WO2004103380A1 - 水可溶性イソフラボン組成物およびその製造方法並びにその用途 - Google Patents

Abstract

　α−グルコシルイソフラボンと、イソフラボンと、必要によりイソフラボンアグリコンとを含むイソフラボン組成物であって、 　α−グルコシルイソフラボン中のアグリコン量に対する、イソフラボンとイソフラボンアグリコンとの合計中に含まれるアグリコン量の比［α−グルコシルイソフラボン中のアグリコン量／（イソフラボン中のアグリコン量＋イソフラボンアグリコン量）］が、２．５／１以上である水可溶性イソフラボン組成物、または、 　α−グルコシルイソフラボンとイソフラボンとイソフラボンアグリコンとを含むイソフラボン組成物であって、該組成物中のイソフラボンアグリコン量が、該組成物中の全アグリコン量の０．０１～２０％である水可溶性イソフラボン組成物、あるいは、 該組成物を含む飲料、化粧品、医薬品又は飼料。  

Description

明 細 書

水可溶性イソフラボン組成物およびその製造方法並びにその用途 技術分野

[0001] 本発明は、水可溶性イソフラボン組成物およびその製造方法並びにその用途に関 し、さらに詳しくは、水可溶性に優れ、吸収における即効性と、吸収後の薬理作用の 持続性等に優れた水可溶性イソフラボン組成物およびその製造方法並びにその用 途に関する。

背景技術

[0002] イソフラボンおよびその誘導体 (イソフラボン誘導体）は、骨のカルシウムの過剰な 流出を防ぎ、補給したカルシウムを逃さない効果があり、高齢者に多い骨粗鬆症を防 止し、また女性ホルモンのアンバランスを緩和し、女性ホルモンの役割を果たすもの を補充して更年期障害を防止し、コレステロールの酸化を防ぎ動脈硬化を防止し、高 脂血症等の成人疾患の防止に有効であることが知られている。そのため大豆イソフラ ボンおよびその誘導体の摂取が推奨され、大豆イソフラボンおよびその誘導体を抽 出する方法が種々提案されてレ、る。

[0003] 例えば、上記した骨粗鬆症の薬剤による治療法としては、従来よりカルシウム剤、活 性ビタミン D剤、女性ホルモン剤などの投与が挙げられる。また、骨粗鬆症の発症を

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予防するには、 日ごろ力 食事、運動を含めた生活習慣の改善を図ることによって骨 密度を低下させないようにすることが有効である。特に閉経後の女性では、女性ホル モンのエストロゲンの分泌量が低下するが、その影響を受けて動脈硬化、高脂血症、 高血圧などの更年期障害に加えて、閉経後骨粗鬆症の発症のリスクも高まる。したが つて、そうした疾患に対する予防策としても大豆イソフラボンおよびその誘導体などを 積極的に摂取することが望ましい。

[0004] また、もし、体内に速やかに吸収され、かつ、より長期間体内に高濃度で止まること ができるイソフラボン誘導体あるいはその組成物が開発できれば、その意義は大きい

[0005] し力 ながら、これまでのところ、その栄養分や薬効成分が速やかに吸収され、吸 収後はより長期間体内に止まり、骨粗鬆症、動脈硬化、更年期障害などの発症をより 積極的に防止しうるような、栄養分や薬効成分を含む食品や医薬品などは提案され ていない。

[0006] そのため、 日常的に食品または健康食品などを摂取することによりカルシウムの流 出を低減'防止でき、骨密度を維持させ、骨粗鬆症の発症を予防でき、あるいは骨粗 鬆症を治療できれば、その有用性は高い。このため手軽にそして安全に骨密度を向 上させ、骨粗鬆症を予防できるような新規な健康食品または医薬品の出現が望まれ ていた。

[0007] これと同様に、女性ホルモンのアンバランスを緩和し、女性ホルモンの役割を果た すものを補充して更年期障害を防止し、コレステロールの酸化を防ぎ動脈硬化を防 止し、高脂血症等の成人疾患を予防できるような新規な健康食品、医薬品あるいは 化粧品の出現も望まれていた。

[0008] さらにまた、本発明者らは、従来より提案されている、大豆イソフラボン誘導体の抽 出方法、あるいはその水可溶性を向上させる方法、さらには、それにより得られたもの などにっレ、ても鋭意検討した。

[0009] 大豆イソフラボン誘導体を抽出する方法あるいはその水可溶性を向上させる方法 などとしては、例えば、大豆抽出液を合成吸着樹脂に接触させて該樹脂にイソフラボ ンを吸着させた後、有機溶媒または有機溶媒と水との混合物でイソフラボンを溶出さ せる方法 (特開昭 62 - 126186号公報：特許文献 1)、

大豆胚芽を水可溶性有機溶媒で抽出し濃縮した後、疎水性有機溶媒により親油性 成分を除去し、再び濃縮、精製、乾燥してイソフラボン化合物を製造する方法 (特開 平 11—263786号公報：特許文献 2)、

大豆由来のイソフラボン誘導体抽出物をエタノール溶液中で分岐型マルトシルひ— サイクロデキストリンの共存下で加温溶解し、冷却後不溶物を除去する、水溶解性ィ ソフラボン誘導体抽出物の製造方法（特開 2002—155072号公報：特許文献 3)、ま た、

大豆原料から得た粗抽出物を、水溶液中でサイクロデキストリンと混合させた後、不 溶物を除去する、水易溶性大豆イソフラボンの製造方法 (特開平 10—298175号公 報:特許文献 4)、

などが挙げられる。

[0010] また、イソフラボン誘導体を β -または γ -サイクロデキストリンで包接させてなり、苦 味などが抑制され、水に対する溶解性が高ぐ体内への吸収効率の高い包接物（特 開平 9 - 309902号公報:特許文献 5)も提案されている。

[0011] し力、しながら、例えば、上記特開昭 62—126186号公報、特開平 11—263786号公 報に記載の方法で得られた抽出物は、特開 2002—155072号公報にも記載されて いるように、水溶液への溶解性が悪レ、。同様に、特開平 9—309902号公報に記載の 包接物も、水溶液への溶解性、水溶液中での安定性の点で改良の余地がある。

[0012] また、上記特開 2002—155072号公報に記載の方法によれば、イソフラボン誘導 体抽出物を効率的に回収できる旨記載されているが、大豆粗抽出物中のエタノール 可溶性の不純物までも濾液中に流出し回収されてしまうため、イソフラボンあるいは その誘導体の収率などの点で更なる改良の余地があり、また得られたイソフラボンあ るいはその誘導体の包接物は、次いで、糖および糖転移酵素の存在下に α -ダルコ シノレ化して用いようとすると、含まれているエタノールが酵素活性を阻害するため、酵 素処理に先立ちエタノールを揮散 ·除去しておく必要がある。また、特開平 10-298 175号公報に記載の方法では、上記特開 2002-155072号公報にも記載されてい るように、約 10%程度回収できるに過ぎず、イソフラボンあるいはその誘導体の収率 の点で更なる改良の余地がある。

[0013] なお、特開 2000-327691号公報（特許文献 6)には、大豆及び/または大豆加 ェ品カ ρΗ8以上のアルカリ性溶液でイソフラボン誘導体を抽出し、あるいは熱水ま たは有機溶媒でイソフラボン誘導体を抽出し、次いで、 ひーグリコシル糖化合物と糖 転移酵素を作用させひーグリコシルイソフラボン誘導体を生成した後、 ρΗ5. 5以下の 酸性にするか冷却することにより不純物を沈澱として除去する、大豆由来イソフラボン 誘導体またはそのァグリコンの製造方法が記載されている。

[0014] し力 ながら、この公報（特開 2000—327691号公報）に記載の方法では、得られ た大豆由来ひ—ダルコシルイソフラボン誘導体は、イソフラボンおよびその誘導体以 外の大豆不純物を含みアルカリ側で酵素反応を行っているため、不純物に由来する 色価が高ぐまた分解反応も起こりやすぐ改良の余地があった。

[0015] 特許文献 1 :特開昭 62— 126186号公報

特許文献 2：特開平 11 - 263786号公報

特許文献 3：特開 2002 - 155072号公報

特許文献 4 :特開平 10— 298175号公報

特許文献 5：特開平 9 - 309902号公報

特許文献 6 :特開 2000— 327691号公報

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0016] 本発明は、体内に速やかに吸収され、かつより長期間に亘り体内に高濃度で止ま ること力 Sでき、骨密度の向上、骨粗鬆症の予防 ·治療などの効果が期待でき、骨密度 向上剤などの医薬品として利用でき、さらに一般飲食物、健康食品、機能性食品ある いは飼料に添加して用いることにより、骨代謝の改善をバランスよく効率的に図ること ができる酵素処理イソフラボン類組成物 (イソフラボン誘導体組成物）を提供すること を目的としている。

[0017] 本発明は、水可溶性イソフラボン組成物の特性を生力、した化粧品など、水可溶性ィ ソフラボン組成物の好適な用途を提供することを目的としている。

[0018] 本発明は、原料として大豆イソフラボン類を含む大豆イソフラボン抽出物を用いて、 酵素処理されたイソフラボン類を高収率で製造し得るような、酵素処理イソフラボン類 の製造方法を提供することを目的としている。

課題を解決するための手段

[0019] 本発明者らは、鋭意研究を進めた結果、驚くべきことに特定組成比のフラボノイド類 を摂取すると、従来のフラボノイド類を摂取する場合に比して、より長期間に亘つて体 内に止まり、骨密度の向上、骨粗鬆症の予防'治療などに効果が期待できること、ま た、上記特定組成比のフラボノイド類は、骨密度向上剤などの医薬品として利用でき 、さらに一般飲食物、健康食品、機能性食品および飼料に添加して用いることにより 、骨代謝の改善をバランスよく効率的に図ることができることなどを見出して本発明を 完成するに至った。 [0020] さらに、本発明者らは、水可溶性イソフラボン組成物の調製に好適に用い得るイソ フラボン誘導体自体の抽出効率を上げるべく鋭意研究を重ねた結果、大豆イソフラ ボン類を含む粗大豆抽出物からイソフラボン類を抽出するに際して、特開 2002— 15 5072号公報に示すようにエタノールを用いるのではなくアルカリを用レ、、またサイク ロデキストリンによる包接後は、不純物を酸の存在下に沈殿させると、濾別にて効率 よく濾液カもイソフラボン類を分取でき、さらに必要により、容易に酵素処理反応を行 つて水可溶性イソフラボン組成物あるいはその調製用などとして好適に用いることも できることなどを見出して本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は以下の事項に関する。

[0021] 本発明に係る水可溶性イソフラボン組成物は、 ひ—グノレコシルイソフラボンと、イソフ ラボンと、必要によりイソフラボンァグリコンとを含むイソフラボン組成物であって、 ひ一ダルコシルイソフラボン中のァグリコン量に対する、イソフラボンとイソフラボンァ グリコンとの合計中に含まれるァグリコン量の比 = [ α—ダルコシルイソフラボン中のァ グリコン量/ (イソフラボン中のァグリコン量 +イソフラボンァグリコン量）]力 2. 5/1 以上、好ましくは 5/1以上であることを特徴としている。

[0022] 本発明に係る水可溶性イソフラボン組成物は、 α—グノレコシルイソフラボンとイソフラ ボンとイソフラボンァグリコンとを含むイソフラボン組成物であって、該組成物中のイソ フラボンァグリコン量が、該組成物中の全ァグリコン量の 0. 01— 20%であることを特 徴としている。

[0023] 本発明においては、上記 α _ダルコシルイソフラボンは、イソフラボンにグルコース が α—結合にて平均 2. 0— 20個付カ卩したものであることが望ましい。

[0024] 本発明においては、上記イソフラボン組成物は、 ひ—ダルコシルイソフラボンと、イソ フラボンと、イソフラボンァグリコンとを含むことが好ましい。

[0025] 本発明においては、上記ひ一ダルコシルイソフラボン力 イソフラボン及びイソフラボ ン誘導体を含む組成物に、サイクロデキストリンと糖転移酵素とを作用させて得られた ものであることが好ましい。

[0026] 本発明においては、上記ひ一ダルコシルイソフラボン力 イソフラボン及びイソフラボ ン誘導体を含む組成物に、サイクロデキストリンを作用させ、次いで、酸性条件下に 冷却して生じた沈殿物を濾別除去した後、糖転移酵素を作用させることにより得られ たものであることが好ましレ、。

[0027] 本発明においては、上記何れの態様においても、上記サイクロデキストリンが、 β— サイクロデキストリンまたは分岐 β—サイクロデキストリンであることが水可溶性良好の ものが得られるため好ましレ、。

[0028] 本発明に係る飲食物、化粧品、医薬又は飼料は、上記の何れかに記載の水可溶 性イソフラボン組成物を含むことを特徴としてレ、る。

[0029] 本発明においては、上記飲食物が酸性飲料であることが好ましい。

[0030] 本発明においては、上記飲食物は、さらに、酵素処理ヘスペリジンおよび/または 酵素処理ルチンを含んでレ、てもよレ、。

[0031] 本発明においては、大豆イソフラボン抽出物を水又は水性媒体に懸濁させ、得られ た懸濁液にサイクロデキストリンを加え、 40— 100°Cに加熱してサイクロデキストリンを 溶解させた後、得られた溶液に、アルカリを添加混合して pH8— 13に調整してイソフ ラボン類を溶解させると共に、イソフラボン類をサイクロデキストリンに包接させ、次い で、

サイクロデキストリンに包接されたイソフラボン類の含有液に、酸を添加混合して pH 5. 5— 2. 0に調整した後降温し、生じた沈殿物を濾過にて除去し、得られた濾液を、 次いで、 pH5. 0— 7. 0に調整して、濾液中に含まれているイソフラボン類の酵素処 理を行うことを特徴としてレ、る。

発明の効果

[0032] 本発明によれば、体内に速やかに吸収され即効性を有し、かつより長期間に亘り体 内に高濃度で止まることができ効果の持続性を有し、骨密度の向上、骨粗鬆症の予 防'治療などのより優れた効果が期待でき、骨密度向上剤などの医薬品として利用で き、さらに一般飲食物、健康食品、機能性食品あるいは飼料に添加して用いることに より、骨代謝の改善をバランスよく効率的に図ることができる水可溶性イソフラボン組 成物（酵素処理イソフラボン類組成物）が提供される。

[0033] 本発明によれば、水可溶性イソフラボン組成物の特性を生力 た用途である飲食 物、化粧品、医薬品、飼料などが提供される。 [0034] 本発明によれば、原料として (粗)大豆イソフラボン抽出物を用いて、酵素処理イソフ ラボン類を製造するに際して、粗大豆イソフラボン抽出物からエタノール溶解に依ら ずに、アルカリを用いてイソフラボン類の溶解、抽出などを行っているため、イソフラボ ン類の酵素処理に先立つエタノールの除去工程が不要であり、より少ない工程数で

、効率よく酵素処理イソフラボン類を製造でき、し力、も、エタノールを使用しないため、 抽出液 (溶解液）中にエタノール可溶性の不純物の流入がなぐ高収率で高純度の 酵素処理イソフラボン類を製造し得るような、酵素処理イソフラボン類の製造方法が 提供される。

発明を実施するための最良の形態

[0035] 以下、本発明に係る水可溶性イソフラボン組成物およびその製造方法並びにその 用途について、具体的に説明する。

[0036] <水可溶性イソフラボン組成物 >

本発明に係る水可溶性イソフラボン組成物は、 α—グノレコシルイソフラボンと、イソフ ラボンと、必要によりイソフラボンァグリコンとを含み、

ひ_ダルコシルイソフラボン中のァグリコン量に対する、イソフラボンとイソフラボンァ グリコンとの合計中に含まれるァグリコンの量の比（Cg) = [ひ—ダルコシルイソフラボ ン中のァグリコン量 Z (イソフラボン中のァグリコン量 +イソフラボンァグリコン量） ] 、 2. 5/1以上であることが水溶液中での安定性と、経口摂取時の吸収における即効 性と、吸収後の薬効の持続性の点から望ましい。

[0037] なお、ァグリコン量比は、重量比、モル比の何れでもよいが、特に断らない限り重量 比で示す。また、上記ァグリコン量比（Cg)の算出等に際し、 ひ—グノレコシルイソフラボ ン中のァグリコン量、イソフラボン中のァグリコン量、イソフラボンァグリコン中のァグリ コン量等は、何れも、ゲニスティンに換算して求める。

[0038] なお、このァグリコン量比（Cg)の上限値は、通常 25/1かそれ以下であることが、 該組成物が体内に速やかに吸収され即効性を有し、かつより長期間に亘り体内に高 濃度で止まることができ効果の持続性を有し、骨密度の向上、骨粗鬆症の予防'治 療などのより優れた効果が期待でき、骨密度向上剤などの医薬品として利用でき、さ らに一般飲食物、健康食品、機能性食品あるいは飼料に添加して用いることにより、 骨代謝の改善をバランスよく効率的に図ることができる点から望ましい。

[0039] なお、このイソフラボン組成物中の上記ァグリコン量比（Cg) (重量比）が 2. 5/1未 満では、該組成物の溶液安定性が低くなることから、特に飲料等の液体中での使用 に好ましくない。

[0040] また本発明では、上記ひ一ダルコシルイソフラボンにおいて、イソフラボンにひ一結 合したグルコース（G)の数が平均 2. 0— 20個であることが該組成物中のイソフラボン とイソフラボンァグリコンが水溶液中での安定性を保つことができる点から望ましい。

[0041] 本発明に係る上記イソフラボン組成物には、 ひ—ダルコシルイソフラボンとイソフラボ ンとが必須成分として含まれているが、その好ましい態様においては、 ひ—ダルコシ ノレイソフラボンと、イソフラボンと、イソフラボンァグリコンとが含まれていることが上記 効果、すなわち、体内により速やかに吸収され強い即効性を有し、かつより長期間に 亘り体内に高濃度で止まることができ効果のより優れた持続性を有し、骨密度の向上 、骨粗鬆症の予防 ·治療などのより優れた効果が期待でき、骨密度向上剤などの医 薬品として利用でき、さらに一般飲食物、健康食品、機能性食品あるいは飼料に添 カロして用いることにより、骨代謝の改善をバランスよく効率的に図ることができる点から 望ましい。

[0042] 本発明に係る上記イソフラボン組成物には、上記 α—ダルコシルイソフラボンと、イソ フラボンと、必要により含まれるイソフラボンァグリコン以外に、デキストリン (サイクロデ キストリン（CD)を含む。）、オリゴ糖などの糖類、タンパク質、ペプチド、他のフラボノ イド類などが、本発明の目的に反しない範囲で含まれていてもよい。

[0043] なお、イソフラボンァグリコンは、下記式 [1]：

[0044] [化 1]

イソフラ

[0045] [表 1]

表 1

[0046] で表されるイソフラボンにおいて、その基 R³が Hである構造のものである。 （式 [I]中、 R¹, R²、 R³の定義は、上記表 1の通りである。 )

本発明では、 α—グノレコシルイソフラボンの付加糖数 (付加グルコース数）（η)、す なわち、上記式 [I]の化合物における R³力 ひ—結合で連なる複数のグルコースから なる場合にこのひ—結合にて付加したグノレコースの数が、平均 2. 0個以上であること 力 本発明のイソフラボン組成物の水可溶性の向上、該組成物中のイソフラボンとィ ソフラボンァグリコンの水溶液中での安定性を保つ点から望ましい。なお、該 α _ダル コシルイソフラボンの付加糖数 (η)の上限値は、特に限定されないが、通常、 20個程 度までである。

[0047] このようなァグリコン量比（Cg)のイソフラボン組成物を得るには、 ひ一グノレコシルイソ フラボンと、イソフラボンと、必要により用いられるイソフラボンァグリコンとを、 (Cg) = [ ひ一ダルコシルイソフラボンのァグリコン Z (イソフラボンのァグリコン +イソフラボンァ グリコン) ] (重量比）で 2. 5/1以上となるようにこれら成分を配合する力、、あるいはィ ソフラボンのひ—ダルコシル化反応等を実施すればょレヽ。

[0048] なお、重量比では、 ひ—ダルコシルイソフラボンにおける付加糖数が多いほど、単位 ひ—ダルコシルイソフラボン重量におけるァグリコン重量の割合は減るから、その付加 糖数を考慮して、 ひ—グノレコシルイソフラボン重量を増加させる必要がある。

[0049] また、本発明では、上記ひ一グノレコシルイソフラボン力 後述するように、イソフラボ ン及びイソフラボン誘導体を含む組成物に、サイクロデキストリンを作用させ、次いで 、酸性条件下に冷却して生じた沈殿物を濾別除去した後、イソフラボン及びイソフラ ボン誘導体を含む濾液に _PH5. 0— 7. 0で糖転移酵素を作用させることにより得られ たものであると、イソフラボン及びイソフラボン誘導体の分解がほとんど生じず、収率 良く α—ダルコシルイソフラボン及びその組成物が得られることから好ましレ、。

[0050] 本発明では、上記サイクロデキストリンとしては、 α—タイプ、 β—タイプ、 γ—タイプ が挙げられる。これらのうちでは、 —サイクロデキストリンまたは分岐 ーサイクロデキ ストリンが、イソフラボンを効率よく包接し、安定化させることから、該組成物の製造上 好ましい。

[0051] また、本発明に係る水可溶性イソフラボン組成物は、 ひ—グノレコシルイソフラボンとィ ソフラボンとイソフラボンァグリコンとを含むイソフラボン組成物であって、該組成物中 のイソフラボンァグリコン量力 該組成物中の全ァグリコン量の 0. 01— 20%であるこ と力好ましく、さらに好ましくは 0. 5— 10. 0%であることが望ましい。

[0052] このような量でイソフラボンァグリコンを含む水可溶性イソフラボン組成物は、特に即 効性と持続性に優れる傾向がある。なお、このイソフラボンァグリコン量が特に 0. 01 %に満たなレ、と即効性に欠ける傾向があり、また 20%を超えると溶液中で沈殿を生 じゃすい傾向にある。

[0053] <用途 (飲食物、医薬など） >

本発明に係る飲食物、化粧品、医薬又は飼料 (これらをまとめて、「飲食物等」とも いう。）は、上記の水可溶性イソフラボン組成物を含むことを特徴としている。

[0054] 例えば、この飲食物中に含まれる水可溶性イソフラボン組成物は、水可溶性に優 れ、例えば、 5°Cの水 1リットルに、 lgの量で溶解させることができ、呈味は良好であり

、苦味、渋味、収斂味などの異味が殆どない。

[0055] またこの飲食物中に含まれる水可溶性イソフラボン組成物は、水や、天然ジュース

、コーヒー、ウーロン茶、紅茶、麦茶、緑茶、コーラ、ラムネ、サイダー、ミルクココア、コ コアなどの清涼飲料、加工乳、発酵乳、乳製品、乳酸菌飲料などの水性飲料； みそ、醤油、そばつゆ、めんつゆ、焼き肉のたれ、だし汁、ソース、ケチャップ、マョ ネーズ、ドレッシング等の液体または半固体の調味料；

ゼリー、プリン等の水性菓子；

などへの溶解性に優れており、その配合量は、特に限定されず、飲食物の種類な どに応じて適宜設定できる。

[0056] これらの飲食物のうちでは、特に酸性飲料に対する溶解性に優れ、例えば、柑橘ジ ユース、リンゴジュース、トマトジュース、パイナップルジュース、コーラ、乳酸菌飲料な どの酸性飲料 1リットル中に、 0. 001— 10gの量で用いることが好ましい。

[0057] このような飲食物、あるいは化粧品、医薬又は飼料は、さらに酵素処理ヘスペリジン および/または酵素処理ノレチンを水可溶性イソフラボン組成物に対して任意の割合 で含んでレ、てもよレ、。この酵素処理ヘスペリジンと上記水可溶性イソフラボン組成物 、または酵素処理ヘスペリジンと酵素処理ノレチンと上記水可溶性イソフラボン組成物 を含む飲食物は、骨粗鬆症の予防および改善効果、循環器疾患の改善という点で 優れている。

[0058] 本発明に係る水可溶性イソフラボン組成物は、経口摂取すると、体内に速やかに 吸収される即効性を有し、かつより長期間に亘り体内に高濃度で止まることができ効 果の持続性を有し、骨密度の向上、骨粗鬆症の予防'治療などのより優れた効果が 期待でき、骨密度向上剤、骨粗鬆症予防 ·治療剤、更年期障害予防 ·治療剤、ガン 細胞増殖抑制剤などの医薬品として利用できる。

[0059] このように上記用途の医薬品あるいは健康食品などとして、水可溶性イソフラボン 組成物を用いる場合には、体重 lkg当たり、 0. 0002— 2g/日の量で経口摂取す れは'よレ、。

[0060] この水可溶性イソフラボン組成物を、さらに一般飲食物、健康食品、機能性食品、 嗜好品、飼料、医薬部外品などに任意量で添加して用いることにより、骨代謝の改善 などをバランスよく効率的に図ることができる。

[0061] 一般飲食物としては、より具体的には、例えば、菓子、洋菓子、氷菓、シロップ、果 実加工品、野菜加工品、漬け物、魚肉、ハム、ソーセージ、缶詰、瓶詰め品、酒類等 ；嗜好品としては、タバコ、ガム等;飼料としては、家畜、家禽、魚、ペットなどの飼料、 餌等；ィ匕粧品としては、 口紅、リップクリーム、化粧水、乳液、クリーム等の美容液や整 髪料等；医薬部外品としては、練り歯磨きなどが挙げられる。

[0062] このように本発明の水可溶性イソフラボン組成物を、上記用途に経口剤、外用剤、 薬用剤として用い、また各種食品用、化粧品用、飼料用の添加剤として用いてもよい

[0063] <水可溶性イソフラボン組成物の製造 >

本発明に係る水可溶性イソフラボン組成物は、大豆イソフラボン類を 0. 05-0. 35 % (重量％)の量で含む大豆胚芽、大豆粉、脱脂加工大豆、きな粉、豆乳、おから等 の粗大豆抽出物 (粗大豆カ卩ェ品）を用いることもできる力 好ましくはイソフラボンを 5 一 90%含有する大豆イソフラボン抽出物を用い、まず大豆イソフラボン抽出物を水あ るいは水性媒体 1リットノレ当たり、 1一 200g程度加え混合し、次いで、得られた懸濁 液に前記サイクロデキストリン、好ましくは優れた溶解性、経済性の点から /3—サイク ロデキストリンまたは分岐 β一サイクロデキストリンを加え、 40— 100°Cに加熱してサイ クロデキストリンを溶解させる。

[0064] この際のサイクロデキストリン使用量は、懸濁液 1リットノレ当たり、 0. 1一 4000g、好 ましくは 1一 2000gの量で用いられる。

[0065] このように懸濁液にサイクロデキストリンを溶解させた後、得られた溶液に、アルカリ を添加混合して pH8 13、好ましくは pH9— 12に調整してイソフラボン類を溶解さ せると共に、イソフラボン類をサイクロデキストリンに包接させる。

[0066] アルカリとしては、 KOH、 NaOH、炭酸水素ナトリウム等が挙げられる。

[0067] なお、イソフラボン類がサイクロデキストリンに包接されたことは、懸濁液が透明にな ることカゝら確言忍できる。

[0068] 次いで、本発明では、サイクロデキストリンに包接されたイソフラボン類の含有液に、 酸を添加混合して pH5. 5-2. 0、好ましくは pH4. 5-3. 0に調整した後、通常、 1 一 60°C、好ましくは 13— 20°Cに降温して沈殿を生じさせる。酸としては、有機酸でも 無機酸でもよぐ酢酸、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、クェン酸等が挙げられる。

[0069] 次いで、生じた沈殿物を濾過にて除去し、さらに、下記のように酵素処理して水可 溶性イソフラボン組成物を調製する。

[0070] すなわち、本発明では、上記のように沈殿物を濾過にて除去して得られた上記濾 液を酵素活性の良好な条件である、 pH5. 0— 9. 0、好ましくは pH5. 5-7. 0に調 整して、常法により酵素処理を行う。

[0071] このようにサイクロデキストリンに包接されたイソフラボン類の酵素処理を行なうと、ィ ソフラボン類にサイクロデキストリン由来の糖が転移される。この糖は、通常、イソフラ ボン類を包接してレ、るサイクロデキストリンの一部（あるいは全部）を利用すればょレ、 、酵素処理に際し、新たに澱粉やその部分分解物、糖などを添加し、これを糖転 移に利用してもよい。

[0072] 酵素としては、イソフラボン類に糖転移可能な酵素であれば特に制限されないが、 本発明では、バチルス'ステアロザーモフィラスやバチルス'マセランス等バチルス属 の微生物由来のサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（CGTase)などが好 ましく使用でき、バチルス ·ステアロサーモフィラス由来の CGTaseが糖転移効率が高 い点からより好ましレ、。その他に、バチルス 'メガテリゥム、バチルス'サーキュランス等 の同じバチルス属に属する微生物由来の CGTaseも使用できる。本発明では、 2種 以上の酵素を併用してもよい。酵素使用量、酵素処理条件 (温度、水量、 pH、時間） などは、常法によればよい。

[0073] このように酵素処理された水可溶性イソフラボン組成物は、酵素処理前のイソフラボ ン類と同様の生理活性を有し、水可溶性の点で未処理物に比して、非常に優れてい る。

[0074] このように酵素処理された水可溶性イソフラボン組成物は、必要により、予め 10— 9 9. 5% (重量％)エタノールなどの含水有機溶媒、有機溶媒などで活性化された無 極性多孔性吸着樹脂に、上記酵素処理イソフラボン類の水溶液として通液し、水洗 した後、 10 99. 5% (重量％)エタノールなどの含水有機溶媒、有機溶媒などを通 液して、吸着しているイソフラボン類を溶出させ、溶出液を回収し、溶媒を留去した後 、凍結乾燥等してもよい。このように、多孔性吸着樹脂による処理を行うと、酵素処理 イソフラボン類の「総イソフラボン含量」（定義は後述する。）は、通常 20 80%程度 にまで高めることができる。なお、多孔性吸着樹脂としては、特開 2000-327691号 公報第 4頁 [0009]欄に記載のもの、例えば、「ダイヤイオン HP」、「デュオライト S」、「 アンバーライト XAD」等を使用すればよい。また、このように多孔性吸着樹脂を使用し て総イソフラボン含量を高める代わりに、クロマト分離により総イソフラボン含量を高め ても良い。

[0075] この水可溶性イソフラボン組成物（乾燥固形物）中の総イソフラボン含量は、通常、 5— 90%、好ましくは 20— 40%であることが前記比（Cg)を好ましい範囲に維持する 点から望ましい。

[0076] 本発明の水可溶性イソフラボン組成物の製造においては、酵素反応に供するイソ フラボン類の溶解用としてエタノールを使用していないため、その後の酵素処理に先 立ち、酵素活性を阻害するエタノールの除去工程が不要化できる。その結果、より少 なレ、工程数で、効率よく水可溶性イソフラボン組成物を製造できる。

[0077] さらに、本発明では、大豆イソフラボン抽出物 (抽出液）を用いた水可溶性イソフラ ボン組成物の製造工程でこのようにエタノールを使用しなレ、ため、抽出液中にェタノ ール可溶性の不純物の流入がなぐ高収率でひ—グノレコシルイソフラボンを製造し得 るような、水可溶性イソフラボン組成物の製造方法が提供される。

[0078] 本発明の水可溶性イソフラボン組成物では、該組成物中に含まれるひ—グノレコシノレ イソフラボンの平均付加糖数 (n)が、 2. 0個以上であることが望ましい。

[0079] 上記のようにして得られた水可溶性イソフラボン組成物は、前記イソフラボン組成物 中の上記ァグリコン量比（Cg)が 2. 5/1以上となるようにそのままで用い、またはひ —ダルコシルイソフラボンとイソフラボンァグリコンとイソフラボンとを適宜配合すればよ レ、。なお、このァグリコン量比（Cg)の上限値は特に限定されないが通常 25/1程度 である。

[0080] 本発明に係る上記水可溶性イソフラボン組成物は、その好ましい態様においては、 ひ一ダルコシルイソフラボンとイソフラボンとイソフラボンァグリコンとを含むイソフラボン 組成物であって、該組成物中のイソフラボンァグリコン量カ 前述したように、該組成 物中の全ァグリコン量の 0. 01— 20%であることが好ましレ、が、このようにイソフラボン ァグリコン量を調整するには、例えば、酵素処理イソフラボン中に含まれるひ—グノレコ シルイソフラボンとイソフラボン中のァグリコン量に対して、所定量となるように既知の イソフラボンァグリコンを添カ卩し、アルカリ溶解した後、所望の pHに調整すればよい。

[0081] 以下、本発明について実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明は、係る実 施例により何ら限定されるものではない。

[0082] 以下の実施例、比較例などで、「％」は、特に断らない限り、「重量％」の意味である

[0083] <総イソフラボン含量の測定 >

総イソフラボン含量 (イソフラボン含量（単位：重量％)の総和を意味する。）は、酵素 処理イソフラボンの場合は、糖転移酵素（CGTase)の作用によりイソフラボンに付カロ されている糖を加水分解酵素（グノレコアミラ-ゼ）で外して測定する。

[0084] 具体的には、試料の酵素処理イソフラボン lgを 25°Cの水 0. 1リットノレに溶解し、グ ノレコアミラーゼを 0. Olg添加した後、 ρΗ5· 0、温度 50°Cの条件で 3時間反応させて 、酵素処理イソフラボン中の α— 1 , 4結合で結合している糖 (G)を加水分解させてか ら、既知の方法 ((財)日本健康 ·栄養食品協会発行、健康補助食品規格規準集に記 載された、大豆イソフラボンの試験方法に準拠）に基づき、下記の条件下で HPLC ( 高速液体クロマトグラフィー）にてイソフラボン量を測定する。

[0085] HPLC条件

使用機器： Waters996 (ウォーターズ社製）

使用カラム： 資生堂カプセルパック ODS-C18 UG120 (250mm X 4. 6mml. D . ) カラム温度： 40°C

流速： 1. Omレ min.

溶離液： 水/メタノール/酢酸 = 65/30/5 (v/v/v)

検出： UV 254nm

注入量： 10 μ ΐ

[0086] ぐ付加糖数の測定 >

酵素処理イソフラボン 5gを 25°Cのイオン交換水 50mlに溶解し、吸着樹脂 50mlに 通液 '水洗してひ—ダルコシルイソフラボン以外の物質を除去する。吸着画分を 60% エタノール 150mlで脱着し、アルコールを留去した後、ダルコアミラーゼを 0. Olg添 加して、 pH5. 0、温度 50°Cで 5時間作用させる。

[0087] グノレコアミラーゼ処理した液は、水を用いて同様の処理した液をブランクとし、巿販 のグルコース測定キット（ムタロターゼ. GOD法）により、グルコース量を求め、そのモ ル数を算出する (D)。

[0088] 一方、上述した総イソフラボン含量の測定方法で求めた酵素処理イソフラボン中の 総イソフラボン量をゲニスチンに換算し、そのモル数を求める（E)。

[0089] 平均付加糖数 (個)は、（D)を (E)で割る、次式により求める。

付加糖数 (個) = D/E

[0090] < (Cg)の測定 >

試料 A: 0. 05gを 25°Cのイオン交換水 100mlに溶解し、総イソフラボン含量の測 定の項目で既述した HPLC条件と同じ条件で測定する。 （財）日本健康'栄養食品協 会発行の健康補助食品規格基準集の「大豆イソフラボンの試験方法」に基づき、試 料中のイソフラボン (F)およびイソフラボンァグリコン (G)を、標準としてダイズイン標 準品を使用し、ゲニスティンとしてァグリコン量を求める。すなわち、ァグリコン量は、 ゲニスティンに換算して求めた量である。

[0091] また、上述した総イソフラボン含量の測定方法に従レ、、試料中の総イソフラボンをゲ ニスティンとして測定し、これより、上記（F)および（G)を引いた値をひ—ダルコシルイ ソフラボンのァグリコン量とする。

実施例 1 [0092] くサイクロデキストリンによる包接工程〉

40% (重量⁰ /₀)の量でイソフラボンを含む大豆イソフラボン抽出物 3gを 600mlのィ オン交換水に懸濁させた。次に、得られた懸濁液に j3 -サイクロデキストリン 27gを加 え、 70°Cに加温し、 j3—サイクロデキストリンを溶解させた。この溶液に、濃度 15%の 水酸化ナトリウム水溶液を 9ml添加混合し pHl l . 3に調整してイソフラボンを完全に 溶解し、イソフラボンを β—サイクロデキストリンに包接させた。

[0093] 次に、 j3—サイクロデキストリンに包接されたイソフラボンの含有液に、濃度 20%の 硫酸 5. 5mlを 60°Cで添加混合して pH4. 0に調整した後降温し、液温が 12°Cにな るまで冷却した。

[0094] その結果生じた沈殿物を濾過にて取り除き、濾液を分取した。 （これを、「試料 C」と もいう。 )

<酵素処理反応工程 (酵素処理） >

得られた濾液を、 15%水酸化ナトリウム溶液 lmlを用いて pH5. 5に調整した。

[0095] 次いで、この濾液 610mlにバチルス'ステア口サーモフィラス由来のサイクロマルト デキストリングルカノトランスフェラーゼ [ (株)林原生物化学研究所製、 0. 3ml]を添 加して 60°Cでー晚加温し、イソフラボンに糖を転移反応させた。

[0096] なお、イソフラボンに、糖が転移したことは、 HPLCにより確認した。

[0097] このようにイソフラボンへの糖の転移反応を行った後、反応液を 90°C以上の温度で 1時間加温し酵素を失活させた。その後、濾過を行った。分取された濾液を濃縮後に 凍結乾燥し、乾燥物 27. 6gを得た。

該乾燥物中の「総イソフラボン含量」は 4. 02%であった。

[0098] <多孔性吸着樹脂による精製工程 >

次いで、予め 50%エタノールを通液して活性化させた無極性多孔性吸着樹脂 (ォ ルガノ (株)製、型番: XAD—7)に、上記乾燥物の水溶液 (濃度： 5. 5重量％) 500ml を通液してイソフラボン類を該樹脂に吸着させた後、 1000mlの水を流下させて該樹 脂を水洗し、サイクロデキストリン (CD)および CD分解物を溶出'除去した。その後、 50%エタノールを通液して吸着していたイソフラボン類を溶出させた。イソフラボンを 含んだ出液を回収し、出液中のアルコールを留去した後、凍結乾燥させ、固形物 3. 5gを得た。本品（水可溶性イソフラボン組成物）の総イソフラボン含量は 35· 8%であ つた（これを「試料 A」とする）。本品を分析したところ、 α -グノレコシルイソフラボン (イソ フラボンとして） 29.2% (ァグリコンとして 18.3%)、イソフラボン 6.6% (ァグリコンとして 4.1% )、イソフラボンァグリコン 0%であり、平均付加糖数は、 3. 6であった。

[0099] [比較例 1]

くサイクロデキストリンによる包接工程〉

総イソフラボン含量 40%の大豆イソフラボン抽出物 1. 2gに、濃度約 30%のェタノ ール水溶液 38mlを添加して混合し、次いで、この大豆イソフラボン抽出物の 9倍量 の j3—サイクロデキストリン 10. 8gを添加した後、攪拌下に 60°Cに加熱して、その温 度で 30分間保持して、イソフラボン類を β—サイクロデキストリンに包接させた。

[0100] 次いで、常温（25°C)まで放冷した後に濾過した。分取された濾液よりエタノールを 留去させ、濃縮乾固して固形物 2. 67gを得た（特開 2002-155072号公報に準拠。 ) (試料 Bとする)。

[0101] 得られた固形物の HPLC (高速液体クロマトグラフィー）分析を行い、総イソフラボン 含量を求めたところ、 3. 85%となった。

<酵素処理反応工程 >

次いで、上記試料 Bを用いて、サイクロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼ を作用させて酵素処理反応を行なう際に、溶媒が 30%エタノールの場合は酵素の作 用が低下し、酵素処理がほとんど進行せず、酵素処理前にエタノールを留去する必 要があった。

[0102] また本発明の実施例 1における、大豆イソフラボン抽出物 1. 2gを pH8以上にして 溶解し、 /3 _サイクロデキストリン 10. 8gに包接させ酸性域に戻した後に濾過をした、 実施例 1における酵素処理直前のもの（試料 C)を、 HPLC (高速液体クロマトグラフィ 一）分析したところ、試料 Cの総イソフラボン含量は 4. 12%となった。

[0103] 試料 Bと試料 Cの総イソフラボン量を比較検討した。

ぐ考察 >

(1) 総イソフラボン含量は、 HPLC分析の結果、 30%エタノールを溶媒として包接 させた試料 Bの総イソフラボン含量 3. 85%に対して、本発明の試料 Cの総イソフラボ ン含量は 4· 12%と、総イソフラボン含量が高い。その理由は、試料 Βでは大豆イソフ ラボン抽出物のエタノール可溶性の不純物が濾液中に流出し回収されてしまうが、 試料 Cでは調整時にエタノールを使わないため、濾液中への不純物の混入が抑えら れて総イソフラボン含量が高くなつたものと思われる。

[0104] (2) 比較例 1では、サイクロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼを作用さ せて酵素処理反応を行なう際に、溶媒が 30%エタノールの場合は酵素の作用が低 下し、酵素処理がほとんど進行せず、酵素処理前にエタノールを留去する必要があ つた。

これに対し、本発明の実施例 1では、 ρΗ8以上にしてイソフラボンを溶解してサイク ロデキストリンで包接させたのち、中性域に ρΗ調整しており、エタノールを留去する 必要が無ぐそのまま酵素反応へと進めることができるため、酵素処理反応の工程を より簡便にすることができるという利点がある。

[0105] [血中動態試験]

(i) 5週齢の Sprague- Dawley (SD)系の雄ラット（体重範囲： 108— 134g)を日本 チャールズリバ一株式会社より購入し、 7日間の検疫を行ない、検疫期間終了後に 用いた。

(ii) ラットは、室温 22± 3°C、相対湿度 50± 20%、換気回数 10回以上/時間（ォ ールフレッシュエアー方式）、照明 12時間/日（午前 6時より午後 6時まで照明、 150 一 300ルクス）に設定した飼育室で、ステンレス製のラット用ブラケットケージ、 1ケー ジあたり 1匹ずつ収容し、飼育した。

(iii) 飼料は、精製飼料 (AIN - 76A配合固形飼料、オリエンタル酵母株式会社製） をケージ付属の給餌器により与え、入荷時から自由摂取させた。また、飲料水は自家 用水道水をポリカーボネイト製給水瓶により与え、自由摂取させた。

(iv) 群分けは、健康状態を評価し健康な動物の中から体重の層別無作為化法によ り 9匹づっ 3群に配分し、各群の平均体重ができるだけ等しくなるようにした。投与開 始日のラットの週齢は 6週齢、体重範囲は 137 179gであった。

(V) 群構成は、酵素処理イソフラボン投与群、イソフラボンのァグリコン投与群、 ひ— ダルコシルイソフラボン/ (イソフラボン +イソフラボンのァグリコン）のァグリコン重量 比が 3. 6/1の混合試料投与群の 3群構成とした。

[0106] 被験物質として、イソフラボンのァグリコンには、「ソィァクト W」（イソフラボンのァグリ コン 33. 3%含有、キッコ一マン株式会社 製）を使用し、酵素処理イソフラボンには

、実施例 1で作つた「試料 A」を用レ、た。

[0107] 混合試料は、試料 Aとソィァタト Wをアルカリ溶解し、 pH5.5に調整したものを使用し た。

[0108] [表 2]

(vi) 被験物質は、それぞれ 0. 5%カルボキシメチルセルロースナトリウム（CMC— N a)水溶液に懸濁、または溶解した。これを 18時間の絶食を行なったラットに、ラット用 経口ゾンデを用レ、てラット体重あたり 50 molとなるように強制経口投与した。投与 2 4時間後の採血、および尿の採取まで、給餌は行なわず給水のみとした。

(vii) 被験物質投与前（以下 0時間とする）、および投与から 0. 5、 1、 2、 4、 8、 12、 16、 24時間後に頸静脈より 2mlづっ採血し、それぞれプラスチックチューブに入れ、 ハイキャパシティ冷却遠心器 (株式会社久保田製作所製）により遠心分離 (3500 X G、 4°C、 10分間）をし、血漿を分離した。また、 24時間尿を採取して尿量を測定し、 血液と同様に遠心分離した。得られた血漿、および 24時間尿は分析するまでサンョ 一超低温フリーザー（三洋電機株式会社製）にて - 80°Cで冷凍保存した。

(viii) 得られた血漿 0. 5mlと、 1M酢酸ナトリウム緩衝液（pH4. 5) 0. 5mlを 1. 5ml 容量のエツペンドルフチューブに取り、充分に攪拌した後に 37°Cで 2分間、プレイン キュベーシヨンした。次に、 /3—グルクロニダーゼ /スルファターゼ（シグマ社製、 Typ e-H-2 ; 10500units/ml, 4300units/ml)を、 5. 5 X 10 ts/ml, 2 X 10²un its/mlになるように添加し、 37°Cで 20分間インキュベーションした。その後、直ちに 氷冷し、 0. 01Mシユウ酸 0. 5mlを加えて攪拌し、 8000rpm、 4°Cで 5分間遠心分離 した。得られた上清を予めメタノールにて活性化させておいた「Sep_Pack C18 C artridgej (ウォーターズ社製）に注入し、 0. 01Mシユウ酸 lml、イオン交換水 10ml を順次に流して洗浄した。吸着物を 25%メタノール 5ml、 100%メタノール 10ml で溶出し、試験管に分取した。

[0110] これをロータリーエバポレーター（EYELAN— 2、東京理化器械株式会社製）を用 レ、て減圧乾固した。これを分析直前まで、サンョー超低温フリーザー（三洋電機株式 会社製）にて一 80°Cで冷凍保存した。

(ix) HPLC分析は、得られた減圧乾固残留物に 100%メタノール 100 /i lをカロえて 溶解し、 15000rpm、 0°Cで 2分間遠心分離（SIGMA KUBOTA3615：株式会社 久保田製作所製）して HPLC試料とし、以下に示す HPLC条件にて分析し、定量し た。

[0111] なお、本分析では、標準物質として、ダイゼイン（関東化学製）、ゲニスティン（関東 化学製）を用いてそれぞれの検量線を作成することにより定量し、ダイゼインとダイゼ イン抱合体を併せてダイゼイン量として、同様にゲニスティンとゲニスティン抱合体を 併せてゲニスティン量として算出した。これらを合わせて、血中の総イソフラボン含量 とした。 （なお、上記ダイゼイン抱合体、ゲニスティン抱合体とは、ダイゼインゃゲニス ティンのグルクロン酸抱合体や硫酸抱合体のことを意味する。 )

その結果を図 1および表 3に示す。 [0112] [表 3]

<表 3 >

[0113] く HPLC条件 >

前記に同じ。

すなわち、使用機器： Waters996 (ウォーターズ社製）

使用カラム： 資生堂カプセルパック ODS-C18 UG (250mm X 4. 6mml. D. ) カラム温度： 40°C

溶離液： 水/メタノール/酢酸 = 65/30/5 (v/v/v)

検出： UV 254nm

注入量： 10 μ 1。

[0114] <考察 >

図 1、および表 3からもわかるように、本発明の「水可溶性イソフラボン組成物」、およ び「水可溶性イソフラボン組成物とイソフラボンァグリコンの混合物」は、イソフラボン ァグリコンに比べ、血中での初期総イソフラボン濃度も高ぐかつ高い総イソフラボン 濃度を長時間維持 (持続)できることがわ力る。

[0115] [溶解安定性試験 1]

ひ_ダルコシルイソフラボン中のァグリコン量に対する、イソフラボンとイソフラボンァ グリコンとの合計中に含まれるァグリコン量の比（Cg) = [ひ—ダルコシルイソフラボン 中のァグリコン量/ (イソフラボン中のァグリコン量 +イソフラボンァグリコン量）]を、溶 解安定性の点から調べた。

[0116] 被験物質として、イソフラボンァグリコンに「ソィァクト W」（イソフラボンァグリコン 33.

3%、キッコ一マン株式会社製）を使用し、酵素処理イソフラボンには実施例 1で作つ た「試料 A」を用いた。

[0117] これらを全ァグリコン量として 250ppmとなるように適宜量の水に分散し、 15%水酸 化ナトリウムにて PH12. 0で溶解後、 20%硫酸にて中和し組成比（Cg)力 2. 0/1 、 2. 5/1、 3. 0/1の試験夜（サンプノレ3八、 SB、 SC)とした。

[0118] 結果を表 4に示す。

[0119] [表 4] 表 4

[0120] なお、表 4中、「組成比（Cg)」は、 [ α _ダルコシルイソフラボン中のァグリコン量 / ( イソフラボン中のァグリコン量 +イソフラボンァグリコン量）]を示す。

[0121] 表 4中の記号の意味は、以下の通り。

「一」：析出なし。 「土」：僅かに析出する。 「十」：析出する。

[0122] [溶解安定性試験 2]

即効性と持続性を有する組成物において、即効性の面からイソフラボンァグリコン の添加は、重要な要因となる。し力 その量が多くなり過ぎると析出が生じ、商品ライ フに大きな影響をきたす結果となる。

[0123] そこで、組成物中のイソフラボンァグリコン量と全ァグリコン量との関係が長期保存 下で析出にどのように影響するかを調べた。 [0124] 被験物質としてイソフラボンァグリコンに「ソィァクト W」（イソフラボンァグリコン 33. 3 %、キッコ一マン株式会社製）を使用し、酵素処理イソフラボンには実施例 1で作った 「試料 A」を用いた。

[0125] これらを全ァグリコン量として 250ppmとなるように適宜量の水に分散し、 15%水酸 化ナトリウムにて PH12. 0で溶解後、 20%硫酸にて中和し、重量比「イソフラボンァ グ]; ン/全 グ]; ン」力 S表 5に示すように、それぞれ 3. 0/100、 10. 0/100、 20 . 0/100、 30. 0/100の試験液（サンプル SD SG)を調製した。該試験液を 1ケ 月間、常温で保存し、保存に伴う析出の有無を調べた。

[0126] 結果を、表 5に示す。

[0127] [表 5]

[0128] 表 5中の記号の意味は、以下の通り。

「一」：析出なし。 「土」：僅かに析出する。 「十」：析出する。

[0129] [飲食物の調製例 1]

ぐ清涼飲料 >

表 6に示す配合組成を有し、水可溶性イソフラボン組成物（Cg=4.0/1、 イソフラボ ンァグリコン =2.2%)と他の骨密度改善効果を有する物質とを併含する清涼飲料を 調製した。

[0130] [表 6] 表 6

材 料 含有量

水 184.81 g

砂糖 6.0 g

果糖プドウ糖液糖 6.0 g

酵素処理ステビア 0.04 g

レモン濃縮果汁. 1.2 g

レモンフレーパ一 0.1 g

酸味料 1 .0 g

酵素処理ヘスペリジン 0.1 g

水可溶性ィソフラボン組成物 0.01 g

轧酸カルシウム 0.7 g

ビタ ミン C 0.04 g

ビタ ミン D₃ 150 IU

ビタ ミン K 100

α s ρi- 1 200 g

[0131] このように、水可溶性イソフラボン組成物と、他の骨密度改善効果を持つ成分と併 用することによって、骨密度の維持 ·回復効果が期待できる清涼飲料が得られる。

[0132] [飲食物の調製例 2]

<オレンジジュース >

表 7に示す配合組成を有し、水可溶性イソフラボン組成物（Cg=4.0/1、 イソフラボ ンァグリコン = 2.2 % )を含有するオレンジジュース飲料を調製した。

[0133] [表 7] 表 7

材 料 含有量

水 183.36

オレンジ濃縮果汁 （1/6容に .濃縮） 10 .0 g

果糖ブドウ糖液糖 1.8 g

マノレチトーノレ 4.0 g

酵素処理ステビア 0.04 g

酸眛料 0.6 g

ビタ ミン C 0.04 g

酵素処理ヘスペリジン 0.1 g

水可溶性イソフラボン組成物 0.01 g

香料 0.05 g

ム

！十 200

[0134] 本製品（オレンジジュース）は、イソフラボンの沈殿を生じなレ、果汁飲料として、骨粗 鬆症を気にするヒトに好適に利用可能である。

[0135] [飲食物の調製例 3]

<乳酸飲料 >

表 8に示す配合組成を有し、水可溶性イソフラボン組成物（Cg=4.0/1、 イソフラボ ンァグリコン = 2.2%)を含有する乳酸飲料を調製した。

[0136] [表 8]

表 8

材 料 B有堇

水 169.89 g

乳酸菌原料 20.0 g

レモン果汁 0.8 g

異性化液糖 5.0 g

マノレチト一ノレ 4.0 g

酵素処理ステビア 0.02 g

酵素処理ルチン 0.08 g

酵素処理へスぺリ ジン 0.1 g

水可溶性ィソフラボン組成物 0.01

レモン香料 0.1 g

¾ 200

[0137] この乳酸飲料は、 pHが低い（酸性）にも拘わらず、析出の生じないイソフラボン含有 乳酸飲料として利用できる。

[0138] [飲食物の調製例 4]

<ゼリー >

表 9に示す配合組成を有し、水可溶性イソフラボン組成物（Cg=4.3/1、 イソフラボ ンァグリコン = 1.2。/₀)を含有するゼリーを調製した。

[0139] [表 9]

表 9

材 料 含有量

水 155.026 g

砂糖 20.0 g

レモン濃縮果汁 17.0 g

ゲル化剤 3.0 g

酵素処理ステビア 0.04 g

酸味料 0.4 g

酵素処理ルチン 0.08 g

酵素処理へスぺリジン 0.1 g

水可溶性ィソフラボン組成物 0.01

ゲル化剤 3.0 g

レモンフレーバー 0.2 g

轧塩基性タンパク質 0.4 g

乳酸カルシウム 0.7 g

クチナシ色素製剤 0.004 g

ビタミン C 0.04 g

ビタミン D₃ 75 IU

ビタミン K 50 g

ム き屮 200 g

[0140] 本製品（ゼリー）は、（半）固形物であるにも拘わらず濁りがなぐ味質に影響のない 澄明なイソフラボン含有ゼリーとして利用できる。

[0141] [化粧料組成物の調製例 1]

ぐ含水化粧料 >

表 10に示す配合組成を有し、水可溶性イソフラボン組成物（Cg=4.3/1、 イソフラ ボンァグリコン = 1.2%)を含有する、弱酸性の柔軟化粧水を調製した。

[0142] [表 10] 表 1 o

材 科 含有量

精製水 78.5 g

グリセリン 5.0 g

プロピレングリ コール 4.0 g

ォレイルアルコール 0.1 g

ホ'リ才キシエチレンゾルビタンモノラウリン酸エステル 1.5 g

ホ。リォキシエチレンラウリルェ-テル 0.5 g

ェタノール 1 0.0 g

香料 0.1 g

染料 適量

防腐剤 適里

酵素処理ルチン 0.1 g

酵素処理ヘスペリ ジン 0.1 g

水可溶性ィ ソフラボン組成物 0.1 g

Π a 1 100 g

[0143] [化粧料組成物の調製例 2]

<クリーム化粧料 >

表 11に示す配合組成を有し、水可溶性イソフラボン組成物（Cg=4.3/1、 イソフラ ボンァグリコン = 1.2%)を含有するクリーム化粧料を調製した。

[0144] [表 11]

表 1 1

材 料 含有量

ミツロウ 15.3 g

流動パラフィン 76.3 g

グリセリン 8.0 g

酵素処理ルチン 0.1 g

酵素処理ヘスペリジン 0.1 g

水可溶性ィソフラボン組成物 0.1 G

香料 0.1 g

適里

精製水 適量

ム a ¾ - P I 100 g

[0145] このクリーム化粧料は、イソフラボンの持つ「肌の老化を防ぐ」作用を持ちつつ、タリ ームとして安定している。

[0146] また、クリームの配合組成を化粧水用に変えることにより、化粧水としても水可溶性 の安定な商品が得られる。

図面の簡単な説明

[0147] [図 1]図 1は、水可溶性イソフラボン組成物（♦) 、「水可溶性イソフラボン組成物とイソ フラボンァグリコンの混合物」である混合試料（國）、イソフラボンァグリコン（▲)を 25 時間に亘つて、被験動物に経口投与し、投与開始からの経過時間 (h) (横軸）と、血 中総イソフラボン濃度 (nmol/ml) (縦軸）との関係を示すグラフである。

符号の説明

[0148] ▲ イソフラボンァグリコン投与群

國 · · · · ·混合試料投与群

♦……水可溶性イソフラボン組成物投与群

Claims

請求の範囲

[1] ひ一ダルコシルイソフラボンと、イソフラボンと、必要によりイソフラボンァグリコンとを 含むイソフラボン組成物であって、

ひ一ダルコシルイソフラボン中のァグリコン量に対する、イソフラボンとイソフラボンァ グリコンとの合計中に含まれるァグリコン量の比 [ひ—ダルコシルイソフラボン中のァグ リコン量/ (イソフラボン中のァグリコン量 +イソフラボンァグリコン量）]力 2. 5/1以 上であることを特徴とする水可溶性イソフラボン組成物。

[2] α _ダルコシルイソフラボンとイソフラボンとイソフラボンァグリコンとを含むイソフラボ ン組成物であって、該組成物中のイソフラボンァグリコン量が、該組成物中の全ァグリ コン量の 0· 01— 20%であることを特徴とする水可溶性イソフラボン組成物。

[3] 上記 α _ダルコシルイソフラボンは、イソフラボンに α—結合にてグルコースが平均 2

. 0— 20個付加したものであることを特徴とする請求項 1または 2に記載の水可溶性ィ ソフラボン組成物。

[4] 上記イソフラボン組成物は、 α—グノレコシルイソフラボンと、イソフラボンと、イソフラ ボンァグリコンとを含むことを特徴とする請求項 1一 3の何れかに記載の水可溶性イソ フラボン組成物。

[5] 上記ひ一ダルコシルイソフラボンは、イソフラボン及びイソフラボン誘導体を含む組 成物に、サイクロデキストリン共存下で糖転移酵素を作用させて得られたものであるこ とを特徴とする請求項 1一 4の何れかに記載の水可溶性イソフラボン組成物。

[6] 上記ひ一ダルコシルイソフラボンは、イソフラボン及びイソフラボン誘導体を含む組 成物に、サイクロデキストリンを作用させ、次いで、酸性条件下に冷却して生じた沈殿 物を濾別除去した後、糖転移酵素を作用させることにより得られたものであることを特 徴とする、請求項 5に記載の水可溶性イソフラボン組成物。

[7] 上記サイクロデキストリンは、 /3—サイクロデキストリンまたは分岐 j3—サイクロデキスト リンであることを特徴とする請求項 5または 6に記載の水可溶性イソフラボン組成物。

[8] 請求項 1一 7の何れかに記載の水可溶性イソフラボン組成物を含むこと特徴とする 飲食物、化粧品、医薬品または飼料。

[9] 上記飲食物が酸性飲料であることを特徴とする請求項 8に記載の飲食物、化粧品、 医薬品または飼料。

[10] さらに、酵素処理ヘスペリジンおよび/または酵素処理ルチンを含むことを特徴と する請求項 8または 9に記載の飲食物、化粧品、医薬品または飼料。

[11] 大豆イソフラボン抽出物を水又は水性媒体に懸濁させ、得られた懸濁液にサイクロ デキストリンを加え、 40— 100°Cに加熱してサイクロデキストリンを溶解させた後、得ら れた溶液に、アルカリを添加混合して pH8— 13に調整してイソフラボン類を溶解させ ると共に、イソフラボン類をサイクロデキストリンに包接させ、次いで、

サイクロデキストリンに包接されたイソフラボン類の含有液に、酸を添加混合して pH 5. 5-2. 0に調整した後降温し、生じた沈殿物を濾過にて除去し、次いで、得られた 濾液を pH5. 0 7. 0に調整して、濾液中に含まれるイソフラボン類の酵素処理を行 うことを特徴とする水可溶性イソフラボン組成物の製造方法。