JPH08116971A - β−グルコセレブロシダーゼの活性化方法 - Google Patents
β−グルコセレブロシダーゼの活性化方法Info
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- JPH08116971A JPH08116971A JP28930194A JP28930194A JPH08116971A JP H08116971 A JPH08116971 A JP H08116971A JP 28930194 A JP28930194 A JP 28930194A JP 28930194 A JP28930194 A JP 28930194A JP H08116971 A JPH08116971 A JP H08116971A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】表皮中のβ−グルコセレブロシダーゼをモノグ
リコシルスフィンゴ脂質によって活性化させる方法。 【効果】荒肌の改善。
リコシルスフィンゴ脂質によって活性化させる方法。 【効果】荒肌の改善。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は表皮中のβ-グルコセレ
ブロシダーゼを活性化させる方法に関する。さらに詳し
くは皮膚に外用されるモノグリコシルスフィンゴ脂質に
よって表皮中のβ-グルコセレブロシダーゼを活性化さ
せる方法に関する。
ブロシダーゼを活性化させる方法に関する。さらに詳し
くは皮膚に外用されるモノグリコシルスフィンゴ脂質に
よって表皮中のβ-グルコセレブロシダーゼを活性化さ
せる方法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】荒肌
とは、一般に角質細胞の剥離現象が認められる乾燥状態
の皮膚をいう。このような荒肌はコレステロール、セラ
ミド、脂肪酸等の角質細胞間脂質の溶出、および紫外
線、洗剤等に起因する角質細胞の変性や表皮細胞の増殖
・角化バランスの崩壊による角質層透過バリアの形成不
全等によって発生する。この荒肌を予防又は治癒する目
的で、角質細胞間脂質が角質層透過バリアに必須な成分
であることに着目して、角質細胞間脂質成分又はそれに
類似する合成の角質細胞間脂質成分を供給したり、ＥＧ
Ｆ（Epidermal Growth Factor)等の表皮細胞の増殖・角
化調節物質などを投与するなどの研究が行われている。
とは、一般に角質細胞の剥離現象が認められる乾燥状態
の皮膚をいう。このような荒肌はコレステロール、セラ
ミド、脂肪酸等の角質細胞間脂質の溶出、および紫外
線、洗剤等に起因する角質細胞の変性や表皮細胞の増殖
・角化バランスの崩壊による角質層透過バリアの形成不
全等によって発生する。この荒肌を予防又は治癒する目
的で、角質細胞間脂質が角質層透過バリアに必須な成分
であることに着目して、角質細胞間脂質成分又はそれに
類似する合成の角質細胞間脂質成分を供給したり、ＥＧ
Ｆ（Epidermal Growth Factor)等の表皮細胞の増殖・角
化調節物質などを投与するなどの研究が行われている。
【０００３】この角質層細胞間脂質は、有棘層と顆粒層
の細胞で生合成された層板顆粒が、角質層直下で細胞間
に放出され、伸展し、層板（ラメラ）構造をとり、細胞
間に広がったものである。層板顆粒はグルコシルセラミ
ド、コレステロール、セラミド、リン脂質等から構成さ
れるが、角質層細胞間脂質にはグルコシルセラミドは殆
ど含まれていない。すなわち、層板顆粒中のグルコシル
セラミドは、β-グルコセレブロシダーゼによって加水
分解を受け、セラミドに変換され、このセラミドが、ラ
メラ構造をとる結果、角質層細胞間脂質として角質層透
過バリアの形成を改善し、荒れ肌防御のバリアの働きを
持つと考えられる。たとえば、β-グルコセレブロシダ
ーゼを遺伝的に完全に欠損したゴーシェ病タイプ２の疾
患患者では病的荒れ肌が観察され、また、その表皮の組
織学的研究によって角質層細胞間脂質のラメラ構造に異
常が認められている。また、β-グルコセレブロシダー
ゼを人為的に欠損させたトランスジェニックマウスでも
角質層細胞間脂質のラメラ構造の異常と荒れ肌の相関が
認められている。さらに、実験的にも、β-グルコセレ
ブロシダーゼを阻害すると荒れ肌と角質層細胞間脂質の
ラメラ構造の異常が観察されている。これらの諸事実よ
り正常な角質層透過バリアの形成にはグルコシルセラミ
ドがβ-グルコセレブロシダーゼによってセラミドに加
水分解されることが必要であると言われている。したが
って、β-グルコセレブロシダーゼを活性化させること
によって角質層透過バリアの形成が改善され、その結果
として荒れ肌を改善することが可能であると考えられ
る。
の細胞で生合成された層板顆粒が、角質層直下で細胞間
に放出され、伸展し、層板（ラメラ）構造をとり、細胞
間に広がったものである。層板顆粒はグルコシルセラミ
ド、コレステロール、セラミド、リン脂質等から構成さ
れるが、角質層細胞間脂質にはグルコシルセラミドは殆
ど含まれていない。すなわち、層板顆粒中のグルコシル
セラミドは、β-グルコセレブロシダーゼによって加水
分解を受け、セラミドに変換され、このセラミドが、ラ
メラ構造をとる結果、角質層細胞間脂質として角質層透
過バリアの形成を改善し、荒れ肌防御のバリアの働きを
持つと考えられる。たとえば、β-グルコセレブロシダ
ーゼを遺伝的に完全に欠損したゴーシェ病タイプ２の疾
患患者では病的荒れ肌が観察され、また、その表皮の組
織学的研究によって角質層細胞間脂質のラメラ構造に異
常が認められている。また、β-グルコセレブロシダー
ゼを人為的に欠損させたトランスジェニックマウスでも
角質層細胞間脂質のラメラ構造の異常と荒れ肌の相関が
認められている。さらに、実験的にも、β-グルコセレ
ブロシダーゼを阻害すると荒れ肌と角質層細胞間脂質の
ラメラ構造の異常が観察されている。これらの諸事実よ
り正常な角質層透過バリアの形成にはグルコシルセラミ
ドがβ-グルコセレブロシダーゼによってセラミドに加
水分解されることが必要であると言われている。したが
って、β-グルコセレブロシダーゼを活性化させること
によって角質層透過バリアの形成が改善され、その結果
として荒れ肌を改善することが可能であると考えられ
る。
【０００４】このような背景にあって、β-グルコセレ
ブロシダーゼの活性化因子として、従来、モルモット脾
臓から発見されたＳＡＰ-２やヒトゴーシェ病脾臓から
発見されたＡ1ａやサポシンＣが知られている。
ブロシダーゼの活性化因子として、従来、モルモット脾
臓から発見されたＳＡＰ-２やヒトゴーシェ病脾臓から
発見されたＡ1ａやサポシンＣが知られている。
【０００５】しかし、これら活性化因子はタンパク質で
あってこれらを外用して表皮のβ-グルコセレブロシダ
ーゼを活性化させることは、経皮吸収性や安全性の点で
大きな問題がある。また、これらのタンパク質を単離し
て産業上利用することは極めて困難である。
あってこれらを外用して表皮のβ-グルコセレブロシダ
ーゼを活性化させることは、経皮吸収性や安全性の点で
大きな問題がある。また、これらのタンパク質を単離し
て産業上利用することは極めて困難である。
【０００６】以上のことから、表皮のβ-グルコセレブ
ロシダーゼを活性化させる簡便な方法が求められてい
る。そこで、本発明者らは、上記の事情に鑑み従来の問
題を解決する方法を鋭意研究した結果、後記方法によっ
て意外にも表皮中のβ-グルコセレブロシダーゼを極め
て容易に活性化できることを見いだし、本発明を完成す
るに至った。
ロシダーゼを活性化させる簡便な方法が求められてい
る。そこで、本発明者らは、上記の事情に鑑み従来の問
題を解決する方法を鋭意研究した結果、後記方法によっ
て意外にも表皮中のβ-グルコセレブロシダーゼを極め
て容易に活性化できることを見いだし、本発明を完成す
るに至った。
【０００７】
【課題を解決するための手段】即ち、本発明の請求項１
は、モノグリコシルスフィンゴ脂質を用いることを特徴
とするβ-グルコセレブロシダーゼの活性化方法であ
る。また、本発明の請求項２は、モノグリコシルスフィ
ンゴ脂質がβ-ガラクトシルセラミドである請求項１記
載のβ-グルコセレブロシダーゼの活性化方法である。
は、モノグリコシルスフィンゴ脂質を用いることを特徴
とするβ-グルコセレブロシダーゼの活性化方法であ
る。また、本発明の請求項２は、モノグリコシルスフィ
ンゴ脂質がβ-ガラクトシルセラミドである請求項１記
載のβ-グルコセレブロシダーゼの活性化方法である。
【０００８】以下、本発明の構成について詳述する。本
発明の表皮中のβ-グルコセレブロシダーゼを活性化す
る方法は、モノグリコシルスフィンゴ脂質が配合された
ローション等の皮膚外用剤を皮膚に塗布することにより
達成される。ここで、モノグリコシルスフィンゴ脂質
は、β-ガラクトシルセラミド、β-グルコシルセラミ
ド、その他の合成によるモノグリコシルスフィンゴ糖脂
質である。
発明の表皮中のβ-グルコセレブロシダーゼを活性化す
る方法は、モノグリコシルスフィンゴ脂質が配合された
ローション等の皮膚外用剤を皮膚に塗布することにより
達成される。ここで、モノグリコシルスフィンゴ脂質
は、β-ガラクトシルセラミド、β-グルコシルセラミ
ド、その他の合成によるモノグリコシルスフィンゴ糖脂
質である。
【０００９】これらのモノグリコシルスフィンゴ脂質の
皮膚外用剤中の配合量は、総量を基準として０．００５
〜５．０重量％が好ましい。これら各々の下限未満の配
合量では本発明の目的とする効果が十分でなく、一方、
上限を越えてもその増加分に見合った効果の向上はな
い。
皮膚外用剤中の配合量は、総量を基準として０．００５
〜５．０重量％が好ましい。これら各々の下限未満の配
合量では本発明の目的とする効果が十分でなく、一方、
上限を越えてもその増加分に見合った効果の向上はな
い。
【００１０】表皮のβ-グルコセレブロシダーゼ活性は
一般に、表皮のホモジネートを酵素原として、基質とし
て、放射標識したβ-グルコシルセラミドや合成基質で
ある４-メチルウンベリフェリルβ-グルコピラノシドを
用いて測定される。
一般に、表皮のホモジネートを酵素原として、基質とし
て、放射標識したβ-グルコシルセラミドや合成基質で
ある４-メチルウンベリフェリルβ-グルコピラノシドを
用いて測定される。
【００１１】以下、実施例および比較例に基づいて本発
明を証明する。
明を証明する。
【００１２】
実施例１、比較例１ β-ガラクトシルセラミド（牛脳由来、シグマ社、米
国）を１．０％含有するプロピレングリコール・エタノ
ール混液（７：３）のローションを作成し、これを試料
として１日に１回の頻度で１群５匹のヘアレスマウス
（１０週齢）の背部皮膚に５０μＬ１０日間連続塗布し
た。β-ガラクトシルセラミドの濃度を変えて行ったこ
れらの実験を実施例１とする。また、β-ガラクトシル
セラミドを含有しないプロピレングリコール・エタノー
ル混液のみのローションを同様に塗布した。この実験を
比較例１とする。
国）を１．０％含有するプロピレングリコール・エタノ
ール混液（７：３）のローションを作成し、これを試料
として１日に１回の頻度で１群５匹のヘアレスマウス
（１０週齢）の背部皮膚に５０μＬ１０日間連続塗布し
た。β-ガラクトシルセラミドの濃度を変えて行ったこ
れらの実験を実施例１とする。また、β-ガラクトシル
セラミドを含有しないプロピレングリコール・エタノー
ル混液のみのローションを同様に塗布した。この実験を
比較例１とする。
【００１３】実施例１、比較例１における試料の最終塗
布２４時間後に皮膚を採取し、皮下脂肪組織を可及的に
除去した後、３７℃の２規定の臭化ナトリウム水溶液中
で２時間放置した。次いで、表皮をピンセットで剥離
し、氷冷した１０倍容のリン酸緩衝生理食塩水中でポリ
トロンホモジナイザー（キネマティカ社製、スイス）を
用いてホモジネートを調製した。
布２４時間後に皮膚を採取し、皮下脂肪組織を可及的に
除去した後、３７℃の２規定の臭化ナトリウム水溶液中
で２時間放置した。次いで、表皮をピンセットで剥離
し、氷冷した１０倍容のリン酸緩衝生理食塩水中でポリ
トロンホモジナイザー（キネマティカ社製、スイス）を
用いてホモジネートを調製した。
【００１４】β-グルコセレブロシダーゼ活性は、ミエ
ルとファンデルフルクの方法（ブリチッシュ・ジャーナ
ル・オブ・デルマトロジー、９５巻、頁２７１-２７
４、１９７６年）に準じて測定した。すなわち、ホモジ
ネート５０μｌに１００ｍＭクエン酸-２００ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ５.６）を５００μｌと１０ｍＭタウロ
コール酸-１００ｍＭクエン酸-２００ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ５.６）５００μｌを加えて、３７℃で１０分間
加温した。次いで０.５ｍＭの４-メチルウンベリフェリ
ル-β-Ｄグルコシド（シグマ社、米国）を５０μｌ加え
て、３７℃で６０分間加温した。その後、２００ｍＭ炭
酸ナトリウム-炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０.
５）を加え、励起波長３６０ｎＭ、吸収波長４５０ｎＭ
で蛍光強度を測定した。標準品の４-メチルウンベリフ
ェロン（シグマ社、米国）の蛍光強度より作成した検量
線をもとに酵素活性を計算した。
ルとファンデルフルクの方法（ブリチッシュ・ジャーナ
ル・オブ・デルマトロジー、９５巻、頁２７１-２７
４、１９７６年）に準じて測定した。すなわち、ホモジ
ネート５０μｌに１００ｍＭクエン酸-２００ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ５.６）を５００μｌと１０ｍＭタウロ
コール酸-１００ｍＭクエン酸-２００ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ５.６）５００μｌを加えて、３７℃で１０分間
加温した。次いで０.５ｍＭの４-メチルウンベリフェリ
ル-β-Ｄグルコシド（シグマ社、米国）を５０μｌ加え
て、３７℃で６０分間加温した。その後、２００ｍＭ炭
酸ナトリウム-炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０.
５）を加え、励起波長３６０ｎＭ、吸収波長４５０ｎＭ
で蛍光強度を測定した。標準品の４-メチルウンベリフ
ェロン（シグマ社、米国）の蛍光強度より作成した検量
線をもとに酵素活性を計算した。
【００１５】比較例２，３ β-グルコセレブロシダーゼ活性の特異性を証明するた
めに、β-グルコセレブロシダーゼの特異的阻害剤とし
て知られているコンジュリトール-β-エポキシド（シグ
マ社、アメリカ合衆国）を最終濃度５０μＭ加えて上記
と同様にして酵素活性を測定した。すなわち、実施例１
の酵素試料にコンジュリトール-β-エポキシドを添加し
たものを比較例２、比較例１の酵素試料にコンジュリト
ール-β-エポキシドを添加したものを比較例３とする。
めに、β-グルコセレブロシダーゼの特異的阻害剤とし
て知られているコンジュリトール-β-エポキシド（シグ
マ社、アメリカ合衆国）を最終濃度５０μＭ加えて上記
と同様にして酵素活性を測定した。すなわち、実施例１
の酵素試料にコンジュリトール-β-エポキシドを添加し
たものを比較例２、比較例１の酵素試料にコンジュリト
ール-β-エポキシドを添加したものを比較例３とする。
【００１６】表皮中のβ-グルコセレブロシダーゼ活性
の実施例１、比較例１、２、３における測定結果を図１
に示す。
の実施例１、比較例１、２、３における測定結果を図１
に示す。
【００１７】この結果において、β-ガラクトシルセラ
ミドを含有するローション（実施例１）とそれを含有し
ないローション（比較例１）との比較から、実施例１と
比較例１の間に危険率１％以下で有意差が確認され、β
-ガラクトシルセラミドが表皮のβ-グルコセレブロシダ
ーゼ活性を高めることが分かった。また、β-グルコセ
レブロシダーゼの特異的阻害剤であるコンジュリトール
-β-エポキシドを添加した比較例２、３においては酵素
活性はほとんど検出されなかった。このことは、本測定
条件でβ-グルコセレブロシダーゼ活性は特異的に測定
されていることを意味する。
ミドを含有するローション（実施例１）とそれを含有し
ないローション（比較例１）との比較から、実施例１と
比較例１の間に危険率１％以下で有意差が確認され、β
-ガラクトシルセラミドが表皮のβ-グルコセレブロシダ
ーゼ活性を高めることが分かった。また、β-グルコセ
レブロシダーゼの特異的阻害剤であるコンジュリトール
-β-エポキシドを添加した比較例２、３においては酵素
活性はほとんど検出されなかった。このことは、本測定
条件でβ-グルコセレブロシダーゼ活性は特異的に測定
されていることを意味する。
【００１８】実施例２、３、比較例４、５ ０．１％又は１．０％のβ-ガラクトシルセラミド（牛
脳由来、シグマ社、米国）を含有するようにプロピレン
グリコール・エタノール混液（７：３）を基剤としたロ
−ションを作成し、実施例２、実施例３の試料とする。
また、β-ガラクトシルセラミドを含有しないプロピレ
ングリコール・エタノール混液のみのローションを作成
し、比較例４の試料とする。更に、１．０％のセラミド
（シグマ社、米国）を含有するプロピレングリコール・
エタノール混液（７：３）のロ−ションを作成し、比較
例４の試料とする。これらの試料を１日に１回の頻度で
１群５匹のヘアレスラット（９週齢）の背部皮膚に３０
０μＬ１０日間塗布した。以後、実施例１〜２と同様の
方法によってβ-グルコセレブロシダーゼ活性を調べ
た。その結果を図２に示す。
脳由来、シグマ社、米国）を含有するようにプロピレン
グリコール・エタノール混液（７：３）を基剤としたロ
−ションを作成し、実施例２、実施例３の試料とする。
また、β-ガラクトシルセラミドを含有しないプロピレ
ングリコール・エタノール混液のみのローションを作成
し、比較例４の試料とする。更に、１．０％のセラミド
（シグマ社、米国）を含有するプロピレングリコール・
エタノール混液（７：３）のロ−ションを作成し、比較
例４の試料とする。これらの試料を１日に１回の頻度で
１群５匹のヘアレスラット（９週齢）の背部皮膚に３０
０μＬ１０日間塗布した。以後、実施例１〜２と同様の
方法によってβ-グルコセレブロシダーゼ活性を調べ
た。その結果を図２に示す。
【００１９】この結果において、β-ガラクトシルセラ
ミドを含有するローション（実施例２、３）とそれを含
有しないローション（比較例４）又はセラミドを含有す
るローション（比較例５）との比較から、実施例２、実
施例３と比較例４又は比較例５の間に危険率０．１％以
下で有意差が確認され、β-ガラクトシルセラミドが表
皮のβ-グルコセレブロシダーゼ活性を高めることと、
セラミドはその活性を高めないことが分かった。このよ
うなβ-グルコセレブロシダーゼ活性を高める方法によ
って荒れ肌の新たな予防と防御方法が示された。
ミドを含有するローション（実施例２、３）とそれを含
有しないローション（比較例４）又はセラミドを含有す
るローション（比較例５）との比較から、実施例２、実
施例３と比較例４又は比較例５の間に危険率０．１％以
下で有意差が確認され、β-ガラクトシルセラミドが表
皮のβ-グルコセレブロシダーゼ活性を高めることと、
セラミドはその活性を高めないことが分かった。このよ
うなβ-グルコセレブロシダーゼ活性を高める方法によ
って荒れ肌の新たな予防と防御方法が示された。
【００２０】
【発明の効果】以上記載のごとく、本発明は、表皮のβ
-グルコセレブロシダーゼを活性化する簡便で且つ優れ
た方法を提供することが明らかである。また、本方法に
よって荒れ肌の新たな予防と防御が可能となる。
-グルコセレブロシダーゼを活性化する簡便で且つ優れ
た方法を提供することが明らかである。また、本方法に
よって荒れ肌の新たな予防と防御が可能となる。
【図１】実施例１、比較例１、２、３のβ-グルコセレ
ブロシダーゼ活性測定結果を示す。
ブロシダーゼ活性測定結果を示す。
【図２】実施例２、３、比較例４、５のβ-グルコセレ
ブロシダーゼ活性測定結果を示す。
ブロシダーゼ活性測定結果を示す。
Claims (2)
- 【請求項１】 モノグリコシルスフィンゴ脂質を用いる
ことを特徴とするβ-グルコセレブロシダーゼの活性化
方法。 - 【請求項２】 モノグリコシルスフィンゴ脂質がβ-ガ
ラクトシルセラミドである請求項１記載のβ-グルコセ
レブロシダーゼの活性化方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28930194A JP2896321B2 (ja) | 1994-10-27 | 1994-10-27 | β−グルコセレブロシダーゼの活性化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28930194A JP2896321B2 (ja) | 1994-10-27 | 1994-10-27 | β−グルコセレブロシダーゼの活性化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08116971A true JPH08116971A (ja) | 1996-05-14 |
| JP2896321B2 JP2896321B2 (ja) | 1999-05-31 |
Family
ID=17741414
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28930194A Expired - Fee Related JP2896321B2 (ja) | 1994-10-27 | 1994-10-27 | β−グルコセレブロシダーゼの活性化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2896321B2 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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-
1994
- 1994-10-27 JP JP28930194A patent/JP2896321B2/ja not_active Expired - Fee Related
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