または硫黄原子から選択される）を組み込んでいることを意味することも理解されるべきである。

（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基の他の例としては、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチルまたはノルボルニル基が挙げられる。有利には、（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基は、（Ｃ_５−Ｃ_１０）単環式または多環式炭化水素基、より有利にはＣ_５またはＣ_６単環式または多環式炭化水素基である。より有利には、（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基は、シクロペンチル、シクロヘキシル、アダマンチルまたはノルボルニル基である。

「（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基」とは、ＸまたはＹ基と、あるいは上に定義されるような（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基により固体支持体と連結された、上に定義されるような任意の（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基を意味する。さらに、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基の場合、（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基は、加えて、不飽和または部分飽和炭化水素基、例えば、多環式炭化水素基の環それぞれまたは少なくとも１つの環、有利には多環式炭化水素基の総ての環が、アリール環、有利にはフェニル環である単環式または多環式炭化水素基などを指し得る。

「（Ｃ_２−Ｃ_６）アルケニル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基」とは、ＸまたはＹ基と、あるいは（Ｃ_２−Ｃ_６）アルケニル基により固体支持体と連結された、上に定義されるような任意の（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基を意味する。「（Ｃ_２−Ｃ_６）アルケニル基」とは、２〜６個の炭素原子を有する任意の直鎖または分枝炭化水素アルケニル基を意味する。（Ｃ_２−Ｃ_６）アルケニル基の例としては、限定されるものではないが、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニルなどが挙げられる。（Ｃ_２−Ｃ_６）アルケニル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基の場合、（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基は、加えて、不飽和または部分飽和炭化水素基、例えば、多環式炭化水素基の環それぞれまたは少なくとも１つの環、有利には多環式炭化水素基の総ての環が、アリール環、有利にはフェニル環である単環式または多環式炭化水素基などを指し得る。

「（Ｃ_２−Ｃ_６）アルキニル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基」とは、ＸまたはＹ基と、あるいは（Ｃ_２−Ｃ_６）アルキニル基により固体支持体と連結された、上に定義されるような任意の（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基を意味する。「（Ｃ_２−Ｃ_６）アルキニル基」とは、２〜６個の炭素原子を有する任意の直鎖または分枝炭化水素アルキニル基を意味する。（Ｃ_２−Ｃ_６）アルキニル基の例としては、限定されるものではないが、エチニル、プロピニル、１−ブチニルなどが挙げられる。（Ｃ_２−Ｃ_６）アルキニル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基の場合、（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基は、加えて、不飽和または部分飽和炭化水素基、例えば、多環式炭化水素基の環それぞれまたは少なくとも１つの環、有利には多環式炭化水素基の総ての環が、アリール環、有利にはフェニル環である単環式または多環式炭化水素基などを指し得る。

有利には、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）不飽和または部分飽和単環式または多環式炭化水素基、（Ｃ_２−Ｃ_６）アルケニル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）不飽和または部分飽和単環式または多環式炭化水素基、あるいは（Ｃ_２−Ｃ_６）アルキニル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）不飽和または部分飽和単環式または多環式炭化水素基の環の１以上が、１個以上、有利には１個または２個のヘテロ原子（有利には窒素、酸素または硫黄原子）を組み込んでいる複素環であってよい。

より有利には、「（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基」は「（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル−（Ｃ_５−Ｃ_１０）単環式または多環式炭化水素基である。さらに有利には、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基はメチル−Ｃ_５またはＣ_６単環式または多環式炭化水素基である。最も有利には、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式または多環式炭化水素基はノルボルナ−２−イル−メチル基である。

本発明の特に好ましい実施形態では、前記固相−リンカー組合せは、下記式：

（式中、

は上に定義される通りであり、Ｒ_１はノルボルナ−２−イル−メチルであり、Ｘは−ＮＨ−ＣＯ−である）、

（式中、

は上に定義される通りであり、Ｒ_１はシクロヘキシルであり、Ｘは−ＮＨ−ＣＯ−である）および

（式中、

は上に定義される通りであり、Ｒ_１はアダマンチルであり、Ｘは−ＮＨ−ＣＯ−である）
から選択される式により表される。

本発明はまた、本発明による式（Ｉ）の固相−リンカー組合せを調製するための方法であって、下記式

（式中、Ｒ_１は上に定義される通りであり、
Ｒ_３はＯ保護基であり、

およびＸは上に定義される通りである）
の固相リンカー組合せの脱保護の工程（ｄ１）を含む方法にも関する。

本発明の観点から、用語「Ｏ保護基」とは、本明細書において、Greene、"Protective Groups In Organic Synthesis", (John Wiley & Sons, New York (1981))において開示されているＯ保護基などの、合成手順の間に望ましくない反応からヒドロキシル基を保護する置換基を指す。Ｏ保護基は、置換メチルエーテル、例えば、メトキシメチル（ＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル、２−メトキシエトキシメチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、ｔ−ブチル、ベンジルおよびトリフェニルメチル、テトラヒドロピラニルエーテル、置換エチルエーテル、例えば、２，２，２−トリクロロエチル、シリルエーテル、例えば、トリメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）およびｔ−ブチルジフェニルシリル；ならびにヒドロキシル基をカルボン酸と反応させることにより調製されるエステル、例えば、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、安息香酸エステルなどを含んでなる。

好ましい実施形態では、Ｏ保護基Ｒ_３は（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、有利にはメチルであり、脱保護ステップ（ｄ１）は、テトラヒドロフランなどの溶媒中ＬｉＯＨの溶液での鹸化により行われる。

有利には、式（ＩＩ）の固相リンカー組合せは、（ｃ１）式

（式中、

、ＸおよびＲ_１は上に定義される通りである）
の固相リンカー組合せと、式

（式中、Ｒ_３は上に定義される通りである）
の化合物との反応により得られる。有利には、Ｒ_３は（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、より有利にはメチルである。

さらなる好ましい実施形態では、反応ステップ（ｃ１）は、ジメチルホルムアミドなどの溶媒中トリエチルアミンの存在下で、Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルホスホニウムヘキサフルオロホスフェートにより促進されるアミドカップリングの下で行われる。

有利な実施形態では、式（ＩＩＩ）の固相リンカー組合せは、
（ａ１）Ｘを得るための、式

（式中、

は上に定義される通りであり、ｐｒｅＸは反応する固体支持体の官能基である）の官能基化固相と、式

（式中、Ｒ_１およびＲ_３は上に定義される通りである）
の化合物の官能基Ｙとの反応、および
（ｂ１）式（ＶＩ）の化合物のＹと反応しなかった式（Ｖ）の固相リンカー組合せの官能基−ｐｒｅＸの、適当なキャッピング基でのキャッピング
：により得られる。

用語「キャッピング基」とは、本明細書において、式（ＶＩ）の化合物と反応しなかった固体支持体の官能基−ｐｒｅＸを保護する置換基を指す。これにより、ペプチド合成などの後の適用における式（Ｉ）の固相リンカー組合せの使用の間に望ましくない反応から前記官能基を遮断することが可能である。キャッピング基は当業者には周知であり、固体支持体の官能基−ｐｒｅＸに従って選択される。

より好ましくは、官能基−ｐｒｅＸが−ＮＨ_２である場合、キャッピング工程（ｂ１）において用いられる適当なキャッピング基はＮ保護基アセチルであり、キャッピング工程（ｂ１）は、ジクロロメタンなどの溶媒中で無水酢酸を用いることにより行われる。

有利な工程（ａ１）は、−ｐｒｅＸが−ＮＨ_２でありＹが−ＣＯＯＨである場合である。

有利には、工程（ａ１）は、溶媒（例えば、ジメチルホルムアミドなど）中でジイソプロピルカルボジイミドおよびヒドロキシベンゾトリアゾールを含んでなるカップリング混合物を用いることにより行われる。このようなカップリング混合物は、−ｐｒｅＸが−ＮＨ_２である場合に非常に適当であるが、他の官能基の場合、例えば、ｐｒｅＸが−ＯＨである場合なども用いることができる。用いることができるもう１つのカップリング混合物は、特に−ｐｒｅＸが−ＯＨである場合、ジイソプロピルカルボジイミドの存在下での４−ジメチルアミノピリジンである。

式（Ｉ）の固相リンカー組合せを調製するための方法は、下記の実施例のパートＩおよび合成スキーム番号１において具体化される。

本発明はまた、本発明による式（Ｉ）の固相−リンカー組合せを調製するための方法であって、下に定義される式（ＸＩ）の化合物が官能基Ｙで官能基化され、上に定義される式（Ｖ）の化合物とカップリングされる方法にも関する。

本発明はまた、下記式：

（式中、Ｒ_１およびＲ_３は上に定義される通りである）
を有する化合物にも関する。

本発明において、式（ＸＩ）の化合物は「ピペコリン酸リンカー」と呼ぶ。

有利には、Ｒ_３は（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、より有利にはメチルである。

有利には、Ｒ_１は、当業者には周知のプロセスにより官能基Ｙで官能基化され、その場合、Ｙは上に定義される通りである。

有利には、Ｙは−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ_２、−ＳＯ_２、−ＳＯ_３Ｈまたは−ＳＨを表す。より有利には、Ｙは−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ_２、さらに有利には−ＣＯＯＨである。

好ましくは、Ｒ_１は、（Ｃ_５−Ｃ_１０）単環式または多環式炭化水素基、より好ましくはＣ_５またはＣ_６単環式または多環式炭化水素基である。別の好ましい実施形態では、Ｒ_１は、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル−（Ｃ_５−Ｃ_１０）単環式または多環式炭化水素基、より好ましくはメチル−Ｃ_５またはＣ_６単環式または多環式炭化水素基である。

本発明の特に好ましい実施形態では、ピペコリン酸リンカーは、下式：

（式中、Ｒ_１はノルボルナ−２−イル−メチルであり、Ｒ_１は有利には官能基Ｙで官能基化されており、Ｒ_３は上に定義される通りである）、

（式中、Ｒ_１はシクロヘキシルであり、Ｒ_１は有利には官能基Ｙで官能基化されており、Ｒ_３は上に定義される通りである）、および

（式中、Ｒ_１はアダマンチルであり、Ｒ_１は有利には官能基Ｙで官能基化されており、Ｒ_３は上に定義される通りである）
から選択される式により表される。

有利には、Ｒ_３は（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、より有利にはメチルである。

本発明はまた、上に定義される式（ＸＩ）を有する化合物の、固相リンカーとしての使用にも関する。

さらなる態様において、本発明は、第一級アミン、第二級アミン、芳香族アミン、アルコール、フェノールおよびチオールの間で選択された官能基のカップリングのための、本発明による式（Ｉ）の固相リンカー組合せの使用に関する。

下記の合成スキーム番号２（実施例のパートＩＩＩ）に、本発明による式（Ｉ）の固相リンカー組合せの一般的使用を開示する。

カップリング反応は、当業者には周知の適当なカップリング試薬、例えば、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、ＤＩＣ／ＨＯＡｔ、ＤＣＣ／ＨＯＳｕ、ＤＣＣ／ＨＯＢＴ、ＰｙＢｏｐ／ＤＩＥＡ、ＰｙＢｒｏｐ／ＮＭＭ、ＨＢＴＵ／ＴＥＡ、ＥＤＣ／ＨＯＢｔなどを用いて行われ得る。有利には、本発明による式（Ｉ）の固相リンカー組合せの使用は、第二級および第一級非芳香族アミンのカップリングに向けられ、その場合、カップリング反応はジメチルホルムアミドなどの溶媒中ジイソプロピルエチルアミンの存在下でＯ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルホスホニウムヘキサフルオロホスフェート活性化を用いて行われる。

もう１つの有利な実施形態では、本発明による式（Ｉ）の固相リンカー組合せの使用は、第一級芳香族アミンのカップリングに向けられ、その場合、カップリング反応はジメチルホルムアミドなどの溶媒中２，４，６ トリメチルピリジンの存在下でＮ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル−メチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド活性化を用いて行われる。

本発明はまた、例えば、ピペラジン−１−イル−Ｍ−トリル−メタノンなどの小有機分子の合成のための、本発明による式（Ｉ）の固相−リンカー組合せの使用にも関する。

本発明はさらに、逆方向のＮからＣへのペプチド合成、ＣからＮへのペプチド合成または擬ペプチド合成、例えば、レトロインベルソ型ペプチド合成などのための、本発明による式（Ｉ）の固相−リンカー組合せの使用にも関する。

より特に、本発明は、以下の連続的工程：
（ａ２）本発明による式（Ｉ）の固相リンカー組合せとカップリングされたＣＯＯ保護アミノ酸を得るために、その固相リンカー組合せと、アミノ酸側鎖の反応性官能基が保護されているＣＯＯ保護アミノ酸とをカップリングする工程、
（ｂ２）固相リンカー組合せとカップリングされたアミノ酸をＣＯＯ脱保護する工程、
（ｃ２）固相リンカー組合せとカップリングされたＣＯＯ保護ペプチドを得るために、工程（ｂ２）において得られた固相リンカー組合せとカップリングされたＣＯＯ脱保護アミノ酸と、アミノ酸側鎖の反応性官能基が保護されているＣＯＯ保護アミノ酸とをカップリングする工程、
（ｄ２）所望により、ペプチド鎖を担持している固相リンカー組合せを得るために、必要なだけ工程（ｂ２）および（ｃ２）を繰り返す工程、
（ｅ２）式（Ｉ）の固相リンカー組合せおよびペプチド鎖を回収するために、固相リンカー組合せとペプチド鎖との結合を開裂する工程
を含んでなる逆方向のＮからＣへのペプチド合成方法に関する。

用語「ＣＯＯ保護アミノ酸」とは、本明細書において、合成手順の間に望ましくない反応を回避するために、ＣＯＯ−基が置換基によって保護されているアミノ酸を指す。ＣＯＯ保護アミノ酸のＣＯＯ保護基は、Greene、"Protective Groups In Organic Synthesis", (John Wiley & Sons, New York (1981))において開示されている。ＣＯＯ保護基は、置換メチルエーテル、例えば、メトキシメチル（ＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル、２−メトキシエトキシメチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、ｔ−ブチル、ベンジルおよびトリフェニルメチル、テトラヒドロピラニルエーテル、置換エチルエーテル、例えば、２，２，２−トリクロロエチル、シリルエーテル、例えば、トリメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）およびｔ−ブチルジフェニルシリル；ならびにヒドロキシル基をカルボン酸と反応させることにより調製されるエステル、例えば、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、安息香酸エステルなどを含んでなる。特に、ＣＯＯ保護アミノ酸のＣＯＯ保護基は、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、有利にはメチルであり、ＣＯＯ脱保護工程（ｂ２）は、テトラヒドロフランなどの溶媒中ＬｉＯＨの溶液での鹸化により行われる。

さらに、本発明において、アミノ酸側鎖の反応性官能基は、当業者には周知の適当な置換基を用いて合成手順の間に望ましくない反応から保護され得る。

本発明の意味において、「アミノ酸」とは、Ｄ型またはＬ型の総ての天然α−アミノ酸残基（例えば、アラニン（Ａｌａ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、システイン（Ｃｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、リジン（Ｌｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）およびバリン（ＶａＩ））、ならびに非天然アミノ酸（例えば、β−アラニン、アリルグリシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、３−アミノ−アジピン酸、２−アミノ安息香酸、３−アミノ安息香酸、４−アミノ安息香酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン、１−アミノ−１−シクロブタンカルボン酸、４−アミノシクロヘキサン酢酸、１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸、（１Ｒ，２Ｒ）−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸、（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸、（１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸、（１Ｓ，２Ｓ）−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸、３−アミノシクロヘキサンカルボン酸、４−アミノシクロヘキサンカルボン酸、（１Ｒ，２Ｒ）−２−アミノシクロペンタンカルボン酸、（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノシクロペンタンカルボン酸、１−アミノ−１−シクロペンタンカルボン酸、１−アミノ−１−シクロプロパンカルボン酸、４−（２−アミノエトキシ）−安息香酸、３−アミノメチル安息香酸、４−アミノメチル安息香酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、６−アミノヘキサン酸、１−アミノインダン−１−カルボン酸、４−アミノメチル−フェニル酢酸、４−アミノフェニル酢酸、３−アミノ−２−ナフトエ酸、４−アミノフェニル酪酸、４−アミノ−５−（３−インドリル）−ペンタン酸、（４Ｒ，５Ｓ）−４−アミノ−５−メチルヘプタン酸、（Ｒ）−４−アミノ−５−メチルヘキサン酸、（Ｒ）−４−アミノ−６−メチルチオヘキサン酸、（Ｓ）−４−アミノ−ペンタン酸、（Ｒ）−４−アミノ−５−フェニルペンタン酸、４−アミノフェニルプロピオン酸、（Ｒ）−４−アミノピメリック酸 ((R)-4-aminopimeric acid)、（４Ｒ，５Ｒ）−４−アミノ−５−ヒロキシヘキサン酸((4R,5R)-4-amino-5-hyroxyhexanoic acid)、（Ｒ）−４−アミノ−５−ヒドロキシペンタン酸、（Ｒ）−４−アミノ−５−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−ペンタン酸、８−アミノオクタン酸、（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−ピロリジン−２−カルボン酸、（２Ｓ，４Ｓ）−４−アミノ−ピロリジン−２−カルボン酸、アゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ，４Ｒ）−４−ベンジル−ピロリジン−２−カルボン酸、（Ｓ）−４，８−ジアミノオクタン酸、ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、γ−カルボキシグルタメート、β−シクロヘキシルアラニン、シトルリン(citruline)、２，３−ジアミノプロピオン酸、馬尿酸、ホモシクロヘキシルアラニン、モロイシン(moleucine)、ホモフェニルアラニン、４−ヒドロキシプロリン、インドリン−２−カルボン酸、イソニペコチン酸、α−メチル−アラニン、ニコペチック酸(nicopetic acid)、ノルバリン、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸、オルニチン、ペニシラミン、フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、４−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸、プロパルギルグリシン、３−ピリジニルアラニン、４−ピリジニルアラニン、１−ピロリジン−３−カルボン酸、サルコシン、スタチン類、テトラヒドロイソキノリン−１−カルボン酸、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、トラネキサム酸、４，４−ジフルオロプロリン、４−フルオロプロリン、α−（３，４−ジフルオロベンジル）−プロリン、γ−（３，４−ジフルオロベンジル）−プロリン、α−（トリフルオロメチル）フェニルアラニン、ヘキサフルオロロイシン、５，５，５−トリフルオロロイシン、６，６，６−トリフルオロノルロイシン、２−（トリフルオロメチル）ロイシン、２−（トリフルオロメチル）ノルロイシン、４，４，４−トリフルオロバリン、４，４，４，４’，４’，４’−ヘキサフルオロバリン、ペンタフルオロフェニルアラニン、２，３−ジフルオロフェニルアラニン、２，４−ジフルオロフェニルアラニン、２，５−ジフルオロフェニルアラニン、２，６−ジフルオロフェニルアラニン、３，４−ジフルオロフェニルアラニン、３，５−ジフルオロフェニルアラニン、３，３−ジフルオロ−３−（４−フルオロフェニル）アラニン、２，３−ジフルオロフェニルグリシン、２，４−ジフルオロフェニルグリシン、２，５−ジフルオロフェニルグリシン、３，４−ジフルオロフェニルグリシン、４，４−ジフルオロエチルグリシン、４，４，４−トリフルオロエチルグリシンおよびヘキサフルオロノルロイシン）を意味する。

本発明の意味において、用語「ペプチド」とは、上に定義されるアミノ酸の配列を意味する。その配列は直鎖または環状であり得る。例えば、環状ペプチドは、配列内の２つのシステイン残基の間でのジスルフィド結合の形成によって生じ得る。もう１つの例において、環状ペプチドは、そのＮ末端−およびそのＣ末端−部分の間での、またはアミノ酸ＡｓｐおよびＬｙｓの側鎖の間でのアミン結合の形成によって生じ得る。ペプチドを環化するためおよび固体支持体を用いて環状ペプチドを得るための技術は、当業者には周知である。

カップリング工程（ａ２）および／または（ｃ２）は、ジメチルホルムアミドなどの溶媒中ジイソプロピルエチルアミンの存在下でＯ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルホスホニウムヘキサフルオロホスフェート活性化の下で行われ得る。

もう１つの好ましい実施形態では、カップリング工程（ａ２）および／または（ｃ２）は、アミノ酸エピマー化を回避するために、ジメチルホルムアミドなどの溶媒中２，４，６ トリメチルピリジンの存在下でＮ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル−メチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド活性化の下で行われる。

開裂工程（ｅ２）は、酸性条件下で（例えば、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を、好ましくは１〜１００％、より好ましくは１０〜１００％の間の用量で、または酢酸（ＡｃＯＨ）を、好ましくは１０〜１００％の間の用量で用いてなど）行われ得る。

好ましくは、本発明による逆方向のＮからＣへのペプチド合成方法は、工程（ｅ２）の前または後に、ペプチド鎖のアミノ酸側鎖を脱保護しかつ／またはペプチド鎖をＣＯＯ脱保護するさらなる工程（ｆ２）を含んでなる。

さらに、本発明による逆方向のＮからＣへのペプチド合成方法は、ペプチド鎖を精製する最終工程をさらに含んでよい。精製に用いられる技術は、当業者には周知である（高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、など．．．）。

逆方向のＮからＣへのペプチド合成方法を用いて得ることができるペプチド鎖の例は、ＣＯＯ保護ジペプチドＨ−Ａｉｂ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ（Ａｉｂ＝アミノ−イソ酪酸、Ｐｈｅ＝フェニルアラニン、Ｍｅ＝メチル）およびＨ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ（Ｌｅｕ＝ロイシン）である（下記の実施例のパートＩＩＩ．３および合成スキーム番号５参照）。

さらなる態様において、本発明は、以下の連続的工程：
（ａ３）本発明による式（Ｉ）の固相−リンカー組合せとカップリングされたＮ保護およびＣＯＯ保護アミノ酸を得るために、その固相リンカー組合せと、側鎖がヒドロキシル基、アミン基およびチオール基の中から選択される非保護基を担持するＮ保護およびＣＯＯ保護アミノ酸とをカップリングする工程、
（ｂ３）固相リンカー組合せへカップリングされたＮ脱保護ＣＯＯ保護アミノ酸を得るために、固相リンカー組合せへカップリングされたＣＯＯ保護アミノ酸をＮ脱保護する工程、
（ｃ３）固相リンカー組合せとカップリングされたＮ保護ＣＯＯ保護ペプチドを得るために、カップリングされたＮ脱保護ＣＯＯ保護アミノ酸と、アミノ酸側鎖の反応性官能基が保護されているＮ保護アミノ酸とをカップリングする工程、
（ｄ３）工程（ｃ３）において得られたカップリングされたＣＯＯ保護ペプチドをＮ脱保護する工程、
（ｅ３）所望により、ペプチド鎖を担持している式（Ｉ）の固相リンカー組合せを得るために、必要なだけ工程（ｃ３）および（ｄ３）を繰り返す工程、
（ｆ３）式（Ｉ）の固相リンカー組合せおよびペプチド鎖を回収するために、固相リンカー組合せとペプチド鎖との結合を開裂する工程
を含んでなるＣからＮへのペプチド合成方法に関する。

本発明において用いられる用語「Ｎ保護基」とは、合成手順の間に望ましくない反応からアミノ基を保護することを目的とする基を指す。よく用いられるＮ保護基は、Greene、"Protective Groups In Organic Synthesis", (John Wiley & Sons, New York (1981))において開示されている。Ｎ保護基は、カルバメート、アミド、Ｎ−アルキル誘導体、アミノアセタール誘導体、Ｎ−ベンジル誘導体、イミン誘導体、エナミン誘導体およびＮ−ヘテロ原子誘導体を含んでなる。特に、Ｎ保護基としては、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、フェニルスルホニル、ベンジル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、トリクロロエトキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アセチルなどが挙げられる。

好ましくは、Ｎ保護アミノ酸のＮ保護基はＦｍｏｃであり、Ｎ脱保護工程は、ジメチルホルムアミド／ピペリジン溶液を用いて行われる。

好ましくは、カップリング工程（ａ３）および／または（ｃ３）は、ジメチルホルムアミドなどの溶媒中ジイソプロピルエチルアミンの存在下でＯ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルホスホニウムヘキサフルオロホスフェート活性化の下で行われる。

好ましくは、本発明によるＣからＮへのペプチド合成方法は、工程（ｆ３）の前または後に、ペプチド鎖のアミノ酸側鎖を脱保護しかつ／またはペプチド鎖のＣＯＯ脱保護するさらなる工程（ｇ３）を含んでなる。ペプチド鎖のＣＯＯ脱保護は、テトラヒドロフランなどの溶媒中ＬｉＯＨの溶液での鹸化により行われ得る。

また好ましくは、ＣからＮへのペプチド合成方法は、側鎖が工程（ａ３）の非保護基を担持するＮおよびＣＯＯ保護アミノ酸が、
−ヒドロキシル基を担持するＮ保護およびＣＯＯ保護トレオニン、セリンおよびチロシン、
−アミン基を担持するＮ保護およびＣＯＯ保護リジン、オルニチン、ジアミノ酪酸およびジアミノプロピオン酸、および
−チオール基を担持するＮ保護およびＣＯＯ保護システイン、
−ＮおよびＣＯＯ保護アミノ酸トリプトファンおよびアルギニン
：からなる群から選択されるものである。

ＣＯＯ保護アミノ酸は上記に定義される通りである。有利には、ＣＯＯ保護アミノ酸のＣＯＯ保護基は（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、有利にはメチルである。

また有利には、Ｎ保護アミノ酸のＮ保護基はＦｍｏｃであり、Ｎ脱保護工程は、ジメチルホルムアミド／ピペリジン溶液を用いて行われる。

開裂工程（ｆ３）は、酸性条件下で（例えば、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を、好ましくは１〜１００％、より好ましくは１０〜１００％の間の用量で、または酢酸（ＡｃＯＨ）を、好ましくは１０〜１００％の間の用量で用いてなど）行われ得る。

さらに、本発明によるＣからＮへのペプチド合成方法は、ペプチド鎖を精製する最終工程をさらに含んでよく、精製に使用される技術は当業者には周知である。

ＣからＮへのペプチド合成方法を用いて得ることができるペプチド鎖の例は、Ｎ保護およびＣＯＯ保護ジペプチドＦｍｏｃ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ（Ａｌａ＝アラニン、Ｓｅｒ＝セリン）、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−ＯＭｅ（Ｔｙｒ＝チロシン）およびＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−ＯＭｅである（下記の実施例のパートＩＩＩ．５、合成スキーム番号７参照）。

さらなる態様において、本発明は、以下の連続的工程：
（ａ４）式

（式中、

、Ｘ、Ｒ_１およびＲ_４は上記に定義される通りである）
の固相リンカー組合せを得るために、式

（式中、Ｒ_４は、反応性官能基が保護されているアミノ酸の側鎖を表す）
の化合物と、
本発明による式（Ｉ）の固相リンカー組合せとをカップリングする工程、
（ｂ４）式

（式中、

、Ｘ、Ｒ_１およびＲ_４は上記に定義される通りである）
の固相リンカー組合せを得るために、工程（ａ４）において得られた式（ＶＩＩＩ）の固相リンカー組合せを処理する工程、
（ｃ４）式（ＩＸ）の固相リンカー組合せへカップリングされたＮ保護アミノ酸を得るために、工程（ｂ４）において得られた式（ＩＸ）の固相リンカー組合せと、アミノ酸側鎖の反応性官能基が保護されているＮ保護アミノ酸とをカップリングする工程、
（ｄ４）所望により、カップリングされたアミノ酸をＮ脱保護する工程、
（ｅ４）所望により、式（ＩＸ）の固相リンカー組合せとカップリングされたＮ保護ペプチドを得るために、工程（ｄ４）のＮ脱保護されたカップリングされたアミノ酸と、アミノ酸側鎖の反応性官能基が保護されているＮ保護アミノ酸とをカップリングする工程、
（ｆ４）所望により、レトロインベルソ型ペプチド鎖を担持している式（Ｉ）の固相リンカー組合せを得るために、必要なだけ工程（ｄ４）および（ｅ４）を繰り返す工程、
（ｇ４）式（Ｉ）の固相リンカー組合せおよびペプチド鎖を回収するために、固相リンカー組合せとペプチド鎖との結合を開裂する工程
を含んでなるレトロインベルソ型ペプチド合成方法に関する。

Ｎ保護基は上記に定義される通りである。有利には、Ｎ保護アミノ酸のＮ保護基はＦｍｏｃであり、Ｎ脱保護工程は、ジメチルホルムアミド／ピペリジン溶液を用いて行われる。

好ましくは、カップリング工程（ａ４）および／または（ｃ４）および／または（ｅ４）は、ジメチルホルムアミドなどの溶媒中ジイソプロピルエチルアミンの存在下でＯ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルホスホニウムヘキサフルオロホスフェート活性化の下で行われる。

有利には、工程（ｂ４）は、ジメチルホルムアミド／水溶液などの溶液中ビストリフルオロアセトキシヨードベンゼンおよびピリジンでの処理により行われる。

また有利には、本発明によるレトロインベルソ型ペプチド合成方法は、工程（ｇ４）の前または後に、ペプチド鎖のアミノ酸側鎖を脱保護しかつ／またはペプチド鎖をＮ脱保護するさらなる工程（ｈ４）を含んでなる。

開裂工程（ｇ４）は、酸性条件下で（例えば、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を、好ましくは１〜１００％、より好ましくは１０〜１００％の間の用量で、または酢酸（ＡｃＯＨ）を、好ましくは１０〜１００％の間の用量で用いてなど）行われ得る。

さらに、本発明によるレトロインベルソ型ペプチド合成方法は、ペプチド鎖を精製する最終工程をさらに含んでよい。

レトロインベルソ型ペプチド合成方法を用いて得ることができるレトロインベルソ型ペプチド鎖の例は、Ｎ保護擬ジペプチドＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−ｇ−ＤＬｅｕ−Ｈである（下記の合成スキーム番号６のパートＩＩＩ．４参照）。

本発明は、以下の限定されない実施例および図面においてさらに具体化される。

本発明においては、次の略語が用いられる：ＡＭ−ＰＳ、アミノメチルポリスチレン；ＢＡＬ、主鎖アミドリンカー；ＢＯＰ、Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１、１，３，３−テトラメチルホスホニウムヘキサフルオロホスフェート；ＢＴＩＢ、ビストリフルオロアセトキシヨードベンゼン；ＤＣＭ、ジクロロメタン；ＤＩＣ、ジイソプロピロカルボジイミド(diisopropylocarbodiimide)；ＤＣＣ、ジシクロヘキシルカルボジイミド；ＥＤＣ、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド；ＤＩＥＡ、ジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＦ、ジメチルホルムアミド；ＰｙＢｏｐ、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート；ＰｙＢｒｏｐ、ブロモ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート；ＨＢＴＵ、Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート；ＨＡＴＵ、Ｎ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル−メチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド；ＨＭＢＡ、ヒドロキシメチルベンズアミドリンカー；ＨＯＢＴ、ヒドロキシベンゾトリアゾール；ＨＯＡｔ、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、ＨＰＬＣ、高速液体クロマトグラフィー；ＬＣ／ＭＳ、タンデム液体クロマトグラフィー／質量分析；Ｐｉｐ、ピペコリン酸リンカー；ＰＳ、ポリスチレン；ＳＰＰＳ、固相ペプチド合成；ＴＥＡ、トリエチルアミン；ＮＭＭ、Ｎ−メチルモルホリン；ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸；ＴＨＦ、テトラヒドロフラン；ＴＩＳ、トリイソプロピルシラン；ＴＭＰ、２，４，６ トリメチルピリジン；ＴＮＢＳ、トリニトロベンゼンスルホン酸；用いられた他の略語は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ委員会により勧告されているものであった(Eur. J. Biochem. 1984, 138, 9-37)。

１％ＤＶＢと架橋された市販のアミノメチル−ＰＳ樹脂（１００〜２００メッシュ、１．３ｍｍｏｌ／ｇ担持）は、Senn Chemicalsから購入した。活性化試薬はSenn社のものであり、他の試薬はAcros社およびLancaster社のものであった。アミノ酸誘導体はIris Biotech社のものであった。

リンカー調製の総ての段階は比色試験によりモニタリングした。加えて、樹脂ビーズ上でＩＲ分光を実施した。

以下の実施例では、用いられるピペコリン酸リンカー（Ｐｉｐ）はＲ_１＝シクロヘキシルを含む。

Ｉ−ピペコリン酸リンカー固体支持体の調製
ピペコリン酸リンカー固体支持体の調製は、以下の合成スキーム番号１において開示される通りである：

シクロヘキサン−１，４−ジカルボン酸を、アミノメチルポリスチレン樹脂とピペコリン酸との間のスペーサーとして用いた。ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中でカップリング混合物としてジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）およびヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を用いて１２時間、シクロヘキサン−１，４−ジカルボン酸をアミノメチルポリスチレン樹脂（Ｂ）（理論的担持：１．２ｍｍｏｌ／ｇ）へカップリングした。アシル化の有効性は、カイザー試験およびＴＮＢＳ試験によりモニタリングした。無水酢酸を用いることにより未反応のアミノ官能基をキャッピングした後、ピペコリン酸メチルエステルを固体支持体（Ｃ）へアンカリングした。反応は、ＤＭＦ中トリエチルアミン（ＴＥＡ）の存在下でＢＯＰにより促進されるアミドカップリングの下で２時間実施した。

アシル化をもう一度１時間繰り返し、遊離カルボン酸官能基が存在しないことをマラカイトグリーン試験により確認した(Attardi et al., 2000)。得られた樹脂（Ｄ）を次いで、実験室で事前に最適化されたプロトコールを用いることにより加水分解し(Cantel et al., 2003)、ピペコリン酸アミノメチルポリスチレン樹脂、すなわち、ｐｉｐ−ＡＭ−ＰＳ（Ａ）を得た。固体支持体上でのメチルエステル加水分解は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中２Ｎ ＬｉＯＨ溶液での樹脂の処理を含む(Cantel et al., 2004)。

加えて、前記樹脂へ取り付けられた新たなハンドルの存在もＩＲ分光分析を用いることにより確認した（スペクトルは示していない）。最初のアッセイは、通常のアミノメチル化ＰＳ樹脂（赤）を用いて実施し、その後ピペコリン酸リンカーにより得られたＰＳ樹脂（黒）を用いて実施した。出発樹脂のスペクトルは、ＣＨ、ＣＨ_２伸縮モードを表す３０５８〜２８５７ｃｍ^−１の間に現われるポリスチレンピークから主として起こるピークで構成された。アミノ基は、遊離第一級アミノ官能基から起こるおよそ３４００〜３３２７ｃｍ^−１のバンドを生み出した。後者のバンド範囲はピペコリン酸のカルボキシル官能基の遊離ヒドロキシル基の特徴を示したが、ピペコリン酸樹脂のスペクトルではおよそ１７１７〜１７００ｃｍ^−１のバンドはカルボン酸官能基のカルボニル基に起因するものであった。さらに、アミド基から起こるカルボニル基も１６４１ｃｍ^−１で観察できた。興味深いことに、ピペコリン酸リンカー官能基化ＰＳ樹脂のスペクトルでは、１６０２ｃｍ^−１のＮＨバンドの消失が観察された。

シクロヘキサン１，４−ジカルボン酸の取り付け
シクロヘキサン１，４−ジカルボン酸（３０．０ｍｍｏｌ、５当量）およびＨＯＢｔ（３０．０ｍｍｏｌ、５当量）を２０ｍＬのＤＭＦに溶解させ、その後ＤＩＣ（３０．０ｍｍｏｌ、５当量）を加え、混合物を１０分間穏やかに攪拌した。次いで、それを５ｇのアミノメチル−ＰＳ樹脂（（Ｂ）、これは式（Ｖ）の官能基化固体支持体（式中、ｐｒｅＸはＮＨ_２である）に相当する）に加え（１．３ｍｍｏｌ／ｇ）、ＤＣＭで予備膨潤させ、反応混合物を６時間穏やかに振盪した(shacken)。濾過後、その樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨ、およびＤＣＭで洗浄し、真空下、室温で乾燥させた。カップリング効率はカイザー試験およびＴＮＢＳ試験により確認した。最後に、その樹脂をＡｃ_２Ｏ／ＤＣＭ（５０／５０ ｖ／ｖ）の混合物で処理し、ＤＣＭで３回洗浄し、樹脂（（Ｃ）、式（ＩＩＩ）（式中、Ｘ＝−ＮＨ−ＣＯ−、Ｒ_１＝シクロヘキシル）の化合物に相当）を得た。

ピペコリン酸メチルエステルの取り付け
ＤＩＥＡ（３０ｍｍｏｌ、５当量）の存在下で活性化剤としてＢＯＰ（１２ｍｍｏｌ、２当量）およびＨＯＢｔ（１２ｍｍｏｌ、２当量）を用いてピペコリン酸メチルエステルヒドロクロリド（２．３３ｇ、２当量）を樹脂へカップリングした。その反応混合物を２時間反応させ、そのプロセスをもう一度繰り返した。最後に、その樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨ、およびＤＣＭで洗浄し、樹脂（（Ｄ）、式（ＩＩ）（式中、Ｘ＝−ＮＨ−ＣＯ−、Ｒ_１＝シクロヘキシルおよびＲ_３＝メチル）の化合物に相当）を得た。

ピペコリン酸メチルエステルの加水分解
ピペコリン酸誘導体結合樹脂（Ｄ）のメチルエステルを２Ｍ水酸化リチウム水溶液およびテトラヒドロフラン ３０／７０（ｖ／ｖ）の混合物中で室温で１２時間加水分解した。樹脂（Ｄ）をＨ_２Ｏ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭで洗浄し、ピペコリン酸ＡＭ ＰＳ樹脂（（Ａ）、式（Ｉ）（式中、Ｘ＝−ＮＨ−ＣＯ−およびＲ_１＝シクロヘキシル）の化合物に相当）（計算担持０．９１ｍｍｏｌ／ｇ）を得た。

ＩＩ−「樹脂上での」メチルエステル加水分解の実施例
Ｐｉｐ−ＡＭ−ＰＳ樹脂結合アミノ酸メチルエステル（１ｇ）を５ｍＬの、２Ｍ ＬｉＯＨ水溶液およびテトラヒドロフラン（３０／７０、ｖ／ｖ）の混合物で処理した。その反応器を室温で１２時間振盪し、その樹脂をＨ_２Ｏ（３×）、ＴＨＦ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、ＤＣＭ（２×）で洗浄し、最後に真空下で乾燥させた。

ＩＩＩ−応用研究
以下の合成スキーム番号２に、固体支持体がポリスチレン支持体であり、Ｘが−ＮＨ−ＣＯ−であり、Ｒ_１がシクロヘキシルであるピペコリン酸リンカー固体支持体（Ａ）の一般的使用を開示する：

ＩＩＩ．ｌ初期担持決定
ｐｉｐ−ＡＭ−ＰＳ樹脂（Ａ）を用いる担持実験の実施前に、本発明者らはピペコリン酸リンカー調製に用いられるアミノメチル樹脂の実験的担持を決定した：

Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨは市販のアミノメチルポリスチレン樹脂（ＡＭ−ＰＳ樹脂（Ｂ）、理論的担持＝１．２ｍｍｏｌ／ｇ）へ容易にカップリングされた。その反応は、ＤＭＦ中でジイソプロピロカルボジイミド（ＤＩＣ）およびヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を用いる二重カップリングにより実施した。アシル化の有効性は、カイザー試験およびＴＮＢＳ試験陰性により確認した。Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＡＭ−ＰＳ樹脂の最大理論的担持は、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨカップリングによって生じる理論的質量増分に基づき、式によって計算した：１．２／［１＋（１．２×０．２９４）］＝０．８９ｍｍｏｌ／ｇ。実験的担持は、樹脂担持決定のための標準的なプロトコールに従い、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＡＭ−ＰＳ樹脂からＦｍｏｃ開裂により解離されたジベンゾフルベンの３回の連続するＵＶ滴定の平均（質量増分＝２９４ｇ／ｍｏｌ）により決定した。この実験値は理論値０．８９ｍｍｏｌ／ｇに等しい（表１）。

合成スキーム番号１（実施例のパートＩ）に記載されているプロトコールに従いＡＭ−ＰＳ樹脂（Ｂ）において調製されたｐｉｐ−ＡＭ−ＰＳ樹脂（Ａ）の担持を決定するために、同じ種類の実験を実施した。ＤＭＦ中でＤＩＥＡの存在下でＢＯＰ活性化を用いて２時間、Ｆｍｏｃ−１−アミノ−３−アミノプロパンをピペコリン酸樹脂（Ａ）へカップリングした。カップリング反応の有効性は、マラカイトグリーン比色試験により確認し(Attardi et al., 2000)、樹脂ビーズにおけるカルボン酸官能基の消失を調べた。ピペコリン酸リンカーおよびＦｍｏｃ−１−アミノ−３−アミノプロパンの分子量（質量増分＝５４４ｇ／ｍｏｌ）を含む樹脂２の理論的担持は、式に基づいて計算した：１．２／［１＋（１．２×０．５４４）］＝０．７３ｍｍｏｌ／ｇ。Ｆｍｏｃ滴定により樹脂２について担持を決定し、０．７３ｍｍｏｌ／ｇの値を得た。これはリンカー合成およびアミンアンカリングが定量的であったということを示す。

担持決定実験によれば、ピペコリン酸リンカーの調製は定量的である。ｐｉｐ−ＡＭ−ＰＳ樹脂（Ａ）の担持は、ＡＭ−ＰＳ樹脂からのピペコリン酸リンカー（２６６ｇ／ｍｏｌ）の質量増分（１．２ｍｍｏｌ／ｇ）によって計算することができる１．２／［１＋（１．２×０．２６６）］＝０．９１ｍｍｏｌ／ｇ。

表１．担持決定（Ｆｍｏｃ滴定）

ＩＩＩ．２ アミンアンカリング

ピペコリン酸リンカーはまず、様々なアミンまたはアルコール構成単位をそれぞれアミドまたはエステル結合の形成によりアンカリングするように設計されたため、いくつかのアッセイを実施しその多用途性を調べた。まず、いくつかのカップリング試薬を使用することにより、リンカーに対して安定な実験条件で、いくつかのモデルアミンを支持体へアンカリングしようとする試みおよびそれらのその後の修飾に取り組んだ。モデル第一級アミンとしてＦｍｏｃ−１−アミノ−３−アミノプロパンを、モデル第二級アミンとしてピペラジンを、モデル芳香族アミンとして２−アミノ安息香酸メチルを選択した。さらに、アラニン、フェニルアラニン、およびアミノイソ酪酸のアミノ酸メチルエステルも用い、ペプチド化学分野におけるピペコリン酸リンカーの有用性を立証した。９０分のＴＦＡ開裂により解離された化合物の純度は、ＨＰＬＣ分析の積分ピークの相対面積（２００〜２７０ｎｍの間の吸光度の和）によって決定した。収率は、樹脂から解離された生成物の計量によって決定した（下の表２）。

実施例１−第一級アミン（Ｈ−ＰＨＥ−ＯＭＥ）のＰＩＰ−ＡＭ−ＰＳ樹脂への取り付けおよびこの第一級アミンの回収
ピペコリン酸ＡＭ−ＰＳ樹脂（Ａ）（２００ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ、０．９１ｍｍｏｌ／ｇ）を、ＢＯＰ（２３９ｍｇ、１００ｍＭ、５４０μｍｏｌ、３当量）、ＤＩＥＡ（１４０ｍｇ、１８８μｌ、２００ｍＭ、１．０８ｍｍｏｌ、６当量）、およびＨ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ（９７ｍｇ、１００ｍＭ、５４０μｍｏｌ、３当量）を含有するＤＭＦカップリング溶液５．４ｍＬで膨潤させた。その樹脂を２時間穏やかに攪拌し、その後ＤＭＦ（３×）、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（２×）で洗浄した。その樹脂を穏やかに攪拌しながらＴＦＡで９０分間開裂した。樹脂を濾過し、ＴＦＡ溶液を窒素下で蒸発させた。その残渣をアセトニトリル／水 １／１溶液に溶解させ、凍結乾燥させた。凍結乾燥後、ＴＦＡ塩として２５．６ｍｇ（収率４８％、純度９８％）の化合物５を得、ＬＣ／ＭＳおよびＨＰＬＣ分析に供した（ＲＴ＝０．７０分、ＭＳ ＥＳＩ＋［Ｍ＋Ｈ］^＋ｍ／ｚ＝１８０．３）。

実施例２−芳香族アミン（２−アミノ安息香酸メチル）のＰＩＰ−ＡＭ−ＰＳ樹脂への取り付けおよびこの芳香族アミンの回収
ピペコリン酸ＡＭ−ＰＳ樹脂（Ａ）（２００ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ、０．９１ｍｍｏｌ／ｇ）を、ＨＡＴＵ（２７６ｍｇ、１３５ｍＭ、７３０μｍｏｌ、４当量）、ＴＭＰ（１７７ｍｇ、１９４μｌ、２７０ｍＭ、１．４６ｍｍｏｌ、８当量）、および２−アミノ安息香酸メチル（８１ｍｇ、６９μｌ、１３５ｍＭ、７３０μｍｏｌ、４当量）を含有するＤＭＦカップリング溶液５．４ｍＬで膨潤させた。

その樹脂を２時間穏やかに攪拌し、その後ＤＭＦ（３×）、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（２×）で洗浄した。その樹脂を穏やかに攪拌しながらＴＦＡで９０分間開裂した。樹脂を濾過し、ＴＦＡ溶液を窒素下で蒸発させた。その残渣をアセトニトリル／水 １／１溶液に溶解させ、凍結乾燥させた。凍結乾燥後、ＴＦＡ塩として２２．６ｍｇ（収率４７％、純度９７％）の化合物８を得、ＬＣ／ＭＳおよびＨＰＬＣ分析に供した（ＲＴ＝０．７２分、ＭＳ ＥＳＩ＋［Ｍ＋Ｈ］^＋ｍ／ｚ＝１５２．３）。

実施例３−化合物７、ピペラジン−１−イル Ｍ−トリルメタノンの調製
ピペコリン酸ＡＭ−ＰＳ樹脂（Ａ）（１００ｍｇ、９１μｍｏｌ、０．９１ｍｍｏｌ／ｇ）を、ＢＯＰ（１１９ｍｇ、１００ｍＭ、２７０μｍｏｌ、３当量）、ＤＩＥＡ（７０ｍｇ、９４μｌ、２００ｍＭ、５４０μｍｏｌ、６当量）、およびピペラジン（２１μｌ、２３ｍｇ、１００ｍＭ、２７０μｍｏｌ、３当量）を含有するＤＭＦカップリング溶液２．７ｍＬで膨潤させた。その樹脂を２時間穏やかに攪拌し、その後ＤＭＦ（３×）、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（２×）で洗浄し、ピペラジン担持固相を得た。次いで、その樹脂を、ｍ−トルオイルクロリド（５６ｍｇ、４８μｌ、１３５ｍＭ、３６５μｍｏｌ、４当量）およびＤＩＥＡ（１２７μｌ、９４ｍｇ、２７０ｍＭ、７３０μｍｏｌ、８当量）を含有するＤＣＭ溶液２．７ｍＬ中で２時間穏やかに振盪した。樹脂をＤＭＦ（３×）、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（２×）で洗浄し、穏やかに攪拌しながらＴＦＡで９０分間開裂した。樹脂を濾過し、ＴＦＡ溶液を窒素下で濃縮した。その残渣をアセトニトリル／水 １／１溶液に溶解させ、凍結乾燥させた。凍結乾燥後、ＴＦＡ塩として１１．８ｍｇ（収率４１％、純度９８％）の化合物７を得、ＬＣ／ＭＳおよびＨＰＬＣ分析に供した（ＲＴ＝０．５４分、ＭＳ ＥＳＩ＋［Ｍ＋Ｈ］^＋ｍ／ｚ＝２０５．１）

表２．ピペコリン酸リンカー開裂の結果

第二級および第一級アミン（アミノ酸メチルエステルを含む）は、ＤＭＦ中でＤＩＥＡの存在下でＢＯＰ活性化を用いて支持体へ容易にカップリングされ、低〜高収率であった。解離された化合物の純度は非常に高かった。モデル第一級芳香族アミン、２−アミノ安息香酸メチルの場合、このような活性化により得られた収率は中程度であった（１２％収率）。本発明者らは他のカップリング試薬を調査する。最も効率的な方法は、ジメチルホルムアミド中２，４，６ トリメチルピリジン（ＴＭＰ）の存在下でのＮ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル−メチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）活性化であり、収率が５１％まで向上することを見出した（純度９９％）。

注目すべきは、ピペコリン酸リンカーを用いて、嵩高いα−アミノ−イソ酪酸メチルエステル（Ｈ−Ａｉｂ−ＯＭｅ）を簡単なＢＯＰ活性化の下で支持体へ取り付けることに成功し（化合物６）、収率は３４％であったことである。より一般的には、ピペコリン酸リンカーの使用により、トリチルリンカーと比較してアミンの樹脂アンカリングが大幅に向上した。例として、２−クロロクロロトリチルＰＳ樹脂（１．６ｍｍｏｌ／ｇ）から出発して(Barlos et al., 1988; Bernhardt et al., 1997)、アミノ酸側鎖（Ｏｒｎ、Ｌｙｓ）の第一級アミンの担持は０．３ｍｍｏｌ／ｇ未満であった。

ＩＩＩ．３ 逆方向のＮからＣへのペプチド合成への応用
以下の合成スキーム番号５に、ピペコリン酸固体支持体上での逆方向のＮからＣへのＳＰＰＳを開示する：

本発明者らは、ピペコリン酸リンカーをＮからＣへの逆方向固相ペプチド合成へ応用する可能性を調査した。このアプローチを実施するためには、ピペコリン酸リンカーはＣ末端保護除去の間安定していなければならない。この重要な側面を調べるために、固相に担持されたＡｉｂおよびＬｅｕメチルエステルを、ＴＨＦ中２Ｎ ＬｉＯＨでの鹸化に供し、その後、これまでに記載されている標準的なＢＯＰ／ＤＩＥＡ活性化プロトコールを用いてＨ−Ｐｈｅ−ＯＭｅへカップリングした。通常、カップリング反応の有効性はマラカイトグリーン比色試験を用いることにより確認した。

ジペプチド９および１０、それぞれＨ−Ａｉｂ−Ｐｈｅ−ＯＭｅおよびＨ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ＯＭｅは、９０分間のＴＦＡ処理後に高収率および純度で得られた（表２）。予想どおり、アミノ酸鎖のＮ末端からＣ末端への伸長では、ジペプチド１０のキラル完全性を失う結果となった。実際、支持体へ取り付けられたロイシン残基は、ピペコリン酸ハンドル−アミド結合からの酸素が活性化カルボン酸官能基を攻撃することによるオキサゾロニウムイオン(oxazolonium ion)形成により容易にエピマー化された。そのため、ＢＯＰ／ＤＩＥＡ活性化を用いる、樹脂に結合されたロイシンのＨ−Ｐｈｅ−Ｏｍｅへのカップリングの場合、ＨＰＬＣ分析により示されるように、完全なエピマー化が起こった（５０／５０）。注目すべきは、逆方向のＳＰＰＳ活性化中のエピマー化現象は他の著者らによりこれまでに調査されているということである。カップリングプロトコールまたはカップリング試薬のいずれかがエピマー化率に影響を及ぼすことが分かった。本研究の目的はラセミ化しない方法を決定することではなかったが、本発明者らは、ＤＭＦ中ＴＭＰの存在下でＨＡＴＵ（ラセミ化を最小限に抑えることがすでに記載されている条件）を用いた(Gutheil, W. G.; Xu, Q. In PCT Int. Appl; (The Curators of the University of Missouri, USA). Wo, 2002, p 30 pp ; Johansson, A.; Akerblom, E.; Ersmark, K.; Lindeberg, G.; Hallberg, A. Journal of Combinatorial Chemistry 2000, 2, 496-507)。この場合、エピマー化率は、ジペプチドＨ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ＯｍｅのＨＰＬＣ分析によれば１０％未満であった。

ＩＩＩ．４ 擬ペプチド化学：固体支持体上でのｇｅｍ ジアミノ誘導体の合成
以下の合成スキーム番号６に、ピペコリン酸固体支持体を用いるＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−ｇ−ＤＬｅｕ−Ｈの合成を開示する：

ピペコリン酸リンカー戦略は、ホフマン転位に関する一般概念に従ってｇｅｍ−ジアミノ誘導体の固相合成にも応用された。この戦略の固相担持化学への適合は、溶液中で不安定なｇｅｍ−ジアミノ誘導体の単調で退屈な調製を回避しレトロインベルソ型またはレトロ型ペプチドを簡単な方法で合成することができることから、非常に興味深い(Cantel et al., 2003)。この目的で、本発明者らは擬−ジペプチド１１、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ｇ−ＤＬｅｕ−Ｈを合成することに決めた。

Ｈ−Ｌｅｕ−ＮＨ_２を標準的なＢＯＰ／ＤＩＥＡ活性化によってピペコリン酸ハンドルへカップリングした。ＤＭＦ／水溶液中ＢＴＩＢ（ビストリフルオロアセトキシヨードベンゼン）およびピリジンでの処理により、アミド結合によって固体支持体上にアンカリングされたロイシンのｇｅｍ ジアミノ酸誘導体を得た。次に、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨとのカップリングにより、固体支持体へアンカリングされた擬ジペプチドを得た。ＴＦＡの媒介による開裂により、４６％収率および９２％純度で擬−ジペプチド１１（Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ｇ−ＤＬｅｕ−Ｈ）が解離された。この戦略はレトロインベルソ型およびインベルソ型ペプチドの合成に新たな道を開き、ｇｅｍ ジアミノ酸の支持体上での作製および取扱いを著しく容易にする。Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ｇ−Ａｉｂ−Ｈを作製するために同じ順序を調査した。Ａｉｂなどの立体障害作用を示すアミノ酸ではホフマン転位を受けることが困難なため、観察された純度はたった５０％であった。

実施例４−ＰＩＰ−ＡＭ−ＰＳ樹脂上でのＧＥＭ−ジアミノ誘導体１１、ＦＭＯＣ−ＰＨＥ−Ｇ−ＤＬＥＵ−Ｈの調製。
ピペコリン酸ＡＭ−ＰＳ樹脂（Ａ）（２５０ｍｇ、２２５μｍｏｌ、０．９１ｍｍｏｌ／ｇ）を、ＢＯＰ（２９８ｍｇ、１００ｍＭ、６７５μｍｏｌ、３当量）、ＤＩＥＡ（２３６ｍｇ、３１７μｌ、２００ｍＭ、１．８２ｍｍｏｌ、６当量）、およびＨ−Ｌｅｕ−ＮＨ_２（８８ｍｇ、１００ｍＭ、６７５μｍｏｌ、３当量）を含有するＤＭＦカップリング溶液６．７５ｍＬで膨潤させた。その樹脂を２時間穏やかに攪拌し、その後ＤＭＦ（３×）、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（２×）で洗浄した。次いで、その樹脂をピリジン（１４７μｌ、１４４ｍｇ、３６５ｍＭ、１．８２ｍｍｏｌ、８．１当量）およびＢＴＩＢ（１５７ｍｇ、７３ｍＭ、３６５μｍｏｌ、１．６２当量）を含有するＤＭＦ／Ｈ_２Ｏ（８０／２０、ｖ／ｖ）溶液５ｍＬで膨潤させ、１時間攪拌した。その後、その樹脂をＤＭＦ（３×）およびＤＣＭ（２×）で洗浄した。得られた樹脂を、ＢＯＰ（３９８ｍｇ、１５０ｍＭ、０．９ｍｍｏｌ、３当量）、ＤＩＥＡ（２３３ｍｇ、３１４μｌ、３００ｍＭ、１．８ｍｍｏｌ、６当量）およびＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ（３４９ｍｇ、１５０ｍＭ、０．９ｍｍｏｌ、３当量）を含有するＤＭＦカップリング溶液６ｍＬで膨潤させた。その樹脂を２時間穏やかに攪拌し、その後ＤＭＦ（３×）、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（２×）で洗浄した。樹脂を最後に穏やかに攪拌しながらＴＦＡで９０分間開裂した。樹脂を濾過し、ＴＦＡ溶液を窒素下で濃縮した。その残渣をアセトニトリル／水 １／１溶液に溶解させ、凍結乾燥させた。凍結乾燥後、ＴＦＡ塩として６０ｍｇ（収率４６％、純度９２％）の化合物１１を得、ＬＣ／ＭＳおよびＨＰＬＣ分析に供した（ＲＴ＝１．５２分、ＭＳ ＥＳＩ＋［Ｍ＋Ｈ］^＋ｍ／ｚ＝４７２．６）。

ＩＩＩ．５ アルコールアンカリング
ピペコリン酸ハンドルへのアミン構成単位の取り付けのために実施した簡単な反応順序に関して、本発明者らは、エステル結合によるアルコール誘導体の導入に類似反応条件を用いてよいことを記載した。概念実証として、本発明者らはリンカーへの取り付けを実施するためにアミノ酸側鎖を選択した。これらのアッセイではセリン側鎖の第一級アルコール官能基、トレオニンの第二級アルコールおよびチロシンのフェノール官能基を用いた。

表３．アルコール側鎖アンカリング後の担持決定（Ｆｍｏｃ滴定）

ピペコリン酸リンカー上へのアルコール固定化の可能性を立証することとは別に、この側鎖アンカリング戦略は、環状ペプチドを作製しまたはＦｍｏｃまたはＡｌｌｏｃ−化学を用いてＣ末端修飾ペプチドを得るためにも興味深い。このアプローチを調べるために、側鎖にグラフト化されたアミノ酸において脱保護／カップリングステップのサイクルを実施した。以下の合成スキーム番号７に、ピペコリン酸リンカー固体支持体上へのモデルアルコールのアンカリングを開示する：Ｔｈｒ、ＳｅｒおよびＴｙｒの側鎖。

ピペコリン酸ハンドルとアミノ酸の側鎖とのエステル結合は、９０分間のＢＯＰ／ＤＩＥＡカップリングを用いることにより形成された。Ｔｈｒ、ＳｅｒおよびＴｙｒ−官能基化樹脂それぞれについての樹脂１２、１４および１８のアリコートにおいてＦｍｏｃ滴定により担持を決定した（表３）。驚くべきことに、ＤＩＣ／ＤＭＡＰ活性化を用いることでは、ＢＯＰ／ＤＩＥＡの媒介によるエステル化よりも良い結果は得られなかった。一般的には、マラカイトグリーン試験陰性が認められた場合でも、Ｆｍｏｃ滴定結果によれば、アルコール固定化はアミン担持よりも効率が悪かった。特に、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＭｅおよびＦｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ側鎖のエステル化により得られた、樹脂１２および１４では、実験的担持はわずか０．３０ｍｍｏｌ／ｇおよび０．３２ｍｍｏｌ／ｇであった（すなわち、最大理論的担持０．７０ｍｍｏｌ／ｇに対して４３％および４４％収率）。この結果は、トリチル系樹脂上に第一級アルコールを担持することが困難である（理論的最大担持に対して２０％未満の実験的担持収率を与える）という観点から見なければならない(Barlos et al., 1988)。

担持決定後に、本発明者らは、側鎖にアンカリングされたＦｍｏｃアミノ酸上での連続的なＦｍｏｃ ＳＰＰＳの可能性を調べることに決めた。この目的で、樹脂１４および１８をＤＭＦ／ｐｉｐ ８／２溶液中でＦｍｏｃ脱保護に２０分間供し、その後ＢＯＰ／ＤＩＥＡ活性化を用いてＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨまたはＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨのいずれかとのカップリングステップを行った。続いて、ジペプチド１６、１７、２０、２１（それぞれ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−（ＯＨ）−ＯＭｅ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−（ＯＨ）−ＯＭｅ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ（ＯＨ）−ＯＭｅ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｔｙｒ（ＯＨ）−ＯＭｅ）を、ＴＦＡでの処理により固体支持体から開裂することに成功し、高純度および１５％収率であった。

ジペプチド１７（Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ）のジアステレオ異性体が同定された（＜１０％）が、これは恐らくピペコリン酸リンカー上へのＦｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＭｅのカップリング中のセリン残基のエピマー化により促進されるエノール化に起因した。セリンはエピマー化に対する感受性で周知である。固体支持体へ結合したチロシンの場合、エピマー化は観察されなかった。

実施例５−アルコール（ＦＭＯＣ−ＳＥＲ−ＯＭＥ）のＰＩＰ−ＡＭ−ＰＳ樹脂への取り付けおよびこのアルコールの回収
ピペコリン酸ＡＭ−ＰＳ樹脂（Ａ）（２００ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ、０．９１ｍｍｏｌ／ｇ）を、ＢＯＰ（２３９ｍｇ、１００ｍＭ、５４０μｍｏｌ、３当量）、ＤＩＥＡ（１４０ｍｇ、１８８μｌ、２００ｍＭ、５４０μｍｏｌ、６当量）およびＦｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ（１８４ｍｇ、１００ｍＭ、５４０μｍｏｌ、３当量）を含有するＤＭＦカップリング溶液５．４ｍＬで膨潤させた。その樹脂を２時間穏やかに攪拌し、その後ＤＭＦ（３×）、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（２×）で洗浄した。樹脂１４を穏やかに攪拌しながらＴＦＡで９０分間開裂した。樹脂を濾過し、ＴＦＡ溶液を窒素下で濃縮した。その残渣をアセトニトリル／水 １／１溶液に溶解させ、凍結乾燥させた。凍結乾燥後、１８．２ｍｇ（収率３０％、純度９７％）の化合物１５を得、ＬＣ／ＭＳおよびＨＰＬＣ分析に供した（ＲＴ＝１．３５分、ＭＳ ＥＳＩ＋［Ｍ＋Ｈ］^＋ｍ／ｚ＝３４２．０）

実施例６−側鎖によりリンカーへ結合されたアミノ酸のアシル化：ＣからＮへのジペプチド合成
樹脂１４（すなわち、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｐｉｐ−ＡＭ−ＰＳ樹脂）−ＯＭｅ）（１００ｍｇ、３２μｍｏｌ、０．３２ｍｍｏｌ／ｇ）を、ＢＯＰ（１１９ｍｇ、１００ｍＭ、２７０μｍｏｌ、８．４当量）、ＤＩＥＡ（７０ｍｇ、９４μｌ、２００ｍＭ、５４０μｍｏｌ、１６．８当量）、およびＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ（８４ｍｇ、１００ｍＭ、２７０μｍｏｌ、８．４当量）を含有するＤＭＦカップリング溶液２．７ｍＬで膨潤させた。その樹脂を２時間穏やかに攪拌し、その後ＤＭＦ（３×）、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（２×）で洗浄し、穏やかに攪拌しながらＴＦＡで９０分間開裂した。樹脂を濾過し、ＴＦＡ溶液を窒素下で濃縮した。その残渣をアセトニトリル／水 １／１溶液に溶解させ、凍結乾燥させた。凍結乾燥後、８．４ｍｇ（アシル化ステップ収率：６４％、全収率：１９％、純度９６％）のジペプチド１６を得、ＬＣ／ＭＳおよびＨＰＬＣ分析に供した。（ＲＴ＝１．２６分、ＭＳ ＥＳＩ＋［Ｍ＋Ｈ］^＋ｍ／ｚ＝４１２．９）。

この一連の実施例は活性化ピペコリン酸リンカー上でのアミンまたはアルコール担持の容易さ、および固相合成へのこの新しいリンカーの適応性を例示している。

ＩＩＩ．６ 開裂速度論研究
前記のアッセイにおいて用いた開裂手順は、側方アリールピペラジンシリーズライブラリー合成中の本発明者らの観察に基づき９０分間の１００％ＴＦＡ処理であった(Zajdel et al., 2004)。しかしながら、ピペコリン酸リンカーの酸感受性を調査するために、さらなる調査を実施した。アミド結合については樹脂２、エステル結合については樹脂１４および１８の開裂のために実験を計画した。

１００ｍｇの樹脂２、１４または１８を、次の開裂溶液：１００％ＴＦＡ、ＤＣＭ中１０％ＴＦＡ、ＤＣＭ中１％ＴＦＡ、９５％ＡｃＯＨ、およびＤＣＭ中１０％ＡｃＯＨのうちの１つが５ｍＬ入っているバイアルに注ぎ入れた。溶液（１００μｌ）のアリコートを異なる時点において２４時間採取し、ＨＰＬＣにより分析した。樹脂２から解離されたＦｍｏｃ−１−アミノ−３−アミノプロパン、樹脂１４から解離されたＦｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ（１５）、および樹脂１８からのＦｍｏｃ−Ｔｙｒ−ＯＭｅ（１９）に相当する３０１ｎｍにおけるピークの面積を測定し、データを収集した。図１〜３に曲線を報告する。

エステルおよびアミド結合は、酸性条件においてほぼ同じ挙動を示した。一般的に、ピペコリン酸リンカーは酸性条件において安定しない；すなわち、アミドおよびエステル結合のＴＦＡでの１時間の処理後にほぼ８０％の生成物が樹脂から解離され、一方、純ＴＦＡでの１２時間の処理後には生成物は支持体から遊離された。

１％ＴＦＡでも、１時間の処理後に１０％の量の生成物が支持体から解離されたため、結合は完全に安定しているわけではなかった。ＤＭＦ中１０％ＡｃＯＨの混合物での樹脂の１時間処理により、支持体へ取り付けられた７０％Ｎ−Ｆｍｏｃアミノ酸メチルエステルの開裂がもたらされたことも注目すべきである。驚くべきことに、９５％ＡｃＯＨでのアミド結合の１時間処理ではＮ−Ｆｍｏｃアミノ酸メチルエステルの２２％しか解離されなかった。１２時間および２４時間のさらなる処理により、それぞれ、化合物の６５％および８０％の開裂がもたらされた。これは恐らく純酢酸はＰＳ樹脂を十分に膨潤させないという事実のためであった。

ＩＶ：結論
この研究はピペコリン酸に基づく新しいリンカーの設計を提示する。酸処理においては、アミド結合またはエステルを開裂する、オキサゾリニウム−５−オン（ムンクノン(munchnone)）中間体が関与する機構により第一級アミンまたはアルコールが溶液中に解離される。本発明者らは、担持カルボン酸官能基の活性化によりアミンおよびアルコールをアンカリングするピペコリン酸リンカーの有効性を立証した。速度論的開裂研究は、Ｆｍｏｃに基づく保護戦略におけるトリチルリンカーの代替手段として用いることができるこのリンカーの酸不安定性を明確に示した。逆方向のＳＰＰＳ、擬ペプチド合成およびアミノ酸側鎖アンカリングの例は、この新しいリンカーの多用途性を示した。非常に簡単なアンカリング戦略に関して、ピペコリン酸ハンドルを介しての固体支持体への他の求核試薬の取り付け（attachment）を現在実験室で調査中である。
［参考文献］

アミド結合の開裂速度論、樹脂２。 エステル結合の開裂速度論 樹脂１４（Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ）。 エステル結合の開裂速度論 樹脂１８（Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ−ＯＭｅ）。

Claims (16)

1. 下記式：
   

   

   ［式中、
   

   

   は、有機合成において用いられる固体支持体を表し、
   Ｘは、存在しないか、または−ＮＲ_２−、−ＮＲ_２−ＣＯ−、−Ｓ−ＣＯ−、−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＲ_２−、−Ｓ−、−ＣＯ−Ｓ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＳＯ_２−ＮＲ_２−、もしくは−ＮＲ_２ＳＯ_２−（ここで、Ｒ_２は、Ｈまたは（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキルを表す）を表し（Ｘはスペーサーによって固体支持体から分離することができると理解される）、および
   Ｒ_１は、分枝（Ｃ_３−Ｃ_３０）アルキル基、分枝（Ｃ_３−Ｃ_３０）アルケニル基、分枝（Ｃ_３−Ｃ_３０）アルキニル基、（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式もしくは多環式シクロアルキル基、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式もしくは多環式シクロアルキル基、（Ｃ_２−Ｃ_６）アルケニル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式もしくは多環式シクロアルキル基、または（Ｃ_２−Ｃ_６）アルキニル−（Ｃ_４−Ｃ_１２）単環式もしくは多環式シクロアルキル基を表す］
   を有する固相−リンカー組合せ。
2. Ｘが、−ＮＨ−ＣＯまたは−ＣＯ−ＮＨ−である、請求項１に記載の式（Ｉ）の固相−リンカー組合せ。
3. 下記式：
   

   

   （式中、
   

   

   は請求項１に記載の通りである）、
   

   

   （式中、
   

   

   は請求項１に記載の通りである）、および
   

   

   （式中、
   

   

   は請求項１に記載の通りである）、
   から選択される式により表される、請求項１または２に記載の式（Ｉ）の固相−リンカー組合せ。
4. 下記式:
   

   

   （式中、Ｒ_１は請求項１に記載の通りであり、Ｒ_１は−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ_２ （ここで、Ｒ _２ は、Ｈまたは（Ｃ _１ −Ｃ _６ ）アルキルを表す）、−ＳＯ_２、−ＳＯ_３Ｈおよび−ＳＨから選択される官能基Ｙで官能基化されていてもよく、Ｒ_３はＯ保護基を表す）
   を有する化合物の固相リンカーとしての使用。
5. 第一級アミン、第二級アミン、芳香族アミン、アルコール、フェノールおよびチオールの間で選択される官能基のカップリングのための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の固相−リンカー組合せの使用。
6. 逆方向のＮからＣへのペプチド合成のため、またはＣからＮへのペプチド合成のため、または擬ペプチド合成もしくはレトロインベルソ型ペプチド合成のための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の固相−リンカー組合せの使用。
7. 小有機分子の合成のための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の固相−リンカー組合せの使用。
8. 逆方向のＮからＣへのペプチド合成方法であって、以下の連続的工程：
   （ａ２）請求項１〜３のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の固相リンカー組合せとカップリングされたＣＯＯ保護アミノ酸を得るために、その固相リンカー組合せと、アミノ酸側鎖の反応性官能基が保護されているＣＯＯ保護アミノ酸とをカップリングする工程、
   （ｂ２）固相リンカー組合せとカップリングされたアミノ酸をＣＯＯ脱保護する工程、 （ｃ２）固相リンカー組合せとカップリングされたＣＯＯ保護ペプチドを得るために、工程（ｂ２）において得られた固相リンカー組合せとカップリングされたＣＯＯ脱保護アミノ酸と、アミノ酸側鎖の反応性官能基が保護されているＣＯＯ保護アミノ酸とをカップリングする工程、
   （ｄ２）所望により、ペプチド鎖を担持している固相リンカー組合せを得るために、必要なだけ工程（ｂ２）および（ｃ２）を繰り返す工程、
   （ｅ２）式（Ｉ）の固相リンカー組合せおよびペプチド鎖を回収するために、固相リンカー組合せとペプチド鎖との結合を開裂する工程
   を含んでなる、方法。
9. 工程（ｅ２）の前または後に、ペプチド鎖のアミノ酸側鎖を脱保護する、および／またはペプチド鎖をＣＯＯ脱保護するさらなる工程（ｆ２）を含んでなる、請求項８に記載の逆方向のＮからＣへのペプチド合成方法。
10. カップリング工程（ａ２）および／または（ｃ２）が、アミノ酸エピマー化を回避するために、ジメチルホルムアミドなどの溶媒中２，４，６ トリメチルピリジンの存在下で、Ｎ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル−メチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド活性化の下で行われる、請求項８または９に記載の逆方向のＮからＣへのペプチド合成方法。
11. ＣからＮへのペプチド合成方法であって、以下の連続的工程：
    （ａ３）請求項１〜３のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の固相−リンカー組合せとカップリングされたＮ保護およびＣＯＯ保護アミノ酸を得るために、その固相リンカー組合せと、側鎖がヒドロキシル基、アミン基およびチオール基の中から選択される非保護基を担持するＮ保護およびＣＯＯ保護アミノ酸とをカップリングする工程、
    （ｂ３）固相リンカー組合せへカップリングされたＮ脱保護ＣＯＯ保護アミノ酸を得るために、固相リンカー組合せへカップリングされたＣＯＯ保護アミノ酸をＮ脱保護する工程、
    （ｃ３）固相リンカー組合せとカップリングされたＮ保護ＣＯＯ保護ペプチドを得るために、カップリングされたＮ脱保護ＣＯＯ保護アミノ酸と、アミノ酸側鎖の反応性官能基が保護されているＮ保護アミノ酸とをカップリングする工程、
    （ｄ３）工程（ｃ３）において得られたカップリングされたＣＯＯ保護ペプチドをＮ脱保護する工程、
    （ｅ３）所望により、ペプチド鎖を担持している式（Ｉ）の固相リンカー組合せを得るために、必要なだけ工程（ｃ３）および（ｄ３）を繰り返す工程、
    （ｆ３）式（Ｉ）の固相リンカー組合せおよびペプチド鎖を回収するために、固相リンカー組合せとペプチド鎖との結合を開裂する工程
    を含んでなる、方法。
12. 工程（ｆ３）の前または後に、ペプチド鎖のアミノ酸側鎖を脱保護する、および／またはペプチド鎖をＣＯＯ脱保護するさらなる工程（ｇ３）を含んでなる、請求項１１に記載のＣからＮへのペプチド合成方法。
13. 側鎖が工程（ａ３）の非保護基を有するＮおよびＣＯＯ保護アミノ酸が、
    −ヒドロキシル基を有するＮ保護およびＣＯＯ保護トレオニン、セリンおよびチロシン、
    −アミン基を有するＮ保護およびＣＯＯ保護リジン、オルニチン、ジアミノ酪酸およびジアミノプロピオン酸、および
    −チオール基を有するＮ保護およびＣＯＯ保護システイン、
    からなる群から選択される、請求項１１または１２に記載のＣからＮへのペプチド合成方法。
14. レトロインベルソ型ペプチド合成方法であって、以下の連続的工程：
    （ａ４）式
    

    

    （式中、
    

    

    、Ｘ、およびＲ_１は請求項１に定義される通りであり、Ｒ_４は反応性官能基が保護されているアミノ酸の側鎖を表す）
    の固相リンカー組合せを得るために、式
    

    

    （式中、Ｒ_４は、上記に定義される通りである）の化合物と、
    請求項１〜３のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の固相リンカー組合せとをカップリングする工程、
    （ｂ４）式
    

    

    （式中、
    

    

    、Ｘ、Ｒ_１およびＲ_４は上記に定義される通りである）
    の固相リンカー組合せを得るために、工程（ａ４）において得られた式（ＶＩＩＩ）の固相リンカー組合せを処理する工程、
    （ｃ４）式（ＩＸ）の固相リンカー組合せへカップリングされたＮ保護アミノ酸を得るために、工程（ｂ４）において得られた式（ＩＸ）の固相リンカー組合せと、アミノ酸側鎖の反応性官能基が保護されているＮ保護アミノ酸とをカップリングする工程、
    （ｄ４）カップリングされたアミノ酸をＮ脱保護する工程、
    （ｅ４）式（ＩＸ）の固相リンカー組合せとカップリングされたＮ保護ペプチドを得るために、工程（ｄ４）のＮ脱保護されたカップリングされたアミノ酸と、アミノ酸側鎖の反応性官能基が保護されているＮ保護アミノ酸とをカップリングする工程、
    （ｆ４）所望により、レトロインベルソ型ペプチド鎖を担持している式（Ｉ）の固相リンカー組合せを得るために、必要なだけ工程（ｄ４）および（ｅ４）を繰り返す工程、
    （ｇ４）式（Ｉ）の固相リンカー組合せおよびペプチド鎖を回収するために、固相リンカー組合せとペプチド鎖との結合を開裂する工程
    を含んでなる、方法。
15. 工程（ｇ４）の前または後に、ペプチド鎖のアミノ酸側鎖を脱保護する、および／またはペプチド鎖をＮ脱保護するさらなる工程（ｈ４）を含んでなる、請求項１４に記載のレトロインベルソ型ペプチド合成方法。
16. 下記式:
    

    

    （式中、Ｒ_１は請求項１に記載の通りであり、Ｒ_１は−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ_２ （ここで、Ｒ _２ は、Ｈまたは（Ｃ _１ −Ｃ _６ ）アルキルを表す）、−ＳＯ_２、−ＳＯ_３Ｈおよび−ＳＨから選択される官能基Ｙで官能基化されていてもよく、Ｒ_３はＯ保護基を表す）
    を有する化合物を含んでなる、固相リンカー。

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