UA78738C2 - Composition containing cowpox virus and method for its preparation - Google Patents
Composition containing cowpox virus and method for its preparation Download PDFInfo
- Publication number
- UA78738C2 UA78738C2 UA20040705588A UA20040705588A UA78738C2 UA 78738 C2 UA78738 C2 UA 78738C2 UA 20040705588 A UA20040705588 A UA 20040705588A UA 20040705588 A UA20040705588 A UA 20040705588A UA 78738 C2 UA78738 C2 UA 78738C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- composition
- temperature
- product
- composition according
- buffer
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 182
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 48
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 title claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 39
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims abstract description 27
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 31
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 30
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 29
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 22
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 21
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 21
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 19
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 18
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 12
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 10
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 7
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 claims description 7
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 claims description 7
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 claims description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 2
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 claims description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 79
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 51
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 13
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 9
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 description 3
- 239000004484 Briquette Substances 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- 241001183012 Modified Vaccinia Ankara virus Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 2
- 101100533283 Dictyostelium discoideum serp gene Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 208000005585 Poxviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 229920005549 butyl rubber Polymers 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 238000005443 coulometric titration Methods 0.000 description 2
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M monosodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M 0.000 description 2
- 239000004223 monosodium glutamate Substances 0.000 description 2
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 229940083538 smallpox vaccine Drugs 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- FHYAUNJNVMGZQN-NHCUHLMSSA-N (2r,3r)-5-iodo-3-(4-phenylpiperidin-1-yl)-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-2-ol Chemical compound C1CN([C@@H]2CC3=C(I)C=CC=C3C[C@H]2O)CCC1C1=CC=CC=C1 FHYAUNJNVMGZQN-NHCUHLMSSA-N 0.000 description 1
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 108010040864 CERE Proteins 0.000 description 1
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700664 Capripoxvirus Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 241001562081 Ikeda Species 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 241000700639 Parapoxvirus Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010037888 Rash pustular Diseases 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000287219 Serinus canaria Species 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical class [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700568 Suipoxvirus Species 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 201000003740 cowpox Diseases 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000004455 differential thermal analysis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- -1 glucose Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000006911 nucleation Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010587 phase diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 208000029561 pustule Diseases 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- OJLGASCOGOIOJR-UHFFFAOYSA-N soyasaponin gammag Natural products CC1=C(O)C(=O)CC(OC2CC(C)(C)CC3C4=CCC5C6(C)CCC(OC7OC(C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(=O)O)C(C)(CO)C6CCC5(C)C4(C)CCC23C)O1 OJLGASCOGOIOJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013097 stability assessment Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 238000004017 vitrification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Опис винаходу
Даний винахід відноситься до складу, зокрема водного складу, який містить (ії) поксвірус одного з родів 2 ортопоксвірус, авіпоксвірус, парапоксвірус, капріпоксвірус та суіпоксвірус, (ії) дисахарид, (КкК(іїї) фармацевтично прийнятний полімер або, необов'язково, (ім) буфер. Водний склад є, зокрема, прийнятним для сублімаційної сушки, в результаті якої одержують стійку, ліофільно висушену композицію, яка містить поксвірус. Винахід також стосується способу виготовлення ліофільно висушеної композиції, яка містить поксвірус та продукту, одержаного таким чином. 70 Рохмігідаеє являє собою велике сімейство сукупності ДНК-вірусів, котрі реплікуються в цитоплазмі клітин хребетних та безхребетних. У людей віспа була найбільш поширеною поксвірусною інфекцією. Збудником хвороби віспи є вірус віспи, який є членом родини Огіпорохмігиз. Вірус коров'ячої віспи, котрий також є членом родини Огіпорохмігиз сімейства Рохмігідае, використовувався як жива вакцина для імунізації проти хвороби віспи. Всесвітня вакцинація вірусом коров'ячої віспи призвела до знищення вірусу віспи Глобальне 12 знищення хвороби віспи. Заключний звіт всесвітньої комісії по засвідченню знищення віспи; Історія охорони здоров'я, Мо4, Женева: Всесвітня Організація Здоров'я, 1980). В той же час більшість запасів інфекційних вірусів віспи було знищено. Однак не можна виключати того факту, що поксвіруси, котрі викликають віспу, або захворювання подібні до віспи можуть знову стати основною проблемою охорони здоров'я. Саме тому необхідно мати можливість для виготовлення стабільних вакцин проти поксвірусних інфекцій, зокрема, проти інфекцій віспи, наприклад вакцин на основі вірусу коров'ячої віспи.
У минулому віруси коров'ячої віспи також використовувалися для створення вірусних векторів для експресії рекомбінантних генів та для можливості їх використання як рекомбінантних живих вакцин (Маскей, М., Зтій,
С.І. апа Мозз, В. (1982) Р; М. А. 5. ОБА 79, 7415-7419; тій, С.І1., Маскей, М. апа Мозз, В. (1984)
ВіоїесппоІоду апа Сепеїйіс Епдіпеегіпд Кеміемув 2,383-407). Це було пов'язано зокрема з тим, що в геном вірусу с коров'ячої віспи за допомогою методу рекомбінації ДНК були введені послідовності ДНК (гени), які кодують Ге) чужорідні антигени. Якщо ген інтегровано в ділянку вірусної ДНК, котра не є життєво важливою для життєвого циклу вірусу, може так статися, що новопродуковані рекомбінантні віруси коров'ячої віспи будуть інфекційними, тобто вірус здатен інфікувати інші клітини й таким чином експресувати інтегровану послідовність ДНК (ЕР 83286 та ЕР 110385). со
Рекомбінантні віруси коров'ячої віспи одержані таким чином, можуть бути використані з одного боку як живі со вакцини для профілактики інфекційних захворювань, а, з іншого, для виготовлення гетерологічних протеїнів в еукаріотичних клітинах. Іншими прикладами рекомбінантних вірусів коров'ячої віспи є віруси, що містять в терапевтичні гени, такі як суїцидні гени, гени рибозиму, антисмислові гени. с
Модифікований вірус коров'ячої віспи Анкара (ММА) є відомим як виключно безпечний. ММА був одержаний 3о довготривалими послідовними пасажами штаму Анкара вірусу коров'ячої віспи (СМА) на курячих в ембріофібробластах |для огляду див. Мауг, А., Носпзвіеїіп-МіпігеІ, М. та сКІ, Н. (1975) Іптесіоп 3,6-14;
Зулівв Раїепі Мо. 568,392). Зразками штамів вірусу ММА, які депоновано у відповідності із вимогами
Будапештської угоди є штами ММА 572, депонований в Європейській Колекції Тваринних Клітинних Культур « (ЕСАСС), Салісбері (ШК) під депозитним номером ЕСАСС М94012707, ММА 575, депонований під ЕСАСС З 40. М00120707 та ММУА-ВМ, з депозитарним номером ЕСАСС МО0083008. с ММА є відомим своїми значною ослабленістю, що визначається його низькою вірулентністю або
Із» інфективністю при збереженні гарної імуногенності. Вірус ММА був досліджений для визначення змін в геномі порівняно із штамом СМА природного типу. Було визначено шість основних делецій в геномній ДНК (делеції І, ІІ,
Ш, М, М, та МІ), які разом мають 31000 пар основ |Меуег, Н., ЗЇиЧег, б. апа Мауг А. (1991) 9. СепМігої. 72,1031-1038). Одержаний вірус ММА стає жорстко обмеженим клітиною-хазяїном до клітин птахів. Також ММА 7 характеризується своєю надзвичайною ослабленістю. При тестуванні на різноманітних тваринних моделях було
Ге | доведено його вірулентність лише у тварин з пригніченим імунітетом. Більш важливим є те, що відмінні якості штаму ММА було показано при широких клінічних випробуваннях І(Мауг еї аї., 2БІ. Вакі. Нусд.І, АБ. Ога. В це. 167,375-390 (19871, ЗИСК! ей а), Оі8сй. тей. МУвзспг. 99,2386-2392 |19741). Під час цих досліджень на більш со 20 ніж 120тис. людей, включаючи пацієнтів високого ризику, не було виявлено жодних побічних ефектів пов'язаних із використанням вакцини ММА. Вже створений та використовується в клінічних дослідженнях рекомбінантний со ММА придатний для використання як вакцина дивись, наприклад, МУ097/023551. У М/О 98/13500) описується рекомбінантний ММА, який містить й здатний експресувати послідовності ДНК, що кодують антигени вірусу тропічної лихоманки. Чужорідні послідовності ДНК були рекомбіновані у вірусну ДНК у сайт делеції, що природно 29 зустрічається в геномі ММА.
ГФ) Штам ММА, депонований в Європейській Колекції Культур Тваринних Клітинних (ЕСАСС), Салісбері, ОК під депозитним номером М00083008 демонструє навіть більшу ослабленість та поліпшені характеристики безпеки. о Крім того, вірус коров'ячої віспи та інші поксвіруси використовувалися як вектори для доставки генетичної інформації у клітини ссавців. У цьому контексті робляться посилання на авіпоксвіруси, такі як поксвіруси 60 птахів. Поксвіруси птахів, що містять у своєму геномі гени НІМ описано у (05 5,736,368 та 05 6,051,4101.
Способи виготовлення композицій, які містять поксвіруси і придатні для використання у якості вакцин добре відомі спеціалістам у даній галузі техніки |дивись, наприклад, оКіїК МУ.К., Мігооду (1962), 18, 9-18;
Кісніег, К.Н., Арпапаіпдеп аз дет Випдездезипанеїйїзаті (1970), 9, 53-57).
Відомо результати очистки у водних, поксвірусвмісних розчинах або поксвірусвмісних осадах. Поксвіруси у бо цих розчинах та осадах нестабільні, тобто інфекційність цих вірусів швидко зменшується. Однак важливим є той факт, що вакцина може бути збережена та переведена у стабілізовану форму, особливо у тих випадках, коли вакцини необхідно транспортувати у тропічні регіони з обмеженою інфраструктурою. Ліофільно висушений продукт може зберігатися при температурах в межах від 49С до 252. Це очевидна перевага у порівнянні зі стандартними умовами зберігання рідких складів, які необхідно зберігати при нижчих температурах
ІСтуоргезегуайоп апа іееле-агуіпд ргоїосоїз Мау у, Мсіейап М; Меїйодз іп Моїіесшіаг Віоіоду, 38,1995,
Нитапа Ргеззві.
Відомими та придатними для цієї мети є способи ліофільної сушки поксвірусів, зокрема вірусу коров'ячої віспи та вірусовмісних композицій та розчинів ІВигКе еї аї., Стгйіса! Кеміемуз іп Тпегареціїс ЮОгид Саттіег 70 Зузіетв (1999), 16, 1-83). У загальних рисах ліофільна сушка вакцини включає заморожування водного розчину, котрий містить вакцину та придатний для ліофільної сушки, наступне видалення води сублімацією за умов пониженого тиску та низьких температур, та подальше видалення води десорбцією за умов зниженого тиску та підвищеної температури.
Відомі поксвірусвмісні композиції для ліофільного висушування мають важливі недоліки. Багато з відомих 75 Композицій для ліофільної сушки, які містять вірус коров'ячої віспи, містять пептон або гемасел, котрі є, як правило, речовинами тваринного походження. Однак, викликає занепокоєння той факт, що захворювання тварин, такі як ВЕ можуть передаватися від тварин до людей через продукти тваринного походження, такі як пептон, желатин або гемасел. Більше того, поксвіруси у відомих вірусовмісних композиціях для ліофільної сушки знаходяться у неочищеному вигляді. Таким чином, відомі з рівня техніки композиції для ліофільної сушки, які го Містять поксвіруси містять, між іншим велику кількість протеїнів із клітин з клітинних або тканинних культуральних систем та з бичачої сироватки, яка використовується для культивації клітин, відповідно.
Спеціалістам у даній галузі також відомі ліофільно висушені композиції, котрі не містять додаткових компонентів тваринного походження (наприклад, пептон або гемасел). В цьому випадку композиції містять окремо або в певних співвідношеннях: глутамат натрію, сорбітом, лактозу, солі, амінокислоти та гліцерин. с
Однак, продукт, отриманий після ліофільної сушки частіш за все виявляється нестабільним, тобто, загальні втрати вірусу при зберіганні виявляються невиправдано великими. Більше того, було показано, що поксвірус о тяжіє до утворення агрегатів в деяких із цих композицій та те, що інші складники преципітуються перед або під час заморожування.
В Іпатенті О5 3,577,526| розкривається вакцина віспи, яка відрізняється тим, що вона виготовлена з с зо подрібненого вірусного матеріалу вакцини, диспергованої в сахарозі. Кількість сахарози була в межах 20-4090.
Склад також може містити 595 декстрану. Вираз "подрібнений вірус" відноситься до вірусу, одержаного із пульп і. або пустул. По суті, лімфу подрібнювали для розбиття грудок та відділення рідини від мертвих волосся та ї- шкіри. Таким чином, вміст протеїну у вакцині є дуже високим і вимагає стабілізації вірусу.
Об'єктом даного винаходу є створення композиції, що містить поксвірус, зокрема водна композиція, що со
Зз5 Містить поксвірус для ліофільного сушіння, котре призводить до стабільного ліофіліьно висушеного продукту, ї- коли поксвірус бажано є очищеним або частково очищеним вірусом. Наступним об'єктом винаходу є створена водна композиція, яка містить поксвірус, в котрій поксвіруси, не схильні до агрегації та в котрих інгредієнти не утворюють осаду перед або під час заморожування. Наступним об'єктом винаходу є створена композиція, що містить поксвірус, зокрема водна композиція, що містить поксвірус, яка включає невеликі кількості « непоксвірусних асоційованих протеїнів. Наступним об'єктом винаходу є створена стабільна, ліофільно висушена, с композиція, що містить поксвірус та спосіб одержання вказаної композиції. й Даний винахід представляє композицію, що містить поксвірус, зокрема водну композицію, що містить «» поксвірус. Композиція, зокрема, водна композиція, може бути придатна для ліофільного сушіння вказаного поксвірусу.
Також, винаходом пропонується ліофільно висушений, продукт, що містить поксвірус. Композиція, згідно -І даного винаходу, зокрема водна композиція, яка містить поксвірус, дисахарид, фармацевтично прийнятний полімер, та необов'язково буфер. Оскільки ліофільно висушена композиція, згідно даного винаходу не містить бо стабілізуючих добавок тваринного походження, таких як, пептон, желатин, гемасел, також не містить великих -І кількостей протеїнів, які походять із систем, які використовуються для ампліфікації вірусу (таких як, систем 5р Культивування клітин), вірусна композиція виявляється неочікувано стабільною, тобто, поксвірус в ліофільно о висушеній композиції залишається інфекційним на протязі тривалого періоду часу, а також при високих со температурах таких як кімнатна температура або 372С. Якщо не зазначено інакше термін кімнатна температура" в даному описі винаходу відноситься до температури від 20 до 2596.
Поксвірус, що буде ліофільно висушено є будь-яким поксвірусом вибраним з групи Огіпорохмігив, Рагарохмігив, Амірохмігиз, Саргірохмігиз та Зийірохмігиз. Ці віруси можуть бути застосовані як вакцини для людей або тварин (|Мігоїоду, Зга еййоп, 1995, еа.-іп- спіеї Рівеід5, В.М.) Зокрема, переважними о поксвірусами є віруси родів Огійпорохмігиз або Амірохмігиз. Переважними прикладами поксвірусів, що належать до іме) роду Амірохмігиз є поксвіруси канарейковий та свійських птахів.
Переважними прикладами, що належать до сімейства Огіпорохмігиз є коров'ячий поксвірус та вірус коров'ячої 60 віспи.
Поксвірус, що міститься в композиції, згідно даного винаходу може бути поксвірусом, що зустрічається в природі, ослабленим поксвірусом або рекомбінантним поксвірусом.
Для вакцинації людей проти віспи поксвірус в композиції є переважно штамом вірусу коров'ячої віспи.
Прикладами штамів коров'ячої віспи придатними для цих цілей є штами Тетріє ої Неамеп, Сорепнадеп, Рагів, 65 Видарезі, Оаігеп, Сат, МКМР, Рег, ТазпКепі, ТВК, Тот, Вет, Раїмадапдаг, ВІЕМ, В-15, І івїег, ЕМ-63, Мем Могк
Сйу Воага ої Неакнй, ЕїІвігее, ІКеда та МУК. Найбільш придатним штамом вірусу коров'ячої віспи є штам модифікованого вірусу коров'ячої віспи АпКага (ММА) та його похідні, зокрема, штам, який депоновано в ЕСАСС із депозитним номером М00083008 та штам Еівігее.
Поксвірус в композиції, згідно даного винаходу, є переважно поксвірус, котрий є по суті апатогеном у тварин або суб'єкта вакцинації. Для цих цілей є бажаним або використовувати ослаблені вірусні штами або використовувати поксвіруси, які в природі реплікуються в носіях видів відмінних від видів, котрі будуть вакцинуватися та які не є патогенними в гетерологічному хазяїні. »"Ослаблений вірус" є вірусом, який походить від патогенного вірусу але такий, що при інфікуванні організму хазяїна призводить до нижчої смертності та/або захворюваності порівняно з неослабленим 7/0 батьківським вірусом. Приклади ослаблених поксвірусів є відомими особам досвідченим в цій галузі. Найбільш переважним є модифікований вірус коров'ячої віспи АпКага (ММА). Штамами ММА є штами ММА 575 та ММА 572 котрі депоновано в Європейській Колекції Тваринних Клітинних Культур із депозитними номерами ЕСАСС
МО00120707 та ЕСАСС М 94012707, відповідно. Найбільш переважним є ММА-ВМ або його похідний, який описаний в (МУ/002/42480 (РСТ/ЕРО1/13628)). Зміст цієї заявки включено до даної заявки через посилання. 7/5 ММУА-ВМ депоновано в Європейській Колекції Тваринних Клітинних Культур із депозитними номером ЕСАСС
Уо0о083008.
Прикладами поксвірусів для яких людина є гетерологічним носієм та які не є патогенними для людини є поксвіруси свійської птиці та канарейковий.
Термін ,)рекомбінантний вірус" відноситься до будь-якого вірусу, який має вставлений у вірусний геном го гетерологічний ген, котрий в природі не є частиною вірусного геному. Гетерологічний ген може бути терапевтичним геном, геном, що кодує принаймні один пептид, який включає принаймні один епітоп для викликання імунної відповіді, антисмислову експресійну касету або рибозимний ген. Способи конструювання рекомбінантних вірусів є відомими особам досвідченим в даній галузі. Найбільш переважним поксвірусним вектором є ММА, зокрема ММА 575 та ММА-ВМ (дивись вище). Особам досвідченим в даній галузі відомо, як сч ов поксвіруси можна ампліфікувати та одержувати із культур інфікованих клітин. В загальних рисах, на першому етапі еукаріотична клітина інфікується поксвірусом, котрий має стати частиною композиції згідно даного і) винаходу. Еукаріотичні клітини є клітинами які є сприйнятливими до інфекції відповідним поксвірусом й допускають реплікацію та вироблення інфекційного вірусу. Такі клітини є відомі особам досвідченим в даній галузі для всіх поксвірусів. Для ММА прикладом цього типу клітин є курячі ембріофібробласти (СЕРЕ) |Огехіегі. со зо ек аї., 3. беп. Мігої. (1998), 79,347-352). СЕР-клітини можуть бути культивовані за умов відомих особам досвідченим в даній галузі Переважно СЕРБ-клітини культивують на безсироватковому середовищі. Час о інкубування переважно становить від 48 до 96 годин при 37 2С-22С. Для інфікування поксвіруси беруть в М кількостях інфікування (МОЇ) від 0,05 до 1 ТСІЮО 590 (ТСІО - доза, що викликає інфекцію культури тканин) та інкубують 48-72 години при тій самій температурі. со
Інфекційний процес може бути виявлено шляхом спостереження цитопатичних ефектів (СРЕ), типово, значне р. округлення інфікованих клітин.
Поксвіруси відомі як такі, що існують у двох різних формах: поксвіруси, прикріплені до клітинних мембран в цитоплазмі інфікованих клітин (внутрішньоклітинні зрілі віріони (ІММ)) та сформовані віруси (позаклітинні упаковані віріони (ЕЕМ)) |Мападегріаззспеп А. еї аї., 9У. еп. Міго!Ї. (1998), 79,877-887|. Обидві вірусні форми « можуть бути використані у складах, згідно з представленим винаходом. ЕЕМ можуть бути легко одержані з 0) с супернатанту шляхом центрифугування та можуть бути безпосередньо суспендовані у водну композицію, яка й включає дисахарид та фармацевтично прийнятний полімер. Однак, вірусовмісні фракції можуть містити «» клітинний детрит та інші забруднювачі. Особливо для вакцинації людей є надзвичайно бажаним, щоб вірус перед введенням у композицію згідно з представленим винаходом було додатково очищено. Способи очистки поКксвірусів відомі спеціалістам у даній галузі. Стадія очищення може являти собою, наприклад, пакетне -і центрифугування (напр. з використанням сахарозної підкладки) або безперервно-проточне ультрацентрифугування (сахарозні градієнти), ультрафільтрацію (наприклад, поперечно-проточну фільтрацію з бо використанням мембрани із порами розміром більше 500кДа, але рівними чи меншими 0,1 ум), колонкову -І хроматографію (наприклад, іонообмінна, гідрофобної взаємодії, розмірна ексклюзія або комбінація) або
Комбінації деяких, або усіх з приведених вище методів (Мазида М. еї аї., ) Васіегіо! (1981) 147,1095-1104).
Мамі У відповідності з одержанням ІММ клітини накопичували на першому етапі і руйнували на другому етапі. Якщо с інфіковані клітини є клітинами, які можна культивувати у суспензійній культурі, інфіковані клітини можуть бути легко зібрані шляхом центрифугування. Якщо інфіковані клітини є більш чи менш інтактними адгезивними клітинами, можна зібрати клітини, тобто видалити їх з культуральної посудини, перед тим, як піддати їх руйнуванню. Методи збору є відомими особам досвідченим в даній галузі. Придатними для цього є механічні методи (наприклад, з використанням гумового клітинного скребку), фізичні методи (наприклад, охолодження о нижче -152С і відтавання культуральних посудин до близько 152) або біохімічні методи (обробка ферментами, ко наприклад, трипсином, для відділення клітин від культуральних посудин).
Якщо для цих потреб використовуються ферменти, слід контролювати час інкубації, оскільки ці ферменти 60о можуть після довготривалого часу інкубації пошкодити також вірус.
Методи руйнування клітин також відомі спеціалістам у даній галузі техніки. Вже описаний вище метод заморожування-відтавання в результаті дає часткове руйнування клітин. Інша відома техніка руйнування клітин включає використання ультразвуку. В результаті обробки клітин ультразвуком одержують вірусовмісний гомогенат. 6Е Поксвірусвмісний гомогенат може бути використаний у композиції згідно з представленим винаходом для вакцинації тварин. Однак знову ж таки бажано використовувати поксвіруси, які були хоч би частково очищені. Як підкреслювалося вище, такі методи очищення відомі спеціалістам уданій галузі.
Поксвіруси містяться у композиції, зокрема у водній композиції, у концентрації у межах від 10 7 до 109 ТСІОво/ті, переважно у концентрації у межах від, наприклад, 109 до 5х1089 ТСІОво/ті, більш переважно у концентрації у межах від, наприклад, 109 до 5х109 ТСІОво/ті. Дійсна концентрація залежить від кількості введеного у людину або тварину вірусу, котра у свою чергу залежить від типу вірусу, котрий вводять. Для штаму
Еївігее вірусу коров'ячої віспи типова доза вакцинації для людини включає 2,5 х10?7 ТСІОво. Для штаму ММА-ВМ вірусу коров'ячої віспи типова доза вакцинації для людини включає 1х109 ТСІОво.
Як вже відмічалось вище, поксвірус у композиції згідно з представленим винаходом переважно є очищеним то або хоча б частково очищеним вірусом. Термін «очищений або хоча б частково очищений" відноситься до факту, що вірус, який використовується у композиції згідно з представленим винаходом має чистоту, вищу, від чистоти неочищеного вірусу (подрібненого вірусу"), котрий використовували у вакцинах, що застосовувались до знищення хвороби віспи (як це розкрито, наприклад у 05 3,577,526). Така вища очистка може бути одержана, наприклад, одним або більше наступними методами: пакетним центрифугуванням (напр., з використанням т5 сахарозної підкладки) або безперервно-проточним ультрацентрифугуванням (сахарозні градієнти), ультрафільтрацією (наприклад, поперечно-проточною фільтрацією з використанням мембрани із порами розміром більше 500кДа, але рівними чи меншими 0,їнм), колонковою хроматографією (наприклад, іонообмінною, гідрофобної взаємодії, розмірною ексклюзією або комбінаціями). Особливо бажаною є ультрафільтрація та/(або пакетне центрифугування з використанням сахарозної підкладки. У більш загальних термінах, термін «очищений або хоча б частково очищений" стосується вірусних препаратів (наприклад таких, що містять ММА або Еївігее), які мають титр щонайменше 10 5, переважно щонайменше 10/, більш бажано щонайменше 5Хх109 ТСІЮОво на мг загального протеїну. Для штаму ЕіІвігее типовий препарат має титр 8х108 ТСІОБо на мг загального протеїну. Спосіб для визначення титру поксвірусовмісного препарату відомий Ге спеціалісту у даній галузі; один з таких методів наведено у розділі прикладів. Вміст загального протеїну о переважно визначається згідно з методом Кіеїдані (упсй, У.М. апа Ваграпо, О.М., Кіеідані пігодеп апаїувзів аз а геегепсе теїйой ог ргоївіп де(егтіпайоп іп даїгу ргодисів. ) АОАСІпі. 1999 Моу-Юес; 82 (6): 1389-98.
Кеміем/). Необхідно відмітити, що загальний вміст протеїну є сумою вірусного та клітинного протеїнів.
Несподіваним виявився той факт, що композиція, яка містить очищений або частково очищений вірус, (2,0) дисахарид та фармацевтично активний полімер є стабільною, з огляду на те, що існувала думка, що велика с кількість не вірусних протеїнів у неочищених вірусних препаратах сприяє стабільності композицій рівня техніки.
Композиція згідно з представленим винаходом, зокрема водна композиція, містять дисахарид. На відміну від - моносахаридів, таких як глюкоза, котра дає хороший біозахист під час сублімаційної сушки, але має низьку со температуру колапсу та часто сублімаційна сушка з колапсом, дисахариди показали себе як ефективні проективні агенти, які мають більш високі температури колапсу ніж моносахариди. -
Дисахариди, що містяться у композиції згідно з представленим винаходом є фармацевтично прийнятними дисахаридами, які мають температуру колапсу (То) у межах від близько -252С до -3592С. Характерна температура колапсу для сахарози -312С, для трегалози -28,59С, для лактози -30,52С. Характерною температурою колапсу « для цільової композиції, згідно з представленим винаходом, є, переважно, температура в межах від -5090 до -202с. Бажанішими діапазонами є, наприклад, -372С до -302С, -362С до -312С або -35,72С до -31,296. 8 с Переважно дисахариди вибирають із групи, яка складається з трегалози, лактози та сахарози. Бажанішою є "з цукроза. Дисахарид, бажано цукроза, міститься у композиції згідно з представленим винаходом, зокрема, у водній композиції, переважно у концентрації в межах 10-100г/л, більш бажано у межах 20-80г/л, найбільш бажано у межах 25-60г/л. Для цукрози типовою є концентрація 45г/л. 75 Композиція згідно з представленим винаходом, зокрема водна композиція, також містить фармацевтично - прийнятний полімер. Полімер переважно вибирають з групи, яка складається з декстрану та полівінілпіролідону (ее) (РМР). Полімер, що використовується повинен бути розчинним у композиції згідно з представленим винаходом.
Якщо використовується декстран, його молекулярна маса повинна бути переважно у межах від 30,000 до 70,000, і більш бажано у межах від 30,000 до 70,000, найбільш бажано у межах від 36,000 до 44,000. Найбільш бажаний (4) 50 декстран має середню молекулярну масу 40,000. Концентрація декстрану є в межах від 1 до 50г/л, переважно в межах від 2 до 40г/л або від З до Збг/л. Зокрема хороші результати спостерігалися у межах від 5 до 5Ог/л, від со 5 до 40г/л або від 5 до З0г/л. Навіть більш бажаним є діапазон від 8 до З0г/л. Найбільш бажаним діапазоном є 10-27г/л. Прикладом кращої концентрації є 18,9г/л. Кращі концентрації та концентрації меж декстрану як показано вище, зокрема діапазон від 5 до 50г/л та відповідні піддіапазони мають особливу перевагу у тому, що 59 температура колапсу композиції є відносно високою, що дає можливість здійснювати процес у промислових
ГФ) масштабах. Якщо використовується РУР, його молекулярна маса є переважно у межах від 50,000 до 400,000, т краще у межах від 70,000 до 360,000, концентрація РМР є в межах від 5 до 200г/л, краще від 5 до 1ООг/л, найкраще в межах від 10 до 40Ог/л.
Композиція згідно з представленим винаходом, зокрема водна композиція, також може містити буфер. Як 60 відмічалося вище, одним з об'єктів представленого винаходу, що забезпечує одержання водних поксвірусвмісних композицій, в яких поксвірус не агрегує і в яких не відбувається преципітація при висушуванні. Несподівано було показано, що такі несприятливі ефекти корелюють з присутністю фосфатного буфера у водній композиції. Прикладами фосфатного буферу є РВ5 (фосфатно-сольовий буфер) та фосфатний ве буфер. | | шо
Отже, окрема задача винаходу вирішена водною композицією для ліофільного висушування, котра не містить фосфатний буфер. Таким чином буфер, який міститься у композиції згідно з представленим винаходом є переважно вибраним з групи, яка містить ТКІ5, ТВ5, МОР5Б, НЕРЕЗ та (бі-укарбонатний буфери. Найкращими буферами є ТКІЗ та ТВ5.
Буфер використовується у концентраціях, достатніх для створення необхідних буферних властивостей. Для
ТКІЗ буферу бажаною є концентрація у межах 1-50пМ; найкращою є концентрація 10тМ, рН переважно встановлюється на рівні, котрий з одного боку є фармацевтично прийнятним для введення людині або тварині, а з іншого - не спричиняє згубного впливу на вірус. Таким чином, рН повинно бути в межах від 6,0 до 9,0, бажаніше, у межах від 7,2 до 7,8, найкращим є рН7,4. 70 Несподівано було одержано хороші результати з використанням вільного від фосфату буферу, незалежно від того, чи був вірус у композиції очищеним, чи неочищеним, чи частково очищеним. Бажаними є очищені або частково очищені віруси.
Композиція згідно з представленим винаходом, зокрема водна композиція, може містити солі такі як Масі.
Типовою для МасСі є концентрація у межах від 10 до 200тМ. Прикладом переважної концентрації Масі є 7/5 Концентрація 140тМ.
Композиція згідно з представленим винаходом, зокрема водна композиція, може містити сіль І -глютамінової кислоти. Сіль є переважно монокалієвою або мононатрієвою сіллю. Бажаною концентрацією солі І -глютамінової кислоти є концентрація у межах 0,05-0,5г/л, краще, у межах 0,1-0,15г/л.
Деякі окремі переважні водні розчини, згідно з представленою заявкою, наведені у наступній таблиці 1. У
Всіх композиціях, представлених у таблиці 1 буфером є 10тМ ТКІ5, рН7,4, 140тМ Масі. коров'ячої віспи Анкара (ММА) |(ТСІОво/ті) таблицю 6 з ся о 000001 вцнрону воіднюрею о (тююикветюют со » лю тую 0 зле одестею ол тюємнюнкют с
Водна композиція згідно з представленим винаходом придатна для заморожування-висушування. Для ї- використання ліофільно висушений продукт повинен бути відновлений за допомогою придатного розчинника. (ее)
Згідно з одним варіантом здійснення для того, щоб перевести компоненти у розчин, до ліофільно висушеного м продукту додають стерильну воду. Переважно кількість доданої води у більшій чи меншій мірі відповідає кількості води, що була видалена у процесі заморожування-висушування. Таким чином, згідно з цим варіантом здійснення, композиція відновленого продукту більш-менш ідентична з вихідною водною композицією. Тому у межах представленого винаходу водна композиція згідно з представленим винаходом використовується як « дю вакцина. Згідно з альтернативним варіантом здійснення, ліофільно висушений продукт може також бути - відновленим у будь-якому іншому фармацевтично прийнятному розчиннику, котрий може бути використано у с підходящій кількості. У якості прикладу розчинником може бути вода, яка містить один або більше наступних :з» компонентів, вибраних з фенолу, гліцерину та буфер. Концентрація фенолу у відновленому продукті є, наприклад, 0.595, як відзначалося вище, буфер переважно є не фосфатним.
На закінчення, цей аспект винаходу стосується, між іншим, наступних особливо бажаних варіантів - 15 здійснення: (І) композиції, зокрема водної композиції, що містить або навіть складається з очищеного або частково очищеного поксвірусу, вибраного з групи, яка складається з Огпіпорохмігив, Рагарохмігив, Амірохмігив, (ее) Саргірохмігиз та Зицірохмігиз, дисахариду, фармацевтично прийнятного полімеру та необов'язково, буферу. - Полімером переважно є декстран, бажано у кількості, як визначено вище (ІІ) композиції, зокрема водної композиції, що містить або навіть складається з поксвірусу, вибраного з групи, яка складається з (95) 20 Огпіпорохмігиз, Рагарохмігиз, Амірохмігив, Саргірохмігиз та Зцірохмігиз, дисахариду, фармацевтично прийнятного со полімеру та буферу, де буфер є не фосфатним, та де поксвірус є переважно очищеним або частково очищеним.
Полімером переважно є декстран, бажано у кількості, як визначено вище, (Ії) композиції, зокрема водної композиції, що містить або навіть складається з поксвірусу, вибраного з групи, яка складається з
Огпіпорохмігиз, Рагарохмігиз, Амірохмігив, Саргірохмігиз та Зцірохмігиз, дисахариду, фармацевтично прийнятного полімеру та не обов'язково буферу, де полімером переважно є декстран, у кількості, як визначено вище, у
ГФ) якості прикладу переважно в межах від 5 до 4О0г/л. Бажано, щоб буфер був не фосфатним. Поксвірус є 7 переважно очищеним або частково очищеним.
Термін ,складається з" як його використано у контексті вказаних вище варіантів (І), (І) та (ІІ), стосується композицій, що складаються тільки з вказаних вище компонентів, та композицій, що додатково бо містять одну або більше солей. Прикладами солей, які можуть додаватися до композицій (І), (І) та (ІІ), що складаються з визначених вище компонентів є КСІ, Масі, глутамат натрію. Таким чином термін ,складається з" у визначенні вказаних вище композицій (1), (І) та (ІІ) не виключає можливості додавання однієї або більше солей.
У якості прикладу окреме втілення представленого винаходу включає водну композицію, яка містить очищений або частково очищений поксвірус, вибраний з групи, яка складається з Огпіпорохмігив, Рагарохмігив, 65 Амірохмігиз, Саргірохмігиз та Зйцірохмігиз, дисахарид, фармацевтично прийнятний полімер та буфер, де дисахарид є цукрозою у визначених вище кількостях, полімер - декстрином у визначених вище кількостях, і де буфер є не фосфатним буфером. У якості прикладу інше окреме втілення представленого винаходу включає водну композицію, яка містить поксвірус, вибраний з групи, яка складається з ОпПпорохмігив, Рагарохмігив,
Амірохмігив, Саргірохмігиз та Зицірохмігиз, дисахарид, фармацевтично прийнятний полімер та необов'язково буфер. Поксвірус переважно є очищеним або частково очищеним. Бажані кількості та приклади дисахариду, полімеру та буферу були визначені вище.
Питання щодо того, як багато композицій, зокрема водних композицій, що містять поксвірус може бути введено та яку кількість вірусу використовувати при вакцинації лежать у межах компетенції практикуючого 7/о бпеціаліста. Як вказувалося вище, вакцини можуть бути використані для індукування імунної відповіді проти їх поксвірусів, зокрема, якщо використовуються атенуйовані або непатогенні, не рекомбінантні поксвіруси. Якщо використовується рекомбінантний поксвірус, додатково підвищується імунна відповідь проти рекомбінантного протеїну/пептиду, що експресується поксвірусним вектором.
Термін композиція" як його використано вище звичайно стосується рідких композицій, переважно водних композицій, якщо не вказано інакше. Якщо концентрації або межі концентрацій позначені "тМ", "г/л" і так далі, це показує, що відповідна композиція є рідкою або навіть водною композицією. Термін ,'водна композиція" стосується тих композицій, в котрих розчинником є вода. Однак, межі представленого винаходу також охоплюють ті сухі композиції, котрі можуть бути одержані з рідких або навіть водних композицій згідно з представленим винаходом шляхом видалення рідини, незалежно від методу, що використовується для 2о вказаного видалення. Таким чином, винахід також охоплює ті сухі композиції, котрі одержані способами, іншими, ніж заморожуванням-висушуванням.
Зокрема, представлений винахід також стосується способу виготовлення стабільної, поксвірусвмісної композиції, який характеризується тим, що композицію згідно з представленим винаходом, зокрема водну композицію ліофілізують. У представленій заявці терміни стійка, поксвірусвмісна композиція" та сч ов ліофілізована поксвірусвмісна композиція" використовуються замінюючи один одного, якщо не зазначено інакше. Термін ,стійка, поксвірусвмісна композиція" використовується у представленій заявці для позначення і) поксвірусвмісної композиції, у котрій загальна втрата вірусного титру при температурі інкубування 372 протягом 28 днів менша ніж 0.5Ісд, переважно, менше ніж 0.4І09. Детальний протокол визначення вірусного титру та таким чином загальної втрати титру вірусу наведено у розділі прикладів. Однак, також може бути використаний о будь-який інший протокол визначення титру вірусу.
Метод заморожування-висушування є в цілому відомим для фахівця, обізнаного у даній галузі (Оау, У. апа і.
Ме еап, М., Меййод3з іп МоіІесціаг Віоіоду, Нитапа Ргезвз, (1995) мої.З8). ї-
Процес заморожування-висушування зазвичай полягає у наступних стадіях, котрі більш детально пояснені нижче: 1. виготовлення вакцини; 2. заморожування зразку; 3. первинне висушування (сублімація); 4. вторинне со
Зз5 висушування (десорбція); 5. закупорювання продукту та вивантаження; 6. зберігання вакцини; 7. відновлення ї- вмісту вологи.
Виготовлення й ампліфікація поксвірусів, що мають використовуватися буде детально пояснено далі.
Поксвіруси необов'язково очищували. Склад, згідно даного винаходу було одержано додаванням раніше зазначених дисахаридів, полімерів та, необов'язково, буферу, І -глютамінової кислоти та, необов'язково, також « добавок до поксвірусного складу. 8 с Заморожування зразка для іммобілізації компонентів в розчині, і таким чином попереджувало пінення й продукту під час зниження тиску. Заморожування є двоетапним процесом під час якого вода спочатку утворює "» нуклеати, з подальшим ростом кристалів льоду, що призводило в результаті до суміші льоду та концентрованого розчину.
Енуклеація льоду стимулювалася зниженням температур та збовтуванням охолодженої суспензії. Порівняно -І із нуклеацією, ріст льоду стимулювався підвищенням температури, й таким чином зниження в'язкості розчину.
Незважаючи на вивірений характер заморожування, проліферація кристалів льоду в розчині призводила до бо зростання концентрації розчину. Біополімери в розчині або суспензії ушкоджувалися або інактивувалися -І впливом на них підвищеними концентраціями розчину, швидке охолодження мінімізувало вплив біопродукту на
Концентрат. Вище критичної температури (температури осклування) масова в'язкість може знижуватися о достатньо для того щоб скло пом'якшувалося й деформувалося. Це висушувалося до утворення клейкого о залишку в ампулі. Температура викривлення називається температурою колапсу. Більш детально, температура колапсу, визначається як температура при якій рухомість води в проміжному регіоні матриксу стає значною. Для запобігання викривленню температура має бути нижчою за температуру колапсу водного складу. Температура Колапсу може бути визначена згідно методів, відомих особі досвідченій в даній галузі, наприклад, шляхом диференціального термального аналізу Юеппіпдв, Т.А., "Гуорпйїгайоп, Іпігодисіоп апа Вавіс Ргіпсіріев", (Ф, Іпіегрпагт Ргезз, Оепмег, СО, 5, 1999, ІЗВМ 1-57491-081-7, радез 132-134). ко Якщо температура занадто низька, дифузія води з вірусу може бути загальмована, й може мати місце ушкодження внутрішньоклітинним льодом. От чому, особа досвідчена в даній галузі може емпірично визначити бо декілька температур замерзання, котрі всі є нижчими за температуру колапсу водного складу й він може визначити котра температура призводить до ліофільно висушеного продукту, котрий має найвищий титр поксвірусів.
Первинне сушіння (сублімація):
Первинне сушіння є тією частиною процесу ліофільного сушіння, котрий призводить до сублімації сольвенту б5 (льоду) з замороженого матриксу. Процес первинного сушіння починається після того як ліофільна сушила досягає бажаної конденсорної температури та тиску в камері. Тиск в камері зазвичай є нижчим за ІмБар, бажано нижче за 0,2мБар. Типово тиск в знаходиться в межах до 0,04 до 0,12мБар. В усьому цьому описі ці умови іноді будуть зазначені як низький тиск".
Температура полички була збільшена так, щоб відбувалася сублімація льоду в матриксі продукту і
Температура продукту була значно нижчою за температуру колапсу складу для забезпечення повної замороженості матриксу на протязі всього процесу первинного заморожування й забезпечення ліофільного сушіння без колапсу. Температура може лишатися постійною на протязі всього процесу первинного сушіння. В іншому випадку температура полички може постійно зростати під час первинного сушіння. Однак, температура продукту має бути нижчою від температури колапсу протягом усього процесу первинного сушіння. Наприкінці 7/0 первинного сушіння продукт все ще може містити більш ніж 595 вологи (за масою). Для одержання продукту із вмістом вологи, який не буде підтримувати біологічний ріст або хімічні реакції необхідно провести повторне сушіння.
Під час вторинного сушіння водяна пара десорбується з поверхні брикету, який утворився під час первинного сушіння. Це виконується збільшенням температури тоді як тиск в камері залишається низьким так, що вода /5 десорбується з поверхні брикету.
Температура полички для вторинного сушіння була визначена за стабільністю продукту і може бути в межах від 09С до «302С. Звичайно температура продукту знаходиться в межах від -52С до «302С. Більш бажано, щоб температура була в межах від 59С до 202С. Повторне сушіння може біти виконане в дві стадії. На першій стадії температура продукту має бути в межах від -59С до 159, краще в межах 09С до ї102С, ще краще в межах від ї22С до ї72С. Друга стадія виконується при вищій температурі ніж на першій стадії повторного сушіння.
Температура може бути в межах від 09С до 302С, краще в межах від 59С до ї202С. Вміст залишкової вологості також може залежати від вимог продукту. Деякі вироби потребують більшої вологості, а деякі меншої для одержання найкращої стабільності виробу. Оптимальний вміст залишкової вологи, а також час необхідний с для досягнення цього має бути визначено емпірично. о
Процес вторинного сушіння триває до досягнення бажаної вологості. Спосіб визначення рівня вологості продукту є відомим особі досвідченій в даній галузі. Зокрема, може бути застосоване кулонометричне титрування за Карл-Фішером Юеппіпдв, Т.А., "Іуорпійїгайноп, Іпігодисіоп апа Вавіс Ргіпсіріев", Іпіегрпагт
Ргезв, Оепмег, СО, 05, 1999, ІЗВМ 1-57491-081-7, радез 415-418). Вміст залишкової вологості бажано має бути с меншим за 595, більш бажано в межах від 0,5 до 495, ще більш бажано в межах від 1 до 395. со
Усі флакони, що містять продукт, закриваються способом відомим особі, досвідченій в даній галузі. Флакони можуть закорковуватися при дуже низькому тиску (наприклад, 0,04-2,56мБар) безпосередньо в ліофільній і - сушилці. Також флакони можна закривати при тиску дещо більшому або меншому за атмосферний, з со використанням хімічно інертного газу, такого як азот або гелій. Звичайно, флакони можна закривати в атмосфері азоту при тиску У0О0мБар. Флакони закорковують, переважно за допомогою бутилкаучукових пробок. Після і - коркування продукту система може бути приведена до атмосферного тиску й поличка може бути розвантажено.
Після цього флакони можуть бути закриті алюмінієвими кришками для довготривалого зберігання.
Ліофільно висушений продукт може зберігатися при кімнатній температурі (2523) й лишатися стабільним на « протязі принаймні 18 тижнів, бажано принаймні 20 тижнів, більш бажано на протязі 22 тижнів при цій температурі. Стабільний при певній температурі на протязі певного проміжку часу" означає, що втрата о) с вірусного титру при цій температурі становить 0,5біодз за цей проміжок часу. Однак якщо можливе охолодження, "» бажано щоб ліофільно висушений продукт зберігався при знижених температурах таких як 4 С. Бажано " зберігати продукт в темряві. Якщо це не можливо, бажано використовувати кольорове скло або будь-які інші флакони які запобігають небажаному впливу світла.
Для розведення ліофільно-висушеного продукту відповідну кількість розчиннику додають у ліофільно це. висушений продукт для одержання фармацевтично придатної композиції яку можна використовувати для людей
Го) або тварин. Розчинником є переважно вода. Зазвичай розчинник додається до композиції в кількості яка є досить подібною до кількості втраченого розчинника під час ліофільного сушіння. - Винахід також відноситься до ліофілізованого продукту одержаного способом згідно даного винаходу.
Га 50 Отже, ліофілізований продукт, згідно даного винаходу включає: (ії) поксвірус, переважно з родів ортопоксвірус або авіпоксвірус, (ії) дисахарид, (ії) фармацевтично прийнятний полімер та необов'язково, (ім) со та буфер, де поксвірус, дисахарид, полімер та буфер такі як означено вище.
Типові композиції ліофільно висушеного продукту показані в наступній таблиці 2. В усіх складах приведених ря в таблиці 2 кількість вірусу становить 5х109ТСІОво/ті. о
Кількість ОО (90) у водному складі перед ліофільною сушкою (050:63г/л декстран у із ММ/ 20 зо до хи со нини
Ї-глютамінової кислоти во та) та) та) (0.0864. то) | (0.1296 то) | (0.1728 то) вв
Ліофільно висушений продукт, згідно даного винаходу, використовується для виготовлення вакцини. Для цього ліофільно висушений продукт розчиняють/відновлюють, як описано вище й застосовують до людей або тварин способами відомими особі досвідченій в цій галузі.
Фігура 1 показує стабільність ліофільно висушеної композиції, яка містить ММА, при температурі 31 26.
Досліджувана композиція 123 (дивіться розділ прикладів та таблицю 6). Вірусний титр водного розчину, згідно даного винаходу, визначали до ліофільного сушіння. Ліофільне сушіння 5123 було проведено як описано (дивіться приклади та таблицю 6). Після ліофільного сушіння композиція зберігалася при 31 20. У вказаних точках часу ліофільно висушену композицію було відновлено й повторно визначено вірусний титр.
На Фігурах 2 та З показано результати таких самих експериментів, як описано в підписах до Фігури 1 за виключенням того, що відбувалося інкубування при температурі 372С на Фігурі 2 та 452С Фігурі 3.
Приклади
Наступні приклади додатково проілюструють даний винахід. Особі досвідченій в даній галузі, має бути добре зрозуміло що наведені приклад(и) ні в якому разі не можуть інтерпретуватися як обмеження застосування 75 технології передбаченої даним винаходом для цього прикладів).
Приклад 1:
Ліофільно висушені композиції, які містять Модифікований вірус коров'ячої віспи Анкара (ММА)
В цьому прикладі композиції згідно даного винаходу, які містять ММА були висушені заморожуванням за різних умов. Стабільність ММА в композиції була проаналізована визначенням титру ММА після розведення продукту висушеного заморожуванням та порівняння результату із титром ММА до висушування заморожуванням. Було визначено вплив різних термінів зберігання на вірусний титр. Методика визначення титру композиції, що містить ММА наведено в прикладі 2. 1. Опис експерименту
Приготування вакцини/композиції Ге
Для тестування процесу сушки заморожуванням згідно даного винаходу було використано декілька о композицій ММА. Для експериментів сушки заморожуванням (строки СТ 1-4,6-10 та 13-15 в таблиці 6) було використано Модифікований вірус коров'ячої віспи штаму Анкара (ММА). Вірус було очищено центрифугуванням в 36905 та 40965 сахарозних градієнтах і наступним ресуспендуванням в 1тМ ТТтіз-буфері із рнНо.
В експериментах СТ 1-4 (табл.б) не використовували жодних домішок. Було застосовано буферну систему 00
ОтМ Тгіз з 140тМ Масі із рН7.4. Для сушки заморожуванням починаючи з номеру СТ6 (табл.б) використовувалися різні домішки без зміни буферної системи. о
Було вибрано дві різні композиції із різними домішками. Домішки було додано до розчинів, що містили че вірус, додаванням буферу розведення. Склад використаних буферів розведення приведено в наступних таблицях З та 4. Дані додавання буферу розведення 1 (055) у водний розчин, згідно даного винаходу. Дані со додавання буферу розведення 2 (005) у розчин для проведення порівняльного аналізу. ї- ч 4 З с ;» в - бо
Ці буфери розведення використовувалися в різних концентраціях у кінцевого складах. Буфер розведення 1 (95) 50 (055) застосовувався як 16.7905, 2395, З09о та 4095 (об/об), буфер розведення 2 (000) 20905 (об/о06). ТСІО в5о/ті со кінцевого складу доводився до 5х109ТСіІЮОво/ті із фізіологічним Ттгіз-буфером (10тМ Ттів- буфер; 140тМ масі; рн?.4).
Зразки було заморожено в заморожувальному сушнику (заморожувальний сушник Спгізі, Тип АЇІрна 2-4). Для вв складу із сахарозою (055) порівняння різних температур заморожування (від -30 92 до -459С) показало, що суспензія має заморожуватися до -402С, яка є нижчою за температуру колапсу складу, для одержання відмінної іФ) структури брикету. Коли температура всередині заморожувального сушника, температура -402С досягається ко через 3,5-4,5год (початкова 202).
Для складу із сахарозою (055) температура колапсу становить від -30 до -372С, як було припущено на 60 значенні температури колапсу сахарози (-31С). От чому температура продукту підтримувалася в межах від -37 до -412С, для підтримання повністю замороженої матриці. Тиск застосовувався від 0,04 до 0,12мБар (-50 С та -402С на фазовій діаграмі води).
Рушійною силою сублімації під час первинного висушування є різниця тисків між продуктом та конденсором заморожувального сушника створена температурним диференціалом. Закон природи говорить про те, що якщо бо температура води знижується, то і тиск над водою також знижується. Певна температура води завжди пов'язана із певним тиском. Конденсор було встановлено на температуру в межах від -83 до -8992С. Тиск у камеру й температура полички регулює температуру полички. Це вказує на те, що тривалість первинної сушки не може бути просто скорочена, оскільки температура конденсора є фіксованою. То складу є лімітуючим фактором для
Збільшення температури продукту.
Температури вторинного сушіння були визначені за стабільністю продукту. Також вміст остаточної вологи складу залежав від вимог продукту. Деякі потребували більший вміст вологи, деякі менший, для досягнення найкращої стабільності продукту. Оптимальний вміст остаточної вологи так само як і час для його досягнення мав бути визначений дослідним шляхом. 70 Після того як почалася вторинна сушка і температура продукту стала вище 02С, вторинна сушка проводилася в два етапи. На першому температура полички регулювалася на протязі декількох годин (в межах від 4 до 7 годин) таким чином, що температура продукту була вищою за 02С, (в межах від 4 до 62С). Таким чином весь залишковий лід, який лишився після первинного сушіння було розтоплено. Застосування таких м'яких умов для початку вторинного сушіння дозволило мінімізувати ушкодження продукту. Потім, другий етап було розпочато 75 збільшенням температури продукту до значень в межах від 18 до 202 на протязі 20-30 годин. Час другого етапу чітко залежав від потрібного рівня залишкової вологи у ліофільно висушеного продукту. Для одержання різних рівнів залишкової вологи застосовували різні проміжки часу.
Як метод визначення вмісту залишкової вологи в ліофільно висушеному матеріалі було кулонометричне титрування за Карлом-Фішером |Чеппіпд5, Т.А., "І уорпіїї2аноп, Іпігодисіоп апа Вавіс Ргіпсіріев", Іпіегрпагт
Ргевзв, ЮОепмег, СО, 05, 1999, ІБВМ 1-57491-081-7, радез 415-418).
Усі продукти одержані під час розробки даного способу коркували при дуже низькому тиску (0,04-2,5бмБар) безпосередньо в ліофільній сушилці. Флакони закорковували, переважно за допомогою бутилкаучукових пробок.
Після того як продукт було закорковано, система була приведена до атмосферного тиску й стелаж може бути розвантажено. с
Після цього флакони були закриті алюмінієвими кришками для довготривалого зберігання. (5)
Важливим аспектом застосування даного винаходу є одержання вакцини, яка є стабільною при зберіганні.
Факторами, які впливають на стабільність включають остаточний вміст вологи, склад атмосфери при коркуванні, та умови зберігання, включаючи температуру, вологість та світло. Різні пакети одержані при розробленні даного способу зберігали при 42С та при кімнатній температурі. Також, декілька пакетів зберігали при 312С,376С та 4596. Всі зразки зберігали в темноті. со
Ліофільно висушені зразки розводили автоклавованою водою Мій-О. Більш докладно, вода (1,2мл) вносилася до зразка за допомогою шприца. Суспензію розмішували легким збовтуванням. Розведення тривало - лише декілька секунд. Вірусний титр розведеного продукту було визначено порівняно з вірусним титром до с ліофільного сушіння.
Зо Стабільність складу СТ23 (див. таблицю 6) оцінювали при 312, 372С та 4590. Вірусний титр спостерігали в. постійно. Результати приведено на фігурах з 1 по 3. 2. Результати й заключення:
ММА було ліофільно висушено без застосування різних домішок. «
Склади без домішок виявилися нестабільними (див. таблицю 6). В цьому контексті зразки було визнано стабільними де титр не падав більш ніж на 0,5ісд. Таким чином, термін стабільний при певній температурі для в) с певного проміжку часу" означає, що втрата вірусного титру при цій температурі менша за 0О,5іод на протязі з» цього часу. Склад ,невдалий", якщо втрата вірусного титру на протязі вказаного часу при вказаній температурі становить 0,5іосд або більше. Склади, які містили декстран та глюкозу, показали дуже низьку стабільність при кімнатній температурі. Склади, згідно даного винаходу, які мали різні концентрації сахарози та декстрану визнано стабільними. Стабільність ММА в складах, згідно даного винаходу, є принаймні 25 тижнів при 42С та і кімнатній температурі.
Ге | Детальну інформацію стосовно окремих експериментів подано в таблиці 6:
В таблиці б показано, що стабільність складів без добавок (таблиця 6, ЗТ 1-4) дуже низька. Після і декількох тижнів вони втрачали 0,5іІ0од їхнього початкового титру, що не є прийнятним. оз 20 Склади із 2095 (об/06) ОО були не прийнятні із-за колапсу матеріалу під час процесу ліофільного сушіння (дані не приведено). Цей колапс пояснює низьку Тс глюкози, яка значно не збільшувалася застосуванням со декстрану, котрий має високу То (-112С). Для первинного сушіння було застосовано найнижчу можливу температуру обладнання для ліофільного сушіння (-45 22). От чому неможливо було знизити температури нижче за То глюкози. Склади із 3095 (0б/06) ОО не зазнали колапсу. Цей феномен може бути пояснений більшим 59 вмістом декстрану, котрий підвищив То до значення вищого за температуру первинного сушіння.
ГФ) Хоча матеріал не зазнав колапсу, стабільність, особливо при кімнатній температурі, була незадовільною, що 7 могло бути спричинено низькою солідністю То глюкози (таблиця 6, СТ 10).
Буфер розведення 1 (055) використовувався в більшості експериментів. Стабілізація із цим компонентом є дуже доброю. Завдяки високій Т 5 (-3192) колапс сахарози не був проблемою в цьому складі. Стабільність бо ліофільно висушеного складу (таблиця 6). Не було великої різниці між застосуванням 16.7905, 2095, 2395, 28.690, 3090 та 4095 (об/о06) ОО у складах. Стабільність при 42С та кімнатній температурі було визнано для 6 складів.
Ліофільно висушені продукти із 3095 та 4095 050 мали дещо кращу стабільність.
Одну з композицій (процес СТ 23, дивись таблицю 6) було детально проаналізовано на прискорений тест 65 стабільності. Результати показано на фігурах 1-3 та підсумовано у наступній таблиці 5.
При 312С вакцина зберігалася протягом близько 1 місяця та все ще відповідала технічним вимогам (втрата вірусного титру є меншою, ніж половина Іс4). Однак навіть при вищих температурах є можливим зберігання /р вакцини протягом більш ніж одного місяця, що може викликати зацікавленість особливо у тропічних регіонах.
Для старої вакцини проти віспи М/НО рекомендував метод оцінки стабільності. Якщо вакцина втратила менше, ніж 11од за 4 тижні при 372С, то допускалося, що вона є стабільною щонайменше протягом 1 року, якщо зберігалася при 42С (прийнятним критерієм для використання старих вакцин була втрата менше ніж 11Іод). Як показано, композиція СТ 23 згідно з представленим винаходом задовольняє цьому критерію.
Приклад 2:
Титрування модифікованого вірусу коров'ячої віспи АпКага (ММА)
Титрування модифікованого вірусу коров'ячої віспи АпКага (ММА) проводилося методом заснованим на
ТСІО5о з використанням 10-разового розведення в 9б-лункових планшетах. Кінцева точка тесту, інфіковані клітини візуалізовані з використанням антитіл до вірусу коров'ячої віспи та відповідним забарвлюючим розчином. 2-3-денні первинні клітини СЕЕ (курячі ембріобласти) були розведені до 1 х10? клітин/мл в 795 ЕРМІ. 10-кратні розведення виконані із 8-ма реплікатами на кожне розведення. Після розведення 100 | поміщали в кожну лунку 96-лункової планшети. Клітини інкубували на протязі ночі при 372С та 595 СО».
Розведення розчинів, що містили вірус були виконані в 10 стадій (107 до 10712 як призначено) з використанням КРМІ без телячої сироватки. Потім, 100 Ці кожного вірусного зразка додавали в лунки із с 725 клітинами. 96-лункові планшети інкубували при 372С та 595 СО» на протязі 5 днів для того щоб забезпечити Ге) інфікування та вірусну реплікацію.
Через 5 днів після інфікування клітини обробляти антитілами специфічними до вірусу коров'ячої віспи. Для визначення специфічних антитіл використовували пероксидазу хрону (НЕР) зв'язану із вторинними антитілами.
Антитіла специфічні до ММА є антитілами специфічними до вірусу коров'ячої віспи, кролячими поліклональними со 3о антитілами, фракція до (Оцапекн, Вегіп, Септапу 9503-2057). Вторинні антитіла є антитіла до кролячого со (дО, поліклональні козячі зв'язані із НКР антитіла |Рготеда, Маппйеїт, Септапу, ЯМ/4011). Кольорові реакції виконуються згідно відомих методик. ге
Кожна лунка із клітинами, котра є позитивною при кольоровій реакції, маркувалася як позитивна для (ее) обрахування ТСІЮОБо.
Титр обраховувався з використанням формули Зреагтап |1) та Каегбрег 21). Оскільки всі параметри методу - залишалися незмінними, то використовувалася спрощена формула:
Вірусний титр рин « -7 (тсіОво /ті| - 10 в В 8 З ц а - коефіцієнт розведення останньої колонки, в котрій всі вісім лунок були позитивними "» Ха - кількість позитивних лунок в колонці ат1
Хь - кількість позитивних лунок в колонці аж2
Хо - кількість позитивних лунок в колонці аз -І со ; ки ї | шо
Температура полички: полички: кімнатній температурі та 3720 с 220 (протягом 20год) |52С (протягом 2,5год) 82 (протягом год) 102С (протягом 2год)
Температура продукту: продукту: кімнатній температурі та 3720
ГФ) -49С (протягом З,Б5год) 122С -1820 (протягом 24год) (протягом 4год)
І протя ДТ Ж
Температура продукту: продукту: кімнатній температурі во -12С (протягом 2,75год) 72С -162С (протягом 24год) (протягом З,5год) тА - до -452С Тиск: О,б4мБар Тиск: 0, 04мБар Температура Втрачає активність після 2 тижнів зберігання при
Температура продукту: продукту: 49С та кімнатній температурі -32С (протягом бгод) 1420 -372С (протягом (протягом 26,5год) 65 25,5год)
ст6 зожовО до -442С Тиск: О,04мБар Тиск: 0,04мБар Температура Композиція стабільна при 42С протягом
Температура продукту: Іпродукту: 57С (протягом бгод) |Іщонай-менше З4тижнів при кімнатній температурі 1622 (протягом 25год) протягом щонайменше 20 тижнів -422С (протягом 23год) ст7 23505 до -442С Тиск: О,04мБар Тиск: 0,04мБар Температура |Композиція стабільна протягом щонайменше 46
Температура продукту: тижнів при 42С та при кімнатній температурі продукту: -372С ОС (протягом бгод) 1320 (протягом 22,5год) (протягом 24год) ств 16,795 та до -4226 Тиск: О,04мБар Тиск: 0,04мБар Температура |при 42С та кімнатній температурі стабільна 239 ОО Температура продукту: продукту: протягом щонайменше 45 тижнів дос (протягом 8год) 172 -382С (протягом 24год) (протягом 21год) ста 3095 та до -442С Тиск: О,04мБар Тиск: 0,04мБар Температура Композиція З 30956 Ю5О: При 42С протягом 409 ОО Температура продукту: |продукту: щонайменше Б7тижнів при кімнатній температурі 490 (протягом 6,5год) 1720 протягом щонайменше 43 тижнів. Композиція З 4095 -3726 (протягом (протягом 24год) раз: Стабільна при 42С та кімнатній температурі 25,5год) протягом щонайменше 43 тижнів ст10 305 Осо до -355С Тиск: О,04мБар Тиск: 0,04мБар Температура |Композиція стабільна при 42С протягом 42 тижнів.
Температура продукту: Композиція втрачає активність після 10 тижнів продукту: -372С 62С (протягом 6,5год) 1920 при кімнатній температурі (КТ) (протягом 2Згод) (протягом 24год) отТ11 205 Осо до -459С Тиск: О,04мБар Тиск: 0,04мБар Температура |Композиція втрачає активність при 42С після 56
Температура продукту: Іпродукту: 57С (протягом 4год) тижнів; при КТ - після 14 тижнів 1920 (протягом 25,5год) -412С (протягом 2Згод) ст12 І309 ОО до -402С Тиск: О,04мБар Тиск: 0,04мБар Температура |Композиція стабільна протягом щонайменше 54
Температура продукту: продукту: тижнів при 42С При 252С стабільна протягом Ге! 42С (протягом бгод) 172 щонайменше 40 тижнів -372С (протягом 24год) (протягом 24год) (о) ст13 309 ОО до -402С Тиск: О,04мБар Тиск: 0,04мБар Температура |Композиція стабільна протягом щонайменше 36
Температура продукту: 42С (протягом тижнів при 42С продукту: 15,5год) 172С( -382С (протягом 19год) |протягом2б, 5год) (со) -152С (протягом Угод) с ст14 3095 ОО до -402С Тиск: О,04мБар Тиск: 0,04мБар Температура |Композиція стабільна протягом щонайменше 50 їм-
Температура продукту: тижнів при 42С При 252С стабільна протягом продукту: -38:С0Т 1522 (протягом 6,5год) 1820 щонайменше 19 тижнів с (протягом 21,5год) (протягом2б,5год) -1382СОТ (протягом - 17,5год) стТ15 І309 ОО до -412С Тиск: О,04мБар Тиск: 0,04мБар Температура |Композиція втрачає активність після 49 тижнів
Температура продукту: при 42С; При 252С стабільна протягом щонайменше продукту: -372С0ОТ 5еС (протягом Згод) 1720 18 тижнів « (протягом 2Огод) (протягом 24,5год) ст23 309 ОО до -402С Тиск: О0,12мБар Тиск: 0,04мБар Температура |Дивись дані прискорений тест на стабільність на - с Температура продукту: 72СОТ (протягом Фіг.1-3 продукту: -342СОТ 18год) 172С (протягом 28год) . и з (протягом 21год)
Claims (1)
- -1 Формула винаходу (ее)1. Композиція, яка містить (і) вірус коров'ячої віспи, що має титр щонайменше 10 9 ТСІОво на мг загального і протеїну, (ії) дисахарид, (ії) фармацевтично прийнятний полімер та (ім) буфер, причому буфер не є фосфатним г) 20 буфером. со 2. Композиція за п. 1, де вірус коров'ячої віспи має титр щонайменше 108 ТСІО»о на мг загального протеїну.З. Композиція за будь-яким з пп. 1-2, де вірус коров'ячої віспи вибирають зі штаму ЕЇвігее та модифікованого штаму вірусу коров'ячої віспи АпКага (ММА).4. Композиція за будь-яким з пп. 1-3, де вірус коров'ячої віспи є рекомбінантним вірусом коров'ячої віспи. 59 5. Композиція за будь-яким з пп. 1-4, де буфер вибирають з групи, яка містить ТКІ5, ТВ5, МОР5Б, НЕРЕЗ5 та ГФ) (бі-укарбонатні буфери.з 6. Композиція за будь-яким з пп. 1-5, де дисахарид вибирають з групи, яка включає цукрозу, лактозу та трегалозу.7. Композиція за будь-яким з пп. 1-6, де концентрація дисахариду знаходиться в межах від 10 до 100 г/л. 60 8. Композиція за будь-яким з пп. 1-7, де фармацевтично прийнятний полімер вибирають з декстрану та полівінілпіролідону (РМР).9. Композиція за п. 8, де декстран має молекулярну масу в межах від 30,000 до 70,000 та концентрацію від 1 до 50 г/л.10. Композиція за будь-яким з пп. 1-9, де додатково містить глютамінову кислоту. бо 11. Композиція за будь-яким з пп. 1-10, де температура колапсу композиції знаходиться в межах від -372С до12. Композиція за будь-яким з пп. 1-11, де вірусом коров'ячої віспи є штам ММА або штам Еіївігее, дисахаридом - цукроза, а полімером -- декстран.13. Композиція за будь-яким з пп. 1-12, яка використовується як вакцина.14. Застосування композиції за будь-яким з пунктів 1-12 для виготовлення вакцини.15. Спосіб виготовлення стійкої композиції, що містить вірус коров'ячої віспи, де композицію за будь-яким з пп. 1-13 ліофілізують.16. Спосіб за п. 15, який включає наступні стадії: 70 () заморожування композиції, вказаної за будь-яким з пп. 1-12 до температури нижче ніж температура колапсу композиції для одержання замороженої матриці продукту, (і) попереднє висушування замороженої композиції в умовах низького тиску та при температурі продукту, що забезпечує сублімацію льоду в матриці продукту, де температура продукту є нижчою за температуру колапсу композиції, (ії) повторне висушування в умовах низького тиску та при температурі продукту в межах від 09С до З02С до залишкової вологості продукту, нижчої за 5905.17. Ліофільно висушений продукт, який містить (і) вірус коров'ячої віспи, що має титр щонайменше 109 ТСІОво на мг загального протеїну, (ії) дисахарид, (ії) фармацевтично прийнятний полімер та (ім) буфер, де буфер не є фосфатним буфером, а вірус коров'ячої віспи, дисахарид, полімер та буфер є такими, як вказано в будь-якому з пп. 1-6, 8 та 10.18. Ліофільно висушений продукт, одержаний способом згідно з будь-яким з пп. 15-16, де композиція, що використовується для ліофілізації, містить дисахарид у концентрації згідно з п. 7 та/(або містить декстран з молекулярною вагою та концентрацією згідно з п. 9.19. Ліофільно висушений продукт за будь-яким з пп. 17-18, де вміст залишкової вологості знаходиться в см межах від 1 до 395. (5)20. Застосування ліофільно висушеного продукту за будь-яким з пп. 17-19 для виготовлення вакцини.21. Спосіб відновлення вологості ліофільно висушеного продукту за будь-яким з пп. 17-19, де продукт розчиняють у придатній кількості фармацевтично прийнятного розчинника. с со ча с м. -с . и? -І (ее) -І о 50 ІЧ е) Ф) іме) 60 б5
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DKPA200101831 | 2001-12-10 | ||
| PCT/EP2002/013434 WO2003053463A2 (en) | 2001-12-10 | 2002-11-28 | Poxvirus-containing compositions and process for their preparation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA78738C2 true UA78738C2 (en) | 2007-04-25 |
Family
ID=8160885
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA20040705588A UA78738C2 (en) | 2001-12-10 | 2002-11-28 | Composition containing cowpox virus and method for its preparation |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7094412B2 (uk) |
| EP (1) | EP1418942B1 (uk) |
| JP (1) | JP4439263B2 (uk) |
| KR (1) | KR20040074067A (uk) |
| CN (1) | CN1296096C (uk) |
| AT (1) | ATE300954T1 (uk) |
| AU (1) | AU2002361962A1 (uk) |
| BR (1) | BR0214822A (uk) |
| CA (1) | CA2467365C (uk) |
| DE (1) | DE60205388T2 (uk) |
| DK (1) | DK1418942T3 (uk) |
| EA (1) | EA006880B1 (uk) |
| ES (1) | ES2247414T3 (uk) |
| HK (1) | HK1071295A1 (uk) |
| HU (1) | HUP0402179A3 (uk) |
| IL (2) | IL161590A0 (uk) |
| MX (1) | MXPA04005577A (uk) |
| NO (1) | NO20042958L (uk) |
| NZ (1) | NZ533302A (uk) |
| PL (1) | PL213326B1 (uk) |
| UA (1) | UA78738C2 (uk) |
| WO (1) | WO2003053463A2 (uk) |
Families Citing this family (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7501127B2 (en) | 2002-05-16 | 2009-03-10 | Bavarian Nordic A/S | Intergenic regions as novel sites for insertion of HIV DNA sequences in the genome of Modified Vaccinia virus Ankara |
| PT1434858E (pt) | 2002-09-05 | 2008-07-28 | Bavarian Nordic As | Método de amplificação de um poxvírus em condições sem soro |
| CN1207005C (zh) * | 2002-10-31 | 2005-06-22 | 威世药业（如皋）有限公司 | 含生物活性物质的兔皮和其用途 |
| WO2006029467A1 (en) * | 2004-09-16 | 2006-03-23 | Btf Pty Ltd | Rapid freeze drying process |
| CN101360821A (zh) * | 2005-11-21 | 2009-02-04 | 圣诺菲·帕斯图尔有限公司 | 重组病毒的稳定制剂 |
| AU2008250596C1 (en) | 2007-05-14 | 2010-11-25 | Bavarian Nordic A/S | Purification of Vaccinia virus- and recombinant Vaccinia virus-based vaccines |
| BRPI0811161A2 (pt) * | 2007-05-18 | 2014-10-07 | Medimmune Llc | Conservação de materiais bioativos por espuma liofilizada. |
| US8394385B2 (en) | 2009-03-13 | 2013-03-12 | Bavarian Nordic A/S | Optimized early-late promoter combined with repeated vaccination favors cytotoxic T cell response against recombinant antigen in MVA vaccines |
| KR20120093941A (ko) | 2009-10-08 | 2012-08-23 | 버베리안 노딕 에이/에스 | 인간에서 ｈｉｖ에 대한 광범위한 ｔ-세포 반응의 생성 |
| KR20130008645A (ko) | 2010-05-21 | 2013-01-22 | 에이에이치 유에스에이 42 엘엘씨 | 광견병 바이러스 항원을 함유하는 파라폭스바이러스 벡터 |
| JP2013537409A (ja) | 2010-07-20 | 2013-10-03 | ゾエティス・エルエルシー | パラポックスウイルスベクター |
| CA2802430C (en) | 2010-07-20 | 2021-07-20 | Bavarian Nordic A/S | Method for harvesting poxvirus |
| EP2788021B1 (en) | 2011-12-09 | 2017-01-18 | Bavarian Nordic A/S | Poxvirus vector for the expression of bacterial antigens linked to tetanus toxin fragment c |
| BR112015000530A2 (pt) | 2012-07-10 | 2018-08-28 | Transgene Sa | vacina de antígeno micobacteriano. |
| WO2014009433A1 (en) | 2012-07-10 | 2014-01-16 | Transgene Sa | Mycobacterium resuscitation promoting factor for use as adjuvant |
| TWI690322B (zh) | 2012-10-02 | 2020-04-11 | 法商傳斯堅公司 | 含病毒的調配物及其使用 |
| DE102013004595A1 (de) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Emergent Product Development Germany Gmbh | RSV-Impfstoffe |
| WO2015104380A1 (en) | 2014-01-09 | 2015-07-16 | Transgene Sa | Fusion of heterooligomeric mycobacterial antigens |
| EP3116541B1 (en) | 2014-03-12 | 2019-11-27 | Bavarian Nordic A/S | Use of oil and water emulsions for increasing b cell responses with modified vaccinia ankara virus |
| EP3552615B8 (en) | 2014-07-16 | 2022-03-02 | Transgene | Oncolytic virus for expression of immune checkpoint modulators |
| DK3226894T3 (da) | 2014-12-01 | 2019-10-21 | Transgene Sa | Stabile flydende vacciniavirus-formuleringer |
| WO2016131945A1 (en) | 2015-02-20 | 2016-08-25 | Transgene Sa | Combination product with autophagy modulator |
| FR3042121A1 (fr) | 2015-10-08 | 2017-04-14 | Jean-Marc Limacher | Composition anti-tumorale |
| EP3452081A1 (en) | 2016-05-04 | 2019-03-13 | Transgene SA | Combination therapy with cpg tlr9 ligand |
| TW201825674A (zh) | 2016-09-09 | 2018-07-16 | 美商艾斯合顧問有限公司 | 表現雙特異性接合分子的溶瘤病毒 |
| US20190328869A1 (en) | 2016-10-10 | 2019-10-31 | Transgene Sa | Immunotherapeutic product and mdsc modulator combination therapy |
| WO2018091680A1 (en) | 2016-11-18 | 2018-05-24 | Transgene Sa | Cowpox-based oncolytic vectors |
| KR20190097240A (ko) | 2016-12-28 | 2019-08-20 | 트랜스진 에스.에이. | 종양용해성 바이러스 및 치료 분자 |
| CN110603058A (zh) | 2017-05-15 | 2019-12-20 | 扬森疫苗与预防公司 | 含有病毒的稳定组合物 |
| KR102658198B1 (ko) * | 2017-05-15 | 2024-04-16 | 얀센 백신스 앤드 프리벤션 비.브이. | 안정한 바이러스 함유 조성물 |
| JP7272965B2 (ja) | 2017-06-15 | 2023-05-12 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェー | Ｈｉｖ抗原をコードするポックスウイルスベクターおよびその使用方法 |
| WO2018234506A2 (en) | 2017-06-21 | 2018-12-27 | Transgene Sa | PERSONALIZED VACCINE |
| WO2019020543A1 (en) | 2017-07-28 | 2019-01-31 | Transgene Sa | ONCOLYTIC VIRUSES EXPRESSING AGENTS TARGETING METABOLIC IMMUNE MODULATORS |
| BR112020018117A2 (pt) | 2018-03-07 | 2020-12-22 | Transgene | Vírus da pseudovaríola (pcpv), métodos para gerar o pcpv e para amplificar o pcpv, composição, método de tratamento, método para inibir o crescimento de células tumorais, uso ou método e método para induzir ou estimular e/ ou reorientar uma resposta imune |
| WO2020011754A1 (en) | 2018-07-09 | 2020-01-16 | Transgene | Chimeric vaccinia viruses |
| CA3111273C (en) | 2018-09-06 | 2024-03-26 | Bavarian Nordic A/S | Storage improved poxvirus compositions |
| US20210386807A1 (en) | 2018-10-30 | 2021-12-16 | The University Of Tokyo | Oncolytic virus for cancer therapy |
| CN113453712A (zh) | 2018-12-28 | 2021-09-28 | 特兰斯吉恩股份有限公司 | M2缺陷型痘病毒 |
| WO2020136232A1 (en) | 2018-12-28 | 2020-07-02 | Transgene Sa | Immunosuppressive m2 protein |
| CN115243717A (zh) | 2020-03-12 | 2022-10-25 | 巴法里安诺迪克有限公司 | 改善痘病毒稳定性的组合物 |
| US12029787B2 (en) | 2020-07-01 | 2024-07-09 | University Of Connecticut | Method for generating recombinant poxviruses |
| CA3189238A1 (en) | 2020-07-13 | 2022-01-20 | Transgene | Treatment of immune depression |
| WO2023025899A2 (en) | 2021-08-26 | 2023-03-02 | Transgene | Delivery system for targeting genes of the interferon pathway |
| WO2023213763A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Poxvirus encoding a binding agent comprising an anti- pd-l1 sdab |
| WO2023213764A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Fusion polypeptide comprising an anti-pd-l1 sdab and a member of the tnfsf |
| WO2024003238A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Bavarian Nordic A/S | Epstein-barr-virus vaccine |
| WO2024003239A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Bavarian Nordic A/S | RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) AND VACCINIA VIRUS ANKARA (MVA) PRIME-BOOST REGIMEN |
| WO2024003353A1 (en) | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Transgene | Fusion protein comprising a surfactant-protein-d and a member of the tnfsf |
| TW202413636A (zh) | 2022-08-18 | 2024-04-01 | 法商傳斯堅公司 | 嵌合痘病毒 |
| WO2024149832A1 (en) | 2023-01-12 | 2024-07-18 | Bavarian Nordic A/S | RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) FOR CANCER VACCINE |
| WO2024188801A1 (en) | 2023-03-10 | 2024-09-19 | Bavarian Nordic A/S | Use of quail cell lines for poxvirus production |
| WO2024188803A1 (en) | 2023-03-10 | 2024-09-19 | Bavarian Nordic A/S | Production of poxviruses from quail cell cultures |
| WO2024188802A1 (en) | 2023-03-10 | 2024-09-19 | Bavarian Nordic A/S | Methods of isolating poxviruses from avian cell cultures |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE299213C (uk) | ||||
| US4380582A (en) * | 1965-07-09 | 1983-04-19 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Preparation of dry variola virus |
| FR7773M (uk) * | 1968-06-14 | 1970-03-23 | ||
| US3577526A (en) * | 1969-06-13 | 1971-05-04 | Merieux Inst | Stabilized smallpox vaccine |
| US3915794A (en) | 1973-02-09 | 1975-10-28 | Rit Rech Ind Therapeut | Stabilizing compositions for cell-free viruses and cell-free virus preparations containing them |
| CA1341245C (en) * | 1988-01-12 | 2001-06-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Recombinant vaccinia virus mva |
| DD299213A7 (de) * | 1988-05-04 | 1992-04-09 | Saechsische Landesgewerbefoerderungsgesellschaft M.B.H.,De | Verfahren zur stabilisierung eines lebendvirusimpfstoffes gegen temperatureinwirkung |
| CA2158935A1 (en) | 1993-10-12 | 1995-04-20 | Chiron Viagene, Inc. | Methods for preserving recombinant viruses |
| MY150893A (en) * | 1996-09-24 | 2014-03-14 | Bavarian Nordic As | Recombinant mva virus expressing dengue virus antigens, and the use thereof in vaccines |
| GB9808922D0 (en) * | 1998-04-24 | 1998-06-24 | Cantab Pharmaceuticals Res Ltd | Virus preparations |
| US6225289B1 (en) * | 1998-12-10 | 2001-05-01 | Genvec, Inc. | Methods and compositions for preserving adenoviral vectors |
-
2002
- 2002-11-28 US US10/496,858 patent/US7094412B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-28 NZ NZ533302A patent/NZ533302A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-11-28 KR KR10-2004-7008900A patent/KR20040074067A/ko active Search and Examination
- 2002-11-28 EP EP02796552A patent/EP1418942B1/en not_active Revoked
- 2002-11-28 BR BR0214822-6A patent/BR0214822A/pt active Search and Examination
- 2002-11-28 IL IL16159002A patent/IL161590A0/xx unknown
- 2002-11-28 HU HU0402179A patent/HUP0402179A3/hu unknown
- 2002-11-28 EA EA200400796A patent/EA006880B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-11-28 ES ES02796552T patent/ES2247414T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-28 DK DK02796552T patent/DK1418942T3/da active
- 2002-11-28 CA CA2467365A patent/CA2467365C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-28 MX MXPA04005577A patent/MXPA04005577A/es active IP Right Grant
- 2002-11-28 DE DE60205388T patent/DE60205388T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-28 AT AT02796552T patent/ATE300954T1/de active
- 2002-11-28 PL PL369954A patent/PL213326B1/pl unknown
- 2002-11-28 WO PCT/EP2002/013434 patent/WO2003053463A2/en active IP Right Grant
- 2002-11-28 CN CNB028246780A patent/CN1296096C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-28 JP JP2003554220A patent/JP4439263B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-28 UA UA20040705588A patent/UA78738C2/uk unknown
- 2002-11-28 AU AU2002361962A patent/AU2002361962A1/en not_active Abandoned
-
2004
- 2004-04-22 IL IL161590A patent/IL161590A/en not_active IP Right Cessation
- 2004-07-09 NO NO20042958A patent/NO20042958L/no not_active Application Discontinuation
-
2005
- 2005-05-13 HK HK05104050A patent/HK1071295A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE60205388T2 (de) | 2006-03-30 |
| KR20040074067A (ko) | 2004-08-21 |
| AU2002361962A1 (en) | 2003-07-09 |
| WO2003053463A2 (en) | 2003-07-03 |
| US7094412B2 (en) | 2006-08-22 |
| BR0214822A (pt) | 2004-12-14 |
| HK1071295A1 (en) | 2005-07-15 |
| EA006880B1 (ru) | 2006-04-28 |
| WO2003053463A3 (en) | 2004-03-04 |
| CN1602205A (zh) | 2005-03-30 |
| CN1296096C (zh) | 2007-01-24 |
| EA200400796A1 (ru) | 2004-12-30 |
| EP1418942A2 (en) | 2004-05-19 |
| IL161590A0 (en) | 2004-09-27 |
| ES2247414T3 (es) | 2006-03-01 |
| CA2467365A1 (en) | 2003-07-03 |
| JP4439263B2 (ja) | 2010-03-24 |
| DK1418942T3 (da) | 2005-11-28 |
| CA2467365C (en) | 2012-11-20 |
| JP2005513109A (ja) | 2005-05-12 |
| HUP0402179A3 (en) | 2012-09-28 |
| IL161590A (en) | 2009-06-15 |
| NO20042958L (no) | 2004-07-09 |
| MXPA04005577A (es) | 2005-04-19 |
| PL369954A1 (en) | 2005-05-02 |
| PL213326B1 (pl) | 2013-02-28 |
| US20050019349A1 (en) | 2005-01-27 |
| DE60205388D1 (de) | 2005-09-08 |
| NZ533302A (en) | 2005-11-25 |
| EP1418942B1 (en) | 2005-08-03 |
| HUP0402179A2 (hu) | 2005-01-28 |
| ATE300954T1 (de) | 2005-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA78738C2 (en) | Composition containing cowpox virus and method for its preparation | |
| JP2005513109A6 (ja) | ポックスウイルス含有調合物およびその調製方法 | |
| US8313897B2 (en) | Method for preserving viral particles | |
| ES2373238T3 (es) | Estabilizadores para vacunas liofilizadas. | |
| CN110478479B (zh) | 用于活的减毒病毒的方法和组合物 | |
| US9187729B2 (en) | Alphavirus and alphavirus replicon particle formulations and methods | |
| US10201600B2 (en) | Process for preparing an attenuated tetravalent dengue vaccine | |
| EA006485B1 (ru) | Способ выделения и очистки поксвирусов из инфицированных клеток | |
| CN105377293B (zh) | 减毒活甲病毒制剂的组合物和方法 | |
| KR102544928B1 (ko) | 아미노산을 유효성분으로 함유하는 동물용 백신 또는 진단용 항원의 안정성 증진용 조성물 및 이의 용도 | |
| NZ525117A (en) | Vaccine composition stabilised by addition of high-molecular-weight polyvinylpyrrolidone, in particular PVF360 whose molecular weight is 360 000 daltons | |
| RU2657801C1 (ru) | Комбинированная вакцина для иммунопрофилактики кори, эпидемического паротита и краснухи | |
| AU2008201215B2 (en) | Poxvirus containing formulations and process for preparing stable, poxvirus containing compositions |