BR122020004875B1 - Molécula de ácido nucleico recombinante, polinucleotídeo, proteína inseticida quimérica, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros - Google Patents
Molécula de ácido nucleico recombinante, polinucleotídeo, proteína inseticida quimérica, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros Download PDFInfo
- Publication number
- BR122020004875B1 BR122020004875B1 BR122020004875-1A BR122020004875A BR122020004875B1 BR 122020004875 B1 BR122020004875 B1 BR 122020004875B1 BR 122020004875 A BR122020004875 A BR 122020004875A BR 122020004875 B1 BR122020004875 B1 BR 122020004875B1
- Authority
- BR
- Brazil
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- plant
- protein
- chimeric
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 308
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 299
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 title claims abstract description 228
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 45
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 18
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 14
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 14
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 title claims description 85
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 title claims description 79
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 title claims description 60
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 title claims description 35
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 title claims description 35
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 title claims description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 26
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 104
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 39
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 23
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 14
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 88
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 192
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 116
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 97
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 86
- 241000255967 Helicoverpa zea Species 0.000 description 75
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 52
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 37
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 31
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 27
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 26
- 241000209149 Zea Species 0.000 description 25
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 25
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 25
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 25
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 24
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 24
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 21
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 21
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 19
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 17
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 17
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 16
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 16
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 14
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 14
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 13
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 13
- 241000879145 Diatraea grandiosella Species 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 12
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 12
- 241000258937 Hemiptera Species 0.000 description 11
- 241000256247 Spodoptera exigua Species 0.000 description 11
- 108010031100 chloroplast transit peptides Proteins 0.000 description 11
- 241001367803 Chrysodeixis includens Species 0.000 description 10
- 241001147381 Helicoverpa armigera Species 0.000 description 10
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 10
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 10
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 241000400698 Elasmopalpus lignosellus Species 0.000 description 9
- 241000256244 Heliothis virescens Species 0.000 description 9
- 241001477931 Mythimna unipuncta Species 0.000 description 9
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 9
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 8
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 8
- 241000625764 Anticarsia gemmatalis Species 0.000 description 8
- 241000426497 Chilo suppressalis Species 0.000 description 8
- 241000255990 Helicoverpa Species 0.000 description 8
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 8
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 8
- 241001521235 Spodoptera eridania Species 0.000 description 8
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 7
- 241000566547 Agrotis ipsilon Species 0.000 description 7
- 241000289763 Dasygaster padockina Species 0.000 description 7
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 7
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 7
- 241001147398 Ostrinia nubilalis Species 0.000 description 7
- 241000721451 Pectinophora gossypiella Species 0.000 description 7
- 241000255969 Pieris brassicae Species 0.000 description 7
- 241000500437 Plutella xylostella Species 0.000 description 7
- 241000931750 Spodoptera cosmioides Species 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 7
- 241000122106 Diatraea saccharalis Species 0.000 description 6
- 241001572697 Earias vittella Species 0.000 description 6
- 241000346285 Ostrinia furnacalis Species 0.000 description 6
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 6
- 241000985245 Spodoptera litura Species 0.000 description 6
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 5
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 5
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 5
- 241001000403 Herpetogramma licarsisalis Species 0.000 description 5
- 241001012098 Omiodes indicata Species 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 5
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 5
- 241001340508 Crambus Species 0.000 description 4
- 101150102464 Cry1 gene Proteins 0.000 description 4
- 241000721703 Lymantria dispar Species 0.000 description 4
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 4
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 4
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 4
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 4
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 4
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 4
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 4
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 4
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000035611 feeding Effects 0.000 description 4
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 description 4
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 4
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 3
- 235000000832 Ayote Nutrition 0.000 description 3
- 241000555281 Brevibacillus Species 0.000 description 3
- 101710151559 Crystal protein Proteins 0.000 description 3
- 240000004244 Cucurbita moschata Species 0.000 description 3
- 235000009854 Cucurbita moschata Nutrition 0.000 description 3
- 235000009804 Cucurbita pepo subsp pepo Nutrition 0.000 description 3
- 241000353522 Earias insulana Species 0.000 description 3
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 3
- 235000004341 Gossypium herbaceum Nutrition 0.000 description 3
- 240000002024 Gossypium herbaceum Species 0.000 description 3
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 241000255901 Tortricidae Species 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 230000000967 entomopathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- -1 organophosphates Chemical class 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 235000015136 pumpkin Nutrition 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 3
- 241000001996 Agrotis orthogonia Species 0.000 description 2
- 241001652650 Agrotis subterranea Species 0.000 description 2
- 241000449794 Alabama argillacea Species 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 241001259789 Amyelois transitella Species 0.000 description 2
- 241001002470 Archips argyrospila Species 0.000 description 2
- 241001423656 Archips rosana Species 0.000 description 2
- 108700003918 Bacillus Thuringiensis insecticidal crystal Proteins 0.000 description 2
- 101000878902 Bacillus thuringiensis Pesticidal crystal protein Cry6Aa Proteins 0.000 description 2
- 101000878906 Bacillus thuringiensis Pesticidal crystal protein Cry6Ba Proteins 0.000 description 2
- 235000021537 Beetroot Nutrition 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 2
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 2
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 description 2
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 2
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 2
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 description 2
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 2
- 108010049994 Chloroplast Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000098289 Cnaphalocrocis medinalis Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 241001635274 Cydia pomonella Species 0.000 description 2
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108010074122 Ferredoxins Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 241001441330 Grapholita molesta Species 0.000 description 2
- 241001201676 Hedya nubiferana Species 0.000 description 2
- 241000630740 Homoeosoma electellum Species 0.000 description 2
- 241000370523 Hypena scabra Species 0.000 description 2
- 241001325860 Lacanobia oleracea Species 0.000 description 2
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 2
- 241001261104 Lobesia botrana Species 0.000 description 2
- 241000193386 Lysinibacillus sphaericus Species 0.000 description 2
- 241000732113 Mamestra configurata Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000497111 Paralobesia viteana Species 0.000 description 2
- 241000459456 Parapediasia teterrellus Species 0.000 description 2
- 241001525654 Phyllocnistis citrella Species 0.000 description 2
- 241000907661 Pieris rapae Species 0.000 description 2
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 2
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 241001456339 Rachiplusia nu Species 0.000 description 2
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 description 2
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 2
- 241001575047 Suleima Species 0.000 description 2
- 241000255993 Trichoplusia ni Species 0.000 description 2
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 2
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 2
- 241001389010 Tuta Species 0.000 description 2
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 2
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 2
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 2
- 230000035613 defoliation Effects 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 2
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 2
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- ZHVOBYWXERUHMN-KVJKMEBSSA-N 3-[(3s,5r,8r,9s,10s,13s,14s,17s)-10,13-dimethyl-3-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2h-furan-5-one Chemical compound O([C@@H]1C[C@H]2CC[C@@H]3[C@@H]([C@]2(CC1)C)CC[C@]1([C@H]3CC[C@@H]1C=1COC(=O)C=1)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O ZHVOBYWXERUHMN-KVJKMEBSSA-N 0.000 description 1
- 241001133760 Acoelorraphe Species 0.000 description 1
- 241001014341 Acrosternum hilare Species 0.000 description 1
- 241001136249 Agriotes lineatus Species 0.000 description 1
- 241000234282 Allium Species 0.000 description 1
- 235000005254 Allium ampeloprasum Nutrition 0.000 description 1
- 240000006108 Allium ampeloprasum Species 0.000 description 1
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 description 1
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 description 1
- 102100034613 Annexin A2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000668 Annexin A2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000669 Annexin A4 Proteins 0.000 description 1
- 102100034612 Annexin A4 Human genes 0.000 description 1
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 1
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 1
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 1
- 101000768857 Arabidopsis thaliana 3-phosphoshikimate 1-carboxyvinyltransferase, chloroplastic Proteins 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 241001002469 Archips Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000011331 Brassica Nutrition 0.000 description 1
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000017647 Brassica oleracea var italica Nutrition 0.000 description 1
- 235000010149 Brassica rapa subsp chinensis Nutrition 0.000 description 1
- 244000221633 Brassica rapa subsp chinensis Species 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 241000193417 Brevibacillus laterosporus Species 0.000 description 1
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 1
- 101710167800 Capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 description 1
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 description 1
- 108010007108 Chloroplast Thioredoxins Proteins 0.000 description 1
- 244000045195 Cicer arietinum Species 0.000 description 1
- 235000010523 Cicer arietinum Nutrition 0.000 description 1
- 244000241235 Citrullus lanatus Species 0.000 description 1
- 235000012828 Citrullus lanatus var citroides Nutrition 0.000 description 1
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 1
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 1
- 240000007154 Coffea arabica Species 0.000 description 1
- 241000219112 Cucumis Species 0.000 description 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 235000014466 Douglas bleu Nutrition 0.000 description 1
- 241001517923 Douglasiidae Species 0.000 description 1
- 241001546516 Elasmus Species 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 244000004281 Eucalyptus maculata Species 0.000 description 1
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 description 1
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 description 1
- 235000011363 Fragaria x ananassa Nutrition 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 241001201623 Hofmannophila pseudospretella Species 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 235000008694 Humulus lupulus Nutrition 0.000 description 1
- 244000025221 Humulus lupulus Species 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- 240000007049 Juglans regia Species 0.000 description 1
- 235000009496 Juglans regia Nutrition 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 1
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 1
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 1
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 1
- 241000208682 Liquidambar Species 0.000 description 1
- 235000006552 Liquidambar styraciflua Nutrition 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000819714 Monema flavescens Species 0.000 description 1
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 1
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 241000256259 Noctuidae Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001310339 Paenibacillus popilliae Species 0.000 description 1
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 1
- 101100056487 Petunia hybrida EPSPS gene Proteins 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 241001236219 Pinus echinata Species 0.000 description 1
- 235000005018 Pinus echinata Nutrition 0.000 description 1
- 235000017339 Pinus palustris Nutrition 0.000 description 1
- 235000008577 Pinus radiata Nutrition 0.000 description 1
- 241000218621 Pinus radiata Species 0.000 description 1
- 241000218679 Pinus taeda Species 0.000 description 1
- 235000008566 Pinus taeda Nutrition 0.000 description 1
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 1
- 240000003889 Piper guineense Species 0.000 description 1
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 1
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 101710130420 Probable capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 102000014961 Protein Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 240000001416 Pseudotsuga menziesii Species 0.000 description 1
- 235000005386 Pseudotsuga menziesii var menziesii Nutrition 0.000 description 1
- 241000255893 Pyralidae Species 0.000 description 1
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 1
- 241001456337 Rachiplusia Species 0.000 description 1
- 244000088415 Raphanus sativus Species 0.000 description 1
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 240000000528 Ricinus communis Species 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 101710204410 Scaffold protein Proteins 0.000 description 1
- 241000563489 Sesamia inferens Species 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 1
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 235000009337 Spinacia oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 244000300264 Spinacia oleracea Species 0.000 description 1
- 244000107946 Spondias cytherea Species 0.000 description 1
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 241001414989 Thysanoptera Species 0.000 description 1
- 235000019714 Triticale Nutrition 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 241000482268 Zea mays subsp. mays Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000011681 asexual reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000013465 asexual reproduction Methods 0.000 description 1
- 210000004666 bacterial spore Anatomy 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- VEMKTZHHVJILDY-UXHICEINSA-N bioresmethrin Chemical compound CC1(C)[C@H](C=C(C)C)[C@H]1C(=O)OCC1=COC(CC=2C=CC=CC=2)=C1 VEMKTZHHVJILDY-UXHICEINSA-N 0.000 description 1
- 244000037672 biotech crops Species 0.000 description 1
- 125000005340 bisphosphate group Chemical group 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 1
- 235000016213 coffee Nutrition 0.000 description 1
- 235000013353 coffee beverage Nutrition 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 244000013123 dwarf bean Species 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004634 feeding behavior Effects 0.000 description 1
- 230000003031 feeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000037666 field crops Species 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000021393 food security Nutrition 0.000 description 1
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 244000037671 genetically modified crops Species 0.000 description 1
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 235000021331 green beans Nutrition 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007758 mating behavior Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 150000004045 organic chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000002824 peroxisome Anatomy 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000014639 sexual reproduction Effects 0.000 description 1
- JXOHGGNKMLTUBP-HSUXUTPPSA-N shikimic acid Chemical compound O[C@@H]1CC(C(O)=O)=C[C@@H](O)[C@H]1O JXOHGGNKMLTUBP-HSUXUTPPSA-N 0.000 description 1
- JXOHGGNKMLTUBP-JKUQZMGJSA-N shikimic acid Natural products O[C@@H]1CC(C(O)=O)=C[C@H](O)[C@@H]1O JXOHGGNKMLTUBP-JKUQZMGJSA-N 0.000 description 1
- 210000004215 spore Anatomy 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000005382 thermal cycling Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 235000020234 walnut Nutrition 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
- 241000228158 x Triticosecale Species 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
- C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
- A01N47/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having one or more single bonds to nitrogen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Catching Or Destruction (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
Abstract
a presente invenção refere-se a sequências de nucleotídeos que codificam novas proteínas inseticidas quiméricas que exibem atividade inibidora de lepidópteros. modalidades particulares proporcionam composições e plantas, partes de plantas, sementes transformadas contendo as moléculas de ácido nucleico recombinante, que codificam uma ou mais dentre as proteínas inseticidas quiméricas.
Description
[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório n° de Série US 62/064,989 depositado em 16 de março de 2016 o qual é incorporado ao presente documento a título de referência em sua totalidade.
[002] Uma forma legível por computador de uma Listagem de Sequências é depositada com este pedido por apresentação eletrônica e é incorporada a este pedido por referência em sua totalidade. A Listagem de Sequências está contida no arquivo criado em 23 de agosto de 2016, sob o nome do arquivo P34230WO00_Seq_PCT_Art34.txt, e que tem 898.229 bytes de tamanho (medido no sistema operacional MS- Windows®).
[003] A invenção se refere, em geral, ao campo de proteínas inibidoras de insetos. Uma classe inovadora de proteínas de inseticidas quiméricas que exibem atividade inibidora de insetos contra pragas relevantes para agricultura de plantas e sementes cultivadas é divulgada. Em particular, a classe divulgada de proteínas exibe atividade inseticida contra a ordem Lepidoptera de pragas de insetos. As plantas, partes de plantas e sementes que contém uma molécula de ácido nucleico recombinante que codifica uma ou mais dentre as proteínas de toxina descritas são fornecidos.
[004] Aprimorando a produtividade dos cultivos de plantas agricolamente significativas, que inclui, entre outros, milho, soja, cana- de-açúcar, arroz, trigo, legumes e algodão, têm se tornado cada vez mais importante. Além da necessidade crescente de produtos agrícolas para alimentar, vestir e fornecer energia para uma população humana crescente, efeitos relacionados ao clima e pressão da crescente população para usar a terra para outros propósitos além das práticas agrícolas são previstos para reduzir a quantidade de terra arável disponível para a agricultura. Estes fatores levaram a previsões sombrias no que diz respeito à segurança alimentar, particularmente na ausência de grandes aprimoramentos em biotecnologia vegetal e práticas agronômicas. À luz dessas pressões, os aprimoramentos ambientalmente sustentáveis em tecnologia, técnicas agrícolas e gerenciamento de pragas são ferramentas vitais para expandir a produção de cultivo na quantidade limitada de terra arável disponível para a agricultura.
[005] Insetos, particularmente insetos dentro da ordem Lepidoptera, são considerados uma das principais causas de danos a culturas de campo, diminuindo assim o rendimento das culturas em áreas infestadas. Espécies de praga de Lepidópteros que impactam negativamente a agricultura são, porém, sem limitação, lagarta-do- cartucho (Spodoptera frugiperda), lagarta-da-beterraba (Spodoptera exigua), lagarta-bertha (Mamestra configurata), lagarta-negra (Agrotis ipsilon), lagarta-da-couve (Trichoplusia ni), lagarta-da-soja (Chrysodeixis includens), lagarta-da-soja (Anticarsia gemmatalis), lagarta do trevo verde (Hypena scabra), lagarta-do-tabaco (Heliothis virescens), lagarta-rosca subterrânea (Agrotis subterranea), lagarta- dos-cereais (Pseudaletia unipuncta), lagarta-rosca ocidental (Agrotis orthogonia), broca-do-milho Europeia (Ostrinia nubilalis), lagarta-laranja (Amyelois transitella), verme-da-raiz-do-milho (Crambus caliginosellus), verme-da-teia-dos-gramados (Herpetogramma licarsisalis), traça-do- girassol (Homoeosoma electellum), lagarta-elasmo (Elasmopalpus lignosellus), mariposa-das-maçãs (Cydia pomonella), traça-da-uva (Endopiza viteana), traça-oriental (Grapholita molesta), traça-do-botão- do-girassol (Suleima helianthana), traça-da-couve (Plutella xylostella), traça das crucíferas(Pectinophora gossypiella), broca-do-caule-rosa (Sesamia inferens), mariposa-cigana (Lymantria dispar), lagarta-da- folha-do-algodoeiro (Alabama argillacea), lagarta-das-folhas-das- árvores-frutíferas (Archips argyrospila), traça tortricídea dos arbustos(Archips rosana), broca-do-arroz-asiático ou broca-do-colmo- do-arroz (Chilo suppressalis), enrolador-da-folha (Cnaphalocrocis medinalis), verme-de-teia-da-raiz-do-milho (Crambus caliginosellus), verme-de-teia-de-capim-do-campo (Crambus teterrellus), broca- grande-do-milho (Diatraea grandiosella)), broca-grande-da-cana-de- açúcar (Diatraea saccharalis), lagarta-espinhosa (Earias insulana), lagarta-da-maçã (Earias vittella), lagarta helicoverpa (Helicoverpa armigera), lagarta-do-milho, lagarta-da-soja ou lagarta-do-algodão (Helicoverpa zea), verme-da-teia-dos-gramados (Herpetogramma licarsisalis), traça-da-uva (Lobesia botrana), lagarta-mineira (Phyllocnistis citrella), borboleta-branca-da-couve (Pieris brassicae),borboleta-pequena-da-couve (Pieris rapae), larva-do-tabaco ou curuquerê-oriental (Spodoptera litura), e traça-do-tomateiro (Tuta absoluta).
[006] Historicamente, a aplicação intensiva de inseticidas químicos sintéticos foi invocada como o agente de controle de pragas na agricultura. Preocupações com o meio ambiente e a saúde humana, além de problemas de resistência emergentes, estimulou a pesquisa e o desenvolvimento de pesticidas biológicos. Este esforço de investigação resultou na constatação e no uso progressivos de várias espécies microbianas entomopatogênicas, que inclui bactérias.
[007] O paradigma de controle biológico foi alterado quando o potencial de bactérias entomopatogênicas, especialmente, bactérias pertencentes ao gênero Bacilo, foi constado e desenvolvido como um agente biológico de controle de pragas. As cepas da bactéria Bacillus thuringiensis (Bt) foram usadas como uma fonte de proteínas insecticidas uma vez que foi constatado que cepas de Bt mostram uma alta toxicidade contra insetos específicos. As cepasBt são conhecidas por produzir delta-endotoxinas que são localizadas dentro de corpos de inclusão cristalinos parasporais no estabelecimento da esporulação e durante a fase de crescimento estacionária (por exemplo, proteínas Cry) e também são conhecidas por produzir proteína inseticida secretada. Após a ingestão por um inseto susceptível, a delta-endotoxinas, bem como toxinas secretadas exercem seus efeitos na superfície do epitélio do intestino médio, rompendo a membrana celular, levando a ruptura de célula e morte. Os genes que codificam proteínas insecticidas também foram identificados em espécies bacterianas diferentes de Bt, incluindo outros Bacilo e uma diversidade de outras espécies bacterianas, tais como Brevibacillus laterosporus, Lysinibacillus sphaericus ("Ls" anteriormente conhecido como Bacillus sphaericus) e Paenibacillus popilliae.
[008] Toxinas de proteína inseticida secretadas e cristalinas são altamente específicas para seus hospedeiros e receberam aceitação mundial como alternativas aos inseticidas químicos. Por exemplo, proteínas de toxinas inseticidas têm sido empregados em diversas aplicações agrícolas para proteger plantas agricolamente importantes contra infestações de insetos, diminuir a necessidade por aplicação de pesticidas químicos e aumentar o rendimento. Proteínas de toxinas insecticidas são usadas para controlar as pragas agricolamente relevantes de plantas de cultura por métodos mecânicos, tais como a aspersão para dispersar formulações microbianas contendo várias cepas de bactérias sobre as superfícies de plantas, e usando técnicas de transformação genética para produzir plantas e sementes transgênicas que expressam a proteína de toxina inseticida.
[009] O uso de plantas transgênicas que expressa proteínas inseticidas tem sido adotado globalmente. Por exemplo, em 2012, foram plantados 26,1 milhões de hectares com culturas transgênicas que expressam toxinas Bt (James, C., Global Status of Commercialized Biotech/GM Crops: 2012. ISAAA Resumo n° 44). O uso global de culturas transgênicas protegidas contra insetos e o número limitado de proteínas inseticidas usadas nestas culturas criaram uma pressão de seleção para os alelos de insetos existentes que conferem resistência às proteínas inseticida usadas atualmente.
[0010] O desenvolvimento de resistência em pragas-alvo a proteínas inseticidas cria a necessidade contínua por constatação e desenvolvimento de novas formas de proteínas inseticidas que são úteis para gerir o aumento da resistência a insetos aos cultivos transgênicos que expressam proteínas inseticidas. Novas proteínas insecticidas com eficácia aprimorada e que exibem controle ao longo de um espectro mais amplo de espécies de insetos sensíveis irá reduzir o número de insetos que sobrevivem que podem desenvolver alelos de resistência. Além disso, o uso numa planta de duas ou mais proteínas insecticidas transgênicas tóxicos para a mesma praga de insetos e exibir modos de ação diferentes reduz a probabilidade de resistência em qualquer espécie de inseto-alvo único.
[0011] Consequentemente, existe uma necessidade crítica para identificar proteínas inseticidas adicionais com propriedades inseticidas aprimoradas, tais como eficácia aumentada contra um espectro mais amplo de espécies de pragas de inseto alvo e modos de ação diferentes em comparação às toxinas usadas atualmente em práticas agrícolas. Para satisfazer esta necessidade, a presente invenção descreve proteínas inseticidas quiméricas Cry1 inovadoras que exibem atividade contra espécies importantes de pragas de Lepidópteros alvo.
[0012] Os membros da família de proteínas de cristal Cry1 são conhecidos na técnica por exibir bioatividade contra pragas de Lepidópteros. A forma precursora de proteínas de cristal Cry 1 consiste em dois segmentos de tamanhos aproximadamente iguais. A porção carbóxi-terminal da proteína precursora, conhecida como o segmento protoxina, estabiliza a formação de cristais e exibe nenhuma atividade inseticida. A metade amino-terminal da proteína precursora compreende o segmento de toxina da proteína Cry1 e, com base no alinhamento de sequências conservadas ou substancialmente conservadas nos membros da família Cry1, pode estar ainda subdividido em três domínios estruturais, domínio I, domínio II e domínio III. O domínio I compreende cerca do primeiro terço do segmento de toxina ativa e tem sido demonstrado como essencial para a formação de canais. Os domínios II e III têm, ambos, sido implicados na ligação de receptor e especificidade de espécie de inseto, dependendo do inseto e da proteína inseticida a ser examinada.
[0013] A probabilidade de criar arbitrariamente uma proteína quimérica com propriedades melhoradas da variedade das estruturas de domínio das numerosas proteínas inseticidas nativas conhecidas na técnica é remota. Este é um resultado da natureza complexa da estrutura proteica, oligomerização e ativação (incluindo processamento proteolítico correto do precursor quimérico, se expressado de tal forma) exigido para liberar um segmento de proteína inseticida. Apenas através da seleção cuidadosa de protoxinas e alvos específicos dentro de cada proteína parental para a criação de uma estrutura quimérica as toxinas, toxinas inseticidas quiméricas funcionais podem ser construídas, as quais exibem atividade inseticida melhorada em comparação às proteínas parentais a partir dos quais as quimeras são derivadas. É conhecido na técnica que a remontagem dos domínios I, II e III de protoxina e toxina de quaisquer duas ou mais toxinas que são diferentes umas das outras, muitas vezes resultam na construção de proteínas que exibem a formação de cristais com ausência completa de qualquer atividade inseticida detectável direcionada para uma espécie de pragas de insetos alvo preferida. Apenas por tentativa e erro as quimeras inseticidas eficazes são projetadas, e mesmo assim, o versado na técnica não pode garantir que obterá uma quimera que exibe atividade inseticida que é equivalente ou aprimorada em comparação a uma única proteína de toxina parental a partir da qual a protoxina constituinte ou domínios de toxina da quimera podem ter sido derivados. Por exemplo, a literatura relata numerosos exemplos de construção ou montagem de proteínas quiméricas a partir de dois ou mais precursores de proteína de cristal. Consultar, por exemplo. Jacqueline S. Knight, et al. "A Strategy for Shuffling Numerous Bacillus thuringiensis Crystal Protein Domains". J. Economic Entomology, 97 (6) (2004): páginas 1.805 a 1.813; Bosch, et al (Patente n° U.S.6204246); Malvar e Gilmer (Patente n° U.S.6017534). Em cada um destes exemplos, muitas das quimeras resultantes não exibiram propriedades inseticidas ou formadoras de cristal que fossem equivalentes ou melhoradas, em comparação às proteínas precursoras a partir das quais os componentes das quimeras foram derivados.
[0014] As moléculas de ácido nucleico recombinantes são fornecidas em que codificam proteínas inseticidas quiméricas tóxicas para espécie de Lepidópteros de pragas de plantas. Cada uma dentre as proteínas inseticidas quiméricas pode ser usada isoladamente ou umas em combinação com as outras e com outras proteínas inseticidas e agentes inibidores de insetos em formulações e in planta; deste modo, fornecendo alternativas às proteínas inseticidas e químicas de inseticidas atualmente em uso em sistemas agrícolas.
[0015] Em certas modalidades descritas no presente documento, uma proteína inseticida quimérica compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma dentre as SEQ ID NOs: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61,63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91,93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 ou 111.Esta proteína insecticida quimérica exibe atividade inibidora contra uma espécie de inseto da ordem Lepidopteras tais como, porém, sem limitação, Anticarsia gemmatalis, Diatraea saccharalis, Elasmopalpus lignosellus, Helicoverpa zea, Heliothis virescens, Chrysodeixis includens, Spodoptera cosmioides, Spodoptera eridania, Spodoptera frugiperda, Spodoptera exigua, Helicoverpa armigera, Spodoptera litura, Pectinophora gossypiella, Diatraea grandiosella, Earias vitella, Helicoverpa gelotopeon e Rachiplusia nu.
[0016] Em outra modalidade, é divulgado um polinucleotídeo que codifica uma proteína inseticida quimérica, em que o polinucleotídeo é ligado de modo operativo a um promotor heterólogo e a proteína inseticida quimérica compreende a sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma dentre as SEQ ID NOs: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 ou 111. Também é contemplado um polinucleotídeo que codifica uma proteína inseticida quimérica, em que o polinucleotídeo compreende uma sequência de nucleotídeos que opcionalmente: se hibridiza sob condições rigorosas com o complemento inverso da sequência de polinucleotídeo como estabelecido em qualquer uma dentre as SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 ou 130; ou codifica a proteína inseticida quimérica que compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma dentre as SEQ ID NOs: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41 , 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 ou 111.
[0017] Em outras modalidades divulgadas no presente documento, uma célula hospedeira que compreende o polinucleotídeo conforme estabelecido de em qualquer uma dentre as SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, or 130, em que a célula hospedeira é selecionada a partir do grupo que consiste numa célula hospedeira bacteriana ou uma célula hospedeira vegetal. As células hospedeiras bacterianas contempladas incluem Agrobacterium, Rhizobium, Bacillus, Brevibacillus, Escherichia, Pseudomonas, Klebsiella,Erwinia, em que a espécie Bacillus é uma Bacillus cereus ou uma Bacillus thuringiensis, a referida Brevibacillus é uma Brevibacillus laterosperous e a referida Escherichia é uma Escherichia coli. As células de plantas contempladas incluem monocotiledôneas e dicotiledôneas.
[0018] Outras modalidades divulgadas no presente incluem composições inibidoras de insetos que compreendem uma proteína inseticida quimérica que compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma dentre as SEQ ID NOs: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 ou 111. Em certas modalidades, a composição inibidora de insetos compreende ainda pelo menos um agente inibidor de insetos diferente da proteína inseticida quimérica. Os agentes inibidores de insetos contemplados diferentes da proteína inseticida quimérica incluem uma proteína inibidora de inseto, uma molécula de dsRNA inibidora de insetos e uma química inibidora de insetos. Estes agentes inibidores de inseto diferentes da proteína inseticida quimérica podem exibir atividade contra uma ou mais espécies de pragas das ordens Lepidópteros, Coleoptera, Hemiptera, Homoptera ou Thysanoptera.
[0019] Em ainda outra modalidade divulgada no presente documento, uma semente que compreende uma quantidade eficaz inibidora de insetos de: uma proteína inseticida quimérica que compreende a sequência de aminoácidos conforme estabelecido em qualquer uma dentre as SEQ ID NOs: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16 , 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 ou 111; ou um polinucleotídeo conforme estabelecido em qualquer uma dentre as SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 ou 130.
[0020] Também são contemplados métodos para controlar ma praga de Lepidópteros compreendem colocar a praga de Lepidópteros em contato com uma quantidade inibidora de uma proteína inseticida quimérica da invenção.
[0021] Em outra modalidade, divulgada no presente documento, uma célula de planta, planta ou parte da planta transgênica que compreende uma proteína inseticida quimérica, em que: a proteína inseticida quimérica compreende qualquer sequência de aminoácidos estabelecida em qualquer uma dentre as SEQ ID NOs: 21, 10, 28, 7, 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, or 111; ou a proteína inseticida quimérica que compreende uma proteína que é: pelo menos 94% idêntica à SEQ ID NOs: 21, 10; pelo menos 93% idêntica à SEQ ID NO: 28, pelo menos 87% idêntica à SEQ ID NO: 7; pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 4; pelo menos 91% idêntica à SEQ ID NO: 13; pelo menos 64% idêntica à SEQ ID NO: 16; pelo menos 66% idêntica à SEQ ID NO: 19; pelo menos 86% idêntica à SEQ ID NO: 23; pelo menos 91% idêntica à SEQ ID NO: 25; pelo menos 94% idêntica à SEQ ID NO: 30; pelo menos 91% idêntica à SEQ ID NO: 33; pelo menos 64% idêntica à SEQ ID NO: 36; pelo menos 66% idêntica à SEQ ID NO: 39; pelo menos 94% idêntica à SEQ ID NO: 41; pelo menos 84% idêntica à SEQ ID NO: 43; pelo menos 93% idêntica à SEQ ID NO: 45; pelo menos 94% idêntica à SEQ ID NO: 47; pelo menos 91% idêntica à SEQ ID NO: 50; ou, pelo menos, 93% idêntica à SEQ ID NO: 53; ou pelo menos 87% idêntica a SEQ ID NOs:85, 93, 105; ou pelo menos 85% idêntica a SEQ ID NOs: 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79; ou pelo menos 88% idêntica a SEQ ID NOs: 91, 87, 89; ou pelo menos 89% idêntica a SEQ ID NOs: 107, 111; ou pelo menos 90% idêntica a SEQ ID NO: 97; ou pelo menos 91% idêntica a SEQ ID NO:109; ou pelo menos 93% idêntica a SEQ ID NO:83; ou pelo menos 94% idêntica a SEQ ID NOs:91 ou 103; ou pelo menos 95% idêntica a SEQ ID NOs:95, 101; ou pelo menos 98% idêntica a SEQ ID NO:99. Também são contemplados métodos de controlo de uma praga de Lepidópteros que compreendem a exposição da praga a esta célula de planta, planta ou parte da planta transgênica, em que a referida célula de planta, planta ou parte da planta expressa uma quantidade inibidora Leptdoptera da proteína inseticida quimérica.
[0022] Em outras modalidades descritas no presente documento, são fornecidos os produtos de bens de consumo derivados das matérias-primas da célula de planta, planta ou parte de planta, em que o produto compreende uma quantidade detectável da proteína inseticida quimérica. Os produtos de bens de consumo contemplado incluem biomassa vegetal, óleo, farelo, ração animal, farinha, flocos, farelo de trigo, fiapos, cascas e sementes processadas.
[0023] Um outro método aqui descrito é um método de produção de uma semente que compreende a proteína inseticida quimérica, o método compreendendo: plantar pelo menos uma semente que compreende a proteína inseticida quimérica; cultivar plantas a partir da referida semente; e colher sementes das plantas, em que a referida semente colhida compreende a proteína inseticida quimérica.
[0024] As moléculas de polinucleotídeo recombinante que codificam uma proteína inseticida quimérica, que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 ou 130; e, opcionalmente, uma sequência de polinucleotídeos que codifica um agente inibidor de insetos diferente da proteína inseticida quimérico também são contempladas no presente documento.
[0025] Outra molécula de ácido nucleico recombinante contemplada no presente documento compreende um promotor heterólogo operacionalmente ligado a um segmento de polinucleotídeo que codifica proteínas inseticidas quiméricas, em que: a proteína inseticida quimérica compreende qualquer sequência de aminoácidos estabelecida em qualquer uma dentre as SEQ ID NOs: 21, 10, 28, 7 , 4, 13, 16, 19, 23, 25, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 ou 111; ou a proteína insecticida quimérica compreende uma proteína que possui: pelo menos 94% idêntica à SEQ ID NOs: 21, 10; pelo menos 93% idêntica à SEQ ID NO: 28; pelo menos 87% idêntica à SEQ ID NO: 7; pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 4; pelo menos 91% idêntica à SEQ ID NO: 13; pelo menos 64% idêntica à SEQ ID NO: 16; pelo menos 66% idêntica à SEQ ID NO: 19; pelo menos 86% idêntica à SEQ ID NO: 23; pelo menos 91% idêntica à SEQ ID NO: 25; pelo menos 94% idêntica à SEQ ID NO: 30; pelo menos 91% idêntica à SEQ ID NO: 33; pelo menos 64% idêntica à SEQ ID NO: 36; pelo menos 66% idêntica à SEQ ID NO: 39; pelo menos 94% idêntica à SEQ ID NO: 41; pelo menos 84% idêntica à SEQ ID NO: 43; pelo menos 93% idêntica à SEQ ID NO: 45; pelo menos 94% idêntica à SEQ ID NO: 47; pelo menos 91% idêntica à SEQ ID NO: 50; ou, pelo menos, 93% idêntica à SEQ ID NO: 53; ou pelo menos 87% idêntica a SEQ ID NOs:85, 93, 105; ou pelo menos 85% idêntica a SEQ ID NOs:55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79; ou pelo menos 88% idêntica a SEQ ID NOs:91, 87, 89; ou pelo menos 89% idêntica a SEQ ID NOs:107, 111; ou pelo menos 90% idêntica a SEQ ID NO:97; ou pelo menos 91% idêntica a SEQ ID NO:109; ou pelo menos 93% idêntica a SEQ ID NO:83; ou pelo menos 94% idêntica a SEQ ID NOs:91, 103; ou pelo menos 95% idêntica a SEQ ID NOs:95, 101; ou pelo menos 98% idêntica a SEQ ID NO:99;ou o segmento de polinucleotídeo se hibridiza com um polinucleotídeo que tem uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido em qualquer uma dentre as SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 ou 130.
[0026] Outras modalidades, recursos e vantagens da invenção se tornarão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada, exemplos e reivindicações.
[0027] SEQ ID NO: 1 é uma sequência de DNA recombinante que codifica TIC1100 usado para a expressão numa célula bacteriana.
[0028] SEQ ID NO: 2 é uma sequência de DNA que codifica TIC1100 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0029] SEQ ID NO: 3 é uma sequência de DNA que codifica TIC1100 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0030] SEQ ID NO: 4 é a sequência de aminoácidos de TIC1100.
[0031] SEQ ID NO: 5 é uma sequência de DNA que codifica TIC860 recombinante usada para a expressão numa célula bacteriana.
[0032] SEQ ID NO: 6 é uma sequência de DNA que codifica TIC860 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0033] SEQ ID NO: 7 é a sequência de aminoácidos de TIC860.
[0034] SEQ ID NO: 8 é uma sequência de DNA que codifica TIC867 recombinante usada para a expressão numa célula bacteriana.
[0035] SEQ ID NO: 9 é uma sequência de DNA que codifica TIC867 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0036] SEQ ID NO: 10 é a sequência de aminoácidos de TIC867.
[0037] SEQ ID NO: 11 é uma sequência de DNA que codifica TIC867_20 recombinante usada para a expressão numa célula bacteriana.
[0038] SEQ ID NO: 12 é uma sequência de DNA que codifica TIC867_20 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0039] SEQ ID NO: 13 é a sequência de aminoácidos de TIC867_20.
[0040] SEQ ID NO: 14 é uma sequência de DNA que codifica TIC867_21 recombinante usada para a expressão numa célula bacteriana.
[0041] SEQ ID NO: 15 é uma sequência de DNA que codifica TIC867_21 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0042] SEQ ID NO: 16 é a sequência de aminoácidos de TIC867_21.
[0043] SEQ ID NO: 17 é uma sequência de DNA que codifica TIC867_22 recombinante usada para a expressão numa célula bacteriana.
[0044] SEQ ID NO: 18 é uma sequência de DNA que codifica TIC867_22 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0045] SEQ ID NO: 19 é a sequência de aminoácidos de TIC867_22.
[0046] SEQ ID NO: 20 é uma sequência de DNA que codifica TIC867_23 sintético para a expressão na célula vegetal.
[0047] SEQ ID NO: 21 é a sequência de aminoácidos de TIC867_23.
[0048] SEQ ID NO: 22 é uma sequência de DNA que codifica TIC867_24 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0049] SEQ ID NO: 23 é a sequência de aminoácidos de TIC867_24.
[0050] SEQ ID NO: 24 é uma sequência de DNA que codifica TIC867_24 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0051] SEQ ID NO: 25 é a sequência de aminoácidos de TIC867_25.
[0052] SEQ ID NO: 26 é uma sequência de DNA que codifica TIC868 recombinante usada para a expressão numa célula bacteriana.
[0053] SEQ ID NO: 27 é uma sequência de DNA que codifica TIC868 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0054] SEQ ID NO: 28 é a sequência de aminoácidos de TIC868.
[0055] SEQ ID NO: 29 é uma sequência de DNA que codifica TIC868_9 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0056] SEQ ID NO: 30 é a sequência de aminoácidos de TIC868_9.
[0057] SEQ ID NO: 31 é uma sequência de DNA que codifica TIC868_10 recombinante usada para a expressão numa célula bacteriana.
[0058] SEQ ID NO: 32 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica a variante TIC868, TIC868_10.
[0059] SEQ ID NO: 33 é a sequência de aminoácidos de TIC868_10.
[0060] SEQ ID NO: 34 é uma sequência de DNA que codifica TIC868_11 recombinante usada para a expressão numa célula bacteriana.
[0061] SEQ ID NO: 35 é uma sequência de DNA que codifica TIC868_11 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0062] SEQ ID NO: 36 é a sequência de aminoácidos de TIC868_11.
[0063] SEQ ID NO: 37 é uma sequência de DNA que codifica TIC868_12 recombinante usada para a expressão numa célula bacteriana.
[0064] SEQ ID NO: 38 é uma sequência de DNA que codifica TIC868_12 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0065] SEQ ID NO: 39 é a sequência de aminoácidos de TIC868_12.
[0066] SEQ ID NO: 40 é uma sequência de DNA que codifica TIC868_13 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0067] SEQ ID NO: 41 é a sequência de aminoácidos de TIC868_13.
[0068] SEQ ID NO: 42 é uma sequência de DNA que codifica TIC868_14 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0069] SEQ ID NO: 43 é a sequência de aminoácidos de TIC868_14.
[0070] SEQ ID NO: 44 é uma sequência de DNA que codifica TIC868_15 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0071] SEQ ID NO: 45 é a sequência de aminoácidos de TIC868_15.
[0072] SEQ ID NO: 46 é uma sequência de DNA que codifica TIC868_29 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0073] SEQ ID NO: 47 é a sequência de aminoácidos de TIC868_29.
[0074] SEQ ID NO: 48 é uma sequência de DNA que codifica TIC869 recombinante usada para a expressão numa célula bacteriana.
[0075] SEQ ID NO: 49 é uma sequência de DNA que codifica TIC869 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0076] SEQ ID NO: 50 é a sequência de aminoácidos de TIC869.
[0077] SEQ ID NO: 51 é uma sequência de DNA que codifica TIC836 recombinante usada para a expressão numa célula bacteriana.
[0078] SEQ ID NO: 52 é uma sequência de DNA que codifica TIC836 sintético para a expressão numa célula vegetal.
[0079] SEQ ID NO: 53 é a sequência de aminoácidos de TIC836.
[0080] SEQ ID NO: 54 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminoácidos TIC713 quimérica.
[0081] SEQ ID NO: 55 é a sequência de aminoácidos de TIC713 traduzida a partir da estrutra de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 54.
[0082] SEQ ID NO: 56 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC843 quimérica.
[0083] SEQ ID NO: 57 é a sequência de aminácidos TIC843 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 56.
[0084] SEQ ID NO: 58 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC862 quimérica.
[0085] SEQ ID NO: 59 é a sequência de aminácidos TIC862 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 58.
[0086] SEQ ID NO: 60 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC1099 quimérica.
[0087] SEQ ID NO: 61 é a sequência de aminácidos TIC1099 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 60.
[0088] SEQ ID NO: 62 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC1099-T507E quimérica.
[0089] SEQ ID NO: 63 é a sequência de aminácidos TIC1099- T507E traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 62.
[0090] SEQ ID NO: 64 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC1099-R522K quimérica.
[0091] SEQ ID NO: 65 é a sequência de aminácidos TIC1099- R522K traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 64.
[0092] SEQ ID NO: 66 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC1099-K490S quimérica.
[0093] SEQ ID NO: 67 é a sequência de aminácidos TIC1099- K490S traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 66.
[0094] SEQ ID NO: 68 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC1099-T562R quimérica.
[0095] SEQ ID NO: 69 é a sequência de aminácidos TIC1099- T562R traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 68.
[0096] SEQ ID NO: 70 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC1099-S553R quimérica.
[0097] SEQ ID NO: 71 é a sequência de aminácidos TIC1099- S553R traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 70.
[0098] SEQ ID NO: 72 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC1099-G498D quimérica.
[0099] SEQ ID NO: 73 é a sequência de aminácidos TIC1099- G498D traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 72.
[00100] SEQ ID NO: 74 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC1099-K490A quimérica.
[00101] SEQ ID NO: 75 é a sequência de aminácidos TIC1099- K490A traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 74.
[00102] SEQ ID NO: 76 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC1099-E564A quimérica.
[00103] SEQ ID NO: 77 é a sequência de aminácidos TIC1099- E564A traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 76.
[00104] SEQ ID NO: 78 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC1103 quimérica.
[00105] SEQ ID NO: 79 é a sequência de aminácidos TIC1103 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 78.
[00106] SEQ ID NO: 80 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC1101 quimérica.
[00107] SEQ ID NO: 81 é a sequência de aminácidos TIC1101 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 80.
[00108] SEQ ID NO: 82 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC845 quimérica.
[00109] SEQ ID NO: 83 é a sequência de aminácidos TIC845 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 82.
[00110] SEQ ID NO: 84 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC846 quimérica.
[00111] SEQ ID NO: 85 é a sequência de aminácidos TIC846 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 84.
[00112] SEQ ID NO: 86 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC858 quimérica.
[00113] SEQ ID NO: 87 é a sequência de aminácidos TIC858 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 86.
[00114] SEQ ID NO: 88 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC865 quimérica.
[00115] SEQ ID NO: 89 é a sequência de aminácidos TIC865 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 88.
[00116] SEQ ID NO: 90 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC866 quimérica.
[00117] SEQ ID NO: 91 é a sequência de aminácidos TIC866 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 90.
[00118] SEQ ID NO: 92 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC838 quimérica.
[00119] SEQ ID NO: 93 é a sequência de aminácidos TIC838 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 92.
[00120] SEQ ID NO: 94 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC839 quimérica.
[00121] SEQ ID NO: 95 é a sequência de aminácidos TIC839 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 94.
[00122] SEQ ID NO: 96 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC841.
[00123] SEQ ID NO: 97 é a sequência de aminácidos TIC841 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 96.
[00124] SEQ ID NO: 98 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC842 quimérica.
[00125] SEQ ID NO: 99 é a sequência de aminácidos TIC842 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 98.
[00126] SEQ ID NO: 100 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC850.
[00127] SEQ ID NO: 101 é a sequência de aminácidos TIC850 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 100.
[00128] SEQ ID NO: 102 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC859 quimérica.
[00129] SEQ ID NO: 103 é a sequência de aminácidos TIC859 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 102.
[00130] SEQ ID NO: 104 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC861 quimérica.
[00131] SEQ ID NO: 105 é a sequência de aminácidos TIC861 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 104.
[00132] SEQ ID NO: 106 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC848 quimérica.
[00133] SEQ ID NO: 107 é a sequência de aminácidos TIC848 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 106.
[00134] SEQ ID NO: 108 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC849 quimérica.
[00135] SEQ ID NO: 109 é a sequência de aminácidos TIC849 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 108.
[00136] SEQ ID NO: 110 é uma sequência de DNA que codifica uma sequência de aminácidos TIC847 quimérica.
[00137] SEQ ID NO: 111 é a sequência de aminácidos TIC847 traduzida a partir da estrutura de leitura aberta estabelecida na SEQ ID NO: 110.
[00138] SEQ ID NO: 112 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC713.
[00139] SEQ ID NO: 113 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC713.
[00140] SEQ ID NO: 114 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC843.
[00141] SEQ ID NO: 115 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC862.
[00142] SEQ ID NO: 116 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC1099.
[00143] SEQ ID NO: 117 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC1103.
[00144] SEQ ID NO: 118 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC845.
[00145] SEQ ID NO: 119 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC846.
[00146] SEQ ID NO: 120 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC858.
[00147] SEQ ID NO: 121 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC866.
[00148] SEQ ID NO: 122 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC838.
[00149] SEQ ID NO: 123 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC841.
[00150] SEQ ID NO: 124 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC842.
[00151] SEQ ID NO: 125 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC850.
[00152] SEQ ID NO: 126 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC859.
[00153] SEQ ID NO: 127 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC861.
[00154] SEQ ID NO: 128 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC848.
[00155] SEQ ID NO: 129 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC849.
[00156] SEQ ID NO: 130 é uma sequência de DNA sintético para expressão na célula vegetal que codifica TIC847.
[00157] O problema na técnica de controle de pragas agrícolas pode ser distinguido como uma necessidade por novas proteínas inseticidas que são eficazes contra as pragas-alvo, exibem toxicidade de amplo espectro contra espécies de praga-alvo, têm a capacidade para serem expressas em plantas sem causar problemas agronômicos indesejáveis, e fornecem um modo alternativo de ação em comparação às toxinas atuais que são comercialmente usadas nas plantas. As proteínas inseticidas quiméricas inovadoras são divulgadas no presente documento e abordam cada uma destas necessidades, particularmente, contra um espectro amplo de pragas de insetos Lepidópteros.
[00158] A fim de evitar o desenvolvimento de, ou contornar a resistência a insetos contra as proteínas insecticidas usadas atualmente, novas proteínas inseticidas com modos de ação (MOA) diferentes, bem como um espectro amplo e eficácia, são necessários para o controle de Lepidópteros. Uma forma de abordar esta necessidade é obter novas proteínas inseticidas de diferentes fontes biológicas, de preferência, a partir de bactérias, fungos ou plantas. Outra abordagem consiste em intercambiar segmentos entre várias proteínas Bt que exibem semelhanças estruturais para criar novas proteínas Bt com propriedades inibidoras de insetos. A probabilidade de criar uma proteína quimérica com propriedades melhoradas da variedade das estruturas de domínio das numerosas proteínas inseticidas nativas conhecidas na técnica é remota. Consultar, por exemplo, Jacqueline S. Knight, et al. "A Strategy for Shuffling Numerous Bacillus thuringiensis Crystal Protein Domains". J. Economic Entomology, 97 (6) (2004): páginas 1.805 a 1.813.
[00159] Sequências de moléculas de ácido nucleico recombinante que codificam novas proteínas inseticida quiméricas são reveladas no presente documento. Estas proteínas inseticidas abordam a necessidade contínua na técnica de preparar proteínas inseticidas tóxicos adicionais com propriedades inseticidas melhoradas tais como eficácia aumentada contra um espectro mais amplo de espécies de praga de inseto alvo e modos de ação diferentes. Os membros deste grupo de proteínas, que incluem as proteínas exemplificativas divulgadas no presente documento, exibem uma atividade inseticida contra espécies de pragas de insetos Lepidópteros.
[00160] O termo "segmento" ou "fragmento" é utilizado neste pedido para descrever sequências de aminoácidos ou de ácidos nucleicos consecutivas que são mais curtas que a sequência aminoácidos ou ácidos nucleicos completa que descreve uma proteína inseticida quimérica divulgada. Um segmento ou fragmento que exibe atividade inibidora de insetos também é divulgado no presente pedido se o alinhamento de tal segmento ou fragmento, com a seção correspondente da proteína inseticida quimérica, resultar em identidade de sequência de aminoácidos de qualquer porcentagem de fração de cerca de 65 a cerca de 100 por cento entre o segmento ou fragmento e a seção correspondente da proteína inseticida quimérica.
[00161] A referência nesse pedido aos termos "ativo(a)" ou "atividade"; "atividade pesticida" ou "pesticida"; ou "atividade insecticida", "inibidor de inseto", "inseticida", se refere à eficácia de um agente tóxico, tal como uma proteína inseticida, na inibição (inibição do crescimento, alimentação, fecundidade ou viabilidade) , na supressão (suprimindo a infestação de pragas, suprimindo as atividades de alimentação de pragas numa cultura particular contendo uma quantidade eficaz de uma proteína inseticida) ou matando (causando a morbidade, a mortalidade ou a fecundidade reduzida de) uma praga. Estes termos se destinam a incluir o resultado do fornecimento de uma quantidade eficaz de uma proteína inseticida a uma praga em que a exposição da praga à pro-teína inseticida resulta em morbidade, mortalidade, fecundidade reduzida ou retardação do crescimento. Estes termos também incluem a repulsão da praga da planta, de um tecido da planta, de uma parte da planta, da semente, de células vegetais, ou da localização geográfica particular onde a planta pode estar sendo cultivada, como resultado do fornecimento de uma quantidade eficaz como pesticida da proteína inseticida dentro ou na planta. De um modo geral, atividade pesticida se refere à capacidade de uma proteína inseticida ser eficaz na inibição do crescimento, desenvolvimento, viabilidade, comportamento de alimentação, comportamento de acasalamento, fecundidade ou qualquer diminuição mensurável NOs efeitos adversos causados por uma alimentação de insetos nesta proteína, fragmento de proteína, segmento de proteína ou polinucleotídeo de uma praga-alvo particular, incluindo, sem limitação, insetos da ordem Lepidoptera. A proteína inseticida pode ser produzida pela planta ou pode ser aplicada à planta ou ao ambiente dentro do local onde a planta é localizada. O termo "bioatividade", "eficaz", "eficácia" ou variações dos mesmos também são termos usados intercambiavelmente neste pedido para descrever os efeitos das proteínas inseticidas quiméricas da presente invenção em pragas de inseto alvo.
[00162] Uma quantidade eficaz como pesticida de um agente tóxico, quando fornecida na dieta de uma praga-alvo, exibe atividade pesticida quando o tóxico entra em contato com a praga. Um agente tóxico pode ser uma proteína inseticida ou um ou mais agentes químicos conhecidos na técnica. Os agentes químicos inseticidas e os agentes proteicos inseticidas podem ser usados sozinhos ou em combinações uns com os outros. Os agentes químicos incluem, sem limitação, moléculas de dsRNA direcionadas a genes específicos para a supressão de uma praga-alvo, organocloretos, organofosfatos, carbamatos, piretroides, neonicotinoides e rianoides. Agentes de proteínas inseticidas incluem as proteínas inseticidas quiméricas apresentadas neste pedido, bem como outros agentes tóxicos proteicos incluindo aqueles que visam espécies de praga de lepidópteros, assim como toxinas proteicas que são usadas para controlar outras pragas de plantas, tais como proteínas Cry disponíveis na técnica para uso no controle de espécies de espécies de Coleópteros, Tisanópteros, Hemípteros e Homópteros.
[00163] É direcionado que a referência a uma praga, particularmente, uma praga de uma plantação, signifique pragas de insetos de plantações, particularmente, pragas de insetos Lepidópteros, que são controladas pelas proteínas inseticidas quiméricas divulgadas. No entanto, a referência a uma praga pode também incluem pragas de insetos Coleópteros, hemípteros e Homópteros de plantas, bem como os nemátodos e fungos, quando os agentes tóxicos que visam estas pragas são co-localizados ou estão presentes em conjunto com a proteína inseticida quimérica ou com uma proteína que é 65 a cerca de 100 por cento idêntica à proteína inseticida quimérica.
[00164] As proteínas inseticidas quiméricas descritas no presente documento exibem atividade inseticida no sentido de pragas de inseto a partir de espécies de insetos Lepidópteros, incluindo adultos, pupas, larvas e recém-nascidos, bem como espécies de insetos Hemípteros, incluindo adultos e ninfas. Os insetos da ordem Lepidoptera incluem, porém, sem limitação, lagartas-militar, brocas, verme e heliothines na família Noctuidae, por exemplo, lagarta-do-cartucho (Spodoptera frugiperda), lagarta-da-beterraba (Spodoptera exigua), lagarta-bertha (Mamestra configurata), lagarta-negra (Agrotis ipsilon), lagarta-da- couve (Trichoplusia ni), lagarta-da-soja (Pseudoplusia includens), lagarta-da-soja (Anticarsia gemmatalis), percevejo-verde (Hypena scabra), lagarta-do-tabaco (Heliothis virescens), lagarta-rosca subterrânea (Agrotis subterranea), lagarta-dos-cereais (Pseudaletia unipuncta), lagarta-rosca ocidental (Agrotis orthogonia); brocas, traças- da-parede, vermes-de-teia, traças-das-caníferas, traças-do-repolho e traças esqueletizadoras da família Pyralidae, por exemplo, broca-do- milho europeira (Ostrinia nubilalis), lagarta-laranja (Amyelois transitella), lagarta-da-raiz-do-milho (Crambus caliginosellus), verme-da-teia-dos- gramados (Herpetogramma licarsisalis), traça-do-girassol (Homoeosoma electellum), lagarta-elasmo (Elasmopalpus lignosellus); lagarta-enroladeira, lagarta-da-maçã-do-algodoeiro, traça-da-semente e traça-dos-frutos na família Tortricidae, por exemplo, mariposa-das- maçãs (Cydia pomonella), traça-da-uva (Endopiza viteana), traça oriental (Grapholita molesta), traça-do-botão-do-girassol (Suleima helianthana); e muitos outros Lepidóptoros economicamente importantes, por exemplo, traça-da-couve (Plutella xylostella), lagarta- rosada (Pectinophora gossypiella) e mariposa-cigano (Lymantria dispar). Outras pragas de insetos da ordem Lepidoptera incluem, por exemplo, Alabama argillacea (lagarta-da-folha-do-algodoeiro), Archips argyrospila (lagarta-das-folhas-das-árvores-frutíferas), Archips rosana (tortrícideo-dos-arbustos) e outras espécies de Archips, Chilo suppressalis (broca-do-arroz-asiático ou broca-do-colmo-do-arroz), Cnaphalocrocis medinalis (enrolador-da-folha), Crambus caliginosellus (verme-de-teia-da-raiz-do-milho), Crambus teterrellus (verme-de-teia- de-capim-do-campo), Diatraea grandiosella (broca-grande-do-milho), Diatraea saccharalis (broca-grande-da-cana-de-açúcar), Earias insulana lagarta-espinhosa), Earias vittella (lagarta-da-maçã), Helicoverpa armigera (lagarta helicoverpa), Helicoverpa zea (lagarta- do-milho ou lagarta-do-algodão), Heliothis virescens (lagarta-do- tabaco), Herpetogramma licarsisalis (verme-da-teia-dos-gramados), Lobesia botrana (traça-da-uva), Phyllocnistis citrella (lagarta-mineira), Pieris brassicae (borboleta-branca-da-couve), Pieris rapae (borboleta- pequena-da-couve), Plutella xylostella (traça-da-couve), Spodoptera exigua (lagarta-da-beterraba), Spodoptera litura (curuquerê-oriental) e Tuta absoluta (traça-do-tomateiro).
[00165] Referência neste pedido a uma "molécula de DNA isolada", ou um termo ou frase equivalente, destina-se a significar que a molécula de DNA é uma que esteja presente sozinha ou em combinação com outras composições, mas não dentro do seu ambiente natural. Por exemplo, elementos de ácidos nucleicos, tais como uma sequência de codificação, sequência de íntron, sequência principal não traduzida, sequência do promotor, sequência de terminação da transcrição, e semelhantes, que são encontradas naturalmente no DNA do genoma de um organismo não são considerados como "isolado "desde que o elemento está dentro do genoma do organismo e no local dentro do genoma em que se encontra naturalmente. No entanto, cada um destes elementos, e subpartes destes elementos, seriam "isolado", no escopo da presente divulgação, desde que o elemento não esteja dentro do genoma do organismo e no local dentro do genoma em que se encontra naturalmente. De modo similar, uma sequência de nucleotídeo que codifica uma proteína inseticida ou qualquer variante inseticida de ocorrência natural dessa proteína seria uma sequência de nucleotídeos solada, desde que a sequência de nucleotídeos não esteja dentro do DNA da bactéria da qual a sequência que codifica a proteína é naturalmente encontrada. Uma sequência de nucleotídeos sintéticos que codifica a sequência de aminoácidos da proteína inseticida de ocorrência natural seria considerada isolada para os propósitos desta divulgação. Para os fins da presente divulgação, qualquer sequência de nucleotídeos transgênicos, por exemplo., a sequência de nucleotídeos do DNA inserida no genoma das células de uma planta ou bactéria, ou presente num vetor extra-cromossômico seria considerada ser uma sequência de nucleotídeos isolada se estiver presente no interior do plasmídeo ou estrutura semelhante utilizada para transformar as células, dentro do genoma da planta ou bactéria, ou presente em quantidades detectáveis em tecidos, descendência, as amostras biológicas ou produtos de bens de consumo derivados da planta ou bactéria.
[00166] Conforme descrito ainda NOs Exemplos, por meio de um esforço de quimerogênese cerca de oitocentas e quarenta e quatro (844) sequências de nucleotídeos que codificam proteínas inseticidas quiméricas foram construídas a partir dos domínios de protoxina e toxina de toxinas inseticidas conhecidas (chamadas no presente documento de "proteínas parentais"), e expressos e testados no bioensaio quanto a atividade de Lepidópteros. Um pequeno número das proteínas quiméricas construídas insecticidas exibiu atividade aprimorada de Lepidópteros ou um espectro de Lepidópteros melhorado em comparação às proteínas de progenitores das quais seus componentes de toxina foram derivados.
[00167] Estas proteínas inseticidas quiméricas com atividade de Lepidópteros aprimorada ou um espectro de Lepidópteros melhorado foram construídos a partir dos seguintes domínios de protoxina e toxina de proteína parental inseticida: Cry1Ah (Domínio I), Cry1Bb1 (Domínios I e II), Cry1Be2 (Domínios I e II), Cry1Ja1 (Domínios I e II), Cry1Fa1 (Domínios I e II), Cry1Ac (Domínio II e protoxina), Cry1Ca (Domínio III e protoxina), Cry1Ka (Domínio III e protoxina), Cry1Jx (Domínio III), Cry1Ab (Domínio III), Cry1Ab3 (protoxina), Cry1Da1 (protoxina), Cry4 (protoxina), Cry9 (protoxina), Cry1Be (protoxina) e Cry1Ka (protoxina).
[00168] Especificamente, as novas proteínas quiméricas inseticidas da presente invenção com atividade de Lepidópteros aprimorada ou um espectro de Lepidópteros melhorado compreendem as seguintes combinações de domínio e protoxina: TIC1100/SEQ ID NO: 4 (Domínio I-Cry1Ah, Domínio II-Cry1Ac, Domínio III-Cry1Ca, Protoxina-Cry1Ac), TIC860/SEQ ID NO: 7 (Domínio I-Cry1Bb1, Domínio II-Cry1BB1, Domínio III-Cry1Ca, Protoxina-Cry1Ac), TIC867/SEQ ID NO: 10 (Domínio I-Cry1Be2, Domínio II-Cry1Be2 , Domínio III-Cry1Ka, Protoxina-Cry1Ab3), TIC868/SEQ ID NO: 28 (Domínio I-Cry1Be2, Domínio II-Cry1Be2 e Domínio III-Cry1Ca, Protoxina-Cry1Ab3), TIC869/SEQ ID NO: 50 (Domínio I-Cry1Ja1, Domínio II-Cry1Ja1, Domínio III-Cry1Jx, Protoxina-Cry1Ab3) e TIC836/SEQ ID NO: 53 (Domínio I-Cry1Fa1, Domínio II-Cry1Fa1, Domínio III-Cry1Ab, Protoxina-Cry1Ac).
[00169] As variantes nas quais substituições de aminoácidos ou domínios de protoxina alternativos foram introduzidos, também foram construídas para as proteínas inseticidas quiméricas TIC867 e TIC868. Especificamente, essas variantes de TIC867 e TIC868 compreendem as seguintes substituições de aminoácidos ou domínios de protoxina alternativos: TIC867_20/SEQ ID NO: 13 (domínio de protoxina alternativo Cry1Da1), TIC867_21/SEQ ID NO: 16 (domínio de protoxina alternativo Cry4), TIC867_22/SEQ ID NO: 19 (domínio de protoxina alternativo Cry9), TIC867_23/SEQ ID NO: 21 (domínio de protoxina alternativo Cry1Be), TIC867_24/SEQ ID NO: 23 (domínio de protoxina alternativo Cry1Ka), TIC867_25/SEQ ID NO: 25 (domínio de protoxina alternativo Cry1Ka), TIC868_9/SEQ ID NO: 30 (modificação de aminoácido N240S_Y343Q_N349T), TIC868_10/SEQ ID NO: 33 (domínio de protoxina alternativo Cry1Da1), TIC868_11/SEQ ID NO: 36 (domínio de protoxina alternativo Cry4), TIC868_12/SEQ ID NO : 39 (domínio de protoxina alternativo Cry9), TIC868_13/SEQ ID NO: 41 (domínio de protoxina alternativo Cry1Be), TIC868_14/SEQ ID NO: 43 (domínio de protoxina alternativo Cry1Ka), TIC868_15/SEQ ID NO: 45 (domínio de protoxina alternativo Cry1Ca), e TIC868_29/SEQ ID NO: 47 (modificação de aminoácidos Q136Y_Y343Q_N349T).
[00170] Conforme demonstrado NOs Exemplos, cada uma dentre estas variantes de TIC867 e TIC868 alterou a atividade de Lepidópteros e/ou reduziu o espectro de atividade de Lepidópteros da proteína inseticida quimérica parental, desta forma, indicando que o domínio de protoxina alternativo e as substituições de aminoácidos possuíam uma consequência direta sobre o espectro de atividade inseticida e proteínas insecticidas quiméricas de TIC867 e TIC868.
[00171] Muitas das proteínas inseticidas quiméricas demonstram atividade inseticida contra múltiplas espécies de pragas de insetos Lepidópteros. Especificamente, as proteínas insecticidas quiméricas inovadoras divulgadas nesta aplicação exibiram atividade contra uma ou mais das seguintes pragas de insetos lepidópteros, a lagarta de soja (VBC, Anticarsia gemmatalis), broca de cana-de-açúcar (SCB, Diatraea saccharalis), lagarta-elasmo (LSCB, Elasmopalpus lignosellus), lagarta helicoverpa (CEW, Helicoverpa zea), verme da semente de soja (SPW, Helicoverpa zea), lagarta do algodão (CBW, Helicoverpa zea), lagarta do tabaco (TBW, Heliothis virescens), larva da soja (SBL, Chrysodeixis includens), lagarta da vagem (BLAW, Spodoptera cosmioides), Southern armyworm (SAW, Spodoptera eridania), lagarta-do-cartucho (FAW, Spodoptera frugiperda), lagarta-da-beterraba (BAW, Spodoptera exigua), lagarta helicoverpa (OBW, Helicoverpa armigera), curuquerê- oriental (OLW, Spodoptera litura), lagarta rosada (PBW, Pectinophora gossypiella), broca-do-milho-do-sudoeste (SWCB, Diatraea grandiosella), lagarta-pintada (SBW, Earias vitella), larva de vagem (SABW, Helicoverpa gelotopeon), e lagarta de girassol (SFL, Rachiplusia nu). Desta forma, as proteínas exemplificativas descritas neste pedido estão relacionadas pela função comum e exibem atividade inseticida no sentido de pragas de insetos a partir de espécies de insetos Lepidópteros, incluindo adultos, larvas e pupas.
[00172] As proteínas que se assemelham a proteínas inseticidas quiméricas podem ser identificadas por comparação umas com as outras usando vários algoritmos com base em computadores conhecidos na técnica. Por exemplo, as identidades de sequências de aminoácidos das proteínas relacionadas às proteínas inseticidas quiméricas podem ser analisadas usando um alinhamento Clustal W usando estes parâmetros padrão: matriz de peso: blosum, penalidade de abertura de lacuna: 10,0, penalidade de extensão de lacuna: 0,05, lacunas hidrofílicas: Ligado, resíduos hidrofílicos: GPSNDQERK, Penalidades de lacuna de resíduo específico: Ligado (Thompson, Et al (1994) Nucleic Acids Research, 22: 4.673 a 4.680). A porcentagem de identidade de aminoácido é ainda calculada pelo produto de 100% multiplicado por (identidades de aminoácido/comprimento da proteína em questão). Outros algoritmos de alinhamento também estão disponíveis na técnica, fornecem resultados semelhantes àqueles obtidos usando um alinhamento Clustal W e são contemplados nesse pedido.
[00173] Se deseja que uma proteína de consulta que exibe atividade inibidora de insetos seja descrita neste pedido, se o alinhamento de tal proteína de consulta com as proteínas inseticidas quiméricas estabelecidas em SEQ ID NOs: 4, 7, 10, 13, 16, 19, 21, 23, 25, 28, 30, 33, 36, 39, 41, 43, 45, 47, 50, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109 e 111e resulta em pelo menos cerca de 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70% , 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87 %, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou cerca de 100% de identidade de sequência de aminoácidos (ou qualquer percentagem de fração nesta faixa) entre a proteína de consulta e matéria.
[00174] Como descrito adicionalmente NOs exemplos deste pedido, sequências sintéticas ou artificiais que codificam as proteínas inseticidas quiméricas foram projetadas para uso em plantas. As sequências de nucleotídeos sintéticos exemplificativas que foram projetadas para o uso em plantas estabelecidas nas SEQ ID NOs: 2 e 3 (TIC1100), SEQ ID NO: 6 (TIC860), SEQ ID NO: 9 (TIC867), SEQ ID NO: 12 (TIC867_20), SEQ ID NO: 15 (TIC867_21), SEQ ID NO: 18 (TIC867_22), SEQ ID NO: 20 (TIC867_23), SEQ ID NO: 22 (TIC867_24), SEQ ID NO: 24 (TIC867_25), SEQ ID NO: 27 (TIC868), SEQ ID NO: 29 (TIC868_9), SEQ ID NO: 32 (TIC868_10), SEQ ID NO: 35 (TIC868_11), SEQ ID NO: 38 (TIC868_12), SEQ ID NO: 40 (TIC868_13), SEQ ID NO: 42 (TIC868_14), SEQ ID NO: 44 (TIC868_15), SEQ ID NO: 46 (TIC868_29), SEQ ID NO: 49 (TIC869) e SEQ ID NO: 52 (TIC836), SEQ ID NO:112 e 113 (TIC713), SEQ ID NO:114 (TIC843), SEQ ID NO:115 (TIC862), SEQ ID NO:116 (TIC1099), SEQ ID NO:117 (TIC1103), SEQ ID NO:118 (TIC845), SEQ ID NO:119 (TIC846), SEQ ID NO:120 (TIC858), SEQ ID NO:121 (TIC866), SEQ ID NO:122 (TIC838), SEQ ID NO:123 (TIC841), SEQ ID NO:124 (TIC842), SEQ ID NO:125 (TIC850), SEQ ID NO:126 (TIC859), SEQ ID NO:127 (TIC861), SEQ ID NO:128 (TIC848), SEQ ID NO:129 (TIC849), e SEQ ID NO:130 (TIC847)..
[00175] Para expressão em células vegetais, as proteínas inseticidas quiméricas podem ser expressas para residir no citosol ou direcionadas para várias organelos da célula vegetal. Por exemplo, destinar uma proteína para o cloroplasto pode resultar em aumento dos níveis de proteína expressos numa planta transgênica, evitando fenótipos diferentes ocorram. O direcionamento também pode resultar num aumento da eficácia de resistência a pragas em caso transgênico. Um péptido alvo ou peptídeo de trânsito é uma cadeia de peptídeo curta (3 a 70 aminoácidos de comprimento) que direciona o transporte de uma proteína para uma região específica da célula, incluindo o núcleo, mitocôndria, retículo endoplasmático (ER), cloroplastos, apoplasto, peroxissoma e membrana plasmática. Alguns peptídeos alvo são clivados da proteína por peptidase de sinal depois de as proteínas serem transportadas. Para o direcionamento para o cloroplasto, as proteínas contêm peptídeos de trânsito que têm cerca de 40 a 50 aminoácidos. Para descrições do uso de peptídeos de trânsito de cloroplasto, consultar Patentes n° U.S.5.188.642 e n° U.S.5.728.925. Muitas proteínas localizadas em cloroplasto são expressas a partir de genes nucleares como precursores e são direcionadas para o cloroplasto por um peptídeo de trânsito do cloroplasto (CTP). Exemplos de tais proteínas de cloroplastos isolados incluem, porém, sem limitação, aqueles associados com a subunidade pequena (SSU) da ribulose-1,5, carboxilase-bisfosfato, ferredoxina, ferredoxina oxidorredutase, o complexo proteína de colheita I e proteína II, tioredoxina F, enolpiruvil chiquimato fosfato sintase (EPSPS) e peptídeos de trânsito descritos na Patente n° U.S.7.193.133. Foi demonstrado in vivo e in vitro que as proteínas não cloroplasto podem ser direcionadas ao cloroplasto pelo uso de fusões de proteínas com uma CTP heteróloga e que a CTP é suficiente para destinar uma proteína para o cloroplasto. A incorporação de um peptídeo de trânsito de cloroplasto adequado tal como o Arabidopsis thaliana EPSPS CTP (CTP2) (consultar, Klee et al., Mol. Gen Genet. 210: páginas 437 a 442, 1987) ou o Petunia hybrida EPSPS CTP (CTP4) (consultar, Della- Cioppa et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: páginas 6.873 a 6.877, 1986) foi mostrada direcionando sequências protéicas de EPSPS heterólogas para cloroplastos em plantas transgênicas (consultar, Patentes n° U.S.5.627.061; n° U.S.5.633.435; e n° U.S.5.312.910; e n° EP0218571; n° EP189707; n° EP508909; e EP924299). Para destinar as proteínas inseticidas quiméricas para o cloroplasto, uma sequência que codifica um peptídeo de trânsito de cloroplasto é colocada em 5' em ligação operável e na estrutura com uma sequência de codificação sintética que codifica a proteína inseticida quimérica que foi projetada para expressão ideal em células vegetais.
[00176] Os cassetes de expressão e os vetores contendo estas sequências de nucleotídeos sintéticos ou artificiais foram construídos e introduzidos em células de plantas de milho, algodão e soja de acordo com os métodos e conjuntos de procedimentos de transformação que são conhecidos na técnica. As células transformadas foram regeneradas em plantas transformadas que foram observadas expressando a proteína inseticida quimérica. Para testar a atividade pesticida, foram realizados bioensaios na presença de larvas de praga de lepidópteros usando discos de folhas de plantas obtidos junto às plantas transformadas. As composições de moléculas de ácidos nucleicos recombinantes que codificam as proteínas inseticidas quiméricas são contempladas. Por exemplo, as proteínas inseticidas quiméricas podem ser expressas com construtos de DNA recombinante, em que uma molécula de polinucleotídeo com uma ORF que codifica a proteína inseticida quimérica operacionalmente ligada a elementos de expressão genética tal como um promotor e qualquer outro elemento regulador necessário para a expressão no sistema para o qual se destina o construto. Exemplos não limitadores incluem um promotor de planta funcional operacionalmente ligado à proteína inseticida quimérica sintética que codifica sequências para a expressão da proteína inseticida quimérica em plantas ou um promotor de Bt funcional operacionalmente ligado a uma proteína inseticida quimérica que codifica a sequência para a expressão da proteína numa bactéria Bt ou outras espécies de Bacillus. Outros elementos podem ser operacionalmente ligados às proteínas inseticidas quiméricas que codificam sequências incluindo, sem limitação, intensificadores, íntrons, líderes não traduzidos, etiquetas de imobilização de proteína codificada (HIS-tag), peptídeos de translocação (isto é, peptídeos de trânsito de plastídeo, peptídeos de sinal), sequências de polipeptídeo para enzimas de modificação pós-translacional, sítios de ligação ribissômicos e sítios- alvo de RNAi.
[00177] Moléculas de polinucleotídeo recombinante exemplificativas aqui fornecidas incluem, sem limitação, um promotor heterólogo operacionalmente ligado a um polinucleotídeo tal como SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 49, 51, 52 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129 e 130;, que codifica o polipeptídeo ou proteína tendo a sequência de aminoácidos conforme apresentado na SEQ ID NOs: 4 (TIC1100), 7 (TIC860), 10 (TIC867), 13 (TIC867_20), 16 (TIC867_21), 19 (TIC867_22), 21 (TIC867_23), 23 (TIC867_24), 25 (TIC867_25), 28 (TIC868), 30 (TIC868_9), 33 (TIC868_10), 36 (TIC868_11), 39 (TIC867_12), 41 (TIC867_13), 43 (TIC867_14), 45 (TIC867_15), 47 (TIC867_29), 50 (TIC869), 53 (TIC836), 55 (TIC713), 57 (TIC843), 59 (TIC862), 61 (TIC1099), 63 (TIC1099-T507E), 65 (TIC1099-R522K), 67 (TIC1099-K490S), 69 (TIC1099-T562R), 71 (TIC1099-S533R), 73 (TIC1099-G498D), 75 (TIC1099-K490A), 77 (TIC1099-E564A), 79 (TIC1103), 81 (TIC1101), 83 (TIC845), 85 (TIC846), 87 (TIC858), 89 (TIC865), 91 (TIC866), 93 (TIC838), 95 (TIC839), 97 (TIC841), 99 (TIC842), 101 (TIC850), 103 (TIC859), 105 (TIC861), 107 (TIC848), 109 (TIC849), e 111 (TIC847). Um promotor heterólogo também pode ser operacionalmente ligado a sequências codificantes de DNA sintético que codificam uma proteína inseticida quimérica alvo de plastídeo e proteína inseticida quimérica não alvo. Contempla-se que os códons de uma molécula de ácidos nucleicos recombinantes que codifica uma proteína inseticida quimérica divulgada neste documento pode ser substituída por códons sinônimos (conhecidos na técnica como uma substituição silenciosa).
[00178] Uma molécula de DNA recombinante ou construto que compreende uma proteína inseticida quimérica que codifica sequência pode compreender adicionalmente uma região de DNA que codifica um ou mais agentes tóxicos que podem ser configurados para expressar concomitantemente ou coexpressar uma sequência de DNA que codifica uma proteína inseticida quimérica, uma proteína diferente de uma proteína inseticida quimérica, uma molécula de dsRNA inibidora de insetos ou uma proteína complementar. Proteínas complementares incluem, sem limitação, cofatores, enzimas, parceiros de ligação ou outros agentes que funcionam para ajudar na eficácia de um agente inibidor de insetos, por exemplo, para ajudar em sua expressão, influenciando sua estabilidade em plantas, otimizando energia livre para oligomerização, aumentando sua toxicidade e aumentando seu espectro de atividade. Uma proteína complementar pode facilitar a absorção de um ou mais agentes inibidores de insetos, por exemplo, ou potencializar os efeitos tóxicos do agente tóxico.
[00179] Uma molécula de DNA recombinante ou construto pode ser montado de modo que todas as proteínas ou moléculas de dsRNA sejam expressas de um promotor ou cada proteína ou molécula de dsRNA está sob o controle de promotor separado ou alguma combinação dos mesmos. As proteínas desta invenção podem ser expressas de um sistema de expressão de múltiplos genes em que uma proteína inseticida quimérica é expressa de um segmento de nucleotídeos comuns, que também contém outros quadros de leitura aberta e promotores, dependendo do tipo de sistema de expressão selecionado. Por exemplo, um sistema de expressão de múltiplos genes bacterianos pode utilizar um único promotor para acionar a expressão de quadros de leitura aberta ligados de múltiplas formas/aleatóriosdentro de um único operon (isto é, a expressão policistrônica). Em outro exemplo, um sistema de expressão de múltiplos genes de plantas pode utilizar cassetes de expressão não ligados de maneira múltipla, cada um expressando uma proteína diferente ou outro agente tóxico, tal como uma ou mais moléculas de dsRNA.
[00180] As moléculas de ácido nucleico recombinantes ou os construtos de DNA recombinante compreendendo uma sequência que codificação proteína inseticida quimérica pode ser administrada a células hospedeiras por vetores, por exemplo, plasmídeo, baculovírus, cromossoma sintético, vírion, cosmídeo, fagomídeo, fago ou vetor viral. Tais vetores podem ser usados para alcançar a expressão estável ou transiente de uma sequência codificadora de proteína inseticida quimérica numa célula hospedeira, ou expressão subsequente do polipepetídeo codificado. Um polinucleotídeo recombinante exógeno ou construto de DNA recombinante que compreende uma sequência de codificação de sequência proteica inseticida quimérica e que é introduzido numa célula hospedeira também é referido, neste documento, como um "transgene".
[00181] Bactérias transgênicas, células vegetais transgênicas, plantas transgênicas e partes de plantas transgênicas que contêm um polinucleotídeo que codifica qualquer uma ou mais das proteínas insecticidas quiméricas são fornecidas neste documento. O termo "célula bacteriana" ou "bactéria" pode incluir, sem limitação, uma célula de Agrobacterium, Bacillus, Escherichia, Salmonella, Pseudomonas ou Rhizobium. O termo "célula vegetal" ou "planta" pode incluir, sem limitação, uma célula dicotiledônea ou uma célula monocotiledônea. Plantas e células vegetais contempladas incluem, sem limitação, alfafa, banana, cevada, feijão, brócolos, couve, brassica, cenoura, mandioca, mamona, couve-flor, aipo, grão-de-bico, couve chinesa, cítrico, coco, café, milho, trevo, algodão, abóbora, pepino, abeto-de-Douglas, berinjela, eucalipto, linho, alho, uva, lúpulo, alho-poró, alface, Pinus taeda, painço, melões, noz, aveia, azeite, cebola, ornamental, palma, capim, ervilha, amendoim, pimenta, ervilha-da-Angola, pinho, batata, álamo, abóbora, pinheiro radiata, rabanete, colza, arroz, porta-enxertos, centeio, cártamo, arbusto, sorgo, pinho sul, soja, espinafre, abóbora, morango, beterraba sacarina, cana , girassol, milho doce, goma doce, batata-doce, gramínea-do-norte, chá, tabaco, tomate, triticale, relvado, melancia e célula vegetal ou planta de trigo. Em certas modalidades, as plantas transgênicas e partes de plantas transgênicas regeneradas de uma célula vegetal transgênica são fornecidas. Em certas modalidades, as plantas transgênicas podem ser obtidas a partir de uma semente transgênica, por corte, rotura, moagem ou dissocianod de outra forma a parte da planta. Em certas modalidades, a parte da planta pode ser uma semente, uma cápsula, uma folha, uma flor, um caule, uma raiz, ou qualquer porção da mesma, ou uma porção não regenerável, de uma parte da planta transgênica. Conforme usado neste contexto, uma porção "não regenerável" de uma parte de planta transgênica é uma porção que não pode ser induzida a formar uma planta inteira ou que não pode ser induzida a formar uma planta inteira capaz de reprodução sexual ou assexual. Em certas modalidades, uma porção não regenerável de uma parte de planta é uma porção de um uma semente, de um casulo, de uma folha, flor, de um caule ou de uma raiz transgênica.
[00182] Métodos de fabricação de plantas transgênicas que compreendem quantidades inibidoras de lepidópteros de proteínas inseticidas quiméricas são fornecidas. Tais plantas podem ser produzidas através da introdução de um polinucleotídeo que codifica as proteínas inseticidas quiméricas fornecidas neste pedido numa célula vegetal, e da seleção de uma planta derivada da referida célula vegetal que expressa uma quantidade inibidora de inseto ou lepidópteros da proteína inseticida quimérica. Plantas podem ser derivadas a partir de células de plantas por regeneração, sementes, pólen ou técnicas de transformação de meristema. Os métodos para a transformação de plantas são conhecidos na técnica. Por exemplo, a transformação mediada por Agrobacterium é descrita nas Publicações de Pedido de Patente n° U.S.2009/0138985A1 (soja), U.S.2008/0280361A1 (soja), U.S.2009/0142837A1 (milho), U.S.2008/0282432 (algodão) e U.S.2008/0256667 (algodão).
[00183] As plantas que expressam as proteínas insecticidas quiméricas podem ser cruzadas por meio da reprodução com eventos transgênicos expressando outras proteínas inseticidas e/ou expressando outros traços transgênicos tais como outros traços de controle de insetos, genes de tolerância a herbicidas, genes que conferem características de rendimento ou tolerância ao estresse e similares, ou tais traços podem ser combinados num único vetor para que os traços sejam todos ligados.
[00184] Os produtos vegetais processados, em que o produto processado compreende uma quantidade detectável de uma proteína inseticida quimérica, um segmento inibidor de insetos ou um fragmento da mesma, ou qualquer porção distintiva da mesma, são também revelados neste pedido. Em certas modalidades, o produto processado é selecionado do grupo que consiste em partes de planta, biomassa vegetal, óleo, farinha, açúcar, alimentos para animais, farinhas de farelo, flocos, fiapos, cascas, sementes processadas e sementes. Em certas modalidades, o produto processado é não regenerável. O produto vegetal pode compreender mercadorias ou outros produtos de bens de consumo derivados de uma planta transgênica ou de uma parte de planta transgênica, em que o produto de bens de consumo ou outros produtos podem ser rastreados através do comércio através da detecção de segmentos de nucleotídeos ou RNA ou proteínas expressas que codificam ou compreendem porções distintivas de uma proteína inseticida quimérica.
[00185] Os métodos de controle de insetos, em particular, infestações de lepidópteros de plantações, com as proteínas inseticidas quiméricas são também reveladas neste pedido. Tais métodos podem compreender o cultivo de uma planta compreendendo uma quantidade inibidora de lepidópteros ou inseto da proteína inseticida quimérica. Em certas modalidades, tais métodos podem ainda compreender qualquer um ou mais dentre: (i) aplicar qualquer composição compreendendo ou codificando uma proteína inseticida quimérica a uma planta ou uma semente que dê origem a uma planta; e (ii) transformar uma planta ou uma célula vegetal que dá origem a uma planta com um polinucleotídeo que codifica uma proteína inseticida quimérica. Em geral, é contemplado que a proteína inseticida quimérica pode ser fornecida numa composição, fornecida num micro-organismo ou fornecida numa planta transgênica para conferir atividade inibidora de insetos contra insetos lepidópteros.
[00186] Em certas modalidades, a proteína inseticida quimérica é o ingrediente ativo como inseticida de uma composição inibidora de inseto preparada por cultivo de Bacilo recombinante ou qualquer outra célula bacteriana recombinante transformada para expressar uma proteína inseticida quimérica sob condições adequadas para a expressão. Tal composição pode ser preparada por dessecação, liofilização, homogeneização, extração, filtração, centrifugação, sedimentação ou concentração de uma cultura de tais células recombinantes que expressam/produzem a proteína inseticida quimérica. Tal processo pode resultar num extrato de célula de Bacilo ou outro extrao de célula bacteriana entomopatogênica, suspensão celular, homogenato celular, lisado celular, sobrenadante celular, filtrado celular ou sedimento celular. Através da obtenção da proteína inseticida quimérica tal como produzida, uma composição que inclui a proteína inseticida quimérica pode incluir células bacterianas, esporos bacterianos e corpos de inclusão parasporais e pode ser formulada para várias utilizações, incluindo como produtos de pulverização inibidores de insetos agrícolas ou como formulações inibidoras de insetos em bioensaios dietéticos.
[00187] O composto ou formulação mencionada acima pode compreender ainda um carreador aceitável em agricultura, tal como uma isca, um pó, poeira, pélete, grânulo, pulverização, emulsão, uma suspensão coloidal, uma solução aquosa, uma preparação de esporo ou cristal de Bacilo ou um tratamento de sementes. O composto ou formulação também pode compreender ainda uma célula vegetal recombinante, tecido vegetal, sementes ou planta transformada para expressar uma ou mais das proteínas; ou bactéria transformada para expressar uma ou mais das proteínas. Dependendo do nível de inibição inseticida ou inibição de insetos inerente ao polipeptídeo recombinante e do nível de composto ou formulação a ser aplicada a uma planta ou ensaio de dieta, o composto ou formulação pode incluir várias quantidades em peso do polipeptídeo recombinante, por exemplo de 0,0001% a 0,001% a 0,01% a 1% a 99% em peso do polipeptídeo recombinante.
[00188] Numa modalidade, a fim de reduzir a probabilidade de desenvolvimento de resistência, uma composição inibidora de inseto ou planta transgênica compreendendo uma proteína inseticida quimérica pode compreender ainda pelo menos um agente tóxico adicional que exibe atividade inibidora de inseto contra a mesma espécie de inseto Lepidóptero, mas que é diferente da proteína inseticida quimérica. Possíveis agentes tóxicos adicionais para tal composição incluem uma proteína inibidora de insetos e uma molécula de dsRNA inibidora de inseto. Um exemplo para uso de tais sequências de ribonucleotídeos para controlar as pragas de insetos é descrito em Baum, Et al. (Publicação de Patente US 2006/0021087 A1). Tal polipepetídeo adicional (ou polipepetídeos) para o controle de pragas de lepidópteros pode ser selecionado do grupo que consiste numa proteína inibidora de insetos, tais como, sem limitação, Cry1A (Patente n° US 5.880.275), CrylAb, CrylAc, Cry1A.105, CrylAe, CrylB (Pedido de Patente n° U.S.10/525,318), Cry1C (Pedido de Patente n° U.S.6.033.874), quimeras Cry1D, Cry1E, Cry1F e Cry1A/F (Pedido de Patente n° U.S.7.070.982; n° U.S.6.962.705; e n° U.S.6.713.063), Cry1G, Cry1H, Cry1I, CrylJ, CrylK, CrylL, Cry2A, Cry2Ab (Pedido de Patente n° U.S.7.064.249), Cry2Ae, Cry4B, Cry6, Cry7, Cry8, Cry9, Cry15, Cry43A, Cry43B, Cry51Aa1, ET66, TIC400, TIC800, TIC834, TIC1415, Vip3A, VIP3Ab, VIP3B, AXMI-001, AXMI-002, AXMI-030, AXMI-035, E AXMI- 045 (Pedido de Patente n° U.S.2013-0117884 A1), AXMI-52, AXMI-58, AXMI-88, AXMI-97, AXMI-102, AXMI-112, AXMI-117, AXMI-100 (Pedido de Patente n° U.S.2013-0310543 A1), AXMI-115, AXMI-113, AXMI-005 (Pedido de Patente n° U.S.2013-0104259 A1), AXMI-134 (Pedido de Patente n° U.S.2013-0167264 A1), AXMI-150 (Pedido de Patente n° U.S.2010-0160231 A1), AXMI-184 (Pedido de Patente n° U.S.2010-0004176 A1), AXMI-196, AXMI-204, AXMI-207, AXMI-209 (Pedido de Patente n° U.S.2011-0030096 A1), AXMI-218, AXMI-220 (Pedido de Patente n° U.S.2014-0245491 A1), AXMI-221z, AXMI-222z, AXMI-223z, AXMI-224z, AXMI-225z (Pedido de Patente n° U.S.2014- 0196175 A1), AXMI-238 (Pedido de Patente n° U.S.2014-0033363 A1), AXMI-270 (Pedido de Patente n° U.S.2014-0223598 A1), AXMI-345 (Pedido de Patente n° U.S.2014-0373195 A1), DIG-3 (Pedido de Patente n° U.S.2013-0219570 A1), DIG-5 (Pedido de Patente n° U.S.2010-0317569 A1), DIG-11 (Pedido de Patente n° U.S.2010- 0319093 A1), AfIP-1A e derivados dos mesmos (Pedido de Patente n° U.S.2014-0033361 A1), AfIP-1B e derivados dos mesmos (Pedido de Patente n° U.S.2014-0033361 A1), PIP-1APIP-1B (Pedido de Patente n° U.S.2014-0007292 A1), PSEEN3174 (Pedido de Patente n° U.S.2014-0007292 A1), AECFG-592740 (Pedido de Patente n° U.S.2014-0007292 A1), Pput_1063 (Pedido de Patente n° U.S.2014- 0007292 A1), Pput_1064 (Pedido de Patente n° U.S.2014-0007292 A1), GS-135 e derivados dos mesmos (Pedido de Patente n° U.S.2012- 0233726 A1), GS153 e derivados dos mesmos (Pedido de Patente n° U.S.2012-0192310 A1), GS154 e derivados dos mesmos (Pedido de Patente n° U.S.2012-0192310 A1), GS155 e derivados dos mesmos (Pedido de Patente n° U.S.2012-0192310 A1), SEQ ID NO:2 e derivados dos mesmos conforme descrito no Pedido de Patente n° U.S.2012- 0167259 A1, SEQ ID NO:2 e derivados dos mesmos conforme descrito no Pedido de Patente n° U.S.2012-0047606 A1, SEQ ID NO:2 e derivados dos mesmos conforme descrito no Pedido de Patente n° U.S.2011-0154536 A1, SEQ ID NO:2 e derivados dos mesmos conforme descrito no Pedido de Patente n° U.S.2011-0112013 A1, SEQ ID NO:2 e 4 e derivados dos mesmos conforme descrito no Pedido de Patente n° U.S.2010-0192256 A1, SEQ ID NO:2 e derivados dos mesmos conforme descrito no Pedido de Patente n° U.S.2010-0077507 A1, SEQ ID NO:2 e derivados dos mesmos conforme descrito no Pedido de Patente n° U.S.2010-0077508 A1, SEQ ID NO:2 e derivados dos mesmos conforme descrito no Pedido de Patente n° U.S.2009-0313721 A1, SEQ ID NO:2 ou 4 e derivados dos mesmos conforme descrito no Pedido de Patente n° U.S.2010-0269221 A1, SEQ ID NO:2 e derivados dos mesmos conforme descrito no Pedido de Patente n° U.S.7.772.465 (B2), CF161_0085 e derivados dos mesmos conforme descrito no documento WO2014/008054 A2, proteínas tóxicas Lepidóptera e derivados dos mesmos conforme descrito NOs Pedidos de Patente n° U.S.US2008-0172762 A1, n° US2011-0055968 A1, e n° US2012- 0117690 A1; SEQ ID NO:2 e derivados dos mesmos conforme descrito no documento US7510878(B2), SEQ ID NO:2 e derivados dos mesmos conforme descrito no Pedido de Patente n° U.S.7812129(B1); e semelhantes.
[00189] Em outras modalidades, uma composição inibidora de inseto ou uma planta transgênica pode ainda compreender pelo menos um agente tóxico adicional que exiba atividade inibidora de inseto a uma praga de inseto que não é inibida pelas proteínas inseticidas quiméricas da presente invenção (tais como pragas de coleópteros, hemípteros e homópteros), a fim de expandir o espectro de inibição de insetos obtido.
[00190] Tal agente tóxico adicional para o controle de pragas de coleópteros pode ser selecionado do grupo consistindo numa proteína inibidora de inseto, tal como, sem limitação, Cry3Bb (Patente n° US 6.501.009), variantes Cry1C, variantes Cry3A, Cry3, Cry3B, Cry34/35, 5307, AXMI-134 (Publicação de Patente n° US 2013-0167264 A1), AXMI-184 (Publicação de Patente n° US 2010-0004176 A1), AXMI-205 (Publicação de Patente n° US 2014-0298538 A1), axmi207 (Publicação de Patente n° US 2013-0303440 A1), AXMI-218, AXMI-220 (Publicação de Patente n° US 20140245491A1), AXMI-221z, AXMI-223z (Publicação de Patente n° US 2014-0196175 A1), AXMI- 279 (Publicação de Patente n° US 2014-0223599 A1), AXMI-R1 e variantes das mesmas (Publicação de Patente n° US 2010-0197592 A1, TIC407, TIC417, TIC431, TIC807, TIC853, TIC901, TIC1201, TIC3131, DIG-10 (Publicação de Patente n° US 2010-0319092 A1), eHIPs (Publicação de Pedido de Patente n° US 2010 / 0017914), IP3 e variantes das mesmas (Publicação de Patente n° US 2012-0210462 A1), e □-Hexatoxina-Hv1a (Publicação de Pedido de Patente n° US US2014-0366227 A1).
[00191] Tal agente tóxico adicional para o controle de pragas de hemípteros pode ser selecionado do grupo que consiste em proteínas ativas para hemípteros, tais como, sem limitação, TIC1415 (Publicação Patente n° US 2013-0097735 A1), TIC807 (Patente n° US 8.609.936), TIC834 (Publicação de Patente n° US 2013-0269060 A1), AXMI-036 (Publicação da Patente n° US 2010-0137216 A1) e AXMI-171 (Publicação da Patente n° US 2013-0055469 A1). Polipeptídeos adicionais para o controle de insetos coleópteros, lepidópteros e hemípteros podem ser encontrados na página da web de nomenclatura de toxina de Bacillus thuringiensis mantida por Neil Crickmore (na página btnomenclature.info).
[00192] As sequências codificantes de proteína inseticida quimérica e as sequências que têm uma percentagem substancial de identidade com as proteínas inseticidas quiméricas podem ser identificadas usando métodos conhecidos pelos versados na técnica tais como reação em cadeia da polimerase (PCR), amplificação térmica e hibridização. Por exemplo, as proteínas inseticidas quiméricas podem ser usadas para produzir anticorpos que se ligam especificamente a proteínas relacionadas e podem ser usadas para pesquisar e encontrar outras proteínas que estão intimamente relacionadas.
[00193] Além disso, as sequências de nucleotídeos que codificam as proteínas inseticidas quiméricas podem ser usadas como sondas e iniciadores para rastreio para identificar outros membros da classe usando métodos de hibridização e amplificação isotérmica ou de ciclo térmico. Por exemplo, podem ser usados oligonucleotídeos derivados de sequências como apresentado na SEQ ID NO: 2 para determinar a presença ou ausência de um transgene inseticida quimérico numa amostra de ácido desoxirribonucleico derivada de um produto de bens de consumo. Dada a sensibilidade de certos métodos de detecção de ácido nucleico que empregam oligonucleotídeos, prevê-se que os oligonucleotídeos derivados de sequências como apresentado em qualquer uma das SEQ ID NO: 2 podem ser usados para detectar a respectiva proteína inseticida quimérica em produtos de bens de consumo derivados de fontes reunidas em que apenas uma fração do produto de bens de consumo é derivada de uma planta transgênica contendo qualquer uma das SEQ ID NO: 2.
[00194] Considerando o disposto acima, os versados na técnica apreciarão que as seguintes modalidades descritas são meramente representativas da invenção, que pode ser concretizada de várias formas. Assim, detalhes estruturais e funcionais específicos divulgados neste documento não devem ser interpretados como limitadores.
[00195] Este Exemplo ilustra a criação das proteínas insecicidas quiméricas inovadoras e a clonagem e expressão das proteínas inseticidas quiméricas.
[00196] As sequências de ácidos nucleicos recombinantes foram construídas a partir de genes de proteínas Cry conhecidos para produzir sequências de polinucleotídeos que codificam proteínas inseticidas quiméricas inovadoras. As sequências polinucleotídicas resultantes foram clonadas num vetor de plasmídeo de expressão de Bacillus thuringiensis (Bt). Após a confirmação da sequência de polinucleotídeo, o plasmídeo de expressão foi transformado em Bt e expressado. Preparações das proteínas quiméricas inovadoras expressas foram analisadas quanto à atividade contra várias pragas de lepidópteros.
[00197] Muitas sequências de polinucleotídeos que codificam proteínas inseticidas quiméricas foram produzidas e testadas no bioensaio. Nem todas as proteínas inseticidas quiméricas demonstraram atividade. Apenas algumas das proteínas inseticidas quiméricas foram selecionadas com base na sua atividade específica para lepidópteros demonstrada no bioensaio. Variantes de aminoácidos, em que substituições de aminoácidos, ou domínios protoxina alternativos, foram introduzidas também foram produzidas com base nas proteínas inseticidas quiméricas originais TIC867 e TIC868. Os componentes das proteínas inseticidas quiméricas (domínios I, II e III e da protoxina) da presente invenção são apresentados na Tabela 1. As substituições de aminoácidos nas variantes de TIC868 em relação à sequência da proteína TIC868 original também são apresentadas. TABELA 1. PROTEÍNAS PESTICIDAS QUIMÉRICAS INOVADORAS E SEUS COMPONENTES.
[00198] * As mutações de aminoácidos são identificadas usando o código de aminoácidos padrão da IUPAC. Consultar a Comissão Conjunta IUPAC-IUB para Nomenclatura Bioquímica. Nomenclatura e Simbolismo para Aminoácidos e Peptídeos. Eur. J. Biochem. 138:9 a 37(1984). A primeira abreviatura de sequência de aminoácidos indica o aminoácido original na dada proteína-esqueleto, o número representa a posição do aminoácido, e a segunda abreviatura de sequência de aminoácidos indica o aminoácido colocado nessa posição na proteína variante melhorada.
[00199] As Proteínas Inseticidas Quiméricas Inovadoras Demonstram Atividade Contra Pragas de Lepidópteros
[00200] Este Exemplo ilustra o teste das proteínas inseticidas quiméricas descritas no Exemplo 1 e da atividade de lepidópteros observada para as proteínas inseticidas quiméricas.
[00201] As sequências de polinucleotídeo que codificam proteínas inseticidas quiméricas foram expressas em Bt. As proteínas inseticidas quiméricas expressas foram, então, testadas contra uma variedade de lepidópteros conhecida por ser uma praga de milho, cana de açúcar, soja e algodão, bem como outras plantações. Especificamente, as proteínas inseticidas foram analisadas para atividade contra lagarta-da- soja (VBC, Anticarsia gemmatalis), broca-da-cana-de-açúcar (SCB, Diatraea saccharalis), lagarta-elasmo (LSCB, Elasmopalpus lignosellus), lagarta-do-milho (CEW, Helicoverpa zea), lagarta-do- tabaco (TBW, Heliothis virescens), lagarta-falsa-medideira (SBL, Chrysodeixis includens), lagarta-da-vagem (BLAW, Spodoptera cosmioides), lagarta-das-vagens (SAW, Spodoptera eridania), lagarta- militar (FAW, Spodoptera frugiperda), lagarta-da-beterrada (BAW, Spodoptera exigua), lagarta-helicoverpa (OBW, Helicoverpa armigera), curuquerê-oriental (OLW, Spodoptera litura), lagarta-rosada (PBW, Pectinophora gossypiella), lagarta-negra (BCW, Agrotis ipsilon), broca- do-milho-do-sudoeste (SWCB, Diatraea grandiosella), lagarta-pintada (SBW, Earias vitella) e broca-europeia-do-milho (ECB, Ostrinia nubilalis). A lagarta-do-milho (CEW, Helicoverpa zea) também é referida como lagarta-da-soja (SPW) e lagarta-do-algodão (CBW). A atividade foi determinada através de uma combinação de escores de mortalidade e nanismo, bem como escores de MIC50. MIC50 se refere a uma concentração de inibição de muda em que tanto as larvas mortas como as larvas L1 (larvas que falharam na muda para o segundo instar) são consideradas no escore. A Tabela 2 mostra a atividade de cada proteína inseticida quimérica. Um sinal ‘+’ indica a atividade observada para a praga de inseto específica. TABELA 2. ATIVIDADE DE B IOENSAIO CONTRA LEPIDÓPTEROS SELECIONADOS.
[00202] Como pode ser visto na Tabela 2 acima, a maioria das proteínas inseticidas quiméricas exibiu atividade contra uma ou mais espécies de pragas lepidópteros.
[00203] Este Exemplo ilustra a síntese de polinucleotídeos que codificam as proteínas inseticidas quiméricas para expressão em plantas.
[00204] Sequências codificantes sintéticas foram construídas para uso na expressão das proteínas inseticidas quiméricas em plantas. As sequências sintéticas foram projetadas e sintetizadas de acordo com os métodos geralmente descritos na Patente n° US 5.500.365, evitando certas sequências problemáticas tais como sequências de poliadenilação de plantas ricas em ATTTA e A/T enquanto preserva a sequência de aminoácidos da proteína inseticida quimérica. As sequências de nucleotídeos para estes genes que codificam proteínas inseticidas quiméricas para expressão em plantas estão listadas abaixo na Tabela 3. TABELA 3. SEQUÊNCIAS DE POLINUCLEOTÍDEOS QUE CODIFICAM PROTEÍNAS INSETICIDAS QUIMÉRICAS PROJETADAS PARA USO EM PLANTAS.
[00205] Este Exemplo ilustra a construção de cassetes de expressão compreendendo sequências de polinucleotídeo concebidas para uso em plantas que codificam proteínas inseticidas quiméricas.
[00206] Foi construída uma variedade de cassetes de expressão de plantas com as sequências de polinucleotídeos que codificam as proteínas inseticidas quiméricas concebidas para expressão de planta apresentada na Tabela 3. Tais cassetes de expressão são úteis para a expressão transitória em protoplastos vegetais ou transformação de células vegetais. Os cassetes de expressão típicos foram concebidos em relação à colocação eventual da proteína dentro da célula. Um conjunto de cassetes de expressão foi concebido de forma a permitir que a proteína fosse traduzida e permanecesse no citosol. Outro conjunto de cassetes de expressão foi concebido para ter um peptídeo de trânsito contíguo com a proteína de toxina para permitir o direcionamento para uma organela da célula, tal como o cloroplasto ou plastídeo. Todos os cassetes de expressão foram concebidos para começar na extremidade 5 'com um promotor, que pode ser composto de vários elementos promotores, elementos intensificadores, ou outros elementos de expressão conhecidos pelos versados na técnica operacionalmente ligados para reforçar a expressão do transgene. A sequência de promotor foi geralmente seguida contiguamente com uma ou mais sequências líder 3' relativamente para o promotor. Uma sequência de íntron foi geralmente fornecida 3' da sequência líder para melhorar a expressão do transgene. Uma sequência de codificação para a toxina ou peptídeo de trânsito e a sequência que codifica para a toxina foi normalmente localizada em 3' para a configuração do promotor, líder e íntron ligados operacionalmentes. Uma sequência de 3' UTR era geralmente fornecida 3' da sequência de codificação para facilitar a terminação da transcrição e para fornecer sequências importantes para a poliadenilação do transcrito resultante. Todos os elementos acima descritos estavam operativamente ligados e dispostos sequencialmente, muitas vezes, com sequências complementares previstas na construção do cassete de expressão.
[00207] Este Exemplo ilustra a atividade inibidora exibida pelas proteínas inseticidas quiméricas contra pragas de lepidópteros quando expressas em plantas de milho e fornecidas como uma dieta para a respectiva praga de inseto de milho.
[00208] A variedade de milho LH244 foi transformada com os vetores de transformação binária descritos no Exemplo 4 usando um método de transformação mediado por Agrobacterium. As células transformadas foram induzidas a formar plantas por métodos conhecidos na técnica. Bioensaios usando discos de folhas de plantas foram realizados análogos aos descritos na patente n° US 8.344.207. Uma planta LH244 não transformada foi usada para obter o tecido a ser usado como um controle negativo. Múltiplos eventos de transformação de cada vetor binário foram avaliados contra lagarta-do-milho (CEW, Helicoverpa zea), lagarta-militar (FAW, Spodoptera frugiperda), lagarta-negra (BCW, Agrotis ipsilon) e broca-do-milho-do-sudoeste (SWCB, Diatraea grandiosella).
[00209] O bioensaio de disco de folha foi realizado em plantas transgênicas de geração R0 e F1. Além disso, as classificações de dano à folha foram avaliadas para todas as plantas de F1 transgênicas que expressam certas proteínas inseticidas quiméricas infestadas com as pragas de inseto lepidóptero. Eventos transgênicos de F1 que expressam TIC860 e TIC868 também foram avaliados para atividade no campo contra FAW, CEW e SWCB. Os resultados do ensaio são mostrados na Tabela 4. Um sinal ‘+’ indica a atividade observada para a praga de inseto específica. Como pode ser visto na Tabela 4, a maioria das proteínas inseticidas quiméricas e muitas das variantes de proteína inseticida quimérica demonstrou atividade contra uma ou mais espécies de pragas lepidópteros. TABELA 4. ATIVIDADE DE BIOENSAIO DE PROTEÍNAS INSETICIDAS QUIMÉRICAS DE TECIDO DE FOLHA DE MILHO ESTAVELMENTE TRANSFORMADA
[00210] Este Exemplo ilustra a atividade inibidora exibida pelas proteínas inseticidas quiméricas contra pragas de lepidópteros quando expressas em plantas de soja e fornecidas como uma dieta para a respectiva praga de inseto de soja.
[00211] As sequências codificantes para proteínas inseticidas quiméricas selecionadas foram reprojetadas para expressão em plantas, clonadas num vetor de transformação de plantas binário, e usadas para transformar células vegetais de soja. Os vetores de transformação de plantas compreendem um primeiro cassete de transgene para expressão da proteína inseticida quimérica, conforme descrito no Exemplo 4 e um segundo cassete de transgene para a seleção de células vegetais transformadas, usando a seleção com espectinomicina. Em alguns exemplos, como no caso de TIC1100, TIC860 e TIC836, uma sequência de codificação de peptídeo de trânsito de cloroplasto estava operativamente ligada à sequência de codificação de inseticida quimérica. Os ensaios foram realizados com plastídeo direcionado e TIC1100, TIC860 e TIC836 não direcionados. A Tabela 5 abaixo mostra o inseticida variante quimérica e proteína inseticida quimérica TIC867 e sequências codificantes associadas usadas para a expressão em plantas de soja estavelmente transformadas.
[00212] Células de plantas de soja foram transformadas com o vetor de transformação binários descritos acima pela transformação mediada de Agrobacterium. As células de plantas transformadas resultantes foram induzidas a formar plantas de soja integrais. O tecido foliar foi colhido e utilizado no bioensaio como descrito no Exemplo 5 ou, alternativamente, tecido liofilizado foi utilizado na dieta de insetos para bioensaio. O bioensaio foi realizado contra FAW, lagarta da vagem (SAW, Spodoptera eridania), larva de soja (SBL, Chrysodeixis includens), lagarta-do-algodoeiro (SPW, Helicoverpa zea), lagarta-da- soja (VBC, Anticarsia gemmatalis), lagarta do tabaco (TBW, Heliothis virescens, lagarta de preto (BLAW, Spodoptera cosmioides), lagarta- elasmo (LSCB, Elasmopalpus lignosellus) e lagarta helicoverpa (OBW, Helicoverpa armigera).
[00213] A Tabela 5 mostra a atividade contra as especies selecionadas de Lepidópteros para cada proteína inseticida em plantas de geração de R0, em que '+' indica a atividade. Conforme pode ser visto na Tabela 5, cada uma dentre as proteínas inseticidas quiméricas expressas em soja estavelmente transformada demonstraram atividade contra várias espécies de lepidópteros. Se observa, particularmente, é que a variante TIC867, TIC867_23 demonstrou atividade contra SPW. TABELA 5. ATIVIDADE DE BIOENSAIO DE PROTEÍNAS INSETICIDAS QUIMÉRICAS DE TECIDO DE FOLHA DE SOJA R0 ESTAVELMENTE TRANSFORMADA.
[00214] Os eventos transformados selecionados foram permitidos auto-polinizar e a a semente resultante foi cultivada. O tecido foliar foi colhido a partir das plantas de geração R1 e usado num bioensaio de alimentação. As plantas de R1 que expressam TIC1100, TIC860, TIC867, TIC868, TIC869 e TIC836 foram ensaiadas quanto a atividade contra SAW, SBL, SPW e VBC. A Tabela 6 mostra a atividade observada nestes testes. Um sinal ‘+’ indica a atividade observada para a praga de inseto específica. Conforme demonstrado na Tabela 6, a maior parte das proteínas inseticidas quiméricas expressas a partir de plantas de geração de R1 demonstraram atividade para uma ou mais espécies de Lepidópteros. TABELA 6. ATIVIDADE DE BIOENSAIO DE PROTEÍNAS INSETICIDAS QUIMÉRICAS DE TECIDO DE FOLHA DE SOJA R1 ESTAVELMENTE TRANSFORMADA.
[00215] A Tabela 7 demonstra os resultados de testes de campo realizados em estufas com plantas de soja de geração de R1 estavelmente transformadas expressando TIC1100, TIC860 e TIC836. As espécies utilizadas para infestar plantas nas estufas incluem SAW, SBL e SPW. A resistência foi definida como sendo inferior ou igual a quinze por cento de desfolhamento em plantas de soja. A resistência observada nestes ensaios de gaiola é consistente com a resistência observada no ensaio de tecido de folha de soja de geração de R1 apresentada na tabela 6. Um sinal ‘+’ indica a atividade observada para a praga de inseto específica. TABELA 7. PERFIL DE ATIVIDADE DE TIC1100, TIC860 E TIC836 EXPRESSOS EM SOJA DE GERAÇÃO DE R1 TESTADA EM TESTES EM CAMPO DE ESTUFA.
[00216] Os testes de campo em estudas com plantas de soja de geração de R1 estavelmente transformado que expressam TIC867 e TIC869 também foram conduzidos em duas localizações diferentes na Argentina, Acevedo e Fontezuela. As espécies usadas para infestar plantas nas estufas incluem lagarta da vagem (SABW, Helicoverpa gelotopeon), VBC, BLAW, e Lagarta do girassol (SFL, Rachiplusia nu). A resistência foi definida como sendo inferior ou igual a quinze por cento de desfolhamento em plantas de soja. A Tabela 8 abaixo mostra a resistência observada. Um sinal ‘+’ indica a atividade observada para a praga de inseto específica. Conforme demonstrado na Tabela 8, plantas de soja transgênica que expressam TIC867 demonstraram resistência à BLAW e VBC. Plantas de soja transgênica que expressam TIC869 demonstraram resistência à SABW, SFL, BLAW e VBC. TABELA 8. PERFIL DE ATIVIDADE DE TIC867 E TIC869 EXPRESSOS EM SOJA DE GERAÇÃO DE R1 TESTADA EM TESTES EM CAMPO DE ESTUFA.
[00217] Este Exemplo ilustra a atividade inibidora exibida pelas proteínas inseticidas quiméricas contra pragas de lepidópteros quando expressas em plantas de algodão e fornecidas como uma dieta para a respectiva praga de inseto.
[00218] As sequências codificantes para proteínas inseticidas quiméricas selecionadas foram reprojetadas para expressão em plantas, clonadas num vetor de transformação de plantas binário, e usadas para transformar células vegetais de algodão. Os vetores binários resultantes foram semelhantes àqueles descritos no Exemplo 4 e foram usados para expressar plastídeo direcionado e TIC860 não direcionado (sequência de codificação: SEQ ID NO: 6; sequência proteica: SEQ ID NO: 7), TIC867 (sequência de codificação: SEQ ID NO: 9; sequência proteica: SEQ ID NO: 10), TIC868 (sequência de codificação: SEQ ID NO: 27; sequência proteica: SEQ ID NO: 28) e TIC867_23 (sequência de codificação: SEQ ID NO: 20; sequência proteica: SEQ ID NO: 23).
[00219] As células vegetais de algodão foram transformadas por um método de transformação mediado por Agrobacterium. As células de algodão transformadas foram induzidas a formar plantas inteiras. O tecido de folha de algodão foi usado no bioensaio conforme descrito no Exemplo 5 contra Lagarta-da-Espiga (CBW, Helicoverpa zea), FAW, TBW e SBL. A Tabela 9 mostra a atividade observada contra estas espécies de Lepidópteros para TIC860, TIC867 e TIC868 em algodão de geração de R0 estavelmente transformado, em que '+' indica a atividade. Conforme pode ser visto na Tabela 9, TIC860, TIC867 e TIC868 demonstram a atividade contra duas ou mais espécies de pragas de Lepidópteros algodão de geração de R0 estavelmente transformado. TABELA 9. ATIVIDADE DE BIOENSAIO DE TIC860, TIC867 E TIC868 A PARTIR DE TECIDO DE FOLHA DE ALGODÃO R0 ESTAVELMENTE TRANSFORMADO.
[00220] Os eventos de transformação selecionados foram usados para produzir semente de R1. Plantas de R1 que expressa TIC860, TIC867 e TIC868 foram testados quanto a resistência a CBW, FAW, TBW e SBL. Tecidos de folha, quadrados e cápsula foram utilizados no ensaio. A Tabela 10 mostra a atividade observada nestes testes. Um sinal ‘+’ indica a atividade observada para a praga de inseto específica. Conforme demonstrado na Tabela 10, TIC860 demonstrou atividade contra FAW no tecido de folha. Adicionalmente, a proteína insecticida quimérica TIC867 demonstrou atividade contra CBW e FAW NOs tecidos de folha, quadrados e de cápsulas, bem como TBW e SBL na folha. A proteína inseticida quimérica TIC868 demonstrou atividade contra FAW NOs tecidos de folhas, quadrados e de cápsulas, bem como TBW e SBL na folha. TABELA 10. ATIVIDADE DE BIOENSAIO DE PROTEÍNAS INSETICIDAS QUIMÉRICAS DE TECIDO DE FOLHA DE ALGODÃO R1 ESTAVELMENTE TRANSFORMADA.
[00221] Sequências de ácidos nucléicos recombinantes foram construídas a partir dos genes de proteína Cry conhecidas usadas para produzir sequências codificantes que codificam proteínas inseticidas quiméricas inovadoras. As sequências codificantes foram clonadas no vetor de plasmídeo de expressão Bacillus thuringiensis (Bt). Após a confirmação da sequência clonada, o plasmídeo de expressão foi transformado em Bt e expressa. As preparações das proteínas Cry quiméricas inovadoras expressas foram ensaiadas quanto a atividade contra várias Pragas de lepidópteros. Muitas sequências codificantes que codificam proteínas inseticidas quiméricas foram produzidas e testadas no bioensaio. Nem todas dentre as proteínas inseticidas quiméricas demonstraram atividade. Apenas algumas dentre as proteínas inseticidas quiméricas foram seleciondas com base em suas atividades para especificar Lepidoptera, e são apresentadas na Tabela 11 abaixo. TABELA 11. PROTEÍNAS PESTICIDAS QUIMÉRICAS INOVADORAS E SUAS SEQUÊNCIA DE CODIFICAÇÃO BACTERIANA E SEQUÊNCIA PROTÉICA CORRESPONDENTES.
[00222] Sequências codificantes que codificam proteínas inseticidas quiméricas foram expressas em Bt. As proteínas expressas foram, então, ensaiadas contra uma variedade de Lepidoptera conhecido como pragas de milho, cana-de-açúcar, soja e algodão, bem como outras plantas de colheita. As proteínas inseticidas foram ensaiadas quanto a atividade contra lagarta-da-soja (VBC, Anticarsia gemmatalis), broca da cana-de-açúcar borer (SCB, Diatraea saccharalis), lagarta-elasmo (LSCB, Elasmopalpus lignosellus), lagarta-do-algodão (CEW, Helicoverpa zea), Lagarta-do-tabaco (TBW, Heliothis virescens), larva de soja (SBL, Chrysodeixis includens), lagarta da vagem (BLAW, Spodoptera cosmioides), larva da vagem (SAW, Spodoptera eridania), lagarta-militar (FAW, Spodoptera frugiperda), Lagarta da beterraba (BAW, Spodoptera exigua), Lagarta helicoverpa (OBW, Helicoverpa armigera), curuquerê-oriental (OLW, Spodoptera litura), Larva rosada (PBW, Pectinophora gossypiella), lagarta-negra (BCW, Agrotis ipsilon), Broca-do-milho-do-sudoeste (SWCB, Diatraea grandiosella) e Broca europeia do milho (ECB, Ostrinia nubilalis). lagarta-do-algodão (CEW, Helicoverpa zea) também é chamado de Verme da semente de soja (SPW) e Lagarta do algodão (CBW). A atividade foi determinada através de uma combinação de mortalidade e indicações de crescimento bem como indicações de MIC50. MIC50 se refere a uma concentração de inibição de exúvia em que tanto a larva morta quanto as larvas L1 (larvas que falharam em exuviar para segundos ínstares) são fatoradas na indicação. A Tabela 12 abaixo mostra a atividade de cada proteína inseticida quimérica. Um sinal ‘+’ indica a atividade observada à praga de inseto específica. TABELA 12. ATIVIDADE DE BIOENSAIO CONTRA LEPIDOPTERA SELECIONADO.
[00223] Conform epode ser observado na Tabela 12 acima, todas as proteínas inseticidas quiméricas exibiram atividade contra múltiplas espécies Lepidópteros.
[00224] A sequência de codificação para TIC1099 (SEQ ID NO: 60) foi modifica pelos métodos conhecidos na técnica para alterar aminoácidos específicos a partir da sequência de proteína TIC1099 original (SEQ ID NO: 61). As variantes resultantes foram ensaidas quanto a atividade contra a Lepidoptera selecionada. A Tabela 13 abaixo mostra as variantes TIC1099 e o DNA e a SEQ ID NOs de proteína correspondentes. TABELA 13. VARIANTES DE TIC1099
[00225] Cada variante foi ensaiada quanto a mortalidade e o crescimento contra lagarta-militar (FAW, Spodoptera frugiperda), lagarta-do-algodão (CEW, Helicoverpa zea), lagarta-negra (BCW, Agrotis ipsilon), larva de soja (SBL, Chrysodeixis includens) e Broca-do- milho-do-sudoeste (SWCB, Diatraea grandiosella). A Tabela 14 abaixo mostra a atividade contra cada Praga de Lepidópteros. A atividade é classificada de ‘+’ a ‘++++’ com base na porcentagem de mortalidade. TABELA 14. ATIVIDADE DE LEPIDOPTERA DE VARIANTES DE TIC1099.
[00226] Todas dentre as variantes de TIC1099 demonstraram atividade contra as cinco espécies de Lepidópteros testadas. Algumas dentre as variantes demonstraram atividade inferior quando comparadas às outras para pragas específicas.
[00227] Sequências codificantes sintética foram construídos para o uso na expressão da proteína codificada em plantas, clonada num vetor de transformação de planta binário, e usada para transformer células vegetais de milho. Os vetores de transformação de planta compreenderam um primeiro cassete de transgene para a expressão da proteína inseticida quimérica que compreendeu um promotor constitutivo, 5' ligado operativamente a um líder, 5' ligado operativamento a um íntron, 5' ligado operativamente à sequência de codificação proteína inseticida quimérica, que foi, por sua vez, 5' ligada operativamente a um 3' UTR e; um segundo cassete de transgene para a seleção de células vegetais transformadas usando seleção de glifosato. A Tabela 15 abaixo mostra as sequências codificantes de proteína inseticida quimérica usadas para a expressão no milho e nas SEQ ID NOs correspondentes. TABELA 15. SEQUÊNCIAS CODIFICANTES DE PROTEÍNA INSETICIDA E SEQ ID NOS CORRESPONDENTES.
[00228] A variedade de milho LH244 foi transformada com os vetores de transformação binária descritos acima usando um método de transformação mediado por Agrobacterium. As células transformadas foram induzidas para formar plantas por métodos conhecidos na técnica. Os bioensaios que usam discos de folha de planta foram realizados análogos àqueles descritos na Patente n° U.S.8.344.207. Uma planta LH244 não transformada foi usada para obeter tecido para ser usado como um controle negativo. Múltiplos eventos de transformação a partir de cada vetor binário foram ensaiados contra lagarta-do-algodão (CEW, Helicoverpa zea), lagarta-militar (FAW, Spodoptera frugiperda), lagarta-negra (BCW, Agrotis ipsilon) e Broca- do-milho-do-sudoeste (SWCB, Diatraea grandiosella). Os resultados de ensaio são mostrados na Tabela 16 abaixo em que ‘+’ indica a atividade. TABELA 16. BIOENSAIO ATIVIDADE DE PROTEÍNAS INSETICIDAS QUIMÉRICAS A PARTIR DE TECIDO DE FOLHA DE MILHO ESTAVELMENTE TRANSFORMADO.
[00229] Conform epode ser observado na Tabela 16 acima, todas as proteínas inseticidas quiméricas demonstraram atividade contra duas ou mais especies de Lepidópteros.
[00230] As sequências codificantes para as proteínas inseticidas quiméricas selecionadas foram reprojetadas para expressão de planta, clonadas num vetor de transformação de planta binário, e usadas para transformer células vegetais de soja. Os vetores de transformação de planta compreenderam um primeiro cassete de transgene para a expressão da proteína inseticida quimérica que compreendeu um promotor constitutivo, 5' ligado operativamente a um líder, 5' ligado operativamente à proteína inseticida quimérica sequência de codificação, que por sua vez foi 5' ligado operativamente a um 3' UTR e; um segundo cassete de transgene para a seleção de células vegetais transformadas usando seleção de espectinomicina. A Tabela 17 abaixo mostra as sequências codificantes de proteína inseticida quimérica usadas para a expressão na soja e as SEQ ID NOs correspondentes. TABELA 17. SEQUÊNCIAS CODIFICANTES DE PROTEÍNA INSETICIDA E SEQ ID NOS CORRESPONDENTES.
[00231] As células vegetais de seoja foram transformadas usando os vetores de transformação binária descrutis acima pela transformação mediada por Agrobacterium. As células vegetais transformadas resultants foram induzidas para formar plantas de soja inteiras. O tecido de folha foi colhido e usado no bioensaio conforme descrito no Exemplo 11 ou, alternativamente, o tecido liofilizado foi usado na dieta de inseto para o bioensaio. O bioensaio foi realizado contra lagarta-militar (FAW, Spodoptera frugiperda), lagarta da vagem (SAW, Spodoptera eridania), larva de soja (SBL, Chrysodeixis includens), lagarta-do-algodão (SPW, Helicoverpa zea), lagarta-da-soja (VBC, Anticarsia gemmatalis), larva de soja (SBL, Chrysodeixis includens), Lagarta-do-tabaco (TBW, Heliothis virescens), lagarta da vagem (BLAW, Spodoptera cosmioides), lagarta da vagem (SAW, Spodoptera eridania), lagarta-elasmo (LSCB, Elasmopalpus lignosellus) e Lagarta helicoverpa (OBW, Helicoverpa armigera). A Tabela 18 abaixo mostra a atividade contra espécies selecionadas de Lepidoptera para cada Proteína Inseticida nas plantas de geração de R0. TABELA 18. ATIVIDADE DE DE PROTEÍNAS INSETICIDAS QUIMÉRICAS A PARTIR DE TECIDO DE FOLHA DE SOJA DE R0 ESTAVELMENTE TRANSFORMADA.
[00232] Conforme pode ser observado na Tabela 18, cada uma dentre as proteínas inseticidas quiméricas expressas na soja estavelmente transformada demonstrou atividade contra múltiplas especies de Lepidópteros.
[00233] Os eventos transformados selecionados foram permitidos se auto-polinizar e a semente resltante foi cultivada. Tecido de folha foi colhido a partir das plantas de geração de R1 e usada num bioensaio de alimentação. A Tabela 19 mostra a atividade observada contra espécies de Lepidópteros selecionadas a partir das proteínas inseticidas expressas no tecido de folha de soja de geração de R1. TABELA 19. ATIVIDADE DE BIOENSAIO DE PROTEÍNAS INSETICIDAS QUIMÉRICAS A PARTIR DE TECIDO DE FOLHA DE SOJA DE R1 ESTAVELMENTE TRANSFORMADA.
[00234] Conforme pode ser observado na Tabela 19 acima, as proteínas inseticidas quiméricas expressas a partir das plantas de geração de R1 demonstraram atividade para duas ou mais espécies de Lepidópteros.
[00235] Todas as composições divulgadas e aqui reivindicadas no presente documento podem ser feitas e executadas sem experimentação indevida à luz da presente divulgação. Embora as composições desta invenção tenham sido descritas em termos das modalidades ilustrativas precedentes, será evidente para os versados na técnica que podem ser aplicadas variações, mudanças, modificações e alterações às composições descritos no presente documento sem se afastar do verdadeiro conceito, essência e escopo da divulgação. Mais especificamente, será aparente que determinados agentes que são química e fisiologicamente relacionados podem ser substituídos pelos agentes descritos no presente documento enquanto os mesmos ou resultados semelhantes seriam atingidos. Todos esses substitutos e modificações semelhantes aparentes àqueles versados na técnica são considerados como estando dentro da essência, âmbito e conceito da invenção conforme definido pelas reivindicações anexas.
[00236] Todas as publicações e documentos de patentes publicados no relatório descritivo são incorporados ao presente documento a título de referência na sua totalidade como se cada publicação ou pedido de patente individual fosse específica ou individualmente indicado para ser incorporado por referência.
Claims (9)
1. Molécula de ácido nucleico recombinante, caracterizada pelo fato de que compreende um promotor heterólogo operacionalmente ligado a um segmento de polinucleotídeo compreendendo uma sequência como apresentada na SEQ ID NO: 9 ou uma sequência degenerada da mesma que codifica a mesma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 10.
2. Molécula de ácido nucleico recombinante, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o referido segmento de polinucleotídeo codifica uma proteína inseticida quimérica como apresentada na SEQ ID NO: 10.
3. Polinucleotídeo caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência como apresentada na SEQ ID NO: 9 ou 27 ou uma sequência degenerada da mesma que codifica a mesma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 10.
4. Proteína inseticida quimérica, caracterizada pelo fato de que compreende uma sequência de aminoácidos como apresentada na SEQ ID NO: 10.
5. Proteína inseticida quimérica, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que a proteína inseticida quimérica exibe atividade inibidora contra uma espécie de inseto da ordem Lepidoptera.
6. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende um polinucleotídeo como apresentado na SEQ ID NO: 9, sendo que a célula hospedeira é uma célula hospedeira bacteriana.
7. Composição inibidora de inseto, caracterizada pelo fato de que compreende uma proteína inseticida quimérica compreendendo uma sequência de aminoácidos como apresentada na SEQ ID NO: 10.
8. Método para controlar uma praga de lepidópteros, caracterizado pelo fato de que compreende colocar a praga de lepidóptero em contato com uma quantidade inibidora de uma proteína inseticida quimérica compreendendo uma sequência de aminoácidos como apresentada em SEQ ID NO: 10.
9. Método para controlar uma praga de lepidópteros, caracterizado pelo fato de que compreende expor a praga a uma célula de planta transgênica, planta ou parte de planta, sendo que a referida célula de planta, planta ou parte de planta expressa um polinucleotídeo como apresentado na SEQ ID NO: 9.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201462064989P | 2014-10-16 | 2014-10-16 | |
| US62/064,989 | 2014-10-16 | ||
| BR112017007794-9A BR112017007794B1 (pt) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Molécula de ácido nucleico recombinante, polinucleotídeo, proteína inseticida quimérica, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros |
| PCT/US2015/055800 WO2016061391A2 (en) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Novel chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BR122020004875B1 true BR122020004875B1 (pt) | 2024-01-30 |
Family
ID=54608929
Family Applications (4)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BR122020004875-1A BR122020004875B1 (pt) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Molécula de ácido nucleico recombinante, polinucleotídeo, proteína inseticida quimérica, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros |
| BR112017007794-9A BR112017007794B1 (pt) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Molécula de ácido nucleico recombinante, polinucleotídeo, proteína inseticida quimérica, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros |
| BR122020004897-2A BR122020004897B1 (pt) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Molécula de ácido nucleico recombinante, polinucleotídeo, proteína inseticida quimérica, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros |
| BR122020004891-3A BR122020004891B1 (pt) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Molécula de ácido nucleico recombinante, polinucleotídeo, proteína inseticida quimérica, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros |
Family Applications After (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BR112017007794-9A BR112017007794B1 (pt) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Molécula de ácido nucleico recombinante, polinucleotídeo, proteína inseticida quimérica, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros |
| BR122020004897-2A BR122020004897B1 (pt) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Molécula de ácido nucleico recombinante, polinucleotídeo, proteína inseticida quimérica, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros |
| BR122020004891-3A BR122020004891B1 (pt) | 2014-10-16 | 2015-10-15 | Molécula de ácido nucleico recombinante, polinucleotídeo, proteína inseticida quimérica, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (7) | US10233217B2 (pt) |
| EP (5) | EP3715364A1 (pt) |
| JP (1) | JP6626102B2 (pt) |
| KR (5) | KR102208980B1 (pt) |
| CN (5) | CN112175094A (pt) |
| AR (6) | AR103129A1 (pt) |
| AU (6) | AU2015332384B2 (pt) |
| BR (4) | BR122020004875B1 (pt) |
| CA (3) | CA3151123A1 (pt) |
| CL (5) | CL2017000895A1 (pt) |
| CO (1) | CO2017004807A2 (pt) |
| CR (3) | CR20210268A (pt) |
| CU (5) | CU24541B1 (pt) |
| EA (5) | EA201892760A1 (pt) |
| EC (1) | ECSP17029551A (pt) |
| ES (1) | ES2864657T3 (pt) |
| IL (1) | IL251570B (pt) |
| MX (5) | MX2017004919A (pt) |
| MY (1) | MY181627A (pt) |
| NI (1) | NI201700044A (pt) |
| NZ (3) | NZ768151A (pt) |
| PE (5) | PE20170895A1 (pt) |
| PH (5) | PH12017500697A1 (pt) |
| SG (5) | SG10201913849RA (pt) |
| SV (1) | SV2017005422A (pt) |
| UA (3) | UA123482C2 (pt) |
| UY (1) | UY36360A (pt) |
| WO (1) | WO2016061391A2 (pt) |
| ZA (6) | ZA201702191B (pt) |
Families Citing this family (38)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA3236911A1 (en) * | 2013-12-09 | 2015-06-18 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Axmi477, axmi482, axmi486 and axmi525 toxin genes and methods for their use |
| US10487123B2 (en) | 2014-10-16 | 2019-11-26 | Monsanto Technology Llc | Chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
| CA2963555A1 (en) | 2014-10-16 | 2016-04-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof |
| CA3151123A1 (en) | 2014-10-16 | 2016-04-21 | Monsanto Technology Llc | Novel chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
| EP3310803A1 (en) | 2015-06-16 | 2018-04-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| US10036037B2 (en) | 2015-08-18 | 2018-07-31 | Monsanto Technology Llc | Insect inhibitory proteins |
| EP3349582B1 (en) | 2015-08-27 | 2021-08-11 | Monsanto Technology LLC | Novel insect inhibitory proteins |
| US10572836B2 (en) | 2015-10-15 | 2020-02-25 | International Business Machines Corporation | Automatic time interval metadata determination for business intelligence and predictive analytics |
| EP3472323A1 (en) | 2016-06-16 | 2019-04-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| WO2018013333A1 (en) | 2016-07-12 | 2018-01-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| US11016730B2 (en) | 2016-07-28 | 2021-05-25 | International Business Machines Corporation | Transforming a transactional data set to generate forecasting and prediction insights |
| CA3037565A1 (en) | 2016-10-21 | 2018-04-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
| CA3044408A1 (en) | 2016-12-12 | 2018-06-21 | Syngenta Participations Ag | Engineered pesticidal proteins and methods of controlling plant pests |
| BR112019013710A2 (pt) | 2017-01-04 | 2020-03-03 | Syngenta Participations Ag | Composições e métodos para controle de pragas de plantas |
| US10703782B2 (en) * | 2017-01-12 | 2020-07-07 | Monsanto Technology Llc | Pesticidal toxin proteins active against lepidopteran insects |
| US20200165626A1 (en) | 2017-10-13 | 2020-05-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Virus-induced gene silencing technology for insect control in maize |
| CN108148841B (zh) * | 2017-12-14 | 2020-12-29 | 云南大学 | 氨基酸序列在用于使昆虫Dip3蛋白失活中的应用 |
| US11492639B2 (en) | 2017-12-19 | 2022-11-08 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal polypeptides and uses thereof |
| CA3092078A1 (en) * | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
| EP3764796A4 (en) * | 2018-03-14 | 2021-12-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | INSECTICIDAL PROTEINS FROM PLANTS AND METHOD OF USING THEM |
| EP3829286A4 (en) * | 2018-07-30 | 2022-08-24 | Monsanto Technology LLC | TRANSGENIC CORN EVENT MON 95379 AND METHODS OF DETECTING AND USES THEREOF |
| CN109198845A (zh) * | 2018-08-21 | 2019-01-15 | 广州杰赛科技股份有限公司 | 全自主甲面彩绘装置、方法、设备及存储介质 |
| MX2021002290A (es) | 2018-08-29 | 2021-04-28 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas y metodos para su uso. |
| CN111100208A (zh) * | 2020-01-16 | 2020-05-05 | 黑龙江大鹏农业有限公司 | 一种人工合成的抗虫蛋白mCry1Ia2及其制备方法和应用 |
| WO2022125639A1 (en) | 2020-12-08 | 2022-06-16 | Monsanto Technology Llc | Modified plant-associated bacteria and methods of their use |
| EP4262400A1 (en) | 2020-12-21 | 2023-10-25 | Monsanto Technology LLC | Novel insect inhibitory proteins |
| UY39585A (es) | 2020-12-23 | 2022-07-29 | Monsanto Technology Llc | Proteínas que exhiben actividad inhibidora de insectos frente a plagas con importancia agrícola de plantas de cultivo y semillas |
| WO2022146874A1 (en) | 2020-12-31 | 2022-07-07 | Monsanto Technology Llc | Novel insect inhibitory proteins |
| AR125217A1 (es) | 2021-03-26 | 2023-06-28 | Flagship Pioneering Innovations Vii Llc | Producción de polirribonucleótidos circulares en un sistema procariota |
| TW202300650A (zh) | 2021-03-26 | 2023-01-01 | 美商旗艦先鋒創新有限責任（Ｖｉｉ）公司 | 真核系統中環狀多核糖核苷酸的產生 |
| EP4314289A1 (en) | 2021-03-26 | 2024-02-07 | Flagship Pioneering Innovations VII, LLC | Production of circular polyribonucleotides in a prokaryotic system |
| CN114134171B (zh) * | 2021-10-29 | 2023-09-15 | 隆平生物技术(海南)有限公司 | 一种抑制或杀灭东方黏虫的方法及其应用 |
| AU2022375817A1 (en) | 2021-11-01 | 2024-05-09 | Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc | Polynucleotides for modifying organisms |
| WO2023141540A2 (en) | 2022-01-20 | 2023-07-27 | Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc | Polynucleotides for modifying organisms |
| CN114507673A (zh) * | 2022-01-20 | 2022-05-17 | 隆平生物技术(海南)有限公司 | 一种抑制或杀灭小地老虎的方法及应用 |
| CN116063431B (zh) * | 2022-09-19 | 2023-11-10 | 隆平生物技术(海南)有限公司 | 一种植物抗虫蛋白质及其应用 |
| WO2024092330A1 (pt) * | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária - Embrapa | Proteínas inseticidas quiméricas truncadas |
| CN117144054A (zh) * | 2023-10-27 | 2023-12-01 | 莱肯生物科技(海南)有限公司 | 一种核酸检测方法及其应用 |
Family Cites Families (84)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3587548T2 (de) | 1984-12-28 | 1993-12-23 | Plant Genetic Systems Nv | Rekombinante DNA, die in pflanzliche Zellen eingebracht werden kann. |
| AU590597B2 (en) | 1985-08-07 | 1989-11-09 | Monsanto Technology Llc | Glyphosate-resistant plants |
| US5312910A (en) | 1987-05-26 | 1994-05-17 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase |
| ES2164633T3 (es) | 1989-02-24 | 2002-03-01 | Monsanto Technology Llc | Genes vegetales sinteticos y procedimiento para su preparacion. |
| US5633435A (en) | 1990-08-31 | 1997-05-27 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases |
| FR2673643B1 (fr) | 1991-03-05 | 1993-05-21 | Rhone Poulenc Agrochimie | Peptide de transit pour l'insertion d'un gene etranger dans un gene vegetal et plantes transformees en utilisant ce peptide. |
| US5723758A (en) * | 1991-09-13 | 1998-03-03 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis genes encoding lepidopteran-active toxins |
| US5322687A (en) | 1993-07-29 | 1994-06-21 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryet4 and cryet5 toxin genes and proteins toxic to lepidopteran insects |
| GB9318207D0 (en) | 1993-09-02 | 1993-10-20 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
| US5508264A (en) * | 1994-12-06 | 1996-04-16 | Mycogen Corporation | Pesticidal compositions |
| US6063756A (en) * | 1996-09-24 | 2000-05-16 | Monsanto Company | Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor |
| US6017534A (en) | 1996-11-20 | 2000-01-25 | Ecogen, Inc. | Hybrid Bacillus thuringiensis δ-endotoxins with novel broad-spectrum insecticidal activity |
| DE69730730T2 (de) * | 1996-11-20 | 2005-09-22 | Monsanto Technology Llc | Delta-endotoxine mit breitem spektrum |
| US6713063B1 (en) | 1996-11-20 | 2004-03-30 | Monsanto Technology, Llc | Broad-spectrum δ-endotoxins |
| US5942664A (en) | 1996-11-27 | 1999-08-24 | Ecogen, Inc. | Bacillus thuringiensis Cry1C compositions toxic to lepidopteran insects and methods for making Cry1C mutants |
| US6218188B1 (en) * | 1997-11-12 | 2001-04-17 | Mycogen Corporation | Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins |
| US6489542B1 (en) | 1998-11-04 | 2002-12-03 | Monsanto Technology Llc | Methods for transforming plants to express Cry2Ab δ-endotoxins targeted to the plastids |
| US6283613B1 (en) | 1999-07-29 | 2001-09-04 | Cooper Technologies Company | LED traffic light with individual LED reflectors |
| US6501009B1 (en) | 1999-08-19 | 2002-12-31 | Monsanto Technology Llc | Expression of Cry3B insecticidal protein in plants |
| WO2001014562A1 (en) * | 1999-08-19 | 2001-03-01 | Syngenta Participations Ag | Hybrid insecticidal toxins and nucleic acid sequences coding therefor |
| CN1390259A (zh) * | 1999-09-15 | 2003-01-08 | 孟山都技术有限公司 | 对鳞翅目昆虫有活性的苏云金芽孢杆菌δ内毒素组合物及其使用方法 |
| WO2002014517A1 (en) | 2000-08-11 | 2002-02-21 | Monsanto Technology Llc | BROAD-SPECTRUM δ-ENDOTOXINS |
| CA2419029A1 (en) * | 2000-08-25 | 2002-02-28 | Syngenta Participations Ag | Bacillus thuringiensis crystal protein hybrids |
| AR035799A1 (es) * | 2001-03-30 | 2004-07-14 | Syngenta Participations Ag | Toxinas insecticidas aisladas de bacillus thuringiensis y sus usos. |
| CN101385467B (zh) * | 2001-03-30 | 2014-11-05 | 辛根塔参与股份公司 | 新的杀虫毒素 |
| EP2360179A1 (en) * | 2002-03-22 | 2011-08-24 | Bayer BioScience N.V. | Novel bacillus thuringiensis insecticidal proteins |
| WO2004020636A1 (en) * | 2002-08-29 | 2004-03-11 | Monsanto Technology, Llc | Nucleotide sequences encoding cry1bb proteins for enhanced expression in plants |
| EP2402441A1 (en) | 2004-04-09 | 2012-01-04 | Monsanto Technology, LLC | Compositions and methods for control of insect infestations in plants |
| US7193133B2 (en) | 2004-06-09 | 2007-03-20 | Michael Lassner | Plastid transit peptides |
| MX2007012147A (es) | 2005-04-01 | 2008-03-12 | Athenix Corp | Axmi-027, axmi-036 y axmi-038, una familia de genes delta-endotoxina y metodos para su uso. |
| CA2771677A1 (en) | 2005-08-31 | 2007-03-08 | Monsanto Technology Llc | Nucleotide sequences encoding insecticidal proteins |
| CL2007002135A1 (es) | 2006-07-21 | 2008-03-14 | Pioneer Hi Bred Int | Acido nucleico de bacillus thuringiensis que codifican polipeptidos con actividad plaguicida; construccion de adn y celula huesped que lo comprenden; metodo de proteccion de una planta contra una plaga; polipeptidos y metodo de produccion; y composic |
| EP2046991B1 (en) | 2006-07-21 | 2010-01-13 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Method for identifying novel genes |
| CA2672036C (en) | 2006-12-08 | 2015-10-13 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel bacillus thuringiensis crystal polypeptides, polynucleotides, and compositions thereof |
| US8362317B2 (en) | 2007-03-09 | 2013-01-29 | Monsanto Technology Llc | Preparation and use of plant embryo explants for transformation |
| CN103588865B (zh) | 2007-03-28 | 2016-09-07 | 先正达参股股份有限公司 | 杀虫的蛋白质 |
| US8609936B2 (en) * | 2007-04-27 | 2013-12-17 | Monsanto Technology Llc | Hemipteran-and coleopteran active toxin proteins from Bacillus thuringiensis |
| AU2008248360B2 (en) | 2007-05-08 | 2013-05-23 | Monsanto Technology Llc | Methods for inducing cotton embryogenic callus |
| US7772465B2 (en) | 2007-06-26 | 2010-08-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| WO2009029852A2 (en) | 2007-08-31 | 2009-03-05 | Monsanto Technology Llc | Method and apparatus for substantially isolating plant tissues |
| US8283524B2 (en) | 2008-05-15 | 2012-10-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| US8129594B2 (en) * | 2008-06-11 | 2012-03-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| CA2727614A1 (en) | 2008-06-11 | 2009-12-17 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| EP2297189A2 (en) | 2008-06-25 | 2011-03-23 | Athenix Corporation | Toxin genes and methods for their use |
| EP2949659A1 (en) | 2008-07-02 | 2015-12-02 | Athenix Corporation | AXMI-115, AXMI-113, AXMI-005, AXMI-163 and AXMI-184: insecticidal proteins and methods for their use |
| US8445749B2 (en) | 2008-09-19 | 2013-05-21 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| US20100077507A1 (en) | 2008-09-22 | 2010-03-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel Bacillus Thuringiensis Gene with Lepidopteran Activity |
| EP2671951A3 (en) | 2008-12-22 | 2014-06-04 | Athenix Corporation | Pesticidal genes from Brevibacillus and methods for their use |
| AR075114A1 (es) | 2008-12-23 | 2011-03-09 | Athenix Corp | Gen de delta-endotoxina axmi-150 y metodos de uso del mismo |
| BRPI0924154A2 (pt) | 2009-01-23 | 2015-08-25 | Pioneer Hi Bred Internacional Inc | Mólecula de ácido nucleico isolada, construção de dna, célula hospedeira, planta transgênica, semente transformada, polipetídeo isolado com atividade pesticida, composição e métodos para controlar uma população de praga de insetos, para exterminar uma praga de insetos, para produzir um polipeptídeo com atividade pesticida e para proteger uma planta de uma praga. |
| CN102369286B (zh) | 2009-02-05 | 2014-12-10 | 阿森尼克斯公司 | 变体axmi-r1δ-内毒素基因和使用它们的方法 |
| EP2957638B1 (en) | 2009-02-27 | 2018-12-12 | Athenix Corporation | Pesticidal proteins and methods for their use |
| WO2010141141A2 (en) | 2009-03-11 | 2010-12-09 | Athenix Corporation | Axmi-001, axmi-002, axmi-030, axmi-035, and axmi-045: toxin genes and methods for their use |
| HUE025156T2 (en) * | 2009-04-17 | 2016-03-29 | Dow Agrosciences Llc | Insecticide DIG-3 CRY toxins |
| RU2012101278A (ru) | 2009-06-16 | 2013-07-27 | ДАУ АГРОСАЙЕНСИЗ ЭлЭлСи | Инсектицидные cry-токсины dig-5 |
| KR20120039625A (ko) | 2009-06-16 | 2012-04-25 | 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 | 살충성 ｄｉｇ-11 ｃｒｙ 독소 |
| WO2010147879A1 (en) | 2009-06-16 | 2010-12-23 | Dow Agrosciences Llc | Dig-10 insecticidal cry toxins |
| US8461415B2 (en) | 2009-07-31 | 2013-06-11 | Athenix Corp. | AXMI-192 family of pesticidal genes and methods for their use |
| EP2482639B1 (en) * | 2009-10-02 | 2017-08-02 | Syngenta Participations AG | Insecticidal proteins |
| WO2011060009A2 (en) | 2009-11-12 | 2011-05-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| US9567602B2 (en) * | 2009-12-16 | 2017-02-14 | Dow Agrosciences Llc | Combined use of CRY1Ca and CRY1Fa proteins for insect resistance management |
| US8586832B2 (en) | 2009-12-21 | 2013-11-19 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with Lepidopteran activity |
| MX2012009634A (es) | 2010-02-18 | 2012-09-28 | Athenix Corp | Genes delta-endotoxinicos axmi218, axmi219, axmi220, axmi226, axmi227, axmi228, axmi229, axmi230, y axmi231 y metodos para sus uso. |
| MX2012009632A (es) | 2010-02-18 | 2012-09-28 | Athenix Corp | Genes delta-endotoxinicos axmi221z, axmi222z, axmi223z, axmi224z, axmi225z y metodos para su uso. |
| US8802934B2 (en) | 2010-08-19 | 2014-08-12 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| US8822762B2 (en) | 2010-12-28 | 2014-09-02 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| CA2825049A1 (en) | 2011-01-24 | 2012-08-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel bacillus thuringiensis genes with lepidopteran activity |
| MX2013009092A (es) | 2011-02-11 | 2013-10-17 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas sinteticas activas contra el gusano de la raiz del maiz. |
| CA2825951C (en) * | 2011-02-11 | 2019-08-20 | Monsanto Technology Llc | Pesticidal nucleic acids and proteins and uses thereof |
| US8878007B2 (en) | 2011-03-10 | 2014-11-04 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
| US9321814B2 (en) | 2011-03-30 | 2016-04-26 | Athenix Corp. | AXMI238 toxin gene and methods for its use |
| GB201105418D0 (en) | 2011-03-31 | 2011-05-18 | Univ Durham | Pesticide |
| AU2012240004B2 (en) | 2011-04-07 | 2017-03-02 | Monsanto Technology Llc | Insect inhibitory toxin family active against Hemipteran and/or Lepidopteran insects |
| US9862965B2 (en) | 2011-07-28 | 2018-01-09 | Athenix Corp. | AXMI205 variant proteins and methods of use |
| BR112014001909A2 (pt) | 2011-07-28 | 2017-02-21 | Athenix Corp | gene da toxina axmi270 e métodos para a sua utilização |
| AR087366A1 (es) | 2011-07-29 | 2014-03-19 | Athenix Corp | Gen plaguicida axmi 279 y sus metodos de empleo |
| US9725735B2 (en) | 2012-03-08 | 2017-08-08 | Athenix Corp. | AXMI345 delta-endotoxin gene and methods for its use |
| KR20220047395A (ko) | 2012-03-09 | 2022-04-15 | 베스타론 코포레이션 | 독성 펩타이드 제조, 식물에서의 펩타이드 발현 및 시스테인 농후 펩타이드의 조합 |
| WO2013152264A2 (en) | 2012-04-06 | 2013-10-10 | Monsanto Technology Llc | Proteins toxic to hemipteran insect species |
| US9688730B2 (en) | 2012-07-02 | 2017-06-27 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| US9475847B2 (en) | 2012-07-26 | 2016-10-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| EP2903413A4 (en) * | 2012-10-05 | 2016-07-20 | Dow Agrosciences Llc | USE OF CRY1EA IN COMBINATIONS FOR MANAGING FALLING AUTUMN LEGION INSECTS |
| CA3151123A1 (en) | 2014-10-16 | 2016-04-21 | Monsanto Technology Llc | Novel chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
| US10487123B2 (en) | 2014-10-16 | 2019-11-26 | Monsanto Technology Llc | Chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
-
2015
- 2015-10-15 CA CA3151123A patent/CA3151123A1/en active Pending
- 2015-10-15 KR KR1020197037523A patent/KR102208980B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 CU CU2018000051A patent/CU24541B1/es unknown
- 2015-10-15 PE PE2017000604A patent/PE20170895A1/es unknown
- 2015-10-15 PE PE2021002061A patent/PE20220375A1/es unknown
- 2015-10-15 CU CU2018000052A patent/CU24570B1/es unknown
- 2015-10-15 EP EP20171028.2A patent/EP3715364A1/en active Pending
- 2015-10-15 CU CU2018000054A patent/CU24551B1/es unknown
- 2015-10-15 EA EA201892760A patent/EA201892760A1/ru unknown
- 2015-10-15 CN CN202011055790.5A patent/CN112175094A/zh active Pending
- 2015-10-15 MY MYPI2017701293A patent/MY181627A/en unknown
- 2015-10-15 CR CR20210268A patent/CR20210268A/es unknown
- 2015-10-15 NZ NZ768151A patent/NZ768151A/en unknown
- 2015-10-15 PE PE2021002063A patent/PE20220374A1/es unknown
- 2015-10-15 SG SG10201913849RA patent/SG10201913849RA/en unknown
- 2015-10-15 NZ NZ768153A patent/NZ768153A/en unknown
- 2015-10-15 WO PCT/US2015/055800 patent/WO2016061391A2/en active Application Filing
- 2015-10-15 CU CU2018000053A patent/CU24571B1/es unknown
- 2015-10-15 CN CN202011054128.8A patent/CN112175093A/zh active Pending
- 2015-10-15 KR KR1020197037525A patent/KR102208985B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 MX MX2017004919A patent/MX2017004919A/es unknown
- 2015-10-15 NZ NZ730747A patent/NZ730747A/en unknown
- 2015-10-15 SG SG10201913879PA patent/SG10201913879PA/en unknown
- 2015-10-15 BR BR122020004875-1A patent/BR122020004875B1/pt active IP Right Grant
- 2015-10-15 CN CN202011068643.1A patent/CN112142857A/zh active Pending
- 2015-10-15 AU AU2015332384A patent/AU2015332384B2/en active Active
- 2015-10-15 SG SG10201913870RA patent/SG10201913870RA/en unknown
- 2015-10-15 CR CR20170198A patent/CR20170198A/es unknown
- 2015-10-15 US US14/884,469 patent/US10233217B2/en active Active
- 2015-10-15 UA UAA201909676A patent/UA123482C2/uk unknown
- 2015-10-15 CA CA3151125A patent/CA3151125A1/en active Pending
- 2015-10-15 CU CU2017000049A patent/CU24456B1/es unknown
- 2015-10-15 CR CR20210269A patent/CR20210269A/es unknown
- 2015-10-15 BR BR112017007794-9A patent/BR112017007794B1/pt active IP Right Grant
- 2015-10-15 CA CA2964776A patent/CA2964776A1/en active Pending
- 2015-10-15 BR BR122020004897-2A patent/BR122020004897B1/pt active IP Right Grant
- 2015-10-15 JP JP2017520352A patent/JP6626102B2/ja active Active
- 2015-10-15 EP EP20171026.6A patent/EP3715363A1/en active Pending
- 2015-10-15 EP EP15797725.7A patent/EP3207049B1/en active Active
- 2015-10-15 EA EA201790843A patent/EA034918B1/ru unknown
- 2015-10-15 ES ES15797725T patent/ES2864657T3/es active Active
- 2015-10-15 UA UAA201909675A patent/UA123481C2/uk unknown
- 2015-10-15 KR KR1020177013031A patent/KR102127553B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 EA EA201892762A patent/EA201892762A1/ru unknown
- 2015-10-15 CN CN201580055840.0A patent/CN107074974B/zh active Active
- 2015-10-15 SG SG10201913859XA patent/SG10201913859XA/en unknown
- 2015-10-15 KR KR1020197037524A patent/KR102208984B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 KR KR1020197037522A patent/KR102208978B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-15 PE PE2021002059A patent/PE20220940A1/es unknown
- 2015-10-15 EP EP20171022.5A patent/EP3715361A1/en active Pending
- 2015-10-15 EA EA201892761A patent/EA201892761A1/ru unknown
- 2015-10-15 PE PE2021002064A patent/PE20220372A1/es unknown
- 2015-10-15 BR BR122020004891-3A patent/BR122020004891B1/pt active IP Right Grant
- 2015-10-15 SG SG11201702749RA patent/SG11201702749RA/en unknown
- 2015-10-15 EP EP20171024.1A patent/EP3715362A1/en active Pending
- 2015-10-15 CN CN202011069672.XA patent/CN112142858A/zh active Pending
- 2015-10-15 EA EA201892763A patent/EA201892763A1/ru unknown
- 2015-10-15 UA UAA201909674A patent/UA123480C2/uk unknown
- 2015-10-16 UY UY0001036360A patent/UY36360A/es active IP Right Grant
- 2015-10-16 AR ARP150103361A patent/AR103129A1/es unknown
-
2017
- 2017-03-29 ZA ZA2017/02191A patent/ZA201702191B/en unknown
- 2017-04-05 IL IL251570A patent/IL251570B/en active IP Right Grant
- 2017-04-07 SV SV2017005422A patent/SV2017005422A/es unknown
- 2017-04-07 NI NI201700044A patent/NI201700044A/es unknown
- 2017-04-11 PH PH12017500697A patent/PH12017500697A1/en unknown
- 2017-04-11 CL CL2017000895A patent/CL2017000895A1/es unknown
- 2017-04-12 MX MX2021009320A patent/MX2021009320A/es unknown
- 2017-04-12 MX MX2021009317A patent/MX2021009317A/es unknown
- 2017-04-12 MX MX2021009319A patent/MX2021009319A/es unknown
- 2017-04-12 MX MX2021009318A patent/MX2021009318A/es unknown
- 2017-05-12 CO CONC2017/0004807A patent/CO2017004807A2/es unknown
- 2017-05-12 EC ECIEPI201729551A patent/ECSP17029551A/es unknown
- 2017-12-20 US US15/849,218 patent/US10611806B2/en active Active
- 2017-12-20 US US15/848,852 patent/US10494409B2/en active Active
- 2017-12-20 US US15/849,012 patent/US10669317B2/en active Active
- 2017-12-20 US US15/848,837 patent/US10494408B2/en active Active
-
2019
- 2019-01-10 ZA ZA2019/00217A patent/ZA201900217B/en unknown
- 2019-01-14 CL CL2019000109A patent/CL2019000109A1/es unknown
- 2019-01-14 CL CL2019000110A patent/CL2019000110A1/es unknown
- 2019-01-15 CL CL2019000112A patent/CL2019000112A1/es unknown
- 2019-04-30 AU AU2019203025A patent/AU2019203025B2/en active Active
- 2019-04-30 AU AU2019203014A patent/AU2019203014B2/en active Active
- 2019-04-30 AU AU2019203015A patent/AU2019203015B2/en active Active
- 2019-04-30 AU AU2019203021A patent/AU2019203021B2/en active Active
- 2019-05-15 CL CL2019001328A patent/CL2019001328A1/es unknown
-
2020
- 2020-03-20 ZA ZA2020/01770A patent/ZA202001770B/en unknown
- 2020-03-20 ZA ZA2020/01768A patent/ZA202001768B/en unknown
- 2020-03-20 ZA ZA2020/01769A patent/ZA202001769B/en unknown
- 2020-03-20 ZA ZA2020/01771A patent/ZA202001771B/en unknown
- 2020-04-05 AU AU2020202394A patent/AU2020202394C1/en active Active
- 2020-05-08 AR ARP200101323A patent/AR118891A2/es unknown
- 2020-05-08 AR ARP200101325A patent/AR118893A2/es unknown
- 2020-05-08 AR ARP200101322A patent/AR118890A2/es unknown
- 2020-05-08 AR ARP200101326A patent/AR118894A2/es unknown
- 2020-05-08 AR ARP200101324A patent/AR118892A2/es unknown
- 2020-05-14 US US16/874,186 patent/US11267849B2/en active Active
-
2021
- 2021-03-04 PH PH12021500021A patent/PH12021500021A1/en unknown
- 2021-03-04 PH PH12021500022A patent/PH12021500022A1/en unknown
- 2021-03-04 PH PH12021500020A patent/PH12021500020A1/en unknown
- 2021-03-04 PH PH12021500019A patent/PH12021500019A1/en unknown
-
2022
- 2022-02-14 US US17/671,011 patent/US20220306703A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11267849B2 (en) | Chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests | |
| US11987603B2 (en) | Chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests | |
| BR122020005237B1 (pt) | Cassetes de expressão, proteína inseticida projetada, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, e métodos para controlar uma praga de lepidópteros | |
| BR112018003695B1 (pt) | Molécula de ácido nucleico recombinante, uso de uma planta, célula de planta, parte de planta ou semente compreendendo a mesma, composição inibidora de inseto, produto básico, e métodos para controlar uma praga ou infestação de praga de espécie de lepidópteros e de detecção da presença de uma proteína pesticida | |
| EA040101B1 (ru) | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей | |
| EA040097B1 (ru) | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей | |
| EA040497B1 (ru) | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей | |
| EA040152B1 (ru) | Новые химерные инсектицидные белки, токсичные или ингибиторные в отношении чешуекрылых-вредителей | |
| BR112017007735B1 (pt) | Cassetes de expressão, proteína inseticida projetada, célula hospedeira, composição inibidora de insetos, bem como métodos para controlar uma praga de lepidópteros |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B07A | Application suspended after technical examination (opinion) [chapter 7.1 patent gazette] | ||
| B06A | Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette] | ||
| B09A | Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette] | ||
| B16A | Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette] |
Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 15/10/2015, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS |