ES2869430T3 - Procedimiento para preparar D-arginil-2,6-dimetil-L-tirosil-L-lisil-L-fenilalaninamida - Google Patents

Procedimiento para preparar D-arginil-2,6-dimetil-L-tirosil-L-lisil-L-fenilalaninamida Download PDF

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Abstract

Un procedimiento en fase líquida para la producción de H-D-Arg-(2,6-Dimetil)Tyr-Lys-Phe-NH2 de fórmula (I), en forma de la sal de ácido acético. **(Ver fórmula)** que comprende las siguientes etapas: - acoplar el compuesto (II) H-Phe-NH2: **(Ver fórmula)** con el compuesto (III) Boc-Lys(Z)-OH: **(Ver fórmula)** para obtener un compuesto de fórmula (IV), Boc-Lys(Z)-Phe-NH2: - hacer reaccionar el compuesto (IV) con ácido metanosulfónico (V) MeSO3H (V) para obtener la sal de amina libre (VI) MeSO3H.H-Lys(Z)-Phe-NH2: **(Ver fórmula)** - hacer reaccionar la sal (VI) con el aminoácido protegido Boc-Dmt(Bzl)-OH (VII) **(Ver fórmula)** para obtener el tripéptido protegido (VIII): **(Ver fórmula)** - tratar el compuesto (VIII) con ácido metanosulfónico (V) para obtener la correspondiente sal (IX), MeSO3.H-Dmt(Bzl)- Lys(Z)-Phe-NH2: **(Ver fórmula)** (IX) - acoplar la sal de ácido (IX) con Z-D-Arg-ONa (X) **(Ver fórmula)** para formar el tetrapéptido protegido (XI), Z-D-Arg-Dmt(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2: **(Ver fórmula)** y - desproteger el compuesto (XI) por hidrogenolisis para obtener el tetrapéptido H-D-Arg-(2,6-Dimetil)Tyr-Lys-Phe-NH2 (I) y después formar su sal con ácido acético para formar la sal correspondiente.

Description

DESCRIPCIÓN
Procedimiento para preparar D-arginil-2,6-dimetil-L-tirosil-L-lisil-L-fenilalaninamida
Campo técnico
La invención se refiere a un procedimiento para la síntesis en fase de disolución de D-arginil-2,6-dimetil-L-tirosil-L-lisil-L-fenilalaninamida (abreviado H-D-Arg-(2,6-Dimetil)Tyr-L- Lys-L-Phe-NH2, código de desarrollo SS-31, MTP-131, RX-31) de fórmula (I), un principio activo desarrollado por Stealth BioTherapeutics bajo las marcas de fármacos en investigación Bendavia® y Ocuvia®, tanto para enfermedades comunes como raras que incluyen una terapia dirigida a las mitocondrias para la lesión por isquemia-reperfusión.
Figure imgf000002_0001
Fórmula (I)
Antecedentes
El producto pertenece a la clase de los llamados "péptidos de Szeto-Schiller". Los péptidos de Szeto-Sciller o "péptidos SS" son péptidos pequeños, aromático-catiónicos, solubles en agua y muy polares, tales como los descritos en los documentos US 6703483 y US 7576061, que pueden penetrar fácilmente en las membranas celulares. Los péptidos aromático-catiónicos incluyen un mínimo de dos aminoácidos, y preferiblemente incluyen un mínimo de cuatro aminoácidos, unidos covalentemente por enlaces peptídicos. El número máximo de aminoácidos es de aproximadamente veinte aminoácidos unidos covalentemente por enlaces peptídicos. Como se describe en el documento EP 2012/2436390, de forma óptima, el número de aminoácidos presentes en los péptidos SS es cuatro.
Bendavia® se está ensayando para el tratamiento de la lesión por isquemia-reperfusión en pacientes con infarto agudo de miocardio (IAM), para el tratamiento de lesión renal aguda (LRA) y disfunción microvascular renal en la hipertensión, para el tratamiento de la disfunción del músculo esquelético, para el tratamiento de la miopatía mitocondrial y para el tratamiento de la insuficiencia cardiaca crónica. Se están realizando ensayos para evaluar el potencial de Ocuvia para tratar la neuropatía óptica hereditaria de Leber (NOHL), una enfermedad hereditaria devastadora que causa ceguera repentina, a menudo en adultos jóvenes.
Las mitocondrias son la fuente de energía de las células, responsables de más de 90% de la energía que nuestros cuerpos necesitan para mantener la vida y soportar el crecimiento. La energía de las mitocondrias mantiene una fisiología saludable y previene enfermedades. En muchas enfermedades comunes y raras, las mitocondrias disfuncionales son un componente clave de la evolución de la enfermedad.
La D-Arginil-2,6-dimetil-L-tirosil-L-lisil-L-fenilalaninamida es un péptido permeable a las células y dirigido a las mitocondrias que mostraba actividad antioxidante y se concentraba en la membrana mitocondrial interna. El compuesto (<1 nM) reducía significativamente las especies de oxígeno reactivo intracelulares, aumentaba el potencial mitocondrial y prevenía la apoptosis inducida por tBHP en las líneas celulares neuronales tanto N2A como SH-SY5Y. En ratas, el tratamiento intraperitoneal (1 y 3 mg/kg) 1 día antes de obstrucción ureteral unilateral y todos los días a partir de entonces durante 14 días disminuyó significativamente el daño tubular, la infiltración de macrófagos y la fibrosis intersticial. El compuesto (3 mg/kg i.p., una vez al día, durante 2 semanas) también prevenía la apoptosis y la reducción de insulina en islotes pancreáticos de ratón causada por la estreptozotocina.
Estudios adicionales realizados en un modelo de ratón G93A de esclerosis lateral amiotrófica (ELA) demostraron que el compuesto (5 mg/kg/día i.p. empezando a los 30 días de edad) conducía a un retraso significativo en el inicio de la enfermedad. Potencialmente útil para el tratamiento de la ELA y puede ser beneficioso en el tratamiento del envejecimiento y enfermedades asociadas con el estrés oxidativo.
En los últimos años, el péptido H-D-Arg-(2,6-Dimetil)Tyr-L-Lys-L-Phe-NH2, que se muestra en la Fig. 1, y su actividad terapéutica se han descrito y reivindicado en varias solicitudes de patente.
Los documentos EP 2436390, US 20110245182 y US 20110245183 reivindican composiciones anestésicas tópicas para aplicar en la piel para el tratamiento del dolor o agentes antienvejecimiento de la piel, respectivamente, que comprenden péptidos de Szeto-Schiller; el SS-31 se reivindica específicamente como principio activo. La secuencia de síntesis en fase sólida se indica como el procedimiento de preparación preferido.
El documento US 7718620 reivindica un procedimiento para tratar o prevenir la lesión por isquemia-reperfusión del riñón en un mamífero por administración de una cantidad eficaz de un péptido aromático-catiónico. El SS-31 se reivindica específicamente como principio activo.
La publicación internacional WO2005/001023 describe un procedimiento genérico y complejos vehículo para suministrar moléculas a células que comprenden una molécula y un péptido aromático-catiónico de tipo D-Arg-Dmt-Lys-Phe-NH2. El tetrapéptido SS-31 se reivindica específicamente como producto útil para el procedimiento en la reivindicación 18.
Las publicaciones internacionales WO2012/174117 y WO2014/210056 reivindican composiciones terapéuticas basadas en péptidos SS y el péptido aromático-catiónico D-Arg-Dmt-Lys-Phe-NH2 como agente activo.
Las publicaciones internacionales WO 2013/086020, WO 2004/070054 y WO 2005/072295 proporcionan procedimientos para prevenir la transición de permeabilidad mitocondrial y reducir el daño oxidativo en un mamífero, un órgano extraído o una célula que lo necesite y específicamente reivindica el procedimiento en donde el péptido no tiene actividad agonista del receptor opioide mu, es decir, D-Arg-Dmt-Lys-Phe-NH2.
La publicación internacional WO 2009/108695 describe un procedimiento para proteger un riñón de una lesión renal que puede estar asociada con una disminución o bloqueo del flujo sanguíneo en el riñón del sujeto o la exposición a un agente nefrotóxico, tal como un colorante de radiocontraste. Los procedimientos incluyen administrar al sujeto una cantidad eficaz de un péptido aromático-catiónico a un sujeto que lo necesite y uno de los péptidos seleccionados es D-Arg-Dmt-Lys-Phe-NH2.
El documento US 6703483 describe un procedimiento detallado para la preparación de nuevos análogos de DALDA [H-Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2], en concreto H-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2 usando técnicas de fase sólida y resina de pmetilbenzhidrilamina y protocolos que se han usado ampliamente en el laboratorio de los autores de la invención.
La mayoría de los procedimientos de la técnica anterior para preparar el compuesto comprenden típicamente la síntesis de péptidos en fase sólida realizada de forma convencional con purificación adicional por cromatografía con el fin de obtener la pureza requerida para uso terapéutico.
Es bien sabido que la síntesis en fase sólida seguida de purificación cromatográfica requiere mucho tiempo, es muy cara y muy difícil de ampliar a la escala industrial, por lo que es obvia la necesidad de desarrollar un procedimiento para la producción a gran escala. El compuesto se aísla como sal de ácido orgánico, como acetato o trifluoroacetato.
Reddy et al., Adv. Exp. Med. Biol, 2009, 611, 473, describen en general la síntesis en fase líquida de péptidos antioxidantes de la Figura 1 y otros similares (SS-02, SS-20), que implica grupos protectores de cadena lateral usados de forma rutinaria para las unidades estructurales de aminoácidos. El grupo guanidina se protegía con NO2 y el £-NH2 de la Lys se protegía con Cbz o 2-Cl-Cbz. Estos péptidos se sintetizaron usando la química de Boc/Cbz y el acoplamiento del reactivo BOP. Empezando con el resto de Lys C-terminal protegido como H-Lys(2-Cl-Cbz)-NH2, (preparado a partir del Boc-Lys(2-Cl-Cbz)-OH disponible en el mercado, en dos etapas por amidación con NH4HCO3 en presencia de DCC/HOBt siguiendo un procedimiento de la bibliografía [Ueyama et all, Biopolymers, 1992, 32, 1535, PubMed: 1457730], seguido de exposición a TFA). La eliminación selectiva del 2-Cl-Cbz en presencia del grupo NO2 se conseguía usando hidrogenolisis de transferencia catalítica (CTH) [Gowda et al., Lett. Pept. Sci., 2002, 9, 153].
Un procedimiento por etapas por síntesis de péptidos en disolución convencional para la preparación de un potente agonista p [Dmt] DALDA y su conversión en un potente antagonista 5 H-Dmt-Tic-Phe-Lys(Z)-OH por sustitución de D-Arg por Tic para mejorar la actividad agonista opioide 5 lo describen Balboni et al., J. Med. Chem., 2005, 48, 5608. Un procedimiento sintético general para un tetrapéptido similar ([Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2 lo describen Ballet et al., J. Med. Chem. 2011, 54, 2467.
Se prepararon tetrapéptidos análogos de DALDA similares por la técnica manual de fase sólida usando protección con Boc para el grupo a-amino y DIC/HOBt o HBTU/DIEA como agente de acoplamiento [Berezowska et al., J. Med. Chem., 2009, 52, 6941; Olma et al., Acta Biochim. Polonica, 2001, 48, 4, 1121; Schiller et al., Eur. J. Med. Chem., 2000, 35, 895].
A pesar del alto rendimiento general en el enfoque en fase sólida, tiene varios inconvenientes para el procedimiento de aumento de escala, tales como:
a. la aplicación del fluoruro de hidrógeno altamente tóxico y corrosivo para la escisión del péptido de la resina,
b. resultaba ser necesaria una carga baja (0.3-0.35 mmol/g de resina) para el éxito de la etapa final, y
c. el uso de cantidades en exceso de reactivos (3 veces de DIC, 2.4 veces de HOBt, etc.) en cada etapa [Ryakhovsky et al., Beilstein J. Org. Chem., 2008, 4(39), 1, doi: 10.376 / bjoc.4.39]
Resumen
La presente invención está definida por las reivindicaciones. Cualquier materia que quede fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona únicamente con fines informativos. La invención se refiere a un procedimiento más eficaz que evita la síntesis en fase sólida o la purificación cromatográfica, más adecuado para la producción a gran escala. El procedimiento de la invención se describe en el esquema A.
Se usan las siguientes abreviaturas:
Dmt = 2,6-dimetil-tirosina; Z = benciloxicarbonilo; MeSO3H = ácido metanosulfónico; Boc = terc-butiloxicarbonilo; NMM = N-metilmorfolina; TBTU = tetrafluoroborato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(benzotriazol-1-il)uronio; DMF = dimetilformamida; TFA = ácido trifluoroacético
El esquema A muestra el procedimiento para la síntesis en fase de disolución del péptido 1, para el ensamblaje de la cadena principal del tetrapéptido usando el grupo O-bencilo (Bzl) y el grupo benciloxicarbonilo (Z) respectivamente, como protección temporal para los extremos N de los aminoácidos (esquema de la figura 2), seguido de una hidrogenolisis catalítica final. El producto final se aísla como sal de ácido orgánico, por ejemplo, sal de ácido acético.
Figure imgf000004_0001
Este procedimiento es una mejora notable con respecto al estado de la técnica y sus ventajas se pueden resumir como sigue:
- La síntesis se realiza en fase líquida permitiendo la ampliación a escala industrial sin necesidad de equipo especial;
- La selección del grupo protector en las unidades estructurales permite una síntesis directa con una desprotección muy simple en cada etapa y minimiza la formación de subproductos no deseados;
- Cada compuesto intermedio se puede cristalizar permitiendo la eliminación de impurezas que no se transfieren a la siguiente etapa;
- La pureza de cada compuesto intermedio es muy alta y generalmente cercana al 99%.
Descripción detallada
La presente invención proporciona, en un primer aspecto, un procedimiento novedoso y eficaz que conduce a una sal de SS-31, en especial la sal de ácido acético, que es conveniente para la escala industrial y proporciona el producto deseado con buenos rendimientos. En particular, los autores de la invención encontraron que la sal de acetato de SS-31 se puede obtener ventajosamente con un procedimiento, en el que la etapa de desprotección global es la etapa n-1 del procedimiento.
Por consiguiente, un objeto de la presente invención es proporcionar un procedimiento para preparar H-D-Arg-Dmt-Lys-Phe-NH2 de fórmula (I) como la sal de ácido acético.
Figure imgf000005_0001
que comprende las etapas de:
- acoplar el compuesto (II) H-Phe-NH2 :
Figure imgf000005_0002
con el compuesto (III) Boc-Lys(Z)-OH:
Figure imgf000005_0003
para obtener un compuesto de fórmula (IV), Boc-Lys(Z)-Phe-NH2 :
Figure imgf000006_0001
y
- hacer reaccionar el compuesto (IV) con ácido metanosulfónico (V)
MeSOaH (V)
para obtener la sal de amina libre (VI) MeSO3H.H-Lys(Z)-Phe-NH2 :
Figure imgf000006_0002
La sal (VI) se hace reaccionar con el aminoácido protegido Boc-Dmt(Bzl)OH (VII)
Figure imgf000006_0003
para obtener el tripéptido protegido (VIII):
Figure imgf000006_0004
que se trata con ácido metanosulfónico (V) para obtener la correspondiente sal (IX), MeSO3.H-Dmt(Bzl)-Lys(Z)-Phe
Figure imgf000007_0001
La sal de ácido (IX) se acopla con Z-D-Arg-ONa (X)
Figure imgf000007_0002
para formar el tetrapéptido protegido (XI), Z-D-Arg-Dmt(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2 :
Figure imgf000007_0003
El tetrapéptido (I) se obtiene por hidrogenolisis de (XI) y después se hace reaccionar con ácido acético para formar la sal correspondiente.
En una realización del procedimiento, el acoplamiento entre (II) y (III) se lleva a cabo en presencia de tetrafluoroborato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(benzotriazol-1-il)uronio (conocido como TBTU ) y una base orgánica que pertenece a la clase de las aminas terciarias tales como NMM, trietilamina y diisopropiletilamina, así como un disolvente polar tal como DMF, acetonitrilo, tetrahidrofurano (THF), 2-metil-tetrahidrofurano (ME-THF), etc.
En una realización, el acoplamiento entre (II) y (III) se lleva a cabo en un intervalo de temperatura entre 0°C y 602C, preferiblemente entre 20°C y 30°C.
En otra realización, la formación de la sal metanosulfónica (VI) se obtiene en cloruro de metileno como disolvente y se cristaliza en el mismo disolvente. Otros disolventes adecuados para la cristalización son THF, acetato de etilo y acetonitrilo.
En una realización del procedimiento, la reacción de acoplamiento entre el compuesto (VI) y el compuesto (VII) se lleva a cabo en presencia de tetrafluoroborato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(benzotriazol-1-il)uronio (conocido como TBTU) y una base de clase amina terciaria tal como N-metilmorfolina (NMM), trietilamina y diisopropiletilamina, así como un disolvente polar tal como DMF, acetonitrilo, THF, 2-ME-THF, etc.
En otra realización, la formación de la sal metanosulfónica (IX) se obtiene en cloruro de metileno como disolvente y se cristaliza en el mismo disolvente. Otros disolventes adecuados para la cristalización son THF, acetato de etilo y acetonitrilo.
En una realización del procedimiento, la reacción de acoplamiento entre el compuesto (IX) y el compuesto (X) se lleva a cabo en presencia de tetrafluoroborato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(benzotriazol-1-il)uronio (conocido como TBTU) y una base de clase amina terciaria tal como NMM, trietilamina y diisopropiletilamina, así como un disolvente polar tal como DMF, acetonitrilo, THF, 2-ME-THF, etc.
En una realización, la hidrogenolisis de (XI) se lleva a cabo con un catalizador heterogéneo de Pd sobre C y ácido acético como disolvente. Otros catalizadores adecuados son Pd(OH)2 sobre carbono, Pd (y o PdCh) sobre SiO2 , AhO3 o polímero, y disolventes tales como metanol, etanol, isopropanol, DMF, THF y acetonitrilo.
Los compuestos intermedios se pueden aislar o no de la mezcla de reacción.
En un aspecto del procedimiento, los compuestos intermedios (IV), (VI), (VIII), (IX) y (XI) se aíslan y cristalizan. Cuando los compuestos intermedios se aíslan, su pureza supera 98%.
En un aspecto preferido, la cristalización del compuesto intermedio (VIII), Boc-Dmt(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2 puede evitar la transferencia de una impureza crítica a las siguientes etapas del procedimiento.
En un aspecto preferido, la impureza crítica es el compuesto (XII), H-D-Dmt(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2.
Figure imgf000008_0001
En otro aspecto preferido, el procedimiento de cristalización del tetrapéptido protegido (XI), Z-D-Arg-Dmt(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2 permite obtener el producto como un sólido con una pureza cercana al 99%.
En otro aspecto preferido, la desprotección final se lleva a cabo por simple hidrogenación y permite obtener el producto final en forma de sólido de sal de acetato tras simple cristalización sin ninguna necesidad de purificación por HPLC ni ninguna liofilización, un procedimiento de purificación y aislamiento extremadamente caro pero comúnmente usado en la fabricación de péptidos como fármaco.
En un aspecto preferido, el procedimiento permite aumentar la escala de un procedimiento eficaz para obtener el péptido como un sólido que se puede usar en la formulación como tal o se puede convertir fácilmente en cualquier otra sal si es necesario. La pureza del compuesto final obtenido es superior a 98.5%, normalmente de 99% y cada impureza está cerca de 0.2% o menos.
Ejemplos
Ejemplo 1: Preparación de Boc-Lys(Z)-Phe-NH2
Cargar 200 ml de DMF, 44 g de Boc-Lys(Z)-OH y 15.6 g de H-Phe-NH2 en un matraz. Agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 10 min. Añadir 19.2 g de N-metilmorfolina y 32.1 g de TBTU sucesivamente a temperatura ambiente. Agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 1 h. Añadir 500 ml de agua a la mezcla de reacción para precipitar el producto a temperatura ambiente. Filtrar la mezcla para aislar el producto sólido y lavar la torta de filtración con agua. Transferir la torta de filtración a un matraz que contiene 360 ml de acetato de etilo y calentar la mezcla a 50°C hasta que se disuelva todo el sólido. Separar la fase orgánica del producto y descartar la pequeña fase acuosa. Concentrar la fase orgánica a 40~45°C y con vacío para eliminar el disolvente hasta que se forme una gran cantidad de sólido. Filtrar el residuo para aislar el producto sólido. Transferir la torta de filtración a un matraz que contiene 2000 ml de MTBE y calentar la mezcla a reflujo durante 20 min. Después, enfriar la mezcla a temperatura ambiente. Filtrar la mezcla para aislar el producto sólido. Secar la torta de filtración a 30°C y con vacío para dar 35 g de producto sólido.
Ejemplo 2: Preparación de H-Lys(Z)-Phe-NH2.MeSO3H
Cargar 26.3 g de Boc-Lys(Z)-Phe-NH2 , 200 ml de cloruro de metileno y 9.6 g de ácido metanosulfónico. Agitar la mezcla a 15~20°C durante 18 h. Añadir 100 ml de MTBE a la mezcla y agitar a 15~20°C durante 1 h. Filtrar la mezcla para aislar el producto sólido. Secar la torta húmeda en aire a temperatura ambiente para dar 26.4 g de producto sólido blanco.
Ejemplo 3: Preparación de Boc-DMeTyr(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2
Cargar 8.4 g de Boc-DMeTyr(Bzl)-OH, 11 g de H-Lys(Z)-Phe-NH2.MeSO3H, 7.4 g de TBTU y 80 ml de THF en un matraz. Agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 15 minutos y después enfriar a 10°C. Añadir 6.36 g de N-metilmorfolina y agitar la mezcla a 20-25°C durante 3 h. Añadir la mezcla de reacción a un matraz que contiene 240 ml de agua. Añadir 32 ml de cloruro de metileno a la mezcla obtenida en la operación anterior. Agitar la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 20 min. Filtrar la mezcla para aislar el producto sólido y lavar la torta de filtración con acetona (300 ml X 2). Secar la torta de filtración en aire a temperatura ambiente para dar 14.3 g de producto sólido blanco.
Ejemplo 4: Preparación de H-DMeTyr(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2.MeSO3H
Cargar 14 g de Boc-BMeTyr(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2, 280 ml de cloruro de metileno y 3.3 g de ácido metanosulfónico en un matraz. Agitar la mezcla a 18~22°C durante 10 h. Añadir 560 ml de heptanos a la mezcla y agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 30 min. Filtrar la mezcla para aislar el producto sólido. Secar la torta húmeda en aire a temperatura ambiente para dar 14 g de producto sólido blanco.
Ejemplo 5: Preparación de Z-D-Arg-DMeTyr(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2
Cargar 6.34 g de Z-D-Arg-ONa, 100 ml de DMF y 2.0 g de ácido metanosulfónico en un matraz. Agitar la mezcla a temperatura ambiente hasta que se forma una disolución transparente. Añadir 14 g de H-DMeTyr(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2.MeSO3H y enfriar la mezcla a 10°C. Añadir 6.15 g de TBTU y 9.67 g de N-metilmorfolina sucesivamente. Agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 4 h. Añadir disolución acuosa de LiOH preparada disolviendo 2.9 g de LDH.H2O en 8 ml de agua. Agitar la mezcla durante 30 min. Añadir la mezcla resultante lentamente a un matraz que contiene 420 ml de agua con agitación. Añadir 56 ml de cloruro de metileno a la mezcla. Filtrar la mezcla para aislar el producto sólido. T ransferir la torta de filtración a un matraz que contiene 150 ml de ácido acético y calentar la mezcla a 35~40°C hasta que se disuelva la mayor parte del sólido. Añadir 450 ml de MTBE a la mezcla y enfriar la mezcla con agitación a temperatura ambiente. Filtrar la mezcla para aislar el producto sólido. Secar la torta de filtración en aire a temperatura ambiente para dar 17.3 g del producto sólido blanco.
Ejemplo 6 Preparación de H-D-Arg-DMeTyr-Lys-Phe-NH2.3AcOH
Cargar 2.0 g de ZD-Arg-DMeTyr(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2, 20 ml de ácido acético y catalizador de Pd/C al 5% (que se obtiene lavando 5.0 g de Pd/C al 5% que contiene 60% de agua con 30 ml de ácido acético) en un matraz. Cambiar la atmósfera del matraz con hidrógeno. Agitar la mezcla a temperatura ambiente y presión de 1 atm de hidrógeno durante 2 h. Filtrar la mezcla para eliminar el catalizador de Pd/C y lavar la torta de filtración con 10 ml de ácido acético. Combinar el filtrado y la disolución de lavado y concentrar la disolución a 20°C y con vacío para eliminar la mayor parte del disolvente. Añadir 100 ml de acetonitrilo al residuo y agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 20 min. Filtrar la mezcla para aislar el producto sólido. Secar la torta de filtración a temperatura ambiente y con vacío para dar 0.7 g del producto blanco.

Claims (10)

REIVINDICACIONES
1. Un procedimiento en fase líquida para la producción de H-D-Arg-(2,6-Dimetil)Tyr-Lys-Phe-NH2 de fórmula (I), en forma de la sal de ácido acético.
Figure imgf000010_0001
que comprende las siguientes etapas:
- acoplar el compuesto (II) H-Phe-NH2 :
Figure imgf000010_0002
con el compuesto (III) Boc-Lys(Z)-OH:
Figure imgf000010_0003
para obtener un compuesto de fórmula (IV), Boc-Lys(Z)-Phe-NH2 :
Figure imgf000010_0004
- hacer reaccionar el compuesto (IV) con ácido metanosulfónico (V)
MeSO3H (V)
para obtener la sal de amina libre (VI) MeSO3H.H-Lys(Z)-Phe-NH2:
Figure imgf000011_0001
- hacer reaccionar la sal (VI) con el aminoácido protegido Boc-Dmt(Bzl)-OH (VII)
Figure imgf000011_0002
para obtener el tripéptido protegido (VIII):
Figure imgf000011_0003
- tratar el compuesto (VIII) con ácido metanosulfónico (V) para obtener la correspondiente sal (IX), MeSO3.H-Dmt(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2 :
Figure imgf000011_0004
- acoplar la sal de ácido (IX) con Z-D-Arg-ONa (X)
Figure imgf000012_0001
para formar el tetrapéptido protegido (XI), Z-D-Arg-Dmt(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2 :
Figure imgf000012_0002
y
- desproteger el compuesto (XI) por hidrogenolisis para obtener el tetrapéptido H-D-Arg-(2,6-Dimetil)Tyr-Lys-Phe-NH2 (I) y después formar su sal con ácido acético para formar la sal correspondiente.
2. Un procedimiento según la reivindicación 1, en donde el acoplamiento entre (II) y (III) y/o el acoplamiento entre (VI) y (VII) y/o el acoplamiento entre (IX) y (X) se lleva a cabo en presencia de tetrafluoroborato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(benzotriazol-1 -il)uronio.
3. Un procedimiento según la reivindicación 2, en donde el acoplamiento entre (II) y (III) y/o el acoplamiento entre (VI) y (VII) y/o el acoplamiento entre (IX) y (X) se lleva a cabo en presencia de una amina terciaria, preferiblemente seleccionada de N-metilmorfolina, trietilamina o diisopropiletilamina.
4. Un procedimiento según las reivindicaciones 1 -3, en donde el acoplamiento entre (II) y (III) y/o el acoplamiento entre (VI) y (VII) y/o el acoplamiento entre (IX) y (X) se lleva a cabo en disolventes polares orgánicos, preferiblemente seleccionados de dimetilformamida, acetonitrilo, tetrahidrofurano, 2-metil-tetrahidrofurano, o una mezcla de los mismos.
5. Un procedimiento según la reivindicación 1, en donde el acoplamiento entre (II) y (III) se lleva a cabo en un intervalo de temperatura entre 0°C y 60°C, preferiblemente entre 20°C y 30°C.
6. Un procedimiento según la reivindicación 1, en donde la formación de la sal metanosulfónica (VI) se obtiene en cloruro de metileno como disolvente y se cristaliza en el mismos disolvente.
7. Un procedimiento según la reivindicación 1, en donde el acoplamiento entre (VI) y (VII) se lleva a cabo en un intervalo de temperatura entre 0°C y 60°C, preferiblemente entre 20°C y 30°C.
8. Un procedimiento según la reivindicación 1, en donde el acoplamiento entre (IX) y (X) se lleva a cabo en un intervalo de temperatura entre 0°C y 60°C, preferiblemente entre 20°C y 30°C.
9. Un procedimiento según las reivindicaciones 1 -8, en donde la desprotección final se lleva a cabo por hidrogenación.
10. Un compuesto seleccionado de un compuesto de fórmula (VIII), Boc-(2,6-dimetil)Tyr(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2
Figure imgf000013_0001
compuesto de fórmula (XIV) H-(2,6-dimetil)Tyr(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2 o una de sus sales, preferiblemente la sal de mesilato:
Figure imgf000013_0002
y un compuesto de fórmula (XI) Z-D-Arg-(2,6-dimetil)Tyr(Bzl)-Lys(Z)-Phe-NH2
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