WO2009009951A1 - 2'-fluoro-4'-substituted nucleosides, the preparation and use - Google Patents

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dissolved
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Junbiao Chang
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Zhengzhou University
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Definitions

  • the present invention relates to nucleoside analogs, processes for their preparation and their use, and in particular to 2'-fluoro-4'-substituted nucleoside analogs, processes for their preparation and their use.
  • HIV HIV
  • the HI V replication cycle has been basically clarified.
  • the study found that its reproductive process is roughly divided into the following steps: adsorption, invasion and husking, reverse transcription, integration, synthesis, assembly, release and maturation of viral RNA and proteins, among which Each link can be used as a target for screening HIV drugs, where protein synthesis and viral genomic nucleic acid replication are the most critical steps.
  • HIV reverse transcriptase is a multifunctional enzyme with both RNA-dependent DNA polymerase, DNA-dependent DNA polymerase, and Rhase H activity. HIV first uses the RNA of the viral genome as a template, and uses the RNA of the host cell as a primer to synthesize the (-) strand DNA, and then synthesizes the (+) strand DNA in the same manner. When reverse transcription is over, all genetic information carried by HIV is converted from single-stranded RNA to double-stranded mDNA.
  • Reverse transcriptase inhibitors can prevent the prolongation of mDNA and interfere with the reverse transcription process of HIV, thus becoming a drug for chemotherapy and AIDS.
  • they can be divided into two categories - 1) nucleoside reverse transcriptase inhibitors, which act on the reverse transcription of HIV DNA and are inserted into viral DNA to cause it to become defective DNA.
  • the DNA of the host cell of HIV can not be replicated after integration, so as to achieve anti-HIV effect.
  • the existing drugs are zidovudine (AZT), deoxygenated muscle # (ddl), zalcitabine (ddC), sitaf Ding (d4T), lamivudine (3TC), abacavir (Abacavir); 2) non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors, the mechanism of action is to prevent HIV RNA from directly connecting to RT, not encoding it into DNA .
  • ZT zidovudine
  • ddl deoxygenated muscle #
  • ddC zalcitabine
  • d4T sitaf Ding
  • lamivudine 3TC
  • abacavir Abacavir
  • nucleoside reverse transcriptase inhibitor Zidovudine, the first anti-HIV drug listed in 1987, was a nucleoside reverse transcriptase inhibitor. Although it is very toxic and fails to cure a patient, it can alleviate symptoms and prolong life. Subsequently, several nucleoside analogs have been marketed for anti-HI V drugs. Therefore, nucleoside analogs are an important class of compounds with anti-HIV activity. At present, these drugs have certain defects, on the one hand, limited efficacy, and on the other hand, long-term use has serious side effects and can cause resistance. Therefore, the synthesis of novel nucleoside analogs remains an important research direction.
  • nucleosides In order to find more effective nucleoside antiviral drugs, various modifications have been made to nucleosides, among which fluoronucleoside analogs containing fluorine are one of them. (Clark, J. PCT Patent Appl., WO 2005003174;
  • the main object of the present invention is to provide a 2'-fluoro-substituted nucleoside analog; another object is to provide a method for synthesizing such a compound; and a further object is to provide a pharmaceutical use of the compound.
  • the 2'-fluoro-4,-substituted nucleoside analog of the present invention has the structure of the formula (I):
  • R CH 3 , CN, N 3 , C ⁇ CH
  • R' H, F
  • X F, OH, NH 2 ;
  • It can be formed as a salt by reacting the active compound (I) or a latent drug thereof or its 5'-phosphate with an organic or inorganic acid to form a salt.
  • the invention relates to the use of a 2'-fluoro-4'-substituted-nucleoside analog in the preparation of a medicament for preparing an anti-HBV or anti-HCV or anti-HIV virus drug, wherein the anti-HBV virus drug is anti-hepatitis B
  • the anti-HIV virus drug is an anti-AIDS drug
  • the anti-HCV virus drug is an anti-HC virus drug.
  • Synthesis of compound b Take compound a, add acetone, slowly add concentrated sulfuric acid under stirring, stir the reaction at room temperature, after TLC detection reaction, adjust the pH with concentrated ammonia water, filter, and distill off most of the acetone under vacuum. Under stirring, 0.4% dilute hydrochloric acid was added, and the reaction was carried out under reflux of acetone, and all of the compound a was hydrolyzed to the compound b.
  • the reaction solution was neutralized with solid NaHC0 3, filtered, and the filtrate was evaporated under reduced pressure to remove the solvent, the residue was dissolved with of dichloromethane, dried over anhydrous N3 ⁇ 4S0 4 overnight, filtered, the solvent was evaporated to give a yellow viscous oil b.
  • Synthesis of compound j The compound i is added to a dilute hydrochloric acid solution, and the reaction is stirred at room temperature. After completion of the reaction, the mixture is neutralized with solid NaHC0 3 , filtered, and the filtrate is evaporated under reduced pressure. The residue is dissolved with dichloromethane. After drying with anhydrous N3 ⁇ 4S0 4 and filtering, the solvent was evaporated to give a compound.
  • Synthesis of compound k Compound j is dissolved in pyridine: BzCl is added dropwise, reacted at room temperature, and the solvent is evaporated to dryness after completion of the reaction.
  • the invention has the beneficial effects that the special structure of the D- and L-nucleoside analogs fluorine-containing group, alkynyl group, azide group, cyano group and the like can make up for the current D- and L- by modification of the glycosyl group and the base.
  • Nucleoside analogues have large toxic side effects and low activity; and the synthesis method is simple and feasible, and the yield is relatively low. It is applied to the preparation of anti-HBV or anti-HCV or anti-HIV virus drugs, and has good application value.
  • the compound ( is synthesized: the compound i (D-ribose or L-ribose) (8. 66 mmol) is dissolved in 31.2 ml of HCl/MeOH (0.2 mmol/L), and the mixture is stirred and kept under a water bath at 27 ° C for 3 h. The reaction was quenched by the addition of 7.8 ml of pyridine, and dried under reduced pressure to give a pale yellow sugar powder compound ii (96%);
  • Drugs to be tested Compound 1, 9, 15, 19, 36, 39, 46, 50, 52, no batch number, water insoluble, DMS0 can be dissolved, dissolved in DMS0 at the appropriate concentration, diluted with medium, immediately added Cell culture.
  • Zidovudine is a known nucleoside HIV-1 reverse transcriptase inhibitor for clinical use. It is a white powder purchased from Shanghai Dysonuo Chemical Pharmaceutical Co., Ltd., 'batch number: 040201b,
  • NTP Nevirapine
  • the HIV-1 ⁇ experimental virus strain was given to Dr. Jiang Jiandong of Mount Sinai Medical Center in the United States, expanded in H9 cells, and frozen at -196 °C.
  • T lymphocytes The passage of T lymphocytes was presented to Professor Zhang Xingquan of the University of Colorado Medical Research Center. The room was passed down and stored at -196 °C.
  • Cell culture medium RPMI Medium 1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum, 100 IU/ml penicillin, 100 g/ml streptomycin and kanamycin, and L-glutamine. Incubate in a 37 ° C, 5% CO 2 incubator and pass once every three days. '
  • RPMI Medium 1640 medium is the product of GIBC0 Company of the United States; Fetal Bovine Serum is the product of Tianjin Chuanpage Biochemical Products Co., Ltd.; Penicillin and streptomycin are products of Huabei Pharmaceutical Factory; Kanamycin is Shanghai Xu Products of Donghaipu Pharmaceutical Co., Ltd.; Thiazolyl blue (MTT), citric acid is the product of Sigma Company of America; Triton X-100 is the product of KEB0 AB STOCKHOLM of Sweden; N, N-dimethylformamide (N, N-Dimethyl Formamide) is a product of Beijing Chemical Plant; HIV-1 P24 Antigen Test Kit: It is made with Bio erieux of the Netherlands.
  • EmaxTM microplate reader is a product of MolICular Devices, USA; Experimental method: 96-well culture plate, with drug and positive control drug inhibition virus experimental group, each well was added with different concentrations of DMS0 solution lOOul or positive control drugs AZT and NVP or rat oral drug different dose groups at different times Different dilution groups of blood, 100 ul per well, and a control group and a virus control group positive drug AZT and NVP control group. MT-4 cells were treated with 100 TCID 5 .
  • a 96-well culture plate inoculated into a drug-inhibiting virus test group, a positive control drug group, and a virus control group was prepared at 2 X 10 5 cells/ml. in.
  • the cell control group was supplemented with an equal amount of culture medium and cultured for 4 days.
  • the cytopathic effect was observed with a microscope, and toxicity was measured by MTT staining, and the supernatant was assayed for P24 antigen according to the method described.
  • the inhibition rate, half toxic concentration (CC 5 ), and half effective concentration (IC 5 ) and SI were calculated separately.
  • OBJECTIVE To screen anti-hepatitis B virus drugs using Hep G2. 2. 15 cells transfected with HBV genome, and provide theoretical and experimental basis for research and development of new anti-hepatitis B drugs.
  • Lamivudine Compound 15 significantly reduced HBV DNA copy number after administration.
  • HBV DNA clone was transfected into human hepatoma cell He P G2 by Hep G2. 2. 15 cell line was constructed in 1986 by The Mount Sinai Medical Center in the United States, and stably expressed e antigen and surface antigen. Presented by the Wuhan Institute of Virology, Chinese Academy of Sciences. The laboratory was self-passaged and screened by G418 during the culture.
  • Test drug Compound 15, 17 is a synthetic drug of the present invention, a control drug: lamivudine (3TC), product of GlaxoSmithKline (Suzhou) Co., Ltd.
  • DMEM medium Hyclone fetal bovine serum Hangzhou Sijiqing
  • 24-well culture plate US corning culture bottle US corning
  • Hepatitis B virus nucleic acid amplification fluorescence quantitative detection kit Shenzhen Piji
  • Hep G2. The cells were cultured in DMEM containing 10% fetal bovine serum, 500 mg/L G418, digested with 0.25% trypsin and 0.02% EDTA, and pressed 1 : 3 subculture, once every three days. Study on the anti-HBV effect of drugs:
  • the cells in good growth state were adjusted to a cell concentration of 10 4 /ml, and 1 ml per well was inoculated into a 24-well plate.
  • the culture was carried out for 48 hours at 37 ° in a 5% CO 2 incubator, and the test was started when the cells adhered well.
  • the three drugs were grouped according to the different concentrations of the preparation (Table 1), and two duplicate wells were set for each concentration, and the cell culture control without the drug was set as a blank control. On the 3rd, 6th and 9th day of the drug, the same concentration of the drug-containing medium and the blank group culture solution were changed once, and the culture supernatant of each well was inhaled into the EP tube and stored at -20 ° for examination.
  • 3TC EC 50 is 38.78 g/L
  • HCV replicating cells (A a.5) were cultured in Dulbecco's modified Eagle medium containing 10% fetal bovine serum and 1 mg/mL of G418. 293-Sip-L cells were cultured in Dulbecco's modified Eagle medium containing 10% fetal bovine serum and 250 ⁇ g/mL G418 and 150 ⁇ g/mL hygromycin B.
  • the cells in a 60 mm diameter Petri dish were incubated for 12 hours in a medium containing 100 ⁇ L of HCV-positive medium. The cells are then incubated in fresh medium that does not contain HCV and replaced daily. When the cells were tested for HCV-RNA 7 days after infection, the cells were trypsinized and washed twice with Dulbecco's modified Eagle medium by centrifugation. The upper portion of the second wash (as a control) and the washed cells were collected in pairs for R A extraction and RT-PCR detection. ⁇ -actin mRNA was simultaneously measured for comparison.
  • Compound 17 has an inhibitory effect at 6, 0.6 and 0.06 ⁇ g mL (see table below). HCV-RNA levels were determined by fully automated PCR enzyme-linked immunosorbent assay. From this point of view, Compound 17 has a strong inhibitory effect on HCV.

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Description

r -氟- 4， -取代-核苷类似物、 其制备方法及应用 技术领域
本发明涉及核苷类似物、其制备方法及其应用，尤其涉及 2' -氟 -4' -取代核苷类似 物、 其制备方法及应用。
背景技术
1981年美国发现第一例艾滋病患者， 到 1983年科学家即分离鉴定出了艾滋病病毒 (HIV) ， 发现 HIV属于逆转录病毒科的慢病毒亚科， 仅由 9749个核苷酸组成。 目前对 HI V复制循环过程己经基本搞清，研究发现其繁殖过程大致分为以下步骤：吸附、侵入和 脱壳、 逆转录、 整合、 病毒 RNA和蛋白质的合成、 装配、 释放和成熟， 其中每个环节均 可作为筛选 HIV药物的靶点，其中蛋白质的合成和病毒基因组核酸复制是最关键的步骤。 目前筛选抗 HIV药物的焦点集中于寻找这些特异性酶的抑制剂， 包括逆转录酶（RT)抑 制剂、蛋白质合成酶抑制剂和逆转录酶启动因子抑制剂等。 HIV的逆转录酶是一种多功能 酶， 同时具有依赖 RNA的 DNA聚合酶、依赖 DNA的 DNA聚合酶和 Rhase H活性。 HIV首先 以病毒基因组的 RNA为模板， 以宿主细胞的运转 RNA为引物， 进行（-）链 DNA的合成， 然后以同样的方式合成（+)链 DNA。 当逆转录结束以后， HIV所携带的全部遗传信息从 单链 RNA转化为双链 mDNA。逆转录酶抑制剂可以阻止 mDNA的延长，干扰 HIV的逆转录过 程， 从而成为化学治疗艾滋病的药物。 根据抑制剂的作用机理不同， 可以把它们分为两 类- 1 )核苷类逆转录酶抑制剂， 其作用于 HIV DNA逆转录过程中， 通过嵌入到病毒 DNA 中， 促使其成为缺陷 DNA而使 HIV的宿主细胞的 DNA整合后无法复制， 从而达到抗 HIV 的作用， 现有药物为齐多夫定（AZT) 、 去羟肌 # (ddl ) 、 扎西他滨 (ddC) 、 司他夫定 (d4T) 、 拉米夫定 (3TC) 、 阿巴卡韦 (Abacavir) ； 2)非核苷类逆转录酶抑制剂， 其 作用机制是阻止 HIV RNA直接连接到 RT, 不让其编码成 DNA。 现有药物奈韦拉平
(Nevirapine) 、 Delavirdine Efavirenz0
1987年第一个上市的抗 HIV药物齐多夫定即为核苷类逆转录酶抑制剂， 虽然该药物 毒性很大， 并且未能治愈一例病人， 但是它可以减轻症状， 延长患者的生命。 随后又有 几个核苷类似物抗 HI V药物上市， 因此， 核苷类似物是一类重要的具有抗 HIV活性的化 合物。 目前这些药物存在一定的缺陷， 一方面是药效有限， 另一方面是长期服用有严重 的毒副作用， 并且会产生抗性。 因此， 新型核苷类似物的合成依然是一个重要的研究方 向。 为了发现更有效的核苷类抗病毒药物， 人们对核苷进行了各种各样的修饰， 其中含 有氟的核苷类似物即为其中的一类。 (Clark, J. PCT Patent Appl. , WO 2005003174 ;
1
确认本 Ismaili, H. M. A. PCT Patent Appl. , WO 0160315A22001 ) 。 研究表明该类化合物都有 不同程度的抗病毒活性， 是一类新型的具有抗病毒活性的化合物。但是在现有的文献中， 迄今尚未见到本发明之含 2' -氟- 4' -取代 -D-和 L-核苷类似物的合成， 以及将其用于制 备抗 HIV和抗 HBV及 HCV病毒药物的相关报道。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种含 2' -氟 -取代核苷类似物;另一目的在于提供 该类化合物的合成方法； 又一目的在于提供该类化合物在药物方面的应用。
为实现本发明目的， 技术方案如下实现：
该本发明 2' -氟- 4， -取代核苷类似物， 具有通式 （ I ) 结构：
Figure imgf000004_0001
R = CH3，CN，N3，C≡CH;
R' = H， F;
X = F, OH，NH2;
Y = H， CH3，F, OH, NH
其可以通过活性化合物 （I ) 或其潜药或其 5' -磷酸酯与有机酸或无机酸反应形成 盐， 以盐的形式存在。
其可以是如下化合物之一但不仅限于这些化合物：
Figure imgf000005_0001
Figure imgf000006_0001
54 55
本发明含 2' -氟 -4' -取代 -核苷类似物在制备药物中的应用，将其应用于制备抗 HBV 或抗 HCV或抗 HIV病毒药物中， 所述抗 HBV病毒药物为抗乙肝药物； 所述抗 HIV病毒药 物为抗艾滋病药物；所述抗 HCV病毒药物为抗丙肝药物。本发明含 2' -氟 -4' -取代核苷 类似物的制备反应， 当 R=N3时路径如下：
Figure imgf000007_0001
iii iv
Figure imgf000007_0002
化合物 ii的合成： 将化合物 i (D-核糖或 L-核糖）溶于 HCl/MeOH中， 在水浴下保 温密闭搅拌， 加入吡啶终止反应， 减压抽千， 得浅黄色糖 状物质化合物 ii;
化合物 iii的合成： 将化合物 ii溶于干燥的吡啶中， 冰盐浴下缓慢滴加苯甲酰氯， 室温下搅拌反应， 反应完毕后将反应液倒入冰水中， 氯仿提取。 有机层用冰水、 预冷的 硫酸、 饱和碳酸氢钠依次洗涤至水层呈弱碱性， 再用冰水洗至水层呈中性， 无水硫酸钠 干燥， 减压抽千得浅黄色糖浆状物质化合物 iii。
化合物 iv的合成： 将苯甲酰化物化合物 iii溶于氯仿中， 加入红磷， 冰水浴搅拌下 缓慢滴加溴， 搅拌 30min左右， 缓慢滴加冰水， 室温搅拌， 然后加入碎冰搅融， 再将反 应液倒入冰水中， 氯仿提取。 有机层饱和碳酸氢钠洗至水层呈弱碱性， 冰水洗至水层呈 中性，无水硫酸钠干燥，减压抽干得深黄色糖浆，用硅胶柱分离得白色干糖浆化合物 iv。
化合物 V的合成： 将化合物 iv溶解在干燥的吡啶中， 冰水浴下缓慢滴加醋酐， 搅拌 30min左右， 撤去冰水浴， 室温搅拌约 7h， 升温到 40°C保持约 lh。加入碎冰搅融后， 将 反应液倒入冰水中， 氯仿提取。 有机层用冰水、 预冷的硫酸、 饱和碳酸氢钠依次洗至水 层呈弱碱性，冰水洗至水层呈中性，无水硫酸钠干燥，减压抽干得浅黄色糖浆状化合物 V。
化合物 vi的合成：将化合物 V溶于干燥的二氯甲烷中，冰水浴下缓慢通入干燥的 HC1 气体， 加入冰水洗涤， 分出有机层， 用饱和碳酸氢钠洗至水层呈弱碱性， 冰水洗至水层 呈中性， 无水硫酸钠干燥， 减压抽干得浅黄色糖漿。 重结晶得白色固体化合物 vi。
化合物 vii的合成： 将化合物 vi溶于干燥的二氯甲垸中和干燥的 DMF中， - 15°C左 右搅拌下缓慢加入 S02C12, -15Ό搅拌 30min左右， 自然升至室温反应， 在 0Ό下分 3次 加入咪唑， 混合液室温搅拌， 反应完毕后向反应液加入 CH2C12稀释， 用冰水洗涤， 水层 用 CH2C12提取， 有机层合并后用无水硫酸钠干燥， 减压抽干溶剂得浅黄色糖浆。 用硅胶 柱分离纯化得白色固体化合物 vii。
化合物 viii的合成： 将化合物 vii溶于乙酸乙酯中， 搅拌下加入 Et3N * 3HF, 升温 至 60°C左右搅拌约 3h， 70°C搅拌约 1. 5h。 加入冰盐水终止反应， 然后用二氯甲烷提取， 有机层合并后依次用盐水、 水、 饱和碳酸氢钠洗涤， 无水硫酸钠干燥， 减压抽干溶剂得 深黄色糖浆。 纯化得浅黄色糖浆， 粗品结晶得 色晶体化合物 viii。
化合物 ix的合成： 将化合物 viii溶解于无水二氯甲烷中， 加入 HBr-AcOH的混合溶 液， 室温搅拌反应。 反应完毕后将混合物蒸干， 用二氯甲垸溶解剩余物， 并用碳酸氢钠 洗涤二氯甲烷溶液，将二氯甲垸蒸去，得到糖桨状物。同时，将保护过的胞嘧啶和 (N ) 2S04 在 HMDS中氮气保护下回流反应， 反应完毕， 减压蒸去溶剂， 得到甲硅烷基化的胞嘧啶。 将上述反应中得到的糖浆状物溶于二氯乙垸中， 加入到甲硅烷基化的胞嘧啶中， 混合物 在 N2保护下回流反应。 用冰终止反应， 二氯甲烷萃取， 二氯甲垸层依次用饱和碳酸氢钠 和盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥。 干燥后蒸除溶剂， 得到白色固体， 柱色谱分离纯化， 得 到化合物 ix。
化合物 X的合成：将化合物 ix溶于饱和的 H3-CH30H，室温搅拌反应。反应完毕后将 溶剂蒸干， 所得剩余物通过柱色谱纯化， 得到 合物 X。
化合物 xi的合成： 将化合物 x， 咪唑、 三苯基膦， 溶解在四氢呋喃中， 向其中缓慢 加入溶解有碘的四氢呋喃溶液。 室温搅拌反应。 反应完毕后蒸除溶剂， 向剩余物中加入 乙酸乙酯， 过滤。 蒸除乙酸乙酯， 剩余物柱色谱分离得到化合物 xi。
化合物 xii的合成： 将化合物 xi溶解在四氢呋喃中， 向其中加入 DBU。在 60°C左右 搅拌反应。 反应完毕后蒸干溶剂， 剩余物柱色谱分离得到化合物 xii。
化合物 xiii的合成： 在 0°C左右， 将溶有 IC1的 DMF溶液加入到溶有 NaN3的 DMF溶 液中， 冰点搅拌约 10分钟， 将溶有化合物 xii的 DMF缓慢加入到上述溶液， 继续反应。 反应完毕后向混合溶液中加入亚硫酸钠， 直到碘的颜色完全消失。 减压蒸除溶剂， 剩余 物用柱色谱分离纯化， 得到化合物 xiii。
化合物 xiv的合成： 将化合物 xiii溶于 DMF中， 搅拌下加入醋酸银， 室温反应， 反 应完毕后过滤。 在减压下移除溶剂， 剩余物用柱色谱纯化， 得到化合物 xiv。 化合物 xv的合成： 将化合物 xiv溶于三乙胺甲醇溶液中， 室温搅拌反应， 反应结束 后蒸除溶剂， 剩余物用柱色谱纯化， 得到化合物 xv。
本发明含 2， -氟- 4， -取代核苷类似物的制备反应，当 R=C ，CN, C≡CH时路径如下:
Figure imgf000009_0001
化合物 b的合成： 取化合物 a， 加入丙酮， 搅拌条件下慢慢加入浓硫酸， 室温下搅拌 反应， TLC检测反应结束后， 用浓氨水调节 pH偉， 过滤， 减压蒸去大部分丙酮， 在搅拌 条件下加入 0. 4%稀盐酸， 在丙酮回流条件下反应， 化合物 a全部水解成化合物 b。 用固 体 NaHC03中和反应液， 过滤， 滤液在减压下蒸去溶剂， 剩余物用二氯甲垸溶解， 用无水 N¾S04干燥过夜， 过滤， 蒸去溶剂后， 得到黄色粘稠油状物 b。
化合物 c的合成： 将化合物 b和三乙胺溶于二氯甲垸， 冰盐浴下慢慢滴加对氯苯甲 酰氯， 保持 0°C以下机械搅拌反应。 反应完毕后加入饱和 NaHC03水溶液， 二氯甲烷层用 水、饱和食盐水洗涤， 无水 MgS04干燥， 过滤， 减压蒸去溶剂， 并重结晶剩余物， 得白色 晶体化合物 c。
化合物 d的合成： 化合物 c溶解到无水二氯甲烷中， 在氮气保护下， 加入咪唑和叔 丁基二甲基氯化硅（TBDMSC1 ) 。 室温反应， 反应结束后， 用盐酸中和反应， 分出两层， 有机层分别用水和饱和食盐水洗漆后， 用无水 Na2S04干燥， 蒸除溶剂， 剩余物通过柱色 谱进行分离纯化， 得到化合物 d。
化合物 e的合成： 化合物 d加入到甲醇钠-甲醇的混合物液中， 室温反应。反应结束 后用稀醋酸中和， 过滤， 用甲醇洗漆， 减压蒸除溶剂， 剩余物用柱色谱分离纯化， 得化 合物 e。
化合物 f 的合成：在约 -60Ό条件下向草酰氯的二氯甲垸溶液中逐滴滴加 DMS0,在相 同的温度下， 搅拌约 15分钟后， 滴加化合物 e的二氯甲烷溶液。 在约- 65°C搅拌反应约 30分钟， 加入三乙胺， 室温搅拌反应。 反应结束后向反应液中加入水， 分出有机层， 有 机层用无水硫酸镁干燥。 蒸除溶剂， 剩余物用柱色谱分离纯化得化合物 f。
化合物 g的合成： 在反应瓶中放入氢氧化钠和水， 搅拌均匀后， 加入甲醛水溶液、 95%乙醇， 然后再加入化合物 f。 约 35°C下搅拌反应， 反应结束后， 边搅拌边用冰水冷却 反应瓶， 直至产物完全析出。 抽滤， 固体用水洗涤至中性并烘干， 所得固体溶解到无水 甲醇中， 再加入硼氢化钠， 回流反应， 反应结束后用稀盐酸中和反应液， 用二氯甲烷萃 取反应液， 无水 N¾S04干燥后蒸除溶剂， 得化合物g。
化合物 h的合成： 化合物 g溶解到甲醇中， 加入 Dowex H+ (事先用甲醇洗涤） ， 室 温反应， 反应完毕后将树脂过滤除去， 并用甲 反复洗漆树脂， 溶液蒸干得固体。 将所 得固体溶于丙酮中， 搅拌条件下慢慢加入浓硫酸 '（催化量） ， 室温搅拌反应， 用浓氨水 调节 pH值， 过滤， 减压蒸去丙酮， 得到化合物 h。
化合物 i的合成：在- 60°C下向草酰氯的二氯甲烷溶液中逐滴滴加 DMS0，滴完后搅拌 约 15分钟，滴加化合物 h的二氯甲垸溶液，滴完后约 -60'C反应约 30分钟，加入三乙胺， 室温反应约 30分钟后加入水终止反应， 分出有机层， 有机层用无水 N¾S04干燥。 蒸除溶 剂， 剩余物用柱色谱分离纯化得固体。 将 C1C P (C6H5) 3C1加入到无水四氢呋喃中， 冷却 到约 -78°C， 加入 n- BuLi的正己烷溶液搅拌反应约 lh， 然后加入所得固体的干燥四氧呋 喃溶液。 温度逐渐升高到 O'C左右， 继续反应。 反应完毕后小心滴加饱和的 N C1溶液， 用乙酸乙酯萃取， 有机层用盐水洗涤两次， 最后用无水 MgS04干燥， 减压蒸除溶剂， 得到 的剩余物溶解到无水四氢呋喃中， 冷却到 - 78°C左右， 慢慢滴加 n-BuLi的正己垸溶液。 搅拌反应 2h左右， 小心地用饱和 NH4C1溶液终止反应。 有机层用饱和食盐水洗涤， 无水 MgS04干燥， 减压蒸除溶剂， 剩余物用快速硅胶柱分离纯化， 得化合物1。
化合物 j的合成： 将化合物 i加入到稀盐酸溶液中， 室温搅拌反应， 反应完毕后用 固体 NaHC03中和， 过滤， 滤液在减压条件下蒸去溶剂， 剩余物用二氯甲垸溶解， 并用无 水 N¾S04干燥后过滤， 蒸去溶剂， 得化合物」。 化合物 k的合成： 将化合物 j溶解到吡啶中:， 滴加 BzCl , 室温反应， 反应完毕后蒸 干溶剂， 剩余物纯化后得化合物
化合物 1的合成： 将化合物 k和 2, 2， 6, 6-四甲基哌啶- N-氧溶于二氯甲垸中， 冷至 0 。C左右，将混合的次氯酸钠溶液、 NaHC03和水混合溶液加入到反应液， 0°C左右反应约 30 分钟，加入异丙醇，室温搅拌。分出的二氯甲垸层用水洗涤 2次，无水 MgS04干燥，过滤， 蒸去溶剂得到的剩余物进行重结晶， 得到化合物 1。
化合物 m的合成：将化合物 1加入到无水乙醇和乙酸乙酯的混合液中；冷至 0Ό左右， 分批加入硼氢化钠， 搅拌反应， 反应完毕后用稀醋酸中和， 过滤， 滤液蒸干， 剩余物再 用二氯甲垸溶解， 然后水洗， 二氯甲烷层用无水 MgS04干燥， 过滤， 减压蒸去二氯甲垸， 剩余物用二氯甲垸和石油醚的混合溶剂重结晶， 得到固体物。将所得固体物溶于吡啶中， 在 (TC左右滴加 BzCl, 滴加完毕后， 室温反应， 反应完毕后蒸除溶剂， 剩余物用乙酸乙 酯萃取， 饱和 NaHC03溶液洗漆， 无水 Na2S04干燥， 过滤， 蒸去溶剂， 剩余物柱色谱分离 纯化得化合物 m。
化合物 n的合成： 将化合物 m溶于甲醇中， 加入浓盐酸 /二氧六环的混合溶液， 室温 反应， 反应完毕后用 NaHC03中和反应液， 过滤， 滤液减压蒸镏除去溶剂， 剩余物溶于适 量二氯甲垸中， 用无水 N¾S04干燥过夜， 滤液蒸干， 用柱色谱分离纯化得化合物 n。
化合物 0的合成： 化合物 n溶解在二氯甲烷中， 室温条件下加入 DAST搅拌反应， 反 应完毕后将混合物倒入饱和 NaHC03溶液中， 分出有机层， 并用饱和 NaHC03溶液洗涤， 无 水 2504干燥， 柱色谱分离纯化得到化合物 o。
化合物 p的合成： 将化合物0加入到甲酸瘠液中， 在室温下搅拌反应， 反应完毕后 减压蒸去溶剂， 剩余物与甲苯共蒸得固体物， 将所得固体物溶于干燥吡啶和醋酸酐溶液， 室温反应， 反应完毕后将反应液浓縮， 然后与甲苯共蒸， 得到化合物 p。
化合物 q的合成： 化合物 p溶于无水二氯甲垸中， 将其冷至 O'C左右， 然后慢慢通 HC1气体至饱和， 室温下真空蒸去溶剂， 剩余物真空干燥得到化合物 q。
化合物 r的合成： 2, 6-二氨基嘌呤与六甲基硅氮烷 (HMDS)在 (NH4) 2S04存在下加热 回流至得到透明溶液， 真空下蒸去溶剂得到白色固体， 将该固体溶于 1, 2-二氯乙烷中， 再加入化合物 q的 1, 2-二氯乙垸溶液及分子筛， 在氮气保护下室温搅拌反应， TLC检测 反应完全后， 在反应液中加入二氯甲烷， 并用硅藻土过滤， 滤液分别用饱和 NaHC03和食 盐水洗涤， 有机层用无水 N¾S04干燥过夜， 蒸去溶剂得到的剩余物用减压硅胶柱分离得 到化合物 r。
化合物 s的合成： 将化合物 r溶解在 NH3- CH30H饱和的溶液中， 室温搅拌反应， 反应 完毕后蒸除溶剂， 剩余物通过柱色谱分离纯化得到化合物 S。
本发明有益效果在于，通过对糖基和碱基的修饰，使该 D-和 L-核苷类似物含氟基团、 炔基、叠氮、氰基等特殊结构弥补目前 D-和 L-核苷类似物毒副作用大、活性较小的不足； 且该合成方法简便可行， 收率较髙， 将其应用于制备抗 HBV或抗 HCV或抗 HIV病毒药物， 具有较好的应用价值。
具体实施方式
根据本发明通式化合物 I的合成路线并结合实施例对发明进行进一步说明， 但并非 限制本发明的范围。
实施例 1 当碱基为胞嘧啶时化合物 15的合成
化合物 ϋ的合成：将化合物 i(D-核糖或 L-核糖） （8. 66mmol )溶于 31. 2ml HCl/MeOH (0. 2mmol/L)中， 在 27°C水浴下保温密闭搅拌 3h， 加入 7. 8ml吡啶终止反应， 减压抽 干， 得浅黄色糖桨状物质化合物 ii (96%) ； .
化合物 iii的合成： 将化合物 ii (7. 92mmol;)溶于 21ml干燥的吡啶中， 冰盐浴下缓 慢滴加 5. 2ml苯甲酰氯 （0. 0447mol ) , 室温下搅拌 17h后将反应液倒入 39ml冰水中， 氯仿提取。有机层用冰水、预冷的 3mol/L硫酸、饱和碳酸氢钠依次洗涤至水层呈弱碱性， 再用冰水洗至水层呈中性， 无水硫酸钠干燥 4h以上， 减压抽干得浅黄色糖浆状物质化合 物 iii (80. 0%) 。 'H NMR (CDC13) δ ppm-. 7.28~8. 10(m, 15H, OBz) , 5.87 (m, 1H, H-3) , 5. 68 (d, 1H, H - 2) , 5. 16 (s, 1H， H_l) , 4. 72 (m, 2H, H—5) , 4. 52 (q, 1H, H— 4)， 3. 42 (s, 3H, 0CH3)。
化合物 iv的合成： 将苯甲酰化物化合物 iii (0. 0027mol )溶于 13mol氯仿中， 加入 红磯（390mg， 0. 0126mol )冰水浴搅拌下缓慢滴加溴（1. 3ml, 0. 025mmol )， 搅拌 30min 后， 缓慢滴加冰水 1. 3ml, 室温搅拌 4h， 然后加,入 7g碎冰搅融， 再将反应液倒入 1½1 冰水中， 氯仿提取。 有机层饱和碳酸氢钠洗至水层呈弱碱性， 冰水洗至水层呈中性， 无 水硫酸钠干燥 4h以上，减压抽干得深黄色糖浆，用硅胶柱分离（石油醚：丙酮梯度冼脱) 得白色干糖漿化合物 iv(64.2%)。'H NMR(CDCl3) δ ppm: 7. 32~8. 10(m, 15H, OBz) , 5.90 (m, 1H, H-3) , 5. 70 (d, 1H, H—2) , 5. 63 (s, 1H, H_l) , 4. 55~4. 79 (m, 3H, H-5, H— 4)。. 化合物 v的合成： 将化合物 iv (2. 73mmol )溶解在 5ml干燥的吡啶中， 冰水浴下缓 慢滴加醋酐（0. 0276mol ) ， 搅拌 30min后， 撤去冰水浴， 室温搅拌 7h, 升温到 4(TC保 持 lh。 加入 6. 5g碎冰搅融后， 将反应液倒入 13ml冰水中， 氯仿提取。 有机层用冰水、 预冷的 3mol/L硫酸、饱和碳酸氢钠依次冼至水层呈弱碱性， 冰水洗至水层呈中性， 无水 硫酸钠干燥 4h以上， 减压抽干得浅黄色糖浆状化合物 V (92. 1%) 。 'Η NMR (CDC13) δ ppm: 7.30^8.10 (m, 15H， OBz), 6.43 (s, 1H, H- 1), 5.90 (m, 1H, H- 3), 5.80 (d, 1H， H— 2), 4.50^4.80 (m, 2H， H- 5), 2.00 (s, 3H, CH3C00~)。
化合物 vi的合成： 将化合物 v (2.57mmol)溶于 26ml干燥的二氯甲垸中， 冰水浴下 缓慢通入干燥的 HC1气体 2.5h，加入冰水 19.5ml洗涤，分出有机层，用饱和碳酸氧钠洗 至水层呈弱碱性， 冰水洗至水层呈中性， 无水硫酸钠干燥 4h以上， 减压抽干得浅黄色糖 浆。用正己烷、二氯甲垸混合溶剂重结晶得白色固体化合物 vi (65.1%)。 'HNMR (CDC13) δ ppm: 7.36~8.14 (m, 15H, OBz), 6.68 (d, J=^.4Hz, 1H, H- 1)， 5.59 (dd, 1H， H— 3), 4.64^4.80 (m, 4H, H- 2， H- 4 and H-5)。 M. p.139~140。C。
化合物 vii的合成： 将化合物 vi (2.81mmol)溶于 13ml干燥的二氯甲烷中和 3.5ml 干燥的 DMF中， - 15°C搅拌下缓慢加入 S02C12 (0.0079麵 ol)， - 15。C搅拌 30min后， 自然 升至室温， 反应 3h， 在 0°C下分 3次加入咪唑（0.0407mmol)， 混合液室温搅拌 151 反 应液加入 CH2C12 (26ml)稀释， 用冰水（35ml)洗涤， 水层用 CH2C12提取， 有机层合并后 用无水硫酸钠干燥 4h以上， 减压抽干溶剂得浅黄色糖浆。 用硅胶柱分离纯化（石油醚- 丙酮梯度洗脱）得白色固体化合物 vii (76.0%)。 'HN R (CDC13) Sppm: 7.00^8.10 (m, 15H, OBz), 6.71(d, 4.4Hz， 1H, H— 1), 5.59 (dd, 1H, H - 3)， 5.25(dd, 1H, H—2)， 4.56〜4.81(m, 3H, H-4, H- 5)。 M. p.128〜129。C。
化合物 viii的合成： 将化合物 vii (2.2mmol)溶于乙酸乙酯（54ml) ψ， 搅拌下加 入 Et3N · 3HF (2.08ml, 0.013mraol)， 升温至 60°C搅拌 3h， 70。C搅拌 1.5h。加入冰盐水 (10ml)终止反应， 然后用二氯甲烷提取， 有机层合并后依次用盐水、 水、 饱和碳酸氢 钠洗涤，无水硫酸钠干燥 4h以上，减压抽干溶剂得深黄色糖浆。用硅胶漏斗（5cmX5cin) 纯化（二氯甲烷洗脱）得浅黄色糖浆（86.8%) , 粗品在 95%的乙醇溶液中结晶得白色晶 体化合物 viii (66.4%) 。 Ή N R (CDC13) δ ppm: 7.3广 8.10 (m, 15H, OBz) , 6.71 (d, 9.0Hz, 1H, H-l), 5.68(dd, ^19.44Hz, 1H， H-3), 5.32 (d, 48.2Hz， 1H, H- 2)， 4.65^4.77 (ra, 3H, H-4, H— 5)。 M.p.8(T82°C。
化合物 ix的合成： 将化合物 viii (6. Ommol)溶解于无水二氯甲垸（20ral) 中， 加 入 HBr- AcOH (45%, V/V， 4.6ml, 25腿 ol)的混 溶液， 室温搅拌反应 20h。 将混合物蒸 干， 用二氯甲垸（50ml)溶解剩余物， 并用碳 氢钠（3X30ml)洗涤二氯甲烧溶液， 将 二氯甲烷蒸去， 得到糖浆状物。 同时， 将保护过的胞嘧啶 （15瞧 ol)和 (NH4)2S04 (O.lg) 在 HMDS (30ml) 中氮气保护下回流反应 17h, 减压蒸去溶剂， 得到甲硅垸基化的胞嘧啶。 将上述反应中得到的糖浆状物溶于二氯乙垸（25ml)中， 加入到甲硅焼基化的胞嘧啶中， 混合物在 N2保护下回流反应 15h。 用冰终止反应， 用二氯甲垸（3X45ml)萃取， 二氯甲 垸层依次用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥。 干燥后蒸除溶剂， 得到白色固 体， 柱色谱分离（l%MeOH - CHC13)纯化， 得到化 物 ix (71%) 。 'HNMR (CDC13) δ ppm: 8.07 (d, J=9.86Hz, 1H)， 7.45(d, J=9.82Hz, 1H), 7.26〜8.10 (m, 10H, OBz) , 6.03 (d, 9.0Hz, 1H, H- 1), 5.64 (dd, ^19.44Hz, 1H, H - 3), 5.26 (d, ^48.2Hz, 1H, H- 2), 4.65~4.77 (m, 3H, H- 4， H_5)。
化合物 x的合成： 将化合物 ix (3.60mmol)溶于饱和的 NH3-CH30H (30ml)室温搅拌反 应 15h。 将溶剂蒸干， 所得剩余物通过柱色谱（15: lCHCl3-MeOH)纯化， 得到化合物 x (80%)。'HNMR(CDC13) δ ppm; 8.10 (d, J=9.86Hz， 1H), 7.40 (d, J=9.82Hz, 1H), 6.03 (d, ^9.0Hz, 1H， H- 1), 5.64 (dd, 19.44Hz, 1H， H- 3)， 5.26 (d, 48.2Hz， 1H, H - 2)， 4.50 (m, 1H, H-4), 3.70~3.77 (m, 2H， H- 5)。
化合物 xi的合成：将化合物 x(9.46醒 01), 唑（18.93mmol)、三苯基膦（14.19mmol), 溶解在四氢呋喃（50ml)中， 向其中缓慢加入溶解有碘（14. lSrnmol)的四氢呋喃溶液 15ml。 室温搅拌反应 3h。 蒸除溶剂， 向剩余物中加入乙酸乙酯（100ml)， 过滤。 蒸除乙酸乙酯， 剩余物柱色谱分离得到化合物 xi (83.9%) Ή腿 (CDC13) δ ppm: 8.06 (d, J=9.86Hz, 1H), 7.43(d, J=9,82Hz， 1H), 6.01 (d, 9.0Hz, 1H, H— 1), 5.66 (dd, J=19.44Hz, 1H, H-3), 5.22 (d, 48.2Hz， 1H, H-2), 4.57 (m, 1H， H-4), 3.58~3.69(m, 2H, H - 5)。
化合物 xii的合成： 将化合物 xi(5.88mraol)溶解在四氢呋喃（50ml)中， 向其中加入 DBU(6.44mmol)。在 60°C搅拌 3h。蒸干溶剂，剩余物柱色谱分离得到化合物 xii (75.1%)。 直接用于下一步反应。
化合物 xiii的合成： 在 (TC， 将溶有 ICl(l'3.9mmol)的 15ml DMF溶液加入到溶有 NaN3(9.75誦 ol)的 DMF (15ml)溶液中， 0°C搅拌 10分钟， 将溶有化合物 xii (6.8mmol) 的 DMF (20ml)缓慢加入到上述溶液。 0°C反应 1小时。 向混合溶液中加入亚硫酸钠， 直 到碘的颜色完全消失。减压蒸除溶剂，剩余物用柱色谱分离纯化,得到化合物 xii(77.6%)。 直接用于下一步反应。
化合物 xiv的合成： 将化合物 xiii (5mmol)溶于 DMF(15ml)中， 搅拌下加入醋酸银 (6mmol)， 室温反应 8h,过滤。在减压下移除溶剂（50°C以下），剩余物用柱色谱纯化， 得到化合物 xiv (71.3%) 。 Ή NMR (DMS0- ， 300 MHz) δ： 8.12 (d, 1H), 7.40(d, 1H)， 7.26(br, 2H), 6.12 (dd, 1H), 5.87 (d, 1H)， 5.09(t, 1H), 4.90 (dt, 1H), 4.18 (dt, 1H)， 3.74-3.87 (m, 2H)， 2.12 (s, 3H, CH3)。
化合物 xv的合成： 将化合物 xiv (5隱 ol)溶于 5%的三乙胺甲醇溶液（100ml) 中， 室温搅拌 12h， 蒸除溶剂， 剩余物用柱色谱纯化， 得到化合物 xv (89.0%) 。 ESI- MS: 287[M+H]。 Ή NMR (DMSO-c^, 300 MHz) δ： 8.14 (d, 1H)， 7.32(d, 1H), 7.21(br, 2H), 6.08 (dd, 1H), 5.82 (d, 1H)， 5.11 (t, 1H), 4.92 (dt, 1H)， 4.16 (dt, 1H), 3.62-3.69 (ra, 2H)。
实施例 2 当 4' -位取代基为炔基， 碱基为 1， 6-二氨基嘌呤时化合物 25的合成
化合物 b的合成： 取化合物 a (60g) ， 加入丙酮 （2L) ， 搅拌条件下慢慢加入浓硫 酸（40ml)， 室温下搅拌反应 40分钟， TLC检测反应结束， 用浓氨水调节 pH=7〜8， 过滤， 减压蒸去大部分丙酮，剩余丙酮和水约 150ml，在搅拌条件下加入 0.4%稀盐酸（150ml)， 在丙酮回流条件下反应 20分钟， 化合物 a全部水解成化合物 b。 用固体 NaHC03中和反应 液至 pH=7~8, 过滤， 滤液在减压下蒸去溶剂， 剩余物用二氯甲垸溶解（200ml)， 用无水 Na2S04千燥过夜，过滤，蒸去溶剂后，得到黄色粘稠油状物 b( 73g,95%),ESI-MS： 191 [ +H]。
化合物 c的合成： 将化合物 b (154g, 0.81mol)和三乙胺 （339ml， 2.43mol)溶于 二氯甲烷 （1.50L) 中， 冰盐浴冷至 0°C, 慢慢滴加对氯苯甲酰氯 （113ml, 0.891mol) ， 保持 O'C以下机械搅拌反应 4h， 加入饱和 NaHC03水溶液（500ml) ， 二氯甲垸层用水、饱 和食盐水洗涤， 无水 MgS04干燥， 过滤， 减压蒸去溶剂， 并重结晶剩余物， 得白色晶体化 合物 c (196g， 74.6%) ， ESI-MS: 330[M+H]。
化合物 d的合成： 化合物 c (O. lHmol)溶解到无水二氯甲垸（600ml) 中， 在氮气 保护下， 加入咪唑（15.5g， 0.228mol)和叔丁基二甲基氯化硅（TBDMSC1) (18.9g, 0.125mol) 。 室温反应 3h后， 用 1N盐酸中和反应， 分出两层， 有机层分别用水和饱和 食盐水洗涤后， 用无水 N¾S04干燥， 蒸除溶剂， 剩余物通过柱色谱进行分离纯化， 得到 化合物 d， 产率 69.2%, ESI-MS: 444[M+H]。
化合物 e的合成： 化合物 d (0.64mmol)加入到 0.2N甲醇钠 -甲醇（15ml)的混合物 液中， 室温反应 4h， 用稀醋酸中和， 过滤， 用甲醇洗涤， 减压蒸除溶剂， 剩余物用柱色 谱分离纯化， 得化合物 e， 产率 75%， ESI-MS: 305 [M+H] 0
化合物 f的合成： - 60°C下向草酰氯（3.4π^， 38.7mmol) 的二氯甲垸（80.0ml)溶 液中逐滴滴加 DMS0 (5.5ml, 77.5mmol) , 在相同的温度下， 搅拌 15分钟后， 滴加化合 物 e(25.7mmol )的二氯甲烷（ 100ml )溶液。在- 65°C搅拌反应 30分钟，加入三乙胺（ 10.9ml, 78.2mmol) ， 室温搅拌反应 30分钟。 反应混合物中加入水， 分出有机层， 有机层用无水 硫酸镁干燥。 蒸除溶剂， 剩余物用柱色谱分离醇化得化合物 f, 产率 94.6%， ESI-MS: 303 [M+H]
化合物 g的合成： 在反应瓶中放入氢氧化钠（1.3g)和水（11.5ml)， 搅拌均匀后加入 30%的甲醛水溶液、 7.2ml 95%乙醇，然后加入化合物 f (25mraol)。控制反应温度在 30〜35 °C下搅拌 2h。 反应结束后， 边搅拌边用冰水冷却反应瓶， 直至产物完全析出。 抽滤， 固 体用水洗涤至中性并烘干， 所得固体溶解到无水甲醇中， 再加入硼氢化钠 （0.925g， 25瞧 ol) ， 回流反应 lh, 用稀盐酸中和反应液， 二氯甲垸萃取（3X50ml) ， 加入无水 N¾S04 燥， 蒸除溶剂， 得化合物 g， 产率 90.5%， ESI-MS: 335[Μ+Η]„
化合物 h的合成：化合物 g (9.7誦 ol)溶解到甲醇（260ml)中，加入 Dowex H+ (40ml， 事先用甲醇洗涤） ， 室温反应 4h, 将树脂过滤除去， 并用甲醇反复洗涤树脂， 溶液蒸干 得固体。将所得固体溶于丙酮（200ml)中，搅拌条件下慢慢加入浓硫酸（催化量， 2ml)， 室温搅拌反应约 0.5h, 用浓氨水调节 PH=7〜8， 过滤， 减压蒸去大部分丙酮， 再加入 0.4% 稀盐酸（40ral) ， 丙酮回流条件下反应 20分钟, 用 NaHC03中和反应液至 pH=7〜8， 过滤， 减压下蒸除溶剂， 剩余物用适量二氯甲垸溶解， 用无水 N¾S04干燥后， 蒸去溶剂， 得到 化合物 h， 产率 80.2%， ESI-MS: 261 [M+H] 0
化合物 i的合成： -60Ό向草酰氯 （3.4ml, 38.7mmol) 的二氯甲垸（80ml)溶液中 逐滴滴加 DMSO (5.5ml, 77.5讓 1) ， 滴完搅拌 15分钟后， 滴加化合物 h (25.7画1) 的二氯甲垸（100ml)溶液，滴完后 -60°C反应 30分钟，加入三乙胺（10.9ml， 78.2mmol) , 室温反应 30分钟后加入水终止反应，分出有机层，有机层用无水 Na2S04干燥。蒸除溶剂， 剩余物用柱色谱分离纯化得固体。 将 C1CH2P(C6H5)3C1 (2.15g， 6.19ramol)加入到无水四 氢呋喃 (50ml) 中， 冷却到 - 78°C， 加入 n- BuLi的正己烷溶液 (1.6M, 4.0ml)搅拌反应 lh, 然后加入所得固体 （1.51醒 ol) 的干燥四每呋喃溶液 （50ml) 。 冷却温度逐渐升高 到 0°C，继续反应 3h。小心滴加饱和的 NH4C1溶液（10ml)，用乙酸乙酯萃取（2X 100ml ) ， 有机层用盐水洗涤两次（2X75ml) ， 最后用无水 MgS04千燥， 减压蒸除溶剂， 得到 剩 余物溶解到无水四氢呋喃（40ml)中，冷却到 -78°C，慢慢滴加 n- BuLi的正己垸溶液（1.6M, 20ml) 。 搅拌反应 2h， 小心地用饱和 NH4C1溶液（20ml) 终止反应。 有机层用饱和食盐 水洗涤， 无水 MgS04干燥， 减压蒸除溶剂， 剩余物用快速硅胶柱分离纯化， 得化合物 i, 产率 48.5%, ESI-MS: 255 [M+H] 0
化合物 j的合成： 将化合物 i (lOmmol)加入到 0.2¾的盐酸溶液（50ml) 中， 室温 搅拌反应 6h， 用固体 NaHC03中和反应至 PH=7〜8; 过滤， 滤液在减压条件下蒸去溶剂， 剩 余物用二氯甲垸溶解， 并用无水 N¾S04干燥后过滤，蒸去溶剂，得化合物 j，产率 99，.0%， ESI-MS: 215 [M+H]
化合物 k的合成：将化合物 j (5議 ol)溶解到吡啶（20ml)中，滴加 BzCl (5醒 ol)， 室温反应 6h, 蒸干， 剩余物纯化后得化合物 k， 产率 85.3%， ESI-MS: 319 [M+H] 0
化合物 1的合成：将化合物 k (59.3画 ol)和 2, 2, 6, 6-四甲基哌啶- N-氧（0.059mmol) 溶于二氯甲垸（99ml) 中， 冷至 0°C， 将次氯酸钠溶液（33.6ml， 8.5〜13· 5%有效氯） 、 NaHC03 (11.2g)和水（190ml)混合溶液加入到 应液， 0°C反应 30分钟， 加入异丙醇 (1.95ml) , 室温反应 10分钟， 分出的二氯甲垸层用水洗涤 2次， 无水 MgS04干燥， 过 滤， 蒸去溶剂得到的剩余物进行重结晶，得到化合物 1， 产率 87.8%， ESI- S: 317[M+H]0 化合物 m的合成：将化合物 1 (0.05mol)加入到无水乙醇（60ml )和乙酸乙酯（30ml ) 的混合液中，冷至 0Ό， 分批加入硼氢化钠（23.3g， 612ramol)，然后在 0°C搅拌反应 lh， 用稀醋酸中和至 pH=7~8， 过滤， 滤液蒸干， 剩余物再用二氯甲垸溶解， 然后水洗， 二氯 甲垸层用无水 MgS04干燥， 过滤， 减压蒸去二氯甲烷， 剩余物用二氯甲烷和石油醚的混合 溶剂重结晶，得到固体物。将所得固体物溶于吡啶中，在 0°C条件下，滴加 BzCl (50ramol), 滴加完毕后， 室温反应 3h, 蒸除溶剂， 剩余物用乙酸乙酯萃取， 饱和 NaHC03溶液洗涤， 无水 N¾S04干燥，过滤，蒸去溶剂，剩余物柱色谱分离纯化得化合物 m，产率 89.7%, ESI- S： 423[ +H]0
化合物 n的合成： 将化合物 m (4mmol)溶于甲醇（22ml) 中， 加入 4.0M的盐酸 /二 氧六环混合溶液（20ml) ， 室温反应 10h， 用 NaHC03中和反应液至 pH=7~8， 过滤， 滤液 减压蒸馏除去溶剂， 剩余物溶于适量二氯甲垸中， 用无水 N¾S04干燥过夜， 滤液蒸干， 用柱色谱分离纯化得化合物 n, 产率 89.5%, ESI-MS: 397[M+H]0
化合物 o的合成： 化合物 n (1.76mm0l)溶解在二氯甲烷中， 室温条件下加入 DAST (0.4ml, 3.03mmol)搅拌 12h， 将其倒入 10ml饱和 NaHC03溶液中， 分出有机层， 并用 饱和 NaHC03溶液洗涤，无水 N¾S04干燥,柱色谱分离纯化得到化合物 o，产率 11.5%, ESI-MS: 399[M+H]0
化合物 p的合成： 将化合物 0 (lOmmol)加入到 20ml浓度为 80%的甲酸溶液中， 在 室温下搅拌反应 12h，减压蒸去溶剂，剩余物与甲苯共蒸得固体物，将所得固体物溶于干 燥吡啶和醋酸酐溶液，室温反应 4h，反应液浓縮后与甲苯共蒸，得到化合物 p，产率 90.3%， ESI-MS: 427[Μ+Η] ο Ή NMR(CDC13, 300 MHz) δ： 2.07 (s, 3H) , 2.85(s, 1Η) , 4.62- 4.77 (m， 2H)， 4.89-5.07 (m， 3H)， 7.32-8.17 (m, 10H)。
化合物 q的合成： 化合物 p (4.76mmol)溶于无水二氯甲烷（40ml)中， 将其 ^至 0 °C， 然后慢慢通 HC1气体至饱和 （约 3h) , 室温下真空蒸去溶剂， 剩余物真空干燥 2小 时得到化合物 q， 产率 87.1%， 化合物 q直接用于下一步反应。
化合物 r的合成 :2, 6-二氨基嘌呤 (4.78画 ol )与六甲基硅氮烷 (1¾«)5，91111)在(!^4)2504 (50mg)存在下加热回流至得到透明溶液（约 5h) , 真空下蒸去溶剂得到白色固体， 将 该固体溶于 1， 2 -二氯乙垸 (35ml)中，再加入化合物 q的 1, 2-二氯乙垸溶液（4.56画 ol， 30ml)及 0. 4nm分子筛（2. 6g)， 在氮气保护下室温搅拌 6天， TLC检测反应完全后， 在 反应液中加入二氯甲烷（80ml ) ， 并且用硅藻土过滤， 滤液分别用饱和 NaHC03和食盐水 洗涤， 有机层用无水 N¾S04干燥过夜， 蒸去溶剂得到的剩余物用减压硅胶柱分离得到化 合物 r， 产率 78. 5%， ESI-MS: 517 [Μ+Η] 0 'Η N R (CDC13, 300 MHz) δ： 2. 85 (s, 1H) , 4. 67—4. 79 (m, 2H) , 4. 92 - 5. 13 (m, 3H) , 5. 79 (br; 1H) , 7. 32-8. 17 (m, 9H) , 8. 35 (s, 1H)。
化合物 25的合成： 将化合物 r (3. 60mmol )溶解在饱和的 NH3-甲醇溶液（30ml )中， 室温搅拌反应 15h， 蒸除溶剂， 剩余物通过柱色谱分离纯化得到化合物 25， 产率 78. 9%, ESI-MS : 309 [Μ+Η] ο Ή NMR (CDC13, 300 MHz) δ： 2. 85 (s， 1H)， 3. 69-3. 79 (m, 2H) , 4. 79-5. 07 (m, 3H) , 5. 60 (br, 1H) , 5. 79 (br, 1H) , 7. 32- 8. 17 (m, 4H) , 8. 35 (s, 1H)。
本发明体外抗 HIV活性实验：化合物 1、 9、 15、 19、 36、 39、 46、 50、 52在细胞培 养内的抗 HIV-1活性。
待试药物： 化合物 1、 9、 15、 19、 36、 39、 46、 50、 52， 无批号， 水不溶， DMS0 可溶解， 实验时用 DMS0溶解配成适当浓度后用培养基稀释， 立即加入细胞培养。
阳性对照药：
(1)齐多夫定 (Zidovudine, AZT)为临床应用的已知核苷类 HIV-1逆转录酶抑制剂， 为 白色粉末， 购自上海迪赛诺化学制药有限公司，'批号： 040201b,
(2)奈韦拉平（nevirapine, NVP)购自南京泽众医化信息研究中心（批号： 0301001) , 为临床应用的已知非核苷类逆转录酶抑制剂。
HIV-1 ΙΠΒ实验病毒株， 为美国 Mount Sinai Medical Center蒋建东博士赠予, 在 H9 细胞中扩增， -196°C冻存。
传代人 T淋巴细胞 为美国科罗拉多大学医学研究中心张兴权教授赠送，本室传代， -196°C保存。 细胞培养基： RPMI Medium 1640培养基， 加 10%胎牛血清、 100IU/ml青霉 素、 100 g/ml链霉素和卡那雩素及含 L-谷氨酰胺。 37°C， 5%C02培养箱中培养， 每三天 传代一次。 '
主要试剂： RPMI Medium 1640培养基为美国 GIBC0公司产品； 胎牛血清 (Fetal Bovine Serum)为天津市川页生化制品有限公司产品； 青霉素和链霉素为华北制药厂产品； 卡那 霉素为上海旭东海普药业有限公司产品； 四氮唑蓝 (Thiazolyl blue, MTT) , 柠檬酸为美 国 Sigma公司产品； Triton X- 100为瑞典 KEB0 AB STOCKHOLM公司产品； N, N二甲基甲 酰胺 (N，N- Dimethyl Formamide)为北京化工厂产品； HIV-1 P24抗原检测试剂盒： 用荷兰 Bio erieux公司产品。
主要仪器： Emax™酶标仪为美国 MolICular Devices公司产品； 实验方法： 96孔培养板， 设药物及阳性对照药抑制病毒实验组， 每孔加入待测药物的不 同浓度 DMS0溶液 lOOul或阳性对照药 AZT和 NVP或大鼠口服药物不同剂量组后不同时间 取血不同稀释组， 每孔 100ul， 同时设细胞对照和病毒对照组阳性药 AZT和 NVP对照组。 MT-4细胞用 100TCID5。 HIV- 1 IIIB感染 1. 5小时后， 用培养基洗涤 1次后， 配成 2 X 105 细胞 /ml'接种于药物抑制病毒实验组和阳性对照药物组及病毒对照组的 96孔培养板中。 细胞对照组加等量培养液， 培养 4天后。 用显微镜观察细胞病变， 同时用 MTT染色测定 毒性， 上清液按说明书方法测定 P24抗原。 分别计算抑制率、 半数有毒浓度（CC5。）和半 数有效浓度（IC5。）及 SI。
化合物 1, 9, 15, 19, 36, 39, 46, 50, 52在 MT- 4细胞培养内对 HIV-1的抑制作用
用 MTT法测定化合物 1, 9, 15, 19, 36, 39, 46， 50, 52对细胞的毒性和抗 HIV- 1活性， 并比 较药物用 HIV-1 感染细胞和未感染细胞测定细胞毒性对 CC5。和 SI的影响。 结果见表 1 表 1 化合物 1, 9, 15, 19, 36, 39, 46, 50, 52及阳性药物 AZT和 NVP在 MT- 4细胞培养 内抗 HIV-1活性
Figure imgf000019_0001
*： 细胞毒性： MTT法
表 2化合物 1、 15和 19用野生型 HIV-1复制药理模型进行药理筛选结果
Figure imgf000020_0001
1、化合物 15和化合物 19具有很好的应用开发前景。该类化合物的开发， 将为艾滋病患 者带来福音。 本发明体外抗乙型肝炎病毒药物的筛选
目的： 利用 HBV基因组转染的 Hep G2. 2. 15细胞筛选抗乙型肝炎病毒药物， 为研究和开 发新的抗乙肝药物提供理论及试验依据。
方法： 选择拉米夫定， 化合物 15, 17 ΤΟο以下的药物浓度作用于细胞， 分别在 144h， 216h收集细胞培养上清液， 采用荧光定量 PCR法检测 HBV DNA的含量。
结果： 拉米夫定， 化合物 15用药后均能显著降低 HBV DNA拷贝数。
结论： 化合物 15体外有显著的降低 HBV DNA的作用， 且毒性较低。 本实验为进一步研究 化合物的抗 HBV作用提供了依据。
细胞株： HBV DNA克隆转染人肝癌细胞 HePG2的 Hep G2. 2. 15细胞株是由美国 The Mount Sinai Medical Center于 1986年构建的， 能稳定表达 e抗原和表面抗原。 由中科院武汉 病毒研究所赠送。 本研究室自行传代， 培养过程中用 G418筛选。
受试药物： 化合物 15， 17为本发明合成药物， 对照药物： 拉米夫定 （3TC) ， 葛兰素-史 可 （苏州） 有限公司产品
主要试剂和器材： DMEM培养液 Hyclone; 胎牛血清 杭州四季青； 24孔培养板 美国 corning;培养瓶美国 corning; 乙型肝炎病毒核酸扩增荧光定量检测试剂盒 深圳匹基；
G418 introvegeno
抗 HBV的体外试验研究：
Hep G2. 2. 15细胞的培养：用含 10%胎牛血清， 500mg/L G418的 DMEM培养液培养细胞， 用 0. 25%胰蛋白酶和 0. 02%EDTA的消化液消化， 并按 1 : 3传代培养， 三天传代一次。 药物抗 HBV作用的研究：
取生长状态良好的细胞， 调整细胞浓度为 104个 /ml， 每孔 lml接种到 24孔板中。 于 37° ， 5%C02培养箱中培养 48小时， 细胞贴壁生长良好时开始试验。三种药物按配制 的不同浓度分组（表 1 )， 每一浓度设两个复孔， 同时设不加药物的细胞培养对照为空白 对照。 用药第 3、 6、 9日换同样浓度含药培养基及空白组培养液 1次， 并将各孔培养上 清液吸入 EP管 -20° 保存待检。
表 1、 拉米夫定、 化合物 15, 17三种药物的浓度
Figure imgf000021_0001
药物对 HBV PCR荧光定量检测:
HBV DNA抑制率 （％) = (空白组 HBV DNA拷贝数-实验组 HBV DNA拷贝数） /空白组 HBV DNA拷贝数 *100%。 结果： 药物对 Hep G2.2.15细胞培养上清 HBV D A的抑制作用见表 2， 3 表 2、 拉米夫定作用后对细胞上清中 HBV 0NA拷贝数的影响 （拷贝数为 χΧΙΟ5) 组别 浓度（ g/ml) HBV DNA含量 抑制率 正常 I 99.79 I
3TC 20 g /ml 12.15 87.82
2 μ g /ml 25.32 74.63
0.2 μ g /ml 39.59 60.33
0.02 u g /ml 55.98 43.9
3TC EC50为 38.78 g/L
表 3、 化合物 15, 17作用后对细胞上清液中 HBV DNA拷贝数的影响（拷贝数为 χΧΙΟ5) 组别 剂量 HBV DNA拷贝数（*105) 抑制率 (%)
Normal 1 32.01 1
3TC 10, 000 g/L 5.49 82.8
15 2y g/L 5.21 83.7
0.4 g/L 10.3 67.8
0.08 μ g/L 13.5 57.8
0.016 μ g/L 1§:9 41.0
17 1000 μ g/L 10.2 67.9
500 μ g/L 14.3 52.2
100 μ g/L 19.2 40.6 化合物 15 ECBO为 0.19 μ g/L 表 4、 化合物 15对 Hep G2. 2. 15细胞的毒性（MTT法） 组别 剂量 0D值 细胞存活率
Normal I 0. 644 I
15 lOOO u g/ml 0. 520 82. 6%
200 μ g/ml 0. 552 85. 5%
40 μ g/ml 0. 606 96. 7%
8 μ g/ml 0. 626 98. 7% 本发明体外抗 HCV活性实验
1.材料及方法
HCV复制细胞（A a.5)在 Dulbecco's改 的包含 10%牛胎儿血清和 lmg/mL的 G418的 Eagle介质中培养。 293-Sip-L细胞在 Dulbecco's改进的含 10%牛胎儿血清和 250 μ g/mL的 G418及 150 μ g/mL的潮霉素 B的 Eagle介质中培养.
1.2 HCV感染测定方法（RT-PCR方法）
用 60mm直径的 Petri培养皿中的细胞在包含 100 μ L的 HCV阳性的培养基中培育 12小时。 然后细胞在不包含 HCV的新鲜介质中培育并且每天更换一次。 细胞在感染 7 天后检测 HCV-RNA时， 细胞需要胰蛋白酶化并用离心法用 Dulbecco's改进的 Eagle介 质清洗两次。第二次洗涤的上层部分（作为对照）和洗过的细胞成对收集来进行 R A提 取和 RT-PCR检测。 Ρ -肌动蛋白 mRNA同时测定以做对照。
1.3 HCV-RNA的定量检测
采用全自动 PCR酶联免疫法来定量测定 HCV-RNA (2.0版， Roche Diagnostics, Branchburg, NJ) 。
2.结果
化合物 17在 6， 0.6和 0.06 μ g mL时有抑制效果 (见下表)。 HCV-RNA水平用全自动 PCR酶联免疫法来测定。
Figure imgf000024_0001
由此看来， 化合物 17对 HCV有较强的抑制作用。

Claims

权 利 要 求
1. 2， -氟- 4， -取代-核苷类似物， 其特征在于， 其具有通式 （ I ) 结构:
Figure imgf000025_0001
Figure imgf000025_0002
R = CH3, CN,N3，C≡CH;
R' = H, F;
X = F, OH,NH2;
Y = H，CH3,F,0 NH2。
2、 如权利要求 1所述的 2' -氟 -4' -取代核苷类似物或其潜药或其 5' -磷酸酯， 其特征在于， 其可以通过活性化合物（I)与有机酸或无机酸反应形成盐， 以盐的形式存 在。
3、如权利要求 1所述的 2' -氟 -4' -取代核苷类 ί以物， 其特征在于， 所述化合物是 以下化合物之一：
Figure imgf000026_0001

Figure imgf000027_0001
Figure imgf000028_0001
化合物 ii的合成： 将化合物 i D-核糖或 核糖溶于 HCl/MeOH中， 在水浴下保温密 闭搅拌， 加入吡啶终止反应， 减压抽干， 得浅黄色糖浆状物质化合物 ii ;
化合物 iii的合成： 将化合物 ii溶于干燥的吡啶中， 冰盐浴下缓慢滴加苯甲酰氯， 室温下撹拌反应， 反应完毕后将反应液倒入冰水中， 氯仿提取； 有机层用冰水、 预冷的 硫酸、 饱和碳酸氢钠依次洗涤至水层呈弱碱性， 再用冰水洗至水层呈中性， 无水硫酸钠 千燥， 减压抽干得浅黄色糖浆状物质化合物 iii ;
化合物 iv的合成： 将苯甲酰化物化合物 iii溶于氯仿中， 加入红磷， 冰水浴搅拌下 缓慢滴加溴， 搅拌 30min左右， 缓慢滴加冰水， .室温搅拌， 然后加入碎冰搅融， 再将反 应液倒入冰水中， 氯仿提取； 有机层饱和碳酸氢^洗至水层呈弱碱性， 冰水洗至水层呈 中性，无水硫酸钠干燥，减压抽干得深黄色糖浆'，用硅胶柱分离得白色干糖桨化合物 iv; 化合物 V的合成： 将化合物 iv溶解在干燥的吡啶中， 冰水浴下缓慢滴加醋酐， 搅拌 约 30分钟， 撤去冰水浴， 室温搅拌约 7h， 升温到 40°C保持 lh; 加入碎冰搅融后， 将反 应液倒入冰水中， 氯仿提取； 有机层用冰水、 预冷的硫酸、 饱和碳酸氢钠依次洗至水层 呈弱碱性， 冰水洗至水层呈中性， 无水硫酸钠干燥， 减压抽干得浅黄色糖浆状化合物 V； 化合物 vi的合成：将化合物 V溶于干燥的二氯甲烷中，冰水浴下缓慢通入干燥的 HC1 气体， 加入冰水洗涤， 分出有机层， 用饱和碳酸氢钠洗至水层呈弱碱性， 冰水洗至水层 呈中性， 无水硫酸钠干燥， 减压抽干得浅黄色糖浆， 重结晶得白色固体化合物 vi;
化合物 vii的合成： 将化合物 vi溶于干燥的二氯甲垸中和干燥的 DMF中， - 15'C左 右搅拌下缓慢加入 S02C12, - 15Ό搅拌约 30分钟， 自然升至室温反应， 在 0°C下分 3次加 入咪唑， 混合液室温搅拌， 反应完毕后向反应液加入 CH2C12稀释， 用冰水洗涤， 水层用 CH2C12提取，有机层合并后用无水硫酸钠干燥， 减压抽干溶剂得浅黄色糖浆； 用硅胶柱分 离纯化得白色固体化合物 vii;
化合物 viii的合成： 将化合物 vii溶于乙酸乙酯中， 搅拌下加入 Et3N · 3HF, 升温 至 60'C左右搅拌约 3h, 70'C搅拌约 1. 5h， 加入 盐水终止反应， 然后用二氯甲烷提取， 有机层合并后依次用盐水、 水、 饱和碳酸氢钠洗涤， 无水硫酸钠干燥， 减压抽干溶剂得 深黄色糖浆； 纯化得浅黄色糖浆， 粗品结晶得白色晶体化合物 viii;
化合物 ix的合成： 将化合物 viii溶解于无水二氯甲烷中， 加入 HBr- AcOH的混合溶 液， 室温搅拌反应； 反应完毕后将混合物蒸干， 用二氯甲院溶解剩余物， 并用碳酸氢钠 洗涤二氯甲烷溶液，将二氯甲垸蒸去，得到糖浆状物；同时，将保护过的胞嘧啶和 (NH4)2S04 在 HMDS中氮气保护下回流反应， 反应完毕， 减压蒸去溶剂， 得到甲硅垸基化的胞嘧啶； 将上述反应中得到的糖浆状物溶于二氯乙垸中， 加入到甲硅垸基化的胞嘧啶中， 混合物 在 N2保护下回流反应； 用冰终止反应， 二氯甲烷萃取， 二氯甲垸层依次用饱和碳酸氢钠 和盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥； 干燥后蒸除溶 ， 得到白色固体， 柱色谱分离纯化， 得 到化合物 ix;
化合物 X的合成：将化合物 ix溶于饱和的 NH3-C 0H，室温搅拌反应； 反应完毕后将 溶剂蒸干， 所得剩余物通过柱色谱纯化， 得到化合物 X；
化合物 xi的合成： 将化合物 x、 咪唑、 三苯基膦溶解在四氢呋喃中， 向其中缓慢加 入溶解有碘的四氢呋喃溶液； 室温搅拌反应， 反应完毕后蒸除溶剂， 向剩余物中加入乙 酸乙酯， 过滤， 蒸除乙酸乙酯， 剩余物柱色谱分离得到化合物 xi。
化合物 xii的合成： 将化合物 xi溶解在四氢呋喃中， 向其中加入 DBIL在 60'C左右 搅拌反应。 反应完毕后蒸干溶剂， 剩余物柱色谱分离得到化合物 xii;
化合物 xiii的合成： 在 O'C将溶有 IC1的 DMF溶液加入到溶有 NaN3的 DMF溶液中， 冰点搅拌约 10分钟， 将溶有化合物 xii的 DMF缓慢加入到上述溶液， 继续反应； 反应完 毕后向混合溶液中加入亚硫酸钠， 直到碘的颜色完全消失， 减压蒸除溶剂， 剩余物用柱 色谱分离纯化， 得到化合物 xii;
化合物 xiv的合成： 将化合物 xiii溶于 DMF中， 搅拌下加入醋酸银， 室温反应， 反 应完毕后过滤； 在减压下移除溶剂， 剩余物用柱色谱纯化， 得到化合物 xiv; WO 2009/009951 PCT/CN2008/001239 一 — . 化合物 XV的合成： 将化合物 xiv溶于三 胺甲醇溶液中， 室温搅拌反应， 反应结 束后蒸除溶剂， 剩余物用柱色谱纯化， 得到化合物 XV。
5、 如权利要求 1所述的核苷类似物的制备方法， 其特征在于， 包括下列步骤：
Figure imgf000030_0001
化合物 b的合成： 取化合物 a， 加入丙酮， 搅拌条件下慢慢加入浓硫酸， 室温下搅拌 反应， TLC检测反应结束后， 用浓氨水调节 pH ， 过滤， 减压蒸去大部分丙酮， 在搅拌 条件下加入 0. 4%稀盐酸， 在丙酮回流条件下反应， 化合物 a全部水解成化合物 b; 用固 体 NaHC03中和反应液， 过滤， 滤液在减压下蒸去溶剂， 剩余物用二氯甲垸溶解， 用无水 N¾S04干燥过夜， 过滤， 蒸去溶剂后， 得到黄色粘稠油状物 b。
化合物 c的合成： 将化合物 b和三乙胺溶于二氯甲烷， 冰盐浴下慢慢滴加对氯苯甲 酰氯， 保持 (TC以下机械搅拌反应； 反应完毕后加入饱和 NaHC03水溶液， 二氯甲垸层用 水、饱和食盐水洗涤， 无水 MgS04干燥， 过滤， 减压蒸去溶剂， 并重结晶剩余物， 得白色 晶体化合物 c;
化合物 d的合成： 化合物 c溶解到无水二氯甲垸中， 在氮气保护下， 加入咪唑和叔 丁基二甲基氯化硅 （TBDMSC1 ) ； 室温反应， 反应结束后， 用盐酸中和反应， 分出两层， 有机层分别用水和饱和食盐水洗涤后， 用无水 ¾S04干燥， 蒸除溶剂， 剩余物通过柱色 谱进行分离纯化， 得到化合物山
化合物 e的合成： 化合物 d加入到甲醇钠-甲醇的混合物液中， 室温反应， 反应结束 后用稀醋酸中和， 过滤， 用甲醇洗涤， 减压蒸除溶剂， 剩余物用柱色谱分离纯化， 得化 合物 e;
化合物 f的合成：在约 -60°C条件下向草酰 的二氯甲垸溶液中逐滴滴加 DMS0，在相 同的温度下， 搅拌约 15分钟后， 滴加化合物 e 二氯甲烷溶液， 在约- 65°C搅拌反应约 30分钟， 加入三乙胺， 室温搅拌反应； 反应结束后向反应液中加入水， 分出有机层， 有 机层用无水硫酸镁干燥， 蒸除溶剂， 剩余物用柱色谱分离纯化得化合物 f。
化合物 g的合成： 在反应瓶中放入氢氧化钠和水， 搅拌均匀后， 加入甲醛水溶液、 95%乙醇， 然后再加入化合物 f， 约 35Ό下搅拌反应； 反应结束后， 边搅拌边用冰水冷却 反应瓶， 直至产物完全析出， 抽滤， 固体用水洗涤至中性并烘干， 所得固体溶解到无水 甲醇中， 再加入硼氢化钠， 回流反应， 反应结束后用稀盐酸中和反应液， 用二氯甲垸萃 取反应液， 无水 N¾S04干燥后蒸除溶剂得化合物 g;
化合物 h的合成： 化合物 g溶解到甲醇中， ;加入 Dowex H+ (事先用甲醇洗涤） ， 室 温反应， 反应完毕后将树脂过滤除去， 并用甲醇反复洗涤树脂， 溶液蒸干得固体； 将所 得固体溶于丙酮中， 搅拌条件下慢慢加入浓硫 (催化量） ， 室温搅拌反应， 用浓 水 调节 pH值， 过滤， 减压蒸去丙酮， 得到化合物 h;
化合物 i的合成：在约- 60°C下向草酰氯的二氯甲烷溶液中逐滴滴加 DMS0，滴完后搅 拌约 15分钟， 滴加化合物 h的二氯甲烷溶液， 滴完后于 _60'C反应约 30分钟， 加入三乙 胺， 室温反应约 30分钟后加入水终止反应， 分出有机层， 有机层用无水 N¾S04干燥； 蒸 除溶剂， 剩余物用柱色谱分离纯化得固体； 将 ClCH2P(CeH5) 3Cl加入到无水四氢呋喃中， 冷却到约 -78°C， 加入 n- BuLi的正己烷溶液搅拌反应约 lh， 然后加入所得固体的干燥四 氢呋喃溶液； 温度逐渐升高到.0°C左右， 继续反庳， 反应完毕后滴加饱和的 NH l ^液， 用乙酸乙酯萃取， 有机层用盐水洗涤两次， 最后 ffl无水 MgS04干燥， 减压蒸除溶剂， 得到 的剩余物溶解到无水四氢呋喃中， 冷却到 - 78°C〖 慢慢滴加 n-BuLi的正己垸溶液， 搅拌 反应 2h左右， 用饱和 N C1溶液终止反应； 有机层用饱和食盐水洗涤， 无水 MgS04干燥, 减压蒸除溶剂， 剩余物用快速硅胶柱分离纯化， 得化合物 i;
化合物 j的合成： 将化合物 i加入到稀盐酸溶液中， 室温搅拌反应， 反应完毕后用 固体 NaHC03中和， 过滤， 滤液在减压条件下蒸去溶剂， 剩余物用二氯甲烷溶解， 并用无 水 N¾S04干燥后过滤， 蒸去溶剂， 得化合物 j;
化合物 k的合成： 将化合物 j溶解到吡啶中， 滴加 BzCl， 室温反应， 反应完毕后蒸 干溶剂， 剩余物纯化后得化合物 k;
化合物 1的合成： 将化合物 k和 2, 2, 6， 6-四甲基哌啶 -N-氧溶于二氯甲垸中， 冷至 0 "C , 将混合的次氯酸钠溶液、 NaHC03和水混合溶液加入到反应液中， 欲 0°C反应约 30分 钟， 加入异丙醇， 室温搅拌， 分出的二氯甲烷层用水洗涤 2次， 无水 MgS04干燥， 过滤， 蒸去溶剂得到的剩余物进行重结晶， 得到化合物 1;
化合物 m的合成：将化合物 1加入到无水乙醇和乙酸乙酯的混合液中，冷至 0°C左右， 分批加入硼氢化钠， 搅拌反应， 反应完毕后用稀醋酸中和， 过滤， 滤液蒸干， 剩余物再 用二氯甲垸溶解， 然后水洗， 二氯甲垸层用无本 MgS04干燥， 过滤， 减压蒸去二氯甲垸， 剩余物用二氯甲垸和石油醚的混合溶剂重结晶， f寻到固体物； 将所得固体物溶于吡啶中， 在 0°C左右滴加 BzCl , 滴加完毕后， 室温反应，'反应完毕后蒸除溶剂， 剩余物用乙酸乙 酯萃取， 饱和 NaHC03溶液洗涤， 无水 N S04干燥， 过滤， 蒸去溶剂， 剩余物柱色谱分离 纯化得化合物 m;
化合物 n的合成： 将化合物 m溶于甲醇中， 加入浓盐酸 /二氧六环的混合溶液， 室温 反应， 反应完毕后用 NaHC03中和反应液， 过滤， 滤液减压蒸馏除去溶剂， 剩余物溶于适 量二氯甲烷中， 用无水 N¾S04干燥过夜， 滤液蒸干， 用柱色谱分离纯化得化合物 n; 化合物 0的合成： 化合物 n溶解在二氯甲垸中， 室温条件下加入 DAST搅拌反应， 反 应完毕后将混合物倒入饱和 NaHC03溶液中， 分出有机层， 并用饱和 NaHC03溶液洗涤， 无 水 N¾S04干燥， 柱色谱分离纯化得到化合物 0 ; ；
化合物 p的合成： 将化合物 o加入到甲酸溶液中， 在室温下搅拌反应， 反应完毕后 减压蒸去溶剂， 剩余物与甲苯共蒸得固体物， 将所得固体物溶于干燥吡啶和醋酸酐溶液 中， 室温反应， 反应完毕后将反应液浓缩， 然后与甲苯共蒸， 得到化合物 p;
化合物 q的合成： 化合物 p溶于无水二氯甲烷中， 将其冷至 0°C， 然后慢慢通 HC1 气体至饱和， 室温下真空蒸去溶剂， 剩余物真空干燥得到化合物 q;
化合物 r的合成： 2, 6-二氨基嘌呤与六甲基硅氮垸（HMDS)在 (NH4) 2S04存在下加热 回流至得到透明溶液， 真空下蒸去溶剂得到白色固体， 将该固体溶于 1, 2-二氯乙垸中， 再加入化合物 q的 1, 2-二氯乙烷溶液及分子筛， 在氮气保护下室温搅拌反应， TLC检测 反应完全后， 在反应液中加入二氯甲垸， 并用娃藻土过滤， 滤液分别用饱和 NaHC03和食 盐水洗涤， 有机层用无水 N¾S04干燥过夜， 蒸去溶剂得到的剩余物用减压硅胶柱分离得 到化合物 r;
化合物 s的合成： 将化合物 r溶解在 NH3-CH30H饱和的溶液中， 室温搅拌反应， 反应 完毕后蒸除溶剂， 剩余物通过柱色谱分离纯化得到化合物 s。 6、如权利要求 1或 2或 3中所述的 2' -氟- 4' -取代核苷类似物在制备药物中的应 用， 其特征在于， 将其应用于制备抗 HBV病毒药物或抗 HCV病毒药物或抗 HIV病毒药物。
7、 如权利要求 6中所述的 2' -氟 -4' -取代 -核苷类似物在制备药物中的应用， 其 特征在于， HBV病毒药物为抗乙肝药物， HIV病毒药物为抗艾滋病药物， HCV病毒药物为 抗丙肝药物。
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