1322151 五、發明說明（1 ) 技術領域 本發明係關於一種新穎半乳糖苷神經醯胺同類物；使用 €些之；S-葡萄糖腦苷酯酶活性化劑、皮膚外用劑及/3 -葡 萄糖腦苷酯酶活性化方法。進一步詳言之，係關於一種藉 由特定之半乳糖苷神經醯胺同類物以活性化表皮中之召· 葡萄糖腦苷酯酶之Θ -葡萄糖腦苷酯酶活性化劑、皮膚外 用劑及；β -葡萄糖腦苷酯酶活性化方法。此等被期待用以 改善粗糙皮膚及各種皮膚疾病。 習知技術 所謂粗糙皮膚（乾燥皮膚），一般係指經確認具有角質 層細胞剝離現象之處於乾燥狀態的皮膚。此類粗糙皮膚之 \ 發生原因係膽固醇、神經醯胺、脂肪酸等之角質層細胞間 脂質之溶析，以及肇因於紫外線、淸潔劑之角質層細胞之 變性或因表皮細胞之增殖•角化失衡所導致之角質層穿透 障礙之形成不全等。以預防或治療此粗糙皮膚爲目的，已 進行供給角質層細胞間脂質成分或與其類似之合成角質層 細胞間脂質、或投與表皮增殖因子（EGF; Epidermal Growth Factor )等之表皮細胞增殖•角化調節物質等之 硏究。 該角質層細胞間脂質，係由棘細胞層與粒層之細胞所生 合成之層板顆粒，釋放於角質層正下方之細胞間隙，並延 伸形成層板（lamella)結構，而擴散於細胞間隙者。層 板顆粒雖係由葡萄糖苷神經醯胺、膽固醇、神經醯胺、磷 1322151 五、 發明說明 (2) 脂 質 等 所 構 成，但角質層細胞間脂質中幾乎不含 葡 萄 糖 苷 神 經 醯 胺 0 亦即，層板顆粒中之葡萄糖苷神經 醯 胺 因 β -葡萄糖腦苷酯酶而被水解並轉變爲神經醯胺 e 而 該 神 經 醯 胺 形 成 層板結構之結果，做爲角質層細胞間脂 質 被 認 爲 可改 善 角 質層穿透障礙之形成，具有粗糙皮膚 防 禦 障 礙 之 機 能 〇 例如，在葡萄糖腦苷酯酶遺傳上完 全 缺 失 ( dele t i on ) 之高歇病（Gaucher's disease)第 2 型 之 患 者 中 可 觀 察到病態之粗糙皮膚。又，藉由該表 皮 之組 織 學 硏究 確 認角質層細胞間脂質之層板結構的異 常 〇 又 y 在 β -葡萄糖腦苷酯酶以人爲方式使其缺失之轉 殖 基 因 小 鼠 中 亦 確 認角質層細胞間脂質之層板結構的異 常 與粗 糙 皮 膚 間 之 關 連性。進一步，實驗中，在/3 -葡萄 糖 腦 苷 酯 酶 受 抑 制 時 ，亦觀察到粗糙皮膚與角質層細胞間 脂 質 之 層 板 構 造 的 異 常。根據此諸事實，一般認爲在形成 正 常 之 角 質 層 穿 透 障 礙時，葡萄糖苷神經醯胺必須藉由冷- 葡 萄 糖 腦 苷 酯 酶 水 解爲神經醯胺。因此，藉由活性化泠- 葡 萄 糖 腦 苷 酯 酶 » 被認爲可改善角質層穿透障礙之形成 其 結 果 可改 善 粗 糙 皮膚。 在 此 背 景 下，過去，已知自豚鼠脾臟所發現之 SAP- 2 或 人 類 筒 歇 病 脾臟所發現之Ala或SaposinC爲召- 葡 萄 糖 腦 苷 酯 酶 之活性化因子。 惟 此 等 活性化因子係蛋白質，外用此等以活性化 表 皮 之 β -葡萄糖腦苷酯酶，存在經皮吸收性或安全 -4- 上 之 重 大 1322151 五、發明說明（3) 問題。又，分離此等蛋白質以供產業上之利用，就成本面 而言極爲困難。 此外，已知半乳糖苷神經醯胺爲非蛋白質之/3-葡萄 糖腦苷酯酶之活性化因子。 惟，實際上可利用之/9 -半乳糖苷神經醯胺係來自牛腦 萃取物，將此等用於外用時，在安全性上存在重大問題。 又，-半乳糖苷神經醯胺之大量合成極爲困難，且成本 過高，而爲產業上利用時之缺點。 因此，本發明之目的係提供一種藉由活性化葡萄糖 腦苷酯酶以改善角質層穿透障礙之形成，其結果可望具有 改善粗糙皮膚之效果，且易於取得之/S-葡萄糖腦苷酯酶 活性化劑、皮膚外用劑及；(3 -葡萄糖腦苷酯酶活性化方法 0 發明揭示 因此，有鑑於上述狀況，本發明人等就解決習知問題之 方法戮力硏究，其結果發現：藉由下述之特定化合物，出 乎意料地可極爲容易、且強力地使表皮中之点-葡萄糖腦 苷酯酶活性化，而完成本發明。 亦即，本發明係一種下述一般式（1)或（2)所示之 万-半乳糖苷神經醯胺同類物；使用這些之A -葡萄糖腦苷 酯酶活性化劑、皮膚外用劑及^ -葡萄糖腦苷酯酶活性化 方法。 1322151 五、發明說明（4)
(其中，X、Y爲S或0;R、R2爲碳原子數9〜35之烷基 或烯基。R3爲碳原子數2〜30之烷基或烯基。） 圖式之簡單說明 第1圖所示爲表皮細胞之葡萄糖腦苷酯酶活性化能 測定試驗（試驗例1 )的結果。第2圖所示爲針對UVB所 引起之粗糙皮膚，塗佈實施例4之化合物的效果（試驗例 2之結果）。第3圖所示爲針對UVB所引起之粗糙皮膚， 塗佈實施例4之化合物的效果（試驗例2之結果）。 實施發明之最佳型態 本發明所使用之半乳糖苷神經醯胺同類物，係由上述一 般式（1)或（2)所示。X、Y爲硫原子或氧原子，就效果 上而言，以硫原子較佳。R1及R2爲碳原子數9〜35,較佳 者爲碳原子數14〜22,最佳者爲碳原子數16〜20。1?3爲 碳原子數2〜30,較佳者爲碳原子數14〜22,最佳者爲碳 原子數6〜14。又，R'、R2、R3可爲飽和’亦可爲不飽和 1322151 五、發明說明（5) 。具體而言，可列舉下述一般式（3)〜（6)之化學式所 示者。
此等化合物，可輕易根據習知之醯胺合成方法而製得。 例如，表示合成方法之槪略時，具有兩股烷鏈之一般式（ 2)所示之化合物可以下述方法製得：在保護胺、羧酸部 分之絲胺酸或半胱胺酸上，藉由轉葡萄糖作用引入半乳糖 後，藉由胺基部分之去保護及縮合反應，引入一個烷基， 其次，去除羧酸之保護基.，並與三氯化磷作用形成酸氯化 物後，再與一級胺反應。又，具有單股化合物之一般式（ 1322151 五、發明說明（6) 1)所示之化合物亦可以相同方法製得。 本發明相關之Θ-葡萄糖腦苷酯酶活性化劑係一種組合 物’其係含有1種或2種以上上述一般式（1)或（2)所 示之半乳糖苷神經醯胺同類物用以做爲改善粗糙皮膚之有 效成分。 本發明相關之Θ -葡萄糖腦苷酯酶活性化劑、皮膚外用 劑’可製成軟膏、化妝水、乳液、乳劑（m i 1 k )、粉撲（ puff)劑、面膜、噴霧、泡沫、顆粒、粉末、凝膠等各種 劑型。又，本發明中，所謂皮膚外用劑係以包含頭皮之身 體所有皮膚爲對象，包含沐浴劑。基材只要是一般所用之 外用基劑即可，並無特殊限制。又，最終型態可做爲化妝 料、醫藥品、半藥品（quasi-drug)。 /3 -葡萄糖腦苷酯酶活性化劑、皮膚外用劑中，半乳糖 苷神經醯胺同類物之混合量，以組成物總量爲基準，以總 組成量之0.005〜5.0質量％爲佳，以0·01〜3·0質量％ 更佳。混合量未滿0,005質量％時，本發明之目的效果有 時將不夠充分；反之，超過5.0質量％時，有時其增加量 亦未能具有相對應效果之提升。 實施例 以下，藉由實施例以詳細說明。又，本發明未受限於以 下之實施例。 實施例1 Ν-〔2-/9-D-吡喃半乳糖苷硫基-1-(十四基甲醯基）乙基 1322151 月“修(更)正替換頁五、發明說明（7) 〕十八醯基醯胺〔一般式（5)之化合物〕之製造 (1) 將1，2,3,4,6-五-0-乙醯基-冷-D_吡喃半乳糖苷 300mg與2-(苄氧羰胺基）-3-氫硫丙酸甲酯43〇mg溶解於 氯仿4raL中，冷卻至0°C後，添加三氟化硼二乙醚配位化 合物l_3mL’並在室溫下攪拌20小時。將氯仿添加於反應 混合液中’以飽和碳酸氫鈉水溶液與飽和食鹽水洗淨。藉 由以分取薄層層析法（展開溶媒：正己垸：乙酸乙醋=3 :2)將殘渣予以精製，製得2-(苄氧羰胺基）-3-(2,3,4,6 -四-0 -乙醯基-召-吡喃半乳糖苷硫基）丙酸甲 醋 370mg 。 (2) 將2-(苄氧羰胺基）-3-(2,3,4,6-四-0-乙醯基-石-D-吡喃半乳糖苷硫基）丙酸甲酯370mg溶解於1，4-二曙烷 5mL與甲醇5mL之混合溶液中，再添加20%氫氧化鈀碳 200mg，並在氫氣流下攪拌18小時。使用析來得TM過濾分 開雜質後，將濾液予以減壓濃縮。將殘渣溶解於DMF6mL 中，添加硬脂酸193mg、EDC〔卜乙基- 3·(3·二甲胺丙基） 碳化二亞胺〕180mg、HOBt ( 1 -羥苯並三唑）140mg，在室 溫下攪拌一晚。以乙酸乙酯萃取反應混合液，以2莫耳/L 鹽酸與飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨後，以無水硫酸鎂將乙酸 乙酯層予以乾燥，其次減壓下去除溶媒。最後藉由使用中 壓管柱層析法（洗析溶媒：正己烷：乙酸乙酯=4: 1)將 所得之殘渣予以精製，製得2-(十八醯胺基）-3-(2,3，4,6· 四-0-乙醯基-冷-D-吡喃半乳糖苷硫基）丙酸甲酯313mg。 1322151 五、發明說明（8) (3) 將2-(十八醯胺基）-3-(2,3,4,6-四-0-乙醯基-/S-D·吡喃半乳糖苷硫基）丙酸甲酯313mg溶解於吡啶6πlL中 ，再添加硕化鋰515mg後，在氮氣氛圍環境下，加熱回流 4小時。以乙酸乙酯萃取反應混合液後，以2莫耳/L鹽酸 洗淨後，以無水硫酸鎂將乙酸乙酯層予以乾燥，其次減壓 下去除溶媒。最後藉由使用中壓管柱層析法（洗析溶媒： 氯仿：甲醇=15: 1)將所得之殘渣予以精製，製得2-(十 八醯胺基）-3-(2，3, 4,6-四-0-乙醯基-/3 -D-吡喃半乳糖苷 硫基）丙酸247mg。 (4) 將2-(十八醯胺基）-3-(2,3,4,6 -四-0-乙醯基- /ίο-吡喃半 乳糖苷硫基）丙酸 247mg 溶解於 DMF4mL 中 ，添加 正十四胺80mg、EDC100mg、HOBt80mg，在室溫下攪拌17 小時。以乙酸乙酯萃取反應混合液，以2莫耳/L鹽酸與飽 和碳酸氫鈉水溶液洗淨後，以無水硫酸鎂將乙酸乙酯層予 以乾燥，其次減壓下去除溶媒。最後藉由使用中壓管柱層 析法（洗析溶媒：正己烷：乙酸乙酯=3: 1)將所得之殘 渣予以精製，製得N-〔 1-(十四基甲醯基 -D-吡喃半 乳糖苷 硫基）乙基〕 十八醯 基醯胺 278mg 〇 (5) 將1^-〔1-(十四基甲醯基）-2-(2,3,4,6-四-0-泠-D-吡喃半乳糖苷硫基）乙基〕十八醯基醯胺278mg溶解於 THF5rnL與甲醇5mL之混合溶媒中，添加觸媒量之28%甲 醇鈉甲醇溶液，在室溫下攪拌1小時。使用陽離子交換樹 -10- 1322151 五、發明說明（9) 脂（道愛克斯TM50-X8)中和反應混合液後，過濾分開樹 脂，並將濾液予以減壓濃縮。最後藉由以甲醇將殘渣予以 結晶化，製得白色結晶之N-〔 2-( /3 -D-吡喃半乳糖苷硫基 )-1-(十四基甲醯基）乙基〕十八醯基醯胺202mg。 NMR (DMS〇-d6) (5:0. '86 (t, 3 H, J = 5. 9Hz) ， 1. 24 (s，4 6H) , 1. 3 5 - 1. 5 5 (m, 4H) , 2. 15-2. 5 0 (m, 2H) ,3.71 (bs, 1 H) , 4. 24 (d t, 1H)，7 · 7 1 (b t, 1H)，7. 9 2 (d、1H、J = 7. 9Hz) · T〇F—MS : m/z 7 6 8 (M + Na) \ 7 8 4 (M + K) +. 元素分析値（以CuH^NiC^S · 1/1 0H2O爲準） 計算値（％)C，65. 93; Η, 10. 82; N, 3. 75; S, 4.29 實測値（％) C, 6 5. 6 7 ; H，1 0. 8 2 ; N，3. 6 8 ; S，4. 2 9. ,實施例2 Ν·〔 2-(冷-D -吡喃半乳糖苷氧基）乙基〕十八醯基醯胺 〔一般式（4)之化合物〕之製造 (1)將1，2,3,4,6-五-0-乙醯基吡喃半乳糖苷 1.8g與2-(苄氧羰胺基）乙醇1.2g溶解於1,2-二氯乙烷 1 OmL中，冷卻至0°C後，添加三氟化硼二乙醚配位化合物 3.6mL，並在室溫下攪拌17小時。將氯仿添加於反應混合 液中，以飽和碳酸氫鈉水溶液與飽和食鹽水洗淨。藉由以 矽膠管柱層析法（洗析溶媒：正己烷：乙酸乙酯=3: 1) 將殘渣予以精製，製得2-(2,3,4,6-0-四-苯醯基-沒-D-吡 喃半乳糖苷氧基）乙基胺基甲酸苄酯1.3g。 -11- 1322151 博玄月6曰修(更)正替換頁！ ---·—圓·— 」_ 五、發明說明（1〇) (2) 將2·(2’3,4,6-0 -四-苯醯基_点_〇·吡喃半乳糖苷 氧基）乙基胺基甲酸苄酯250mg溶解於i，4_二吗院3)1^與 甲醇3mL之混合溶液中’再添加20%氫氧化鈀碳17〇 mg ’並在氫氣流下攪拌1 8小時。使用析來得τ·(過濾分開雜 質後’將濾液予以減壓濃縮。將殘澄溶解於DMF5mL中， 添加硬脂酸123mg、EDC90mg、HOBt75mg，在室溫下攪拌一 晚。以乙酸乙醋萃取反應混合液，以2莫耳/ L鹽酸與飽和 碳酸氫鈉水溶液洗淨後’以無水硫酸鎂將乙酸乙酯層予以 乾燥，其次減壓下去除溶媒。最後藉由使用矽膠管柱層析 法（洗析溶媒：正己烷：乙酸乙酯=1: 1)將所得之殘渣 予以精製，製得N-〔 2-(2,3，4,6-四-0-苯醯基- 沒-D-吡喃 半乳糖苷氧基）乙基〕十八醯基醯胺l〇3mg。 (3) 將心〔2-(2,3,4,6-四-0-苯醯基-/3-0-吡喃半乳 糖苷氧基）乙基〕十八醯基醯胺l〇3mg溶解於1,4-二噚烷 2mL與甲醇2mL之混合溶液中，添加觸媒量之28%甲醇鈉 甲醇溶液，在室溫下攪拌4小時。使用.陽離子交換樹脂（ 道愛克斯TM50-X8)中和反應混合液後’過濾分開樹脂’ 並將濾液予以減壓濃縮。最後藉由以甲醇將殘渣予以結晶 化，製得白色結晶之N-〔2-(冷-D -吡喃半乳糖苷氧基）乙 基〕十八醯基醯胺59mg。 -12- 1322151 年艾n (史丨正替換頁j 五、發明說明（11) NMR (DMS〇-d6). <5:0. 84 (t, 3 H, J = 6. 4Hz) , 1.26 (s, 2 8H) , 1. 4 5- 1. 5 0 (m, 2Ή) , 2. 0 4 (t., 2H, J = 7. 5Hz), 3.40-3.50 (m, 3 H) , 3. 6 1 (b s, 1H) , 3. 6 8 (d t, 1H, J =5. 8, 10. 2Hz) , 4. 0 5 (d, 1H, J = 6. 7、Hz), 4. 32，4. 56，4. 6 7, 4. 8 1 (4b s, 4H) , 7.7 2 (t, 1H, J = 5. 6Hz). T〇F—1VIS : m/z 5 12 (M+Na) \ 5 2 8 (M + K) +. 元素分析値；（以Ci6H5lNCV I/5H2O爲準）： .計算値（％) C, 6 3. 3 1 ; Η, 1 0. 5 0 ; N, 2. 8 4 實測値（％) C, 6 3· 1 4 ; Η, 1 0. 2 2 ; Ν, 2. 8 6. 實施例3 Ν-〔 2-(^ -D -吡喃半乳糖苷硫基）乙基〕十八醯基醯胺 〔一般式（3)之化合物〕之製造 (1)將2-(2,3,4,6-四-0-苯醯基-召-0-吡喃半乳糖苷 硫基）乙基胺基甲酸苄酯l.Og溶解於甲醇10mL與1，4-二 曙烷10raL之混合溶液中，添加氫氧化鈀lg，在氫氣流下 攪拌6小時。使用析來得TM過濾分開雜質後，將濾液予以 減壓濃縮。將殘渣溶解於DMFlOmL中，添加硬脂酸432mg 、EDC364mg、HOBt 257mg，在室溫下攪拌一晚。以氯仿稀 釋反應混合液，以2莫耳/L鹽酸與飽和碳酸氫鈉水溶液洗 淨後，以無水硫酸鎂將氯仿層予以乾燥，其次減壓下去除 溶媒。最後藉由使用矽膠管柱層析法（洗析溶媒：正己烷 :乙酸乙酯=3: 1)將所得之殘渣予以精製，製得N·〔2- -13- 1322151 五、發明說明（12) (2, 3,4,6 -四·〇·苯醯基-/5 -D -吡喃半乳糖苷硫基）乙基〕 十八醯基醯胺442mg。 (3)將心〔2-(2,3,4,6-四-0-苯醯基-冷-〇-吡喃半乳 糖苷硫基）乙基〕十八醯基醯胺440mg溶解於1,4-二嗶烷 lOrnL與甲醇15mL之混合溶媒中，添加觸媒量之28%甲醇 鈉甲醇溶液，在室溫下攪拌2小時》使用陽離子交換樹脂 (道愛克斯TM50-X8)中和反應混合液後，過濾分開樹脂 ，並將濾液予以減壓濃縮。最後藉由以甲醇將殘渣予以結 晶化，製得白色結晶之N-〔 2-(沒-D_吡喃半乳糖苷硫基） 乙基〕十八醯基醯胺209mg。 NMR CDMS.〇-d-6) β : 0. 8 5 Ct, 3 H, J = 6. 6 Η z) , 1. 2 6 (s, 3 OH) , 1. 4 5 - 1. 5 0 (m, 2 H)，2. 00-2. 10 (t, 2H, J =7. 2Hz) , 2. 55-2. 7 0 (m, 2 H) , 3. 2 0-3. 2 5 (m, 2 H)，3. 3 0-3. 4 0 (m, 2 H)，3. 4 5 - 3 · 50 (m,. 2H) , 3. 6 8 (b s, 1H)，4. 2 0 (d, 1H, J = 9. 0Hz) , 4. 3 7 (d, 1H, J=4. 8Hz), 4. 5 5 (d, 1H, J = 5. 4Hz)， 4.7 6 (d, 1H, J = 5. 4Hz)，4. 92 (d，1H, J = 5. 4Hz)， 7. 8 4 (b t, 1H). 'TOF-MS : m/z 5 2 8 (M + Na) 5 4 4 (M + K) +. 元素分析値（以C26HslNOeS爲準）： 計算値（％)C, 61. 7 5 ; Η, 10. 1 6 ; Ν2. 7 7 ; S, 6. 34 實測値（％) C, 6 ί. 6 5 ; Η, 10. X 〇 ; Ν2. 7 7 ; S, 6. 3 5 . 、 ' · · 實施例4 Ν-〔2-(；8-D-吡喃半乳糖苷氧基）-1-(己基甲醯基）乙基 -14- 1322151 五、發明說明（13) 〕十八醯基醯胺〔一般式（6)之化合物〕之製造 (1) 將2-(2,3,4,6-四-0·苯醯基-冷-D-吡喃半乳糖苷 硫基）乙基胺基甲酸苄酯2.4g與3-羥基-2-(十八醯胺基） 丙酸甲酯lg溶解於氯仿35mL中，冷卻至0°C後，添加N-碘琥珀酸亞胺1.4g與三氟甲磺酸0.1 3mL，在室溫下攪拌 3小時。其次，將氯仿添加於反應液中，以飽和碳酸氫鈉 水溶液與1 〇%硫代硫酸鈉水溶液洗淨。以無水硫酸鎂將氯 仿層予以乾燥後，過濾分開硫酸鎂，並將濾液予以減壓濃 縮。藉由以矽膠管柱層析法（洗析溶媒：正己烷：乙酸乙 酯=3 : 1 )將殘渣予以精製，製得2 -(十八醯胺基）-3-(2, 3,4, 6 -四-0-苯醯基-yS -D-吡喃半乳糖苷氧基）丙酸甲 酯 1‘ 4g。 (2) 將2-(十八醯胺基）-3-(2,3,4,6-四-0-苯醯基-冷-D-吡喃半乳糖苷氧基）丙酸甲酯1.4g溶解於吡啶26mL中 ，再添加碘化鋰1.7g後，在氮氣氛圍環境下，加熱回流4 小時。將氯仿添加於反應混合液中，以2莫耳/L鹽酸洗淨 後，以無水硫酸鎂將氯仿層予以乾燥，其次減壓下去除溶 媒。最後藉由使用矽膠管柱層析法（洗析溶媒：氯仿：甲 醇= 60: 1)將所得之殘渣予以精製，製得2-(十八醯胺基 )-3-(2 ,3,4,6 -四-0 -苯醯基-/S -D -吡喃半乳糖苷氧基）丙 酸 940mg 。 (3) 將2-(十八醯胺基）-3-(2,3,4,6-四-0-苯醯基-召-D-吡喃半乳糖苷氧基）丙酸940mg溶解於DMFlOmL中，添 -15- 1322151 —~ ^ _五、發明說明（14) 加正己胺120mg、EDC285mg'HOBt201mg，在室溫下攪拌4 小時。將氯仿添加於反應混合液中，以2莫耳/L鹽酸與飽 和碳酸氫鈉水溶液洗淨後，以無水硫酸鎂將氯仿層予以乾 燥，其次減壓下去除溶媒。最後藉由使用矽膠管柱層析法 (洗析溶媒：正己烷：乙酸乙酯=3: 1)將所得之殘渣予 以精製，製得N-〔 1-(己基甲醯基）-2-(2,3,4,6-四-0-苯 醯基-冷-D-吡喃半乳糖苷氧基）乙基〕十八醯基醯胺29 5mg 〇 (4)將N-〔l-(己基甲醯基）-2-(2,3,4,6-四-0-苯醯 基- /3-D-吡喃半乳糖苷氧基）乙基〕十八醯基醯胺290rog 溶解於1,4-二曙烷5mL與甲醇5mL之混合溶媒中，添加觸 媒量之28%甲醇鈉甲醇溶液，在室溫下攪拌3小時。使用 陽離子交換樹脂（道愛克斯TM50-X8)中和反應混合液後 ，過濾分開樹脂，並將瀘液予以減壓濃縮。最後藉由以蒸 餾水將殘渣予以結晶化，製得白色結晶之N-〔 2-(召-D-吡 喃半乳糖苷氧基）-1-(己基甲醯基）乙基〕十八醯基醯胺 144mg。 NMR (DMS〇-d6) δ : 0. 85 (t, 6H, J = 6. 〇Hz) ， 1. 2 4 (s，3 4H) , 1. 3 0 - 1. 4 0 (m, 2H) , 1. 4〇-l. 5 0 (m, 2 H)，2. 10-2. 1 5 (m, 2 H) , 3. 0 0 - 3. 1 〇 (m, 2 H), 3 . 3 4 . ( t, 1 H, J = 6 . 6 H z ) , 3 . 4 5 - 3 . 5 5 (m, 3 H) , 3 . 62 (bs, 1H) , 3. 8 9 (d d, 1H, J =4. 8，1 〇· 2Hz) , 4. 07 (d，1H, J =7. 2Hz)，4. 35 (d, 1H, J = 4. 8Hz)， 4. 40 (d t, 1H，J = 5. 4，7. 8 Hz), 4. 5 5 (t, 1H, J = -16- 1322151 五、發明說明（15) 5· 4H z) , 4. 6 9 (d，1H, J = 5. 4Hz) , 4. 8 5 (d, 1H, J = 3. 6 Hz) , 7. 6 7 (t, 1H, J = 5. 4H z) , 7. 8 5 (d, 1 H，J = 8. 4Hz). TOF-MS : m/z 6 3 9 (M + N a) 6 5 5 (M + K) +. 元素分析値（以〇33116<队08爲準）： 計算値（％) C, 6·4· 25;H10. 46;N, 4. 54 實測値（％) C，6 4· 0 2 ; Η 1 0· 3 2 ; Ν，4. 5 5 實驗例1 表皮細胞之θ -葡萄糖腦苷酯酶活性化能測定 試驗 (1 )方法 (a )培養表皮細胞 使用市售之人類正常表皮角化細胞（Epidercen”：樂 保公司製）。 (b )細胞培養用培養基 使用Mediuml54S (樂保公司製）做爲培養基，又使用添 加劑HKGS (樂保公司製）添加其中以做爲增殖因子。 (c) Hepes緩衝液之調製 將Hepes7.15g、葡萄糖1.8g、氯化鉀〇.22g、氯化鈉 7.7g、磷酸氫二鈉· 12水合物〇.27g溶解於純水中，以1 莫耳/ L氫氧化鈉水溶液調整爲pH7.4後，加水至1L" (d )細胞培養 在Mudiuml54S中將人類正常表皮細胞之細胞數調整至 2 . 5xl〇4個/mL後，分別接種4mL於60mm膠原蛋白塗佈培 -17- 1322151 五、發明說明（16) 養皿（法爾康公司製）中，並在95%空氣（V/V) -5%二 氧化碳氣體（V/V)之氛圍環境下，在37 °C下靜置培養4 曰。 抽去培養上淸液後，在各培養皿中，分別添加經添加上 述實施例1、2、4所製得之各藥劑之濃度200 // mo 1/L的 乙醇溶液，且最終濃度爲5/zmol/L之Medium 154S 4mL 。其後，在95%空氣（V/V) -5%二氧化碳氣體（V/V)之 氛圍環境下，將該培養皿在3 7°C下靜置培養4日。又，以 不含；8 -半乳糖苷神經醯胺同類物而僅爲單獨之乙醇做爲 比較例1。 (e )粗酵素液之萃取 抽去培養上淸液，並以lmL之磷酸緩衝生理食鹽水洗淨 2回後，以細胞刮杓（住友貝克萊德公司製）自培養皿中 刮取細胞。添加含有0.1 mmol /L苯甲磺醯氟之磷酸緩衝 生理食鹽水，以超音波處理裝置（索尼司及馬爹力亞爾斯 公司製）將細胞打碎，回收離心上淸液做爲粗酵素液。 (f ) /3 -葡萄糖腦苷酯酶活性測定 以艾米爾與方德爾福爾克之方法（British Journal of Dermatology，95 卷，第 271-274 頁，1976 年）爲準進行 測定。亦即，添加lOOmmol/L檸檬酸一200nimol/L磷酸緩 衝液（PH5.6) 500//L 與 lOmmol / L 牛磺膽酸一lOOmmol / L 檸檬酸一200mmol/L磷酸緩衝液（pH5.6 ) 500 /zL於粗酵 素液50// L中，並在371下保溫10分鐘。其次，添加 -18- 1322151 五、發明說明（17) O.5mmol/L之4-甲基傘形酮基-冷-D葡萄糖苷（西格瑪公 司製）50 // L，在37 °C下保溫60分鐘。其後，添加 200mmol/L碳酸鈉一碳酸氫鈉緩衝液（ρΗΙΟ.5)，在激發 波長360nm、吸收波長450nm下測定螢光強度》酵素活性 係根據由標準品之4-甲基傘形酮（西格瑪公司製）之螢光 強度所製作之校正曲線計算求得。 (2 )結果 如第1圖所示，N-〔2-(/S-D_吡喃半乳糖苷氧基）乙基 〕十八醯基醯胺〔實施例2:—般式（4)所示之化合物〕 、N-〔 2-/5 -D-吡喃半乳糖苷硫基-1-(十四基甲醯基）乙基 〕十八醯基醯胺〔實施例1: 一般式（5)所示之化合物〕 、N-〔 2-(/5-D-吡喃半乳糖苷氧基）-1-(己基甲醯基）乙基 〕十八醯基醯胺〔實施例4 :—般式（6 )所示之化合物〕 均被確認具有/S -葡萄糖腦苷酯酶活性化效果。 試驗例2小鼠之粗糙皮膚回復試驗 (1 )方法 (a)實驗動物 使用試驗開始時爲9週齡之無毛鼠1組共5隻。 (b )測定裝置及條件 經皮水分蒸散量（以下，略記爲TEWL )，係使用連續發 汗測定裝置之海德魯格拉夫AMU-100 ( K & S公司製）進行 如下之測定。將1平方公分之膠囊緊貼於皮膚，引入氮氣 (3 00mL/min )於膠囊內，測定送入膠囊前與自膠囊回收 •19- 1322151 五、發明說明（18) 後之氮氣中的水蒸氣量。由該値之差，算出每丨分鐘1平 方公分皮膚所蒸散之水分量（mg/cm2)，以做爲TEWL。 (c)試驗物質與實驗方法 使用基劑（丙二醇：乙醇=3: 7)，將實施例4之化合 物〔一般式（6)所示之化合物〕調製爲濃度0.1%、 1.0%。將該調整後之試驗物質0.05niL，以1曰1回、1 星期5回之頻率連續塗佈TEWL預先經測定之無毛鼠背部 皮膚（直徑2.5cm) 4星期。其後，自事先塗佈之最終塗 佈起第3日照射0.15J/cm2之紫外線B波長（UVB) 1回。 測定UVB照射前、照射後第3及4日之TEWL，根據相對基 劑塗佈前之TEWL的比率進行比較評估。 (2 )結果 如第2圖及第3圖所示，N-〔2-(/3-D-吡喃半乳糖苷氧 基）-1-(己基甲醯基）乙基〕十八醯基醯胺〔實施例4之化 合物：一般式（6)之化合物〕在1.0%之濃度下，以 p<0.01 ( Dunne tt多重檢定）之危險率，相較於基劑單獨 下，TEWL値顯著減少，改善粗糙皮膚。 實施例5 將實施例1〜4所得之半乳糖苷神經醯胺同類物之10% 乙醇溶液1 0g，在水浴中加熱至80°C，並添加下述成分， 製得100g之4種化妝水。 乳酸 0.3g 檸檬酸鈉 0 . 1 g -20- 1322151 五、發明說明（19) 甘油 2.0g 防腐劑、香料及界面活性劑 適量 純水 以100g爲總量之殘餘量 產業上利用之可能性 如以上記載，顯而易見本發明可提供一種簡便且容易合 成之表皮之θ-葡萄糖腦苷酯酶活性化劑。又，根據本發 明可預防與防禦粗糙皮膚及改善各種皮膚疾病。 -21 -