JP2926046B2

JP2926046B2 - 水安定型ｌ−アスコルビン酸誘導体とその製造方法及びこれを含有する美白化粧料組成物

Info

Publication number: JP2926046B2
Application number: JP10156461A
Authority: JP
Inventors: ▲ソウ▼ 彦洪; ▲キ▼ 和李; 浚 ▲てつ▼ ▲ちょ▼; 長燮李; 正老李; 芝民天; 東逸張; 玉燮李; 相麟李
Original assignee: TAIHEIYO KK
Current assignee: TAIHEIYO KK
Priority date: 1997-06-04
Filing date: 1998-06-04
Publication date: 1999-07-28
Anticipated expiration: 2018-06-04
Also published as: US5916915A; DE19824983C2; CN1069904C; CN1201036A; JPH111486A; DE19824983A1; FR2764891B1; FR2764891A1

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、水安定性が改善された
Ｌ−アスコルビン酸誘導体及びその製造方法並びにこれ
を活性成分として含有する美白化粧料組成物に関するも
のである。

【０００２】

【従来の技術】Ｌ−アスコルビン酸は、強い抗酸化作
用、コラゲン生合成促進効果及び繊維芽細胞の生長促進
効果を有している生体活性物質であって、特に抗酸化作
用により皮膚内のメラニンの生成を抑制する生理活性を
持っているので、染み、そばかす等のような非正常的な
色素形成を防止するための皮膚外用剤として使用されて
いる。

【０００３】しかるに、アスコルビン酸は、水相で容易
に酸化されて分解されるため、水溶性基剤内で長期保存
の際、力価減少を招くという不都合がある。これより、
最近の研究は、水相基剤内でより安定な誘導体の開発に
注力している。これらの誘導体は、アスコルビン酸の２
−、３−、５−又は６−位の水酸基に、リン酸基や硫酸
基、又はステアリン酸やパルミチン酸等の脂肪酸を導入
してエステル化させた形態であって、生体内に吸収され
て酵素により容易に加水分解されてアスコルビン酸を遊
離させることにより、前述の生理活性を得ることができ
る。その一例として、アスコルビン酸−2-ホスフェート
マグネシウム塩を挙げることができる。この化合物は、
リン酸基の導入により経皮吸収が促進されて真皮層まで
アスコルビン酸を伝達することができ、且つ水相基剤内
での物質自体の安定性に優れていて酸化による変色が殆
どないため、これを有効成分として使用する美白化粧料
が提示されている（特開平１−２８３２０８号公報、特
開平３−２２７９０７号公報）。

【０００４】しかしながら、アスコルビン酸−2-ホスフ
ェートマグネシウムの場合、物質自体の安定性はある程
度改善されたが、水相基剤内においてそれ自体で不溶性
結晶を析出したり、あるいは、組成物中の陰イオン性高
分子物質や界面活性剤等の成分と結合して沈殿物を生成
するという問題点がある。

【０００５】かかる問題点を有しない誘導体として、最
近、微生物発酵により生成され、アスコルビン酸の２−
位の水酸基にグルコースが置換されたアスコルビン酸−
2-Ｏ−α−グルコサイドが開発された。しかしながら、
未だこの化合物の経皮吸収及び生体内でのメラニン生成
阻害作用が不確実であり、且つ微生物発酵により提供さ
れるために高価であるという欠点がある。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明者ら
は、物質自体の安定性に優れ、水相基剤内で沈殿現象を
誘発しない新たなアスコルビン酸誘導体を開発するため
研究を重ねたところ、アスコルビン酸の２−位の水酸基
に導入し得るリン酸基について検討し、3-アミノプロパ
ンリン酸が、水を少しでも含有する限り如何なるタイプ
の化粧料であっても使用できる程度にまで、水溶解性に
優れている点に着目し、この3-アミノプロパンリン酸を
リン酸エステル結合により２−位の水酸基に導入して得
られた 2-(3-アミノプロパンリン酸)-L-アスコルビン酸
が上記目的を達成できることを知見し、本発明を完成し
た。

【０００７】特に、3-アミノプロパンリン酸は、それ自
体として皮膚の水分保有能力を向上させ、変形に対する
回復力及び皮膚強度等を増大させ、これにより、皮膚老
化を効果的に遅延させるという作用を有する。さらに、
皮膚に刺激がないだけでなく、細胞の成長及び真皮のコ
ラゲン合成を促進する有効活性を有している。このよう
な効果及び作用により、3-アミノプロパンリン酸を含有
した化粧料組成物が提案されている（ＵＳＰ第 5,723,6
45号）。

【０００８】すなわち、本発明者らは、アスコルビン酸
の２−位の水酸基に3-アミノプロパンリン酸をリン酸エ
ステル結合させた 2-(3-アミノプロパンリン酸)-L-アス
コルビン酸が、物質自体の安定性に優れていて酸化によ
る変色及び力価低下がなく、また、組成物内で沈殿現象
を引き起こさないことを確認した。さらに、リン酸基に
より容易に経皮吸収され、生体内で酵素により容易に加
水分解されるので、アスコルビン酸と3-アミノプロパン
リン酸を遊離させることにより、アスコルビン酸と3-ア
ミノプロパンリン酸の両者が持つ皮膚に対する有効な活
性を同時に得ることができるものと期待され、本発明を
完成するに至った。

【０００９】従って、本発明の目的は、物質自体の安定
性に優れ、水相基剤内で沈殿現象を引き起こさないアス
コルビン酸誘導体を提供することにある。また、本発明
の他の目的は、前記アスコルビン酸誘導体の製造方法を
提供することにある。

【００１０】また、本発明のさらに他の目的は、前記ア
スコルビン酸誘導体を活性成分として含有することによ
り、メラニン生成を抑制して皮膚美白効果を提供するこ
とができるとともに、皮膚の小皺の形成を防止して皮膚
の老化を効果的に遅延せしめることができる美白化粧料
組成物を提供することにある。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明によると、下記一
般式（Ｉ）

【００１２】

【化４】

【００１３】で表される新規の 2-(3-アミノプロパンリ
ン酸)-L-アスコルビン酸が提供される。

【００１４】一般式（Ｉ）のアスコルビン酸誘導体〔以
下、ＡｓＡ−ＡＰＰＡ(ascorbic acid aminopropanol p
hosphoric diester)という〕は、アスコルビン酸の２−
位の水酸基に、3-アミノプロパンリン酸がリン酸エステ
ル結合された化合物である。この化合物は、物質自体の
安定性に優れていて水相基剤内で酸化による変色及び力
価低下がなく、しかも、水溶解性に優れていて沈殿現象
を引き起こさない。また、リン酸基により容易に経皮吸
収され、また、生体内で加水分解酵素により容易に分解
されてアスコルビン酸と3-アミノプロパンリン酸とを遊
離し、これによって、アスコルビン酸のメラニン生成抑
制効果と3-アミノプロパンリン酸の皮膚老化遅延効果と
を同時に提供することができる。

【００１５】前記一般式（Ｉ）のＡｓＡ−ＡＰＰＡの製
造方法を説明すると、本発明の製造方法において、3-ア
ミノプロパンリン酸（ＡＰＰＡ，3-aminopropane phosp
horic acid）は、ＵＳＰ第 5,723,645号に開示された方
法により製造される。このＵＳＰ第 5,723,645号に開示
された3-アミノプロパンリン酸の製造方法は、安価で大
量購入が可能なオキシ塩化リンを使用しており、反応が
２段階よりなっていて、非常に簡単であり、経済的であ
る。

【００１６】具体的には、本発明のＬ−アスコルビン酸
誘導体の製造方法は、（１）3-アミノ−1-プロパノール
とオキシ塩化リンを１：１〜１．３の当量比で、有機塩
基の存在下に有機溶媒中で０〜５℃の温度で１〜２時間
反応させて、下記一般式（II）

【００１７】

【化５】

【００１８】で表される2-クロロテトラヒドロ-2H-1,3,
2-オキサアザホスホリンP-オキサイドを得る段階と、
（２）５，６−水酸基が保護されたＬ−アスコルビン酸
と前記段階（１）で得られた一般式（II）の化合物と
を、有機塩基の存在下に有機溶媒中で反応させて、下記
一般式（III）

【００１９】

【化６】

【００２０】で表されるＬ−アスコルビン酸誘導体を得
る段階と、（３）反応液を濾過して得られた濾液を減
圧、濃縮した後、精製水を加えて５〜１００℃の温度で
約３時間加水分解させて、一般式（Ｉ）の 2-(3-アミノ
プロパンリン酸)-L-アスコルビン酸を得る段階と、
（４）極性有機溶媒で一般式（Ｉ）の化合物を結晶化す
る段階と、（５）任意的に、前記段階（４）で得られた
化合物をアルカリ又は塩基で中和する段階とを含むこと
を特徴とする。

【００２１】本発明による製造方法は、次の反応式で図
式化されることができる。

【００２２】

【化７】

【００２３】段階（１）において、3-アミノ−1-プロパ
ノール（ＡＰ）及びオキシ塩化リン（ＰＯ）は、１：１
〜１．３（ＰＯ／ＡＰ＝１〜１．３）の当量比で反応さ
せることが好ましい。当量比が１：１未満であれば、所
望の生成物を得ることができないし、１：１．３を超過
すると、所望の生成物以外に過量の副産物が生成され
る。

【００２４】また、この段階において、3-アミノ−1-プ
ロパノール及びオキシ塩化リンが１：１で結合した中間
体が９５％以上生成され、3-アミノ−1-プロパノール及
びオキシ塩化リンが２：１で結合した副産物が１〜２％
以下で生成される。

【００２５】しかしながら、前記副産物は、クロマトグ
ラフィを用いて分離するか、又はトルエン溶媒に対する
溶解度の差異を用いて容易に除去することができる。特
に、オキシ塩化リン分子内の３つの塩素原子のうち、２
つの塩素原子が3-アミノ−1-プロパノールの２官能基、
即ち水酸基及びアミン基により置換されて環化された2-
クロロテトラヒドロ-2H-1,3,2-オキサアザホスホリンP-
オキサイドが生成され、他の１つの塩素原子は、５℃以
下の低温では、反応性が減少されて置換されないまま残
される。これは、2-クロロテトラヒドロ-2H-1,3,2-オキ
サアザホスホリンP-オキサイドの塩素原子が低温の無水
非活性溶媒中で安定して、3-アミノ−1-プロパノールと
容易に置換されないからである。

【００２６】従って、５℃以下で反応させることが、２
当量以上の3-アミノ−1-プロパノールがオキシ塩化リン
に置換されて副残物を生成することを防止することがで
きるので好ましい。また、この場合、オキシ塩化リン中
の上記３番目の塩素原子を保護するため、エステル基や
アミド基を導入する必要がないので、反応工程を減らす
ことができるという利点がある。一方、０℃未満の温度
では、反応物の溶解度が減少されて反応の進行が難しい
ので、未反応物の含量が増加されて反応歩留まりが低
い。従って、反応は、０〜５℃で進行させることが好ま
しい。

【００２７】また、この段階においての有機塩基として
は、ピリジン、トリエチルアミン等を使用することがで
き、これらのうち、トリエチルアミンを使用することが
好ましい。

【００２８】また、有機溶媒としては、ジクロロメタ
ン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトニトリ
ル、クロロホルム、エチルエテール等のような非活性溶
媒を使用することができ、これらのうち、ジクロロメタ
ンを使用することが好ましい。

【００２９】一方、段階（２）において、Ｌ−アスコル
ビン酸の５，６−水酸基の保護基としては、ベンジリデ
ン基、フェニルエチリデン基、イソプロピリデン基等を
使用することができ、これらのうち、イソプロピリデン
基を使用することが好ましい。

【００３０】この段階において、有機塩基としては、ピ
リジン、トリエチルアミン等を使用することができ、こ
れらのうち、トリエチルアミンを使用することが好まし
い。

【００３１】また、有機溶媒としては、ジクロロメタ
ン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトニトリ
ル、クロロホルム、エチルエテール等のような非活性溶
媒を使用することができ、これらのうち、クロロホルム
を使用することが好ましい。

【００３２】この段階で生成される一般式（III）の化
合物は、水溶液中において強い酸性（１％水溶液：ｐＨ
２）を示すので、別途に酸触媒を付加することなく、精
製水を添加した後、５〜１００℃の温度で攪拌すること
により、アスコルビン酸の５，６−水酸基の保護基及び
Ｐ−Ｎ結合を容易に加水分解させることができる。この
際の温度は、５〜１００℃の範囲が適当であり、好まし
くは、約５０℃で約３時間反応させる。

【００３３】反応生成物は、極性有機溶媒を析出溶媒と
して結晶化することにより精製することができる。この
際、極性有機溶媒としては、特に限定されるものではな
く、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノー
ル、アセトン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル又
はジオキサンを使用することができる。

【００３４】以上の製造方法により提供されるＡｓＡ−
ＡＰＰＡは、酸性を呈するので、これを中和して塩の形
態で使用することもできる。中和剤としては、炭酸ナト
リウム、水酸化ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化カリ
ウム、水酸化マグネシウム、酸化マグネシウム、水酸化
カルシウム及び酸化カルシウム等のアルカリ又は金属酸
化物；リシン、アルギニン及びヒスチジン等の塩基性ア
ミノ酸；トリエタノールアミン等のアミン又はアンモニ
ア；ポリクアタニウム-4、ポリクアタニウム-6、ポリク
アタニウム-7、ポリクアタニウム−10、ポリクアタニウ
ム−11、ポリクアタニウム−16（polyquaternium-4, -
6, -7, -10, -11, 16）等の陽イオン性ポリマー；及び
ラウリルジメチルベンジルアンモニウムクロライド及び
ステアリルジメチルベンジルアンモニウムクロライド等
の陽イオン性界面活性剤等を使用することができる。

【００３５】ひいては、本発明は、以上の製造方法によ
り製造された一般式（Ｉ）の 2-(3-アミノプロパンリン
酸)-L-アスコルビン酸及び／又はその塩を有効成分とし
て含有することにより、メラニン生成を抑制して皮膚美
白効果を提供することができるとともに、繊維芽細胞の
生長促進等を通じて皮膚老化を効果的に遅延せしめるこ
とができる美白化粧料組成物を提供する。本発明による
美白化粧料組成物は、一般式（Ｉ）の 2-(3-アミノプロ
パンリン酸)-L-アスコルビン酸及び／又はその塩を、化
粧料組成物の総重量に対して０．００５〜１０重量％の
量で、好ましくは０．０１〜３重量％の量で含有する。

【００３６】本発明の美白化粧料は、その化粧料のタイ
プについては特に限定されるものではなく、具体的に
は、柔軟化粧水、収斂化粧水、栄養化粧水、栄養クリー
ム、マッサージクリーム、エッセンス、アイクリーム、
アイエッセンス、クレンジングクリーム、クレンジング
フォーム、クレンジングウォーター、パック、パウダ
ー、ボディローション、ボディクリーム、ボディオイル
又はボディエッセンスとして使用することができる。

【００３７】

【実施例】以下、実施例及び試験例により、本発明によ
るＡｓＡ−ＡＰＰＡの製造方法及びこれを含有する組成
物の作用効果についてより詳しく説明する。しかしなが
ら、本発明がこれらの実施例により限定されるものでは
ない。

【００３８】製造例１ 2-クロロテトラヒドロ-2H-1,3,2-オキサアザホスホリン
P-オキサイドの製造：オキシ塩化リン３４．１ｍｌ
（０．３６mol ）をジクロロメタン４００ｍｌに溶かし
た後、得られた溶液を氷浴(ice bath)で０〜５℃に冷却
させた。他の容器に、3-アミノ−1-プロパノール２８ｍ
ｌ（０．３６mol ）とトリエチルアミン１０２ml（０．
７３mo）をジクロロメタン２００ｍｌに希釈した後、上
記で製造した反応溶液に２時間滴加した。滴加後、生成
されたトリエチルアンモニウムクロライドを濾過して除
去した。濾液を精製水１００ｍｌで洗浄した後、無水硫
酸ナトリウムで乾燥させ、濾過、減圧して濃縮した。ト
ルエンを加えて結晶を収得し、減圧下に乾燥して白色固
体５３ｇを得た。ＩＲ及びＮＭＲ分析により標題化合物
であることを確認した。

【００３９】融点：７９〜８２℃ ＩＲ（ＣＨＣｌ₃, cm ^-1）：3254, 1477, 1274, 1092,
1036, 996¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ(ppm)= 1.7(m,1H), 1.1
(m,1H), 3.3(m,2H),4.4(m,2H), 4.9(br,1H)¹³ Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ(ppm)= 25.78, 25.85,
42.11, 71.69, 71.81

【００４０】製造例２ 2-(3-アミノプロパンリン酸)-L-アスコルビン酸の製
造：５，６−水酸基がイソプロピリデン基で保護された
Ｌ−アスコルビン酸１０ｇ（０．０４６mol ）をクロロ
ホルム１００ｍｌに溶かした後、５℃の氷浴でトリエチ
ルアミン１２．９ｍｌ（０．０９３mol ）を滴加した。
同温度で、製造例１で得られた2-クロロテトラヒドロ-2
H-1,3,2-オキサアザホスホリンP-オキサイド８．６ｇ
（０．０５５mol ）をクロロホルム２０ｍｌに溶かした
後、前記溶液に滴加した。滴加後、混合物を常温で一晩
攪拌した。

【００４１】有機層をリン酸水溶液で洗浄した後、無水
硫酸ナトリウム及び活性炭を加えて乾燥、脱色させた。
反応液を濾過して得られた濾液を減圧、濃縮した後、精
製水３０ｍｌに加えて５０℃の恒温槽で３時間攪拌し
た。攪拌済みの反応液にイソプロパノール１５０ｍｌを
加えて結晶を収得し、減圧下に乾燥させて白色固体６ｇ
を得た。ＩＲ及びＮＭＲ分析により標題化合物であるこ
とを確認した。

【００４２】融点：１７６〜１８０℃ ＩＲ（ＫＢｒ, cm^-1）：3407, 3322, 3101, 2914, 174
7, 1673, 1664, 1533,1364, 1218, 1072¹ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ）：δ(ppm)= 1.9(m,2H), 3.05(t,
2H), 3.62(m,2H),3.98(m,3H), 4.90(s,1H)¹³ Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ）：δ(ppm)= 26.76, 22.86, 32.
35, 57.30, 59.77,59.84, 64.15, 71.55, 71.72, 109.7
9,109.88, 156.58, 156.63, 167.32,167.38

【００４３】製造例３〜７ 2-(3-アミノプロパンリン酸)-L-アスコルビン酸の各種
塩の製造：製造例２で得られたＡｓＡ−ＡＰＰＡ１ｇず
つを精製水３０ｍｌに溶かした後、各々に５％の炭酸ナ
トリウム水溶液（製造例３）、５％の炭酸カリウム水溶
液（製造例４）、水酸化カルシウム（製造例５）、酸化
マグネシウム（製造例６）、５％のトリエタノールアミ
ン水溶液（製造例７）を加えてｐＨ７とした。得られた
溶液を凍結乾燥して白色固体として各々の塩を得た。

【００４４】試験例１〔物質自体の安定性評価〕Ｌ−アスコルビン酸と、製造
例２で得られたＡｓＡ−ＡＰＰＡを、各々５０μＭの濃
度でｐＨ７の緩衝溶液に溶かした後、５０℃の恒温槽で
保管した。一定時間毎に、製造例２の試料は２５９ｎｍ
で、Ｌ−アスコルビン酸は２６６ｎｍでＵＶ吸光度を測
定した。試料溶液中の試料残存率（％）を表１に示し
た。

【００４５】

【表１】

【００４６】表１から明らかなように、Ｌ−アスコルビ
ン酸は、１時間以内に大部分分解されるが、本発明の化
合物は、中性の水溶液で安定した状態で存在することが
わかる。

【００４７】試験例２〔水相基剤内での安定性評価〕製造例３及び製造例６の
化合物と、比較例１の化合物（L-アスコルビン酸2-ホス
フェートマグネシウム塩）各々３ｇを精製水１００ｍｌ
に溶かした後、５０℃の恒温槽で３０日間保管した後、
沈殿生成と着色有無等の経時変化を観察した。その結果
を表２に示す。

【００４８】

【表２】

【００４９】表２から明らかなように、本発明の化合物
は、水相基剤内で沈殿物を形成することなく、また、経
時変化による変色も発生しない。

【００５０】試験例３〔繊維芽細胞の増殖〕新生児の表皮から得た皮膚をタイ
プ１コラゲナーゼ(Type 1 collagenase)を加えて表皮を
除去して繊維芽細胞を培養した。この際、培地は、Dulb
ecco's Modified Eagle's Media(DMEM) を使用した。繊
維芽細胞の測定は、ＭＴＴ法（Journal of Immunologic
al Methods, 65(1983) 55-63. 参照) で測定した。実験
の結果、製造例２の化合物は、１０ｍＭ濃度まで繊維芽
細胞の増殖効果を示した。

【００５１】試験例４〔人体安定性評価〕化粧料の原料は、人体に使用される
ため、もっとも人体に対する安定性が重要である。本発
明のＡｓＡ−ＡＰＰＡの人体に対する毒性及び刺激性の
有無を下記のような実験を経て調べた。その結果、Ａｓ
Ａ−ＡＰＰＡが化粧料として毒性と刺激がないものであ
ることを確認した。

【００５２】試験例４−１〔急性経口毒性実験(Acute oral toxicity test)〕２０
〜３３ｇの１０匹（雌雄各々５匹）のＩＣＲマウスに、
製造例２のＡｓＡ−ＡＰＰＡ１０ml／kgを生理食塩水に
５０％の濃度で希釈して１回経口投与して試験群（Ａｓ
Ａ−ＡＰＰＡ投与量：５ｇ／ｋｇ）とした。また、２０
〜３３ｇの１０匹（雌雄各々１０匹）のＩＣＲマウス
に、生理食塩水１０ｍｌ／ｋｇを投与して対照群（Ａｓ
Ａ−ＡＰＰＡ投与量：０ｇ／ｋｇ）とした。投与当日、
６時間までは毎時間一般状態変化を観察し、翌日から１
４日までは毎日の一般状態変化（臨床症状）、中毒症
状、死亡如何等を観察した。また、１、３、７、１４日
には、体重を測定して体重変化を観察した。

【００５３】観察期間中に死亡動物が発生した場合は直
ちに剖検し、また、観察期間終了時まで生存した動物
は、観察期間終了後に剖検して内部臓器を肉眼で検査し
た後、異常症状が観察された場合には病理組織検査を実
施した。観察の結果、試験全期間にわたって死亡動物は
観察されず、体重変化も全体試験群において対照群に比
べて著しい差異は観察されなかった。また、試験群及び
対照群を投与した動物各個体において臓器剖検所見の結
果、特異な異常症状は観察されなかった。以上の実験結
果において、リチフィールド−ウィルコソン(Litchfiel
d-Wilcoxon) 法によると、ＡｓＡ−ＡＰＰＡのＬＤ
₅₀（致死量）は、急性経口露出の際、５ｇ／ｋｇ以上で
あった。

【００５４】試験例４−２〔急性経皮毒性実験(Acute dermal toxicity test)〕２
０〜３３ｇの１０匹（雌雄各々５匹）のＩＣＲマウス
に、製造例２のＡｓＡ−ＡＰＰＡ４ml／kgを生理食塩水
に５０％の濃度で希釈して１回経皮投与して試験群（Ａ
ｓＡ−ＡＰＰＡ投与量：２ｇ／ｋｇ）とした。また、２
０〜３３ｇの１０匹（雌雄各々５匹）のＩＣＲマウス
に、生理食塩水４ｍｌ／ｋｇを投与して対照群（ＡｓＡ
−ＡＰＰＡ投与量：０ｇ／ｋｇ）とした。

【００５５】投与約２４時間前に、皮膚に異常のない腹
部の毛を１．５×１．５ｃｍ²のサイズで除去した。次
いで、投与当日に対照物質及び試験物質を１×１ｃｍ²
のガーゼに均一に塗布した後、ガーゼを除毛部位に取り
付け、非刺激性テープを用いて２４時間固定した。投与
当日、６時間までは毎時間一般状態変化を観察し、翌日
から１４日までは毎日の一般状態変化（臨床症状）、中
毒症状、死亡如何等を観察した。また、１、３、７、１
４日には、体重を測定して体重変化を観察した。

【００５６】観察期間中に死亡動物が発生した場合は直
ちに剖検し、また、観察期間終了時まで生存した動物
は、観察期間終了後に剖検して内部臓器を肉眼で検査し
た後、異常症状が観察された場合には病理組織検査を実
施した。観察の結果、試験全期間にわたって死亡動物は
観察されず、体重変化も全体試験群において対照群に比
べて著しい差異は観察されなかった。また、試験群及び
対照群を投与した動物各個体において臓器剖検所見の結
果、特異な異常症状は観察されなかった。以上の実験結
果において、リチフィールド−ウィルコソン(Litchfiel
d-Wilcoxon) 法によると、ＡｓＡ−ＡＰＰＡのＬＤ
₅₀（致死量）は、急性経皮露出の際、２ｇ／ｋｇ以上で
あった。

【００５７】試験例４−３〔皮膚１次刺激実験(primary skin irritation test)〕
ニュージーランド白色種の雄ウサギ１２匹を、実験２４
時間前に背中部位の毛を除去して試験群及び対照群とし
て使用した。また、脊椎を中心として左右各々２部位に
約２．５ｃｍ×２．５ｃｍ程度のサイズで、左側には対
照群として生理食塩水１．０ｍｌを塗布し、右側には、
製造例２のＡｓＡ−ＡＰＰＡ１．０ｍｌ（０．５ｍｌ／
site）を生理食塩水で５０％濃度で希釈して塗布した。
塗布後、各試験部位をガーゼで被覆した後、非刺激性テ
ープでよく固定した。２４時間後、生理食塩水を用いて
試験部位を軽く洗浄した。

【００５８】その結果、パッチを除去した後、２４時間
及び７２時間に紅斑(erythema)、痂皮、浮腫等の刺激性
有無を観察した。食品医薬品安全本部告示第９６−８号
「医薬品等の毒性試験基準」により決定された皮膚反応
評価結果、浮腫及び痂皮の形成は、全く観察されず、弱
い紅斑に起因して皮膚１次刺激指数ＰＩＩ(Draize のPr
imary Irritation Index) は、０．１３（ほぼ無刺激
性）であった。

【００５９】試験例４−４〔眼粘膜刺激実験(Eye irritation test) 〕ニュージー
ランド白色種のウサギ９匹を試験群及び対照群として使
用した。ウサギ１匹当たり右側の目には、製造例２のＡ
ｓＡ−ＡＰＰＡ０．１ｍｌを生理食塩水で１０％の濃度
で希釈して投与した。２０〜３０秒後、ただ３匹のウサ
ギだけを無菌生理食塩水で十分に洗眼し、他の６匹は洗
眼しなかった。１、２、３、４、７日後に、角膜の混濁
とその範囲、紅彩の反応、結膜の発赤、浮腫、排出物の
程度等のような刺激性有無を観察した。「医薬品等の毒
性試験基準」上の眼球病変の等級を用いて眼粘膜反応の
刺激を評価し、一般に多く使用される眼刺激区分表によ
って結果に対する刺激性の程度を判定した結果、２４時
間及び４８時間の経過後、如何なる異常反応も観察され
ず、眼粘膜の刺激率（Ｍ．Ｏ．Ｉ）は、洗浄の場合０．
０であり、無洗浄の場合も０．０であった。

【００６０】試験例４−５〔皮膚感作性実験(skin sensitization test) 〕３００
〜３６０ｇのギニア豚(Hartley Albino Guinea Pig) ６
匹（雌雄各々３匹）を試験群及び対照群としてマグヌソ
ン(Maggnusson)とキリグマン(Kligman)の試験方法(Guin
ea Pig Maximization test)を実施した。

【００６１】インダクション試験（Induction test：軽
刺激範疇の試験物質濃度）とチェリンジ試験（Challeng
e test：無刺激範疇の試験物質濃度）に使用すべき試料
濃度を決定するために、試験物質の濃度を６．２５％、
１２．５％、２５．０％にして雌雄各々３匹のギニア豚
に対して１次刺激を実施した。各動物に対して３つの濃
度の試料を脊椎を中心として左右２部位各々（２．５×
２．５ｃｍ）に、製造例２のＡｓＡ−ＡＰＰＡ０．５ｍ
ｌ／siteを塗布し、ガーゼで被覆した後、非刺激性テー
プを用いて２４時固定した。次に、雌雄各々１匹に２５
％濃度のＡｓＡ−ＡＰＰＡを２６ゲージ（gauge ）１／
２インチの針で０．１ｍｌ注射する皮内注射（Intrader
mal injectio）を実施した。皮内注射７日目に、同一部
位を除毛した後、１０％ＳＬＳ溶液（基剤：ペトロラチ
ウム）を塗布して前処理した後、ＡｓＡ−ＡＰＰＡを同
一部位に０．５ｍｌ／siteを塗布し、ガーゼで被覆し
た後、非刺激性テープを用いて４８時間固定した。２週
間後、除毛された実験動物の左側の背中部位に試験物質
を塗布し、右側には、生理食塩水を塗布して同一の方法
で適用した。

【００６２】２４時間後、試験部位を生理食塩水溶液で
軽く洗浄した。対照群は、試験物質の代わりに生理食塩
水を使用し、他の試験過程は同一に進行した。試験の結
果、パッチを除去した後、２４、４８、７２時間で、対
照群と試験群は、いずれも、紅斑、痂皮、浮腫等のよう
な皮膚症状は全く観察されず、皮膚感作性は、キリグマ
ン(Kligman) の基準によると、等級１の感作性誘発範疇
に属する安全性の高い物質であった。

【００６３】試験例４−６〔人体パッチ実験（Human patch test）〕２０〜３０歳
の健康な女性３０名を対象としてＣＴＦＡガイドライン
(The Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association,
Inc. Washington, D.C., 20036,1991) によって実施し
た。フィンチャンバ(Finn Chamber)に準備された物質
（１０％in Patch base ）２０μｌを滴下した後、７０
％のエタノールで洗浄した後、乾燥し、試験部位である
背中部位に載置して微少孔テープ(micropore tape)で固
定した。２４時間後、テープ及びチャンバを除去し、マ
ーキングペン(marking pen) で試験部位を表示し、２
４、４８時間後に各試験部位の皮膚反応を観察して国際
接触皮膚炎研究会（International Contact Dermatitis
Research Group:ICDRG ）の規定により判定した。その
結果、人体皮膚１次刺激反応は殆ど現れず、紅斑反応は
１％程度であったが、４８時間後に全部消失した。平均
反応度（ＭＳ）は、０．４２であった。その結果を表３
に示す。

【００６４】

【表３】

【００６５】試験例４−７〔累積刺激性実験（Repeat insult human patch tes
t）〕２０〜３０歳の健康な女性２０名を対象としてＣ
ＴＦＡガイドライン（The Cosmetic, Toiletry and Fra
grance Association, Inc. Washington, D.C., 20023,
1991）によって実施した。７０％のプロパノールで試験
部位である背中部位を拭きだし、乾燥した後、フィンチ
ャンバーに準備された試験物質（１０％in patch base
）２０μｌを滴下したものを塗布し、塗布部位は、左
側の上部にマーキングペンで表示した。塗布は、２４時
間毎に９回３週間行った。３週間の誘導期間(induction
period)を適用した後、約２週間後にチェリンジ挿入パ
ッチ(challenge Insult Patch)を行い、この段階では、
元来の試験部位と新たな試験部位を４８時間パッチ適用
した。パッチ除去後、２４、４８、７２時間に各試験部
位の皮膚反応を観察して国際接触皮膚炎研究会（Intern
ational Contact Dermatitis Research Group:ICDRG ）
の規定により判定した。実験の結果、累積パッチによる
累積刺激性は、微少刺激範囲であり、著しい刺激反応は
現れず、感作性もなかった。誘導期間の平均反応度は、
０．１４であり、チェリンジ期間の平均反応度は、０で
あった。その結果を表４に示す。

【００６６】

【表４】

【００６７】以上の（試験例４−１）〜（試験例４−
７）の試験結果を整理して次の表５に示した。

【００６８】

【表５】

【００６９】以上のような毒性及び皮膚に対する安全性
実験において、本願発明のＡｓＡ−ＡＰＰＡは、皮膚外
用剤として安全な物質であることが確認できた。

【００７０】実施例１及び比較例１〜５（クリーム）表６に示す成分で、実施例１及び比較例１〜５のクリー
ムを製造した。

【００７１】

【表６】

【００７２】実施例２及び比較例２〜１０（柔軟化粧
水）表７に示す成分で、実施例２及び比較例２〜１０の柔軟
化粧水を製造した。

【００７３】

【表７】

【００７４】試験例５〔皮膚安全性評価〕実施例１〜２及び比較例１〜１０に
より製造された美白化粧料に対して通常のパッチテスト
を実施して皮膚安全性を比較した。刺激の程度は、下記
のように区分し、試験結果を表８に示した。

【００７５】（判定基準） +++ ：刺激が非常に激しく、化粧料として使用するに
は不適合である。 ++ ：刺激が激しく、使用しない方がよい。＋：若干の刺激があり、使用時に注意を要する。 ± ：殆ど刺激がない。 − ：全然刺激がなく、敏感な皮膚に使用してもよ
い。＝：数回の繰り返し実験の結果、刺激が殆どない。

【００７６】

【表８】

【００７７】表８の結果から明らかなように、ＡｓＡ−
ＡＰＰＡ含有化粧料は、皮膚に対して刺激がないことが
わかる。

【００７８】試験例６〔美白効能〕本発明の化粧料の美白効能を実験するた
め、健康な成人男女１０名を対象として設定して、両腕
の下膊部に、直径１．５ｃｍの円形孔４つを穿設したパ
スを貼った後、１０ｃｍ距離でフィリブスＴＬ２０Ｗ／
１２ＵＶランプとＴＬ２０Ｗ／０９ＵＶランプを同時に
１．５ＭＥＤずつ１日１回ずつ２日間紫外線を照射し
た。被験者をＡ、Ｂグループで分けて、グループＡに
は、クリーム（実施例１及び比較例１〜５）を、グルー
プＢには、柔軟化粧料（実施例２及び比較例６〜１０）
を１日２回ずつ６週間塗布した後、肉眼で美白効能を判
定した。その結果を表９に示す。

【００７９】

【表９】

【００８０】表９から明らかなように、ＡｓＡ−ＡＰＰ
Ａ含有化粧料（実施例１と実施例２）は、アスコルビン
酸含有化粧料（比較例２と比較例７）に比べて美白効果
が多少低いが、アスコルビン酸2-ホスフェートマグネシ
ウム塩含有化粧料（比較例４と比較例９）と比較する
と、ほぼ類似する美白効果を示す。

【００８１】

【発明の効果】本発明により提供されるＡｓＡ−ＡＰＰ
Ａは、物質自体の安定性に優れていて水相基剤内で酸化
による変色及び力価低下がなく、また、水溶解性に優れ
ていて沈殿現象を誘発することがなく、しかも、皮膚に
対する刺激がないばかりでなく、アスコルビン酸のメラ
ニン生成抑制効果と3-アミノプロパンリン酸の皮膚老化
遅延効果を同時に提供することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者李長燮大韓民国京畿道龍仁市器興邑書川里356 −11 (72)発明者李正老大韓民国京畿道群浦市産本２洞1328− 1605 (72)発明者天芝民大韓民国京畿道龍仁市器興邑上渇里102 −３、ネックスビルアパート1204号 (72)発明者張東逸大韓民国京畿道安養市滿安區石水２洞 423−22、韓信アパート205棟201号 (72)発明者李玉燮大韓民国京畿道安養市滿安區石水２洞、ラッキアパート８棟1002号 (72)発明者李相麟大韓民国ソウル特別市廣津區九宜洞35− 47 (56)参考文献特開平１−283208（ＪＰ，Ａ) 特開昭61−50908（ＪＰ，Ａ) 特開平３−291289（ＪＰ，Ａ) 特開平７−206879（ＪＰ，Ａ) 特公昭44−31237（ＪＰ，Ｂ１) 米国特許5723645（ＵＳ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C07F 9/09 A61K 7/00 ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】下記一般式（Ｉ）【化１】で表される水安定型 2-(3-アミノプロパンリン酸)-L-ア
スコルビン酸又はその塩。
【請求項２】前記塩は、ナトリウム、カリウム等のア
ルカリ金属による塩；カルシウム、マグネシウム等のア
ルカリ土金属による塩；リシン、アルギニン、ヒスチジ
ン等の塩基性アミノ酸による塩；トリエタノールアミン
等のアミン又はアンモニアによる塩；ポリクアタニウム
-4、ポリクアタニウム-6、ポリクアタニウム-7、ポリク
アタニウム−10、ポリクアタニウム−11、ポリクアタニ
ウム−16等の陽イオン性ポリマーによる塩；及びラウリ
ルジメチルベンジルアンモニウムクロライド及びステア
リルジメチルベンジルアンモニウムクロライド等の陽イ
オン性界面活性剤による塩から選ばれることを特徴とす
る請求項１に記載の 2-(3-アミノプロパンリン酸)-L-ア
スコルビン酸の塩。
【請求項３】（１）3-アミノ−1-プロパノールとオキ
シ塩化リンを１：１〜１．３の当量比で、有機塩基の存
在下に有機溶媒中で０〜５℃の温度で１〜２時間反応さ
せて、下記一般式（II）【化２】で表される2-クロロテトラヒドロ-2H-1,3,2-オキサアザ
ホスホリンP-オキサイドを得る段階と、（２）５，６−
水酸基が保護されたＬ−アスコルビン酸と前記段階
（１）で得られた一般式（II）の化合物とを、有機塩基
の存在下に有機溶媒中で反応させて、下記一般式（II
I）【化３】で表されるＬ−アスコルビン酸誘導体を得る段階と、
（３）反応液を濾過して得られた濾液を減圧、濃縮した
後、精製水を加えて５〜１００℃の温度で約３時間加水
分解させて、一般式（Ｉ）の 2-(3-アミノプロパンリン
酸)-L-アスコルビン酸を得る段階と、（４）極性有機溶
媒で一般式（Ｉ）の化合物を結晶化する段階と、（５）
任意的に、前記段階（４）で得られた化合物をアルカリ
又は塩基で中和する段階とを含むことを特徴とする請求
項１に記載の 2-(3-アミノプロパンリン酸)-L-アスコル
ビン酸の製造方法。
【請求項４】請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表され
る 2-(3-アミノプロパンリン酸)-L-アスコルビン酸及び
／又はその塩を、組成物の総重量に対して０．００５〜
１０重量％の量で含有することを特徴とする美白化粧料
組成物。