UA126595C2 - Кон'югат антитіло-лікарський засіб - Google Patents

Кон'югат антитіло-лікарський засіб Download PDF

Info

Publication number
UA126595C2
UA126595C2 UAA202003245A UAA202003245A UA126595C2 UA 126595 C2 UA126595 C2 UA 126595C2 UA A202003245 A UAA202003245 A UA A202003245A UA A202003245 A UAA202003245 A UA A202003245A UA 126595 C2 UA126595 C2 UA 126595C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
formula
drug conjugate
mai
rgo
Prior art date
Application number
UAA202003245A
Other languages
English (en)
Inventor
Адріан Д. Гобсон
Адриан Д. ХОБСОН
Майкл Дж. МАКФЕРСОН
Венді Вейджелл
Венди Вэйджелл
Крістіан Ґоесс
Кристиан Гоесс
Аксель мол. Ернандес
Аксель мл. Эрнандес
Лу ВАН
Крістофер С. Марвін
Кристофер С. МАРВИН
Лінґ С. Сантора
Линг С. Сантора
Original Assignee
Еббві Інк.
Эббви Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Еббві Інк., Эббви Инк. filed Critical Еббві Інк.
Publication of UA126595C2 publication Critical patent/UA126595C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6845—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a cytokine, e.g. growth factors, VEGF, TNF, a lymphokine or an interferon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/249—Interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Abstract

Винахід стосується кон’югату антитіло-лікарський засіб, що містить антитіло до ФНПα та агоніст глюкокортикоїдного рецептора, та його застосування.

Description

Споріднені заявки
У цій заявці заявляється пріоритет за попередньою заявкою США Мо 62/593776, поданою 1 грудня 2017 р., та попередньою заявкою США Мо 62/595054, поданою 5 грудня 2017 р., кожна з яких включена шляхом посилання у повному обсязі.
Список послідовностей
Ця заявка містить Перелік послідовностей, який був поданий в електронному вигляді у форматі АЗСІЇ і включений до цього документу шляхом посилання у повному обсязі. Вказана копія АЗСІЇ, створена 28 листопада 2018 р., має назву АТ03017 1490УУО 51 їх та розмір 14758 байт.
Галузь техніки
Фактор некрозу пухлини а (ФНПа, ТМЕа) відіграє центральну роль у патофізіології декількох розладів людини, а агенти проти ФНПа мають клінічно підтверджену терапевтичну користь при лікуванні аутоїмунних та запальних розладів, таких як ревматоїдний артрит, псоріаз та запальні захворювання кишечника. Незважаючи на успіх у клінічному застосуванні, високомолекулярні засоби проти ФНПс все ще обмежені в максимальній ефективності, якої вони можуть досягти у пацієнтів, що вимагає виявлення та розробки більш потужних та ефективних терапевтичних засобів. У пацієнтів, які отримують лікування високомолекулярними засобами проти ФНПа, також може розвитися імуногенна відповідь на терапевтичний засіб, обмежуючи таким чином його ефективність. Тому терапія проти ФНПс зі зниженою імуногенністю та високою ефективністю була б корисною для подальшого контролю захворювання.
Синтетичні агоністи глюкокортикоїдних рецепторів являють собою потужний клас низькомолекулярних сполук, що застосовуються при лікуванні запальних розладів, але їх корисність при лікуванні хронічного захворювання обмежена через важкі побічні ефекти. Існує потреба у розробці терапевтичних засобів з підвищеною ефективністю та більшою тривалістю дії у порівнянні з антитілами проти ФНП та з мінімальними небажаними ефектами.
Сутність винаходу
У цьому винаході запропоновані імунокон'югати агоністів глюкокортикоїдних рецепторів, ефективні для лікування аутоїмунних захворювань.
В одному аспекті у цьому винаході запропонований кон'югат антитіло-лікарський засіб, що
Зо містить: (а) антитіло проти ФНПа, що містить важкий ланцюг, зображений як ЗЕО ІЮО Мо 3, і легкий ланцюг, зображений як ЗЕО ІЮ Мо 4; і (5) агоніст глюкокортикоїдного рецептора, що містить радикал, зображений формулою: о о га о о
Н о но" У он ; і при цьому антитіло кон'югують з агоністом глюкокортикоїдного рецептора з допомогою лінкера, зображеного формулою: о о
КОЖ А
МТ я вА но То.
В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований кон'югат антитіло-лікарський засіб відповідно до формули:
о се о о во ОН н
М гії г о
А я ЖК о
Н І н У 0 з но7ї, дХ " но о п де А являє собою антитіло, і п дорівнює цілому числу від 1-10.
В одному аспекті у цьому винаході запропонований кон'югат антитіло-лікарський засіб, що містить: (а) антитіло проти ФНПа, що містить важкий ланцюг, зображений як ЗЕО ІЮО Мо 3, і легкий ланцюг, зображений як ЗЕО ІЮ Мо 4; і (5) агоніст глюкокортикоїдного рецептора, що містить радикал, зображений формулою: о
Фе кросу он о
Ко о
Н хо но" У он ; і при цьому антитіло кон'югують з агоністом глюкокортикоїдного рецептора з допомогою лінкера, зображеного формулою: о о г У
Н о
МН».
В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований кон'югат антитіло-лікарський засіб відповідно до формули: о «Ге о о Ше он нН
А М М. о о й ЕН М/о о но" Х
У Он п
МН» де А являє собою антитіло, і п дорівнює цілому числу від 1-10.
В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким попереднім варіантом здійснення, причому вміст лікарського засобу становить 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10. В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким попереднім варіантом здійснення, причому вміст лікарського засобу становить 4, наприклад п у вищенаведеній формулі кон'югата антитіло-лікарський засіб дорівнює 4. В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким попереднім варіантом здійснення, причому вміст лікарського засобу становить 2, наприклад п у вищенаведеній формулі кон'югата антитіло-лікарський засіб дорівнює 2.
В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований спосіб отримання кон'югата антитіло-лікарський засіб за будь-яким попереднім варіантом здійснення, що включає стадію кон'югації антитіла з агоністом глюкокортикоїдного рецептора. В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований спосіб за попереднім варіантом здійснення, що додатково включає стадію введення фрагмента РО у агоніст глюкокортикоїдного рецептора перед кон'югацією антитіла з агоністом глюкокортикоїдного рецептора. В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований спосіб за будь-яким попереднім варіантом здійснення, в якому кон'югування включає часткове відновлення антитіла та алкілювання частково відновленого антитіла сполукою відповідно до формули: о
У о о у Он
Нн
М Ф Фі о вер ще о
Н у І Н ра и дя но о .
В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонована фармацевтична композиція, що містить кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким попереднім варіантом здійснення та фармацевтично прийнятний носій. В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонована фармацевтична композиція за будь-яким з попередніх варіантів здійснення, що характеризується відношенням лікарського засобу до антитіла (АК) 1-10.
В одному кращому варіанті здійснення у цьому винаході запропонований кон'югат антитіло- лікарський засіб відповідно до формули: о се
ОО о ц о С С що он
А М Ж о - М ша: Зо з но" Х дХ " но і) п де А являє собою адалімумаб, і п дорівнює 4.
В одному кращому варіанті здійснення у цьому винаході запропонований кон'югат антитіло- лікарський засіб відповідно до формули: о се во 9 н Ї г р 7 - М
Ся Зо ни ноу
Х " но о п де А являє собою антитіло проти ФНПа, що містить важкий ланцюг, зображений як 5ЕО ІЮ
Мо 3, і легкий ланцюг, зображений як 5ЕО ІЮ Мо 4, і п дорівнює 4.
В іншому кращому варіанті здійснення у цьому винаході запропонований кон'югат антитіло- лікарський засіб відповідно до формули:
о зо
А М о з но7ї, д » но о п з де А являє собою адалімумаб, і п дорівнює 2. В іншому кращому варіанті здійснення у цьому винаході запропонований кон'югат антитіло-лікарський засіб відповідно до формули: о зо
А М о ве а о 5 з но" д » но о п з де А являє собою антитіло проти ФНПа, що містить важкий ланцюг, зображений як 5ЕО ІЮ
Мо 3, і легкий ланцюг, зображений як 5ЕО ІЮО Мо 4, і п дорівнює 2.
В одному кращому варіанті здійснення у цьому винаході запропонована фармацевтична композиція за будь-яким попереднім варіантом здійснення, що характеризується відношенням лікарського засобу до антитіла (БАК) 2,0.
В одному кращому варіанті здійснення у цьому винаході запропонована фармацевтична композиція за будь-яким попереднім варіантом здійснення, що характеризується відношенням лікарського засобу до антитіла (АК) 4,0.
В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований спосіб лікування патологічного стану, обраного з ревматоїдного артриту, анкілозуючого спондиліту, псоріатичного артриту, бляшкоподібного псоріазу, виразкового коліту, хвороби Крона у дорослих, хвороби Крона у дітей, увеїту, гнійного гідраденіту та ювенільного ідіопатичного артриту, у суб'єкта, що включає введення суб'єкту ефективного кількості кон'югата антитіло- лікарський засіб за будь-яким попереднім варіантом здійснення або фармацевтичної композиції за будь-яким попереднім варіантом здійснення.
В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким попереднім варіантом здійснення або фармацевтична композиція за будь- яким попереднім варіантом здійснення для застосування при лікуванні патологічного стану, обраного з ревматоїдного артриту, анкілозуючого спондиліту, псоріатичного артриту, бляшкоподібного псоріазу, виразкового коліту, хвороби Крона у дорослих, хвороби Крона у дітей, увеїту, гнійного гідраденіту та ювенільного ідіопатичного артриту.
В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропоновано застосування кон'югата антитіло-лікарський засіб за будь-яким попереднім варіантом здійснення або фармацевтичної композиції за будь-яким попереднім варіантом здійснення для виготовлення лікарського препарату для лікування патологічного стану, обраного з ревматоїдного артриту, анкілозуючого
Зо спондиліту, псоріатичного артриту, бляшкоподібного псоріазу, виразкового коліту, хвороби
Крона у дорослих, хвороби Крона у дітей, увеїту, гнійного гідраденіту та ювенільного ідіопатичного артриту.
В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований набір, що містить: (а) контейнер, що містить кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким попереднім варіантом здійснення або фармацевтичну композицію за будь-яким попереднім варіантом здійснення; та (Б) етикетку або листівку-вкладку на один контейнер або у поєднанні з одним або більше контейнерами, причому етикетка або листівка-вкладка вказує, що кон'югат антитіло-лікарський засіб або фармацевтичну композицію застосовують для лікування патологічного стану, обраного з ревматоїдного артриту, анкілозуючого спондиліту, псоріатичного артриту, бляшкоподібного псоріазу, виразкового коліту, хвороби Крона у дорослих, хвороби Крона у дітей, увеїту, гнійного гідраденіту та ювенільного ідіопатичного артриту.
В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований спосіб доставки агоніста глюкокортикоїдних рецепторів до клітини, що експресує ФНПа, що включає стадію приведення клітини у контакт з кон'югатом антитіло-лікарський засіб за будь-яким попереднім варіантом здійснення. В одному варіанті здійснення у цьому винаході запропонований спосіб визначення протизапальної активності кон'югата антитіло-лікарський засіб, що включає: (а) приведення клітини, що експресує ФНПа, у контакт з кон'югатом антитіло-лікарський засіб за будь-яким попереднім варіантом здійснення; та (б) визначення вивільнення прозапальних цитокінів з клітини порівняно з контрольною клітиною.
Стислий опис графічних матеріалів
На Фі, 1 наведене хроматографічне розділення модулятора /ВгАс-Спу-с1и- глюкокортикоїдного рецептора (ЗЕМ)-РО», як виконано та описано у Прикладі 7. Як показано,
АС являє собою гетерогенну суміш АОС, що містить АОС з двома приєднаними молекулами лікарський засіб-лінкер та АОС з чотирма приєднаними молекулами лікарський засіб-лінкер.
На Фіг. 2 наведені дані МС після деконволюції для адалімумабу, кон'югованого з ВгАс-С1у-
Сін-глюкокортикостероїд-РОх. Як показано, кон'югація була досягнута.
На Фіг. З наведений графік, що демонструє ефективність високої та низької дози АОСІ у порівнянні з тАб проти ФНПа (високою дозою) або носієм у мишачій моделі артриту, що являє собою артрит, викликаний колагеном, (СІА), як виконано та описано у Прикладі 7. Як показано, разова доза глюкокортикостероїду АОС1 проти ФНПа продемонструвала збільшення тривалості дії шляхом зменшення набряку лапи протягом «28 діб у порівнянні з тАб проти ФНПа або лише носієм.
Фіг. 4 являє собою графік концентрації (мкг/мл) для закритого та відкритого кільця АОС у крабоїдних макак з плином часу, як це виконано та описано у Прикладі 7. Як показано, закрита форма кільця сприйнятлива до зворотної реакції Міхаеля та подальшої втрати лінкер- лікарського засобу іп мімо.
Детальний опис сутності винаходу
У цьому документі наведені імунокон'югати агоністів глюкокортикоїдних рецепторів, агоністи глюкокортикоїдних рецепторів та способи їх виготовлення та використання.
У цьому документі наведений кон'югат антитіло-лікарський засіб відповідно до формули: о зо нН
А М АЖ о кр ою о й но7 У он
МН п
Зо де А являє собою адалімуаб, і п дорівнює 4. Як показано в Прикладі 7 нижче, цей АЮС (тобто АЮС4 нижче) демонструє активність іп міо, стабільність у плазмі та мінімальне агрегування.
Також запропоновані способи виготовлення та способи використання АОС.
І. Визначення
Для полегшення розуміння цього винаходу нижче визначені низка термінів і фраз.
Термін "білок проти ФНПа» стосується білків, які здатні (ї) зв'язуватися з ФНПа та (ії) інгібувати зв'язування розчинного ФНПа з рецепторами ФНПа поверхні клітини (р55 та/або р75) та/або лізувати клітини, що експресують поверхневий ФНІПс або рецептор ФНПа іп мійго у присутності комплементу. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло до ФНП може зв'язуватися з ФНП альфа на поверхні клітини і ставати інтерналізованим. Наприклад, в 05 2014/0294813, який включений до цього документу шляхом посилання у повному обсязі, розкриті антитіла проти ФНП, які проявляють клітинну інтерналізацію при зв'язуванні з ФНП людини на поверхні клітини. Білюи проти ФНПса включають, наприклад, антитіла проти ФНПа (наприклад, адалімумаб, інфліксимаб та голімумаб). Антитіла проти ФНПа активно інтерналізуються при зв'язуванні з трансмембранним ФНП на ОС, отриманих з моноцитів, і швидко надходять у лізосоми, де вони деградують. (Оеога еї.аІ. МАВ5, 2017, Мої. 9, Мо. 4, 680- 694).
Термін "антитіло", при використанні у цьому документі, призначений для позначення молекул імуноглобуліну, що складаються з чотирьох поліпептидних ланцюгів, двох важких (Н)
ланцюгів і двох легких (І) ланцюгів, зв'язаних між собою дисульфідними зв'язками. Кожний важкий ланцюг складається з варіабельної ділянки важкого ланцюга (скорочено у цьому документі як НСМК або МН) та константної ділянки важкого ланцюга. Константна ділянка важкого ланцюга складається з трьох доменів, СНІ, СН2 і СНЗ. Кожний легкий ланцюг складається з варіабельної ділянки легкого ланцюга (скорочено у цьому документі як Ї СМЕ або
МІ) та константної ділянки легкого ланцюга. Константна ділянка легкого ланцюга складається з одного домену, СІ. Ділянки МН та Мі. можна додатково поділити на ділянки гіперваріабельності, які називають ділянками, що визначають комплементарність (СОК), які перемежовуються з ділянками, що є більш консервативними і називаються каркасними ділянками (ЕК). Кожен МН і
МІ. складається з трьох СОК і чотирьох ЕК, розташованих від аміно-кінця до карбокси-кінця у такому порядку: ЕК1Т, СОКІ, ЕК2, СОК2, ЕКЗ, СОКЗ, ЕКАУ.
Термін "антитіло проти ФНПа» або "антитіло, яке зв'язується з ФНПа» стосується антитіла, яке здатне зв'язувати ФНПа, наприклад, з достатньою афінністю, так що антитіло є корисним як терапевтичний агент при націлюванні на ФНПа. Ступінь зв'язування антитіла проти ФНПа з неспорідненим білком, що не є ФНПа, може бути меншим, ніж приблизно 10 95 від зв'язування антитіла з ФНПа, що вимірюється, наприклад, радіоїмунологічним аналізом (РІА). У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло, яке зв'язується з ФНПа, має константу дисоціації (Ка) 1 МКМ, «100 НМ, «10 НМ, «1 нМ або х0,1 НМ.
Термін "імунокон'югат", "кон'югат", "кон'югат антитіло-лікарський засіб" або "АОС", при використанні у цьому документі, стосується сполуки або її похідного, що кон'югують з білком, таким як агент, що зв'язується з клітинами (наприклад, антитіло проти ФНПа). Такі імунокон'югати можна визначити загальною формулою: (ЗМ-І-О)-А, де ЗМ - радикал, отриманий з низькомолекулярного агоніста глюкокортикоїдних рецепторів, наприклад, глюкокортикостероїду, Ї - лінкер, 0 - гетеробіфункціональна група або відсутній, і А - білок (наприклад, антитіло), і п-1-10. Імунокон'югати можна також визначити за загальною формулою у зворотному порядку: А-(О-Ї -5М) п.
У цьому винаході термін "лінкер" стосується хімічного фрагмента, здатного зв'язувати білок проти ФНПа (наприклад, антитіло) з глюкокортикостероїдом. Лінкери можуть бути сприйнятливими до розщеплення ("лінкер, що може розщеплюватися"), тим самим полегшуючи
Зо вивільнення глюкокортикостероїду. Наприклад, такі лінкери, що здатні розщеплюватися, можуть бути сприйнятливими до розщеплення, викликаного пептидазою, за умов, при яких глюкокортикостероїд та/або антитіло залишаються активними.
Зокрема, розкритий у цьому документі лінксерний компонент, що розщеплюється, включає пептид, що містить два-три залишки амінокислот (дипептид або трипептид), і конкретно дипептиди і трипептиди, вибрані з групи, що складається з аланін-аланіну (АїІа-Аїйа), гліцин- глутамінової кислоти (Сіу-Сіи), глутамінова кислота-аланін-аланіну (Сіи-АІа-Аїа) та гліцин-лізину (Сіу-Гу5). Пептид дозволяє розщеплювати лінкер протеазою, тим самим полегшуючи вивільнення глюкокортикостероїду при впливі внутрішньоклітинних протеаз, таких як лізосомальні ферменти (богопіпа еї аї. (2003) Маї. Віоїтесппої!. 21:778-784).
У цьому розкритті термін "глюкокортикостероїд" стосується природного або синтетичного стероїдного гормону, який взаємодіє з глюкокортикоїдними рецепторами, та у цьому документі докладно розкриті конкретні глюкокортикостероїди. "Радикал глюкокортикостероїду" утворюється при видаленні одного або більше атомів Гідрогену від вихідного глюкокортикостероїду. Видалення атома(-ів) Гідрогену полегшує приєднання вихідного глюкокортикостероїду до лінкера. У цьому розкритті атом Гідрогену видаляють з будь-якої придатної групи -МН»е вихідного глюкокортикостероїду. Зокрема, "радикал глюкокортикостероїду" являє собою одновалентний радикал, отриманий при видаленні одного атома Гідрогену з вихідного глюкокортикостероїду.
У цьому розкритті термін "гетеробіфункціональна група" стосується хімічного фрагмента, який з'єднує лінкер і білок проти ФНПа (наприклад, антитіло). Гетерофункціональні групи характеризуються як такі, що мають різні реакційноздатні групи на обох кінцях хімічного фрагмента.
Термін "відношення лікарського засобу до антитіла" або "ОСАК" стосується кількості ЗМ (наприклад, радикалу, отриманого з низькомолекулярного агоніста глюкокортикоїдного рецептора, наприклад глюкокортикостероїду), пов'язаних з А (наприклад, антитілом). Таким чином, в імунокон'югаті, що має загальну формулу (ЗМ-І-О)и-А, БАК визначається кількістю лікарського засобу на один кон'югат антитіло-лікарський засіб, наприклад "п".
При згадуванні сполуки, що має формулу (ЗМ-І-О)и-А, яка представляє індивідуальний імунокон'югат, термін "САК сполуки" позначає кількість ЗМ, пов'язаних з окремим А (наприклад, бо кількість лікарського засобу або п у вигляді цілого числа від 1 до 10).
При згадуванні сполуки, що має формулу (5М-І-О0)-А, що представляє сукупність імунокон'югатів, термін "САК сукупності" стосується середньої кількості ЗМ, пов'язаних з А (наприклад, кількість лікарських засобів або п у вигляді цілого число або дробу від 1 до 10--0,5, -0,4,0,3, 0,2, 01).
Термін "суб'єкт" позначає людей, нижчих приматів тощо, які повинні бути реципієнтами певного лікування. Зазвичай терміни "суб'єкт" та "пацієнт" вживаються у цьому документі взаємозамінно по відношенню до людини.
Термін "фармацевтичний препарат" стосується препарату, який знаходиться в такій формі, яка дозволяє біологічній активності активного інгредієнта бути ефективною, і який не містить додаткових компонентів, неприйнятно токсичних для суб'єкта, якому будуть вводити препарат.
Препарат може бути стерильним. "Ефективна кількість" імунокон'югата, як описано у цьому документі, є кількістю, достатньою для здійснення конкретно зазначеної мети. "Ефективна кількість" може бути визначена по відношенню до заявленої мети.
Термін "терапевтично ефективна кількість" стосується кількості імунокон'югата, ефективної для "лікування" захворювання або розладу у суб'єкта або ссавця. "Профілактично ефективна кількість" означає кількість, ефективну для досягнення бажаного профілактичного результату.
Такі терміни, як "лікуючий", або "лікування", або "лікувати" або "полегшення", або "полегшувати" стосуються терапевтичних заходів, які виліковують, уповільнюють, зменшують один або більше симптомів та/або сповільнюють або зупиняють прогресування діагностованого патологічного стану або розладу ("терапевтичне лікування"). Таким чином, до тих, хто потребує терапевтичного лікування, належать ті, у кого вже встановлено діагноз або є підозра на наявність розладу. Профілактичні або попереджувальні заходи стосуються заходів, що запобігають розвитку цільового патологічного стану або розладу ("профілактичне лікування").
Таким чином, до тих, хто потребує профілактичного лікування, належать ті, хто має схильність до розладу, і ті, у яких це захворювання необхідно попередити.
ІЇ. Білки для зв'язування з агоністами глюкокортикоїдних рецепторів
У цьому розкритті наведені імунокон'югати, що містять агоністи глюкокортикоїдних рецепторів, пов'язані з білками, наприклад антитілами. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло є людським, гуманізованим, химерним або мишачим. У деяких варіантах здійснення винаходу білок, наприклад антитіло, може зв'язуватися з мішенню на поверхні клітини і ставати інтерналізованим.
У цьому розкритті також наведені імунокон'югати, що містять агоністи глюкокортикоїдних рецепторів, пов'язані з білками проти ФНІПа. У деяких варіантах здійснення винаходу білки проти ФНПа є антитілами. У деяких варіантах здійснення винаходу білки проти ФНПс являють собою антитіла, які зв'язуються з ФНПа (наприклад, розчинний ФНПа та/або мембранозв'язаний
ФНІа). У деяких варіантах здійснення винаходу білюи проти ФНІПса є розчинними білками- рецепторами ФНП, наприклад розчинними білками-рецепторами ФНП, злитими з константою ділянкою важкого ланцюга. У деяких варіантах здійснення винаходу білок проти ФНПа, наприклад антитіло проти ФНІс, зв'язується з ФНПоа она поверхні клітини і стає інтерналізованим. Наприклад, у публікації заявки на патент США Мо 2014/0294813, включеної до цього документу шляхом посилання, описані білки проти ФНПа, які демонструють клітинну інтерналізацію при зв'язуванні з людським ФНПа поверхні клітини.
У деяких варіантах здійснення винаходу антитіла зв'язуються з людським та/або мишачим
ФНПа.
Послідовність амінокислот повної довжини для мембранозв'язаного ФНІПа людини являє собою:
М5ТЕЗМІВОМЕЇГ АЕЕАЇ РККТаСРОСУЗАВСЇ РІ 5І ЗЕ ІМАСАТТІ ЕС НЕСМІСРОВЕЕЕРРАО
Г5ІІЗРГ АОАУАЗОЗЗАТРОЮКРМАНУМАМРОАЕСОЇ ОМ МА!ААВАМАС АМО МЕ ВОМОЇ ММРЗЕСІ МІ І
УБОМІ ЕКОССРЗТНМІИ І ТНТІЗВІАУЗУОТКУМИ ЗАІКЗРСОВЕТРЕСАЕАКРМУУ/МЕРІМІ ам ЕОЇ Е
КООКІ ЗАБІМКРОМІ ОБАЕБСОМУБСОПАГ (5БО ОО Ме 1). Розчинний ФНІПс людини містить амінокислоти 77-233 з 5ЕБЕО ІЮ Ме 1. Послідовність амінокислот повної довжини для мембранозв'язаного ФНПс миші являє собою:
М5ТЕЗМІВОМЕЇГ АЕЕАЇ РОКМОаСЕОМ5АВСЇІ СІ БІ ЕЗЕ І МАСАТТІ ЕС МЕОМІСРОВОЕКЕР
Маг РИІЗЗМАОТІ ТІ 55504550 КРМАНУМАМНОМЕЕОГ ЕМІ ЗОВАМАЇ ЇЇ АМаМОІ КОМОЇ ММРА рам мом ткаорасРоОМмМІ| СТ!НТУЗАБАІЗМОЕКММ ЗАУКЗРОРКОТРЕСАЄБЇІ КРУУМЕРІМІ СІ
СМРОЇ ЕКОБОЇ ЗАЕУММІ РЕМ ОРАЕБСОМУБОМІАЇ (ЗЕО ІО Мо 2). Розчинний мишачий ФНПа містить амінокислоти 80-235 з БЕО ІЮ Мо 2.
У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло проти ФНПс зв'язується з ФНПа людини. бо У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло проти ФНПа зв'язується з ФНПа миші.
У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло проти ФНПа виявляє один або більше з наступних ефектів: нейтралізує цитотоксичність ФНПс людини в іп міїго аналізі І 929 з ІС50 1 х 107 М або менше; блокує взаємодію ФНПа з рецепторами клітинної поверхні р55 і р75; та/або лізує клітини, що експресують ФНП, іп міїго у присутності комплементу.
У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло проти ФНПа не зв'язується з ФНП-бета.
Антитіла проти ФНПс включають, наприклад, адалімумаб, який є рекомбінантним антитілом людини. Послідовності амінокислот, що відповідають СОК та варіабельним ділянкам адалімумабу, описані в патенті США Мо 6258562 стосовно антитіла О2Е7, тобто ЗЕО ІЮО Мо 1-8.
Міжнародна непатентована назва (МНН) адалімумабу міститься на сайті переліку МНН
ВООЗ: рік 2000, список 44 (М/НО Опа Іпгіоптаїйоп (2000) Мої. 14(3)).
У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло проти ФНПс включає послідовності адалімумабу, наприклад, ділянки, що визначають комплементарність (СОК), варіабельний домен важкого ланцюга (УН) та/або варіабельний домен легкого ланцюга (М). Ілюстративні послідовності наведені у Таблиці 1.
Таблиця 1
Ілюстративні послідовності ділянок антитіла адалімумабу антитіла
ЕМОГЇ МЕЗО СОЇ МОРОВБІ ВІ БСААБаєТтТеЕООХАМН
М УВОАРакагєЕММУ5БАІТУМЗанівАОБМЕСАЕТІЗАОМАКМБІ МІОМІ.
ВАЕОТАМУХУСАКУБУІ 5ТАЗБІ ОМ СОСТІ МТМ55АЗТКОаРОУМЕРІ АРЗБК5ЗТ5
Важкий СОТААГ аСІ МКОМЕРЕРУТУБУМЗСОАІ ТЗаМНТЕРАМІ О5БИЇ У5І 55ММТМУР ланцюг ЗБЗЗЯТОТМІСМММНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОСРАРЕЇ І ССРБМБЇ Е
РРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМОСМЕМНМАКТКРАЕЕО
УМЗТУАММУБМІ ТМ НОБУМІ МОКЕУКСКУЗМКАГГРАРІЕКТІЗКАКСОРВЕРОМУ
ТЕРРЗАОРЕСТКМОМ5БІ ТС УКОЕУРБОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОСЯ
ЗЕРМЗКІТУОКЗАМООСММЕЗСЗММНЕАСНМНУТОКЗІ БІ. ЗРОК (ЗЕО ІЮО Мо 3)
ВІОМТО5РББІ БАБМООВМТІТСВАБОСІАММІ АМУМООКРОКАРКИІ І
Легкий МААБТІ ОБаМРОАЕБОЗаЗатоОвтІ ТІЗБІ ОРЕОМАТУУСОВУМААРУ ланцюг ТЕВБОСТКМЕІКАТМААРЗМРІЕРРБОЕОЇ КЗатТАБМУМСІ І ММЕУРАЕАК
МОМКМОМАГОБОМЗОЕВМТЕОО5КОБЗТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКММА
СЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМКОЕС (5ЕО ІО Мо 4)
Варіабельна ЕМО МЕЗООСІ МОРОВЗІ ВІ ЗСААЗСЕТЕОЮУАМНУУВОАРОКОСЇГ ЕМ важкого М5АЇТМ/МЗСНІОУАЮЗУЕСВЕТІЗВОМАКМОІ МІОМІ ВАЕОТАУУУ СА
КУМ ЗТАБЗБІ ЮМУУВОСТІ ТУ (ЗЕО ІО Мо 5) ланцюга
Варіабельна ПІОМТО5РУЗВІ ЗАЗМСОВМТІТСВАВОСІВМУ! АМУХООКРОКАРКИ І ділянка ХААБТІ ОБСОУРЗВЕЗО5О5СТОЕТІ ТІЗ8І ОРЕОМАТУУСОВУМВАРУТЕСОСТКМЕК легкого (ЗЕО ІО Ме 6) ланцюга
У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло проти ФНПс включає СОК з 5ЕО ІО Мо З і 4. У деяких варіантах СОК містять 5ЕО ІЮ Мо 7 або 8, 9, 10 або 11, 12, 13 ї 14. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло проти ФНПс включає важкий ланцюг 5ЕО ІЮО Мо З та/або легкий ланцюг 5ЕО ІЮ Мо 4.
Це розкриття додатково охоплює варіанти та їх еквіваленти, які по суті є гомологічними антитілам проти ФНІПс, наведеним у цьому документі. Вони можуть містити, наприклад, консервативні мутації заміни, тобто заміна однієї або більше амінокислот аналогічними амінокислотами. Наприклад, консервативна заміна стосується заміни амінокислоти іншою в межах того ж загального класу, як, наприклад, однієї кислотної амінокислоти іншою кислотною амінокислотою, однієї основної амінокислоти іншою основною амінокислотою або однієї нейтральної амінокислоти іншою нейтральною амінокислотою. У цій галузі техніки добре відомо, що розуміють під консервативною заміною амінокислот.
Описані у цьому документі окремі антитіла проти ФНПсе можуть бути отримані будь-яким придатним способом, відомим у цій галузі техніки. Такі способи варіюються від прямих способів синтезу білку до конструювання послідовності ДНК, що кодує окремі поліпептидні послідовності, та експресії цих послідовностей у відповідному трансформованому хазяїні. У деяких варіантах здійснення винаходу послідовність ДНК побудована за допомогою рекомбінантної технології шляхом виділення або синтезу послідовності ДНК, що кодує цільовий білок дикого типу.
Необов'язково, у послідовність можуть бути введені мутації за допомогою сайт-специфічного мутагенезу для отримання їх функціональних аналогів. Див., наприклад, 2оеПег єї аї., Ргос. Ммагі.
Асад. 5сі. ОБА 81:5662-5066 (1984) та патент США Мо 4588585.
У деяких варіантах здійснення винаходу послідовність ДНК, що кодує цільове антитіло, сконструйована хімічним синтезом з використанням олігонуклеотидного синтезатора. Такі олігонуклеотиди можуть бути сконструйовані на основі амінокислотної послідовності бажаного поліпептиду та вибору тих кодонів, які є бажаними у клітині-хазяїні, в якій буде вироблятися цільовий рекомбінантний поліпептид. Для синтезу окремої полінуклеотидної послідовності, що кодує окремий цільовий поліпептид, можна застосовувати стандартні способи.
У деяких варіантах здійснення винаходу для ампліфікації та експресії ДНК, що кодує антитіла проти ФНІПа, використовуються рекомбінантні вектори експресії. Можна використовувати широке різноманіття комбінацій хазяїн/вектор експресії. Корисні вектори експресії для еукаріотичних хазяїв включають, наприклад, вектори, що містять послідовності контролю експресії від 5М40, вірус папіломи великої рогатої худоби, аденовірус та цитомегаловірус. Корисні вектори експресії для бактеріальних хазяїв включають відомі бактеріальні плазміди, такі як плазміди з Ех5сПегіспіа соїї, включаючи рек 1, рвВе322, рМВе та їх похідні, плазміди з більш широким діапазоном хазяїв, такі як М1З3 та нитчасті фаги з одноланцюговою ДНК.
Відповідні клітини-хазяї для експресії антитіл проти ФНПа включають прокаріоти, дріжджі, комах або вищі еукаріотичні клітини під контролем відповідних промоторів. До прокаріотів відносяться грамнегативні або грампозитивні організми, наприклад Е. соїї або паличкоподібні бактерії. Вищі еукаріотичні клітини включають встановлені клітинні лінії від ссавців. Також можуть бути використані безклітинні системи трансляції. Відповідні вектори клонування та експресії для використання з клітинами-хазяями бактерій, грибів, дріжджів та ссавців описані
Зо Роцугеї5 єї а!. (Сіопіпуд Месіоге: А І арогаїогу Мапаиаї, ЕІземієг, М.У., 1985). Додаткову інформацію щодо способів отримання білка, включаючи отримання антитіл, можна знайти, наприклад, у патентній публікації США Мо 2008/0187954, патентах США Мо 6413746 та 6660501 та міжнародній патентній публікації Мо ММО 04009823.
І. Імунокон'югати, що містять агоністи глюкокортикоїдних рецепторів
Також запропоновані імунокон'югати, що містять агоністи глюкокортикоїдних рецепторів. У деяких варіантах здійснення винаходу імунокон'югат зв'язується з Ес-гамма-рецептором. У деяких варіантах здійснення винаходу імунокон'югат є активним у аналізі трансмембранного
ФНПа з репортером СКЕ (як використовується у цьому документі "аналіз трансмембранного
ФНПа з репортером СКЕ" стосується аналізу, що використовується нижче у Прикладі 7). В деяких варіантах здійснення винаходу імунокон'югат демонструє знижену імуногенність (знижену імунну реакцію проти лікарського засобу (АБА)) порівняно з білком в імунокон'югаті (наприклад, антитілом) окремо.
В одному варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а: (ЗМ-І-О)2-А 1-а, де:
А являє собою антитіло проти фактору некрозу пухлини (ФНП) а, моноклональне антитіло проти ФНПс або адалімумаб;
Ї являє собою лінкер;
О являє собою гетеробіфункціональну групу; або
О відсутній; п дорівнює 1-10; і
ЗМ являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку 3: (1) Формули І-а:
пон о о тон н но ти - о
Сл о ПІ-а; (2) Формули 1І-р: он Н о М но ти - о
Сл о ПІ-Б; (3) Формули 1І-с: он Н о М но я - ю
Сл о ї
Е ПІ-с; або (4) Формули 1-й: пон о о тон н но ти - о лев о ї
Е ПІ-а.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І1-а, де
ЗМ являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а,
ПІ-Б, ПІ-с або 1І-д, де Ї. являє собою лінкер, що здатний розщеплюватися, який містить дипептид або трипептид, 0 являє собою гетеробіфункціональну групу, або О відсутній, і п дорівнює 1-10.
Зокрема, І. містить дипептид або трипептид, обраний з групи, що складається з аланін-аланіну (Аіа-Айа), гліцин-глутамінової кислоти (Сіу-СіІи), глутамінова кислота-аланін-аланіну (СіІи-Аїа-Аїа) та гліцин-лізину (С1у-Г ув).
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І1-а, де
ЗМ являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а,
П-Б, П-с і 1І-д, де О являє собою гетеробіфункціональну групу, зображену як: о я ук,
Ат т я о де т дорівнює 0 або 1.
В іншому варіанті здійснення винаходу т дорівнює 0, а ОО зображений як: о
Ав . О-1а.
В іншому варіанті здійснення винаходу т дорівнює 1, а ОО зображений як: о
КВ я
Н О-1Ь.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І1-а, де
ЗМ являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а,
П-Б, П-с і 1І-а, де -І-0- являє собою будь-яку хімічну структуру з Таблиці 2:
Таблиця 2 о
АХА
М - туя ех но о; ()
СЮ о о - : о о
Н
КИ А
Н о о - : о о
Н Н яр ЕН ох пе но о ;
Ге) о
Н
Я М т - г д Е о У о о о
Ж АЖ Ж
М о Е ,
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, наприклад сполука Формули І-а де 5М являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а, 1І-Б, 1І-с і 1-4, де п дорівнює 2-8. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 1-5. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 2-5. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 1. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 2. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 3. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 4. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 5. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 6. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 7. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 8.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, наприклад сполука Формули І-а де 5М являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а, 1-5, 1І-с і 1І-О, де п А являє собою антитіло.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, наприклад сполука Формули І-а де 5М являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а, ІІ-Ю, ІП-с ії П-а, причому антитіло є мишачим, химерним, гуманізованим або людським.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, наприклад сполука Формули І-а де 5М являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а, 1І-Б, ІІ-с ії ІІ-4, причому А конкурентно інгібує зв'язування антитіла, вибраного з групи, що складається з адалімумабу, інфліксімабу, цертолізумабу пеголу та голімумабу, з ФНПа.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, наприклад сполука Формули І-а де 5М являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а, 1І-Б, 1І-с і 1-3, причому А зв'язується з тим же епітопом ФНІПс, що й антитіло, вибране з групи, що складається з адалімумабу, інфліксімабу, цертолізумабу пеголу, афелімомабу, нерелімомабу, озоралізумабу, плакулумабу та голімумабу.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, наприклад сполука Формули І-а де 5М являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а, ІІ-Б, ІП-с ої П-а, причому А містить варіабельні послідовності СОКІ, СОК2 і СОРЗ важкого ланцюга ЗЕО ІО Мо 7 або 8, 5ЕО ІЮО Мо 9 і 5ЕО ІЮО Мо 10 або 11, відповідно, та варіабельні послідовності СОКІ, СОК2 і СОМЗ легкого ланцюга ЗЕО ІО Мо 12, 5ЕО ІО Мо 13 та 5ЕО ІО Мо 14, відповідно.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, наприклад сполука Формули І-а де 5М являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а, 1І-Б, ІІ-с ї ІІ-4, причому А являє собою антитіло проти ФНПа, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, зображену як 5ЕО ІЮ
Мо 5, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, зображену як ЗЕО ІЮ Мо 6.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, наприклад сполука Формули І-а де 5М являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а, 1І-Б, ІІ-с ї ІІ-4, причому А являє собою антитіло проти ФНПа, що містить важкий ланцюг, зображений як ЗЕО ІЮ Мо 3, та легкий ланцюг, зображений як 5ЕО ІЮО Мо 4.
Зо В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, наприклад сполука Формули І-а де 5М являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а, 1І-Б, 1І-с і 1-4, причому А блокує взаємодію
ФНПа з рецепторами поверхні клітини р55 та р75.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, наприклад сполука Формули І-а де 5М являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а, 1І-Б, 1І-с і 1-4, причому А лізує клітини, що експресують поверхневий ФНП, іп міїго у присутності комплементу.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, наприклад сполука Формули І-а де 5М являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а, ІП-Б, ІП-с ої 1-4, де А являє собою етанерцепт.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, наприклад сполука Формули І-а де 5М являє собою одновалентний радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ІІ-а, ІП-Б, ІП-с ої 1-4, де А являє собою адалімумаб.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули І-а, яка має будь-яку з хімічних структур з Таблиці 3:
Таблиця З о зо
АД
Ї АХ г о
М
7 тр т й 9 о о у нон но о п о г о о РА он н й с о
Ме ою й У нон п
Мн» о «ГА о що он
А УА, дн н Е н (в) о Е о
Я о о о Ко он
Н
Н ЕЕ Н он о ж «СЯ с
Р он о
А КИ 4, он
Е н Е Нн
ПВ но о п о (8 А «бок Он
ЕН он ве п «50 «бою ОН о
А кА, о
Н Е н фло о шо Но рн о зе
СТИ
9 ч Ї а, ох он
А М о
КА, 0, г
Н 5 Е Н 1 - и но "он п о «(8 о о во он , 4, о ї Н Е Н че) ох о 0- но" Х х " ного п
Е
Ге А -О о щу он
А УА,
Н ЕН он о о - п
Е
А о зе щ- «бою ОН о Н о 1
ПА ДО
Н ЕН он о і-ї п
Е за ес Тв) о о що он н
Ж Ж о
К ї Й Е М он но о п
Е
А о «ГТ «Є ох он о Н о хх
А М М Ж о тр ЕЙ он
Ї Ве но о п
Е
А о «ГТ - о у он
М МЖК о
А м М о 3 н о Е н ро
Е Кк но ОН п
Е
А о «Ге - о (с мою он н
А КАХ о о н Е НУ фло о - их но ОН п
Е
А о «Ге о о мною он
Нн н
ТЕ н ЕН фло
ЕЕ о БЕ и дХ пе ної о п о о по " х КАК у й . с ДЕ н/ Зо
КС
АДАМ
А о о ши т
АЛЛО г де п дорівнює 1-5, а А являє собою адалімумаб.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкритий кон'югат антитіло- лікарський засіб відповідно до формули: о ее
РТ о о кто он нН
А М М. о о тр Е Н о ми но7 У
У Он п
МН» ; де А являє собою адалімуаб, і п дорівнює 4. Як показано в Прикладі 7 нижче, цей АОС (тобто АЮС4 нижче) демонструє активність іп міо, стабільність у плазмі та мінімальне агрегування.
ЇМ. Способи отримання імунокон'югатів та синтетичних проміжних продуктів
Загальний синтез різних імунокон'югатів за винаходом передбачає приведення низькомолекулярної сполуки, функціоналізованої МН»г, (ЗМ) будь-якої з Формул ПШ-а, ПІ-Б, ПІ-с або ІІ-й нижче у контакт з лінкерною частиною та функціоналізація отриманої сполуки, що дає проміжний продукт, функціоналізований бромацетамідом. Потім проміжний продукт,
функціоналізований бромоацетамідом, приводять у контакт з Н5З-А, де Н5-А являє собою антитіло, наприклад адалімумаб, що має обмежену кількість відновлених міжланцюгових дисульфідних зв'язків. (1) Формула П-а: оон о тон о но НО СІ Ф в "о
ФО о Пі-а; (2) Формула ПІ-Б: он о но о СІ і
Я
"о ж о ПІ-Ь; (3) Формула ПІ-с: он о, но о СІ і я а
Ж о ї
Е ПІ-с; або (4) Формула ПІ-а: тон «Р о он о но "о «С А
Оу "о
ЖЕ о :
Е І-а.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкритий спосіб отримання сполуки, що має Формулу ІМ-а:
ЗМ-ї. яз о по ма, де:
А являє собою адалімумаб;
Ї являє собою лінкер; п дорівнює 1-10; і
ЗМ являє собою радикал глюкокортикостероїду, що має будь-яку з Формул ПІ-а-Ша; причому спосіб включає: а) кон'югування сполуки Формули У:
ЗМ В о М з білком проти фактору некрозу пухлини (ФНПІ) а або білком; і р) виділення сполуки Формули ІМ-а.
У деяких варіантах здійснення винаходу розкритий спосіб додатково включає очищення сполуки Формули ІМ-а. У деяких варіантах здійснення винаходу використовується аніонообмінна хроматографія (АЕС), яка (за рахунок заряджених фрагментів пептидної частини лінкера у деяких варіантах здійснення та/"або фосфатної групи на ЗМ у деяких варіантах здійснення) може забезпечити ефективне розділення молекул з різним ВАК.
У деяких варіантах здійснення винаходу розкритий спосіб потребує менше синтетичних стадій, ніж способи, що спираються на стандартну хімію лінкерів на основі малеїіміду. Зокрема, способи, що спираються на стандартну хімію лінкерів на основі малеїміду, можуть вимагати подальшої стадії гідролізу для розкриття сукцинімідного кільця, яку здійснюють після очищення молекул з придатним БАК. Отже, у деяких варіантах здійснення винаходу розкритий спосіб значно скорочує протокол кон'югації у порівнянні зі стандартною хімією лінкера на основі малеїіміду.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкритий спосіб отримання сполуки Формули МІ-а: о
ДА
А М о миша но7ї д ; но о по Мі-а де:
А являє собою адалімумаб; і п дорівнює 1-10, причому спосіб включає: а) кон'югування сполуки Формули МІІ-а: о 8 вк. Ж о а 9 4 миша но" Х
Х » но То МІІ-а, з частково відновленим адалімумабом; і р) виділення, наприклад, за допомогою хроматографії, сполуки, що має Формулу МІ-а.
В іншому варіанті здійснення у цьому документі розкритий спосіб отримання сполуки
Формули ІМ-а або Формули Мі-а, де п дорівнює 1-7. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 1-5. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 2-4. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 1. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 2. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 3. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 4. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 5. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 6. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 7. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 8.
В іншому варіанті здійснення винаходу у цьому документі розкрита сполука Формули ІМ-а або Мі-а, де:
А являє собою адалімумаб; і п дорівнює 1-10.
В іншому варіанті здійснення у цьому документі розкрита сполука Формули ІМ-а або Мі-а, де п дорівнює 1-7. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 1-5. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 2-4. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 1. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 2. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 3. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 4. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 5. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 6. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 7. В іншому варіанті здійснення винаходу п дорівнює 8.
Також у цьому документі передбачені синтетичні проміжні продукти, які придатні для отримання імунокон'югатів.
В одному варіанті здійснення винаходу описаний у цьому документі синтетичний проміжний продукт являє собою сполуку, що має будь-яку з Формул М або МІІ-а.
МІ. Способи застосування та фармацевтичні композиції
У цьому документі наведені кон'югати Формули І-а (наприклад, мають формули, зображені у
Таблиці 3), які можна використовувати іп міго або іп мімо. Відповідно, також запропоновані композиції, наприклад фармацевтичні композиції для певного застосування іп мімо, що містять кон'югат або агоніст глюкокортикоїдного рецептора з бажаним ступенем чистоти у фізіологічно прийнятному носії, допоміжній речовині або стабілізаторі (Кетіпдіоп'є Рпагтасецшіїса! Зсіепсе5 (1990) Маск Рибіїєпіпуд Со., Еавіоп, РА). Прийнятні носії, допоміжні речовини або стабілізатори є не токсичними для реципієнтів у дозуваннях і концентраціях, що застосовуються.
Композиції (наприклад, фармацевтичні композиції), які використовуються для введення іп мімо, можуть бути стерильними, що може бути здійснено шляхом фільтрування через, наприклад, стерильні фільтраційні мембрани. Композиції (наприклад, фармацевтичні композиції), що використовуються для введення іп мімо, можуть містити консервант.
Кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або фармацевтичні композиції, що містять описані у цьому документі кон'югати антитіло-лікарський засіб, можуть бути ефективними для лізису
Зо клітини, що експресує поверхневий ФНПа (іп міїго або іп мімо), та/або для лікування захворювань або розладів, що характеризуються підвищеним ФНПса (наприклад, підвищеним ФНПа в синовіальній рідині). У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції є ефективними при інгібуванні вивільнення цитокінів (іп міїго або іп мімо) та/або для лікуванні аутоїмунних або запальних захворювань. У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування хвороби Крона (наприклад, хвороби Крона від помірного до тяжкого ступеня, що зачіпає клубову кишку та/або висхідну ободову кишку, і/або підтримання клінічної ремісії хвороби Крона від помірного до тяжкого ступеня, що зачіпає клубову кишку та/або висхідну ободову кишку, до З місяців). У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції застосовуються для лікування виразкового коліту (наприклад, для індукції ремісії у пацієнтів з активним виразковим колітом від помірного до тяжкого ступеня). У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування ревматоїдного артриту (РА, КА). У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування ювенільного ідіопатичного артриту (ЮА, ЗА). У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування псоріатичного артриту (ПсА, Р5А). У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування спондилоартропатії, такої як анкілозуючий спондиліт (АС, АБ) або аксіальний спондилоартрит (аксСпА, ахб5рА). У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування хвороби Крона (ХК, СО) у дорослих. У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування хвороби
Крона у дітей. У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування виразкового коліту (ВК, ОС). У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування бляшкоподібного псоріазу (БП, Р5). У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування гнійного гідраденіту (ГГ, Н5). У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування увеїту. У деяких бо варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування хвороби Бехчета. У деяких варіантах здійснення винаходу кон'югати антитіло-лікарський засіб та/або композиції використовуються для лікування псоріазу, включаючи бляшкоподібний псоріаз. Деякі варіанти здійснення винаходу включають використання кон'югатів лікарського засобу та/"або фармацевтичних композицій для виготовлення лікарського препарату для лікування захворювань або розладів, описаних у цьому документі.
Деякі варіанти здійснення винаходу включають способи доставки агоніста глюкокортикоїдного рецептора до клітини, що експресує ФНПа. Такі способи можуть включати стадію приведення клітини, що експресує ФНІПа, у контакт з кон'югатом антитіло-лікарський засіб, як описано у цьому документі. Деякі варіанти здійснення винаходу включають іп мйго спосіб доставки агоніста глюкокортикоїдного рецептора до клітини, що експресує ФНПа.
Також наведені способи визначення протизапальної активності кон'югата антитіло- лікарський засіб. Такі способи можуть включати стадію приведення клітини, що експресує
ФНІПа, у контакт з кон'югатом антитіло-лікарський засіб, як описано у цьому документі. Деякі варіанти здійснення винаходу включають приведення клітини, що експресує ФНПа, у контакт з кон'югатом антитіло-лікарський засіб, як описано у цьому документі, та визначення зменшення вивільнення прозапальних цитокінів з клітини порівняно з контрольною клітиною. Деякі варіанти здійснення винаходу включають спосіб визначення протизапальної активності кон'югата антитіло-лікарський засіб іп міо.
Деякі варіанти здійснення винаходу включають способи відбору (наприклад, способи іп міо), які включають приведення у контакт, безпосередньо чи опосередковано, клітин (наприклад, клітин, що експресують ФНІПй) з кон'югатом антитіло-лікарський засіб та визначення, чи модулює кон'югат антитіло-лікарський засіб активність або функцію клітин, що відображається, наприклад, змінами у морфології та життєздатності клітин, експресією маркера, диференціацією або дедиференціацією, клітинним диханням, мітохондріальною активністю, цілісністю мембрани, дозріванням, проліферацією, життєздатністю, апоптозом або загибеллю клітин. Одним прикладом безпосередньої взаємодії є фізична взаємодія, тоді як опосередкована взаємодія включає, наприклад, дію композиції на проміжну молекулу, яка, в свою чергу, діє на згадуваний об'єкт (наприклад, клітину або клітинну культура).
Зо МІ. Готові вироби
Винахід також включає фармацевтичні упаковки та набори, що містять один або більше контейнерів, причому контейнер може містити одну або більше доз кон'югата антитіло- лікарський засіб або композиції, як описано у цьому документі. У деяких варіантах здійснення винаходу упаковка або комплект містить одиничне дозування, що означає заздалегідь визначену кількість композиції або кон'югата антитіло-лікарський засіб з одним або більше додатковими агентами або без них.
Набір може містити один або декілька контейнерів та етикетку або листівку-вкладку у, на або у поєднанні з контейнером(-ами), що вказує на те, що композиція, що міститься у ньому, використовується для лікування вибраного захворювання. Придатні контейнери включають, наприклад, пляшки, флакони, шприци тощо. Контейнери можуть бути виготовлені з різних матеріалів, таких як скло або пластик. Контейнер(-и) можуть містити стерильний вхідний отвір, наприклад контейнер може являти собою пакет для внутрішньовенного розчину або флакон, що має пробку, яку можна проткнути голкою для підшкірних ін'єкцій.
У деяких варіантах здійснення винаходу набір може містити засоби для введення пацієнту антитіла та будь-яких необов'язкових компонентів, наприклад одну або більше голок або шприців (попередньо наповнених або порожніх), очну крапельницю, піпетку або інший подібний пристрій, з якого препарат може бути ін'єктований або введений суб'єкту або нанесений на уражену ділянку тіла. Набори за винаходом також зазвичай включають засоби для зберігання флаконів тощо та інші компоненти у захисній упаковці для комерційного продажу, такі як, наприклад, виготовлені видувним формуванням пластикові контейнери, у які поміщають та у яких зберігають бажані флакони та інші пристрої.
Приклади
Зрозуміло, що приклади та варіанти здійснення, описані у цьому документі, наведені лише з ілюстративними цілями, і що в їх світлі фахівцям у цій галузі будуть запропоновані різні модифікації або зміни, які повинні бути включені у сутність та межі цього винаходу.
Вихідні речовини є комерційно доступними, можуть бути отримані за описаними у цьому документі методиками, літературними методиками або методиками, які добре відомі фахівцю в галузі органічної хімії. Назви реагентів/реактивів є такими, як вони наведені на покупній пляшці або згенеровані відповідно до конвенцій ІШРАС за допомогою СПпетОгам/ ОПйга 12.0, 60 Сатбргіддебойе, Спетівігу Е-МоїероокК 11, Сатбгіддевой? або АшіоМот 2000. Зрозуміло, що приклади та варіанти здійснення, описані у цьому документі, наведені лише з ілюстративними цілями, ї що в їх світлі фахівцям у цій галузі будуть запропоновані різні модифікації або зміни, які повинні бути включені у сутність та межі цього винаходу.
Аналітичні методики синтезу та характеризація сполук
Аналітичні дані включені до наведених нижче методик, до ілюстрацій загальних методик або до таблиць прикладів. Якщо не вказано інше, всі "Н та З3С ЯМР дані були отримані на приладі
Магіап Мегсигу Ріиз 400 МГц або ВгиКег АМІІІ! 300 МГц; хімічні зсуви наведені у мільйонних долях (м. д.). Аналітичні дані ВЕРХ або деталізуються в межах експерименту, або наведені у таблиці умов РХ/МС та ВЕРХ з використанням методики, зображеної у Таблиці 4.
Таблиця 4
Градієнт являв собою 1-90 95 В за 3,4 хв., 90-100 95 В за 0,45 хв., 100-1 95 В за 0,01 хв., а потім витримування при 1 95 В протягом 0,65 хв. (швидкість потоку 0,8 мл/хв.). Рухома фаза А являла собою 0,0375 95 ТФК у НгО, рухома фаза В являла собою 0,018 95 ТФК в МесмМ. Колонка, яку використовували для хроматографії, являла собою колонку Рпепотепех І ипа-С18, 2,0 х 50 мм (частинки 5 мкм). Методи виявлення являють собою БАЮО та ЕЇ 50, а також іонізація електроспреєм у режимі позитивних йонів.
У нижче наведених прикладах використовуються наступні скорочення:
АКТГ Адренокортикотропний гормон НІС Хроматографія з гідрофобними взаємодіями
Бромацетамід ВЕРХ Високоефективна рідинна хроматографія
Рідинна хроматографія з
СУ Об'єми колонок РХМО мас-спектрометричним детектуванням
Діодна матриця антитіла середовище
Дибутилфталат
МЕАА
. Ядерний магнітний дмоя Диметилформамія | ям / Я ореюрано
Фосфатно-сольовий дМсо Диметилсульфоксид буферний розчин
ЕЕРО 2-Етокси-1-етоксикарбоніл-1 ,2- РМР Амінокінцевий пропептид дигідрохінолін проколагену 1 типу
БІО Випарювальний детектор розсіювання Кімнатна температура
Розуєлл-Парк
Ексклюзійна (трис(2-
ФФБ Фетальна бичача сироватка ТСЕР карбоксиетил)фосфін) 9-флуоренілметилоксикарбоніл Трифлуороцтова кислота
Приклад 1: Синтез (25, баз, бЬК, 75, ваб5, 865, 105, 11аК, 12а5, 1265)-10-(4-(3- амінобензил)феніл)-2,6б-дифлуоро-7-гідрокси-8р-(2-гідроксиацетил)-ба, ва-диметил-1,2,ба, 66, 7,68,ва, 80, 1т1а, 12,12а, 1260-додекагідро-4Н-нафтої|2"174,5|індено|1,2-42И1,3|діоксол-4-ону
Стадія 1: Синтез 4-(бромометил)бензальдегіду
Мо. оно
ТА в А в
Гідрид діїзобутилалюмінію (153 мл, 153 ммоль, 1 М у толуені) додавали по краплях до розчину 4-(бромометил)бензонітрилу (20 г, 102 ммоль) у толуені (400 мл) протягом 1 години при 0 С. Були підготовлені два додаткові флакони, як описано вище. Всі три реакційні суміші об'єднували. До суміші додавали 10 95 водну НСІ (1,5 л). Суміш екстрагували ДХМ (З х 500 мл).
Органічний шар сушили над Маг5О»:, фільтрували і концентрували при зниженому тиску.
Залишок очищали колонковою хроматографією на силікагелі (евлюювали ПЕ:ЕЮАсС-10:1), щоб отримати цільову сполуку (50 г, вихід 82 95) у вигляді білої твердого речовини. "Н ЯМР. (400
МГц, СОСІ») 6 10,02 (с, 1Н), 7,91-7,82 (м, 2Н), 7,56 (д, 9-7,9 Гц, 2Н), 4,55-4 45 (м, 2Н).
Стадія 2: Синтез 3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)аніліну
Вг г ст о
МН НОМ
До розчину 3-броманіліну (40 г, 233 ммоль) в 1,4-діоксані (480 мл) додавали 4,4,4"4,5,5,5,5'- тетраметил-2 2'-6і(1,3,2-діоксаборолан) (94 г, 372 ммоль), ацетат калію (45,6 г, 465 ммоль), 2- дициклогексилфосфіно-2",4",6'-триізопропіл-1,1"-біфеніл (8,07 Г, 13,95 ммоль) та трис(дибензиліденацетон)дипаладій (0) (8,52 г, 9,30 ммоль). Отриману суміш нагрівали при 80 "С протягом 4 годин під азотом. Додатковий флакон був підготовлений, як описано вище. Дві реакційні суміші об'єднували і концентрували, а залишок очищали колонковою хроматографією на силікагелі (евлюювали ПЕ:ЕТОАсС-10:1), щоб отримати цільову сполуку (60 г, вихід 55,4 95) у вигляді світло-жовтої твердої речовини. "Н ЯМР (400 МГц, СОСІ») б 7,23-7,13 (м, ЗН), 6,80 (д, 9У7,5 Гц, 1Н), 3,82-3,38 (м, 2Н), 1,34 (с, 12Н).
Стадія З: Синтез трет-бутил-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2- іл/феніл)карбамату с С « ди о --52 о
НМ НМ,
Вос 3-(4,4,5,5- Тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)анілін (Приклад 1, Стадія 2) (30 г, 137 ммоль) та ди-трет-бутилдикарбонат (38,9 г, 178 ммоль) перемішували в толуені (600 мл) при 100 С протягом 24 годин. Інший флакон був підготовлений, як описано вище. Дві реакційні суміші об'єднували, і суміш випарювали, розчиняли в ЕІОАс (1,5 л), промивали 0,1 н. НСІ (3 х 2 л) і насиченим водним розчином хлориду натрію (3 л), сушили над Ма250О»4, фільтрували і концентрували при зниженому тиску, що давало цільову сполуку (50 г, вихід 57 95) у вигляді червоної твердої речовини. "Н ЯМР (400 МГц, СОСІв) б 7,63 (ш. м, 2Н), 7,48 (д, 9У-7,1 Гц, 1Н),
Зо 7,37-1,28 (м, 1Н), 1,52 (с, 9Н), 1,34 (с, 12Н).
Стадія 4: Синтез трет-бутил-(3-(4-формілбензил)феніл)карбамату 5 Н в онс М 57- А я М. У -вос
НМ, ве онс
Вос
Суміш 4-(бромометил)бензальдегіду (Приклад 1, Стадія 1) (24,94 г, 125 ммоль), комплексу 1,1-бісідифенілфосфіно)фероцендіхлоропаладію (ІІ) з ДХМ (13,75 г, 18,80 ммоль), трет-бутил- (3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)уфеніл)укарбамату (з Прикладу 1, Стадія 3) (20 г, 62,7 ммоль) і карбонату калію (43,3 г, 313 ммоль) у тетрагідрофурані (400 мл) нагрівали до 80 "С протягом 12 годин. Інший флакон був підготовлений, як описано вище. Дві реакційні суміші об'єднували і розбавляли водою (500 мл). Водну суміш екстрагували ЕЮАсС (3 х 500 мл).
Органічні шари об'єднували і сушили над Ма5Ох, фільтрували і концентрували при зниженому тиску. Залишок очищали колонковою хроматографією на силікагелі (евлюювали ПЕ:ЕЮАсС-10:1), щоб отримати цільову сполуку (15 г, вихід 38,4 95) у вигляді білої твердої речовини. "Н ЯМР (400
МГу, СОС») б 9,95 (с, 1Н), 7,78 (д, У-7,9 Гц, 2Н), 7,33 (д, 9-7,9 Гц, 2Н), 7,27-7,13 (м, ЗН), 6,82 (д,
У71 Гц, 1Н), 6,47 (ш. с, 1Н), 4,00 (с, 2Н), 1,48 (с, 9Н).
Стадія 5: Синтез (65, 85, 9К, 105, 115, 135, 145, 16К, 175)-6,9-дифлуоро-11,16,17- тригідрокси-17-(2-гідроксиацетил)-10,13-диметил-б, 7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагідро-
ЗН-циклопента(а|френантрен-3-ону он он о о но є но о дао з» «он
ХО ХО о у о у
Е Е
(25, баб, бЬА, 75, ваб5, 855, тай, 12а5, 12055)-2,606-Дифлуоро-7-гідрокси-8р-(2- гідроксиацетил)-ба, ва, 10,10-тетраметил-1 2,ба, 660, 7,8,ва, 80, 1т1а, 12,12а, 120-додекагідро-4Н- нафто(2",174,5|індено|1,2-4|И1,3|діоксол-4-он (20 г, 44,2 ммоль) суспендували в 40 95-ому водному НВР». (440 мл), і суміш перемішували при 25 "С протягом 48 годин. Після завершення реакції додавали 2 л води, і тверду речовину збирали фільтруванням. Цю тверду речовину промивали водою (1 л), а потім МеонН (200 мл), що давало цільову сполуку (11 г, вихід 60,3 90) у вигляді білої твердої речовини. "Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-аб) б 7,25 (д, 9-10,1 Гц, 1Н), 6,28 (д,
У-10,1 Гц, 1Н), 6,10 (с, 1Н), 5,73-5,50 (м, 1Н), 5,39 (ш. с, 1Н), 4,85-4,60 (м, 2Н), 4,50 (д, 9-194 Гц, 1Н), 4,20-4,04 (м, 2Н), 2,46-2,06 (м, 6Н), 1,87-1,75 (м, 1Н), 1,56-1,30 (м, 6Н), 0,83 (с, ЗН).
Стадія б: Синтез (25, баб5, бОК, 75, ваз, 8р5, ТОК, 1т1ак, 12а5, 1265)-10-(4-(3- амінобензил)феніл)-2,60Б-дифлуоро-7-гідрокси-8Б-(2-гідроксиацетил)-ба, ва-диметил-1,2,ба, бБ, 7,8,ва, 86, 1т1а, 12,12а, 12б-додекагідро-4Н-нафтої|2",17:4,5|індено|1,2-4111,З|діоксол-4-ону. он он ; ;
Кол Н Ох но . он .
А онс Н
Ж Ж
Е Е
Суспензію (65, 85, 9, 105, 115, 135, 145, 168, 175)-6,9-дифлуоро-11,16,17-тригідрокси-17- (2-гідроксиацетил)-10,13-диметил-б, 7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагідро-ЗН- циклопента(аїфенантрен-3-ону (Приклад 1, Стадія 5) (4,4 г, 10,67 ммоль) і Мо5оОх (6,42 г, 53,3 ммоль) у МесМ (100 мл) перемішували при 20 "С протягом 1 години. Однією порцією додавали розчин трет-бутил-(3-(4-формілбензил)феніл)/укарбамату (Приклад 1, Стадія 4) (3,65 г, 11,74 ммоль) в Месм (100 мл). По краплях додавали трифлуорометансульфонову кислоту (9,01 мл, 53,3 ммоль), підтримуючи внутрішню температуру нижче 25 "С, використовуючи льодяну баню.
Після додавання суміш перемішували при 20 "С протягом 2 годин. Три додаткові флакони були підготовлені, як описано вище. Всі чотири реакційні суміші об'єднували і концентрували, а залишок очищали препаративною ВЕРХ, що давало цільову сполуку (4,5 г, вихід 14,2 95) у вигляді жовтої твердої речовини. РХМС (методика а, Таблиця 4) Не-2,65 хв.; МС т/7-606,2 (МАН); "Н ЯМР (400 МГц, ДМСоО-аб) 6 7,44-7,17 (м, 5Н), 6,89 (т, 9-7,7 Гц, 1Н), 6,44-6,25 (м, 4Н), 6,13 (ш. с, 1Н), 5,79-5,52 (м, 2Н), 5,44 (с, 1Н), 5,17-4,89 (м, ЗН), 4,51 (д, 9У-19,4 Гц, 1Н), 4,25-4,05 (м, 2Н), 3,73 (с, 2Н), 3,17 (ш. с, 1Н), 2,75-2,55 (м, 1Н), 2,36-1,97 (м, ЗН), 1,76-1,64 (м, ЗН), 1,59- 1,39 (м, 4Н), 0,94-0,78 (м, ЗН). Методика препаративної ВЕРХ: прилад: система для
Зо напівпрепаративної ВЕРХ сіїЇзоп 281; рухома фаза: А: мурашина кислота/НгО-0,01 95 об/об; В:
Месм; колонка: Гипа С18, 150725, 5 мкм; швидкість потоку: 25 мл/хв.; довжина хвилі детектування: 220 і 254 нм.
Час | 00 | 7105 | 706 | 710,7 | 7137 | 138 | 150
Приклад 2: Синтез (бак, 665, 75, ваз, 865, 10, 11акК, 12а5, 1265)-10-(4-(3- амінобензил)феніл)-7-гідрокси-8р-(2-гідроксиацетил)-ба, ва-диметил-1,2,ба, 60, 7,8,ва, 80, 1та, 12,12а, 120-додекагідро-4Н-нафто|2,1"4,5|індено!1,2-411,З|діоксол-4-ону. он но бр "
У»
Св о
Приклад 2 був синтезований за методикою, аналогічною Прикладу 1, використовуючи (85, 95, 108, 115, 135, 145, 168, 175)-11,16,1 7-тригідрокси-17- (2-гідроксиацетил)-10,13-диметил- 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагідро-ЗН-циклопента(а|фенантрен-3-он.
ІН ЯМР (400 МГц, ДМСО-ав) б 7,36 (д, У-7,9 Гц, 2Н), 7,31 (д, 9-101 Гц, 1Н), 7,20 (д, У-7,9 Гу, 2Н), 6,89 (т, У-7,9 Гц, 1Н), 6,39-6,28 (м, ЗН), 6,16 (дд, 9У-1,5, 9,9 Гц, 1Н), 5,93 (с, 1Н), 5,39 (с, 1Н), 5,08 (т, 95,7 Гц, 1Н), 4,98-4,87 (м, ЗН), 4,78 (д, 9-3,1 Гц, 1Н), 4,49 (дд, У-6,2, 19,4 Гц, 1Н), 4,29 (ш. с, 1Н), 4,17 (дд, 95,5, 19,6 Гц, 1Н), 3,74 (с, 2Н), 2,61-2,53 (м, 1Н), 2,36-2,26 (м, 1Н), 2,11 (д, 911,0 Гц, 1Н), 2,07 (с, 1Н), 2,02 (д, У-12,8 Гц, 1Н), 1,83-1,54 (м, 5Н), 1,39 (с, ЗН), 1,16-0,96 (м, 2Н), 0,85 (с, ЗН). РХМС (Методика а, Таблиця 4) Н-2,365 хв.; т/2-570,2 (МАН).
Приклад 3: Синтез (баб, бОК, 75, ваз, 865, 10, 11акК, 12а5, 1265)-10-(4-(3- амінобензил)феніл)-6бб-флуоро-7-гідрокси-8Б-(2-гідроксиацетил)-ба, 8а-диметил-1,2,ба, 6, 7,68,ва, 80, 1т1а, 12,12а, 120-додекагідро-4Н-нафтої|2",174,5Ііндено1,2-4211,3|діоксол-4-ону. он но ше щі
ТО.
ХО о
Приклад З був синтезований за методикою, аналогічною Прикладу 1, використовуючи (85, 98, 105, 115, 135, 145, 168, 175)-9-флуоро-11,16,17-тригідрокси-17-(2-гідроксиацетил)-10,13- диметил-б,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагідро-ЗН-циклопента(а|їфенантрен-3-он.
ІН ЯМР (400 МГц, ДМСО-ав) б 7,37-7,26 (м, ЗН), 7,21 (д, 9-7,9 Гц, 2Н), 6,89 (т, 9-7,7 Гц, 1Н), 6,43-6,30 (м, ЗН), 6,23 (д, 9У-10,1 Гц, 1Н), 6,04 (с, 1Н), 5,75 (с, 1Н), 5,44 (с, 2Н), 5,09 (т, 9У-5,7 Гу, 1Н), 4,93 (ш. с, ЗН), 4,50 (дд, 9У-6,2, 19,4 Гц, 1Н), 4,28-4,09 (м, 2Н), 3,74 (с, 2Н), 2,73-2,54 (м, 2Н), 2,35 (д, 9-13,2 Гц, 1Н), 2,25-2,12 (м, 1Н), 2,05 (д, 9-15,0 Гц, 1Н), 1,92-1,77 (м, 1Н), 1,74-1,58 (м,
ЗН), 1,50 (с, ЗН), 1,45-1,30 (м, 1Н), 0,87 (с, ЗН). РХМС (Методика а, Таблиця 4) Ве-2,68 хв.; т/2-588,1 (МАН).
Приклад 4: Синтез (5)-4-(2-(2-бромацетамідо)ацетамідо)-5-((3-(4-((бав, 6р5, 75, ваб5, 805, 108, 11ав, 12а5, 1265)-7-гідрокси-ба, ва-диметил-4-оксо-8р-(2-(фосфонокси)ацетил)-2,4,ба, 6Б, 7,68,ва, 86, та, 12,12а, 12р-додекагідро-їН-нафтої|2"174,5|індено|(1,2-4111,3|діоксол-10- іл/бензил)феніл)аміно)-5-оксопентанової кислоти
Стадія 1: Синтез (5)-2-(2-((9Н-флуорен-9-ілуметокси)карбоніл)аміно)ацетамідо)-5-(трет- бутокси)-5-оксопентанової кислоти. о о
Нн н вто" 997 Чон втюс ТИМ сон
Е н Е у 0075 ОХ
ХК хо
Суміш 2-хлоротритилхлоридної смоли (30 г, 92 ммоль), триетиламіну (46,4 г, 458 ммоль) та (5)-2-«(9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентанової кислоти (25,5 г, 60 ммоль) у сухому ДХМ (200 мл) продували Ме при 20 "С протягом 8 годин. Суміш
Зо фільтрували, і смолу промивали ДХМ (2 х 200 мл), Мен (2 х 200 мл) і ДМФА (2 х 200 мл). До смоли додавали розчин піперидин:ДМФА (1:4, 400 мл), і суміш продували М» протягом 8 хвилин, а потім фільтрували. Цю операцію повторювали п'ять разів для повного видалення захисної групи Етос. Вказану смолу промивали ДМФА (5 х 500 мл), щоб отримати зв'язану зі смолою (5)-2-аміно-5-(трет-бутокси)-5-оксопентанову кислоту. Суміш 2-«(9Н-флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)оцтової кислоти (13,38 г, 45,0 ммоль), М, М-діззопропілетиламіну (7,86 мл, 45 ммоль), гідроксибензотриазолу (6,89 г, 45 ммоль), 2-(б-хлоро-1Н-бензо|94111,2,3)гриазол- 1-іл)-1,1,3,3-тетраметилізоуронію гексафлуорофосфату (М) (18,62 г, 45,0 ммоль) у ДМФА (200 мл) перемішували при 20 "С протягом 30 хв. До суміші додавали зв'язану зі смолою (5)-2-аміно-
Б-(трет-бутокси)-5-оксопентанову кислоту, і отриману суміш продували Ма при 25 С протягом 1,5 годин. Суміш фільтрували, і смолу промивали ДМФА (4 х 500 мл) і ДХМ (2 х 500 мл). До суміші додавали 195 ТФК/ДХМ (5 х 500 мл) і продували Мо» протягом 5 хвилин. Суміш фільтрували, і фільтрат безпосередньо додавали до насиченого розчину МанСоОз (200 мл).
Об'єднану суміш відокремлювали, та органічну фазу промивали насиченим водним розчином лимонної кислоти (4 х 400 мл) та насиченим водним розчином хлориду натрію (2 х 300 мл).
Фінальний органічний розчин сушили над Ма»5О4 (20 г), фільтрували, концентрували при зниженому тиску, щоб отримати цільову сполуку (10 г, вихід 20 95) у вигляді світло-жовтої твердої речовини.
ІН ЯМР: (СОС, 400 МГц) 6 - 7,75 (д, 9-7,5 Гц, 2Н), 7,59 (ш. д, 9У-7,5 Гц, 2Н), 7,41-7,36 (м,
2Н), 7,30 (т, У-7,0 Гц, 2Н), 5,82 (ш. с, 1Н), 4,57 (ш. д, У-4,8 Гц, 1Н), 4,38 (ш. д, 9-7,5 Гц, 2Н), 4,27- 4,15 (м, 1Н), 4,06-3,83 (м, 2Н), 2,50-2,29 (м, 2Н), 2,26-2,13 (м, 1Н), 2,06-2,02 (м, 1Н), 1,43 (с, 9Н).
Стадія 2: Синтез трет-бутил-(5)-4-(2-((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)ацетамідо)- 5-((3-(4-((банв, 6Ь5, 75, ваб5, 805, 108, 1т1аВ, 12а5, 1265)-7-гідрокси-8Б-(2-гідроксиацетил)-ба, ва-диметил-4-оксо-2,4,ба, бБ, 7,8,ва, 85, та, 12,12а, 12р-додекагідро-1 Н- нафто|2,17:4,5|інденої1,2-4111,З|діоксол-10-іл)бензил)феніл)аміно)-5-оксопентаноату о 8 я аО нс му аа он поету т й он
Н дО о й ху 2 он ЖК о
До розчину (5)-2-(2-((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)дацетамідо)-5-(трет-бутокси)-
Б-оксопентанової кислоти (Приклад 4, стадія 1) (424 мг, 0,878 ммоль) у ДМФА (3,5 мл) додавали (бав, 605, 75, ваб, 865, 108, 11айВ, 12а5, 12605)-10-(4-(З-амінобензил)феніл)-7-гідрокси-8р-(2- гідроксиацетил)-ба, 8а-диметил-1,2,ба, бр, 7,68,8а, 806, т1та, 12,12а, 12р-додекагідро-4Н- нафто(2",17:4,5|індено|1,2-4И1,3|діоксол-4-он (Приклад 2) (500 мг, 0,878 ммоль) і триетиламін (0,3 мл, 2,63 ммоль) при 25 "С. Розчин охолоджували до 0 "С, а потім додавали 2,4,6-трипропіл- 1,3,5,2,4,6-триоксатрифосфінан-2,4,6--риоксид (1,12 г, 1,755 ммоль). Реакційну суміш перемішували протягом 12 годин при 25"С. РХМС показала, що реакція завершена.
Чотирнадцять додаткових флаконів були підготовлені, як описано вище. Всі п'ятнадцять реакційних сумішей об'єднували. Суміш очищали на колонці з оберненою фазою, щоб отримати цільову сполуку (5 г, вихід 38,4 95) у вигляді жовтої твердої речовини. Методика для колонки з оберненою фазою: прилад: Зпітайдли І С-8А для препаративної ВЕРХ; колонка: Рпепотепех
Гипа С18, 200740 мм"10 мкм; рухома фаза: А позначає НгО (0,05 95 ТФК), і В позначає МЕеСМ; градієнт: В від ЗО 95 до 100 95 за 30 хв.; швидкість потоку: 60 мл/хв.; довжина хвилі: 220 та 254 нм.
РХМС (Методика а, Таблиця 4) Н-1,34 хв.; т/2 1016,6 (М'-Н-18)7.
Стадія 3: Синтез трет-бутил-(5)-4-(2-((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)ацетамідо)- 5-(3-(4-((банй, 605, 75, 8ва5, 865, 108, тав, т12а5, 1265)-85-(2-((ди-трет- бутоксифосфорил)окси)ацетил)-7-гідрокси-ба, ва-диметил-4-оксо-2,4,ба, бр, 7,8,ва, 80, та, 12,12а, 126б-додекагідро-1 Н-нафто(2",174,5|індено|/1,2-4111,З|діоксол-10-іл)убензил)феніл)аміно)-5- оксопентаноату.
Да Я що РАК о " о ї руду їч о ж «руда о 4 о
Ве ХУ ТЕ ї о А о А
Зо До розчину трет-бутил-(5)-4-(2-((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)дацетамідо)-5-((3- (4-(бав, 6р5, 75, ваб, 805, 108, 1т1ав, 12а5, 1265)-7-гідрокси-8Б-(2-гідроксиацетил)-ба, Ва- диметил-4-оксо-2,4,ба, 66, 7,8,ва, 80, 1т1а, 12,1г2а, 120-додекагідро-1 Н-нафто|2",17:4,5|інденої|1,2- «ЧИ, З)діоксол-10-іл)бензил)феніл)аміно)-5-оксопентаноату (Приклад 4, стадія 2) (400 мг, 0,387 ммоль) у ДМФА (2,5 мл) додавали 1Н-тетразол (271 мг, 3,87 ммоль) і ди-трет- бутилдіетилфосфорамідит (1,16 г, 4,64 ммоль). Реакційну суміш перемішували при к.т. протягом 2,5 годин, потім охолоджували до 0 "С. До отриманої суміші додавали пероксид гідрогену (241 мг, 2,127 ммоль), давали нагрітися до к.т. та перемішували протягом 1 години, після чого РХМС показала, що реакція завершена. Одинадцять додаткових флаконів були підготовлені, як описано вище. Усі дванадцять реакційних сумішей об'єднували. Суміш очищали на колонці з оберненою фазою, щоб отримати цільову сполуку (44 г, вихід 64,2 95) у вигляді жовтої твердої речовини. Методика для колонки з оберненою фазою: прилад: ЗПітай7и І/С-8А для препаративної ВЕРХ; колонка: Рпепотепех Гипа С18, 200740 мм"10 мкм; рухома фаза: А позначає НО, і В позначає Месм); градієнт: В від 50 95 до 100 95 за 30 хв; швидкість потоку: 60 мл/хв.; довжина хвилі: 220 та 254 нм.
РХМС (Методика а, Таблиця 4) НВ-1,41 хв.; т/2 1226,7 (МН).
Стадія 4: Синтез трет-бутил-(5)-4-(2-аміноацетамідо)-5-((3-(4- (бан, 605, 75, ваб, 805, 108, 11ав, 12а5, 1265)-8р-(2-(ди-трет-бутоксифосфорил)окси)ацетил)-7-гідрокси-ба, ва-диметил-4-
оксо-2,4,6а, бр, 7,8,8а, 86, та, 1212а, 12Б-додекагідро-1Н-нафто(2',174 5|індено(|1,2- «ЧИ, З)діоксол-10-іл)бензил)феніл)аміно)-5-оксопентаноату. є 44 тк АД о с Її с
Вл пи те Ж те Де
До розчину трет-бутил-(5)-4-(2-((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)дацетамідо)-5-((3- (4-(бав, 65, 795, вав, 85, 1Ов, 11анв, 12а5, 1265)-80-(2-(ди-трет- бутоксифосфорил)окси)ацетил)-7-гідрокси-ба, ва-диметил-4-оксо-2,4,ба, бр, 7,8,ва, 80, та, 12,12а, 12Бб-додекагідро-1Н-нафтої(2",174,5|індено|1,2-4|1, З|діоксол-10-іл)/бензил)феніл)аміно)-
Б-оксопентаноату (Приклад 4, Стадія 3) (1,1 г, 0,897 ммоль) у МесСМ (6 мл) додавали піперидин (0,75 мл, 7,58 ммоль) при 25 "С. Реакційну суміш перемішували при к.т. протягом 20 хвилин, після чого РХМС показала, що реакція завершена. Три додаткові флакони були підготовлені, як описано вище. Всі чотири реакційні суміші об'єднували. Суміш концентрували, щоб отримати залишок, який обробляли ПЕ (10 мл) при перемішуванні протягом 2 годин. Отриману тверду речовину збирали фільтруванням і сушили при зниженому тиску, щоб отримати цільову сполуку (3,8 г, вихід 90 95) у вигляді жовтої твердої речовини.
РХМС (Методика а, Таблиця 4) Н-1,16 хв.; т/:2 10046 (МН).
Стадія 5: Синтез трет-бутил-(5)-4-(2-(2-бромацетамідо)ацетамідо)-5-((3-(4-((бан, 65, 75, ва5, 8065, 108, 1т1айв, 12а5, 12655)-80-(2-(ди-трет-бутоксифосфорил)окси)ацетил)-7-гідрокси-ба, ва-диметил-4-оксо-2,4,ба, бБ, 7,8,ва, 85, та, 12,12а, 12р-додекагідро-1 Н- нафто|2',17:4,5|індено|1,2-41И1,3|діоксол-10-іл)бензил)феніл)аміно)-5-оксопентаноату. о о . С о Ще мий ДИТ ву тн дю 7 и дл 7 о Х в о в г о ле о л- я Ж
До розчину 2-бромоцтової кислоти (97 мг, 0,697 ммоль) у ДМФА (2,5 мл) додавали ЕЕРО (172 мг, 0,697 ммоль) при к.т. Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 1 години. Додавали трет-бутил-(5)-4-(2-аміноацетамідо)-5-((3-(4-((бан, 605, 75, ваб5, 805, 108, 11ав, 12а5, 1265)-8р-(2-(ди-трет-бутоксифосфорил)окси)ацетил)-7-гідрокси-ба, ва-диметил-4- оксо-2,4,6а, бр, 7,8,8а, 86, та, 1212а, 12Б-додекагідро-ІН-нафто(2',174 5|індено(|1,2- «ЧИ, З)діоксол-10-іл)бензил)феніл)аміно)-5-оксопентаноат (Приклад 4, Стадія 4) (350 мг, 0,349 ммоль), та отриманий розчин перемішували протягом 2,5 годин, після чого РХМС показала, що реакція завершена. Сім додаткових флаконів були підготовлені, як описано вище. Всі вісім реакційних сумішей об'єднували. Реакційну суміш розбавляли ДХМ (100 мл), промивали водним
Зо розчином НВг (1 М, 2 х 80 мл), водним розчином Мансо»з (60 мл) і насиченим водним розчином хлориду натрію (60 мл). Органічний шар сушили над Маг250», фільтрували і концентрували при зниженому тиску, щоб отримати цільову сполуку (2 г, вихід 63,7 95) у вигляді жовтого масла.
РХМС (Методика а, Таблиця 4) Н-1,30 хв.; т/2 11242, 1125,9 (МАН).
Стадія 6: Синтез (5)-4-(2-(2-бромацетамідо)ацетамідо)-5-((3-(4-((бав, бЬ5, 75, баб, 805, 108, 1т1ав, 12а5, 1265)-7-гідрокси-ба, ва-диметил-4-оксо-8р-(2-(фосфонокси)ацетил)-2,4,ба, 6Б, 7,68,ва, 86, та, 12,12а, 12р-додекагідро-їН-нафтої|2"174,5|індено|(1,2-4111,3|діоксол-10- іл/бензил)феніл)аміно)-5-оксопентанової кислоти
ЗОФи о я 4 і алко дя ги ве о о м он т з ої Що зу идиИ я ох нон
А Й и А,
До розчину трет-бутил-(5)-4-(2-(2-бромацетамідо)ацетамідо)-5-((3-(4-((бан, 605, 75, вав, 865, ТОВ, 1т1ав, 12а5, 12055)-85-(2-((ди-трет-бутоксифосфорил)окси)ацетил)-7-гідрокси-ба, ва- диметил-4-оксо-2,4,ба, 66, 7,8,ва, 80, 1т1а, 12,1г2а, 120-додекагідро-1 Н-нафто(|2",17:4,5|інденої|1,2-
«ЧИ, З)діоксол-10-іл)бензил)феніл)аміно)-5-оксопентаноату (Приклад 4, Стадія 5) (2 г, 1,778 ммоль) у ДХМ (16 мл) додавали ТФК (8 мл, 104 ммоль), та отриману суміш перемішували при к.т. протягом 40 хвилин, після чого РХМС показала, що реакція завершена. Розчинник видаляли при зниженому тиску. Отриманий залишок очищали за допомогою препаративної ВЕРХ. Рухому фазу безпосередньо ліофілізували, щоб отримати цільову сполуку (640 мг, вихід 35,3 95). у вигляді жовтої твердої речовини. Методика препаративної ВЕРХ: прилад: Зпітай?и ГС-8А для препаративної ВЕРХ; колонка: Рпепотепех Гипа С18, 200740 мм"10 мкм; рухома фаза: А позначає НгО (0,09 95 ТФК), і В позначає МесМ; градієнт: В від 30 95 до 4095 за 20 хв.; швидкість потоку: 60 мл/хв.; довжина хвилі: 220 та 254 нм.
І"Н 'ЯМР (ДМСО-а6, 400 МГц) б - 9,88 (с, 1Н), 8,52 (с, 1Н), 8,24 (ш. д, 9-84 Гц, 1Н), 7,46 (ш. д, 9У-7,9 Гу, 1Н), 7,42 (с, 1Н), 7,36 (ш. д, У-7,9 Гц, 2Н), 7,30 (ш. д, 9У-9,7 Гц, 1Н), 7,23-7,17 (м, ЗН), 6,90 (ш. д, У-6,8 Гц, 1Н), 6,16 (ш. д, 9У-10,4 Гц, 1Н), 5,93 (с, 1Н), 5,47 (с, 1Н), 4,96-4,85 (м, ЗН), 4,58 (ш. дд, 9У-7,9, 18,7 Гц, 1Н), 4,38 (ш. д, 9-5,3 Гц, 1Н), 4,29 (ш. с, 1Н), 3,93 (с, 2Н), 3,89 (с, 2Н), 3,80 (ш. с, 2Н), 2,30-2,22 (м, 2Н), 2,16-1,91 (м, 4Н), 1,85-1,62 (м, 6Н), 1,39 (с, ЗН), 1,00 (ш. с, 2Н), 0,87 (с, ЗН). РХМС (Методика а, Таблиця 4) В-2,86 хв.; пп/72 956,0, 958,0 (МАН).
Приклад 5: Синтез 2-((25, баб, 6БА, 75, ва5, 805, 108, 11айВ, 12а5, 12605)-10-(4-(3-((5)-6- аміно-2-(2-(2-бромацетамідо)ацетамідо)гексанамідо)бензил)феніл)-2,6б-дифлуоро-7-гідрокси- ба, ва-диметил-4-оксо-1,2,4,ба, бБ, 7,68,ва, та, 12,12а, 12Бр-додекагідро-ВЬН- нафто(2',174,5|індено|1,2-4|И1,3|діоксол-8р-іл)-2-оксоетилдигідрогену фосфату.
Стадія 1: Синтез трет-бутил-((5)-5-(2-((9Н-флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)ацетамідо)-6-((3-(4-((25, баб, 60, 75, ваб5, 805, 108, 1т1айв, 12а5, 12065)-2,6б-дифлуоро-7-гідрокси-8Б-(2-гідроксиацетил)-ба, ва-диметил-4-оксо-2,4,ба, 60, 7,8,ва, 85, та, 12,12а, 12Б-додекагідро-1Н-нафтої|2,174,5|індено!1,2-4111,З|діоксол-10- іл/бензил)феніл)аміно)-6-оксогексил)карбамату.
Е
Е о т о н г
У Се . й РАДИ «бо он Етос., МЖК о 2 он уд
До розчину Ме-((9Н-флуорен-9-ілуметокси)карбоніл)гліцил)-Мб-(трет-бутоксикарбоніл)-І - лізину (5,58 г, 8,26 ммоль) у ДМФА (60 мл) при 0 "С додавали 2,4,6-трипропіл-1,3,5,2,4,6- триоксатрифосфінан-2,4,6-триоксид (10,51 г, 16,51 ммоль) і триетиламін (3,45 мл, 24,77 ммоль).
Отриману суміш перемішували при к.т. протягом 1 години, додавали (25, баз, бЬК, 75, вав,
Зо 865, 108, тав, т12а5, 12065)-10-(4-(3-амінобензил)феніл)-2,6б-дифлуоро-7-гідрокси-8р-(2- гідроксиацетил)-ба, 8а-диметил-1,2,ба, бр, 7,68,8а, 806, т1та, 12,12а, 12р-додекагідро-4Н- нафто(21": 4,5|індено|1,2-4111,3З|діоксол-4-он (Приклад 1, Стадія 6) (5 г, 8,26 ммоль). Отриману суміш перемішували протягом 5 годин при к.т., після чого РХМС показала, що реакція завершена. Було підготовлено шість додаткових флаконів, як описано вище. Всі сім реакційних сумішей об'єднували. Реакційну суміш очищали на колонці з оберненою фазою, щоб отримати цільову сполуку (24 г, вихід 24,62 95) у вигляді білої твердої речовини. Методика для колонки з оберненою фазою: прилад: Зпітайдли І С-8А для препаративної ВЕРХ; колонка: Рпепотепех
Гипа С18, 200740 мм"10 мкм; рухома фаза: А позначає НгО (0,05 95 ТФК), і В позначає МЕеСМ; градієнт: В від ЗО 95 до 100 95 за 30 хв.; швидкість потоку: 60 мл/хв.; довжина хвилі: 220 та 254
НМ.
РХМС (Методика а, Таблиця 4) Н-1,29 хв.; т/2 1095,6 (М'-Н-18)7.
Стадія 2: Синтез трет-бутил-((5)-5-(2-((9Н-флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)ацетамідо)-6-((3-(4-((25, баз, 60, 75, ваб5, 805, 108, 1т1аВ, 12а5, 1265)-85-(2-((ді-трет-бутоксифосфорил)окси)ацетил)-2,6б-дифлуоро-7-гідрокси-ба, ва-диметил- 4-оксо-2,4,ба, бр, 7,8,8а, 86, 1т1а, 12,12а, 12Б-додекагідро-1Н-нафто|21"4,5|інденої|1,2- «ПИ, З)діоксол-10-іл)бензил)феніл)аміно)-6-оксогексил)укарбамату.
Е Е
А о х о г що , ОМ й ДИ пе АД о Етос., ЯК о о н 8 І н он у І н о йо а Ж щт
До розчину трет-бутил-((5)-5-(2-((9Н-флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)ацетамідо)-6-
((3-(4-(25, баб5, 6БА, 75, баб, 805, 108, 1т1ав, 12а5, 12655)-2,60Б-дифлуоро-7-гідрокси-8р-(2- гідроксиацетил)-ба, ва-диметил-4-оксо-2,4,ба, 60, 7,8,8а, 856, 1т1а, 12,12а, 126-додекагідро-1 Н- нафто|2,17:4,5|індено|1,2-41И1,3|діоксол-10-іл)бензил)феніл)аміно)-6-оксогексил)укарбамату (Приклад 5, Стадія 1) (З г, 2,69 ммоль) у ДМФА (30 мл) додавали 1Н-тетразол (1,888 г, 26,9 ммоль) і ди-трет-бутилдіетилфосфорамідит (8,06 г, 32,3 ммоль), та реакційну суміш перемішували при к.т. протягом 3,5 годин. До реакційної суміші додавали пероксид гідрогену (224 мг, 1,97 ммоль) і перемішували 0,5 години, після чого РХМС показала, що реакція завершена. Було підготовлено шість додаткових флаконів, як описано вище. Всі сім реакційних сумішей об'єднували. Реакційну суміш очищали на колонці з оберненою фазою, щоб отримати цільову сполуку (10 г, чистота: 78 95, вихід 37,1 95) у вигляді білої твердої речовини. Методика для колонки з оберненою фазою: прилад: Зпітайли І С-8А для препаративної ВЕРХ; колонка:
Рпепотепех Гипа С18, 200740 мм"10 мкм; рухома фаза: А позначає НО, і В позначає МЕеСМ; градієнт: В від 50 95 до 100 95 за 30 хв.; швидкість потоку: 60 мл/хв.; довжина хвилі: 220 та 254 нм.
РХМС (Методика а, Таблиця 4) Н-1,42 хв.; т/2 1305,7 (МН).
Стадія 3: Синтез трет-бутил-((5)-5-(2-аміноацетамідо)-6-((3-(4-(25, баб, бЬВ, 75, ваб, 8Б5, 108, ї1тав, 12а5, 12065)-85-(2-((ди-трет-бутоксифосфорил)окси)ацетил)-2,6б-дифлуоро-7- гідрокси-ба, ва-диметил-4-оксо-2,4,ба, бр, 7,8,6а, 86, та, 12,12а, 12р-додекагідро-1 Н- нафто|2,17:4,5|індено|1,2-41И1,3|діоксол-10-іл)бензил)феніл)аміно)-6-оксогексил)карбамату.
Е Е н о? н о о Ще о Ще її у ебоне " Он У нії су" є й то... М о М о н Нн
А А. йо А-
До розчину трет-бутил-((5)-5-(2-((9Н-флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)ацетамідо)-6- (3-(4-((25, баб5, бБА, 75, ваб5, 855, 108, 1т1авВ, 12а5, 12Б55)-85-(2-((ди-трет- бутоксифосфорил)окси)ацетил)-2,6б-дифлуоро-7-гідрокси-ба, 8а-диметил-4-оксо-2,4,ба, б, 7,68,ва, 86, та, 12,12а, 12р-додекагідро-1Н-нафтої|2"174,5|індено|(1,2-4111,3|діоксол-10- іл/бензил)феніл)аміно)-6-оксогексилукарбамату (Приклад 5, Стадія 2) (2,5 г, 1,969 ммоль) в
Месм (10 мл) додавали піперидин (2 мл, 1,969 ммоль), і реакційну суміш перемішували при к. т. протягом 1 години, після чого РХМС показала, що реакція завершена. Три додаткові флакони були підготовлені, як описано вище. Всі чотири реакційні суміші об'єднували. Реакційну суміш концентрували, щоб отримати неочищений продукт, який перемішували у ПЕ (30 мл) протягом 2
Зо годин. Отриману тверду речовину збирали фільтруванням і сушили при зниженому тиску, щоб отримати цільову сполуку (7 г, чистота: 83 95, вихід 70,4 95) у вигляді жовтої твердої речовини.
РХМС (Методика а, Таблиця 4) В-1,17 хв.; т/:2 1083,5 (М.Н).
Стадія 4: Синтез трет-бутил-((5)-5-(2-(2-бромацетамідо)ацетамідо)-6-((3-(4-((25, баб, 668, 75, 8аб5, 805, 108, 1т1ав, 12а5, 120655)-80-(2-(ди-трет-бутоксифосфорил)окси)ацетил)-2,6Б- дифлуоро-7-гідрокси-ба, ва-диметил-4-оксо-2,4,ба, 660, 7,8,ва, 860, 1т1а, 12,12а, 120-додекагідро- 1Н-нафто(2174 5|інденої1,2-4111,3З|діоксол-10-іл)бензил)феніл)аміно)-6-оксогексил)карбамату.
Е Е о о но спос он -- о но со он вив У ро Й и У, дю о и о7 о о йо дк п, дк
До розчину 2-бромоцтової кислоти (0,929 г, 6,68 ммоль) у ДМФА (35 мл) додавали 2-етокси- 1-етоксикарбоніл-1,2-дигідрохінолін (1,653 г, 6,68 ммоль), і отриману суміш перемішували при к.т. протягом 1 години. Додавали продукт з Прикладу 5, Стадія З (3,5 г, 3,34 ммоль), і отриману суміш перемішували при к. т. протягом 2 годин. РХМС показала, що реакція завершена.
Реакційну суміш розбавляли ДХМ (100 мл), промивали водним розчином НВГг (1 М, 2 х 80 мл), водним розчином МанНСОз (60 мл) і насиченим водним розчином хлориду натрію (60 мл).
Органічний шар сушили над Маг250», фільтрували і концентрували при зниженому тиску, щоб отримати цільову сполуку (2 г, вихід 51,2 905) у вигляді жовтого масла.
РХМС (Методика а, Таблиця 4) Н-1,32 хв.; т/2 1205,5 (М.Н).
Стадія 5: Синтез 2-(25, баб, 66, 75, вав, 865, 108, 11аВ, 12а5, 1265)-10-(4-(3-((5)-6-аміно-
2-(2-(2-бромацетамідо)ацетамідо)гексанамідо)бензил) феніл)-2,6б-дифлуоро-7-гідрокси-ба, ва- диметил-4-оксо-1,2,4,ба, 60, 7,8,ва, 11а, 12,12а, 120-додекагідро-ВОН-нафтої|2',174,5|індено|1,2- 9ІИ1,З)діоксол-8р-іл)-2-оксоетилдигідрогенфосфату. б я ? о ХАМУ о І «Ще
І це де їж мон
До розчину трет-бутил-((5)-5-(2-аміноацетамідо)-6-((3-(4-(25, баб, 668, 75, баб, 8065, 108, 11ав, 12а5, 1255)-80-(2-((ди-трет-бутоксифосфорил)окси)ацетил)-2,6б-дифлуоро-7-гідрокси-ба, ва-диметил-4-оксо-2,4,ба, бБ, 7,8,ва, 85, та, 12,12а, 12р-додекагідро-1 Н- нафто|2,17:4,5|інденої1,2-4111,3|діоксол-10-іл)бензил)феніл)аміно)-6-оксогексил)укарбамату (Приклад 5, Стадія 3) (2 г, 1,661 ммоль) у ДХМ (10 мл) додавали ТФК (5 мл, 64,9 ммоль), і реакційну суміш перемішували при к.т. протягом 40 хв., після чого РХМС показала, що реакція завершена. Розчинник видаляли при зниженому тиску, і неочищений продукт очищали за допомогою препаративної ВЕРХ. Рухому фазу безпосередньо ліофілізували, щоб отримати цільову сполуку (550 мг, чистота: 96,9 95, вихід 32,3 95) у вигляді жовтувато-білої твердої речовини. Методика препаративної ВЕРХ: прилад: Зпітай?и І С-8А для препаративної ВЕРХ; колонка: Рпепотепех І ипа С18, 200740 мм"10 мкм; рухома фаза: А позначає НгО (0,09 95 ТФК), і В позначає МесМ; градієнт: В від 30 905 до 40 95 за 20 хв.; швидкість потоку: 60 мл/хв.; довжина хвилі: 220 та 254 нм.
ІН ЯМР: (ДМСО-46, 400 МГц) б м.д. 0,90 (с, ЗН) 1,19-1,41 (м, 2Н) 1,43-1,62 (м, 7 Н) 1,64-1,77 (м, З Н) 1,84 (ш. д, У-14,55 Гц, 1 Н) 1,95-2,07 (м, 1 Н) 2,18-2,36 (м, З Н) 2,65-2,78 (м, З Н) 3,71- 3,86 (м, З Н) 3,89 (с, 2 Н) 3,93 (с, 2 Н) 4,20 (ш. д, У-9,48 Гц, 1 Н) 4,33-4,41 (м, 1 Н) 4,59 (ш. дд, уУ-18,41, 8,05 Гц, 1 Н) 4,81 (ш. дд, 9У-18,52, 8,60 Гц, 1 Н) 4,94 (д, 9-4,63 Гц, 1 Н) 5,50 (с, 1 Н) 5,54- 5,76 (м, 1 Н) 6,13 (с, 1 Н) 6,29 (дд, 9У-10,14, 1,32 Гц, 1 Н) 6,95 (д, 9-7,72 Гц, 1 Н) 7,15-7,28 (м, 4 Н) 7,30-7,41 (м, З Н) 7,51 (ш. д, У-7,94 Гц, 1 Н) 7,72 (ш. с, З Н) 8,21 (ш. д, 9-7,72 Гц, 1 Н) 8,54 (т, 9-5,62 Гц, 1 Н) 9,93 (ш. д, 9У-2,65 Гц, 1 Н). РХМС (методика а, Таблиця 4) Ві-2,31 хв.
Приклад 6: Синтез (5)-2-(2-(2-бромацетамідо)етил)аміно)-М-((5)-1-((3-(4-(банв, 665, 75, вав, 865, 108, 1т1ав, 12а5, 12065)-7-гідрокси-8р-(2-гідроксиацетил)-ба, ва-диметил-4-оксо-2,4,ба, 66, 7,68,ва, 86, ї1та, 12,12а, 12Бб-додекагідро-1Н-нафтої|2"174,5|індено|(1,2-4111,3|діоксол-10- іл)бензил)феніл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)/пропанаміду.
Продукт Прикладу б може бути синтезований за допомогою сполучення М-(2-(((9Н-
Зо флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)етил)-М-(трет-бутоксикарбоніл)-І -аланіл-ІЇ -аланіну (продукт стадій 51 і 52 нижче) з амінопродуктом Прикладу 2 з наступними стадіями 54-56: (1) зняття захисту Етос, (2) сполучення з 2-бромоцтовою кислотою і (3) зняття захисту Вос. Етос - флуоренілметилоксикарбоніл; Вос - третбутоксикарбоніл. я поч щи я п шо це а її ЩІ де ях ке з р ен пн ідінью я ЩЕ : гу ру» не Зх и ех Як т й тет. зер те причи швея їз не 5 Ї я : в А доожецхсвв допета я ом о М т : я мої побу Фнаттазакисту БО. ' шт - сен стук: ут, Же рр р
Загальний протокол кон'югації цистеїну
Розчину бажаного антитіла з концентрацією приблизно 5-20 мг/мл готували у буферному розчині ФСБ, рН 6-7,4. Вибраний відновлювальний агент, такий як ТСЕР, розбавляли або розчиняли у таких розчинниках, як НгО, ДМСО, ДМА або ДМФА, отримуючи розчин з діапазоном концентрацій від 1 до 25 мМ. Потім антитіла (піде! проти АФНП (02Е7) або тідсг2а проти тФНП (8С11; МсКає ВІ еї аК. У Стопи Соїйів 10 (1): 69-76 (2016)) частково відновлювали, додаючи приблизно 2-3,5 еквіваленти відновлюючого агента, недовго перемішуючи та інкубуючи протягом ночі при 0 - 4 "С. Потім додавали буферний розчин Трис, рН 8-8,5 (20-50
ММ), після чого лінкер-лікарський засіб у ДМСО або ДМА (менше 15 95 загалом), і суміш інкубували протягом 2-3 годин при к.т. Потім надлишок лінкер-лікарського засобу та органічного розчиннику видаляли очищенням. Очищені зразки АОС потім аналізували за допомогою 5ЕС,
НІС та мас-спектрометрії зі зменшенням заряду.
Аналітичні методики для АОС
АС піддавали або аніонообмінній хроматографії (АЕС), або хроматографії з гідрофобними взаємодіями (НІС) для визначення ступеня кон'югації та чистоти АОС.
АЕС. Приблизно 20 мкг АОС було завантажено у систему для РХ ШШітаїе 3000 Юиа! (Тпегто
Зсіепійіс), оснащену колонкою Ргорас"М М/АХ-10, 4 х 250 мм (Тозоп Віозсіепсе, Ме кат. 054999).
Колонку врівноважували 100 95 буферним розчином А та елюювали за допомогою лінійного градієнта від 100 95 буферного розчину А до 100 95 буферного розчину В протягом 18 хв. при 1,0 мл/хв., при цьому буферний розчин А являє собою 20 мМ МЕ, рН 6,7, та буферний розчин
В являє собою 20 мМ МЕ5, 500 хлориду натрію, рН 6,7.
НІС. Приблизно 20 мкг АОС завантажували у систему для РХ ОПітате 3000 Юма! (Тпепто
Зсіепійіс), оснащену колонкою бутил-МРЕ, 4,6 х 35 мм (То5оп Віозсіепсе, Мо у кат. 14947).
Колонку врівноважували у 100 95 буферному розчині А та елюювали за допомогою лінійного градієнта від 100 95 буферного розчину А до 100 95 буферного розчину В протягом 12 хв. при 0,8 мл/хв., при цьому буферний розчин А являє собою 25 мМ фосфату натрію, 1,5 М сульфату амонію, рН 7,0, та буферний розчин В являє собою 25 мМ фосфату натрію, 25 95 ізопропанолу, рН 7,0.
ЗЕС. Розподіл АОС за розмірами був встановлений з використанням ексклюзійної ЗЕС за допомогою системи для РХ Ойіитаїте 3000 Юиаї! (Тпепто З5сіепійс), оснащеної колоною Т5К-де
ЗО0005МУхі, 7,8 х 300 мм (То5оп Віобсіепсе, Мо у кат. 08541). Приблизно 20 мкг АОС завантажували у колонку та елюювали протягом 17 хв., використовуючи ізократичний градієнт 100 мМ сульфату натрію, 100 мМ фосфату натрію, рН 6,8 при швидкості потоку 1,0 мл/хв.
МС. Відновлені зразки (10 мкл) вводили в систему РХ/МС Адіепі 6550 ОТОої за допомогою автоматичного пробовідбирача з контрольованою температурою (5 С) СТО. Елюювання зразка здійснювали на колонці для ВЕРХ Умаїег5 С-4, 3,5 мкм, 300 А, 2,1 х 50 мм внутрішній діаметр.
Рухомі фази являли собою: А: 0,1 95 мурашиної кислоти у воді, та В: 0,1 95 мурашиної кислоти в месм); швидкість потоку становила 0,45 мл/хв., а відсік для колонок підтримували при 40 "С.
Градієнт ВЕРХ наведений у Таблиці 5:
Таблиця 5 0111111119611111ї11115СС2С 006111111111111711111111111195611111ї11111115 ЮщЩ щ гло 9сИсИЙ2 во 90сс2
Приклад 7: Отримання адалімумабу, кон'югованого з глюкокортикостероїдом, щоб забезпечити кон'югат антитіло-лікарський засіб
АЮрС адалімумабу та ВгАс-Спіу-СІи-стероїд-РОх, що має популяцію БАК 4,0, отримували за двоступеневим хімічним процесом: відновлення дисульфіду адалімумабу з подальшим алкілюванням (кон'югацією) з бромацетамідо-гліцин-глутамінова кислота-стероїдом з Прикладу 4. о
ЗО
АТ
Ї ве г о
Ве М ку Ї М Зо й: но То 100 мг адалімумабу у концентрації 20 мг/мл відновлювали дифенілфосфіноцтовою кислотою (2,9-3,0 екв.) при 0 "С протягом ночі. Частково відновлений адалімумаб потім кон'югували з Прикладом 4 (10 екв.) у ДМСО протягом З годин при к.т. У суміші для кон'югації перший буферний розчин замінювали на 20 мМ буферний розчин Трис, 50 мМ масі, рН 7,8 за допомогою декількох колонок для знесолення МАР 25. Знесолений розчин АОС очищали за допомогою АЕС, отримуючи компоненти АОС з БАК4. Методика для хроматографії АЕС: прилад: АКіа риге; колонка: 2Х Ніїгар О НР 5 мл; рухома фаза: А позначає 20 мМ буферний розчин Трис, рН 7,8; В позначає 20 мМ буферний розчин Трис, 1 М Масі, рН 7,8; градієнт: В від
О 95 до 25 95 за 60 хв.; швидкість потоку: 5 мл/хв.; довжина хвилі: 280 та 214 нм.
Посилаючись на Фіг. 1, на якій показано хроматографічне розділення одержаного препарату
АОС, АОС є гетерогенною сумішшю, що містить антитіла, до яких приєднані дві молекули лікарський засіб-лінкер (пік "САК2"), приєднані чотири молекули лікарський засіб-лінкер (пік "ВАКА4") залежно від кількості відновлених міжланцюгових дисульфідних зв'язків. Умови АЕС, що використані на Фіг. 1, були наступними: колонка являла собою Ргорас"М М/АХ-10, 4 х 250 мм (Тпепто Різпег Зсіепійіс, Ме у кат. 054999), а температура колонки становила 372С. Довжина хвилі становила 280 нм, час циклу становив 18 хвилин, введена кількість становила 20 мкг, а швидкість потоку становила 1,0 мл/хвилина. Рухома фаза А: 20 мМ МЕЗ5, рН 6,7, рухома фаза В: 20 мМ МЕ5, 500 мм масі, рн 6,7. Градієнтний профіль (Таблиця 6).
Таблиця 6 01115111 25сС 271в611171111111111111011111111117111111111111лоо1 тв 111110111111111711111111111лов
На Фіг. 2 показаний мас-спектр очищеного АЮС після деконволюції. Цей АОС має 4 молекули лікарський засіб-лінкер, кон'юговані з кожним антитілом. Пік зліва має молекулярну масу 24284,74 Да, що є результатом приєднання одного лікарський засіб-лінкера до одного легкого ланцюга. Пік справа має молекулярну масу 51513,96 Да, що є результатом приєднання одного лікарський засіб-лінкера до одного важкого ланцюга. АОС у 7 та 8 отримували відповідно до описаної вище методики.
Таблиця 7
Кон'югати антитіло-лікарський засіб проти ФНПа миші. Х стосується антитіла 8С11 проти ФНПа миші дети ик ар атьна.
Ар хай ен вки 4 вир ув, п-ва пк ит йо ТА ж кт зав кор ше я В Ї
Я ле КМ яя
З МК
-7 водій ни ТЕ хіралпьна
З щ тн дя -» з доба лосз -е і у саду АЖ в Ї " г З т . шо ня Зо
Таблиця 8
Кон'югати антитіло-лікарський засіб проти ФНПа людини.
Х стосується адалімумабу проти ФНІПа людини
Внутрішньоорганізаційний ідентифікаційний Мо Структура рАН з Ой Хірапьна: дрсА - и Не тя букви т 5 Б ой 4 хи -у че АЖ «. ї г я Ге ншН
Арс5 жо пою г. г их 7 2 ; Х м щі сок й «реальна я я ще спла к ї урлютє ки те пе ЕЙ й ди ди В й ке ен Че яв
Іо як Щ
Отримання клітинних ліній з репортером ОКЕ, що містить трансмембранний ФНІП-альфа людини та миші
Для того, щоб створити батьківську клітинну лінію, клітини К562 висівали на б-лунковий планшет (Совіаг: 3516) з 2 мл повного живильного середовища (КРМІ, 10 95 ФБС, 1 95 1- глютаміну, 1 96 Ма пірувату та 1 956 МЕМ МЕАА) у кількості 500000 клітин на лунку протягом 24 годин при 37", 595 СО». На наступний день 1,5 мкг рої 4.36 (І ис2Р/ММТУ/Нудго| (Рготеда:
ЕЗ316), 1,5 мкг роІ4.75 |НКГис/СММІ (Рготеда: Еб6З9А) і З мкл реагенту РІГ О5 (Іпмігодеп: 10964- 021) розводили до 244 мкл з використанням Орії-МЕМ (Сібсо: 31985-070) та інкубували при к.т. протягом 15 хвилин. Вектор рої 4.36 Пис2гР/ММТМ/Нудго| містить ММТМ ІТК (довгий кінцевий повтор вірусу пухлини молочної залози мишей), що запускає транскрипцію гена-репортера люциферази Ішс2Р у відповідь на активацію кількох ядерних рецепторів, таких як рецептор глюкокортикоїдів та рецептор андрогенів. Вектор РОЇ 4.75|пАїйс/СММ| кодує ген-репортер люциферази НАшс (НКепіа гепітогптів) і розроблений для високої експресії та зменшення аномальної транскрипції.
Після інкубації розведений розчин ДНК попередньо інкубували з використанням 1:1 розчину ліпофектаміну ЇТХ (Іпмйодеп: 94756) (13,2 мкл ж 256,8 мкл Оріїі-МЕМ) та інкубували при кімнатній температурі протягом 25 хвилин для утворення комплексів ДНК-ліпофектамін І ТХ.
Після інкубації 500 мкл комплексів ДНК-ліпофектамін безпосередньо додавали у лунку, що містить клітини. Клітини К5б2 трансфікували протягом 24 годин при 37 "С, 595 СО». Після інкубації клітини промивали З мл ФСБ і збирали з повним живильним середовищем, що містить 125 мкг/мл гігроміцину В (Іпмігодеп: 10687-010), протягом двох тижнів. Були отримані клітини "К562 рої 4.36 ис2Р/ММТМ/Нудгої| рої 4.75(пК ис/СММІ».
Для того, щоб створити клітинну лінію з репортером СКЕ, що містить трансмембранний
ФНП-альфа миші, батьківські клітини, К562 рої 4.36| ис2Р/ММТМУ/Нудгої|. раї 4.75ІПАГис/СММіІ, висівали на б-лунковому планшеті (Совіаг: 3516) з 2 мл повного живильного середовища (ЕКРМІ, 10 95 ФБС, 1 95 І -гглютаміну, 1 96 Ма пірувату та 1 96 МЕМ МЕАА) у кількості 500000 клітин на лунку протягом 24 год. при 37", 5 95 СО». На наступний день З мкг ДНК тег ФНПа (Огідепе:
МОС208048), яка кодує немічений ФНІП миші, і З мкл реагенту РГО5 (Іпміодеп: 10964-021) розводили у 244 мкл Орії-МЕМ (аірсо: 31985-070) та інкубували при к.т. протягом 15 хвилин.
Після інкубації розведений розчин ДНК попередньо інкубували з використанням 1:1 розчину ліпофектаміну ЇТХ (Іпмйодеп: 94756) (13,2 мкл ж 256,8 мкл Оріїі-МЕМ) та інкубували при к.т. протягом 25 хвилин для утворення комплексів ДНК-ліпофектамін ІТХ. Після інкубації 500 мкл комплексів ДНК-ліпофектамін безпосередньо додавали у лунку, що містить клітини. Батьківські клітини К562 рої 4.36| ис2Р/ММТМ/Нуадго| ро 4.75ІйКГис/СММ| трансфікували протягом 24 годин при 37 "С, 5595 СО». Після інкубації клітини промивали З мл ФСБ і збирали з повним живильним середовищем, що містить 125 мкг/мл гігроміцину В (Іпмігодеп: 10687-010) ії 250 мкг/мл (3418 (сібсо: 10131-027), протягом двох тижнів. Були отримані клітини "К562 мишачий
Е-ФНПа СКЕ (рої 4.3З6ПДис2Р/ММТМ/Нуогої)».
Зо Для створення клітинної лінії з репортером СКЕ, що містить трансмембранний ФНІП-альфа людини, батьківські клітини, К562 рої 4.36 ис2Р/ММТМ/Нуагої| рої 4.75|ІпКГ ис/СММ, були трансфіковані плазмідою пПФНП-дельта, плазмідною конструкцією 1-12 С-Мус реОМАЗ.1(-). Ця плазміда являє собою рсрМА 3.1 (Тпептоїї5пег, Мо у кат. М79020), що кодує стійкий до дії ТАСЕ трансмембранний ФНП (тобто ЗЕО ІО Мо 1, в якій відсутні амінокислоти 77-88). (Див. Реге С еї аІ. Сеї! 63 (2): 251-8 (1990), у якій обговорюються стійкий до ТАСЕ трансмембранний ФНП.) Ці клітинні лінії потім використовували у репортерних аналізах ФНП-альфа, описаних у наступних прикладах.
Активність імунокон'югатів проти ФНІП-альфа в аналізах трансмембранного ФНП-альфа з репортером ОКЕ
Батьківські клітини К562 СРЕ (рої 4.3З6Пис2Р/ММТМ/Нуагої) та клітини К562 т -ФНП-а або
ПФНІП-дельта 1-12 ОКЕ (рої 4.36ПЙис2Р/ММТМ/Нудгої) висівали у 96б-лункові оброблені білі планшети для тканинних культур (Созіаг: 3917) при 50000 клітин на лунку у 50 мкл середовища для аналізу (ЕРМІ, 195 С5ЕВ5, 1 95 І-глютаміну, 195 Ма пірувату і 195 МЕАА). Клітини обробляли 25 мкл послідовно розведених ЗХ кон'югатів антитіло-лікарський засіб проти ФНП-а миші або людини у середовищі для аналізу, стероїдної сполуки або лише середовища та інкубували протягом 48 годин при 37 "С, 5 95 СО». Після 48 годин інкубації клітини обробляли 75 мкл системи для аналізу люоциферази ЮцаІ-сіо (Рготеда-Е2920) протягом 10 хв. та визначали люмінесценцію за допомогою Місгобеїга (РегКкіпЕІтег). Дані аналізували, використовуючи чотирипараметричну апроксимацію кривої, щоб отримати значення ЕСзо. Уо максимальної активації нормалізували до 100 нМ дексаметазону. Результати з використанням клітинної лінії з мишачим ФНП-альфа наведені в Таблиці 9 нижче, а результати з використанням клітинної лінії з ФНІП-альфа людини наведені у Таблиці 10 нижче. У Таблиці 9 нижче антитіло в АОС являє собою антитіло проти ФНІПса миші 8С11. У Таблиці 10 нижче антитіло в АОС являє собою антитіло проти ФНІПа людини адалімумаб. Відсоток (905) мономеру визначали за допомогою
ЗЕС, як описано раніше (див. Аналітичні методики для АОС).
Таблиця 9
Іп міго активність кон'югата антитіло-лікарський засіб проти ФНПа миші в аналізі трансмембранного ФНПа миші з репортером СКЕ
ЕСз5о тФНПа | тпФНІПа СКЕ (96 ЕСво К5б2 | КОб2 СОВЕ (95 о
АОС Мономер, 76 СКЕ (мкг/мл) макс.) СКЕ (мкг/мл) макс.)
АрСІ 77899 2 юЮщ | 006 | 150 | 550 | 63 дрса
АрСЗ
Таблиця 10
Іп міго активність кон'югата антитіло-лікарський засіб проти ФНПа людини в аналізі трансмембранного ФНПа людини з репортером СКЕ о ЕСво пНФНПа | пнФНПа СЕ (96і ЕС»5о К5б2 | К5б2 СОВЕ (95
АОС Мономер, 75 СКЕ (мкг/мл) макс.) СКЕ (мкг/мл) макс.)
АрсаА 77И7899 юю | 003 | 118 | 5502 | 63
АрС5
АрСб
Активність імунокон'югатів проти ПФНП-альфа в аналізі вивільнення цитокінів МКПК людини, стимульованими ліпополісахаридом
Первинні мононуклеарні клітини периферичної крові людини (МКПК) були придбані в корпорації Віоіодісаї Зресіанку (Ме у кат. 214-00-10), їх промивали 50 мл ФСБ, повторно суспендували в ФБС з 5 95 ДМСО, розподіляли аліквотами та заморожували у рідкому азоті до використання. МКПК розморожували, повторно суспендували в середовищі ЕРМІ, доповненому 2 96 ФБС та 1 95 пеніциліну-стрептоміцину і поміщали у планшет для аналізу клітин (Совіаг Мо 3799). Потім клітини інкубували з різною концентрацією АОС проти ФНП при 37 "С та 5 95 СО» протягом 4 годин. Потім клітини стимулювали протягом ночі з використанням 100 нг/мл І Р5. На наступний день планшет обертали протягом п'яти хвилин при 1000 об/хв, і 100 мкл середовища над осадом переносили безпосередньо на додатковий 9б-лунковий планшет та визначали концентрації ІЛ-6 (МБО, Мо К1І51АКВ) та ІЛ-1-бета (М5О, Мо К1І51АСВ). Дані відповіді на дозу були апроксимовані сигмоїдальною кривою за допомогою нелінійної регресії, а значення ІСво обчислені за допомогою СсгарпРаа 5.0 (сгарпРад боймаге). Результати, показані в Таблиці 11, демонструють, що АОС проти ФНП має потужну активність при інгібуванні вивільнення прозапальних цитокінів ІЛ-6 та ІЛ-1-бета з активованих первинних імунних клітин.
Таблиця 11.
Активність іп міго стероїдного АОС проти ФНП в аналізі вивільнення цитокінів стТимульованими
МКПК
ІСво ІЛ-1 бета (нг/мл) ІСво ІЛ-6 (нг/мл)
АрсА
Активність імунокон'югата проти тфФНП-альфа в моделі контактної гіперчутливості
Стероїдний АОС проти ФНІПс оцінювали у моделі гострої контактної гіперчутливості, виникнення гострого запалення шкіри із застосуванням реакції гіперчутливості уповільненого типу (ОТН) (керованої Т-клітинами) шляхом нанесення сенсибілізуючого агента (флуоресцеїн- ізотіоціанат (РІТС)). Ефективність стероїдних АЮС проти ФНПа вимірювали за здатністю зменшувати набряк вуха. Стероїдні біомаркери кортикостерон та М-кінцевий пропептид проколагену 1 типу (Р1МР) були включені як показники для оцінки можливого впливу лікування стероїдним АОС проти ФНПа на вісь гіпоталамус-гіпофіз-надниркова залоза (НРА) та ремоделювання кістки, відповідно.
Набряк вуха
У день 0 мишей поміщали під загальний наркоз та голили животи. За допомогою мікропіпетки мишей сенсибілізували шляхом нашкірного нанесення 400 мкл розчину РІТС (1,5 95 розчин в 1:1 ацетон:ДБФ) на живіт. Через шість днів мишам вводили носій або терапевтичний агент за 1 годину до стимулювання вуха за допомогою РІТС. Для стимулювання вуха мишей поміщали під загальну анестезію та стимулювали, наносячи 20 мкл РІТС на праве вухо. Через двадцять чотири години після стимулювання мишей поміщали під загальний наркоз, а товщину їх вух вимірювали штангенциркулем. Розраховували різницю між стимульованим та нестимульованим вухами. Через сімдесят дві години після стимулювання вуха мишам вводили
АКТГ при 1 мг/кг в/б та через 30 хв. після АКТГ умертвляли і збирали кров. Збирали плазму та визначали рівень РМР, кортикостерону, вільного стероїду та високомолекулярних сполук.
Кількісне визначення вивільненого вільного стероїду та ендогенного кортикостерону
Калібрувальну криву стероїду готували у мишачій плазмі з кінцевими концентраціями від 0,03 нМ до 0,1 мкМ при 8 різних концентраційних рівнях. Калібрувальну криву кортикостерону в межах кінцевих концентрацій кортикостерону від 0,3 нМ до 1 мкМ готували у розчині бичачого сироваткового альбуміну в буферному розчині ФСБ з концентрацією 70 мг/мл. До 40 мкл досліджуваних зразків плазми або калібрувальних стандартів додавали 160 мкл розчину МеСМ 3 0,1 96 мурашиної кислоти. Надосадкову рідину розбавляли дистильованою водою та 30 мкл кінцевого розчину зразка вводили для аналізу РХ/МС.
Кількісне визначення вивільнених вільного стероїду та кортикостерону проводили на потрійному квадрупольному мас-спектрометрі АВ 5сіех 5500, під'єднаному до системи ВЕРХ
Зпітаад?7и АС20, зв'язаної із джерелом іонізації електроспреєм, що працює в режимі позитивних йонів. Для хроматографічного розділення використовували колонку Умаїег5 ХВгідде ВЕН С18, 2,1 х 30 мм, 3,5 мкм. Рухома фаза А являла собою 0,1 95 мурашиної кислоти у воді Мій С) для
ВЕРХ, а рухома фаза В являла собою 0,1 95 мурашиної кислоти в МесМм. Лінійний градієнт від 2 Ус рухомої фази В до 98 956 рухомої фази В застосовували від 0,6 до 1,2 хв. Загальний час циклу становив 2,6 хв. при швидкості потоку 0,8 мл/хв. Мас-спектрометр працював у режимі
МЕМ з реєстрацією позитивних йонів при температурі джерела 700 20.
Кількісне визначення РМР у плазмі
Кількісне визначення РІМР у плазмі проводили на платформі РХМС на основі розщеплення білка трипсином. Зразки плазми частково осаджували та повністю відновлювали додаванням суміші МесСмМ/0,1 М гідрокарбонат амонію/ДТТ. Надосадкову рідину збирали та алкілювали
Зо додаванням йодоцтової кислоти. Алкільовані білюи розщеплювали трипсином, а отримані триптичні пептиди аналізували за допомогою РХМС. Калібрувальну криву отримували за допомогою синтетичного триптичного пептиду, що вводили у сироватку коня (сурогатна матриця, що не чинить заважаючого впливу). Мічений стабільним ізотопом фланкуючий пептид (подовження на 3-6 амінокислот на обох кінцях триптичного пептиду) був використаний як внутрішній стандарт, що додавали у суміш для осадження білка МесмМм/ДтТтТ для нормалізації ефективності розщеплення та введення у РХМС.
Для хроматографічного розділення використовували колонку Соїштпех Спготепіа ВВ-С18, 2,1 х 150 мм, 5 мкм. Рухома фаза А являла собою 0,1 95 мурашиної кислоти у воді Мій С) для
ВЕРХ, а рухома фаза В являла собою 0,1 95 мурашиної кислоти в МесМм. Лінійний градієнт від 2 Чо рухомої фази В до 65 95 рухомої фази В застосовували від 0,6 до З хв. Загальний час циклу становив 8 хв. при швидкості потоку 0,45 мл/хв. Мас-спектрометр з пасткою АВ Зсіех 40000 використовували у режимі МКМ з реєстрацією позитивних йонів, щоб кількісно визначити пептиди РІТРМІР, при температурі джерела 700 26.
Результати
Результати наведені у Таблиці 12 нижче.
Таблиця 12
Порівняння активності стероїдного АОС проти тФНП альфа щодо набряку вуха та біомаркерів стероїдів у моделі запалення СНО
Набряк вуха 05) ріМмр (9, інгібування // Кортикостерон (о
АрС інгібування при 10 при 10 мг/кг « ЗЕМ) інгібування при 10 мг/кг мг/кг хх ЗЕМ) 7 - ЗЕМ)
Активність імунокон'югатів проти тФНП-альфа при індукованому колагеном артриті
Здатність стероїдного АОС (АОСТ) проти тФНПа впливати на хворобу оцінювали в моделі артриту, що являє собою викликаний колагеном артрит (СІА).
У цих експериментах самців мишей ОВАЛ). отримували в даскзхоп І абз (Бар-Харбор, Мен).
Мишей використовували у віці від 6 до 8 тижнів. Усіх тварин тримали при постійній температурі та вологості протягом 12-годинного циклу освітлення/темрява та годували їжею для гризунів (аб Оівї 5010 Рпагтазегм, Фрамінгем, Массачусетс) та водою у необмеженій кількості. АБрМіе має акредитацію АААГАС (Асоціація з оцінки та акредитації догляду за лабораторними тваринами), та всі процедури були затверджені Інституційним комітетом з догляду та використання тварин АСИС) і контролювалися супроводжуючим ветеринаром. Контролювали масу тіла та загальний стан, і тварин умертвляли, якщо вони демонстрували » 20 9о втрату маси.
Самців мишей ОВА/) імунізували внутрішньошкірно (в/ш) в основі хвоста з використанням 100 мкл емульсії, що містить 100 мкг бичачого колагену типу Ії (МО Віозсіепсе5), розчиненого в 0,1 н. оцтовій кислоті, та 200 мкг інактивованої нагріванням Мусобасіегішт їшбегсцов5і5 НЗ7Ка (повний ад'ювант Фрейнда, Осо, Лоуренс, Канзас). Через двадцять один день після імунізації колагеном мишей стимулювали в/ч 1 мг зимозану А (Зідта, Сент-Луїс, Міссурі) у ФСБ. Після стимулювання за мишами спостерігали від З до 5 разів на тиждень щодо артриту. Для задніх лап оцінювали набряк лапи за допомогою пружинного штангенциркуля Юуег (Юуег 310-115).
Мишей включали між 24 та 28 днями при перших клінічних ознаках хвороби та розподяли в групи з еквівалентною тяжкістю артриту. Раннє терапевтичне лікування починалося в момент зарахування.
Тваринам вводили одноразово внутрішньочеревно (в/ч) тАб проти тФНП (висока доза) або стероїдний АОС проти тФнНП (висока та низька доза - мг/кг) у 0,9 9о фізіологічному розчині. Кров відбирали для визначення впливу антитіл через надріз на хвості через 24 та 72 години після введення дози. Лапи збирали в момент умертвіння для гістопатології. Кров відбирали в момент умертвіння пункцією серця для повного аналізу крові (Зухтех ХТ-2000іМ). Статистичну значимість визначали за допомогою АМОМА.
Результати наведені на Фіг. З та демонструють, що разова доза стероїдного АОС проти
ФНПа може мати більшу тривалість дії через зменшення набряку лапи протягом «28 днів порівняно з тАб проти ФНПа або лише носієм.
Стабільність АОС у плазмі
Хоча гідроліз застосовують для підвищення іп мімо стабільності лінкерів на основі малеїіміду, він зазвичай вимагає дії основного рН, що може призвести до модифікацій антитіла (наприклад, дезамідування), збільшення гетерогенності, зниження виходу тощо. (Зпеп еї аї., Машге
Віотесппоїоду 30:184-189 (2012) (гідроліз малеїмідів дозволяє уникнути передчасного вивільнення лікарського засобу та системного впливу лікарського засобу); 5ігор еї аІ., Спетівігу а Віоїсаду 20(2):161-167 (2013) (аналогічне дослідження); Титеу еї аї., Віосопішдаїє Спет 25(10):1871-1880 (2014) (використання проксимального ланцюга ПЕГ для забезпечення гідролізу кільця в основних умовах); Гуоп еї аїЇ., Маїште Віоїесппоїоду 32:1059-1062 (2014) (способи полегшення отримання гідролізованого сукциніміду); Спгівзіе еї аїЇ., ) Сопіго! Веїєазе 2209(РІВ):660-70 (28 ЮОес 2015) (використання малеїмідів М-арилу для полегшення гідролізу сукцинімідного кільця в основних умовах); Юомдап сеї аї., Зсієпійійс Верогів 6:1 (2016) (використання 2-(малеїмідометил)-1,3-діоксану для полегшення гідролізу кільця у м'яких основних умовах протягом тривалого періоду часу); і У Рпагт сі 2013: 102 (6) 1712-1723 (залежність дезамідування аспарагіну від типу буферного розчину, рН та температури).
Навпаки, у типових умовах кон'югація з використанням бромацетаміду закінчується протягом декількох годин у порівнянні з декількома днями для малеїміду (кон'югація та подальший гідроліз кільця при основному рН). Крім того, 2-меркаптоацетамід, що утворюється під час реакції цистеїну з бромацетамідом, не сприйнятливий до зворотної реакції Міхаєля і забезпечує стабільне приєднання лінкера до антитіла, як показано в Таблиці 13 нижче для АЮСА.
Таблиця 13 до ЗМ, що вивільнюються з АОС у плазму через 4 дні при 37 "С
Стабільність АОС у розчині
Для оцінки довготривалої стабільності високомолекулярну сполуку піддають стрес- дослідженню методом "прискореного старіння". Протокол цього дослідження являє собою 100 мг/мл високомолекулярної сполуки у 15 мМ гістидину при 40 "С протягом 21 дня. Коли АОСА піддали цьому дослідженню, відсотковий приріст агрегатів становив «5 95 порівняно з АОС20О3 з публікації заявки на патент США Мо 2018/012600, опублікованої 10 травня 2018 р., в якій спостерігали збільшення агрегації на 18 95 (Таблиця 14). Це демонструє покращені властивості, що надані АОС4 лінкером СіІу-Сіи з проліками з фосфатними групами як корисна частина.
АЮРС203 з О52018/0126000 являє собою: 23 З пов
Та нк / | АЙ М : роде чк у - ї тек, 3 с я- о г ц і ! К 0. й сом щу с і
І о но
ОА де п:--4, і А стосується антитіла адалімумабу проти ФНПа людини.
Таблиця 14
Втрата мономерів при|Втрата мономерів при| Втрата мономерів при
АрС о о о 5 "С протягом 21 дня /|25 "С протягом 21 дня |40 "С протягом 21 дня
АОрСгОоЗ 1,43 95 2,26 90 17,56 95
АрсА 3,46 95
Додатковою перевагою проліків з фосфатними групами є можливість використання аніонообмінної хроматографії для очищення ЮАК. Це викликає покращення розділення піків порівняно з хроматографією з гідрофобними взаємодіями, що дає більш високі виходи очищеного АОС з певним ВАК.
У буферному розчині для препарату гідролізоване сукцинімідне кільце АЮОС203 знаходиться у рівновазі із закритою формою кільця. Закрита форма кільця сприйнятлива до зворотної реакції Міхаєля та подальшої втрати лінкер-лікарського засобу іп мімо у крабоїдних макак (Фіг. 4). : Бозквите кільце я ре ! « г боту парт»
Рівновагау | ГЕ буферному 7 рей - КЕ з : Я ї розчингдля : ; «аквите кіньце ве Кр препарату 3 ! ще сек дою рей ;
БЖ | - 2 ї м 2 яко й: у ее Ех і о
Км А. 1 Мою дк Кз ї Мшй ях В Її Ух те
За номінальних умов зберігання рідини при приєднанні сукциніміда у відкритій конформації вона перетвориться на закриту конформацію на більше ніж 5 95 при 5 "С і більше ніж 15 95 при 7С через 6 місяців (Таблиця 15).
Таблиця 15 пнІ?нс«ІСТОВВВВТООЛЛТОООООЛОЛОЛОТОТОТОТИІ Закрите сукцинімідне кільце, 95
З місяці/5 С 6 місяців/5 "С 11117132 |. .69 2 щЩ Ж
З місяці/25 "С 6 місяців/25 "С
З місяці/40 "С
З місяці/40 "С
Слід розуміти, що для інтерпретації формули винаходу призначений розділ "Детальний опис сутності винаходу", а не розділи "Сутність винаходу" та "Реферат". У розділах "Сутність винаходу" та "Реферат" викладені один чи більше, але не всі ілюстративні варіанти здійснення цього винаходу, як передбачається автором(-ами) винаходу, і, таким чином, вони не призначені для обмеження цього розкриття та доданої формули винаходу жодним чином.
Це розкриття було описано вище за допомогою функціональних структурних елементів, що ілюструють реалізацію зазначених функцій та взаємозв'язків між ними. Межі цих функціональних структурних елементів були довільно визначені у цьому документі для зручності опису. Можна визначити альтернативні межі доти, поки зазначені функції та взаємозв'язки між ними виконуються належним чином.
Вищенаведений опис конкретних варіантів здійснення винаходу настільки повно розкриває загальний характер винаходу, що інші можуть, застосовуючи знання у цій галузі техніки, легко модифікувати і/або адаптувати для різних застосувань такі конкретні варіанти здійснення винаходу без зайвого експериментування, не відступаючи від загальної концепції цього розкриття. Отже, передбачається, що такі адаптації та модифікації знаходяться у межах змісту та діапазону еквівалентів розкритих варіантів здійснення, виходячи з викладених у цьому документі ідей та принципів. Потрібно розуміти, що формулювання або термінологія у цьому документі призначена для опису, а не для обмеження, так що термінологія або формулювання цього опису повинні тлумачитися фахівцем у цій галузі техніки з огляду на ідеї та принципи.
Широта і обсяг цього розкриття не повинні обмежуватися жодним з описаних вище ілюстративних варіантів здійснення, а повинні визначатися лише відповідно до наступної формули винаходу та її еквівалентів.
Включення шляхом посилання
Всі публікації, включаючи патенти та опубліковані заявки, про які згадується в "Детальному описі сутності винаходу", включені до цього документу шляхом посилання у повному обсязі.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
-110» АВВМІЕ ІМС. «120» АГОНІСТ ГЛЮКОКОРТИКОЇДНОГО РЕЦЕПТОРА ТА ЙОГО ІМУНОКОН'ЮГАТИ -1305» АТ103017 1490М/0 -140» «141» -1505» 62/595054 «1515 2017-12-05 -1505 62/593776 «1515 2017-12-01 -160» 14 «170» Раїепінп версії 3.5 -2105 1
«2115 233 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «40051
Меї Зег Тнг Спи Зег Меї Пе Агу Ар Маї Си І еи Аіа Спи Сім Аа 1 5 10 15
Ї еи Рго Гуз Гуз ТАг Спіу Спу Рго Сп Стпу Бег Ага Агу Суз Гей Рпе 20 25 Зо
Ї еи Зег І єи Рпе 5ег РНе І єи Іе Маї Аа Стпу Аа Тниг ТНг Гей Ре 35 40 45
Сув І еи Геи Нів Рне Стпу Ма! Пе Спу Рго Сп Ага Спи Спи Рпє Рго 50 55 60
Ага Азвр І еи 5ег І єи Пе 5ег Рго І еи Аа Сіп Аа Маї Агу бег 5ег 65 70 75 80 зЗег Агу ТАг Рго 5ег Азр Гуз Рго Маї Аїа Ніз Маї Маї Аа Авп Рго 85 90 95 ап Аа Спи Спу Сіп Гей Сп Тр Геи Авп Агу Агу Айва Авп Аа І єи 100 105 110
Ї еи Аіа Азп Су Маї Спи І еи Ага Авр Авп ап І єи Маї Маї Рго Зег 115 120 125
Сіи Спу І еи Туг Гей Пе Туг Зег Сп Ма! Ї еи Рне Гуз Спу Сп Спу 130 135 140
Сув Рго 5ег ТАг Ніз Маї І ви Геи Тиг Нів Тниг Пе 5ег Ага Іе Аа 145 150 155 160 маї Зег Туг СіІп ТАг Гуз Маї Авп Г еи І єи 5ег Аїа Іе Гуз Зег Рго 165 170 175
Сув Сп Агу См Тк Рго СПм Спу Аа Спи Аа Гуз Рго Тгр Туг Сім 180 185 190
Рго Іе Туг І єи Спу Спу Ма! Рне Сп Гей Си Гуз Спу Авр Агу І єи 195 200 205 зЗег Аіа Си Пе Авп Аг Рго Ар Туг І еи Ар РНе Аа Спи 5ег Су 210 215 220 60
Сіп Маї Тук Рне Су Пе Пе Аа Гей 225 230 -21052 «2115 235 «212» Білок -213» рід Ми5 «40052
Меї 5ег Тнг Си бЗег Меї Пе Ага Авр Маї Сім І єи Аа Спи Спи Аа 1 5 10 15
Ї еи Рго Сп І уз Меї Спу Спу Рне Сіп Авп 5ег Ага Агу Суз І єи Суб
Зо 20 Геи Зегі ви РНе 5ег РнНеє І єи ГІ еи Маї Аа Сіу Аа Тниг ТАг ГГ еи Рпе
Сув І еи Геи Авп Ріє Сту Маї Пе Спіу Рго Сп Агу Авр Спи Гуз Рпе 25 50 55 60
Рго Авп ау І єи Рго І єи Пе бег бег Меї Аа Сіп ТНгІ єи ТНг І єи 65 70 75 80
Зо
Аг Зег Зег Зег Сп Авп 5Зег Зег Авр Гуз Рго Маї Аїа Ніз Ма! Маї 85 90 95
З5
Аа Авп Ні Сіп Ма! Спи СТи Спи Гей Сі Тер Г єеи Зег Сп Ага Аа 100 105 110 40 Авзп Аа ГІ єи І еи Аа Азп Стпу Меї Азр І єи Гуз Авр Авп ап І еи Маї 115 120 125
Ммаї Рго Аа Азвр Су І еи Туг Геи Маї Туг Зег Сп Маї І єи Рпє Гуз 45 130 135 140
Спу Сип Спу Сув Рго Азвр Туг Ма! Гей Гей Тнг Ніз Тнг Ма! Зег Ат 145 150 155 160
Ре Аїа Іе 5ег Туг Сіп Спи Гуз Маї Авп Геи І еи 5ег Аа Маї! Гуз 165 170 175 зЗег Рго Сув Рго І уз Авр Тпг Рго Сти Спіу Аа Спи Гей Гуз Рго Ттр 180 185 190 60 Туг Спи Рго Пе Туг Г еи Спіу Спу Ма! Рне Сп ви Спи Гув Спу А5р
195 200 205
Сіп Гей 5ег Аа Сіи Маї Авп І єи Рго Гуз Туг І єи Авр Рнє Аа Сіи 210 215 220 зЗег Сіу СіІп Ма! Туг Рне Сіу Маї! Пе Аїа І єи 225 230 235 «2105 З «2115 451 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005» З
Сім Ма! Сіп Г еи Ма! Спи Зег Спу Сіу Спу Геи Маї Сіп Рго Спу Агд 1 5 10 15 зег І ви Аго І єи б5ег Суз Аа Аа 5ег Сіу Рпе ТАг Рне Азр Азр Туг 20 25 Зо
Зо
Аа Меї Ніз Тгтр Маї Аг Сп Аїа Рго Стпу Гуз Спу Геи Сім Тгр Маї 35 ЗБег Аа Пе ТНг Тгтр Авп 5ег Сту Нів Пе Авр Туг Аа Авр 5ег Маї 60
Сіи Спу Агу Рне ТиНг Пе Зег Агу Авр Авп Аа Гуз Авп з5ег І ви Туг 40 (65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп 5ег І ви Агу Аа Сіи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95 45
Аа І уз Ма! бЗег Туг І єи 5ег ТНг Аа бег 5ег І єи Азвр Туг Ттр Су 100 105 110 50
Сп СЧУу ТНг І єи Маї Тнг Маї Зег 5ег АІа 5ег ТНг Гуз Спу Рго Зег 115 120 125 55 Маї Рпе Рго І ви Аа Рго Бег 5ег Гу Зег Тит Зег СПу Спу ТАг Аіа 130 135 140
Аа Геи Сіу Суз І еи Ма! Гуз Авр Туг РНе Рго Сім Рго Маї Тнг Маї 60 145 150 155 160 ді зЗег Тр Азп 5ег Су Аа І и Тнг бег Стпу Маї Ні Тнг Рне Рго Аїа 165 170 175 маї Геи СіІп Зег Зег Спу Геи Туг Зег І єи 5ег Зег Маї Ма! Тнг Маї 180 185 190
Рго бег Зег Зег І ви Спу ТАг Сп ТАг Туг Пе Суз Авп Маї Авп Ні 195 200 205
Гуз Ро 5ег Азп ТНг Гуз Маї Азр І уз І уз Ма! Сім Рго Гуз бег Суз 210 215 220
Ар Гуз ТНг Ні Тнг Сув Рго Рго Суз Рго Аа Рго Спи І ей Гей Спу (225 230 235 240
Сіу Рго 5ег Маї Рпе Геи РНе Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї 245 250 255
Пе Бег Агу Тниг Рго Сім Маї Тиг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Нів 260 265 270
Зо
Сі Авр Рго Си Ма! Гуз РНе Авзп Тгр Туг Маї Азр ау Маї Сіи Маї 275 280 285
Ні Авп Аа Гуз ТНг Гуз Рго Ага Спи СПми Стіп Туг Авп 5ег ТАг Туг 290 295 00
Аг Маї Маї Зег Ма! І єи Тиг Ма! Геи Ні Сіп Авр Тгр Геи Авп Спу 305 з10 315 з20
Гуз Спи Туг Гуз Суз І уз Ма! бЗег Авп І уз Аа І еи Рго Аа Рго Пе 325 330 335 сій Суз ТА Пе Зег Гуз Ага Гуз Спу Сп Рго Агу Сім Рго Сіп Маї 340 345 350
Туг Тиг ГГ еи Рго Рго Зег Агу Авр Си І єи Тйиг Гуз Авп Сп Маї Зег 355 360 365
Ї еи Тиг Суз І єи Ма! Гуз Сіу РНе Туг Рго 5ег Авр Іе Аа Маї СІ 370 375 380
Тр Спи Бег Авп ау Сп Рго См Авп Авп Туг Гуз Тит Тнг Рго Рго 60 385 390 395 400 маї Геи Авр бег Авр СПу 5ег Рпе РНе Геи Туг Зег Гуз Геи ТНг Маї 405 до 415
Азр Гуз 5ег Агу Тгтр Сп Сп Спу Авп Маї Ре 5Зег Сув 5ег Ма! Меї 420 425 430
Ніз Спи Айа Г єм Ні Авп Ні Туг ТНг Сп Гуз Зег І єи 5ег Гей Зег 435 440 445
Рго Сіу Гув 450 «2105 4 20. «2115 214 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 4
Авбр Пе Сп Меї ТНг Сп Зег Рго Зег Зег І еи 5ег Аа 5ег Ма! СПу 1 5 10 15
Азр Аг Ма! Тиг Пе Тнг Суз Агу Аа Зег Сп Спу Пе Агу Авп Туг 20 25 Зо
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гув Рго Стпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45
Туг Авіа Аа 5ег ТНиг Гей Сп Зег СПу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60 зЗег Сіу Зег Сіу Тит Авр РНе ТНг ГГ еи ТНг Пе 5ег Зег І єи Сп Рго 65 70 75 80
См Авр Маї Аа Тниг Туг Туг Суз Сіп Агу Туг Авп Аг Аїа Рго Туг 85 90 95
Тиг Ре ау Сип Спу Тиг Гуз Маї Спи Пе Гуз Агу Тнг Маї Аїа Аа 100 105 110
Рго бег Ма! РНе Іе Рне Рго Рго 5ег Азр Сім Сп І єи Гуз бег Спу 115 120 125 60
Тиг Айва 5ег Маї Маї Суз І ви І еи Авп Авп РнНе Туг Рго Аго Сім Аа 130 135 140
Гуз Ма! Сп Тр Гуз Маї Азр Авп Аа І єи СіІп бег Сіу Авп 5ег Сп 145 150 155 160 спи Бег Ма! Тиг Сім Сп Авр Зег Гуз Авр 5ег ТНг Туг Зег ГГ еи Зег 165 170 175 зЗег ТигІ єи ТигГеи Зег Гуз Аіа Авр Туг Си Гуз Нів Гуз Маї Туг 180 185 190
Аа Суз Спи Маї Тнг Ні Сіп С1пу І еи Бег Зег Рго Маї Тиг Гув 5ег 195 200 205
Ре Авзп Агу Сіу Спи Суз 210 «21055 «2115 121 «212» Білок 213» Штучна послідовність
Зо «220» «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид"
З5 «4005» 5
Сім Маї Сіп Г еи Ма! Спи Зег Спу Сіу Спу Геи Маї Сип Рго Спу Агд 1 5 10 15 40 зег І ви Аго І єи б5ег Суз Аа Аа 5ег Сіу Рпе ТАг Рне Азр Азр Туг 20 25 Зо 45 Аа Меї Ніз Тгр Маї Аго Сп Аїа Рго Спу Гуз СПу Геи Спи Тер Маї зЗег Аа Пе ТНг Тгр Авп 5ег Су Нів Пе Ар Туг Аа Ар 5ег Маї 50 55 бо
Сіи Спу Агу Рне ТиНг Пе Зег Агу Авр Авп Аа Гуз Авп з5ег І ви Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп з5ег І еи Аг Аїа Спи Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суб 85 90 95 60
Аа І уз Ма! бЗег Туг І єи 5ег ТНг Аа бег 5ег І єи Азвр Туг Ттр Су 100 105 110
Сп СЧУу ТНг І єи Маї Тниг Маї Зег 5ег 115 120 «2105 6 «2115107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 6
Авр Пе Сіп Меї ТНг Сп Зег Рго Зег Зег І еи 5ег Аа 5ег Ма! СПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тнг Пе Тнг Суз Агу Аа Зег Сп Спу Пе Агу Авп Туг 20 25 зо
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гув Рго Стпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе
Зо
Туг АІа Аа 5ег ТНг І єи Сп бег Спу Маї Рго Зег Ага РНе 5ег Спу бо 35 зЗег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе Зег 5ег І и Сп Рго 65 70 75 80 40 сім Авр Маї Аа Тниг Туг Туг Суз Сіп Агу Туг Авп Аг Аїа Рго Туг 85 90 95
Тиг Ре ау Сіп Спу Тиг Гуз Маї Спи Пе Гув 45 100 105 -2105 7 «-21155 50 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «221» джерело 55 «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 7
Ар Туг АІа Меї Ні5 бо 1 5
-2105» 8 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 8
Сіу Рпе Тиг Ріє Азвр Ар Туг Аїа Меї Нів 1 5 10 «2105 9 «211517 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005» 9
Аа Іе ТНиг Ттр Авп 5ег Су Ніз Пе Авр Туг АІа Авр 5ег Ма! Спи
Зо 1 5 10 15 спіу 210510 «-21159 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 10 маї Зег Туг І еи Бег Тниг Аіа 5ег 5ег 1 5 «2105 11 «211512 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний 60 поліпептид"
«4005 11 маї Зег Туг І єи Зег Тнг Аа 5ег Зег І ви Авр Туг 1 5 10 «2105 12 «211511 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 12
Ага Аа 5ег Сп Спу Пе Агу Авп Туг ГГ еи Аа 1 5 10 210513 «2115 7 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «4005 13
Аа Аа бег ТНг І єи Сп 5ег 1 5 «2105 14 «-21159 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «223» /примітка-"Опис штучної послідовності: Синтетичний поліпептид" «400» 14
Сіп Ага Туг Авп Аг Аа Рго Туг ТНг

Claims (10)

1 5 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Кон'югат антитіло-лікарський засіб, що містить: (а) антитіло проти ФНІПа, що містить важкий ланцюг, зображений як 5ЕО ІЮ МО: 3, і легкий ланцюг, зображений як 5ЕО ІЮ МО: 4; і (Б) агоніст глюкокортикоїдного рецептора, що містить радикал, зображений формулою: бо о я Тк кросу ОН о Кок Ф СЯ о Н ме) но Ух он , при цьому антитіло кон'югують з агоністом глюкокортикоїдного рецептора за допомогою лінкера, зображеного формулою: о о г - Н Е у ех но То.
2. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 1 відповідно до формули: о се о о - ОН н М сі С о А й я о Н Е н 0 о х но Х д " но о п, де А являє собою антитіло, і п дорівнює цілому числу від 1-10.
3. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 2, який відрізняється тим, що п дорівнює 4.
4. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 2, який відрізняється тим, що п дорівнює 2.
5. Фармацевтична композиція, що містить кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. З та фармацевтично прийнятний носій.
6. Спосіб лікування патологічного стану, вибраного з ревматоїдного артриту, анкілозуючого спондиліту, псоріатичного артриту, бляшкоподібного псоріазу, виразкового коліту, хвороби Крона у дорослих, хвороби Крона у дітей, увеїту, гнійного гідраденіту та ювенільного ідіопатичного артриту, у суб'єкта, що включає введення суб'єкту ефективної кількості кон'югата антитіло-лікарський засіб за п. 3.
7. Набір, що містить: (а) контейнер, що містить кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. З або фармацевтичну композицію за п. 5; і (5) етикетку або листівку-вкладку на один контейнер або у поєднанні з одним або більше контейнерами, причому етикетка або листівка-вкладка вказує, що кон'югат антитіло-лікарський засіб або фармацевтичну композицію застосовують для лікування патологічного стану, вибраного з ревматоїдного артриту, анкілозуючого спондиліту, псоріатичного артриту, бляшкоподібного псоріазу, виразкового коліту, хвороби Крона у дорослих, хвороби Крона у Зо дітей, увеїту, гнійного гідраденіту та ювенільного ідіопатичного артриту.
8. Спосіб доставки агоніста глюкокортикоїдного рецептора до клітини, що експресує ФНПа, що включає стадію приведення клітини у контакт з кон'югатом антитіло-лікарський засіб за п. 3.
9. Кон'югат антитіло-лікарський засіб відповідно до формули:
о зе о о - (еп н А М Ж о В на: о ох р дя но о п де А являє собою адалімумаб, і п дорівнює 4.
10. Кон'югат антитіло-лікарський засіб відповідно до формули: о зе о о -ш ОН н А М Ж о ре о ох р Д м но о п де А являє собою адалімумаб, і п дорівнює 2.
UAA202003245A 2017-12-01 2018-11-29 Кон'югат антитіло-лікарський засіб UA126595C2 (uk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762593776P 2017-12-01 2017-12-01
US201762595054P 2017-12-05 2017-12-05
PCT/IB2018/059482 WO2019106609A1 (en) 2017-12-01 2018-11-29 Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA126595C2 true UA126595C2 (uk) 2022-11-02

Family

ID=65010803

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA202003245A UA126595C2 (uk) 2017-12-01 2018-11-29 Кон'югат антитіло-лікарський засіб

Country Status (34)

Country Link
US (2) US10772970B2 (uk)
EP (2) EP3884962A1 (uk)
JP (2) JP6813712B2 (uk)
KR (1) KR20200095477A (uk)
CN (1) CN111417410B (uk)
AU (1) AU2018374634A1 (uk)
BR (1) BR112020010694A2 (uk)
CA (1) CA3082356A1 (uk)
CL (2) CL2020001452A1 (uk)
CO (1) CO2020006446A2 (uk)
CR (1) CR20200239A (uk)
CY (1) CY1124230T1 (uk)
DK (1) DK3658192T3 (uk)
DO (1) DOP2020000116A (uk)
EC (1) ECSP20029001A (uk)
ES (1) ES2877659T3 (uk)
HR (1) HRP20210917T1 (uk)
HU (1) HUE054428T2 (uk)
IL (1) IL274651B (uk)
LT (1) LT3658192T (uk)
MA (1) MA49796A (uk)
MX (1) MX2020005583A (uk)
PE (1) PE20201286A1 (uk)
PL (1) PL3658192T3 (uk)
PT (1) PT3658192T (uk)
RS (1) RS61994B1 (uk)
RU (1) RU2020117698A (uk)
SG (1) SG11202004867WA (uk)
SI (1) SI3658192T1 (uk)
TW (1) TWI803542B (uk)
UA (1) UA126595C2 (uk)
UY (1) UY37991A (uk)
WO (1) WO2019106609A1 (uk)
ZA (1) ZA202003325B (uk)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2018374634A1 (en) * 2017-12-01 2020-05-28 Abbvie Inc. Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
JP2023523589A (ja) * 2020-04-22 2023-06-06 イミューンネクスト・インコーポレイテッド 抗ヒトｖｉｓｔａ抗体及びその使用
TW202245796A (zh) * 2021-02-04 2022-12-01 大陸商上海森輝醫藥有限公司 糖皮質激素受體激動劑的藥物偶聯物及其在醫藥上的應用
AR125079A1 (es) 2021-03-23 2023-06-07 Lilly Co Eli Agonistas de receptores de glucocorticoides sustituidos con carboxi
TW202304462A (zh) 2021-03-23 2023-02-01 美商美國禮來大藥廠 糖皮質素受體激動劑
WO2022268176A1 (zh) * 2021-06-24 2022-12-29 江苏先声药业有限公司 甾体类化合物、其药物组合物及其应用
JP2024531480A (ja) * 2021-08-26 2024-08-29 デュアリティ バイオロジクス（スーチョウ）カンパニー，リミティド ステロイド化合物及びそのコンジュゲート
CN118201943A (zh) * 2021-09-14 2024-06-14 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种抗炎症的化合物及其用途
TW202340252A (zh) 2022-01-29 2023-10-16 大陸商上海盛迪醫藥有限公司 糖皮質激素的藥物偶聯物
WO2024020164A2 (en) 2022-07-21 2024-01-25 Firefly Bio, Inc. Glucocorticoid receptor agonists and conjugates thereof
WO2024064779A1 (en) * 2022-09-22 2024-03-28 Eli Lilly And Company Glucocorticoid receptor agonists
WO2024140917A1 (zh) * 2022-12-28 2024-07-04 上海盛迪医药有限公司 抗cd40抗体药物偶联物、其制备方法及其医药用途
WO2024149093A1 (zh) * 2023-01-10 2024-07-18 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 糖皮质激素受体激动剂及其偶联物
WO2024153162A1 (en) * 2023-01-18 2024-07-25 Shanghai Micurx Pharmaceutical Co., Ltd. Peptide-drug conjugates for targeted therapy of renal diseases

Family Cites Families (134)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3126375A (en) 1964-03-24 Chioacyl
GB933868A (en) 1958-12-08 1963-08-14 American Cyanamid Co Process for fluorinating steroids
IT1057859B (it) 1972-04-28 1982-03-30 Sigma Tao Ind Farmaceutiche Sp Perivato del triamoinolone
US4588585A (en) 1982-10-19 1986-05-13 Cetus Corporation Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins
US5681718A (en) 1986-03-14 1997-10-28 Celltech Limited Methods for enhanced production of tissue plasminogen activator in cell culture using alkanoic acids or salts thereof
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
ATE106249T1 (de) 1987-11-05 1994-06-15 Hybritech Inc Polysaccharidmodifizierte immunglobuline mit reduziertem immunogenem potential oder verbesserter pharmakokinetik.
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5010176A (en) 1988-11-10 1991-04-23 Eli Lilly And Company Antibody-drug conjugates
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
US6284471B1 (en) 1991-03-18 2001-09-04 New York University Medical Center Anti-TNFa antibodies and assays employing anti-TNFa antibodies
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
CZ287877B6 (cs) 1993-04-02 2001-03-14 Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh Prednisolonové deriváty a farmaceutické prostředky s jejich obsahem
WO1994025478A1 (en) 1993-04-29 1994-11-10 Instytut Farmaceutyczny 16α,17α-ACETAL GLUCOCORTICOSTEROIDAL DERIVATIVES
CA2185015C (en) 1994-03-09 2007-05-08 Beate Gutterer Novel silyl compounds and their use
JP2749778B2 (ja) 1994-09-05 1998-05-13 日清食品株式会社 トリアムシノロン誘導体
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
US5792758A (en) 1995-12-08 1998-08-11 G. D. Searle & Co. Steroid nitrite ester derivatives useful as anti-inflammatory drugs
BRPI9715219B8 (pt) 1996-02-09 2015-07-07 Abbvie Biotechnology Ltd Vetor recombinante de expressão, e célula hospedeira procariótica.
US5824669A (en) 1996-03-22 1998-10-20 Nitromed, Inc. Nitrosated and nitrosylated compounds and compositions and their use for treating respiratory disorders
DE19635498A1 (de) 1996-09-03 1998-03-26 Byk Gulden Lomberg Chem Fab Verfahren zur Epimerenanreicherung
AU3703900A (en) 1999-02-24 2000-09-14 Nitromed, Inc. Nitrosated and nitrosylated steroids for the treatment of cardiovascular diseases and disorders
US8383081B2 (en) 1999-05-10 2013-02-26 Immunomedics, Inc. Anti-CD74 immunoconjugates and methods of use
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
IL155274A0 (en) 2000-11-10 2003-11-23 Altana Pharma Ag Process for the production of 16,17[(cylohexylmethylen)bis(oxy)]-dihydroxy-pregna-1,4-dien-3,20-dione
DE10055820C1 (de) 2000-11-10 2002-07-25 Byk Gulden Lomberg Chem Fab Verfahren zur Herstellung eines Glucocorticoids
CA2868614A1 (en) 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US7595378B2 (en) 2001-06-13 2009-09-29 Genmab A/S Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor (EGFR)
US20060073141A1 (en) 2001-06-28 2006-04-06 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
EP2298809A3 (en) 2001-07-12 2012-02-15 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
IL161251A0 (en) 2001-10-10 2004-09-27 Neose Technologies Inc Remodeling and glycoconjugation of peptides
ES2346517T3 (es) 2001-11-12 2010-10-18 Merck Patent Gmbh Anticuerpo modificado anti-tnf alfa.
GB0216648D0 (en) 2002-07-18 2002-08-28 Lonza Biologics Plc Method of expressing recombinant protein in CHO cells
US20040157810A1 (en) 2002-08-23 2004-08-12 Teicher Martin H. Corticosteroid conjugates and uses thereof
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
AU2003301516A1 (en) 2002-10-24 2004-05-13 Goldstein, Jay A Antifungal formulations
BR0317168A (pt) 2002-12-13 2005-11-01 Neurogen Corp Composto ou uma forma farmaceuticamente aceitável do mesmo, composição farmacêutica, métodos de reduzir condutância de cálcio de um receptor de capsaicina celular, e de inibir ligação de ligante vanilóide a um receptor de capsaicina, métodos de tratar uma condição responsiva à modulação de receptor de capsaicina, dor, coceira, tosse ou soluços, incontinência urinária, de promover perda de peso em paciente, e de determinar a presença ou ausência de receptor de capsaicina em uma amostra, preparação farmacêutica embalada, e, uso de um composto
CA2512174A1 (en) 2003-01-30 2004-08-12 Christian B. Allan Anti-integrin .alpha..nu..beta.3 antibody formulations and uses thereof
MY143936A (en) 2003-03-27 2011-07-29 Nycomed Gmbh Process for preparing crystalline ciclesonide with defined particle size
WO2005044759A2 (en) 2003-08-14 2005-05-19 Sun Pharmaceutical Industries Limited Acetalization process for preparation of steroid compounds
PT1670482E (pt) 2003-09-16 2014-03-12 Takeda Gmbh Utilização de ciclesonida para o tratamento de doenças respiratórias
WO2005028495A1 (en) 2003-09-24 2005-03-31 Glaxo Group Limited Anti-inflammatory glucocorticoids
WO2005041865A2 (en) 2003-10-21 2005-05-12 Igf Oncology, Llc Compounds and method for treating cancer
DK1685131T3 (da) 2003-11-13 2007-07-09 Hoffmann La Roche Hydroxyalkylsubstituerede pyrido-7-pyrimidin-7-oner
PT1697370E (pt) 2003-12-19 2007-05-31 Bristol Myers Squibb Co Heterociclos azabicíclicos como moduladores do receptor de canabinóides
WO2005063777A1 (en) 2003-12-23 2005-07-14 Corus Pharma Benzylphosphate and substituted benzylphosphate prodrugs for the treatment of pulmonary inflammation
RU2390330C2 (ru) 2003-12-31 2010-05-27 Сайдекс, Инк. Ингаляционная препаративная форма, содержащая простой сульфоалкиловый эфир гамма-циклодекстрина и кортикостероид
GB0402797D0 (en) 2004-02-09 2004-03-10 Novartis Ag Organic compounds
WO2005084390A2 (en) 2004-03-02 2005-09-15 Seattle Genetics, Inc. Partially loaded antibodies and methods of their conjugation
EP1725585A2 (en) 2004-03-10 2006-11-29 Lonza Ltd Method for producing antibodies
EP2940043A1 (en) 2004-07-15 2015-11-04 Xencor, Inc. Optimized fc variants
AU2005279347A1 (en) 2004-08-30 2006-03-09 Lonza Biologics Plc. Affinity- plus ion exchange- chromatography for purifying antibodies
ES2377979T3 (es) 2004-09-03 2012-04-03 Genentech, Inc. Antagonistas anti-beta7 humanizados y utilizaciones para los mismos
WO2006027377A1 (en) 2004-09-10 2006-03-16 Altana Pharma Ag Ciclesonide and syk inhibitor combination and methods of use thereof
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
JP2008521828A (ja) 2004-11-29 2008-06-26 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 操作された抗体およびイムノコンジュゲート
WO2006097458A1 (en) 2005-03-15 2006-09-21 Nycomed Gmbh Novel combination
WO2006110593A2 (en) 2005-04-07 2006-10-19 Macrogenics, Inc. Biological targets for the diagnosis, treatment and prevention of cancer
EP1712220A1 (en) 2005-04-15 2006-10-18 PARI GmbH Spezialisten für effektive Inhalation Pharmaceutical aerosol composition
WO2006135479A2 (en) 2005-05-10 2006-12-21 Angiotech International Ag Anti-scarring agents, therapeutic compositions, and use thereof
BRPI0611567A2 (pt) 2005-06-14 2016-11-16 Gilead Sciences Inc composto e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, processo para síntese dos compostos, e formulação aerossol, e, uso de pelo menos uma pró-droga mútua de fenilfosfato
WO2007002222A2 (en) 2005-06-20 2007-01-04 Psma Development Company, Llc Psma antibody-drug conjugates
WO2007054974A2 (en) 2005-09-28 2007-05-18 Arch Pharmalab Limited A green chemistry process for the preparation of pregnadiene esters
CA2648582C (en) 2006-04-07 2016-12-06 Nektar Therapeutics Al, Corporation Conjugates of an anti-tnf-alpha antibody
WO2008015696A2 (en) 2006-05-23 2008-02-07 Cadila Healthcare Limited Process for preparing ciclesonide
TWI523864B (zh) 2006-05-30 2016-03-01 建南德克公司 抗體及免疫接合物及其用途
EP2392584A1 (en) 2006-09-19 2011-12-07 Cipla Limited Crystalline Ciclesonide Methanol Solvate Form C
WO2008052350A1 (en) 2006-11-03 2008-05-08 Qlt Inc. Photodynamic therapy for the treatment of hidradenitis suppurativa
NO331891B1 (no) 2007-03-20 2012-04-30 Clavis Pharma Asa Kjemiske forbindelser, et farmasoytisk preparat inneholdende slike forbindelser, samt anvendelse derav for behandling av kreft, inflammasjon og KOLS
UA100120C2 (en) 2007-04-03 2012-11-26 Анадис Фармасьютикалз, Инк. 5,6-dihydro-1h-pyridin-2-one compounds
CN106038481A (zh) 2007-06-28 2016-10-26 锡德克斯药物公司 皮质类固醇水溶液的鼻部和眼部给药
NZ585434A (en) 2007-11-30 2012-06-29 Pfizer Ltd Novel glucocorticoid receptor agonists
US20110262368A1 (en) 2007-12-21 2011-10-27 Schering Corporation C21 thioethers as glucocorticoid receptor agonists
AR069804A1 (es) 2007-12-21 2010-02-17 Schering Corp Agonistas del receptor glucocorticoide c20- c21 sustituido
ES2618292T3 (es) 2008-01-31 2017-06-21 Inserm - Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Anticuerpos contra CD39 humano y uso de los mismos para inhibir la actividad de las células T reguladoras
WO2009108118A1 (en) 2008-02-27 2009-09-03 Astrazeneca Ab 16 alpha, 17 alpa-acetal glucocorticosteroidal derivatives and their use
WO2009112557A2 (en) 2008-03-13 2009-09-17 Farmabios S.P.A. Process for the preparation of pregnane derivatives
EP2294077A1 (en) 2008-06-10 2011-03-16 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid linked beta-agonist compounds for use in therapy
KR20110028450A (ko) 2008-06-16 2011-03-18 이뮤노젠 아이엔씨 새로운 상승 효과
AU2009271328B2 (en) 2008-06-24 2012-09-06 Irm Llc Compounds and methods for modulating G protein-coupled receptors
WO2010054158A2 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Auspex Pharmaceuticals, Inc. Steroid modulators of glucocorticoid receptor
SG171812A1 (en) 2008-12-04 2011-07-28 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2744176C2 (ru) 2008-12-19 2021-03-03 Макродженикс, Инк. Ковалентные диантитела и их применение
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
AU2010221972B2 (en) 2009-03-09 2012-07-05 Mikasa Seiyaku Co., Ltd. Steroid compound
WO2010126953A1 (en) 2009-04-29 2010-11-04 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid linked beta-agonist compounds for use in therapy
WO2010132743A1 (en) 2009-05-15 2010-11-18 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid beta-agonist compounds for use in therapy
WO2010136940A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Pfizer Limited Novel glucocorticoid receptor agonists
GB0917044D0 (en) 2009-09-29 2009-11-18 Cytoguide As Agents, uses and methods
RU2016105962A (ru) 2009-12-04 2018-11-23 Дженентек, Инк. Мультиспецифические антитела, аналоги антител, композиции и способы
CA2782398C (en) 2009-12-09 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Delivery system for cytotoxic drugs by bispecific antibody pretargeting
WO2011081937A1 (en) 2009-12-15 2011-07-07 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid-beta-agonist-muscarinic antagonist compounds for use in therapy
CN102167741B (zh) 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
RU2012147249A (ru) 2010-04-07 2014-05-20 Эббви Инк. TNF-α- СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ
EP2560683B2 (en) 2010-04-23 2022-07-20 F. Hoffmann-La Roche AG Production of heteromultimeric proteins
EP2571525A4 (en) 2010-05-18 2016-04-27 Cerulean Pharma Inc Compositions and methods for treating autoimmune and other diseases
WO2011153477A2 (en) 2010-06-03 2011-12-08 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of hidradenitis suppurativa (hs)
KR20130043168A (ko) 2010-06-24 2013-04-29 아비에 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
US8574630B2 (en) 2010-09-22 2013-11-05 Map Pharmaceuticals, Inc. Corticosteroid particles and method of production
AR084210A1 (es) 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
WO2012082947A1 (en) 2010-12-16 2012-06-21 Irm Llc Compounds and compositions as tgr5 agonists
EP2659642A1 (en) 2010-12-29 2013-11-06 Nokia Siemens Networks Oy A method and apparatus for transmitting an identity
AU2012237287B2 (en) 2011-03-30 2016-09-08 Ablynx Nv Methods of treating immune disorders with single domain antibodies against TNF-alpha
RS20140202A1 (en) 2011-10-24 2014-10-31 Abbvie Inc. BIOSPECIFIC IMMUNOVELING PROTEINS DIRECTED AGAINST TNF AND IL-17
AU2012328921B2 (en) 2011-10-24 2017-05-11 Abbvie Inc. Immunobinders directed against TNF
US20130115269A1 (en) 2011-11-04 2013-05-09 Henry John Smith Anti-tumor necrosis factor alpha (TNF-a) antibody used as a targeting agent to treat arthritis and other diseases
WO2013087912A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compounds and methods for treating inflammatory diseases
US9109005B2 (en) 2012-02-23 2015-08-18 Boehringer Ingelheim International Gmbh Method for manufacturing of ciclesonide
EP2641900A1 (en) 2012-03-20 2013-09-25 Almirall, S.A. Novel polymorphic Crystal forms of 5-(2-{[6-(2,2-difluoro-2-phenylethoxy) hexyl]amino}-1-(R)-hydroxyethyl)-8-hydroxyquinolin-2(1h)-one, heminapadisylate as agonist of the ß2 adrenergic receptor.
EP2647627A1 (en) 2012-04-02 2013-10-09 Almirall, S.A. Salts of 5-[(1r)-2-({2-[4-(2,2-difluoro-2-phenylethoxy)phenyl] ethyl}amino)-1-hydroxyethyl]-8-hydroxyquinolin-2(1h)-one.
CN103421075B (zh) 2012-05-16 2017-07-28 上海特化医药科技有限公司 孕烷衍生物16,17‑缩醛(酮)的制备方法
EP2855745A4 (en) 2012-06-01 2016-01-20 Momenta Pharmaceuticals Inc METHODS RELATING TO ADALIMUM AB
EP2906599B1 (en) 2012-10-12 2019-07-17 Agency For Science, Technology And Research Optimised heavy chain and light chain signal peptides for the production of recombinant antibody therapeutics
CN105849086B (zh) 2012-11-24 2018-07-31 杭州多禧生物科技有限公司 亲水性链接体及其在药物分子和细胞结合分子共轭反应上的应用
US9107960B2 (en) 2012-12-13 2015-08-18 Immunimedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
DK2934544T3 (en) 2012-12-21 2019-03-04 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh PHARMACEUTICAL FORMULA INCLUDING CICLESONID
JP2016516041A (ja) 2013-03-15 2016-06-02 アッヴィ・インコーポレイテッド 改善されたｔｎｆ結合タンパク質
WO2015047510A1 (en) 2013-09-27 2015-04-02 Immunomedics, Inc. Anti-trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2015073884A2 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
US10464955B2 (en) 2014-02-28 2019-11-05 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Charged linkers and their uses for conjugation
EP3125943A4 (en) 2014-04-04 2017-12-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphate based linkers for intracellular delivery of drug conjugates
CA2948013A1 (en) 2014-06-30 2016-01-07 Immunomedics, Inc. Antibodies reactive with an epitope located in the n-terminal region of muc5ac comprising cysteine-rich subdomain 2 (cys2)
CN117695204A (zh) 2014-09-19 2024-03-15 奥叙拉尔有限公司 眼部药物组合物
US10233210B2 (en) 2015-01-30 2019-03-19 Coral Drugs Pvt. Ltd. Process for preparation of glucocorticoid steroids
JP2016190798A (ja) 2015-03-31 2016-11-10 三笠製薬株式会社 アレルギー性鼻炎治療用局所点鼻薬
CN108026123B (zh) 2015-06-15 2021-02-05 杭州多禧生物科技有限公司 用于偶联的亲水链接体
WO2015151079A2 (en) 2015-06-20 2015-10-08 Hangzhou Dac Biotech Co, Ltd Auristatin analogues and their conjugates with cell-binding molecules
CA2991975C (en) 2015-08-10 2021-04-06 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Novel linkers and their uses in specific conjugation of drugs to a biological molecule
JP2017066075A (ja) 2015-09-30 2017-04-06 三笠製薬株式会社 リウマチ治療薬
KR20220119529A (ko) 2016-06-02 2022-08-29 애브비 인코포레이티드 글루코코르티코이드 수용체 작용제 및 이의 면역접합체
JP6767796B2 (ja) 2016-07-08 2020-10-14 株式会社日立情報通信エンジニアリング 通話管理システム及びその音声認識制御方法
WO2018089373A2 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Steroids and protein-conjugates thereof
AU2018374634A1 (en) * 2017-12-01 2020-05-28 Abbvie Inc. Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof

Also Published As

Publication number Publication date
MA49796A (fr) 2020-06-03
KR20200095477A (ko) 2020-08-10
CY1124230T1 (el) 2022-05-27
HUE054428T2 (hu) 2021-09-28
EP3658192B1 (en) 2021-04-28
BR112020010694A2 (pt) 2020-11-10
DOP2020000116A (es) 2020-08-31
EP3658192A1 (en) 2020-06-03
LT3658192T (lt) 2021-07-12
TWI803542B (zh) 2023-06-01
ECSP20029001A (es) 2020-06-30
RS61994B1 (sr) 2021-07-30
PT3658192T (pt) 2021-06-25
CN111417410A (zh) 2020-07-14
WO2019106609A1 (en) 2019-06-06
US20210015938A1 (en) 2021-01-21
JP2021054845A (ja) 2021-04-08
SG11202004867WA (en) 2020-06-29
MX2020005583A (es) 2020-11-25
RU2020117698A (ru) 2022-01-04
PL3658192T3 (pl) 2021-10-18
US10772970B2 (en) 2020-09-15
HRP20210917T1 (hr) 2021-09-03
ZA202003325B (en) 2021-07-28
IL274651B (en) 2021-04-29
UY37991A (es) 2019-06-28
EP3884962A1 (en) 2021-09-29
IL274651A (en) 2020-06-30
DK3658192T3 (da) 2021-06-21
SI3658192T1 (sl) 2021-08-31
CA3082356A1 (en) 2019-06-06
CR20200239A (es) 2020-09-21
US20190167804A1 (en) 2019-06-06
CO2020006446A2 (es) 2020-06-09
JP6813712B2 (ja) 2021-01-13
RU2020117698A3 (uk) 2022-01-04
CN111417410B (zh) 2023-06-23
CL2021001075A1 (es) 2021-10-15
ES2877659T3 (es) 2021-11-17
CL2020001452A1 (es) 2020-09-11
PE20201286A1 (es) 2020-11-24
JP2021501124A (ja) 2021-01-14
TW201924723A (zh) 2019-07-01
AU2018374634A1 (en) 2020-05-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA126595C2 (uk) Кон'югат антитіло-лікарський засіб
US20230079407A1 (en) Anti-msr1 antibodies and methods of use thereof
US12070506B2 (en) Steroids and antibody-conjugates thereof
AU2018270784B2 (en) Cyclodextrin protein drug conjugates
CN115651056A (zh) 类固醇类化合物及其蛋白质-偶联物
TW201636359A (zh) 免疫調節劑
CN102264762A (zh) 人抗pd-1、pd-l1和pd-l2的抗体及其应用
UA121844C2 (uk) Людське антитіло до cd27, спосіб його одержання та застосування
SA04240497A (ar) طرق لمعالجة اضطرابات حيث تكون فعالية عامل النخر الورمي ألفا ضارة وذلك بإعطاء جرعات علاجية منخفضة
CA3176161A1 (en) Anti-human vista antibodies and use thereof
TW202241451A (zh) 新穎類固醇有效負載、類固醇連接子、含有其之ａｄｃ及其用途
CA2939543A1 (en) Il-21 antibodies
KR20210094568A (ko) Lxr 작용물질로서 사용하기 위한 비스-옥타하이드로펜안트렌 카복스아미드 유도체 및 그의 단백질 접합체
EA006423B1 (ru) Олигопептид, обладающий биологической активностью модулятора рецептора тромбопоэтина, и способы его применения
AU2018210388A1 (en) Anti-HERV-K envelope antibody and uses thereof
WO2023040793A1 (zh) 一种抗炎症的化合物及其用途
CA3203332A1 (en) Pegylated t cell engager with dual specificities to cd3 and cd19
EA045111B1 (ru) Стероиды и их антитело-конъюгаты