WO2007083634A1 - 外傷性神経障害および／または運動機能障害の治療薬 - Google Patents

外傷性神経障害および／または運動機能障害の治療薬 Download PDF

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WO2007083634A1
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oligosaccharide
keratan sulfate
derivative
gal
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Inventor
Akira Asari
Tadahiko Kato
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Glycoscience Laboratories, Inc.
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system

Definitions

  • the present invention relates to a therapeutic agent for traumatic neuropathy and Z or motor dysfunction, and particularly to a therapeutic agent for traumatic neuropathy due to spinal cord injury and Z or motor dysfunction.
  • Non-patent Document 1 L4 represented by the following formula, which is a keratan sulfate disaccharide, has an inhibitory action on interleukin 12 (IL-12) expression.
  • Gal represents a galactose residue
  • GlcNAc represents an N-acetylyldarcosamine residue
  • 6S represents that the hydroxyl group at the 6-position is a 6-O-sulfate ester
  • ⁇ -4 -4 Represents a ⁇ 1-4 glycosidic bond.
  • IL-12 is expressed at high levels in MRL-lprZlpr mice, immortalizing T lymphocytes (CD4-CD8-) and swelling lymphoid organs (lymph nodes and spleen) It is known (Non-Patent Document 2). Furthermore, it has been reported that administration of L4 reduces the blood IL 12 concentration, induces cell death in T lymphocytes, and shrinks lymphoid organs (Non-patent Document 1).
  • Non-patent Document 3 The role of IL-12 in spinal cord injury is unknown
  • Patent Document 1 Japanese Patent Laid-Open No. 2-57182
  • Patent Document 2 International Publication No. W096 / 16166 Pamphlet
  • Patent Document 3 International Publication No. W096 / 16973 Pamphlet
  • Patent Document 4 JP 2001-89493 A
  • Non-Patent Document 1 Xu H, Kurihara H, Ito T, Kikuchi H, Yoshida K, Yamanokuchi H, Asa ri A.
  • the keratan sulfate disaccharide Gal (6S03) betal, 4-GlcNAc (6S03) modulates i nterleukin 12 production by macrophages in murine Thy— 1 type autoimmune disease J Biol Chem. 2005 May 27; 280 (21): 20879-86.
  • Non-Patent Document 2 Xu H, Kurihara H, Ito T, Nakajima S, Hagiwara E, Yamanokuchi H, A sari A.
  • IL— 12 enhances lymphoaccumulation by suppressing cell death of T cells in MRL-lpr / lpr mice. J Autoimmun. 2001 Mar; 16 (2): 87—95.
  • Non-Patent Document 3 Basu S, Aballa TC, Ferrell SM, Lynne CM, Brackett NL. Inflammator y cytokine concentrations are elevated in seminal plasma of men with spinal cora inj uries. J Androl. 2004 Mar— Apr; 25 (2): 250— 4.
  • Non-Patent Document 4 Kubota, M., Yoshida, K., Tawada, A., and Ohashi, M. (2000) Eur. J. Mass Spectrom. 6, 193-203
  • Non-Patent Document 5 Basso DM, Beattie MS, Bresnahan JC, A sensitive and reliable locom otor rating scale for open field testing in rats., J. Neurotauma, 1995 Feb, 12 (1), pi— 21.
  • Non-Patent Document 6 Basso DM, Beattie MS, Bresnahan JC, Graded nistological and locom otor outcomes after spinal cord contusion using the NYU weight-drop device versus transection., Exp. Neurol, 1996 Jun, 139 (2), p244—56
  • An object of the present invention is to provide a therapeutic agent for traumatic neuropathy and Z or motor dysfunction, particularly a therapeutic agent for traumatic neuropathy due to spinal cord injury and Z or motor dysfunction.
  • a therapeutic agent for traumatic neuropathy comprising an effective amount of keratan sulfate oligosaccharide or a derivative thereof is provided.
  • a therapeutic agent for motor dysfunction comprising an effective amount of a keratan sulfate oligosaccharide or a derivative thereof.
  • the present inventors examined the effect of keratan sulfate oligosaccharide or its derivative on spinal cord injury using a rat spinal cord injury model. As a result, surprisingly, the details below As explained, keratan sulfate oligosaccharide or its derivatives were found to have an improvement effect on motor dysfunction due to spinal cord injury and useful as a therapeutic agent for traumatic neuropathy and z or motor dysfunction .
  • FIG. 1 shows the effect of L4 on hindlimb motor function in a rat spinal cord injury model by tweezer annihilation.
  • the relationship between the number of days after spinal cord injury treatment and L4 administration and hindlimb motor function (B BB score) is shown.
  • FIG. 2 shows the effect of L4 on hindlimb motor function in a rat spinal cord injury model by tweezer eradication.
  • FIG. 3 shows the effect of L4 on spinal cord evoked potential in a rat spinal cord injury model by tweezer annihilation. Shows spinal cord evoked potential on day 7 after spinal cord injury treatment and L4 administration.
  • a therapeutic agent for traumatic neuropathy and Z or motor dysfunction comprising an effective amount of a keratan sulfate oligosaccharide or a derivative thereof is provided.
  • keratan sulfate oligosaccharide is a basic structure of keratan sulfate (generally, a galactose residue or a galactose 6-O sulfate residue, and N These are oligosaccharides including disaccharides including cetyldarcosamine residues or N-acetylethylcosamine 6-O sulfate residues alternately glycosidically linked, but not particularly limited.
  • the KS oligosaccharide may also contain a sialic acid (neuraminic acid acyl derivative) residue and a Z or fucose residue.
  • sialic acid residues are attached to galactose residues with a 2, 3 or a 2, 6 glycosidic linkages
  • fucose residues are attached to N-acetylyldarcosamine residues with a 1, 3 glycosidic linkages.
  • the oligosaccharide in the present invention usually includes a constituent sugar substance in a range called an oligosaccharide in the field of polysaccharides.
  • oligosaccharides are preferably sugar polymers consisting of 2 to 10 sugars. Those consisting of ⁇ 6 sugars are more preferred. Those consisting of 2 ⁇ 4 sugars are even more preferred. Of these, disaccharides are particularly preferred.
  • the KS oligosaccharide may be, for example, a product obtained by enzymatically or chemically degrading keratan sulfate, and for example, an oligosaccharide formed by binding one or more units of N-acetyllactosamine.
  • a compound obtained by sulfuric acid or the like may be used.
  • oligosaccharides obtained by degrading keratan sulfate oligosaccharides derived from keratan sulfate
  • J8-N-Acetyldarcosaminidase type keratan A decomposition product obtained by decomposition with a sulfate decomposing enzyme is more preferable.
  • Keratan sulfate obtained from nature has many hydroxyl groups at the 6-position of N-acetylyldarcosamine residues sulfated, and the hydroxyl group at the 6-position of galactose residues is partially sulfated. It is often done.
  • the KS oligosaccharide may be a keratan sulfate oligosaccharide obtained by decomposing this keratan sulfate as described above.
  • the hydroxyl group at the 6-position of the N-acetyldarcosamine residue is The hydroxyl group at the 6-position of the galactose residue that is sulphated or not is more preferably sulphated.
  • the KS oligosaccharide is either a disaccharide represented by the following formula, or an oligosaccharide composed of an even sugar containing either or both of the disaccharide as a repeating structural unit. It is preferable.
  • Gal represents a galactose residue
  • GlcNAc represents an N-acetylyldarcosamine residue
  • 6S represents that the hydroxyl group at the 6-position is a 6-O-sulfate, and-represents a glycoside. Represents a bond
  • the KS oligosaccharide is particularly preferably any oligosaccharide represented by the following formulas 1 to 3.
  • Gal (6S) ⁇ l-4GlcNAc Formula 3
  • Gal represents a galactose residue
  • GlcNAc represents an N-acetylyldarcosamine residue
  • 6S represents that the hydroxyl group at the 6-position is a 6-O-sulfate ester
  • ⁇ ⁇ - 4 represents a ⁇ 1-4 glycosidic bond
  • ⁇ 1-3 represents a ⁇ 1-3 glycosidic bond.
  • the oligosaccharide represented by formula 1 is also referred to as L4L4, the oligosaccharide represented by formula 2 as L4, and the oligosaccharide represented by formula 3 as L3.
  • a sialic acid residue such as N-acetylaminouraminic acid may be bonded to the oligosaccharide represented by the formulas 1 to 3, and such a sialic acid-containing keratan sulfate oligosaccharide may be: Are exemplified.
  • SA represents a sialic acid residue
  • Gal represents a galactose residue
  • GlcNAc represents an N-acetylacetylcosamine residue
  • 6S represents a 6-hydroxyl group at the 6-position hydroxyl group. 1 represents a glycosidic bond.
  • the "derivative" of keratan sulfate oligosaccharide (hereinafter also referred to as KS oligosaccharide derivative) is usually at least one hydrogen atom of the hydroxyl group of KS oligosaccharide (preferably all Includes more than 10% of the hydroxyl group) substituted by a acyl group (partially or fully O-acylated derivative).
  • the KS oligosaccharide and the KS oligosaccharide derivative include those in an ionized state and structures having a proton or a cation added thereto. Accordingly, KS oligosaccharides and KS oligosaccharide derivatives (added with a cation) also include pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • Pharmaceutically acceptable salts include, for example, alkali metal salts such as sodium salt, potassium salt and lithium salt, alkaline earth metal salts such as calcium salt, and inorganic bases such as ammonium salt. Or a salt having an organic salt such as diethanolamine salt, cyclohexylamine salt, amino acid salt, and the like, and is not limited to these.
  • the acyl group substituting the hydrogen atom of the hydroxyl group of the KS oligosaccharide is preferably an acyl group having 1 to 10 carbon atoms, more preferably an aliphatic or aromatic group having 1 to 10 carbon atoms. Is an alkanoyl or aroyl group which may contain heteroatoms. Examples include acetyl, chloroacetyl, dichloroacetyl.
  • Trifluoroacetyl methoxyacetyl, propionyl, n-butyryl, (E) -2-methylbutenoyl, isobutyryl, pentanoyl, benzoyl, o- (dibromomethyl) benzol, o- (methoxycarbol) benzoyl, Examples include groups such as 2, 4, 6-trimethylbenzoyl, p-toluoyl, p-benzene, p-chlorobenzoyl, and p-trobenzoyl.
  • these acyl groups may be the same or different from each other.
  • the coordination of the O-acyl group is ⁇ -glycoside coordination or j8-glycoside coordination. Any of the positions may be used, but ⁇ -daricoside coordination is preferred.
  • acylated KS oligosaccharide has advantages such as improved solubility in organic solvents and lipids, increased permeability through biological membranes, and increased gastrointestinal absorption when administered orally, preferable.
  • the KS oligosaccharide or KS oligosaccharide derivative is preferably a compound represented by the following formula 4.
  • the structure in which ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ is added is shown in the following formula 4.
  • the sulfonic acid group is a negative ion. It becomes a state.
  • the bond represented by the wavy line represents a single bond of ⁇ -glycoside coordination or j8-glycoside coordination.
  • all of ⁇ ⁇ '- ⁇ 'in the above formula 4 are preferably acetyl groups.
  • Particularly preferred is a derivative represented by the following formula 5.
  • the bond represents a single bond of ⁇ -glycoside coordination or j8-glycoside coordination.
  • the KS oligosaccharide or its derivative may be composed of a single species or a mixture.
  • the portion indicated by the wavy line in the above formula 4 may be a substance having an ⁇ -glycoside coordination or a substance having a ⁇ -glycoside coordination, or a mixture thereof.
  • the KS oligosaccharide is prepared by, for example, adding a buffer solution of keratan sulfate, preferably highly sulfated keratan sulfate to endo / 3-3 acetyl dalcosaminidase-type keratan sulfate degrading enzyme, for example, keratanase ( ⁇ ) derived from Bacillus bacteria.
  • keratanase ( ⁇ ) keratanase ( ⁇ ) derived from Bacillus bacteria.
  • Patent Document 1 Japanese Patent Laid-Open No. 2-57182
  • It can be obtained by fractionating the resulting degradation product.
  • the obtained oligosaccharide can be separated and purified by the usual separation and purification methods such as ethanol precipitation, gel filtration and anion exchange chromatography.
  • the raw material keratan sulfate mainly consists of galactose or galactose-6-sulfuric acid and ⁇ acetylyldarcosamine or ⁇ acetylyldarcosamine 6- ⁇ -sulfur. It consists of a repeating structure of a disaccharide with an acid. Keratan sulfate has a different sulfate content depending on animal species and organs, etc. Usually, cartilage fish such as sharks, mammal cartilage such as whales and lions, raw materials such as bones and cornea Can be used.
  • Keratan sulfate used as a raw material is not particularly limited as long as it is usually available, but high sulfated keratan sulfate (a constituent disaccharide) in which a galactose residue as a constituent sugar is sulfated. It is preferable to use high-sulfuric acid-keratan sulfate containing 1.5 to 2 molecules of sulfuric acid per group (sometimes referred to as keratan polysulfuric acid). The 6-position is preferred as the position of the sulfate group of the galactose residue.
  • Such high-sulfuric acid-keratan sulfate can be obtained from, for example, proteodarican of cartilaginous fish such as sharks. Commercially available products can also be used
  • the KS oligosaccharide obtained as described above is used as the KS oligosaccharide used in the present invention in which the sulfate group content is appropriately adjusted by a known desulfation method or sulfation method of a sugar chain. Also good.
  • the hydrogen group of the hydroxyl group of the KS oligosaccharide is replaced with an acyl group in accordance with a conventional acylation method for protecting the hydroxyl group of the sugar. I can do it.
  • a reactive derivative of an acyl group to be introduced an anhydride of a carboxylic acid corresponding to the acyl group (for example, acetic anhydride when introducing an acetyl group, propionic anhydride when introducing a propanoyl group), Carboxylic acids, halides, etc.) and appropriate reaction solvents (pyridine, dioxane, tetrahydrofuran, N, N-dimethylformamide (DMF), acetonitrile, chloroform, dichloromethane, methanol, ethanol, water, and these
  • the acyl group can be introduced by reacting KS oligosaccharides in a conventional manner in a mixture. If necessary, the reaction can be carried out in the presence of a base catalyst such as pyridine.
  • this adjustment may be carried out by adjusting the degree of the acylation by partially carrying out the acylation in the above-mentioned method, or by using the KS oligosaccharide obtained from the acylation. This can be done by partially removing the group.
  • the acyl group can be removed by hydrolysis using methanolic ammonia, concentrated aqueous ammonia, sodium methoxide, sodium ethoxide, sodium hydroxide, potassium hydroxide, etc. .
  • the obtained derivative can be purified by reverse phase high performance liquid chromatography or the like.
  • the KS oligosaccharide or derivative thereof which is an active ingredient of the therapeutic agent that is effective in the present invention, has been purified to such a degree that it can be used as a medicine, is not allowed to be mixed as a medicine, contains no substances! /, It is preferable that
  • the therapeutic agent according to the present invention treats, suppresses or prevents the progression of traumatic neuropathy and Z or motor dysfunction in mammals such as humans, dogs, horses, horses, mice and rats. It is effective.
  • the therapeutic agent according to the present invention is suitable when the motor dysfunction is due to neuropathy.
  • the therapeutic agent according to the present invention is suitable when the neuropathy is caused by spinal cord injury.
  • Spinal cord injuries include traumatic spinal cord injury (dislocation or subluxation of vertebral body joints, vertebral fractures (linear fractures, compression fractures, crush fractures, complete transverse injuries, incomplete transverse injuries, Brown-Sequard type injuries, acute Spinal cord injury, acute spinal cord injury, high cervical spinal cord injury, etc.), spinal degenerative diseases (spondylosis, etc.), spinal inflammatory diseases (spondylitis, rheumatoid arthritis, etc.) Vascular diseases (spinal cord hemorrhage, spinal cord paralysis due to extravasation, etc.), myelitis (arachnoiditis, viral myelitis, bacterial myelitis, etc.), multiple sclerosis, amyotrophic lateral sclerosis, etc.
  • neurological disorders caused by spinal cord injury include lower body motor dysfunction, half body insufficiency, lower body paralysis, sensory impairment, autonomic dysfunction, loss of reflexes, and decreased sexual function. Disorders include those that occur based on neuropathy. , Respiratory paralysis, sensory paralysis, motor paralysis, loss of reflexes, autonomic nerve paralysis, etc.
  • the therapeutic agent according to the present invention not only has a pure therapeutic purpose but also prevents and maintains (deteriorates) the disease. It can be applied for the purpose of prevention) or reduction (improvement of symptoms).
  • any dosage form can be appropriately selected according to the nature and progress of the target disease, the administration method, and the like. That is, the therapeutic agent of the present invention can be administered by injection (intravenous, intramuscular, subcutaneous, intradermal, intraperitoneal, etc.), nasal, oral, transdermal, inhalation, etc., depending on these administration methods. Can be formulated as appropriate.
  • the dosage form that can be selected is also not particularly limited.
  • injections solutions, suspensions, emulsions, solid preparations for use
  • tablets capsules, granules, powders, liquids, lipolytic agents , Ointment, plaster, lotion, noster, patch, gel, suppository, external powder, spray, inhalant, etc.
  • conventional excipients stabilizers, binders, lubricants, emulsifiers, osmotic pressure adjusting agents, P H modifiers, other colorants, disintegrating agents and the like, usually used pharmaceutical Ingredients can be used.
  • the compounding amount and dosage of KS oligosaccharide or derivative thereof, which is an active ingredient in the therapeutic agent of the present invention are the administration method, dosage form, purpose of use, specific symptoms of patient, body weight of patient, and the like. Although it should be determined individually according to age, sex, etc., there is no particular limitation, but the clinical dose of KS oligosaccharide is 50 to 5000 mg per adult per day.
  • Non-patent Document 1 was prepared according to the method of Xu et al. (Non-patent Document 1) by decomposing keratan sulfate with keratanase II and then fractionating with anion exchange chromatography as follows.
  • KS oligosaccharide (L4) was isolated from the degradation products of shark fin-derived keratan sulfate (Seikagaku Corporation) by keratanase II by a series of anion exchange chromatography and gel permeation chromatography steps. did. The oligosaccharide was identified by capillary electrophoresis and mass spectrometry (Non-patent Document 4).
  • Capillary electrophoresis was performed using a Quanta 4000 capillary one electrophoretic system (Waters) with an ultraviolet detector.
  • the capillary electrophoresis system was used with normal polarity with the sample on the anode.
  • As the running buffer 50 mM sodium tetraborate (pH 9.0) was used.
  • the sample was separated and analyzed using a quartz glass capillary tube from Waters (excluding the area where the tube passes the detector above, the outside is covered. Inner diameter 75 m, length 60 cm). Before introducing the sample, the capillary tube 0. Rinse manually with 5M sodium hydroxide, distilled water, and running buffer. The sample was loaded by hydrostatic pressure with a 10 second injection period. The experiment was performed at a constant voltage (12 kV). The eluate was monitored at 185 nm. Data analysis was performed using Waters software Millenium 32 (version 3.06.01).
  • Endotoxin of the obtained sugar was confirmed by a blood cell extract (Limulus amebocyte lysate) using a Toxicolor LS set (Seikagaku Corporation).
  • the endotoxin contained in L4 was 0.03 pgZmg or less.
  • a spinal cord injury model (tweezer annihilation model) was prepared as follows. As experimental animals, 12-week-old male Wistar rats were used. The animals were anesthetized with pentobarbital (50 mg Zkg body weight), shaved with an electric clipper with cervical force on the buttocks, and wiped with 70% ethanol and isodine (Meiji Seika Co., Ltd.). The dorsal skin was incised, and the T5 to T10 thoracic vertebrae were exposed, and then the sixth thoracic vertebra (T6 thoracic vertebra) was excised by a half arch and a small incision was made in the dura mater.
  • pentobarbital 50 mg Zkg body weight
  • an electric clipper with cervical force on the buttocks and wiped with 70% ethanol and isodine (Meiji Seika Co., Ltd.).
  • the dorsal skin was incised, and the T5 to T10 thoracic vertebrae were exposed
  • BBB scale is an evaluation method that measures the recovery of hindlimb motor function by using the scores subdivided into 21 levels and allowing the animals to walk freely in the open field. If there is no voluntary hindlimb movement, the score is 0; if normal hindlimb movement is observed, the score is 21. [0048] [Measurement of spinal cord evoked potential]
  • the animal On the 7th day after spinal cord injury, the animal was intubated into the trachea under halothane anesthesia (introduction 4.0%, maintenance 1.0%), the experimental animal was demobilized with a muscle relaxant, and the head in prone position. Fixed and maintained by ventilator. Insert a catheter electrode from the 2nd Z3 cervical vertebrae and the 13th thoracic vertebrae Z 1st lumbar vertebrae into the experimental animal, and use an electromyograph (Counterpoint, Dantech) to stimulate the maximal stimulation (stimulation frequency: 1 ⁇ , duration: 0 05ms) and the spinal cord evoked potential (SCEP) was measured. The obtained potential was evaluated using the amplitude of the first potential as an index. An increase in spinal cord evoked potential means recovery of the damaged area.
  • Non-parametric Tukey's multiple comparison test was used for the BBB score.

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Abstract

【課題】　外傷性神経障害および／または運動機能障害の治療薬、特に、脊髄損傷による外傷性神経障害および／または運動機能障害の治療薬を提供することを目的とする。 【解決手段】　ケラタン硫酸オリゴ糖またはその誘導体が脊髄損傷による外傷性神経障害および／または運動機能障害に対し改善効果を有し、外傷性神経障害および／または運動機能障害の治療薬として有用であることが見出された。すなわち、本発明によると、有効量のケラタン硫酸オリゴ糖またはその誘導体を含む、外傷性神経障害および／または運動機能障害の治療薬が提供される。

Description

明 細 書
外傷性神経障害および Zまたは運動機能障害の治療薬
技術分野
[oooi] 本発明は、外傷性神経障害および Zまたは運動機能障害の治療薬、特に、脊髄 損傷による外傷性神経障害および Zまたは運動機能障害の治療薬に関する。
背景技術
[0002] 浅利らは、ケラタン硫酸 2糖である下記式で表される L4にはインターロイキン 12 ( IL— 12)発現抑制作用があることを報告している (非特許文献 1)。
Gal(6S) β l-4GlcNAc(6S)
(式中、 Galはガラクトース残基を表し、 GlcNAcは N ァセチルダルコサミン残基を 表し、 6Sは 6位のヒドロキシル基が 6— O—硫酸エステルとなっていることを表し、 β ΐ -4は β 1-4グリコシド結合を表す。 )
[0003] また、 IL—12は、 MRL—lprZlprマウスにおいては、高レベルに発現しており、 T リンパ球 (CD4— CD8 -)を不死化し、リンパ性器官 (リンパ節および脾臓)を腫脹さ せることが知られている（非特許文献 2)。さらに、 L4を投与することで、血中 IL 12 濃度に低下が見られ、 Tリンパ球に細胞死が誘導され、リンパ性器官が縮小すること が報告されて ヽる (非特許文献 1)。
[0004] 一方、脊髄損傷患者の精液では、 IL— 12濃度が高くなつていることが報告されて いる（非特許文献 3)。なお、脊髄損傷における IL— 12の役割については不明である
[0005] 特許文献 1：特開平 2-57182号公報
特許文献 2：国際公開第 W096/16166号パンフレット
特許文献 3：国際公開第 W096/16973号パンフレット
特許文献 4：特開 2001-89493号公報
非特許文献 1 : Xu H, Kurihara H, Ito T, Kikuchi H, Yoshida K, Yamanokuchi H, Asa ri A. The keratan sulfate disaccharide Gal(6S03) betal ,4-GlcNAc(6S03) modulates i nterleukin 12 production by macrophages in murine Thy— 1 type autoimmune disease . J Biol Chem. 2005 May 27;280(21):20879-86.
非特許文献 2 : Xu H, Kurihara H, Ito T, Nakajima S, Hagiwara E, Yamanokuchi H, A sari A. IL— 12 enhances lymphoaccumulation by suppressing cell death of T cells in MRL-lpr/lpr mice. J Autoimmun. 2001 Mar;16(2):87— 95.
非特許文献 3 : Basu S, Aballa TC, Ferrell SM, Lynne CM, Brackett NL. Inflammator y cytokine concentrations are elevated in seminal plasma of men with spinal cora inj uries. J Androl. 2004 Mar— Apr;25(2):250— 4.
非特許文献 4 : Kubota, M., Yoshida, K., Tawada, A., and Ohashi, M. (2000) Eur. J. Mass Spectrom. 6, 193—203
非特許文献 5 : Basso DM, Beattie MS, Bresnahan JC, A sensitive and reliable locom otor rating scale for open field testing in rats., J. Neurotauma, 1995 Feb, 12(1), pi— 21.
非特許文献 6 : Basso DM, Beattie MS, Bresnahan JC, Graded nistological and locom otor outcomes after spinal cord contusion using the NYU weight-drop device versus transection., Exp. Neurol, 1996 Jun, 139(2), p244— 56
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0006] 本発明は、外傷性神経障害および Zまたは運動機能障害の治療薬、特に、脊髄 損傷による外傷性神経障害および Zまたは運動機能障害の治療薬を提供することを 目的とする。
課題を解決するための手段
[0007] 本発明の一の側面によると、有効量のケラタン硫酸オリゴ糖またはその誘導体を含 む外傷性神経障害の治療薬が提供される。本発明の他の側面によると、有効量のケ ラタン硫酸オリゴ糖またはその誘導体を含む、運動機能障害治療薬が提供される。 発明の効果
[0008] 本発明者等は、ラット脊髄損傷モデルを用いて、ケラタン硫酸オリゴ糖またはその誘 導体の脊髄損傷に対する作用を検討した。この結果、驚くべきことに、以下に詳細に 説明するように、ケラタン硫酸オリゴ糖またはその誘導体が脊髄損傷による運動機能 障害に対し改善効果を有し、外傷性神経障害および zまたは運動機能障害の治療 薬として有用であることが見出された。
図面の簡単な説明
[0009] [図 1]図 1は、ピンセット挫滅法によるラット脊髄損傷モデルにおける後肢運動機能に 対する L4の作用を示す。脊髄損傷処理および L4投与後の日数と後肢運動機能 (B BBスコア）との関係を示す。
[図 2]図 2は、ピンセット挫滅法によるラット脊髄損傷モデルにおける後肢運動機能に 対する L4の作用を示す。脊髄損傷処理および L4投与後の 7日目の後肢運動機能（ BBBス =fァ）を示す。
[図 3]図 3は、ピンセット挫滅法によるラット脊髄損傷モデルにおける脊髄誘発電位に 対する L4の作用を示す。脊髄損傷処理および L4投与後の 7日目の脊髄誘発電位 を示す。
発明を実施するための最良の形態
[0010] 以下に、本発明の実施の形態を説明する。もっとも、本発明は、以下に説明する実 施の形態によって、限定されるものではない。
[0011] 上記したように、本発明によると、有効量のケラタン硫酸オリゴ糖またはその誘導体 を含む、外傷性神経障害および Zまたは運動機能障害の治療薬が提供される。
[0012] 本発明にお 、て、「ケラタン硫酸オリゴ糖」（以下、 KSオリゴ糖とも言う）は、ケラタン 硫酸の基本構造 (一般に、ガラクトース残基またはガラクトース 6— O 硫酸残基と 、 N ァセチルダルコサミン残基または N ァセチルダルコサミン 6— O 硫酸残 基とが交互にグリコシド結合した構造であるが、特に限定されない。）を含むニ糖以 上のオリゴ糖である。また、 KSオリゴ糖は、シアル酸 (ノイラミン酸のァシル誘導体)残 基および Zまたはフコース残基を含んでいても良い。通常は、シアル酸残基は、 a 2 , 3または a 2, 6グリコシド結合でガラクトース残基に結合し、フコース残基は、 a l, 3 グリコシド結合で N ァセチルダルコサミン残基に結合する。
[0013] 本発明におけるオリゴ糖とは、通常、多糖の分野にぉ 、てオリゴ糖と称される範囲 の構成糖物質を含む。特に、オリゴ糖とは 2〜 10糖から成る糖ポリマーが好ましぐ 2 〜6糖から成るものがより好ましぐ 2〜4糖から成るものが更に好ましい。中でも特に 2 糖から成るものが好ましい。
[0014] KSオリゴ糖は、例えばケラタン硫酸を酵素的または化学的に分解して得られる生 成物であっても良ぐまた例えば N—ァセチルラクトサミンが 1単位以上結合してなる オリゴ糖などを硫酸ィ匕して得られる化合物であっても良い。この様なケラタン硫酸オリ ゴ糖の中でも、ケラタン硫酸を分解して得られるオリゴ糖 (ケラタン硫酸由来のオリゴ 糖)が好ましぐケラタン硫酸をエンド一 j8—N—ァセチルダルコサミニダーゼ型ケラ タン硫酸分解酵素で分解して得られる分解生成物がより好ましい。
[0015] 天然より得られるケラタン硫酸は、 N—ァセチルダルコサミン残基の 6位のヒドロキシ ル基の多くが硫酸ィ匕されており、ガラクトース残基の 6位のヒドロキシル基は一部硫酸 化されていることが多い。 KSオリゴ糖は、このケラタン硫酸を上述の様に分解して得 られるケラタン硫酸オリゴ糖でも構わないが、本発明の KSオリゴ糖としては、 N—ァセ チルダルコサミン残基の 6位のヒドロキシル基は硫酸化されて 、てもされて 、なくても 良ぐガラクトース残基の 6位のヒドロキシル基は硫酸ィ匕されているものがより好ましい
[0016] すなわち、 KSオリゴ糖は、下記式で表される二糖のいずれかであるか、または、当 該ニ糖のいずれかもしくは両方を繰り返し構成単位として含む偶数糖からなるオリゴ 糖であることが好ましい。
Gal(6S)-GlcNAc(6S) または
Gal(6S)- GlcNAc
(式中、 Galはガラクトース残基を表し、 GlcNAcは N—ァセチルダルコサミン残基を 表し、 6Sは 6位のヒドロキシル基が 6— O—硫酸エステルとなっていることを表し、 - はグリコシド結合を表す）
[0017] KSオリゴ糖は、特に好ましくは、下記式 1〜式 3で表されるいずれかのオリゴ糖であ る。
Gal(6S) β l-4GlcNAc(6S) β 1— 3Gal(6S) β 1— 4GlcNAc(6S) 式 1
Gal(6S) β l-4GlcNAc(6S) 式 2
Gal(6S) β l-4GlcNAc 式 3 (式中、 Galはガラクトース残基を表し、 GlcNAcは N—ァセチルダルコサミン残基を 表し、 6Sは 6位のヒドロキシル基が 6— O—硫酸エステルとなっていることを表し、 β ΐ -4は β 1-4グリコシド結合を表し、 β 1-3は β 1-3グリコシド結合を表す。 )
[0018] なお、式 1で表されるオリゴ糖を L4L4、式 2で表されるオリゴ糖を L4、式 3で表され るオリゴ糖を L3とも言う。前述の様に式 1〜式 3で表されるオリゴ糖に N—ァセチルノ イラミン酸などのシアル酸残基が結合して 、ても良ぐこの様なシアル酸含有ケラタン 硫酸オリゴ糖としては、下記のものが例示される。
SA-Gal(6S)-GlcNAc(6S) および
SA-Gal(6S)-GlcNAc(6S)-Gal(6S)-GlcNAc(6S)
(式中、 S Aはシアル酸残基を表し、 Galはガラクトース残基を表し、 GlcNAcは N—ァ セチルダルコサミン残基を表し、 6Sは 6位のヒドロキシル基が 6— O—硫酸エステルと なっていることを表し、一はグリコシド結合を表す。 )
[0019] 本明細書において、ケラタン硫酸オリゴ糖の「誘導体」は（以下、 KSオリゴ糖誘導体 とも言う）、通常には、 KSオリゴ糖のヒドロキシル基の水素原子の少なくとも 1つ (好ま しくは全ヒドロキシル基の 10%以上）力 ァシル基により置換されたもの（部分または 完全 O—ァシル化誘導体)を包含する。
[0020] さらに、 KSオリゴ糖および KSオリゴ糖誘導体は、電離した状態のもの、プロトンまた はカチオンが付加した構造のものを包含する。従って、（カチオンが付加した) KSオリ ゴ糖および KSオリゴ糖誘導体は、薬学的に許容され得るその塩も包含する。
[0021] 薬学的に許容され得る塩とは、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のァ ルカリ金属塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモ-ゥム塩等の無機塩基 との塩、またはジエタノールアミン塩、シクロへキシルァミン塩、アミノ酸塩等の有機塩 基との塩のうち、薬学的に許容されるものである力 これらに限定されるものではない
[0022] KSオリゴ糖誘導体において、 KSオリゴ糖のヒドロキシル基の水素原子を置換する ァシル基は、好ましくは炭素数 1〜 10のァシル基、より好ましくは炭素数 1〜10の脂 肪族または芳香族のァシル基、すなわちヘテロ原子を含むこともあるアルカノィル基 またはァロイル基である。その例としては、ァセチル、クロロアセチル、ジクロロアセチ ル、トリフルォロアセチル、メトキシァセチル、プロピオニル、 n—ブチリル、 (E) - 2- メチルブテノィル、イソブチリル、ペンタノィル、ベンゾィル、 o—（ジブロモメチル）ベン ゾィル、 o—（メトキシカルボ-ル）ベンゾィル、 2, 4, 6—トリメチルベンゾィル、 p—ト ルオイル、 p—ァ-ソィル、 p—クロ口べンゾィル、 p— -トロベンゾィルなどの基が挙げ られる。 KSオリゴ糖誘導体が複数のァシル基を有する場合には、それらのァシル基 は互いに同一でも異なっていても良い。なお、 KSオリゴ糖の還元末端糖の 1位のヒド 口キシル基の水素原子がァシル基により置換されている場合、その O—ァシル基の 配位は、 α—グリコシド配位または j8—グリコシド配位のいずれでもよいが、 α—ダリ コシド配位であることが好まし 、。
[0023] ァシル化された KSオリゴ糖は、有機溶媒、脂質に対する溶解性の向上、生体膜透 過性の増大、経口投与した場合の消化管吸収量の増大等の利点を有するため、特 に好ましい。
[0024] 本発明にお 、て、 KSオリゴ糖または KSオリゴ糖誘導体は、好ましくは、下記式 4で 示される化合物である。なお、下記式 4において便宜上、 Μが付加している構造を記 載したが、溶液中では電離している場合があり、この様に電離している場合は、スル ホン酸基はマイナスイオンの状態になる。
[0025] [化 1]
Figure imgf000007_0001
(式中、 〜 5は、それぞれ独立して、水素原子またはァシル基を表し、 Υは水素原 子または SO Mを表し、 Mは水素原子または 1価〜 3価の金属カチオンもしくは 1価
3
〜3価の塩基を表し、波線で示した結合は α—グリコシド配位または j8—グリコシド配 位の単結合を表す。 ) [0026] ァシル基が置換した KSオリゴ糖誘導体は、好ましくは、上記式 4にお ^ΤΧ'-Χ' の全てがァセチル基である。特に好ましくは、下記式 5で示される誘導体である。
[0027] [化 2]
Figure imgf000008_0001
(式中、 Acはァセチル基を表し、 Yは水素原子または SO Naを表し、波線で示した
3
結合は、 α—グリコシド配位または j8—グリコシド配位の単結合を表す。 )
[0028] 本発明に力かる治療薬にぉ 、て、 KSオリゴ糖またはその誘導体は、単一の種から なっていても、混合物であってもよい。例えば上記式 4中の波線で示した部分が α— グリコシド配位である物質であってもよぐ βーグリコシド配位である物質であってもよ ぐこれらの混合物であってもよい。
[0029] KSオリゴ糖は、例えばケラタン硫酸、好ましくは高硫酸化ケラタン硫酸の緩衝溶液 にエンド /3—Ν ァセチルダルコサミニダーゼ型ケラタン硫酸分解酵素、例えばバ チルス属細菌由来のケラタナーゼ (Π) (特許文献 1、特開平 2-57182号公報）、または バチルス 'サーキュランス KsT202株由来のケラタン硫酸分解酵素 (特許文献 2、国 際公開第 W096/16166号)を作用させて分解した後、得られた分解物を分画すること により得ることが出来る。得られたオリゴ糖は通常の分離精製方法、例えばエタノー ル沈殿、ゲル濾過および陰イオン交換クロマトグラフィーにより、 目的のオリゴ糖を分 離精製することが出来る。
[0030] この様な製造方法の例は、特許文献 3 (国際公開第 W096/16973号）に記載されて いる。なお、原料となるケラタン硫酸は、主としてガラクトースまたはガラクトースー 6— Ο 硫酸と Ν ァセチルダルコサミンまたは Ν ァセチルダルコサミン 6— Ο—硫 酸との二糖の繰り返し構造で構成される。ケラタン硫酸は、動物種および器官などに よって硫酸含量が異なっている力 通常はサメなどの軟骨魚類、クジラ、ゥシなどの哺 乳動物の軟骨、骨や角膜などの生原料力 製造されるものを用いることが出来る。
[0031] 原料として使用されるケラタン硫酸は、通常入手出来るものであればよぐ特に制限 されな 、が、構成糖であるガラクトース残基が硫酸化された高硫酸ィ匕ケラタン硫酸（ 構成二糖あたり 1. 5〜2分子の硫酸基を含む高硫酸ィ匕ケラタン硫酸をケラタンポリ硫 酸と言うこともある）を用いることが好ましい。また、ガラクトース残基の硫酸基の位置と して 6位が好ましい。この様な高硫酸ィ匕ケラタン硫酸は、例えば、サメなどの軟骨魚類 のプロテオダリカンから取得出来る。また市販されているものを使用することも出来る
[0032] この様にして得られた KSオリゴ糖の硫酸基含量を、糖鎖の公知の脱硫酸化方法や 硫酸化方法によって適宜調整したものを、本発明に使用される KSオリゴ糖として用 いても良い。
[0033] KSオリゴ糖誘導体を作るに際し、 KSオリゴ糖のヒドロキシル基の水素原子のァシ ル基による置換は、糖のヒドロキシル基の保護のために通常に行われるァシルイ匕方 法に従って行うことが出来る。例えば、導入すべきァシル基の反応性誘導体 (ァシル 基に対応するカルボン酸の無水物（例えば、ァセチル基を導入する場合は、無水酢 酸、プロパノィル基を導入する場合は、無水プロピオン酸）、カルボン酸、ハロゲンィ匕 物など）と、適当な反応溶媒 (ピリジン、ジォキサン、テトラヒドロフラン、 N, N—ジメチ ルホルムアミド（DMF)、ァセトニトリル、クロ口ホルム、ジクロロメタン、メタノール、エタ ノール、水、およびこれらの混合物など）中で KSオリゴ糖を常法によって反応させる ことによってァシル基を導入することが出来る。必要に応じて、ピリジン等の塩基触媒 の存在下で反応させることも出来る。
[0034] また、必要により、ァシルイ匕の程度を調整してもよぐこの調整は、上記のァシルイ匕 方法において部分的にァシルイ匕を行うか、または、ァシルイ匕された KSオリゴ糖からァ シル基を部分的に除去することによって行うことが出来る。ァシル基の除去は、メタノ ール性アンモニア、濃アンモニア水、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、水酸 化ナトリウム、水酸ィ匕カリウムなどを用いて加水分解することによって行うことが出来る 。得られた誘導体は、逆相高速液体クロマトグラフィー等で精製することが出来る。
[0035] 本発明に力かる治療薬の有効成分である KSオリゴ糖またはその誘導体は、医薬と して使用出来る程度に精製され、医薬として混入が許されな 、物質を含まな!/、もので あることが好ましい。
[0036] 本発明にかかる治療薬は、ヒト、ィヌ、ゥシ、ゥマ、マウス、ラット等の哺乳動物におけ る外傷性神経障害および Zまたは運動機能障害を治療、進行抑制または予防する のに有効である。特に、本発明にかかる治療薬は、運動機能障害が神経障害による ものである場合に好適である。さらに、本発明にかかる治療薬は、神経障害が脊髄損 傷によるものである場合に好適である。脊髄損傷としては、外傷性脊髄損傷 (椎体関 節の脱臼または亜脱臼、脊椎骨折 (線状骨折、圧迫骨折、圧挫骨折、完全横断損傷 、不完全横断損傷、 Brown-Sequard型損傷、急性脊髄前半部損傷、急性脊髄中心 部損傷、高位頸髄損傷等)、脊椎変性疾患 (脊椎症等)、脊椎炎症性疾患 (脊椎炎、 慢性関節リウマチ等)、腫瘍 (脊髄腫瘍、脊椎腫瘍等)、血管性疾患 (脊髄出血、隋外 血管障害による脊髄麻痺等)、脊髄炎 (クモ膜炎、ウィルス性脊髄炎、細菌性脊髄炎 等)、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症等が挙げられる。脊髄損傷による神経障 害としては、下半身の運動機能障害、半身不随、下半身麻痺、知覚障害、自律神経 機能障害、反射の喪失、性機能の低下等が挙げられる。神経障害による運動機能障 害としては、神経障害に基づいて起こるショック、呼吸麻痺、知覚麻痺、運動麻痺、 反射の消失、自律神経麻痺等が挙げられる。なお、本発明にかかる治療薬は、純然 とした治療目的のみならず、疾患の予防、維持 (悪化防止）、軽減 (症状の改善)等を 目的として適用することができる。
[0037] 本発明においては、対象となる疾患の性質や進行状況、投与方法などに応じて、 任意の剤形を適宜選択することが出来る。すなわち、本発明の治療薬は、注射 (静脈 内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内など）、経鼻、経口、経皮、吸入などにより投与する ことができ、これらの投与方法に応じて適宜製剤化することが出来る。選択しうる剤形 も特に限定されず、例えば、注射剤 (溶液、懸濁液、乳濁液、用時溶解用固形剤など )、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、リポ化剤、軟膏剤、硬膏剤、ローション剤 、ノ スタ剤、貼付剤、ゲル剤、坐剤、外用散剤、スプレー剤、吸入剤など力も広く選択 することが出来る。また、これらの製剤調製にあたり、慣用の賦形剤、安定化剤、結合 剤、滑沢剤、乳化剤、浸透圧調整剤、 PH調整剤、その他着色剤、崩壊剤など、通常 医薬に用いられる成分を使用することが出来る。
[0038] 本発明の治療薬中の有効成分である KSオリゴ糖またはその誘導体の配合量なら びに投与量は、その製剤の投与方法、投与形態、使用目的、患者の具体的症状、 患者の体重、年齢、性別などに応じて個別に決定されるべき事項であり、特に限定さ れないが、 KSオリゴ糖の臨床量としては成人 1人 1日 1回あたり 50〜5000mg力 S例 示される。
[0039] 本発明の治療薬の有効成分である KSオリゴ糖の安全性にっ 、ては、特許文献 3 ( 国際公開第 W096/16973号）において示されており、その誘導体については、特許 文献 4 (特開 2001-89493号公報）に記載の実施例から安全性が推定される。
実施例
[0040] 以下に、本発明の実施例を、添付図面を参照しながら説明する。もっとも、本発明 は、以下に説明する実施例によって限定されるものではない。
[0041] [材料および方法]
〔L4の調整〕
L4は、 Xuらの方法 (非特許文献 1)に準じて、以下のように、ケラタン硫酸をケラタ ナーゼ IIで分解後、陰イオン交換クロマトグラフィーにて分画することで調製した。
[0042] KSオリゴ糖 (L4)は、サメのヒレ由来のケラタン硫酸 (生化学工業)のケラタナーゼ II による分解産物から、陰イオン交換クロマトグラフィーおよびゲル パーミエーシヨン クロマトグラフィーの一連のステップにより単離した。当該オリゴ糖は、キヤビラリー電 気泳動および質量分析法により同定した (非特許文献 4)。
[0043] キヤピラリー電気泳動は、紫外線検出器を有する Quanta 4000キヤビラリ一電気泳 動システム (Waters)を用いて行った。キヤピラリー電気泳動システムは、試料を陽極 に載せ、通常の極性で使用した。ランニングバッファ一として、 50mMの四ホウ酸ナト リウム (pH9. 0)を用いた。試料は、 Waters社の石英ガラスキヤビラリ一チューブ (チュ ーブが上記検出器を通過する領域以外は外部が被覆されている。内径 75 m,長 さ 60cm)を用いて分離し、分析した。試料を導入する前に、キヤビラリ一チューブは、 0. 5Mの水酸ィ匕ナトリウム、蒸留水、およびランニングバッファーにより、手動でリンス した。試料は 10秒の注入期間で静水圧によりロードした。実験は定電圧（12kV)で 行った。溶出物は、 185nmでモニターした。データの分析は、 Waters社のソフトゥェ ァ Millenium 32 (バージョン 3.06.01)を用いて行った。
[0044] 得られた糖は、トキシカラー LSセット（生化学工業)を用いて、血球抽出物アツセィ（ Limulus amebocyte lysate)によりエンドトキシンを確認した。 L4が含むエンドトキシン は、 0. 03pgZmg以下であった。
[0045] 〔脊髄損傷モデル作製および試験物質投与〕
以下のように、脊髄損傷モデル (ピンセット挫滅モデル)を作製した。実験動物とし て、 12週齢の雄性 Wistarラットを用いた。動物はペントバルビタール（50mgZkg体 重)麻酔下に、頸部力も臀部にかけて電気バリカンで剪毛し、 70%エタノールおよび イソジン (明治製菓株式会社製)で清拭した。背部皮膚を切開し、 T5から T10胸椎を 露出後、第六胸椎 (T6胸椎)を半椎弓切除し、硬膜に小切開を加えた。キシロカイン (ァストラゼネカ製)で局所麻酔後、 T6の位置でピンセット (先端を 0. 3mmに加工)を その先端が椎体に届くまで刺入して、両側力も 10秒間はさむことによって脊髄を坐 滅させた。
[0046] 損傷後、直ちにチューブの先端 (OD : 0. 3mm)を損傷部頭部側の硬膜下に留置 し、 L4 (6 をマイクロシリンジ (25 レ（株)伊藤製作所)を用いて硬膜内投与し た。損傷部に周囲組織との隔離のために、ゼラチンスポンジ (Gelform、フアルマシア 社製)を置き、創部を縫合し、飼育ケージに戻した。
[0047] 〔行動学的評価〕
脊髄損傷後、 7日間毎日、後肢運動機能検査を行った。 Bassoらの方法 (非特許文 献 5, 6参照）〖こ準じ、 Basso- Beeattie-Bresnahan (BBB)スケールを用いて、 2人の試 験者が盲目的に独立して評価を行い、その平均点を最終評点とした。なお、 BBBス ケールとは、 21段階に細分ィ匕された評点を用い、動物をオープンフィールド内で自 由に歩行させ、後肢運動機能の回復を計測する評価方法である。後肢の自発的運 動が全くみられない場合、評点は 0となり、正常な後肢の運動がみられる場合は、評 点は 21となる。 [0048] 〔脊髄誘発電位測定〕
脊髄損傷後 7日に、ハロタン麻酔 (導入 4. 0%、維持 1. 0%)下で実験動物に気管 内挿管し、実験動物を筋弛緩剤で非動化し、腹臥位に頭部を固定し、人工呼吸器に より維持した。実験動物に、第 2Z3頸椎間および第 13胸椎 Z第 1腰椎間からカテー テル電極を挿入し、筋電計 (Counterpoint,ダンテック）を用いて、最大上刺激 (刺激 頻度： 1Ηζ、持続期間： 0. 05ms)し、脊髄誘発電位 (SCEP)を測定した。得られた 電位の評価は第 1電位の振幅を指標とした。脊髄誘発電位の上昇は、損傷部の回復 を意味する。
[0049] 〔統計学的評価〕
BBBスコアにはノンパラメトリック Tukeyの多重比較検定を用いた。
[0050] [結果]
BBBスケールを用いた後肢運動機能検査においても、生食投与群と比較して、脊 髄損傷後 7日に、 L4の 60 gZ匹での投与で有意な後肢運動機能の回復 (Pく 0. 001)が認められた（図 1、 2)。脊髄誘発電位では、生食投与群と比較して、 L4の 60 μ gZ匹での投与で SCEP振幅の回復傾向が認められた（図 3)。

Claims

請求の範囲
[1] 有効量のケラタン硫酸オリゴ糖またはその誘導体を含む外傷性神経障害の治療薬
[2] 有効量のケラタン硫酸オリゴ糖またはその誘導体を含む運動機能障害の治療薬。
[3] 運動機能障害が神経障害によるものである、請求項 2に記載の治療薬。
[4] 神経障害が脊髄損傷によるものである、請求項 1または 3に記載の治療薬。
[5] ケラタン硫酸オリゴ糖力 下記式で表される 、ずれかの二糖、または、下記式で表 される二糖の 、ずれかもしくは両方を繰り返し構成単位として含む偶数糖からなるォ リゴ糖である、請求項 1〜4の 、ずれかに記載の治療薬。
Gal(6S)-GlcNAc(6S) または
Gal(6S)- GlcNAc
(式中、 Galはガラクトース残基を表し、 GlcNAcは N—ァセチルダルコサミン残基を 表し、 6Sは 6位のヒドロキシル基が 6— O—硫酸エステルとなっていることを表し、 - はグリコシド結合を表す。 )
[6] ケラタン硫酸オリゴ糖力 下記式で表されるいずれかのオリゴ糖である、請求項 5に 記載の治療薬。
Gal(6S) β l-4GlcNAc(6S) β 1— 3Gal(6S) β 1— 4GlcNAc(6S)
Gal(6S) β l-4GlcNAc(6S) または
Gal(6S) β l-4GlcNAc
(式中、 Galはガラクトース残基を表し、 GlcNAcは N—ァセチルダルコサミン残基を 表し、 6Sは 6位のヒドロキシル基が 6— O—硫酸エステルとなっていることを表し、 β 1 — 4は |8 1, 4グリコシド結合を表し、 β 1— 3は |8 1, 3グリコシド結合を表す。 )
[7] ケラタン硫酸オリゴ糖の誘導体が、ヒドロキシル基におけるァシルイ匕誘導体である、 請求項 1〜6のいずれかに記載の治療薬。
[8] ケラタン硫酸オリゴ糖の誘導体が、下記式で示される、請求項 7に記載の治療薬。
[化 1]
Figure imgf000015_0001
(式中、 x5は、それぞれ独立して、水素原子またはァシル基を表し、 Yは水素原 子または SO Mを表し、 Mは水素原子または 1価〜 3価の金属カチオンもしくは 1価
3
〜3価の塩基を表し、波線で示した結合は α—グリコシド配位または j8—グリコシド配 位の単結合を表す。 )
[9] 〜 5がいずれも炭素数 1〜10のァシル基であり、 Mがアルカリ金属である、請求 項 8に記載の治療薬。
[10] ケラタン硫酸オリゴ糖の誘導体が、下記式で示される、請求項 9に記載の治療薬。
[化 2]
Figure imgf000015_0002
(式中、 Acはァセチル基を表し、 Yは水素原子または SO Naを表し、波線で示した
3
結合は、 aーグリコシド配位または —グリコシド配位の単結合を表す。 )
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