WO2000021501A1 - Preparations dermatologiques a usage externe - Google Patents

Description

明 細 書 皮膚外用剤 技術分野

本発明は、 肌荒れ改善効果及び皮膚老化防止効果等に優れる皮膚外用剤及び化 粧料に関するものである。

背景技術

従来、 大豆抽出液、 又はこの一種である豆乳を化粧料に用いた例はすでにいく つか報告されており、 美白効果があるとされている。 また、 これらのうち豆乳の 発酵生成物 （以下、 「発酵豆乳」 という） を化粧料に用いたものとして、 リブー プス属の微生物を作用させたもの （特開平 1 一 1 0 2 0 1 1号公報） 及び乳酸菌 を作用させたもの （特開平 3— 1 2 7 7 1 3号） が挙げられる。

しかし、 これらの発酵豆乳が、 加齢や紫外線による皮膚の老化によって発生す るしわや肌荒れを改善するという報告はない。

従って本発明の目的は、 このようなしわや肌荒れを改善しうる皮膚外用剤を提 供することにある。

発明の開示

斯かる実状に鑑み本発明者は、 鋭意研究を行った結果、 意外なことにビフィ ド バクテリウ厶属細菌を大豆抽出液に作用させて得られる発酵生成物から有機溶媒 で抽出すれば、 しわや肌荒れを改善し得る発酵大豆抽出物が得られることを見出 し本発明を完成した。

すなわち本発明は、 ビフィ ドバクテリゥ厶属細菌から選ばれる 1種又は 2種以 上の微生物を大豆抽出液に作用させて得られる発酵生成物から有機溶媒抽出した 発酵大豆抽出物を含有する皮膚外用剤を提供するものである。 図面の簡単な説明

図 1は、 発酵豆乳抽出物のしわ形成に及ぼす効果を示す図である 〔* ：発酵豆 乳に比較して有意（P〈0. 05, n=5) 〕 。 図 2は、 発酵豆乳抽出物の皮溝、 皮丘数の 減少に及ぼす効果を示す図である 〔* ：発酵豆乳に比較して有意（pく 0. 05, n=5)〕 。 図 3は、 発酵豆乳抽出物の皮膚中のヒアルロン酸含量に及ぼす効果を示 す図である 〔数値は Mean土 SD(n=3 or 6) , * (pく 0. 05)と **(pく 0. 01)はコントロー ル （50%エタノール） に対し有意〕 。 発明を実施するための最良の形態

本発明の皮膚外用剤に用いる発酵大豆抽出物は、 ビフィ ドバクテリゥ厶属細菌 を大豆抽出液に作用させて得られた発酵生成物から有機溶媒で抽出したものであ り、 ここで用いる大豆抽出液としては、 大豆の水抽出液である豆乳が特に好まし い。

従って、 豆乳から本発明の皮膚外用剤を製造する工程の一例を次に挙げる。 ( 1 ) 豆乳の製造 （工程 1 )

本発明で用いる豆乳はいかなる方法で製造されたものであってもよいが、 例え ば、 原料となる大豆を水につけた後、 熱水又は 0 . 5 〜 1 . 0重量％の炭酸ナト リウムを含む熱水を添加して磨砕後、 おからを取り除き、 更に加熱殺菌すること により製造することができる。 通常、 固形分 1 0 %程度のものを用いる。

ここで、 本発明において用いられる豆乳の原料となる大豆は、 特に制限はない が油脂を含有した丸大豆、 脱皮大豆、 又はフレーク大豆等を原料としたものが好 ましく、 特に脱皮大豆を原料としたものが好ましい。

また、 かかる豆乳には、 必要に応じて、 製造後、 次の工程である微生物処理の ために、 ショ糖、 ブドウ糖、 果糖、 転化糖等の食品に用いられる糖や、 肉エキス、 酵母エキス、 ペプトン、 ペプチド等の微生物の増殖に必要な栄養素を添加しても よく、 微生物の至適 pHに調整するために豆乳にクェン酸、 リンゴ酸、 ァスコルビ ン酸、 乳酸、 酢酸等の食品に用いられる酸を添加してもよい。

( 2 ) 大豆の発酵 （工程 2 )

前記工程 1で製造した豆乳に微生物を作用させる方法は特に限定されず、 例え ば、 培養した微生物の菌液を上記豆乳に接種した後、 その微生物に適した温度

(ビフィ ドバクテリゥム属細菌は通常 2 0〜3 9 °C) 、 時間、 条件を適宜決定し て発酵を行えばよく、 攪拌培養又は静置培養のいずれであってもよい。 なお、 発 酵は、 菌株を複数種組み合わせた混合発酵であってもよいし、 菌株を複数種組み 合わせた連続発酵であつてもよい。

大豆抽出液に作用させるビフィ ドバクテリゥム属細菌に属する微生物としては、 特に限定されず、 例えば、 ビフイ ドバクテリウム ·ブレーべ、 ビフイ ドパクテリ ゥム ' ビフィダム、 ビフイ ドバクテリゥム ' ロンガム、 ビフイ ドバクテリウ厶 ' ァドレツセンテイス、 ビフィ ドノくクテリゥム 'インファンティス等が挙げられ、 これらは 1種でも 2種以上を混合して用いてもよい。 また、 これらの微生物と共 に、 ラクトバチルス属、 ストレプトコッカス属、 ラクトコッカス属、 ェンテロコ ッカス属等の乳酸菌で発酵させ、 これらの発酵生成物を利用してもよい。

( 3 ) 発酵生成物の抽出 （工程 3 )

工程 2で得られた発酵生成物を抽出する有機溶媒は特に限定されず、 炭素数 1 〜 1 3の一価又は多価アルコール、 へキサン、 ベンゼン、 アセトン、 酢酸ェチル、 ジメチルスルフォキシド、 エーテル等が挙げられ、 具体的には、 メタノール、 ェ 夕ノール等の低級アルコール （一価アルコール） 、 ポリエチレングリコール、 プ ロピレングリコール、 1， 3—ブチレングリコール、 イソプレングリコール、 グ リセリン等の多価アルコールが挙げられる。 発酵生成物を有機溶媒で抽出するこ とにより、 しわや肌荒れを改善し、 皮膚のヒアルロン酸含量を高める成分が得ら れる。 しかし、 発酵生成物を抽出する溶媒の種類によって、 しわ、 肌荒れ防止の有効 成分や臭気の原因成分 （揮発成分） の抽出量が異なる。 すなわち、 分子量が小さ かったり、 水酸基が 1つしか有しないものを溶媒として用いると、 不快な香りの する揮発成分をより多く抽出してしまい、 化粧品等の素材として用いる際の価値 が低下してしまう。 一方、 分子量が大きいものを溶媒として用いると、 有効成分 の抽出量がやや減ってしまい、 また、 化粧品等に配合した場合べたつき感が生じ てしまうこともある。

このため、 抽出溶媒としては、 炭素数 3〜 1 3の多価アルコールが好ましく、 これを用いれば不快な香りが少なく使用感の良いものが得られる。 このような多 価アルコールとして、 具体的には、 し 3—ブチレングリコール、 グリセリン、 プロピレングリコール、 イソプレングリコール等が挙げられ、 これらは単独又は 組み合わせて用いることができる。 ここで、 多価アルコールとは同一分子内に水 酸基が 2個以上有するアルコールであり、 いかなる方法で製造されたものであつ ても使用することができる。

これらの有機溶媒を用いて抽出を行う際には、 発酵生成物 1重量部に対し、 0 . 0 1〜 1 0 0重量部の有機溶媒を添加した後、 濾過あるいは遠心分離を行い 高極性物質を除去する。 抽出温度は、 4 °Cから各々の単独あるいは混合溶媒の沸 点までのいずれであってもよく、 また、 抽出時間は 1 5分〜 4 8時間程度の範囲 内とするのが好ましい。

こうして得られた発酵生成物抽出物を皮膚外用剤として用いる場合には、 その まま溶液として用いてもよいが、 更に遠心分離、 濾過等の手段により不溶物を除 去した溶液として、 減圧乾固、 加熱乾固、 風乾等の手段で濃縮した溶液あるいは 固形物として、 又は水、 アルコール等で希釈した溶液としても使用可能である。 その際使用量は、 抽出物の固形分濃度で 0 . 0 0 5〜5 0重量％、 特に 0 . 0 1 〜 1 0重量％が好ましい。 0 . 0 0 5重量％未満では十分な肌荒れ改善効果を得 られない場合があり、 5 0重量％を超えるとやや豆乳由来の豆臭が感じられてし まうためである。

本発明の皮膚外用剤としては、 治療用外用剤、 化粧料があり、 このうち化粧料 が好ましく、 特に皮膚老化防止用化粧料又は肌荒れ改善用化粧料が好ましい。 本発明の化粧料は、 更にヒアルロン酸等のムコ多糖類、 グリセリン、 豆乳に乳 酸菌を接種して得られた培養液、 乳成分の乳酸菌培養液、 ピロリ ドンカルボン酸、 ひ—ヒ ドロキシ酸、 トリメチルグリシン等の保湿成分を配合することにより保湿 効果を高めることができる。 これらの保湿成分のうちヒアル口ン酸が特に好まし い。

また、 本発明の化粧料には、 本発明の効果を妨げない範囲で公知の化粧料成分、 例えば水、 アルコール類、 油成分、 界面活性剤、 水溶性高分子、 ビタミ ン類、 防 腐剤、 香料、 色素等を配合することができる。

本発明の化粧料は、 常法により製造することができ、 化粧水、 乳液、 保湿クリ ーム、 クレンジングクリーム、 マッサージクリーム、 洗顔クリーム、 ノ、。ック、 美 容液等種々の形態とすることができる。 実施例

次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、 本発明はこれらに限定される ものではない。

実施例 1

大豆を水洗し、 水に一夜浸潰して充分に吸水させ 4倍量の水を加えミキサ一で ペースト状に粉砕した。 これを 1 0 0 °Cで 3 0分間加熱して冷却後、 濾過して豆 乳を得た。 得られた豆乳を 1 0 0 °C、 9 0分間蒸気滅菌して発酵用素豆乳を調製 した。 前培養したビフイ ドバクテリゥ厶 'ブレーべ F E R M P - 1 5 4 8 8 株の菌液をこれに接種した後、 3 7 °C、 2 4時間静置培養して発酵豆乳を得た。 こうして得られた発酵豆乳 1 0 にエタノールもしくは 1， 3—ブチレング リコール 3 0 0 を添加して室温にて 2 4時間攪拌した後、 9 0 0 O rpm で 3 0 分間遠心分離することによって生じた沈澱物を除去した。 更に、 発酵豆乳ェ夕ノ

—ル抽出液は、 減圧乾固した後、 得られた抽出物 （2. 3 g) を 1 0 0^の 5 0 %エタノールに溶解し、 塗布サンプルとした。

実施例 2

大豆を水洗し、 水に一夜浸潰して充分に吸水させ、 4倍量の水を加えミキサー でペースト状に粉砕した。 これを 1 0 0°Cで 3 0分間加熱して冷却後、 濾過して 豆乳を得た。

更に、 得られた豆乳を 1 0 0て、 9 0分間蒸気滅菌して発酵用素豆乳を調製し た。 前培養したビフィ ドバクテリゥ厶 ·ブレーべ FERM P— 1 5 4 8 8株 の菌液をこれに接種した後、 3 7°C、 2 4時間静置培養して発酵豆乳を得た。 こうして得られた豆乳、 発酵豆乳 1 0 Oraにエタノール 1 0 0wを添加し、 実 施例 1 と同様に攪拌、 遠心分離して豆乳、 発酵豆乳の抽出物を調製し、 塗布サン プルとした。

試験例 1

実施例 1で得られた発酵豆乳エタノール抽出物及び発酵豆乳 （未抽出物） をサ ンプルとし、 これらの皮膚表面形態改善効果を検討した。 K i s s らの方法 (Photochem. Photobiol. 53, 109. 1991) に従って紫外線を照射したヘアレス マウス皮膚にサンプルを 1 0 ^Zcm² 連日塗布し、 4週間後にしわを画像解析 を用いて定量し、 測定した全体の皮膚面積に占めるしわ部分の面積の増加率を求 めた。 結果を図 1に示す。

図 1より本発明の発酵豆乳の抽出物は、 コントロール群 （サンプル無塗布） や 未抽出物塗布群に比較して優れたしわの改善効果を有しており、 皮膚老化防止剤 として有用であることがわかる。

同様の試験を 1 , 3—ブチレングリコール抽出物でも実施したが、 エタノール 抽出の場合とほとんど同じ結果が得られた。 表 1 香り、 使用感、 官能評価基準表

試験例 2

試験例 1 と同様のサンプルを同様のマウスに塗布してキメ （皮溝 ·皮丘） の数 を画像解析にて定量し、 紫外線照射によって減少した皮溝 ·皮丘数を示した。 結 果を図 2に示す。

図 2より発酵豆乳エタノール抽出物は、 コントロール群 （サンプル無塗布） や 未抽出物塗布群に比較して優れたキメの改善効果を有しており、 肌荒れ改善化粧 料として有用であることがわかる。

同様の試験を 1 , 3 —ブチレングリコール抽出物でも実施したが、 エタノール 抽出の場合とほとんど同じ結果が得られた。

試験例 3

種々の有機溶媒による発酵豆乳液の抽出成分の香りと得られた有効成分の使用 感に及ぼす影響を検討した。

発酵豆乳液に表 2に示す各種溶媒を同量混合し一夜放置後濾過し、 その香りを 官能評価し、 有効成分の分析を行った。 香りの官能評価は 1 0名の評価員にそれ ぞれサンプルをランダムにブラインドテストして行い、 表 1の評価基準にのっと り、 絶対評価してもらい平均値を算出した。 使用感の官能評価も 1 0名の評価員 にそれぞれのサンプルをランダムにブラインドテストして行い、 表 1に示した評 価基準にのっとり、 絶対評価してもらい平均値を算出した。 なお発酵豆乳を比較 品として用いた。 表 2 種々の有機溶媒による発酵豆乳抽出成分の香りと使用感に及ぼす景遷 抽出-廳 職。口 本翻 本翻 本翻 本翻 本翻 本翻 本翻 本翻 ロ Dロ 0

乙 DD 3 品 4 α □π C 品 6 DD / 品 9 メタノール 1 50%

エタノール 2 50%

ポリグリセリン 6 50%

ポリエチレング 14 50%

リコ一 0

ポリエチレング 37 50%

リコール 1540

プロピレングリ 3 50%

コール

1 , 3—フ'チレ 4 50% ングリコール グリセリン 3 50% 聽豆乳 100% 50% 50% 50% 50% 50% 50% 50% 50% 香り官觸 、 3.8 3.0 2.9 1.9 2.2 2.2 1.8 1.6 1.7 麵感官翻 ffi 3.5 1. 1 1.0 2.5 3.3 3.6 0.5 0.4 0.5 点

総合点 7.3 4. 1 3.9 4.4 5.5 5.8 2.3 2.0 2.2 総^ fffi X Δ Δ Δ X X 〇 〇 〇

表 2の結果より発酵豆乳は、 プロピレングリコール、 1 , 3—ブチレングリコ —ル及びグリセリンを用いて抽出したとき、 香り及び使用感の評価が優れている ことがわかった。

試験例 4

ヘアレスマウス皮膚に実施例 2で調製した発酵豆乳のエタノール抽出物及び豆 乳のエタノール抽出物 （いずれも固形物濃度 1. 7重量 ） を 2週間、 1 0 0 ^ / 5 cm³ ノ匹に塗布し、 ヘアレスマウス皮膚のヒアルロン酸含量に及ぼす影 響を検討した。 コントロールを 5 0 %エタノール溶液とし、 サンプルとして、 5 0重量％ (希釈は 5 0 %エタノールで行った） 、 1 0 0重量％の発酵豆乳抽出 物、 及び 1 0 0重量％豆乳抽出物を用いた。 最終塗布 2 4時間後に皮膚を採取し、 橋爪らの方法 （日本油化学会誌 46， 985-989, 1997) で皮膚からヒアルロン酸画 分を調製し、 ピオチン標識ヒアルロン酸結合性タンパク （生化学工業） を用いた E L I SA法 （Fosang, A. J., et al， Matrix, 10, 306-313, 1990) でヒアル 口ン酸を定量した。

その結果、 発酵豆乳抽出物を塗布した場合、 有意にヒアルロン酸含量が増加す ることが示された （図 3) 。 ヒアルロン酸の増加により、 皮膚のしなやかさや弾 力性が向上するものと考えられる。

なお、 同様の試験を実施例 1で調製した 1 , 3 -ブチレングリコール抽出物で も実施したが、 ェタノ一ル抽出物の場合とほとんど同じ結果が得られた。

実施例 3

下記組成の化粧水を常法により製造した。

発酵豆乳エタノール抽出物 （実施例 1にて製造） 1. 0重量％ エタノール 1 0. 0重量％

1 , 3—ブチレングリコール 2. 0重量％ ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 （ 5 0 E. 0. ) 0. 0 5重量％ パラォキシ安息香酸メチル 0. 1重量％ 香料 0. 1重量 9 精製水 残部

得られた化粧水は肌あれ改善作用に優れ、 且つさっぱりとした使用感のもので あった。 また、 保存安定性も良好であった。

実施例 4

下記組成の乳液を常法により製造した。

発酵豆乳エタノ一ル抽出物 （実施例 1にて製造） 1. 0重量％ ステアリン酸 2. 0重量％ 流動パラフィン 6. 0重量％ スクヮラン 2. 0重量％ ソルビタンモノステアレート 1. 5重量％ ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート （2 0 Ε. 0. )

2. 0重量％ パラォキシ安息香酸メチル 0. 0 5重量％

1 , 3—ブチレングリコール 1. 0重量％ 香料 0. 1 5重量 精製水 残部

得られた乳液はしわ改善作用に優れ、 しっとりとした使用感のものであつた。 また保存安定性にも優れていた。

実施例 5

下記組成のクリームを常法により製造した。

発酵豆乳エタノール抽出物 （実施例 1にて製造） 1. 0重量％ 流動パラフィ ン 2 3. 0重量％ ワセリン 7. 0重量％ ベへニルアルコール 1. 0重量％ ステアリン酸 2. 0重量％ ミツロウ 2 . 0重量％ ソルビ夕ンモノステアレ一ト 1 . 5重量％ ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレ一ト （ 2 0 E 0 . )

2 . 5重量％ パラォキシ安息香酸ブチル 0 . 0 5重量％ 1 , 3—ブチレングリコール 3 . 0重量％ パラォキシ安息香酸メチル 0 . 1重量％ 香料 0 . 1 5重量％ 精製水 残部

得られたクリームはしわ改善作用に優れ、 使用感も良好であった。 また保存安 定性にも優れていた。

実施例 6

下記組成の軟膏を常法により製造した。

発酵豆乳エタノール抽出物 （実施例 1にて製造） 5 . 0重量％ 日本薬局方親水軟膏 9 5 . 0重量％ 本軟膏を一日 2回しわの部位に塗布 （2 mg/cm²) したところ、 優れたしゎ改 善作用がみられ、 また、 保存安定性も良好であった。 産業上の利用可能性

本発明の皮膚外用剤及び化粧料は、 しわ改善、 肌荒れ改善効果に優れるため、 皮膚老化防止剤又は肌荒れ改善剤として有用である。 また特定の多価アルコール で抽出した発酵大豆抽出物は、 香り、 使用感にも優れる皮膚外用剤とすることが できる。

Claims

請 求 の 範 囲

1 . ビフィ ドバクテリゥ厶属細菌から選ばれる 1種又は 2種以上の微生物を大 豆抽出液に作用させて得られる発酵生成物から有機溶媒抽出した発酵大豆抽出物 を含有する皮膚外用剤。

2 . 有機溶媒が、 炭素数 1〜1 3の一価又は多価アルコールである請求項〗記 載の皮膚外用剤。

3 . 化粧料である請求項 1又は 2記載の皮膚外用剤。

4 . 皮膚老化防止用化粧料又は肌荒れ改善用化粧料である請求項 1又は 2記載 の皮膚外用剤。