WO1999010001A1

WO1999010001A1 - Agents cancerostatiques

Info

Publication number: WO1999010001A1
Application number: PCT/JP1998/003697
Authority: WO
Inventors: Toshisuke Kawasaki
Original assignee: Takara Shuzo Co., Ltd.
Priority date: 1997-08-21
Filing date: 1998-08-19
Publication date: 1999-03-04
Also published as: DE69836428T2; US20020086817A1; DE69836428D1; US7410953B2; ATE345139T1; KR100497849B1; CN1106846C; AU8748198A; EP1008351A1; EP1008351B1; KR20010021768A; CN1267223A; JP3990736B2; EP1008351A4

Description

明細書

制がん剤

発明の属する技術分野

本発明は、がん細胞、その周辺組織又は非患部組織の特定のタンパク質濃度を増強させることにより、がんの増殖を抑制する、医薬の分野に有用な薬剤に関する。

従来の技術

近年、がん化学療法などを始めとするがん治療法の進歩にはめざましいものがあるが、それでもなお世界中でがんはいまだに死因の主要な位置を占める疾病である。したがって、真に有効な新しいがん治療法の開発が強く望まれている。動物組織や体液中には、血液型認識抗体のような免疫グロプリン以外に糖を認識するタンパク質として「動物レクチン」と総称される一群の機能性タンパク質が存在する。

本発明者は、この動物レクチンに関する研究過程で、カルシウム依存的にマンノース（Man ) や N—ァセチルグルコサミン（GlcNAc) に結合する C型レクチンを哺乳動物肝臓及び血清中に見出し、マンナン結合タンパク質（MBP) と命名している [バイオケミカルアンドバイオフィジカルリサーチコミュニケーシヨンズ (Biochemical and Biophysical Research Communications ) 、第 8 1卷、第 3号、第 10 18〜1024頁（ 1 978 ) 、バイオケミカルアンドバイオフィジカルリサ一チコミュニケ一ションズ、第 95卷、第 2号、第 658〜 664頁（ 1980) ほか] 。

更に、ヒト肝臓及びヒト血清 MB P、並びにその遺伝子を獲得することに成功している [ジャーナルォプバイオケミストリー（Journal of Biochemistry ) 、第 1 1 5巻、第 6号、第 1 148〜 1 1 54頁（ 1 994) ] 。なお、マンナン結合夕ンパク質は、マンノース結合タンパク質あるいはマンナンバインディングレクチンと呼ばれることがある。

本発明者は、この MB Pの構造と機能に関する研究を進める中で、血清 MBP が抗体や補体成分である C 1 αに依存することなく、古典経路、あるいはレクチン経路を介して補体系を活性化していることを明らかにしている。更に、血清 M B Pは直接的な生体防御作用を有していることが知られている。例えば、ヒト免疫不全ウィルスのエンベロープ糖タンパク質上のハイマンノース型糖鎖に結合することによって感染を抑制したり、酵母やある種のグラム陰性細菌に対してファゴサイトによる除去を促進することが知られている。

しかしながら、 M B Pのがん細胞あるいはがん組織に対する作用はこれまで全く知られていなかった。

発明が解決しょうとする課題

本発明の目的は、がん細胞、その周辺組織又は非患部組織のがんの増殖を抑制させる薬剤を提供することにある。

課題を解決するための手段

本発明者は、上記目的を達成するために、 M B Pの構造並びに機能について、種々研究を行っていたところ、驚くべきことに、 M B Pをコードする遺伝子を投与した担がん動物と、 M B Pをコードする遺伝子を投与していない担がん動物とでは、明らかに MB Pをコードする遺伝子を投与した担がん動物のがん細胞の増殖能が抑制されていることを見出し、本発明を完成した。

本発明を概説すれば、本発明は、マンナン結合タンパク質又はその遺伝子を有効成分とすることを特徴とする制がん剤に関する。

図面の簡単な説明

図 1はワクシニアウィルスベクタ一 p B S F 2 - 1 6の制限酵素地図を示す図である。

図 2は M B P発現プラスミド p B S F 2— 1 6 /M B Pの模式図を示す図である。

図 3はインビボでの制がん効果評価実験の結果を示す図である。

発明の実施の形態

以下、本発明を具体的に説明する。

本明細書において、 M B Pとは、天然型の M B Pのみならず、 M B Pとしての活性を有する限り天然型のアミノ酸配列中、アミノ酸残基の置換、欠失、付加、挿入等によりアミノ酸配列が改変されたタンパク質をも本発明に含む意味である

。また、ここで言う天然型 MB Pとしては、例えばヒト又はゥサギ由来のものが挙げられるが、本発明においてはこれらに限定されるものではなく、他の動物、植物等の生物体由来のもの、あるいは細菌類、酵母類、放線菌類、糸状菌類、子嚢菌類、担子菌類等の微生物由来のものも含まれる。

本明細書において、 MBPをコードする遺伝子とは、上述した MBP及び MB P活性を有するタンパク質をコ一ドする遺伝子であれば、特に限定されるものではなく、該遺伝子に対し、遺伝子工学的な置換、欠失、付加、挿入等の変異処理を行ったものでも、 MBP活性を有しているタンパク質をコ一ドする遺伝子であれば、本発明に含まれる。

本発明においては、がん細胞、その周辺組織又は非患部組織に MB Pを導入することによってその目的を達成することができる。 MBPを導入するには、例えばマイクロインジェクション法のような、がん細胞への直接投与法などによって MB Pの活性を保持したままで、がん細胞に直接導入してもよいし、皮下投与法あるいは静脈内投与法等によって MB P活性を保持したままで導入してもよい。また、例えばウィルス等を使って MB Pをコ一ドする遺伝子をがん細胞へ導入してもよいし、皮下投与法等により MB Pをコ一ドする遺伝子をがん細胞へ導入し、 MB Pを発現させることによって本発明の目的を達成することができる。

すなわち、本発明の薬剤を用いれば MB P又は MB Pをコ一ドする遺伝子をがん細胞、その周辺組織又は非患部組織に導入することができ、がんの増殖を抑制することができる。

MB P又は MB Pをコードする遺伝子は、組織表面の患部あるいはその周辺組織に直接注入すればよい。また、組織内部の患部、その周辺組織にも直接注入すればよいが、ドラグデリバリーシステム（DDS) を応用することもできる。 D DSとしては、がん細胞に特異的なシステムであれば良く、例えば、がん細胞リセプ夕一、がん特異抗体等を利用した一般的なシステムから選択すれば良い。また、周辺組織の特定の臓器あるいは細胞に特異的なリガンド、リセプ夕一を利用してそれらの臓器に MB Pを特異的に導入させることもできる。なお、がん組織を外科手術的に摘出した後、非がん部に本発明の薬剤を適用するのも、微小がんの増殖抑制に極めて有効な方法である。

本発明の MB P又は MB Pをコ一ドする遺伝子を有効成分とする薬剤を、がん細胞、その周辺組織又は非患部組織に使用する場合、上記薬剤が最も効果的に効くようにするのは当然である。本発明の制がん剤は、 MB P又は MB Pをコードする遺伝子を医薬として許容される範囲で含有していれば良く、通常の遺伝子治療剤、タンパク質含有剤と同様に製剤化することができ、製剤中には担体、賦形剤、安定化剤、粘稠化剤等が含有されていても良い。

本発明の制がん剤として用いられる MB P又は MB Pをコ一ドする遺伝子の使用量は、その製剤形態、使用方法及び該薬剤を使用する患者の年齢、体重、疾患の進行度等を考慮した上で、適宜設定、調節すればよい。例えば、タンパク質の場合、成人 1回当り 0. 01〃g〜l g/kgである。また、タンパク質発現用組換えウィルスを使用する場合、成人 1回当り l x l 0² 〜l x l 0¹²PFU ( プラーク形成ユニット）を使用する。当然、使用量は種々の条件によって変動するものであるので、上記の使用量より少ない量で十分な場合、あるいは範囲を超えて必要な場合もある。

本発明の制がん剤に含有される MB P又は MB Pをコ一ドする遺伝子は、生体内物質であり、毒性は無い。

本発明で用いられる MB Pについては、既にその詳細なタンパク質化学的性質が明らかにされており、例えばヒト血清から川寄らの方法 [ジャーナルォブバイオケミストリ一、第 94巻、第 3号、第 937〜947頁（ 1983) ] に従って、下記表 1に示す工程により調製することができる。ェ程比活性収率

〔ュニット /夕ンパ ( ) ク質量（/ g) 〕丄 * U · )\)ϋ 100

2. セファロース 4 B—マンナン 1 19.7 4.5

3. セファロース 4 B—マンナン 2 70.9 51.5

4. セファロース 4 B—マンナン 3 79.5 43.6

5. セファロース CL— 6 B 160.6 29.6

MB Pの結合活性は、ジャーナルォブバイオケミストリ一、第 94卷、第 3号、第 937〜947頁（1983) に記載の方法に準じ、 ¹²⁵ Iでラベルされたマンナン（ I -mannan) を用いて測定することができる。 MB Pの比活性は、結合した'²⁵ I— mannan (ng) /タンパク質量（〃g) で表す。タンパク質量は、牛血清アルブミンを標準物質として、ローリ一法で測定する。

MB Pをコードする遺伝子は、例えばヒト肝臓 cDNAライブラリーから倉田らの方法 [ジャーナルォブバイオケミストリ一、第 115卷、第 6号、第 1 148〜： 1154頁（1994) ] によって得ることができる。

この方法により得られるヒト MB Pの成熟タンパク質のアミノ酸配列は、配列表の配列番号 1に、それらをコードする遺伝子の塩基配列を配列表の配列番号 2 に示す。

これらの遺伝子若しくはその一部をプローブとして用いることにより、該遺伝子にハイブリダィズし、かつ、 MBP活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を調製することができる。また、これらの遺伝子若しくはその一部からプライマ一をデザインし、このプライマーを用いて P CR反応を行うことにより、 MB P活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を調製することもできる。ハイブリダィゼ一シヨンの方法としては、例えば、生物体又は微生物等から得たゲノム DNAあるいは c DNAライブラリーを固定化したナイ口ン膜を作製し、 0. 5%SD S、 5 Xデンハルヅ [Denhardt，s、 0. 1%ゥシ血清アルブミン

(B SA) 、 0. 1 %ポリビニルピロリドン、 0. 1%フイコール 400] 、 1 0 サケ精子 DNA及び 6 X S S C ( l x S S Cは、 0. 15M NaC l 、 0. 0 1 5Mクェン酸ナトリウム、 pH7. 0) を含むプレハイブリダィゼーシヨン溶液中、 65 °Cでナイロン膜をブロッキングする。その後、 " Pでラベルした各プローブを加えて、 65°Cで 4時間〜一晚保温する。このナイロン膜を 6 xS SC中、室温で 10分間、 0. 1%SD S中、 45 °Cで 30分間洗浄した後、ォ一トラジオグラフィーをとつてプローブとハイプリダイズする DN Aを検出することができる。また、洗いなどの条件を変えることにより様々な相同性を示す遺伝子を得ることができる。

配列表の配列番号 2で表される遺伝子に対し、遺伝子工学的な置換、欠失、付加、挿入等の変異処理等を行うことによつても、配列表の配列番号 2で表される遺伝子にハイブリダィズし、かつ M B P活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を調製することができる。

変異処理を行う方法としては、例えば、アンバー変異を利用する方法 [ギヤップドデュプレックス（gapped duplex ) 法、ヌクレイックァシッズリサ一チ（Nucleic Acids Research) 、第 12巻、第 24号、第 9441〜 9456頁

( 1984) ] 、制限酵素部位を利用する方法 [アナリティカルバイオケミストリ一（Analytical Biochemistry ) 、第 200卷、第 8 1〜 88頁（ 1 992 ) 、ジーン（Gene) 、第 102卷、第 67〜 70頁（ 199 1) ] 、 dut (dU TPase ) と ung (ゥラシル D N Aグリコシラーゼ）変異を利用する方法 [クンケル（Kunkel) 法、プロシ一ディングズォブザナショナルアカデミーォブサイエンシーズォブザ U S A (Proceedings of the National Acad emy of Sciences of the USA) 、第 82卷、第 488〜 492頁（ 1985) ] 、 D N Aポリメラ一ゼ及び D N Aリガーゼを用いたアンバー変異を利用する方法

[オリゴヌクレオチド一ダイレクティッドデュアルアンバー（Oligonucleot ide- directed Dual Amber 、 ODA) 法、ジーン、第 152卷、第 27 1〜 27 5頁（ 1995 ) ] 、制限酵素の認識部位を付加した 2種類の変異導入用プライマ一を用いた P CI こよる方法（米国特許第 5, 5 12, 463号）等を利用することができる。

また、市販されているキット、例えば、ギャップドデュプレックス法を用いたミュータン一 G [ Mutan (登録商標） - G、宝酒造社製] 、クンケル法を用いた

—ヽ

ユータン— K [ Mutan (登録商標） - K、宝酒造社製] 、 OD Α法を用いたミュ

—タン一エキスプレス Km [ Mutan (登録商標） -Express Km 、宝酒造社製] 、変異導入用プライマーとピロコッカスフリオサス（Pyrococcus furiosus ) 由来 DN Aポリメラ一ゼを用いたクイックチェンジサイト一ダイレクティヅドミュー夕ジエネシスキッ卜 [QuikChange^TM Site-directed Mutagenesis Kit 、ストラタジーン（STMTAGENE) 社製] 、 P C R法を利用する T a K a R a L A— PCR インビトロミュータジエネシスキット（TaKaRa LA-PCR in V itro Mutagenesis Kit、宝酒造社製）、ミュータン—スーパ一エキスプレス Km [ Mutan (登録商標） -Super Express Km、宝酒造社製] 等を利用することができる。

こうして得られた遺伝子が、 MB P活性を有するタンパク質をコードする遺伝子であるかどうかは、ジャーナルォブバイオケミストリ一、第 94卷、第 3 号、第 937〜947頁（ 1983 ) 又はジャーナルォブバイオケミストリ ―、第 1 1 5巻、第 6号、第 1 148〜 1 1 54頁（1994) 記載の方法に従い、 MB P活性を測定することにより確認することができる。

これらの遺伝子、及び該遺伝子により得られる発現タンパク質も本発明の薬剤として使用することができる。

MBPをコ一ドする遺伝子そのものを用いて、本発明の薬剤をがん細胞に導入する場合、例えば MB Pをコードする遺伝子と、これに関係する調節遺伝子を持つ組換えベクターを使用することで、簡単に MB Pをコ一ドする遺伝子を導入することができる。調節遺伝子としては、 MB Pをコードする遺伝子そのもののプ口モーター以外にも、もちろん他の有効なプロモ一夕一、例えばワクシニアウイルス A型封入体（A T I ) プロモ一夕一、 S V 4 0プロモ一夕一、レトロウィルス由来 L T Rプロモ一夕一、ヒートショックプロモーター、メタ口チォネインプロモ一夕一、ァクチンプロモ一夕一等を有するベクタ一を使用することができるこれらべクタ一は、細胞中の染色体外にとどまるようなベクタ一の形で、がんあるいはまだがん化していない細胞に導入することができる。このような状態では、遺伝子は染色体外の位置から細胞によって発現され、 M B Pを生産し、細胞内の M B P濃度を増加することができ、本発明の目的を達成することができる。染色体外保持用ベクターは、当該分野において知られており、適切なベクターが用いられる。該ベクタ一を細胞内に導入する方法としては、例えば、電気穿孔法、リン酸カルシウム共沈法、ウィルス形質導入法などが当該分野において知られており、どのような方法を選択するかは日常的作業の範囲である。

また、 M B Pをコードする遺伝子を染色体内に組込まれるようなベクターの形で、がんあるいはまだがん化していない細胞に導入することができる。このような状態では、遺伝子は染色体中に保持され、細胞によって発現され、 M B Pを生産し、細胞内の M B P濃度を増加することができ、本発明の目的を達成することができる。

細胞への M B P遺伝子導入には、ウィルスベクタ一を使用することにより、当該遺伝子を含むベクターを効率よく導入することができる。これらのベクタ一としては、従来から目的の D N Aを細胞に輸送することが知られており、かつ感染効率の高いワクシニアウィルスベクタ一、レトロウイルスベクタ一、アデノウィルスベクター、アデノ随伴ウィルスベクターあるいは非増殖性組換えウィルスべクタ一等を用いることができる。特に、非増殖性組換えウィルスベクタ一は目的の細胞等に導入後、この組換えウィルスは増殖しないために 2週間から 2ヶ月ごとに毎回用いる必要はあるが、その際に投与量の調節を行えるという利点もある。また、非ウィルスベクターである、脂質を用いて人工的に作製した球状カプセルのリボソーム、例えば、膜結合リポソ一ムゃカチォニックリボソーム等を用いることも可能である。本発明の薬剤として望ましい組換えウィルスの構築方法としては、例えば次に示すような方法があげられる。ヒト MBPの cDNAを、アーカイブスォブビロロジー（Archives of Virology)、第 138卷、第 315〜 330頁（19 9 ) 記載の方法で構築したワクシニアウィルスベクタ一 pB S F 2 - 16 (図 1 ) の Smalと Saclサイトに導入し、 AT Iハイブリッドプロモ一夕一（ 7. 5 k D aプロモーターを直列に数個並べたものと、 AT Iプロモ一夕一を組合せたプ口モーター）で制御される MBPの組換えベクター pBSF2— l 6/MBP ( 図 2 ) を作製する。この組換えべクタ一 pB S F 2 - 16/MBPと野生型ワクシニアウィルス DNAを COS— 7細胞に、コトランスフエクトし、生じる組換えワクシニアウィルスを、例えばへマグルチニンフヱノタイプ、あるいは MB Pの発現量によつて選抜することにより、 MBP発現組換えヮクシニアウィルスを得ることができる。

制がん効果に関しては、例えばヒトがん細胞をヌードマウスに接種後、本発明の薬剤を投与し、その後のがん組織の増殖能を測定することによって、がん増殖抑制効果を評価することができる。すなわち、ヒト結腸がん細胞株 SW1116 を K SNヌードマウスの皮下に接種し、その 3週間後に先に述べた MB P発現組換えワクシニアウィルスを、腫瘍内投与あるいは非患部の皮下に投与する。その 2週間後、更にもう一度 MB P発現組換えワクシニアウィルスを同様の方法で投与し、投与後の腫瘍の大きさを測定することによりがん細胞の増殖抑制能を評価することができる。

実施例

以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に示すが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

実施例 1

発現ベクター及び組換えワクシニアウィルスの構築

ヒト MBPのコ一ディング領域全長を含む cDN Aクローン H— 3— 1 [ジャ —ナルォブバイオケミストリ一、第 115巻、第 6号、第 1148〜115 4頁（ 1994) ] を、ワクシニアウィルスベクタ一 pB S F 2 - 16 [ァ一力ィブスォブビロロジ一、第 138卷、第 315〜 330頁（1994) ] の AT Iハイブリッドプロモ一夕一（ 7. 5 kD aプロモーターを直列に数個並べたものと、 AT Iプロモ一夕一を組合せたプロモー夕一）のすぐ下流、 Smalと Sa clサイトにサブクローニングし、 AT Iハイブリヅドプロモーターで制御される MB P発現プラスミド pBSF2_ 16 /MB Pを作製した。

図 1にワクシニアウィルスベクター pB S F 2 - 16の制限酵素地図を示す。また、図 2に MB P発現プラスミド pB S F 2— 16 ZM B Pの模式図を示す。次に、 IBT (ィサチン—/?—チォセミカルバゾン）依存性ワクシニアウィルス株 [ピロロジー（Virology) 、第 155卷、第 97〜： L 05頁（ 1986 ) ] を〇03— 7細胞（八丁( 〇 CRL 1651 ) に感染させた。この IB T依存性ワクシニアウィルス株を感染させた CO S— 7細胞に、 pBSF2— 16 /M BPと野生型ワクシニアウィルス WR株のビリオンから抽出したゲノム DN Aを、 DOTAP試薬（ベ一リンガーマンハイム社製）を用いて導入し、 MBP組換えワクシニアウィルスを作製した。

なお、組換えワクシニアウィルスは、アーカイブスォブヴィロロジー、第 138卷、第 315〜 330頁（1994) 記載の方法に従い、へマグルチニンフエノタイプによって選抜し、 RK— 13細胞（ATCC CCL37) 中で E L I S A法によって検出した。ウィルスの夕イタ一は、プラーク形成法によつて測定し、プラーク形成ユニット（PFU) として表した。

実施例 2

制がん効果の評価

インビボ（in vivo ) での制がん効果の評価は、次のようにして行った。ヒト結腸がん細胞 SW1116株（ATCC CCL233) を KSNヌードマウス（日本エスエルシ一株式会社製）の皮下に、マウス 1匹当り 10'個接種し、その 3週間後に実施例 1で述べた MBP組換えワクシニアウィルスを、マウス 1匹当り 5x l O^E PFUを患部の腫瘍内、あるいは非患部の皮下に投与した。コントロールとして野生型ワクシニアウィルス WR株を同量、患部の腫瘍内に投与した。その 2週間後、更にもう一度、同量の M B P組換えワクシニアウィルス、あるいは野生型ワクシニアウィルス WR株を同様の方法で投与し、投与後の腫瘍の大きさを測定することにより、がん細胞の増殖抑制能を評価した。

なお、対照として、生理食塩水を非患部の皮下に投与した群を用いた。その結果を図 3に示す。すなわち図 3は、インビボでの制がん効果評価実験の結果を示す図であり、縦軸は腫瘍の大きさ（mm) を、横軸はがん細胞移植後の週数を示す。図中、黒四角印は生理食塩水を非患部の皮下に投与した群を示し、白丸印は野生型ヮクシニアウィルス WR株を患部の腫瘍内に投与した群を示し、黒丸印は M B P組換えワクシニアウィルスを患部の腫瘍内に投与した群を示し、黒三角印は M B P組換えワクシニアウィルスを非患部の皮下に投与した群を示す。また、図中の矢印は、 M B Pワクシニアウィルス、野生型ワクシニアウィルス WR株及び生理食塩水をそれそれ投与した週を示す。

図 3から明らかなように、本発明の M B P組換えワクシニアウイルスを患部の腫瘍内に投与した場合、腫瘍が明らかに小さくなることが観察され、また、非患部の皮下に投与した場合でも、コントロールの野生型ワクシニアウィルス WR株及び生理食塩水を投与したものと比べると、顕著ながん細胞の増殖抑制が観察された。

発明の効果

本発明によって、がん細胞中、その周辺組織又は非患部組織の M B P濃度を増強させる、すなわち M B P又はその遺伝子を有効成分とすることを特徴とする制がん剤が提供された。該制がん剤は、がんの治療の分野で有用である。配列表配列番号： 1

配列の長さ： 228

配列の型：アミノ酸

鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状

配列の種類：ペプチド

配列：

Glu Thr Val Thr Cys Glu Asp Ala Gin Lys Thr Cys Pro Ala Val

1 5 10 15 lie Ala Cys Ser Ser Pro Gly l ie Asn Gly Phe Pro Gly Lys Asp

20 25 30

Gly Arg Asp Gly Thr Lys Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Gin Gly

35 40 45

Leu Arg Gly Leu Gin Gly Pro Pro Gly Lys Leu Gly Pro Pro Gly

50 55 60

Asn Pro Gly Pro Ser Gly Ser Pro Gly Pro Lys Gly Gin Lys Gly

65 70 75

Asp Pro Gly Lys Ser Pro Asp Gly Asp Ser Ser Leu Ala Ala Ser

80 85 90

Glu Arg Lys Ala Leu Gin Thr Glu Met Ala Arg l ie Lys Lys Trp

95 100 105

Leu Thr Phe Ser Leu Gly Lys Gin Val Gly Asn Lys Phe Phe Leu

110 115 120

Thr Asn Gly Glu l ie Met Thr Phe Glu Lys Val Lys Ala Leu Cys

125 130 135

Val Lys Phe Gin Ala Ser Val Ala Thr Pro Arg Asn Ala Ala Glu

140 145 150

Asn Gly Ala lie Gin Asn Leu l ie Lys Glu Glu Ala Phe Leu Gly

155 160 165 lie Thr Asp Glu Lys Thr Glu Gly Gin Phe Val Asp Leu Thr Gly

170 175 180

Asn Arg Leu Thr Tyr Thr Asn Trp Asn Glu Gly Glu Pro Asn Asn 185 190 195

Ala Gly Ser Asp Glu Asp Cys Val Leu Leu Leu Lys Asn Gly Gin

200 205 210

Trp Asn Asp Val Pro Cys Ser Thr Ser His Leu Ala Val Cys Glu

215 220 225

Phe Pro l ie 配列番号： 2

配列の長さ： 684

配列の型：核酸

鎖の数：二本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類： cDNA to genomic RNA

配列：

GAAACTGTGA CCTGTGAGGA TGCCCAAAAG ACCTGCCCTG CAGTGATTGC CTGTAGCTCT 60 CCAGGCATCA ACGGCTTCCC AGGCAAAGAT GGGCGTGATG GCACCAAGGG AGAAAAGGGG 120 GAACCAGGCC AAGGGCTCAG AGGCTTACAG GGCCCCCCTG GAAAGTTGGG GCCTCCAGGA 180 AATCCAGGGC CTTCTGGGTC ACCAGGACCA AAGGGCCAAA AAGGAGACCC TGGAAAAAGT 240 CCGGATGGTG ATAGTAGCCT GGCTGCCTCA GAAAGAAAAG CTCTGCAAAC AGAAATGGCA 300 CGTATCAAAA AGTGGCTGAC CTTCTCTCTG GGCAAACAAG TTGGGAACAA GTTCTTCCTG 360 ACCAATGGTG AAATAATGAC CTTTGAAAAA GTGAAGGCCT TGTGTGTCAA GTTCCAGGCC 420 TCTGTGGCCA CCCCCAGGAA TGCTGCAGAG AATGGAGCCA TTCAGAATCT CATCAAGGAG 480 GAAGCCTTCC TGGGCATCAC TGATGAGAAG ACAGAAGGGC AGTTTGTGGA TCTGACAGGA 540 AATAGACTGA CCTACACAAA CTGGAACGAG GGTGAACCCA ACAATGCTGG TTCTGATGAA 600 GATTGTGTAT TGCTACTGAA AAATGGCCAG TGGAATGACG TCCCCTGCTC CACCTCCCAT 660 CTGGCCGTCT GTGAGTTCCC TATC 684

Claims

請求の範囲

1. マンナン結合タンパク質又はその遺伝子を有効成分とすることを特徴とする制がん剤。

2. マンナン結合タンパク質が、配列表の配列番号 1に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質である請求の範囲 1記載の制がん剤。

3. マンナン結合タンパク質が、配列表の配列番号 1に記載のアミノ酸配列において、 1個若しくは複数個のアミノ酸残基が置換、欠失、付加若しくは挿入の少なくとも 1つがなされているアミノ酸配列を有し、かつ、マンナン結合タンパク質としての活性を有するタンパク質である請求の範囲 1記載の制がん剤。

4. 遺伝子が、配列表の配列番号 1で表されるアミノ酸配列をコードする遺伝子、又は該遺伝子を含む遺伝子である請求の範囲 1記載の制がん剤。

5. 遺伝子が、配列表の配列番号 2で表される遺伝子、又は該遺伝子を含む遺伝子である請求の範囲 4記載の制がん剤。

6. 遺伝子が、配列表の配列番号 1で表されるアミノ酸配列において、 1個若しくは複数個のアミノ酸残基が置換、欠失、付加若しくは挿入の少なくとも 1つがなされており、かつ、マンナン結合タンパク質としての活性を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は該遺伝子を含む遺伝子である請求の範囲 1記載の制がん剤。

7. 遺伝子が、配列表の配列番号 2で表される遺伝子にハイブリダィズし、かつ、マンナン結合タンパク質としての活性を有するタンパク質をコードする遺伝子、又は該遺伝子を含む遺伝子である請求の範囲 1記載の制がん剤。

8. 請求の範囲 4 ~ 7のいずれか 1項に記載の遺伝子が、ベクターに組込まれていることを特徴とする請求の範囲 1に記載の制がん剤。

9. ベクタ一が、プラスミドベクターである請求の範囲 8記載の制がん剤。

10. ベクタ一が、ウィルスベクタ一である請求の範囲 8記載の制がん剤。

11. ウィルスベクターが、ワクシニアウィルスベクタ一である請求の範囲 1 0 記載の制がん剤。