WO2004021803A1 - 精製ローヤルゼリー - Google Patents

Description

精製ローヤルゼ リ一

技術分野

本発明は、 精製ローヤルゼ リ ー、 詳細 は、 水溶性蛋白質量 明

が、 全蛋白質量に対して 5 0質量％未満 低減している精製口 —ャルゼ リ ーとその製造方法並田びに用途 関するものである。

背景技術

ローヤルゼ リ ーは、 ミ ツバチの巣における王台 （女王バチの 房） に蓄積された、 働きバチの外分泌腺からの乳白色の分泌物 であり 、 女王バチとなるべき幼虫に餌と して与えられるゼ リ ー 状物質である。 その化学的組成は生産地や季節などによ り 、 多 少の差違はあるものの、 水分 6 5 〜 7 5 % ( wZw )、 蛋白質 1 5 〜 2 0 % ( w / w ) 炭水化物 〗 0〜 〗 5 % ( w w ), 脂肪 1 . 7 ~ 6 % ( w / w ), 灰分 0 . 7 ~ 2 % ( wZw ) とされて おり 、 1 0 — ヒ ド ロキシ一 2 —デセン酸をはじめとする有機酸 類、 各種ビタ ミ ン類、 各種ミネラル類をも含んでいる。 また、 ローヤルゼ リ ーに含まれる蛋白質には水溶性のものと水不溶性 のものとがあり 、 前者が蛋白質全体の約 7 5 %を、 後者が約 2 5 %をそれぞれ占めているとされている （例えば、 竹中哲夫、 ミ ツバチ科学、 1 9 8 2年、 3卷、 2号、 6 9乃至 7 4頁など を参照。）

ローヤルゼ リ ーは古く から ヒ 卜の健康食品と して広く 利用さ れており、 最近では、 人体に対して有用な薬理作用、 例えば抗 菌作用、 免疫増強作用、 抗腫瘍作用、 抗炎症作用、 寿命延長作 用などを有するという報告が数多く なされている。

しかしながら、 ローヤルゼ リ ーにはァ レルゲン性を示す物質 が含まれているため、 摂取することによ り 、 個人差はあるもの のア レルギー症状が引き起こされる場合があり、 場合によって は重篤なアナフィ ラキシーシ ョ ッ クを引き起こすこと もある。 このよ うなローヤルゼ リ ーの問題点を解消する目的で、 特開 2 0 0 2 - 1 1 2 7 1 5号にはローヤルゼ リ ーに糖分解酵素処理 及び蛋白質分解酵素処理を施して低ア レルゲン化する方法が開 示されている。 しかしながら、 ア レルゲン性を示す物質となる 水溶性蛋白質を等電点沈殿によ り沈殿させ、 糖分解酵素処理及 び蛋白質分解酵素を用いて分解処理したこのローヤルゼ リ ーは、 添加 した酵素自体が新たなア レルゲン性を示す物質となる可能 性があり、 健康を目的に摂取するローヤルゼ リ ーと して好ま し く ないという問題点があった。 発明の開示

本発明は、 斯かる状況に鑑み為されたものであり 、 ア レルゲ ン性が低減され、 且つ、 ロ ーヤルゼ リ ー本来の有用な薬理作用 が保持された、 ア レルギ一症状を引き起す懸念の少ない精製口 ーャルゼ リ ーとその製造方法並びに精製ローヤルゼ リ ーを配合 してなる組成物の飲食物、 飼料、 餌料、 ぺッ 卜 フー ド又は化粧 品への用途を提供することを課題とする。

本発明者らは、 上記の課題を解決するため、 ア レルゲン性が 低減され、 且つ、 ローヤルゼ リ ー本来の有用な薬理作用が保持 された、 ア レ ルギー症状を引き起す懸念の少ない高品質の精製 ローヤルゼ リ ーとその製造方法について、 銳意研究を重ねてき た。 その結果、 未処理のローヤルゼ リ ー （以下、 本明細書では 「未処理のローヤルゼ リ ー」 を単に「ローヤルゼ リ ー」又は「生 ローヤルゼ リ ー」 という場合がある。 また、 表中では 「 R J 」 と略記する場合がある。） を原料と して、 これに水を加えて遠心 分離することによ り上清と沈殿とに分離し、 生ローヤルゼ リ ー を対照と して、 それぞれのア レルゲン性を測定したところ、 生 ローヤルゼ リ ーに含まれるア レルゲン性物質の大部分が上清に 移行することを見出 した。 また、 生ローヤルゼ リ ーに水を加え、 遠心分離して上清と沈殿に分離する工程 （以下、 本明細書では この工程を 「水分画工程」 と略称し、 この操作を 「水分画」 と 略称する。） と、 該上清を限外濾過又はゲル濾過することによ り 水溶性蛋白質を含む高分子物質を除去し低分子物質を採取する 工程 （以下、 本明細書では 「高分子除去工程」 と略称する。）、 及び該限外濾過又はゲル濾過によ り得られる低分子物質を前記 沈殿に合わせる工程 （以下、 本明細書では 「混合工程」 と略称 する。） とを組合せる方法によ り 、 水溶性蛋白質が、 全蛋白質量 に対して 5 0質量％ (以下、 本明細書では、 特にことわらない 限り 、 質量％を単に％と略称する。） 未満に低減し、 ア レルゲン 性を低減し、 且つ、 生ローヤルゼ リ ーが本来有する有用な薬理 作用を保持した精製ローヤルゼ リ ーを調製し得るこ とを独自の 知見と して見出 した。

すなわち、 本発明は、 水溶性蛋白質量が、 全蛋白質量に対し て 5 0 %未満に低減している精製ロ ーヤルゼ リ ーとその製造方 法並びに精製ロ ーヤルゼ リ ーを配合 してなる組成物、 更には該 組成物の飲食物、 飼料、 餌料、 ペッ ト フー ド又は化粧品への用 途を提供することによ り上記の課題を解決するものである。 発明を実施するための最良の形態

本発明は、 水溶性蛋白質量が、 全蛋白質量に対して 5 0 %未 満に低減している精製ローヤルゼ リ ーに関するものである。 本 発明の精製ローヤルゼ リ ーの原料と して用いる生ローヤルゼ リ 一は、 分泌するハチの種類やその産地、 及び供給形態 （生また は冷凍） に特に限定はない。 分泌するハチの種と しては、 セィ ヨウ ミ ツ ノくチ （ A p i s m e I I i f e r a )、 ト ウ ヨ ウ ミ ツ バチ （ A p i s c e r a n a )、 才ォ ミ ツバチ （ A p i s d o r s a t a )、 コ ミ ツバチ （ A p i s f I o r e a ) など力《 挙げられる。 産地と しては、 日本、 南米、 北米、 豪州、 中国、 欧州などが挙げられる。 これらのローヤルゼ リ 一はいずれも本 発明の精製ローヤルゼ リ ーの原料と して有利に用いることがで きるものの、 できるだけ新鮮な、 又は、 低温保存された生口一 ャルゼリ ーを用いるのがよ り望ま しい。

本発明の精製ローヤルゼ リ 一は、 ローヤルゼ リ 一が本来有す る有用な薬理作用を実質的に失わない範囲で、 水溶性蛋白質量 力、'、 全蛋白質量に対して 5 0 %未満、 よ り好ま し く は 4 0 %未 満、 更に好ま し く は 2 0 %未満、 よ り更に好ま し く は 1 0 %未 満に低減しており 、 且つ、 それによつてア レルゲン性が低減し たものであれば良い。 本発明における蛋白質の定量は、 斯界で 汎用される蛋白質の定量方法であるロー リ ー （ L o w r y ) の 方法 （ 0. H . L o w r y 等、 ジ ャ ーナリレ ' バイ オロ ジ カ リレ . ケ ミ ス ト リ ー ( J o u r n a l B i o l o g i c a l C h e m i s t r y )、 第 1 9 3 巻、 2 6 5頁、 1 9 5 1 年） によ り、 ゥ シ血清アルブミ ンを標準蛋白質と して用いて行う。 また、 口 —ャルゼ リ ーに含まれるァ レルゲン性は、 後記実験例で示す測 定法によ り確認するこ とができる。

本発明の精製ローヤルゼ リ 一は、 ローヤルゼ リ 一本来の有用 な薬理作用に寄与している 1 0 — ヒ ド ロキシ一 2 —デセン酸を よ く 保持している一方、 ア レルゲン性の原因となる高分子物質 である蛋白質を低減させているものであり 、 その理化学的指標 と しては、 遊離脂肪酸換算での 1 0 — ヒ ド ロキジ— 2 —デセン 酸に対する全蛋白質の質量比が挙げられ、 本発明の精製ローャ ルゼ リ 一はこの比が 6未満である。 この質量比は生ローヤルゼ リ ーの場合、 通常、 7乃至 1 5 の範囲にあって、 本発明の精製 ローヤルゼ リ ーのそれと明瞭に区別することができる。 なお、 1 0 — ヒ ド ロキジ一 2 —デセ ン酸は、 後記実験例で示す測定法 によ り定量することができる。

また、 本発明の精製ローヤルゼ リ ーは、 これに含まれる蛋白 質を 8 M尿素存在下、 p H 3乃至 1 0 の範囲でゲル等電点電気 泳動にかけ、 等電点 5未満を示す蛋白質と等電点 5以上を示す 蛋白質の量比を後記する実験例に従って測定することによって も特定することができる。 本発明の精製ローヤルゼ リ ーは、 等 電点 5未満を示す蛋白質に対する等電点 5以上を示す蛋白質の 量比が 1 以上を示し、 1 未満を示す生ロ ーヤルゼ リ ーと明瞭に 区別することができる。

ローヤルゼ リ 一の精製方法は、 ローヤルゼ リ 一が本来有する 有用な薬理作用を実質的に失う ことな く 、 ア レルゲン性を除去 できる方法であればよ く 、 具体的には、 水溶性蛋白質量を、 全 蛋白質量に対して 5 0 %未満、 よ り好ま し く は 4 0 %未満、 更 に好ま し く は 2 0 %未満、 よ り更に好ま し く は 1 0 %未満にま で低減できるものであればよい。 具体的な精製方法と しては、 例えば、 水希釈、 遠心分離、 膜濾過、 濾過、 濃縮、 分別沈澱、 塩析、 透析、 イ オン交換ク ロマ ト グラフィ ー、 ゲル濾過ク ロマ 5 卜 グラ フ ィ 一、 吸着ク ロ マ ト グラ フ ィ ー、 等電点ク ロ マ 卜 グラ フ ィ 一、 疎水性ク ロ マ 卜 グラ フ ィ ー、 逆相ク ロ マ 卜 グラ フ ィ 一、 ァ フ ィ 二ティ ーク ロ マ ト グラ フ ィ ー、 ゲル電気泳動、 等電点電 気泳動など蛋白質含有物質を精製するために斯界で汎用される 方法の 1 又は複数を適宜用いることができる。

0 本発明の精製ローヤルゼ リ ーの製造方法は、 水分画工程と高 分子除去工程、 及び混合工程との組合せからなり 、 上記方法の 内、 水希釈及び遠心分離は水分画工程で用いられる。 高分子除 去工程では膜分離、 ゲル濾過ク ロマ ト グラ フ ィ ーなどの方法が 有用であるものの、 膜分離の方がよ り簡便に行えるため好適で □ め 。

本発明において水溶性蛋白質は、 水分画工程において生口 一 ャルゼ リ ーに水を加え、 遠心分離した場合に上清に移行し水不 溶性の沈殿と分離することができる。 本発明でいう全蛋白質量 とは数式 1 にて算出されるよ うに、 上清の蛋白質量 （水溶性蛋0 白質量） と沈殿の蛋白質量とを合計したものを意味する。 また、 本発明でいう全蛋白質量に対する水溶性蛋白質量の割合 （％ ) とは数式 2で算出されるよ うに、 全蛋白質量に占める水溶性蛋 白質量の割合を意味する。 5 数式 1 全蛋白質量 =上清の蛋白質量 (水溶性蛋白質量) +沈殿の蛋白質量

数式 2 全蛋白質量に対する水溶性蛋白質量の割合 (<½) = (水溶性蛋白質量 全蛋白質量）x 100

以下、 本発明のローヤルゼ リ ーの精製方法について、 工程別 に説明する。

(水分画工程）

前記したよ うに、 本発明者らはローヤルゼ リ ーに含まれるァ レルゲン性が主と して水分画の上清に存在する高分子物質に由 来していることを見出 した。 本工程はローヤルゼ リ一を水分画 することによ り 、 上清と沈殿とに分離する工程であ ¾。 ローャ ルゼ リ ーに加える水と しては特に限定されず、 必要に応じて、 例えば、 超純水、 イ オ ン交換水、 蒸留水、 磁化水、 ミ ネラル ウ オーター、 水道水、 海洋深層水のいずれも有利に利用できる。 ローヤルゼ リ ーを懸濁、 溶解した水溶液の p H を一定範囲に保 つために必要に応じて緩衝液を用いること もできる。 ローヤル ゼ リ ーを懸濁、 溶解しだ水溶液の p Hは、 通常、 p H 3 . 5 乃 至 4 . 5の範囲にあるため特に p H調整する必要はない。 しか しながら、 p Hが 3 . 5未満の場合、 酸味が強く なリ 、 食品と しての加工上に不都合となる。 また、 p Hが 4 . 5 よ り も高 く なると本来水溶性である蛋白質が等電点沈殿を起こ し沈殿とな る場合があるため、 水分画に適さない。 ロ ーヤルゼ リ ーを懸濁、 溶解した水溶液の p H は 3 . 5乃至 4 . 5 の範囲に保つのが望 差替え用紙 兒 ¹ W ま しい。 また、 精製中、 ローヤルゼ リ ーに含まれる有効成分を 安定に保っためには比較的低温で無菌の水を用いるのが望ま し い。 ローヤルゼ リ ーに加える水の量は、 水分画を繰り返す回数 によっても異なるものの、 通常、 生ローヤルゼ リ ー質量の 1 乃 至 1 0 0 0倍量が用いられ、 好ま し く は 1 乃至 1 0 0倍量が用 いられる。 混合する水の量が少なすぎると水溶性蛋白質の溶解 が不充分となり上清と沈殿の分離も不充分なものとなる。また、 加える水が多すぎると製造に時間を要することになり 、 有効成 分の劣化をまねく ことにもつながる上に、 作業効率の面からも 好ま し く ない。 水分画は比較的多量の水を用いて遠心分離を一 回で行っても、 又は、 比較的少量の水を用いて数回に分けて行 つてもよい。 本発明の、 水溶性蛋白質量の全蛋白質量に対する 割合を 5 0 %未満にまで低減する目的のためには、 生ローヤル ゼ リ ー質量の 4倍量程度の水を加える場合には、 水分画を少な く と も 1 回行う力、、好ま し く は 2回以上繰り返すのが望ま しい。 遠心分離は上清と沈殿とに充分分離できるものであればよ く 、 バッチ式、連続式のいずれの方式も有利に用いることができる。 遠心分離の条件は、 用いる遠心力や遠心分離の時間によっても 左おされるものの、 通常、 3 ， O O O X g の遠心力で 1 0分間 以上、 好ま し く は 5 , 0 0 0 X g で 1 0分間以上、 更に好ま し く は 1 0 , 0 0 0 X g で 1 0分間以上行うのが望ま しい。

(高分子除去工程）

上記、 水分画工程によ り得られるア レルゲン性を示す上清に は高分子物質である水溶性蛋白質が含まれる一方、 本来口一ャ ルゼ リ ーに含まれる有用な 1 0 — ヒ ド ロ キ シ — 2 —デセ ン酸な どの有機酸、 ア ミ ノ酸、 糖質、 ビタ ミ ン類などの低分子物質も 同時に含まれる。 本工程は上清に存在する物質を限外濾過又は ゲル濾過によ り高分子物質と低分子物質とに分離し、 水溶性蛋 白質を含む高分子物質を除去し、 有用な低分子物質を採取する 工程である。 高分子物質である水溶性蛋白質は、 これが通過で きないポアサイ ズの限外濾過膜を使用 した膜分離によ り効果的 に除去することができる。 この様な限外濾過膜と しては、 例え ば、 分画分子量 1 ， 0 0 0乃至 1 0， 0 0 0 ダル ト ンから選ば れる限外濾過膜が好ま しい。 分画分子量 1 ， 0 0 0 ダル ト ン未 満では低分子物質までが除去される懸念があり 、 1 0， 0 0 0 ダル ト ンよ り大きい膜では濾液に高分子物質である水溶性蛋白 質の一部が混入する懸念がある。 ゲル濾過ク ロマ 卜 グラフィ ー などによっても低分子物質と高分子物質を分離することは可能 であり 、 この様な方法を本発明の高分子除去工程に用いても良 いものの、 作業の効率や産業上の応用性を考慮すると限外濾過 膜を用いるのが好ま しい。

(混合工程）

本工程は高分子除去工程で採取した有用な低分子物質を前記 沈殿と混合して本発明の精製ローヤルゼ リ ーとする工程である。 限外濾過又はゲル濾過によって得られた低分子物質を直接、 前 記沈殿と混合してもよい。 通常、 限外濾過又はゲル濾過によ り 得られる低分子物質は原料中の本来の濃度よ り もかなり希釈さ れる場合が多 く 、 そのよ うな場合には、 必要に応じて該低分子 物質を濃縮した後、 沈殿と混合すること もできる。 また、 低分 子物質と前記沈殿とを混合した後、濃縮することも随意である。 濃縮は必要に応じて加熱濃縮、 減圧濃縮、 逆浸透膜濃縮が採用 される。 これらの中では比較的低温で行える減圧濃縮、 逆浸透 膜濃縮がローヤルゼ リ 一に含まれる有効成分の熱変性などの懸 念が少なく 好ま しい。 逆浸透膜にて濃縮する場合は、 ローヤル ゼ リ ーに含まれる水溶性低分子物質を濃縮液側に回収できる膜 であればよ く 、 通常、 食塩カ ツ 卜率が 7 5 %以上、 好ま し く は 9 0 %以上、 よ り好ま し く は 9 5 %以上の逆浸透膜が用いられ る。 この操作によ り濃度を適宜調製すれば、 所望の濃度の本発 明の精製ローヤルゼ リ ーを得ることができる。

以上の方法で得られる本発明の精製ローヤルゼ リ ーは、 全蛋 白質量に対する水溶性蛋白質量の割合が 5 0 %未満にまで低減 されており 、 それに伴いローヤルゼ リ ーに含まれるア レルゲン 性物質の量も低減されて、 且つ、 ローヤルゼ リ ーが本来有する、 抗炎症作用及び寿命延長作用等の有用な薬理作用を実質的に失 つていないので、 健康の維持、 増進を目的と した健康食品など と して有利に利用できる。

本発明の精製ローヤルゼ リ ーは、 上記で述べたよ うにそれ自 体で有用である一方、 他の成分に配合してなる組成物の形態と しても有利に利用できる。 本発明は斯かる組成物を提供するも のでもある。 本発明による組成物は、 通常、 ヒ 卜 を含む哺乳類 への経口的又は経皮的適用ないしは皮膚外用が許容される成分 の 1 種又は 2種以上を当該精製ローヤルゼ リ ーと と もに含んで なり 、 例えば、 食品分野、 飲料分野、 飼料 · 餌料 · ペッ ト フ一 ド分野、 化粧品分野などで有利に.利用するこ とができる。 本発 明で用いる、 ヒ 卜 を含む哺乳類への経口的又は経皮的適用ない しは皮膚外用が許容される成分と しては、 本発明の組成物の 個々の利用分野で通常使用される、 例えば、 水、 アルコール、 澱粉質、 蛋白質、 ア ミ ノ酸、 繊維質、 糖質、 脂質、 脂肪酸、 ビ タ ミ ン、 ミ ネラル、 着香料、 着色料、 甘味料、 調味料、 香辛料、 防腐剤、 乳化剤、 界面活性剤などが挙げられる。 以上のよ うな 成分を含む本発明の組成物の形態には特に制限はなく 、 粉末、 顆粒、 錠剤、 ペース 卜、 乳液、 溶液などの所望の形態で提供さ れる。

本発明の精製ローヤルゼ リ ーを配合してなる組成物を製造す るには、 以上に示したよ うな成分と個々の含量に基づいて、 目 的に応じて、 すなわち、 対象とする哺乳類の種類やその摂取方 法などに応じて選ばれる適宜の組成に従って混合し、 希釈、 濃 縮、 乾燥、 濾過、 遠心分離等の処理を適宜施し、 必要に応じて 所望の形状に成形すればよい。 各成分を配合する順序や、 種々 の処理を施す時期は、 精製ローヤルゼ リ ーの品質劣化をもたら さないものであればいずれでもよ く 、 例えば、 できるだけ調製 直後の、 又は、 調製後低温保存された精製ローヤルゼ リ ーを混 合し、 その後、 必要に応じて種々の処理を適宜施せばよい。 ま た、 製造過程での精製ローヤルゼ リ ーの品質の劣化を防ぐため には、 上記の工程はいずれも常温以下、 望ま し く は、 3 0 °C以 下の条件下で行うのがよい。

本発明の精製ローヤルゼ リ ーを配合してなる組成物は、 精製 ローヤルゼ リ ーと無水糖質とを配合し、 乾燥させることによ り 固状の形態とするこ と もでき、 更に、 粉末、 顆粒、 錠剤などと することもできる。 無水糖質と しては例えば、 無水 α ， α — 卜 レハロース、 無水マル 卜 ース、 無水環状四糖などが挙げられる。 無水 ， - ト レハロ ースは特許第 3 1 6 8 5 5 0号に開示さ れている方法で市販の 卜 レハロ ース 2含水結晶 （株式会社林原 商事販売、 登録商標 『 卜 レハ』） から容易に調製でき、 上記目的 に用いることができる。 また、 無水マル ト ースと しては市販の 無水結晶マル ト ース （株式会社林原商事販売、 登録商標 『フ ァ イ ン ト ース』） が有利に利用できる。 更に、 無水環状四糖と して は国際公開 W 0 0 2 Z 0 5 7 0 1 1 号に開示されている無 水環状四糖を用いるこ とが有利に実施できる。

本発明の精製ローヤルゼ リ ーに無水糖質を配合してなる組成 物は、 例えば、 精製ロ ーヤルゼ リ ーと無水糖質を混合し、 必要 に応じて他の成分を更に混合した後、 該混合物を脱水乾燥する 力、、 必要に応じて、 更に、 減圧乾燥、 真空乾燥、 加熱等の通常 の乾燥工程に供するこ とによ り得ることができる。 よ り具体的 には、 結晶又は非結晶の無水糖質を、 精製ローヤルゼ リ ーに、 精製ローヤルゼ リ ーと しての質量に対して、 通常、 4倍量以上、 望ま し く は、 8倍量以上混合し、 必要に応じて他の成分を更に 混合した後、 該混合物を、 常温以下、 望ま し く は、 3 0 °C以下 で、 通常、 4時間以上、 望ま し く は、 8時間以上静置して、 脱 水乾燥すればよい。 斯く して調製される固状の形態の当該精製 ローヤルゼ リ ーは、 必要に応じて、 更に乾燥工程を経た後、 粉 砕機、 造粒機、 打錠機などを用いて、 粉末、 顆粒、 錠剤など所 望の形態にしたり 、 さ らに必要に応じて、 例えば、 該粉末又は 該顆粒をカプセルに充填して利用すること も有利に実施できる。

以上のよ うな本発明の組成物に、 更に、 必要に応じて、 市販 の糖転移ビタ ミ ン C (別名 L ー ァ ス コル ビ ン酸 2 — グルコ シ ド ） を配合するこ と もできる。 L —ァ スコルビン酸が生体内でコ ラ 一ゲンの産生を増強する作用を有するこ とは良く 知られている ものの、 L —ァ スコルビン酸は不安定で酸化分解を受け易いと いう欠点がある。 一方、 糖転移ビ タ ミ ン C は化学的に安定な物 質であり 、 且つ、 生体内ではじめて分解されて し 一ァスコル ビ ン酸を遊離する。

また、 本発明の組成物に、 更に、 必要に応じて、 抗酸化剤を 添加すると、 精製ローヤルゼ リ ーに含まれる有効成分の更なる 安定化を達成することができる。 したがって、 当該組成物の適 用対象や適用地域などに応じて、 例えば、 温度制御することな く船舶などで当該組成物を輸送したり 、 高温の地域で利用する 場合などに有利に実施できる。 本発明で用いる抗酸化剤は特定 の種類に限定されないけれども、 当該組成物を、 ヒ 卜 を含む哺 乳類のための食用と して利用する場合には、 食品分野で通常用 いられるものから適宜選択するのが望ま しい。 食品分野で通常 用いられる抗酸化剤と しては、 具体的には、 フラボノ イ ド、 ポ リ フ エ ノ ール、 ビタ ミ ン E 、 ビタ ミ ン Cなどが挙げられる。 フ ラボノイ ド と しては、 よ り詳細には、 ルチン、 ヘスペ リ ジン、 ナ リ ンジン、 ケルセチンや、 それらのそれぞれにグルコース又 はその重合体などの糖類が結合してなる、 糖転移ルチン、 糖転 移ヘスペ リ ジン、 糖転移ナ リ ンジン、 糖転移ケルセチンなどが 挙げられる。 ポ リ フ エ ノールと しては、 よ り詳細には、 力テキ ン、 没食子酸などが挙げられる。 さ らに、 植物抽出物である、 ェン ジ ュ抽出物、 ローズマ リ 一抽出物、 ユーカ リ 抽出物なども、 本発明においては抗酸化剤と して有利に利用できる。 これらの 抗酸化剤の当該組成物における含量は特に制限がないけれども、 当該組成物を食用と して用いる場合には、 呈味への影響を考慮 して、 食品分野で通常用いられる配合割合に したがう力、、 また はそれ以下で用いるのが望ま しい。

本発明の組成物の望ま しい食品の形態と しては、 例えば、 ァ イ ス ク リ ーム、 アイ スキ ャ ンデー、 シ ャ ーベ ッ ト などの氷菓、 氷蜜などのシロ ップ、 バターク リ ーム、 カスター ド ク リ ーム、 フ ラ ワーペース ト 、 ピ一ナ ッ ツペース ト 、 フルーツペース ト な どのスプ レ ッ ド及びペース 卜 、 チ ョ コ レー ト 、 ゼ リ ー、 キ ャ ン ディ ー、 グ ミ ゼ リ ー、 キ ャ ラ メ ル、 チ ュ ーイ ン ガム、 プ リ ン 、 シュ ー ク リ ーム、 スポ ン ジケーキなどの洋菓子、 ジ ャ ム、 マ一 マ レー ド、 シロ ップ漬、 糖菓などの加工果実ないしは加工野菜、 まん じ ゅ う 、 う いろ う 、 あん、 羊羹、 水羊羹、 カ ステラ、 飴玉 などの和菓子、 醤油、 粉末醤油、 味噌、 粉末味噌、 マヨネーズ、 ド レ ッ シン グ、 食酢、 三杯酢、 テーブルシ ュ ガー、 コー ヒー シ ュガーなどの調味料などが挙げられる。 望ま しい飲料の形態と しては、 例えば、 合成酒、 醸造酒、 果実酒、 洋酒などの酒類、 ジュース、 ミ ネ ラル飲料、 炭酸飲料、 乳酸飲料、 乳酸菌飲料、 スポーツ ド リ ン ク、 ド リ ンク剤、 茶、 紅茶、 ウーロ ン茶、 コー ヒ一、 ココアなどの清涼飲料などが挙げられる。

本発明の精製ローヤルゼ リ ーはそのままで、 又は、 他の成分 を配合した組成物の形態で、 例えば、 家畜、 家禽、 ぺッ 卜、 そ の他蜜蜂、 蚕、 昆虫、 魚などの飼育動物のための飼料、 餌料、 ペッ ト フー ドなどと しても有利に利用できる。 このよ うな形態 を有する組成物に配合できる他の成分と しては、 それぞれの分 野で通常利用される、 例えば、 榖類、 澱粉類、 糟糖類、 糖類、 油脂類、 種実類、 豆類、 魚介類、 肉類、 卵類、 乳類、 植物蛋白 エキス、 果実類、 きのこ類、 藻類、 ビタ ミ ン類、 ミ ネラル類、 ア ミ ノ酸類、 その他と して酵母、 牧草、 バガス、 コーンコブ、 稲藁、 干し草、 油粕類、 ふすま、 大豆糟、 各種発酵糟など、 飼 料 ·餌料， ぺ ッ 卜 フー ド成分の 1 種又は 2種以上が挙げられる。 組成物の形態と しては、 粉末、 顆粒、 錠剤、 ペース 卜、 グミ な どの固状、 又は乳液、 ド リ ン ク剤などの液状の形態で有利に利 用できる。

本発明の組成物の望ま しい化粧品の形態と しては、 例えば、 ローシ ョ ン、 乳液又はク リ ームの形態の、 基礎化粧品、 洗浄用 化粧品、 入浴用化粧品、 頭髪化粧品、 日焼け · 日焼け止め化粧 品、 メイ クア ッ プ化粧品、 発毛剤、 育毛剤などが挙げられる。 以上のよ うな形態の本発明による組成物を製造するには、 目 的とする製品を慣用の方法に したがって製造する過程の適宜の 時期に本発明の精製ローヤルゼ リ ーを添加すればよい。 添加の 時期に特に制限はないけれども、 目的とする製品が加熱工程を 経て製造されるものの場合には、 加熱工程の後、 常温、 望ま し く は、 3 0 °C以下に冷却した後に添加することによ り、 製造ェ 程での有用な薬理作用の減衰を防ぐことができる。 以上のよ う な本発明の組成物は、 本発明の精製ローヤルゼ リ ーを、 製品質 量あたり 、 通常、 0 . 0 0 1 %乃至 2 0 %、 望ま し く は、 0 . 0 1 %乃至 1 0 %含有する。

以上のよ うな本発明による組成物は、 ア レルゲン性が低減さ れている上、 各種の有用な薬理作用が安定化されているので、 利用 した生体において有用な薬理作用が効果的に発揮され、 そ の生体の抵抗力の増強や、 体調不良の改善の早期化、 健康な状 態の維持などが達成される。 したがって、 本発明の組成物は、 健康を維持 · 増進するための食品、 飲料、 飼料、 餌料、 ぺッ 卜 フー ド、 化粧品などと して極めて有用である。

以下、 実験例に基づいて、 よ り詳細に本発明を説明する。 く実験例 1 ： ブラ ジル産及び中国産ロ ーヤルゼ リ ーの水分画と ア レルゲン性試験 >

<実験例 〗 ― 1 ： ブラ ジル産及び中国産ロ ーヤルゼ リ ーの水分 画 >

凍結保存していたブラジル産の生ローヤルゼ リ ー（水分 6 2 . 5 % ) 及び中国産の生ローヤルゼ リ ー （水分 6 5 . 7 % ) を常 温で解凍し、 1 2 g ずつを精秤し採取した。 ローヤルゼ リ ー質 量の 4倍量、 すなわち 4 8 g の無菌の脱イ オン水を上記ローャ ルゼ リ 一に加えて均一に攪拌し、 一様に分散したのを確認した 後、 5 0 0 0 X g で 1 0分間遠心分離 し、 それぞれから上清と 沈殿を回収した。 対照と して、 生ローヤルゼ リ ー 1 2 g に脱ィ オン水を 4 8 g 加えて 6 0 g と し、 上記と同様に攪拌し分散さ せたものを調製した。

<実験例 1 一 2 ： ァ レルゲン性試験 >

実験例 1 一 1 で調製 したブラ ジル産及び中国産ロ ーヤルゼ リ 一の上清と沈殿とについてア レルゲン性を評価するにあたり 、 試料は全て生ローヤルゼ リ ー相当量に合わせて用いた。 生ロ ー ャルゼ リ ー相当量とは、 試料の量をその原料である生ローヤル ゼ リ ーの質量に換算した量であり、 上清、 沈殿のいずれにおい ても、 その試料の量が本来の生ローヤルゼ リ ーの質量 1 g に由 来するものであればいずれも生ローヤルゼ リ ー 1 g 相当量と表 される。 ア レルゲン性試験はマウスでの抗原性試験を萩田らの 方法 （萩田忠厚、 水島裕、 「医学のあゆみ」、 第 1 0 0巻、 8 1 4頁、 1 9 7 7年） に従って行った。 すなわち、 試験群当たり 各 5 匹の雌性 B A L B Z c マ ウ ス （ 9週齢、 日本チ ヤ 一ルス リ バー株式会社） に対し、 一週間おきに 3 回、 各標品を生ローャ ルゼ リ 一相当量で 1 . 5 m g Z匹、 及びアジュバン 卜 と して水 酸化アル ミ ニウ ムゲル （ A I u m ) 2. 5 m _g /匹を腹腔内投 与にて免疫した。 3回目の免疫から一週間後に各マウスの尾動 脈よ り採血し、 マイ ク ロテナ一を用いて血清を採取してラ ッ 卜 を用いた P C A法に供した。 すなわち、 正常 S Dラ ッ 卜の除毛 した背中に、 生理食塩水を用いて希釈 （ 1 0 0倍又は 2 0 0倍） したマウ ス血清を 0. 1 m I ずつ皮内注射し、 2 4時間経過後 にマウスに投与 した標品と同一の標品を生ローヤルゼ リ ー相当 量 7. 5 m g を 1 m l の 0. 5 %エバンスブルー色素溶液と と もに静脈内投与して、 血清投与部位に観察される青いスポ ッ ト の大きさを測定 した。 平均直径 5 m m以上のスポッ 卜 を示すも のを陽性と判断 し、 試験群 5 匹と も陽性であったものを 5 ブラ ス （ + + + + + )、 5 匹とも陰性であったものをマイ ナス （ 一 ） と してア レルゲン性の強さを評価した。 ブラジル産ローヤルゼ リ ーの上清と沈殿、 及び対照についての試験結果を表 1 に、 ま た、 中国産ローヤルゼ リ ーについて同様に表 2 に示す。 表 1

RJ:ローヤルゼリー

表 2

影 アレルゲン性

血清希釈倍数 1 00倍 200倍

対照 (生 RJ) + + + + + + + +

上 清 + + + + + + + + + +

沈 殿 + + + + +

RJ :ローヤルゼリー

表 1 及び表 2から明らかなよ うに、 比較的強いア レルゲン性 がブラジル産ローヤルゼ リ ー、 中国産ローヤルゼ リ ーと もに上 清に認められ、沈殿のァ レルゲン性は比較的低い結果となった。 水溶性の蛋白質が主なァ レルゲン性物質であると推察された。 また、 血清の希釈倍数 1 0 0倍、 2 0 0倍の結果から中国産口 一ャルゼ リ 一の方がブラジル産ローヤルゼ リ 一に比べてァ レル ゲン性の強いことが判明 した。

<実験例 2 ： 水分画で回収される沈殿の全蛋白質量に対する水 溶性蛋白質の割合とア レルゲン性の低減に水分画回数が与える 響 >

<実験例 2 — 1 ： 回収される沈殿中の全蛋白質量に対する水溶 性蛋白質の割合に水分画回数が与える影響 >

水分画回数が回収される沈殿中の全蛋白質量に対する水溶性 蛋白質の割合に与える影響を調べるために、 ブラ ジル産の生口 ーャルゼ リ ー （水分 6 2 . 5 % ) 1 2 g を材料と して用い、 実 験例 1 一 1 と同様にその質量の 4倍量 （ 4 8 g ) の水を加えて 5 0 0 0 X g で 〗 0分間遠心分離する水分画によ り上清と沈殿 とに分離し、同様の操作をさ らに 2 回繰返して沈殿を調製した。 水分画を 1 乃至 3 回行って得たそれぞれの沈殿に含まれる水溶 性蛋白質の割合を算出するため、 沈殿に上記水分画と同様に 4 倍量の水を加え、 遠心分離して上清の蛋白質量と沈殿の蛋白質 量をロー リ ー法によ り ゥ シ血清アルブミ ンを標準蛋白質と して 定量し、 上清に含まれる蛋白質量を水溶性蛋白質量と した。 対 照と して、 実験例 1 一 1 と同様に、 調製した生ロ ーヤルゼ リ ー 懸濁液を遠心分離し、 上記沈殿標品の場合と同様に蛋白質量を 定量した。 それぞれの水分画回数において回収される沈殿に會 まれる全蛋白質と水溶性蛋白質の分析値と、 これによ リ算出さ れる全蛋白質量に対する水溶性蛋白質の割合を表 3 に示す。 表 3

表 3 から明らかなよ うに、 生ローヤルゼ リ ーの上記分析にお ける全蛋白質量に対する水溶性蛋白 （上清蛋白質量） の割合は 6 5 . 8 %であると ころ、 水分画を 1 回行う ことによ り得られ た沈殿のそれは約 4 0 %、 水分画を 2 回行う こ とによ り得られ た沈殿のそれは約 6 %に低減していた。

<実験例 2 — 2 ： 水分画によ り得られる沈殿とそのア レルゲン 性の関係 >

実験例 2 — 1 で得た水分画を 1 回、 2 回、 及び 3 回おこなつ た沈殿のア レ ルゲン性を、 希釈倍率を 5 0 倍と 1 0 0倍とに変 差替え用紙（規則 26) えた以外は実験 1 一 2 と同様の方法を用いて評価した。 対照と して、 実験例 1 ― 〗 と同様に調製した生ロ ーヤルゼ リ ー懸濁液 を用いた。 結果は表 4 に示す。 表 4

上記結果よ り 、 水分画を 1 回行えば、 沈殿の全蛋白質量に対 する水溶性蛋白質の割合を約 4 0 %未満にまで低減でき、且つ、 ア レルゲン性を顕著に低減させ得ることが判明 した。

<実験例 3 ： ローャルゼ リ一からの各種分離品と精製ロ ーヤル ゼ リ ーの調製 >

中国産生ロ ーヤルゼ リ ー 6 0 g を原料と し、 これに 4 °Cの脱 イ オン水を 2 4 0 g 加えて攪拌し、 均一に分散させた。 次いで、 この懸濁液を遠心分離 （ 5 , 0 0 0 X g 、 1 0分間） し、 上清 と沈殿とに分離した。 得られた沈殿に再度 4 °Cの脱イ オ ン水を 2 4 0 g 加えて同様に処理し、 沈殿を得た。 水分画一回めと 2 回めの上清をあわせて水分画上清液と し、 ペ ン シル型の限外濾 過膜 （旭化成販売、 商品名 『 A I P 0 0 1 3 』、 分画分子量 6 0 0 0 ダル ト ン） を用いた限外濾過に供した。 少量の水にて水押 し し、 限外濾過液と限外濾過濃縮液とに分離した。 限外濾過で 得られた濾液を最終的に沈殿に合わせて精製ローャルゼ リ ーと した。 各操作段階の試料について蛋白質、 糖質、 及び有効成分 の指標と してロ ーヤルゼ リ ー特有の成分であり、 糖代謝や老化 防止に関与するといわれている 1 0 — ヒ ド ロキシー 2 —デセ ン 酸の量を定量した。 蛋白質はウ ジ血清アルブミ ンを標準蛋白質 と して口一 リ ー法にて、 また、 糖質はグルコースを標準糖質と してアンスロ ン硫酸法にて定量した。 1 0 — ヒ ド ロキジ一 2 — デセ ン酸は下記の条件による H P L C法にて定量した。

( 1 0 — ヒ ド ロキシ— 2 —デセ ン酸の H P L C分析条件）

カ ラ ム ： Y M C — P a c k A Q 3 0 3 - O D S ( 0 4. 6 m m X 2 5 0 m m、 株式会社ヮ イ エムシィ ）、 カ ラ ム温度 ： 4 0 °C、 検出器 ： U V 2 1 O n m、 移動相 ： 5 0 %メ タ ノ ール （ リ ン酸 で p Hを 2. 2 に調整したもの）、 流速 ： 0. 6 m I 分、 サン プル量 ： 2 0 μ I 、 1 0 — ヒ ド ロキシ— 2 —デセン酸標準溶液

( 2 0 μ g / m I , 5 0 μ g / m I l O O i g / m l ) を用 いてあらかじめ作成した検量線によ り定量した。

各操作段階における各成分の回収率は、 原料生ローヤルゼ リ —中に含まれる量を 1 0 0 と してそれぞれ算出 した。 結果を表 5 に示した。 表 5 ^ ^ ί> J 45:□ I

10— HDA:10-ヒドロキシ-2-デセン酸

ft.

質の大半の 6 6 0 5 m g を占める水溶性蛋白質は水分画処理に よ り上清に移行し、 その内、 5 8 3 0 m g 、 すなわち 9 0 %近 くが限外濾過濃縮液と して除去できることが判明 した。 また、 ア レルゲン性が比較的強い水溶性蛋白質と同時に上清に移行す る原料生ローヤルゼ リ ー中の糖質や 1 0 — ヒ ド ロキジ一 2 —デ セン酸に代表される有用な低分子物質は、 上清をさ らに限外濾 過に供して濾液と してこれを採取し、 沈殿に合わせることによ り、 それぞれ約 9 0 %以上及び 8 0 %以上の回収率で沈殿と限 外濾過液とを合わせた本発明の精製ローヤルゼ リ ーに回収でき ることが判明 した。 得られた精製ローヤルゼ リ ーにおける遊離 脂肪酸換算での 1 0 — ヒ ド ロキシー 2 —デセン酸に対する全蛋 白質の質量比は約 2 . 7であり 、 約 7 . 2 の値を示す原料生口 —ャルゼ リ ーとは明瞭に異なっていた。 く実験例 4 ： ローヤルゼ リ ー各種分離品と精製口一ャルゼ リ一 のァ レルゲン性と有用な薬理作用〉

実験例 3で得たローヤルゼ リ ー各種分離品と精製ローャルゼ リ ーのア レルゲン性と、 抗炎症作用の指標と しての腫瘍壊死因 子 T N F — αの産生抑制活性を調べた。

く実験例 4一 1 ： 腫瘍壊死因子 T N F — αの産生抑制活性測定

>

4 %チォグ リ コ レー 卜培地 1 . 5 m l を B A L B / c マウス の腹腔内に注射し、 3 日後に誘発された B A L B / c マウス腹 腔マク ロ フ ァ ージを腹腔内よ り 回収した。 次いで、 実験例 3 — 1 で得た各ローヤルゼ リ ー分離品をも との生ローヤルゼ リ ー相 当量で合わせて添加し、 リ ポポ リ サッ カライ ド （ L P S ) を終 濃度 1 g Z m I 、 及びイ ンターフ ェ ロ ン ァ ( I F Ν —ァ ） を 終濃度 1 0 I U Z m I 、 及び、 B A L B Z c マウス腹腔マク ロ フ ァージを終濃度 5 X 1 0 ⁵個ノウ エルになるよ う に播きこん だ。 培養 4 8時間後に培養上清液を回収し T N F — a産生量を 固相酵素免疫測定法 （ E L I S A法） にて測定した 0 ローヤル ゼ リ 一各分離品の代わリ に リ ン酸緩衝生理食塩水を用いて同様 の操作を行ったものを対照 1 と し、 また、 生ローャルゼ リ ーを 同濃度で同様の操作を行ったものを対照 2 と して、 対照 1 と対 照 2 の T N F — α活性の差を 1 0 0 %と して生ローャルゼ リ一 の T N F — αの産生抑制活性に対する相対的な Τ Ν F — αの産 生抑制活性をパ一セン 卜 で表した。 また、 各種ローャルゼ リ一 分離品及び精製ローヤルゼ リ ーのァ レルゲン性を実験例 1 一 2 と同様に評価した。 結果を表 6 に示す。 表 6

表 6から明らかなよ うに、 ア レルゲン性を示す物質は水分画 と膜分離によ り限外濾過濃縮液へと移行し、 水分画の沈殿と限 外濾過液を混合して調製した精製ローヤルゼ リ ーでは原料の生 ローヤルゼ リ ーに対して、 ア レルゲン性が 1 Z 3 に低減してい た。 また、 ローヤルゼ リ ーが本来有する抗炎症作用の指標とな る腫瘍壊死因子 T N F — αの産生抑制活性を、 原料の生口一ャ ルゼ リ ーに対して、 約 9 0 %が精製ローヤルゼ リ ーに回収でき ていることが判明 した。 このよ うに本発明の精製ローヤルゼ リ 一はア レルゲン性が低減し、 且つ、 口一ャルゼ リ ーが本来有す る有用な薬理作用が保持されたものであり 、 健康の維持、 増進 に有用であると判断される。 く実験例 5 ： 精製ローヤルゼ リ ー及び生ローヤルゼ リ ーに含ま れる蛋白質のゲル等電点電気泳動法による比較 >

実験例 3の方法で調製した精製ローヤルゼ リ ーに含まれる蛋 白質と原料の中国産生ローヤルゼ リ ーに含まれる蛋白質とを比 較する目的で両者をゲル等電点電気泳動に供した。 まず、 精製 ローヤルゼ リ ー及び生ロ ーヤルゼ リ 一それぞれ 4 0 a g をテス 卜チューブに採取し、 真空乾燥した後、 これに 〗 0 0 μ I の 8 Μ尿素、 4 % ( w / V ) C H A P S及び 0. 5 % ( w / v ) フ ァ ソレマライ ト （ P h a r m a r i t e 、 ア マ シャ ム ' ゾく ィ 才テ ク社製） を含む等電点電気泳動用液に溶解し、 さ らに 〗 5 0 I の 8 M尿素、 4 % ( w / V ) C H A P S 、 5 0 m Mジチ才ス レイ ト ール及び 1 %の I P G緩衝液 （ アマ シ ャ ム . バイ オテ ク 社製） を加えて混合し泳動用試料と した。 次いで、 試料を専用 の容器に入れ、 これに等電点電気泳動用ゲル （商品名 「 I m m o b i I i n e D r y S t r i p , p H 3 — 1 0」、 1 3 c m、 アマシ ャ ム · バイ オテク社製） を浸し、 室温で 1 6 時間かけて 試料を しみ込ませてゲルを膨潤させた。 このゲルを用い、 電圧 1 0 0 Vで 2 時間、 3 0 0 Vで 5 日寺間、 3 5 0 0 Vで 1 2時間 の条件で等電点電気泳動を行った。 泳動終了後、 ゲルを 0. 0 2 5 % ( w / V ) クーマシ一 ' プ リ リ ア ン 卜 ' ブル一 （ C B B ) R — 2 5 0、 4 0 % ( / V ) メ タ ノ ール及び 7 % ( v / v ) 酢酸を含む染色液に 1 6時間浸漬することによ り ゲル中の蛋白 質を染色し、 4 0 % ( V / V ) メ タ ノ ール及び 7 % ( V / V ) 酢酸を含む脱色液中にて 3 0分、 次いで、 5 % ( V '/ V ) メ タ ノール及び 7 % ( V Z V ) 酢酸を含む脱色液中で 5 時間、 室温 下で攪拌することによ り脱色 した。

精製ローヤルゼ リ 一及び生ローヤルゼ リ 一のいずれの試料に 含まれる蛋白質もゲル等電点電気泳動によ り 、 等電点 5 を境と する大き く分けて 2つの蛋白群に分離したことから、 染色 · 脱 色後のゲルをゲルスキャナー （商品名 「 D U A L — W A V E L E N G T H C H R O M A T O S C A N N E R C S - 9 3 0」、 島津製作所製） に力、け、 等電点 5未満を示す蛋白質と等電 点 5以上を示す蛋白質の割合 （％ ) を 6 0 0 n mの吸光度ピー クの面積比を測定することによ り比較した。 精製ローヤルゼ リ 一及び生ローヤルゼ リ ーそれぞれ 4検体で測定 した平均の結果 を表 7 に示した。 表 7

* 4検体の平均値

表 7の結果から明らかなよ う に、 通常の生ローヤルゼ リ 一は 差替え陌紙（規則 26) ゲル等電点電気泳動における等電点 5以上を示す蛋白質が全蛋 白質の約 4 2 %であるのに対して、 本発明の精製ローヤルゼ リ 一のそれは約 5 7 %を占めていた。 このことから水分画処理に よって低減させたア レルゲン性の強い水溶性蛋白質中には、 等 電点 5未満を示す蛋白質が比較的多く含まれることが推察され る。 本発明の精製ローヤルゼ リ ーは、 本明細書記載の 8 M尿素 存在下、 p H 3乃至 1 0の範囲でのゲル等電点電気泳動におい て、 等電点 5未満を示す蛋白質に対する等電点 5以上を示す蛋 白質の量比が 1 以上であることが特徴といえる。

以下に、 具体的な実施例をあげて本発明をさ らに詳し く説明 するが、 本発明はこれらの実施例によって限定されるものでは ない。 実施例 A — 1

<精製ローヤルゼ リ ーの調製 >

生ローヤルゼ リ ー （ブラジル産） 1 0 k g に、 4 °Cの脱ィ ォ ン水 4 0 k g を加えて攪拌し、 均一に分散させた。 次いで、 こ の懸濁液を連続遠心分離機 （株式会社久保田製作所製、 モデル K T — 2 0 0 0 G ) を用いて、 1 0， O O O X g 、 流速 1 0 L / h r の条件で遠心分離し、 上清と沈殿とに分離した。 得られ た上清を分画分子量 6， 0 0 0 ダル ト ンの限外濾過膜 （旭化成 販売、 商品名 『 A I P 2 0 1 3』 で濾過した。 少量の脱イ オ ン 水にて水押し し、 限外濾過液と限外濾過濃縮液とに分離した。 この限外濾過液約 4 0 L を逆浸透膜（東洋紡販売、登録商標『ホ ロセッ プ』） を用いて 5 0 k g f Z c m ²の圧力で約 5 k g まで 濃縮した。 得られた濃縮液と前記遠心分離の沈殿とを合わせ、 均一に攪拌し、 精製ロ ーヤルゼ リ ーを調製した。 本精製口一ャ ルゼ リ ーにおいて、 遊離脂肪酸換算での 1 0 — ヒ ド ロキシ— 2 —デセ ン酸に対する全蛋白質の質量比は 3 . 7であった。 また、 この精製ローヤルゼ リ ーをゲル等電点電気泳動に供したところ、 等電点 5未満を示す蛋白質に対する等電点 5以上を示す蛋白質 の量比は約 1 . 3であった。 実施例 A - 2

<精製ローヤルゼ リ ーの調製 >

生ローヤルゼ リ ー （中国産） 2 0 k g に、 4 °Cの脱イ オン水 8 0 k g を加えて攪拌し、 均一に分散させた。 次いで、 この懸 濁液を連続遠心分離機 （株式会社久保田製作所製、 モデル K T - 2 0 0 0 G ) を用いて、 1 0 , 0 0 0 X g 、 流速 1 O L / h r の条件で遠心分離し、 上清と沈殿に分画した。 得られた沈殿 に再度 4 °Cの脱イ オン水 8 0 k g を加えて同様に処理し沈殿を 得た。水分画 1 回めと 2 回めの上清を合わせて水分画上清と し、 これを分画分子量 6 , 0 0 0 ダル ト ンの限外濾過膜 （旭化成販 売、 商品名 『 A I P 2 0 1 3』 で濾過した。 少量の脱イ オン水 にて水押し し、 限外濾過液と限外濾過濃縮液とに分離した。 こ の限外濾過液約 1 6 0 Lを逆浸透膜（東洋紡販売、登録商極『ホ ロセ ッ プ』） を用いて 5 0 k g f / c m ²の圧力で約 1 2 k g ま で濃縮した。得られた濃縮液と前記遠心分離の沈殿とを合わせ、 均一に攪拌 し、 精製ロ ーヤルゼ リ ーを調製した。 本精製口一ャ ルゼ リ ーにおける遊離脂肪酸換算での 1 0 — ヒ ド ロキジ一 2 — デセ ン酸に対する蛋白質の質量比は 4 . 2 であった。 また、 こ の精製ローヤルゼ リ ーをゲル等電点電気泳動に供したところ、 等電点 5未満を示す蛋白質に対する等電点 5以上を示す蛋白質 の量比は約 1 . 2であった。 実施例 A — 3

<精製ローヤルゼ リ ーの調製 >

生ローヤルゼ リ ー （中国産） 5質量部に、 4 °Cの脱イ オン水 2 0質量部を加えて攪拌 し、 均一に分散させた。 次いで、 この 懸濁液を連続遠心分離機 （株式会社久保田製作所製、 モデル T— 2 0 0 0 G ) を用いて、 1 0， O O O X g 、 流速 1 0 L Z h r の条件で遠心分離し、 上清と沈殿に分離した。 得られた沈 殿に再度 4 °Cの脱イ オン水 2 0質量部を加えて同様に処理し沈 殿を得た。 水分画 1 回めと 2 回めの上清を合わせて水分画上清 と し、 これを ト ヨパール H W— 4 0 Fゲル （株式会社東ソ一販 売） を用いたゲル濾過ク ロマ ト グラ フィ ーに供した。 脱イ オン 水にて溶出 し、 高分子画分と低分子画分とに分画した。 この低 分子画分を減圧エバポ レーター （柴田科学株式会社製、 R E — 1 0 E — 1 0 0型） を用いて 4 0 °Cで 8質量部まで濃縮した。 得られた濃縮液と前記遠心分離の沈殿とを合わせ、 均一に攪拌 し、 精製ローヤルゼ リ ーを調製した。 本精製ローヤルゼ リ ーに おける遊離脂肪酸換算での 1 0 — ヒ ド ロキシ— 2 —デセン酸に 対する蛋白質の質量比は 4 . 9 であった。 また、 この精製ロ ー ャルゼ リ ーをゲル等電点電気泳動に供したところ、 等電点 5未 満を示す蛋白質に対する等電点 5以上を示す蛋白質の量比は約 1 . 2 5であった。 参考例 く無水 α , α — 卜 レハロースの調製 >

市販の α， α — 卜 レハロースの含水結晶 （株式会社林原商事 販売、 登録商標 『 卜 レハ』） を、 ジャ ケ ッ 卜付き回転式真空乾燥 機を用いて、 温度 9 0 °C、 気圧一 3 0 0乃至 3 5 0 m m H g の 条件で約 7時間減圧乾燥した。 その後、 温度を常温に、 気圧を 常圧に戻して、 製品を回収し、 無水 α， α — ト レハロースを得

実施例 Β — 1

<健康食品 >

参考例の方法で得た無水 α， α - 卜 レハロースの 5質量部と、 実施例 A _ 1 の方法で得た精製ローヤルゼ リ ーの 1 質量部とを 万能混合機 （株式会社ダル ト ン製、 モデル M D R _ 6 0 ) にて 1 5分間均一に混合した。 この混合物を 4 0 °Cで一夜真空乾燥 した後、 粉砕機 （株式会社ダル ト ン製、 商品名 『パワー ミ ル P 一 3』） を用いてス ク リ ーン 0. 5 m mで粉末にした。

当該粉末組成物を、 打錠機を用いて 1 錠あたり約 2 0 0 m g の錠剤に成形した。 本品は、 簡便に利用できかつ著効を示す組 成物である。 本品は、 まろやかな甘味と適度な酸味を示すので、 日常的に利用する健康食品と して有用である。 実施例 B — 2

<健康食品 >

以下の成分を以下の配合で均一に混合した後、 実施例 B - 1 に準じて操作して、 粉末形態の本発明の精製ローヤルゼ リ ーを 配合してなる組成物を調製した。 調製後、 実験 1 に準じて実験 を行い、 当該組成物ではア レルゲン性が低減していることを確 nS し 。 参考例の方法で得た無水 α , α — 卜 レハ ロ ース

8 . 5質量部 実施例 A — 2の方法で得た精製口 一ャルゼ リ 一

0 . 5質量部 糖転移ヘスペ リ ジ ン （商品名 『 a G ヘスペ リ ジ ン P S』、 株式 会社林原商事販売）

0 . 5質量部 プルラン （商品名 『プルラン P F — 2 0』、 株式会社林原商事 販売）

0 . 5質量部 この精製ロ ーヤルゼ リ 一配合組成物を、 打錠機を用いて 1 錠 あたり約 3 0 0 m g の錠剤に成形した。 本品は、 ァ レルゲン性 が低減しており、簡便に利用できかつ著効を示す組成物である。 本品は、 まろやかな甘味と適度な酸味によ り良好な呈味を示す ので、 日常的に利用する健康食品と して有用である。 実施例 B — 3

<健康食品 >

以下の成分を以下の配合で均一に混合した後、 実施例 B — 1 に準じて操作して、 粉末形態の本発明の精製口一ャルゼ リ ー組 成物を調製 した。 調製後、 実験 1 に準じて実験を行い、 当該組 成物はア レルゲン性が低減していることをを確認した。 参考例の方法で得た無水な， α — ト レハ ロ ース

5質量部 実施例 Α — 3の方法で得た精製ローヤルゼ リ 一

1 0質量部 マルチ ト ール 1 3質量部 L — ト リ プ 卜 フ ァ ン 0 2質量部 本品は、 ア レルゲン性が低減された、 簡便に利用できかつ著 効を示す精製ローヤルゼ リ ー組成物である。 本品は、 まろやか な甘味と適度な酸味によ り良好な呈味を示すので、 日常的に利 用する健康食品と して有用である。 実施例 B — 4

< アイ ス ク リ ーム >

生ク リ ーム （油脂含量約 4 6質量％ ) 1 8質量部、 脱脂粉乳 7質量部、 全乳 5 1 質量部、 砂糖 1 0質量部、 ラ ク ト スク ロー ス含有粉末 （登録商標 『乳化オ リ ゴ』） 4質量部、 プルラ ン 2質 量部、 及びアラ ビアガム 2質量部の混合物を溶解し、 7 0 °Cで 3 0分間保持して殺菌した後、ホモゲナイ ザーで乳化分散させ、 次いで、 3乃至 4 °C にまで急冷 し、 これに、 実施例 A — 2 の方 法で得た精製ロ ーャルゼ リ 一 4質量部を加えてさ らに混合し、 一夜熟成した後、 フ リ 一ザ一で凍結させてア イ スク リ ームを得 た。

本品は、 適度な甘味と上品な風味を示すと ともに、 健康の維 持 · 増進に奏効するァイ スク リ ームである。 実施例 B — 5

<甘酒 >

白米 1 0質量部を、 常法に従って水を加えて炊き上げ、 次い で、 得られた飯米を冷却して 5 5 °C と し、 常法によ り調製した た麹 3 0質量部と食塩 0 . 1 質量部を混合して 5 0乃至 5 5 °C で 8時間保ち、 これを ミ キサーにかけ、 さ らに約 2 5 °Cにまで 冷却した時点で、 実施例 A - 1 の方法で得た精製ローヤルゼ リ 一 2質量部を加えて混合した後、 小包に充填し、 甘酒を得た。 本品は、 色調もよ く 、 風味豊かな高品質の甘酒である上、 健 康の維持 · 増進のための飲料と して有用である。 実施例 B — 6

<健康飲料 >

無水結晶マル ト ース （林原商事販売、 登録商標 『フ ァ イ ン 卜 一ス』） 5 0 0質量部、 実施例 A — 〗 の精製ロ ーヤルゼ リ ー 1 0 0質量部、 粉末卵黄 1 9 0質量部、 脱脂粉乳 2 0 0質量部、 糖 転移ビタ ミ ン C (株式会社林原生物化学研究所販売、 登録商標 『 A A 2 G』） 2 質量部、 塩化ナ ト リ ウム 4 . 4質量部、 塩化力 リ ウ ム 1 . 8 5 質量部、 硫酸マ グネシウ ム 4質量部、 チア ミ ン 0 . 0 1 質量部、 ァ ス コル ビン酸ナ ト リ ウ ム 0 . 1 質量部、 ビ 夕 ミ ン E アセテー ト 0 . 6質量部及びニ コ チ ン酸ア ミ ド 0 . 0 4質量部からなる配合物を調製 した。 この配合物 2 5質量部を 精製水 1 5 0質量部に均一に分散 · 溶解させ、 1 5 0 g ずつ褐 色ガラス瓶に封入した。

本品は、 ア レルゲン性が低減されている上、 栄養源が補足さ れているので、 健康維持、 成長促進、 病気の予防、 治療の促進、 スポーツ後の疲労回復促進などを目的とする健康飲料と して有 利に利用できる。 なお、 本品は、 ヒ 卜のみならず、 家畜などの 動物のための経口摂取又は経管投与用組成物と しても有利に利 用できる。 実施例 B — 7

<ペッ ト フー ド （グミ ） >

砂糖 3 0質量部に水 8質量部を加え加熱溶解し、 これに水飴 5 0質量部を加えプ リ ッ クス糖度 8 5乃至 9 0 ° に煮詰めた後、 8 0 °C以下まで冷却した。 次いで、 この糖液に、 水 1 0質量部 の水にゼラチン 7質量部を加熱溶解したものを加え、 さ らにビ 一フエキス 2質量部、 5 0質量％ク ェ ン酸溶液 3質量部、 実施 例 A — 1 の方法で得た精製ローヤルゼ リ ー 1 質量部、 香料を適 量加えて均一に混合した。 得られた配合物をスターチモール ド に分注し、 一晩放置 してグミ状のぺッ 卜 フー ドを調製した。

本品は、 ァ レルゲン性が低減された精製口一ャルゼ リ ーを配 合している上、 栄養源が補足されているので、 ぺッ 卜の健康維 持、 成長促進、 病気の予防、 治療の促進などを目的とするぺッ 卜 フー ド と して有利に利用できる。 なお、 本品は、 ィ ヌ、 ネコ のみならず、 各種ぺッ 卜及び家畜などの動物のための経口摂取 用組成物と しても有利に利用できる。 実施例 B — 8

<皮膚外用ク リ ーム >

以下の成分を、 以下の配合にしたがって、 常法によ り加熱し つつ混合した モノ ステア り ン酸ポ リ 才キシエチ レング リ セ リ ン

2 0質量部 自己乳化型モノ ステア リ ン酸グ リ セ リ ン 5 0質量部 ベへニン酸エイ コサニル 1 0質量部 流動パラフィ ン 1 9 質量部 ト リ オク タ ン酸 ト リ メチロールプロ ノ ン 1 0 0質量部 上記の混合物に、 精製ローヤルゼ リ ー 除く以下の成分を以 下の配合に したがって添加 · 混合し、 3 0 °C以下にまで冷却し た後に、 さ らに精製ローヤルゼ リ ーを以下の配合で加え、 ホモ ゲナイザーによ リ乳ィ匕して、 皮膚外用ク リ ームを製造した。 1 ， 3 —ブチ レング リ コール 5 0質量部 乳酸ナ ト リ ウム液 1 0 0質量部 パラ才キシ安息香酸メチル 0 1 質量部 モモ葉エキス 1 5質量部 精製水 6 2 2質量部 実施例 A — 3の方法で得た精製口 ャルゼ リ一

1 0質量部 本ク リ ームは、 優れた保湿性を示す上、 ローヤルゼ リ ーのァ レルゲン性も低減されているので、 ァ レルギ一症状を引き起こ す懸念なく 、 皮膚のみずみずしさを保つ基礎化粧品と して有用 ある。 産業上の利用可能性

以上説明 したよ うに、 本発明は、 全蛋白質量に対する水溶性 蛋白質量の割合が 5 0 %未満に低減している精製ローヤルゼ リ 一が、 ヒ 卜 を含む哺乳類に対するァ レルゲン性が顕著に低減し ている上にローヤルゼ リ ー本来の有用な薬理作用を保持してい るという全く 独自の知見に基づく ものである。 当該精製ロ ーャ ルゼ リ ーは、 重篤なア レルギー症状を引き起こす懸念がないの で、 ヒ ト を含む哺乳類が簡便かつ快適に、 健康の維持 · 増進の ために利用することができる。 また、 以上のような特長を有す る本発明の精製ローヤルゼ リ ーは、 他の成分と配合するこ とに よ り 、 食品、 飲料、 飼料、 餌料、 ペッ ト フー ド、 化粧品など各 種組成物と して利用するこ とも有利に実施できる。

本発明は、 斯く も顕著な作用効果を奏する発明であり、 斯界 に貢献すること誠に多大な意義のある発明である。

Claims

請 求 の 範 囲

1 . 水溶性蛋白質が、 全蛋白質量に対して 5 0質量％未満に低 減している精製ローヤルゼ リ ー。

2 . 精製ローヤルゼ リ ーが、 ローヤルゼ リ ーが本来有する有用 な薬理作用を実質的に失う ことなく ア レルゲン性を除去したも のである請求の範囲第 1 項記載の精製ローヤルゼ リ ー。

3 . 遊離脂肪酸換算での 1 0 — ヒ ド ロキジ一 2 —デセ ン酸に対 する全蛋白質の質量比が 6未満である請求の範囲第 〗 項又は第 2項記載の精製ローヤルゼ リ ー。

4 . ローヤルゼ リ ーに水を加えて遠心分離することによ り沈殿 と水溶性蛋白質を含む上清とに分離する工程、 得られる上清を 限外濾過又はゲル濾過することによ り水溶性蛋白質を含む高分 子物質を除去し低分子物質を採取する工程、 及び得られた低分 子物質を前記沈殿と混合する工程を組合わせることを特徴とす る精製ローヤルゼ リ ーの製造方法。

5 . 請求の範囲第 4項記載の製造方法によ って得られる請求の 範囲第 1 項乃至第 3項のいずれかに記載の精製ローヤルゼ リ ー。

6 . 請求の範囲第 1 項乃至第 3項又は第 5項のいずれかに記載 の精製ローヤルゼ リ ーを配合してなる組成物。

7 . 請求の範囲第 1 項乃至第 3項又は第 5項のいずれかに記載 の精製ローヤルゼ リ ーと と もに無水糖質を配合して製造される 組成物。

8 . 無水糖質が、 無水 卜 レハロ ース、 無水マル ト 一ス又は無水 環状四糖のいずれかである請求の範囲第 7項記載の組成物。

9 . 糖転移ビタ ミ ン Cをさ らに配合してなる請求の範囲第 6項 乃至第 8項のいずれかに記載の組成物。

1 0 . 抗酸化剤の 1 種又は 2種以上をさ らに配合してなる請求 の範囲第 6項乃至第 9項のいずれかに記載の組成物。

1 1 . 抗酸化剤がフ ラボ ノ イ ド 、 ポ リ フ エ ノ ール、 ビタ ミ ン E 及びビタ ミ ン Cである請求の範囲第 1 0項に記載の組成物。

1 2 . 飲食物、 飼料、 餌料、 ペッ ト フー ド又は化粧品と しての 請求の範囲第 6項乃至第 1 1 項のいずれかに記載の組成物。