JP6182680B2 - Hiv逆転写酵素阻害剤としての4’置換ヌクレオシド誘導体 - Google Patents
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Description
R2は、−H、−C(O)R6a、−C(O)OR6aまたは−C(O)N(R6a)2であり;
R3は、−H、−Fまたは−OHであり;
R4は、−H、−C1−C6アルキル、−C2−C6アルケニル、−C2−C6アルキニル、−C1−C6ハロアルキル、−C3−C7シクロアルキル、5もしくは6員単環式ヘテロアリール、9もしくは10員二環式ヘテロアリール、ハロ、−CN、−NO2、−N(RX)2、−NH(C1−C6アルキレン)−(5または6員単環式ヘテロアリール)、−NH(C1−C6アルキレン)−(9または10員二環式ヘテロアリール)、アリール、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2または−NHC(O)R6bであり、前記−C1−C6アルキル基、前記−C2−C6アルケニル基または前記−C2−C6アルキニル基はそれぞれ、ハロで置換されていてもよく;
R5は、−H、−C1−C6アルキル、−C2−C6アルケニル、−C2−C6アルキニル、−C1−C6ハロアルキル、−C3−C7シクロアルキル、5もしくは6員単環式ヘテロアリール、9もしくは10員二環式ヘテロアリール、ハロ、−ORX、−CN、−NO2、−N(RX)2、−NH(C1−C6アルキレン)−(5または6員単環式ヘテロアリール)、−NH(C1−C6アルキレン)−(9または10員二環式ヘテロアリール)、アリール、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2または−NHC(O)R6bであり、前記−C1−C6アルキル基、前記−C2−C6アルケニル基または前記−C2−C6アルキニル基はそれぞれ、ハロで置換されていてもよく;
R6、R6aおよびR6bはそれぞれ独立して、−H、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、−(C1−C3アルキレン)m−(C3−C7シクロアルキル)、−(C1−C3アルキレン)m−(アリール)、−(C1−C3アルキレン)m−(4〜7員ヘテロシクロアルキル)、−(C1−C3アルキレン)m−(5または6員単環式ヘテロアリール)または−(C1−C3アルキレン)m−(9または10員二環式ヘテロアリール)から出現ごとに選択され、前記−C1−C6アルキル、前記C3−C7シクロアルキル基、前記アリール基、前記4〜7員ヘテロシクロアルキル基、前記−(5もしくは6員単環式ヘテロアリール基または前記9もしくは10員二環式ヘテロアリール基はそれぞれ、R7で置換されていてもよく;
mは、0(ゼロ)または1から選択される整数であり;
R7は、−C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、C2−C6アルキニル、C1−C6ハロアルキル、アリールまたは5〜6員ヘテロアリールからそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基を表し;
R8は、−H、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、−C3−C7シクロアルキル、アリール、5もしくは6員単環式ヘテロアリールまたは9もしくは10員二環式ヘテロアリールであり;
R9は、−H、ハロ、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、−CN、−ORYまたは−N(RY)2であり;
RXは独立して、−H、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、アリールまたは5もしくは6員単環式ヘテロアリールから出現ごとに選択され;
または、R4またはR5のいずれかまたは両方が−N(RX)2である場合、各RXは、それらが両方とも結合している窒素と一緒になって、5もしくは6員単環式ヘテロアリールまたは9もしくは10員二環式ヘテロアリールを形成していてもよく;ならびに
RYは、−H、−C1−C6アルキルまたは−C1−C6ハロアルキルであり;
ただし、XがOであり、Yが−C≡CHまたは−C≡Nであり、R1が−Hであり、R2が−Hであり、R4が−NH2であり、R5が−H、−Fまたは−OHであり、R9が−Fである場合、R3は−Fではない)の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を対象とする。
(式中:
Xは、O、S、CH2またはCF2であり;
Yは、−C≡C−R8または−C≡Nであり;
R1は、−H、
R2は、−Hであり;
R3は、−H、−Fまたは−OHであり;
R4は、−H、−C1−C6アルキル、−C2−C6アルケニル、−C2−C6アルキニル、−C1−C6ハロアルキル、−C3−C7シクロアルキル、5もしくは6員単環式ヘテロアリール、9もしくは10員二環式ヘテロアリール、ハロ、−CN、−NO2、−N(RX)2、−NH(C1−C6アルキレン)−(5または6員単環式ヘテロアリール)、−NH(C1−C6アルキレン)−(9または10員二環式ヘテロアリール)、アリール、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2または−NHC(O)R6bであり、前記−C1−C6アルキル基、前記−C2−C6アルケニル基または前記−C2−C6アルキニル基はそれぞれ、ハロで置換されていてもよく;
R5は、−H、−C1−C6アルキル、−C2−C6アルケニル、−C2−C6アルキニル、−C1−C6ハロアルキル、−C3−C7シクロアルキル、5もしくは6員単環式ヘテロアリール、9もしくは10員二環式ヘテロアリール、ハロ、−ORX、−CN、−NO2、−N(RX)2、−NH(C1−C6アルキレン)−(5または6員単環式ヘテロアリール)、−NH(C1−C6アルキレン)−(9または10員二環式ヘテロアリール)またはアリールであり、前記−C1−C6アルキル基、前記−C2−C6アルケニル基または前記−C2−C6アルキニル基はそれぞれ、ハロで置換されていてもよく;
R8は、−H、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、−C3−C7シクロアルキル、アリール、5もしくは6員単環式ヘテロアリールまたは9もしくは10員二環式ヘテロアリールであり;
R9は、−H、ハロ、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、−CN、−ORYまたは−N(RY)2であり;
RXは独立して、−H、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、アリールまたは5もしくは6員単環式ヘテロアリールから出現ごとに選択され;
または、R4またはR5のいずれかまたは両方が−N(RX)2である場合、各RXは、それらが両方とも結合している窒素と一緒になって、5もしくは6員単環式ヘテロアリールまたは9もしくは10員二環式ヘテロアリールを形成していてもよく;ならびに
RYは、−H、−C1−C6アルキルまたは−C1−C6ハロアルキルであり、
すべての他の変数(例えば、R6、R6a、R6b、mなど)は、式Iに定義されている通りである)の化合物またはそれらの薬学的に許容され得る塩である。
R2は、−H、−C(O)R6a、−C(O)OR6aまたは−C(O)N(R6a)2であり;ならびに
R4は、−H、−C1−C6アルキル、−C2−C6アルケニル、−C2−C6アルキニル、−C1−C6ハロアルキル、−C3−C7シクロアルキル、5もしくは6員単環式ヘテロアリール、9もしくは10員二環式ヘテロアリール、ハロ、−CN、−NO2、−N(RX)2、−NH(C1−C6アルキレン)−(5または6員単環式ヘテロアリール)、−NH(C1−C6アルキレン)−(9または10員二環式ヘテロアリール)、アリール、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2または−NHC(O)R6bであり、前記−C1−C6アルキル基、前記−C2−C6アルケニル基または前記−C2−C6アルキニル基はそれぞれ、ハロで置換されていてもよく;
R5は、−H、−C1−C6アルキル、−C2−C6アルケニル、−C2−C6アルキニル、−C1−C6ハロアルキル、−C3−C7シクロアルキル、5もしくは6員単環式ヘテロアリール、9もしくは10員二環式ヘテロアリール、ハロ、−ORX、−CN、−NO2、−N(RX)2、−NH(C1−C6アルキレン)−(5または6員単環式ヘテロアリール)、−NH(C1−C6アルキレン)−(9または10員二環式ヘテロアリール)、アリール、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2または−NHC(O)R6bであり、前記−C1−C6アルキル基、前記−C2−C6アルケニル基または前記−C2−C6アルキニル基はそれぞれ、ハロで置換されていてもよく;
ただし、R1、R2、R4またはR5の1個以上は以下のように選択される:
R1は、−C(O)R6、−C(O)OR6、−C(O)N(R6)2または前記モノホスフェート、ジホスフェートもしくはトリホスフェートのプロドラッグ修飾であり;および/または
R2は、−C(O)R6a、−C(O)OR6aまたは−C(O)N(R6a)2であり;および/または
R4は、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2または−NHC(O)R6bであり;および/または
R5は、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2または−NHC(O)R6bであり、
すべての他の変数(例えば、X、Y、R3、R6、R6a、R6b、m、R7、R8、R9、RXおよびRY)は、式Iに定義されている通りである)の化合物またはそれらの薬学的に許容され得る塩である。
Xは、Oであり;
Yは、−C≡CHまたは−C≡Nであり;
R1は、−H、−C(O)R6、−C(O)OR6、−C(O)N(R6)2、
R2は、−H、−C(O)R6a、−C(O)OR6aもしくは−C(O)N(R6a)2であり、または特にそれは−Hであり;
R3は、−Hもしくは−OHであり、または特にR3は−Hであり;
R4は、−N(RX)2、−NHC(O)OR6bもしくは−NHC(O)N(R6b)2であり、または特にR4は−N(RX)2であり;
R5は、−H、ハロ、−C1−C6アルキル、−ORXもしくは−N(RX)2であり、または特にR5は、−H、−Cl、−Fまたは−NH2であり;
R6、R6aおよびR6bはそれぞれ独立して、−H、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、アリール(好ましくは、フェニル)または5もしくは6員単環式ヘテロアリールから出現ごとに選択され、R6、R6aおよびR6bはそれぞれ、R7で置換されていてもよく;
R7は、−C1−C6アルキル、アリール(好ましくは、フェニル)または5もしくは6員単環式ヘテロアリールであり;
R8は、−Hであり;
R9は、−H、ハロ、−C1−C3アルキル、−C1−C3ハロアルキル、−CN、−ORYまたは−N(RY)2であり、特にそれは、−H、−F、−Cl、−I、−Brまたは−CH3であり;
RXは独立して、−H、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、アリールまたは5もしくは6員単環式ヘテロアリールから出現ごとに選択され;
または、R4またはR5のいずれかまたは両方が−N(RX)2である場合、各RXは、それらが両方とも結合している窒素と一緒になって、5もしくは6員単環式ヘテロアリールまたは9もしくは10員二環式ヘテロアリールを形成していてもよく;ならびに
RYは、−H、−C1−C6アルキルまたは−C1−C6ハロアルキルである)の化合物またはそれらの薬学的に許容され得る塩である。
R2は、−Hであり;
R3は、−Hであり;
R4は、−NH2であり;
R5は、−H、−Cl、−Fまたは−NH2であり;
R8は、−Hであり;ならびに
R9は、−H、−F、−Cl、−I、−Brまたは−CH3である)の化合物またはそれらの薬学的に許容され得る塩である。
R2は、−H、−C(O)R6a、−C(O)OR6aまたは−C(O)N(R6a)2であり;
またはR2は、−C(O)R6a、−C(O)OR6aまたは−C(O)N(R6a)2であり;
またはR2は、−Hである)の化合物またはそれらの薬学的に許容され得る塩である。
R5は、−H、ハロ、−C1−C6アルキル、−ORX、−N(RX)2、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2または−NHC(O)R6bであり;
またはR5は−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2、または−NHC(O)R6bであり;
またはR5は、−H、ハロ(好ましくは、−Fまたは−Cl)、−C1−C6アルキル、−ORXまたは−N(RX)2)であり;
またはR5は、−H、−Cl、−Fまたは−NH2である)の化合物またはそれらの薬学的に許容され得る塩である。
R5は、−H、ハロ(好ましくは、−Fまたは−Cl)、−C1−C6アルキル、−ORXまたは−N(RX)2)であり;
またはR5は、−H、−Cl、−Fまたは−NH2である。
a)R1は、−P(O)(OH)−O−P(O)(OH)−O−P(O)(OH)2であり;
b)R1は、−P(O)(OH)−O−P(O)(OH)−O−P(O)(OH)2であり、R2は、−Hであり;および/または
c)R1は、−P(O)(OH)−O−P(O)(OH)−O−P(O)(OH)2であり、R2は、−Hであり、R4は、−NH2であり、R5は、−Hまたは−NH2である)の化合物が挙げられる。
(a)有効量の上記に定義される式(I)の化合物またはそのプロドラッグもしくは薬学的に許容され得る塩と、薬学的に許容され得る担体とを含む、医薬組成物。
アルゴン雰囲気下で、(4S,5R)−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2,4−ジオール(7.0g、52.2mmol)の無水メタノール(105mL)撹拌溶液に、塩化アセチル(0.614g、7.83mmol)を0℃で撹拌しながら5分間かけて滴下し、得られた混合物を0℃で3時間撹拌した。次いで、固体の重炭酸ナトリウムを追加して、反応混合物を中和した。有機相をろ過によって回収し、次いで、減圧下で濃縮して、シロップとして残留物を得た。残留物を、ジクロロメタン/メタノール(20/1)を用いてシリカゲル(100〜200メッシュ)クロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ 4.98−5.04(m,1H),4.21−4.23(m,0.4H),4.07−4.09(m,0.6H),3.83−3.89(m,1H),3.50−3.66(m,2H),3.27−3.32(m,3H),2.23−2.29(m,0.6H),2.08−2.12(m,0.4H),1.98−2.03(m,0.4H),1.77−1.83(m,0.6H).
工程2:(2R,3S)−5−メトキシ−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエートの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S)−2−(ヒドロキシメチル)−5−メトキシテトラヒドロフラン−3−オール(6.5g、43.9mmol)の無水ピリジン(45mL)撹拌溶液に、4−メチルベンゾイルクロリド(20.35g、132mmol)を0℃で15分間かけて滴下した。得られた混合物を30℃に徐々に加温し、次いで、16時間撹拌した。得られた溶液を減圧下で濃縮した。得られた残留物を酢酸エチル(400mL)で希釈し、次いで、それぞれ塩化水素水溶液(1mol/L、2×100mL)、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(2×100mL)およびブライン(100mL)で洗浄した。有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物を、石油エーテル/酢酸エチル(20:1)を用いてシリカゲル(100〜200メッシュ)クロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ 7.90−7.99(m,4H),7.20−7.26(m,4H),5.58−5.61(m,0.47H),5.39−5.42(m,0.55H),5.18−5.24(m,1H),4.46−4.65(m,3H),3.43(s,1.61H),3.36(s,1.33H),2.52−2.60(m,1H),2.17−2.43(m,7H).
工程3:(2R,3S,5R)−5−クロロ−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(中間体A)
100mL三つ口丸底フラスコ中、(2R,3S)−5−メトキシ−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(4.0g、10.41mmol)の無水ジエチルエーテル(20mL)撹拌溶液に、HCl(g)を導入した。生成物を0℃で40分間かけて徐々に沈殿させた。固体をろ過し、無水ジエチルエーテル(3×20mL)で洗浄し、高真空下で2時間乾燥させて、固形物として中間体Aを得た。1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ 7.96(d,J=9.0Hz,2H),7.90(d,J=8.1Hz,2H),7.19−7.27(m,4H),6.47(d,J=5.1Hz,1H),5.54−5.58(m,1H),4.85(dd,J=3.3Hz,J=7.2Hz,1H),4.68(dd,J=3.3Hz,J=12.0Hz,1H),4.59(dd,J=4.2Hz,J=12.0Hz,1H),2.83−2.92(m,1H),2.74(d,J=15.0Hz,1H),2.42(d,J=3.6Hz,6H).
[実施例1]:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(1)の合成
250ml三つ口丸底フラスコ中、アルゴン雰囲気下で、水素化ナトリウム(60%鉱油分散液、0.272g、6.79mmol)の無水アセトニトリル(50ml)懸濁液に、4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(0.948g、6.17mmol)を追加し、混合物を周囲温度で30分間撹拌した。(2R,3S,5R)−5−クロロ−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(2.4g、6.17mmol)を撹拌しながら少しずつ追加した。反応混合物を50℃に加熱し、2時間撹拌した。反応の進行を、TLCおよびLCMSによってモニタリングした。反応混合物を蒸発させて油状残留物を得、これを、酢酸エチル/石油エーテル(1:6、v/v)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ 8.64(s,1H),7.98(d,J=8.1Hz,2H),7.92(d,J=8.1Hz,2H),7.43(d,J=3.6Hz,1H),7.20−7.30(m,4H),6.82(dd,J=5.7Hz,J=8.1Hz,1H),6.60(d,J=3.9Hz,1H),4.60−4.76(m,3H),2.86−2.96(m,1H),2.74−2.82(m,1H),2.43(d,J=5.4Hz,6H).LC−MS:(ES,m/z):506.43[M+H]+.
工程2:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
(2R,3S,5R)−5−(4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(2.18g、4.31mmol)を80mlスチールボンベに追加し、それを−40℃に冷却した。これに、イソプロパノールアンモニア(−40℃で飽和、60ml)を追加した。混合物を90℃で15時間撹拌した後、それを室温に冷却し、真空下で濃縮した。残留物を、ジクロロメタン/メタノール(4/1)を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ 8.04(s,1H),7.34(d,J=3.6Hz,1H),7.04(br,2H),6.58(d,J=3.6Hz,1H),6.48(dd,J=6.0Hz,J=8.0Hz,1H),5.24(d,J=3.6Hz,1H),5.16(t,J=4.2Hz,1H),4.34(d,J=2.0Hz,1H),3.82(dd,J=4.0Hz,J=6.4Hz,1H),3.48−3.58(m,2H),2.48−2.54(m,1H),2.13−2.17(m,1H).
工程3:7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミンの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(950mg、3.796mmol)およびイミダゾール(775.4mg、11.388mmol)を25mL丸底フラスコに追加した。フラスコに無水DMF(8mL)を注入し、続いて、t−ブチルジメチルシリルクロリド(1716.4mg、11.388mmol)を追加した。混合物を25℃で3時間撹拌した後、それを酢酸エチル(40mL)で希釈し、それぞれ水(20mL×2)、NaHCO3水溶液(飽和、20mL×2)およびブライン(20mL×2)で洗浄した。有機層を回収し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を、酢酸エチル/石油エーテル(35%〜42%酢酸エチルの石油エーテル溶液)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ 8.32(s,1H),7.32(d,J=3.9Hz,1H),6.69(t,J=6.6Hz,1H),6.39(d,J=3.6Hz,1H),5.29(br,2H),4.56−4.61(m,1H),3.96(dd,J=3.5Hz,J=7.0Hz,1H),3.74−3.84(m,2H),2.42−2.51(m,1H),2.30−2.38(m,1H),0.92(d,J=4.2Hz,18H),0.08−0.1(m,12H).LC−MS:(ES,m/z):497.71[M+H]+.
工程4:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン(1.2g、2.506mmol)のTHF(24mL)撹拌溶液に、予め冷却したトリフルオロ酢酸/水(1/2、v/v、9mL)溶液を0℃で10分間かけて滴下した。得られた混合物を0℃で4時間撹拌し、次いで、25℃未満でトルエンと3回共蒸発させて、シロップを得た。粗生成物を、酢酸エチル/ジクロロメタン(1/1)を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ 8.03(s,1H),7.34(d,J=3.9Hz,1H),7.03(brs,2H),6.58(d,J=3.6Hz,1H),6.46(dd,J=5.7Hz,1H),5.19(t,J=5.7Hz,1H),4.51−4.53(m,1H),3.79−3.83(m,1H),3.47−3.57(m,2H),2.55−2.64(m,1H),2.10−2.17(m,1H),0.9(s,9H),0.11(s,6H).
工程5:(2S,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
25mL丸底フラスコ中、アルゴン雰囲気下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(100mg、0.274mmol)の無水アセトニトリル(10mL)撹拌溶液に、2−ヨードキシ安息香酸(230mg、0.823mmol)を追加した。得られた混合物を0.5時間還流し、次いで、室温に冷却した。固体をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮して表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):363.20[M+H]+,381.20[M+H+H2O]+.
工程6:((3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノールの合成
(2S,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(100mg、0.276mmol、未精製)の1,4−ジオキサン(1mL)撹拌溶液に、ホルムアルデヒド溶液(0.3mL、4.00mmol)を追加し、続いて、水酸化ナトリウム溶液(0.3mL、0.600mmol、2M)を1分間かけて滴下した。得られた混合物を3時間25℃で撹拌した。反応が完了した後、反応混合物を、酢酸の追加によって中和し、酢酸エチルで希釈し、水、飽和NaHCO3水溶液およびブラインで順次洗浄し、Na2SO4で脱水し、減圧下で蒸発させた。残留物を無水エタノール(2mL)に再溶解し、水素化ホウ素ナトリウム(20.87mg、0.552mmol)を0℃で少しずつ追加した。25℃で1時間撹拌した後、反応混合物を、酢酸の追加によって中和し、クロロホルム(20mL)で希釈し、水およびブラインで洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、減圧下で蒸発させた。残留物を、ジクロロメタン/メタノール(20/1)を用いて分取TLCによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ 8.03(s,1H),7.37(d,J=3.6Hz,1H),7.02(brs,2H),6.57(d,J=3.6Hz,1H),6.50(dd,J=5.7Hz,J=8.1Hz,1H),5.12(dd,J=5.1Hz,J=6.3Hz,1H),4.59−4.60(m,1H),4.38(dd,J=5.1Hz,J=6.3Hz,1H),3.46−3.61(m,4H),2.70−2.75(m,1H),2.13−2.20(m,1H),0.90(s,9H),0.09(s,6H).LC−MS:(ES,m/z):395.20[M+H]+.
工程7:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、((3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノール(100mg、0.253mmol)の無水アセトニトリル(20mL)撹拌溶液に、2−ヨードキシ安息香酸(284mg、1.014mmol)を追加した。得られた混合物を30℃で36時間撹拌した。LCMSにより、最初のジオールヌクレオシドのごく一部が残っており、目的化合物が主生成物であったことが示された。混合物をろ過し、ジクロロメタンで洗浄した。ろ液を回収し、減圧下で濃縮して表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):393.28[M+H]+ .
工程8:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(100mg、0.248mmol、未精製)の無水メタノール(10mL)撹拌溶液に、炭酸カリウム(68.04mg、0.492mmol)を追加した。混合物を0℃に冷却し、次いで、ジメチル(1−ジアゾ−2−オキソプロピル)ホスホネート(94.56mg、0.492mmol)を2分間かけて滴下した。得られた混合物を25℃で一晩撹拌した後、それを減圧下で濃縮した。残留物を、分取TLC(メタノール/ジクロロメタン=1/15)によって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ 8.24(s,1H),7.04(d,J=3.6Hz,1H),6.35(d,J=3.6Hz,1H),6.31(dd,J=5.7Hz,J=9.3Hz,1H),5.48(br,2H),4.73(d,J=4.2Hz,1H),4.03(d,J=12.6Hz,1H),3.80(d,J=12.3Hz,1H),3.13−3.23(m,1H),2.58(s,1H),2.22−2.28(m,1H),0.95(s,9H),0.15(d,J=7.2Hz,6H).
工程9:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
アルゴン雰囲気下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(60mg、0.154mmol)の無水THF(2mL)撹拌溶液に、1Mフッ化テトラブチルアンモニウムTHF溶液(0.309mL、0.309mmol)を周囲温度で1分間かけて滴下した。得られた溶液をこの温度で2時間撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。最初のヌクレオシドがすべて消費されたら、混合物を減圧下で濃縮した。残留物を、分取TLC(メタノール/ジクロロメタン=1/9)によって精製して未精製の表題化合物を得、これを、以下の条件:(1#−Pre−HPLC−011(Waters)):カラム、X−select CSHカラム、19*150mm、5um;移動相、10mmol重炭酸アンモニウムを含む水およびアセトニトリル(5%アセトニトリルを7.5分間で20%に上昇させ、2分間で95%に上昇させる);検出器、UV254および220nmを用いて分取HPLCによって精製して、固体として化合物1を得た。1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.05(s,1H),7.31(d,J=3.6Hz,1H),7.03(brs,2H),6.58(d,J=3.6Hz,1H),6.50(t,J=6.3Hz,1H),5.40−5.49(m,2H),4.49(dd,J=6.0Hz,J=11.4Hz,1H),3.51−3.66(m,2H),3.46(s,1H),2.55−2.59(m,1H),2.28−2.39(m,1H).LC−MS:(ES,m/z):275.20[M+H]+.
[実施例2]:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(2)の合成
アルゴン雰囲気下で、4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(5g、32.6mmol)およびSELECTFLUOR(登録商標)(1−クロロメチル−4−フルオロ−1,4−ジアゾニアビシクロ[2.2.2]オクタンビス(テトラフルオロボレート))(17.30g、48.8mmol)を500mL丸底フラスコに入れた。これに、無水アセトニトリル(150mL)および無水酢酸(50mL)を追加した。混合物を70℃に加熱し、16時間撹拌した。室温に冷却した後、溶媒を減圧下で除去し、残留物をトルエンと共蒸発させた。未精製の固体をジクロロメタン/酢酸エチル(1:1)の混合物に溶解し、シリカゲルのパッドに通してろ過した。合わせた有機相を減圧下で蒸発させた。次いで、粗生成物を、ジクロロメタン/酢酸エチル(5:1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ12.48(brs,1H),8.62(s,1H),7.71(t,J=2.6Hz,1H).F−NMR:(376MHz,d6−DMSO,ppm):δ−170.76(s,1F).LC−MS:(ES,m/z):172.00[M+H]+.
工程2:(2R,3S,5R)−5−(4−クロロ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエートの合成
アルゴン雰囲気下で、水素化ナトリウム60%鉱油分散液(0.177g、4.41mmol)の無水アセトニトリル(40mL)懸濁液を4−クロロ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(0.688g、4.01mmol)に少しずつ追加し、混合物を周囲温度で30分間撹拌した。次いで、中間体A(1.56g、4.01mmol)を少しずつ追加した。反応混合物を50℃に加熱し、2時間撹拌した後、揮発性物質を減圧下で除去し、次いで、残留物を、酢酸エチル/石油エーテル(1/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ8.62−8.68(m,1H),7.91−7.99(m,4H),7.26−7.29(m,4H),7.16−7.18(m,2H),6.84−6.88(m,1H),5.74−5.76(m,1H),4.60−4.74(m,3H),2.74−2.79(m,2H),2.43−2.46(m,6H).LC−MS:(ES,m/z):524.30[M+H]+.
工程3:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
80mLスチールボンベに、(2R,3S,5R)−5−(4−クロロ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(2.0g、3.82mmol)を追加した。媒体を−40℃に冷却した。これに、飽和アンモニア/i−PrOH(60mL)を追加した。混合物を80℃に加熱し、18時間撹拌した後、得られた混合物を減圧下で濃縮した。残留物を、ジクロロメタン/メタノール(5/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.06(s,1H),7.33(d,J=2.0Hz,1H),6.99(brs,2H),6.54(t,J=6.0Hz,1H),5.24(d,J=4.4Hz,1H),4.99(t,J=5.6Hz,1H),4.30−4.33(m,1H),3.78−3.81(m,1H),3.47−3.56(m,2H),2.37−2.44(m,1H),2.12−2.17(m,1H).F−NMR:(376MHz,d6−DMSO,ppm):δ−167.49(s,1F).
工程4:7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミンの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(538mg、2.006mmol)およびイミダゾール(819mg、12.03mmol)を25mL丸底フラスコに追加した。これに、無水DMF(5mL)を追加し、続いて、tert−ブチルクロロジメチルシラン(1209mg、8.02mmol)を少しずつ追加した。得られた混合物を25℃で3時間撹拌した。反応の進行を、TLCおよびLCMSによってモニタリングした。反応が完了した後、混合物を酢酸エチル(40mL)で希釈し、それぞれ水(20mL×2)、飽和NaHCO3水溶液(20mL×2)およびブライン(20mL×2)で洗浄した。有機層を回収し、無水Na2SO4で脱水し、減圧下で濃縮した。次いで、粗生成物を、酢酸エチル/石油エーテル(28%〜41%酢酸エチルの石油エーテル溶液)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.07(s,1H),7.27(s,1H),6.99(brs,2H),6.54(t,J=6.0Hz,1H),4.49(s,1H),3.60−3.78(m,3H),2.51−2.53(m,1H),2.16−2.20(m,1H),0.88(d,J=4.2Hz,18H),0.11(s,6H),0.04(s,6H).LC−MS:(ES,m/z):497.71[M+H]+.
工程5:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン(900mg、1.812mmol)のTHF(12mL)撹拌溶液に、トリフルオロ酢酸水溶液(トリフルオロ酢酸/水=1/1、v/v、6mL)を0℃で撹拌しながら10分間かけて滴下した。得られた混合物を0℃で撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。反応が完了した後、温度を25℃未満に維持しながら、得られた混合物を、真空下でトルエン(50mL×3)と共蒸発させて、揮発性物質を除去した。残留物を、酢酸エチル/石油エーテル(52%〜58%酢酸エチルの石油エーテル溶液)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.07(s,1H),7.34(s,1H),6.99(brs,2H),6.53(t,J=6.9Hz,1H),5.04(t,J=5.6Hz,1H),4.47−4.51(m,1H),3.76−3.79(m,1H),3.44−3.57(m,2H),2.45−2.51(m,1H),2.11−2.16(m,1H),0.90(s,9H),0.11(s,6H).LC−MS:(ES,m/z):383.26[M+H]+.
工程6:(2S,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(360mg、0.941mmol)の無水アセトニトリル(12mL)撹拌溶液に、2−ヨードキシ安息香酸(791mg、2.82mmol)を追加した。得られた混合物を35分間還流した。反応物を室温に冷却し、固体をろ過した。ろ液を回収し、次いで、真空下で濃縮して表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。
(2S,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(400mg、1.051mmol、未精製)の1,4−ジオキサン(4mL)撹拌溶液に、ホルムアルデヒド溶液(1.2mL、16.01mmol)を追加し、続いて、水酸化ナトリウム溶液(1.2mL、2M、2.400mmol)を5分間かけて滴下した。得られた混合物を25℃で3時間撹拌し、次いで、反応混合物を、酢酸の追加によって中和した。得られた混合物を酢酸エチルで希釈し、水、飽和NaHCO3水溶液およびブラインで順次洗浄した。有機相をNa2SO4で脱水し、減圧下で蒸発させた。残留物をエタノール(10mL)に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム(80mg、2.103mmol)を0℃で少しずつ追加した。25℃で1時間撹拌した後、反応混合物を、酢酸の追加によって中和し、次いで、クロロホルムで希釈し、水および食塩水で順次洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、減圧下で蒸発させた。残留物を、ジクロロメタン/メタノール(30/1)を用いてシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.06(s,1H),7.36(s,1H),6.99(brs,2H),6.57(t,J=3.6Hz,1H),4.99(t,J=4.8Hz,1H),4.55−4.59(m,1H),4.39(t,J=5.1Hz,1H),3.45−3.55(m,4H),2.57−2.65(m,1H),2.17−2.20(m,1H),0.90(s,9H),0.09(s,6H).
工程8:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、((3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノール(120mg、0.291mmol)の無水アセトニトリル(8mL)撹拌溶液に、2−ヨードキシ安息香酸(326mg、1.164mmol)を追加した。得られた混合物を30℃で24時間撹拌し、次いで、ろ過し、ジクロロメタンで洗浄した。ろ液を回収し、減圧下で濃縮して表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):411.43[M+H]+.
工程9:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
アルゴン下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(110mg、0.268mmol、未精製)の無水メタノール(8mL)撹拌溶液に、炭酸カリウム(111mg、0.804mmol)を追加した。混合物を0℃に冷却し、次いで、ジメチル(1−ジアゾ−2−オキソプロピル)ホスホネート(154mg、0.804mmol)を1分間かけて滴下した。混合物を25℃で一晩撹拌した後、得られた混合物を真空下で濃縮し、次いで、分取TLC(メタノール/ジクロロメタン=1/15)によって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.07(s,1H),7.34(s,1H),7.03(br,2H),6.56(t,J=6.3Hz,1H),5.43(t,J=6.0Hz,1H),4.61(t,J=5.4Hz,1H),3.58−3.67(m,1H),3.49−3.53(m,1H),3.47(s,1H),2.52−2.61(m,1H),2.23−2.31(m,1H),0.91(s,9H),0.11(d,J=2.4Hz,6H).LC−MS:(ES,m/z):407.30[M+H]+ .
工程10:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
アルゴン雰囲気下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(40mg、0.098mmol)の無水THF(2mL)撹拌溶液に、TBAF/THF溶液(0.118mL、0.118mmol)を室温で1分間かけて撹拌しながら滴下し、得られた溶液をこの温度で2時間撹拌した。反応が完了した後、得られた混合物を真空下で濃縮し、残留物を、分取TLC(メタノール/ジクロロメタン=1/10)によって精製して、粗生成物(28mg)を得た。粗生成物を、以下の条件:(1#−Pre−HPLC−011(Waters)):カラム、X−select CSHカラム、19*150mm、5um;移動相、10mmol重炭酸アンモニウムを含む水およびアセトニトリル(5%アセトニトリルを7.5分間で35%に上昇させ、2分間で95%に上昇させる);検出器、UV254および220nmを用いて分取HPLCによってさらに精製した。生成物含有画分を回収し、凍結乾燥して、固体として化合物2を得た。1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.07(s,1H),7.30(d,J=1.6Hz,1H),7.02(br,2H),6.55(t,J=5.8Hz,1H),6.05(br,1H),5.31−5.45(m,1H),4.46(t,J=6.6Hz,1H),3.58(dd,J=11.8Hz,J=29.4Hz,2H),3.47(s,1H),2.44−2.51(m,1H),2.29−2.36(m,1H).F−NMR:(376MHz,d6−DMSO,ppm):δ−167.23(s,1F).LC−MS:(ES,m/z):293.10[M+H]+,315.10[M+Na]+ .
[実施例3]:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(1g、6.51mmol)を無水DCM(20mL)に懸濁し、続いて、アルゴン雰囲気下で、NBS(−ブロモスクシンイミド)(1.275g、7.16mmol)を周囲温度で追加した。混合物を加熱還流し、16時間撹拌した。最初のデアザ−ピリミジンがすべて消費されたら、混合物を周囲温度に冷却し、30分間維持した。沈殿物を、ろ過によって回収し、DCM(2×20mL)で洗浄し、真空下で乾燥させて、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):233.90[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ12.98(brs,1H),8.64(s,1H),7.96(s,1H).
工程2:4−クロロ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジンの合成
5−ブロモ−4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(232mg、0.998mmol)を無水THF(10mL)に溶解し、アルゴン雰囲気下で−78℃に冷却した。これに、n−ブチルリチウムヘキサン溶液(2.5M、0.88mL、2.196mmol)を撹拌しながら5分間かけて滴下した。混合物を約40分間撹拌し、続いて、ヨードメタン(212mg、1.497mmol)を追加した。次いで、この溶液を2時間かけて室温に徐々に加温した。水(2mL)を追加して、反応物をクエンチした。揮発物質を40℃未満の真空下で除去して、スラリーを得た。スラリーをEtOAc(50mL)に再溶解し、水(2×15mL)およびブライン(20mL)で洗浄した。有機層を回収し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を真空下で濃縮して粉末を得、これをMeOHから再結晶化して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):168.00[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ12.22(brs,1H),8.51(s,1H),7.43(s,1H),2.41(d,J=0.90Hz,1H).
工程3:(2R,3S,5R)−5−(4−クロロ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエートの合成
アルゴン雰囲気下で、水素化ナトリウム(60%油分散液、0.453g、11.32mmol)の無水ACN(50mL)撹拌懸濁液に、4−クロロ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(1.724g、10.29mmol)を少しずつ追加し、混合物を25℃で30分間撹拌した。得られた透明な溶液に、中間体A(4.0g、10.29mmol)を25℃で少しずつ追加した。得られた混合物を50℃に加熱し、3時間撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。混合物を真空下で濃縮して固体を得、これを、酢酸エチル/石油エーテル(1:6、v/v)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):520.25[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ8.55(s,1H),7.90−7.99(m,4H),7.20−7.30(m,4H),7.11(s,1H),6.81(dd,J=6.0Hz,J=8.4Hz,1H),5.76(dd,J=1.5Hz,J=3.6Hz,1H),4.73−4.79(m,1H),4.54−4.64(m,2H),2.79−2.88(m,1H),2.68−2.75(m,1H),2.43(d,J=3.0Hz,6H),2.33(d,J=0.9Hz,3H).
工程4:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
150mLスチールボンベに、(2R,3S,5R)−5−(4−クロロ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(4.5g、7.79mmol)を入れた。媒体を−40℃に冷却した。これに、2−プロパノールアンモニア(i−PrOH/液体NH3=1/1、v/v、120mL)を追加した。ボンベを密封し、混合物を90℃に加熱し、40時間撹拌した。反応が完了したら、混合物を0℃に冷却し、真空下で濃縮した。残留物を、DCM/MeOH(4/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):265.10[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.00(s,1H),7.08(s,1H),6.58(brs,2H),6.45(dd,J=6.0Hz,J=8.1Hz,1H),5.21(d,J=3.3Hz,1H),5.05(t,J=5.1Hz,1H),4.32−4.36(m,1H),3.78(d,J=2.1Hz,1H),3.44−3.57(m,2H),2.39−2.51(m,1H),2.33(s,3H),2.06−2.13(m,3H).
工程5:7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミンの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(1.7g、6.43mmol)および1H−イミダゾール(1.752g、25.7mmol)の無水DMF(10mL)撹拌溶液に、tert−ブチルクロロジメチルシラン(2.91g、19.30mmol)を25℃で撹拌しながら追加した。得られた混合物を25℃で3時間撹拌し、次いで、酢酸エチル(100mL)で希釈し、それぞれ水(2×30mL)、NaHCO3水溶液(飽和、2×30mL)およびブライン(30mL)で洗浄した。有機層を回収し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、真空下で濃縮して、粗生成物を得た。次いで、粗生成物を、酢酸エチル/石油エーテル(28%〜41%EAのPE溶液)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):493.30[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ8.24(s,1H),7.02(s,1H),6.67(dd,J=6.3Hz,J=7.2Hz,1H),5.37(br,2H),4.54−4.57(m,1H),3.94(dd,J=3.3Hz,J=6.3Hz,1H),3.72−3.82(m,2H),2.37−2.46(m,4H),2.25−2.32(m,1H),0.91(2s,18H),0.10(s,12H).
工程6:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−(tert−ブチルジメチルシリル)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
7−((2R,4S,5R)−4−(tert−ブチルジメチルシリル)−5−((tert−ブチルジメチルシリル)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン(2.5g、5.07mmol)のTHF(30mL)撹拌溶液に、予め冷却したトリフルオロ酢酸/水(1/1、v/v、15mL)溶液を0℃で撹拌しながら10分間かけて滴下した。得られた混合物を0℃で3時間撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。内部温度を25℃未満に維持しながら、得られた溶液を、トルエン(3×100mL)と共蒸発させた。次いで、得られた粗生成物を、酢酸エチル/石油エーテル(50%〜58%EAのPE溶液)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):493.30[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ8.18(s,1H),7.41(s,1H),6.59(dd,J=6.0Hz,J=7.8Hz,1H),4.56−4.60(m,1H),3.93(dd,J=3.9Hz,J=6.6Hz,1H),3.65−3.70(m,2H),2.45−2.54(m,1H),2.42(d,J=0.9Hz,3H),2.23−2.31(m,1H),0.91(s,9H),0.11(s,6H).
工程7:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−(tert−ブチルジメチルシリル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−(tert−ブチルジメチルシリル)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(600mg、1.585mmol)の無水ACN(12mL)撹拌懸濁液に、IBX(888mg、3.17mmol)を追加した。混合物を加熱還流し、55分間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。混合物を室温に冷却し、固体をろ過した。ろ過を回収し、次いで、真空下で濃縮して表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):377.15[M+H]+,409.15[M+H+MeOH]+.
工程8:((3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−(tert−ブチルジメチルシリル)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノールの合成
50mL丸底フラスコ中、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−(tert−ブチルジメチルシリル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(420mg、未精製)の1,4−ジオキサン(12mL)および水(3mL)撹拌溶液に、ホルムアルデヒド水溶液(37%w/w、6mL)を追加し、続いて、水酸化ナトリウム溶液(2N、6mL、0.12mmol)を2分間かけて滴下した。得られた混合物を25℃で3時間撹拌した。最初のヌクレオシド−アルデヒドがすべて消費されたら、反応混合物を、AcOH(約0.8mL)の追加によって中和した。得られた混合物をAcOEt(50mL)で希釈し、水(30mL)、飽和NaHCO3水溶液(20mL)およびブライン(20mL)で順次洗浄した。有機層を無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、真空下で濃縮した。残留物を無水EtOH(8mL)に再溶解し、水素化ホウ素ナトリウム(84.4mg、2.23mmol)を0℃で少しずつ追加した。25℃で1時間撹拌した後、反応混合物を、AcOHの追加によって中和した。混合物を真空下で濃縮し、CHCl3(50mL)と水(30mL)との間に分けた。水層をCHCl3(2×20mL)で再抽出した。合わせた有機層を水およびブラインで順次洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、真空下で濃縮した。残留物を、ジクロロメタン/メタノール(5.5%MeOHのDCM溶液)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):409.35[M+H]+,431.35[M+Na]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.00(s,1H),7.11(s,1H),6.56(br,2H),6.48(dd,J=6.0Hz,J=8.4Hz,1H),6.45−6.47(m,1H),5.02(t,J=5.5Hz,1H),4.58(t,J=2.7Hz,1H),4.35(dd,J=4.5Hz,J=6.3Hz,1H),3.42−3.60(m,4H),2.58−2.63(m,1H),2.34(s,3H),2.09−2.16(m,1H),0.90(s,9H),0.09(s,6H).
工程9:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、((3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノール(140mg、0.343mmol)を無水ACN(15mL)に懸濁し、続いて、2−ヨードキシ安息香酸(240mg、0.857mmol)を追加した。混合物を30℃で20時間撹拌した。固体をろ過し、CHCl3(2×20mL)で洗浄した。合わせたろ液を真空下で濃縮して表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):407.25[M+H]+.
工程10:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(120mg、−0.236mmol、未精製)の無水MeOH(15mL)撹拌溶液に、K2CO3(82mg、0.590mmol)を0℃で追加し、続いて、ジメチル(1−ジアゾ−2−オキソプロピル)ホスホネート(91mg、0.472mmol)のMeOH(2mL)溶液を0℃で撹拌しながら2分間かけて滴下した。得られた混合物を25℃に徐々に加温し、16時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮した。残留物を、酢酸エチル/石油エーテル(30%−50%EAのPE溶液)を使用してフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):403.25[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.01(s,1H),7.07(s,1H),6.60(br,2H),6.49(dd,J=6.0Hz,J=7.2Hz,1H),5.48(t,J=5.7Hz,1H),4.62(t,J=5.7Hz,1H),3.57−3.68(m,1H),3.48−3.52(m,1H),3.45(s,1H),2.49−2.62(m,1H),2.33(s,3H),2.21−2.31(m,1H),0.91(s,9H),0.12(d,J=6.0Hz,6H).
工程11:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(3)の合成
((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(27mg、0.067mmol)の無水THF(1mL)撹拌溶液に、テトラ−ブチルアンモニウムフルオリドTHF溶液(1.0M、0.067mL、0.067mmol)を0℃で撹拌しながら滴下した。得られた混合物を25℃で30分間撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。得られた溶液を真空下で濃縮した。粗生成物を、以下の条件:(1#−Pre−HPLC−011(Waters)):カラム、XBridge(商標)C18カラム、19*150mm、5um;移動相、10mmol重炭酸アンモニウムを含む水およびアセトニトリル(30%アセトニトリルを10分間で70%に上昇させ、2分間で95%に上昇させ、1.5分間で5%に低下させる);流速:20mL/分;検出器、UV254および220nmを用いて分取HPLCによって精製した。生成物含有画分を回収し、凍結乾燥して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):289.05[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.00(s,1H),7.06(s,1H),6.58(br,2H),6.48(t,J=6.60Hz,1H),5.45(d,J=5.1Hz,1H),5.38(t,J=6.0Hz,1H),4.46(q,J=5.4Hz,1H),3.50−3.64(m,2H),3.44(s,1H),2.44−2.54(m,1H),2.33(s,3H),2.24−2.32(m,1H).
[実施例4]:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(4)の合成
アルゴン雰囲気下で、水素化ナトリウム(60%鉱油分散液、0.509g、12.73mmol)の無水アセトニトリル(125mL)撹拌懸濁液に、2,4−ジクロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(2.176g、11.57mmol)を少しずつ追加し、混合物を周囲温度で30分間撹拌した。上記透明な溶液に、中間体A(4.5g、11.57mmol)を撹拌しながらバッチ式で追加した。反応混合物を周囲温度で2時間撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。反応混合物を蒸発させて油状残留物を得、これを、酢酸エチル/石油エーテル(1/6、v/v)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):540.20[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,CDCl3,ppm):δ8.01(d,J=8.0Hz,2H),7.93(d,J=8.0Hz,2H),7.43(d,J=3.6Hz,1H),7.22−7.37(m,4H),6.80(dd,J=6.0Hz,J=8.0Hz,1H),6.61(d,J=4.0Hz,1H),5.76(t,J=2.8Hz,1H),4.76(dd,J=3.6Hz,J=12.0Hz,1H),4.63−4.69(m,2H),2.76−2.86(m,2H),2.47,2.45(2s,6H).
工程2:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
250mLスチールボンベに、(2R,3S,5R)−5−(2,4−ジクロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(5g、9.25mmol)を追加した。媒体を−40℃に冷却した。これに、イソプロパノールアンモニア(イソプロパノール/液体アンモニア=1/3、v/v、150mL)を追加した。媒体を密封し、90℃に加熱し、16時間撹拌した。得られた混合物を室温に冷却し、真空下で濃縮した。残留物をMeOH(100mL)に再溶解し、続いて、ナトリウムメトキシドMeOH溶液(1.0M、16.89mL、16.89mmol)0℃で滴下した。得られた混合物を25℃に加温し、2時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を、酢酸(0.01mL)の追加によって中和し、真空下で濃縮した。残留物をDCM/MeOH(v/v、100/1、150mL)に懸濁した。20分間撹拌した後、固体が沈殿した。固体をろ過によって回収、DCMで洗浄し、真空下で乾燥させて、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):285.20[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ7.31(d,J=2.8Hz,1H),6.58(d,J=2.8Hz,1H),6.45(t,J=6.8Hz,1H),4.52−4.53(m,1H),3.98−4.01(m,1H),3.81(dd,J=2.4Hz,J=12.0Hz,1H),3.73(dd,J=3.2Hz,J=12.0Hz,1H),2.63−2.70(m,1H),2.29−2.34(m,1H).
工程3:7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミンの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(3.2g、6.74mmol)およびイミダゾール(1.836g、27.0mmol)の無水DMF(10mL)撹拌溶液に、TBS−Cl(3.05g、20.23mmol)を周囲温度で追加した。得られた混合物を一晩撹拌した。反応混合物を酢酸エチル(100mL)で希釈し、水(2×20mL)、NaHCO3水溶液(飽和、2×20mL)およびブライン(2×20mL)で順次洗浄した。有機層を無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、真空下で濃縮した。残留物を、酢酸エチル/石油エーテル(35%〜42%EAのPE溶液)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):513.20[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,CDCl3,ppm):δ7.32(s,1H),6.61(t,J=6.8Hz,1H),6.38(s,1H),5.44(br,2H),4.59−4.61(m,1H),3.91−3.99(m,1H),3.77−3.88(m,2H),2.44−2.51(m,1H),2.34−2.37(m,1H),0.93−0.95(m,18H),0.11−0.12(m,12H).1H−NMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ7.31(d,J=2.8Hz,1H),6.58(d,J=2.8Hz,1H),6.45(t,J=6.8Hz,1H),4.52−4.53(m,1H),3.98−4.01(m,1H),3.81(dd,J=2.4Hz,J=12.0Hz,1H),3.73(dd,J=3.2Hz,J=12.0Hz,1H),2.63−2.70(m,1H),2.29−2.34(m,1H).
工程4:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン(2.3g、4.48mmol)のTHF(40mL)撹拌溶液に、予め冷却したトリフルオロ酢酸/水(v/v、1/1、20mL)を0℃で撹拌しながら10分間かけて滴下した。得られた混合物を0℃で2時間撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。内部温度を25℃未満に維持しながら、得られた溶液をトルエン(3×60mL)と共蒸発させて、ピンク色のシロップを得た。残留物を、酢酸エチル/ジクロロメタン(1/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):399.20[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ7.53(br,2H),7.35(d,J=3.2Hz,1H),6.60(d,J=3.2Hz,1H),6.35(t,J=6.8Hz,1H),4.95(t,J=5.4Hz,1H),4.51−4.54(m,1H),3.73−3.79(m,1H),3.46−3.55(m,2H),2.54−2.59(m,1H),2.16−2.20(m,1H),0.90(s,9H),0.11(s,6H).1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ7.53(br,2H),7.35(d,J=3.2Hz,1H),6.60(d,J=3.2Hz,1H),6.35(t,J=6.8Hz,1H),4.95(t,J=5.4Hz,1H),4.51−4.54(m,1H),3.73−3.79(m,1H),3.46−3.55(m,2H),2.54−2.59(m,1H),2.16−2.20(m,1H),0.90(s,9H),0.11(s,6H).
工程5:(2S,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(600mg、1.504mmol)の無水DMSO(3mL)およびアセトニトリル(15mL)撹拌溶液に、IBX(632mg、2.256mmol)を追加した。混合物を周囲温度で2.5時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル(20mL)で希釈し、ブライン(2×10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過した。ろ液を真空下で濃縮して表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):415.40[M+H2O]+.
工程6:((3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノールの合成
(2S,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(700mg、未精製)の1,4−ジオキサン(28mL)および水(7mL)撹拌溶液に、ホルムアルデヒド溶液(7mL、93mmol)を追加し、続いて、水酸化ナトリウム(7mL、2N、14.00mmol)水溶液を5分間かけて滴下した。得られた混合物を25℃で3時間撹拌した。最初のヌクレオシド−アルデヒドがすべて消費されたら、反応混合物を、酢酸(0.5mL)の追加によって中和した。混合物を酢酸エチル(100mL)で希釈し、水(2×20mL)、飽和NaHCO3水溶液(20mL)およびブライン(20mL)で順次洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、ろ過し、真空下で濃縮した。残留物を無水EtOH(4mL)に再溶解し、アルゴン雰囲気下で、水素化ホウ素ナトリウム(133mg、3.53mmol)を0℃で少しずつ追加した。25℃で1時間撹拌した後、混合物を、酢酸(1.0mL)の追加によって中和した。混合物を真空下で濃縮した。残留物をCHCl3(100mL)で希釈し、水(2×20mL)およびブライン(1×20mL)で順次洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、ろ過し、真空下で濃縮した。残留物を、DCM/MeOH(30/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):429.30[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ7.51(br,2H),7.38(d,J=3.9Hz,1H),6.60(d,J=3.6Hz,1H),6.40(t,J=6.9Hz,1H),4.88(t,J=5.5Hz,1H),4.62(dd,J=3.3Hz,J=5.5Hz,1H),4.39(t,J=5.7Hz,1H),3.43−3.63(m,4H),2.61−2.70(m,1H),2.21−2.29(m,1H),0.90(s,9H),0.10(s,6H).
工程7:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、((3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノール(150mg、0.350mmol)の無水アセトニトリル(15mL)撹拌溶液に、IBX(294mg、1.049mmol)を追加した。得られた混合物を30℃で2時間撹拌した。混合物をろ過し、CHCl3(3×15mL)で洗浄した。ろ液を回収し、次いで、真空下で濃縮して表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):427.30[M+H]+.
工程8:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(200mg、0.468mmol)を無水MeOH(9mL)に溶解し、続いて、アルゴン雰囲気下で、炭酸カリウム(162mg、1.171mmol)を追加した。この懸濁液に、ジメチル(1−ジアゾ−2−オキソプロピル)ホスホネート(180mg、0.937mmol)のMeOH(1mL)溶液を撹拌しながら1分間かけて0℃で滴下した。得られた混合物を30℃に加温し、16時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮した。残留物を酢酸エチル(30mL)と水(10mL)との間に分けた。有機層を回収し、ブライン(2×10mL)で洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、真空下で濃縮した。次いで、残留物を、分取TLC(MeOH/DCM=1/15)によって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):423.60[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ7.55(br,2H),7.34(d,J=3.6Hz,1H),6.61(d,J=3.6Hz,1H),6.38(t,J=6.4Hz,1H),5.32(t,J=6.0Hz,1H),4.67(t,J=6.0Hz,1H),3.58−3.61(m,1H),3.48−3.52(m,1H),3.47(s,1H),2.60−2.63(m,1H),2.31−2.35(m,1H),0.91(s,9H),0.11(d,J=3.6Hz,6H).
工程9:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(60mg、0.142mmol)のTHF(1mL)撹拌溶液に、TBAF THF溶液(1M、0.28mL、0.284mmol)を周囲温度で撹拌しながら滴下した。得られた溶液を周囲温度で2時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮した。次いで、残留物を、以下の条件(1#−Pre−HPLC−011(Waters)):カラム、SunFire Prep C18 OBDカラム、5um、19*150mm;移動相、(10mmol重炭酸アンモニウムを含む)水およびアセトニトリル(8%アセトニトリルを6分間で40%に上昇させ、1.5分間で95%に上昇させ、1分間で5%に低下させる);検出器、uv254および220nmを用いて分取HPLCによってさらに精製した。生成物含有画分を回収し、凍結乾燥して、固体として化合物4を得た。LC−MS:(ES,m/z):309.00[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ7.54(br,2H),7.33(d,J=4.0Hz,1H),6.60(d,J=3.6Hz,1H),6.41(t,J=6.4Hz,1H),5.52−5.53(m,1H),5.26(t,J=6.0Hz,1H),4.47−4.48(m,1H),3.61(dd,J=5.2Hz,J=11.6Hz,1H),3.53(dd,J=6.2Hz,J=11.8Hz,1H),3.48(s,1H),2.41−2.50(m,1H),2.32−2.38(m,1H)
[実施例5]:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(5)の合成
水素化ナトリウム(0.479g、11.98mmol)を、5−ブロモ−4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(2.32g、9.98mmol、実施例3の工程1に記載されているように合成したもの)のアセトニトリル(30mL)撹拌溶液に追加した。得られた混合物を0℃で30分間撹拌し、次いで、(2R,3S,5R)−5−クロロ−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(4.27g、10.98mmol)を追加した。得られた混合物を室温で1時間撹拌した後、それを200mLの酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液(60mL)および飽和塩化ナトリウム水溶液(60mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空下で濃縮した。残留物を、石油エーテル\酢酸エチル(1:2)を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR(300MHz,DMSO)δ8.65(s,1H),8.22(s,1H),7.96(d,J=8.4Hz,2H),7.84(d,J=8.1Hz,2H),7.24−7.39(m,4H),6.76−6.79(m,1H),5.74−5.76(m,1H),4.51−4.68(m,3H),3.05−3.15(m,1H),2.74−2.79(m,1H),2.37(d,J=1.8Hz,6H).
工程2:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
(2R,3S,5R)−5−(5−ブロモ−4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(4.50g、7.69mmol)をNH3飽和i−PrOH(15mL)に−60℃で追加した。得られた混合物を80℃で12時間撹拌し、次いで、室温に冷却し、真空下で蒸発させて、固体として(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(4.2g、7.43mmol)を得た。この粗化合物を30mLのMeOHに溶解し、次いで、ナトリウムメタノラート(14.86mL、14.86mmol)を追加した。得られた溶液を室温で2時間撹拌した後、酢酸(0.1mL)でクエンチし、真空下で濃縮した。粗生成物を、石油エーテル\酢酸エチル(1:2)によるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR(300MHz,DMSO)δ8.12(s,1H),7.78(s,1H),6.78(s,2H),6.48−6.51(m,1H),5.25(s,1H),5.01(s,1H),4.32(s,1H),3.81(s,1H),3.17(s,1H),2.35−2.50(m,1H),2.12−2.19(m,1H).
工程3:5−ブロモ−7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミンの合成
tert−ブチルクロロジメチルシラン(1.786g、11.85mmol)を、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(1.3g、3.95mmol)、1H−イミダゾール(1.076g、15.80mmol)のDMF(8mL)撹拌溶液に追加した。得られた混合物を室温で4時間撹拌し、次いで、400mLの酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(80mL)および飽和塩化ナトリウム水溶液(80mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空下で濃縮した。残留物を、酢酸エチル/石油エーテル(1:4)を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR(300MHz,DMSO)δ8.10(s,1H),7.55(s,1H),6.79(s,2H),6.48−6.53(m,1H),4.50(s,1H),3.62−3.76(m,3H),2.43−2.50(m,1H),2.17−2.16(m,1H),0.88(d,J=2.7Hz,18H),0.10(s,6H),0.05(s,6H).
工程4:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)の合成
5−ブロモ−7−((2R,4S,5R)−4−((tertブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tertブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン(1.55g、2.78mmol)をTHF(4mL)に溶解し、次いで、予め冷却したトリフルオロ酢酸/水(v/v=1/1、4mL)溶液で処理し、0℃で撹拌しながら10分間かけて滴下した。得られた混合物を0℃で2時間撹拌した後、それを25℃未満のトルエンと共蒸発させて、ピンク色のシロップを得た。残留物をシリカゲルカラムにアプライし、酢酸エチル/ジクロロメタン(1/1)を用いて溶出して、表題化合物を得た。1H−NMR(300MHz,DMSO)δ8.19(s,1H),7.74(s,1H),7.28(s,2H),6.50(q,J=6.0Hz,2H),4.51(q,J=2.7Hz,1H),3.81(s,1H),3.47−3.57(m,2H),2.49−2.58(m,1H),2.17−2.22(m,1H),0.85(s,9H),0.09(s,6H).
工程5:(2R,3S)−2−(((tert−ブチルジフェニルシリル)オキシ)メチル)−5−メトキシ−2−フェニルテトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエートの合成
2−ヨードキシ安息香酸(839mg、3.00mmol)を、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(443mg、0.999mmol)のアセトニトリル(45mL)溶液に追加した。得られた溶液を80℃で2時間撹拌し、次いで、0℃に冷却し、ろ過し、減圧下で濃縮した。これにより表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の工程に直接使用した:MS(ES,m/z):441.08[M+H]+.
工程6:((2S,4R)−4−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)シクロペンタン−1,1−ジイル)ジメタノールの合成
水酸化ナトリウム(4.03mL、8.07mmol)を、(2S,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(445mg、1.008mmol)およびホルムアルデヒド(1009mg、10.08mmol)のジオキサン(6mL)撹拌溶液に追加した。得られた混合物を室温で3時間撹拌し、次いで、150mLの酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(30mL)および飽和塩化ナトリウム水溶液(30mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空下で濃縮して、固体を得た。水素化ホウ素ナトリウム(109mg、2.88mmol)を、先の固体のエタノール(15mL)溶液に0℃で追加した。得られた溶液を室温で2時間撹拌し、次いで、酢酸(0.1mL)でクエンチし、減圧下で濃縮した。粗生成物を、石油エーテル\酢酸エチル(1:2)によるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにアプライして、表題化合物を得た。MS(ES,m/z):473.43[M+H]+.
工程7:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
2−ヨードキシ安息香酸(302mg、1.077mmol)を、((3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノール(170mg、0.359mmol)のアセトニトリル(40mL)溶液に追加した。得られた溶液を12時間0℃で撹拌した後、それを0℃に冷却し、次いで、減圧下で濃縮して表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の工程に直接使用した。MS(ES,m/z):471.43[M+H]+.
工程8:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
ジメチル(1−ジアゾ−2−オキソプロピル)ホスホネート(139mg、0.721mmol)を、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(170mg、0.361mmol)、炭酸カリウム(125mg、0.902mmol)のメタノール(8mL)溶液に0℃で追加した。得られた溶液を室温で12時間撹拌し、次いで、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗化合物を、石油エーテル\酢酸エチル(1:2)による分取TLCによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR(300MHz,CD3OD,ppm)δ8.00(s,1H),7.39(s,1H),6.44−6.47(m,1H),4.62−4.66(m,1H),3.61−3.71(m,2H),2.90(s,1H),2.25−2.55(m,2H),0.88(s,9H),0.57(d,J=3Hz,6H).
工程9:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ブロモ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(40mg、0.086mmol)およびTBAF(0.086mL、0.086mmol)をTHF(1mL)に溶解した。得られた溶液を30℃で2時間撹拌し、次いで、蒸発させ、以下の条件:カラム、XBridge C18、19*150mm、5um;移動相A:水/0.05%TFA、移動相B:ACN;流速:20mL/分;勾配:10分間で30%B〜70%B;254nmで精製した。これにより、固体として化合物5を得た。1H−NMR(300MHz,DMSO,ppm)δ8.11(s,1H),7.59(s,1H),6.52(t,J=6.6Hz,1H),4.48(t,J=6.6Hz,1H),3.53−3.64(m,2H),3.44(s,1H),2.33−2.52(m,2H);MS(ES,m/z):353.17[M+H]+.
[実施例6]:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(6)の合成
4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(2.5g、16.28mmol)の無水DCM(100mL)混合物に、NCS(N−クロロスクシンイミド)(4.35g、32.6mmol)を25℃で追加した。アルゴン雰囲気下で、得られた混合物を40℃で16時間撹拌した。4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジンが消費されたら、混合物を冷却せずに直接ろ過した。固体を回収し、DCM(20mL)で洗浄し、真空下で乾燥させて、固体として4,5−ジクロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジンを得た。LC−MS:(ES,m/z):188.01[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ12.90(br,1H),8.65(s,1H),7.93(d,J=2.7Hz,1H).
工程2:(2R,3S,5R)−5−(4,5−ジクロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエートの合成
250mL三つ口丸底フラスコ中、アルゴン雰囲気下で、NaH(60%鉱油分散液、0.538g、13.46mmol)の無水ACN(100mL)懸濁液に、4,5−ジクロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(2.3g、12.23mmol)を少しずつ追加し、混合物を周囲温度で30分間撹拌した。濁った混合物が透明になったら、(2R,35)−5−クロロ−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル−4−メチルベンゾエート(中間体A、4.76g、12.23mmol)を撹拌しながら5分間かけて少しずつ追加した。得られた混合物を50℃に加熱し、2時間撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。揮発性物質を真空下で除去した。粗生成物を、10%−40%酢酸エチルの石油エーテル溶液を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):540.39[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ8.64(s,1H),7.91−7.99(m,4H),7.39(s,1H),7.25−7.30(m,4H),6.80(t,J=6.9Hz,1H),5.75(dd,J=3.6Hz,J=6.0Hz,1H),4.60−4.78(m,3H),2.76−2.80(m,2H),2.44(d,J=4.8Hz,6H).
工程3:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
150mLスチールボンベに、(2R,3S,5R)−5−(4,5−ジクロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(3.6g、6.66mmol)を入れた。媒体を−40℃に冷却した。これに、イソプロパノールアンモニア(イソプロパノール/液体アンモニア=1/3、v/v、120mL)を追加した。媒体を密封し、90℃に加熱し、16時間撹拌した。TLCにより、最初のヌクレオシドはすべて消費され、目的生成物が主生成物として観察されたことが示された。得られた混合物を真空下で濃縮した。粗生成物を、2%−10%メタノールのジクロロメタン溶液を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):284.70[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.09(s,1H),7.58(s,1H),6.87(br,2H),6.51(dd,J=6.3Hz,J=7.8Hz,1H),5.25(d,J=4.2Hz,1H),5.03(t,J=5.6Hz,1H),4.30−4.34(m,1H),3.81(dd,J=4.3Hz,J=6.8Hz,1H),3.46−3.60(m,2H),2.40−2.48(m,1H),2.13−2.20(m,1H).
工程4.7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミンの合成
(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(1.7g、5.97mmol)のDMF(10mL)撹拌溶液に、アルゴン雰囲気下で、1H−イミダゾール(1.423g、20.90mmol)およびTBDMS−Cl(2.70g、17.91mmol)を0℃で順次追加した。得られた混合物を25℃に加温し、2時間撹拌した。得られた溶液を酢酸エチル(100mL)で希釈し、水(100mL)で洗浄した。水層を酢酸エチル(2×100mL)で再抽出した。有機層を合わせ、飽和NaHCO3(2×100mL)およびブライン(2×100mL)で順次洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、真空下で濃縮した。残留物を、2%−10%酢酸エチルの石油エーテル溶液を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):513.22[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.10(s,1H),7.50(s,1H),6.85(br,2H),6.51(t,J=6.8Hz,1H),4.48−4.52(m,1H),3.62−3.80(m,3H),2.55−2.60(m,1H),2.17−2.24(m,1H),0.89(s,18H),0.08(d,J=13.6Hz,12H).
工程5((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン)−2−イル)−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン(2.42g、4.72mmol)のTHF(48mL)撹拌溶液に、予め冷却したトリフルオロ酢酸/水(1/1、v/v、24mL)溶液を0℃で撹拌しながら10分間かけて滴下した。得られた混合物を0℃で4時間撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。内部温度を25℃未満に維持しながら、得られた溶液をトルエン(3×100mL)と共蒸発させた。得られた粗物質を、2%−10%メタノールのジクロロメタン溶液を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):398.96[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.28(s,1H),7.86(br,2H),7.78(s,1H),6.52(t,J=6.8Hz,1H),4.53(t,J=2.6Hz,1H),3.83(dd,J=4.5Hz,J=6.9Hz,1H),3.48−3.60(m,2H),2.50−2.58(m,1H),2.18−2.25(m,1H),0.90(s,9H),0.11(s,6H).
工程6.(2S,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tertブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(300mg、0.752mmol)の無水ACN(30mL)撹拌溶液に、2−ヨードキシ安息香酸(632mg、2.256mmol)を追加した。混合物を85℃に加熱し、20分間撹拌した。固体をろ過した。ろ液を真空下で濃縮して表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):396.94[M+H]+.
工程7.((3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノールの合成
100mL丸底フラスコ中、(2S,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(434mg、0.820mmol)の1,4−ジオキサン(25mL)撹拌溶液に、ホルムアルデヒド溶液(5mL)を追加し、続いて、水酸化ナトリウム溶液(2N、5mL、10.00mmol)を0℃で5分間かけて滴下した。得られた混合物を25℃に加温し、3時間撹拌した。最初のヌクレオシド−アルデヒドがすべて消費されたら、反応混合物を、AcOHの追加によって中和した。混合物を酢酸エチル(60mL)で希釈し、水(2×20mL)、飽和NaHCO3水溶液(2×20mL)およびブライン(2×20mL)で順次洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、減圧下で蒸発させた。残留物を無水EtOH(30mL)に再溶解し、アルゴン雰囲気下で、テトラヒドロホウ酸ナトリウム(62.0mg、1.640mmol)を0℃で少しずつ追加した。25℃で16時間撹拌した後、反応混合物を、AcOHの追加によって中和した。混合物を真空下で濃縮した。残留物をCHCl3(40mL)に懸濁し、水(2×15mL)およびブライン(2×15mL)で順次洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、ろ過し、真空下で濃縮した。残留物を、ジクロロメタン/メタノール(30/1)を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):428.99[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.10(s,1H),7.60(s,1H),6.86(br,2H),6.54(t,J=6.9Hz,1H),5.01(t,J=5.3Hz,1H),4.59(dd,J=3.0Hz,J=5.4Hz,1H),4.40(t,J=5.6Hz,1H),3.42−3.61(m,4H),2.60−2.69(m,1H),2.18−2.25(m,1H),0.89(s,9H),0.09(s,6H).
工程8.(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、((3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノール(166mg、0.387mmol)を無水ACN(20mL)に溶解し、IBX(325mg、1.161mmol)を追加した。得られた混合物を30℃に加温し、20時間撹拌した。固体をろ過した。ろ液を真空下で濃縮して表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):426.97[M+H]+.
工程9:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(160mg、0.375mmol)の無水MeOH(8mL)撹拌溶液に、K2CO3(129mg、0.937mmol)を追加し、続いて、アルゴン雰囲気下で、ジメチル(1−ジアゾ−2−オキソプロピル)ホスホネート(144mg、0.749mmol)を0℃で撹拌しながら滴下した。得られた混合物を25℃に徐々に加温し、16時間撹拌した。得られた混合物を真空下で濃縮した。残留物を、30%−50%酢酸エチルの石油エーテル溶液を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):422.98[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.10(s,1H),7.58(s,1H),6.90(br,2H),6.52(t,J=6.6Hz,1H),5.42−5.46(m,1H),4.64(t,J=5.7Hz,1H),3.59−3.67(m,1H),3.50−3.54(m,1H),3.48(s,1H),2.59−2.64(m,1H),2.27−2.31(m,1H),0.91(s,9H),0.12(s,6H).
工程10:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(6)の合成
アルゴン雰囲気下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(64mg、0.151mmol)のTHF(3mL)撹拌溶液に、TBAF溶液(1.0M、151μl、0.151mmol)を撹拌しながら滴下した。得られた溶液を25℃で1時間撹拌した。得られた混合物を真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムにアプライし、DCM/MeOH(20/1〜5/1)を用いて溶出して、粗生成物を得た。粗生成物を、以下の条件:(1#−Pre−HPLC−011(Waters)):カラム、SunFire Prep C18 OBD(Optimum Bed Density)カラム、5um、19*150mm;移動相、(10mmol重炭酸アンモニウム)を含む水およびアセトニトリル(10%アセトニトリルを5分間で45%に上昇させ、1.5分間で95%に上昇させ、1分間で5%に低下させる);検出器、UV254および220nmを用いて分取HPLCによってさらに精製した。生成物含有画分を回収し、凍結乾燥して、固体として化合物6を得た。LC−MS:(ES,m/z):308.72[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.10(s,1H),7.54(s,1H),6.88(br,2H),6.52(t,J=6.4Hz,1H),5.39−5.52(m,2H),4.48(t,J=6.6Hz,1H),3.59(dd,J=12.0Hz,J=28.8Hz,2H),3.48(s,1H),2.47−2.54(m,1H),2.31−2.37(m,1H).
中間体B
((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(中間体B)の合成
アルゴン下で、4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(5g、32.6mmol)のDMF(60mL)混合物に、NIS(N−ヨードスクシンイミド)(7.33g、32.6mmol)を0℃で追加した。暗所、アルゴン雰囲気下で、得られた混合物を25℃で15時間撹拌した。反応混合物を冷水に注ぎ、混合物をろ過し、固体を冷水(3×50mL)で洗浄し、25℃で乾燥させて、固体として4−クロロ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジンを得た。LC−MS:(ES,m/z):279.9[M+H]+1.1H−NMR:(400MHz,CD3SOCD3,ppm):12.96(brs,1H),8.62(s,1H),7.95(d,J=1.8Hz,1H)
工程2:(2R,3S,5R)−5−(4−クロロ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエートの合成
アルゴン下で、水素化ナトリウム(0.845g、21.13mmol)および4−クロロ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(5.37g、19.21mmol)のアセトニトリル(150mL)混合物に、(2R,3S,5R)−5−クロロ−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(7.47g、19.21mmol)を20℃で追加した。アルゴン雰囲気下で、得られた混合物を50℃で2時間撹拌し、次いで、溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物を、EA/PE(1/5)を用いて溶出するシリカゲル100〜200カラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):613.9[M+H]+1.1H−NMR:(400MHz,CDCl3,ppm):8.63(s,1H),8.00(d,J=8.4Hz,2H),7.95(d,J=8.4Hz,2H),7.60(s,1H),7.32−7.25(m,4H),6.82(t,J=7.2Hz,1H),5.77(dd,J=6.4Hz,4Hz,1H),4.80−4.76(m,1H),4.71−4.62(m,2H),2.46(s,6H),1.66−1.31(m,2H)
工程3:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
(2R,3S,5R)−5−(4−クロロ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(12g、18.99mmol)を、−50℃に冷却したアンモニア(120mL、240mmol)の2−プロパノール(30mL)撹拌混合物に追加し、混合物を90℃で48時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物を、DCM/MeOH(10/1)を用いて溶出するシリカゲル100〜200カラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):377.0[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,CD3SOCD3,ppm):8.10(s,1H),7.81(s,1H),6.79(brs,2H),6.79−6.51(dd,J=8.1Hz,3Hz,1H),5.27(d,J=3.9Hz,1H),5.05(t,J=5.4Hz,1H),4.33(brs,1H),3.81(brs,1H),3.60−3.46(m,2H),2.51−2.44(m,1H),2.19−2.10(m,1H)
工程4:7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミンの合成
アルゴン下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(6g、15.95mmol)およびイミダゾール(4.34g、63.8mmol)のDMF(30mL)混合物に、TBS−Cl(44.7mL、44.7mmol)を0℃で追加した。アルゴン雰囲気下で、得られた混合物を23℃で2時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を水(150mL)でクエンチし、酢酸エチル(3×200mL)で抽出した。合わせた有機層をブライン(5×200mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残留物を、EA/PE(3:7)を用いて溶出するシリカゲルカラムによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):605.3[M+H]+1.1H−NMR:(400MHz,CD3SOCD3,ppm):8.10(s,1H),7.58(s,1H),6.67(brs.2H),6.49(t,J=6.8Hz,1H),4.50(t,J=2.4Hz,1H),3.88−3.81(m,1H),3.74(dd,J=10.8Hz,5.6Hz,1H),3.65(dd,J=10.8Hz,4Hz,1H),2.50−2.49(m,1H),2.25−2.14(m,1H),0.89(s,18H),0.10−0.07(m,12H).
工程5:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン(6.6g、10.92mmol)のTHF(66mL)混合物に、TFA(16mL、208mmol)水溶液(16mL)を0℃で追加した。得られた混合物を0℃で4時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物をDCM/MeOH(10/1、150mL)に溶解し、溶液のpH値を炭酸水素ナトリウム(5.0g)で7に調整し、ろ過し、溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物を、40−50%EAのPE溶液を用いて溶出するシリカゲル100〜200カラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):491.1[M+H]+1.1H−NMR:(400MHz,CD3SOCD3,ppm):8.14(s,1H),7.71(s,1H),6.88(brs,2H),6.47(dd,J=8.4Hz,6Hz,1H),4.51(t,J=2.4Hz,1H),3.80−3.79(m,1H),3.54−3.50(m,2H),2.57−2.53(m,1H),2.18−2.13(m,1H),0.89(s,9H),0.10(s,6H).
工程6:(2S,3S,5R)−3−[(tert−ブチルジメチルシリル)オキシ]−5−{4−[(ジメチル−Si{4}−スルファニルイデン)アミノ]−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル}オキソラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(4.682g、9.55mmol)およびDCC(N,N−ジシクロヘキシルカルボジイミド)(6.1g、29.6mmol)のDMSO(40mL)混合物に、ピリジン(0.850mL、10.51mmol)およびTFA(0.515mL、6.68mmol)0℃で追加した。アルゴン下で、得られた混合物を20℃で14時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を水(150mL)でクエンチし、酢酸エチル(3×100mL)で抽出した。合わせた有機層をブライン(120mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して、固体として未精製の表題生成物を得た。LC−MS:(ES,m/z):567.0[M+H2O+H]+
工程7:[(3S,5S)−3−[(tert−ブチルジメチルシリル)オキシ]−5−{4−[(ジメチル−Si{4}−スルファニルイデン)アミノ]−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル}−2−(ヒドロキシメチル)オキソラン−2−イル]メタノールの混合物の合成
(2S,3S,5R)−3−[(tert−ブチルジメチルシリル)オキシ]−5−{4−[(ジメチル−Si{4}−スルファニルイデン)アミノ]−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル}オキソラン−2−カルバルデヒド(80mg、0.146mmol)およびホルムアルデヒド(0.5mL、0.146mmol)の1,4−ジオキサン(4mL)混合物に、2M水酸化ナトリウム(0.5mL、1.000mmol)を0℃で追加した。得られた混合物を20℃で4時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を酢酸(0.2mL)でクエンチし、酢酸エチル(3×40mL)で抽出した。合わせた有機層を飽和NaHCO3(30mL)で洗浄し、次いで、ブライン(40mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残留物をエタノール(4mL)に溶解した。アルゴン下で、この混合物をテトラヒドロホウ酸ナトリウム(20mg、0.529mmol)に追加した。この混合物を20℃で36時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を酢酸(0.05mL)でクエンチし、CHCl3(3×40mL)で抽出した。合わせた有機層を飽和NaHCO3(30mL)で洗浄し、次いで、ブライン(40mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、DCM/MeOH(12:1)を用いて溶出するTLCによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):581.1[M+H]+1.1H−NMR:(300MHz,CD3SOCD3,ppm):8.09(s,0.6H),7.97(s,0.4H),7.69(s,0.6H),7.46(s,0.4H),6.66(brs,0.8H),6.53−6.42(m,1H),5.10(t,J=5.4Hz,0.4H),5.02(t,J=5.4Hz,0.6H),4.58(brs,1H),4.42−4.37(m,1H),3.58−3.49(m,4H),2.78(d,J=2.7Hz,3H),2.68−2.61(m,1H),2.23−2.16(m,1H),0.90(s,9H),0.10(s,6H).
工程8:((3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノールの合成
[(3S,5R)−3−[(tert−ブチルジメチルシリル)オキシ]−5−{4−[(ジメチル−Si{4}−スルファニルイデン)アミノ]−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル}−2−(ヒドロキシメチル)オキソラン−2−イル]メタノール(230mg、0.396mmol)のDCM(2mL)溶液に、TFA(2mL、26.0mmol)を0℃で追加した。アルゴン下で、得られた混合物を20℃で3時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を、DCM/MeOH(95:5)を用いて溶出するシリカゲルカラムによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):521.2[M+H]+1.1H−NMR:(400MHz,CD3SOCD3,ppm):8.12(s,1H),7.71(s,1H),7.10(brs,2H),6.43(t,J=6.8Hz,1H),4.50(dd,J=6Hz,3.2Hz,1H),3.50−3.37(m,4H),2.59−2.52(m,1H),2.17−2.11(m,1H),0.80(s,9H),0.00(s,6H).
工程9:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン下で、((3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノール(960mg、1.845mmol)のアセトニトリル(25mL)溶液に、IBX(1550mg、5.53mmol)を18℃で追加した。アルゴン下で、得られた混合物を18℃で18時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物をろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して、固体として粗生成物を得た。この粗生成物をさらに精製せずに次の工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):519.1[M+H]+
工程10:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(中間体B)の合成
アルゴン下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(190mg、0.366mmol)およびK2CO3(127mg、0.916mmol)のMeOH(10mL)混合物に、ジメチル(1−ジアゾ−2−オキソプロピル)ホスホネート(141mg、0.733mmol)を0℃で追加した。アルゴン下で、得られた混合物を18℃で16時間撹拌した。混合物の色が黄色から青色に変化した。反応の進行を、LCMS/TLCによってモニタリングした。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を、DCM/MeOH(97:3)を用いて溶出するシリカゲルカラムによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):515.1[M+H]+1.1H−NMR:(400MHz,CDCl3,ppm):8.22(s,1H),7.12(s,1H),6.25(dd,J=8.8Hz,5.6Hz,1H),5.84(brs,2H),4.71(dd,J=5.6Hz,2Hz,1H),4.01(d,J=12.4Hz,1H),3.80(d,J=16Hz,1H),3.17−3.10(m,1H),2.59(s,1H),2.27−2.21(m,1H),0.91(s,9H),0.11(s,6H)
[実施例7]:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−ヨード−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(7)の合成
[実施例8]:(2R,3S,5R)−5−(2,4−ジアミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(8)の合成
アルゴン下で、4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2−アミン(2.0g、11.86mmol)およびNaH(0.524g、13.09mmol)のアセトニトリル(60mL)混合物を室温で0.5時間撹拌した。次いで、混合物を中間体A(4.628g、11.90mmol)に追加し、室温で10分間撹拌し、次いで、50℃で2時間撹拌した。進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を、CH2Cl2/MeOH(92:8)を用いて溶出するシリカゲルカラムによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):521.1[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,DMSO−d6):δ7.93(dd,J=8.1Hz,4H),7.68−7.21(m,5H),6.78(s,2H),6.57(q,J=5.85Hz,1H),6.39(d,J=3.9Hz,1H),5.69(d,J=5.7Hz,1H),4.63−4.43(m,3H),3.04−2.94(m,1H),2.66(dd,J=4.95Hz,1H),2.41(d,J=7.8Hz,6H),1.99(s,1H).
工程2:(2R,3S,5R)−5−(2,4−ジアミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
(2R,3S,5R)−5−(2−アミノ−4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(1.0g、0.960mmol)およびアンモニア(50mL、0.960mmol)の2−プロパノール(5mL)混合物を100℃で20時間撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。反応混合物を周囲温度に冷却し、減圧下で濃縮し、残留物を、CH2Cl2/MeOH(82:18)を用いて溶出するシリカゲルカラムによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):266.0[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,DMSO−d6):δ6.93(d,J=3.6Hz,1H),6.76(s,2H),6.40(d,J=3.6Hz,1H),6.32(q,J=5.85Hz,1H),5.70(s,2H),5.20(d,J=3.6Hz,1H),4.29(d,J=2.4Hz,1H),3.78−3.74(m,1H),3.55−3.41(m,2H),3.16(s,1H),2.49−2.34(m,1H),2.08−2.01(m,1H).
工程3:7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジアミンの合成
アルゴン下で、(2R,3S,5R)−5−(2,4−ジアミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(1.39g、5.24mmol)およびTBDMS−Cl(2.369g、15.72mmol)のDMF(6mL)混合物に、イミダゾール(1.784g、26.2mmol)を追加した。アルゴン雰囲気下で、得られた混合物を20℃で16時間撹拌した。反応の進行を、LCMS/TLCによってモニタリングした。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を、CH2Cl2/MeOH(92:8)を用いて溶出するシリカゲルカラムによって精製して、固体として表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):494.4[M+H]+,1H−NMR:(300MHz,CDCl3):δ7.58(s,2H),7.04(d,J=3.9Hz,1H),6.54(d,J=3.9Hz,1H),6.52(s,2H),6.32(dd,J=6.0Hz,1H),4.45(t,J=2.4Hz,1H),3.78(d,J=2.1Hz,1H),3.68(t,J=5.5Hz,2H),3.17(d,J=3.0Hz,1H),2.49−2.42(m,1H),2.17−2.10(m,1H),0.89(s,18H),0.10−0.09(m,12H).
工程4:N,N’−(7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジイル)ジベンズアミドの合成
アルゴン下で、7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジアミン(138mg、0.279mmol)およびDMAP(5mg、0.041mmol)のピリジン(5mL)混合物に、ベンゾイルクロリド(158mg、1.124mmol)を追加した。アルゴン下で、得られた混合物を0℃で4時間撹拌した。反応の進行を、LCMS/TLCによってモニタリングした。反応混合物を水(50mL)によってクエンチし、酢酸エチル(3×30mL)で抽出した。合わせた有機層をブライン(40mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残留物を、PE/EA(2:1)を用いて溶出するシリカゲルカラムによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):702.3[M+H]+,1H−NMR:(300MHz,CDCl3):δ11.11(s,1H),10.80(s,1H),8.09(d,J=7.2Hz,2H),7.73(d,J=7.2Hz,2H),7.66−7.43(m,8H),6.62−6.54(m,2H),4.56(s,1H),3.84−3.64(m,4H),2.81−2.72(m,1H),2.26−2.22(m,1H),0.90−0.83(m,18H),0.11−0.01(m,12H).
工程5:N,N’−(7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジイル)ジベンズアミドの合成
N,N’−(7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジイル)ジベンズアミド(110mg、0.157mmol)のTHF(4mL)混合物に、TFA(0.5mL、6.49mmol)水溶液(0.5mL)を0℃で追加した。得られた混合物を0℃で4時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を、CH2Cl2/MeOH(95:5)を用いて溶出するシリカゲルカラムによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):588.6[M+H]+,1H−NMR:(300MHz,CDCl3):δ11.11(s,1H),10.81(s,1H),8.09(d,J=7.2Hz,2H),7.97(d,J=7.2Hz,2H),7.65−7.46(m,8H),6.62−6.56(m,2H),4.96(t,J=5.4Hz,1H),4.58(t,J=2.7Hz,1H),3.82−3.77(m,2H),3.56−3.51(m,2H),2.72−2.67(m,1H),2.27−2.21(m,1H),0.88(s,9H),0.09(s,6H).
工程6:N,N’−(7−((2R,4S,5S)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−ホルミルテトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジイル)ジベンズアミドの合成
アルゴン下で、N,N’−(7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジイル)ジベンズアミド(35mg、0.060mmol)のアセトニトリル(5mL)混合物に、IBX(42mg、0.150mmol)を追加した。アルゴン下で、得られた混合物を50℃で50分間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を周囲温度に冷却し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、粗生成物をさらに精製せずに次の工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):618.3[M+CH3OH]+
工程7:N,N’−(7−((2R,4S)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5,5−ビス(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジイル)ジベンズアミドの合成
N,N’−(7−((2R,4S,5S)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−ホルミルテトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジイル)ジベンズアミド(35mg、0.060mmol)の1,4−ジオキサン(5mL)溶液に、ホルムアルデヒド(1mL、0.060mmol)、NaOH(1mL、2.000mmol)を追加し、混合物を20℃で4時間撹拌し、0℃に冷却し、AcOHでpH6にクエンチし、水(40mL)を追加し、酢酸エチル(3×40mL)で抽出した。合わせた有機層をブライン(30mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残留物をエタノール(5.00mL)に溶解し、アルゴン下で、NaBH4(5.65mg、0.149mmol)を追加した。得られた混合物を20℃で16時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を周囲温度に冷却し、AcOHでpH6にクエンチし、水(40mL)を追加し、酢酸エチル(3×40mL)で抽出した。有機層を濃縮し、CH2Cl2/MeOH(20:1)を用いて溶出するシリカゲルカラムによって精製して、固体として表題生成物を得た。LC−MS:(ES,m/z):618.2[M+H]+,1H−NMR:(400MHz,CDCl3):δ11.11(s,1H),10.80(s,1H),8.09(d,J=7.2Hz,2H),7.73(d,J=7.2Hz,2H),7.66−7.43(m,8H),6.62−6.54(m,2H),4.56(s,1H),3.84−3.64(m,4H),2.81−2.72(m,1H),2.26−2.22(m,1H),0.90−0.83(m,18H),0.11−0.01(m,12H).
工程8:N,N’−(7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−ホルミル−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジイル)ジベンズアミドの合成
アルゴン下で、N,N’−(7−((2R,4S)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5,5−ビス(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジイル)ジベンズアミド(30mg、0.049mmol)のアセトニトリル(10mL)溶液に、IBX(40mg、0.143mmol)を20℃で追加した。アルゴン下で、得られた混合物を25℃で3時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を周囲温度に冷却し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して固体として粗生成物を得、これをさらに精製せずに次の工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):616.2[M+H]+
工程9:N,N’−(7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−エチニル−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジイル)ジベンズアミドの合成
アルゴン下で、N,N’−(7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−ホルミル−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジイル)ジベンズアミド(70mg、0.114mmol)およびK2CO3(39.3mg、0.284mmol)のMeOH(5mL)混合物に、ジメチル(2−ジアゾ−3−オキソブタノイル)ホスホネート(50.0mg、0.227mmol)のMeOH(0.25mL)溶液を0℃で追加した。アルゴン下で、得られた混合物を25℃で16時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を、CH2Cl2/MeOH(20:1)を用いて溶出するTLCによって精製して、表題生成物を得た。LC−MS:(ES,m/z):612.4[M+H]+
工程10:(2R,3S,5R)−5−(2,4−ジアミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(8)の合成
アルゴン下で、N,N’−(7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−エチニル−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2,4−ジイル)ジベンズアミド(40mg、0.065mmol)のMeOH(4mL)溶液に、NaOCH3のMeOH(0.065mL、0.065M)溶液を20℃で追加した。アルゴン下で、得られた混合物を40℃で48時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を周囲温度に冷却し、減圧下で濃縮し、残留物を、CH2Cl2/MeOH(20:1)を用いて溶出するTLCによって精製して、固体として粗中間体(27mg)を得、アルゴン下で、これをTHF(3mL)で希釈した。TBAF溶液(1M、0.040mL、0.04mmol)を20℃で追加した。アルゴン下で、得られた混合物を20℃で0.5時間撹拌した。反応の進行を、LCMS/TLCによってモニタリングした。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を、CH2Cl2/MeOH(5:1)を用いて溶出するTLCによって精製して粗生成物(15mg)を得、次いで、これを、以下の条件:機器、Waters−2767−Prep;カラム:Xbridge RP18、5um、19×150mm;移動相:水(0.05%重炭酸アンモニウム(二酸化炭素))およびアセトニトリル(5%アセトニトリルを8分間で40%に上昇させる);検出器、UV220および254nmを用いて分取HPLCによって精製した。回収した画分を合わせ、減圧下で濃縮して、固体として化合物8を得た。LC−MS:(ES,m/z):618.2[M+H]+,1H−NMR:(400MHz,CDCl3):δ6.85(d,J=3.6Hz,1H),6.55(s,2H),6.36(d,J=4.0Hz,2H),5.56(s,2H),5.48−5.43(m,2H),4.42(q,J=5.6Hz,1H),3.61−3.49(m,2H),3.44(s,1H),2.47−2.40(m,1H),2.26−2.21(m,1H).
[実施例9]:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(9)の合成
アルゴン雰囲気下で、4−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2−アミン(3.5g、20.76mmol)の無水DMSO(35mL)撹拌溶液に、アジ化ナトリウム(2.025g、31.1mmol)水溶液(3.50mL)を追加した。混合物を100℃に加熱し、一晩撹拌した。反応の進行を、TLCおよびLCMSによってモニタリングした。得られた混合物を周囲温度に冷却した。250gのクラッシュアイスを追加し、混合物を0℃で30分間撹拌した。沈殿物が形成した。沈殿物をろ過によって回収し、冷水で洗浄し、真空下、P2O5で一晩脱水し、固体として4−アジド−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2−アミンを得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ11.91(brs,1H),7.96(brs,2H),7.13(t,J=3.0Hz,1H),6.72(dd,J=2.0Hz,J=3.2Hz,1H).LC−MS:(ES,m/z):176.00[M+H]+.
工程2:4−アジド−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジンの合成
アルゴン雰囲気下で、フッ化水素−ピリジン(70%HFの30%Py溶液)(12mL、133mmol)をテフロンボトルに入れた。これに、4−アジド−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−2−アミン(3.1g、17.70mmol)を追加した。混合物を、それが透明な溶液になるまで周囲温度で撹拌し、次いで、−60℃に冷却し、続いて、亜硝酸tert−ブチル(2.5mL、21.02mmol)を10分間かけて滴下した。得られた混合物を−40℃〜−60℃で2時間撹拌した。反応の進行を、TLCおよびLCMSによってモニタリングした。混合物を冷NaHCO3水溶液(150mL、飽和)に注いだ。粗生成物を酢酸エチル(100mL×3)で抽出し、ブライン(100mL×2)で洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を真空下で濃縮して、残留物を得た。次いで、残留物を、酢酸エチル/石油エーテル(1/4)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、固体として4−アジド−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]を得た。1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ12.43(brs,1H),7.48(d,J=3.9Hz,1H),6.50(d,J=3.6Hz,1H).F−NMR:(282MHz,d6−DMSO,ppm):δ−54.57(s,1F).LC−MS:(ES,m/z):179.20[M+H]+.
工程3:(2R,3S,5R)−5−(4−アジド−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエートの合成
50mL二つ口丸底フラスコ中、アルゴン雰囲気下で、水素化ナトリウム60%鉱油分散液(0.272g、6.79mmol)の無水DMF(20mL)撹拌懸濁液に、4−アジド−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン(1.1g、6.18mmol)を0℃で少しずつ追加し、混合物をこの温度で5分間撹拌した。中間体A(2.4g、6.17mmol)を撹拌しながら追加した。反応混合物を25℃に加温し、2時間撹拌した。反応の進行を、TLCおよびLCMSによってモニタリングした。混合物を酢酸エチル(100mL)で希釈し、水(70mL)で洗浄した。水層を酢酸エチル(60mL×2)で再抽出した。合わせた有機層をブライン(100mL×3)で洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、酢酸エチル/石油エーテル(1/10)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(400MHz,CDCl3,ppm):δ8.00(d,J=8.4Hz,2H),7.95(d,J=8.0Hz,2H),7.32−7.23(m,4H),6.74(dd,J=6.4Hz,J=8.0Hz,1H),6.49(d,J=4.0Hz,1H),5.75−5.74(m,1H),4.75−4.54(m,3H),2.85−2.74(m,2H),2.47−2.43(m,6H).F−NMR:(376MHz,CDCl3,ppm):δ−52.26(s,1F,βisomer),−52.48(s,1F,αisomer).LC−MS:(ES,m/z):531.42[M+H]+.
工程4:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエートの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アジド−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(2.0g、3.77mmol)のMeOH(10mL)およびDCM(15mL)混合撹拌溶液に、プロパン−1,3−ジチオール(0.816g、7.54mmol)を追加し、続いて、トリエチルアミン(0.763g、7.54mmol)を25℃で撹拌しながら10分間かけて滴下した。混合物を25℃で30分間撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。得られた混合物を真空下で濃縮した。次いで、残留物を、酢酸エチル/石油エーテル(42%EAのPE溶液)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、粉末として表題化合物を得た。1H−NMR:(400MHz,CDCl3,ppm):δ8.00(d,J=8.0Hz,2H),7.97(d,J=8.0Hz,2H),7.33−7.26(m,4H),7.12(d,J=4.0Hz,1H),6.72(dd,J=6.2Hz,J=8.2Hz,1H),6.38(d,J=3.6Hz,1H),5.75−5.72(m,1H),5.36(brs,2H),4.73−4.57(m,3H),2.79−2.74(m,2H),2.47(s,3H),2.44(s,3H).F−NMR:(376MHz,CDCl3,ppm):δ−52.97(s,1F,βisomer),−53.10(s,1F,αisomer).LC−MS:(ES,m/z):505.63[M+H]+.
工程5:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(((4−メチルベンゾイル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−3−イル4−メチルベンゾエート(1.75g、3.47mmol)の無水MeOH(10mL)撹拌溶液に、ナトリウムメトキシドMeOH溶液(1.0M、3.47mL、3.47mmol)を0℃で撹拌しながら5分間かけて注入した。得られた混合物を0℃〜10℃で4時間撹拌した。反応の進行を、TLCおよびLCMSによってモニタリングした。得られた混合物を、AcOHの追加によって中和し、次いで、減圧下で濃縮した。次いで、残留物を、ジクロロメタン/メタノール(6%MeOHのDCM溶液)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ7.55(brs,2H),7.31(d,J=3.6Hz,1H),6.61(d,J=3.6Hz,1H),6.34(dd,J=6.4Hz,J=8.0Hz,1H),5.26(d,J=3.6Hz,1H),4.92(t,J=5.0Hz,1H),4.32(d,J=2.4Hz,1H),3.82−3.79(m,1H),3.58−3.46(m,2H),2.48−2.41(m,1H),2.19−2.13(m,1H).F−NMR:(376MHz,d6−DMSO,ppm):δ−53.77(s,1F,βisomer),−53.98(s,1F,αisomer).LC−MS:(ES,m/z):269.20[M+H]+.
工程6:7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミンの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(850mg、3.17mmol)およびイミダゾール(863mg、12.68mmol)を50mL丸底フラスコに入れた。フラスコに、無水DMF(10mL)を注入し、続いて、TBS−Cl(1433mg、9.51mmol)を少しずつ追加した。混合物を25℃で2時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を酢酸エチル(60mL)で希釈し、それぞれ水(30mL×2)、NaHCO3水溶液(飽和、30mL×2)およびブライン(30mL×2)で洗浄した。有機層を回収し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。次いで、残留物を、酢酸エチル/石油エーテル(20%EAのPE溶液)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ7.55(brs,2H),7.26(d,J=3.6Hz,1H),6.60(d,J=3.3Hz,1H),6.31(t,J=6.6Hz,1H),4.55−4.50(m,1H),3.80−3.61(m,4H),2.64−2.55(m,1H),2.23−2.17(m,1H),0.90−0.87(m,18H),0.11−0.06(m,12H).F−NMR:(282MHz,d6−DMSO,ppm):δ−53.64(s,1F,βisomer),−53.78(s,1F,αisomer).LC−MS:(ES,m/z):497.58[M+H]+.
工程7:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノール
7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4−アミン(1.4g、2.82mmol)のTHF(24mL)撹拌溶液に、TFA水溶液(TFA/H2O=1/1、v/v、12mL)を0℃で撹拌しながら10分間かけて滴下した。得られた混合物を0℃で撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。5時間撹拌した後、最初のジ−TBS保護ヌクレオシドがすべて消費されたら、反応混合物をトルエン(50mL×3)と共蒸発させた。残留物をMeOH/DCM(15%MeOHのDCM,溶液50mL)の混合物に再溶解した。固体のNaHCO3(2g)を0℃で追加し、続いて、水(1mL)を追加した。得られた混合物を30分間撹拌した。pH値を7に調整した後、固体をろ過し、ろ液を回収し、減圧下で濃縮した。残留物を、酢酸エチル/石油エーテル(40%EAのPE溶液)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ7.57(brs,2H),7.32(d,J=3.6Hz,1H),6.61(d,J=3.6Hz,1H),6.32(dd,J=6.0Hz,J=8.0Hz,1H),4.99−4.96(m,1H),4.52(t,J=2.8Hz,1H),3.79(q,J=2.4Hz,1H),3.54−3.49(m,2H),2.57−2.53(m,1H),2.19−2.13(m,1H),0.91−0.88(m,9H),0.13−0.11(m,6H).F−NMR:(376MHz,d6−DMSO,ppm):δ−53.71(s,1F,βisomer),−53.89(s,1F,αisomer).LC−MS:(ES,m/z):383.36[M+H]+.
工程8:(2S,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、TFA(0.051mL、0.659mmol)を、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(360mg、0.941mmol)、DCC(N,N−ジシクロヘキシルカルボジイミド)(602mg、2.92mmol)およびピリジン(0.084mL、1.035mmol)の無水DMSO(2mL)撹拌溶液に室温で2分間かけて注入し、混合物を一晩撹拌した。反応の進行を、TLCおよびLCMSによってモニタリングした。混合物をろ過してジシクロヘキシル尿素を除去し、ろ液を酢酸エチル(30mL)およびH2O(30mL)で分けた。有機層を回収し、ブライン(20mL×2)洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で蒸発させて表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):381.20[M+H]+,413.20[M+MeOH+H]+.
工程9:((3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノールの合成
50mL丸底フラスコ中、(2S,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(400mg、1.051mmol)の1,4−ジオキサン(8mL)撹拌溶液に、ホルムアルデヒド溶液(1.2mL、16.01mmol)を追加し、続いて、水酸化ナトリウム溶液(1.2mL、2.400mmol)を2分間かけて滴下した。得られた混合物を25℃で7時間撹拌した。最初のヌクレオシドがすべて消費されたら、反応混合物を、AcOHの追加によって中和した。得られた混合物をAcOEt(100mL)で希釈し、水(2×40mL)、飽和NaHCO3水溶液(2×40mL)およびブライン(50mL)で順次洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、減圧下で蒸発させた。残留物をEtOH(3mL)に再溶解し、水素化ホウ素ナトリウム(199mg、5.26mmol)を0℃で少しずつ追加した。25℃で5時間撹拌した後、反応混合物を、AcOHの追加によって中和した。混合物を減圧下で濃縮し、残留物をCHCl3(100mL)と水(50mL)との間に分けた。有機層を水およびブラインで順次洗浄し、Na2SO4で脱水し、減圧下で蒸発させた。残留物を、ジクロロメタン/メタノール(30/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ7.55(brs,2H),7.34(d,J=3.6Hz,1H),6.60(d,J=3.6Hz,1H),6.35(t,J=7.0Hz,1H),4.90(t,J=3.6Hz,1H),4.60(q,J=2.8Hz,1H),4.41(t,J=3.6Hz,1H),3.60−3.43(m,4H),2.69−2.62(m,1H),2.23−2.17(m,1H),0.92(s,9H),0.09(s,6H).F−NMR:(376MHz,d6−DMSO,ppm):δ−53.80(s,1F,βisomer).LC−MS:(ES,m/z):413.32[M+H]+,435.34[M+Na]+.
工程10:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
50mL丸底フラスコ中、アルゴン雰囲気下で、((3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノール(180mg、0.436mmol)の無水アセトニトリル(15mL)および無水DMSO(1.5mL)撹拌溶液に、IBX(367mg、1.309mmol)を追加した。得られた混合物を20℃で8時間撹拌した。反応混合物をろ過し、ジクロロメタンで洗浄した。ろ液を回収し、減圧下で濃縮した。残留物を酢酸エチル(40mL)に再溶解し、水(3×15mL)およびブライン(2×20mL)で順次洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮して表題化合物を得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。1H−NMR:(400MHz,CDCl3,ppm):δ9.65(s,1H),7.60(d,J=3.6Hz,1H),6.43(dd,J=5.6Hz,J=9.6Hz,1H),6.39(d,J=3.6Hz,1H),5.56−5.43(m,3H),4.96(d,J=4.8Hz,1H),4.08(d,J=11.2Hz,1H),3.81(d,J=12.8Hz,1H),3.27−3.19(m,1H),2.25(dd,J=5.4Hz,J=13.0Hz,1H),0.91(s,9H),0.11(d,J=5.2Hz,6H).
F−NMR:(376MHz,CDCl3,ppm):δ−53.14(s,1F).LC−MS:(ES,m/z):411.21[M+H]+ .
工程11:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(190mg、0.463mmol)の無水MeOH(8mL)撹拌溶液に、炭酸カリウム(160mg、1.157mmol)を追加した。混合物を0℃に冷却し、次いで、ジメチル(1−ジアゾ−2−オキソプロピル)ホスホネート(178mg、0.926mmol)を1分間かけて滴下した。得られた混合物を25℃に加温し、一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、次いで、メタノール/ジクロロメタン(4.8%MeOHのDCM)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。1H−NMR:(400MHz,CDCl3,ppm):δ6.99(d,J=3.6Hz,1H),6.35(d,J=3.6Hz,1H),6.28(dd,J=6.0Hz,J=8.8Hz,1H),5.45−5.33(m,3H),4.76(q,J=2.8Hz,1H),4.03(dd,J=2.0Hz,J=12.4Hz,1H),8.16−3.79(m,1H),3.12−3.06(m,1H),2.70(s,1H),2.33−2.27(m,1H),0.94(s,9H),0.16(d,J=8.0Hz,6H).F−NMR:(376MHz,CDCl3,ppm):δ−53.26(s,1F).LC−MS:(ES,m/z):407.30[M+H]+ .
工程12:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(9)の合成
アルゴン雰囲気下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−フルオロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(15mg、0.037mmol)の無水THF(1mL)撹拌溶液に、TBAF THF溶液(0.037mL、0.037mmol)を周囲温度で撹拌しながら1分間かけて滴下した。媒体を周囲温度で2時間撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。最初のヌクレオシドがすべて消費されたら、混合物を真空下で濃縮し、次いで、残留物を、分取TLC(MeOH/DCM=1/15)によって精製して、粗生成物(10mg)を得た。粗生成物を、以下の条件:(1#−Pre−HPLC−011(Waters)):カラム、X−Bridge C18カラム、19*150mm、5um;移動相、10mmol重炭酸アンモニウムを含む水およびアセトニトリル(5%アセトニトリルを5分間で30%に上昇させ、2分間で95%に上昇させる);検出器、UV254&220nmを用いて分取HPLCによってさらに精製した。生成物含有画分を回収し、凍結乾燥して、化合物9を得た。1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ7.57(brs,2H),7.28(d,J=3.6Hz,1H),6.61(d,J=3.6Hz,1H),6.35(t,J=6.4Hz,1H),5.51(d,J=5.6Hz,1H),5.27(t,J=6.0Hz,1H),4.48(dd,J=6.4Hz,J=12.0Hz,1H),3.61(dd,J=5.6Hz,J=11.6Hz,1H),3.53(dd,J=6.4Hz,J=12.0Hz,1H),3.48(s,1H),2.50−2.46(m,1H),2.37−2.31(m,1H).F−NMR:(376MHz,d6−DMSO,ppm):δ−53.67(s,1F).LC−MS:(ES,m/z):293.15[M+H]+,315.15[M+Na]+ .
[実施例10]:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−ヒドロキシ−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルボニトリル(10)の合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(実施例1、中間体C、50mg、0.127mmol、1.0当量)の無水ピリジン(2.5mL)撹拌溶液に、ヒドロキシルアミンヒドロクロリド(26.6mg、0.382mmol、3.0当量)を追加した。得られた混合物を30℃で2時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物を真空下で濃縮し、次いで、酢酸エチル(50mL)に溶解し、水(2×30mL)およびブライン(35mL)で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、ろ液を真空下で濃縮した。残留物を、分取TLC(DCM/MeOH=10/1)によって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):408.20[M+H]+.
工程2:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルボニトリルの合成
アルゴン雰囲気下で、5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドオキシム(40mg、0.098mmol)およびトリエチルアミン(105mg、1.038mmol)の無水DCM(5mL)撹拌混合物に、2,2,2−トリフルオロ無水酢酸(110mg、0.524mmol)を20℃で撹拌しながら滴下した。得られた混合物を20℃で20時間撹拌した。反応の進行を、LCMSによってモニタリングした。反応混合物をDCM(30mL)で希釈し、飽和NaHCO3水溶液(25mL)およびブライン(25mL)で順次洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を真空下で濃縮した。残留物を、分取TLC(DCM/MeOH=10/1)によって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:(ES,m/z):390.11[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ8.10(s,1H),7.30(d,J=3.6Hz,1H),6.68(t,J=6.9Hz,1H),6.64(d,J=3.6Hz,1H),4.90(t,J=6.3Hz,1H),3.85(dd,J=12.0Hz,J=21.6Hz,2H),2.85−2.94(m,1H),2.42−2.49(m,1H),1.02(s,9H),0.26(d,J=9.0Hz,6H).
工程3:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−ヒドロキシ−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルボニトリル(10)の合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルボニトリル(35mg、0.090mmol)の無水THF(5mL)撹拌溶液に、TBAF THF溶液(1.0M、0.108mL、0.108mmol)を15℃で撹拌しながら滴下した。得られた混合物を15℃で0.5時間撹拌した。反応の進行を、LCMSおよびTLCによってモニタリングした。反応混合物を真空下で濃縮した。残留物を、分取TLC(DCM/MeOH=10/1)によって精製して、シロップを得た。粗生成物を、以下の条件:(1#−Pre−HPLC−011(Waters)):カラム、SunFire C18逆相カラム、19*150mm、5um;移動相、10mmol重炭酸アンモニウムを含む水およびアセトニトリル(5%アセトニトリルを7.5分間で20%に上昇させ、2分間で95%に上昇させ、1分間で5%に低下させる);検出器、uv254および220nmを用いて分取HPLCによってさらに精製した。生成物含有画分を回収し、凍結乾燥して、固体として化合物10を得た。LC−MS:(ES,m/z):276.10[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.07(s,1H),7.34(d,J=3.6Hz,1H),7.33(br,2H),7.08(s,1H),6.64(t,J=7.0Hz,1H),6.61(d,J=3.6Hz,1H),6.27(d,J=4.8Hz,1H),5.82(t,J=6.0Hz,1H),4.61(dd,J=4.8Hz,J=10.0Hz,1H),3.75(dd,J=5.6Hz,J=12.0Hz,1H),3.62(dd,J=6.0Hz,J=11.6Hz,1H),2.74−2.81(m,1H),2.33−2.38(m,1H).
[実施例11]:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(11)の合成
4−クロロピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジンの合成は、国際公開第2011/150356号、2011年に記載されている。500−mL丸底フラスコに、4−クロロピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン(17g、110.70mmol)および(メチルスルファニル)ナトリウム(15g、214.01mmol.のテトラヒドロフラン(300mL)溶液を入れた。得られた溶液を室温で一晩撹拌した。固体をろ過した。得られた混合物を真空下で濃縮した。残留物を、酢酸エチル/石油エーテル(1:10)を用いるシリカゲルカラムにアプライした。これにより、表題化合物を得た。LC−MS(ES,m/z):166[M+H]+
工程2:(3R,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)−2−(4−(メチルチオ)ピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)テトラヒドロフラン−2−オール
アルゴン雰囲気下で、4−(メチルチオ)ピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン(1.650g、9.99mmol)のTHF(30mL)溶液に、リチウムジイソプロピルアミド(7.5mL、15.00mmol)を−78℃で追加し、得られた混合物を−78℃で30分間撹拌した。その後、アルゴン雰囲気下で、(3R,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)ジヒドロフラン−2(3H)−オン(4.18g、9.99mmol)のTHF(10mL)溶液を−78℃で追加し、−78〜−50℃で120分間撹拌した。反応を、塩化アンモニウム(水溶液、10mL)の追加によってクエンチし、次いで、酢酸エチル(300mL)で抽出した。有機層を(3×50mL)ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムにアプライし、酢酸エチル/石油エーテル(1:5)を用いて溶出して、表題化合物を得た。LC−MS:584.2[M+H]+
工程3:7−((2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−4−(メチルチオ)ピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジンの合成
アルゴン雰囲気下で、3R,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)−2−(4−(メチルチオ)ピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)テトラヒドロフラン−2−オール(3.00g、5.14mmol)のDCM(30mL)溶液に、トリエチルシラン(2.390g、20.56mmol)およびトリフルオロボラン(0.697g、10.28mmol)を0℃で追加した。得られた溶液を0℃で30分間撹拌し、次いで、重炭酸ナトリウム(水溶液、20mL)の追加によってクエンチし、DCM(200mL)によって抽出した。有機層を3×50mLブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムにアプライし、酢酸エチル/石油エーテル(1:10)を用いて溶出し、表題化合物を得た。LC−MS:568.4[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ8.21(s,1H),7.23−7.36(m,15H),6.81(d,J=4.5Hz,1H),6.70(d,J=4.5Hz,1H),5.69(d,J=4.2Hz,1H),4.37−4.62(m,7H),4.22−4.26(m,1H),4.10−4.13(m,1H),3.66−3.67(m,1H),3.62−3.63(m,1H),2.75(s,3H).
工程4:7−((2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)ピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミンの合成
密封チューブ中、7−((2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−4−(メチルチオ)ピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン(4.6g、8.10mmol)の2−プロパノール(5mL)溶液に、アンモニア(1350mg、79mmol)を−400℃で60分間かけて流した。得られた混合物を80℃で16時間撹拌した後、それを蒸発させて、表題化合物を得た。LC−MS:537.3[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,DMSO,ppm):δ7.80(s,1H),7.69(s,2H),7.24−7.36(m,15H),6.88(d,J=4.5Hz,1H),6.80(d,J=4.2Hz,1H),5.44(d,J=5.4Hz,1H),4.49−4.62(m,6H),4.31(t,J=5.1Hz,1H),4.15−4.18(m,1H),4.09−4.12(m,1H),3.29−3.67(m,2H).
工程5:(2S,3R,4S,5R)−2−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3,4−ジオールの合成
水素下で、7−((2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)ピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミン(100mg、0.186mmol)の酢酸(2mL)溶液に、Pd(OH)2(10mol%)/C(100mg、0.130mmol)を25℃で4時間かけて追加した。混合物をセライトパッドに通してろ過し、ろ液を蒸発させた。残留物をシリカゲルカラムにアプライし、MeOH/DCM(1:8)を用いて溶出して、表題化合物を得た。LC−MS:267.2[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,DMSO,ppm):δ7.79(s,1H),7.77(s,2H),6.84(d,J=4.2Hz,1H),6.68(d,J=4.2Hz,1H),5.10(d,J=6.6Hz,1H),4.95(d,J=6.6Hz,1H),4.84(d,J=4.8Hz,1H),4.76(t,J=5.4Hz,1H),4.20−4.25(m,1H),3.94(d,J=4.8Hz,1H),3.78(d,J=4.2Hz,1H),3.41−3.64(m,2H).
工程6:(6aR,8S,9S,9aS)−8−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−オールの合成
アルゴン下で、(2S,3R,4S,5R)−2−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3,4−ジオール(790mg、2.97mmol)および1H−イミダゾール(606mg、8.90mmol)をDMF(20mL)に溶解した。1,3−ジクロロ−1,1,3,3−テトライソプロピルジシロキサン(936mg、2.97mmol)を0℃で滴下した。アルゴン下で、得られた混合物を25℃で5時間撹拌した後、水(10mL)を追加し、得られた混合物を酢酸エチル(400mL)で希釈した。有機相を(3×60mL)の水および60mLのブラインで洗浄し、Na2SO4で脱水し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルにアプライし、MeOH/DCM(1:20)を用いて溶出して、表題化合物を得た。LC−MS:509.3[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,DMSO,ppm):δ7.81(s,1H),7.70(s,2H),6.82(d,J=4.8Hz,1H),6.61(d,J=4.4Hz,1H),5.20(d,J=4.8Hz,1H),5.16(d,J=1.6Hz,1H),4.31−4.35(m,1H),4.12−4.15(m,1H),4.00−4.03(m,1H),3.88−3.91(m,1H),0.96−1.05(m,28H)
工程7:O−((6aR,8S,9S,9aR)−8−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−イル)O−フェニルカルボノチオエートの合成
アルゴン下で、(6aR,8S,9S,9aS)−8−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−オール(210mg、0.413mmol)およびN,N−ジメチルピリジン−4−アミン(202mg、1.651mmol)をDCM(10mL)に溶解した。O−フェニルカルボノクロリドチオエート(143mg、0.826mmol)を0℃で滴下した。アルゴン下で、反応物を25℃で2時間撹拌した後、得られた混合物をDCM(100mL)で希釈し、次いで、3×30mLの水および30mLのブラインで洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムにアプライし、酢酸エチル/石油エーテル(3:1)を用いて溶出して、表題化合物を得た。LC−MS:645.2[M+H]+,1H−NMR:(400MHz,DMSO,ppm):δ7.83(s,2H),7.79(s,1H),7.48(t,J=8.0Hz,2H),7.33(t,J=7.2Hz,1H),7.14(d,J=7.6Hz,2H),6.80(d,J=4.4Hz,1H),6.71(d,J=4.4Hz,1H),6.16(dd,J=2.4Hz,J=5.6Hz,1H),5.46(d,J=2.0Hz,1H),4.90(dd,J=5.6Hz,J=8.8Hz,1H),3.95−4.06(m,2H),3.85−3.87(m,1H),0.96−1.06(m,28H).
工程8:7−((6aR,8R,9aS)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−8−イル)ピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミンの合成
アルゴン下で、O−((6aR,8S,9S,9aR)−8−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−イル)O−フェニルカルボノチオエート(1.45g、2.248mmol)、AIBN(0.738g、4.50mmol)およびトリブチルスタンナン(3.93g、13.49mmol)をトルエン(20mL)に溶解した。アルゴン下で、反応物を80℃で3時間撹拌した後、得られた溶液を真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムにアプライし、酢酸エチル/石油エーテル(2.5:1)を用いて溶出して、表題化合物を得た。LC−MS:493.4[M+H]+,1H−NMR:(400MHz,DMSO,ppm):δ7.81(s,1H),7.79(s,2H),6.81(d,J=4.4Hz,1H),6.60(d,J=4.4Hz,1H),5.46(t,1H),4.58−4.62(m,1H),3.90−4.00(m,1H),3.75−3.80(m,2H),2.20−2.30(m,1H),2.30−2.40(m,1H),0.98−1.06(m,28H).
工程9:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
アルゴン下で、7−((6aR,8R,9aS)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−8−イル)ピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミン(1.0g、2.029mmol)をTHF(10mL)に溶解した。TBAF(0.531g、2.029mmol)を反応溶液に20℃で滴下した。アルゴン下で、得られた溶液を20℃で2時間撹拌した後、それを真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムにアプライし、DCM/MeOH(20:1)を用いて溶出して、表題化合物を得た。LC−MS:251.2[M+H]+,1H−NMR:(400MHz,DMSO,ppm):δ7.83(s,1H),7.81(s,2H),6.84(d,J=4.8Hz,1H),6.82(d,J=4.4Hz,1H),5.47−5.51(m,1H),5.06(d,J=4.0Hz,1H),4.73(t,J=6.0Hz,1H),4.22(m,1H),3.74−3.78(m,1H),3.32−3.45(m,2H),2.16−2.20(m,1H),2.09−2.14(m,1H).
工程10:7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)ピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミンの合成
アルゴン下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(300mg、1.199mmol)、1H−イミダゾール(490mg、7.19mmol)およびtert−ブチルクロロジメチルシラン(723mg、4.80mmol)をDMF(4.0mL)に溶解した。アルゴン下で、反応混合物を20℃で5時間撹拌した後、得られた混合物を酢酸エチル(100mL)で希釈し、(3×30mL)の水および30mLのブラインで洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムにアプライし、酢酸エチル/石油エーテル(2:1)を用いて溶出し、表題化合物を得た。LC−MS:479.3[M+H]+,1H−NMR:(300MHz,DMSO,ppm):δ7.82(s,1H),7.75(s,2H),6.82(d,J=4.5Hz,1H),6.61(d,J=4.5Hz,1H),5.48−5.53(m,1H),4.42(m,1H),3.78(m,1H),3.48−3.62(m,2H),2.22−2.27(m,1H),2.04−2.10(m,1H),0.78−0.89(m,18H),0.00−0.10(m,12H)
工程11:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)ピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミン(500mg、1.044mmol)をTHF(8.0mL)、H2O(2.0mL)およびTFA(2.0mL)に溶解し、0℃で4時間撹拌した。反応混合物を重炭酸ナトリウムでpH7に調整し、次いで、酢酸エチル(30mL×3)で抽出し、(3×20mL)の水および20mLのブラインで洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムにアプライし、酢酸エチル/石油エーテル(2:1)で溶出して、表題化合物を得た。LC−MS:365.3[M+H]+,1H−NMR:(400MHz,DMSO,ppm):δ7.82(s,1H),7.68(s,2H),6.82(d,J=4.4Hz,1H),6.65(d,J=4.4Hz,1H),5.46−5.50(m,1H),4.80(t,J=5.6Hz,1H),4.42(d,J=4.2Hz,1H),3.74−3.78(m,1H),3.32−3.44(m,2H),2.24−2.28(m,1H),2.02−2.06(m,1H),0.85−0.90(m,9H),0.00−0.10(m,6H).
工程12:(2S,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(270mg、0.741mmol)およびIBX(270mg、0.963mmol)をアセトニトリル(20.0mL)に溶解した。アルゴン下で、反応混合物を80℃で1時間撹拌した後、固体をろ過し、ろ液を真空下で濃縮して表題化合物を得、これを次の工程に直接使用した。LC−MS:363.2[M+H]+,1H−NMR:(400MHz,DMSO,ppm):δ9.59(s,1H),7.84(s,1H),7.73(s,2H),6.86(d,J=4.4Hz,1H),6.64(d,J=4.4Hz,1H),5.67−5.71(m,1H),4.71(d,J=4.4Hz,1H),4.25(s,1H),2.25−2.32(m,1H),2.12−2.17(m,2H),0.84−0.91(m,9H),0.00−0.13(m,6H).
工程13:((3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノールの合成
(2S,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(200mg、0.552mmol)を1,4−ジオキサン(10mL)に20℃で溶解した。次いで、ホルムアルデヒド(2.0mL、0.552mmol)および水酸化ナトリウム(2.0mL、4.00mmol)を追加した。得られた混合物を20℃で4時間撹拌した後、それを酢酸でpH7に調整した。混合物を酢酸エチル(150mL)で希釈し、次いで、3×30mLの水および30mLのブラインで洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、真空下で濃縮した。残留物を0℃でエタノール(10mL)に溶解し、次いで、NaBH4(41.7mg、1.103mmol)を0℃で追加した。得られた混合物を20℃で16時間撹拌した後、それを酢酸でpH=7に調整し、混合物を酢酸エチル(150mL)で抽出し、次いで、(3×30mL)の水および30mLのブラインで洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムにアプライし、DCM/MeOH(10:1)を用いて溶出して、表題化合物を得た。LC−MS:395.2[M+H]+,1H−NMR:(400MHz,DMSO,ppm):δ7.82(s,1H),7.70(s,2H),6.82(d,J=4.4Hz,1H),6.66(d,J=4.4Hz,1H),5.50−5.60(m,1H),4.68(t,1H),4.52(d,J=4.4Hz,1H),4.22(t,1H),3.53−3.60(m,2H),2.35−2.45(m,1H),2.00−2.10(m,1H),0.90(s,9H),0.08−0.09(m,6H).
工程14:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン下で、((3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノール(90mg、0.228mmol)およびIBX(256mg、0.912mmol)をアセトニトリル(15.0mL)に溶解した。アルゴン下で、反応混合物を30℃で48時間撹拌した後、固体をろ過した。ろ液を真空下で濃縮して表題化合物を得、これを次の工程に直接使用した。
アルゴン下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(80mg、0.204mmol)およびK2CO3(85mg、0.611mmol)をメタノール(10mL)に溶解した。ジメチル(1−ジアゾ−2−オキソプロピル)ホスホネート(78mg、0.408mmol)を反応混合物に0℃で滴下した。アルゴン下で、反応混合物を25℃で16時間撹拌した後、それをろ過し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムにアプライし、DCM/MeOH(10:1)を用いて溶出して、表題化合物を得た。LC−MS:389.3[M+H]+
工程16:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(11)の合成
アルゴン下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(50mg、0.129mmol)およびTBAF(33.6mg、0.129mmol)をTHF(5.0mL)に溶解した。アルゴン下で、得られた溶液を25℃で2時間撹拌した後、反応混合物を真空下で濃縮した。残留物を、以下の条件(1#−Pre−HPLC−011(Waters)):カラム、XBridge Prep C18カラム、19*150mm;移動相、水(10mmoL/L NH4HCO3)およびアセトニトリル(5.0%アセトニトリルを8分間で25.0%に上昇させ、1.5分間で95.0%に上昇させ、1.5分間で5.0%に低下させる);検出器、UV254および220nm)を用いて分取HPLCによって精製して、固体として表題化合物を得た。LC−MS:275.1[M+H]+,1H−NMR:(400MHz,DMSO,ppm):δ7.82(s,1H),7.69(s,2H),6.82(d,J=4.4Hz,1H),6.69(d,J=4.0Hz,1H),5.60(t,J=7.6Hz,1H),5.28(d,J=4.2Hz,1H),5.06(d,J=6.8Hz,J=6.0Hz,1H),4.30−4.34(m,1H),3.45−3.56(m,2H),3.38(s,1H),2.30−2.37(m,1H),2.17−2.13(m,1H).
[実施例12]:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−ヒドロキシ−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルボニトリル(12)の合成
アルゴン下で、中間体D(実施例11を参照のこと)(70mg、0.178mmol)のピリジン(5mL)混合物に、ヒドロキシルアミンヒドロクロリド(37.17mg、0.543mmol)を25℃で追加した。得られた混合物を25℃で2時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を酢酸エチル(100mL)で希釈し、水(3×20mL)およびブライン(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮して表題化合物を得、これを精製せずに使用した。LC−MS:408.2[M+H]+
工程2:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルボニトリルの合成
アルゴン下で、5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドオキシム(70mg、0.172mmol)のDCM(15mL)混合物に、Et3N(69.5mg、0.687mmol)および2,2,2−トリフルオロ無水酢酸(72.2mg、0.344mmol)を25℃で追加した。得られた混合物を25℃で16時間撹拌し、次いで、反応混合物をDCM(100mL)で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液(3×20mL)およびブライン(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮した。残留物を、DCM/MeOH(15:1)を用いて溶出するシリカゲルカラムによって精製して、表題化合物を得た。LC−MS:309.2[M+H]+.
工程3:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−ヒドロキシ−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルボニトリル(12)の合成
アルゴン下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルボニトリル(50mg、0.128mmol)のTHF(10mL)混合物に、TBAF(33.6mg、0.128mmol)を25℃で追加した。得られた混合物を25℃で2時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮した。粗生成物を、以下の条件:機器、(1#−Pre−HPLC−011(waters);カラム:Xbridge C18、5um、19×150mm;移動相:水(0.05%NH4HCO3)およびACN(5.0%ACNを10分間で40%に上昇させ、95%を2分間維持し、2分間で5%に低下させる);検出器、UV220および254nmを用いて分取HPLCによって精製した。回収した画分を合わせ、減圧下で濃縮して、固体として化合物12を得た。LC−MS:276.0[M+H]+,1H−NMR:(400MHz,DMSO,ppm):δ7.86(s,1H),7.74−7.84(s,2H),6.88(d,J=4.4Hz,1H),6.84(d,J=4.4Hz,1H),6.10(d,J=4.4Hz,1H),5.72−5.79(m,1H),5.62−5.63(m,1H),4.44−4.61(s,1H),3.53−3.62(m,2H),2.42−2.49(m,1H),2.19−2.24(m,1H).
[実施例13]:アンモニウム((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−3−ヒドロキシテトラヒドロホスフェート(13)
アルゴン雰囲気下のグローブボックス中、無水トリブチルアミン(0.4mL、1.679mmol)を、0.4mLのジメチルホルムアミド(DMF)に溶解したトリブチルアンモニウムピロホスフェート(112mg、0.205mmol)を含有するフラスコに追加して、透明な溶液を得た。次いで、透明な溶液を、激しく撹拌しながら、無水2−クロロ−4H−ベンゾ[d][1,3,2]ジオキサホスフィニン−4−オン(27.6mg、0.136mmol)のジメチルホルムアミド(0.4mL)溶液を含有するフラスコに注入した。得られた混合物を30℃で30分間撹拌して中間体Eの溶液を得、これを、いかなる後処理もせずに次の反応に直接使用した。
(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(化合物1,8mg、0.029mmol)を丸底フラスコ(10mL)に入れ、次いで、高真空下、P2O5で一晩脱水した。このフラスコに、活性化分子篩4A(100mg)を追加した。アルゴンを媒体に充填し、次いで、中間体E(2.0当量、新たに調製したもの)の無水DMF(0.15mL)溶液をシリンジによって上記フラスコに移し、混合物を25℃で3時間撹拌した。反応の進行を、TLC(アセトニトリル:0.1Mアンモニウムクロリド=7:3)によってモニタリングした。最初のヌクレオシドのほとんどが消費されたら、混合物を0℃に冷却し、次いで、ヨウ素溶液[0.1mLのピリジン/水(9:1)中、3%]を反応混合物に注入した。ヨウ素は消費されるので、ヨウ素の色落ちしない褐色が維持されるまで、ヨウ素溶液の滴下を継続した。15分後、重炭酸トリエチルアンモニウム緩衝液(1.0M、2mL)を10℃で撹拌しながらさらに15分間かけて追加した。揮発物質を真空下で除去した(内部温度は25℃を超えず)。残留物を水(2mL)に再溶解し、クロロホルム(2×2mL)で抽出した。粗生成物を含有する回収した水層を、以下の条件(1#−Pre−HPLC−011(Waters)):カラム、XBridge(登録商標)Prep OBD(Optimum Bed Density)T3カラム、19*150mm、5um;移動相、50mmol重炭酸アンモニウムを含む水およびアセトニトリル(2%アセトニトリルを5分間で5.2%に上昇させ、2分間で95%に上昇させ、1.5分間で5%に低下させる);検出器、UV254および220nmを用いて分取HPLCによって精製した。生成物含有画分を回収し、凍結乾燥して、固体として化合物13を得た。LC−MS:(ES,m/z):512.90[M−H−4NH3]−.1H−NMR:(400MHz,D2O,ppm):δ8.06(s,1H),7.38(d,J=3.6Hz,1H),6.63(t,J=7.6Hz,1H),6.58(d,J=3.6Hz,1H),4.06−4.14(m,2H),2.67−2.72(m,1H),2.54−2.59(m,1H).P−NMR:(161MHz,D2O,ppm):δ−5.86(s,1P),−11.49−−11.39(d,J=15.13Hz,1P),−19.29(s,1P).
実施例13に記載されている方法を使用して、以下の化合物14〜21を合成した。
[実施例15]:アンモニウム(2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−メチル−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−3−ヒドロキシテトラヒドロフラン−2−イル)メチルトリホスフェート(15)。LC−MS:(ES,m/z):527.00[M−H−4NH3]−.1H−NMR:(400MHz,D2O,ppm):δ7.96(s,1H),7.07(s,1H),6.55(t,J=6.6Hz,1H),4.11(dd,J=6.2Hz,J=11.4Hz,1H),4.05(dd,J=5.8Hz,J=12.0Hz,1H),2.59−2.66(m,1H),2.48−2.53(m,1H),2.78(s,3H).P−NMR:(161MHz,D2O,ppm):δ−5.90(s,1P),−11.48−−11.39(d,J=14.49Hz,1P),−19.32(s,1P).
[実施例16]:ビス−トリエチルアンモニウム((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−2−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−3−ヒドロキシテトラヒドロフラン−2−イル)メチルトリホスフェート(16)。LC−MS:(ES,m/z):546.95[M−H−2TEA]−.1H−NMR:(400MHz,D2O,ppm):δ7.31(d,J=4.0Hz,1H),6.53(d,J=4.0Hz,1H),6.50(t,J=6.4Hz,1H),4.15(dd,J=5.8Hz,J=10.6Hz,1H),4.08(dd,J=4.8Hz,J=11.2Hz,1H),2.62−2.67(m,1H),2.53−2.58(m,1H).P−NMR:(161MHz,D2O,ppm):δ−5.86−−5.77(d,J=14.81Hz,1P),−11.45−−11.35(d,J=15.13Hz,1P),−19.24(s,1P).
[実施例17]:アンモニウム((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−5−クロロ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−エチニル−3−ヒドロキシテトラヒドロフラン−2−イル)メチルトリホスフェート(17)。LC−MS:(ES,m/z):546.70[M−H−4NH3]−.1H−NMR:(400MHz,D2O,ppm):δ7.97(s,1H),7.34(s,1H),6.54(t,J=6.0Hz,1H),4.01−4.13(m,2H),2.52−2.62(m,2H).P−NMR:(161MHz,D2O,ppm):δ−5.81(s,1P),−11.42(s,1P),−19.25(s,1P).
[実施例18]:ビス−トリエチルアンモニウム((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−7−イル)−2−シアノ−3−ヒドロキシテトラヒドロフラン−2−イル)メチルトリホスフェート(18)。LC−MS:(ES,m/z):514.35[M−H−2TEA]−.1H−NMR:(400MHz,D2O,ppm):δ8.04(s,1H),7.29(d,J=3.2Hz,1H),6.70(t,J=6.8Hz,1H),6.55(d,J=3.2Hz,1H),4.87(t,J=6.0Hz,1H),4.21−4.16(m,2H),2.99(q,J=7.2Hz,15H),2.80−2.76(m,1H),2.58−2.54(m,1H),1.12(t,J=7.2Hz,26H).P−NMR:(161MHz,D2O,ppm):δ−5.85(s,1P),−11.84(d,J=15.30Hz,1P),−19.38(s,1P).
[実施例19]:アンモニウム((2R,3S,5R)−5−(4−アミノピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2−エチニル−3−ヒドロキシテトラヒドロフラン−2−イル)メチルトリホスフェート(19)。LC−MS:(ES,m/z):512.90[M−H−4NH3]−.1H−NMR:(400MHz,D2O,ppm):δ7.73(s,1H),6.77(dd,J=4.4Hz,J=7.4Hz,2H),5.73(t,J=7.4Hz,1H),4.52−4.56(m,1H),3.98−4.03(m,2H),2.56−2.63(m,1H),2.34−2.40(m,1H).P−NMR:(161MHz,D2O,ppm):δ−5.79(s,1P),−11.24(s,1P),−19.21(s,1P).
[実施例20]:アンモニウム((2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−2−エチニル−3−ヒドロキシテトラヒドロフラン−2−イル)メチルトリホスフェート(20)。LC−MS:(ES,m/z):513.95[M−H−4NH3]−.1H−NMR:(400MHz,D2O,ppm):δ8.22(s,1H),7.99(s,1H),5.53(t,J=7.6Hz,1H),4.60−4.57(m,1H),4.12−4.03(m,2H),2.56−2.49(m,1H),2.35−2.29(m,1H).P−NMR:(161MHz,D2O,ppm):δ−5.82(s,1P),−11.32−11.23(d,J=13.69Hz,1P),−19.24(s,1P).
[実施例21]:アンモニウム((2R,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2−エチニル−3−ヒドロキシテトラヒドロフラン−2−イル)メチルトリホスフェート(21)。LC−MS:(ES,m/z):513.95[M−H−4NH3]−.1H−NMR:(400MHz,D2O,ppm):δ8.23(s,1H),7.98(s,1H),5.66(t,J=7.6Hz,1H),4.61−4.58(m,1H),4.05(brs,2H),2.68−2.61(m,1H),2.46−2.42(m,1H).P−NMR:(161MHz,D2O,ppm):δ−5.81(s,1P),−11.33−11.24(d,J=13.85Hz,1P),−19.19(s,1P).
化合物13〜21の対応する遊離塩形態の名称は、それぞれ以下の通りである。
ヒドロキシルアミンヒドロクロリド(70g、1007mmol)の1,4−ジオキサン(100mL)および水(100mL)混合撹拌溶液に、NaOH(38.3g、957mmol)水溶液(400mL)を0℃で撹拌しながら30分間かけて滴下した。得られた溶液を0℃で20分間撹拌した。上記に、ジフェニルホスフィンクロリド(77mL、403mmol)の1,4−ジオキサン(100mL)溶液を0℃で迅速に注入した。得られた混合物を周囲温度で10分間激しく撹拌した。沈殿物が形成し、ろ過によって回収した。固体をNaOH水溶液(0.25N、1000mL)に再懸濁し、4℃で1.5時間撹拌した。混合物をろ過し、フィルタケーキを水(3×1000mL)およびエーテル(2×500mL)で順次洗浄した。固体を真空下で一晩乾燥させて、(アミノオキシ)ジフェニルホスフィンオキシドを得た。LC−MS:(ES,m/z):233.9[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ7.82−7.69(m,4H),7.58−7.40(m,6H)P−NMR:(121MHz,d6−DMSO,ppm):δ21.53(s,1P).
工程2:エチル1−アミノ−1H−イミダゾール−2−カルボキシレートの合成
アルゴン雰囲気下で、エチル1H−イミダゾール−2−カルボキシレート(6g、30.9mmol)のDMF(250mL)撹拌溶液に、LiHMDS THF溶液(93mL、93mmol、1M)を−10℃で60分間かけて滴下した。得られた混合物を−10℃でさらに30分間撹拌し、次いで、温度を0℃〜10℃に維持しながら、(アミノオキシ)ジフェニルホスフィンオキシド(21.63g、93mmol)を30分間かけて少しずつ追加した。得られた混合物を室温に加温し、16時間激しく撹拌した。反応物を氷水(600mL)でクエンチし、EtOAc(2×800mL)で抽出した。合わせた有機層を無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮してエチル1−アミノ−1H−イミダゾール−2−カルボキシレートを得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):156.1[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ7.37(d,J=0.8Hz,1H),6.96(d,J=0.8Hz,1H),6.57(brs,2H),4.33−4.27(m,2H),1.31(t,J=7.2Hz,3H).
工程3:イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4(3H)−オンの合成
アルゴン雰囲気下で、エチル1−アミノ−1H−イミダゾール−2−カルボキシレート(6g、30.9mmol)のEtOH(60mL)撹拌混合物に、酢酸ホルムアミジン(17.71g、170mmol)を追加した。得られた混合物を加熱還流し、一晩撹拌した。反応混合物を周囲温度に冷却し、ろ過した。フィルタケーキを水(3×10mL)およびEtOAc(2×10mL)で順次洗浄した。回収した固体を高真空下で一晩乾燥させて、イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4(3H)−オンを得た。LC−MS:(ES,m/z):136.9[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ12.31(brs,1H),8.09(s,1H),7.98(d,J=0.8Hz,1H),7.50(d,J=0.8Hz,1H).
工程4:4−クロロイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジンの合成
アルゴン雰囲気下で、イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4(3H)−オン(2.4g、17.63mmol)を100mL丸底フラスコに入れ、続いて、POCl3(20mL)を室温で注入した。混合物を加熱還流し、16時間撹拌した。揮発物質を減圧下で除去した。残留物をEtOAc(100mL)と水(30mL)との間に分けた。有機層を冷NaHCO3水溶液(飽和、3×20mL)およびブライン(20mL)で順次洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物を、石油エーテル/EtOAc(5/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、4−クロロイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジンを得た。LC−MS:(ES,m/z):155.0[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.81(s,1H),8.65(d,J=1.2Hz,1H),8.08(d,J=0.8Hz,1H).
工程5.4−(メチルチオ)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジンの合成
アルゴン雰囲気下で、4−クロロイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン(20g、129mmol)のTHF(500mL)撹拌溶液に、NaSMe(13.60g、194mmol)を室温で追加した。得られた混合物を室温で72時間撹拌した。反応混合物をNH4Cl水溶液(飽和、200mL)でクエンチし、EtOAc(2×500mL)で抽出した。合わせた有機層をブライン(2×200mL)で洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物を、石油エーテル/EtOAc(1/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、4−(メチルチオ)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジンを得た。LC−MS:(ES,m/z):167.2[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,CDCl3,ppm):δ8.47(s,1H),7.90(d,J=0.8Hz,1H),7.76(d,J=0.4Hz,1H),2.73(s,3H).
工程6:(3R,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)−2−(4−(メチルチオ)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)テトラヒドロフラン−2−オールの合成
アルゴン雰囲気下で、4−(メチルチオ)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン(1g、6.02mmol)のTHF(25mL)撹拌溶液に、LDA THF溶液(4.5mL、9.0mmol、2M)を−78℃で5分間かけて注入した。得られた混合物を−78℃に30分間維持し、次いで、(3R,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)ジヒドロフラン−2(3H)−オン(市販、3.27g、7.82mmol)のTHF(15mL)溶液を注入し、得られた混合物を−78℃〜−50℃で2時間撹拌した。反応物をNH4Cl水溶液(飽和、20mL)でクエンチし、EtOAc(2×50mL)で抽出した。合わせた有機層をブライン(2×20mL)で洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物を、石油エーテル/EtOAc(5/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、(3R,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)−2−(4−(メチルチオ)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)テトラヒドロフラン−2−オールを得た。LC−MS:(ES,m/z):585.1[M+H]+.
工程7:7−((2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−4−(メチルチオ)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジンの合成
アルゴン雰囲気下で、(3R,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)−2−(4−(メチルチオ)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)テトラヒドロフラン−2−オール(1.7g、2.91mmol)のDCM(30mL)撹拌溶液に、三フッ化ホウ素−ジエチルエーテル(825.3mg、5.82mmol)およびトリエチルシラン(1.35g、11.63mmol)を0℃で順次注入した。得られた混合物を0℃でさらに16時間撹拌した。反応物をNaHCO3水溶液(飽和、20mL)でクエンチし、DCM(2×30mL)で抽出した。合わせた有機層をブライン(30mL)で洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物を、石油エーテル/EtOAc(10/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、7−((2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−4−(メチルチオ)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジンを得た。LC−MS:(ES,m/z):570.0[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ8.38(s,1H),7.66(s,1H),7.37−7.26(m,15H),5.56(d,J=5.4Hz,1H),4.70−4.49(m,6H),4.39(q,J=4.2Hz,1H),4.34(t,J=5.4Hz,1H),4.15(t,J=5.1Hz,1H),3.70(dd,J=3.6Hz,J=10.5Hz,1H),3.60(dd,J=3.9Hz,J=10.8Hz,1H),2.70(s,3H).
工程8:7−((2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミンの合成
80mLスチールボンベに、7−((2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−4−(メチルチオ)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン(1.4g、2.462mmol)を入れた。媒体を−60℃に冷却した。これに、イソプロパノールアンモニア(イソプロパノール/液体アンモニア=2/3を−60℃で混合したもの、50mL)を追加した。得られた混合物を90℃に加熱し、16時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、次いで、減圧下で濃縮した。残留物を、石油エーテル/EtOAc(1/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、7−((2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミンを得た。LC−MS:(ES,m/z):538.3[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.24(brs,1H),8.15(brs,1H),8.05(s,1H),7.49(s,1H),7.36−7.28(m,15H),5.35(d,J=5.2Hz,1H),4.63(s,2H),4.56(d,J=4.8Hz,2H),4.52(d,J=2.0Hz,2H),4.45(t,J=5.2Hz,1H),4.22−4.16(m,2H),3.65(dd,J=3.2Hz,J=10.8Hz,1H),3.58(dd,J=4.4Hz,J=10.8Hz,1H).
工程9:(2S,3R,4S,5R)−2−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3,4−ジオールの合成
7−((2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミン(1.2g、2.232mmol)のAcOH(10mL)撹拌溶液に、20%Pd(OH)2/C(1.2g)を追加した。水素(2atm)を媒体に充填し、25℃で24時間撹拌した。固体をろ過し、AcOH(2×15mL)で洗浄した。合わせたろ液を減圧下で濃縮した。残留物を、DCM/MeOH(8/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、(2S,3R,4S,5R)−2−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3,4−ジオールを得た。LC−MS:(ES,m/z):290.0[M+Na]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.22(brs,1H),8.15(brs,1H),8.07(s,1H),7.64(s,1H),5.13−5.09(m,2H),5.03(d,J=6.4Hz,1H),4.78(brs,1H),4.32(t,J=6.0Hz,1H),3.99(t,J=4.8Hz,1H),3.81(q,J=4.4Hz,1H),3.56(dd,J=3.2Hz,J=11.2Hz,1H),3.46(dd,J=3.6Hz,J=11.2Hz,1H).
工程10:(6aR,8S,9S,9aS)−8−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−オールの合成
アルゴン雰囲気下で、(2S,3R,4S,5R)−2−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3,4−ジオール(3.2g、11.97mmol)および1H−イミダゾール(3.26g、47.9mmol)のDMF(65mL)撹拌溶液に、1,3−ジクロロ−1,1,3,3−テトライソプロピルジシロキサン(3.97g、12.57mmol)を0℃で注入した。得られた混合物を30℃に加温し、5時間撹拌した。反応物を水(70mL)でクエンチし、EtOAc(3×100mL)で抽出した。合わせた有機層をブライン(3×100mL)で洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物を、石油エーテル/EtOAc(3/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、(6aR,8S,9S,9aS)−8−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−オールを得た。LC−MS:(ES,m/z):510.4[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,CDCl3,ppm):δ8.12(s,1H),7.62(s,1H),7.03(brs,1H),6.39(brs,1H),5.31(d,J=3.2Hz,1H),4.68(dd,J=6.0Hz,J=7.0Hz,1H),4.47(q,J=2.8Hz,1H),4.10−4.05(m,3H),3.20(brs,1H),1.15−1.05(m,28H).
工程11:O−((6aR,8S,9S,9aR)−8−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−イル)O−フェニルカルボノチオエートの合成
アルゴン雰囲気下で、(6aR,8S,9S,9aS)−8−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−オール(4.0g、7.85mmol)およびDMAP(3.83g、31.4mmol)のDCM(160mL)撹拌溶液に、O−フェニルカルボノクロリドチオエート(2.71g、15.69mmol)を0℃で注入した。得られた混合物を0℃でさらに3時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を、石油エーテル/EtOAc(1/3)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、O−((6aR,8S,9S,9aR)−8−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−イル)O−フェニルカルボノチオエートを得た。LC−MS:(ES,m/z):646.3[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.37(brs,1H),8.28(brs,1H),8.02(s,1H),7.67(s,1H),7.49(t,J=8.0Hz,2H),7.34(t,J=7.4Hz,1H),7.15(d,J=8.4Hz,2H),6.22(dd,J=2.0Hz,J=5.2Hz,1H),5.49(d,J=2.0Hz,1H),4.95(dd,J=5.2Hz,J=8.8Hz,1H),4.07−3.96(m,2H),3.91−3.88(m,1H),1.07−1.04(m,28H).
工程12:7−((6aR,8R,9aS)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−8−イル)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミンの合成
アルゴン雰囲気下で、O−((6aR,8S,9S,9aR)−8−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−イル)O−フェニルカルボノチオエート(350mg、0.542mmol)およびAIBN(133mg、0.813mmol)の脱気トルエン(10mL)撹拌溶液に、トリ−n−水素化ブチルスズ(314mg、1.084mmol)を室温で注入した。混合物を80℃に加熱し、3時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を、石油エーテル/EtOAc(1/3)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、7−((6aR,8R,9aS)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−8−イル)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミンを得た。LC−MS:(ES,m/z):494.5[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.23(brs,1H),8.16(brs,1H),8.05(s,1H),7.56(s,1H),5.42(t,J=7.0Hz,1H),4.63(dd,J=5.8Hz,J=13.0Hz,1H),3.95(dd,J=3.2Hz,J=11.6Hz,1H),3.83(dd,J=6.8Hz,J=12.0Hz,1H),3.78−3.75(m,1H),2.55−2.51(m,1H),2.37−2.32(m,1H),1.07−1.01(m,28H).
工程13:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
7−((6aR,8R,9aS)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−8−イル)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミン(2.7g、5.47mmol)のTHF(60mL)撹拌溶液に、フッ化水素−ピリジン(5.42g、54.7mmol)を0℃で注入した。混合物を周囲温度に加温し、20時間撹拌した。反応混合物を0℃に冷却し、固体NaHCO3で中和し、次いで、MeOH(50mL)で希釈した。固体をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物をDCM/MeOH(20mL、100/1、v/v)で処理し、30分間撹拌した。白色の沈殿物を回収し、真空下で一晩乾燥させて、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールを得た。1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.20(brs,1H),8.13(brs,1H),8.06(s,1H),7.60(s,1H),5.42(dd,J=5.8Hz,J=10.2Hz,1H),5.12(d,J=4.0Hz,1H),4.74(t,J=5.6Hz,1H),4.28−4.25(m,1H),3.81−3.78(m,1H),3.42(t,J=5.4Hz,2H),2.33−2.26(m,1H),2.13−2.09(m,1H).
工程14:7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミンの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(200mg、0.796mmol)および1H−イミダゾール(217mg、3.18mmol)を10mLフラスコに入れた。混合物に、無水DMF(2.5mL)を注入し、続いて、tert−ブチルクロロジメチルシラン(360mg、2.388mmol)を0℃で追加した。混合物を25℃で3時間撹拌した。得られた混合物をEtOAc(50mL)で希釈し、それぞれNaHCO3水溶液(飽和、2×15mL)およびブライン(20mL)で洗浄した。有機層を回収し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物を、石油エーテル/EtOAc(35%〜52%EtOAcの石油エーテル溶液)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミンを得た。LC−MS:(ES,m/z):480.1[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.20(brs,1H),8.13(brs,1H),8.06(s,1H),7.57(s,1H),5.43(dd,J=5.6Hz,J=10.0Hz,1H),4.46−4.44(m,1H),3.81(t,J=4.5Hz,1H),3.63−3.51(m,2H),2.45−2.36(m,1H),2.16−2.10(m,1H),0.89(s,9H),0.86(s,9H),0.10(s,6H),0.02(d,J=3.6Hz,6H).
工程15:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f|[1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
7−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4−アミン(350mg、0.730mmol)を25mL丸底フラスコに入れ、続いて、THF(4mL)を注入した。媒体を0℃に冷却した。これに、予め冷却したトリフルオロ酢酸/水(1/1、v/v、2mL)溶液を0℃で撹拌しながら10分間かけて滴下した。得られた混合物を0℃で2時間撹拌した。反応の進行を、TLCおよびLCMSによってモニタリングした。得られた溶液をトルエン(3×20mL)と共蒸発させ、残留物をNaHCO3水溶液(飽和、4mL)に再懸濁し、次いで、蒸発乾固した。残留物を、EtOAc/DCM(1/1)を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノールを得た。LC−MS:(ES,m/z):366.2[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.09(brs,1H),8.03(brs,1H),7.96(s,1H),7.51(s,1H),5.31(q,J=5.4Hz,1H),4.70(t,J=5.7Hz,1H),4.34(d,J=5.1Hz,1H),3.69(t,J=4.5Hz,1H),3.33−3.28(m,2H),2.34−2.24(m,1H),2.01−1.96(m,1H),0.79(s,9H),0.01(s,6H).
工程16:(2S,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(280mg、0.766mmol)の無水アセトニトリル(20mL)撹拌溶液に、IBX(644mg、2.298mmol)を室温で追加した。混合物を80℃に加熱し、25分間撹拌した。LCMSにより、最初のヌクレオシドがすべて消費されたことが示された。得られた混合物を室温に冷却した。固体をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮して、(2S,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドを得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):363.7[M+H]+.
工程17:((3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノールの合成
25mL丸底フラスコ中、(2S,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(300mg、未精製)の1,4−ジオキサン(4mL)撹拌溶液に、37%ホルムアルデヒド水溶液(1.0mL)を注入し、続いて、NaOH水溶液(1.0mL、2.0mmol、2N)を0℃で注入した。得られた混合物を周囲温度に加温し、16時間撹拌した。最初のヌクレオシドがすべて消費されたら、反応混合物をAcOH(約0.2mL)で中和した。混合物をEtOAc(100mL)で希釈し、水(2×25mL)、NaHCO3水溶液(飽和、25mL)およびブライン(20mL)で順次洗浄した。有機層を無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。アルゴン雰囲気下で、粗生成物をEtOH(5mL)に再溶解し、水素化ホウ素ナトリウム(153mg、4.04mmol)を0℃で少しずつ追加した。周囲温度で16時間撹拌した後、反応混合物をAcOH(約0.2mL)で中和し、蒸発乾固した。残留物をCHCl3(50mL)と水(25mL)との間に分けた。水層をCHCl3(2×25mL)で再抽出した。合わせた有機層をブライン(40ml)で洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物を、DCM/MeOH(30/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、((3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノールを得た。LC−MS:(ES,m/z):395.8[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.18(brs,1H),8.12(brs,1H),8.07(s,1H),7.62(s,1H),5.47(q,J=5.2Hz,1H),4.68(t,J=5.6Hz,1H),4.53(d,J=3.6Hz,1H),4.27(t,J=5.6Hz,1H),3.60−3.55(m,1H),3.53−3.51(m,2H),3.34−3.31(m,1H),2.56−2.53(m,1H),2.11−2.07(m,1H),0.90(s,9H),0.09(d,J=2.8Hz,6H).
工程18:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、((3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノール(180mg、0.455mmol)のアセトニトリル(20mL)およびDMSO(2mL)撹拌混合物に、IBX(382mg、1.365mmol)を室温で追加した。得られた混合物を30℃に加温し、2時間撹拌した。固体をろ過し、CHCl3(2×20mL)で洗浄し、合わせたろ液を減圧下で濃縮した。残留物をEtOAc(30mL)に再溶解し、NaHCO3水溶液(飽和、2×15mL)およびブライン(20mL)で順次洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮して、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドを得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):393.8[M+H]+.
工程19:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7aH−ピロロ[3,2−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(250mg、0.286mmol、未精製)およびK2CO3(120mg、0.86mmol)のMeOH(10mL)撹拌混合物に、ジメチル(1−ジアゾ−2−オキソプロピル)ホスホネート(110mg、0.58mmol)のMeOH(1mL)溶液を0℃で注入した。得られた混合物を30℃に加温し、16時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を、DCM/MeOH(30/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノ−7aH−ピロロ[3,2−d]ピリミジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノールを得た。LC−MS:(ES,m/z):390.2[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.23(brs,1H),8.15(brs,1H),8.08(s,1H),7.67(s,1H),5.54(t,J=7.8Hz,1H),5.16(t,J=6.2Hz,1H),4.53(dd,J=4.6Hz,J=6.2Hz,1H),3.55(dd,J=5.2Hz,J=11.6Hz,1H),3.45(dd,J=7.0Hz,J=11.8Hz,1H),3.42(s,1H),2.56−2.53(m,1H),2.23−2.17(m,1H),0.91(s,9H),0.10(d,J=3.2Hz,6H).
工程20.(2R,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(22)の合成
アルゴン雰囲気下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノイミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−7−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(150mg、0.385mmol)の無水THF(5mL)撹拌溶液に、TBAF THF溶液(0.385mL、0.385mmol、1M)を0℃で注入した。混合物を室温に加温し、16時間撹拌した。反応の進行を、TLCおよびLCMSによってモニタリングした。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残留物を、DCM/MeOH(24/1)を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物22を得た。LC−MS:(ES,m/z):309.00[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.21(brs,1H),8.14(brs,1H),8.07(s,1H),7.64(s,1H),5.53(t,J=7.6Hz,1H),5.34(d,J=5.2Hz,1H),5.07(t,J=6.4Hz,1H),4.35(q,J=6.0Hz,1H),3.56(dd,J=5.6Hz,J=12.0Hz,1H),3.48(dd,J=7.0Hz,J=11.8Hz,1H),3.41(s,1H),2.46−2.41(m,1H),2.28−2.21(m,1H).
[実施例23]:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(23)の合成
工程2:2−((3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−3−(ジメチルアミノ)アクリロニトリルの合成
アルゴン雰囲気下で、2−((3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)アセトニトリル(12.6g、28.4mmol)のDCM(90mL)撹拌溶液に、無水DMF(2.54mL、32.8mmol)を注入し、続いて、1−tert−ブトキシ−−N,N,N’,N’−テトラメチルメタンジアミン(19.80g、114mmol)を0℃で5分間かけて注入した。得られた混合物を25℃に加温し、16時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残留物を、EtOAc/石油エーテル(15%−35%EtOAcの石油エーテル溶液)を使用してフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、2−((3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−3−(ジメチルアミノ)アクリロニトリルを得た。LC−MS:(ES,m/z):499.25[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ7.33−7.30(m,15H),6.47(s,1H),4.65−4.53(m,6H),4.32(d,J=7.2Hz,1H),4.19−4.15(m,1H),4.00−3.90(m,2H),3.59−3.46(m,2H),3.04(s,6H).
工程3.2−((3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−3−hydrアジニルアクリロニトリルの合成
2−((3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−3−(ジメチルアミノ)アクリロニトリル(12.9g、25.9mmol)のMeOH(90mL)撹拌溶液に、ヒドラジン水和物(21.15g、647mmol)、H2O(3.0mL、167mmol)およびヒドラジンヒドロクロリド(2.66g、38.8mmol)を室温で順次追加した。得られた混合物を65℃に加熱し、16時間撹拌した。最終混合物を減圧下で濃縮した。残留物をH2O(500mL)で希釈し、EtOAc(3×500mL)で抽出した。合わせた有機層をブライン(500mL)で洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮して、2−((3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−3−ヒドラジニルアクリロニトリルを得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):486.23[M+H]+.
工程4:4−[(2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−[(ベンジルオキシ)メチル]オキソラン−2−イル]−1H−ピラゾール−5−アミンの合成
2−((3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−3−ヒドラジニルアクリロニトリル(18g、37.1mmol)を1000mL丸底フラスコに入れ、続いて、ACN(200mL)を注入した。混合物を48時間還流した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残留物を、MeOH/DCM(2%〜10%MeOHのDCM溶液)を使用してフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、4−[(2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−[(ベンジルオキシ)メチル]オキソラン−2−イル]−1H−ピラゾール−5−アミンを得た。LC−MS:(ES,m/z):486.23[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,CDCl3,ppm):δ7.40−7.24(m,16H),4.97(d,J=6.8Hz,1H),4.68(d,J=12.0Hz,1H),4.62−4.44(m,5H),4.24−4.22(m,1H),4.10−4.04(m,2H),3.71(dd,J=3.0Hz,J=10.2Hz,1H),3.63−3.50(m,1H).
工程5.8−((2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)ピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−4−アミンの合成
シアナミド(50g、1189mmol)の撹拌混合物に、トリメトキシメタン(505g、4757mmol)を追加し、混合物を105℃に加熱し、5分間撹拌した。上記に、ギ酸(4.38g、95mmol)を105℃で5分間かけて注入した。得られた溶液を105℃で5時間撹拌した後、反応混合物を室温に冷却した。固体をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。生成物を蒸留(0.1mmHg、60℃〜70℃)によって回収して、(E)−メチルN−シアノホルムイミデート(50g、0.595mol)を得た。
工程6:(2S,3R,4S,5R)−2−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3,4−ジオールの合成
8−((2S,3S,4R,5R)−3,4−ビス(ベンジルオキシ)−5−((ベンジルオキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)ピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−4−アミン(10g、18.60mmol)のAcOH(250mL)撹拌混合物に、20%水酸化パラジウム炭素を追加した。水素(1.5〜2atm)を混合物に充填し、25℃で14時間撹拌した。固体をろ過した。ろ液を減圧下で濃縮した。残留物をDCM(150mL)でトリチュレートして、白色の沈殿物が形成した。沈殿物をろ過によって回収し、DCMで洗浄し、真空下で乾燥させて、(2S,3R,4S,5R)−2−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3,4−ジオールを得た。LC−MS:(ES,m/z):268.10[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.76(brs,1H),8.41(brs,1H),8.19(s,1H),8.06(s,1H),4.96−4.91(m,2H),4.86−4.81(m,2H),4.20(q,J=6.0Hz,1H),3.98(q,J=4.5Hz,1H),3.78(q,J=3.9Hz,1H),3.61−3.55(m,1H),3.49−3.43(m,1H).
工程7:(6aR,8S,9S,9aS)−8−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−オールの合成
アルゴン雰囲気下で、(2S,3R,4S,5R)−2−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3,4−ジオール(2.2g、8.23mmol)および1H−イミダゾール(1.681g、24.70mmol)の無水DMF(100mL)撹拌溶液に、1,3−ジクロロ−1,1,3,3−テトライソプロピルジシロキサン(2.86g、9.06mmol)を0℃で4分間かけて注入した。得られた混合物を25℃に加温し、3時間撹拌した。残留物をH2O(50mL)で希釈し、EtOAc(3×50mL)で抽出した。合わせた有機層をブライン(2×50mL)で洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物を、EtOAc/石油エーテル(30%−50%EtOAcの石油エーテル溶液)を使用してフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、(6aR,8S,9S,9aS)−8−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−オールを得た。LC−MS:(ES,m/z):510.25[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.72(brs,1H),8.42(brs,1H),8.08(s,1H),8.02(s,1H),5.08(d,J=4.8Hz,1H),4.91(d,J=1.8Hz,1H),4.41(dd,J=5.4Hz,J=8.1Hz,1H),4.30−4.28(m,1H),3.99−3.86(m,3H),1.04−1.00(m,28H).
工程8:.8−((6aR,8R,9aS)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−8−イル)ピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−4−アミンの合成
アルゴン雰囲気下で、(6aR,8S,9S,9aS)−8−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−9−オール(3.90g、7.65mmol)の無水DCE(120mL)撹拌溶液に、1,1’−チオカルボニルジイミダゾール(1.704g、9.56mmol)を室温で追加した。得られた混合物を85℃に加熱し、1.5時間撹拌した。TLCにより、最初のヌクレオシドがすべて消費されたことが示された。得られた溶液を減圧下で濃縮して未精製の中間体イミダゾリルを得、アルゴン雰囲気下で、これを脱気トルエン(120mL)に直ぐに再溶解した。上記に、AIBN(1.88g、11.48mmol)を追加し、続いて、トリブチルスタンナン(4.45g、15.30mmol)を25℃で2分間かけて注入した。得られた混合物を80℃に加熱し、3時間撹拌した。得られた溶液を減圧下で濃縮した。粗残留物を、EtOAc/石油エーテル(30%−50%EtOAcの石油エーテル溶液)を使用してフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、8−((6aR,8R,9aS)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−8−イル)ピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−4−アミンを得た。LC−MS:(ES,m/z):494.25[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ8.18(s,1H),8.06(s,1H),6.61(brs,2H),5.40(t,J=7.5Hz,1H),4.70−4.65(m,1H),4.10(dd,J=3.0Hz,J=10.8Hz,1H),3.95−3.81(m,2H),2.52−2.38(m,2H),1.08−1.05(m,28H).
工程9:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールの合成
アルゴン雰囲気下で、8−((6aR,8R,9aS)−2,2,4,4−テトライソプロピルテトラヒドロ−6H−フロ[3,2−f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン−8−イル)ピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−4−アミン(1.5g、3.04mmol)の無水THF(35mL)撹拌溶液に、HF−ピリジン溶液(1.5mL、11.65mmol)を0℃で5分間かけて注入した。混合物を25℃に加温し、4時間撹拌した。得られた混合物を、固体NaHCO3の追加によって中和し、次いで、MeOH(30mL)で希釈した。未溶解の固体をろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、次いで、EtOAc(20mL)でトリチュレートした。白色の沈殿物が形成し、ろ過によって回収し、次いで、真空下で一晩乾燥させて、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールを得た。LC−MS:(ES,m/z):252.10[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.71(brs,1H),8.39(brs,1H),8.19(s,1H),8.05(s,1H),5.25(q,J=5.4Hz,1H),5.03(d,J=3.9Hz,1H),4.87(t,J=6.0Hz,1H),4.26−4.24(m,1H),3.76−3.74(m,1H),3.52−3.40(m,2H),2.32−2.22(m,1H),2.04−1.98(m,1H)
工程10:8−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)ピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−4−アミンの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(540mg、2.149mmol)および1H−イミダゾール(512mg、7.52mmol)のDMF(10mL)撹拌溶液に、TBS−Cl(972mg、6.45mmol)を0℃で1分間かけて追加した。得られた混合物を25℃に加温し、2時間撹拌した。得られた溶液をH2O(50mL)で希釈し、EtOAc(3×50mL)で抽出した。合わせた有機層をブライン(2×50mL)で洗浄し、無水Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物を、EtOAc/石油エーテル(20%EtOAcの石油エーテル溶液)を使用してフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、8−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)ピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−4−アミンを得た。LC−MS:(ES,m/z):480.27[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,CDCl3,ppm):δ8.18(s,1H),8.10(s,1H),6.80(brs,2H),5.49(q,J=5.2Hz,1H),4.51(d,J=5.2Hz,1H),3.98(t,J=4.0Hz,1H),3.74(dd,J=3.8Hz,J=10.6Hz,1H),3.63(dd,J=6.4Hz,J=10.8Hz,1H),2.39−2.32(m,1H),2.22−2.17(m,1H),0.93−0.92(m,18H),0.11−0.05(m,12H).
工程11:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
8−((2R,4S,5R)−4−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−5−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)テトラヒドロフラン−2−イル)ピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−4−アミン(800mg、1.667mmol)のTHF(16mL)撹拌溶液に、予め冷却したTFA/H2O(8mL、v/v、1/1)溶液を0℃で5分間かけて注入した。得られた混合物を0℃で1.5時間撹拌した。反応の進行を、TLCによってモニタリングした。得られた溶液をトルエン(3×50mL)と25℃未満で共蒸発させ、残留物をMeOH/DCM(20mL、v/v、1/2)に再溶解し、混合物を固体NaHCO3で中和した。固体をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。粗生成物を、MeOH/DCM(2%〜10%MeOHのDCM溶液)を使用してフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノールを得た。LC−MS:(ES,m/z):366.19[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.70(brs,1H),8.38(brs,1H),8.19(s,1H),8.05(s,1H),5.24(q,J=5.4Hz,1H),4.92(t,J=6.0Hz,1H),4.42(d,J=4.8Hz,1H),3.75(dd,J=3.6Hz,J=4.8Hz,1H),3.46−3.43(m,2H),2.39−2.30(m,1H),2.00−1.94(m,1H),0.90(s,9H),0.11(s,6H).
工程12:(2S,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(350mg、0.958mmol)の無水ACN(40mL)撹拌懸濁液に、IBX(804mg、2.87mmol)を25℃で追加した。得られた混合物を80℃に加熱し、1時間撹拌した。固体をろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して、(2S,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドを得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):364.17[M+H]+.
工程13:((3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノールの合成
100mL丸底フラスコ中、(2S,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(349mg、0.960mmol)の1,4−ジオキサン(25mL)撹拌溶液に、ホルムアルデヒド37%水溶液(5mL)を注入し、続いて、NaOH水溶液(5mL、2N)を室温で5分間かけて注入した。得られた混合物を室温で5時間撹拌した。最初のヌクレオシドがすべて消費されたら、反応混合物をAcOH(約0.5mL)で中和した。混合物をEtOAc(50mL)で希釈し、H2O(2×20mL)、NaHCO3水溶液(飽和、2×20mL)およびブライン(20mL)で順次洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物を無水EtOH(40mL)に再溶解し、アルゴン雰囲気下で、テトラヒドロホウ酸ナトリウム(72.6mg、1.920mmol)を℃で少しずつ追加した。25℃で16時間撹拌した後、反応混合物をAcOH(約0.2mL)で中和し、減圧下で濃縮した。残留物をCHCl3(30mL)とH2O(15mL)との間に分けた。水層をCHCl3(2×15mL)で再抽出した。合わせた有機層をブライン(20mL)で洗浄し、Na2SO4で脱水し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残留物を、MeOH/DCM(3.5%MeOHのDCM溶液)を使用してフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、((3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノールを得た。LC−MS:(ES,m/z):396.20[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.70(brs,1H),8.38(brs,1H),8.20(s,1H),8.05(s,1H),5.30(dd,J=5.1Hz,J=11.1Hz,1H),4.84(t,J=6.0Hz,1H),4.50(d,J=4.2Hz,1H),4.22(dd,J=5.1Hz,J=6.3Hz,1H),3.62−3.48(m,3H),3.41−3.31(m,1H),2.57−2.50(m,1H),1.95(dd,J=5.1Hz,J=12.6Hz,1H),0.90(s,9H),0.11(s,6H).
工程14:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドの合成
アルゴン雰囲気下で、((3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)テトラヒドロフラン−2,2−ジイル)ジメタノール(190mg、0.480mmol)のACN/DMSO(8mL、v/v、10/1)撹拌懸濁液に、IBX(404mg、1.441mmol)を25℃で追加した。得られた混合物を30℃で7時間撹拌した。固体をろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒドを得、これをさらに精製せずに次の反応工程に直接使用した。LC−MS:(ES,m/z):394.18[M+H]+.
工程15:((2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノールの合成
アルゴン雰囲気下で、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−カルバルデヒド(189mg、0.480mmol)の無水MeOH(6mL)撹拌溶液に、K2CO3(199mg、1.441mmol)を追加し、続いて、ジメチル(1−ジアゾ−2−オキソプロピル)ホスホネート(185mg、0.961mmol)のMeOH(1.5mL)溶液を0℃で3分間かけて注入した。反応混合物を25℃に徐々に加温し、次いで、25℃で16時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残留物を、MeOH/DCM(2%〜10%MeOHのDCM溶液)を使用してフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノールを得た。LC−MS:(ES,m/z):390.19[M+H]+.1H−NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ8.17(s,1H),7.98(s,1H),6.43(brs,2H),5.54(dd,J=5.7Hz,J=10.5Hz,1H),4.61(d,J=4.2Hz,1H),3.97(d,J=12.3Hz,1H),3.76(d,J=12.0Hz,1H),2.70−2.61(m,1H),2.54(s,1H),2.20−2.14(m,1H),0.95(s,9H),0.12(d,J=6.0Hz,6H).
工程16:(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール(23)
アルゴン雰囲気下で、((2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−3−((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)−2−エチニルテトラヒドロフラン−2−イル)メタノール(120mg、0.308mmol)のTHF(5mL)撹拌溶液に、TBAF THF溶液(0.462mL、0.462mmol、1.0M)を0℃で2分間かけて注入した。混合物を20℃で26時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残留物を、MeOH/DCM(5%〜10%MeOHのDCM溶液)を使用してフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、粗生成物を得た。粗生成物(90mg)を、以下の条件(1#−Pre−HPLC−011(Waters)):カラム、X−Bridge C18、19×150mm;移動相、NH4HCO3(10mmol/L)を含む水およびACN(4%ACNを6分間で9%に上昇させ、95%を2分間維持し、2分間で5%に低下させる);検出器、UV254および220nmを用いて分取HPLCによってさらに精製した。生成物含有画分を回収し、凍結乾燥して、(2R,3S,5R)−5−(4−アミノピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−8−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オールを得た。LC−MS:(ES,m/z):276.10[M+H]+.1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.71(brs,1H),8.43(brs,1H),8.20(s,1H),8.05(s,1H),5.36(t,J=7.6Hz,1H),5.26−5.22(m,2H),4.34(dd,J=4.8Hz,J=11.2Hz,1H),3.58(dd,J=5.2Hz,J=11.6Hz,1H),3.49(dd,J=7.6Hz,J=11.6Hz,1H),3.37(s,1H),2.44−2.37(m,1H),2.16−2.12(m,1H).
RTポリメラーゼアッセイ
全長野生型および2つの突然変異体RTタンパク質を大腸菌BL21(DE3)細胞で発現させ、精製した。簡潔に言えば、HIV−1 RTポリメラーゼ反応で使用したヘテロダイマー核酸基質は、ビオチン化DNAプライマーを500ヌクレオチドのRNA鋳型にアニーリングすることによって作製した。アッセイ緩衝液(62.5mM Tris−HCl、pH7.8、1.25mMジチオトレイトール、7.5mM MgCl2、100mM KCl、0.03%CHAPS、0.125mM EGTA)中で、HIV−1 RT酵素(最終濃度50pM)を阻害剤化合物またはDMSO(最終反応混合物中、10%DMSO)と混ぜ合わせた。マイクロタイタープレート中、この混合物を室温で30分間プレインキュベートした。鋳型/プライマー基質(最終濃度:16.6nM)およびdNTP(最終濃度:2μM dCTP、dGTP、dATPおよび66.6nM Ru−dUTP)の追加によって、重合反応を開始させた。37℃で90分間インキュベートした後、反応物を、EDTA(25mM)の追加によってクエンチした。得られた混合物を室温でさらに5分間インキュベートし、続いて、この溶液(50μL)を、Meso Scale Discovery(MSD)のブロッキングアビジンプレートに移した。混合物を室温で60分間インキュベートしてから、ECL6000撮像装置によって反応生成物を定量した。得られたデータを表2に示す。
バイキングアッセイ:
複数ラウンドのHIV−1感染アッセイにおける抗ウイルス効力の評価。
CellTiter−Glo発光細胞生存率アッセイ(CTG)における細胞毒性の評価。
MT4−gag−GFPクローンD3(以下、MT4−GFPと称す)(これは、その発現がHIV−1発現タンパク質tatおよびrevに依存するGFPレポーター遺伝子を有するように改変されたMT−4細胞である)を使用して、HIV−1複製をモニタリングした。HIV−1をMT4−GFP細胞に増殖感染させると、感染の約24時間後にGFPが発現する。レポーター遺伝子を維持するために、10%ウシ胎児血清、100U/mLペニシリン/ストレプトマイシンおよび400μg/mL G418を補充したRPMI1640中で、MT4−GFP細胞を37℃/5%CO2/相対湿度90%で維持した。72時間の時点の持続性アッセイ(72時間プレート)および24時間の時点の持続性アッセイ(24時間プレート)のために、MT4−GFP細胞を洗浄し、10%正常ヒト血清を含有するRPMI1640に細胞1.6×105個または2.4×105個/mLで再懸濁した(10%NHS)。ECHOアコースティックディスペンサーを使用して、DMSOに溶解した化合物を、384ウェル細胞培養プレートのウェル(0.205μl/ウェル)に分注することによって、化合物プレートを調製した。3倍系列希釈の10地点(典型的な最終濃度:4.2μM〜0.21nM)において、各化合物を試験した。対照には、阻害剤なし(DMSOのみ)および3つの抗ウイルス剤(それぞれ最終濃度4μΜのエファビレンツ、インジナビルおよびインテグラーゼ鎖転移阻害剤)の組み合わせが含まれていた。細胞を化合物プレートに追加し(50μL/ウェル)、37℃/5%CO2/相対湿度90%で24時間インキュベートした。10%NHSおよび100U/mLペニシリン/ストレプトマイシンを補充した5×40uLのRPMI1640で、細胞を洗浄した。さらに48時間インキュベートするために、72時間プレートを37℃のインキュベーターに戻した。(洗浄後に48時間インキュベートした後の)24時間プレートまたは72時間プレートの各ウェルの40μLの細胞をポリ−D−リジンコーティングプレートに移した。次いで、同じインキュベーション条件で、H9IIIBウイルスを細胞に約0.1の感染多重度で感染させた。
Tris−HCl緩衝液(pH7.5)の存在下、40℃で、基質化合物をヒトADA1型と反応させ、出発物質の消費をLCMSによってモニタリングすることによって、表5のデータを作成した。表5では、対応するイノシン生成物への50%変換に必要な時間は、T1/2として記されている。アデノシンデアミナーゼによる脱アミノ化は、特にインビボにおけるアデノシン様ヌクレオシド阻害剤の治療潜在力を減少させることが公知である(以下の参考文献を参照のこと)。表5に示されている化合物は、EDA((2R,3S,5R)−5−(6−アミノ−9H−プリン−9−イル)−2−エチニル−2−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−3−オール)および天然デオキシアデノシンと比較した場合、アデノシンデアミナーゼに対して様々な安定度を有することが示されている。ADAに対してより耐性である化合物は、優れた薬物動態特性を有することが可能である。
7−((2R,4S,5R)−5−エチニル−4−ヒドロキシ−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−イル)−5−フルオロ−3H−ピロロ[2,3−d]ピリミジン−4(7H)−オン(2A)
化合物2〜2Aの変換に関する上記一般的手順を表5の各基質化合物に適用し、デオキシ−アデノシンおよびEDAについて示されているイノシン生成物、ならびにイノシン生成物1A、2A、11A、22Aおよび23Aを生産した。記載されている手順を使用して、それぞれ化合物4、8および9の4A、8Aおよび9Aへの変換は検出されなかった(NA=アデノシンデアミナーゼ非感受性基質)。
化合物11A:7−((2R,4S,5R)−5−エチニル−4−ヒドロキシ−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−イル)ピロロ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4(3H)−オン:1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ10.25(brs,1H),7.86(s,1H),6.83(d,J=4.5Hz,1H),6.63(d,J=4.2Hz,1H),5.53(t,J=7.5Hz,1H),5.31−5.25(m,1H),5.09−5.05(m,1H),4.31−4.27(m,1H),3.55−3.45(m,2H),3.33(s,1H),2.35−2.18(m,2H).LC−MS:(ES,m/z):298.00[M+Na]+.
化合物22A:7−((2R,4S,5R)−5−エチニル−4−ヒドロキシ−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−イル)イミダゾ[2,1−f][1,2,4]トリアジン−4(3H)−オン:1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.12(s,1H),7.56(s,1H),5.45(t,J=7.4Hz,1H),5.35(d,J=4.0Hz,1H),5.06(brs,1H),4.33(brs,1H),3.56−3.46(m,2H),3.32(s,1H),2.42−2.33(m,1H),2.28−2.22(m,1H).LC−MS:(ES,m/z):277.10[M+H]+.
化合物23A:8−((2R,4S,5R)−5−エチニル−4−ヒドロキシ−5−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−2−イル)ピラゾロ[1,5−a][1,3,5]トリアジン−4(3H)−オン:1H−NMR:(400MHz,d6−DMSO,ppm):δ8.08(s,1H),7.98(s,1H),5.30(t,J=7.4Hz,1H),5.25(d,J=5.2Hz,1H),5.24−5.11(m,1H),4.32(q,J=5.2Hz,1H),3.53(dd,J1=11.6Hz,J2=32.0Hz,2H),3.36(s,1H),2.36−2.29(m,1H),2.16−2.10(m,1H).LC−MS:(ES,m/z):274.80[M−H]−.
Claims (41)
- 構造式I
(式中:
Rは、
であり、
Xは、Oであり;
Yは、−C≡C−R8または−C≡Nであり;
R1は、−H、−C(O)R6、−C(O)OR6、−C(O)N(R6)2、または
であり;
R2は、−H、−C(O)R6a、−C(O)OR6aまたは−C(O)N(R6a)2であり;
R3は、−Hであり;
R4は、−N(RX)2、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2または−NHC(O)R6bであり;
R5は、−H、ハロ、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、−CN、−ORX、−N(RX)2、−C3−C7シクロアルキル、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2または−NHC(O)R6bであり;
R6、R6aおよびR6bはそれぞれ独立して、−H、−C1−C6アルキル、または−C1−C6ハロアルキルから出現ごとに選択され;
R8は、−H、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、または−C3−C7シクロアルキルであり;
R9は、−H、ハロ、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、−CN、−ORYまたは−N(RY)2であり;
RXは独立して、−H、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、アリールまたは5もしくは6員単環式ヘテロアリールから出現ごとに選択され;
または、R4またはR5のいずれかまたは両方が−N(RX)2である場合、各RXは、それらが両方とも結合している窒素と一緒になって、5もしくは6員単環式ヘテロアリールまたは9もしくは10員二環式ヘテロアリールを形成していてもよく;ならびに
RYは、−H、−C1−C6アルキルまたは−C1−C6ハロアルキルである。)の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。 - R2が、−Hである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
- Yが−C≡C−R8である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
- R4が−N(RX)2である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
- R5が、−H、ハロ、−C1−C6アルキル、−ORXまたは−N(RX)2である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
- Yが−C≡CHである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
- R9が、−H、ハロ、−C1−C3アルキル、−C1−C3ハロアルキル、−CN、−ORYまたは−N(RY)2である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
- RXが−H、−C1−C6アルキルまたは−C1−C6ハロアルキルである、請求項1から10のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
- Yが−C≡CHであり;
R5が、−H、ハロ、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、−CN、−ORX、−N(RX)2、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2または−NHC(O)R6bであり;および
R9が、−H、ハロ、−C1−C3アルキル、−C1−C3ハロアルキル、−CN、−ORYまたは−N(RY)2である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。 - R4が−N(RX)2である、請求項12に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
- R2が−Hであり、
R4が−NH2である、請求項12に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。 - Xは、Oであり;
Yは、−C≡CHまたは−C≡Nであり;
R1は、−H、−C(O)R6、−C(O)OR6、−C(O)N(R6)2、または
であり;
R2は、−H、−C(O)R6a、−C(O)OR6aもしくは−C(O)N(R6a)2であり;
R3は、−Hであり;
R4は、−N(RX)2、−NHC(O)OR6bもしくは−NHC(O)N(R6b)2であり;
R5は、−H、ハロ、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキル、−CN、−ORXもしくは−N(RX)2であり;
R6、R6aおよびR6bはそれぞれ独立して、−H、−C1−C6アルキルまたは−C1−C6ハロアルキルから出現ごとに選択され;
R9は、−H、ハロ、−C1−C3アルキル、−C1−C3ハロアルキル、−CN、−ORYまたは−N(RY)2であり;
RXは独立して、−H、−C1−C6アルキル、−C1−C6ハロアルキルから出現ごとに選択され;ならびに
RYは独立して、−H、−C1−C6アルキルまたは−C1−C6ハロアルキルから出現ごとに選択される。)を有する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。 - R1、R2、R4またはR5の一つ以上が、以下から選択される、請求項1〜3のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩:
R1は、−C(O)R6、−C(O)OR6もしくは−C(O)N(R6)2であり;および/または
R2は、−C(O)R6a、−C(O)OR6aもしくは−C(O)N(R6a)2であり;および/または
R4は、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2もしくは−NHC(O)R6bであり;および/または
R5は、−NHC(O)OR6b、−N(C(O)OR6b)2、−NHC(O)N(R6b)2もしくは−NHC(O)R6bである。 - 有効量の請求項1〜19のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩と、薬学的に許容され得る担体とを含む、医薬組成物。
- 有効量の請求項1〜19のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩と、薬学的に許容され得る担体とを含み、抗HIV抗ウイルス剤、免疫調節剤または抗感染剤から選択される有効量の抗HIV剤をさらに含む、医薬組成物。
- 前記抗HIV抗ウイルス剤が、HIVプロテアーゼ阻害剤、HIV逆転写酵素阻害剤、HIVインテグラーゼ阻害剤、HIV融合阻害剤、HIV侵入阻害剤またはHIV成熟阻害剤である、請求項29に記載の医薬組成物。
- アバカビル、アバカビル+ラミブジン、アバカビル+ラミブジン+ジドブジン、アンプレナビル、アタザナビル、AZT、カプラビリン、ダルナビル、ジデオキシシチジン、ジデオキシイノシン、デラビルジン、ドルテグラビル、ドラビリン、エファビレンツ、エファビレンツ+エムトリシタビン+テノホビルDF、4’−エチニル−2−フルオロ−2’−デオキシアデノシン、エルテグラビル、エムトリシタビン、エムトリシタビン+テノホビルDF、エミビリン、エンフビルチド、エトラビリン、ホスアンプレナビルカルシウム、インジナビル、ラミブジン、ラミブジン+ジドブジン、ロピナビル、ロピナビル+リトナビル、マラビロク、ネルフィナビル、ネビラピン、PPL−100、ラルテグラビル、リルピビリン、リトナビル、サキナビル、スタブジン、テノホビル フマル酸ジソプロキシル、フマル酸テノホビルアラフェナミド、チプラナビルまたはビクリビロックから選択される一つ以上の抗HIV剤をさらに含む、請求項29に記載の医薬組成物。
- 請求項1〜19のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩の医薬の製造における使用であって、HIVによる感染症を治療もしくは予防するための、またはAIDSを治療し、予防し、もしくはその発症を遅延するための医薬の製造における前記使用。
- HIVプロテアーゼの阻害、HIVによる感染症の治療もしくは予防、またはAIDSの治療、予防もしくはその発症の遅延を必要とする被験体における、HIVプロテアーゼを阻害するため、HIVによる感染症の治療もしくは予防のための、または、AIDSを治療し、予防し、もしくは、その発症を遅延するための医薬の調製に使用するための、請求項1〜19のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
- 前記医薬が、アバカビル、アバカビル+ラミブジン、アバカビル+ラミブジン+ジドブジン、アンプレナビル、アタザナビル、AZT、カプラビリン、ダルナビル、ジデオキシシチジン、ジデオキシイノシン、デラビルジン、ドルテグラビル、ドラビリン、エファビレンツ、エファビレンツ+エムトリシタビン+テノホビルDF、4’−エチニル−2−フルオロ−2’−デオキシアデノシン、エルテグラビル、エムトリシタビン、エムトリシタビン+テノホビルDF、エミビリン、エンフビルチド、エトラビリン、ホスアンプレナビルカルシウム、インジナビル、ラミブジン、ラミブジン+ジドブジン、ロピナビル、ロピナビル+リトナビル、マラビロク、ネルフィナビル、ネビラピン、PPL−100、ラルテグラビル、リルピビリン、リトナビル、サキナビル、スタブジン、テノホビル フマル酸ジソプロキシル、フマル酸テノホビルアラフェナミド、チプラナビルまたはビクリビロックから選択される一つ以上の抗HIV剤をさらに含む、請求項32に記載の使用。
- 有効量の請求項20〜27のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容され得る担体とを含む、医薬組成物。
- 有効量の請求項20〜27のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容され得る担体とを含み、抗HIV抗ウイルス剤、免疫調節剤または抗感染剤から選択される有効量の抗HIV剤をさらに含む、医薬組成物。
- 前記抗HIV抗ウイルス剤が、HIVプロテアーゼ阻害剤、HIV逆転写酵素阻害剤、HIVインテグラーゼ阻害剤、HIV融合阻害剤、HIV侵入阻害剤またはHIV成熟阻害剤である、請求項36に記載の医薬組成物。
- アバカビル、アバカビル+ラミブジン、アバカビル+ラミブジン+ジドブジン、アンプレナビル、アタザナビル、AZT、カプラビリン、ダルナビル、ジデオキシシチジン、ジデオキシイノシン、デラビルジン、ドルテグラビル、ドラビリン、エファビレンツ、エファビレンツ+エムトリシタビン+テノホビルDF、4’−エチニル−2−フルオロ−2’−デオキシアデノシン、エルテグラビル、エムトリシタビン、エムトリシタビン+テノホビルDF、エミビリン、エンフビルチド、エトラビリン、ホスアンプレナビルカルシウム、インジナビル、ラミブジン、ラミブジン+ジドブジン、ロピナビル、ロピナビル+リトナビル、マラビロク、ネルフィナビル、ネビラピン、PPL−100、ラルテグラビル、リルピビリン、リトナビル、サキナビル、スタブジン、テノホビル フマル酸ジソプロキシル、フマル酸テノホビルアラフェナミド、チプラナビルまたはビクリビロックから選択される一つ以上の抗HIV剤をさらに含む、請求項36に記載の医薬組成物。
- 請求項20〜27のいずれか一項に記載の化合物の医薬の製造における使用であって、HIVによる感染症を治療もしくは予防するための、またはAIDSを治療し、予防し、もしくはその発症を遅延するための医薬の製造における前記使用。
- HIVプロテアーゼの阻害、HIVによる感染症の治療もしくは予防、またはAIDSの治療、予防もしくはその発症の遅延を必要とする被験体における、HIVプロテアーゼを阻害するため、HIVによる感染症の治療もしくは予防のための、または、AIDSを治療し、予防し、もしくは、その発症を遅延するための医薬の調製に使用するための、請求項20〜27のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記医薬が、アバカビル、アバカビル+ラミブジン、アバカビル+ラミブジン+ジドブジン、アンプレナビル、アタザナビル、AZT、カプラビリン、ダルナビル、ジデオキシシチジン、ジデオキシイノシン、デラビルジン、ドルテグラビル、ドラビリン、エファビレンツ、エファビレンツ+エムトリシタビン+テノホビルDF、4’−エチニル−2−フルオロ−2’−デオキシアデノシン、エルテグラビル、エムトリシタビン、エムトリシタビン+テノホビルDF、エミビリン、エンフビルチド、エトラビリン、ホスアンプレナビルカルシウム、インジナビル、ラミブジン、ラミブジン+ジドブジン、ロピナビル、ロピナビル+リトナビル、マラビロク、ネルフィナビル、ネビラピン、PPL−100、ラルテグラビル、リルピビリン、リトナビル、サキナビル、スタブジン、テノホビル フマル酸ジソプロキシル、フマル酸テノホビルアラフェナミド、チプラナビルまたはビクリビロックから選択される一つ以上の抗HIV剤をさらに含む、請求項39に記載の使用。
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