WO2003002584A1

WO2003002584A1 - Nouveaux analogues de galactosylceramide et activateurs de $g(b)-glucocerebrosidase, preparations externes pour la peau et procede d'activation de $g(b)-glucocerebrosidase au moyen d'analogues

Info

Publication number: WO2003002584A1
Application number: PCT/JP2002/006532
Authority: WO
Inventors: Rie Uematsu; Fumio Nakajima; Masahiro Yoshida; Kyoko Fukunaga; Mariko Hara; Shintaro Inoue; Shinichiro Nishimura
Original assignee: Kanebo, Limited
Priority date: 2001-06-28
Filing date: 2002-06-27
Publication date: 2003-01-09
Also published as: US20040242499A1; JP2003012684A; CN1522263A; CN1247605C; US7183261B2; TW201002734A; JP4070966B2; EP1408045B1; KR100739250B1; TWI322151B; DE60232449D1; KR20040048381A; EP1408045A1; HK1067642A1; US20070111951A1; EP1408045A4

Description

明細書

新規ガラクトシルセラミド類縁体、これらを用いた i3—ダルコセレブ口シダ一ゼ活性化剤、皮膚外用剤及び /3—ダルコセレブロシダーゼ活性化方法

技術分野

本発明は、新規ガラクトシルセラミド類縁体、これらを用いた /3—ダルコセレプロシダ一ゼ活性化剤、皮膚外用剤及び) 3—ダルコセレブロシダーゼ活性化方法に関する。さらに詳しくは、特定のガラクトシルセラミド類縁体によって表皮中の) 3—ダルコセレブ口シダ一ゼを活性化する) 3—ダルコセレブロシダ一ゼ活性化剤、皮膚外用剤及び /3—ダルコセレブ口シダ一ゼ活性化方法に関し、これらは、荒れ肌および各種皮膚疾患の改善が期待される。

背景技術

荒れ肌（乾燥肌）とは、一般に角質細胞の剥離現象が認められる乾燥状態の皮膚をいう。このような荒れ肌はコレステロール、セラミド、脂肪酸等の角質細胞間脂質の溶出、および紫外線、洗剤等に起因する角質細胞の変性や表皮細胞の増殖 ·角化バランスの崩壊による角層透過バリアの形成不全等によって発生する。この荒れ肌を予防または治癒する目的で、角質細胞間脂質成分又はそれに類似する合成の角質細胞間脂質を供給したり、表皮増殖因子（E G F ； Ep i derma l Growth Fac t or)等の表皮細胞増殖 ·角化調節物質などを投与するなどの研究が行われている。

この角層細胞間脂質は、有棘層と顆粒層の細胞で生合成された層板顆粒が、角層直下で細胞間に放出され、伸展し、層板（ラメラ）構造をとり、細胞間に広がつたものである。層板顆粒はダルコシルセラミド、コレステロール、セラミド、リン脂質等から構成されるが、角層細胞間脂質にはダルコシルセラミドは殆ど含まれていない。すなわち、層板顆粒中のダルコシルセラミドは、）3—ダルコセレプロシダ一ゼによって加水分解を受け、セラミドに変換され、このセラミドがラメラ構造をとる結果、角層細胞間脂質として角層透過バリアの形成を改善し、荒れ肌防御のバリアの働きを持つと考えられる。たとえば、 /3—ダルコセレブ口シダーゼを遺伝的に完全に欠損したゴーシェ病タイプ 2の疾患患者では病的荒れ肌が観察され、また、その表皮の組織学的研究によって角層細胞間脂質のラメラ構造に異常が認められている。また、 i3—ダルコセレブ口シダーゼを人為的に欠損させたトランスジエニックマウスでも角層細胞間脂質のラメラ構造の異常と荒れ肌の相関が認められている。さらに実験的にも、）3—ダルコセレブ口シダ一ゼを阻害した場合に荒れ肌と角層細胞間脂質のラメラ構造の異常が観察されている。これらの諸事実より正常な角層透過バリァの形成にはダルコシルセラミドが) 3— ダルコセレブ口シダ一ゼによってセラミドに加水分解されることが必要であるといわれている。従って、 3—ダルコセレブロシダーゼを活性化させることによつて、角層透過バリアの形成が改善され、その結果として荒れ肌を改善することが可能であると考えられる。

このような背景にあって、 ]3—ダルコセレブ口シダ一ゼの活性化因子として、従来、モルモット脾臓から発見された S A P— 2やヒトゴ一シェ病脾臓から発見された A 1 aやサボシン Cが知られている。

しかし、これら活性化因子はタンパク質であってこれらを外用して表皮の i3— ダルコセレブロシダーゼを活性化させることは経皮吸収性や安全性の点で大きな問題がある。また、これらのタンパク質を単離して産業上利用することはコスト面より極めて困難である。

一方、タンパク質以外の i3—ダルコセレブ口シダーゼ活性化因子としては、 β —ガラクトシルセラミドが知られている。

しかし、現実的に利用可能な /3—ガラクトシルセラミドは、牛脳抽出物由来であり、これを外用に用いることは、安全性の点で大きな問題がある。また、 /3— ガラクトシルセラミドの大量合成は極めて難しく高コストであることが、産業上利用する上での欠点となっていた。

従って、本発明の目的とするところは、 /3—ダルコセレブ口シダーゼを活性化させることによって、角層透過バリアの形成が改善され、その結果として荒れ肌改善効果が期待される、容易に入手可能な 3—ダルコセレブ口シダーゼ活性化剤、皮膚外用剤及び 0—ダルコセレブロシダーゼ活性化方法を提供するにある。

発明の開示

そこで本発明者らは、上記の事情に鑑み、従来の問題を解決する方法を鋭意研究した結果、後記特定の化合物によって意外にも表皮中の) 3—ダルコセレブ口シダーゼを極めて容易に、強く活性化できることを見出し、本発明を完成するに至つた。

すなわち、本発明は、下記一般式（1 ) 又は（2 ) で示されるガラクトシルセラミド類縁体、これらを用いた) 3—ダルコセレブ口シダーゼ活性化剤、皮膚外用

剤及び /3—ダルコセレブロシダーゼ活性化方法にある。

(伹し、 X、 Υは、 S又は〇であり、 R R²は炭素数 9 〜 3 5のアルキル基又はアルケニル基である。 R³は、炭素数 2 〜 3 0のアルキル基又はアルケニル基である。）

図面の簡単な説明

'第 1図は、表皮細胞の ]3—ダルコセレブ口シダーゼ活性化能測定試験（試験例 1) の結果を示す図である。第 2図は、 UVBによる荒れ肌に対する実施例 4の化合物塗布の効果（試験例 2の結果）を示す図である。第 3図は、 UVBによる荒れ肌に対する実施例 4の化合物塗布の効果（試験例 2の結果）を示す図である。

発明を実施するための最良の形態

本発明で用いられるガラクトシルセラミド類縁体は、前記一般式（1)又は（2) で表わされる。 X Yは硫黄原子又は酸素原子であり、効果の点からは硫黄原子であることが好ましい。 R¹及び R²は、炭素数 9 35であり、好ましくは 14 22、最も好適には炭素数 16 20である。 R³は、炭素数 2 30であり、好ましくは炭素数 14 22、最も好適には炭素数 6 14である。また、 R¹, R² R³は、飽和であっても、不飽和であっても良い。具体的には、下記一般式（3) （6) の化学式で表わされるものを挙げることができる。

これらの化合物は、公知のアミド合成方法で容易に製造することができる。例えば、合成方法の概略を示すとすれば、二本のアルキル鎖を有する一般式（2 ) で示される化合物は、ァミン、カルボン酸部分を保護したセリン又はシスティンに、ダルコシル化反応によりガラクト一スを導入した後、アミノ基部分の脱保護及び縮合反応により一つのアルキル基を導入し、続いてカルボン酸の保護基を除去し、三塩化リンを作用させ酸クロライドとした後、第一ァミンと反応させ製造することができる。また、一本鎖の化合物を有する一般式（1 ) で示される化合物も同様に製造することができる。本発明に係る /3—ダルコセレブ口シダーゼ活性化剤とは、荒れ肌を改善するための有効成分として、上記一般式（1 ) 又は（2 ) で示されるガラクトシルセラミド類縁体を 1種又は 2種以上含有する組成物である。本発明に係る /3—ダルコセレブ口シダーゼ活性化剤、皮膚外用剤は、軟膏、口ーシヨン、乳液、ミルク、パップ剤、パック、ミスト、フォーム、顆粒、粉末、ゲル等種々の剤形とすることができる。なお、本発明において、皮膚外用剤とは、頭皮を含む身体のすべての皮膚を対象とするものであり、入浴剤を包含するものである。基材は一般に用いられる外用基剤ならば特に制限されない。また、最終形態は、化粧料、医薬品、医薬部外品とすることができる。

ガラクトシルセラミド類縁体の /3—ダルコセレブロシダーゼ活性化剤、皮膚外用剤への配合量は、組成物総量を基準として、全組成量の 0 . 0 0 5〜5 . 0質量％が好ましく、 0 . 0 1〜3 . 0質量％が更に好ましい。 0 . 0 0 5質量％未満の配合量では本発明の目的とする効果が充分でない場合があり、一方、 5 . 0 質量％を超えてもその増加分に見合った効果の向上はない場合がある。実施例

以下、実施例により詳細に説明する。なお、本発明は以下の実施例に何ら限定されるものではない。実施例 1

N- [2— /3— D-ガラク卜ビラノシルチオ _ 1 _ (テトラデシルカルバモイル）ェチル] ォク夕デカノィルアミド [一般式（5) の化合物] の製造

(1) 1， 2, 3， 4， 6 _ペン夕一0—ァセチルー )3—D—ガラクトピラノシド 300mgと 2— (ベンジルォキシカルボニルァミノ） _ 3—メルカプトプロピオン酸メチル 43 Omgをクロ口ホルム 4m Lに溶かし、 0 まで冷却した後、 ≡フッ化ホウ素ジェチルエーテル錯体 1. 3 mLを加え室温で 20時間攪拌した。反応混合液にクロ口ホルムを加え、飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液と飽和食塩水で洗浄した。残査を分取薄層クロマトグラフィー（展開溶媒； n—へキサン：酢酸ェチル =3 ： 2) で精製することによって、 2— (ベンジルォキシカルポニルァミノ）一 3— (2， 3, 4, 6—テトラー O—ァセチルー /3—D—ガラクトビラノシルチオ）プロピオン酸メチルを 37 Omg得た。

(2) 2— (ベンジルォキシカルポニルァミノ） — 3— (2, 3, 4, 6—テトラ一 O—ァセチルー )3—D_ガラクトビラノシルチオ）プロピオン酸メチル 37 Omgを 1， 4一ジォキサン 5 mLとメタノール 5 mLの混合溶媒に溶かし、 2 0%水酸化パラジウムカーボン 20 Omgを加え、水素気流下で 18時間攪拌した。セライト™を用いて不溶物を濾別した後、濾液を減圧濃縮した。残渣を DMF 6mLに溶かし、ステアリン酸 1 93mg、 EDC [； 1 _ェチル _ 3— （3— ジメチルァミノプロピル）カルポジイミド] 1 80mg、 HOB t (； 1ーヒドロキシベンゾトリァゾール） 140mgを加え、室温で一晩攪拌した。反応混合液を酢酸ェチルで抽出し、 2mo 1ZL塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、酢酸ェチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下で溶媒を留去した。最後に得られた残渣を中圧力ラムクロマトグラフィー（溶出溶媒； n—へキサン：酢酸ェチル =4 ： 1) で精製することによって、 2— (ォクタデカノィルァミノ） _ 3— (2, 3, 4, 6—テトラー O—ァセチル— )3— D—ガラクトピラノシルチオ）プロピオン酸メチルを 31 3mg得た。

(3) 2 - (ォク夕デカノィルァミノ）一 3— (2, 3， 4, 6—テトラ一 O— ァセチルー /3— D—ガラクトピラノシルチオ）プロピオン酸メチル 31 3mgをピリジン 6mLに溶かし、ヨウ化リチウム 5 1 5mgを加えた後、窒素雰囲気下、 4時間加熱還流した。反応混合液を酢酸ェチルで抽出し、 2mo 1/L塩酸で洗浄後、酢酸ェチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下溶媒を留去した。最後に得られた残渣を中圧力ラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；クロロホルム：メタノール = 15 : 1) で精製することによって、 2— （ォク夕デカノィルァミノ） _3— （2, 3, 4， 6—テトラ一 O—ァセチル一 /3—D—ガラクトピラノシルチオ）プロピオン酸を 247mg得た。

(4) 2 - (ォクタデカノィルァミノ）一3— (2, 3， 4， 6—テトラ一 O— ァセチルー /3—D—ガラクトビラノシルチオ）プロピオン酸 247mgを DMF4 mLに溶かし、 n—テトラデシルァミン 8 Omg、 EDC 100mg、 HOB t 8 Omgを加え、室温にて 17時間攪拌した。反応混合液を酢酸ェチルで抽出し、 2mo 1/L塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、酢酸ェチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下で溶媒を留去した。最後に得られた残渣を中圧力ラムクロマトグラフィー（溶出溶媒； n—へキサン：酢酸ェチル = 3 : 1) で精製することによって、 N— [1— (テトラデシルカルバモイル） -2- (2, 3， 4， 6—テトラ一〇一 3— D—ガラクトピラノシルチオ）ェチル] ォク夕デカノィルアミドを 278mg得た。

(5) N— [1— (テトラデシルカルバモイル） —2— (2, 3， 4, 6—テトラ一〇一0— D—ガラクトビラノシルチオ）ェチル] ォク夕デカノィルアミド 27 8mgを THF 5 mLとメタノール 5 mLの混合溶媒に溶かし、 28%ナトリウムメチラ一トメ夕ノール溶液を触媒量加え、室温で 1時間攪拌した。反応混合液を陽イオン交換樹脂（ダウエックス 50— X8) を用いて中和した後、樹脂を濾別し、濾液を減圧濃縮した。最後に得られた残渣をメタノールで結晶化することによって、 N— [2- (/3—D—ガラクトビラノシルチオ）一 1— (テトラデシル力ルバモイル）ェチル] ォク夕デカノィルアミドを白色の結晶として 202mg 得た。

NMR (DMSO-d₆) δ 0. 86 (t， 3H, J = 5. 9Hz) , 1. 24 (s, 46 H) , 1. 35 - 1. 55 (m, 4H) ， 2. 15— 2. 50 (m, 2H) ， 3. 71 (b s， 1 H) , 4. 24 (d t, 1 H) , 7. 71 (b t ,

1H) ， 7. 92 (d、 1H、 J = 7. 9Hz) .

TOF-MS ： m/z 768 (M + N a) +, 784 (M + K) ⁺.

元素分析値（C_4lH_8QN₂0₇S - 1/10H₂Oとして）

計算値（％) C， 65. 93 ； H， 10. 82 ； N， 3. 75 ； S, 4. 29 実測値（％) C， 65. 67 ； H, 10. 82 ； N, 3. 68 ； S, 4. 29. 実施例 2

N- [2- ()3— D—ガラクトビラノシルォキシ）ェチル] ォク夕デカノィルアミド [一般式（4) の化合物] の製造：

(1) 1, 2, 3， 4， 6—ペン夕一〇_ァセチル一) 3-D—ガラクトピラノシド 1. 88と2_ (ベンジルォキシカルボニルァミノ）エタノール 1. 28を1, 2—ジクロ口ェ夕ン 1 OmLに溶かし、 0 まで冷却した後、三フッ化ホウ素ジェチルエーテル錯体 3. 6mLを加え室温で 17時間攪拌した。反応混合液にクロロホルムを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒； n—へキサン：酢酸ェチル =3 ： 1) で精製することによって、 2— (2, 3, 4， 6— O—テトラ—ベンゾィル— /3—D_ガラクトビラノシルォキシ）ェチルカルバミン酸ベンジルを 1. 3 g得た。

(2) 2— (2, 3， 4， 6—〇一テトラ一ベンゾィルー) 3— D—ガラクトピラノシルォキシ）ェチルカルバミン酸べンジル 25 Omgを 1 , 4一ジォキサン 3 mLとメタノール 3mLの混合溶媒に 20 %水酸化パラジウムカーボン 17 Om gを加え、水素気流下で 18時間攪拌した。セライト™を用いて不溶物を濾別した後、濾液を減圧濃縮した。残渣を DMF 5mLに溶かし、ステアリン酸 123m g、 EDC 90mg、 H〇B t 75mgを加え、室温で一晩攪拌した。反応混合液を酢酸ェチルで抽出し、 2mo 1/L塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、酢酸ェチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下で溶媒を留去した。最後に得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒； n—へキサン：酢酸ェチル = 1 ： 1) で精製することによって、 N— [2 一（2, 3, 4， 6—テトラー 0_ベンゾィル _/3— D—ガラクトビラノシルォキシ）ェチル] ォク夕デカノィルアミドを 103mg得た。

(3) N— [2— (2, 3, 4, 6—テトラー〇一ベンゾィルー ]3— D—ガラクトピラノシルォキシ）ェチル] ォク夕デカノィルアミド 103mgを 1, 4ージォキサン 2 mLとメタノール 2 mLの混合溶媒に溶かし、 28%ナトリウムメチラ一トメ夕ノール溶液を触媒量加え、室温で 4時間攪拌した。反応混合液を陽ィォン交換樹脂（ダウエックス¹"50—X8) を用いて中和した後、樹脂を濾別し、濾液を減圧濃縮した。最後に得られた残渣をメタノールで結晶化することによって、 N— [2 - (0— D—ガラクトビラノシルォキシ）ェチル] ォク夕デカノィルアミドを白色の結晶として 59mg得た。

NMR (DMSO— d₆) (5 : 0. 84 ( t , 3Η, J = 6. 4H z) , 1. 26 (s， 28H) , 1. 45- 1. 50 (m, 2 H) , 2. 04 (t， 2H, J = 7. 5Hz) , 3. 40 -3. 50 (m, 3H) , 3. 61 (b s , 1H) , 3. 68 (d t , 1H， J = 5. 8， 10. 2Hz) ， 4. 05 (d， 1 H, J = 6. 7Hz) , 4. 32， 4. 56, 4. 67， 4. 81 (4 b s , 4H) , 7. 7 2 ( t , 1 H, J = 5. 6Hz) .

TOF-MS ： m/z 512 (M + Na) +， 528 (M + K) ⁺.

元素分析値（C₂₆H₅₁N0₇- 1 5H₂0として）：

計算値（％) C， 63. 31 ； H， 10. 50 ； N, 2. 84

実測値（％) C, 63. 14 ； H, 10. 22 ； N, 2. 86. 実施例 3

N— [2 - (/3—D—ガラクトビラノシルチオ）ェチル] ォク夕デカノィルアミド [一般式（3) の化合物] の製造：

(1) 2 - (2, 3， 4， 6—テトラー〇一ベンゾィル一 )3— D—ガラクトビラノシルチオ）ェチルカルバミン酸べンジル 1. 0 gをメタノール 1 OmLと 1， 4 一ジォキサン 1 OmLの混合溶媒に溶かし、水酸化パラジウム 1 gを加え、水素気流下で 6時間攪拌した。セライト™にて不溶物を濾別した後、濾液を減圧濃縮した。残渣を DMF 1 OmLに溶かし、ステアリン酸 432mg、 EDC 364m g、 HOB t 257mgを加え、室温にてー晚攪拌した。反応混合液をクロロホルムで希釈し、 2mo 1 ZL塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、クロ口ホルム層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下で溶媒を留去した。最後に得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒； n—へキサン：酢酸ェチル =3 ： 1) で精製することによって、 N— [2 - (2， 3， 4, 6—テトラー O—ベンゾィル _i3—D—ガラクトビラノシルチオ）ェチル] ォクタデカノィルアミドを 442mg得た。

(2) N- [2 - (2, 3， 4, 6—テトラ一〇一ベンゾィル一 )3—D—ガラクトビラノシルチオ）ェチル] ォク夕デカノィルアミド 44 Omgを 1， 4—ジォキサン 1 OmLとメタノール 1 5 mLの混合溶媒に溶かし、 28%ナトリウムメチラートメタノール溶液を触媒量加え、室温で 2時間攪拌した。反応混合液を陽ィオン交換樹脂（ダウエックス⁷"50— X8) を用いて中和した後、樹脂を濾別し、濾液を減圧濃縮した。最後に得られた残渣をメタノールで結晶化することによつて、 N— [2- (]3—D—ガラクトピラノシルチオ）ェチル] ォクタデカノィルァミドを白色の結晶として 209mg得た。

NMR (DMSO - d₆) (5 : 0. 85 ( t , 3H, J = 6. 6Hz) , 1. 26 (s， 30 H) , 1. 45 - 1. 50 (m, 2 H) , 2. 00— 2. 1 0 ( t , 2 H, J = 7. 2Hz) , 2. 55 - 2. 70 (m, 2H) ， 3. 20 - 3. 2 5 (m， 2H) , 3. 30- 3. 40 (m， 2 H) , 3. 45— 3. 50 (m， 2H) , 3. 68 (b s , 1 H) ， 4. 20 (d， 1 H, J = 9. 0Hz) , 4. 37 (d, 1H, J =4. 8 H z ) ， 4. 55 (d, 1 H, J = 5. 4H z ) ， 4. 76 (d, 1 H, J = 5. 4Hz) , 4. 92 (d， 1 H, J = 5. 4Hz) ， 7. 84 (b t， 1 H) .

TOF-MS ： m/z 528 (M + Na) ⁺, 544 (M + K) +·

元素分析値（C₂₆H₅₁N〇₆Sとして）：

計算値（％) C， 6 1. 75 ； H, 10. 16 ； N2. 77 ； S, 6. 34 実測値（％) C， 6 1. 65 ; H， 10. 1 0 ； N 2. 77 ； S, 6. 35 実施例 4

N- [2- ( )3— D—ガラクトピラノシルォキシ） _ 1 _ (へキシルカルバモイル）ェチル] ォクタデカノィルアミド [一般式（6) の化合物] の製造：

(1) 2 - (2, 3， 4, 6—テトラ一〇一ベンゾィル一;3— D—ガラクトビラノシルチオ）ェチルカルバミン酸べンジル 2. 4 gと 3—ヒドロキシー 2— (ォク夕デカノィルァミノ）プロピオン酸メチル 1 gをクロ口ホルム 35mLに溶かし、 0 まで冷却した後、 N—ョードコハク酸イミド 1. 4 gとトリフルォロメタンスルホン酸 0. 1 3mLを加え、室温にて 3時間攪拌した。次いで、反応液にクロロホルムを加え、飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液と 10 %チォ流酸ナトリゥム水溶液で洗浄した。クロ口ホルム層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、硫酸マグネシウムを濾別し、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒； n—へキサン：酢酸ェチル =3 ： 1) で精製することによって、 2— (ォク夕デカノィルァミノ）一 3— (2, 3， 4， 6—テトラ一 O—ベンゾィル _ )3— D—ガラクトビラノシルォキシ）プロピオン酸メチルを 1. 4 g得た。

(2) 2— (ォク夕デカノィルァミノ）一 3— (2, 3， 4， 6—テトラ一〇一ベンゾィルー) 3— D—ガラクトビラノシルォキシ）プロピオン酸メチル 1. 4 g をピリジン 26mLに溶かし、ヨウ化リチウム 1. 7 gを加えた後、窒素雰囲気下で 4時間加熱還流した。反応混合液にクロ口ホルムを加え、 2mo l /L塩酸で洗浄し、クロ口ホルム層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下溶媒を留去した。最後に得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；クロ口ホルム：メタノール = 60 : 1) で精製することによって、 2— (ォク夕デカノィルァミノ）一 3 _ (2, 3, 4， 6—テトラ一〇一ベンゾィルー /3 _D—ガラクトビラノシルォキシ）プロピオン酸を 94 Omg得た。

(3) 2— (ォク夕デカノィルァミノ）一 3— (2, 3， 4， 6—テトラー O— ベンゾィル一 /3— D—ガラクトビラノシルォキシ）プロピオン酸 94 Omgを D MF l OmLに溶かし、 n—へキシルァミン 1 2 Omg、 EDC 285mg、 H OB t 20 lmgを加え、室温にて 4時間攪拌した。反応混合液にクロ口ホルムを加え、 2 mo 1 ZL塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、クロ口ホルム層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下で溶媒を留去した。最後に得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒； n—へキサン：酢酸ェチル = 3 ： 1) で精製することによって、 N— [1— (へキシルカルバモイル）一 2— (2, 3, 4, 6—テトラー 0—ベンゾィル—]3—D—ガラクトビラノシルォキシ）ェチル] ォク夕デカノィルアミドを 295mg得た。

(4) N- [ 1 - (へキシルカルバモイル） —2— (2, 3, 4， 6—テトラ— 〇一ベンゾィル一/3—D—ガラクトピラノシルォキシ）ェチル] ォクタデカノィルアミド 290mgを 1, 4 _ジォキサン 5 mLとメタノール 5 mLの混合溶媒に溶かし、 28%ナトリウムメチラートメタノール溶液を触媒量加え、室温で 3時間攪拌した。反応混合液を陽イオン交換樹脂（ダウエックス 50—X8) を用いて中和した後、樹脂を濾別し、濾液を減圧濃縮した。最後に得られた残渣を蒸留水で結晶化することによって、 N_ [2- ()3_D—ガラクトビラノシルォキシ） - 1 - (へキシルカルバモイル）ェチル] ォクタデカノィルアミドを白色の結晶として 144mg得た。

NMR (DMSO— d₆) 6 : 0. 85 ( t , 6H， J = 6. OHz) ， 1. 24 (s, 34H) ， 1. 30 - 1. 40 (m， 2 H) , 1. 40— 1. 50 (m, 2H) , 2. 1 0- 2. 1 5 (m, 2 H) , 3. 00 - 3. 1 0 (m， 2 H)

3. 34 ( t， 1 H, J = 6. 6Hz) , 3. 45— 3. 55 (m， 3H) ， 3 62 (b s , 1H) ， 3. 89 (dd, 1 H， J =4. 8， 10. 2Hz) , 4 07 (d， 1 H, J = 7. 2Hz) , 4. 35 (d, 1 H， J =4. 8Hz)

4. 40 (d t , 1 H, J = 5. 4， 7. 8Hz) ， 4. 55 ( t , 1 H, J =

5. 4Hz) ， 4. 69 (d， 1 H， J = 5. 4Hz) ， 4. 85 (d, 1 H, J = 3. 6Hz) , 7. 67 ( t , 1H， J = 5. 4Hz) , 7. 85 (d, 1 H， J = 8. 4Hz) .

TOF-MS ： m/z 639 (M + Na) +, 655 (M + K)

元素分析値（C₃₃H₆₄N₂0₈として）：

計算値（％) C， 64. 25 ； H 10. 46 ； N, 4. 54 実測値（％) C， 64. 02 ； H 10. 32 ； N, 4. 55

試験例 1 表皮細胞の /3—ダルコセレブロシダーゼ活性化能測定試験

( 1 ) 方法

(a) 培養表皮細胞

ヒト正常表皮角化細胞は市販されているもの（Ep i d e r c e 1 1™：クラボゥ社製）を用いた。

(b) 細胞培養用培地

培地としては Me d i uml 54 S (クラボウ社製）、又増殖因子としてこれに添加する添加剤 HKGS (クラボウ社製）を用いた。

( c ) He p e s緩衝液の調製

He p e s 7. 15 g、グルコース 1. 8 g、塩化カリウム 0. 22 g、塩化ナトリウム 7. 7 g、リン酸水素ニナトリウム · 12水和物 0. 27 gを精製水に溶解し、 1 mo 1 ZL水酸化ナトリウム水溶液にて pH 7. 4に調整後、 1 L にメスアップした。

(d) 細胞培養

ヒト正常表皮細胞の細胞数を Me d i uml 54 Sにて 2. 5 X 1 O SZmL に調整し、 6 Ommコラーゲンコートプレート（ファルコン社製）に 4mLずつ播種し、 95%空気（VZV) — 5%炭酸ガス（VZV) の雰囲気下、 37°Cで 4日間静置培養した。

培養上清を吸引除去し、前記実施例 1、 2、 4で製造した各薬剤の 200 m o 1 ZLのエタノール溶液を終濃度 5 mo 1 ZLとなるように添加した M e d i urn 154Sを 4mLずつ各ディッシュに加えた。このディッシュを 95 %空気（VZV) — 5%炭酸ガス（VZV) の雰囲気下、 37 で 4日間静置培養した。また、ガラクトシルセラミド類縁体を含有しないエタノールのみを比較例 1 とした。

(e) 粗酵素液の抽出

培養上清を吸引除去し、 lmLのリン酸緩衝生理食塩水で 2回洗浄した後、細胞をセルスクレーパー（住友ベークライト社製）でディッシュからかきとった。これに 0. lmmo 1 ZLフッ化フエ二ルメチルスルホニル含有リン酸緩衝生理食塩水を添加し、超音波処理装置（ソニックスアンドマテリアルズ社製）で破砕し、遠心上清を粗酵素液として回収した。

(f) β-ダルコセレブ口シダーゼ活性測定

ミエルとファンデルフルクの方法（プリティッシュ ·ジャーナル ·ォブ ·デルマトロジ一、 95巻、頁 271— 274、 1976年）に準じて測定した。すなわち、粗酵素液 50 Lに、 1 0 Ommo 1ノ Lクェン酸— 2 0 Ommo 1 L リン酸緩衝液（pH 5. 6) を 5 00 Lと、 1 Ommo 1 ZLタウロコール酸 - 1 0 Ommo 1 ZLクェン酸— 20 Ommo 1 ZLリン酸緩衝液（pH 5. 6) 500 zLを加えて、 37°Cで 10分間加温した。次いで 0. Smmo lZLの 4—メチルゥンベリフェル—) 3— Dダルコシド（シグマ社製）を 50 /L加えて、

3 7 で 6 0分間加温した。その後、 2 0 Ommo 1/L炭酸ナトリウム—炭酸水素ナトリウム緩衝液（ρΗΙ Ο. 5) を加え、励起波長 360 nm、吸収波長

450 nmで蛍光強度を測定した。標準品の 4—メチルゥンベリフエロン（シグマ社製）の蛍光強度より作成した検量線をもとに酵素活性を計算した。

(2) 結果

第 1図に示すように、 N— [2 - ()3—D—ガラクトピラノシルォキシ）ェチル] ォク夕デカノィルアミド [実施例 2 ；—般式（4) で示される化合物] 、 N— [2 —)3— D-ガラクトビラノシルチオ一 1 _ (テトラデシルカルバモイル）ェチル] ォク夕デカノィルアミド [実施例 1 ；一般式（5) で示される化合物] 、 N— [2 ― (/3—D—ガラクトピラノシルォキシ） — 1— (へキシルカルバモイル）ェチル] ォクタデカノィルアミド [実施例 4 ；一般式（6) で示される化合物] は、すべて 13—ダルコセレブ口シダーゼ活性化効果が認められた。試験例 2 マウスにおける荒れ肌回復試験

(1) 方法

(a) 実験動物

試験開始時 9週齢のヘアレスマウス 1群 5匹を用いた。 (b) 測定装置及び条件

経皮水分蒸散量（以下、 TEWLと略記する）は、連続発汗測定装置八イド口グラフ AMU— 100 (ケィアンドエス社製）を用いて次のとおりに測定した。 1平方センチメートルのカプセルを皮膚に密着させ、カプセル内に窒素ガスを導入（300mLZm i n) し、カプセルに送り出す前とカプセルから回収した後の窒素ガス中の水蒸気量を測定した。この値の差から、 1分当たり皮膚 1平方センチメートルから蒸散する水分量（mgZcm²) を算出し、 TEWLとした。

(b) 試料と実験方法

基剤（プロピレングリコール：エタノール = 3 ： 7) を用い、実施例 4の化合物 [一般式（6) で示される化合物] を 0. 1 %、 1. 0%の濃度に調製した。この調製後の試料 0. 05 mLを予め TEWLを測定したヘアレスマウスの背部皮膚（直径 2. 5 cm) に 1日 1回、一週間に 5回の頻度で 4週間連続の塗布を行なった。その後、事前塗布の最終塗布から 3日目に紫外線 B波長（UVB) を 0. 15 JZcm²、 1回照射した。 UVB照射前、照射後 3及び 4日目の TEW Lを測定し、基剤塗布前の TEWLに対する比率で比較評価した。

(2) 結果

第 2図及び第 3図に示すように、 N— [2- (0— D—ガラクトピラノシルォキシ） — 1— (へキシルカルバモイル）ェチル] ォク夕デカノィルアミド [実施例 4の化合物；一般式（6) の化合物] は、 1. 0%の濃度で p<0. 01 (Du nn e t t多重検定）の危険率で、基剤のみと比して有意に T EWLの値が減少し、荒れ肌が改善されていた。

実施例 5

実施例 1〜4で得たガラクトシルセラミド類縁体の 10%エタノール溶液 10 gを湯浴で 8 Ot:に加温し、混合した下記成分を加えて 100 gの 4種のローシヨンを得た。乳酸 0. 3 g クェン酸ナトリウム 0 . 1 g

グリセリン 2 . 0 g

防腐剤、香料及び界面活性剤適量

精製水 1 0 0 gを総量とする残量産業上の利用可能性

以上記載の如く、本発明は簡便かつ容易に合成可能な、表皮の 0—ダルコセレブロシダーゼ活性化剤を提供できることは明らかである。また、本発明によって荒れ肌の予防と防御および各種皮膚疾患の改善が可能となる。

Claims

請求の範囲

1. 下記一般式（1) 又は（2) で示されるガラクトシルセラミド類縁体。

(但し、 X Yは、 S又は〇であり、 R R²は炭素数 9 35のアルキル基又はアルケニル基である。 R³は、炭素数 2 30のアルキル基又はアルケニル基である。）

2. 下記構造式（3) で表されるガラクトシルセラミド類縁体。

3. 下記構造式（4) で表されるガラクトシルセラミド類縁体。

(4)

4. 下記構造式（5) で表されるガラクトシルセラミド類縁体。

5. 下記構造式（6) で表されるガラクトシルセラミド類縁体。

(₆₎

6. 請求の範囲 1項記載のガラクトシルセラミド類縁体を含有することを特徴とする皮膚外用剤。

7. 請求の範囲 1項記載のガラクトシルセラミド類縁体を有効成分とする 3—グルコセレブロシダーゼ活性化剤。

8. 一般式（1) 又は（2) で示されるガラクトシルセラミド類縁体を 0. 00 5〜5. 0質量％含有する特許請求の範囲 6項記載の皮膚外用剤。

9. 一般式（1) 又は（2) で示されるガラクトシルセラミド類縁体を 0. 01 〜 3. 0質量％含有する特許請求の範囲 6項記載の皮膚外用剤。

10. —般式（1) 又は（2) で示されるガラクトシルセラミド類縁体を 0. 0 05〜5. 0質量％含有する特許請求の範囲 7項記載の )3—ダルコセレブロシダーゼ活性化剤。

1 1. 一般式（1) 又は（2) で示されるガラクトシルセラミド類縁体を 0. 0 1〜 3. 0質量％含有する特許請求の範囲 7項記載の β -ダルコセレブ口シダ一ゼ活性化剤。

12. —般式（1) 又は（2) で示されるガラクトシルセラミド類縁体を皮膚に適応し、）3—ダルコセレブロシダーゼを活性化することを特徴とする /3—ダルコセレブロシダーゼ活性化方法。

13. —般式（1) 又は（2) で示されるガラクトシルセラミド類縁体を 0. 0 05〜5. 0質量％含有する組成物を用いることによる特許請求の範囲 12項記載の ]3—ダルコセレブ口シダーゼ活性化方法。

14. 一般式（1) 又は（2) で示されるガラクトシルセラミド類縁体を 0. 0 1〜3. 0質量％含有する組成物を用いることによる特許請求の範囲 12項記載の /3—ダルコセレブ口シダ一ゼ活性化方法。

15. ]3—ダルコセレブロシダーゼを活性化させることで皮膚の荒れを改善する方法であって、一般式（1) 又は（2) で示されるガラクトシルセラミド類縁体を皮膚に適応することを特徴とする荒れ肌改善方法。