EA006880B1 - Композиции, содержащие поксвирус, и способ изготовления устойчивых композиций, содержащих поксвирус - Google Patents
Композиции, содержащие поксвирус, и способ изготовления устойчивых композиций, содержащих поксвирус Download PDFInfo
- Publication number
- EA006880B1 EA006880B1 EA200400796A EA200400796A EA006880B1 EA 006880 B1 EA006880 B1 EA 006880B1 EA 200400796 A EA200400796 A EA 200400796A EA 200400796 A EA200400796 A EA 200400796A EA 006880 B1 EA006880 B1 EA 006880B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- composition
- product
- temperature
- composition according
- virus
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 193
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 20
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 66
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 44
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 40
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 32
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims abstract description 29
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 26
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 37
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 34
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 32
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 30
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 30
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 28
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 20
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 19
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 16
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 11
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 10
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 8
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 claims description 7
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 claims description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 2
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229940083538 smallpox vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 abstract description 7
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 abstract description 7
- 241000700639 Parapoxvirus Species 0.000 abstract description 7
- 241000700568 Suipoxvirus Species 0.000 abstract description 7
- 241000700664 Capripoxvirus Species 0.000 abstract description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 5
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 abstract 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 90
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 15
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 14
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 13
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 13
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 12
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 10
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 10
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 102100022907 Acrosin-binding protein Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- 101000756551 Homo sapiens Acrosin-binding protein Proteins 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- NASFKTWZWDYFER-UHFFFAOYSA-N sodium;hydrate Chemical compound O.[Na] NASFKTWZWDYFER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 description 2
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 208000005585 Poxviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 229920005549 butyl rubber Polymers 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000005443 coulometric titration Methods 0.000 description 2
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M monosodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M 0.000 description 2
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004223 monosodium glutamate Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005873 Hematocele Diseases 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical group [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010037888 Rash pustular Diseases 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical class [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 208000005881 bovine spongiform encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000003990 capacitor Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000004455 differential thermal analysis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 1
- -1 glucose Chemical class 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010587 phase diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001012 protector Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 208000029561 pustule Diseases 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к композиции, в частности, водной композиции, включающей (i) поксвирус одного из родов Orthopoxvirus, Avipoxvirus, Parapoxvirus, Capripoxvirus и Suipoxvirus, (ii) дисахарид, (iii) фармацевтически приемлемый полимер и, необязательно, (iv) буфер. Водная композиция особенно подходит для способов лиофилизации, приводящих к изготовлению устойчивой, лиофилизированной, содержащей поксвирус композиции. Изобретение, кроме того, касается способа изготовления лиофилизированной, содержащей поксвирус композиции и полученного таким образом продукта.
Description
Настоящее изобретение относится к композиции, в частности, водной композиции, включающей (ί) поксвирус одного из родов Ог1йороху1ги8, Λνίροχνίπίδ. Рагарохупик, Сарпрохтинк и 8шрохтпик, (ίί) дисахарид, (ш) фармацевтически приемлемый полимер и, необязательно, (ίν) буфер. Водная композиция особенно подходит для способов лиофилизации, приводящих к изготовлению устойчивой, лиофилизированной, содержащей поксвирус композиции. Изобретение, кроме того, касается способа изготовления лиофилизированной, содержащей поксвирус композиции и полученного таким образом продукта.
Предпосылки изобретения
Рохттбае включают большое семейство комплексных ДНК вирусов, которые реплицируются в цитоплазме клеток позвоночных и беспозвоночных. У людей натуральная оспа была самой важной инфекцией поксвирусами. Возбудителем натуральной оспы является вирус натуральной оспы, член рода Ог(йорохтйик. Вирус коровьей оспы, также член рода Оййорохтпик в семействе Рохттбае, использовали в качестве живой вакцины для иммунизации против натуральной оспы. Кульминацией успешной всемирной вакцинации вирусом коровьей оспы было искоренение вируса натуральной оспы (Тйе д1оЬа1 егабюайоп о£ кша11рох. Бша1 герой о£ (Не д1оЬа1 сошшккюп £ог (Не сегййсайоп о£ кта11рох егабкайоп; Нй1огу о£ РиЬ11с Неа1!й, №.4, Сепета: \Уог1б Неайй Огдаш/айоп, 1980). Тем временем, большинство находящихся на хранении штаммов инфекционных вирусов натуральной оспы было разрушено. Однако нельзя исключить, что поксвирусы, индуцирующие натуральную оспу и заболевания, подобные натуральной оспе, могут опять стать серьезной проблемой здравоохранения. Таким образом, необходимо иметь возможность изготовить устойчивые вакцины против поксвирусных инфекций, в частности, инфекций натуральной оспы, такие как вакцины на основе вируса коровьей оспы.
В прошлом вирусы коровьей оспы также использовали для создания методами генной инженерии вирусных векторов для экспрессии рекомбинантного гена и для потенциального использования в качестве рекомбинантных живых вакцин (Маске!!, М., 8шйй, СТ апб Мокк, В. [1982] Ρ.Ν.Α.8. И8А 79, 74157419; 8шйй, СТ., Маскей, М. апб Мокк, В. [1984] Вю!есйпо1оду апб Сепейс Епдшеейпд Яет1е\\ъ 2, 383407). Это, наряду с прочим, приводит к последовательностям ДНК (генам), которые кодируют чужеродные антигены, вводимым в геном вирусов коровьей оспы с помощью методик рекомбинации ДНК. Если ген интегрирован в участке вирусной ДНК, который не существен для жизненного цикла вируса, то возможно, что вновь созданный рекомбинантный вирус коровьей оспы будет инфекционным, т.е. будет способен инфицировать чужеродные клетки и, таким образом, экспрессировать интегрированную последовательность ДНК (ЕР 83286 и ЕР 110385). Полученные таким путем рекомбинантные вирусы коровьей оспы можно использовать, с одной стороны, в качестве живых вакцин для профилактики инфекционных заболеваний, а, с другой стороны, для изготовления гетерологичных белков в эукариотических клетках. Другими примерами рекомбинантных вирусов коровьей оспы являются вирусы, включающие терапевтические гены, такие как суицидные гены, рибозимные гены или антисмысловые гены.
Известно, что модифицированный вирус коровьей оспы Анкара (МУА) исключительно безопасен. МУА был генерирован длительными серийными пассажами штамма Анкара вируса коровьей оспы (СУА) на фибробластах куриных эмбрионов (обзор см. Мауг, А., Носййет-МйЦ/ек У. апб 8йск1, Н. [1975] Шесйоп 3, 6-14; патент Швейцарии №568392). Примерами штаммов вируса МУА, депонированных в соответствии с требованиями Будапештского договора, являются штаммы МУА 572, депонированные в Европейской коллекции культур клеток животных (ЕСАСС), 8айкЬшу (ИК) под номером депозита ЕСАСС У94012707, МУА 575, депонированный под номером ЕСАСС У00120707 и МУА-ΒΝ с номером депозита ЕСАСС У00083008.
МУА характеризуется тем, что является в значительной степени ослабленным, то есть, другими словами, характеризуется уменьшенной вирулентностью или инфекционной способностстью, в то же самое время сохраняя хорошую иммуногенность. Был проведен анализ вируса МУА для определения изменений в геноме относительно штамма СУА дикого типа. Были идентифицированы 6 основных делеций геномной ДНК (делеция I, II, III, 1У, У и У1), всего охватывающей 31000 пар оснований (Меуег, Н., 8ийег, С. апб Мауг А. [1991] I. Сеп. Уио1. 72, 1031-1038). Полученный вирус МУА стал крайне ограниченным по клеткам-хозяевам птичьими клетками. Кроме того, МУА характеризуется его чрезвычайным ослаблением. При испытании на разнообразных экспериментальных моделях было доказано, что МУА является авирулентным даже у животных с подавленным иммунитетом. Важнее то, что отличные свойства штамма МУА были продемонстрированы в обширных клинических испытаниях (Мауг е! а1., ΖΗ. Вак!. Нуд. I, АЬ!. Огд. В 167, 375-390 [1987], 8йск1 е! а1., Э!ксй. шеб. А'ксйг. 99, 2386-2392 [1974]). Во время данных исследований у более чем 120000 людей, включая пациентов с высоким риском, не было побочных эффектов, связанных с использованием вакцины МУА. Рекомбинантные МУА, которые можно использовать в качестве вакцин, уже были сконструированы (см., например, \¥О 97/02355) и используются в клинических испытаниях. \УО 98/13500 раскрывает рекомбинантные МУА, содержащие и способные экспрессировать последовательности ДНК, кодирующие антигены вируса денге. Чужеродные последовательности ДНК встраивали в вирусную ДНК в участке естественно встречающейся делеции в геноме МУА.
- 1 006880
Штаммом МУЛ, проявляющим характеристики даже более сильного ослабления и усиленной безопасности, является штамм ΜνΑ-ΒΝ, депонированный в Европейской коллекции культур клеток животных (ЕСАСС), ЗайкЬшу ик под номером депозита У00083008.
Кроме вируса коровьей оспы, в качестве векторов для доставки генетической информации в клетки млекопитающих использовали другие поксвирусы. В данном контексте делается ссылка на птичьи поксвирусы, такие как поксвирус домашней птицы. Поксвирусы домашней птицы, содержащие гены ВИЧ в геноме, раскрыты в патентах США №№5736368 и 6051410.
Способы изготовления содержащих поксвирус композиций, пригодных в качестве вакцин, известны специалисту в данной области (см., например, 1окНк XV. К., Упо1оду (1962), 18, 9-18; ΚίοΗΐΟΓ. К.Н., АЬНапЛипдеп аик бет Випйекдекипййейкага! (1970), 9, 53-57). Известная очистка приводит к изготовлению водных, содержащих поксвирус растворов или содержащих поксвирус осадков. Поксвирусы в указанных растворах и осадках неустойчивы, т.е., инфекционная активность вирусов быстро уменьшается. Однако необходимо, чтобы вакцину можно было хранить и распределять в стабилизированной форме, особенно, когда вакцины необходимо транспортировать в тропических регионах с ограниченной инфраструктурой распределения. Лиофилизированный продукт можно хранить при температурах в диапазоне от 4 до 25°С. Это очевидное преимущество, по сравнению со стандартными условиями хранения для жидких композиций, которые необходимо хранить при температуре ниже -20°С (Сгуоргекегуайоп апб Ггее/е-йгушд рго!осок Иау 1., МсЬеПап М.; МеШойк шМо1еси1аг Вю1оду, 38, 1995, Нитапа Ргекк).
Способы лиофилизации поксвирусов, в частности, вируса коровьей оспы, и содержащих вирусы композиций и растворов, пригодных для этой цели, известны (Вигке е! а1., СгШса1 Яеу1е№ ш ТНегареийс Эгид Сатег 8ук!етк (1999), 16, 1-83). В общем смысле, лиофилизация вакцины включает замораживание вакцины, содержащей водную композицию, пригодную для лиофилизации, с последующим удалением воды сублимацией в условиях пониженного давления и низких температур и следуемым далее удалением воды десорбцией в условиях пониженного давления и более высоких температур.
Известные, содержащие поксвирус, композиции для лиофилизации имеют важные недостатки. Многие из известных, содержащих вирус коровьей оспы, композиций для лиофилизации содержат пептон или гемаццел, которые часто имеют животное происхождение. Однако имеются опасения, что заболевания животных, такие как губчатый энцефалит коров, может передаваться от животного человеку через животные продукты, такие как пептон, желатин или гемаццел. Кроме того, поксвирусы в известных, содержащих поксвирус, композициях для лиофилизации не были очищены. Таким образом, содержащие поксвирус композиции для лиофилизации, известные в предшествующем уровне техники, содержат, наряду с другими веществами, большое количество белков, происходящих соответственно из клеток системы культуры клеток или ткани и из бычьей сыворотки, используемой во время культивирования клеток.
Специалисту в данной области также известны подвергнутые лиофилизации композиции, которые не содержат дополнительных соединений животного происхождения (которые представляют собой, например, пептон или гемаццел). В данном случае композиции содержат следующие соединения отдельно или в определенных комбинациях: глутамат натрия, сорбит, лактозу, соли, аминокислоты и глицерин. Однако продукт, полученный после процесса лиофилизации, часто является достаточно неустойчивым, т.е., общая потеря титра вируса неприемлемо высока во время хранения. Кроме того, было показано, что поксвирус имеет тенденцию образовывать агрегаты в некоторых из указанных композиций, и что другие соединения осаждаются перед замораживанием или во время него.
Патент США №3577526 раскрывает вакцину против натуральной оспы, характеризуемую тем, что она изготовлена из основного вирусного материала вакцины, диспергированного в сахарозе. Количество сахарозы находится в диапазоне от 20 до 40%. Композиция может, кроме того, включать 5% декстрана. Термин «основной вирус» относится к вирусу, полученному из пульп и пустул. В основном, лимфу перемалывают для разрушения комков и отделения жидкости от мертвых волос и кожи. Таким образом, белковая нагрузка препарата вакцины очень высокая и вносит вклад в стабилизацию вируса.
Цель изобретения
Целью настоящего изобретения является предоставление композиции, содержащей поксвирус, в частности, водной композиции, содержащей поксвирус, для лиофилизации, которая приводит к изготовлению устойчивого лиофилизированного продукта, в котором поксвирус предпочтительно представляет собой очищенный или, по меньшей мере, частично очищенный вирус. Еще одной целью настоящего изобретения является предоставление водной композиции, содержащей поксвирус, в которой поксвирусы не имеют тенденции к агрегации, и в которой компоненты не осаждаются перед замораживанием или во время него. Еще одной целью настоящего изобретения является предоставление композиции, содержащей поксвирус, в частности, водной композиции, содержащей поксвирус, включающей низкие количества белков, не связанных с поксвирусом. Еще одной целью настоящего изобретения является предоставление устойчивой, лиофилизированной композиции, содержащей поксвирус, и способа изготовления указанной композиции.
- 2 006880
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение предоставляет композицию, содержащую поксвирус, в частности, водную композицию, содержащую поксвирус. Композиция, в частности, водная композиция, может подходить для лиофилизации указанного поксвируса. Кроме того, изобретение предоставляет лиофилизированный продукт, содержащий поксвирус. Композиция в соответствии с настоящим изобретением, в частности, водная композиция, включает поксвирус, дисахарид, фармацевтически приемлемый полимер и, необязательно, кроме того, буфер. Хотя лиофилизированная композиция в соответствии с настоящим изобретением не содержит ни стабилизирующие добавки животного происхождения, такие как пептон, желатин, гемаццел, ни высокие количества белков, происходящих из системы, используемой для амплификации вируса (такой как системы культуры клеток), вирус в композиции удивительно устойчив, т.е., поксвирус в лиофилизированной композиции остается инфекционным в течение длительных периодов времени, даже при высоких температурах хранения, таких как комнатная температура или 37°С.
При отсутствии других определений, используемый в настоящем описании термин «комнатная температура» соответствует температуре от 20 до 25°С.
Поксвирусы, подлежащие лиофилизации, представляют собой любые поксвирусы, выбранные из группы, состоящей из ортопоксвирусов, авипоксвирусов, парапоксвирусов, каприпоксвирусов и суипоксвирусов. Указанные вирусы можно использовать в качестве вакцины для людей или животных (У1го1оду, 3гб ебйюи, 1995 еб.-ш-еШеГ: Р1е1бк, Β.Ν.). Особенно предпочтительными поксвирусами являются вирусы родов ОйНорохуйик или Ανίροχνίπικ. Предпочтительными примерами поксвирусов, относящихся к роду Ау1роху1гик, являются поксвирус канареек и поксвирус домашней птицы. Предпочтительными примерами, относящимися к семейству ОпНорохуйик. являются поксвирус коров и вирус коровьей оспы.
Поксвирус, содержащийся в композиции в соответствии с настоящим изобретением, может представлять собой естественно встречающийся поксвирус, ослабленный поксвирус или рекомбинантный поксвирус.
Для вакцинации людей против натуральной оспы поксвирус в композиции представляет собой предпочтительно штамм вируса коровьей оспы. Примерами штаммов вируса коровьей оспы, подходящих для данной цели, являются штаммы Тетр1е оГ Неауеи, Сореийадеи, Рапк, Вибарек!, Райеи, Оаш, МК1УР, Рег, Такйкеи!, ТВК, Тош, Веги, Ра!табаидаг, В1ЕМ, В-15, Ык!ег, ЕМ-63, №\ν Уогк Сйу Воагб оГ Неайй, Е1к!гее, 1кеба и \УР. Наиболее предпочтительными штаммами вируса коровьей оспы являются штамм модифицированного вируса коровьей оспы Анкара (МУА) и его производные, в частности, штамм, который был депонирован в ЕСАСС с номером депозита У00083008 и штамм Е1к!гее.
Поксвирус в композиции в соответствии с настоящим изобретением представляет собой предпочтительно поксвирус, который является по существу непатогенным для животного или лица, подлежащего вакцинации. Для данной цели предпочтительно или использовать ослабленные штаммы вируса, или использовать поксвирус, который естественно реплицируется у вида хозяина, отличного от вида, подлежащего вакцинации, и который не является патогенным для гетерологичного хозяина.
«Ослабленный вирус» представляет собой вирус, происходящий от патогенного вируса, но который при инфицировании организма хозяина приводит к более низкой смертности и/или заболеваемости, по сравнению с не ослабленным родительским вирусом. Примеры ослабленных поксвирусов известны специалисту в данной области. Наиболее предпочтительным является модифицированный вирус коровьей оспы Анкара (МУА). Типичными штаммами МУА являются МУА 575 и МУА 572, которые были депонированы в Европейской коллекции культур клеток животных под номерами депозитов ЕСАСС У00120707 и ЕСАСС У94012707, соответственно. Наиболее предпочтительным штаммом является МУАΒN или производный от него штамм, который был описан в \УО 02/42480 (РСТ/ЕР01/13628). Содержание указанной заявки включено в настоящую заявку в качестве ссылки. МУΑ-ΒN был депонирован в Европейской коллекции культур клеток животных под номером депозита ЕСАСС У00083008.
Примерами поксвирусов, для которых люди представляют собой гетерологичных хозяев и которые являются не патогенными для людей, включают поксвирус домашней птицы и поксвирус канареек.
Термин «рекомбинантный вирус» относится к любому вирусу, имеющему вставленный в вирусный геном гетерологичный ген, который не является естественной частью вирусного генома. Г етерологичный ген может представлять собой терапевтический ген, ген, кодирующий пептид, включающий по меньшей мере один эпитоп для индукции иммунного ответа, кассету антисмысловой экспрессии или рибозимный ген. Способы конструирования рекомбинантных вирусов известны специалисту в данной области. Наиболее предпочтительным вектором поксвируса является МУА, в частности, МУА 575 и МУΑ-ΒN (см. выше).
Специалисту в данной области известно, как можно амплифицировать и выделить поксвирусы из инфицированных клеточных культур. В целом, на первом этапе эукариотические клетки инфицируют поксвирусом, который, как предполагается, является частью композиции в соответствии с настоящим изобретением. Эукариотические клетки представляют собой клетки, которые восприимчивы к инфицированию соответствующим поксвирусом и обеспечивают возможность репликации и продукции инфекционного вируса. Такие клетки известны специалисту в данной области для всех поксвирусов. Для МУА
- 3 006880 примерами данного типа клеток являются фибробласты куриных эмбрионов (СЕР) (Эех1ег I. е! а1., I. Сей. У1го1. (1998), 79, 347-352). Клетки СЕР можно культивировать в условиях, известных специалисту в данной области. Предпочтительно клетки СЕР культивируют в бессывороточной среде. Время инкубации предпочтительно составляет от 48 до 96 ч при 37°С ± 2°С. Для инфицирования поксвирусы используют при множественности заражения (ΜΟΙ) от 0,05 до 1 ТСГО50 (ТСГО = инфекционная доза культуры ткани), и инкубация происходит в течение 48-72 ч при такой же температуре.
Развитие инфекции можно наблюдать слежением за цитопатическими эффектами (СРЕ), обычно, значительным округлением инфицированных клеток.
Известно, что поксвирусы существуют в двух различных формах: поксвирус, прикрепленный к клеточным мембранам в цитоплазме инфицированных клеток (внутриклеточный зрелый вирион (ΙΜν)) и вирусы, вышедшие наружу (внеклеточные, покрытые оболочкой вирионы (ΕΕν)) (Уапбегр1а55с11еп А. е! а1. , 1. Сеп. νίτοί. (1998), 79, 877-887). Обе вирусные формы можно использовать в композициях в соответствии с настоящим изобретением. ΕΕν можно просто получить из надосадочной жидкости центрифугированием, и их можно непосредственно суспендировать в водной композиции, включающей дисахарид и фармацевтически приемлемый полимер. Однако фракции, содержащие вирус, могут включать клеточный дебрис и другие примеси. Поэтому, особенно для вакцинации людей предпочтительно, чтобы вирус был подвергнут дальнейшей очистке перед тем, как он будет включен в композицию в соответствии с настоящим изобретением. Способы очистки поксвирусов известны специалисту в данной области. Этап очистки может представлять собой, например, серийное центрифугирование (например, с использованием сахарозных подушек) или ультрацентрифугирование с непрерывным протоком (градиенты сахарозы), ультрафильтрацию (например, фильтрацию в поперечном потоке с использованием мембраны с размером пор более, чем 500 кДа, но равным или меньшим чем, 0,1 мкм), колоночную хроматографию (например, ионообменную, гидрофобного взаимодействия, исключения по размеру или их комбинацию) или комбинацию некоторых или всех из указанных выше методов очистки (Макиба N. е! а1., 1. Вас1епб (1981) 147, 1095-1104).
Для получения ΙΜν клетки необходимо собрать на первом этапе и разрушить на втором этапе. Если инфицированные клетки представляют собой клетки, которые можно культивировать в суспензионной культуре, то инфицированные клетки можно легко собрать центрифугированием. Если инфицированные клетки являются более или менее интактными прикрепленными клетками, то можно собрать клетки, т. е., удалить клетки из флакончика для культур, перед тем как они будут подвергнуты этапам разрушения. Способы сбора известны специалисту в данной области. Методики, которые можно использовать, представляют собой механические способы (например, использованием резинового скребка для клеток), физические способы (например, замораживание ниже -15°С и оттаивание сосудов для культивирования при температуре выше +15°С) или биохимические способы (обработку ферментами, например, трипсином, для открепления клеток от сосудов для культивации). Если ферменты используют с данной целью, время инкубации следует контролировать, поскольку ферменты могут также повредить вирус после длительных периодов инкубации.
Способы разрушения клеток также известны специалисту в данной области. Описанный выше способ оттаивания-замораживания уже приводит к частичному разрушению клеток. Другие известные методики для разрушения клеток включают использованием ультразвука. Обработка клеток ультразвуком приводит к изготовлению гомогената, содержащего вирус.
Для вакцинации животных гомогенат, содержащий поксвирус, можно использовать в композициях в соответствии с настоящим изобретением. Однако снова предпочтительно использовать поксвирусы, которые были очищены, по меньшей мере, частично.
Как подчеркнуто выше, такие способы очистки известны специалисту в данной области.
Поксвирусы содержатся в композиции, в частности, в водной композиции, в диапазоне концентраций от 104 до 109 ТС1Э5(1/мл. предпочтительно в диапазоне концентраций, например, от 105 до 5 х 108 ТСГО50/мл, наиболее предпочтительно, в диапазоне концентраций, например, от 106 до 108 ТСГО50/мл. Действительная концентрация зависит от количества вируса, которое предстоит ввести человеку или животному, которое, в свою очередь, зависит от типа вируса, который предстоит ввести. Для штамма вируса коровьей оспы ЕМгее типичная доза вакцинации для людей включает 2,5 х 105 ТСГО50/мл. Для штамма вируса коровьей оспы ΜνΑ-ΒΝ типичная доза вакцинации для людей включает 1 х 108 ТСГО50.
Как указано выше, поксвирус в композиции в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно представляет собой очищенный или, по меньшей мере, частично очищенный вирус. Термин «очищенный или, по меньшей мере, частично очищенный вирус» относится к тому обстоятельству, что вирус, используемый в композиции в соответствии с настоящим изобретением, имеет чистоту, которая выше, чем чистота неочищенного вируса («основного вируса»), который использовали в вакцинах, применявшихся до искоренения натуральной оспы (таких как раскрытые в патенте США №3577526). Такую более высокую чистоту можно получить, например, одним или несколькими следующими способами: например, серийным центрифугированием (например, с использованием сахарозных подушек) или ультрацентрифугированием с непрерывным протоком (градиенты сахарозы), ультрафильтрацией (например, фильтрацией в поперечном потоке с использованием мембраны с размером пор более чем 500 кДа, но
- 4 006880 равным или меньшим, чем 0,1 мкм), колоночной хроматографией (например, ионообменной, гидрофобного взаимодействия, исключения по размеру или их комбинацией). Особенно предпочтительной является ультрафильтрация и/или серийное центрифугирование с использованием сахарозных подушек. В более общем смысле термин «очищенный или, по меньшей мере, частично очищенный вирус» относится к вирусным препаратам (таким как препараты, включающие МУЛ или Е11гее), имеющим титр по меньшей мере 106, предпочтительно по меньшей мере 107, предпочтительнее по меньшей мере 108, еще предпочтительнее по меньшей мере 5х108 ТСГО50 на 1 мг общего количества белка. Для штамма Е11гее типичные препараты имеют титр 8х108 ТСШ50 на 1 мг общего количества белка. Способы определения титра препарата, содержащего поксвирус, известны специалисту в данной области; один из данных способов описан в разделе примеров. Общее содержание белка предпочтительно определяют в соответствии со способом К)е1каЫ (Ьуисй, 1.М. апк ВагЬаио, Ό.Μ., К)е1каЫ ийгодеи апа1уз1з аз а геГегепсе ше11юк Рог рго1еш ке1егтша1юи ίη ка1гу ргокис!з. 1. АОАС 1п1. 1999 Ыоу.-Пес.; 82(6): 1389-98. Кеу1ете). Следует отметить, что общее содержание белка представляет собой сумму вирусных белков и клеточных белков.
Было неожиданно, что композиция, включающая очищенный или частично очищенный вирус, дисахарид и фармацевтически активный полимер, устойчива, поскольку считали, что большие количества не вирусного белка в неочищенных вирусных препаратах способствуют устойчивости композиций предшествующего уровня техники.
Композиция в соответствии с настоящим изобретением, в частности, водная композиция, включает дисахарид. В отличие от моносахаридов, таких как глюкоза, которые дают хорошую биологическую защиту во время лиофилизации, но которые имеют низкую температуру разрушения и часто лиофилизируются с разрушением, было показано, что дисахариды являются эффективными протекторами при лиофилизации, проявляющими более высокие температуры разрушения, чем моносахариды.
Дисахариды, содержащиеся в композициях в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой фармацевтически приемлемые дисахариды, имеющие температуру разрушения (Тс) в диапазоне приблизительно от -25 до -35°С. Типичные температуры разрушения составляют -31°С для сахарозы, -28,5°С для трегалозы и -30,5°С для лактозы. Типичные температуры разрушения для всей композиции в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно находятся в диапазоне от -50 до -20°С. Предпочтительными субдиапазонами являются, например, от -37 до -30°С от -36 до -31°С или от -35,7 до -31,2°С.
Предпочтительно, дисахарид выбирают из группы, состоящей из трегалозы, лактозы и сахарозы. Наиболее предпочтительным дисахаридом является сахароза. Дисахарид, предпочтительно сахароза, содержится в композиции в соответствии с настоящим изобретением, в частности, водной композиции, предпочтительно в диапазоне концентраций 10-100 г/л, предпочтительнее, в диапазоне 20-80 л/г, наиболее предпочтительно, в диапазоне 25-60 г/л. Для сахарозы типичная концентрация составляет 45 г/л.
Композиция в соответствии с настоящим изобретением, в частности, водная композиция, кроме того, включает фармацевтически приемлемый полимер. Полимер предпочтительно выбирают из группы, состоящей из декстрана и поливинилпирролидона (РУР). Используемый полимер должен быть растворим в композиции в соответствии с настоящим изобретением. Если используют декстран, его молекулярная масса предпочтительно находится в диапазоне от 20000 до 100000, предпочтительнее в диапазоне от 30000 до 70000, наиболее предпочтительно в диапазоне от 36000 до 44000. Самый предпочтительный декстран имеет среднюю молекулярную массу 40000. Концентрация декстрана находится в диапазоне от 1 до 50 г/л, предпочтительно в диапазоне от 2 до 40 г/л или от 3 до 30 г/л. Особенно хорошие результаты наблюдали в диапазонах от 5 до 50 г/л, от 5 до 40 г/л или от 5 до 30 г/л. Даже более предпочтительным является диапазон от 8 до 30 г/л. Наиболее предпочтительным диапазоном является от 10 до 27 г/л. Примером предпочтительной концентрации является 18,9 г/л.
Предпочтительные концентрации и диапазоны концентрации декстрана, как показано выше, в частности, диапазон от 5 до 50 г/л и соответствующие субдиапазоны, имеют особое преимущество в том, что температура разрушения композиции сравнительно высокая, что обеспечивает возможность проведения процесса в промышленном масштабе. Если используют РУР, его молекулярная масса находится предпочтительно в диапазоне от 50000 до 400000, предпочтительнее в диапазоне от 70000 до 360000. Концентрация РУР находится в диапазоне от 5 до 200 г/л, предпочтительнее в диапазоне от 5 до 100 г/л, наиболее предпочтительно в диапазоне от 10 до 40 г/л.
Композиция в соответствии с настоящим изобретением, в частности, водная композиция, кроме того, включает буфер. Как указано выше, одной из целей настоящего изобретения является предоставление водной композиции, содержащей поксвирус, в которой поксвирусы не агрегируют и в которой при сушке не происходит осаждение. Неожиданно было показано, что такие нежелательные эффекты коррелируют с присутствием буфера, содержащего фосфат, в водной композиции. Примерами буферов, содержащих фосфат, являются РВ8 (солевой забуференный фосфатный раствор) и фосфатный буфер. Следовательно, данную конкретную цель изобретения достигают водной композицией для лиофилизации, которая не содержит фосфатный буфер. Таким образом, буфер, содержащийся в композиции в соответствии с настоящим изобретением, предпочтительно выбирают из группы, состоящей из ТК18, ТВ8, МОР8, НЕРЕ8 и (би-)карбонатных буферов. Наиболее предпочтительными являются ТК18 и ТВ8.
- 5 006880
Буфер используют в концентрации, которая достаточна для придания требуемой буферной емкости. Для ТК!8-буферов предпочтительным диапазоном концентрации является от 1 до 50 мМ; наиболее предпочтительной концентрацией является 10 мМ. рН предпочтительно доводят до величины, которая, с одной стороны, является фармацевтически приемлемой для введения людям или животным, а с другой стороны, не оказывает повреждающее действие на вирус. Таким образом, рН должен быть в диапазоне от 6,0 до 9,0, предпочтительнее в диапазоне от 7,2 до 7,8. Наиболее предпочтительный рН составляет 7,4.
Неожиданно хорошие результаты при использовании лишенного фосфата буфера получают независимо от того, является ли вирус в композиции неочищенным, очищенным или частично очищенным.
Предпочтительными являются очищенные или частично очищенные вирусы.
Композиция в соответствии с настоящим изобретением, в частности, водная композиция, может содержать соли, такие как №С1. Типичные концентрации для Νη(Ί находятся в диапазоне от 10 до 200 мМ. Примером предпочтительной концентрации Νη(Ί является 140 мМ.
Композиция в соответствии с настоящим изобретением, в частности, водная композиция, кроме того, может содержать соли Б-глутаминовой кислоты. Соль представляет собой предпочтительно монокалиевую соль или мононатриевую соль. Концентрация соли Б-глутаминовой кислоты находится предпочтительно в диапазоне от 0,05 до 0,5 г/л, предпочтительнее, в диапазоне от 0,1 до 0,15 г/л.
Некоторые особенно предпочтительные водные композиции в соответствии с настоящей заявкой перечислены в следующей табл.1. Во всех композициях, приведенных в табл. 1, буфер представляет собой 10 мМ ТК18, рН=7,4, количество Νη(Ί составляет 140 мМ.
Таблица 1
| Модифицированный вирус коровьей оспы Анкара (МУА) | Первая добавка (г/л) | Вторая добавка (г/л) | Третья добавка (г/л) | Способ в табл. 6 |
| [ТСЫЭзо/тЦ | ||||
| 5x10° | 25 (сахароза) | 10,5(декстран) | 0,06 (Ьглутаминовая кислота) | ОТ8 |
| 5x10® | 34,5(сахароза) | 14,5(декстран) | 0,083 (Ьглутаминовая кислота) | ОТ8 |
| 5x10® | 45(сахароза) | 18,9 (декстран) | 0,108 (Ьглутаминовая кислота) | ОТ 9 |
| 5x10° | 60 (сахароза) | 25,2(декстран) | 0,144 (Ьглутаминовая кислота) | ОТ9 |
| 1x10° | 45 (сахароза) | 18,9(декстран) | 0,108 (Ьглутаминовая кислота) | |
| 1x10® | 45(сахароза) | 3,78(декстран) | 0,108 (Ьглутаминовая кислота) |
Водная композиция в соответствии с настоящим изобретением подходит для лиофилизации. Для введения лиофилизированный продукт необходимо растворить соответствующим растворителем. В соответствии с одним вариантом реализации стерильную воду добавляют к лиофилизированному продукту для того, чтобы ввести соединения в раствор. Предпочтительно количество добавленной воды более или менее соответствует количеству воды, которая была удалена во время лиофилизации. Таким образом, в соответствии с данным вариантом реализации композиция продукта с восстановленным влагосодержанием более или менее идентична исходной водной композиции. Поэтому в пределах диапазона притязаний настоящего изобретения находится то, что водную композицию в соответствии с настоящим изобретением используют в качестве вакцины. В соответствии с альтернативным вариантом реализации, лиофилизированный продукт можно также растворить в любом другом фармацевтически приемлемом разбавителе, который можно использовать в соответствующих количествах. В качестве примера разбавитель может представлять собой воду, включающую один или более из соединений, выбранных из фенола, глицерина и буфера. Концентрация фенола в продукте с восстановленным влагосодержанием составляет, например, 0,5%. Как указано выше, буфер предпочтительно не является фосфатным буфером.
Резюмируя, данный аспект изобретения касается, наряду с другими вариантами, следующих особенно предпочтительных вариантов реализации: (I) Композиция, в частности водная композиция, включающая или даже состоящая из очищенного или частично очищенного поксвируса, выбранного из группы, состоящей из ортопоксвирусов, авипоксвирусов, парапоксвирусов, каприпоксвирусов и суипоксвирусов, дисахарида, фармацевтически приемлемого полимера и, необязательно, буфера, причем буфер представляет собой предпочтительно не фосфатный буфер. Предпочтительно полимер представляет собой декстран, предпочтительно в количествах, как определено выше. (II) Композиция, в частности водная композиция, включающая или даже состоящая из поксвируса, выбранного из группы, состоящей из ортопоксвирусов, авипоксвирусов, парапоксвирусов, каприпоксвирусов и суипоксвирусов, дисахарида, фармацевтически приемлемого полимера и, необязательно, буфера, где буфер представляет собой не
- 6 006880 фосфатный буфер, и где поксвирус является предпочтительно очищенным или частично очищенным вирусом. Предпочтительно полимер представляет собой декстран, предпочтительно в количествах, как определено выше. (ΙΙΙ) Композиция, в частности водная композиция, включающая или даже состоящая из поксвируса, выбранного из группы, состоящей из ортопоксвирусов, авипоксвирусов, парапоксвирусов, каприпоксвирусов и суипоксвирусов, дисахарида, фармацевтически приемлемого полимера и, необязательно, буфера, где полимер представляет собой декстран в количествах, как определено выше, в качестве примера, предпочтительно в диапазоне от 5 до 40 г/л. Предпочтительно буфер представляет собой не фосфатный буфер. Предпочтительно поксвирус является очищенным или частично очищенным вирусом.
Термин «состоящая», используемый выше в контексте вариантов (Ι), (ΙΙ) и (ΙΙΙ), относится к композициям, состоящим только из упомянутых выше соединений, и к композициям, содержащим, кроме того, одну или более солей. Примерами солей, которые можно добавить к композициям (Ι), (ΙΙ) и (ΙΙΙ), состоящим из определенных выше соединений, являются КС1, №С1, глутамат натрия. Таким образом, термин «состоящая» в определении определенных выше композиций (Ι), (ΙΙ) и (ΙΙΙ), не исключает возможности добавления одной или более солей.
В качестве примера, конкретный вариант реализации настоящего изобретения включает водную композицию, включающую очищенный или частично очищенный поксвирус, выбранный из группы, состоящей из ортопоксвирусов, авипоксвирусов, парапоксвирусов, каприпоксвирусов и суипоксвирусов, дисахарид, фармацевтически приемлемый полимер и буфер, где дисахарид представляет собой сахарозу в определенных выше количествах, где полимер представляет собой декстран в определенном выше количестве, и где буфер является не фосфатным буфером. В качестве примера, другой конкретный вариант реализации настоящего изобретения включает водную композицию, состоящую из поксвируса, выбранного из группы, состоящей из ортопоксвирусов, авипоксвирусов, парапоксвирусов, каприпоксвирусов и суипоксвирусов, дисахарида, фармацевтически приемлемого полимера и, необязательно, буфера. Поксвирус предпочтительно представляет собой очищенный или частично очищенный поксвирус. Предпочтительные количества и примеры дисахарида, полимера и буфера очерчены выше.
В пределах навыков практикующего врача находится то, как такие композиции, в частности, водные композиции, содержащие поксвирусы, можно вводить, и какие количества вируса использовать для вакцинации. Как указано выше, вакцины можно использовать для индукции иммунного ответа против самих поксвирусов, в частности, если используют ослабленные или не патогенные, не рекомбинантные поксвирусы. Если поксвирусы представляют собой рекомбинантные поксвирусы, иммунный ответ дополнительно возникает против рекомбинантного белка/пептида, экспрессируемого вектором поксвируса.
Если нет других указаний, используемый выше термин «композиция» обычно относится к жидким композициям, предпочтительно водным композициям. Если концентрации или диапазоны концентрации определены в «мМ», «г/л» и т.д., это является указанием на то, что соответствующая композиция является жидкостью или даже водной композицией. Термин «водная композиция» относится к тем композициям, в которых разбавитель представляет собой воду. Однако диапазон притязаний настоящего изобретения также охватывает те сухие композиции, которые можно изготовить из жидкости или даже водной композиции в соответствии с настоящим изобретением удалением жидкости, независимо от способа, который используют для указанного удаления. Таким образом, изобретение также охватывает те сухие композиции, которые получают способами, отличными от лиофилизации.
В частности, настоящее изобретение, кроме того, относится к способу изготовления устойчивой, содержащей поксвирус композиции, отличающейся тем, что композицию в соответствии с настоящим изобретением, в частности, водную композицию, лиофилизируют. Если нет других указаний, в настоящей заявке термины «устойчивая композиция, содержащая поксвирус», и «лиофилизированная композиция, содержащая поксвирус», используются взаимозаменяемо. Термин «устойчивая композиция, содержащая поксвирус», используется в настоящей заявке для определения композиций, содержащих поксвирус, в которых общая потеря титра вируса при температуре инкубации 37°С в течение 28 дней составляет менее чем 0,5 1од., предпочтительно менее чем 0,4 1од. Подробный протокол для определения титра вируса, а, следовательно, общей потери титра вируса приведен в разделе примеров. Однако можно также использовать любой другой протокол для определения вирусного титра.
Способы лиофилизации в целом известны специалисту в данной области (Оау, 1. апб Μс^е11ап, Μ., Μеΐйοб8 ΐπ Μο^υ^ В1о1оду, Нитапа Ргекк, (1995) νο1. 38).
Процесс лиофилизации обычно состоит из следующих этапов, которые подробнее объяснены ниже:
1. Изготовление вакцины;
2. Замораживание образца;
3. Первичная сушка (сублимация);
4. Вторичная сушка (десорбция);
5. Укупорка и перемещение продукта;
6. Хранение вакцины;
7. Восстановление влагосодержания.
- 7 006880
Изготовление вакцины
Продуцирование и амплификация поксвирусов, которые предстоит использовать в качестве вакцин, было подробно объяснено выше. Поксвирусы являются необязательно очищенными. Композицию в соответствии с настоящим изобретением получают добавлением определенных выше дисахаридов, полимеров и, необязательно, буфера, Ь-глутаминовой кислоты и, необязательно, дополнительных добавок к препарату поксвируса.
Замораживание образца
Замораживание образца иммобилизует компоненты в растворе, предотвращая посредством этого вспенивание продукта, когда снижено давление. Замораживание представляет собой двухэтапный процесс, в течение которого вода первоначально образует центры кристаллизации с последующим ростом кристаллов льда, приводя к образованию смеси льда и концентрата растворенных веществ. Образование центров кристаллизации стимулируется снижением температур и перемешиванием охлажденной суспензии. В отличие от образования центров кристаллизации увеличение количества льда стимулируется увеличением температуры, уменьшая посредством этого вязкость суспензии. Независимо от точного типа замораживания, распространение льда по среде приводит к увеличению концентрации растворенного вещества. Биополимеры в растворе или суспензии повреждаются или инактивируются под воздействием указанных увеличивающихся концентраций растворенного вещества. Быстрое охлаждение минимизирует контакт биопродукта с концентратом. Выше критической температуры (температуры стеклования) вязкость массы может достаточно уменьшаться с тем, чтобы стекло стало мягче и деформировалось. Оно высыхает с образованием бесструктурного, липкого остатка внутри флакончика. Температуру деформации называют температурой разрушения. Конкретнее, температуру разрушения определяют как температуру, при которой подвижность воды в интерстициальной области матрицы становится значительной. Во избежание деформации температура замораживания должна быть ниже температуры разрушения водной композиции. Температуру разрушения можно определить в соответствии со способами, известными специалисту в данной области, например, дифференциальным термическим анализом (1епшпдз, Т.А. , Ьуορίιίΐίζηΐίοη. ΙηίΓοάιιοΙίοη апй Вазю Ртше1р1ез, Шегрйатш Ргезз, Эепует, СО, И8, 1999, Ι8ΒΝ 1-57491-081-7, радез 132-134).
Если температура слишком низкая, диффузия воды из вируса может быть ингибирована, и может произойти повреждение внутриклеточным льдом. Следовательно, специалист в данной области должен эмпирически испытать несколько температур замораживания, все из которых ниже температуры разрушения водной композиции, и он должен испытать, какая температура приводит к изготовлению лиофилизированного продукта, имеющего самый высокий титр инфекционных поксвирусов.
Первичная сушка (сублимация)
Первичная сушка представляет собой ту часть процесса лиофилизации, которая запускает сублимацию растворителя (льда) из замороженной матрицы. Процесс первичной сушки начинается после того, как лиофилизатор приобретает требуемую температуру конденсатора и давление в камере. Давление в камере составляет обычно менее чем 1 мбар, предпочтительно менее чем 0,2 мбар. Обычно давление находится в диапазоне от 0,04 до 0,12 мбар. Во всем данном описании данные условия иногда именуют «низким давлением».
Температуру на полке камеры увеличивают таким образом, что происходит сублимация льда в матрице продукта, и температура продукта значительно ниже, чем температура разрушения композиции для обеспечения полностью замороженной матрицы в течение всего процесса первичной сушки и для обеспечения лиофилизации без разрушения. Температура может оставаться постоянной в течение всего процесса первичной сушки. Альтернативно, температуру на полке камеры можно непрерывно увеличивать в течение первичной сушки. Однако температура продукта должна быть ниже температуры разрушения в течение всего процесса первичной сушки. В конце первичной сушки высушенный продукт еще может содержать более чем 5% влаги (мас./мас.). Для изготовления продукта с содержанием влаги, которое больше не поддержит биологический рост или химические реакции, необходимо провести этап вторичной сушки.
Вторичная сушка (десорбция)
В течение вторичной сушки происходит десорбция водяного пара с поверхности лепешки, которая образуется в течение первичной сушки. Это осуществляется увеличением температуры, в то время как камера еще находится при низких давлениях с тем, чтобы происходила десорбция воды с поверхности лепешки.
Температуры на полке камеры для вторичной сушки определяют устойчивостью продукта, и они могут быть в диапазоне от 0 до +30°С. Температура продукта обычно находится в диапазоне от -5 до 30°С. Предпочтительнее температура в диапазоне от 5 до 20°С. Вторичную сушку можно проводить в 2 этапа. На первом этапе температура продукта может быть в диапазоне от -5°С до +15°С, предпочтительно в диапазоне от 0 до + 10°С, предпочтительнее в диапазоне от 2 до +7°С. Второй этап проводят при более высокой температуре, чем вторичная сушка на первом этапе. Температура может быть в диапазоне от 0 до 30°С, предпочтительно в диапазоне от +5 до +20°С. Также содержание остаточной влаги композиции зависит от требований продукта. Некоторые продукты требуют более высокого, некоторые про
- 8 006880 дукты - более низкого содержания влаги для достижения наилучшей устойчивости продукта. Оптимальное содержание влаги, а также время для достижения этого следует определить эмпирически.
Процесс вторичной сушки продолжают до тех пор, пока не будет достигнута желательная влажность. Способы определения влаги в продукте известны специалисту в данной области. В частности, можно использовать кулометрическое титрование Каг1-Е1§сйег ^еиитдз, Т.А., I уорЫН/аиоп, 1и1гобисйои аиб Ва§1с Рг1ис1р1е§, 1и!егрйагт Рге§8, Веиуег, СО, ϋ8, 1999, I8ΒN 1-57491-081-7, раде§ 415-418). Остаточное содержание влаги составляет предпочтительно менее чем 5%, предпочтительнее в диапазоне от 0,5 до 4%, еще предпочтительнее в диапазоне от 1 до 3%.
Укупорка и перемещение продукта
Все флакончики, содержащие продукт, укупоривают в соответствии со способами, известными специалисту в данной области. Флакончики можно укупорить при очень низком давлении (например, 0,042,56 мбар) непосредственно в лиофилизаторе. Можно также укупорить флакончики при более или менее нормальном давлении при использовании химически инертного газа, такого как азот или гелий. Обычно флакончики можно укупорить в атмосфере азота при давлении 900 мбар. Флакончики закрывают предпочтительно использованием пробок из синтетического бутилкаучука. Как только продукт укупорен, систему можно вернуть в атмосферное давление, и полку камеры можно разгрузить. После этого флакончики, кроме того, можно укупорить алюминиевыми колпачками для длительного хранения.
Хранение вакцины
Лиофилизированный продукт можно хранить при комнатной температуре (25°С), и он остается устойчивым в течение по меньшей мере 18 нед., предпочтительно по меньшей мере 20 нед., предпочтительнее по меньшей мере 22 нед. при указанной температуре. «Устойчивый при определенной температуре в течение определенного периода времени» означает, что потеря вирусного титра при данной температуре составляет менее 0,5 1од в течение данного периода времени. Однако если имеется охлаждение, предпочтительно, чтобы лиофилизированный продукт хранился при более низких температурах, таких как 4°С. Предпочтительно продукт хранят в темноте. Если это невозможно, предпочтительно использовать цветное стекло для хранения или любые другие флакончики, которые позволяют избежать повреждающего воздействия света.
Восстановление влагосодержания
Для восстановления влагосодержания лиофилизированного продукта соответствующее количество растворителя добавляют к лиофилизированному продукту, что приводит к изготовлению фармацевтически приемлемой композиции, обеспечивающей возможность введения людям или животным. Растворитель представляет собой предпочтительно воду. Обычно растворитель добавляют к композиции в количестве, которое соответствует по существу количеству растворителя, потерянному во время процесса лиофилизации.
Изобретение относится также к лиофилизированному продукту, полученному способом в соответствии с настоящим изобретением.
Таким образом, лиофилизированный продукт в соответствии с настоящим изобретением включает (1) поксвирус, предпочтительно, родов ОгШороху1ги§ или Ау1роху1ги§, (ίί) дисахарид, (ш) фармацевтически приемлемый полимер и, необязательно, (ΐν) буфер, где поксвирус, дисахарид, полимер и буфер такие, или определенные выше.
Типичные композиции в лиофилизированном продукте показаны в следующей табл. 2. Во всех композициях, показанных в табл. 2, количество вируса составляет 5 х 108 ТСГО50/мл.
Таблица 2
Количество Ό3Ο [%] в водной композиции перед лиофилизацией (Ό3Ο: 63 г/л декстрана с молекулярной массой 36000-44000, 150 г/л сахарозы, 0,36 г/л моногидрата мононатриевой соли Ьглутаминовой кислоты) Сахароза (%) в лиофилизированном продукте_______________
Декстран (%) в лиофилизированном продукте_______________
Моногидрат мононатриевой соли Ъглутаминовой кислоты (%) в лиофилизированном •продукте________________
Средняя величина лиофилизированной лепешки (мг) (при заполнении 1.2 мл)
58,4 (72 мг) (15,12 мг)
24,7 (22,68 мг)
0,13 (0,0864 мг)
0,14 (0,1296 мг)
0,14 (0,1728 мг)
65,8
123,1
- 9 006880
Лиофилизированный продукт в соответствии с настоящим изобретением используют для изготовления вакцины. Для этого лиофилизированный продукт повторно растворяют/восстанавливают влагосодержание в нем, как описано выше, и вводят человеку или животному в соответствии со способами, известными специалисту в данной области.
Краткое объяснение фигур
На фиг. 1 показана устойчивость содержащей МУА лиофилизированной композиции при температуре 31 °С. Испытанная композиция представляет собой СТ23 (см. раздел примеров и табл. 6). Титр вируса в водной композиции в соответствии с настоящим изобретением определяют перед лиофилизацией. Лиофилизацию проводили, как описано для СТ23 (см., примеры и табл. 6). После лиофилизации композицию хранили при 31°С. В указанные моменты времени восстанавливали влагосодержание лиофилизированной композиции, и снова определяли вирусный титр.
Фиг. 2 и 3 показывают результаты того же эксперимента, как описано в подписи к фиг. 1, за исключением того, что температура инкубации была 37°С на фиг. 2 и 45°С на фиг. 3.
Примеры
Следующие примеры дополнительно проиллюстрируют настоящее изобретение. Специалисту в данной области будет понятно, что приведенный пример (примеры) никоим образом нельзя трактовать как ограничение применимости технологии, предоставленной настоящим изобретением.
Пример 1. Лиофилизация композиций, содержащих штамм Анкара модифицированного вируса коровьей оспы (МУА).
В данном примере композиции в соответствии с настоящим изобретением, содержащие МУА, лиофилизировали в различных условиях. Лиофилизированный продукт хранили при различных температурах. Устойчивость МУА в препарате анализировали определением титра МУА после восстановления влагосодержания лиофилизированного продукта и сравнения его с титром МУА перед лиофилизацией. Определяли влияние различных периодов времени хранения на вирусный титр. Протокол для определения вирусного титра в композиции, содержащей МУА, приведен в примере 2.
1. Структура экспериментов
Изготовление вакцин/композиций
Для испытания способа лиофилизации в соответствии с настоящим изобретением использовали несколько препаратов МУА. Для экспериментов по лиофилизации (ряды СТ1-4, 6-10 и 13-15 в таблице) использовали штамм Анкара модифицированного вируса коровьей оспы (МУА). Вирус очищали центрифугированием с использованием 36 и 40% - сахарозных подушек с последующим ресуспендированием в 1 мМ Тпк-буфера при рН 9.
В экспериментах по лиофилизации СТ1-4 (табл. 6) добавок не использовали. Использованная буферная система представляла собой 10 мМ Тпк со 140 мМ №С1 при рН 7,4. Для лиофилизации, начинающейся с номера СТ6 (табл. 6), использовали различные добавки без изменения буферной системы.
Выбирали две различные композиции с различными добавками. Добавки вводили в растворы, содержащие вирус, добавлением буфера для разведения. Использованная композиция буферов для разведения показана в следующих табл. 3 и 4. Добавление буфера 1 для разведения (О8С) приводило к изготовлению водной композиции в соответствии с настоящим изобретением. Использование буфера 2 для разведения (ОСС) приводило к изготовлению композиции, используемой для сравнительного анализа.
Таблица 3
| Буфер 1 для разведения (БЗС) | Концентрация в маточном растворе (г/л) | |
| Декстран (молекулярная масса 36000-44000) | 63 | |
| Сахароза | 150 | |
| Моногидрат мононатриевой Ь-глутаминовой кислоты | соли | 0,36 |
Таблица 4
| Буфер 2 для разведения (ϋθ(3) | Концентрация в маточном растворе (г/л) | |
| Декстран (молекулярная масса 36000-44000) | 63 | |
| Глюкоза | 150 | |
| Моногидрат мононатриевой Ь-глутаминовой кислоты | соли | 0,36 |
Указанные буферы для разведения использовали при различных концентрациях в конечных композициях. Буфер 1 для разведения (О8С) использовали при 16,7, 23, 30 и 40% (об./об.), буфер 2 для разведения (ОСС) использовали при 20% (об./об.). ТСГО50/мл конечной композиции доводили до 5 х 108 ТСГО50/мл физиологическим Тпк-буфером (10 мМ Тпк-буфер; 140 мМ №С1; рН 7,4).
- 10 006880
Замораживание образца
Образцы замораживали внутри лиофилизатора (лиофилизатор С’Ьпк! тип альфа 2-4). Для композиции с сахарозой (О8С) сравнение различных температур замораживания (от -30 до -45°С) показало, что суспензию следует замораживать до -40°С, которая ниже температуры разрушения композиции, для изготовления отличной структуры лепешки. При замораживании внутри лиофилизатора, температуру -40°С достигали в пределах приблизительно от 3,5 до 4,5 ч (начиная приблизительно при 20°С).
Первичная сушка
Для композиции с сахарозой (Э8С) температура разрушения приблизительно от -30 до -37°С приобреталась за счет температуры разрушения сахарозы (-31°С). Поэтому температуру продукта доводили до величин в диапазоне от -37 до -41°С для обеспечения полностью замороженной матрицы. Использовали величины давления 0,04 и 0,12 мбар (-50°С и -40°С на фазовой диаграмме воды).
Движущей силой сублимации во время первичной сушки является разница давления между продуктом и конденсатором лиофилизатора, созданная разницей их температур. Закон природы состоит в том, что по мере уменьшения температуры воды, давление над данной водой также уменьшается. Конкретная температура воды всегда связана с конкретным давлением. Конденсатор устанавливали на температуры в диапазоне от -83 и -89°С. Давление в камере и температура на полке регулируют температуру продукта. Это указывает на то, что длительность первичной сушки нельзя очень легко укоротить, потому что температура конденсатора фиксирована. Для увеличения температуры продукта Тс композиции является ограничивающим фактором.
Вторичная сушка
Температуры для вторичной сушки определяют устойчивостью продукта. Содержание остаточной влаги в композиции также зависит от требований продукта. Некоторые требуют более высокого, некоторые более низкого содержания влаги для достижения наилучшей устойчивости продукта. Оптимальное содержание остаточной влаги, а также время до его достижения следует определять эмпирически. Поскольку вторичная сушка начинается, когда продукт достигает температуры выше 0°С, вторичную сушку проводили в 2 этапа. На первом этапе температуру на полке камеры регулировали в течение нескольких часов (в диапазоне от 4 до 7 ч) таким образом, что температура продукта была выше 0°С (в диапазоне от 4 до 6°С) . Таким образом, достигали таяния всего возможно существовавшего льда, который оставался после первичной сушки. При использовании таких мягких условий для начала вторичной сушки повреждения продукта будут минимизированы. Затем начинали второй этап увеличением температуры продукта до величин в диапазоне от 18 до 21°С в течение 20-30 ч. Время для второго этапа сильно зависит от желаемой остаточной влаги лиофилизированного продукта. Для получения различных величин содержания остаточной влаги использовали различные периоды времени. В качестве анализа для измерения содержания остаточной влаги в лиофилизированном материале использовали кулометрическое титрование Каг1-Р18сйег (кппшдк, Т.А., ЬуорЬШ/айоп, 1п!гобисйоп апб Вайс Ргшс1р1е8, 1п1егрЬагт Ргекк, Оегкег СО, И8, 1999, Ι3ΒΝ 1-57491-081-7, радек 415-418).
Укупорка и перемещение продукта
Все продукты, изготовленные во время разработки способа, укупоривали при очень низком давлении (0,04-2,56 мбар) непосредственно в лиофилизаторе. Флакончики закрывали с использованием пробок из синтетического бутилкаучука. Как только продукт укупоривали, систему возвращали в атмосферное давление, и полку камеры разгружали. Затем флакончики герметизировали алюминиевыми колпачками для длительного хранения.
Хранение вакцины
Важным аспектом практики составления композиции является производство вакцины, которая устойчива при хранении. Факторы, влияющие на устойчивость, включают содержание остаточной влаги, состав атмосферы при герметизации и условия хранения, включая температуру, влажность и свет.
Все различные партии, изготовленные во время разработки способа, хранили при 4°С и при комнатной температуре. Кроме того, несколько партий также хранили при 31, 37 и 45°С.
Все образцы хранили в темноте.
Восстановление влагосодержания
Влагосодержание в лиофилизированных образцах восстанавливали автоклавированной водой Μί11ίр. Конкретнее, воду (1,2 мл) добавляли к образцу с использованием шприца. Суспензию смешивали легким встряхиванием. Восстановление влагосодержания занимает лишь несколько секунд. Определяли титр вируса в продукте с восстановленным влагосодержанием и сравнивали с титром вируса перед лиофилизацией.
Ускоренный тест на устойчивость
Устойчивость композиции СТ23 (см табл. 6) оценивали при 31, 37 и 45°С. Вирусный титр регулярно контролировали. Результаты показаны на фиг. 1-3.
2. Результаты и выводы:
ΜνΑ лиофилизировали с использованием различных добавок и без них. Было показано, что композиции без добавок неустойчивы (см. табл. 6). В данном контексте образцы считали устойчивыми, когда титр не падал более, чем на 0,5 1од. Таким образом, термин «устойчивая при определенной температуре в
- 11 006880 течение определенного периода времени» означает, что потеря вирусного титра при данной температуре составляет менее, чем 0,5 1од в течение данного периода времени. Композиция «ослабевает», если потеря титра вируса в течение указанного периода времени при указанной температуре составляет 0,5 1од или более. Композиции, включающие декстран и глюкозу, проявили очень низкую устойчивость при комнатной температуре. Композиции настоящего изобретения, включающие различные концентрации сахарозы и декстрана, оказались устойчивыми. Устойчивость МУЛ в композициях в соответствии с настоящим изобретением составляет по меньшей мере 25 нед. при 4°С и комнатной температуре.
Подробная информация по отдельным экспериментам представлена в табл. 6:
В табл. 6 показано, что устойчивость композиций без добавок (табл. 6, ΘΤ1-4) была очень низкой. Лишь через несколько недель они теряли 0,5 1од их исходного, первоначального титра, что неприемлемо.
Композиция с 20% (об./об.) ΌΘΘ была неприемлема вследствие разрушения материала во время процесса лиофилизации (данные не показаны). Данное разрушение можно объяснить низкой Тс глюкозы, заметно не увеличивавшуюся при использовании декстрана, который имеет высокую Тс (-11°С). Для первичной сушки использовали самую низкую возможную температуру оборудования для лиофилизации (-45°С). Поэтому было невозможно уменьшить температуру ниже Тс глюкозы. Композиции с 30% (об./об.) ΌΘΘ не разрушались. Данный феномен, вероятно, связан с более высоким общим количеством декстрана, который увеличивает Тс до величины, более высокой, чем температура, использованная для первичной сушки.
Хотя материал не разрушался, устойчивость, особенно при комнатной температуре, была неудовлетворительной, что могло быть вследствие низкой Тс глюкозы в твердом состоянии (табл. 6, ΘΤ 10).
Буфер для разведения 1 (Ό8Θ) использовали в большинстве экспериментов. Стабилизация данной добавкой очень хорошая. Вследствие высокой Тс (-31 °С) сахарозы, разрушение не было проблемой с данной композицией. Устойчивость лиофилизированного материала была всегда хорошей (табл. 6). Не было больших различий между использованием 16,7, 20, 23, 28,6, 30 и 40% (об./об.) Ό8Θ в композиции. Устойчивость при 4°С и комнатной температуре доказана для всех 6 композиций. Лиофилизированные продукты с 30 и 40% Ό8Θ имели несколько лучшую устойчивость.
Одну композицию (процесс ΘΤ 23, см. табл. 6) подробно анализировали в ускоренном тесте на устойчивость. Результаты показаны на фиг. 1-3 и сведены в следующей ниже табл. 5.
Таблица 5
| Температура [°С] | Потеря титра (экспериментальные данные) | Потеря [дни] | 0,5 1од через (рассчитанные) |
| 31 | 0,245 1од через 29 дней | 59 | |
| 37 | 0,321 1од через 35 дней | 54 | |
| 45 | 0,332 1од через 29 дней | 44 |
При 31°С вакцину хранили приблизительно в течение 1 мес., и она еще отвечала спецификациям (потеря титра вируса менее половины логарифма). Но даже при более высоких температурах можно было хранить вакцину в течение более 1 мес., что может быть интересным, особенно для тропических регионов.
Для старых вакцин против натуральной оспы ВОЗ рекомендовала способ оценки устойчивости. Если вакцина теряла менее 1 1од в пределах 4 нед. при 37°С, ее считали устойчивой в течение, по меньшей мере, 1 года при хранении при 4°С (критерием приемлемости для использования старой вакцины была потеря менее, чем 1 1од). Как показано, композиция ΘΤ23 в соответствии с настоящим изобретением соответствует указанному критерию.
Пример 2. Титрование модифицированного вируса коровьей оспы Анкара (МУА)
Титрование модифицированного вируса коровьей оспы Анкара (МУА) выполняют в анализе на основе Τί.ΊΙ)50 с использованием 10-кратных разведений в 96-луночной планшете. В конечной точке анализа инфицированные клетки визуализируют с использованием антитела против вируса коровьей оспы и соответствующего окрашивающего раствора.
2-3-дневные первичные клетки СЕР (фибробласты куриных эмбрионов) разводят до 1 х 105 клеток/мл в 7% КРМ1. 10-кратные разведения производят с 8 повторениями на разведение. После разведения 100 мкл высевают на лунку 96-луночных планшет. Затем клетки инкубируют в течение ночи при 37°С и 5% СО2.
Разведения растворов, содержащих вирус, производят 10-кратными шагами (как целесообразно, от 10-1 до 10-12) с использованием КРМ1 без фетальной бычьей сыворотки. Затем 100 мкл каждого образца вируса добавляют в лунки, содержащие клетки. 96-луночные планшеты инкубируют при 37°С с 5% СО2 в течение 5 дней для обеспечения возможности инфицирования и вирусной репликации.
Через 5 дней после инфекции клетки окрашивают антителом, специфичным для вируса коровьей оспы. Для выявления специфического антитела используют вторичное антитело, соединенное с пероксидазой хрена (НКР). Антитело, специфичное для МУА, является антителом против вируса коровьей оспы, кроличья поликлональная фракция Ιμ6 (ОиаПеН, Вегйп, Оегшапу #9503-2057). Вторичное антитело пред
- 12 006880 ставляет собой козье поликлональное антитело против кроличьего 1§С, связанное с НКР, (Рготеда, МаппКепт Сегтаиу, #^4011). Цветную реакцию проводят в соответствии с известными методиками.
Каждую лунку с клетками, которые положительны при цветной реакции, маркируют в качестве положительных лунок для расчета
ТСГО50.
Титр рассчитывают с использованием формулы Бреагтаи [11] и КаегЬег [2]. Ввиду того, что все параметры анализа поддерживаются на постоянном уровне, используют следующую упрощенную формулу: г Ί Γα+1,5+^+^1
Титр вируса[ГСГО50 / ΙΊΐΐ] = 10*· а = фактор разведения последней колонки, в которой все 8 лунок положительны /а = количество положительных лунок в колонке а+1 /Ь = количество положительных лунок в колонке а+2 /с = количество положительных лунок в колонке а+3
Таблица 6. Данные устойчивости поксвирусов в различных лиофилизированных композициях
| Способ | Добавки | Замсраошвание | Первичная сушка | Вторичная сушка | Устойчивость |
| СТ1 | ___ | До -3 0°С | Давление: 0,37 мбар Температура на полке камеры: 2°С (в течение 20 ч) | Давление: 0,37 мбар Температура на полке камеры: 5°С (в течение 2,5 ч) 8°С (в течение 1 ч) 10°С (в течение 2 ч) | Ослабевает через 1 нед при комнатной температуре и 3 7°С |
| СТ2 | — | До -40°С | Давление: 0,12 мбар Температура продукта: -13°С (в течение 24 ч) | Давление: 2,56 мбар Температура продукта: -4°С (в течение 3,5 ч) 12°С (в течение 4 ч) | Ослабевает через 11 дней при комнатной температуре и 37°С |
| етз | — | До -3 9°С | Давление: 0,07 мбар Температура продукта: -16°С (в течение 24 ч) | Давление: 0,07 мбар Температура продукта: -1°С (в течение 2,75 ч) 7°С (в течение 3,5 ч) | Ослабевает через 23 дня при комнатной температуре |
| ОТ4 | --- | До -45°С | Давление: 0,04 мбар · Температура продукта: -37°С (в течение 25,5 ч) | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: -3°С (в течение 6 ч) 14°С (в течение 26,5 ч) | Ослабевает через 2 нед при 4°С и комнатной температуре |
| ОТ6 | 30% Ό3Ο | До -44°С | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: -42°С (в течение 23 ч) | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: 5°С (в течение 6 ч) 16°С (в течение 25 ч) | Композиция устойчива при 4°С в течение, по меньшей мере, 34 нед, при комнатной температуре в течение, по меньшей мере, 20 нед |
| СТ7 | 23% Ό3Θ | До -44°С | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: -37°С (в течение 22,5 ч) | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: 0°С (в течение 7 ч) 13°С (в течение 24 ч) | Композиция устойчива, по меньшей мере, 46 нед при температуре 4°С |
| СТ8 | 16,7% и 23% ЦЗС | До -42°С | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: -38°С (в течение 24 ч) | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: 4°С (в течение 8 ч) 17°С (в течение 21 ч) | При температуре 4°С устойчива, по меньшей мере, 45 нед |
| ОТ 9 | 30% ОЗО и 40% 03(3 | До -44°С | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: -37°С (в течение 25,5 ч) | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: 4°С (в течение 6,5 ч) 17°С (в течение 24 ч) | Композиция с 30% Ό3Θ: устойчива при 4°С в течение, по меньшей мере, 57 нед, при комнатной температуре в течение, по меньшей мере, 43 нед. Композиция с 40% ϋ36: устойчива при 4°С и комнатной температуре в течение, по меньшей мере, 43 нед |
| отю | 30% 000 | До -35°С | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: -37°С (в течение 23 ч) | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: 6°С (в течение 6,5 ч) 19°С (в течение 24 ч) | Композиция устойчива при 4°С в течение 42 нед. Композиция ослабевает через 10 нед при комнатной температуре (КТ) |
| 6Т11 | 20% 000 | До -45°С | Давление: 0,04 мбар | Давление: 0,04 мбар | Композиция ослабевает при |
- 13 006880
| Температура продукта: (в течение 23 ч) | -41°С | Температура продукта: 5°С (в течение 4 ч) 19°С (в течение 25,5 ч) | 4°С через 56 нед, при КТ через 14 нед | ||||
| ОТ12 | 30% | Ώ8Θ | До -40°С | Давление: 0,04 Температура продукта: (в течение 24 ч) | мбар -37°С | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: 4°С (в течение 6 ч) 17°С (в течение 24 ч) | Композиция устойчива в течение, по меньшей мере, 54 нед при 4°С, при 25°С устойчива в течение, по меньшей мере, 40 нед |
| ΘΤ13 | 30% | бзс | До -40°С | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: (в течение 19 ч) -15°С течение 9 ч) | -38°С (в | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: 4°С (в течение 15,5 ч) 17°С (в течение 26,5 ч) | Композиция устойчива в течение, по меньшей мере, 36 нед при 4°С |
| ОТ14 | 30% | Ό3Θ | До -40°С | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: (в течение 21,5 ч) -13 течение 17,5 ч) | -38°С °С (в | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: 15°С (в течение 6,5 ч) 18°С (в течение 26,5 ч) | Композиция устойчива в течение, по меньшей мере, 50 нед при 4°С, при 25°С устойчива в течение, по меньшей мере, 19 нед |
| ОТ15 | 30% | ϋ3Θ | До -41°С | Давление: 0,04 Температура продукта: (в течение 20 ч) | мбар -37°С | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: 5°С (в течение 3 ч) 17°С (в течение 24,5 ч) | Композиция ослабевает через 49 нед при 4°С, при 25°С устойчива в течение, по меньшей мере, 18 нед |
| ОТ23 | 30% | ϋ3Ο | До -40°С | Давление: 0,12 Температура продукта: (в течение 21 ч) | мбар -34°С | Давление: 0,04 мбар Температура продукта: 7°С (в течение 18 ч) 17°С (в течение 28 ч) | Данные см. Ускоренный тест устойчивости на фиг.1-3 |
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Claims (22)
1. Композиция, включающая (1) вирус осповакцины с титром по меньшей мере 106 ТСГО50 на мг общего белка, (ΐΐ) дисахарид, (ΐΐΐ) фармацевтически приемлемый полимер и (ΐν) буфер, где буфер не является фосфатным буфером.
2. Композиция по п.1, где титр вируса осповакцины составляет по меньшей мере 108 ТСПУ0 на мг общего белка.
3. Композиция по любому из пп.1-2, где вирус осповакцины выбран из штамма Е1§1гее и штамма модифицированного вируса осповакцины Апкага (МУА).
4. Композиция по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что вирус осповакцины представляет собой рекомбинантый вирус осповакцины.
5. Композиция по любому из пп.1-4, где буфер выбран из группы, включающей ТК1З, ТВЗ, МОРЗ, НЕРЕЗ и (би)карбонатный буфер.
6. Композиция по любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что дисахарид выбран из группы, состоящей из сахарозы, лактозы и трегалозы.
7. Композиция по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что концентрация дисахарида находится в диапазоне от 10 до 100 г/л.
8. Композиция по любому из пп.1-7, отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемый полимер выбран из декстрана и поливинилпирролидона (РУР).
9. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что молекулярная масса декстрана находится в диапазоне от 30000 до 70000 и концентрация составляет от 1 до 50 г/л.
10. Композиция по любому из пп.1-9, отличающаяся тем, что композиция дополнительно содержит глутаминовую кислоту.
11. Композиция по любому из пп.1-10, отличающаяся тем, что температура разрушения композиции находится в диапазоне от -37 до -30°С.
12. Композиция по любому из пп.1-11, отличающаяся тем, что вирус осповакцины является вирусом штамма МУА или штамма Е1§1гее, дисахарид является сахарозой и полимер является декстраном.
13. Композиция по любому из пп.1-12, которая является вакциной.
14. Применение композиции по любому из пп.1-12 для получения вакцины.
15. Способ получения стабильной композиции, содержащей вирус осповакцины, характеризующийся тем, что композицию по любому из пп.1-13 лиофилизируют.
16. Способ по п.15, предусматривающий следующие стадии:
(1) замораживание композиции по любому из пп.1-12 до температуры ниже температуры разрушения композиции с получением матрицы замороженного продукта;
(ΐΐ) первичную сушку замороженной композиции при низком давлении и при температуре продукта, обеспечивающей возможность сублимации льда в матрице продукта, где температура продукта ниже, чем температура разрушения композиции;
- 14 006880 (ш) вторичную сушку при низком давлении и при температуре в диапазоне от 0 до 30°С до тех пор, пока остаточная влажность продукта не будет ниже 5%.
17. Лиофилизированный продукт, включающий (1) вирус осповакцины с титром по меньшей мере 106 ТСГО50 на мг общего белка, (й) дисахарид, (ίίί) фармацевтически приемлемый полимер и (ιν) буфер, где вирус осповакцины, дисахарид, полимер и буфер такие, как определено в пп.1-6, 8 и 10.
18. Лиофилизированный продукт, полученный способом по любому из пп.15-16, где используемая для лиофилизации композиция содержит дисахарид в концентрации, как определено в п.7, и/или содержит декстран с молекулярным весом и концентрацией, как определено в п. 9.
19. Лиофилизированный продукт по п.17-18, отличающийся тем, что содержание остаточной влажности находится в пределах 1-3%.
20. Применение лиофилизированного продукта по любому из пп.17-19 для получения вакцины.
21. Способ восстановления лиофилизированного продукта по любому из пп.17-19, характеризующийся тем, что продукт растворяют в соответствующем количестве фармацевтически приемлемого растворителя.
22. Способ вакцинации нуждающегося в ней животного, включая человека, композицией по любому из пп.1-12, вакциной по п.13 или продуктом с восстановленным влагосодержанием, полученным способом по п.21.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DKPA200101831 | 2001-12-10 | ||
| PCT/EP2002/013434 WO2003053463A2 (en) | 2001-12-10 | 2002-11-28 | Poxvirus-containing compositions and process for their preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200400796A1 EA200400796A1 (ru) | 2004-12-30 |
| EA006880B1 true EA006880B1 (ru) | 2006-04-28 |
Family
ID=8160885
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200400796A EA006880B1 (ru) | 2001-12-10 | 2002-11-28 | Композиции, содержащие поксвирус, и способ изготовления устойчивых композиций, содержащих поксвирус |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7094412B2 (ru) |
| EP (1) | EP1418942B1 (ru) |
| JP (1) | JP4439263B2 (ru) |
| KR (1) | KR20040074067A (ru) |
| CN (1) | CN1296096C (ru) |
| AT (1) | ATE300954T1 (ru) |
| AU (1) | AU2002361962A1 (ru) |
| BR (1) | BR0214822A (ru) |
| CA (1) | CA2467365C (ru) |
| DE (1) | DE60205388T2 (ru) |
| DK (1) | DK1418942T3 (ru) |
| EA (1) | EA006880B1 (ru) |
| ES (1) | ES2247414T3 (ru) |
| HK (1) | HK1071295A1 (ru) |
| HU (1) | HUP0402179A3 (ru) |
| IL (2) | IL161590A0 (ru) |
| MX (1) | MXPA04005577A (ru) |
| NO (1) | NO20042958L (ru) |
| NZ (1) | NZ533302A (ru) |
| PL (1) | PL213326B1 (ru) |
| UA (1) | UA78738C2 (ru) |
| WO (1) | WO2003053463A2 (ru) |
Families Citing this family (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7501127B2 (en) | 2002-05-16 | 2009-03-10 | Bavarian Nordic A/S | Intergenic regions as novel sites for insertion of HIV DNA sequences in the genome of Modified Vaccinia virus Ankara |
| PT1434858E (pt) | 2002-09-05 | 2008-07-28 | Bavarian Nordic As | Método de amplificação de um poxvírus em condições sem soro |
| CN1207005C (zh) * | 2002-10-31 | 2005-06-22 | 威世药业（如皋）有限公司 | 含生物活性物质的兔皮和其用途 |
| WO2006029467A1 (en) * | 2004-09-16 | 2006-03-23 | Btf Pty Ltd | Rapid freeze drying process |
| CN101360821A (zh) * | 2005-11-21 | 2009-02-04 | 圣诺菲·帕斯图尔有限公司 | 重组病毒的稳定制剂 |
| AU2008250596C1 (en) | 2007-05-14 | 2010-11-25 | Bavarian Nordic A/S | Purification of Vaccinia virus- and recombinant Vaccinia virus-based vaccines |
| BRPI0811161A2 (pt) * | 2007-05-18 | 2014-10-07 | Medimmune Llc | Conservação de materiais bioativos por espuma liofilizada. |
| US8394385B2 (en) | 2009-03-13 | 2013-03-12 | Bavarian Nordic A/S | Optimized early-late promoter combined with repeated vaccination favors cytotoxic T cell response against recombinant antigen in MVA vaccines |
| KR20120093941A (ko) | 2009-10-08 | 2012-08-23 | 버베리안 노딕 에이/에스 | 인간에서 ｈｉｖ에 대한 광범위한 ｔ-세포 반응의 생성 |
| KR20130008645A (ko) | 2010-05-21 | 2013-01-22 | 에이에이치 유에스에이 42 엘엘씨 | 광견병 바이러스 항원을 함유하는 파라폭스바이러스 벡터 |
| JP2013537409A (ja) | 2010-07-20 | 2013-10-03 | ゾエティス・エルエルシー | パラポックスウイルスベクター |
| CA2802430C (en) | 2010-07-20 | 2021-07-20 | Bavarian Nordic A/S | Method for harvesting poxvirus |
| EP2788021B1 (en) | 2011-12-09 | 2017-01-18 | Bavarian Nordic A/S | Poxvirus vector for the expression of bacterial antigens linked to tetanus toxin fragment c |
| BR112015000530A2 (pt) | 2012-07-10 | 2018-08-28 | Transgene Sa | vacina de antígeno micobacteriano. |
| WO2014009433A1 (en) | 2012-07-10 | 2014-01-16 | Transgene Sa | Mycobacterium resuscitation promoting factor for use as adjuvant |
| TWI690322B (zh) | 2012-10-02 | 2020-04-11 | 法商傳斯堅公司 | 含病毒的調配物及其使用 |
| DE102013004595A1 (de) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Emergent Product Development Germany Gmbh | RSV-Impfstoffe |
| WO2015104380A1 (en) | 2014-01-09 | 2015-07-16 | Transgene Sa | Fusion of heterooligomeric mycobacterial antigens |
| EP3116541B1 (en) | 2014-03-12 | 2019-11-27 | Bavarian Nordic A/S | Use of oil and water emulsions for increasing b cell responses with modified vaccinia ankara virus |
| EP3552615B8 (en) | 2014-07-16 | 2022-03-02 | Transgene | Oncolytic virus for expression of immune checkpoint modulators |
| DK3226894T3 (da) | 2014-12-01 | 2019-10-21 | Transgene Sa | Stabile flydende vacciniavirus-formuleringer |
| WO2016131945A1 (en) | 2015-02-20 | 2016-08-25 | Transgene Sa | Combination product with autophagy modulator |
| FR3042121A1 (fr) | 2015-10-08 | 2017-04-14 | Jean-Marc Limacher | Composition anti-tumorale |
| EP3452081A1 (en) | 2016-05-04 | 2019-03-13 | Transgene SA | Combination therapy with cpg tlr9 ligand |
| TW201825674A (zh) | 2016-09-09 | 2018-07-16 | 美商艾斯合顧問有限公司 | 表現雙特異性接合分子的溶瘤病毒 |
| US20190328869A1 (en) | 2016-10-10 | 2019-10-31 | Transgene Sa | Immunotherapeutic product and mdsc modulator combination therapy |
| WO2018091680A1 (en) | 2016-11-18 | 2018-05-24 | Transgene Sa | Cowpox-based oncolytic vectors |
| KR20190097240A (ko) | 2016-12-28 | 2019-08-20 | 트랜스진 에스.에이. | 종양용해성 바이러스 및 치료 분자 |
| CN110603058A (zh) | 2017-05-15 | 2019-12-20 | 扬森疫苗与预防公司 | 含有病毒的稳定组合物 |
| KR102658198B1 (ko) * | 2017-05-15 | 2024-04-16 | 얀센 백신스 앤드 프리벤션 비.브이. | 안정한 바이러스 함유 조성물 |
| JP7272965B2 (ja) | 2017-06-15 | 2023-05-12 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェー | Ｈｉｖ抗原をコードするポックスウイルスベクターおよびその使用方法 |
| WO2018234506A2 (en) | 2017-06-21 | 2018-12-27 | Transgene Sa | PERSONALIZED VACCINE |
| WO2019020543A1 (en) | 2017-07-28 | 2019-01-31 | Transgene Sa | ONCOLYTIC VIRUSES EXPRESSING AGENTS TARGETING METABOLIC IMMUNE MODULATORS |
| BR112020018117A2 (pt) | 2018-03-07 | 2020-12-22 | Transgene | Vírus da pseudovaríola (pcpv), métodos para gerar o pcpv e para amplificar o pcpv, composição, método de tratamento, método para inibir o crescimento de células tumorais, uso ou método e método para induzir ou estimular e/ ou reorientar uma resposta imune |
| WO2020011754A1 (en) | 2018-07-09 | 2020-01-16 | Transgene | Chimeric vaccinia viruses |
| CA3111273C (en) | 2018-09-06 | 2024-03-26 | Bavarian Nordic A/S | Storage improved poxvirus compositions |
| US20210386807A1 (en) | 2018-10-30 | 2021-12-16 | The University Of Tokyo | Oncolytic virus for cancer therapy |
| CN113453712A (zh) | 2018-12-28 | 2021-09-28 | 特兰斯吉恩股份有限公司 | M2缺陷型痘病毒 |
| WO2020136232A1 (en) | 2018-12-28 | 2020-07-02 | Transgene Sa | Immunosuppressive m2 protein |
| CN115243717A (zh) | 2020-03-12 | 2022-10-25 | 巴法里安诺迪克有限公司 | 改善痘病毒稳定性的组合物 |
| US12029787B2 (en) | 2020-07-01 | 2024-07-09 | University Of Connecticut | Method for generating recombinant poxviruses |
| CA3189238A1 (en) | 2020-07-13 | 2022-01-20 | Transgene | Treatment of immune depression |
| WO2023025899A2 (en) | 2021-08-26 | 2023-03-02 | Transgene | Delivery system for targeting genes of the interferon pathway |
| WO2023213763A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Poxvirus encoding a binding agent comprising an anti- pd-l1 sdab |
| WO2023213764A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Fusion polypeptide comprising an anti-pd-l1 sdab and a member of the tnfsf |
| WO2024003238A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Bavarian Nordic A/S | Epstein-barr-virus vaccine |
| WO2024003239A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Bavarian Nordic A/S | RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) AND VACCINIA VIRUS ANKARA (MVA) PRIME-BOOST REGIMEN |
| WO2024003353A1 (en) | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Transgene | Fusion protein comprising a surfactant-protein-d and a member of the tnfsf |
| TW202413636A (zh) | 2022-08-18 | 2024-04-01 | 法商傳斯堅公司 | 嵌合痘病毒 |
| WO2024149832A1 (en) | 2023-01-12 | 2024-07-18 | Bavarian Nordic A/S | RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) FOR CANCER VACCINE |
| WO2024188801A1 (en) | 2023-03-10 | 2024-09-19 | Bavarian Nordic A/S | Use of quail cell lines for poxvirus production |
| WO2024188803A1 (en) | 2023-03-10 | 2024-09-19 | Bavarian Nordic A/S | Production of poxviruses from quail cell cultures |
| WO2024188802A1 (en) | 2023-03-10 | 2024-09-19 | Bavarian Nordic A/S | Methods of isolating poxviruses from avian cell cultures |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE299213C (ru) | ||||
| US4380582A (en) * | 1965-07-09 | 1983-04-19 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Preparation of dry variola virus |
| FR7773M (ru) * | 1968-06-14 | 1970-03-23 | ||
| US3577526A (en) * | 1969-06-13 | 1971-05-04 | Merieux Inst | Stabilized smallpox vaccine |
| US3915794A (en) | 1973-02-09 | 1975-10-28 | Rit Rech Ind Therapeut | Stabilizing compositions for cell-free viruses and cell-free virus preparations containing them |
| CA1341245C (en) * | 1988-01-12 | 2001-06-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Recombinant vaccinia virus mva |
| DD299213A7 (de) * | 1988-05-04 | 1992-04-09 | Saechsische Landesgewerbefoerderungsgesellschaft M.B.H.,De | Verfahren zur stabilisierung eines lebendvirusimpfstoffes gegen temperatureinwirkung |
| CA2158935A1 (en) | 1993-10-12 | 1995-04-20 | Chiron Viagene, Inc. | Methods for preserving recombinant viruses |
| MY150893A (en) * | 1996-09-24 | 2014-03-14 | Bavarian Nordic As | Recombinant mva virus expressing dengue virus antigens, and the use thereof in vaccines |
| GB9808922D0 (en) * | 1998-04-24 | 1998-06-24 | Cantab Pharmaceuticals Res Ltd | Virus preparations |
| US6225289B1 (en) * | 1998-12-10 | 2001-05-01 | Genvec, Inc. | Methods and compositions for preserving adenoviral vectors |
-
2002
- 2002-11-28 US US10/496,858 patent/US7094412B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-28 NZ NZ533302A patent/NZ533302A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-11-28 KR KR10-2004-7008900A patent/KR20040074067A/ko active Search and Examination
- 2002-11-28 EP EP02796552A patent/EP1418942B1/en not_active Revoked
- 2002-11-28 BR BR0214822-6A patent/BR0214822A/pt active Search and Examination
- 2002-11-28 IL IL16159002A patent/IL161590A0/xx unknown
- 2002-11-28 HU HU0402179A patent/HUP0402179A3/hu unknown
- 2002-11-28 EA EA200400796A patent/EA006880B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-11-28 ES ES02796552T patent/ES2247414T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-28 DK DK02796552T patent/DK1418942T3/da active
- 2002-11-28 CA CA2467365A patent/CA2467365C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-28 MX MXPA04005577A patent/MXPA04005577A/es active IP Right Grant
- 2002-11-28 DE DE60205388T patent/DE60205388T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-28 AT AT02796552T patent/ATE300954T1/de active
- 2002-11-28 PL PL369954A patent/PL213326B1/pl unknown
- 2002-11-28 WO PCT/EP2002/013434 patent/WO2003053463A2/en active IP Right Grant
- 2002-11-28 CN CNB028246780A patent/CN1296096C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-28 JP JP2003554220A patent/JP4439263B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-28 UA UA20040705588A patent/UA78738C2/uk unknown
- 2002-11-28 AU AU2002361962A patent/AU2002361962A1/en not_active Abandoned
-
2004
- 2004-04-22 IL IL161590A patent/IL161590A/en not_active IP Right Cessation
- 2004-07-09 NO NO20042958A patent/NO20042958L/no not_active Application Discontinuation
-
2005
- 2005-05-13 HK HK05104050A patent/HK1071295A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE60205388T2 (de) | 2006-03-30 |
| KR20040074067A (ko) | 2004-08-21 |
| AU2002361962A1 (en) | 2003-07-09 |
| WO2003053463A2 (en) | 2003-07-03 |
| UA78738C2 (en) | 2007-04-25 |
| US7094412B2 (en) | 2006-08-22 |
| BR0214822A (pt) | 2004-12-14 |
| HK1071295A1 (en) | 2005-07-15 |
| WO2003053463A3 (en) | 2004-03-04 |
| CN1602205A (zh) | 2005-03-30 |
| CN1296096C (zh) | 2007-01-24 |
| EA200400796A1 (ru) | 2004-12-30 |
| EP1418942A2 (en) | 2004-05-19 |
| IL161590A0 (en) | 2004-09-27 |
| ES2247414T3 (es) | 2006-03-01 |
| CA2467365A1 (en) | 2003-07-03 |
| JP4439263B2 (ja) | 2010-03-24 |
| DK1418942T3 (da) | 2005-11-28 |
| CA2467365C (en) | 2012-11-20 |
| JP2005513109A (ja) | 2005-05-12 |
| HUP0402179A3 (en) | 2012-09-28 |
| IL161590A (en) | 2009-06-15 |
| NO20042958L (no) | 2004-07-09 |
| MXPA04005577A (es) | 2005-04-19 |
| PL369954A1 (en) | 2005-05-02 |
| PL213326B1 (pl) | 2013-02-28 |
| US20050019349A1 (en) | 2005-01-27 |
| DE60205388D1 (de) | 2005-09-08 |
| NZ533302A (en) | 2005-11-25 |
| EP1418942B1 (en) | 2005-08-03 |
| HUP0402179A2 (hu) | 2005-01-28 |
| ATE300954T1 (de) | 2005-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA006880B1 (ru) | Композиции, содержащие поксвирус, и способ изготовления устойчивых композиций, содержащих поксвирус | |
| JP2005513109A6 (ja) | ポックスウイルス含有調合物およびその調製方法 | |
| ES2373238T3 (es) | Estabilizadores para vacunas liofilizadas. | |
| TWI690322B (zh) | 含病毒的調配物及其使用 | |
| US8313897B2 (en) | Method for preserving viral particles | |
| EP2099485B1 (en) | Alphavirus and alphavirus replicon particle formulations and methods | |
| CN107206063A (zh) | 稳定的液体痘苗病毒制剂 | |
| JP6041361B2 (ja) | 生物学的製品、特にはワクチンの真空保存 | |
| EA006485B1 (ru) | Способ выделения и очистки поксвирусов из инфицированных клеток | |
| KR102658198B1 (ko) | 안정한 바이러스 함유 조성물 | |
| AU2008201215B2 (en) | Poxvirus containing formulations and process for preparing stable, poxvirus containing compositions |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ KZ KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): BY RU |