UA126328C2 - Молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти, яка кодує білок, що проявляє інгібуючу активність відносно комах - Google Patents

Description

(54) МОЛЕКУЛА РЕКОМБІНАНТНОЇ НУКЛЕЇНОВОЇ КИСЛОТИ, ЯКА КОДУЄ БІЛОК, ЩО ПРОЯВЛЯЄ

ІНГІБУЮЧУ АКТИВНІСТЬ ВІДНОСНО КОМАХ

(57) Реферат:

Винахід стосується молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти, трансгенної рослини або її частини, насіння, які є стійкими до зараження лускокрилими (І ерідорієга), композиції, що має інгібуючу активність відносно комах ряду лускокрилі, способу виявлення наявності послідовностей рекомбінантних нуклеїнових кислот або білка за даним винаходом у біологічному зразку, і способу боротьби з лускокрилими із застосуванням пестицидного білка.

ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ

ІЇО0О0О1| У даній заявці заявляється пріоритет попередньої заявки на патент США Мо 6б2/210,737, що подана 27 серпня 2015 року, яка включена в даний документ за допомогою посилання в повному обсязі.

ВКЛЮЧЕННЯ ПЕРЕЛІКУ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

ЇО0О2| Файл з ім'ям "38-21 616270500015ЕО1І5ТІМО 5Т254Х, що містить машинозчитувану форму переліку послідовностей, був створений З серпня 2016 року. Цей файл складає 94,508 байт (виміряний в М5-М/іпаом5?), одночасно поданий в електронному вигляді (з використанням системи реєстрації ЕЕ5-УМУер Патентного відомства США) і повністю включається в дану заявку за допомогою посилання у всій своїй повноті.

ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ

0003) Винахід в цілому стосується області білків, що володіють інгібіторною активністю по відношенню до комах. Розкривається новий клас білків, які проявляють інсектицидну інгібуючу активність проти сільськогосподарських шкідників сільськогосподарських культур і насіння.

Зокрема, описаний клас білків є інсектицидно активним по відношенню до шкідників сільськогосподарських культур і насіння, зокрема видів комах-шкідників ряду лускокрилих.

Пропонуються рослини, частини рослин і насіння, що містять рекомбінантний полінуклеотидний конструкт, який кодує один або більше описаних білків токсину.

РІВЕНЬ ТЕХНІКИ

ІЇ0004| Все більшого значення набуває підвищення врожайності сільськогосподарських культур, включаючи кукурудзу, сою, цукровий очерет, рис, пшеницю, овочі і бавовну. За прогнозами, на додаток до зростаючої потреби в сільськогосподарській продукції для забезпечення їжею, одягом та забезпечення енергією зростаючого населення, кліматичних наслідків і тиску з боку зростаючого населення на використання землі, відмінної від сільськогосподарської, зменшується кількість доступних орних земель для ведення сільського господарства. Дані фактори призвели до неоптимістичних прогнозів продовольчої безпеки, особливо в умовах відсутності значних поліпшень в галузі біотехнології рослин і агрономічних практик. У світлі даних факторів, екологічно стабільні удосконалення в області технологій, агротехніки і боротьби зі шкідниками є життєво важливими інструментами для розширення

Зо виробництва сільськогосподарських культур на обмеженій кількості орних земель, доступних для ведення сільського господарства. 0005) Комахи, особливо комахи в межах рядів лускокрилих та твердокрилих, вважаються основною причиною пошкодження польових культур, тим самим знижуючи врожайність культур в заражених районах. Види-шкідники ряду лускокрилих, які негативно впливають на сільське господарство, включають, але без обмежень, африканську совку (5родорієга ехептріа), совку- іпсилон (Адгоїї5 ірзіоп), американську кукурудзяну совку (Неїїсомегра 7еа), совку бавовняну американську (АІабата агоійасеа), капустяну міль (Рішіеййа хуїовзієЇйа), метелика стеблового кукурудзяного (Оз5ігіпіа пибріїайїї5), кукурудзяну листову совку (5родоріеєга Іидірегаа), кукурудзяну листову совку, стійку до СтуїРа!1 (Зродорієга Ігидірегда), совку американську (ОУМВ, Неїїсомегра аптідега), південну совку (5родоріега егідапіа), соєву совку (Спгузодеїхі5 іпсішдепв5), совку плямисту (Еагіаз міцеїІІа), вогнівку кукурудзяну південно-західну (Оіаїгаєа дгапаїозеїІа), тютюнову листовійку (Неїїоїйпі5 мігезсеп5), тютюнову совку (Зродоріега ІШига, також відому як тютюновий озимий черв'як), совку бобову західну (5ігіасовіа аїіБісовіа) і совку оксамитових бобів (Апіїісагвіа деттаїаї в).

ІЇ000Об| Історично склалося так, що інтенсивне застосування синтетичних хімічних інсектицидів використовувалося як засіб боротьби з шкідниками в сільському господарстві.

Стурбованість з приводу навколишнього середовища і здоров'я людини, окрім виникаючих проблем зі стійкістю, стимулювала дослідження і розробку біологічних пестицидів. Дане дослідження привело до прогресивного відкриття і застосування різних ентомопатогенних видів мікроорганізмів, включаючи бактерії.

І0007| Парадигма біологічних методів боротьби змінилася, коли був відкритий потенціал ентомопатогенних бактерій, особливо бактерій, що відносяться до роду Васійив5, і застосований в розробці агентів для біологічної боротьби з шкідниками. Штами бактерії Васійи5 (игіпдіепвів (ВО використовували в якості джерела пестицидних білків, оскільки було виявлено, що штами Ві проявляють високу токсичність проти конкретних комах. Відомо, що штами Ві продукують дельта-ендотоксини, що локалізовані в параспоральних кристалічних тільцях включення на початку споруляції та під час фази стаціонарного росту (наприклад, білки Сгу) і також відомо, що вони продукують інсектицидний білок, що секретується. При ковтанні чутливою комахою, дельта-ендотоксини, а також токсини, що секретуються, діють на поверхню епітелію середньої бо кишки, руйнують клітинну мембрану, приводячи до руйнування і загибелі клітин. Гени, що кодують інсектицидні білки, також були ідентифіковані у бактеріальних видів, відмінних від Ві, в тому числі інших Васіїйш5 ії багатьох інших видів бактерій, таких як Вгемірасійи5 Іатегозрогив,

ІГувіпірасШив зрпаєеєгісиз ("І 5" раніше відомий як Васійиз зрпаєгіси5) та РаєпірасшШи5 роріае.

ЇО0О8| Кристалічні і такі, що секретуються розчинні інсектицидні токсини (є високоспецифічними для їх господарів і отримали світове визнання як альтернатива хімічним інсектицидам. Наприклад, інсектицидні білки-токсини застосовують в різних сільськогосподарських цілях з метою захисту господарсько-цінних рослин від зараження комахами, зменшення потреби в застосуванні хімічних пестицидів і підвищення врожайності.

Інсектицидні білки-токсини застосовують для боротьби з сільськогосподарськими шкідниками культурних рослин механізованими способами, такими як розпорошення дисперсних мікробних препаратів, що містять різні штами бактерій, на поверхні рослин, та з використанням методів генетичної трансформації для отримання трансгенних рослин і насіння, що експресують інсектицидний білок-токсин.

ІЇ0009| Застосування трансгенних рослин, що експресують інсектицидні білки-токсини, визнано в світовому масштабі. Наприклад, у 2012 році 26,1 мільйона гектарів були засаджені трансгенними культурами, що експресували токсини Ві (дЧате5, С., СіІобра! еаше ої

Сотітегсіаїїлей Віоїесп/зМ Сгоре: 2012 рік. Короткий зміст звіту ІЗААА (Міжнародна служба зі збору відомостей стосовно застосування біотехнологій в сільському господарстві) Мо 44).

Глобальне застосування трансгенних культур, захищених від комах, та обмежена кількість інсектицидних білків-токсинів, що застосовуються для цих культур, створило тиск відбору для існуючих алелів комах, які надають стійкість до інсектицидних білків, що застосовуються в даний час.

ІЇ0010| Розвиток резистентності у цільових шкідників до інсектицидних білків-токсинів створює постійну потребу у відкритті і розробці нових форм інсектицидних токсичних білків, які є корисними для контролю над підвищенням резистентності комах до трансгенних культур, що експресують інсектицидні білки-токсини. Нові білкові токсини з підвищеною ефективністю, і які контролюють більш широкий спектр сприйнятливих видів комах, зменшують число комах, які вижили і можуть розвинути резистентні алелі. Крім того, застосування в одній рослині двох або більше трансгенних інсектицидних білків-токсинів, токсичних для однієї і тієї ж комахи-шкідника і

Зо які демонструють різні способи впливу, знижує ймовірність резистентності у будь-яких окремих цільових видів комах.

І0011| Таким чином, винахідники розкривають в даному документі нову родину білкових токсинів з Раепібасійн5 роріШає, поряд з аналогічними білками токсинів, варіантними білками і типовими рекомбінантними білками, які проявляють інсектицидну активність по відношенню до певних видів ряду лускокрилих, зокрема до африканської совки (Зродоріега ехетріа), совки- іпсилон (Аадгоїї5 ірзіоп), американської кукурудзяної совки (Неїїсомегра 7єа), совки бавовняної американської (АіІабата агоійасеа), капустяної молі (РішейПа хуїовіеПйа), метелика стеблового кукурудзяного (Об5ігіпіа пибіїайв), кукурудзяної листової совки (Зродорієга пидірегаа), кукурудзяної листової совки, стійкої до Стуї!Ра1 (Зродоріега Іпидірегда), совки американської (ОМ/В, Неїїсомегра агтідега), південної совки (Зродорієега егідапіа), соєвої совки (Спгузодеїхів5 іпсіцдеп5), совки плямистої (Еагіах мійеПа), вогнівки кукурудзяної південно-західної (Оіаїгаєа дгапаіозеПа), тютюнової листовійки (Неїїоїпіб5 мігезсеп5), тютюнової совки (Зродорієга Ійига, також відомої як тютюновий озимий черв'як), совки бобової західної (5ігпасовіа аїБісовіа) і совки оксамитових бобів (Апіїсагсіа деттаїйаїїв).

КОРОТКИЙ ОПИС СУТІ ВИНАХОДУ

0012) В даному документі описана нова група пестицидних білків з інгібуючою активністю по відношенню до комах (білки-токсини), що згадуються в даному документі як ТІСб6757, ТІС7472 та ТІС7473, що належать до класу білкового токсину ТІСб6757, які, як показано, проявляють інгібуючу активність проти одного або більше шкідників сільськогосподарських рослин. Білок

ТІСб6757 та білки в класі білкового токсину ТІС6757 можуть застосовуватися окремо або в поєднанні з іншими інсектицидними білками і токсичними речовинами в препаратах і іп ріапіа, таким чином забезпечуючи альтернативи інсектицидним білкам та хімії інсектицидів, які в даний час використовуються в сільськогосподарських системах.

І0013| В одному варіанті реалізації винаходу в даній заявці представлена молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти, яка містить гетерологічний промоторний фрагмент, функціонально пов'язаний з полінуклеотидним сегментом, що кодує пестицидний білок або його фрагмент, при цьому (а) зазначений пестицидний білок містить амінокислотну послідовність

ЗЕО ІО МО: 4, БЕО І МО: 2, 5ЕО ІО МО: 6, 5ЕО І МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО

ІО МО: 14, 5ЕО ІЮ МО: 16 або 5ЕО ІО МО: 18; або (Б) зазначений пестицидний білок містить 60 амінокислотну послідовність, що має щонайменше 85 95 або 90 95, або 95 95, або 98 95, або 99 уо, або близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності з ФЕО ІЮО МО: 4, ЗЕО ІЮО МО: 2,

ЗЕО ІО МО: 6, 5ЕО І МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІЮ МО: 12, ЗЕО ІО МО: 14, 5ЕО ІЮ МО: 16 або

ЗЕО І МО: 18; або (с) зазначений полінуклеотидний сегмент гібридизується з полінуклеотидом, який має нуклеотидну послідовність зБЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 5, 5ЕО ІЮ МО: 7,

ЗЕО ІЮ МО: 9, ЗЕО ІЮО МО: 11, 5ЕО ІЮО МО: 13, 5ЕО ІЮО МО: 15 та 5ЕО ІЮ МО: 17; або (а) зазначений полінуклеотидний сегмент, який кодує пестицидний білок або його фрагмент, містить полінуклеотидну послідовність, що має щонайменше 65 95 або 70 95, або 75 95, або 80 о, або 85 95, або 90 95, або 95 95, або 98 95, або 99 95, або близько 100 95 ідентичності послідовності з нуклеотидною послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІО МО: 5, 5ЕО 10

МО: 7, ЗЕО ІЮ МО: 9, БЕО ІЮ МО: 11, ЗЕО ІЮ МО: 13, 5ЕО ІЮО МО: 15 або 5ЕО ІЮ МО: 17; або (є) зазначена молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти знаходиться у функціональному зв'язку з вектором і зазначений вектор вибраний з групи, що складається з плазміди, фагміди, бакміди, косміди та бактеріальної або дріжджової штучної хромосоми. Молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти може містити послідовність, яка функціонує експресуючи пестицидний білок в рослині; або експресується в рослинній клітині продукуючи пестицидно ефективну кількість пестицидного білка. (0014) В іншому варіанті реалізації винаходу даної заявки присутні клітини-господарі, що містять молекулу рекомбінантної нуклеїнової кислоти даної заявки, причому клітина-господар вибрана з групи, що складається з бактеріальної та рослинної клітини. Розглянуті бактеріальні клітини-господарі включають Адгорасіегішт, КПпі2орішт, Васійй5, Вгемірасійй5, Евспегіспіа,

Рзепдотопавх, КіІерзіеІйа, Рапіоеа та Егміпі«а В окремих варіантах реалізації винаходу зазначеними видами Васійй5 були Васійи5 сегеи5 або Васійи5 ІПигіпдіепвіх, зазначеним

Вгемірасійй5 був Вгемірасіййи5 Іагбегозрегих, або Ев5сПпегіспіа був ЕбсПегіспіа соїї. Розглянуті рослинні клітини-господарі рослин включають рослинну клітину дводольних і рослинну клітину однодольних. Розглянуті рослинні клітини додатково включають рослинну клітину люцерни, банана, ячменю, квасолі, броколі, капусти, Вгазвзіса, моркви, маніоки, рицини, цвітної капусти, селери, нуту, китайської капусти, цитрусових, кокосової пальми, кави, кукурудзи, конюшини, бавовнику (Со55зурішт 5р. ), гарбузових, огірка, Дугласової ялиці, баклажана, евкаліпта, льону, часнику, винограду, хмелю, цибулі порею, салату-латуку, сосни ладанної, проса, дині, горіха,

Зо вівса, оливи, цибулі, декоративної рослини, пальми, трави пасовиська, гороху, арахісу, перцю, голубиного гороху, сосни, картоплі, тополі, гарбуза, сосни променистої, редису, ріпаку, рису, кореневищних злаків, жита, американського шафрану, чагарнику, сорго, південної сосни, сої, шпинату, кабачка, полуниці, цукрових буряків, цукрової тростини, соняшнику, солодкої кукурудзи, амбрового дерева, солодкої картоплі, проса прутовидного, чаю, тютюну, томату, тритикале, дернової трави, кавуна і пшениці. 0015) В іншому варіанті реалізації винаходу пестицидний білок проявляє активність проти комахи ряду лускокрилих, в тому числі совки оксамитових бобів, вогнівки очеретяної, точильника зернового, совки бавовняної, тютюнової листовійки, соєвої совки, африканської совки, південної совки, кукурудзяної листової совки, совки бурякової, совки американської, азіатської бавовняної совки, рожевого коробкового хробака бавовника, совки-іпсилон, вогнівки кукурудзяної південно-західної совки бавовняної американської, капустяної молі, совки плямистої, тютюнової совки, совки бобової західної і метелика стеблового кукурудзяного. 0016) Також в даній заявці розглядаються рослини, що містять молекулу рекомбінантної нуклеїнової кислоти, яка містить гетерологічний промоторний фрагмент, функціонально пов'язаний з полінуклеотидним сегментом, що кодує пестицидний білок або його фрагмент, при цьому: (а) зазначений пестицидний білок містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 4,

ЗЕО ІЮ МО: 2, 5ЕО Ір МО: 8, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО ІЮ МО: 16 або 5ЕО ІЮО МО: 18; або (Б) зазначений пестицидний білок містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 85 905 або 90 95, або 95 95, або 98 95, або 99 95, або близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності з ЗЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО ІЮ МО: 2, ЗЕО ІЮ МО: 8, ЗЕО ІЮО МО: 12, ЗЕО ІЮО МО: 16 або

ЗЕО ІО МО: 18; або (с) зазначений полінуклеотидний сегмент гібридизується в жорстких умовах гібридизації з комплементарною нуклеотидною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 15 або

ЗЕО ІЮ МО: 17; або (а) зазначена рослина демонструє кількість зазначеного пестицидного білка, яка може бути визначена. В деяких варіантах реалізації винаходу пестицидний білок містить

ЗЕО ІО МО: 4, 5ЕО ІЮО МО: 2, 5ЕО ІЮ МО: 8, БЕО ІО МО: 12, 5БЕО ІО МО: 16 або 5ЕО ІО МО: 18. В одному варіанті реалізації винаходу рослина є однодольною або дводольною. В іншому варіанті реалізації винаходу рослину додатково вибирають з групи, що складається з люцерни, банана, ячменю, бобів, броколі, капусти, Вгабхзіса, моркви, маніоки, рицини, цвітної капусти, селери, нуту, китайської капусти, цитрусових, кокосової пальми, кави, кукурудзи, конюшини, бавовнику, 60 гарбузових, огірка, Дугласової ялиці, баклажана, евкаліпта, льону, часнику, винограду, хмелю,

цибулі порею, салату-латуку, сосни ладанної, проса, дині, горіха, вівса, оливи, цибулі, декоративної рослини, пальми, трави пасовиська, гороху, арахісу, перцю, голубиного гороху, сосни, картоплі, тополі, гарбуза, сосни променистої, редису, ріпаку, рису, кореневищних злаків, жита, американського шафрану, чагарнику, сорго, південної сосни, сої, шпинату, кабачка, полуниці, цукрових буряків, цукрової тростини, соняшнику, солодкої кукурудзи, амбрового дерева, солодкої картоплі, проса прутовидного, чаю, тютюну, томату, тритикале, дернової трави, кавуна і пшениці.

І0017| У додаткових варіантах реалізації винаходу описуються насіння, що містять молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти.

І0018| В іншому варіанті реалізації винаходу розглядається описана в даній заявці композиція, що володіє інгібуючою активністю по відношенню до комах, яка містить молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти. Композиція, яка володіє інгібуючою активністю по відношенню до комах, може додатково містити нуклеотидну послідовність, що кодує щонайменше один інший пестицидний агент, який відрізняється від зазначеного пестицидного білка. В деяких варіантах реалізації винаходу щонайменше один інший пестицидний агент вибирають з групи, що складається з білка, який володіє інгібіторною активністю по відношенню до комах, молекули длРНК, що володіє інгібіторною активністю по відношенню до комах, і допоміжного білка. Також передбачається, що щонайменше один інший пестицидний агент в композиції, яка володіє інгібуючою активністю по відношенню до комах, проявляє активність проти одного або більше видів шкідників рядів лускокрилих, твердокрилих або напівтвердокрилих. Щонайменше один інший пестицидний агент в композиції, що володіє інгіібуючою активністю по відношенню до комах, знаходиться в одному варіанті реалізації винаходу, обраному з групи, що складається з Сту1тА, СтутАБ, СтгутАс, СтутА. 105, СтутАе,

Сту!1В, Сту1сС; варіантів Сту1!С, Сту10, Сту1Е, Стуї1Е, химер СтутА/Е; Сту1б, Стуї1Н, СтутІ, Стуту,

Стук, СгутІ,, Сту2А, Стгу2АБ, Стуг2Ае, Сгуз, варіантів СтузА; СтуЗВ, Стгу4В, Стгуб, Сту7, Стув8, Сту9,

Сту15, Сту34, СтузЗ35, Сту4ЗА, Сту4З3В, СтубіАа!, ЕТ29, ЕТЗ33, ЕТ34, ЕТЗ5, ЕТ6б, ЕТ70, ТІС400,

ТІС407, ТІС417, ТІС431, ТІС800, ТІС807, ТІС834, ТІС853, ТІС900, ТІСО9О1, ТІС1201, ТІС1415,

ТІС2160, ТІСЗ3131, ТІС836, ТІС860, ТІС867, ТІС869, ТІС1100, МІРЗА, МІРЗВ, МІРЗАБ, АХМІ-АХМІ-,

АХМІ-88, АХМІ-97, АХМІ-102, АХМІ-112, АХМІ-117, АХМІ-100, АХМІ-115, АХМІ-113 та АХМІ-005,

Зо АХМІ134, АХМІ-150, АХМІ-171, АХМІ-184, АХМІ-196, АХМІ-204, АХМІ-207, АХМІ-209, АХМІ-205,

АХМІ-218, АХМІ-220, АХМІ-22172, АХМІ-22272, АХМІ-22372, АХМІ-2247 та АХМІ-2257, АХМІ-238,

АХМІ-270, АХМІ-279, АХМІ-345, АХМІ-335, АХМІ-КІ1 та їх варіантів, ІРЗ та його варіантів, ОІ-3, ріа-5, 0ІС-10, БІС-657 та білка БІС-11.

Ї0019| Також розглядаються товарні продукти, що містять молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти, описаної в даній заявці, у кількості, яка може бути встановлена. Такі товарні продукти включають в себе товарну кукурудзу, упаковану оброблювачем зерна, кукурудзяні пластівці, кукурудзяні коржі, кукурудзяну муку, кукурудзяну муку грубого помелу, кукурудзяний сироп, кукурудзяну олію, кукурудзяний силос, кукурудзяний крохмаль, кукурудзяну кашу тощо, а також відповідні товарні продукти з сої, рису, пшениці, сорго, голубиного гороху, арахісу, фруктів, дині і овочів, включаючи, де це може бути застосовано, соки, концентрати, джеми, желе, мармелади та інші їстівні форми таких товарних продуктів, що містять таку кількість, яка може бути визначена, таких полінуклеотидів та або поліпептидів даної заявки, цілісне або оброблене насіння бавовнику, бавовняне масло, лінт, насіння і частини рослин, оброблені для корму або продуктів харчування, волокно, папір, біомаси і паливні продукти, такі як паливо, отримане з бавовняного масла або пелетів, отриманих з відходів бавовняного очищення, цілісного або обробленого насіння сої, соєвого масла, соєвого білка, соєвого борошна грубого помелу, соєвого борошна, соєвих пластівців, соєвих висівок, соєвого молока, соєвого сиру, соєвого вина, корму для тварин, що містить соєві боби, паперу, що містить сою, вершків, що містять сою, біомаси соєвих бобів і паливних продуктів, вироблених з використанням рослин сої та частин рослин сої. 00201 У даній заявці також розглядається спосіб виробництва насіння, що містять молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти, описаної в даній заявці Спосіб включає посадку щонайменше одного з насіння, що містить молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти, описаної в даній заявці; вирощування рослини з насіння; і збирання насіння з рослин, причому зібране насіння містить молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти даної заявки.

І0021) В іншому ілюстративному варіанті реалізації винаходу пропонується рослина, стійка до зараження комахами, в якій клітини зазначеної рослини містять: (а) молекулу рекомбінантної нуклеїнової кислоти, що кодує інсектицидно ефективну кількість пестицидного білка, як зазначено в ЗЕО ІЮ МО: 4, ЗЕО ІЮ МО: 2, ЗЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІО МО: 12, ЗЕО ІЮ МО: 16 або ЗЕО бо ІЮ МО: 18; або (Б) інсектицидно ефективну кількість білка, що містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 85 95 або 90 95, або 95 95, або близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності з «ЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО ІЮО МО: 2, 5ЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 12, 5ЕО

ІО МО: 16 або 5ЕО ІО МО: 18. (0022) Також в даній заявці описані способи боротьби з шкідниками видів лускокрилих, і боротьби з зараженням рослин шкідниками видів лускокрилих, зокрема сільськогосподарської культури. В одному варіанті реалізації винаходу спосіб включає (а) контактування шкідника з інсектицидно ефективною кількістю пестицидних білків, як зазначено в 5ЕО ІЮО МО: 4, 5ЕО ІЮ

МО: 2, 5ЕО ІО МО: 8, 5ЕО ІЮО МО: 12, 5ЕО ІЮО МО: 16 або 5ЕО ІЮО МО: 18; або (Б) контактування шкідника з інсектицидно ефективною кількістю одного або більше пестицидних білків, що містять амінокислотну послідовність, яка має, щонайменше 85 95 або 90 95, або 95 95, або близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності з ФЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО ІЮО МО: 2, 5ЕО ІЮ

МО: 8, ЗЕО ІЮ МО: 12, БЕО ІО МО: 16 або 5ЕО ІО МО: 18.

І0023| Додатково в даному документі пропонується спосіб виявлення наявності молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти, що містить полінуклеотидний сегмент, який кодує пестицидний білок або його фрагмент, в якому: (а) зазначений пестицидний білок містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО ІЮ МО: 2, БЕО ІО МО: 6, 5ЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО І

МО: 10, 5ЕО ІЮО МО: 12, 5ЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІЮО МО: 16 або 5ЕО ІЮ МО: 18; або (б) зазначений пестицидний білок містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 65 95 або 70 95, або 75 95, або 80 95, або 85 95 або 90 95, або 95 95, або 98 95, або 99 95, або близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності з «ЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО ІЮ МО: 2, 5ЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІЮ

МО: 8, ЗЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІЮ МО: 12, 5БЕО ІО МО: 14, 5ЕО ІО МО: 16 або 5ЕО ІО МО: 18; або (с) зазначений полінуклеотидний сегмент гібридизується з полінуклеотидом, який має нуклеотидну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО І МО: 5, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІЮО МО: 9, 5ЕО ІЮ

МО: 11, 5ЕО ІЮ МО: 13, 5ЕО ІЮ МО: 15 або 5ЕО ІО МО: 17. В одному варіанті реалізації винаходу спосіб включає контактування зразка нуклеїнових кислот з зондом на основі нуклеїнової кислоти, який гібридизується в жорстких умовах гібридизації з геномною ДНК з рослини, що містить полінуклеотидний сегмент, який кодує пестицидний білок або його фрагмент, представлений в даному документі, і не гібридизується в таких умовах гібридизації з геномною ДНК з іншої ізогенної рослини, яка не містить сегмент, при цьому зонд є гомологічним

Ко) або комплементарним до 5ЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІО МО: 5, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО І МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 11, 5ЕО ІО МО: 13, 5ЕО ІЮО МО: 15 або 5ЕО ІО МО: 17, або послідовності, яка кодує пестицидний білок, що містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 65 95, або 70 95, або 75 95, або 80 95, або 85 95, або 90 95, або 95 95, або 98 95, або 99 95, або близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності з «ЕС ІЮ МО: 4, 5ЕО ІЮО МО: 2, 5ЕО ІЮО МО: 6,

ЗЕО ІЮ МО: 8, ЗЕО ІЮ МО: 10, ЗЕО ІЮ МО: 12, 5ЕО ІЮО МО: 14, 5ЕО ІЮ МО: 16 або ЗЕО ІЮ МО: 18.

Спосіб може додатково включати (а) застосування до зразка і зонду жорстких умов гібридизації; і (Б) визначення гібридизації зонда з ДНК зразка. (0024) Також винаходом передбачені способи виявлення наявності пестицидного білка або його фрагмента в зразку, що містить білок, причому вказаний пестицидний білок містить амінокислотну послідовність ЗЕО І МО: 2; або зазначений пестицидний білок містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 65 95, або 70 95, або 75 95, або 80 95, або 85

У, або 90 95, або 95 95, або 98 95, або 99 95, або близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності з «ЕО ІЮ МО: 4, ЗЕО ІЮО МО: 2, 5ЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО І МО: 10, 5ЕО

ІО МО: 12, 5ЕО ІЮО МО: 14, 5ЕБЕО ІЮ МО: 16 або 5ЕО ІО МО: 18. В одному варіанті реалізації винаходу спосіб включає: (а) контактування зразка з імунореактивним антитілом; і (б) виявлення наявності білка. У деяких варіантах реалізації винаходу етап виявлення включає твердофазний імуноферментний аналіз ЕЇГ І5А або вестерн-блот.

КОРОТКИЙ ОПИС ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

(0025 5ЕО ІО МО: 1 є нуклеїновою кислотою, що кодує пестицидний білок ТІСб6757, отриманий з виду Раєпібасійи5 рорШіає 05С02004343. 0026) 5ЕО ІО МО: 2 є амінокислотною послідовністю пестицидного білка ТІС6757.

І0027| ЗЕО ІО МО: З є синтетичною кодуючою послідовністю, яка кодує пестицидний білок

ТІС6757РІ, призначений для експресії в рослинній клітині, причому додатковий кодон аланіну вбудовується відразу після ініціюючого кодону метіоніну. (0028) 5ЕО ІЮ МО: 4 є амінокислотною послідовністю ТІС6757РІ,, яка кодується синтетичною кодуючою послідовністю, призначеною для експресії в рослинній клітині (ЗЕО ІО МО: 3), |і причому додаткова амінокислота аланін вбудовується відразу після ініціюючого метіоніну.

І0029| ЗЕО ІЮО МО: 5 є послідовністю нуклеїнової кислоти, що кодує пестицидний білок

ТІСб6757 Ні5, причому послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує гістидинову мітку,

функціонально пов'язана 5' і знаходиться в одній рамці зчитування з кодуючою послідовністю

ТІС6757. 0030 5ЕО ІО МО: 6 є амінокислотною послідовністю пестицидного білка ТІС6757 Нів.

ІЇ0031| 5ЕО ІО МО: 7 є нуклеїновою кислотою, що кодує пестицидний білок ТІС7472, отриманий з виду Раєпірасійи5 рорШае 0502007648. 00321 5ЕО ІО МО: 8 є амінокислотною послідовністю пестицидного білка ТІС7242.

ІЇ0033| ЗЕО ІЮО МО: 9 є послідовністю нуклеїнової кислоти, що кодує пестицидний білок

ТІС7472 Ні5, причому послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує гістидинову мітку, функціонально пов'язана 3' і знаходиться в одній рамці зчитування з кодуючою послідовністю

ТІС7472. (0034) 5ЕО ІО МО: 10 є амінокислотною послідовністю пестицидного білка ТІС7472 Нів.

ІЇ0035| 5ЕО ІО МО: 11 є послідовністю нуклеїнової кислоти, що кодує пестицидний білок

ТІС7473 з відкритої рамки зчитування в положенні нуклеотидів 1-2391 ї кодон термінації трансляції. (0036 5ЕБО ІЮ МО: 12 є амінокислотною послідовністю пестицидного білка ТІС7243, отриманого з виду Раєепірасійи5 роріййае 0502008493.

ІЇ0037| ЗЕО ІЮО МО: 13 є послідовністю рекомбінантної нуклеїнової кислоти, що кодує пестицидний білок ТІС7473 Ніх, причому послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує гістидинову мітку, функціонально пов'язана З їі знаходиться в одній рамці зчитування з кодуючою послідовністю ТІС7472. (0038) 5ЕО ІО МО: 14 є амінокислотною послідовністю пестицидного білка ТІС7473 Нів. 0039) 5ЕО ІО МО: 15 є синтетичною кодуючою послідовністю, яка кодує пестицидний білок

ТІС7472РІ,, призначений для експресії в рослинній клітині, причому додатковий кодон аланіну вбудовується відразу після ініціюючого кодону метіоніну.

І0040| 5ЕО І МО: 16 є амінокислотною послідовністю ТІС7472РІ, яка кодується синтетичною кодуючою послідовністю, призначеною для експресії в рослинній клітині (ЗЕО ІЮ

МО: 15), і причому додаткова амінокислота аланін вбудовується відразу після ініціюючого метіоніну. 00411) 5ЕО ІО МО: 17 є синтетичною кодуючою послідовністю, яка кодує пестицидний білок

ТІС747ЗРІ, призначений для експресії в рослинній клітині, причому додатковий кодон аланіну вбудовується відразу після ініціюючого кодону метіоніну.

І0042| 5ЕБЕО ІЮО МО: 18 є амінокислотною послідовністю ТІС7473РІ, яка кодується синтетичною кодуючою послідовністю, призначеною для експресії в рослинній клітині (ЗЕО ІЮ

МО: 17), і причому додаткова амінокислота аланін вбудовується відразу після ініціюючого метіоніну.

ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС СУТІ ВИНАХОДУ

І0043| Проблема в області боротьби з сільськогосподарськими шкідниками може бути охарактеризована як потреба в нових білках-токсинах, які ефективні проти цільових шкідників, проявляють токсичність широкого спектра по відношенню до цільових видів шкідників, здатні експресуватися в рослинах, не викликаючи небажаних агрономічних проблем, та забезпечують альтернативний спосіб впливу в порівнянні з існуючими на сьогоднішній день токсинами, які використовують в рослинах в комерційних цілях.

І0044| В даному документі розкриті нові пестицидні білки, прикладами яких є ТІСб6757,

ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 ії ТІС7473РІ, що володіють інгібуючою активністю, зокрема, проти широкого спектра комах-шкідників ряду лускокрилих і, більш конкретно, африканської совки (Зродорієга ехетріа), совки-іпсилон (Адгоїїз ірзбіоп), американської кукурудзяної совки (Неїїсомегра 7еа), совки бавовняної американської (АіІарата агойасеа), капустяної молі (Рішейа хуїЇовіеМПа), метелика стеблового кукурудзяного (О5ігіпіа пибійаїів), кукурудзяної листової совки (Зродоріега Іидірегада), кукурудзяної листової совки, стійкої до

СтуїРа1 (Зродорієега І птидірегда), совки американської (ОУМУВ, Неїїсомегра агтідега), південної совки (5родоріега егідапіа), соєвої совки (Спгузодеїхі5 іпсішдеп5), совки плямистої (Еагіа5 міЧеїПа), вогнівки кукурудзяної південно-західної (Оіаїйгаєа дгапаїозеПа), тютюнової листовійки (Неїїоїпі5 міге5сеп5), тютюнової совки (З5родоріега ІШига, також відомої як тютюновий озимий черв'як), совки бобової західної (Зіпасовіа аїЇБісобіїа) і совки оксамитових бобів (Апіїсагвіа деттаїаї в). 0045) Посилання в цій заявці на ТІС6757, "білок ТІС6757", "білковий токсин ТІС6757", "білок- токсин ТІСб6757", "пестицидний білок ТІСб6757", "токсини, пов'язані з ТІСб6757", "білки-токсини, пов'язані з ТІС6757", ТІС6757РІ,, "білок ТІС6757РІ ", "білковий токсин ТІС6757РІ", "білок-токсин

ТІСб6757РІ", "пестицидний білок ТІС6757РІ", "токсини, пов'язані з ТІС6757РІ", "білки-токсини, 60 пов'язані з ТІС6757РІ", ТІС7472, "білок ТІС7472", "білковий токсин ТІС7472", "білок-токсин

ТІС7472", "пестицидний білок ТІС7472", "токсини, пов'язані з ТІС7472", "білки-токсини, пов'язані з ТІС7472", ТІС7472РІ, "білок ТІС7472РІ", "білковий токсин ТІС7472РІ", "білок-токсин

ТІС7Т472РІ", "пестицидний білок ТІС7472РІ", "токсини, пов'язані з ТІС7472РІ", "білки-токсини, пов'язані з ТІС7472РІ", ТІС7473, "білок ТІС7473", "білковий токсин ТІС7473", "білок-токсин

ТІС7473", "пестицидний білок ТІС7473", "токсини, пов'язані з ТІС7473", "білки-токсини, пов'язані з ТІС7473", ТІС7473РІ, "білок ТІС7473РІ", "білковий токсин ТІС7473РІ", "білок-токсин

ТІС747ЗРІ", "пестицидний білок ТІС747З3РІ", "токсини, пов'язані з ТІС747ЗРІ", "білки-токсини, пов'язані з ТІС747З3РІ" тощо, відноситься до будь-якого нового пестицидного білка або білка, який проявляє інгібуючу активність по відношенню до комах, який містить, складається з, або який є по суті гомологічним, який є подібним, або який отриманий з будь-якої пестицидної білкової або такої що проявляє інгібуючу активність по відношенню до комах білкової послідовності ТІС6757 (ЗЕО ІО МО: 2), ТІС6757РІ (ЗЕО ІО МО: 4), ТІС7472 (ЗЕО ІО МО: 8).

ТІС7472РІ (5ЕО ІЮ МО: 16), ТІС7473 (ЗЕО ІО МО: 12) або ТІС7473РІ (ЗЕО ІЮО МО: 18) і їх пестицидні або такі, що проявляють інгібуючу активність по відношенню до комах сегменти, або їх комбінації, які надають активність проти шкідників ряду лускокрилих, включаючи будь-який білок, що проявляє пестицидну або інгібуючу активність по відношенню до комах, якщо вирівнювання такого білка з ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747З3РІ. призводять до ідентичності амінокислотної послідовності, вираженої в будь-якому відсотку від близько 85 95 до близько 100 95. Білки ТІС6757 та ТІС6757РІ включають як націлену на пластиди, так і не націлену на пластиди форму білків.

І0046| Термін "сегмент" або "фрагмент" використовується в даній заявці для опису безперервних послідовностей амінокислот або нуклеїнових кислот, які коротше ніж повна амінокислотна або нуклеотидна послідовність, що описує білок ТІСб6757, ТІС6757РІ, ТІС7472,

ТІС7Т472РІ, ТІС7473 або ТІС747З3РІ. Сегмент або фрагмент, що проявляє інгібуючу активність відносно комах, також розкрито в даній заявці, якщо вирівнювання такого сегмента або фрагмента з відповідною ділянкою білка ТІС6757, викладеним в 5ЕО ІО МО: 2, білка ТІС6757РІ, викладеним в 5ЕО ІЮО МО: 4, білка ТІС7472, викладеним в 5ЕО ІЮО МО: 8, білка ТІС7472РІ, викладеним в ЗЕО ІЮО МО: 16, білка ТІС7473, викладеним в ЗЕО ІЮО МО: 12 або білка ТІС747ЗРІ, викладеним в 5ЕО ІО МО: 18, призводить до ідентичності амінокислотної послідовності,

Ко) вираженої у будь-якому відсотку від близько 85 до близько 100 відсотків між сегментом або фрагментом та відповідною ділянкою білка ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7Т472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ. 0047) В контексті даної заявки терміни "активна" або "активність", "пестицидна активність" або "пестицидна" або "інсектицидна активність", "інгібітор по відношенню до комах" або "Інсектицидна" відносяться до ефективності токсичної речовини, такої як білок-токсин, в інгібуванні (інгібуванні росту, харчування, плодючості або життєздатності), пригніченні (пригніченні росту, годування, плодючості або життєздатності), боротьбі (боротьбі з зараженням комахами-шкідниками, контролі інтенсивності харчування комах-шкідників на певній культурі, що містить ефективну кількість білка ТІСб6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або

ТІС747ЗРІ), або знищенні (що викликає захворюваність, смертність або зниження плодючості) шкідника. Ці терміни покликані включати результат забезпечення пестицидно ефективної кількості токсичного білка для шкідника, при якій вплив токсичного білка на шкідника призводить до захворюваності, смертності, зниження плодючості або затримки росту. Дані терміни також включають відлякування шкідника від рослини, тканини рослини, частини рослини, насіння, рослинних клітин або від конкретного географічного місця розташування, причому рослина може рости, в результаті забезпечення пестицидно ефективної кількості токсичного білка в або на рослині. Загалом, пестицидна активність відноситься до здатності токсичного білка бути ефективним в інгібуванні росту, розвитку, життєздатності, кормової поведінки, шлюбної поведінки, плодючості або будь-якого зниження, що може бути виміряне, викликаного несприятливими ефектами, в зв'язку з надходженням в раціон комахи даного білка, фрагмента білка, сегмента білка або полінуклеотиду, конкретному цільовому шкіднику, включаючи, але не обмежуючись ними, комах ряду лускокрилих. Токсичний білок може бути вироблений рослиною або може бути застосований до рослини або до навколишнього середовища в тому місці, де знаходиться рослина. Терміни "біоактивність", "ефективний", "дієвий" або їх варіації також є термінами, які взаємозаміно використовуються у даній заявці, для опису впливу білків даного винаходу на цільових комах-шкідників. (0048) Пестицидно ефективна кількість токсичної речовини, забезпечена в раціоні цільового шкідника, проявляє пестицидну активність при контакті токсичної речовини з шкідником.

Токсична речовина може бути пестицидним білком або одною, або більше хімічною речовиною, 60 відомою в даній галузі техніки. Пестицидні або інсектицидні хімічні речовини і пестицидні або інсектицидні білкові агенти можуть бути використані окремо або в поєднанні один з одним.

Хімічні речовини включають, але без обмежень, молекули длРНК, націлені на специфічні гени для супресії в цільовому шкіднику, органохлориди, органофосфати, карбамати, піретроїди, неонікотиноїди та ріаноїди. Пестицидні або інсектицидні білкові агенти включають білкові токсини, викладені в даній заявці, а також інші білкові токсичні речовини, включаючи ті, які націлені на лускокрилих, а також білкові токсини, які використовуються для боротьби з іншими шкідниками рослин, такі як білки Сгу та Суї, доступні в даній галузі техніки для застосування у боротьбі з видами рядів твердокрилих, напівтвердокрилих та рівнокрилих. (00491 Передбачається, що посилання на шкідника, особливо шкідника сільськогосподарської рослини, означає шкідників культурних рослин, особливо тих комах- шкідників ряду лускокрилих, які контролюються класом білків-токсинів ТІСб6757, ТІСб6757РІ,

ТІС7Т472, ТІС7Т472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ.. Однак, посилання на комаху-шкідника може також включати комах-шкідників ряду твердокрилих, напівтвердокрилих та рівнокрилих, а також нематод і грибів за умов, коли токсичні агенти, націлені на цих шкідників, спільно локалізуються або присутні разом з білком ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ, або білком, який має від близько 85 до близько 100 відсотків ідентичності з ТІС6757, ТІС6757РІ,

ТІС7472, ТІС7472РІ,, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ. 00501 Білки ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 та ТІС7473РІ пов'язані спільною функцією і проявляють інсектицидну активність по відношенню до комах-шкідників з видів комах ряду лускокрилих, включаючи імаго, лялечок, личинок і новонароджених. 0051) Комахи ряду лускокрилих включають, але без обмежень, гусениць, совок, п'ядунів і представників підродини Неїйоїпіпае родини Мосіцідає, наприклад, кукурудзяну листову совку (Зродоріега Ігидірегаа), совку помідорну (Зродоріега ехідча), африканську совку (Зродоріевега ехетріа), південну совку (5родорієга егідапіа), совку латукову (Матезвіга сопіїдигага), совку- іпсилон (Адгоїї5 ірзіоп), совку капустяну (Тгіспоріизіа пі), соєву совку (Рзецйдорієивзіа іпсійдепв), совку оксамитових бобів (Апіїсагхіа деттаїгаїї5), совку конюшинну (Нурепа 5сабга), тютюнову листовійку (Неїїоївпів5 міге5сеп5), совку бавовняну (Аадгоїї5 зибіетапеа), совку лугову (Рзецдаїейа ипірипсіа), совку прямокутну (Адгоїї5 огіподопіа); точильників, чохлоносок, метеликів, вогнівок шишкових, гусениць метелика капустянки і піроморфід з родини Ругаїїдає, наприклад, метелика

Зо стеблового кукурудзяного (О5ігіпіа пирііаій5), метелика-вогнівку (Атуеїоїі5 ігап5йейПа), кукурудзяну вогнівку (Статбриз саїїдіпозеПйи5), лучного метелика (Негреїодгатта Іісагвізаїй5), вогнівку соняшникову (Нотоеозота еїесіеПит), точильника зернового кукурудзяного (ЕІазтораїрив

Ідпозеїїи5); листовійок, димчастих листовійок, плодожерок і плодових листовійок з родини

Тогпгісідаеє, наприклад, плодожерку яблуні (Суаїа ротопеїІа), листовійку виноградну (Епдоріга мііеапа), листовійку східну (сгарпоїйа птоїезіа), листовійку соняшнику (Зцйцієїта Пеїйапійпапа); і багатьох інших економічно важливих лускокрилих, наприклад, капустяну міль (Рішеїа хуїоєтейПа), рожевого коробкового хробака (Ресііпорпога до5зуріейа) і шовкопряда непарного (ІГутапігіа аізраг). Інші комахи-шкідники ряду лускокрилих, включають в себе, наприклад, совку бавовняну американську (АіІарата агодіПНасеа), листовійку плодових дерев (АгсПпір5 агдуго5ріїа), листовійку розанова (АгоПпір5 гозапа) та інших представників листовійок, (Спо зирргеззаїї5, вогнівку стеблову азіатську або жовту рисову вогнівку), листовійку рисову (Спарпайосгосіє теаіпаїїв), блішку довговусу (Статривх саїїдіпозеПи5), гусеницю тонконога (Статри»5 іеїеггеїПи5), вогнівку кукурудзяну південно-західну (Оіаїгаєа дгапаїозейПа), очеретяну вогнівку (Оіайгаєа з5асспагаїїв), совку бавовняну єгипетську (Еагіах іпзціапа), совку плямисту (Еагіах міцеПа), совку американську (Неїїсомегра агтідега), американську кукурудзяну совку (Неїїсомегра 7єа, також відому як совка бавовняна), тютюнову листовійку (Неїоїпіє мігезєсеп5), метелика лугового (Негреїодгатта

Іїсагвізаіїі5), совку бобову західну (5ігіасовіа аїібрісовіа), листовійку виноградну (І обевзіа Броїгапа), цитрусову мінуючу міль (РпуїЇоспівіїє сіїгеПа), білявку капустяну (Рієгі5 Бгаззісає), білявку ріпну (Рієгі5 гарає, також відому як репніца), совку бурякову (Зродоріега ехідча), тютюнову совку (ЗБродоріега ІШига, також відому як тютюновий озимий черв'як) і томатну мінуючу міль (Тша арзоїша). 0052) В контексті даної заявки термін "виділена молекула ДНК" або еквівалентний термін або фраза означає, що молекула ДНК є молекулою ДНК, яка присутня окремо або в комбінації з іншими композиціями, але не в її природному середовищі. Наприклад, елементи нуклеїнової кислоти, такі як кодуюча послідовність, інтронна послідовність, нетрансльована лідерна послідовність, промоторна послідовність, термінуюча послідовність транскрипції тощо, які, природно, знаходяться в ДНК генома організму, не рахуються "виділеними" до того часу, поки елемент знаходиться в геномі організму і в тому місці геному, в якому він зустрічається в природі. Проте, кожен з цих елементів і їх частини були б "виділені" в рамках даного опису за бо умови, якщо елемент не знаходиться всередині генома організму і в тому місці в геномі, в якому він зустрічається в природі. Точно так само нуклеотидна послідовність, що кодує інсектицидний білок або будь-який інсектицидний варіант цього білка, що зустрічається в природі, буде виділеною нуклеотидною послідовністю, якщо нуклеотидна послідовність не знаходиться у ДНК бактерії, в якій природним чином знаходиться послідовність, що кодує білок. Синтетична нуклеотидна послідовність, що кодує амінокислотну послідовність природного інсектицидного білка, буде вважатися виділеною для цілей даного опису. Для цілей даного опису будь-яка трансгенна нуклеотидна послідовність, тобто, нуклеотидна послідовність ДНК, вбудована в геном клітин рослини чи бактерії або присутня у позахромосомному векторі, буде вважатися виділеною нуклеотидною послідовністю незалежно від того, чи присутня вона в плазміді або подібній структурі, що використовується для трансформації клітин, в геномі рослини або бактерії, або присутня в тканинах, нащадках, біологічних зразках або товарах, отриманих з рослини або бактерії, у кількостях, що можуть бути виявлені. 0053) Як описано далі в даній заявці, відкрита рамка зчитування (ВРЗ), що кодує ТІСб6757 (ЗЕО ІО МО: 19), була виявлена в ДНК, що отримана зі штаму О5С004343 Раепірасіїйи5 роріїНнає.

Кодуючу послідовність клонували і експресували в мікробних клітинах-господарях для отримання рекомбінантних білків, які використовуються в біологічних аналізах. Методи високопродуктивного скринінгу і методи біоінформатики використовували для скринінгу мікробних послідовностей на предмет наявності генів, що кодують білки, які мають схожість з

ТІС6757. Відкрита рамка зчитування (ВРЗ), що кодує ТІС7472 (5ЕО ІО МО: 7), була виявлена в

ДНК, що отримана зі штаму 05С02007648 Раєпірасниз роріінає. Відкрита рамка зчитування (ВРЗ), що кодує ТІС7473 (5ЕО ІО МО: 11), була виявлена в ДНК, що отримана зі штаму 50008493

Раепірасійи5 роріШає. Біологічний аналіз з використанням білків ТІСб6757, отриманих з мікробіологічних клітин-господарів, продемонстрував активність проти видів ряду лускокрилих совки помідорної (5родоріега ехідца), совки-іпсилон (Адгої5 ірзіюп), американської кукурудзяної совки (Неїїсомегра 7еа), совки бавовняної американської (АІабата агоіасеа), капустяної молі (РішеїІа хуїозієЇІа), метелика стеблового кукурудзяного (О5ігіпіа пибіїаіі5), кукурудзяної листової совки (Зродоріега Ігидірегда), кукурудзяної листової совки, стійкої до СтуїРа!1 (Зродоріега їпидірегда), совки американської (ОМУВ, Неїїсомегра аптідега), південної совки (Зродоріега егідапіа), соєвої совки (СПпгузодеїхіє іпсіцдеп5), совки плямистої (Еагіах5 міЩШейа), вогнівки

Зо кукурудзяної південно-західної (Оіаїгаєа дгапаіозейа), тютюнової листовійки (Неїїоїпів мігезсепв), тютюнової совки (Зродоріега ІШига, також відомої як тютюновий озимий черв'як) та совки оксамитових бобів (Апіїсагзіа деттагйаїї5). Біологічний аналіз з використанням білків ТІС7472 та

ТІС7473, отриманих з мікробіологічних клітин-господарів, продемонстрував активність проти видів ряду лускокрилих американської кукурудзяної совки (Неїїсомегра 7еєа), кукурудзяної листової совки (5родоріега їидірегаа), південної совки (5роаоріега егідапіа), соєвої совки (Спгузодеїхів іпсіцадепв) і вогнівки кукурудзяної південно-західної (Оіаїгаєа дгапаїіозейа). 0054) Для експресії в рослинних клітинах білки ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7Т472РІ,

ТІС7473 і ТІС747З3РІ. можуть експресуватися так, щоб вони знаходилися в цитоплазмі або були націлені на різні органели рослинної клітини. Наприклад, націлювання білка на хлоропласти може призводити до збільшення рівнів експресованого білка в трансгенній рослині, запобігаючи появі ознак інших фенотипів. Націлювання може також призводити до підвищення резистентності до шкідників у трансгенного об'єкта. Націлюючий пептид або транзитний пептид є коротким пептидним ланцюгом (довжиною 3-7 амінокислот), який спрямовує транспортування білка в певну область клітини, включаючи ядро, мітохондрії, ендоплазматичний ретикулум (ЕР), хлоропласти, апопласт, пероксисому та плазматичну мембрану. Деякі націлюючі пептиди відщеплюються від білка під дією сигнальної пептидази після транспортування білків. Для націлювання на хлоропласти, білки містять транзитні пептиди, які містять близько 40-50 амінокислот. Для опису застосування транзитних пептидів хлоропластів, див., патенти США Мо 5,188,642 та 5,728,925. Багато локалізованих на хлоропластах білків експресуються з ядерних генів як попередники та націлені на хлоропласти транзитним пептидом хлоропластів (ТПХ).

Приклади таких виділених білків хлоропластів включають, але без обмежень, такі, що пов'язані з малою субодиницею (МСУ) рибулозо-1,5,-бісфосфаткарбоксилази, фередоксином, фередоксин-оксидоредуктазою, білком І та білком ІІ світлозбирального комлексу, тіоредоксином

Е, 5-енолпіруват -шикімат-З3-фосфатсинтазою (ЕПШФС) та транзитними пептидами, що описані в патенті США Мо 7,193,133. В умовах іп мімо та іп мйго було продемонстровано, що нехлоропластні білки можуть бути націлені на хлоропласти з використанням білкових гібридів з гетерологічним ТПХ і що наявності ТПХ досить для націлювання білка на хлоропласти.

Включення відповідного хлоропластного транзитного пептиду, такого як ЕПШФС ТтТПХ

Агарідорзібх (паійапа (ТПХ2) (див., Кіее і співавт., МоїЇ. Сеп. Сепеї. 210: 437-442, 1987) або бо ЕПШФС ТПХ Решпіа Ппубгіда (ТПХа4) (див., аеМПа-Сіорра і співавт., Ргос. Май. Асай. 5сі. ОБА 83:

6873-6877, 1986) було показано, що вони націлюють гетерологічні послідовності білла ЕПШФС на хлоропласти в трансгенних рослинах (див., патенти США Мо 5,627,061; 5,633,435; та 5,312,910; та ЕР 0218571; ЕР 189707; ЕР 508909; та ЕР 924299). Для націлювання білка-токсину

ТІС6757 або ТІСб6757РІ на хлоропласти, послідовність, що кодує транзитний пептид хлоропластів, розташована 5' у функціональному зв'язку та в одній рамці зчитування до синтетичної кодуючої послідовності, що кодує білок-токсин ТІС6757 або ТІС6757РІ, який був сконструйований для оптимальної експресії в рослинних клітинах.

І0055| Передбачається, що додаткові послідовності білка-токсину, пов'язані з ТІСб757,

ТІС7472 та ТІС7473, можуть бути створені з використанням амінокислотної послідовності

ТІС6757, ТІС7472 або ТІС7473 для створення нових білків з новими властивостями. Білки- токсини ТІС6757, ТІС7472 та ТІС7473 можуть бути вирівняні з метою об'єднання відмінностей на рівні амінокислотної послідовності для нових варіантів амінокислотних послідовностей і внесення відповідних змін у послідовність рекомбінантної нуклеїнової кислоти, яка кодує варіанти.

ІЇ0056| Даний опис додатково передбачає, що поліпшені варіанти класу білка-токсину

ТІС6757 можуть бути сконструйовані іп ріапіа з використанням різних способів генної інженерії, відомих в даній галузі техніки. Такі технології, що використовуються в генній інженерії, включають, але без обмежень, 2ЕМ (нуклеазу з цинковими пальцями), мегануклеази, ТАГЕМ (ефекторні нуклеази, подібні активаторам транскрипції) та системи СКІ5РЕ. (кластерні короткі паліндромні повтори, розділені регулярними проміжками)/Саз (СКІЗРК-асоційовані). Такі способи генної інженерії можуть бути використані для зміни кодуючої послідовності білка- токсину, що трансформована в рослинну клітину, в іншу послідовність, що кодує токсин.

Зокрема, за допомогою цих способів один або більше кодонів в кодуючій послідовності токсину змінюються з метою розробки нової білкової амінокислотної послідовності. В альтернативному варіанті, фрагмент в межах кодуючої послідовності замінюється або видаляється, або додаткові фрагменти ДНК вставляються в кодуючу послідовність для створення нової кодуючої послідовності токсину. Нова кодуюча послідовність може кодувати білок-токсин з новими властивостями, такими як підвищена активність чи збільшений спектр проти комах-шкідників, а також забезпечувати активність проти видів комах-шкідників, які розвинули стійкість проти вихідного білка-токсину. Рослинна клітина, яка містить редаговану послідовність гена токсину, може бути використана, за допомогою способів відомих в даній галузі техніки, для отримання цілих рослин, що експресують новий білок-токсин.

І0057| Також передбачається, що фрагменти білків ТІСб6757, ТІС7472 і ТІС7473 або їх варіанти, можуть бути вкороченими формами з інгібуючою активністю по відношенню до комах, причому одна або більше амінокислот видаляються з М-кінця, С-кінця, середини білка, або їх комбінацій, при цьому фрагменти та варіанти зберігають інгібуючу активність по відношенню до комах. Ці фрагменти можуть бути природного походження або синтетичними варіантами

ТІС6757, ТІС7472 та ТІС7473 або варіантами похідного білка, але повинні зберігати інгібуючу активність по відношенню до комах, щонайменше ТІС6757, ТІС7472 або ТІС7473. 00581 Білки, які нагадують білки ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 та

ТІС7473РІ, можна ідентифікувати і порівнювати один з одним з використанням різних комп'ютерних алгоритмів, відомих в даній галузі техніки (див., таблиці 1 та 2). Ідентичності амінокислотних послідовностей, зазначені в даній заявці, є результатом вирівнювання Сіивіа! М/ з використанням даних параметрів за замовчуванням: Матриця порівняння: рБіозит, штраф на внесення делеції у вирівнювання: 10,0, штраф на продовження делеції: 0,05, гідрофільні делеції: ввімкн., гідрофільні залишки: СРЗМООЕКК, штраф на залишкоспецифічні делеції: ввімкн. (Тпотрзоп, та співавт (1994 рік) Мисієїс Асійд5 Кезеагсп, 22: 4673-4680). Відсоток ідентичності амінокислот далі розраховується у вигляді виразу 100 95 помножених на (ідентичності амінокислот/довжина шуканого білка). Інші алгоритми вирівнювання також доступні в даній галузі техніки і забезпечують результати, аналогічні тим, що отримані з використанням вирівнювання Сіизха! УМ розглянуті в даному документі. 0059) Передбачається, що білок, що проявляє інгібуючу активність по відношенню до видів комах ряду лускокрилих, пов'язаний з ТІС6757, ТІСб6757РІ, ТІС7472, ТІС7Т472РІ, ТІС7473 або

ТІС747ЗРІ,, якщо білок використовується у запиті, наприклад, у вирівнюванні Сіиеа! МУ, і білки даного винаходу, викладені в ЗЕО ІЮ МО: 2, 5ЕО ІЮО МО: 4, 5БЕО І МО: 8, 5БО ІО МО: 16, 5ЕО

І МО: 12 або 5ЕО ІЮО МО: 18, ідентифіковані як співпадіння у такому вирівнюванні, в якому шуканий білок проявляє щонайменше від 85 95 до близько 100 95 амінокислотної ідентичності по довжині шуканого білка, який становить близько 85 905, 86 95, 87 95, 88 905, 89 905, 90 95, 91 95, 92 90, 93 95, 94 95, 95 95, 96 905, 97 905, 98 95, 99 95, 100 95 або будь-який відсоток в цьому діапазоні.

0060 Типові білки ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7Т472РІ, ТІС7473 та ТІС747ЗРІ. були вирівняні один з одним з використанням алгоритму СіивеїаІ МУ. Була створена матриця пар відсотка ідентичності амінокислотних послідовностей для кожного з повнорозмірних білків, як зазначено в таблиці 1.

Таблиця 1

Відображення матриці пар типових білків ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472,

ТІС74А72РІ,, ТІС7473 та ТІС747ЗРІ.

ТІС6757 ТІСб6757РІ. ТІС7472 |1Т1С7472РІ | ТІС7473 |1ІС7473РІ.

Токсин (ЗЕО ІЮ МО: | (ЗЕО ІО МО: | (5ЕО ІЮ МО: (5ЕО І (ЗЕОСО!ІЮО | (ЗЕО І 2 4 8 МО: 16 МО: 12 МО: 18 во ие 251 05 151515.

МО: 2 796 795 794 796 795 вт 0 «и 1 105

МО: 4 796 794 796 795 797 ви ле 051 5. 1 | 1-15

МО: 8 795 794 796 796 795 в и 1 09 1 51 А 11

МО: 16 794 796 796 795 797 ви ще 0 125 151 ві 18

МО: 12 796 795 796 795 796 ви ші г

МО: 18 795 797 795 797 796

Опис таблиці: Вирівнювання з використанням Сіивїа! ММ між (Х) та (У) представлено в матриці пар. Обчислюється відсоток ідентичності амінокислот між усіма парами і подається першим числом у кожному полі. Друге число (в дужках) у кожному полі є кількістю ідентичних амінокислот між парою.

ІЇОО61| На додаток до відсотку ідентичності, ТІСб757, ТІСб6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ,

ТІС7473, ТІС747ЗРІ та спорідненні білки також можуть бути близькі за первинною структурою (консервативні амінокислотні мотиви), довжиною (близько 797 амінокислот) та іншими характеристиками. Характеристики білкових токсинів ТІСб6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІСТА72РІ,

ТІС7473 та ТІС747ЗРІ наведені в таблиці 2.

Таблиця 2

Обрані характеристики білків ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 та

ТІС747ЗРІ.

Кількіс-|,, ьо. 2. . Кількіс-|,,. о. |Кількіс-

Аміно- ть ть Кількіс- ть

Молекулярна | кислот- |Ізоелек-| Заряд |сильно- ть гідро-

Білок маса (в на 0 трична при РНО основ- | СИЛЬНО) фобнух Поляр- кислих : них дальтонах) | довжи- | точка 7,0 них (-) й аміно- й на аміно- / ЗМІНО- | Куслот | 2МІНО- кислот | КИСЛОТ кислот

І0062)| Як описано далі в прикладах даної заявки, синтетична послідовність нуклеїнових кислот, що кодує варіант ТІС6757, ТІСб6757РІ, була сконструйована для застосування в рослинах. Ілюстративна послідовність молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти, що кодує білок ТІС6757РІ, яка була сконструйована для застосування в рослинах, представлена в 5ЕО

ІЮО МО: 3. Білок ТІС6757РІ має додаткову амінокислоту аланін відразу після ініціюючого метіоніну відносно білка ТІС6757. Вважається, що додатковий залишок аланіну, введений в амінокислотну послідовність ТІС6757, покращує експресію білка іп ріапіа. Аналогічним чином, синтетичні послідовності молекул нуклеїнової кислоти, що кодують варіанти ТІС7472 та

ТІС7473, згадуються в даному документі як ТІС7472РІ та ТІС747З3РІ, відповідно, і сконструйовані для застосування в рослинах. Типові синтетичні послідовності молекул нуклеїнової кислоти, які були сконструйовані для застосування в рослинах та які кодують

ТІС7Т472РІ. їі ТІС747ЗРІ,, представлені в ЗЕО ІО МО: 15 та 5ЕО ІЮО МО: 17, відповідно. Обидва білка ТІС7472РІ. та ТІС747З3РІ мають додаткову амінокислоту аланін відразу після ініціюючого метіоніну відносно білків ТІС7472 та ТІС7473.

І0063| Експресійні касети і вектори, що містять рекомбінантну послідовність нуклеїнової кислоти, можуть бути сконструйовані і введені у клітини рослин кукурудзи, сої або бавовнику відповідно до способів та методик трансформації, що відомі в даній галузі техніки. Наприклад, опосередкована Адгобасіегішт трансформація описана в публікаціях патентної заявки США 2009/0138985А1 (соя), 2008/0280361А1 (соя), 2009/0142837А1 (кукурудза), 2008/0282432 (бавовник), 2008/0256667 (бавовник), 2003/0110531 (пшениця), 2001/0042257 А1 (цукровий буряк), патентах США Мо 5,750,871 (канола), 7,026,528 (пшениця) і 6,365,807 (рис), та в Агепсіріа та співавт. (1998) Тгапздепіс Кев5. 7: 213-222 (цукрова тростина) повний зміст яких включено в даний документ за допомогою посилання. Трансформовані клітини можуть бути відтворені у трансформовані рослини, які експресують білки ТІСб757РІ, ТІС7472 та ТІС7473, і демонструють пестицидну активність за допомогою біологічних аналізів, що проводяться в присутності личинок шкідників ряду лускокрилих, з використанням листових дисків, отриманих з трансформованих рослин. Рослини можуть бути отримані з рослинних клітин шляхом регенерації, з насіння, пилку або меристеми, отриманих способами трансформації. Способи трансформації рослин відомі в даній галузі техніки.

І0064| В якості альтернативи традиційним способам трансформації, послідовність ДНК, така як трансгени, експресійна касета(-ти) тощо, може бути вставлена або інтегрована в конкретний сайт або локус в геномі рослини або рослинної клітини через сайт-спрямовану інтеграцію.

Таким чином, конструкція(-ції) рекомбінантної ДНК та молекула(-и) даного опису можуть включати послідовність донорної матриці, що містить, щонайменше, один трансген, експресійну

Зо касету або іншу послідовність ДНК для вставки в геном рослини або рослинної клітини. Така донорна матриця для сайт-спрямованої інтеграції може додатково включати одне або два гомологічних "плеча", що фланкують послідовність вставки (тобто, послідовність, трансген, касету тощо, які повинні бути вставлені в рослинний геном). Конструкція(-ції) рекомбінантної

ДНК даного опису може додатково містити експресійну касету(-ти), що кодує сайт-специфічну нуклеазу та/або будь-який пов'язаний білок(-ки) для здійснення сайт-спрямованої інтеграції.

Така касета(-ти), що експресує нуклеазу, може бути присутня в тій же молекулі або векторі, що й донорна матриця (в цис) або на окремій молекулі або векторі (в транс). У даній галузі техніки відомо декілька способів сайт-спрямованої інтеграції за участю різних білків (або комплексів білків та/"або провідної РНК), які розрізають геномну ДНК для отримання дволанцюгового розриву (ДЛР, О5В-аошбіе 5ігапа Бгеак) або ніка на бажаному геномному сайті або локусі. Якщо коротко, як зрозуміло з рівня техніки, в процесі репарації ДЛР або ніка, утворених ферментом нуклеази, ДНК донорної матриці може інтегруватися в геном в місці ДЛР або ніка. Наявність гомологічного "плеча(-чей)" у донорній матриці може сприяти прийняттю та націлюванню послідовності вставки у геном рослини під час процесу репарації за допомогою гомологічної рекомбінації, незважаючи на те, що вставка може відбуватися за допомогою негомологічного з'єднання кінців (МНЕ) - поп-потоіодоиз епа |оіпіпу). Прикладами сайт-специфічних нуклеаз, що використовуються, є нуклеази з цинковими пальцями, сконструйовані або нативні мегануклеази, ТА Е-ендонуклеази та керовані за допомогою РнНкК-гідів ендонуклеази (наприклад, Са59 або Срії). Для способів використання керованих за допомогою РНК-гідів сайт- специфічних ендонуклеаз (наприклад, Сабз9 або Ср), конструкція(-ції) рекомбінантної ДНК також буде містити послідовність, що кодує одну або більше провідних РНК (дцпіде ЕМА) для направлення нуклеази на бажану ділянку у геномі рослини. 0065) Розглядаються композиції молекул рекомбінантної нуклеїнової кислоти, які кодують

ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 та ТІС747З3РІ.. Наприклад, білки ТІСб6757,

ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, 7ТІС7473 та ТІС7473РІ можуть бути експресовані конструкціями рекомбінантної ДНК, в яких молекула полінуклеотиду з ВРЗ (відкритої рамки зчитування), що кодує білок, функціонально пов'язана з елементами генетичної експресії, такими як промотор і будь-яким іншим регуляторним елементом, необхідним для експресії в системі для якої призначена дана конструкція. Приклади без обмежень включають бо функціональний промотор рослини, функціонально пов'язаний з кодуючою послідовністю білка

ТІС6757РІ,, ТІС7472РІ або ТІС747ЗРІ, для експресії білка в рослинах, або Ві-функціональний промотор, функціонально пов'язаний з кодуючою послідовністю білка ТІС6757, ТІС7472 або

ТІС7473, для експресії білка в ВІ бактерії або інших видах роду Васій5. Інші елементи можуть бути функціонально пов'язані з кодуючою послідовністю білка ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472,

ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС7473РІ, включаючи, але без обмежень, енхансери, інтрони, нетрансльовані лідерні послідовності, кодовані білкові іммобілізаційні мітки (гістидинові мітки), транслокаційні пептиди (тобто, транзитні пептиди пластид, сигнальні пептиди) поліпептидні послідовності для посттрансляційних модифікаційних ферментів, сайти зв'язування рибосом і сайти-мішені РНКІі. Типові рекомбінантні полінуклеотидні молекули, представлені в даному документі, включають, але без обмежень, гетерологічний промотор, функціонально пов'язаний з полінуклеотидом, таким як ЗЕО ІЮ МО: 3, ЗЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО І МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 11, 5ЕО ІЮ

МО: 15 та 5ЕО ІЮО МО: 17, що кодує відповідні поліпептиди або білки, що мають амінокислотну послідовність, викладену у ЗЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО ІЮО МО: 2, 5ЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІЮО МО: 12, 5БЕО ІЮ

МО: 16 та ЗЕО ІО МО: 18. Гетерологічний промотор також може бути функціонально пов'язаний з синтетичними кодуючими послідовностями ДНК, що кодують ТІС6757РІ, ТІС7472РІ або

ТІС747ЗРІ. націлений на пластиди; або ТІС6757РІ, ТІС7472РІ або ТІС747ЗРІ не націлений на пластиди. Кодони молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти, що кодують білки, описані в даному документі, можуть бути замінені синонімічними кодонами (відомі в даній галузі техніки як мовчазні заміни (5епі зирзйшіоп)). 0066) Конструкція рекомбінантної ДНК, що містить послідовність, яка кодує білок ТІСб6757,

ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7Т4А72РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ, може додатково містити область ДНК, яка кодує одну або більше речовин, що володіють інгібуючою активністю по відношенню до комах, що можуть бути сконструйовані для одночасної експресії або коекспресії з послідовністю

ДНК, що кодує білок ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ, білок відмінний від білка ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС74А72РІ,, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ, молекулу

ДлЛРНК, що володіє інгібуючою активністю по відношенню до комах, або допоміжний білок.

Допоміжні білки включають, але без винятків, кофактори, ферменти, партнери по зв'язуванню або інші агенти, які сприяють підвищенню ефективності агента, що володіє інгібуючою активністю по відношенню до комах, наприклад, сприяючи його експресії, впливаючи на його

Зо стабільність в рослинах, оптимізуючи вільну енергію для олігомеризації, збільшуючи його токсичність та збільшуючи спектр його активності. Допоміжний білок може полегшувати захоплення однієї або більше речовин, що володіють інгібуючою активність по відношенню до комах, наприклад, або посилювати токсичну дію токсичної речовини.

І0067| Конструкцію рекомбінантної ДНК можна збирати так, щоб всі білки або молекули

З5 длЛРНК експресувалися з одного промотора, або кожен білок або молекула длРнНК експресувалися під контролем окремого промотора, або в певній їх комбінації. Білки відповідно до даного винаходу можуть бути експресовані з мультигенної системи експресії, в якій один або більше білків ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747З3РІ. експресуються із загального нуклеотидного сегмента, який також містить інші відкриті рамки зчитування і промотори, в залежності від обраного типу системи експресії. Наприклад, бактеріальна мультигенна система експресії може використовувати єдиний промотор для керування експресією багатократнопов'язаних/тандемних відкритих рамок зчитування в межах одного оперону (тобто, поліцистронною експресією). В іншому прикладі мультигенна система експресії рослин може використовувати багатократнонепов'язані або пов'язані експресійні касети, кожна касета експресує інший білок або інший агент, такий як одна або більше молекул ддРНК.

І0068| Рекомбінантні полінуклеотиди або конструкції рекомбінантної ДНК, що містять послідовність, що кодує білок ТІСб6757, ТІСб6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або

ТІС7473РІ, можуть бути доставлені у клітини-господарі за допомогою векторів, наприклад, плазмідою, бакуловірусом, синтетичною хромосомою, віріоном, космідою, фагмідою, фагом або вірусним вектором. Такі вектори можуть бути використані для досягнення стабільної або транзієнтної експресії послідовності, що кодує білок ТІСб6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІСТА72РІ,

ТІС7473 або ТІС747ЗРІ в клітині-господарі, або подальшої експресії поліпептиду, що кодується.

Екзогенний рекомбінантний полінуклеотид або конструкція рекомбінантної ДНК, яка містить послідовність, що кодує білок ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС7473РІ і яка вводиться в клітину-господаря, згадується в даному документі як "трансген".

ІЇ0069| У даному документі представлені трансгенні бактерії, трансгенні клітини рослин, трансгенні рослини і частини трансгенних рослин, які містять рекомбінантний полінуклеотид, який експресує будь-яку одну або більше з послідовностей, що кодують ТІС6757 або білок- токсин спорідненої родини. Термін "бактеріальна клітина" або "бактерія" може включати, але 60 без обмежень, клітину Адгобасіегішт, Васійиб5, ЕвсПегіспіа, ЗаїЇтопейПа, Рвзтеидотопав,

Вгемірасійи5, КіерзіеПа, Егміпіа або РЕПігобішт. Термін "клітина рослини" або "рослина" може включати, але без обмежень, дводольну або однодольну рослину. Термін "клітина рослини" або "рослина" може включати, але без обмежень, клітину або рослину люцерни, банана, ячменю, бобів, броколі, капусти, Вгаззіса, моркви, маніоки, рицини, цвітної капусти, селери, нуту, китайської капусти, цитрусових, кокосової пальми, кави, кукурудзи, конюшини, бавовнику, гарбузових, огірка, Дугласової ялиці, баклажана, евкаліпта, льону, часнику, винограду, хмелю, цибулі порею, салату-латуку, сосни ладанної, проса, дині, горіха, вівса, оливи, цибулі, декоративної рослини, пальми, трави пасовиська, гороху, арахісу, перцю, голубиного гороху, сосни, картоплі, тополі, гарбуза, сосни променистої, редису, ріпаку, рису, кореневищних злаків, жита, американського шафрану, чагарнику, сорго, південної сосни, сої, шпинату, кабачка, полуниці, цукрових буряків, цукрової тростини, соняшнику, солодкої кукурудзи, амбрового дерева, солодкої картоплі, проса прутовидного, чаю, тютюну, томату, тритикале, дернової трави, кавуна і пшениці. У деяких варіантах реалізації винаходу представлені трансгенні рослини та частини трансгенних рослин, які регенерували з трансгенної рослинної клітини. У деяких варіантах реалізації винаходу трансгенні рослини можуть бути отримані з трансгенного насіння шляхом розрізання, зривання, подрібнення або іншого відділення частини від рослини.

В окремих випадках реалізації винаходу частина рослини може бути насінням, коробочкою, листом, квіткою, стеблом, коренем або будь-якою його частиною або невідновлювальною частиною трансгенної частини рослини. Як використовується в даному контексті, частина трансгенної частини рослини, що "не регенерується" є частиною, яка не може бути індукована для утворення цілої рослини або яка не може бути індукована для утворення цілої рослини, здатної до статевого та/або безстатевого розмноження. У деяких варіантах реалізації винаходу частина відібраної частини рослини, що не регенерується, є частиною трансгенного насіння, коробочки, листа, квітки, стебла або кореня.

ІЇ0070О| Наведено способи отримання трансгенних рослин, які містять інгібуючі по відношенню до комах ряду лускокрилих кількості білка ТІСб757, ТІСб6757РІ, ТІС7472,

ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС7473РІ. Такі рослини можуть бути отримані шляхом введення рекомбінантного полінуклеотиду, який кодує будь-який з білків, запропонованих в даній заявці, у рослинній клітині, і вибору рослини, отриманої з вказаної рослинної клітини, яка експресує

Зо інгібуючу по відношенню до комах ряду лускокрилих кількість білків. Рослини можуть бути отримані з рослинних клітин шляхом регенерації, з насіння, пилку або меристеми, отриманих способами трансформації. Способи трансформації рослин відомі в даній галузі техніки. 00711 Оброблені рослинні продукти, причому процесований продукт містить білок ТІСб6757,

ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ, у кількості, що може бути виявленою, сегменти і фрагменти, що володіють інгібіторною активністю по відношенню до комах, або його фрагмент або будь-яку його відмінну частина, також описані в даному документі. У деяких варіантах реалізації винаходу оброблений продукт вибирають з групи, що складається з частин рослини, біомаси рослин, масла, борошна, цукру, корму для тварин, борошна, пластівців, висівок, пуху, шкірки, обробленого насіння і насіння. В окремих випадках реалізації винаходу оброблений продукт є таким, що не регенерується. Рослинний продукт може включати товар або інші комерційні продукти, отримані з трансгенної рослини або частини трансгенних рослин, причому товар або інші продукти можна відстежити шляхом виявлення нуклеотидних сегментів або експресованих РНК або білків, які кодують або містять частини білка ТІС6757, ТІС6757РІ,

ТІС7472, ТІС7472РІ,, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ,, що відрізняються. 00721 Рослини, які експресують білок ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7Т472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ,, можна схрещувати шляхом селекції з трансгенними об'єктами, що експресують інші білки-токсини та/або інші трансгенні ознаки, такі як гени стійкості до гербіцидів, гени, що підвищують врожайність або стійкість до стресу тощо, або ознаки можуть бути об'єднані в одному векторі, так що всі ознаки будуть пов'язані між собою.

Ї0073| Як додатково описано в прикладах, послідовності, що кодують білок ТІСб757,

ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ, і послідовності, які мають значну відсоткову ідентичність з ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ, можуть бути ідентифіковані з використанням способів, що відомі фахівцям в даній галузі техніки, таких як полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), термічна ампліфікація та гібридизація.

Наприклад, білки ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС7473РІ можуть бути використані для отримання антитіл, які специфічно зв'язуються з подібними білками, і можуть бути використані для скринінгу та пошуку інших білків, які тісно пов'язані. 00741 Крім того, нуклеотидні послідовності, що кодують білки-токсини ТІС6757, ТІС6757РІ,

ТІС7Т472, ТІСТА7Т2РІ, ТІС7473 та ТІС747ЗРІ, можуть бути використані у якості зондів і праймерів бо для скринінгу та ідентифікації інших членів класу з використанням способів термоциклічної або ізотермічної ампліфікації та гібридизації. Наприклад, олігонуклеотиди, отримані з послідовності, викладеної в 5БЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІО МО: 15 або 5ЕО ІЮО МО: 17, можуть бути використані для встановлення присутності або відсутності трансгена ТІС6757РІ, ТІС7472РІ або ТІС747ЗРІ. у зразку дезоксирибонуклеїнової кислоти, отриманої з товарного продукту. З огляду на чутливість певних способів виявлення нуклеїнових кислот, які використовують олігонуклеотиди, передбачається, що олігонуклеотиди, отримані з послідовностей, викладених в ЗЕО ІЮО МО: 3,

ЗЕО ІЮО МО: 15 та 5ЕО ІО МО: 17, можуть бути використані для виявлення трансгена ТІС6757РІ,

ТІС7472РІ та ТІС7473РІ у товарних продуктах, отриманих з об'єднаних джерел, де тільки частина товарного продукту отримана з трансгенної рослини, що містить будь-який з трансгенів.

Крім того, визнано, що такі олігонуклеотиди можуть бути використані для введення зміни послідовності нуклеотидів в кожній з ЗЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІЮО МО: 15 та 5ЕО ІО МО: 17. Такі "мутагенезні" олігонуклеотиди є корисними для ідентифікації варіантів амінокислотної послідовності ТІС6757РІ, ТІС7472РІЇ та ТІС7473РІ, що проявляють діапазон |інгібуючої активності по відношенню до комах або різну експресію в клітинах-господарях трансгенної рослини. 0075) Гомологи нуклеотидної послідовності, наприклад, інсектицидні білки, які кодуються нуклеотидними послідовностями, що гібридизуються з кожною або будь-якою з послідовностей, описаних у даній заявці в жорстких умовах гібридизації, також є варіантом реалізації даного винаходу. Винахід також відноситься до способу виявлення першої нуклеотидної послідовності, яка гібридизується з другою нуклеотидною послідовністю, при цьому перша нуклеотидна послідовність (або її зворотна комплементарна послідовність) кодує пестицидний білок або його пестицидний фрагмент і гібридизується з другою нуклеотидною послідовністю. В такому випадку друга нуклеотидна послідовність може бути будь-якою з нуклеотидних послідовностей, представлених як ЗЕО ІЮ МО: 3, ЗЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 11, 5ЕО ІЮ МО: 15 або ЗЕО ІЮ МО: 17 у жорстких умовах гібридизації. Кодуючі нуклеотидні послідовності гібридизуються одна з одною у відповідних умовах гібридизації, таких як жорсткі умови гібридизації, а білки, що кодуються цими нуклеотидними послідовностями, перехресно реагують з антисироваткою до будь-якого з інших білків. Жорсткі умови гібридизації, як визначено в даному документі, включають, щонайменше, гібридизацію при 427 С з подальшими двома

Зо промивками протягом п'яти хвилин кожна при кімнатній температурі з 2 Х 55С, 0,1 до ДСН, з подальшими двома промивками протягом 30 хвилин кожна при 657 С в 0,5 Х 55С, 0,1 95 ДСН.

Промивання за ще більш високих температур є ще більш жорсткими умовами, наприклад, умови гібридизації 68" С з наступним промиванням при 68 "С у 2 х 55С, що містить 0,1 95 ДСН. 0076) Фахівцю в даній галузі техніки буде зрозуміло, що через виродженість генетичного коду багато інших послідовностей здатні кодувати такі подібні білки, і ці послідовності в тій мірі, в якій вони функціонують для експресії пестицидних білків або в штамах Васійи5 або в рослинних клітинах є варіантами реалізації даного винаходу, маючи на увазі, звичайно, що багато таких вироджених кодуючих послідовностей не будуть гібридизуватися в цих умовах з нативними послідовностями Васійш5 або Раепірасійш5 , що кодують ТІСб6757, ТІС7472 або

ТІС7473. Дана заявка розглядає застосування цих та інших способів ідентифікації, відомих фахівцям в даній галузі техніки, для ідентифікації послідовностей, що кодують білок ТІСб757,

ТІС7472 та ТІС7473 і послідовностей, що мають значну відсоткову ідентичність з послідовностями, що кодують білок ТІС6757, ТІС7472 та ТІС7473.

І0077| У цьому описі також розглядається застосування молекулярних методів, відомих в даній галузі техніки, для розробки і клонування комерційно корисних білків, що містять химери білків з пестицидних білків; наприклад, химери можуть бути зібрані з сегментів білків ТІС6757,

ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ,, ТІС7Т473 або ТІС747З3РІ для отримання додаткових корисних варіантів реалізації винаходу, включаючи збірку сегментів ТІСб757, ТІСб6757РІ, ТІС7472,

ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС7473РІ з сегментами різних білків, що відмінні від ТІСб757,

ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ і споріднених білків. Білки ТІС6757,

ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747З3РІ можуть бути піддані вирівнюванню один з одним і з іншими (білками) Васіїйй5, Раепірбасійй5 або іншими пестицидними білками (незалежно від того, чи є вони філогенетично далеко або близько спорідненими), і можуть бути ідентифіковані сегменти кожного такого білка, що можуть бути використані для заміщення між вирівняними білками, в результаті чого утворюються химерні білки. Такі химерні білки можуть бути піддані біологічному аналізу до шкідника і характеризуються наявністю або відсутністю підвищеної біологічної активності або розширеного спектру цільових шкідників у порівнянні з вихідними білками, з яких було отримано кожен такий сегмент у химері. Пестицидна активність поліпептидів може бути додатково спроектована для активності до конкретного шкідника або більш широкого спектра шкідників шляхом заміни доменів або сегментів іншими білками або з використанням методів керованої еволюції, відомих в даній галузі техніки. 0078) Також в даній заявці розкриті способи боротьби з комахами, зокрема, зараженнями культурних рослин комахами ряду лускокрилих з використанням білків ТІС6757, ТІС6757РІ,

ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС7473РІ. Такі способи можуть включати в себе вирощування рослини, що містить інгібуючу по відношенню до комах ряду лускокрилих кількість білка-токсину ТІСб6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС7473РІ. У деяких варіантах реалізації винаходу такі способи можуть додатково включати будь-одне або більше з: () нанесення будь-якої композиції, які містять або кодує білок-токсин ТІС6757, ТІСб6757РІ,

ТІС7Т472, ТІСТ472РІ, ТІС7Т473 або ТІС747ЗРІ,, на рослину або насіння, яке дає початок рослині ; і (ї) трансформацію рослини або клітини рослини, яка дає початок рослині, полінуклеотидом, що кодує білок-токсин ТІСб6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ.

Загалом, передбачається, що білок-токсин ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС7473РІ може бути забезпечений у композиції, в мікроорганізмі, або в трансгенній рослині, для забезпечення інгібуючої активності по відношенню до комах ряду лускокрилих. 0079) У деяких варіантах реалізації винаходу молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти білків-токсинів ТІСб6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС7473РІ| є інсектицидно активним інгредієнтом композиції, яка має інгібуючу активність по відношенні до комах, що отримана культивуванням рекомбінантної клітини Васійш5 або будь-якої іншої рекомбінантної бактеріальної клітини, трансформованої з метою експресії білка-токсину

ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ в умовах, що підходять для експресії білка-токсину ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ.. Така композиція може бути отримана шляхом висушування, ліофілізації, гомогенізації, екстракції, фільтрації, центрифугування, седиментації або концентрування культури таких рекомбінантних клітин, що експресують/продукують вказаний рекомбінантний поліпептид. Такий процес може призвести до утворення екстракту бактеріальних клітин, суспензії клітин, клітинного гомогенату, клітинного лізату, клітинного супернатанта, клітинного фільтрату або осадження клітин Васійи5 або іншого ентомопатогена. Отримавши таким чином виготовлений рекомбінантний поліпептид, створюють композицію, яка містить рекомбінантний поліпептид, може містити бактеріальні

Зо клітини, бактеріальні спори, а також параспоральні тільця і може поставлятися для різних застосувань, включаючи продукти-спреї, що володіють інгібуючою активністю по відношенні до сільськогосподарських комах або препарати кормової біомаси, що володіють інгібуючою активністю по відношенні до комах в кормових біологічних тестах.

І0О80| В одному варіанті реалізації винаходу для зниження ймовірності розвитку резистентності, композиція, що володіє інгібуючою активністю по відношенню до комах, що містить ТІС6757, ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7Т472РІ, ТІС7473 або ТІС7473РІ, може додатково містити, щонайменше, один додатковий поліпептид, який проявляє інгібуючу активність проти тих же видів комах ряду лускокрилих, але який відрізняється від білка-токсину ТІСб757,

ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ,, ТІС7473 або ТІС7473РІ. Можливі додаткові поліпептиди для такої композиції містять білок, що володіє інгібуючою активністю по відношенню до комах, і молекулу длРНК, що володіє інгібуючою активністю по відношенню до комах. Один із прикладів використання таких рибонуклеотидних послідовностей для боротьби з комахами-шкідниками описаний в Вашт та співавт. (публікація патенту США 2006/0021087 АТ). Такий додатковий поліпептид для боротьби зі шкідниками ряду лускокрилих може бути вибраний з групи, що складається з білка, який володіє інгібуючою активністю по відношенню до комах, такого як, без обмежень, СгутїА (патент США Мо 5,880,275), СтутАр, СтутАс, СтутА. 105, Сту1Ає, Сту!В (публікація патенту США Мо 10/525,318), Сту!С (патент США Мо 6,033,874), Сгу10, Стуїба і їх варіантів, СТУТЕ, СтутїЕ, та химер СтутА/Е (патенти США Мо 7,070,982; 6,962,705; та 6,713,063),

Стута, СтуїН, СтгутІ, Сту1у), СтуїК, Стутї,, химери типу Стгу!, такі як, але без обмежень, ТІС836,

ТІС860, ТІС867, ТІС869 та ТІС1100 (публікація міжнародної заявки УУО2016/061391 (А2)),

ТІС2160 (публікація міжнародної заявки УМО2016/061392 (А2)), Сту2А, Стгу2АБ (патент США Мо 7,064,249), СтугАє, Сту4В, Стуб, Сту7, Стув, Сту9, Сту1!5, Сту4ЗА, Сту43В, СтубіАа!, ЕТб6б,

ТІС400, ТІС8О00, ТІС834, ТІС1415, МірзА, МІРЗАБ, МІРЗВ, АХМІ-001, АХМІ-002, АХМІ-030, АХМІ- 035 та АХМІ-045 (публікація патенту США 2013-0117884 Ат), АХМІ-52, АХМІ-58, АХМІ-88, АХМІ- 97, АХМІ-102, АХМІ-112, АХМІ-117, АХМІ-100 (публікація патенту США 2013-0310543 АТ), АХМІ- 115, АХМІ-113, АХМІ-005 (публікація патенту США 2013-0104259 АТ), АХМІ-134 (публікація патенту США 2013-0167264 Ат), АХМІ-150 (публікація патенту США 2010 -0160231 Ат), АХМІ- 184 (публікація патенту США 2010-0004176 Ат), АХМІ-196, АХМІ-204, АХМІ-207, АХМІ-209 (публікація патенту США 2011-0030096 АТ), АХМІ-218, АХМІ-220 (публікація патенту США 2014- 60 0245491 АТ), АХМІ-2217, АХМІ-2227, АХМІ-2237, АХМІ-2247, АХМІ-2257 (публікація патенту США

2014-0196175 АТ), АХМІ-238 (публікація патенту США 2014-0033363 АТ ), АХМІ-270 (публікація патенту США 2014-0223598 АТ), АХМІ-345 (публікація патенту США 2014-0373195 Ат), АХМІ-335 (міжнародна публікація заявки ММО2013/134523 (А2)), 0ІС-3 (публікація патенту США 2013- 0219570 АТ), БІС-5 (публікація патенту США 2010-0317569 АТ), 0ІС-11 (публікація патенту США 2010-0319093 АТ), АПР-1А та його похідні (публікація патенту США 2014-0033361 АТ), АПР-18В та його похідні (публікація патенту США 2014-0033361 АТ), РІР-ТАРІР-1В (публікація патенту США 2014-0007292 АТ), РЗЕЕМЗ3174 (публікація патенту США 2014-0007292 Ат), АЕСРОа-592740 (публікація патенту США 2014-0007292 АТ), Рриї 1063 ( публікація патенту США 2014-0007292

АТ), рІіа-657 (міжнародна публікація заявки УМО2015/195594 А2), Рриї 1064 (публікація патенту

США 2014-0007292 АТ), 145-135 та його похідні (публікація патенту США 2012-0233726 АТ), 055153 та його похідні (публікація патенту США 2012-0192310 АТ), 55154 та його похідні (публікація патенту США 2012-0192310 АТ), 55155 та його похідні (публікація патенту США 2012-0192310 АТ), 5ЕО ІЮО МО: 2 та її похідні, як описано в публікації патенту США 2012-0167259

А1, 5ЕО ІЮО МО: 2 та її похідні, як описано в публікації патенту США 2012-0047606 АТ, 5ЕО І

МО: 2 та її похідні, як описано в публікації патенту США 2011-0154536 АТ, 5ЕО ІЮО МО. 2 та її похідні, як описано в публікації патенту США 2011-0112013 АТ, 5ЕО ІЮО МО: 2 і 4, та їх похідні, як описано в публікації патенту США 2010-0192256 АТ, 5ЕО ІЮО МО: 2 та її похідні, як описано в публікації патенту США 2010-0077507 АТ, ЗЕО ІО МО: 2 та її похідні, як описано в публікації патенту США 2010-0077508 АТ, 5ЕО ІО МО: 2 та її похідні, як описано в публікації патенту США 2009-0313721 АТ, 5ЕО ІО МО: 2 або 4, та їх похідні, як описано в публікації патенту США 2010- 0269221 АТ, 5ЕО ІЮО МО: 2 та її похідні, як описано в публікації патенту США Мо 7,772,465 (В2),

СЕ161 0085 та його похідні, як описано у УМО2014/008054 А2, токсичні до лускокрилих білки та їх похідні, як описано в публікації патентів США 2008-0172762 АТ, 2011-0055968 А1 та 2012- 0117690 А1; 5ЕО ІО МО: 2 та її похідні, як описано в 7510878(82), 5ЕО ІЮО МО: 2 та її похідні, як описано в публікації патенту США Мо 7812129 (В1); тощо.

І0081) В інших варіантах реалізації винаходу така композиція/препарат може додатково містити, щонайменше, один додатковий поліпептид, який проявляє інгібуючу активність по відношенню до комах-шкідників, які не інгібуються іншим білком, що володіє інгібуючою активністю проти комах, даного винаходу, з тим щоб розширити спектр інгібуючої активності по відношенню до комах. Наприклад, для боротьби зі шкідниками ряду напівтвердокрилих, комбінації білків даного винаходу, що проявляють інгібуючу активність по відношенню до комах, можуть бути застосовані з активними по відношенню до ряду напівтвердокрилих білками, такими як ТІС1415 (публікація патенту США 2013-0097735 Ат), ТІС807 (патент США Мо 8609936), ТІС834 (публікація патенту США 2013-0269060 Ат), АХМІ-036 (публікація патенту

США 2010-0137216 АТ) та АХМІ-171 (публікація патенту США 2013-0055469 АТ). Додатково, поліпептид для боротьби зі шкідниками ряду твердокрилих може бути вибраний з групи, що складається з білка, що володіє інгібуючою активністю по відношенню до комах, такого як, без обмежень, СтуЗзВЬ (публікація патенту США Мо 6,501,009), варіанти Сгу1С, варіанти СгузА, СгуЗз,

СтуЗзВ, Сгу34/35, 5307, АХМІ134 (публікація патенту США 2013-0167264 Ат), АХМІ-184 (публікація патенту США 2010-0004176 АТ), АХМІ-205 (публікація патенту США 2014-0298538

АТ), АХМІ-207 (публікація патенту США 2013-0303440 АТ), АХМІ-218, АХМІ-220 (публікація патенту США 20140245491 А1), АХМІ-2217, АХМІ-2237 (публікація патенту США 2014-0196175

АТ), АХМІ-279 (публікація патенту США 2014-0223599 АТ), АХМІ-КІ1 та його варіанти (публікація патенту США 2010-0197592 Ат), ТІС407, ТІС417, ТІС431, ТІС807, ТІС853, ТІС90О1, ТІС1201,

ТІСЗ3131, БІС-10 (публікація патенту США 2010-0319092 АТ), еНІРз (публікація заявки на патент

США Мо 2010/0017914), ІРЗ та його варіанти (публікація патенту США 2012-0210462 АТ) та П-

Нехаюхіп-Нута (публікація заявки на патент США 2014-0366227 АТ).

І0082| Додаткові поліпептиди для боротьби з комахами-шкідниками рядів твердокрилих, лускокрилих і напівтвердокрилих можна знайти на сайті номенклатури токсину Васійи5

ІШигіпдіепзіз , що підтримується Мей СтісКтоге (у всесвітній павутині за адресою

Біпотепсіайиге.іпо). 0083) Здатність комах розвивати стійкість до певних інсектицидів була описана в даній галузі техніки. Одна стратегія керування стійкістю комах полягає в використанні трансгенних культур, які експресують дві різні речовини, що володіють інгібуючою активністю проти комах, які діють через різні механізми дії. Таким чином, будь-які комахи зі стійкістю до однієї з речовин, що володіють інгібуючою активністю проти комах, можуть контролюватися за допомогою іншої речовини, що володіє інгібуючою активністю проти комах. Інша стратегія боротьби зі стійкістю комах полягає в застосуванні рослин, які не захищені від цільових видів комах ряду лускокрилих, з метою забезпечення укриття для таких незахищених рослин. Один конкретний приклад описаний в патенті США Мо 6,551,962, повний зміст якого включено за допомогою посилання.

І0084) Інші варіанти реалізації винаходу, такі як пестицидні хімікати, що застосовуються місцево, які розроблені для боротьби зі шкідниками, що також регулюються білками, описаними в даному документі, для застосування з білками в препаратах для обробки насіння, запилення, точкового поливу або протирання, і які можуть бути нанесені безпосередньо на грунт (поливання грунту), нанесені на рослини, що вирощуються, які експресують білки, описані в даному документі, або приготовані для нанесення на насіння, що містять один або більше трансгенів, що кодують один або більше описаних білків. Такі препарати для застосування при обробці насіння можна наносити за допомогою різних наклейок і липких речовин, відомих в даній галузі техніки. Такі препарати можуть містити пестициди, які є синергічними за способом дії з описаними білками, так що пестициди препарату діють за допомогою іншого способу дії для боротьби з тими ж або схожими шкідниками, які можуть регулюватися описаними білками, або що такі пестициди діють для боротьби зі шкідниками в ширшому діапазоні господарів або видів шкідників рослин, які неефективно регулюються пестицидними білками ТІСб757,

ТІС6757РІ, ТІС7472, ТІС7472РІ, ТІС7473 або ТІС747ЗРІ.

І0085| Вищезгадана композиція/препарат може додатково містити сільськогосподарсько прийнятний носій, такий як приманка, порошок, дуст, таблетки, гранули, спреї, емульсія, колоїдна суспензія, водний розчин, препарати спор/кристалів Васійй5, оброблене насіння, рекомбінантна рослинна клітина/рослинна тканина/насіння/рослина, трансформована для експресії одного або більше білків, чи бактерія, трансформована для експресії одного або більше білків. Залежно від рівня інгібування по відношенню до комах або інсектицидного інгібування, властивого рекомбінантному поліпептиду, і рівня препарату, який повинен застосовуватися в аналізі рослин або раціону, композиція/препарат можуть містити різні масові кількості рекомбінантного поліпептиду, наприклад, від 0,0001 95 до 0,001 95, до 0,01 95, до 1 95, до 99 95 від маси рекомбінантного поліпептиду. (0086) Зважаючи на вищевикладене фахівцям в даній галузі техніки повинно бути зрозуміло, що можуть бути зроблені зміни в конкретних описаних аспектах, і все ж буде отримано подібний або аналогічний результат, не відходячи від суті і об'єму винаходу. Таким чином, конкретні

Зо структурні і функціональні деталі, описані в даному документі, не повинні інтерпретуватися як такі, що обмежують. Слід розуміти, що повне розкриття кожної із зазначених вище публікацій включено в описі даної заявки.

ПРИКЛАДИ

Приклад 1

Виявлення, клонування і експресія ТІС6757

І0087| Послідовності, що кодують три нових пестицидних білки Раепібасіїйй5 рорійає були ідентифіковані, клоновані, підтверджені і протестовані в біологічному аналізі комах. Пестицидні білки ТІС6757, ТІС7472 і ТІС7473, виділені зі штамів 50004343, Ю05С02007648 і Ю05СО008493

Раєпібасійи5 рорійає, відповідно, є новими МірзС-подібними білками. Послідовності, що мають віддалену спорідненість із ТІС6757, ТІС7472 та ТІС7473, є МірзСаг2 (при ідентичності 83,7 95, найближчий відомий родич), МірзАа! (ідентичність 66,75 95) і МірзВ-подібним білком (ідентичність 60,93 95). Відмітна і унікальна ознака ТІС6757, ТІС7472 і ТІС7473 вказує на те, що ці пестицидні білки, ймовірно, мають новий спосіб дії (СД). (0088) Праймери полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) були розроблені для ампліфікації повнорозмірної копії кодуючої області ТІСб6757, ТІС7472 і ТІС7473 із загальної геномної ДНК, виділеної зі штамів 05С004343, Ю05СО0О07648 і 05С02008493 Раепірасіїйи5 роріїйає, відповідно.

ПЛР-амплікона також включали в себе кодони ініціації і термінації трансляції кожної кодуючої послідовності.

ІЇ0089| Кожен з ампліконів клонували з використанням способів, відомих в даній галузі техніки, в два різних експресійних вектора Ві у функціональному зв'язку з експресуючим промотором Ві. Один експресійний вектор Ві містив промотор, який був активним під час споруляції бацили. Інший експресійний вектор містив промотор, що зупиняє спороутворення.

Крім того, кожен з ампліконів клонували у вектор, який використовується для експресії білка в

Е5спегіспіа соїї (Е. соїї). Для виділення експресованих білків Е. соїї, гістидинову мітку функціонально пов'язували з кодуючими послідовностями, що експресуються, для полегшення очищення білка за допомогою колонки. Кодуючі послідовності та їх відповідні послідовності білка, що використовуються для експресії у бактеріях, представлені в таблиці З нижче.

Таблиця З

Послідовності, що кодують токсин і відповідні послідовності білка, що використовуються для експресії в Вгі Е. соїї

ДНК 5ЕО ІО МО: білка ФЕО ІО МО: експресії тіс7т4721111111111171 11111186 то6б757 Ні 7 1777777171717171751111717171171Ї171717171717161111111(1Еш.сої С тіс747а Ні ////1777771717171717179111111111711711111170 1ЕБ.сої

Приклад 2

ТІСб6757, ТІС7472 і ТІС747 демонструють активність по відношенню до представників ряду лускокрилих в біологічному аналізі комах.

І0090| Пестицидні білки ТІСб6757, ТІС7472 і ТІС7473 експресували в Ві і БЕ. соїї та аналізували на токсичність по відношенню до різних видів ряду лускокрилих, твердокрилих та напівтвердокрилих. Препарати кожного токсину з Ві аналізували проти видів ряду лускокрилих совки помідорової (ВАМУ, 5родорієга ехідча), совки-іпсилон (ВСМУ, Адгоїїз ірзіоп), американської кукурудзяної совки (СЕМУ, Неїїсомегра 7еа), совки бавовняної американської (СІ МУ, Аіабата агоаШПасеа), капустяної молі (ОВМ, Рішеїйа хуїозіеПа), метелика стеблового кукурудзяного (ЕСВ,

О5ігіпіа пибійаійє), кукурудзяної листової совки (БАМУ, Зроаоріега Ппидірегаа), кукурудзяної листової совки, стійкої до СтуїРа1 (ЕАМУКІ, Зродорієга Ігидірегаа), совки американської (АУМВ,

Неїїсомегра аптідега), рожевого коробкового хробака (РВУУ, Ресііпорпога доззуріеїІа), південної совки (ЗАМУ, Зроадоріега егідапіа), соєвої совки (ЗВГ, Спгузоавеїхів іпсічдеп5), совки плямистої (ЗВУМ, Еагіах міцеПа), вогнівки кукурудзяної південно-західної (ЗМУСВ, Оіамгаєа дгапаїіозепа), тютюнової листовійки (ТВУУ, Неїоїпі5 мігезсеп5), тютюнової совки (ТОМУ, зродоріега Ійига, також відомої як тютюновий озимий черв'як) і совки оксамитових бобів (МВМУ, Апіісагзіа деттанцаїїв); видів ряду твердокрилих колорадського жука (СРВ, Іеріїпоїагза адесетіїпеага), західного кукурудзяного жука (МУСВ, Оіабгоїїса мігуїега мігдітега); і видів ряду напівтвердокрилих клопа трав'яного (ТРВ, Гудиз Ііпеоїагі5), сліпняка західного матового (МУТР, Гуди5 ПпПезреги5), клопа коричневого смердючого (МВВ, Еизспізіи5 Пегоб5) і зеленого клопа (558, Мел7ага мігіашіа). 00911 Біологічну активність пестицидних білків ТІС6757, ТІС7472 і ТІС7473 оцінювали шляхом виробництва білка в експресійних господарях Е. соїї або Ві. У випадку господаря Ві, штам ВІ, що експресує ТІС6757, ТІС7472 або ТІС7473, вирощували протягом двадцяти чотирьох (24) годин, а потім культуру додавали до раціону комах. Смертність і затримку росту оцінювали шляхом порівняння зростання і розвитку комах на дієті з культурою зі штаму Ві, що експресує

ТІС6757, ТІС7472 або ТІС7473 з комахою на дієті з контрольною культурою. Штами Е. сої, що експресують ТІС6757, ТІС7472 або ТІС7473, оброблялися аналогічним чином і також були

Зо представлені в раціоні комах. Активність біологічного аналізу, що спостерігалася для кожного білка із препарату Ві чи Е. соїї, чи обох препаратів, представлена в таблицях 4 і 5 нижче, при цьому "ж" вказує на активність, а "НТ" вказує, що токсин не аналізувався проти цього конкретного комахи-шкідника.

Таблиця 4

Активність біологічного аналізу ТІС6757, ТІС7472 і ТІС7473 проти комах-шкідників тс6757| ях | я | ях | я | ях | я | | її 5 | | ях | з

Таблиця 5

Активність біологічного аналізу ТІС6757, ТІС7472 і ТІС7473 проти комах-шкідників тсвб757| я | я | я 1 я | 5 Її Її 171 Г17111171711171Гї тіста7та|нт | я | нт (нт Її фнтоЇ | інт (но пс7473|нт | я | нт інт Її нт ЇЇ! інт (нг 0092) Як можна бачити в таблицях 4 і 5 вище, токсин ТІС6757 продемонстрував активність проти багатьох комах-шкідників ряду лускокрилих (ВАМУ, ВСУУ, СЕМУ, СІ ММ, ОВМ, ЕСВ, ГАМУ,

ЕАМУКІ, АМУВ, БАМУ, ВІ, 5ВУМ, 5МУСВ, ТВУМ, ТСУМ ії МВС). Активність спостерігалася для більшості шкідників, перевірених до ТІС7472 і ТІС7473 (СЕМ, ЕАМУ, БАМУ, ВІ, 5УУСВ).

Приклад З

Аналіз активності ТІС6757РІ по відношенню до шкідників ряду лускокрилих у стабільно трансформованих рослинах кукурудзи.

ЇО093| Бінарні вектори для трансформації рослин, що містять трансгенні касети, сконструйовані для експресії як націленого, так і не націленого на пластиди пестицидного білка

ТІС6757РІ, клонували з використанням способів, відомих у даній галузі техніки. Отримані вектори використовувалися для стабільної трансформації рослин кукурудзи. Тканини збирали з трансформантів і використовували в біологічному аналізі комах проти різних комах-шкідників ряду лускокрилих.

І0094| Синтетичні кодуючі послідовності були сконструйовані для застосування в експресії кодованого білка у рослинах, клоновані в бінарний вектор для трансформації рослин та використовувалися для трансформації рослинних клітин кукурудзи. Синтетичні послідовності синтезували відповідно до способів, в цілому описаних в патенті США 5,500,365, уникаючи деяких непідходящих проблемних послідовностей, таких як послідовності поліаденілювання рослин, збагачені АТТТА і А/Ї, при збереженні амінокислотної послідовності нативного білка

Раепірасійш5. Синтетичні кодуючі послідовності кодували білок ТІС6757РІ, який містить додатковий залишок аланіну безпосередньо після ініціюючого метіоніну в порівнянні з білком

ТІС6757. Для білка, націленого на пластиди, синтетичну послідовність, що кодує пестицидний білок ТІС6757РІ, функціонально пов'язували в одній рамці зчитування з послідовністю, що кодує сигнальний пептид, для доставки в хлоропласти. Отримані вектори для трансформації рослин містили першу трансгенну касету для експресії пестицидного білка ТІС6757РІ, яка містить конститутивний промотор, функціонально пов'язаний 5 з лідерною послідовністю, функціонально пов'язаний 5' з інтроном, функціонально пов'язаний 5' з синтетичною кодуючою послідовністю, що кодує націлений або не націлений на пластиди білок ТІС6757РІ,, який, в свою чергу, функціонально пов'язаний 5' з 3і-нетрансльованою областю; і другу трансгенну касету для відбору трансформованих рослинних клітин з використанням гліфосату. Синтетична кодуюча послідовність для пестицидного білка ТІС6757РІ. представлена у вигляді 5ЕО ІЮО МО: З і кодує білок, представлений у вигляді 5ЕО ІЮ МО: 4.

І0095| Рослини кукурудзи трансформували чотирма різними бінарними векторами для трансформації, як описано вище, із застосуванням способу трансформації, опосередкованої

Адгорасіегічшт. Бінарний вектор для трансформації рослин Конструкції 1 і З містить кодуючу послідовність, що кодує націлений на пластиди білок ТІС6757РІ,, тоді як Конструкції 2 і 4 містять кодуючу послідовність, що кодує не націлений на пластиди білок ТІС6Є757РІ. Трансформовані клітини індукували для утворення рослин за допомогою способів, відомих у даній галузі техніки.

Біологічний аналіз із використанням листових дисків рослини виконували за аналогією з тими, які описані в патенті США Мо 8,344,207. Одну личинку, що вилупилася, віком менше одного дня, поміщали на кожен зразок листового диска і годували її протягом приблизно чотирьох днів.

Тканину, отриману з нетрансформованої рослини кукурудзи, використовували в якості негативного контролю. Багато об'єктів трансформації Ко однокопійної вставки для кожного бінарного вектора оцінювали проти совки-іпсилон (ВСМУМ, Аодгоїї5 ірзіп), американської кукурудзяної совки (СЕМУ, Неїїсомегра 7еа), кукурудзяної листової совки (БАМУ, Зродоріега

Тгидірегаа) та вогнівки кукурудзяної південно-західної (ЗУУСВ, Ріаїгаєа дгапаіозег Іа).

Ї0096| Трансформовані рослини Ко, що експресують ТІС6757РІ, були дуже ефективними (визначалися як такі, що мають пошкодження листя менше або рівне 17,5 95 зі стовідсотковою смертністю) проти всіх чотирьох комах-шкідників, як показано в таблиці 6. Висока пенетрантність (позначена літерою "(В)) визначалась як більше п'ятдесяти відсотків аналізованих об'єктів для кожної конструкції, що мають пошкодження листя менше або рівне 17,5 95 зі стовідсотковою смертністю. Низька пенетрантність (позначена літерою "(Н9У) визначалася як менша або рівна п'ятдесяти відсоткам аналізованих об'єктів для кожної конструкції що мають пошкодження листя менше або рівне 17,5 905 зі стовідсотковою смертністю.

Таблиця 6

Кількість об'єктів, що експресують ТІС6757 з пошкодженням листя «17,5 90 зі стовідсотковою смертністю і пенетрантністю

ППД смертністю (пенетрантністю)

Загальна

Конструкція кількість ВС СЕМ ЕАМ/ ЗМ об'єктів

І0097| Вибраним об'єктам Ко, отриманим із Ко Конструкції 1 (націлена на пластиди) і

Конструкції 2 (не націлена на пластиди) було дозволено самозапилюватися, даючи потомство

Е1. Декілька гетерозиготних рослин нащадків Рі з кожного об'єкта Ко були вибрані для біологічного аналізу листового диска і проаналізовані проти совки-іпсилон (ВСМУ, Адгоїї5 ірзіїоп), американської кукурудзяної совки (СЕМУ, Неїїсомегра 7еа), кукурудзяної листової совки (ЕАМУ, зродорієега їгидірегаа) та вогнівки кукурудзяної південно-західної (2УУСВ, Оіаїгаєа дгапаїйозепПа).

У таблиці 7 нижче наведено середній відсоток пошкодження листя і середня смертність для кожної рослини, отриманої від кожної конструкції/об'єкта. Потомство рослин КЕ: оцінювалося з урахуванням об'єкта Ко. Наприклад, "Об'єкт-ї4 1" є першою гетерозиготною рослиною потомства Еї, отриманою з Об'єкта-1ї1, а "Об'єкт-14 2" є першою гетерозиготною рослиною потомства ЕР, отриманою з Об'єкта-1. "М" представляє кількість зразків з кожної рослини, яку використовують в аналізі. Як видно з таблиць 7 і 8, більшість рослин, отриманих із кожного об'єкта Ко, демонстрували не більше п'яти відсотків пошкодження листя і стовідсоткову смертність по відношенню до ВСМУ, СЕММ і РАМУ. Що стосується 5УУСВ, багато рослин, отримані з кожного об'єкта Ко, демонстрували в аналізі менше 10 відсотків пошкодження листя і більше 50 відсотків смертності.

Таблиця 7

Середній відсоток пошкодження листя і смертність серед нащадків Е.:, отриманих із вибраних об'єктів Ко, які експресують ТІС6757РІ. ши я п Хто: ТТ ох ПОН о ТОН

Середній 90 Середня Середній 90 Середня

Конструкція | Об'єкт Рослина| М | пошкодження ред пошкодження ред смертність смертність листя листя

Продовження Таблиці 7 теє (жи 181 вх | ою | вх | ою контроль

Таблиця 8

Середній відсоток пошкодження листя і смертність серед нащадків Е.:, отриманих із вибраних об'єктів Ко, які експресують ТІС6757РІ. нн Я УТ Я ПОН ТУ їх ЗОО вет овен ноти ТС ет екрИТЬ

Конструкція | Об'єкт Рослина| М | пошкодження й пошкодження й пистЯ смертність пистЯ смертність

Конструкція2 (Об'єкта4 1 | 3 | 500 | 10000 | 1250 | 000

Конструкція2 |(Об'єкт4 З | З | 500 | 10000 | 48935 | 000

Конструкція2 |(Об'єкт4 4. | 3 | 500 | 10000 | 500 | 000

Конструкція2 |(Об'єкт4 5 | З | 500 | 10000 | 5500 | 000

Конструкція2 |Об'єк-5 З | З | 500 | 10000 | 835 | 000 теє ее 11 ве | ою | ев | ою контроль

ІЇ0098| Вибраним об'єктам Ко, отриманим із Конструкції З (націлена на пластиди) і

Конструкції 4 (не націлена) було дозволено самозапилюватися, даючи потомство Кі.

Гетерозиготні рослини нащадки КЕ: з кожного об'єкта Ко були обрані для біологічного аналізу листового диска і проаналізовані проти совки бобової західної (М/ВС, 5ігіасовіа аїБісовіа). У таблиці 9 наведено середній відсоток пошкодження листя і середній відсоток смертності рослини нащадка РЕ; із кожного об'єкта Ко та негативний контроль. "М" представляє кількість зразків з кожної рослини, яку використовують в аналізі.

Таблиця 9

Середній відсоток пошкодження листя і середній відсоток смертності серед нащадків Рі, отриманих із вибраних об'єктів Ко, які експресують ТІС6757РІ. пошкодження листя смертність

Продовження Таблиці 9 (Негативнийконтроль./ | 777777 | 4 17714500. |... ЮюЮ0002ЖБк2ж2щ2«ф. 0099) Як можна бачити в таблиці 9 вище, всі, крім однієї рослини потомства Рі, з кожного об'єкта Ко, проаналізованого проти М/УВС, продемонстрували не більше п'яти відсотків пошкодження листя і стовідсоткову смертність.

ІЇО0100| Саджанці, отримані з відібраних гетерозиготних рослин нащадків Кі, трансформованих Конструкцією З (націлена на пластиди) і Конструкцією 4 (не націлена), аналізували на стійкість до совку-іпсилон (ВСМУ, Адгоїі5 ірзіоп). Насіння потомства РЕ.:, а також нетрансформоване насіння (негативний контроль) було посаджене в горщиках. Через вісім днів, коли саджанці з'являлися з грунту, кожна рослина була заражена трьома личинками третього віку ВСМУ. Через 14 днів після зараження рослини були перевірені з метою підрахунку кількості рослин, які були уражені ВСМУ. В аналізі використовували шістдесят вісім рослин нащадків Ні, отриманих із десяти різних об'єктів Ко, трансформованих Конструкцією 3, і десять рослин нащадків Е;:, отриманих із чотирьох різних об'єктів Ко, трансформованих Конструкцією 4. Також в аналізі використовувалися 15 рослин в якості негативного контролю. Після огляду рослин було виявлено, що вісімдесят відсотків негативних контролів були уражені ВСМУМ, тоді як нульовий відсоток рослин нащадків Е:, трансформованих або Конструкцією 3, або Конструкцією 4, продемонстрував ураження рослини.

І00101| Вищенаведене демонструє, що трансформовані рослини кукурудзи, які експресують

ТІС6757РІ, забезпечують чудову стійкість до комах-шкідників ряду лускокрилих, зокрема совки- іпсилон (Адгоїї5 ірзіоп), американської кукурудзяної совки (Неїїсомегра 7еа), кукурудзяної листової совки (5родоріега Шпидірегда), вогнівки кукурудзяної південно-західної (Оіаїгаєа дгапаїіозег|Іа) і совки бобової західної (5ігіасовіа аїБісовіа).

Приклад 4

Аналіз активності ТІС6757РІ по відношенню до шкідників ряду лускокрилих у стабільно трансформованих рослинах сої.

І00102| Бінарні вектори для трансформації рослин, що містять трансгенні касети, сконструйовані для експресії як націленого, так і не націленого на пластиди пестицидного білка

ТІС6757РІ, клонували з використанням способів, відомих у даній галузі техніки. Отримані

Зо вектори використовувалися для стабільної трансформації рослин сої. Тканини збирали з трансформантів і використовували в біологічному аналізі комах проти різних комах-шкідників ряду лускокрилих. 00103) Синтетична кодуюча послідовність, сконструйована для експресії в рослинах, як описано в прикладі З вище, була клонована в бінарні вектори для трансформації рослин, і використана для трансформації клітин рослини сої. Бінарні вектори, що містять націлені і не націлені на пластиди кодуючі послідовності ТІС6757РІ, були сконструйовані з використанням способів, відомих у даній галузі техніки. Отримані вектори для трансформації рослин містили першу трансгенну касету для експресії пестицидного білка ТІС6757РІ, яка містить конститутивний промотор, функціонально пов'язаний 5 з лідерною послідовністю, функціонально пов'язаний 5' із синтетичною кодуючою послідовністю, що кодує націлений або не націлений на пластиди білок ТІС6757РІ, який, в свою чергу, функціонально пов'язаний 5' з

З'-нетрансльованою областю і; другу трансгенну касету для відбору трансформованих рослинних клітин із використанням спектиноміцина. Конструкції 71, З ї 5 містять кодуючу послідовність, яка кодує не націлений пестицидний білок ТІС6757РІ.. Конструкції 2, 4 і 6 містять кодуючу послідовність, яка кодує націлений на пластиди білок ТІС6757РІ.

І00104| Трансформовані клітини сої індукували для утворення рослин за допомогою способів, відомих у даній галузі техніки. Біологічний аналіз із використанням листових дисків рослини виконували за аналогією з тими, які описані в патенті США Мо 8,344,207. Тканину, отриману з нетрансформованої рослини сої, використовували в якості негативного контролю.

Численні об'єкти трансформації від кожного бінарного вектора оцінювалися проти південної совки (ЗАМУ, зродоріега егідапіа), соєвої совки (З5ВІ,, Спгузодеїхіз іпсіцдеп5) та американської кукурудзяної совки (5РМУ, Неїїсомегра 7еа).

Ї00105| Трансформовані рослини сої Ко, що експресують ТІС6757РІ, були дуже ефективними (визначалися як такі, що мають пошкодження листя менше або рівне 20 95) проти

ЗАММ, ЗВІ і ЗРМУУ, як наведено в таблиці 10. Висока пенетрантність (позначена літерою "(В)") визначалася як більше п'ятдесяти відсотків аналізованих об'єктів для кожної конструкції, що мають пошкодження листя менше або рівне 20 95. Низька пенетрантність (позначена літерою "(НУУ) визначалася як менша або рівна п'ятдесяти відсоткам аналізованих об'єктів для кожної конструкції, що мають пошкодження листя менше або рівне 20 95.

Таблиця 10

Кількість об'єктів, що експресують ТІС6757РІ, з пошкодженням листя і пенетрантністю «20 90

ПНЯ ПИ НО віін (пенетрантністю) «20 905. . Загальна кількість

ІЇ00106| Вибраним трансгенним рослинам сої Ко, що експресують білковий токсин

ТІС6757РІ,, отриманий в результаті трансформації Конструкціями 3, 4, 5 і 6, було дозволено самозапилюватися, даючи насіння К1. Насінню К1 дали можливість проростати для отримання рослин КТ. Рослини КІ, гомозиготні за експресійною касетою ТІС6757РІ, були вибрані для біологічного аналізу листового диска проти південної совки (ЗАМУ, Зродоріега егідапіа), соєвої совки (ЗВІ., Спгузодеїхі5 іпсіцадеп5з), американської кукурудзяної совки (ЗРУУ, Неїїсомегра 7еа) та совки оксамитових бобів (УВУМ, Апіїсагзіа деттагцаїйй5). У таблицях 11 і 12 наведено середній відсоток пошкодження листя, показаний кожною комахою для кожної рослини потомства Кі та негативного контролю, сорт АЗ555. У таблицях 11 і 12 також наведена стандартна похибка середнього (СПС) відсотка пошкодження листя, показана кожною комахою для кожного об'єкта, що оцінювавася по відношенню до негативного контролю. "М" представляє кількість зразків з кожної рослини, яку використовують в аналізі. "СПС" є стандартною похибкою середнього відсотка пошкодження.

Коо)

Таблиця 11

Середній відсоток пошкодження листя рослин сої К:, що експресують ТІС6757РІ. 11111111 5АМ11171 11111115 об'єктів | рослин/об'єктів пошкодження пошкодження

КонструсцяЗ| 5 / 6 1|4| 037 |03014| 191 | 072

Конструуця4| 8 | 6 1|4| 031 |025|14| 125 | 034

Конструкця5| 8 / 6 1|4| 002 |002,14| 075 | 035

Конструущіяб| 8 / 6 1|4| 076 |0534|4| 097 | 035

Негативний /|Сорт зонтюль (дз 0060004) ве ля)4| теме | мя

Таблиця 12

Середній відсоток пошкодження листя рослин сої К:, що експресують ТІС6757 РІ. пи п Я НЕТТО БУТ: То

Конструкція тд ; М пошкод- спе М спе об'єктів |лин/об'єк- пошкодження : ження тів ее! 5 |» зр ня зво 15)» рю

І в в || аж | оо 4 оо

Если НОСИ ОСНО НЕО ВОЄН НС НН ВСЯ НСС НС ніс НОСИ ОСНО НЕО НОЕ-ЗНН ОНОС НН ВСЗЯ НСНУ

Негативний |Сорт сте | 8151 51 50 151 ве Гох

Ї00107| Як видно з таблиць 11 і 12, рослини сої Кі, що експресують білок токсину

ТІС6757РІ,, забезпечують чудову стійкість до БАМУ, ЗВІ, ЗРУМ ії МВС. Що стосується 5АМУ, усі чотири об'єкта продемонстрували менше одного (1) відсотка пошкодження листя, в той час як негативний контроль мав приблизно вісімдесят вісім (88) відсотків пошкодження листя. Що стосується ЗВІ, усі чотири (4) об'єкта продемонстрували менше двох (2) відсотків ПошКОДЖенНнЯ листя, в той час як контроль мав приблизно вісімдесят (80) відсотків пошкодження листя. Що стосується ЗРУМ, три з чотирьох об'єктів продемонстрували менше чотирьох (4) відсотків пошкодження листя, в той час як контроль мав приблизно дев'яносто сім (97) відсотків пошкодження листя. Що стосується МВС, три об'єкти продемонстрували менше одного (1) відсотка пошкодження листя, і один об'єкт продемонстрував менше двох (2) відсотків пошкодження листя, тоді як негативний контроль мав близько вісімдесяти дев'яти (89) відсотків пошкодження листя.

І00108| Вищенаведене свідчить про те, що трансформовані рослини сої, які експресують

ТІС6757РІ,, забезпечують чудову стійкість до комах ряду лускокрилих, зокрема південної совки (Зродоріега егідапіа), соєвої совки (Спгузодеїхі5 іпсішдепв), американської кукурудзяної совки (Неїїсомегра 7еа) та совки оксамитових бобів (Апіісагзіа деттанаїїв).

Приклад 5

Аналіз активності ТІС6757РІ по відношенню до шкідників ряду лускокрилих у стабільно трансформованих рослинах бавовнику.

ІЇ00109| Бінарні вектори для трансформації рослин, що містять трансгенні касети, сконструйовані для експресії як націленого, так і не націленого на пластиди пестицидного білка

ТІС6757РІ, клонували з використанням способів, відомих у даній галузі техніки. Отримані вектори використовувалися для стабільної трансформації бавовників. Тканини збирали з трансформантів і використовували в біологічному аналізі комах проти різних комах-шкідників ряду лускокрилих. 00110) Синтетична кодуюча послідовність, сконструйована для експресії в рослинах, як описано в прикладі З вище, була клонована в бінарні вектори для трансформації рослин, і

Зо використана для трансформації клітин рослини бавовнику. Бінарні вектори, що містять націлені і не націлені на пластиди кодуючі послідовності ТІСб757РІ, були сконструйовані з використанням способів, відомих у даній галузі техніки. Отримані вектори для трансформації рослин містили першу трансгенну касету для експресії пестицидного білка ТІС6757РІ, яка містить конститутивний промотор, функціонально пов'язаний 5 з лідерною послідовністю, функціонально пов'язаний 5' із синтетичною кодуючою послідовністю, що кодує націлений або не націлений на пластиди білок ТІС6757РІ, який, в свою чергу, функціонально пов'язаний 5' з

З'-нетрансльованою областю і; другу трансгенну касету для відбору трансформованих рослинних клітин із використанням спектиноміцина. 001111) Трансформовані клітини бавовнику індукували для утворення рослин за допомогою способів, відомих у даній галузі техніки. Біологічний аналіз із використанням листових дисків рослини виконували за аналогією з тими, які описані в патенті США Мо 8,344,207. Тканину,

отриману з нетрансформованої рослини бавовнику, використовували в якості негативного контролю. Численні об'єкти трансформації від кожного бінарного вектора оцінювалися проти бавовняної совки (СВУМ, Неїїсомегра 7еа), кукурудзяної листової совки (РАМУ, 5родоріега їгидірегда), соєвої совки (5ВГІ,, Спгузодаеїхі5 іпсімдеп5) та тютюнової листовійки (ТВМУ, Неїїоїпів мігевсепв).

І00112| Трансформовані рослини бавовнику КО, що експресують ТІС6757РІ, були дуже ефективними (визначалися як такі, що мають пошкодження листя менше або рівне 10 95) проти

СВУМ, РАМУ, ЗВІ і ТВМУ, як наведено в таблиці 13. Висока пенетрантність (позначена літерою "(ВУ) визначалася як більше п'ятдесяти відсотків аналізованих об'єктів для кожної конструкції, що мають пошкодження листя менше або рівне 10 95. Низька пенетрантність (позначена літерою "(Н)") визначалася як менша або рівна п'ятдесяти відсоткам аналізованих об'єктів для кожної конструкції, що мають пошкодження листя менше або рівне 10 95.

Таблиця 13

Кількість об'єктів, що експресують ТІСб6757РІ, з пошкодженням листя «10 95 і пенетрантністю дн об'єктів (пенетрантність)

Приклад 6

Аналіз активності ТІС7472РІ. ї ТІС747ЗРІ. по відношенню до шкідників ряду лускокрилих у стабільно трансформованих рослинах кукурудзи.

ІЇ00113| Бінарні вектори для трансформації рослин, що містять трансгенні касети, сконструйовані для експресії як націленого, так і не націленого на пластиди пестицидного білка

ТІС7472РІ чи ТІС747ЗРІ, клонували з використанням способів, відомих у даній галузі техніки.

Отримані вектори використовували для стабільної трансформації рослин кукурудзи. Тканини збирали з трансформантів і використовували в біологічному аналізі комах проти різних комах- шкідників ряду лускокрилих. 00114) Синтетичні кодуючі послідовності були сконструйовані для застосування в експресії кодованого білка у рослинах, клоновані в бінарний вектор для трансформації рослин та використовувалися для трансформації рослинних клітин кукурудзи. Синтетичні послідовності синтезували відповідно до способів, в цілому описаних у патенті США 5,500,365, уникаючи деяких непідходящих проблемних послідовностей, таких як послідовності поліаденілювання рослин, збагачені АТТТА та А/І, при збереженні амінокислотної послідовності нативного білка

Раєепірасійи5. Синтетичні кодуючі послідовності кодували білок ТІС7472РІ і ТІС747ЗРІ, який містить додатковий залишок аланіну безпосередньо після ініціюючого метіоніну по відношенню до білка ТІС7472 і ТІС7473. Для білка, націленого на пластиди, синтетичну послідовність, що кодує пестицидний білок ТІС7472РІ чи ТІС747З3РІ, функціонально пов'язували в одній рамці зчитування з послідовністю, що кодує сигнальний пептид, для доставки в хлоропласти.

Отримані вектори для трансформації рослин містили першу трансгенну касету для експресії пестицидного білка ТІС7472РІ чи ТІС7473РІ , яка містить конститутивний промотор, функціонально пов'язаний 5' з лідерною послідовністю, функціонально пов'язаний 5' з інтроном, функціонально пов'язаний 5' із синтетичною кодуючою послідовністю, що кодує націлений або не націлений на пластиди білок ТІС7472РІ чи ТІС7473РІ , який, в свою чергу, функціонально пов'язаний 5 з З3-нетрансльованою областю і; другу трансгенну касету для відбору трансформованих рослинних клітин із використанням гліфосату. Синтетична кодуюча послідовність для пестицидного білка ТІС7472РІ. представлена у вигляді зЗЕО ІЮ МО: 15 і кодує білок, представлений у вигляді ЗЕО ІЮ МО: 16. Синтетична кодуюча послідовність для пестицидного білка ТІС7473РІ представлена у вигляді 5ЕБЕО ІЮО МО: 17 і кодує білок, представлений у вигляді 5ЕО ІЮ МО: 18.

00115) Рослини кукурудзи трансформували бінарними векторами для трансформації, як описано вище, із застосуванням способу трансформації, опосередкованої Адгорасієегійт.

Трансформовані клітини індукували для утворення рослин за допомогою способів, відомих у даній галузі техніки. Біологічний аналіз із використанням листових дисків рослини виконували за аналогією 3 тими, які описані в патенті США Мо8,344,207. Тканину, отриману з нетрансформованої рослини кукурудзи, використовували в якості негативного контролю. Велику кількість об'єктів трансформації для кожного бінарного вектора оцінювали проти совки-іпсилон (ВСМУ, Аагоїї5 ірзіоп), американської кукурудзяної совки (СЕМУ, Неїїсомегра 7еа), кукурудзяної листової совки (ЕАМУ, Зродоріега гидірегаа) та вогнівки кукурудзяної південно-західної (5УМСВ,

Оіаїгаєа дгапаїіозеїІа), а також інших комах-шкідників ряду лускокрилих.

Ї00116| Комахи-шкідники спостерігалися на наявність затримки росту та смертність, викликані поїданням листових дисків, що експресують ТІС7472РІ або ТІС747ЗРІ, і порівнювались з комахами, що поїдали листові диски, отримані з нетрансформованих рослин кукурудзи.

Приклад 7

Аналіз активності ТІС6757РІ по відношенню до шкідників ряду лускокрилих у стабільно трансформованих рослинах сої та бавовнику.

ІЇ00117| Бінарні вектори для трансформації рослин, що містять трансгенні касети, сконструйовані для експресії як націленого, так і не націленого на пластиди пестицидного білка

ТІС7472РІ чи ТІС747ЗРІ, клонували з використанням способів, відомих у даній галузі техніки.

Отримані вектори використовувалися для стабільної трансформації рослин сої та бавовнику.

Тканини збирали з трансформантів і використовували в біологічному аналізі комах проти різних комах-шкідників ряду лускокрилих. 00118) Синтетичну кодуючу послідовність, сконструйовану для експресії в рослинах, як описано в прикладі б вище, клонували в бінарні вектори для трансформації рослин, і використовували для трансформації клітин рослини сої або бавовнику. Бінарні вектори, що містять націлені і не націлені на пластиди кодуючі послідовності ТІС7472РІ чи ТІС747ЗРІ, сконструйовані з використанням способів, відомих у даній галузі техніки. Отримані вектори для трансформації рослин містили першу трансгенну касету для експресії пестицидного білка

Зо ТІС7472РІ. чи ТІС747ЗРІ., яка містить конститутивний промотор, функціонально пов'язаний 5 з лідерною послідовністю, функціонально пов'язаний 5' із синтетичною кодуючою послідовністю, що кодує націлений або не націлений на пластиди білок ТІС7472РІ. чи ТІС747ЗРІ, який, в свою чергу, функціонально пов'язаний 5' з 3'-нсетрансльованою областю і; другу трансгенну касету для відбору трансформованих рослинних клітин із використанням спектиноміцина. Конструкції 1,2 і 7 містять клоновану послідовність , яка кодує не націлений пестицидний білок ТІС6757РІ.

Конструкції 3, 4, 5 і 6 містять кодуючу послідовність, яка кодує націлений пестицидний білок

ТІС6757РІ.

І00119| Трансформовані клітини сої або бавовнику індукували для утворення рослин за допомогою способів, відомих у даній галузі техніки. Біологічний аналіз із використанням листових дисків рослини виконували за аналогією з тими, які описані в патенті США Мо 8,344,207. Тканину, отриману з нетрансформованих рослин сої чи бавовнику, використовували в якості негативного контролю. Численні об'єкти трансформації від кожного бінарного вектора оцінювалися проти південної совки (ЗАМУ, зродорієга егідапіа), соєвої совки (ВІ, Спгузодеїхів іпсіцдеп5), американської кукурудзяної совки (ЗРУМ, Неїїсомегра 7еа), кукурудзяної листової совки (БАМУ, Зродоріега Іігидірегда), соєвої совки (5ВІ, СпПпгузоавеїхіз іпсішаеп5), тютюнової листовійки (Неїйоїпів5 мігезсеп5), совки бавовняної (СВМУ, Неїїсомегра 7еа) та совки оксамитових бобів (МВМУМ, Апіісагзіа деттаїаїй5), а також інших комах-шкідників ряду лускокрилих. Комахи- шкідники спостерігалися на наявність затримки росту та смертність, викликані поїданням листових дисків, що експресують ТІС7472РІ або ТІС7473РІ, і порівнювалися з листовими дисками, отриманими з нетрансформованих рослин сої або бавовнику. 00120) Всі композиції, розкриті і заявлені в даному документі, можуть бути зроблені і виконані без зайвого експериментування в світлі даного опису. Хоча композиції даного винаходу були описані з точки зору вищевикладених ілюстративних варіантів реалізації винаходу, фахівцям у даній галузі техніки буде зрозуміло, що варіанти, зміни, модифікації та перебудови можуть бути застосовані до композиції що описана в даному документі, без відступу від концепції, сутності та обсягу даного винаходу. Більш конкретно, буде очевидно, що деякі речовини, які як хімічно, так і фізіологічно спорідненні, можуть бути замінені на речовини, які описані в даному винаході, при цьому будуть досягнуті такі ж або подібні результати. Всі такі аналогічні заміни і модифікації, очевидні фахівцям у даній галузі техніки, вважаються такими,

що не виходять за межі сутності, об'єму і концепції даного винаходу, як визначено в формулі винаходу, що додається. 00121) Всі публікації та опубліковані патентні документи, цитовані в даній специфікації, включені в даний документ за допомогою посилання в тому ж обсязі, як якби кожна окрема публікація або патентна заявка були конкретно і окремо вказані для включення за допомогою посилання.

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«110» Мопзапіо ТесппоЇоду І 1 С

Вомжеп, Юаміа у

Сатетгіпе, Снау А

Тода, Сісне А та, Кезапараїі А

Уеппітег, І шке ї «120» НОВІ БІЛКИ, ЩО ПРОЯВЛЯЮТЬ ІНГІБУЮЧУ АКТИВНІСТЬ ПО ВІДНОШЕННЮ ДО

КОМАХ

-1305» 38-21(61627)-0001 -1505 США 62/210,737 «1515» 2015-08-27 -1605 18 «170» Раїепіп версія 3.5 «2105 1 «2115» 2394 «2125» ДНК «213» Раєпірасіїи5 рорійає «220» «221» інша ознака «222» (1)...(2394)

Зо «223» Послідовність ДНК, отримана зі штаму 05С004343 Раєпірасійи5 роріййає, що кодує

ТІС6757. «4005 1 адаадсада агаатааці їадідіааду дсснассаа дішанда щищшааї 60 ддааша!гд дішоссас Іддсайсаа даїайша асадаці юдаасадаї 120

З5 асаддщдаїс їІаасасіада адаадійа аааааїсаад аднасша даїашесї 180 ддіааасноу аддаданад ддадассіа адщадайца пдсдсадодо ааашоааї 240 асадаанад сіааддаай дсіааааагс дсіаа(дадс адаасаасої апйаасідаї 300 оНааїааса аасісааїдс даїааанся аїдсіссаса ісіаїснос іаааайцнаса 360 ааїацнаа дсдашюцнаї дааасадаа! їаїдсісюа діснсаааї адааїаїсіс 420 адіааасаас їасаддадаї аїсадаїааа снданйна Нааснааа щіасісай 480 аасісіасас ісасадаааї сасіссідсі іІаїсаасдіа Наааїаці адаадааааа 540 шоащдааї іаасіснос їІасадааааа асісідадад саааасаадд їіадсдаадас 600 ацйацосіа аїдаїасісї Ідааааша асідадсіаа садаасіадс даааадщшюіа 660 асаааааа!д асаїддаїад Шсдадни гаїсіссаїа сайссаїда анодай 720 ддсаагаан ташодісд Ппсдудещша аааасадсід садаайоаї їасіааадас 780 дадаїааада сдадіддаад Фадаїадда ааадшаїа «Шеснааї асіаасі 840 дістасаад саааадссії Іісісасша асддсадсс даааацан дадснаїса 900 дагайнодаїй аїасіааїаї іІстаааїсаяд саїсіааа адаааадаа шщіашсої 960 даїаасаїас Нссіасасі діссааіааа Шеїаасс сіаанайції ааааасіаїа 1020 ддадщдага ацйадсааа аднаїша даадсідаас саддатас Шаонода 1080 шоаааца ісааідаїсо аагсссддіа Каааадсоі аїааадсіаа дсіаааасаа 1140 аацаїсаад Ноаїсаїса дісунаїса даданцаійї ашадаїаї сдагааасіа 1200 ішдіссаа аааансіда асаааааїйаї іаіасіаааа дісідасаїй іссідадас 1260 тагюцайца сіаадацас сшдааааа аадсюааса ассіаадаїа даддсааса 1320 дсааацшії адасссаїс їасаддада! айдашаа аїдадаадса аддодааїсі 1380 асішесйне аадсадайцна їашсіата ааїднадю ашдаюайща дшасаїд 1440 ссонадодсо Наїсадсда аасайщо ісіссаана аїадійда айадаади 1500 дасдадаааї сдааааїсії аасшааса щдіаааїсії ашасдада аїашайна 1560 дааїсідаї! Іааіїаааїаа ададасаадс сісайосіс сдссіаащі (Шаїсаді 1620 бо аагаісдіад аааайддаа саїадаадсу даїааїсіад аассащдадді адсаааїаас 1680 аадааюдсаї аїдісдаїгад їасаддсддс агададддаї сіааадсісї ашасісаа 1740 ддадаїдаода аашісаса ашацодда даїааайаа аассаааїас адацатай 1800 айсаагїаїа сіціаааадо аааассідсі ашашаа аааасааааа їасіддайа!ї 1860 асіаїіасду аадаїасааа сддіадіїсї даадааціє ааасіагадс щіааайнаї 1920 аснсадааа сідаїсснсе асааасасаї Надіщша ааацдісааад ддсіаюдаяд 1980 дснда9999 асаасшаї їіайсіадаа діаадосаї йдааасісс адааддісса 2040 даайдаїаа аашйодащда нподайцаді Шодіасіа снасанад адаюдаїйціа 2100 сНасіаїсо аїссаадісд юдадонаї Шадасааї сісцааай адасадсіаї 2160 їсааснаїа ашдадсії пеншесї дданаюод сіаадойаї іаїааааааї 2220 їсссасддад їадіанції Ідаааааціа адісадсаді снсаїасої адаганаді 2280 дааадіша сіассасаїс аааіїааадаа ддашша їадаасіаас дддсдаїаді 2340 сащаадії пддаїсаїї ссддацші ісіаїдаадуд ааааашоа аїаа 2394 -21052 «2115 797 «212» ПРТ «213» Раєпірасіїи5 рорійає «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (1)...(197) «223» Амінокислотна послідовність ТІСб6757, отримана з кодуючої послідовності штаму 05С0С004343 Раєпірасійиз роріїйає, що кодує ТІСб6757. «40052

Ме їде Сн Аснп Ан Ах БЕ бет Узі Ат Ав і еп Ро вес Ріє ЦЕ і 5 Ів 15

Авр'уві Рі Аспіх Пе тут ох Ве А Бів ші Пе 5 Авр 1 2 а5 3

Ре Ахп МЕС Пе Ре Су Ті Азов ТП СУ Ар ен ті Беп йо 35 я 45

УМіевіує явОСвВвсіієнівен ія Ао Пе есте

БІ х5 ща

СН Це ек (Му АЮ ем бек в Це Тв АВ ста СС звів Аа тіж сСівізвАвВізв свіввівві ух Це Ав Ллю хв ів Аза Али

Уаї Ева Кіш хр Ві ахн ні жві ен ха АВ Ів Ази ех Ме: тет що 125 13

Нвів тів Ре Е хе Пе Тв Аза Месіев Бех Авюо Уві Мекі зе 115 1 15

Сів єв ГУ Афіенобеєівенпівів и укіекоеЕ в нівв

Свовів беглеріхзівт Ав Уві НЕ Ав івз Ах Увіїівевів 153 155 150

Ахп ін іє ігр: Це Ті Ро Аз Та ал пе ув 1 155 НЕ їТ5

Уві Ахп'ілі: і ле Ріє Авр С Теп бін тех А ті: іло ТіК ву 150 185 і:

АгтвАЩ і хв Сів СТУ ек бій асв Пе Це АВ захв Ар гг еп ст це М 205 в«пісп іш СтівєціновівицАїз ля зе Узі Пе я Ах Ар

Ме Ар зе вів сії Ре ТІ Ні ТВ Ре Нів Або Узіген Це

СіхАспАсвієц Ре сі Атв Бе А Б ецпіля Між А АВС ів ік ід5 АрОоВЦеі тує Бе Сів звів Сіл Уді з 265 М

Тусег РБетїсців Узііїсп ПЕ Су Бен ст Ав 5 АВР ец 25 ЗО ЗЖа ішмісзім АСУ Атріівціевсітіви за АФ Пе Асо Туг ю до ЗО тіж Авів ем Ах СВ Ні тем Ав ахо Сом і ля захв Уді Рів АтЕ 305 ЗВ 315 32

Авр Азвівієй то Птіспе лЛепізв Не Зеє Аз го Аа ГУ 330 335

УвВіїле їж Пе сих бег Ар Ав Бр ав іх Узі1віги Ст АВ

Б за 350

Сірбо бі тм АБ ев Уві сту Ре Сто Ге Пе Ахи Ар те Це 355 ЗО 585

Рі уУзіїенісх АБ Тіз Авт еніхе Сів хв Суді

Ав ішеое іга берсміве Уч і лівпАрів Ав св ей 385 ха зах кю

Рі Ст гої Азвов Сі сш в Т5т БУ КіБгілв Зе їем Пг ах о 415

Рі Різ Ахробу 13 Узі Це Ті і т8 Ле ПЕ РТ Сірі ух в вет в 25 БЖ;

Азпазпівн Ато Б АБ ТЕ Аз ап Рів із Або бо зе ГЕ іх о 35

Сі Або Пе еріст Ав Сів ля Сів Узі й ес Гж Ре ех Со 450 ях Я

АвВАхр ря Пезе ів Абв Уві се Ар Ахо Або біт Узі я Ме ах о ат Зо

Ріпа су Уа! НЕ Бег Св їм Ре с ех Ро Пе йбп зе Ріє 4К5 а ча

СщівенвсСів Уві Аерозів Елв зеї ле Пе ес Пі ев Пе С 55 500 505 51В

Ж- Гм ігр свв тя іевівецітпибегаАхріви Це Ахп Ех Спв

ІВ 5 535 тТієбе Тест АБ Рез Ріо Ап уві Ре Пе бек Аз ів Уві Сх

З 53 5

Авп тр Аве Це Св Зіз Ар Ав Бен С: Ро Тр Уві Ав Ах хв 545 зу 5І5 що іх Аа гу УдіАврові Ж Си сту ів спос зегі де Ах

КО Зо 35 іемрІЕ ПЕ св зі дер су Сі Ре Бег сів Ре Пе біб Ар г ля

ЗВО 585 5 іеп хво Ап тіж бер гм Ше Пе слів Гр її Уді Гл Спу Б

РюАвВів місні Ахілл хв Ті у їх Ті ет с від 5 ще

Ар Тіж Ази Су Зет чех С СІ Ре С Пи Те Аз Уві Аза ТЯ 52 о щх 5-е

Ті Бер 1ВЕ Або Рід Без 1 Неівц УЛ Ре ух Бе сій

У 50 955 зе ГУК ст А Бнсіх ахо Аза Ре Те Пе Гео стві що Безе 55

АВР ЄВ я Ро скін х Роб ів: Пеїле Ре Або Ахо ігр 65 Б БЕХ

ІвбБе Віж Сі Гіж Гі Туг бе Ягве хр Або Уяівев Пе Пе Ар

Бгто сег агрусу Гук Ре ато Сі зетіеціхзівен рве ж 75 та іх 72

Зег ж Тук Ахпівсш ех Ре Зег РЕе Зек Сік лев іо Ав уд тах 3 Т3х

Зб

І Пе ле АхпЗе Нік спу уві узі ев Веб хв Ха кет схва ке т т

Сіпбегбеї і Уві Авр Пе Бег Сів бег Ре іх ім ТБ Бег Ап уз ЩЕ 765 іх Свіже рі Пе сів їв су лар Бег Ага ів СПУ Р Не

В тях ТЕО

Сіфзег рве Аге Ахо Рі зе Мегілз сі дя Ве ст

ТА ТО 5 «2105 3 «2115 2397 -212» ДНК 213» Штучна «220» «223» Синтетична послідовність ДНК, сконструйована для експресії в рослині, що кодує ТІС6757РІ. з додатковим залишком аланіну, вбудованим в положенні 2 по відношенню до амінокислотної послідовності бактеріального ТІСб6757, отриманого зі штаму 0О502004343 Раеєпібасіїйи5 рорійає, що кодує ТІСб6757. «4005 З адодсіаадс адаасаасаа сісіссдід сдсдсодсісс сдісунсаї сдасдісне 6о0 аасоддсаїсі асддайсодс сассдосаїс саддасаїсі Ісаасаїдаї спсддсасс 120 дасасоддосо ассісасдсі ддаддадої сісаадаасс аддаасідсі стасдасаїс 180

Ісддасаадс Іддаддосаї сіссддсдас сісадсдааа Паїсдсдса адддаассіс 240 аасасддадс дасдааада дсідсісаад аїсоссаасд адсадаасаа соїдсідасяа 300 дасдщдааса асаасдсісаа сдсдаїсаас ісдадсісс асаїсіассі сссааадай 360 асдаасаїдс щіссдасої саїдаадсад аасіаїдссс іІсадссісса даїсдавіас 420 сісісдаадс адсіссадда дзашсоддаї аадсюдасая ісаїсаассі даасддсеію 480 агааасісса сдсісасдда даїсасіссо одссіассадс дсаїсаацдіа сдідаасдаяд 540 ааднсдасду адсіюдасасі ддсдасідад аадасссісс дсдссаадса адддіссдад 600 дасаїсацоу сдаасдасас дсіддадаас Нндасддаді дассдадсі ддссаададс 660 дюасдаада асдасаюда садсійсдад Нсіассісс асасшсса сдасоаюсія 720 аїсддсааса ассіснсду ссддадсодсод сісаадассд садссдадсі дапйасдааяд 780 дасдадаїса адассіссдд діссдадаїс ддаааоддіді асадснссі даїсдіссіс 840 асоддсйнас аадсіааддс діссісасс сідассдссі дссдіааадсі оподассд 900 іссдасаїсяЯ асіасассаа саїссісаас садсассіса асдасдадаа даасдісєш 960 сдддасааса іссісссдас асідадсаас аадіїсадіа асссдаасіа сдісаадасду 1020 айддсадсд асаасіасдс саадонаїс сіададдссду адсссддона сдсссідаїс 1080 дддісдада ісаїсаасда ссдсаїсссо діссісааду сдіасааддс саадсісаад 1140 садаасіасс аадіддасса ссададссіс адсдада!со щіассідда саїсдасаад 1200 поунсідсс сдаадаасіс ддадсадааяд їайасасса ададссюдас сісссддас 1260 додсіасона пасааадаї сасуйсдад аадаадсіса асаассіссуд Пасдаддса 1320 асюссаасі ісїасдассс діссассддс дасайдасі Ідаасдадаа дсаадісдад 1380

Іїссасоднсс Іссаддссда сіасаїсадс аїсаасдіса дсдасдасда сддсдідіас 1440 ашдссдсісд дадісаїсад сдадассійс сісадсссда ісаасісдії сдадсіддад 1500 дюдасдада адіссаадаї ісісасссід ассідсаада дсіассіссд ддааїассіс 1560 сіддададсо ассісаїсаа їааддадасі Ісдсісаїад сіссдсссаа саїсіїсаїс 1620

Іссаасаїся іІсдадаасід даасаїсдад дссдасаасс ддадссодід даїддсааас 1680 аасаадаасд ссіасдідда сіссассодс дддаїсдадо даадсааддс ссіднсасс 1740 саддасдасд додасдйсіс дсадіїсаїс ддсдасаадс ісаадсссаа сасддасіас 1800 аїсаїссаді асассдісаа дддсаадсса дсодаїсіасс Ісаадаасаа даасассоддао 1860 їТасассаюі асдаддасас даасдасадс адсдаддаді Іссадассаї сдсддісаас 1920

Тасассіссу адассодаїсс сісссадасс сассндісі Ісаадіссса дадсддсіас 1980 дадасдіддо дсдасаасії саїсаїссід дадідсаадд сісдадас Ісссдаддас 2040 ссддадсена ісааднсда дасіддан Ісдашодаоса ссассіасаї ссдддасдас 2100 дюсіаасса ісдасссадїіс дсдсдодсдас їасіссдсс ааадссісаа дсюдасісд 2160

Тасіссасдї асаассіаїс Шсадснс Ісдадссії дддсдаадаї данаїсаад 2220 аасісдсасд дсдідаїссі дісдадаад дісісссадс адісдісаїа сдіддасаїс 2280 адсдацдіссі Ісассассас садсаасаад дадддснсі Ісаїсдадсі дассддсдас 2340

Ісдсдсдоса дайсоддсіс сіссдсдас Неїссада аддадаааїйї сдадща 2397 «2105 4 «2115 798 «212» ПРТ 213» Штучна «220» «223» Амінокислотна послідовність ТІС6757РІ,, яка кодується синтетичною

Зо послідовністю ДНК, при цьому додатковий залишок аланіну вбудований у положенні 2 по відношенню до бактеріальної амінокислотної послідовності ТІС6757 «4005» 4

Ме Авіх Св АЗпаАвн Аа Ре ет Уві Ат Аз Бер Рто Бех Ріє і З І 15 ів Авр Ууді Рів Ах сту Пе Буг их Ре іа тіж Б ЦЕ Сів А кр вх 5 30

Те Рі Аза Ме Пе Ре Сх Ті Ав ТіК Сп Ахр Бею См Бен

БІ З

СпрУял іевів Аліна св Бепівв Тут Ар Пе хе іх іл Ге хх За що

СС ее сі аріви зе спи ее А всю еуУ Акп ет

Ахаіш Сшіви іі Сі іев ім і зе Пе Ді Ав би сив Аеп що 25 депУ іі Ах УЗ АхвАхпі теп Асі АвВіІв Аюв зе Ме

Не 5 І

Іечнвів ТУ їсцвтої їв і Аза Мегістібег Ар Уві Меї 10 ї2а ів Сів яв Бе ад Тецоет теп о Це С я Бемег в сив 138 135 140

Тецбйв с Ше бе Арі ів кв Усі Пе Ав вен Ав УВІ Газ 145 і50 155 150 ів Абпзег іч лев їм спе Гі Ра Аза Гук ія Аге Пед 155 тя 175

ТУ УгіАза С і лв РЕ Ар ев ж Тен Аа тіж 5 1 ТІ

150 185 В:

ТевАкгв Ав ле св лу Бек Ахо Ме Пе Ав Ах А вин і ех сиБАхпіец іш сіні ошівьАнв іл ке уні ік іує Ав

Аза МегАЗо ет Вів Спа Рі тугі п Би5 Ті РІ Нв Ав УщЕі и 235 230 дах ща ів сіу а5пАспісв Ве Сі Ага ет Аз Б езі ле Пн віх АБ бі а 350 255 іеці: т іх Ав СІ Це ї хо іч бег Сн ет С ів ох г Ух з 3655 З вія БегРБеіенів Увіїгц Пе Єзв і ек св АБ ля Аз Ре дм ат ЗБ 285 іп іміс)ій АВС відвів ецвсіх Без Ахр Пе Дар

ТУ Аза Це із Аха св Нвівп Ап Аз і Ав УВІ рт

Зх 319 315 за тв Ао а5вівіснрто їйгісцое ахвпіля РЕ бек Ахв Ро Аа 335 35 335

Ту УП Тл» Тін Пе Сіу Бег Авр Ава Тут АВ іл Узі Ше Тез Сію за їх Б

Ав Св рю Сіу Ту Аза Тен уві СЇу Ве Сів Пе Це Акт: дер Ате

Те Ро Уві тевіде Ав Тугідв Ав ідвтевізв ін Ав Ту СЮ

БУ БУ БАТЕ

УТА Нв Спи бетівец ет Пе Уві Гм т евАсвів Ав 385 390 395 ЗО ігпБіесСтв Роз ід Аве Сі ге г тіж Бу бек Тед за5 но 415

Іі Ріє Ро Ахр бік Ту Уа! Пе її гля Пе Бі Рів Сів і ук і ле

ЕІ 435 5 ієвАзвАзвісн Ат ТУ Св АВ ТВА Ахв Ре Тук ар Рго Зеї

Ті Сх Ав Пе авт ем Ап ст іл св Уа Спи Бех Пі Рівїгц я ях 45 св АБАо Гя Пе бе ів Ап удібе Азов Аза Ахр Су УдЕ ГУ

Я а БО керівну УдіПе зех сій ПЕ Ре еп ет Ро Це Аба Бе 5 о 5

Рі Сівієнсв Уа! Арі ле зе ув Це ев ті ем ТКС хв.

Зк як зів іх зе гжшівваАссщ хівців сі оег Ав ец Не Азвіде 515 53 525 555 З'й 55

АВівп Ріє тіж іп Ар СТУ с Ре бег Сів Не Пе бі Ахо

ЗВО 5855 590 ізівецізв Рі» Аби 1 аАср г Пе бебі їз біж Узії хв сх що 5 іхеРю АВів тм ісепіх звів Ак Тіж сих Гує іх Мер що ціх 5

СвЕАєо ТВ Аспізіх бе Бе соте С бін Пе Ах Уді Аа 525 що що що ту Ті зе би ГП Ахо Ро зе Сів ж Нвісц Уві Тл Зег що Б 455

Себе сі ГУ осі А БпріуУ Ав Ах Ре Це Це Бек ста Сх що 565 о їує АВ РТЄ з 1 Ріо Со СНУ го о Тези Це Гуз Ре Ар Ахо 075 5 Б

Тер Пе Зех Ре іу Тк тіж туї Пе Ате або Аво Увііен бр ІТ що ах КЕН

Аврбго зе ге Сі У ГУК Ріє Аге Спа бетіеціхв те Азов БЕГ тах ТЗ 5 ЕК. тя ще 15 Ту Аспівц зех Ре ет Ре ст СПУ Без пр Ав ле а т т

Уві ПеПеїзч Ах вії Нв у Ум іегввРіе Сі уві Бег

Я КЕ 750 сСірсСвоерзегі Уві Ахр Це зе стер вРівю ТБ бі Ті беї

Т5а де 765

Аввілв сх Сіу Рів Рів Пе сло еп ін Сіу Ар озеї Ага Сбж Се

Не ТЕ то

Ріє іт зе Рі Аго Абр Рі зе Меріл сві ля Ре СТ 785 У 7о5 «21055 «2115 2454 «212» ДНК «213» Штучна «220» «223» Рекомбінантна послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує білок ТІС6757, мічений гістидином. «4005» 5 аюдсаїсасс аїсассаїса ссаїсассаї сасддіассд адассдіссд сіссааїсс 60 адаадсада агааіїааш їадідіааду дссцассаа дішанда ншааї 120 ддааша!гд дішоссас Іддсайсаа даїайша асадацші юдаасада! 180 асаддщдаїс їІаасасіада адаадша аааааїсаад аднасща ідаїашсї 240 ддіааасну аддаданад ддадассіа адщадайца пдсдсадодо ааашодааї 300 асадаанад сіааддаай дсіааааагс дсіаа(дадс адаасаасої апйаасідаї 360 оНааїааса аасісааїдс даїааанся аїдсіссаса ісіаїснос іаааайцаса 420 ааїацнаа дсдашюцнаї дааасадаа! їаїдсісіда діснсаааї адааїа!сіс 480 адіааасаас їасаддадаї аіїсадаїааа сндаюцна Нааснааа ідіасісаїй!ї 540 аасісіасас ісасадаааї сасіссідсі іІаїсаасдіа Наааїаці агаадааааа 600 шоащдааї іаасіснос їІасадааааа асісідадад саааасаадо їіадсдаадас 660 ацйацосіа аїдаїасісї Ідааааша асідадсіаа садаасіадс даааадщшіа 720 асаааааа!д асаддаїтад Шсдадни їаїсіссаїа сайссаїда цаноаї! 780 ддсаагаан ташодісд Ппсдудещша аааасадсід садаайоаї їасіааадас 840 дадаїааада сдадіддаад дадаїадда ааадша!ца оШсейнааї юіасіаасі 900 дістасаад саааадссії Іісісасша асддсадсс даааацан дадснаїса 960 даайнодаїй аїасіааїаї іІстаааїсаяд саїсіаааю адаааадаа шіашсадї 1020 даїаасаїас Нссіасасі діссааіааа Шеїаасс сіаанайції ааааасіаїа 1080 ддадщдага ацйа(дсааа аднашща даадсюдаас саддаїацс Шаднода 1140 шоаааца ісааідаїсо ааісссддіа Наааадсої аїааадсіаа дсіаааасаа 1200 аацаїсаад Ноаїсаїса дісунаїса даданцаійї ашадаїаї сдагааасіа 1260 ішдіссаа аааансіда асаааааїйаї іаіасіаааа дісідасаїй іссідадас 1320 тагюцайца сіаадацас сшдааааа аадсюдааса ассіаадаїа даддсааса 1380 дсааацшії адасссаїс їасаддада! айдашаа аідадаадса адіддааїсі 1440 асішесйне аадсадайцна їашсіата ааїднадю ашдаюайца дшасаїд 1500 ссонадодсо Наїсадсда аасацйщо ісіссааца аїаданнода апйадаадії 1560 дасдадаааї сдааааїсії аасшааса щдіаааїсії ашасдада аїашана 1620 дааїсідаї! Іааіїаааїаа ададасаадс сісайосіс сдссіаащі (Шаїсаді 1680 аагаісдіад аааайддаа саїадаадсу даїааїсіад аассащдадді адсаааїаас 1740 аадааюсаї аїдісдаїгад їасаддсоддс агададдодаї сіааадсісї ашасісаа 1800

Зо ддадаїщдаода аашісаса ашанодда даїааанаа аассаааїас адайцатан 1860 айсаагїаїа сіціаааадо аааассідсі ашашаа аааасааааа їасіддайаї 1920 асіаїіасду аадаїасааа сддіадіїсї даадааціє ааасіаїадс щіааанаї 1980 аснсадааа сідаїсснсе асааасасаї Надіщша ааацдісааад ддсіадад 2040 дснда9999 асаасшаї їіайсіадаа діаадосаї йдааасісс адааддісса 2100 даайдаїаа аашйодащда нподайцаді Шодіасіа снасанад адаюдаїйціа 2160 сНасіаїсод аїссаадісуд юдадойнаї Шадасааї сіснаааїй! адасадсіаї 2220 їсааснаїа ашдадсії Ясне дданаюдо сіаадонаї іаїааааааї 2280 їсссасддад їадіанції Іаааааціа адісадсаді снсаїасої адаганаді 2340 дааадіша сіассасаїс аааїааадаа ддашша їадаасіаас ддасодаїаді 2400 сащаадії пддаїсаіїї ссддацші ісіаїдаадуд ааааашоа аїаа 2454 «210556 «2115» 817 «212» ПРТ «213» Штучна «220» «223» Амінокислотна послідовність міченого гістидином білка ТІС6757. «4005 6

Мене пе НеНенНе пе НЕ НЕ Нв НЕ С СВТ Уді 1 5 13 І5

Аг Не сів зе Ме їле ів ев Ав Ах Не хе УМ Атс Авц

Зо 5 КО

Ргто ех Ре Пе Азо УдіРтє Ан У ТІВ г я Сі Вів АВОПЕ Сх 35 в 45

Те сів Ава Пе Ре Ав Ме Це Ре Су ІТіж Або Гі Ж Авріви

ЗВ 55 ГАсЕ

Тшжігвссю Увііецілде хв сві іенівн іч Ар ет 55 7 75 що

Сікідеіенствьсіх ее сії Ахрівц вет се Пе Дів СВ 55 5 5

Су аопіспазв р Сіна ївіч Сювіевівціл ів АВ АБ

Е не Не:

СповаАхвАхп Уа ів ік Ахр уві аза азвілвіво Аха із Не 115 125 125 аАкпсзе Ме іец Не ТУ ес вт ле Пе їі Ап ті ви че 136 135 1

Аво уві Мет Сів Ах т Аізівги Бе ісп Ше сь і ев іх 150 155 І150 зегідв ст ец сів сів БегАввіх ев Аєв Узі Ше ев Ге 155 1ї7о 175

АхпУМі еле йспоеі тії і с Пе їж Ро АВ г св

ЕВ ї85 Не

Ати Пе іл Буг Узі Аквізщ іле Рів Ар ощіев м ен А їх ТЕ 1 ве 295

Стіл їі іврбАти ді ілдх св су зе Сі Ав Вів АБ Ахв.

ЗІв ЗІБ 220

Ахо ші епсСстаАхнпіви Пе Сп беч Пи сіієц Аз тя бек Уді

Ма: 235 315 юю тіж 15 Ав Ахр Мет захо ех Ріе стрів я еп Ні Ті Ре Не зх 358 55

Ав уві іні (іт Аво Азвівн бе СУ Аги Зе Аієтів ТБЕ 2 де зт

АвАвВоОшівца не їх уз Ахв ще ле З бебСіу хе св

ЩО жа івОВієс міч Зе Рів сві Удіі ев біб Су івец Св А іс АВРІВІіеВіІмівевінАВСт Атсіхівцієевост ів те хх що 315 3

Ахр Педро Гері Ахв ів Геп Аз ОВ Нв і ев Ав ав Сі Ух 350 335

Аква Узі Ріж Ати Ар Аза Неїепрто Тгіви ет аАхві хуя Ре бе за 345 35

АхпрР ах я УЛ ле їі Те Сі бе Авто Ахп ГУ АВ ув Уві 155 35 ба

ТвігиставсмВіч су и АБівн УВІ СТУ Ре С ТЕ Пе

ВО 375 350

АкпАхо Алтаї чо Удіієзіхв Ай Гуілв Ав ев іяя 355 Бе БО щю асп ік сів Уді Ах Ні сі зеріви бер Це Ухі Гі ев Ахр зах но 15 ів Арі теп Ре сту Рез в ак ек ії 1 ЗЕ ПК

ЕІ 435 Ж ілеверіец ії Ре Ріо Ахо Сіу ГУК Уві Пе їн і х5 Це Те Ве

СвісіхівгзАзвАсвіенп Аг БЖ СОВА тн Аз Аа Ве тя щ-о а 4

Аве Рго Зег Тв сі Яр Пе хр еп ав с лев Сів Ул Бех нЕеа о 475 45о тіж Рівіевісв АВ Ар Бу Пе бех Ше Ах Удібег ар Авто Ар

БІО ве

С УВІ Ти Ме Ро сенсу Ві ТЕ Берг их Рів! еп бег а во 505 що і Ап зе Ре зві юі Узі дер с іле ек ле Пе еп ж 5І5 ха 525 ієвіМмбзвільни мій Ага сі Гу іеспігц ій зе Асі ів аАхпілхвіс ім сетіец Не із Різ Різ ап Уві рі Пе Зе

Зах ка ЗхУ о

Аве уві Сів Ап по Ав Це Св Аз Аво Аза ем Сью 1гр

Зах ЗА ЗТ

УЧ АН Ав АзпіАхп А ту Уві Ар зех Ті Сік у ПЕ СНИ

ЗВО 5 590

Сх зе Авіецп Ре ТК Св Сх Ахр су СПИ Рів ек і Ре що 5 ів бі Аввіхзіеціхв Р Аза ім заяв Гу Пе бе Сів ГУК ТВ що іх 5

Уілв іі ле Ре Азвів Бе іецпіхв Ані йав ж СУ Бк ца що 535 5

Ті Ме іх з Ар їж світу еф бек схві бо Ве хв ін їв щ3х

АвУвіАха я Ті ех С б Ав го зе Св і НеЕівп Уві 5 55 о

Ве ле зер св зексіу Був Аа Тр сту Ар Аа Ріє Це Те 575 Бщ 685 івевсСстпств в Аа Рів Спа 1 Рез СОІУ Ро Сі БГец Тв і дв

Віж Ав Ар іт ПЦебе Рів іх 1іж Тія ТІВ Аго АхрАхрокаі ла 715 3 їецп їі Пе а5р Роз у ге СІУ пу Га Рів Аг Зегівец Е дв 3 т 735 іспвАзвеч гм се м ге Азпісибеї Рі сг Ріє ет Сх їв т 745 т

НрАБВіІля Ма Це Пе їде Ахпаег Ні сту Уа а! Бере ст

Ехув УвібексСивстьзес не ТЗр Узі Ар Пе Бех зв Зег Бе ТВ тю ТТ ТО

Еш Піх Зег Авв і дв з Сх Рі Рі Ге ОВієц ПЕ СТУ Ар бег 785 то 795 КВ

Агріх Сіх Ріє Сх т РЕ Аге Авр Рі Бех Мегі з сть ле КБе

ЩО іо Щ15

С

-2105 7 «211» 2394 «212» ДНК «213» Раєпірасіїи5 рорійає «220» «221» інша ознака «222» (1)...(2394) «223» Послідовність ДНК, отримана зі штаму 052С2007648

Раєпірасійи5 роріПає, що кодує ТІС7472. «4005 7 адаадсада агаатааці їадідіааду дсснассаа дішанда щищшааї 60 ддааша!гд аїшоссас іддсайсаа даайша асадаці юдаасадаї 120 асаддщдаїс їІаасасіада адаадша аааааїсаад аднасща ідаїашсї 180 ддіааасноу аддаданад ддадассіа адщадайца пдсдсадодо ааашоааї 240 асадаанад сіааддаай дсіааааагс дсіаа(дадс адаасаасої апйаасідаї 300 оНааїааса аасісааїдс даїааанся аїдсіссаса ісіаїсісс їІаааанаса 360 ааїацнаа дсдашюцнаї дааасадаа! їаїдсісіда діснсаааї адааїа!сіс 420 адіааасаас їасаддадаї аїсадаїааа снданйна Нааснааа щіасісай 480 аасісіасас ісасадаааї сасіссідсі іІаїсаасдіа Наааїаці адаадааааа 540 шодащдааї іІаасіснос їасадааааа асісідадад саааасаадо їадсдаадас 600 ацйацосіа аїдаїасісї Ідааааша асідадсіаа садаасіадс даааадщшюіа 660 асаааааа!д асаїддаїад Шсдадни гаїсіссаїа сайссаїда анодай 720 ддсааїаан ташодісд Псдудещша аааасадсід садаайоаї їасіааадас 780 дадаїааада сдадіддаад дадаїадда ааадша!йа оШсйнааї юіасіаасі 840 дістасаад саааадссії Іісісасша асддсадсс даааацан дадснаїса 900 дагайнодаїй аїасіааїаї іІстаааїсаяд саїсіааа адаааадаа шщіашсої 960 даїаасаїас Нссіасасі діссааіааа Шсїаасс сіаанащі ааааасіаїа 1020 ддадщдага ацйа(дсааа аднашща даадсюдаас саддаїацс Шаднода 1080

Зо шоаааца ісааідаїсо аагсссддіа Каааадсоі аїааадсіаа дсіаааасаа 1140 аацаїсаад Ноаїсаїса дісунаїса даданцаійї ашадаїаї сдагааасіа 1200 іШдіссаа аааайсюа асааааагаї іаіасіаааа дісідасаїй іссідадас 1260 тагюцайца сіаадацас сшдааааа аадсюааса ассіаадаїа даддсааса 1320 дсааацшії адасссаїс їасаддада! айдашаа аїдадаадса аддодааїсі 1380 асішсйне аадсадайца їашсіата ааїднадю ашдаюаща дшасаїд 1440 ссонадодсо Наїсадсда аасацщо ісіссааца аїаданнода апйадаацдії 1500 дасдадаааї сдааааїсії аасшааса щдіаааїсії ашасдада аїашайна 1560 дааїсідаї! Іааіїаааїаа ададасаадс сісайосіс сдссіаащі (Шаїсаді 1620 аагаісдіад аааайддаа саїадаадсо даїааїсіад аассаддої адсаааїаас 1680 аадааюсаї аїдісдаїгад їасаддсоддс агададдодаї сіааадсісї ашасісаа 1740 ддадаїдаода аашісаса ашацодда даїааайаа аассаааїас адацатай 1800 айсаагїаїа сіціаааадо аааассідсі ашашаа аааасааааа їасіддайа!ї 1860 асіаїдіасу аадагасааа сддіадіїсї даадааціє ааасіаїадс щіааанаї 1920 аснсадааа сідаїсснсе асааасасаї Надіщша ааацдісааад ддсіаюдаяд 1980 дснда9999 асаасшаї їіайсіадаа діаадосаї йдааасісс адааддісса 2040 даайндаїаа аашодащда нподайнаді Шодіасіа снасацад адаюдающіа 2100 сНасіаїсод аїссаадісуд юдадойнаї Шадасааї сіснааайї адасадсіаї 2160 їсааснаїа ашдадсії пеншесї дданаюод сіаадойаї іаїааааааї 2220 їсссасддад їадіанції Іаааааціа адісадсаді снсаїасої адаганааї 2280 дааадіша сіассасаїс аааїааадаа ддашша їадаасіаас дддсдаїаді 2340 сащаадії пддаїсаїї ссддацші ісіаїдаадуд ааааашоа аїаа 2394 «2105 8 «2115» 797 «212» ПРТ «213» Раєпірасіїи5 рорійає «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (1)...(197) «223» Амінокислотна послідовність ТІС7472, отримана з кодуючої 60 послідовності штаму 0О52007648 Раєпірасійив роріПйає, що кодує ТІС7472.

«4005» 8

Мей сю ав Ази АБ Ре бег уві ат Ай теп ро зеє Ре Пе і 5 НЯ іх

Ав Узі Ріє Аєпсіх Пе 1 Ао Ре Ада Пн су ПебізАхрів з Мао КН

Ріє Ап МІВ РІ Су Ті Ахо Пи іх АБ ієт Бк Бей би Ст 3 ве Я чЖЩівцілз Ап от івецітрі ж Ахв Цебегп сіті лк іно ві; 35 щі сік Пе чек сСпу лавр без век Пе Пе АБ Св у Аніс ан 85 та ТУ 8 івсвісцаАнісвсщіврсієвіхя Це Аа авВізщ Сів Ап Ап тУщтезтіж Азр У Ап Ахвілв ен Ази Аді Це Ахп бЗеї МЕС Т а ню 105 1

НІВ Га іечРизі ле Це Тр Аа Ме теп сег АБО Уві Мері ле й їх 125

СібАзв ж Аініевбегіев сті сі гурісецбегіл Сівіси 150 135 10

Св сВвоПЛезе Арі ів во У Ше Ахвіви Автп узі ен Це 145 150 155 150

АспбегіїіМ іез їм Сб Це Біб Ро Ав Букі АтвівіуЗ ж 155 170 175 чвіАввосшіля Рве Аз сві і жіеп АБ Ті Снів ж ет 150 155 Не

Ате Аїа Ел Св бу Зег Ст Ахо Не Пе АВ АзпАвр Вк емо 195 ХЕ 205

Авспіва іш Ссмієеній ісп відів Уві ж і 35 ав хр

Зв ТІ в

Ме Азозе вів СІ Рів тм Іев Не ж Ріє Нв або Уві евів

СіхАвпАввіст Ве іх ле бетАгзіссіхв Тк А ав Осшіги 245 З5О 255

Їе ін їхе ав в Пеїле Тім бек бі Бех Се Сб Гл Ущі ім ямч Ве ісцв Це Уаіт ем ті Ст епі Ав іх АВР Тен аа й 285 ііі АВС АгтііецієцсСіхієцест Акр Пе Ар г уг

ХО 5 щюЮ тіж АВ ІВ і ес Ахв а Би теп Ахв Аа сіл зв Узі Рі Ате 305 мо 315 ЕВ

Ар Ав Пе Б епвргз Пе епбег Ап хе Віе бе Ака Бо Ах Гу

Зах 330 355

Удіїле 1 Ів сі ек Авою дв Гм Аля УдіЦе епі АВ

Би ІБ 350 сіро іх гм Ащоівен Уві су Вест Це Пе Ав Ахо А тя Не 355 о ї6х

Р звіієпі- АВ ж із Амвіхвіснвіхв Сів Ах Бурса Уді 17 375 ЗВ

А Ні із бегістбегіни Це Уві г Теп Ав Те Ар Гл ем

Ріс Рід Ап овес щіхя У тУіішільзегівціїв

Я а 5

РіеРго Ахв Сі Тк Уа ЦЕ тіж І яз Це ПЕ Ре Сід ем с 5 Зо

АввАзвівц Ат ГУ Сім А ТВ Ай Авп ріж Гл Ар Бгто Бе ТЕ 435 Ю зх

Ст Ар Педявівен Ав стві Сі Увісни зех Пе Рів епі я 45 З

АВлерімів бегів ас УдіЗегАво Би ази су Улі УК Ме

Я ж ТЕ 450

Взівн сії Уві Це се С ін Ріє Тезе Рго Пе Ап ех бе 455 о ах

СьщієвсСст Уві Арі ізсеіля Неївев ів ісп і Сі як ще ІЙ мч ме Атебш Гя Бей без і ет Або Бе Пе хв Гл ства 515 БУ 5

Ті Бегі еп Це АБ Ріо Ро Аси Узі Рів Пе Бех Ас Це Ух См

Авп і тр Ані Сі А Або Азвівн сть Бо оуві АВ ах Ах іх Ав А гу Увідвр ет ТВ пу у Це ср оуегі ув дів ха ЗУ 575 івиВіе Ті ст Су Ява пу і Р Бе зег С РВе Не Сх Ар Був

ЗО 555 хю іепілв Ро Ав тіж Ахр ГУ Пе ПЦебзів ТУ ГП Каб ле Сі іде ах 50 505

Рго а Пе Ек евілв Ахпідх Аа ТП іх Гб ТВ Ме ТУ Ст що 515 5:30

Ав б Ахвбу его сі ім Рів Сію 1Тіш Ле Ав Уті Ав Гук 2 що 85 Бщ-О

Кібер іш Або Раз бе св 1 Нвівп уд ве ле бек

Бетсі Гу бін Ах то Ст Авр Ахп Рів ЇВ ІВ ін СС хв - 505 КО авВРНеєсн п Ро Сірелу Бо бівівиЦеї хо рве дав Ав Но 575 БО Б

Те Бек ЕНе Сх їі Бін Ії їв Ати Ахр Ар Уві еп тіж Пе Ар

Ріта Бе Ат См іт УТ Ре Ати Сівсегівцізіем Аве зе т

Б о 715 а

Яеї Піж БУК Ахпіеціек Ріє зе Рів бер Сітієв фр аАБВілв 75 730 т3х

Те ПеіхвАхпое Ні Сіх Узі Увігец ів СВРі ух Уа бек тю та т5а б бег5ег туї Узі Ам» Пе зп сли Бе Ре Тіж Ті Тр Зеї Аза 755 тю 785 і увів іт Ре Рів ів Сів Пк Сі Ар Зеє Ап Сх СПУ Ре о ТВ тв

Спу я Вів Аєв Ар Ре ет Меі хв спі ля ВНе Се 785 Й т95 «2105» 9 «2115 2418 «212» ДНК «213» Штучна «220» «223» Рекомбінантна послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує білок ТІС7472, мічений гістидином. «4005» 9 адаадсада агаатааці їадідіааду дсснассаа дішанда щищшааї 60 ддааша!гд аїшоссас іддсайсаа даайша асадаці юдаасадаї 120 асаддщдаїс їІаасасіада адаадійа аааааїсаад аднасщша їдаїашесї 180 ддіааасноу аддаданад ддадассіа адщадайца пдсдсадодо ааашоааї 240 асадаанад сіааддаай дсіааааагс дсіаа(дадс адаасаасої апйаасідаї 300 оНааїааса аасісааїдс даїааанся аїдсіссаса ісіаїснос іаааайцнаса 360 ааїацнаа дсдашюцнаї дааасадаа! їаїдсісіда діснсаааї адааїайсіс 420 адіааасаас їасаддадаї аїсадаїааа снданйна Нааснааа щіасісай 480 аасісіасас ісасадаааї сасіссідсі іІаїсаасдіа Наааїаці адаадааааа 540 шоащдааї іаасіснос їІасадааааа асісідадад саааасаадд їіадсдаадас 600 ацйацосіа аїдаїасісї Іааааша асідадсіаа садаасіадс даааадщшюіа 660 асаааааа!д асаїддаїад Шсдадни гаїсіссаїа сайссаїда анодай 720 ддсаагаан ташодісд Ппсдудещша аааасадсід садаайоаї їасіааадас 780 дадаїааада сдадіддаад Фадаїадда ааадша!йа оШейнааї юіасіаасі 840 дістасаад саааадссії Іісісасша асддсадсс даааацан дадснаїса 900 дагайнодаїй аїасіааїаї іІстаааїсаяд саїсіааа адаааадаа шщіашсої 960 даїаасаїас Нссіасасі діссааіааа Шеїаасс сіаанайції ааааасіаїа 1020 ддадщдага ацйа(дсааа аднаша даадсіюдаас саддатас Шаонода 1080 шоаааца ісааідаїсо аагсссддіа Каааадсоі аїааадсіаа дсіаааасаа 1140 аацаїсаад Ноаїсаїса дісунаїса даданцаійї ашадаїаї сдагааасіа 1200 ішдіссаа аааансіда асаааааїйаї іаіасіаааа дісідасай іссідадас 1260 тагюцайца сіаадацас сшдааааа аадсюдааса ассіаадаїа даддсааса 1320 дсааацшії адасссаїс їасаддада! айдашаа аїдадаадса аддодааїсі 1380 асішесйне аадсадайцна їашсіата ааїднадю ашдаюайща дшасаїд 1440 ссонадодсо Наїсадсда аасацйщо ісіссааца аїадшіда ападаади 1500 дасдадаааї сдааааїсії аасшааса щдіаааїсії ашасдада аїашайна 1560 дааїсідаї! Іааіїаааїаа ададасаадс сісайосіс сдссіаащі (Шаїсаді 1620 аагаісдіад аааайддаа саїадаадсу даїааїсіад аассащдадді адсаааїаас 1680 аадааюсаї аїдісдаїгад їасаддсддс агададоадаї сіааадсісї ашасісаа 1740

Зо ддадаїдаода аашісаса ашацодда даїааайаа аассаааїас адацатай 1800 айсаагїаїа сіціаааадо аааассідсі ашашаа аааасааааа їасіддайа!ї 1860 асіаїіасду аадаїасааа сддіадіїсї даадааціє ааасіаїадс щіааанаї 1920 аснсадааа сідаїсснсе асааасасаї Надіщша ааацдісааад ддсіаюдаяд 1980 дснда9999 асаасшаї їіайсіадаа діаадосаї йдааасісс адааддісса 2040 даайдаїаа аашйодащда нподайцаді Шодіасіа снасанад адаюдаїйціа 2100 сНасіаїсод аїссаадісуд юдадойнаї Шадасааї сісцааай адасадсіаї 2160 їсааснаїа ашдадсії пеншесї дданаюод сіаадойаї іаїааааааї 2220 їсссасддад їадіанції Іаааааціа адісадсаді снсаїасої адаганааї 2280 дааадіша сіассасаїс аааїааадаа ддашша їадаасіаас ддасодаїаді 2340 сащаадії пддаїсаї ссдщдацші істаїдаадд аааадшоа асассассаї 2400 сасдсісасс аїсасіда 2418 «210510 -2115 805 «212» ПРТ «213» Штучна «220» «223» Амінокислотна послідовність міченого гістидином білка ТІС747. «4005 10 кіесіля Сі Ав сш Ав Бе зеї Уві Ате А ен Ро еї Ре Пе і 5 Ів 15

Ах уві Ге Ахп Су Пе 5. Аз Ве А ін Сі Пе бів Ар їв 20 35 30

Ріє Аза Мей Пе Ре бі Пк Або 15 Су Аа Бен ПЕ і еп СТИ 15 во а

Уаіецізв АВ СсювсСсв іевієц ія Ав ТЕ зе біілвівв і 50 55 що сСіЦебБе ок Авріви зе сп ет АВ Св пу Ахпвівв дя та 5 о тові Авідосвівцівецід ПеаАв Аа Сн Ав Ав 5 ща Зх

Уцііевіїш зазор Уа Ах Ахві хі еп хв в Пе Ах зе Мері ец 1о їх об

Нвів Гл евро ля Це Тв Аза Ме Безе Ар УЛ Мел 115 120 135

СювАєпіч Авіа івепсів ем мів) іх вів 155 155 1

СюсПезе Арі іезаев у Це Азвіст Авп Ужіт еп Не 145 156 155 150

Аспбе ій без ій сі Це ГТ го Аз г Са Ати Це уз Ук 155 1 ІТ5

Уві Авнстілхе ве А Сщівгн м ісвАв сіл ж Бех їЇ5О 155 Не

Ат Аїзі я Сюену ех сві і Це АБ АсАТ і емо: 105 в 205

Асіспіїш сшіепііїш співи віл ве: Уді 1 гля Аза Дер

Мет Ахрзе Бест Ре Гуісс Не Ті Ре Ні бер Увіїец ів 23 З 235 зо ші Аа ев ве біт Аге ех Ай бецілв їн АВ АВ 'свівси ях 50 255

Те тієілх бе св пеї хе ів Бех і дет сі ів зіх ув Ма! їй зх З тя бе Рівіса Те Уліїсб Пе С Без с Ав і АБ Тец

ХТ5 ЩО З

РТшісєцім Ав Атвізісцієвот еп зе йор ЦЕ Авро Тут тіж авпів Ген Ахв сів Ніс ім Ап Ар 5 Аза УЗ рі Ат 305 ма 515 хо

Ав АсиЦе теп ім іецее Ахпіл5 Ріе зи Аа Бо Ахв КУ 335 333 53Х

Утізя 1 ІвВ Ст ЗеюаАво й гм Ал УдіЦеівнізв АВ ве 345 35 сто сі я АвБісп уд Сх Ре спи Пе Ге Ап Авр Аге Не 355 ЗО 165

Во Узііеніле АВ Ті Аз тему Спо йлхв б Сів Уді

КО 175 ї50

АФ Не Зівбегіеипегізви Це Узі г ІецпаАхо Те Ав і ле ех

Рез ої ав св освіхя У Бузі іх ае і ев Пе

ЕЕ но ЗІ5 гіеРго заз сСиу ім УзіНЦе тіж ух Пе їж Рів Сіізвілвівв в 5 а

АвваАзвівши Ага ТУуг Сів Ай Ті Аз захв Буг Аво Ро Зег ТЕ

Ст Ав Пе Авр І ев Авт з і Уві са ег ТВ Ве Ге 450 ах Я

АВ Аім Пезе їв Аха Уві є Або Ар Ах іх Уві я Ме а во 75 Зо

Різівса Су Улі ПЕ ет Сім Тім Ре еп бег Ро Це Ап Зах Ре 45 ява ах

Свівецсв Узі Ахосірізв'етіз ві ец іш і еп ін Сіл о во У ертя Гей ге б Гр фев іа і бег Аво Бей ПЕ Ах Гл м зі5 КА 525 тТіш'етієв Це Ав го Різ Ав Узі РІ Це бег Ав Не Уві хв 530 55 53

Аєп іп Ави Це С А їх Ахо Ахпівн сСпьРю То Уві Аз Ая Ав

За 55 555 а їв АзвБАїв ім уві Ар Тест Сну Де Сп Сі ет ли Ав 585 а 5

Ігпввбе тіж несу Ака Су С Ре ех Сів Ріє Це Сх Арі лк

ЗО 585 то

Іепіле рт Ас тіж Ар їз Ле Пебзв Гі Узіг ух Сх Був 585 ОО 505

Бо Авів я ісенілз Ахніхх Авц їі Сі ТУ ті Ще тя спа з ЩІ що

Ав ПЕ Ав пу бе бек св с Ре хів Пи Пе Ав УвіАва ГУК що 30 3 що

Ті ер сбто іш ар Ро ет Св 15 Нківи Узі Ріє ув Бех С 545 550 555

Бе сіх Гук Сб Аз Тр Сі захо Аза Рів ЇВ Пе Тева Св хв 56 665 5

Аве ЗВ В о Ст бо сііви Пеїль Ре Ар Ахо тр 575 о в іебегРбе бі Ті Тіж Ту Пе Аге Азов Уаітез ТВ Те аз о що кю

Бгто зег Аго СУ Су гг Ріж Ага бі бетіецілв і ей йо Бех ТЕ 795 тів 7і5 ЕІ зеї Пи іст аАзвівец ет Рів мі іже бізівв Пр АвВіхв Уві 25 30 ТАх іївЦеі5 Ап оеНі сіУ уУзі Уві ем Не Спи їхк уві бе

ТА Я 5

Стіоег зах ту уві хо Пе Ахп бір ет Рів 115 Ті І Бк бег Ах ту 75 ТБ ух се ре Ріє Пе С івц 15 Су Ахрож Ате СУ Су ЕТе та ТБ тв

Сутоек Вів Ага Ар Рів бе Міекі хв Спр іля ВВЕ Св Ні Нв Ні

Та Й тах в

Не Ав Нв НЕ Ні 505 -2105 11 «2115 2394 «212» ДНК «213» Раєпірасіїи5 рорійає «220» «221» інша ознака «222» (1)...(2394) «223» Послідовність ДНК, отримана зі штаму 05С2008493 Раепірасіив роріНає, що кодує ТІС7473. «4005 11 адаадсада агааіааці їадідіааду дсснассаа чішанода шшщшааї 60 ддааша!гд аїшоссас іддсайсаа даайша асадаці юдаасадаї 120 асаддщдаїс їІаасасіада адаадша аааааїсаад аднасща ідаїашсї 180 ддіааасноу аддаданад ддадассіа адщадайца пдсдсадодо ааашоааї 240 асадаанад сіааддаай дсіааааагс дсіааідадс адаасаасої айаасіда!ї 300 оНааїааса аасісааїдс даїааанся аїдсіссаса ісіаїснос іаааайцнаса 360 ааїацнаа дсдашюцнаї дааасадаа! їаїдсісіда діснсаааї адааїа!сіс 420 адіааасаас їасаддадаї аїсадаїааа сіндайццйна Нааснааа ідіасісаїй! 480 аасісіасас ісасадаааї сасіссідсі іІаїсаасдіа Наааїаці адаадааааа 540 шоащдааї іаасіснос їІасадааааа асісідадад саааасаадд їіадсдаадас 600 ацйацосіа аїдаїасісї Ідааааша асідадсіаа садаасіадс даааадщшюіа 660 асаааааа!д асаїддаїад Шсдадни їаїсіссаїа санссаюа ідіаноай 720 ддсаагаан ташодісд Ппсдудещша аааасадсід садаайоаї їасіааадас 780 дадаїааада сдадіддаад дадаїадда ааадша!йа оШсйнааї юіасіаасі 840 дістасаад саааадссії Іісісасша асддсадсс даааацан дадснаїса 900 дагайнодаїй аїасіааїйаї іІстаааїсад саїсіаааг ашдаааадаа щіайцісої 960 даїаасаїас Нссіасасі діссааіааа Шеїаасс сіаанайції ааааасіаїа 1020 ддадщдага ацйа(дсааа аднашща даадсюдаас саддаїацс Шаднода 1080 шоаааца ісааідаїсо аагсссддіа Каааадсоі аїааадсіаа дсіаааасаа 1140 аацаїсаад Ноаїсаїса дісунаїса даданцаійї ашадаїаї сдагааасіа 1200 ішдіссаа аааансіда асаааааїйаї іаіасіаааа дісідасай іссідадас 1260 тагюцайца сіаадацас сшдааааа аадсюааса ассіаадаїа даддсааса 1320 дсааацшії адасссаїс їасаддадаї андашаа ададаадса адіддааїсі 1380 асішесйне аадсадайцна їашсіата ааїднадю ашдаюайща дшасаїд 1440 ссонадодсо Наїсадсда аасацщо ісіссааца аїаданнода апйадаацдії 1500 дасдадаааї сдааааїсії аасшааса щдіаааїсії ашасдада аїашайна 1560 дааїсідаї! Іааіїаааїаа ададасаадс сісайосіс сдссіаащі (Шаїсаді 1620 аагаісдіад аааайддаа саїадаадсу даїааїсіад аассащдадді адсаааїаас 1680 аадааюсаї аїдісдаїгад їасаддсоддс агададдодаї сіааадсісї ашасісаа 1740 ддадаїдода аашісаса ашацодда даїааайаа аассаааїас адайнаїан 1800 айсаагїаїа сіціаааадо аааассідсі ашашаа аааасааааа їасіддайа!ї 1860 асіаїіасду аадаїасааа сддіадіїсї даадааціє ааасіаїадс щіааанаї 1920

Зо аснсадааа сідаїсснсе асааасасаї Надіщша ааацдісааад ддсіаюдаяд 1980 дснда9999 асаастшаї іайсіадаа діаадосаї Ноааасісс адааддаісса 2040 даайдаїаа аашйодащда нподайцаді Шодіасіа снасанад адаюдаїйціа 2100 сНасіаїсод аїссаадісуд юдадойнаї Шадасааї сіснааайї адасадсіаї 2160 їсааснаїа ашдадсії Яйесншесї дданаюаодод сіаадойаї іаїааааааї 2220 їсссасддад їадіанції Ідаааааціа адісадсаді снсаїасої адаганаді 2280 дааадіша сіассасаїс аааїааадаа ддашша їадаасіаас ддасодаїаді 2340 сащаадії пддаїсаїї ссддацші ісіаїдаадуд ааааашоа аїаа 2394 «2105 12 «2115» 797 «212» ПРТ «213» Раєпібасіїїи5 рорійає «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (1)...(197) «223» Амінокислотна послідовність ТІС7473, отримана з кодуючої послідовності штаму 05С008493 Раєпірасіїнв, що кодує ТІС7473. «4005 12

Міегіле сів Ав Ази ав ре Зег Уві Ат Аїіви Во Хег ЕНе Пе 1 5 І І5

Ар Уві РНе хв Сі ПЕ Ту Авр Ре ліз Таг Це Сі Дер Це го 5 30

Ріє Аза Мет Те Ве Сх Ті Або Те СЛУ Аха бен ТЕЖ Без М 35 а їх

Узііепілв йепсівсвівевівевіУ а5вів Бе оіу Ед Бек ств ща

Су Пе бе сі Аврівс зе СіміВіВ АВ Сів СУ Ап ів Ах 5 Бе 75 о їж Свісцавілвсшвіввіввіле Пе Аа Ані св хв Ап

Ущівв ії вхр уві Ап Авп уві сп Ахв Ай Ле Авп ех Мет ет цю КБ о

НІВ їси вБг ле Трава бів і си 5еазо УЗ мес ля с Ахп губа івевобегієенпізн Це Сім Бевоегілв Ст ен 135 1юЮ

Срстп іє се Ахріхзіви Ар УМІВ Асі Ав Ум іев Пе 145 150 155 ща

Авспоес ій ієц їж сті Ще Гі Ргто Ав Ту біз Аге Пе у Тут 155 І Т75

УЖ Аспсив іль Рів Ав Стів імісАвінстіл ів 15 155 ню

Ате Аїд ля Сів є че Св йхр Не Це АВ Ах ляр Ті Тези 195 о 205

Аспіеційм Сі енпітіш ін А із бе Уяі Ті іх Аза лою зів 315 в;

Ве Ахрозе Ріесв Ріє ТУ і: Не ТВ Рів НієАвр Ухі тей Не 225 КК 235 З

Сі АзпАзвіснц лесі АтабегАвівесіху ік АВ АВ ев зах 250 255

Те ті Ге Арі іві хв Тх 5ерСпу мегб ТВ Сі Уді 265 з тус 5е Рівієн Це Узіїенп Пш Субієв Св Амі АВР і ви їх ЗО 285 твісішАвВсУуАгвіазієцівм сі ев Ар Пеляр тя 2иО 255 33

Ті Ав Це іп Ап св Ні теп Аза Аа іх яв Уві рве Аге

М по 51 аа ко ян Те Тест Тміви Бе Ахвпіле Ре бзег Аха Бгто Ах Гж

Зх 530 335

Уабіля Тім Пе лу бег Ахр Ах Бут АВі Уаіівігв С АВ

Яни то сх 1 Ашівн Уві Су Ве Сп Пе Пе АзпоАзо А ге ЦЕ з З 365

Ріо уаіТеніхв ав Гі Ай ув вБепі ув бі Ап ТЗ Сів у ді та 375 Зо

Ав Нв оівзеісизе сві у ія іп лярів Ахрічівв ї85 іо 335 БІК

Ребро 135 зп сві У тугі зе ів Тій що З 5

РієРю дах су їмо Узі Це Тік Ех Пе Ті Рів біз ле ей

АавАхвпівн Аг тм б АВ ТВ Аз ап Рі Б Ав бро Зег ТЕ 35 Б 45

Сех Абвів Ас ісп хв ізя св Уді Сб ет Пе Бе сі 453 455 що

В Ахр Би Пебегів ази Узі зе Ар Ахр Акр ія Уві ГП Ме

ККЗ то Ем ЗБ

Рюівц су УВІ Це бе Сірі Ріеі ги зе Ро Пе Ап бе Ре

Як в в свівенсСі Уві ав освілеоегілеЛеітец ін івц і Сухі я ве 5 зі1б зе ГмієепАга Стіч іеніец свое аазівгнів Аєпіхв Ст

МІ5 хо 25

Ті зегіен Не зів Різ Різ Ап Усі Бе Пе зех Аве УЗ Ст

Ав ітр Аха Пе См Ах ер аєпів ство То У АБ Ав Аз ів АзвАв Ту Улі яр бег ТК СТУ СЛУ Пе СЕ СЛУ бе ух Ах 505 50 Зх інве Ті са Сі Аза Су Сі РБе зе Сів Ріє ЇВ Су Аз іль 580 555 УК

Іепідч рю Ав тіж Ар гм Пе Пебхіх ТУ Ті Уфі т ля Су ле 385 що що

БаАвівішівпітАхніх Азп ж Сі Бу Тр мебі св що щХ що

Аве Пе А5зпотк Зег Бех сфе Сн Б Ге Аза Уві Ахва Ту

Кер са іш Ахр Рез зер 11 Бк еп Узин ля зе Сів 550 255 зе сі Гя СБ АВ Та су хр Аза Біе ів Івін оС о 65 5

АВРЕЕЄ СВ хо сСтібіх Роб Гей Це 1 хе Ре Акро Або Тор че 55 ів Рів СБ Ті Бій Бур Пе Агро Авр Ахр Узі їец Пк Пе Ахр

Різ озег тв СІ ОХ ТЗ Ріе Атд Св Зегівнізеіви Акрбею ТЯ 5 та 715 ре ек їх Гр аАхвівц бек Вів бе Ре бек іх фе Гоа А Вік ді

Ка: КЕ тах іі із Авчисе Ні сі уаі Увііен Бе Сміх Уві ст т 745 5

Сівбегбзек м Уві Ако Пе бе пе Не Ті Ті їн бе Аква т55 760 76 ів ві Рі РІ ІВ Сів іі СИ Ао 5еї Ат СИХ СПУ Рів я КЕ: ТО

Сім бек РЕНе го Ар Бе ет Мері хв мМ і у Ре С 755 ча Б «210513 «2115 2418 «2125» ДНК «213» Штучна «220» «223» Рекомбінантна послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує білок ТІС7473, мічений гістидином. «4005 13 адаадсада агаатааці їадідіааду дсснассаа дішанда щищшааї 60 ддааша!гд аїшоссас ддсайсаа даїайша асадацші ддаасадаї 120 асаддщдаїс їІаасасіада адаадша аааааїсаад аднасща ідаїашсї 180 ддіааасноу аддаданад ддадассіа адщадайца пдсдсадодо ааашоааї 240 асадаанад сіааддаай дсіааааагс дсіаа(дадс адаасаасої апйаасідаї 300 оНааїааса аасісааїдс даїааансу адсіссаса ісіаїснос іІаааацаса 360 ааїацнаа дсдашюцнаї дааасадаа! їаїдсісіда діснсаааї адааїа!сіс 420 адіааасаас їасаддадаї аїсадаїааа снданйна Нааснааа щіасісай 480 аасісіасас ісасадаааї сасіссідсі іІаїсаасдіа Наааїаці аааїдааааа 540 шоащдааї іаасіснос їІасадааааа асісідадад саааасаадд їіадсдаадас 600 ацйацосіа аїдаїасісї Ідааааша асідадсіаа садаасіадс даааадщшюіа 660 асаааааа!д асаїддаїад Шсдадни гаїсіссаїа сайссаїда анодай 720 ддсааїаан ташодісд Псдудещша аааасадсід садаайоаї їІасіааадас 780 дадаїааада сдадіддаад дадаїадда ааадша!йа оШсйнааї юіасіаасі 840 в2 дістасаад саааадссії Іісісасша асддсадсс даааацан дадснаїса 900 дагайнодаїй аїасіааїаї іІстаааїсаяд саїсіааа адаааадаа шщіашсої 960 даїаасаїас йссіасасі діссааіааа Шеїаасс сіаанайії ааааасіаїа 1020 ддадщдага ацйа(дсааа аднашща даадсюдаас саддаїацс Шаднода 1080 шоаааца ісааідаїсо аагсссддіа Каааадсоі аїааадсіаа дсіаааасаа 1140 аацаїсаад Ноаїсаїса дісунаїса даданцаії ашадаїаї сдаїааасіа 1200 ішдіссаа аааансіда асаааааїйаї іаіасіаааа дісідасай іссідадас 1260 тагюцайца сіаадацас сшдааааа аадсюааса ассіаадаїа даддсааса 1320 дсааацшії адасссаїс їасаддада! айдашаа аїдадаадса аддодааїсі 1380 асішесйне аадсадайцна їашсіага ааюнцадід адащдата їщШасаїд 1440 ссонадодсо Наїсадсда аасацщо ісіссааца аїаданнода апйадаацдії 1500 дасдадаааї сдааааїсії аасшааса щдіаааїсії ашасдада аїашайна 1560 дааїсідаї! Іааіїаааїаа ададасаадс сісайосіс сдссіаащі (Шаїсаді 1620 аагаісдіад аааайддаа саїадаадсу даїааїсіад аассащдадді адсаааїаас 1680 аадааюсаї аїдісдаїгад їасаддсоддс агададдодаї сіааадсісї ашасісаа 1740 ддадаїдаода аашісаса ашацодда даїааайаа аассаааїас адацатай 1800 айсаагїаїа сіціаааадд аааассідсії ашашаа аааасааааа їасіддата! 1860 асіаїіасду аадаїасааа сддіадіїсї даадааціє ааасіаїадс щіааанаї 1920 аснсадааа сідаїсснсе асааасасаї Надіщша ааацдісааад ддсіаюдаяд 1980 дснда9999 асаасшаї їіайсіадаа діаадосаї йдааасісс адааддісса 2040 даайдаїаа аашодаїда нодайнаді Шодіасіа снасанад адаюдаїйціа 2100 сНасіаїсод аїссаадісуд юдадойнаї Шадасааї сіснааайї адасадсіаї 2160 їсааснаїа ашдадсії пеншесї дданаюод сіаадойаї іаїааааааї 2220 їсссасддад їадіанції Іаааааціа адісадсаді снсаїасої адаїганаді 2280 дааадіша сіассасаїс аааїааадаа ддашша їадаасіаас ддасодаїаді 2340 сащаадії пддаїсаї ссдщдацші ісіаїдаадд аааадшоа асассассаї 2400 сасдсісасс аїсасіда 2418 «2105 14 -2115 805

Ко) «212» ПРТ «213» Штучна «220» «223» Амінокислотна послідовність міченого гістидином білка ТІС7473. «400» 14 кеглі Ахо Ав Або Ре зег Узі Ат А еп Рго чех РБе Пе і 5 НУ 15

Аза Уа Ріє Аз Сі Пе Ту Або Ре АВ ТІ Су Не б Аво ПЕ ще: ах К

Ре Ахп Ме Пе Ріє СУ Пн Аво Пе біт Азов без Тк тек бів Ста 35 щи Я

УФ івпіхя спос сіні ії Аве Бебі 35 ес ща сів оегбіУАНіви зе СВ Ле ее АВ сі Сі ахп ев Ав. що В 75 ща імМсСшвівваАціхщівніеціхв Пе Аа Аа с Сі Ап Ап 5 ох

УФ їгец тіж Ахр Уві Аяп Аз ув ев Ах АВ Пе Азп ех Б ев о 15 1

Невів ія генію ув Пе їж Аа МейігибегАво Узі Ме і хв 1І5 120 15

Свтасвій Авівгнеівв сів світа вперті снів и 150 135 1

Сснвьсіщіє бе А5рілківи дер Уві ШеАвпівец Ан Уві еп НЕ 145 150 15 15

Аввпбек ій іє ій Сі в ТЕ Ріо Ав 15т Сів аг Пе ї тв Гу 155 170 17

Уві ази Спа гу Рів Ав Сі ів ііш Геп Аз Біб з іде 1 Бен

Іо 155 150

Ате Аза г ув бунту Зег и Авр Це Це АВ Аа Аво Пи без Св

Авпівн ій сШівн ій св ін А ів ек УЗ ЕЕ ув Ав Лв 210 215 Б

Ве азробе гів Св Ре Тл ів Пе ТМ Ріє Нв азо Узітіевів

З 135 Бе

Су Аспасн теп ве Су Ате Зех Аз епі Тв А АвсСвВівн

І5О0 355 ів 155 Ар С: Пе! уз Тег су ет сів іх іля Уві ак 265 ж

Ти егРієїеців увіієв Їж Стіч сВАвВіх Аве

БІ БЕЗЕ ііі АВС Аніс івцівнсіу і сере АЗІЇ Ар ТУг 29 СЕ щю

Ті Ав Пе теп Асв св НвіспаАни орні л Ах УЗ ННе Ате

М мо Зі 20

АхвАхвівісцрРто гівцие авіа Рі Зег Ахв Різ АВ ГУ 353 33х

Уайіляе ПЦМ Тв Сі Бег Ар Аз їм АБіс УМ іт ев СВАВ

ЗО 45 350

Савіо зі Тая АБівиц Уві СУ Ре См ГЕ ТЕ Ав Ар Ат Пе ї55 БЕ Бк

Ріо Узіієпізб Ав Гм іч Аміхт ен тв Сто Аввогчкбхнь У ді

Зх ІТ ї8О

Ар Нв пе Еевберсміве У г 1іевАрів Арі ев 355 Зо 3а5 ща

РіеСт рю ілх Авпое См сві у ііі есте ВГ

ЗО ЕЕ 315

БЕР Асі у Це віл ів Пи Ре спілі іва

Ж ща о вхвпАаАхвівн Ат Тр Св АВ ТЕ Аз Ап Рі Ту А во Ро зе ПЕ 435 а 445

Сіу Або Пе Ар Бен ав сміх СВ У Сірет Те Ре ев Са

Я ю

Ав'Ар т Це зе ів Ав Уві бе Аво Аво Ар су Узі ту Ме

ЕЕ т 15 З50

Реоіецену Ущі Це екв тім Ре ец ех Ріо Це Ази ех РЕ 455 БІ ящ5

Ссвівнст айворі у ог іле ее Пн іга Пе Сухі в

Мю Ох У

Зег ІТ і єн Атрзйх ГЗК зр тец й ех ар ем Пе Авв уз С

КУ; 535 і Зе інве Ав Ро о А хп Узі це Пе Бек Ахв Пе Уві! Спо

З 535 З ха Ір аАхв Пес Ай Аа Аопівсип стро тр Уві АЇЗ Ах Ази 545 530 55 У іле Аква ГУ УЖ Ах зер ТП Ох Сіх Пе п сі мегідх Ада 585 ат 575 івцпве Тв іх Арх СО Вів бег з Вів Ів Сі Ар Е у

ЗВО ЗВ в іспіух Ро асп їж Ар гм Пе Пе бю Гр Ті Уді Бл Сп Бл

РАВ тісті Ахвізя ав ії і я ТВбМе тус що сен ще

Ав ПЕ Акпііх бер оер с сій Рів Стів 1 Те Аза Узі Ахи Тут

Я що 515 -о

ТЕ Бе С іш Ахр Раз ет 1 НЕ їв удіР Не хв Зег Ст що 50 555

Бек Сію Тут СуВа Ав Тгр сх Ар Ас Рі ТЕ Пе ем СС ух їв що що5 А

АвРіесв т іРт іс Роз Св іевеілде Ре Ав Ав Тр ща ВО 585

Те Зех Ре Се Тік тіж Тк Ле Аг Або Авр о Увії сн Тк Ле Ар що ях т

Бгто ег Ага Сх СТУ Ге Рі Ат оегіецілвіец Ав Бер

Не па ті ТО зе іш ТухАхв ісп ек Ріє Хе Рі ех бітів в Аве Уві

То 735

ЇїеПеїх Ап Ні Сі Уді Удіі єп Ріє Сб і ле Уді его тю тах Та

Сбвбегбек Буг Уві Арі Бетсі Бех Ре Тіюк Товт 5ег Ав ї55 за Ще їх Ст і РЕ Рі Пе Сів г Су ар Бег Ага Си СУ Ве я ЧЕ ТЕО

Сі ес Ре Агро Ахр Ре зег Мет Бл Ку і 5 Ре Стів Нів Ніх ГИ5

ТЕХ де то 55

НеваВнНЕНВ ПВ що «210515 «2115 2397 -212» ДНК 213» Штучна «220» «223» Синтетична послідовність ДНК, сконструйована для експресії у рослині, що кодує ТІС7472РІ. з додатковим залишком аланіну, вбудованим в положенні 2 по відношенню до амінокислотної послідовності бактеріального ТІС7472 отриманого зі штаму 05С02007648 Раеєпібасіїйи5 рорійає, що кодує ТІС7472. «4005 15 адодсіаадс адаасаасаа сисадсдіюд соадососісс сдіссіїсаї сдасаїснс 60 аасоддсаїсі асдаснсодс сасдоддсаїс саддасаїсі Ісаасаїдаї стдддасяо 120 даїассоддсо ассісасссі сдаадаадісє спаадаасс аддаасіссі діасдасаїс 180 адсоаддаацдс ддаддосаї сісаддсдас сідісддада іІсаїсдссса дддсаассіс 240 аасасддадс Ісдссаадда асідснаад аїсдссаасд адсадаасаа сайсідасс 300 дасдісааса асаадсісаа содсдаїсаас іссаїдсісс асаїсіассі дссдаадаїс 360 ассаасаїдс дадсдасої садаадсад аасіасдсдс ідісдсісса даїсдавдіаї 420 пдаодсаадс адсіссадда ааїсісддас аадсісдасяо Ідаїааассі даасдіссіс 480 аїсаасісса сдсідассда даїсасассс дссіассадс дсаїсаадіа сдісаасдад 540 ааднсдасд адсіюдасодсі ддсдассдад аадасссідс дддсдааодса аддсадсдад 600 дасанайцо сдаасдасас дсідадааї сісасададс щдасідадсі ддсдаацдісс 660 дюассаада асдасаюда сісдійсдад Неїассіас асассшса щдасаїссю 720 аїсдддааса ассіснсду дсдсадсосо сісаадассяа сідсддадсі їІаїсасдаад 780 дасдадаїса адассіссдд сісддадаїс дддааддіюдї асадснссї даїсаюна 840 асдідссісс аддссааддс діссісасяо сісасідссі дассддаадсі сндддссіс 900

Ісадасаїсд асіасасдаа саїссісаас садсассіса асдасдадаа даасдісне 960 сдсдасааса іссйссдас дспсдааї аадісадса асссдаасіа сдідаадасс 1020 аїсддсадсод агаасіасдс дааддідаїа сіддаддс99 адсссдасіа сдсссіддіс 1080 доснсдада ісайаасода ссаїаїсссяа діссісаада сдіасааддс саадсісаад 1140 садаасіасс аадіддасса ссадісссіс Іссдадаїсо ідіассідда саїсдасаад 1200 сіднсідсс сдаадаасад сдадсадаад їасіасасса адісдсщдас сісссодас 1260 дддіасдіса Ісасааадаї сасцсдад аадаадсіда асаассідсу сіасдаддсо 1320 асдасдаасі іІстасдассс дадсассодді дасаїсдасс даасдадаа дсаадіюдад 1380 їссасднсс Іссаддсдда сіасаїсісі аїсаасаїда дсдасдасда сдасаїщдіас 1440 адссдсідд дсдісаїсіс сдадассійс сісісіссса Ісаасісдії сдадсндаа 1500 дюдасдада ааісодаадаї ссідасдсід ассідсаада дсіассідсу сдадіассід 1560 сіддадіссд ассісаїсаа сааддадасс адссідаїсу сдссдссіаа шідісаїс 1620 адсаасаїсд юдадаасід даасаїсдад дссдасаай дадаасссід ддісдссаас 1680 аасаадаасду ссіасдідда садсасдддс доасаїсдадао дсіссаадас ссідшасс 1740 садддадасд дсдаднсад ісаднсаїс ддсдасаадс Ісаадсссаа сасддасіас 1800 аїсаїссаді асассдісаа адддаадссі дсодаїсіасс Ісаадаасаа даасассода 1860 їасасдаці асдаддасас саасоддсісс Ісддаддавді Іссадассаї сдсддаюдаас 1920

Тасассіссу адасддассс дісссадасд сассісдіді Ісаадіссса дісаддсіас 1980 дааасодідодао дідасаасії іаїсаїссід дадідсаадд суопсдадас дсссдадодс 2040 ссддаасіса Ісааднсда сдасіддаїс ісансддса ссасдіасаї ссдадасдас 2100 діссісасса Ісдасссдіс Ісдсоадсдадс їаснссдсс адісссісаа дсісдасісд 2160 їТасадсасої асаассідіс спсісше адсдадсіої дддссаадої саїсаїсаад 2220 аасісдсаїд дсдісдіссі снсдадаад дідісссадс ададіссіа сдіддасаїс 2280 аасдададсі Ісасдасдас діссаасаад дадддансі ісаїсдадсі дассддсдас 2340 адісдсддад асісодддад спссдддас Нсіссаїда аддадчаацдії сдадіад 2397 «210516 «2115 798 «212» ПРТ 213» Штучна «220» «223» Амінокислотна послідовність ТІС7472РІ,, яка кодується синтетичною послідовністю ДНК, при цьому додатковий залишок аланіну вбудований в положенні 2 по відношенню до бактеріальної амінокислотної послідовності ТІС7472. «4005 16

Мер аівіх св запа аа Рів ек Уві Але Аз і ер то бе Рів 1 х т Ї5

ІеАвр'узі Ріє яп су Пе Геї Ар Ре Ай Тв Су Пе за Ар ів Рі АвапМебів Ре Сі Гіж Або Тік СУ Ав тем їж Ге В

БІВ 45

СвпрУз іецілз Ахпосвіовщівцієв гугАІіе зе бітілдеівц в 55 щі

Свої Пес сі аввівц бе свие їв АВС сі Ап ец

Не 75 8

Акпіш сві Аміз сівіввівні хе Пе Віз Авп оп ів Ав зва Уузііец ій ав Узі ав аАспіз ен п АВ ІВ Ахв хег Ме іЮ їК Її іеи 5 Пе Гм Тер уз Це Ті Аха Мет Те бет авр Узі Мі

Іа: 120 125 іхв бів Ап гг Азіви зе існ Сів ПВ С бі еп бер ух сла 155 135 140 ігвсСтовів бе Ахріхівв аю уд Ле Ачвпівсн Ав УМ Без 145 150 155 150 ів Азпсзег Ті іев'їїмх Свце ТЕ Рг Аза Гл біз АгеТвіхх 155 НО 175

ТУ У АзпсСвілв Віж Ав Сів ер Пк і ев ія Те іл іх

Іо 185 1 іепАта Аді ст су зе Ах Це Це АВ вп А во 1 ец

ІЧ з в

СсврАпіесвійг скінів щівена із УдіїВрі ло АВ ве 315 32 де МегАзи БегРіе Ст Ріє Те Тех По Ті Рі Нв Аво Узі вет 315 ЗО 235 за

Тест АзвпАзпівип РЕ СОУ Аг Бест А Вініл пн АБ АВ СИ дах 25О ря із 1 іл Ав СВ Шеїхе Персі бегбсщів Сібіле 2 365 шт ча тя зегВіеівеціе Уміец Пі Су Бецп Ссв А Біля Аз Ре

75 5 дж іп іі іс)іш Аве міліції гене Арі ер

Зо Зах БАН

ТУ 8 Аза Це і ер Аза св віп Ахп Арія А5а Уа Ре

За5 БЕ 315 Би

Атв А5р Аза ПВ Бе Ро Пт ей бе Авпіхв Рі Бег Аква Різ лав 325 330 335

БУ УБіїле ж ТВ Сі ех ав Аза Гу АБ іде Уві їв без бтв 34 345 350

АВОСВвгн сі Авітев Улісс Рез іе Те Азп Ар Аге 355 Зо 355 івРю Узііезі АВ тя їз Авіхвівнпіхя СВ Ахеа ТУ св

УВА НІ ів бегістпбетіз ів Уві тя Тез Ав Аврідв ї85 393 395 в

Іеп рів Ст Ріо ле Азпозех сі сімвіль г ТЯ іБгітебетівв

Я яма ні ін РЕ РО Арі ТУ Узі Твій хів Ті Ре зв ілкї ла 4235 43 іепАхпаАхвівц те Ту Сп Ада Пн Ав Аза Бе їз або Роз Бег тіж у Ар Це лові азвОвмізе ств Удієзві зе лі РНЕї еп

ВІВ 43 ко ща Ар БУ ПЕ ех Ів Азн Уві ет Ар Ар Ар Су Уві Тк

455 ЕЕ т о

Ме ро істо Уві ШЕ Бека ж Рів Бецбег Рга Пе ха зе 455 95 495

Віебіівнов Уа стщіле зегіле еітвец й Бен ій Сх щО в зій їхав БУ їез Ат ім гм епі еп сті Зет Аво Бен Те Ахп бух 515 ХВ З35

Стій єї ен Ве Ав Ро Ро хв Узі Ре Це 5ег Ахп Пе Уві

СвАвп тр Аа Не Ст Ах Або Азвівн СТЕ Про А дя в за ЗБЕ з вхпіаАснав гГУУвВі р Бех Ті Сі су Це бін сСпу бе лк

Бах Уа ЗВ

АвВівпрРіж їх Сі у Авр Су СІ РІ Зег с вів Пе СТУ Ахр 555 З ічіемілч іо Ап іх лер Бу Це Це Сів Тур бі Узії у СТУ 5 щю ще ілерРто АвВів Гяжівціле Азніхв аа Біж Сів Ту ж Мет

См Ав Ти Азпоіу Бер зе СМ сів Ре Спо Ті ТЕ Аа Узі Аа 525 ща 35 чо

Ту Тегі Тім Або Ріо Бех Сів біж Нвіго уві РБеїху ет ще що 555

Спа бек і Тут С Аа Бр іх Аа Аве не Це Це БГев Спо Сов що ще що іх АБ РІВ Є Пш Бо с СУ Бо сів ех Пе Гу Ве Ар Аяв 75 оо Ех

Те Пебег рів бі Тіж Тіх туї Пе Ат Ар оАво Увііец іі

ЩО щих ча

Зо га ее Ас сіУ Су тя Ріє Ат бі Зегієціхв ен Азо Бе

КО ло ТІ» та

Бурзеє б їз Ав еп ег Ре Бег Ре Бех сх ев Пр Ада ух 725 т3а 785

У: у ав ле НвСі Уві УВіівц Рів ші Уві Бег т ТЯ 75а

Сів Своє обекітя Уді Арі Ав Се Ре Тв Гб Тв обег

755 5 85

Авіа Ре Рі Пе Сип еп Гм Су АерЗег Ат су Сп т Я 0

Ре пу еї Ре ге аа Ре Зег Мер Ел См г 55 Ре Св

У85 тво 795 «210517 «2115 2397 -212» ДНК 213» Штучна «220» «223» Синтетична послідовність ДНК, сконструйована для експресії в рослині, що кодує ТІС747ЗРІ. з додатковим залишком аланіну, вбудованим в положенні 2 по відношенню до амінокислотної послідовності бактеріального ТІС7473, отриманого зі штаму 0О5С02008493 Раеєпібасіїйи5 рорійає, що кодує ТІС7473. «4005 17 адодсіаадс адаасаасаа сисадідіє сдсдсссідс ссісснсаї їІдасодіснео 60 аасоддсаїсі асдаснсодс їассддсаїс саддасаїсі Ісаасаюаї стддаааса 120 даїассоддсу ассщдасодсі ддадаадої сісаадаасс аддадсідсі стасдасаїс 180 іссдддаадс Іддададосаї сіссддсдас сідісддада ісаїсдссса дддсаассіс 240 аасасддаді Іададссааада дсідсісааяд аїсдссаасд адсадаасаа сдіссідасс 300 дасдщдааса асаасдсісаа содссаїсаас іссаїдсісс асаїсіассі сссдаадаїс 360 ассаасаїдс ісіссдасді саїдаадсад аасіасдссс ісадссісса даїсдадіас 420 сісіссаадс адсіасадда дзашссдас аадсіддасод іІсаїсаассі даасдіссіс 480 аїсаайсода сдсісассда даїсасісся дсдїассадс дсаїсаадіа союдаасдаяд 540 ааднсдасу адсщдасасі ддсдасщдад аадасссісс дсоссаааса ддасадсдад 600 дасаїсаїсд сіаасдасас дсіддадаас сідасддаас іІсасоддадсі ддосаадісєс 660 дюассаада асдасаюда садсіїсдад Нсїассідс аїасонсса сдасаїдсіс 720 аїсддсааса ассіднсодд ссосіссодсс сісаадасдд ссдссдадсі дапйасааач 780 дасдадаїса адасдадсод сісддадаїс ддсааддаюі асааціссі даїсдіссід 840 ассідісісс аддсіаадас аіссідасод сіаассдссі дссддаадсі ссідддссіс 900 адсдасаїсд асіасассаа саїссідаас садсассіда асдасдадаа даасцдісне 960 сдсдасааса іІссідсссас асідісдаас аадіісісаа асссдаасіа сдідаадасс 1020

Зо аїсдддадсд асаасіасдс сааддщюаїс сіддаддссд адссддасіа сдсосідаг 1080 доуснсдада ісаїсаасда ссодсаїсссо діссісаадд сдіасааддс даадсісаад 1140 садаасіасс аадіддасса ссададссіа іссдада!со шщіассідда саїсдасааа 1200 сіднсідсс сдаадаасіс сдадсадаад їасіасасса адісосісас снсссддас 1260 дусіасадїса іІсассаадаї сасунсдад аадаадсіса асаассідсуд Пасдадоса 1320

З5 ассдссаасі іІсіасдассс діссассддс дасаїсдасс Паасдадаа дсаадісдад 1380 адсассісс іссаддссда сіасаїсісс аїсаасвдісї сддасдасда сддсощдіас 1440 адссдсідо дсдісаїсіс сдадассіс сдадсссда ісаасадсії сдаадсіддад 1500 дюдасдада адіссаадаї ссдасссіа асдідсаада дсіассісад ддадіассіс 1560 сіддадіссд ассісаїсаа сааддадасд адссідаїса соссіссааа сдісіїсаїс 1620 адсаасацо ддадаасід даасаісдад дсддасаасс їадаасссід ддіддсдаас 1680 аасаадаасд ссіасдідда садсассддс дасаїсдадд дсадсааадс асідйсасі 1740 саддащюдасо дсдаднсіс дсадіїсаїс ддсдасаадс іІісаадссааа сассдасіас 1800 аїсаїссаді асасддісаа дддсаадссі одсіаїсіасс Ісаадаасаа даасассоддс 1860 їасасдаці асдаддасас даасодддісс адсдаддацді Іссадассаї соссдідаас 1920

Тасассадсу адассдассс дісссадасс сассісдіді Іісаадісоаса дадсоддадіас 1980 дадасі9додо дадаїаасії сацнаїссід дадідсааду сайсдадас дссддаадас 2040 ссддадсіса Ісааднсда сдасіддаїс ісднсддда ссассіасаї ссдсдасдас 2100 діосісасса іІсдасссдад ссдіддсдас їасіссосс адіссідаа асісдасісд 2160

Тасісдасої асаассісіс дісадснс ісддоссісі дддсіаадої саїсаїсаад 2220 аасісссаса дсдісдіссі днсдадаад дідісдсадс ададнсодіа соіддасаїс 2280 ісддадіссі ісассассас садсаасаад чадодснсі Наїсдадсі сасадддсдас 2340

Ісдсдсдоса осісоддсіс дайссдоддас Шадіада аддадаацчії сдадіад 2397 «2105 18 «2115 798 «212» ПРТ «213» Штучна «220» «223» Амінокислотна послідовність ТІС747ЗРІ,, яка кодується синтетичною послідовністю ДНК, при цьому додатковий залишок аланіну вбудований у положенні 2 по відношенню до бактеріальної амінокислотної послідовності ТІС7473. «4005 18

МесАві св ахп апа ріе зе Узі ати А їв еп бо зак Бе

Те Ар уві Ре АвСу Пе Тут Явро Рів А їз Тім Сх Пе біз Акр 20 5 Б

Те ре лев мів Пе Ве Су ів Ав Ти Сім Ахо Бец ТЕ Без

Сі Уа іеціз АзвСтевієвіеці Ахо Пебетосіжілвів 5 55 щи

Сів Пебеч Сіх аярігцбе ощівів АБС сітУ Ахпіст 5 Ще т ща

Амріш свіевАцвіз сщівміеніля ів А АС См Ав зо ма

АваУж іє і Аво У АзвАхпітієеп Ан АВ ТЕ Аза ех Міеї ню 105 1 із Бі: ТЯ стро л5 в тіж Ах Аіез іп зегАхо Уді Ме? 1 125 їх С Ах гм Аз епос тен сії С я еп бе Св 150 135 15 ігвСтеніє бе АтіллківаАвр Узі ів Авівнп Ах Удії ей 145 150 155 1

Їе ха Зе їі ісв і чів ПЕ Ро Аз т СВ Ага Тв хв 155 Гл 175

ТМ Узі Аза Єіпіде Ре Ахр іч Гей Піх Ів А Тр свід ПЕ 185 155 Бе: іегмАтеАїв о сі зе соя Ар Не Не Аз Ав ав іх ет 195 й де

СтаАхнпівнц і Сттіезіїнстшівиаізвіле ер узі ін лк Ява з ЗІ 220 длв Мет Ар Бег Рів ст: Ріє Ту ій Пі 1іг Рі НЕ АБО Узі г ва 225 3 255 а ів аАхпАхвіец ве Сі Ат зе із івеціхв м Аа Аз с іс Це Тігіле Ав Спа Ше ув Піносег сіу Бегозд Це Сік дк 365 зт

Ук ТУ ЗекРцеївеців Узі іев ііжслвівц св АБ ле АВ вве ат ЩО ЗЕ ігвішж іні АВ СУ Агоііемівепсіу еп зег Аво Це ахр

КЕ ах а

ТУ Ті Аза Це Тем Асп з Нх Тепла мі у Ап кат Ріє 305 310 315 32о їв Ах Ав Пе І ет Рг Пи і епое З«піля Ре бе Ах Ро Ак

ТМ Уміле ТП Пе біт бегАзо Аза ж Авіхв умів івв Сів 35 350

АвосіРЮ Сі я Аіівв УЗИ СТУ Не сі Це Це Ахл Ахр Аге з3ух мо 05 іеРею учііецпіх АВ ' іх Ав іт венпіся Св Аза б Св 370 375 ЗВО

Ук Або Пів зі Зег еп егій: Це УЗ Гм Тез Аврвів Арі 355 ЕВ За що іемпрРНесСувРІв ху Аєпозег стро іх У ГУ ііі х5бЗегівез що що зі15

Ті Ріо Ар сік У Уфі Те Твгіля Це Тіх РБе зв був 1 д 4 5 яю

ІгепАхваяв ев Ате Тука А тіж вів Аа Ре Бут Авто Рто ет

Я а

Ті су дорів аевіенр Аза Сі дв в Уві Стоек їж Бе ів 455 Я

Став Ахр ім Пебзе ів Аа узі бе Або Ахю Акраіж Узі ж 5 47 Я75 о

Ме роїв сі Узі Це Бех Сіл Ріє Ге Бех Рез Це Аве 5 455 Е 95

Рів сів Узі Аза сті ів ог Щеївен гів ТЕ ув ще в ЗІ їз бег іч ев св Сб гм Гепівсн сівоег Або Гея ПВ Ав іль

Ух Ум 25 і Іі5 зетісвів ав Різ Ро Ап уді ре Пе бе Ах ПЕ ОМ ВЕ

З Зїі5 5

Сім Ап Но Ап Ле С А їв Акр Ав без С Ро Ттроуві Діз Ай 545 550 335 За

АвпізвАхв а т Уві Абе ії сту Сі В сьо Зегіда

Зах ЗТ УТ

АВісипвР Тв ою Аа Оу І Ре бег БВЕРбе Це Сх Аве

ЗО 585 59О іхвбеціле вто Ав Бін Ар Бу Пе Пебів ж я Уввбблв СУ вед БО 505 іч Ро Аве їетіспі Азнпіхх вв 1йгезіх 1 п Ме тя ів ІЗ 5

С Ао тіж Ав Сік о зе сім і ее Сів Бін ЇВ А Уві Яви

ЩО ЩО 535 -О ти ті бБегсСі їі Азр Ро бер бСів Пе Ні і ев УдіВНе їла зег

Сзеріну їм В АТ тр бі Аво Ахв Рі ІВ ІВ і еп туя 56 665 5 іх АВР СВ і Рто хх бу Рез хв теє Це 5 Рве Ар Ар

БО 685

Те Пе бех Ріє Сім Тж Ті ТУ Пе Аге або Аво Узі бе Тк ТЕ

Ав Розе Ага Сі Сі ТУ Ре ги свбегіенвіувіви Ар 'зег 705 Ів 715 о тя Бер т Ге Ах«півен ех Ре зе Ре Бе Сім НА хь я то У35

УВІ Івіхзанзе и сі уві Уміти Рі іі УВІ Бе пай ча ТМ

Свошое оеріє УЗ Арі Бег бін Зеє Ре тіж Тік їн бег т55 т 755

Авспіхв Ст у Ре Ріє Це б Гев' сіх Зхр Бе Ага іх Су тю ТІ то

Ві су ет Рі Аге аво Ріе зер Мебі уз ем у Ре Є Ва 785 я т

Claims (26)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти, яка містить гетерологічний промотор, функціонально пов'язаний з полінуклеотидним сегментом, який кодує пестицидний білок або його пестицидний фрагмент, при цьому:

а) зазначений пестицидний білок містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 4, 5ЕО І МО: 2, 5ЕО ІО МО: 6, 5ЕО І МО: 8, 5ЕО ІЮО МО: 10, 5ЕО ІО МО: 12, 5ЕО І МО: 14, 5ЕО І МО: 16 або 5ЕО ІЮО МО: 18; або р) зазначений пестицидний білок містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 95 до ідентичності амінокислотної послідовності з 560 ІЮ МО: 4, 5ЕО ІЮО МО: 2, 5ЕО ІЮО МО: 6, 5ЕО ІО МО: 8, ЗЕО ІЮ МО: 10, ЗЕО ІО МО: 12, 5ЕО ІЮ МО: 14, ЗЕО ІЮ МО: 16 або 5ЕО ІЮ МО: 18; де вказаний пестицидний білок або його пестицидний фрагмент є активним проти комахи ряду І ерідорієга.

2. Молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти за п. 1, яка відрізняється тим, що: а) вказаний гетерологічний промотор являє собою рослинний промотор, або р) вказана молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти міститься в рослинній клітині, або с) зазначена молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти міститься в векторі, і вказаний вектор вибраний з групи, що складається з плазміди, фагміди, бакміди, косміди та бактеріальної або дріжджової штучної хромосоми.

3. Молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти за п. 1, що визначається як присутня в клітині- хазяїні, яка відрізняється тим, що зазначена клітина-хазяїн вибрана з групи, що складається з бактеріальної клітини та рослинної клітини.

4. Молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти за п. 3, яка відрізняється тим, що зазначена бактеріальна клітина-хазяїн походить з роду бактерій, вибраних з групи, що складається з: Адгорасіегішт, Кпі2обічт, Васійи5, ВгемібасіШшв5, ЕбсПегіспіа, Рзендотопав, КіІерзівЇІа, Рапіоєва та Ееміпіа.

5. Молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти за п. 4, яка відрізняється тим, що зазначений вид Васіїйиє5 є Васійи5 сегеи5 або Васійи5 ІпПигіпдіепві5, зазначений Вгемірасійй5 є Вгемібасійи5 Іаїегозрегоив, і зазначений Езспегіспіа є ЕзсоПегіспіа соїї.

6. Рекомбінантна нуклеїнова кислота за п. 2, яка відрізняється тим, що зазначена рослинна клітина є клітиною дводольної або однодольної рослини.

7. Рекомбінантна нуклеїнова кислота за п. 6, яка відрізняється тим, що зазначена рослинна клітина-хазяїн вибрана з групи, що складається з рослинної клітини люцерни, банана, ячменю, бобів, броколі, капусти, Вгазвзіса, моркви, маніоки, рицини, цвітної капусти, селери, нуту, Зо китайської капусти, цитрусових, кокосової пальми, кави, кукурудзи, конюшини, бавовнику, гарбузових, огірка, дугласової ялиці, баклажана, евкаліпта, льону, часнику, винограду, хмелю, цибулі порею, салату-латуку, сосни ладанної, проса, дині, горіха, вівса, оливи, цибулі, декоративної рослини, пальми, трави пасовиська, гороху, арахісу, перцю, голубиного гороху, сосни, картоплі, тополі, гарбуза, сосни променистої, редису, ріпаку, рису, кореневищних злаків, жита, американського шафрану, чагарнику, сорго, південної сосни, сої, шпинату, кабачка, полуниці, цукрових буряків, цукрової тростини, соняшника, солодкої кукурудзи, амбрового дерева, солодкої картоплі, проса прутовидного, чаю, тютюну, томата, тритикале, дернової трави, кавуна і пшениці.

8. Молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти за п. 1, яка відрізняється тим, що вказаний білок проявляє активність проти комахи ряду лускокрилих.

9. Молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти за п. 8, яка відрізняється тим, що вказану комаху ряду лускокрилих вибрано з групи, що складається з: совки оксамитових бобів, вогнівки очеретяної, точильника зернового, совки бавовняної, тютюнової листовійки, соєвої совки, африканської совки, південної совки, кукурудзяної листової совки, совки бурякової, совки американської, азіатської бавовняної совки, рожевого коробкового хробака бавовника, совки- іпсилон, вогнівки кукурудзяної південно-західної, совки бавовняної американської, капустяної молі, совки плямистої, тютюнової совки, совки бобової західної і метелика стеблового кукурудзяного.

10.Рослина або її частина, що містить молекулу рекомбінантної нуклеїнової кислоти за п. 1.

11. Рослина або її частина за п. 10, яка відрізняється тим, що вказана рослина є однодольною рослиною або дводольною рослиною.

12. Рослина за п. 10, яка відрізняється тим, що рослину вибирають з групи, що складається з люцерни, банана, ячменю, бобів, броколі, капусти, Вгавзвіса, моркви, маніоки, рицини, цвітної капусти, селери, нуту, китайської капусти, цитрусових, кокосової пальми, кави, кукурудзи, конюшини, бавовнику, гарбузових, огірка, дугласової ялиці, баклажана, евкаліпта, льону, часнику, винограду, хмелю, цибулі порею, салату-латуку, сосни ладанної, проса, дині, горіха, вівса, оливи, цибулі, декоративної рослини, пальми, трави пасовиська, гороху, арахісу, перцю, голубиного гороху, сосни, картоплі, тополі, гарбуза, сосни променистої, редису, ріпаку, рису, кореневищних злаків, жита, американського шафрану, чагарнику, сорго, південної сосни, сої, бо шпинату, кабачка, полуниці, цукрових буряків, цукрової тростини, соняшника, солодкої кукурудзи, амбрового дерева, солодкої картоплі, проса прутовидного, чаю, тютюну, томата, тритикале, дернової трави, кавуна і пшениці.

13. Насіння рослини за п. 10, яке відрізняється тим, що вказане насіння містить зазначену молекулу рекомбінантної нуклеїнової кислоти.

14. Композиція, що має інгібуючу активність відносно комах ряду Іерідорієга, яка містить молекулу рекомбінантної нуклеїнової кислоти за п. 1.

15. Композиція, яка має інгібуючу активність відносно комах ряду І ерідорієга, за п. 14, яка додатково містить нуклеотидну послідовність, що кодує щонайменше один інший пестицидний агент, який відрізняється від зазначеного пестицидного білка.

16. Композиція, що має інгібуючу активність відносно комах ряду І ерідорієга, за п. 15, яка відрізняється тим, що зазначений щонайменше один інший пестицидний агент вибирають з групи, що складається з білка, який має інгібуючу активність відносно комах, молекули длРНК, що має інгібуючу активність відносно комах, і допоміжного білка.

17. Композиція, що має інгібуючу активність відносно комах ряду І ерідорієга, за п. 15, яка відрізняється тим, що зазначений щонайменше один інший пестицидний агент проявляє активність відносно одного або більше видів шкідників рядів лускокрилих, твердокрилих або напівтвердокрилих.

18. Композиція, що має інгібуючу активність відносно комах ряду І ерідорієга, за п. 15, яка відрізняється тим, що зазначений щонайменше один інший пестицидний білок є вибраним із групи, що складається з СтутА, СтутАБ, СтутАс, СтутА. 105, СтуТтАє, Сту1В, Сту1сС; варіантів Стус, Сту1О, Сгу1Е, СтуїЕ, химер СтутА/Е; Сту1!б, СтуїН, СтгутІ, Сту!ту, СтуїК, Стуті,, СтугА, СтугАр, СтугАеє, СтуЗ, варіантів СгузА; СтуЗВ, Сту4В, Стуб, Сту7, Сгув, Сту9, Сту15, Сту34, Сту35, Сту4ЗА, Сту43В, СтубіАа!, ЕТ29, ЕТЗ33, ЕТ34, ЕТЗ5, ЕТб6б, ЕТ70, ТІС400, ТІС407, ТІСА17, ТІС431, ТІС8О00, ТІС807, ТІС834, ТІС853, ТІС900, ТІС9О1, ТІС1201, ТІС1415, ТІС2160, ТІСЗ3131, ТІС836, ТІС860, ТІС867, ТІС869, ТІС1100, МІРЗА, МІРЗВ, МІРЗАБ, АХМІ-АХМІ-, АХМІ-88, АХМІ-97, АХМІ-102, АХМІ-112, АХМІ-117, АХМІ-100, АХМІ-115, АХМІ-113 та АХМІ-005, АХМІ134, АХМІ- 150, АХМІ-171, АХМІ-184, АХМІ-196, АХМІ-204, АХМІ-207, АХМІ-209, АХМІ-205, АХМІ-218, АХМІ- 220, АХМІ-2217, АХМІ-2227, АХМІ-2237, АХМІ-2247 та АХМІ-2257, АХМІ-238, АХМІ-270, АХМІ- 279, АХМІ-345, АХМІ-335, АХМІ-КІ1 та їх варіантів, ІРЗ та його варіантів, БІС-3, БІС-5, 01-10, Зо ріа-657 та білка 01-11.

19. Композиція, що має інгібуючу активність відносно комах ряду І ерідорієга, за п. 14, яка визначається як така, що містить рослинну клітину, яка експресує зазначену рекомбінантну молекулу нуклеїнової кислоти за п. 1.

20. Товарний продукт, отриманий з рослини або її частини за п. 10, який відрізняється тим, що товарний продукт містить кількість зазначеної молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти та пестицидного білка, яка може бути визначена.

21. Товарний продукт за п. 20, вибраний з групи, що складається з товарної кукурудзи, упакованої оброблювачем зерна, кукурудзяних пластівців, кукурудзяних коржів, кукурудзяного борошна, кукурудзяного борошна грубого помелу, кукурудзяного сиропу, кукурудзяної олії, кукурудзяного силосу, кукурудзяного крохмалю, кукурудзяної каші і тому подібного, а також відповідних товарних продуктів з сої, рису, пшениці, сорго, голубиного гороху, арахісу, фруктів, дині і овочів, включаючи, де це може бути застосовано, соки, концентрати, джеми, желе, мармелади та інші їстівні форми таких товарних продуктів, що містять кількість, яка може бути визначена, таких полінуклеотидів і чи поліпептидів даної заявки, цільного або обробленого насіння бавовнику, бавовняного масла, лінту, насіння і частин рослин, оброблених для корму або продуктів харчування, волокна, паперу, біомаси і паливних продуктів, таких як паливо, отримане з бавовняного масла або пелет, отриманих з відходів бавовняного очищення, цільного або обробленого насіння сої, соєвого масла, соєвого білка, соєвого борошна грубого помелу, соєвого борошна, соєвих пластівців, соєвих висівок, соєвого молока, соєвого сиру, соєвого вина, корму для тварин, що містить соєві боби, паперу, що містить сою, вершків, що містять сою, біомаси соєвих бобів і паливних продуктів, вироблених з використанням рослин сої та частин рослин сої.

22. Спосіб отримання насіння, що включає: а) посадку першого насіння за п. 13; р) вирощування рослини з насіння; і с) збирання насіння з рослин, що відрізняється тим, що вказане зібране насіння містить зазначену молекулу рекомбінантної нуклеїнової кислоти.

23. Рослина, стійка до зараження комахами-шкідниками, при цьому клітини зазначеної рослини містять молекулу рекомбінантної нуклеїнової кислоти за п. 1.

24. Спосіб боротьби з комахами-шкідниками ряду лускокрилих або зараженням комахами- шкідниками, причому зазначений спосіб включає: а) контактування шкідника з інсектицидно ефективною кількістю пестицидного білка, як зазначено в ЗЕО ІЮ МО: 4, ЗЕО ІЮО МО: 2, ЗЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІО МО: 12, ЗЕО ІЮ МО: 16 або 5ЕО ІО МО: 18; або р) контактування шкідника з інсектицидно ефективною кількістю одного або більше пестицидних білків, що містять амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 85 або 90, або 95, або 98, або 99, або близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності з зЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО І МО: 2, БЕО ІЮ МО: 8, ЗЕО ІЮ МО: 12, 5БЕО ІО МО: 16 або 5ЕО І МО: 18.

25. Спосіб виявлення наявності молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти за п. 1 у зразку, що містить геномну ДНК рослин, який включає: а) контактування зазначеного зразка з зондом нуклеїнової кислоти, який гібридизується в жорстких умовах гібридизації з геномною ДНК з рослини, що містить молекулу рекомбінантної нуклеїнової кислоти за п. 1, ії не гібридизується в таких умовах гібридизації з геномною ДНК із іншої ізогенної рослини, яка не містить молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти за п 1, причому вказаний зонд є гомологічним або комплементарним до 5ЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІЮО МО: 5, 5ЕО ІО МО: 7, ЗЕО І МО: 9, 5ЕО ІО МО: 11, 5ЕО ІО МО: 13, 5ЕО ІО МО: 15 або ЗЕО ІЮО МО: 17, або послідовності, яка кодує пестицидний білок, що містить амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 65 або 70, або 75, або 80, або 85, або 90, або 95, або 98, або 99, або близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності з зЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІО МО: 5, 5ЕО ІЮО МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 9, 5ЕО ІЮ МО: 11, 5ЕО ІО МО: 13, 5ЕО І МО: 15 або 5ЕО ІО МО: 17; р) застосування до зазначеного зразка і зазначеного зонду жорстких умов гібридизації; і с) визначення гібридизації зазначеного зонду нуклеїнової кислоти з вказаною геномною ДНК рослини зазначеного зразка.

26. Композиція, що має інгібуючу активність відносно комах ряду І ерідорієга, за п. 14, яка додатково містить пестицидний білок або пестицидний фрагмент за п. 1.