WO2009092276A1 - 双环取代吡唑酮偶氮类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用 - Google Patents

双环取代吡唑酮偶氮类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用 Download PDF

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Hejun LÜ
Hao Zheng
Yiqian Chen
Hongbo Fei
Shenglan Wang
Li Wang
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Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd.
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Definitions

  • the present invention relates to a novel bicyclic substituted pyrazolone azo derivative of the formula (I), a process for the preparation thereof, and a pharmaceutical composition containing the same, and as a therapeutic agent, particularly thrombopoietin (TPC simulation) And their use as thrombopoietin receptor agonists.
  • TPO Thrombopoietin
  • the activity of TPO is derived from the binding of TPO to the TPO receptor (also known as MPL).
  • TPO receptor also known as MPL.
  • the TPO receptor has been successfully cloned and sequenced for amino acid sequence (Vigon et al., Proc. Nat. Acad. ScL 89: 5640-5644 (1992))
  • TPO is a 332-amino acid glycosylated polypeptide that plays a key role in regulating megakaryocyte production and platelet production by bone marrow megakaryocytes (Kuter et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91 : 1 1104-1 1 108 (1994); Barley et al., Cell 77: 1117-1 124 (1994); Kaushansky et al., Nature 369: 568-571 (1994); Wendling et al., Nature 369: 571- 574 (1994); and Sauvage et al., Nature 369: 533-538 (1994)). TPO is produced in the liver but mainly acts on the bone marrow, stimulating stem cell differentiation.
  • TPO is a major regulator of thrombocytopenia and a large number of studies on increasing platelet count, size, and increasing the involvement of experimental animal isotope in platelets (Metcalf Nature 369:519-520 (1994)).
  • TPO has been used to diagnose and treat a variety of blood diseases, such as those caused primarily by platelet defects.
  • TPO can be used to treat thrombocytopenia, especially chemotherapy, radiation and bone marrow transplantation for the treatment of cancer and lymphoma.
  • the thrombopoietin analog dtrombopag is reported by GSK in the patent (WO-00189457/WO-01089457/WO-2006064957) and exhibits considerable activity.
  • the present invention discloses a series of compounds that are more effective as TPO receptor agonists and are potent TPO mimetics. Summary of the invention
  • A is selected from a carbon atom or an oxygen atom
  • R is selected from a hydrogen atom or an alkyl group
  • R, . R 2 and each independently selected from a hydrogen atom, a fluorenyl group, an alkoxy group, a halogen, an 'aryl group or a heteroaryl group, wherein the aryl or heteroaryl group is optionally further selected from one or more selected from one or more Substituted with a substituent of a mercapto group, a halogen, a hydroxyl group, a tetrazolyl group, an imidazole, a dihydroimidazole, a carboxylic acid or a carboxylic acid ester;
  • R 5 and R 7 are each independently selected from a hydrogen atom, a decyl group, an alkoxy group, a halogen, a hydroxyl group, an amino group, a nitro group, a cyano group, a carboxylic acid or a carboxylic acid ester;
  • R is selected from a hydrogen atom or a sulfhydryl group
  • aryl or heteroaryl group wherein the aryl or heteroaryl group is optionally further selected from one or more selected from the group consisting of fluorenyl, halogen, hydroxy, tetrazolyl, imidazole, dihydroimidazole, carboxylic acid or carboxylic acid ester Substituted by a substituent;
  • R 2 , R 3 and R 4 are each independently selected from a hydrogen atom, a decyl group, an alkoxy group or a halogen;
  • R 5 and R 7 are each independently selected from a hydrogen atom, a decyl group, an alkoxy group, a halogen, a hydroxyl group, an amino group, a nitro group, a cyano group, a carboxylic acid or a carboxylic acid ester;
  • R s , R 9 , . And R n are each independently selected from a hydrogen atom or an alkyl group
  • n 0, 1 or 2.
  • Preferred compounds of the compounds of the formula (I) of the present invention include, but are not limited to:
  • the present invention includes a compound represented by the formula (IA) which is an intermediate for the synthesis of the compound of the formula (I):
  • A is selected from a carbon atom or an oxygen atom
  • R s , R 9 , R IG and R n are each independently selected from a hydrogen atom or a fluorenyl group
  • n 0, 1 or 2.
  • Preferred compounds of the compound of the formula (IA) of the present invention include, but are not limited to:
  • the amino-substituted benzopolycyclic ring is diazotized with sodium nitrite in an acidic solution, and then reduced by stannous chloride to obtain hydrazine, hydrazine and an electrophilic carbonyl compound such as ethyl acetoacetate in a suitable solvent ( Condensation under heating, such as acetic acid, ethanol, etc., gives the compound of formula (IA).
  • another aspect of the present invention provides a process for the preparation of the compound (I) of the formula, which comprises:
  • a substituted aniline compound By diazotizing a substituted aniline compound with sodium nitrite in a suitable acidic solution (such as nitric acid, sulfuric acid, hydrochloric acid), and then reacting a compound of the formula (IA) with an alkaline solution (such as sodium hydrogencarbonate, carbonic acid) A coupling reaction occurs in potassium hydrogen) to give a compound of the formula ⁇ .
  • a suitable acidic solution such as nitric acid, sulfuric acid, hydrochloric acid
  • an alkaline solution such as sodium hydrogencarbonate, carbonic acid
  • the present invention relates to the use of a compound of the formula and ( ⁇ ) in the manufacture of a medicament for the treatment of thrombocytopenia.
  • a therapeutically effective amount of a drug selected from the group consisting of: colony stimulating factor, cytokine, chemokine, interleukin or cytokine receptor agonist or antagonist, soluble receptor, receptor agonist or antagonist
  • a drug selected from the group consisting of: colony stimulating factor, cytokine, chemokine, interleukin or cytokine receptor agonist or antagonist, soluble receptor, receptor agonist or antagonist
  • An antibody or a peptide or small molecule that functions in the same mechanism as one or more of the drugs.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically effective amount of a compound of the formula ⁇ and ( ⁇ ), and a pharmaceutically acceptable salt, hydrate or solvate thereof, and a pharmaceutically acceptable salt.
  • the composition may further comprise a therapeutically effective amount of a drug selected from the group consisting of: a colony stimulating factor, a cytokine, a chemokine, an interleukin or a cytokine receptor agonist.
  • a drug selected from the group consisting of: a colony stimulating factor, a cytokine, a chemokine, an interleukin or a cytokine receptor agonist.
  • the combined use includes the simultaneous use or sequential use of the compounds described herein.
  • the present invention relates to a method of preparing a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutically acceptable carrier or diluent and an effective amount of a compound of the formula ⁇ and ( ⁇ ) and a pharmaceutically acceptable salt, hydrate or solvate thereof, the method comprising
  • the compounds of formula (I) and ( ⁇ ) are combined with a pharmaceutically acceptable carrier and diluent.
  • Alkyl means a saturated aliphatic hydrocarbon group comprising straight and branched chain groups of 1 to 20 carbon atoms.
  • An alkyl group having 1 to 10 carbon atoms such as a methyl group, an ethyl group, a propyl group, a 2-propyl group, a n-butyl group, an isobutyl group, a t-butyl group or a pentyl group or the like is preferable.
  • lower fluorenyl groups having 1 to 4 carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, 2-propyl, n-butyl, isobutyl or t-butyl groups and the like.
  • the fluorenyl group may be substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituent is preferably one or more, independently selected from the group consisting of an indenyl group, a decyloxy group, a halogen group, a hydroxyl group, an amino group, a nitro group, a cyano group, and an aryl group. , heteroaryl, carboxylic acid or carboxylic acid ester.
  • Aryl means a group having at least one aromatic ring structure, that is, an aromatic ring having a conjugated ⁇ -electron system, Carbocyclic aryl, heteroaryl and biaryl.
  • the block group may be substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituent is preferably one or more, independently selected from the group consisting of alkyl, alkoxy, halogen, hydroxy, amino, nitro, cyano, aryl. , heteroaryl, carboxylic acid or carboxylic acid ester.
  • Heteroaryl means an aryl group having from 1 to 4 heteroatoms as ring atoms, the remaining ring atoms being carbon, and hetero atoms including oxygen, sulfur and nitrogen.
  • the ring may be a 5- or 6-membered ring.
  • the heteroaryl group include a furyl group, a thienyl group, a pyridyl group, a pyrrole, an N-fluorenylpyrrolyl group, a pyrimidinyl group, a pyrazinyl group, an imidazolyl group, a tetrazolyl group and the like.
  • the heteroaryl group may be substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituent is preferably one or more, independently selected from the group consisting of alkyl, alkoxy, halogen, hydroxy, amino, nitro, cyano, aryl.
  • Base heteroaryl, carboxylic acid or carboxylic acid ester.
  • Haldroxy means an -OH group.
  • Alkoxy means -0-(alkyl) and -0-(unsubstituted cycloalkyl). Representative examples include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, cyclopropoxy, cyclobutoxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy and the like.
  • the methoxy group may be substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituent is preferably one or more, independently selected from the group consisting of an indenyl group, a decyloxy group, a halogen group, a hydroxyl group, an amino group, a nitro group, a cyano group, and an aromatic group.
  • Base heteroaryl, carboxylic acid or carboxylic acid ester.
  • Halogen means fluoro, chloro, bromo or iodo.
  • Amino means -NH 2 .
  • Neitro means -N0 2 .
  • Alkoxy means -0-(alkyl).
  • the amino-substituted benzopolycyclic ring is diazotized with sodium nitrite in an acidic solution, and then reduced by stannous chloride to obtain hydrazine, hydrazine and an electrophilic carbonyl compound such as ethyl acetoacetate in a suitable solvent (such as acetic acid, Ethanol or the like is condensed under heating to give a compound of the formula (IA).
  • the substituted o-bromophenol is nitrated by sodium nitrate to obtain a nitrophenol.
  • the nitrophenol is alkylated with a halogenated sulfhydryl group such as methyl iodide at a suitable temperature to obtain a hydroxy-protected nitrophenol; a hydroxy-protected nitrate
  • a halogenated sulfhydryl group such as methyl iodide
  • R substituted aryl compound
  • R substituted aryl compound under hydrogen atmosphere, palladium/carbon reduction to obtain aryl aniline, aryl aniline in bromine to remove sulfhydryl groups to obtain deprotected aniline.
  • the substituted aryl compound is deprotected from the sulfhydryl group in hydrogen bromide to give the deprotected nitro compound.
  • the nitro compound is reduced under palladium on carbon under hydrogen to give the deprotected aryl aniline.
  • the HPLC test was performed using an Agilent 1200 DAD high pressure liquid chromatograph (Sunfire C18 150> ⁇ 4.6 mm column) and a Waters 2695-2996 high pressure liquid chromatograph (Gimini C18 150 x 4.6 mm column).
  • the pressurized hydrogenation reaction uses a Pau 3916EKX hydrogenation apparatus and a clear blue QL type hydrogen generator;
  • the microwave reaction uses a CEM Discover-S 908860 microwave reactor;
  • the nitrogen atmosphere means that the reaction flask is connected to a nitrogen balloon of about 1 L volume;
  • the hydrogen atmosphere means that the reaction flask is connected to a hydrogen balloon of about 1 L volume;
  • the solution in the reaction means an aqueous solution
  • 5-Aminoindan lg (3.59 g, 27.0 mmol) was dissolved in 20 mL of concentrated hydrochloric acid and stirred for 10 min.
  • 10 mL of sodium nitrite solution (1.86 g, 27.0 mmol) was added dropwise, and stirring was continued for 15 minutes in an ice bath.
  • the stannous chloride dihydrate (24.4 g, 108.0 mmol) was dissolved in 10 mL of concentrated hydrochloric acid under ice salt bath, and the intermediate solution was added thereto, and the mixture was allowed to react to room temperature for 1.5 hours. The mixture was adjusted to pH 9 with 40% EtOAc EtOAc (EtOAc)EtOAc. Yield: 51.3%.
  • 2-Bromo-4-fluoro-phenol 2a (8.0 g, 41.9 mmol) was dissolved in 10 mL of sulfuric acid solution (50%) in an ice salt bath, and sodium nitrate (7.1 g, 83.5 mmol) in 24 mL of sulfuric acid solution was added dropwise. (25%), reacted at room temperature for 1.5 hours. TLC was traced to the disappearance of the starting material, 50 mL of water was added, and the mixture was extracted with ethyl acetate (50 mL ⁇ 2).
  • 3-carboxylic acid 3'-Amino-5'-fluoro-2'-hydroxybiphenyl-3-carboxylic acid 2f (296 mg, 1.20 mmol) was dissolved in 10 mL of hydrochloric acid (IN) under ice bath, and 10 mL of sodium nitrite solution was added dropwise. (91 mg, 1.32 mmol), followed by 2-indan-5-yl-5-methyl-2,4-dihydropyrazol-3-one li (257 mg, 1.20 mmol) with sat. sodium bicarbonate The solution was adjusted to pH 8 and added to 10 mL of ethanol and allowed to warm to room temperature overnight.
  • 2-Amino-5,6,7,8-tetrahydronaphthalene 3g (3.68 g, 25.0 mmol) was dissolved in 20 mL of concentrated hydrochloric acid and stirred for 10 min.
  • 10 mL of sodium nitrite solution (1.72 g, 25.0 mmol) was added dropwise, and stirring was continued for 15 minutes in an ice bath.
  • Ethyl 5-iodo-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxylate 6d (4.1 g, 13.99 mmol) was dissolved in 80 mL of tetrahydrofuran, and methyl 4-methylbenzenesulfonate (2.73) was added. g, 14.69 mmol) and sodium tert-butoxide (2.02 g, 20.99 mmol), and the mixture was stirred at room temperature for 0.5 hour. The reaction was monitored by TLC until the reaction mixture was completed. The reaction mixture was filtered, and the filter cake was washed with THF. The product 5-iodo-1,2,4-trimethyl-1H-pyrrole-3-carboxylic acid ethyl ester 6e (3.8 g, m.p.).
  • 5-(3-Amino-2-hydroxyphenyl)-furan-2-carboxylic acid hydrobromide salt 5-(3-amino-2-methoxy-phenyl)-furan-2-carboxylic acid 9b ( 2.79 g, 11.97 mmol) was dissolved in 25 mL of dichloromethane, and boron tribromide (23.9 mL, 2.0 mol/L) was added dropwise and allowed to react at room temperature for 1 hour. TLC was traced to the disappearance of the starting material, 5 mL of methanol was added, and concentrated under reduced pressure.
  • the TLC was traced to the disappearance of the starting material, cooled to room temperature, and concentrated under reduced pressure to remove acetic acid.
  • the acid in the reaction mixture was neutralized with saturated sodium hydrogen carbonate solution, extracted with ethyl acetate (20 mL ⁇ 3), and the organic phase was combined with saturated sodium chloride solution.
  • the organic layer was dried (MgSO4jjjjjjjjjjjj 5-yl)-2,4-dihydropyrazole-3-one 19d (130 mg, light yellow oily liquid). Yield: 13.6%.
  • 5-(3-nitro-2-methoxy-5-methylphenyl)-thiophene-2-carboxylic acid 5-(3-nitro-2-methoxy-5-methylphenyl)-thiophene 2-carboxylic acid 24b (0.29 g, 1 mmol) dissolved in To 30 mL of ethyl acetate, 0.06 g of palladium-carbon and cesium formate (0.25 g, 4 mmol) were added, and the mixture was heated and refluxed for 45 minutes. The TLC was traced to the disappearance of the starting material, and the palladium-carbon was removed by filtration.
  • 3-Amino-3'-(1 ⁇ -tetrazol-5-yl)-biphenyl-2-ol hydrochloride 8f (188 mg, 0.74 mmol) was dissolved in 4 mL of 2N hydrochloric acid and added dropwise. 1 mL of sodium nitrite solution (57 mg, 0.82 mmol), react for 30 minutes, then add 2-indan-5-yl-5-methyl-2,4-dihydropyrazol-3-one li (159 mg , 0.74 mmol), the pH was adjusted to 8 with saturated sodium bicarbonate, and 0.5 mL of ethanol was added and allowed to react overnight at room temperature.
  • 2-(2'-Hydroxy-3'-amino-biphenyl-4-yl)-4,5-dihydro-1H-imidazole 32d (334 mg, 1.11 mmol) was dissolved in hydrochloric acid (3.7 mL). In 1 mol/L), 1.5 mL of sodium nitrite solution (85 mg, 1.22 mmol) was added dropwise, and the reaction was carried out for 20 minutes, followed by the addition of 2-indan-5-yl-5-methyl-2,4-dihydropyridinium. Zylin-3-one li (214 mg, 1 mmol) was adjusted to pH 8 with saturated sodium bicarbonate solution, and 5 mL of ethanol was added and allowed to react overnight at room temperature.
  • 3-(4-Bromophenyl)-propionic acid 38a (20.6 g, 90 mmol, ABCR) was added to a 250 mL single-necked flask and dried in vacuo for 20 min.
  • Thionyl chloride (20 mL, 276 mmol) was added with stirring and heated to reflux overnight. Most of the solvent was removed under reduced pressure, and 100 mL of dichloromethane was added, and aluminum chloride (24.5 g, 25.8 mmol) was added portionwise with stirring, and a large amount of gas was released, and the reaction was refluxed overnight.
  • the reaction mixture was poured into 200 g of crushed ice, and a large amount of solid was precipitated, which was purified by silica gel chromatography. 6-Bromo-indanone 38b (18.34 g, yellow solid). Yield: 96.6%.
  • methyl group phenylphosphonium bromide (4.56 g, 12.76 mmol) was dissolved in 25 mL of tetrahydrofuran, and potassium t-butoxide (1.5 g, 13.4 mmol) was added in one portion, and the mixture was stirred at room temperature for 35 minutes.
  • 6-Bromo-indan-1 -one 38b (898 mg, 4.25 mmol) was dissolved in 5 mL of tetrahydrofuran, and the solution was added dropwise with stirring. The resulting solution was stirred at room temperature for 1 hour and quenched with 25 mL of water. reaction. The mixture was extracted with chloroform (25 mL EtOAc). EtOAc (EtOAc m. Separation and purification gave the title product 6-bromo-1-methylene-indane 38c (830 mg,yield of yellow oil). Yield: 93.4%. MS nVz (ESl): 208 [M-1] third
  • 6-Bromomethylene indan 38c (4.91 g, 23.5 mmol) was dissolved in ethyl acetate, palladium-carbon (0.98 g) was added, and the reaction was carried out for 4 hours at room temperature under a hydrogen atmosphere, and the TLC was traced until the starting material disappeared. The filtrate was filtered, and the filtrate was evaporated tolulululululululululululululululululululululululululululululu
  • n-butyllithium (8.6 mL, 13.76 mmol) was added to a three-necked flask, and added to 8 mL of tetrahydrofuran under a dry ice-acetone bath, and 6-bromo-1-methylindane 38d was added with stirring. 1.32 g, 6.26 mmol), the obtained solution was reacted in a dry ice-acetone bath for 2 hours, and a solution of di-tert-butyl azodicarboxylate G.87 g, 8.14 mmol) in 10 mL of tetrahydrofuran was added dropwise, stirring was continued for 30 minutes, and ice was removed.
  • Ethyltriphenylphosphonium bromide (14.5 g, 39.1 mmol) was dissolved in 75 mL of tetrahydrofuran, and potassium t-butoxide (5.29 g, 47.3 mmol) was added and stirred at room temperature for 1 hour.
  • 6-Bromo-indan-1-one 38b (3.39 g, 18.6 mmol) was dissolved in 25 mL of tetrahydrofuran, and the solution was added dropwise with stirring, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. TLC was monitored until the reaction of the starting material was complete. The reaction was quenched by the addition of 150 mL of water. The reaction mixture was extracted with dichloromethane (50 mL ⁇ 4). The organic phase was combined and washed with brine (45 mL ⁇ 2) The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered and evaporated, evaporated, evaporated, evaporated, evaporated.
  • 6-Bromo-1-ethylidene-indan 41a (3.07 g, 13.7 mmol) was dissolved in 80 mL of ethyl acetate at room temperature, and palladium-carbon (0.61 g) was added in a hydrogenation apparatus at 3 atm. After hydrogenation with hydrogen, the mixture was reacted for 5 hours at room temperature, and the reaction of the material was monitored by TLC.
  • the di-tert-butyl azodicarboxylate was dissolved in 15 mL of tetrahydrofuran, added dropwise to the above reaction solution, and the mixture was further stirred in a dry ice-acetone bath for 0.5 hour, and the dry ice-acetone bath was removed, and the reaction solution was naturally warmed to room temperature. After stirring for 18 hours, the reaction of the starting material was completely monitored by TLC. To the reaction mixture was added 25 mL of a saturated solution of ammonium chloride to quench the reaction.
  • 5-P-Amino-2-hydroxyphenyl)-furan-2-carboxylic acid hydrobromide 9c 333 mg, 1.1 mmol was dissolved in hydrochloric acid (3.7 mL, 1 mol/L) under ice bath. Add 1.5 mL of sodium nitrite solution (85 mg, 1.22 mmol) for 20 minutes, then add 2-(3,3-dimethylindan-5-yl)-5-methyl-2,4-dihydro Pyrazol-3-one 8i (242 mg, 1.0 mmol) was added portionwise sodium bicarbonate (1.4 g, 16.67 mmol) and 3 mL of EtOAc.
  • 5-(3-Amino-2-hydroxyphenyl)-furan-2-carboxylic acid hydrobromide 9c (333 mg, 1.1 mmol) was dissolved in hydrochloric acid (3.7 mL, 1 mol/L). Add 1.5 mL of sodium nitrite solution (85 mg, 1.22 mmol) dropwise for 20 minutes, then add 5-methyl-2-(3-methylindan-5-yl)-2,4-dihydropyrazole 3-ketone 38c (228 mg, 1.0 mmol), sodium bicarbonate (1.4 g, 16.67 mmol) and 3 mL of ethanol were added portionwise and allowed to react overnight at room temperature.
  • 6-Bromo-indan-1-one 38b (6.02 g, 28.5 mmol) and iodoguanidine (4.4 mL, 70 mmol) were dissolved in 200 mL of THF (dry) and stirred at room temperature for 15 min. g, 68.2 mmol), stirring for 2 hours, TLC was monitored until the reaction of the starting material was completed, 150 mL of water was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted with ethyl acetate (150 mL ⁇ 2), and the organic phase was washed with saturated brine. The mixture was dried over sodium sulfate, filtered and evaporated, evaporated, evaporated, evaporated, evaporated,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,
  • the mixture is adjusted to ppHi to basic with saturated sodium carbonate, extracted with ethyl acetate (50 mL ⁇ 3), combined organic phase, organic Wash with saturated saline, no The aqueous solution was dried over sodium sulfate, and filtered, and then filtered, evaporated, evaporated, evaporated, evaporated.
  • 5-(2-methoxy-3-amino-phenyl)-2-methylfuran-3-carboxylic acid 5-(2-methoxy-3-nitrophenyl)-2-methylfuran 3-carboxylic acid 53c (450 mg, 1.62 mmol) was dissolved in methanol, 45 mg of palladium/carbon was added, and the mixture was stirred under reflux for 4 hours under a hydrogen atmosphere, and the residue was evaporated to the residue, and the filtrate was filtered.
  • the product 5-(2-methoxy-3-amino-phenyl)-2-methylfuran-3-carboxylic acid 53d (370 mg, white solid).
  • reaction solution was sequentially saturated sodium carbonate solution and sodium thiosulfate solution ( 2M) Washed with saturated brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and evaporated to remove the solvent, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to give the title product 2,2,2-trichloro-1 -(4-iodo-1 H -pyrrol-2-yl)-acetyl 57c (47 g, yellow solid), Yield: 92%.
  • Methyl 4-iodo-1-(toluene-4-sulfonyl)- 1 H-pyrrole-2-carboxylate Methyl 4-iodo-1H-pyrrole-2-carboxylate 57d (25.1 g, 100 mmol)
  • triethylamine 30.6 mL, 220 mmol
  • 4-dimethylaminopyridine (1.22 g, 10 mmol)
  • p-toluenesulfonic acid 21 g, 110 mmol
  • reaction mixture was extracted with methylene chloride (50 mL ⁇ 3).
  • organic phase was washed with saturated sodium carbonate and brine, dried over anhydrous sodium sulfate 4-iodo-1-(toluene-4-sulfonyl)-1H-pyrrole-2-carboxylic acid methyl ester 57e (32.5 g, white solid), yield: 80.2%.
  • mouse IL-3 (chemicon Catalog no.IL015 )
  • Plasmid construction Purchasing the EX-B0010-M02 plasmid (FulenGen) using the QuikChange® Multi Site Directed Mutagenesis Kit (Stratagene) kit according to the TPOR gene sequence provided by Entrez Gene ID: 4325, Refseq: NM-005373 2 point mutation.
  • the multi-point mutation primer sequences are: g491a: 5'-gggaacttcagatcagctgggaggagccg-3 ' , g491a- antisense:
  • BAF3-TPOR cell line A BaF3 cell line stably expressing a highly functional TPO receptor was constructed. The by expressing human after the 2-point mutant TPO receptor and screening gene neomycin the EX-B0010-M02 plasmid; 25 ⁇ ⁇ transfected with wild-type BaF3 cells (1X10 7), transfection instruments as Electro Square Porator ECM830 (BTX Division of Genetronic, Inc. US), transfection conditions: 250V, 18ms. The BAF3-TPOR stable cell line was obtained by G418 (Gibco, US) screening.
  • BAF3-TPOR was cultured in RPMI 1640 (Gibco, US) medium, 10% FB (Gibco, US) S, 800 ng/ml G418, 5 ng/mU rmIL-3 (Chemicon, US).
  • Centrifuge the cells by centrifugation Take appropriate amount of cell suspension at 1000 rpm, centrifuge for 5 minutes, discard the supernatant, resuspend the cells with 10 ml of cell culture medium containing no IL3, centrifuge at lOOOOrpm for 5 minutes, discard the supernatant;
  • test compound powder was formulated into 10 mM stock solution in DMSO, and diluted to different concentrations with RPM11640: 30 ⁇ , 10 ⁇ , 3 ⁇ , ⁇ , 0.3 ⁇ , 0 ⁇ 1 ⁇ , 0.03 ⁇ , 0 ⁇ 01 ⁇ , 0.003 ⁇ ,
  • Rats were used as test animals, and the concentration of the drug in plasma was measured by LC/MS/MS method at different times after administration of Example 1, Example 15 and Example 29 by intragastric administration.
  • the pharmacokinetic behavior of the compounds of the invention in rats was investigated and their pharmacokinetic characteristics were evaluated.
  • Example 1 Example 15 and Example 29
  • the pharmacokinetic parameters of the compounds of the invention are as follows:
  • test results showed that each of the compounds was well absorbed after the rats were intragastrically administered with the above compounds of the present invention.

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Description

双环取代吡唑酮偶氮类衍生物、 其制备方法及其在医药上的应用
技术领域
本发明涉及通式 (I)所示新的双环取代吡唑酮偶氮类衍生物、其制备方法以及含 有该衍生物的药物组合物、 .以及其作为治疗剂特别是血小板生成素 (TPC模拟物和 它们用作血小板生成素受体激动剂的用途。
背景技术
血小板生成素（Thrombopoietin， TPO), 又称为巨核细胞生长发育因子
(megakaryocyte growth and development factor, MGDF)， 血小板生成朿 lj激因子 (thrombocytopoiesis stimulating factor, TSF)， c-Mpl 酉己体 (c-myeloproliferative leukemia ligand, c-Mpl), mpl 配体， megapoietin是一种与产生血小板有关的糖蛋白 (Wendling. R, et. al., Biotherapy 10(4):269-77 (1998); Kuter D.l. et al., The Oncologist; 1 :98-106(1996); Metcalf, Nature 369: 519-520 (1994))。
在某些情况下， TPO的活性源自 TPO与 TPO受体 (也称 MPL)的结合。 TPO受体已 经被成功克隆， 也进行了氨基酸序列的测序 (Vigon et al., Proc. Nat. Acad. ScL 89:5640-5644(1992))
TPO是一种 332-氨基酸糖基化多肽，在调节巨核细胞生成和由骨髓巨核细胞产 生血小板的过程中起着关键的作用（Kuter et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91 : 1 1104-1 1 108 (1994); Barley et al., Cell 77: 1117-1 124 (1994); Kaushansky et al., Nature 369:568-571 ( 1994); Wendling et al., Nature 369: 571-574 (1994); and Sauvage et al., Nature 369: 533-538 (1994))。 TPO产生于肝脏但主要作用于骨髓， 刺激干细胞分化. 成为巨核细胞以及巨核细胞的增殖， 多倍体化， 最重要的是进入血小板身体循环 分裂。 TPO在血小板减少症和大量关于增加血小板数量、大小、增加实验动物同位 素参入血小板的研究中是一种主要的调节剂 (Metcalf Nature 369:519-520 (1994))。 TPO被认为主要通过几个途径影响巨核细胞生成： （1)引起巨核细胞大小和数量的 增加； （2)增加 DNA内含物， 多倍体的形式， 巨核细胞； （3)增加巨核细胞的核内有 丝分裂； （4)增加成熟的巨核细胞； （5)增加前体细胞的百分比， 小乙酰胆碱酶一阳 性形式的细胞， 骨髓细胞。 ■
血小板是血液凝固必需的， 当它的数量非常低时， 病人就有出血死亡的危险。 因此， TPO己经被用于诊断和治疗多种血液疾病，如主要由血小板缺陷引起的疾病。 同时， TPO可以用于治疗血小板减少症，尤其是为治疗癌症和淋巴瘤而进行的化疗、 放疗和骨髓移植。
患者因血小板减少症而导致血小板水平恢复过慢是一个严重的问题， 因此希 望可以找到一种治疗血小板减少症的活性 TPO类似物。几年前， 多肽类 TPO类似物 的发展被报导。 （WO96/40750, W098/25965) 这些多肽可以结合并活化 TPO受体， 但是不具备天然 TPO的序列同源性。最近几年， 一些小分子的活性 TPO类似物被报 导。 包括 1,4-苯并二氮杂卓 -2-酮类 (JP11001477), 由希夫碱配体得到的金属络合物 (WO 99/11262), 环多胺衍生物 (WO00/28987), 噻唑 -2-¾-苯酰胺类 (WO01/07423, WO01/53267) , 偶氮 -芳基衍生物（WO00/35446, WO 1/17349), 2-芳基-萘唑类 (WOOl/39773, WO01/53267)和缩氨基脲衍生物 (WO01/34585)。 在基于细胞的体系 内，所有这些分子都能活化细胞膜上的 TPO受体的信号转导途径，一些类型能直接 作用于 TPO受体本身。 据介绍， 取代缩氨硫脲居然是非常有效的 TPO受体激动剂。 这一系列中一些最优先的化合物被发现可以刺激 TPO-responsive人类细胞系和低 于 ΙΟΟηΜ的人类骨髓培养液中的 TP0的增殖和分化。
GSK公司在专利 ( WO-00189457/ WO-01089457/WO-2006064957)中报道血小板 生成素类似物 dtrombopag, 并表现出了相当的活性。
本发明公开了一系列化合物且更有效地用作 TPO受体激动剂， 是有效的 TPO 模拟物。 发明内容
为了克服现有技术的不足之处， 本发明的目的在于提供一种通式 (I)所示的双环 取代吡唑酮偶氮类衍生物， 以及它们的互变异构体、 对映体、 非对映体、 消旋体 和药学上可接受的盐、 水合物或溶剂化合物， 以及代谢产物和代谢前体或前药。
Figure imgf000004_0001
其中：
A选自碳原子或氧原子；
R选自氢原子或烷基；
R, . R2、 和 各自独立地选自氢原子、 垸基、 烷氧基、 卤素、 '芳基或杂芳 基， 其中芳基或杂芳基任选进一歩被一个或多个选自垸基、 卤素、 羟基、 四唑基、 咪唑、 二氢咪唑、 羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
R5、 和 R7各自独立地选自氢原子、 垸基、 烷氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝 基、 氰基、 羧酸或羧酸酯；
R8、 R9、 RI Q和 各自独立地选自氢原子或垸基； 且 n是 0， 1或 2。
本发明优选的实施方案中，
A选自碳原子或氧原子；
R选自氢原子或垸基；
选自芳基或杂芳基， 其中芳基或杂芳基任选进一歩被一个或多个选自垸基、 卤素、 羟基、 四唑基、 咪唑、 二氢咪唑、 羧酸或羧酸酯的取代基所取代； R2、 R3 和 R4各自独立地选自氢原子、 垸基、 烷氧基或卤素；
R5、 和 R7各自独立地选自氢原子、 垸基、 烷氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝 基、 氰基、 羧酸或羧酸酯；
Rs、 R9、 。和 Rn各自独立地选自氢原子或烷基； 且
n是 0， 1或 2。 本发明通式 （I ) 所示的化合物的优选化合物包括， 但不限于:
Figure imgf000005_0001
Figure imgf000006_0001
5-{2-羟基 -3-[N'-(l -茚满 -5-基 -3-甲
18 基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼 基] -苯基 } -噻吩 -2-羧酸
2'-羟基 -3'-{N'-[3-甲基 -5-氧代 -1-(1 , 1 ,3,3-四甲基茚满 -5-基) -1 ,5-二
】9
氢吡唑—4-亚基]-肼基 联苯基 -3-羧 酸
2'-羟基 -5'-甲基 -3'-{N'-[3-甲基 -5-氧 v//工
代 -1-(U ,3,3-四甲基茚满 -5-基) -1,5- 0
二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-联苯基 - 3-
3'-[N'-( 1 -双环 [4.2.0]辛垸- 1 ,3,5-三烯 o 〇I - -3-基 -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 1
-4-亚基) -肼基 ]-2'-羟基 -5'-甲基联苯 o
基 -3-羧酸
5-{3-[Ν'- (卜双环 [4.2.0]辛烷 -1 ,3,5-三 烯—3—基—3—甲基—5—氧代— 二氢吡 2
唑 -4-亚基) -肼基 ]-2-羟基苯基} -呋喃 。
2-双环 [4.2.0] 辛垸 -1 ,3,5-三烯 -3-基 -4-{[2-羟基 -3'-(1 Η-四唑 -5-基) -联苯 3
-3-基]-亚肼基 }- 5-甲基 -2,4-二氢吡
H 唑 -3-酮
5-{2-羟基 -3-[Ν'-(1-茚满 -5-基 -3-甲 4 基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼
XT ΐ 基] -5-甲基苯基 噻吩 -2-羧酸
5-(2-羟基 -3-{Ν'- [3-甲基 -5-氧代 -1-(1 ,1 ,3,3-四甲基茚满 -5-基) -1 ,5-二 5
氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-苯基) -呋喃
-2-羧酸 .
3'-[Ν'-(1 -双环 [4.2.0]辛垸 -1 ,3,5-三烯 -3-基- 3-甲基 -5-氧代- 1,5-二氢吡唑 6
-4-亚基) -肼基 ]-5'-氟 -2'-羟基联苯 -3- 羧酸
4-{[2-羟基 -3'-(1Η-四唑 -5-基) -联苯 7 -3-基]-肼叉 2-茚满 -5-基 -5-甲基
N- -2,4-二氢吡唑 -3-酮
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000009_0001
5-(2-羟基 -3- {Ν'-[3-甲基 -5-氧代
-1 -(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1,5-二氢吡
53
唑 -4-亚基] -肼基 } -苯) -2-甲基呋喃
-3-羧酸
5-(2-羟基 -3- {Ν'-[3-甲基 -5-氧代 小(5,6,7，8-四氢萘亚甲基 -2-基) -1 ,5-
54
二氢吡唑 -4-並基] -肼基 } -苯基) -呋 喃 -2-羧酸甲酯
5-{2-羟基 -3-[Ν'-(1-茚满 -5-基 -3-甲
55 基 -5-氧代 -1，5-二氢吡唑 -4-亚基 HI井 基 ]-苯基 呋喃 -2-羧酸甲酯 .
3'-{Ν'- [ (2,2-二甲基茚满 -5-基) -3-
56 甲基 -5-氧代- 1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基] - 肼基 }-2'-羟基联苯 -3-羧酸
4-(2-羟基 -3-{Ν'-[3-甲基 -5-氧代 小(5,6,7,8-四氢萘亚甲基 -2-基)- 1,5-
57
二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 } -苯) -1Η-吡 咯 -2-羧酸
4-{2-羟基 -3-[Ν'-(1 -茚满 -5-基 -3-甲
58 基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼 基] -苯 }-1Η-吡咯 -2-羧酸 或其药学上可以接受的盐、 水合物或溶剂化合 ( f勿。 进一步， 本发明包括通式 (IA)所示的化合物， 其作为通式 (I)化合物合成的中间体:
Figure imgf000010_0001
( I A)
其中：
A选自碳原子或氧原子；
R5、 和 R7各自独立地选自氢原子、 垸基、 垸氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝 基、 氰基、 羧酸或羧酸酯；
Rs、 R9、 RIG和 Rn各自独立地选自氢原子或垸基； 且
n是 0， 1或 2。 - 本发明通式 (IA)所示的化合物的优选化合物包括， 但不限于：
编号 结构 命名
2-二环 [4.2.0]辛垸 -1(6),2,4-三烯
1
-3-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2，4-二氢吡唑
2
. -3-酮
5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基)- 2,4- 二氢吡唑 -3-酮
2-(2,3-二氢-苯并呋喃 -5-基) -5-甲基
4 or -2，4-二氢吡唑 -3-酮
5-甲基 -2-(3-甲基茚满 -5-基) -2,
5
4-二氢吡唑- 3-酮
2-(3-乙基茚满 -5-yl)-5-甲基 -2,4
6
-二氢吡唑 -3-酮
2-(3,3-二甲基茚满 -5-基) -5-甲基
7
-2,4-二氢吡唑 -3-酮
2-(2,2-二甲基茚满 -5-基) -5-甲基
8
-2,4-二氢吡唑 -3-酮
5-甲基 -2-(1，1,3,3-四甲基 -茚满 -5-
9
基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 在本发明的另一个方面是制备中间体 (IA)所示化合物的方法， 包括以下步骤:
Figure imgf000011_0001
( I A)
氨基取代的苯并多元环与亚硝酸钠在酸性溶液中发生重氮化反应，再通过氯化 亚锡还原得到肼， 肼与亲电的羰基化合物如乙酰乙酸乙酯、 在适宜的溶剂中 (如乙 酸、 乙醇等)加热下缩合得到通式 (IA)化合物。 进一歩， 本发明的另一方面是提供通式化合物 (I)的制备方法， 该方法包括:
Figure imgf000012_0001
( I A) ( I )
通过将取代的苯胺类化合物与亚硝酸钠在适宜的酸性溶液 (如硝酸、 硫酸、 盐 酸） 中进行重氮化反应， 再与通式 (IA)化合物在碱性溶液 (如碳酸氢钠、 碳酸氢钾) 中发生偶联反应得到通式 ω化合物。 本发明涉及通式 (1)和 (ΙΑ)化合物在制备 ΤΡΟ受体激动剂中的用途，
本发明涉及通式 和 (ΙΑ)化合物在制备治疗血小板减少症药物中的用途。 包括 联合使用治疗有效量的选自下列的药物： 集落刺激因子、 细胞因子、 趋化因子、 白细胞介素或细胞因子受体激动剂或拮抗剂、 可溶的受体、 受体激动剂或拮抗剂 抗体或与一个或多个所述药物具有相同的机理而起作用的肽或小分子类。
本发明涉及一种药用组合物，其包括药物有效剂量的通式 ω和 (ΐΑ)化合物及其 药学上可以接受的盐、 水合物或溶剂化合物及药学上可接受的盐。 该组合物可以 进一歩含有联合使用的治疗有效量的选自下列的药物： 集落刺激因子、 细胞因子、 趋化因子、 白细胞介素或细胞因子受体激动剂。 该药物组合物在制备治疗血小板 减少症药物的用途。
所述的联合使用包括同时使用或者先后依次使用本发明所述的化合物。
本发明涉及一种制备含有药用载体或稀释剂和有效量的通式 ω和 (ΙΑ)化合物 及其药学上可以接受的盐、 水合物或溶剂化合物的药物组合物的方法， 该方法包 括将通式 (I)和 (ΙΑ)化合物与药用载体和稀释剂相结合。 发明的详细说明
除非有相反陈述， 下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。 "烷基 "指饱和的脂族烃基团， 包括 1至 20个碳原子的直链和支链基团。 优选 含有 1至 10个碳原子的烷基， 例如甲基、 乙基、 丙基、 2-丙基、 正丁基、 异丁基、 叔丁基或戊基等。 更优选的是含有 1至 4个碳原子的低级垸基， 例如甲基、 乙基、 丙基、 2-丙基、 正丁基、 异丁基或叔丁基等。 垸基可以是取代的或未取代的， 当被 取代时， 取代基优选为一个或多个， 独立地选自垸基、 垸氧基、 卤素、 羟基、 氨 基、 硝基、 氰基、 芳基、 杂芳基、 羧酸或羧酸酯。
"芳基"指具有至少一个芳环结构的基团， 即具有共轭的 π电子体系的芳环， 包 括碳环芳基、 杂芳基和联芳基。 块基可以是取代的或未取代的， 当被取代时， 取 代基优选为一个或多个， 独立地选自烷基、 烷氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 芳基、 杂芳基、 羧酸或羧酸酯。
"杂芳基"指具有 1至 4个杂原子作为环原子， 其余的环原子为碳的芳基， 杂原 子包括氧、 硫和氮。 所述环可以是 5元或 6元环。 杂芳基基团的实例包括呋喃基、 噻吩基、 吡啶基、 吡咯、 N-垸基吡咯基、 嘧啶基、 吡嗪基、 咪唑基、 四唑基等。 杂芳基可以是取代的或未取代的， 当被取代时， 取代基优选为一个或多个， 独立 地选自烷基、 烷氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 芳基、 杂芳基、 羧酸或 羧酸酯。
"羟基 "指 -OH基团。
"烷氧基"指 -0- (烷基)和 -0- (未取代的环烷基)。 代表性实例包括但不限于甲氧 基、 乙氧基、 丙氧基、 丁氧基、 环丙氧基、 环丁氧基、 环戊氧基、 环己氧基等。 垸氧基可以是取代的或未取代的， 当被取代时， 取代基优选为一个或多个， 独立 地选自垸基、 垸氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 芳基、 杂芳基、 羧酸或 羧酸酯。
"卤素"指氟、 氯、 溴或碘。
"氨基 "指 -NH2。
"氰基 "指 -CN。
"硝基 "指 -N02。
"烷氧基"指 -0- (烷基)。
"羧酸 "指 (綜基) C(=0)OH。
"羧酸酯"指 (烷基) C(=0)0 (垸基）。
"药物组合物 "表示一种或多种本文所述化合物或其生理学上 /药学上可接受 的盐或前体药物与其他化学组分的混合物， 其他组分例如生理学 /药学上可接受的 载体和赋形剂。 药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。 . 本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的， 本发明采用如下技术方案:
Figure imgf000013_0001
( I A)
氨基取代的苯并多环与亚硝酸钠在酸性溶液中进行重氮化反应，再通过氯化亚 锡还原得到肼，肼与亲电的羰基化合物如乙酰乙酸乙酯、在适宜的溶剂中 (如乙酸、 乙醇等)加热下缩合得到通式 (IA)化合物。 流程图 II
Figure imgf000014_0001
取代的邻溴苯酚经硝酸钠硝化得到硝基苯酚，硝基苯酚在适宜的温度下与卤代 垸基， 如碘甲烷发生烷基化反应得到羟基被保护的硝基苯酚； 羟基被保护的硝基 苯酚与取代的芳基硼酸在四 (三苯基膦；)耙催化下发生 Suzuki 偶联， 或者与硼酸类 化合物反应， 得到的芳基硼酸类化合物与卤代化合物 发生 Suzuki .偶联， 得到 R,取代的芳基化合物； R,取代的芳基化合物在氢气氛下，钯 /碳还原得到芳基苯胺， 芳基苯胺在.溴化氢中去掉垸基得到去保护的苯胺。 或者， 取代的芳基化合物在溴 化氢中去掉垸基得到去保护的硝基化合物， 硝基化合物在氢气氛下， 钯 /碳还原得 到去保护的芳基苯胺。
将取代的苯胺类化合物与亚硝酸钠在适宜的酸性溶液 (如硝酸、 硫酸、 盐酸)中 重氮化， 再与通式 (IA)化合物在碱性溶液 (如碳酸氢钠、 碳酸氢钾)中发生偶联反应 得到通式 (I)化合物。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一歩描述本发明， 但这些实施例并非限制着本发明的 范围。
实施例 化合物的结构是通过核磁共振 (iHNMR)或质谱 (MS)来确定的。 'HNMR位移 (δ) 以百万分之一 (ppm)的单位给出。 1HNMR的测定是用 Bruker AVANCE-400核磁仪， 测定溶剂为氘代甲醇 (CD3OD)、 氘代氯仿 (CDC13)， 六氘代二甲基亚砜 (DMSO-d6) 内标为四甲基硅垸 (TMS)， 化学位移是以 10—6(pprr作为单位给出；
MS的测定用 FINNIGAN LCQAd (ESI)质谱仪 (生产商： Therm,型号： Finnigan LCQ advantage MAX;
IC50值的测定用. NovoStar酶标仪 (德国 BMG .公司）；
薄层硅胶使用烟台黄海 HSGF254或青岛 GF254硅胶板；
硅胶柱层析一般使用烟台黄海硅胶 200~300目硅胶为载体；
HPLC测试使用安捷伦 1200DAD高压液相色谱仪 (Sunfire C18 150><4.6mm色谱 柱)和 Waters 2695-2996高压液相色谱仪 (Gimini C18 150x4.6mm色谱柱）
加压氢化反应使用 Pau 3916EKX型氢化仪和清蓝 QL型氢气发生器；微波反应 使用 CEM Discover-S 908860型微波反应器；
实施例中无特殊说明， 反应均在氮气氛下进行；
氮气氛是指反应瓶连接一个约 1L容积的氮气气球；
氢气氛是指反应瓶连接一个约 1L容积的氢气气球；
实施例中无特殊说明， 反应中的溶液是指水溶液；
. TLC是指薄层色谱。 实施例 1
2'-羟基 -3'-ΓΝ'-ίί-節满- 5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢 [¾ -4-亚基) -肼基 1-联苯基 -3-羧
Figure imgf000015_0001
第一步
2-溴 -6-硝基苯酚
.将.60 mL浓硫酸稀释到 186 mL水中， 冷却至室温后加入硝酸钠 (79.2 g, 0.932 mol), 保持 25°C以下， 滴加邻溴苯酚 la(60 mL, 0.516 mol)， 室温反应 2小时。 TLC 跟踪至原料消失， 加入 320mL乙酸乙酯溶解析出的固体， 分别用水和饱和氯化钠 溶液洗涤， 用无水硫酸镁干燥， 过滤， 滤液减压浓缩， 用硅胶柱色谱法纯化所得 残余物， 得到标题产物 2-溴 -6-硝基苯酚 lb(48.2 g， 黄色固体)。 产率： 42.8%。 MS m/z(ESI): 218[M+1]
'HNMR(400MHZ, CDCb): 56.88-7.02(m, IH), 7.89-7.91(d, J=8Hz, IH), 8.12-8.15(m, IH), 11.18(s, IH) 第二步
1-溴 -2-甲氧基 -3-硝基苯
将 2-溴 -6-硝基苯酚 lb(46.55 g, 0.214 mol)溶解于 500 mL丙酮中， 加入碳酸钾
(35.36 g, 0.256 mol)和碘甲垸 (20.1 mL, 0.32 mol), 70°C加热回流 40小时。 TLC跟 踪至原料消失， 减压浓缩， 加入 1300 mL乙酸乙酯和 500 mL水， 水相用乙酸乙酯 萃取 (300mLx2)， 合并有机相， 分别用 4N盐酸和饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 用无水 硫酸镁干燥， 过滤， 滤液减压浓缩， 用硅胶柱色谱法纯化所得残余物， 得到标题 产物 1-溴 -2-甲氧基 -3-硝基苯 lc(44.59 g， 棕色固体)。 产率： 90.0%。
MS mix (ESI): 234[M+1] 第三歩
2'-甲氧基 -3'-硝基联苯基 -3-羧酸
将 1-溴 -2-甲氧基 -3-硝基苯 lc (23.25 g, 0.10 mol)、3-羧基苯基硼酸 (19.5 g, 0.117 mol)和四 (三苯基膦)钯 (8.86 g, 7.7 mol)溶解于 100 mL 2N碳酸钠溶液和 500 mLl,4- 二氧六环的混和溶剂中， 105°C加热回流 43小时。 TLC跟踪至原料消失， 减压浓 缩， 加入 300 mL 6N 盐酸溶液和 400 mL 乙酸乙酯， 水相用乙酸乙酯萃取 (200 mLx2), 合并有机相， 用无水硫酸镁干燥， 过滤， 滤液减压浓缩， 得到标题产物 2'-甲氧基 -3'-硝基联苯基 -3-羧酸 ld(53.93 g， 浅黄色固体)。
MS m/z (ESI): 272[M-1]
1HNMR(400MHz, CDC13): 53.44-3.46(d, J=8Hz,3H), 7.42-7.46(m, IH), 7.63-7.67(m, IH), 7.21-7.75(m, IH), 7.82-7.84(m, IH), 7.90-7.92(m, IH), 8.01-8.03(d, J=8Hz, IH), 8.11(s, IH) 第四步
2'-甲氧基 -3'-氨基联苯基 -3-羧酸
将 2'-甲氧基 -3'-硝基联苯基 -3-羧酸 Id (0.48 g, 1.74 mmol)溶解于 60 mL乙醇中， 加入 0.5g钯-碳和甲酸铵 (U g, 17.4mmol)， 80°C加热回流 20分钟。 TLC跟踪至原 枓消失， 过滤， 滤液减压浓缩， 干燥， 得到标题产物 2'-甲氧基 -3'-氨基联苯基 -3- 羧酸 le(0.42 g， 白色固体)。 产率： 93.3%。
MSm/z(ESl): 242 [M-1] 第五歩
3'-氨基 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐
将 2'-甲氧基 -3'-氨基联苯基 -3-羧酸 le (2.5 g, 10.3 mmol)溶解于 100 mL氢溴酸 溶液 (40%)中， 120Ό加热回流过夜。 TLC跟踪至原料消失， 减压浓缩， 用硅胶柱 色谱法纯化所得残余物， 得到标题产物 3'-氨基 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐 lf(2.4 g， 土黄色固体)， 产率： 88.8%。
MS m/z (ESI): 230[M+1]
[注： 参考文献： WO0189457]
第六歩
5-肼基茚满
冰浴下将 5-氨基茚满 lg (3.59 g, 27.0 mmol)溶解于 20 mL浓盐酸中， 搅拌 10 分钟。 滴加入 10 mL亚硝酸钠溶液 (1.86 g, 27.0 mmol), 冰浴下继续搅拌 15分钟备 用。
冰盐浴下将二水合氯化亚锡 (24.4 g, 108.0 mmol)溶解于 10 mL浓盐酸中， 将备 用中间体溶液加入其中， 升至室温反应 1.5小时。 冰浴下用 40%氢氧化钠溶液调 pH至 9， 加入 400 mL乙酸乙酯萃取， 减压浓缩， 干燥， 得到标题产物 5-肼基茚 满 lh(2.05 g， 红棕色固体)。 产率： 51.3%。
MS m/z (ESI): 149[M+1] 第七歩
2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮
将 5-肼基茚满 lh (2.05 g, 13.8 mmol)溶解于 50mL乙酸中， 加入乙酰乙酸乙酯 (1.76 mL, 13.8 mmol), 加热至 100°C过夜。 TLC跟踪至原料消失， 减压浓缩， 用硅 胶柱色谱法纯化所得残余物， 得到标题产物 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li(1.84 g, 黄色固体)。 产率： 62.3%。
MS m/z (ESI): 215[M+1]
'HNMR(400MHz, CDC13): 57.69(s, 1H), 7.60(d, J=8.0Hz, 1H), 7.24(d, J=8Hz, 1H), 3.44(s, 2H), 2.90-2.97(m, 4H), 3.2 l(s, 3H), 2.07-2.14(m, 2H)。 第八歩
2'-轻基 -3'-[Ν'- ( 茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 ]-联苯基 -3-羧 酸
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐 If (267 mg, 1.16 mmol)溶解于 10 mL盐酸 (IN) 中， 滴加入 10 mL亚硝酸钠溶液 (88 mg, 1.28 mmol)的， 再加入 2- 茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (249 mg, 1.16 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液 将反应液 pH调至 8， 加入 10 mL乙醇， 升至室温过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过 滤， 干燥， 用甲醇重结晶， 得到标题产物 2'-羟基 -3'-[Ν'-(1-茚满 -5-基 -3-甲基 -5-羰基 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基]-联苯基 -3-羧酸 1(60 mg, 黄色固体)。 产率： 11.4%。 MS m/z (ESI): 453[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-i¾: 62.03-2.10(m, 2H), 2.34 (s, 3H)， 2.86-2.93(m, 4H)， 7.13-7.17(m, 2H), 7.28-7.30(d, J = 8.1Hz, 1H), 7.60-7.82(m, 5H), 7.96-7.98 (d, J = 8.1 Hz, 1H)， 8.13 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 13.03 (s, 1H), 13.76 (s, 1H)0
实施例 2
Figure imgf000018_0001
第一步
2-溴 -4-氟 -6-硝基苯酚
冰盐浴下将 2-溴 -4-氟 -苯酚 2a(8.0 g, 41.9 mmol)溶解于 10 mL硫酸溶液 (50%) 中， 滴加入硝酸钠 (7.1 g, 83.5 mmol)的 24 mL硫酸溶液 (25 %)， 室温反应 1.5小时。 TLC跟踪至原料消失， 加入 50 mL水， 用乙酸乙酯萃取 (50 mLx2)， 合并有机相， 乙酸乙酯层分别用水和饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 用无水硫酸镁干燥， 过滤， 滤液 减压浓缩， 得到标题产物 2-溴 -4-氟 -6-硝基苯酚 2b(8.0 g， 红色固体)， 直接用于下 一步反应， 产率： 80.8%。 第二步
1-溴 -5-氟 -2-甲氧基 -3-硝基苯
将 2-溴 -4-氟 -6-ϊί肖基苯酚 2b (24.7 g, 104.7 mmol)和碳酸钾（17.34 g, 125.6 mmol) 溶解于 300 mL丙酮中， 快速加入碘甲垸 (9.8 mL, 157.1 mmol), 80°C加热回流 22 小时。 TLC跟踪至原料消失， 减压浓缩， 加入 200 mL乙酸乙酯和 200 mL水， 水 相用乙酸乙酯萃取 (100 mLx2)， 合并有机相， 分别用 4N盐酸和饱和碳酸氢钠溶液 洗涤， 用无水硫酸镁干燥， 过滤， 滤液减压浓缩， 用硅胶柱色谱法纯化所得残余 物，得到标题产物 1 -溴 -5-氟 -2-.甲氧基 -34肖基苯 2c(16.18 g，白色固体)。产率： 61.8%。 MS m/z (ESI): 252[M+1]
'H NMR (CDC13): δ 3.99(s, 3H), 7.81 (d, J = 8.0Hz, 1H)， 7.28 (q, J = 8.0Hz, 4.0Hz, 1 H) 7.89 (q, J = 8.0Hz, 4.0Hz, 1H)。 第三歩
5'-氟 -2'-甲氧基 -3'-硝基联苯基 -3-羧酸
将 1-溴 -5-氟 -2-甲氧基 -3-硝基苯 2c (16.18 g， 64.7 mmol)、3-羧基苯基硼酸 (13.88 g, 77.7 mmol)和四 (三苯基膦)钯 (3.73 g, 3.2 mmol)溶解于 65 mL碳酸钠溶液 (2N) 和 300 mLl ,4-二氧六环的混和溶剂中， 120°C加热回流 24小时。 TLC跟踪至原料 消失， 减压浓缩， 加入 150 mL盐酸溶液 (6N)和 200 mL乙酸乙酯， 水相用乙酸乙 酯萃取 (100 mLx2)， 合并有机相， 用无水硫酸镁干燥， 过滤， 滤液减压浓缩， .得到 标题产物 5'-氟 -2'-甲氧基 -3'-硝基联苯基 -3-羧酸 2d(7.86 g，黄色固体)。产率： 41.7%。 MS m/z (ESI): 290[M-1] 第四步
3'-硝基 -5'-氟 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸
将 5'-氟 -2'-甲氧基 -3'-硝基联苯基 -3-羧酸 2d (2.91 g, 10.0 mmol) 溶解于 10 mL 氢溴酸溶液 (40%)中， 120°C加热回流过夜。 TLC跟踪至原料消失， 减压浓缩， 用 硅胶柱色谱法纯化所得残余物， 得到标题产物 3'-硝基 -5'-氟 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸 2e(2.38 g, 黄色固体)， 直接用于下一歩反应。 产率： 85.7%。
MS m/z (ESI): 277[M-1] 第五歩
3'-氨基 -5'-氟 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸
将 3'-硝基 -5'-氟 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐 2e (417 mg， 1.5 mmol)溶解于 60 mL乙醇中，加入 0.5g钯-碳和甲酸铰 (0.95 g, 1.5 mmol), 80°C加热回流 20分钟。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 减压浓缩， 干燥， 得到标题产物 3'-氨基 -5'-氟 -2'-羟 基联苯基 -3-羧酸 2f(339 mg， 紫红色固体)。 产率： 91.5%。
MS m/z (ESI): 246[M-1] 第六歩
5'-氟 -2'-羟基 -3'-[N'-(l -茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基]-联苯基
-3-羧酸 冰浴下将 3'-氨基 -5'-氟 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸 2f (296 mg, 1.20 mmol)溶解于 10mL盐酸 (IN)中， 滴加入 10mL亚硝酸钠溶液 (91 mg, 1.32 mmol), 再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (257 mg, 1.20 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液将反 应液 pH调至 8， 加入 lO niL乙醇， 升至室温过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 干燥， 用甲醇重结晶， 得到标题产物 5'-氟 -2'-羟基 -3'-[Ν'-(1 -茚满 -5-基 1-3-甲基 -5- 氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基] -联苯基 -3-羧酸 2(87 mg,红色固体)。产率： 14.1%。 MS m/z (ESI): 471 [M-1]
'HNMR(400MHz, DMS0-d6): δ 2.02(m, 2H), 2.34(s, 3H), 2.87(m, 4H), 7.03(dd, Jl=9.2Hz, J2=2.8Hz, IH), 7.28(d, J=8.0Hz, IH), 7.48(m, IH), 7.6 l(m, 2H), 7.76(s, IH), 7.83(d, J=7.6Hz, IH), 7.98(d, J=8.0Hz, IH), 8.17(s, IH), 9.59(s, IH), 13.03(s, IH), 13.62(s, IH) '
实施例 3
2'-羟基- 3 N'-「3-甲基- 5-氧代小 (5.6,7,8-四氢萘 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基 1-肼基 联苯基 -3-羧酸
Figure imgf000020_0001
第一步
2-肼基 -5,6,7,8-四
冰浴下将 2-氨基 -5,6，7,8-四氢萘 3g (3.68 g, 25.0 mmol)溶解于 20 mL浓盐酸中， 搅拌 10分钟。滴加入 10 mL亚硝酸钠溶液 (1.72 g, 25.0 mmol),冰浴下继续搅拌 15 分钟备用。
冰盐浴下将二水合氯化亚锡 (22.6 g, 100 mmol)溶解于 10 mL浓盐酸中，将备用 中间体溶液加入其中， 升至室温反应 1.5小时。 冰浴下用 40%氢氧化钠溶液调 pH 至 9， 加入 400 mL乙酸乙酯萃取， 减压浓缩， 干燥， 得到标题产物 2-肼基 -5,6,7,8- 四氢萘 3h(2.19 g， 黄色油状液体)。 产率： 53.7%。
MS m/z (ESI): 163[ +1] 第二步 5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 将 2-肼基- 5,6,7,8-四氢萘 3h (2.0 g, 12.3 mmol)溶解于 50 mL乙酸中， 再加入乙 酰乙酸乙酯 (1.57 mL, 12.3 mmol), 加热至 100°C过夜。 TLC跟踪至原料消失， 减压 浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到标题产物 5-甲基- 2-(5,6,7,8-四氢萘 -2- 基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 3i(1.58 g， 无色油状液体)。 产率： 56.2%。
MS m/z (ESI): 457[2M+1]
'HNMR(CDC13): 87.54-7.58(m, 2H), 7.08-7.10(d, J=8Hz, IH), 3.43(s, 2H),
62.77-2.81(m, 4H), 2.21(s, 3H), 1.80-1.83(m, 4H). 第三步
2'-羟基 -3'-{N'-[3-甲基 -5-氧代 -l-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1，5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 联苯基 -3-羧酸
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐 If (250 mg, 1.09 mmol)溶解于 10 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 10 mL亚硝酸钠溶液 (82 mg, 1.2 mmol), 再加入 5-甲基 ,-2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 3i (249 mg, 1.09 mmol), 用饱和碳酸氢 钠溶液将反应液 pH调至 8， 加入 10 mL乙醇， 升至室温过夜。 TLC跟踪至原料消 失， 过滤， 干燥， 用甲醇重结晶， 得到标题产物 2'-羟基 -3'-{N'-[3-甲基 -5-氧代 -1-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 联苯基 -3-羧酸 3(59 mg, 黄色 固体)。 产率： 11.6%。
MS m/z (ESI): 467[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-d6): δ 1.75(m, 4H), 2.33(s, 3H), 2.70(m, 4H), 7.13(m, 3H), 7.36(m, IH), 7.60(m, 2H), 7.7 l(m, IH), 7.75(m, IH), 7.97(d, J=7.6Hz, IH), 8.14(s, 1H): 9.66(s, IH), 13.03(br, IH), 13.76(s, IH) 实施例 4
5'-氟 -2'-羟基 -3'4N'-「3-甲基 -5-氧代 -l-(5，6,7,8-四氢萘 -2-基 1.5-二氢吡唑 -4-亚基 肼基 }-联苯基 -3-羧酸
Figure imgf000021_0001
冰浴下将 3'-氨基 -5'-氟 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸 2f (250 mg, 1.01 mmol)溶解于 10 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 10 mL亚硝酸钠溶液 (77 mg, 1.12 mmol), 再加入 5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基)- 2,4-二氫吡唑 -3-酮 4i (230 mg, 1.01 mmol), 用饱和碳酸氢 钠溶液将反应液 pH调至 8， 加入 10mL乙醇， 升至室温过夜。 TLC跟.踪至原料消 失， 过滤， 干燥， 用甲醇重结晶， 得到标题产物 5'-氟 -2'-羟基- 3'-ίΝ'-Γ3-甲基 -5-氧 代 -1 -(5,6,7，8-四氢萘 -2-基) -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-联苯基 -4-羧酸 4(64 mg, 红 色固体)。 产率： 13.1%。
MS m/z (ESI): 485 [M-l]
'HNMR(400MHz, DMSO-i 6): δ 1.74(m, 4H)， 2.33(s, 1H), 2.73(m, 4H), 7.02(dd, Jl=9.2Hz, J2=2.0Hz, 1 H), 7.11 (d， d=8.0Hz, 1H), 7.47(m, 1H), 7.63(m, 3H), 7.82(d J=7.6Hz, 1 H), 7.98(d, J=7.6Hz, 1H), 8.18(s, 1H), 9.58(s, 1H), 13.05(s, 1H), 13.62(s, 1H) 实施例 5
3'-Γ '-Π -双环『4.2.01 辛垸 -1ί6),2.4-三烯 -3-基 -3-甲基 -5-氧代 -1.5-二氢吡唑 -4-亚基) - 肼基 1-2'-羟基联苯基 -3-羧酸
Figure imgf000022_0001
第一步
3-溴 -双环 [4.2.0]辛垸 -1(6),2,4-三烯
室温下，将双环 [4.2.0]辛垸 -1(6),2,4-三烯 5a(7.9 g, 76 mmol)溶解于 80 mL水中， 冰浴冷却后缓慢滴加 3.9 mL溴， 加毕撤去冰浴， 反应混合物缓慢升至室温后搅拌 过夜。 TLC监测反应至原料反应完全， 停止反应。 向反应液中加入 50 mL正已烷 Na2S03(3 g， 23.8 mmol), 加毕于室温下搅拌 30分钟。 反应混合物分液后取有 机层用无水硫酸钠干燥， 过滤除去干燥剂， 有机相减压浓缩得到标题产物 3-溴-双 环 [4.2.0]辛垸 -1(6),2，4-三烯 5b(13.53 g， 无色油状液体)， 直接投入下步反应。
MS m/z (ESI): 181.8[M-1] 第二歩
(N-双环 [4.2.0]辛垸 -1(6)，2,4-三烯 -3-基 -Ν'-叔丁氧羰基-肼基) -碳酸叔丁酯 将 3-溴-双环 [4.2.0]辛垸 -1(6),2,4-三烯 5b(13.5 g， 73.8 mmol)溶解于 100 mL四 氢呋喃 (千燥)中， 用干冰-乙醇浴冷却至 -78°C后加入正丁基锂 (66 mL， 165 mmol), 加毕继续低温搅拌。 将偶氮二甲酸二叔丁酯 (20.1 g， 87.4 mmol)溶解于 80 mL四氢 呋喃 (千燥)中， 缓慢加入到上述反应液中， 加毕撤去干冰-乙醇浴， 反应体系温度 缓慢升至室温后搅拌过夜。 TLC 监测原料反应完全后停止反应。 向反应体系中加 入 100 mL水淬灭反应， 反应液分液， 水相用乙酸乙酯萃取 (100 mLx2)， 合并有机 相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤 (150 mLx l),无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂， 滤液经柱层析得到标题产物 (N-双环 [4.2.0]辛烷 -1(6),2,4-三烯 -3-基 -Ν'-叔丁氧羰基- 肼基) -碳酸叔丁酯 5c(4.07 g， 黄色油状液体)， 产率： 16.5 %。 第三步
2-双环 [4.2.0]辛垸 -1(6),2,4-三烯- 3-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 将 (N-双环 [4.2.0]辛烷 -1(6),2,4-三烯 -3-基- Ν'-叔丁氧羰基-肼基) -碳酸叔丁酯
5c(4.0 g， 12 mmol)溶解于 30 mL乙酸中， 加入 30 mL三氟乙酸， 室温搅拌 30分 钟， 向反应体系中加入 3-氧代-丁酸甲酯 (1.6 mL， 15 mmol)于 100Ό油浴中搅拌 1.5 小时， TLC表明原料反应完全，停止反应。反应液减压蒸除溶剂，分批加入 100 mL 水， 60 mL 乙酸乙酯和碳酸钠 (3 g)， 加毕反应液分液， 水相用乙酸乙酯萃取 (40 mLx2),合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤 (lOO mLx l),无水硫酸钠干燥， 过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩后柱层析得到标题产物 2-双环 [4.2.0]辛垸 -1(6),2,4- 三烯 -3-基 -5-甲基- 2,4-二氢吡唑 -3-酮 5d(910 mg， 黄色固体)， 产率： 37.9%。
MS m/z (ESI): 201.2[M+ 1] 第四步
3'-[Ν'-(1-双环 [4.2.0]辛垸 -1(6),2,4-三烯 -3-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) - 肼基] -2'-羟基联苯基 -3-羧酸
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸 If (258 mg, 0.83 mmol)溶解于 10 mL盐 酸 (IN)中， 滴加入 10 mL亚硝酸钠溶液 (63 mg, 0.92 mmol), 再加入 2-双环 [4.2.0] 辛垸 -1(6),2,4-三烯 -3-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 5d (150 mg, 0.75 mmol), 用饱和 碳酸氢钠溶液将反应液 pH调至 8, 加入 10 mL乙醇， 升至室温搅拌过夜。 TLC跟 踪至原料消失， 过滤。 所得固体溶于 30 mL水中， 用浓盐酸调节 pH至 3-4左右， 继续过滤所得固体用二氯甲烷洗涤 (8 mL) , 干燥后得到标题产物 3'-[Ν'-(1-双环 [4.2.0]辛烷 -1(6),2,4-三烯 -3-基 -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 ]-2'-羟基联 苯基 -3-羧酸 5(198 mg， 红色固体)， 产率： 60 %。
MS m/z (ESI )： 439.5[M-1] 'H MR(400MHz, DMSO /6): δ 2.33(s, 3H), 3.16(m, 4H), 7.14(m, 3H), 7.64(m, 2H); 7.79(m, 2H), 7.80(m, 1H), 7.98(m, 1H), 8.18(s, 1H), 9.61(s, 1H), 12.93(br, 1H), 13.75(br, 1H) 实施例 6
5-(2-羟基 -3-ίΝ'-「3-甲基 -5-氧代 -l-(5.6.7.8-四氢萘亚甲基 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚 基 1-肼基 苯) -1 ,2,4-三甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酉 I
Figure imgf000024_0001
第一步
2-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -4,4,5,5-四甲基 -[1 ,3,2]硼酸乙二醇酯 将 1-溴 -2-甲氧基 -3-硝基苯 lc (67 g, 0.289 mol)、 4,4,4',4，,5,5,5，,5，-八甲基 -2,2'- 联 -1,3,2-硼酸乙二醇酯（110 g, 0.433 mol)、四 (三苯基膦)钯 (11.80 g, 14.44 mmol)和乙 酸钾 (71 g, 0.724 mol)溶解于 600 mL 乙二酸二甲醚中， 加热回流 17小时。 TLC跟 踪至原料消失， 减压浓缩， 用硅胶柱层析分离纯化， 得到标题产物 2-(2-甲氧基 -3- 硝基苯基) -4，4,5,5-四甲基 -[1 ,3,2]硼酸乙二醇酯 6a(50.5 g, 黄色晶体)。产率： 61.9%。
第二步
3,5-二甲基 -1H-吡咯 -2,4-二羧酸 4-乙酯
冰浴下， 将 3,5-二甲基 -1H-吡咯 -2,4-二羧酸 2-叔丁酯 4-乙酯 6b(5.34 g， 20 mmol)溶解于三氟醋酸中 (7.4 mL， 100 mmol), 搅拌 2小时， TLC监测反应至原料 反应完全， 向反应液中加入 40 mL水， 过滤， 滤饼用二氯甲烷洗涤后干燥， 得到 标题产物 3,5-二甲基 -1 H-吡咯 -2,4-二羧酸 4-乙酯 6c(3.65 g， 粉色固体)， 产率： 86.5%。
MS m/z (ESI): 209.8[M-1] 第三步
5-碘 -2,4-二甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯
将 3,5-二甲基 -1 H-吡咯 -2,4-二羧酸 4-乙酯 6c(3.65 g, 17.3 mmol)加入到 l OO mL 二氯甲垸和 10 mL水的混合溶剂中，再加入碘化钾 (11.5 g， 69.2 mmol)和碘 (4.39 g， 17.3 mmol), 加毕加热回流 2小时， TLC监测反应至原料反应完全， 反应液冷却至 室温， 加入 20 mL水和 lO mL硫代硫酸钠溶液 (2M；)， 用二氯甲垸萃取 (30 mL <3)， 合并有机相， 有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸镁干燥， 过滤除去干燥剂， 滤 液减压浓缩得到标题产物 5-碘 -2,4-二甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 6d(4.1 g, 橙色固 体）， 产率： 80.8%。 第四歩
5-碘 -1,2,4-三甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 .
将 5-碘 -2,4-二甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 6d(4.1 g, 13.99 mmol)溶解于 80 mL四 氢呋喃中， 加入 4-甲基苯磺酸甲酯 (2.73 g， 14.69 mmol)和叔丁醇钠 (2.02 g， 20.99 mmol), 加毕室温搅拌 0.5小时， TLC监测反应至原料反应完全， 反应液过滤， 滤 饼用四氢呋喃洗涤， 滤液减压浓缩， 得到标题产物 5-碘 -1,2,4-三甲基 -1H-吡咯 -3- 羧酸乙酯 6e(3.8 g, 灰色固体)， 产率： 88.6%。
MS m/z (ESI): 308.1 [M+1]
'HNMR(400MHz, CDC13): δ 4.287〜4.340(q, 2H), 3.561(s, 3H), 2.618(s, 3H), 2.888(s, 3H), 1.369-1.405(t, 3H) 第五步
5-(3-硝基 -2-甲氧基 -苯基 )-1,2,4-三甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 将 5-碘 -1,2,4-三甲基 -1 H-吡咯 -3-羧酸乙酯 6e(2.88 g， 9.38 mmol)溶解于 25 mLl ,4-二氧六环中， 加入 2-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -4,4,5,5-四甲基 -[1,3,2]硼酸乙二 醇酉旨 6a (3.6 g， 10.3 mmol) 四 (三苯基膦)钯 (270 mg， 0.234 mmol),碳酸钠（1.99 g， 18.77 mmol)和 10 mL水， 加毕加热回流 3小时， TLC监测反应至原料反应完全， 反应液冷却至室温， 加入 30 mL水， 用乙酸乙酯萃取 (30 ηΛχ3)， 合并有机相， 有 机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸镁干燥， 过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩得到 标题产物 5-(3-硝基 -2-甲氧基 -苯基 )-1，2,4-三甲基 -1Η-吡咯 -3-羧酸乙酯 6f(1.25 g，黄 色油状液体)， 产率： 40.4%。
MS m/z (ESI): 333.2[M+1]
'H MR(400MHz, CDC13): δ 7.817-7.84 l(m, 1H), 7.457~7.476(m, 1H), 7.284〜7.324(m, 1H), 4.322~4.375(q, 2H), 3.521 (s, 3H), 3.316(s, 3H), 2.625(s, 3H); 2.177(s, 3H), 1.398-1.434(t, 3H) 第六歩
5-(3-氨基 -2-甲氧基 -苯基 )-1,2,4-三甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 将 5- (3-硝基 -2-甲氧基 -苯基 )-1,2,4-三甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 6f(300 mg， 0.9 mmol)溶解于 5 mL乙酸乙酯中， 加入甲酰胺 (227 mg， 1.61 mmol)和 60 mg钯 /碳， 加热回流 1 小时， TLC监测反应至原料反应完全， 反应液过滤， 滤饼用乙酸乙酯 洗涤， 滤液减压浓缩得到标题产物 5-(3-氨基 -2-甲氧基 -苯基 )-1,2,4-三甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 6g(234 mg， 白色固体)， 产率： 86%。
MS m/z (ESI): 303.4[M+1]
'HNMR(400MHz, CDC13): δ 6.968~7.006(m, 1Η), 6.817~6.840(m, 1H),
6.595〜6.618(m, 1H)， 4.31卜 4.364(q, 2H), 3.381(s, 3H), 3.315(s, 3H)， 2.615(s, 3H), 2.181(s, 3H), 1.391~1.426(t, 3H) 第七歩
5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -1,2，4-三甲基 -】H-吡咯 -3-羧酸乙酯氢溴酸盐 将 5-(3-氨基- 2-甲氧基 -苯基 )- 1,2,4-三甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 6g(210 mg， 0.69 mmol)溶解于 5 mL二氯甲垸中， 加入溴化硼（1.39 mL, 2.78 mmol), 室温反应 0.5 小时， TLC 监测反应至原料反应完全， 用甲醇淬灭反应， 反应液减压浓缩后加入 50 mL乙酸乙酯和 15 mL饱和碳酸氢钠溶液， 搅拌均匀后分液， 有机相用饱和食 盐水洗涤， 无水硫酸镁干燥，'过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩后柱层析得到标题 产物 5-(3-氨基 -2-羟基苯基)- 1,2，4-三甲基 -1H-吡咯- 3-羧酸乙酯氢溴酸盐 6h(165 mg， 白色固体)， 产率： 82.5%。
MS m/z (ESI): 289.3[M+1]
'HNMR(400MHz, DMSO-t d): δ 7.313~7.396(m, 1H), 7.098-7.117(m, 1H),
6.993〜7.032(m， 1H)， 4.173~4.227(q, 2H), 3.221(s, 3H), 1.979(s, 3H), 1.242-1.295(t, 3H) 第八步
5-(2-羟基 -3-{N'-[3-甲基 -5-氧代 -1- (5,6,7,8-四氢萘亚甲基 -2-基)- 1,5-二氢吡唑 -4-亚 基] -肼基 苯 )-1,2,4-三甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -1,2,4-三甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯氢溴酸盐 6h (140 mg， 0.51 mmol)溶解于 1.76 mL盐酸 (IN)中，滴加入 1 mL亚硝酸钠溶液 (39 mg， 0.56 mmol), 搅拌 20分钟， 再加入 5-甲基 -2-(5,6,7，8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3- 酮 3i (105 mg, 0.46 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液将反应液. pH调至 8， 加入 1 mL 乙醇， 升至室温过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 滤饼干燥后用二氯甲垸溶解， 用饱和食盐水洗涤， 有机相减压浓缩后柱层析， 得到标题产物 5-(2-羟基 -3-{N'-[3- 甲基 -5-氧代 -1-(5,6,7,8-四氢萘亚甲基 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 苯) -1 ,2,4- 三甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 6(120 mg， 红色固体 )。 产率： 50.8%。
MS m/z (ESI): 514.1 [M+1]
'HNMR(400MHz, DMSO-C 6): 51.84(m,4H), 2.14(s,3H), 2.41(s,3H), 2.57(s,3H), 2.80(m,4H), 3.34(s,3H), 3.87(s,3H), 6.51(m,lH), 7.00(d,J=7.6Hz,l H), 7.11(m,2H), 7.71(m,2H), 13.82(br,lH) 实施例 7
3'-{Ν'-Π-(2.3-二氢苯并呋喃 - 5-基) -3-甲基- 5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基卜肼基 2'-羟
Figure imgf000027_0001
7a 7b 7c 第一步
1- (2,3-二氢苯并呋喃基)肼基 -1,2-二羧酸二 (2,2,2-三氯乙酯） 将 2，3-二氢苯并呋喃 7a (0.6 mL, 5.32 mmol), 二 (2,2,2-三氯乙基)偶氮二碳酸酯 (1.96 g, 5.15 mmol)和氯化锌 (920 mg, 6.76 mmol)溶解于 40 mL二氯甲烷中，室温反 应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 用硅胶柱层析分离纯化， 得到标题产物 1-(2,3-二 氢苯并呋喃基)肼基 -1,2-二羧酸二 (2,2,2-三氯乙酯) 7b(2.5 g， 白色固体）。 产率： 96.6%。 第二步
2- (2,3-二氢苯并呋喃 -5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 将 】-(2,3-二氢苯并呋喃基)肼基 -1 ,2-二羧酸 二 (2,2,2-三氯乙酯) 7b (2.9 g, 5.8 mmol)溶解于 50 mL乙醇和 5 mL甲醇的混合溶剂中，再加入锌粉 (10.8 g, 166 mmol) 和乙酸铵溶液 (15 mL, 1 mol/L)室温反应 1小时， 滴加乙酰乙酸乙酯 (0.75 mL, 5.9 mmol), 加热回流 2小时。 TLC跟踪至原料消失， 将反应液冷却至室温， 过滤， 滤 液减压浓缩后用硅胶柱色谱法纯化， 得到标题产物 2-(2,3-二氢苯并呋喃 -5-基) -5-
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100000/600ZN3/X3d 氩气氛下将 3-溴-苯甲腈 8a(18.2 g, 0.1 mol)和氯化按 (5.9 g, 0.11 mol)溶解于 80 mLN,N'-二甲基甲酰胺中， 再加入叠氮化钠 (7.16 g, 0.11 mol)， 加热至 100°C反应过 夜。 冷却至 60°C， 减压浓缩除去 Ν,Ν'-二甲基甲酰胺， 加入 100 mL水和 4 mL浓 盐酸， 搅拌 1小时， 过滤， 干燥， 得到标题产物 5-(3-溴-苯基) -1H-四唑 8b(23 g， 白色固体)。 第二歩
5-(2'-甲氧基-联苯基 -3-基) -1H-四唑
氩气氛下将 5-(3-溴-苯基) -1 H-四唑 8b(20 g, 89 mmol)和邻甲氧基苯硼酸 (14.2 g, 93.3 mmol)溶解于 530 mL 1，4-二氧六环中， 加入四 (三苯基膦)钯 (1.84 g)和碳酸钠 (18.9 g, 178 mmol) , 加热回流过夜。 TLC跟踪至原料消失， 减压浓缩除去 1，4-二氧 六环， 加入盐酸 (200 mL, 6 mol/L)， 冷却 2小时， 弃去水层， 残余物溶解于 500 mL 乙酸乙酯中，用 250 mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物溶解于 25 mL 乙酸乙酯中， 静置过夜， 过滤， 得到标题产物 5-(2'-甲氧基-联苯基 -3-基) -1 H-四唑 8c(15 g， 淡黄色固体）。 产率： 68.2%。 第三步
3'-(1 H-四唑 -5-基) -联苯基 -2-醇
氩气氛下将 5-(2'-甲氧基-联苯基 -3-基;) -1 H-四唑 8c(15.5 g, 61.5 mol)溶解于 195 mL 乙酸中， 加入 195 mL氢溴酸， 加热回流 5小时。 TLC跟踪至原料消失， 冷却 过夜， 过滤， 固体溶解于 500 mL乙酸乙酯中， 用水洗涤 (500 tnLx2), 无水硫酸钠 干燥， 过滤， 减压浓缩， 加入 100 mL乙酸乙酯重结晶， 得到标题产物 3'-(1 Η-四唑 -5-基)-联苯基 -2-醇 8d(12 g， 白色固体)。 产率： 82.8%。 第四步
3-硝基 -3'-(1Η-四唑 -5-基) -联苯基 -2-醇
氩气氛下将 3'-(1Η-四唑 -5-基) -联苯基 -2-醇 8d(3.5 g, 14.7 mmol)溶解于 145mL 乙醇中， 35 °C下滴加发烟硝酸 (0.565 mL， 13.2 mmol), 室温反应 1小时， 加入 150 mL水， 静置过夜， 过滤， 固体用 100 mL水洗涤， 溶解于 500 mL乙酸乙酯和 250 mL水中， 萃取， 有机相用饱和氯化钠溶液洗涤， 无水硫酸镁干燥， 用硅胶柱层析 分离纯化，得到标题产物 3-硝基 -3'-(1Η-四唑 -5-基) -联苯基 -2-醇 8e(l g，黄色固体)。 产率： 27.0%。
MS m/z (ESI): 282[M-1] 第五步
3-氨基 -3'-(1Η-四唑- 5-基)-联苯基 -2-醇 盐酸盐 将 3-硝基 -3'-(1Η-四唑 -5-基) -联苯基 -2-醇 8e (2.5 g, 8.83 mmol)溶解于 118 mL乙 醇和 78.6 mL水中， 再加入氢氧化钠溶液 (2.95 mL, 3 mol/L)和 313 mg钯 -碳， 于氢 化仪中在 3个大气压下用氢气氢化， 室温反应 3小时。 TLC跟踪至原料消失， 过 滤， 滤液中加入盐酸 (60 mL, 3 mol/L)， 减压浓缩， 向残余物中加入少量水， 过滤， 固体用少量水和正己垸洗涤， 干燥， 得到标题产物 3-氨基 -3'-(1Η-四唑 -5-基:) -联苯 基 -2-醇盐酸盐 8f(2.33 g， 红棕色固体；)。
MS m/z (ESI): 252[M+1] 第六步
1- (3,3-二甲基茚满 -5-基)肼基 -1，2-二羧酸 二 (叔丁酯） 将 6-溴 -1,1-二甲基茚满 (WO2005066115) 8g (4.32 g, 19.27 mmol)溶解于 40mL 四氢呋喃中， -78°C下滴加丁基锂（15.67 mL, 1.6mol/L, 25.05 mmol), 反应 40分钟， 加入偶氮二甲酸二叔丁酯 (5.32 g, 23.12 mmol)的 30 mL四氢呋喃溶液， -78°C下继 续反应 3小时。 TLC跟踪至原料消失， 加入 5mL甲醇， 反应液升至室温， 用硅胶 过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱层析分离纯化，得到标题产物 1-(3,3-二甲基茚满 -5- 基)肼基 -] ,2-二羧酸 二 (叔丁酯) 8h(2.70 g， 黄色固体)。 产率： 37.2%。 第七步
2- (3,3-二甲基茚满- 5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 将 1-(3,3-二甲基茚满 -5-基)肼基 -1,2-二羧酸 二 (叔丁酯 )8h (2.70 g, 7.18 mmol) 溶解于 lOOmL乙酸中， 加入 20 mL三氟乙酸， 室温反应 2小时， 加入乙酰乙酸乙 酯 (0.98 g, 7.54 mmol), 加热至 100Ό反应 2小时。 TLC跟踪至原料消失， 冷却至室 温， 减压浓缩除去乙酸， 用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液中的酸， 用乙酸乙酯萃 取， 合并有机相， 用饱和氯化钠溶液洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩， 用硅胶柱色谱法纯化所得残余物， 得到标题产物 2-(3,3-二甲基茚满 -5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 8i 1.0 g， 淡褐色固体；)。 产率： 47.7%。
MS m/z (ESI): 243 [M+l] 第八步
2-(3,3-二甲基茚满 -5-基) -4-{[2-羟基 -3'-(1Η-四唑 -5-基)-联苯基 -3-基] -肼基 }-5-甲基
-2,4-二氢吡唑 -3-酮
冰浴下将 3-氨基 -3'-(1Η-四唑 -5-基)-联苯基 -2-醇盐酸盐 8f (290 mg, 1.0 mmol)溶 解于盐酸 (3.4 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 1.2 mL亚硝酸钠溶液 (73 mg, 1.05 mmol), 反 应 10分钟， 再加入 2-(3,3-二甲基茚满 -5-基;) -5-甲基 -2，4-二氢吡唑 -3-酮 8i (218 mg, 0.9 mmol), 分批加入碳酸氢钠 (1.26 g, 15 mmol)和 4.4 mL乙醇， 室温反应 10小时。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 固体用 20 mL水洗涤， 再溶解于 20 mL水中， 冰浴 下用浓盐酸调节 pH<5， 过滤， 干燥， 得到标题产物 2-(3,3-二甲基茚满 -5-基) -4-{[2- 羟基 -3'-(1Η-四唑 -5-基)-联苯基 -3-基] -肼基 }-5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 8(336 mg，黄 色固体)。 产率:. 73.8%。
MS m/z (ESI): 505 [M-l]
'HNMR(400MHz, DMSO-C 6): 8 1.24(m, 6H), 1.92(t, J=7.2Hz, 2H), 2.36(s, 3H), 2.87(t, J=7.2Hz, 2H), 7.2 l(m, 3H), 7.73(m, 5H), 8.08(d, J=7.6Hz, IH), 8.25(s, IH), 9.77(s, I H): 13.80(s, IH) 实施例 9
5-{2-羟基 -3-ΓΝ'-Π-茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 1-苯基 呋 喃 -2-羧酸
Figure imgf000031_0001
9c
第一歩
5-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -呋喃 -2-羧酸
将 2-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -4,4,5,5-四甲基 -[1,3，2]硼酸乙二醇酯 6a (10 g, 35.85 mmol), 5-溴 -呋喃 -2-羧酸 (5.47 g, 28.66 mmol), 四 (三苯基膦)钯 (2.07 g, 1.79 mmol) 和碳酸钠 (7.60 g, 71.66 mmol)溶解于 200 mL 1,4-二氧六环和 30 mL水的混合溶剂 中， 加热回流 2.5小时。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 滤液减压浓缩， 向残余物中 加入 150 mL水， 用 1N盐酸酸化至 pH〜3， 过滤， 固体用 50 mL正己烷和乙酸乙 酯的混合溶剂 (1/1)洗涤， 千燥， 得到标题产物 5-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -呋喃 -2-羧 酸 9a(4.23 g， 灰白色固体；)。 产率： 56.1%。
MS m/z (ESI): 262[M-1] 笛
一一丄!^
少
-(3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -呋喃 -2-羧酸 将 5-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -呋喃 -2-羧酸 9a (4.23 g, 16.09 mmol)溶解于 125mL 乙酸乙酯中， 再加入 423 mg钯 -碳和甲酸铵 (4.054 g, 64.35 mmol) , 加热回流 3.5小 时。 TLC 跟踪至原料消失， 减压浓缩， 用硅胶柱色谱法纯化所得残余物. 得到标 题产物 5-(3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -呋喃 -2-羧酸 9b(2.79 g，淡绿色固体)，产率： 74.4%。
MS m/z (ESI): 232[M- 1 ]
笛二
^ _ > -少·
5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 将 5-(3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -呋喃 -2-羧酸 9b (2.79 g, 11.97 mmol)溶解于 25 mL 二氯甲烷中， 滴加入三溴化硼 (23.9 mL, 2.0 mol/L)， 室温反应 1小时。 TLC跟踪至 原料消失， 加入 5 mL甲醇， 减压浓缩， 向残余物中加入 100 mL乙酸乙酯， 搅拌 1 小时， 过滤， 收集固体， 干燥， 得到标题产物 5- 3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧 酸氢溴酸盐 9c (1 .24 g， 黄色固体)。 产率： 47.2%。
MS m/z (ESI): 218[M- 1] 第四歩
冰浴下将 5-C3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 9c (300 mg, 1.0 mmol)溶 解于盐酸 (3.4 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 1 .2 mL亚硝酸钠溶液 (73 mg, 1.05 mmol), 反 应 10分钟， 再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (193 mg, 0.9 mmol) , 分批加入碳酸氢钠 (1.26 g, 15 mmol)和 4.4 mL乙醇， 室温反应 24小时。 TLC跟踪 至原料消失， 过滤， 固体用 20 mL水洗涤， 再溶解于 20 mL水中， 冰浴下用浓盐 酸调节 pH<5， 过滤， 干燥， 得到标题产物 5-{2-羟基 -3-[Ν'-(1-茚满 -5-基 -3-甲基 -5- 氧代 - 1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基] -苯基 呋喃 -2-羧酸 9(287 mg, 黄色固体)。 产率： 71.8%。
MS m/z (ESI): 443 [M- l ]
' HNMR(400MHz, OMSO-d6): δ 2.03(m, 2H), 2.32(s, 3H), 2.89)m, 4H), 7.15(m, 1 H), 7.22(t, J=8.0Hz, 1 H), 7.29(d, J=8.0Hz, 1 H), 7.36(d, J=3.6Hz, 1 H), 7,57(m, 1 H), 7.70(m, 2H), 7.78(s, 1 H), 9.97(s, 1H), 13.73(s, 1 H) 实施例 10
4- {「2-羟基 -3'-( 1 H-四唑 -5-基)-联苯基 -3-基 1-亚肼基 5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2- 基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮
Figure imgf000032_0001
Figure imgf000033_0001
冰浴下将 3-氨基 -3'-(1Η-四唑 -5-基)-联苯基 -2-醇盐酸盐 8f (340 mg, 1.34 mmol) 溶解于 3 mL IN盐酸中， 滴加入 3 mL亚硝酸钠溶液 (98 mg, 1.41 mmol), 反应 10 分钟， 再加入 5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 3i (276 mg, 1.21 mmol), 分批加入碳酸氢钠 (1.69 g, 20 mmol)和 3 mL乙醇， 室温反应 18小时。 TLC 跟踪至原料消失， 过滤， 固体用 20 mL水洗涤， 再溶解于 20 mL水中， 冰浴下用 浓盐酸调节 pH=3〜4， 过滤， 干燥， 得到标题产物 4-{[2-羟基 -3'- (1H-四唑 -5-基) - 联苯基 -3-基]-亚肼基 }-5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 10(208 mg, 黄色固体）。 产率： 31.6%。
MS m/z (ESI): 491 [M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-i¾: δ 8.19(1H, s), 7.99(1H, s), 7.69(2H, t, .T=8,8),
7.49(2H，d,J=7.6), 7.15(3H,m), 2.75(4H,m), 2.39(3H,s), 1.75(4H,m) 实施例 11
2'-羟基 -5'-甲基 -3'-W'-f3-甲基 -5-氧代 - 5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚
Figure imgf000033_0002
11f 第一步
2-溴 -4-甲基 -6-硝基苯酚 -5 °C下将硝酸钠 (28 g, 0.33 mmol)溶解于 70 mL浓硫酸和 210 mL水的混合溶 剂中， 缓慢滴加 2-溴 -4-甲基苯酚 11a (30.8 g, 0.165 mol)， 冰浴反应 2小时， 升至室 温反应 1小时。 TLC跟踪至原料消失， 加入 200 mL乙酸乙酯萃取， 有机相用水洗 涤 (100 mLx5;i， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩， 用硅胶柱层析分离纯化， 得到 标题产物 2-溴 -4-甲基 -6-硝基苯酚. llb(22.24 g, 黄色固体)。 产率： 58.1 %。
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): δ 2.29 ( s,3H ) , 7.81(m,2H), 10.76(s,l H) 第二歩
1-溴 -2-甲氧基 -5-甲基 -3-硝基苯
将 2-溴 -4-甲基 -6-硝基苯酚 lib (22.24 g, 95.9 mmol)溶解于 150 mL丙酮中， 加 入碳酸钾（15.9 g, 115 mmol)和碘甲垸 (13.7 mL, 220.6 mmol)， 加热回流过夜。 TLC 跟踪至原料消失， 过滤， 滤液减压浓缩， 向残余物中加入 100 mL乙酸乙酯， 再次 过滤， 减压浓缩， 得到标题产物 1-溴 -2-甲氧基 -5-甲基 -3-硝基苯 llc(23.1 g， 橙色 固体)。 产率： 97.9%。 第三步
2'-甲氧基 -5'-甲基 -3'-硝基联苯基 -3-羧酸
将 溴 -2-甲氧基 -5-甲基 -3-硝基苯 11c (15.0 g, 61 mmol)和间羧基苯硼酸 (11.6 g， 70.1 mmol)溶解于 200mLl,4-二氧六环中， 再加入四 (三苯基膦)钯 (2.8 g， 2.44 mmol)和 61 mL碳酸钠溶液 (12.9 g, 122 mmol), 加热回流过夜。 TLC跟踪至原料消 失， 减压浓缩， 向残余物中加入 500 mL水， 用 150 mL正己烷和 150 mL乙酸乙酯 的混合溶剂洗涤， 再用乙酸乙酯洗涤 (300 mLx2)， 水相用浓盐酸调节 pH至 1〜2， 过滤， 收集固体干燥， 得到标题产物 2'-甲氧基 -5'-甲基 -3'-硝基联苯基 -3-羧酸 lld(15.4 g, 黄色固体）， 产率： 88.1%。
'HNMR(400MHz, DMSO-i 6): δ 2.40(s,3H), 3.42(s,3H), 7.58(s,lH), 7.58-7.75(m,lH),
7.75(d,J=1.6Hz,lH), 7.82-7.84(m,lH), 8.02(d,J=8Hz,lH), 8.11(d,J=1.6Hz,l H),
13.12(s,lH) 第四步
2'-羟基 -5'-甲基 -3'-硝基联苯基 -3-羧酸
将 2'-甲氧基 -5'-甲基 -3'-硝基联苯基 -3-羧酸 lid (1 1.2 g, 39.0 mmol)溶解于氢溴 酸溶液 (250 mL， 40%)中， 加热回流过夜。 TLC跟踪至原料消失， 将反应液冷却至 室温， 过滤， 固体用少量水和正己垸洗涤， 干燥， 得到标题产物 2'-羟基 -5'-甲基 -3'- 硝基联苯基 -3-羧酸 lle(9.15 g， 黄色固体)。 产率： 85.9%。
MS m/z (ESI): 272[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): 62.36(s,3H),7.60(m,2H), 7.78(d,J=8Hz,lH),
7.88(d,J=1.2Hz,lH), 7.97(d,J=8Hz,lH), 8.11(s,lH), 10.44(s,lH),】3.06(s,l H) 第五步
3'-氨基 -2'-羟基 -5'-甲基联苯基 -3-羧酸盐酸盐 将 2'-羟基 -5'-甲基 -3'-硝基联苯基 -3-羧酸 lie (9.15 g, 33.5 mmol)溶解于 200 mL 乙酸乙酯， 加入 2g钯-碳和甲酸铵 (8.45 g, 134 mmol)， 加热回流 30分钟。 TLC跟 踪至原料消失， 将反应液， 过滤， 滤液用盐酸酸化， 过滤， 干燥， 得到标题产物 3'-氨基 -2'-羟基- 5'-甲基联苯基- 3-羧酸盐酸盐 llf(6.65 g， 白色固体)。 产率： 71.0%。 MS m/z (ESI): 242[M-1]
'HNMR(400MHz, OMSO-d6): 52.29(s,3H), 7.09(d,J=1.6Hz,lH), 7.14(d,J=1.6Hz,lH), 7.59(t,J=8Hz,lH), 7.74(dd,J,=6.4Hz,J2=l .6Hz,lH), 7.94(dd,J,=6.4Hz,J2=1.6Hz,lH), 8.07(s,lH) 第六步
2'-羟基 -5'-甲基 -3'-{N'-[3-甲基- 5-氧代 -l-(5,6,7，8-四氢萘 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚 基] -肼基 }-联苯基 -3-羧酸
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基 -5'-甲基联苯基 -3-羧酸 盐酸盐 llf (272 mg, 0.97 mmol) 溶解于盐酸 (3.3 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 1.3 mL亚硝酸钠溶液 (74 mg, 1.07 mmol), 反应 20分钟， 再加入 5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 3i (200 mg, 0.88 mmol), 分批加入碳酸氢钠 (1.22 g, 14.6 mmol)和 2.1 mL乙醇， 室温反应 4小 时。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 固体用 20mL水洗涤， 再溶解于 20 mL水中， 冰浴下用浓盐酸调节 pH<5， 过滤， 干燥， 得到标题产物 2'-羟基 -5'-甲基 -3'-{N'-[3- 甲基 -5-氧代小 (5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1，5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-联苯基 -3-羧酸 11(170 mg, 红色固体）。 产率： 40.2%。
MSm/z(ESI): 481[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO- δ 1.75(m, 4Η), 2.30(s, 3H), 2.34(s, 3H), 2.74(m, 4H)， 7.00(d, J=1.2Hz, IH), 7.11(d, J=8.0Hz, IH), 7.53(s, IH), 7.62(m, 3H), 7.80(d, J=7.6Hz, IH), 7.95(d, J=7.6Hz, IH), 8.14(s, IH), 9.39(s, IH), 13,03(s, IH), 13.77(s, IH) 实施例 12
5-(3-{N'-「l-(3,3-二甲基茚满- 5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基 1-肼基 }-2-羟 基苯基) -噻吩 -2-羧酸
Figure imgf000035_0001
12
Figure imgf000036_0001
> 少
5-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -噻吩 -2-羧酸
将 2-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -4,4,5,5-四甲基 -[1 ,3,2]硼酸乙二醇酯 6a(10 g， 35.85 mmol)、 5-溴 -噻吩 -2-羧酸 (6.68 g， 32.2 mmol), 四 (三苯基膦)钯 (2.07 g, 1.79 mmol) 和碳酸钠 (7.59 g, 71.6 mmol)溶解于 200 mL 1 ,4-二氧六环和 30 mL水的混合溶剂 中， 加热回流 1小时。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 滤液减压浓缩， 向残余物中 加入 150 mL水， 用 1N盐酸酸化至 pH = 3， 过滤， 固体用 50 mL正己垸和乙酸乙 酯的混合溶剂 (V:V=1/1)洗涤， 干燥， 得到标题产物 5-(2-甲氧基 - 3-硝基苯基) -噻吩 -2-羧酸 12a (7.7 g， 淡黄色固体)。 产率： 77%。
MS m/z (ESI): 277.9[M-1] 第一步
5- 3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -噻吩 -2-羧酸
将 5-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -噻吩 -2-羧酸 12a (7.7 g, 27.6 mmol)溶解于 300 mL 乙酸乙酯中， 再加入 500 mg钯 -碳和甲酸铵 (6.96 g, 110 mmol), 加热回流 4小时。 TLC 跟踪至原料消失， 减压浓缩， 用硅胶柱色谱法纯化所得残余物， 得到标题产 物 5-(3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -噻吩 -2-羧酸 12b(6.2 g， 灰色固体)， 产率： 90.1%。 MS m/z (ESI): 248[M-1] 第三歩
5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 将 5-(3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -噻吩 -2-羧酸 12b (2.2 g, 8.83 mmol)溶解于 20 mL 二氯甲垸中， 滴加入三溴化硼 (35 mL, 35.32 mmol/L)， 室温反应 1.5小时。 TLC跟 踪至原料消失， 加入 5 mL甲醇， 减压浓缩， 向残余物中加入 100 mL乙酸乙酯， 搅拌 1.5小时， 过滤， 收集固体， 干燥， 得到标题产物 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 12c (1.2 g， 灰色固体)。 产率： 57.1%。
MS m/z (ESI): 234[M-1 ] 第四步
5— 二甲基茚满—5—基 3-甲基 -5—氧代 -1,5—二氢吡唑 -4—亚基 ] -肼基 }-2—羟
. 基苯基) -噻吩 -2-羧酸
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 12c (171 mg, 0.62 mmol) 溶解于 3 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1 mL亚硝酸钠溶液 (47 mg, 0.68 mmol) , 搅拌 20 分钟， 再加入 2-(3 3-二甲基茚满 -5-基) -5-甲基 -2 4-二氢吡唑 -3-酮 8i (150 mg, 0.62 mmol), 分批加入饱和碳酸氢钠溶液 (781 mg, 9.3 mmol)将 pH调至 8 9， 用 2 mL 乙醇淬灭气泡， 升至室温反应过夜。 TLC 跟踪至原料消失， 过滤出固体， 固体用 20 mL水溶解， 浓盐酸调 pH = 3 4， 过滤， 干燥， 粗品用 HPLC分离纯化， 得到 标题产物 5-(3- {N'-[l-(3,3-二甲基茚满 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] - 肼基 2-羟基苯基) -噻吩 -2-羧酸 12 (48 mg， 橙色固体)。 产率： 15.9%
MS m/z (ESI): 487[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-i (5): 51.24(t,J=8.6,6H), 1.93(t,J=7.0,2H), 2.87(t,J=7.0,2H), 7.16(m,J=6.0,lH), 7.27(d,J=4.2,2H), 7.57(d,J=8.0,lH), 7.64(d,J=4.0,lH),
7.70(t,J=8.4,2H), 7.75(d,J=4.0,lH) 实施例 13
3'-{Ν'-『1- 3-二氢苯并呋喃 -5-基 3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基 1-肼基 }- 2'-羟
Figure imgf000037_0001
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基 -5'-甲基联苯基 -3-羧酸盐酸盐 llf (287 mg, 1.03 mmol) 溶解于 3.5 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (78 mg, 1.13 mmol), 搅拌 20分钟， 再加入 2-(2 3-二氢苯并呋喃 -5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 7c (200 mg, 0.93 mmol), 分批加入饱和碳酸氢钠溶液 (1.298 g, 15.45 mmol)将 pH调至 8 9， 用 2 mL乙醇淬灭气泡， 升至室温反应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 用 20 mL水溶解， 搅拌均匀， 用浓盐酸调 pH = 3 4, 过滤， 干燥， 固体用 10 mL二 氯甲烷和甲醇混合溶剂 (V:V=1 : 1)洗涤， 粗品用 HPLC 分离纯化， 得到标题产物 3'-{Ν'-[1-(2,3-二氢苯并呋喃 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-2'-羟 基- 5'-甲基联苯基 -3-羧酸 13 (100 mg, 红色固体)。 产率： 23.0%。
MS m/z (ESI): 469[M-1]
'HNMR(400MHZ, DMSO-i/6): δ 2.34(s, 3H), 2.36(s, 3H), 3.24(t, J=8.8Hz, 2H), 4.57(t, J=8.8Hz, 2H), 6.82(d, J=8.8Hz, IH), 7.00(s, IH), 7.54(s, IH), 7.61 (m, 2H), 7.74(s, 1H): 7.80(d, J=7.6Hz, IH), 7.95(d, J=7.6Hz, IH), 8.13(s， IH), 9.38(s, IH), 13.02(s, IH), 13.76(s, IH) 实施例 14
N'-「l-(2,3-二氢苯并呋喃 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基卜肼基 }-5'-氟
-2'-羟基联苯基 -3-羧酸
Figure imgf000038_0001
冰浴下将 3'-氨基 -5'-氟 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸盐酸盐 2f (219 mg, 0.772 mmol)溶 解于 3 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1 mL亚硝酸钠溶液 (59 mg, 0.85 mmol), 搅拌 20分 钟， 再加入 2-(2,3-二氢苯并呋喃 -5-基;) -5-甲基- 2,4-二氢吡唑 -3-酮 7c (150 mg, 0.69 mmol),分批加入饱和碳酸氢钠溶液 (1.007 g, 11.57 mmol)将 pH调至 8〜9，用 2 mL 乙醇淬灭气泡， 升至室温反应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 用 15 mL 氷溶解， 搅拌均匀， 用浓盐酸调 pH = 3〜4， 过滤， 干燥， 粗品用 HPLC分离纯化， 得到标题产物 3'-{Ν'-[1-(2,3-二氢苯并呋喃 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚 基] -肼基 }-5'-氟 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸 14 (65 mg， 红色固体)。 产率： 20.0%。
MS m/z (ESI): 473 [M-l]
'HNMR(400MHz, DMSO-i/(5): δ 2.33(s, 3H), 3.23(t, J=8.8Hz, 2H), 4.56(t, J=8.8Hz, 2H), 6.83(d, J=8,4Hz, IH), 7.03(m, IH), 7.48(m, IH), 7.60(m, 2H), 7.65(s, IH), 7.83(d, J=8.0Hz, IH), 7.98(d, J=8.0Hz, IH), 8.17(s, IH), 9.57(s, IH), 13.07(s, 1H)， 13.62(s, IH) 实施例 15
5-〔2-羟基- 3-{N'-「3-甲基 -5-氧代小 (5.6.7,8-四氢萘 -2-基) -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基卜肼
基 苯基) -呋喃 -2-羧酸
Figure imgf000039_0001
ac 3i 15
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 9c (292 mg, 0.975 mmol) 溶解于 3.3 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1.3 mL亚硝酸钠溶液 (74 mg, 1.07 mmol), 搅拌 20分钟， 再加入 5-甲基- 2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 3i (200 mg, 0.88 mmol), 分批加入饱和碳酸氢钠溶液 (1.226 g, 14.6 mmol)将 pH调至 8〜9， 用 2 mL 乙醇淬灭气泡， 升至室温反应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 用 20 mL 水溶解， 搅拌均匀， 用浓盐酸调 pH = 3〜4， 过滤， 干燥， 粗品用 HPLC分离纯化， 得到标题产物 5-(2-羟基 -3-{N'-[3-甲基 -5-氧代 -1-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基]-肼基 苯基) -呋喃 -2-羧酸 15 (160 mg， 红色固体)。 产率： 39.8%。
MS m/z (ESI): 457[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): δ 1.76(m, 4Η), 2.33(s, 3H), 2.75(m, 4H), 7.13(m, 2H), 7.22(t, J=8.0Hz, IH), 7.37(d, J=3.2Hz, IH), 7.56(d, J=7.6Hz, IH), 7.63(m, 2H), 7.71(d, J=8.4Hz, IH) 实施例 16
3'-ίΝ'-「1-(3.3-二甲基茚满 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基 1-肼基 2'-羟基
-5'-甲基联苯基 -3-羧酸
Figure imgf000039_0002
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基 -5'-甲基联苯基 -3-羧酸盐酸盐 llf (257 mg, 0.92 mmol) 'Ρ)£8'乙 '(Η£ ' )£9·乙 '(HI ^)LYL '(HI ' ·8=ί 'P)S '(HI '^ίθ'ί XHZ 'zH6 /.=f ¾98 m
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100000/600ZN3/X3d J=7.6Hz, IH), 7.98(d, J=8.0Hz, IH), 8.18(s, I H), 9.60(s, I H), 13.07(br, 1H)， 13.64(s: IH) 实施例 .18
5- {2-羟基 1 - -S- -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 1-苯基 噻 吩 -2-羧酸
Figure imgf000041_0001
12c 18
冰浴下，将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 12c(380 mg, 1.2 mmol) 溶解于 3.9 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (90 mg, 1.32 mmol), 搅拌 20分钟， 再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (210 mg, 1 mmol), 分批 加入饱和碳酸氢钠溶液 (1.51 g， 18 mmol)将 pH调至 8〜9， 用 2 mL乙醇淬灭气泡， 升至室温反应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 用 20 mL 5 %氢氧化钠溶 液溶解，水相用二氯甲垸萃取 (50 mL>O)，水相用浓盐酸调 pH = 3〜4，过滤，干燥， 粗品用 HPLC分离纯化，得到标题产物 5-{2-羟基 -3-[Ν'-(1-茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基] -苯基 噻吩 -2-羧酸 18 (15 mg,橙色固体)。产率： 3.3%。 MS m/z (ESI): 459[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-i¾: 61.36-1.78(m,2H), 2.33(s,3H), 2.86-2.94(m,4H), 7.17(t,J=8Hz,lH), 7.30(d,J=8Hz,lH), 7.56(dd,J,=8Hz,J2=0.8Hz,lH), 7.56(d,J=4Hz, lH), 7.70(m,2H), 7.75(d,J=4Hz,lH), 7.79(s,lH) 实施例 19
2'-羟基 -3'-{Ν'-Γ3-甲基 -5-氧代 -1-(U.3，3-四甲基茚满 -5-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基卜肼
Figure imgf000041_0002
Figure imgf000042_0001
第一步
5-溴 -3,3-二甲基茚满 -1 -酮
将 6-溴 -1,1-二甲基茚满 8g (4g， 17.8 mmol)溶解于 40 mL重蒸的二氯甲垸中， 加入氧化铬 (280 mg， 1.8 mmol), 缓慢滴加过氧化叔丁醇 (19 mL, 190 mmol)， 反应 液呈深红色， 有气体放出， 密闭反应， 室温下搅拌过夜。 TLC 跟踪至原料消失， 将反应液中加入 50 mL水稀释， 用二氯甲垸萃取 (100 mLx3)， 合并的有机相通过 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压下浓缩， 得到标题产物 5-溴 -3,3-二甲基茚满 -1-酮 19a (3.5 g, 白色固体)， 产率： 82.3 %。
MS m/z (ESI): 238[M-1] f¾一少
5-溴 -1,1,3,3-四甲基茚满
将 40 mL二氯甲垸用乙腈 -干冰冷却至 -40°C，注射器加入四氯化钛 (2.7 mL， 24.6 mmol), 冷却下搅拌 20分钟后加入二甲基锌 (29.3 mL,35.1 mmol)甲苯溶液， 控制反 应在 -30Ό下，滴加完毕后低温反应 30分钟，加入 5-溴 -3,3-二甲基茚满 -1-酮 19a (2.8 g, 11.7 mmol)的 10 mL二氯甲烷溶液， 反应缓慢升至室温， 反应过夜。 TLC跟踪 至原料消失， 将反应液在减压下浓缩， 得到的残留物通过硅胶柱层析分离纯化， 得到标题产物 5-溴 -1,1,3,3-四甲基茚满 19b (1.55g， 无色油状液体)， 产率： 52.3 %。 MS m/z (ESI): 252[M-1 ] 第三步
1-(1 ,1,3，3-四甲基 -2,3-二氢 -1H-茚满 -5-基)肼基 -1,2-二甲酸二叔丁酯 将 5-溴 -1,1 , 3,3-四甲基茚满 19b (1.4g， 5.53 mmol) 溶于 10 mL四氢呋喃中， 在 丙酮-干冰浴冷却至 -78°C， 滴加叔丁基锂 (4.4 mL， 11.1 mmol), 搅拌 40分钟， 恒 压漏斗滴加偶氮二甲酸二叔丁酯 (1.59g, 6.92 mmol)的 10 mL四氢呋喃溶液， -78°C 下继续反应 3小时。 TLC跟踪至原料消失， 加入 5mL甲醇， 反应液升至室温， 用 乙酸乙酯萃取 (20 mLx3)反应液， 合并的有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压下 浓缩， 用硅胶柱层析分离纯化， 得到标题产物 1 -(1 ,1 ,3,3-四甲基 -2,3-二氢 -1H-茚满 -5-基)肼基 -1 ,2-二甲酸二叔丁酯 19c (1.326 g， 黄色油状液体)。 产率： 59.3%。
MS m/z (ESI): 403 [M+l ] 第四步
5-甲基 -2-(1,1,3,3-四甲基茚满 -5基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 将 1-(1山3,3-四甲基 -2,3-二氢 -1H-茚满 -5-基)肼基 -1,2-二甲酸二叔丁酯 19c (2.70 g, 7.18 mmol)溶解于 10 mL乙酸中，加入 13 mL三氟乙酸，室温反应 30分钟， 加入乙酰乙酸乙酯 (502 mg, 3.86 mmol), 加热至 100Ό反应 2小时。 TLC跟踪至原 料消失， 冷却至室温， 减压浓缩除去乙酸， 用饱和碳酸氢钠溶液中和反应液中的 酸， 用乙酸乙酯萃取 (20 mLx3)， 合并有机相， 用饱和氯化钠溶液洗涤， 无水硫酸 钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩， 所得残余物用硅胶柱色谱法纯化， 得到标题产物 5-甲基 -2-(1 ,1,3,3-四甲基茚满 -5基) -2，4-二氢吡唑- 3-酮 19d (130 mg， 淡黄色油状液 体)。 产率： 13.6%。
MS m/z (ESI): 269[M+1] 第五步
2'-羟基 -3'-{N'-[3-甲基- 5-氧代 -1-(1,1,3,3-四甲基茚满 -5-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼 基}-联苯基— 3-羧酸
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐 If (172 mg, 0.56 mmol)溶解于 1.9 mL IN盐酸中， 滴加入的 0.7 mL亚硝酸钠溶液 (42 mg, 0.61 mmol), 再加入 5- 甲基 -2-(1,1,3,3-四甲基茚满 -5基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 19d (135 mg, 0.5 mmol), 分批 加入碳酸氢钠 (700 mg， 8.33 mmol), 将反应液 pH调至 8〜9， 加入 2 mL乙醇， 升 至室温过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 固体用 20 mL水溶解， 搅拌均匀， 用 浓盐酸调 pH = 3〜4， 过滤， 干燥， 粗品用 HPLC分离纯化， 得到标题产物 2'-羟基 -3'-{N'-[3-甲基 -5-氧代 -1-(1 ,1 ,3,3-四甲基茚满 -5-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }4关 苯基 -3-羧酸 19 (75 mg， 红色固体；)。 产率： 29.4%。
MS m/z (ESI): 509[M-1 ]
'HNMR(400MHz, DMSO- δ 1.30(m, 12H), 1.92(s, 2H)， 2.35(s, 3H), 7.14(m, 2H)， 7.23(d, J=8.0Hz, 1H)， 7.62(m, 2H), 7.72(m, 2H), 7.80(d, J=7.6Hz, 1H), 7.96(d, J=8.0Hz; 1H), 8.14(s, 1H)， 9.68(s, 1H), 13.10(br, 1H), 13.78(s, 1H) 实施例 20
2'-羟基 -5'-甲基 -3'-{Ν'-Γ3-甲基 -5-氧代 -1 -0,1,3,3-四甲基茚满 -5-基) -1 ,5-二氢吡唑 -4- 亚基 1-肼基 }-联苯基 -3-羧酸
Figure imgf000044_0001
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基 -5'-甲基联苯基 -3-羧酸 盐酸盐 llf (155 mg, 0.56 mmol) 溶解于 1.9 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1.2 mL亚硝酸钠溶液 (42 mg, 0.61 mmol), 搅拌 20分钟，再加入 5-甲基 -2-(1,1，3,3-四甲基茚满 -5-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 19d(135 mg, 0.5 mmol), 分批加入饱和碳酸氢钠溶液 (700 mg， 8.33 mmol)将 pH调至 8〜9， 用 2 mL 乙醇淬灭气泡， 升至室温反应过夜。 TLC 跟踪至原料消失， 过滤出固体， 用 30mL水溶解， 搅拌均匀， 用浓盐酸调 pH=3〜4， 过滤， 干燥， 粗品用 HPLC分 离纯化， 得到标题产物 2'-羟基 -5'-甲基 -3'-{N'-[3-甲基 -5-氧代- 1-(1,1,3，3-四甲基茚满 -5-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 联苯基 -3-羧酸 20(50 mg, 红色固体)。 产率： 19.1%。
MS m/z (ESI): 523 [M-l]
'HNMR(400MHz, OMSO-d6): δ 1.30(m, 12H), 1.92(s, 2H), 2.35(m, 6H), 7.00(m, 1H), 7.23(d, J=8.4Hz, 1H), 7.59(s, 1H), 7.65(m, 2H), 7.74(m, 1H), 7.80(d, J=8.0Hz, 1H), 7.95(d, J=7.6Hz, 1H), 8.14(s, 1H), 9.4 l(s, 1H), 13.05(br, 1H)， 13.78(s, 1H) 实施例 21
3'-[ '- Π -双环「4.2.01辛烷 -1，3.5-三烯 -3-基 -3-甲基 -5-氧代- 1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼 基卜 2'-羟基 -5'-甲基联苯基 -3-羧酸
Figure imgf000044_0002
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基 -5'-甲基联苯基 -3-羧酸盐酸盐 llf (3 U mg, 1.11 mmol) 溶解于 3.7 mLlN盐酸中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (84 mg, 1.22 mmol), 再加 入 2-双环 [4.2.0]辛烷 -1 (6),2,4-三烯 -3-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 5d (200 mg, 1 mmol), 分批加入碳酸氢钠 (1.4 g， 16.7 mmol), 将反应液 pH调至 8〜9， 加入 2 mL 乙醇， 升至室温过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 用 20 mL水溶解， 搅 拌均匀， 用浓盐酸调 pH = 3〜4， 过滤， 干燥， 粗品用 HPLC分离纯化， 得到标题 产物 3'-[Ν'-(1 -双环 [4.2.0]辛垸 -1,3,5-三烯 -3-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚 基)-肼基] -2'-羟基 -5'-甲基联苯基 -3-羧酸 21 (330 mg， 橙色固体)。 产率： 72.7%。 MS m/z (ESI): 453[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-t 6): δ 2.34(m, 6H), 3.16(m, 4H)， 7.00(s, 1H), 7.15(d, J=8.0Hz, 1H), 7.54(s, 1H), 7.62(m, 2H), 7.71(d, J=8.0Hz, 1H), 7.80(d, J=7.6Hz, 1H), 7.95(d, J=7.6Hz, 1H)， 8.13(s, 1H), 9.40(s, 1H), 13.02(s, 1H), 13.75(s, 1H) 实施例 22
5-Π-1Ν'-Π-双环 Γ4.2.01辛垸 -U，5-三烯 -3-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) - 肼基 1-2-羟基苯基 呋喃 -2-羧酸
Figure imgf000045_0001
9c
5d 22 冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 9c (333 mg, 1.11 mmol) 溶解于 3.7 mLlN盐酸中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (84 mg, 1.22 mmol), 再加 入 2-双环 [4.2.0]辛垸 -1(6),2，4-三烯 -3-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 5d (200 mg, 1 mmol), 分批加入碳酸氢钠 (1.4 g， 16.7 mmol), 将反应液 pH调至 8〜9， 力 Π入 2 mL 乙醇， 升至室温过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 用 20 mL水溶解， 搅 拌均匀， 用浓盐酸调 pH = 3〜4， 过滤， 干燥， 粗品用 HPLC分离纯化， 得到标题 产物 5-{3-[Ν'-(1-双环 [4.2.0]辛垸 -1,3,5-三烯 -3-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚 基)-肼基] -2-羟基苯基} -呋喃 -2-羧酸 22(275 mg， 暗红色固体)。 产率： 63.9%。
MS m/z (ESI): 429ΓΜ-1] 'H MR(400MHz, DMSO-t/(5): δ 2.3 l (s, 3H), 3.15(m, 4H), 7.15(m, 2H), 7.20(t, J=8.0Hz, 1H), 7.36(d, J=3.6Hz, 1H), 7.54(m, 1H), 7.68(m, 1H), 7.72(m, 2H), 9.97(s, 1H), 13.71(s, 1H) 实施例 23
2-双环「4.2.01 辛垸 -1 5-三烯 -3-基 -4-ί「2-羟基 -3'-ΠΗ-四唑 -5-基) -联苯 -3-基卜 亚肼
基}-5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮
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8f 5d 23
冰浴下将 3-氨基 -3'- (1H-四唑 -5-基) -联苯基 -2-醇盐酸盐 8f (321 mg, 1.11 mmol) 溶解于 3.7 mL IN盐酸中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (85 mg, 1.22 mmol), 反应 20分钟，再加入 2-双环 [4.2.0]辛垸 -1(6),2,4-三烯 -3-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 5d (200 mg, 1 mmol), 分批加入碳酸氢钠（1.69 g, 20 mmol)和 3 mL乙醇， 室温反应过 夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 固体用 20mL水洗涤， 再溶解于 20mL水中， 冰 浴下用浓盐酸调节 pH=3〜4， 过滤， 干燥， 得到标题产物 2-双环 [4.2.0] 1,3,5- 三烯—3-基 -4-{[2-羟基 -3'-(1Η-四唑 -5-基) -联苯 -3-基]- 亚肼基 }-5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-S 23 (150 mg, 红色固体）。 产率： 32.3%。
MS m/z (ESI): 463 [M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-t/d): 5 2.34(s, 3Η), 3.16(m, 4H), 7.18(m, 3H), 7.68(s, 1H), 7.73(m, 4H), 8.08(d, J=7.6Hz, 1H)， 8.25(d, J=10Hz, 1H), 9.71(br, 1H), 13.77(br, 1H) 实施例 24
5-{2-羟基 -3-ΓΝ'-Π-茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1，5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 1-5-甲基苯
Figure imgf000046_0002
Figure imgf000047_0001
第一步
2-(2-甲氧基 -5-甲基 -3-硝基苯基 )-4,4,5,5-四甲基 -1,3,2-二氧硼戊环 将 3-溴 -2-甲氧基 -5-甲基-硝基苯 11c (20 g, 81.3 mmol)和 4,4,4',4，,5,5,5，,5，-八甲 基 -2,2，-联 -1,3,2-硼酸乙二醇酯 (30.9 g, 112 mmol)溶解于 400 mL二甲醚中， 加入 1，Γ-双 (二苯膦基)二茂铁二氯化钯 (3.3 g, 4.06 mmol)和醋酸钾 (19.9 g， 203 mmol), 加毕加热回流 3小时， 反应液过滤除去 Ι ,Γ-双 (二苯膦基)二茂铁二氯化钯， 滤液减 压浓缩后经硅胶柱色谱法纯化得到标题产物 3-(4,5-二甲基 -[1,3,2]硼酸频那醇酯 -2- 基) -2-甲氧基 -5-甲基-硝基苯 24a(13.1 g， 黄色油状液体)， 产率 57.1 %。
MS m/z (ESI): 293.09 [M+ l]
'HNMR(400MHz, CDCI3): δ 1.16(s,12H), 2.39(s,3H), 3.5(s,3H), 7.53(d,J=2Hz,lH), 7.83(d,J=2Hz,lH) 第二步
5-(3-硝基 -2-甲氧基 -5-甲基苯基) -噻吩 -2-羧酸 将 3-(4,5-二甲基 -[1,3,2]硼酸频那醇酯 -2-基) -2-甲氧基 -5-甲基-硝基苯 24a (4.0 g, 14.5 mmol)、 5-溴 -噻吩 -2-羧酸 (1.0 g, 4.8 mmol).四 (三苯基膦)钯 (0.276 g， 0.24 mmol) 和碳酸钠（1.01 g， 9.6 mmol)溶解于 30 mLl,4-二氧六环和 10 mL水中， 反应体系加 热回流 1小时， TLC跟踪至原料消失，反应液减压浓缩后加水溶解，过滤除去四 (三 苯基膦：)钯， 滤液用乙酸乙酯萃取， 水相经酸化后有固体析出， 固体用乙酸乙酯溶 解， 经无水硫酸锾干燥， 过滤除去干燥剂， 滤液浓缩得到标题产物 5-(3-硝基 -2-甲 氧基 -5-甲基苯基) -噻吩 -2-羧酸 24b(1.03 g， 黄色固体)， 产率： 73.6%。
MS m/z (ESI): 291.7[M-1]
'HNMR(400MHz, CDCI3): δ 2.41(s,3H), 3.73(s,3H), 7.73-7.79(m,3H), 8.00(m,l H), 13.20(Br,lH) 第三步
5-C3-氨基 -2-甲氧基 -5-甲基苯基) -噻吩 -2-羧酸 将 5-(3-硝基 -2-甲氧基 -5-甲基苯基) -噻吩 -2-羧酸 24b(0.29 g, 1 mmol)溶解于 30mL乙酸乙酯中， 加入 0.06 g钯 -碳和甲酸垵 (0.25 g, 4 mmol), 加毕加热回流 45 分钟。 TLC跟踪至原料消失， 过滤除去钯 -碳， 滤液减压浓缩， 干燥， 得到标题产 物 5-(3-氨基 -2-甲氧基 -5-甲基苯基) -噻吩 -2-羧酸 24c(0.26 g，绿色固体)。产率： 99%。 MS m/z (ESI): 261.7[M-1]
'HNMR(400MHz, CDC13): δ 2.18(s,3H), 3.58(s,3H), 6.54(d,J=1.6Hz,lH),
6.78(d,J=1.6Hz,lH), 7.53(d,.T=4Hz,lH), 7.68(d,J=4Hz,lH) 第四步
5-(3-氨基 -2-羟基 -5-甲基苯基)-噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 将 5-(3-氨基 -2-甲氧基 -5-甲基苯基) -噻吩 -2-羧酸 24c (0.26 g, 1 mmol)溶解于 20 mL二氯甲烷中， 滴加入三溴化硼 (5 mL, 35.32 mmol/L), 室温反应 1小时。 TLC 跟踪至原料消失， 减压浓缩， 向残余物中加入 30mL乙酸乙酯， 搅拌 0.5小时， 过 滤， 滤饼用乙酸乙酯洗涤后干燥， 得到标题产物 5-(3-氨基 -2-羟基 -5-甲基苯基) -噻 吩 -2-羧酸氢溴酸盐 24d (0.15 g， 灰色固体)。 产率： 45.5%。
MS m/z (ESI): 247.8[M-1]
'HNMR(400MHz, CDCI3): 52.29(s,3H), 7.02(d,J=1.6Hz,lH), 7.41(s,lH),
7.59(d,J=4Hz,lH), 7.73(d,J=4Hz,lH) 第五歩
5-{2-羟基 -3-[N'-(l-茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 ]-5-甲基苯 基} -噻吩 -2-羧酸
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基 -5-甲基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 24d (138 mg, 0.42 mmol) 溶解于 1.5 mL IN盐酸中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (85 mg, 1.22 mmol),反应 20分钟，再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2，4-二氢吡唑 -3-酮 li (81 mg, 0.38 mmol), 分批加入碳酸氢钠 (527 mg, 6.27 mmol)和 2 mL乙醇， 室温反应过夜。 TLC 跟踪至原料消失， 过滤， 固体用 20mL水洗涤， 再溶解于 10mL水中， 冰浴下用浓 盐酸调节 Ph=3〜4， 过滤， 干燥， 得到标题产物 5-{2-羟基 -3-[Ν'-(1-茚满 -5-基 -3-甲 基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 ]-5-甲基苯基} -噻吩 -2-羧酸 24 (30 mg,红色固 体)。 产率： 16.7%。
MS m/z (ESI): 473 [M-l]
"HNM (400MHz, DMSO-ί/ό): δ 2.03(m, 2H), 2.32(s, 3H), 2.36(s, 3H), 2.89(m, 4H), 7.29(d, J=8.0Hz, 1H), 7.38(s, 1H), 7.50(s, 1H), 7.63(d, J=4.0Hz, 1H), 7.68(d, J=8.0Hz, 1H), 7.74(m, 2H), 9.78(s, 1H), 13.72(br, 1H) . 实施例 25
5-(2-轻基 -3-{N'-D-甲基 -5-氧代 -1-(U,3.3-四甲基茚满 -5-基) -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基 肼基 μ苯基 呋喃 -2-羧酸
Figure imgf000049_0001
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 - 2-羧酸氢溴酸盐 9c (124 mg, 0.41 mmol) 溶解于 1.4 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 0.5 mL亚硝酸钠溶液 (32 mg, 0.45 mmol), 搅拌 20分钟，再加入 5-甲基 -2-(1,1 ,3,3-四甲基茚满 -5基) -2,4-二氢吡唑- 3-酮 19d (100 mg, 0.37 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH值至 8， 用 2 mL乙醇淬灭气泡， 升至室 温反应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 固体中加入 10 mL水， 用浓盐 酸调 pH = 3〜4， 过滤， 固体后经柱层析后干燥得到标题产物 5-(2-羟基 -3-{N'-[3- 甲基 -5-氧代 -1-(1 , 1,3,3-四甲基茚满 -5-基) -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基]-肼基 苯基) -呋喃 -2-羧酸 25 (22 mg， 红色固体)。 产率： 11.9%。
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): δ 1.30(m, 12H), 1.92(s, 2H), 2.34(s, 3H), 7.15(d, J=3.6Hz, 1H), 7.22(m, 2H), 7.36(d, J=3.2Hz, 1H), 7.56(dd, Jl=8.0Hz, J2=1.2Hz, 1H), 7.66(d, J=2.0Hz, 1H), 7.75(m, 2H) 实施例 26
3'— ΓΝ'-Π -双环「4.2.01辛烷 -1,3,5-三烯 -3-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基)- 肼 基卜 5'-氟 -2'-羟基联苯 -3-羧酸
Figure imgf000049_0002
26
Figure imgf000050_0001
26
第一歩
3'-氨基 -5'-氟 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐
将实施例 2第五步所得中间体 3'-氨基 -5'-氟 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸 2f(500 mg, 1.92 mmol) 滴加 20 mL氢溴酸， 有白色浑浊物生成， 加热回流反应过夜， 反应澄 清， 变为黄褐色溶液。 TLC 跟踪至原料消失， 减压下浓缩溶液， 得到的棕黄色固 体用 20 mL乙酸乙酯溶解， 搅拌 20分钟， 过滤， 得到标题产物 3'-氨基 -5'-氟 -2'-羟 基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐 26a (344 mg， 灰白色固体)。 产率： 54.8%。
MS m/z (ESI): 248 [M+l] 第二步
3'-[N'-(l -双环 [4.2.0]辛烷 -1,3,5-三烯 -3-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) - 肼基] -5'-氟 -2'-羟基-二苯基 -3-羧酸
冰浴下将 3'-氨基 -5'-氟 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐 26a (328 mg, 1.11 mmol) 溶解于 3.7 mL IN盐酸中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (84 mg, 1.22 mmol), 再加 入 2-双环 [4.2.0]辛垸 -1(6)，2,4-三烯 -3-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 5d (200 mg, 1 mmol), 分批加入碳酸氢钠 (1.4 g， 16.7 mmol), 将反应液 pH调至 8〜9， 加入 2 mL 乙醇， 升至室温过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 用 20 mL水溶解， 搅 拌均勾， 用浓盐酸调 pH = 3〜4， 过滤， 干燥， 粗品用 HPLC分离纯化， 得到标题 产物 3'-[Ν'-(1-双环 [4.2.0]辛烷 -1,3,5-三烯 -3-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚 基) - 肼基] -5'-氟 -2'-羟基联苯 -3-羧酸 26 (335 mg， 红色固体)。 产率： 73.1%。
MS m/z (ESI): 457[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO- δ 2.32(s, 3H), 3.22(m, 4H), 7.02(m, 1H), 7.14(d, J=8.0Hz, 1H), 7.46(m, 1 H), 7.6 l(m, 2H), 7.69(m, 1 H), 7.82(d, J=7, 6Hz, 1H), 7.98(d, J=7.6Hz, 1H), 8.17(s, 1 H), 9.58(s, 1H), 13.07(s, 1H), 13.60(s, 1H) 实施例 27 4- 2-羟基 -3'-ΠΗ-四唑 -5-基)-联苯 -3-基 1-肼叉 }-2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑
-3-酮
Figure imgf000051_0001
冰浴下将 3-氨基 -3'-(1Η-四唑 -5-基)-联苯基 -2-醇盐酸盐 8f (188 mg, 0.74 mmol) 溶解于 4 mL 2N盐酸中， 滴加入 1 mL亚硝酸钠溶液 (57 mg, 0.82 mmol), 反应 30 分钟， 再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (159 mg, 0.74 mmol), 用饱 和碳酸氢钠调节 pH值至 8， 加入 0.5 mL乙醇， 室温反应过夜。 TLC跟踪至原料 消失， 过滤， 固体用氢氧化钠溶液 (3N)溶解后用二氯甲烷洗涤 3次， 水相用 2N盐 酸调节 pH值至 3，有大量固体析出，过滤，所得固体经柱层析得到标题产物 4-{[2- 羟基 -3'-(1Η-四唑 -5-基) -联苯 -3-基]-肼叉 }-2-茚满 -5-基 -5-甲基- 2,4-二氢吡唑 -3-酮 27(67 mg, 橙色固体）， 产率： 18.8%。
MS m/z (ESI): 477.2[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-ί/ό): δ 2.03(m, 2H), 2.33(s, 3H), 2.89(m, 4H), 7.17(m, 2H), 7.28(d, J=8.0Hz, 1H), 7.71(m, 5H), 8.08(d, J-8.0Hz,】H), 8.25(s, 1H), 9.73(br, 1H), 13.77(s, 1H) 实施例 28
4-(2-羟基 -3-W'-「3-甲基 -5-氧代 -l-(5,6，7，8-四氢萘亚甲基 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚 基 1-肼基 苯基) -呋喃 -2-羧酸
Figure imgf000051_0002
Figure imgf000052_0001
第一步
4-溴 -呋喃 -2-羧酸
室温下， 将 4,5-二溴-呋喃 -2-羧酸 28a(5.5 g， 20.3 mmol)和 18 mL氨水加入到 63 mL水中， 加入锌粉（1.46 g， 22.33 mmol), 加毕室温搅拌 6小时， TLC监测至 原料反应完全， 停止反应。 用盐酸 (1N)调节反应液 pH至 3， 有大量固体析出， 过 滤，滤饼用正己垸洗涤 (15 mLx4)后干燥，得到标题产物 4-溴 -呋喃 -2-羧酸 28b(3.2 g， 白色固体)， 产率： 83.1 %。
MS m/z (ESI): 188.7[M-1] 第二步
4-(3-硝基 -2-甲氧基-苯基) -呋喃 -2-羧酸
将 2-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -4,4,5,5-四甲基 -[1,3,2]硼酸乙二醇酯 6a (4 g, 14.34 mmol) , 4-溴 -呋喃 -2-羧酸 28b(2.18 g, 1 1.47 mmol)、 四（三苯基膦)钯 (829 mg， 0.717 mmol)和碳酸钾 (3.96 g, 28.68 mmol)溶解于 80 mL 1 ,4-二氧六环和 30mL水的混合溶 剂中， 加热回流 2.5小时。 TLC跟踪至原料消失， 反应液用 1N盐酸酸化至 pH〜3， 乙酸乙酯萃取 (80 mLx3) , 合并有机相， 有机相减压浓缩后柱层析得到标题产物 4-(3-硝基 -2-甲氧基-苯基)-呋喃- 2-羧酸 28c(3.42 g， 棕色油状液体)。 产率： 90.7%。 MS m/z (ESI): 261.8[M-1] 第三歩
4-0氨基 -2-甲氧基-苯基) -呋喃 -2-羧酸
将 4-(3-硝基 -2-甲氧基-苯基) -呋喃 -2-羧酸 28c(500 mg, 1.9 mmol)溶解于 15mL 乙酸乙酯中， 再加入 100 mg钯 -碳和甲酸铵 (429 mg, 7.6 mmol), 加热回流 3小时。 TLC跟踪至原料消失， 反应液过滤除去耙 /碳， 减压浓缩得到标题产物 4-(3-氨基 -2- 甲氧基-苯基) -呋喃 -2-羧酸 28d(325 mg， 黄色油状液体)， 产率： 73.4%。
MS m/z (ESI): 231.8[M-1] 第四歩 4-(3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐
将 4-(3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -呋喃 -2-羧酸 28d (325 mg, 1.4 mmol)溶解于 5 mL 二氯甲垸中， 滴加入三溴化硼 (2.8 mL, 5.6 mmol), 室温反应 4.5小时。 TLC跟踪至 原料消失， 加入 5 mL甲醇， 减压浓缩， 向残余物中加入 10 mL乙酸乙酯， 搅拌 0.5 小时， 过滤， 收集固体， 干燥， 得到标题产物 4-(3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2- 羧酸氢溴酸盐 28e(174 mg, 灰色固体)。 产率： 57.1%。
MS m/z (ESI): 217.7[M-1] 第五歩
4-(2-羟基 -3-{Ν'- [3-甲基 -5-氧代 -1-(5,6,7,8-四氢萘亚甲基 -2-基)- 1 ,5-二氢吡唑 -4-亚 基] -肼基 }-苯基) -呋喃 -2-羧酸
冰浴下将 4-(3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 28e (170 mg, 0.57 mmol) 溶解于盐酸 (1.9 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 0.7 mL亚硝酸钠溶液 (43 mg, 0.63 mmol), 反应 20分钟， 再加入 5-甲基 -2-(5，6，7,8-四氢萘 -2-基)- 2,4-二氢吡唑 -3-酮 3i (116 mg, 0.51 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 8〜9, 加入 2 mL乙醇， 室温反应 24 小时。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 固体中加入 15 mL水， 冰浴下用浓盐酸调节 pH至 2〜3， 过滤， 滤饼用乙酸乙酯洗涤， 干燥， 得到标题产物 4-(2-羟基 -3-{N'-[3- 甲基 -5-氧代 -1-(5,6,7,8-四氢萘亚甲基 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-苯基) -呋 喃 -2-羧酸 28(13 mg， 红色固体)。 产率： 5.5%。
MS m/z (ESI): 456.7[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-t/6): δ 1.75(m,4H), 2.31(s,3H), 2.78(m,4H), 3.86(s,3H), 7.13(m,2H), 7.43(d,J=7.6Hz,lH), 7.62(m,2H), 7.78(s,lH), 8.43(s,lH), 9.68(br,lH), 13.73(br,lH) 实施例 29
2'-羟基 -3'-ΓΝ'-Π-茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 1-5'-甲基 -联苯
-3-羧酸
Figure imgf000053_0001
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基 -5'-甲基联苯基 -3-羧酸盐酸盐 llf (346 mg, 1.07 mmol) 溶解于盐酸 (5 mL, 2 mol/L)中， 滴加入 2 mL亚硝酸钠溶液 (81 mg, 1.17 mmol), 反 应 30分钟， 再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (229 mg, 1.07 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH值至 8， 加入 5 mL乙醇， 室温反应过夜。 TLC跟踪 至原料消失， 过滤， 固体用乙醇洗涤， 滤液倒入冰水中， 用 1 N盐酸调节 pH值至 4， 有固体析出， 过滤， 所得固体用乙酸乙酯洗涤 3 次， 干燥后得到标题产物 2'- 羟基 -3'-[Ν'-(1-茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 ]-5'-甲基 -联苯 -3-羧酸 29(75 mg， 红色固体)。 产率： 15%。
MS m/z (ESI): 467.2 [M-1 ]
'HNMR(400MHz, DMSO-C 6): δ 2.01(m, 2H), 2.35(m, 6H), 2.88(m, 4H), 6.97(s, 1H), 7.30(s, 1H), 7.70(m, 5H)， 8.02(s, 1H), 8.15(s, 1H), 9.42(br, 1H)， 13.03(br, 1H), 13.77(s, 1H) 实施例 30
3WN'-ri-(3,3-二甲基茚满 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基卜肼基 2'-羟基 联苯 -3-羧酸
Figure imgf000054_0001
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐 If (310 mg, 1.0 mmol)溶解于 盐酸 (3.4 mL, 1 mol/L)中，滴加入 1.2 mL亚硝酸钠溶液 (73 mg, 1.05 mmol),反应 10 分钟， 再加入 2-(3,3-二甲基茚满 -5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 8i (218 mg, 0.9 mmol),分批加入碳酸氢钠 (1.26 g, 15 mmol)和 4.4 mL乙醇，室温反应 10小时。 TLC 跟踪至原料消失， 过滤， 固体用 20 mL水洗涤， 再溶解于 20 mL水中， 冰浴下用 浓盐酸调节 pH<5， 过滤， 干燥， 得到标题产物 3'-{Ν'-[1-(3,3-二甲基茚满 -5-基) -3- 甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-2'-羟基联苯 -3-羧酸 30(500 mg, 黄色固 体)。 产率： 94%。
MS mix (ESI): 509.1 [M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-C?(5): δ 1.24(m, 6H), 1.92(t, J=7.2Hz, 2H), 2.34(s, 3H)， 2.86(t, J=7.2Hz, 2H), 7.16(m, 2H), 7.25(d, J=8.8Hz, 1 H), 7.62(t, J=7.6Hz, 1H)， 7.70(m, 3H), 7.80(d, J=7.6Hz, 1H), 7.96(d, J=7.2Hz, 1H), 8.14(s, 1H), 9.68(s, 1H) 实施例 31 4-{2-羟基 -3- Γ '-Π-茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 1-苯 呋喃
-2-羧酸
Figure imgf000055_0001
冰浴下将 4-(3-氨基- 2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 28e (170 mg, 0.57 mmol) 溶解于盐酸 (1.9 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 0.7 mL亚硝酸钠溶液 (43 mg, 0.63 mmol), 反应 20分钟，再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (109 mg, 0.51 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 8〜9, 加入 2 mL乙醇， 室温反应 24小时。 TLC 跟踪至原料消失， 过滤， 固体中加入 15 mL水， 冰浴下用浓盐酸调节 pH至 2〜3 , 过滤， 滤饼用乙酸乙酯洗涤， 干燥， 得到标题产物 4-{2-羟基 -3-[Ν'-(1-茚满 -5-基 -3- 甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基] -苯 呋喃- 2-羧酸 31(83 mg, 黑色固体)。 产率： 36.7%。
MS m/z (ESI): 442.8[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): δ 2.08(m,2H), 2.32(s,3H), 2.89(m,4H),
7.13(t,J=8.0Hz,lH), 7.28(d,J=8.4Hz,lH), 7.41(d,J=7.6Hz,lH), 7.65(m,3H), 7.75(m,lH), 8.37(s,lH), 9.68(s,lH), 13.22(br,l H), 13.74(s,lH) 实施例 32
4-{「4'-(4，5-二氫 -1H-咪唑 -2-基 2-羟基联苯 -3-基 1-肼叉 }-2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二 氢吡唑 -3-酮
Figure imgf000055_0002
Figure imgf000056_0001
第一步
3'-硝基 -2'-甲氧基 -联苯 -4-甲醛
室温下， 将 4-甲酰基苯硼酸 (3.0 g， 0.02 mol) , 1-溴 -2-甲氧基 -3-硝基苯 lc(4.64 g， 0.02 mol)、 四 (三苯基膦)钯 (1.15 g， 1 mmol)和碳酸钠 (4.24 g， 0.04 mol)加入到 60 mLl ,4-二氧六环和 10 mL水中， 加毕加热回流 5小时， TLC监测至原料反应完 全， 过滤， 滤饼用乙酸乙酯洗涤， 滤液减压浓缩后柱层析得到标题产物 3'-硝基 -2'- 甲氧基 -联苯 -4-甲醛 32a(4.1 g， 黄色固体)， 产率： 80.4 %。 第二步
2-(2'-甲氧基 - 3'-硝基-联苯- 4-基) -4,5-二氢- 1H-咪唑 冰浴下， 将 3'-硝基 -2'-甲氧基 -联苯 - 4-甲醛 32a(4.0 g， 15.5 mmol)加入到 40 mL 二氯甲垸中， 搅拌至溶解后加入 1 ,2-二氨基乙垸 (981 mg， 16.3 mmol), 继续搅拌 0.5小时， 加入 1 -溴-吡咯烷 -2,5-二酮 (2.91 g， 16.33 mmol), 加毕撤去冰浴， 室温搅 拌过夜， TLC监测至原料反应完全，反应液减压浓缩后经柱层析得到标题产物 2-(2'- 甲氧基 -3'-硝基 -联苯 -4-基) -4，5-二氢- 1H-咪唑 32b(4.0 g， 黄色固体)， 产率： 86.9 %。 MS m/z (ESI): 298.1 [M+ 1]
1丽 MR(400MHz, OMSO-d6): δ 8.11(2H,d,J=8.4), 7.89(l H,dd,Jl=8.0,J2=1.6),
7.87(2H,d,J=8.4), 7.79(1 H,m), 7.49(lH,t,J=8.0), 4.04(4H,m), 3.47(3H,s) 第三步
2-(2'-甲氧基 -3'-氨基 -联苯 -4-基 )-4,5-二氢 -1 H-咪唑 室温下， 将 2-(2'-甲氧基 -3'-硝基 -联苯 -4-基) -4,5-二氢 -1 H-咪唑 32b(1.5 g， 5.05 mmol)加入到 30 mL甲醇中，搅拌溶解后加入甲酸胺 (1.28 g，20.2 mmol)和钯-碳 (200 mg)， 加毕加热回流 1小时， TLC监测至原料反应完全， 反应液自然冷却至室温后 过滤， 滤液减压浓缩得到标题产物 2-(2'-甲氧基 -3'-氨基 -联苯 -4-基) -4,5-二氢 -1H-咪 唑 32c(l . l g， 黄色固体)， 产率： 81.5 %。
MS m/z (ESI): 268.2[M+ 1 ]
'HNM (400MHz, OMSO-d6): δ 8.42(2H,s), 7.96(2H,d,J=8.0), 6.89(1 H,t,J=7.6), 6.75(lH,m), 6.54(lH,dd,Jl=8.0,J2=1.6), 3.80(4H,m), 3.47(3H,s) 第四歩
2-(2'-羟基 -3'-氨基 -联苯 -4-基) -4,5-二氢 - 1 H-咪唑 室温下， 将 2-(2'-甲氧基 - 3'-氨基 -联苯 -4-基:) -4,5-二氢 -1H-咪唑 32c(l .l g， 4.1 mmol)溶解于 50 mL二氯甲垸中， 加入溴化硼的二氯甲垸溶液 (1 N， 16.5 mL), 继 续室温搅拌 4小时， TLC监测至原料反应完全， 用甲醇淬灭反应， 反应液减压浓 缩， 所得固体加入 10 mL乙酸乙酯溶解后搅拌 0.5小时， 过滤， 滤饼用乙酸乙酯洗 涤 (5 mLx2)， 干燥后得到标题产物 2-(2'-羟基 -3'-氨基 -联苯 -4-基 4,5-二氢 -1H-咪唑 32d(900 mg, 灰色固体）， 产率： 89.6%。
MS m/z (ESI): 254.3[M+ 1]
'HNMR(400MHz, DMSO-i¾): δ 7.23(2H,m), 7.01(2H,t,J=6.8), 6.65(lH,m),
6.62(lH,dd,J=8.0,J2=l .6), 6.36(lH,t,J=7.6), 4.03(4H,m) 第五步
4-{[4'-(4,5-二氢- 1H-咪唑 -2-基) -2-羟基联苯 -3-基] -肼叉 }-2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二 氢吡唑 -3-酮
冰浴下将 2-(2'-羟基 -3'-氨基 -联苯 -4-基) -4,5-二氢 -1H-咪唑 32d(334 mg, 1.11 mmol)溶解于盐酸 (3.7 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (85 mg, 1.22 mmol), 反应 20分钟， 再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (214 mg, 1 mmol),用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH值至 8，加入 5 mL乙醇，室温反应过夜。 TLC 跟踪至原料消失， 过滤， 所得固体加入到 30 mL水中， 搅拌均匀用浓盐酸调节 pH 值至 4， 有固体析出， 过滤， 所得固体经柱层析得到标题产物 4-{[4'-(4,5-二氢 -1H- 咪唑 -2-基) -2-羟基联苯 -3-基] -肼叉 }-2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 32(145 mg, 红色固体)。 产率： 30.3%。
MS m/z (ESI): 476.9[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-i/6): δ 2.02(m,2H), 2.34(s,3H), 2.87(m,4H), 4.00(s,4H), 6.88(m,lH), 7.18(m,2H), 7.49(m,lH), 7.90(m,5H), 8.18(s,lH) 实施例 33
5-(2-羟基 -5-甲基 -3-{N'-「3-甲基 -5-氧代 -l-(5,6,7.8-四氢萘 -2-基 ,5-二氢吡唑 -4-亚 基 1-肼基 } -苯 V噻吩 -2-羧酸
Figure imgf000057_0001
Figure imgf000058_0001
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基 -5-甲基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 24d (366 mg, 1.11 mmol) 溶解于 3.7 mL IN盐酸中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (85 mg, 1.22 mmol), 反应 20分钟， 再加入 5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 3i (228 mg, 1 mmol),分批加入碳酸氢钠 (1.4 g, 16.67 mmol)和 2 mL乙醇，室温反应过 夜。 TLC跟踪至原料消失，过滤，固体加入到 30 mL水中，再用浓盐酸调节 pH=3〜 4， 过滤， 固体干燥后经柱层析得到标题产物 5-(2-羟基 -5-甲基 -3-{N'-[3-甲基 -5-氧 代 -1-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 苯) -噻吩 -2-羧酸 33 (88 mg, 红色固体)。 产率： 18.09%。
MS m/z (ESI): 486.7[M-1]
'HNMR(400MHz, DMS。- δ 1.75(m, 4H), 2.3 l(s, 3H), 2.36(s, 3H), 2.73(m, 4H), 7.12(d, J=8.4Hz, 1H), 7.37(s, 1H), 7.56(s, 1H), 7.63(m, 3H), 7.74(d, J=3.6Hz, 1H), 9.77(s, 1H), 13.07(br, 1H), 13.70(s, 1H) 实施例 34 .
5-(3-{Ν'-「l-(3,3-二甲基茚满 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基卜肼基 }-2-羟 基 -5-甲基苯) -噻吩 -2-羧酸
Figure imgf000058_0002
冰浴下将 5- (3-氨基 -2-羟基 -5-甲基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 24d (366 mg,
1.11 mmol) 溶解于 3.7 mL IN盐酸中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (85 mg, 1.22 mmol), 反应 20分钟， 再加入 2-(3,3-二甲基茚满 -5-基) -5-甲基- 2,4-二氢吡唑 -3-酮 8i (242 mg, 1 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH值至 8， 加入 2 mL乙醇， 撤去 冰浴， 室温反应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 固体加入到 30 mL水中， 再 用浓盐酸调节 pH=3〜4， 过滤， 固体干燥后得到标题产物 5-(3-{N'-[ 3,3-二甲基 茚满 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-2-羟基- 5-甲基苯) -噻吩 -2-羧 酸 34 (308 mg， 红色固体)。 产率： 61.4%。
MS m/z (ESI): 500.8[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-t/6): δ 1 .25(s, 6H), 1.93(m, 2H), 2.36(s, 3H), 2.38(s, 3H), 2.87(t, J=7.2Hz, 2H), 7.27(d, J=8.8Hz, IH), 7.40(d, J=1.6Hz, IH), 7.53(d, J=1.2Hz, IH): 7.65(m, I H), 7.71(m, 2H), 7.74(d, J=4.0Hz, IH), 9.82(br, IH), 13.06(s, I H), 13.71(br, IH) 实施例 35
5-{3-ΓΝ'-Π-双环「4.2.01辛烷 -1(6).2.4-三烯 -3-基 -3-甲基- 5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚 基) -肼基 1-2-羟基 -5-甲基苯 } -噻吩 -2-羧酸
Figure imgf000059_0001
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基 -5-甲基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 24d (366 mg, 1.11 mmol) 溶解于 3.7 mL IN盐酸中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (85 mg, 1.22 mmol), 反应 20分钟， 再加入 2-双环 [4.2.0]辛烷 -1 (6),2,4-三烯 -3-基 -5-甲基 -2,4-二 氢吡唑 -3-酮 5d (200 mg, 1 mmol),用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH值至 8，加入 2 mL 乙醇，撤去冰浴，室温反应 5小时。 TLC跟踪至原料消失，过滤，固体加入到 30 mL 水中， 再用浓盐酸调节 pH=3〜4， 过滤， 滤饼用 6 mL二氯甲垸洗涤后干燥得到标 题产物 5-{3-[Ν'-(1-双环 [4.2.0]辛垸 -1(6),2，4-三烯 -3-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 ]-2-羟基 -5-甲基苯 噻吩 -2-羧酸 35 (306 mg,红色固体)。产率： 66.5%。 MS m/z (ESI): 459.2[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-ί/ό): δ 2.33(s, 3H), 2.36(s, 3H), 3.16(m, 4H), 7.16(d,
J=8.0Hz, IH), 7.38(s, IH), 7.49(s， IH), 7.62(m, 2H), 7.73(m, 2H) 实施例 36
5-(2-羟基 -3-W'-「3-甲基 -5-氧代 -l-(5,6,7，8-四氢萘 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基卜肼 基 苯 V噻吩 -2-羧酸
Figure imgf000060_0001
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基)-噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 12c (351 mg, 1.11 mmol) 溶解于 3.7 mL盐酸（IN)中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (85 mg, 1.22 mmol), 搅拌 20分钟， 再加入 5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 3i (228 mg, 1 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH值至 8， 用 2 mL乙醇淬灭气泡， 升至室温反 应 3小时。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 固体中加入 30 mL水， 用浓盐酸 调 pH = 3〜4，过滤， 固体干燥后经柱层析得到标题产物 5-(2-羟基 -3-{N'-[3-甲基 -5- 氧代 -1-(5，6,7，8-四氢萘 -2-基) -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 苯) -噻吩 -2-羧酸 36 (30 mg, 红色固体)。 产率： 6.3%。
MS m/z (ESI): 472.8[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-i/6): δ 1.74(m, 4H), 2.30(s, 3H), 2.73(m, 4H), 7.12(d, J=8.0Hz, 1H), 7.17(m, 1H), 7.53(d, J=7.6Hz, 1H), 7.62(m, 3H), 7.67(d, J=8.0Hz, 1H), 7.74(d, J=4.0Hz, 1H) 实施例 37
5-{3-fN'-(l-双环「4.2.01辛垸 -1 (6),2,4-三烯 -3-基 -3-甲基- 5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚 基) -肼基 1-2-羟基苯 塞吩 -2-羧酸
Figure imgf000060_0002
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 12c (298 mg, 0.94 mmol) 溶解于 3.1 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1.3 mL亚硝酸钠溶液 (72 mg, 1.04 mmol), 搅拌 20分钟， 再加入 2-双环 [4.2.0]辛垸 -1(6),2,4-三烯 -3-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 5d (170 mg, 0.85 mmol),用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH值至 8，用 2 mL乙醇淬灭气泡， 升至室温反应 3小时。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 固体中加入 30 mL水， 用浓盐酸调 pH = 3〜4， 过滤， 固体干燥后经柱层析得到标题产物 5-{3-[N'-G -双环 [4.2.0]辛烷 -1(6),2,4-三烯 -3-基 -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 ]-2-羟基 苯 噻吩 -2-羧酸 37 (57 mg， 红色固体 )。 产率： 15.01%。
MS i-n/z (ESl): 444.5 [M-l ]
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): δ 2.31(s, 3H), 3.15(m, 4H), 7.15(m, 2H), 7.54(d, J=7.6Hz, 1H), 7.63(m, 2H), 7.67(d, J=7.6Hz, 1H), 7.73(m, 2H) 实施例 38
2'-羟基 -3'-{Ν'-Γ3-甲基小(3-甲基茚满 -5-基) -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基卜肼基 } -联
Figure imgf000061_0001
38
第一步
6-溴 -茚满 -1-酮
将 3-(4-溴苯基) -丙酸 38a (20.6 g， 90 mmol, ABCR) 加入 250 mL单口烧瓶中， 真空干燥 20分钟后加入 110 mL重蒸过的二氯甲垸， 氮气保护， 搅拌下加入氯化 亚砜 (20 mL, 276 mmol), 加热回流过夜。 减压下除去大部分溶剂， 加入 100 mL 二氯甲垸， 搅拌下分批加入氯化铝 (24.5 g， 25.8 mmol), 有大量气体放出， 升温回 流反应过夜。 将反应液倒入 200g碎冰中， 析出大量固体， 用硅胶过滤， 分液， 水 相用 30 mL二氯甲垸萃取， 合并的有机相用无水硫酸钠干燥， 减压浓缩， 得到标 题产物 6-溴-茚满小酮 38b (18.34 g， 黄色固体)。 产率： 96.6%。
MS m/z (ESI): 210[M-1 ] 第二步
6-溴小亚甲基-茚满
将甲基 =苯基溴化膦 (4.56 g， 12.76 mmol)溶解于 25 mL四氢呋喃中，一次性加 入叔丁醇钾 (1.5g, 13.4 mmol), 加入完毕后室温下搅拌 35分钟备用。
将 6-溴 -茚满 -1 -酮 38b (898 mg, 4.25 mmol) 溶解于 5 mL四氢呋喃中， 搅拌下 滴加入上述的溶液中， 所得溶液在室温下搅拌 1小时， 加入 25 mL水淬灭反应。 用二氯甲垸萃取 (25 mLx4) 反应液， 合并的有机相用饱和食盐水 (10 mL )洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压下浓缩， 得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离 纯化，得到标题产物 6-溴- 1-亚甲基 -茚满 38c (830 mg,黄色油状液体)。产率： 93.4%。 MS nVz (ESl): 208[M-1] 第三歩
6-溴 - 甲基茚满
将 6-溴小亚甲基茚满 38c(4.91 g， 23.5 mmol)溶解于乙酸乙酯中，加入钯-碳 (0.98 g), 在氢气氛下室温反应 4小时， TLC跟踪至原料消失， 反应液过滤， 滤液减压 浓缩后柱层析得到标题产物 6-溴 -1-甲基茚满 38d(3.11g， 无色油状液体)， 产率： 62.7%。
MS m/z (ESI): 209.8 [M-1] 第四步
1-(3-甲基茚满 -5-基)肼 -1,2-二甲酸二叔丁酯
氩气氛下， 将正丁基锂 (8.6 mL, 13.76 mmol) 加入到三口烧瓶中， 在干冰-丙 酮浴冷却下加入 8 mL四氢呋喃中， 搅拌下加入 6-溴 -1-甲基茚满 38d (1.32 g， 6.26 mmol),所得溶液在干冰-丙酮浴下反应 2小时， 滴加偶氮二甲酸二叔丁酯 G .87 g， 8.14 mmol) 的 10 mL四氢呋喃溶液， 继续搅拌 30分钟， 撤去冰浴， 升温至室温， 搅拌 20小时反应完毕。 将反应液中加入 20 mL饱和氯化胺淬灭反应， 用乙酸乙酯 萃取 (25 mLx3;i反应液， 合并的有机相用饱和食盐水 (10 mL><2)洗涤， 无水硫酸钠干 燥， 过滤， 滤液减压下浓缩， 残留物通过硅胶柱层析得到标题产物 1-(3-甲基茚满 -5-基)肼 -1,2-二甲酸二叔丁酯 38e (1.05 g， 黄色油状液体)。 产率： 46.7%。
MS m/z (ESI): 362.6[M+1] 第五步
5-甲基 -2-P-甲基茚满 -5-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮
将 1-(3-甲基茚满 -5-基)肼 -1,2-二甲酸二叔丁酯 38e (1.05 g， 2.9 mmol)溶解于 16 mL乙醇和水混合溶剂 (V:V=5:3)中， 搅拌下依次加入乙酰乙酸乙酯 (0.377 mL， 2.9 mmol)和 1.45 mL 6N盐酸， 氮气保护下， 加热回流反应 1.5小时反应完毕。 冷却至 室温， 将反应液在减压下浓缩， 除去乙醇， 水相用二氯甲垸萃取 (15 mLx3)， 合并 的¾"机相通过无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压下浓缩， 残留物通过硅胶柱层析得到 标题产物 5-甲基 -2-(3-甲基茚满 -5-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 38f (103 mg， 黄色油状液 体）。 产率： 15.6%。
MS m/z (ESI): 229.3[M+1] 第六步
2'-羟基 -3'-{N'-[3-甲基 -l-(3-甲基茚满 -5-基) -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼 基} -联苯 -3-羧酸
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐 If (344 mg, 1.11 mmol)溶解于
3.7 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (85 mg, 1.22 mmol), 再加入 5-甲 基 -2-(3-甲基茚满 -5-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 38f (228 mg, 1 mmol), 用饱和碳酸氢钠 溶液将反应液 pH调至 8， 加入 2 mL乙醇， 升至室温过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 固体中加入 30 mL水， 用浓盐酸调 pH = 3〜4， 过滤， 固体干燥后加 入 10 mL二氯甲垸和甲醇的混合溶液 (V:V=50: 1)， 加毕搅拌 1小时， 过滤， 滤饼用 二氯甲垸洗涤 (2 mLx3),干燥后得到标题产物 2'-羟基 -3'-{Ν'- [3-甲基 -1-(3-甲基茚满 -5-基) -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 联苯 -3-羧酸 38(300 mg， 黄色固体)。 产 率： 64.1%。
MS m/z (ESI): 466.9[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-t/6): δ 1.25(m, 3H), l ,58(m, IH), 2.30(m, IH), 2.33(s, 3H), 2.80(m, 2H), 3.19(m, IH), 7.13(m, 2H), 7.26(d, J=8.0Hz, IH), 7.62(t, J=7.6Hz, IH), 7.69(m, 3H), 7.80(d, J=7.6Hz, IH), 7.97(d, J=7.6Hz, IH), 8.43(s, IH), 9.69(br, IH), 13.06(s, IH), 13.76(s, IH) 实施例 39
2'-羟基 -5'-甲基 -3'-{N'-「3-甲基 -l-(3-甲基茚满 -5-基) -5-氧代 -1.5-二氢吡唑 -4-亚基卜肼 基} -联苯 -3-羧酸
Figure imgf000063_0001
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基 -5'-甲基联苯基 -3-羧酸盐酸盐 llf (360 mg, 1.11 mmol) 溶解于 3.7 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (85 mg, 1.22 mmol), 搅拌 20分钟， 再加入 5-甲基 -2-(3-甲基茚满 -5-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 38f (228 mg, 1.0 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液将反应液 pH调至 8， 加入 2 mL乙醇， 升至室温反应 过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 用 30 mL水溶解， 搅拌均匀， 用浓盐 酸调 pH = 3〜4，过滤， 固体干燥后加入 10 mL二氯甲垸搅拌 1小时，过滤出固体， 固体干燥后得到标题产物 2'-轻基 -5'-甲基 -3'-{N'-[3-甲基 -1-(3-甲基茚满 -5-基 5-氧 代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 联苯 -3-羧酸 39(240 mg， 红色固体)。 产率： 49.8%。 MS m/z (ESI): 480.9[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): δ 1.29(m, 3H), 1.56(m, IH), 2.28(m, IH), 2.34(s, 3H), 2.36(s, 3H), 2.80(m, 2H), 3.18(m, IH), 7.00(s, IH), 7.27(d, J=8.0Hz, IH), 7.54(s, IH), 7.61 (t, J=7.6Hz, IH), 7.70(m, 2H), 7.80(d, J=8.0Hz, IH), 7.95(d, J=7.6Hz， IH), 8.14(d, J=4.4Hz, IH), 9.40(br, IH), 13.03(s, IH), 13.76(s, IH) 实施例 40
5-(2-羟基 -3-ίΝ'-「3-甲基 -l-(3-甲基茚满 -5-基)- 5-氧代 -1.5-二氢吡唑 -4-亚基 肼基 苯) -噻吩 -2-羧酸
Figure imgf000064_0001
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 12c (351 mg, 1.11 mmol) 溶解于 3.7 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (85 mg, 1.22 mmol), 搅拌 20 分钟， 再加入 5-甲基 -2-(3-甲基茚满 -5-基) -2,4-二氢吡唑- 3-酮 38f (228 mg, 1 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH值至 8， 用 2 mL乙醇淬灭气泡， 升至室温反 应 3小时。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 固体中加入 30 mL水， 用浓盐酸 调 pH = 3〜4， 过滤， 固体干燥后经柱层析得到标题产物 5-(2-羟基 -3-{N'-[3-甲基 -1-(3-甲基茚满 -5-基) -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 苯) -噻吩 -2-羧酸 40 (90 mg, 红色固体)。 产率： 19.0%。
MS m/z (ESI): 472.8[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): δ 1.26(m, 3H), 1.58(m, IH), 2.30(m, IH), 2.32(s, 3H), 2.82(m, 2H), 3.18(m, IH), 7.16(t, J=8.0Hz, IH), 7.27(d, J=8.0Hz, 1H)， 7.54(d, J=7.6Hz, IH), 7.70(m, 5H), 10.09(br, IH), 13.71(br, IH) 买施例 41
3'-{Ν'-Π-(3-乙基-茚满- 5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基 1-肼基 }-2'-羟基联
苯 -3-羧酸
Figure imgf000065_0001
第一步
6-溴小亚乙基 -茚满
室温下， 将乙基三苯基溴化膦 (14.5 g, 39.1 mmol)溶解于 75 mL四氢呋喃中， 加入叔丁醇钾 (5.29 g, 47.3 mmol)，加毕室温搅拌 1小时。将 6-溴 -茚满 -1-酮 38b (3.39 g， 18.6 mmol) 溶解于 25 mL四氢呋喃中， 搅拌下滴加入上述的溶液中， 加毕继续 于室温下搅拌 1小时。 TLC监测至原料反应完全， 向反应液中加入 150 mL水淬灭 反应， 用二氯甲垸萃取反应液 (50 mLx4)， 合并有机相， 有机相用饱和食盐水洗涤 (45 mLx2), 无水硫酸钠干燥， 过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩后柱层析得到标题 产物 6-溴小亚乙基 -茚满 41a(3.07 g， 黄色油状液体)， 产率： 74%。
MS m/z (ESI): 221.8[M-1] 第二步
6-溴 -1-乙基 -茚满
室温下， 将 6-溴 -1-亚乙基 -茚满 41a(3.07 g， 13.7 mmol)溶解于 80 mL乙酸乙酉旨 中， 加入钯-碳 (0.61 g)， 于氢化仪中在 3个大气压下用氢气氢化， 室温反应 5小时 后， TLC 监测原料反应完全， 反应液过滤除去钯 -碳， 滤饼用乙酸乙酯洗涤 (10 mLx3), 滤液减压浓缩后柱层析， 得到标题产物 6-溴 -1-乙基 -茚满 41b(2.75 g， 浅 黄色液体)， 产率： 88.7%。
MS m/z (ESI): 224[M-1] 第三步 1 -(3-乙基 -2，3-二氢-】 H-茚满 -5-基) -1 -叔丁氧羰基 -2-叔丁氧羰基-肼 氩气氛下， 将 6-溴 -1 -乙基 -茚满 41b(2.52 g， 1 1 .2 mmol)溶解于 15 mL四氢呋喃 中， 滴加到干冰-丙酮浴浴冷却的叔丁基锂的环已垸溶液中 (18.1 mL， 1 .3 N) , 加毕 继续于干冰-丙酮浴中搅拌 2小时。 将偶氮二甲酸二叔丁酯溶解于 15 mL四氢呋喃 中， 滴加到上述反应液中， 加毕继续于干冰-丙酮浴中搅拌 0.5小时， 撤去干冰-丙 酮浴， 反应液自然升至室温后搅拌 18小时， TLC监测原料反应完全， 向反应液中 加入 25 mL氯化氨饱和溶液淬灭反应， 用乙酸乙酯 (30 mL <3)萃取反应液， 合并有 机相， 用无水硫酸钠干燥， 过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩后柱层析得到标题产 物 1 -(3-乙基 -2,3-二氢- 1 H-茚满 -5-基) - 1-叔丁氧羰基 -2-叔丁氧羰基-肼 41c(3.43 g，棕 黄色油状液体)， 产率： 81.5 %。 第四步
2-0乙基 -茚满 -5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 室温下， 将 1-(3-乙基 -2,3-二氢 -1H-茚满 -5-基) - 1 -叔丁氧羰基- 2-叔丁氧羰基-肼 41 c(3.43 g, 9.1 mmol)溶解于 50 mL乙醇和水的混合溶剂中 (V:V=3:2)， 加入 3-氧代 -丁酸乙酯 (1.18 g， 9.1 mmol)和 4.55 mL盐酸 (6N；)， 加毕， 反应液回流 1小时， TLC 监测原料反应完全， 反应液减压除去乙醇， 再用二氯甲垸萃取 (15 mLx3)， 合并有 机相， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩后柱层析得到 标题产物 2-(3-乙基 -茚满 -5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 41d(0.712 g， 黄色油状液 体）， 产率： 39.8 %。
MS m/z (ESI): 243.2[M+ 1] 第五步
3'-{Ν'-[1-(3-乙基 -茚满 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-2'-羟基联 苯 -3-羧酸
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐 If (285 mg, 0.92 mmol)溶解于 3.1 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1.2 mL亚硝酸钠溶液 (70 mg, 1.01 mmol) , 继续搅拌 20 分钟， 加入 2-(3-乙基 -茚满 -5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 41d (200 mg, 0.83 mmol) ,用饱和碳酸氢钠溶液将反应液 pH调至 8，加入 2 mL乙醇，升至室温过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 固体加入 20 mL水， 用浓盐酸调节 pH值至 3〜4， 过滤出固体， 固体干燥后得到标题产物 3'-{Ν'-[1 -(3-乙基 -茚满 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 } -2'-羟基联苯 -3-羧酸 41(145 mg, 红色固体)， 产率- 36.4%。
MS m/z (ESI): 480.9[M-1 ]
'HNMR(400MHz, DMSO-d6): δ 0.95(m, 3H), 1.43(m, 1 H), 1.65(m, 1H), 1.83(m, 1 H), 2.23(m, 1H), 2.34(s, 3H), 2.92(m, 2H), 3.05(m, 1 H), 7.15(s, 2H), 7.27(d, J=8.0Hz, 1H), 7.62(t, J=8.0Hz, 1H)， 7.72(m, 3H), 7.80(d, J=7.6Hz, 1 H)， 7.97(d, J=8.0Hz, 1 H), 8.14(s, 1H), 9.66(s, 1H), 13.04(s, 1H), 13.76(s, 1 H) 实施例 42
3'-ίΝ'-「1- (3-乙基-茚满 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基 肼基 }-2'-羟基 -5'- 甲基-联苯— 3-羧酸
Figure imgf000067_0001
冰浴下将 3'-氨基 -2'-羟基 -5'-甲基联苯基 -3-羧酸盐酸盐 llf (298 mg, 0.92 mmol) 溶解于 3.1 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1.2 mL亚硝酸钠溶液 (70 mg, 1.01 mmol), 继续 搅拌 20分钟， 加入 2-(3-乙基 -茚满 -5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 41d (200 mg, 0.83 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液将反应液 pH调至 8， 加入 2 mL乙醇， 升至室温 过夜。 TLC跟踪至原料消失，过滤，固体加入 20 mL水，用浓盐酸调节 pH值至 3〜 4， 过滤出固体， 固体干燥后得到标题产物 3'-{Ν'-[1-(3-乙基-茚满- 5-基) -3-甲基 -5- 氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-2'-羟基- 5'-甲基 -联苯 -3-羧酸 42(290 mg, 红色固 体）， 产率： 70.7%。
MS m/z (ESI): 494.9[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-i d): δ 0.95(m, 3H), 1.43(m, 1H), 1.65(m， 1H), 1.83(m, 1H), 2.23(m, 1H), 2.34(s, 3H), 2.92(m, 2H), 3.05(m, 1H), 6.99(s, 1H), 7.26(d, J=8.0Hz, 1H), 7.53(s, 1H), 7.60(t, J=8.0Hz， 1H), 7.68(m, 1H), 7.75(s, 1H), 7.80(d, J=7.6Hz, 1H), 7.96(d, J=7.6Hz, 1H), 8.14(s, 1H)， 9.39(s, 1H), 13.03(s, 1H), 13.76(s, 1H) 实施例 43
5— 0-{Ν'— Π-(3，3-二甲基茚满 -5-基) -3-甲基- 5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基 1-肼基 2-羟 基苯) -呋喃 -2-羧酸
Figure imgf000067_0002
Figure imgf000068_0001
冰浴下将 5-P-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 9c (333 mg, 1.1 mmol)溶 解于盐酸 (3.7 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (85 mg, 1.22 mmol), 反 应 20分钟， 再加入 2-(3,3-二甲基茚满 -5-基)- 5-甲基 -2，4-二氢吡唑 -3-酮 8i (242 mg, 1.0 mmol), 分批加入碳酸氢钠（1.4 g， 16.67 mmol)和 3 mL乙醇， 室温反应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 固体加入 20 mL水， 用浓盐酸调节 pH值至 3〜4， 过滤出固体， 固体干燥后经柱层析得到标题产物 5-(3-{N'-[l-(3，3-二甲基茚满- 5- 基) -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-2-羟基苯) -呋喃 -2-羧酸 43(190 mg, 红色固体)， 产率： 40.3%
MS m/z (ESI): 470.9[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-i/<5): δ 1.26(s, 6H), 1.92(t, J=7.2Hz, 2H), 2.33(s, 3H)， 2.86(t, J=7.2Hz， 2H), 7.15(m, IH), 7.20(m, 2H), 7.37(d, J=3.6Hz, IH), 7.55(d, .1=6.8Hz, IH), 7.71(m, 3H), 9.99(br, IH), 13.15(br, IH), 13.74(br, IH) 实施例 44
5-(2-羟基 -3-{Ν'-Γ3-甲基小 G-甲基茚满 -5-基) -5-氧代 -1，5-二氢吡唑 -4-亚基 1-肼基 苯) -呋喃 -2-羧酸
Figure imgf000068_0002
38f 9c
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 9c (333 mg, 1.1 mmol)溶 解于盐酸 (3.7 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 1.5 mL亚硝酸钠溶液 (85 mg, 1.22 mmol), 反 应 20分钟， 再加入 5-甲基 -2-(3-甲基茚满 -5-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 38c (228mg， 1.0 mmol), 分批加入碳酸氢钠 (1.4 g， 16.67 mmol)和 3 mL乙醇， 室温反应过夜。 TLC 跟踪至原料消失， 过滤， 固体加入 20 mL水， 用浓盐酸调节 pH值至 3〜4， 过滤 出固体， 固体干燥后经柱层析得到标题产物 5-(2-羟基 -3-{N'-[3-甲基 -1-(3-甲基茚满 -5-基) -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 苯) -呋喃 -2-羧酸 44(110 mg, 红色固体)， 产率： 24.0%。
MS m/z (ESI): 457.0[M-1 ]
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): δ 1.25(m, 3H), 1.59(m, 1H), 2.29(m, 1H), 2.33(s, 3H), 2.84(m, 2H), 3.17(m, 1H), 7.14(d, J=3.2Hz, 1H), 7.22(t, J=8.0Hz, 1H), 7.28(d, J=8.0Hz, 1 H), 7.36(d, J=3.2Hz, 1H), 7.55(d, J=8.0Hz, 1H), 7.71(m, 3H)9.96(br, l H)13.75(br, 1H) 实施例 45
5-0-{Ν'-Π— 2-二甲基茚满 -5—基 )— 3—甲基 -5—氧代— 二氢吡唑—4—亚基 I—肼基 }— 2_经 基苯) -呋喃 -2-羧酸
Figure imgf000069_0001
笛 _
6-溴 -2,2-二甲基茚满 -1-酮
将 6-溴 -茚满 -1-酮 38b (6.02 g， 28.5 mmol)和碘甲浣 (4.4 mL， 70 mmol)溶解于 200 mL四氢呋喃 (干燥)中， 室温搅拌 15分钟， 加入氢化钠 (2.73 g, 68.2 mmol), 继续搅拌 2小时， TLC监测至原料反应完全， 反应液中加入 150 mL水， 用乙酸乙 酯萃取 (150 mLx2)， 合并有机相， 有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过 滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩后柱层析得到标题产物 6-溴 -2,2-二甲基茚满 -1-酮 45a(5.36 g, 棕色固体)， 产率： 78.6%。
'HNMR(400MHz, CDC13): δ 7.918(d, J=1.6Hz, 1H), 7.725(dd, J,=8Hz, J2=2Hz, 1H), 7.352(d, J=8Hz， 1H), 2.979(s, 2H), 1.273(s, 6H) 第二步
5-溴 -2,2-二甲基茚满
将 6-溴 -2,2-二甲基茚满 -1-酮 45a(7.23 g, 30.3 mmol)溶解于 150 mL三氟醋酸中， 加入三乙基硅烷 (12.1 mL， 75.6 mmol), 室温搅拌过夜， TLC监测反应至原料反应 完全， 加水淬灭反应， 反应液减压浓缩除去三氟醋酸， 加入饱和碳酸钠调节 pPHi 至碱性， 用乙酸乙酯萃取 (50 mLx3)， 合并有机相， 有机相用饱和食盐水洗涤， 无 水硫酸钠干燥， 过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩后柱层析得到标题产物 5-溴 -2,2- 二甲基茚满 45b(14 g， 无色油状液体)， 直接投下一歩反应。
'HNMR(400MHz, CDC13): δ 7.335(s,lH), 7.281(d, J=8Hz, 1 H), 7.063(s, J=8Hz, 1H), 2.749(s, 2H), 2.702(s, 2H), 1.188(s, 6H) 第三步
1 -(2,2-二甲基茚满 -5-基)肼 - 1 ,2-二甲酸二叔丁酯 将 5-溴 -2,2-二甲基茚满 45b(2.4 g， 10.7 mmol)溶解于 20 mL四氢呋喃 (干燥)中， 用干冰 /乙醇浴冷却至 -78°C， 滴加正丁基锂 (12.1 mL， 30.2 mmol), 加毕搅拌 2小 时， 将偶氮二甲酸二叔丁酯 (3.27 g， 14.2 mmol)溶解于 20 mL四氢呋喃 (干燥)， 加 入到上述反应液中， 继续低温反应 3小时， TLC监测至原料反应完全， 用 50 mL 水淬灭反应， 反应液用乙酸乙酯萃取 (50 mLx2)， 合并有机相， 有机相用饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩后柱层析得到标题产 物 1-(2，2-二甲基茚满- 5-基)肼 -1,2-二甲酸二叔丁酯 45c(2.68 g， 黄色油状液体)， 产 率： 66.8%。 第四歩
2-(2,2-二甲基茚满 -5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 将 1-(2，2-二甲基茚满 -5-基)肼 -1,2-二甲酸二叔丁酯 45c(3.3 g， 8.78 mmol)溶解于 12 mL乙酸中， 加入 6 mL三氟乙酸和 3-氧代-丁酸甲酯 (1.5 mL， 13.8 mmol), 加毕 于 90°C下搅拌 2小时， TLC监测反应至原料反应完全， 反应液减压浓缩， 向残余 物中加入 30 mL水和 30 mL乙酸乙酯， 搅拌均匀后分液， 有机相用饱和食盐水洗 涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩后柱层析得到标题产物 2-(2,2- 二甲基茚满 -5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 45d(464 mg， 黄色油状液体)， 产率： 22.1%。
MS m/z (ESI): 243.3[M+1] 第五步
5— (3— {Ν'— [卜 (2,2—二甲基茚满 -5—基 )-3—甲基— 5—氧代— ^5-二氢吡唑— 4—亚基]—肼基 }-2-轻 基苯:) -呋喃 -2-羧酸
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 9c (150 mg, 0.5 mmol)溶 解于盐酸 (1.7 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 0.6 mL亚硝酸钠溶液 (38 mg, 0.55 mmol), 反 应 20分钟，再加入 2-(2,2-二甲基茚满 -5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 45d (109 mg, 0.45 mmol), 分批加入碳酸氢钠 (630 mg， 7.5 mmol)禾 tH mL乙醇， 室温反应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 固体加入 15 mL水， 用浓盐酸调节 pH值至 3〜4， 过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤 (1 mLx3)后干燥得到标题产物 5-(3-{Ν'-[1 -(2,2-二甲基茚 满 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-2-羟基苯) -呋喃 -2-羧酸 45(67 mg, 黄色固体)， 产率： 31.6%。
MS m/z (ESI): 470.7[M-1]
lHNMR(400MHz,DMSO-i/6): 51.13(s,6H),2.32(s,3H),2.70(m,4H),7.14(d,J=3.6Hz,lH), 7.21 (m,2H),7.36(d,J=3.6Hz, 1 H),7.54(m, 1 H),7.62(m, 1 H),7.69(m,2H) 实施例 46
5-{2-羟基 -3-ΓΝ'-Π-茚满 -5-基 -3甲基 -5-氧代 -L5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 1- 5-甲基苯
Figure imgf000071_0001
第一步
5-(3-硝基 -2-甲氧基 -5-甲基苯基) -呋喃 -2-羧酸 将 3-(4,5-二甲基 -[1,3,2]硼酸频那醇酯 -2-基) -2-甲氧基 -5-甲基-硝基苯 24a (3.1 g,
7.5 mmol), 5-溴 -呋喃 -2-羧酸 (1.3 g， 6.8 mmol)、 四 (三苯基膦)钯 (0.43 g， 0.4 mmol) 和碳酸钠（1.6 g, 15.1 mmol)加入到 30 mLl,4-二氧六环和 15 mL水的混合溶剂中， 反应体系加热回流 1 小时， TLC跟踪至原料消失， 反应液冷却后过滤， 滤液用乙 酸乙酯洗涤后减压浓缩， 所得固体中加入 50 mL水， 用浓盐水调节 pH值至 3， 过 滤， 滤饼用乙酸乙酯洗涤后干燥得到标题产物 5-(3-硝基 -2-甲氧基 - 5-甲基苯基) -呋 喃 -2-羧酸 46a(522 mg， 黄色固体)， 产率： 29%。
MS m/z (ESI): 275.7[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): δ 13.31(1H, br), 7.90(1 H, s)， 7.78(1H, s), 7.39(1 H, d，
J=3.2Hz), 7.16(1 H, d， J=3.6Hz),
3.80(3H,s) , 2.42(3H,s)
第二步
5-(3-氨基 -2-甲氧基 -5-甲基苯基) -呋喃 -2-羧酸 将 5-(3-硝基 -2-甲氧基 -5-甲基苯基;) -呋喃 -2-羧酸 46a(410 mg, 1.48 mmol)溶解于 28niL乙酸乙酯中， 加入 61 mg钯 -碳和甲酸铵 (658 mg, 10.44 mmol)， 加毕加热回 流 3小时。 TLC跟踪至原料消失， 过滤除去钯 -碳， 滤液减压浓缩， 干燥， 得到标 题产物 5-P-氨基 -2-甲氧基 -5-甲基苯基) -呋喃 -2-羧酸 46b(356 mg,白色固体)。产率： 97.3%。
MS m/z (ESI): 246.0[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-C/(5): δ 7.18(l H,s) , 6.98(lH,m), 6.80(lH,s), 6.56(lH,s), 3.62(3H,s), 2.20(3H,s) 第三步
5-(3-氨基 -2-羟基 -5-甲基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 将 5-(3-氨基 -2-甲氧基 -5-甲基苯基) -呋喃 -2-羧酸 46b (248 mg, 1 mmol)溶解于 20 mL二氯甲垸中， 滴加入三溴化硼的二氯甲垸溶液 (3 mL, 1 mmol/L), 室温反应 2 小时。 TLC跟踪至原料消失， 减压浓缩， 所得固体用乙酸乙酯洗涤 (50 mLx3)， 干 燥后得到标题产物 5-(3-氨基 -2-羟基 -5-甲基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 46c(172 mg, 白色固体)。 产率： 54.7%。
MS m/z (ESI): 231.8[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): δ 7.46(1 H,m) , 7.34(lH,m)， 7.10(2H,m) , 2.31(3H,s) 第四歩
5-{2-羟基 -3-[N'-(l -茚满 -5-基 -3甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 ]-5-甲基苯 呋喃 -2-羧酸
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基 -5-甲基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 46c (219 mg, 0.70 mmol) 溶解于 2.3 mL IN盐酸中， 滴加入 1.0 mL亚硝酸钠溶液 (53 mg, 0.77 mmol),反应 20分钟，再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (134 mg, 0.63 mmol),分批加入碳酸氢钠 (878 mg, 10.45 mmol)和 2 mL乙醇，室温反应过夜。 TLC 跟踪至原料消失， 过滤， 固体加入到 20mL水中， 冰浴下用浓盐酸调节 Ph=3〜4， 过滤，滤饼用 6 mL二氯甲烷洗涤后干燥，得到标题产物 5-{2-羟基 -3-[Ν'-(1-茚满 -5- 基 -3甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 ]-5-甲基苯 } -呋喃 -2-羧酸 46(170 mg, 红色固体)。 产率： 59.2%。
MS m/z (ESI): 456.8[M-1]
"HNMR(400MHz, DMSO-t/d): 5 2.05(m, 2H), 2.32(s, 3H), 2.37(s, 3H), 2.88(m, 4H), 7.13(d, J=3.6Hz, 1 H), 7.28(d, J=8.0Hz, 1 H), 7.35(m, 2H), 7.51(s, 1 H), 7.68(d, J=7.6Hz, 1H), 7.78(s, 1H) 实施例 47
2-ί2-经基 -3-ΓΝ'-(1-茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 1-苯}-5-甲 基 -噻唑 -4-羧酸
Figure imgf000073_0001
第一步
2-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -5-甲基 -噻唑 -4-羧酸 将 2-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -4,4，5,5-四甲基 -[1,3,2]硼酸乙二醇酯 6a(1.7 g, 6.08 mmol)、 2-溴 -5-甲基 -噻唑 -4-羧酸 (900 mg, 4.05 mmol)、 四 (三苯基膦)钯 (233 mg, 0.2 mmol)和碳酸钠（1.29 g, 12.16 mmol)溶解于 30mL 1,4-二氧六环中，加热回流 4小时。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 滤液减压浓缩， 向残余物中加入 20 mL盐酸 (IN)和 30 mL乙酸乙酯， 搅拌后静置分液， 将有机相用饱和氯化钠溶液洗涤， 无水硫酸钠 干燥， 过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩后用乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂重结晶， 所得固体干燥后得到标题产物 2-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -5-甲基 -噻唑 -4-羧酸 47a (310 mg, 黄色固体)。 产率： 26%。
MS m/z (ESI): 292.6[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): δ 13.45(br, 1H), 8.58(dd, J=8.0, 1H)， 8.14(dd, J=8.0, 1H), 7.52(t, J=8.0, 1H), 3.93(s, 3H), 2.71(s, 3H) 第二步
2-(2-甲氧基 -3-氨基-苯基) -5-甲基-噻唑 -4-羧酸 将 2-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -5-甲基 -噻唑 -4-羧酸 47a (300 mg, 1.02 mmol)溶解 于 15 mL甲醇中， 加入 30 mg钯 -碳， 于氢气氛下搅拌 24小时。 TLC跟踪至原料 消失， 反应液过滤除去钯 -碳， 滤液减压浓缩得到标题产物 2-(2-甲氧基 -3-氨基-苯 基) -5-甲基 -噻唑 -4-羧酸 47b(250 mg， 黄色固体)， 产率： 92%。
MS m/z (ESI): 262.8ΓΜ-1] 卜
2-(2-羟基 -3-氨基-苯基) -5-甲基 -噻唑 -4-羧酸氢溴酸盐 将 2-(2-甲氧基 -3-氨基-苯基) -5-甲基 -噻唑 -4-羧酸 47b (280 mg, 0.94 mmol)溶解 于 5 mL溴化氢中， 于 80°C下搅拌过夜。 TLC跟踪至原料消失， 反应液过滤， 滤 饼用乙酸乙酯洗涤后干燥， 得到标题产物 2-(2-羟基 -3-氨基-苯基) -5-甲基 -噻唑 -4- 羧酸氢溴酸盐 47c (200 mg， 黄色固体)。 产率： 64%。
MS m/z (ESI): 262.7[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-i¾): 67.88(d, J=8.0,1 H), 7.5 l(d, J=8.0， 1H), 7.09(t, J=8.0, lH), 2.73(s, 3H) 第四步
2-{2-羟基 -3-[N'-(l -茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基)-肼基] -苯 }-5-甲 基 -噻唑 -4-羧酸
冰浴下将 2-(2-羟基 -3-氨基-苯基) -5-甲基 -噻唑 -4-羧酸氢溴酸盐 47c (200 mg, 0.60 mmol)溶解于 2 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 0.82 mL亚硝酸钠溶液 (46 mg, 0.66 mmol), 搅拌 20分钟， 再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (116 mg, 0.544 mmol),分批加入饱和碳酸氢钠溶液 (781 mg, 9.3 mmol)将 pH调至 8〜9，用 2 mL乙醇淬灭气泡， 升至室温反应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 固体 用 20 mL水溶解， 浓盐酸调 pH = 3〜4， 过滤， 干燥， 粗品用 HPLC分离纯化， 得 到标题产物 2-{2-羟基 -3-[Ν'-(1-茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1，5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼 基] -苯 5-甲基 -噻唑 -4-羧酸 47 (195 mg， 红色固体)。 产率： 75.9%。
MS m/z (ESI): 473.7[M-1]
1丽 MR(400MHz, D20): δ 1.97(m, 2H), 2.3 l (s, 3H), 2.53(s, 3H), 2.80(m, 4H), 6.52(t, J=8.0Hz, 1H), 7.23(m, 4H), 7.84(d, J=8.0Hz, 1H) 实施例 48
{2-羟基 -3-ί '-(1-茚满 -5-基- 3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 1-苯 }-l，2，4- 三甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯
Figure imgf000074_0001
Figure imgf000075_0001
冰浴下， 将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -1,2,4-三甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯氢溴酸盐 6h (180 mg, 0.66 mmol)溶解于 2.2 mL盐酸 (IN)中，滴加入 0.8 mL亚硝酸钠溶液 (50 mg, 0.72 mmol)，搅拌 20分钟，再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (126 mg, 0.59 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液 pH调至 8〜9， 用 2 mL乙醇淬灭气泡， 升 至室温反应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 加入 20 mL二氯甲垸和 20 mL水， 搅拌均匀后用浓盐酸调剂 pH = 3〜4， 分液， 有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩后柱层析得到标题产物 5-{2-羟 基 3-[Ν'— (1—茚满—5—基—3—甲基—5—氧代— 1 二氢吡唑—4-亚基) -肼基] -苯 }-1,2，4-三甲基 -1Η-吡咯 -3-羧酸乙酯 48 (80 mg， 红色固体)。 产率： 25.8%。
MS m/z (ESI): 514.0[M+1]
'HNMR(400MHz, DMSO-i/6): 51.30(m,3H), 2.01(m,2H), 2.23(s,3H), 2.50(s,3H), 2.95(m,4H), 3.32(s,3H)， 4.33(m,2H), 6.63(m,lH), 7.00(m,lH), 7.12(m,lH), 7.28(m,lH): 7.73(m,2H), 13.91(br,lH) 实施例 49
5-(2-羟基 -3-{Ν'-「3-甲基 -5-氧代 -1-(1,U,3-四甲基茚满 -5-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基卜 肼基 } -苯) -噻吩 -2-羧酸
Figure imgf000075_0002
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 12c (260 mg, 0.823 mmol) 溶解于 2.7 mL盐酸 (IN)中， 滴加入 1.1 mL亚硝酸钠溶液 (62 mg, 0.91 mmol), 搅拌 20分钟，再加入 5-甲基 -2-(1,1,3,3-四甲基茚满 -5基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 19d (200 mg, 0.74 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH值至 8， 用 2 mL乙醇淬灭气泡， 升至室 温反应 3小时。 TLC跟踪至原料消失， 过滤出固体， 固体中加入 20 mL水， 用浓 盐酸调 pH = 3〜4, 过滤， 固体干燥后经柱层析得到标题产物 5-(2-羟基 -3-{N'-[3- 甲基 -5-氧代 1,3,3-四甲基茚满 -5-基) -1，5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 苯) -噻吩 -2- 羧酸 49 (216 mg， 红色固体)。 产率： 56.5%。
'HNMR(400MHz, DMSO-i 6): δ 1.30(m, 12H), 1.93(s, 2H), 2.34(s, 3H), 7.19(t, J=8.0Hz, 1H), 7.25(d, J=8.0Hz， 1H), 7.57(d, J=8.0Hz, 1H), 7.66(m, 2H), 7.7 l(d, J=8.0Hz, 1H), 7.77(m, 2H), 10.10(s, 1H), 13.06(br, 1H), 13.72(br, 1H) 实施例 50
5- 2-羟基 -5-甲基 -3-{Ν'-Γ3-甲基 -5-氧代 -1 - (5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1.5-二氢吡唑 -4-亚 基卜肼基 苯) -呋喃 -2-羧酸
Figure imgf000076_0001
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基 -5-甲基苯基) -呋喃 -2-羧酸氢溴酸盐 46c (120 mg, 0.38 mmol) 溶解于 1.3 mL IN盐酸中， 滴加入 0.5 mL亚硝酸钠溶液 (29 mg, 0.42 mmol), 反应 20分钟， 再加入 5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 3i (78 mg, 0.34 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 8， 加入 2 mL乙醇， 室温反 应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 固体加入到 20 mL水中， 再用浓盐酸调节 pH=3〜4， 过滤， 固体干燥后经柱层析得到标题产物 5-(2-羟基 -5-甲基 -3-{N'-[3-甲 基 -5-氧代 -1-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 苯) -呋喃 -2-羧酸 50 (56 mg, 红色固体)。 产率： 34.8%。
MS m/z (ESI): 470.8[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO-C 6): δ 1.75(m, 4H), 2.3 l (s, 3H), 2.37(s, 3H), 2.73(m, 4H), 7.13(m, 2H), 7.35(m, 2H), 7.50(s, 1H), 7.62(m, 2H) 实施例 51
4-(2-羟基 -3-W'-「3-甲基 -5-氧代 -l-(5,6.7,8-四氢萘 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基 1-肼 基 苯) -噻吩 -2-羧酸
Figure imgf000076_0002
Figure imgf000077_0001
第一歩
4-(3-硝基 -2-甲氧基-苯基) -噻吩 -2-羧酸
将 2-(2-甲氧基 -3-硝基苯基)- 4,4,5,5-四甲基 -[1 ,3,2]硼酸乙二醇酯 6a (0.81 g, 2.9 mmol), 4-溴 -噻吩 -2-羧酸 (0.3 g, 1.45 mmol), 四 (三苯基膦)钯 (80 mg, 0.073 mmol) 和碳酸钠 (0.31 g， 2.9 mmol)溶解于 20 mL 1,4-二氧六环和 10 mL水的混合溶剂中， 加热回流 0.5小时。 TLC跟踪至原料消失， 反应液用 1N盐酸酸化至 pH〜3， 乙酸 乙酯萃取 (20 mLx3) , 合并有机相， 有机相减压浓缩后柱层析得到标题产物 4-(3- 硝基 -2-甲氧基-苯基) -噻吩 -2-羧酸 51a(0.54 g， 棕色油状液体)， 直接进行下步反应。 MS m/z (ESI): 277.6[M-1] 第二步
4-(3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -噻吩 -2-羧酸
将 4-(3-硝基 -2-甲氧基-苯基) -噻吩 -2-羧酸 51a (400 mg, 1.45 mmol)溶解于 30mL 乙酸乙酯中， 再加入 100 mg钯 -碳和甲酸胺 (360 mg, 5.8 mmol), 加热回流 3小时。 TLC跟踪至原料消失， 反应液过滤除去钯 /碳，减压浓缩得到标题产物 4- 3-氨基 -2- 甲氧基-苯基) -噻吩 -2-羧酸 51b(410 mg， 棕色油状液体） ， 直接进行下步反应。 MS m/z (ESI): 247.8[M-1] 第三步
4-(3-氨基 -2-羟基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 将 4- 3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -噻吩 -2-羧酸 51b (360 mg, 1.45 mmol)溶解于 5 mL 二氯甲烷中， 滴加入三溴化硼 (2.8 mL， 5.6 mmol)， 室温反应 4.5小时。 TLC跟踪至 原料消失， 加入 5 mL甲醇， 减压浓缩， 向残余物中加入 10 mL乙酸乙酯， 搅拌 0.5 小时， 过滤， 收集固体， 干燥， 得到标题产物 4-(3-氨基 -2-羟基苯基) -噻吩 -2- 羧酸氢溴酸盐 51c(80 mg， 灰色固体)。 产率： 17.5%。
MS m/z (ESI): 236.1 [M+l] 第四步
4-(2-羟基 -3-{N'-[3-甲基 -5-氧代 -1-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼 基} -苯) -噻吩 -2-羧酸 .
冰浴下将 4-(3-氨基 -2-羟基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 51c (80 mg, 0.25 mmol) 溶解于 1 mL IN盐酸中， 滴加入 0.3 mL亚硝酸钠溶液 (19 mg, 0.28 mmol), 反应 20 分钟， 再加入 5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 3i (52 mg, 0.23 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 8， 加入 2 mL乙醇， 室温反应过夜。 TLC 跟踪至原料消失， 过滤， 固体加入到 20 mL水中， 再用浓盐酸调节 pH=3〜4， 过 滤， 固体中加入 4 mL乙酸乙酯搅拌 2小时， 过滤， 所得固体干燥后得到标题产物 4-(2-羟基 -3-{N'-[3-甲基 -5-氧代 -1- (5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼 基 苯) -噻吩 -2-羧酸 51 (11 mg， 黑色固体)。 产率： 10.2%。
MS m/z (ESI): 472.8[M-1 ]
'HNMR(400MHz, DMSO-i 6): δ 1.76(m, 4H), 2.33(s， 3H), 2.74(m, 4H), 7.13(m, 2H), 7.33(m, 1H), 7.65(m, 3H), 8.06(d, J=1.6Hz, 1H), 8.14(d, J=1.6Hz, 1H), 9.68(s, 1H), 13.75(s, 1H) 实施例 52
4-{2-羟基 -3-ΓΝ'-Π-茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 1-苯 噻吩
-2-羧酸
Figure imgf000078_0001
冰浴下将 4-(3-氨基 -2-羟基苯基) -噻吩 -2-羧酸氢溴酸盐 51c(120 mg, 0.38 mmol) 溶解于 2.7 mL IN盐酸中， 滴加入 0.45 mL亚硝酸钠溶液 (29 mg, 0.42 mmol), 反应 20分钟， 再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (73 mg, 0.34 mmol), 用 饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 8， 加入 2 mL乙醇， 室温反应过夜。 TLC跟踪至原 料消失， 过滤， 固体加入到 20 mL水中， 再用浓盐酸调节 pH=3〜4， 过滤， 固体 中加入 5 mL乙酸乙酯搅拌 1小时， 过滤， 所得固体干燥后得到标题产物 4-{2-羟 基 _3-[Ν'-(1-茚满 _5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基]-苯} -噻吩 -2-羧酸 52(45 mg, 黄色固体)。 产率： 28.7%。
MS m/z (ESI): 458.8[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO- d): δ 2.05(m, 2H), 2.32(s, 3H), 2.87(m, 4H), 7.13(t,
J=8.0Hz, 1H), 7.32(m, 2H), 7.67(m, 2H), 7.78(s, 1H), 8.05(d, J=1.6Hz, 1H), 8.13(d, J=1.2Hz, 1H), 9.68(s, 1H), 13.79(s, 1H) 实施例 53
-Q-羟基 -3-W'-「3-甲基 -5-氧代 -l-(5,6，7,8-四氢萘 -2-基) -1,5-二氢吡唑 1-4-亚基卜肼
Figure imgf000079_0001
第一步
5-溴 -2-甲基呋喃 -3-羧酸甲酯
将 2-甲基呋喃 -3-羧酸甲酯 (2.0 g， 14.3 mmol)溶解于苯中，加入偶氮二异丁腈 (10 mg, 0.06 mmol), 冰浴冷却至 0°C， 加入 N-溴代琥珀酰亚胺 (2.8 g， 15.7 mmol), 加毕撤去冰浴， 反应液于室温下搅拌过夜， TLC 跟踪至原料消失， 反应液过滤， 滤液减压浓缩后柱层析得到标题产物 5-溴 -2-甲基呋喃 -3-羧酸甲酯 53a(1.9 g， 无色 油状液体)， 产率： 61%。 第二步
5-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -2-甲基呋喃 -3-羧酸甲酯 将 5-溴 -2-甲基呋喃 -3-羧酸甲酯 53a(0.65 g， 3.0 mmol)和 2-(2-甲氧基 -3-硝基苯 基) -4,4,5,5-四甲基 -[1,3,2]硼酸乙二醇酯 6a(1.0 g， 3.58 mmol)溶解于 1,4-二氧六环 (15 mL)中， 加入四 (三苯基膦)钯 (173 mg, 0.15 mmol)和碳酸钠 (636 mg, 6.0 mmol), 加 毕于 100Ό下回流 3小时， TLC跟踪至原料消失， 反应液冷却后过滤， 滤液减压浓 缩后经柱层析得到标题产物 5-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -2-甲基呋喃 -3-羧酸甲酯 53b(659 mg, 白色固体）。 产率： 75%。 第三步
5-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -2-甲基呋喃 -3-羧酸 将 5-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -2-甲基呋喃 -3-羧酸甲酯 53b(650 mg, 2.23 mmol) 溶解于甲醇中，加入氢氧化钠 (268 mg, 6.7 mmol),加毕于 50°C下搅拌 3小时， TLC 跟踪至原料消失， 反应液减压浓缩后用 1N的盐酸调节 pH至 3〜4， 有大量固体析 出， 过滤， 所得固体用正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂 (V:V=5:1)重结晶， 得到标题 产物 5-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -2-甲基呋喃 -3-羧酸 53c(450 mg， 白色固体 )， 产率： 84%。
MS m/z (ESI): 275.7[M-1]
!HNMR(400MHz, DMSO- i¾):S12.80(s, 1H), 8.03(dd, J=8.0, 1H), 7.87(dd, J=8.0, 1H), 7.44(t, J=8.0, 1 H), 7.13(s, 1H), 3.83(s, 3H), 2.64(s, 3H) 第四歩
5-(2-甲氧基 -3-氨基-苯基) -2-甲基呋喃 -3-羧酸 将 5-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -2-甲基呋喃 -3-羧酸 53c(450 mg, 1.62 mmol)溶解于 甲醇中， 加入 45 mg钯 /碳， 在氢气氛下回流搅拌 4小时， TLC跟踪至原料消失， 反应液过滤， 滤液减压浓缩得到标题产物 5-(2-甲氧基 -3-氨基-苯基) -2-甲基呋喃 -3- 羧酸 53d(370 mg， 白色固体)， 产率： 92%。
MS m/z (ESI): 245.8[M-1]
'H MR(400MHz, CDC13): 66.97(s, 1H), 6.87(m, 2H), 6.68(m, 1H), 5.06(br, 2H),
3.63(s, 3H)， 2.59(s, 3H) 第五步
5-(2-羟基 -3-氨基-苯基) -2-甲基呋喃 -3-羧酸氢溴酸盐 将 5-(2-甲氧基 -3-氨基-苯基； )-2-甲基呋喃 -3-羧酸 53dC370 mg， 1.5 mmol)溶解于 二氯甲垸中， 冰浴冷却至 0°C， 滴加三溴化硼的二氯甲垸溶液 (1 N， 3.6 mL) , 加毕 室温反应 2小时， TLC跟踪至原料消失， 反应液中加入 0.5 mL甲醇淬灭反应， 反 应液搅拌 30分钟后浓缩， 所得固体中加入 10 mL乙酸乙酯搅拌 30分钟， 过滤， 所得固体干燥后得到标题产物 5-(2-羟基 -3-氨基-苯基) -2-甲基呋喃 -3-羧酸氢溴酸盐 53e(240 mg , 灰色固体）， 产率： 46%。
MS m/z (ESI): 231.7[M-1]
'HNMR(400MHz, CDC13): 57.57(dd, J=8.0, 1H), 7.24(dd, J=8.0, 1H), 7.05(t, J=8.0, 1H), 2.61(s, 3H) 第六步
5-(2-羟基 -3-{N'-[3-甲基 -5-氧代小 (5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1，5-二氢吡唑 1-4-亚基] '-肼 基 苯 )-2-甲基呋喃 -3-羧酸
冰浴下将 5-(2-羟基 -3-氨基-苯基) -2-甲基呋喃 -3-羧酸氢溴酸盐 53e (200 mg, 0.64 mmol) 溶解于 2.2 mL IN盐酸中， 滴加入 0.9 mL亚硝酸钠溶液 (48 mg, 0.7 mmol), 反应 20分钟， 再加入 5-甲基 -2-(5,6，7,8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 3i (131 mg, 0.57 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 8， 加入 2 mL乙醇， 室温反 应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 固体加入到 20 mL水中， 再用浓盐酸调节 pH=3〜4， 过滤， 固体中加入 8 mL乙酸乙酯搅拌 1小时， 过滤， 所得固体干燥后 得到标题产物 5-(2-羟基 -3-{N'-[3-甲基 -5-氧代 -1 -(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -1 ,5-二氢吡唑 1-4-亚基] -肼基 苯) -2-甲基呋喃 -3-羧酸 53 (200 mg， 红色固体)。 产率： 73.8%。 1HNMR(400MHz, DMSO-c/6): δ 1.75(m, 4H), 2.3 l(s, 3H), 2.62(s, 3H), 2.77(m, 4H), 7.14(m, 3H)， 7.47(d, J=7.6Hz, I H), 7.65(m, 3H), 9.79(s, IH), 12.73(br, IH), 13.76(br, IH) 实施例 54
-(2-羟基- -W'-「3-甲基 -5-氧代- 1 -(5,6,7,8-四氢萘亚甲基 -2-基 I ：氢吡唑 -4-亚 基 肼基 苯基) -呋喃 -2-羧酸甲酯
Figure imgf000081_0001
第一步
5-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -呋喃 -2-羧酸甲酯 将 2-(2-甲氧基 -3-硝基苯基)- 4,4,5,5-四甲基 -[1，3，2]硼酸乙二醇酯 6a (3.6 g, 12 mmol), 5-溴 -呋喃 -2-羧酸甲酯 (2.05 g, 10 mmol), 四 (三苯基膦)钯 (1.55 g, 0.5 mmol) 和碳酸钠 C2.12 g, 20 nimoi;)溶解于 1 ,4-二氧六环中， 加热回流 3小时。 TLC跟踪至 原料消失， 过滤， 滤液减压浓缩， 向残余物中加入 30 mL水和 50 mL乙酸乙酯， 搅拌均匀后静置， 有机相浓缩后用乙酸乙酯和正己垸重结晶， 得到标题产物 5-(2- 甲氧基 -3-硝基苯基) -呋喃 -2-羧酸甲酯 54a(500 mg， 黄色固体)。 产率： 18%。
'HNMR(400MHz, CDC13): δ 8.23(dd, J=7.6, IH), 7.83(dd, 5=7.6, IH), 7.35(m, 2H), 7.16(d, J=4.0, IH), 3.98(s, 3H), 3.94(s, 3H) 第二步
氨基 -2-甲氧基-苯基) -呋喃 -2-羧酸甲酯
将 5- (2-甲氧基 -3-硝基苯基) -呋喃 -2-羧酸甲酯 54a (500 mg, 1.8 mmol)溶解于甲 醇中， 再加入 50 mg钯 -碳， 于氢气氛下加热回流 4小时。 TLC跟踪至原料消失， 减压浓缩， 所得固体用乙酸乙酯和正己垸的混合溶剂重结晶 (V:V=1 :5)后干燥， 得 到标题产物 5-(3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -呋喃 -2-羧酸甲酯 54b(370 mg, 白色固体)， 产率： 83%。 第三步
5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧酸甲酯
将 5-(3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -呋喃 -2-羧酸甲酯 54b (350 mg, 1.42 mmol)溶解于 二氯甲烷中， 滴加入三溴化硼 (3.3 mL, 2.0 mol/L), 室温反应 2小时。 TLC跟踪至 原料消失， 用甲醇淬灭反应， 反应液用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 5〜6， 用乙 酸乙酯萃取， 有机相浓缩后经柱层析得到标题产物 5- (3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2- 羧酸甲酯 54c(170 mg， 灰色固体)。 产率： 451%。
MS m/z (ESI): 232.0[M-1]
!HNMR(400MHz, DMSO-i/6): 57.32(d, J=7.6, I H), 7.05(d, J=7.6， IH), 6.82(m, 3H), 3.96(s, 3H) " 第四步
5-(2-羟基 -3-{N'-[3-甲基 -5-氧代 -l-(5，6,7,8-四氢萘亚甲基 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚 基] -肼基 }-苯基) -呋喃 -2-羧酸甲酯
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基)-呋喃- 2-羧酸甲酯 54c (110 mg, 0.47 mmol)溶解 于盐酸 (1.6 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 0.6 mL亚硝酸钠溶液 (36 mg, 0.52 mmol), 反应 10分钟， 再加入 5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -2，4-二氢吡唑 -3-酮 3i (97 mg, 0.43 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 8〜9， 室温反应 24小时。 TLC跟踪至原 料消失， 过滤， 固体溶解于 15 mL水中， 冰浴下用浓盐酸调节 pH至 3〜4， 过滤， 固体经柱层析后干燥， 得到标题产物 5-(2-羟基 -3-{N'-[3-甲基 -5-氧代 -1 -(5,6,7,8-四 氢萘亚甲基 -2-基) -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 苯基) -呋喃 -2-羧酸甲酯 54(48 mg, 红色固体)。 产率： 23.9%。
MS m/z (ESI): 470.7[M-1]
'H MR(400MHz, DMSO- 6): δ 1.76(m, 4H), 2.31(s, 3H), 2.73(m, 4H), 3.86(s, 3H), 7.12(m, IH), 7.17(m, IH), 7.22(t, J=8.0Hz, IH), 7.46(m, IH), 7.56(m, I H), 7.65(m, 2H)， 7.72(m, IH), 10.02(s, IH), 13.72(br, IH) 实施例 55
5-{2-羟基 -3-ΓΝ'-Π -茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1，5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 1-苯基 呋
Figure imgf000082_0001
Figure imgf000083_0001
冰浴下将 5-(3-氨基 -2-羟基苯基) -呋喃 -2-羧酸甲酯 54c (110 mg, 0.47 mmol)溶解 于盐酸 (1.6 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 0.6 mL亚硝酸钠溶液 (36 mg, 0.52 mmol), 反应 20分钟， 再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (91 mg, 0.43 mmol), 用 饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 8〜9， 室温反应 24小时。 TLC跟踪至原料消失， 用 乙醇淬 ^反应， 过滤， 固体溶解于 15 mL水中， 冰浴下用浓盐酸调节 pH至 3〜4， 过滤， 固体经柱层析后干燥， 得到标题产物 5-{2-羟基 -3-[Ν'-(1-茚满 -5-基 -3-甲基 -5- 氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基)-肼基] -苯基 } -呋喃 -2-羧酸甲酯 55(137 mg, 红色固体)。 产率： 70.3%。
MS m/z (ESI): 456.7[M-1]
]HNMR(400MHz, DMSO-c/6): δ 2.05(m, 2H), 2.33(s, 3H), 2.89(m, 4H), 3.86(s, 3H), 7.18(m, 2H), 7.30(d, J=8.4Hz, 1H), 7.46(d, J=3.6Hz, 1H), 7.56(m, 1H), 7.71(m, 2H), 7.78(s, lH) ' 实施例 56
3WN'-「l-(2,2-二甲基茚满 -5-基) -3-甲基 -5-氧代- 1,5-二氢吡唑 -4-亚基 肼基 }-2'-羟基
联苯 -3-羧酸
Figure imgf000083_0002
冰浴下将 2'-羟基 -3'-氨基联苯基 -3-羧酸氢溴酸盐 If (150 mg, 0.5 mmol)溶解于
-盐酸 (1.7 mL, 1 mol/L)中，滴加入 0.6 mL亚硝酸钠溶液 (38 mg, 0.55 mmol),反应 20 分钟，再加入 2-(2,2-二甲基茚满- 5-基) -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 45d (109 mg， 0.45 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 8〜9, 用乙醇淬灭气泡， 室温反应过夜。 TLC跟踪至原料消失， 过滤， 固体加入 15 mL水， 用浓盐酸调节 pH值至 3〜4， 过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤 (1 mLx3)后干燥得到标题产物 3'-{Ν'-[1-(2,2-二甲基茚满 -5-基) -3-甲基 -5-氧代 -1,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 }-2'-羟基联苯 -3-羧酸 56(16 mg,黄 色固体)， 产率： 7.6%。 ' MS m/z (ESI): 480.7[M-1] 'HNMR(400MHz, DMSO-d6): 61 .13(s,6H), 2.32(s,3H), 2.70(m,4H), 7.14(m,2H).
7.22(d,J=8.8Hz, lH), 7.61 (t,J=8.0Hz,lH), 7.66(d,J=7.6Hz, lH), 7.70(m,2H),
7.80(d,J=7.6Hz, lH), 7.95(d,J=8.0Hz, lH),8.13(s,lH) 实施例 57
4-(2-羟基 -3-{N'-「3-甲基 -5-氧代 -l-(5,6,7，8-四氢萘亚甲基 - 2-基)- ：氢吡唑 -4-亚 基卜肼基 苯 1H-吡咯- 2-羧酸
Figure imgf000084_0001
第一步
2,2,2-三氯 - 1 -( 1 H-吡咯 -2-基) -乙酰
将三氯乙酰氯 (45 g， 247 mmol)溶解于 100 mL乙醚中，将吡咯（15.4 g， 230 mmol) 溶解于 100 mL中，滴加到上述溶液中，加入 200 mL碳酸钾溶液 (20 g, 145 mmol), 加毕室温搅拌 1 小时， TLC监测反应至原料反应完全， 反应液分液， 有机相用无 水硫酸镁干燥， 过滤除去干释剂， 滤液减压浓缩后柱层析得到标题产物 2,2,2-三氯 - 1 -(1Η-吡咯 -2-基) -乙酰 57b(38 g， 白色固体)， 产率： 77.8%。
MS m/z (ESI): 210.3 [M-1] 第二步
2,2,2-三氯 - 1-(4-碘 -1H-吡咯 -2-基) -乙酰
将 2,2,2-三氯 -1- (1 H-吡咯 -2-基) -乙酰 57b(32 g, 151.8 mmol)溶解于 250 mL二 氯甲垸中， 将氯化碘 (25 g， 153 mmol)溶解于 125 mL二氯甲垸中， 滴加到上述溶 液中， 加毕室温搅拌 2小时， TLC监测反应至原料反应完全， 反应液依次用饱和 碳酸钠溶液、 硫代硫酸钠溶液 (2M)和饱和食盐水洗涤， 用无水硫酸镁千燥， 过滤 除去干燥剂， 滤液减压浓缩后柱层析得到标题产物 2,2,2-三氯 -1 -(4-碘 -1 H-吡咯 -2- 基) -乙酰 57c(47 g， 黄色固体)， 产率： 92%。
MS m/z (ESI): 336.4[M-1] 第三步
4-碘 -1H-吡咯 -2-羧酸甲酯
将 2,2,2-三氯 -1-(4-碘 -1H-吡咯 -2-基)-乙酰 57c(47 g， 136 mmol)溶解于 265 mL 甲醇中， 将甲醇钠 (17.23 g， 163 mmol)溶解于 200 mL甲醇中， 滴加到上述溶液中， 室温搅拌 1小时， TLC监测反应至原料反应完全， 反应液减压浓缩， 残余物中加 入 20 mL水， 用乙酸乙酯萃取 (30 mLx3)， 合并有机相， 有机相用饱和食盐水洗涤， 用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到标题产物 4-碘 -1H-吡咯 -2- 羧酸甲酯 57d(32.2 g， 灰色固体)， 产率： 92.5%。
MS m/z (ESI): 250.1 [M-1] 第四步
4-碘— 1 -(甲苯 -4-磺酰 )- 1 H-吡咯 -2-羧酸甲酯 将 4-碘 -1H-吡咯 -2-羧酸甲酯 57d(25.1 g, 100 mmol)溶解于 150 mL二氯甲垸中， 加入三乙胺 (30.6 mL， 220 mmol)、 4-二甲氨基吡啶（1.22 g， 10 mmol)和对甲苯磺酸 (21 g, 110 mmol),于 20°C下反应过夜， TLC监测反应至原料反应完全，加入 30 mL 盐酸 (IN)淬灭反应。 反应液用二氯甲垸萃取 (50 mLx3), 有机相依次用饱和碳酸钠 溶液、 饱和食盐水洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩后 柱层析得到标题产物 4-碘 -1- (甲苯 -4-磺酰) -1H-吡咯 -2-羧酸甲酯 57e(32.5 g， 白色固 体)， 产率： 80.2%。
MS m/z (ESI): 405.8[M+1] 第五步
4-(3 -硝基 -2-甲氧基 -苯基 )- 1 - (甲苯 -4-磺酰) - 1 H-吡咯 -2-羧酸甲酯 将 2-(2-甲氧基 -3-硝基苯基) -4,4,5,5-四甲基 -[1,3,2]硼酸乙二醇酯 6a(2.05 g， 5.5 、 4-碘- （甲苯-4-磺酰)-111-吡咯-2-羧酸甲酯 57e(2.03 g， 5 mmol)、碳酸钾（1.38 g， 10 mmol)和四 (苯基膦)钯 (144 mg， 0.125 mmol)加入到 15 mLl,4-二氧六环和 5 mL 水的混合溶剂中， 加毕于 8(TC微波反应 30分钟， TLC监测反应原料反应完全， 反 应液减压浓缩， 加入 20 mL水， 搅拌均匀后用乙酸乙酯萃取 (20 mLX3)， 合并有机 相， 有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸镁干燥， 过滤除去干燥剂， 滤液减压浓 缩后柱层析得到标题产物 4-(3-硝基- 2-甲氧基 -苯基 )-1- (甲苯 -4-磺酰) -1H-吡咯 -2-羧 酸甲酯 57f(1.04 g， 灰色固体)， 产率： 48%。
MS m/z (ESI): 431.0[M+1]
'HNMR(400MHz, CDC13): δ 8.225-8.23 l(m, 1Η), 7.979~8.00(m, 2H), 7.710~7.765(m, 1H), 7.452~7.457(m, 1H), 7.389~7.409(m, 2H), 7.271~7.311(m, 2H), 3.839(s, 3H), 3.829(s, 2H), 2.488(s, 3H) 第六步 4-(3-硝基 -2-甲氧基-苯基) - 1 H-吡咯 -2-羧酸
将 4-(3-硝基 -2-甲氧基 -苯基 )-1- (甲苯 -4-磺酰) -1H-吡咯 -2-羧酸甲酯 57f(1.04 g， 2.42 mmol)和一水合氢氧化锂 (1.01 g, 24.19 mmol)加入到 10 mL N,N-二甲基甲酰胺 和 5 mL水的混合溶剂中， 于 100°C微波反应 30分钟， TLC监测反应原料反应完 全， 反应液用盐酸 (IN)调节 pH至 3， 有大量固体析出， 过滤， 滤饼干燥后得到标 题产物 4-(3-硝基 -2-甲氧基-苯基) -1H-吡咯 -2-羧酸 57g(350 mg， 黄色固体)， 产率： 50%。
S m/z (ESI): 260.8[M-1] 第七步
4-(3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -1H-吡咯 -2-羧酸 将 4-(3-硝基 -2-甲氧基-苯基) -1H-吡咯 -2-羧酸 57g(633 mg， 2.41 mmol)溶解于 15 mL乙酸乙酯中， 加入 127 mg钯 /碳和甲酸胺 (609 mg， 9.66 mmol), 加毕加热回 流 2小时， TLC监测反应至原料反应完全， 反应过滤除去钯 /碳， 滤液减压浓缩后 柱层析得到标题产物 4-(3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -1H-吡咯 -2-羧酸 57h(130 mg， 灰色 固体)， 产率： 23.2%。
MS m/z (ESl): 230.8[M-1]
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): δ 11.631(s, 1H), 7.305(s, 1H), 7.025(s, 1H),
6.712~6.798(m, 2H), 6.524-6.543 (m, 1H), 3.514(s, 3H) 第八歩
4-(3-氨基 -2-羟基苯基 1H-吡咯 -2-羧酸
将 4-(3-氨基 -2-甲氧基-苯基) -1H-吡咯 -2-羧酸 57h(130 mg， 0.56 mmol)加入 2 mL 二氯甲垸中， 加入溴化硼 (1.12 mL， 2.24 mmol), 室温搅拌 6小时， TLC监测反应 至原料反应完全， 用甲醇淬灭反应， 反应液减压浓缩后柱层析得到标题产物 4-(3- 氨基- 2-羟基苯基) -1H-吡咯 -2-羧酸 57i(140 mg， 灰色固体)， 产率： 99%。
'HNMR(400MHz, CD3OD): 5 7.312(s, 1H), 7.178(s, 1H), 7.006~7.028(m, 1H), 6.822~6.837(m, 2H) 第九歩
4-(2-羟基 -3-{N'-[3-甲基 -5-氧代小(5,6,7,8-四氢萘亚甲基 -2-基) -1,5-二氢吡唑 -4-亚 基] -肼基 } -苯) -1H-吡咯 -2-羧酸
冰浴下将 4-(3-氨基 -2-羟基苯基) -1H-吡咯 -2-羧酸 57i (130 mg, 0.43 mmol)溶解 于盐酸 (1.5 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 0.6 mL亚硝酸钠溶液 (33 mg, 0.47 mmol), 反应 10分钟， 再加入 5-甲基 -2-(5,6,7,8-四氢萘 -2-基) -2,4-二氢吡唑 -3-酮 3i (89 mg, 0.3 mmol), 用饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 8〜9， 室温反应 24小时。 TLC跟踪至原 料消失， 过滤， 固体溶解于 15 mL水中， 冰浴下用浓盐酸调节 pH至 3〜4， 过滤， 滤饼用乙酸乙酯洗涤后干燥， 得到标题产物 4-(2-羟基 -3-{Ν'- [3-甲基 -5-氧代 -1- (5,6,7,8-四氢萘亚甲基 -2-基) -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基] -肼基 苯) -1Η-吡咯 -2-羧酸 57(38 mg, 灰色固体)。 产率： 21.3%。
'HNMR(400MHz, DMSO- (5): δ 11.74(1 H,br), 11.64(lH,br), 7.60(lH,d J=8.2), 7.49(lH,d J=8.0), 7.32(3H,m), 7.05(3H,m), 2.67(4H,m), 1.95(3H,s ), 1.13(4H,m) 实施例 58
4-{2-羟基 -3-ΓΝ'-Π -茚满 -5-基 -3-甲基 -5-氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基 1-苯 1H-吡
Figure imgf000087_0001
冰浴下将 4-(3-氨基 -2-羟基苯基) -1H-吡咯 -2-羧酸 57i (240 mg, 0.8 mmol)溶解于 盐酸 (3 mL, 1 mol/L)中， 滴加入 1.1 mL亚硝酸钠溶液 (61 mg, 0.88 mmol), 反应 20 分钟， 再加入 2-茚满 -5-基 -5-甲基 -2,4-二氢吡唑 -3-酮 li (154 mg, 0.72 mmol), 用饱 和碳酸氢钠溶液调节 pH至 8〜9， 室温反应 24小时。 TLC跟踪至原料消失， 用乙 醇淬灭反应， 过滤， 固体溶解于 15 mL水中， 冰浴下用浓盐酸调节 pH至 3〜4， 过滤， 固体经柱层析后干燥， 得到标题产物 4-{2-羟基 -3-[Ν'-(1-茚满 -5-基 -3-甲基 -5- 氧代 -1 ,5-二氢吡唑 -4-亚基) -肼基]-苯}-1?1-吡咯 -2-羧酸 58(101 mg,红色固体)，产率： 28.4%。
'HNMR(400MHz, DMSO- 6): 611.83(lH,br), 11.77(lH,br), 7.57(lH,d ,J=7.2),
7.50(lH,s), 7.37(4H,m), 7.26(1 H,m), 7.10(lH,m), 2.87(4H,m), 2.32(3H,s), 2.04(2H,m)
测试例：
生物学评价
测试例 1 TPO系列化合物对 BAF3-TPOR细胞的增殖作用
1. 材料和方法：
a. RPM1 Medium 1640,Powder,10* lL, 含 HEPES (Gibco Catalog no.23400021) b. FBS胎牛血清 （Gibco Catalog no.10099-141 ) 、' υ A c. PENICILLIN STREPTOMYCIN SOL ( Gibco Catalog no. 15140-122 )
d. Geneticin(G418) ( Gibco Catalog no, 11811 -098 )
e. recombinant mouse IL-3 (chemicon Catalog no.IL015 )
f. Human Thrombopoietin R Mab ( TPO ) ( R&D Catalog no.MAB 1016 )
g. DMSO (AppliChem Catalog no.A3672 )
h. QuikChange® Multi Site Directed Mutagenesis Kit, 10 Runs (Stratagene ST200515) i, Cell Counting Kit-8 (同仁化学研究所 Catalog no.CK04-13 )
j, Ba/F3细胞 (协和细胞库 Catalog no.0095)
k. EX-EGFP-M02 (FulenGen Catalog no. EX-EGFP-M02 Control)
1. EX-B0010-M02 (FulenGen Catalog no. EX-B0010-M02)
2. 操作步骤：
(1) 质粒构建：根据 Entrez Gene ID:4325, Refseq: NM— 005373提供的 TPOR基因序 列，对购买的 EX-B0010-M02质粒（FulenGen)利用 QuikChange® Multi Site Directed Mutagenesis Kit (Stratagene)试剂盒进行 2点突变。多点突变引物序列分别为： g491a: 5'-gggaacttcagatcagctgggaggagccg-3 ' , g491a— antisense:
5 '-cggctcctcccagctgatctgaagttccc-3 '； c965t: 5'-caggaccatgctagctcccaaggcttcttct-3', c965t_antisense: 5'-agaagaagccttgggagctagcatggtcctg-3，。 突变后质粒转化大肠杆菌 . DH5ot， 经 Amp 筛选出阳性克隆， 测序鉴定突变结果正确。
(2) BAF3-TPOR细胞株构建： 构建稳定高表达功能性 TPO受体的 BaF3细胞株。 将经 2点突变后的表达人 TPO受体和筛选基因 neomycin的 EX-B0010-M02质粒 ； 25μβ转染野生型 BaF3细胞 （ 1X107 ), 转染所用仪器为 Electro Square Porator ECM830 (BTX Division of Genetronic, Inc.US), 转染条件为： 250V, 18ms。通过 G418 ( Gibco, US ) 筛选获得 BAF3- TPOR稳定细胞株。 BAF3-TPOR在 RPMI1640 ( Gibco, US ) 培养基， 10%FB ( Gibco, US ) S， 800ng/ml G418, 5ng/mU rmIL-3 (Chemicon, US ) 中培养。
3. 化合物筛选：
(1) 离心清洗细胞： 取适量细胞悬液 lOOOrpm,离心 5分钟， 弃去上清， 再用 10ml 不含 IL3的细胞培养液将细胞重新悬起， lOOOrpm,离心 5分钟， 弃去上清；
(2) 加入 lml不含 IL3的细胞培养液将细胞吹打均匀，取适量细胞悬液稀释后计数；
(3) 根据细胞计数结果制备密度为 100000个 /ml的细胞悬液；
(4) 于 96-well平板中每孔加入 ΙΟΟμΙ细胞悬液， 设置 3个复孔， 并设置空白对照 组 (Β)， 阴性对照组 (N)， TPO阳性对照组 (P)和待测化合物组 (S);
(5) 用 DMSO将待测化合物粉末配成 10mM的储存液， 再用 RPM11640稀释成不 同浓度： 30μΜ,10μΜ,3μΜ, ΙμΜ, 0.3μΜ， 0· 1μΜ,0.03μΜ, 0·01μΜ, 0.003μΜ,
0.001 μΜ; (6) 每孔加入 ΙΟμΙ相应浓度的药液， 阳性对照孔中加入 l^ rhTPO(l(^g/mL);
(7) 置于 5%C02,37°C细胞培养箱中培养 24小时；
(8) 每孔加入 l(^lCCK-8， 于细胞培养箱中培养 4小时；
(9) 利用 VICTOR3 (Perkin Elmer 1420-120)仪器在 450nm检测 OD值。
4. 结果分析计算：
(1 ) 增值率定义： [(S- B)/(P-B)] *100%
S: 样品； B: 空白对照； P: 阳性对照
(2) 通过 Origin 7.0计算 EC50.
5. 结果：
化合物 TPO活性 £^0值
Figure imgf000089_0001
药物动力学测试 测试例 1 本发明化合的药代动力学测试 试验目的
以大鼠为受试动物， 应用 LC/MS/MS法测定了大鼠分别灌胃给予实施例 1、 实施 例 15和实施例 29后不同时刻血浆中的药物浓度。 研究本发明化合物在大鼠体内的 药代动力学行为， 评价其药动学特征。
2、 试验方案
2.1、 试验药品
实施例 1、 实施例 15和实施例 29
2.2、 试验动物
健康成年 SD大鼠 24只， 雌雄各半， 购自上海西普尔 -必凯实验动物有限公司， 动物生产许可证号： SCXK (沪) 2003- 0002。
2.3、 仪器设备
TSQ Quantum Ultra AM三重四极杆质谱仪， 美国 Thermo Finnigan公司； Agilent 1200高效液相色谱系统， 美国 Agilent公司。
2.4、 药物配制
称取适量样品加 1%羧甲基纤维素钠制成 0.5 mg/ml (以原形计)混悬液， 临用时 配制。
2.5、 给药
健康成年 SD大鼠 24只， 雌雄各半， 平均分成 5组， 禁食过夜后分别灌胃给药， 给药剂量均为 5.0 mg/kg (以原形计)， 给药体积 10 ml/kg。
2.6、 样品采集
SD大鼠 24只， 雌雄各半， 禁食一夜后灌胃给药， 剂量为 5 mg/kg。 于给药前 及给药后 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 8.0, 11.0, 14.0, 24.0, 36.0, 48.0 h由眼眶采血 0.2 ml, 置于肝素化试管中， 3500 rpm离心 lO min分离血浆， 子 20°C保存。
2.7、 分析方法
取给药后各时刻的大鼠血浆 50 μ1， 加入内标溶液 20 μ1， 甲醇： 水 (80: 20, ν/ν)
20 μΐ, 混匀后加入甲醇 150μΓ沉淀蛋白， 涡流混合 1 min， 13000 rpm离心 10 min， 取 20 μΐ 进行 LC/MS/MS分析。
2.8、 标准曲线制备
取大鼠空白血浆 50μ1，分别加入标准系列溶液，使血药浓度为 1.0, 5.0, 25.0, 50.0, 100.0, 250.0, 500.0 ng/ml, 加入内标溶液 20μ1， 按"血浆样品预处理"项下进行操作。 以血药浓度为横坐标， 样品与内标色谱峰面积比为纵坐标， 以加权最小二乘法 (w=l/x2)进行线性回归， 获得典型标准曲线方程。
2.9、 药代动力学参数计算 对受试化合物的药代动力学行为进行房室模型拟合， 并计算主要药代动力学 参数， 其中 Cmax、 tmax采用实测值。
3、 药代动力学参数结果
本发明化合物的药代动力学参数如下:
Figure imgf000091_0001
试验结果表明，大鼠分别灌胃给予上述本发明化合物后，各化合物均吸收较好。

Claims

权利要求书：
1. 通式 (I)所示的化合物或其药学上可以接受的盐、 水合物或溶剂化合物:
Figure imgf000092_0001
( I )
Α选自碳原子或氧原子；
R选自氢原子或垸基；
R,、 R2、 和 R4各自独立地选自氢原子、 垸基、 烷氧基、 卤素、 芳基或杂芳 基， 其中芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自烷基、 卤素、 羟基、 四唑基、 咪唑、 二氢咪唑、 羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
R5、 和 R7各自独立地选自氢原子、 垸基、 烷氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝 基、 氰基、 羧酸或羧酸酯；
R8、 R9、 R1G和 Ru各自独立地选自氢原子或垸基； 且
n是 0， 1或 2。
2. 根据权利要求 1所述的化合物或其药学上可接受的盐、 水合物或溶剂化合物， 其中：
A选自碳原子或氧原子；
R选自氢原子或垸基；
是芳基或杂芳基，其中芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自垸基、卤 素、 羟基、 四唑基、 咪唑、 二氢咪唑、 羧酸或羧酸酯的取代基所取代； R2、 和 R4各自独立地选自氢原子、 垸基、 垸氧基或卤素；
、 和 R7各自独立地选自氢原子、 烷基、 垸氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝 基、 氰基、 羧酸或羧酸酯；
R8、 R9、 R1Q和 Ru各自独立地选自氢原子或烷基； 且
n是 0， 1或 2。 根据权利要求 1或 2所述的化合物或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合 物， 其中所述的化合物选自
Figure imgf000093_0001
Figure imgf000094_0001
4. 通式 (IA)所示的化合物， 所述化合物为合成如权利要求 1所述的通式 (I)化合物 的中间体：
Figure imgf000094_0002
A选自碳原子或氧原子；
R5、 和 R7各自独立地选自氢原子、 烷基、 烷氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝 基、 氰基、 羧酸或羧酸酯；
R8、 R9、 RI Q和 Rn各自独立地选自氢原子或垸基； 且
n是 0， 1或 2。
5. 根据权利要求 4所述的化合物， 其中所述的化合物选自:
Figure imgf000095_0001
6. 制备根据权利要求 4所述的通式 (IA)化合物的方法， 该方法包括：
Figure imgf000095_0002
( I A)
将氨基取代的苯并多元环与亚硝酸钠在酸性溶液中进行重氮化反应，再通过氯 化亚锡还原得到肼， 将肼与羰基化合物在溶剂中加热下缩合得到通式 (IA)化合物。 7. 制备根据权利要求 1所述的通式 (I)化合物的方法， 该方法包括：
Figure imgf000095_0003
( I A) ( I )
将取代的苯胺类化合物与亚硝酸钠在酸性溶液中进行重氮化反应， 再与通式
(ΙΑ)化合物在碱性溶液中发生偶联反应从而得到通式①化合物。
8. 根据权利要求 1-5任一项所述的化合物或其盐、水合物或溶剂化合物在制备血 小板生成素 (TPO)受体激动剂中的用途。
9. 根据权利要求 1-5任一项所述的化合物或其盐、水合物或溶剂化合物在制备治 疗血小板减少症药物中的用途。
10. 根据权利要求 9 所述的用途， 其中所述药物进一歩与选自下列的药物联合使 用： 集落刺激因子、 细胞因子、 趋化因子、 白细胞介素或细胞因子受体激动剂或 拮抗剂、 可溶的受体、 受体激动剂或拮抗剂抗体或与一个或多个与所述药物具有 相同的作用机理的肽或小分子类物质。
1 1. 一种药物组合物， 所述组合物包括有效剂量的如权利要求 1 -5任一项所述的化 合物及其药学上可以接受的盐、 水合物或溶剂化合物， 及药学上可以接受的载体。
12. 根据权利要求 11所述的药物组合物， 其中所述组合物进一步含有联合使用的 治疗有效量的选自下列的药物： 集落刺激因子、 细胞因子、 趋化因子、 白细胞介 素或细胞因子受体激动剂。
13. 根据权利要求 11所述的药物组合物在制备治疗血小板减少症药物的用途。
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