TWI660967B - 4'-經取代之核苷反轉錄酶抑制劑 - Google Patents

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Abstract

本發明係針對式I之4'-經取代之核苷衍生物
及其抑制HIV反轉錄酶、預防HIV感染、治療HIV感染，及預防、治療及延遲AIDS及/或ARC發作或進展的用途。

Description

4'-經取代之核苷反轉錄酶抑制劑
命名為人類免疫缺陷病毒(HIV)的反轉錄病毒，尤其稱為1型HIV(HIV-1)及2型HIV(HIV-2)之病毒株，其已與稱為後天免疫缺乏症候群(AIDS)之免疫抑制疾病建立病源學聯繫。HIV血清反應陽性的個體最初無症狀，但通常產生AIDS相關複合症(ARC)，隨後AIDS。受影響之個體呈現嚴重免疫抑制，此使其對虛弱高度敏感且最終致命機會性感染。由宿主細胞複製HIV需要將病毒基因組整合至宿主細胞之DNA中。因為HIV為反轉錄病毒，所以HIV複製週期需要經稱為反轉錄酶(RT)之酶將病毒RNA基因組轉錄成DNA。
反轉錄酶具有三種已知酶促功能：充當RNA依賴性DNA聚合酶、核糖核酸酶及DNA依賴性DNA聚合酶的酶。在其作為RNA依賴性DNA聚合酶的作用中，RT轉錄病毒RNA之單股DNA複本。作為核糖核酸酶，RT破壞初始病毒RNA且使剛剛由初始RNA產生之DNA游離。且作為DNA依賴性DNA聚合酶，RT使用第一DNA股作為模板製造第二互補DNA股。兩個股形成雙股DNA，其藉由整合酶整合至宿主細胞之基因組中。
已知抑制HIV RT之酶促功能的化合物將抑制經感染細胞中之HIV複製。此等化合物適用於預防或治療人類中之HIV感染。在批准用於治療HIV感染及AIDS的化合物中，為核苷RT抑制劑(NRTI)，諸如3'- 疊氮基-3'-去氧胸苷(AZT)、2',3'-雙去氧肌苷(ddI)、2',3'-雙去氧胞苷(ddC)、d4T、3TC、阿巴卡韋(abacavir)、恩曲他濱(emtricitabine)及順丁烯二酸替諾福韋酯(tenofovir disoproxil fumarate)，以及非核苷RT抑制劑(nNRTI)，諸如奈韋拉平(nevirapine)、地拉韋啶(delavirdine)及依法韋侖(efavirenz)。
儘管前述藥物中之每一者有效治療HIV感染及AIDS，但仍需要開發額外HIV抗病毒藥物，包括額外RT抑制劑。特定問題為產生對已知抑制劑耐藥之突變HIV病毒株。使用抗反轉錄病毒治療AIDS通常導致病毒對抑制劑較不敏感。此耐藥性通常為pol基因的反轉錄酶區段中產生突變之結果。繼續使用抗病毒化合物預防HIV感染必然將導致出現新耐藥HIV病毒株。因此，持續需要有效針對突變HIV病毒株的新RT抑制劑。
本發明係針對4'-經取代之核苷衍生物及其抑制HIV反轉錄酶、預防HIV感染、治療HIV感染以及預防、治療及延遲AIDS及/或ARC發作或進展之用途。
本發明係針對具有結構式I之化合物：
或其藥學上可接受之鹽，其中：R為 X為O、S、CH2或CF2；Y為-C≡C-R8或-C≡N；R 1 為-H、-C(O)R6、-C(O)OR6、-C(O)N(R6)2、 或單、二或三磷酸酯之前藥修飾型；R 2 為-H、-C(O)R6a、-C(O)OR6a或-C(O)N(R6a)2；R 3 為-H、-F或-OH；R 4 為-H、-C1-C6烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、-C1-C6鹵烷基、-C3-C7環烷基、5或6員單環雜芳基、9或10員雙環雜芳基、鹵基、-CN、-NO2、-N(RX)2、-NH(C1-C6伸烷基)-(5或6員單環雜芳基)、-NH(C1-C6伸烷基)-(9或10員雙環雜芳基)、芳基、-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b，其中該-C1-C6烷基、該-C2-C6烯基或該-C2-C6炔基中之每一者視情況經鹵基取代；R 5 為-H、-C1-C6烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、-C1-C6鹵烷基、-C3-C7環烷基、5或6員單環雜芳基、9或10員雙環雜芳基、鹵基、-ORX、-CN、-NO2、-N(RX)2、-NH(C1-C6伸烷基)-(5或6員單環雜芳基)、-NH(C1-C6伸烷基)-(9或10員雙環雜芳基)、芳基、-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b，其中 該-C1-C6烷基、該-C2-C6烯基或該-C2-C6炔基中之每一者視情況經鹵基取代；R 6 、R 6a 及R 6b 在每次出現時各自獨立地選自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、-(C1-C3伸烷基)m-(C3-C7環烷基)、-(C1-C3伸烷基)m-(芳基)、-(C1-C3伸烷基)m-(4至7員雜環烷基)、-(C1-C3伸烷基)m-(5或6員單環雜芳基)或-(C1-C3伸烷基)m-(9或10員雙環雜芳基)，其中該-C1-C6烷基、該C3-C7環烷基、該芳基、該4至7員雜環烷基、該-(5或6員單環雜芳基或該9或10員雙環雜芳基中之每一者視情況經R7取代；m為選自0(零)或1之整數；R 7 表示一至五個取代基，其各自獨立地選自-C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵烷基、芳基或5-6員雜芳基；R 8 為-H、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、-C3-C7環烷基、芳基、5或6員單環雜芳基或9或10員雙環雜芳基；R 9 為-H、鹵基、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、-CN、-ORY或-N(RY)2；R X 在每次出現時獨立地選自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、芳基或5或6員單環雜芳基；或當R 4 或R 5 中之一者或兩者為-N(RX)2時，各RX可視情況與其兩者連接之氮結合在一起形成5或6員單環雜芳基或9或10員雙環雜芳基；及R Y 為-H、-C1-C6烷基或-C1-C6鹵烷基；其限制條件為當X為O，Y為-C≡CH或-C≡N，R 1 為-H，R 2 為-H，R 4 為-NH2，R 5 為-H、-F或-OH且R 9 為-F時，則R 3 不為-F。
在本文中稱為式Ia的本發明之一實施例中為式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R為 或；且其中的全部其他變數(R1、R2、X、Y等)如式I中所定義。
在本發明之一實施例中為具有結構式II之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽： 其中全部變數(R1、R2、X、Y等)如式I中所定義。
在本發明之另一實施例中為具有結構式III之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽： 其中全部變數(R1、R2、X、Y等)如式I中所定義。
在本發明之另一實施例中為具有結構式IV之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽： 其中全部變數(R1、R2、X、Y等)如式I中所定義。
在本發明之另一實施例中為具有結構式V之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽： 其中全部變數(R1、R2、X、Y等)如式I中所定義。
在本文中稱為實施例A的本發明之一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中：X為O、S、CH2或CF2；Y為-C≡C-R8或-C≡N；R 1 為-H或 R 2 為-H；R 3 為-H、-F或-OH；R 4 為-H、-C1-C6烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、-C1-C6鹵烷基、-C3-C7環烷基、5或6員單環雜芳基、9或10員雙環雜芳基、鹵基、-CN、-NO2、-N(RX)2、-NH(C1-C6伸烷基)-(5或6員單環雜芳基)、-NH(C1-C6伸烷基)-(9或10員雙環雜芳基)、芳基、-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b，其中該-C1-C6烷基、該-C2-C6烯基或該-C2-C6炔基中之每一者可視情況經鹵基取代；R 5 為-H、-C1-C6烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、-C1-C6鹵烷基、-C3-C7環烷基、5或6員單環雜芳基、9或10員雙環雜芳基、鹵基、-ORX、-CN、-NO2、-N(RX)2、-NH(C1-C6伸烷基)-(5或6員單環雜芳 基)、-NH(C1-C6伸烷基)-(9或10員雙環雜芳基)或芳基，其中該-C1-C6烷基、該-C2-C6烯基或該-C2-C6炔基中之每一者可視情況經鹵基取代；R 8 為-H、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、-C3-C7環烷基、芳基、5或6員單環雜芳基或9或10員雙環雜芳基；R 9 為-H、鹵基、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、-CN、-ORY或-N(RY)2；R x 在每次出現時獨立地選自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、芳基或5或6員單環雜芳基；或當R 4 或R 5 中之一者或兩者為-N(RX)2時，各RX可視情況與其所連接之氮結合在一起形成5或6員單環雜芳基或9或10員雙環雜芳基；及R Y 為-H、-C1-C6烷基或-C1-C6鹵烷基；且例如R6、R6a、R6b、m等所有其他變數如式I中所定義。
在實施例A為式I、Ia、II、III、IV或V化合物或其醫藥學上可接受之鹽的類別中，其中：R 1 為-H； 或R 1 為、或； 或R 1 為。
在本文中稱為實施例B的本發明之一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R 1 為-H、-C(O)R6、-C(O)OR6或-C(O)N(R6)2、
或單、二或三磷酸酯之前藥修飾型；R 2 為-H、-C(O)R6a、-C(O)OR6a或-C(O)N(R6a)2；及R 4 為-H、-C1-C6烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、-C1-C6鹵烷基、-C3-C7環烷基、5或6員單環雜芳基、9或10員雙環雜芳基、鹵基、-CN、-NO2、-N(RX)2、-NH(C1-C6伸烷基)-(5或6員單環雜芳基)、-NH(C1-C6伸烷基)-(9或10員雙環雜芳基)、芳基、-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b，其中該-C1-C6烷基、該-C2-C6烯基或該-C2-C6炔基中之每一者可視情況經鹵基取代；R 5 為-H、-C1-C6烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、-C1-C6鹵烷基、-C3-C7環烷基、5或6員單環雜芳基、9或10員雙環雜芳基、鹵基、-ORX、-CN、-NO2、-N(RX)2、-NH(C1-C6伸烷基)-(5或6員單環雜芳基)、-NH(C1-C6伸烷基)-(9或10員雙環雜芳基)、芳基、-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b，其中該-C1-C6烷基、該-C2-C6烯基或該-C2-C6炔基中之每一者可視情況經鹵基取代；其限制條件為R 1 、R 2 、R 4 或R 5 中之一或多者係如下選擇：R 1 為-C(O)R6、-C(O)OR6、-C(O)N(R6)2或單、二或三磷酸酯之前藥修飾型；及/或R 2 為-C(O)R6a、-C(O)OR6a或-C(O)N(R6a)2；及/或R 4 為-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b；及/或R 5 為-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b； 且例如X、Y、R3、R6、R6a、R6b、m、R7、R8、R9、RX及RY之全部其他變數如式I中所定義。
在稱為實施例C的本發明之另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中：X為O；Y為-C≡CH或-C≡N；R 1 為-H、-C(O)R6、-C(O)OR6、-C(O)N(R6)2、
或單、二或三磷酸酯之前藥修飾型；R 2 為H、-C(O)R6a、-C(O)OR6a或-C(O)N(R6a)2，或尤其為-H；R 3 為-H或-OH；或尤其R 3 為-H；R 4 為-N(RX)2、-NHC(O)OR6b或-NHC(O)N(R6b)2；或尤其R 4 為-N(RX)2；R 5 為-H、鹵基、-C1-C6烷基、-ORX或-N(RX)2；且尤其R 5 為-H、-Cl、-F或-NH2；R 6 、R 6a 及R 6b 在每次出現時各自獨立地選自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、芳基(較佳為苯基)或5或6員單環雜芳基，其中R 6 、R 6a 及R 6b 各自視情況經R 7 取代；R 7 為-C1-C6烷基、芳基(較佳為苯基)或5-6員單環雜芳基；R 8 為-H；R 9 為-H、鹵基、-C1-C3烷基、-C1-C3鹵烷基、-CN、-ORY或-N(RY)2，且尤其為-H、-F、-Cl、-I、-Br或-CH3；R X 在每次出現時獨立地選自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、芳基或5或6員單環雜芳基； 或當R 4 或R 5 中之一者或兩者為-N(RX)2時，各RX可視情況與其兩者連接之氮結合在一起形成5或6員單環雜芳基或9或10員雙環雜芳基；及R Y 為-H、-C1-C6烷基或-C1-C6鹵烷基。
在稱為實施例D的本發明之另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中：X為O；Y為-C≡CH或-C≡N；R 1 為-H、 或單、二或三磷酸酯之前藥修飾型；R 2 為-H；R 3 為-H；R 4 為-NH2；R 5 為-H、-Cl、-F或-NH2；R 8 為-H；及R 9 為-H、-F、-Cl、-I、-Br或-CH3。
在本發明之另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V、或實施例A或B之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中X為O。
在本發明之另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V或實施例A或B之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中Y為-C≡C-R8。在另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例A、B、C或D之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中Y為-C≡CH。
在本發明的另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例 A、B、C或D之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中Y為-C≡N。
在本發明的其他實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例B或C之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R 1 為-H、-C(O)R6、-C(O)OR6、-C(O)N(R6)2或以下之前藥修飾型
在本發明的其他實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例A、B、C或D之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中(a)R 1 為-H；或 (b)R 1 為、或；或 (c)R 1 為。
在本發明的其他實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例B、C或D之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中： (a)R 1 為-H或、或或單、二或三磷酸酯之前藥修飾型； 或(b)R 1 為、或或單、二或三磷酸酯之前藥修飾型； (c)R 1 為或三磷酸酯之前藥修飾型；或(d)R 1 為以下之前藥修飾型：
在本發明的另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例B或C之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1 為-H、-C(O)R6、-C(O)OR6或-C(O)N(R6)2，或單、二或三磷酸酯之前藥修飾型。在其類別中，R 1 為-C(O)R6、-C(O)OR6或-C(O)N(R6)2，或單、二或三磷酸酯之前藥修飾型。
在本發明的其他實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例B或C之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R 2 為-H、-C(O)R6a、-C(O)OR6a或-C(O)N(R6a)2；或R 2 為-C(O)R6a、-C(O)OR6a或-C(O)N(R6a)2；或R 2 為-H。
在本發明的另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例A、B或C之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 3 為-H或-OH。 在另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例A、B或C之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 3 為-H。
在本發明的另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例A或B之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4 為-N(RX)2、-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b；且尤其R 4 為-N(RX)2。更尤其R 4 為-NH2。
在本發明的其他實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例B之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R 5 為-H、鹵基、-C1-C6烷基、-ORX、-N(RX)2、-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b；或R 5 為-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或- NHC(O)R6b；或R 5 為-H、鹵基(較佳為-F或-Cl)、-C1-C6烷基、-ORX或-N(RX)2；或R 5 為-H、-Cl、-F或-NH2。
在本發明的其他實施例中為實施例A或B之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R 5 為-H、鹵基(較佳為-F或-Cl)、-C1-C6烷基、-ORX或-N(RX)2；或R 5 為-H、-Cl、-F或-NH2。
在本發明的另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例B之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 6 、R 6a 及R 6b 在每次出現時各自獨立地選自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、芳基(較佳苯基)或5或6員單環雜芳基。在本發明的另一實施例中為實施例A之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 6b 在每次出現時選自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、芳基(較佳為苯基)，或5或6員單環雜芳基。
在本發明的另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例A或B之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 7 為-C1-C6烷基、芳基(較佳為苯基)或5-6員單環雜芳基。
在本發明的另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例A或B之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 8 為-H。
在本發明的另一實施例中為式I、Ia、II、III、IV或V，或實施例A或B之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 9 為-H、鹵基、-C1-C3烷基、-C1-C3鹵烷基、-CN、-ORY或-N(RY)2；且尤其為-H、-F、-Cl、-I、-Br或-CH3。
本文所述之全部結構式、實施例及其類別包括其中所定義之化合物的醫藥學上可接受之鹽。本文提及式I化合物涵蓋式I、Ia、II、III、IV或V中之每一者，及其全部實施例及類別的化合物。除非另外規 定，否則稱為特定化學式或實施例(例如式I、Ia、II、III、IV或V或其實施例)或任何其他通用結構式之化合物或本文所描述或主張之特定化合物的本發明化合物欲涵蓋在化學式或實施例範圍內的特定化合物，包括其鹽(尤其醫藥學上可接受之鹽)、此類化合物之溶劑合物(包括水合物)以及其溶劑化鹽形式，其中此類形式為可能的。
本發明包括本文所述之各實例及其醫藥學上可接受之鹽。本發明亦涵蓋醫藥組合物，其包含有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之載劑。
如本文所用，術語「烷基」係指具有在指定範圍中之數目的碳原子的單價直鏈或分支鏈、飽和脂族烴基。因此，例如，「C1-6烷基」(或「C1-C6烷基」)係指己基烷基及戊基烷基異構體以及正丁基、異丁基、第二丁基及第三丁基、正丙基及異丙基、乙基及甲基中之任一者。作為另一實例，「C1-4烷基」係指正丁基、異丁基、第二丁基及第三丁基、正丙基及異丙基、乙基及甲基。
術語「烯基」係指含有一個碳-碳雙鍵且具有指定範圍中之數目的碳原子的單價直鏈或分支鏈脂族烴基。因此，例如，「C2-6烯基」(或「C2-C6烯基」)係指己烯基及戊烯基異構體以及1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、異丁烯基、1-丙烯基、2-丙烯基及乙烯基中之全部。
術語「炔基」係指含有一個碳-碳參鍵且具有在指定範圍中之數目的碳原子的單價直鏈或分支鏈脂族烴基。因此，例如，「C2-6炔基」(或「C2-C6炔基」)係指己炔基及戊炔基異構體以及1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-丙炔基、2-丙炔基及乙炔基中之全部。
術語「伸烷基」係指具有指定範圍中之數目的碳原子的任何二價直鏈或分支鏈脂族烴基。因此，例如，「-C1-6伸烷基-」係指C1至C6直鏈或分支鏈伸烷基中之任一者，且「-C1-3伸烷基-」係指C1至C3直鏈或分支鏈伸烷基中之任一者。特定類別之伸烷基包括-(CH2)1-3-、- (CH2)2-3、-(CH2)1-2-及-CH2-、-CH(CH3)-及-C(CH3)2-。
術語「環烷基」係指具有指定範圍中之數目的碳原子的任何單環烷烴。因此，例如，「C3-7環烷基」(或「C3-C7環烷基」)係指環丙基、環丁基、環戊基、環己基及環庚基。所關注的特定類別之式I化合物及其實施例為C3-6環烷基。
術語「鹵素」(或「鹵基」)係指氟、氯、溴及碘(或者稱為氟基、氯基、溴基及碘基)。所關注的特定類別之式I化合物及其實施例各自為氟或氯。
術語「鹵烷基」係指如上文所定義之烷基，其中一或多個氫原子已置換為鹵基(亦即-F、-Cl、-Br及/或-I)。因此，例如，「C1-6鹵烷基」(或「C1-C6鹵烷基」)係指具有一或多個鹵基取代基的如上文所定義之C1至C6直鏈或分支鏈烷基。術語「氟烷基」具有類似含義，但鹵素取代基限於氟。適合氟烷基包括(CH2)0-4CF3系列(亦即三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟正丙基等)。尤其關注之氟烷基為CF3。
術語「C(O)」係指羰基。術語「S(O)2」及「SO2」各自係指磺醯基。術語「S(O)」係指亞碸基。
術語「芳基」(或「C6-C10芳基」)係指(i)苯基，或(ii)9或10員雙環稠合碳環系統，其中至少一個環為芳族環。適合芳基包括例如苯基、萘基、四氫萘基(萘滿基)或茚基。在一特定類別之式I化合物及其實施例中，芳基為苯基或萘基，且更特定言之芳基為苯基。
術語「雜芳基」係指(i)含有1至4個獨立地選自N、O及S之雜原子的5或6員雜芳環，其中各N視情況呈化學上可能程度之氧化物形式，(ii)9或10員雙環稠環系統，其中稠環系統含有1至6個獨立地選自N、O及S之雜原子，其中稠環系統中之各環含有零、一個或一個以上雜原子，且至少一個環為芳族環，且各N視情況呈化學上可能程度之氧 化物形式，且不為芳族環之環中的各S視情況為S(O)或S(O)2。適合5及6員雜芳族環包括例如吡啶基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、三嗪基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、三唑基三唑基(亦即1,2,3-三唑基或1,2,4-三唑基)、四唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基(亦即1,2,3-、1,2,4-、1,2,5-(呋呫基)或1,3,4-異構體)、噁三唑基、噻唑基、異噻唑基及噻二唑基。適合9及10員雜雙環稠環系統包括例如苯并呋喃基、吲哚基、吲唑基、啶基、異苯并呋喃基、苯并哌啶基、苯并異噁唑基、苯并噁唑基、烯基、喹啉基、異喹啉基、啉基、喹唑啉基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、異吲哚基、苯并間二氧 雜環戊烯基(例如苯并-1,3-間二氧雜環戊烯基：)、苯并哌啶基、苯并異噁唑基、苯并噁唑基、烷基、異烷基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、苯并三唑基、二氫吲哚基、二氫異吲哚基、吲唑基、二氫吲哚基、異吲哚啉基、喹喏啉基、喹唑啉基、2,3-二氫苯并呋喃基及2,3-二氫苯并-1,4-二氧雜環己烯基(亦即 )。
應理解適於本發明之特定環及環系統不限於前述段落中所列之環。此等環及環系統僅為代表性的。除非在特定情形中明確規定為相反，否則本文所述之多種環及環系統中之任一者可在任何環原子(亦即任何碳原子或任何雜原子)處連接至化合物的其餘部分，其限制條件為該連接化學性質上允許且產生穩定化合物。
除非另外明確描繪或描述，否則具有連接至環的「浮動」鍵之結構式中描繪的變數(諸如式I中之R9)允許為變數所連接之環中的任何可用碳或氮原子上的取代基(或者R9可為-H)。
當式I或其任何實施例中的部分指示為「視情況經取代」時，意謂式I或其實施例涵蓋在該部分上經指定取代基取代之化合物及在該 部分上不含指定取代基(亦即其中該部分未經取代)之化合物。作為一個實例，當R4為可視情況經鹵基取代之-C1-C6烷基時，則R4可為-C1-C6烷基或-C1-C6鹵烷基。
當任何變數(例如R7、RX、RY)在描繪及描述本發明化合物之任何構成或式I或任何其他化學式中出現一次以上時，其在每次出現時之定義獨立於其每一其他出現時間的定義。另外，取代基及/或變數之組合僅當此類組合產生穩定化合物時才為允許的。
除非明確規定為相反，否則允許在環(例如環烷基、芳基或雜芳基)中任何原子上由指定取代基取代，只要此類環取代在化學性質上允許且產生穩定化合物。
除非明確規定為相反，否則本文引用之全部範圍均為包括性的。舉例而言，描述為含有「1至4個雜原子」的雜芳環意謂該環可含有1、2、3或4個雜原子。亦應理解本文所引用之任何範圍的範疇內包括彼範圍內之全部子範圍。因此，例如，描述為含有「1至4個雜原子」的雜環欲包括以下作為其態樣：含有2至4個雜原子、3或4個雜原子、1至3個雜原子、2或3個雜原子、1或2個雜原子、1個雜原子、2個雜原子、3個雜原子或4個雜原子之雜環。作為另一實例，描述為視情況經R7取代之芳基或雜芳基(其中R7為「1至5個取代基」)欲包括以下作為其態樣：經1至5個取代基、2至5個取代基、3至5個取代基、4至5個取代基、5個取代基、1至4個取代基、2至4個取代基、3至4個取代基、4個取代基、1至3個取代基、2至3個取代基、3個取代基、1至2個取代基、2個取代基及1個取代基取代之芳基或雜芳基。
在實施例B中，「R1、R2、R4或R5中之一或多者如下選擇」如限制條件中所定義包括R1、R2、R4或R5中之僅一者，或如限制條件中所定義包括R1、R2、R4及/或R5中超過一者之任何組合。舉例而言，變數之以下組合可如實施例B之限制條件中所定義：R1及R2；R1及R4； R1及R5；R2及R4；R2及R5；R4及R5；R1、R2及R4；R1、R2及R5；R1、R4及R5；R2、R4及R5；或R1、R2、R4及R5。
如一般技術者所瞭解，某些本發明化合物可以互變異構體形式存在。此等化合物之全部互變異構形式不論個別地經分離或呈混合物形式均在本發明之範疇內。舉例而言，在雜芳環上允許存在-OH取代基且酮-烯醇互變異構為可能的情形中，應理解取代基實際上可全部或部分以側氧基(=O)形式存在。
「穩定」化合物為可製備及分離的化合物且其結構及特性保持或可基本上保持不變持續足以允許將化合物用於本文所述之目的的時間段(例如向個體治療或預防性投與)。本發明化合物限於式I及其實施例涵蓋的穩定化合物。
式I化合物可具有一或多個對掌性(不對稱)中心。本發明涵蓋式I化合物之全部立體異構形式。式I化合物中存在的不對稱中心可全部彼此獨立地具有(R)或(S)組態。當連接至對掌性碳的鍵在本發明之結構式中描繪為直線時或當以不指明對掌性碳之(R)或(S)對掌性的情況下描繪化合物名稱時，應理解各此類對掌性碳之(R)及(S)構型且因此各對映異構體或非對映異構體及其混合物涵蓋於化學式或名稱中。在獲得特定立體異構體或混合物之實例中可鑑別此類立體異構體或其混合物之產生，但不以任何方式限制全部立體異構體及其混合物使其不包括於本發明範圍內。
本發明包括全部可能對映異構體及非對映異構體及兩種或兩種以上立體異構體的全部比率之混合物，例如對映異構體及/或非對映異構體之混合物。因此，對映異構體為本發明之主題，為呈左旋及右旋對映體之對映異構純形式、外消旋物形式及兩種對映異構體的全部比率之混合物形式。在順/反異構的情形中，本發明包括順形式及反形式兩者以及此等形式的全部比率之混合物。需要時，可以藉由慣用 方法(例如藉由層析法或結晶)分離混合物、藉由使用立體化學性均勻的起始物質合成或藉由立體選擇性合成來進行個別立體異構體之製備。可視情況在分離立體異構體之前進行衍生作用。可在式I化合物合成期間以中間步驟進行或可對最終外消旋產物進行立體異構體之混合物的分離。絕對立體化學可藉由衍生之結晶產物或結晶中間物的X-射線結晶學(必要時)使用含有已知組態之立體對稱中心之試劑加以確定。或者，可藉由振動圓二色性(VCD)光譜學分析測定絕對立體化學。本發明包括全部此類異構體以及此類外消旋物、對映異構體、非對映異構體及互變異構體及其混合物的鹽、溶劑合物(其包括水合物)及溶劑化鹽。
式I化合物中的原子可展現其天然同位素豐度，或一或多種原子可人工富集原子數相同但原子質量或質量數與自然界中主要存在之原子質量或質量數不同的特定同位素中。本發明欲包括通式I之化合物的全部適合同位素變體。舉例而言，氫(H)之不同同位素形式包括氕(1H)及氘(2H)。氕為自然界中存在之主要氫同位素。增濃氘可獲得某些治療優勢，諸如增加活體內半衰期或減少劑量需求，或可提供適用作表徵生物樣品之標準物的化合物。通式I範圍內之同位素增濃化合物無需過度實驗即可藉由熟習此項技術者熟知的習知技術或藉由與本文之流程及實例中所述類似的製程使用適當同位素增濃試劑及/或中間物來製備。
化合物可呈醫藥學上可接受之鹽的形式投與。術語「醫藥學上可接受之鹽」係指生物或其他方面沒有不合需要之鹽(例如對其接受者既無毒性，其他方面又無害)。
當式I化合物含有一或多個酸性或鹼性基團時，本發明亦包括相應醫藥學上可接受之鹽。因此，含有酸性基團(例如-COOH或酚基)的式I化合物可根據本發明以例如(但不限於)鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽或銨 鹽形式使用。此類鹽之實例包括(但不限於)鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽或與氨或有機胺(諸如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或胺基酸)之鹽。含有一或多個鹼性基團(亦即可質子化之基團)的式I化合物可根據本發明以其與無機或有機酸的酸加成鹽形式使用，例如(但不限於)與以下之鹽：鹽酸、溴化氫、磷酸、硫酸、硝酸、苯磺酸、甲烷磺酸、對甲苯磺酸、萘二磺酸、乙二酸、乙酸、三氟乙酸、酒石酸、乳酸、水楊酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、特戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、丁二酸、庚二酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、蘋果酸、胺基磺酸、苯基丙酸、葡萄糖酸、抗壞血酸、異菸酸、檸檬酸、己二酸等。若式I化合物的分子中同時含有酸性及鹼性基團，則除了所提及之鹽形式外，本發明亦包括內鹽或甜菜鹼(兩性離子)。可藉由熟習此項技術者已知的慣用方法，例如藉由與有機或無機酸或鹼在溶劑或分散劑中組合，或藉由與其他鹽陰離子交換或陽離子交換，自式I化合物獲得鹽。本發明亦包括式I化合物的全部鹽，其由於低生理學相容性而不適於直接用於藥劑中，但其可例如用作化學反應之中間物或用於製備醫藥學上可接受之鹽。
本發明的另一實施例為式I化合物，其中化合物或其鹽為實質上純形式。如本文所用，「實質上純」意謂適合地至少約60重量%，通常至少約70重量%，較佳至少約80重量%，更佳至少約90重量%(例如約90重量%至約99重量%)，甚至更佳至少約95重量%(例如約95重量%至約99重量%，或約98重量%至100重量%)，且最佳至少約99重量%(例如100重量%)含有式I化合物或其鹽的產物(例如自反應混合物分離獲得化合物或鹽之產物)組成化合物或鹽。化合物及鹽之純度水準可使用標準分析方法(諸如薄層層析法、凝膠電泳、高效液相層析及/或質譜)測定。若採用一種以上分析方法且該等方法以實驗方式提供所測定純度水準的顯著差異，則以提供最高純度水準之方法為準。 100%純度之化合物或鹽為如標準分析方法所測定不含可偵測雜質之化合物或鹽。關於具有一或多個不對稱中心且可以立體異構體之混合物形式存在的本發明化合物，實質上純化合物可為立體異構體的實質上純混合物或為實質上純個別非對映異構體或對映異構體。
此外，本發明化合物可以非晶形式及/或一或多種結晶形式存在，且因而式I化合物的全部非晶形及結晶形式及其混合物欲包括於本發明之範疇內。此外，本發明的一些化合物可與水(亦即水合物)或常見有機溶劑形成溶劑合物。本發明化合物之此類溶劑合物及水合物(尤其醫藥學上可接受之溶劑合物及水合物)同樣與非溶劑化及無水形式一起涵蓋於本發明範疇內。
應理解例如R1為-H、-C(O)R6、-C(O)OR6、-C(O)N(R6)2或單、二或三磷酸酯之前藥修飾型的式I化合物(或其任何實施例及其醫藥學上可接受之鹽)可藉由一或多種機制(例如酶催化化學反應)胞內/活體內轉化成相應核苷5'三磷酸酯(亦即其中R1為-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2)。儘管不希望受任何特定理論束縛，但核苷5'三磷酸酯一般理解為負責抑制HIV RT酶及向個體投與式I化合物後產生抗病毒活性。
因此，本發明化合物之前藥涵蓋於本文中。前藥之論述提供於T.Higuchi及V.Stella,Pro-drugs as Novel Delivery Systems(1987)14 of the A.C.S.Symposium Series，及Bioreversible Carriers in Drug Design,(1987)Edward B.Roche編，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press中。本文之術語「前藥」意謂化合物(例如藥物前驅物)可呈醫藥學上可接受之鹽形式，其可胞內/活體內轉換獲得為HIV反轉錄酶抑制劑的4'-經取代之核苷衍生物。核苷5'三磷酸酯為4'-經取代之核苷衍生物的實例。活體內轉換可藉由多種機制進行，例如酶催化化學反應、代謝化學反應及/或自發化學反應(例如溶 劑分解)，諸如藉由在血液中水解。本發明涵蓋由於胞內/活體內轉化而轉化成為HIV反轉錄酶抑制劑的式I化合物之4'-經取代之核苷衍生物的任何前藥。舉例而言，式I之4'-經取代之核苷衍生物包括(但不限於)式I化合物，其中：a)R1為-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2；b)R1為-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2且R2為-H；及/或c)R1為-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2，R2為-H，R4為-NH2且R5為-H或-NH2。
式I化合物之前藥相較於化合物本身可呈現提高之溶解度、吸收及/或親脂性，藉此產生增加之生物可用性及功效。當化合物含有例如羥基時，前藥可為羥基之衍生物，諸如酯(-OC(O)R)、碳酸酯(-OC(O)OR)、磷酸酯(-O-P(=O)(OH)2)、醚(-OR)或單磷酸酯前藥，諸如胺基磷酸酯(可活體內轉化成相應核苷單磷酸酯)。
舉例而言，若式I化合物含有醇官能基，則前藥可藉由用諸如以下之基團置換醇基的一或多個氫原子形成：(C1-C6)烷醯氧基甲基、1-((C1-C6)烷醯氧基)乙基、1-甲基-1-((C1-C6)烷醯氧基)乙基、(C1-C6)烷氧羰基氧基甲基、N-(C1-C6)烷氧羰基胺基甲基、丁二醯基、(C1-C6)烷醯基、α-胺基(C1-C4)烷基、α-胺基(C1-C4)伸烷基-芳基、芳基醯基及α-胺基醯基，或α-胺基醯基-α-胺基醯基，其中各α-胺基醯基獨立地選自天然存在之L-胺基酸，或糖基(移除半縮醛形式之碳水化合物的羥基產生之基團)。
如本文所用的術語「單、二或三磷酸酯之前藥修飾型」包括(但不限於)5'-醇-衍生之前藥，諸如-P(O)(-O-C1-C6烷基)2；-P(O)(-NH-(α-胺基醯基))(-O-芳基)，稱為「McGuigan」型前藥；-P(O)(-O-(C1-C6伸烷基)-S-醯基)(-NH-芳基烷基)；S-醯基-2-硫基乙基(SATE)前藥；在兩個核糖羥基之間形成橋之環磷酸酯，諸如： 其中環磷酸酯在3'-OH基團與5'-OH基團之間形成橋；及美國專利第7,879,815號；國際公開案第WO2005/003047號、第WO2008/082602號、第WO2010/0081628號、第WO2010/075517號及第WO2010/075549號；Mehellou,Chem.Med.Chem.,5：1841-1842(2005)；Bobeck等人，Antiviral Therapy 15：935-950(2010)；Furman等人，Future Medicinal Chemistry,1：1429-1452(2009)；及Erion,Microsomes and Drug Oxidations,Proceedings of the International Symposium,17th,Saratoga Springs,NY,United States,2008年7月6-10日，2008,7-12(2008)中所述者。
若4'-經取代之衍生物併入胺官能基，則前藥可藉由用諸如以下之基團置換胺基中之氫原子形成：R-羰基-、RO-羰基-、NRR'-羰基-，其中R及R'各自獨立地為(C1-C10)烷基、(C3-C7)環烷基、苯甲基、天然α-胺基醯基、-C(OH)C(O)OY1，其中Y1為H、(C1-C6)烷基或苯甲基、-C(OY2)Y3，其中Y2為(C1-C4)烷基且Y3為(C1-C6)烷基；羧基(C1-C6)烷基；胺基(C1-C4)烷基或單-N-或二-N,N-(C1-C6)烷基胺基烷基；-C(Y4)Y5，其中Y4為H或甲基且Y5為單-N-或二-N,N-(C1-C6)烷基胺基(N-嗎啉基)；哌啶-1-基或吡咯啶-1-基及其類似基團。
本發明化合物的醫藥學上可接受之酯包括以下群組：(1)藉由酯化羥基化合物之羥基獲得的羧酸酯，其中酯基的羧酸部分的非羰基部分係選自直鏈或分支鏈烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、第三丁基、第二丁基或正丁基)、烷氧基烷基(例如甲氧基甲基)、芳基(例如苯甲基)、芳氧基烷基(例如苯氧基甲基)、芳基(例如視情況經例如鹵素、C1-4烷基、-O-(C1-4烷基)或胺基取代之苯基)；(2)磺酸酯，諸 如烷基-或芳烷基磺醯基(例如甲烷磺醯基)；(3)胺基酸酯(例如L-纈胺醯基或L-異白胺醯基)；(4)膦酸酯及(5)單、二或三磷酸酯。磷酸酯可進一步藉由例如C1-20醇或其反應性衍生物或2,3-二(C6-24)醯基甘油酯化。
若4'-經取代之去氧核糖衍生物含有羧酸官能基，則前藥可包含藉由用諸如以下之基團置換酸基之氫原子形成的酯：(C1-C8)烷基、(C2-C12)烷醯氧基甲基、具有4至9個碳原子的1-(烷醯氧基)乙基、具有5至10個碳原子的1-甲基-1-(烷醯氧基)-乙基、具有3至6個碳原子的烷氧羰基氧基甲基、具有4至7個碳原子的1-(烷氧羰基氧基)乙基、具有5至8個碳原子的1-甲基-1-(烷氧羰基氧基)乙基、具有3至9個碳原子的N-(烷氧羰基)胺基甲基、具有4至10個碳原子的1-(N-(烷氧羰基)胺基)乙基、3-酞基、4-巴豆酸內酯基、γ-丁內酯-4-基、二-N,N-(C1-C2)烷基胺基(C2-C3)烷基(諸如β-二甲基胺基乙基)、羰基-(C1-C2)烷基、N,N-二(C1-C2)烷基胺甲醯基-(C1-C2)烷基及N-哌啶基-、N-吡咯啶基-或(N-嗎啉基)(C2-C3)烷基及其類似基團。
其他實例包括以下：當式I化合物含有羧基時，前藥可為酯或醯胺，且當式I化合物含有一級胺基或可衍生之另一適合氮時，前藥可為醯胺、胺基甲酸酯、脲、亞胺或曼尼希鹼(Mannich base)。選擇及製備適合前藥衍生物之習知程序描述於例如Design of Prodrugs,H.Bundgaard,Elsevier編，1985；J.J.Hale等人，J.Med.Chem.2000，第43卷，第1234-1241頁；C.S.Larsen及J.Ostergaard,「Design and application of prodrugs」in：Textbook of Drug Design and Discovery，第3版，C.S.Larsen編，2002，第410-458頁；及Beaumont等人，Current Drug Metabolism 2003，第4卷，第461-458頁；其各自之揭示內容以全文引用的方式併入本文中。
因此，通用結構式、實施例範圍內之化合物及本文所描述及主 張之特定化合物涵蓋其鹽、全部可能立體異構體及互變異構體、物理形式(例如非晶形及結晶形式)、溶劑合物及水合物形式及此等形式之任何組合，以及其鹽、包括該前藥之立體異構體、互變異構體、溶劑合物、水合物、鹽及/或物理形式的任何組合的其前藥形式，其中除非另外規定，否則此類形式為可能的。
本發明亦涵蓋用於為有需要之個體治療或預防HIV感染、抑制HIV反轉錄酶、治療、預防或延遲體內的AIDS發作之方法，其包含向該個體投與有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明亦涵蓋本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於製備用以為有需要之個體治療或預防HIV感染、用於抑制HIV反轉錄酶或用於治療、預防或延遲體內的AIDS發作之藥劑。
本發明亦涵蓋一種醫藥組合物，其包含有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之載劑，且進一步包含有效量之額外抗HIV劑，該藥劑選自由HIV抗病毒劑、免疫調節劑及抗感染劑組成之群。在此實施例內，抗HIV劑為選自由以下組成之群的抗病毒劑：HIV蛋白酶抑制劑、HIV反轉錄酶抑制劑、HIV整合酶抑制劑、HIV融合抑制劑、HIV進入抑制劑及HIV成熟抑制劑。
式Ia、II、III、IV或V化合物各自形成包括於式I中的化合物子組。上文或其後稱為式I化合物的任何描述亦適用於式Ia、II、III、IV或V中每一者及其各實施例之化合物。
本發明之其他實施例包括以下：
(a) 一種醫藥組合物，其包含有效量之如上文所定義的式I化合物或其前藥或醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之載劑。
(b) 一種醫藥組合物，其包含藉由組合(例如混合)有效量之如上文所定義的式I化合物或其前藥或醫藥學上可接受之鹽與醫藥學上可接受之載劑製備的產物。
(c) (a)或(b)之醫藥組合物，其進一步包含有效量的一或多種選自由HIV抗病毒劑、免疫調節劑及抗感染劑組成之群的抗HIV劑。
(d) (c)之醫藥組合物，其中抗HIV劑係選自選自由以下組成之群的抗病毒中之一或多者：HIV蛋白酶抑制劑、核苷HIV反轉錄酶抑制劑、非核苷HIV反轉錄酶抑制劑、HIV整合酶抑制劑、HIV融合抑制劑、HIV進入抑制劑及HIV成熟抑制劑。
(e) 一種組合，其為(i)如上文所定義的式I化合物或其前藥或醫藥學上可接受之鹽，及(ii)選自由HIV抗病毒劑、免疫調節劑及抗感染劑組成之群的抗HIV劑；其中化合物及抗HIV劑各自以使組合有效抑制HIV反轉錄酶、用於治療或預防HIV感染或用於治療、預防或延遲AIDS發作或進展的量採用。
(f) (e)之組合，其中抗HIV劑為選自由以下組成之群的抗病毒：HIV蛋白酶抑制劑、核苷HIV反轉錄酶抑制劑、非核苷HIV反轉錄酶抑制劑、HIV整合酶抑制劑、HIV融合抑制劑、HIV進入抑制劑及HIV成熟抑制劑。
(g) 一種用於抑制有需要之個體體內HIV反轉錄酶之方法，其包含向該個體投與有效量之式I化合物或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
(h) 一種用於預防或治療有需要之個體體內HIV(例如HIV-1)感染之方法，其包含向該個體投與有效量之式I化合物或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
(i) (h)之方法，其中式I化合物與有效量之至少一種選自由以下組成之群的其他HIV抗病毒劑組合投與：HIV蛋白酶抑制劑、HIV整合酶抑制劑、非核苷HIV反轉錄酶抑制劑、核苷HIV反轉錄酶抑制劑、HIV融合抑制劑、HIV進入抑制劑及HIV成熟抑制劑。
(j) 一種用於預防、治療或延遲有需要之個體體內的AIDS發作 或進展之方法，其包含向該個體投與有效量之式I化合物或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
(k) (j)之方法，其中化合物與有效量之至少一種選自由以下組成之群的其他HIV抗病毒劑組合投與：HIV蛋白酶抑制劑、HIV整合酶抑制劑、非核苷HIV反轉錄酶抑制劑、核苷HIV反轉錄酶抑制劑、HIV融合抑制劑、HIV進入抑制劑及HIV成熟抑制劑。
(l) 一種用於抑制有需要之個體體內的HIV反轉錄酶之方法，其包含向該個體投與(a)、(b)、(c)或(d)之醫藥組合物或(e)或(f)的組合。
(m) 一種用於預防或治療有需要之個體體內的HIV(例如HIV-1)感染之方法，其包含向該個體投與(a)、(b)、(c)或(d)之醫藥組合物或(e)或(f)之組合。
(n) 一種用於預防、治療或延遲有需要之個體體內的AIDS發作或進展之方法，其包含向該個體投與(a)、(b)、(c)或(d)之醫藥組合物或(e)或(f)中組合。
本發明亦包括式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，(i)用於以下，(ii)用作用以以下之藥劑或(iii)用於製備用以以下之藥劑：(a)療法(例如人體之療法)，(b)藥品，(c)抑制HIV反轉錄酶，(d)治療或預防HIV感染，或(e)治療、預防或延遲AIDS發作或進展。在此等用途中，本發明化合物可視情況與一或多種選自HIV抗病毒劑、抗感染劑及免疫調節劑的抗HIV劑組合使用。
本發明之其他實施例包括上文(a)至(n)中所述之醫藥組合物、組合及方法以及前述段落中所述之用途(i)(a)-(e)至(iii)(a)-(e)，其中所用本發明化合物為具有上文所述之實施例、態樣、類別、子類或特徵中之一者的化合物。在全部此等實施例等中，化合物可視情況以前藥或醫藥學上可接受之鹽或前藥的醫藥學上可接受之鹽形式使用。
本發明的其他實施例包括前述段落中所述的醫藥組合物、組合、方法及用途中之每一者，其中採用的本發明化合物或其鹽實質上純。關於包含式I化合物或其前藥或鹽以及醫藥學上可接受之載劑及視情況選用的一或多種賦形劑的醫藥組合物，應理解術語「實質上純」關於式I化合物或其前藥及/或鹽本身。
本發明之其他實施例包括上文(a)-(n)中所述的醫藥組合物、組合及方法以及上文所述用途(i)(a)-(e)至(iii)(a)-(e)，其中所關注HIV為HIV-1。因此，例如，在醫藥組合物(d)中，式I化合物以有效針對HIV-1之量採用，且抗HIV劑為選自由以下組成之群的HIV-1抗病毒劑：HIV-1蛋白酶抑制劑、HIV-1反轉錄酶抑制劑、HIV-1整合酶抑制劑、HIV-1融合抑制劑及HIV-1進入抑制劑。式I化合物亦可為針對HIV-2之適用藥劑。
關於式I化合物的術語「投與(administration)」及其變體(例如「投與(administering)」化合物)意謂向需要治療或預防之個別提供化合物且包括自身投與及由另一個人向患者投與。當化合物或其前藥與一或多種其他活性劑(例如適用於治療或預防HIV感染或AIDS的抗病毒劑)組合提供時，「投與」及其變體各自理解為同時或在不同時間提供包括提供化合物或前藥及其他藥劑。當組合之藥劑同時投與時，其可在單個組合物中一起投與或其可各別地投與。
如本文所用，術語「組合物」欲涵蓋包含指定成分之產物以及由指定成分組合產生的任何產物。適於納入醫藥組合物中之成分為醫藥學上可接受之成分，此意謂該等成分必須彼此相容且對其受體無害。「醫藥學上可接受」意謂醫藥組合物之成分必須彼此相容且對其接受者無害。
如本文所用之術語「個體」係指動物，較佳哺乳動物，最佳人類，其已為治療、觀測或實驗的目標。
如本文所用之術語「有效量」意謂足以抑制HIV反轉錄酶、抑制HIV複製、在投與後發揮預防性作用及/或發揮治療作用的量。「有效量」之一個實施例為「治療有效量」，其為有效抑制HIV反轉錄酶、抑制HIV複製(前述中之任一者亦可在本文中稱為「抑制有效量」)、治療HIV感染、治療AIDS、延遲AIDS發作及/或減緩患者之AIDS進展的化合物之量。「有效量」之另一實施例為「預防有效量」，其為有效預防HIV感染或預防患者之AIDS的化合物之量。應理解有效量可同時為治療有效量(例如用於治療HIV感染)及預防有效量(例如用於預防或降低產生AIDS之風險)。當式I化合物以鹽形式投與時，化合物之量的提及為化合物的游離形式(亦即非鹽形式)。
在本發明之方法(亦即抑制HIV反轉錄酶、治療或預防HIV感染、抑制HIV複製、治療或預防AIDS、延遲AIDS發作或延遲或減緩AIDS進展)中，視情況呈鹽形式之本發明化合物可藉由使活性劑與藥劑作用部位接觸的方式投與。其可作為個別治療劑或與治療劑組合的形式藉由適於與藥劑結合使用的習知方式投與。其可以單獨投與，但通常與基於所選投與途徑和標準藥學實踐選擇的藥學載劑一起投與。本發明化合物可例如以含有有效量之化合物及習知無毒醫藥學上可接受之載劑、佐劑及媒劑的醫藥組合物的單位劑量形式經口、非經腸(包括皮下注射、靜脈內、肌肉內、胸骨內注射或輸注技術)、吸入噴霧或經直腸，該等投與方法中之任一者可以單次劑量每天一次或以較低頻率(諸如每週一次或每月一次)提供，劑量範圍及量在下文中描述。適於經口投與之液體製劑(例如懸浮液、糖漿、酏劑及其類似物)可根據此項技術中已知的技術製備，且可採用任何常見培養基，諸如水、二醇、油、醇及其類似物。適於經口投與之固體製劑(例如粉末、丸劑、膠囊及錠劑)可根據此項技術中已知的技術製備，且可採用諸如澱粉、糖、高嶺土、潤滑劑、黏合劑、崩解劑及其類似物的固體賦形 劑。非經腸組合物可根據此項技術中已知的技術製備且通常採用作為載劑的無菌水及視情況選用的其他成分，諸如溶解助劑。可注射溶液可根據此項技術中已知之方法製備，其中載劑包含生理食鹽水溶液、葡萄糖溶液或含有生理食鹽水與葡萄糖之混合物的溶液。適合用於製備用於本發明之醫藥組合物的方法以及適合用於該等組合物之成分的進一步描述提供於Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，A.R.Gennaro編，Mack Publishing Co.,1990以及Remington-The Science and Practice of Pharmacy，第22版，Pharmaceutical Press and Philadelphia College of Pharmacy at University of the Sciences出版，2012,ISBN 978 0 85711-062-6及先前版本。
導致藥物過飽和及/或快速溶解的式I描述的化合物之調配可用於促進口服藥物吸收。引起藥物過飽和及/或快速溶解的調配方法包括(但不限於)奈米顆粒系統、非晶形系統、固溶體、固態分散體及脂質系統。用於其製備的此類調配方法及技術在所屬領域中熟知。舉例而言，固態分散體可使用綜述(例如A.T.M.Serajuddin,J Pharm Sci,88：10，第1058-1066頁(1999))中所述的賦形劑及製程製備。基於損耗及直接合成的奈米顆粒系統亦描述於綜述中，諸如Wu等人(F.Kesisoglou,S.Panmai,Y.Wu,Advanced Drug Delivery Reviews,59：7第631-644頁(2007))。
式I化合物及其醫藥學上可接受之鹽為HIV反轉錄酶抑制劑。該等化合物適用於活體外及活體內抑制HIV反轉錄酶及抑制HIV複製。更特定言之，式I化合物抑制HIV-1反轉錄酶的聚合酶功能。下文RT聚合酶分析法中所述的分析法中本發明之實例的化合物之測試說明本發明化合物抑制HIV-1反轉錄酶之RNA依賴性DNA聚合酶活性的能力。式I化合物亦可為針對HIV-2之適用藥劑。
式I化合物可以單次劑量或分次劑量，以每天0.001至1000毫克/公 斤哺乳動物(例如人類)體重的劑量範圍投與，或根據需要以其他時間間隔投與。劑量範圍的一個實例為以單次劑量或分次劑量經口或經其他途徑，每天0.01至500毫克/公斤體重，或根據需要以其他時間間隔投與。劑量範圍的另一實例為以單次劑量或分次劑量經口或經其他投與途徑，每天0.1至100毫克/公斤體重投與，或根據需要以其他時間間隔投與。對於經口(例如錠劑或膠囊)或其他投與途徑，可提供含有1.0至500毫克活性成分，尤其1、5、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400及500毫克活性成分，根據症狀調整的待治療患者劑量。對於任何特定患者之特定劑量水準及劑量頻率可變化且將取決於多種因素，包括所用特定化合物之活性、該化合物之代謝穩定性及作用時長長度、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、投與模式及時間、排泄速率、藥物組合、特定病狀之嚴重程度及所治療之主體。在一些情況下，視化合物功效或個體反應而定，其可能必須向上或向下偏離既定劑量。本發明化合物可以單次劑量每天一次投與或以較低頻率(諸如每週一次或每月一次)以例如(但不限於)上文指出之劑量範圍及量投與。此外，化合物可針對立即釋放或修飾釋放(諸如延長或控制釋放)調配。
如上所述，本發明亦針對式I化合物與一或多種抗HIV劑之用途。「抗HIV劑」為直接或間接有效抑制HIV、治療或預防HIV感染及/或治療、預防或延遲AIDS之發作或進展的任何藥劑。應瞭解，抗HIV劑有效治療、預防或延遲HIV感染或AIDS及/或由其產生或與其相關之疾病或病狀的發作或進展。舉例而言，無論在暴露前及/或暴露後之時間，本發明化合物均可與有效量之一或多種選自抗HIV抗病毒劑、免疫調節劑、抗感染劑或適用於治療HIV感染或AIDS之疫苗的一或多種抗HIV劑組合有效投與。適合與本發明化合物組合使用之HIV抗病毒劑包括例如下表1中所列出者。
EI=進入抑制劑；FI=融合抑制劑；InI=整合酶抑制劑；PI=蛋白酶抑制劑；nRTI=核苷反轉錄酶抑制劑；nnRTI=非核苷反轉錄酶抑制劑。表中所列之一些藥物以鹽形式使用，例如硫酸阿巴卡韋、甲磺酸地拉韋啶、硫酸茚地那韋、硫酸阿紮那韋、甲磺酸奈非那韋、甲磺酸沙喹那韋。
應理解，本發明化合物與抗HIV劑之組合的範疇不限於表A中列出之HIV抗病毒劑，但在原則上包括與可用於治療或預防AIDS之任何醫藥組合物之任何組合。HIV抗病毒劑及其他藥劑通常將以此等組合以此項技術中報導的其習知劑量範圍及方案採用，包括例如Physicians' Desk Reference,Thomson PDR,Thomson PDR，第57版(2003)，第58版(2004)或第59版(2005)以及the current Physicians' Desk Reference(第68版).(2014),Montvale,NJ：PDR Network中所述之劑量。本發明化合物在此等組合中之劑量範圍可與上述劑量範圍相同。
本發明化合物亦適用於製備及執行針對抗病毒化合物之篩選分析法。舉例而言，本發明化合物適用於分離酶突變體，其為較強力抗病毒化合物之優良篩選工具。此外，本發明化合物適用於例如藉由競技抑制確定或測定其他抗病毒劑與HIV反轉錄酶之結合位點。
本文所採用之縮寫及字首語包括以下：
本發明化合物可藉由有機化學方法技術中熟知之方法製備。參見例如J.March,『Advanced Organic Chemistry』第6版，John Wiley and Sons。在合成工序期間，可能必須及/或需要保護任何所涉及分子上的敏感或反應性基團。此藉助於習知保護基實現，諸如T.W.Greene及P.G.M.Wutts『Protective Groups in Organic Synthesis』第4版，John Wiley and Sons中所述者。保護基可視情況在適宜後續階段使用此項技術中熟知之方法移除。
本發明化合物容易根據以下反應流程及實例或其修正，使用容易獲得之起始物質、試劑及習知合成程序製備。在此等反應中，亦可使用本身為此項技術中之一般技術者已知但未更詳細地提及之變體。此外，根據以下反應流程及實例，製備本發明化合物之其他方法對於 本領域的普通技術人員將顯而易知。除非另外指明，否則全部變數均如上文所定義。
乳醇1-1可使用甲醇HCl轉化成1-2。中間物1-2之羥基接著可經保護，隨後使用HCl氣體將1'-OMe轉化成1'-Cl獲得1-4。中間物1-4可與不同經取代之雜環(1-5)在適合鹼存在下反應獲得中間物1-6。中間物1-6之6-氯可使用適合化學方法轉化為R4，隨後對羥基脫除保護基獲得中間物1-7。中間物1-7可經不同保護獲得1-8。氧化1-8獲得醛1-9，其接著可與甲醛發生醇醛反應，隨後還原獲得1-10。選擇性氧化α面羥基，隨後將醛轉化為炔烴獲得1-11。3'-醇之最終脫除保護基獲得目標物1-13。
流程2：
內酯2-1可用不同雜環之陰離子處理獲得2-2類型之中間物。中間物2-2可藉由在矽烷存在下用酸處理轉化成2-3。對2-3脫除保護基，隨後對3'及5'羥基進行不同保護提供2-5。將2-5去氧提供2-6，其可接著脫除保護基，隨後經不同保護獲得2-8。將末端醇氧化成2-9，隨後與甲醛發生醇醛反應且還原提供2-10。選擇性氧化α表面醇提供醛2-11，其可接著轉化成乙炔2-12。整體脫除保護基獲得2-13。
流程3：
3-1型中間物(使用流程1中之方法合成)轉化成3-2型肟。將肟脫水產生化合物3-3，其可進行最終脫除保護基獲得目標物3-4。
4-1型中間物(使用流程2中之方法合成)轉化成4-2型肟。將肟脫水產生化合物4-3，其可進行最終脫除保護基獲得目標物4-4。
5-1型中間物(使用前述流程之方法合成)可使用文獻已知方法轉化成三磷酸酯5-2。
6-1型中間物(使用前述流程之方法合成)可使用文獻已知方法轉化成三磷酸酯6-2。
通用化學程序：全部試劑購自常見商業來源或根據文獻程序以市售試劑為起始物質合成。市售試劑未經進一步純化即可使用。除非另外指示，否則百分比為鑒於組分及組合物總重量的重量百分比，溫度以℃為單位或為環境溫度，且壓力為常壓或接近常壓。在Varian VNMR系統400(400MHz)上獲得1H NMR光譜，且以自Me4Si向低磁場之Ppm報導，同時在括號中指示質子數、多峰性及偶合常數(赫茲)。若提出LC/MS資料，則使用Agilent 6110A MSD或Applied Biosystems API-100質譜儀進行分析。親本離子已給定。在裝配有Waters Xselect.C18管柱之Waters製備型HPLC系統上，通常使用水/乙腈(含有0.075%三氟乙酸)的梯度溶離進行製備型HPLC。使用來自Biotage,Inc.之預裝填正相二氧化矽或來自Fisher Scientific之本體二氧化矽進行急驟管柱層析。除非另外指示，否則使用石油醚100%至100%乙酸乙酯的石油醚/乙酸乙酯之梯度溶離進行管柱層析。實例中之術語「室溫」係指通常在約20℃至約26℃範圍內的環境溫度。
中間物A (2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-氯-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(中間物A)
步驟1：合成(2R,3S)-2-(羥基甲基)-5-甲氧基四氫呋喃-3-醇
在氬氣氛圍下，在0℃下，經5分鐘在攪拌同時向(4S,5R)-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2,4-二醇(7.0g，52.2mmol)於無水甲醇(105mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加乙醯氯(0.614g，7.83mmol)，且在0℃下攪拌 所得混合物3小時。接著添加固體碳酸氫鈉以中和反應混合物。藉由過濾收集有機相，接著減壓濃縮獲得呈糊漿狀之殘餘物。藉由矽膠(100-200目)層析法使用二氯甲烷/甲醇(20/1)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 4.98-5.04(m,1H),4.21-4.23(m,0.4H),4.07-4.09(m,0.6H),3.83-3.89(m,1H),3.50-3.66(m,2H),3.27-3.32(m,3H),2.23-2.29(m,0.6H),2.08-2.12(m,0.4H),1.98-2.03(m,0.4H),1.77-1.83(m,0.6H)。
步驟2：合成(2R,3S)-4-甲基苯甲酸5-甲氧基-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
在氬氣氛圍下，在0℃下，經15分鐘之時段向(2R,3S)-2-(羥基甲基)-5-甲氧基四氫呋喃-3-醇(6.5g，43.9mmol)於無水吡啶(45mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加4-甲基苯甲醯氯(20.35g，132mmol)。將所得混合物逐漸升溫至30℃，接著攪拌16小時。減壓濃縮所得溶液。所得殘餘物用乙酸乙酯(400mL)稀釋，接著用鹽酸水溶液(1mol/L，2×100mL)、碳酸氫鈉飽和水溶液(2×100mL)及鹽水(100mL)分別洗滌。收集有機相，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由矽膠(100-200目)層析法使用石油醚/乙酸乙酯(20：1)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 7.90-7.99(m,4H),7.20-7.26(m,4H),5.58-5.61(m,0.47H),5.39-5.42(m,0.55H),5.18-5.24(m,1H),4.46-4.65(m,3H),3.43(s,1.61H),3.36(s,1.33H),2.52-2.60(m,1H),2.17-2.43(m,7H)。
步驟3：(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-氯-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(中間物A)
向100mL三頸圓底燒瓶中的(2R,3S)-4-甲基苯甲酸5-甲氧基-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(4.0g，10.41mmol)於無水乙醚(20mL)中之經攪拌溶液中引入HCl(g)。在0℃，產物經40分 鐘之時段逐漸沈澱出來。過濾固體且用無水乙醚(3×20mL)洗滌，在高度真空下乾燥2小時獲得呈固體狀之中間物A。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 7.96(d,J=9.0Hz,2H),7.90(d,J=8.1Hz,2H),7.19-7.27(m,4H),6.47(d,J=5.1Hz,1H),5.54-5.58(m,1H),4.85(dd,J=3.3Hz,J=7.2Hz,1H),4.68(dd,J=3.3Hz,J=12.0Hz,1H),4.59(dd,J=4.2Hz,J=12.0Hz,1H),2.83-2.92(m,1H),2.74(d,J=15.0Hz,1H),2.42(d,J=3.6Hz,6H)。
實例1：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(1)
步驟1：合成(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
在氬氣氛圍下，向250mL三頸圓底燒瓶中的氫化鈉(礦物油中60%分散液，0.272g，6.79mmol)於無水乙腈(50ml)中之懸浮液中添加4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.948g，6.17mmol)，且在環境溫度下攪拌混合物30分鐘。在攪拌的同時分批添加(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸 5-氯-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(2.4g，6.17mmol)。將反應混合物加熱至50℃且攪拌2小時。藉由TLC及LCMS監測反應進展。蒸發反應混合物獲得油性殘餘物，其藉由矽膠層析法用乙酸乙酯/石油醚(1：6，v/v)純化獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.64(s,1H),7.98(d,J=8.1Hz,2H),7.92(d,J=8.1Hz,2H),7.43(d,J=3.6Hz,1H),7.20-7.30(m,4H),6.82(dd,J=5.7Hz,J=8.1Hz,1H),6.60(d,J=3.9Hz,1H),4.60-4.76(m,3H),2.86-2.96(m,1H),2.74-2.82(m,1H),2.43(d,J=5.4Hz,6H).LC-MS：(ES,m/z)：506.43[M+H]+。
步驟2：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
將(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(2.18g，4.31mmol)添加至80ml鋼製反應釜中且將其冷卻至-40℃。向其中添加異丙醇氨(在-40℃下飽和，60mL)。在90℃下攪拌混合物15小時後，使其冷卻至室溫且真空濃縮。藉由矽膠管柱層析使用二氯甲烷/甲醇(4/1)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.04(s,1H),7.34(d,J=3.6Hz,1H),7.04(br,2H),6.58(d,J=3.6Hz,1H),6.48(dd,J=6.0Hz,J=8.0Hz,1H),5.24(d,J=3.6Hz,1H),5.16(t,J=4.2Hz,1H),4.34(d,J=2.0Hz,1H),3.82(dd,J=4.0Hz,J=6.4Hz,1H),3.48-3.58(m,2H),2.48-2.54(m,1H),2.13-2.17(m,1H)。
步驟3：合成7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
在氬氣氛圍下，將(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(950mg，3.796mmol)及咪唑(775.4 mg，11.388mmol)添加至25mL圓底燒瓶中。向燒瓶中注入無水DMF(8mL)，隨後添加第三丁基二甲基矽烷基氯(1716.4mg，11.388mmol)。在25℃下攪拌混合物3小時後，將其用乙酸乙酯(40mL)稀釋，用水(20mL×2)、NaHCO3水溶液(飽和，20mL×2)及鹽水(20mL×2)分別洗滌。收集有機層且經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮獲得粗產物。接著藉由矽膠層析法用乙酸乙酯/石油醚(35%至42%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.32(s,1H),7.32(d,J=3.9Hz,1H),6.69(t,J=6.6Hz,1H),6.39(d,J=3.6Hz,1H),5.29(br,2H),4.56-4.61(m,1H),3.96(dd,J=3.5Hz,J=7.0Hz,1H),3.74-3.84(m,2H),2.42-2.51(m,1H),2.30-2.38(m,1H),0.92(d,J=4.2Hz,18H),0.08-0.1(m,12H).LC-MS：(ES,m/z)：497.71[M+H]+。
步驟4：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇
在0℃下，經10分鐘之時段向7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(1.2g，2.506mmol)於THF(24mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加預先冷卻之三氟乙酸/水溶液(1/2，v/v，9mL)。所得混合物在0℃下攪拌4小時，接著在低於25℃下與甲苯一起共蒸發三次獲得糊漿。藉由矽膠管柱層析用乙酸乙酯/二氯甲烷(1/1)純化粗產物獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.03(s,1H),7.34(d,J=3.9Hz,1H),7.03(brs,2H),6.58(d,J=3.6Hz,1H),6.46(dd,J=5.7Hz,1H),5.19(t,J=5.7Hz,1H),4.51-4.53(m,1H),3.79-3.83(m,1H),3.47-3.57(m,2H),2.55-2.64(m,1H),2.10-2.17(m,1H),0.9(s,9H),0.11(s,6H)。
步驟5：合成(2S,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第 三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣氛圍下，向25mL圓底燒瓶中的((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇(100mg，0.274mmol)於無水乙腈(10mL)中之經攪拌溶液中添加2-碘醯基苯甲酸(230mg，0.823mmol)。所得混合物回流0.5小時，接著冷卻至室溫。濾出固體且減壓濃縮濾液，獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟中。LC-MS：(ES,m/z)：363.20[M+H]+,381.20[M+H+H2O]+。
步驟6：合成((3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇
向(2S,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛(100mg，0.276mmol，粗)於1,4-二噁烷(1mL)中之經攪拌溶液中添加甲醛溶液(0.3mL，4.00mmol)，隨後在1分鐘內逐滴添加氫氧化鈉溶液(0.3mL，0.600mmol，2M)。在25℃下攪拌所得混合物3小時。反應完成後，反應混合物藉由添加乙酸中和，用乙酸乙酯稀釋且用水、NaHCO3飽和水溶液及鹽水依序洗滌，經Na2SO4乾燥且減壓蒸發。殘餘物再溶解於無水乙醇(2mL)中且在0℃下分批添加硼氫化鈉(20.87mg，0.552mmol)。在25℃下攪拌1小時後，反應混合物藉由添加乙酸中和，用氯仿(20mL)稀釋，用水及鹽水洗滌。有機層經Na2SO4乾燥且減壓蒸發。藉由製備型TLC使用二氯甲烷/甲醇(20/1)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.03(s,1H),7.37(d,J=3.6Hz,1H),7.02(brs,2H),6.57(d,J=3.6Hz,1H),6.50(dd,J=5.7Hz,J=8.1Hz,1H),5.12(dd,J=5.1Hz,J=6.3Hz,1H),4.59-4.60(m,1H),4.38(dd,J=5.1Hz,J=6.3Hz,1H),3.46-3.61(m,4H),2.70-2.75(m,1H),2.13-2.20(m,1H),0.90(s,9H),0.09(s,6H).LC-MS：(ES,m/z)：395.20[M+H]+。
步驟7：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣氛圍下，向((3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇(100mg，0.253mmol)於無水乙腈(20mL)中之經攪拌溶液中添加2-碘醯基苯甲酸(284mg，1.014mmol)。在30℃下攪拌所得混合物36小時。LCMS顯示仍留下少部分起始二醇-核苷，且目標化合物為主要產物。過濾混合物，用二氯甲烷洗滌。收集濾液且減壓濃縮獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟中。LC-MS：(ES,m/z)：393.28[M+H]+。
步驟8：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇
在氬氣氛圍下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛(100mg，0.248mmol，粗)於無水甲醇(10mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸鉀(68.04mg，0.492mmol)。將混合物冷卻至0℃，接著在2分鐘內逐滴添加(1-重氮基-2-側氧基丙基)膦酸二甲酯(94.56mg，0.492mmol)。在25℃下攪拌所得混合物隔夜後，將其減壓濃縮。藉由製備型TLC(甲醇/二氯甲烷=1/15)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.24(s,1H),7.04(d,J=3.6Hz,1H),6.35(d,J=3.6Hz,1H),6.31(dd,J=5.7Hz,J=9.3Hz,1H),5.48(br,2H),4.73(d,J=4.2Hz,1H),4.03(d,J=12.6Hz,1H),3.80(d,J=12.3Hz,1H),3.13-3.23(m,1H),2.58(s,1H),2.22-2.28(m,1H),0.95(s,9H),0.15(d,J=7.2Hz,6H)。
步驟9：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
在氬氣氛圍下，在環境溫度下，在1分鐘內向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇(60mg，0.154mmol)於無水THF(2mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加1M氟化四丁銨THF溶液(0.309mL,0.309mmol)。在此溫度下攪拌所得溶液2小時。藉由TLC監測反應進展。當起始核苷全部耗盡時，減壓濃縮混合物。藉由製備型TLC(甲醇/二氯甲烷=1/9)純化殘餘物獲得粗標題化合物，其藉由具有以下條件之製備型HPLC進一步純化獲得固體狀之化合物1：(1#-製備型-HPLC-011(Waters))：管柱，X-選擇CSH管柱，19×150mm,5μm；移動相，具有10mmol碳酸氫銨及乙腈之水(7.5分鐘內5%乙腈直至20%，2分鐘內直至95%)；偵測器，UV 254 & 220nm。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.05(s,1H),7.31(d,J=3.6Hz,1H),7.03(brs,2H),6.58(d,J=3.6Hz,1H),6.50(t,J=6.3Hz,1H),5.40-5.49(m,2H),4.49(dd,J=6.0Hz,J=11.4Hz,1H),3.51-3.66(m,2H),3.46(s,1H),2.55-2.59(m,1H),2.28-2.39(m,1H).LC-MS：(ES,m/z)：275.20[M+H]+。
實例2：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(2)
步驟1：合成4-氯-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
在氬氣氛圍下將4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(5g，32.6mmol)及SELECTFLUOR®(1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷雙(四氟硼酸))(17.30g，48.8mmol)置於500mL圓底燒瓶中。向上述中添加無水乙腈(150mL)及無水乙酸(50mL)。在70℃下加熱混合物且攪拌16小時。冷卻至室溫後，減壓移除溶劑且將殘餘物與甲苯一起共蒸發。粗固體溶解於二氯甲烷/乙酸乙酯之混合物(1：1)中且經矽膠墊過濾。減壓蒸發合併之有機相。接著藉由矽膠層析法用二氯甲烷/乙酸乙酯(5：1)純化粗產物獲得標題化合物。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 12.48(brs,1H),8.62(s,1H),7.71(t,J=2.6Hz,1H).F-NMR：(376MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ -170.76(s,1F).LC-MS：(ES,m/z)：172.00[M+H]+。
步驟2：合成(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-氯-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
在氬氣氛圍下，向礦物油中的60%氫化鈉分散液(0.177g，4.41mmol)於無水乙腈(40mL)中之懸浮液中分批添加4-氯-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.688g，4.01mmol)，且在環境溫度下攪拌混合物30分鐘。接著分批添加中間物A(1.56g，4.01mmol)。反應混合物加熱至50℃且攪拌2小時後，減壓移除揮發物，接著藉由矽膠層析法用乙酸乙酯/石油醚(1/1)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.62-8.68(m,1H),7.91-7.99(m,4H),7.26-7.29(m,4H),7.16-7.18(m,2H),6.84-6.88(m,1H),5.74-5.76(m,1H),4.60-4.74(m,3H),2.74-2.79(m,2H),2.43-2.46(m,6H).LC-MS：(ES,m/z)：524.30[M+H]+。
步驟3：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
向80mL鋼製反應釜中添加(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-氯-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(2.0g，3.82mmol)。將培養基冷卻至-40℃。向其中添加氨氣飽和之i-PrOH(60mL)。將混合物加熱至80℃且攪拌18小時後，減壓濃縮所得混合物。藉由矽膠層析法使用二氯甲烷/甲醇(5/1)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.06(s,1H),7.33(d,J=2.0Hz,1H),6.99(brs,2H),6.54(t,J=6.0Hz,1H),5.24(d,J=4.4Hz,1H),4.99(t,J=5.6Hz,1H),4.30-4.33(m,1H),3.78-3.81(m,1H),3.47-3.56(m,2H),2.37-2.44(m,1H),2.12-2.17(m,1H).F-NMR：(376MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ -167.49(s,1F)。
步驟4：合成7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3- d]嘧啶-4-胺
在氬氣氛圍下將(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(538mg，2.006mmol)及咪唑(819mg，12.03mmol)添加至25mL圓底燒瓶中。向其中添加無水DMF(5ml)，隨後分批添加第三丁基氯二甲基矽烷(1209mg，8.02mmol)。在25℃下攪拌所得混合物3小時。藉由TLC及LCMS監測反應進展。反應完成後，混合物用乙酸乙酯(40mL)稀釋，用水(20mL×2)、NaHCO3飽和水溶液(20mL×2)及鹽水(20mL×2)分別洗滌。收集有機層，經無水Na2SO4乾燥且減壓濃縮。接著藉由矽膠層析法用乙酸乙酯/石油醚(28%至41%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.07(s,1H),7.27(s,1H),6.99(brs,2H),6.54(t,J=6.0Hz,1H),4.49(s,1H),3.60-3.78(m,3H),2.51-2.53(m,1H),2.16-2.20(m,1H),0.88(d,J=4.2Hz,18H),0.11(s,6H),0.04(s,6H).LC-MS：(ES,m/z)：497.71[M+H]+。
步驟5：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇
在0℃下，在攪拌下，在10分鐘內向7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(900mg，1.812mmol)於THF(12mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加三氟乙酸水溶液(三氟乙酸/水=1/1，v/v，6mL)。在0℃下攪拌所得混合物。藉由TLC監測反應進展。在反應完成之後，所得混合物與甲苯(50mL×3)一起在真空下共蒸發，同時將溫度保持低於25℃移除揮發物。藉由矽膠層析法用乙酸乙酯/石油醚(52%至58%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.07(s,1H),7.34(s,1H),6.99(brs,2H),6.53(t,J=6.9Hz,1H),5.04(t,J=5.6Hz,1H),4.47-4.51 (m,1H),3.76-3.79(m,1H),3.44-3.57(m,2H),2.45-2.51(m,1H),2.11-2.16(m,1H),0.90(s,9H),0.11(s,6H).LC-MS：(ES,m/z)：383.26[M+H]+。
步驟6：合成(2S,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣下，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇(360mg，0.941mmol)於無水乙腈(12mL)中之經攪拌溶液中添加2-碘醯基苯甲酸(791mg，2.82mmol)。使所得混合物回流35分鐘。將反應物冷卻至室溫，且濾出固體。收集濾液，接著真空濃縮獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟中。
步驟7：合成((3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇
向(2S,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛(400mg，1.051mmol，粗)於1,4-二噁烷(4mL)中之經攪拌溶液中添加甲醛溶液(1.2mL，16.01mmol)，隨後經5分鐘逐滴添加氫氧化鈉溶液(1.2mL，2M，2.400mmol)。在25℃下攪拌所得混合物3小時，接著藉由添加乙酸中和反應混合物。所得混合物用乙酸乙酯稀釋，且用水、NaHCO3飽和水溶液及鹽水依序洗滌。有機相經Na2SO4乾燥且減壓蒸發。將殘餘物溶解於乙醇(10mL)中且在0℃下分批添加硼氫化鈉(80mg，2.103mmol)。在25℃下攪拌1小時後，反應混合物藉由添加乙酸中和，接著用氯仿稀釋且用水及鹽水依序洗滌。有機層經Na2SO4乾燥且減壓蒸發。藉由矽膠層析法使用二氯甲烷/甲醇(30/1)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.06(s,1H),7.36(s,1H),6.99(brs,2H),6.57(t,J=3.6Hz,1H),4.99(t,J=4.8Hz,1H),4.55- 4.59(m,1H),4.39(t,J=5.1Hz,1H),3.45-3.55(m,4H),2.57-2.65(m,1H),2.17-2.20(m,1H),0.90(s,9H),0.09(s,6H)。
步驟8：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣氛圍下向((3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇(120mg，0.291mmol)於無水乙腈(8mL)中之經攪拌溶液中添加2-碘醯基苯甲酸(326mg，1.164mmol)。在30℃下攪拌所得混合物24小時，接著過濾且用二氯甲烷洗滌。收集濾液且減壓濃縮獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟中。LC-MS：(ES,m/z)：411.43[M+H]+。
步驟9：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇
在氬氣下向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛(110mg，0.268mmol，粗)於無水甲醇(8mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸鉀(111mg，0.804mmol)。混合物冷卻至0℃，接著經1分鐘逐滴添加(1-重氮基-2-側氧基丙基)膦酸二甲酯(154mg，0.804mmol)。在25℃下攪拌混合物隔夜後，真空濃縮所得混合物，接著藉由製備型TLC(甲醇/二氯甲烷=1/15)純化獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.07(s,1H),7.34(s,1H),7.03(br,2H),6.56(t,J=6.3Hz,1H),5.43(t,J=6.0Hz,1H),4.61(t,J=5.4Hz,1H),3.58-3.67(m,1H),3.49-3.53(m,1H),3.47(s,1H),2.52-2.61(m,1H),2.23-2.31(m,1H),0.91(s,9H),0.11(d,J=2.4Hz,6H).LC-MS：(ES,m/z)：407.30[M+H]+。
步驟10：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)- 2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
在氬氣氛圍下，在室溫下，在攪拌同時向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇(40mg，0.098mmol)於無水THF(2mL)中之經攪拌溶液中經1分鐘逐滴添加TBAF/THF溶液(0.118mL,0.118mmol)，且在此溫度下攪拌所得溶液2小時。反應完成後，真空濃縮所得混合物，且藉由製備型TLC(甲醇/二氯甲烷=1/10)純化殘餘物獲得粗產物(28mg)。粗產物藉由具有以下條件之製備型HPLC進一步純化：(1#-製備型-HPLC-011(Waters))：管柱，X-select CSH管柱，19×150mm,5μm；移動相，具有10mmol碳酸氫銨及乙腈之水(7.5分鐘內5%乙腈直至35%，2分鐘內直至95%)；偵測器，UV 254 & 220nm。收集含產物之溶離份且凍乾獲得呈固體狀之化合物2。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.07(s,1H),7.30(d,J=1.6Hz,1H),7.02(br,2H),6.55(t,J=5.8Hz,1H),6.05(br,1H),5.31-5.45(m,1H),4.46(t,J=6.6Hz,1H),3.58(dd,J=11.8Hz,J=29.4Hz,2H),3.47(s,1H),2.44-2.51(m,1H),2.29-2.36(m,1H).F-NMR：(376MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ -167.23(s,1F).LC-MS：(ES,m/z)：293.10[M+H]+,315.10[M+Na]+。
實例3：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(3)
步驟1：5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
在環境溫度下，在氬氣氛圍下將4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1g，6.51mmol)懸浮於無水DCM(20mL)中，隨後添加NBS(N-溴丁二醯亞胺)(1.275g，7.16mmol)。將混合物加熱至回流且攪拌16小時。當起始脫氮-嘧啶全部耗盡時，將混合物冷卻至環境溫度且維持30分鐘。沈澱物藉由過濾收集，用DCM(2×20mL)洗滌，真空乾燥獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：233.90[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 12.98(brs,1H),8.64(s,1H),7.96(s,1H)。
步驟2：合成4-氯-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
將5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(232mg，0.998mmol)溶解於無水THF(10mL)中且在氬氣氛圍下冷卻至-78℃。在攪拌同時在5分鐘內向其中逐滴添加正丁基鋰己烷溶液(2.5M，0.88mL，2.196 mmol)。攪拌混合物約40分鐘，隨後添加碘甲烷(212mg，1.497mmol)。接著使溶液在2小時內緩慢升溫至室溫。添加水(2mL)以淬滅反應。在40℃以下真空移除揮發物得到漿液。將漿液再溶解於EtOAc(50mL)中且用水(2×15mL)及鹽水(20mL)洗滌。收集有機層，經無水Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮濾液獲得粉末，將其自MeOH再結晶獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：168.00[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 12.22(brs,1H),8.51(s,1H),7.43(s,1H),2.41(d,J=0.90Hz,1H)。
步驟3：合成(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-氯-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
在氬氣氛圍下，向氫化鈉(油中60%分散液，0.453g，11.32mmol)於無水ACN(50mL)中之經攪拌懸浮液中分批添加4-氯-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.724g，10.29mmol)且在25℃下攪拌混合物30分鐘。在25℃下向所得澄清溶液中逐份添加中間物A(4.0g，10.29mmol)。將所得混合物加熱至50℃且攪拌3小時。藉由TLC監測反應進展。真空濃縮混合物獲得固體，其藉由矽膠管柱層析使用乙酸乙酯/石油醚(1：6，v/v)純化獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：520.25[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.55(s,1H),7.90-7.99(m,4H),7.20-7.30(m,4H),7.11(s,1H),6.81(dd,J=6.0Hz,J=8.4Hz,1H),5.76(dd,J=1.5Hz,J=3.6Hz,1H),4.73-4.79(m,1H),4.54-4.64(m,2H),2.79-2.88(m,1H),2.68-2.75(m,1H),2.43(d,J=3.0Hz,6H),2.33(d,J=0.9Hz,3H)。
步驟4：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
向150mL鋼製反應釜中置入(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-氯-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四 氫呋喃-3-基酯(4.5g，7.79mmol)。將介質冷卻至-40℃。向其中添加2-丙酸銨(i-PrOH/液體NH3=1/1，v/v，120mL)。將反應釜密封且將混合物加熱至90℃且攪拌40小時。反應完成時，將混合物冷卻至0℃且真空濃縮。藉由矽膠管柱層析法使用DCM/MeOH(4/1)純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：265.10[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.00(s,1H),7.08(s,1H),6.58(brs,2H),6.45(dd,J=6.0Hz,J=8.1Hz,1H),5.21(d,J=3.3Hz,1H),5.05(t,J=5.1Hz,1H),4.32-4.36(m,1H),3.78(d,J=2.1Hz,1H),3.44-3.57(m,2H),2.39-2.51(m,1H),2.33(s,3H),2.06-2.13(m,3H)。
步驟5：合成7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
在氬氣氛圍下，在25℃下，在攪拌同時向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(1.7g，6.43mmol)及1H-咪唑(1.752g，25.7mmol)於無水DMF(10mL)中之經攪拌溶液中添加第三丁基氯二甲基矽烷(2.91g，19.30mmol)。在25℃下攪拌所得混合物3小時，接著用乙酸乙酯(100mL)稀釋，用水(2×30mL)、NaHCO3水溶液(飽和，2×30mL)及鹽水(30mL)分別洗滌。收集有機層且經無水Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮獲得粗產物。接著藉由矽膠管柱層析使用乙酸乙酯/石油醚(28%至41% EA/PE)純化粗產物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：493.30[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.24(s,1H),7.02(s,1H),6.67(dd,J=6.3Hz,J=7.2Hz,1H),5.37(br,2H),4.54-4.57(m,1H),3.94(dd,J=3.3Hz,J=6.3Hz,1H),3.72-3.82(m,2H),2.37-2.46(m,4H),2.25-2.32(m,1H),0.91(2s,18H),0.10(s,12H)。
步驟6：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7- 基)-3-(第三丁基二甲基矽烷基)四氫呋喃-2-基)甲醇
在0℃，在攪拌同時在10分鐘內向7-((2R,4S,5R)-4-(第三丁基二甲基矽烷基)-5-((第三丁基二甲基矽烷基)甲基)四氫呋喃-2-基)-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(2.5g，5.07mmol)於THF(30mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加預先冷卻之三氟乙酸/水溶液(1/1，v/v，15mL)。在0℃下攪拌所得混合物3小時。藉由TLC監測反應進展。所得溶液與甲苯(3×100mL)一起共蒸發，同時將內部溫度維持於25℃以下。接著藉由矽膠管柱層析法使用乙酸乙酯/石油醚(50%至58% EA/PE)純化所得粗產物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：493.30[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CD3OD,ppm)：δ 8.18(s,1H),7.41(s,1H),6.59(dd,J=6.0Hz,J=7.8Hz,1H),4.56-4.60(m,1H),3.93(dd,J=3.9Hz,J=6.6Hz,1H),3.65-3.70(m,2H),2.45-2.54(m,1H),2.42(d,J=0.9Hz,3H),2.23-2.31(m,1H),0.91(s,9H),0.11(s,6H)。
步驟7：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-(第三丁基二甲基矽烷基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣氛圍下，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-(第三丁基二甲基矽烷基)四氫呋喃-2-基)甲醇(600mg，1.585mmol)於無水ACN(12mL)中之經攪拌懸浮液中添加IBX(888mg，3.17mmol)。將混合物加熱至回流且攪拌55分鐘。藉由LCMS監測反應進展。使混合物冷卻至室溫，且濾出固體。收集濾液，接著真空濃縮獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟中。LC-MS：(ES,m/z)：377.15[M+H]+,409.15[M+H+MeOH]+。
步驟8：合成((3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-(第三丁基二甲基矽烷基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇
向50mL圓底燒瓶中(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-(第三丁基二甲基矽烷基)四氫呋喃-2-甲醛(420mg， 粗)於1,4-二噁烷(12mL)及水(3mL)中之經攪拌溶液中添加甲醛水溶液(37重量%，6mL)，隨後在2分鐘內逐滴添加氫氧化鈉溶液(2N，6mL，0.12mmol)。在25℃下攪拌所得混合物3小時。起始核苷-醛全部耗盡後，藉由添加AcOH(約0.8mL)中和反應混合物。所得混合物用AcOEt(50mL)稀釋且用水(30mL)、NaHCO3飽和水溶液(20mL)及鹽水(20mL)依序洗滌。有機層經無水Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物再溶解於無水EtOH(8mL)中且在0℃分批添加硼氫化鈉(84.4mg，2.23mmol)。在25℃下攪拌1小時後，藉由添加AcOH中和反應混合物。真空濃縮混合物，分配於CHCl3(50mL)與水(30mL)之間。水層用CHCl3(2×20mL)再萃取。合併之有機層用水及鹽水依序洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮。藉由矽膠管柱層析法使用二氯甲烷/甲醇(5.5% MeOH/DCM)純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：409.35[M+H]+,431.35[M+Na]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.00(s,1H),7.11(s,1H),6.56(br,2H),6.48(dd,J=6.0Hz,J=8.4Hz,1H),6.45-6.47(m,1H),5.02(t,J=5.5Hz,1H),4.58(t,J=2.7Hz,1H),4.35(dd,J=4.5Hz,J=6.3Hz,1H),3.42-3.60(m,4H),2.58-2.63(m,1H),2.34(s,3H),2.09-2.16(m,1H),0.90(s,9H),0.09(s,6H)。
步驟9：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣氛圍下，將((3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇(140mg，0.343mmol)懸浮於無水ACN(15mL)中，隨後添加2-碘醯基苯甲酸(240mg，0.857mmol)。在30℃下攪拌混合物20小時。濾出固體，用CHCl3(2×20mL)洗滌。真空濃縮經合併之濾液獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟中。LC-MS：(ES, m/z)：407.25[M+H]+。
步驟10：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇
在0℃下，在氬氣氛圍下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛(120mg，約0.236mmol，粗)於無水MeOH(15mL)中之經攪拌溶液中添加K2CO3(82mg，0.590mmol)，隨後在0℃下在攪拌下，在2分鐘內逐滴添加(1-重氮基-2-側氧基丙基)膦酸二甲酯(91mg，0.472mmol)於MeOH(2mL)中之溶液。將所得混合物逐漸升溫至25℃，且攪拌16小時。真空濃縮混合物。藉由急驟矽膠管柱層析法使用乙酸乙酯/石油醚(30%-50% EA/PE)純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：403.25[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.01(s,1H),7.07(s,1H),6.60(br,2H),6.49(dd,J=6.0Hz,J=7.2Hz,1H),5.48(t,J=5.7Hz,1H),4.62(t,J=5.7Hz,1H),3.57-3.68(m,1H),3.48-3.52(m,1H),3.45(s,1H),2.49-2.62(m,1H),2.33(s,3H),2.21-2.31(m,1H),0.91(s,9H),0.12(d,J=6.0Hz,6H)。
步驟11：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(3)
在0℃，在攪拌下，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇(27mg，0.067mmol)於無水THF(1mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加氟化四丁銨THF溶液(1.0M，0.067mL，0.067mmol)。在25℃下攪拌所得混合物30分鐘。藉由TLC監測反應進展。真空濃縮所得溶液。藉由具有以下條件之製備型HPLC(1#-製備型-HPLC-011(Waters))純化粗產物：管柱，XBridgeTM C18管柱，19×150mm,5μm；移動相，具有10mmol碳酸氫銨之水及乙腈(10分鐘內30%乙腈升 至70%，2分鐘內升至95%，1.5分鐘內降至5%)；流動速率：20mL/min；偵測器，UV 254&220nm。收集含產物之溶離份且凍乾獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：289.05[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.00(s,1H),7.06(s,1H),6.58(br,2H),6.48(t,J=6.60Hz,1H),5.45(d,J=5.1Hz,1H),5.38(t,J=6.0Hz,1H),4.46(q,J=5.4Hz,1H),3.50-3.64(m,2H),3.44(s,1H),2.44-2.54(m,1H),2.33(s,3H),2.24-2.32(m,1H)。
實例4：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(4)
步驟1：合成(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(2,4-而氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
在氬氣氛圍下，向氫化鈉(礦物油中60%分散液，0.509g，12.73mmol)於無水乙腈(125mL)中之經攪拌懸浮液中分批添加2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.176g，11.57mmol)，且在環境溫度下攪拌混合物30分鐘。在攪拌下向上述澄清溶液中逐批添加中間物A(4.5g， 11.57mmol)。反應混合物在環境溫度下攪拌2小時。藉由TLC監測反應進展。蒸發反應混合物獲得油性殘餘物，其藉由矽膠管柱層析法使用乙酸乙酯/石油醚(1：6，v/v)純化獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：540.20[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.01(d,J=8.0Hz,2H),7.93(d,J=8.0Hz,2H),7.43(d,J=3.6Hz,1H),7.22-7.37(m,4H),6.80(dd,J=6.0Hz,J=8.0Hz,1H),6.61(d,J=4.0Hz,1H),5.76(t,J=2.8Hz,1H),4.76(dd,J=3.6Hz,J=12.0Hz,1H),4.63-4.69(m,2H),2.76-2.86(m,2H),2.47,2.45(2s,6H)。
步驟2：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
向250mL鋼製反應釜中添加(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(5g，9.25mmol)。將介質冷卻至-40℃。向其中添加異丙醇氨(異丙醇/液氨=1/3，v/v，150mL)。密封介質，加熱至90℃且攪拌16小時。將所得混合物冷卻至室溫且真空濃縮。將殘餘物再溶解於MeOH(100mL)中，隨後在0℃下逐滴添加甲醇鈉MeOH溶液(1.0M，16.89mL,16.89mmol)。將所得混合物升溫至25℃且攪拌2小時。反應完全後，藉由添加乙酸(0.01mL)中和混合物且真空濃縮。將殘餘物懸浮於DCM/MeOH(v/v，100/1，150mL)中。攪拌20分鐘後，固體沈澱。藉由過濾收集固體，用DCM洗滌且真空乾燥獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：285.20[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,CD3OD,ppm)：δ 7.31(d,J=2.8Hz,1H),6.58(d,J=2.8Hz,1H),6.45(t,J=6.8Hz,1H),4.52-4.53(m,1H),3.98-4.01(m,1H),3.81(dd,J=2.4Hz,J=12.0Hz,1H),3.73(dd,J=3.2Hz,J=12.0Hz,1H),2.63-2.70(m,1H),2.29-2.34(m,1H)。
步驟3：合成7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第 三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
在氬氣氛圍下，在環境溫度下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(3.2g，6.74mmol)及咪唑(1.836g，27.0mmol)於無水DMF(10mL)中之經攪拌溶液中添加TBS-Cl(3.05g，20.23mmol)。攪拌所得混合物隔夜。反應混合物用乙酸乙酯(100mL)稀釋，用水(2×20mL)、NaHCO3水溶液(飽和，2×20mL)及鹽水(2×20mL)依序洗滌。有機層經無水Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮。藉由矽膠管柱層析法使用乙酸乙酯/石油醚(35%至42% EA/PE)純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：513.20[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,CDCl3,ppm)：δ 7.32(s,1H),6.61(t,J=6.8Hz,1H),6.38(s,1H),5.44(br,2H),4.59-4.61(m,1H),3.91-3.99(m,1H),3.77-3.88(m,2H),2.44-2.51(m,1H),2.34-2.37(m,1H),0.93-0.95(m,18H),0.11-0.12(m,12H).1H-NMR：(400MHz,CD3OD,ppm)：δ 7.31(d,J=2.8Hz,1H),6.58(d,J=2.8Hz,1H),6.45(t,J=6.8Hz,1H),4.52-4.53(m,1H),3.98-4.01(m,1H),3.81(dd,J=2.4Hz,J=12.0Hz,1H),3.73(dd,J=3.2Hz,J=12.0Hz,1H),2.63-2.70(m,1H),2.29-2.34(m,1H)。
步驟4：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇
在0℃下，在攪拌下，在10分鐘內，向7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(2.3g，4.48mmol)於THF(40mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加預先冷卻之三氟乙酸/水溶液(v/v，1/1，20mL)。在0℃下攪拌所得混合物2小時。藉由TLC監測反應進展。所得溶液與甲苯(3×60mL)一起共蒸發，同時維持內部溫度 低於25℃，獲得粉紅色糊漿。藉由矽膠管柱層析法使用乙酸乙酯/二氯甲烷(1/1)純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：399.20[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 7.53(br,2H),7.35(d,J=3.2Hz,1H),6.60(d,J=3.2Hz,1H),6.35(t,J=6.8Hz,1H),4.95(t,J=5.4Hz,1H),4.51-4.54(m,1H),3.73-3.79(m,1H),3.46-3.55(m,2H),2.54-2.59(m,1H),2.16-2.20(m,1H),0.90(s,9H),0.11(s,6H).1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 7.53(br,2H),7.35(d,J=3.2Hz,1H),6.60(d,J=3.2Hz,1H),6.35(t,J=6.8Hz,1H),4.95(t,J=5.4Hz,1H),4.51-4.54(m,1H),3.73-3.79(m,1H),3.46-3.55(m,2H),2.54-2.59(m,1H),2.16-2.20(m,1H),0.90(s,9H),0.11(s,6H)。
步驟5：合成(2S,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣氛圍下，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇(600mg，1.504mmol)於無水DMSO(3mL)及乙腈(15mL)中之經攪拌溶液中添加IBX(632mg，2.256mmol)。混合物在環境溫度下攪拌2.5小時。反應混合物用乙酸乙酯(20mL)稀釋，用鹽水(2×10mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且過濾。真空濃縮濾液獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一步驟。LC-MS：(ES,m/z)：415.40[M+H2O]+。
步驟6：合成((3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇
向(2S,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛(700mg，粗)於1,4-二噁烷(28mL)及水(7mL)中之經攪拌溶液中添加甲醛溶液(7mL，93mmol)，隨後在5分鐘內逐滴添加氫氧化鈉水溶液(7mL，2N，14.00 mmol)。在25℃下攪拌所得混合物3小時。起始核苷-醛全部耗盡後，藉由添加乙酸(0.5mL)中和反應混合物。混合物用乙酸乙酯(100mL)稀釋且用水(2×20mL)、NaHCO3飽和水溶液(20mL)及鹽水(20mL)依序洗滌。將有機層經Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物再溶解於無水EtOH(4mL)中且在0℃下，在氬氣氛圍下分批添加硼氫化鈉(133mg，3.53mmol)。在25℃下攪拌1小時後，藉由添加乙酸(1.0mL)中和混合物。真空濃縮混合物。將殘餘物用CHCl3(100mL)稀釋且用水(2×20mL)及鹽水(1×20mL)依序洗滌。將有機層經Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮。藉由矽膠管柱層析法使用DCM/MeOH(30/1)純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：429.30[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 7.51(br,2H),7.38(d,J=3.9Hz,1H),6.60(d,J=3.6Hz,1H),6.40(t,J=6.9Hz,1H),4.88(t,J=5.5Hz,1H),4.62(dd,J=3.3Hz,J=5.5Hz,1H),4.39(t,J=5.7Hz,1H),3.43-3.63(m,4H),2.61-2.70(m,1H),2.21-2.29(m,1H),0.90(s,9H),0.10(s,6H)。
步驟7：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣氛圍下，((3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇(150mg，0.350mmol)於無水乙腈(15mL)中之經攪拌溶液中添加IBX(294mg，1.049mmol)。在30℃下攪拌所得混合物2小時。過濾混合物，用CHCl3(3×15mL)洗滌。收集濾液，接著真空濃縮獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一步驟中。LC-MS：(ES,m/z)：427.30[M+H]+。
步驟8：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇
將(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛(200mg，0.468mmol)溶解於無水MeOH(9mL)中，隨後在0℃下，在氬氣氛圍下下，添加碳酸鉀(162mg，1.171mmol)。在攪拌下，在1分鐘內，向懸浮液中逐滴添加(1-重氮基-2-側氧基丙基)膦酸二甲酯(180mg，0.937mmol)於MeOH(1mL)中之溶液。將所得混合物升溫至30℃且攪拌16小時。真空濃縮反應混合物。將殘餘物分配於乙酸乙酯(30mL)與水(10mL)之間。收集有機層，用鹽水(2×10mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮。接著藉由製備型TLC(MeOH/DCM=1/15)純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：423.60[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 7.55(br,2H),7.34(d,J=3.6Hz,1H),6.61(d,J=3.6Hz,1H),6.38(t,J=6.4Hz,1H),5.32(t,J=6.0Hz,1H),4.67(t,J=6.0Hz,1H),3.58-3.61(m,1H),3.48-3.52(m,1H),3.47(s,1H),2.60-2.63(m,1H),2.31-2.35(m,1H),0.91(s,9H),0.11(d,J=3.6Hz,6H)。
步驟9：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
在環境溫度下，在攪拌下，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇(60mg，0.142mmol)於THF(1mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加TBAF THF溶液(1M，0.28mL，0.284mmol)。所得溶液在環境溫度下攪拌2小時。真空濃縮混合物。接著藉由具有以下條件之製備型HPLC(1#-製備型-HPLC-011(Waters))純化殘餘物：管柱，SunFire Prep C18 OBD管柱，5μm,19×150mm；移動相，水(具有10mmol碳酸氫銨)及乙腈(6分鐘內8%乙腈升至40%，1.5分鐘內升至95%，1分鐘內降至5%)；偵測器，uv 254&220nm。收集含產物之溶離 份且凍乾獲得呈固體狀之化合物4。LC-MS：(ES,m/z)：309.00[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 7.54(br,2H),7.33(d,J=4.0Hz,1H),6.60(d,J=3.6Hz,1H),6.41(t,J=6.4Hz,1H),5.52-5.53(m,1H),5.26(t,J=6.0Hz,1H),4.47-4.48(m,1H),3.61(dd,J=5.2Hz,J=11.6Hz,1H),3.53(dd,J=6.2Hz,J=11.8Hz,1H),3.48(s,1H),2.41-2.50(m,1H),2.32-2.38(m,1H)。
實例5：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(5)
步驟1：合成(2R,3S,5S)-4-甲基苯甲酸5-(5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.32g，9.98mmol，如實例3，步驟1中所述合成)於乙腈(30mL)中之經攪拌溶液中添加氫化鈉(0.479g，11.98mmol)。在0℃下攪拌所得混合物30分鐘，接著添加(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-氯-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(4.27g，10.98mmol)。在室溫下攪拌所得混合物1小時後，將其用200mL乙酸乙酯稀釋，用碳酸氫鈉飽和水溶液(60mL)及氯化鈉飽和水溶液(60mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且真空濃縮。藉由矽 膠管柱層析法使用石油醚\乙酸乙酯(1：2)純化殘餘物獲得標題化合物：1H-NMR(300MHz,DMSO)δ 8.65(s,1H),8.22(s,1H),7.96(d,J=8.4Hz,2H),7.84(d,J=8.1Hz,2H),7.24-7.39(m,4H),6.76-6.79(m,1H),5.74-5.76(m,1H),4.51-4.68(m,3H),3.05-3.15(m,1H),2.74-2.79(m,1H),2.37(d,J=1.8Hz,6H)。
步驟2：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
在-60℃下，向NH3飽和i-PrOH(15mL)中添加(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(4.50g，7.69mmol)。在80℃下攪拌所得混合物12小時，接著冷卻至室溫且在真空下蒸發獲得呈固體狀之(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(4.2g，7.43mmol)。此粗化合物溶解於30mL MeOH中，接著添加甲醇鈉(14.86mL，14.86mmol)。在室溫下攪拌所得溶液2小時後，將其用乙酸(0.1mL)淬滅且真空濃縮。藉由矽膠管柱層析法藉由石油醚\乙酸乙酯(1：2)純化粗產物獲得標題化合物：1H-NMR(300MHz,DMSO)δ 8.12(s,1H),7.78(s,1H),6.78(s,2H),6.48-6.51(m,1H),5.25(s,1H),5.01(s,1H),4.32(s,1H),3.81(s,1H),3.17(s,1H),2.35-2.50(m,1H),2.12-2.19(m,1H)。
步驟3：合成5-溴-7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(1.3g，3.95mmol)、1H-咪唑(1.076g，15.80mmol)於DMF(8mL)中之經攪拌溶液中添加第三丁基氯二甲基矽烷 (1.786g，11.85mmol)。在室溫下攪拌所得混合物4小時，接著用400mL乙酸乙酯稀釋，用碳酸氫鈉飽和水溶液(80mL)及氯化鈉飽和水溶液(80mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且真空濃縮。藉由矽膠管柱層析法使用乙酸乙酯/石油醚(1：4)純化殘餘物獲得標題化合物：1H-NMR(300MHz,DMSO)δ 8.10(s,1H),7.55(s,1H),6.79(s,2H),6.48-6.53(m,1H),4.50(s,1H),3.62-3.76(m,3H),2.43-2.50(m,1H),2.17-2.16(m,1H),0.88(d,J=2.7Hz,18H),0.10(s,6H),0.05(s,6H)。
步驟4：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)
將5-溴-7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(1.55g，2.78mmol)溶解於THF(4mL)中，接著在0℃下，在攪拌下，在10分鐘內用預冷卻之三氟乙酸/水溶液(v/v=1/1,4mL)逐滴處理。在0℃下攪拌所得混合物2小時後，將其與甲苯一起在25℃以下共蒸發獲得粉紅色糊漿。將殘餘物施加至矽膠管柱(用乙酸乙酯/二氯甲烷(1/1)溶離)上獲得標題化合物：1H-NMR(300MHz,DMSO)δ 8.19(s,1H),7.74(s,1H),7.28(s,2H),6.50(q,J=6.0Hz,2H),4.51(q,J=2.7Hz,1H),3.81(s,1H),3.47-3.57(m,2H),2.49-2.58(m,1H),2.17-2.22(m,1H),0.85(s,9H),0.09(s,6H)。
步驟5：合成(2R,3S)-4-甲基苯甲酸2-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)-5-甲氧基-2-苯基四氫呋喃-3-基酯
向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇(443mg，0.999mmol)於乙腈(45mL)中之溶液中添加2-碘醯基苯甲酸(839mg，3.00mmol)。在80℃下攪拌所得溶液2小時，接著冷卻至0℃，過濾且減壓濃縮。此產生標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一步驟： MS(ES,m/z)：441.08[M+H]+。
步驟6：合成((2S,4R)-4-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環戊烷-1,1-二基)二甲醇
向(2S,3S,5R)-5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛(445mg，1.008mmol)及甲醛(1009mg，10.08mmol)於二噁烷(6mL)中之經攪拌溶液中添加氫氧化鈉(4.03mL，8.07mmol)。在室溫下攪拌所得混合物3小時，接著用150mL乙酸乙酯稀釋，用碳酸氫鈉飽和水溶液(30mL)及氯化鈉飽和水溶液(30mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且真空濃縮獲得固體。在0℃下，向上述固體於乙醇(15mL)中之溶液中添加硼氫化鈉(109mg，2.88mmol)。在室溫下攪拌所得溶液2小時，接著用乙酸(0.1mL)淬滅且減壓濃縮。將粗產物施加至矽膠管柱層析上，藉由石油醚\乙酸乙酯(1：2)獲得標題化合物。MS(ES,m/z)：473.43[M+H]+。
步驟7：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛
向((3S,5R)-5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇(170mg，0.359mmol)於乙腈(40mL)中之溶液中添加2-碘醯基苯甲酸(302mg，1.077mmol)。在0℃下攪拌所得溶液12小時後，將其冷卻至0℃，接著減壓濃縮獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一步驟中。MS(ES,m/z)：471.43[M+H]+。
步驟8：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇
在0℃下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛(170mg，0.361mmol)、碳酸鉀(125mg，0.902mmol)於甲醇(8mL)中 之溶液中添加(1-重氮基-2-側氧基丙基)膦酸二甲酯(139mg，0.721mmol)。在室溫下攪拌所得溶液12小時，接著過濾且減壓濃縮。藉由製備型TLC，藉由石油醚\乙酸乙酯(1：2)純化粗化合物獲得標題化合物。1H-NMR(300MHz,CD3OD,ppm)δ 8.00(s,1H),7.39(s,1H),6.44-6.47(m,1H),4.62-4.66(m,1H),3.61-3.71(m,2H),2.90(s,1H),2.25-2.55(m,2H),0.88(s,9H),0.57(d,J=3Hz,6H)。
步驟9：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
將((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇(40mg，0.086mmol)及TBAF(0.086mL，0.086mmol)溶解於THF(1mL)中。在30℃下攪拌所得溶液2小時，接著蒸發且如以下條件純化：管柱：X Bridge C18,19×150mm,5μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：ACN；流動速率：20mL/min；梯度：10分鐘內30% B至70% B；254nm。此產生呈固體狀之化合物5：1H-NMR(300MHz,DMSO,ppm)δ 8.11(s,1H),7.59(s,1H),6.52(t,J=6.6Hz,1H),4.48(t,J=6.6Hz,1H),3.53-3.64(m,2H),3.44(s,1H),2.33-2.52(m,2H)；MS(ES,m/z)：353.17[M+H]+。
實例6：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(6)
步驟1：合成4,5-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
在25℃下，向4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.5g，16.28mmol)於無水DCM(100mL)中之混合物中添加NCS(N-氯丁二醯亞胺)(4.35g，32.6mmol)。在40℃下，在氬氣氛圍下，攪拌所得混合物16小時。當4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶耗盡時，未經冷卻直接過濾混合物。收集固體，用DCM(20mL)洗滌，真空乾燥獲得呈固體狀之4,5-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。LC-MS：(ES,m/z)：188.01[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 12.90(br,1H),8.65(s,1H),7.93(d,J=2.7Hz,1H)。
步驟2：合成(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4,5-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
在氬氣氛圍下，在250mL三頸圓底燒瓶中，向NaH(於礦物油中之60%分散液，0.538g，13.46mmol)於無水ACN(100mL)中之懸浮液中分批添加4,5-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.3g，12.23mmol)，且 在環境溫度下攪拌混合物30分鐘。混濁混合物變澄清，接著在攪拌下，在5分鐘內逐份添加(2R,3S)-4-甲基苯甲酸5-氯-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(中間物A，4.76g，12.23mmol)。將所得混合物加熱至50℃且攪拌2小時。藉由TLC監測反應進展。真空移除揮發物。藉由矽膠管柱層析法使用10%-40%乙酸乙酯/石油醚純化粗產物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：540.39[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.64(s,1H),7.91-7.99(m,4H),7.39(s,1H),7.25-7.30(m,4H),6.80(t,J=6.9Hz,1H),5.75(dd,J=3.6Hz,J=6.0Hz,1H),4.60-4.78(m,3H),2.76-2.80(m,2H),2.44(d,J=4.8Hz,6H)。
步驟3：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
向150mL鋼製反應釜中置入(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4,5-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(3.6g，6.66mmol)。將介質冷卻至-40℃。向其中添加異丙醇氨(異丙醇/液氨=1/3，v/v，120mL)。密封介質，加熱至90℃且攪拌16小時。TLC指示起始核苷全部耗盡且觀測到目標產物為主要產物。真空濃縮所得混合物。藉由矽膠管柱層析法使用2%-10%甲醇/二氯甲烷純化粗產物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：284.70[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.09(s,1H),7.58(s,1H),6.87(br,2H),6.51(dd,J=6.3Hz,J=7.8Hz,1H),5.25(d,J=4.2Hz,1H),5.03(t,J=5.6Hz,1H),4.30-4.34(m,1H),3.81(dd,J=4.3Hz,J=6.8Hz,1H),3.46-3.60(m,2H),2.40-2.48(m,1H),2.13-2.20(m,1H)。
步驟4.合成7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d] 嘧啶-4-胺
在0℃下，在氬氣氛圍下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(1.7g，5.97mmol)於DMF(10mL)中之經攪拌溶液中依序添加1H-咪唑(1.423g，20.90mmol)及TBDMS-Cl(2.70g，17.91mmol)。將所得混合物升溫至25℃且攪拌2小時。用乙酸乙酯(100mL)稀釋所得溶液且用水(100mL)洗滌。用乙酸乙酯(2×100mL)再萃取水層。合併有機層，用NaHCO3飽和水溶液(2×100mL)及鹽水(2×100mL)依序洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮。藉由矽膠管柱層析法使用2%-10%乙酸乙酯/石油醚純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：513.22[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.10(s,1H),7.50(s,1H),6.85(br,2H),6.51(t,J=6.8Hz,1H),4.48-4.52(m,1H),3.62-3.80(m,3H),2.55-2.60(m,1H),2.17-2.24(m,1H),0.89(s,18H),0.08(d,J=13.6Hz,12H)。
步驟5.合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇
在0℃下，在攪拌下，在10分鐘內，向7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(2.42g，4.72mmol)於THF(48mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加預先冷卻之三氟乙酸/水溶液(1/1，v/v，24mL)。在0℃下攪拌所得混合物4小時。藉由TLC監測反應進展。所得溶液與甲苯(3×100mL)一起共蒸發，同時保持內部溫度低於25℃。藉由矽膠管柱層析法使用2%-10%甲醇/二氯甲烷純化所得粗物質獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：398.96[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.28(s,1H),7.86(br,2H),7.78(s,1H),6.52(t,J=6.8Hz,1H),4.53(t,J=2.6Hz,1H),3.83(dd,J=4.5Hz,J= 6.9Hz,1H),3.48-3.60(m,2H),2.50-2.58(m,1H),2.18-2.25(m,1H),0.90(s,9H),0.11(s,6H)。
步驟6.合成(2S,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣氛圍下，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇(300mg，0.752mmol)於無水ACN(30mL)中之經攪拌溶液中添加2-碘醯基苯甲酸(632mg，2.256mmol)。將混合物加熱至85℃且攪拌20分鐘。濾出固體。真空濃縮濾液獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟中。LC-MS：(ES,m/z)：396.94[M+H]+。
步驟7.合成((3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇
向100mL圓底燒瓶中，(2S,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛(434mg，0.820mmol)於1,4-二噁烷(25mL)中之經攪拌溶液中添加甲醛溶液(5mL)，隨後在0℃下在5分鐘內逐滴添加氫氧化鈉溶液(2N，5mL，10.00mmol)。將所得混合物升溫至25℃且攪拌3小時。起始核苷-醛全部耗盡後，藉由添加AcOH中和反應混合物。混合物用乙酸乙酯(60mL)稀釋且用水(2×20mL)、NaHCO3飽和水溶液(2×20mL)及鹽水(2×20mL)依序洗滌。有機層經Na2SO4乾燥且減壓蒸發。將殘餘物再溶解於無水EtOH(30mL)中且在0℃下，在氬氣氛圍下，分批添加四氫硼酸鈉(62.0mg，1.640mmol)。在25℃下攪拌16小時後，藉由添加AcOH中和反應混合物。真空濃縮混合物。將殘餘物懸浮於CHCl3(40mL)中且用水(2×15mL)及鹽水(2×15mL)依序洗滌。有機層經Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮。藉由矽膠管柱層析法使用二氯甲烷/甲醇(30/1)純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：428.99 [M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.10(s,1H),7.60(s,1H),6.86(br,2H),6.54(t,J=6.9Hz,1H),5.01(t,J=5.3Hz,1H),4.59(dd,J=3.0Hz,J=5.4Hz,1H),4.40(t,J=5.6Hz,1H),3.42-3.61(m,4H),2.60-2.69(m,1H),2.18-2.25(m,1H),0.89(s,9H),0.09(s,6H)。
步驟8.合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣氛圍下，將((3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇(166mg，0.387mmol)溶解於無水ACN(20mL)中，接著添加IBX(325mg，1.161mmol)。將所得混合物升溫至30℃且攪拌20小時。濾出固體。真空濃縮濾液獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟中。LC-MS：(ES,m/z)：426.97[M+H]+。
步驟9：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇
向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛(160mg，0.375mmol)於無水MeOH(8mL)中之經攪拌溶液中添加K2CO3(129mg，0.937mmol)，隨後在0℃下，在氬氣氛圍下，在攪拌下逐滴添加(1-重氮基-2-側氧基丙基)膦酸二甲酯(144mg，0.749mmol)。將所得混合物逐漸升溫至25℃，且攪拌16小時。真空濃縮所得混合物。藉由矽膠管柱層析法使用30%-50%乙酸乙酯/石油醚純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：422.98[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.10(s,1H),7.58(s,1H),6.90(br,2H),6.52(t,J=6.6Hz,1H),5.42-5.46(m,1H),4.64(t,J=5.7Hz,1H),3.59-3.67(m,1H),3.50-3.54(m,1H),3.48(s,1H),2.59-2.64(m,1H),2.27-2.31(m,1H),0.91(s,9H),0.12(s,6H)。
步驟10：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(6)
在氬氣氛圍下，在攪拌下，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇(64mg，0.151mmol)於THF(3mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加TBAF溶液(1.0M，151μl，0.151mmol)。在25℃下攪拌所得溶液1小時。真空濃縮所得混合物。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用DCM/MeOH(20/1至5/1)溶離獲得粗產物。藉由使用以下條件之製備型HPLC(1#-製備型-HPLC-011(Waters))進一步純化粗產物：管柱，SunFire Prep C18 OBD(最佳床密度)管柱，5μm，19×150mm；移動相，水(具有10mmol碳酸氫銨)及乙腈(5分鐘內10%乙腈升至45%，1.5分鐘內升至95%，1分鐘內降至5%)；偵測器，uv 254&220nm。收集含產物之溶離份且凍乾獲得呈固體狀之化合物6。LC-MS：(ES,m/z)：308.72[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.10(s,1H),7.54(s,1H),6.88(br,2H),6.52(t,J=6.4Hz,1H),5.39-5.52(m,2H),4.48(t,J=6.6Hz,1H),3.59(dd,J=12.0Hz,J=28.8Hz,2H),3.48(s,1H),2.47-2.54(m,1H),2.31-2.37(m,1H)。
中間物B 合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇(中間物B)
步驟1：合成4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
在0℃下，在氬氣下，向4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(5g，32.6mmol)於DMF(60mL)中之混合物中添加NIS(N-碘丁二醯亞胺)(7.33g，32.6mmol)。在25℃下，在氬氣氛圍中，在黑暗中攪拌所得混合物15小時。將反應混合物傾入冷水中且過濾混合物，固體用冷水(3×50mL)洗滌且在25℃下乾燥獲得呈固體狀之4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。LC-MS：(ES,m/z)：279.9[M+H]+1。1H-NMR：(400MHz,CD3SOCD3,ppm)：12.96(brs,1H),8.62(s,1H),7.95(d,J=1.8Hz,1H)。
步驟2：合成(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
在氬氣下，在20℃下，向氫化鈉(0.845g，21.13mmol)及4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(5.37g，19.21mmol)於乙腈(150mL)中之混合物中添加(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-氯-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(7.47g,19.21mmol)。在50℃下，在氬氣氛圍下攪拌所得混合物2小時，接著減壓蒸發溶劑。藉由矽膠(100-200)管柱 層析法用EA/PE(1/5)溶離純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：613.9[M+H]+1。1H-NMR：(400MHz,CDCl3,ppm)：8.63(s,1H),8.00(d,J=8.4Hz,2H),7.95(d,J=8.4Hz,2H),7.60(s,1H),7.32-7.25(m,4H),6.82(t,J=7.2Hz,1H),5.77(dd,J=6.4Hz,4Hz,1H),4.80-4.76(m,1H),4.71-4.62(m,2H),2.46(s,6H),1.66-1.31(m,2H)。
步驟3：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
向氨水(120mL，240mmol)於2-丙醇(30mL)中之經冷卻-50℃的經攪拌混合物中添加(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(12g，18.99mmol)，且在90℃下攪拌混合物48小時。減壓蒸發溶劑。藉由矽膠(100-200)管柱層析法用DCM/MeOH(10/1)溶離純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：377.0[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CD3SOCD3,ppm)：8.10(s,1H),7.81(s,1H),6.79(brs,2H),6.79-6.51(dd,J=8.1Hz,3Hz,1H),5.27(d,J=3.9Hz,1H),5.05(t,J=5.4Hz,1H),4.33(brs,1H),3.81(brs,1H),3.60-3.46(m,2H),2.51-2.44(m,1H),2.19-2.10(m,1H)。
步驟4：合成7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
在0℃下，在氬氣下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(6g，15.95mmol)及咪唑(4.34g，63.8mmol)於DMF(30mL)中之混合物中添加TBS-Cl(44.7mL，44.7mmol)。在23℃下，在氬氣氛圍下，攪拌所得混合物2小時。藉由LCMS監測反應進展。反應混合物用水(150mL)淬滅且用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(5×200mL)洗滌，經 無水硫酸鈉乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，藉由矽膠管柱用EA/PE(3：7)溶離純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：605.3[M+H]+1。1H-NMR：(400MHz,CD3SOCD3,ppm)：8.10(s,1H),7.58(s,1H),6.67(brs.2H),6.49(t,J=6.8Hz,1H),4.50(t,J=2.4Hz,1H),3.88-3.81(m,1H),3.74(dd,J=10.8Hz,5.6Hz,1H),3.65(dd,J=10.8Hz,4Hz,1H),2.50-2.49(m,1H),2.25-2.14(m,1H),0.89(s,18H),0.10-0.07(m,12H)。
步驟5：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇
在0℃下，向7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(6.6g，10.92mmol)於THF(66mL)中之混合物中添加TFA(16mL，208mmol)於水(16mL)中之溶液。在0℃下攪拌所得混合物4小時。藉由LCMS監測反應進展。減壓蒸發溶劑。將殘餘物溶解於DCM/MeOH(10/1，150mL)中，且使用碳酸氫鈉(5.0g)將溶液之pH值調整至7，過濾且減壓蒸發溶劑。藉由矽膠(100-200)管柱層析法用40-50% EA/PE溶離純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：491.1[M+H]+1。1H-NMR：(400MHz,CD3SOCD3,ppm)：8.14(s,1H),7.71(s,1H),6.88(brs,2H),6.47(dd,J=8.4Hz,6Hz,1H),4.51(t,J=2.4Hz,1H),3.80-3.79(m,1H),3.54-3.50(m,2H),2.57-2.53(m,1H),2.18-2.13(m,1H),0.89(s,9H),0.10(s,6H)。
步驟6：合成(2S,3S,5R)-3-[(第三丁基二甲基矽烷基)氧基]-5-{4-[(二甲基-Si{4}-亞硫基)胺基]-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}氧雜環戊烷-2-甲醛
在0℃下，在氬氣下，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲 醇(4.682g，9.55mmol)及DCC(N,N-二環己基碳化二亞胺)(6.1g，29.6mmol)於DMSO(40mL)中之混合物中添加吡啶(0.850mL，10.51mmol)及TFA(0.515mL，6.68mmol)。在20℃下，在氬氣下，攪拌所得混合物14小時。藉由LCMS監測反應進展。反應混合物用水(150mL)淬滅且用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(120mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥且過濾。減壓濃縮濾液獲得呈固體狀之粗標題產物。LC-MS：(ES,m/z)：567.0[M+H2O+H]+
步驟7：合成[(3S,5R)-3-[(第三丁基二甲基矽烷基)氧基]-5-{4-[(二甲基-Si{4}-亞硫基)胺基]-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2-(羥基甲基)氧雜環戊烷-2-基]甲醇混合物
在0℃下，向(2S,3S,5R)-3-[(第三丁基二甲基矽烷基)氧基]-5-{4-[(二甲基-Si{4}-亞硫基)胺基]-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}氧雜環戊烷-2-甲醛(80mg，0.146mmol)及甲醛(0.5mL，0.146mmol)於1,4-二噁烷(4mL)中之混合物中添加2M氫氧化鈉(0.5mL，1.000mmol)。在20℃下攪拌所得混合物4小時。藉由LCMS監測反應進展。反應混合物用乙酸(0.2mL)淬滅且用乙酸乙酯(3×40mL)萃取。經合併之有機層用飽和NaHCO3(30mL)接著鹽水(40mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，將殘餘物溶解於乙醇(4mL)中。在氬氣下，向此混合物添加四氫硼酸鈉(20mg，0.529mmol)。在20℃下攪拌此混合物36小時。藉由LCMS監測反應進展。反應混合物用乙酸(0.05mL)淬滅且用CHCl3(3×40mL)萃取。經合併之有機層用飽和NaHCO3(30mL)接著鹽水(40mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，藉由TLC用DCM/MeOH(12：1)溶離純化獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：581.1[M+H]+1。1H-NMR：(300MHz,CD3SOCD3,ppm)：8.09(s,0.6H),7.97(s,0.4H),7.69(s,0.6H),7.46(s,0.4H),6.66(brs,0.8H),6.53-6.42(m,1H),5.10(t,J=5.4Hz,0.4H),5.02(t,J=5.4Hz, 0.6H),4.58(brs,1H),4.42-4.37(m,1H),3.58-3.49(m,4H),2.78(d,J=2.7Hz,3H),2.68-2.61(m,1H),2.23-2.16(m,1H),0.90(s,9H),0.10(s,6H)。
步驟8：合成((3S,5R)-5-(4-胺基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇
在0℃下，向[(3S,5R)-3-[(第三丁基二甲基矽烷基)氧基]-5-{4-[(二甲基-Si{4}-亞硫基)胺基]-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2-(羥基甲基)氧雜環戊烷-2-基]甲醇(230mg，0.396mmol)於DCM(2mL)中之溶液中添加TFA(2mL，26.0mmol)。在20℃下，在氬氣下，攪拌所得混合物3小時。藉由LCMS監測反應進展。減壓濃縮反應混合物，藉由矽膠管柱用DCM/MeOH(95：5)溶離純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：521.2[M+H]+1。1H-NMR：(400MHz,CD3SOCD3,ppm)：8.12(s,1H),7.71(s,1H),7.10(brs,2H),6.43(t,J=6.8Hz,1H),4.50(dd,J=6Hz,3.2Hz,1H),3.50-3.37(m,4H),2.59-2.52(m,1H),2.17-2.11(m,1H),0.80(s,9H),0.00(s,6H)。
步驟9：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛
在18℃下，在氬氣下，向((3S,5R)-5-(4-胺基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇(960mg，1.845mmol)於乙腈(25mL)中之溶液中添加IBX(1550mg，5.53mmol)。在18℃下，在氬氣下，攪拌所得混合物18小時。藉由LCMS監測反應進展。過濾反應混合物。減壓濃縮濾液獲得呈固體狀之粗產物。此粗產物未經進一步純化即直接用於下一步驟中。LC-MS：(ES,m/z)：519.1[M+H]+。
步驟10：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇 (中間物B)
在0℃下，在氬氣下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛(190mg，0.366mmol)及K2CO3(127mg，0.916mmol)於MeOH(10mL)中之混合物中添加(1-重氮基-2-側氧基丙基)膦酸二甲酯(141mg，0.733mmol)。在18℃下，在氬氣下，攪拌所得混合物16小時。混合物之顏色從黃色變為藍色。藉由LCMS/TLC監測反應進展。減壓濃縮反應混合物，藉由矽膠管柱用DCM/MeOH(97：3)溶離純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：515.1[M+H]+1。1H-NMR：(400MHz,CDCl3,ppm)：8.22(s,1H),7.12(s,1H),6.25(dd,J=8.8Hz,5.6Hz,1H),5.84(brs,2H),4.71(dd,J=5.6Hz,2Hz,1H),4.01(d,J=12.4Hz,1H),3.80(d,J=16Hz,1H),3.17-3.10(m,1H),2.59(s,1H),2.27-2.21(m,1H),0.91(s,9H),0.11(s,6H)。
實例7：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(7)
在18℃下，在氬氣下，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇(中間物B，20mg，0.039mmol)於四氫呋喃(3mL)中之溶液中添加TBAF(0.05mL，0.050mmol)。在18℃下，在氬氣下，攪拌所得混合物0.5小時。藉由TLC監測反應進展。減壓濃縮反應混合物，藉由矽膠管柱用CH2Cl2/MeOH(7：1)溶離純化殘餘物，獲得粗產物，其藉由具有以下條件之製備型-HPLC純化：儀器，Water-1(26)； 管柱：Xbridge RP18,5μm,19×150mm；移動相：水(0.05%碳酸氫銨+二氧化碳)及乙腈(8分鐘內10%乙腈升至40%，維持100%持續2分鐘，2分鐘內降至10%)；偵測器，UV 220及254nm。將所收集之溶離份合併及減壓濃縮獲得呈固體狀之化合物7。LC-MS：(ES,m/z)：401.0[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,CD3OD)：δ 8.10(s,1H),7.63(s,1H),6.68(s,2H),6.49(t,J=6.4Hz,1H),5.52(d,J=5.2Hz,1H),4.48(q,J=6.0Hz,1H),3.64-3.60(m,1H),3.57-3.52(m,1H),3.48(s,1H),2.53-2.47(m,1H),2.35-2.29(m,1H)。
實例8：合成(2R,3S,5R)-5-(2,4-二胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(8)
步驟1：合成(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(2-胺基-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
在氬氣下，在室溫下，攪拌4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(2.0g，11.86mmol)及NaH(0.524g，13.09mmol)於乙腈(60mL)中之混合 物0.5小時。接著向混合物添加中間物A(4.628g，11.90mmol)，在室溫下攪拌10分鐘，接著在50℃下攪拌2小時。藉由LCMS監測過程。減壓濃縮反應混合物，藉由矽膠管柱用CH2Cl2/MeOH(92：8)溶離純化殘餘物獲得標題化合物。
LC-MS：(ES,m/z)：521.1[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,DMSO-d 6)：δ 7.93(dd,J=8.1Hz,4H),7.68-7.21(m,5H),6.78(s,2H),6.57(q,J=5.85Hz,1H),6.39(d,J=3.9Hz,1H),5.69(d,J=5.7Hz,1H),4.63-4.43(m,3H),3.04-2.94(m,1H),2.66(dd,J=4.95Hz,1H),2.41(d,J=7.8Hz,6H),1.99(s,1H)。
步驟2：合成(2R,3S,5R)-5-(2,4-二胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
在100℃下，攪拌(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(2-胺基-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(1.0g，0.960mmol)及氨水(50mL，0.960mmol)於2-丙醇(5mL)中之混合物20小時。藉由TLC監測反應進展。使反應混合物冷卻至環境溫度，且減壓濃縮，藉由矽膠管柱用CH2Cl2/MeOH(82：18)溶離純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：266.0[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,DMSO-d 6)：δ 6.93(d,J=3.6Hz,1H),6.76(s,2H),6.40(d,J=3.6Hz,1H),6.32(q,J=5.85Hz,1H),5.70(s,2H),5.20(d,J=3.6Hz,1H),4.29(d,J=2.4Hz,1H),3.78-3.74(m,1H),3.55-3.41(m,2H),3.16(s,1H),2.49-2.34(m,1H),2.08-2.01(m,1H)。
步驟3：合成7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二胺
在氬氣下，向(2R,3S,5R)-5-(2,4-二胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(1.39g，5.24mmol)及TBDMS-Cl (2.369g，15.72mmol)於DMF(6mL)中之混合物添加咪唑(1.784g，26.2mmol)。在20℃下，在氬氣氛圍下，攪拌所得混合物16小時。藉由LCMS/TLC監測反應進展。減壓濃縮反應混合物，藉由矽膠管柱用CH2Cl2/MeOH(92：8)溶離純化殘餘物獲得呈固體狀之標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：494.4[M+H]+，1H-NMR：(300MHz,CDCl3)：δ 7.58(s,2H),7.04(d,J=3.9Hz,1H),6.54(d,J=3.9Hz,1H),6.52(s,2H),6.32(dd,J=6.0Hz,1H),4.45(t,J=2.4Hz,1H),3.78(d,J=2.1Hz,1H),3.68(t,J=5.5Hz,2H),3.17(d,J=3.0Hz,1H),2.49-2.42(m,1H),2.17-2.10(m,1H),0.89(s,18H),0.10-0.09(m,12H)。
步驟4：合成N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二基)二苯甲醯胺
在氬氣下，向7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二胺(138mg，0.279mmol)及DMAP(5mg，0.041mmol)於吡啶(5mL)中之混合物添加苯甲醯氯(158mg，1.124mmol)。在0℃下，在氬氣下，攪拌所得混合物4小時。藉由LCMS/TLC監測反應進展。反應混合物藉由水(50mL)淬滅且用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(40mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，藉由矽膠管柱用PE/EA(2：1)溶離純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：702.3[M+H]+，1H-NMR：(300MHz,CDCl3)：δ 11.11(s,1H),10.80(s,1H),8.09(d,J=7.2Hz,2H),7.73(d,J=7.2Hz,2H),7.66-7.43(m,8H),6.62-6.54(m,2H),4.56(s,1H),3.84-3.64(m,4H),2.81-2.72(m,1H),2.26-2.22(m,1H),0.90-0.83(m,18H),0.11-0.01(m,12H)。
步驟5：合成N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5- (羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二基)二苯甲醯胺
在0℃下，向N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二基)二苯甲醯胺(110mg，0.157mmol)於THF(4mL)中之混合物中添加TFA(0.5mL，6.49mmol)於水(0.5mL)中之溶液。在0℃下攪拌所得混合物4小時。藉由LCMS監測反應進展。減壓濃縮反應混合物，藉由矽膠管柱用CH2Cl2/MeOH(95：5)溶離純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：588.6[M+H]+,1H-NMR：(300MHz,CDCl3)：δ 11.11(s,1H),10.81(s,1H),8.09(d,J=7.2Hz,2H),7.97(d,J=7.2Hz,2H),7.65-7.46(m,8H),6.62-6.56(m,2H),4.96(t,J=5.4Hz,1H),4.58(t,J=2.7Hz,1H),3.82-3.77(m,2H),3.56-3.51(m,2H),2.72-2.67(m,1H),2.27-2.21(m,1H),0.88(s,9H),0.09(s,6H)。
步驟6：合成N,N'-(7-((2R,4S,5S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-甲醯基四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二基)二苯甲醯胺
在氬氣下，向N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二基)二苯甲醯胺(35mg，0.060mmol)於乙腈(5mL)中之混合物中添加IBX(42mg，0.150mmol)。在50℃下，在氬氣下，攪拌所得混合物50分鐘。藉由LCMS監測反應進展。使反應混合物冷卻至環境溫度且過濾。減壓濃縮濾液，粗產物未經進一步純化即直接用於下一步驟中。LC-MS：(ES,m/z)：618.3[M+CH3OH]+。
步驟7：合成N,N'-(7-((2R,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5,5-雙(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二基)二苯甲醯胺
向N,N'-(7-((2R,4S,5S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-甲醯基四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二基)二苯甲醯胺(35mg，0.060mmol)於1,4-二噁烷(5mL)中之溶液中添加甲醛(1mL，0.060mmol)、NaOH(1mL，2.000mmol)，在20℃下攪拌混合物4小時，冷卻至0℃，用AcOH淬滅至pH 6，添加水(40mL)且用乙酸乙酯(3×40mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(30mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，將殘餘物溶解於乙醇(5.00mL)中，在氬氣下添加NaBH4(5.65mg，0.149mmol)。在20℃下攪拌所得混合物16小時。藉由LCMS監測反應進展。使反應混合物冷卻至環境溫度，用AcOH淬滅至pH 6，添加水(40mL)且用乙酸乙酯(3×40mL)萃取。濃縮有機層且藉由矽膠管柱用CH2Cl2/MeOH(20：1)溶離純化獲得呈固體狀之標題產物。LC-MS：(ES,m/z)：618.2[M+H]+,1H-NMR：(400MHz,CDCl3)：δ 11.11(s,1H),10.80(s,1H),8.09(d,J=7.2Hz,2H),7.73(d,J=7.2Hz,2H),7.66-7.43(m,8H),6.62-6.54(m,2H),4.56(s,1H),3.84-3.64(m,4H),2.81-2.72(m,1H),2.26-2.22(m,1H),0.90-0.83(m,18H),0.11-0.01(m,12H)。
步驟8：合成N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-甲醯基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二基)二苯甲醯胺
在20℃下，在氬氣下，向N,N'-(7-((2R,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5,5-雙(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二基)二苯甲醯胺(30mg，0.049mmol)於乙腈(10mL)中之溶液中添加IBX(40mg，0.143mmol)。在25℃下，在氬氣下，攪拌所得混合物3小時。藉由LCMS監測反應進展。使反應混合物冷卻至環境溫度且過濾。減壓濃縮濾液獲得呈固體狀之粗產物，其未經進一步純化即直接用於下一步驟中。LC-MS：(ES,m/z)：616.2[M+H]+。
步驟9：合成N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-乙炔基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二基)二苯甲醯胺
在0℃下，在氬氣下，向N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-甲醯基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二基)二苯甲醯胺(70mg，0.114mmol)及K2CO3(39.3mg，0.284mmol)於MeOH(5mL)中之混合物添加(2-重氮基-3-側氧基丁醯基)膦酸二甲酯(50.0mg，0.227mmol)於MeOH(0.25mL)中之溶液。在25℃下，在氬氣下，攪拌所得混合物16小時。藉由LCMS監測反應進展。減壓濃縮反應混合物，藉由TLC用CH2Cl2/MeOH(20：1)溶離純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：612.4[M+H]+。
步驟10：合成(2R,3S,5R)-5-(2,4-二胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(8)
在20℃下，在氬氣下，向N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-乙炔基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二基)二苯甲醯胺(40mg，0.065mmol)於MeOH(4mL)中之溶液添加NaOCH3於MeOH中之溶液(0.065mL，0.065M)。在40℃下，在氬氣下，攪拌所得混合物48小時。藉由LCMS監測反應進展。使反應混合物冷卻至環境溫度，且減壓濃縮，藉由TLC用CH2Cl2/MeOH(20：1)溶離純化殘餘物獲得呈固體狀之粗中間物(27mg)，其在氬氣下稀釋於THF(3mL)中。在20℃下添加TBAF(1M，0.040mL，0.04mmol)。在20℃下，在氬氣下攪拌所得混合物0.5小時。藉由LCMS/TLC監測反應進展。減壓濃縮反應混合物，藉由TLC用CH2Cl2/MeOH(5：1)溶離純化殘餘物獲得粗產物(15mg)，其接著藉由具有以下條件之製備型-HPLC純化：儀器，Waters-2767-製備型；管柱：Xbridge RP18,5μm,19×150mm；移動相：水(0.05%碳酸氫銨 (二氧化碳)及乙腈(8分鐘內5%乙腈升至40%)；偵測器，UV 220及254nm。將所收集之溶離份合併且減壓濃縮獲得呈固體狀之化合物8。LC-MS：(ES,m/z)：618.2[M+H]+，1H-NMR：(400MHz,CDCl3)：δ 6.85(d,J=3.6Hz,1H),6.55(s,2H),6.36(d,J=4.0Hz,2H),5.56(s,2H),5.48-5.43(m,2H),4.42(q,J=5.6Hz,1H),3.61-3.49(m,2H),3.44(s,1H),2.47-2.40(m,1H),2.26-2.21(m,1H)。
實例9：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(9)
步驟1：合成4-疊氮基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺
在氬氣氛圍下，向4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(3.5g，20.76mmol)於無水DMSO(35mL)中之經攪拌溶液中添加疊氮化鈉(2.025 g，31.1mmol)於水(3.50mL)中之溶液。將混合物加熱至100℃且攪拌隔夜。藉由TLC及LCMS監測反應進展。將所得混合物冷卻至環境溫度。添加250g碎冰且在0℃下攪拌混合物30分鐘。形成沈澱物。藉由過濾收集沈澱物，用冷水洗滌且經P2O5真空乾燥隔夜，獲得呈固體狀之4-疊氮基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 11.91(brs,1H),7.96(brs,2H),7.13(t,J=3.0Hz,1H),6.72(dd,J=2.0Hz,J=3.2Hz,1H).LC-MS：(ES,m/z)：176.00[M+H]+。
步驟2：合成4-疊氮基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
在氬氣氛圍下，將氟化氫-吡啶(含70% HF之30% Py)(12mL，133mmol)稱重至鐵氟龍瓶子中。向其中添加4-疊氮基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(3.1g，17.70mmol)。在環境溫度下攪拌混合物直至其變成澄清溶液，接著冷卻至-60℃，隨後在10分鐘內逐滴添加亞硝酸第三丁酯(2.5mL,21.02mmol)。在-60℃至-40℃之間攪拌所得混合物2小時。藉由TLC及LCMS監測反應進展。將混合物倒入冷NaHCO3水溶液(150mL，飽和)中。粗產物用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，用鹽水(100mL×2)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮濾液獲得殘餘物。接著藉由矽膠管柱層析法使用乙酸乙酯/石油醚(1/4)純化殘餘物獲得呈固體狀之4-疊氮基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 12.43(brs,1H),7.48(d,J=3.9Hz,1H),6.50(d,J=3.6Hz,1H)。F-NMR：(282MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ -54.57(s,1F).LC-MS：(ES,m/z)：179.20[M+H]+。
步驟3：合成(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-疊氮基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
在0℃下，在氬氣氛圍下，在50mL兩頸圓底燒瓶中，向礦物油中60%氫化鈉分散液(0.272g，6.79mmol)於無水DMF(20mL)中之經 攪拌懸浮液分批添加4-疊氮基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.1g，6.18mmol)，且在此溫度下攪拌混合物5分鐘。在攪拌下添加中間物A(2.4g，6.17mmol)。將反應混合物升溫至25℃且攪拌2小時。藉由TLC及LCMS監測反應進展。混合物用乙酸乙酯(100mL)稀釋，用水(70mL)洗滌。用乙酸乙酯(60mL×2)再萃取水層。合併之有機層用鹽水(100mL×3)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮。藉由矽膠管柱層析法使用乙酸乙酯/石油醚(1/10)純化粗產物獲得標題化合物。1H-NMR：(400MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.00(d,J=8.4Hz,2H),7.95(d,J=8.0Hz,2H),7.32-7.23(m,4H),6.74(dd,J=6.4Hz,J=8.0Hz,1H),6.49(d,J=4.0Hz,1H),5.75-5.74(m,1H),4.75-4.54(m,3H),2.85-2.74(m,2H),2.47-2.43(m,6H)。F-NMR：(376MHz,CDCl3,ppm)：δ -52.26(s,1F,β異構體)，-52.48(s,1F,α異構體).LC-MS：(ES,m/z)：531.42[M+H]+。
步驟4：合成(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
在氬氣氛圍下，向(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-疊氮基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(2.0g，3.77mmol)於MeOH(10mL)與DCM(15mL)之混合物中的經攪拌溶液中添加丙烷-1,3-二硫醇(0.816g，7.54mmol)，隨後在25℃下，在攪拌下，在10分鐘內逐滴添加三乙胺(0.763g，7.54mmol)。在25℃下攪拌混合物30分鐘。藉由TLC監測反應進展。真空濃縮所得混合物。接著藉由矽膠管柱層析法使用乙酸乙酯/石油醚(42% EA/PE)純化殘餘物獲得呈粉末狀之標題化合物。1H-NMR：(400MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.00(d,J=8.0Hz,2H),7.97(d,J=8.0Hz,2H),7.33-7.26(m,4H),7.12(d,J=4.0Hz,1H),6.72(dd,J=6.2Hz,J=8.2Hz,1H),6.38(d,J=3.6Hz,1H),5.75-5.72(m,1H),5.36(brs,2H),4.73-4.57(m, 3H),2.79-2.74(m,2H),2.47(s,3H),2.44(s,3H)。F-NMR：(376MHz,CDCl3,ppm)：δ -52.97(s,1F,β異構體)，-53.10(s,1F,α異構體).LC-MS：(ES,m/z)：505.63[M+H]+。
步驟5：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
在0℃，在氬氣氛圍下，在攪拌下，在5分鐘內向(2R,3S,5R)-4-甲基苯甲酸5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(((4-甲基苯甲醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(1.75g，3.47mmol)於無水MeOH(10mL)中之經攪拌溶液中注射甲醇鈉MeOH溶液(1.0M，3.47mL，3.47mmol)。在0℃至10℃下攪拌所得混合物4小時。藉由TLC及LCMS監測反應進展。藉由添加AcOH中和所得混合物，接著減壓濃縮。接著藉由矽膠管柱層析法使用二氯甲烷/甲醇(6% MeOH/DCM)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 7.55(brs,2H),7.31(d,J=3.6Hz,1H),6.61(d,J=3.6Hz,1H),6.34(dd,J=6.4Hz,J=8.0Hz,1H),5.26(d,J=3.6Hz,1H),4.92(t,J=5.0Hz,1H),4.32(d,J=2.4Hz,1H),3.82-3.79(m,1H),3.58-3.46(m,2H),2.48-2.41(m,1H),2.19-2.13(m,1H)。F-NMR：(376MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ -53.77(s,1F,β異構體)，-53.98(s,1F,α異構體).LC-MS：(ES,m/z)：269.20[M+H]+。
步驟6：合成7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
在氬氣氛圍下，將(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(850mg，3.17mmol)及咪唑(863mg，12.68mmol)稱重至50mL圓底燒瓶中。向燒瓶中注射無水DMF(10mL)，隨後分批添加TBS-Cl(1433mg，9.51mmol)。在25℃下攪 拌混合物2小時。反應完全後，混合物用乙酸乙酯(60mL)稀釋，用水(30mL×2)、NaHCO3水溶液(飽和，30mL×2)及鹽水(30mL×2)分別洗滌。收集有機層且經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮獲得粗產物。接著藉由矽膠管柱層析法使用乙酸乙酯/石油醚(20% EA/PE)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 7.55(brs,2H),7.26(d,J=3.6Hz,1H),6.60(d,J=3.3Hz,1H),6.31(t,J=6.6Hz,1H),4.55-4.50(m,1H),3.80-3.61(m,4H),2.64-2.55(m,1H),2.23-2.17(m,1H),0.90-0.87(m,18H),0.11-0.06(m,12H)。F-NMR：(282MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ -53.64(s,1F,β異構體)，-53.78(s,1F,α異構體).LC-MS：(ES,m/z)：497.58[M+H]+。
步驟7：((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇
在0℃下，在攪拌下，在10分鐘內向7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(1.4g，2.82mmol)於THF(24mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加TFA水溶液(TFA/H2O=1/1，v/v，12mL)。在0℃下攪拌所得混合物。藉由TLC監測反應進展。攪拌5小時後，起始二TBS保護之核苷全部耗盡，接著反應混合物與甲苯(50mL×3)一起共蒸發。殘餘物再溶解於MeOH/DCM混合物(15% MeOH/DCM，50mL)中。在0℃下添加固體NaHCO3(2g)，隨後添加水(1mL)。攪拌所得混合物30分鐘。pH值調整至7後，濾出固體，收集濾液且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析法使用乙酸乙酯/石油醚(40% EA/PE)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 7.57(brs,2H),7.32(d,J=3.6Hz,1H),6.61(d,J=3.6Hz,1H),6.32(dd,J=6.0Hz,J=8.0Hz,1H),4.99-4.96(m,1H),4.52(t,J=2.8Hz,1H),3.79(q,J=2.4Hz,1H),3.54-3.49(m,2H),2.57-2.53 (m,1H),2.19-2.13(m,1H),0.91-0.88(m,9H),0.13-0.11(m,6H)。F-NMR：(376MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ -53.71(s,1F,β異構體)，-53.89(s,1F,α異構體).LC-MS：(ES,m/z)：383.36[M+H]+。
步驟8：合成(2S,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛
在室溫下，在氬氣氛圍下，在2分鐘內將TFA(0.051mL，0.659mmol)注入至((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇(360mg，0.941mmol)、DCC(N,N-二環己基碳化二亞胺)(602mg，2.92mmol)及吡啶(0.084mL，1.035mmol)於無水DMSO(2mL)中之經攪拌溶液中，且攪拌混合物隔夜。藉由TLC及LCMS監測反應進展。過濾混合物移除二環已基脲，且將濾液分配於乙酸乙酯(30mL)與H2O(30mL)之間。收集有機層且用鹽水(20mL×2)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓蒸發濾液獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟。LC-MS：(ES,m/z)：381.20[M+H]+,413.20[M+MeOH+H]+。
步驟9：合成((3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇
在50mL圓底燒瓶中，向(2S,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛(400mg，1.051mmol)於1,4-二噁烷(8mL)中之經攪拌溶液中添加甲醛溶液(1.2mL，16.01mmol)，隨後在2分鐘內逐滴添加氫氧化鈉溶液(1.2mL，2.400mmol)。在25℃下攪拌所得混合物7小時。起始核苷全部耗盡後，藉由添加AcOH中和反應混合物。所得混合物用AcOEt(100mL)稀釋且用水(2×40mL)、NaHCO3飽和水溶液(2×40mL)及鹽水(50mL)依序洗滌。有機層經Na2SO4乾燥且減壓蒸發。殘餘物再溶解於EtOH(3mL)中且在0℃下分批添加硼氫化鈉(199mg，5.26 mmol)。在25℃下攪拌5小時後，藉由添加AcOH中和反應混合物。減壓濃縮混合物，將殘餘物分配於CHCl3(100mL)與水(50mL)之間。有機層用水及鹽水依序洗滌，經Na2SO4乾燥，且減壓蒸發。藉由矽膠管柱層析法使用二氯甲烷/甲醇(30/1)純化殘餘物獲得標題化合物。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 7.55(brs,2H),7.34(d,J=3.6Hz,1H),6.60(d,J=3.6Hz,1H),6.35(t,J=7.0Hz,1H),4.90(t,J=3.6Hz,1H),4.60(q,J=2.8Hz,1H),4.41(t,J=3.6Hz,1H),3.60-3.43(m,4H),2.69-2.62(m,1H),2.23-2.17(m,1H),0.92(s,9H),0.09(s,6H)。F-NMR：(376MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ -53.80(s,1F,β異構體).LC-MS：(ES,m/z)：413.32[M+H]+,435.34[M+Na]+。
步驟10：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣氛圍下，向50mL圓底燒瓶中，向((3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇(180mg，0.436mmol)於無水乙腈(15mL)及無水DMSO(1.5mL)中之經攪拌溶液中添加IBX(367mg，1.309mmol)。在20℃下攪拌所得混合物8小時。過濾反應混合物，用二氯甲烷洗滌。收集濾液且減壓濃縮。將殘餘物再溶解於乙酸乙酯(40mL)中，用水(3×15mL)及鹽水(2×20mL)依序洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液獲得標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟。1H-NMR：(400MHz,CDCl3,ppm)：δ 9.65(s,1H),7.60(d,J=3.6Hz,1H),6.43(dd,J=5.6Hz,J=9.6Hz,1H),6.39(d,J=3.6Hz,1H),5.56-5.43(m,3H),4.96(d,J=4.8Hz,1H),4.08(d,J=11.2Hz,1H),3.81(d,J=12.8Hz,1H),3.27-3.19(m,1H),2.25(dd,J=5.4Hz,J=13.0Hz,1H),0.91(s,9H),0.11(d,J=5.2Hz,6H)。
F-NMR：(376MHz,CDCl3,ppm)：δ -53.14(s,1F)。LC-MS：(ES, m/z)：411.21[M+H]+。
步驟11：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇
在氬氣氛圍下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛(190mg，0.463mmol)於無水MeOH(8mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸鉀(160mg，1.157mmol)。將混合物冷卻至0℃，接著在1分鐘內逐滴添加(1-重氮基-2-側氧基丙基)膦酸二甲酯(178mg，0.926mmol)。將所得混合物升溫至25℃且攪拌隔夜。減壓濃縮反應混合物，接著藉由矽膠管柱層析法使用甲醇/二氯甲烷(4.8% MeOH/DCM)純化獲得標題化合物。1H-NMR：(400MHz,CDCl3,ppm)：δ 6.99(d,J=3.6Hz,1H),6.35(d,J=3.6Hz,1H),6.28(dd,J=6.0Hz,J=8.8Hz,1H),5.45-5.33(m,3H),4.76(q,J=2.8Hz,1H),4.03(dd,J=2.0Hz,J=12.4Hz,1H),8.16-3.79(m,1H),3.12-3.06(m,1H),2.70(s,1H),2.33-2.27(m,1H),0.94(s,9H),0.16(d,J=8.0Hz,6H)。F-NMR：(376MHz,CDCl3,ppm)：δ -53.26(s,1F).LC-MS：(ES,m/z)：407.30[M+H]+。
步驟12：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(9)
在環境溫度下，在氬氣氛圍下，在攪拌下，在1分鐘內，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-2-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇(15mg，0.037mmol)於無水THF(1mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加TBAF THF溶液(0.037mL，0.037mmol)。在環境溫度下攪拌介質2小時。藉由TLC監測反應進展。起始核苷全部耗盡後，真空濃縮混合物，接著藉由製備型TLC(MeOH/DCM=1/15)純化殘餘物獲得粗產物(10mg)。藉由具有 以下條件之製備型HPLC進一步純化粗產物：(1#-製備型-HPLC-011(Waters))：管柱，X-bridge C18管柱，19×150mm,5μm；移動相，具有10mmol碳酸氫銨之水及乙腈(5分鐘內5%乙腈升至30%，2分鐘內升至95%)；偵測器，uv 254&220nm。收集含產物之溶離份且凍乾獲得呈固體狀之化合物9。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 7.57(brs,2H),7.28(d,J=3.6Hz,1H),6.61(d,J=3.6Hz,1H),6.35(t,J=6.4Hz,1H),5.51(d,J=5.6Hz,1H),5.27(t,J=6.0Hz,1H),4.48(dd,J=6.4Hz,J=12.0Hz,1H),3.61(dd,J=5.6Hz,J=11.6Hz,1H),3.53(dd,J=6.4Hz,J=12.0Hz,1H),3.48(s,1H),2.50-2.46(m,1H),2.37-2.31(m,1H)。F-NMR：(376MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ -53.67(s,1F).LC-MS：(ES,m/z)：293.15[M+H]+,315.15[M+Na]+。
實例10：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-羥基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲腈(10)
步驟1：合成5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛肟
在氬氣氛圍下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛(實例1，中間物C，50mg，0.127mmol，1.0當量)於無水吡啶(2.5mL)中之經攪拌溶液中添加羥基胺鹽酸鹽(26.6mg，0.382mmol，3.0當量)。在30℃下攪拌所得混合物2小時。藉由LCMS監測反應進展。真空濃縮反應混合物，接著將殘餘物溶解於乙酸乙酯(50mL)中，用水(2×30mL)及鹽水(35mL)依序洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且真 空濃縮濾液。藉由製備型TLC(DCM/MeOH=10/1)純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：408.20[M+H]+。
步驟2：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲腈
在20℃下，在氬氣氛圍下，在攪拌下，向5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛肟(40mg，0.098mmol)及三乙胺(105mg，1.038mmol)於無水DCM(5mL)中之經攪拌混合物中逐滴添加2,2,2-三氟乙酸酐(110mg，0.524mmol)。在20℃下攪拌所得混合物20小時。藉由LCMS監測反應進展。反應混合物用DCM(30mL)稀釋，用NaHCO3飽和水溶液(25mL)及鹽水(25mL)依序洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮濾液。藉由製備型TLC(DCM/MeOH=10/1)純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：(ES,m/z)：390.11[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CD3OD,ppm)：δ 8.10(s,1H),7.30(d,J=3.6Hz,1H),6.68(t,J=6.9Hz,1H),6.64(d,J=3.6Hz,1H),4.90(t,J=6.3Hz,1H),3.85(dd,J=12.0Hz,J=21.6Hz,2H),2.85-2.94(m,1H),2.42-2.49(m,1H),1.02(s,9H),0.26(d,J=9.0Hz,6H)。
步驟3：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-羥基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲腈(10)
在15℃下，在氬氣氛圍下，在攪拌下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲腈(35mg，0.090mmol)於無水THF(5mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加TBAF THF溶液(1.0M，0.108mL，0.108mmol)在15℃下攪拌所得混合物0.5小時。藉由LCMS及TLC監測反應進展。真空濃縮反應混合物。藉由製備型TLC(DCM/MeOH=10/1)純化殘餘物獲得糊漿。藉由具有以下條件之製備型HPLC進一步純化粗產 物：(1#-製備型-HPLC-011(Waters))：管柱，SunFire C18逆相管柱，19×150mm,5μm；移動相，具有10mmol碳酸氫銨之水及乙腈(7.5分鐘內5%乙腈升至20%，2分鐘內升至95%，1分鐘內降至5%)；偵測器，uv 254&220nm。收集含產物之溶離份且凍乾獲得呈固體狀之標題化合物10。LC-MS：(ES,m/z)：276.10[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.07(s,1H),7.34(d,J=3.6Hz,1H),7.33(br,2H),7.08(s,1H),6.64(t,J=7.0Hz,1H),6.61(d,J=3.6Hz,1H),6.27(d,J=4.8Hz,1H),5.82(t,J=6.0Hz,1H),4.61(dd,J=4.8Hz,J=10.0Hz,1H),3.75(dd,J=5.6Hz,J=12.0Hz,1H),3.62(dd,J=6.0Hz,J=11.6Hz,1H),2.74-2.81(m,1H),2.33-2.38(m,1H)。
實例11：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(11)
步驟1：合成4-(甲基硫基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪
4-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪之合成描述於WO2011/150356A1，2011年中。
向500mL圓底燒瓶中置入4-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪(17g，110.70mmol)及(甲基硫基)鈉(15g，214.01mmol)於四氫呋喃(300mL)中之溶液。在室溫下攪拌所得溶液1個隔夜。濾出固體。真空濃縮所得混合物。將殘餘物施用至乙酸乙酯/石油醚(1：10)之矽膠管柱上。此產生標題化合物。LC-MS(ES,m/z)：166[M+H]+。
步驟2：(3R,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)-2-(4-(甲基硫基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫呋喃-2-醇
在78℃下，在氬氣氛圍下，向4-(甲基硫基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪(1.650g，9.99mmol)於THF(30mL)中之溶液中添加二異丙胺基鋰(7.5mL，15.00mmol)，且在-78℃下攪拌所得混合物30分鐘。此後，在-78℃下，在氬氣氛圍下，添加含(3R,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)二氫呋喃-2(3H)-酮(4.18g，9.99mmol)之THF(10mL)且在-78至-50℃下攪拌120分鐘。藉由添加氯化銨(水溶液，10mL)淬滅反應物，接著用乙酸乙酯(300mL)萃取。有機層用(3×50mL)鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且真空濃縮。將殘餘物施加至用乙酸乙酯/石油醚(1：5)溶離之矽膠管柱上獲得標題化合物。LC-MS：584.2[M+H]+。
步驟3：合成7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-4-(甲基硫基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪
在0℃下，在氬氣氛圍下，向(3R,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)-2-(4-(甲基硫基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫呋喃-2-醇(3.00g，5.14mmol)於DCM(30mL)中之溶液添加三乙基矽烷(2.390g，20.56mmol)及三氟硼烷(0.697g，10.28mmol)。在0℃下攪 拌所得溶液30分鐘，接著藉由添加碳酸氫鈉(水溶液，20mL)淬滅，藉由DCM(200mL)萃取。有機層用3×50mL鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且真空濃縮。將殘餘物施加至用乙酸乙酯/石油醚(1：10)溶離之矽膠管柱上獲得標題化合物。LC-MS：568.4[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.21(s,1H),7.23-7.36(m,15H),6.81(d,J=4.5Hz,1H),6.70(d,J=4.5Hz,1H),5.69(d,J=4.2Hz,1H),4.37-4.62(m,7H),4.22-4.26(m,1H),4.10-4.13(m,1H),3.66-3.67(m,1H),3.62-3.63(m,1H),2.75(s,3H)。
步驟4：合成7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
在-400℃下，在密封試管中向7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-4-(甲基硫基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪(4.6g，8.10mmol)於2-丙醇(5mL)中之溶液中沖入氨氣(1350mg，79mmol)持續60分鐘。在80℃下攪拌所得混合物16小時後，將其蒸發獲得標題化合物。LC-MS：537.3[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,DMSO,ppm)：δ 7.80(s,1H),7.69(s,2H),7.24-7.36(m,15H),6.88(d,J=4.5Hz,1H),6.80(d,J=4.2Hz,1H),5.44(d,J=5.4Hz,1H),4.49-4.62(m,6H),4.31(t,J=5.1Hz,1H),4.15-4.18(m,1H),4.09-4.12(m,1H),3.29-3.67(m,2H)。
步驟5：合成(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-(羥基甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
在25℃下，在氫氣下，向7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(100mg，0.186mmol)於乙酸(2mL)中之溶液中添加Pd(OH)2(10mol%)/C(100mg，0.130mmol)持續4小時。通過矽藻土墊過濾混合物且蒸發濾液。將殘餘物施加至用MeOH/DCM(1：8)溶離之矽膠管柱上獲得標題 化合物。LC-MS：267.2[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,DMSO,ppm)：δ 7.79(s,1H),7.77(s,2H),6.84(d,J=4.2Hz,1H),6.68(d,J=4.2Hz,1H),5.10(d,J=6.6Hz,1H),4.95(d,J=6.6Hz,1H),4.84(d,J=4.8Hz,1H),4.76(t,J=5.4Hz,1H),4.20-4.25(m,1H),3.94(d,J=4.8Hz,1H),3.78(d,J=4.2Hz,1H),3.41-3.64(m,2H)。
步驟6：合成(6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-醇
在氬氣下，將(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-(羥基甲基)四氫呋喃-3,4-二醇(790mg，2.97mmol)及1H-咪唑(606mg，8.90mmol)溶解於DMF(20mL)中。在0℃下逐滴添加1,3-二氯-1,1,3,3-四異丙基二矽烷(936mg，2.97mmol)。在25℃下，在氬氣下攪拌所得混合物5小時後，添加水(10mL)且用乙酸乙酯(400mL)稀釋所得混合物。有機相用(3×60mL)水及60mL鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且真空濃縮。將殘餘物施加至用MeOH/DCM(1：20)溶離之矽膠上獲得標題化合物。LC-MS：509.3[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,DMSO,ppm)：δ 7.81(s,1H),7.70(s,2H),6.82(d,J=4.8Hz,1H),6.61(d,J=4.4Hz,1H),5.20(d,J=4.8Hz,1H),5.16(d,J=1.6Hz,1H),4.31-4.35(m,1H),4.12-4.15(m,1H),4.00-4.03(m,1H),3.88-3.91(m,1H),0.96-1.05(m,28H)
步驟7：合成O-((6aR,8S,9S,9aR)-O-苯基硫代碳酸8-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-基)酯
在氬氣下，將(6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-醇(210mg，0.413mmol)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(202mg，1.651mmol)溶解於DCM(10mL)中。在0℃逐滴添加O-苯基氯硫碳酸酯(143 mg，0.826mmol)。在25℃下，在氬氣下攪拌反應物2小時後，所得混合物用DCM(100mL)稀釋，接著用3×30mL水及30mL鹽水洗滌。有機層經Na2SO4乾燥，且真空濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用乙酸乙酯/石油醚(3：1)溶離獲得標題化合物。
LC-MS：645.2[M+H]+,1H-NMR：(400MHz,DMSO,ppm)：δ 7.83(s,2H),7.79(s,1H),7.48(t,J=8.0Hz,2H),7.33(t,J=7.2Hz,1H),7.14(d,J=7.6Hz,2H),6.80(d,J=4.4Hz,1H),6.71(d,J=4.4Hz,1H),6.16(dd,J=2.4Hz,J=5.6Hz,1H),5.46(d,J=2.0Hz,1H),4.90(dd,J=5.6Hz,J=8.8Hz,1H),3.95-4.06(m,2H),3.85-3.87(m,1H),0.96-1.06(m,28H)。
步驟8：合成7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-8-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
在氬氣下，將O-((6aR,8S,9S,9aR)-O-苯基硫代碳酸8-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-基)酯(1.45g，2.248mmol)、AIBN(0.738g，4.50mmol)及三丁基錫烷(3.93g，13.49mmol)溶解於甲苯(20mL)中。在80℃下在氬氣下攪拌反應物3小時後，真空濃縮所得溶液。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用乙酸乙酯/石油醚(2.5：1)溶離獲得標題化合物。LC-MS：493.4[M+H]+,1H-NMR：(400MHz,DMSO,ppm)：δ 7.81(s,1H),7.79(s,2H),6.81(d,J=4.4Hz,1H),6.60(d,J=4.4Hz,1H),5.46(t,1H),4.58-4.62(m,1H),3.90-4.00(m,1H),3.75-3.80(m,2H),2.20-2.30(m,1H),2.30-2.40(m,1H),0.98-1.06(m,28H)。
步驟9：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
在氬氣下，將7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-8-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(1.0 g，2.029mmol)溶解於THF(10mL)中。在20℃下，向反應溶液中逐滴添加TBAF(0.531g，2.029mmol)。在20℃下在氬氣下攪拌所得溶液2小時後，將其真空濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用DCM/MeOH(20：1)溶離獲得標題化合物。LC-MS：251.2[M+H]+,1H-NMR：(400MHz,DMSO,ppm)：δ 7.83(s,1H),7.81(s,2H),6.84(d,J=4.8Hz,1H),6.82(d,J=4.4Hz,1H),5.47-5.51(m,1H),5.06(d,J=4.0Hz,1H),4.73(t,J=6.0Hz,1H),4.22(m,1H),3.74-3.78(m,1H),3.32-3.45(m,2H),2.16-2.20(m,1H),2.09-2.14(m,1H)。
步驟10：合成7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
在氬氣下，將(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(300mg，1.199mmol)、1H-咪唑(490mg，7.19mmol)及第三丁基氯二甲基矽烷(723mg，4.80mmol)溶解於DMF(4.0mL)中。在20℃下在氬氣下攪拌反應混合物5小時後，所得混合物用乙酸乙酯(100mL)稀釋，用(3×30mL)水及30mL鹽水洗滌。有機層經Na2SO4乾燥，且真空濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用乙酸乙酯/石油醚(2：1)溶離獲得標題化合物。LC-MS：479.3[M+H]+,1H-NMR：(300MHz,DMSO,ppm)：δ 7.82(s,1H),7.75(s,2H),6.82(d,J=4.5Hz,1H),6.61(d,J=4.5Hz,1H),5.48-5.53(m,1H),4.42(m,1H),3.78(m,1H),3.48-3.62(m,2H),2.22-2.27(m,1H),2.04-2.10(m,1H),0.78-0.89(m,18H),0.00-0.10(m,12H)。
步驟11：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇
將7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4- 胺(500mg，1.044mmol)溶解於THF(8.0mL)、H2O(2.0mL)及TFA(2.0mL)中且在0℃下攪拌4小時。使用碳酸氫鈉將反應混合物調整至pH 7，接著用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，用(3×20mL)水及20mL鹽水洗滌。有機層經Na2SO4乾燥，且真空濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用乙酸乙酯/石油醚(2：1)溶離獲得標題化合物。LC-MS：365.3[M+H]+,1H-NMR：(400MHz,DMSO,ppm)：δ 7.82(s,1H),7.68(s,2H),6.82(d,J=4.4Hz,1H),6.65(d,J=4.4Hz,1H),5.46-5.50(m,1H),4.80(t,J=5.6Hz,1H),4.42(d,J=4.2Hz,1H),3.74-3.78(m,1H),3.32-3.44(m,2H),2.24-2.28(m,1H),2.02-2.06(m,1H),0.85-0.90(m,9H),0.00-0.10(m,6H)。
步驟12：合成(2S,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣下，將((2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇(270mg，0.741mmol)及IBX(270mg，0.963mmol)溶解於乙腈(20.0mL)中。在80℃下在氬氣下攪拌反應混合物1小時後，濾出固體且真空濃縮濾液獲得標題化合物，其可直接用於下一步驟。LC-MS：363.2[M+H]+,1H-NMR：(400MHz,DMSO,ppm)：δ 9.59(s,1H),7.84(s,1H),7.73(s,2H),6.86(d,J=4.4Hz,1H),6.64(d,J=4.4Hz,1H),5.67-5.71(m,1H),4.71(d,J=4.4Hz,1H),4.25(s,1H),2.25-2.32(m,1H),2.12-2.17(m,2H),0.84-0.91(m,9H),0.00-0.13(m,6H)。
步驟13：合成((3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇
在20℃下，將(2S,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛(200mg，0.552mmol)溶解於1,4-二噁烷(10mL)中。接著添加甲醛(2.0mL，0.552 mmol)及氫氧化鈉(2.0mL，4.00mmol)。在20℃下攪拌所得混合物4小時後，使用乙酸將其調整至pH 7。混合物用乙酸乙酯(150mL)稀釋，接著用3×30mL水及30mL鹽水洗滌。有機層經Na2SO4乾燥，且真空濃縮。在0℃下將殘餘物溶解於乙醇(10mL)中，接著在0℃下添加NaBH4(41.7mg，1.103mmol)。在20℃下攪拌所得混合物16小時後，使用乙酸將其調整至pH=7且混合物用乙酸乙酯(150mL)萃取，接著用(3×30mL)水及30mL鹽水洗滌。有機層經Na2SO4乾燥，且真空濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用DCM/MeOH(10：1)溶離獲得標題化合物。LC-MS：395.2[M+H]+,1H-NMR：(400MHz,DMSO,ppm)：δ 7.82(s,1H),7.70(s,2H),6.82(d,J=4.4Hz,1H),6.66(d,J=4.4Hz,1H),5.50-5.60(m,1H),4.68(t,1H),4.52(d,J=4.4Hz,1H),4.22(t,1H),3.53-3.60(m,2H),2.35-2.45(m,1H),2.00-2.10(m,1H),0.90(s,9H),0.08-0.09(m,6H)。
步驟14：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛
在氬氣下，將((3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇(90mg，0.228mmol)及IBX(256mg，0.912mmol)溶解於乙腈(15.0mL)中。在30℃下在氬氣下攪拌反應混合物48小時後，濾出固體。真空濃縮濾液獲得標題化合物，其可直接用於下一步驟。
步驟15：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇
在氬氣下，將(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛(80mg，0.204mmol)及K2CO3(85mg，0.611mmol)溶解於甲醇(10mL)中。在0℃下向反應混合物中逐滴添加(1-重氮基-2-側氧基丙基)膦 酸二甲酯(78mg，0.408mmol)。在25℃下在氬氣下攪拌反應混合物16小時後，將其過濾且真空濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用DCM/MeOH(10：1)溶離獲得標題化合物。LC-MS：389.3[M+H]+。
步驟16：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(11)
在氬氣下，將((2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇(50mg，0.129mmol)及TBAF(33.6mg，0.129mmol)溶解於THF(5.0mL)中。在25℃下在氬氣下攪拌所得溶液2小時後，真空濃縮反應混合物。藉由具有以下條件之製備型-HPLC純化殘餘物(1#-製備型-HPLC-011(Waters))：管柱，Xbridge Prep C18管柱，19×150mm；移動相，水(10mmoL/L NH4HCO3)及乙腈(8分鐘內5.0%乙腈升至25.0%，1.5分鐘內升至95.0%，1.5分鐘內降至5.0%)；偵測器，UV254 & 220nm)獲得呈固體狀之標題化合物11。LC-MS：275.1[M+H]+，1H-NMR：(400MHz,DMSO,ppm)：δ 7.82(s,1H),7.69(s,2H),6.82(d,J=4.4Hz,1H),6.69(d,J=4.0Hz,1H),5.60(t,J=7.6Hz,1H),5.28(d,J=4.2Hz,1H),5.06(d,J=6.8Hz,J=6.0Hz,1H),4.30-4.34(m,1H),3.45-3.56(m,2H),3.38(s,1H),2.30-2.37(m,1H),2.17-2.13(m,1H)。
實例12：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-羥基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲腈(12)
步驟1：合成5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛肟
在25℃下，在氬氣下，向中間物D(參見示例11)(70mg，0.178mmol)於吡啶(5mL)中之混合物中添加羥基胺鹽酸鹽(37.17mg，0.543mmol)。在25℃下攪拌所得混合物2小時後，減壓濃縮反應混合物。將殘餘物用乙酸乙酯(100mL)稀釋，用水(3×20mL)及鹽水(20mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮獲得標題化合物，其未經純化即使用。LC-MS：408.2[M+H]+
步驟2：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲腈
在25℃下，在氬氣下，向5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛肟(70mg，0.172mmol)於DCM(15mL)中之混合物中添加Et3N(69.5mg，0.687mmol)及2,2,2-三氟乙酸酐(72.2mg，0.344mmol)。在25℃下攪拌所得混合物16小時，接著反應混合物用DCM(100mL)稀釋，用碳酸氫鈉飽和水溶液(3×20mL)及鹽水(20mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠管柱用DCM/MeOH(15：1)溶離純化殘餘物獲得標題化合物。LC-MS：309.2[M+H]+。
步驟3：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-羥 基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲腈(12)
在25℃下，在氬氣下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲腈(50mg，0.128mmol)於THF(10mL)中之混合物添加TBAF(33.6mg，0.128mmol)。在25℃下攪拌所得混合物2小時，接著減壓濃縮。藉由具有以下條件之製備型-HPLC純化粗產物：儀器，(1#-製備型-HPLC-011(waters))；管柱：Xbridge C18,5μm,19×150mm；移動相：水(0.05% NH4CO3)及ACN(10分鐘內5.0% ACN升至40%，維持95%持續2分鐘，2分鐘內降至5%)；偵測器，UV 220及254nm。將所收集之溶離份合併且減壓濃縮獲得呈固體狀之標題化合物12。LC-MS：276.0[M+H]+,1H-NMR：(400MHz,DMSO,ppm)：δ 7.86(s,1H),7.74-7.84(s,2H),6.88(d,J=4.4Hz,1H),6.84(d,J=4.4Hz,1H),6.10(d,J=4.4Hz,1H),5.72-5.79(m,1H),5.62-5.63(m,1H),4.44-4.61(s,1H),3.53-3.62(m,2H),2.42-2.49(m,1H),2.19-2.24(m,1H)。
實例13：((2R,3S,5R)-三磷酸5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲酯銨(13)
步驟1：2-((4,4,6,6-四氧離子基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三亞膦-2-基)氧基)苯甲酸酯(中間物E)
在氬氣氛圍下，在手套箱中，將無水三丁胺(0.4mL，1.679mmol)添加至含有溶解於0.4mL二甲基甲醯胺(DMF)中的焦磷酸三丁銨(112mg，0.205mmol)的燒瓶中獲得澄清溶液。接著在劇烈攪拌下將澄清溶液注入含有無水2-氯-4H-苯并[d][1,3,2]二氧雜磷雜苯-4-酮(27.6mg，0.136mmol)於二甲基甲醯胺(0.4mL)之燒瓶中。在30℃下攪拌所得混合物30分鐘獲得中間物E之溶液，其未經任何處理即直接用於隨後反應中。
步驟2：合成((2R,3S,5R)-三磷酸5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲酯銨(13)
將(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(化合物1，8mg，0.029mmol)置於圓底燒瓶(10mL)中，接著在高度真空下經P2O5乾燥隔夜。向此燒瓶中添加經活化分子篩4Å(100mg)。將介質與氬氣一起裝入，接著藉由注射器將中間物E(2.0當量，新鮮製備)於無水DMF(0.15mL)中之溶液轉移至上述燒瓶中，且在25℃下攪拌混合物3小時。藉由TLC(乙腈：0.1M氯化銨=7：3)監測反應進展。在大多數起始核苷耗盡後，將混合物冷卻至0℃，接著將碘溶液[0.1mL吡啶/水(9：1)中3%]注入至反應混合物中。隨著碘耗盡，繼續逐滴添加碘溶液直至保持碘的持久褐色。15分鐘後，在10℃下在攪拌下再添加碳酸氫三乙銨緩衝液(1.0M，2mL)持續15分鐘。真空移除揮發物(內部溫度不超過25℃)。將殘餘物再溶解於水(2mL)中且用氯仿(2×2mL)萃取。所收集的含有粗產物之水層接著藉由具有以下條件之製備型HPLC(1#-製備型-HPLC-011(Waters))純化：管柱，XBridgeTM Prep OBD(最佳床密度)T3管柱，19×150mm,5μm；移動相，具有50mmol碳酸氫銨之水及乙腈(5分鐘內2%乙腈升至5.2%，2分鐘內升至95%，1.5分鐘內降至5%)；偵測器，UV 254 & 220nm。收集含產物之溶離份且凍乾獲得呈固體狀之標題化合物13。 LC-MS：(ES,m/z)：512.90[M-H-4NH3]-。1H-NMR：(400MHz,D2O,ppm)：δ 8.06(s,1H),7.38(d,J=3.6Hz,1H),6.63(t,J=7.6Hz,1H),6.58(d,J=3.6Hz,1H),4.06-4.14(m,2H),2.67-2.72(m,1H),2.54-2.59(m,1H).P-NMR：(161MHz,D2O,ppm)：δ -5.86(s,1P),-11.49--11.39(d,J=15.13Hz,1P),-19.29(s,1P)。
以下化合物14-21使用實例13中所述之方法合成：
實例14：((2R,3S,5R)-三磷酸5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲酯銨(14). LC-MS：(ES,m/z)：530.85[M-H-4NH3]-。1H-NMR：(400MHz,D2O,ppm)：δ 8.00(s,1H),7.14(s,1H),6.62(dd,J=4.8Hz,J=6.0Hz,1H),4.13(dd,J=5.6Hz,J=11.2Hz,1H),4.06(dd,J=5.0Hz,J=11.4Hz,1H),2.48-2.64(m,2H).P-NMR：(161MHz,D2O,ppm)：δ -5.97--5.89(d,J=13.85Hz,1P),-11.52--11.43(d,J=14.81Hz,1P),-19.31(s,1P)。
實例15：(2R,3S,5R)-三磷酸5-(4-胺基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲酯銨(15). LC-MS：(ES,m/z)：527.00[M-H-4NH3]-。1H-NMR：(400MHz,D2O,ppm)：δ 7.96(s,1H),7.07(s,1H),6.55(t,J=6.6Hz,1H),4.11(dd,J=6.2Hz,J=11.4Hz,1H),4.05(dd,J=5.8Hz,J=12.0Hz,1H),2.59-2.66(m,1H),2.48-2.53(m,1H),2.78(s,3H).P-NMR：(161MHz,D2O,ppm)：δ -5.90(s,1P),-11.48--11.39(d,J=14.49Hz,1P),-19.32(s,1P)。
實例16：((2R,3S,5R)-三磷酸5-(4-胺基-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲酯雙-三乙銨(16). LC-MS：(ES,m/z)：546.95[M-H-2TEA]-。1H-NMR：(400MHz,D2O,ppm)：δ 7.31(d,J=4.0Hz,1H),6.53(d,J=4.0Hz,1H),6.50(t,J=6.4Hz,1H),4.15(dd,J=5.8Hz,J=10.6Hz,1H),4.08(dd,J=4.8Hz,J=11.2Hz,1H),2.62-2.67(m,1H),2.53-2.58(m,1H)。P-NMR：(161MHz,D2O,ppm)：δ -5.86--5.77(d,J=14.81Hz,1P),-11.45--11.35(d,J=15.13Hz,1P),-19.24(s,1P)。
實例17：((2R,3S,5R)-三磷酸5-(4-胺基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲酯銨(17). LC-MS：(ES,m/z)：546.70[M-H-4NH3]-。1H-NMR：(400MHz,D2O,ppm)：δ 7.97(s,1H),7.34(s,1H),6.54(t,J=6.0Hz,1H),4.01-4.13(m,2H),2.52-2.62(m,2H).P-NMR：(161MHz,D2O,ppm)：δ -5.81(s,1P),-11.42(s,1P),-19.25(s,1P)。
實例18：((2R,3S,5R)-三磷酸5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氰基-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲酯雙-三乙銨(18). LC-MS：(ES,m/z)：514.35[M-H-2TEA]-。1H-NMR：(400MHz,D2O,ppm)：δ 8.04(s,1H),7.29(d,J=3.2Hz,1H),6.70(t,J=6.8Hz,1H),6.55(d,J=3.2Hz,1H),4.87(t,J=6.0Hz,1H),4.21-4.16(m,2H),2.99(q,J=7.2Hz,15H),2.80-2.76(m,1H),2.58-2.54(m,1H),1.12(t,J=7.2Hz,26H).P-NMR：(161MHz,D2O,ppm)：δ -5.85(s,1P),-11.84(d,J=15.30Hz,1P),-19.38(s,1P)。
實例19：(2R,3S,5R)-三磷酸5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-乙炔基-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲酯銨(19). LC-MS：(ES,m/z)：512.90[M-H-4NH3]-。1H-NMR：(400MHz,D2O,ppm)：δ 7.73(s,1H),6.77(dd,J=4.4Hz,J=7.4Hz,2H),5.73(t,J=7.4Hz,1H),4.52-4.56(m,1H),3.98-4.03(m,2H),2.56-2.63(m,1H),2.34-2.40(m,1H).P-NMR：(161MHz,D2O,ppm)：δ -5.79(s,1P),-11.24(s,1P),-19.21(s,1P)。
實例20：((2R,3S,5R)-三磷酸5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2-乙炔基-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲酯銨(20). LC-MS：(ES,m/z)：513.95[M-H-4NH3]-。1H-NMR：(400MHz,D2O,ppm)：δ 8.22(s, 1H),7.99(s,1H),5.53(t,J=7.6Hz,1H),4.60-4.57(m,1H),4.12-4.03(m,2H),2.56-2.49(m,1H),2.35-2.29(m,1H)。P-NMR：(161MHz,D2O,ppm)：δ -5.82(s,1P),-11.32-11.23(d,J=13.69Hz,1P),-19.24(s,1P)。
實例21：((2R,3S,5R)-三磷酸5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-乙炔基-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲酯銨(21). LC-MS：(ES,m/z)：513.95[M-H-4NH3]-。1H-NMR：(400MHz,D2O,ppm)：δ 8.23(s,1H),7.98(s,1H),5.66(t,J=7.6Hz,1H),4.61-4.58(m,1H),4.05(brs,2H),2.68-2.61(m,1H),2.46-2.42(m,1H).P-NMR：(161MHz,D2O,ppm)：δ -5.81(s,1P),-11.33-11.24(d,J=13.85Hz,1P),-19.19(s,1P)。
化合物13-21之相應鹽-游離形式的名稱分別為：
實例22：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(22)
步驟1：合成氧化(胺基氧基)二苯基膦
在0℃下，在攪拌下，在30分鐘內，向羥基胺鹽酸鹽(70g，1007mmol)於1,4-二噁烷(100mL)與水(100mL)之混合物中的經攪拌溶液中逐滴添加NaOH(38.3g，957mmol)於水(400mL)中之溶液。在0℃下攪拌所得溶液20分鐘。在0℃下，向上述中快速注入二苯基次膦醯氯 (77mL，403mmol)於1,4-二噁烷(100mL)中之溶液。在環境溫度下劇烈攪拌所得混合物10分鐘。形成沈澱物且藉由過濾分離。將為再懸浮於NaOH水溶液(0.25N，1000mL)中且在4℃下攪拌1.5小時。過濾混合物且濾餅用水(3×1000mL)及乙醚(2×500mL)依序洗滌。真空乾燥固體隔夜獲得氧化(胺基氧基)二苯基膦。LC-MS：(ES,m/z)：233.9[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 7.82-7.69(m,4H),7.58-7.40(m,6H)。P-NMR：(121MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 21.53(s,1P)。
步驟2：合成1-胺基-1H-咪唑-2-甲酸乙酯
在-10℃下，在氬氣氛圍下，向1H-咪唑-2-甲酸乙酯(6g，30.9mmol)於DMF(250mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加LiHMDS THF溶液(93mL，93mmol，1M)持續60分鐘。在-10℃下再攪拌所得混合物30分鐘，接著分批添加氧化(胺基氧基)二苯基膦(21.63g，93mmol)30分鐘，同時將溫度維持於0℃至10℃。所得混合物升溫至室溫且劇烈攪拌16小時。反應物用冰水(600mL)淬滅且用EtOAc(2×800mL)萃取。經合併之有機層經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液獲得1-胺基-1H-咪唑-2-甲酸乙酯，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟。LC-MS：(ES,m/z)：156.1[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 7.37(d,J=0.8Hz,1H),6.96(d,J=0.8Hz,1H),6.57(br s,2H),4.33-4.27(m,2H),1.31(t,J=7.2Hz,3H)。
步驟3：合成咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮
在氬氣氛圍下，向1-胺基-1H-咪唑-2-甲酸乙酯(6g，30.9mmol)於EtOH(60mL)中之經攪拌混合物中添加甲脒乙酸鹽(17.71g，170mmol)。將所得混合物加熱至回流，且攪拌隔夜。將反應混合物冷卻到環境溫度且過濾。用水(3×10mL)及EtOAc(2×10mL)依序洗滌濾餅。收集之固體在高度真空下乾燥隔夜獲得咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪- 4(3H)-酮。LC-MS：(ES,m/z)：136.9[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 12.31(br s,1H),8.09(s,1H),7.98(d,J=0.8Hz,1H),7.50(d,J=0.8Hz,1H)。
步驟4：合成4-氯咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪
在氬氣氛圍下，將咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮(2.4g，17.63mmol)稱重至100mL圓底燒瓶中，隨後在室溫下注射POCl3(20mL)。將混合物加熱至回流且攪拌16小時。減壓移除揮發物。將殘餘物分配於EtOAC(100mL)與水(30mL)之間。有機層用冷NaHCO3水溶液(飽和，3×20mL)及鹽水(20mL)依序洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法使用石油醚/EtOAc(5/1)純化殘餘物獲得4-氯咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪。LC-MS：(ES,m/z)：155.0[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 8.81(s,1H),8.65(d,J=1.2Hz,1H),8.08(d,J=0.8Hz,1H)。
步驟5.合成4-(甲基硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪
在室溫下，在氬氣氛圍下，向4-氯咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪(20g，129mmol)於THF(500mL)中之經攪拌溶液中添加NaSMe(13.60g，194mmol)。在室溫下攪拌所得混合物72小時。反應混合物用NH4Cl水溶液(飽和，200mL)淬滅且用EtOAc(2×500mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(2×200mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法使用石油醚/EtOAc(1/1)純化殘餘物獲得4-(甲基硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪。LC-MS：(ES,m/z)：167.2[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.47(s,1H),7.90(d,J=0.8Hz,1H),7.76(d,J=0.4Hz,1H),2.73(s,3H)。
步驟6：合成(3R,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)-2-(4-(甲基硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫呋喃-2-醇
在-78℃下，在氬氣氛圍下，在5分鐘內，向4-(甲基硫基)咪唑并 [2,1-f][1,2,4]三嗪(1g，6.02mmol)於THF(25mL)中之經攪拌溶液中注入LDA THF溶液(4.5mL，9.0mmol，2M)。將所得混合物在-78℃下維持30分鐘，接著注入(3R,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)二氫呋喃-2(3H)-酮(市售，3.27g，7.82mmol)於THF(15mL)中之溶液且在-78℃至-50℃下攪拌所得混合物2小時。反應物用NH4Cl水溶液(飽和，20mL)淬滅且用EtOAc(2×50mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(2×20mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法使用石油醚/EtOAc(5/1)純化殘餘物獲得(3R,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)-2-(4-(甲基硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫呋喃-2-醇。LC-MS：(ES,m/z)：585.1[M+H]+。
步驟7：合成7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-4-(甲基硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪
在0℃下，在氬氣氛圍下，向(3R,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)-2-(4-(甲基硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫呋喃-2-醇(1.7g，2.91mmol)於DCM(30mL)中之經攪拌溶液中注入三氟化硼-二乙基醚合物(825.3mg，5.82mmol)及三乙基矽烷(1.35g，11.63mmol)。在0℃下再攪拌所得混合物16小時。反應物用NaHCO3水溶液(飽和，20mL)淬滅且用DCM(2×30mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(30mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法使用石油醚/EtOAc(5/1)純化殘餘物獲得7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)4-(甲基硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪。LC-MS：(ES,m/z)：570.0[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.38(s,1H),7.66(s,1H),7.37-7.26(m,15H),5.56(d,J=5.4Hz,1H),4.70-4.49(m,6H),4.39(q,J=4.2Hz,1H),4.34(t,J=5.4Hz,1H),4.15(t,J=5.1Hz,1H),3.70 (dd,J=3.6Hz,J=10.5Hz,1H),3.60(dd,J=3.9Hz,J=10.8Hz,1H),2.70(s,3H)。
步驟8：合成7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
向80mL鋼製反應釜中稱入7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-4-(甲基硫基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪(1.4g，2.462mmol)。將介質冷卻至-60℃。向其中添加異丙醇氨(異丙醇/液氨=2/3，在-60℃下混合，50mL)。將所得混合物加熱至90℃且攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫，接著減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析法使用石油醚/EtOAc(1/1)純化殘餘物獲得7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。LC-MS：(ES,m/z)：538.3[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 8.24(br s,1H),8.15(br s,1H),8.05(s,1H),7.49(s,1H),7.36-7.28(m,15H),5.35(d,J=5.2Hz,1H),4.63(s,2H),4.56(d,J=4.8Hz,2H),4.52(d,J=2.0Hz,2H),4.45(t,J=5.2Hz,1H),4.22-4.16(m,2H),3.65(dd,J=3.2Hz,J=10.8Hz,1H),3.58(dd,J=4.4Hz,J=10.8Hz,1H)。
步驟9：合成(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-(羥基甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
向7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(1.2g，2.232mmol)於AcOH(10mL)中之經攪拌溶液中添加20% Pd(OH)2/C(1.2g)。向介質裝入氫氣(2atm)且在25℃下攪拌24小時。濾出固體且用AcOH(2×15mL)洗滌。減壓濃縮經合併之濾液。藉由矽膠管柱層析法使用DCM/MeOH(8/1)純化殘餘物獲得(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-(羥基甲基)四氫呋喃-3,4-二醇。LC-MS：(ES,m/z)：290.0[M+ Na]+。1H-NMR：(400MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 8.22(br s,1H),8.15(br s,1H),8.07(s,1H),7.64(s,1H),5.13-5.09(m,2H),5.03(d,J=6.4Hz,1H),4.78(br s,1H),4.32(t,J=6.0Hz,1H),3.99(t,J=4.8Hz,1H),3.81(q,J=4.4Hz,1H),3.56(dd,J=3.2Hz,J=11.2Hz,1H),3.46(dd,J=3.6Hz,J=11.2Hz,1H)。
步驟10：合成(6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-醇
在0℃下，在氬氣氛圍下，向(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-(羥基甲基)四氫呋喃-3,4-二醇(3.2g，11.97mmol)及1H-咪唑(3.26g，47.9mmol)於DMF(65mL)中之經攪拌溶液中注入1,3-二氯-1,1,3,3-四異丙基二矽氧烷(3.97g，12.57mmol)。將所得混合物升溫至30℃且攪拌5小時。反應物用水(70mL)淬滅，且用EtOAc(3×100mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(3×100mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法使用石油醚/EtOAc(3/1)純化殘餘物獲得(6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-醇。LC-MS：(ES,m/z)：510.4[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.12(s,1H),7.62(s,1H),7.03(br s,1H),6.39(br s,1H),5.31(d,J=3.2Hz,1H),4.68(dd,J=6.0Hz,J=7.0Hz,1H),4.47(q,J=2.8Hz,1H),4.10-4.05(m,3H),3.20(br s,1H),1.15-1.05(m,28H)。
步驟11：合成O-((6aR,8S,9S,9aR)-O-苯基硫代碳酸8-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-基)酯
在0℃下，在氬氣氛圍下，向(6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2- f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-醇(4.0g，7.85mmol)及DMAP(3.83g，31.4mmol)於DCM(160mL)中之經攪拌溶液中注入O-苯基氯硫碳酸酯(2.71g，15.69mmol)。在0℃下再攪拌所得混合物3小時。減壓濃縮反應混合物。藉由矽膠管柱層析法使用石油醚/EtOAc(1/3)純化殘餘物獲得O-((6aR,8S,9S,9aR)-O-苯基硫代碳酸8-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-基)酯。LC-MS：(ES,m/z)：646.3[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 8.37(br s,1H),8.28(br s,1H),8.02(s,1H),7.67(s,1H),7.49(t,J=8.0Hz,2H),7.34(t,J=7.4Hz,1H),7.15(d,J=8.4Hz,2H),6.22(dd,J=2.0Hz,J=5.2Hz,1H),5.49(d,J=2.0Hz,1H),4.95(dd,J=5.2Hz,J=8.8Hz,1H),4.07-3.96(m,2H),3.91-3.88(m,1H),1.07-1.04(m,28H)。
步驟12：合成7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-8-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
在室溫下，在氬氣氛圍下，向O-((6aR,8S,9S,9aR)-O-苯基硫代碳酸8-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-基)酯(350mg，0.542mmol)及AIBN(133mg，0.813mmol)於脫氣甲苯(10mL)中之經攪拌溶液中注入氫化三-正丁基錫(314mg，1.084mmol)。將混合物加熱至80℃且攪拌3小時。減壓濃縮反應混合物。藉由矽膠管柱層析法使用石油醚/EtOAc(1/3)純化殘餘物獲得7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-8-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。LC-MS：(ES,m/z)：494.5[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 8.23(br s,1H),8.16(br s,1H),8.05(s,1H),7.56(s,1H),5.42(t,J=7.0Hz,1H),4.63(dd,J=5.8Hz,J=13.0Hz,1H),3.95(dd,J=3.2Hz,J=11.6Hz,1H),3.83(dd,J=6.8Hz,J=12.0Hz, 1H),3.78-3.75(m,1H),2.55-2.51(m,1H),2.37-2.32(m,1H),1.07-1.01(m,28H)。
步驟13：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
在0℃下，向7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-8-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(2.7g，5.47mmol)於THF(60mL)中之經攪拌溶液中注入氟化氫-吡啶(5.42g，54.7mmol)。將混合物升溫至環境溫度且攪拌20小時。將反應混合物冷卻至0℃，用固體NaHCO3中和，接著用MeOH(50mL)稀釋。濾出固體且減壓濃縮濾液。殘餘物用DCM/MeOH(20mL，100/1，v/v)處理且攪拌30分鐘。收集白色沈澱物且真空乾燥隔夜獲得(2R,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇。1H-NMR：(400MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 8.20(br s,1H),8.13(br s,1H),8.06(s,1H),7.60(s,1H),5.42(dd,J=5.8Hz,J=10.2Hz,1H),5.12(d,J=4.0Hz,1H),4.74(t,J=5.6Hz,1H),4.28-4.25(m,1H),3.81-3.78(m,1H),3.42(t,J=5.4Hz,2H),2.33-2.26(m,1H),2.13-2.09(m,1H)。
步驟14：合成7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
在氬氣氛圍下，將(2R,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(200mg，0.796mmol)及1H-咪唑(217mg，3.18mmol)稱重至10mL燒瓶中。向混合物中注入無水DMF(2.5mL)，隨後在0℃下添加第三丁基氯二甲基矽烷(360mg，2.388mmol)。在25℃下攪拌混合物3小時。所得混合物用EtOAc(50mL)稀釋，用NaHCO3水溶液(飽和，2×15mL)及鹽水(20mL)分別洗滌。收 集有機層且經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析法使用石油醚/EtOAc(35%-52% EtOAc/石油醚)純化殘餘物獲得7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。LC-MS：(ES,m/z)：480.1[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 8.20(br s,1H),8.13(br s,1H),8.06(s,1H),7.57(s,1H),5.43(dd,J=5.6Hz,J=10.0Hz,1H),4.46-4.44(m,1H),3.81(t,J=4.5Hz,1H),3.63-3.51(m,2H),2.45-2.36(m,1H),2.16-2.10(m,1H),0.89(s,9H),0.86(s,9H),0.10(s,6H),0.02(d,J=3.6Hz,6H)。
步驟15：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇
將7-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(350mg，0.730mmol)稱重至25mL圓底燒瓶中，隨後注入THF(4mL)。將介質冷卻至0℃。在0℃下，在攪拌下，在10分鐘內，向其中逐滴添加預冷卻之三氟乙酸/水溶液(1/1，v/v，2mL)。在0℃下攪拌所得混合物2小時。藉由TLC及LCMS監測反應進展。所得溶液與甲苯(3×20mL)一起共蒸發且將殘餘物再懸浮於NaHCO3水溶液(飽和，4mL)中，接著蒸發至乾燥。藉由矽膠管柱層析法使用EtOAc/DCM(1/1)純化殘餘物獲得((2R,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇。LC-MS：(ES,m/z)：366.2[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 8.09(br s,1H),8.03(br s,1H),7.96(s,1H),7.51(s,1H),5.31(q,J=5.4Hz,1H),4.70(t,J=5.7Hz,1H),4.34(d,J=5.1Hz,1H),3.69(t,J=4.5Hz,1H),3.33-3.28(m,2H),2.34-2.24(m,1H),2.01-1.96(m,1H),0.79(s,9H),0.01(s,6H)。
步驟16：合成(2S,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛
在室溫下，在氬氣氛圍下，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇(280mg，0.766mmol)於無水乙腈(20mL)中之經攪拌溶液中添加IBX(644mg，2.298mmol)。將混合物加熱至80℃且攪拌25分鐘。LCMS指示起始核苷全部耗盡。使反應混合物冷卻至室溫。濾出固體且減壓濃縮濾液獲得(2S,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟。LC-MS：(ES,m/z)：363.7[M+H]+。
步驟17：合成((3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇
在0℃下，在25mL圓底燒瓶中向(2S,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛(300mg，粗)於1,4-二噁烷(4mL)中之經攪拌溶液中注入37%甲醛水溶液(1.0mL)，隨後添加NaOH水溶液(1.0mL，2.0mmol，2N)。將所得混合物升溫至環境溫度且攪拌16小時。起始核苷全部耗盡後，用AcOH(約0.2mL)中和反應混合物。混合物用EtOAc(100mL)稀釋且用水(2×25mL)、NaHCO3水溶液(飽和，25mL)及鹽水(20mL)依序洗滌。有機層經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液獲得粗產物。在氬氣氛圍下將粗產物再溶解於EtOH(5mL)中，且在0℃下分批添加硼氫化鈉(153mg，4.04mmol)。在環境溫度下攪拌16小時後，反應混合物用AcOH(約0.2mL)中和且蒸發至乾燥。將殘餘物分配於CHCl3(50mL)與水(25mL)之間。水層用CHCl3(2×25mL)再萃取。經合併之有機層用鹽水(40mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓 濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法使用DCM/MeOH(30/1)純化殘餘物獲得((3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇。LC-MS：(ES,m/z)：395.8[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 8.18(br s,1H),8.12(br s,1H),8.07(s,1H),7.62(s,1H),5.47(q,J=5.2Hz,1H),4.68(t,J=5.6Hz,1H),4.53(d,J=3.6Hz,1H),4.27(t,J=5.6Hz,1H),3.60-3.55(m,1H),3.53-3.51(m,2H),3.34-3.31(m,1H),2.56-2.53(m,1H),2.11-2.07(m,1H),0.90(s,9H),0.09(d,J=2.8Hz,6H)。
步驟18：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛
在室溫下，在氬氣氛圍下，向((3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇(180mg，0.455mmol)於乙腈(20mL)及DMSO(2mL)中之經攪拌混合物添加IBX(382mg，1.365mmol)。將所得混合物升溫至30℃且攪拌2小時。濾出固體，用CHCl3(2×20mL)洗滌且減壓濃縮經組合之濾液。將殘餘物再溶解於EtOAc(30mL)中，用NaHCO3水溶液(飽和，2×15mL)及鹽水(20mL)依序洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液獲得(2R,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟。LC-MS：(ES,m/z)：393.8[M+H]+。
步驟19：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7aH-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇
在0℃下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛(250mg，0.286mmol，粗)及K2CO3(120mg，0.86mmol)於MeOH(10 mL)中之經攪拌混合物中注入(1-重氮基-2-側氧基丙基)膦酸二甲酯(110mg，0.58mmol)於MeOH(1mL)中之溶液。將所得混合物升溫至30℃且攪拌16小時。減壓濃縮反應混合物。藉由矽膠管柱層析法使用DCM/MeOH(30/1)純化殘餘物獲得((2R,3S,5R)-5-(4-胺基-7aH-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇。LC-MS：(ES,m/z)：390.2[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 8.23(br s,1H),8.15(br s,1H),8.08(s,1H),7.67(s,1H),5.54(t,J=7.8Hz,1H),5.16(t,J=6.2Hz,1H),4.53(dd,J=4.6Hz,J=6.2Hz,1H),3.55(dd,J=5.2Hz,J=11.6Hz,1H),3.45(dd,J=7.0Hz,J=11.8Hz,1H),3.42(s,1H),2.56-2.53(m,1H),2.23-2.17(m,1H),0.91(s,9H),0.10(d,J=3.2Hz,6H)。
步驟20.合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(22)
在0℃下，在氬氣氛圍下，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇(150mg，0.385mmol)於無水THF(5mL)中之經攪拌溶液中注入TBAF THF溶液(0.385mL，0.385mmol，1M)。將混合物升溫至室溫且攪拌16小時。藉由TLC及LCMS監測反應進展。減壓濃縮所得混合物。藉由矽膠管柱層析法使用DCM/MeOH(24/1)純化殘餘物獲得標題化合物22。LC-MS：(ES,m/z)：309.00[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6-DMSO,ppm)：δ 8.21(br s,1H),8.14(br s,1H),8.07(s,1H),7.64(s,1H),5.53(t,J=7.6Hz,1H),5.34(d,J=5.2Hz,1H),5.07(t,J=6.4Hz,1H),4.35(q,J=6.0Hz,1H),3.56(dd,J=5.6Hz,J=12.0Hz,1H),3.48(dd,J=7.0Hz,J=11.8Hz,1H),3.41(s,1H),2.46-2.41(m,1H),2.28-2.21(m,1H)。
實例23：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2- 乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(23)
步驟1：合成(3R,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-醇：在0℃下，在氬氣氛圍下，經10分鐘向分散於礦物油中的60% NaH(1.878g，46.9mmol)於無水DME(二甲基醚)(150mL)中之經攪拌懸浮液中注入(氰基甲基)膦酸二乙酯(11.88g，67.1mmol)。混合物升溫至25℃且維持0.5小時，接著在0℃下，在攪拌下經30分鐘逐滴添加(3R,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-醇(14.1g，33.5mmol)於無水DME(100mL)中之溶液。將所得混合物再升溫至25℃且維持2小時。所得混合物用H2O(300mL)稀釋且用Et2O(3×500mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(500mL)洗滌，經無 水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液。藉由急驟矽膠管柱層析法使用EtOAc/石油醚(5%-20% EtOAc/石油醚)純化殘餘物獲得2-((3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)乙腈。LC-MS：(ES,m/z)：444.21[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 7.33-7.31(m,15H),4.63-4.43(m,6H),4.25-4.13(m,2H),3.95(dd,J=3.0Hz,J=4.8Hz,1H),3.77(dd,J=5.4Hz,J=6.9Hz,1H),3.53-3.45(m,2H),2.78-2.75(m,0.4 H),2.66(dd,J=4.8Hz,J=16.8Hz,0.8 H),2.50(dd,J=4.8Hz,J=16.8Hz,0.8 H)。
步驟2：合成2-((3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-3-(二甲基胺基)丙烯腈
在0℃下，在氬氣氛圍下，經5分鐘向2-((3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)乙腈(12.6g，28.4mmol)於DCM(90mL)中之經攪拌溶液中注入無水DMF(2.54mL，32.8mmol)，隨後1-第三丁氧基-N,N,N',N'-四甲基甲烷二胺(19.80g，114mmol)。將所得混合物升溫至25℃且攪拌16小時。減壓濃縮所得混合物。藉由急驟矽膠管柱層析法使用EtOAc/石油醚(15%-35% EtOAc/石油醚)純化殘餘物獲得2-((3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-3-(二甲基胺基)丙烯腈。LC-MS：(ES,m/z)：499.25[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 7.33-7.30(m,15H),6.47(s,1H),4.65-4.53(m,6H),4.32(d,J=7.2Hz,1H),4.19-4.15(m,1H),4.00-3.90(m,2H),3.59-3.46(m,2H),3.04(s,6H)。
步驟3.合成2-((3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-3-肼基丙烯腈
在室溫下，向2-((3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-3-(二甲基胺基)丙烯腈(12.9g，25.9mmol)於MeOH(90mL)中之經攪拌溶液中依序添加水合肼(21.15g，647 mmol)、H2O(3.0mL，167mmol)及肼鹽酸鹽(2.66g，38.8mmol)。將所得混合物加熱至65℃且攪拌16小時。減壓濃縮最終混合物。殘餘物用H2O(500mL)稀釋且用EtOAc(3×500mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(500mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液獲得2-((3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-3-肼基丙烯腈，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟。LC-MS：(ES,m/z)：486.23[M+H]+。
步驟4：合成4-[(2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-[(苯甲氧基)甲基]氧雜環戊烷-2-基]-1H-吡唑-5-胺
將2-((3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-3-肼基丙烯腈(18g，37.1mmol)置於1000mL圓底燒瓶中，隨後注入ACN(200mL)。使混合物回流48小時。減壓濃縮所得混合物。藉由急驟矽膠管柱層析法使用MeOH/DCM(2%至10% MeOH/DCM)純化殘餘物獲得4-[(2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-[(苯甲氧基)甲基]氧雜環戊烷-2-基]-1H-吡唑-5-胺。LC-MS：(ES,m/z)：486.23[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,CDCl3,ppm)：δ 7.40-7.24(m,16H),4.97(d,J=6.8Hz,1H),4.68(d,J=12.0Hz,1H),4.62-4.44(m,5H),4.24-4.22(m,1H),4.10-4.04(m,2H),3.71(dd,J=3.0Hz,J=10.2Hz,1H),3.63-3.50(m,1H)。
步驟5.合成8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺
向經攪拌之氰胺混合物(50g，1189mmol)中添加三甲氧基甲烷(505g，4757mmol)且將混合物加熱至105℃且攪拌5分鐘。在105℃下，經5分鐘向上述中注入甲酸(4.38g，95mmol)。在105℃下攪拌所得溶液5小時後，將反應混合物冷卻至室溫。濾出固體且減壓濃縮濾液。藉由蒸餾(0.1mm Hg，60℃至70℃)收集產物獲得(E)-N-氰基甲亞 胺甲酯(50g，0.595mol)。
在室溫下，在氬氣氛圍下，向(E)-N-氰基甲亞胺甲酯(21.82g，259mmol)於甲苯(150mL)中之經攪拌溶液中添加4-((3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-5-胺(21g，43.2mmol)於甲苯(30mL)中之溶液。將所得混合物加熱至90℃且攪拌20小時。減壓濃縮所得溶液。藉由急驟矽膠管柱層析法使用EtOAc/石油醚(30%-50% EtOAc/石油醚)純化殘餘物獲得8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺。LC-MS：(ES,m/z)：538.24[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.05(s,1H),7.99(s,1H),7.31-7.23(m,15H),6.67(br s,2H),5.33(d,J=5.4Hz,1H),4.67-4.50(m,6H),4.35-4.29(m,2H),4.15-4.11(m,1H),3.72(dd,J=3.9Hz,J=10.5Hz,1H),3.62(dd,J=4.2Hz,J=10.8Hz,1H)。
步驟6：合成(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-5-(羥基甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
向8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-雙(苯甲氧基)-5-((苯甲氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺(10g，18.60mmol)於AcOH(250mL)中之經攪拌混合物中添加20%氫氧化鈀/碳。向混合物裝入氫氣(1.5-2atm)且在25℃下攪拌14小時。濾出固體。減壓濃縮濾液。用DCM(150mL)濕磨殘餘物形成白色沈澱物。藉由過濾收集沈澱物，用DCM洗滌且真空乾燥隔夜獲得(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-5-(羥基甲基)四氫呋喃-3,4-二醇。LC-MS：(ES,m/z)：268.10[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.76(br s,1H),8.41(br s,1H),8.19(s,1H),8.06(s,1H),4.96-4.91(m,2H),4.86-4.81(m,2H),4.20(q,J=6.0Hz,1H),3.98(q,J=4.5Hz,1H),3.78(q,J=3.9Hz,1H),3.61-3.55(m,1H),3.49-3.43(m,1H)。
步驟7：合成(6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-醇
在0℃下，在氬氣氛圍下，經4分鐘向(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-5-(羥基甲基)四氫呋喃-3,4-二醇(2.2g，8.23mmol)及1H-咪唑(1.681g，24.70mmol)於無水DMF(100mL)中之經攪拌溶液中注入1,3-二氯-1,1,3,3-四異丙基二矽氧烷(2.86g，9.06mmol)。將所得混合物升溫至25℃且攪拌3小時。殘餘物用H2O(50mL)稀釋且用EtOAc(3×50mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(2×50mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液。藉由急驟矽膠管柱層析法使用EtOAc/石油醚(30%-50% EtOAc/石油醚)純化殘餘物獲得(6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-醇。LC-MS：(ES,m/z)：510.25[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.72(br s,1H),8.42(br s,1H),8.08(s,1H),8.02(s,1H),5.08(d,J=4.8Hz,1H),4.91(d,J=1.8Hz,1H),4.41(dd,J=5.4Hz,J=8.1Hz,1H),4.30-4.28(m,1H),3.99-3.86(m,3H),1.04-1.00(m,28H)。
步驟8：合成8-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-8-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺
在室溫下，在氬氣氛圍下，向(6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-9-醇(3.90g，7.65mmol)於無水DCE(120mL)中之經攪拌溶液中添加1,1'-硫羰基二咪唑(1.704g，9.56mmol)。將所得混合物加熱至85℃且攪拌1.5小時。TLC指示起始核苷全部耗盡。減壓濃縮所得溶液獲得粗產物咪唑基中間物，其立即在氬氣氛圍下再溶解於脫氣甲苯(120mL)中。向上述中添加AIBN(1.88g，11.48mmol)，隨後在25℃下經2分鐘注入三丁基錫烷(4.45g，15.30 mmol)。將所得混合物加熱至80℃且攪拌3小時。減壓濃縮所得溶液。藉由急驟矽膠管柱層析法使用EtOAc/石油醚(30%-50% EtOAc/石油醚)純化粗殘餘物獲得8-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-8-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺。LC-MS：(ES,m/z)：494.25[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.18(s,1H),8.06(s,1H),6.61(br s,2H),5.40(t,J=7.5Hz,1H),4.70-4.65(m,1H),4.10(dd,J=3.0Hz,J=10.8Hz,1H),3.95-3.81(m,2H),2.52-2.38(m,2H),1.08-1.05(m,28H)。
步驟9：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇
在0℃下，在氬氣氛圍下，經5分鐘向8-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽-8-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺(1.5g，3.04mmol)於無水THF(35mL)中之經攪拌溶液中注入HF-吡啶溶液(1.5mL，11.65mmol)。將混合物升溫至25℃且攪拌4小時。藉由添加固體NaHCO3中和所得混合物，接著用MeOH(30mL)稀釋。濾出未溶解之固體。減壓濃縮濾液，接著用EtOAc(20mL)濕磨。形成白色沈澱物且藉由過濾收集，接著真空乾燥隔夜獲得(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇。LC-MS：(ES,m/z)：252.10[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.71(br s,1H),8.39(br s,1H),8.19(s,1H),8.05(s,1H),5.25(q,J=5.4Hz,1H),5.03(d,J=3.9Hz,1H),4.87(t,J=6.0Hz,1H),4.26-4.24(m,1H),3.76-3.74(m,1H),3.52-3.40(m,2H),2.32-2.22(m,1H),2.04-1.98(m,1H)。
步驟10：合成8-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺
在0℃下，在氬氣氛圍下，經1分鐘向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(540mg，2.149mmol)及1H-咪唑(512mg，7.52mmol)於DMF(10mL)中之經攪拌溶液中添加TBS-Cl(972mg，6.45mmol)。將所得混合物升溫至25℃且攪拌2小時。所得溶液用H2O(50mL)稀釋且用EtOAc(3×50mL)萃取。經合併之有機層用鹽水(2×50mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液。藉由急驟矽膠管柱層析法使用EtOAc/石油醚(20% EtOAc/石油醚)純化殘餘物獲得8-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺。LC-MS：(ES,m/z)：480.27[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.18(s,1H),8.10(s,1H),6.80(br s,2H),5.49(q,J=5.2Hz,1H),4.51(d,J=5.2Hz,1H),3.98(t,J=4.0Hz,1H),3.74(dd,J=3.8Hz,J=10.6Hz,1H),3.63(dd,J=6.4Hz,J=10.8Hz,1H),2.39-2.32(m,1H),2.22-2.17(m,1H),0.93-0.92(m,18H),0.11-0.05(m,12H)。
步驟11：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇
在0℃下，經5分鐘向8-((2R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-胺(800mg，1.667mmol)於THF(16mL)中之經攪拌溶液中注入預先冷卻之TFA/H2O溶液(8mL，v/v，1/1)。在0℃下攪拌所得混合物1.5小時。藉由TLC監測反應進展。所得溶液與甲苯(3×50mL)一起在低於25℃下共蒸發，且殘餘物再溶解於MeOH/DCM(20mL，v/v，1/2)中且用固體NaHCO3中和混合物。濾出固體且減壓濃縮濾液。藉由急驟矽膠管柱層析法使用MeOH/DCM(2%至10% MeOH/DCM)純化粗產物獲得((2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5- a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇。LC-MS：(ES,m/z)：366.19[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.70(br s,1H),8.38(br s,1H),8.19(s,1H),8.05(s,1H),5.24(q,J=5.4Hz,1H),4.92(t,J=6.0Hz,1H),4.42(d,J=4.8Hz,1H),3.75(dd,J=3.6Hz,J=4.8Hz,1H),3.46-3.43(m,2H),2.39-2.30(m,1H),2.00-1.94(m,1H),0.90(s,9H),0.11(s,6H)。
步驟12：合成(2S,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛
25℃下，在氬氣氛圍下，向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲醇(350mg，0.958mmol)於無水ACN(40mL)中之經攪拌懸浮液中添加IBX(804mg，2.87mmol)。將所得混合物加熱至80℃且攪拌1小時。濾出固體。減壓濃縮濾液獲得(2S,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟。LC-MS：(ES,m/z)：364.17[M+H]+。
步驟13：合成((3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇
向100mL圓底燒瓶中(2S,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-甲醛(349mg，0.960mmol)於1,4-二噁烷(25mL)中之經攪拌溶液中注入甲醛37%水溶液(5mL)，隨後在室溫下經5分鐘注入NaOH水溶液(5mL，2N)。在室溫下攪拌所得混合物5小時。起始核苷全部耗盡後，用AcOH(約0.5mL)中和反應混合物。混合物用EtOAc(50mL)稀釋且用H2O(2×20mL)、NaHCO3水溶液(飽和，2×20mL)及鹽水(20mL)依序洗滌。有機層經Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液。將殘餘物再溶解於無水 EtOH(40mL)中且在0℃下，在氬氣氛圍下，分批添加四氫硼酸鈉(72.6mg，1.920mmol)。在25℃下攪拌16小時後，反應混合物用AcOH(約0.2mL)中和且減壓濃縮。將殘餘物分配於CHCl3(30mL)與H2O(15mL)之間。水層用CHCl3(2×15mL)再萃取。經合併之有機層用鹽水(20mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液。藉由急驟矽膠管柱層析法使用MeOH/DCM(3.5% MeOH/DCM)純化殘餘物獲得((3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇。LC-MS：(ES,m/z)：396.20[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.70(br s,1H),8.38(br s,1H),8.20(s,1H),8.05(s,1H),5.30(dd,J=5.1Hz,J=11.1Hz,1H),4.84(t,J=6.0Hz,1H),4.50(d,J=4.2Hz,1H),4.22(dd,J=5.1Hz,J=6.3Hz,1H),3.62-3.48(m,3H),3.41-3.31(m,1H),2.57-2.50(m,1H),1.95(dd,J=5.1Hz,J=12.6Hz,1H),0.90(s,9H),0.11(s,6H)。
步驟14：合成(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛
在25℃下，在氬氣氛圍下，向((3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2,2-二基)二甲醇(190mg，0.480mmol)於ACN/DMSO(8mL，v/v，10/1)中之經攪拌懸浮液中添加IBX(404mg，1.441mmol)。在30℃下攪拌所得混合物7小時。濾出固體。減壓濃縮濾液獲得(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛，其未經進一步純化即直接用於下一反應步驟。LC-MS：(ES,m/z)：394.18[M+H]+。
步驟15：合成((2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇
在氬氣氛圍下，向(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥基甲基)四氫呋喃-2-甲醛(189mg，0.480mmol)於無水MeOH(6mL)中之經攪拌溶液中添加K2CO3(199mg，1.441mmol)，隨後在0℃下經3分鐘注入(1-重氮基-2-側氧基丙基)膦酸二甲酯(185mg，0.961mmol)於MeOH(1.5mL)中之溶液。反應混合物緩慢升溫至25℃，接著在25℃下攪拌16小時。減壓濃縮所得混合物。藉由急驟矽膠管柱層析法使用MeOH/DCM(2%至10% MeOH/DCM)純化殘餘物獲得((2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇。LC-MS：(ES,m/z)：390.19[M+H]+。1H-NMR：(300MHz,CDCl3,ppm)：δ 8.17(s,1H),7.98(s,1H),6.43(br s,2H),5.54(dd,J=5.7Hz,J=10.5Hz,1H),4.61(d,J=4.2Hz,1H),3.97(d,J=12.3Hz,1H),3.76(d,J=12.0Hz,1H),2.70-2.61(m,1H),2.54(s,1H),2.20-2.14(m,1H),0.95(s,9H),0.12(d,J=6.0Hz,6H)。
步驟16：(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(23)
在0℃下，在氬氣氛圍下，經2分鐘向((2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-乙炔基四氫呋喃-2-基)甲醇(120mg，0.308mmol)於THF(5mL)中之經攪拌溶液中注入TBAF THF溶液(0.462mL，0.462mmol，1.0M)。在20℃下攪拌混合物26小時。減壓濃縮所得混合物。藉由急驟矽膠管柱層析法使用MeOH/DCM(5%至10% MeOH/DCM)純化殘餘物獲得粗產物。粗產物(90mg)藉由具有以下條件(1#-製備型-HPLC-011(Waters))之製備型HPLC進一步純化：管柱，X-bridge C18 19×150mm；移動相，具有NH4HCO3之水(10mmol/L)及ACN(6分鐘內4% ACN升至9%，保持95%持續2分鐘，2分鐘內降至5%)；偵測器，UV 254 & 220nm。收 集含產物之溶離份且凍乾隔夜獲得(2R,3S,5R)-5-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇。LC-MS：(ES,m/z)：276.10[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.71(br s,1H),8.43(br s,1H),8.20(s,1H),8.05(s,1H),5.36(t,J=7.6Hz,1H),5.26-5.22(m,2H),4.34(dd,J=4.8Hz,J=11.2Hz,1H),3.58(dd,J=5.2Hz,J=11.6Hz,1H),3.49(dd,J=7.6Hz,J=11.6Hz,1H),3.37(s,1H),2.44-2.37(m,1H),2.16-2.12(m,1H)。
RT聚合酶分析法
在大腸桿菌BL21(DE3)細胞中表現全長野生型及2突變RT蛋白質及純化。簡言之，藉由將生物素標記之DNA引子黏接至500個核苷酸之RNA模板來產生用於HIV-1 RT聚合酶反應中之雜二聚核酸受質。在分析緩衝液(62.5mM Tris-HCl，pH 7.8，1.25mM二硫蘇糖醇，7.5mM MgCl2，100mM KCl，0.03% CHAPS，0.125mM EGTA)中組合HIV-1 RT酶(最終濃度50pM)與抑制劑化合物或DMSO(最終反應混合物中10% DMSO)。此混合物在室溫下在微量滴定板中預培育30分鐘。藉由添加模板/引子受質(最終濃度：16.6nM)及dNTP(最終濃度：2μM dCTP、dGTP、dATP及66.6nM Ru-dUTP)來開始聚合反應。在37℃下培育90分鐘後，藉由添加EDTA(25mM)淬滅反應物。所得混合物在室溫下額外培育5分鐘，隨後將溶液(50μL)轉移至來自Meso Scale Discovery(MSD)之阻斷抗生素蛋白板中。在室溫下培育混合物60分鐘，隨後經ECL 6000成像儀定量反應產物。所得資料顯示於表2中。
維京分析法(Viking Assay)/CTG 維京分析法：
在多輪HIV-1感染分析法中評定抗病毒效能. 使用MT4-gag-GFP純系D3(下文命名為MT4-GFP)監測HIV-1複製，MT4-gag-GFP純系D3為經修飾以具有GFP報導基因之MT-4細胞，其表現取決於HIV-1表現蛋白質tat及rev。MT4-GFP細胞生產性感染HIV-1導致在感染後約24小時的GFP表現。
MT4-GFP細胞在37℃/5% CO2/90%相對濕度下保持於補充有10%胎牛血清、100U/mL青黴素/鏈黴素及400μg/mL G418之RPMI 1640中以維持報導基因。對於感染，MT4-GFP細胞置於缺乏G418之相同培養基中且在相同培育條件下在約0.01感染倍率下用H9IIIB病毒感染隔夜。細胞接著洗滌且以1.6×105個細胞/毫升再懸浮於含有10%或50%正常人類血清的RPMI 1640中(10%或50% NHS條件)或以2×105個細胞/毫升再懸浮於100%正常人類血清中(100% NHS條件)。藉由使用ECHO音波施配器將溶解於DMSO中之化合物施配至384孔聚D離胺酸塗佈之板的孔(0.2微升/孔)中來製備化合物板。以10點連續3倍稀釋(典型最終濃度：8.4μM-0.43nM)測試各化合物。對照組不包括抑制劑(僅DMSO)及三種抗病毒劑之組合(依法韋侖、茚地那韋及整合酶股轉移抑制劑，最終濃度各自為4μM)。向化合物板中添加細胞(50微升 /孔)且經感染細胞保持在37℃/5% CO2/90%相對濕度下。
在兩個時間點(感染後約48小時及約72小時)藉由使用Acumen eX3掃描儀計數各孔中綠色細胞之數目來定量經感染細胞。經約24小時時段綠色細胞數目的增加產生生殖比R0，其通常為5-15且已以實驗方式顯示處於對數階段(資料未圖示)。計算各孔的R0之抑制，且藉由非線性4參數曲線擬合測定IC50。
CTG分析法： 在CellTiter-Glo發光細胞活力分析法(CTG)中評定細胞毒性
在37℃/5% CO2/90%相對濕度下將MT4-GFP細胞接種於補充有10%胎牛血清、100U/mL青黴素/鏈黴素之RPMI 1640中隔夜。細胞接著洗滌且以0.8×105個細胞/毫升的密度再懸浮於含有10%正常人類血清之RPMI 1640中。藉由使用ECHO音波施配器(0.2微升/孔)將溶解於DMSO中之化合物施配至384孔固體黑色板(Corning 3571)的孔中來製備化合物板。以10點連續3倍稀釋(最終濃度：8.4μM-0.43nM)測試各化合物。對照組包括DMSO。向化合物板添加細胞(50微升/孔)且保持在37℃/5% CO2/90%相對濕度下。在48小時培育後，根據製造商的描述向細胞板中添加CTG試劑(Promega，G7573)。在EnVision板讀取器(PerkinElmer)上記錄發光信號。藉由非線性4參數曲線擬合測定LD50。所得資料顯示於表3中，其中包括市售HIV核苷反轉錄酶抑制劑AZT(疊氮胸苷、齊多夫定)作為對照。
抗病毒持久性
使用MT4-gag-GFP純系D3(下文命名為MT4-GFP)監測HIV-1複製，MT4-gag-GFP純系D3為經修飾以具有GFP報導基因之MT-4細胞，其表現取決於HIV-1表現蛋白質tat及rev。MT4-GFP細胞生產性感染HIV-1導致在感染後約24小時的GFP表現。MT4-GFP細胞在37℃/5% CO2/90%相對濕度下保持於補充有10%胎牛血清、100U/mL青黴素/鏈黴素及400μg/mL G418之RPMI 1640中以維持報導基因。對於72小時時間點持久性分析法(72小時板)及24小時時間點對照分析法(24小時板)，MT4-GFP細胞洗滌且以1.6×105或2.4×105個細胞/毫升再懸浮於含有10%正常人類血清的RPMI 1640中(10% NHS)。藉由使用ECHO音波施配器將溶解於DMSO中之化合物施配至384孔細胞培養物板之孔(0.205微升/孔)中來製備化合物板。以10點連續3倍稀釋(典型最終濃度：4.2μM-0.21nM)測試各化合物。對照組不包括抑制劑(僅DMSO)及三種抗病毒劑之組合(依法韋侖、茚地那韋及整合酶股轉移抑制劑，最終濃度各自為4μM)。向化合物板中添加細胞(50微升/孔)且在37℃/5% CO2/90%相對濕度下培育24小時。細胞用5×40μL補充有10% NHS及100U/mL青黴素/鏈黴素之RPMI 1640洗滌。使72小時板返回至37℃培育箱中持續額外48小時培育。來自24小時板或72小時板的各孔之40μL細胞(在洗滌後48小時培育之後)轉移至聚D-離胺酸塗佈之板。細胞接著在相同培育條件中以約0.1之感染倍率用H9IIIB病毒感染。
藉由使用Acumen eX3掃描儀計數各孔中之綠色細胞的數目，在約24小時感染後定量感染之細胞。表4中化合物之IC50藉由非線性4參數曲線擬合測定。
抗病毒持久性分析法欲評定移除核苷後抗病毒活性之持久性。表4中之資料展示本發明化合物相較於市售核苷AZT之抗病毒持久 性。公開案AIDS Research and Therapy,2009,6：5強調抗病毒持久性之值。
腺苷脫胺酶(ADA)半衰期
表5中之資料藉由使受質化合物與1型人類ADA在40℃下在Tris-HCl緩衝液(pH 7.5)存在下反應產生且藉由LCMS監測起始物質之消耗。50%轉化成相應肌苷產物所必需之時間在表5中標註為T1/2。已知腺苷脫胺酶之去胺基作用尤其活體內降低腺苷類核苷抑制劑的治療潛力(參看以下參考文獻)。當與EDA((2R,3S,5R)-5-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇)及天然去氧腺苷比較時，表5中所示的化合物已顯示具有不同程度之腺苷脫胺酶穩定性。更耐ADA之化合物可能將具有較佳藥物動力學特性。
參考文獻：Journal of Medicinal Chemistry 1996, 39, 19, 3847；Chemical Pharmaceutical Bulletin. 1994, 42, 8, 1688-1690；Antimicrobial Agents and Chemotherapy (2013), 57(12), 6254-6264；Collection of Czechoslovak Chemical Communications (2006), 71(6), 769-787
Microbiologica (1995), 18(4), 359-70；J Antivir Antiretrovir S10.doi：10.4172/jaa.S10-002。
化合物2轉化成肌苷產物2A 7-((2R,4S,5R)-5-乙炔基-4-羥基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-5-氟-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4(7H)-酮(2A)
將Tris-HCl緩衝液(pH 7.5，5mL)注入至25-mL圓底燒瓶中。將混合物加熱至回流持續30分鐘。接著，將混合物冷卻至30℃且添加(2R,3S,5R)-5-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-乙炔基-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(實例化合物2，7mg，0.024mmol)，隨後添加腺苷脫胺酶(3mg，約33單位)。在40℃下攪拌所得混合物且攪拌4天。真空濃縮反應混合物且藉由具有以下條件之製備型HPLC純化殘餘物：管柱：X-Bridge C18,19×150mm,5μm；移動相，具有10mmol碳酸氫銨之水及乙腈(5分鐘內6%乙腈直至30%，保持95%持續2分鐘，2分鐘內降至40%)；偵測器，uv 254&220nm。收集含產物之溶離份且凍乾獲得呈固體狀之標題化合物2A。1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 11.58(brs,1H),7.86(s,1H),7.22(d,J=1.6Hz,1H),6.44(t,J=5.8Hz,1H),5.47(d,J=4.8Hz,1H),5.26-5.22(m,1H),4.39-4.35(m,1H),3.55-3.45(m,2H),3.42(s,1H),2.41-2.24(m,2H)。19F-NMR：(376MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ -165.50(s,1F).LC-MS：(ES,m/z)：294.15[M+H]+。
上文所述之用於將化合物2轉化成2A的通用程序應用於表5中之每一種受質化合物，且產生針對去氧腺苷及EDA所示之肌苷產物，以及肌苷產物1A、2A、11A、22A及23A。使用所述程序，偵測不到化合物4、8及9分別至4A、8A及9A的轉化(NA=受質對腺苷脫胺酶不敏感)。
化合物1A：7-((2R,4S,5R)-5-乙炔基-4-羥基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4(7H)-酮： 1H-NMR：(400MHz,CD3OD,ppm)：δ 8.31(s,1H),7.37(d,J=3.6Hz,1H),6.68(d,J=3.6Hz,1H),6.62(t,J=6.4Hz,1H),4.69(t,J=7.0Hz,1H),3.80(dd,J=12.0Hz,J=30.0Hz,2H),3.09(s,1H),2.67-2.54(m,2H)。LC-MS：(ES,m/z)：276.00[M+H]+。
化合物11A：7-((2R,4S,5R)-5-乙炔基-4-羥基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮： 1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 10.25(brs,1H),7.86(s,1H),6.83(d,J=4.5Hz,1H),6.63(d,J=4.2Hz,1H),5.53(t,J=7.5Hz,1H),5.31-5.25(m,1H),5.09-5.05(m,1H),4.31-4.27(m,1H),3.55-3.45(m,2H),3.33(s,1H),2.35-2.18(m,2H)。LC-MS：(ES,m/z)：298.00[M+Na]+。
化合物22A：7-((2R,4S,5R)-5-乙炔基-4-羥基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮：1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.12(s,1H),7.56(s,1H),5.45(t,J=7.4Hz,1H),5.35(d,J=4.0Hz,1H),5.06(brs,1H),4.33(brs,1H),3.56-3.46(m,2H),3.32(s,1H),2.42-2.33(m,1H),2.28-2.22(m,1H)。LC-MS：(ES,m/z)：277.10[M+H]+。
化合物23A：8-((2R,4S,5R)-5-乙炔基-4-羥基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4(3H)-酮：1H-NMR：(400MHz,d 6 -DMSO,ppm)：δ 8.08(s,1H),7.98(s,1H),5.30(t,J=7.4Hz,1H),5.25(d,J=5.2Hz,1H),5.24-5.11(m,1H),4.32(q,J=5.2Hz,1H),3.53(dd,J 1 =11.6Hz,J 2 =32.0Hz,2H),3.36(s,1H),2.36-2.29(m,1H),2.16-2.10(m,1H)。LC-MS：(ES,m/z)：274.80[M-H]-。
儘管前述說明書教示本發明之原理，但實例出於說明之目的提供，本發明之實踐涵蓋隨附申請專利範圍之範疇內的全部常見變化、改適及/或修正。申請專利範圍中未指定特定立體組態或不到全部對掌性中心具有此類指定之特定化合物(亦即物質)之列舉或描述欲涵蓋化合物之外消旋物、外消旋混合物、各個別對映異構體、非對映異構混合物及各個別非對映異構體，此類形式可能由於存在一或多個不對稱中心引起。本文所引用的所有公開案、專利及專利申請案均以全文引用的方式併入本發明中。

Claims (34)

  1. 一種結構式I之化合物，
    Figure TWI660967B_C0001
    或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R為
    Figure TWI660967B_C0002
    X為O；Y為-C≡C-R8或-C≡N；R 1 為-H、-C(O)R6、-C(O)OR6、-C(O)N(R6)2、
    Figure TWI660967B_C0003
    R 2 為-H、-C(O)R6a、-C(O)OR6a或-C(O)N(R6a)2；R 3 為-H；R 4 為-N(RX)2、-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b；R 5 為-H、鹵基、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、-CN、-ORX、-N(RX)2、-C3-C7環烷基、-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b；R 6 、R 6a 及R 6b 在每次出現時各自獨立地選自-H、-C1-C6烷基或-C1-C6鹵烷基；R 8 為-H、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基或-C3-C7環烷基；R 9 為-H、鹵基、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、-CN、-ORY或-N(RY)2；R X 在每次出現時獨立地選自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、芳基或5或6員單環雜芳基；或當R 4 或R 5 中之一者或兩者為-N(RX)2時，各RX可視情況與其兩者連接之氮結合在一起形成5或6員單環雜芳基或9或10員雙環雜芳基；及R Y 為-H、-C1-C6烷基或-C1-C6鹵烷基。
  2. 如請求項1之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R為
    Figure TWI660967B_C0004
  3. 如請求項1之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其具有結構式II，
    Figure TWI660967B_C0005
    ，其中X、Y、R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、R 5 及R 9 係如請求項1所定義。
  4. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R 1 為-H、
    Figure TWI660967B_C0006
    、
    Figure TWI660967B_C0007
    或
    Figure TWI660967B_C0008
    ；及R 4 為-N(RX)2。
  5. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 2 為-H。
  6. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中Y為-C≡C-R8。
  7. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4 為-N(RX)2。
  8. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 5 為-H、鹵基、-C1-C6烷基、-ORX或-N(RX)2。
  9. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中Y為-C≡CH。
  10. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 9 為-H、鹵基、-C1-C3烷基、-C1-C3鹵烷基、-CN、-ORY或-N(RY)2。
  11. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R X 為-H、-C1-C6烷基或-C1-C6鹵烷基。
  12. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中：Y為-C≡CH；R 5 為-H、鹵基、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、-CN、-ORX、-N(RX)2、-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b；及R 9 為-H、鹵基、-C1-C3烷基、-C1-C3鹵烷基、-CN、-ORY或-N(RY)2。
  13. 如請求項12之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4 為-N(RX)2。
  14. 如請求項12之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 2 為-H及R 4 為-NH2。
  15. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中：X為O；Y為-C≡CH或-C≡N；R 1 為-H、-C(O)R6、-C(O)OR6、-C(O)N(R6)2、
    Figure TWI660967B_C0009
    、
    Figure TWI660967B_C0010
    或
    Figure TWI660967B_C0011
    ；R 2 為H、-C(O)R6a、-C(O)OR6a或-C(O)N(R6a)2；R 3 為-H；R 4 為-N(RX)2、-NHC(O)OR6b或-NHC(O)N(R6b)2；R 5 為-H、鹵基、-C1-C6烷基、-C1-C6鹵烷基、-CN、-ORX或-N(RX)2；R 6 、R 6a 及R 6b 在每次出現時各自獨立地選自-H、-C1-C6烷基或-C1-C6鹵烷基；R 9 為-H、鹵基、-C1-C3烷基、-C1-C3鹵烷基、-CN、-ORY或-N(RY)2；R X 在每次出現時獨立地選自-H、-C1-C6烷基或-C1-C6鹵烷基；及R Y 在每次出現時獨立地選自-H、-C1-C6烷基或-C1-C6鹵烷基。
  16. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中：Y為-C≡CH或-C≡N；R 1 為-H、
    Figure TWI660967B_C0012
    、
    Figure TWI660967B_C0013
    或
    Figure TWI660967B_C0014
    ；R 2 為H；R 3 為H；R 4 為-NH2；R 5 為-H、鹵基或-NH2；及R 9 為-H、鹵基或-CH3。
  17. 如請求項1至3中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1 、R 2 、R 4 或R 5 中之一或多者係如下選擇：R 1 為-C(O)R6、-C(O)OR6或-C(O)N(R6)2；及/或R 2 為-C(O)R6a、-C(O)OR6a或-C(O)N(R6a)2；及/或R 4 為-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b；及/或R 5 為-NHC(O)OR6b、-N(C(O)OR6b)2、-NHC(O)N(R6b)2或-NHC(O)R6b。
  18. 一種具有結構式II之化合物，
    Figure TWI660967B_C0015
    或其醫藥學上可接受之鹽，其中：X為O；Y為-C≡CH；R 1 為-H、
    Figure TWI660967B_C0016
    R 2 為-H；R 3 為-H；R 4 為-NH2；R 5 為-H、鹵基或-NH2；及R 9 為-H、鹵基或-CH3。
  19. 如請求項1之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其為：
    Figure TWI660967B_C0017
    Figure TWI660967B_C0018
    或其醫藥學上可接受之鹽。
  20. 如請求項1之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其為：
    Figure TWI660967B_C0019
  21. 如請求項1之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其為：
    Figure TWI660967B_C0020
    之醫藥學上可接受之鹽。
  22. 如請求項1之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其為：
    Figure TWI660967B_C0021
  23. 如請求項1之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其為：
    Figure TWI660967B_C0022
    之醫藥學上可接受之鹽。
  24. 如請求項1之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其為：
    Figure TWI660967B_C0023
  25. 如請求項1之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其為：
    Figure TWI660967B_C0024
    之醫藥學上可接受之鹽。
  26. 如請求項1之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其為：
    Figure TWI660967B_C0025
  27. 如請求項1之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其為：
    Figure TWI660967B_C0026
    之醫藥學上可接受之鹽。
  28. 如請求項1至3及18至27中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其係用於製備在有需要之個體抑制HIV反轉錄酶、治療或預防HIV感染，或治療、預防或延遲AIDS發作的藥劑。
  29. 一種醫藥組合物，其包含有效量之如請求項1至27中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之載劑。
  30. 一種醫藥組合物，其包含有效量之如請求項1至27中任一項之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之載劑，且進一步包含有效量的選自抗HIV抗病毒劑、免疫調節劑或抗感染劑之抗HIV劑。
  31. 如請求項30之醫藥組合物，其中該抗HIV抗病毒劑為HIV蛋白酶抑制劑、HIV反轉錄酶抑制劑、HIV整合酶抑制劑、HIV融合抑制劑、HIV進入抑制劑或HIV成熟抑制劑。
  32. 如請求項30之醫藥組合物，其進一步包含一或多種選自如下之抗HIV劑：
    Figure TWI660967B_C0027
    Figure TWI660967B_C0028
  33. 一種如請求項1至27中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製備治療或預防HIV感染，或治療、預防或延遲AIDS發作的藥劑。
  34. 如請求項33之用途，其中該藥劑進一步包含一或多種選自如下之抗HIV劑：
    Figure TWI660967B_C0029
    Figure TWI660967B_C0030
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