CN103502214A - D-异谷氨酰基-[d/l]-色氨酸的前药 - Google Patents
D-异谷氨酰基-[d/l]-色氨酸的前药 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103502214A CN103502214A CN201280020994.2A CN201280020994A CN103502214A CN 103502214 A CN103502214 A CN 103502214A CN 201280020994 A CN201280020994 A CN 201280020994A CN 103502214 A CN103502214 A CN 103502214A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- trp
- glu
- compound
- compound according
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 0 *N1CCOCC1 Chemical compound *N1CCOCC1 0.000 description 1
- ALNBJMJAIIYCBK-MRVPVSSYSA-N CC(CNC(CC[C@H](C(OCCC(F)(F)F)=O)N)=O)=O Chemical compound CC(CNC(CC[C@H](C(OCCC(F)(F)F)=O)N)=O)=O ALNBJMJAIIYCBK-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N c1cccc2c1[nH]cc2 Chemical compound c1cccc2c1[nH]cc2 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
- C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
- C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
- C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
- C07D209/20—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals substituted additionally by nitrogen atoms, e.g. tryptophane
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
- A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/0215—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing natural amino acids, forming a peptide bond via their side chain functional group, e.g. epsilon-Lys, gamma-Glu
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明提供式(I)的羧酸酯衍生物，制备它们的方法和使用它们的方法。这些化合物为D-异谷氨酰基-[D/L]-色氨酸的前药。在人类肝细胞中和在人类血液中检测到一些前药向母药D-异谷氨酰基-D-色氨酸（或thymodepressin）的体外生物转化。还报导了向大鼠口服施用一些前药之后的体内药代动力学研究。
Description
技术领域
本发明涉及药物科学领域，更特别地涉及D-异谷氨酰基-D-色氨酸的前药和D-异谷氨酰基-L-色氨酸的前药。
背景技术
前药是当其施用后在体内被修饰以提供活性药物的化合物。根据治疗用途和施用模型，前药可以被经口使用，注射、鼻内使用，或在用于肺组织的吸入器制剂中使用（Rautio等人Nature Reviews Drug Discovery7,255-270(2008年2月)）。已经综述了前药化合物在用于肺组织的吸入器制剂中的使用（Proceedings Of TheAmerican Thoracic Society Vol12004,How the Lung Handles Drugs,Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of Inhaled Corticosteroids,Julia Winkler,Guenther Hochhaus,and Hartmut Derendorf356-363;H.Derendorf等人,Eur Respir J2006;28:1042–1050）。
对于吸入器和鼻内施用方式，通过迅速清除吸收的活性药物使口服生物利用度和系统副作用最小化可能是部分设计考虑要素。被设计用于经口施用的前药可以更加提供改善的经口施用于动物后的口服生物利用度和在pH1.2（也称为人工胃液）或pH5.8或6.8（也称为人工肠液）的人工消化液中的适当的化学稳定性。对于在注射中使用的前药，化合物的水溶性是重要的考虑要素。
前药的筛选基准取决于其施用模型。然而，在人类血液中能够被容易地水解为活性药物的前药是施用后的积极特征。人类血液具有脂酶，其能够生物转化一些酯衍生物为活性药物（Derek Richter和Phyllis Godby Croft,Blood Esterases,Biochem J.1942年12月;36(10-12):746–757;Williams FM.Clinical significance ofesterases in man.Clin Pharmacokinet.1985年9至10月;10(5):392-403）。此外，前药可以在人类肝脏中被生物转化为活性药物（Baba等人,The pharmacokinetics ofenalapril in patients with compensated liver cirrhosis Br J Clin Pharmacol.1990年6月;29(6):766-9）。因此，不管施用模型如何，人类肝细胞和血液的生物转化结果可以被用于评估酯前药。
D-异谷氨酰基-D-色氨酸（也称为H-D-Glu(D-Trp-OH)-OH或Apo805）是一种为了治疗自身免疫疾病（包括牛皮癣）而开发的合成的血液调节二肽（Sapuntsova,S.G.,等人(2002年5月),Bulletin of Experimental Biology and Medicine,133(5),488-490）。H-D-Glu(D-Trp-OH)-OH（thymodepressin）的钠盐被视为是对于牛皮癣的有效治疗剂（US5,736,519），并且在俄罗斯是可以作为注射安瓿提供的。
D-异谷氨酰基-L-色氨酸（也称为H-D-Glu(L-Trp-OH)-OH或SCV-07）被报道对于调节患者的免疫系统是有用的（US5,744,452）并且有用于治疗肺癌（WO2009/025830A1）、结核（WO2003/013572A1）、生殖器病毒感染（WO2006/076169）、黑素瘤（WO2007/123847）、出血性病毒感染（WO2006/047702）、呼吸系统病毒感染（WO2005/112639）、C型肝炎（WO2010/017178）、和由于粘膜疾病的伤害或损伤（WO2008/100458）。SCV-07还被报道作为疫苗增强剂（WO2006/116053）。
发明内容
在某种程度上，本发明基于D-异谷氨酰基-D-色氨酸（H-D-Glu(D-Trp-OH)-OH）的前药和D-异谷氨酰基-L-色氨酸（H-D-Glu(L-Trp-OH)-OH）的前药的说明。
本发明的例证性实施方案提供一种式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中G选自：H、2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、C1-C8烷基、苄基和A5-A10芳基；T选自：H、C1-C8烷基、2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、CH2CONR4R5、CH2CH2NR4R5、C3-C6环烷基、A5-A10芳基、
和
n为1、2、3或4；R1为H或C1-C8烷基；R2为C1-C8烷基、C3-C6环烷基或苯基；R3为C1-C8烷基、C3-C6环烷基、或苯基；并且R4和R5或者为分开的基团，或者与它们连接的N一起形成单一基团；当R4和R5为分开的基团时，R4和R5独立地选自C1-C6烷基；R4和R5与它们连接的N一起形成单一基团时，该单一基团选自吗啉基、N-(C1-C4烷基)-哌嗪基和哌啶基；条件是，如果T为H，那么G为2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、C1-C8烷基或苄基；如果T为CH2CONR4R5、CH2CH2NR4R5、或C3-C6环烷基，那么G为H；并且如果T为C1-C8烷基，那么G为2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、或A5–A10芳基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中如果G为H，那么T选自：2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、CH2CONR4R5、CH2CH2NR4R5、C3-C6环烷基、
和
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中如果G为H，那么T选自：2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、CH2CH2NR4R5、C3-C6环烷基、
和
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中如果G为H，那么T选自2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、CH2CH2NR4R5、
和
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中色氨酸基团的手性碳为D-构型。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中色氨酸基团的手性碳为L-构型。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中G为H并且T为A5至A10芳基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为(CH2)nCF3。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为2-吗啉乙基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中G为2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、或C1-C8烷基；并且，T为2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、A5至A10芳基、
或
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为C1-C8烷基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中G为A5至A10芳基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为异戊基，G为茚满基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为H并且G为乙基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为H并且G为苄基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为H并且G为甲基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为H并且G为异戊基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为H并且G为异丙基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为H，G为(CH2)nCF3并且n为1。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为H，G为(CH2)nCF3并且n为2。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为H并且G为2-吗啉乙基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为
R1为甲基，R3为环己基，并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为2-吗啉乙基并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为环己基并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为
R1为甲基，R3为环己基并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为(CH2)nCF3，n为2并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为
R1为甲基，R3为乙基并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为
R1为H，R2为戊-2-基并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为
R1为甲基，R3为异丙基并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为CH2CONR4R5，R4为CH3，R5为CH3并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为CH2CONR4R5，R4为CH3，R5为CH3并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为
R1为H，R2为C(CH3)2-CH2CH2CH3并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为(CH2)nCF3，n为1并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为(CH2)nCF3，n为1并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为茚满基并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为2-甲氧基苯基并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为R1为H，R2为叔丁基并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为
R1为H，R2为苯基并且G为H。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为(CH2)nCF3，n为2，G为(CH2)nCF3并且n为2。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为2-吗啉乙基并且G为乙基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为
R1为甲基，R3为乙基并且G为乙基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为2-吗啉乙基并且G为2-吗啉乙基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为苄基并且G为2-吗啉乙基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为茚满基并且G为2-吗啉乙基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为2-吗啉乙基，G为(CH2)nCF3并且n为2。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为2-吗啉乙基并且G为异戊基。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的化合物，其中T为(CH2)nCF3，n为1，G为(CH2)nCF3并且n为1。
本发明的例证性实施方案提供一种药物制剂，其含有本文描述的化合物和药学上可接受的赋形剂。
本发明的例证性实施方案提供本文描述的药物组合物，其中所述制剂适合于吸入使用。
通过阅读以下的本发明具体实施方案和附图，本发明的其它方面和特征对于本领域技术人员将变得明显。
附图说明
图1显示向大鼠口服给予H-D-Glu(D-Trp-O-CH2-O-CO-t-Bu)-OH(Apo839)和H-D-Glu(D-Trp-OH)-OH单钾盐(Apo805K1)(5mg/kg)后，H-D-Glu(D-Trp-OH)-OH(Apo805)在血浆中的平均浓度(n=5)，其证明了前药的相似的口服生物利用度。
图2显示向大鼠口服给予H-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-环己基)-OH(Apo843)和H-D-Glu(D-Trp-OH)-OH单钾盐(Apo805K1)(5mg/kg)后，H-D-Glu(D-Trp-OH)-OH(Apo805)在血浆中的平均浓度(n=5)，其证明了前药降低的口服生物利用度。口服生物利用度的最小化是对于吸入施用模型而设计的前药的一个考虑特征。
具体实施方式
在某种程度上，本发明基于D-异谷氨酰基-D-色氨酸的前药和D-异谷氨酰基-L-色氨酸的前药的说明。
如本文所使用的，符号
指所展示的基团连接于分子的其余部分的点。例如，戊基或CH3-CH2-CH2-可以表示为
另一个例子是CH3-CH2-CH-CH2-CH3（戊-3-基基团）可以表示为
如本文所使用的，术语“烷基”意指支链或直链饱和烃链。烷基基团的非限定性、例证性实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丙基、丁基、仲丁基、异丁基、正戊基、己基、辛基等。当术语“Cx-Cy”（其中x和y是整数）被用于烷基基团时，‘C’指烷基基团的碳原子数。例如，甲基可以被描述为C1烷基，和异丁基可以被描述为C4烷基。C1-C4烷基意指甲基（C1烷基）、乙基（C2烷基）、丙基或异丙基（C3烷基）、丁基或仲丁基或异丁基或叔丁基（C4烷基）。每个范围中的所有特定整数和整数范围特别地用宽范围描述。例如，C1-C8，特别包括下列例子：C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C1-C2、C1-C3、C1-C4、C1-C5、C1-C6、C1-C7、C1-C8、C2-C3、C2-C4、C2-C5、C2-C6、C2-C7、C2-C8、C3-C4、C3-C5、C3-C6、C3-C7、C3-C8、C4-C5、C4-C6、C4-C7、C4-C8、C5-C6、C5-C7、C5-C8、C6-C7、C6-C8、和C7-C8。另一个例子是C5-C8特别包括C5、C6、C7、C8、C5-C6、C5-C7、C5-C8、C6-C7、C6-C8、和C7-C8。
如本文所使用的术语“芳基”意指具有至少一部分符合休克尔规则的基团的任何基团。这包括烃基团和包括杂原子的基团。更清楚地，当不考虑该基团的其余部分时，只要芳基基团的某部分符合休克尔规则，芳基基团作为一个整体不需要符合休克尔规则。芳基基团的非限定性、例证性实例包括苯基、苄基、茚满基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基和2-氟苯基。当术语“Ax-Ay”（其中x和y是整数）被用于芳基基团时，‘A’指芳基基团中的碳原子和杂原子的总数。例如，1-氟苯基可以被描述为A7芳基，和2-甲氧基苯基可以被描述为A8芳基。呋喃是A5芳基的一个例子。每个范围中的所有特定整数和整数范围特别地用宽范围描述。例如，A5-A10，特别包括下列例子：A5、A6、A7、A8、A9、A10、A5-A6、A5-A7、A5-A8、A5-A9、A5-A10、A6-A7、A6-A8、A6-A9、A6-A10、A7-A8、A7-A9、A7-A10、A8-A9、A8-A10和A9-A10。
如本文所使用的，术语“吗乙基（mofeti）”意指具有结构：
的吗啉乙基基团。吗乙基通常以IUPAC命名2-吗啉乙基被提及。
本文还使用以下的首字母缩写和/或简化符号。
本发明的化合物可以描述为式I：
在式I中：
G选自：H、2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、C1-C8烷基、和A5-A10芳基；和
T选自：H、C1-C8烷基、2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、CH2CONR4R5、CH2CH2NR4R5、C3-C6环烷基、A5-A10芳基、和
在(CH2)nCF3基团中，n为1、2、3或4。
在这些R1存在的基团中，R1为H或C1-C3烷基。
在这些R2存在的基团中，R2为C1-C8烷基、C3-C6环烷基、或苯基。
在这些R3存在的基团中，R3为C1-C8烷基、C3-C6环烷基、或苯基。
在这些R4和R5存在的基团中，R4和R5或者为分开的基团，或者与它们连接的N一起形成单一基团。当R4和R5为分开的基团时，R4和R5独立地选自：C1-C6烷基。当R4和R5与它们连接的N一起形成单一基团时，该单一基团选自：吗啉基、N-(C1-C4烷基)-哌嗪基和哌啶基。
式I的化合物被限制为以下化合物，其中如果T为H，那么G为2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、C1-C8烷基或苄基（苄基为特殊的A5-A10芳基），并且如果T为CH2CONR4R5、CH2CH2NR4R5、或C3-C6环烷基，那么G为H，和如果T为C1-C8烷基，那么G为2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、或A5-A10芳基。
在特殊的实施方案中，式I的化合物可以进一步被限定为以下化合物，其中当G为H时，T选自2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、CH2CONR4R5、CH2CH2NR4R5、C3-C6环烷基、和
在特殊的实施方案中，式I的化合物可以被进一步限定为以下化合物，其中当G为H时，T选自2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、CH2CH2NR4R5、C3-C6环烷基、
和
在特殊的实施方案中，式I的化合物可以被进一步限定为以下化合物，其中当G为H时，T选自2-吗啉乙基、(CH2)nCF3,CH2CH2NR4R5、
和
在特殊的实施方案中，式I的化合物特别排除其中T为A5-A10芳基并且G为H的化合物。
在特殊的实施方案中，式I的化合物特别排除其中G为C1-C8烷基并且T为H的化合物。
在特殊的实施方案中，式I的化合物特别排除其中T为H并且G为H的化合物。
在特殊的实施方案中，式I的化合物特别排除其中G为C1-C8烷基并且T为C1-C8烷基的化合物。
在特殊的实施方案中，式I的化合物还为式IA的化合物：
在式IA中，T选自：2-吗啉乙基；
其中R1为H或C1-C3烷基，并且R2为C1-C8烷基、C3-C6环烷基、或苯基；其中R1为H或C1-C3烷基，并且R3为C1-C8烷基、苯基、或C3-C6环烷基；和-(CH2)nCF3，其中n为1至4。
在特殊的实施方案中，式I的化合物还为式IB的化合物：
在式IB中，G选自：2-吗啉乙基；和(CH2)nCF3，其中n为1至4。
在特殊的实施方案中，式I的化合物还为式IC的化合物：
在式IC中：
G选自：C1-C8烷基、2-吗啉乙基、-(CH2)nCF3，其中n为1至4、和A5-A10芳基；并且
T选自：2-吗啉乙基；
其中R1为H或C1-C3烷基，并且R2为C1-C8烷基、C3-C6环烷基、或苯基；
其中R1为H或C1-C3烷基，并且R3为C1-C8烷基、苯基、或C3-C6环烷基；和-(CH2)nCF3，其中n为1至4。
式I、IA、IB和IC的化合物含有色氨酸基团。色氨酸基团可以被视为以下基团：
色氨酸基团中特别感兴趣的是手性碳（在其上面标有“*”）。色氨酸基团的手性碳可以或者是L构型，或者是D-构型。在一些实施方案中，式I、IA、IB和/或IC的化合物含有D-构型的色氨酸基团的手性碳。在其它实施方案中，式I、IA、IB和/或IC的化合物含有L-构型的色氨酸基团的手性碳。在另外的实施方案中，含有式I、IA、IB和/或IC的化合物的化合物的组合可以包含一些化合物，其中色氨酸基团的手性碳为L构型和另一些化合物，其中色氨酸基团的手性碳为D-构型。
本发明的化合物还可以盐或药学上可接受的盐的形式提供。本发明药学上可接受的盐的例子是Apo900、H-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-Et.2HCl、(乙基(2R)-2-氨基-5-({(2R)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-[2-(吗啉-4-基)乙氧基]-1-氧代丙-2-基}氨基)-5-氧代戊酸酯二盐酸盐)，其可以用以下结构表示：
本发明的化合物可以是药学上可接受的盐，并且包括存在于本文描述的化合物中的酸式基团或碱式基团的盐。药学上可接受的酸式加成盐包括，但不限于，盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗环血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐（即，1,1’-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘酸盐)）。合适的碱式盐包括，但不限于，铝盐、钙盐、锂盐、镁盐、钾盐、钠盐、锌盐、和二乙醇胺盐。关于药学上可接受的盐的综述请见Berge等人,66J.Pharm.Sci.1-19(1977)。
式I的化合物的合成概括于以下方案1、2和3。
方案1
方法A：(a)EDCI/HOBt/DIEA、D-Trp-O-T.HCl、CH2Cl2；(b)H2、10%Pd/C、EtOH。
方法B：(c)EDCI/HOBt/DIEA、D-Trp-O-T.HCl、CH2Cl2；(d)H2、10%Pd/C、EtOH。
方法C：(e)EDCI/HOBt/DIEA、然后D-Trp-OH、CH2Cl2；(f)T-I或T-Cl、K2CO3、DMF；(g)H2、10%Pd/C、EtOH。
方法D：(h)EDCI/HOBt/DIEA、然后L-Trp-OH、CH2Cl2；(i)T-I或T-Cl、K2CO3、DMF；(j)H2、10%Pd/C、EtOH。
方法A描述了式IA化合物（其中二肽为H-D-Glu(D-Trp-O-T)-OH）的合成用作例证性例子。该方法可以容易地适用于制备式I的其它化合物。
在方法A的步骤(a)中，使用CH2Cl2中的EDCI、HOBt、DIEA（二异丙基乙基胺），将Cbz-D-Glu-OCH2Ph与D-Trp-O-T.HCl酯（其中，T为C3-C6环烷基，或A5-A10芳基）偶联得到化合物Cbz-D-Glu(D-Trp-O-T)-OCH2Ph。在步骤(b)中，Cbz-D-Glu(D-Trp-O-T)-OCH2Ph的氢化得到如上所示的式(IA)的化合物。
方法B描述了式IC的化合物（其中二肽为H-D-Glu(D-Trp-O-T)-O-G）的合成用作例证性例子。该方法可以容易地适用于制备式I的其它化合物。
在方法B的步骤(c)中，使用CH2Cl2中的EDCI、HOBt、DIEA，将Cbz-D-Glu-OEt与D-Trp-O-T.HCl酯（其中，T为C3-C6环烷基，或A5-A10芳基）偶联得到化合物Cbz-D-Glu(D-Trp-O-T)-OEt。在步骤(d)中，Cbz-D-Glu(D-Trp-O-T)-OEt的氢化得到式(IC)的化合物，其中，G为乙基，T为C3-C6环烷基，或A5-A10芳基。
方法C描述了式IA化合物的合成，其中，T为N-吗啉乙基；
其中R1为H或C1-C3烷基，并且R2为C1-C8烷基、C3-C6环烷基、或苯基；
其中R1为H或C1-C3烷基，并且R3为C1-C8烷基、苯基、或C3-C6环烷基；或(CH2)nCF3，其中n为1至4。该方法可以容易地适用于制备式I的其它化合物。
在方法C的步骤(e)中，使用CH2Cl2中的EDCI、HOBt、DIEA，将Cbz-D-Glu-OCH2Ph与D-Trp-OH偶联得到化合物Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-OCH2Ph。在步骤(f)中，将Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-OCH2Ph与碳酸钾和T-Cl或T-I（其中T如上在方法C的式(IA)的化合物下所定义）反应得到二肽Cbz-D-Glu(D-Trp-O-T)-OCH2Ph。在步骤(g)中，Cbz-D-Glu(D-Trp-O-T)-OCH2Ph的氢化得到肽H-D-Glu(D-Trp-O-T)-OH，一种式(IA)的化合物，其中T如上方法C中所定义。
方法D描述了式IA的化合物的合成，其中T为N-吗啉乙基；
其中R1为H或C1-C3烷基，并且R2为C1-C8烷基，C3-C6环烷基，或苯基；
其中R1为H或C1-C3烷基，并且R3为C1-C8烷基，苯基，或C3-C6环烷基；或(CH2)nCF3，其中n为1至4。该方法可以容易地适用于制备式I的其它化合物。
方法D与方法C相同，除了在该方法中使用L-Trp-OH代替D-Trp-OH。作为例证性例子，通过在步骤(e)中将D-Trp-OH替换为L-Trp-OH，可以制得Apo894(D,L)，一种式IA的化合物，其中T=CH2CON(CH3)2。在实施例16的具体实施方案中进一步例证该过程。
方案2
方法E：(k)EDCI/HOBt/DIEA,CH2Cl2,D-Trp-OCH2Ph；(l)H2,10%Pd/C,EtOH；(m)HCl,EtOAc。
方法E描述式IB的化合物的合成。该方法可以容易地适用于制备式I的其它化合物。
在方法E的步骤(k)中，用CH2Cl2中的EDCI/HOBt/DEIA，将Boc-D-Glu-O-G（其中G为C1-C8烷基、三氟丙基）与D-Trp-OCH2Ph.HCl偶联得到Boc-D-Glu(D-Trp-OCH2Ph)-O-G。在步骤(I)中，在乙醇中经Pd/C的氢化得到Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-G。在步骤(m)中，使用EtOAc中的HCl脱除Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-G的Boc得到式(IB)的化合物。
方案3
方法F：(p)T=G（在该反应中）,T-I,K2CO3,DMF；(m)HCl,EtOAc。
方法F描述了其中G=T=N-吗啉乙基的化合物的合成。该方法容易地适用于制备式I的其它化合物。
在方法F的步骤(p)中，将Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-OH与T-I、K2CO3、DMF反应得到Boc-D-Glu(D-Trp-O-T)-O-G（其中，G=T，并且G为N-吗啉基乙基）。在步骤(m)中，Boc-D-Glu(D-Trp-O-T)-O-G的处理得到化合物(IC)（其中G=T）。
以相似的方式，可以使用如适应于所需产品的细节的方法A至F所描述的信息制备具有γ-D-谷氨酰基和L-色氨酰基基团的式I的化合物。
通过用合适的无机或有机酸处理，可以将以游离碱形式存在的式I的化合物转化为它们的药学上可接受的盐。式I的化合物的盐可以被转化为游离碱形式或另一种盐。
本发明的化合物或其盐可以被制成药物制剂。本发明的许多化合物通常是水溶的并且可以形成盐。在这种情况下，根据本发明的药物组合物可以包含所述化合物的盐，优选生理学上可接受的盐（其在本领域是已知的）。药物制剂典型地包含一种或多种该制剂的施用模型可接受的载体，所述施用通过注射、吸入、局部施用、灌胃、或其它适合于所选择的治疗的模型。合适的载体是用于所述施用模型的领域中所已知的那些。
根据本领域已知的方法和它们的施用模型以及由熟练的医生所确定的剂量可以制得合适的药物组合物。对于胃肠外施用，化合物可以被溶解于无菌水中或生理盐水中或用于非水溶性化合物的施用的药学上可接受的载体（例如用于维生素K的那些）中。对于肠内施用，化合物可以在片剂、胶囊中或溶解为液体形式施用。所述片剂或胶囊可以是肠溶包衣的或者在缓释制剂中。许多合适的制剂是已知的，包括，封装有将被释放的化合物的聚合或蛋白质微粒、软膏、糊剂、凝胶剂、水凝胶，或溶液剂，其可以被整体地或局部地用于施用化合物。可以采用缓释贴剂或植入剂来提供长时间的缓释。本领域技术人员已知的许多技术描述于Remington:the Science&Practice of Pharmacy by Alfonso Gennaro,20th ed.,Lippencott Williams&Wilkins,(2000)。胃肠外施用的制剂可以，例如，包含赋形剂，聚二醇如聚乙二醇，植物油，或氢化萘。生物可相容的、生物可降解的丙交酯聚合物，丙交酯/乙交酯共聚物，或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物可以被用于控制化合物的释放。其它对于调剂化合物潜在有用的胃肠外递送系统包括乙烯-醋酸乙烯酯共聚物颗粒、渗透泵、可植入的灌输系统、和脂质体。用于吸入的制剂可以包含赋形剂例如乳糖，或者可以是含有例如聚氧乙烯-9-月桂酰乙醚、甘胆酸盐和脱氧胆酸盐的水性溶液，或者可以是用于以滴鼻剂形式施用的油性溶液，或者作为凝胶剂。
根据本发明的或者用于本发明的化合物或药物组合物可以通过医疗设备或器械如植入物、移植、义肢、支架等的手段施用。此外，可以设计植入物以旨在包含并释放所述化合物或组合物。一个例子可以是由适合于经时释放化合物的聚合材料构成的植入物。
根据本发明的药物组合物的“有效量”包括治疗有效量或预防有效量。“治疗有效量”指达到需要的治疗结果（例如改善的PASI评分）所必需的一段时间和剂量下有效的量。化合物的治疗有效量可以根据各种因素例如受试者的疾病状态、年龄、性别、和体重，以及化合物引发受试者需要的应答的能力而变化。可以调整给药方案以提供最佳的治疗应答。治疗有效量还为化合物的任何有毒的或有害的作用被治疗的有益效果超过的量。“预防有效量”指达到需要的预防结果（例如需要的PASI评分）所必需的一段时间和剂量下的有效量。典型地，在患病之前或疾病的早期阶段在受试者中使用预防剂量，以使得预防有效量可能低于治疗有效量。
需注意的是剂量值可以随着需缓解的病情的严重性而变化。对于任何特定的受试者，可以根据个体需要和管理或监管组合物施用的人员的专业判断经时调整具体的给药方案。本文提出的剂量范围仅是示例性的，并不限制可能由执业医师选择的剂量范围。组合物中活性化合物的量可以根据以下因素例如受试者的疾病状态、年龄、性别和体重而变化。可以调整给药方案以提供最佳的治疗应答。例如，可以施用单一灌注，经时施用数个分开的剂量，或者如治疗情况的紧急性所提示的可以成比例地降低或增加剂量。将胃肠外组合物制成单一剂量形式对于施用的容易性和剂量的均一性可能是有利的。
通常地，应在不引起实质毒性下使用本发明的化合物。可以使用标准技术，例如，通过细胞培养物或实验动物中的测试并确定治疗指数（即，LD50（导致50%种群死亡的剂量）至LD100（导致100%种群死亡的剂量）之间的比例）可以确定本发明化合物的毒性。在某些环境下，例如严重疾病状况下，可能有必要施用基本过量的组合物。
如本文所使用的，“受试者”可以是人类、非人灵长类、大鼠、小鼠、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫等。所述受试者可以被怀疑患有或具有风险患有牛皮癣和/或过敏性皮炎和/或其中使用试剂来调节免疫系统的医学病状。对于牛皮癣、过敏性皮炎和免疫调节化合物被使用的各种疾病的诊断方法以及那些病状的诊断的临床描述对于本领域技术人员是已知的。
实施例
以下实施例阐明本文描述的本发明的一些实施方案。这些实施例并不以任何方式限制本发明的精神或范围。
实施例1：
H-D-Glu(D-Trp-OH)-OCH2CH2CF3，Apo878的制备
A、Boc-D-Glu(OH)-OCH2CH2CF3的制备
向Boc-D-Glu(O-Bzl)-OH(7.00g,20.7mmol)在DMF(50mL)的溶液中加入N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu,2.63g,22.8mmol)和随后的EDCI.HCl(4.38g,22.8mmol)。搅拌1小时后，加入3,3,3-三氟丙-1-醇(3.2mL,36.3mmol)和DIPEA(4.0mL,22.8mmol)并将得到的混合物于室温搅拌过夜。用去离子水淬灭反应混合物并用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机部分，经无水Na2SO4干燥，过滤，然后减压下蒸发至干。然后，在45磅/平方英寸的氢气压力下，在帕尔仪器中，氢化粗Boc-D-Glu(O-Bzl)-OCH2CH2CF3和1.6g湿10%Pd-C在EtOH(100mL)中的混合物1.5小时。过滤混合物，并且真空浓缩滤液得到Boc-D-Glu(OH)-OCH2CH2CF3(粗产率=81%)，其未经进一步纯化而使用。
B、Boc-D-Glu(D-Trp-O-Bzl)-OCH2CH2CF3的制备
将从A步骤得到的Boc-D-Glu(OH)-OCH2CH2CF3溶解于DMF(70mL)中。相继加入N-羟基琥珀酰亚胺(2.63g,22.8mmol)、EDCI.HCl(4.38g,22.8mmol)、H-D-Trp-OBzl.HCl(7.5g,22.8mmol)和DIPEA(4.0mL,22.8mmol)。将得到的溶液于室温搅拌过夜。将反应混合物用去离子水淬灭，然后用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层并经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。使用EtOAc和己烷(1/1，v/v)的混合物作为洗脱液，通过闪式柱色谱法纯化残余物，由此获得Boc-D-Glu(D-Trp-O-Bzl)-OCH2CH2CF3(3.74g,收率=29%)；MS-ESI(m/z)：620[M+1]+。
C、Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-OCH2CH2CF3的制备
在45磅/平方英寸的氢气压力下，在帕尔仪器中，氢化从上述步骤B得到的Boc-D-Glu(D-Trp-O-Bzl)-OCH2CH2CF3(3.7g,6.0mmol)和1.5g湿10%Pd-C在EtOH(150mL)中的混合物2.5小时。过滤反应混合物，并且将滤液浓缩至干以得到粗Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-OCH2CH2CF3。
D、H-D-Glu(D-Trp-OH)-OCH2CH2CF3，Apo878的制备
将从上述步骤C中得到的Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-OCH2CH2CF3溶解于Et2O(15mL)中，然后加入2M HCl在Et2O中的溶液(25mL)。将混合物于室温搅拌过夜。将反应混合物浓缩至干。将残余物溶解于去离子水(10mL)中，然后使用浓NH4OH溶液(28-30%)，在冰水浴温度下，调节至pH6。通过抽吸过滤收集沉淀的固体，并在真空下干燥，得到淡紫色固体状的H-D-Glu(D-Trp-OH)-OCH2CH2CF3，(Apo878,1.49g)。产率=58%;1H NMR(DMSO-D6+D2O,400MHz)δ(ppm):7.51(d,J=5.1Hz,1H),7.31(dd,J=8.1,3.0Hz,1H),7.10(br.s,1H),7.04(t,J=5.6Hz,1H),6.89-7.01(m,1H),4.18-4.44(m,3H),3.41-3.55(m,1H),3.13-3.29(m,1H),2.89-3.04(m,1H),2.56-2.76(m,2H),2.07-2.18(m,2H),1.78-1.94(m,1H),1.64-1.79(m,1H);MS-ESI(m/z):430[M+1]+。
实施例2
制备Boc-D-Glu(OH)-O-烷基的一般程序
A、Boc-D-Glu(OH)-O-异戊基的制备
于室温，向Boc-D-Glu(O-Bzl)-OH(5.48g,16.2mmol)、碳酸钾(4.48g,32.5mmol)和DMF(30mL)的混悬液中加入1-碘-3-甲基丁烷(6.43g,32.5mmol)。将反应混合物于室温搅拌过夜后，将固体滤出并用乙酸乙酯洗涤。通过旋转蒸发浓缩滤液并将残余物与水混合。将得到的固体置于己烷中，并用水(2x)洗涤有机溶液，经硫酸镁干燥，然后过滤。通过旋转蒸发浓缩滤液得到白色固体状的Boc-D-Glu(O-Bzl)-O-异戊基(6.64g)，定量产率。1H NMR(CDCl3,90MHz)δppm:7.03-7.56(m,5H),5.12(s,3H),3.87-4.50(m,3H),2.25-2.63(m,2H),1.83-2.20(m,2H),1.23-1.75(m,12H),0.91(d,J=5.85Hz,6H)。
将上述得到的Boc-D-Glu(O-Bzl)-O-异戊基(6.20g,15.2mmol)和10%Pd/C(湿，0.62g)在乙酸乙酯(80mL)中混合。使用帕尔仪器，在氢气气氛下，于40磅/平方英寸的氢气压力，氢化反应混合物4.5小时。通过CeliteTM过滤混合物并用乙酸乙酯彻底洗涤滤饼。通过旋转蒸发浓缩滤液，得到粘性澄清油状物的标题化合物Boc-D-Glu(OH)-O-异戊基，定量产率(5.50g)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δppm:5.18(d,J=7.1Hz,1H),4.35(br.s,1H),4.18(t,J=7.1Hz,2H),2.38-2.54(m,2H),2.12-2.27(m,1H),1.84-2.04(m,1H),1.63-1.81(m,1H),1.50-1.63(m,2H),1.45(s,9H),0.93(d,J=6.1Hz,6H)。
B、以相似的方式，通过用其它烷基碘化物(碘甲烷、碘乙烷、2-碘丙烷)代替1-碘-3-甲基丁烷，制备以下化合物：
Boc-D-Glu(OH)-O-Me
Boc-D-Glu(OH)-O-Et
Boc-D-Glu(OH)-O-i-Pr
实施例3
H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-异戊基(Apo844)的制备
A、Boc-D-Glu(D-Trp-O-Bzl)-O-异戊基的制备
向Boc-D-Glu(OH)-O-异戊基(1.94g,6.1mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)的溶液中加入EDCI.HCl(1.17g,6.1mmol)、HOBt水合物(0.93g,6.1mmol)和H-D-Trp-OBzl.HCl(2.02g,6.1mmol)，随后加入DIPEA(1.18g,9.1mmoL)。将反应混合物于室温搅拌过夜。用0.5N HCl溶液将反应混合物淬灭，然后用乙酸乙酯萃取。用水、0.5M碳酸钠溶液、水和盐水相继洗涤有机层，经硫酸镁干燥并过滤。真空浓缩滤液，并使用由乙酸乙酯/二氯甲烷/己烷的混合物组成的梯度溶剂(2/1/7至3/1/6,v/v/v)作为洗脱液，通过柱色谱法纯化粗产物。由此获得淡黄色固体状的Boc-D-Glu(D-Trp-O-Bzl)-O-异戊基(2.24g)。产率=62%；MS-ESI(m/z)：594[M+1]+。
B、Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-异戊基的制备
将从上述步骤A中得到的Boc-D-Glu(D-Trp-O-Bzl)-O-异戊基(2.09g,3.5mmol)和10%Pd/C(湿，0.28g)在乙酸乙酯(50mL)中混合。在帕尔仪器中，于10磅/平方英寸（仪表读数）的氢气压力下，氢化反应混合物2.5小时。通过CeilteTM过滤混合物并用乙酸乙酯洗涤滤饼。减压下通过旋转蒸发浓缩滤液。用己烷研磨残余物得到淡粉色固体状的Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-异戊基(1.49g)。产率=84%；MS(m/z)：504[M+1]+。
C、H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-异戊基(Apo844)
于室温，将在上述步骤B中得到的Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-异戊基(987mg,2.0mmol)与2M HCl在乙醚溶液(30mL)中混合并搅拌22.5小时。用二氯甲烷稀释反应混合物并通过旋转蒸发在真空下浓缩。将残余物溶解于水(20mL)中并用炭(1g)脱色，然后通过CeliteTM过滤。用1M氢氧化钠溶液中和滤液至pH6。过滤沉淀物，用水洗涤，得到灰白色固体状的H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-异戊基(Apo844,652mg)。产率=82%；1H NMR(DMSO-D6+D2O,400MHz)δppm:7.50(d,J=8.1Hz,1H),7.30(d,J=8.1Hz,1H),7.10(s,1H),7.03(t,J=7.1Hz,1H),6.86-6.99(m,1H),4.27-4.39(m,1H),4.05(t,J=6.1Hz,2H),3.23-3.31(m,1H),3.17(dd,J=14.2,5.1Hz,1H),2.96(dd,J=14.2,8.1Hz,1H),2.14(t,J=7.1Hz,2H),1.70-1.85(m,1H),1.51-1.68(m,2H),1.38-1.50(m,2H),0.86(d,J=6.1Hz,6H)；MS-ESI(m/z)：404[M+1]+。
实施例4
H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Et盐酸盐(Apo836.HCl)的制备
A、Boc-D-Glu(D-Trp-O-Bzl)-O-Et的制备
以实施例3A所描述的相似的方式进行，制备Boc-D-Glu(D-Trp-O-Bzl)-O-Et，产率87%。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.87,(s,1H),8.35(d,J=7.2Hz,1H),7.48(d,J=7.8Hz,1H),7.35(d,J=7.9Hz,1H),7.29-7.33(m,3H),7.23(d,J=7.7Hz,1H),7.09-7.22(m,3H),7.08(t,J=7.6Hz,1H),6.98(t,J=7.7Hz,1H),4.98-5.06(m,2H),4.55(明显的q,J=7.3Hz,1H),4.04–4.11(m,2H),3.90-3.95(m,1H),3.04–3.19(m,2H),2.18–2.23(m,2H),1.84-1.89(m,1H),1.70-1.77(m,1H),1.38(s,9H),1.16(t,J=7.1Hz,3H)；MS-ESI(m/z)：552[M+1]+。
B、Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Et的制备
以实施例3B所描述的相似的方式进行，制备Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Et，定量产率。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:12.62(br.1H),10.82,(s,1H),8.10(d,J=7.7Hz,1H),7.52(d,J=7.8Hz,1H),7.33(d,J=8.0Hz,1H),7.23(d,J=7.5Hz,1H),7.12(s,1H),7.06(t,J=7.3Hz,1H),6.98(t,J=7.5Hz,1H),4.45(明显的q,J=7.7Hz,1H),4.03–4.11(m,2H),3.87-3.92(m,1H),3.13–3.18(m,1H),2.96–3.03(m,1H),2.13–2.20(m,2H),1.82-1.88(m,1H),1.69-1.75(m,1H),1.38(s,9H),1.17(t,J=7.1Hz,3H)；MS-ESI(m/z):462[M+1]+。
C、H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Et.HCl(Apo836.HCl)的制备
向上述步骤B中获得的Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Et(4.55g,9.8mmol)在二氯甲烷(100mL)的冰冷却的溶液中鼓吹HCl气体15分钟。通过旋转蒸发在真空下浓缩反应混合物，得到泡沫状固体的H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Et盐酸盐(Apo836.HCl,4.0)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:12.68(br.s,1H),10.90,(s,1H),8.66(br,s,H),8.33(d,J=7.8Hz,1H),7.52(d,J=7.8Hz,1H),7.33(d,J=8.0Hz,1H),7.12(d,=1.5Hz,1H),7.06(t,J=7.2Hz,1H),6.98(t,J=7.2Hz,1H),4.47(明显的q,J=.8Hz,1H),4.13–4.19(m,2H),3.90(br,1H),3.16–3.20(m,1H),2.98–3.04(m,H),2.29–2.33(m,2H),1.94-1.98(m,2H),1.20(t,J=7.1Hz,3H)；MS-ESI(m/z)：62[M+1]+(游离碱)。
实施例5
H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-i-Pr，Apo846的制备
A、Boc-D-Glu(D-Trp-O-Bzl)-O-i-Pr的制备
将Boc-D-Glu(OH)-O-i-Pr溶解于DMF(60mL)中，然后相继加入N-羟基琥珀酰亚胺(2.87g,24.9mmol)、EDCI.HCl(4.77g,24.9mmol)和DIPEA(4.3mL,24.9mmol)。于室温搅拌3.5小时后，加入H-D-Trp-OBzl.HCl(7.55g,22.8mmol)和随后的DIPEA(4.3mL,24.9mmol)。将混合物搅拌过夜。将反应混合物用去离子水淬灭，然后用EtOAc萃取。用盐水洗涤EtOAc层，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干，得到Boc-D-Glu(D-Trp-O-Bzl)-O-i-Pr。
B、Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-i-Pr的制备
将从上述步骤A得到的粗产物溶解于异丙醇(100mL)中，并加入0.7g湿10%Pd-C。在40磅/平方英寸氢气压力下，在帕尔仪器中，氢化混合物2小时。将混合物过滤，并且蒸发滤液至干，得到粗Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-i-Pr。
C、H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-i-Pr，Apo846的制备
将从上述步骤B得到的残余物溶解于Et2O(20mL)中，并加入2M HCl在Et2O中的溶液(15mL)。将混合物于室温搅拌过夜。将反应混合物浓缩至干。将残余物溶解于去离子水(6mL)中，并使用6N NaOH溶液，在冰-水浴温度下，将混合物的pH调节至约5.5，得到粗产物。使用具有反相C18柱的Biotage仪器纯化粗产物，得到白色固体状的H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-i-Pr(Apo846,1.06g)。产率=14%；1HNMR(DMSO-D6+D2O,400MHz)δppm:7.52(d,J=7.1Hz,1H),7.31(d,J=8.1Hz,1H),7.10(s,1H),7.04(t,J=7.6Hz,1H),6.93-6.99(m,1H),4.90(五重峰,J=6.1Hz,1H),4.35(dd,J=8.6,4.5Hz,1H),3.35(dd,J=8.1,5.1Hz,1H),3.18(dd,J=14.7,4.5Hz,1H),2.96(dd,J=14.7,8.6Hz,1H),2.16(t,J=7.6Hz,2H),1.73-1.85(m,1H),1.59-1.72(m,1H),1.18(m,6H)；MS-ESI(m/z)：376[M+1]+。
实施例6
H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl，Apo829的制备
A、Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl的制备
于室温，将Boc-D-Glu-OBzl(11.24g,33.3mmol)与HOSu(3.83g,33.3mmol)和EDCI盐酸盐(6.38g,33.3mmol)在DMF(80mL)中混合，并搅拌过夜。一次性加入D-Trp-OH(10.2g,50mmol)，并将反应混合物于室温另外搅拌另外6小时。然后将混合物用0.5N HCl溶液(250mL)淬灭，形成粘性固体。倾倒出液体部分，并将残余粘性固体溶解于乙酸乙酯(200mL)中。用0.5N HCl溶液(100mL x2)、水(100mL x2)和盐水洗涤乙酸乙酯层，经MgSO4干燥并过滤。通过旋转蒸发在真空中浓缩滤液，并将残余物用乙醚研磨，得到白色固体状的Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl(6.60g)。浓缩母液并用己烷中10%的乙酸乙酯研磨，得到灰白色固体状的第二批产物(7.23g)。合计产率=13.82g(79%)；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δ(ppm):10.82(br.s,1H),8.09(d,J=7.1Hz,1H),7.51(d,J=7.1Hz,1H),7.27-7.41(m,7H),7.11(s,1H),7.05(t,J=7.1Hz,1H),6.92-7.00(m,1H),5.01-5.21(m,2H),4.39-4.51(m,1H),3.94-4.06(m,1H),3.08-3.19(m,1H),2.93-3.06(m,1H),2.05-2.26(m,2H),1.82-1.98(m,1H),1.67-1.79(m,1H),1.37(s,9H)；MS(m/z)524[M+1]+。
B、H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl盐酸盐，Apo829.HCl的制备
于室温，将Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl(6.60g,12.6mmol)与4M HCl在二氧六环(30mL)和乙酸乙酯(30mL)中混合。搅拌50分钟后，加入另外的二氧六环中的4M HCl(10mL)。将反应混合物另外搅拌140分钟，然后通过旋转蒸发在真空中浓缩。将残余物用乙酸乙酯研磨并将混合物搅拌过夜。然后用10%乙酸乙酯在己烷中的混合物研磨得到的粘性固体，得到灰白色固体状的H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl盐酸盐(5.15g)。产率=88%；1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δppm:10.88(br.s,1H),8.53(br.s,3H),8.31(d,J=8.1Hz,1H),7.51(d,J=8.1Hz,1H),7.29-7.43(m,6H),7.14(s,1H),7.05(t,J=7.6Hz,1H),6.97(m,1H),5.24(d,J=12.4Hz,1H),5.16(d,J=12.4Hz,1H),4.41-4.52(m,1H),3.96-4.13(m,2H),3.16(dd,J=14.2,5.1Hz,1H),3.01(dd,J=14.7,8.6Hz,1H),2.26-2.36(m,2H),1.92-2.03(m,2H)。在重复实验中，从用二氧六环中的4M HCl(40mL)的Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl的脱保护反应中得到94%的需要的HCl产物(5.95g)。
C、H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl，Apo829的制备
将上述步骤B中获得的合并的产物(11.0g)溶解于水(75mL)中并过滤。然后，用6N NaOH溶液中和冰-水冷却的滤液至pH约6。过滤产生的沉淀，用水洗涤，得到H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl(Apo829)。将湿产物用乙醚(100mL)研磨一小时，然后通过抽吸过滤收集。HPLC分析显示AUC纯度96.7%。进行进一步纯化。因此，将产物与乙酸乙酯(20mL)和二氧六环中的4M HCl(20mL)混合，以形成澄清溶液。浓缩溶液，并将残余物用乙酸乙酯和己烷研磨。将固体溶解于水(300mL)中并在冰-水浴中冷却，然后用6N NaOH溶液中和至pH约6。通过抽吸过滤收集沉淀出的细固体，用水和乙醚洗涤，得到H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl，Apo829(6.05g)。产率=60%；HPLC纯度(AUC)=98.8%；1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δppm:10.81(br.s,1H),8.05(d,J=8.1Hz,1H),7.51(d,J=8.1Hz,1H),7.27–7.41(m,6H),7.12(s,1H),7.04(t,J=7.6Hz,1H),6.91–6.99(m,1H),5.10(s,2H),4.35–4.46(m,1H),3.30–3.36(m,1H),3.16(dd,J=14.7,4.6Hz,1H),2.97(dd,J=14.7,8.6Hz,1H),2.12–2.24(m,2H),1.74–1.87(m,1H),1.59(dd,J=14.2,7.1Hz,1H)；MS-ESI(m/z)424[M+1]+。
D、以如上相似的方式进行，制备H-D-Glu(D-Trp-OH)-OCH2CF3，Apo865。
产率=8.3g(49%)；1H NMR(DMSO-D6+D2O,400MHz)δ(ppm):7.50(d,J=6.8Hz,1H),7.32(d,J=7.0Hz,1H),7.10(s,1H),7.03-7.09(m,1H),6.94-7.03(m,1H),4.70-4.75(m,2H),4.38-4.41(m,1H),3.49-3.51(m,1H),3.14-3.19(m,1H),2.93-2.99(m,1H),2.17-2.24(m,2H),1.80-1.86(m,1H),1.60-1.68(m,1H)；MS-ESI(m/z):416[M+1]+。
实施例7
H-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-环己基)-OH(Apo843)的制备
A、Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl的制备
于冰-水浴温度，将Cbz-D-Glu(OH)-O-Bzl(18.57g,50mmol)、HOSu(5.76g,50mmol)和EDCI.HCl(9.59g,50mmol)在DMF(100mL)中混合。允许反应混合物升至室温，然后于室温搅拌过夜。再次将反应混合物在冰-水浴中冷却，并加入D-Trp-OH(10.21g,50mmol)。然后于室温搅拌混合物6小时。将混合物倒入含有0.5N HCl(200mL)和冰块的混合物的烧杯中。用乙酸乙酯萃取混合物两次(200mL+100mL)。合并有机层并用水(100mL x3)和盐水(100mL)洗涤，经硫酸镁干燥并过滤。通过旋转蒸发在减压下浓缩滤液并用乙醚和己烷的混合物研磨得到的固体。抽吸过滤后得到白色固体状的Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl(24.5g)。产率=88%；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:12.55(br.s,1H),10.81(s,1H),8.11(d,J=8.1Hz,1H),7.78(d,J=8.1Hz,1H),7.51(d,J=7.1Hz,1H),7.19–7.45(m,11H),7.11(s,1H),7.05(t,J=7.6Hz,1H),6.96(t,J=7.6Hz,1H),4.92–5.22(m,4H),4.37–4.55(m,1H),3.99–4.17(m,1H),3.14(dd,J,=,14.7,5.6Hz,1H),2.92–3.07(m,1H),2.08–2.33(m,2H),1.85–2.07(m,1H),1.64–1.85(m,1H)；MS-ESI(m/z)：558[M+1]+。
B、Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-环己基)-O-Bzl的制备
于室温，向Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl(6.00g,10.8mmol)、碳酸钾(5.94g,43.0mmol)和碘化钠(28.50g,190.1mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中的混合物中加入1-氯乙基-环己基碳酸酯(8.90g,43.0mmol)。于30℃搅拌过夜后，用乙酸乙酯稀释反应混合物。然后用水(x3)和盐水洗涤混合物。使用由己烷中的乙酸乙酯的混合物组成的梯度溶剂(20至40%)作为洗脱液，通过硅胶上的柱色谱法使残余物经历纯化。合并富含产物的部分，并在真空中除去挥发物。由此，获得淡黄色泡沫状的烷基化产物CBz-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-环己基)-O-Bzl(3.77g)。产率=48%；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.86(s,1H),8.35(dd,J=17.7,7.6Hz,1H),7.78(t,J=7.6Hz,1H),7.46(t,J=8.1Hz,1H),7.34(br.s,11H),7.14(d,J=3.0Hz,1H),7.06(t,J=7.6Hz,1H),6.94-7.00(m,1H),6.62(q,J=5.1Hz,0.5H),6.51(q,J=5.1Hz,0.5H),5.12(d,J=3.0Hz,2H),4.97-5.09(m,2H),4.40-4.59(m,2H),4.05-4.15(m,1H),2.93-3.18(m,2H),2.15-2.27(m,2H),1.91-1.97(m,1H),1.71-1.86(m,3H),1.57-1.68(m,2H),1.13-1.49(m,9H)；MS-ESI(m/z)：728[M+1]+。
C、H-D-Glu(D-Trp-O-CO-O-环己基)-OH(Apo843)的制备
将上述步骤B中获得的Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-环己基)-O-Bzl(3.67g,5.0mmol)和10%Pd-C(湿，1.16g)在乙醇(100mL)中混合。在帕尔仪器中，在氢气覆盖下，在15-25磅/平方英寸的氢气压力下，氢化混合物3小时。通过CeilteTM过滤混合物并用乙醇洗涤滤饼。通过旋转蒸发在减压下浓缩滤液并用乙醚研磨残余物，得到白色固体状的标题化合物H-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-环己基)-OH(Apo843,2.00g)。产率=78%；1H NMR(DMSO-D6+D2O,400MHz,)δppm:7.46(t,J=9.1Hz,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.17(s,1H),7.07(t,J=7.6Hz,1H),6.90-7.03(m,1H),6.58-6.68(m,0.5H),6.42-6.57(m,0.5H),4.49-4.61(m,1H),4.32-4.49(m,1H),3.20-3.30(m,1H),2.89-3.20(m,2H),2.09-2.38(m,2H),1.75-1.92(m,4H),1.62(br.s,2H),1.12-1.54(m,9H)；MS-ESI(m/z)：504[M+1]+。
实施例8
H-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-Et)-OH，Apo888的制备
以实施例7B所描述的相似的方式进行，从实施例7A获得的Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl(2.24g,4.0mmol)与1-氯乙基乙基碳酸酯(1.22g,8.0mmol)在碳酸钾(1.10g,8.0mmol)和碘化钠(2.40g,16.0mmol)的存在下，在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，于50℃的过夜反应制备Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-Et)-O-Bzl(1.65g,产率=61%)。1H NMR(CD3OD,400MHz)δppm:10.86(br.s,1H),8.24-8.47(m,1H),7.79(t,J=7.6Hz,1H),7.40-7.52(m,1H),7.24-7.42(m,11H),7.14(d,J=5.1Hz,1H),7.06(t,J=7.6Hz,1H),6.93-7.02(m,1H),6.57-6.67(m,0.5H),6.44-6.56(m,0.5H),5.12(d,J=3.0Hz,2H),4.97-5.09(m,2H),4.41-4.49(m,1H),4.05-4.18(m,3H),2.95-3.17(m,2H),2.13-2.29(m,2H),1.88-1.98(m,1H),1.76(dd,J=14.1,8.1Hz,1H),1.42(d,J=6.1Hz,1.5H),1.13-1.25(m,4.5H)；MS-ESI(m/z)：674[M+1]+。
以实施例7C所描述的相似的方式进行，通过在氢气覆盖下，使用乙醇(100mL)中的10%Pd/C(湿，0.5g)的氢化，将Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-Et)-O-Bzl(1.65,2.5mmol)脱保护，制备H-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-Et)-OH，Apo888(623mg,产率=56%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.96(br.s,1H),8.76(br.s,1H),7.41-7.52(m,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.20(br.s,1H),7.02-7.14(m,1H),6.90-7.02(m,1H),6.57-6.69(m,0.5H),6.44-6.57(m,0.5H),4.36-4.49(m,1H),4.14(q,J=7.1Hz,2H),2.93-3.17(m,3H),2.18-2.37(m,2H),1.71-1.99(m,2H),1.45(d,J=5.1Hz,1.5H),1.17-1.27(m,4.5H)。MS m/z：450[M+1]+。
实施例9
H-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-i-Pr)-OH(Apo891)的制备
以实施例7B所描述的相似的方式进行，从上述实施例7A获得的Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl(2.24g,4.0mmol)与1-氯乙基异丙基碳酸酯(1.33g,8.0mmol)在碳酸钾(1.10g,8.0mmol)和碘化钠(2.40g,16.0mmol)的存在下，在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，于50℃的过夜反应制备Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-i-Pr)-O-Bzl(1.54g,产率=56%)。1H NMR(CD3OD,400MHz)δppm:7.43-7.55(m,1H),7.31(br.s,11H),7.03-7.12(m,2H),6.92-7.04(m,1H),6.67-6.78(m,0.5H),6.53-6.67(m,0.5H),5.00-5.18(m,4H),4.76-4.85(m,1H),4.63-4.76(m,1H),4.12-4.23(m,1H),3.20-3.25(m,1H),3.05-3.19(m,1H),2.18-2.31(m,2H),2.01-2.13(m,1H),1.77-1.93(m,1H),1.45(d,J=5.1Hz,1.5H),1.18-1.31(m,7.5H)；MS-ESI(m/z)：688[M+1]+。
以实施例7C所描述的相似的方式进行，从使用乙醇(50mL)中的10%Pd/C(湿，0.56g)的Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-i-Pr)-O-Bzl(1.50,2.2mmol)的氢化，制备H-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-i-Pr)-OH，Apo891，(0.36g,产率=36%)。1H NMR(CD3OD,400MHz)δppm:7.47-7.55(m,1H),7.33(d,J=8.1Hz,1H),7.05-7.15(m,2H),6.97-7.05(m,1H),6.70-6.78(m,0.5H),6.58-6.66(m,0.5H),4.80-4.86(m,1H),4.66-4.74(m,1H),3.58-3.65(m,1H),3.24-3.37(m.1H),3.04-3.21(m,1H),2.32-2.50(m,2H),1.93-2.11(m,2H),1.49(d,J=5.1Hz,1.5H),1.21-1.32(m,7.5H)；MS-ESI(m/z)：464[M+1]+。
实施例10
H-D-Glu(D-Trp-O-CH2CO-N(CH3)2)-OH，Apo893的制备
以实施例7B所描述的相似的方式进行，从上述实施例7A获得的Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl(2.24g,4.0mmol)与2-氯-N,N-二甲基乙酰胺(0.73g,6.0mmol)在碳酸钾(1.10g,8.0mmol)的存在下，在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的反应制备Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH2CO-N(CH3)2)-O-Bzl(1.11g,产率=43%)。1HNMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.84(br.s,1H),8.31(d,J=7.1Hz,1H),7.78(d,J=8.1Hz,1H),7.49(d,J=8.1Hz,1H),7.22-7.44(m,11H),7.17(s,1H),7.02-7.15(m,1H),6.98(d,J=7.1Hz,1H),4.94-5.18(m,4H),4.85(d,J=14.8Hz,1H),4.75(d,J=14.8Hz,1H),4.48-4.60(m,1H),3.99-4.14(m,1H),3.28-3.32(m,1H),2.95-3.07(m,1H),2.89(s,3H),2.82(s,3H),2.07-2.27(m,2H),1.82-1.98(m,1H),1.64-1.80(m,1H)；MS-ESI(m/z)：643[M+1]+。
以实施例7C所描述的相似的方式进行，通过在氢气覆盖下，使用乙醇(100mL)中的10%Pd/C(湿，0.62g)的氢化，将Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH2CO-N(CH3)2)-O-Bzl(1.10g,1.7mmol)脱保护，制备H-D-Glu(D-Trp-O-CH2CO-N(CH3)2)-OH，Apo893，(0.54g,产率=75%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.98(br.s,1H),8.82(d,J=7.1Hz,1H),7.51(d,J=8.1Hz,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.22(s,1H),7.02-7.13(m,1H),6.94-7.02(m,1H),4.89(d,J=14.8Hz,1H),4.78(d,J=14.8Hz,1H),4.46-4.58(m,1H),3.26-3.37(m,2H),2.95-3.08(m,1H),2.90(s,3H),2.83(s,3H),2.24-2.36(m,1H),2.11-2.24(m,1H),1.72-1.89(m,2H)；MS-ESI(m/z)：419[M+1]+。
实施例11
H-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-OH.HCl盐(Apo849.HCl)的制备
以实施例7B所描述的相似的方式进行，从Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl(2.24g,4.0mmol)与2-吗啉乙基甲磺酸酯（其从2-吗啉乙醇(1.97g,15.0mmol)与甲磺酰氯(1.72g,15.0mmol)制得）在碳酸钾(1.10g,8.0mmol)的存在下，在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的反应制备Cbz-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-Bzl盐酸盐(4.53g,产率=64%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)d ppm:10.91(br.s,2H),8.49(d,J=7.1Hz,1H),7.81(d,J=8.1Hz,1H),7.49(d,J=8.1Hz,1H),7.35(d,J=3.0Hz,11H),7.17(s,1H),7.07(t,J=7.6Hz,1H),6.93-7.03(m,1H),5.12(br.s,2H),4.98-5.10(m,2H),4.53(q,J=7.1Hz,1H),4.22-4.41(m,2H),4.06-4.15(m,1H),3.61-3.89(m,4H),3.01-3.34(m,6H),2.86-3.01(m,2H),2.21-2.30(m,2H),1.89-2.03(m,1H),1.69-1.83(m,1H)；MS-ESI(m/z)：671[M+1]+。
以实施例7C所描述的相似的方式进行，从用甲醇(100mL)中的10%Pd-C(湿，1.00g)的Cbz-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-Bzl盐酸盐(2.00g,2.8mmol)的氢化，制备H-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-OH盐酸盐，Apo849.HCl，(1.01g,产率=74%)。1HNMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:11.20(br.s,1H),8.87(d,J=7.1Hz,1H),7.74(d,J=8.1Hz,1H),7.59(d,J=8.1Hz,1H),7.44(s,1H),7.32(t,J=7.1Hz,1H),7.24(t,J=7.6Hz,1H),4.75(q,J=7.1Hz,1H),4.35-4.50(m,2H),3.96-4.06(m,1H),3.88(br.s,4H),3.41(dd,J=14.1,6.1Hz,1H),3.31(dd,J=14.1,8.1Hz,1H),2.91-3.08(m,2H),2.85(br.s,4H),2.45-2.66(m,2H),2.12-2.28(m,2H)；MS-ESI(m/z)：447[M+1]+(游离碱)。
实施例12
H-D-Glu(D-Trp-OCH2O-CO-Ph)-OH，Apo883的制备
以上述实施例7B所描述的相似的方式进行，将氯苯甲酸甲酯(1.04g,6.1mmol)、碘化钠(4.6g,30.7mmol)和Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Bzl(2.29g,4.1mmol)在DIPEA(0.82mL,4.7mmol)的存在下，在丙酮(80mL)中反应，后处理后，获得Cbz-D-Glu(D-Trp-OCH2O-CO-Ph)-O-Bzl(2.45g)。产率=86%；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.86(br.s,1H),8.40(d,J=7.1Hz,1H),7.94(d,J=7.1Hz,2H),7.78(d,J=8.1Hz,1H),7.70(t,J=7.6Hz,1H),7.51-7.61(m,2H),7.47(d,J=8.1Hz,1H),7.24-7.42(m,11H),7.14(d,J=2.0Hz,1H),7.05(t,J=7.6Hz,1H),6.89-7.00(m,1H),5.90-6.00(m,2H),4.97-5.18(m,4H),4.47-4.59(m,1H),4.05-4.11(m,1H),3.11-3.21(m,1H),3.00-3.11(m,1H),2.12-2.31(m,2H),1.87-2.02(m,1H),1.67-1.83(m,1H)；MS-ESI(m/z)：692[M+1]+。
以实施例7C所描述的相似的方式进行，用2.2g在MeOH(150mL)中的湿10%Pd-C，在45磅/平方英寸的氢化压力下，在帕尔仪器中，将上述获得的Cbz-D-Glu(D-Trp-OCH2O-CO-Ph)-O-Bzl(2.2g,3.2mmol)氢化5.5小时，得到粗H-D-Glu(D-Trp-OCH2O-CO-Ph)-OH。使用i-PrOH和H2O(85/15，v/v)的混合物作为洗脱液，通过硅胶上的闪式柱色谱法纯化粗产物(1.2g)，得到标题化合物H-D-Glu(D-Trp-OCH2O-CO-Ph)-OH(Apo883,410mg)。产率=28%；1H NMR(DMSO-D6+D2O,400MHz):δppm:7.91(d,J=8.1Hz,2H),7.65-7.74(m,1H),7.54(t,J=7.6Hz,2H),7.44(d,J=8.1Hz,1H),7.31(d,J=8.1Hz,1H),7.13(s,1H),7.04(t,J=7.6Hz,1H),6.90-6.98(m,1H),5.86-5.97(m,2H),4.45-4.55(m,1H),3.30(t,J=6.1Hz,1H),2.97-3.19(m,2H),2.24(t,J=7.6Hz,2H),1.75-1.93(m,2H)；MS-ESI(m/z)：468[M+1]+。
实施例13
H-D-Glu(D-Trp-OCH2O-CO-[戊-3-基])-OH，Apo889的制备
以实施例12所描述的相似的方式，通过用氯2-乙基丁酸甲酯代替氯苯甲酸甲酯，制备H-D-Glu(D-Trp-OCH2O-CO-[戊-3-基])-OH(Apo889)。1H NMR(DMSO-D6+D2O,400MHz)δppm:7.46(d,J=7.1Hz,1H),7.35(d,J=8.1Hz,1H),7.18(s,1H),7.04-7.12(m,1H),6.96-7.03(m,1H),5.74-5.82(m,1H),5.67-5.74(m,1H),4.45(dd,J=9.1,5.1Hz,1H),3.27(t,J=6.6Hz,1H),3.06-3.17(m,1H),2.99(dd,J=14.7,9.6Hz,1H),2.14-2.32(m,3H),1.72-1.91(m,2H),1.38-1.58(m,4H),0.74-0.87(m,6H)；MS-ESI(m/z)：462[M+1]+。
实施例14
H-D-Glu(D-Trp-OCH2O-CO-C(CH3)2-CH2CH2CH3)-OH，Apo895的制备
以实施例12中描述的相似的方式进行，通过用氯甲基2,2-二甲基戊酸酯代替氯苯甲酸甲酯，制备H-D-Glu(D-Trp-OCH2O-CO-C(CH3)2-CH2CH2CH3)-OH(Apo895)。1H NMR(DMSO-D6+D2O,400MHz)δppm:7.44(d,J=8.1Hz,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.17(s,1H),7.04-7.14(m,1H),6.93-7.04(m,1H),5.61-5.83(m,2H),4.36-4.53(m,1H),3.20-3.38(m,1H),3.06-3.21(m,1H),2.91-3.06(m,1H),2.14-2.36(m,2H),1.72-1.94(m,2H),1.25-1.52(m,2H),0.91-1.26(m,8H),0.68-0.88(m,3H)；MS-ESI(m/z)：476[M+1]+。
实施例15
H-D-Glu(D-Trp-OCH2CH2CF3)-OH，Apo877的制备
以实施例12所描述的相似的方式，通过用CF3CH2CH2I代替氯苯甲酸甲酯，在通过硅胶上的闪式柱色谱法的纯化后，获得Cbz-D-Glu(D-Trp-OCH2CH2CF3)-O-Bzl(2.0g，产率=86%)。用EtOH(150mL)中的1g湿10%Pd-C，在45磅/平方英寸的氢气压力下，在帕尔仪器中，将Cbz-D-Glu(D-Trp-OCH2CH2CF3)-O-Bzl(2.0g,3.1mmol)氢化1.5小时，后处理和纯化后，获得白色固体状的标题化合物H-D-Glu(D-Trp-OCH2CH2CF3)-OH(Apo877,1.2g)。产率=91%；1H NMR(DMSO-D6+D2O,400MHz)δppm:7.47(d,J=8.1Hz,1H),7.35(d,J=8.1Hz,1H),7.18(s,1H),7.08(t,J=7.1Hz,1H),6.95-7.04(m,1H),4.43(dd,J=9.1,5.1Hz,1H),4.21(qt,J=11.7,5.7Hz,2H),3.30(t,J=6.6Hz,1H),3.10-3.21(m,1H),2.96-3.08(m,1H),2.41-2.64(m,2H),2.17-2.36(m,2H),1.76-1.96(m,2H)；MS-ESI(m/z)：430[M+1]+。
实施例16
H-D-Glu(L-Trp-OCH2-CO-N(CH3)2)-OH，Apo894的制备
将Cbz-D-Glu(OH)-OBzl(18.57g,50.0mmol)、HOSu(6.04g,52.5mmol)和EDCI盐酸盐(10.55g,55.0mmol)在DMF(75mL)中混合并搅拌2.5小时。然后向反应混合物中加入L-Trp-OH(12.25g,55.0mmol)。于室温搅拌过夜后，将混合物用乙酸乙酯稀释，然后用0.5N HCl溶液(x2)、水和盐水洗涤，经MgSO4干燥并过滤。通过旋转蒸发浓缩滤液以得到白色固体状的Cbz-D-Glu(L-Trp-OH)-OBzl(27.5g)。产率=98%。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)d ppm:12.55(br.s,1H),10.83(br.s,1H),8.14(d,J=8.1Hz,1H),7.78(d,J=8.1Hz,1H),7.51(d,J=7.1Hz,1H),7.28-7.44(m,11H),7.12(s,1H),7.02-7.10(m,1H),6.90-7.01(m,1H),5.12(s,2H),4.97-5.08(m,2H),4.35-4.50(m,1H),4.04-4.15(m,1H),3.14(dd,J=14.7,4.5Hz,1H),2.98(dd,J=14.7,8.6Hz,1H),2.12-2.27(m,2H),1.87-2.00(m,1H),1.64-1.81(m,1H)。
向在45℃温度的油浴中加热的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的Cbz-D-Glu(L-Trp-OH)-OBzl(2.24g,4.08mmol)与碳酸钾(1.11g,8.0mmol)的混合物加入2-氯-N,N-二甲基乙酰胺(0.73g,6.0mmol)。搅拌3小时后，用水将反应混合物稀释，并用乙酸乙酯萃取。用水(x3)然后是盐水洗涤有机层。通过硅胶上的柱色谱法，使用乙酸乙酯/己烷(8/2，v/v)的溶剂混合物纯化产物，得到白色泡沫状的需要的烷基化化合物Cbz-D-Glu(L-Trp-OCH2-CO-N(CH3)2)-OBzl(1.79g)。产率=69%；1H NMR(DMSO-D6,300MHz)δppm:10.85(br.s,1H),8.34(d,J=7.5Hz,1H),7.78(d,J=7.5Hz,1H),7.50(d,J=7.5Hz,1H),7.34(br.s,11H),7.19(s,1H),7.03-7.13(m,1H),6.93-7.02(m,1H),5.12(s,2H),4.96-5.09(m,2H),4.81(q,J=15.1Hz,2H),4.49-4.62(m,1H),4.02-4.15(m,1H),3.27-3.33(m,1H),3.01(dd,J=14.3,9.8Hz,1H),2.90(s,3H),2.83(s,3H),2.12-2.30(m,2H),1.87-1.98(m,1H),1.64-1.80(m,1H)；MS(m/z)：643[M+1]+。
在乙醇(100mL)中混合Cbz-D-Glu(L-Trp-OCH2-CO-N(CH3)2)-OBzl(1.65g,2.6mmol)和10%Pd-C(湿，0.36g)。在氢气气氛下，在帕尔仪器中，将反应混合物氢化1.5小时。通过CeilteTM过滤混合物。通过旋转蒸发在减压下浓缩滤液并用乙腈研磨残余物。通过抽吸过滤收集白色固体状的标题化合物H-D-Glu(L-Trp-OCH2-CO-N(CH3)2)-OH(Apo894,1.00g)。产率=92%；1H NMR(DMSO-D6+D2O,300MHz)d ppm:7.49(d,J=7.5Hz,1H),7.34(d,J=7.5Hz,1H),7.18(br.s,1H),6.90-7.12(m,2H),4.79(q,J=15.1Hz,2H),4.47-4.61(m,1H),3.26-3.39(m,1H),3.19(t,J=5.7Hz,1H),2.94-3.12(m,1H),2.88(br.s,3H),2.81(br.s,3H),2.11-2.33(m,2H),1.68-1.93(m,2H)。
实施例17
H-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-吗乙基.3HCl，Apo903.3HCl的制备
Boc-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-吗乙基的制备
向冰-水浴中冷却的二氯甲烷(40mL)中的2-吗啉乙醇(3.94g,30.0mmol)和三乙胺(5.06g,50mmol)溶液中，小心加入甲磺酰氯(3.44g,30.0mmol)。搅拌10分钟后，通过旋转蒸发在减压下浓缩反应混合物。在冰-水浴冷却下，将残余物与碳酸钾(4.15g,30.0mmol)和Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-OH(4.33g,10.0mmol)在DMF(30mL)中混合。然后将混合物加热至40℃并搅拌过夜。允许混合物冷却至室温并用乙酸乙酯稀释。通过抽吸过滤除去无机盐，并用水(x3)和盐水洗涤滤液。用硅胶浓缩乙酸乙酯层，并且用丙酮和乙酸乙酯(梯度，1/9至4/6比例，v/v)的溶剂混合物，通过柱色谱法纯化粗混合物，得到白色泡沫状的Boc-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-吗乙基(3.13g)。产率=47%；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.86(br.s,1H),8.26(d,J=7.1Hz,1H),7.47(d,J=8.1Hz,1H),7.33(d,J=8.1Hz,1H),7.25(d,J=8.1Hz,1H),7.15(s,1H),7.06(t,J=7.1Hz,1H),6.95-7.01(m,1H),4.46(q,J=7.1Hz,1H),4.17-4.27(m,1H),3.97-4.12(m,3H),3.88-3.97(m,1H),3.43-3.57(m,8H),3.13(dd,J=14.7,6.6Hz,1H),3.01(dd,J=14.7,7.6Hz,1H),2.20-2.55(m,14H),1.80-1.94(m,1H),1.65-1.78(m,1H),1.38(s,9H)；MS-ESI(m/z)：660[M+1]+。
以实施例6B所描述的相似的方式进行，从在二氧六环(4mL)和乙酸乙酯(20mL)中的4M HCl中的Boc-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-吗乙基(660mg,1.0mmol)的脱保护获得标题化合物H-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-吗乙基.3HCl(Apo903.3HCl,590mg，产率=88%)；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:11.21(br.s,2H),10.94(br.s,1H),8.70(m,4H),7.51(d,J=7.1Hz,1H),7.35(d,J=8.1Hz,1H),7.21(s,1H),7.08(t,J=7.1Hz,1H),6.95-7.04(m,1H),4.28-4.62(m,5H),4.02-4.13(m,1H),3.71-3.99(m,9H),2.85-3.47(m,13H),2.29-2.44(m,2H),1.98-2.06(m,2H)；MSMS-ESI(m/z)：560[M+1]+(游离碱)。
实施例18
H-D-Glu(D-Trp-O-CH2CH2CF3)-O-CH2CH2CF3盐酸盐(Apo879.HCl)的制备
在冰-水浴温度下，向3,3,3-三氟丙-1-醇(8.5mL,96.4mmol)中的H-D-Glu(D-Trp-OH)-OH(2.0g,6.0mmol)混悬液中鼓吹HCl(气体)。允许得到的混合物升至室温，然后搅拌过夜。在真空中将反应混合物浓缩至干。使用IPA和CH2Cl2(从1/9至2/8，v/v)的溶剂混合物作为洗脱液，通过硅胶上的闪式柱色谱法纯化残余物。将富含产物的部分收集起来并在真空中浓缩。在Et2O(10mL)中的2M HCl中搅拌残余物，然后浓缩至干并在真空下干燥，得到标题化合物(1.8g)。产率=53.4%；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:11.00(br.s,1H),8.73(br.s,3H),8.58(d,J=7.1Hz,1H),7.48(d,J=8.1Hz,1H),7.36(d,J=8.1Hz,1H),7.22(s,1H),7.04-7.13(m,1H),6.96-7.04(m,1H),4.43-4.53(m,1H),4.29-4.43(m,2H),4.14-4.29(m,2H),3.95(t,J=6.1Hz,1H),3.12-3.24(m,1H),3.01-3.12(m,1H),2.64-2.81(m,2H),2.47-2.64(m,2H),2.23-2.45(m,2H),1.91-2.06(m,2H)；MS-ESI(m/z)：526[M+1]+。
实施例19
H-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-环己基)-O-Et盐酸盐，Apo854.HCl的制备
在冰-水浴温度下，将Cbz-D-Glu(OH)-O-Et(12.1g,39.1mmol)、HOSu(4.60g,40.0mmol)和EDCI.HCl(7.67g,40.0mmol)在DMF(100mL)中混合。允许反应混合物升至室温，然后搅拌过夜。再次在冰-水浴中冷却反应混合物并加入D-Trp-OH(8.17g,40.0mmol)。将混合物于室温搅拌过夜。将混合物倒入含有0.5N HCl(200mL)和冰球的烧杯中。用乙酸乙酯(2x200mL+1x100mL)萃取混合物。合并有机层并用0.5N HCl溶液(100mL)、水(2x100mL)和盐水(100mL)洗涤，经MgSO4干燥，然后过滤。通过旋转蒸发在减压下浓缩滤液，并用己烷中的10%乙酸乙酯研磨得到的固体Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Et。通过抽吸过滤收集沉淀出的白色固体(17.6g)。产率=90%；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:12.58(br.s,1H),10.82(s,1H),8.12(d,J=8.1Hz,1H),7.71(d,J=8.1Hz,1H),7.52(d,J=8.1Hz,1H),7.23-7.42(m,6H),7.12(s,1H),7.06(t,J=7.6Hz,1H),6.97(t,J=7.6Hz,1H),4.97-5.10(m,2H),4.41-4.51(m,1H),3.95-4.15(m,3H),3.15(dd,J=14.1,5.1Hz,1H),2.99(dd,J=15.2,8.1Hz,1H),2.09-2.26(m,2H),1.83-1.96(m,1H),1.65-1.81(m,1H),1.16(t,J=7.1Hz,3H)；MS-ESI(m/z)：496[M+1]+。
于室温，向N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Et(4.95g,10.0mmol)与碳酸钾(4.15g,30.0mmol)和碘化钠(6.00g,40.0mmol)的混合物中加入1-氯乙基环己基碳酸酯(6.20g,30.0mmol)。于室温搅拌过夜后，加入另外的N,N-二甲基甲酰胺(30mL)，并将反应混合物于40℃搅拌过夜。用乙酸乙酯稀释反应混合物，然后依次用水(3x)和盐水洗涤。使用己烷中的乙酸乙酯的混合物的梯度溶剂(20至40%)作为洗脱液，通过硅胶上的柱色谱法纯化粗产物Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-环己基)-O-Et。将富含产物的部分合并起来并蒸发至干。由此，获得浅黄色泡沫状的需要的化合物Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-环己基)-O-Et(4.43g)。产率=66%；1HNMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.86(br.s,1H),8.36(dd,J=17.2,7.1Hz,1H),7.66-7.77(m,1H),7.46(t,J=8.0Hz.,1H),7.22-7.42(m,6H),7.10-7.20(m,1H),7.02-7.10(m,1H),6.90-7.02(m,1H),6.58-6.70(m,0.5H),6.46-6.58(m,0.5H),5.04(br.s,2H),4.38-4.61(m,2H),3.93-4.15(m,3H),2.90-3.17(m,2H),2.20(br.s,2H),1.54-1.96(m,6H),1.02-1.53(m,12H)；MS-ESI(m/z):666[M+1]+。
将Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-环己基)-O-Et(2.0g,3.0mmol)和10%Pd/C(湿，0.6g)在乙醇(50mL)和乙醚中的2M HCl(1.7mL,3.4mmol)中混合。在帕尔仪器中，在20-25磅/平方英寸的氢气压力下，将反应混合物氢化一小时。通过CeliteTM过滤混合物，并用乙醇洗涤滤饼。通过旋转蒸发浓缩滤液并将残余物用乙醚和己烷的混合物研磨。由此，获得粉色固体泡沫状的H-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-环己基)-O-Et盐酸盐(Apo854.HCl,0.80g)。产率=47%；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.94(br.s,1H),8.57(br.s,4H),7.47(t,J=8.1Hz,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.19(s,1H),7.07(t,J=7.6Hz,1H),6.88-7.03(m,1H),6.58-6.72(q,J=5.1Hz,0.5H),6.53(q,J=5.1Hz,0.5H),4.39-4.63(m,2H),4.00-4.26(m,2H),3.78-4.00(m,1H),2.93-3.18(m,2H),2.18-2.41(m,2H),1.88-2.02(m,2H),1.82(br.s,2H),1.63(br.s,2H),1.13-1.53(m,12H)；
MS-ESI(m/z)：532[M+1]+(游离碱)。
实施例20
H-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-Et)-O-Et盐酸盐，Apo901.HCl的制备
以上述实施例19中描述的相似的方式进行，从CBz-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Et(2.48g,5.00mmol)与1-氯乙基乙基碳酸酯(1.53g,10.0mmol)，在碳酸钾(1.38g,10.0mmol)和碘化钠(3.00g,20.0mmol)的存在下，在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，于50℃的过夜反应，制备Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-Et)-O-Et(1.64g，产率53%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.87(br.s,1H),8.24-8.48(m,1H),7.72(t,J=7.1Hz,1H),7.42-7.55(m,1H),7.22-7.42(m,6H),7.14(d,J=5.1Hz,1H),7.07(t,J=7.6Hz,1H),6.91-7.02(m,1H),6.63(q,J=5.1Hz,0.5H),6.51(q,J=5.1Hz,0.5H),4.97-5.13(m,2H),4.37-4.51(m,1H),3.88-4.23(m,5H),2.92-3.20(m,2H),2.10-2.28(m,2H),1.80-1.96(m,1H),1.73(m,1H),1.43(d,J=5.1Hz,1.5H),1.12-1.29(m,7.5H)。
从用乙醇(75mL)中的10%Pd/C(湿，1.00g)和二氧六环(0.8mL)中的4M HCl，在帕尔仪器中，在氢气气氛下，Cbz-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-COO-Et)-O-Et(1.60,2.60mmol)的氢化，获得H-D-Glu(D-Trp-O-CH(CH3)-O-CO-O-Et)-O-Et盐酸盐(Apo901.HCl,0.97g)。产率=72%；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:11.04(br.s,1H),8.56-8.89(m,4H),7.42-7.53(m,1H),7.35(d,J=7.1Hz,1H),7.22(s,1H),7.06(t,J=7.1Hz,1H),6.91-7.01(m,1H),6.64(m,0.5H),6.54(m,0.5H),4.39-4.57(m,1H),4.05-4.27(m,4H),3.80-3.97(m,1H),2.97-3.24(m,2H),2.20-2.45(m,2H),1.92-2.07(m,2H),1.45(d,J=5.1Hz,1.5H),1.12-1.30(m,7.5H)；MS-ESI(m/z)：478[M+1]+(游离碱)。
实施例21
H-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-Et.2HCl，Apo900.2HCl的制备
以上述实施例19中描述的相似的方式进行，从Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-O-Et(4.96g,10.0mmol)与2-吗啉乙基甲磺酸酯（从2-吗啉乙醇(1.97g,15.0mmol)和甲磺酰氯(1.72g,15.0mmol)制得），在碳酸钾(2.76g,20.0mmol)的存在下，在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的反应，制备Cbz-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-Et盐酸盐(2.21g，产率34%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:11.07(br.s,1H),10.90(br.s,1H),8.48(d,J=7.1Hz,1H),7.73(d,J=8.1Hz,1H),7.50(d,J=7.1Hz,1H),7.27-7.43(m,6H),7.17(s,1H),7.07(t,J=7.6Hz,1H),6.93-7.04(m,1H),4.98-5.11(m,2H),4.54(q,J=7.1Hz,1H),4.25-4.44(m,2H),3.96-4.14(m,3H),3.67-3.91(m,4H),3.04-3.33(m,6H),2.85-3.04(m,2H),2.19-2.30(m,2H),1.85-1.97(m,1H),1.68-1.82(m,1H),1.17(t,J=7.1Hz,3H)；MS-ESI(m/z)：609[M+1]+(游离碱)。
从用乙醇(100mL)中的10%Pd/C(湿，1.4g)和乙醚(2.5mL)中的2M HCl，在帕尔仪器中，在氢气气氛下，Cbz-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-Et盐酸盐(2.21,3.40mmol)的氢化，制备H-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-Et二盐酸盐(1.22g,65%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:11.80(br.s,1H),11.02(br.s,1H),8.66-8.85(m,4H),7.51(d,J=8.1Hz,1H),7.35(d,J=8.1Hz,1H),7.23(br.s,1H),7.06(t,J=7.1Hz,1H),6.94-7.02(m,1H),4.56(q,J=7.1Hz,1H),4.33-4.45(m,2H),4.06-4.23(m,2H),3.86(br.s,5H),2.90-3.37(m,8H),2.26-2.46(m,2H),1.91-2.03(m,2H),1.20(t,J=6.6Hz,3H)；MS-ESI(m/z)：475[M+1]+(游离碱)。
实施例22
H-D-Glu(D-Trp-O-5-茚满基)-OH，Apo851的制备
A、H-D-Trp-O-5-茚满基盐酸盐的制备
将Boc-D-Trp-OH(3.04g,10.0mmol)、5-茚醇(5.41g,40.0mmol)、EDCI.HCl(2.30g,12.0mmol)、HOBt水合物(1.68g,11.0mmol)和N-甲基吗啉(1.21g,12.0mmol)在二氯甲烷(10mL)中混合。将反应混合物于室温搅拌过夜，然后用乙酸乙酯稀释。用水(2x)和盐水洗涤混合物，然后经硫酸镁干燥。使用由己烷中乙酸乙酯的混合物组成的梯度溶剂(5至20%)作为洗脱液，通过硅胶上的柱色谱法纯化产物，得到无色泡沫状的Boc-D-Trp-O-5-茚满基(3.26g)。产率：77%；1H NMR(CD3OD,90MHz)δppm:7.60(d,J=7.0Hz,1H),7.27-7.47(m,1H),6.88-7.27(m,4H),6.48-6.82(m,2H),4.63(t,J=6.9Hz,1H)4.10(q,6.8Hz,1H)2.63-3.05(m,4H),1.87-2.31(m,3H)1.09-1.65(m,11H)；MS-ESI(m/z)421[M+1]+。
于室温，将Boc-D-Trp-O-5-茚满基(3.25g,7.70mmol)与乙醚(20mL)中的2MHCl混合并搅拌20小时。加入另外的乙醚(10mL)中的2M HCl，并继续将混合物搅拌另外的3.5小时。通过抽吸过滤收集沉淀物，用乙醚彻底洗涤，得到灰白色固体状的H-D-Trp-O-5-茚满基盐酸盐(2.01g)。产率：72%；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:7.57(d,J=8.1Hz,1H),7.40(d,J=8.1Hz,1H),7.31(s,1H),7.08-7.20(m,2H),6.97-7.06(m,1H),6.51-6.62(m,2H),4.45(t,J=6.6Hz,1H),3.30-3.49(m,2H),2.70-2.84(m,4H),1.91-2.05(m,2H)；MS m/z：321[M+1]+(游离碱)。
B、Cbz-D-Glu(D-Trp-O-5-茚满基)-O-Bzl的制备
将H-D-Trp-O-5-茚满基盐酸盐(1.00g,2.8mmol)、Cbz-D-Glu-O-Bzl(1.04g,2.80mmol)、EDCI.HCl(0.64g,3.30mmol)、HOBt水合物(0.47g,3.10mmol)和N-甲基吗啉(0.57g,5.60mmol)在二氯甲烷(10mL)中混合。将反应混合物于室温搅拌过夜，然后用乙酸乙酯稀释。用水、饱和碳酸氢钠溶液、水、0.5N HCl溶液和盐水洗涤混合物，然后用硫酸镁干燥。通过旋转蒸发浓缩有机溶液并用乙醚研磨残余物，得到白色固体状的Cbz-D-Glu(D-Trp-O-5-茚满基)-O-Bzl(1.63g)。产率87%；1HNMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.92(br.s,1H),8.52(d,J=6.1Hz,1H),7.82(d,J=8.1Hz,1H),7.54(d,J=7.1Hz,1H),7.19-7.41(m,12H),7.04-7.18(m,2H),6.94-7.04(m,1H),6.60(s,1H),6.57(d,J=8.1Hz,1H),5.13(s,2H),4.99-5.09(m,2H),4.55-4.70(m,1H),4.08-4.21(m,1H),3.12-3.28(m,2H),2.70-2.86(m,4H),2.29(br.s,2H),1.92-2.08(m,3H),1.69-1.90(m,1H)；MS-ESI(m/z)：674[M+1]+。
C、H-D-Glu(D-Trp-O-5-茚满基)-OH，Apo851的制备
将Cbz-D-Glu(D-Trp-O-5-茚满基)-O-Bzl(1.62g,2.4mmol)和10%Pd/C(湿，0.60g)在乙醇(180mL)中混合。使用气球，在氢气气氛下，将反应混合物氢化4小时。通过CeliteTM过滤混合物并用乙醇洗涤滤饼。通过旋转蒸发浓缩滤液并用乙腈研磨残余物，得到白色固体状的H-D-Glu(D-Trp-O-5-茚满基)-OH(Apo851,0.95g)。产率=80%；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.99(br.s,1H),9.02(d,J=7.1Hz,1H),7.55(d,J=8.1Hz,1H),7.37(d,J=8.1Hz,1H),7.28(s,1H),7.15(d,J=8.1Hz,1H),7.04-7.12(m,1H),6.92-7.04(m,1H),6.64(s,1H),6.59(d,J=8.1Hz,1H),4.60(q,J=7.1Hz,1H),3.11-3.43(m,4H),2.71-2.87(m,4H),2.23-2.42(m,2H),1.94-2.11(m,2H),1.71-1.93(m,2H)；MS-ESI(m/z)：450[M+1]+。
实施例23
H-D-Glu(D-Trp-O-(2-甲氧基苯基))-OH，Apo852的制备
A、H-D-Trp-O-(2-甲氧基苯基)盐酸盐的制备
以上述实施例22A中描述的相似的方式进行，于室温，从二氯甲烷(20mL)中的Boc-D-Trp-OH(6.08g,20.0mmol)、EDCI.HCl(4.60g,24.0mmol)、HOBt水合物(3.36g,22.0mmol)、N-甲基吗啉(2.42g,24.0mmol)和2-甲氧基苯酚(10.3g,80.0mmol)制备Boc-D-Trp-O-(2-甲氧基苯基)(5.85g，产率=70%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.89(br.s,1H),7.56(d,J=8.1Hz,1H),7.42(d,J=8.1Hz,1H),7.36(d,J=8.1Hz,1H),7.20-7.31(m,2H),7.11-7.16(m,1H),7.09(t,J=7.6Hz,1H),6.92-7.03(m,3H),4.36-4.51(m,1H),3.76(s,3H),3.31-3.38(m,1H),3.09-3.20(m,1H),1.35(s,7.5H),1.28(s,1.5H)。
从室温Boc-D-Trp-O-(2-甲氧基苯基)(5.64g,13.6mmol)与在乙醚(40mL)中的2M HCl反应制备H-D-Trp-O-(2-甲氧基苯基)盐酸盐(4.55g，产率=96%)。
B、Cbz-D-Glu(D-Trp-O-(2-甲氧基苯基))-O-Bzl的制备
以上述实施例22B中描述的相似的方式进行，于室温，从二氯甲烷(20mL)中的H-D-Trp-O-(2-甲氧基苯基)盐酸盐(2.50g,7.2mmol)、EDCI.HCl(1.66g,8.6mmol)、HOBt水合物(1.21g,7.9mmol)、N-甲基吗啉(1.53g,15.1mmol)和Cbz-D-Glu-O-Bzl(2.68g,7.2mmol)制备Cbz-D-Glu(D-Trp-O-(2-甲氧基苯基))-O-Bzl(2.25g，产率=47%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.90(br.s,1H),8.50(d,J=8.1Hz,1H),7.81(d,J=7.1Hz,1H),7.56(d,J=8.1Hz,1H),7.19-7.40(m,13H),7.05-7.15(m,2H),6.96-7.03(m,1H),6.87-6.96(m,2H),5.12(s,2H),4.98-5.09(m,2H),4.69-4.79(m,1H),4.05-4.16(m,1H),3.73(s,3H),3.32-3.41(m,1H),3.15(dd,J=14.7,8.6Hz,1H),2.15-2.35(m,2H),1.88-2.03(m,1H),1.70-1.86(m,1H)；MS-ESI(m/z)：664[M+1]+。
C、H-D-Glu(D-Trp-O-(2-甲氧基苯基))-OH，Apo852的制备
以上述实施例22C中描述的相似的方式进行，使用乙醇(200mL)中的10%Pd/C(湿，0.75g)，使用气球，在氢气气氛下，将Cbz-D-Glu(D-Trp-O-(2-甲氧基苯基))-O-Bzl(2.00g,3.0mmol)氢化，制备H-D-Glu(D-Trp-O-(2-甲氧基苯基))-OH，Apo852(1.11g,产率=84%)。1H NMR(CD3OD,400MHz)δppm:7.60(d,J=8.1Hz,1H),7.35(d,J=8.1Hz,1H),7.17-7.26(m,2H),6.99-7.14(m,3H),6.88-6.95(m,2H),4.99(dd,J=9.1,5.1Hz,1H),3.78(s,3H),3.60(t,J=6.1Hz,1H),3.54(dd,J=14.1,5.1Hz,1H),3.21-3.30(m,1H),2.35-2.57(m,2H),1.98-2.11(m,2H)；MS-ESI(m/z)：440[M+1]+。
实施例24
H-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-CH2CH2CF3二盐酸盐(Apo913.2HCl)的制备
A、Boc-D-Trp-O-吗乙基的制备
将Boc-D-Trp-OH(30.4g,100.0mmol)、2-吗啉乙醇(13.2g,100.0mmol)、EDCI.HCl(19.2g,100.0mmol)、HOBt水合物(15.3g,100.0mmol)在二氯甲烷(300mL)中的溶液于室温搅拌。两天后，在真空中浓缩反应混合物。用乙酸乙酯稀释残余物。用饱和碳酸氢钠溶液(2x)、水(2x)和盐水相继洗涤得到的溶液，然后经硫酸镁干燥。过滤后，在真空中浓缩有机部分，得到浅棕色油状的粗Boc-D-Trp-O-吗乙基(37.6g)。该产物未经进一步纯化而用于下一步。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm):8.37(br.s,1H),7.56(d,J=8.1Hz,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.18(t,J=7.6Hz,1H),7.06-7.14(m,1H),7.03(s,1H),5.12(d,J=8.1Hz,1H),4.58-4.71(m,1H),4.10-4.20(m,2H),3.58-3.73(m,4H),3.19-3.35(m,2H),2.43-2.56(m,2H),2.29-2.42(m,4H),1.43(s,9H)。
B、H-D-Trp-O-吗乙基二盐酸盐的制备
向Boc-D-Trp-O-吗乙基(37.0g,89.0mmol)在乙酸乙酯(250mL)的溶液中缓慢鼓吹HCl气体3小时。通过抽吸过滤收集产生的沉淀并用乙酸乙酯彻底洗涤，得到灰白色固体状的H-D-Trp-O-吗乙基二盐酸盐(30.6g)。产率=88%；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δ(ppm):11.35(br.s,1H),11.11(br.s,1H),8.77(br.s,3H),7.56(d,J=8.1Hz,1H),7.38(d,J=8.1Hz,1H),7.29(s,1H),7.10(t,J=7.6Hz,1H),6.93-7.06(m,1H),4.33-4.57(m,2H),4.22-4.31(m,1H),3.85(br.s,4H),2.82-3.48(m,8H)；MS-ESI(m/z)：318[M+1]+(游离碱)。
C、Boc-D-Glu-(OBn)-O-CH2CH2CF3的制备
将Boc-D-Glu-(OBn)-OH(6.75g,20.0mmol)、3,3,3-三氟丙醇(2.28g,20.0mmol)、EDCI.HCl(3.84g,20.0mmol)和HOBt水合物(3.06g,20.0mmol)在二氯甲烷(100mL)中的混合物于室温搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物，并用乙酸乙酯稀释残余物。用1N HCl溶液(2x)、饱和碳酸氢钠溶液(2x)、水(2x)和盐水相继洗涤得到的溶液，然后经硫酸镁干燥。过滤后，蒸发滤液至干，然后用乙醚研磨，得到第一批白色固体状的Boc-D-Glu-(OBn)-O-CH2CH2CF3(3.69g)。将母液浓缩得到第二批(1.09g)。总计=4.78g，1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm):7.35(br.s,5H),4.93-5.29(m,3H),4.26-4.50(m,2H),2.34-2.67(m,4H),2.09-2.34(m,1H),1.90-2.04(m,1H),1.35-1.49(m,9H)。
D、Boc-D-Glu-O-CH2CH2CF3的制备
使用气球，在氢气气氛下，于室温，将Boc-D-Glu-(OBn)-O-CH2CH2CF3(4.71g,10.8mmol)和10%Pd-C(湿，1.22g)在乙酸乙酯(100mL)中的混合物搅拌2小时。通过CeliteTM过滤混合物并在真空中浓缩滤液。用己烷研磨残余物，得到白色固体状的Boc-D-Glu-O-CH2CH2CF3(3.43g)，其未经进一步纯化而用于下一步。
E、Boc-D-Glu-(D-Trp-O-吗乙基)-O-CH2CH2CF3的制备
向H-D-Trp-O-吗乙基二盐酸盐(1.26g,3.2mmol)、Boc-D-Glu-O-CH2CH2CF3(1.00g,2.94mmol)和EDCI.HCl(0.62g,3.23mmol)在二氯甲烷(75mL)中的混合物加入三乙胺(0.98g,9.7mmol)。将反应混合物于室温搅拌过夜，然后在真空中浓缩。用乙酸乙酯稀释残余物，并用水、饱和碳酸氢钠溶液和盐水相继洗涤得到的溶液，然后经硫酸镁干燥，过滤，并用硅胶浓缩。用乙酸乙酯作为洗脱液，通过柱色谱法纯化产物，得到白色泡沫状的Boc-D-Glu-(D-Trp-O-吗乙基)-O-CH2CH2CF3(0.944g)。产率=45%。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm):8.21(br.s,1H),7.53(d,J=7.1Hz,1H),7.35(d,J=8.1Hz,1H),7.19(t,J=7.6Hz,1H),7.00-7.15(m,2H),6.37(br.s,1H),5.32(br.s,1H),4.80-5.05(m,1H),4.06-4.48(m,5H),3.58-3.85(m,4H),3.19-3.46(m,2H),2.08-2.69(m,10H),1.80-2.01(m,2H),1.43(s,9H)；MS-ESI(m/z)：643[M+1]+。
F、H-D-Glu-(D-Trp-O-吗乙基)-O-CH2CH2CF3二盐酸盐的制备
以实施例6B所描述的相似的方式进行，从二氧六环(3.45mL)和乙酸乙酯(3.0mL)中的4M HCl中的Boc-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-CH2CH2CF3(890mg,1.4mmol)的脱保护，获得标题化合物H-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-CH2CH2CF3.2HCl(Apo913.2HCl，737mg，产率=86%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δ(ppm):11.41(br.s,1H),10.95(br.s,1H),8.68(d,J=7.1Hz,1H),8.61(br.s,3H),7.51(d,J=8.1Hz,1H),7.35(d,J=8.1Hz,1H),7.20(s,1H),7.04-7.11(m,1H),6.95-7.03(m,1H),4.57(q,J=7.1Hz,1H),4.27-4.45(m,4H),3.96-4.07(m,1H),3.85(br.s,4H),2.83-3.37(m,8H),2.63-2.81(m,2H),2.25-2.45(m,2H),1.91-2.06(m,2H)；MS-ESI(m/z)：543[(M+1]+(游离碱)。
实施例25
H-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-异戊基二盐酸盐(Apo917.2HCl)的制备
A、Boc-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-异戊基的制备
以上述实施例24E中描述的相似的方式进行，从Boc-D-Glu-O-异戊基(实施例2，2.00g，6.3mmol)和H-D-Trp-O-吗乙基盐酸盐(实施例24B，2.46g，6.3mmol)与二氯甲烷(20mL)中的HOBt水合物(1.06g,6.9mmol)、EDCI盐酸盐(1.38g,7.2mmol)和N-甲基吗啉(0.64g,6.3mmol)于室温的过夜反应，制备Boc-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-异戊基(2.22g，产率=57%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)(ppm):10.86(br.s,1H),8.29(d,J=7.1Hz,1H),7.47(d,J=8.1Hz,1H),7.33(d,J=8.1Hz,1H),7.23(d,J=7.1Hz,1H),7.15(s,1H),7.07(t,J=7.6Hz,1H),6.93-7.02(m,1H),4.46(q,J=7.1Hz,1H),3.96-4.16(m,4H),3.84-3.97(m,1H),3.43-3.57(m,4H),3.08-3.21(m,1H),2.93-3.08(m,1H),2.09-2.45(m,8H),1.79-1.94(m,1H),1.56-1.79(m,2H),1.24-1.55(m,11H),0.87(d,J=6.1Hz,6H)；MS-ESI(m/z)：617[M+1]+。
B、H-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-异戊基二盐酸盐的制备
以实施例6B所描述的相似的方式进行，从在二氧六环(15mL)和乙酸乙酯(20mL)中的4M HCl中的Boc-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-异戊基(2.13g,1.4mmol)的脱保护，获得标题化合物H-D-Glu(D-Trp-O-吗乙基)-O-异戊基二盐酸盐(0.81g，产率=40%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz).(ppm):11.75(br.s,1H),11.01(br.s,1H),8.72(br.s,4H),7.52(d,J=8.1Hz,1H),7.35(d,J=7.1Hz,1H),7.22(s,1H),7.04-7.12(m,1H),6.92-7.02(m,1H),4.49-4.64(m,1H),4.39(br.s,2H),4.14(br.s,2H),3.70-3.97(m,5H),2.80-3.46(m,8H),2.19-2.46(m,2H),1.87-2.11(m,2H),1.55-1.72(m,1H),1.49(d,J=7.1Hz,2H),0.87(d,J=7.1Hz,6H)；MS-ESI(m/z)：517[M+1]+(游离碱)。
实施例26
H-D-Glu(D-Trp-O-Bn)-O-吗乙基二盐酸盐(Apo904.2HCl)的制备
A、Boc-D-Glu-(OBn)-O-吗乙基的制备
以上述实施例24C中描述的相似的方式进行，从Boc-D-Glu-(OBn)-OH(6.75g,20.0mmol)、2-吗啉乙醇(2.62g,20.0mmol)、HOBt水合物(3.06g,20.0mmol)和EDCI盐酸盐(3.84g,20.0mmol)在二氯甲烷(100mL)中于室温的过夜反应，制备Boc-D-Glu-(OBn)-O-吗乙基(8.70g，产率=96%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δ(ppm):7.16-7.61(m,5H),5.77(s,1H),5.10(s,2H),4.18-4.42(m,1H),3.88-4.18(m,2H),3.52(br..s,4H),2.51(br.s,4H),2.23-2.46(m,4H),1.71-2.12(m,2H),1.20-1.57(m,9H)。
B、Boc-D-Glu-(OH)-O-吗乙基的制备
以上述实施例24D中描述的相似的方式进行，从用乙酸乙酯(100mL)中的10%Pd-C(湿，2.5g)，在氢气气氛下，使用帕尔仪器，Boc-D-Glu-(OBn)-O-吗乙基(8.70g,19.3mmol)的氢化，制备Boc-D-Glu-(OH)-O-吗乙基(6.58g，产率=94%)。MS-ESI(m/z)：361[M+1]+。
C、Boc-D-Glu-(D-Trp-O-Bn)-O-吗乙基的制备
以上述实施例24E中描述的相似的方式进行，从Boc-D-Glu-O-吗乙基(1.80g,5.0mmol)和H-D-Trp-OBn盐酸盐(1.65g,5.0mmol)与EDCI盐酸盐(0,96g,5.0mmol)在二氯甲烷(50mL)中于室温的过夜反应，制备Boc-D-Glu-(D-Trp-O-Bn)-O-吗乙基(1.72g，产率=54%)。MS-ESI(m/z)：637[M+1]+。
D、H-D-Glu-(D-Trp-O-Bn)-O-吗乙基二盐酸盐的制备
以实施例6B所描述的相似的方式进行，用二氧六环(8mL)和乙酸乙酯(20mL)中的4M HCl，将Boc-D-Glu-(D-Trp-O-Bn)-O-吗乙基(1.70g,2.67mmol)脱保护，获得标题化合物H-D-Glu-(D-Trp-O-Bn)-O-吗乙基二盐酸盐(Apo904.2HCl，1.26g，产率=77%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δ(ppm):11.12(br.s,1H),10.91(s,1H),8.68(br.s,3H),8.56(d,J=7.1Hz,1H),7.48(d,J=8.1Hz,1H),7.25-7.39(m,4H),7.09-7.20(m.,3H),7.08(t,J=7.6Hz,1H),6.95-7.03(m,1H),4.93-5.10(m,2H),4.38-4.63(m,3H),4.00-4.16(m,1H),3.85-4.00(m,4H),3.00-3.52(m,8H),2.27-2.42(m,2H),1.95-2.16(m,2H)。MS-ESI(m/z)：537[M+1]+(游离碱)。
实施例27
H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-吗乙基二盐酸盐(Apo905.2HCl)的制备
以上述实施例22C中描述的相似的方式进行，使用乙醇(50mL)中的10%Pd/C(湿，450mg)，使用气球，在氢气气氛下，将H-D-Glu-(D-Trp-O-Bn)-O-吗乙基二盐酸盐(900mg,1.48mmol)氢化，制备H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-吗乙基二盐酸盐(Apo905.2HCl，580mg，产率=75%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δ(ppm):11.28(br.s,1H),10.89(br.s,1H),8.73(br.s,3H),8.34(d,J=8.1Hz,1H),7.52(d,J=8.1Hz,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.17(s,1H),7.06(t,J=7.6Hz,1H),6.90-7.01(m,1H),4.38-4.63(m,3H),4.03(br.s,1H),3.92(br.s.,4H),3.07-3.60(m,7H),3.01(dd,J=14.7,8.6Hz,1H),2.27-2.39(m,2H),1.91-2.06(m,2H);MS-ESI(m/z):447[M+1]+。
实施例28
H-D-Glu(D-Trp-O-5-茚满基)-O-吗乙基二盐酸盐(Apo906.2HCl)的制备
Boc-D-Glu(D-Trp-O-5-茚满基)-O-吗乙基的制备
以上述实施例24E中描述的相似的方式进行，从Boc-D-Glu-O-吗乙基(2.00g,6.3mmol)、H-D-Trp-O-5-茚满基盐酸盐(实施例22A，2.46g，6.3mmol)与HOBt水合物(1.06g,6.9mmol)、EDCI盐酸盐(1.38g,7.2mmol)和N-甲基吗啉(0.64g,6.3mmol)在二氯甲烷(20mL)中于室温的过夜反应，制备Boc-D-Glu(D-Trp-O-5-茚满基)-O-吗乙基(499mg，产率=75%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm):8.79(br.s,1H),7.61(d,J=8.1Hz,1H),7.35(d,J=8.1Hz,1H),7.08-7.24(m,4H),6.81(s,1H),6.70-6.77(m,2H),5.14-5.26(m,2H),4.17-4.32(m,2H),4.04-4.14(m,1H),3.63-3.74(m,4H),3.42-3.57(m,2H),2.88(t,J=7.1Hz,4H),2.61(t,J=5.1Hz,2H),2.51(br.s,4H),2.24-2.32(m,2H),2.03-2.18(m,3H),1.81-1.96(m,1H),1.44(br.s,9H)；MS-ESI(m/z):663[M+1]+。
H-D-Glu(D-Trp-O-5-茚满基)-O-吗乙基二盐酸盐的制备
以实施例6B所描述的相似的方式进行，在二氧六环溶液(3mL)和乙酸乙酯(3mL)中的4M HCl中将Boc-D-Glu(D-Trp-O-5-茚满基)-O-吗乙基(142mg,0.214mmol)脱保护，获得标题化合物H-D-Glu(D-Trp-O-5-茚满基)-O-吗乙基二盐酸盐(Apo906.2HCl，85mg，产率=62%)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δ(ppm):11.05(br.s,1H),10.97(br.s,1H),8.51-8.91(m,4H),7.54(d,J=8.1Hz,1H),7.37(d,J=8.1Hz,1H),7.28(s,1H),7.16(d,J=8.1Hz,1H),7.09(t,J=7.6Hz,1H),6.95-7.05(m,1H),6.55-6.67(m,2H),4.38-4.73(m,3H),4.01-4.15(m,1H),3.76-4.01(m,4H),2.98-3.50(m,8H),2.79(m,4H),2.29-2.48(m,2H),1.88-2.17(m,4H)；MS-ESI(m/z)：563[M+1]+(游离碱)。
实施例29
H-D-Glu(D-Trp-O-环己基)-OH(Apo850)的制备
A、H-D-Trp-O-环己基盐酸盐的制备
于室温，向Boc-D-Trp-OH(15.0g,49.4mmol)在CH2Cl2的混悬液中加入EDC.HCl(14.2g,74.1mmol)。于室温，向得到的澄清溶液中加入环己醇(26.1mL,247mmol)，然后是DMAP(0.6g,4.9mmol)。将得到的混合物搅拌4天。将反应混合物分配于1N HCl溶液(200mL)和EtOAc(120mL)之间。再次用EtOAc(150mL)萃取水层。用1N HCl(100mL)然后是水(100mL)洗涤合并的有机部分，然后经硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干。通过硅胶上的闪式柱色谱法(100%己烷和20%己烷中的EtOAc作为洗脱液)纯化残余物，得到淡黄色固体状的Boc-D-Trp-O-环己基(15.4g)。产率=81%；MS-ESI(m/z)：387[M+1]+。
向冷却至5-10℃的Boc-D-Trp-O-环己基(13.8g,35.8mmol)在CH2Cl2中的溶液鼓吹HCl气体30分钟。通过抽吸过滤收集得到的固体混悬液，用CH2Cl2(2x100mL)洗涤，然后在42℃的真空烘箱中干燥6小时。由此，获得固体H-D-Trp-O-环己基盐酸盐(6.4g)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:11.12(br.s,1H),8.68(br.s,3H),7.55(d,J=7.8Hz,1H),7.37(d,J=8.0Hz,1H),7.24(s,1H),7.07(t,J=7.7Hz,1H),7.02(t,J=7.4Hz,1H),4.64(明显的br.t,1H),4.13(明显的br.t,1H),3.30-3.35(m,1H),3.22–3.28(m,1H),1.44-1.50(m,1H),1.35-1.65(m,4H),1.10-1.30(m,5H)；MS-ESI(m/z)：287[M+1]+(游离碱)。
B、Cbz-D-Glu(D-Trp-O-环己基)-O-Bzl的制备
于室温，向Cbz-D-Glu-O-Bzl(2.8g,7.6mmol)、EDC.HCl(2.2g,11.4mmol)、HOBt水合物(1.5g,11.4mmol)和DIPEA(3.3mL,19.0mmol)的溶液中加入H-D-Trp-O-环己基盐酸盐(3.2g,9.9mmol)。在氢气覆盖下，将混合物搅拌过夜。在真空中将混合物蒸发至干，并将残余物分配于5%碳酸钠溶液(150mL)和EtOAc(150mL)之间。再次用EtOAc(150mL)萃取水层。用5%碳酸钠溶液(100mL)、1NHCl溶液(2x100mL)和水(100mL)相继洗涤合并的有机部分，然后经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶上的柱色谱法(在己烷中20至40%EtOAc，然后是EtOAc中10%的MeOH作为洗脱液)纯化残余物，得到定量产率的Cbz-D-Glu(D-Trp-O-环己基)-O-Bzl。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:10.88(br.s,1H),8.35(d,J=7.0Hz,1H),7.82(d,J=7.0Hz,1H),7.49(d,J=7.0Hz,1H),7.25–7.40(m,11H),7.18(s,1H),7.08(t,J=7.4Hz,1H),6.98(t,J=7.4Hz,1H),5.13(s,2H),5.02–5.10(m,2H),4.56–4.62(m,1H),4.48(明显的q,J=7.2Hz,1H),4.05–4.12(m,1H),3.04-3.12(m,1H),2.98–3.06(m,1H),2.15-2.25(m,2H),1.90-2.00(m,1H),0.90-1.80(m,11H)；MS-ESI(m/z)：640[M+1]+。
C、H-D-Glu(D-Trp-O-环己基)-OH(Apo850)的制备
在15磅/平方英寸的氢气压力下，使Cbz-D-Glu(D-Trp-O-环己基)-O-Bzl(2.89g,4.52mmol)和10%湿Pd/C(387mg)在EtOH(180mL)中的溶液经历氢化2.75小时。通过CeliteTM垫过滤混合物并蒸发滤液至干。通过硅胶上的柱色谱法(CH2Cl2中5至20%的MeOH)纯化残余物，得到白色固体状的H-D-Glu(D-Trp-O-环己基)-OH(Apo850，1.40g)。产率=75%；1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:11.01(br.s,1H),8.78(d,J=7.2Hz,1H),7.50–8.20(br基线以上的驼峰),7.49(d,J=7.8Hz,1H),7.34(d,J=8.0Hz,1H),7.18(s,1H),7.06(t,J=7.2Hz,1H),6.98(t,J=7.5Hz,1H),4.60(br明显的t,1H),4.48(明显的q,J=6.9Hz,1H),3.20–3.60(br基线以上的驼峰),3.30(t,J=6.3Hz,2H),3.10-3.18(m,1H),2.98–3.06(m,1H),2.24-2.32(m,2H),1.83-1.87(m,2H),1.50–1.70(m,4H),1.15-1.45(m,6H；MS-ESI(m/z)：416[M+1]+。
实施例30
H-D-Glu(D-Trp-OCH2O-CO-C(CH3)3)-OH，Apo839的制备
以实施例12中描述的相似的方式进行，通过用氯三甲基乙酸甲酯代替氯苯甲酸甲酯，制备H-D-Glu(D-Trp-OCH2O-CO-C(CH3)3)-OH(Apo839)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δppm:11.09(br.1H),8.83(d,J=7.1Hz,1H),7.50–8.20(br基线以上的驼峰),7.47(d,J=7.8Hz,1H),7.34(d,J=8.0Hz,1H),7.21(d,J=2.1Hz,1H),7.06(t,J=7.1Hz,1H),6.98(t,J=7.4Hz,1H),5.68–5.76(m,2H),4.42–4.48(m,1H),3.40–3.70(br.基线以上的驼峰),3.29(t,J=6.5Hz,1H),3.12–3.15(m,1H),3.00–3.08(m,1H),2.26–2.30(m,2H),1.46-1.52(m,2H),1.12(s,9H)；MS-ESI(m/z)：448[M+1]+。
实施例31
H-D-Glu(D-Trp-OH)-OMe(Apo841)的制备
将Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-OBzl(实施例6A，2.10g，4.00mmol)和甲醇钠(0.55g,10.0mmol)在甲醇(60mL)中的混合物于室温搅拌25分钟。用乙酸(0.6mL,10.5mmol)淬灭反应混合物，然后在真空中蒸发至干，得到油状粗Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-OMe。
将残余油置于CH2Cl2(180mL)中，然后用去离子水(50mL)和乙酸(0.3mL)的混合物洗涤。将有机溶液经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发将滤液的体积减少至约80mL。随着缓慢鼓吹HCl气体，在冰-水浴中冷却有机层。通过HPLC监测反应进程。倾倒出上层液体，并用更多的CH2Cl2研磨粘性固体。然后将粘性固体溶解于水(30mL)中，并通过使用6N NaOH溶液(0.5mL,3mmol)将溶液的pH调节至约5.5。然后加入乙腈(100mL)，并将混合物在真空中蒸发至干，得到油状物。通过用乙酸乙酯的研磨形成固体。通过抽吸过滤收集固体，用水彻底洗涤并干燥，得到H-D-Glu(D-Trp-OH)-OMe(Apo822,0.49g)。产率=35%；HPLC(AUC)purityat280nm=98.1%;1H NMR(DMSO-D6)δppm:10.82(s,1H),8.07(d,J=7.8Hz,1H),7.52(d,J=7.8Hz,1H),7.32(d,J=8.0Hz,1H),7.12(s,1H),7.05(t,J=7.4Hz,1H),6.97(t,J=7.4Hz,1H),4.39-4.45(m,1H),3.60(s,3H),3.28-3.31(m,1H),3.14-3.19(m,1H),2.95-3.01(m,1H),2.15-2.19(m,2H),1.73-1.82(m,1H),1.54-1.63(m,1H)；MS-ESI(m/z):348[M+1]+。
实施例32
D-Glu(D-Trp-OCH2CF3)-OH和D-Glu(L-Trp-OCH2CF3)-OH的混合物，Apo860的制备
A、Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-OBn的制备
向冰-水冷却的Cbz-D-Glu-OBzl(20.0g,53.9mmol)在DMF(100mL)中的溶液中加入N-羟基琥珀酰亚胺(6.82g,59.2mmol)，随后加入EDCI.HCl(11.4g,59.2mmol)，并将混合物于室温搅拌过夜。然后将混合物在冰-水浴中冷却，并加入H-D-Trp-OH(12.1g,59.2mmol)，随后加入DIPEA(10mL)。将混合物搅拌过夜。用0.5N HCl溶液淬灭反应混合物，然后用EtOAc萃取。用10%柠檬酸溶液和盐水洗涤EtOAc层，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。用Et2O研磨残余物，并通过过滤收集固体，得到Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-OBn(26.1g)。产率=87%；MS-ESI(m/z)：558[M+1]+。
B、D-Glu(D-Trp-OCH2CF3)-OH和D-Glu(L-Trp-OCH2CF3)-OH的混合物，Apo860的制备
向冰-水冷却的Cbz-D-Glu(D-Trp-OH)-OBzl(3.5g,6.3mmol)在DMF(50mL)中的溶液中加入N-羟基琥珀酰亚胺(0.8g,6.9mmol)，随后加入EDCI.HCl(1.32g,6.9mmol)，并将混合物于室温搅拌过夜。然后在冰-水浴中将混合物冷却并加入DIPEA(1.23mL,6.9mmol)，随后加入2.2.2-三氟乙醇(1.8mL,25.1mmol)。将混合物于室温搅拌5小时。然后将反应混合物分配于水和EtOAc之间。收集EtOAc层并用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。用己烷研磨残余物。弃除己烷层。将粗残余物与0.95g湿10%Pd-C在EtOH(100mL)中混合，并在氢气覆盖下，在45磅/平方英寸氢气气压下，在帕尔仪器中氢化3小时。将混合物过滤，并在真空中将滤液浓缩至干。用丙酮、EtOAc和己烷的混合物研磨残余物。通过过滤收集固体，并使用IPA/H2O(85/15比例，v/v)的溶剂混合物作为洗脱液，通过硅胶上的闪式柱色谱法进一步纯化所述固体，得到D-Glu(D-Trp-OCH2CF3)-OH(1.16g)。产率=44%；1H NMR(DMSO-D6+D2O,400MHz):δ(ppm)7.47(d,J=8.1Hz,1H),7.35(d,J=8.1Hz,1H),7.17(s,1H),7.04-7.12(m,1H),6.96-7.04(m,1H),4.57-4.75(m,2H),4.45-4.57(m,1H),3.29(t,J=6.1Hz,0.7H),3.23(t,J=6.1Hz,0.3H),3.18(d,J=6.1Hz,0.3H),3.15(d,J=6.1Hz,0.7H),3.01-3.12(m,1H),2.14-2.39(m,2H),1.68-1.97(m,2H)。MS-ESI(m/z)：416[M+1]+。
1H NMR数据显示约30%的D-Glu(L-Trp-OCH2CF3)-OH的存在。
实施例33
H-D-Glu(D-Trp-OCH2CF3)-OCH2CF3盐酸盐，Apo868.HCl的制备
A、Boc-D-Glu(D-Trp-OCH2CF3)-OCH2CF3的制备
向冰-水冷却的Boc-D-Glu(D-Trp-OH)-OH(6.0g,13.8mmol)在DMF(50mL)中的溶液相继加入N-羟基琥珀酰亚胺(3.5g,30.5mmol)、EDCI.HCl(5.8g,30.5mmol)、2.2.2-三氟乙醇(6mL,83.1mmol)和DIPEA(5.3mL,30.5mmol)。然后将得到的溶液于室温搅拌过夜。用水淬灭反应混合物，然后用EtOAc萃取。用10%柠檬酸溶液和盐水洗涤EtOAc层，然后经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。使用EtOAc和己烷(1/1比例，v/v)的混合物作为洗脱液，通过硅胶上的闪式柱色谱法纯化残余物，得到Boc-D-Glu(D-Trp-OCH2CF3)-OCH2CF3(6.1g)。产率=74%)；MS-ESI(m/z)：598[M+1]+。
B、H-D-Glu(D-Trp-OCH2CF3)-OCH2CF3盐酸盐，Apo868.HCl的制备
向冰-水冷却的Boc-D-Glu(D-Trp-OCH2CF3)-OCH2CF3(6.0g,10.0mmol)在EtOAc中的溶液中鼓吹HCl气体35分钟。将反应混合物浓缩至干以得到粗产物(5.4g)。使用EtOAc和MeCN的混合物(从10/0至1/1比例的梯度，v/v)作为洗脱液，通过在硅胶上的闪式柱色谱法纯化部分粗产物(1.0g)，得到H-D-Glu(D-Trp-OCH2CF3)-OCH2CF3盐酸盐(625mg)。1H NMR(DMSO-D6,400MHz):δ(ppm)10.95(s,1H),8.66-8.72(m,4H),7.48(d,J=7.8Hz,1H),7.35(d,J=8.0Hz,1H),7.19(s,1H),7.06-7.09(m,1H),6.98-7.01(m,1H),4.86-4.92(m,2H),4.69-4.77(m,2H),4.52-4.56(m,1H),4.18-4.20(m,1H),3.07-3.20(m,2H),2.30-2.41(m,2H),1.97–2.01(m,2H)；MS-ESI(m/z)：498[M+1]+。
实施例34
(R)-2,3-二氢-1H-茚-5-基5-((S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(异戊氧基)-1-氧代丙-2-基氨基)-2-氨基-5-氧代戊酸酯盐酸盐或H-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-O-2,3-二氢-1H-茚-5-基.HCl或(Apo928.HCl)的制备
A、Boc-L-Trp-O-异戊基的制备
将Boc-L-Trp-OH(10.0g,32.8mmol)、3-甲基-1-丁醇(7.1mL,65.7mmol)与HOBt(5.3g,39.4mmol)、DIPEA(7.4mL,42.7mmol)和EDCI(8.2g,42.7mmol)在DMF(100mL)中反应制得Boc-L-Trp-O-异戊基。将得到的混合物于室温搅拌过夜。将反应混合物在搅拌下倒入冷水(100mL)的烧杯中，并于5℃(冰浴)将得到的混悬液搅拌20分钟。抽吸过滤得到白色固体状的Boc-L-Trp-O-异戊基（其经空气干燥过夜）(10.8g)。产率=88%；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δppm:10.86(br.s.,1H),7.48(d,J=8.1Hz,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.22(d,J=7.1Hz,1H),7.16(s,1H),7.07(t,J=7.1Hz,1H),6.99(t,J=7.6Hz,1H),4.12-4.24(m,1H),3.93-4.09(m,2H),3.05-3.15(m,1H),2.95-3.05(m,1H),1.48-1.59(m,1H),1.31-1.41(m,11H),0.82(t,J=6.6Hz,6H)；MS-ESI(m/z)375[M+1]+。
B、H-L-Trp-O-异戊基盐酸盐的制备
将HCl气体鼓吹入Boc-L-Trp-O-异戊基(10.52g,28.1mmol)在150ml EtOAc中的混悬液中1.5小时。于5℃(冰浴)搅拌该混悬液20分钟。通过抽吸过滤收集固体产物，并用EtOAc(3x15mL)洗涤，得到白色固体状的H-L-Trp-O-异戊基盐酸盐(7.83g)。产率：90%；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δppm:11.13(br.s.,1H),8.66(br.s.,2H),7.52(d,J=8.1Hz,1H),7.38(d,J=8.1Hz,1H),7.25(s,1H),7.09(t,J=7.6Hz,1H),7.01(t,J=7.6Hz,1H),4.19(t,J=6.6Hz,1H),3.94-4.08(m,2H),3.33(d,J=5.1Hz,1H),3.20-3.29(m,1H),1.36-1.48(m,1H),1.23-1.33(m,2H),0.78(d,J=5.1Hz,6H)；MS-ESI(m/z)275[M+1]+(游离碱)。
C、Boc-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-O-bzl的制备
将H-L-Trp-O-异戊基盐酸盐(7.65g,24.6mmol)、Boc-D-Glu-O-bzl(8.3g,24.6mmol)、EDCI(5.67g,29.5mmoL)、HOBt(3.5g,25.8mmol)和DIPEA(8.6mL,49.2mmol)在DMF(100mL)中反应制备Boc-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-O-bzl。将得到的混合物于室温搅拌过夜。将反应混合物在搅拌下倒入冷水(250mL)的烧杯。用乙酸乙酯(100mL x3)萃取混合物。用10%柠檬酸溶液(30mL)、饱和的NaHCO3(50mL)和盐水(50mL)相继洗涤合并的有机层，然后经MgSO4干燥。在真空中除去溶剂后，获得淡黄色油状的Boc-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-O-bzl(13.5g)。产率=93%；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δppm:10.87(br.s.,1H),8.30(d,J=7.1Hz,1H),7.48(d,J=8.1Hz,1H),7.27-7.40(m,7H),7.15(br.s.,1H),7.07(t,J=7.6Hz,1H),6.91-7.03(m,1H),5.04-5.19(m,2H),4.48(d,J=6.1Hz,1H),3.97(t,J=6.1Hz,3H),3.12(dd,J=14.1,6.1Hz,1H),3.02(dd,J=14.1,8.1Hz,1H),2.14-2.29(m,2H),1.93(d,J=8.1Hz,1H),1.67-1.83(m,1H),1.41-1.55(m,2H),1.28-1.38(m,10H),0.80(t,J=6.1Hz,6H)；MS-ESI(m/z)594[M+1]+。
D Boc-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-OH的制备
将Boc-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-O-苄基(12.35g,20.8mmol)和1.5g活性炭上10%Pd(湿)在乙醇(250ml)中的混合物，在帕尔仪器中，在氢气气氛下，于45磅/平方英寸的压力，于室温，震摇2小时。通过CeliteTM过滤Pd催化剂并在减压下蒸发滤液，得到粉色油状物，其在真空下干燥得到粉色泡沫状固体Boc-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-OH(9.1g)。产率=87%；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δppm:10.87(s,1H),8.30(d,J=7.1Hz,1H),7.48(d,J=7.1Hz,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.15(s,1H),7.03-7.12(m,2H),6.93-7.03(m,1H),4.41-4.54(m,1H),3.98(t,J=6.6Hz,2H),3.82-3.92(m,1H),3.39-3.50(m,2H),3.07-3.18(m,1H),2.97-3.07(m,1H),2.18(t,J=7.6Hz,2H),1.90(d,J=8.1Hz,1H),1.70(dd,J=13.6,7.6Hz,1H),1.47(dq,J=13.3,6.7Hz,1H),1.26-1.41(m,9H),1.07(t,J=6.6Hz,1H),0.75-0.84(m,6H)；MS-ESI(m/z)504[M+1]+。
E、Boc-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-O-2,3-二氢-1H-茚-5-基的制备
将5-茚醇(0.43g,3.23mmol)加入至Boc-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-OH(1.25g,2.48mmol)在DMF(35mL)中的溶液中，随后加入EDCI(0.62g,3.23mmol)、HOBt(0.40g,2.98mmol)和DIPEA(0.62mL,3.48mmol)。将得到的混合物于室温搅拌过夜。将反应混合物在搅拌下倒入冷水(100mL)的烧杯中。用乙酸乙酯(50mL x3)萃取混合物。用10%柠檬酸溶液(20mL)、饱和的NaHCO3溶液(25mL)和盐水(40mL)相继洗涤合并的有机层。将有机部分经MgSO4干燥。在真空中除去溶剂后，获得淡黄色油状粗产物。使用EtOAc和己烷(1/1比例，v/v)的溶剂混合物作为洗脱液，通过硅胶上的闪式柱色谱法进一步纯化油状物，得到淡黄色泡沫状固体Boc-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-O-2,3-二氢-1H-茚-5-基(1.36g)。产率：91%；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δppm:10.87(s,1H),8.37(d,J=7.1Hz,1H),7.48(d,J=8.1Hz,2H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.21-7.27(m,J=8.1Hz,1H),7.15(s,1H),7.07(t,J=7.1Hz,1H),6.98(t,J=7.1Hz,1H),6.92(s,1H),6.76-6.84(m,J=8.1Hz,1H),4.43-4.55(m,1H),4.07-4.19(m,1H),3.98(t,J=6.6Hz,2H),3.13(dd,J=6.1,14.2Hz,1H),3.03(dd,J=8.1,14.2Hz,1H),2.80-2.90(m,4H),2.24-2.34(m,2H),1.98-2.10(m,3H),1.82-1.95(m,1H),1.46(dd,J=6.6,13.6Hz,1H),1.41(s,8H),1.27-1.36(m,2H),0.80(t,J=6.6Hz,6H)：MS-ESI(m/z)620[M+1]+。
F、H-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-O-2,3-二氢-1H-茚-5-基盐酸盐(Apo928.HCl)的制备
将HCl气体鼓吹入Boc-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-O-2,3-二氢-1H-茚-5-基(0.72g,1.16mmoL)在35mL二氯甲烷的溶液中3.5小时。将反应混合物蒸发至干，并且使用异丙醇和二氯甲烷(1/1比例，v/v)的溶剂混合物作为洗脱液，通过硅胶上的闪式柱色谱法进一步纯化粗产物，以得到粘性泡沫状固体。然后将该泡沫状固体溶解于2M HCl Et2O溶液中，并于室温搅拌15分钟。在真空中蒸发挥发物后，获得棕色泡沫状固体的H-D-Glu(L-Trp-O-异戊基)-O-2,3-二氢-1H-茚-5-基盐酸盐(Apo928.HCl)(0.34g)。产率：52%；1H NMR(DMSO-d6,400MHz,)δppm:10.93(s,1H),8.79(br.s.,2H),8.62(d,J=7.1Hz,1H),7.48(d,J=8.1Hz,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.28(d,J=8.1Hz,1H),7.17(s,1H),7.02-7.10(m,2H),6.92-7.01(m,2H),4.50(q,J=7.1Hz,1H),4.27(br.s.,1H),3.97(t,J=6.6Hz,2H),3.10-3.18(m,1H),3.01-3.10(m,1H),2.87(q,J=7.1Hz,4H),2.45-2.50(m,1H),2.33-2.45(m,1H),2.10-2.20(m,2H),1.99-2.10(m,2H),1.46(dt,J=6.6,13.1Hz,1H),1.26-1.36(m,2H),0.80(t,J=6.6Hz,6H)；MS-ESI(m/z)520[M+1]+(游离碱)。
实施例35
A.式I的化合物在人类肝细胞中的生物转化研究
一般过程：
从Celsis In Vitro Technologies获得
冷冻保存的人类肝细胞（从10名男性捐赠者采集到）。使用前将肝细胞储存在液氮中。刚好在试验前，将肝细胞于37℃迅速解冻并以100x g离心10分钟。除去介质并将细胞以4x106细胞/mL的密度再次悬浮于PBS中。以50μL的体积将式I的化合物（100μM）与0.1x106个肝细胞孵育。孵育10、20、60、120和240分钟后，通过加入等体积的5%(w/v)TCA淬灭反应。在测试化合物前，通过加入TCA产生“0时”的样品。在冰上简短的涡流和10分钟孵育后，离心样品（16,000x g，10分钟）并通过具有UV检测器的HPLC分析上清液。
SGF、SIF、血浆和肝细胞样品中前药的HPLC分析：
使用由可编程的多通道泵、自动进样器、真空脱气器和HP检测器组成的安捷伦1100系列HPLC系统完成HPLC分析，所述HP检测器由安捷伦HPLC218色谱工作站Rev.A.09.03软件控制用于数据采集和分析。在安捷伦Eclipse XDB，C18柱（零件#963967-902，150X4.6mm，3.5μm）上，用以下色谱条件，使用梯度法测定所有的前药及其水解产物（包括Apo805）：
温度： 环境温度
流动相： A=水相：10mM Tris-HCl、2mM EDTA，pH7.4
B=有机相：乙腈
梯度法： 时间：0分钟5%B，25分钟50%B，35分钟
80%B，45分钟5%B，50分钟5%B。
流动相流速： 1.0mL/分钟
进样体积： 50μL
数据采集时间：30分钟
检测波长： 280nm；4nm带宽，参比波长360nm，4nm带
宽
分析λ=280nm处的色谱图。使用峰面积（mAU*s）定量前药、中间体和thymodepressin（无中译文）（Apo805）。
B.在人类血液中的稳定性
在含有ACD溶液A（22.0g/L柠檬酸三钠，8.0g/L柠檬酸，24.5g/L右旋糖）的Becton Dickinson ACD vacutainerTM中，从健康志愿者（男、女均有）收集血液。将来自志愿者的血液收集入50mL FalconT,管中，保持在冰上，并在收集2小时后用于试验。为了测定水解速率，于37℃在收集的人类血液中孵育每种前药（100μM）。在测试化合物加入后立刻，以及0.5、1、2、4、6和24小时孵育后，除去等份血液（500μL）并于4℃以1500x g离心10分钟。将等份血浆（150μL）转移至微量离心管中，并通过加入等体积的5%TCA(w/v)沉淀血浆蛋白。在冰上孵育10分钟后，离心样品（16000x g，10分钟）并通过HPLC分析上清液。
式I的化合物在人类血液和人类肝细胞中的生物转化数据显示于下表1至3中：
表1：在人类肝细胞和血液中H-D-Glu(Trp-O-T)-OH向Apo805的体外生物转化
所选择的具有式H-D-Glu(D-Trp-OR2)-OR1的式I的化合物在人类肝细胞和人类血液中其生物转化为thymodepressin方面显示更好的t1/2（Apo805，H-D-Glu(D-Trp-OH)-OH较单乙酯Apo835H-D-Glu(D-Trp-OEt)-OH好），然而在人类肝细胞中肽酰胺Apo893不容易被转化为thymodepressin。
表2：在人类肝细胞和血液中H-Glu(Trp-OH)-O-G向Apo805的体外生物转化
当与单烷基酯衍生物H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-R3例如Apo829、Apo836、Apo841和Apo846相比较时，氟烷基衍生物H-D-Glu(D-Trp-OH)-O-(CH2)nCF3显示在人类肝细胞中向Apo805生物转化的更快的速率。
表3：在人类肝细胞和血液中H-Glu(Trp-O-T)-O-G向Apo805的体外生物转化
实施例36
大鼠中式I的化合物的药代动力学研究
动物给药的一般过程
每个剂量组采用体重在250至300g的五只雄性斯普拉-道来氏大鼠。给药前一天，将静脉和动脉导管（由20cm长的聚氨酯连续油管制得，并填充100单位/mL的肝素化生理盐水）植入每只大鼠的颈静脉和颈动脉。在口服给药前将大鼠禁食过夜并在给药后约2小时喂食。在完全清醒的大鼠上进行所有的给药和血液采集。或者通过水中溶液的口服灌胃或者通过0.9%氯化钠中的溶液（最终pH7.0）的静脉注射（仅对于Apo805K1），以相当于5mg/kg(每Apo805含量)的剂量，给予测试化合物。从每只动物的颈动脉采集血液（0.3mL）直至给药后30小时，每次采样后进行等量的天然血液替换。将血液样品立刻离心（4℃，4300x g，5分钟），并于-80℃冷冻直至LC/MS/MS分析。
血浆药物浓度的LC-MS/MS分析的一般过程
将甲醇（200μL）加入到血浆样品（50μL）中以沉淀血浆蛋白。简短的涡旋和离心后，除去上清液（200μL）并于40℃在氮气流下干燥。在水中（300μL）重建样品并进样25μL进行分析。
使用配备有离子型表面活性剂EP10+和HSID的Sciex API365LC/MS/MS分光光度计。于环境温度使用手性柱（Supelco-Astec CHIROBIOTICTMTAG），100x2.1mm，5μm。流动相由水中0.1%甲酸（A）和乙腈中0.1%甲酸（B）以88:12(A:B；v/v)比例构成，并且流速为0.6mL/分钟。使用MRM模式中的正离子电喷雾电离（ESI+）分析。分析样品的Apo805（thymodepressin）浓度。
PK分析
使用WinNonlin5.2软件对于个体动物数据进行无隔分析（non-compartmentalanalysis）。以口服给予测试化合物后的AUCINF_D和IV给予Apo805K1后的AUCINF_D的比例计算生物利用度。
Apo839和Apo843在大鼠中的生物利用度
将雄性斯普拉-道来氏大鼠中前药Apo839和Apo843的绝对口服生物利用度与Apo805K1（thymodepressin的钾盐）的绝对口服生物利用度进行比较。成年动物（每组五只）口服给予5mg/kg Apo805K1、Apo839、或Apo843和静脉给予5mg/kgApo805K1。图1显示口服给予Apo839或Apo805K1后Apo805的血浆浓度。图2显示口服给予Apo843或Apo805K1后Apo805的血浆浓度。大鼠中Apo839和Apo843显示口服生物利用度并且转化为thymodepressin(Apo805)。
尽管本文公开了本发明的各种实施方案，但在本发明的范围内，根据本领域技术人员的公知常识可以作出许多改造和修改。所述修改包括对于本发明的任何方面的已知等价物的替换以基本上相同的方式获得相同的结果。数值范围包括限定范围的数值。另外，提供数值范围，以使得除了在数值范围不存在下具体引用的列举范围内的个别值以外，还列举出值的范围。本文使用词语“包含（comprising）”作为开放式术语，其基本上等同于短语“包括但不限于”，并且词语“包含（comprises）”具有相应的含义。如本文所使用的，单数形式“a”、“an”和“the”包括复数的参照物（除非文中另有明确的指出）。因此，例如，引用“一件事（a thing）”包括不只一件这样的事。本文的参考文献并不承认该参考文献是本发明的现有技术。此外，在说明书的背景技术部分出现的材料并不承认这样的材料是本发明的现有技术。任何现有技术文献以引用的形式并入本文，如同每一单独的现有技术文献被特别地、单独地提及从而以引用的形式并入本文并且如同在本文中完全陈述。本发明包括实质上如本文之前所描述的所有实施方案和其变体以及相关的实施例和附图。
Claims (53)
1.一种式I的化合物或其药学上可接受的盐，
其中
G选自：H、2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、C1-C8烷基、苄基和A5-A10芳基；
T选自：H、C1-C8烷基、2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、CH2CONR4R5、CH2CH2NR4R5、C3-C6环烷基、A5-A10芳基、
和
n为1、2、3或4；
R1为H或C1-C8烷基；
R2为C1-C8烷基、C3-C6环烷基、或苯基；
R3为C1-C8烷基、C3-C6环烷基、或苯基；并且
R4和R5或者为分开的基团，或者与它们连接的N一起形成单一基团；当R4和R5为分开的基团时，R4和R5独立地选自C1-C6烷基；当R4和R5与它们连接的N一起形成单一基团时，该单一基团选自：吗啉基、N-(C1-C4烷基)-哌嗪基和哌啶基；
条件是，如果T为H，那么G为2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、C1-C8烷基或苄基；如果T为CH2CONR4R5、CH2CH2NR4R5、或C3-C6环烷基，那么G为H；并且如果T为C1-C8烷基，那么G为2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、或A5–A10芳基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中如果G为H，那么T选自：2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、CH2CONR4R5、CH2CH2NR4R5、C3-C6环烷基、
和
3.根据权利要求1所述的化合物，其中如果G为H，那么T选自：2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、CH2CH2NR4R5、C3-C6环烷基、
和
4.根据权利要求1所述的化合物，其中如果G为H，那么T选自2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、CH2CH2NR4R5、
和
5.根据权利要求1至4任一项所述的化合物，其中色氨酸基团的手性碳为D-构型。
6.根据权利要求1至4任一项所述的化合物，其中色氨酸基团的手性碳为L-构型。
7.根据权利要求5或6所述的化合物，其中G为H并且T为A5至A10芳基。
8.根据权利要求5或6所述的化合物，其中T为
9.根据权利要求5或6所述的化合物，其中T为
10.根据权利要求5或6所述的化合物，其中T为(CH2)nCF3。
11.根据权利要求5或6所述的化合物，其中T为2-吗啉乙基。
12.根据权利要求5或6所述的化合物，其中G为2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、或C1-C8烷基；并且，T为2-吗啉乙基、(CH2)nCF3、A5至A10芳基、
或
13.根据权利要求5或6所述的化合物，其中T为C1-C8烷基。
14.根据权利要求13所述的化合物，其中G为A5至A10芳基。
15.根据权利要求14所述的化合物，其中T为异戊基，G为茚满基。
16.根据权利要求5或6所述的化合物，其中T为H。
17.根据权利要求5或6所述的化合物，其中G为H。
18.根据权利要求5所述的化合物，其中T为H并且G为乙基。
19.根据权利要求5所述的化合物，其中T为H并且G为苄基。
20.根据权利要求5所述的化合物，其中T为H并且G为甲基。
21.根据权利要求5所述的化合物，其中T为H并且G为异戊基。
22.根据权利要求5所述的化合物，其中T为H并且G为异丙基。
23.根据权利要求5所述的化合物，其中T为H，G为(CH2)nCF3并且n为1。
24.根据权利要求5所述的化合物，其中T为H，G为(CH2)nCF3并且n为2。
25.根据权利要求5所述的化合物，其中T为H并且G为2-吗啉乙基。
26.根据权利要求5所述的化合物，其中T为
R1为甲基，R3为环己基并且G为H。
27.根据权利要求5所述的化合物，其中T为2-吗啉乙基并且G为H。
28.根据权利要求5所述的化合物，其中T为环己基并且G为H。
29.根据权利要求5所述的化合物，其中T为
R1为甲基，R3为环己基并且G为H。
30.根据权利要求5所述的化合物，其中T为(CH2)nCF3，n为2并且G为H。
31.根据权利要求5所述的化合物，其中T为
R1为甲基，R3为乙基并且G为H。
32.根据权利要求5所述的化合物，其中T为
R1为H，R2为戊-2-基并且G为H。
33.根据权利要求5所述的化合物，其中T为
R1为甲基，R3为异丙基并且G为H。
34.根据权利要求5所述的化合物，其中T为CH2CONR4R5，R4为CH3，R5为CH3并且G为H。
35.根据权利要求6所述的化合物，其中T为CH2CONR4R5，R4为CH3，R5为CH3并且G为H。
36.根据权利要求5所述的化合物，其中T为
R1为H，R2为C(CH3)2-CH2CH2CH3并且G为H。
37.根据权利要求5所述的化合物，其中T为(CH2)nCF3，n为1并且G为H。
38.根据权利要求6所述的化合物，其中T为(CH2)nCF3，n为1并且G为H。
39.根据权利要求5所述的化合物，其中T为茚满基并且G为H。
40.根据权利要求5所述的化合物，其中T为2-甲氧基苯基并且G为H。
41.根据权利要求5所述的化合物，其中T为R1为H，R2为叔丁基并且G为H。
42.根据权利要求5所述的化合物，其中T为
R1为H，R2为苯基并且G为H。
43.根据权利要求5所述的化合物，其中T为(CH2)nCF3，n为2，G为(CH2)nCF3并且n为2。
44.根据权利要求5所述的化合物，其中T为2-吗啉乙基并且G为乙基。
45.根据权利要求5所述的化合物，其中T为
R1为甲基，R3为乙基并且G为乙基。
46.根据权利要求5所述的化合物，其中T为2-吗啉乙基并且G为2-吗啉乙基。
47.根据权利要求5所述的化合物，其中T为苄基并且G为2-吗啉乙基。
48.根据权利要求5所述的化合物，其中T为茚满基并且G为2-吗啉乙基。
49.根据权利要求5所述的化合物，其中T为2-吗啉乙基，G为(CH2)nCF3并且n为2。
50.根据权利要求5所述的化合物，其中T为2-吗啉乙基并且G为异戊基。
51.根据权利要求5所述的化合物，其中T为(CH2)nCF3，n为1，G为(CH2)nCF3并且n为1。
52.一种药物制剂，其含有根据权利要求1至51任一项所述的化合物和药学上可接受的赋形剂。
53.根据权利要求52所述的药物制剂，其中所述制剂适合于吸入使用。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201161470467P | 2011-03-31 | 2011-03-31 | |
| US61/470,467 | 2011-03-31 | ||
| PCT/CA2012/000304 WO2012129671A1 (en) | 2011-03-31 | 2012-03-30 | Prodrugs of d-isoglutamyl-[d/l]-tryptophan |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103502214A true CN103502214A (zh) | 2014-01-08 |
Family
ID=46929258
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201280020994.2A Pending CN103502214A (zh) | 2011-03-31 | 2012-03-30 | D-异谷氨酰基-[d/l]-色氨酸的前药 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20140343050A1 (zh) |
| EP (1) | EP2691369A4 (zh) |
| JP (1) | JP2014509613A (zh) |
| CN (1) | CN103502214A (zh) |
| AU (1) | AU2012234680A1 (zh) |
| CA (1) | CA2831427A1 (zh) |
| EA (1) | EA201391419A1 (zh) |
| WO (1) | WO2012129671A1 (zh) |
| ZA (1) | ZA201307229B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR3030512B1 (fr) | 2014-12-18 | 2018-03-30 | L'oreal | Utilisation comme agent deodorant et/ou parfumant de derives esters du l-tryptophane |
| WO2022033202A1 (zh) * | 2020-08-13 | 2022-02-17 | 南京海融医药科技股份有限公司 | 布洛芬酯类前药、药物组合物以及制备方法和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1189837A (zh) * | 1995-06-07 | 1998-08-05 | V·I·戴金 | 肽及其制备方法 |
| CN1306540A (zh) * | 1998-06-24 | 2001-08-01 | 前体生物药物开发有限公司 | Dpiv抑制剂的前药 |
| CA2569204A1 (en) * | 2006-11-28 | 2008-05-28 | Apotex Technologies Inc. | Crystalline d-isoglutamyl-d-tryptophan and the mono ammonium salt of d-isoglutamyl-d-tryptophan |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2141483C1 (ru) * | 1997-07-04 | 1999-11-20 | Небольсин Владимир Евгеньевич | Производные пептидов или их фармацевтически приемлемые соли, способ их получения, применение и фармацевтическая композиция |
-
2012
- 2012-03-30 CA CA2831427A patent/CA2831427A1/en not_active Abandoned
- 2012-03-30 AU AU2012234680A patent/AU2012234680A1/en not_active Abandoned
- 2012-03-30 EP EP12764373.2A patent/EP2691369A4/en not_active Withdrawn
- 2012-03-30 EA EA201391419A patent/EA201391419A1/ru unknown
- 2012-03-30 WO PCT/CA2012/000304 patent/WO2012129671A1/en active Application Filing
- 2012-03-30 CN CN201280020994.2A patent/CN103502214A/zh active Pending
- 2012-03-30 US US14/008,902 patent/US20140343050A1/en not_active Abandoned
- 2012-03-30 JP JP2014501373A patent/JP2014509613A/ja active Pending
-
2013
- 2013-09-26 ZA ZA2013/07229A patent/ZA201307229B/en unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1189837A (zh) * | 1995-06-07 | 1998-08-05 | V·I·戴金 | 肽及其制备方法 |
| CN1306540A (zh) * | 1998-06-24 | 2001-08-01 | 前体生物药物开发有限公司 | Dpiv抑制剂的前药 |
| CA2569204A1 (en) * | 2006-11-28 | 2008-05-28 | Apotex Technologies Inc. | Crystalline d-isoglutamyl-d-tryptophan and the mono ammonium salt of d-isoglutamyl-d-tryptophan |
| CN101605806A (zh) * | 2006-11-28 | 2009-12-16 | 阿普泰克斯科技公司 | 晶态的d-异谷氨酰基-d-色氨酸以及d-异谷氨酰基-d-色氨酸的单铵盐 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| H. DERENDORF等: "Relevance of pharmacokinetics and pharmacodynamics of inhaled corticosteroids to asthma", 《EUR. RESPIR. J.》, vol. 28, no. 5, 1 November 2006 (2006-11-01), pages 1042 - 1050 * |
| JARKKO RAUTIO等: "Prodrugs：design and clinical applications", 《NATURE REVIEWS DRUG DISCOVERY》, vol. 7, no. 3, 31 March 2008 (2008-03-31), pages 255 - 270 * |
| 尤启东: "《药物化学》", 31 January 2004, article "药物化学", pages: 35 - 9-14 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2691369A1 (en) | 2014-02-05 |
| ZA201307229B (en) | 2014-06-25 |
| US20140343050A1 (en) | 2014-11-20 |
| EA201391419A1 (ru) | 2014-02-28 |
| WO2012129671A1 (en) | 2012-10-04 |
| JP2014509613A (ja) | 2014-04-21 |
| NZ615880A (en) | 2015-05-29 |
| CA2831427A1 (en) | 2012-10-04 |
| EP2691369A4 (en) | 2014-09-10 |
| AU2012234680A1 (en) | 2013-10-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103665107A (zh) | 同时具溶血栓、清除自由基和血栓靶向功能的新颖化合物及其制备方法和用途 | |
| US10501497B2 (en) | Cyclic polypeptides, method for obtaining them and the therapeutic use thereof | |
| KR102258630B1 (ko) | 펩티드-올리고우레아 키메라 화합물 및 이의 사용 방법 | |
| CN104530199B (zh) | 一种抗肿瘤多肽及其制备方法和应用 | |
| TWI480070B (zh) | 具礦質親和能力之多歧狀胜肽構型 | |
| CN109415353A (zh) | 聚乙二醇化卡非佐米化合物 | |
| BR112017000730B1 (pt) | Derivados de pirrolidinona como inibidores de metap-2 | |
| CA3152529A1 (en) | Asialoglycoprotein receptor mediated delivery of therapeutically active conjugates | |
| WO2011156003A2 (en) | Peptoid and synthetic oligomers, pharmaceutical compositions and methods of using same | |
| CN101454309B (zh) | 焦谷氨酸衍生物的合成和用途 | |
| US8754049B2 (en) | Organic compound for the regulation of vectorial ion channels | |
| RU2362579C1 (ru) | Фармацевтическая композиция на основе пептида, обладающего противоопухолевым действием | |
| ES2869430T3 (es) | Procedimiento para preparar D-arginil-2,6-dimetil-L-tirosil-L-lisil-L-fenilalaninamida | |
| CN103502214A (zh) | D-异谷氨酰基-[d/l]-色氨酸的前药 | |
| CN111285923B (zh) | 一种psd-95抑制剂 | |
| CN111971290B (zh) | 用于预防或治疗关节疾病的葡萄糖胺衍生物 | |
| CN103965458A (zh) | 聚乙二醇-氨基酸寡肽-达沙替尼结合物及其药物组合物 | |
| CN107530369A (zh) | 具有生物可逆的二硫基的单核苷酸 | |
| CN103502215A (zh) | D-γ-谷氨酰基-D-色氨酸和D-γ-谷氨酰基-L-色氨酸的前药 | |
| EP3272765A1 (en) | Peptide derivative for regulating thymic stromal lymphoid protein-mediated signaling and pharmaceutical composition for preventing and treating allergy and asthma diseases comprising same | |
| EP2041161B1 (de) | Chirale mit phosphonsäureester- oder phosphonsäure- substituierte verbindungen | |
| CN112094317B (zh) | His-Gly-Lys修饰的甲氨蝶呤,其合成,抗转移活性和应用 | |
| EP1506970A1 (en) | Compounds which can block the response to chemical substances or thermal stimuli or mediators of inflammation of nociceptors, production method thereof and compositions containing same | |
| CN114072381A (zh) | 氨基硫醇类化合物作为脑神经或心脏保护剂的用途 | |
| CN115594724A (zh) | 用于预防或治疗关节疾病的葡萄糖胺衍生物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C05 | Deemed withdrawal (patent law before 1993) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140108 |