TW201002734A - A ameliorating preparation for rough skin - Google Patents

Description

201002734 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種新穎半乳糖苷神經醯胺同類物；使用這些 之yS -葡萄糖腦苷酯酶活性化劑、皮膚外用劑及；5 -葡萄糖腦苷 酯酶活性化方法。進一步詳言之，係關於一種藉由特定之半乳 糖苷神經醯胺同類物以活性化表皮中之/3 -葡萄糖腦苷酯酶之 石-葡萄糖腦苷酯酶活性化劑、皮膚外用劑及/5 -葡萄糖腦苷酯 酶活性化方法。此等被期待用以改善粗糙皮膚及各種皮膚疾病 【先前技術】 所謂粗糙皮膚（乾燥皮膚），一般係指經確認具有角質層細 胞剝離現象之處於乾燥狀態的皮膚。此類粗糙皮膚之發生原因 係膽固醇、神經醯胺、脂肪酸等之角質層細胞間脂質之溶析， 以及肇因於紫外線、清潔劑之角質層細胞之變性或因表皮細胞 之增殖•角化失衡所導致之角質層穿透障礙之形成不全等。以 預防或治療此粗糙皮膚爲目的，已進行供給角質層細胞間脂質 成分或與其類似之合成角質層細胞間脂質、或投與表皮增殖因 子（EGF; Epidermal Growth Factor)等之表皮細胞增殖•角 化調節物質等之硏究。 該角質層細胞間脂質，係由棘細胞層與粒層之細胞所生合成 之層板顆粒，釋放於角質層正下方之細胞間隙，並延伸形成層 板（1 aroe 1 1 a )結構，而擴散於細胞間隙者。層板顆粒雖係由 葡萄糖苷神經醯胺、膽固醇、神經醯胺、磷脂質等所構成，但 角質層細胞間脂質中幾乎不含葡萄糖苷神經醯胺。亦即，層板 顆粒中之葡萄糖苷神經醯胺，因/3-葡萄糖腦苷酯酶而被水解 並轉變爲神經醯胺。而該神經醯胺形成層板結構之結果，做爲 201002734 角質層細胞間脂質被認爲可改善角質層穿透障礙之形成’具有 粗糙皮膚防禦障礙之機能。例如’在0 -葡萄糖腦管醋酶遺傳 上完全缺失（deletion)之尚歇病（Gaucher s disease)第2 型之患者中，可觀察到病態之粗糙皮膚。又’藉由該表皮之組 織學硏究，確認角質層細胞間脂質之層板結構的異常。又’在 /3 -葡萄糖腦苷酯酶以人爲方式使其缺失之轉殖基因小鼠中’ 亦確認角質層細胞間脂質之層板結構的異常與粗糙皮膚間之 關連性。進一步，實驗中，在Θ -葡萄糖腦苷酯酶受抑制時’ 亦觀察到粗糙皮膚與角質層細胞間脂質之層板構造的異常。根 1 據此諸事實，一般認爲在形成正常之角質層穿透障礙時’葡萄 糖苷神經醯胺必須藉由Θ -葡萄糖腦苷酯酶水解爲神經醯胺。 因此，藉由活性化/3-葡萄糖腦苷酯酶，被認爲可改善角質層 穿透障礙之形成，其結果可改善粗糙皮膚。 在此背景下，過去，已知自豚鼠脾臟所發現之SAP-2或人類 高歇病脾臟所發現之Ala或Sapo si nC爲沒·葡萄糖腦苷酯酶之 活性化因子。 惟，此等活性化因子係蛋白質，外用此等以活性化表皮之石 ί -葡萄糖腦苷酯酶，存在經皮吸收性或安全上之重大問題。又 ，分離此等蛋白質以供產業上之利用，就成本面而言極爲困難 〇 此外，已知/3-半乳糖苷神經醯胺爲非蛋白質之/3-葡萄糖腦 苷酯酶之活性化因子。 惟，實際上可利用之/5 -半乳糖苷神經醯胺係來自牛腦萃取 物，將此等用於外用時’在安全性上存在重大問題。又，冷-半乳糖苷神經醯胺之大量合成極爲困難，且成本過高，而爲產 業上利用時之缺點。 201002734 因此，本發明之目的係提供一種藉由活性化yS-葡萄糖腦苷 酯酶以改善角質層穿透障礙之形成，其結果可望具有改善粗糙 皮膚之效果，且易於取得之葡萄糖腦苷酯酶活性化劑、皮 虜外用劑及葡萄糖腦苷酯酶活性化方法。 【發明内容】 因此，有鑑於上述狀況，本發明人等就解決習知問題之方法 戮力硏究，其結果發現：藉由下述之特定化合物，出乎意料地 可極爲容易、且強力地使表皮中之Θ -葡萄糖腦苷酯酶活性化 ，而完成本發明。 亦即，本發明係一種下述一般式（1)或（2)所示之々-半 乳糖苷神經醯胺同類物；使用這些之/3 -葡萄糖腦苷酯酶活性 化劑、皮膚外用劑及/3-葡萄糖腦苷酯酶活性化方法。

(其中，X、Y爲S或0; R1、R2爲碳原子數9〜35之烷基或烯 基。R3爲碳原子數2〜30之烷基或烯基。） 【實施方式】 實施發明之最佳型態 本發明所使用之半乳糖苷神經醯胺同類物，係由上述一般式 (1)或（2)所示。X、Y爲硫原子或氧原子，就效果上而言， 201002734 以硫原子較佳。R1及R2爲碳原子數9〜35,較佳者爲碳原子數 14〜22，最佳者爲碳原子數16〜20。R3爲碳原子數2〜30,較 佳者爲碳原子數14〜22,最佳者爲碳原子數6〜14。又’ R1、 R2、R3可爲飽和，亦可爲不飽和。具體而言’可列舉下述一般 式（3)〜（6)之化學式所示者。

τη — OH κ ip'(CH2)16CH3 Ο (3)

OH Ο

1 (CH2)16CH3 (4)

CxTo i. NH^(CH2)16CH3 (5)

OH OH OH

OH '(CH2)13CH3

⑹ 此等化合物，可輕易根據習知之醯胺合成方法而製得。例如 ，表示合成方法之槪略時，具有兩股烷鏈之一般式（2)所示 之化合物可以下述方法製得：在保護胺、羧酸部分之絲胺酸或 半胱胺酸上，藉由轉葡萄糖作用引入半乳糖後，藉由胺基部分 之去保護及縮合反應，引入一個烷基，其次，去除羧酸之保護 基，並與三氯化磷作用形成酸氯化物後，再與一級胺反應。又 201002734 ，具有單股化合物之一般式（η所示之化合物亦可以相同方 法製得。 本發明相關之θ-葡萄糖腦苷酯酶活性化劑係一種組合物， 其係含有1種或2種以上上述一般式（1)或（2)所示之半乳 糖苷神經醯胺同類物用以做爲改善粗糙皮膚之有效成分。 本發明相關之Θ -葡萄糖腦苷酯酶活性化劑' 皮膚外用劑， 可製成軟膏、化妝水、乳液、乳劑（milk)、粉撲（puff)劑 、面膜、噴霧、泡沫、顆粒、粉末、凝膠等各種劑型。又，本 發明中，所謂皮膚外用劑係以包含頭皮之身體所有皮膚爲對象 ，包含沐浴劑。基材只要是一般所用之外用基劑即可，並無特 殊限制。又，最終型態可做爲化妝料、醫藥品、半藥品（ quasi-drug)° 沒-葡萄糖腦苷酯酶活性化劑、皮膚外用劑中，半乳糖苷神 經醯胺同類物之混合量，以組成物總量爲基準，以總組成量之 0.00 5〜5.0質量％爲佳，以〇.〇1〜3.0質量％更佳。混合量未 滿0.00 5質量％時，本發明之目的效果有時將不夠充分；反之 ，超過5.0質量％時，有時其增加量亦未能具有相對應效果之 提升。 實施例 以下，藉由實施例以詳細說明。又，本發明未受限於以下之 實施例。 實施例1 N-〔2-；S-D-吡喃半乳糖苷硫基-1-(十四基甲醯基）乙基〕十 八醯基醯胺〔一般式（5)之化合物〕之製造 (1)將1,2,3,4,6-五-0-乙醯基-/3-〇-吡喃半乳糖苷3 0〇1!^ 與2-(苄氧羰胺基）_3_氫硫丙酸甲酯430mg溶解於氯仿4mL中 201002734 ，冷卻至0°C後，添加三氟化硼二乙醚配位化合物1 . 3mL，並 在室溫下攪拌20小時。將氯仿添加於反應混合液中，以飽和 碳酸氫鈉水溶液與飽和食鹽水洗淨。藉由以分取薄層層析法（ 展開溶媒：正己烷：乙酸乙酯=3: 2)將殘渣予以精製，製得 2-(苄氧羰胺基）-3-(2,3,4,6-四-0-乙醯基-/3-0-吡喃半乳糖 苷硫基）丙酸甲酯370mg。 (2) 將2-(苄氧羰胺基）-3-(2,3,4,6-四-0-乙醯基-沒-D-吡喃半乳糖苷硫基）丙酸甲酯370rog溶解於1，4-二噚烷5niL與 甲醇5mL之混合溶液中，再添加20%氫氧化鈀碳200mg，並在 ' 氫氣流下攪拌1 8小時。使用析來得TM過濾分開雜質後，將濾 液予以減壓濃縮。將殘渣溶解於DMF6mL中，添加硬脂酸193mg 、EDC〔卜乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳化二亞胺〕180mg、HOBt (1 _羥苯並三唑）140mg，在室溫下攪拌一晚。以乙酸乙酯萃 取反應混合液，以2莫耳/L鹽酸與飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨後 ，以無水硫酸鎂將乙酸乙酯層予以乾燥，其次減壓下去除溶媒 。最後藉由使用中壓管柱層析法（洗析溶媒：正己烷：乙酸乙 酯=4: 1)將所得之殘渣予以精製，製得2-(十八醯胺基 r . )-3-(2，3,4,6 -四-0 -乙醯基-沒-D-吡喃半乳糖苷硫基）丙酸甲 醋 3 1 3 ro g。 (3) 將2-(十八醯胺基）-3-(2,3,4,6 -四-0-乙醯基- yS-D· 吡喃半乳糖苷硫基）丙酸甲酯31 3mg溶解於吡啶6mL中，再添 加碘化鋰5 1 5mg後，在氮氣氛圍環境下，加熱回流4小時。以 乙酸乙酯萃取反應混合液後，以2莫耳/L鹽酸洗淨後，以無水 硫酸鎂將乙酸乙酯層予以乾燥，其次減壓下去除溶媒。最後藉 由使用中壓管柱層析法（洗析溶媒：氯仿：甲醇=15: 1)將 所得之殘渣予以精製，製得2 -(十八醯胺基）-3 - ( 2，3，4，6 -四 201002734 -〇-乙醯基-D-吡喃半乳糖苷硫基）丙酸247mg。 (4) 將2-(十八醯胺基）-3-(2,3,4,6-四-0-乙醯基-/9 -D-吡喃半乳糖苷硫基）丙酸247rag溶解於DMF4mL中，添加正十四 胺80nig、EDClOOmg、HOBt8 0mg，在室溫下攪拌Π小時。以乙 酸乙酯萃取反應混合液，以2莫耳/L鹽酸與飽和碳酸氫鈉水溶 液洗淨後，以無水硫酸鎂將乙酸乙酯層予以乾燥，其次減壓下 去除溶媒。最後藉由使用中壓管柱層析法（洗析溶媒：正己烷 :乙酸乙酯=3 ·· 1 )將所得之殘渣予以精製，製得N -〔 1 -(十 四基甲醯基）-2-(2,3,4,6-四-0-；8-0-吡喃半乳糖苷硫基）乙 < 基〕十八醯基醯胺27811^。 (5) 將Ν-〔1·(十四基甲醯基）-2-(2,3,4,6-四-0-々-0-吡 喃半乳糖苷硫基）乙基〕十八醯基醯胺278rag溶解於THF5mL 與甲醇5mL之混合溶媒中，添加觸媒量之28%甲醇鈉甲醇溶液 ，在室溫下攪拌1小時。使用陽離子交換樹脂（道愛克斯tm50-X8 )中和反應混合液後，過濾分開樹脂，並將濾液予以減壓濃縮 。最後藉由以甲醇將殘渣予以結晶化，製得白色結晶之N-〔 2-( 冷-D-吡喃半乳糖苷硫基十四基甲醯基）乙基〕十八醯基 ί 醯胺 202mg。 i NMR (DMSO-d6) δ : 0. '8 6 (t, 3H, J = 5. 9Hz) , 1. 24 (s , 4 6 H) , 1. 3 5 — 1. 5 5 (m, 4 H) * 2 . 1 5 — 2 . 5 0 (tri, ............................................................................... ........................................................ 2H) , 3. 7 1 (b s, 1H) , 4. 2 4 (d t, 1 H) , 7. 7 1 (b t , 1H)，7. 9 2 (d、1H、J = 7. 9Hz). TOF-MS : m/z 7 6 8 (M + Na) 7 8 4 (M + K) +. 元素分析値 '(以;C41HmNz〇7S · 1/1 0H2O爲準.） 計算値（％) C, 6 5. 9. 3 ; Η, 10. 8 2 ; N, 3. 7 5 ; S, 4.2 9 實測値（％) C, 6 5. 6 7' j H, 10· 8 2 ； N, 3. 6 8 ; S, 4. 2 9· -10- 201002734 實施例2 N-〔 2_(/3 -D -吡喃半乳糖苷氧基）乙基〕十八醯基醯胺〔一 般式（4)之化合物〕之製造 (1) 將1，2,3,4,6-五-0-乙醯基-/3-D-吡喃半乳糖苷1.8g 與2-(苄氧羰胺基）乙醇1.2g溶解於1，2-二氯乙烷10raL中， 冷卻至0°C後，添加三氟化硼二乙醚配位化合物3. 6mL，並在 室溫下攪拌1 7小時。將氯仿添加於反應混合液中，以飽和碳 酸氫鈉水溶液與飽和食鹽水洗淨。藉由以矽膠管柱層析法（洗 析溶媒：正己烷：乙酸乙酯=3: 1)將殘渣予以精製，製得 ( 2-(2,3，4, 6-0 -四-苯醯基-彡-D-吡喃半乳糖苷氧基）乙基胺基 甲酸苄酯1.3g。 (2) 將2-(2,3,4,6-0-四-苯醯基-沒-D-吡喃半乳糖苷氧基） 乙基胺基甲酸苄酯250mg溶解於1,4·二噚烷3mL與甲醇3mL之 混合溶液中，再添加20%氫氧化鈀碳170 mg，並在氫氣流下 攪拌1 8小時。使用析來得TM過濾分開雜質後，將濾液予以減 壓濃縮。將殘渣溶解於DMF5mL中，添加硬脂酸123mg、EDC90mg 、HOBt7 5mg，在室溫下攪拌一晚。以乙酸乙酯萃取反應混合液 I ，以2莫耳/L鹽酸與飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨後，以無水硫酸 鎂將乙酸乙酯層予以乾燥，其次減壓下去除溶媒。最後藉由使 用矽膠管柱層析法（洗析溶媒：正己烷：乙酸乙酯=1: 1)將 所得之殘渣予以精製，製得心〔2-(2,3,4,6-四-0-苯醯基-/3 -D-吡喃半乳糖苷氧基）乙基〕十八醯基醯胺103mg。 (3) 將N-〔 2-(2,3,4,6-四-0-苯醯基-沒-D-吡喃半乳糖苷 氧基）乙基〕十八醯基醯胺l〇3mg溶解於1,4-二噚烷2mL與甲 醇2mL之混合溶液中，添加觸媒量之28%甲醇鈉甲醇溶液，在 室溫下攪拌4小時。使用陽離子交換樹脂（道愛克斯tm50-X8 -11- 201002734 )中和反應混合液後，過濾分開樹脂，並將濾液予以減壓濃縮 。最後藉由以甲醇將殘渣予以結晶化，製得白色結晶之N-〔 2-( 泠-D-吡喃半乳糖苷氧基）乙基〕十八醯基醯胺5 9mg。 NMR (DMS〇-ds). <5:0. 8 4l(t, 3H, J = 6. 4Hz)，1. 26 (s, 2 8H)，1.4 5 - 1. 5 0 (m, 2Ή) , 2. 0 4 (t., 2 H, J = 7. 5Hz), 3.. 40-3.50 (m, 3 H) , 3. 6 1 (b s, 1H) , 3. 68 (dt, 1H, J = 5. 8, 10. 2Hz).( 4. 0 5 (d, 1H, J = 6.· 7、Hz), 4. 3 2, 4. 5 6, 4. 6 7, 4. 8 1 (4bs, 4H) , 7. 7 2 (t, 1H, J = 5. 6Hz). / . . . . TOF-MS : m/z 5 12 (M + Na) 4, 5 2 8 (M+K) +. 元素分析値丨（以CisHslN〇7. 1/51^0爲準）： 計算値（％) C, 6’3. 3 1 ; Η, 1 0· 5 0 ; N, 2. 8 4 .實測値（％〉C, 6 3. 14;H, 10. 22;N, 2. 86. . . · 實施例3 N-〔 2-(/3 -D-毗喃半乳糖苷硫基）乙基〕十八醯基醯胺〔一 般式（3)之化合物〕之製造 (1)將2-(2,3,4,6 -四-0-苯醯基-/3 -D-吡喃半乳糖苷硫基） (; 乙基胺基甲酸苄酯1 .Og溶解於甲醇10mL與1 ,4-二噚烷10mL 之混合溶液中，添加氫氧化鈀1 g，在氫氣流下攪拌6小時。使 用析來得τΜ過濾分開雜質後，將濾液予以減壓濃縮。將殘渣溶 解於 DMFlOmL 中，添加硬脂酸 432mg、EDC364mg、HOBt 257mg ，在室溫下攪拌一晚。以氯仿稀釋反應混合液，以2莫耳/L鹽 酸與飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨後，以無水硫酸鎂將氯仿層予以 乾燥，其次減壓下去除溶媒。最後藉由使用矽膠管柱層析法（ 洗析溶媒：正己烷··乙酸乙酯=3: 1)將所得之殘渣予以精製 ’製得N-〔 2-(2,3,4,6-四-0-苯醯基-/3 -D-吡喃半乳糖苷硫基 -12- 201002734 )乙基〕十八醯基醯胺442mg。 (3)將卜〔2-(2,3,4,6-四-0-苯醯基-/3-0-吡喃半乳糖苷 硫基）乙基〕十八醯基醯胺440mg溶解於1,4-二噚烷lOraL與甲 醇15roL之混合溶媒中，添加觸媒量之28%甲醇鈉甲醇溶液， 在室溫下攪拌2小時。使用陽離子交換樹脂（道愛克斯tm5 0-X8 )中和反應混合液後，過濾分開樹脂，並將濾液予以減壓濃縮 。最後藉由以甲醇將殘渣予以結晶化，製得白色結晶之N-〔 2·( 泠-D-吡喃半乳糖苷硫基）乙基〕十八醯基醯胺209mg。 NMR (DMS〇-d6). <5:0. 8 4 '(t, 3H, J = 6. 4Hz) , 1. 26 (s , 2 8 H) , 1. 4 5 - 1. 5 0 (m, 2Ή) , 2 . 0 4 (t„ 2 H, J = 7. 5Hz) , 3.. 4 0-3. 5 0 (m, 3H) , 3. 6 1 (b s, 1H) , 3. 68 (dt, 1H, J=5. 8, 1 0. 2Hz) , 4. 0 5 (d, 1H, J = 6. 7'Hz), 4. 3 2, 4. 5 6, 4. 6 7, 4. 8 1 (4bs, 4H) , 7. 7 2 ( t, 1 H, J == 5 . 6 H z). . TOF-MS : m/z 5 12 (M + Na) 5 2 8 (M+K) +. 元素分析値丨（以ςί6Η51Ν07. Ι/δΗ,Ο:爲準）： .計算値（¾) C, 6·3. 3 1 ; Η, 1 0. 5 0 ; Ν, 2. 8 4 :實測値（％> C, 6 3· 14;Η, 10. 22;Ν，2· 8 6. 實施例4 Ν-〔2-(万-D-吡喃半乳糖苷氧基）-1-(己基甲醯基）乙基〕十 八醯基醯胺〔一般式（6)之化合物〕之製造 (1)將2-(2,3,4,6-四-0-苯醯基-/3 -D-吡喃半乳糖苷硫基） 乙基胺基甲酸苄酯2.4g與3-羥基-2-(十八醯胺基）丙酸甲酯 lg溶解於氯仿35mL中，冷卻至0°C後，添加N-碘琥珀酸亞胺 1.4g與三氟甲磺酸0.13raL，在室溫下攪拌3小時。其次，將 氯仿添加於反應液中，以飽和碳酸氫鈉水溶液與10%硫代硫酸 -13- .201002734 鈉水溶液洗淨。以無水硫酸鎂將氯仿層予以乾燥後，過濾分開 硫酸鎂，並將濾液予以減壓濃縮。藉由以矽膠管柱層析法（洗 析溶媒：正己烷：乙酸乙酯=3: 1)將殘渣予以精製，製得2_( 十八醯胺基）-3-(2,3,4,6-四-0-苯醯基-召-〇-吡喃半乳糖苷 氧基）丙酸甲酯1 .4g。 (2) 將2-(十八醯胺基）-3-(2,3,4,6-四-0-苯醯基-沒-D-吡喃半乳糖苷氧基）丙酸甲酯1.4g溶解於吡啶26mL中，再添 加碘化鋰1.7g後，在氮氣氛圍環境下，加熱回流4小時。將 氯仿添加於反應混合液中，以2莫耳/L鹽酸洗淨後，以無水硫 酸鎂將氯仿層予以乾燥，其次減壓下去除溶媒。最後藉由使用 矽膠管柱層析法（洗析溶媒：氯仿：甲醇= 60: 1)將所得之 殘渣予以精製，製得2-(十八醯胺基）-3-(2,3,4,6-四-0-苯醯 基-卢-D-吡喃半乳糖苷氧基）丙酸940mg。 (3) 將2-(十八醯胺基）-3-(2,3,4,6 -四-0 -苯醯基- 沒-D-吡喃半乳糖苷氧基）丙酸940mg溶解於DMFlOmL中，添加正己 胺120rag、EDC28 5mg、HOBt201rag，在室溫下攪拌4小時。將氯 仿添加於反應混合液中，以2莫耳/ L鹽酸與飽和碳酸氫鈉水溶 液洗淨後，以無水硫酸鎂將氯仿層予以乾燥，其次減壓下去除 溶媒。最後藉由使用矽膠管柱層析法（洗析溶媒：正己烷：乙 酸乙酯=3: 1)將所得之殘渣予以精製，製得N-〔1-(己基甲 醯基）-2-(2, 3，4,6-四-0-苯醯基-石-D -吡喃半乳糖苷氧基）乙 基〕十八醯基醯胺295mg。 (4) 將N-〔 1-(己基甲醯基）-2-(2,3 ,4,6-四-0-苯醯基-冷 -D-吡喃半乳糖苷氧基）乙基〕十八醯基酶胺290mg溶解於1，4-二曙烷5mL與甲醇5mL之混合溶媒中，添加觸媒量之28%甲醇 鈉甲醇溶液’在室溫下攪拌3小時。使用陽離子交換樹脂（道 -14- 201002734 愛克斯TM50-X8)中和反應混合'液後’過鴻^分開樹脂’並將濾、液 予以減壓濃縮。最後藉由以蒸餾水將殘'澄予以結晶化’製得白 色結晶之N-〔 2-(/5 -D-卩比喃半乳糖苷氧基）-1-(己基甲酿基） 乙基〕十八醯基醯胺144mg ° NMR (DMSO-d-6) δ ： 〇· 8 5 (t, 3Η, J = 6. 6Hz) , 1.. 2 6 (s, 30 Η), 1. 45 — 1. 50 (m, 2Η), 2. 00 — 2. 10 (t, 2 Η, J = 7. 2Hz). 2. 55-2. 7 0 (m, 2 Η) , 3. 2 0-3. 2 5 (m, 2 Η) , 3. 3 〇 — 3. 4 0 (m, 2 Η) , 3. 4 5 — 3. 5 0 (m,. 2Η) , 3. 6 8 (b s, 1Η) . 4. 2 0 (d, 1Η, J = 9. 0Hz) , 4. * 3 7 (d, 1H. J=4. 8Hz) , 4. 5 5 (d, 1H, J = 5. 4Hz), 4.7 6 (d, 1H, J = 5. 4Hz) , 4. 9 2 (d, 1H, J = 5. 4Hz), 7. 8 4 (b t, 1H) · 'TOF-kS:m/z 5 2 8 (M + N a) +, 5 44 (M+K) +. 元素分析値（以C26H5lN〇+sS爲準）： . 計算値（％) C, 6 1· 7 5 ; Η, 10. 1 6 ; Ν2. 7 7 ; S, 6. 3 4 實測値（％) C, 6 ϊ. 6 5 ; Η, 1 〇. 1 〇 ; Ν2. 7 7· ; S, 6. 3 5 • V · * • . · 實驗例1 表皮細胞之θ -葡萄糖腦苷酯酶活性化能測定試驗 (1 )方法 U ( a )培養表皮細胞 使用市售之人類正常表皮角化細胞（EpiderceirM:樂保公 司製）。 (b )細胞培養用培養基 使用Medium 15 4S (樂保公司製）做爲培養基，又使用添加劑 HKGS (樂保公司製）添加其中以做爲增殖因子。 (c) Hepes緩衝液之調製

將Hepes7.15g、葡萄糖1.8g、氯化鉀0.22g、氯化鈉7.7g 、磷酸氫二鈉· 12水合物〇.27g溶解於純水中，以1莫耳/ L -15- 201002734 氫氧化鈉水溶液調整爲.pH7.4後，加水至1L。 (d )細胞培養 在Mudiuml54S中將人類正常表皮細胞之細胞數調整至2.5x 104個/mL後，分別接種4mL於6 0mra膠原蛋白塗佈培養皿（法 爾康公司製）中，並在95%空氣（V/V) -5%二氧化碳氣體（ V/V)之氛圍環境下，在37°C下靜置培養4曰。 抽去培養上清液後，在各培養皿中，分別添加經添加上述實 施例1、2、4所製得之各藥劑之濃度200 # mo 1/L的乙醇溶液 ，且最終濃度爲5#mol/L之Medium 154S 4mL。其後，在95 ( %空氣（V/V) -5%二氧化碳氣體（V/V)之氛圍環境下，將該 培養皿在37°C下靜置培養4曰。又，以不含沒-半乳糖苷神經 醯胺同類物而僅爲單獨之乙醇做爲比較例1。 (e )粗酵素液之萃取 抽去培養上清液，並以IroL之磷酸緩衝生理食鹽水洗淨2回 後，以細胞刮杓（住友貝克萊德公司製）自培養皿中刮取細胞 。添加含有O.lmrool /L苯甲磺醯氟之磷酸緩衝生理食鹽水， 以超音波處理裝置（索尼司及馬爹力亞爾斯公司製）將細胞打 碎，回收離心上清液做爲粗酵素液。 (f ) Θ -葡萄糖腦苷酯酶活性測定 以艾米爾與方德爾福爾克之方法（British Journal of Dermatology，95卷，第271-274頁，1976年）爲準進行測定 。亦即，添加100_〇l/L檸檬酸一200mmol/L磷酸緩衝液（pH5.6 )500 /zL 與 10mmol/L 牛磺膽酸一100mmol/L 檸檬酸一 200nmol/L磷酸緩衝液（pH5.6) 500 #L於粗酵素液50yL中 ，並在37°C下保溫10分鐘。其次，添加0.5mmol/L之4-甲基 傘形酮基- yS-D葡萄糖苷（西格瑪公司製）50//L，在37t下 -16 - 201002734 保溫60分鐘。其後，添加200mraol/L碳酸鈉一碳酸氫鈉緩衝 液（pH10.5)，在激發波長360nm、吸收波長450nm下測定營光 強度。酵素活性係根據由標準品之4 -甲基傘形酮（西格瑪公司 製）之螢光強度所製作之校正曲線計算求得。 (2 )結果 如第1圖所示，N-〔2-(々-D-吡喃半乳糖苷氧基）乙基〕十 八醯基醯胺〔實施例2: —般式（4)所示之化合物〕、N-〔2-召-D-吡喃半乳糖苷硫基-1-(十四基甲醯基）乙基〕十八醯基醯 胺〔實施例1 :—般式（5)所示之化合物〕、N-〔 2-(石-D-吡 喃半乳糖苷氧基）-1-(己基甲醯基）乙基〕十八醯基醯胺〔實施 例4: 一般式（6)所示之化合物〕均被確認具有葡萄糖腦 苷酯酶活性化效果。 試驗例2小鼠之粗糙皮膚回復試驗 (1 )方法 (a )實驗動物 使用試驗開始時爲9週齡之無毛鼠1組共5隻。 (b )測定裝置及條件 經皮水分蒸散量（以下，略記爲TEWL )，係使用連續發汗測 定裝置之海德魯格拉夫AMU-100 (K&S公司製）進行如下之測 定。將1平方公分之膠囊緊貼於皮膚，引入氮氣（300mL/mi η )於膠囊內，測定送入膠囊前與自膠囊回收後之氮氣中的水蒸 氣量。由該値之差，算出每1分鐘1平方公分皮膚所蒸散之水 分量（rag/cm2)，以做爲TEWL。 (c)試驗物質與實驗方法 使用基劑（丙二醇：乙醇=3: 7)，將實施例4之化合物〔 一般式（6)所示之化合物〕調製爲濃度0.1%、 1.0%。將該 -17- 201002734 調整後之試驗物質0.05mL，以1日1回、1星期5回之頻率連 續塗佈TEWL預先經測定之無毛鼠背部皮膚（直徑2.5cm) 4星 期。其後，自事先塗佈之最終塗佈起第3日照射0.15J/cm2之 紫外線B波長（UVB) 1回。測定UVB照射前、照射後第3及4 日之TEWL，根據相對基劑塗佈前之TEWL的比率進行比較評估 〇 (2 )結果 如第2圖及第3圖所示，N-〔2_(/3-D -吡喃半乳糖苷氧基 )-1-(己基甲醯基）乙基〕十八醯基醯胺〔實施例4之化合物： 1 一般式（6 )之化合物〕在1 . 0%之濃度下，以p<0.01 ( Dunnet t 多重檢定）之危險率，相較於基劑單獨下，TEWL値顯著減少， 改善粗糙皮膚。 實施例5 將實施例1〜4所得之半乳糖苷神經醯胺同類物之10%乙醇 溶液10g，在水浴中加熱至80°C，並添加下述成分，製得100g 之4種化妝水。 乳酸 〇.3g

ί 檸檬酸鈉 0.U

%： J 甘油 2.0g 防腐劑、香料及界面活性劑 適量 純水 以1 〇〇g爲總量之殘餘量 產業上利用之可能性 如以上記載，顯而易見本發明可提供一種簡便且容易合成之 表皮之/3-葡萄糖腦苷酯酶活性化劑。又’根據本發明可預防 與防禦粗糙皮膚及改善各種皮膚疾病。 【圖式簡單說明】 -18 - 201002734 第1圖所示爲表皮細胞之葡萄糖腦苷酯酶活性化能測定 試驗（試驗例1 )的結果。 第2圖所示爲針對UVB所引起之粗糙皮膚，塗佈實施例4之 化合物的效果（試驗例2之結果）。 第3圖所示爲針對UVB所引起之粗糙皮膚，塗佈實施例4之 化合物的效果（試驗例2之結果）。 【主要元件符號說明】 無。 -19-

Claims (1)

1. 201002734 七、申請專利範圍： 1.一種皮虜組織之粗糙皮膚改善劑，其含有一般式（1)或（2)所 示之半乳糖苷神經醯胺化合物，

   (其中’ X、Y爲S或0，R1、R2爲碳原子數9〜35之烷基， R3爲碳原子數2〜30之烷基）。 2. 如申請專利範圍第1項之粗糙皮膚改善劑，其含有0.005〜 5 . 0質量％之一般式（1 )或（2 )所示之半乳糖苷神經醯胺 化合物。 3. 如申請專利範圍第1項之粗糙皮膚改善劑，其含有0.01〜3.0 質量％之一般式（1)或（2)所示之半乳糖苷神經醯胺化合 物0 -20-