UA123482C2 - Химерний інсектицидний білок, інгібіторний відносно лускокрилих шкідників - Google Patents
Химерний інсектицидний білок, інгібіторний відносно лускокрилих шкідників Download PDFInfo
- Publication number
- UA123482C2 UA123482C2 UAA201909676A UAA201909676A UA123482C2 UA 123482 C2 UA123482 C2 UA 123482C2 UA A201909676 A UAA201909676 A UA A201909676A UA A201909676 A UAA201909676 A UA A201909676A UA 123482 C2 UA123482 C2 UA 123482C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- chimeric insecticidal
- insecticidal protein
- activity against
- plant
- inhibitory activity
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 325
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 316
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 title claims abstract description 263
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims abstract description 116
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims abstract description 83
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 71
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 47
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 46
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 23
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 167
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 81
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 25
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 21
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 15
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 12
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 12
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 3
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000010903 husk Substances 0.000 claims description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 claims 1
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 claims 1
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 abstract description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 59
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 46
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 44
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 36
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 35
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 30
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 30
- 241000254171 Curculionidae Species 0.000 description 29
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 29
- 241000255967 Helicoverpa zea Species 0.000 description 29
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 26
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 23
- 244000299507 Gossypium hirsutum Species 0.000 description 20
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 20
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 19
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 19
- 241000254158 Lampyridae Species 0.000 description 18
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 18
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 16
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 16
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 16
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 16
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 15
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 15
- 101100123850 Caenorhabditis elegans her-1 gene Proteins 0.000 description 14
- 241001414720 Cicadellidae Species 0.000 description 12
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 11
- 241000346285 Ostrinia furnacalis Species 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 10
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 10
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 10
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 9
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 9
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 8
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 6
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 6
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 6
- 244000111261 Mucuna pruriens Species 0.000 description 6
- 235000008540 Mucuna pruriens var utilis Nutrition 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 5
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 5
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 5
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 5
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 5
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 5
- 108010031100 chloroplast transit peptides Proteins 0.000 description 5
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 5
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 description 5
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 5
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 4
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 4
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 4
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 4
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 4
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 4
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 4
- 241000256682 Peregrinus maidis Species 0.000 description 4
- 241000500437 Plutella xylostella Species 0.000 description 4
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 4
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 3
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 3
- 241001572697 Earias vittella Species 0.000 description 3
- 235000004341 Gossypium herbaceum Nutrition 0.000 description 3
- 240000002024 Gossypium herbaceum Species 0.000 description 3
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 3
- 241000258937 Hemiptera Species 0.000 description 3
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 3
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 3
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 241001147398 Ostrinia nubilalis Species 0.000 description 3
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 3
- 241000255901 Tortricidae Species 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 3
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000000967 entomopathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 3
- 230000035611 feeding Effects 0.000 description 3
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- -1 merican Species 0.000 description 3
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 241001629128 Alnetoidia alneti Species 0.000 description 2
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 2
- 235000000832 Ayote Nutrition 0.000 description 2
- 108700003918 Bacillus Thuringiensis insecticidal crystal Proteins 0.000 description 2
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 2
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 2
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 description 2
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 description 2
- 235000000540 Brassica rapa subsp rapa Nutrition 0.000 description 2
- 108010049994 Chloroplast Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 101710151559 Crystal protein Proteins 0.000 description 2
- 235000009854 Cucurbita moschata Nutrition 0.000 description 2
- 240000001980 Cucurbita pepo Species 0.000 description 2
- 235000009804 Cucurbita pepo subsp pepo Nutrition 0.000 description 2
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010074122 Ferredoxins Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 235000011430 Malus pumila Nutrition 0.000 description 2
- 235000015103 Malus silvestris Nutrition 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 2
- 241000348346 Suta Species 0.000 description 2
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 2
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 2
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 2
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 2
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 2
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000035613 defoliation Effects 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 231100000502 fertility decrease Toxicity 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 2
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 2
- 235000015136 pumpkin Nutrition 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 2
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 2
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- VDBHOHJWUDKDRW-UHFFFAOYSA-N 1-(1,1,2,3,3,6-hexamethyl-2h-inden-5-yl)ethanone Chemical compound CC1=C(C(C)=O)C=C2C(C)(C)C(C)C(C)(C)C2=C1 VDBHOHJWUDKDRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000107983 Aleyrodes proletella Species 0.000 description 1
- 241000234282 Allium Species 0.000 description 1
- 235000005254 Allium ampeloprasum Nutrition 0.000 description 1
- 240000006108 Allium ampeloprasum Species 0.000 description 1
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 description 1
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 description 1
- 241000254175 Anthonomus grandis Species 0.000 description 1
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 1
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 1
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 241000239223 Arachnida Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000017647 Brassica oleracea var italica Nutrition 0.000 description 1
- 235000010149 Brassica rapa subsp chinensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000000536 Brassica rapa subsp pekinensis Nutrition 0.000 description 1
- 241000499436 Brassica rapa subsp. pekinensis Species 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 101100378707 Caenorhabditis elegans air-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000010773 Cajanus indicus Nutrition 0.000 description 1
- 244000105627 Cajanus indicus Species 0.000 description 1
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 1
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 description 1
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 description 1
- 241000700114 Chinchillidae Species 0.000 description 1
- 235000010523 Cicer arietinum Nutrition 0.000 description 1
- 244000045195 Cicer arietinum Species 0.000 description 1
- 244000241235 Citrullus lanatus Species 0.000 description 1
- 235000012828 Citrullus lanatus var citroides Nutrition 0.000 description 1
- 241001465977 Coccoidea Species 0.000 description 1
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 1
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 241001364569 Cofana spectra Species 0.000 description 1
- 240000007154 Coffea arabica Species 0.000 description 1
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 1
- 241000219112 Cucumis Species 0.000 description 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 241000879145 Diatraea grandiosella Species 0.000 description 1
- 241000122106 Diatraea saccharalis Species 0.000 description 1
- 241000353522 Earias insulana Species 0.000 description 1
- 241000086608 Empoasca vitis Species 0.000 description 1
- 244000004281 Eucalyptus maculata Species 0.000 description 1
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 description 1
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 description 1
- 235000011363 Fragaria x ananassa Nutrition 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 1
- 240000000047 Gossypium barbadense Species 0.000 description 1
- 235000009429 Gossypium barbadense Nutrition 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000008694 Humulus lupulus Nutrition 0.000 description 1
- 244000025221 Humulus lupulus Species 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- 241000758791 Juglandaceae Species 0.000 description 1
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 1
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 1
- 235000006550 Liquidambar Nutrition 0.000 description 1
- 241000208682 Liquidambar Species 0.000 description 1
- 241000193981 Loxostege sticticalis Species 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 244000081841 Malus domestica Species 0.000 description 1
- 244000070406 Malus silvestris Species 0.000 description 1
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241001647769 Mirza Species 0.000 description 1
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 1
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 101100366988 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) stu-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000207836 Olea <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 241001012098 Omiodes indicata Species 0.000 description 1
- 241000238814 Orthoptera Species 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 1
- 241001442654 Percnon planissimum Species 0.000 description 1
- 241001236219 Pinus echinata Species 0.000 description 1
- 235000005018 Pinus echinata Nutrition 0.000 description 1
- 235000017339 Pinus palustris Nutrition 0.000 description 1
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 1
- 240000003889 Piper guineense Species 0.000 description 1
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 1
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 108010078762 Protein Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000014961 Protein Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 1
- 244000088415 Raphanus sativus Species 0.000 description 1
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 description 1
- 241000109329 Rosa xanthina Species 0.000 description 1
- 235000008406 SarachaNachtschatten Nutrition 0.000 description 1
- 241001249129 Scirpophaga incertulas Species 0.000 description 1
- 241000555745 Sciuridae Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 241000563489 Sesamia inferens Species 0.000 description 1
- 241000532790 Sitona hispidulus Species 0.000 description 1
- 235000004790 Solanum aculeatissimum Nutrition 0.000 description 1
- 235000008424 Solanum demissum Nutrition 0.000 description 1
- 235000018253 Solanum ferox Nutrition 0.000 description 1
- 235000000208 Solanum incanum Nutrition 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 235000013131 Solanum macrocarpon Nutrition 0.000 description 1
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 1
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 1
- 235000009869 Solanum phureja Nutrition 0.000 description 1
- 240000002307 Solanum ptychanthum Species 0.000 description 1
- 235000000341 Solanum ptychanthum Nutrition 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 235000017622 Solanum xanthocarpum Nutrition 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 235000009337 Spinacia oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 244000300264 Spinacia oleracea Species 0.000 description 1
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 1
- 241001455617 Sula Species 0.000 description 1
- 235000018639 Terminalia sericea Nutrition 0.000 description 1
- 241000844454 Terminalia sericea Species 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 102000002933 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 235000019714 Triticale Nutrition 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 241000254234 Xyeloidea Species 0.000 description 1
- 241000482268 Zea mays subsp. mays Species 0.000 description 1
- 244000128884 Zier Kohl Species 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000004666 bacterial spore Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- VEMKTZHHVJILDY-UXHICEINSA-N bioresmethrin Chemical compound CC1(C)[C@H](C=C(C)C)[C@H]1C(=O)OCC1=COC(CC=2C=CC=CC=2)=C1 VEMKTZHHVJILDY-UXHICEINSA-N 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 235000016213 coffee Nutrition 0.000 description 1
- 235000013353 coffee beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004634 feeding behavior Effects 0.000 description 1
- 244000037666 field crops Species 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000021393 food security Nutrition 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 235000007919 giant pumpkin Nutrition 0.000 description 1
- 244000155489 giant pumpkin Species 0.000 description 1
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000011901 isothermal amplification Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- JCCNYMKQOSZNPW-UHFFFAOYSA-N loratadine Chemical compound C1CN(C(=O)OCC)CCC1=C1C2=NC=CC=C2CCC2=CC(Cl)=CC=C21 JCCNYMKQOSZNPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007758 mating behavior Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 150000004045 organic chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 210000002824 peroxisome Anatomy 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000014639 sexual reproduction Effects 0.000 description 1
- JXOHGGNKMLTUBP-HSUXUTPPSA-N shikimic acid Chemical compound O[C@@H]1CC(C(O)=O)=C[C@@H](O)[C@H]1O JXOHGGNKMLTUBP-HSUXUTPPSA-N 0.000 description 1
- JXOHGGNKMLTUBP-JKUQZMGJSA-N shikimic acid Natural products O[C@@H]1CC(C(O)=O)=C[C@H](O)[C@@H]1O JXOHGGNKMLTUBP-JKUQZMGJSA-N 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 230000036435 stunted growth Effects 0.000 description 1
- 235000020238 sunflower seed Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000005382 thermal cycling Methods 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000009417 vegetative reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000013466 vegetative reproduction Methods 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 235000020234 walnut Nutrition 0.000 description 1
- 241000228158 x Triticosecale Species 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
- A01N47/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having one or more single bonds to nitrogen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
- C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Catching Or Destruction (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
Abstract
Винахід стосується химерного інсектицидного білка, який має інгібіторну активність відносно видів комах ряду Lepidoptera. Винахід також стосується полінуклеотиду, який кодує химерний інсектицидний білок, клітини-хазяїна, яка містить полінуклеотид, композиції, яка має інгібувальну активність відносно комах, насіння, трансгенної клітини рослини, товарного продукту, рекомбінантної полінуклеотидної молекули, молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти, способу боротьби з лускокрилим шкідником та способу отримання насіння.
Description
(54) ХИМЕРНИЙ ІНСЕКТИЦИДНИЙ БІЛОК, ІНГІБІТОРНИЙ ВІДНОСНО ЛУСКОКРИЛИХ ШКІДНИКІВ (57) Реферат:
Винахід стосується химерного інсектицидного білка, який має інгібіторну активність відносно видів комах ряду І ерідорієга. Винахід також стосується полінуклеотиду, який кодує химерний інсектицидний білок, клітини-хазяїна, яка містить полінуклеотид, композиції, яка має інгібувальну активність відносно комах, насіння, трансгенної клітини рослини, товарного продукту, рекомбінантної полінуклеотидної молекули, молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти, способу боротьби з лускокрилим шкідником та способу отримання насіння.
Ця заявка заявляє пріоритет за попередньою заявкою на патент США Мо 62/064989, поданою 16 жовтня 2014 року, зміст якої в повному обсязі включено в цей документ за допомогою посилання.
Перелік послідовностей у машиночитаній формі, поданий з цією заявкою в електронному форматі й включений в цю заявку за допомогою посилання в повному обсязі. Перелік послідовностей міститься в файлі, створеному 23 серпня 2016 року, з ім'ям файлу
РЗ4230М000 Зед РСТ АгпЗ4хі та розміром 898,229 байт (як виміряно в операційній системі
М5-М/іпдохмФ).
Цей винахід в цілому належить до області білків, які здійснюють інгібуючу дію на комах. У цій заявці описаний новий клас химерних інсектицидних білків, які проявляють інгібуючу активність проти сільськогосподарських шкідників культурних рослин і насіння. Зокрема, розкритий клас білків має інсектицидну активність відносно лускокрилих комах-шкідників. Передбачені рослини, частини рослин і насіння, що містять молекулу рекомбінантної нуклеїнової кислоти, яка кодує один або більше описаних токсичних білків.
Все більшого значення набуває підвищення врожайності сільськогосподарських культур, в тому числі кукурудзи, сої, цукрового очерету, рису, пшениці, овочів і бавовнику. За прогнозами, на додаток до зростаючої потреби в сільськогосподарській продукції для забезпечення їжею, одягом та забезпечення енергією населення, що росте, кліматичних наслідків і тиску з боку зростаючого населення на використання землі, відмінної від сільськогосподарської, зменшується кількість доступних орних земель для ведення сільського господарства. Ці фактори привели до неоптимістичних прогнозів відносно продовольчої безпеки, особливо в умовах відсутності значних поліпшень в галузі біотехнології рослин і агрономічних прийомів. У світлі цих факторів, екологічно стійкі удосконалення в області технологій, агротехніки та боротьби зі шкідниками є життєво важливими інструментами для розширення виробництва сільськогосподарських культур на обмеженій кількості орних земель, доступних для ведення сільського господарства.
Комахи, особливо комахи в межах ряду лускокрилих, вважаються основною причиною пошкодження польових культур, та які знижують врожайність культур в заражених районах.
Види лускокрилих шкідників, які мають негативний вплив на сільське господарство, включають,
Зо без обмеження, кукурудзяну листову совку (Зродоріега Ігидірегда), совку малу (Зродоріега ехідча), совку латукову (Матезіга сопіїдигада), совку-іпсилон (Адгоїї5 ірзхіоп), совку капустяну (Ттіспоріизіа пі), соєву совку (Спгузодеїхі5 іпсіцдеп5), совку оксамитових бобів (Апіїсагвіа деттаїгаїї5), совку конюшинову (Нурепа з5сабга), тютюнову листовійку (Неїїоїпі5 мігезсеп5), совку бавовняну (Адгоїї5 з,ибіеггапеа), совку лугову (Рзецдаїейа ипірипсіа), совку прямокутну (Аадгоїі5 огпподопіа), метелика стеблового кукурудзяного (О5ігіпіа пибрііайй5), метелика-вогнівку (Атуеїоі5 іїгапо5йейПа), кукурудзяну вогнівку (Статбри5 саїїдіпозеПи5), лугового метелика (Негредгатта
Ісагвізаїі5), вогнівку соняшникову (Нотоеозота еїесіеПшит), точильника зернового кукурудзяного (Еіаєтораїрих Імщдпозеййи5), плодожерку яблуневу (Судіа ротопеїа), листовійку виноградну (Епдоріла міеапа), листовійку східну персикову (Сгарпоїйа тоїевіа), листовійку брунькову соняшнику (Зцівїта Пеїйап(папа), капустяну моль (Рішейа хуЇозіейа), рожевого коробкового хробака (Ресііпорпога доззуріейа), рожеву стеблову совку (Зезатіа іптегеп5), шовкопряда непарного (Гутапіга аїзраг), совку бавовняну американську (АіІабата агодіНасеа), листовійку плодових дерев (АгсПпір5 агдугозрііа), листовійку різану золотисту (Агопір5 гозапа), вогнівку азіатську стеблову або вогнівку жовту рисову (Спйо зирргеззаїї5), листовійку рисову (Спарпаосгосі5 теадіпаїї5), кукурудзяну вогнівку (Статриз5 саїїдіпозеПи5), метелика трав'яного (Статрих еїегтеїйи5), вогнівку кукурудзяну південно-західну (Оіаїйгаєа дгапаїозейПа), вогнівку цукрової тростини (Оіаїгаєа засспагаїїє), совку бавовняну єгипетську (Еагіазх іп5шапа), совку плямисту (Еагіа5 міцеПйа), совку американську (Неїїсомегра агтідега), совку бавовняну або американську кукурудзяну совку (Неїїсомегра 7еа), лугового метелика (Негре(одгатта
Іісагвізаїі5), гронову листовійку (І обезіа роїгапа), цитрусового мінуючого метелика (РпуПоспівіів5 сіїгеІМа), білявку капустяну (Ріегі5 Бгаззісає), репніцу або білявку ріпняну (Ріегі5 гарає), азіатську бавовникову совку або азіатську бавовняну совку (Зродоріеєга Ійшига) і пасльонового мінера (Тша арзоїша).
Історично склалося так, що синтетичні хімічні інсектициди інтенсивно застосовували як засіб боротьби з шкідниками в сільському господарстві. Занепокоєність з приводу навколишнього середовища і здоров'я людини, крім виникаючих проблем зі стійкістю, стимулювала дослідження та розробку біологічних пестицидів. Це дослідження привело до прогресивного відкриття і застосування різних ентомопатогенних видів мікроорганізмів, включаючи бактерій.
Коли відкрили потенціал ентомопатогенних бактерій, особливо бактерій, що належать до 60 роду Васійи5, і застосували його в розробці агентів для біологічної боротьби зі шкідниками,
змінилася парадигма біологічних методів боротьби. Штами бактерії Васійн5 «(Пигіпдіепвів5 (ВО використовували як джерело інсектицидних білків, оскільки було виявлено, що штами Ві проявляють високу токсичність проти конкретних комах. Відомо, що штами Ві продукують дельта-ендотоксини, які локалізовані в параспоральному кристалічному тільці включення на початку споруляції та під час фази стаціонарного росту (наприклад, білки Стгу), і також відомо, що вони продукують інсектицидний білок, що секретується. При ковтанні сприйнятливою комахою, дельта-ендотоксини, а також токсини, що секретуються, надають свою дію на поверхню епітелію середньої кишки, руйнують клітинну мембрану, приводячи до руйнування та загибелі клітин. Гени, що кодують інсектицидні білки, також були ідентифіковані у бактеріальних видів, відмінних від Ві, включаючи інші Васійш5 і множину інших видів бактерій, таких як
Вгемібасійи5 Іагегозрогив, І узіпірасійи5 5рпаеєгісив ("/5" раніше відомий як Васійи5 5рпаеєгісив) і
Раепібасійи5 рорійав.
Кристалічні і що секретуються розчинні інсектицидні білкові токсини є високоспецифічними для їх хазяїв і отримали світове визнання як альтернатива хімічним інсектицидам. Наприклад, інсектицидні токсичні білки застосовують в різних сільськогосподарських цілях для захисту господарсько-цінних рослин від зараження комахами, зменшення потреби в застосуванні хімічних пестицидів і підвищення врожайності. Інсектицидні токсичні білки застосовують для боротьби з сільськогосподарськими шкідниками культурних рослин механізованими способами, такими як розпорошення дисперсних мікробних препаратів, що містять різні штами бактерій, на поверхні рослин, і з використанням способів генетичної трансформації для отримання трансгенних рослин і насіння, що експресують інсектицидний токсичний білок.
Застосування трансгенних рослин, які експресують інсектицидні білки, визнано в світовому масштабі. Наприклад, у 2012 році 26,1 мільйона гектарів були засаджені трансгенними культурами, експресуючими Ві-токсини (датев, С., сіоба! Єайшв5 ої Соттегсіаіїїйгей Віотїесп/ЗмМ
Сторе: 2012. Короткий зміст звіту ІЗААА (Міжнародна служба зі збору відомостей про застосування біотехнологій в сільському господарстві) Мо 44). Глобальне застосування трансгенних культур, захищених від комах, і обмежена кількість інсектицидних білків, що застосовуються для цих культур, створило тиск відбору для існуючих алелей комах, які надають стійкість до застосовуваних в цей час інсектицидних білків.
Зо Розвиток резистентності у цільових шкідників до інсектицидних білків створює постійну потребу у відкритті і розробці нових форм інсектицидних білків, які корисні для контролю над підвищенням резистентності комах трансгенних культур, експресуючих інсектицидні білки. Нові інсектицидні білки з підвищеною ефективністю, і які контролюють більш широкий спектр сприйнятливих видів комах, зменшують число комах, що вижили, і які можуть розвинути резистентні алелі. Крім того, застосування в одній рослині двох або більше трансгенних інсектицидних білків, токсичних для одного і того ж комахи-шкідника і які демонструють різні способи впливу, знижує ймовірність резистентності у будь-яких окремих цільових видів комах.
Отже, існує загальна необхідність ідентифікувати додаткові інсектицидні білки з поліпшеними інсектицидними властивостями, такими як підвищена ефективність проти більш широкого спектру цільових видів комах-шкідників і різні механізми дії в порівнянні з токсинами, що застосовуються в цей час в агрономічних прийомах. Для задоволення цієї потреби цей винахід описує нові химерні інсектицидні білки Стгу!, які проявляють активність проти численних цільових видів лускокрилих шкідників.
Члени сімейства кристалічних білків Стгу!, відомі в цій галузі техніки, проявляють біологічну активність проти лускокрилих-шкідників. Форма попередника кристалічних білків Сту 1 складається з двох сегментів приблизно рівних розмірів. Карбоксікінцева частина білка- попередника, що відома як сегмент протоксину, стабілізує утворення кристалів і не проявляє інсектицидної активності. Амінокінцева половина білка- попередника містить сегмент токсину білка Стгу!ї і, грунтуючись на вирівнюванні консервативних або по суті консервативних послідовностей в межах членів сімейства Сгу!, може бути додатково розділена на три структурних домени: домен І, домен ЇЇ та домен І. Домен І містить близько першої третини активного сегмента токсину і, як було показано, є істотним для формування каналу. Домени ЇЇ та
І залучені до зв'язування рецепторів і специфічні до видів комах, залежно від досліджуваної комахи та інсектициду.
Імовірність довільного створення химерного білка з покращеними властивостями з асортименту доменних структур численних нативних інсектицидних білків, відомих в цій області техніки, є незначною. Це є результатом складного характеру структури білка, олігомеризації й активації (включаючи відповідний протеолітичний процесинг химерного попередника, якщо він експресований в такій формі), необхідної для вивільнення сегмента інсектицидного білка. Тільки бо шляхом ретельного відбору протоксинів і конкретних мішеней в кожному вихідному білку для створення химерної структури можуть бути створені функціональні химерні інсектицидні токсини, які проявляють поліпшену інсектицидну активність в порівнянні з вихідними білками, з яких отримані химери. У цій області техніки відомо, що повторна збірка протоксину і токсинових доменів І, ІІ ї ПІ будь-яких двох або більше токсинів, які відрізняються один від одного, часто призводить до отримання білків, які проявляють дефектне утворення кристалів або у яких повністю відсутня будь-яка інсектицидна активність, що детектують, яка спрямована на переважний вид комах-шкідників. Тільки метод проб і помилок є ефективним в отриманні інсектицидних химер, і навіть в такому випадку кваліфікований фахівець не впевнений, в кінцевому підсумку, в химері, що проявляє інсектицидну активність, яка еквівалентна або поліпшена в порівнянні з будь-яким єдиним вихідним токсичним білком, з якого отримані домени протоксину або токсинів химери. Наприклад, в літературі наводяться численні приклади конструювання або збірки химерних білків з двох або більше попередників кристалічного білка.
Див., наприклад, Часдцеїйпе 5. Кпідні еї а). "А бБігаїєду їог ЗпМИитЩШіпуд Митегоиз5 Васійи5
ТІигіпдієпвіз Стувіа! Ргоївіп Ботаїп5." У. Есопотіс Епіотоіоау, 97 (6) (2004): 1805-1813; Вовспи, єї ам. (патент США Мо 6204246); МаїЇмаг апа Сійтег (патент США 6017534). У кожному з цих прикладів багато з отриманих химер не проявляли інсектицидних або кристалоутворюючих властивостей, які були еквівалентні або поліпшені в порівнянні з білками-попередниками, з яких були отримані компоненти химер.
Запропоновані молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти, які кодують химерні інсектицидні білки, токсичні відносно видів лускокрилих-шкідників рослин. Кожен з химерних інсектицидних білків може застосовуватися окремо або в комбінації один з одним і з іншими інсектицидними білками й агентами, що мають інгібуючу активність відносно комах, в препаратах і в умовах іп ріапіа (в рослині)) таким чином, забезпечуючи альтернативи інсектицидним білкам і хімікатам-інсектицидам, що застосовуються в цей час в сільськогосподарських системах.
У деяких варіантах реалізації винаходу в цьому документі розкритий химерний інсектицидний білок, що містить амінокислотну послідовність, зазначену в будь-якій з послідовностей 5ЕО ІЮ МО: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103,
Зо 105, 107, 109 або 111. Цей химерний інсектицидний білок проявляє інгібуючу активність проти видів комах ряду І ерідорієга, таких як, без обмежень, Апіїсагзіа деттагаїї5, Оіаїгаєа засспагаїї5,
Еіазтора!|риз ІдпозеїПв5, Неїїсомегра 2єа, Неїоїйів мігезсепв, Спгузодеїхів іпсіидепв5, Ззродорівга созтіоїде5, 5родорієга егідапіа, 5родорієга идірегаа, Зродорієга ехідца, Неїїсомегра аптідега,
Зродорієга ІШига, Ресіїпорпога доззурієейа, Оіаїйаєа агапаіозеПа, Еагавз мйейа, Неїїсомегтра деІюореоп, та Каспіріивзіа пи.
В іншому варіанті реалізації винаходу полінуклеотид, який кодує химерний інсектицидний білок, причому полінуклеотид, функціонально зв'язаний з гетерологічним промотором, і химерний інсектицидний білок містить амінокислотну послідовність, представлену в будь-якій з послідовностей 5ЕО ІЮ МО: 21, 10, 28, 7,4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 або 111. Також розглядається полінуклеотид, який кодує химерний інсектицидний білок, причому полінуклеотид містить нуклеотидну послідовність, яка необов'язково гібридизується в жорстких умовах зі зворотним комплементом полінуклеотидної послідовності, зазначеної в будь-якій з ЗЕО ІЮО МО: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14,15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29,
З1, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 або 130; або кодує химерний інсектицидний білок, що містить амінокислотну послідовність, зазначену в будь-якій з ЗЕО ІЮ
МО: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 або 111.
В інших варіантах реалізації винаходу в цьому документі розкрита клітина-хазяїн, яка містить полінуклеотид, зазначений в будь-якій з 5ЕО ІЮ МО: 1, 2, 3, 5,6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 або 130; причому клітина-хазяїн вибрана з групи, що складається з бактеріальної клітини-хазяїна або рослинної клітини-хазяїна. Розглянуті бактеріальні клітини-господарі включають Адгобасіегішт,
КПпі2орішт, Васійив5, Вгемірасіїйй5, Евспегіспіа, Рхеендотопав, КіерзієїІа, і Егміпіа; і причому види роду Васійй5 являють собою Васійй5 сегеи5 або ВасШив5 игіпдіепві5, зазначена Вгемірасійи5 являє собою Вгемібасіїйи5 Іаг(егозрегоц5, та зазначена Ебспегіспіа являє собою ЕзсопПегіспіа соїї.
Крім того, передбачувані рослинні клітини-хазяї включають однодольні або дводольні рослини.
В інших варіантах реалізації винаходу в цьому документі розкриті композиції, які мають інгібуючу активність відносно комах, що містять химерний інсектицидний білок, який містить амінокислотну послідовність, зазначену в будь-якій з ЗЕО ІЮО МО: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 або 111. У деяких варіантах реалізації винаходу композиція, яка має інгібуючу активність відносно комах, може додатково містити щонайменше один агент, який має інгібуючу активність відносно комах, відмінний від химерного інсектицидного білка. Розглянуті агенти, які мають інгібуючу активністю відносно комах, відмінні від химерного інсектицидного білка, включають білок, що має інгібуючу активність відносно комах, молекулу длРНК, що має інгібуючу активність відносно комах, і хімічний склад, що має інгібуючу активність відносно комах. Ці агенти, які мають інгібуючу активність відносно комах, відмінні від химерного інсектицидного білка, можуть проявляти активність відносно одного або більше видів шкідників із рядів І ерідоріега, СоіІеорієга, Нетірієега, Ноторіега, або Тпузапоріега.
У ще одному варіанті реалізації винаходу в цьому документі описано насіння, що містить інгібуючу ефективну відносно комах кількість химерного інсектицидного білка, що містить амінокислотну послідовність, зазначену в будь-якій з послідовностей 5ЕО ІЮ МО: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 або 111;; або полінуклеотид, зазначений в будь-якій з 5ЕО ІЮ МО: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, А8, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 або 130.
Також розглядаються способи боротьби з лускокрилими-шкідниками, що включають приведення у контакт лускокрилого-шкідника з інгібуючою кількістю химерного інсектицидного білка за цим винаходом.
В іншому варіанті реалізації винаходу в цьому документі розкрита трансгенна рослинна клітина, рослина або частина рослини, яка містить химерний інсектицидний білок, причому
Зо химерний інсектицидний білок містить будь-яку амінокислотну послідовність, зазначену в будь- якій з ФЕО ІЮ МО: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 або 111; або химерний інсектицидний білок містить білок, який має щонайменше 94 95 ідентичності з БЗЕО ІО МО: 21, 10; щонайменше 93 95 ідентичності з БЕО ІЮ МО: 28, щонайменше 87 95 ідентичності з БЕО ІЮО МО: 7; щонайменше 90 95 ідентичності з БЕО ІЮО МО: 4; щонайменше 9195 ідентичності з ЗЕО І МО: 13; щонайменше 64 95 ідентичності з 5БЕО ІО МО: 16; щонайменше 66 95 ідентичності з 5ЕО ІЮ МО: 19; щонайменше 86 95 ідентичності з БЕО ІЮ МО: 23; щонайменше 91 95 ідентичності з ЕО ІЮО МО: 25; щонайменше 94 95 ідентичності з зЕО ІЮ
МО: 30; щонайменше 91 95 ідентичності з «ЕО ІЮ МО: 33; щонайменше 64 95 ідентичності з «ЕО
ІО МО: 36; щонайменше 66 95 ідентичності з БЕО ІЮО МО: 39; щонайменше 94 95 ідентичності з
ЗБЕО ІО МО: 41; щонайменше 84 95 ідентичності з 5ЕО ІЮ МО: 43; щонайменше з 93 95 ідентичності з БЕО ІЮ МО: 45; щонайменше 94 95 ідентичності з БЕО ІЮ МО: 47; щонайменше 91 95 ідентичності з «ЕО ІЮ МО: 50; або щонайменше 93 95 ідентичності з ЗЕО ІЮ МО: 53; або щонайменше 87 95 ідентичності з «ЕО ІЮ МО: 85, 93, 105; або щонайменше 85 95 ідентичності з
ЗЕО І МО: 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79; або щонайменше 88 95 ідентичності з
ЗБЕО ІО МО: 91, 87, 89; або щонайменше 89 95 ідентичності з ЗЕО ІЮ МО: 107, 111; або щонайменше 90 95 ідентичності з 5ЕО ІЮО МО: 97; щонайменше 91 95 ідентичності з БЕО ІЮ МО: 109; або щонайменше 93 95 ідентичності з з«ЕО ІО МО: 83; або щонайменше 94 95 ідентичності з
ЗЕО ІЮ МО: 91 або 103; або щонайменше 95 95 ідентичності з «ЕО ІЮ МО: 95, 101; или по меньшей мере 98 95 ідентичності с 5ЕО ІЮ МО: 99. Також розглядаються способи боротьби з лускокрилими-шкідниками, що включають вплив трансгенної рослинної клітини, рослини або частини рослини на шкідника, причому зазначені рослинна клітина, рослина або частина рослини експресують інгібуючу відносно лускокрилих кількість химерного інсектицидного білка.
В інших варіантах реалізації винаходу в цьому документі запропоновані продукти, отримані з рослинної клітини, рослини або частини рослини, причому продукт містить кількість химерного інсектицидного білка, яка виявляється. Розглянуті товари включають біомасу рослин, масло, борошно грубого помелу, корм для тварин, борошно, пластівці, висівки, волокно, шкірку та оброблене насіння.
Ще один спосіб, розкритий в цьому документі, являє собою спосіб отримання насінини, яка 60 містить химерний інсектицидний білок, що включає: висаджування щонайменше однієї насінини,
яка містить химерний інсектицидний білок; вирощування рослин із зазначеної насінини; та збір насіння від рослин, причому зібрана насінина містить інсектицидний білок.
Рекомбінантні полінуклеотидні молекули, які кодують химерний інсектицидний білок, що містить нуклеотидну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15,17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 4Аб, А8, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 або 130; і необов'язково полінуклеотидну послідовність, яка кодує агента, що має інгібіторну активність відносно комах, відмінного від химерного інсектицидного білка.
Інша розглянута в цьому документі молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти містить гетерологічний промотор, функціонально зв'язаний з полінуклеотидним сегментом, що кодує химерні інсектицидні білки, причому химерний інсектицидний білок містить будь-яку амінокислотну послідовність, зазначену в будь-якій з ЗЕО ІЮО МО: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 або 111; або химерний інсектицидний білок містить білок, який має: щонайменше 94 95 ідентичності з «ЕО ІЮО МО: 21, 10; щонайменше 93 95 ідентичності з БЕО ІЮ МО: 28; щонайменше 87 95 ідентичності з «ЕО ІО МО: 7; щонайменше 9095 ідентичності з ЗЕО ІО МО: 4; щонайменше 9195 ідентичності з 5БО ІО МО: 13; щонайменше 64 95 ідентичності з 5ЕО ІЮ МО: 16; щонайменше 66 95 ідентичності з БЕО ІЮ МО: 19; щонайменше 86 95 ідентичності з БЕО ІО МО: 23; щонайменше 91 95 ідентичності з «ЕО ІЮ
МО: 25; щонайменше 94 95 ідентичності з «ЕО ІЮ МО: 30; щонайменше 91 95 ідентичності з «ЕО
ІО МО: 33; щонайменше 64 95 ідентичності з БЕО ІЮО МО: 36; щонайменше 66 95 ідентичності з
ЗБО І МО: 39; щонайменше 94 95 ідентичності з 5ЕБО І МО: 41; щонайменше 84 95 ідентичності з БЕО ІЮ МО: 43; щонайменше 93 95 ідентичності з БЕО ІЮ МО: 45; щонайменше 94 95 ідентичності з БЕО ІЮ МО: 47; щонайменше 91 95 ідентичності з 5ЕО ІЮ МО: 50; або щонайменше 93 95 ідентичності з «ЕО ІЮ МО: 53 або щонайменше 87 95 ідентичності з ЗЕО ІЮ
МО: 85, 93, 105; або щонайменше 85 95 ідентичності з зЗЕО ІЮО МО: 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 19; або щонайменше 88 95 ідентичності з БЕО ІЮ МО: 91, 87, 89; або щонайменше 89 95 ідентичності з «ЕО ІЮ МО: 107, 111; або щонайменше 90 95 ідентичності з БЕО ІЮ МО: 97;
Ко) або щонайменше 91 95 ідентичності з ЗЕО ІЮ МО: 109; або щонайменше 93 95 ідентичності з
ЗЕО ІЮО МО: 83; або щонайменше 94 95 ідентичності з БЕО ІЮО МО: 91, 103; або щонайменше 95 95 ідентичності з зЗЕО ІЮ МО: 95, 101; або щонайменше 98 95 ідентичності з 5ЕО ІЮ МО: 99; або полінуклеотидний сегмент гібридизується з полінуклеотидом, який має нуклеотидну послідовність, зазначену в будь-якій з зЕО ІЮ МО: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20,22, 24,26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 або 130.
Інші варіанти реалізації, особливості та переваги цього винаходу будуть очевидні з наступного детального опису, прикладів і формули винаходу.
КОРОТКИЙ ОПИС ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
ЗБО ІЮ МО: 1 являє собою послідовність рекомбінантної ДНК, яка кодує ТІС1100, використовувану для експресії в бактеріальній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 2 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС1100, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: З являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС1100, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 4 являє собою амінокислотну послідовність ТІС1100.
ЗБО ІЮ МО: 5 являє собою послідовність рекомбінантної ДНК, яка кодує ТІС860, використовувану для експресії в бактеріальній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 6 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС860, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 7 являє собою амінокислотну послідовність ТІС860.
ЗБО ІЮ МО: 8 являє собою послідовність рекомбінантної ДНК, яка кодує ТІС867, використовувану для експресії в бактеріальній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 9 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС867, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 10 являє собою амінокислотну послідовність ТІС867.
ЗБЕО ІЮ МО: 11 являє собою послідовність рекомбінантної ДНК, яка кодує ТІС867 20, використовувану для експресії в бактеріальній клітині.
ЗБЕО ІЮ МО: 12 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС867 20 для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 13 являє собою амінокислотну послідовність ТІС867 20.
ЗБЕО ІЮ МО: 14 являє собою послідовність рекомбінантної ДНК, яка кодує ТІС867 21, використовувану для експресії в бактеріальній клітині.
ЗБЕО І МО: 15 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС867 21, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 16 являє собою амінокислотну послідовність ТІС867 21.
ЗБЕО ІЮ МО: 17 являє собою послідовність рекомбінантної ДНК, яка кодує ТІС867 22, використовувану для експресії в бактеріальній клітині.
ЗБЕО ІЮО МО: 18 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС867 22, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 19 являє собою амінокислотну послідовність ТІС867 22.
ЗБЕО І МО: 20 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС867 23, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 21 являє собою амінокислотну послідовність ТІС867 23.
ЗБЕО І МО: 22 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС867 24, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 23 являє собою амінокислотну послідовність ТІС867 24.
ЗБЕО І МО: 24 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС867 24, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 25 являє собою амінокислотну послідовність ТІС867 25.
ЗБО І МО: 26 являє собою послідовність рекомбінантної ДНК, яка кодує ТІС868, використовувану для експресії в бактеріальній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 27 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС868 для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 28 являє собою амінокислотну послідовність ТІС868.
ЗБО ІЮ МО: 29 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС868 9, для експресії в рослинній клітині.
Зо ЗЕО ІЮ МО: 30 являє собою амінокислотну послідовність ТІС868 9.
ЗБЕО ІЮ МО: 31 являє собою послідовність рекомбінантної ДНК, яка кодує ТІС868 10, використовувану для експресії в бактеріальній клітині.
ЗБЕО ІО МО: 32 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує варіант ТІС868,
ТІС868 10, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 33 являє собою амінокислотну послідовність ТІС868 10.
ЗБЕО Ір МО: 34 являє собою послідовність рекомбінантної ДНК, яка кодує ТІС868 11, використовувану для експресії в бактеріальної клітині.
ЗБЕО ІЮО МО: 35 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС868 11, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 36 являє собою амінокислотну послідовність ТІС868 11.
ЗБЕО ІЮ МО: 37 являє собою послідовність рекомбінантної ДНК, яка кодує ТІС868 12, використовувану для експресії в бактеріальної клітині.
ЗБЕО ІЮО МО: 38 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС868 12, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 39 являє собою амінокислотну послідовність ТІС868 12.
ЗБЕО І МО: 40 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС868 13, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 41 являє собою амінокислотну послідовність ТІС868 13.
ЗБЕО І МО: 42 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС868 14, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО І МО: 43 являє собою амінокислотну послідовність ТІС868 14.
ЗБЕО І МО: 44 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС868 15, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 45 являє собою амінокислотну послідовність ТІС868 15.
ЗБЕО ІЮ МО: 46 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС868 29, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 47 являє собою амінокислотну послідовність ТІС868 29.
ЗБО І МО: 48 являє собою послідовність рекомбінантної ДНК, яка кодує ТІС869, використовувану для експресії в бактеріальній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 49 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС869, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 50 являє собою амінокислотну послідовність ТІС869.
ЗБО ІЮ МО: 51 являє собою послідовність рекомбінантної ДНК, яка кодує ТІС836, використовувану для експресії в бактеріальній клітині.
ЗЕО І МО: 52 являє собою синтетичну послідовність ДНК, яка кодує ТІС836, для експресії в рослинній клітині.
ЗЕО ІЮ МО: 53 являє собою амінокислотну послідовність ТІС836.
ЗЕБЕО І МО: 54 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС713.
ЗБЕО І МО: 55 являє собою амінокислотну послідовність ТІС713, яка трансльовона з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮО МО: 54.
ЗБО ІЮ МО: 56 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС843.
ЗБЕО ІЮ МО: 57 являє собою амінокислотну послідовність ТІС843, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО І МО: 56.
ЗБО ІЮ МО: 58 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС862.
ЗБЕО І МО: 59 являє собою амінокислотну послідовність ТІС862, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮО МО: 58.
ЗБО ІЮ МО: 60 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС1099.
ЗБЕО ІЮ МО: 61 являє собою амінокислотну послідовність ТІС1099, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО І МО: 60.
ЗБО ІЮ МО: 62 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС1099-1507Е.
ЗЕО ІЮ МО: 63 являє собою амінокислотну послідовність ТІС1099-1507Е, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО І МО: 62.
ЗБО ІЮ МО: 64 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС1099-8522К.
ЗЕО ІЮ МО: 65 являє собою амінокислотну послідовність ТІС1099-2522К, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, представленої в ЗЕО ІЮ МО: 64.
ЗБЕО ІЮ МО: 6б являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС1099-КА905.
ЗЕО ІЮ МО: 67 являє собою амінокислотну послідовність ТІС1099-К4905, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮ МО: 66.
ЗБЕО ІЮ МО: 68 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС1099-1562Н8.
ЗЕО ІЮ МО: 69 являє собою амінокислотну послідовність ТІС1099-1562Е, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО І МО: 68.
ЗБО ІЮ МО: 70 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС1099-55538.
ЗЕО ІЮ МО: 71 являє собою амінокислотну послідовність ТІС1099-5553Е,, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО І МО: 70.
ЗБО ІЮ МО: 72 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС1099-(34980.
ЗЕО ІЮ МО: 73 являє собою амінокислотну послідовність ТІС1099-054980, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮО МО: 72.
ЗБО ІО МО: 74 являє собою послідовність ДНК, що кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС1099-КА9ОА.
ЗЕО ІО МО: 75 являє собою амінокислотну послідовність ТІС1099-К490А, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮО МО: 74.
ЗБО ІЮ МО: 76 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС1099-Е564А.
ЗЕО ІЮ МО: 77 являє собою амінокислотну послідовність ТІС1099-Е564А, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО І МО: 76.
ЗБО ІЮ МО: 78 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС1103.
ЗБЕО ІЮ МО: 79 являє собою амінокислотну послідовність ТІС1103, яка трансльована з 60 відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮО МО: 78.
ЗБО ІЮ МО: 80 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС1101.
ЗБЕО ІЮ МО: 81 являє собою амінокислотну послідовність ТІС1101, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО І МО: 80.
ЗБО ІЮ МО: 82 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС845.
ЗБЕО Ір МО: 83 являє собою амінокислотну послідовність ТІС845, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮО МО: 82.
ЗБО ІЮ МО: 84 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС846.
ЗБЕО Ір МО: 85 являє собою амінокислотну послідовність ТІС846, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮО МО: 84.
ЗБЕО ІЮ МО: 86 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС858.
ЗБЕО І МО: 87 являє собою амінокислотну послідовність ТІС858, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮ МО: 86.
ЗБЕО І МО: 88 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС865.
ЗБЕО І МО: 89 являє собою амінокислотну послідовність ТІС865, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮ МО: 88.
ЗБО ІЮ МО: 90 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС866.
ЗЕО ІЮ МО: 91 являє собою амінокислотну послідовність ТІС866, трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮ МО: 90.
ЗЕБЕО І МО: 92 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС838.
ЗБЕО І МО: 93 являє собою амінокислотну послідовність ТІС838, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮО МО: 92.
ЗБО ІЮ МО: 94 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС839.
ЗБЕО Ір МО: 95 являє собою амінокислотну послідовність ТІС839, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО ІЮО МО: 94.
ЗБО ІЮ МО: 96 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС841.
ЗБЕО І МО: 97 являє собою амінокислотну послідовність ТІС841, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО І МО: 96.
ЗБО ІЮ МО: 98 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС842.
ЗБЕО І МО: 99 являє собою амінокислотну послідовність ТІС842, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ЗЕО І МО: 98.
ЗБО ІЮО МО: 100 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС850.
ЗБЕО ІЮ МО: 101 являє собою амінокислотну послідовність ТІС850, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ХЕО ІЮ МО: 100.
ЗБО ІЮО МО: 102 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС859.
ЗЕО ІО МО: 103 являє собою амінокислотну послідовність ТІС859, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ХЕО ІЮ МО: 102.
ЗБО ІЮО МО: 104 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС861.
ЗБЕО ІЮ МО: 105 являє собою амінокислотну послідовність ТІС861, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ХЕО ІЮ МО: 104.
ЗБЕО ІЮО МО: 106 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС848.
ЗБЕО ІЮ МО: 107 являє собою амінокислотну послідовність ТІС848, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в ХЕО ІЮ МО: 106.
ЗБЕО ІЮО МО: 108 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС849.
ЗБЕО ІЮ МО: 109 являє собою амінокислотну послідовність ТІС849, яка трансльована з 60 відкритої рамки зчитування, зазначеної в ХЕО ІЮ МО: 108.
ЗБО ІЮО МО: 110 являє собою послідовність ДНК, яка кодує химерну амінокислотну послідовність ТІС847.
ЗБЕО ІЮ МО: 111 являє собою амінокислотну послідовність ТІС847, яка трансльована з відкритої рамки зчитування, зазначеної в 5ХЕО ІЮ МО: 110.
ЗЕО ІЮ МО: 112 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС713.
ЗЕО ІЮ МО: 113 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС713.
ЗЕО ІЮ МО: 114 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС843.
ЗЕО ІЮ МО: 115 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС862.
ЗЕО ІЮ МО: 116 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС1099.
ЗЕО ІЮ МО: 117 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС1103.
ЗЕО ІЮ МО: 118 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС845.
ЗЕО ІЮ МО: 119 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС846.
ЗЕО ІЮ МО: 120 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС858.
ЗЕО ІЮ МО: 121 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС866.
ЗЕО ІЮ МО: 122 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС838.
ЗЕО ІЮ МО: 123 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС841.
ЗЕО ІЮ МО: 124 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС842.
ЗЕО ІЮ МО: 125 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС850.
ЗЕО ІЮ МО: 126 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС859.
ЗЕО ІЮ МО: 127 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС861.
ЗЕО ІЮ МО: 128 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС848.
ЗЕО ІЮ МО: 129 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС849.
ЗЕО ІЮ МО: 130 являє собою синтетичну послідовність ДНК для експресії в клітині рослини, яка кодує ТІС847.
Детальний опис винаходу
Проблема в галузі боротьби з сільськогосподарськими шкідниками може бути охарактеризована як потреба в нових інсектицидних білках, які ефективні проти цільових шкідників, проявляють токсичність широкого спектра відносно цільових видів шкідників, здатні експресувати в рослинах, не викликаючи небажаних агрономічних проблем, і забезпечують альтернативний спосіб впливу в порівнянні з існуючими на сьогодні токсинами, які використовують в рослинах в комерційних цілях. В цьому документі розкриті нові химерні інсектицидні білки й розглянута кожна з цих потреб, зокрема, відносно широкого спектра лускокрилих комах-шкідників.
Щоб уникнути розвитку резистентності комах до використовуваних в цей час інсектицидним білкам, усуваючи їх недоліки, необхідні нові інсектицидні білки з різними механізмами дії (МД), а також з широким спектром дії й ефективністю для боротьби з І ерідоріега. Одним зі шляхів вирішення цієї проблеми є виявлення нових інсектицидних білків з різних біологічних джерел, переважно з бактерій, грибів або рослин. Іншим підходом є перестановка сегментів між різними
Ві-білками, які демонструють структурну подібність для створення нових химерних Ві-білків, що мають інгібуючі властивості відносно комах. Імовірність створення химерного білка з покращеними властивостями рекомбінацією доменних структур численних нативних 60 інсектицидних кристалічних білків, відомих в цій області техніки, незначна. Див., наприклад,
Уасдцеїїпе 5. Кпідні, єї а. "А 5ігаїеду ог ЗпиНіпд Митегоив Васійнв5 Іпигіпдіепвів Стувіа! Ргоївіп
Ботаїп5." У. Есопотіс Епіото!оду, 97 (6) (2004): 1805-1813.
В цьому документі розкриті послідовності молекул рекомбінантної нуклеїнової кислоти, які кодують нові химерні інсектицидні білки. Ці інсектицидні білки враховують поточну потребу в цій області техніки в розробці додаткових токсичних інсектицидних білків з поліпшеними інсектицидними властивостями, такими як підвищена ефективність проти більш широкого спектра цільових видів комах-шкідників і різних механізмів дії. Члени цієї групи білків, включаючи наведені в цьому документі ілюстративні білки, виявляють інсектицидну активність відносно видів лускокрилих комах-шкідників.
Термін "сегмент" або "фрагмент" використовується в цій заявці для опису безперервних послідовностей амінокислот або нуклеїнових кислот, які коротше, ніж повна амінокислотна або нуклеотидна послідовність, яка описувала розкритий химерний інсектицидний білок. Сегмент або фрагмент, що виявляє інгібуючу активність відносно комах, також розкрито в цій заявці, якщо вирівнювання такого сегмента або фрагмента з відповідною ділянкою химерного інсектицидного білка призводить до ідентичності амінокислотної послідовності будь-якого відсотка фракції від близько 65 до близько 100 відсотків між сегментом або фрагментом і відповідною ділянкою химерного інсектицидного білка.
У контексті цієї заявки терміни "активна" або "активність", "пестицидна активність" або "пестицидна" або "інсектицидна активність", "інгібітор відносно комах" або "інсектицидна" належать до ефективності токсичного агента, такого як інсектицидний білок, в інгібуванні (інгібуванні зростання, годування, плодючості або життєздатності), пригніченні (пригніченні зростання, годування, плодючості або життєздатності), контролі (контролі зараження комахами- шкідниками, контролі інтенсивності годування комах-шкідників на певній культурі, що містить ефективну кількість інсектицидного білка), або знищення (викликають захворюваність, смертність або зниження плодючості) шкідника. Ці терміни охоплюють результат забезпечення пестицидно ефективної кількості інсектицидного білка для шкідника, при якому надання шкіднику інсектицидного білка призводить до захворюваності, смертності, зниження плодючості або затримки росту. Ці терміни також включають відлякування шкідника від рослини, тканини рослини, частини рослини, насіння, рослинних клітин або від конкретного географічного місця
Зо розташування, причому рослина може рости, в результаті надання пестицидно ефективної кількості інсектицидного білка в або на рослині. Загалом, пестицидна активність належить до здатності токсичного агента бути ефективним в інгібуванні росту, розвитку, життєздатності, кормової поведінки, шлюбної поведінки, плодючості або будь-якого вимірного зниження, викликаного несприятливими ефектами, в зв'язку з наданням у раціон комахи цього білка, фрагмента білка, сегмента білка або полінуклеотиду, конкретному цільовому шкіднику, включаючи, але не обмежуючись ними, комах ряду І ерідорієега. Інсектицидний білок може бути продукований рослиною або може бути застосований до рослини або до навколишнього середовища в тому місці, де знаходиться рослина. Терміни "біоактивность", "ефективний", "ефективний" або їх варіації також є термінами, які взаємозамінно використовувані в цій заявці, для опису впливу химерних інсектицидних білків відповідно до цього винаходу на цільових комах-шкідників.
Пестицидно ефективна кількість токсичного агента, якщо вона передбачена в раціоні цільового шкідника, проявляє пестицидну активність при контакті токсичного агента зі шкідником. Токсичним агентом може бути інсектицидний білок, або один або більше хімічних агентів, відомих в цій області техніки. Інсектицидні хімічні агенти та інсектицидні білкові агенти можна застосовувати окремо або в комбінації один з одним. Хімічні агенти включають, без обмежень, молекули длРНК, націлені на специфічні гени для пригнічення в цільовому шкіднику, органохлоріди, органофосфати, карбамати, піретроїди, неонікотиноїди та ріаноіди. Інсектицидні білкові агенти включають химерні інсектицидні білки, представлені в цій заявці, а також інші білкові токсичні агенти, в тому числі такі, які націлені на види лускокрилих-шкідників, а також білкові токсини, які використовуються для боротьби з іншими шкідниками рослин, такі як Сту- білкі, доступні в цій області техніки для застосування в боротьбі з видами рядів СоіІеорієга,
Твпузапоріега, Нептірієга і Ноторіега.
Передбачається, що посилання на шкідника, особливо шкідника сільськогосподарської рослини, означає шкідників культурних рослин, особливо тих лускокрилих-шкідників, які контролюються описаними химерними інсектицидними білками. Однак посилання на комаху- шкідника може також включати комах-шкідників рядів СоіІеорієга, Нетіріега і Ноторіега, а також нематод і гриби при тих умовах, коли токсичні агенти, націлені на цих шкідників, спільно локалізуються або присутні разом з химерним інсектицидним білком або білком, який має від 60 близько 65 до близько 100 95 ідентичності з химерним інсектицидним білком.
Химерні інсектицидні білки, які розкриті в цьому документі, демонструють інсектицидну активність відносно комах-шкідників з видів лускокрилих комах, включаючи імаго, лялечок, личинок та новонароджених, а також представників ряду Нептірієга, включаючи імаго та німф.
Комахи ряду І ерідорієга, включають, без обмежень, совок лугових, совок, листокруток, і совок з родини Мосіцідає, наприклад, кукурудзяну листову совку (5родорієга їгидірегда), совку малу (Зродорієега ехідца), совку латукову (Матезіга сопіїдигага), совку-іпсилон (Адгоїї5 ірзіоп), совку капустяну (Тгіспоріизіа пі), соєву совку (Рзецйдоріихіа іпсіцдеп5), совку оксамитових бобів (Апіїсагзіа детитаїйаїїє), совку конюшинову (Нурепа 5сарга), тютюнову листовійку (Неїйоїтпів мігезсеп5), совку бавовняну (Адгоїї5 5,ибріетапеа), совку лугову (Рзецдаїейна ипірипсіа), совку прямокутну (Адгоїї5 огпподопіа); точильників, чехлоносок, метеликів, вогнівок шишкових, гусениць метелика капустянки та піроморфід з родини Ругаїїдає, наприклад, метелика стеблового кукурудзяного (О5ігіпіа пибіїаі|й5), метелика-вогнівку (Атуеїоїі5 ігапейеїа), кукурудзяну вогнівку (Статбрив5 саїїдіпозеПйи5), лугового метелика (Негреїодгатта Іісагвізаїї5), вогнівку соняшникову (Нотоеозота еїесіеПит), точильника зернового кукурудзяного (ЕІазхтораїрив5
ІдпозеїІи5); листокруток, димчастих листокруток, плодожерок і плодових листокруток з родини
Тогпгісідаеєе, наприклад, плодожерки яблуні (Судіа ротопеїІа), листовійку виноградну (Епдоріга міеапа), листовійку східну персикову (Сгарпоїйа тоїевзіа), листовійку соняшнику (Зйієїта
Пеїапіпапа); і багатьох інших економічно важливих представників ряду І ерідорієга, наприклад, капустяну міль (Рішейа хуїовіейа), рожевого коробкового хробака (Ресіїпорпога доззуріеє|Іа) і шовкопряда непарного (Гутапігіа аізраг). Інші комахи-шкідники ряду ГІерідорієга включає, наприклад, АІабата агодійасеа (совка бавовняна американська), Агспір5 агдуго5ріїа (листовійка плодових дерев), АгоПпір5 гозапа (листовійка різана золотиста) та інші види АгсПпір5, Спо з",ирргеззаїї5 (вогнівка азіатська стеблова або жовта рисова вогнівка), СпарпаІосгосів теаіпаїїв (листовійка рисова), Статриз саїїдіпозеїПи5 (кукурудзяна вогнівка), Статризх ТеїгегейПив5 (метелик трав'яний), Оіаїгаєа дгапдіозеПа (вогнівка кукурудзяна південно-західна), Оіаїгаєа засспагаїї5 (вогнівка цукрової тростини), Еагіа5 іп5ціапа (совка бавовняна єгипетська), Еагіах міЧейПа (совка плямиста), Неїїсомегра агтідега (совка американська), Неїїсомегра 7еа (совка бавовняна або американська кукурудзяна совка), Неїоїпі5 мігезсеп5 (тютюнова листовійка), Негреїосдгатта
Іїсагзізайв (луговий метелик), ІГоБезіа бБоїгапа (листовійка гронова), РпПуїоспібії5 сйгейа
Зо (цитрусова мінуючая моль), Ріегіз ргаззісае (білявка капустяна), Ріегіє гараеє (ріпниця або білявка ріпнака), РішеїІа хуїоєіеПа (капустяна моль), 5родорієга ехідца (совка мала), Зродорієега
Ійига (азіатська бавовникова совка, азіатська бавовняна совка) та Тша арзоїша (пасльоновий мінер).
Зазначена в цій заявці "виділена молекула ДНК" або еквівалентний термін або фраза означає, що молекула ДНК являє собою молекулу ДНК, яка присутня окремо або в поєднанні з іншими композиціями, але не в її природному середовищі. Наприклад, елементи нуклеїнової кислоти, такі як кодуюча послідовність, інтронна послідовність, нетрансльована лідерна послідовність, промоторна послідовність, послідовність термінації транскрипції і т.п., які, природно, знаходяться в ДНК геному організму, не вважаються "виділеними" до тих пір, поки елемент знаходиться в геномі організму та в тому місці, де він знаходиться, в природному геномі. Проте, кожен з цих елементів та їх частини були б "виділеними" в рамках цього опису, якщо елемент не знаходиться всередині геному організму та в тому місці, де він знаходиться, в геномі, в якому він природним чином знаходиться. Саме так нуклеотидна послідовність, що кодує інсектицидний білок або будь-який інсектицидний варіант цього білка, який зустрічається в природі, буде являти собою виділену нуклеотидну послідовність, якщо нуклеотидна послідовність не перебуває у ДНК бактерії, в якій природним чином знаходиться послідовність, що кодує білок. Синтетична нуклеотидна послідовність, яка кодує амінокислотну послідовність природного інсектицидного білка, буде вважатися виділеною для цілей цього розкриття. Для цілей цього розкриття будь-яка трансгенна нуклеотидна послідовність, тобто нуклеотидна послідовність ДНК, яка вставлена в геном клітин рослини чи бактерії або присутня у позахромосомному векторі, буде вважатися виділеною нуклеотидною послідовністю незалежно від того, чи присутня вона в плазміді або подібній структурі, що використовується для трансформації клітин, в геномі рослини або бактерії або присутній в кількостях, які виявляються в тканинах, потомстві, біологічних зразках або продуктах, отриманих з рослини або бактерії.
Як описано далі в прикладах, за допомогою хімерогенеза з доменів протоксину та токсину відомих інсектицидних токсинів (які називаються в цьому документі "вихідні білки") сконструювали близько восьмисот сорок чотири (844) нуклеотидних послідовностей, які кодують химерні інсектицидні білки, і експресували та проводили випробування в біотесті на активність відносно лускокрилих. Невелика кількість сконструйованих химерних інсектицидних білків продемонструвала поліпшену активність відносно лускокрилих або посилений спектр відносно лускокрилих в порівнянні з вихідними білками, з яких були отримані його токсинові компоненти.
Ці нові химерні інсектицидні білюим з підвищеною активністю відносно лускокрилих або посиленим спектром відносно лускокрилих були сконструйовані з наступних протоксинових і токсинових доменів вихідних інсектицидних білків: СтгутАй (домен І), Сту!ВБ1 (домени | і Ії),
Сту!Ве2 (домени І і ІІ), СтуМШа! (домени І ї Ії), СтуїРа1 (домени І ї ІІ), СтулАс (домен І і протоксин), СтуїСа (домен ПІ ї протоксин), СтуїКа (домен ІІ ії протоксин), Сту1їух (домен ЇЇ),
СтутАБбБ (домен ІІ), СтутАбБЗ (протоксин), СтуїОаї (протоксин), Стгу4 (протоксин), Сгу9 (протоксин), Сту1Ве (протоксин) і СтуїКа (протоксин).
Зокрема, нові химерні інсектицидні білки відповідно до цього винаходу з підвищеною активністю відносно лускокрилих або посиленим спектром відносно лускокрилих включають такі комбінації протоксину та доменів: ТІС1100/5ЕО ІЮ МО: 4 (домен І-СгутАйЙ, домен ІІ-СтутАс, домен ПІ-СтуїСа, протоксин-СтуТАс), ТІС860/5ЕО ІЮ МО: 7 (домен І-Стгу!ВЬ1, домен ІІ-Сту! ВВ, домен ІПІ-СтуїСа, протоксин-СтуТтАс), ТІС867/5ЕО ІО МО: 10 (домен І-Сту1Ве2, домен ІІ-Сту1Вег, домен ПІ-СтуїКа, протоксин-СтутАрЗ), ТІС868/5БО ІЮО МО: 28 (домен І-Стгу!Ве2, домен І-
Сту!Ве2 і домен П-Стуї!Са, протоксин-СтгутАбБЗ), ТІС869 / 5ЕО ІЮ МО: 50 (домен І-Стуїдаї, домен ІІ-Стуїда!, домен П-Стуїух, протоксин-Сту! АБЗ) і ТІС836 / 5ЕО ІЮ МО: 53 (домен І-
СтуїРаї1, домен ІІ-Стгуї!Ра1, домен ІПІ-СтутАБ, протоксин-Сту Ас).
Варіанти, в які вводили амінокислотні заміни або альтернативні протоксинові домени, також були сконструйовані для химерних інсектицидних білків ТІС867 і ТІС868. Зокрема, ці варіанти
ТІС867 і ТІС868 включають такі амінокислотні заміни або альтернативні протоксинові домени:
ТІС867 20/50 ІЮО МО: 13 (альтернативний протоксиновий домен Сту1Оаї1), ТІС867 21 /5ЕО1Ю
МО: 16 (альтернативний протоксиновий домен Сгу4), ТІС867 22/5Б0 І МО: 19 (альтернативний протоксиновий домен Сгу9), ТІС867 23/5ЕБО ІЮО МО: 21 (альтернативний протоксиновий домен Сгу1Ве), ТІС867 24/5ЕБО ІО МО: 23 (альтернативний протоксиновий домен СтгуїКа), ТІС867 25/56 10 МО: 25 (альтернативний протоксиновий домен СгуїКа),
ТІС868 9/5ЕО ІО МО: 30 (амінокислотна модифікація М2405 У3430) М349Т), ТІС868 10/5ЕБО ІЮ
МО: 33 (альтернативний протоксиновий домен СгуїМра1!), ТІС868 11/56 10 МО: 36 (альтернативний протоксиновий домен Стгу4), ТІС868 12/5Б0О ІЮ МО: 39 (альтернативний
Зо протоксиновий домен Сгу 9), ТІС868 13/56О ІЮО МО: 41 (альтернативний протоксиновий домен
Сту1Ве), ТІС868 14/5Е0 ІЮ МО: 43 (альтернативний протоксиновий домен СтуїКа), ТІС868 15 /
ЗЕБЕО ІО МО: 45 (альтернативний протоксиновий домен Сту!Са) і ТІС868 29/50 ІЮ МО: 47 (модифікація амінокислоти О136У У3430) М349Т).
Як продемонстровано в прикладах, у кожного з цих варіантів ТІС867 і ТІС868 змінена активність відносно лускокрилих та/або знижений спектр активності вихідного химерного інсектицидного білка відносно лускокрилих, вказуючи, таким чином, на те, що альтернативний протоксиновий домен і амінокислотні заміни мали прямий вплив на інсектицидну активність та спектр химерних інсектицидних білків ТІС867 і ТІС868.
Багато з химерних інсектицидних білків демонструють інсектицидну активність відносно численних видів лускокрилих комах-шкідників. Зокрема, нові химерні інсектицидні білки, які розкриті в цій заявці, проявляють активність відносно одного або більше з таких лускокрилих комах-шкідників: совки оксамитових бобів (МВС, Апіїсагзіа детітпаїаїйі5), вогнівку цукрової тростини (ЗСВ, бОіаїгаєа з5асспвагаїї5), точильника зернового кукурудзяного (І 5СВ, ЕІазтораїрив
Ідпозеїйи5), американської кукурудзяної совки (СЕМУ, Неїїсомегра 7еа), соєвої совки (5РМ,
Неїїсомегра леа), совки бавовняної СВУМ, Неїїсомегра 7еа), совки тютюнової (ТВМУ, Неїоїтів мігезсеп5), соєвої совки (5ВІ, СПгузодеїхіє іпсішдеп5), совки чорної (ВГАМУ, зродоріега со5ітіоіде5), південної совки (ЗАМУ, Зродоріега егідапіа), кукурудзяної листової совки (ЕАМУ, зродорієга Шшидірегда), совки малої (ВАМУ, Зродорієга ехідча), совки американської (ОВУ,
Неїїсомегра агтідега), совки азіатської бавовняної (ОЇМУ, Бродоріега Ійига), рожевого коробкового хробака (РВУМ, Ресііпорпога доззуріеМПа), південно-західного кукурудзяного метелика (ЗМУСВ, Оіайаєа дгапаійобзеМПйа), совки плямистої (ЗВУМ, Еагіа5 мйейа), південноамериканської совки (ЗАВМУ, Неїїсомегра деІоїореоп), та п'ядуна соняшникового (5БРЇ,
Каспіріизіа пи). Таким чином, ілюстративні білки, описані в цій заявці, пов'язані спільною функцією та проявляють інсектицидну активність відносно видів комах-шкідників із ряду
І ерідорієега, включаючи імаго, личинок і лялечок.
Білки, які мають схожість з химерними інсектицидними білками, можуть бути ідентифіковані шляхом порівняння один з одним із використанням різних комп'ютерних алгоритмів, відомих в цій області техніки. Наприклад, ідентичність амінокислотних послідовностей білків, зв'язаних з химерними інсектицидними білками, може бути проаналізована з використанням вирівнювання бо Сіивзіа! МУ з використанням цих параметрів за замовчуванням: матриця порівняння: Біозит,
штраф на внесення делеції в вирівнювання: 10,0, штраф на продовження делеції: 0, 05, гідрофільні делеції: увімк., гідрофільні залишки: СРОМООЕКК, штраф на залишкоспецифічні делеції: увімк. (Тпотрз5оп, еї аі/ (1994) Мисіеіс Асід5 Кезеагсі, 22:4673-4680). Відсоток ідентичності амінокислот далі розраховують у вигляді виразу 10095 помножених на (ідентичності амінокислот/довжина бажаного білка). Інші алгоритми вирівнювання, також доступні в цій області техніки і забезпечують результати, аналогічні результатам, які отримані з використанням вирівнювання Сіизеаї! МУ, і розглянуті в цій заявці.
Передбачається, що бажаний білок, який проявляє інгібуючу активність відносно комах, розкритий в цій заявці, якщо вирівнювання такого бажаного білка з досліджуваними химерними інсектицидними білками, зазначеними в ЗЕО ІЮ МО: 4, 7, 10, 13, 16, 19, 21, 23, 25, 28, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 и 111 дає в результаті щонайменше близько 64 95, 65 9, 66 95, 67 то, 68 95, 69 в, 70 90, 71 96, 72 95, 73 ув, 7490, 75 о, бю, 77 о, 78 Уо, 79 ую, 80 Ус, 81 Уо, 82 Ор, 83 У, 84 95, 85 У, 86 95, 87 У, 88 95, 89 У, 90 9, 91 У, 92 Ус, 93 У, 94 Ус, 95 У, 96 Ус, 97 У, 98 9, 99 95 або близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності (або будь-який відсоток в цьому діапазоні) між шуканим і досліджуваним білком.
Як описано далі в прикладах цієї заявки, синтетичні або штучні послідовності, що кодують химерні інсектицидні білки, були сконструйовані для застосування в рослинах. Ілюстративні синтетичні нуклеотидні послідовності, які були сконструйовані для застосування в рослинах, зазначені в «ЕО ІЮ МО: 2 ї З (ТІС1100), 5ЕО 10 МО:6 (ТІС860), 5ЕО І МО:9 (ТІС867), 5ЕО ІЮ
МО:12 (ТІС867 20), 5ЕО 10 МО 15 (ТІС867 21), 5ЕО Ір МО:18 (ТІС867 22), 5ЕО І МО:20 (ТІС867 23), БЕО ІЮ МО:22 (ТІС867 24), 5ЕБО ІЮ МО: 24 (ТІС867 25), 5ЕО ІЮ МО:27 (ТІС868),
ЗЕО ІЮ МО:29 (ТІС868 9), 5ЕО ІЮ МО:32 (ТІС868 10), 5ЕО 10 МО:З35 (ТІС868 11), 5ЕО І МО:З38 (ТІС868 12), 5ЕО І МО:40 (ТІС868 13), БЕО 10 МО:42 (ТІС868 14), 5ЕО ІО МО:44 (ТІС868 15),
ЗЕО ІЮ МО:46 (ТІС868 29), БЕО ІЮО МО:49 (ТІС869) і БЕО ІЮ МО:52 (ТІС836), 5ЕО ІЮ МО:112 и 113 (ТІС713), 5ЕО ІЮ МО:114 (ТІС843), 5ЕО ІЮ МО:115 (ТІС862), 5ЕО ІЮ МО:116 (ТІС1099), 5ЕО
ІЮ МО:117 (ТІС1103), 5ЕО 10 МО: 118 (ТІС845), 5БО 10 МО:119 (ТІС846), 5ЕБО І МО:120 (ТІС858), 5ЕО ІЮ МО:121 (ТІС866), 5ЕО 10 МО: 122 (ТІС838), 5ЕО 10 МО 123 (ТІС841), 5ЕО Ір
МО: 124 (ТІС842), 5ЕО 10 МО: 125 (ТІС850), 5ЕО 10 МО 126 (ТІС859), БЕО ІЮ МО 127 (ТІС861),
Коо) ЗЕО ІЮ МО:128 (ТІС848), 5ЕО ІЮ МО:129 (ТІС849), і БЕО ІЮ МО:130 (ТІС847).
Для експресії в рослинних клітинах химерні інсектицидні білки можуть експресуватися так, щоб вони знаходилися в цитоплазмі або були націлені на різні органели рослинної клітини.
Наприклад, націлювання білка на хлоропласт може призводити до збільшення рівнів експресії білка в трансгенній рослині, запобігаючи появі ознак інших фенотипів. Націлювання може також призводити до підвищення резистентності до шкідників у трансгенного об'єкта. Цільовий пептид або транзитний пептид являє собою короткий пептидний ланцюг (довжиною 3-70 амінокислот), який спрямовує перенесення білка в певну область клітини, включаючи ядро, мітохондрії, ендоплазматичний ретикулум (ЕР), хлоропласт, апопласт, пероксисом і плазматичну мембрану.
Деякі сигнальні пептиди відщеплюються від білка під дією сигнальної пептідази після транспортування білків. Для націлювання на хлоропласт, білки містять транзитні пептиди, які містять близько 40-50 амінокислот. Для опису застосування хлоропластних транзитних пептидів, див. патенти США МоМо 5188642 та 5728925. Багато з локалізованих на хлоропласті білків експресуються з ядерних генів як попередники і націлені на хлоропласт транзитним пептидом хлоропласта (ТПХ). Приклади таких виділених хлоропластних білків включають, без обмежень, такі, які зв'язані з малою субодиницею (МСУ) рибулозо-1,5,-бісфосфаткарбоксилази, ферредоксином, фередоксин-оксидоредуктазою, білком |! і білком 1 світлозбирального комплексу, тіоредоксином Е, енолпіруват шикімат фосфатсинтазою (ЕПШФС) їі транзитними пептидами, описаними в патенті США Мо 7193133. В умовах іп хмімо і іп міо було продемонстровано, що нехлоропластні білки можуть бути націлені на хлоропласт з використанням білкових гібридів з гетерологічним ТПХ і що наявность ТПХ достатьно для націлювання білка на хлоропласт. Включення відповідного хлоропластного транзитного пептиду, такого як ЕПШФС ТПХ Агабідорзів Інаійапа (ТПХ2) (див. Кієе еї аї., Мої. Сеп. Сепеї. 210:437-442, 1987) або ЕПШФС ТПХ Рейшпіа Нубгіа (ТПХ4) (див., деїМПа-Сіорра еї а!., Ргос. Маї!).
Асад. Зсі БА 83: 6873-6877, 1986) було показано, що вони націлюють гетерологічні послідовності біль»а ЕПШФС на хлоропласти в трансгенних рослинах (див., патенти США МоМо 5627061, 5633435 та 5312910 і ЕР 0218571, ЕР 189707, ЕР 508909 і ЕР 924299). Для націлювання химерних інсектицидних білків на хлоропласт, послідовність, який кодує транзитний пептид хлоропласта, розташована 5'-кінці у функціональному зв'язку і в рамці до синтетичної кодуючої послідовності, що кодує химерний інсектицидний білок, який був бо сконструйований для оптимальної експресії в рослинних клітинах.
Експресійні касети та вектори, що містять ці синтетичні або штучні нуклеотидні послідовності, конструювали та вводили в клітини рослин кукурудзи, бавовнику та сої відповідно до способів та методик трансформації, відомих в цій галузі техніки. Трансформовані клітини регенерували в трансформовані рослини, які, як було виявлено, експресували химерний інсектицидний білок. Для перевірки пестицидної активності, біотестування проводили в присутності личинок лускокрилих-шкідників з використанням дисків з листя рослин, отриманих з трансформованих рослин. Розглядаються композиції молекул рекомбінантної нуклеїнові кислоти, які кодують химерні інсектицидні білки. Наприклад, химерні інсектицидні білки можуть бути експресувати конструктами рекомбінантної ДНК, в яких молекула полінуклеотида з ОКЕ, що кодує химерний інсектицидний білок, функціонально зв'язаний з генетичними експресійними елементами, такими як промотор і будь-яким іншим регуляторним елементом, необхідним для експресії в системі, для яких призначений конструкт. Необмежуючі приклади включають рослинний функціональний промотор, функціонально зв'язаний з синтетичним химерним інсектицидним білком, що кодує послідовності, для експресії химерного інсектицидного білка в рослинах, або ВІ - функціональний промотор, функціонально зв'язаний з послідовністю, що кодує химерний інсектицидний білок, для експресії білка в Ві-бактерії або в інших видах роду
Васійй5. Інші елементи можуть бути функціонально зв'язані з послідовностями, що кодують химерні інсектицидні білки, включаючи, без обмежень, енхансери, інтрони, нетрансльовані лідери, кодовані білкові іммобілізаційні мітки (гістидинові мітки), транслокаційні пептиди (тобто, пластидні транзитні пептиди, сигнальні пептиди), поліпептидні послідовності для посттрансляційних модифікуючих ферментів, сайти зв'язування рибосом і сайти-мішені РНКІ.
Наведені в цьому документі приклади рекомбінантних полінуклеотидних молекул включають, без обмежень, гетерологічний промотор, функціонально зв'язаний з полінуклеотидом, таким як ЗЕО ІЮ МО: 1, 2, 3, 5,6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, Аб, АВ, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 и 130; який кодує поліпептид або білок, що містить амінокислотну послідовність, зазначену в 5ЕО ІЮ МО: 4 (ТІС1100), 7 (ТІС860), 10 (ТІС867), 13 (ТІС867 20), 16 (ТІС867 21), 19 (ТІС867 22), 21 (1ІС867 23), 23 (ТІС867 24), 25
Коо) (ТІС867 25), 28 (ТІС868), 30 (ТІС868 9), 33 (ТІС868 10), 36 (ТІС868 11), 39 (ТІС867 12), 41 (ТІС867 13), 43 (ТІС867 14), 45 (ТІС867 15), 47 (ТІС867 29), 50 (ТІС869), 53 (ТІС836), 55 (ТІС713), 57 (ТІС843), 59 (ТІС862), 61 (ТІС1099), 63 (ТІС1099-1507Е), 65 (ТІС1099-8522К), 67 (ТІС1099-К4905), 69 (ТІС1099-15628Н8), 71 (ТІС1099-55338), 73 (ТІС1099-234980), 75 (ТІС1099-
К4А90А), 77 (ТІС1099-Е564А), 79 (ТІС1103), 81 (ТІС1101), 83 (ТІС845), 85 (ТІС846), 87 (ТІС858), 89 (ТІС865), 91 (ТІС866), 93 (ТІС838), 95 (ТІС839), 97 (ТІС841), 99 (ТІС842), 101 (ТІС850), 103 (ТІС859), 105 (ТІС861), 107 (ТІС848), 109 (ТІС849) и 111 (ТІС847). Гетерологічний промотор також може бути функціонально зв'язаний з синтетичними кодуючими послідовностями ДНК, які кодують химерний інсектицидний білок, націлений на пластиду, і ненацілений химерний інсектицидний білок. Передбачається, що кодони молекули рекомбінантної нуклеїнової кислоти, що кодують химерний інсектицидний білок, розкритий в цьому документі, можуть бути замінені синонімічні кодонами (відомими в цій області техніки як мовчазні заміни).
Молекула рекомбінантної ДНК або конструкт, який містить послідовність, що кодує химерний інсектицидний білок, може додатково містити область ДНК, яка кодує один або більше токсичних агентів, які можуть бути сконструйовані для одночасної експресії або коекспресії з послідовністю ДНК, що кодує химерний інсектицидний білок, відмінний від химерного інсектицидного білка, молекулу длРНК, що має інгібуючу активність відносно комах, або допоміжний білок. Допоміжні білки включають, без обмежень, кофактор, ферменти, партнери по зв'язуванню або інші агенти, які діють з метою підвищення ефективності агента, який має інгібуючу активністю відносно комах, наприклад, шляхом впливу на його експресію, впливу на його стабільність в рослинах, оптимізації вільної енергії для олігомеризації, збільшуючи його токсичність і збільшуючи спектр його активності. Допоміжний білок може полегшувати захоплення одного або більше агентів, що мають інгібуючий вплив на комах, наприклад, або посилювати токсичний ефект токсичного агента.
Рекомбінантну молекулу ДНК або конструкт можна сформувати так, щоб всі білки або молекули длРНК експресувалися від одного промотору, або кожен білок, або молекула длРНК перебувала під контролем окремого промотору, або деякої їх комбінації. Білки за винаходом можуть бути експресовані системою множинної експресії генів, в якій сконструйований інсектицидний білок експресується із загального нуклеотидного сегмента, який також містить інші відкриті рамки зчитування і промотори, залежно від вибраного типу системи експресії. бо Наприклад, бактеріальна система множинної експресії генів може використовувати єдиний промотор для керування експресією багатократнозв'язаних/тандемних відкритих рамок зчитування з одного оперону (тобто, поліцистронної експресії). В іншому прикладі рослинна система множинної експресії генів може використовувати багатократнозв'язані експресійні касети, кожна з яких експресує інший білок або інший токсичний агент, такий як одна або більше молекул длРНК.
Рекомбінантні молекули нуклеїнової кислоти або рекомбінантні конструкти ДНК, що містять послідовність, яка кодує химерний інсектицидний білок, можуть бути доставлені в клітини-хазяї за допомогою векторів, наприклад, плазмідного, бакуловірусного, синтетичної хромосоми, віріону, космідного, фагмідного, фагового або вірусного вектору. Такі вектори можуть бути використані для досягнення стабільної або транзієнтної експресії послідовності, що кодує химерний інсектицидний білок, в клітині-хазяїні, або подальшої експресії кодованого поліпептиду. Екзогенний рекомбінантний полінуклеотид або конструкт рекомбінантної ДНК, який містить послідовність, що кодує химерний інсектицидний білок, і який вводиться у клітину- хазяїна, згадуваний в цьому документі як "трансген".
У цьому документі запропоновано трансгенні бактерії, трансгенні клітини рослин, трансгенні рослини і трансгенні частини рослин, які містять полінуклеотид, що кодує будь-який один або більше химерних інсектицидних білків. Термін "бактеріальна клітина" або "бактерія" може включати, без обмежень, клітину видів родів Адгобрасієтійт, Васіїйшв5, ЕвсНегісніа, ЗаітопеїПа,
Рзейдотопах або ЕПігорішт. Термін "клітина рослини" або "рослина" може включати, без обмежень, клітину дводольної рослини або клітину однодольної рослин. Розглянуті рослини і клітини рослин включають, але не обмежуються ними, люцерну, банан, ячмінь, боби, броколі, капусту, капусту декоративну, моркву, маніок, рицину, капусту кольорову, селеру, нут, капусту пекінську, цитрусові, кокосовий горіх, каву, кукурудзу, конюшину, бавовник, гарбузові, огірок, сосну Дугласа, баклажан, евкаліпт, льон, часник, виноград, хміль, цибулю-порей, салат латук, сосну Лоболі, просо, дині, горіх, овес, маслину, цибулю, декоративні рослини, пальму, пасовищну траву, горох, арахіс, перець, голубиний горох, сосну, картоплю, тополю, гарбуз, сосну променисту, редис, рапс, рис, кореневищні злаки, жито, сафлор, чагарникові троянди, сорго, сосну південну, сою, шпинат, гарбуз гігантський, полуницю, цукровий буряк, цукрову тростину, соняшник, кукурудзу цукрову, ліквідамбар смолоносний, солодку картоплю, просо,
Зо чай, тютюн, томат, тритикале, дернову траву, кавун і клітину або рослину пшениці. У деяких варіантах реалізації винаходу представлені трансгенні рослини і частини трансгенних рослин, які регенерували з трансгенної рослинної клітини. У деяких варіантах реалізації винаходу трансгенні рослини можуть бути отримані з трансгенної насінини, шляхом живцювання, відщипування, подрібнення або іншим способом роз'єднання частини з рослиною. В певних варіантах винаходу частина рослини може являти собою насінину, коробочку, лист, квітку, стебло, корінь або будь-яку їх частину або частину трансгенної частини рослини, яка регенерується. Використовуваний в цьому контексті термін частина трансгенної частини рослини, "яка не регенерується" є частиною, з якої не може бути індуковано утворення цілої рослини, або з якої не може бути індуковано утворення цілої рослини, здатної до статевого та/або вегетативного розмноження. У деяких варіантах реалізації винаходу частина частини рослини, яка не регенерується, являє собою частину трансгенної насінини, коробочки, листа, квітки, стебла або кореня.
Запропоновані способи отримання трансгенних рослин, які містять інгібуючу відносно комах
І ерідорієга кількість химерних інсектицидних білків. Такі рослини можуть бути отримані шляхом введення полінуклеотиду, який кодує химерні інсектицидні білки, запропоновані в цій заявці, в рослинну клітину та відбору рослини, отримане з зазначеної рослинної клітини, яка експресує інгібуючу відносно комах або комах ряду І ерідорієга кількість інсектицидної речовини. Рослини можуть бути отримані з рослинних клітин шляхом регенерації насіння, пилку або меристеми, отриманих способами трансформації. Способи трансформації рослин відомі в цій області техніки. Наприклад, трансформація, опосередкована Адгобасіегішт, описана в публікаціях патентної заявки США, 2009/0138985А1 (соя), 2008/0280361А1 (соя), 2009/0142837А1 (кукурудза), 2008/0282432 (бавовник) та 2008/0256667 (бавовник).
Рослини, які експресують химерні інсектицидні білки, можна схрещувати шляхом селекції з трансгенними об'єктами, які експресують інші інсектицидні білки та/або експресують інші трансгенні ознаки, такі як інші ознаки для боротьби з комахами, гени стійкості до гербіцидів, гени, що підвищують врожайність або стійкість до стресу, і т.п. або ознаки можуть бути об'єднані в один вектор, так що всі ознаки будуть пов'язані між собою.
Оброблені рослинні продукти, причому процесований продукт містить кількість (придатну для виявлення) химерного інсектицидного білка, сегменти та фрагменти, що мають інгібуючу бо активність відносно комах, або його фрагмент або будь-яку його відмінну частину, також розкриту в цій заявці. У деяких варіантах реалізації винаходу оброблений продукт вибраний з групи, що складається з частин рослини, біомаси рослини, олії, борошна грубого помелу, цукру, корму для тварин, борошна, пластівців, висівок, волокна, лузги, обробленого насіння та насіння.
У деяких варіантах реалізації винаходу оброблений продукт являє собою той, що не здатен регенеруватися. Рослинний продукт може включати товар або інші комерційні продукти, отримані з трансгенної рослини або частини трансгенних рослин, причому товар або інші продукти можна відстежити шляхом виявлення нуклеотидних сегментів або експресованих РНК або білків, які кодують або містять відмінні частини химерного інсектицидного білка.
Також в цій заявці розкриті способи боротьби з комахами, зокрема, зараженнями культурних рослин лускокрилими комахами з використанням химерних інсектицидних білків. Такі способи можуть включати вирощування рослини, що містить інгібуючу відносно комах І ерідорієега кількість химерного інсектицидного білка. У деяких варіантах реалізації винаходу такі способи можуть додатково включати будь-яке одне або більше з наступного: (ї) застосування будь-якої композиції, яка містять або кодує сконструйований інсектицидний білок, до рослини або насінини, що призводить до утворення рослини; і (її) трансформацію рослини або рослинної клітини, що призводить до утворення рослини з полінуклеотидом, що кодує сконструйований інсектицидний білок. Загалом, передбачається, що химерний інсектицидний білок може бути забезпечений в композиції, забезпечений в мікроорганизмі, або забезпечений в трансгенній рослині, щоб забезпечити інгібуючу активність відносно лускокрилих комах.
У деяких варіантах реалізації винаходу химерний інсектицидний білок є інсектицидно активним інгредієнтом композиції, яка має інгібуючу активність відносно комах, отриманої культивуванням рекомбінантного Васійш5 або будь-якої іншої рекомбінантної бактеріальної клітини, трансформованої для експресії химерного інсектицидного білка в умовах, придатних для експресії. Така композиція може бути отримана шляхом висушування, ліофілізації, гомогенізації, екстракції, фільтрації, центрифугування, седиментації або концентрування культури таких рекомбінантних клітин, що експресують/продукують химерний інсектицидний білок. Такий процес може призводити до утворення клітинного екстракту, клітинної суспензії, клітинного гомогенату, клітинного лізату, клітинного супернатанта, клітинного фільтрату або клітинного осаду з клітин Васіїи5 або інших ентомопатогенних бактерій. Отримавши химерний інсектицидний білок, таким чином створюють, композицію, яка містить химерний інсектицидний білок, може містити бактеріальні клітини, бактеріальні спори, а також параспоральні тільця, і може поставлятися для різних застосувань, включаючи продукти-спреї, що мають інгібуючу активність відносно сільськогосподарських комах або препарати кормової біомаси, що мають інгібуючу активність відносно комах в кормових біотестах.
Вищезазначена сполука або препарат може додатково містити сільськогосподарсько прийнятний носій, такий як приманка, порошок, пил, таблетки, гранули, спреї, емульсія, колоїдна суспензія, водний розчин, спори Васійи5 або кристалічні препарати або оброблене насіння. Сполука або препарат також можуть додатково містити рекомбінантну рослинну клітину, рослинну тканину, насіння або рослину, трансформовані для експресії одного або більше білків; або бактерії, трансформовані для експресії одного або більше білків. Залежно від рівня інгібування відносно комах або інсектицидного інгібування, властивого рекомбінантному поліпептиду, і рівня сполуки або препарату, який повинен застосовуватися в аналізі рослин або раціону, з'єднання або препарат можуть містити різні масові кількості рекомбінантного поліпептиду, наприклад, від 0,0001 до 0,001, до 0,01, до 1, до 99 95 від маси рекомбінантного поліпептиду.
У варіанті реалізації винаходу для зниження ймовірності розвитку резистентності, композиція, що проявляє інгібуючу активність відносно комах, або трансгенна рослина, яка містить химерний інсектицидний білок, може додатково містити щонайменше один додатковий токсичний агент, який проявляє інгібуючу активність проти тих самих видів лускокрилих комах, але який відрізняється від химерного інсектицидного білка. Можливі додаткові токсичні агенти для такої композиції містять білок, яка має інгібуючу активність проти комах, і молекулу длРНК, яка має інгібуючу активність проти комах. Один приклад використання таких рибонуклеотидних послідовностей для боротьби з комахами-шкідниками описаний в Ваицйт, еї аї. (публікація патенту США 2006/0021087 АТ). Такий додатковий поліпептид(и) для боротьби з лускокрилими- шкідниками може бути вибраний з групи, що складається з білка, який проявляє інгібуючої активністю щодо комах, такого як, без обмежень, СтутА (патент США Мо 5880275), Стут АБ,
СтгутАс, СтутА.105, Сту1Аеє, Сту1В (публікація патенту США 10/525318), Сту1С (патент США Мо 6033874), кримери Стгу10, Сту1Е, СтуїЕ і СтулА/Е (патенти США 7070982, 6962705 і 6713063),
Сту1б, СтуїН, СгутІ, Сгу1ту, СтуїК, Стуті, Сту2А, Стгу2АБ (патент США Мо 7064249), Стуг2Ае, 60 Сту4аВ, Стуб, Сту7, Сту8, Сту9, Сту15, Студ4ЗА, Сту4ЗВ, СтубіАа!, ЕТб66, ТІС400, ТІС800, ТІС834,
ТІС1415, МірзА, МІРЗАБ, МІРЗВ, АХМІ-001, АХМІ-002, АХМІ-030, АХМІ-035 ії АХМІ-045 (патентна публікація США 2013-0117884 Ат), АХМІ-52, АХМІ-58, АХМІ-88, АХМІ-97, АХМІ-102, АХМІ-112,
АХМІ-117, АХМІ-100 (патентна публікація США 2013-0310543 АТ), АХМІ-115, АХМІ-113, АХМІ- 005 (патентна публікація США 2013-0104259 АТ), АХМІ-134 (патентна публікація США 2013- 0167264 Ат), АХМІ-150 (патентна публікація США 2010-0160231 Ат), АХМІ-184 (патентна публікація США 2010-0004176 Ат) АХМІ-196, АХМІ-204, АХМІ-207, АХМІ-209 (патентна публікація США 2011-0030096 АТ), АХМІ-218, АХМІ-220 (патентна публікація США 2014-0245491
АТ), АХМІ-2217, АХМІ-2227, АХМІ-2237, АХМІ-2247, АХМІ-2257 (патентна публікація США 2014- 0196175 АТ), АХМІ-238 (патентна публікація США 2014-0033363 Ат), АХМІ-270 (патентна публікація США 2014-0223598 А1), АХМІ-345 (патентна публікація США 2014-0373195 АТ), БІС-3 (патентна публікація США 2013-0219570 АТ), 0І0-5 (патентна публікація США 2010-0317569
А1), 0106-11 (патентна публікація США 2010-0319093 АТ), АПР-1А і його похідні (публікація патентної заявки США 2014-0033361 АТ), АТПР-18В і його похідні (патентна публікація США 2014- 0033361 Ат), РІР-ТАРІР-1В (патентна публікація США 2014-0007292 АТ), РЗЗЕЕМ3174 (патентна публікація США 2014-0007292 Ат), АЕСРИ-592740 (патентна публікація 2014-0007292 АТ),
Рриї 1063 (патентна публікація США 2014-0007292 АТ), Рриї 1064 (патентна публікація США 2014-0007292 АТ), 555-135 і його похідні (патентна публікація США 2012-0233726 АТ), 55153 і його похідні (патентна публікація США 2012-0192310 АТ), 55154 і його похідні (публікація патенту США 2012-0192310 АТ), 55155 і його похідні (публікація патенту 2012-0192310 АТ), 5ЕО
ІО МО: 2 і її похідні, як описано в патентній публікації США 2012-0167259 АТ, 5ЕО ІЮО МО: 2 і її похідні, як описано в патентній публікації США 2012-0047606 АТ, 5ЕО ІЮ МО: 2 і її похідні, як описано в патентній публікації США 2011-0154536 А1, 5ЕО ІЮ МО: 2 і її похідні, як описано в патентній публікації у США 2011-0112013 АТ, 5ЕО ІЮ МО: 2 і 4, ї її похідні, як описано в патентній публікації США 2010-0192256 АТ, 5ЕО ІО МО: 2 і її похідні, як описано в патентній публікації США 2010-0077507 АТ, ЗЕО ІЮ МО: 2 і її похідні, як описано в патентній публікації
США 2010-0077508 АТ, 5ЕО ІО МО: 2 і її похідні, як описано в патентній публікації США 2009- 0313721 АТ, 5ЕО ІЮО МО: 2 або 4, і їх похідних, як описано в патентній публікації США 2010- 0269221 АТ, БЕО ІЮ МО: 2 і її похідні, як описано в патенті США Мо 7772465 (82), СЕ161 0085 і його похідні, як описано в УМО 2014/008054 А2, токсичні білки до лускокрилих комах і їх похідні, як описано в патенті США 052008-0172762 А1, О052011-0055968 А1 і О52012-0117690 А1; 5ЕО
ІО МО: 2 ії її похідні, як описано в 57510878 (В2), ЗЕО ІО МО: 2 і її похідні, як описано в патенті
США Мо 7812129 (В1); і тому подібне.
В інших варіантах реалізації винаходу композиція або трансгенні рослини, що мають інгібуючу активність відносно комах, може додатково містити щонайменше один додатковий токсичний агент, який проявляє інгібуючу активність відносно комах-шкідників, для яких не відзначено інгібування химерними інсектицидними білками за цим винаходом (наприклад, жорстокрилих, напівжорсткокрилих і прямокрилих шкідників) з тим, щоб розширити спектр інгібуючої активності відносно комах.
Такий додатковий токсичний агент для боротьби з жорсткокрилими комахами-шкідниками може бути вибраний з групи, що складається з білка, що проявляє інгібуючу активність відносно комах, такого як, без обмежень, СтузВЬ (патент США Мо 6501009), варіанти Сту1С, варіанти
СтузЗА, Стгу3, СтуЗВ, Сту34/35, 5307, АХМІ134 (патентна публікація США 2013-0167264 А1) АХМІ- 184 (патентна публікація США 2010-0004176 АТ), АХМІ-205 (патентна публікація США 2014- 0298538 Ат), ахті207 (патентна публікація США 2013-0303440 Ат), АХМІ-218, АХМІ-220 (патентна публікація США 20140245491А1), АХМІ-2217, АХМІ-2237 (патентна публікація США 2014-0196175 АТ), АХМІ-279 (патентна публікація США 2014-0223599 АТ), АХМІ-КІ і їх варіанти (патентна публікація США 2010-0197592 АТ, ТІС407, ТІС417, ТІС431, ТІС807, ТІС853, ТІС9О1,
ТІС1201, ТІСЗ3131, 0ІС-10 (патентна публікація США 2010-0319092 АТ), енНіІРз (публікація патентної заявки США 2010/0017914) ІРЗ і його варіанти (патентна публікація США 2012- 0210462 АТ) і о-гексатоксин-Нм1а (публікація патентної заявки О52014-0366227 АТ).
Такий додатковий токсичний агент для боротьби з напівжорсткокрилими шкідниками може бути вибраний з групи, що складається з білків, що мають активність відносно напівжорсткокрилих, таких як, але не обмежуючись ними, ТІС1415 (патентна публікація США 2013-0097735 АТ), ТІС807 (патент США Мо 8609936), ТІС834 (патентна публікація США 2013- 0269060 Ат), АХМІ-036 (патентна публікація США 2010-0137216 АТ) ії АХМІ-171 (патентна публікація США 2013-0055469 А1). Додаткові поліпептиди для боротьби з жорсткокрилими, лускокрилими й равнокрилими комахами-шкідниками можна знайти на сайті номенклатури токсинів Васійи5 (пПигіпдіепо5і5, що знаходиться у веденні Ніла Крікмора (у всесвітній павутині за адресою ріпотепсіаїиге.іпго).
Послідовності, що кодують химерні інсектицидні білки, і послідовності, які мають значну відсоткову ідентичність з химерними інсектицидними білками, можна ідентифікувати з використанням способів, відомих фахівцям в цій області техніки, таких як полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), термічна ампліфікація та гібридизація. Наприклад, химерні інсектицидні білки можуть бути використані для отримання антитіл, які специфічно зв'язуються з білками, і можуть бути використані для скринінгу і пошуку інших білків, які тісно пов'язані.
Крім того, нуклеотидні послідовності, що кодують химерні інсектицидні білки, можуть бути використані як зонди і праймери для скринінгу з метою виявлення інших представників класу з використанням методів термічного циклу або ізотермічної ампліфікації та гібридизації.
Наприклад, олігонуклеотиди, отримані з послідовностей, зазначених в 5ЗЕО ІО МО: 2, можуть бути використані для визначення присутності або відсутності химерного інсектицидного трансгену в зразку дезоксирибонуклеїнової кислоти, отриманої з продукту. З огляду на чутливість певних способів виявлення нуклеїнових кислот, які використовують олігонуклеотиди, передбачається, що олігонуклеотиди, отримані з послідовностей, зазначених в будь-якій з ФЕО
ІО МО: 2, можуть бути використані для виявлення відповідного химерного інсектицидного білка в продуктах, отриманих з об'єднаних джерел, де тільки частина продукту отримана з трансгенної рослини, яка містить будь-яку з БЕО ІЮО МО: 2.
ПРИКЛАДИ
Зважаючи на вищезазначене фахівцям в цій області техніки буде зрозуміло, що наступні розкриті варіанти реалізації є виключно репрезентативними для цього винаходу, який може бути реалізований в різних формах. Таким чином, конкретні структурні та функціональні деталі, розкриті в цьому документі, не слід інтерпретувати як обмеження.
ПРИКЛАД 1
Створення і клонування послідовностей, що кодують нові химерні інсектицидні білки, активні відносно лускокрилих
Цей приклад ілюструє створення нових химерних інсектицидних білків і клонування, і експресію химерних інсектицидних білків.
Послідовності рекомбінантної нуклеїнової кислоти були сконструйовані з відомих генів Сгу- білка для отримання полінуклеотидних послідовностей, які кодують нові химерні інсектицидні
Зо білки. Отримані полінуклеотидні послідовності клонували в плазмідний експресійний вектор
Васійи5 Шигіпдіеєпзіз (ВО. Після підтвердження полінуклеотидної послідовності експресійну плазміду трансформували в Ві та експресували. Препарати нових химерних білків аналізували на активність проти різних лускокрилих-шкідників.
Багато з полінуклеотидних послідовностей, що кодують химерні інсектицидні білки, були отримані й випробувані в біотесті. Не всі химерні інсектицидні білки демонстрували активність.
Тільки кілька з химерних інсектицидних білків були відібрані на підставі їх активності відносно конкретних лускокрилих, продемонстрованої в біотесті. Варіанти амінокислот, в які були введені амінокислотні заміни або альтернативні протоксинові домени, також були отримані на основі вихідних химерних інсектицидних білків ТІС867 і ТІС868. Компоненти химерних інсектицидних білків (домени І, ЇЇ й ПІ та протоксин) відповідно до цього винаходу представлені в таблиці 1.
Також представлені амінокислотні заміни в варіантах ТІС868 щодо вихідної послідовності білка
ТІС868.
Таблиця 1
Нові химерні пестицидні білки і їх компоненти тісто | 4 | СутАп | СутАс | СуїСса| Сус |: (З Ф тсвбо | 7 | сСтуїврі | Су | Суїа| Сус 77777777 тсвб7 | ло | СтуїВег2| СуїВе2| Сука | СутАЗ |:-/:(КЗф(( тсвб7 20 | 13 |СтуїВе2| СуїВе2| Сука | Суїа! (|: г тсв67 21 | 16 |СтуїВег2| СуїВвег| Суїка| Сус (77777777 тсе867 22 | 19 |СтуїВег2| СуїВвег| Суїка| Суб | С тсв867 23 | 21 |СтуїВе2| СуїВе2 | Сука | Сушве ( тсе867 24 | 23 |СтуїВег2| СуїВе2| Сука | СуїЖа (:/ НА б тсв867 25 | 25 |СтуїВе2| СуїВе2| Сука | Суїба (:-/ 5: :З тсвб8 | 28 |СтуїВе2| СуїВе2 | Стуса | Су 77771
Таблиця 1
Нові химерні пестицидні білки і їх компоненти тов 10 | 33 | СтуїВе2| СуїВе2 | Стуса | Сума! (|: 5 тсвб8 11 | 36 |СтуїВег2| СуїВе2| Суїса| Сус (77777777 тсвб8 12 | 39 |СтуїВег2| СуїВе2| Суїса| Суб |: СС тсвб8 13 | 41 | СтуїВе2| СуїВе2| Стуса | Суве ( щД тсвб8 14 | 43 | СтуїВе2| СуїВе2| СуїСса| СуїЖа (:-/б 77: тсвб8 15 | 45 |СтуїВе2| СуїВе2| СтуїСса| Суїба (сс тсвб9 | 50 | Ста! Стушаї | Суутх | Су 77777777 (тісв36 | 53 | Стутаїу| Сутга! | СУЛА | Сутас | |/ "Амінокислотні мутації ідентифікуються з використанням стандартного коду амінокислот
ІЮПАК. Див. Об'єднана комісія з біохімічної номенклатурі ІЮПАК-ІШВ по біохімічній номенклатурі. Номенклатура і система позначень амінокислот і пептидів. Еиг. У. Віоспет. 138:9-37(1984). Перша абревіатура амінокислотної послідовності вказує на вихідну амінокислоту в цьому каркасному білку, число вказує положення амінокислоти, а друга абревіатура амінокислотної послідовності, вказує на амінокислоту, розташовану в цьому положенні в удосконаленому варіанті білка.
ПРИКЛАД 2
Нові химерні інсектицидні білки демонструють активність проти лускокрилих-шкідників
Цей приклад ілюструє тестування химерних інсектицидних білків, описаних в прикладі 1, і активність відносно лускокрилих, що спостерігається для химерних інсектицидних білків.
Полінуклеотидні послідовності, які кодують химерні інсектицидні білки, експресували в Ві.
Експресовані химерні інсектицидні білки потім аналізували відносно різних лускокрилих, відомих як шкідники кукурудзи, цукрового очерету, сої та бавовнику, а також інших культурних рослин.
Зокрема, інсектицидні білки аналізували на активність проти совки оксамитових бобів (УВС,
Апіїсагзіа деттагзаїї5), вогнівки цукрової тростини (5СВ, Оіайгаєа засспагаї5), точильника зернового кукурудзяного (І5СВ, ЕІазтораїризх ІдпозейПи5), совки бавовняної (СЕМУ, Неїїсомегра 7еа), тютюнової листовійки (ТВУМ, Неїйоїпів мігезсеп5), соєвої совки (ЗВІ., Спгузодеїхів іпсісдепв), совки чорної (ВІАМУ, Зродоріега со5ітіоідев5), південної совки (ЗАМУ, Зроаоріега егідапіа), кукурудзяної листової совки (РАМУ, Зродоріега Іігидірегда), совки малої (ВАММ, 5родорієга ехідча), совки американської (ОВМУ, Неїїсомегра агтідега), совки азіатської бавовняної (ОЇ МУ,
Зродоріеєга Ійига), рожевого коробкового хробака (РВУМ, Ресііпорпога доззуріеЇПа), совки-іпсилон (ВСМУ, Адгоїї5 ірзіїоп), південно-західного кукурудзяного метелика (5М/СВ, Оіаїгаєа агапаіозеїа), совки плямистої (ЗВУМ, Еагіає міейа), і метелика стеблового кукурудзяного (ЕСВ, Об5ігіпіа пибріїайб). Американська кукурудзяна совка (СЕМУ, Неїїсомегра 7еа) також називається як коробковий черв'як (ЗРУМ) і як совка бавовняна (СВУМ). Активність визначали за допомогою комбінації показників смертності й затримки росту, а також оцінки МІК5БО (мінімальна інгібуюча концентрація для 50 95). МІК5О належить до концентрації, інгібуючої линьку, причому як мертві личинки, так і личинки 11 (личинки, які позбавлені линьки до других віків) враховуються в оцінці.
У таблиці 2 продемонстрована активність кожного химерного інсектицидного білка. Знак вказує на активність, що спостерігається у конкретної комахи-шкідника.
Таблиця 2
Біологічна активність проти вибраних лускокрилих
ПРТ пе ре трете ен знімні ам мінні я ех
ІЮО |мвс/|5свІ5свІіСЕМеРМ/СВМ/ВІ АМ/| ТВМУ | 5ВІ. | БАМУ | РАМУ | ВАМУ | ОВМУ | СІМ | РВМУ | ВСМУ |ЗБМУСВІ ЕСВ | 5ВМУ
МО: тісто | 41515, Її 15 | 151 1 11-11 1 тісвво | 7 5515! ||| 155 1515 11 тісвб7 |1ї0|-5|5| Її |5-5| |55| | 11 | 1-1 тісввб7 го 13 | Її. ГГ 1 17171711 тісввб7 211 16 | ЇЇ. Її 5 | Її 1171 171717171111 тісвб722119| | | Її я | | Її Її 1571 1 71 7 7171711 тісвв68 |28|5|5| | (|| |-5 тісввв 10 33 | | Її ЇЇ 1 1 1511 11 1111 тісввв 1 36 | | Її ГЮГО Ї ЇЇ 1 1 1551 1 1 1 1 111 тісввбв 1239 | | Її (Б! ЇЇ Її Її 1-51 1 71717111 тісвве |50|-5|5| Її ЇЇ | 15 151 1 11-11 тісв3б |53|5| | Її 1-5 | 5515, 1 1 717 1717711
Як можна бачити з таблиці 2 вище, більшість химерних інсектицидних білків проявляли активність проти одного або більше видів лускокрилих-шкідників.
ПРИКЛАД З
Синтез генів, що кодують химерні інсектицидні білки, для експресії в рослинах
Цей приклад ілюструє синтез полінуклеотидів, що кодують химерні інсектицидні білки, для експресії в рослинах.
Синтетичні кодуючі послідовності були сконструйовані для застосування в експресії химерних інсектицидних білків в рослинах. Синтетичні послідовності були сконструйовані і синтезовані відповідно до способів, як правило, описаними в патенті США 5500365, уникаючи деяких невідповідних проблемних послідовностей, таких як послідовності поліаденілювання рослин, збагачені АТТТА й А/І, при збереженні амінокислотної послідовності химерного інсектицидного білка. Нуклеотидні послідовності для цих генів, що кодують химерні інсектицидні білки для експресії в рослинах, перераховані в таблиці 3.
Таблиця З
Полінуклеотидні послідовності, що кодують химерні інсектицидні білки, призначені для застосування в рослинах тІЄввО 11111167
НЕТ ої: У ДН НО: ОН КОН С кН
Таблиця З
Полінуклеотидні послідовності, що кодують химерні інсектицидні білки, призначені для застосування в рослинах
ПРИКЛАД 4
Експресійні касети для експресії химерних інсектицидних білків в рослинах
Цей приклад ілюструє конструкцію експресійних касет, що містять призначені для застосування в рослинах полінуклеотидні послідовності, які кодують химерні інсектицидні білки.
Різноманітні експресійні касети рослин були сконструйовані із застосуванням полінуклеотидних послідовностей, що кодують химерні інсектицидні білки, запропоновані в таблиці З і призначені для експресії в рослинах. Такі експресійні касети корисні для транзієнтної експресії в протопластах рослин або трансформації рослинних клітин. Типові експресійні касети були розроблені з урахуванням можливого розміщення білка всередині клітини. Один набір експресійних касет був сконструйований таким чином, щоб білок був трансльований і зберігався в цитоплазмі. Інший набір експресійних касет був сконструйований так, щоб утримувати транзитний пептид, суміжний з білком токсину, для забезпечення націлювання на органели клітини, такі як хлоропласт або пластиду. Усі експресійні касети були сконструйовані, щоб починатися на 5'-кінці з промотору, який може складатися з декількох промоторних елементів, енхансерних елементів або інших експресійних елементів, відомих фахівцям в цій області техніки, функціонально зв'язаних, для підвищення експресії трансгена. За промоторною послідовністю, як правило, послідовно розташована одна або більше лідерних послідовностей на 3"-кінці промотору. Інтронна послідовність, як правило, розташована на З "-кінці лідерної послідовності, для поліпшення експресії трансгену. Послідовність, що кодує токсин або транзитний пептид, і послідовність, що кодує токсин, як правило, розташована на 3'-кінці функціонально зв'язаного промотору, лідера і інтрону. Послідовність 3-НТО, як правило, розташована на 3'-кінці послідовності, що кодує для полегшення термінації транскрипції і забезпечення послідовності, важливою для поліаденілювання одержуваного транскрипта. Всі елементи, описані вище, були функціонально зв'язані між собою і розташовані послідовно, часто з додатковими послідовностями, використовуваними для конструювання експресійної касети.
ПРИКЛАД 5
Активність по відношення до лускокрилих химерного інсектицидного білка в стабільно
Зо трансформованій кукурудзі
Цей приклад ілюструє інгібиторну активність, що проявляється химерними інсектицидними білками відносно лускокрилих-шкідників, які експресовані рослинами кукурудзи («І запропонованими у вигляді корму для відповідних комах-шкідників кукурудзи.
Сорт кукурудзи І Н244 трансформували в бінарні вектори для трансформації, описані в прикладі 4, із застосуванням способу трансформації, опосередкованої Адгобасіегійт.
Трансформовані клітини індукували для утворення рослин за допомогою способів, відомих в цій області техніки. Біотести з використанням дисків з листя рослин були проведені аналогічно тим, які описані в патенті США Мо 8344207. Тканину, отриману з нетрансформованих рослин сорту
І Н2г44, використовували як негативний контроль. Множину об'єктів трансформації для кожного бінарного вектору оцінювали проти американської кукурудзяної совки (СЕМУ, Неїїсомегра 7еа), кукурудзяної листової совки (ЕАМУ, Зродоріега їгидірегаа), совки-іпсилон (ВСМУ, Адгої5 ірзіоп) і південно-західного кукурудзяного метелика (З5УУСВ, Оіаїгаєа дгапаїіозеП Іа).
Біотести з використанням листових дисків виконували на трансгенних рослинах Ко та РЕ. поколінь. Крім того, ступінь пошкодження листя оцінювали для цілих трансгенних КЕ; рослин, які експресують певні химерні інсектицидні білки, заражених лускокрилими комахами-шкідниками.
ЕК: трансгенні об'єкти, які експресують ТІС860 і ТІС868, також оцінювали за активністю в полі проти ГАМУ, СЕМУ, і 5УУСВ. Результати аналізу наведені в таблиці 4. Знак - вказує на активність, що спостерігається у конкретної комахи-шкідника. Як видно з таблиці 4, більшість химерних інсектицидних білків і багато варіантів химерних інсектицидних білків демонстрували активність відносно одного або більше видів лускокрилих-шкідників
Таблиця 4
Біотестування активності химерного інсектицидного білка з стабільно трансформованої тканини листа кукурудзи
ПРІ 77111111 Комаха
М дан шо о м в
ІО мвсС|5СВ|І5СВІСЕМ5РМСВУМВІ АМ/| ТВМУ | 5ВІ. | БАМУ | ГАМУ | ВАМУ | ОВМ/ | ОММУ | РВМУ | ВСМУ |(ІБМУСВІ ЕСВ | ВМ
МО: тісто 4|515Ї. 17777717 151111 111151 11 тісвво /7|5|Ї5Ї417 ля! я я 1 11 011 тісвб7 ло! 17771111 11 ля 1111 тісв67 го 13 |нтІнтІНнт. нт унтінтнту унтінт нтуінтінтуінт нтунт) тісв67 21 16|нтІнтІНнт. о онтІнтнтнту унтінт нтуінтінтуінт нтунт) тісвб8 (28|5|15|. 17777131 ях 11 11 тісвв9 (505151. 1777717171717171171 1 пюлх1я 1 ЇЇ 111 111111 псв3б |53|5| | Її Й лю, 151 1 1 1 17 01711
ПРИКЛАД 6
Активність відносно лускокрилих химерного інсектицидного білка в стабільно трансформованій сої
Цей приклад ілюструє інгібіторну активність, що проявляється химерним інсектицидним білком відносно лускокрилих-шкідників, які експресовані рослинами сої та запропонованим у вигляді корму для відповідних комах-шкідників.
Кодуючі послідовності для обраного химерного інсектицидного білка змінювали для експресії в рослинах, клонували в бінарний вектор для трансформації рослин, і застосовували для трансформації клітин рослини сої. Вектори для трансформації рослин містили першу трансгенну касету для експресії химерного інсектицидного білка, як описано в прикладі 4 і другу трансгенну касету для селекції трансформованих рослинних клітин, із застосуванням спектиноміцинової селекції. У деяких випадках, наприклад, в разі ТІС1100, ТІС860 і ТІС836, послідовність, яка кодує транзитний пептид хлоропласта, була функціонально зв'язана з послідовністю, яка кодує химерний інсектицидний білок. Аналізи виконували з використанням
ТІС1100, ТІС860 і ТІС836, націленими і ненаціленими на пластиду. У таблиці 5 нижче показаний химерний інсектицидний білок і варіант ТІС867 химерного інсектицидного білка і зв'язані кодуючі послідовності, що застосовуються для експресії в стабільно трансформованій сої.
Рослинної клітини сої трансформували в бінарні вектори для трансформації, описані вище, із застосуванням способу трансформації, опосередкованої Адгобрасіегішт. В результаті трансформовані рослинні клітини індукували для формування рослин сої. Тканину листа збирали і використовували в біотесті, як описано в Прикладі 5, або, в альтернативному варіанті, ліофілізовану тканину використовували в раціоні комах для біотестів. Біотестування виконували проти ЕАМУ, південної совки (ЗАММ, Зродорієга егідапіа), соєвої совки (5ВІ, СпПпгузодеїхі5 іпсіцдепе), коробкового хробака (5РУМ, Неїїсомегра 7еа), совки оксамитових бобів (УВС,
Апіісагзіа детітаїйаїї5), тютюнової листовійки (ТВУМ, Неїїоїйіб мігезсеп5), чорної совки (ВІ АМУ, зродорієга со5тіоіде5), точильника зернового кукурудзяного (І5СВ, ЕІазтораїриз ІїдпозейПив) та совки американської (ОВМУ, Неїїсомегра агтідега).
Зо У таблиці 5 показана активність відносно окремих видів лускокрилих для кожного інсектицидного білка в рослинах покоління Ко, причому "- вказує на активність. Як видно з таблійиці 5, кожен з химерних інсектицидних білків, експресованих в стабільно трансформованій сої, демонстрував активність проти кількох видів лускокрилих. Варто окремо відзначити, що варіант ТІС867, ТІС867 23 продемонстрував активність відносно ЗРУМ.
Таблиця 5
Біотестування активності химерного інсектицидного білка з тканини листа стабільно трансформованої Ко сої тісто 7/1. | ях 131 15115 111 тісввбо 7/1. | ях 131 15111111 її тсвб7 7/1. | ях 131 1515111 її
Вої: УДЕ т й ПИ ПОЛЯ ПОН ПОН КОНЯ КОН КОНЯ НОЯ КОХ
ВТої: с Дх М ПИЛ ПОЛЯ ПОНІ КОНЯ КОНЯ КОН КОНЯ НОЯ КОХ тісвб7 22 17777717 Її 11111111 тсвб7 23.1 | я 1315 11 Ї111111111111с111 тісвб7 24. 17771117 Її 11111111 тісвб7 25. 17777717 ЇЇ її 11111111
ПЕТ ої: 1: ПНЯ ПО НЯ ПОЛОН НОЯ КОЛОН КОН КОН КОН УНН НО УНІ КОХ
ВЕТої: С: ПИ ОНИ ПОН НОЯ НОЯ КОН КОН ОДН КОХ НО ОНИ КОХ псв3б | я | їх 13 11 Їх | я 15 | 1
Вибраним трансформованим об'єктам забезпечили самозапилення та отримане зерно вирощували. Тканини листа збирали з рослин покоління К: і використовували в кормовому біотесті. Кі рослини, які експресують ТІС1100, ТІС860, ТІС867, ТІС868, ТІС869 і ТІС836, досліджували на активність проти 5АМУ, 5ВІ, 5РУМ і МВС. В таблиці 6 продемонстрована активність, що спостерігається в цих тестах. Знак" вказує на активність, що спостерігається у конкретної комахи-шкідника. Як видно з таблиці б, найбільш експресований химерний інсектицидний білок з рослин К ї покоління проявив активність відносно одного або більше видів лускокрилих.
Таблиця 6
Біотести активності химерного інсектицидного білка з тканини листа стабільно трансформованої Кі: сої
ВТеяТоТ НЯ КО НН ОО ОНИ КОН НО
НЕТ ої: 1 ПНЯ ПО ОН ОО ОНИ КОН НО
НЕТ ої: У ДНЯ ПО ОН КОН КОН НО
ПЕТ: 1: ПНЯ ПО ОН ОО ОНИ КОН НО
НЕТ: ПНЯ ПОП ОН ОО ОНИ КОН НО
НЕТ: КН ПО ОН НО ОН ОН НО
У таблиці 7 представлені результати польових випробувань, проведених в теплиці з використанням стабільно трансформованих рослин сої покоління Кі, що експресують ТІС1100,
ТІС860, і ТІС836. Види, які використовуються для зараження рослин в теплиці, включають ЗАМ,
ЗВІ ії ЗРМУУ. Резистентність визначали як дефоліацію в рослинах сої, яка становить менше ніж або дорівнює п'ятнадцяти відсотків. Резистентність, яка спостерігається в експериментальній клітці, відповідає резистентності, що спостерігається в тканині листя рослини сої покоління Кі, аналізу, представленого в таблиці б. Знак я- вказує на активність, що спостерігається у конкретної комахи-шкідника.
Таблиця 7
Профіль активності ТІС1100, ТІС860 і ТІС836, експресованих в сої покоління Кі, досліджуваний в польових випробуваннях в теплиці
ВТея Готи ПО НН НО ННЯ КО тІввоЛ/ Їх Ї11111111яї1Г1 св3671 Її Їх
Польові випробування в теплицях з використанням стабільно трансформованих рослин сої покоління Кі, що експресують ТІС867 і ТІС869, також проводили в двох різних місцях в
Аргентині, в Асеведо та Фонтесуеле. Види, які використовуються для зараження рослин в теплицях, включають американську совку (ЗАВУУ, Неїїсомегра деІоїореоп), МВС, ВІ АМУ, і п'ядуна соняшникового (5ЕЇ., КаспПіріизіа пи). Резистентність визначали як дефоліацію в рослинах сої, яка становить менше ніж або дорівнює п'ятнадцяти відсотків. В таблиці 8 нижче показана резистентність, що спостерігається. Знак "- вказує на активність, що спостерігається у конкретної комахи-шкідника. Як показано в таблиці 8, трансгенні рослини сої, які експресують
ТІС867, продемонстрували резистентність до ВІГАМУ ії МВС. Трансгенні рослини сої, які експресують ТІС869, продемонстрували резистентність до ЗАВММ, ЗЕ, ВІ АМУ, і МВС.
Таблиця 8
Профіль активності ТІС867 і ТІС869, експресованих в сої покоління Ку, тестували в польових випробуваннях в теплиці 11110711 Асеведо// | Фонтесувла/УУ0.С(С тісвбї ЇЇ Ї1711111171Ї11я5111111111111ї1я 1 сввя ЇЇ 77777717 ЇЇ я Їх їж 1 1
ПРИКЛАД 7
Активність відносно лускокрилих химерного інсектицидного білка в стабільно трансформованому бавовнику
В цьому прикладі показана інгібіторна активність, що проявляється химерним інсектицидним білком проти лускокрилих комах-шкідників, при експресії в рослинах бавовнику, і запропоновані як корм для відповідних комах-шкідників.
Кодуючі послідовності для вибраного химерного інсектицидного білка змінені для експресії в рослинах, клонували в бінарний вектор для трансформації рослин, і застосовували для трансформації клітин рослини бавовнику. Отримані бінарні вектори були схожі на ті, що описані в прикладі 4, і їх використовували, щоб експресувати ТІС860, націлені і ненацілені на пластиди, (кодуюча послідовність: ЗЕО ІЮО МО: 6; послідовність білка: БЕО ІЮО МО: 7), ТІС867 (кодуюча послідовність: ЗЕО ІО МО: 9; послідовність білка: 5ЕБО 10 МО: 10), ТІС868 (кодуюча послідовність: ЗЕО ІЮ МО: 27; послідовність білка: 5ЕО ІЮ МО: 28) і ТІС867 23 (кодуюча послідовність: зЕО ІЮ МО: 20; послідовність білка: ФЕО ІЮ МО: 23).
Рослинні клітини бавовнику трансформували за допомогою способу трансформації,
Зо опосередкованої Адгорасіегіцт. Трансформовані клітини бавовника індукували для формування цілих рослин. Тканину листя бавовнику використовували в біотестуванні, як описано в прикладі 5, проти совки бавовняної (СВМУ, Неїїсомегра 7еа), ЕАМУ, ТВУМ і ЗВІ. У таблиці 9 продемонстрована активність, яка спостерігається відносно цих видів лускокрилих для ТІС860, ТІС867, і ТІС868 в стабільно трансформованому бавовнику покоління Ко, причому "'- вказує на активність. Як видно з таблиці 9, ТІС860, ТІС867, і ТІС868 продемонстрували активність відносно двох або більше видів лускокрилих комах-шкідників в стабільно трансформованому бавовнику покоління Ко.
Таблиця 9
Біотестування активності ТІС860, ТІС867 і ТІС868 з листової тканини стабільно трансформованого бавовнику покоління Ко
НЕТ ої: 1 ПНЯ ПОН КО ОН НО КО
НЕТ: Гі: ПНЯ ПОН КО ОН НО КО
Вибрані трансформовані об'єкти використовували для того, щоб отримати К.: насіння. Кі рослини, які експресують ТІС860, ТІС867, і ТІС868, досліджували на резистентність до СВУУ,
ЕАМУ, ТВУУ, і ВІ. Тканини листа, бутона і коробочки використовували в аналізі. В таблиці 10 продемонстрована активність, що спостерігається в цих тестах. Знак" вказує на активність, що спостерігається у конкретної комахи-шкідника. Як показано в таблиці 10, ТІС860 продемонстрував активність проти ЕАМУ в тканини листя. Крім того, химерний інсектицидний білок ТІС867 продемонстрував активність проти СВМУ і ЕАМУ в тканині листя, бутону і коробочки, а також ТВУУ і ЗВІ. в листях. Химерний інсектицидний білок ТІС868 продемонстрував активність проти ГАМУ в тканинах листа, бутону і коробочки, а також ТВУУ і ЗВІ. в листях.
Таблиця 10
Біотестування активності химерного інсектицидного білка з тканини листа стабільно трансформованого К: бавовнику 17711111 свМ 77771117 11111711 Ам | тв | вві тібвво Її 71111711 11111111 свв | Її 17711117 151 1 Їх 1
ПРИКЛАД 8
Клонування послідовностей, які кодують нові химерні інсектицидні білки, активні відносно лускокрилих
Послідовності рекомбінантних нуклеїнових кислот були сконструйовані з відомих генів Стгу- білка для отримання кодуючих послідовностей, які кодують нові химерні інсектицидні білки.
Отримані кодучі послідовності клонували в плазмідний експресійний вектор Васіїйи5 (пигіпдіепвів (ВО. Після підтвердження клонованої послідовності експресійну плазміду трансформували в Ві і експресували. Препарати нових химерних Сгу-білків досліджували на активність проти різних лускокрилих-шкідників. Багато кодуючих послідовностей, які кодують химерні інсектицидні білки, були отримані і випробувані в біоаналізі. Не всі химерні інсектицидні білки демонстрували активність. Тільки декілька з химерних інсектицидних білків були відібрані на підставі їх активності відносно конкретних лускокрилих і представлені нижче в таблиці 11.
Таблиця 11
Нові химерні пестицидні білки та їх відповідні бактеріальні кодуючі послідовності та послідовності білка
ВЕТої Ге ОН Те ПОН ОО сх НО
Те БТ:Х ПОН ОН: Те ПОН ООН х НО
Таблиця 11
Нові химерні пестицидні білки та їх відповідні бактеріальні кодуючі послідовності та послідовності білка
НЕТ: 1: ПН ОО: ГПО ОО У ОО
НЕТ: 1 ОО: 1: ТОНН ОО: ПОН
НЕТ: 1: НН ПОН Те ПОН ОО х НО
ВЕТої: СУ ПН ОН Т: ПОН ОО У ДО ес: У ОД ПОН: 1: ЗОН ОО С: ПОН
ПРИКЛАД 9
Нові химерні інсектицидні білки демонструють активність проти лускокрилих-шкідників
Кодуючі послідовності, які кодують химерні інсектицидні білки, експресували в Ві. Потім експресовані білки аналізували відносно різних І ерідорієга, відомих як шкідники кукурудзи, цукрового очерету, сої та бавовнику, а також інших культурних рослин. Інсектицидні білки аналізували на активність проти совки оксамитових бобів (МВС, Апіїсагвіа деттаїаїї5), вогнівки цукрової тростини (З5СВ, Оіайгаєа засспагаїї5), точильника зернового кукурудзяного (ІЗСВ,
ЕІазтораїрих Імщдпозеїйи5), коробкового черв'яка (СЕМУ, Неїїсомегра 7еа), тютюнової листовійки (ТВУМ, Неїйоїйі5 мігезсеп5), соєвої совки (ЗВГ, СПгузодеїхіз іпсіцдеп5), чорної совки (ВІГАМУ, зродорієга соз5тіоідев5), південної совки (ЗАМУ, Зродоріеєга егідапіа), кукурудзяної листової совки (ЕАМУ, зродоріега Ігидірегада), совки малої (ВАМУ, 5родоріега ехідца), совки американської (ОВУУ,
Неїїсомегра агтідега), азіатської бавовняної совки (ОЇМУ, Бродоріега Ійига), рожевого коробкового хробака (РВМУУ, Ресііпорпога доззурієПа), совки-іпсилон (ВСМУ/, Адгоїї5 ірвійоп), вогнівки кукурудзяної південно-західної (ЗУУСВ, Оіаїгаєа дгапаїозеПа) та метелика стеблового кукурудзяного (ЕСВ, О5ігіпіа пибііаійв5). Американська кукурудзяна совка (СЕМУ, Неїїсомегра 7еа) також називається як коробковий черв'як (5РМУМ) і совка бавовняна (СВУМ). Активність визначали за допомогою комбінації показників смертності і затримки росту, а також оцінки МІК5О. МІКбО належить до концентрації, інгібуючої линьку, причому як мертві личинки, так і личинки 11 (личинки, які позбавлені линьки до других віків), враховуються в оцінці. У таблиці 12 нижче показана активність кожного химерного інсектицидного білка. Знак вказує на активність, що спостерігається у конкретного комахи-шкідника.
Таблиця 12
Біологічна активність проти вибраних І ерідоріега
ПРт пшее шим оююююе 5Б|х|чх ях|ч1|:1|:|Ї 57 | хх я | 1:11: | | 1: 515 5958|х|чх я ||: ||| | її 1 б ||: || |: | |: 5|15 79|-|Їх:ї |:1:1:Ї | | || ||: 8 | Їх: ЇЇ Її 1:11 1 її 1 1 1 83| |: | Її 1:71 || 1: 15 і 85-х: / Її 1: 5 її 11 87 | «|: | Її 1-71 151 1: 1515 11
Таблиця 12
Біологічна активність проти вибраних І ерідоріега
ПРт
І Св 898| «| | ||: 5 | ЇЇ | її | - ея ||: ЇЇ Її 1:71 11 11 1 - 9 || | /|:15:71 ЇЇ її її 1 1 95| |: | Її ЇЇ ЇЇ її 1 1 97 | «|: ЇЇ Її 1:11 її 1151 1 895| «| | |чх/|:|Ї 5 | «| ххх 115 1 1 1 1:11: 15 І: 103 хх: | 1: 5 | «1: | -5 1о5| «Їх: ЇЇ Її 1:71 51 її 1 1 1 107 | «Її: |:1:1:Ї | |: 5155! 1099 хх: ||: | |: 515 п 5151 ЇЇ 1:11 1151 1 15155 11
Як можна бачити з таблиці 12 вище, все химерні інсектицидні білки проявляють активність проти декількох видів лускокрилих комах.
ПРИКЛАД 10
Варіанти амінокислот ТІС1099 демонструють активність по відношенню до лускокрилих
Кодуючу послідовність для ТІС1099 (5ЕБО ІЮО МО: 60) модифікували відомими в цій галузі техніки способами для зміни конкретних амінокислот з вихідної білкової послідовності ТІС1099 (ЗЕО ІО МО: 61). Отримані варіанти досліджували на активність проти вибраних І ерідоріега. У таблиці 13 нижче показані варіанти ТІС1099 і відповідні ДНК і білкові ЗЕО ІЮ МО.
Таблиця 13
Варіанти ТІС1099
Варіант ТІС1099 ДНК 5ЕО ІЮ МО: ПРТ 5ЕО ІЮ МО:
ТІСТ099-Т507Е тІСт099-ЯБ22К
ТІС1099-К4905 нини лиш тІСсто99-Т5в2В8 нини ши
ТІСТ099-55538
ТІСт099-04980
ТІС1099-КА9ОА
ТІС1099-ЕБбАА
Для кожного варіанта досліджували смертність і затримку росту кукурудзяної листової совки (ЕАМУ, Зродорієега Ігидірегаа), американської кукурудзяної совки (СЕМУ, Неїїсомегра 7еа), совки- іпсилон (ВСМУ, Адгоїїз ірзіоп), соєвої совки (ЗВІ.,, Спгузодеїхі5 іпсіцдепв) та вогнівки кукурудзяної південно-західної (ЗУУСВ, Оіайгаєа дгапаіозеМПа). У таблиці 14 нижче показана активність відносно кожного лускокрилого-шкідника. Активність оцінували від «й» до «н-» залежно від відсотка смертності.
Таблиця 14
Активність варіантів ТІС1099 відносно ГІ ерідорієга спістове-тьв2А 17110169 | зх з | хз | 1451 111
Всі варіанти ТІС1099 продемонстрували активність проти п'яти тестованих видів
І ерідоріегап. Декілька варіантів продемонстрували більш низьку активність у порівнянні з іншими для конкретних шкідників.
ПРИКЛАД 11
Химерні інсектицидні білки, експресовані в стабільно трансформованій кукурудзі, демонструють активність відносно лускокрилих-шкідників.
Синтетичні кодуючі послідовності конструювали для експресії кодованого білка в рослинах, клонували в бінарний рослинний вектор для трансформації, і використовували для трансформації клітин рослини кукурудзи. Вектори для трансформації рослин містять першу трансгенну касету для експресії химерного інсектицидного білка, який містить конститутивний промотор, функціонально зв'язаний 5' з лідером, функціонально зв'язаним 5' з інтроном, функціонально зв'язаним 5' з послідовністю, яка кодує химерний інсектицидний білок, який в свою чергу функціонально зв'язаний 5' з 3-НТО; і другу трансгенну касету для селекції трансформованих клітин рослин із застосуванням гліфосатної селекції. Нижче в таблиці 15 показані послідовності, що кодують химерні інсектицидні білки, що застосовуються для експресії в кукурудзі та відповідні ФЕО ІЮ МО.
Таблиця 15
Послідовності, які кодують інсектицидні білки, та відповідні ФЕО ІЮ МО ес: КУ У Ох КУ ОН: ПОН
Сорт кукурудзи І Н244 трансформували за допомогою бінарних векторів для трансформації, описаних вище, із застосуванням способу трансформації, опосередкованої Адгобасіегішт.
Трансформовані клітини індукували для формування рослин за допомогою методів, відомих в цій області техніки. Біотести з використанням листових дисків рослини виконували за аналогією з тими, які опісані в патенті США Мо 8344207. Тканину, отриману з нетрансформованих рослин сорту ГН244, використовували як негативний контроль. Множину об'єктів трансформації для кожного бінарного вектору оцінювали проти американської кукурудзяної совки (СЕМУ,
Неїїсомегра 7еа), кукурудзяної листової совки (ЕАМУ, Зродоріега Ігидірегаа), совки-іпсилон (ВСМ/,
Адгоїіх ірзйоп) і вогнівки кукурудзяної південно-західної (5МУСВ, Оіамгаєа дгапаїйозейа).
Результати аналізу показані в таблиці 16, де «я» позначає активність.
Таблиця 16
Біотестування активності химерного інсектицидного білка зі стабільно трансформованої тканини листа кукурудзи кет АЄ ПИ ПО ОН НО НН КОН НО ЗО о: ЕЕ ВХ ПО ОДН НО НН КОН НО ЗО
ВЕТої: У ОХ ПО ОДН ОН КОН НО ЗО ех БТ: х НИХ ПО ОН НО НН КОН НО ЗО
НЕТ: ЕХ ПО ОДН ОН НН КОН НО ЗО ої: ЕТ ПО ОДН НО НН КОН НО ЗО
НЕТ: 1: ВХ ПО ООН НО НН КОН НО ЗО
НЕТ: 1: НЯ ПО ООН КО НН КОН НО ЗО
ВЕТої: КІ: ВХ КОНЯ КО ННЯ КОН НО ЗО
ВЕТої: СУ ПН ПО ОН НО НН КОН НО ЗО
ВЕТої: БТ НИХ ПО ООН НО НН КОН НО ЗО ої: С ХП ОДН НО НН КОН НО ЗО
ПЕТ ої: ся ПОН НО ООН КО НН КОН НО ЗО ої: 21: ВХ ПО ОДН НО НН КОН НО ЗО ог: КС ПО ОДН НО НН КОН НО ЗО ої: СУ ДОН ПОН КО НН КОНЯ НО ЗО
Як можна бачити в таблиці 16 вище, всі химерні інсектицидні білки продемонстрували активність проти двох або більше видів лускокрилих-комах.
ПРИКЛАД 12
Химерні інсектицидні білки, експресовані в стабільно трансформованій сої, демонструють активність відносно лускокрилих-шкідників.
Кодуючі послідовності для вибраного химерного інсектицидного білка змінювали для експресії в рослинах, клонували в бінарний вектор для трансформації рослин, і застосовували для трансформації клітин рослини сої. Вектори для трансформації рослин містять першу трансгенну касету для експресії химерного інсектицидного білка, який містить конститутивний промотор, функціонально зв'язаний 5' з лідером, функціонально зв'язаним 5' з кодуючою послідовністю химерного інсектицидного білка, який, в свою чергу, функціонально зв'язаний 5' з
З-НТО і; другу трансгенну касету для селекції трансформованих рослинних клітин з використанням спектиноміцинової селекції. У таблиці 17 нижче показані послідовності, що кодують химерні інсектицидні білки, які застосовуються для експресії в сої, та відповідні ЗЕО ІЮ
МО.
Таблиця 17
Послідовності, які кодують інсектицидні білки, та відповідні ФЕО ІЮ МО
Інсектицидний білок ДНК 5ЕО ІЮ МО: ПРТ ЗЕО ІЮ МО:
ТІС11О3
ТІСВеб
ТІСВв42 1011241111711111111111981
ТІСВ49
Рослинної клітини сої трансформували за допомогою бінарних векторів для трансформації, описаних вище, із застосуванням способу трансформації, опосередкованої Адгобасіегішт. В результаті трансформовані рослинні клітини індукували для формування рослин сої. Тканини листя збирали та використовували в біотестах, як описано в прикладі 11, або альтернативно, ліофілізовані тканини використовували у вигляді корму для комах у біотестах. Біотести виконували проти кукурудзяного листової совки (ЕАМУ, Зроадоріеєега Іїидірегаа), південної совки (ЗАМУ, Зродоріега егідапіа), соєвої совки (ВІ, СпПгузодеїхіб5 іпсійдеп5), коробкового хробака (ЗРУУ, Неїїсомегра 7еа), совки оксамитових бобів (УВС, Апіісагзіа деттагаїї5), соєвої совки (ЗВІ,
Спгузодеїхі5 іпсіцдеп5), тютюнової листовійки (ТВУУ, Неїїоїпі5 мігезсеп5), чорної совки (ВІАМУ,
Зродоріега соз5ітіоіде5), південної совки (5АМУМ, Зродоріега егідапіа), точильника зернового кукурудзяного (І5СВ, ЕІазтораїри5 ІдпозеПйи5) і совки американської (ОВУМУ, Неїїсомегра аппідега). Нижче в таблиці 18 показана активність відносно вибраних видів Іерідорієга для кожного інсектицидного білка в рослинах покоління КО.
Таблиця 18
Біотестування активності химерного інсектицидного білка з тканини листа стабільно трансформованої КО сої
ТІС11О3 пили п ПЕ ПЧ ПО ПО Я ПОЛЯ НОЯ КО НО
ТІСВеб пити п Я ПО ПО Я КОНЯ КОНЯ НО КОХ ОХ
ТІСВв42 я 1 ях | | ЇЇ 5151 1 | | з
ТІСВ49 ния п ПЕ ПЧ ПО ПО ПО НО НО НОЯ
Як видно з таблиці 18, кожен з химерних інсектицидних білків, експресований в стабільно трансформованій сої, демонстрував активність проти кількох видів лускокрилих.
Вибраним трансформованим об'єктам забезпечили самозапилення й отримане зерно вирощували. Тканину листа збирали з рослин покоління КІ! та використовували в кормових біотестах. У таблиці 19 показана активність інсектицидних білків, експресованих в тканинах листа сої КІ, яка спостерігається по відношенню деяких видів лускокрилих.
Таблиця 19
Біотестування активності химерного інсектицидного білка з тканини листа стабільно трансформованої КІ1 сої
ТІС11О3 пншннншии нн шишешшши
ТІСВеб нини иншнн шини
ТІСВв42 пншнн шиннншишишшш
ТІСВ49 понти шиншили
Як можна бачити з вищенаведеної таблиці 19, експресовані химерні інсектицидні білки з рослин покоління К1 продемонстрували активність відносно двох або більше видів лускокрилих.
Всі композиції, розкриті і заявлені в цьому документі, можуть бути зроблені і виконані без зайвого експериментування в межах цього розкриття. Хоча композиції винаходу були описані з
Зо точки зору вищезазначених ілюстративних варіантів реалізації, фахівцям в цій області техніки
Зо буде зрозуміло, що варіанти, зміни, модифікації та перебудови можуть бути застосовані до композиції, описаної в цьому документі, без відступу від концепції, суті та обсягу цього винаходу. Більш конкретно, буде очевидно, що певні агенти, які схожі й хімічно, та фізіологічно, можуть бути використані замість агентів, описаних в цьому документі, досягаючи тих самих або подібних результатів. Всі такі аналогічні заміни та модифікації, очевидні фахівцям в цій області техніки, вважаються такими, що виходять за межі суті, об'єму і концепції цього винаходу, як визначено в поданій формулі винаходу.
Всі публікації та опубліковані патентні документи, цитовані в цій специфікації, включені в цей документ за допомогою посилання в тій самій мірі, якби кожна індивідуальна публікація або патентна заявка були конкретно й індивідуально вказана для включення за допомогою посилання.
Claims (20)
1. Химерний інсектицидний білок, який відрізняється тим, що химерний інсектицидний білок містить амінокислотну послідовність, яка містить ЗЕО ІЮ МО: 28, і виявляє інгібіторну активність відносно видів комах ряду І ерідоріега.
2. Химерний інсектицидний білок за п. 1, який відрізняється тим, що види комахи вибрані з групи, яка складається з: Апліїсагвіа деттаїга!/і5, Оіаїгаєа 5ассНага!ї5, ЕІаєтора!рив ПІдпозеПив, Неїїсомегра 7єеа, Неїоїків уігезсепв, Спузодеїхів іпсійидепв, бродорієга созтіоіде5, броаорієга епдапіа, броайорієга Мпидірегаа, броайорієга ехідца, Неййсомегра агптідега, бродорієта Шига, Ресійпорнога доззуріе!а, Оіаггаєа дгапаюзеп/а, Еапах уїйепЛа, Неїїсомегра деІоїореоп і НаспНіріивіа пи.
3. Полінуклеотид, який кодує химерний інсектицидний білок, який виявляє інгібіторну активність відносно видів комах ряду Іерідорієга, який відрізняється тим, що полінуклеотид функціонально зв'язаний з гетерологічним промотором, а химерний інсектицидний білок містить ЗЕО І МО: 28.
4. Полінуклеотид, який кодує химерний інсектицидний білок, який виявляє інгібіторну активність відносно видів комах ряду Герідоріега, який відрізняється тим, що вказаний полінуклеотид містить нуклеотидну послідовність, яка: а) представлена 5ЕО ІЮ МО: 27; або р) кодує химерний інсектицидний білок, який містить ЗЕО ІЮО МО: 28.
5. Клітина-хазяїн, яка містить полінуклеотид, представлений ЗЕО ІО МО: 27, яка відрізняється тим, що вказана клітина-хазяїн вибрана з групи, яка складається з бактеріальної клітини-хазяїна і рослинної клітини-хазяїна.
6. Клітина-хазяїн за п. 5, яка відрізняється тим, що вказана бактеріальна клітина-хазяїн вибрана з групи, яка складається з Адгобасіегит, ВНіхобійт, Васіив5, Вгемірасійи5, ЕвсНегісніа, Рзеййотопаз, КіІервзів!а і Епуіпіа.
7. Клітина-хазяїн за п. 5, яка відрізняється тим, що вказана рослинна клітина-хазяїн вибрана з групи рослин, яка складається з однодольних і дводольних.
8. Композиція, яка має інгібіторну активність відносно комах, яка містить химерний інсектицидний білок, який виявляє інгібіторну активність відносно видів комах ряду ГІ ерідорієга, який містить БЕО ІЮ МО: 28.
9. Композиція, яка має інгібіторну активність відносно комах, за п. 8, яка додатково містить щонайменше один агент, який має інгібіторну активність відносно комах, відмінний від химерного інсектицидного білка, який виявляє інгібіторну активність відносно видів комах ряду І ерідорієга.
10. Композиція, яка має інгібіторну активність відносно комах, за п. 9, яка відрізняється тим, що вказаний щонайменше один агент, який має інгібіторну активність відносно комах, вибраний з групи, яка складається з білка, який має інгібіторну активність відносно комах, і молекули длРНК, яка має інгібіторну активність відносно комах.
11. Композиція, яка має інгібіторну активність відносно комах, за п. 9, яка відрізняється тим, що вказаний щонайменше один агент, який має інгібіторну активність відносно комах, виявляє активність відносно одного або більше видів шкідників рядів І ерідорієга, СоІеорієга, Нептірієга, Ноторіега або Тпузапоріега.
12. Насіння, яке містить: а) інгібувальну ефективну відносно комах кількість химерного інсектицидного білка, який виявляє інгібіторну активність відносно видів комах ряду ГІ ерідорієга, який містить ХЕО ІЮ МО: 28; або 60 р) полінуклеотид, представлений 5ЕО ІЮ МО: 27.
13. Спосіб боротьби з лускокрилим шкідником, який включає годування лускокрилого шкідника інгібувальною кількістю химерного інсектицидного білка за п. 1.
14. Трансгенна клітина рослини, рослина або частина рослини, які містять химерний інсектицидний білок, який виявляє інгібіторну активність відносно видів комах ряду ГІ ерідорієга, де химерний інсектицидний білок містить 5ЕО ІЮ МО: 28.
15. Спосіб боротьби з лускокрилим шкідником, який включає годування лускокрилого шкідника трансгенною клітиною рослини, рослиною або частиною рослини за п. 14, де вказана клітина рослини, рослина або частина рослини експресує інгібувальну відносно лускокрилих кількість химерного інсектицидного білка, який виявляє інгібіторну активність відносно видів комах ряду І ерідорієга.
16. Товарний продукт, отриманий з трансгенної рослинної клітини, рослини або частини рослини за п. 14, де вказаний продукт містить химерний інсектицидний білок.
17. Товарний продукт за п. 16, який відрізняється тим, що вказаний продукт вибраний з групи, яка складається з рослинної біомаси, борошна грубого помелу, корму для тварин, борошна, пластівців, висівок, волокна, лузги і обробленого насіння.
18. Спосіб отримання насіння, яке містить химерний інсектицидний білок за п. 1, який включає: а) посадку множини насіння, яке містить химерний інсектицидний білок за п. 1; р) вирощування рослин з вказаного насіння; і с) збирання насіння від указаних рослин, де указане зібране насіння містить химерний інсектицидний білок за п. 1.
19. Рекомбінантна полінуклеотидна молекула, яка кодує химерний інсектицидний білок за п. 1, яка містить 5ЕО ІЮО МО: 27; і полінуклеотидну послідовність, яка кодує агент, який має інгібіторну активність відносно комах, відмінний від вказаного химерного інсектицидного білка.
20. Молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти, яка містить гетерологічний промотор, функціонально зв'язаний з сегментом полінуклеотиду, який кодує химерний інсектицидний білок, який виявляє інгібіторну активність відносно видів комах ряду І ерідорієга, де: а) химерний інсектицидний білок містить ЗЕО ІЮ МО: 28; або р) сегмент полінуклеотиду містить 5ЕО ІЮ МО: 27.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201462064989P | 2014-10-16 | 2014-10-16 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
UA123482C2 true UA123482C2 (uk) | 2021-04-07 |
Family
ID=54608929
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
UAA201909674A UA123480C2 (uk) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Химерний інсектицидний білок, інгібіторний відносно лускокрилих шкідників |
UAA201909675A UA123481C2 (uk) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Химерний інсектицидний білок, інгібіторний відносно лускокрилих шкідників |
UAA201909676A UA123482C2 (uk) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Химерний інсектицидний білок, інгібіторний відносно лускокрилих шкідників |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
UAA201909674A UA123480C2 (uk) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Химерний інсектицидний білок, інгібіторний відносно лускокрилих шкідників |
UAA201909675A UA123481C2 (uk) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Химерний інсектицидний білок, інгібіторний відносно лускокрилих шкідників |
Country Status (29)
Country | Link |
---|---|
US (7) | US10233217B2 (uk) |
EP (5) | EP3207049B1 (uk) |
JP (1) | JP6626102B2 (uk) |
KR (5) | KR102208985B1 (uk) |
CN (5) | CN112175094A (uk) |
AR (6) | AR103129A1 (uk) |
AU (6) | AU2015332384B2 (uk) |
BR (4) | BR112017007794B1 (uk) |
CA (3) | CA2964776A1 (uk) |
CL (5) | CL2017000895A1 (uk) |
CO (1) | CO2017004807A2 (uk) |
CR (3) | CR20210269A (uk) |
CU (5) | CU24541B1 (uk) |
EA (5) | EA034918B1 (uk) |
EC (1) | ECSP17029551A (uk) |
ES (1) | ES2864657T3 (uk) |
IL (1) | IL251570B (uk) |
MX (5) | MX2017004919A (uk) |
MY (1) | MY181627A (uk) |
NI (1) | NI201700044A (uk) |
NZ (3) | NZ768153A (uk) |
PE (5) | PE20170895A1 (uk) |
PH (5) | PH12017500697A1 (uk) |
SG (5) | SG10201913870RA (uk) |
SV (1) | SV2017005422A (uk) |
UA (3) | UA123480C2 (uk) |
UY (1) | UY36360A (uk) |
WO (1) | WO2016061391A2 (uk) |
ZA (6) | ZA201702191B (uk) |
Families Citing this family (38)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111560385B (zh) * | 2013-12-09 | 2023-11-28 | 巴斯夫农业解决方案种子美国有限责任公司 | Axmi477、axmi482、axmi486和axmi525毒素基因及使用方法 |
CN107074917B (zh) | 2014-10-16 | 2022-05-24 | 先锋国际良种公司 | 具有改进的活性谱的杀昆虫多肽及其用途 |
EP3207049B1 (en) | 2014-10-16 | 2021-01-27 | Monsanto Technology LLC | Novel chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
US10487123B2 (en) | 2014-10-16 | 2019-11-26 | Monsanto Technology Llc | Chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
WO2016205445A1 (en) | 2015-06-16 | 2016-12-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
US10036037B2 (en) | 2015-08-18 | 2018-07-31 | Monsanto Technology Llc | Insect inhibitory proteins |
US10155960B2 (en) | 2015-08-27 | 2018-12-18 | Monsanto Technology Llc | Insect inhibitory proteins |
US10572836B2 (en) | 2015-10-15 | 2020-02-25 | International Business Machines Corporation | Automatic time interval metadata determination for business intelligence and predictive analytics |
CA3022858A1 (en) | 2016-06-16 | 2017-12-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
US20210292778A1 (en) | 2016-07-12 | 2021-09-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
US11016730B2 (en) | 2016-07-28 | 2021-05-25 | International Business Machines Corporation | Transforming a transactional data set to generate forecasting and prediction insights |
US11345925B2 (en) | 2016-10-21 | 2022-05-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
CN110062579B (zh) | 2016-12-12 | 2023-06-27 | 先正达参股股份有限公司 | 工程化的杀有害生物蛋白和控制植物有害生物的方法 |
RU2019123825A (ru) * | 2017-01-04 | 2021-02-05 | Зингента Партисипейшнс Аг | Композиции и способы контроля вредителей растений |
CR20190367A (es) * | 2017-01-12 | 2019-09-25 | Monsanto Technology Llc | Proteínas toxinas pesticidas activas contra insectos lepidópteros |
US20200165626A1 (en) | 2017-10-13 | 2020-05-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Virus-induced gene silencing technology for insect control in maize |
CN108148841B (zh) * | 2017-12-14 | 2020-12-29 | 云南大学 | 氨基酸序列在用于使昆虫Dip3蛋白失活中的应用 |
BR112020012477A2 (pt) | 2017-12-19 | 2020-11-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | polipeptídeo recombinante; polipeptídeo inseticida recombinante; composição agrícola; construto de dna; célula hospedeira; planta transgênica; método para inibir o crescimento ou exterminar uma praga de inseto ou população de praga; método para controlar a infestação de praga; e método para melhorar o rendimento de uma cultura |
EP3764798A4 (en) * | 2018-03-14 | 2021-12-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | PROTEIN INSECTICIDES FROM PLANTS AND PROCESSES FOR THEIR USE |
WO2019178038A1 (en) * | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
CR20210046A (es) * | 2018-07-30 | 2021-06-10 | Monsanto Technology Llc | Evento transgénico de maíz mon 95379 y métodos para su detección y usos |
CN109198845A (zh) * | 2018-08-21 | 2019-01-15 | 广州杰赛科技股份有限公司 | 全自主甲面彩绘装置、方法、设备及存储介质 |
MX2021002290A (es) | 2018-08-29 | 2021-04-28 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas y metodos para su uso. |
CN111100208A (zh) * | 2020-01-16 | 2020-05-05 | 黑龙江大鹏农业有限公司 | 一种人工合成的抗虫蛋白mCry1Ia2及其制备方法和应用 |
WO2022125639A1 (en) | 2020-12-08 | 2022-06-16 | Monsanto Technology Llc | Modified plant-associated bacteria and methods of their use |
US11825850B2 (en) | 2020-12-21 | 2023-11-28 | Monsanto Technology Llc | Insect inhibitory proteins |
UY39585A (es) | 2020-12-23 | 2022-07-29 | Monsanto Technology Llc | Proteínas que exhiben actividad inhibidora de insectos frente a plagas con importancia agrícola de plantas de cultivo y semillas |
WO2022146874A1 (en) | 2020-12-31 | 2022-07-07 | Monsanto Technology Llc | Novel insect inhibitory proteins |
TW202305129A (zh) | 2021-03-26 | 2023-02-01 | 美商旗艦先鋒創新有限責任(Vii)公司 | 用於產生環狀多核糖核苷酸之組成物及方法 |
US20240181079A1 (en) | 2021-03-26 | 2024-06-06 | Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc | Production of circular polyribonucleotides in a eukaryotic system |
TW202305130A (zh) | 2021-03-26 | 2023-02-01 | 美商旗艦先鋒創新有限責任(Vii)公司 | 原核系統中環狀多核糖核苷酸之產生 |
CN114134171B (zh) * | 2021-10-29 | 2023-09-15 | 隆平生物技术(海南)有限公司 | 一种抑制或杀灭东方黏虫的方法及其应用 |
WO2023077118A1 (en) | 2021-11-01 | 2023-05-04 | Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc | Polynucleotides for modifying organisms |
WO2023141540A2 (en) | 2022-01-20 | 2023-07-27 | Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc | Polynucleotides for modifying organisms |
CN114507673A (zh) * | 2022-01-20 | 2022-05-17 | 隆平生物技术(海南)有限公司 | 一种抑制或杀灭小地老虎的方法及应用 |
CN116063431B (zh) * | 2022-09-19 | 2023-11-10 | 隆平生物技术(海南)有限公司 | 一种植物抗虫蛋白质及其应用 |
WO2024092330A1 (pt) * | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária - Embrapa | Proteínas inseticidas quiméricas truncadas |
CN117144054B (zh) * | 2023-10-27 | 2024-06-11 | 莱肯生物科技(海南)有限公司 | 一种核酸检测方法及其应用 |
Family Cites Families (84)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE93542T1 (de) | 1984-12-28 | 1993-09-15 | Plant Genetic Systems Nv | Rekombinante dna, die in pflanzliche zellen eingebracht werden kann. |
EP0218571B1 (en) | 1985-08-07 | 1993-02-03 | Monsanto Company | Glyphosate-resistant plants |
US5312910A (en) | 1987-05-26 | 1994-05-17 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase |
BR9007159A (pt) | 1989-02-24 | 1991-12-10 | Monsanto Co | Genes sinteticos de plantas e processo para a preparacao dos mesmos |
US5633435A (en) | 1990-08-31 | 1997-05-27 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases |
FR2673643B1 (fr) | 1991-03-05 | 1993-05-21 | Rhone Poulenc Agrochimie | Peptide de transit pour l'insertion d'un gene etranger dans un gene vegetal et plantes transformees en utilisant ce peptide. |
US5723758A (en) * | 1991-09-13 | 1998-03-03 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis genes encoding lepidopteran-active toxins |
US5322687A (en) | 1993-07-29 | 1994-06-21 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryet4 and cryet5 toxin genes and proteins toxic to lepidopteran insects |
GB9318207D0 (en) | 1993-09-02 | 1993-10-20 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
US5508264A (en) * | 1994-12-06 | 1996-04-16 | Mycogen Corporation | Pesticidal compositions |
US6063756A (en) * | 1996-09-24 | 2000-05-16 | Monsanto Company | Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor |
BR9713373A (pt) * | 1996-11-20 | 2001-06-19 | Ecogen Inc | Delta-endotoxinas de amplo espectro |
US6713063B1 (en) | 1996-11-20 | 2004-03-30 | Monsanto Technology, Llc | Broad-spectrum δ-endotoxins |
US6017534A (en) * | 1996-11-20 | 2000-01-25 | Ecogen, Inc. | Hybrid Bacillus thuringiensis δ-endotoxins with novel broad-spectrum insecticidal activity |
US5942664A (en) | 1996-11-27 | 1999-08-24 | Ecogen, Inc. | Bacillus thuringiensis Cry1C compositions toxic to lepidopteran insects and methods for making Cry1C mutants |
US6218188B1 (en) * | 1997-11-12 | 2001-04-17 | Mycogen Corporation | Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins |
US6489542B1 (en) | 1998-11-04 | 2002-12-03 | Monsanto Technology Llc | Methods for transforming plants to express Cry2Ab δ-endotoxins targeted to the plastids |
US6283613B1 (en) | 1999-07-29 | 2001-09-04 | Cooper Technologies Company | LED traffic light with individual LED reflectors |
US6501009B1 (en) | 1999-08-19 | 2002-12-31 | Monsanto Technology Llc | Expression of Cry3B insecticidal protein in plants |
AU6702300A (en) * | 1999-08-19 | 2001-03-19 | Syngenta Participations Ag | Hybrid insecticidal toxins and nucleic acid sequences coding therefor |
BR0014516A (pt) * | 1999-09-15 | 2002-07-02 | Monsanto Technology Llc | Composições e métodos de uso de delta-endotoxina do bacilo thuringiensis ativo de lepidopteran |
AU2000269030A1 (en) * | 2000-08-11 | 2002-02-25 | Monsanto Technology Llc | Broad-spectrum delta-endotoxins |
KR100581163B1 (ko) * | 2000-08-25 | 2006-05-22 | 신젠타 파티서페이션즈 아게 | 하이브리드 바실러스 튜린지엔시스 독소, 이를 암호화하는 핵산 및 이를 사용한 해충의 방제방법 |
AR035799A1 (es) * | 2001-03-30 | 2004-07-14 | Syngenta Participations Ag | Toxinas insecticidas aisladas de bacillus thuringiensis y sus usos. |
CN101385467B (zh) * | 2001-03-30 | 2014-11-05 | 辛根塔参与股份公司 | 新的杀虫毒素 |
CN100497378C (zh) * | 2002-03-22 | 2009-06-10 | 拜尔生物科学公司 | 新的苏云金芽孢杆菌杀昆虫蛋白质 |
US20060112447A1 (en) | 2002-08-29 | 2006-05-25 | Bogdanova Natalia N | Nucleotide sequences encoding cry1bb proteins for enhanced expression in plants |
CA2562022C (en) | 2004-04-09 | 2016-01-26 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for control of insect infestations in plants |
CA2735315A1 (en) | 2004-06-09 | 2005-12-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plastid transit peptides |
EP2130839B1 (en) | 2005-04-01 | 2012-03-07 | Athenix Corporation | AXMI-036 a delta-endotoxin gene and methods for its use |
KR101156893B1 (ko) * | 2005-08-31 | 2012-06-21 | 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 | 살충 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열들 |
MX2009000774A (es) | 2006-07-21 | 2009-02-17 | Pioneer Hi Bred Int | Gen novedoso de bacillus thuringiensis con actividad lepidoptera. |
CL2007002135A1 (es) | 2006-07-21 | 2008-03-14 | Pioneer Hi Bred Int | Acido nucleico de bacillus thuringiensis que codifican polipeptidos con actividad plaguicida; construccion de adn y celula huesped que lo comprenden; metodo de proteccion de una planta contra una plaga; polipeptidos y metodo de produccion; y composic |
EP2087120A2 (en) | 2006-12-08 | 2009-08-12 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Novel bacillus thuringiensis crystal polypeptides, polynucleotides, and compositions thereof |
CN105219694A (zh) | 2007-03-09 | 2016-01-06 | 孟山都技术公司 | 用于转化的植物胚外植体的制备和用途 |
MX2009010062A (es) | 2007-03-28 | 2009-10-13 | Syngenta Participations Ag | Proteinas insecticidas. |
US8609936B2 (en) | 2007-04-27 | 2013-12-17 | Monsanto Technology Llc | Hemipteran-and coleopteran active toxin proteins from Bacillus thuringiensis |
WO2008137985A2 (en) | 2007-05-08 | 2008-11-13 | Monsanto Technology Llc | Methods for inducing cotton embryogenic callus |
US7772465B2 (en) | 2007-06-26 | 2010-08-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
CN105830921A (zh) | 2007-08-31 | 2016-08-10 | 孟山都技术公司 | 充分分离植物组织的方法和装置 |
US8283524B2 (en) | 2008-05-15 | 2012-10-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
US8129593B2 (en) | 2008-06-11 | 2012-03-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
US8129594B2 (en) * | 2008-06-11 | 2012-03-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
CA3008307C (en) | 2008-06-25 | 2020-12-15 | Athenix Corp. | Toxin genes and methods for their use |
EP2949659A1 (en) | 2008-07-02 | 2015-12-02 | Athenix Corporation | AXMI-115, AXMI-113, AXMI-005, AXMI-163 and AXMI-184: insecticidal proteins and methods for their use |
US8445749B2 (en) | 2008-09-19 | 2013-05-21 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
US20100077507A1 (en) | 2008-09-22 | 2010-03-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel Bacillus Thuringiensis Gene with Lepidopteran Activity |
MX2011006693A (es) | 2008-12-22 | 2011-10-14 | Athenix Corp | Genes pesticidas de brevibacillus y metodos para su uso. |
CN102388143A (zh) | 2008-12-23 | 2012-03-21 | 阿森尼克斯公司 | AXMI-150 δ-内毒素基因及其使用方法 |
MX2011007157A (es) | 2009-01-23 | 2011-09-01 | Pioneer Hi Bred Int | Nuevo gen de bacillus thuringiensis con actividad lepidoptera. |
WO2010091230A1 (en) | 2009-02-05 | 2010-08-12 | Athenix Corporation | Variant axmi-r1 delta-endotoxin genes and methods for their use |
US8318900B2 (en) | 2009-02-27 | 2012-11-27 | Athenix Corp. | Pesticidal proteins and methods for their use |
CN102421792B (zh) | 2009-03-11 | 2015-11-25 | 阿森尼克斯公司 | Axmi-001、axmi-002、axmi-030、axmi-035和axmi-045: 来自苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白及其用法 |
ES2532145T3 (es) | 2009-04-17 | 2015-03-24 | Dow Agrosciences Llc | Toxinas Cry insecticidas DIG-3 |
JP2012529911A (ja) | 2009-06-16 | 2012-11-29 | ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー | Dig−10殺虫性cry毒素 |
AU2010260305A1 (en) | 2009-06-16 | 2011-12-15 | Dow Agrosciences Llc | DIG-11 insecticidal Cry toxins |
WO2010147877A1 (en) | 2009-06-16 | 2010-12-23 | Dow Agrosciences Llc | Dig-5 insecticidal cry toxins |
MX354219B (es) | 2009-07-31 | 2018-02-19 | Athenix Corp | Familia de genes plaguicidas axmi-192 y metodos para su uso. |
RU2613778C2 (ru) * | 2009-10-02 | 2017-03-21 | Зингента Партисипейшнс Аг | Инсектицидные белки |
CA2780540A1 (en) | 2009-11-12 | 2011-05-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
BR112012014801B1 (pt) * | 2009-12-16 | 2024-03-05 | Dow Agrosciences Llc | Métodos para controlar o desenvolvimento da resistência de um inseto à uma proteína inseticida derivada de um bacillus thuringiensis, e para o controle de pragas de lepidópteros, bem como composição para o controle de pragas de lepidópteros |
WO2011084324A2 (en) | 2009-12-21 | 2011-07-14 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
EP2536267B1 (en) | 2010-02-18 | 2015-07-22 | Athenix Corp. | AXMI221z, AXMI222z, AXMI223z, AXMI224z, AND AXMI225z DELTA-ENDOTOXIN GENES AND METHODS FOR THEIR USE |
CN102892886A (zh) | 2010-02-18 | 2013-01-23 | 阿森尼克斯公司 | AXMI218、AXMI219、AXMI220、AXMI226、AXMI227、AXMI228、AXMI229、AXMI230、和AXMI231δ-内毒素基因以及它们的使用方法 |
MX2013001742A (es) | 2010-08-19 | 2013-05-14 | Pioneer Hi Bred Int | Nuevo gen de bacillus thuringiensis con actividad lepidoptera |
BR112013015515A2 (pt) | 2010-12-28 | 2018-04-24 | Pioneer Hi Bred Int | molécula de ácido nucleico isolada, construto de dna, célula hospedeira, planta transgênica, semente transformada da planta, polipeptídeo isolado com atividade pesticida, composição, método para controlar uma população de praga de lepidóptero, método para matar uma praga de lepidóptero, método para produzir um polipeptídeo com atividade pesticida, planta que tem incorporado de maneira estável em seu genoma um construto de dna, método para proteger uma planta contra uma praga |
US9000261B2 (en) | 2011-01-24 | 2015-04-07 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
CA2825951C (en) * | 2011-02-11 | 2019-08-20 | Monsanto Technology Llc | Pesticidal nucleic acids and proteins and uses thereof |
CN103459601A (zh) | 2011-02-11 | 2013-12-18 | 先锋国际良种公司 | 具有对抗玉米根虫的活性的合成杀昆虫蛋白 |
US8878007B2 (en) | 2011-03-10 | 2014-11-04 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
US9321814B2 (en) | 2011-03-30 | 2016-04-26 | Athenix Corp. | AXMI238 toxin gene and methods for its use |
GB201105418D0 (en) | 2011-03-31 | 2011-05-18 | Univ Durham | Pesticide |
CN111197051B (zh) * | 2011-04-07 | 2023-10-20 | 孟山都技术公司 | 具有对抗半翅目和/或鳞翅目昆虫的活性的昆虫抑制毒素家族 |
RU2014107672A (ru) | 2011-07-28 | 2015-09-10 | Атеникс Корп. | Ген токсина axmi270 и способы его применения |
PL2737069T3 (pl) | 2011-07-28 | 2018-01-31 | Athenix Corp | Warianty białka axmi205 i sposoby ich zastosowania |
CA2844355C (en) | 2011-07-29 | 2022-05-10 | Athenix Corp. | Pesticidal gene with pesticidal activity against western corn rootworm and method for its use |
UY34663A (es) | 2012-03-08 | 2013-10-31 | Athenix Corp | Acido nucleico y proteina recombinante del gen de la endotoxina axmi345, vectores, células, composiciones y métodos para proteger plantas |
US9567381B2 (en) | 2012-03-09 | 2017-02-14 | Vestaron Corporation | Toxic peptide production, peptide expression in plants and combinations of cysteine rich peptides |
BR112014024861B1 (pt) | 2012-04-06 | 2021-11-16 | Monsanto Technology Llc | Polipeptídeo inibidor de inseto, polinucleotídeo codificando o mesmo, célula hospedeira bacteriana, composição inibidora de inseto, mercadoria e métodos de controle de uma peste hemíptera e de produzir uma mercadoria |
US9688730B2 (en) | 2012-07-02 | 2017-06-27 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
US9475847B2 (en) | 2012-07-26 | 2016-10-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
CA2886787A1 (en) * | 2012-10-05 | 2014-04-10 | Dow Agrosciences Llc | Use of cry1ea in combinations for management of resistant fall armyworm insects |
EP3207049B1 (en) | 2014-10-16 | 2021-01-27 | Monsanto Technology LLC | Novel chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
US10487123B2 (en) | 2014-10-16 | 2019-11-26 | Monsanto Technology Llc | Chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
-
2015
- 2015-10-15 EP EP15797725.7A patent/EP3207049B1/en active Active
- 2015-10-15 AU AU2015332384A patent/AU2015332384B2/en active Active
- 2015-10-15 PE PE2017000604A patent/PE20170895A1/es unknown
- 2015-10-15 KR KR1020197037525A patent/KR102208985B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 PE PE2021002063A patent/PE20220374A1/es unknown
- 2015-10-15 CN CN202011055790.5A patent/CN112175094A/zh active Pending
- 2015-10-15 CU CU2018000051A patent/CU24541B1/es unknown
- 2015-10-15 SG SG10201913870RA patent/SG10201913870RA/en unknown
- 2015-10-15 SG SG10201913849RA patent/SG10201913849RA/en unknown
- 2015-10-15 UA UAA201909674A patent/UA123480C2/uk unknown
- 2015-10-15 CN CN202011069672.XA patent/CN112142858A/zh active Pending
- 2015-10-15 UA UAA201909675A patent/UA123481C2/uk unknown
- 2015-10-15 CA CA2964776A patent/CA2964776A1/en active Pending
- 2015-10-15 CR CR20210269A patent/CR20210269A/es unknown
- 2015-10-15 EA EA201790843A patent/EA034918B1/ru unknown
- 2015-10-15 EA EA201892763A patent/EA201892763A1/ru unknown
- 2015-10-15 NZ NZ768153A patent/NZ768153A/en unknown
- 2015-10-15 EP EP20171022.5A patent/EP3715361A1/en active Pending
- 2015-10-15 US US14/884,469 patent/US10233217B2/en active Active
- 2015-10-15 EP EP20171024.1A patent/EP3715362A1/en active Pending
- 2015-10-15 SG SG10201913879PA patent/SG10201913879PA/en unknown
- 2015-10-15 EP EP20171028.2A patent/EP3715364A1/en active Pending
- 2015-10-15 MY MYPI2017701293A patent/MY181627A/en unknown
- 2015-10-15 CN CN201580055840.0A patent/CN107074974B/zh active Active
- 2015-10-15 CU CU2018000052A patent/CU24570B1/es unknown
- 2015-10-15 JP JP2017520352A patent/JP6626102B2/ja active Active
- 2015-10-15 KR KR1020197037522A patent/KR102208978B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 CN CN202011054128.8A patent/CN112175093A/zh active Pending
- 2015-10-15 WO PCT/US2015/055800 patent/WO2016061391A2/en active Application Filing
- 2015-10-15 KR KR1020197037523A patent/KR102208980B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 PE PE2021002061A patent/PE20220375A1/es unknown
- 2015-10-15 KR KR1020177013031A patent/KR102127553B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 CA CA3151125A patent/CA3151125A1/en active Pending
- 2015-10-15 CN CN202011068643.1A patent/CN112142857A/zh active Pending
- 2015-10-15 SG SG10201913859XA patent/SG10201913859XA/en unknown
- 2015-10-15 MX MX2017004919A patent/MX2017004919A/es unknown
- 2015-10-15 PE PE2021002064A patent/PE20220372A1/es unknown
- 2015-10-15 EA EA201892760A patent/EA201892760A1/ru unknown
- 2015-10-15 CU CU2018000054A patent/CU24551B1/es unknown
- 2015-10-15 EP EP20171026.6A patent/EP3715363A1/en active Pending
- 2015-10-15 NZ NZ730747A patent/NZ730747A/en unknown
- 2015-10-15 CR CR20170198A patent/CR20170198A/es unknown
- 2015-10-15 CU CU2018000053A patent/CU24571B1/es unknown
- 2015-10-15 ES ES15797725T patent/ES2864657T3/es active Active
- 2015-10-15 SG SG11201702749RA patent/SG11201702749RA/en unknown
- 2015-10-15 KR KR1020197037524A patent/KR102208984B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 BR BR112017007794-9A patent/BR112017007794B1/pt active IP Right Grant
- 2015-10-15 BR BR122020004891-3A patent/BR122020004891B1/pt active IP Right Grant
- 2015-10-15 UA UAA201909676A patent/UA123482C2/uk unknown
- 2015-10-15 CU CU2017000049A patent/CU24456B1/es unknown
- 2015-10-15 BR BR122020004897-2A patent/BR122020004897B1/pt active IP Right Grant
- 2015-10-15 CA CA3151123A patent/CA3151123A1/en active Pending
- 2015-10-15 EA EA201892762A patent/EA201892762A1/ru unknown
- 2015-10-15 PE PE2021002059A patent/PE20220940A1/es unknown
- 2015-10-15 CR CR20210268A patent/CR20210268A/es unknown
- 2015-10-15 NZ NZ768151A patent/NZ768151A/en unknown
- 2015-10-15 EA EA201892761A patent/EA201892761A1/ru unknown
- 2015-10-15 BR BR122020004875-1A patent/BR122020004875B1/pt active IP Right Grant
- 2015-10-16 UY UY0001036360A patent/UY36360A/es active IP Right Grant
- 2015-10-16 AR ARP150103361A patent/AR103129A1/es unknown
-
2017
- 2017-03-29 ZA ZA2017/02191A patent/ZA201702191B/en unknown
- 2017-04-05 IL IL251570A patent/IL251570B/en active IP Right Grant
- 2017-04-07 NI NI201700044A patent/NI201700044A/es unknown
- 2017-04-07 SV SV2017005422A patent/SV2017005422A/es unknown
- 2017-04-11 PH PH12017500697A patent/PH12017500697A1/en unknown
- 2017-04-11 CL CL2017000895A patent/CL2017000895A1/es unknown
- 2017-04-12 MX MX2021009317A patent/MX2021009317A/es unknown
- 2017-04-12 MX MX2021009320A patent/MX2021009320A/es unknown
- 2017-04-12 MX MX2021009318A patent/MX2021009318A/es unknown
- 2017-04-12 MX MX2021009319A patent/MX2021009319A/es unknown
- 2017-05-12 CO CONC2017/0004807A patent/CO2017004807A2/es unknown
- 2017-05-12 EC ECIEPI201729551A patent/ECSP17029551A/es unknown
- 2017-12-20 US US15/849,012 patent/US10669317B2/en active Active
- 2017-12-20 US US15/848,852 patent/US10494409B2/en active Active
- 2017-12-20 US US15/848,837 patent/US10494408B2/en active Active
- 2017-12-20 US US15/849,218 patent/US10611806B2/en active Active
-
2019
- 2019-01-10 ZA ZA2019/00217A patent/ZA201900217B/en unknown
- 2019-01-14 CL CL2019000110A patent/CL2019000110A1/es unknown
- 2019-01-14 CL CL2019000109A patent/CL2019000109A1/es unknown
- 2019-01-15 CL CL2019000112A patent/CL2019000112A1/es unknown
- 2019-04-30 AU AU2019203015A patent/AU2019203015B2/en active Active
- 2019-04-30 AU AU2019203025A patent/AU2019203025B2/en active Active
- 2019-04-30 AU AU2019203014A patent/AU2019203014B2/en active Active
- 2019-04-30 AU AU2019203021A patent/AU2019203021B2/en active Active
- 2019-05-15 CL CL2019001328A patent/CL2019001328A1/es unknown
-
2020
- 2020-03-20 ZA ZA2020/01771A patent/ZA202001771B/en unknown
- 2020-03-20 ZA ZA2020/01770A patent/ZA202001770B/en unknown
- 2020-03-20 ZA ZA2020/01769A patent/ZA202001769B/en unknown
- 2020-03-20 ZA ZA2020/01768A patent/ZA202001768B/en unknown
- 2020-04-05 AU AU2020202394A patent/AU2020202394C1/en active Active
- 2020-05-08 AR ARP200101325A patent/AR118893A2/es unknown
- 2020-05-08 AR ARP200101324A patent/AR118892A2/es unknown
- 2020-05-08 AR ARP200101326A patent/AR118894A2/es unknown
- 2020-05-08 AR ARP200101323A patent/AR118891A2/es unknown
- 2020-05-08 AR ARP200101322A patent/AR118890A2/es unknown
- 2020-05-14 US US16/874,186 patent/US11267849B2/en active Active
-
2021
- 2021-03-04 PH PH12021500021A patent/PH12021500021A1/en unknown
- 2021-03-04 PH PH12021500022A patent/PH12021500022A1/en unknown
- 2021-03-04 PH PH12021500019A patent/PH12021500019A1/en unknown
- 2021-03-04 PH PH12021500020A patent/PH12021500020A1/en unknown
-
2022
- 2022-02-14 US US17/671,011 patent/US20220306703A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
UA123482C2 (uk) | Химерний інсектицидний білок, інгібіторний відносно лускокрилих шкідників | |
JP7317080B2 (ja) | 新規防虫タンパク質 | |
US11254950B2 (en) | Insecticidal proteins toxic or inhibitory to hemtpteran pests | |
US20200157562A1 (en) | Novel insect inhibitory proteins | |
US11920145B2 (en) | Insect inhibitory proteins | |
US11673922B2 (en) | Insect inhibitory proteins | |
US11744250B2 (en) | Insect inhibitory proteins | |
RU2765310C2 (ru) | Новые белки, проявляющие ингибирующую активность по отношению к насекомым | |
JP7125976B2 (ja) | 新規の昆虫阻害タンパク質 | |
US10626151B2 (en) | Insect inhibitory proteins | |
OA21316A (en) | Novel insect inhibitory proteins. | |
EA040152B1 (ru) | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей | |
EA040497B1 (ru) | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей | |
EA040097B1 (ru) | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей | |
EA040101B1 (ru) | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей |