EA031476B1

EA031476B1 - 4'-замещенные нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы

Info

Publication number: EA031476B1
Application number: EA201691931A
Authority: EA
Inventors: Винай М. Гириджаваллабхан; Дэвид Б. Олсен; Чжибо Чжан; Цзяньминь Фу; Бин-Юй Тан
Original assignee: Мерк Шарп И Доум Корп.
Priority date: 2014-03-28
Filing date: 2015-03-26
Publication date: 2019-01-31
Also published as: ECSP16085206A; IL247923B; RS62418B1; UA120758C2; NI201600145A; EP3122752B1; CN106795199B; WO2015148746A1; DOP2016000265A; MD20160117A2; CA2943792A1; AU2017225090B2; PT3122752T; AU2017225090A1; PH12016501897A1; CY1124829T1; CR20160451A; TW201619180A; PL3122752T3; TWI660967B

Abstract

Изобретение относится к производным 4'-замещенных нуклеозидов формулы Iи их применению для ингибирования обратной транскриптазы ВИЧ, профилактики заражения ВИЧ, лечения заражения ВИЧ и профилактики, лечения и задержки начала развития или прогрессирования СПИДа и/или ARC.

Description

Изобретение относится к производным 4'-замещенных нуклеозидов формулы I

031476 Bl и их применению для ингибирования обратной транскриптазы ВИЧ, профилактики заражения ВИЧ, лечения заражения ВИЧ и профилактики, лечения и задержки начала развития или прогрессирования СПИДа и/или ARC.

Предпосылки изобретения

Ретровирус, называемый вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), в частности штаммы, известные как ВИЧ 1-го типа (ВИЧ-1) и 2-го типа (ВИЧ-2), этиологически связан с иммуносупрессивным заболеванием, известным как синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД). ВИЧ у серопозитивных пациентов является сначала бессимптомным, но, как правило, в дальнейшем развивается СПИДассоциированный комплекс (ARC), прогрессирующий в СПИД. Пораженные пациенты демонстрируют серьезную иммуносупрессию, что делает их очень чувствительными к ослабляющим и, в конечном счете, приводящим к смертельному исходу оппортунистическим инфекциям. Репликация ВИЧ клеткой хозяина требует интеграции вирусного генома в ДНК клетки хозяина. Поскольку ВИЧ представляет собой ретровирус, для цикла репликации ВИЧ требуется транскрипция вирусного генома РНК в ДНК с помощью фермента, известного как обратная транскриптаза (RT).

Обратная транскриптаза имеет три известные ферментативные функции: фермент действует как РНК-зависимая ДНК-полимераза, как рибонуклеаза и в качестве ДНК-зависимой ДНК-полимеразы. В своей роли в качестве РНК-зависимой ДНК-полимеразы RT разрушает одноцепочечную копию ДНК вирусной РНК. В качестве рибонуклеазы RT разрушает исходную вирусную РНК и высвобождает ДНК, только что полученную из исходной РНК. И в качестве ДНК-зависимой ДНК-полимеразы RT создает вторую, комплементарную ДНК цепь, используя первую цепь ДНК в качестве матрицы. Две нити образуют двойную двухцепочечную ДНК, которая интегрирована в геном клетки хозяина с помощью фермента интегразы.

Известно, что соединения, которые ингибируют ферментативные функции RT ВИЧ, будут ингибировать репликацию ВИЧ в инфицированных клетках. Эти соединения могут быть использованы для профилактики или лечения ВИЧ-инфекции у человека. Среди соединений, одобренных для использования в лечении ВИЧ-инфекции и СПИДа, представлены нуклеозидные ингибиторы RT (nRTI), такие как 3'-азидо-3'-дезокситимидин (AZT), 2',3'-дидезоксиинозин (DDI), 2',3'-дидезоксицитидин (DDC), d4T, 3TC, абакавир, эмтрицитабин и тенофовир дизопроксилфумарат, а также ненуклеозидные ингибиторы RT (nnRTI), такие как невирапин, делавирдин и эфавиренц.

Хотя каждый из вышеуказанных лекарственных средств является эффективным в лечении ВИЧинфекции и СПИДа, сохраняется необходимость разработки дополнительных противовирусных лекарственных средств для лечения ВИЧ, в том числе дополнительных ингибиторов RT. Особой проблемой является развитие мутантных штаммов ВИЧ, резистентных к известным ингибиторам. Применение антиретровирусных лекарственных средств для лечения СПИДа часто приводит к появлению вирусов, которые менее чувствительны к ингибиторам. Эта резистентность, как правило, является результатом мутаций, которые происходят в сегменте обратной транскриптазы гена pol. Продолжающееся использование противовирусных соединений для предотвращения ВИЧ инфекции неизбежно приведет к появлению новых резистентных штаммов ВИЧ. Соответственно, существует постоянная потребность в новых ингибиторах RT, которые эффективны против мутантных штаммов ВИЧ.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к производным 4'-замещенных нуклеозидов и их применению для ингибирования обратной транскриптазы ВИЧ, профилактики заражения ВИЧ, лечения заражения ВИЧ, а также профилактики, лечения и задержки начала развития или прогрессирования СПИДа и/или ARC.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим структурную формулу I

или их фармацевтически приемлемым солям, где R представляет собой

X представляет собой О, S, СН₂ или CF₂;

Y представляет собой -C=C-R⁸ или -C=N;

R¹ представляет собой -Н,

-C(O)R⁶, -СК))(Ж ,

-C(O)N(R⁶)2,

- 1 031476

или пролекарственную модификацию в виде моно-, ди- или трифосфата;

R² представляет собой -Н, -C(O)R^6a, -C(O)OR^6a или -C(O)N(R^6a)₂;

R³ представляет собой -Н, -F или -ОН;

R⁴ представляет собой -Н, -CrQ-алкил, -C^^-алкенил, -C^^-алкинил, -Cl-C6-галогеналкил, -Q-Cy-циклоалкил, 5- или 6-членный моноциклический гетероарил, 9- или 10-членный бициклический гетероарил, галоген, -CN, -NO2, -N(R^X)2, ^И^-^-алкилен)-^ или 6-членный моноциклический гетероарил), -ХИ^г^-алкилен)-^- или 10-членный бициклический гетероарил), арил, -NHC(O)OR^6b, -N(C(O)OR^6b)2, -NHC(O)N(R^6b)2 или -NHC(O)R^6b, где каждая из указанной -^-^-алкильной группы, указанной -^-^-алкенильной группы или указанной -C^^-алкинильной группы может быть необязатель но замещена галогеном;

R⁵ представляет собой -Н, -^-^-алкил, -C^^-алкенил, -C^^-алкинил, -Cr^-галогеналкил, -Q-Cy-циклоалкил, 5- или 6-членный моноциклический гетероарил, 9- или 10-членный бициклический гетероарил, галоген, -OR^X, -CN, -NO2, -N(R^X)2, -NИ(C₁-C₆-алкилен)-(5- или 6-членный моноциклический гетероарил), -NИ(C₁-C₆-алкилен)-(9- или 10-членный бициклический гетероарил), арил, -NHC(O)OR^6b, -N(C(O)OR^6b)2, -NHC(O)N(R^6b)2 или -NHC(O)R^6b, где каждая из указанной -^-^-алкильной группы, указанной -C^^-алкенильной группы или указанной -C^^-алкинильной группы может быть необязатель но замещена галогеном;

R⁶, R^6a и R^6b, каждый независимо, выбраны в каждом случае из -Н, -Q-^-алкила,

-Cr^-галогеналкила, -(C₁-C₃-алкилен)_m-(C₃-C7-циклоалкил), -(C₁-C₃-алкилен)_m-(арил), -(C₁-C₃алкилен)_т-(4-7-членный гетероциклоалкил), -(^-^-алкилен^-^- или 6-членный моноциклический гетероарил) или -(C₁-C₃-алкилен)_m-(9- или 10-членный бициклический гетероарил), где каждая из указанной -Cr^-алкильной группы, указанной ^-^-циклоалкильной группы, указанной арильной группы, указанной 4-7-членной гетероциклоалкильной группы, указанной 5- или 6-членной моноциклической гетероарильной группы или указанной 9- или 10-членной бициклической гетероарильной группы может быть, необязательно, замещена R⁷;

m обозначает целое число, выбранное из 0 или 1;

R⁷ представляет собой от одной до пяти групп заместителей, каждый из которых независимо выбран из -^-^-алкила, C^^-алкенила, ^-^-алкинила, C₁-C₆-галогеналкила, арила или 5-6-членного гетероарила;

R⁸ представляет собой -Н, -^-^-алкил, -C₁-C₆-галогеналкил, -C₃-C₇-циклоалкил, арил, 5- или 6-членный моноциклический гетероарил или 9- или 10-членный бициклический гетероарил;

R⁹ представляет собой -Н, галоген, -Cr^-алкил, -C1-C6-галогеналкил, -CN, -OR^Y или -N(R^Y)2;

R^X в каждом случае независимо выбран из -Н, -^-^-алкила, -C₁-C₆-галогеналкила, арила или 5или 6-членного моноциклического гетероарила или когда любой или оба из R⁴ или R⁵ представляют собой -N(R^X)₂, каждый R^X, необязательно, может быть связан с атомом азота, к которому они оба присоединены с образованием 5- или 6-членного моноциклического гетероарила или 9- или 10-членного бициклического гетероарила; и

R^Y представляет собой -Н, -Q-^-алкил или -Cr^-галогеналкил;

при условии, что когда X представляет собой О, Y представляет собой -С=СН или -C^N, R¹ представляет собой -Н, R² представляет собой -Н, R⁴ представляет собой -NIF, R⁵ представляет собой -Н, -F или -ОН и R⁹ представляет собой -F, тогда R³ не представляет собой -F.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, указываемых в настоящем описании в виде формулы Ia, представлены соединения формулы I или их фармацевтически приемлемые соли, где R представляет собой

и все другие переменные в данном случае (R¹, R², X, Y и т.д.) имеют значения, определенные для формулы I.

- 2 031476

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения представлены соединения формулы I, имеющие структурную формулу II, или их фармацевтически приемлемые соли:

где все другие переменные в данном случае (R¹, R², X, Y и т.д.) имеют значения, определенные для формулы I.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формулы I, имеющие структурную формулу III, или их фармацевтически приемлемые соли:

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формулы I, имеющие структурную формулу IV, или их фармацевтически приемлемые соли:

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формулы I, имеющие структурную формулу V, или их фармацевтически приемлемые соли:

В варианте осуществления настоящего изобретения, указываемом в настоящем описании как вариант осуществления изобретения А, представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V или их фармацевтически приемлемые соли, где

X представляет собой О, S, СН₂ или CF₂;

Y представляет собой -С^С-R⁸ или -С<\;

-С₂-С₆-алкенил, -С₂-С₆-алкинил, -С1-С₆-галогеналкил,

R¹ представляет собой -Н или

R² представляет собой -Н;

R³ представляет собой -Н, -F или -ОН;

R⁴ представляет собой -Н, -С₁-С₆-алкил,

-С₃-С₇-циклоалкил, 5- или 6-членный моноциклический гетероарил, 9- или 10-членный бициклический гетероарил, галоген, -С\, -\О₂, -\(R^X)2, -\Н(С1-С6-алкилен)-(5- или 6-членный моноциклический гетероарил), -\Н(С1-С6-алкилен)-(9- или 10-членный бициклический гетероарил), арил, -\HC(O)OR^6b, -\(C(O)OR^6b)2, -\НС(О)\^^6Ь)2 или -\НС(О^^6Ь, где каждая из указанной -С1-С₆-алкильной группы, указанной -С₂-С₆-алкенильной группы или указанной -С₂-С₆-алкинильной группы может быть необязатель- 3 031476 но замещена галогеном;

R⁵ представляет собой -Н, -СгС6-алкил, -C2-C6-алкенил, -C2-C6-алкинил, -C1-C6-галогеналкил, -Cз-C7-циклоалкил, 5- или 6-членный моноциклический гетероарил, 9- или 10-членный бициклический гетероарил, галоген, -OR^X, -CN, -NO2, -N(R^X)₂, -КН(С_гС₆-алкилен)-(5- или 6-членный моноциклический гетероарил), ^Н(С_гС₆-алкилен)-(9- или 10-членный бициклический гетероарил) или арил, где каждая из указанной -С₁-С₆-алкильной группы, указанной -С₂-С₆-алкенильной группы или указанной -С₂-С₆-алкинильной группы может быть необязательно замещена галогеном;

R⁸ представляет собой -Н, -С₁-С₆-алкил, -С₁-С₆-галогеналкил, -С₃-С₇-циклоалкил, арил, 5- или 6-членный моноциклический гетероарил или 9- или 10-членный бициклический гетероарил;

R⁹ представляет собой -Н, галоген, -С1-С6-алкил, -С1-С6-галогеналкил, -СН -OR^Y или -N(R^Y)2;

R^X в каждом случае независимо выбран из -Н, -С₁-С₆-алкила, -С₁-С₆-галогеналкила, арила или 5или 6-членного моноциклического гетероарила;

или, когда любой или оба из R⁴ или R⁵ представляют собой -N(R^X)₂, каждый R^X, необязательно, может быть связан с атомом азота, к которому они оба присоединены с образованием 5- или 6-членного моноциклического гетероарила или 9- или 10-членного бициклического гетероарила; и

R^Y представляет собой -Н, -С₁-С₆-алкил или -С₁-С₆-галогеналкил;

все другие переменные, например R⁶, R^6a, R^6b, m и т.д., имеют значения, определенные для формулы I.

В классах варианта осуществления изобретения А представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V или их фармацевтически приемлемые соли, где представляет собой -Н; или о н : но—Р— I представляет собой ^он

R¹

ООО

II II II s

НО—Р—O-P-0-P-S I I I ь или ОН ОН ОН ; _или

R¹

представляет собой

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, указываемых в настоящем описании как вариант осуществления изобретения В, представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V или их фармацевтически приемлемые соли, где собой о

II .. ..

но—р—Ο-ΡΌ-Ρ-;

I ' он

R¹

О н :

НО—Р— I он но-, ди- или трифосфата;

R² представляет собой -Н, -С(О^^6а, -QO)OR^6a или C(O)N(R^6a)₂;

R⁴ представляет собой -Н, -С1-С6-алкил, -С2-С6-алкенил, -С2-С6-алкинил, -С1-С6-галогеналкил, -С3-С7-циклоалкил, 5- или 6-членный моноциклический гетероарил, 9- или 10-членный бициклический гетероарил, галоген, -СН -NO2, -N(R^X)2, -NH(C₁-C₆-алкилен)-(5- или 6-членный моноциклический гетероарил), -NI 1(С|-СС-алкилен)-(9- или 10-членный бициклический гетероарил), арил, -NHQO^R⁶’, -N(C(O)OR^6b)2, -NHQO^R⁶^ или -NHQO^⁶’, где каждая из указанной -С1-С₆-алкильной группы, указанной -С2-С6-алкенильной группы или указанной -С2-С6-алкинильной группы может быть необязательно замещена галогеном;

R⁵ представляет собой -Н, -С₁-С₆-алкил, -С₂-С₆-алкенил, -С₂-С₆-алкинил, -С₁-С₆-галогеналкил, -С₃-С₇-циклоалкил, 5- или 6-членный моноциклический гетероарил, 9- или 10-членный бициклический XX гетероарил, галоген, -OR , -СЫ, -NO₂, -N(R )₂, -NH(C₁-C₆-алкилен)-(5- или 6-членный моноциклический гетероарил), -ЯЩСгС^алкилен)-^- или 10-членный бициклический гетероарил), арил, -NHQO^R⁶’, -N(C(O)OR^6b)2, -NHQO^R⁶^ или -NHQO^⁶’, где каждая из указанной -С1-С₆-алкильной группы, указанной -С2-С6-алкенильной группы или указанной -С2-С6-алкинильной группы может быть необязательно замещена галогеном;

при условии, что один или несколько из R¹, R², R⁴ или R⁵ выбраны следующим образом:

R¹ представляет собой -QO^⁶, -C(O)OR⁶, -QO^R⁶^ или пролекарственную модификацию в виде моно-, ди- или трифосфата; и/или

R² представляет собой -QO^^, -QO)OR^6a или -C(O)N(R^6a)₂; и/или

R⁴ представляет собой NHqO)OR^6b, -N(C(O)OR^6b)2, -NHQOWR⁶^ или -NHQO^; и/или

R⁵ представляет собой -NHqO)OR^6b, -N(C(O)OR^6b)2, -NHQOWR⁶^ или -NHQO^⁶’;

все другие переменные, например X, Y, R³, R⁶, R^6a, R^6b, m, R⁷, R⁸, R⁹, R^X и R^Y, имеют значения, определенные для формулы I.

представляет оо

II IIНО—Р—О-РI I:

> он он

ИЛИ

-Н, О

II ,

I он

-QO)R⁶, -C(O)OR⁶ или -ОД^,

О

II ς

I S ^0H ' или пролекарственную модификацию в виде мо- 4 031476

В другом варианте осуществления настоящего изобретения, указываемом в настоящем описании как вариант осуществления изобретения С, представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V или их фармацевтически приемлемые соли, где

X представляет собой О;

Y представляет собой -С=СН или -C=N;

R^{1 666}

О

I но—р—

I он но-, ди- или трифосфата;

R² представляет собой Н, -C(O)R^6a, -C(O)OR^6a или С(О^^^)₂ или, в частности, представляет собой -Н;

R³ представляет собой -Н или -ОН или, в частности, R³ представляет собой -Н;

R⁴ представляет собой -N(R^X)2, -NHC(O)OR^6b или -NHC^N^⁶^ или, в частности, R⁴ представляет собой -N(R^x)2;

R⁵ представляет собой -Н, галоген, -CrQ-алкил, -OR^X или -N(R^X)2 и, в частности, R⁵ представляет собой -Н, -Cl, -F или -NH2;

R⁶, R^6a и R^6b, каждый независимо, выбраны в каждом случае из -Н, -^-^-алкила, -C₁-C₆галогеналкила, арила (предпочтительно фенила) или 5- или 6-членного моноциклического гетероарила, где R⁶, R^6a и R^6b, каждый независимо, замещены R⁷;

R⁷ представляет собой -CpQ-алкил, арил (предпочтительно фенил) или 5-6 членный моноциклический гетероарил;

R⁸ представляет собой -Н;

R⁹ представляет собой -Н, галоген, -Q-Q-алкил, -Q-Q-галогеналкил, -CN, -OR^Y или -N(R^Y)₂, в частности представляет собой -Н, -F, -Cl, -I, -Br или -СН₃;

R^X в каждом случае независимо выбран из -Н, -Q-G-алкила, -Q-G-галогеналкила, арила или 5или 6-членного моноциклического гетероарила;

R^Y представляет собой -Н, -CpQ-алкил или -Q-G-галогеналкил.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения, указываемом в настоящем описании как вариант осуществления изобретения D, представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V или их фармацевтически приемлемые соли, где

X представляет собой О;

Y представляет собой -С=СН или -C=N;

о н : но—Р—

I ‘

R¹ представляет собой -Н, ^он венную модификацию в виде моно-, ди- или трифосфата;

R² представляет собой -Н;

R³ представляет собой -Н;

R⁴ представляет собой -NH2;

R⁵ представляет собой -Н, -Cl, -F или -NH2;

R⁸ представляет собой -Н;

R⁹ представляет собой -Н, -F, -Cl, -I, -Br или -СН3.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения А или В, или их фармацевтически приемлемые соли, где X представляет собой О.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения А или В, или их фармацевтически приемлемые соли, где Y представляет собой -С^С-R⁸.

В другом варианте осуществления изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения А, В, С или D, или их фармацевтически приемлемые соли, где Y представляет собой -С=СН.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения А, В, С или D, или их фармацевтически приемлемые соли, где Y представляет собой -C=N.

В других вариантах осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения В или С, или их фармацевтически представляет

Оо

IIII <

НО—Р—О-PII :

он он собой о

II .. ..

но—р—о-р-о-р-;

I ' или ОН

-Н, О

II

-C(O)R⁶,

-C(O)OR⁶,

-C(O)N(R⁶)₂,

I ^он ' или пролекарственную модификацию в виде мо⁰ i? и II s ρΌ-ρ-s

I I Ь

ОН он ' или пролекарст- 5 031476 приемлемые соли, где R¹ представляет собой -Н, -C(O)R⁶, -C(O)OR⁶, -C(O)N(R⁶)₂ или пролекарственную

модификацию вида

В других вариантах осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения А, В, С или D, или их фармацевтически приемлемые соли, где:

(a) R¹ представляет собой -Н; или о

:

НО—Р— , I · (b) R представляет собой ^он о

II .. ..

но—Ρ-Ο-ΡΌ-Ρ-;

I ' и ОН ⁰ Я

Η _Λ II |

ОН ОН ; или ί

(с) R¹ представляет собой

В других вариантах осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения В, С или D, или их фармацевтически приемлемые соли, где:

(a) R¹ представляет собой -Н или карственную модификацию в виде моно-, ди- или трифосфата;

О 0 0

II ь н II

НО—Р—> но—Р-О-Р-:

он

I он или ι он

I ь ^он ' или проле(b) R¹ представляет собой венную модификацию в виде моно-, ди- или трифосфата; О ОО

II IIII S

НО—р—O-P'0-P-S

I II он он он ' или

I он

НО—ρ—Ο-ΡΌ-Ρили пролекарст- (c) R¹ представляет собой фосфата или (d) R¹ представляет собой пролекарственную модификацию групп пролекарственную модификацию в виде три-

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения В или С, или их фармацевтически приемлемые соли, где R¹ представляет собой -Н, -C(O)R⁶, ^^)OR⁶ или -C(O)N(R⁶)2 или пролекарственную модификацию в виде моно-, ди- или трифосфата. В этом классе R¹ представляет собой -C(O)R⁶, ^^)OR⁶ или -C(O)N(R⁶)2 или пролекарственную модификацию в виде моно-, ди- или трифосфата.

В других вариантах осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения В или С, или их фармацевтически приемлемые соли, где

R² представляет собой -Н, -C(O)R^6a, -C(O)OR^6a или C(O)N(R^6ab; или

R² представляет собой -C(O)R^6a, -C(O)OR^6a или C(O)N(R^6ab; или

R² представляет собой -Н.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения А, В или С, или их фармацевтически приемлемые соли, где R³ представляет собой -Н или -ОН. В еще одном варианте осуществления изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения А, В или С, или их фармацевтически приемлемые соли, где R³ представляет собой -Н.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения А или В, или их фармацевтически приемлемые соли, где R⁴ представляет собой -N(R^X)₂, -NHC(O)OR^6b, -N(C(O)OR^6b)2, -NHC(O)N(R^6b)2 или -NHC(O)R^6b и, в частности, R⁴ представляет собой -N(R^X)₂. Более конкретно, R⁴ представляет собой -NH₂.

В других вариантах осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения В, или их фармацевтически при

- 6 031476 емлемые соли, где

R⁵ представляет собой -Н, галоген, -С1-С6-алкил, -OR^X, N(R^X)2, -NHC(O)OR^6b, -N(C(O)OR^6b)2, -NHC(O)N(R^6b)2 или -NHC(O)R^6b; или

R⁵ представляет собой -NHC(O)OR^6b, -N(C(O)OR^6b)2, -NHC(O)N(R^6b)2 или -NHC(O)R^6b; или

R⁵ представляет собой -Н, галоген (предпочтительно -F или -Cl), -^-^-алкил, -OR^X или -N(R^X)₂; или

R⁵ представляет собой -Н, -Cl, -F или -NH₂.

В других вариантах осуществления настоящего изобретения представлены соединения варианта осуществления изобретения А или В или их фармацевтически приемлемые соли, где

R⁵ представляет собой -Н, галоген (предпочтительно -F или -Cl), -Q-Ce-алкил, -OR^X или -N(R^X)₂или

R⁵ представляет собой -Н, -Cl, -F или -NH2.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения В, или их фармацевтически приемлемые соли, где R⁶, R^6a и R^6b, каждый независимо, выбраны в каждом случае из -Н, -C₁-C₆-алкила, -C₁-C₆-галогеналкила, арила (предпочтительно фенила) или 5- или 6-членного моноциклического гетероарила.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения варианта осуществления изобретения А или их фармацевтически приемлемые соли, где R^6b в каждом случае выбран из -Н, -Q-^-алкила, -C₁-C₆-галогеналкила, арила (предпочтительно фенила) или 5- или 6-членного моноциклического гетероарила.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения А или В, или их фармацевтически приемлемые соли, где R⁷ представляет собой -Ж^-алкил, арил (предпочтительно фенил) или 5-6членный моноциклический гетероарил.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения А или В, или их фармацевтически приемлемые соли, где R⁸ представляет собой -Н.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлены соединения формул I, Ia, II, III, IV или V, или соединения варианта осуществления изобретения А или В, или их фармацевтически приемлемые соли, где R⁹ представляет собой -Н, галоген, -Q-Q-алкил, -C1-Cз-галогеналкил, -CN, -OR^Y, или -N(R^y)2 и, в частности, представляет собой -Н, -F, -Cl, -I, -Br или -СН₃.

Все структурные формулы, их варианты и классы, описанные в настоящем описании, включают фармацевтически приемлемые соли соединений, охарактеризованных в настоящем описании. Ссылка на соединения формулы I в настоящем описании охватывает соединения каждой из формул I, Ia, II III, IV или V и все их варианты и классы. Ссылка на соединения по настоящему изобретению в виде конкретной формулы или варианта, например, формулы I, Ia, II III, IV или V или ее варианты, или любые другие общие структурные формулы, или на конкретное соединение, описанное или заявленное в настоящем описании, охватывает конкретное соединение или соединения, входящие в объем формулы или ее варианта, в том числе их соли, в частности, фармацевтически приемлемые соли, сольваты (в том числе гидраты) таких соединений и сольватированные солевые формы, когда такие формы возможны, если не указано иное.

Настоящее изобретение включает каждое из соединений по примерам, описанных в настоящем описании, и его фармацевтически приемлемые соли. Изобретение охватывает также фармацевтические композиции, содержащие эффективное количество соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемых солей и фармацевтически приемлемый носитель.

Как используется в настоящем описании, термин алкил относится к моновалентному насыщенному алифатическому углеводородному радикалу с прямой или разветвленной цепью, имеющему число атомов углерода в указанном диапазоне. Так, например, C_1-6алкил (или C₁-C₆-алкил) относится к любому из изомеров алкила гексила и алкила пентила, а также к н-, изо-, втор- и трет-бутилу, н- и изопропилу, этилу и метилу. В качестве другого примера C_1-4алкил относится к н-, изо-, втор- и трет-бутилу, н- и изопропилу, этилу и метилу.

Термин алкенил относится к моновалентному алифатическому углеводородному радикалу с прямой или разветвленной цепью, содержащему одну углерод-углерод двойную связь и имеющему число атомов углерода в указанном диапазоне. Так, например, С_2-6алкенил (или C₂-C₆-алкенил) относится ко всем изомерам гексенила и пентенила, а также к 1-бутенилу, 2-бутенилу, 3-бутенилу, изобутенилу, 1пропенилу, 2-пропенилу и этенилу (или винилу).

Термин алкинил относится к моновалентному алифатическому углеводородному радикалу с прямой или разветвленной цепью, содержащему одну углерод-углерод тройную связь и имеющему число атомов углерода в указанном диапазоне. Так, например, С_2-6алкинил (или C₂-C₆-алкинил) относится ко всем изомерам гексинила и пентинила, а также к 1-бутинилу, 2-бутинилу, 3-бутинилу, 1-пропинилу, 2-пропинилу и этинилу.

- 7 031476

Термин алкилен относится к любому дивалентному алифатическому углеводородному радикалу с прямой или разветвленной цепью, имеющему число атомов углерода в указанном диапазоне. Так, например, -С1_₆алкилен- относится к любому от C₁ до С₆ прямому или разветвленному алкилену, и -С1_-3алкилен- относится к любому от C₁ до С₃ прямому или разветвленному алкилену. Конкретный класс алкиленов включает -(CH₂)_1-3-, (СН₂)_2-3-, -(CH₂)_1-2-, -СН₂-, -СН(СН₃)- и -С(СН₃)₂-.

Термин циклоалкил относится к любому моноциклическому кольцу алкана, имеющему число атомов углерода в указанном диапазоне. Так, например, С_3-7циклоалкил (или ^^-циклоалкил) относится к циклопропилу, циклобутилу, циклопентилу, циклогексилу и циклогептилу. Представляющим особенный интерес классом соединений формулы I и их вариантов является С_3-бциклоалкил.

Термин галоген (или гало) относится к атомам фтора, хлора, брома и йода (альтернативно указываемые как фтор, хлор, бром и йод). Представляющим особенный интерес классом соединений формулы I и их вариантов является каждый из фтора или хлора.

Термин галогеналкил относится к алкильной группе, как определено выше, в которой один или несколько атомов водорода заменены на галоген (т.е. -F, -Cl, -Br и/или -I). Так, например, С_1-6галогеналкил (или C₁-C₆-галогеналкил) относится к C₁-G₆ прямой или разветвленной алкильной группе, как определено выше, с одним или несколькими галогеновыми заместителями.

Термин фторалкил имеет аналогичный смысл, за исключением того, что галогеновые заместители ограничены фтором. Подходящие фторалкилы включают серии (CH₂)_0-4CF₃ (т.е. трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, 3,3,3-трифтор-н-пропил и т.д.). Представляющим особенный интерес фторалкилом является CF₃.

Термин С(О) относится к карбонилу. Термины S(O)₂ и SO₂, каждый, относятся к сульфонилу. Термин S(O) относится к сульфинилу.

Термин арил (или Cg-Cw-арил:) относится к (i) фенилу или (ii) 9- или 10-членным бициклическим, конденсированным карбоциклическим кольцевым системам, в которых по меньшей мере одно кольцо является ароматическим. Подходящие арилы включают, например, фенил, нафтил, тетрагидронафтил (тетралинил) или инденил. В конкретном классе соединений формулы I и их вариантах арил представляет собой фенил или нафтил и, более конкретно, арил представляет собой фенил.

Термин гетероарил относится к (i) 5- или 6-членному гетероароматическому кольцу, содержащему от 1 до 4 гетероатомов, независимо выбранных из N, О и S, где каждый N, необязательно, находится в виде оксида, если это химически возможно, (ii) 9- или 10-членной бициклической конденсированной кольцевой системе, где конденсированная кольцевая система содержит от 1 до 6 гетероатомов, независимо выбранных из N, О и S, где каждое кольцо в конденсированной кольцевой системе содержит ноль, один или более чем один гетероатом, и по меньшей мере одно кольцо является ароматическим, и каждый N, необязательно, находится в виде оксида, если это химически возможно, и каждый S в кольце, которое не является ароматическим, необязательно представлен в виде S(O) или S(O)₂. Подходящие 5- и 6-членные гетероароматические кольца включают, например, пиридил, пирролил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, триазинил, тиенил, фуранил, имидазолил, пиразолил, триазолил (т.е. 1,2,3-триазолил или 1,2,4-триазолил), тетразолил, оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил (т.е. то 1,2,3-, 1,2,4-, 1,2,5(фуразанил) или 1,3,4-изомер), оксатриазолил, тиазолил, изотиазолил и тиадиазолил. Подходящие 9- и 10-членные гетеробициклические конденсированные кольцевые системы включают, например, бензофуранил, индолил, индазолил, нафтиридинил, изобензофуранил, бензопиперидинил, бензизоксазолил, бензоксазолил, хроменил, хинолинил, изохинолинил, циннолинил, хиназолинил, тетрагидрохинолинил, тет-

рагидроизохинолинил, изоиндолил, бензодиоксолил (например, бензо-1,3-диоксолил: ^{O i} / бензопиперидинил, бензизоксазолил, бензоксазолил, хроманил, изохроманил, бензотиенил, бензофуранил, имидазо[1,2-а]пиридинил, бензотриазолил, дигидроиндолил, дигидроизоиндолил, индазолил, индолил, изоиндолинил, хиноксалинил, хиназолинил, 2,3-дигидробензофуранил и 2,3-дигидробензо-1,4-диоксинил (т.е.

Понятно, что конкретные кольца и кольцевые системы, подходящие для использования в настоящем изобретении, не ограничиваются перечисленными в предыдущих абзацах. Эти кольца и кольцевые системы просто являются характерными. Если в конкретном контексте специально не указано иное, любые из различных циклических колец и кольцевых систем, описанные в настоящем документе, могут быть присоединены к остатку соединения по любому атому кольца (т.е. по любому атому углерода или любому гетероатому) при том условии, что присоединение химически возможно и приводит к стабильному соединению.

Если специально не указано или не описано иное, переменная, изображенная в структурной формуле со свободной связью, присоединенной к кольцу, такая как R⁹ в формуле I, может представлять собой заместитель (в качестве альтернативы R⁹ может представлять собой -Н) на любом доступном атоме углерода или азота в кольце, к которому эта переменная присоединена.

Когда в формуле I или любом ее варианте группа указана как необязательно замещенная, это оз

- 8 031476 начает, что формула I или ее вариант охватывает как соединения, в которых эта группа замещена указанным заместителем (или заместителями), так и соединения, в которых эта группа не содержит указанного заместителя (или заместителей) (т.е. группа является незамещенной). В качестве одного примера, когда представляет собой -С1-С₆-алкильную группу, которая может быть необязательно замещена галогеном, тогда R⁴ может представлять собой -С1-С₆-алкил или -Cl-C₆-галогеналкил.

Когда какая-нибудь переменная (например, R⁷, R^X, R^Y) встречается более чем один раз в любой составляющей, или в формуле I, или в любой другой формуле, изображающей и описывающей соединения по настоящему изобретению, ее определение в каждом случае не зависит от ее определения в каждом другом случае. Кроме того, комбинации заместителей и/или переменных допустимы только тогда, когда такие комбинации приводят к получению стабильных соединений.

Если специально не указано иное, замещение указанным заместителем допускается по любому атому кольца (например, циклоалкила, арила или гетероарила) при условии, что такое замещение в кольце химически возможно и приводит к получению стабильного соединения.

Если специально не указано иное, охватываются все интервалы, приведенные в настоящем описании. Например, гетероароматическое кольцо, описанное как содержащее от 1 до 4 гетероатомов, означает, что кольцо может содержать 1, 2, 3 или 4 гетероатома. Кроме того, следует понимать, что любой интервал, приведенный в настоящем описании, включает в свой объем все подинтервалы в пределах этого интервала. Так, например, гетероциклическое кольцо, описанное как содержащее от 1 до 4 гетероатомов, предназначено для включения в качестве своих аспектов гетероциклические кольца, содержащие от 2 до 4 гетероатомов, 3 или 4 гетероатома, от 1 до 3 гетероатомов, 2 или 3 гетероатома, 1 или 2 гетероатома, 1 гетероатом, 2 гетероатома, 3 гетероатома или 4 гетероатома. В качестве другого примера арил или гетероарил, описанные как необязательно замещенные R⁷, где R⁷ представляет собой от 1 до 5 групп заместителей, предназначены для включения в качестве своих аспектов арил или гетероарил, замещенный 1-5 заместителями, 2-5 заместителями, 3-5 заместителями, 4 или 5 заместителями, 5 заместителями, 1-4 заместителями, 2-4 заместителями, 3 или 4 заместителями, 4 заместителями, 1-3 заместителями, 2 или 3 заместителями, 3 заместителями, 1 или 2 заместителями, 2 заместителями и 1 заместителем.

В варианте осуществления изобретения В выражение один или несколько R¹, R², R⁴ или R⁵ выбраны следующим образом включает только один R¹, R², R⁴ или R⁵, как определено в условии, или любую комбинацию более чем одного из R¹, R², R⁴ и/или R⁵, каждый из которых определен как в условии. Например, следующие комбинации переменных могут быть определены как в условии по варианту осуществления изобретения В: R¹ и R²; R¹ и R⁴; R¹ и R⁵; R² и R⁴; R² и R⁵; R⁴ и R⁵; R¹, R² и R⁴; R¹, R² и R⁵; R¹, R⁴и R⁵; R², R⁴ и R⁵ или R¹, R², R⁴ и R⁵.

Как понятно обычному специалисту в данной области техники, некоторые соединения по настоящему изобретению могут существовать в виде таутомеров. Все таутомерные формы этих соединений, как выделенных отдельно, так и в смеси, находятся в пределах объема настоящего изобретения. Например, в тех случаях, когда на гетероароматическом кольцо допустим заместитель -ОН и возможна кетоенольная таутомерия, следует понимать, что заместитель в действительности может присутствовать, полностью или частично, в оксо (=O) форме.

Стабильное соединение представляет собой соединение, которое может быть получено и выделено и структура и свойства которого остаются или могут оставаться, по существу, неизменными в течение периода времени, достаточного, чтобы дать возможность использовать соединение для целей, описанных в настоящем документе (например, для терапевтического или профилактического введения пациенту). Соединения по настоящему изобретению ограничены стабильными соединениями, охватываемыми формулой I и ее вариантами.

Соединения формулы I могут иметь один или несколько хиральных (асимметрических) центров. Настоящее изобретение охватывает все стереоизомерные формы соединений формулы I. Центры асимметрии, которые имеются в соединениях формулы I, могут все, независимо друг от друга, быть в (R)- или (8)-конфигурации. Когда связи с хиральным атомом углерода изображены в структурных формулах по изобретению в виде прямых линий или когда название соединения читается без обозначения для хирального атома углерода хиральностями (R) или (S), следует понимать, что конфигурации (R) или (S) каждого такого хирального атома углерода и, следовательно, каждый энантиомер или диастереомер и их смеси охватываются формулой или названием. В примерах, в которых получали такие стереоизомеры или их смеси, может быть идентифицировано получение конкретных стереоизомеров или их смесей, но это никоим образом не ограничивает включение всех стереоизомеров и их смесей в объем настоящего изобретения.

Изобретение включает все возможные энантиомеры и диастереомеры и смеси двух или более стереоизомеров, например смеси энантиомеров и/или диастереомеров во всех соотношениях. Таким образом, энантиомеры являются объектом изобретения в энантиомерно чистой форме как в виде лево-, так и правовращающих антиподов, в форме рацематов и в форме смесей двух энантиомеров во всех соотношениях. В случае цис/транс-изомерии изобретение включает как цис-форму, так и транс-форму, а также смеси этих форм во всех соотношениях. Получение отдельных стереоизомеров может быть осуществле

- 9 031476 но, если это желательно, путем разделения смеси обычными способами, например с помощью хроматографии или кристаллизацией, с использованием в синтезе стереохимически однородных исходных материалов или путем стереоселективного синтеза. Необязательно, получение производных может быть осуществлено перед разделением стереоизомеров. Разделение смеси стереоизомеров может быть осуществлено на стадии получения промежуточного соединения в процессе синтеза соединения формулы I или оно может быть осуществлено на конечном рацемическом продукте. Абсолютная стереохимия может быть определена с помощью рентгеновской кристаллографии кристаллических продуктов или кристаллических получаемых промежуточных соединений, в случае необходимости, с реагентом, содержащим стереогенный центр известной конфигурации. Альтернативно, абсолютная стереохимия может быть определена с помощью спектроскопического анализа колебательного кругового дихроизма (VCD). Настоящее изобретение включает все такие изомеры, а также соли, сольваты (которые включает гидраты) и сольватированные соли таких рацематов, энантиомеров, диастереомеров и таутомеров и их смеси.

Атомы в соединении формулы I могут быть представлены в своем естественном изотопном количестве или один или несколько атомов могут быть искусственно обогащены конкретным изотопом, имеющим тот же атомный номер, но атомная масса или массовое число отличается от атомной массы или массового числа, преимущественно встречающегося в природе. В настоящее изобретение включены все подходящие изотопные варианты соединения общей формулы I. Например, различные изотопные формы водорода (Н) включают протий (¹Н) и дейтерий (²Н). Протий является преобладающим изотопом водорода в природе. Обогащение дейтерием может давать определенные терапевтические преимущества, такие как увеличение времени полураспада in vivo или снижение требований к дозировке, или может обеспечить соединения, которые могут использоваться в качестве стандарта для определения характеристик биологических образцов. Изотопно обогащенные соединения общей формулы I могут быть получены без излишних экспериментов с помощью обычных методов, хорошо известных специалистам в данной области техники, или способами, аналогичными тем, которые описаны в схемах и примерах, представленных в настоящем описании, с использованием соответствующих изотопно обогащенных реагентов и/или промежуточных соединений.

Соединения могут быть введены в виде фармацевтически приемлемых солей. Термин фармацевтически приемлемая соль относится к соли, которая не является биологически или иным образом нежелательной (например, не является ни токсичной, ни иным образом вредной для ее получателя).

Когда соединения формулы I содержат одну или несколько кислотных или основных групп, изобретение также включает соответствующие фармацевтически приемлемые соли. Так, соединения формулы I, которые содержат кислотные группы (например, -СООН или фенольную группу), могут быть использованы в соответствии с изобретением в виде, например, но этим не ограничиваясь, солей щелочных металлов, солей щелочноземельных металлов или в виде солей аммония. Примеры таких солей включают, но этим не ограничиваются, соли натрия, соли калия, соли кальция, соли магния или соли с аммиаком или органическими аминами, такими как, например, этиламин, этаноламин, триэтаноламин или аминокислоты. Соединения формулы I, которые содержат одну или несколько основных групп, т.е. группы, которые могут быть протонированными, могут быть использованы в соответствии с изобретением в виде их кислотно-аддитивных солей с неорганическими или органическими кислотами, как, например, но не ограничиваясь ими, соли с хлористым водородом, бромистым водородом, фосфорной кислотой, серной кислотой, азотной кислотой, бензолсульфоновой кислотой, метансульфоновой кислотой, птолуолсульфоновой кислотой, нафталиндисульфоновой кислотой, щавелевой кислотой, уксусной кислотой, трифторуксусной кислотой, винной кислотой, молочной кислотой, салициловой кислотой, бензойной кислотой, муравьиной кислотой, пропионовой кислотой, пивалиновой кислотой, диэтилуксусной кислотой, малоновой кислотой, янтарной кислотой, пимелиновой кислотой, фумаровой кислотой, малеиновой кислотой, яблочной кислотой, сульфаминовой кислотой, фенилпропионовой кислотой, глюконовой кислотой, аскорбиновой кислотой, изоникотиновой кислотой, лимонной кислотой, адипиновой кислотой и т.д. Если соединения формулы I содержат в молекуле одновременно кислотные и основные группы, изобретение также включает, помимо указанных солевых форм, внутренние соли или бетаины (цвиттерионы). Соли могут быть получены из соединений формулы I обычными способами, которые известны специалистам в данной области, например путем сочетания с органической или неорганической кислотой или основанием в растворителе или диспергирующем агенте или путем анионного обмена или катионного обмена с другими солями. Настоящее изобретение также включает все соли соединений формулы I, которые вследствие низкой физиологической совместимости непосредственно не являются пригодными для использования в фармацевтических препаратах, но которые могут быть использованы, например, в качестве промежуточных продуктов в химических реакциях или при получении фармацевтически приемлемых соли.

Другим вариантом осуществления по настоящему изобретению является соединение формулы I, где соединение или его соль представлены практически в чистом виде. Как используется в настоящем описании, по существу чистый означает соответственно, что по меньшей мере около 60 мас.%, обычно по меньшей мере около 70 мас.%, предпочтительно по меньшей мере около 80 мас.%, более предпочтительно по меньшей мере около 90 мас.% (например, от примерно 90 до примерно 99 мас.%), еще более пред- 10 031476 почтительно по меньшей мере около 95 мас.% (например, от примерно 95 до примерно 99 мас.% или от примерно 98 до 100 мас.%) и наиболее предпочтительно по меньшей мере около 99 мас.% (например, 100 мас.%) продукта, содержащего соединение формулы I или его соль (например, продукт, выделенный из реакционной смеси при получении соединения или соли), состоит из соединения или соли.

Степень чистоты соединения и соли может быть определена с помощью стандартного метода анализа, такого как тонкослойная хроматография, гель-электрофорез, высокоэффективная жидкостная хроматография и/или масс-спектрометрия. Если используется более чем один метод анализа и способы обеспечивают экспериментально существенные различия в степени определяемой чистоты, тогда преимуществом обладает способ, который обеспечивает наиболее высокую степень чистоты. Соединение или соль 100%-ной чистоты являются такими, которые не содержат обнаруживаемых примесей, как определено с помощью стандартного метода анализа. Что касается соединения по изобретению, которое имеет один или несколько асимметрических центров и может встречаться в виде смесей стереоизомеров, по существу чистое соединение может быть либо по существу чистой смесью стереоизомеров, либо по существу чистым отдельным диастереомером или энантиомером.

Кроме того, соединения по настоящему изобретению могут существовать в аморфной форме и/или в виде одной или более кристаллических форм, и как таковые все аморфные и кристаллические формы и их смеси соединений формулы I включены в объем настоящего изобретения. Кроме того, некоторые соединения по настоящему изобретению могут образовывать сольваты с водой (т.е. гидраты) или с обычными органическими растворителями. Такие сольваты и гидраты, в частности фармацевтически приемлемые сольваты и гидраты данного соединения, аналогичным образом входят в объем настоящего изобретения вместе с несольватированными и безводными формами.

Понятно, что соединение формулы I (или любой его вариант и их фармацевтически приемлемые соли), где, например, R¹ представляет собой -Н, -C(O)R⁶, -C(G)OR⁶, -C(O)N(R⁶)2 или пролекарственную модификацию в виде моно-, ди- или трифосфата, может быть преобразовано внутриклеточно/in vivo с помощью одного или нескольких механизмов (например, фермент-катализируемых химических реакций) в соответствующий нуклеозид 5'-трифосфат (т.е. где R¹ означает -P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(0)(OH)2). Не желая быть связанными с какой-либо конкретной теорией, обычно понимается, что нуклеозид 5'-трифосфат ответственен за ингибирование фермента RT ВИЧ и за проявление противовирусной активности после введения пациенту соединения формулы I.

Соответственно, в настоящем описании рассматриваются пролекарства соединений по изобретению. Обсуждение пролекарств представлено в обзорах Т. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987), 14 of the A.C.S. Symposium Series и Bioreversible Carriers in Drug Design (1987), Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association and Pergamon Press.

Термин пролекарство в настоящем описании означает соединение (например, предшественник лекарственного средства), которое может быть в виде фармацевтически приемлемой соли, трансформирующейся внутриклеточно/in vivo в производное 4'-замещенного нуклеозида, которое является ингибитором обратной транскриптазы ВИЧ. Нуклеозид-5'-трифосфат представляет собой пример производного 4'-замещенного нуклеозида. Трансформация in vivo может происходить различными механизмами, например путем катализируемой ферментом химической реакцией, метаболической химической реакцией и/или спонтанной химической реакцией (например, сольволизом), такими как, например, в результате гидролиза в крови. Настоящее изобретение охватывает пролекарства, которые преобразуются путем внутриклеточной/in vivo конверсии в производное 4'-замещенного нуклеозида соединения формулы I, которое является ингибитором обратной транскриптазы ВИЧ. Например, производные 4'-замещенных нуклеозидов формулы I включают, но этим не ограничиваются, соединения формулы I, где:

a) R¹ представляет собой -P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)₂;

b) R¹ представляет собой -P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)₂ и R² представляет собой -Н; и/или

c) R¹ представляет собой -P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2, R² представляет собой -Н, R⁴ представляет собой -NH2 и R⁵ представляет собой -Н или -NH₂.

Пролекарства соединений формулы I могут проявлять повышенную растворимость, абсорбцию и/или липофильность по сравнению с соединениями как таковыми, таким образом приводя к повышению биологической доступности и эффективности. Когда соединение содержит, например, гидроксигруппу, то пролекарство может быть производным по гидроксигруппе, таким как сложный эфир (-OC(O)R), сложный эфир угольной кислоты (-GC(G)OR), сложный эфир фосфорной кислоты (-O-P(=O)(OH)₂), простой эфир (-OR) или монофосфатное пролекарство, такое как фосфорамидат (могут быть преобразованы in vivo в соответствующий нуклеозид-монофосфат).

Например, если соединение формулы I содержит спиртовую функциональную группу, пролекарство может быть образовано путем замены одного или нескольких атомов водорода спиртовых групп на такую группу, как, например, (C1-C₆)алканоилоксиметил, 1-((Cl-C₆)алканоилокси)этил, 1 -метил- 1-((C₁ -C₆)алканоилокси)этил, (C₁ -С₆)алкоксикарбонилоксиметил, N-(C₁ Ю^алкоксикарбониламинометил, сукциноил, (C^Cs^^^^, α-амино(C₁-C₄)алкил, α-амино(C₁-C₄)алкиленарил, арилацил и α-аминоацил или α-аминоацил-а-аминоацил, где каждая α-аминоацильная группа независимо выбрана

- 11 031476 из природных L-аминокислот, или гликозил (радикал, полученный в результате удаления гидроксильной группы у полуацетальной формы карбогидрата).

Термин пролекарственная модификация моно-, ди- или трифосфата, как он используется в настоящем описании, включает, но этим не ограничивается:

5'-спиртовые производные пролекарства, такие как -Р(O)(-O-Cl-C₆-алкил)2; -P(O)(-NH-(aаминоацил группа))(-О-арил), известные как пролекарства типа McGuigan; -Р(O)(-O-(C₁-C₆-алкилен)-Sацил)(-М 1-арилалкил);

пролекарства 8-ацил-2-тиоэтил (SATE);

циклические эфиры фосфорной кислоты, которые образуют мостик между двумя гидроксильными группами рибозы, такими как:

основание

где циклические эфиры фосфорной кислоты образуют мостик между 3'-ОН группой и 5'-ОН группами; и такие, которые описаны в патенте США № 7879815; международных публикациях № WO 2005/003047, WO 2008/082602, WO 2010/0081628, WO 2010/075517 и WO 2010/075549; Mehellou, Chem. Med. Chem., 5:1841-1842 (2005); Bobeck et al., Antiviral Therapy 15:935-950 (2010); Furman et al., Future Medicinal Chemistry, 1:1429-1452 (2009) и Erion, Microsomes and Drug Oxidations, Proceedings of the International Symposium, 17th, Saratoga Springs, NY, United States, July 6-10, 2008, 7-12 (2008).

Если 4'-замещенное производное включает аминофункциональную группу, пролекарство может быть образовано путем замены атома водорода в аминогруппе на такую группу, как, например, R-карбонил-, RO-карбонил-, NRR'-карбонил-, где R и R', каждый независимо, представляют собой (С₁-С₁₀)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил, бензил, природный α-аминоацил, -C(OH)C(O)OY¹, где Y¹ представляет собой Н, (С1-С6)алкил или бензил, -C(OY²)Y³, где Y² представляет собой (С1-С₄)алкил и Y³ представляет собой (С₁-С₆)алкил; карбокси(С₁-С₆)алкил; амино(С₁-С₄)алкил или моно-N- или ди-\,\-(С_гС₆)алкила\1ино алкил; -C(Y⁴)Y⁵, где Y⁴ представляет собой Н или метил и Y⁵ представляет собой моно-N- или ди^^ДЦ-С^алкиламиноморфолино; пиперидин-1-ил или пирролидин-1-ил и т.п.

Фармацевтически приемлемые сложные эфиры настоящих соединений включают следующие груп пы:

(1) сложные эфиры карбоновой кислоты, полученные этерификацией гидроксигруппы гидроксильного соединения, в котором некарбонильная группа части карбоновой кислоты сложноэфирной группы выбрана из алкила с прямой или разветвленной цепью (например, метил, этил, н-пропил, изопропил, трет-бутил, втор-бутил или н-бутил), алкоксиалкил (например, метоксиметил), арил (например, бензил), арилоксиалкил (например, феноксиметил), арил (например, фенил, необязательно замещенный, например, галогеном, С_1-4алкилом, Ю-(С_1-4алкил) или амино);

(2) сульфонатные сложные эфиры, такие как алкил- или аралкилсульфонил (например, метансульфонил);

(3) сложные эфиры аминокислот (например, L-валил или L-изолейцил);

(4) сложные эфиры фосфорной кислоты и (5) моно-, ди- или трифосфатные сложные эфиры.

Фосфатные сложные эфиры могут быть далее этерифицированы, например, С_1-20спиртом или их реакционноспособным производным или 2,3-ди(С_6-24)ацилглицерином.

Если 4'-замещенное производное дезоксирибозы содержит функциональную группу карбоновой кислоты, пролекарство может включать сложный эфир, образованный в результате замены атома водорода кислотной группы такой группой, как, например, (С₁-С₈)алкил, (С₂-С₁₂)алканоилоксиметил, 1-(алканоилокси)этил, содержащий от 4 до 9 атомов углерода, 1-метил-1-(алканоилокси)этил, содержащий от 5 до 10 атомов углерода, алкоксикарбонилоксиметил, содержащий от 3 до 6 атомов углерода, 1-(алкоксикарбонилокси)этил, содержащий от 4 до 7 атомов углерода, 1-метил-1-(алкоксикарбонилокси)этил, содержащий от 5 до 8 атомов углерода, ^(алкоксикарбонилЦминометил, содержащий от 3 до 9 атомов углерода, Е^ДалкоксикарбонилЦминоЦтил, содержащий от 4 до 10 атомов углерода, 3-фталидил, 4-кротонолактонил, у-бутиролактон-4-ил, ди^^ДЦ-СДалкиламиноЩ^СДалкил (такой как β-диметиламиноэтил), карбамоил(С₁-С₂) алкил, Н^ди^-СДалкилкарбамоил^-СДалкил и пиперидино-, пирролидино- или морфолино(С₂-С₃)алкил и т.п.

Другие примеры включают следующие: когда соединение формулы I содержит группу карбоновой кислоты, пролекарство может представлять собой сложный эфир или амид, и, когда соединение формулы I содержит первичную аминогруппу или другой подходящий азот, который может быть подвергнут преобразованию, пролекарство может представлять собой амид, карбамат, мочевину, имин или основание Манниха. Обычные методы выбора и получения подходящих производных пролекарств описаны, например, в работах Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard, Elsevier, 1985; J.J. Hale et al., J. Med.

- 12 031476

Chem. 2000, vol. 43, p. 1234-1241; C.S. Larsen and J. Ostergaard, Design and application of prodrugs in: Textbook of Drug Design and Discovery, 3^rd edition, edited by C. S. Larsen, 2002, p. 410-458 и Beaumont et al., Current Drug Metabolism 2003, vol. 4, p. 461-458; раскрытие каждой из которых во всей своей полноте включено в настоящий документ в качестве ссылки.

Соответственно, соединения в объеме общих структурных формул, варианты и конкретные соединения, описанные и заявленные в настоящем описании, охватывают соли, все возможные стереоизомеры и таутомеры, физические формы (например, аморфные и кристаллические формы), формы их сольватов и гидратов и любое сочетание этих форм, а также их соли, их пролекарственные формы, которые включают любую комбинацию стереоизомерных, таутомерных, сольватных, гидратных, солевых и/или физических форм указанных пролекарств, где такие формы возможны, если не указано иное.

Изобретение охватывает также способы лечения или профилактики инфицирования ВИЧ, ингибирования обратной транскриптазы ВИЧ, лечения, профилактики или задержки начала развития СПИДа у пациента, нуждающегося в этом, которые включают введение пациенту эффективного количества соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение охватывает также соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль для использования при получении лекарственного соединения для лечения или профилактики заражения ВИЧ, для ингибирования обратной транскриптазы ВИЧ или лечения, профилактики или задержки начала развития СПИДа у пациента, нуждающегося в этом.

Изобретение охватывает также фармацевтическую композицию, содержащую эффективное количество соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый носитель и дополнительно содержащую эффективное количество дополнительного анти-ВИЧ средства, выбранного из группы, включающей противовирусные агенты против ВИЧ, иммуномодуляторы и антибактериальные средства. В этом варианте осуществления изобретения анти-ВИЧ средство представляет собой противовирусный агент, выбранный из группы, включающей ингибиторы протеазы ВИЧ, ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ, ингибиторы интегразы ВИЧ, ингибиторы слияния ВИЧ, ингибиторы проникновения ВИЧ и ингибиторы созревания ВИЧ.

Соединения формул Ia, II, III, IV или V, каждое, образуют подгруппу соединений, включенных в формулу I. Описание выше или описание, которое следует далее, относится к соединению формулы I, также применимо к соединению каждой из формул Ia, II, III, IV или V и каждому из их вариантов.

Другие варианты осуществления настоящего изобретения включают следующие.

(a) Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения формулы I, как определено выше, или его пролекарство или фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.

(b) Фармацевтическая композиция, которая содержит продукт, полученный объединением (например, смешиванием) эффективного количества соединения формулы I, как определено выше, или его пролекарства или фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемого носителя.

(c) Фармацевтическая композиция по (а) или (b), дополнительно содержащая эффективное количество одного или нескольких анти-ВИЧ средств, выбранных из группы, включающей противовирусные агенты против ВИЧ, иммуномодуляторы и антибактериальное средства.

(d) Фармацевтическая композиция по (с), где анти-ВИЧ средство выбрано из одного или нескольких противовирусных средств, выбранных из группы, включающей ингибиторы протеазы ВИЧ, нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ, ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ, ингибиторы интегразы ВИЧ, ингибиторы слияния ВИЧ, ингибиторы проникновения ВИЧ и ингибиторы созревания ВИЧ.

(e) Комбинация, которая представляет собой (i) соединение формулы I, как определено выше, или его пролекарство или фармацевтически приемлемую соль и (ii) анти-ВИЧ средство, выбранное из группы, включающей противовирусные агенты против ВИЧ, иммуномодуляторы и антибактериальное средства; где соединение и анти-ВИЧ средство, каждое, используются в таком количестве, которое делает сочетание эффективным для ингибирования обратной транскриптазы ВИЧ, для лечения или профилактики заражения ВИЧ или для лечения, профилактики или задержки начала или прогрессирования развития СПИДа.

(f) Комбинация по (е), где анти-ВИЧ средство представляет собой противовирусное средство, выбранное из группы, включающей ингибиторы протеазы ВИЧ, нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ, ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ, ингибиторы интегразы ВИЧ, ингибиторы слияния ВИЧ, ингибиторы проникновения ВИЧ и ингибиторы созревания ВИЧ.

(g) Способ ингибирования обратной транскриптазы ВИЧ у пациента, нуждающегося в этом, который включает введение пациенту эффективного количества соединения формулы I или его пролекарства или фармацевтически приемлемой соли.

(h) Способ профилактики или лечения инфицирования ВИЧ (например, ВИЧ-1) у пациента, нуждающегося в этом, который включает введение пациенту эффективного количества соединения формулы I или его пролекарства или фармацевтически приемлемой соли.

(i) Способ по (h), где соединение формулы I вводят в комбинации с эффективным количеством по

- 13 031476 меньшей мере одного другого противовирусного агента против ВИЧ, выбранного из группы, включающей ингибиторы протеазы ВИЧ, ингибиторы интегразы ВИЧ, ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ, нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ, ингибиторы слияния ВИЧ, ингибиторы проникновения ВИЧ и ингибиторы созревания ВИЧ.

(j) Способ профилактики, лечения или задержки начала развития или прогрессирования СПИДа у пациента, нуждающегося в этом, который включает введение пациенту эффективного количества соединения формулы I или его пролекарства или фармацевтически приемлемой соли.

(k) Способ по (j), где соединение вводят в комбинации с эффективным количеством по меньшей мере одного другого противовирусного агента против ВИЧ, выбранного из группы, включающей ингибиторы протеазы ВИЧ, ингибиторы интегразы ВИЧ, ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ, нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ, ингибиторы слияния ВИЧ, ингибиторы проникновения ВИЧ и ингибиторы созревания ВИЧ.

(l) Способ ингибирования обратной транскриптазы ВИЧ у пациента, нуждающегося в этом, которое включает введение пациенту фармацевтической композиции по (а)-(с) или (d) или комбинации (е) или (f).

(m) Способ профилактики или лечения инфицирования ВИЧ (например, ВИЧ-1) у пациента, нуждающегося в этом, который включает введение пациенту фармацевтической композиции (а)-(с) или (d) или комбинации (е) или (f).

(n) Способ профилактики, лечения или задержки начала развития или прогрессирования СПИДа у пациента, нуждающегося в этом, который включает введение пациенту фармацевтической композиции по (а)-(с) или (d) или комбинации по (е) или (f).

Настоящее изобретение включает также соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль для (i) применения, (ii) применения в качестве лекарственного средства или (iii) применения при получении лекарственного соединения (а) в терапии (например, организма человека), (b) в медицине, (с) для ингибировании обратной транскриптазы ВИЧ, (d) в лечении или профилактике заражения ВИЧ или (е) в лечении, профилактике или задержке начала развития или прогрессирования СПИДа. При указанных применениях соединения по настоящему изобретению, необязательно, могут быть использованы в комбинации с одним или несколькими анти-ВИЧ средствами, выбранными из противовирусных агентов против ВИЧ, антибактериальных средств и иммуномодуляторов.

Дополнительные варианты осуществления изобретения включают фармацевтические композиции, комбинации и способы, указанные в (а)-(ц) выше, и применения от (i) (а)-(е) до (iii) (а)-(е), указанные в предшествующем параграфе, где соединение по настоящему изобретению, используемое в настоящем описании, представляет собой соединение по одному из вариантов осуществления изобретения, аспектов, классов, подклассов или признаков, описанных выше. Во всех указанных вариантах и т.д. соединение, необязательно, может быть использовано в виде пролекарства или фармацевтически приемлемой соли или фармацевтически приемлемой соли пролекарства.

Дополнительные варианты осуществления настоящего изобретения включают каждую из фармацевтических композиций, комбинаций, способов и применений, представленных в предшествующих параграфах, где соединение по настоящему изобретению или его соль, используемые в настоящем описании, являются по существу чистыми. Что касается фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или его пролекарство или соль и фармацевтически приемлемый носитель и, необязательно, одно или несколько вспомогательных веществ, то следует понимать, что термин по существу чистый используется в отношении соединения формулы I или его пролекарства и/или соли как таковых.

Еще следующие варианты осуществления настоящего изобретения включают фармацевтические композиции, комбинации и способы, указанные в (а)-(и), выше, и применения от (i) (а)-(е) до (iii) (а)-(е), указанные выше, где интересующим ВИЧ является ВИЧ-1. Так, например, в фармацевтической композиции (d) соединение формулы I используется в количестве, эффективном против ВИЧ-1, и анти-ВИЧ средством является ВИЧ-1 противовирусное средство, выбранное из группы, включающей ингибиторы протеазы ВИЧ-1, ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ-1, ингибиторы интегразы ВИЧ-1, ингибиторы слияния ВИЧ-1 и ингибиторы проникновения ВИЧ-1. Соединения формулы I могут быть также полезными средствами против ВИЧ-2.

Термин введение и его варианты (например, введение соединения) в отношении соединения формулы I означает обеспечение соединением индивида при необходимости лечения или профилактики и включает как самостоятельный прием, так и введение пациенту иной персоной. Когда соединение или его пролекарство предоставляется в комбинации с одним или несколькими другими активными агентами (например, противовирусными средствами, используемыми для лечения или профилактики ВИЧ инфекции или СПИДа), введение и его варианты, каждое, следует понимать как включающие обеспечение соединением или пролекарством и другими агентам в одно и то же время или в разное время. Когда агенты комбинации вводят в одно и то же время, их можно вводить вместе в одной композиции, или они могут быть введены по отдельности.

- 14 031476

Используемый в данном описании термин композиция включает продукт, содержащий определенные ингредиенты, а также любой продукт, который возникает в результате сочетания указанных ингредиентов. Ингредиентами, подходящими для включения в фармацевтическую композицию, являются фармацевтически приемлемые ингредиенты, это означает, что ингредиенты должны быть совместимы друг с другом и не должны быть вредными для их получателя. Термин фармацевтически приемлемый означает, что компоненты фармацевтической композиции должны быть совместимы друг с другом и не должны быть вредны для их получателя.

Термин пациент, как он используется в настоящем описании, относится к животному, предпочтительно млекопитающему, наиболее предпочтительно человеку, являющемуся объектом лечения, наблюдения или эксперимента.

Термин эффективное количество, как он используется в настоящем описании, означает количество, достаточное для ингибирования ВИЧ обратной транскриптазы, ингибирования репликации ВИЧ, оказания профилактическое действия и/или оказания терапевтического эффекта после введения. Одним из вариантов эффективного количества является терапевтически эффективное количество, которое представляет собой количество соединения, являющееся эффективным для ингибирования обратной транскриптазы ВИЧ, ингибирования репликации ВИЧ (любое из вышеперечисленного также может указываться в настоящем описании как эффективное ингибирующее количество), лечения ВИЧ-инфекции, лечения СПИДа, задержки начала развития СПИДа и/или замедление прогрессирования СПИДа у пациента.

Другим вариантом эффективного количества является профилактически эффективное количество, которое представляет собой количество соединения, являющееся эффективным для профилактики инфицирования ВИЧ или профилактики СПИДа у пациента. Понятно, что эффективное количество одновременно может являться как терапевтически эффективным количеством, например, для лечения ВИЧ инфекции, так и профилактически эффективным количеством, например, для предупреждения или снижения риска развития СПИДа. Когда соединение формулы I вводят в виде соли, ссылка на количество соединения относится к свободной форме соединения (т.е. несолевой форме).

В способе по настоящему изобретению (т.е. ингибирование обратной транскриптазы ВИЧ, лечение или профилактика ВИЧ инфекции, ингибирование репликации ВИЧ, лечение или профилактика СПИДа, задержка начала развития СПИДа или задержка или замедление прогрессирования развития СПИДа) соединения по настоящему изобретению, необязательно, в виде соли, могут быть введены методом, который обеспечивает контакт активного агента с местом воздействия агента. Они могут быть введены с помощью обычных средств, доступных для использования в сочетании с фармацевтическими препаратами, либо в виде отдельных терапевтических агентов, либо в комбинации терапевтических агентов. Их можно вводить отдельно, но обычно вводят с фармацевтическим носителем, выбранным на основании подобранного пути введения и стандартной фармацевтической практики. Соединения по изобретению могут быть введены, например, перорально, парентерально (включая подкожные инъекции, внутривенные, внутримышечные инъекции или инфузии), ингаляцией или ректально, в виде единичной дозированной формы фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения и обычные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества и наполнители, где любой из способов введения может быть представлен как разовая доза, один раз в день или реже, например, один раз в неделю или один раз в месяц, например, но не ограничиваясь этим, в диапазоне дозировок и количествах, описанных ниже. Жидкие препараты, подходящие для перорального введения (например, суспензии, сиропы, эликсиры и тому подобное), могут быть приготовлены в соответствии с методиками, известными в данной области техники, и можно использовать любой из обычных носителей, таких как вода, гликоли, масла, спирты и т.п. Твердые препараты, подходящие для перорального введения (например, порошки, таблетки, капсулы и таблетки), могут быть изготовлены в соответствии с методами, известными в данной области, и могут использоваться такие твердые наполнители, как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и тому подобное. Парентеральные композиции могут быть получены в соответствии с методами, известными в данной области техники, и в качестве носителя обычно используют стерильную воду и, возможно, другие ингредиенты, такие как агенты, улучшающие растворимость. Инъекционные растворы могут быть приготовлены в соответствии со способами, известными в данной области, где носитель включает физиологический раствор, раствор глюкозы или раствор, содержащий смесь физиологического раствора и глюкозы. Более подробное описание методов, пригодных для использования при приготовлении фармацевтических композиций для использования в настоящем изобретении, а также ингредиентов, подходящих для использования в указанных композициях, представлено в работах Remington's Pharmaceutical Sciences, 18^th edition, edited by A.R. Gennaro, Mack Publishing Co., 1990 и Remington - The Science and Practice of Pharmacy, 22^ndEdition, published by Pharmaceutical Press and Philadelphia College of Pharmacy at University of the Sciences, 2012, ISBN 978 0 85711-062-6 и предыдущие выпуски.

Препараты соединений, описываемых формулой I, которые приводят к перенасыщению лекарственным средством и/или быстрому растворению, могут быть использованы для облегчения пероральной абсорбции лекарственного средства. Рецептурные подходы, вызывающие перенасыщение лекарственным

- 15 031476 средством и/или быстрое растворение, включают, но не ограничиваются ими, системы наночастиц, аморфные системы, твердые растворы, твердые дисперсии и липидные системы. Такие рецептурные подходы и методы их получения хорошо известны в данной области техники. Например, твердые дисперсии могут быть получены с использованием вспомогательных веществ и процессов, как описано в обзорах (например, А.Т.М. Serajuddin, J. Pharm Sci., 88:10, p. 1058-1066 (1999)). Системы наночастиц как на основе истирания, так и прямого синтеза, также были описаны в обзорах, таких как Wu et al. (F. Kesisoglou, S. Panmai, Y. Wu, Advanced Drug Delivery Reviews, 59:7, p. 631-644 (2007)).

Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли являются ингибиторами обратной транскриптазы ВИЧ. Соединения могут быть использованы для ингибирования обратной транскриптазы ВИЧ и для ингибирования репликации ВИЧ in vitro и in vivo. Более конкретно, соединения формулы I ингибируют функцию полимеразы обратной транскриптазы ВИЧ-1. Исследование соединений по примерам по изобретению в анализе, описанном в RT полимеразном анализе далее, иллюстрирует способность соединения по изобретению ингибировать активность РНК-зависимой ДНК-полимеразы обратной транскриптазы ВИЧ-1. Соединения формулы I также могут быть полезными агентами против ВИЧ-2.

Соединения формулы I могут быть введены в диапазоне доз от 0,001 до 1000 мг/кг массы тела млекопитающего (например, человека) в день или в других временных интервалах, в зависимости от обстоятельств, в виде разовой дозы или в раздельных дозах. Одним примером диапазона доз является от 0,01 до 500 мг/кг массы тела в день или в других временных интервалах, в зависимости от обстоятельств, вводимые перорально или другими путями введения одной дозой или в виде раздельных доз. Другим примером диапазона доз является от 0,1 до 100 мг/кг массы тела в день или в других временных интервалах, в зависимости от обстоятельств, вводимые перорально или другими путями введения одной дозой или в виде раздельных доз. Для перорального (например, таблетки или капсулы) или других путей введения композиции могут содержать от 1,0 до 500 мг активного ингредиента, в частности 1, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 400 и 500 мг активного ингредиента для симптоматического подбора дозы пациенту, который проходит лечение. Уровень конкретной дозы и частота дозирования для конкретного пациента могут меняться и будут зависеть от различных факторов, включая активность конкретного используемого соединения, метаболическую стабильность и продолжительность действия этого соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, питание, режим и время введения, скорость выведения, комбинацию лекарственных средств, тяжесть конкретного состояния и хозяина, проходящего курс лечения. В некоторых случаях, в зависимости от эффективности соединения или индивидуальной реакции, может возникнуть необходимость отклониться вверх или вниз от заданной дозы. Соединения по изобретению могут быть введены в виде разовой дозы, один раз в день или реже, один раз в неделю или один раз в месяц, например, но не ограничиваясь этим, в диапазоне доз и в количестве, указанных выше. Кроме того, соединение может быть в составе препарата для немедленного или модифицированного высвобождения, такого как пролонгированного или контролируемого высвобождения.

Как указано выше, настоящее изобретение относится также к применению соединения формулы I с одним или несколькими анти-ВИЧ средствами. Анти-ВИЧ средство представляет собой агент, который является напрямую или опосредованно эффективным для ингибирования ВИЧ, лечения или профилактики ВИЧ инфекции и/или лечения, профилактики или задержки начала развития или прогрессирования СПИДа. Понятно, что анти-ВИЧ средство является эффективным при лечении, предупреждении или задержке начала развития или прогрессирования ВИЧ инфекции или СПИДа и/или вызванных ими или связанных с ними заболеваний или состояний. Например, соединения по настоящему изобретению могут быть эффективно введены либо в период перед контактом и/или после облучения в сочетании с эффективными количествами одного или нескольких анти-ВИЧ агентов, выбранных из противовирусных агентов против ВИЧ, иммуномодуляторов, противомикробных средств или вакцин, используемых при лечении ВИЧ-инфекции или СПИДа. Подходящие противовирусные средства против ВИЧ для применения в комбинации с соединениями по настоящему изобретению включают, например, следующие, которые перечислены в табл. 1.

- 16 031476

Таблица 1 Противовирусные агенты для лечения ВИЧ инфекции или СПИДа

Название	Тип
абакавир, ABC, Ziagen®	nRTI
абакавир +ламувидин, Epzicom®	nRTI
абакавир+ламувидин+зидовудин, Trizivir®	nRTI
ампренавир, Agenerase®	PI
атазанавир, Reyataz®	PI
AZT, зидовудин, азидотимидин, Retrovir®	nRTI
каправирин	nnRTI
дарунавир, Prezista®	PI
DDC, зальцитабин, дидезоксицитидин, Hivid®	nRTI
DDI, диданозин, дидезоксиинозин, Videx®	nRTI
DDI (с энтеросолюбильным покрытием), Videx ЕС®	nRTI
делавирдин, DLV, Rescriptor®	nnRTI
долутегравир, Tivicay®	Ini
доравирин, МК-1439	nnRTI
эфавиренц, EFV, Sustiva®, Stocrin®	nnRTI
эфавиренц+эмтрицитабин+тенофовир DF, Atripla®	nnRTI+nRTI
EFdA (4'-этинил-2-фтор-2’-дезоксиаденозин)	nRTI
элвитегравир	Ini
эмтрицитабин, FTC, Emtriva®	nRTI
эмтрицитабин+тенофовир DF, Truvada®	nRTI
эмивирин, Coactinon®	nnRTI
энфувиртид, Fuzeon®	FI
энтеросолюбильно покрытый диданозин, Videx	nRTI

- 17 031476

ЕС®
этравирин, ТМС-125	nnRTI
фозампренавир кальций, Lexiva®	PI
индинавир, Crixivan®	PI
ламувидин, ЗТС, Epivir®	nRTI
ламувидинтзидовудин, Combivir®	nRTI
лопинавир	PI
лопинавир+ритонавир, Kaletra®	PI
маравирок, Selzentry®	EI
нелфинавир, Viracept®	PI
невирапин, NVP, Viramune®	nnRTI
PPL-100 (известный также как PL-462) (Амбрилиа)	PI
ралтегравир, МК-0518, IsentressO	Ini
рилпивирин	nnRTI
ритонавир, Norvir®	PI
саквинавир, Invirase®, Fortovase®	PI
ставудин, d4T, дидегидродезокситимидин, Zerit®	nRTI
тенофовир DF (0Е=дизопроксил фумарат), TDF, Viread®	nRTI
тенофовир, гексадецилоксипропил (СМХ-157)	nRTI
тенофовир алафенамид фумарат (GS-7340)	nRTI
типранавир, Aptivus®	PI
викривирок	EI

В таблице обозначено: EI = ингибитор проникновения; FI = ингибитор слияния; InI = ингибитор интегразы; PI = ингибитор протеазы; nRTI = нуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы; nnRTI = ненуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы.

Некоторые из лекарственных средств, перечисленных в таблице, используются в солевой форме, например абакавир сульфат, делавирдин мезилат, индинавир сульфат, атазанавир сульфат, нелфинавир мезилат, саквинавир мезилат.

Понятно, что объем комбинаций соединений по настоящему изобретению с анти-ВИЧ средствами не ограничивается противовирусными средствами против ВИЧ, перечисленными в табл. А, но по сути дела включает любую комбинацию с любой фармацевтической композицией, которая может использоваться для лечения или профилактики СПИДа. Противовирусные агенты против ВИЧ и другие агенты, как правило, могут быть использованы в этих в этих комбинациях в обычных диапазонах доз и режимах, как это было сообщено в данной области, в том числе, например, в дозах, описанных в Physicians' Desk Reference, Thomson PDR, Thomson PDR, 57^th edition (2003), 58^th edition (2004) или 59^th edition (2005) и в текущих Physicians' Desk Reference (68^th ed.). (2014), Montvale, NJ: PDR Network. Диапазоны доз соединения по изобретению в указанных комбинациях могут быть такими же, как указано выше.

Соединения по настоящему изобретению также могут быть использованы при получении и выполнении скрининговых исследований на противовирусные соединения. Например, соединения по настоящему изобретению могут быть использованы при выделении ферментов-мутантов, которые являются превосходными инструментами скрининга на более мощные противовирусные соединения. Кроме того, соединения по настоящему изобретению могут быть использованы при установлении или определении места связывания других противовирусных средств с обратной транскриптазой ВИЧ, например, путем конкурентного ингибирования.

- 18 031476

Используемые в настоящем описании сокращения и аббревиатуры включают следующие:

АСЫ=ацетонитрил	водн.=водный
АсОН=уксусная кислота	А1ВЫ=азобисизобутиронитрил
CHAPS=3-((3- холамидопропил)диметиламмонио) -1-пропансульфонат	м-СРВА=3-хлорпербензойная кислота
Ме=метил
СЗН=гибрид с заряженной поверхностью	МеОН=метанол

DAS Т=трифторид (диэтиламино)серы	Ме-ТГФ=2-метилтетрагидрофуран
DCE=1,2-дихлорэтан	мин=минута
DCM=дихлорме тан	МГц=мегагерцы
ОЕАР=диэтил азодикарбоксилат	мл=миллилитр
DIBAL- Н=диизобутилалюминийгидрид	моль=моли
01РЕА=диизопропилэтиламин	ММОЛЬ=МИЛЛИМОли
ДМФ=М, N-диметилформамид	ЫаН=гидрид натрия
Перйодинат Десса- Мартина=1,1,1-триацетокси-1, 1дигидро-1,2-бензйодоксол3(1Н)-он	NBS=N- бромсукцинимид
NIS-N-йодсукцинимид
DMAP=4-диме тиламинопиридин	ЫНЗ=нормальная сыворотка человека
ДМСО=диметилсульфоксид	ЙМР=Л/-метил-2-пирролидинон
ЕОТА=этилендиаминтетрауксусная кислота	ЯМР=ядерный магнитный резонанс
ЕбОАс=этилацетат	ЫТР=нуклеозидтрифосфат
ЕА=этилацетат	dNTP=2'- дезоксинуклеозидтрифосфат
ЕСТА=этиленгликоль тетрауксусная кислота	РВЭ=фосфатно-солевой буфер
ЕбОН=этанол	РЕ, петр. эфир=петролейный эфир
ЕВЭ=фетальная бычья сыворотка	М. д.=миллионные доли
ВИЧ=вирус иммунодефицита человека	PPTS=4-толуолсульфоновая кислота
ВЭЖХ=высокоэффективная жидкостная хроматография	к.т.=комнатная температура
ч=час	ИТ=обратная транскриптаза
час=час	TBAF= фторид тетрабутиламмония
Гц=герцы	б-ВиОН=трет-бутанол
1ВХ=2-йодоксибензойная кислота	ТЕА=триэтиламин

- 19 031476

ЪСАР=процент площади в жидкостной хроматографии	ТГФ=тетрагидрофуран ТФУ=трифторуксусная кислота
ЖХМС или ЖХ-МС=жидкостная хроматография-массспектроскопия	ТСХ=тонкослойная хроматография
Ъ=литр	TBS-С1=трет-бутилдиметилсилил хлорид
ЪРА=диизопропиламид лития	TBDMS-Cl=TpeT- бутилдиметилсилил хлорид
Ъ1НМ03=гексаметилдисилазид лития	ТМЗС1=триметилсилил хлорид

Соединения по изобретению могут быть получены способами, хорошо известными в области органической химии. См., например, J. March, Advanced Organic Chemistry, 6^th Edition, John Wiley and Sons. В процессе осуществления синтетических последовательностей может быть необходимо и/или желательно защитить чувствительные или реакционноспособные группы какой-либо из рассматриваемых молекул. Это достигается с помощью обычных защитных групп, таких как те, которые описаны в T.W. Greene and P.G.M. Wutts Protective Groups in Organic Synthesis, 4^th Edition, John Wiley and Sons. Защитные группы могут быть, необязательно, удалены на удобной последующей стадии с использованием способов, хорошо известных в данной области.

Соединения по настоящему изобретению могут быть легко получены в соответствии со следующими схемами реакций и примерами или их модификациями с использованием легкодоступных исходных материалов, реагентов и обычных методов синтеза. В этих реакциях можно также использовать варианты, которые сами по себе являются известными обычным специалистам в данной области техники, но не указаны более подробно. Кроме того, для обычного специалиста в данной области техники в свете следующих схем реакций и примеров будут очевидны другие способы получения соединения по изобретению. Если не указано иное, все переменные являются такими, как определено выше.

Схема 1

Лактол 1-1 может быть преобразован в 1-2 с использованием раствора HCl в метаноле. Гидроксигруппы промежуточного соединения 1-2 затем могут быть защищены с последующим преобразованием 1'-ОМе в 1'-Cl с использованием газообразного HCl с получением 1-4. Промежуточное соединение 1-4 может быть подвергнуто взаимодействию с различными замещенными гетероциклами 1-5 в присутствии подходящего основания с получением промежуточного соединения 1-6. 6-Хлор в промежуточном соединении 1-6 может быть преобразован в R4, используя подходящий химический синтез с последующем удалением защитных гидроксильных групп с получением промежуточного соединения 1-7. В промежуточное соединение 1-7 могут быть различным образом введены защитные группы с получением 1-8. Окисление 1-8 дает альдегид 1-9, который затем может быть подвергнут альдольной конденсации с формальдегидом с последующим восстановлением получением 1-10. Селективное окисление гидроксигруппы в α-положении с последующим преобразованием альдегида в алкин дает 1-11. Заключительное уда- 20 031476 ление защитных групп в З'-спирте дает целевые соединения 1-13.

Схема 2

Лактон 2-1 может быть обработан анионом различных гетероциклов с получением промежуточных соединений типа 2-2. Промежуточное соединение 2-2 может быть преобразовано в 2-3 обработкой кислотой в присутствии силанов. Удаление защитных групп в 2-3 с последующей различной защитой 3' и 5' гидроксилов дает 2-5. Удаление кислорода у 2-5 дает соединение 2-6, которое затем может быть подвергнуто удалению защитных групп и последующему введению различных групп с получением 2-8. Окисление концевой спиртовой группы с получением 2-9 и последующая альдольная конденсация с формальдегидом и восстановление дает 2-10. Селективное окисление спиртовой группы в α-положении дает альдегид 2-11, которое затем может быть преобразован в ацетилен 2-12. Общее удаление защитных групп дает 2-13.

Промежуточные соединения типа 3-1 (синтезированные с использованием способов по схеме 1) преобразуют в оксимы типа 3-2. Дегидрирование оксима приводит к соединениям 3-3, которые могут быть подвергнуты заключительному удалению защитных групп с получением целевых соединений 3-4.

Схема 4

Х = СНилиЫ

Промежуточные соединения типа 4-1 (синтезированные с использованием способов по схеме 2) преобразуют в оксимы типа 4-2. Дегидрирование оксима приводит к соединениям 4-3, которые могут

- 21 031476 быть подвергнуты заключительному удалению защитных групп с получением целевых соединений 4-4.

Схема 5

НС)' 5-1 НО' ₅₂

Промежуточные соединения типа 5-1 (синтезированные с использованием способов по предшествующим схемам) могут быть преобразованы в трифосфаты 5-2 с использованием способов, известных из литературы.

Схема 6

Промежуточные соединения типа 6-1 (синтезированные с использованием способов вующим схемам) могут быть преобразованы в трифосфаты 6-2 с использованием способов, по предшестизвестных из литературы.

Общие химические методы.

Все реагенты были либо приобретены у обычных коммерческих источников или синтезированы в соответствии с литературными методиками исходя из коммерческих реагентов. Коммерческие реагенты используются без дополнительной очистки. Если не указано иное, проценты представляют собой проценты по массе данного компонента от общей массы композиции, температура указана в °C или является температурой окружающей среды, и давление равно или близко к атмосферному.

¹Н-ЯМР спектр получали на приборе Varian VNMR System 400 (400 МГц) и описывали в м.д. относительно Me₄Si с указанием числа протонов, мультиплетности и констант связывания в герцах, указываемых в скобках. Когда представлены данные ГЖ/МС, то анализ проводили с использованием массспектрометра Agilent 6110А MSD или Applied Biosystems API-100. Исходный ион указывали. Препаративную ВЭЖХ осуществляли на системе препаративной ВЭЖХ Waters, снабженной колонкой Waters Xselect.C18, обычно с использованием градиентного элюирования смесью вода/ацетонитрил, содержащей 0,075% трифторуксусной кислоты. Флэш-хроматографию осуществляли с использованием предварительно расфасованного силикагеля с нормальной фазой фирмы Biotage, Inc. или сыпучего силикагеля фирмы Fisher Scientific. Если не указано иного, колоночную хроматографию осуществляли с использованием градиентного элюирования смесью петролейный эфир/этилацетат, от 100% петролейного эфира до 100% этилацетата. Термин комнатная температура в примерах относится к температуре окружающей среды, которая обычно составляет от примерно 20 до примерно 26°C.

Промежуточное соединение А.

(2R,3 S,5R)-5-Хлор-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоат (промежуточное соединение А)

О о

Промежуточное соединение А

Стадия 1. Синтез (2R,3S)-2-(гидроксиметил)-5-метокситетрагидрофуран-3-ола.

К перемешиваемому раствору (4S,5R)-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2,4-диола (7,0 г, 52,2 ммоль) в безводном метаноле (105 мл) в атмосфере аргона по каплям при перемешивании при температуре 0°C в течение 5 мин добавляли ацетилхлорид (0,614 г, 7,83 ммоль) и полученную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 3 ч. Затем для нейтрализации реакционной смеси добавляли твердый бикарбонат натрия. Органическую фазу собирали путем фильтрации и затем концентрировали при пониженном давлении с получением остатка в виде сиропа. Остаток очищали хроматографией на силикагеле (100-200 меш) с помощью смеси дихлорметан/метанол (20/1) с получением указанного в за головке соединения.

- 22 031476 ¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 4,98-5,04 (м, 1Н), 4,21-4,23 (м, 0,4Н), 4,07-4,09 (м, 0,6Н), 3,83-3,89 (м, 1Н), 3,50-3,66 (м, 2Н), 3,27-3,32 (м, 3Н), 2,23-2,29 (м, 0,6Н), 2,08-2,12 (м, 0,4Н), 1,98-2,03 (м, 0,4Н), 1,77-1,83 (м, 0,6Н).

Стадия 2. Синтез (2Я,38)-5-метокси-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоата.

К перемешиваемому раствору (2Я,38)-2-(гидроксиметил)-5-метокситетрагидрофуран-3-ола (6,5 г, 43,9 ммоль) в сухом пиридине (45 мл) в атмосфере аргона по каплям при температуре 0°C в течение периода 15 мин добавляли 4-метилбензоил хлорид (20,35 г, 132 ммоль). Полученную смесь постепенно нагревали до температуры 30°C и затем перемешивали в течение 16 ч. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток разбавляли этилацетатом (400 мл), и затем промывали водным раствором соляной кислоты (1 моль/л, 2x100 мл), насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2x100 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл) соответственно. Органическую фазу собирали, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на силикагеле (100-200 меш) с помощью смеси петролейный эфир/этилацетат (20:1) с получением указанного в заголовке соединения.

'Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 7,90-7,99 (м, 4Н), 7,20-7,26 (м, 4Н), 5,58-5,61 (м, 0,47Н), 5,39-5,42 (м, 0,55Н), 5,18-5,24 (м, 1Н), 4,46-4,65 (м, 3Н), 3,43 (с, 1,61Н), 3,36 (с, 1,ЗЗН), 2,52-2,60 (м, 1Н), 2,17-2,43 (м, 7Н).

Стадия 3. Синтез (2К,38,5Я)-5-хлор-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоата (промежуточное соединение А).

В перемешиваемый раствор (2Я,38)-5-метокси-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3ил 4-метилбензоата (4,0 г, 10,41 ммоль) в безводном диэтиловом эфире (20 мл) в 100-миллилитровой трехгорлой круглодонной колбе вводили HCl (газ). Продукт постепенно выпадал в осадок в течение периода времени 40 мин при температуре 0°C. Твердый продукт фильтровали и промывали сухим диэтило вым эфиром (3x20 мл), сушили в высоком вакууме в течение 2 ч с получением промежуточного соединения А в виде твердого вещества.

^ХН-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 7,96 (д, J=9,0 Гц, 2Н), 7,90 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,19-7,27 (м, 4Н), 6,47 (д, J=5,1 Гц, 1Н), 5,54-5,58 (м, 1Н), 4,85 (дд, J=3,3 Гц, J=7,2 Гц, 1Н), 4,68 (дд, J=3,3 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 4,59 (дд, J=4,2 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 2,83-2,92 (м, 1Н), 2,74 (д, J=15,0 Гц, 1Н), 2,42 (д, J=3,6 Гц, 6Н).

Пример 1. Синтез (2К,38,5К)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3 -ола (1)

Промежуточное соединение С 1

Стадия 1. Синтез (2И,38,5К)-5-(4-хлор-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-7-ил)-2-(((4метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоата.

К суспензии гидрида натрия (60%-ная дисперсия в минеральном масле, 0,272 г, 6,79 ммоль) в безводном ацетонитриле (50 мл) в атмосфере аргона в 250-миллилитровой трехгорлой круглодонной колбе добавляли 4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (0,948 г, 6,17 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. При перемешивании порциями добавляли (2К,38,5Я)-5-хлор-2-(((4метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоат (2,4 г, 6,17 ммоль). Реакционную смесь нагревали до температуры 50°C и перемешивали в течение 2 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ и ЖХМС. Упаривание реакционной смеси давало маслянистый остаток, который очищали с

- 23 031476 помощью хроматографии на силикагеле с помощью смеси этилацетат/петролейный эфир (1:6, об./об.) с получением указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,64 (с, 1Н), 7,98 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,92 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,43 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 7,20-7,30 (м, 4Н), 6,82 (дд, J=5,7 Гц, J=8,1 Гц, 1Н), 6,60 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 4,60-4,76 (м, 3Н), 2,86-2,96 (м, 1Н), 2,74-2,82 (м, 1Н), 2,43 (д, J=5,4 Гц, 6Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 506,43 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Синтез (2К^,5И)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-7-ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

(2К^,5К)-5-(4-Хлор-7И-пирроло[2,3-0]пиримидин-7-ил)-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоат (2,18 г, 4,31 ммоль) добавляли в 80-миллилитровую стальную бомбу и ее охлаждали до температуры -40°C. В нее добавляли раствор аммиака в изопропаноле (насыщенный при температуре -40°C, 60 мл). После перемешивания смеси при температуре 90°C и в течение 15 ч ее охлаждали до комнатной температуры и реакционную смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси дихлорметан/метанол (4/1) с получением указанного в заголовке соединения.

’Н-ЯМР (400 МГц, а₆-ДМСО, м.д.): δ 8,04 (с, 1Н), 7,34 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 7,04 (шир., 2Н), 6,58 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,48 (дд, J=6,0 Гц, J=8,0 Гц, 1Н), 5,24 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 5,16 (т, J=4,2 Гц, 1Н), 4,34 (д, J=2,0 Гц, 1Н), 3,82 (дд, J=4,0 Гц, J=6,4 Гц, 1Н), 3,48-3,58 (м, 2Н), 2,48-2,54 (м, 1Н), 2,13-2,17 (м, 1Н).

Стадия 3. Синтез 7-((2К^,5К)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пирроло[2,3-а]пиримидин-4-амина.

(2R,3S,5R)-5-(4-Амино-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3ол (950 мг, 3,796 ммоль) и имидазол (775,4 мг, 11,388 ммоль) добавляли в 25-миллилитровую круглодонную колбу в атмосфере аргона. В колбу помещали безводный ДМФ (8 мл), затем добавляли третбутилдиметилсилил хлорид (1716,4 мг, 11,388 ммоль). После перемешивания смеси при температуре 25°C в течение 3 ч ее разбавляли этилацетатом (40 мл), промывали водой (2x20 мл), водным NaHCO₃(насыщенный, 2x20 мл) и насыщенным солевым раствором (2x20 мл), соответственно. Органический слой собирали и сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта. Сырой продукт затем очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси этилацетат/петролейный эфир (от 35 до 42% этилацетата в петролейном эфире) с получением указанного в заголовке соединения.

’Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,32 (с, 1Н), 7,32 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 6,69 (т, J=6,6 Гц, 1Н), 6,39 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 5,29 (шир., 2Н), 4,56-4,61 (м, 1Н), 3,96 (дд, J=3,5 Гц, J=7,0 Гц, 1Н), 3,74-3,84 (м, 2Н), 2,422,51 (м, 1Н), 2,30-2,38 (м, 1Н), 0,92 (д, J=4,2 Гц, 18Н), 0,08-0,1 (м, 12Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 497,71 [М+Н]⁺.

Стадия 4. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((третбутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-4-амина (1,2 г, 2,506 ммоль) в ТГФ (24 мл) по каплям при температуре 0°C в течение периода времени 10 мин добавляли предварительно охлажденный раствор трифторуксусная кислота/вода (1/2, об./об., 9 мл). Полученную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 4 ч и затем упаривали совместно с толуолом при температуре ниже 25°C три раза с получением сиропа. Сырой продукт очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси этилацетат/дихлорметан (1/1) с получением указанного в заголовке соединения.

’Н-ЯМР (300 МГц, а₆-ДМСО, м.д.): δ 8,03 (с, 1Н), 7,34 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 7,03 (шир. с, 2Н), 6,58 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,46 (дд, J=5,7 Гц, 1Н), 5,19 (т, J=5,7 Гц, 1Н), 4,51-4,53 (м, 1Н), 3,79-3,83 (м, 1Н), 3,47-3,57 (м, 2Н), 2,55-2,64 (м, 1Н), 2,10-2,17 (м, 1Н), 0,9 (с, 9Н), 0,11 (с, 6Н).

Стадия 5. Синтез (2S,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемому раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола (100 мг, 0,274 ммоль) в безводном ацетонитриле (10 мл) в атмосфере аргона в 25-миллилитровой круглодонной колбе добавляли 2-йодоксибензойную кислоту (230 мг, 0,823 ммоль). Полученную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 0,5 ч и затем охлаждали до комнатной температуры. Твердые продукты отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 363,20 [М+Н]⁺, 381,20 [М+Н+Н₂О]⁺.

Стадия 6. Синтез ((3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола.

К перемешиваемому раствору (2S,3S,5R)-5-(4-амино-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (100 мг, 0,276 ммоль, сырой) в 1,4-диоксане

- 24 031476 (1 мл) добавляли раствор формальдегида (0,3 мл, 4,00 ммоль), затем по каплям в течение 1 мин добавляли раствор гидроксида натрия (0,3 мл, 0,600 ммоль, 2 М). Полученную смесь перемешивали при температуре 25°C в течение 3 ч. После завершения реакции реакционную смесь нейтрализовали путем добавления уксусной кислоты, разбавляли этилацетатом и последовательно промывали водой, насыщенным водным раствором NaHCO₃ и насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄ и упаривали при пониженном давлении. Остаток вновь растворяли в безводном этаноле (2 мл) и порциями при температуре 0°C добавляли боргидрид натрия (20,87 мг, 0,552 ммоль). После перемешивания в течение 1 ч при температуре 25°C реакционную смесь нейтрализовали путем добавления уксусной кислоты, разбавляли хлороформом (20 мл), промывали водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над Na₂SO₄ и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали путем препаративной ТСХ с помощью смеси дихлорметан/метанол (20/1) с получением указанного в заголовке соединения.

^!Н-ЯМР (300 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,03 (с, 1Н), 7,37 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 7,02 (шир. с, 2Н), 6,57 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,50 (дд, J=5,7 Гц, J=8,1 Гц, 1Н), 5,12 (дд, J=5,1 Гц, J=6,3 Гц, 1Н), 4,59-4,60 (м, 1Н), 4,38 (дд, J=5,1 Гц, J=6,3 Гц, 1Н), 3,46-3,61 (м, 4Н), 2,70-2,75 (м, 1Н), 2,13-2,20 (м, 1Н), 0,90 (с, 9Н), 0,09 (с, 6Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 395,20 [М+Н]⁺.

Стадия 7. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемому раствору ((3S,5R)-5-(4-амино-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола (100 мг, 0,253 ммоль) в безводном ацетонитриле (20 мл) в атмосфере аргона добавляли 2-йодоксибензойную кислоту (284 мг, 1,014 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 30°C в течение 36 ч. Данные ЖХМС указывали, что оставалась небольшая часть исходного диол-нуклеозида, и основным продуктом являлось целевое соединение. Смесь фильтровали, промывали дихлорметаном. Фильтрат собирали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 393,28 [М+Н]⁺.

Стадия 8. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (100 мг, 0,248 ммоль, сырой) в безводном метаноле (10 мл) в атмосфере аргона добавляли карбонат калия (68,04 мг, 0,492 ммоль). Смесь охлаждали до температуры 0°C, затем по каплям в течение 2 мин добавляли диметил (1-диазо-2-оксопропил)фосфонат (94,56 мг, 0,492 ммоль). После перемешивания полученной смеси при температуре 25°C в течение ночи ее концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем препаративной ТСХ (метанол/дихлорметан=1/15) с получением указанного в заголовке соединения.

' H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,24 (с, 1Н), 7,04 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,35 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,31 (дд, J=5,7 Гц, J=9,3 Гц, 1Н), 5,48 (шир., 2Н), 4,73 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 4,03 (д, J=12,6 Гц, 1Н), 3,80 (д, J=12,3 Гц, 1Н), 3,13-3,23 (м, 1Н), 2,58 (с, 1Н), 2,22-2,28 (м, 1Н), 0,95 (с, 9Н), 0,15 (д, J=7,2 Гц, 6Н).

Стадия 9. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

К перемешиваемому раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола (60 мг, 0,154 ммоль) в безводном ТГФ (2 мл) в атмосфере аргона по каплям в течение 1 мин при температуре окружающей среды добавляли 1 М раствор тетрабутиламмоний фторида в ТГФ (0,309 мл, 0,309 ммоль). Полученный раствор перемешивали при этой температуре в течение 2 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. После того как весь исходный нуклеозид был израсходован, смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем препаративной ТСХ (метанол/дихлорметан=1/9) с получением сырого указанного в заголовке соединения, которое затем очищали с помощью препаративной-ВЭЖХ при следующих условиях: (1#-Pre-HPLC-011 (Waters)): колонка, X-select CSH Column, 19x150 мм, 5 мкм; мобильная фаза, вода с 10 ммоль бикарбоната амммония и ацетонитрил (от 5%-ного ацетонитрила до 20% в течение 7,5 мин, до 95% в течение 2 мин); детектор, УФ 254 и 220 нм, с получением соединения 1 в виде твердого вещества.

' Н-ЯМР (300 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,05 (с, 1Н), 7,31 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 7,03 (шир. с, 2Н), 6,58 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,50 (т, J=6,3 Гц, 1Н), 5,40-5,49 (м, 2Н), 4,49 (дд, J=6,0 Гц, J=11,4 Гц, 1Н), 3,51-3,66 (м, 2Н), 3,46 (с, 1Н), 2,55-2,59 (м, 1Н), 2,28-2,39 (м, 1Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 275,20 [М+Н]⁺.

- 25 031476

Пример 2. Синтез (2К,38,5К)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3^]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3 -ола (2)

Стадия 1. Синтез 4-хлор-5-фтор-7Н-пирроло[2,3^]пиримидина.

4-Хлор-7И-пирроло[2,3^]пиримидин (5 г, 32,6 ммоль) и SELECTFLUOR® (1-хлорметил-4-фтор1,4-диазонийбицикло[2,2,2]октан бис-(тетрафторборат)) (17,30 г, 48,8 ммоль) в атмосфере аргона помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу. К вышеуказанному добавляли сухой ацетонитрил (150 мл) и сухую уксусную кислоту (50 мл). Смесь нагревали при температуре 70°C и перемешивали в течение 16 ч. После охлаждения до комнатной температуры растворители удаляли при пониженном давлении и остаток упаривали совместно с толуолом. Сырой твердый продукт растворяли в смеси дихлорметан/этилацетат (1:1) и фильтровали через слой из силикагеля. Объединенные органические фазы упаривали при пониженном давлении. Сырой продукт затем очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси дихлорметан/этилацетат (5:1) с получением указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 12,48 (шир. с, 1Н), 8,62 (с, 1Н), 7,71 (т, J=2,6 Гц, 1Н).

F-ЯМР (376 МГц, d₆-ДМСО, м.д.): δ -170,76 (с, 1F).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 172,00 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-хлор-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(((4метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоата.

К суспензии гидрида натрия (60%-ная дисперсия в минеральном масле) (0,177 г, 4,41 ммоль) в безводном ацетонитриле (40 мл) в атмосфере аргона порциями добавляли 4-хлор-5-фтор-7Н-пирроло[2,3d]пиримидин (0,688 г, 4,01 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем порциями добавляли промежуточное соединение А (1,56 г, 4,01 ммоль). После этого реакционную смесь нагревали до температуры 50°C и перемешивали в течение 2 ч, летучие продукты удаляли при пониженном давлении, остаток затем очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси этилацетат/петролейный эфир (1/1) с получением указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCls, м.д.): δ 8,62-8,68 (м, 1Н), 7,91-7,99 (м, 4Н), 7,26-7,29 (м, 4Н), 7,16-7,18 (м, 2Н), 6,84-6,88 (м, 1Н), 5,74-5,76 (м, 1Н), 4,60-4,74 (м, 3Н), 2,74-2,79 (м, 2Н), 2,43-2,46 (м, 6Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 524,30 [М+Н]⁺.

Стадия 3. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

В 80-миллилитровую стальную бомбу помещали (2R,3S,5R)-5-(4-хлор-5-фтор-7Н-пирроло[2,3d]пиримидин-7-ил)-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоат (2,0 г, 3,82 ммоль). Содержимое охлаждали до температуры -40°C. В нее добавляли насыщенный раствор аммиака в изо-PrOH (60 мл). После нагревания до температуры 80°C и перемешивания в течение 18 ч полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси дихлорметан/метанол (5/1) с получением указанного в заголовке соедине ния.

¹Н-ЯМР (400 МГц, de-ДМСО, м.д. ): δ 8,06 (с, 1Н), 7,33 (д, J=2,0 Гц, 1Н), 6,99 (шир. с, 2Н), 6,54 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 5,24 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 4,99 (т, J=5,6 Гц, 1Н), 4,30-4,33 (м, 1Н), 3,78-3,81 (м, 1Н), 3,47-3,56

- 26 031476 (м, 2Н), 2,37-2,44 (м, 1Н), 2,12-2,17 (м, 1Н).

F-ЯМР (376 МГц, а₆-ДМСО, м.д. ): δ -167,49 (с, 1F).

Стадия 4. Синтез 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((третбутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-4-амина.

(2R,3S,5R)-5-(4-Амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол (538 мг, 2,006 ммоль) и имидазол (819 мг, 12,03 ммоль) помещали в 25-миллилитровую круглодонную колбу в атмосфере аргона. В нее добавляли сухой ДМФ (5 мл), затем порциями добавляли трет-бутилхлордиметилсилан (1209 мг, 8,02 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 25°С в течение 3 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ и ЖХМС. После завершения реакции смесь разбавляли этилацетатом (40 мл), промывали водой (2x20 мл), насыщенным водным раствором NaHCO₃ (2x20 мл) и насыщенным солевым раствором (2x20 мл), соответственно. Органический слой собирали, сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт затем очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси этилацетат/петролейный эфир (от 28 до 41% этилацетата в петролейном эфире) с получением указанного в заголовке соединения.

’H-ЯМР (300 МГц, а₆-ДМСО, м.д.): δ 8,07 (с, 1Н), 7,27 (с, 1Н), 6,99 (шир. с, 2Н), 6,54 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,49 (с, 1Н), 3,60-3,78 (м, 3Н), 2,51-2,53 (м, 1Н), 2,16-2,20 (м, 1Н), 0,88 (д, J=4,2 Гц, 18Н), 0,11 (с, 6Н), 0,04 (с, 6Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 497,71 [М+Н]⁺.

Стадия 5. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((третбутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-а]пиримидин-4-амина (900 мг, 1,812 ммоль) в ТГФ (12 мл) при температуре 0°С в течение 10 мин по каплям при перемешивании добавляли водную трифторуксусную кислоту (трифторуксусная кислота/вода=1/1, об./об., 6 мл). Полученную смесь перемешивали при температуре 0°С. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. После завершения реакции полученную смесь упаривали совместно с толуолом (50 млх3) в вакууме, поддерживая температуру ниже 25°С для удаления летучих продуктов. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси этилацетат/петролейный эфир (от 52 до 58% этилацетата в петролейном эфире) с получением указанного в заголовке соединения.

’Н-ЯМР (300 МГц, а₆-ДМСО, м.д.): δ 8,07 (с, 1Н), 7,34 (с, 1Н), 6,99 (шир. с, 2Н), 6,53 (т, J=6,9 Гц, 1Н), 5,04 (т, J=5,6 Гц, 1Н), 4,47-4,51 (м, 1Н), 3,76-3,79 (м, 1Н), 3,44-3,57 (м, 2Н), 2,45-2,51 (м, 1Н), 2,112,16 (м, 1Н), 0,90 (с, 9Н), 0,11 (с, 6Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 383,26 [М+Н]⁺.

Стадия 6. Синтез (2S,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемому раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола (360 мг, 0,941 ммоль) в безводном ацетонитриле (12 мл) в атмосфере аргона добавляли 2-йодоксибензойную кислоту (791 мг, 2,82 ммоль). Полученную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 35 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и твердые продукты отфильтровывали. Фильтрат собирали и затем концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.

Стадия 7. Синтез ((3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола.

К перемешиваемому раствору (2S,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (400 мг, 1,051 ммоль, сырой) в 1,4-диоксане (4 мл) добавляли раствор формальдегида (1,2 мл, 16,01 ммоль), затем по каплям в течение 5 мин добавляли раствор гидроксида натрия (1,2 мл, 2 М, 2,400 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 25°С в течение 3 ч и затем реакционную смесь нейтрализовали путем добавления уксусной кислоты. Полученную смесь разбавляли этилацетатом, последовательно промывали водой, насыщенный водным NaHCO₃ и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na₂SO₄и упаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в этаноле (10 мл) и порциями при температуре 0°С добавляли боргидрид натрия (80 мг, 2,103 ммоль). После перемешивания в течение 1 ч при температуре 25°С реакционную смесь нейтрализовали путем добавления уксусной кислоты и затем разбавляли хлороформом и последовательно промывали водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над Na₂SO₄ и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси дихлорметан/метанол (30/1) с получением указанного в заголовке соединения.

’H-ЯМР (300 МГц, d^d^TO, м.д.): δ 8,06 (с, 1Н), 7,36 (с, 1Н), 6,99 (шир. с, 2Н), 6,57 (т, J=3,6 Гц, 1Н), 4,99 (т, J=4,8 Гц, 1Н), 4,55-4,59 (м, 1Н), 4,39 (т, J=5, 1 Гц, 1Н), 3,45-3,55 (м, 4Н), 2,57-2,65 (м, 1Н),

- 27 031476

2,17-2,20 (м, 1Н), 0,90 (с, 9Н), 0,09 (с, 6Н).

Стадия 8. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемому раствору ((3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола (120 мг, 0,291 ммоль) в безводном ацетонитриле (8 мл) в атмосфере аргона добавляли 2-йодоксибензойную кислоту (326 мг, 1,164 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 30°C в течение 24 ч и затем фильтровали и промывали дихлорметаном. Фильтрат собирали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии реакции напрямую без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 411,43 [М+Н]⁺.

Стадия 9. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (110 мг, 0,268 ммоль, сырой) в безводном метаноле (8 мл) в атмосфере аргона добавляли карбонат калия (111 мг, 0,804 ммоль). Смесь охлаждали до температуры 0°C, затем в течение 1 мин добавляли по каплям диметил (1-диазо-2-оксопропил)фосфонат (154 мг, 0,804 ммоль). После перемешивания смеси при температуре 25°C в течение ночи полученную смесь концентрировали в вакууме и затем очищали путем препаративной ТСХ (метанол/дихлорметан=1/15) с получением указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (300 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,07 (с, 1Н), 7,34 (с, 1Н), 7,03 (шир., 2Н), 6,56 (т, J=6,3 Гц, 1Н), 5,43 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,61 (т, J=5,4 Гц, 1Н), 3,58-3,67 (м, 1Н), 3,49-3,53 (м, 1Н), 3,47 (с, 1Н), 2,52-2,61 (м, 1Н), 2,23-2,31 (м, 1Н), 0,91 (с, 9Н), 0,11 (д, J=2,4 Гц, 6Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 407,30 [М+Н]⁺.

Стадия 10. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

К перемешиваемому раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола (40 мг, 0,098 ммоль) в безводном ТГФ (2 мл) в атмосфере аргона по каплям при перемешивании в течение 1 мин при комнатной температуре добавляли раствор TBAF/ТГФ (0,118 мл, 0,118 ммоль) и полученный раствор перемешивали при этой температуре в течение 2 ч. После завершения реакции полученную смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали путем препаративной ТСХ (метанол/дихлорметан=1/10) с получением сырого продукта (28 мг). Сырой продукт затем очищали путем препаративной-ВЭЖХ в следующих условиях: (1#-Pre-HPLC-011 (Waters)): колонка, X-select CSH Column, 19x150 мм, 5 мкм; мобильная фаза, вода с 10 ммоль бикарбоната амммония и ацетонитрил (от 5%-ного ацетонитрила до 35% в течение 7,5 мин, до 95% в течение 2 мин); детектор, УФ 254 и 220 нм. Содержащие продукт фракции собирали и лиофилизовали с получением соединения 2 в виде твердого вещества.

Ή-ЯМР (400 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,07 (с, 1Н), 7,30 (д, J=1,6 Гц, 1Н), 7,02 (шир., 2Н), 6,55 (т, J=5,8 Гц, 1Н), 6,05 (шир., 1Н), 5,31-5,45 (м, 1Н), 4,46 (т, J=6,6 Гц, 1Н), 3,58 (дд, J=11,8 Гц, J=29,4 Гц, 2Н), 3,47 (с, 1Н), 2,44-2,51 (м, 1Н), 2,29-2,36 (м, 1Н).

F-ЯМР (376 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ -167,23 (с, 1F).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 293,10 [М+Н]⁺, 315,10 [M+Na]⁺.

- 28 031476

Пример 3. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3 -ола (3)

Стадия 1. Синтез 5-бром-4-хлор-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидина.

4- Хлор-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин (1 г, 6,51 ммоль) суспендировали в сухом DCM (20 мл), затем при температуре окружающей среды в атмосфере аргона добавляли NBS (N-бромсукцинимид) (1,275 г, 7,16 ммоль). Смесь нагревали до температуры кипения с обратным холодильником и перемешивали 16 ч. После того как был израсходован весь исходный деазапиримидин, смесь охлаждали до температуры окружающей среды и выдерживали в течение 30 мин. Выпавший осадок собирали путем фильтрации, промывали DCM (2x20 мл), сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 233,90 [М+Н]⁺.

¹Н-ЯМР (300 МГц, do-ДМСО, м.д.): δ 12,98 (шир. с, 1Н), 8,64 (с, 1Н), 7,96 (с, 1Н).

Стадия 2. Синтез 4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3М]пиримидина.

5- Бром-4-хлор-7Н-пирроло[2,3М]пиримидин (232 мг, 0,998 ммоль) растворяли в сухом ТГФ (10 мл) и охлаждали до температуры -78°C в атмосфере аргона. Добавляли по каплям при перемешивании в течение 5 мин раствор н-бутиллития в гексане (2,5 М, 0,88 мл, 2,196 ммоль). Смесь перемешивали в течение примерно 40 мин, затем добавляли йодметан (212 мг, 1,497 ммоль). Раствор затем медленно нагревали до комнатной температуры в течение 2 ч. Для гашения реакции добавляли воду (2 мл). Летучие продукты удаляли в вакууме при температуре ниже 40°C с получением взвеси. Взвесь вновь растворяли в EtOAc (50 мл) и промывали водой (2x15 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл). Органический слой собирали, сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме с получением порошка, который перекристаллизовывали из MeOH с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 168,00 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, do-ДМСО, м.д.): δ 12,22 (шир. с, 1Н), 8,51 (с, 1Н), 7,43 (с, 1Н), 2,41 (д, J=0,90 Гц, 1Н).

Стадия 3. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(((4метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3 - ил 4-метилбензоата.

К перемешиваемой суспензии гидрида натрия (60%-ная дисперсия в масле, 0,453 г, 11,32 ммоль) в безводном ACN (50 мл) порциями в атмосфере аргона добавляли 4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3d]пиримидин (1,724 г, 10,29 ммоль) и смесь перемешивали при температуре 25°C в течение 30 мин. К образовавшемуся прозрачному раствору порциями при температуре 25°C добавляли промежуточное соединение А (4,0 г, 10,29 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 50°C и перемешивали в течение 3 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. Концентрирование смеси в вакууме давало твердое вещество, которое очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (1:6, об./об.) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 520,25 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,55 (с, 1Н), 7,90-7,99 (м, 4Н), 7,20-7,30 (м, 4Н), 7,11 (с, 1Н), 6,81 (дд, J=6,0 Гц, J=8,4 Гц, 1Н), 5,76 (дд, J=1,5 Гц, J=3,6 Гц, 1Н), 4,73-4,79 (м, 1Н), 4,54-4,64 (м, 2Н), 2,79-2,88 (м, 1Н), 2,68-2,75 (м, 1Н), 2,43 (д, J=3,0 Гц, 6Н), 2,33 (д, J=0,9 Гц, 3Н).

- 29 031476

Стадия 4. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

В 150-миллилитровую стальную бомбу помещали (2R,3S,5R)-5-(4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3d]пиримидин-7-ил)-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоат (4,5 г, 7,79 ммоль). Содержимое охлаждали до температуры -40°C. К нему добавляли раствор аммиака в 2-пропаноле (изо-РЮН/жидкий NH₃=1/1, об./об., 120 мл). Бомбу герметически закрывали и смесь нагревали до температуры 90°C и перемешивали в течение 40 ч. После завершения реакции смесь охлаждали до температуры 0°C и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси DCM/MeOH (4/1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 265,10 [M+H]⁺.

¹Н-ЯМР (300 МГц, d^'dMOT, м.д.): δ 8,00 (с, 1Н), 7,08 (с, 1Н), 6,58 (шир. с, 2Н), 6,45 (дд, J=6,0 Гц, J=8,1 Гц, 1Н), 5,21 (д, J=3,3 Гц, 1Н), 5,05 (т, J=5,1 Гц, 1Н), 4,32-4,36 (м, 1Н), 3,78 (д, J=2,1 Гц, 1Н), 3,443,57 (м, 2Н), 2,39-2,51 (м, 1Н), 2,33 (с, 3Н), 2,06-2,13 (м, 3Н).

Стадия 5. Синтез 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-5 -метил-7Н-пирроло [2,3Л]пиримидин-4-амина.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-

2- (гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (1,7 г, 6,43 ммоль) и 1Н-имидазола (1,7 52 г, 25,7 ммоль) в сухом ДМФ (10 мл) при перемешивании при температуре 25°C в атмосфере аргона добавляли третбутилхлордиметилсилан (2,91 г, 19,30 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 25°C в течение 3 ч и затем разбавляли этилацетатом (100 мл), промывали водой (2x30 мл), водным раствором NaHCO₃ (насыщенный. 2x30 мл) и насыщенным солевым раствором (30 мл), соответственно. Органический слой собирали и сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением сырого продукта. Сырой продукт затем очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (от 28 до 41% ЕА в РЕ) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 493,30 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,24 (с, 1Н), 7,02 (с, 1Н), 6,67 (дд, J=6,3 Гц, J=7,2 Гц, 1Н), 5,37 (шир., 2Н), 4,54-4,57 (м, 1Н), 3,94 (дд, J=3,3 Гц, J=6,3 Гц, 1Н), 3,72-3,82 (м, 2Н), 2,37-2,46 (м, 4Н), 2,252,32 (м, 1Н), 0,91 (2s, 18H), 0,10 (с, 12Н).

Стадия 6. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-(третбутилдиметилсилил)тетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору 7-((2R,4S,5R)-4-(трет-бутилдиметилсилил)-5-((третбутилдиметилсилил)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-5-метил-7Н-пирроло[2,3Л]пиримидин-4-амина (2,5 г, 5,07 ммоль) в ТГФ (30 мл) по каплям при перемешивании при температуре 0°C в течение 10 мин добавляли предварительно охлажденный раствор трифторуксусная кислота/вода (1/1, об./об., 15 мл). Полученную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 3 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. Полученный раствор упаривали совместно с толуолом (3x100 мл), поддерживая внутреннюю температуру ниже 25°C. Полученный сырой продукт затем очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (от 50 до 58% ЕА в РЕ) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 493,30 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (300 МГц, CD₃OD, м.д.): δ 8,18 (с, 1Н), 7,41 (с, 1Н), 6,59 (дд, J=6,0 Гц, J=7,8 Гц, 1Н), 4,564,60 (м, 1Н), 3,93 (дд, J=3,9 Гц, J=6,6 Гц, 1Н), 3,65-3,70 (м, 2Н), 2,45-2,54 (м, 1Н), 2,42 (д, J=0,9 Гц, 3Н), 2,23-2,31 (м, 1Н), 0,91 (с, 9Н), 0,11 (с, 6Н).

Стадия 7. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-(третбутилдиметилсилил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемой суспензии ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-

3- (трет-бутилдиметилсилил)тетрагидрофуран-2-ил)метанола (600 мг, 1,585 ммоль) в безводном ACN (12 мл) в атмосфере аргона добавляли IBX (888 мг, 3,17 ммоль). Смесь нагревали до температуры кипения с обратным холодильником и перемешивали в течение 55 мин. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Смесь охлаждали до комнатной температуры, и твердые продукты отфильтровывали. Фильтрат собирали и затем концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 377,15 [М+Н]⁺, 409,15 [М+Н+MeOHf.

Стадия 8. Синтез ((3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-(третбутилдиметилсилил)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)3-(трет-бутилдиметилсилил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (420 мг, сырой) в 1,4-диоксане (12 мл) и воде (3 мл) в 50-миллилитровой круглодонной колбе добавляли водный формальдегид (37% мас./мас., 6 мл), затем по каплям в течение 2 мин добавляли раствор гидроксида натрия (2н., 6 мл, 0,12 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 25°C в течение 3 ч. После того как был израсходован

- 30 031476 весь исходный нуклеозид-альдегид, реакционную смесь нейтрализовали путем добавления AcOH (примерно 0,8 мл). Полученную смесь разбавляли AcOEt (50 мл) и последовательно промывали водой (30 мл), насыщенным водным раствором NaHCO₃ (20 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл). Органический слой сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток вновь растворяли в безводном EtOH (8 мл) и порциями при температуре 0°C добавляли боргидрид натрия (84,4 мг, 2,23 ммоль). После перемешивания в течение 1 ч при температуре 25°C реакционную смесь нейтрализовали путем добавления AcOH. Смесь концентрировали в вакууме, распределяли между CHCl₃ (50 мл) и водой (30 мл). Водный слой опять экстрагировали CHCl₃ (2x20 мл). Объединенный органический слой последовательно промывали водой и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси дихлорметан/метанол (5,5% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 409,35 [М+Н]⁺, 431,35 [M+Na]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, d^'dMTO, м.д.): δ 8,00 (с, 1Н), 7,11 (с, 1Н), 6,56 (шир., 2Н), 6,48 (дд, J=6,0 Гц, J=8,4 Гц, 1Н), 6,45-6,47 (м, 1Н), 5,02 (т, J=5,5 Гц, 1Н), 4,58 (т, J=2,7 Гц, 1Н), 4,35 (дд, J=4,5 Гц, J=6,3 Гц, 1Н), 3,42-3,60 (м, 4Н), 2,58-2,63 (м, 1Н), 2,34 (с, 3Н), 2,09-2,16 (м, 1Н), 0,90 (с, 9Н), 0, 09 (с, 6Н).

Стадия 9. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

((3S,5R)-5-(4-Амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанол (140 мг, 0,343 ммоль) в атмосфере аргона суспендировали в сухом ACN (15 мл) затем добавляли 2-йодилбензойную кислоту (240 мг, 0,857 ммоль). Смесь перемешивали при температуре 30°C в течение 20 ч. Твердый продукт отфильтровывали, промывали CHCl₃(2x20 мл). Объединенный фильтрат концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 407,25 [М+Н]⁺.

Стадия 10. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (120 мг, ~0,236 ммоль, сырой) в сухом MeOH (15 мл) при температуре 0°C в атмосфере аргона добавляли K₂CO₃(82 мг, 0,590 ммоль), затем по каплям при перемешивании при температуре 0°C в течение 2 мин добавляли раствор диметил (1-диазо-2-оксопропил)фосфоната (91 мг, 0,472 ммоль) в MeOH (2 мл). Полученную смесь постепенно нагревали до температуры 25°C и перемешивали в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на колонке с силикагелем с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (30-50% ЕА в РЕ) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 403,25 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, ds-ДМСО, м.д.): δ 8,01 (с, 1Н), 7,07 (с, 1Н), 6,60 (шир., 2Н), 6,49 (дд, J=6,0 Гц, J=7,2 Гц, 1Н), 5,48 (т, J=5,7 Гц, 1Н), 4,62 (т, J=5,7 Гц, 1Н), 3,57-3,68 (м, 1Н), 3,48-3,52 (м, 1Н), 3,45 (с, 1Н), 2,49-2,62 (м, 1Н), 2,33 (с, 3Н), 2,21-2,31 (м, 1Н), 0,91 (с, 9Н), 0,12 (д, J=6,0 Гц, 6Н).

Стадия 11. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (3).

К перемешиваемому раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола (27 мг, 0,067 ммоль) в сухом ТГФ (1 мл) по каплям при перемешивании при температуре 0°C добавляли раствор фторида тетрабутиламмония в ТГФ (1,0 М, 0,067 мл, 0,067 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 25°C в течение 30 мин. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. Полученный раствор концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали путем препаративной-ВЭЖХ в следующих условиях (1#-Pre-HPLC-011 (Waters)): колонка, XBridge™ C18 Column, 19x150 мм, 5 мкм; мобильная фаза, вода с 10 ммоль бикарбоната амммония и ацетонитрил (30%-ного ацетонитрила до 70% в течение 10 мин, вплоть до 95% в течение 2 мин, вплоть до 5% в течение 1,5 мин); скорость потока: 20 мл/мин; детектор, УФ 254 и 220 нм. Содержащие продукт фракции собирали и лиофилизовали с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 289,05 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, ds-ДМСО, м.д.): δ 8,00 (с, 1Н), 7,06 (с, 1Н), 6,58 (шир., 2Н), 6,48 (т, J=6,60 Гц, 1Н), 5,45 (д, J=5,1 Гц, 1Н), 5,38 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,46 (q, J=5,4 Гц, 1Н), 3,50-3,64 (м, 2Н), 3,44 (с, 1Н), 2,44-2,54 (м, 1Н), 2,33 (с, 3Н), 2,24-2,32 (м, 1Н).

- 31 031476

Пример 4. Синтез (2К,38,5К)-5-(4-амино-2-хлор-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3 -ола (4)

CI

TBSO TBSO

Стадия 1. Синтез (2К,38,5К)-5-(2,4-дихлор-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-7-ил)-2-(((4метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3 -ил 4-метилбензоата.

К перемешиваемой суспензии гидрида натрия (60%-ная дисперсия в минеральном масле, 0,509 г, 12,73 ммоль) в безводном ацетонитриле (125 мл) порциями в атмосфере аргона добавляли 2,4-дихлор7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (2,176 г, 11,57 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. В вышеуказанный прозрачный раствор порционно при перемешивании добавляли промежуточное соединение А (4,5 г, 11,57 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. Упаривание реакционной смеси давало маслянистый остаток, который очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (1/6, об./об.) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 540,20 [М+Н]⁺.

¹И-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,01 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,93 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,43 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 7,22-7,37 (м, 4Н), 6,80 (дд, J=6,0 Гц, J=8,0 Гц, 1Н), 6,61 (д, J=4,0 Гц, 1Н), 5,76 (т, J=2,8 Гц, 1Н), 4,76 (дд, J=3,6 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 4,63-4,69 (м, 2Н), 2,76-2,86 (м, 2Н), 2,47, 2,45 (2с, 6Н).

Стадия 2. Синтез (2К^,5К)-5-(4-амино-2-хлор-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-7-ил)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол.

В 250-миллилитровую стальную бомбу помещали (2R,3S,5R)-5-(2, 4-дихлор-7И-пирроло[2,3й]пиримидин-7-ил)-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоат (5 г, 9,25 ммоль). Содержимое охлаждали до температуры -40°C. К нему добавляли раствор аммиака в изопропаноле (изопропанол/жидкий аммиак = 1/3, об./об., 150 мл). Содержимое герметизировали, нагревали до температуры 90°C и перемешивали в течение 16 ч. Полученную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Остаток вновь растворяли в MeOH (100 мл), затем по каплям при температуре 0°C добавляли раствор метоксида натрия в MeOH (1,0 М, 16,89 мл, 16,89 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 25°C и перемешивали в течение 2 ч. После достижения завершения реакции смесь нейтрализовали путем добавления уксусной кислоты (0,01 мл) и концентрировали в вакууме. Остаток суспендировали в смеси DCM/MeOH (об./об., 100/1, 150 мл). После перемешивания в течение 20 мин в осадок выпадало твердое вещество. Твердое вещество собирали путем фильтрации, промывали DCM и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 285,20 [М+Н]⁺.

'И-ЯМР (400 МГц, CD₃OD, м.д.): δ 7,31 (д, J=2,8 Гц, 1Н), 6,58 (д, J=2,8 Гц, 1Н), 6,45 (т, J=6,8 Гц, 1Н), 4,52-4,53 (м, 1Н), 3,98-4,01 (м, 1Н), 3,81 (дд, J=2,4 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 3,73 (дд, J=3,2 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 2,63-2,70 (м, 1Н), 2,29-2,34 (м, 1Н).

Стадия 3. Синтез 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-2-хлор-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-амина.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (3,2 г, 6,74 ммоль) и имидазола (1,836 г, 27,0 ммоль) в сухом ДМФ (10 мл) в атмосфере аргона при температуре окружающей среды добавляли TBS-Cl (3,05 г, 20,23 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (100 мл), последовательно промывали водой (2x20 мл), водным раствором NaHCO₃ (насыщен- 32 031476 ный, 2x20 мл) и насыщенным солевым раствором (2x20 мл). Органический слой сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (от 35 до 42% ЕА в РЕ) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 513,20 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 7,32 (с, 1Н), 6,61 (т, J=6,8 Гц, 1Н), 6,38 (с, 1Н), 5,44 (шир., 2Н), 4,59-4,61 (м, 1Н), 3,91-3,99 (м, 1Н), 3,77-3,88 (м, 2Н), 2,44-2,51 (м, 1Н), 2,34-2,37 (м, 1Н), 0,93-0,95 (м, 18Н), 0,11-0,12 (м, 12Н).

Ή-ЯМР (400 МГц, CD₃OD, м.д.): δ 7,31 (д, J=2,8 Гц, 1Н), 6,58 (д, J=2,8 Гц, 1Н), 6,45 (т, J=6,8 Гц, 1Н), 4,52-4,53 (м, 1Н), 3,98-4,01 (м, 1Н), 3,81 (дд, J=2,4 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 3,73 (дд, J=3,2 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 2,63-2,70 (м, 1Н), 2,29-2,34 (м, 1Н).

Стадия 4. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((третбутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-2-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-амина (2,3 г, 4,48 ммоль) в ТГФ (40 мл) по каплям при перемешивании при температуре 0°C в течение 10 мин добавляли предварительно охлажденный раствор трифторуксусная кислота/вода (об./об., 1/1, 20 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч при температуре 0°C. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. Полученный раствор упаривали совместно с толуолом (3x60 мл), поддерживая внутреннюю температуру ниже 25°C, получая сироп розового цвета. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси этилацетат/дихлорметан (1/1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 399,20 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, d₆-ДМCO, м.д.): δ 7,53 (шир., 2Н), 7,35 (д, J=3,2 Гц, 1Н), 6,60 (д, J=3,2 Гц, 1Н), 6,35 (т, J=6,8 Гц, 1Н), 4,95 (т, J=5,4 Гц, 1Н), 4,51-4,54 (м, 1Н), 3,73-3,79 (м, 1Н), 3,46-3,55 (м, 2Н), 2,542,59 (м, 1Н), 2,16-2,20 (м, 1Н), 0,90 (с, 9Н), 0,11 (с, 6Н).

Ή-ЯМР (400 МГц, d₆-ДМCO, м.д.): δ 7,53 (шир., 2Н), 7,35 (д, J=3,2 Гц, 1Н), 6,60 (д, J=3,2 Гц, 1Н), 6,35 (т, J=6,8 Гц, 1Н), 4,95 (т, J=5,4 Гц, 1Н), 4,51- 4,54 (м, 1Н), 3,73-3,79 (м, 1Н), 3,46-3,55 (м, 2Н), 2,542,59 (м, 1Н), 2,16-2,20 (м, 1Н), 0,90 (с, 9Н), 0,11 (с, 6Н).

Стадия 5. Синтез (2S,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемому раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола (600 мг, 1,504 ммоль) в безводном ДМСО (3 мл) и ацетонитрила (15 мл) в атмосфере аргона добавляли IBX (632 мг, 2,256 ммоль). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2,5 ч. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (20 мл), промывали насыщенным солевым раствором (2x10 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии напрямую без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 415,40 [М+Н₂О]⁺.

Стадия 6. Синтез ((3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (700 мг, сырой) в 1,4-диоксане (28 мл) и воды (7 мл) добавляли раствор формальдегида (7 мл, 93 ммоль), затем по каплям в течение 5 мин добавляли водный раствор гидроксида натрия (7 мл, 2н., 14,00 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 25°C в течение 3 ч. После того как был израсходован весь исходный нуклеозидальдегид, реакционную смесь нейтрализовали путем добавления уксусной кислоты (0,5 мл). Смесь разбавляли этилацетатом (100 мл) и последовательно промывали водой (2x 20 мл), насыщенный водным раствором NaHCO₃ (20 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл). Органический слой сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток вновь растворяли в безводном EtOH (4 мл) и в атмосфере аргона порциями при температуре 0°C добавляли боргидрид натрия (133 мг, 3,53 ммоль). После перемешивания в течение 1 ч при температуре 25°C смесь нейтрализовали путем добавления уксусной кислоты (1,0 мл). Смесь концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли CHCl₃ (100 мл) и последовательно промывали водой (2x20 мл) и насыщенным солевым раствором (1x20 мл). Органический слой сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси DCM/MeOH (30/1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 429,30 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, dr-ДМСО. м.д.): δ 7,51 (шир., 2Н), 7,38 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 6,60 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,40 (т, J=6,9 Гц, 1Н), 4,88 (т, J=5,5 Гц, 1Н), 4,62 (дд, J=3,3 Гц, J=5,5 Гц, 1Н), 4,39 (т, J=5,7 Гц, 1Н), 3,433,63 (м, 4Н), 2,61-2,70 (м, 1Н), 2,21-2,29 (м, 1Н), 0,90 (с, 9Н), 0,10 (с, 6Н).

- 33 031476

Стадия 7. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемому раствору ((3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола (150 мг, 0,350 ммоль) в сухом ацетонитрил (15 мл) в атмосфере аргона добавляли IBX (294 мг, 1,049 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 30°C в течение 2 ч. Смесь фильтровали, промывали CHCl₃ (3x15 мл). Фильтрат собирали и затем концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии напрямую без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 427,30 [М+Н]⁺.

Стадия 8. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

(2R,3S,5R)-5-(4-Амино-2-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегид (200 мг, 0,468 ммоль) растворяли в безводном MeOH (9 мл), затем при температуре 0°C в атмосфере аргона добавляли карбонат калия (162 мг, 1,171 ммоль). К суспензии по каплям при перемешивании в течение 1 мин добавляли раствор диметил (1-диазо-2-оксопропил)фосфоната (180 мг, 0,937 ммоль) в MeOH (1 мл). Полученную смесь нагревали до температуры 30°C и перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Остаток распределяли между этилацетатом (30 мл) и водой (10 мл). Органический слой собирали, промывали насыщенным солевым раствором (2x10 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток затем очищали путем препаративной ТСХ (MeOH/DCM=1/15) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 423,60 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, d^-ДМСО, м.д.): δ 7,55 (шир., 2Н), 7,34 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,61 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,38 (т, J=6,4 Гц, 1Н), 5,32 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,67 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 3,58-3,61 (м, 1Н), 3,48-3,52 (м, 1Н), 3,47 (с, 1Н), 2,60-2,63 (м, 1Н), 2,31-2,35 (м, 1Н), 0,91 (с, 9Н), 0,11 (д, J=3,6 Гц, 6Н).

Стадия 9. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

К перемешиваемому раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола (60 мг, 0,142 ммоль) в ТГФ (1 мл) по каплям при перемешивании при температуре окружающей среды добавляли раствор TBAF в ТГФ (1 М, 0,28 мл, 0,284 ммоль). Полученный раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Смесь концентрировали в вакууме. Остаток затем очищали с помощью преп-ВЭЖХ в следующих условиях (1#-Pre-HPLC-011 (Waters)): колонка, SunFire Prep C18 OBD Column, 5 мкм, 19x150 мм; мобильная фаза, вода (с 10 ммоль бикарбоната амммония) и ацетонитрил (от 8%-ного ацетонитрила до 40% в течение 6 мин, вплоть до 95% в течение 1,5 мин, вплоть до 5% в течение 1 мин); детектор, УФ 254 и 220 нм. Содержащие продукт фракции собирали и лиофилизовали с получением соединения 4 в виде твердого вещества.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 309,00 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, сК-ДУСО, м.д.): δ 7,54 (шир., 2Н), 7,33 (д, J=4,0 Гц, 1Н), 6,60 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,41 (т, J=6,4 Гц, 1Н), 5,52-5,53 (м, 1Н), 5,26 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,47-4,48 (м, 1Н), 3,61 (дд, J=5,2 Гц, J=11,6 Гц, 1Н), 3,53 (дд, J=6,2 Гц, J=11,8 Гц, 1Н), 3,48 (с, 1Н), 2,41-2,50 (м, 1Н), 2,32-2,38 (м, 1Н).

Пример 5. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (5)

TBSCi' тв so' TBSO

- 34 031476

Стадия 1. Синтез (2R,3S,5S)-5-(5-бром-4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(((4метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3 -ил 4-метилбензоата.

К перемешиваемому раствору 5-бром-4-хлор-7Н-пирроло |2.3Л|пиримидина (2,32 г, 9,98 ммоль, синтез описан в примере 3, стадия 1) в ацетонитриле (30 мл) добавляли гидрид натрия (0,479 г,

11.98 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 30 мин при температуре 0°С и затем добавляли (2R,3S,5R)-5-хлор-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоат (4,27 г,

10.98 ммоль). После перемешивания полученной смеси при комнатной температуре в течение 1 ч ее разбавляли 200 мл этилацетата, промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (60 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (60 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси петролейный эфир/этилацетат (1:2) с получением указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ 8,65 (с, 1Н), 8,22 (с, 1Н), 7,96 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,84 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,24-7,39 (м, 4Н), 6,76-6,79 (м, 1Н), 5,74-5,76 (м, 1Н), 4,51-4,68 (м, 3Н), 3,05-3,15 (м, 1Н), 2,74-2,79 (м, 1Н), 2,37 (д, J=1,8 Гц, 6Н).

Стадия 2. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

К насыщенному раствору NH₃ в изо-PrOH (15 мл) при температуре -60°С добавляли (2R,3S,5R)-5(5-бром-4-хлор-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-7-ил)-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3ил 4-метилбензоат (4,50 г, 7,69 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 80°С в течение 12 ч и затем охлаждали до комнатной температуры и упаривали в вакууме с получением (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоата (4,2 г, 7,43 ммоль) в виде твердого вещества. Это сырое соединение растворяли в 30 мл MeOH и затем добавляли метанолат натрия (14,86 мл, 14,86 ммоль). После перемешивания полученного раствора при комнатной температуре в течение 2 ч ее гасили уксусной кислотой (0,1 мл) и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси петролейный эфир/этилацетат (1:2) с получением указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ 8,12 (с, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 6,78 (с, 2Н), 6,48-6,51 (м, 1Н), 5,25 (с, 1Н), 5,01 (с, 1Н), 4,32 (с, 1Н), 3,81 (с, 1Н), 3,17 (с, 1Н), 2,35-2,50 (м, 1Н), 2,12-2,19 (м, 1Н).

Стадия 3. Синтез 5-бром-7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((третбутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-амина.

трет-Бутилхлордиметилсилан (1,786 г, 11,85 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3ола (1,3 г, 3,95 ммоль), 1Н-имидазола (1,076 г, 15,80 ммоль) в ДМФ (8 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч и затем разбавляли 400 мл этилацетата, промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (80 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (80 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси этилацетат/петролейный эфир (1:4) с получением указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ 8,10 (с, 1Н), 7,55 (с, 1Н), 6,79 (с, 2Н), 6,48-6,53 (м, 1Н), 4,50 (с, 1Н), 3,62-3,76 (м, 3Н), 2,43-2,50 (м, 1Н), 2,17-2,16 (м, 1Н), 0,88 (д, J=2,7 Гц, 18Н), 0,10 (с, 6Н), 0,05 (с, 6Н).

Стадия 4. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола.

5-Бром-7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-амин (1,55 г, 2,78 ммоль) растворяли в ТГФ (4 мл) и затем по каплям при перемешивании при температуре 0°С в течение 10 мин обрабатывали предварительно охлажденным раствором трифторуксусная кислота/вода (об./об.=1/1, 4 мл). После перемешивания полученной смеси при температуре 0°С в течение 2 ч ее упаривали совместно с толуолом при температуре ниже 25°С с получением сиропа розового цвета. Остаток помещали на колонку с силикагелем, элюировали смесью этилацетат/дихлорметан (1/1) с получением указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ 8,19 (с, 1Н), 7,74 (с, 1Н), 7,28 (с, 2Н), 6,50 (кв, J=6,0 Гц, 2Н), 4,51 (кв, J=2,7 Гц, 1Н), 3,81 (с, 1Н), 3,47-3,57 (м, 2Н), 2,49-2,58 (м, 1Н), 2,17-2,22 (м, 1Н), 0,85 (с, 9Н), 0,09 (с, 6Н).

Стадия 5. Синтез (2R,3S)-2-(((трет-бутилдифенилсилил)окси)метил)-5-метокси-2фенилтетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоата.

В раствор ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола (443 мг, 0,999 ммоль) в ацетонитриле (45 мл) добавляли 2-йодоксибензойную кислоту (839 мг, 3,00 ммоль). Полученный раствор перемешивали при температуре 80°С в течение 2 ч, затем охлаждали вплоть до 0°С, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Это приводило к получению указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии напрямую без дополнительной очистки.

MS (ES, m/z): 441,08[М+Н]⁺.

- 35 031476

Стадия 6. Синтез ((2S,4R)-4-(4-амино-5-бром-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-((третбутилдиметилсилил)окси)циклопентан-1,1 -диил)диметанола.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (445 мг, 1,008 ммоль) и формальдегида (1009 мг, 10,08 ммоль) в диоксане (6 мл) добавляли гидроксид натрия (4,03 мл, 8,07 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и затем разбавляли 150 мл этилацетата, промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (30 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (30 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением твердого вещества. К раствору вышеуказанного твердого вещества в этаноле (15 мл) при температуре 0°C добавляли боргидрид натрия (109 мг, 2,88 ммоль). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем гасили уксусной кислотой (0,1 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт подвергали хроматографии на колонке с силикагелем с помощью смеси петролейный эфир/этилацетат (1:2) с получением указанного в заголовке соединения.

MS (ES, m/z): 473,43 [М+Н]⁺.

Стадия 7. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К раствору ((3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола (170 мг, 0,359 ммоль) в ацетонитриле (40 мл) добавляли 2-йодоксибензойную кислоту (302 мг, 1,077 ммоль). После перемешивания полученного раствора при температуре 0°C в течение 12 ч ее охлаждали до температуры 0°C и затем концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии напрямую без дополнительной очистки.

MS (ES, m/z): 471,43 [М+Н]⁺.

Стадия 8. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (170 мг, 0,361 ммоль), карбоната калия (125 мг, 0,902 ммоль) в метаноле (8 мл) при температуре 0°C добавляли диметил (1-диазо-2-оксопропил)фосфонат (139 мг, 0,721 ммоль). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч, затем фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырое соединение очищали путем преп-ТСХ с помощью смеси петролейный эфир/этилацетат (1:2) с получением указанного в заголовке соединения.

¹И-ЯМР (300 МГц, CD3OD, м.д.): δ 8,00 (с, 1Н), 7,39 (с, 1Н), 6,44-6,47 (м, 1Н), 4,62-4,66 (м, 1Н), 3,61-3,71 (м, 2Н), 2,90 (с, 1Н), 2,25-2,55 (м, 2Н), 0,88 (с, 9Н), 0,57 (д, J=3 Гц, 6Н).

Стадия 9. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

((2R,3S,5R)-5-(4-Амино-5-бром-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанол (40 мг, 0,086 ммоль) и TBAF (0,086 мл, 0,086 ммоль) растворяли в ТГФ (1 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при температуре 30°C, затем упаривали и очищали в следующих условиях: колонка: X Bridge C18, 19x150 мм, 5 мкм; Мобильная фаза А: вода/0,05% ТФУ, мобильная фаза В: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 30% В до 70% В в течение 10 мин; 254 нм. Это приводило к получению соединения 5 в виде твердого вещества.

'll-ЯМР (300 МГц, ДМСО, м.д.): δ 8,11 (с, 1Н), 7,59 (с, 1Н), 6,52 (т, J=6,6 Гц, 1Н), 4,48 (т, J=6,6 Гц, 1Н), 3,53-3,64 (м, 2Н), 3,44 (с, 1Н), 2,33-2,52 (м, 2Н).

MS (ES, m/z): 353,17 [М+Н]⁺.

Пример 6. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (6)

- 36 031476

Стадия 1. Синтез 4,5-дихлор-7Н-пирроло[2,3Л]пиримидина.

В смесь 4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина (2,5 г, 16,28 ммоль) в сухом DCM (100 мл) при температуре 25°C добавляли NCS (N-хлорсукцинимид) (4,35 г, 32,6 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 16 ч при температуре 40°C в атмосфере аргона. Когда 4-хлор-7H-пирроло[2,3d]пиримидин был израсходован, смесь сразу фильтровали, без охлаждения. Твердое вещество собирали, промывали DCM (20 мл), сушили в вакууме с получением 4,5-дихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина в виде твердого вещества.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 188,01 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 12,90 (шир., 1Н), 8,65 (с, 1Н), 7,93 (д, J=2,7 Гц, 1Н).

Стадия 2. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4,5-дихлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(((4метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоата.

К суспензии NaH (60%-ная дисперсия в минеральном масле, 0,538 г, 13,46 ммоль) в безводном ACN (100 мл) в атмосфере аргона в 250-миллилитровой трехгорлой круглодонной колбе порциями добавляли 4,5-дихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (2,3 г, 12,23 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Мутная смесь становилась прозрачной и затем порциями при перемешивании в течение 5 мин добавляли (2R,3S)-5-хлор-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил-4метилбензоат (промежуточное соединение А, 4,76 г, 12,23 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 50°C и перемешивали в течение 2 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. Летучие продукты удаляли в вакууме. Сырой продукт очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью 10-40%-ного этилацетата в петролейном эфире с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 540,39 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, CDCls, м.д.): δ 8,64 (с, 1Н), 7,91-7,99 (м, 4Н), 7,39 (с, 1Н), 7,25-7,30 (м, 4Н), 6,80 (т, J=6,9 Гц, 1Н), 5,75 (дд, J=3,6 Гц, J=6,0 Гц, 1Н), 4,60-4,78 (м, 3Н), 2,76-2,80 (м, 2Н), 2,44 (д, J=4,8 Гц, 6Н).

Стадия 3. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

В 150-миллилитровую стальную бомбу помещали (2R,3S,5R)-5-(4,5-дихлор-7H-пирроло[2,3d]пиримидин-7-ил)-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоат (3,6 г, 6,66 ммоль). Содержимое охлаждали до температуры -40°C. К нему добавляли раствор аммиака в изопропаноле (изопропанол/жидкий аммиак=1/3, об./об., 120 мл). Бомбу герметически закрывали, нагревали до температуры 90°C и перемешивали в течение 16 ч. ТСХ показывала, что расходовался весь исходный нуклеозид, а в качестве основного продукта наблюдался целевой продукт. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием 210% метанола в дихлорметане с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 284,70 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,09 (с, 1Н), 7,58 (с, 1Н), 6,87 (шир., 2Н), 6,51 (дд, J=6,3 Гц, J=7,8 Гц, 1Н), 5,25 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 5,03 (т, J=5,6 Гц, 1Н), 4,30-4,34 (м, 1Н), 3,81 (дд, J=4,3 Гц, J=6,8 Гц, 1Н), 3,46-3,60 (м, 2Н), 2,40-2,48 (м, 1Н), 2,13-2,20 (м, 1Н).

Стадия 4. Синтез 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-5-хлор-7Н-пирроло[2,3Л]пиримидин-4-амина.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (1,7 г, 5,97 ммоль) в ДМФ (10 мл), последовательно, при температуре 0°C в атмосфере аргона добавляли Ш-имидазол (1,423 г, 20,90 ммоль) и TBDMS-Cl (2,70 г, 17,91 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 25°C и перемешивали в течение 2 ч. Полученный раствор разбавляли этилацетатом (100 мл), промывали водой (100 мл). Водный слой вновь экстрагировали этилацетатом (2x100 мл). Органические слои объединяли, промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃ (2x100 мл) и насыщенным солевым раствором (2x100 мл), последовательно, сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием 2-10% этилацетата в петролейном эфире с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 513,22 [М+Н]⁺.

- 37 031476 ^!И-ЯМР (300 МГц, а₆-ДМСО, м.д.): δ 8,10 (с, 1Н), 7,50 (с, 1Н), 6,85 (шир., 2Н), 6,51 (т, J=6,8 Гц, 1Н), 4,48-4,52 (м, 1Н), 3,62-3,80 (м, 3Н), 2,55-2,60 (м, 1Н), 2,17-2,24 (м, 1Н), 0,89 (с, 18Н), 0,08 (д, J=13,6 Гц, 12Н).

Стадия 5. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((третбутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-5-хлор-7И-пирроло[2,3-0]пиримидин-4-амина (2,42 г, 4,72 ммоль) в ТГФ (48 мл) по каплям при перемешивании при температуре 0°C в течение 10 мин добавляли предварительно охлажденный раствор трифторуксусная кислота/вода (1/1, об./об., 24 мл). Полученную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 4 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. Полученный раствор упаривали совместно с толуолом (3x100 мл), поддерживая внутреннюю температуру ниже 25°C. Полученный сырой продукт очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием 2-10% метанола в дихлорметане с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 398,96 [М+Н]⁺.

^!И-ЯМР (300 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,28 (с, 1Н), 7,86 (шир., 2Н), 7,78 (с, 1Н), 6,52 (т, J=6,8 Гц, 1Н), 4,53 (т, J=2,6 Гц, 1Н), 3,83 (дд, J=4,5 Гц, J=6,9 Гц, 1Н), 3,48-3,60 (м, 2Н), 2,50-2,58 (м, 1Н), 2,18-2,25 (м, 1Н), 0,90 (с, 9Н), 0,11 (с, 6Н).

Стадия 6. Синтез (2S,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемому раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7И-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола (300 мг, 0,752 ммоль) в безводном ACN (30 мл) в атмосфере аргона добавляли 2-йодоксибензойную кислоту (632 мг, 2,256 ммоль). Смесь нагревали до температуры 85°C и перемешивали в течение 20 мин. Твердый продукт отфильтровывали. Фильтрат концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 396,94 [М+Н]⁺.

Стадия 7. Синтез ((3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7И-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (434 мг, 0,820 ммоль) в 1,4-диоксане (25 мл) в 100-миллилитровой круглодонной колбе добавляли раствор формальдегида (5 мл), затем по каплям при температуре 0°C в течение 5 мин добавляли раствор гидроксида натрия (2н., 5 мл, 10,00 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 25°C и перемешивали в течение 3 ч. После того, как был израсходован весь исходный нуклеозид-альдегид, реакционную смесь нейтрализовали путем добавления AcOH. Смесь разбавляли этилацетатом (60 мл) и, последовательно, промывали водой (2x20 мл), насыщенным водным раствором NaHCO₃ (2x20 мл) и насыщенным солевым раствором (2x20 мл). Органический слой сушили над Na₂SO₄ и упаривали при пониженном давлении. Остаток вновь растворяли в безводном EtOH (30 мл) и порциями при температуре 0°C в атмосфере аргона добавляли тетрагидроборат натрия (62,0 мг, 1,640 ммоль). После перемешивания в течение 16 ч при температуре 25°C реакционную смесь нейтрализовали путем добавления AcOH. Смесь концентрировали в вакууме. Остаток суспендировали в CHCl₃ (40 мл) и, последовательно, промывали водой (2x15 мл) и насыщенным солевым раствором (2x15 мл). Органический слой сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси дихлорметан/метанол (30/1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 428,99 [М+Н]⁺.

^!И-ЯМР (300 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,10 (с, 1Н), 7,60 (с, 1Н), 6,86 (шир., 2Н), 6,54 (т, J=6,9 Гц, 1Н), 5,01 (т, J=5,3 Гц, 1Н), 4,59 (дд, J=3,0 Гц, J=5,4 Гц, 1Н), 4,40 (т, J=5,6 Гц, 1Н), 3,42-3,61 (м, 4Н), 2,60-2,69 (м, 1Н), 2,18-2,25 (м, 1Н), 0,89 (с, 9Н), 0,09 (с, 6Н).

Стадия 8. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида ((3S,5R)-5-(4-Амино-5-хлор-7И-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3 -((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанол (166 мг, 0,387 ммоль) в атмосфере аргона растворяли в безводном ACN (20 мл) и затем добавляли IBX (325 мг, 1,161 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 30°C и перемешивали в течение 20 ч. Твердый продукт отфильтровывали. Фильтрат концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 426,97 [М+Н]⁺.

- 38 031476

Стадия 9. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (160 мг, 0,375 ммоль) в сухом MeOH (8 мл) добавляли K₂CO₃ (129 мг, 0,937 ммоль), затем при температуре 0°C по каплям при перемешивании в атмосфере аргона добавляли диметил (1-диазо-2-оксопропил)фосфонат (144 мг, 0,749 ммоль). Полученную смесь постепенно нагревали до температуры 25°C и перемешивали в течение 16 ч. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием 30-50%-ного этилацетата в петролейном эфире с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 422,98 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,10 (с, 1Н), 7,58 (с, 1Н), 6,90 (шир., 2Н), 6,52 (т, J=6,6 Гц, 1Н), 5,42-5,46 (м, 1Н), 4,64 (т, J=5,7 Гц, 1Н), 3,59-3,67 (м, 1Н), 3,50-3,54 (м, 1Н), 3,48 (с, 1Н), 2,59-2,64 (м, 1Н), 2,27-2,31 (м, 1Н), 0,91 (с, 9Н), 0,12 (с, 6Н).

Стадия 10. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (6)

К перемешиваемому раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола (64 мг, 0,151 ммоль) в ТГФ (3 мл) по каплям при перемешивании в атмосфере аргона добавляли раствор TBAF (1,0 М, 151 мкл, 0,151 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при температуре 25°C. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток помещали на колонку с силикагелем и элюировали с помощью смеси DCM/MeOH (от 20/1 до 5/1) с получением сырого продукта. Сырой продукт далее очищали с помощью преп-ВЭЖХ в следующих условиях (1#-Pre-HPLC-011 (Waters)): колонка, SunFire Prep C18 OBD (Optimum Bed Density), 5 мкм, 19x150 мм; мобильная фаза, вода (с 10 ммоль бикарбоната амммония) и ацетонитрил (от 10% ацетонитрила до 45% в течение 5 мин, вплоть до 95% в течение 1,5 мин, вплоть до 5% при температуре 1 мин); детектор, УФ 254 и 220 нм. Содержащие продукт фракции собирали и лиофилизовали с получением соединения 6 в виде твердого вещества.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 308,72 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,10 (с, 1Н), 7,54 (с, 1Н), 6,88 (шир., 2Н), 6,52 (т, J=6,4 Гц, 1Н), 5,39-5,52 (м, 2Н), 4,48 (т, J=6, 6 Гц, 1Н), 3,59 (дд, J=12,0 Гц, J=28,8 Гц, 2Н), 3,48 (с, 1Н), 2,47-2,54 (м, 1Н), 2,31-2,37 (м, 1Н).

Промежуточное соединение В.

Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола (промежуточное соединение В)

Стадия 1. Синтез 4-хлор-5-йод-7Н-пирроло[2,3^]пиримидина.

В смесь 4-хлор-7Н-пирроло[2,3^]пиримидина (5 г, 32,6 ммоль) в ДМФ (60 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C добавляли NIS (N-йодсукцинимид) (7,33 г, 32,6 ммоль). Полученную смесь пере

- 39 031476 мешивали в темноте в течение 15 ч при температуре 25°C в атмосфере аргона. Реакционную смесь выливали в холодную воду и смесь фильтровали, твердое вещество промывали холодной водой (3x50 мл) и сушили при температуре 25°C с получением 4-хлор-5-йод-7И-пирроло[2,3Д]пиримидина в виде твердого вещества.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 279,9 [M+H]⁺¹.

¹И-ЯМР (400 МГц, CD₃SOCD₃, м.д.): δ 12,96 (шир. с, 1Н), 8,62 (с, 1Н), 7,95 (д, J=1,8 Гц, 1Н).

Стадия 2. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-хлор-5-йод-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(((4метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3 -ил 4-метилбензоата.

В смесь гидрида натрия (0,845 г, 21,13 ммоль) и 4-хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина (5,37 г, 19,21 ммоль) в ацетонитриле (150 мл) в атмосфере аргона при температуре 20°C добавляли (2R,3S,5R)-5хлор-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоат (7,47 г, 19,21 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 50°C в атмосфере аргона в течение 2 ч и затем растворитель упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле 100-200, элюируя ЕА/РЕ (1/5), с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 613,9 [M+H]⁺¹.

’H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,63 (с, 1Н), 8,00 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,95 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,60 (с, 1Н), 7,32-7,25 (м, 4Н), 6,82 (т, J=7,2 Гц, 1Н), 5,77 (дд, J=6,4 Гц, 4 Гц,1Н), 4,80-4,76 (м, 1Н), 4,71-4,62 (м, 2Н), 2,46 (с, 6Н), 1,66-1,31 (м, 2Н).

Стадия 3. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

(2R,3S,5R)-5-(4-Хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(((4метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоат (12 г, 18,99 ммоль) добавляли к перемешиваемой, охлаждаемой до температуры -50°C смеси аммиака (120 мл, 240 ммоль) в 2-пропаноле (30 мл) и смесь перемешивали при температуре 90°C в течение 48 ч. Растворитель упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле 100-200, элюируя смесью DCM/MeOH (10/1), с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 377,0 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (300 МГц, CD₃SOCD₃, м.д.): δ 8,10 (с, 1Н), 7,81 (с, 1Н), 6,79 (шир. с, 2Н), 6,79-6,51 (дд, J=8,1 Гц, 3 Гц, 1Н), 5,27 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 5,05 (т, J=5,4 Гц, 1Н), 4,33 (шир. с, 1Н), 3,81 (шир. с, 1Н), 3,603,46 (м, 2Н), 2,51-2,44 (м, 1Н), 2,19-2,10 (м, 1Н).

Стадия 4. Синтез 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-5 -йод-7Н-пирроло [2,3Д]пиримидин-4-амина.

К смеси (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (6 г, 15,95 ммоль) и имидазола (4,34 г, 63,8 ммоль) в ДМФ (30 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C добавляли TBS-Cl (44,7 мл, 44,7 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч при температуре 23°C в атмосфере аргона. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь гасили водой (150 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x200 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (5x200 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали на колонке с силикагелем, элюируя ЕА/РЕ (3:7) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 605,3 [M+H]⁺¹.

’H-ЯМР (400 МГц, CD₃SOCD₃, м.д.): δ 8,10 (с, 1Н), 7,58 (с, 1Н), 6,67 (шир. с,2Н), 6,49 (т, J=6,8 Гц, 1Н), 4,50 (т, J=2,4 Гц, 1Н), 3,88-3,81 (м, 1Н), 3,74 (дд, J=10,8 Гц, 5,6 Гц, 1Н), 3,65 (дд, J=10,8 Гц, 4 Гц, 1Н), 2,50-2,49 (м, 1Н), 2,25-2,14 (м, 1Н), 0,89 (с, 18Н), 0,10-0,07 (м, 12Н).

Стадия 5. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К смеси 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-амина (6,6 г, 10,92 ммоль) в ТГФ (66 мл) при температуре 0°C добавляли раствор ТФУ (16 мл, 208 ммоль) в воде (16 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 4 ч при температуре 0°C. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Растворитель упаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в смеси DCM/MeOH (10/1, 150 мл) и значение pH раствора устанавливали равным 7 с помощью гидрокарбоната натрия (5,0 г), фильтровали, и растворитель упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле 100-200, элюируя 40-50% ЕА в РЕ с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 491,1 [M+H]⁺¹.

’H-ЯМР (400 МГц, CD₃SOCD₃, м.д.): δ 8,14 (с, 1Н), 7,71 (с, 1Н), 6,88 (шир. с, 2Н), 6,47 (дд, J=8,4 Гц, 6 Гц, 1Н), 4,51 (т, J=2,4 Гц, 1Н), 3,80-3,79 (м, 1Н), 3,54-3,50 (м, 2Н), 2,57-2,53 (м, 1Н), 2,18-2,13 (м, 1Н), 0,89 (с, 9Н), 0,10 (с, 6Н).

- 40 031476

Стадия 6. Синтез (2S,3S,5R)-3-[(трет-бутилдиметилсилил)окси]-5-{4-[(диметил-Si{4}сульфанилиден)амино]-5-йод-7Н-пирроло[2,3Л]пиримидин-7-ил}оксолан-2-карбальдегида.

К смеси ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола (4,682 г, 9,55 ммоль) и DCC (N.N-дициклогексилкарбодиимид) (6,1 г, 29,6 ммоль) в ДМСО (40 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C добавляли пиридин (0,850 мл, 10,51 ммоль) и ТФУ (0,515 мл, 6,68 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 14 ч при температуре 20°C в атмосфере аргона. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь гасили водой (150 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (120 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением сырого указанного в заголовке продукта в виде твердого вещества.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 567,0 [М+Н₂О+Н]⁺.

Стадия 7. Синтез смеси [(3S,5R)-3-[(трет-бутилдиметилсилил)окси]-5-{4-[(диметил-Si{4}сульфанилиден)амино]-5-йод-7Н-пирроло[2,3Л]пиримидин-7-ил}-2-(гидроксиметил)оксолан-2ил]метанола.

К смеси (2S,3S,5R)-3-[(трет-бутилдиметилсилил)окси]-5-{4-[(диметил-Si{4}-сульфанилиден)амино]-5-йод-7Н-пирроло[2,3Л]пиримидин-7-ил}оксолан-2-карбальдегида (80 мг, 0,146 ммоль) и формальдегида (0,5 мл, 0,146 ммоль) в 1,4-диоксане (4 мл) при температуре 0°C добавляли 2 М раствор гидроксид натрия (0,5 мл, 1,000 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 4 ч при температуре 20°C. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь гасили уксусной кислотой (0,2 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x40 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃ (30 мл), затем насыщенным солевым раствором (40 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, остаток растворяли в этаноле (4 мл). В эту смесь в атмосфере аргона добавляли тетрагидроборат натрия (20 мг, 0,529 ммоль). Эту смесь перемешивали в течение 36 ч при температуре 20°C. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь гасили уксусной кислотой (0,05 мл) и экстрагировали CHCl₃ (3x40 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 (30 мл), затем насыщенным солевым раствором (40 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, очищали с помощью ТСХ, элюируя смесью DCM/MeOH (12:1), с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 581,1 [M+H]⁺¹.

Ή-ЯМР (300 МГц, CD₃SOCD₃, м.д.): δ 8,09 (с, 0,6Н), 7,97 (с, 0,4Н), 7,69 (с, 0,6Н), 7,46 (с, 0,4Н), 6,66 (шир. с, 0,8Н), 6,53-6,42 (м, 1Н), 5,10 (т, J=5,4 Гц, 0,4Н), 5,02 (т, J=5,4 Гц, 0,6Н), 4,58 (шир. с, 1Н), 4,424,37 (м, 1Н), 3,58-3,49 (м, 4Н), 2,78 (д, J=2,7 Гц, 3Н), 2,68-2,61 (м, 1Н), 2,23-2,16 (м, 1Н), 0,90 (с, 9Н), 0,10 (с, 6Н).

Стадия 8. Синтез ((3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола.

К раствору [(3 S,5R)-3 -[(трет-бутилдиметилсилил)окси] -5-{4-[(диметил^{4}-сульфанилиден)амино]-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил}-2-(гидроксиметил)оксолан-2-ил]метанола (230 мг, 0,396 ммоль) в DCM (2 мл) при температуре 0°C добавляли ТФУ (2 мл, 26,0 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 3 ч при температуре 20°C в атмосфере аргона. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали на колонке с силикагелем, элюируя смесью DCM/MeOH (95:5), с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 521,2 [M+H]⁺¹.

Ή-ЯМР (400 МГц, CD₃SOCD₃, м.д.): δ 8,12 (с, 1Н), 7,71 (с, 1Н), 7,10 (шир. с, 2Н), 6,43 (т, J=6,8 Гц, 1Н), 4,50 (дд, J=6 Гц, 3,2 Гц, 1Н), 3,50-3,37 (м, 4Н), 2,59-2,52 (м, 1Н), 2,17-2,11 (м, 1Н), 0,80 (с, 9Н), 0,00 (с, 6Н).

Стадия 9. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К раствору ((3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола (960 мг, 1,845 ммоль) в ацетонитриле (25 мл) в атмосфере аргона при температуре 18°C добавляли IBX (1550 мг, 5,53 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 18 ч при температуре 18°C в атмосфере аргона. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая сырой продукт в виде твердого вещества. Этот сырой продукт использовали на следующей стадии напрямую без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 519,1 [М+Н]⁺.

- 41 031476

Стадия 10. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола (промежуточное соединение В)

К смеси (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (190 мг, 0,366 ммоль) и K₂CO₃ (127 мг, 0,916 ммоль) в MeOH (10 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C добавляли диметил (1-диазо-2-оксопропил)фосфонат (141 мг, 0,733 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 16 ч при температуре 18°C в атмосфере аргона. Цвет смеси менялся от желтого до голубого. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС/ТСХ. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали на колонке с силикагелем, элюируя смесью DCM/MeOH (97:3), с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 515,1 [M+H]⁺¹.

Ή-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,22 (с, 1Н), 7,12 (с, 1Н), 6,25 (дд, J=8,8 Гц, 5,6 Гц, 1Н), 5,84 (шир. с, 2Н), 4,71 (дд, J=5,6 Гц, 2 Гц, 1Н), 4,01 (д, J=12,4 Гц, 1Н), 3,80 (д, J=16 Гц, 1Н), 3,17-3,10 (м, 1Н), 2,59 (с, 1Н), 2,27-2,21 (м, 1Н), 0,91 (с, 9Н), 0,11 (с, 6Н).

Пример 7. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (7)

TBSO' _н0<··

Промежуточное соединение В 7

К раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола (промежуточное соединение В, 20 мг, 0,039 ммоль) в тетрагидрофуране (3 мл) при температуре 18°C в атмосфере аргона добавляли TBAF (0,05 мл, 0,050 ммоль). Полученную смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 0,5 ч при температуре 18°C. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CH₂Cl₂/Ме0Н (7:1), с получением сырого продукта, который очищали с помощью преп-ВЭЖХ в следующих условиях: прибор, Water-1 (26); колонка: Xbridge RP18, 5 мкм, 19x150 мм; мобильная фаза: вода (0,05%-ный бикарбонат амммония+диоксид углерода) и ацетонитрил (от 10%-ного ацетонитрила до 40% в течение 8 мин, удержание 100% в течение 2 мин, вплоть до 10% в течение 2 мин); детектор, УФ 220 и 254 нм. Объединенные фракции объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 7 в виде твердого вещества.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 401,0 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, CD₃OD): δ 8,10 (с, 1Н), 7,63 (с, 1Н), 6,68 (с, 2Н), 6,49 (т, J=6,4 Гц, 1Н), 5,52 (д, J=5,2 Гц, 1Н), 4,48 (кв, J=6,0 Гц, 1Н), 3,64-3,60 (м, 1Н), 3,57-3,52 (м, 1Н), 3,48 (с, 1Н), 2,53-2,47 (м, 1Н), 2,35-2,29 (м, 1Н).

- 42 031476

Пример 8. Синтез (2К,38,5К)-5-(2,4-диамино-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола

Стадия 1. Синтез (2К,38,5К)-5-(2-амино-4-хлор-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-7-ил)-2-(((4метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3 -ил 4-метилбензоата.

Смесь 4-хлор-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-2-амина (2,0 г, 11,86 ммоль) и NaH (0,524 г, 13,09 ммоль) в ацетонитриле (60 мл) в атмосфере аргона перемешивали в течение 0,5 ч при комнатной температуре в атмосфере аргона. В смесь затем добавляли промежуточное соединение А (4,628 г, 11,90 ммоль), перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре, затем при температуре 50°C в течение 2 ч. Процесс отслеживали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали на колонке с силикагелем, элюируя CH₂Cl₂/MeOH (92:8), с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 521,1 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО-й₆): δ 7,93 (дд, J=8,1 Гц, 4Н), 7,68-7,21 (м, 5Н), 6,78 (с, 2Н), 6,57 (кв, J=5,85 Гц, 1Н), 6,39 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 5,69 (д, J=5,7 Гц, 1Н), 4,63-4,43 (м, 3Н), 3,04-2,94 (м, 1Н), 2,66 (дд, J=4,95 Гц, 1Н), 2,41 (д, J=7,8 Гц, 6Н), 1,99 (с, 1Н).

Стадия 2. Синтез (2К^,5К)-5-(2,4-диамино-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-7-ил)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

Смесь (2К^,5К)-5-(2-амино-4-хлор-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-7-ил)-2-(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоата.

(1,0 г, 0,960 ммоль) и аммиака (50 мл, 0,960 ммоль) в 2-пропаноле (5 мл) перемешивали в течение 20 ч при температуре 100°C. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды и концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CH₂Cl₂/MeOH (82:18), с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 266,0 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО-Й6): δ 6,93 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,76 (с, 2Н), 6,40 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,32 (кв, J=5,85 Гц, 1Н), 5,70 (с, 2Н), 5,20 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 4,29 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 3,78-3,74 (м, 1Н), 3,55-3,41 (м, 2Н), 3,16 (с, 1Н), 2,49-2,34 (м, 1Н), 2,08-2,01 (м, 1Н).

Стадия 3. Синтез 7-((2К^,5К)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пирроло [2,3-d] пиримидин-2,4-диамина.

К смеси (2К^,5К)-5-(2,4-диамино-7Н-пирроло[2,3^]пиримидин-7-ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (1,39 г, 5,24 ммоль) и TBDMS-Cl (2,369 г, 15,72 ммоль) в ДМФ (6 мл) в атмосфере аргона добавляли имидазол (1,784 г, 26,2 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 16 ч при температуре 20°C в атмосфере аргона. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС/ТСХ. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CH₂Cl₂/MeOH (92:8), с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 494,4 [М+Н]⁺.

- 43 031476 ’H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 7,58 (с, 2Н), 7,04 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 6,54 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 6,52 (с, 2Н), 6,32 (дд, J=6,0 Гц, 1Н), 4,45 (т, J=2,4 Гц, 1Н), 3,78 (д, J=2,1 Гц, 1Н), 3,68 (т, J=5,5 Гц, 2Н), 3,17 (д, J=3,0 Гц, 1Н), 2,49-2,42 (м, 1Н), 2,17-2,10 (м, 1Н), 0,89 (с, 18Н), 0,10-0,09 (м, 12Н).

Стадия 4. Синтез N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((третбутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пирроло[2,3^]пиримидин-2,4-диил)дибензамида.

К смеси 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-7Н-пирроло[2,3^]пиримидин-2,4-диамина (138 мг, 0,279 ммоль) и DMAP (5 мг, 0,041 ммоль) в пиридине (5 мл) в атмосфере аргона добавляли бензоилхлорид (158 мг, 1,124 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 4 ч при температуре 0°C в атмосфере аргона. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС/ТСХ. Реакционную смесь гасили с помощью воды (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x30 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (40 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали на колонке с силикагелем, элюируя РЕ/ЕА (2:1), с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 702,3 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 11,11 (с, 1Н), 10,80 (с, 1Н), 8,09 (д, J=7,2 Гц, 2Н), 7,73 (д, J=7,2 Гц, 2Н), 7,66-7,43 (м, 8Н), 6,62-6,54 (м, 2Н), 4,56 (с, 1Н), 3,84-3,64 (м, 4Н), 2,81-2,72 (м, 1Н), 2,26-2,22 (м, 1Н), 0,90-0,83 (м, 18Н), 0,11-0,01 (м, 12Н).

Стадия 5. Синтез N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-7Н-пирроло[2,3^]пиримидин-2,4-диил)дибензамида.

К смеси N,N'-(7 -((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-7Н-пирроло[2,3^]пиримидин-2,4-диил)дибензамида (110 мг, 0,157 ммоль) в ТГФ (4 мл) добавляли раствор ТФУ (0,5 мл, 6,49 ммоль) в воде (0,5 мл) при температуре 0°C. Полученную смесь перемешивали в течение 4 ч при температуре 0°C. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CH₂Cl₂/MeOH (95:5), с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 588,6 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 11,11 (с, 1Н), 10,81 (с, 1Н), 8,09 (д, J=7,2 Гц, 2Н), 7,97 (д, J=7,2 Гц, 2Н),

7.65- 7,46 (м, 8Н), 6,62-6,56 (м, 2Н), 4,96 (т, J=5,4 Гц, 1Н), 4,58 (т, J=2,7 Гц, 1Н), 3,82-3,77 (м, 2Н), 3,563,51 (м, 2Н), 2,72-2,67 (м, 1Н), 2,27-2,21 (м, 1Н), 0,88 (с, 9Н), 0,09 (с, 6Н).

Стадия 6. Синтез N,N'-(7-((2R,4S,5S)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-формилтетрагидрофуран2 -ил) -1Н -пирроло [2,3-d] пиримидин-2,4 -диил)дибензамида.

К смеси N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-7Н-пирроло[2,3^]пиримидин-2,4-диил)дибензамида (35 мг, 0,060 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) в атмосфере аргона добавляли IBX (42 мг, 0,150 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 50 мин при температуре 50°C в атмосфере аргона. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, сырой продукт использовали на следующей стадии напрямую без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 618,3 [М+СН₃ОН]⁺.

Стадия 7. Синтез N,N'-(7-((2R,4S)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5,5-бис-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-7Н-пирроло[2,3^]пиримидин-2,4-диил)дибензамида.

К раствору N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-формилтетрагидрофуран-2ил)-7Н-пирроло[2,3^]пиримидин-2,4-диил)дибензамида (35 мг, 0,060 ммоль) в 1,4-диоксане (5 мл) добавляли формальдегид (1 мл, 0,060 ммоль), NaOH (1 мл, 2,000 ммоль), смесь перемешивали в течение 4 ч при температуре 20°C, охлаждали до температуры 0°C, гасили AcOH до pH 6, добавляли воду (40 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x40 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, остаток растворяли в этаноле (5,00 мл), в атмосфере аргона добавляли NaBH₄ (5,65 мг, 0,149 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 16 ч при температуре 20°C. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды, гасили AcOH до pH 6, добавляли воду (40 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x40 мл). Органические слои концентрировали и очищали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CH2Cl2/MeOH (20:1), с получением указанного в заголовке продукта в виде твердого вещества.

ЖХМС: (ES, m/z): 618,2 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 11,11 (с, 1Н), 10,80 (с, 1Н), 8,09 (д, J=7,2 Гц, 2Н), 7,73 (д, J=7,2 Гц, 2Н),

7.66- 7,43 (м, 8Н), 6,62-6,54 (м, 2Н), 4,56 (с, 1Н), 3,84-3,64 (м, 4Н), 2,81-2,72 (м, 1Н), 2,26-2,22 (м, 1Н), 0,90-0,83 (м, 18Н), 0,11-0,01 (м, 12Н).

- 44 031476

Огадия 8. ^шез N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-формил-5(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-7Н-пирроло[2,3Щ]пиримидин-2,4-диил)дибензамида.

К раствору N,N'-(7-((2R,4S)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5,5-бис-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-7Н-пирроло [2,3-d] пиримидин-2,4-диил)дибензамида (30 мг, 0,049 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) в атмосфере аргона при температуре 20°С добавляли IBX (40 мг, 0,143 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 3 ч при температуре 25°С в атмосфере аргона. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС Реакционную смесь оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта в виде твердого вещества, которое использовали на следующей стадии напрямую без дополнительной очистки.

ЖХ-MC: (ES, m/z): 616,2 [М+Н]⁺.

Ладия 9. ^шез N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-этинил-5(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-7Н-пирроло[2,3Щ]пиримидин-2,4-диил)дибензамида.

К смеси N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-формил-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-7Н-пирроло[2,3Щ]пиримидин-2,4-диил)дибензамида (70 мг, 0,114 ммоль) и KTCO, (39,3 мг, 0,284 ммоль) в MeOH (5 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°С добавляли раствор диметил (2-диазо-3-оксобутаноил)фосфоната (50,0 мг, 0,227 ммоль) в MeOH (0,25 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 16 ч при температуре 25°С в атмосфере аргона. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали с помощью TCX, элюируя СЩСГ/MeOH (20:1), с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-MC: (ES, m/z): 612,4 [М+Н]⁺.

Ладия 10. ^шез (2R,3S,5R)-5-(2,4-диамино-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (8).

К раствору N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-этинил-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-7Н-пирроло[2,3Щ]пиримидин-2,4-диил)дибензамида (40 мг, 0,065 ммоль) в MeOH (4 мл) в атмосфере аргона при температуре 20°С добавляли раствор NaOOTs в MeOH (0,065 мл, 0,065М). Полученную смесь перемешивали в течение 48 ч при температуре 40°С в атмосфере аргона. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС Реакционную смесь оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды и концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали с помощью TCX, элюируя смесью С^СГ/MeOH (20:1), с получением сырого промежуточного соединения (27 мг) в виде твердого вещества, которое разбавляли в ТГФ (3 мл) в атмосфере аргона. При температуре 20°С добавляли раствор TBAF (1 M, 0,040 мл, 0,04 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 0,5 ч при температуре 20°С в атмосфере аргона. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖXMC/TCX. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали с помощью ТСХ, элюируя СЩСГ/MeOH (5:1), с получением сырого продукта (15 мг), затем очищали с помощью преп-ВЭЖХ в следующих условиях: прибор, Waters-2767-Prep; колонка: Xbridge RP18, 5 мкм, 19x150 мм; мобильная фаза: вода (0,05%-ный бикарбонат амммония (диоксид углерода) и ацетонитрил (от 5%-ного ацетонитрила до 40% в течение 8 мин); детектор, УФ 220 и 254 нм. Oбъединенные фракции объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 8 в виде твердого вещества.

ЖХ-Ме (ES, m/z): 618,2 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, СОС1₃): δ 6,85 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,55 (с, 2Н), 6,36 (д, J=4,0 Гц, 2Н), 5,56 (с, 2Н), 5,48-5,43 (м, 2Н), 4,42 (кв, J=5,6 Гц, 1Н), 3,61-3,49 (м, 2Н), 3,44 (с, 1Н), 2,47-2,40 (м, 1Н), 2,26-2,21 (м, 1Н).

- 45 031476

Пример 9. Синтез (2К^,5К)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (9)

Стадия 1. Синтез 4-азидо-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-2-амина.

К перемешиваемому раствору 4-хлор-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-2-амина (3,5 г, 20,76 ммоль) в безводном ДМСО (35 мл) в атмосфере аргона, добавляли раствор азида натрия (2,025 г, 31,1 ммоль) в воде (3,50 мл). Смесь нагревали до температуры 100°C и перемешивали в течение ночи. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ и ЖХМС. Полученную смесь охлаждали до температуры окружающей среды. Добавляли 250 г измельченного льда и смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 30 мин. Образовывался осадок. Осадок собирали путем фильтрации, промывали холодной водой и сушили над P2O5 в вакууме в течение ночи с получением 4-азидо-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-2-амина в виде твердого вещества, которое использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.

¹Н-ЯМР (400 МГц, й₆-ДМСО, м.д.): δ 11,91 (шир. с, 1Н), 7,96 (шир. с, 2Н), 7,13 (т, J=3,0 Гц, 1Н), 6,72 (дд, J=2,0 Гц, J=3,2 Гц, 1Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 176,00 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Синтез 4-азидо-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина.

Фтористый водород-пиридин (70% HF в 30% Ру) (12 мл, 133 ммоль) в атмосфере аргона загружали в тефлоновую бутыль. В нее добавляли 4-азидо-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-2-амин (3,1 г, 17,70 ммоль). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды до тех пор, пока раствор не становился прозрачным, затем охлаждали до температуры -60°C, далее по каплям в течение 10 мин добавляли трет-бутил нитрит (2,5 мл, 21,02 ммоль). Полученную смесь перемешивали при интервале температур от -60 до -40°C в течение 2 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ и ЖХМС. Смесь выливали в холодный водный раствор NaHCO₃ (150 мл, насыщенный). Сырой продукт экстрагировали этилацетатом (3x100 мл), промывали насыщенным солевым раствором (2x100 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме с получением остатка. Остаток затем очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (1/4), с получением 4-азидо-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина в виде твердого вещества.

¹Н-ЯМР (300 МГц, а₆-ДМСО, м.д.): δ 12,43 (шир. с, 1Н), 7,48 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 6,50 (д, J=3,6 Гц, 1Н).

F-ЯМР (282 МГц, й₆-ДМСО, м.д.): δ -54,57 (с, 1F).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 179,20 [М+Н]⁺.

Стадия 3. Синтез (2К^,5К)-5-(4-азидо-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-7-ил)-2-(((4метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоата.

К перемешиваемой суспензии гидрида натрия (60%-ная дисперсия в минеральном масле) (0,272 г, 6,79 ммоль) в безводном ДМФ (20 мл) в атмосфере аргона в 50-миллилитровой двухгорлой круглодонной колбе порциями при температуре 0°C добавляли 4-азидо-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (1,1 г, 6,18 ммоль) и смесь перемешивали при этой температуре в течение 5 мин. При перемешивании добавляли промежуточное соединение А (2,4 г, 6,17 ммоль). Реакционную смесь нагревали до температуры 25°C

- 46 031476 и перемешивали в течение 2 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ и ЖХМС. Смесь разбавляли этилацетатом (100 мл), промывали водой (70 мл). Водный слой вновь экстрагировали этилацетатом (60 млх2). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (100 млх3), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (1/10) с получением указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,00 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,95 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,32-7,23 (м, 4Н), 6,74 (дд, J=6,4 Гц, J=8,0 Гц, 1Н), 6,49 (д, J=4,0 Гц, 1Н), 5,75-5,74 (м, 1Н), 4,75-4,54 (м, 3Н), 2,85-2,74 (м, 2Н), 2,47-2,43 (м, 6Н).

F-ЯМР (376 МГц, CDCl₃, м.д.): δ -52,26 (с, 1F, β изомер), -52,48 (с, 1F, α изомер).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 531,42 [М+Н]⁺.

Стадия 4. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(((4метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3 -ил 4-метилбензоата.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-азидо-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоата.

(2,0 г, 3,77 ммоль) в смеси MeOH (10 мл) и DCM (15 мл) в атмосфере аргона добавляли пропан-1,3дитиол (0,816 г, 7,54 ммоль), затем по каплям при перемешивании в течение 10 мин при температуре 25°C добавляли триэтиламин (0,763 г, 7,54 ммоль). Смесь перемешивали при температуре 25°C в течение 30 мин. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток затем очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (42% ЕА в РЕ) с получением указанного в заголовке соединения в виде порошка.

Ή-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,00 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,97 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,33-7,26 (м, 4Н), 7,12 (д, J=4,0 Гц, 1Н), 6,72 (дд, J=6,2 Гц, J=8,2 Гц, 1Н), 6,38 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 5,75-5,72 (м, 1H), 5,36 (шир. с, 2Н), 4,73-4,57 (м, 3Н), 2,79-2,74 (м, 2Н), 2,47 (с, 3Н), 2,44 (с, 3Н).

F-ЯМР (376 МГц, CDCl₃, м.д.): δ -52,97 (с, 1F, β изомер), -53,10 (с, 1F, α изомер).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 505,63 [М+Н]⁺.

Стадия 5. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3 -ола.

В перемешиваемый раствор (2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2(((4-метилбензоил)окси)метил)тетрагидрофуран-3-ил 4-метилбензоата.

(1,75 г, 3,47 ммоль) в безводном MeOH (10 мл) в атмосфере аргона при перемешивании при температуре 0°C в течение 5 мин вводили раствор метоксида натрия в MeOH (1,0 М, 3,47 мл, 3,47 ммоль). Полученную смесь оставляли перемешиваться при температуре от 0 до 10°C в течение 4 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ и ЖХМС. Полученную смесь нейтрализовали путем добавления AcOH, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток затем очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси дихлорметан/метанол (6%-ный MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (400 МГц, d..-ДМСО. м.д.): δ 7,55 (шир. с, 2Н), 7,31 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,61 (д, J=3,6 Гц, 1Н),

6,34 (дд, J=6,4 Гц, J=8,0 Гц, 1Н), 5,26 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 4,92 (т, J=5,0 Гц, 1Н), 4,32 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 3,823,79 (м, 1Н), 3,58-3,46 (м, 2Н), 2,48-2,41 (м, 1Н), 2,19-2,13 (м, 1Н).

F-ЯМР (376 МГц, б₆-ДМСО, м.д.): δ -53,77 (с, 1F, β изомер), -53,98 (с, 1F, α изомер).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 269,20 [М+Н]⁺.

Стадия 6. Синтез 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-амина.

(2R,3S,5R)-5-(4-Амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол (850 мг, 3,17 ммоль) и имидазол (863 мг, 12,68 ммоль) загружали в 50-миллилитровую круглодонную колбу в атмосфере аргона. В колбу помещали безводный ДМФ (10 мл), затем порциями добавляли TBS-Cl (1433 мг, 9,51 ммоль). Смесь перемешивали при температуре 25°C в течение 2 ч. После завершения реакции смесь разбавляли этилацетатом (60 мл), промывали водой (2x30 мл), водным раствором NaHCO₃ (насыщенный, 2x30 мл) и насыщенным солевым раствором (2х30 мл) соответственно. Органический слой собирали и сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта. Остаток затем очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (20% ЕА в РЕ) с получением указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (300 МГц, б₆-ДМСО, м.д.): δ 7,55 (шир. с, 2Н), 7,26 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,60 (д, J=3,3 Гц, 1Н), 6,31 (т, J=6,6 Гц, 1Н), 4,55-4,50 (м, 1Н), 3,80-3,61 (м, 4Н), 2,64-2,55 (м, 1Н), 2,23-2,17 (м, 1Н), 0,90-0,87 (м, 18Н), 0,11-0,06 (м, 12Н).

F-ЯМР (282 МГц, б₆-ДМСО, м.д.): δ -53,64 (с, 1F, β изомер), -53,78 (с, 1F, α изомер).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 497,58 [М+Н]⁺.

- 47 031476

Стадия 7. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((третбутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-2-фтор-7Н-пирроло[2,3^]пиримидин-4-амина (1,4 г, 2,82 ммоль) в ТГФ (24 мл) по каплям при перемешивании при температуре 0°С в течение 10 мин добавляли водную ТФУ (ТФУ/Н₂О=1/1, об./об., 12 мл). Полученную смесь оставляли перемешиваться при температуре 0°С. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. После перемешивания в течение 5 ч исходный ди-TBS защищенный нуклеозид полностью расходовался, затем реакционную смесь упаривали совместно с толуолом (3x50 мл). Остаток вновь растворяли в смеси MeOH/DCM (15% MeOH в DCM, 50 мл). При температуре 0°С добавляли твердый NaHCO₃ (2 г), затем добавляли воду (1 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 30 мин. После установления значения pH равным 7 твердые продукты отфильтровывали, фильтрат собирали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси этилацетат/петролейный эфир (40% ЕА в РЕ) с получением указанного в заголовке соединения.

’H-ЯМР (400 МГц, d^d^TO, м.д.): δ 7,57 (шир. с, 2Н), 7,32 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,61 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,32 (дд, J=6,0 Гц, J=8,0 Гц, 1Н), 4,99-4,96 (м, 1Н), 4,52 (т, J=2,8 Гц, 1Н), 3,79 (кв, J=2,4 Гц, 1Н), 3,54-3,49 (м, 2Н), 2,57-2,53 (м, 1Н), 2,19-2,13 (м, 1Н), 0,91-0,88 (м, 9Н), 0,13-0,11 (м, 6Н).

F-ЯМР (376 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ -53,71 (с, 1F, β изомер), -53,89 (с, 1F, α изомер).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 383,36 [М+Н]⁺.

Стадия 8. Синтез (2S,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

ТФУ (0,051 мл, 0,659 ммоль) в атмосфере аргона при комнатной температуре в течение 2 мин вводили в перемешиваемый раствор ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола (360 мг, 0,941 ммоль), DCC (N.N-дициклогексилкарбодиимид) (602 мг, 2,92 ммоль) и пиридина (0,084 мл, 1,035 ммоль) в безводном ДМСО (2 мл) и смесь перемешивали в течение ночи. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ и ЖХМС. Смесь фильтровали для удаления дициклогексилмочевины и фильтрат распределяли между этилацетатом (30 мл) и Н2О (30 мл). Органический слой собирали и промывали насыщенным солевым раствором (2x20 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат упаривали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 381,20 [М+Н]⁺, 413,20 C^MeO^^T

Стадия 9. Синтез ((3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола.

К перемешиваемому раствору (2S,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (400 мг, 1,051 ммоль) в 1,4-диоксане (8 мл) в 50-миллилитровую круглодонную колбу добавляли раствор формальдегида (1,2 мл, 16,01 ммоль), затем по каплям в течение 2 мин добавляли раствор гидроксида натрия (1,2 мл, 2,400 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 25°С в течение 7 ч. После того как был израсходован весь исходный нуклеозид, реакционную смесь нейтрализовали путем добавления AcOH. Полученную смесь разбавляли AcOEt (100 мл) и последовательно промывали водой (2x40 мл), насыщенным водным раствором NaHCO₃ (2x40 мл) и насыщенным солевым раствором (50 мл). Органический слой сушили над Na2SO4 и упаривали при пониженном давлении. Остаток вновь растворяли в EtOH (3 мл) и порциями при температуре 0°С добавляли боргидрид натрия (199 мг, 5,26 ммоль). После перемешивания в течение 5 ч при температуре 25°С реакционную смесь нейтрализовали путем добавления AcOH. Смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток распределяли между CHC1₃ (100 мл) и водой (50 мл). Органический слой последовательно промывали водой и насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄ и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси дихлорметан/метанол (30/1) с получением указанного в заголовке соединения.

’Н-ЯМР (400 МГц, d₆-ДМСО, м.д.): δ 7,55 (шир. с, 2Н), 7,34 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,60 (д, J=3,6 Гц, 1Н),

6,35 (т, J=7,0 Гц, 1Н), 4,90 (т, J=3,6 Гц, 1Н), 4,60 (кв, J=2,8 Гц, 1Н), 4,41 (т, J=3,6 Гц, 1Н), 3,60-3,43 (м, 4Н), 2,69-2,62 (м, 1Н), 2,23-2,17 (м, 1Н), 0,92 (с, 9Н), 0,09 (с, 6Н).

F-ЯМР (376 МГц, d^d^TO, м.д.): δ -53,80 (с, 1F, β изомер).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 413,32 [М+Н]⁺, 435,34 [M+Na]⁺.

Стадия 10. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемому раствору ((3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола (180 мг, 0,436 ммоль) в безводном ацетонитриле (15 мл) и сухом ДМСО (1,5 мл) в 50-миллилитровой круглодонной колбе в атмосфере аргона добавляли IBX (367 мг, 1,309 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 20°С в

- 48 031476 течение 8 ч. Реакционную смесь фильтровали, промывали дихлорметаном. Фильтрат собирали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток вновь растворяли в этилацетате (40 мл), промывали водой (3x15 мл) и насыщенным солевым раствором (2x20 мл), последовательно, сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.

Ή-ЯМР (400 МГц, CDCla, м.д.): δ 9,65 (с, 1Н), 7,60 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,43 (дд, J=5,6 Гц, J=9,6 Гц, 1Н), 6,39 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 5,56-5,43 (м, 3Н), 4,96 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 4,08 (д, J=11,2 Гц, 1Н), 3,81 (д, J=12,8 Гц, 1Н), 3,27-3,19 (м, 1Н), 2,25 (дд, J=5,4 Гц, J=13,0 Гц, 1Н), 0,91 (с, 9Н), 0,11 (д, J=5,2 Гц, 6Н).

F-ЯМР (376 МГц, CDCl₃, м.д.): δ -53,14 (с, 1F).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 411,21 [М+Н]⁺.

Стадия 11. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (190 мг, 0,463 ммоль) в безводном MeOH (8 мл) в атмосфере аргона добавляли карбонат калия (160 мг, 1,157 ммоль). Смесь охлаждали до температуры 0°C, затем по каплям в течение 1 мин добавляли диметил (1-диазо-2-оксопропил)фосфонат (178 мг, 0,926 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 25°C и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и затем очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси метанол/дихлорметан (4,8% MeOH в DCM) с получением указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (400 МГц, CDCl3, м.д.): δ 6,99 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,35 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,28 (дд, J=6,0 Гц, J=8,8 Гц, 1Н), 5,45-5,33 (м, 3Н), 4,76 (кв, J=2,8 Гц, 1Н), 4,03 (дд, J=2,0 Гц, J=12,4 Гц, 1Н), 8,16-3,79 (м, 1Н), 3,12-3,06 (м, 1Н), 2,70 (с, 1Н), 2,33-2,27 (м, 1Н), 0,94 (с, 9Н), 0,16 (д, J=8,0 Гц, 6Н).

F-ЯМР (376 МГц, CDCl₃, м.д.): δ -53,26 (с, 1F).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 407,30 [М+Н]⁺.

Стадия 12. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (9).

К перемешиваемому раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

(15 мг, 0,037 ммоль) в безводном ТГФ (1 мл) в атмосфере аргона по каплям при перемешивании в течение 1 мин при температуре окружающей среды добавляли раствор TBAF в ТГФ (0,037 мл, 0,037 ммоль). Содержимое перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. После того как был израсходован весь исходный нуклеозид, смесь концентрировали в вакууме, остаток затем очищали путем препаративной ТСХ (MeOH/DCM = 1/15) с получением сырого продукта (10 мг). Сырой продукт далее очищали путем препаративной-ВЭЖХ в следующих условиях: (1#-Pre-HPLC-011 (Waters)): колонка, X-bridge C18 Column, 19x150 мм, 5 мкм; мобильная фаза, вода с 10 ммоль бикарбоната амммония и ацетонитрил (5%-ного ацетонитрила до 30% в течение 5 мин, вплоть до 95% в течение 2 мин); детектор, УФ 254 и 220 нм. Содержащие продукт фракции собирали и лиофилизовали с получением соединения 9 в виде твердого вещества.

Ή-ЯМР (400 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 7,57 (шир. с, 2Н), 7,28 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,61 (д, J=3,6 Гц, 1Н),

6,35 (т, J=6,4 Гц, 1Н), 5,51 (д, J=5,6 Гц, 1Н), 5,27 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,48 (дд, J=6,4 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 3,61 (дд, J=5,6 Гц, J=11,6 Гц, 1Н), 3,53 (дд, J=6,4 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 3,48 (с, 1Н), 2,50-2,46 (м, 1Н), 2,37-2,31 (м, 1H).

F-ЯМР (376 МГц, ds-ДМСО, м.д.): δ -53,67 (с, 1F).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 293,15 [М+Н]⁺, 315,15 [M+Na]⁺.

Пример 10. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-гидрокси-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрила (10)

Стадия 1. Синтез оксима 5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3Д]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (пример 1, промежуточное соединение С, 50 мг, 0,127 ммоль, 1,0 экв.) в сухом пиридине (2,5 мл) в атмосфере аргона добавляли гидрохлорид гидроксиламина (26,6 мг, 0,382 ммоль, 3,0 экв.). Полученную смесь перемешивали при

- 49 031476 температуре 30°C в течение 2 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, остаток затем растворяли в этилацетате (50 мл), промывали водой (2x30 мл) и насыщенным солевым раствором (35 мл), последовательно, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем препаративной ТСХ (DCM/MeOH=10/1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 408,20 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Синтез (2К^,5И)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-а]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрила.

В перемешиваемую смесь оксима 5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (40 мг, 0,098 ммоль) и триэтиламина (105 мг, 1,038 ммоль) в сухом DCM (5 мл) по каплям при перемешивании при температуре 20°C в атмосфере аргона добавляли ангидрид 2,2,2-трифторуксусной кислоты (110 мг, 0,524 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 20°C в течение 20 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь разбавляли DCM (30 мл), промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 (25 мл) и насыщенным солевым раствором (25 мл), последовательно, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем препаративной ТСХ (DCM/MeOH=10/1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 390,11 [М+Н]⁺.

’Н-ЯМР (300 МГц, CD₃OD, м.д.): δ 8,10 (с, 1Н), 7,30 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,68 (т, J=6,9 Гц, 1Н), 6,64 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 4,90 (т, J=6,3 Гц, 1Н), 3,85(дд, J=12,0 Гц, J=21,6 Гц, 2Н), 2,85-2,94 (м, 1Н), 2,42-2,49 (м, 1Н), 1,02 (с, 9Н), 0,26 (д, J=9,0 Гц, 6Н).

Стадия 3. Синтез (2К^,5И)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-а]пиримидин-7-ил)-3-гидрокси-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрила (10).

К перемешиваемому раствору (2К^,5И)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-а]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрила (35 мг, 0,090 ммоль) в сухом ТГФ (5 мл) по каплям при перемешивании в атмосфере аргона при температуре 15°C добавляли раствор TBAF в ТГФ (1,0 М, 0,108 мл, 0,108 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 15°C в течение 0,5 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХМС и ТСХ. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем препаративной ТСХ (DCM/MeOH=10/1) с получением сиропа. Сырой продукт далее очищали с помощью преп-ВЭЖХ в следующих условиях: (1#-Pre-HPLC-011 (Waters)): колонка, SunFire C18 reverse Column, 19x150 мм, 5 мкм; мобильная фаза, вода с 10 ммоль бикарбоната амммония и ацетонитрил (от 5%-ного ацетонитрила до 20% в течение 7,5 мин, вплоть до 95% в течение 2 мин, вплоть до 5% в течение 1 мин); детектор, УФ 254 и 220 нм. Содержащие продукт фракции собирали и лиофилизовали с получением указанного в заголовке соединения 10 в виде твердого вещества.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 276,10 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (400 МГц, а₆-ДМСО, м.д.): δ 8,07 (с, 1Н), 7,34 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 7,33 (шир., 2Н), 7,08 (с, 1Н), 6,64 (т, J=7,0 Гц, 1Н), 6,61 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,27 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 5,82 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,61 (дд, J=4,8 Гц, J=10,0 Гц, 1Н), 3,75 (дд, J=5,6 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 3,62 (дд, J=6,0 Гц, J=11,6 Гц, 1Н), 2,74-2,81 (м, 1Н), 2,33-2,38 (м, 1Н).

- 50 031476

Пример 11. Синтез (2К^,5К)-5-(4-аминопирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (11)

Стадия 1. Синтез 4-(метилтио)пирроло[2,1-1][1,2,4]триазина.

Синтез 4-хлорпирроло[2,1-1][1,2,4]триазина описан в WO 2011/150356A1, 2011.

В 500-миллитровую круглодонную колбу помещали раствор 4-хлорпирроло[2,1-1][1,2,4]триазина (17 г, 110,70 ммоль) и (метилсульфанил)натрия (15 г, 214,01 ммоль) в тетрагидрофуране (300 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ночи при комнатной температуре. Твердые продукты отфильтровывали. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток помещали на колонку с силикагелем этилацетатом/петролейный эфир (1:10). Это приводило к получению указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС (ES, m/z): 166 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Синтез (3К,4К,5К)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)-2-(4-(метилтио)пирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)тетрагидрофуран-2-ола.

К раствору 4-(метилтио)пирроло[2,1-:1][1,2,4]триазина (1,650 г, 9,99 ммоль) в ТГФ (30 мл) при температуре -78°C в атмосфере аргона добавляли диизопропиламид лития (7,5 мл, 15,00 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение 30 мин при температуре -78°C. После этого при температуре -78°C в атмосфере аргона добавляли (3К,4К,5К)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)дигидрофуран2(3Н)-он (4,18 г, 9,99 ммоль) в ТГФ (10 мл) и перемешивали 120 мин в интервале температур от -78 до 50°C. Реакцию гасили с помощью дополнительного количества хлорида аммония (водн., 10 мл) и затем экстрагировали этилацетатом (300 мл). Органический слой промывали (3x50 мл) насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем, элюировали смесью этилацетат/петролейный эфир (1:5) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 584,2 [М+Н]⁺.

Стадия 3. Синтез 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2ил)-4-(метилтио)пирроло [2,1-f][1,2,4]триазина.

К раствору (3R,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)-2-(4-(метилтио)пирроло[2,1Г][1,2,4]триазин-7-ил)тетрагидрофуран-2-ола (3,00 г, 5,14 ммоль) в DCM (30 мл) при температуре 0°C в атмосфере аргона добавляли триэтилсилан (2,390 г, 20,56 ммоль) и трифторборан (0,697 г, 10,28 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 30 мин при температуре 0°C и затем гасили дополнительным количеством бикарбоната натрия (водн., 20 мл), экстрагировали DCM (200 мл). Органический слой промывали 3x50 мл насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали

- 51 031476 в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем, элюировали смесью этилацетат/петролейный эфир (1:10) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 568,4 [М+Н]⁺.

^!Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,21 (с, 1Н), 7,23-7,36 (м, 15Н), 6,81 (д, J=4,5 Гц, 1Н), 6,70 (д, J=4,5 Гц, 1Н), 5,69 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 4,37-4,62 (м, 7Н), 4,22-4,26 (м, 1Н), 4,10-4,13 (м, 1Н), 3,66-3,67 (м, 1Н), 3,62-3,63 (м, 1Н), 2,75 (с, 3Н).

Стадия 4. Синтез 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2ил)пирроло [2,1-f][ 1,2,4]триазин-4-амина.

Раствор 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-4(метилтио)пирроло[2,14][1,2,4]триазина (4,6 г, 8,10 ммоль) в 2-пропаноле (5 мл) при температуре -40°C в течение 60 мин в герметически закрытой пробирке продували аммиаком (1350 мг, 79 ммоль). После перемешивания полученной смеси в течение 16 ч при температуре 80°C ее упаривали с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 537,3 [М+Н]⁺.

^!Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО, м.д.): δ 7,80 (с, 1Н), 7,69 (с, 2Н), 7,24-7,36 (м, 15Н), 6,88 (д, J=4,5 Гц, 1Н), 6,80 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 5,44 (д, J=5,4 Гц, 1Н), 4,49-4,62 (м, 6Н), 4,31 (т, J=5,1 Гц, 1Н), 4,15-4,18 (м, 1Н), 4,09-4,12 (м, 1Н), 3,29-3,67 (м, 2Н).

Стадия 5. Синтез (2S,3S,4R,5R)-2-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3,4-диола.

К раствору 7-(^,^п^.4Ц.5Ц)-3.4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2ил)пирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-4-амина (100 мг, 0,186 ммоль) в уксусной кислоте (2 мл) в атмосфере водорода при температуре 25°C в течение 4 ч добавляли Pd(OH)₂ (10 мол.%)/С (100 мг, 0,130 ммоль). Смесь фильтровали через слой из целита и фильтрат упаривали. Остаток наносили на колонку с силикагелем, элюировали смесью MeOH/DCM (1:8) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 267,2 [М+Н]⁺.

^!Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО, м.д.): δ 7,79(с, 1Н), 7,77(с, 2Н), 6,84 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 6,68 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 5,10 (д, J=6,6 Гц, 1Н), 4,95 (д, J=6,6 Гц, 1Н), 4,84 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 4,76 (т, J=5,4 Гц, 1Н), 4,20-4,25 (м, 1Н), 3,94 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 3,78 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 3,41-3,64 (м, 2Н).

Стадия 6. Синтез (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2,2,4,4тетраизопропилтетрагидро-6Н-фуро[3,2-£][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9-ола.

^^^^)-2-(4-Аминопирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран3,4-диол (790 мг, 2,97 ммоль) и 1Н-имидазол (606 мг, 8,90 ммоль) растворяли в ДМФ (20 мл) в атмосфере аргона, добавляли по каплям при температуре 0°C 1,3-дихлор-1,1,3,3-тетраизопропилдисилоксан (936 мг, 2,97 ммоль). После перемешивания полученной смеси в течение 5 ч при температуре 25°C в атмосфере аргона добавляли воду (10 мл) и полученную смесь разбавляли этилацетатом (400 мл). Органическую фазу промывали (3x60 мл) водой и 60 мл насыщенного солевого раствора, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем, элюировали MeOH/DCM (1:20) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 509,3 [М+Н]⁺.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО, м.д.): δ 7,81 (с, 1Н), 7,70 (с, 2Н), 6,82 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 6,61 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 5,20 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 5,16 (д, J=1,6 Гц, 1Н), 4,31-4,35 (м, 1Н), 4,12-4,15 (м, 1Н), 4,00-4,03 (м, 1Н), 3,88-3,91 (м, 1Н), 0,96-1,05 (м, 28Н).

Стадия 7. Синтез О-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2,2,4,4тетраизопропилтетрагидро-6Н-фуро[3,2-£][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9-ил) О-фенил карбонотиоата (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-Аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2,2,4,4-тетраизопропилтетрагидро6Н-фуро[3,24][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9-ол (210 мг, 0,413 ммоль) и ^№диметилпиридин-4-амин (202 мг, 1,651 ммоль) растворяли в DCM (10 мл) в атмосфере аргона. По каплям при температуре 0°C добавляли О-фенил карбонохлоридотиоат (143 мг, 0,826 ммоль). После перемешивания реакционной смеси при температуре 25°C в атмосфере аргона в течение 2 ч полученную смесь разбавляли DCM (100 мл) и затем промывали 3x30 мл водой и 30 мл насыщенного солевого раствора. Органический слой сушили над Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем и элюировали смесью этилацетат/петролейный эфир (3:1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 645,2 [М+Н]⁺.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО, м.д.): δ 7, 83 (с, 2Н), 7,79(с, 1Н), 7,48(т, J=8,0 Гц, 2Н), 7,33 (т, J=7, 2 Гц, 1Н), 7,14 (д, J=7,6 Гц, 2Н), 6,80 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 6,71 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 6,16 (дд, J=2,4 Гц, J=5,6 Гц, 1Н), 5,46 (д, J=2,0 Гц, 1Н), 4,90 (дд, J=5,6 Гц, J=8,8 Гц, 1Н), 3,95-4,06 (м, 2Н), 3,85-3,87 (м, 1Н), 0,96-1,06 (м, 28Н).

Стадия 8. Синтез 7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-тетраизопропилтетрагидро-6Н-фуро[3,2-f][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-8-ил)пирроло [2,1-f][ 1,2,4]триазин-4-амина.

О-((6aR,8R,9aS)-8-(4-Аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2,2,4,4-тетраизопропилтетрагидро6Н-фуро[3,24][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9-ил) О-фенил карбонотиоат (1,45 г, 2,248 ммоль), AIBN

- 52 031476 (0,738 г, 4,50 ммоль) и трибутилстаннан (3,93 г, 13,49 ммоль) растворяли в толуоле (20 мл) в атмосфере аргона. После перемешивания реакционной смеси при температуре 80°C в атмосфере аргона в течение 3 ч полученный раствор концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем и элюировали смесью этилацетатом/петролейный эфир (2,5:1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 493,4 [М+Н]⁺.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО, м.д.): δ 7,81 (с, 1Н), 7,79 (с, 2Н), 6,81 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 6,60 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 5,46 (т, 1Н), 4,58-4,62 (м, 1Н), 3,90-4,00 (м, 1Н), 3,75-3,80 (м, 2Н), 2,20-2,30 (м, 1Н), 2,30-2,40 (м, 1Н), 0,98-1,06 (м, 28Н).

Стадия 9. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-Тетраизопропилтетрагидро-6Н-фуро[3,2-f][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-8ил)пирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-амин (1,0 г, 2,029 ммоль) в атмосфере аргона растворяли в ТГФ (10 мл). В реакционный раствор добавляли по каплям при температуре 20°C TBAF (0,531 г, 2,029 ммоль). После перемешивания полученного раствора при температуре 20°C в атмосфере аргона в течение 2 ч его концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем и элюировали с помощью смеси DCM/MeOH (20:1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 251,2 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО, м.д.): δ 7,83 (с, 1Н), 7,81 (с, 2Н), 6,84 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 6,82 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 5,47-5,51 (м, 1Н), 5,06 (д, J=4,0 Гц, 1Н), 4,73 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,22 (м, 1Н), 3,74-3,78 (м, 1Н), 3,323,45 (м, 2Н), 2,16-2,20 (м, 1Н), 2,09-2,14 (м, 1Н).

Стадия 10. Синтез 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло [2,1-f][1,2,4]триазин-4-амина.

(2R,3S,5R)-5-(4-Аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол (300 мг, 1,199 ммоль), 1Н-имидазол (490 мг, 7,19 ммоль) и трет-бутилхлордиметилсилан (723 мг, 4,80 ммоль) в атмосфере аргона растворяли в ДМФ (4,0 мл). После перемешивания реакционной смеси при температуре 20°C в атмосфере аргона в течение 5 ч полученную смесь разбавляли этилацетатом (100 мл), промывали (3x30 мл) водой и 30 мл насыщенного солевого раствора. Органический слой сушили Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем и элюировали смесью этилацетат/петролейный эфир (2:1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 479,3 [М+Н]⁺.

H-ЯМР (300 МГц, ДМСО, м.д.): δ 7,82 (с, 1Н), 7,75 (с, 2Н), 6,82 (д, J=4,5 Гц, 1Н), 6,61 (д, J=4,5 Гц, 1Н), 5,48-5,53 (м, 1Н), 4,42 (м, 1Н), 3,78 (м, 1Н), 3,48-3,62 (м, 2Н), 2,22-2,27 (м, 1Н), 2,04-2,10 (м, 1Н), 0,78-0,89 (м, 18Н), 0,00-0,10 (м, 12Н).

Стадия 11. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола.

7-((2R,4S,5R)-4-((трет-Бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-амин (500 мг, 1,044 ммоль) растворяли в ТГФ (8,0 мл), Н₂О (2,0 мл) и ТФУ (2,0 мл) и перемешивали при температуре 0°C в течение 4 ч. Реакционную смесь доводили до pH 7 с помощью бикарбоната натрия и затем экстрагировали этилацетатом (3x30 мл), промывали (3x20 мл) водой и 20 мл насыщенного солевого раствора. Органический слой сушили над Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем и элюировали смесью этилацетат/петролейный эфир (2:1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 365,3 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО, м.д.): δ 7,82 (с, 1Н), 7,68 (с, 2Н), 6,82 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 6,65 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 5,46-5,50 (м, 1Н), 4,80 (т, J=5,6 Гц, 1Н), 4,42 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 3,74-3,78 (м, 1Н), 3,32-3,44 (м, 2Н), 2,24-2,28 (м, 1Н), 2,02-2,06 (м, 1Н), 0,85-0,90 (м, 9Н), 0,00-0,10 (м, 6Н).

Стадия 12. Синтез (2S,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

((2R,3S,5R)-5-(4-Аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанол (270 мг, 0,741 ммоль) и IBX (270 мг, 0,963 ммоль) растворяли в ацетонитриле (20,0 мл) в атмосфере аргона. После перемешивания реакционной смеси при температуре 80°C в атмосфере аргона в течение 1 ч твердый продукт отфильтровывали и фильтрат концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии напрямую.

ЖХ-МС: 363,2 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО, м.д.): δ 9,59 (с, 1Н), 7,84 (с, 1Н), 7,73 (с, 2Н), 6,86 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 6,64 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 5,67-5,71 (м, 1Н), 4,71 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 4,25 (с, 1Н), 2,25-2,32 (м, 1Н), 2,12-2,17 (м, 2Н), 0,84-0,91 (м, 9Н), 0, 00-0,13 (м, 6Н).

- 53 031476

Стадия 13. Синтез ((3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола.

(2S,3S,5R)-5-(4-Аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегид (200 мг, 0,552 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (10 мл) при температуре 20°С. Затем добавляли формальдегид (2,0 мл, 0,552 ммоль) и гидроксид натрия (2,0 мл, 4,00 ммоль). После перемешивания полученной смеси при температуре 20°С в течение 4 ч ее доводили до pH 7 с помощью уксусной кислоты. Смесь разбавляли этилацетатом (150 мл), затем промывали 3x30 мл водой и 30 мл насыщенного солевого раствора. Органический слой сушили над \a₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в этаноле (10 мл) при температуре 0°С и затем при температуре 0°С добавляли \aBH₄ (41,7 мг, 1,103 ммоль). После перемешивания полученной смеси при температуре 20°С в течение 16 ч ее доводили до pH 7 с помощью уксусной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (150 мл), затем промывали (3x30 мл) водой и 30 мл насыщенного солевого раствора. Органический слой сушили над \a₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Остаток помещали на колонку с силикагелем и элюировали с помощью смеси ПСМ/MeOH (10:1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 395,2 [М+Н]⁺.

'll-ЯМР (400 МГц, ДМСО, м.д.): δ 7,82 (с, 1Н), 7,70 (с, 2Н), 6,82 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 6,66 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 5,50-5,60 (м, 1Н), 4,68 (т, 1Н), 4,52 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 4,22 (т, 1Н), 3,53-3,60 (м, 2Н), 2,35-2,45 (м, 1Н), 2, 00-2, 10 (м, 1Н), 0,90 (с, 9Н), 0,08-0,09 (м, 6Н).

Стадия 14. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

((3S,5R)-5-(4-Аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанол (90 мг, 0,228 ммоль) и IBX (256 мг, 0,912 ммоль) в атмосфере аргона растворяли в ацетонитриле (15,0 мл). После перемешивания реакционной смеси при температуре 30°С в атмосфере аргона в течение 48 ч твердый продукт отфильтровывали. Фильтрат концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали на следующей стадии напрямую.

Стадия 15. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

(2R,3S,5R)-5-(4-Аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегид (80 мг, 0,204 ммоль) и Ι<₂ί'.Ό₃, (85 мг, 0,611 ммоль) в атмосфере аргона растворяли в метаноле (10 мл). В реакционную смесь по каплям при температуре 0°С добавляли диметил(1-диазо-2-оксопропил)фосфонат (78 мг, 0,408 ммоль). После перемешивания реакционной смеси при температуре 25°С в атмосфере аргона в течение 16 ч ее фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток помещали на колонку с силикагелем и элюировали с помощью смеси DdM/MeOH (10:1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 389,3 [М+Н]⁺.

Стадия 16. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (11).

((2R,3S,5R)-5-(4-Аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанол (50 мг, 0,129 ммоль) и TBAF (33,6 мг, 0,129 ммоль) в атмосфере аргона растворяли в ТГФ (5,0 мл). После перемешивания полученного раствора при температуре 25°С в атмосфере аргона в течение 2 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью преп-ВЭЖХ в следующих условиях (1#-Pre-HPLC-011 (Waters)): колонка, Xbridge Prep С18 Со1итп, 19x150мм; мобильная фаза, вода (10 ммоль/л \H₄HCOз) и ацетонитрил (5,0%-ного ацетонитрила до 25,0% в течение 8 мин, вплоть до 95,0% в течение 1,5 мин, вплоть до 5,0% в течение 1,5 мин); детектор, УФ 254 и 220 нм) с получением указанного в заголовке соединения 11 в виде твердого вещества.

ЖХ-МС: 275,1 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (400 МГц, ДМСО, м.д.): δ 7,82 (с, 1Н), 7,69 (с, 2Н), 6,82 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 6,69 (д, J=4,0 Гц, 1Н), 5,60 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 5,28 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 5,06 (д, J=6,8 Гц, J=6,0 Гц, 1Н), 4,30-4,34 (м, 1Н), 3,453,56 (м, 2Н), 3,38 (с, 1Н), 2,30-2,37 (м, 1Н), 2,17-2,13 (м, 1Н).

- 54 031476

Пример 12. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-гидрокси-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрила (12)

Стадия 1. Синтез оксима 5-(4-аминопирроло[2,1-£|[1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К смеси промежуточного соединения D (см. пример 11) (70 мг, 0,178 ммоль) в пиридине (5 мл) в атмосфере аргона при температуре 25°C добавляли гидрохлорид гидроксиламина (37,17 мг, 0,543 ммоль). После перемешивания полученной смеси в течение 2 ч при температуре 25°C реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли этилацетатом (100 мл), промывали водой (3x20 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали без очистки.

ЖХ-МС: 408,2 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f|[1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрила

К смеси оксима 5-(4-аминопирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (70 мг, 0,172 ммоль) в DCM (15 мл) в атмосфере аргона при температуре 25°C добавляли Et₃N (69,5 мг, 0,687 ммоль) и ангидрид 2,2,2-трифторуксусной кислоты (72,2 мг, 0,344 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 16 ч при температуре 25°C, и затем реакционную смесь разбавляли DCM (100 мл), промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (3x20 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали на колонке с силикагелем, элюируя смесью DCM/MeOH (15:1) с получением указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС: 309,2 [М+Н]⁺.

Стадия 3. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-гидрокси-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрила (12).

К смеси (2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрила (50 мг, 0,128 ммоль) в ТГФ (10 мл) в атмосфере аргона при температуре 25°C добавляли TBAF (33,6 мг, 0,128 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч при температуре 25°C и затем концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью преп-ВЭЖХ в следующих условиях: прибор, (1#-Pre-HPLC-011 (Waters)); колонка: Xbridge C18, 5 мкм, 19x150 мм; мобильная фаза: вода (0,05% NH₄CO₃) и ACN (от 5,0% ACN вплоть до 40% в течение 10 мин, задерживали 95% в течение 2 мин, вплоть до 5% в течение 2 мин); детектор, УФ 220 и 254 нм. Объединенные фракции объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения 12 в виде твердого вещества.

ЖХ-МС: 276,0 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО, м.д.): δ 7,86 (с, 1Н), 7,74-7,84 (с, 2Н), 6,88 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 6,84 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 6,10 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 5,72-5,79 (м, 1Н), 5,62-5,63 (м, 1Н), 4,44-4,61 (с, 1Н), 3,53-3,62 (м, 2Н), 2,42-2,49 (м, 1Н), 2,19-2,24 (м, 1Н).

- 55 031476

Пример 13. Синтез аммоний ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-nирроло[2,3-d]nиримидин-7-ил)-2-этинил3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил трифосфата (13)

Стадия 1. Синтез 2-((4,4,6,6-тетраоксидо-1,3,5,2,4,6-триоксатрифосфинан-2-ил)окси)бензоата (промежуточное соединение Е).

В герметизированном рабочем боксе в атмосфере аргона в колбу, содержащую пирофосфат трибутиламмония (112 мг, 0,205 ммоль), растворенный в 0,4 мл диметилформамиде (ДМФ), добавляли сухой трибутиламин (0,4 мл, 1,679 ммоль) с получением прозрачного раствора. Затем прозрачный раствор при энергичном перемешивании вводили в колбу, содержащую сухой 2-хлор-4Н-бензо^][1,3,2]диоксафосфинин-4-он (27,6 мг, 0,136 ммоль) в диметилформамиде (0,4 мл). Полученную смесь перемешивали при температуре 30°C в течение 30 мин с получением раствора промежуточного соединения Е, которое использовали в следующей реакции напрямую без какой-либо обработки.

Стадия 2. Синтез аммоний ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-3гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил трифосфата (13).

(2R,3S,5R)-5-(4-Амино-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол (соединение 1, 8 мг, 0,029 ммоль) помещали в круглодонную колбу (10 мл) и затем сушили над Р₂О₅ в высоком вакууме в течение ночи. В эту колбу помещали активированные молекулярные сита 4 А (100 мг). Содержимое продували аргоном и затем в вышеуказанную колбу с помощью шприцев переносили раствор промежуточного соединения Е (2,0 экв., свежеприготовленный) в сухом ДМФ (0,15 мл) и смесь перемешивали при температуре 25°C в течение 3 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ (ацетонитрил:0,1 М аммония хлорид = 7:3). После того как большая часть исходного нуклеозида была израсходована, смесь охлаждали до температуры 0°C, затем в реакционную смесь вводили раствор йода [3%-ный в 0,1 мл смеси пиридин/вода (9:1)]. Когда йод расходовался, продолжали добавление по каплям раствора йода до удерживания постоянного коричневого цвета йода. Через 15 мин добавляли при перемешивании при температуре 10°C в течение еще 15 мин буфер триэтилбикарбоната амммония (1,0 М, 2 мл). Летучие продукты удаляли в вакууме (внутренняя температура не превышала 25°C). Остаток вновь растворяли в воде (2 мл) и экстрагировали хлороформом (2x2 мл). Собранный водный слой, который содержал сырой продукт, затем очищали путем препаративной-ВЭЖХ в следующих условиях (1#-Pre-HPLC-011 (Waters)): колонка, XBridge™ Prep OBD (Optimum Bed Density) T3 Column, 19x150 мм, 5 мкм; мобильная фаза, вода с 50 ммоль бикарбоната амммония и ацетонитрил (от 2%-ного ацетонитрила до 5,2% в течение 5 мин, вплоть до 95% в течение 2 мин, вплоть до 5% в течение 1,5 мин); детектор, УФ 254 и 220 нм. Содержащие продукт фракции собирали и лиофилизовали с получением указанного в заголовке соединения 13 в виде твердого вещества.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 512,90 [М-Н-4ЫЛ₃]^-.

Ή-ЯМР (400 МГц, D₂O, м.д.): δ 8,06 (с, 1Н), 7,38 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,63 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 6,58 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 4,06-4,14 (м, 2Н), 2,67-2,72 (м, 1Н), 2,54-2,59 (м, 1Н).

Р-ЯМР (161 МГц, D₂O, м.д.): δ -5,86 (с, 1P), -11,49-11,39 (д, J=15,13 Гц, 1P), -19,29 (с, 1P). Следующие соединения 14-21 были синтезированы, используя способ, описанный в примере 13. Пример 14. Аммоний ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил трифосфат (14).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 530,85 [M-H-4NH₃]^-.

Ή-ЯМР (400 МГц, D₂O, м.д.): δ 8,00 (с, 1Н), 7,14 (с, 1Н), 6,62 (дд, J=4,8 Гц, J=6,0 Гц, 1Н), 4,13 (дд, J=5,6 Гц, J=11,2 Гц, 1Н), 4,06 (дд, J=5,0 Гц, J=11,4 Гц, 1Н), 2,48-2,64 (м, 2Н).

Р-ЯМР (161 МГц, D₂O, м.д.): δ -5,97-5,89 (д, J=13,85 Гц, 1P), -11,52-11,43 (д, J=14,81 Гц, 1P), -19,31 (с, 1P).

- 56 031476

Пример 15. Аммоний (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил трифосфат (15).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 527,00 [M-H-4NH₃]^-.

Ή-ЯМР (400 МГц, D₂O, м.д.): δ 7,96 (с, 1Н), 7,07 (с, 1Н), 6,55 (т, J=6,6 Гц, 1Н), 4,11 (дд, J=6,2 Гц, J=11,4 Гц, 1Н), 4,05 (дд, J=5,8 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 2,59-2,66 (м, 1Н), 2,48-2,53 (м, 1Н), 2,78 (с, 3Н).

Р-ЯМР (161 МГц, D₂O, м.д.): δ -5,90 (с, 1P), -11,48-11,39 (д, J=14,49 Гц, 1P), -19,32 (с, 1P).

Пример 16. бис-Триэтиламмоний ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7ил)-2-этинил-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил трифосфат (16).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 546,95 [М-Н-2ТЕА]^-.

Ή-ЯМР (400 МГц, D₂O, м.д.): δ 7,31 (д, J=4,0 Гц, 1Н), 6,53 (д, J=4,0 Гц, 1Н), 6,50 (т, J=6,4 Гц, 1Н), 4,15 (дд, J=5,8 Гц, J=10,6 Гц, 1Н), 4,08 (дд, J=4,8 Гц, J=11,2 Гц, 1Н), 2,62-2,67 (м, 1Н), 2,53-2,58 (м, 1Н).

Р-ЯМР (161 МГц, D₂O, м.д.): δ -5,86-5,77 (д, J=14,81 Гц, 1P), -11,45-11,35 (д, J=15,13 Гц, 1P), -19,24 (с, 1P).

Пример 17. Аммоний ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этинил3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил трифосфат (17).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 546,70 [M-H-4NH₃]^-.

Ή-ЯМР (400 МГц, D₂O, м.д.): δ 7,97 (с, 1Н), 7,34 (с, 1Н), 6,54 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,01-4,13 (м, 2Н),

2.52- 2,62 (м, 2Н).

Р-ЯМР (161 МГц, D₂O, м.д.): δ -5,81 (с, 1P), -11,42 (с, 1P), -19,25 (с, 1P).

Пример 18. бис-Триэтиламмоний ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2циано-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил трифосфат (18).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 514,35 [М-Н-2ТЕА]^-.

Ή-ЯМР (400 МГц, D₂O, м.д.): δ 8,04 (с, 1Н), 7,29 (д, J=3,2 Гц, 1Н), 6,70 (т, J=6,8 Гц, 1Н), 6,55 (д, J=3,2 Гц, 1Н), 4,87 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,21-4,16 (м, 2Н), 2,99 (кв, J=7,2 Гц, 15Н), 2,80-2,76 (м, 1Н), 2,58-2,54 (м, 1Н), 1,12 (т, J=7,2 Гц, 26Н).

Р-ЯМР (161 МГц, D₂O, м.д.): δ -5,85 (с, 1P), -11,84 (д, J=15,30 Гц, 1P), -19,38 (с, 1P).

Пример 19. Аммоний ((2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f|[1,2,4]триазин-7-ил)-2-этинил-3гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил трифосфат (19).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 512,90 [M-H-4NH₃]^-.

Ή-ЯМР (400 МГц, D₂O, м.д.): δ 7,73 (с, 1Н), 6,77 (дд, J=4,4 Гц, J=7,4 Гц, 2Н), 5,73 (т, J=7,4 Гц, 1Н),

4.52- 4,56 (м, 1Н), 3,98-4,03 (м, 2Н), 2,56-2,63 (м, 1Н), 2,34-2,40 (м, 1Н).

Р-ЯМР (161 МГц, D₂O, м.д.): δ -5,79 (с, 1P), -11,24 (с, 1P), -19,21 (с, 1P).

Пример 20. Аммоний ((2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-2-этинил-3гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил трифосфат (20).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 513,95 [М-Н^КЩ]^-.

Ή-ЯМР (400 МГц, D₂O, м.д.): δ 8,22 (с, 1Н), 7,99 (с, 1Н), 5,53 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 4,60-4,57 (м, 1Н), 4,12-4,03 (м, 2Н), 2,56-2,49 (м, 1Н), 2,35-2,29 (м, 1Н).

Р-ЯМР (161 МГц, D₂O, м.д.): δ -5,82 (с, 1P), -11,32-11,23 (д, J=13,69 Гц, 1P), -19,24 (с, 1P).

Пример 21: Аммоний ((2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f|[1,2,4]триазин-7-ил)-2-этинил-3гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил трифосфат (21).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 513,95 [M-H-4NH₃]^-.

Ή-ЯМР (400 МГц, D₂O, м.д.): δ 8,23 (с, 1Н), 7,98 (с, 1Н), 5,66 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 4,61-4,58 (м, 1Н), 4,05 (шир. с, 2Н), 2,68-2,61 (м, 1Н), 2,46-2,42 (м, 1Н).

Р-ЯМР (161 МГц, D₂O, м.д.): δ -5,81 (с, 1P), -11,33-11,24 (д, J=13,85 Гц, 1P), -19,19 (с, 1P).

- 57 031476

Названия соответствующих несолевых форм соединений 13-21 соответственно следующие:

13)	((2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,З-d]пиримидин-7-ил)2-этинил-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат;
14)	((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-3-гидрокситетрагидрофуран-2ил)метил тетрагидротрифосфат;
15)	( (2R, 3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-3-гидрокситетрагидрофуран-2ил)метил тетрагидротрифосфат;
16)	((2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7Н-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-3-гидрокситетрагидрофуран-2ил)метил тетрагидротрифосфат;
17)	((2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7Н-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-3-гидрокситетрагидрофуран-2ил)метил тетрагидротрифосфат;
18)	((2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,З-d]пиримидин-7-ил)2-циано-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат;
19)	((2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,Ι-f][1,2,4]триазин-7ил)-2-этинил-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат;
20)	( (2R, 3S,5R)-5-[4-аминопиразоло[1,5-а] [1,3,5]триазин-8ил)-2-этинил-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат; и
21)	((2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,Ι-f][1,2,4]триазин-7ил)-2-этинил-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.

- 58 031476

Пример 22. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (22)

Стадия 1. Синтез оксида (аминоокси)дифенилфосфина.

К перемешиваемому раствору гидрохлорида гидроксиламина (70 г, 1007 ммоль) в смеси 1,4-диоксана (100 мл) и воды (100 мл) по каплям при перемешивании при температуре 0°C в течение 30 мин добавляли раствор NaOH (38,3 г, 957 ммоль) в воде (400 мл). Полученный раствор перемешивали при температуре 0°C в течение 20 мин. В вышеуказанный раствор быстро при температуре 0°C вводили раствор дифенилфосфинилхлорида (77 мл, 403 ммоль) в 1,4-диоксане (100 мл). Полученную смесь энергично перемешивали при температуре окружающей среды в течение 10 мин. Образовывался осадок и его собирали путем фильтрации. Твердое вещество вновь суспендировали в водном растворе NaOH (0,25н., 1000 мл) и перемешивали при температуре 4°C в течение 1,5 ч. Смесь фильтровали, и слой на фильтре последовательно промывали водой (3x1000 мл) и эфиром (2x500 мл). Твердое вещество сушили в вакууме в течение ночи с получением оксида (аминоокси)дифенилфосфина.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 233,9 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 7,82-7,69 (м, 4Н), 7,58-7,40 (м, 6Н).

Р-ЯМР (121 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 21,53 (с, 1P).

Стадия 2. Синтез этил 1-амино-1Н-имидазол-2-карбоксилата.

К перемешиваемому раствору этил 1И-имидазол-2-карбоксилата (6 г, 30,9 ммоль) в ДМФ (250 мл) в атмосфере аргона по каплям при температуре -10°C в течение 60 мин добавляли раствор LiHMDS в ТГФ (93 мл, 93 ммоль, 1 М). Полученную смесь перемешивали при температуре -10°C дополнительные 30 мин и затем добавляли порциями в течение 30 мин (аминоокси)дифенилфосфин оксид (21,63 г, 93 ммоль), поддерживая температуру в интервале от 0 до 10°C. Полученную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали энергично в течение 16 ч. Реакцию гасили ледяной водой (600 мл) и

- 59 031476 экстрагировали EtOAc (2x800 мл). Объединенные органические слои сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением этил 1-амино-Шимидазол-2-карбоксилата, который использовали на следующей стадии реакции напрямую без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 156,1 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, d^'d^TO, м.д.): δ 7,37 (д, J=0,8 Гц, 1Н), 6,96 (д, J=0,8 Гц, 1Н), 6,57 (шир. с, 2Н), 4,33-4,27 (м, 2Н), 1,31 (т, J=7,2 Гц, 3Н).

Стадия 3. Синтез имидазо|2.1-Г||1.2.4|триазин-4(3Н)-она.

В перемешиваемую смесь этил Самино-Ш-имидазол^-карбоксилата (6 г, 30,9 ммоль) в EtOH (60 мл) в атмосфере аргона добавляли формамидин ацетат (17,71 г, 170 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры кипения и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и фильтровали. Слой на фильтре последовательно промывали водой (3x10 мл) и EtOAc (2x10 мл). Собранный твердый продукт сушили в высоком вакууме в течение ночи с получением имидазо [2,1-Г][ 1,2,4]триазин-4(3H)-она.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 136,9 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, d₆-ДМСО, м.д.): δ 12,31 (шир. с, 1Н), 8,09 (с, 1Н), 7,98 (д, J=0,8 Гц, 1Н), 7,50 (д, J=0,8 Гц, 1Н).

Стадия 4. Синтез 4-хлоримидазо[2,1-Г][1,2,4]триазина.

Имидазо[2,1-Г][1,2,4]триазин-4(3Н)-он (2,4 г, 17,63 ммоль) загружали в 100-миллилитровую круглодонную колбу в атмосфере аргона, затем при комнатной температуре вводили POC4₃, (20 мл). Смесь нагревали до температуры кипения и перемешивали в течение 16 ч. Летучие продукты удаляли при пониженном давлении. Остаток распределяли между EtOAc (100 мл) и водой (30 мл). Органический слой последовательно промывали холодным водным раствором NaHCO₃ (насыщенный, 3x20 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси петролейный эфир/EtOAc (5/1) с получением 4-хлоримидазо[2,1-Г|[1,2,4]триазина.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 155,0 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, d₆-ДМСО, м.д.): δ 8,81 (с, 1Н), 8,65 (д, J=1,2 Гц, 1Н), 8, 08 (д, J=0,8 Гц, 1Н).

Стадия 5. Синтез 4-(метилтио)имидазо[2,1-Г][1,2,4]триазина.

К перемешиваемому раствору 4-хлорнмидазо[2,1-1][1,2,4]трназнна (20 г, 129 ммоль) в ТГФ (500 мл) в атмосфере аргона при комнатной температуре добавляли NaSMe (13,60 г, 194 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч. Реакционную смесь гасили водным раствором NH₄Cl (насыщенный, 200 мл) и экстрагировали EtOAc (2x500 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (2x200 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси петролейный эфир/EtOAc (1/1) с получением 4-(метилтио)имидазо[2,1-Г][1,2,4]триазина.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 167,2 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,47 (с, 1Н), 7,90 (д, J=0,8 Гц, 1Н), 7,76 (д, J=0,4 Гц, 1Н), 2,73 (с, 3Н).

Стадия 6. Синтез (3R,4R,5R)-3,4-бuс-(бензuлоксu)-5-((бензuлоксu)метuл)-2-(4(метилтио)имидазо [2,1-Г][1,2,4]трназнн-7 -ил)тетрагидрофуран-2-ола.

К перемешиваемому раствору 4-(метнлтно)нмидазо[2,1-f|[1,2,4]трназнна (1 г, 6,02 ммоль) в ТГФ (25 мл) в атмосфере аргона вводили раствор LDA в ТГФ (4,5 мл, 9,0 ммоль, 2 М) при температуре -78°C в течение 5 мин. Полученную смесь выдерживали при температуре -78°C в течение 30 мин и затем вводили раствор (3R,4R,5R)-3,4-бнс-(бензнлоксн)-5-((бензнлоксн)метнл)днгидрофуран-2(3H)-она (коммерческий, 3,27 г, 7,82 ммоль) в ТГФ (15 мл) и полученную смесь перемешивали при интервале температур от -78°C до -50°C в течение 2 ч. Реакцию гасили водным раствором NH₄C1 (насыщенный, 20 мл) и экстрагировали EtOAc (2x50 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (2x20 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси петролейный эфир/EtOAc (5/1) с получением (3R,4R,5R)-3,4-бuс-(бензuлоксu)-5-((бензuлоксu)метuл)-2-(4(метилтио)имидазо [2,1-ί][1,2,4]трназнн-7-ил)тетрагидрофуран-2-ола.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 585,1 [М+Н]⁺.

Стадия 7. Синтез 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-бнс-(бензнлоксн)-5-((бензнлоксн)метнл)тетрагидрофуран-2ил)-4-(метилтио)имидазо[2,1-Г][1,2,4]триазина.

К перемешиваемому раствору (3R,4R,5R)-3,4-бuс-(бензuлоксu)-5-((бензuлоксu)метuл)-2-(4(метнлтно)нмидазо[2,1-f|[1,2,4]трназнн-7-нл)тетрагндрофуран-2-ола (1,7 г, 2,91 ммоль) в DCM (30 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C последовательно вводили диэтил эфират трифторида бора (825,3 мг, 5,82 ммоль) и трнэтнлснлан (1,35 г, 11,63 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение дополнительных 16 ч. Реакцию гасили водным раствором NaHCO₃ (насыщенный,

- 60 031476 мл) и экстрагировали DCM (2x30 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси петролейный эфир/EtOAc (10/1) с получением 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-4-(метилтио)имидазо [2,1-f][ 1,2,4]триазина.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 570,0 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,38 (с, 1Н), 7,66 (с, 1Н), 7,37-7,26 (м, 15Н), 5,56 (д, J=5,4 Гц, 1Н), 4,70-4,49 (м, 6Н), 4,39 (кв, J=4,2 Гц, 1Н), 4,34 (т, J=5,4 Гц, 1Н), 4,15 (т, J=5,1 Гц, 1Н), 3,70 (дд, J=3,6 Гц, J=10,5 Гц, 1Н), 3,60 (дд, J=3,9 Гц, J=10,8 Гц, 1Н), 2,70 (с, 3Н).

Стадия 8. Синтез 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2ил)имидазо |2.1-f|| 1,2,4]триазин-4-амина.

В 80-миллилитровую стальную бомбу загружали 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-4-(метилтио)имидазо [2,1-f][ 1,2,4]триазин (1,4 г,

2,462 ммоль). Содержимое охлаждали до температуры -60°C. К нему добавляли раствор аммиака в изопропаноле (изопропанол/жидкий аммиак = 2/3, смешанный при температуре -60°C, 50 мл). Полученную смесь нагревали до температуры 90°C и перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси петролейный эфир/EtOAc (1/1) с получением 7-(^^^^)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)имидазо[2,1Д[1,2,4]триазин-4-амина.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 538,3 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (400 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,24 (шир. с, 1Н), 8,15 (шир. с, 1Н), 8,05 (с, 1Н), 7,49 (с, 1Н), 7,36-7,28 (м, 15Н), 5,35 (д, J=5,2 Гц, 1Н), 4,63 (с, 2Н), 4,56 (д, J=4,8 Гц, 2Н), 4,52 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 4,45 (т, J=5,2 Гц, 1Н), 4,22-4,16 (м, 2Н), 3,65 (дд, J=3,2 Гц, J=10,8 Гц, 1Н), 3,58 (дд, J=4,4 Гц, J=10,8 Гц, 1Н).

Стадия 9. Синтез (2S,3S,4R,5R)-2-(4-аминоимидазо[2,1-f|[1,2,4]триазин-7-ил)-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3,4-диола.

К перемешиваемому раствору 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)имидазо[2,14][1,2,4]триазин-4-амина (1,2 г, 2,232 ммоль) в AcOH (10 мл) добавляли 20%-ный Pd(OH)₂/C (1,2 г). Содержимое продували водородом (2 атм) и перемешивали при температуре 25°C в течение 24 ч. Твердый продукт отфильтровывали и промывали AcOH (2x15 мл). Объединенный фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси DCM/MeOH (8/1) с получением (2S,3R,4S,5R)-2-(4аминоимидазо [2,1-f][ 1,2,4]триазин-7 -ил)-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3,4-диола.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 290,0 [M+Na]⁺.

’H-ЯМР (400 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,22 (шир. с, 1Н), 8,15 (шир. с, 1Н), 8,07 (с, 1Н), 7,64 (с, 1Н), 5,13-5,09 (м, 2Н), 5,03 (д, J=6,4 Гц, 1Н), 4,78 (шир. с, 1Н), 4,32 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 3,99 (т, J=4,8 Гц, 1Н), 3,81 (кв, J=4,4 Гц, 1Н), 3,56 (дд, J=3,2 Гц, J=11,2 Гц, 1Н), 3,46 (дд, J=3,6 Гц, J=11,2 Гц, 1Н).

Стадия 10. Синтез (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2,2,4,4тетраизопропилтетрагидро-6Н-фуро[3,2-£][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9-ола.

К перемешиваемому раствору (2S,3R,4S,5R)-2-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-5(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3,4-диола (3,2 г, 11,97 ммоль) и ’H-имидазола (3,26 г, 47,9 ммоль) в ДМФ (65 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C вводили 1,3-дихлор-1,1,3,3тетраизопропилдисилоксан (3,97 г, 12,57 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 30°C и перемешивали в течение 5 ч. Реакцию гасили водой (70 мл) и экстрагировали EtOAc (3x100 мл). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (3x100 мл), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси петролейный эфир/EtOAc (3/1) с получением (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2,2,4,4-тетраизопропилтетрагидро-6Hфуро [3,2-f [ 1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9-ола.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 510,4 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,12 (с, 1Н), 7,62 (с, 1Н), 7,03 (шир. с, 1Н), 6,39 (шир. с, 1Н), 5,31 (д, J=3,2 Гц, 1Н), 4,68 (дд, J=6,0 Гц, J=7,0 Гц, 1Н), 4,47 (кв, J=2,8 Гц, 1Н), 4,10-4,05 (м, 3Н), 3,20 (шир. с, 1Н), 1,15-1,05 (м, 28Н).

Стадия 11. Синтез O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-аминоимидазо[2,1-f|[1,2,4]триазин-7-ил)-2,2,4,4тетраизопропилтетрагидро-6Н-фуро[3,24][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9-ил) О-фенил карбонотиоата.

К перемешиваемому раствору (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-аминоимидазо[2,1-f|[1,2,4]триазин-7-ил)-2,2,4,4тетраизопропилтетрагидро-6H-фуро[3,2-f|[1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9-ола (4,0 г, 7,85 ммоль) и DMAP (3,83 г, 31,4 ммоль) в DCM (160 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C вводили О-фенил карбонохлоридотиоат (2,71 г, 15,69 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 0°C еще в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси петролейный эфир/EtOAc (1/3) с получением

- 61 031476

О-((6aR,8R,9aS)-8-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]Ίриазин-7-ил)-2,2,4,4-тетраизопропилтетрагидро-6Hфуро[3,2-Щ1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9-ил) О-фенил карбонотиоата.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 646,3 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, d^'d^TO, м.д.): δ 8,37 (шир. с, 1Н), 8,28 (шир. с, 1Н), 8,02 (с, 1Н), 7,67 (с, 1Н), 7,49 (т, J=8,0 Гц, 2Н), 7,34 (т, J=7,4 Гц, 1Н), 7,15 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 6,22 (дд, J=2,0 Гц, J=5,2 Гц, 1Н), 5,49 (д, J=2,0 Гц, 1Н), 4,95 (дд, J=5,2 Гц, J=8,8 Гц, 1Н), 4,07-3,96 (м, 2Н), 3,91-3,88 (м, 1Н), 1,07-1,04 (м, 28Н).

Стадия 12. Синтез 7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-тетраизопропилтетрагидро-6Н-фуро[3,2£][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-8-ил)имидазо[2,1-1][1,2,4]триазин-4-амина.

В перемешиваемый раствор О-((6aR,8R,9aS)-8-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2,2,4,4тетраизопропилтетрагидро-6Н-фуро[3,2-£][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9-ил) О-фенил карбонотиоата (350 мг, 0,542 ммоль) и AIBN (133 мг, 0,813 ммоль) в дегазированном толуоле (10 мл) в атмосфере аргона при комнатной температуре вводили гидрид три-н-бутилолова (314 мг, 1,084 ммоль). Смесь нагревали до температуры 80°C и перемешивали в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси петролейный эфир/EtOAc (1/3) с получением 7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-тетраизопропилтетрагидро-6H-фуро[3,2£][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-8-ил)имидазо[2,1-1][1,2,4]триазин-4-амина.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 494,5 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, d₆-ДМСО, м.д.): δ 8,23 (шир. с, 1Н), 8,16 (шир. с, 1Н), 8,05 (с, 1Н), 7,56 (с, 1Н),

5,42 (т, J=7,0 Гц, 1Н), 4,63 (дд, J=5,8 Гц, J=13,0 Гц, 1Н), 3,95 (дд, J=3,2 Гц, J=11,6 Гц, 1Н), 3,83 (дд, J=6,8 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 3,78-3,75 (м, 1Н), 2,55-2,51 (м, 1Н), 2,37-2,32 (м, 1Н), 1,07-1,01 (м, 28Н).

Стадия 13. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

В перемешиваемый раствор 7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-тетраизопропилтетрагидро-6Н-фуро[3,2£][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-8-ил)имидазо[2,1-£][1,2,4]триазин-4-амина (2,7 г, 5,47 ммоль) в ТГФ (60 мл) при температуре 0°C вводили фтористый водород-пиридин (5,42 г, 54,7 ммоль). Смесь нагревали до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 20 ч. Реакционную смесь охлаждали до температуры 0°C, нейтрализовали твердым NaHCO3 и затем разбавляли MeOH (50 мл). Твердый продукт отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток обрабатывали DCM/MeOH (20 мл, 100/1, об./об.) и перемешивали в течение 30 мин. Осадок белого цвета собирали и сушили в вакууме в течение ночи с получением (2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-

2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

Ή-ЯМР (400 МГц, d₆-ДМСО, м.д.): δ 8,20 (шир. с, 1Н), 8,13 (шир. с, 1Н), 8,06 (с, 1Н), 7,60 (с, 1Н),

5.42 (дд, J=5,8 Гц, J=10,2 Гц, 1Н), 5,12 (д, J=4,0 Гц, 1Н), 4,74 (т, J=5,6 Гц, 1Н), 4,28-4,25 (м, 1Н), 3,81-3,78 (м, 1Н), 3,42 (т, J=5,4 Гц, 2Н), 2,33-2,26 (м, 1Н), 2,13-2,09 (м, 1Н).

Стадия 14. Синтез 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)имидазо [2,1-f][ 1,2,4]триазин-4-амина.

(2R,3S,5R)-5-(4-Аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол (200 мг, 0,796 ммоль) и Ш-имидазол (217 мг, 3,18 ммоль) в атмосфере аргона загружали в 10-миллилитровую колбу. В смесь вводили безводный ДМФ (2,5 мл), затем при температуре 0°C добавляли трет-бутилхлордиметилсилан (3 60 мг, 2,388 ммоль). Смесь перемешивали при температуре 25°C в течение 3 ч. Полученную смесь разбавляли EtOAc (50 мл), промывали водным раствором NaHCO3 (насыщенный, 2x 15 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл), соответственно. Органический слой собирали и сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси петролейный эфир/EtOAc (35-52% EtOAc в петролейном эфире) с получением 7-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)имидазо [2,1-f][1,2,4]триазин-4-амина.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 480,1 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, d₆-ДМСО, м.д.): δ 8,20 (шир. с, 1Н), 8,13 (шир. с, 1Н), 8,06 (с, 1Н), 7,57 (с, 1Н),

5.43 (дд, J=5,6 Гц, J=10,0 Гц, 1Н), 4,46-4,44 (м, 1Н), 3,81 (т, J=4,5 Гц, 1Н), 3,63-3,51 (м, 2Н), 2,45-2,36 (м, 1Н), 2,16-2,10 (м, 1Н), 0,89 (с, 9Н), 0,86 (с, 9Н), 0,10 (с, 6Н), 0,02 (д, J=3,6 Гц, 6Н).

Стадия 15. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола.

7-((2R,4S,5R)-4-((трет-Бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)имидазо[2,1-1][1,2,4]триазин-4-амин (350 мг, 0,730 ммоль) загружали в 25-миллилитровую круглодонную колбу, затем вводили ТГФ (4 мл). Содержимое охлаждали до температуры 0°C. К нему по каплям при перемешивании при температуре 0°C в течение 10 мин добавляли предварительно охлажденный раствор трифторуксусная кислота/вода (1/1, об./об., 2 мл). Полученную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ и ЖХМС. Полученный раствор упаривали совместно с толуолом (3x20 мл) и остаток вновь суспендировали в водном растворе NaHCO₃ (насыщенный, 4 мл) и затем упаривали досуха. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с помощью смеси EtOAc/DCM (1/1) с получением ((2R,3S,5R)-5-(4

- 62 031476 аминоимидазо [2,1-f][ 1,2,4]триазин-7 -ил)-3 -((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2ил)метанола.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 366,2 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, d₆-ДMCG, м.д.): δ 8,09 (шир. с, 1Н), 8,03 (шир. с, 1Н), 7,96 (с, 1Н), 7,51 (с, 1Н), 5,31 (кв, J=5,4 Гц, 1Н), 4,70 (т, J=5,7 Гц, 1Н), 4,34 (д, J=5,1 Гц, 1Н), 3,69 (т, J=4,5 Гц, 1Н), 3,33-3,28 (м, 2Н), 2,34-2,24 (м, 1Н), 2,01-1,96 (м, 1Н), 0,79 (с, 9Н), 0,01 (с, 6Н).

Стадия 16. Синтез (2S,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемому раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола (280 мг, 0,766 ммоль) в безводном ацетонитриле (20 мл) в атмосфере аргона при комнатной температуре добавляли IBX (644 мг, 2,298 ммоль). Смесь нагревали до температуры 80°C и перемешивали в течение 25 мин. Данные ЖХМС показывали, что расходовался весь исходный нуклеозид. Полученную смесь охлаждали до комнатной температуры. Твердые продукты отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением (2S,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо [2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3 -((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида, который использовали на следующей стадии реакции напрямую без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 363,7 [М+Н]⁺.

Стадия 17. Синтез ((3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола.

В перемешиваемый раствор (2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (300 мг, сырой) в 1,4-диоксане (4 мл) в 25-миллилитровой круглодонной колбе при температуре 0°C вводили 37%-ный водный раствор формальдегида (1,0 мл), затем водный раствор NaOH (1,0 мл, 2,0 ммоль, 2н.). Полученную смесь нагревали до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 16 ч. После того, как был израсходован весь исходный нуклеозид, реакционную смесь нейтрализовали AcOH (~0,2 мл). Смесь разбавляли EtOAc (100 мл) и последовательно промывали водой (2x 25 мл), водным раствором NaHCO₃ (насыщенный, 25 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл). Органический слой сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением сырого продукта. Сырой продукт в атмосфере аргона вновь растворяли в EtOH (5 мл) и порциями при температуре 0°C добавляли боргидрид натрия (153 мг, 4,04 ммоль). После перемешивания при температуре окружающей среды в течение 16 ч реакционную смесь нейтрализовали AcOH (~0,2 мл) и упаривали досуха. Остаток распределяли между CHCl₃ (50 мл) и водой (25 мл). Водный слой опять экстрагировали CHCl₃ (2x25 мл). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (40 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси DCM/MeOH (30/1) с получением ( (3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 395,8 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, d₆-ДMCG, м.д.): δ 8,18 (шир. с, 1Н), 8,12 (шир. с, 1Н), 8,07 (с, 1Н), 7,62 (с, 1Н), 5,47 (кв, J=5,2 Гц, 1Н), 4,68 (т, J=5,6 Гц, 1Н), 4,53 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 4,27 (т, J=5,6 Гц, 1Н), 3,60-3,55 (м, 1Н), 3,53-3,51 (м, 2Н), 3,34-3,31 (м, 1Н), 2,56-2,53 (м, 1Н), 2,11-2,07 (м, 1Н), 0,90 (с, 9Н), 0,09 (д, J=2,8 Гц, 6Н).

Стадия 18. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

В перемешиваемую смесь ((3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола (180 мг, 0,455 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) и ДМСО (2 мл) в атмосфере аргона при комнатной температуре добавляли IBX (382 мг, 1,365 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 30°C и перемешивали в течение 2 ч. Твердый продукт отфильтровывали, промывали CHCl₃ (2x20 мл), и объединенный фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток вновь растворяли в EtOAc (30 мл), последовательно промывали водным раствором NaHCO₃ (насыщенный, 2x15 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением (2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида, который использовали на следующей стадии реакции напрямую без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 393,8 [М+Н]⁺.

Стадия 19. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-7аН-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

В перемешиваемую смесь (2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (250 мг, 0,286 ммоль,

- 63 031476 сырой) и K₂CO₃ (120 мг, 0,86 ммоль) в MeOH (10 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C вводили раствор диметил (1-диазо-2-оксопропил)фосфоната (110 мг, 0,58 ммоль) в MeOH (1 мл). Полученную смесь нагревали до температуры 30°C и перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси DCM/MeOH (30/1) с получением ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-7aH-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)-

3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 390,2 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, d₆-ДМСО, м.д.): δ 8,23 (шир. с, 1Н), 8,15 (шир. с, 1Н), 8,08 (с, 1Н), 7,67 (с, 1Н), 5,54 (т, J=7,8 Гц, 1Н), 5,16 (т, J=6,2 Гц, 1Н), 4,53 (дд, J=4,6 Гц, J=6,2 Гц, 1Н), 3,55 (дд, J=5,2 Гц, J=11,6 Гц, 1Н), 3,45 (дд, J=7,0 Гц, J=11,8 Гц, 1Н), 3,42 (с, 1Н), 2,56-2,53 (м, 1Н), 2,23-2,17 (м, 1Н), 0,91 (с, 9Н), 0,10 (д, J=3,2 Гц, 6Н).

Стадия 20. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (22).

В перемешиваемый раствор ((2R,3S,5R)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола (150 мг, 0,385 ммоль) в безводном ТГФ (5 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C вводили раствор TBAF в ТГФ (0,385 мл, 0,385 ммоль, 1 М). Смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ и ЖХМС. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси DCM/MeOH (24/1) с получением указанного в заголовке соединения 22.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 309,00 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, d₆-ДМСО, м.д.): δ 8,21 (шир. с, 1Н), 8,14 (шир. с, 1Н), 8,07 (с, 1Н), 7,64 (с, 1Н), 5,53 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 5,34 (д, J=5,2 Гц, 1Н), 5,07 (т, J=6,4 Гц, 1Н), 4,35 (кв, J=6,0 Гц, 1Н), 3,56 (дд, J=5,6 Гц, J=12,0 Гц, 1Н), 3,48 (дд, J=7,0 Гц, J=11,8 Гц, 1Н), 3,41 (с, 1Н), 2,46-2,41 (м, 1Н), 2,28-2,21 (м, 1Н).

Пример 23. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (23)

Стадия 1. Синтез (3R,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ола.

К перемешиваемой суспензии NaH (60%-ный, диспергированный в минеральном масле) (1,878 г, 46,9 ммоль) в безводном DME (диметиловый эфир) (150 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C в течение 10 мин добавляли диэтил (цианометил)фосфонат (11,88 г, 67,1 ммоль). Смесь нагревали до температуры 25°C и выдерживали в течение 0,5 ч и затем по каплям при перемешивании при температуре

- 64 031476

0°C в течение 30 мин добавляли раствор (3R,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ола (14,1 г, 33,5 ммоль) в сухом DME (100 мл). Полученную смесь опять нагревали до температуры 25°C и выдерживали в течение 2 ч. Полученную смесь разбавляли Н₂О (300 мл) и экстрагировали Et₂O (3x500 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (500 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на колонке с силикагелем с использованием смеси EtOAc/петролейный эфир (5-20% EtOAc в петролейном эфире) с получением

2- ((3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)ацетонитрила.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 444,21 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 7,33-7,31 (м, 15Н), 4,63-4,43 (м, 6Н), 4,25-4,13 (м, 2Н), 3,95 (дд, J=3,0 Гц, J=4,8 Гц, 1Н), 3,77 (дд, J=5,4 Гц, J=6,9 Гц, 1Н), 3,53-3,45 (м, 2Н), 2,78-2,75 (м, 0,4Н), 2,66 (дд, J=4,8 Гц, J=16,8 Гц, 0,8Н), 2,50 (дд, J=4,8 Гц, J=16,8 Гц, 0,8Н).

Стадия 2. Синтез 2-((3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-

3- (диметиламино)акрилонитрила.

В перемешиваемый раствор 2-((3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)ацетонитрила (12,6 г, 28,4 ммоль) в DCM (90 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C в течение 5 мин добавляли сухой ДМФ (2,54 мл, 32,8 ммоль), затем 1-трет-бутокси-ЫХ,№,№тетраметилметандиамин (19,80 г, 114 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 25°C и перемешивали в течение 16 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на колонке с силикагелем с использованием смеси EtOAc/петролейный эфир (15-35% EtOAc в петролейном эфире) с получением 2-((3S,4R,5R)-3,4-бис(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-3-(диметиламино)акрилонитрила.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 499,25 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 7,33-7,30 (м, 15Н), 6,47 (с, 1Н), 4,65-4,53 (м, 6Н), 4,32 (д, J=7,2 Гц, 1Н), 4,19-4,15 (м, 1Н), 4,00-3,90 (м, 2Н), 3,59-3,46 (м, 2Н), 3,04 (с, 6Н).

Стадия 3. Синтез 2-((3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-

3- гидразинилакрилонитрила.

К перемешиваемому раствору 2-((3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-3-(диметиламино)акрилонитрила (12,9 г, 25,9 ммоль) в MeOH (90 мл) при комнатной температуре последовательно добавляли гидразингидрат (21,15 г, 647 ммоль), Н2О (3,0 мл, 167 ммоль) и гидрохлорид гидразина (2,66 г, 38,8 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 65°C и перемешивали в течение 16 ч. Конечную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли Н2О (500 мл) и экстрагировали EtOAc (3x500 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (500 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением 2-((3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-3-гидразинилакрилонитрила, который использовали на следующей стадии реакции напрямую без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 486,23 [М+Н]⁺.

Стадия 4. Синтез 4-[(2S,3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-[(бензилокси)метил]оксолан-2-ил]-1Нпиразол-5-амина.

2-((3S,4R,5R)-3,4-бис-(Бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-3гидразинилакрилонитрил (18 г, 37,1 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую круглодонную колбу, затем вводили ACN (200 мл). Смесь кипятили с обратным холодильником в течение 48 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем с использованием смеси MeOH/DCM (от 2 до 10% MeOH в DCM) с получением

4- [(2S,3S,4R,5R)-3,4-бис (бензилокси)-5-[(бензилокси)метил]оксолан-2-ил]-1Н-пиразол-5-амина.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 486,23 [M+H]⁺.

’H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 7,40-7,24 (м, 16Н), 4,97 (д, J=6,8 Гц, 1Н), 4,68 (д, J=12,0 Гц, 1Н), 4,62-4,44 (м, 5Н), 4,24-4,22 (м, 1Н), 4,10-4,04 (м, 2Н), 3,71 (дд, J=3,0 Гц, J=10,2 Гц, 1Н), 3,63-3,50 (м, 1Н).

Стадия 5. Синтез 8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2ил)пиразоло [1,5-а][ 1,3,5]триазин-4-амина.

В перемешиваемую смесь цианамида (50 г, 1189 ммоль) добавляли триметоксиметан (505 г, 4757 ммоль) и смесь нагревали до температуры 105°C и перемешивали в течение 5 мин. В вышеуказанную смесь при температуре 105°C в течение 5 мин вводили муравьиную кислоту (4,38 г, 95 ммоль). После перемешивания полученного раствора при температуре 105°C в течение 5 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Твердые продукты отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Продукт собирали путем дистилляции (0,1 мм рт. столба, от 60 до 70°C) с получением (Е)-метил N-цианоформимидата (50 г, 0,595 моль). К перемешиваемому раствору (Е)-метил N-цианоформимидата (21,82 г, 259 ммоль) в толуоле (150 мл) в атмосфере аргона добавляли раствор

4-((3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)-1H-пиразол-5-амин (21 г, 43,2 ммоль) в толуоле (30 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь нагревали до темпе

- 65 031476 ратуры 90°С и перемешивали в течение 20 ч. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении. Oстаток очищали путем флэш-хроматографии на колонке с силикагелем с использованием смеси EtOAc/петролейный эфир (от 30 до 50% EtOAc в петролейном эфире) с получением 8-(^^^^)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)пиразоло[1,5а][1,3,5]триазин-4-амина.

ЖХ-МС (ES, m/z): 538,24 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, СОС1₃, м.д.): δ 8,05 (с, 1Н), 7,99 (с, 1Н), 7,31-7,23 (м, 15Н), 6,67 (шир. с, 2Н), 5,33 (д, J=5,4 Гц, 1Н), 4,67-4,50 (м, 6Н), 4,35-4,29 (м, 2Н), 4,15-4,11 (м, 1Н), 3,72 (дд, J=3,9 Гц, J=10,5 Гц, 1Н), 3,62 (дд, J=4,2 Гц, J=10,8 Гц, 1Н).

Ладия 6. бишез (2S,3S,4R,5R)-2-(4-аминопиразоло[1,5-a][1,3,5]гриазин-8-ил)-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3,4-диола.

В перемешиваемую смесь 8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-бис-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)пиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-4-амина (10 г, 18,60 ммоль) в AcOH (250 мл) добавляли гидроксид палладия 20% на углероде. Cмесь продували водородом (1,5-2 атм) и перемешивали при температуре 25°С в течение 14 ч. Твердые продукты отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Oстаток растирали в DOM (150 мл) с образованием белого осадка. Oсадок собирали путем фильтрации, промывали DdM и сушили в вакууме в течение ночи с получением ^^^^)-2-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3,4диола.

ЖХ-Ме (ES, m/z): 268,10 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, de-'WCO, м.д.): δ 8,76 (шир. с, 1Н), 8,41 (шир. с, 1Н), 8,19 (с, 1Н), 8,06 (с, 1Н), 4,96-4,91 (м, 2Н), 4,86-4,81 (м, 2Н),4,20 (кв, J=6,0 Гц, 1Н), 3,98 (кв, J=4,5 Гц, 1Н), 3,78 (кв, J=3,9 Гц, 1Н), 3,61-3,55 (м, 1Н), 3,49-3,43 (м, 1Н).

Ладия 7. Cинтез (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-2,2,4,4тетраизопропилтетрагидро-6Н-фуро[3,2-£][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9-ола.

В перемешиваемый раствор (2S,3R,4S,5R)-2-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-5(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3,4-диола (2,2 г, 8,23 ммоль) и Ш-имидазола (1,681 г, 24,70 ммоль) в сухом ДМФ (100 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°С в течение 4 мин вводили 1,3-дихлор-

1.1.3.3- тетраизопропилдисилоксан (2,86 г, 9,06 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 25°С и перемешивали в течение 3 ч. Oстаток разбавляли CO (50 мл) и экстрагировали EtOAc (3x50 мл). Oбъединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (2x50 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Oстаток очищали путем флэш-хроматографии на колонке с силикагелем с использованием смеси EtOAc/петролейный эфир (30-50% EtOAc в петролейном эфире) с получением (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-2,2,4,4-тетраизопропилтетрагидро-6H-фуро[3,2-

f][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9 -ола.

ЖХ-Ме (ES, m/z): 510,25 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, de-^CO, м.д.): δ 8,72 (шир. с, 1Н), 8,42 (шир. с, 1Н), 8,08 (с, 1Н), 8,02 (с, 1Н), 5,08 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 4,91 (д, J=1,8 Гц, 1Н), 4,41 (дд, J=5,4 Гц, J=8,1 Гц, 1Н), 4,30-4,28 (м, 1Н), 3,99-3,86 (м, 3Н), 1,04-1,00 (м, 28Н).

Ладия 8. бишез 8-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-тетраизопропилтетрагидро-6Н-фуро[3,2Б][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-8-ил)пиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-4-амина.

К перемешиваемому раствору (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-

2.2.4.4- тетраизопропилтетрагидро-6H-фуро[3,2-f][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-9-ола (3,90 г, 7,65 ммоль) в сухом DCE (120 мл) в атмосфере аргона при комнатной температуре добавляли 1,1'-тиокарбонилдиимидазол (1,704 г, 9,56 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 85°С и перемешивали в течение 1,5 ч. ТСХ показывала, что исходный нуклеозид расходовался. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении с получением сырого имидазолильного промежуточного соединения, которое сразу вновь растворяли в дегазированном толуоле (120 мл) в атмосфере аргона. К вышеуказанной смеси добавляли AIBN (1,88 г, 11,48 ммоль), затем при температуре 25°С в течение 2 мин вводили трибутилстаннан (4,45 г, 15,30 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 80°С и перемешивали в течение 3 ч. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении. йгрой остаток очищали путем флэш-хроматографии на колонке с силикагелем с использованием смеси EtOAc/петролейный эфир (30-50% EtOAc в петролейном эфире) с получением 8-((6aR,8R,9aS)-

2.2.4.4- тетраизопропилтетрагидро-6Н-фуро[3,2-1Т][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-8-ил)пиразоло[1,5а][1,3,5]триазин-4-амина.

ЖХ-Ме (ES, m/z): 494,25 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, CDC1₃, м.д.): δ 8,18 (с, 1Н), 8,06 (с, 1Н), 6,61 (шир. с, 2Н), 5,40 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 4,70-4,65 (м, 1Н), 4,10 (дд, J=3,0 Гц, J=10,8 Гц, 1Н), 3,95-3,81 (м, 2Н), 2,52-2.38 (м, 2Н), 1,08-1,05 (м, 28Н).

- 66 031476

Стадия 9. Синтез (2К^,5И)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола

В перемешиваемый раствор 8-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-тетраизопропил тетрагидро-6Н-фуро[3,2Г|[1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-8-ил)пиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-4-амина (1,5 г, 3,04 ммоль) в безводном ТГФ (35 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C в течение 5 мин вводили раствор HF-пиридин (1,5 мл, 11,65 ммоль). Смесь нагревали до температуры 25°C и перемешивали в течение 4 ч. Полученную смесь нейтрализовали путем добавления твердого NaHCO₃ и затем разбавляли MeOH (30 мл). Нерастворимый твердый продукт отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и затем растирали в EtOAc (20 мл). Образовывался белый осадок и его собирали путем фильтрации, затем сушили в вакууме в течение ночи с получением (2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8ил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 252,10 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (300 МГц, а₆-ДМСО, м.д.): δ 8,71 (шир. с, 1Н), 8.39 (шир. с, 1Н), 8,19 (с, 1Н), 8,05 (с, 1Н), 5,25 (кв, J=5,4 Гц, 1Н), 5,03 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 4,87 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,26-4,24 (м, 1Н), 3,76-3,74 (м, 1Н), 3,52-3,40 (м, 2Н), 2,32-2,22 (м, 1Н), 2,04-1,98 (м, 1Н).

Стадия 10. Синтез 8-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)пиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-4-амина.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (540 мг, 2,149 ммоль) и 1Н-имидазола (512 мг, 7,52 ммоль) в ДМФ (10 мл) в атмосфере аргона добавляли TBS-Cl (972 мг, 6,45 ммоль) при температуре 0°C в течение 1 мин. Полученную смесь нагревали до температуры 25°C и перемешивали в течение 2 ч. Полученный раствор разбавляли Н₂О (50 мл) и экстрагировали EtOAc (3x50 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (2x50 мл), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на колонке с силикагелем с использованием смеси EtOAc/петролейный эфир (20% EtOAc в петролейном эфире) с получением 8-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)пиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-4-амина.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 480,27 [М+Н]⁺.

’Н-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,18 (с, 1Н), 8,10 (с, 1Н), 6,80 (шир. с, 2Н), 5,49 (кв, J=5,2 Гц, 1Н), 4,51 (д, J=5,2 Гц, 1Н), 3,98 (т, J=4,0 Гц, 1Н), 3,74 (дд, J=3,8 Гц, J=10,6 Гц, 1Н), 3,63 (дд, J=6,4 Гц, J=10,8 Гц, 1Н), 2,39-2,32 (м, 1Н), 2,22-2,17 (м, 1Н), 0,93-0,92 (м, 18Н), 0,11-0,05 (м, 12Н).

Стадия 11. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору 8-((2R,4S,5R)-4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-5-(((третбутилдиметилсилил)окси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)пиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-4-амина (800 мг, 1,667 ммоль) в ТГФ (16 мл) при температуре 0°C в течение 5 мин добавляли предварительно охлажденный раствор ТФУ/Н₂О (8 мл, об./об., 1/1). Полученную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1,5 ч. Протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. Полученный раствор упаривали совместно с толуолом (3x50 мл) при температуре ниже 25°C, и остаток вновь растворяли в смеси MeOH/DCM (20 мл, об./об., 1/2) и смесь нейтрализовали с помощью твердого NaHCO₃. Твердый продукт отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали путем флэшхроматографии на колонке с силикагелем с использованием смеси MeOH/DCM (от 2 до 10% MeOH в DCM) с получением ((2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 366,19 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (300 МГц, а₆-ДМСО, м.д.): δ 8,70 (шир. с, 1Н), 8,38 (шир. с, 1Н), 8,19 (с, 1Н), 8,05 (с, 1Н), 5,24 (кв, J=5,4 Гц, 1Н), 4,92 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,42 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 3,75 (дд, J=3,6 Гц, J=4,8 Гц, 1Н), 3,463,43 (м, 2Н), 2,39-2,30 (м, 1Н), 2,00-1,94 (м, 1Н), 0, 90 (с, 9Н), 0, 11 (с, 6Н).

Стадия 12. Синтез ^^^)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемой суспензии ((2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)метанола (350 мг, 0,958 ммоль) в безводном ACN (40 мл) в атмосфере аргона при температуре 25°C добавляли IBX (804 мг, 2,87 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры 80°C и перемешивали в течение 1 ч. Твердый продукт отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением (2S,3S,5R)-5-(4аминопиразоло [1,5-а][ 1,3,5]триазин-8-ил)-3 -((трет-бутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2карбальдегида, который использовали на следующей стадии реакции напрямую без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 364,17 [М+Н]⁺.

- 67 031476

Стадия 13. Синтез (^^)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола.

К перемешиваемому раствору ^^^)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (349 мг, 0,960 ммоль) в 1,4-диоксане (25 мл) в 100-миллилитровой круглодонной колбе добавляли 37%-ный водный раствор формальдегида (5 мл), затем при комнатной температуре в течение 5 мин вводили водный раствор NaOH (5 мл, 2 н). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. После того, как был израсходован весь исходный нуклеозид, реакционную смесь нейтрализовали с помощью AcOH (~0,5 мл). Смесь разбавляли EtOAc (50 мл) и последовательно промывали Н₂О (2x20 мл), водным раствором NaHCO₃ (насыщенный, 2x20 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл). Органический слой сушили над Na₂SO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток вновь растворяли в безводном EtOH (40 мл) и порциями при температуре 0°C в атмосфере аргона добавляли натрия тетрагидроборат (72,6 мг, 1,920 ммоль). После перемешивания при температуре 25°C в течение 16 ч реакционную смесь нейтрализовали с помощью AcOH (~0,2 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток распределяли между CHCl₃ (30 мл) и Н₂О (15 мл). Водный слой опять экстрагировали CHCl₃(2x15 мл). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на колонке с силикагелем с использованием смеси MeOH/DCM (3,5% MeOH в DCM) с получением ((3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 396,20 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,70 (шир. с, 1Н), 8,38 (шир. с, 1Н), 8,20 (с, 1Н), 8,05 (с, 1Н), 5,30 (дд, J=5,1 Гц, J=11,1 Гц, 1Н), 4,84 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,50 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 4,22 (дд, J=5,1 Гц, J=6,3 Гц, 1Н), 3,62-3,48 (м, 3Н), 3,41-3,31 (м, 1Н), 2,57-2,50 (м, 1Н), 1,95 (дд, J=5,1 Гц, J=12,6 Гц, 1Н), 0,90 (с, 9Н), 0,11 (с, 6Н).

Стадия 14. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида.

К перемешиваемой суспензии ((3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)тетрагидрофуран-2,2-диил)диметанола (190 мг, 0,480 ммоль) в смеси ACN/ДМСО (8 мл, об./об., 10/1) в атмосфере аргона при температуре 25°C добавляли IBX (404 мг, 1,441 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре 30°C в течение 7 ч. Твердый продукт отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением (2R,3S,5R)-5-(4аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида, который использовали на следующей стадии реакции напрямую без дополнительной очистки.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 394,18 [М+Н]⁺.

Стадия 15. Синтез ((2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

К перемешиваемому раствору (2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбальдегида (189 мг, 0,480 ммоль) в сухом MeOH (6 мл) в атмосфере аргона добавляли K₂CO₃ (199 мг, 1,441 ммоль), затем при температуре 0°C в течение 3 мин добавляли раствор диметил (1-диазо-2-оксопропил)фосфоната (185 мг, 0,961 ммоль) в MeOH (1,5 мл). Реакционную смесь медленно нагревали до температуры 25°C и затем перемешивали при температуре 25°C в течение 16 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на колонке с силикагелем с использованием смеси MeOH/DCM (от 2 до 10% MeOH в DCM) с получением ((2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 390,19 [М+Н]⁺.

Ή-ЯМР (300 МГц, CDCl₃, м.д.): δ 8,17 (с, 1Н), 7,98 (с, 1Н), 6,43 (шир. с, 2Н), 5,54 (дд, J=5,7 Гц, J=10,5 Гц, 1Н), 4,61 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 3,97 (д, J=12,3 Гц, 1Н), 3,76 (д, J=12,0 Гц, 1Н), 2,70-2,61 (м, 1Н), 2,54 (с, 1Н), 2,20-2,14 (м, 1Н), 0,95 (с, 9Н), 0,12 (д, J=6,0 Гц, 6Н).

Стадия 16. Синтез (2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-2-этинил-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (23).

К перемешиваемому раствору ((2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-8-ил)-3-((третбутилдиметилсилил)окси)-2-этинилтетрагидрофуран-2-ил)метанола (120 мг, 0,308 ммоль) в ТГФ (5 мл) в атмосфере аргона при температуре 0°C в течение 2 мин добавляли раствор TBAF ТГФ (0,462 мл, 0,462 ммоль, 1,0 М). Смесь перемешивали при температуре 20°C в течение 26 ч. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на колонке с силикагелем с использованием смеси MeOH/DCM (от 5 до 10% MeOH в DCM) с получением сырого продукта. Сырой продукт (90 мг) далее очищали с помощью преп-ВЭЖХ в следующих условиях (1#-Pre-HPLC-011 (Waters)): колонка, X-bridge C18 19x150 мм; мобильная фаза, вода с NH₄HCO₃

- 68 031476 (10 ммоль/л) и ACN (от 4% ACN вплоть до 9% при температуре 6 мин, задерживали 95% в течение 2 мин, вплоть до 5% в течение 2 мин); детектор, УФ 254 и 220 нм. Содержащие продукт фракции собирали и лиофилизовали в течение ночи с получением (2R,3S,5R)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин8-ил)-2 -этинил-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3 -о ла.

ЖХ-МС: (ES, m/z): 276,10 [М+Н]⁺.

’H-ЯМР (400 МГц, de-ДМСО, м.д.): δ 8,71 (шир. с, 1Н), 8,43 (шир. с, 1Н), 8,20 (с, 1Н), 8,05 (с, 1Н), 5,36 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 5,26-5,22 (м, 2Н), 4,34 (дд, J=4,8 Гц, J=11,2 Гц, 1Н), 3,58 (дд, J=5,2 Гц, J=11,6 Гц, 1Н), 3,49 (дд, J=7,6 Гц, J=11,6 Гц, 1Н), 3,37 (с, 1Н), 2,44-2,37 (м, 1Н), 2,16-2,12 (м, 1Н).

Анализ RT полимеразы.

RT белки непроцессированного дикого типа и 2 мутантных были экспрессированы в клетки Escherichia coli BL21 (DE3) и очищены. В кратком изложении, гетеродимерный субстрат нуклеиновой кислоты, используемой в реакции полимеразы транскриптазы ВИЧ-1, был получен путем ренатурации биотинилированного праймера ДНК в 500 нуклеотидную РНК-матрицу. Фермент ВИЧ-1 RT (конечная концентрация составляла 50 пМ) объединяли с ингибирующим соединением или ДМСО (10% ДМСО в конечной реакционной смеси) в аналитическом буфере (62,5 мМ Tris-HCl, pH 7,8, 1,25 мМ дитиотреитол, 7,5 мМ MgCl₂, 100 мМ KCl, 0,03% CHAPS, 0,125 мМ EGTA). Эту смесь предварительно инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре в микротитровальных планшетах. Реакцию полимеризации инициировали путем добавления субстрата матрица/праймер (конечная концентрация: 16,6 нМ) и dNTP (дНТФ, дезоксирибонуклеозидтрифосфат) (конечная концентрация: 2 мкМ dCTP (дезоксицитидина трифосфат), dGTP (дезоксигуанозина трифосфат), dATP (дезоксиаденозина трифосфат) и 66,6 нМ Ru-dUTP (Ru-дезоксиуридинтрифосфат)). После 90 мин инкубирования при температуре 37°C, реакции гасили путем добавления EDTA (25 мМ). Полученную смесь инкубировали еще дополнительные 5 мин при комнатной температуре, затем переносили раствор (50 мкл) на блокированный авидином планшет фирмы Meso Scale Discovery (MSD). Смеси инкубировали при комнатной температуре в течение 60 мин, затем осуществляли количественную оценку продукта реакции посредством устройства для визуализации ECL 6000. Полученные данные представлены в табл. 2.

- 69 031476

Таблица 2

- 70 031476

Анализ Viking/CTG.

Анализ Viking.

Оценка противовирусной активности в анализе инфекции ВИЧ-1 с многократным раундом.

Репликацию ВИЧ-1 контролировали с помощью клона D3 MT4-gag-GFP (здесь и далее указывается как MT4-GFP), который представляет собой клетки МТ-4, модифицированные для скрытия репортерного гена GFP, экспрессия которого является зависимой от ВИЧ-1 экспрессированных белков tat и rev. Продуктивное заражение клетки MT4-GFP ВИЧ-1 приводит к экспрессии GFP приблизительно через 24 ч после заражения.

Клетки MT4-GFP сохраняли в условиях 37°C/5% СО₂/90%-ная относительная влажность в среде RPMI 1640, дополненной 10%-ной фетальной бычьей сывороткой, 100 ед./мл пенициллина/стрептомицина и 400 мкг/мл G418, для сохранения репортерного гена. Для инфицирования клетки MT4-GFP помещали в ту же самую среду без G418 и инфицировали в течение ночи вирусом H9IIIB при приблизительной множественности заражения 0,1 в тех же условиях инкубирования. Затем клетки промывали и вновь суспендировали либо в среде RPMI 1640, содержащей 10%- или 50%-ную нормальную сыворотку человека при плотности 1,6x10⁵ клеток/мл (условия 10%- или 50%-ной NHS), либо в 100%ной нормальной сыворотке человека при 2x10⁵ клеток/мл (условия 100%-ной NHS). Планшеты с соединениями готовили путем распределения соединений, растворенных в ДМСО, в лунки 384-луночных планшетов, покрытых поли-Э-лизином (0,2 мкл/лунка), с использованием акустического диспенсера ECHO. Каждое соединение исследовали в 10 точках серийного 3-кратного разведения (типичные конечные концентрации: 8,4 мкМ-0,43 нМ). Контроли не содержали ингибитор (только ДМСО), но содержали комбинацию трех противовирусных средств (эфавиренц, индинавир и ингибитор переноса цепи интегразой при конечных концентрациях 4 мкМ, каждый). В планшеты с соединениями добавляли клетки (50 мкл/лунка) и инфицированные клетки сохраняли в условиях 37°C/5% СО₂/90%-ная относительная влажность.

Инфицированные клетки количественно анализировали в двух временных точках через ~48 и ~72 ч после инфицирования путем подсчета количества зеленых клеток в каждой лунке с помощью сканера Acumen еХ3. Увеличение количества зеленых клеток в течение периода ~24 ч дает репродуктивное соотношение, Ro, которое, как правило, составляет 5-15 и, как было показано экспериментально, находится в логарифмической фазе (данные не показаны). Ингибирование R₀ рассчитывается для каждой лунки, и IC₅₀ определяли с помощью подбора нелинейной 4-параметрической кривой.

Анализ CTG.

Оценка цитотоксичности в люминесцентном анализе жизнеспособности клеток CellTiter-Glo (CTG).

Клетки MT4-GFP высевали в среде RPMI 1640, дополненной 10%-ной фетальной бычьей сывороткой, 100 ед./мл пенициллина/стрептомицина, в течение ночи в условиях 37°C/5% СО₂/90%-ная относительная влажность. Затем клетки промывали и вновь суспендировали в среде RPMI 1640, содержащей 10%-ную нормальную сыворотку человека при плотности 0,8x10⁵ клетки/мл. Планшеты с соединениями готовили путем распределения соединений, растворенных в ДМСО, в лунки 384-луночных твердых темных планшетов (Corning 3571) с использованием акустического диспенсера ECHO (0,2 мкл/лунка). Каждое соединение исследовали по 10 точкам серийного 3-кратного разведения (конечные концентрации: 8,4 мкМ-0,43 нМ). Контроли содержали ДМСО. В планшеты с соединениями добавляли клетки (50 мкл/лунка), и инфицированные клетки сохраняли в условиях 37°C/5% СО₂/90%-ная относительная влажность. В соответствии с инструкцией производителя спустя 48 ч инкубирования в планшеты с клетками добавляли реагент CTG (Promega, G7573). Люминесцентные сигналы регистрировали на планшетридере Envision (Perkin Elmer). LD₅₀ определяли подбором нелинейной 4-параметрической кривой. Полученные данные представлены в табл. 3, где в качестве контроля включен доступный на рынке нуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы ВИЧ AZT (азидотимидин, зидовудин).

- 71 031476

Таблица 3

	Структура	Viking, IC₅₀ (10% NHS) (нМ)	CTG (mkM)
ΑΖΤ	V- Ν₃	37	>8,4
Пример №	Структура	Viking, IC₅₀ (10% NHS) (нМ)	CTG (mkM)
1	νη₂ ^H0>₀W но	1,3	>8,4
2	LT <flj ^HOAoW НН но	1, 6	>8,4
3	\ г <flj ^how о ни ИН но	485	>8,4
4	nh₂ лЛ ho^_o\A_nA_c\| но	4,0	>8,4
5	Br NH₂ ΛΥι ^Hov<yA HO	209	>8,4

- 72 031476

Противовирусная резистентность.

Репликацию ВИЧ-’ отслеживали с использованием клона D3 MT4-gag-GFP (здесь и далее указывается как MT4-GFP), который представляет собой клетки МТ-4, модифицированные для скрытия репортерного гена GFP, экспрессия которого является зависимой от ВИЧ-’ экспрессированных белков tat и rev. Продуктивное заражение клетки MT4-GFP ВИЧ-’ приводит к экспрессии GFP приблизительно через

- 73 031476 ч после заражения. Клетки MT4-GFP сохраняли в условиях 37°C/5% СО₂/90%-ная относительная влажность в среде RPMI 1640, дополненной 10%-ной фетальной бычьей сывороткой, 100 ед./мл пенициллина/стрептомицина и 400 мкг/мл G418 для сохранения репортерного гена. В момент времени 72 ч проведения анализа устойчивости (планшет 72 ч) и момент времени 24 ч контрольного анализа (планшет 24 ч), клетки MT4-GFP промывали и вновь суспендировали в среде RPMI 1640, содержащей 10%-ную нормальную сыворотку человека с плотностью либо 1,6х10⁵, либо 2,4х10⁵ клеток/мл (10%-ная NHS). Планшеты с соединениями получали путем распределения соединений, растворенных в ДМСО, в лунки 384-луночных планшетов для клеточных культур (0,205 мкл/лунка) с использованием акустического диспенсера ECHO. Каждое соединение исследовали по 10 точкам серийного 3-кратного разведения (типичные конечные концентрации: 4,2 мкМ-0,21 нМ). Контроли не содержали ингибитор (только ДМСО), но содержали комбинацию трех противовирусных средств (эфавиренц, индинавир и ингибитор переноса цепи при конечных концентрациях 4 мкМ, каждое). В планшеты с соединениями добавляли клетки (50 мкл/лунка) и инкубировали при температуре 37°C/5% CO₂/90%-ная относительная влажность в течение 24 ч. Клетки промывали с помощью 5x40 мкл среды RPMI 1640, дополненной 10%-ной NHS и 100 ед./мл пенициллина/стрептомицина. Планшет 72 ч вновь возвращали в инкубатор с температурой 37°C для дополнительного 48-часового инкубирования. 40 мкл клеток из каждой лунки планшета 24 ч или планшета 72 ч (после 48-часового инкубирования после промывки) переносили в покрытый поли-Dлизином планшет. Затем клетки инфицировали вирусом H9IIIB при приблизительной множественности заражения 0,1 в тех же условиях инкубирования.

Инфицированные клетки были количественно определены через ~24 ч после инфицирования путем подсчета количества зеленых клеток в каждой лунке с помощью сканера Acumen еХ3. IC₅₀ соединений, описанных в табл. 4, были определены с помощью нелинейной аппроксимации 4-параметрической кривой.

Анализ противовирусной резистентности предназначен для оценки устойчивости противовирусной активности после удаления нуклеозида. Данные табл. 4 демонстрируют противовирусную устойчивость соединений по настоящему изобретению по сравнению с доступным на рынке нуклеозидом АЗТ. В публикации Research and Therapy, 2009, 6:5, подчеркивается значение противовирусной резистентности.

- 74 031476

Таблица 4

Кратный

- 75 031476

8	nh₂ ^ηολΖν^ΛΖνη₂zh HO	840	29000	34,5
9	nh₂ ztS ^HOA.o n^n^f Zf HO	37	270	7,3
10	nh₂ NC' \___/ но'	170	1800	10,5
11	nh₂ ZH HO	12,4	1950	157
12	nh₂ Z^T^N HO'yoZ'N^ NC'\__/ HO'	880	25000	28
22	nh₂ n^A_n ^ηολΖζΖ HO'	38	350	9,2
23	nh₂n-A HO'	64	700	10, 9

Время полужизни аденозиндеаминазы (ADA).

Данные, представленные в табл. 5, были получены в результате взаимодействия соединения субстрата с ADA тип 1 человека в присутствии буфера трис-HCl (pH 7,5) при температуре 40°С и расходование исходного материала отслеживали с помощью ЖХМС. Время, необходимое для превращения 50% в соответствующий инозиновый продукт, указывается в табл. 5 как T_1/2. Известно, что дезаминирование с помощью аденозиндезаминазы снижает лечебные возможности аденозиноподобных нуклеозидных ингибиторов, особенно in vivo (см. ссылки ниже). Как было показано, соединения, представленные в табл. 5, обладают разной степенью устойчивости к аденозиндезаминазе по сравнению с EDA (2R,3S,5R)-5-(6амино-9Н-пурин-9-ил)-2-этинил-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол) и природным дезоксиаденозином. Вполне возможно, что соединения, которые являются более устойчивыми к ADA, будут обладать лучшими фармакокинетическими свойствами.

Литературные ссылки:

Journal of Medicinal Chemistry, 1996, 39, 19, 3847.

Chemical Pharmaceutical Bulletin, 1994, 42, 8, 1688-1690.

Antimicrobial Agents and Chemotherapy (2013), 57(12), 6254-6264.

Collection of Czechoslovak Chemical Communications (2006), 71(6), 769-787.

Microbiologica (1995), 18(4), 359-70.

J Antivir Antiretrovir S10.doi:10,4172/jaa.S10-002.

- 76 031476

Преобразование соединения 2 в инозиновый продукт 2А.

7-((2R,4S,5R)-5-Этинил-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-5-фтор-3Нпирроло [2,3-d] пиримидин-4 (7Н)-он (2А)

Буфер трис-HCl (pH 7,5, 5 мл) помещали в 25-миллилитровую круглодонную колбу. Смесь нагревали до температуры кипения с обратным холодильником в течение 30 мин. Затем смесь охлаждали до температуры 30°C и добавляли (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2этинил-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол (соединение по примеру 2, 7 мг, 0,024 ммоль), затем добавляли аденозиндеаминазу (3 мг, ~33 звеньев). Полученную смесь перемешивали при температуре 40°C и перемешивали в течение 4 дней. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, и остаток очищали путем препаративной-ВЭЖХ в следующих условиях: колонка: X-Bridge C18, 19x150 мм, 5 мкм; мобильная фаза, вода с 10 ммоль бикарбоната амммония и ацетонитрил (6%-ного ацетонитрила до 30% в течение 5 мин, выдерживание 95% в течение 2 мин, вплоть до 40% в течение 2 мин); детектор, УФ 254 и 220 нм. Содержащие продукт фракции собирали и лиофилизовали с получением указанного в заголовке соединения 2А в виде твердого вещества.

'll-ЯМР (400 МГц, des-ДМСО, м.д.): δ 11,58 (шир. с, 1Н), 7,86 (с, 1Н), 7,22 (д, J=1,6 Гц, 1Н), 6,44 (т, J=5,8 Гц, 1Н), 5,47 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 5,26-5,22 (м, 1Н), 4,39-4,35 (м, 1Н), 3,55-3,45 (м, 2Н), 3,42 (с, 1Н), 2,41-2,24 (м, 2Н).

¹⁹F-HMP: (376 МГц, d6-ДМСО, м.д.): δ -165,50 (с, 1F).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 294,15 [М+Н]⁺.

Общие способы, описанные в отношении преобразования соединения 2 в 2А, были применены к каждому из соединений субстрата в табл. 5 и приводили к получению инозиновых продуктов, показанных для дезоксиаденозина и EDA, а также инозиновых продуктов 1А, 2А, 11А, 22А и 2ЗА. При использовании описанных способов преобразование соединений 4, 8 и 9 в 4А, 8А и 9А соответственно не обнаруживалось (NA субстрат не чувствителен к аденозиндезаминазе).

Соединение 1А: 7-((2R,4S,5R)-5-этинил-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-3Нпирроло[2,3^]пиримидин-4(7Н)-он:

Ή-ЯМР (400 МГц, CD3OD, м.д.): δ 8,31 (с, 1Н), 7,37 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,68 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 6,62 (т, J=6,4 Гц, 1Н), 4,69 (т, J=7,0 Гц, 1Н), 3,80 (дд, J=12,0 Гц, J=30,0 Гц, 2Н), 3,09 (с, 1Н), 2,67-2,54 (м, 2Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 276, 00 [М+Н]⁺.

Соединение 11А: 7-((2R,4S,5R)-5-этинил-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2ил)пирроло[2,1 -f] [ 1,2,4]триазин-4 (3Н)-он:

Ή-ЯМР (400 МГц, d6-ДМСО, м.д.): δ 10,25 (шир. с, 1Н), 7,86 (с, 1Н), 6,83 (д, J=4,5 Гц, 1Н), 6,63 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 5,53 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 5,31-5,25 (м, 1Н), 5,09-5,05 (м, 1Н), 4,31-4,27 (м, 1Н), 3,55-3,45 (м, 2Н), 3,33 (с, 1Н), 2,35-2,18 (м, 2Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 298,00 [M+Na]⁺.

Соединение 22А: 7-((2R,4S,5R)-5-этинил-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2ил)имидазо[2,1 -f] [ 1,2,4]триазин-4(3Н)-он:

Ή-ЯМР (400 МГц, des-ДМСО, м.д.): δ 8,12 (с, 1Н), 7,56 (с, 1Н), 5,45 (т, J=7,4 Гц, 1Н), 5,35 (д, J=4,0 Гц, 1Н), 5,06 (шир. с, 1Н), 4,33 (шир. с, 1Н), 3,56 -3,46 (м, 2Н), 3,32 (с, 1Н), 2,42-2,33 (м, 1Н), 2,282,22 (м, 1Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 277,10 [М+Н]⁺.

Соединение 23А: 8-((2R,4S,5R)-5-этинил-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2ил)пиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин-4 (3Н)-он:

Ή-ЯМР (400 МГц, d6-ДМСО, м.д.): δ 8,08 (с, 1Н), 7,98 (с, 1Н), 5,30 (т, J=7,4 Гц, 1Н), 5,25 (д, J=5,2 Гц, 1Н), 5,24-5,11 (м, 1Н), 4,32 (кв, J=5,2 Гц, 1Н), 3,53 (дд, J1=11,6 Гц, J₂=32,0 Гц, 2Н), 3,36 (с, 1Н), 2,36-2,29 (м, 1Н), 2,16-2,10 (м, 1Н).

ЖХ-МС: (ES, m/z): 274,80 [М-Н]^-.

- 77 031476

Хотя представленное выше описание позволяет раскрыть принципы настоящего изобретения с помощью примеров, представленных с целью иллюстрации, практическое осуществление изобретения охватывает все обычно используемые варианты, видоизменения и/или модификации, которые входят в рамки следующей далее формулы изобретения. Раскрытие или описание конкретного соединения в формуле изобретения (т.е. образцы) без указания конкретной стереоконфигурации или с обозначением ее для менее чем всех хиральных центров предназначено для охвата рацемата, рацемических смесей, каж

- 78 031476 дого индивидуального энантиомера, диастереоизомерной смеси и каждого отдельного диастереомера соединения, где такие формы возможны благодаря наличию одного или более асимметрических центров. Все публикации, патенты и патентные заявки, цитируемые в настоящем описании, полностью включены в качестве ссылки в настоящее описание.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

’. Соединение структурной формулы I или его фармацевтически приемлемая соль, где R представляет собой или представляет

Оо

IIII

НО—Р— О-РI I:

’ он он собой о

II

LS Г

I или ОН

-Н,

О II

НО—Р—О-Р'О-РI он

-C(O)R⁶, -ОООС -С(О)\(К⁶)> или

О

II ς

I он

X представляет собой О;

Y представляет собой -С^С-R⁸ или -C=N;

R¹

О н :

НО—Р— I он

R² представляет собой -Н, -C(O)R^6a, -C(O)OR^6a или -C(O)N(R^6a)₂;

R³ представляет собой -Н;

R⁴ представляет собой -N(R^X)2, -NHC(O)OR^6b, -УаООГ'к -NHC(O)N(R^6b)2 или -NHC(O)R^6b;

R⁵ представляет собой -Н, галоген, -С’-С6-алкил, -С’-С6-галогеналкил, -CN, -OR^X, -N(R^X)2, -С₃-С₇-циклоалкил, -NHC(O)OR^6b, -N(C(O)OR^6b)2, -NHC(O)N(R^6b)2 или -NHC(O)R^6b;

R⁶, R^6a и R^6b, каждый независимо, выбраны в каждом случае из -Н, -С’-С₆-алкила или -С’-С₆-галогеналкила;

R⁸ представляет собой -Н, -С’-С₆-алкил, -С’-С₆-галогеналкил, -С₃-С₇-циклоалкил;

R⁹ представляет собой -Н, галоген, -С’-С6-алкил, -С’-С6-галогеналкил, -CN, -OR^Y или -N(R^Y)2;

R^X в каждом случае независимо выбран из -Н, -С’-С₆-алкила, -С’-С₆-галогеналкила, арила или 5- или 6-членного моноциклического гетероарила или когда любой или оба из R⁴ или R⁵ представляют собой -N(R^X)₂, каждый R^X, необязательно, может быть связан с атомом азота, к которому они оба присоединены с образованием 5- или 6-членного моноциклического гетероарила или 9- или ’0-членного бициклического гетероарила; и

R^Y представляет собой -Н, -С’-С₆-алкил или -С’-С₆-галогеналкил, причем арил представляет собой (i) фенил или (ii) 9- или ’0-членную бициклическую, конденсированную карбоциклическую кольцевую систему, в которой по меньшей мере одно кольцо является ароматическим, причем гетероарил представляет собой (i) 5- или 6-членное гетероароматическое кольцо, содержащее от ’ до 4 гетероатомов, независимо выбранных из N, О и S, где каждый N, необязательно, находится в виде оксида, если это химически возможно, (ii) 9- или ’0-членную бициклическую конденсированную кольцевую систему, где конденсированная кольцевая система содержит от ’ до 6 гетероатомов, независимо выбранных из N, О и S, где каждое кольцо в конденсированной кольцевой системе содержит ноль, один или более чем один гетероатом, и по меньшей мере одно кольцо является ароматическим, и каждый N, необязательно, находится в виде оксида, если это химически возможно, и каждый S в кольце, которое не является ароматическим, необязательно, представлен в виде S^) или S^)₂.
2. Соединение по п.’ или его фармацевтически приемлемая соль, где R представляет собой
3. Соединение по п.’ или его фармацевтически приемлемая соль, имеющее структурную формулу II

- 79 031476
4. Соединение по любому из пп.’-3 или его фармацевтически приемлемая соль, где

R’ представляет собой -Н,

R⁴ представляет собой -N(R^X)₂.
5. Соединение по любому из пп.’-4 или его фармацевтически приемлемая соль, где R² представляет собой -Н.
6. Соединение по любому из пп.’-4 или его фармацевтически приемлемая соль, где Y представляет собой -C C-R⁸.
7. Соединение по любому из пп.’-3 или его фармацевтически приемлемая соль, где R⁴ представляет собой -N(R^x)₂.
8. Соединение по любому из пп.’-4 или его фармацевтически приемлемая соль, где R⁵ представляет собой -Н, галоген, -Q-Q-алкил, -OR^X или -N(R^X)₂.

9. Соединение по любому из пп.’-4 или его фармацевтически приемлемая соль, где Y представляет собой -С СН.

’0. Соединение по любому из пп.’-4 или его фармацевтически приемлемая соль, где R⁹ представляет собой -Н, галоген, -C’-Q-алкил, -C’-Q-галогеналкил, -CN, -OR^Y или -N(R^Y)₂.

’’. Соединение по любому из пп.’-’0 или его фармацевтически приемлемая соль, где R^X представляет собой -Н, -C’-C₆-алкил или -C’-C₆-галогеналкил.

’2. Соединение по любому из пп.’-4 или его фармацевтически приемлемая соль, где

Y представляет собой -C=C-R⁸;

R⁵ представляет собой -Н, галоген, -C’-C6-алкил, -C’-C6-галогеналкил, -CN, -OR^X, -N(R^X)2, -NHC(O)OR^6b, -NfO^OR⁶^, -NHC(O)N(R^6b)₂ или -NHC(O)R^6b;

R⁹ представляет собой -Н, галоген, -C’-Q-алкил, -C’-Q-галогеналкил, -CN, -OR^Y или -N(R^Y)₂.

’3. Соединение по п.’2 или его фармацевтически приемлемая соль, где R⁴ представляет собой -N(R^x)2.

’4. Соединение по п.’2 или его фармацевтически приемлемая соль, где R² представляет собой -Н и R⁴ представляет собой -NH₂.

’5. Соединение по любому из пп.’-3 или его фармацевтически приемлемая соль, где

X представляет собой О;

Y представляет собой -С=СН или -C=N;

R’ ⁶⁶⁶ но—р—;

I он представляет о о

II II ς

НО—P-O-P-S НС

I I >

ОН ОН или

-Н,

-C(O)R⁶,

-С(О|(Ж.

-C(O)N(R⁶)2, собой ⁰ i?

II II -р-о-рон он или пролекарственную модификацию в виде моно-, ди- или трифосфата;

R² представляет собой Н, -C(O)R^6a, -C(O)OR^6a или ССО^^Ь;

R³ представляет собой -Н;

R⁴ представляет собой -N(R^X)2, -NHC(O)OR^6b или -NHC(О)N(R^6b)2;

R⁵ представляет собой -Н, галоген, -C’-C6-алкил, -C’-C6-галогеналкил, -CN, -OR^X, -N(R^X)2;

R⁶, R^6a и R^6b, каждый независимо, выбраны в каждом случае из -Н, -^-^-алкила или -C’-C₆-галогеналкила;

R⁹ представляет собой -Н, галоген, -C’-Q-алкил, -C’-Q-галогеналкил, -CN, -OR^Y или -N(R^Y)2; R^X в каждом случае независимо выбран из -Н, -^-^-алкила или -C’-C6-галогеналкила;

R^Y в каждом случае независимо выбран из -Н, -^-^-алкила или -C’-C₆-галогеналкила.

’6. Соединение по любому из пп.’-3 или его фармацевтически приемлемая соль, где Y представляет собой -С=СН или -C=N;

R’ представляет собой -Н;

R² представляет собой -Н;

R³ представляет собой -Н;

- 80 031476 _R1

R⁴ представляет собой -NH₂;

R⁵ представляет собой -Н, галоген или -NH₂;

R⁹ представляет собой -Н, галоген или -СН₃.

17. Соединение по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемая соль, где один или более из R¹, R², R⁴ или R⁵ выбран следующим образом:

представляет собой -C(O)R⁶, -С(О)OR⁶, -C(O)N(R⁶)₂; и/или

R² представляет собой -C(O)R^6a, -C(O)OR^6a или -C(O)N(R^6a)₂; и/или

R⁴ представляет собой -NHC(O)OR^6b, -N(C(O)OR^6b)2, -NHC(O)N(R^6b)2 или -NHC(O)R^6b; и/или

R⁵ представляет собой -NHC(O)OR^6b, -N(c(o)OR^6b)2, -NHC(O)N(R^6b)2 или -NHC(O)R^6b

18. Соединение по п.1, имеющее структурную формулу II

R¹

R²

R³

R⁴

R⁵

R⁹ или его фармацевтически приемлемая соль, где X представляет собой О;

Y представляет собой -С=СН;

оо

II sII но—н — 5 но—i^J — I >I представляет собой -Н, он он представляет собой -Н; представляет собой -Н;

представляет собой -NH2;

представляет собой -Н, галоген или -NH2 и представляет собой -Н, галоген или -СН3.

19. Соединение по п.1, представляющее собой

ИЛИ

1) (2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,З-d]пиримидин-7- ил)-2-ЭТИНИЛ-2- (гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол ; 2) (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил- 2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол ; 3) (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2- (гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол ; 4) (2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7Н-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2- (гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол ; 5) (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7Н-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2- (гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол ; 6) (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7Н-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2- (гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол ;

- 81 031476

7) (2R,3S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7Н-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил) -2-этинил-2- (гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол ; 8) (2R,3S, 5R) -5- (2,4-диамино-7Н-пирроло [2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-2- (гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол ; 9) (2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-фтор-7Н-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил- 2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол ; 10) (2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,З-d]пиримидин-7- ил)-З-гидрокси-2- (гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрил ; 11) (2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7- ил)-2-ЭТИНИЛ-2- (гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол ; 12) (2R,3S,5R)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-7- ил)-З-гидрокси-2- (гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрил ; 13) ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-7Н-пирроло[2,З-d]пиримидин-7ил)-2-этинил-3- гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидро трифосфат; 14) ((2Н,3S,5Н)-5-(4-амино-5-фтор-7Н-пирроло[2,3d]пиримидин-7-ил)-2- этинил-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидро трифосфат; 15) ((2Н,3S,5R)-5-(4-амино-5-метил-7Н-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-3гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидро трифосфат; 16) ((2R,3S,5R)-5-(4-амино-2-хлор-7Н-пирроло[2,3d]пиримидин-7-ил)-2-этинил-3гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидро трифосфат;

- 82 031476

17) ((2R_r3S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7Я-пирроло[2,3- d]пиримидин-7-ил)-2-этинил- З-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидро трифосфат; 18) ((2R,35,5Я)-5-(4-амино-7Я-пирроло[2,З-d]пиримидин-7ил)-2-циано-З- гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидро трифосфат; 19) ((2Я,35,5Я)-5-(4-аминопирроло[2,1-f][1,2,4]триазин7-ил)-2-этинил-З- гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидро трифосфат; 20) ((2Я,35,5Я)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин8-ил)-2-этинил-З- гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидро трифосфат; 21) ((2Я,35,5Я)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f][1,2,4]триазин7-ил)-2-этинил-З- гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидро трифосфат; 22) (2 Я,35,5Я)-5-(4-аминоимидазо[2,1-f] [1,2,4]триазин- 7-ил)-2- этинил-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-З-ол; 23) (2Я,35,5Я)-5-(4-аминопиразоло[1,5-а][1,3,5]триазин- 8-ил)-2-ЭТИНИЛ-2- (гидроксиметил)тетрагидрофуран-З-ол;

или его фармацевтически приемлемая соль.

20. Соединение по п.1, представляющее собой

21. Соединение по п.1, представляющее собой фармацевтически приемлемую соль соединения

22. Соединение по п.1, представляющее собой

23. Соединение по п.1, представляющее собой фармацевтически приемлемую соль соединения

24. Соединение по п.1, представляющее собой

- 83 031476

25. Соединение по

26. Соединение по

27. Соединение по

п. 1, представляющее собой фармацевтически приемлемую соль соединения

п. 1, представляющее собой

28. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп.1-19 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.

29. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп.1-19 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель и дополнительно содержащая эффективное количество анти-ВИЧ агента, выбранного из противовирусного средства против ВИЧ, иммуномодулятора или антибактериального средства.

30. Фармацевтическая композиция по п.29, где противовирусное средство против ВИЧ представляет собой ингибитор протеазы ВИЧ, ингибитор обратной транскриптазы ВИЧ, ингибитор интегразы ВИЧ, ингибитор слияния ВИЧ, ингибитор проникновения ВИЧ или ингибитор созревания ВИЧ.

31. Фармацевтическая композиция по п.29, дополнительно содержащая один или более анти-ВИЧ агентов, выбранных из следующих: абакавир, абакавир + ламувидин, абакавир + ламувидин + зидовудин, ампренавир, атазанавир, AZT, каправирин, дарунавир, дидезоксицитидин, дидезоксиинозин, делавирдин, долутегравир, доравирин, эфавиренц, эфавиренц + эмтрицитабин + тенофовир DF, 4'-этинил-2-фтор-2'дезоксиаденозин, элвитегравир, эмтрицитабин, эмтрицитабин + тенофовир DF, эмивирин, энфувиртид, этравирин, фозампренавир кальций, индинавир, ламувидин, ламувидин + зидовудин, лопинавир, лопинавир + ритонавир, маравирок, нелфинавир, невирапин, PPL-100, ралтегравир, рилпивирин, ритонавир, саквинавир, ставудин, тенофовир дизопроксил фумарат, тенофовир алафенамид фумарат, типранавир или викривирок.

32. Способ лечения или профилактики заражения ВИЧ или лечения, профилактики или задержки начала развития СПИДа у пациента, который включает введение пациенту эффективного количества соединения по любому из пп.1-19 или его фармацевтически приемлемой соли.

33. Способ лечения или профилактики заражения ВИЧ или лечения, профилактики или задержки начала развития СПИДа у пациента, который включает введение пациенту эффективного количества соединения по любому из пп.1-19 или его фармацевтически приемлемой соли и дополнительно включает введение эффективного количества анти-ВИЧ агента, выбранного из противовирусного средства против ВИЧ, иммуномодулятора или антибактериального средства.

34. Способ по п.33, где противовирусное средство против ВИЧ представляет собой ингибитор протеазы ВИЧ, ингибитор обратной транскриптазы ВИЧ, ингибитор интегразы ВИЧ, ингибитор слияния ВИЧ, ингибитор проникновения ВИЧ или ингибитор созревания ВИЧ.

35. Способ по п.33, дополнительно включающий введение одного или более анти-ВИЧ агентов, выбранных из следующих: абакавир, абакавир + ламувидин, абакавир + ламувидин + зидовудин, ампренавир, атазанавир, AZT, каправирин, дарунавир, дидезоксицитидин, дидезоксиинозин, делавирдин, долутегравир, доравирин, эфавиренц, эфавиренц + эмтрицитабин + тенофовир DF, 4'-этинил-2-фтор-2'дезоксиаденозин, элвитегравир, эмтрицитабин, эмтрицитабин + тенофовир DF, эмивирин, энфувиртид, этравирин, фозампренавир кальций, индинавир, ламувидин, ламувидин + зидовудин, лопинавир, лопина

- 84 031476 вир + ритонавир, маравирок, нелфинавир, невирапин, PPL-100, ралтегравир, рилпивирин, ритонавир, саквинавир, ставудин, тенофовир дизопроксил фумарат, тенофовир алафенамид фумарат, типранавир или викривирок.

36. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп.20-27 и фармацевтически приемлемый носитель.

37. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп.20-27 и фармацевтически приемлемый носитель и дополнительно содержащая эффективное количество анти-ВИЧ агента, выбранного из противовирусного средства против ВИЧ, иммуномодулятора или антибактериального средства.

38. Фармацевтическая композиция по п.37, где противовирусное средство против ВИЧ представляет собой ингибитор протеазы ВИЧ, ингибитор обратной транскриптазы ВИЧ, ингибитор интегразы ВИЧ, ингибитор слияния ВИЧ, ингибитор проникновения ВИЧ или ингибитор созревания ВИЧ.

39. Фармацевтическая композиция по п.37, дополнительно содержащая один или более анти-ВИЧ агентов, выбранных из следующих: абакавир, абакавир + ламувидин, абакавир + ламувидин + зидовудин, ампренавир, атазанавир, AZT, каправирин, дарунавир, дидезоксицитидин, дидезоксиинозин, делавирдин, долутегравир, доравирин, эфавиренц, эфавиренц + эмтрицитабин + тенофовир DF, 4'-этинил-2-фтор-2'дезоксиаденозин, элвитегравир, эмтрицитабин, эмтрицитабин + тенофовир DF, эмивирин, энфувиртид, этравирин, фозампренавир кальций, индинавир, ламувидин, ламувидин + зидовудин, лопинавир, лопинавир + ритонавир, маравирок, нелфинавир, невирапин, PPL-100, ралтегравир, рилпивирин, ритонавир, саквинавир, ставудин, тенофовир дизопроксил фумарат, тенофовир алафенамид фумарат, типранавир или викривирок.

40. Способ лечения или профилактики заражения ВИЧ или лечения, профилактики или задержки начала развития СПИДа у пациента, который включает введение пациенту эффективного количества соединения по любому из пп.20-27.

41. Способ лечения или профилактики заражения ВИЧ или лечения, профилактики или задержки начала развития СПИДа у пациента, который включает введение пациенту эффективного количества соединения по любому из пп.20-27 и дополнительно включает введение эффективного количества антиВИЧ агента, выбранного из противовирусного средства против ВИЧ, иммуномодулятора или антибактериального средства.

42. Способ по п.41, где противовирусное средство против ВИЧ представляет собой ингибитор протеазы ВИЧ, ингибитор обратной транскриптазы ВИЧ, ингибитор интегразы ВИЧ, ингибитор слияния ВИЧ, ингибитор проникновения ВИЧ или ингибитор созревания ВИЧ.

43. Способ по п.41, дополнительно включающий введение одного или более анти-ВИЧ агентов, выбранных из следующих: абакавир, абакавир + ламувидин, абакавир + ламувидин + зидовудин, ампренавир, атазанавир, AZT, каправирин, дарунавир, дидезоксицитидин, дидезоксиинозин, делавирдин, долутегравир, доравирин, эфавиренц, эфавиренц + эмтрицитабин + тенофовир DF, 4'-этинил-2-фтор-2'дезоксиаденозин, элвитегравир, эмтрицитабин, эмтрицитабин + тенофовир DF, эмивирин, энфувиртид, этравирин, фозампренавир кальций, индинавир, ламувидин, ламувидин + зидовудин, лопинавир, лопинавир + ритонавир, маравирок, нелфинавир, невирапин, PPL-100, ралтегравир, рилпивирин, ритонавир, саквинавир, ставудин, тенофовир дизопроксил фумарат, тенофовир алафенамид фумарат, типранавир или викривирок.