UA124137C2 - Спосіб одержання вуглеводневого продукту - Google Patents

Спосіб одержання вуглеводневого продукту Download PDF

Info

Publication number
UA124137C2
UA124137C2 UAA201701018A UAA201701018A UA124137C2 UA 124137 C2 UA124137 C2 UA 124137C2 UA A201701018 A UAA201701018 A UA A201701018A UA A201701018 A UAA201701018 A UA A201701018A UA 124137 C2 UA124137 C2 UA 124137C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
plant
polypeptide
cell
zeo
exogenous polynucleotide
Prior art date
Application number
UAA201701018A
Other languages
English (en)
Inventor
Томас Венхерке
Джеймс Робертсон Петрі
Джэймс Робертсон Пэтри
Тахчі Анна Ель
ТАХЧИ Анна ЭЛЬ
Суріндер Пел Сінгх
Суриндер Пэл Сингх
Кайл РЕЙНОЛДС
Цин ЛЮ
Бенжамін Алдо Лейта
Бенжамин Алдо Лейта
Original Assignee
Коммонвелс Сайнтіфік Енд Індастріал Рісерч Організейшн
Коммонвелс Сайнтифик Энд Индастриал Рисёрч Организэйшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AU2014902617A external-priority patent/AU2014902617A0/en
Application filed by Коммонвелс Сайнтіфік Енд Індастріал Рісерч Організейшн, Коммонвелс Сайнтифик Энд Индастриал Рисёрч Организэйшн filed Critical Коммонвелс Сайнтіфік Енд Індастріал Рісерч Організейшн
Publication of UA124137C2 publication Critical patent/UA124137C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10B—DESTRUCTIVE DISTILLATION OF CARBONACEOUS MATERIALS FOR PRODUCTION OF GAS, COKE, TAR, OR SIMILAR MATERIALS
    • C10B53/00—Destructive distillation, specially adapted for particular solid raw materials or solid raw materials in special form
    • C10B53/02—Destructive distillation, specially adapted for particular solid raw materials or solid raw materials in special form of cellulose-containing material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10G—CRACKING HYDROCARBON OILS; PRODUCTION OF LIQUID HYDROCARBON MIXTURES, e.g. BY DESTRUCTIVE HYDROGENATION, OLIGOMERISATION, POLYMERISATION; RECOVERY OF HYDROCARBON OILS FROM OIL-SHALE, OIL-SAND, OR GASES; REFINING MIXTURES MAINLY CONSISTING OF HYDROCARBONS; REFORMING OF NAPHTHA; MINERAL WAXES
    • C10G3/00—Production of liquid hydrocarbon mixtures from oxygen-containing organic materials, e.g. fatty oils, fatty acids
    • C10G3/40—Thermal non-catalytic treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10L—FUELS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NATURAL GAS; SYNTHETIC NATURAL GAS OBTAINED BY PROCESSES NOT COVERED BY SUBCLASSES C10G, C10K; LIQUEFIED PETROLEUM GAS; ADDING MATERIALS TO FUELS OR FIRES TO REDUCE SMOKE OR UNDESIRABLE DEPOSITS OR TO FACILITATE SOOT REMOVAL; FIRELIGHTERS
    • C10L1/00—Liquid carbonaceous fuels
    • C10L1/02—Liquid carbonaceous fuels essentially based on components consisting of carbon, hydrogen, and oxygen only
    • C10L1/026—Liquid carbonaceous fuels essentially based on components consisting of carbon, hydrogen, and oxygen only for compression ignition
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10L—FUELS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NATURAL GAS; SYNTHETIC NATURAL GAS OBTAINED BY PROCESSES NOT COVERED BY SUBCLASSES C10G, C10K; LIQUEFIED PETROLEUM GAS; ADDING MATERIALS TO FUELS OR FIRES TO REDUCE SMOKE OR UNDESIRABLE DEPOSITS OR TO FACILITATE SOOT REMOVAL; FIRELIGHTERS
    • C10L1/00—Liquid carbonaceous fuels
    • C10L1/04—Liquid carbonaceous fuels essentially based on blends of hydrocarbons
    • C10L1/08—Liquid carbonaceous fuels essentially based on blends of hydrocarbons for compression ignition
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/10—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B3/00—Refining fats or fatty oils
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B3/00—Refining fats or fatty oils
    • C11B3/02—Refining fats or fatty oils by chemical reaction
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B7/00—Separation of mixtures of fats or fatty oils into their constituents, e.g. saturated oils from unsaturated oils
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
    • C11C3/00—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
    • C11C3/00—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom
    • C11C3/04—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom by esterification of fats or fatty oils
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
    • C11C3/00—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom
    • C11C3/04—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom by esterification of fats or fatty oils
    • C11C3/10—Ester interchange
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
    • C11C3/00—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom
    • C11C3/12—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom by hydrogenation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10L—FUELS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NATURAL GAS; SYNTHETIC NATURAL GAS OBTAINED BY PROCESSES NOT COVERED BY SUBCLASSES C10G, C10K; LIQUEFIED PETROLEUM GAS; ADDING MATERIALS TO FUELS OR FIRES TO REDUCE SMOKE OR UNDESIRABLE DEPOSITS OR TO FACILITATE SOOT REMOVAL; FIRELIGHTERS
    • C10L2200/00—Components of fuel compositions
    • C10L2200/04—Organic compounds
    • C10L2200/0461—Fractions defined by their origin
    • C10L2200/0469—Renewables or materials of biological origin
    • C10L2200/0476—Biodiesel, i.e. defined lower alkyl esters of fatty acids first generation biodiesel
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10L—FUELS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NATURAL GAS; SYNTHETIC NATURAL GAS OBTAINED BY PROCESSES NOT COVERED BY SUBCLASSES C10G, C10K; LIQUEFIED PETROLEUM GAS; ADDING MATERIALS TO FUELS OR FIRES TO REDUCE SMOKE OR UNDESIRABLE DEPOSITS OR TO FACILITATE SOOT REMOVAL; FIRELIGHTERS
    • C10L2270/00—Specifically adapted fuels
    • C10L2270/02—Specifically adapted fuels for internal combustion engines
    • C10L2270/026—Specifically adapted fuels for internal combustion engines for diesel engines, e.g. automobiles, stationary, marine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10L—FUELS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NATURAL GAS; SYNTHETIC NATURAL GAS OBTAINED BY PROCESSES NOT COVERED BY SUBCLASSES C10G, C10K; LIQUEFIED PETROLEUM GAS; ADDING MATERIALS TO FUELS OR FIRES TO REDUCE SMOKE OR UNDESIRABLE DEPOSITS OR TO FACILITATE SOOT REMOVAL; FIRELIGHTERS
    • C10L2290/00—Fuel preparation or upgrading, processes or apparatus therefore, comprising specific process steps or apparatus units
    • C10L2290/06—Heat exchange, direct or indirect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10L—FUELS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NATURAL GAS; SYNTHETIC NATURAL GAS OBTAINED BY PROCESSES NOT COVERED BY SUBCLASSES C10G, C10K; LIQUEFIED PETROLEUM GAS; ADDING MATERIALS TO FUELS OR FIRES TO REDUCE SMOKE OR UNDESIRABLE DEPOSITS OR TO FACILITATE SOOT REMOVAL; FIRELIGHTERS
    • C10L2290/00—Fuel preparation or upgrading, processes or apparatus therefore, comprising specific process steps or apparatus units
    • C10L2290/26—Composting, fermenting or anaerobic digestion fuel components or materials from which fuels are prepared
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10L—FUELS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NATURAL GAS; SYNTHETIC NATURAL GAS OBTAINED BY PROCESSES NOT COVERED BY SUBCLASSES C10G, C10K; LIQUEFIED PETROLEUM GAS; ADDING MATERIALS TO FUELS OR FIRES TO REDUCE SMOKE OR UNDESIRABLE DEPOSITS OR TO FACILITATE SOOT REMOVAL; FIRELIGHTERS
    • C10L2290/00—Fuel preparation or upgrading, processes or apparatus therefore, comprising specific process steps or apparatus units
    • C10L2290/54—Specific separation steps for separating fractions, components or impurities during preparation or upgrading of a fuel
    • C10L2290/544—Extraction for separating fractions, components or impurities during preparation or upgrading of a fuel
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P30/00—Technologies relating to oil refining and petrochemical industry
    • Y02P30/20—Technologies relating to oil refining and petrochemical industry using bio-feedstock

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Thermal Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Liquid Carbonaceous Fuels (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Fats And Perfumes (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Edible Oils And Fats (AREA)

Abstract

Винахід стосується способу одержання вуглеводневого продукту, який включає стадії (i) обробки в реакторі композиції, яка містить: (a) вегетативні частини рослини, суха маса яких становить щонайменше 2 г, і в яких загальний вміст неполярних ліпідів становить щонайменше 5 % мас., у перерахунку на суху масу, і (b) розчинник, який містить воду, спирт або і те, і інше, причому обробка включає нагрівання композиції при температурі від 270 до 400 C і тиску від 70 до 350 бар протягом періоду від 1 до 120 хвилин в окиснювальному, відновлювальному або інертному середовищі, (ii) добування вуглеводневого продукту з реактора з виходом щонайменше 35 % мас., у перерахунку на суху масу вегетативних частин рослини, з одержанням в такий спосіб вуглеводневого продукту, де вуглеводневий продукт містить естери жирних кислот, один або декілька алканів, один або декілька алкенів, або комбінацію будь-яких двох або декількох з них. Винахід також стосується способу одержання гідрогенізованого вуглеводневого продукту; способу зниження рівнів кетонів або цукрів у вуглеводневому продукті; способу одержання одного або більше з мазуту, дизельного палива, гасу або бензину, та способу одержання промислового продукту.

Description

щонайменше 35 95 мас., у перерахунку на суху масу вегетативних частин рослини, з одержанням в такий спосіб вуглеводневого продукту, де вуглеводневий продукт містить естери жирних кислот, один або декілька алканів, один або декілька алкенів, або комбінацію будь-яких двох або декількох з них. Винахід також стосується способу одержання гідрогенізованого вуглеводневого продукту; способу зниження рівнів кетонів або цукрів у вуглеводневому продукті; способу одержання одного або більше з мазуту, дизельного палива, гасу або бензину, та способу одержання промислового продукту. дак
ЛЛАСТИД днатна- Код Прокаріотний шлях | Прожеркютн галіаетогкккя
А пс» івККаза Н сажу вхо дк Вашем леКов і і ЩЕ ! се Вишни іи оно НАШетА ! шен чн ге СН омопе ее! шен и сн ин ин ЯН : Н ча дпе : Кв роді они о і ті! іме щу Е | у карні газактомійіщи 1 ВС КВ ват МАВ : зхватунееания і і ! ЯК о | зав | ' се ПН КТ чем Іс ке онННИИН К Є : НЕ ТЕ нт пр евтннннннняя ВДС, МІК І З : рам і нн дн ЖИ Я ге Бі ния І ша сом па жиле вно пУЛаЦЕНЮОХ сс о нев оо Й роплдннни ПО М В
Он и ро ЕЕ НЕ авжаню
ТЕР І х аж ния здана пулатеекой я ве пул вин вх і : їх : що Е
Н : ще БАС й масляне х : : що | МО ДЕ яння ь ї Н 1 : І поневжеснинь : сли ни іо ши пет Цит вт Їж в ; ня дина-Каа Е х
Шлях Кенеді ! ру
Фіг. 1
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ
Даний винахід пов'язаний із способами одержання промислових продуктів із рослинних ліпідів, особливо з вегетативних частин рослин. Зокрема, у даному винаході пропонуються нафтопродукти, такі як біодизельне паливо і синтетичне дизельне паливо, і способи їх одержання, а також рослини, що містять підвищений рівень одного або більше неполярних ліпідів, таких як триацилгліцероли, і підвищений загальний вміст неполярних ліпідів. У одному конкретному варіанті реалізації винаходу даний винахід пов'язаний з комбінаціями модифікацій двох або більше ферментів, що здійснюють процесинг ліпідів, білків масляних включень, зниження рівня ферментів, що каталізують ліпіди, та/або факторів транскрипції, що регулюють біосинтез ліпіду, з підвищенням рівня одного або більше неполярних ліпідів та/або загального вмісту неполярних ліпідів та/або вмісту мононенасичених жирних кислот у рослинах або будь- якій їх частині. У варіанті реалізації даний винахід пов'язаний із способом екстракції ліпідів. У іншому варіанті реалізації винаходу ліпід перетворюється на один або більше гідрогенкарбонових продуктів у зібраних вегетативних частинах рослини, з метою одержання алкілових естерів жирних кислот, придатних для застосування як відновлюване біодизельне паливо.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Велика частина енергії у світі, особливо для транспортних цілей, постачається видами палива, одержаними з нафти, запас якої є обмеженим. Необхідні альтернативні, відновлювані джерела енергії, наприклад, з масел, що продукуються біологічним шляхом.
Біосинтез триацилгліцеролів
Триацилгліцероли (ТАГ) є основною формою ліпідів у насінні і складаються з трьох ацильних ланцюгів, приєднаних естерним зв'язком до гліцерольного скелету. Жирні кислоти синтезуються у пластиді як проміжні сполуки ацил-ацилпереносного білка (АПБ), та в їх молекулі може утворюватися перший кратний зв'язок під дією каталізатора. Дана реакція каталізується стеаро.л-БНА-десатуразою і дає олеїнову кислоту (С18:12У. В подальшому ацильні ланцюги транспортуються до цитозолю і ендоплазматичного ретикулуму (ЕР) як тіоестери ацил-Коензим (КоА). До входження в основний шлях біосинтезу ТАГ, також відомий як шлях Кенеді або шлях гліцерол-З3-фосфату (СЗР), ацильні ланцюги звичайно інтегруються у
Зо фосфоліпіди мембрани ЕР, де в їх молекулах можуть утворюватися додаткові кратні зв'язки.
Двома ключовими ферментами в одержанні поліненасичених жирних кислот є пов'язані з мембраною десатурази ГАО2 і ЕАЮЗ, які дають лінолеву (С18:229и12) і д-ліноленовуГ кислоту (С18:3891215), відповідно.
Біосинтез ТАГ за шляхом Кенеді складається із серії послідовних реакцій ацилування, в кожній з яких естери ацил-КоОА використовуються як донори ацилу. Перша стадія ацилування звичайно відбувається в положенні 5пі скелету (ЗР і каталізується гліцерол-3- фосфатацилтрансферазою (5п1-ГФАТ). Продукт, 5п1-лізофосфатидинова кислота (5п1-ЛФК), служить субстратом для ацилтрансферази лізофосфатидинової кислоти, (ЛФКАТ), що здійснює приєднання другого ланцюга ацилу в положенні 5п2, з утворенням фосфатидинової кислоти (ФК). Далі ФК дефосфорилується до діацилгліцеролу (ДАГ) фосфатазою фосфатидинової кислоти (ФФК), таким чином забезпечуючи субстрат для завершальної стадії ацилування. В кінці, третій ланцюг ацилу приєднується естерним зв'язком в положенні 513 ДАГ в ході реакції, що каталізується діацилгліцерол ацилтрансферазою (ДГАТ), з утворенням ТАГ, що акумулюється у масляних включеннях. Друга ферментна реакція, здійснювана фосфатидилгліцерол ацилтрансферазою (ФДАТ), також приводить до перетворення ДАГ на
ТАГ. Дана реакція не пов'язана з ДГАТ, і в ній використовуються фосфоліпіди як донори ацилу.
Для максимізації виходу з метою комерційного одержання ліпідів існує потреба у додаткових засобах підвищення рівнів ліпідів, особливо неполярних ліпідів, наприклад, ДАГ і ТАГ, у трансгенних організмах або їх частинах, наприклад, рослинах, насінні, листі, водоростях і грибах. Спроби підвищення виходу нейтрального ліпіду з рослин переважно були зосереджені на окремих критичних ферментних стадіях, що беруть участь у біосинтезі жирних кислот або збиранні ТАГ. Ці стратегії, однак, привели до скромного підвищення вмісту масла в насінні або листі. Нещодавня робота з конструювання в галузі метаболізму маслянистих дріжджів Магтом/іа
Іроїмііса продемонструвала, що комбінований підхід до підвищення виходу гліцерол-3-фосфату і попередження розкладання ТАГ за допомогою В-окиснення приводив до кумулятивного підвищення загального вмісту ліпіду (Ошегто із співавт., 2011).
Ліпіди рослин, наприклад, триацилгліцероли масла з насіння (ТАГ), знаходять широке застосування, наприклад, в кулінарії (розсипчастість, текстура, аромат), промисловості (мило, свічки, духи, косметика, придатні як агенти для сушіння, ізолюючих речовин, любрикантів) і забезпечують поживну цінність. Крім того, зростає інтерес до використання ліпідів рослинного походження як біологічного палива.
Для максимізації виходу при комерційному одержанні ліпідів біологічним способом існує потреба у додаткових засобах для підвищення рівнів ліпідів, особливо неполярних ліпідів, наприклад, ДАГ і ТАГ, у трансгенних організмах або їх частинах, наприклад, рослинах, насінні, листі, водоростях і грибах.
КОРОТКИЙ ОПИС СУТІ ВИНАХОДУ
Авторами даного винаходу ідентифікований спосіб одержання нафтопродукту з вегетативних частин рослини.
У першому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання нафтопродукту, який включає стадії: (ї) обробки в реакторі композиції, що містить: (а) вегетативні частини рослини, суха маса яких становить щонайменше 2 г, і в яких загальний вміст неполярних ліпідів становить щонайменше 5 95 мас., в перерахунку на суху масу, (Б) розчинник, який містить воду, спирт або і те, і інше, і (с) необов'язково каталізатор, причому обробка включає нагрівання композиції при температурі від близько 50 "С до близько 450 С і тиску від 5 до 350 бар протягом періоду від 1 до 120 хвилин, в окиснювальному, відновлювальному або інертному середовищі, (ї) добування нафтопродукту з реактора із виходом щонайменше 35 95 мас., в перерахунку на суху масу вегетативних частин рослини, з одержанням в такий спосіб нафтопродукту.
У варіанті реалізації винаходу суха маса вегетативних частин рослини становить щонайменше 1 кг.
У варіанті реалізації винаходу загальний вміст неполярних ліпідів у вегетативних частинах рослини становить щонайменше 10 95, щонайменше 15 95, щонайменше 20 95, близько 25 95, близько 30 95, близько 35 95, від 10 95 до 75 95, від 20 95 до 75 95 або переважно від 30 95 до 75 95, в перерахунку на суху масу.
Зо У варіанті реалізації винаходу концентрація твердих речовин у композиції становить від 5 95 до 90 95, переважно від 15 95 до 50 95 (суха маса/маса).
Можна застосовувати будь-який придатний каталізатор. У варіанті реалізації винаходу каталізатор є лугом, кислотою або каталізатором на базі дорогоцінного металу. Наприклад, у варіанті реалізації винаходу каталізатор містить МасОН або КОН або обидва, переважно в концентрації 0,1-2 М.
У варіанті реалізації винаходу тривалість обробки становить від 1 до 60 хвилин, переважно від 10 до 60 хвилин, більш переважно, від 15 до 30 хвилин. У варіанті реалізації винаходу, в якому тиск становить менш ніж 50 бар, тривалість реакції може становити до 24 годин або навіть до 7 днів. У переважному варіанті реалізації винаходу температура становить від 2757 до 360 "С, тиск становить від 100 до 200 бар, і тривалість реакції становить 10-60 хвилин.
У варіанті реалізації винаходу, в якому розчинник є водою, вихід нафтопродукту в результаті способу становить від щонайменше 3695, 37 90, З8 90, 3995 або 4095 до максимального значення 55 95 або переважно 60 95 мас., в перерахунку на суху масу вегетативних частин рослини. У даному варіанті реалізації винаходу нафтопродукт містить щонайменше у 2 рази, переважно щонайменше у З рази більше гідрогенкарбонових сполук, ніж естерів жирного ацилу.
Переважно, нафтопродукт містить 35 95, більш переважно, 40 95 С13-С22 гідрогенкарбонових сполук.
В іншому варіанті реалізації винаходу, в якому розчинник містить спирт, переважно метанол, вихід нафтопродукту в результаті способу становить від щонайменше 36 95, 37 Ус, 38 Ус, 39 90 або 40 95 до максимального значення 65 95 або переважно 70 95 мас., в перерахунку на суху масу вегетативних частин рослини. У даному варіанті реалізації винаходу нафтопродукт містить щонайменше у 1,5 рази, переважно щонайменше у 2 рази більше естерів жирного ацилу, ніж гідрогенкарбонових сполук. Переважно, нафтопродукт містить 40 95, більш переважно, 50 95 метилових естерів жирних кислот.
У подальшому варіанті реалізації винаходу, в якому розчинник містить близько 80 95 води, нафтопродукт містить близько 30 95 С013-С22 гідрогенкарбонових сполук, переважно близько 35 95, більш переважно, близько 40 95 213-022 гідрогенкарбонових сполук.
В іншому варіанті реалізації винаходу, в якому розчинник містить близько 50 95 метанолу, нафтопродукт містить близько 50 95 метилових естерів жирних кислот (МЕЖК).
У подальшому варіанті реалізації винаходу вміст води у добутому нафтопродукті становить менш ніж близько 15 95 мас., переважно менш ніж 5 95 мас.
В іншому варіанті реалізації винаходу вихід нафтопродукту є щонайменше на 2 95 мас. більшим, переважно щонайменше на 4 95 мас. більшим, ніж вихід відповідного способу із застосуванням відповідних вегетативних частин рослини, в яких вміст неполярного ліпіду становить менш ніж 2 95, в перерахунку на суху масу.
У варіанті реалізації винаходу вегетативні частини рослини на стадії (І)(а) фізично обробляють одним або більше із сушіння, рубання, нарізання, помелу, вальцювання, пресування, дроблення або перетирання. В альтернативному варіанті реалізації винаходу вегетативні частини рослини не піддають сушінню до вмісту вологи менш ніж 1095 до приготування композиції. Наприклад, вегетативні частини рослини містять щонайменше 20 95 або щонайменше 30 95 вологи, або вегетативні частини рослини зберігають щонайменше 50 95 від вмісту води, що присутня у них на момент їх збирання.
У варіанті реалізації винаходу спосіб додатково включає одне або більше із: (ї) гідродезоксигенації добутого нафтопродукту, (ії) обробки добутого нафтопродукту гідрогеном, з метою зниження рівнів кетону або цукру в нафтопродукті, (ії) продукування синтетичного газу з добутого нафтопродукту, і (м) фракціонування добутого нафтопродукту, з метою одержання одного або більше із мазуту, дизельного палива, гасу або бензину Наприклад, стадія фракціонування може бути фракційною перегонкою.
У варіанті реалізації винаходу вегетативні частини рослини включають листя рослини, стебла або обидва.
У варіанті реалізації винаходу вегетативні частини рослини містять комбінацію екзогенних полінуклеотидів та/або генетичних модифікацій, як визначається у даному документі.
Авторами даного винаходу додатково продемонстровано значне підвищення вмісту ліпідів в організмах, особливо у вегетативних частинах і насінні рослин, шляхом маніпулювання біосинтезом жирних кислот, збиранням ліпідів і шляхами упаковки ліпідів, а також зниження катаболізму ліпідів. Різноманітні комбінації генів і зниження експресії генів застосовували для досягнення значного підвищення вмісту масла, що має велике значення для продукування біопалива та інших промислових продуктів, які одержують з масла.
В другому аспекті даного винаходу пропонується рекомбінантна еукаріотна клітина, що містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, р) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, і будь-яке одне або два або всі три із: с) першої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ) у клітині, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить генетичної модифікації, а) третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить четвертого екзогенного полінуклеотиду, і е) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує другий поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в клітині.
У варіанті реалізації винаходу клітина містить а), Б) і с), і необов'язково 4) або е).
У варіанті реалізації винаходу клітина містить а), Б) і а), і необов'язково с) або є).
У варіанті реалізації винаходу клітина містить а), Б) і є), і необов'язково с) або 4).
У варіанті реалізації винаходу клітина додатково містить одне або більше або все із: а) п'ятого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), переважно пов'язаний з ліпідною крапелькою білок (БПЛК),
Б) другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить другої генетичної модифікації, і с) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластиді, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить третьої генетичної модифікації.
У варіанті реалізації винаходу рекомбінантна еукаріотна клітина містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, р) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, і с) першу генетичну модифікацію, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ)., у клітині, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить генетичної модифікації, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в клітині, і необов'язково клітина додатково містить одне або більше або все із:
Я) третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), переважно БПЛК, е) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить четвертого екзогенного полінуклеотиду,
У другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить другої генетичної модифікації, і 9) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить третьої генетичної модифікації.
У варіанті реалізації винаходу клітина є рослинною клітиною з або у вегетативній частині рослини, причому один або більше або всі промотори експресуються з вищими рівнями у вегетативній частині, ніж у насінні рослини.
Зо У переважному варіанті реалізації винаходу присутність с), а) або е), разом з першим і другим екзогенними полінуклеотидами підвищує загальний вміст неполярних ліпідів у клітині, переважно клітині у вегетативній частині рослини, такій як лист або стебло, відносно відповідної клітини, яка містить перший і другий екзогенні полінуклеотиди, але не містить кожного із с), а) і е). Більш переважно, підвищення є синергетичним. Найбільш переважно, щонайменше промотор, який спрямовує експресію першого екзогенного полінуклеотиду, є промотором, що не належить до конститутивних промоторів.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ, і поліпептид, що приймає участь в катаболізмі ТАГ у клітині, являє собою ліпазу 5ОРІ1.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом М/КІЇ, і поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом М/ВІ1, поліпептидом І ЕС2, поліпептидом І ЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, і поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом М/КІ1, поліпептидом І ЕС2, поліпептидом І ЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, і поліпептид, що приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ, у клітині, являє собою ліпазу БОРІ1.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом М/КІ1, поліпептидом І ЕС2, поліпептидом І ЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою
ДГАТ або ФДАТ, і поліпептид, що приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ) у клітині, являє собою ліпазу 5ОРІ1.
У варіанті реалізації винаходу два фактори транскрипції, якщо вони присутні, являють собою УУКІ! і ЕС2 або МЕП і ЕСІ1.
У згаданих вище варіантах реалізації винаходу клітина переважно знаходиться у вегетативній частині рослини, яка росте на грунті або яка була вирощена на грунті, з подальшим збиранням урожаю частини рослини, причому клітина містить щонайменше 8 95 мас. ТАГ (95 від сухої маси), наприклад, від 8 95 до 75 95 або від 8 95 до 30 95. Більш переважно, вміст ТАГ становить щонайменше 10 95, наприклад, від 10 95 до 75 95 або від 1095 до 30 9.
Переважно, вказані рівні ТАГ присутні у вегетативних частинах до або в ході стадії цвітіння або до стадії зав'язування насіння в ході розвитку рослини. У вказаних варіантах реалізації винаходу співвідношення вмісту ТАГ у листі до вмісту ТАГ у стеблах рослини переважно становить від 1:11 до 10:11, та/або співвідношення з підвищеним, у порівнянні з відповідною клітиною, що містить перший і другий екзогенні полінуклеотиди, але не містить першої генетичної модифікації.
У згаданих вище варіантах реалізації винаходу клітина переважно містить екзогенний полінуклеотид, що кодує ДГАТ, і генетичну модифікацію, що пригнічує продукування ендогенної ліпази 5ОРІ. Більш переважно, клітина не містить екзогенного полінуклеотиду, що кодує ФДАТ, та/або являє собою клітину, що не є клітиною Місоїйапа репіпатіапа, та/або МУКІЇ являє собою
МУКІ1, що не є МУКІЇ Агарідорзіз Шайапа (ЗЕО ІЮ МО: 21 або 22). Найбільш переважно, щонайменше один з екзогенних полінуклеотидів в клітині експресується промотором, що не є конститутивним промотором, такого як промотор, що експресується переважно в зелених тканинах або стеблах рослини або який активізується після початку цвітіння або в ході старіння.
У третьому аспекті даного винаходу пропонується рекомбінантна еукаріотна клітина, що містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, р) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, і с) третій екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид покриття масляного включення
Зо (ПМВ), переважно поліпептид, пов'язаний з ліпідними крапельками (ППЛК), причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в клітині, і, при цьому, рекомбінантна еукаріотна клітина містить підвищений рівень одного або більше неполярних ліпідів тал"або підвищену кількість поліпептиду ПМВ, відносно відповідної клітини, яка містить третій екзогенний полінуклеотид, нуклеотидна послідовність якого є комплементарною послідовності, наведеній у
ЗЕО І МО: 176.
У варіанті реалізації винаходу клітина у відповідності до згаданого вище аспекту додатково містить одне або більше або все із: а) першої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ, у клітині, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить першої генетичної модифікації, е) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить четвертого екзогенного полінуклеотиду, 7 другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить другої генетичної модифікації, і 9) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить третьої генетичної модифікації.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ, і поліпептид ПМВ являє собою олеозин. Як альтернатива, поліпептид ПМВ являє собою БПЛК.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом М/КІЇ, і поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом М/КІ1, поліпептидом І ЕС2, поліпептидом І ЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, і поліпептид ПМВ являє собою олеозин. Як альтернатива, поліпептид ПМВ являє собою БПЛК.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом УУКІ!1, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС або І ЕС1-подібним поліпептидом, поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою
ДГАТ або ФДАТ, і поліпептид ПМВ являє собою олеозин. Як альтернатива, поліпептид ПМВ являє собою БПЛК.
У варіанті реалізації винаходу клітина містить два екзогенні полінуклеотиди, що кодують два різних поліпептиди фактору транскрипції, які підвищують експресію в клітині одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот, такі як МУКІ! і ГЕС2 або М/КПТ і ЕС1.
У переважному варіанті реалізації винаходу присутність третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид ПМВ, переважно БПЛК, разом з першим і другим екзогенними полінуклеотидами, підвищує загальний вміст неполярних ліпідів у клітині рослини, переважно клітині у вегетативній частині рослини, такій як лист або стебло, відносно клітини відповідної рослини, яка містить перший і другий екзогенні полінуклеотиди, але не містить третього екзогенного полінуклеотиду. Більш переважно, підвищення є синергетичним. Найбільш переважно, щонайменше промотор, який спрямовує експресію першого екзогенного полінуклеотиду, є промотором, що не належить до конститутивних промоторів.
У четвертому аспекті даного винаходу пропонується рекомбінантна еукаріотна клітина, що містить пластиди і перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, і одне або більше або все із: а) другого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить другого екзогенного полінуклеотиду, р) першої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить першої генетичної модифікації, і
Зо с) другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить другої генетичної модифікації, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в клітині.
У варіанті реалізації винаходу клітина, переважно рослинна клітина, містить а) і необов'язково Б) або с).
У варіанті реалізації винаходу клітина у відповідності до згаданого вище аспекту додатково містить одне або більше або все із:
Я) третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, е) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ)., у клітині, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить третьої генетичної модифікації, і
Т) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), переважно БПЛК.
У переважному варіанті реалізації винаходу клітина, переважно рослинна клітина, містить перший, другий і третій екзогенні полінуклеотиди і необов'язково третю генетичну модифікацію або четвертий екзогенний полінуклеотид.
У переважному варіанті реалізації винаходу присутність другого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, жирного ацилу, що переважно є тіоестеразою, такий як поліпептид ЕАТА, разом з першим ії, якщо вони присутні, третіми екзогенними полінуклеотидами підвищує загальний вміст неполярних ліпідів у рослинній клітині, переважно клітині у вегетативній частині рослини, такій як лист або стебло, в порівнянні з відповідною рослинною клітиною, яка містить перший і, якщо вони присутні, треті екзогенні полінуклеотиди, але не містить другого екзогенного полінуклеотиду. Більш переважно, підвищення, що забезпечується другим екзогенним полінуклеотидом, є синергетичним.
Найбільш переважно, щонайменше промотор, що спрямовує експресію першого екзогенного полінуклеотиду, є промотором, що не належить до конститутивних промоторів.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію 60 одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом М/КІ1, поліпептидом І ЕС2, поліпептидом І ЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, переважно фактором транскрипції, що не є МУКІ! Агарідорзів Інаійапа (ЗЕО ІЮ МО: 21 або 22), а поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, є тіоестеразою жирних кислот, переважно поліпептидом РАТА або ЕАТВ, більш переважно, поліпептидом ЕАТА або тіоестеразою жирних кислот. На присутність тіоестерази, що не є середньоланцюговою тіоестеразою, вказує відсоток С12:0 та/або С14:0 жирних кислот в загальному вмісті жирних кислот у клітині, яке є приблизно таким же, як і у відповідній клітині, що не містить екзогенного полінуклеотиду, який кодує тіоестеразу. Переважно, клітина додатково містить екзогенний полінуклеотид, що кодує ДГАТ, і генетичну модифікацію, що пригнічує продукування ендогенної ліпази 5ОРІ. У варіанті реалізації винаходу знижене продукування ліпази 5ОРІ діє синергетично з фактором транскрипції і тіоестеразою жирних кислот для підвищення загального вмісту неполярних ліпідів у клітині. Більш переважно, клітина не містить екзогенного полінуклеотиду, що кодує ФДАТ, та/або являє собою клітину, що не є клітиною Місоїйапа репіпатіапа. Найбільш переважно, щонайменше один з екзогенних полінуклеотидів в клітині експресується промотором, що не є конститутивним промотором, таким як промотор, що переважно експресується у зелених тканинах або стеблах рослини або активізується в ході старіння.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом УУКІ!, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС або І ЕС1-подібним поліпептидом, і поліпептид, що приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, є поліпептидом
ТГД.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом УУКІ!, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС1 або І ЕС1-подібним поліпептидом, і поліпептид, що приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), є пластидною ГФАТ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом М/КІ1, поліпептидом І ЕС2, поліпептидом І ЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом,
Зо поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, є тіоестеразою жирних кислот, переважно поліпептидом РГАТА або ЕАТВ, і поліпептид, що приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, є поліпептидом ТГД.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом УУКІ!, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС або І ЕС1-подібним поліпептидом, поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, є тіоестеразою жирних кислот, переважно поліпептидом ЕАТА або БАТВ, і поліпептид, що приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ),, є пластидною ГФАТ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом М/КІ1, поліпептидом І ЕС2, поліпептидом І ЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, поліпептид, що приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, є поліпептидом ТГД, і поліпептид, що приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), є пластидною ГФАТ.
У варіанті реалізації винаходу клітина містить два екзогенні полінуклеотиди, що кодують два різних поліпептиди фактору транскрипції, які підвищують експресію в клітині одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот, таких як МУКІ!1 і ГЕС2 або МІ! і
І ЕС1.
У варіантах реалізації другого, третього і четвертого аспектів винаходу, в яких клітина містить екзогенний полінуклеотид, що кодує тіоестеразу жирних кислот, таку як поліпептид
ЕАТА або РАТВ, тіоестераза переважно є поліпептидом ЕРАТА або тіоестеразою жирних кислот.
У п'ятому аспекті даного винаходу пропонується рекомбінантна еукаріотна клітина, що містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, переважно фактор транскрипції УУКІ, р) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, які Є ЛФКАТ з переважною активністю відносно жирних кислот із середньою довжиною ланцюга (С8-С14), і с) третій екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який підвищує експорт С8-С14 жирних кислот із пластид клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить третього екзогенного полінуклеотиду, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в клітині.
У варіанті реалізації винаходу третій екзогенний полінуклеотид кодує тіоестеразу, переважно тіоестеразу ЕАТВ з переважною активністю по відношенню до жирних кислот із середньою довжиною ланцюга (С8-С14).
У переважному варіанті реалізації винаходу присутність третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт С8-С14 жирних кислот із пластид клітини, разом з першими і другими екзогенними полінуклеотидами підвищує загальний вміст
СЛЖК у клітині, переважно клітині вегетативної частини рослини, такої як лист, коріння або стебло, в порівнянні з відповідною рослинною клітиною, що містить перший і другий екзогенні полінуклеотиди, але не містить третього екзогенного полінуклеотиду. Більш переважно, підвищення, забезпечуване третім екзогенним полінуклеотидом, є синергетичним. Найбільш переважно, щонайменше промотор, який спрямовує експресію першого екзогенного полінуклеотиду, є промотором, що не належить до конститутивних промоторів.
У варіанті реалізації винаходу екзогенний полінуклеотид, що кодує тіоестеразу БАТВ з переважною активністю по відношенню до жирних кислот із середньою довжиною ланцюга (С8-
С14), містить амінокислоти, послідовність яких наведена в будь-якій із ЗЕО ІЮ МО: 193-199, або біологічно активний фрагмент будь-якої з них або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною будь-якій одній або більше із БЗЕО ІЮ МО: 193-199.
Більш переважно, екзогенний полінуклеотид, що кодує тіоестеразу БАТВ з переважною активністю по відношенню до жирних кислот із середньою довжиною ланцюга (С8-С14), містить амінокислоти, послідовність яких наведена у 5ЕО ІЮ МО: 193-199, або біологічно активний фрагмент будь-якої з них або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 95 ідентичною будь-якій одній або обом із БЕО ІЮ МО: 193-199.
У варіанті п'ятого аспекту фактор транскрипції не є УУКІ1 Агарідорзів ІНаійапа (5ЕО І МО: 21 або 22). 30 У варіанті п'ятого аспекту екзогенний полінуклеотид, що кодує ЛФКАТ, містить амінокислоти, послідовність яких наведена як ЗЕО ІЮО МО: 200, або його біологічно активний фрагмент або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною їм.
У варіанті п'ятого аспекту клітина додатково містить одне або більше або все із: а) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує додатковий поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, е) першої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ), у клітині, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить першої генетичної модифікації,
У п'ятого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), переважно БПЛК, 9) другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить другої генетичної модифікації, і
І) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить третьої генетичної модифікації, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в клітині.
У варіанті п'ятого аспекту клітина є рослинною клітиною з або у вегетативній частині рослини, і один або більше або всі із промоторів експресуються у вегетативній частині з вищими рівнями, ніж у насінні рослини.
У варіанті п'ятого аспекту жирна кислота із середньою довжиною ланцюга є щонайменше міристиновою кислотою. У переважному варіанті реалізації винаходу вміст міристинової кислоти в клітині становить щонайменше близько 895, щонайменше близько 1095, щонайменше близько 11 95, щонайменше близько 12 95, щонайменше близько 15 9565, щонайменше близько 20 956, щонайменше близько 25 95, від 8 95 до 25 95, від 8 95 до 20 95, від 10 95 до 25 95, від 11 95 до 25 9б, від близько 15 95 до 25 95, від близько 20 95 до 25 95 (мас., в перерахунку на суху масу).
У варіантах третього, четвертого і п'ятого аспектів клітина переважно знаходиться у вегетативній частині рослини, яка росте на грунті або яка була вирощена на грунті, з бо подальшим збиранням урожаю частин рослини, причому клітина містить щонайменше 8 95 мас.
ТАГ (95 від сухої маси), наприклад, від 8 95 до 75 95 або від 8 95 до 30 95. Більш переважно, вміст
ТАГ становить щонайменше 10 95, наприклад, від 1095 до 75595 або від 1095 до 30 95.
Переважно, вказані рівні ТАГ присутні у вегетативних частинах до або в ході стадії цвітіння або до стадії зав'язування насіння в ході розвитку рослини. У вказаних варіантах реалізації винаходу співвідношення вмісту ТАГ у листі до вмісту ТАГ у стеблах рослини переважно становить від 1:11 до 10:11, та/або співвідношення є підвищеним, у порівнянні з відповідною клітиною, що містить перший і другий екзогенні полінуклеотиди, але не містить першої генетичної модифікації.
У варіантах другого, третього, четвертого і п'ятого аспектів клітина переважно містить екзогенний полінуклеотид, що кодує ДГАТ, і генетичну модифікацію, що пригнічує продукування ендогенної ліпази ЗБОРІ. У переважному варіанті реалізації винаходу клітина не містить екзогенного полінуклеотиду, що кодує ФДАТ, та/або клітина не є клітиною Місоїапа рбепіпатіапа та/або клітина не є клітиною Вгаззіса пари5. Найбільш переважно, щонайменше один із екзогенних полінуклеотидів в клітині експресується промотором, що не є конститутивним промотором, таким як промотор, що переважно експресується в зелених тканинах або стеблах рослини або активізується в ході старіння.
У варіанті реалізації винаходу клітина за винаходом (включаючи другий, третій, четвертий і п'ятий аспекти) володіє однією або більше або всіма з наступних ознак (якщо це є доречним): ї) у клітині підвищений синтез загальних жирних кислот відносно відповідної клітини, яка не містить першого екзогенного полінуклеотиду, або знижений катаболізм загальних жирних кислот відносно відповідної клітини, яка не містить першого екзогенного полінуклеотиду, або присутні обидві ці ознаки, таким чином, що клітина містить підвищений рівень загальних жирних кислот відносно відповідної клітини, яка не містить першого екзогенного полінуклеотиду, ії) у клітині підвищена експресія та/або активність ацилтрансферази ацилов жирних кислот, що каталізує синтез ТАГ, ДАГ або МАГ, переважно ТАГ, відносно відповідної клітини, яка містить перший екзогенний полінуклеотид і не містить екзогенного полінуклеотиду, який кодує поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, ії) у клітині знижене продукування лізофосфатидинової кислоти (ЛФК) з ацил-АПБ і ОЗР у пластидах клітини відносно відповідної клітини, яка містить перший екзогенний полінуклеотид і
Зо не містить генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластиді клітини, ім) у клітині змінене співвідношення С16:3 і С18:3 жирних кислот у вмісті загальних жирних кислот та/або вмісті галактоліпідів відносно відповідної клітини, яка не містить екзогенного(их) полінуклеотиду(ів) та/або генетичної(их) модифікації(й), переважно співвідношення є зниженим, м) клітина знаходиться у вегетативній частині рослини, причому загальний вміст у ній неполярних ліпідів становить щонайменше близько 895, щонайменше близько 10 95, щонайменше близько 1195, щонайменше близько 1295, щонайменше близько 15 95, щонайменше близько 2095, щонайменше близько 2595, щонайменше близько 30 95, щонайменше близько 35595, щонайменше близько 4095, щонайменше близько 45 95, щонайменше близько 5095, щонайменше близько 5595, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 8 95 до 75 95, від 10 95 до 75 95, від 11 95 до 75 95, від близько 15 95 до 75 95, від близько 20 95 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 905 до 75 95, від близько 60 95 до 75 95 або від близько 25 95 до 50 90 (мас., в перерахунку на суху масу); мі) клітина знаходиться у вегетативній частині рослини, причому вміст ТАГ у ній становить щонайменше близько 8595, щонайменше близько 1095, щонайменше близько 11 95, щонайменше близько 1295, щонайменше близько 1595, щонайменше близько 20 95, щонайменше близько 25595, щонайменше близько 3095, щонайменше близько 35 95, щонайменше близько 4095, щонайменше близько 4595, щонайменше близько 50 95,
БО щонайменше близько 55595, щонайменше близько 6095, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 8 95 до 75 90, від 10 95 до 75 95, від 11 95 до 75 95, від близько 1595 до 75 95, від близько 20 95 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 75 95, від близько 60 95 до 75 95 або від близько 25 95 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), мії) поліпептид(и) фактору транскрипції вибраний(ї) з групи, що складається із МуУгіпкІей 1 (М/ВІ1), І еагїу Соїуієдоп 1 (ГЕС), ГЕС1-подібного, І вагу Соїуїедоп 2 (ГЕС2), ВАВУ ВООМ (ВВМ),
ЕИ53, АВІЗ, АВІ4, АВІ5, бої4 і ой 1 або з групи, що складається із МУВ7З3, Б7ІРБЗ, АСІ 15,
МУВ115, МУВ118, ТАММЕЇ, УМОВ, СЕК2а1, СЕКга? і РНК, мії) олеїнова кислота становить щонайменше 20 95 (моль 95), щонайменше 22 9о (моль об), бо щонайменше 30 95 (моль 95), щонайменше 40 95 (моль 95), щонайменше 50 95 (моль 95) або щонайменше 60 95 (моль 95), переважно близько 65 95 (моль 95), або від 20 95 до близько 65 95 від вмісту загальних жирних кислот у клітині, їх) неполярний ліпід в клітині містить жирну кислоту, яка містить гідроксильну групу, епоксигрупу, циклопропанову групу, подвійний карбон-карбоновий зв'язок, потрійний карбон- карбоновий зв'язок, кон'юговані подвійні зв'язки, розгалужений ланцюг, такий як метильований або гідроксильований розгалужений ланцюг, або комбінацію двох або більше з них або будь-яку із двох, трьох, чотирьох, п'яти або шести вищезазначених груп, зв'язків або розгалужених ланцюгів, х) неполярний ліпід в клітині містить одну або більше поліненасичених жирних кислот, вибраних з ейкозадієнової кислоти (ЕДК), арахідонової кислоти (АРК), стеаридонової кислоти (СДК), ейкозатриєнової кислоти (ЕТрК), ейкозатетраєнової кислоти (ЕТК), ейкозапентаєнової кислоти (ЕПК), докозапентаєнової кислоти (ДПК), докозагексаєнової кислоти (ДГК) або комбінації двох або більше із них, хі) клітина знаходиться в рослині або її частині, переважно вегетативній частині рослини, або клітина є клітиною водоростей, наприклад, діатомових (бациляріофітів), зелених водоростей (хлорофітів), зелено-блакитних водоростей (ціанофітів), золотисто-коричневих водоростей (хризофітів), гаптофітів, коричневих водоростей або водоростей гетероконтів, або клітина одержана з або являє собою мікроорганізм, придатний для ферментації, такий як гриб, хії) один або більше або всі з промоторів вибрані із промотору, що не є конститутивним промотором, переважно тканиноспецифічного промотору, такого як специфічний для листя та/або стебел промотор, регульованого розвитком промотору, такого як специфічний для старіння промотор, наприклад, промотор 5БАСІ12, індуцибельного промотору або регульованого циркадним ритмом промотору, причому щонайменше один із промоторів, функціонально пов'язаних з екзогенним полінуклеотидом, що кодує поліпептид фактору транскрипції, переважно є промотором, що не належить до конститутивних промоторів, хії) клітина містить, серед загальних жирних кислот, середньоланцюгові жирні кислоти, переважно С12:0, С14:0 або обидві, на рівні щонайменше 5 95 від загального вмісту жирних кислот, і необов'язково екзогенний полінуклеотид, що кодує ЛФКАТ, яка проявляє переважну активність по відношенню до жирних кислот із середньою довжиною ланцюга (С8-С14),
Ко) переважно С12:0 або С14:0; хім) клітина містить, серед загальних жирних кислот, рівень олеїнової кислоти та/або рівень пальмітинової кислоти, щонайменше на 2 95 вищий, ніж у відповідній клітині, що не містить екзогенного(их) полінуклеотиду(ів) та/або генетичної(их) модифікації(й), та/або рівень а- ліноленової кислоти (АЛК) та/або рівень лінолевої кислоти є щонайменше на 2 95 нижчим, ніж у відповідній клітині що не містить екзогенного(их) полінуклеотиду(ів) та/або генетичної(их) модифікації(й), хм) неполярний ліпід в клітині містить модифікований рівень загальних стеролів, переважно вільних (неестерифікованих) стеролів, стероїльних естерів, стероїлглікозидів, відносно неполярного ліпіду у відповідній клітині, що не містить екзогенного(их) полінуклеотиду(ів) та/або генетичної(їх) модифікації(й), хмі) неполярний ліпід у клітині містить віск та/або естери воску, хмії) клітина є одним з членів популяції або колекції кількістю щонайменше близько 1000 таких клітин, переважно у вегетативній частині рослини або насіння, хміїї) клітина містить екзогенний полінуклеотид, що кодує супресор сайленсингу, причому екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в клітині, хіх) рівень одного або більше неполярних ліпідів та/або загальний вміст неполярних ліпідів у клітині є щонайменше на 295 мас. вищим, ніж у відповідній клітині, яка містить екзогенні полінуклеотиди, що кодують МУКІ! Агарідровзів ІПпайапа (ЗЕБЕО І МО: 21) і ДГАТ1І Агабрідорвів
Інаійапа (5ЕО ІО МО: 1); і хх) загальний вміст поліненасичених жирних кислот (ПНЖК) є зниженим відносно загального вмісту ПНЖК у відповідній клітині, що не містить екзогенного(их) полінуклеотиду(ів) та/або генетичної(их) модифікації(й).
Наступні варіанти реалізації винаходу застосовуються до клітини за винаходом (включаючи другий, третій, четвертий і п'ятий аспекти), а також до способів одержання клітин і до способів застосування клітин. У вказаних варіантах реалізації винаходу, в яких клітина знаходиться у вегетативній частині рослини, переважно рослина росте на грунті або була вирощена на грунті.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, є адилтрансферазою ацилов жирних кислот, що приймає участь у біосинтезі ТАГ, ДАГ або моноацилгліцеролу (МАГ), в клітині, переважно ТАГ у клітині, такою як, наприклад, ДГАТ, ФДАТ, ЛФКАТ, ГФАТ або МГАТ, переважно ДГАТ або ФДАТ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ) у клітині, є ліпазою ЗОРІ, поліпептидом Садіб58, ацил-КоА оксидазою, такою як АСХ1 або АСХ2, або поліпептидом, що приймає участь у В-окисненні жирних кислот у клітині, такою як пероксисомальний переносник АТФ-зв'язуючої касети РХАТ, переважно ліпазою 5БОРІ1.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид покриття масляного включення (ПМВ) являє собою олеозин, такий як поліолеозин або калеозин, або переважно є білком, пов'язаним з ліпідними крапельками (БПЛК).
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, є тіоестеразою С16 або С18 жирних кислот, такого як поліпептид РАТА або поліпептид
ЕАТВ, переносником жирних кислот, таким як поліпептид АВСАЗУ, або синтетазою довголанцюгового ацил-КоА (ДЛАС).
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, є переносником жирних кислот або його субодиницею, переважно поліпептидом ТГД, таким як, наприклад, поліпептид ТОО1, поліпептид ТО02, поліпептид ТО0ОЗ або поліпептид ТО04.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластиді, є пластидною ГФАТ, пластидною ЛФКАТ або пластидною
ФФК.
У одному варіанті реалізації винаходу клітина одержана з або знаходиться в рослині 16:3 або в її вегетативній частині або насінні, причому клітина містить одне або більше або все із наступного: а) екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить екзогенного полінуклеотиду, р) першої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить першої генетичної модифікації, і
Зо с) другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить другої генетичної модифікації, причому екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в клітині.
У альтернативному варіанті реалізації винаходу клітина одержана з або знаходиться в рослині 18:3 або в її вегетативній частині або насінні.
У варіанті реалізації винаходу клітина одержана з або знаходиться в листі стеблі або корінні рослини, перед цвітінням рослини, причому загальний вміст неполярних ліпідів у клітині становить щонайменше близько 8 95, щонайменше близько 10 95, щонайменше близько 11 95, від 8 95 до 15 95, або від 9 95 до 12 95 (мас., в перерахунку на суху масу). У варіанті реалізації винаходу загальний вміст неполярних ліпідів у клітині становить щонайменше на З 95 більше, переважно, щонайменше на 5 95 більше, ніж загальний вміст неполярних ліпідів у відповідній клітині, що трансформована генами, які кодують МУКІ!1 і ДГАТ, але не містить інших екзогенних полінуклеотидів і генетичних модифікацій, описаних у даному документі для другого, третього, четвертого і п'ятого аспектів. Більш переважно, ступінь підвищення знаходиться в клітині, розташованій в стеблі або корінні рослини.
У варіанті реалізації винаходу введення одного або більше екзогенних полінуклеотидів або генетичних модифікацій, переважно екзогенного полінуклеотиду, що кодує ПМВ або тіоестеразу жирного ацилу, або генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ, у клітині, більш переважно, екзогенного полінуклеотиду, що кодує тіоестеразу ЕАТА або БПЛК або знижує експресію ендогенної ліпази ТАГ, такої як ліпаза ТАГ 5ОР', в клітині, приводить до синергетичного підвищення загального вмісту неполярного ліпіду в клітині, при додаванні до пари трансгенів МУ/КІ! і ДГАТ, особливо перед цвітінням рослини і, навіть більш конкретно, в стеблах та/або корінні рослини. Наприклад, див. Приклади 8, 11 і 15. У переважному варіанті реалізації винаходу підвищення вмісту ТАГ у клітині, розташованій у стеблі або корінні рослини, щонайменше у 2 рази, більш переважно, щонайменше у З рази більше, в порівнянні з відповідною клітиною, що трансформована генами, які кодують УМУКІ! і ДГАТІ, але не містить тіоестерази ЕАТА, БПЛК і генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або бо активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ), у клітині.
Найбільш переважно, щонайменше промотор, який спрямовує експресію першого екзогенного полінуклеотиду, є промотором, що не належить до конститутивних промоторів.
Генетична модифікація може бути будь-якою модифікацією природної клітини, яка забезпечує бажаний ефект. Способи генетичної модифікації клітин добре відомі з рівня техніки.
У варіанті реалізації винаходу кожна з однієї або більше або всіх генетичних модифікацій є мутацією ендогенного гена, яка частково або повністю інактивує ген, переважно введену мутацію, таку як точкова мутація, інсерція або делеція (або комбінація одного або більше із цього). Точкова мутація може бути передчасним стоп-кодоном, мутацією сайту зрощення, мутацією зсуву рамки або мутацію заміни амінокислоти, яка знижує активність гена або кодованого поліпептиду. Делеція може складатися з одного або більше нуклеотидів в межах транскрибованого екзону або промотору гена, або простягатися крізь або в більш ніж один екзон, або розширюватися до делеції всього гена. Переважно делецію вводять (із застосуванням технологій 2Е, ТА ЕМ або СКІЗРК. У варіанті реалізації винаходу одна або більше або всі генетичні модифікації являють собою екзогенний полінуклеотид, що кодує молекулу РНК, яка пригнічує експресію ендогенного гена, причому екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в клітині. Приклади екзогенного полінуклеотиду, що знижує експресію ендогенного гена, вибрані з групи, що складається із антисмислового полінуклеотиду, смислового полінуклеотиду, мікроРНК, полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який зв'язується з ендогенним ферментом, молекулою двохланцюгової РНК та одержаною з неї процесованою молекулою РНК. У варіанті реалізації винаходу клітина містить генетичні модифікації, що являють собою введену мутацію в ендогенному гені та екзогенному полінуклеотиді, що кодує молекулу РНК, яка знижує експресію іншого ендогенного гена.
У варіанті реалізації винаходу екзогенний полінуклеотид, що кодує МУКІ!, містить одне або більше з наступного: ї) нуклеотиди, що кодують поліпептид, який містить амінокислоти, послідовність яких наведена в будь-якій із ЗЕО ІЮ МО: 21-75 або 205-210, або його біологічно активний фрагмент або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною будь-якій одній або більше із ЗЕО ІЮ МО: 21-75 або 205-210, і) нуклеотиди, послідовність яких є щонайменше на 30 95 ідентичною Її), і ії) нуклеотиди, що гібридизуються з ії) та/або ії) в суворих умовах. Переважно, поліпептид
М/ВІЇ являє собою поліпептид УУКІ!, що не є УУКІ! Агабідорвів ІНаійапа (5ЕО ІЮ МО: 21 або 22).
Більш переважно, поліпептид МУК! містить амінокислоти, послідовність яких наведена в 5ЕО ІЮ
МО: 208, або їх біологічно активний фрагмент або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною їм.
У варіанті реалізації другого, третього, четвертого або п'ятого аспектів винаходу рекомбінантна клітина є клітиною бульби картоплі (оїапит Шреговит), клітиною бульби або листу цукрового буряка (Веїа мпїдагі5), клітиною цукрової тростини (вид басспагит) або стебла або листу сорго (бБогапит бБісоіог), клітиною ендосперму однодольної рослини, причому клітина містить підвищену кількість загальних жирних кислот відносно відповідної клітини ендосперму дикого типу, такої як, наприклад, клітина зерна пшениці (Т/йісцт аевзіїмит), зерна рису (вид
Огуга) або насіння кукурудзи (7єа таубх), клітина насіння виду Вгаззіса, що містить підвищену кількість загальних жирних кислот, наприклад, насіння рапсу, або клітина зерна боба, що містить підвищену кількість загальних жирних кислот, наприклад, насіння сої (Спіусіпе тах).
У шостому аспекті даного винаходу пропонується організм, що не відноситься до людського роду, або його частина, що містить або складається з однієї або більше клітин за винаходом.
У варіанті реалізації винаходу частина організму, що не відноситься до людського роду, є насінням, плодом або вегетативною частиною рослини, такою як повітряна частина рослини або зелена частина, наприклад, лист або стебло.
В іншому варіанті реалізації винаходу організм, що не відноситься до людського роду, є фототрофним організмом, таким як рослина або водорість, або організмом, придатним для ферментації, таким як гриб.
У сьомому аспекті даного винаходу пропонується трансгенна рослина або її частина, переважно вегетативна частина рослини, яка містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, р) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, і будь-яке одне або два або всі три із:
с) генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ), у рослині, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить генетичної модифікації, а) третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітин рослини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить четвертого екзогенного полінуклеотиду, і е) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує другий поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в рослині.
У варіанті реалізації винаходу рослина або її частина містить а), б) і с), і необов'язково 4) або є).
У варіанті реалізації винаходу рослина або її частина містить а), Б) і а), і необов'язково с) або є).
У варіанті реалізації винаходу рослина або її частина містить а), Б) і є), і необов'язково с) або а).
У переважному варіанті реалізації винаходу присутність с), 4) або є), разом з а) і в), підвищує загальний вміст неполярного ліпіду в рослині або її частині, переважно вегетативній частині рослини, такій як лист, коріння або стебло, відносно відповідної рослини або її частини, яка містить а) і Б), але не містить кожного із с), 4) ії е). Більш переважно, підвищення є синергетичним. Найбільш переважно, щонайменше промотор, який спрямовує експресію першого екзогенного полінуклеотиду, є промотором, що не належить до конститутивних промоторів.
У варіанті реалізації винаходу рослина або її частина додатково містить одне або більше або все із: а) п'ятого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), переважно БПЛК, р) другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність
Зо поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди рослини, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить другої генетичної модифікації, і с) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить третьої генетичної модифікації.
У варіанті реалізації винаходу трансгенна рослина або її частина містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, переважно експресований промотором, що не є конститутивним промотором, р) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, і с) генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ), у рослині, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить генетичної модифікації, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в рослині, і необов'язково рослина або її частина додатково містить одне або більше або все із:
Я) третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), переважно БПЛК, е) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид рослини, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить четвертого екзогенного полінуклеотиду,
У другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди рослини, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить другої генетичної модифікації, і 9) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить третьої генетичної модифікації.
У варіанті реалізації винаходу частина є вегетативною частиною, причому один або більше або всі із промоторів експресуються у вегетативній частині з вищими рівнями, ніж у насінні (516) рослини.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ, і поліпептид, що приймає участь в катаболізмі ТАГ у рослині, є ліпазою ЗОРІ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, є поліпептидом М/КІЇ, і поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, є поліпептидом УУКІ!, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС або І ЕС1-подібним поліпептидом, і поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, є поліпептидом УУКІ!, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС або І ЕС1-подібним поліпептидом, і поліпептид, що приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ) у рослині, є ліпазою
ЗОРІ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, є поліпептидом УУКІ!, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС або І ЕС1-подібним поліпептидом, поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою
ДГАТ або ФДАТ, і поліпептид, що приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ) у рослині, є ліпазою БОРІ1.
У варіанті реалізації винаходу два фактори транскрипції, якщо вони присутні, являють собою УУКІ! і ЕС2 або МЕП і ЕСІ1.
У згаданих вище варіантах реалізації винаходу рослина переважно росте на грунті або була вирощена на грунті, з подальшим збиранням урожаю частини рослини. Переважно, вегетативна частина рослини містить щонайменше 8 9о мас. ТАГ (95 від сухої маси), наприклад, від 8 95 до 7595 або від 895 до 3095. Більш переважно, вміст ТАГ становить щонайменше 10 95, наприклад, від 10 95 до 75 95 або від 10 95 до 30 95. Переважно, вказані рівні ТАГ присутні у вегетативній частині до або під час стадії цвітіння або до стадії зав'язування насіння в ході розвитку рослини. У вказаних варіантах реалізації винаходу співвідношення вмісту ТАГ у листі до вмісту ТАГ у стеблах рослини переважно становить від 1:1 до 10:1, та/або співвідношення є підвищеним, у порівнянні з відповідною клітиною, що містить перший і другий екзогенні полінуклеотиди, але не містить першої генетичної модифікації.
У згаданих вище варіантах реалізації винаходу загальний вміст неполярного ліпіду в рослині або її частині переважно є щонайменше на 3 95, більш переважно, щонайменше на 5 95 вищим, ніж загальний вміст неполярного ліпіду у відповідній рослині або її частині, що трансформована генами, які кодують УУКІ! і ДГАТ, але не містить інших екзогенних полінуклеотидів і генетичних модифікацій, описаних у даному документі. Більш переважно, вказаний ступінь підвищення присутній у тканинах стебла або коріння рослини.
У згаданих вище варіантах реалізації винаходу введення одного або більше екзогенних полінуклеотидів або генетичних модифікацій, переважно екзогенного полінуклеотиду, що кодує
ПМВ або тіоестеразу жирних кислот, або генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ) у клітині, більш переважно, екзогенного полінуклеотиду, що кодує тіоестеразу БПЛК або РАТА або знижує експресію ендогенної ліпази ТАГ, такої як ліпаза ТАГ
ЗОРІ, у клітині, переважно приводить до синергетичного підвищення загального вмісту неполярного ліпіду в рослині або її частині, при додаванні до пари трансгенів МУКІ! і ДГАТ, особливо перед цвітінням рослини, і навіть більш конкретно, в тканині стебла та/або коріння рослини. Наприклад, див. Приклади 8, 11 ї 15. У переважному варіанті реалізації винаходу підвищення вмісту ТАГ у тканинах листа, стебла або коріння або всіх трьох частин рослини щонайменше у 2 рази, більш переважне, щонайменше у З рази вищий, ніж у відповідній частині, що трансформована генами, які кодують МУКІї і ДГАТІ, але не містить екзогенного полінуклеотиду, що кодує ПМВ або тіоестеразу жирних кислот, і генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ, у клітині.
У згаданих вище варіантах реалізації винаходу рослина або її частина переважно містить другий екзогенний полінуклеотид, що кодує ДГАТ, і першу генетичну модифікацію, що пригнічує бо продукування ендогенної ліпази ЗОРІ більш переважно, рослина або її частина не містить екзогенного полінуклеотиду, що кодує ФДАТ, та/або являє собою рослину або її частину, що не належить до Місойапа репіпатіапа та/або Вгазвзіса пари5, та/або МУКІ!Ї представляє собою
МУК, який не є Агабідорвів Інаійапа М/ВІТ (ЗЕО ІЮ МО: 21 або 22). У варіанті реалізації винаходу рослина не є цукровою тростиною. Найбільш переважно, щонайменше один з екзогенних полінуклеотидів у рослині експресується промотором, що не є конститутивним промотором, наприклад, таким як промотор, що переважно експресується у зелених тканинах або стеблах рослини або який регулюється після початку цвітіння або в ході старіння. Переважно, щонайменше перший екзогенний полінуклеотид (що кодує фактор транскрипції) експресується таким промотором.
У восьмому аспекті даного винаходу пропонується трансгенна рослина або її частина, переважно вегетативна частина рослини, що містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині,
Б) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, і с) третій екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), переважно БПЛК, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в рослині, і, при цьому, рослина містить підвищений рівень одного або більше неполярних ліпідів та/"або підвищену кількість поліпептиду ПМВ відносно відповідної рослини, що містить третій екзогенний полінуклеотид, нуклеотидна послідовність якого є комплементарною послідовності, наведеній у БЕО ІО МО: 176.
У переважному варіанті реалізації винаходу присутність третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид ПМВ, разом з першим і другим екзогенними полінуклеотидами, підвищує загальний вміст неполярного ліпіду в рослині або її частині, переважно вегетативній частині рослини, такій як лист, коріння або стебло, відносно відповідної частини рослини, яка містить перший і другий екзогенні полінуклеотиди, але не містить третього екзогенного полінуклеотиду. Більш переважно, підвищення є синергетичним. Найбільш
Зо переважно, щонайменше промотор, який спрямовує експресію першого екзогенного полінуклеотиду, є промотором, що не належить до конститутивних промоторів.
У варіанті реалізації восьмого аспекту винаходу рослина або її частина додатково містить одне або більше або всі із: а) першої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ), у рослині, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить першої генетичної модифікації, е) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид рослини, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить четвертого екзогенного полінуклеотиду, 7 другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди рослини, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить другої генетичної модифікації, і 9) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить третьої генетичної модифікації.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ, і поліпептид ПМВ являє собою олеозин. Як альтернатива, поліпептид ПМВ являє собою БПЛК.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, є поліпептидом М/КІЇ, і поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, є поліпептидом УУКІ!, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС або І ЕС1-подібним поліпептидом, а поліпептид ПМВ являє собою олеозин. Як альтернатива, поліпептид ПМВ являє собою БПЛК.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, є поліпептидом М/КІ1, поліпептидом І ЕС2, поліпептидом І ЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, 60 поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою
ДГАТ або ФДАТ, і поліпептид ПМВ являє собою олеозин. Як альтернатива, поліпептид ПМВ являє собою БПЛК.
У варіанті реалізації винаходу клітина містить два екзогенні полінуклеотиди, що кодують два різні поліпептиди фактору транскрипції, які підвищують експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, такі як МУКІ! і ГЕС2 або
МАПІ ТЕСІ1.
У дев'ятому аспекті даного винаходу пропонується трансгенна рослина або її частина, переважно вегетативна частина рослини, що містить перший екзогенний полінуклеотид, який кодує поліпептид фактору транскрипції, що підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, і одне або більше або все із: а) другого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид рослини, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить другого екзогенного полінуклеотиду, р) першої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди рослини, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить першої генетичної модифікації, і с) другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить другої генетичної модифікації, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в рослині.
У варіанті реалізації винаходу рослина або її частина, переважно вегетативна частина рослини, містить а) і необов'язково б) або с).
У варіанті реалізації дев'ятого аспекту винаходу рослина або її частина додатково містить одне або більше або все із:
Я) третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, е) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ, у рослині, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить третьої генетичної модифікації, і
Т) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), переважно БПЛК.
У переважному варіанті реалізації винаходу рослина або її частина, переважно вегетативна частина рослини, містить перший, другий і третій екзогенні полінуклеотиди і необов'язково третю генетичну модифікацію або четвертий екзогенний полінуклеотид.
У переважному варіанті реалізації винаходу присутність другого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид рослини, що переважно є тіоестеразою жирного ацилу, такою як поліпептид ЕАТА, разом з першим і, якщо вони присутні, третіми екзогенними полінуклеотидами підвищує загальний вміст неполярного ліпіду в частині рослини, переважно вегетативній частині рослини, такій як лист, коріння або стебло, відносно відповідної частини рослини, яка містить перший і, якщо вони присутні, треті екзогенні полінуклеотиди, але не містить другого екзогенного полінуклеотиду. Більш переважно, підвищення, забезпечуване другим екзогенним полінуклеотидом, є синергетичним. Найбільш переважно, щонайменше промотор, який спрямовує експресію першого екзогенного полінуклеотиду, є промотором, що не належить до конститутивних промоторів.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, є поліпептидом М/КІ1, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, і поліпептид, що приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, є поліпептидом
ТГД.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, є поліпептидом М/КІ1, поліпептидом І ЕС2, поліпептидом І ЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, а поліпептид, що приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), є пластидною ГФАТ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, є поліпептидом М/ВІ1, поліпептидом І ЕС2, поліпептидом І ЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид рослини, є тіоестеразою жирних кислот, переважно поліпептидом РГАТА або ЕАТВ, і поліпептид, що приймає участь в імпорті 60 жирних кислот у пластиди рослини, є поліпептидом ТГД.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, є поліпептидом М/КІ1, поліпептидом І ЕС2, поліпептидом І ЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид рослини, є тіоестеразою жирних кислот, переважно поліпептидом ЕБАТА або БАТВ, і поліпептид, що приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ),, є пластидною ГФАТ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, є поліпептидом М/КІ1, поліпептидом І ЕС2, поліпептидом І ЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, поліпептид, що приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди рослини, є поліпептидом
ТГД, ї поліпептид, що приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), є пластидною
ГФАТ.
У варіанті реалізації винаходу рослина містить два екзогенні полінуклеотиди, що кодують два різні поліпептиди фактору транскрипції, які підвищують експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, таких як МУК! і ГЕС2 або
МАПІ ТЕСІ1.
У варіантах реалізації сьомого, восьмого і дев'ятого аспектів винаходу, в яких рослина містить екзогенний полінуклеотид, що кодує тіоестеразу жирних кислот, таку як, наприклад, поліпептид ЕАТА або ЕАТВ, тіоестераза переважно є поліпептидом ЕАТА або тіоестеразою жирних кислот, окрім тіоестерази середньоланцюгових жирних кислот.
У десятому аспекті даного винаходу пропонується трансгенна рослина або її частина, переважно вегетативна частина, що містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині, переважно фактору транскрипції МУКІ, р) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, що являють собою ЛФКАТ з переважною активністю відносно жирних кислот із середньою довжиною ланцюга (С8-С14), і с) третій екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який підвищує експорт С8-С14
Зо жирних кислот із пластид рослини, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить третього екзогенного полінуклеотиду, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в рослині.
У переважному варіанті реалізації винаходу присутність третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт С8-С14 жирних кислот із пластид рослини, разом з першим і другим екзогенними полінуклеотидами, підвищує загальний вміст
СЛЖК в частині рослини, переважно вегетативній частині рослини, такій як лист, коріння або стебло, відносно відповідної частини рослини, яка містить перший і другий екзогенні полінуклеотиди, але не містить третього екзогенного полінуклеотиду. Більш переважно, підвищення, забезпечуване третім екзогенним полінуклеотидом, є синергетичним. Найбільш переважно, щонайменше промотор, який спрямовує експресію першого екзогенного полінуклеотиду, є промотором, що не належить до конститутивних промоторів.
У варіанті реалізації десятого аспекту винаходу трансгенна рослина або її частина додатково містить одне або більше або все із: а) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує додатковий поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, е) першої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ), у рослині, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить першої генетичної модифікації,
І) п'ятого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), переважно БПЛК, 9) другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди рослини, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить другої генетичної модифікації, і
І) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить третьої генетичної модифікації, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в рослині.
У варіанті реалізації десятого аспекту винаходу фактор транскрипції не є МУКІ!Т Агарідорвів
Інаійапа (ЕС ІО МО: 21 або 22), та/або рослина не є М. репіпатіапа.
У варіанті реалізації десятого аспекту винаходу екзогенний полінуклеотид, що кодує ЛФКАТ, містить амінокислоти, послідовність яких наведена в 5ЕО ІЮО МО: 200, або їх біологічно активний фрагмент або поліпептид ЛФКАТ, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною їм.
У варіанті реалізації десятого аспекту винаходу один або більше або всі із промоторів експресуються у вегетативній частині з вищими рівнями, ніж у насінні рослини, переважно включаючи щонайменше промотор, який єкспресує перший екзогенний полінуклеотид.
У варіанті реалізації десятого аспекту винаходу жирна кислота з середньою довжиною ланцюга є щонайменше міристиновою кислотою (С14:0). У переважному варіанті реалізації винаходу вміст міристинової кислоти в частині рослини, переважно вегетативній частині рослини, становить щонайменше близько 895, щонайменше близько 1095, щонайменше близько 11 95, щонайменше близько 12 95, щонайменше близько 15 9565, щонайменше близько 956, щонайменше близько 25 95, від 8 95 до 25 95, від 8 95 до 20 95, від 10 95 до 25 95, від 11 95 до 25 9б, від близько 15 95 до 25 95, від близько 20 95 до 25 95 (мас, в перерахунку на суху масу).
У варіантах реалізації шостого, сьомого, восьмого, дев'ятого і десятого аспектів винаходу рослина переважно росте на грунті або була вирощена на грунті, з подальшим збиранням урожаю частини рослини, переважно вегетативній частині рослини, причому частина рослини 20 містить щонайменше 8 95 мас. ТАГ (95 від сухої маси), наприклад, від 8 95 до 75 95 або від 8 95 до 30 95. Більш переважно, вміст ТАГ становить щонайменше 10 95, наприклад, від 10 95 до 75 95 або від 10 95 до 30 95. Переважно, вказані рівні ТАГ присутні у вегетативній частині до або під час стадії цвітіння або до стадії зав'язування насіння в ході розвитку рослини. У вказаних варіантах реалізації винаходу співвідношення вмісту ТАГ у листі до вмісту ТАГ у стеблах рослини переважно становить від 1:1 до 10:1, та/або співвідношення є підвищеним, у порівнянні з відповідною клітиною, що містить перший і другий екзогенні полінуклеотиди, але не містить першої генетичної модифікації.
У варіантах реалізації шостого, сьомого, восьмого, дев'ятого і десятого аспектів винаходу рослина або її частина переважно містить екзогенний полінуклеотид, що кодує ДГАТ, і
Зо генетичну модифікацію, що пригнічує продукування ендогенної ліпази 5ОРІ1. У переважному варіанті реалізації винаходу рослина або її частина не містить екзогенного полінуклеотиду, що кодує ФДАТ, та/(або рослина не є рослиною Місоїйапа репінпатіапа. Найбільш переважно, щонайменше один з екзогенних полінуклеотидів в рослині або її частині експресується промотором, що не є конститутивним промотором, наприклад, таким як промотор, що переважно експресується у зелених тканинах або стеблах рослини або який регулюється в ході старіння.
В одинадцятому аспекті даного винаходу пропонується рослина, що містить вегетативну частину, або її вегетативна частина, причому загальний вміст неполярного ліпіду у вегетативній частині становить щонайменше близько 1895, щонайменше близько 2095, щонайменше близько 25 95, щонайменше близько 30 95, щонайменше близько 35 96, щонайменше близько 40 95, щонайменше близько 4595, щонайменше близько 50 9565, щонайменше близько 55 95, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 18 95 до 7595, від близько 2095 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 7595, від близько 6095 до 7595 або від близько 2595 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), і, при цьому, неполярний ліпід містить щонайменше 90 95 триацилгліцеролів (ТАГ).
У переважних варіантах реалізації винаходу вегетативна частина рослини відрізняється ознаками, описаними у сьомому, восьмому, дев'ятому і десятому аспектах. Рослина переважно є рослиною 18:3.
У варіанті реалізації згаданих вище аспектів винаходу клітину рослини або частину рослини обробляють таким чином, що вона стає нездатною розмножуватися або дати початок живій рослині, тобто її вбивають. Наприклад, клітину рослини або частину рослини висушують та/або перемелюють.
У дванадцятому аспекті даного винаходу пропонується рослина, що містить вегетативну частину, або її вегетативна частина, причому вміст ТАГ у вегетативній частині становить щонайменше близько 18595, щонайменше близько 2095, щонайменше близько 25 95, щонайменше близько 3095, щонайменше близько 3595, щонайменше близько 40 95, щонайменше близько 45595, щонайменше близько 5095, щонайменше близько 55 95, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 18 95 до 60 7595, від близько 2095 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 7595, від близько 6095 до 7595 або від близько 2595 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), і, при цьому, неполярний ліпід містить щонайменше 90 95 триацилгліцеролів (ТАГ). Рослина переважно є рослиною 18:3.
У тринадцятому аспекті даного винаходу пропонується рослина, що містить вегетативну частину, або її вегетативна частина, причому загальний вміст неполярного ліпіду у вегетативній частині становить щонайменше 8 95, щонайменше близько 10 95, щонайменше близько 11 95, щонайменше близько 1295, щонайменше близько 1595, щонайменше близько 20 95, щонайменше близько 25595, щонайменше близько 3095, щонайменше близько 35 95, щонайменше близько 4095, щонайменше близько 4595, щонайменше близько 50 95, щонайменше близько 55595, щонайменше близько 6095, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 8 95 до 75 90, від 10 95 до 75 95, від 11 95 до 75 95, від близько 1595 до 75 95, від близько 20 95 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 75 95, від близько 60 95 до 75 95, або від близько 25 95 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), і, при цьому, неполярний ліпід містить щонайменше 90 95 триацилгліцеролів (ТАГ), при тому, що рослина є рослиною 16:3 або її вегетативною частиною.
У чотирнадцятому аспекті даного винаходу пропонується рослина, що містить вегетативну частину, або її вегетативна частина, причому вміст ТАГ у вегетативній частині становить щонайменше 895, щонайменше близько 1095, щонайменше близько 11 95, щонайменше близько 12 95, щонайменше близько 15 95, щонайменше близько 20 9565, щонайменше близько 2595, щонайменше близько 30 95, щонайменше близько 35 9565, щонайменше близько 40 95, щонайменше близько 45595, щонайменше близько 5095, щонайменше близько 55 95, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 8 95 до 75 905, від 10 95 до 75 95, від 11 95 до 75 95, від близько 15 95 до 75 95, від близько 20 95 до 75 Об, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 75 95, від близько 60 95 до 7595, або від близько 2595 до 5095 (мас., в перерахунку на суху масу), і, при цьому, неполярний ліпід містить щонайменше 90 95 триацилгліцеролів (ТАГ), при тому, що рослина є рослиною 16:3 або її вегетативною частиною.
У варіанті реалізації винаходу клітина за винаходом (включаючи другий, третій, четвертий або п'ятий аспекти) являє собою клітина наступних видів або родів, або рослину або її частину за винаходом (включаючи шостий, сьомий. Восьмий, дев'ятий, десятий, одинадцятий, дванадцятий, тринадцятий і чотирнадцятий аспекти) являє собою Асгосотіа асціеаїа (макаубська пальма), Агабідорвзі5 ІПаїїапа, Агасіпіз пуродаєа (арахіс), Авігосагупт тигитиги (мурумуру), Абігосагушт миЇдаге (тукума), АйНаІеа дегаепвзі5 (аталія), АйНаеа Питіїв5 (американська масляна пальма), Айцаїєа оїейега (андайя), АНаїеа рпаїегага (урікурі), АЧаїєа зресіоза (бабасу), Амепа заїїма (овес), Веїа миЇдагі5 (цукровий буряк), види Вгазвзіса, наприклад,
Вгазвіса сагіпаїа, Вгазвзіса |ппсєа, Вгазвзіса паробгазвіса, Вгазвіса париз (рапс), Сатеїїйпа займа (несправжній льон), Саппарі5 5айма (конопля), Сапйпатив (іпсіогіи5 (сафлор красильний),
Сагуосаг Бргазійепбое (пекві), Сосо5 писіїега (кокосовий горіх), Статре абузвзіпіса (абісинська капуста), Сиситів тео (диня), ЕІаеі5 диїпееп5із (африканська пальма), Сіусіпе тах (соя),
Сбовззурішт Пігзцішт (бавовник), види Неїїапіпйих наприклад, Неїїапійи5 аппии5 (соняшник),
Ногаєит уцідаге (ячмінь), ЧУаїгорпа сигсаз (лікувальний горіх), Уоаппезвіа ргіпсерз (ліщина арара), види Гетпа (ряска), такі як Їетпа аєдишіпосійаїй5, Гетпа аізрегта, Гетпа есциадогієпвів5, етпа дібба (ряска горбата), Гетпа іаропіса, Гетпа тіпог, Гетпа тіпша, Гетпа орзосига, Гетпа рашмсісовіаїа, І етпа регризіПа, І етпа іепега, І етпа ігізиїса, І етпа ішпіопітега, І етпа маїдіміапа,
І етпа ушппдепвів, І ісапіа гідіча (ойтика), Гіпит изйаїіззітит (льон), Гиріпи5 апдизійоїи5 (люпін),
Машгйіа ПЯехиоза (пальма буриті), Махітійапа тагіра (пальма інайя), види Мізсапійив5, такі як
Мізсапіпи5 х дідапієи5 і Мізсапіпи5 5іпепв5і5, види Місойапа (тютюн), такі як Місоїйапа їарбасит або Місоїйапа репіпатіапа, Оєпосагрих5 расаба (бакаба-до-азейте), Оепосагри5 Баїаца (патайя),
Оепосагризх дівііспи5 (бакаба-де-лек), види Огула (рис), такі як Огуа заїїма і Огула діареїтіта,
Рапісит мігдааїшт (просо прутоподібне), Рагадиеїйа рагаепзіз (марь), Регхеа атепсапа (авокадо), Ропдатіа ріппаїа (індійський бук), Рорши5 ігіспосагра, Кісіпиє соттипіє (рицина звичайна), види засспагит (цукрова тростина), Зезатит іпаісут (кунжут), ЗоїЇапит їшрегозит (картопля), види Зогапит например, Зогупит бБісоїог, Зогоапит миЇдаге, Тпеобгота дгапайогит (какао), види Тгіїтоїйшт, Т/ййгіпах Бгабзйепвіє (бразильська голчаста пальма), види Тгйісит (пшениця), Ттійсит аевзіїмит і 7еа тауз (кукурудза).
У п'ятнадцятому аспекті даного винаходу пропонується рослина картоплі або її частина, переважно бульба, діаметр якої становить щонайменше 2 см, і вміст ТАГ у якій становить щонайменше 0,595, в перерахунку на суху масу, та/або загальний вміст жирних кислот становить щонайменше 1 95, переважно щонайменше 1,595 або щонайменше 2,095, в бо перерахунку на суху масу. Картопляна бульба переважно містить підвищений рівень мононенасичених жирних кислот (МНЖК) та/або знижений рівень поліненасичених жирних кислот (ПНЖК), як у загальному вмісті жирних кислот, так і у фракції ТАГ загального вмісту жирних кислот, наприклад, підвищений рівень олеїнової кислоти і знижений рівень АЛК, в порівнянні з відповідною картопляною бульбою, що не містить генетичних модифікацій та/або екзогенного(их) полінуклеотиду(ів). Переважно, рівень АЛК у загальному вмісті жирних кислот бульби є зниженим до менш ніж 10 95, та/або рівень олеїнової кислоти в загальному вмісті жирних кислот підвищений щонайменше до 5 95, переважно щонайменше до 10 95 або, більш переважно, щонайменше до 15 95, в порівнянні з відповідною картопляною бульбою, що не містить генетичних модифікацій та/або екзогенного(их) полінуклеотиду(ів). Крім того, у варіанті реалізації винаходу рівень пальмітинової кислоти в загальному вмісті жирних кислот бульби є підвищеним, та/або рівні стеаринової кислоти (18:0) є зниженими у загальному вмісті жирних кислот бульби, в порівнянні з відповідною картопляною бульбою, що не містить генетичних модифікацій та/або екзогенного(их) полінуклеотиду(ів). У варіанті реалізації винаходу вміст крохмалю в бульбі становить від близько 90 95 до 100 95 мас., в порівнянні з бульбою дикого типу, при вирощуванні в однакових умовах.
У варіанті реалізації винаходу рослина картоплі або її частина за винаходом, переважно бульба, містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот в бульбі, і р) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в бульбі у процесі росту рослини картоплі.
У переважному варіанті реалізації винаходу картопляна бульба додатково містить одне або більше або все із: с) третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), переважно БПЛК, а) першої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність
Зо поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ, в бульбі, в порівнянні з відповідною бульбою, що не містить першої генетичної модифікації, наприклад, де поліпептид є
ЗОРІ, е) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид бульби, в порівнянні з відповідною бульбою, що не містить четвертого екзогенного полінуклеотиду,
У другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди бульби, в порівнянні з відповідною бульбою, що не містить другої генетичної модифікації, і 9) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластиди бульби, в порівнянні з відповідною бульбою, що не містить третьої генетичної модифікації.
У подальших варіантах реалізації винаходу додаткові генетичні модифікації в бульбі є такими, як визначено в контексті клітини або рослини за винаходом.
У шістнадцятому аспекті даного винаходу пропонується рослина сорго або цукрової тростини або її частина, переважно стебло або лист, загальний вміст жирних кислот у якій становить щонайменше 6 95 або щонайменше 8 95, в перерахунку на суху масу, та/або вміст
ТАГ у стеблі становить щонайменше 2 95 або щонайменше 3 95, в перерахунку на суху масу, та/або вміст ТАГ є підвищеним щонайменше у 50 разів у стеблі та/або щонайменше у 100 разів у листі, в перерахунку на масу. У варіантах реалізації винаходу рослина сорго або цукрової тростини або її частина, переважно стебло або лист, відрізняється ознаками, визначеними у контексті клітини або рослини або її частини за винаходом.
У сімнадцятому аспекті даного винаходу пропонується рослина сорго або цукрової тростини або її частина, переважно стебло або лист, яка містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині або її частині, і р) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в рослині або її бо частині в процесі росту рослини.
Переважно, промотор, що спрямовує експресію щонайменше першого екзогенного полінуклеотиду, являє собою промотор, що не є промотором убіхітину рису (Кибіз). Більш переважно, промотор не є промотором убіхітину або будь-яким іншим конститутивним промотором. Переважно, перший і другий екзогенні полінуклеотиди та їх відповідні промотори об'єднані в одній генетичній конструкції, що інтегрована в геном рослини.
У варіанті реалізації винаходу вміст цукру в стеблі цукрової тростини становить від близько 7096 до 10095 мас. відносно стебла цукрової тростини дикого типу, при вирощуванні в однакових умовах. Як альтернатива, вміст цукру становить від 50 95 до 70 Об.
У варіанті реалізації винаходу рослина сорго або цукрової тростини або її частина, переважно стебло або лист, за винаходом містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у стеблі(ах) рослини, і р) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, причому щонайменше один з екзогенних полінуклеотидів, переважно щонайменше перший екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, який переважно експресується у стеблі(ах) відносно листя в процесі росту рослини.
У варіанті реалізації винаходу рослина сорго або цукрової тростини або її частина за винаходом додатково містить одне або більше або все із: с) третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), переважно БПЛК, а) першої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ) у рослині або її частині, в порівнянні з відповідною рослиною або її частиною, що не містить першої генетичної модифікації, е) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид рослини або її частини, в порівнянні з відповідною рослиною або її частиною, що не містить четвертого екзогенного полінуклеотиду,
Зо 7 другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди рослини або її частини, в порівнянні з відповідною рослиною або її частиною, що не містить другої генетичної модифікації, і 9) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластидах рослини або її частини, в порівнянні з відповідною рослиною або її частиною, що не містить третьої генетичної модифікації.
Рослина сорго або цукрової тростини або його частина за винаходом переважно містить підвищений рівень мононенасичених жирних кислот (МНЖК) та/або знижений рівень поліненасичених жирних кислот (ПНЖК), як у загальному вмісті жирних кислот, так і у фракції
ТАГ загального вмісту жирних кислот, наприклад, підвищений рівень олеїнової кислоти і знижений рівень АЛК, в порівнянні з відповідною рослиною або її частиною, що не містить генетичних модифікацій та/або екзогенного(их) полінуклеотиду(ів).
Переважно, рівень АЛК у загальному вмісті жирних кислот становить менш ніж 10 95, та/або рівень олеїнової кислоти в загальному вмісті жирних кислот становить щонайменше 5 95, переважно щонайменше 1095 або, більш переважно, щонайменше 1595, в порівнянні з відповідною рослиною або її частиною, що не містить генетичних модифікацій та/або екзогенного(их) полінуклеотиду(ів).
У подальших варіантах реалізації винаходу додаткові генетичні модифікації в рослині сорго або цукрової тростини або її частини є такими, як визначено в контексті клітини або рослини за винаходом.
У вісімнадцятому аспекті даного винаходу пропонується трансгенна однодольна рослина або її частина, переважно лист, насіння, стебло, коріння або ендосперм, загальний вміст жирних кислот або вміст ТАГ у якій підвищено щонайменше у 5 разів, в перерахунку на масу, в порівнянні з відповідною нетрансгенною однодольною рослиною або її частиною. Як альтернатива, у винаході пропонується трансгенна однодольна рослина, вміст ТАГ в ендоспермі якої становить щонайменше 2,0 95, переважно щонайменше 3 95, більш переважно, щонайменше 4 95 або щонайменше 5 95, мас., або частина рослини, переважно лист, стебло, коріння, зерно або ендосперм. У варіанті реалізації винаходу вміст ТАГ в ендоспермі становить бо щонайменше 2 9о, що є щонайменше у 5 разів вищим, ніж у відповідному нетрансгенному ендоспермі. Переважно, рослина володіє повною чоловічою і жіночою фертильністю, її пилок по суті є на 100 95 життєздатним, і швидкість проростання його насіння становить від 70 95 до 100 95 відносно відповідного насіння дикого типу. У варіанті реалізації винаходу трансгенна рослина є рослиною-нащадком, щонайменше через два покоління від початкової трансгенної рослини пшениці, і переважно є гомозиготною по трансгенах. У варіантах реалізації винаходу однодольна рослина або її частина, переважно лист, стебло, насіння або ендосперм, додатково відрізняється однією або більше ознаками, визначеними у контексті клітини або рослини за винаходом.
У дев'ятнадцятому аспекті даного винаходу пропонується однодольна рослина або її частина, переважно лист, зерно, стебло або ендосперм, яка містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині або її частині, і р) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в рослині або її частині в процесі росту рослини.
Переважно, промотор, що спрямовує експресію щонайменше першого екзогенного полінуклеотиду, являє собою промотор, що не є конститутивним промотором.
У варіанті реалізації винаходу вміст крохмалю у насінні однодольної рослини за винаходом становить від близько 70 95 до 100 925 мас. відносно насіння дикого типу, якщо рослини, від яких вони одержані, вирощені в однакових умовах. Переважними однодольними рослинами в згаданих вище двох аспектах є пшениця, рис, сорго і кукурудза (маїс).
У варіанті реалізації винаходу однодольна рослина або її частина, переважно лист, зерно або ендосперм, за винаходом містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот в ендоспермі рослини, і р) другий екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі
Ко) одного або більше неполярних ліпідів, причому щонайменше один з екзогенних полінуклеотидів, переважно щонайменше перший екзогенний полінуклеотид, функціонально пов'язаний із промотором, який в процесі росту рослини експресується в ендоспермі з вищими рівнями, ніж у листі.
У переважному варіанті реалізації винаходу однодольна рослина або її частина додатково містить одне або більше або все із: с) третього екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), переважно БПЛК, а) першої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ) у рослині або її частині, в порівнянні з відповідною рослиною або її частиною, що не містить першої генетичної модифікації, е) четвертого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид рослини або її частини, в порівнянні з відповідною рослиною або її частиною, що не містить четвертого екзогенного полінуклеотиду, 7 другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди рослини або її частини, в порівнянні з відповідною рослиною або її частиною, що не містить другої генетичної модифікації, і 9) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластидах рослини або її частини, в порівнянні з відповідною рослиною або її частиною, що не містить третьої генетичної модифікації.
У варіанті реалізації винаходу однодольна рослина володіє ознаками а), Б), одним або обома із с) і є), і необов'язково однією із с), Її) і д).
Однодольна рослина або її частина, переважно лист, насіння, стебло або ендосперм за винаходом переважно містить підвищений рівень мононенасичених жирних кислот (МНЖК) та/або знижений рівень поліненасичених жирних кислот (ПНЖК), як у загальному вмісті жирних кислот, так і у фракції ТАГ загального вмісту жирних кислот, наприклад, підвищений рівень олеїнової кислоти і знижений рівень ЛК (18:2), в порівнянні з відповідною рослиною або її бо частиною, що не містить генетичних модифікацій та/або екзогенного(их) полінуклеотиду(ів).
Переважно, рівень лінолевої кислоти (ЛК, 18:2) в загальному вмісті жирних кислот насіння або ендосперму є зниженим щонайменше на 5 95, та/або рівень олеїнової кислоти в загальному вмісті жирних кислот є підвищеним щонайменше на 5 95 відносно відповідної рослини дикого типу або її частини, переважно щонайменше на 10 95 або, більш переважно, щонайменше на 1595, у порівнянні з відповідною рослиною або її частиною, що не містить генетичних модифікацій та/або екзогенного(их) полінуклеотиду(ів).
Наступні варіанти реалізації винаходу застосовуються до кожної з рослин та їх частин відповідно до п'ятнадцятого, шістнадцятого, сімнадцятого, вісімнадцятого і дев'ятнадцятого аспектів.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ, і поліпептид ПМВ являє собою олеозин. Як альтернатива, поліпептид ПМВ являє собою БПЛК.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині або її частині, є поліпептидом МУКІ!, і поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині або її частині, є поліпептидом М/КІ!, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, і поліпептид ПМВ являє собою олеозин. Як альтернатива, поліпептид ПМВ являє собою БПЛК.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині або її частині, є поліпептидом М/КІ!, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС1 або ГЕС1-подібним поліпептидом, поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ, і поліпептид ПМВ являє собою олеозин. Як альтернатива, поліпептид ПМВ являє собою БПЛК.
У варіанті реалізації винаходу рослина або її частина містить два екзогенні полінуклеотиди, що кодують два різні поліпептиди фактору транскрипції, які підвищують експресію одного або
Зо більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, наприклад, УУКІ! і
ГЕС2 або МКП ії І ЕС1.
У кожному з варіантів реалізації клітин, рослин і їх частин за винаходом (включаючи другий, третій, четвертий, пятий, шостий, сьомий, восьмий, дев'ятий, десятий, одинадцятий, дванадцятий, тринадцятий, чотирнадцятий, п'ятнадцятий, шістнадцятий, сімнадцятий, вісімнадцятий і дев'ятнадцятий аспекти), переважно поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом УМКІ1, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС1 або І ЕС1-подібним поліпептидом, поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ, і поліпептид, що приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ), у клітині, є ліпазою 5ОРІ1.
У кожному з варіантів реалізації клітин, рослин і їх частин за винаходом (включаючи другий, третій, п'ятий, шостий, сьомий, восьмий, десятий, одинадцятий, дванадцятий, тринадцятий, чотирнадцятий, п'ятнадцятий, шістнадцятий, сімнадцятий, вісімнадцятий і дев'ятнадцятий аспекти, але виключаючи п'ятий і десятий аспекти) переважно поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є поліпептидом МУ/КІ!1, поліпептидом ГЕС2, поліпептидом ГЕС1 або І ЕС1- подібним поліпептидом, поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ або ФДАТ, і поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, є тіоестеразою жирних кислот, переважно поліпептидом ЕАТА або
ЕАТВ, більш переважно, поліпептидом ЕРАТА або тіоестеразою жирних кислот, окрім тіоестерази середньоланцюгових жирних кислот.
У кожному із згаданих вище варіантів реалізації клітин, рослин і їх частин за винаходом (включаючи другий, третій, четвертий, п'ятий, шостий, сьомий, восьмий, дев'ятий, десятий, одинадцятий, дванадцятий, тринадцятий, чотирнадцятий, п'ятнадцятий, шістнадцятий, сімнадцятий, вісімнадцятий і дев'ятнадцятий аспекти) переважно поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині або її частині, є комбінацією щонайменше двох поліпептидів, переважно поліпептиду МУКІЇ і поліпептиду ГЕС2. Більш переважно, вказані щонайменше два поліпептиди фактору транскрипції експресуються різними промоторами. 60 Найбільш переважно, екзогенні полінуклеотиди, що кодують вказані щонайменше два поліпептиди, об'єднані на єдиній генетичній конструкції, інтегрованій в геном клітини або рослини.
У кожному із згаданих вище варіантів реалізації винаходу, в яких рослина є дводольною рослиною, вказаний фактор транскрипції може бути фактором транскрипції однодольної рослини. З другого боку, якщо рослина є однодольною рослиною, вказаний фактор транскрипції може бути фактором транскрипції дводольної рослини. Вказаний фактор транскрипції переважно являє собою фактор транскрипції, що не є УМКІ1 А. Ійаїїапа (5ЕО ІЮ МО: 21 або 22).
У кожному із згаданих вище варіантів реалізації винаходу рослина переважно є трансгенною рослиною-нащадком, щонайменше через два покоління від початкової трансгенної рослини, і переважно є гомозиготною за трансгенами.
У подальших варіантах реалізації винаходу додаткові генетичні модифікації в рослині або її частині є такими, як визначено в контексті клітини за винаходом.
У варіанті реалізації винаходу рослина або її частина за винаходом (включаючи шостий, сьомий, восьмий, дев'ятий, десятий, одинадцятий, дванадцятий, тринадцятий, чотирнадцятий, п'ятнадцятий, шістнадцятий, сімнадцятий, вісімнадцятий і дев'ятнадцятий аспекти) володіє однією або більше або всіма із наступних ознак (якщо це доречно): ї) рослина містить частину, переважно вегетативну частину, в якій синтез загальних жирних кислот є підвищеним відносно відповідної частини, що не містить першого екзогенного полінуклеотиду, або катаболізм загальних жирних кислот є зниженим відносно відповідної частини, що не містить першого екзогенного полінуклеотиду, або присутні обидва ці явища, таким чином, що вона містить підвищений рівень загальних жирних кислот відносно відповідної частини, що не містить першого екзогенного полінуклеотиду, і) рослина містить частину, переважно вегетативну частину, в якій підвищена експресія та/або активність ацилтрансферази ацилов жирних кислот, що каталізує синтез ТАГ, ДАГ або
МАГ, переважно ТАГ, відносно відповідної частини, що містить перший екзогенний полінуклеотид і не містить екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, ії) рослина містить частину, переважно вегетативну частину, в якій знижене продукування лізофосфатидинової кислоти (ЛФК) із ацил-АПБ і ЗР у пластидах відносно відповідної частини,
Зо яка містить перший екзогенний полінуклеотид і не містить генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластидах частині рослини, ім) рослина містить частину, переважно вегетативну частину, яка містить модифіковане співвідношення С16:3 і С18:3 жирних кислот у загальному вмісті жирних кислот та/або вмісті галактоліпідів відносно відповідної частини, що не містить екзогенного(их) полінуклеотиду(ів) та/або генетичної(їх) модифікації(й), переважно співвідношення є зниженим, м) загальний вміст неполярного ліпіду у вегетативній частині рослини становить щонайменше близько 8595, щонайменше близько 1095, щонайменше близько 11 95, щонайменше близько 1295, щонайменше близько 1595, щонайменше близько 20 95, щонайменше близько 25595, щонайменше близько 3095, щонайменше близько 35 95, щонайменше близько 4095, щонайменше близько 4595, щонайменше близько 50 95, щонайменше близько 55595, щонайменше близько 6095, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 8 95 до 75 90, від 10 95 до 75 95, від 11 95 до 75 95, від близько 1595 до 75 95, від близько 20 95 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 75 95, від близько 60 95 до 75 95, або від близько 25 95 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), переважно до цвітіння, мі) вміст ТАГ у вегетативній частині рослини становить щонайменше близько 8 95, щонайменше близько 1095, щонайменше близько 1195, щонайменше близько 12 95, щонайменше близько 15595, щонайменше близько 2095, щонайменше близько 25 95,
БО щонайменше близько 3095, щонайменше близько 3595, щонайменше близько 40 95, щонайменше близько 45595, щонайменше близько 5095, щонайменше близько 55 95, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 8 95 до 75 905, від 10 95 до 75 95, від 11 95 до 75 95, від близько 15 95 до 75 95, від близько 20 95 до 75 Об, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 75 95, від близько 60 95 до 75 95, або від близько 2595 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), переважно до цвітіння, мії) поліпептид(и) фактору транскрипції вибраний(ї) з групи, що складається з МУКІ!, ГЕС,
ГЕС1Т-подібного, ГЕС2, ВВМ, ГОБ5З, АВІЗ, АВІЯ4, АВІ5, бога і ой 1, переважно МУКІ!, І ЕС1 або
ГЕС2, або з групи, що складається із МУВ7З3, Б2ІР53, АС 15, МУВ115, МУВ118, ТАММЕЇ, УМОБ, 60 СЕКга1, сЕнга? і РНК,
мії) олеїнова кислота становить щонайменше 20 95 (моль 95), щонайменше 22 9о (моль об), щонайменше 30 95 (моль 95), щонайменше 40 95 (моль 95), щонайменше 50 95 (моль 95), або щонайменше 60 95 (моль 95), переважно близько 65 95 (моль 95) або від 20 95 до близько 65 95 від загального вмісту жирних кислот у рослині або її частині, їх) неполярний ліпід у рослині або її частині, переважно вегетативній частині, містить підвищений рівень однієї або більше жирних кислот, які містять гідроксильну групу, епоксигрупу, циклопропанову групу, подвійний карбон-карбоновій зв'язок, потрійний карбон-карбоновій зв'язок, кон'юговані подвійні зв'язки, розгалужений ланцюг, наприклад, метильований або гідроксильований розгалужений ланцюг, або комбінацію двох або більше із цього, або будь-які дві, три, чотири, п'ять або шість із вищезазначених груп, зв'язків або розгалужених ланцюгів, х) неполярний ліпід у рослині або її частині, переважно вегетативній частині, містить одну або більше поліненасичених жирних кислот, вибраних з ейкозадієнової кислоти (ЕДК), арахідонової кислоти (АРК), стеаридонової кислоти (СДК), ейкозатриєнової кислоти (ЕТРК), ейкозатетраєнової кислоти (ЕТК), ейкозапентаєнової кислоти (ЕПК), докозапентаєнової кислоти (ДПК), докозагексаєнової кислоти (ДГК) або комбінації двох або більше із них, хі) частина є вегетативною частиною рослини, такою як лист або стебло або його частина, хії) один або більше або всі з промоторів вибрані з промотору, що не є конститутивним промотором, переважно тканиноспецифічного промотору, такого як специфічний для листя та/або стебел промотор, регульованого розвитком промотору, такого як специфічний для старіння промотор, наприклад, промотор ЗАСІ12, індуцибельного промотору або регульованого циркадним ритмом промотору, причому щонайменше один із промоторів, функціонально пов'язаних з екзогенним полінуклеотидом, який кодує поліпептид фактору транскрипції, переважно є промотором, що не належить до конститутивних промоторів, хії) рослина або її частина, переважно вегетативна частина, містить, в числі загальних жирних кислот, середньоланцюгові жирні кислоти, переважно С12:0, С14:0 або обидві, на рівні щонайменше 5595 від загального вмісту жирних кислот, і необов'язково екзогенний полінуклеотид, що кодує ЛФКАТ, яка виявляє переважну активність відносно жирних кислот із середньою довжиною ланцюга (С8-С14), переважно С12:0 або С14:0, хім) рослина або її частина, переважно вегетативна частина, містить, в числі загальних
Зо жирних кислот, рівень олеїнової кислоти та/або рівень пальмітинової кислоти, щонайменше на 290 вищий, ніж у відповідній рослині або її частині, що не містить екзогенного(их) полінуклеотиду(ів) та/або генетичної(их) модифікації(й), та/або рівень а-ліноленової кислоти (АЛК) та/або рівень лінолевої кислоти, щонайменше на 2 95 нижче, ніж у відповідній клітині, що не містить екзогенного(их) полінуклеотиду(ів) та/або генетичної(їх) модифікації(й), хм) неполярний ліпід у рослині або її частині, переважно вегетативній частині, містить модифікований рівень загальних стеролів, переважно вільних (неестерифікованих) стеролів, стероїльних естерів, стероїлглікозидів, відносно неполярного ліпіду у відповідній клітині, що не містить екзогенного(их) полінуклеотиду(ів) та/або генетичної(їх) модифікації(й), хмі) неполярний ліпід у рослині або її частині містить віск та/або естери воску, хмії) рослина або її частина, переважно вегетативна частина, є членом популяції або колекції кількістю щонайменше близько 1000 таких рослин або їх частин, хмії) рослина містить екзогенний полінуклеотид, що кодує супресор сайленсингу, причому екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в рослині, хіх) рівень одного або більше неполярних ліпідів та/або загальний вміст неполярного ліпіду в рослині або її частині, переважно вегетативній частині рослини, є щонайменше на 2 95 мас. вищим, ніж у відповідній клітині, що містить екзогенні полінуклеотиди, які кодують МУК
Агарідровзів Іпаійапа (ЗЕО ІЮ МО: 21) ії ДГАТІ1 Агабрідорзів ІНаіапа (5ЕО ІО МО. 1), і хх) загальний вміст поліненасичених жирних кислот (ПНЖК) є зниженим відносно загального вмісту ПНЖК у відповідній клітині, що не містить екзогенного(их) полінуклеотиду(ів) та/або генетичної(їх) модифікації(й). ххі) частина рослини є бульбою картоплі (боїапит їшбего5ит), цукрового буряка (Веїа мицЇдагів), стеблом цукрової тростини (вид басспагит) або сорго (Богапит бБісоог) насінням однодольної рослини з підвищеним загальним вмістом жирних кислот в ендоспермі, наприклад, зерном пшениці (Т/йісит аєвіїмит) або зернятком кукурудзи (7єа таувз), листом виду Місоїапа або насінням боба з підвищеним загальним вмістом жирних кислот, наприклад, насінням виду
Вгазвіса або насінням сої (Спусіпе тах), ххії) якщо частина рослини є насінням, то насіння проростає істотною мірою з такою ж швидкістю, як і відповідне насіння дикого типу, або при висіванні в грунт дає рослину, насіння якого проростає істотною мірою з такою ж швидкістю відносно відповідного насіння дикого типу, і ххії) рослина є водоростевою рослиною, наприклад з числа діатомових (бациляріофітів), зелених водоростей (хлорофітів), зелено-блакитних водоростей (ціанофітів), золотисто- коричневих водоростей (хризофітів), гаптофітів, коричневих водоростей або водоростей гетероконтів.
У згаданих вище варіантах реалізації винаходу переважною частиною рослини є фрагмент листа із площею поверхні щонайменше 1 см або фрагмент стебла завдовжки щонайменше 1 см.
У варіанті реалізації згаданих вище аспектів винаходу рослину або частину рослини обробляють таким чином, що вона стає нездатною розмножуватися або дати початок живій рослині, тобто її вбивають. Наприклад, рослину або частину рослини висушують та/або перемелюють.
У згаданих вище варіантах реалізації винаходу загальний вміст неполярного ліпіду в частині рослини переважно є щонайменше на 3 95 вищим, більш переважно, щонайменше на 5 95 вищим, ніж загальний вміст неполярного ліпіду у відповідній частині рослини, що трансформована генами, які кодують МУКІЇ і ДГАТ, але не містить інших екзогенних полінуклеотидів і генетичних модифікацій, описаних у даному документі для згаданих вище аспектів. Більш переважно, вказаний ступінь підвищення відноситься до стебла або коріння рослини.
У варіанті реалізації винаходу введення одного або більше екзогенних полінуклеотидів або генетичних модифікацій, переважно екзогенного полінуклеотиду, що кодує ПМВ або тіоестеразу жирного ацилу, або генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ, у клітині, більш переважно, екзогенного полінуклеотиду, що кодує тіоестеразу ЕАТА або БПЛК або знижує експресію ендогенної ліпази ТАГ, такої як ліпаза ТАГ 5ОР', в клітині, приводить до синергетичного підвищення загального вмісту неполярного ліпіду в клітині, при додаванні до пари трансгенів МУ/КІ! і ДГАТ, особливо перед цвітінням рослини і, навіть більш конкретно, у стеблах та/або корінні рослини. Наприклад, див. Приклади 8, 11 і 15. У переважному варіанті
Зо реалізації винаходу підвищення вмісту ТАГ у клітині, розташованій у стеблі або корінні рослини, щонайменше у 2 рази, більш переважне, щонайменше у З рази вище, ніж у відповідній клітини, що трансформована генами, які кодують МУК! і ДГАТІ, але не містить тіоестерази ГАТА, БПЛК, і генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ) у рослині. Найбільш переважно, щонайменше промотор, який спрямовує експресію першого екзогенного полінуклеотиду, є промотором, що не належить до конститутивних промоторів.
У варіантах реалізації шостого, сьомого, восьмого, дев'ятого, десятого, одинадцятого, дванадцятого, тринадцятого, чотирнадцятого, шістнадцятого, вісімнадцятого і дев'ятнадцятого аспектів винаходу рослина або її частина переважно є фенотипово нормальною в тому значенні, що її здатність рости і відтворюватися істотною мірою не є зниженою, в порівнянні з немодифікованою рослиною або її частиною. Переважно біомаса, швидкість росту, швидкість проростання, розмір запасаючого органу, розмір насіння та/або кількість утвореного життєздатного насіння становить не менше ніж 90 95 від показників відповідної рослини дикого типу, при вирощуванні в ідентичних умовах. У варіанті реалізації винаходу рослина володіє чоловічою і жіночою фертильністю тією ж мірою, що і відповідна рослина дикого типу, а її пилок (якщо він утворюється) є так само життєздатним, як і пилок відповідної рослини дикого типу, переважно життєздатність становить близько 100 95. У варіанті реалізації винаходу рослина утворює насіння, якому властива швидкість проростання щонайменше 90 95 відносно швидкості проростання відповідного насіння рослини дикого типу, якщо вид рослин утворює насіння. У варіанті реалізації винаходу висота рослини за винаходом становить щонайменше 90 95 відносно висоти відповідної рослини дикого типу, вирощеної в таких же умовах. Комбінація кожної із вказаних ознак є включеною. В альтернативному варіанті реалізації винаходу висота рослини за винаходом становить від 60 95 до 90 95 відносно висоти відповідної рослини дикого типу, вирощеної в таких же умовах. У варіанті реалізації винаходу рослина або її частина за винаходом, переважно лист рослини, не виявляє підсиленого некрозу, тобто ступінь некрозу, якщо він присутній, є таким же, який демонструє відповідна рослина дикого типу або її частина, що вирощена в таких же умовах і знаходиться на тій же стадії розвитку рослини. Дана ознака застосовується, зокрема, до рослини або її частини, що містить екзогенний полінуклеотид, який кодує тіоестеразу жирних кислот, таку як тіоестераза ЕАТВ.
Наступні варіанти реалізації винаходу застосовуються до рослини або її частини за винаходом (включаючи шостий, сьомий, восьмий, дев'ятий, десятий, одинадцятий, дванадцятий, тринадцятий, чотирнадцятий, шістнадцятий, вісімнадцятий і дев'ятнадцятий аспекти), а також до способу одержання рослини або її частини або способу їх застосування. У варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, є ацилтрансферазою ацилов жирних кислот, що приймає участь у біосинтезі
ТАГ, ДАГ або моноацилгліцеролу (МАГ, в рослині або її частині, переважно ТАГ у рослині або її частині, такою як ДГАТ, ФДАТ, ЛФКАТ, ГФАТ або МГАТ, переважно ДГАТ або ФДАТ.
У іншому варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ) у рослині або частині рослини, є ліпазою 5ОРІ, поліпептидом Саі5в8, ацил-КоА оксидазою, такою як АСХ1 або АСХ2, або поліпептидом, що приймає участь у р- окисненні жирних кислот у рослині, таким як пероксисомальний транспортер АТФ-зв'язуючої касети РХАЇТ, переважно ліпазою 5ОРІ1.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид покриття масляного включення (ПМВ) є олеозином, таким як поліолеозин або калеозин, або переважно пов'язаним з ліпідними крапельками білком (БПЛК).
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид рослини, є тіоестеразою С16 або С18 жирних кислот, такою як поліпептид ЕАТА або поліпептид
ЕАТВ, переносником жирних кислот, таким як поліпептид АВСА9У або довголанцюговою ацил-
КоА синтетазою (ДЛАС).
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди рослини, є переносником жирних кислот або його субодиницею, переважно поліпептидом ТГД, таким як поліпептид ТОО1, поліпептид Т502, поліпептид ТО0ОЗ3 або поліпептид ТО04.
У варіанті реалізації винаходу поліпептид, що приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластиді, є пластидною ГФАТ, пластидною ЛФКАТ або пластидною
ФФК.
У варіанті реалізації винаходу рослина або її частина за винаходом є рослиною 16:3 або її частиною, що містить одне або більше або все із наступного:
Зо а) екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид рослини, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить екзогенного полінуклеотиду, р) першої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди рослини, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить першої генетичної модифікації, і с) другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, в порівнянні з відповідною рослиною, що не містить другої генетичної модифікації, причому екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в рослині або її частині.
В альтернативному варіанті реалізації винаходу рослина або її частина за винаходом є рослиною 18:3 або її частиною.
У варіанті реалізації винаходу загальний вміст неполярного ліпіду у вегетативній частині рослини перед цвітінням рослини становить щонайменше близько 8 95, щонайменше близько 10 95, близько 11 95, від 8 95 до 15 95, або від 9 95 до 12 95 (мас., в перерахунку на суху масу)
У варіанті реалізації винаходу одна або більше або всі з генетичних модифікацій являють собою мутацію ендогенного гена, що частково або повністю інактивує ген, таку як точкова мутація, інсерція або делеція (або комбінація одного або більше із цього), переважно введену мутацію. Точкова мутація може бути передчасним стоп-кодоном, мутацією сайту зрощення, мутацією зсуву рамки або мутацією заміни амінокислоти, що знижує активність гена або кодованого поліпептиду. Делеція може складатися з одного або більше нуклеотидів у межах транскрибованого екзону або промотору гена, або простягатися крізь або в більше ніж один екзон, або розширюватися до делеції всього гена. Переважно делецію вводять (із застосуванням технологій 2Е, ТАГЕМ або СКІЗРК. У альтернативному варіанті реалізації винаходу одна або більше або всі генетичні модифікації являють собою екзогенний полінуклеотид, що кодує молекулу РНК, яка пригнічує експресію ендогенного гена, причому екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в рослині або її частині.
У варіанті реалізації винаходу екзогенний полінуклеотид, що кодує МУКІ!, містить одне або 60 більше з наступного:
ї) нуклеотиди, які кодують поліпептид, що містить амінокислоти, послідовність яких наведена в будь-якій із ЗЕО ІЮ МО: 21-75 або 205-210, або його біологічно активний фрагмент або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною будь-якій одній або більше із ЗЕО ІЮ МО: 21-75 або 205-210, і) нуклеотиди, послідовність яких є щонайменше на 30 95 ідентичною Її), і ії) нуклеотиди, що гібридизуються з ї) та/або ії) в суворих умовах. Переважно, поліпептид
МУКІ1 являє собою поліпептид УУКІ!, що не є УУКІ! Агабідорвів ІНаійапа (5ЕО ІЮ МО: 21 або 22).
Більш переважно, поліпептид МУК! містить амінокислоти, послідовність яких наведена в 5ЕО ІЮ
МО: 208, або їх біологічно активний фрагмент або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною їм.
У варіанті реалізації винаходу загальний вміст неполярного ліпіду або одного або більше неполярних ліпідів та/Ллабо рівень олеїнової кислоти або ПНЖК в рослині або її частині визначають за методом аналізу метилових естерів жирних кислот, одержаних із рослини або її вегетативної частини, із застосуванням газової хроматографії.
У подальшому варіанті реалізації винаходу, в якому частина рослини є листом, загальний вміст неполярного ліпіду в листі визначають за методом аналізу із застосуванням ядерного магнітного резонансу (ЯМР).
У варіанті реалізації винаходу рослина або її частина є членом популяції або колекції кількістю щонайменше близько 1000 таких рослин або їх частин.
У подальшому аспекті даного винаходу пропонується популяція кількістю щонайменше близько 1000 рослин, кожне з яких є рослиною за винаходом, вирощеною в полі.
В іншому аспекті даного винаходу пропонується колекція кількістю щонайменше близько 1000 вегетативних частин рослини, кожна з яких є вегетативною частиною рослини за винаходом, причому урожай вегетативних частин рослини зібраний з рослин, що ростуть у полі.
У варіанті реалізації клітини, організму, що не відноситься до людського роду, рослини або її частини за винаходом, поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, є фактором транскрипції М/КІ!, поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів, являє собою ДГАТ, наприклад, ДГАТІ або ДГАТ2, або ФДАТ, і поліпептид, що приймає
Зо участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ), у клітині, є ліпазою ЗОРІ. У переважному варіанті реалізації винаходу поліпептид покриття масляного включення (ПМВ) являє собою олеозин, поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, є тіоестеразою жирних кислот, наприклад, тіоестеразою БРАТА або ЕГАТВ, поліпептид, що приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, є поліпептидом ТГД, переважно поліпептидом ТОО, і поліпептид, що приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, є пластидною
ГФАТ. У більш переважному варіанті реалізації винаходу клітина знаходиться у вегетативній частині рослини, причому вміст ТАГ у вегетативній частині рослини перед цвітінням рослини становить щонайменше 8 95 (95 від сухої маси).
У варіанті реалізації винаходу рослина, вегетативна частина рослини, негуманоїдний організм або його частина, насіння або бульба картоплі містять перший екзогенний полінуклеотид, що кодує МУКІЇ, другий екзогенний полінуклеотид, що кодує ДГАТ або ПДАТ, переважно ДГАТІ, третій екзогенний полінуклеотид, що кодує РНК, яка зменшує експресію гена, що кодує поліпептид ЗРО, і четвертий екзогенний полінуклеотид, що кодує олеозин. У переважних варіантах реалізації винаходу, у вегетативній частині рослини, негуманоїдному організмі або його частині, насінні або бульбі картоплі присутня одна або більше або всі з наступних ознак: ї загальний вміст ліпіду щонайменше 85905, щонайменше 1095, щонайменше 12 95, щонайменше 14 95 або щонайменше 15,5 95 (95, мабс.); ії) загальний вміст ліпіду у вегетативній частині рослини або негуманоїдному організмі є щонайменше у З рази, щонайменше у 5 разів, щонайменше у 7 разів, щонайменше у 8 разів або щонайменше у 10 разів вищим, ніж у відповідній вегетативній частини рослини або негуманоїдного організму, в яких відсутні екзогенні полінуклеотиди; ії) загальний вміст ТАГ становить щонайменше 5 965, щонайменше 6 965, щонайменше 6,5 Фо або щонайменше 7 95 (95, мас. у перерахунку на масу сухої речовини або масу насіння); їм) загальний вміст ТАГ є щонайменше у 40 разів, щонайменше у 50 разів, щонайменше у 60 разів або щонайменше у 70 разів, щонайменше у 100 разів або щонайменше у 120 разів вищим, ніж у відповідній вегетативній частині рослини або негуманоїдного організму, в яких відсутні екзогенні полінуклеотиди; м) олеїнова кислота становить щонайменше 15 95, щонайменше 1995 або щонайменше бо 22 Чо (о, мас., в перерахунку на масу сухого насіння) всіх жирних кислот у ТАГ;
мі) рівень олеїнової кислоти в ТАГ щонайменше у 10 разів, щонайменше у 15 разів або щонайменше у 17 разів перевищує рівень у відповідній вегетативній частині рослини або негуманоїдному організмі, в яких відсутні екзогенні полінуклеотиди; мії) пальмітинова кислота становить щонайменше 20 95, щонайменше 25 965, щонайменше 30 95 або щонайменше 33 95 (95, мас.) жирних кислот у ТАГ,; мії) рівень пальмітинової кислоти в ТАГ є щонайменше у 1,5 рази вищим, ніж у відповідній вегетативній частини рослини або негуманоїдному організмі, в яких відсутні екзогенні полінуклеотиди; їх) лінолева кислота становить щонайменше 22 965, щонайменше 25 9565, щонайменше 30 Фо або щонайменше 34 95 (95, мас.) жирних кислот у ТАГ; х) а-ліноленова кислота складає менше 20 95, менше 15 95, менше 11 95 або менше 8 95 (95, мас.) жирних кислот у ТАГ, хі) рівень а-ліноленової кислоти в ТАГ є щонайменше у 5 разів або щонайменше у 8 разів нижчим, ніж у відповідній вегетативній частини рослини або негуманоїдному організмі, в яких відсутні екзогенні полінуклеотиди, і хії) для картопляної бульби, вміст ТАГ становить щонайменше 0,5 95, в перерахунку на суху масу, та/або загальний вміст жирних кислот становить щонайменше 1 95, переважно щонайменше 1,5 95 або щонайменше 2,0 95, в перерахунку на суху масу.
Додатково пропонується насіння рослини за винаходом або одержане від неї.
В іншому аспекті винаходу пропонується трансгенне стебло рослини або частина стебла розміром щонайменше 1 г сухої маси, вміст ТАГ у якій становить щонайменше 5 95 мас. (суха маса), переважно щонайменше 6 95, більш переважно щонайменше 7 95. У варіанті реалізації винаходу трансгенне стебло рослини або частина стебла належить, або переважно її урожай зібраний з дводольної рослини. Як альтернатива, трансгенне стебло рослини або частина стебла належить, або переважно її урожай зібраний з однодольної рослини. У варіанті реалізації винаходу стебло рослини або частина стебла належить або одержана від рослини, що не є цукровою тростиною. У варіантах реалізації винаходу стебло рослини або частина стебла додатково відрізняється однією або більше ознаками, визначеними у контексті клітини або рослини за винаходом.
Зо В іншому аспекті винаходу пропонується рослинна клітина, що містить: а) перший екзогенний полінуклеотид, який кодує ФДАТ, р) першу генетичну модифікацію, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, переважно поліпептиду ТГД, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить першої генетичної модифікації, і одне або більше з: с) другої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ), у клітині, переважно поліпептиду БОР, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить генетичної модифікації, а) другого екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини, переважно тіоестеразу жирного ацилу, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить другого екзогенного полінуклеотиду, і е) третьої генетичної модифікації, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить третьої генетичної модифікації, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію полінуклеотиду в клітині. У переважному варіанті реалізації винаходу присутність в клітині першої, другої або третьої генетичної модифікації або другого екзогенного полінуклеотиду синергетично підвищує загальний вміст неполярного ліпіду в клітині, в порівнянні з відповідною клітиною, що містить ФДАТ, але не містить додаткової генетичної модифікації або екзогенного полінуклеотиду. Більш переважно, щонайменше один з екзогенних полінуклеотидів експресується промотором, що не є конститутивним промотором.
В іншому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання рекомбінантної еукаріотної клітини за винаходом, який включає стадії: її введення в еукаріотну клітину щонайменше одного екзогенного полінуклеотиду та/або щонайменше однієї генетичної модифікації, визначеної у даному документі, з одержанням еукаріотної клітини, що містить набір екзогенних полінуклеотидів та/або генетичних модифікацій, визначених у даному документі, і) експресії екзогенного(их) полінуклеотиду(ів) в клітині або її клітині-нсащадку, ії) аналіз вмісту ліпідів у клітині або її клітині-нащадку, і 60 їм) відбір клітини за винаходом.
У варіанті реалізації винаходу один або більше екзогенні полінуклеотиди стабільно інтегровані в геном клітини або її клітини-нащадка.
У варіанті реалізації винаходу спосіб додатково включає стадію регенерації трансгенної рослини з клітини або клітини-нащадка, що містить один або більше екзогенних полінуклеотидів.
У подальшому варіанті реалізації винаходу стадія регенерації трансгенної рослини виконується до стадії експресії одного або більше екзогенних полінуклеотидів в клітині або її клітині-нащадку та/або до стадії аналізу вмісту ліпіду в клітині або її клітині-нащадку та/або до стадії відбору клітини або клітини-нащадка, що містить підвищений рівень одного або більше неполярних ліпідів.
В іншому варіанті реалізації винаходу спосіб додатково містить стадію одержання насіння або рослини-нащадка з трансгенної рослини, причому насіння або рослина-нащадок містить один або більше екзогенних полінуклеотидів.
Ще в іншому варіанті реалізації винаходу відібрана клітина або регенерована з неї рослина або вегетативна частина рослини або насіння регенерованої рослини володіє одним або більше ознаками, визначеними у даному документі.
У подальшому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання рослини, в геном якої інтегрований набір екзогенних полінуклеотидів та/або генетичних модифікацій, визначених у даному документі, причому спосіб включає стадії: ї) схрещування двох материнських рослин, і, при цьому, одна рослина містить щонайменше один із екзогенних полінуклеотидів тал'або щонайменше одну з генетичних модифікацій, визначених у даному документі, і друга рослина містить щонайменше один з екзогенних полінуклеотидів тал"або щонайменше одну з генетичних модифікацій, визначених у даному документі, притому, що дві материнські рослини містять набір екзогенних полінуклеотидів та/або генетичних модифікацій, визначених у даному документі, ії) скринінг одного або більше рослин-нащадків схрещування щодо присутності або відсутності набору екзогенних полінуклеотидів та/або генетичних модифікацій, визначених у даному документі, і ії) відбір рослини-нащадка, що містить набір екзогенних полінуклеотидів та/або генетичних модифікацій, визначених у даному документі, з одержанням в такий спосіб рослини.
Додатково запропонована трансгенна клітина або трансгенна рослина, одержані із застосуванням способу за винаходом, або її частина, одержана з неї, яка містить набір екзогенних полінуклеотидів та/або генетичних модифікацій, визначених у даному документі.
Додатково пропонується застосування набору екзогенних полінуклеотидів та/або генетичних модифікацій, визначених у даному документі, для одержання трансгенної клітини, трансгенного організму, що не відноситься до людського роду, або його частини або насіння, що володіє підвищеною здатністю до продукування одного або більше неполярних ліпідів відносно відповідної клітини, організму, що не відноситься до людського роду, або його частини або насіння, що не містить набору екзогенних полінуклеотидів та/"або генетичних модифікацій, причому кожен екзогенний полінуклеотид функціонально пов'язаний із промотором, здатним спрямовувати експресію екзогенного полінуклеотиду в трансгенній клітині, трансгенному організмі, що не відноситься до людського роду, або його частині або насінні
Переважно, щонайменше один із промоторів, функціонально пов'язаних з екзогенним полінуклеотидом, який кодує поліпептид фактору транскрипції, є промотором, що не належить до конститутивних промоторів.
У варіанті реалізації винаходу трансгенна клітина, організм, що не відноситься до людського роду, або його частина або насіння володіє однією або більше ознаками, визначеними у даному документі.
У подальшому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання промислового продукту, який включає стадії: ї) одержання рекомбінантної еукаріотної клітини за винаходом, трансгенного організму, що не відноситься до людського роду, або його частини за винаходом, трансгенної рослини або її частини за винаходом, насіння за винаходом, або трансгенної клітини або трансгенної рослини або її частини за винаходом, і і) перетворення щонайменше частини ліпіду в клітині, організмі, що не відноситься до людського роду, або його частині, рослині або її частини, або насіння на промисловий продукт, із застосуванням нагрівання, хімічних або ферментних засобів або будь-якої їх комбінації до ліпіду іп 5йи в організмі, що не відноситься до людського роду, або його частині, і бо ії) добування промислового продукту,
Зо з одержанням в такий спосіб промислового продукту.
У подальшому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання промислового продукту, який включає стадії: ї) одержання рекомбінантної еукаріотної клітини за винаходом, трансгенного організму, що не відноситься до людського роду, або його частини за винаходом, трансгенної рослини або її частини за винаходом, насіння за винаходом, або трансгенної клітини або трансгенної рослини або її частини за винаходом, і ії) фізична обробка клітини, організму, що не відноситься до людського роду, або його частини, рослини або її частини або насіння із стадії і), ії) одночасне або подальше перетворення щонайменше частини ліпіду в оброблюваній клітині, організмі, що не відноситься до людського роду, або його частині, рослині або її частині або насінні на промисловий продукт, із застосуванням нагрівання, хімічних або ферментних засобів або будь-якої їх комбінації до ліпіду в оброблюваній клітині, організмі, що не відноситься до людського роду, або його частині, рослині або її частині або насінні, і їм) добування промислового продукту, з одержанням в такий спосіб промислового продукту.
У варіанті реалізації двох згаданих вище аспектів винаходу частина рослини є вегетативною частиною рослини.
У подальшому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання промислового продукту, який включає стадії: ї одержання вегетативної частини рослини із загальним вмістом неполярного ліпіду щонайменше близько 18595, щонайменше близько 2095, щонайменше близько 25 95, щонайменше близько 3095, щонайменше близько 3595, щонайменше близько 40 95, щонайменше близько 45595, щонайменше близько 5095, щонайменше близько 55 95, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 18 95 до 7595, від близько 2095 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 5095 до 7595, від близько 6095 до 75 95, або від близько 25 95 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), і) перетворення щонайменше частини ліпіду у вегетативній частині рослини на
Зо промисловий продукт, із застосуванням нагрівання, хімічних або ферментних засобів або будь- якої їх комбінації до ліпіду іп 5йи у вегетативній частині рослини, і ії) добування промислового продукту, з одержанням в такий спосіб промислового продукту.
У іншому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання промислового продукту, який включає стадії: ї одержання вегетативної частини рослини із загальним вмістом неполярного ліпіду щонайменше близько 18595, щонайменше близько 2095, щонайменше близько 25 95, щонайменше близько 3095, щонайменше близько 3595, щонайменше близько 40 95, щонайменше близько 45595, щонайменше близько 5095, щонайменше близько 55 95, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 18 95 до 7595, від близько 2095 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 5095 до 7595, від близько 6095 до 75 95, або від близько 2595 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), її) фізична обробка вегетативної частини рослини із стадії ї), ії) одночасне або подальше перетворення щонайменше частини ліпіду в оброблюваній вегетативній частині рослини на промисловий продукт, із застосуванням нагрівання, хімічних або ферментних засобів або будь-якої їх комбінації до ліпіду в оброблюваній вегетативній частині рослини, і їм) добування промислового продукту, з одержанням в такий спосіб промислового продукту.
Ще в іншому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання промислового продукту, який включає стадії: ї одержання вегетативної частини рослини із загальним вмістом неполярного ліпіду щонайменше близько 1195, щонайменше близько 1295, щонайменше близько 15 95, щонайменше близько 2095, щонайменше близько 2595, щонайменше близько 30 95, щонайменше близько 35595, щонайменше близько 4095, щонайменше близько 45 95, щонайменше близько 5095, щонайменше близько 5595, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 8 95 до 75 95, від 10 95 до 75 95, від 11 95 до 75 95, від близько 15 95 до 75 95, від близько 20 95 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, 60 від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 75 95, від близько 60 95 до 75 95, або від близько
25595 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), причому рослина є рослиною 16:3 або її вегетативною частиною, і) перетворення щонайменше частини ліпіду у вегетативній частині рослини на промисловий продукт, із застосуванням нагрівання, хімічних або ферментних засобів або будь- якої їх комбінації до ліпіду іп 5йи у вегетативній частині рослини, і ії) добування промислового продукту, з одержанням в такий спосіб промислового продукту.
У іншому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання промислового продукту, який включає стадії: ї одержання вегетативної частини рослини із загальним вмістом неполярного ліпіду щонайменше близько 1195, щонайменше близько 1295, щонайменше близько 15 95, щонайменше близько 2095, щонайменше близько 2595, щонайменше близько 30 95, щонайменше близько 35595, щонайменше близько 4095, щонайменше близько 45 95, щонайменше близько 5095, щонайменше близько 5595, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 8 95 до 75 95, від 10 95 до 75 95, від 11 95 до 75 95, від близько 15 95 до 75 95, від близько 20 95 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 75 95, від близько 60 95 до 75 95, або від близько 25595 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), причому рослина є рослиною 16:3 або її вегетативною частиною, її) фізична обробка вегетативної частини рослини із стадії Її), ії) одночасне або подальше перетворення щонайменше частини ліпіду в оброблюваній вегетативній частині рослини на промисловий продукт, із застосуванням нагрівання, хімічних або ферментних засобів або будь-якої їх комбінації до ліпіду в оброблюваній вегетативній частині рослини, і їм) добування промислового продукту, з одержанням в такий спосіб промислового продукту.
У варіанті реалізації винаходу стадія фізичної обробки клітини, організму, що не відноситься до людського роду, або його частини, рослини або її частини, або насіння включає одне або більше з вальцювання, пресування, дроблення або помелу клітини, організму, що не
Ко) відноситься до людського роду, або його частини, рослини або її частини, або насіння.
У варіанті реалізації винаходу спосіб включає стадії: (а) екстракція щонайменше частини неполярного ліпіду, що міститься в клітині, організмі, що не відноситься до людського роду, або його частині, рослині або його частини, або насіння у формі неполярного ліпіду, і (5) добування екстрагованого неполярного ліпіду, причому стадії (а) і (Б) виконуються до стадії перетворення щонайменше частини ліпіду в клітині, організмі, що не відноситься до людського роду, або його частині, рослині або його частини, або насіння на промисловий продукт.
У варіанті реалізації винаходу екстрагований неполярний ліпід містить триацилгліцероли, причому триацилгліцероли складають щонайменше 9095, переважно щонайменше 95 95 екстрагованого ліпіду.
У варіанті реалізації винаходу промисловий продукт є гідрогенкарбоновим продуктом, таким як естери жирних кислот, переважно метилові естери жирних кислот та/або етилові естери жирних кислот, алкан, наприклад, метан, етан або довголанцюговий алкан, суміш алканів з довшим ланцюгом, алкен, біопаливо, газоподібний монооксид карбону та/або гідроген, біоспирт, наприклад, етанол, пропанол або бутанол, біовугілля або комбінація монооксиду карбону, гідрогену і біовугілля. У переважному варіанті реалізації винаходу загальні жирні кислоти у вегетативній частині рослини містять щонайменше 5 95 С12:0, С14:0, або сума С12:0 їі С14:0 становить щонайменше 595 від загального вмісту жирних кислот, і промисловий продукт, одержаний з ліпіду вегетативної частини рослини, є компонентом авіаційного палива.
У подальшому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання екстрагованого ліпіду, який включає стадії: ї) одержання рекомбінантної еукаріотної клітини за винаходом, трансгенного організму, що не відноситься до людського роду, або його частини за винаходом, трансгенної рослини або її частини за винаходом, насіння за винаходом, або трансгенної клітини або трансгенної рослини або її частини за винаходом, ії) екстракція ліпіду з клітини, організму, що не відноситься до людського роду, або його частини, рослини або її частини, або насіння, і ії) добування екстрагованого ліпіду, бо з одержанням в такий спосіб екстрагованого ліпіду.
У подальшому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання екстрагованого ліпіду, який включає стадії: ї одержання вегетативної частини рослини із загальним вмістом неполярного ліпіду щонайменше близько 18595, щонайменше близько 2095, щонайменше близько 25 95, щонайменше близько 3095, щонайменше близько 3595, щонайменше близько 40 95, щонайменше близько 45595, щонайменше близько 5095, щонайменше близько 55 95, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 18 95 до 7595, від близько 2095 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 5095 до 7595, від близько 6095 до 75 95, або від близько 25 95 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), і) екстракцію ліпіду з вегетативної частини рослини, і ії) добування екстрагованого ліпіду, з одержанням в такий спосіб екстрагованого ліпіду.
У подальшому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання екстрагованого ліпіду, який включає стадії: ї одержання вегетативної частини рослини із загальним вмістом неполярного ліпіду щонайменше близько 1195, щонайменше близько 1295, щонайменше близько 15 95, щонайменше близько 2095, щонайменше близько 2595, щонайменше близько 30 95, щонайменше близько 35595, щонайменше близько 4095, щонайменше близько 45 95, щонайменше близько 5095, щонайменше близько 5595, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 8 9о до 75 95, від 10 95 до 75 95, від 11 95 до 75 95, від близько 15 95 до 75 95, від близько 20 95 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 75 95, від близько 60 95 до 75 95, або від близько 25595 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), причому рослина є рослиною 16:3 або її вегетативною частиною, і) екстракцію ліпіду з вегетативної частини рослини, і ії) добування екстрагованого ліпіду, з одержанням в такий спосіб екстрагованого ліпіду.
У варіанті реалізації винаходу спосіб екстракції включає одне або більше із сушіння, вальцювання, пресування, дроблення або помелу клітини, організму, що не відноситься до людського роду, або його частини, рослини або її частини, або насіння, та/(або очищення екстрагованого ліпіду або масла з насіння.
У варіанті реалізації винаходу органічний розчинник застосовується в способі в процесі екстракції, для екстрагування масла.
У подальшому варіанті реалізації винаходу спосіб включає добування екстрагованого ліпіду або масла шляхом збору його в ємність та/або одного або більше з дегуммації, дезодорування, вибілювання, сушіння, фракціонування екстрагованого ліпіду або масла, видалення щонайменше деяких восків та/або естерів воску з екстрагованого ліпіду або масла або аналізу складу жирних кислот екстрагованого ліпіду або масла.
У варіанті реалізації винаходу об'єм екстрагованого ліпіду або масла становить щонайменше 1 літр.
У подальшому варіанті реалізації винаходу застосовуються одна або більше або всі із наступних ознак: () екстрагований ліпід або масло містить триацилгліцероли, причому триацилгліцероли складають щонайменше 9095, переважно щонайменше 09595 або щонайменше 96 95 екстрагованого ліпіду або масла, (і) екстрагований ліпід або масло містить вільні стероли, стероїльні естери, стероїлглікозиди, віск або естери воску або будь-яку їх комбінацію, і (ії) загальний вміст та/"або склад стеролів у екстрагованому ліпіді або маслі значно відрізняється від вмісту та/або складу стеролів у екстрагованому ліпіді або маслі, одержаному з відповідної клітини, організму, що не відноситься до людського роду, або його частини, рослини або її частини, або насіння.
У варіанті реалізації винаходу спосіб додатково включає перетворення екстрагованого ліпіду або масла на промисловий продукт.
У варіанті реалізації винаходу промисловий продукт є гідрогенкарбоновим продуктом, таким як естери жирних кислот, переважно метилові естери жирних кислот та/або етилові естери жирних кислот, алкан, наприклад, метан, етан або довголанцюговий алкан, суміш алканів з довшим ланцюгом, алкен, біопаливо, газоподібний монооксид карбону та/або гідроген, біоспирт, наприклад, етанол, пропанол або бутанол, біовугілля або комбінація монооксиду карбону, бо гідрогену і біовугілля. У переважному варіанті реалізації винаходу загальні жирні кислоти у вегетативній частині рослини містять щонайменше 5 95 С12:0, С14:0, або сума С12:0 їі С14:0 становить щонайменше 595 від загального вмісту жирних кислот, і промисловий продукт, одержаний з ліпіду вегетативної частини рослини, є компонентом авіаційного палива.
У подальшому варіанті реалізації винаходу частина рослини є повітряною частиною рослини або зеленою частиною рослини, переважно вегетативною частиною рослини, такою як лист або стебло рослини. У альтернативному варіанті реалізації винаходу частина рослини є бульбою або буряком, таким як бульба картоплі (Зоїапит їшбрегозит) або цукровий буряк.
Ще в іншому варіанті реалізації винаходу спосіб додатково включає стадію збору урожаю клітини, організму, що не відноситься до людського роду, або його частини, рослини або її частини, такої як бульба або буряк, або насіння, переважно за допомогою механічного збирача, або за допомогою процесу, що включає фільтрацію, центрифугування, осадження, флотацію або флокуляцію водоростевих або грибкових організмів.
В іншому варіанті реалізації винаходу рівень ліпіду в клітині, організмі, що не відноситься до людського роду, або його частині, рослині або його частини, або насіння та/або в екстрагованому ліпіді або маслі може бути визначений за методом аналізу із застосуванням газової хроматографії метилових естерів жирних кислот, одержаних з екстрагованого ліпіду або масла.
Ще в іншому варіанті реалізації винаходу спосіб додатково включає збирання врожаю частини з рослини.
У варіанті реалізації винаходу частина рослини є вегетативною частиною рослини із загальним вмістом неполярного ліпіду щонайменше близько 18 95, щонайменше близько 20 95, щонайменше близько 25595, щонайменше близько 3095, щонайменше близько 35 95, щонайменше близько 4095, щонайменше близько 4595, щонайменше близько 50 95, щонайменше близько 55595, щонайменше близько 6095, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 18 95 до 75 95, від близько 20 95 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 75 95, від близько 60 95 до 75 95, або від близько 25 95 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу).
У подальшому варіанті реалізації винаходу частина рослини є вегетативною частиною рослини із загальним вмістом ТАГ щонайменше близько 18 95, щонайменше близько 20 95,
Ко) щонайменше близько 25595, щонайменше близько 3095, щонайменше близько 35 95, щонайменше близько 4095, щонайменше близько 4595, щонайменше близько 50 95, щонайменше близько 55595, щонайменше близько 6095, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 18 95 до 75 95, від близько 20 95 до 75 95, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 75 95, від близько 60 95 до 75 95, або від близько 25 95 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу).
В іншому варіанті реалізації винаходу частина рослини є вегетативною частиною рослини із загальним вмістом неполярного ліпіду щонайменше близько 11 95, щонайменше близько 12 95, щонайменше близько 15595, щонайменше близько 2095, щонайменше близько 25 95, щонайменше близько 3095, щонайменше близько 3595, щонайменше близько 40 95, щонайменше близько 45595, щонайменше близько 5095, щонайменше близько 55 95, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 8 95 до 75 905, від 10 95 до 75 95, від 11 95 до 75 95, від близько 15 95 до 75 95, від близько 20 95 до 75 Об, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 75 95, від близько 60 95 до 75 95, або від близько 25 95 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), причому вегетативна частина рослини одержана від рослин 16:3.
Ще в іншому варіанті реалізації винаходу частина рослини є вегетативною частиною рослини із загальним вмістом ТАГ щонайменше близько 11 95, щонайменше близько 12 95, щонайменше близько 15595, щонайменше близько 2095, щонайменше близько 25 95, щонайменше близько 3095, щонайменше близько 3595, щонайменше близько 40 95,
БО щонайменше близько 45595, щонайменше близько 5095, щонайменше близько 55 95, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 65 95, щонайменше близько 70 95, від 8 95 до 75 905, від 10 95 до 75 95, від 11 95 до 75 95, від близько 15 95 до 75 95, від близько 20 95 до 75 Об, від близько 30 95 до 75 95, від близько 40 95 до 75 95, від близько 50 95 до 75 95, від близько 60 95 до 75 95, або від близько 25 95 до 50 95 (мас., в перерахунку на суху масу), причому вегетативна частина рослини одержана від рослин 16:3.
Додатково пропонується спосіб одержання насіння, який включає: ї) вирощування рослини за винаходом, і ії) збирання врожаю насіння з рослини.
У варіанті реалізації винаходу згаданий вище спосіб включає вирощування популяції кількістю щонайменше близько 1000 рослин, кожна з яких є рослиною за винаходом, і збирання врожаю насіння з популяції рослин.
Ще в іншому аспекті даного винаходу пропонується спосіб ферментації, що включає: ї) забезпечення ємності, що містить рідку композицію, яка містить рекомбінантну еукаріотну клітину за винаходом або трансгенний організм, що не відноситься до людського роду, за винаходом, причому клітина або організм, що не відноситься до людського роду, є придатними для ферментації, і складові, необхідні для ферментації і біосинтезу жирних кислот, і ії) забезпечення умов, сприяючих ферментації рідкої композиції, що міститься у вказаній ємності.
Крім того, пропонується добутий або екстрагований ліпід, який одержують з рекомбінантної еукаріотної клітини за винаходом, трансгенного організму, що не відноситься до людського роду, або його частини за винаходом, трансгенної рослини або її частини за винаходом, насіння за винаходом або трансгенної клітини або трансгенної рослини або її частини за винаходом, або який одержують із застосуванням способу за винаходом.
У подальшому аспекті даного винаходу пропонується промисловий продукт, одержаний із застосуванням способу за винаходом, який є гідрогенкарбоновим продуктом, таким як естери жирних кислот, переважно метилові естери жирних кислот та/або етилові естери жирних кислот, алкан, наприклад, метан, етан або довголанцюговий алкан, суміш алканів з довшим ланцюгом, алкен, біопаливо, газоподібний монооксид карбону та/або гідроген, біоспирт, наприклад, етанол, пропанол або бутанол, біовугілля або комбінація монооксиду карбону, гідрогену і біовугілля.
Додатково пропонується застосування рекомбінантної еукаріотної клітини за винаходом, трансгенного організму, що не відноситься до людського роду, або його частини за винаходом, трансгенної рослини або її частини за винаходом, насіння за винаходом або трансгенної клітини або трансгенної рослини або її частини за винаходом або добутого або екстрагованого ліпіду за винаходом для виробництва промислового продукту.
Приклади промислових продуктів за винаходом включають, але не обмежуючись цим, гідрогенкарбоновий продукт, такий як естери жирних кислот, переважно метилові естери жирних кислот та/або етилові естери жирних кислот, алкан, наприклад, метан, етан або довголанцюговий алкан, суміш алканів з довшим ланцюгом, алкен, біопаливо, газоподібний монооксид карбону та/або гідроген, біоспирт, наприклад, етанол, пропанол або бутанол, біовугілля або комбінація монооксиду карбону, гідрогену і біовугілля.
У подальшому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання палива, який включає: її приведення в реакцію ліпіду за винаходом із спиртом, необов'язково у присутності каталізатора, з одержанням алкілових естерів, і ії) необов'язкове змішування алкілових естерів з паливом на базі нафти.
У варіанті реалізації згаданого вище способу алкілові естери є метиловими естерами.
Ще в іншому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання синтетичного дизельного палива, який включає: її перетворення ліпіду в рекомбінантній еукаріотній клітині за винаходом, трансгенному організмі, що не відноситься до людського роду, або його частині за винаходом, трансгенній рослині або її частині за винаходом, насінні за винаходом, або трансгенній клітині або трансгенній рослині або її частині за винаходом, на біонафту із застосуванням способу, що включає піроліз або гідротермічну обробку, або на синтетичний газ із застосуванням газифікації, і і) перетворення біонафти на синтетичне дизельне паливо із застосуванням способу, що включає фракціонування, переважно з відбором гідрогенкарбонових сполук, які конденсуються при температурі від приблизно 150 С до приблизно 200 "С або від приблизно 200 С до приблизно 300 С, або перетворення синтетичного газу на біопаливо із застосуванням металевого каталізатора або мікробного каталізатора.
В іншому аспекті даного винаходу пропонується спосіб одержання біопалива, який включає перетворення ліпіду в рекомбінантній еукаріотній клітині за винаходом, трансгенному організмі, що не відноситься до людського роду, або його частині за винаходом, трансгенній рослині або її частини за винаходом, насінні за винаходом або трансгенній клітині або трансгенній рослині або її частини за винаходом на біонафту із застосуванням піролізу, на біоспирт із застосуванням ферментації або на біогаз із застосуванням газифікації або анаеробного розщеплювання.
У варіанті реалізації згаданого вище способу частина є вегетативною частиною рослини.
Крім того, пропонується спосіб одержання кормів (продуктів харчування), який включає змішування рекомбінантної еукаріотної клітини за винаходом, трансгенного організму, що не відноситься до людського роду, або його частини за винаходом, трансгенної рослини або її частини за винаходом, насіння за винаходом або трансгенної клітини або трансгенної рослини або її частини за винаходом, або одержуваних із застосуванням способу за винаходом, або екстракту або його частини, щонайменше з ще одним поживним інгредієнтом.
У подальшому аспекті даного винаходу пропонуються корми (продукти харчування), косметичні продукти або хімічні реактиви, що містять рекомбінантну еукаріотну клітину за винаходом, трансгенний організм, що не відноситься до людського роду, або його частину за винаходом, трансгенну рослина або її частину за винаходом, насіння за винаходом або трансгенну клітину або трансгенну рослину або її частину за винаходом, або одержувані із застосуванням способу за винаходом, або екстракт або його частину.
В іншому аспекті даного винаходу пропонується спосіб годування тварини, який включає пропонування тварині трансгенної рослини або її частини за винаходом, насіння за винаходом або трансгенної рослини або її частини за винаходом, або добутого або екстрагованого ліпіду за винаходом.
Будь-який варіант реалізації винаходу буде узятий для застосування відповідних поправок до будь-якого іншого варіанту реалізації винаходу, якщо конкретно не вказано інше.
Контекст даного винаходу не обмежується конкретними варіантами реалізації винаходу, описаними у даному документі, які призначені тільки для цілей ілюстрації. Функціонально рівноцінні продукти, склади і способи явно знаходяться в межах контексту винаходу, як розкрито у даному документі.
У даному документі, якщо конкретно не вказано інше, або контекст не вимагає іншого, посилання на одну стадію, склад речовини, групу стадій або групу складів речовини повинно інтерпретуватися, як таке, що включає однину і множину (т. е., одну або більше) таких стадій, складів речовини, груп стадій або груп складів речовини.
Винахід додатково розкритий за допомогою наступних необмежуючих Прикладів і з посиланням на додані фігури.
КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
Зо Фіг. 1. Схема синтезу ліпіду в еукаріотних клітинах, яка демонструє експорт деяких із жирних кислот, синтезованих у пластидах, в ендоплазматичний ретикулум (ЕР) через пов'язану із пластидою мембрану (ППЛМ), та імпорт деяких із жирних кислот з ЕР у пластиду для еукаріотного синтезу галактоліпідів. Скорочення: ацетил-КоА і малоніл-КоА: ацетил-кофермент А і малоніл-кофермент А;
АККаза: ацетил-КоА карбоксилаза;
СЖК: комплекс синтетази жирних кислот; 16:0-АПБ, 18:0-АПБ і 18:1-АПБ: С16:0-ацилпереносний білок (АПБ), С18:0-ацилпереносний білок, С18:1-ацилпереносний білок;
КАБ ІІ: кетоацил-АПБ синтетаза ІІ (ЄС 2.3.1.41);
РІ РААТ: пластидна І РААТ;
РОРАТ: пластидна СРАТ;
РАР: фосфорилаза ФК (ЄС 3.1.3.4);
СЗР: гліцерол-З-фосфат;
ЛФК: лізофосфатидинова кислота;
ФК: фосфатидинова кислота;
ДАГ: діацилгліцерол;
ТАГ: триацилгліцерол; ацил-КоА і ацил-ФХ: ацил-коензим А і адил-фосфатидилхолін;
ФХ: фосфатидилхолін;
ОРАТ: гліцерол-3-фосфат ацилтрансфераза;
ІГРААТ: ацилтрансфераза лізофосфатидинової кислоти (ЄС 2.3.1.51);
І РСАТ: ацил-КоА:лізофосфатидилхолін ацилтрансфераза; або синоніми 1- ацилгліцерофосфохолін О-ацилтрансфераза; ацил-КоА:1-ацил-5п-гліцеро-3-фосфохолін -О- ацилтрансфераза (ЄС 2.3.1.23),
СРТ:Сра-холін:-ідиацилгліцерол холінфосфотрансфераза; або синоніми / 1-алкіл-2- ацетилгліцерол холінфосфотрансфераза; алкілацилгліцерол и холінфосфотрансфераза; холінфосфотрансфераза; фосфорилхолін-гліцерол трансфераза (ЄС 2.7.8.2),
РОСТ: фосфатидилхолін:диацилгліцерол холінфосфотрансфераза,
РІС: фосфоліпаза С (ЄС 3.1.4.3), бо РІО: фосфоліпаза 0; холін фосфатаза; лецитиназа 0; ліпофосфодіестераза ІІ (ЄС 3.1.4.4),
РОАТ: фосфоліпід: діацилгліцерол ацилтрансфераза; або синонім фосфоліпід:1,2-діацил- вп-глиїерил О-ацилтрансфераза (ЄС 2.3.1.158);
ЕАб2: Д12-десатураза жирних кислот; ЕАЮЗ, Л15-десатураза жирних кислот;
УДФф-гал: уридиндифосфатгалактоза;
МГДМ: моногалактозилдіацилгліцерол синтетаза;
МГДГ: моногалактозилдіацилгліцерол;
ДГДГ:. дигалактозилдіацилгліцерол
ЕАОб, 7, 8: пластидна А12-десатураза жирних кислот, пластидна о3-десатураза, пластидна ош3-десатураза, що індукується при низькій температурі, відповідно.
Фіг. 2. Схематична генетична карта конструкції для підвищення вмісту масла з насіння у дводольних рослинах. Скорочення: ПРО Різза-місіПп, промотор віциліну і 5'НТД Рібзит 5аїїмит;
ТМВ лідер, 5'НТД вірусу мозаїки тютюну; Агай-ОСАТІ, кодуюча білок ділянка, яка кодує ОСАТ1
А. Шаїїапа; ТЕР СіІута-Їі есііп, 3' ділянка термінатора/поліаденілування гена лектину С. тах;
ПРО РІами-РНавзеоїїйп, промотор з гена білка фазеоліну Рназеоіив мицЇдагів; Агаї-МУКІ!, кодуюча білок ділянка, яка кодує /- М/КІ1 А. і ШВайапа; ТЕР АСКТО-НІС, 3 ділянка термінатора/поліаденілування гена НІС Адгобасієтгійт Шштеїасіеп5; РКО РНАМИО-РНА, промотор гена фазеоліну Рпазеоіивз мцЇдагів; Зевіп-ОІеовзіп, кодуюча білок ділянка, яка кодує ген олеозину
Зезате іпаїісит; ТЕР РНАМО-РНА, 3' ділянка термінатора/поліаденілування гена фазеоліну
Рпазеоиз миїдагів.
Фіг. 3. Схематична діаграма вектору рОІ/ 122. Скорочення: ТЕР АСКТИи-НІС, термінатор нопалінсинтетази Адгорасіетійт їштеїасієпв; МРІЇ, ділянка кодування білка неоміцинфосфотрансферази; ПРО Самму355-Ех2, промотор 355 вірусу мозаїки цвітної капусти з подвійною ділянкою енхансера; Агай-ОСАТІ, ділянка кодування білка ацилтрансферази раАТІ Агарідорзів Інаійапа; РЕО Агаїн-Вибізсо МСУ, промотор маленької субодиниці Кибібсо А.
Таїїапа; Агаі-РАТАЗ, ділянка кодування білка тіоестерази РАТА2 А. ІПаїїапа; Агаї-УУКІ, ділянка кодування білка фактору транскрипції МУК! А. ІПаійапа; ТЕВ Спіута-і есійп, термінатор лектину
Спіусіпе тах; промотор епТСИиР2, криптичний конститутивний промотор Місоїапа їарасит; айВ1 і анв2, сайти рекомбінації Сагемжау; фрагмент МВ ЗОРІ, ділянка БОР1 Місоїйапа репіпатіапа, що служить мішенню для сайленсингу шпРНКІ; термінатор ОКС, термінатор октопінсинтетази А.
Зо Іштеїасіеп5. Ознаки скелету поза межами ділянки Т-ДНК одержані із РОКЕО4 (Соши із співавт., 2007).
Фіг. 4. Профілі метилових естерів загальних жирних кислот (95 мас.) (МЕЖК), що ілюструють вплив опосередкованого УМКІ1-О0САТІ генетичного фону з високим вмістом масла на продукування середньоланцюгових жирних кислот (СЛЖК) в листі Місоїйапа репінатіапа (п - 4).
Найвище продукування СЛЖК спостерігалося після додавання Агаїйп-М/ВІ1.
Фіг. 5. Профілі загальних МЕЖК у листі (95 мас.), що прояснюють вплив МУ/КІ! на акумуляцію
СЛЖК (п - 4). Додавання Агас-УУКІї значно підвищило продукування відповідної жирної кислоти (С12:0, С14:0 або С16:0) відносно попереднього додавання тільки Соспи-І РААТ.
Фіг. 6. Рівні загальних жирних кислот (ЗЖК) (9о мас.), рівні ТАГ, рівні СЛЖК (С16:0 ї С14:0, 95 від загальних жирних кислот) в ЗЖК і СЛЖК у ТАГ (905 від загального вмісту жирних кислот у
ТАГ) у клітинах рослини після експресії комбінацій трьох ОСАТ масляної пальми з ЕАТВ, І РААТ і МУКІ1. Номери 1-10 такі ж, як наведені у тексті (Приклад 9).
Фіг. 7. Рівні ТАГ (9о сухої маси листя) в тканині листя М. рбрепінатіапа, інфільтрованій генами, що кодують різні поліпептиди УМКІ!, їз (прямокутники справа) або без (прямокутники зліва) коекспресії ОСАТІ (п - 3). Всі зразки додатково були інфільтровані конструкцією Р19.
Фі. 8. Схематичне представлення конструкції шпильки 5БОРІ М. Бепіпатіапа.
Проілюстровані генетичні сегменти є такими, як описано в Прикладі 11. Скорочення є такими, як наведено на Фіг. 3. Сайти а(В являють собою сайти рекомбінації з вектору РНЕГІ 5ОАТЕ12.
Фіг. 9. Вміст ТАГ у зразках зеленого листя рослин тютюну, трансформованих Т-ДНК із рОЇ-51, лінії Моб1і і Моб9, зібраних перед цвітінням. Контрольні (батьківські) зразки були одержані від рослин, трансформованих Т-ДНК із рОРЗ3502.
Фіг. 10. Рівні ТАГ (95 сухої маси) в корінні і тканині стовбура дикого типу (дт) і трансгенних рослин М. їабасит, що містять тільки Т-ДНК із руР3502 або додатково містять Т-ДНК із рої! 051.
Фіг. 11. Рівні ТАГ (95 сухої маси) в корінні і тканині стовбура дикого типу (дт) і трансгенних рослин М. їабасит, що містять тільки Т-ДНК із руР3502 або додатково містять Т-ДНК із рої! 049.
Фіг. 12. Вміст ТАГ у зразках листя рослин тютюну, трансформованого Т-ДНК із рої! 049, лінії
Мо23с і Ме32р, у стадії зав'язування насіння. Контрольні (батьківські) зразки були одержані від рослин, трансформованих Т-ДНК із руР3502. Верхня лінія ілюструє відсоток 18:2 у ТАГ, а нижня лінія ілюструє відсоток 18:3 (АЛК) у вмісті жирних кислот.
Фіг. 13. А. Вміст крохмалю в листовій тканині рослин дикого типу (ДТ) і трансгенних рослин, що містять Т-ДНК із руР3502 (контроль НО) або Т-ДНК як із руРЗ3502, так і з ро1І 051 (рої 51.61 ії роО1І51.69), або як із р)УР3502, так і з роО1 049 (рої 49.325). Дані представляють об'єднані результати щонайменше для трьох індивідуальних рослин. В. Кореляція між вмістом крохмалю і
ТАГ у листовій тканині рослин дикого типу (ДТ) і трансгенних рослин, що містять Т-ДНК із рУРЗ502 (контроль НО) або Т-ДНК як із рОРЗ502, так і з роО1І 051 (рої 51.61 і рої! 51.69), або як із роР3502, так і з роО1І 049 (рої 49.326Б). Дані представляють об'єднані результати щонайменше для трьох індивідуальних рослин.
Фіг. 14. Схематичне представлення бінарного вектора рТМ55. Скорочення: ПРО, промотор;
ТЕР, 3 ділянка термінації/поліаденілування; Агайй, А. ІПпаїїапа; І іпив, Гіпит и5наййввітит; Міста,
Місоїапа іабасит; Сіута, Сх. тах; Спіт, конлінін 1 із льону; Спі2, конлінін 2 із льону; УПМ Місаї-
КВ7, ділянка прикріплення до матриксу із КВ7 тютюну, або як на Фіг. 3. Скорочення генів
МОАТ2, ОСБАТІ1, ОРАТА, МКІ! такі ж, як у тексті.
Фіг. 15. Вміст масла (95) у насінні Т2 б. займа, за даними ЯМР трансформованих ртуУ55, ртТм56 і рТМ57. Кожна точка даних представляє середній вміст масла для трьох незалежних партій насіння по 50 мг від кожної трансгенної лінії. Насінням негативного контролю було насіння С. взаїїма дикого типу (нетрансформоване), вирощеної в таких же умовах у теплиці. М вказує на кількість незалежних трансгенних трансформантів для кожної конструкції.
Фіг. 16. Філогенетичне дерево поліпептидів ЛДАФ (Приклад 15).
Фіг. 17. Схематичне представлення генетичної конструкції руР3506, включаючи ділянку Т-
ДНК між лівою і правою межами. Скорочення такі ж, як на Фіг. З, і: 5е5іп-ОІеовзіп, ділянка кодування білка олеозину безате іпаісит.
Фіг. 18. Вихід і зміна калорійності для продукування біомасла методом гідротермічної обробки (ГТО) з вегетативного рослинного матеріалу тютюну із високим вмістом масла, дикого типу і трансгенного, як початкової сировини.
КЛЮЧ ДО ПЕРЕЛІКУ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
ЗЕО ІЮ МО: 1 поліпептид ОСАТІ Агарідорб5і5 (паійапа (САВ44774.1)
ЗЕО ІЮ МО: 2 поліпептид ОСАТ2 Агарідорзів (пайапа (МР 5669521)
ЗЕО ІЮ МО: З поліпептид ОСАТ2 Кісіпи5 соттипів (ААМ16324.1)
Коо) ЗЕО ІЮ МО: 4 поліпептид ОСАТ2 Мегпісіа гогаїї (АВС94474.1)
ЗЕО ІЮ МО: 5 поліпептид ОБАТ2 МопіегеїйПа гатаппіапа (ААК84179.1)
ЗЕО ІО МО: 6 поліпептид ОСАТ2 Ното зарієпв (096РО.2)
ЗЕО ІО МО: 7 поліпептид ОСАТ2 Ното зарієпо (058НТ5.1)
ЗЕО ІО МО: 8 поліпептид ОСАТ2 Вовз їашгив (070М28.1)
ЗЕО ІЮ МО: 9 поліпептид ОБАТ2 Ми тивсши5 (ААКВА4175.1)
ЗЕО ІЮ МО: 10 МЕР трипептид-консервативна ОСАТАІ та/або мотив послідовності МОАТ1/2
ЗБЕО ІЮ МО: 11 НРНО тетрапептид-консервативна ЮОСАТ2 та/або мотив послідовності
МаАТІ1/2
ЗЕО ІЮ МО: 12 мотив послідовності ЕРН5 тетрапептид-консервативної рослинної ОБАТ2
ЗЕО ІЮ МО: 13 ВХОЕХ(К/А)ХАХХХаХХХ(І //)МРХХХРЕО(Е/О) - довгий консервативний мотив послідовності ОБАТ2, що являє собою частину гіпотетичного гліцеролфосфоліпидного домену
ЗЕО ІО МО: 14 РІ ХІ ХХХМ - консервативний мотив послідовності ОБАТ?2 і МОАТ1/2 миші, що являє собою гіпотетичний домен зв'язування із нейтральним ліпідом
ЗЕО ІЮ МО: 15 домен різС ацилтрансферази (РЕО1553) ОРАТ
ЗБО 10 МО: 16 домен суперсімейства галогенокислоти дегалогенази (ГКД)-подібної гидролази (РЕ12710) СОРАТ
ЗБО ІВ МО: 17 домен фосфосерин фосфатази (РЕО00702). СРАТА-8 містить М-кінцеву ділянку, гомологічну вказаному домену.
ЗЕО ІЮ МО: 18 Консервативна амінокислотна послідовність ЗРАТ ОЇ МІСРЕСТТСКЕР
ЗЕО ІЮ МО: 19 Консервативна амінокислотна послідовність ЗОРАТ/фосфатази (Мотив І)
ЗЕО ІЮ МО: 20 Консервативна амінокислотна послідовність ЗОРАТ/фосфатази (Мотив ПП)
ЗЕО ІЮО МО: 21 поліпептид УМКІ1 Агарідорзів Ттаійапа (АВМ557).
ЗЕО ІЮ МО: 22 поліпептид УУКІ1 Агарідорзів (паійапа (О6Х5У6)
ЗЕО ІЮ МО: 23 поліпептид УУКІ1 Агарідорзів Іугадга підвид Іугаїа (ХР. 002876251.1)
ЗЕО ІЮ МО: 24 поліпептид УУКІ! Вгазвзіса пари5 (АВО16282.1)
ЗЕО ІЮО МО: 25 поліпептид УУКІ1Вгазвзіса пари5 (А0О16346.1)
ЗЕО ІЮ МО: 26 поліпептид УУКІ! СіІусіпе тах (ХР. 003530370.1)
Ї5ЕО ІО МО: 27 поліпептид МУКІ1 даїгорпа сигсаз (АЕЄО22131.1)
ІЗЕО ІО МО: 28 поліпептид УУКІ1 Кісіпи5 соттипів (ХР. 002525305.1) бо ЗЕО ІЮ МО: 29 поліпептид УМКІ!Т Роршиз (гіспосагра (ХР. 002316459.1)
ЗЕО ІЮ МО: 30 поліпептид УМКІ1 Мій міпітега (СВІ29147.3)
ЗЕО ІЮ МО: 31 поліпептид УУКІ! Вгаспуродішт дієтаспуоп (ХР. 003578997 1)
ЗЕО ІЮО МО: 32 поліпептид УУКІ1 Ногаеит мцідаге підвид. миЇдаге ВА.)86627.1)
ЗЕО ІЮО МО: 33 поліпептид УУКІ1 Огула займа (ЕАУ79792.1)
ЗЕО ІЮ МО: 34 поліпептид УУКІЇ Зогдпит Бісоїог ХР. 002450194.1)
ЗЕО ІЮ МО: 35 поліпептид УУКІ1 7еа тауз (АСО32367 1)
ЗЕО ІЮ МО: 36 поліпептид УУКІ!1 Вгаспуродішт дієтаспуоп (ХР. 003561189.1)
ЗЕО ІЮ МО: 37 поліпептид УМКІ!1 Вгаспуродіит зуїмайсит(АВІ 85061.1)
ЗЕО ІЮ МО: 38 поліпептид УУКІ1 Огула займа (ВАОб8417.1)
ЗЕО ІЮ МО: 39 поліпептид УУКІ1 Зогдпит Бісоіог (ХР. 002437819.1)
ЗЕО ІЮ МО: 40 поліпептид УУКІЇ Зогдпит Бісоіог (ХР. 002441444.1)
ЗЕО ІЮ МО: 41 поліпептид УУКІ! СіІусіпе тах (ХР. 003530686.1)
ЗЕО ІЮ МО : 42 поліпептид УУКІ! СіІусіпе тах (ХР. 003553203.1)
ЗЕО ІЮ МО: 43 поліпептид УУКІТ Роршиз гіспосагра ХР. 002315794.1)
ЗЕО ІЮ МО: 44 поліпептид УМКІ1 Мій міпітега (ХР. 002270149.1)
ЗЕО ІЮ МО: 45 поліпептид УУКІ! СіІусіпе тах (ХР. 003533548.1)
ЗЕО ІЮ МО: 46 поліпептид УУКІ! СіІусіпе тах (ХР. 003551723.1)
ЗЕО ІЮ МО: 47 поліпептид УУКІ! Меадісадо ігипсаїшіа (ХР. 003621117.1)
ЗЕО ІЮ МО: 48 поліпептид УМКІ!Т Роршиз (гіспосагра (ХР. 002323836..1)
ЗЕО І МО: 49 поліпептид УУКІ1 Кісіпиє5 соттипів (ХР. 002517474.1)
ЗЕО ІЮ МО: 50 поліпептид УМКІ1 Мій міпітега (САМ79925.1)
ЗЕО ІЮ МО: 51 поліпептид УУКІ! Вгаспуродішт дієтаспуоп (ХР. 003572236.1)
ЗЕО ІЮО МО: 52 поліпептид УУКІ1 Огула займа (ВАО10030.1)
ЗЕО ІЮ МО: 53 поліпептид МУКІ1 Зогупит Бісоїог (ХР. 002444429.1)
ЗЕО ІЮ МО: 54 поліпептид УУКІЇ 7еа тауз5 (МР 001170359.1)
ЗЕО ІЮ МО: 55 поліпептид УУКІ1 Агарідорзів Іугасга підвид Іугаїа (ХР. 002889265.1)
ЗЕО ІЮ МО: 56 поліпептид УУКІ! Агабідорвів (паіапа (ААЕ68121.1)
ЗЕО ІО МО: 57 поліпептид УУКІ! Агабідорзі5 (пайапа (МР 1780882)
ЗЕО ІЮ МО: 58 поліпептид УУКІ1 Агарідорзів Іугасга підвид Іугаїа (ХР. 002890145.1)
Коо) ЗЕО ІЮ МО: 59 поліпептид УМКІ! ТНпеїПипдіеїа паіорпійа (ВА.ОЗ33872.1)
ЗЕО ІЮ МО: 60 поліпептид УМКІ1 Агарідорзів (аійапа (МР 563990.1)
ЗЕО ІЮ МО: 61 поліпептид УУМКІ1 СіІусіпе тах (ХР. 003530350.1)
ЗЕО ІЮ МО: 62 поліпептид УУКІ! Вгаспуродішт дієтаспуоп (ХР. 003578142.1)
ЗЕО ІЮ МО: 63 поліпептид УУКІ1 Огула займа (ЕА209147.1)
ЗЕО ІЮ МО: 64 поліпептид УУКІЇ Зогдпит Бісоіог (ХР. 002460236.1)
ЗЕО ІЮ МО: 65 поліпептид УУКІЇ 7еа тауз5 (МР 001146338.1)
ЗЕО ІЮ МО: 66 поліпептид УУКІ! СіІусіпе тах (ХР. 003519167.1)
ЗЕО ІЮ МО: 67 поліпептид УУКІ! СіІусіпе тах (ХР. 003550676.1)
ЗЕО ІЮ МО: 68 поліпептид УУКІ! Меадісадо ігипсаїшіа (ХР. 003610261.1)
ЗЕО ІО МО: 69 поліпептид УУКІ! СіІусіпе тах (ХР. 003524030.1)
ЗЕО ІЮ МО: 70 поліпептид УУКІ! СіІусіпе тах (ХР. 003525949.1)
ЗЕО ІЮО МО: 71 поліпептид УМКІ!Т Роршиз (гіспосагра (ХР. 002325111.1)
ЗЕО ІЮ МО: 72 поліпептид УМКІ1 Мій міпітега (СВІЗ6586.3)
ЗЕО ІЮ МО: 73 поліпептид М/ВІТ Міїі5 міпіїета (ХР. 002273046.2)
ЗЕО ІЮ МО: 74 поліпептид УМКІ!Т Роршиз (гіспосагра (ХР. 002303866.1)
ЗЕО ІЮ МО: 75 поліпептид УМКІ1 Мій міпітега (СВІ25261.3)
ЗЕО І МО: 76 Богрі-МВІ 1
ЗЕО ІО МО: 77 Гирап-М/ВІ 1
ЗЕО І МО: 78 Віссо-М/ВІ 1
БО ЗЕО ІЮ МО: 79 поліпептид УУКІ! Гиріп апдивійноїїи5
ЗЕО ІЮ МО: 80 поліпептид ОСАТІТ АзрегойШивх Типтідашв5 (ХР. 7551721)
ЗЕО ІЮ МО: 81 поліпептид ОСАТІ Кісіпи5 соттипі5 (ААК11479.1)
ЗЕО ІЮ МО: 82 поліпептид ОСАТІ1 Мегпісіа тогаї (АВС94472.1)
ЗЕО ІЮ МО: 83 поліпептид ОСАТІ Мегпопіа даіатепвіз (АВМ21945.1)
ЗЕО ІЮ МО: 84 поліпептид ОСАТІ1 Мегпопіа даіатепвіз (АВМ21946.1)
ЗЕО ІЮ МО: 85 поліпептид ОБАТІТ Епопутиз аріайв5 (ААМ31083.1)
ЗЕО ІЮ МО: 86 поліпептид ОСАТІ1 Саєпогппарайі5 еїєдапо (ААЕ82410.1)
ЗЕО ІЮ МО: 87 поліпептид ОСАТІТ Кайизх погуедісих (МР 445889.1)
ЗЕО ІЮ МО: 88 поліпептид ОСАТІ1 Ното зарієпз (МР. 036211.2) (510) ЗЕО ІЮ МО: 89 мотив КИ (КС М ТЗН Кк)
ЗЕО ІЮ МО: 90 мотив МУК! (Е/ХЕАНІ МО К)
ЗЕО ІЮ МО: 91 мотив МК (СГ АА ЇЇ К М МУ б)
ЗЕО ІЮ МО: 92 мотив МУКІ! (З Х СЕ /А На Х)
ЗЕО ІЮ МО: 93 мотив МК! (НННО МО ККУ/ЕАКІ о Р/К М)
ЗЕО ІЮ МО: 94 мотив ШК! (ФОЕЕА А АХ У 0)
ЗЕО ІЮ МО: 95 поліпептид олеозин Вгаззіса пари5з (САА57545.1)
ЗЕО ІО МО: 96 поліпептид олеозин 51-1Вгавзвіса парив (АСО69504.1)
ЗЕО ІО МО: 97 поліпептид олеозин 52-1 Вгазвіса пари5 (АСО69503.1)
ЗЕО ІО МО: 98 поліпептид олеозин 53-1 Вгазвіса пари5 (АСОа69513.1)
ЗЕО ІО МО: 99 поліпептид олеозин 54-1 Вгазвіса пари5 (АСО69507.1)
ЗЕО О МО: 100 поліпептид олеозин 55-1 Вгавззіса пари5 (АСИаб69511.1)
ЗЕО ІЮ МО: 101 поліпептид олеозин 1 Агаспіз пуродаєа (АА220276.1)
ЗЕО ІЮ МО: 102 поліпептид олеозин 2 Агасіпіз пуродаєа (ААО21500.1)
ЗЕО ІЮ МО: 103 поліпептид олеозин З Агаспіз пуродаєа (ААО21501.1)
ЗЕО ІЮ МО: 104 поліпептид олеозин 5 Агаспіх пуродаєа (АВС96763.1)
ЗЕО ІЮ МО: 105 поліпептид олеозин 1 Кісіпи5 соттипів (ЕЕР40948.1)
ЗЕО ІЮ МО: 106 поліпептид олеозин 2 Кісіпи5 соттипів (ЕЕР51616.1)
ЗЕО ІЮ МО: 107 поліпептид олеозин Сіусіпе тах ізоформа а (Р29530.2)
ЗЕО ІЮ МО: 108 поліпептид олеозин Сіусіпе тах ізоформа Б (Р29531.1)
ЗБО І МО: 109 поліпептид олеозин Ііпит и5йайзбзітит низькомолекулярна ізоформа (АВВО1622.1)
ЗБЕО ІЮ МО: 110 амінокислотна послідовність поліпептиду олеозину Гіпит и5найввітит високомолекулярна ізоформа (АВВО1624.1)
ЗЕО І МО: 111 поліпептид олеозин Неїїапіпи5 аппии5 (САА44224.1)
ЗЕО ІЮ МО: 112 поліпептид олеозин 7еа тау5 (МР 001105338.1)
ЗЕО ІЮ МО: 113 поліпептид стеролеозин Вгаззіса пари5 (АВМ30178.1)
ЗЕО О МО: 114 поліпептид стеролеозин 51 01-1 Вгазвіса париз (АСОаб9522.1)
ЗЕО ІО МО: 115 поліпептид стеролеозин 5І.02-1 Вгазвіса париз (АСОаб9525.1)
ЗЕО ІЮ МО: 116 поліпептид стеролеозин 5езатит іпаісит (ААЇ. 133151)
Зо ЗЕО ІЮ МО: 117 поліпептид стеролеозин 7еа тауз (МР. 001152614.1)
ЗЕО ІО МО: 118 поліпептид калеозин СІ О-1 Вгазвіса париз (АСО69529.1)
ЗЕО ІО МО: 119 поліпептид калеозин СІ О-3 Вгазвіса париз (АСОаб9527.1)
ЗЕО ІЮ МО: 120 поліпептид калеозин Зезатит іпаісит (ААЕ13743.1)
ЗЕО ІЮО МО: 121 поліпептид калеозин 7еа тауз (МР 001151906.1)
ЗЕО ІЮ МО: 122 послідовність Т-ДНК рУРЗ502 (вставлена в геном)
ЗЕО ІЮО МО: 123 послідовність вектора рОРЗ3507
ЗЕО ІЮ МО: 124 послідовність лінкера
ЗБО ІЮ МО: 125 часткова послідовність С(О1І-58 Місойапа Бепіпатіапа, вибрана для сайленсингу шпРНКІ (ртм46)
ЗБЕО ІЮ МО: 126 часткова послідовність АГФази М. їарасит, вибрана для сайленсингу шШпРНКІ (ртУ35)
ЗЕО ІЮ МО: 127 мотив ліпази ОХІХО
ЗЕО ІЮ МО: 128 мотив ацилтрансферази НХ(4)О
ЗЕО ІЮ МО: 129 ймовірний мотив зв'язування с ліпідом МХ(З3)НОГ
ЗЕО ІЮ МО: 130 полінуклеотид Соі58 Агарідорзів (пайапа (ММ 118548.1)
ЗЕО І МО: 131 полінуклеотид СОі58 Вгаспуродішт аібїтаспуоп (ХМ 003578402.1)
ЗЕО ІЮ МО: 132 полінуклеотид Соі58 СіІусіпе тах (ХМ 003523590.1)
ЗЕО ІЮ МО: 133 полінуклеотид Соі58 7еа тауз (ММ 001155541.1)
ЗЕО ІЮ МО: 134 полінуклеотид СОоі58 Богопит БісоЇог (ХМ 002460493.1)
ЗЕО ІЮ МО: 135 полінуклеотид Соі58 Кісіпи5 соттипіб5 (ХМ 002510439.1)
ЗЕО ІЮ МО: 136 полінуклеотид Соі58 Меаїісадо ігипсаїша (ХМ 003603685.1)
ЗЕО ІЮ МО: 137 полінуклеотид І ЕС2 Агабрідорзів (пайапа (ММ 102595.2)
ЗЕО ІЮ МО: 138 полінуклеотид ГЕС2 Меадісадо (пипсаїшіа (Х60387.1)
ЗЕО ІЮ МО: 139 полінуклеотид ГЕС2 Вгаззіса париз (НМ370539.1)
ЗЕО ІЮ МО: 140 полінуклеотид ВВМ Агабрідорзіз Іпаіапа (ММ 121749.2)
ЗЕО ІЮО МО: 141 полінуклеотид ВВМ Меаісадо ігипсаїша (АУ899909.1)
ЗЕО ІЮ МО: 142 поліпептид ГЕС2 Агарідорвів Іпаійапа (МР 564304.1)
ЗЕО ІЮ МО: 143 поліпептид ГЕС2 Меаісадо ігипсаїіа (САА42938.1)
ЗЕО ІЮ МО: 144 поліпептид ГЕС2 Вгаззіса пари5 (А0О16343.1) (510) ЗЕО ІЮ МО: 145 поліпептид ВВМ Агабідорзі5 (паапа (МР. 197245.2)
ЗЕО ІЮ МО: 146 поліпептид ВВМ Меаісадо ігипсашіа( ААМ/82334.1)
ЗЕО ІЮ МО: 147 індуцибельний промотор аЇсСА Азрегадїіїи5 підег
ЗЕО ІЮ МО: 148 індуктор АІсК, що активує промотор АЇїсСА в присутності етанолу
ЗЕО ІО МО: 149 І ЕС1 Агарідорзів ІНнаійапа (ААС39488)
ЗЕО ІО МО: 150 ГЕС1 Агарідорзів Іугтата (ХР. 002862657)
ЗЕО ІО МО: 151 І ЕСТ1 Вгаззіса париз (АОЕ81045)
ЗЕО ІО МО: 152 І ЕСІ1 Вісіпи5 соттипів (ХР. 002522740)
ЗЕО ІЮО МО: 153 І ЕС1 Спіусіпе тах (ХР. 006582823)
ЗЕО ІО МО: 154 І ЕС1 Медісадо Шпсашіа (АЕК49653)
ЗЕО ІО МО: 155 І ЕС1 7єа тауз (ААКУ5562)
ЗЕО ІО МО: 156 І ЕС1 Агасніз нуродаєа (АОС33213)
ЗЕО ІО МО: 157 І ЕС1-подібний Агарідорбзі5 (паіапа (ААМ15924)
ЗЕО ІО МО: 158 І ЕС1-подібний Вгаз5зіса париз (АНІ94922)
ЗЕО ІО МО: 159 І ЕС1-подібний Ріазеоїи5 соссіпеи5 (ААМО1148)
ЗЕО ІО МО: 160 РОЗ Агабрідорвів Інаііапа (ААС35247)
ЗЕО ІО МО: 161 РОБ5З Вгаззіса пари
ЗЕО ІЮ МО: 162 ГО5ЗМедісадо іпопсаїшіа
ЗЕО ІЮ МО: 163 послідовність КДНК 5ОРІ1І Агарідорзіз (Шаїїапа, номер доступу ММ 120486, 3275 нуклеотидів (нт)
ЗЕО ІЮ МО: 164 КДНК 50РІ1 Вгаззіса пари5 номер доступу СОМО78290
ЗЕО ІЮ МО: 165 КДНК 50РІ1 Вгаспуроадічт аїтаспуоп, 2670 нуклеотидів (нт)
ЗЕО ІЮ МО: 166 КДНК 5ОРІ1 Роршиз гіспосагра, 3884 нт
ЗЕО ІЮ МО: 167 КДНК ЗОРІ Медісадо ігипсаїша; ХМ 003591377; 2490 нт
ЗЕО ІЮ МО: 168 КДНК ЗОРІ Сіусіпе тах ХМ 003521103; 2783 нт
ЗЕО ІЮ МО: 169 КДНК ЗОРІ огуопит Бісоїюг ХМ 002458486; 2724 нт
ЗЕО ІЮ МО: 170 КДНК ЗОРІ 7еа таух, ММ 001175206; 2985 нт
ЗЕО ІЮ МО: 171 КДНК ЗОРІ Рпузсоптіїгеїа раїеп5, ХМ 001758117; 1998 нт
ЗЕО ІЮ МО: 172 КДНК ЗОРІ Ногаешт мцідаге, АКЗ372092; 3439 нт
ЗЕО ІЮ МО: 173 КДНК ЗОРІ Місоїйапа репіпатіапа, Мри5т6404201
Ко) ЗЕО ІЮ МО: 174 ділянка КДНК ЗОРІ Місоїйапа Брепіпатіапа, що являє собою мішень для сайленсингу шпРНКІ
ЗЕО ІЮ МО: 175 промотор гена 5ОРІ1 Агарідорзвіз ІПаїіапа, 1,5 тисячі пар основ
ЗЕО ІЮ МО: 176 нуклеотидна послідовність, комплементарна гену резИО-олеозину в Т-ДНК рУРЗ502. В порядку (комплементарної послідовності): термінатор лектину Сіусіпе тах 348 нт, З" екзон 255 нт, інтрон ШВО10 304 нт, 5 екзон 213 нт, промотор 5501 1751 нт
ЗЕО ІЮ МО: 177 КкКДНК пластидної СРАТ Агарідорзів (Ппаійапа, ММ 179407
ЗЕО ІЮ МО: 178 поліпептид пластидної СРАТ Агабідорзів Іпаійапа, ММ 179407
ЗЕО ІЮ МО: 179 кКДНК пластидної СРАТ Роршісиз ігіспосагра, ХР. 006368351
ЗЕО ІЮ МО: 180 кКДНК пластидної СРАТ даїгорпа сигсаз, АСКб61638
ЗЕО ІЮ МО: 181 кКДНК пластидної ОРАТ Кісіпих5 соттипіх, ХР. 002518993
ЗЕО ІЮ МО: 182 КкКДНК пластидної СРАТ Неїїапіпи5 аппиих, АОМ16382
ЗЕО ІЮ МО: 183 КкКДНК пластидної СРАТ Меадісадо Ігипсаїшіа, ХР. 003612801
ЗЕО ІЮ МО: 184 КкКДНК пластидної СРАТ Сіусіпе тах, ХР 003516958 5ЕО ІЮ МО: 185 кКДНК пластидної СРАТ Сагпйпатиз іїіпсіогіиз, САНЕЗРАСТА
ЗЕО ІЮ МО: 186 кКДНК пластидної СРАТ Зоїапит їирегозит, ХР. 006352898
ЗЕО ІЮ МО: 187 КДНК пластидної СРАТ Огула заїїма, японської, ММ 001072027
ЗЕО ІЮ МО: 188 кКДНК пластидної СРАТ Зогуопит Бісоїог, ХМ 002467381
ЗЕО ІЮ МО: 189 кКДНК пластидної СРАТ 7еа тауз, ММ 001158637
ЗЕО ІЮ МО: 190 кКДНК пластидної СРАТ Ногдеит мцідаге, АКЗ371419
ЗЕО ІЮ МО: 191 кКДНК пластидної СОРАТ РпузсотіїгеПа раїеп5, ХМ 001771247
ЗЕО ІЮО МО: 192 КкДНК пластидної ОРАТ Спіатудотопазх геіппагайії, ХМ 001694925
ЗЕО І МО: 193 14:0-АПБ тіоестераза Сіппатотит сатрпрога (Сіпса-ТЕ), хлоропластна, 382 амінокислоти (ак), (номер доступу О39473.1)
ЗБЕО ІЮО МО: 194 ацил-АПБ тіоестераза БаїВ1 Сосо5 писіїега (Соспи-ТЕ1; 417 ак, номер доступу АЕМ72519.1
ЗБО ІЮО МО: 195 ацил-АПБ тіоестераза Ба(В2 Сосо5 писіїега (Соспи-ТЕ2; 423 ак, номер доступу АЕМ72520.1)
ЗБО І МО: 196 ацил-АПБ тіоестераза Ба(В3 Сосо5 писіїега (Соспи-ТЕЗ; 414 ак, номер доступу АЕМ72521.1)
ЗЕО ІО МО: 197 ацил-(АПБ) тіоестераза типа В Сирнеєа Іапсеоїаїа (Сиріа-ТЕ, 419 ак, номер доступу САВбО830.1)
ЗЕО І МО: 198 РаїіВ1 Сирнєа мізсовізвіта (Сирмі-ТЕ; 419 ак, номер доступу АЕМ72522.1)
ЗЕО ІЮ МО: 199 12:0-АПБ тіоестераза Штрвеїйшіагіа саїйогпіса (лауроїл-ацилпереносного білка тіоестераза) (Штьса-ТЕ, 382 ак; номер доступу 0416351)
ЗЕО І МО: 200 І РААТ Сосоз писіїега (Соспи-І РААТ, 308 ак, номер доступу 042670.1)
ЗБО ІЮО МО: 201 пластидна І РААТІ Агабідорзхі5 (Паїйапа (Агац-РІ РААТ; 356 ак, номер доступу АЕЕ85783.1)
ЗЕО І МО: 202 ЕАТА!1 Агабрідорзів ІНаїІїапа
ЗЕО ІО МО: 203 РГАТА2 Агарідорзвів ІНаїІїапа
ЗЕО І МО: 204 ЕАТВ Агабрідорзів ІНайіапа
ЗЕО ІЮ МО: 205 М/ВІЗ Агарідорзвів ІНайііапа
ЗЕО ІЮ МО: 206 М/ВІ4 Агарідорзвів ІНайііапа
ЗЕО ІО МО: 207 М/ВІЇ Амепа заїїма
ЗЕО ІО МО: 208 М/ВІТ Зогдпит бБісоїог
ЗЕО ІО МО: 209 М/ВІ1 7єа таув
ЗЕО І МО: 210 МУ/ВІ1 Тііадіса зебітега
ЗЕО ІЮО МО: 211 послідовність промотору пататину ВЗ33З 5. шврегозит
ЗЕО ІЮ МО 212-215 і 245-254 олігонуклеотидні праймери
ЗЕО ІЮ МО: 216 ділянка промотору 5ЕЕ1 7. тауз (1970 нт із номера доступу Ау494982)
ЗЕО ІЮ МО: 217 послідовність промотору АІ5АР А. ІШогаїї5, номер доступу 00885219
ЗЕО ІЮ МО: 218 послідовність промотору АгКоЇїС А. гпігодепе5, номер доступу 00160187
ЗЕО ІЮ МО: 219 конструкція шпРНКІ, що містить фрагмент 732 пари основ (по) пластидної
СРАТ М. рРепінатіапа
ЗЕО ІЮ МО: 220 ОСАТІ Ейавіз диіпеепві5 (масляна пальма)
ЗЕО ІЮ МО: 221 МУВ7З б. тах, номер доступу АВНО2868
ЗЕО ІЮ МО: 222 БАРБІ А. Шаїїйапа, номер доступу ААМ14360
ЗЕО ІЮ МО: 223 АСІ 15 А. Іпаіапа, номер доступу МР. 196883
ЗЕО ІЮ МО: 224 МУВ118 А. паіапа, номер доступу АА5З58517
Коо) ЗЕО ІЮ МО: 225 МУВ115 А. Іпаіапа, номер доступу АА5З10103
ЗЕО ІЮ МО: 226 ТАММЕЇ А. ІПпаіапа, номер доступу ВАЕ44475
ЗЕО ІЮ МО: 227 МОЗ А. ІПаіапа, номер доступу МР. 565429
ЗЕО ІЮ МО: 228 СЕКЗ2а!1 В. пари, номер доступу АЕВ74090
ЗЕО ІЮ МО: 229 СЕКЗ2а2 В. пари, номер доступу АЕВ74089
ЗЕО ІЮ МО: 230 РНК А. ІПаїііапа, номер доступу ААМ72198
ЗЕО ІЮ МО: 231 фрагмент ТО01 М. репіпатіапа
ЗЕО ІЮ МО: 232 амінокислоти ОРІ картоплі
ЗЕО ІЮ МО: 233 нуклеотидна послідовність 5ОР1 картоплі
ЗЕО ІЮ МО: 234 маленька субодиниця АГф-ази картоплі
ЗЕО ІЮ МО: 235 нуклеотидна послідовність маленької субодиниці АГФ-ази картоплі
ЗЕО ІЮ МО: 236 нуклеотидна послідовність І ОАР-1 Заріит зерітегит
ЗЕО ІЮ МО: 237 амінокислотна послідовність І ОАР-1 бЗаріит зебітетит
ЗЕО ІЮ МО: 238 нуклеотидна послідовність І ОАР-2 Заріит зерітегит
ЗЕО ІЮ МО: 239 амінокислотна послідовність І ОАР-2 Заріит зебітетит
ЗЕО ІЮ МО: 240 нуклеотидна послідовність І ЮАР-З Заріит зерітегит
ЗЕО ІЮ МО: 241 амінокислотна послідовність І ЮАР-З3 Заріит зебітетит
ЗЕО ІЮ МО: 242 5ОРІ 5. рісоїог (номер доступу ХМ 002463620)
ЗЕО ІЮ МО: 243 нуклеотидна послідовність БОРІ1 Т . аезіїмит (номер доступу АКЗ34547)
ЗЕО Ір МО: 244 фрагмент ЗБОРІ шпРНКІ 5. Бісоїог
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Загальні методи
Якщо конкретно не визначено інше, всі технічні і наукові терміни, використовувані у даному документі, слід інтерпретувати як маючі таке ж значення, якого їм звичайно надає середній фахівець в даній галузі (наприклад, культури клітин, молекулярної генетики, біології рослин, клітинної біології, хімії білка, хімії ліпідів і жирних кислот, одержання біопалива і біохімії).
Якщо не вказано інше, методи хімії рекомбінантного білка, культури клітин та імунологічні методи, використовувані в даному винаході, являють собою стандартні методи, добре відомі фахівцям з рівня техніки. Такі методи описані і пояснені в літературних джерелах, наприклад, у.
Регбраї, А Ргасіїса! (зціде то МоїІесшаг СіІопіпо, Уопп Уміеу апа Зопз (1984), 9. затьгоок із співавт., бо Моїесшіаг Сіопіпд: А Гарогаюгу Мапиаї, Соїй 5Зргіпуд Нагроиг І арогафогу Ргез5 (1989), Т.А. Вгом/п
(редактор), Еззепіїіа! МоІесшаг Віоіоду: А Ргасіїса! Арргоасі, Моїштез 1 апа 2, ІКГ. Ргезз (1991),
О.М. Сіомег апа В.О0. Натез (редактори), ОМА Сіопіпд: А Ргасіїса! Арргоасі, Моїштев 1-4, ІВІ
Ргезз (1995 і 1996), Г.М. А!ЄзиБвеї із співавт. (редактори), Ситепі Ргоїосої!5 іп Моїесшіаг Віоіоду,
Стеепе Рир. Авзосіаїе5з апа УмМіеу-Іпівтзсієпсе (1988, включаючи всі оновлення, видані до теперішнього часу), Ей Напоух апа Оаміад І апе (редактори) Апіїбодіев: А І арогаїогу Мапиаї, Соїа
Зрігіпуд Нагфошг І арогаїюгу, (1988), і 9У.Е. Соїїдап із співавт. (редактори), Ситепі Ргоїосоїв5 іп
Іттипоіоаду, Чойп У/їеєу 4 5оп5 (включаючи всі оновлення, видані до теперішнього часу).
Деякі визначення
Термін "трансгенний організм, що не належить до людського роду" позначає, наприклад, суцільну рослину, водорість, тварину, що не належить до людського роду, або організм, придатний для ферментації, такий як дріжджі або гриб, що містить один або більше екзогенних полінуклеотидів (трансген) або поліпептидів. У варіанті реалізації трансгенний організм, що не належить до людського роду, не є твариною або її частиною. В одному варіанті реалізації трансгенний негуманоїдний організм являє собою фототрофний організм (наприклад, рослину або водорість), здатний до одержання із сонячного світла енергії для синтезу поживних органічних сполук.
Термін "екзогенний" в контексті полінуклеотиду або поліпептиду позначає полінуклеотид або поліпептид, якщо він присутній в клітині, що від природи не містить полінуклеотиду або поліпептиду. Така клітина в даному документі називається "рекомбінантною клітиною" або "гтрансгенною клітиною". У варіанті реалізації екзогенний полінуклеотид або поліпептид походить з іншого роду відносно клітини, що містить екзогенний полінуклеотид або поліпептид.
В іншому варіанті реалізації екзогенний полінуклеотид або поліпептид походить з іншого виду. В одному варіанті реалізації екзогенний полінуклеотид або поліпептид експресується в рослині- хазяїні або клітині рослини, і екзогенний полінуклеотид або поліпептид походить від іншого виду або роду. Екзогенний полінуклеотид або поліпептид може бути неприродним, наприклад, таким як синтетична молекула ДНК, що одержана способами рекомбінації ДНК. Молекула ДНК може, часто бажано, містити кодуючу білок ділянку, що є кодон-оптимізованою для експресії в клітині, з одержанням в такий спосіб поліпептиду, який містить таку ж послідовність амінокислот, що і природний поліпептид, навіть якщо нуклеотидна послідовність кодуючої білок ділянки має неприродне походження. Екзогенний полінуклеотид може кодувати або екзогенний поліпептид може бути: діацилгліцерол ацилтрансферазою (ОСАТ), наприклад, ОБАТІ або ОСАТ2,гліцерол фактором транскрипції М/гіпКіей 1 (МУ/УКІ!), на ПМТ, такому як олеозин або переважно ДВФЗ, тіоестеразою жирних кислот, такою як поліпептид ГАТА або ЕГАТВ, або поліпептидом, що пригнічує сайленсинг. МАТМЕАТМОАТ
В даному документі термін "екстрагований ліпід" позначає композицію, екстраговану із трансгенного організму або його частини, яка містить щонайменше 60 95 мас. ліпіду.
В даному документі термін "неполярний ліпід" позначає жирні кислоти і їх похідні, розчинні в органічних розчинниках, але нерозчинні у воді. Жирні кислоти можуть бути жирними кислотами у вільній та/"або естерифікованій формі. Приклади естерифікованих форм включають, без обмежень, триацилгліцерол (ТАГ), діацилгліцерол (ДАГ), моноацилгліцерол (МАГ). Неполярні ліпіди також включають стероїди, естери стероїдів та естери воску. Неполярні ліпіди також відомі як "нейтральні ліпіди". При кімнатній температурі неполярний ліпід звичайно є рідиною.
Бажано, неполярний ліпід в основному (» 5095) містить жирні кислоти, довжина яких становить щонайменше 16 атомів карбону. Більш бажано, щонайменше 5095 загальних жирних кислот в неполярному ліпіді являють собою С18 жирні кислоти, наприклад, олеїнову кислоту.
Переважно, щонайменше 595 загальних жирних кислот у неполярних ліпідах являють собою
С12 або С14 жирні кислоти, або обидві. У варіанті реалізації винаходу щонайменше 5095, більш бажано щонайменше 7095, більш бажано щонайменше 8095, більш бажано щонайменше 9095, більш бажано щонайменше 9195, більш бажано щонайменше 9295, більш бажано щонайменше
БО 9395, більш бажано щонайменше 9495, більш бажано щонайменше 9595, більш бажано щонайменше 9695, більш бажано щонайменше 9795, більш бажано щонайменше 9895, більш бажано щонайменше 9995 жирних кислот в неполярному ліпіді за винаходом можуть являти собою ТАГ. Неполярний ліпід може бути додатково очищений або оброблений, наприклад, гідролізом сильною основою, для вивільнення вільної жирної кислоти, або фракціонуванням, дистиляцією або подібним методом. Неполярний ліпід може бути присутнім в або може бути одержаний із частин рослини, наприклад, насіння, листя, клубеня, буряку або плоду, із рекомбінантних клітин або із організмів, що не належать до людського роду, наприклад, дріжджів. Неполярний ліпід за винаходом може утворювати частину "олії з насіння", якщо він одержаний з насіння.
Концентрація вільного та етерифікованого стероїду (наприклад, ситостеролу, кампестролу, стигмастеролу, брасікастеролу, Д5-авенастеролу, ситостанолу, кампестанолу і холестерину) в екстрагованому ліпіді може бути такою, як описано у РПйЇйр5 із співавт. (2002). Стероїди в рослинних маслах присутні у вигляді вільних спиртів, естерів із жирними кислотами (естерифіковані стероїди), глікозидів стероїдів та ацильованих глікозидів стероїдів. Концентрації стероїдів в природних рослинних маслах (масло з насіння) варіюють до максимального вмісту приблизно 1100 мг/100 г. Гідрогенізоване пальмове масло містить одну з найнижчих концентрацій для природних масел, приблизно 60 мг/100 г. Витягнуті або екстраговані масла з насіння за винаходом бажано містять від приблизно 100 до приблизно 1000 мг загального стероїду/100 г масла. У випадку застосування в ролі продукту харчування або корму, бажано, щоб стероїди були присутні, головним чином, у вільних або естерифікованих формах замість глікозильованих форм. В маслах з насіння за даним винаходом, бажано щонайменше 5095 стероїдів в маслах присутні, як етерифіковані стероїди, за винятком соєвої олії, яка містить близько 2595 естерифікованих стероїдів. Олії каноли і рапсу за винаходом бажано містять від приблизно 500 до приблизно 800 мкг загального стероїда/100 г, причому основним стероїдом є ситостерол, і другим за поширеністю -- кампестрол. Кукурудзяна олія за винаходом бажано містить від приблизно 600 до приблизно 800 мг загального стероїду/100 г, причому основним стероїдом є ситостерол. Соєва олія за винаходом бажано містить від приблизно 150 до приблизно 350 мг загального стероїду/100 г, причому основним стероїдом є ситостерол, і другим за поширеністю -- стигмастерол, і, при цьому, вміст вільного стероїду є вищим, ніж естерифікованого стероїду. Бавовняна олія за винаходом бажано містить від приблизно 200 до приблизно 350 мг загального стероїду/100 г, причому основним стероїдом є ситостерол.
Кокосове масло і пальмове масло за винаходом бажано містять від приблизно 50 до приблизно 100 мг загального стероїду/100 г, причому основним стероїдом є ситостерол. Сафлорова олія за винаходом бажано містить від приблизно 150 до приблизно 250 мг загального стероїду/100 г, причому основним стероїдом є ситостерол. Арахісове масло за винаходом бажано містить від приблизно 100 до приблизно 200 мг загального стероїду/100 г, причому основним стероїдом є ситостерол. Кунжутна олія за винаходом бажано містить від приблизно 400 до приблизно 600 мг загального стероїду/100 г, причому основним стероїдом є ситостерол. Олія соняшнику за винаходом бажано містить від приблизно 200 до 400 мг загального стероїду/100 г, причому основним стероїдом є ситостерол. Масла, одержані з вегетативних частин рослини за винаходом, бажано містять менше 200 мг загального стероїду/100 г, більш бажано менше 100 мг загального стероїду/100 г, і найбілош бажано менше 50 мг загального стероїду/100 г, причому велика частина стероїдів присутня у формі вільних стероїдів.
В даному документі термін "масло з насіння" позначає композицію, одержану з насіння/зерна рослини, яка містить щонайменше боОмас. 95 ліпідів, або таку, яку можна одержати з насіння/зерна, якщо масло з насіння все ще присутня в насінні/зерні. Таким чином, масло з насіння за винаходом включає масло з насіння, яке присутнє в насінні/зерні або його частині, а також масло з насіння, яке екстраговано із насіння/зерна. Масло з насіння бажано являє собою екстраговане масло з насіння. Олія з насіння при кімнатній температурі звичайно є рідиною.
Бажано, щоб загальний вміст жирних кислот (ЗЖК) в маслі з насіння, в основному (» 5095), включав жирні кислоти, довжина яких становить щонайменше 16 атомів карбону. Більш бажано, щонайменше 5095 загальних жирних кислот в маслі з насіння являють собою С18 жирні кислоти, наприклад, олеїнову кислоту. Жирні кислоти звичайно присутні в естерифікованій формі, наприклад, такій як ТАГ, ДАГ, ацил-КоА або фосфоліпід. Жирні кислоти можуть бути присутні у вільній та/або естерифікованій формі. У варіанті реалізації винаходу щонайменше 5095, більш бажано щонайменше 7095, більш бажано щонайменше 8095, більш бажано щонайменше 9095, більш бажано щонайменше 9195, більш бажано щонайменше 9295, більш бажано щонайменше 9395, більш бажано щонайменше 9495, більш бажано щонайменше 9595, більш бажано
БО щонайменше 9695, більш бажано щонайменше 9795, більш бажано щонайменше 9895, більш бажано щонайменше 9995 жирних кислот в маслі з насіння за винаходом можуть бути знайдені у вигляді ТАГ. У варіанті реалізації масло з насіння за винаходом є "істотною мірою очищеним" або "очищеним" маслом, що відокремлене від одного або більше інших ліпідів, нуклеїнових кислот, поліпептидів або інших забруднюючих молекул, з якими воно пов'язане в насінні або неочищеному екстракті. Бажано, істотною мірою очищене масло з насіння є щонайменше на 6095 вільним, більш бажано, щонайменше на 7595 вільним, і більш бажано, щонайменше на 9095 вільним від інших компонентів, з якими воно пов'язане у насінні або екстракті. Масло з насіння за винаходом може додатково містити молекули, що не належать до класу жирних кислот, наприклад, без обмежень, стероїди. У варіанті реалізації масло з насіння являє собою олію 60 каноли (вид Вгаззіса, наприклад, Вгазвбвіса сагіпаїа, Вгаз55віса |ппсеа, Вгазвзіса паробгазвіса,
Вгаззіса парив), гірчичну олію (Вгазвіса |ппсеа), масло інших видів Вгаззіса (наприклад, Вгазвзіса паробргазвзіса, Вгазвзіса сатеїїпа), олію соняшника (вид Неїїапіпи5, наприклад, Неїїапіпи5 аппицв5), олію льону (Гіпит и5іаїйввітит), соєву олію (Сіусіпе тах), сафлорову олію (Сапнатив
Мпеогійв), кукурудзяну олію (/єа тау5з), олію тютюну (вид Місоїйапа, наприклад, Місоїйапа їабасит або Місойапа Бепіпатіапа), арахісове масло (Агаспіє НпНуродаєа), пальмове масло (ЕІаеї5 диіпеепвів), бавовняну олію (Со55урішт Пітгзшит), кокосове масло (Сосов писіїтега), олію авокадо (Регзєа атегісапа), оливкову олію (Оієа епгораєа), олію кеш'ю (Апасагаїшт оссідепіа!є), олію макадамії (Масадатіа іпіегугітоїїа), мигдалеву олію (Ргипиб5 атудаа!ш5), олію насіння вівса (Амепа 5заїїма), рисову олію (вид Огуга, наприклад, Огула займа та Огула діабегтіта), олію насіння Агарідорзіз (Агарідорзіз ІНайапа) або олію насіння Асгосотіа асцівєаїа (макаубська пальма), Агасіпіз пуродаєа (арахіс), Авігосагунт тигитиги (мурумуру), Авігосагушт мцЇдаге (тукума), АЧаїЇеа дегаепвіз (атталія), АНаІєа Ппитії5 (американська масляна пальма), АНаїєа оІеітега (андайя), АНаІєа рГаїегаїа (урікурі), АйаіІеа 5ресіоза (бабасу), Веїа муцідагі5 (цукровий буряю), Сатеїїпа займа (фальшивий льон), Сагуосаг Бгазійєпве (пекві), Статре аБбузвзіпіса (абіссинська капуста), Сиситів тео (диня), Ногдєит муцідаге (ячмінь), ЧУаїгорпйа сигсав5 (лікувальний горіх), дЧоаппевзіа ргіпсер5 (ліщина арара), Гісапіа гідіча (ойтика), Гиріпивб апдивійоїйш5 (люпин), Маша Пехиоза (пальма буриті), Махітіїйапа таїгра (пальма інайя), вид
Мізсапіпйи5, наприклад, Міхсапійпиз х дідапівеиз і Мізсапійив5 5іпепві5, Оєпосагри5 Басаба (бакаба- до-азейте), Оєпосагри5 раїаца (патайя), Оєпосагриз адівіїснив (бакаба-де-лек), Рапісит мігдат (просо прутоподібне), Рагадиеїра рагаєпвзі5 (багно), Регзгеа атепсапа (авокадо), Ропдатіа ріппаїа (індійський бук), Роршиве іспосагра, Вісіпи5 соттипіє (рицина звичайна), вид
Засспагит (цукрова тростина), 5езатит іпаісит (кунжут), Зоїапит (шбегозит (картопля), вид
БЗогупит, наприклад, бБогапит бБісоїог, богапит муцідагє, Тпеоргота дгапайогит (какао), вид
Тийоїййт, Т/ййгіпах Бгазійепбзіє (бразильська голчаста пальма) і вид Тійісит (пшениця), наприклад, Тгйісит аевіїмит. Масло з насіння може бути екстраговане з насіння/зерна за будь- яким способом, відомим з рівня техніки. Це звичайно включає екстракцію неполярними розчинниками, такими як діетиловий етер, петролейний ефір, суміш хлороформ/метанол або бетанол, що загалом асоціюються з першим подрібненням насіння. Ліпіди, пов'язані з крохмалем у насінні, можуть бути екстраговані за допомогою насиченого водою бутанолу.
Масло з насіння може бути "дегумоване" за способами, відомими з рівня техніки, з метою видалення полісахаридів, або оброблена іншими способами для видалення забруднюючих речовин або підвищення чистоти, стабільності або покращення кольору. ТАГ та інші естери в маслі з насіння можуть бути гідролізовані з метою вивільнення вільних жирних кислот, або масло з насіння може бути гідрогенізоване, оброблене хімічним або ферментним способом, як відомо з рівня техніки.
В даному документі термін "жирна кислота" позначає карбоксильну кислоту з аліфатичним хвостом розміром щонайменше 8 атомів карбону, насиченим або ненасиченим. Переважні жирні кислоти містять карбон-карбоновий ланцюг завдовжки щонайменше 12 атомів карбону.
Більшість природних жирних кислот містить парну кількість атомів карбону, оскільки в їх біосинтезі приймає участь ацетат, що містить два атоми карбону. Жирні кислоти можуть знаходитися у вільному стані (неестерифіковані) або в естерифікованій формі, наприклад, як частина ТАГ, ДАГ, МАГ, зв'язку ацил-КоА (тіоестерного), зв'язку ацил-ацилпереносний білок (АПБ) або іншій ковалентно зв'язаній формі. Будучи ковалентно зв'язаною в естерифікованій формі, жирна кислота в даному документі позначається як група "ацил". Жирна кислота може бути естерифікованою як фосфоліпід, наприклад, фосфатидилхолін (ФХ), фосфатидилетаноламін, фосфатидилсерин, фосфатидилгліцерол, фосфатидилінозитол або дифосфатидилгліцерол. Насичені жирні кислоти не містять кратних зв'язків або інших функціональних груп вздовж ланцюга. Термін "насичений" позначає гідрогенкарбон, в якому всі атоми карбону (окрім карбоксильної групи І-СООНІ) зв'язані з максимальною кількістю атомів гідрогену. Іншими словами, омега (0)) кінець містить З атоми гідрогену (СНЗ-), і кожен атом карбону в ланцюгу зв'язаний із 2 атомами гідрогену (-СН2-). Ненасичені жирні кислоти за формою подібні до насичених жирних кислот, за винятком того, що одна або більше алкенових функціональних груп розташовані уздовж ланцюга, причому кожен алкен замінює частину одиничного зв'язку "-БСН2-СН2-" в ланцюгу частиною подвійного зв'язку "-СН-СН-" (тобто, подвійний зв'язок між двома атомами карбону). Два додаткових атоми карбону в ланцюгу, приєднані до кожного з кінців подвійного зв'язку, можуть знаходитися у цис або транс конфігурації.
В даному документі термін "мононенасичена жирна кислота" або "МНЖК" позначає жирну кислоту, що містить щонайменше 12 атомів карбону у карбоновому ланцюгу і тільки одну бо алкенову групу (подвійний карбон-карбоновий зв'язок), яка може знаходитися в естерифікованій або неестерифікованій (вільній) формі. В даному документі термін "поліненасичена жирна кислота" або "ПНЖК" позначає жирну кислоту, яка містить щонайменше 12 атомів карбону у карбоновому ланцюгу і щонайменше дві алкенових групи (подвійні карбон-карбонові зв'язки), яка може знаходитися в естерифікованій або неестерифікованій формі.
В даному документі жирна кислота із "середньою довжиною ланцюга", додатково позначена як "СЛЖК", містить ацильний ланцюг завдовжки 8-14 атомів карбону. Ацильний ланцюг може бути модифікованим (наприклад, він може містити один або більше подвійних зв'язків, гідроксильних груп, епоксигруп і т.д) або не модифікованим (насиченим). Дані терміни включають щонайменше одну або більше або всі з каприлової кислоти (С8:0), капринової кислоти (С10:0), лауринової кислоти (С12:0) і міристинової кислоти (С14:0). "Моноацилгліцерол" або "МАГ" являє собою гліцерол, в якому гліцерин естерифікований однією жирною кислотою. В даному документі МАГ містить гідроксильну групу в положенні 5п- 1/3 (також позначена в даному документі як 5п-1 МАГ або 1-МАГ або 1/3-МАГ) або 5п-2 (також позначена в даному документі як 2-МАГ), і, таким чином, МАГ не містить фосфорильованих молекул, таких як фосфатидинова кислота (ФК) або фосфатидилхолін (ФХ). Таким чином, МАГ, у клітині являє собою компонент нейтральних ліпідів. "Діацилгліцерол" або "ДАГ" являє собою гліцерол, в якому гліцерин етерифікований двома жирними кислотами, що можуть бути однаковими або, бажано, різними. В даному документі ДАГ містить гідроксильну групу в положенні 5й-1,3 або 5п-2, і, таким чином, ДАГ не містить фосфорильованих молекул, таких як ФК або ФХ. ДАГ, таким чином, є компонентом нейтральних ліпідів в клітині. У шляху Кенеді синтезу ДАГ (фіг. 1), прекурсор зп-гліцерол-З3-фосфат (С-3-Р) естерифікується двома групам ацилу, кожна з яких надходить від складного естеру жирної кислоти коензиму А, і при цьому, перша реакція каталізується гліцерин-З-фосфат ацилтрансферазою (ГФАТ) в положенні 5-1 з утворенням ЛізоФК, з подальшою реакцією приєднання другого ацилу в положенні 5п-2, що каталізується ацилтрансферазою лізофосфатидинової кислоти (ЛФКАТ), з утворенням фосфатидинової кислоти (ФК). Дана проміжна сполука в подальшому дефосфорилується РАР з утворенням ДАГ. Крім того, ДАГ може бути утворений із ТАГ видаленням ацильної групи під дією ліпази або із ФХ по суті видаленням головної групи холіну будь-яким з ферментів РОСТ, РІ С або РІ 0 (Фіг. 1).
Зо "Триацилгліцерол" або "ТАГ" являє собою гліцерол, в якому гліцерин естерифікований трьома жирними кислотами, що можуть бути однаковими (наприклад, як у триолеїні) або, частіше, різними. У шляху Кенеді синтезу ТАГ, ДАГ утворюється, як викладено вище, а потім третя ацильна група приєднується до основи гліцерину під дією ЮОСАТ. Альтернативні шляхи утворення ТАГ включають каталізований ферментом РОАТ (фіг. 1) і шлях МОАТ, описані в даному документі.
У даному документі термін "дикий тип" або його варіації позначає вегетативну частину рослини, клітину, насіння або організм, що не відноситься до людського роду, або його частину, наприклад, бульбу або буряк, які не були генетично модифіковані, наприклад, введенням екзогенного(их) полінуклеотиду(ів) за даним винаходом.
Термін "відповідний" позначає вегетативну частину рослини, клітину, насіння або організм, що не відноситься до людського роду, або його частину (наприклад, бульба або буряк), які мають такий же або подібний генетичний фон, як і вегетативна частина рослини, клітина, насіння або організм, що не відноситься до людського роду, або його частина за винаходом, але при цьому вони не були модифіковані, як описано у даному документі (наприклад, вегетативна частина рослини, клітина, насіння або організм, що не відноситься до людського роду, або його частина, в яких відсутній екзогенний(ї) полінуклеотид(и) та/або відсутня генетичнайї) модифікація(ї)). У переважному варіанті реалізації винаходу відповідна вегетативна частина рослини, еукаріотна клітина, насіння або організм, що не відноситься до людського роду, або його частина знаходяться на тій же стадії розвитку, що і вегетативна частина рослини, еукаріотна клітина, насіння або організм, що не відноситься до людського роду, або його частина за винаходом. Наприклад, якщо організм, що не відноситься до людського роду, є квітучою рослиною, то відповідна рослина також переважно знаходиться у стадії цвітіння.
Відповідна вегетативна частина рослини, еукаріотна клітина, насіння або організм, що не відноситься до людського роду, або його частина може застосовуватися як контроль для порівняння рівнів нуклеїнової кислоти або експресії білка або ступеня і природи модифікації ознаки, наприклад, продукування та/або вмісту неполярних ліпідів, з вегетативною частиною рослини, еукаріотною клітиною, насінням або організмом, що не відноситься до людського роду, або його частиною за винаходом, що є модифікованими, як описано у даному документі.
Кваліфікований фахівець в даній галузі з легкістю може визначити придатну "відповідну"
вегетативну частину рослини, еукаріотну клітину, насіння або організм, що не відноситься до людського роду, або його частину, тканину, орган або організм для такого порівняння.
У даному документі "в порівнянні з" або "відносно" позначає порівняння рівнів неполярного ліпіду, загального вмісту неполярних ліпідом, вмісту жирних кислот або іншого параметра вегетативної частини рослини, еукаріотної клітини, насіння, організму, що не відноситься до людського роду або його частини (такої як бульба або буряк), що експресують один або більше екзогенних полінуклеотидів або екзогенних поліпептидів, з вегетативною частиною рослини, еукаріотною клітиною, насінням, що не відноситься до людського роду організму або його частиною, в яких відсутні один або більше екзогенних полінуклеотидів або поліпептидів.
У даному документі "підвищена здатність до продукування неполярних ліпідів" є відносним терміном, що позначає підвищену загальну кількість неполярного ліпіду, продукованого вегетативною частиною рослини, еукаріотною клітиною, насінням або організмом, що не відноситься до людського роду, або його частиною (наприклад, бульба або буряк) за винаходом, відносно відповідної вегетативної частини рослини, еукаріотної клітини, насіння або організму, що не відноситься до людського роду, або його частини. В одному варіанті реалізації винаходу вміст ТАГ та/або поліненасичених жирних кислот або вміст олеїнової кислоти у загальному вмісті жирних кислот неполярного ліпіду є підвищеним, або вміст ліноленової кислоти в загальному вмісті жирних кислот неполярного ліпіду є зниженим, наприклад, щонайменше на 2 95 в абсолютних величинах.
У даному документі кожен із "синергії", "синергетичного", "діючи синергетично" і споріднених термінів являє собою порівняльний термін, який означає, що вплив комбінації елементів, присутніх в клітині, рослині або її частині за винаходом, наприклад, комбінації елементів А і В, перевищує сумарний вплив елементів окремо у відповідних клітинах, рослинах або їх частинах, наприклад, сумарний вплив А і вплив В. Якщо більше двох елементів присутні в клітині, рослині або її частині, наприклад, елементи А, В і С, це означає, що вплив комбінації всіх елементів перевищує сумарний вплив індивідуальних елементів. У переважному варіанті реалізації винаходу це означає, що вплив комбінації елементів А, В і С перевищує суму поєднаного впливу елементів А і В і впливу елементу С. У такому разі, може бути вказано, що елемент С діє синергетично з елементами А і В. Необхідно розуміти, що вплив вимірюють у відповідних
Зо клітинах, рослинах або їх частинах, наприклад, що вирощені в таких же умовах і знаходяться на такій же стадії біологічного розвитку.
У даному документі "проростати із швидкістю, істотною мірою такою ж, як і відповідна рослина дикого типу" означає, що насіння рослини за винаходом, є відносно здатним до проростання при порівнянні з насінням рослини дикого типу, що не містить певного(их) екзогенного(их) полінуклеотиду(ів). Проростання може бути виміряне іп міго, на поживному середовищі для культури тканин, або в грунті, як це відбувається в полі. В одному варіанті реалізації винаходу кількість насіння, яке проростає, наприклад, при вирощуванні в оптимальних умовах теплиці для даного виду рослин, становить щонайменше 75 95, більш переважно, щонайменше 90 95, у порівнянні з відповідним насінням дикого типу. В іншому варіанті реалізації винаходу насіння, яке проростає, наприклад, при вирощуванні в оптимальних умовах теплиці для даного виду рослин, дає саджанці, що ростуть із швидкістю, яка, в середньому, становить щонайменше 75 95, більш переважно, щонайменше 90 95, в порівнянні з відповідними рослинами дикого типу. Це позначається як "сила росту саджанців". У варіанті реалізації винаходу швидкість початкового росту коріння і росту пагонів у саджанців за винаходом є по суті такою ж, як у відповідного саджанця дикого типу, вирощеного в таких же умовах. У варіанті реалізації винаходу біомаса листя (суха маса) рослин за винаходом становить щонайменше 8095, переважно щонайменше 9095 відносно біомаси листя відповідних рослин дикого типу, вирощених у таких же умовах, переважно в полі. У варіанті реалізації винаходу висота рослин за винаходом становить щонайменше 70 95, переважно щонайменше 8095, більш переважно, щонайменше 9095 від висоти рослини відносно відповідної рослини дикого типу, вирощеної в таких же умовах, переважно в полі і переважно в стані зрілості.
У даному документі термін "екзогенний полінуклеотид, який пригнічує продукування та/або активність ендогенного поліпептиду" або його варіації позначає полінуклеотид, що кодує молекулу РНК (наприклад, кодуючий штучну мікроРНК (шміРНК) або шпилькову РНК- інтерференцію (шпРНКІ)), яка пригнічує продукування та/або активність або безпосередньо пригнічує продукування та/або активність (наприклад, являє собою шміРНК або шпРНК, яка може бути доставлена, наприклад, безпосередньо в клітину) ендогенного поліпептиду, наприклад, ЗОРІ ТАГ ліпази, пластидної СРАТ, пластидної І РААТ, поліпептиду ТО, АГФази 60 або дельта-12 десатурази жирних кислот (ЕАО2), або виявляє комбінацію двох або більше із вказаних ефектів. Звичайно, молекула РНК зменшує експресію ендогенного гена, який кодує поліпептид.
В даному документі термін "в перерахунку на масу" позначає масу речовини (наприклад,
ТАГ, ДАГ, жирної кислоти) як відсоток від маси композиції, що містить речовину (наприклад, насіння, лист). Наприклад, якщо трансгенне насіння містить 25 мкг загальних жирних кислот на 120 мкг маси насіння; відсоток від загальних жирних кислот в перерахунку на масу становить 20,8 Фр.
У даному документі термін "у відносному вираженні" позначає параметр, наприклад, кількість речовини в композиції, що містить речовину, порівняно з параметром для відповідної композиції, у відсотковому вираженні. Наприклад, зменшення із З одиниць до 2 одиниць є зменшенням на 33 95 у відносному вираженні.
В даному документі "пластиди" являють собою органели в рослинах, включаючи морські водорості, які є місцем продукування карбонових сполук на базі фотосинтезу, включаючи цукри, крохмаль і жирні кислоти. Пластиди включають хлоропласти, що містять хлорофіл і здійснюють фотосинтез, етіопласти, що є прекурсорами хлоропластів, а також спеціалізовані пластиди, такі як хромопласти, що є забарвленими пластидами для синтезу і зберігання пігментів, геронтопласти, що керують демонтажем фотосинтетичних структур в ході старіння, амілопласти для синтезу і зберігання крохмалю, елайопласти для зберігання ліпідів і протеїнопласти для зберігання і модифікації білків.
В даному документі термін "біологічне паливо" позначає будь-який вид палива, звичайно використовуваний для продукування енергії машинним устаткуванням, наприклад, автомобілями, літаками, лодками, великими вантажними машинами або працюючими на нафті двигунами, енергія якого походить від біологічної фіксації карбону. Біопаливо включає види палива, які одержують в результаті перетворення біомаси, а також твердої біомаси, рідких видів палива і біогазів. Приклади біологічного палива включають біоспирти, біодизельне паливо, синтетичне дизельне паливо, вегетативне масло, біоестери, біогаз, синтетичний газ, тверде біологічне паливо, одержане з водоростей паливо, біогідроген, біометанол, 2,5-диметилфуран (ДМФ), біодиметиловий естер (біоДМЕ), дизельне паливо Фішера-Тропша, біогідрогенове дизельне паливо, змішані спирти і деревне дизельне паливо.
Зо В даному документі термін "біоспирт" позначає одержані біологічним шляхом спирти, наприклад, етанол, пропанол і бутанол. Біоспирти утворюються під дією мікроорганізмів та/або ферментів шляхом ферментації цукрів, геміцелюлози або целюлози.
В даному документі термін "біодизельне паливо" позначає композицію, що містить метилові або етилові естери жирних кислот, одержані з ліпідів шляхом переестерифікації, Причому ліпіди походять із живих клітин, а не із скам'янілого палива.
В даному документі термін "синтетичне дизельне паливо" позначає форму дизельного палива, яке одержане з відновлюваної сировини замість скам'янілої сировини, використовуваної в більшості видів дизельного палива.
В даному документі термін "рослинне масло" включає чисте рослинне масло (або безпосередньо масло) або масло з відходів (продукт інших галузей промисловості), включаючи масло, продуковане у вегетативній частині рослини або в насінні.
В даному документі термін "біогаз" позначає метан або легкозаймисту суміш метану та інших газів, одержані анаеробним розщепленням органічного матеріалу анаеробами.
В даному документі термін "синтетичний газ" позначає горючу суміш, що містить варіюючі кількості монооксиду карбону і гідрогену та може містити інші гідрогенкарбони, одержані частковим окисненням біомаси. Синтетичний газ може бути перетворений на метанол у присутності каталізатора (звичайно на базі міді), з подальшою дегідратацією метанолу в присутності іншого каталізатора (наприклад, силіцію діоксиду-алюмінію).
В даному документі термін "Фішер-Тропш" позначає набір хімічних реакцій, в ході яких суміш монооксиду карбону і гідрогену перетворюється на рідкі гідрогенкарбони. Синтетичний газ спочатку може бути кондиційований з використанням, наприклад, конверсії водяного газу, щоб досягти необхідного співвідношення Нг/СО. Конверсія відбувається у присутності каталізатора, звичайно заліза або кобальту. Температура, тиск і каталізатор визначають, буде утворюватися легка або важка синтетична нафта. Наприклад при 330 "С утворюються в основному бензин і олефіни, тоді як при 180-250 "С утворюються в основному дизельне паливо та віск. Рідини, одержані із синтетичного газу, які містять різноманітні гідрогенкарбонові фракції, є гідрогенкарбонами з нерозгалуженим ланцюгом і високим ступенем чистоти (не містять сульфуру).
В даному документі термін "біовугілля" позначає деревне вугілля, одержане з біомаси, 60 наприклад, піролізом біомаси.
В даному документі термін "сировина" позначає матеріал, наприклад, біомасу або продукт її перетворення (наприклад, синтетичний газ), який використовують для виробництва продукту, наприклад, біологічного палива, наприклад, біодизельного палива або синтетичного дизельного палива.
В даному документі термін "промисловий продукт" позначає гідрогенкарбоновий продукт, який в основному складається з атомів карбону та гідрогену, наприклад, метилові та/або етилові естери жирної кислоти або алкани, такі як метан, суміші алканів з довшим ланцюгом, які звичайно є рідинами при температурі навколишнього середовища, біологічне паливо, монооксид карбону та/або гідроген або біоспирт, наприклад, етанол, пропанол або бутанол або біовугілля. Термін "промисловий продукт" призначений включати проміжні продукти, які можуть бути перетворені на інші промислові продукти, наприклад, синтетичний газ, який сам по собі розглядається, як промисловий продукт, може використовуватися для синтезу гідрогенкарбонового продукту, який також розглядається, як промисловий продукт. Термін промисловий продукт в даному документі включає обидві чисті форми згаданих вище сполук або, частіше, суміш різних сполук і компонентів, наприклад, гідрогенкарбоновий продукт може містити сполуку з довжиною карбонового ланцюга у визначеному інтервалі, як добре відомо з рівня техніки.
В даному документі "нащадок" позначає найближче і всі подальші покоління потомства, одержані від батьківського організму, наприклад, друге, третє або подальші покоління потомства.
В даному документі слово "включають (містять)" або його варіації, наприклад, "включає (містить)" або "який включає (що містить)" слід розуміти як таке, що позначає включення заявленого елементу, цілого числа або стадії або групи елементів, цілих чисел або стадій, але виключення будь-якого іншого елементу, цілого числа або стадії або групи елементів, цілих чисел або стадій.
Термін "та/або", наприклад, "Х та/або У" слід розуміти як такий, що позначає будь-яке із"хХ і
У" або "Х або У", та інтерпретувати як такий, що забезпечує явну присутність обох значень або будь-якого із значень.
В даному документі термін близько (приблизно), якщо не вказано інше, позначає ж/- 10 95,
Ко) більш бажано -/- 5 95, більш бажано ч/- 2 95, більш бажано ч/- 1 95, навіть більш бажано ж/- 0,5 95 від наведеного значення.
Продукування неполярних ліпідів і триацилгліцеролів
Даний винахід базується на відкритті того факту, що вміст неполярних ліпідів у рекомбінантних еукаріотних клітинах може бути підвищений за допомогою комбінації модифікацій, вибраних із позначених у даному документі як: (А) Ризп, (В) Риї, (С) Ргоїесі, (0)
РасКаде, (Е) Ріазійе ехрогі, (Р) Ріазііде ітрогі і (5) РгоКагуоііс РаїйШугау. Як описано в даному документі, клітини без пластид можуть містити різні комбінації А-ЮО, тоді як клітини із пластидами, такі як рослинні і водоростеві клітини, можуть містити різні комбінації А-О.
Таким чином, рекомбінантні клітини, трансгенні тварини, що не відносяться до людського роду, або їх частини, а також трансгенні рослини або їх частини за винаходом містять цілий ряд комбінацій екзогенних полінуклеотидів та/або генетичних модифікацій, кожна з яких забезпечує одну з модифікацій. Вказані екзогенні полінуклеотиди та/або генетичні модифікації включають: (А) екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид фактору транскрипції, який збільшує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, трансгенній тварині, що не відноситься до людського роду, або її частині, або трансгенній рослині або її частині, забезпечуючи модифікацію "Риви" (В) екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів у клітині, трансгенній тварині, що не відноситься до людського роду, або її частині, або трансгенній рослині або її частині, забезпечуючи модифікацію "Риї!" (С) генетичну модифікацію, яка пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, що приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ) у клітині, трансгенній тварині, що не відноситься до людського роду, або її частині, або трансгенній рослині або її частині, в порівнянні з відповідною клітиною, трансгенною твариною, що не відноситься до людського роду, або її частиною, або трансгенною рослиною або її частиною, в яких відсутня генетична модифікація, що забезпечує модифікацію "Ргоїесі" (Юр) екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ), забезпечуючи модифікацію "РасКаде", (Е) екзогенний полінуклеотид, що кодує поліпептид, який збільшує експорт жирних кислот із пластид клітини, трансгенної тварини, що не відноситься до людського роду, або її частини, або 60 трансгенної рослини або її частини, в порівнянні з відповідною клітиною, трансгенною твариною, що не відноситься до людського роду, або її частиною, або трансгенною рослиною або її частиною, в яких відсутній екзогенний полінуклеотид, що забезпечує "Ріавзіїде ехроп", (Р) генетична модифікація, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, трансгенної тварини, що не відноситься до людського роду, або її частину, або трансгенної рослини або її частини, в порівнянні з відповідною клітиною, трансгенною твариною, що не відноситься до людського роду, або її частиною, або трансгенною рослиною або її частиною, в яких відсутня генетична модифікація, що забезпечує "Ріавійде ітроп", і (б) генетична модифікація, що пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластиді клітини, трансгенної тварини, що не відноситься до людського роду, або її частині, або трансгенної рослини або її частині, в порівнянні з відповідною клітиною, трансгенною твариною, що не відноситься до людського роду, або її частиною, або трансгенною рослиною або її частиною, в яких відсутня генетична модифікація, що забезпечує модифікацію "РгоКагусіїс Раїйуау".
Переважними комбінаціями (додатково позначені у даному документі як набори) екзогенних полінуклеотидів та/або генетичними модифікаціями за винаходом є: 1) А, В і необов'язково одне із С, О, Е, Е або б; 2) А, С і необов'язково одне з 0, Е, Е або о;
З) А, 0 і необов'язково одне з Е, Е або о; 4) А, Е і необов'язково Е або о; 5) А, Е і необов'язково о; бА Її; 7) А, В, С і необов'язково одне із О, Е, Е або о; 8) А, В, 0 і необов'язково одне із Е, Е або о; 9) А, В, Е і необов'язково Е або о; 10) А, В, Е і необов'язково о; 11) А, В, С, 0 і необов'язково одне із Е, Е або о; 12) А, В, С, Е і необов'язково Е або 50; 13) А, В, С, Е і необов'язково о;
Ко) 14) А, В, 0, Е і необов'язково Е або о; 15) А, В, 0, Е і необов'язково о; 16) А, В, Е, Е і необов'язково о; 17) А, С, 0 і необов'язково одне із Е, Е або о; 18) А, С, Е і необов'язково Е або о; 19) А, С, Е і необов'язково о; 20) А, С, р, Е і необов'язково Е або о; 21) А, С, р, Е і необов'язково 0; 22) А, С, Е, Е і необов'язково п'ята модифікація с; 23) А, р, Е і необов'язково Е або о; 24) А, р, Е і необов'язково 0; 25) А, 0, Е, Е і необов'язково о; 26) А, Е, Е і необов'язково о; 27) шість і ЗА, В, С, О, Е, Е і С, за винятком одного із А, В, С, О, Е, Е або б, і 28) будь-яка з 1-26 вище, де присутні два або більше екзогенних полінуклеотидів, які кодують два або більше різних поліпептидів фактору транскрипції, що збільшують експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, наприклад, один екзогенний полінуклеотид, що кодує МУКІ1, та інший екзогенний полінуклеотид, що кодує І ЕС2.
У кожній із наведених вище переважних комбінацій можуть бути присутні щонайменше два різні екзогенні полінуклеотиди, які кодують щонайменше два різні поліпептиди фактору транскрипції, які збільшують експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині, трансгенній тварині, що не відноситься до людського роду, або її частині, або трансгенній рослині або її частині.
Ці модифікації описані, як указано нижче:
А. Модифікація "Ризп" відрізняється підвищеним синтезом загальних жирних кислот у пластидах еукаріотної клітини. У варіанті реалізації винаходу це відбувається завдяки підвищеній експресії та/або активності фактору транскрипції, який регулює синтез жирних кислот у пластидах. В одному варіанті реалізації винаходу це може бути досягнуте шляхом експресії в трансгенній клітині екзогенного полінуклеотиду, який кодує поліпептид фактору бо транскрипції, що підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у клітині. У варіанті реалізації винаходу підвищений синтез жирних кислот не є спричиненим доставкою в клітину модифікованої АККази, активність якої меншою мірою інгібується жирними кислотами, в порівнянні з ендогенною АККазою в клітині. У варіанті реалізації винаходу клітина містить екзогенний полінуклеотид, що кодує фактор транскрипції, переважно під контролем промотору, окрім конститутивного промотору. Фактор транскрипції може бути вибраний з групи, що складається із МУКІ1, І ЕС1, І ЕС1-подібного, І ЕС2, ВВМ, РО5З,
АВІЗ, АВІ4, АВІ5, Бої4, Со, або з групи, що складається із МУВ7З, Б7ІР53, АСІ 15, МУВ115,
МУВ118, ТАММЕЇ, УМОВ, СЕКга1, сгкзга?г і РНЕТ, і переважно являє собою УУКІ!, І ЕС1 або
ГЕС2. У подальшому варіанті реалізації винаходу збільшений синтез загальних жирних кислот є відносним в порівнянні з відповідною клітиною дикого типу. У варіанті реалізації винаходу присутні два або більше екзогенних полінуклеотиди, які кодують два або більше різних поліпептиди фактору транскрипції.
В. Модифікація "Риїї" відрізняється підвищеною експресією та/або активністю в клітині ацилтрансферази ацилов жирних кислот, яка каталізує синтез ТАГ, ДАГ або МАГ в клітині, такої як ОСАТ, РОАТ, РААТ, ОРАТ або МОАТ, переважно ОСАТ або РОАТ. В одному варіанті реалізації винаходу це може бути досягнуте шляхом експресії в трансгенній клітині екзогенного полінуклеотиду, який кодує поліпептид, що приймає участь у біосинтезі одного або більше неполярних ліпідів. У варіанті реалізації винаходу ацилтрансфераза є мембрано-зв'язаною ацилтрансферазою, що використовує субстрат ацил-КоА як донор ацилу у разі ОСАТ, І РААТ,
СРАТ або МОАТ, або ацильну групу ФК як донор ацилу у разі РОАТ. Модифікація РиїЇ може бути відносною в порівнянні з відповідною клітиною дикого типу або, переважно, відносною в порівнянні з відповідною клітиною, що містить модифікацію Ризі. У варіанті реалізації винаходу клітина містить екзогенний полінуклеотид, що кодує ацилтрансферазу ацилов жирних кислот. б. Модифікація "Ргоїєсї!" характеризується зниженням катаболізму триацилгліцеролів (ТАГ) у клітині. У варіанті реалізації винаходу це може бути досягнуте шляхом генетичної модифікації в клітині, яка пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, що приймає участь у катаболізмі триацилгліцеролів (ТАГ), у клітині, в порівнянні з відповідною клітиною без генетичної модифікації. У варіанті реалізації винаходу клітина виявляє знижену експресію та/або активність ендогенної ТАГ ліпази в клітині, переважно ліпази БОР, поліпептиду Садівзв,
Зо ацил-КоА оксидази, такої як АСХ1 або АСХ2, або поліпептиду, що приймає участь у В-окисненні жирних кислот у клітині, такого як пероксисомальний переносник АТФ-зв'язуючої касети РХА1.
Це може відбуватися завдяки експресії в клітині екзогенного полінуклеотиду, що кодує молекулу
РНК, яка знижує експресію, наприклад, ендогенного гена, який кодує ТАГ ліпазу, таку як ліпаза
ЗОРІ, ацил-КоА оксидаза або поліпептид, що приймає участь у В-окисненні жирних кислот у клітині, або шляхом мутації в ендогенному гені, що кодує, наприклад, ТАГ ліпазу, ацил-КоА оксидазу або поліпептид, що приймає участь у В-окисненні жирних кислот. Це може відбуватися завдяки експресії в клітині екзогенного полінуклеотиду, що кодує молекулу РНК, яка знижує експресію, наприклад, ендогенного гена, що кодує ТАГ ліпазу, таку як ліпаза 5БОР1, ацил-КоА оксидаза або поліпептид, що приймає участь у В-окисненні жирних кислот у клітині, або шляхом мутації в ендогенному гені, що кодує, наприклад, ТАГ ліпазу, ацил-КоА оксидазу або поліпептид, що приймає участь у В-окисненні жирних кислот. У варіанті реалізації винаходу знижена експресія та/або активність є відносною у порівнянні з відповідною клітиною дикого типу або відносною у порівнянні з відповідною клітиною, що містить модифікацію Ризп.
О. Модифікація "РасКаде" відрізняється підвищеною експресією та/або акумуляцією поліпептиду покриття масляного включення (ПМВ). У варіанті реалізації винаходу це може бути досягнуте шляхом експресії в трансгенній клітині екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид покриття масляного включення (ПМВ). Поліпептид ПМВ може бути олеозином, таким як поліолеозин, каолеозин або стеролеозин або переважно ЛДАФ. У варіанті реалізації винаходу рівень олеозину, який акумулюється в еукаріотній клітині, є щонайменше у 2 рази вищим по відношенню до відповідної клітини, яка містить ген олеозину з Т-ДНК руР3502. У варіанті реалізації винаходу підвищена експресія або акумуляція поліпептиду ПМВ не є спричиненою виключно модифікацією Ри5п. У варіанті реалізації винаходу експресія та/або акумуляція є відносною в порівнянні з відповідною клітиною дикого типу або переважно в порівнянні з відповідною клітиною, що містить модифікацію Ризп.
Е. Модифікація "Ріазіде Ехрогі" характеризується підвищеною швидкістю експорту загальних жирних кислот із пластид еукаріотної клітини. В одному варіанті реалізації винаходу це може бути досягнуте шляхом експресії в трансгенній клітині екзогенного полінуклеотиду, що кодує поліпептид, який збільшує експорт жирних кислот із пластид клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, у якій відсутній екзогенний полінуклеотид. У варіанті реалізації винаходу бо це досягається шляхом підвищення експресії та/або активності тіоестерази (ТЕ) жирних кислот,
поліпептиду-переносника жирних кислот, такого як поліпептид АВСА9У, або синтетази довголанцюгового ацил-КоА (ДЛАС). У варіанті реалізації винаходу клітина містить екзогенний полінуклеотид, що кодує ТЕ, поліпептид-переносник жирних кислот або ДЛАС. ТЕ може бути поліпептидом ЕАТВ або, переважно, поліпептидом РАТА. У варіанті реалізації винаходу ТЕ переважно являє собою ТЕ із специфічністю відносно СЛЖК. У варіанті реалізації винаходу модифікація пластидного експорту є відносною у порівнянні з відповідною клітиною дикого типу або переважно є відносною у порівнянні з відповідною клітиною, що містить модифікацію Ривп.
Е. Модифікація "Ріавзіїйде Ітроп" характеризується зниженою швидкістю імпорту жирних кислот у пластиди клітини із простору поза межами пластид. У варіанті реалізації винаходу це може бути досягнуте за допомогою генетичної модифікації в клітині, яка пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, що приймає участь в імпорті жирних кислот у пластиди клітини, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить генетичної модифікації.
Наприклад, це може відбуватися завдяки експресії в клітині екзогенного полінуклеотиду, що кодує молекулу РНК, яка знижує експресію ендогенного гена, що кодує поліпептид-переносник, такий як поліпептид ТОО, наприклад поліпептид ТОО1, ТО02, ТО0О3 або ТО0ра4, або мутації в ендогенному гені, що кодує поліпептид ТО0О. У варіанті реалізації винаходу знижена швидкість імпорту є відносною в порівнянні з відповідною клітиною дикого типу або відносною в порівнянні з відповідною клітиною, що містить модифікацію Ризп. б. Модифікація "Прокаріотний шлях" відрізняється зниженою кількістю ДАГ або зниженою швидкістю продукування ДАГ у пластидах клітини. У варіанті реалізації винаходу це може бути досягнуте шляхом генетичної модифікації в клітині, яка пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, що приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластиді, в порівнянні з відповідною клітиною, що не містить генетичної модифікації. У варіанті реалізації винаходу знижена кількість або швидкість продукування ДАГ є результатом зниженого продукування ЛФК з ацил-АПБ і ЗР у пластидах. Знижена кількість або швидкість продукування ДАГ може бути результатом експресії в клітині екзогенного полінуклеотиду, що кодує молекулу РНК, яка знижує експресію ендогенного гена, що кодує пластидну ОРАТ, пластидну І РААТ або пластидну РАР, переважно пластидну ОРАТ, або мутації в ендогенному гені, що кодує пластидний поліпептид. У варіанті реалізації винаходу знижена кількість або швидкість продукування ДАГ є відносною в порівнянні з відповідною клітиною дикого типу або переважно відносною в порівнянні з відповідною клітиною, що містить модифікацію Ризп.
Модифікація Ри5пй має велике значення для винаходу, а модифікація РиїЇ є переважною.
Модифікації Ргоїесі і Раскаде можуть бути комплементарними, тобто може бути достатньо однієї з двох. Клітина може містити одну, дві або всі три з модифікацій Ріазійде Ехрогї, Ріавііде
Ітрогі і РгоКагуоїїс Раїйулау. У варіанті реалізації винаходу щонайменше один з екзогенних полінуклеотидів в клітині, переважно щонайменше екзогенний полінуклеотид, що кодує фактор транскрипції, який регулює синтез жирних кислот у пластидах, експресується під контролем (Н) промотору, окрім конститутивного промотору, наприклад, такого як пов'язаний з розвитком промотор, промотор, який переважно є активним у фотосинтезуючих клітинах, тканиноспецифічний промотор, промотор, модифікований шляхом зниження рівня його експресії по відношенню до відповідного природного промотору, або переважно промотору, що є специфічним для старіння промотором. Більш переважно, щонайменше екзогенний полінуклеотид, що кодує фактор транскрипції, який регулює синтез жирних кислот у пластидах, експресується під контролем промотору, окрім конститутивного промотору, причому екзогенний полінуклеотид, що кодує молекулу РНК, яка пригнічує ендогенне продукування та/або активність поліпептиду, що приймає участь в катаболізмі триацилгліцеролів, також експресується під контролем промотору, окрім конститутивного промотору, і, при цьому, промотори можуть бути однаковими або різними.
Рослини продукують деякі, але не всі з їх мембранних ліпідів, таких як МГДГ, у пластидах, у так званому прокаріотному шляху (Фіг. 1). Крім того, в рослинах присутній еукаріотний шлях для синтезу галактоліпідів і гліцероліпідів, в якому ЖК спочатку синтезуються у пластиді, а потім в
ЕР відбувається збирання ЖК у гліцероліпіди. МГДГ, синтезований в еукаріотному шляху, містить С18:3 жирну кислоту (АЛК), естерифіковану в положенні 5п-2 МГДГ. Збирання скелету
ДАГ, що містить АЛК для синтезу МГДГ в даному шляху, відбувається в ЕР, після чого відбувається його імпорт в пластиду. На протилежність цьому, МГДГ, синтезований прокаріотним шляхом, містить С16:3 жирну кислоту, естерифіковану в положенні 5п-2 МГДГ.
Співвідношення внеску прокаріотного шляху щодо еукаріотного шляху у продукування МГДГ (16:3) проти МГДГ (18:3) є характерною і відмітною ознакою різних видів рослин (Мопогапа із співавт., 1998). Вказаний відмітний жирнокислотний склад МГДГ дозволяє класифікувати всі бо вищі рослини (покритонасіннєві) на так звані 16:3 або 18:3 рослини. Види 16:3, прикладом яких є Агарідорзі5 і Вгаззіса пари, загалом містять активний прокаріотний і активний еукаріотний шляхи синтезу МГДГ, тоді як види 18:3, прикладом яких є Місоїйапа їавбасит Різит 5заїмит кі
СПІусіпе тах, загалом, містять тільки (або майже повністю) еукаріотний шлях синтезу МГДГ, з невеликою або відсутньою акумуляцією С16:3 жирної кислоти у вегетативних тканинах. У даному документі "рослина 16:3" або "вид 16:3" є таким, що містить більш ніж 2 95 С16:3 жирної кислоти в загальному вмісті жирних кислот у його фотосинтезуючих тканинах. У даному документі "рослина 18:3" або "вид 18:3" є таким, що містить менш ніж 2 95 С16:3 жирних кислот у загальному вмісті жирних кислот в його фотосинтетичних тканинах. Як описано у даному документі, рослина може бути перетворена з рослини 16:3 на рослину 18:3 шляхом відповідних генетичних модифікацій. Співвідношення потоку між прокаріотним і еукаріотним шляхами не є консервативним для різних видів рослин або тканин. У видах 16:3 до 40 95 потоку в листі проходить по прокаріотному шляху (Вгом/5е із співавт., 1986), тоді як у видах 18:3, таких як горох і соя, близько 9095 ЖК, які синтезовані у пластиді, експортується із пластиди в ЕР, щоб забезпечити джерело ЖК для еукаріотного шляху (ОПігодде і Вгомузе, 1995; ботегмШе із співавт., 2000).
Таким чином, різні кількості 18:3 і 16:3 жирних кислот знайдені у гліколіпідах різних видів рослин. Це використовується для того, щоб відрізняти рослини 18:3, у яких жирні кислоти із З подвійними зв'язками практично повністю є С18 жирними кислотами, і рослини 16:3, що містять як Сів-, так і Стів-жирні кислоти із З подвійними зв'язками. У хлоропластах рослин 18:3 ферментна активність, що каталізує перетворення фосфатидату на діацилгліцерол (і діацилгліцеролів на моногалактозилдіацилгліцерол (МГД), є істотно менш вираженою, ніж у хлоропластах 16:3. В листі рослин 18:3 хлоропласти синтезують стеароїл-АСР2 у стромі, вводять перший подвійний зв'язок у насичений гідрогенкарбоновий ланцюг, а потім гідролізують тіоестер тіоестеразами (Фіг. 1). Вивільнений олеат експортується крізь конверти хлоропластів в мембрани еукаріотної частини клітини, ймовірно, ендоплазматичний ретикулум, де він інкорпорується у ФХ. В цих мембранах у ФХ-зв'язані олеоїльні групи вводяться кратні зв'язки, і далі вони переміщуються назад до хлоропластів. МГД-зв'язані ацильні групи є субстратами для введення третього подвійного зв'язку з утворенням МГД із двома ліноленоїльними залишками.
Даний галактоліпід є характерним для рослин 18:3, наприклад, таких як Авієгасеає і Рабасеає.
У фотосинтетично активних клітинах рослин 16:3, які представлені, наприклад, видами Аріасеає і Вгаззісасеае, два шляхи діють паралельно, щоб забезпечити тилакоїди МГД.
В одному варіанті реалізації винаходу вегетативна частина рослини, еукаріотна клітина, насіння або трансгенний організм, що не належить до людського роду, або їх частина (наприклад, бульба або буряк) за винаходом продукує вищі рівні неполярних ліпідів, таких як
ТАГ, або має вищий вміст загальних жирних кислот (ЗЖК), переважно обидва, у порівнянні з відповідною вегетативною частиною рослини, еукаріотною клітиною, насінням або організмом, що не належить до людського роду, або їх частиною, у якій відсутні генетичні модифікації або екзогенні полінуклеотиди. В одному прикладі рослини за винаходом дають насіння, листя або мають частини листя з площею поверхні щонайменше 1 см, стовбури та/"або бульби з підвищеним вмістом неполярних ліпідів, наприклад, вмістом ТАГ або ЗЖК, переважно обома, в порівнянні з відповідним насінням, листям, частинами листя з площею поверхні щонайменше 1 см, стовбурами або бульбами.
В іншому варіанті реалізації винаходу вегетативна частина рослини, трансгенний організм, що не відноситься до людського роду, або їх частина (така як бульба або буряк), переважно рослина, бульба, буряк або насіння, продукують ТАГ, збагачені однією або більше конкретних жирних кислот. Широкий спектр жирних кислот може бути інкорпорований в ТАГ, зокрема насичені і ненасичені жирні кислоти і коротколанцюгові і довголанцюгові жирні кислоти. Деякі необмежуючі приклади жирних кислот, які можуть бути інкорпоровані у ТАГ, і рівень яких може бути підвищений, включають: капринову (10:0), лауринову (12:0), міристинову (14:0), пальмітинову (16:0), пальмітолеїнову (16:1), стеаринову (18:0), олеїнову (18:1), вакценову (18:1), лінолеву (18:22), елеостеаринову (18:3), у-ліноленову (18:3), с-ліноленову (18:303), стеаридонову (18:403), арахінову (20:0), ейкозадієнову (20:2), дигомо-у-лінолеву (20:3), ейкозатриєнову (20:3), арахідонову (20:4), ейкозатетраєнову (20:4), ейкозапентаєнову (20:503), бегенову (22:0), докозапентаєнову (22:50)), докозагексаєнову (22:603), лігноцеринову (24:0), ацетерукову (24:1), церотинову (26:0) і монтанову (28:0) жирні кислоти. В одному варіанті даного винаходу вегетативна частина рослини, еукаріотна клітина, насіння або трансгенний організм або їх частина (як наприклад, бульба або буряк) збагачена ТАГ, що містять олеїнову кислоту та/або знижений вміст ліноленової кислоти (АЛК), переважно щонайменше на 2 95 або щонайменше на 5 95, в перерахунку на абсолютну речовину.
Переважно, вегетативна частина рослини, еукаріотна клітина, насіння або трансгенний організм, що не належить до людського роду, або їх частина за винаходом трансформовані однією або більше химерних ДНК (екзогенні полінуклеотиди). У разі декількох химерних ДНК, вони переважно є ковалентно зв'язаними в одну молекулу ДНК, наприклад, таку як єдина молекула Т-ДНК, і переважно інтегровані в один локус геному хазяйської клітини. Як альтернатива, химерні ДНК знаходяться на двох або більше молекулах ДНК, що можуть не бути пов'язаними з геномом хазяїна, або молекула(и) ДНК не є інтегрованими в геном хазяїна, наприклад, як це відбувається в експериментах з тимчасовою експресією. Рослина, вегетативна частина рослини, еукаріотна клітина, насіння або трансгенний організм, що не належить до людського роду, або їх частина переважно є гомозиготними по одній молекулі ДНК, інкорпорованої до їх геному.
Фактори транскрипції
В еукаріотних клітинах різноманітні фактори транскрипції беруть участь в синтезі жирних кислот і ліпідів, що містять жирні кислоти, таких як ТАГ, і, таким чином, існує можливість маніпулювати ними з метою модифікації Ри5п. Переважним фактором транскрипції є УМКІ1. В даному документі термін "М/гіпкІєа 1" або "МУК!" або "МУК 1" позначає фактор транскрипції класу АР2/ЕКУМЕВР, який регулює експресію декількох ферментів, що беруть участь у гліколізі та біосинтезі жирних кислот де помо. УУКІЇ містить два специфічних для рослини (АР2/ЕКЕВ) домени зв'язування з ДНК. Додатково, МУКІЇ, щонайменше в Агарідорвзі5х, також регулює розкладання сахарози шляхом гліколізу, таким чином регулюючи надходження прекурсорів для біосинтезу жирних кислот. Іншими словами, він управляє потоком карбону від продукту фотосинтезу до запасних ліпідів. Мутанти м/гії, щонайменше в Агарідорзі5, демонструють фенотип зморщеного насіння, за рахунок дефекту у вбудовуванні сахарози і глюкози в ТАГ.
Приклади генів, які транскрибуються М/КІ1, включають, без обмежень, одну або більше, бажано всі з генів, кодуючих піруваткіназу (Аї5952920, АїЗ9д22960), субодиницю Еї альфа (АМ901090) піруватдегідрогенази (ПДГ), ацетил-КоА карбоксилазу (АЦКазу), субодиницю
ВССРА (Аї5915530), єноїл-БНА редуктазу (Аї2905990; ЕАВ), фосфогліцерат мутазу (АН 92217090), цитозольну фруктокіназу і цитозольну фосфогліцерат мутазу, синтетазу сахарози (Бивбу) (див., наприклад, Гіи із співавт., 20106р; Ваца із співавт., 2007; ВишизкКа із співавт., 2002).
Зо УМУКІ1 містить консервативний домен АР2 (са00018). АР2 являє собою домен зв'язування з
ДНК, знайдений в регуляторах транскрипції в рослинах, наприклад, АРЕТАГ А2 і ЕВЕВР (білок зв'язується з елементом, який реагує на етилен). В ЕКЕВР домен специфічно зв'язується з боксом 11Бр ССС елементу, який реагує на етилен (ЕРЕ), промоторного елементу, незамінного для реагування на етилен. ЕКЕВР і фактор зв'язування з С-повтором СВЕТ, який приймає участь відповідає на стрес, містять одну копію домену АР2. АРЕТАГА2-подібні білки, які виконують роль в розвитку рослини, містять дві копії.
Інші мотиви послідовності, що можуть бути знайдені в М/КІ!ї та його функціональних гомологах, включають: 1. вам АНИАМ/Т а В (5БЕОІЮО МО: 89). 2. Г/М ЕАНІ МО К (5ЕО ІЮ МО: 90).
З. ДГ ААЇ КМ М а (5ЕО ІО МО: 91). 4. 5ХаРгБ/АНа х (5ЕО1ЮО МО: 92). 5БНННОМаИавВкКкуМЕАНІа Вик (5ЕО І МО: 93). б6ОБЕЕБЕААДАХМ ОО (5ЕО ІЮ МО: 94).
В даному документі термін "М/гіпКкІва 1" або "М/ВІ1" також включає "подібні до М/гіпкієа 1" або "М ВІ1-подібні" білки. Приклади білків М/КІЇ включають номери доступу: О6Х5У6, (Агарідорвів
ІШаїїапа; 5ЕО ІЮ МО: 22), ХР. 002876251.1 (Агарідорзіз Іугаїа підвид Іугаїа; БЕО ІЮО МО: 23),
АВО16282.1 (Вгаззіса париб; БЕО ІЮО МО: 24), АРО16346.1 (Вгазвіса парив; ЗЕО ІЮО МО: 25),
ХР 003530370.1 (Сіусіпе тах; 5ЕО ІЮ МО: 26), АЕО22131.1 (даїгорна сигтса5; 5ЕО ІЮ МО: 27),
ХР 002525305.1 (Вісіпи5 соттипів; 5ЕО ІО МО: 28), ХР. 002316459.1 (Роршив ііспосагра; 5ЕО
ІО МО: 29), СВІ29147.3 (Міїів міпі'тета; «БО ІО МО: 30), ХР. 003578997.1 (Вгаспуродіит аїівїаснуоп;
ЗЕО ІЮО МО: 31), ВАУ8б6627.1 (Ногаеит муцідаге підвид миЇдаге; ЗЕО ІЮ МО: 32), ЕАМ79792.1 (Огуга займа; БЕО ІО МО: 33), ХР. 002450194.1 (бБогдпит Бісоїог; БЕО ІЮ МО: 34), АСаз2367.1 (/єа тауз; ЗЕО ІЮО МО: 35), ХР 003561189.1 (Вгаспуродішт аівіаснуоп; ЗЕО ІЮ МО: 36),
АВІ 850611 (Вгаспуродішт з5уїмаїййсит; 5ЕО ІЮ МО: 37), ВАОб68417.1 (Огула заїїма; 5ЕО ІО МО: 38), ХР. 002437819.1 (бБогапит бБісоїог; 5ЗЕО ІО МО: 39), ХР. 002441444.1 (богупит бБісоіог; 5ЕО
ІО МО: 40), ХР 003530686.1 (СПусіпе тах; 5ЕО ІО МО: 41), ХР 003553203.1 (Сіусіпе тах; 5ЕО
ІО МО: 42), ХР. 002315794.1 (Роршив Міспосагра; ЗЕО ІЮ МО: 43), ХР. 002270149.1 (Мійі5 міпітега;
ЗЕО ІЮО МО: 44), ХР 003533548.1 (Сіусіпе тах; ЗЕО ІЮ МО: 45), ХР 003551723.1 (СПіусіпе тах; 60 5ЕО І МО: 46), ХР 003621117.1 (Медісадо ігипсаїша; ЗЕО ІО МО: 47), ХР 002323836.1
(Роршив ііспосагра; 5ЕО ІО МО: 48), ХР 002517474.1 (Вісіпив соттипів; ЗЕО ІО МО: 49),
САМ79925.1 (Мії5 міп'тета; «БО І МО: 50), ХР. 003572236.1 (Вгаспуродіит аїівіаспуоп; ЗЕО І
МО: 51), ВАЮ10030.1 (Огуга займа; 5ЕО 10 МО: 52), ХР. 002444429.1 (5огдпит бБісоїог; 5ЕО 10
МО: 53), МР. 001170359.1 (7еа таув5; ЗЕО ІЮО МО: 54), ХР. 002889265.1 (Агабідорзів Іугага підвид угаїа; 5ЕО І МО: 55), ААЕб68121.1 (Агарідорзіз ІНайапа; 5ЕО ІО МО: 56), МР 1780882 (Агабідорзіз Іаійапа; 5ЕО ІЮО МО: 57), ХР. 002890145.1 (Агарідорзів Іугага підвид Іугаїа; 5ЕО І
МО: 58), ВАУЗЗ3872.1 (ТнеПиподієїа Наіорнпіа; БЕО ІО МО: 59), МР 563990.1 (Агарідорзів ІНаїїапа;
ЗЕОІО МО: 60), ХР 003530350.1 (Сіусіпе тах; ЗЕО ІО МО: 61), ХР. 003578142.1 (Вгаспуродійт дівтаснуоп; ЗЕО ІЮ МО: 62), ЕА709147.1 (Огула займа; ЗЕО ІО МО: 63), ХР 002460236.1 (Богдпит Бісоїог; ЗЕО ІЮ МО: 64), МР 001146338.1 (7еа таув; 5ЕО ІЮ МО: 65), ХР. 003519167.1 (Счусіпе тах; 5ЕО І МО: 66), ХР. 003550676.1 (Сіусіпе тах; 5ЕО ІЮ МО: 67), ХР. 003610261.1 (Медісадо ігипсаїшіа; 5ЕО ІО МО: 68), ХР 003524030.1 (Стіусіпе тах; 5ЕО ІЮ МО: 69),
ХР 003525949.1 (Сіусіпе тах; 5ЕО ІО МО: 70), ХР. 002325111.1 (Роршизв Міспосагра; 5ЕО І0
МО: 71), СВІЗ6586.3 (Мі міп'тега; БЕО І МО: 72), ХР 002273046.2 (Міїів міп'ега; ФЕО ІЮ МО: 73), ХР 002303866.1 (Роршиз іспосагра; ЗЕО ІЮ МО: 74), и СВІ25261.3 (Мійі5 міп'тега; ЗЕО ІЮ
МО: 75). Подальші приклади включають Зогрі-М/ВІ 1 (5ЕО 0 МО: 76), І ирап-ЖМ/ВІ1 (5ЕО ІЮ МО: 77), Віссо-М/КІ1 (ЗЕО ІО МО: 78) ії Гиріп апдивійоїйи5 М/ВІТ (5ЕО ІО МО: 79). Переважним УМКІ1 є
МУК маїсу або МУ/КІ1 сорго.
Пізніше, підмножина МУКІ!-подібних факторів транскрипції була повторно класифікована як фактори транскрипції УУКІ2, МУКІЗ або УУКІ4, які скоріше відрізняються переважною експресією у стовбурах та/або корінні рослин, ніж у насінні, що розвивається (То із співавт., 2012).
Незважаючи на перекласифікацію, вони входять до визначення "МУКІ1" у даному документі.
Переважними МУКІ!-подібними факторами транскрипції є такі, що можуть доповнити функцію мутації мії у рослині, особливо функцію в насінні рослини, що розвивається, наприклад, в мутанті мії А. (йаійапа. Крім того, функція УМКІ1-подібного поліпептиду може бути кількісно оцінена в М. бепінатіапа за допомогою аналізів із тимчасовою експресією, як описано в даному документі.
В даному документі поліпептид "ЛИСТОВА СІМ'ЯДОЛЯ" або "ГЕС" позначає фактор транскрипції, що є фактором транскрипції ГЕС1, ГЕС1-подібним, ГЕС2, АВІЗ або РОЗ і
Зо демонструє широкий контроль над дозріванням насіння і синтезом жирних кислот. ГЕС2, БО5З і
АВІЗ є спорідненими поліпептидами, кожен з яких містить ДНК-зв'язуючий домен ВЗ розміром 120 амінокислот (уатазвакі із співавт., 2004), знайдений тільки у рослинних білках. Їх можна відрізнити за допомогою філогенетичного аналізу, щоб визначити зв'язок амінокислотної послідовності із членами численних поліпептидів А. Іпаійапа, що мають вказані нижче номери доступу: ГЕС2, номер доступу ААЇ 12004.1; РГОБЗ (також відомий як РОЗСАЗ), номер доступу
ААСЗ35247. | ЕС1 належить до іншого класу поліпептидів і є гомологічним поліпептгиду НАРЗ класу фактору зв'язування СВЕ (і ее із співавт., 2003). Гени ГЕС1, ГЕС2 ії РО53З потрібні в ході раннього ембріогенезу, щоб зумовити загибель ембріональних клітин і визначити ідентичність сім'ядолі, та пізніше, в ході ініціації і підтримки дозрівання ембріону (Запіо5-Мепдозла із співавт., 2008). Крім того, вони індукують експресію генів, що кодують запасні білки насіння, шляхом зв'язування з мотивами КУ, присутніми в промоторах, і генів олеозину. Додатково, вони можуть відрізнятися за характером експресії в ході розвитку насіння або за своєю здатністю доповнити відповідну мутацію в А. ІПаїїапа.
У даному документі термін "Листова Сім'ядоля 1" або "ГЕС1" позначає фактор транскрипції
МЕ-МВ-типу, що приймає участь в розвитку зиготи і соматичному ембріогенезі. Ендогенний ген специфічно експресується в насінні, як в ембріоні, так і в ендоспермі. І ЕС1 активізує ген, що кодує МУКІТ, а також великий клас генів синтезу жирних кислот. Крім того, ектопічна експресія
ГЕС2 спричиняє швидку активацію генів, що реагують на ауксин, і може спричиняти утворення соматичних ембріонів. Приклади поліпептидів ЇЕС1 включають білки Агарідорзів ІНаїїапа (ААСЗ39488, 5ЕО ІЮ МО: 149), Медісадо іипсаїша (АЕК49653, 5ЕО ІЮО МО: 154) і Вгазвіса пари (А0Е81045, 5ЕО ІО МО: 151), А. Іугаїа (ХР 002862657, 5ЕО ІЮО МО: 150), В. соттипів (ХР 002522740, 5ЕО ІО МО: 152), й. тах (ХР 006582823, 5ЕО ІЮ МО: 153), А. пуродаєа (А0СЗ33213, 5ЕО І МО: 156), 7. тауз (ААК9О5562, 5ЕО І МО: 155).
ГЕСТ1Т-подібний (11Ї) є близькоспорідненим ГЕС1, але відрізняється іншим характером експресії гена, який експресується раніше в ході ембріогенезу (Ку/опуд із співавт., 2003).
Приклади ГЕС1-подібних поліпептидів включають білки Агарідорзіз Іпаійапа (ААМ15924, 5ЕО ІЮ
МО: 157), Вгазвзіса пари5 (АНІ94922, ЗЕ ІЮО МО: 158) і ГЕС1-подібний РНазеоЇи5 соссіпеи5 (ААМО1148, 5ЕО ІО МО: 159).
В даному документі термін "Листова сім'ядоля 2" або ""ЕС2" позначає домен ВЗ фактору бо транскрипції, який приймає участь в розвитку зиготи і соматичному ембріогенезі та активує експресію гена, що кодує М/ВІ1. Його ектопічна експресія полегшує ембріогенез з вегетативних тканин рослини (АІетаппо із співавт., 2008). Приклади поліпептидів ЇЕС2 включають білки
Агарідорзів ІНаійапа (номер доступу МР 564304.1, 5ЕО ІЮ МО: 142), Медісадо Шшипсашіа (номер доступу САА42938.1, 5ЕО ІЮО МО: 143) і Вгазвзіса пари5 (номер доступу АБО16343.1, 5ЕО ІЮ МО: 144).
У варіанті реалізації винаходу екзогенний полінуклеотид за винаходом, який кодує ГЕС2, містить одне або більше з наступного : ї) нуклеотиди, які кодують поліпептид, що містить амінокислоти, послідовність яких наведена в будь-якій із 5ЕО ІЮ МО: 142-144, або його біологічно активний фрагмент або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною будь-якій або більше із
ЗЕО І МО: 142-144, і) нуклеотиди, послідовність яких є щонайменше на 30 95 ідентичною Її), і ії) полінуклеотид, який гібридизується з одним або обома із ії) або ії) в суворих умовах.
У даному документі термін "бЄО53" позначає домен ВЗ фактору транскрипції, який приймає участь в розвитку зиготи і соматичному ембріогенезі і знайдений здебільшого у протодермальній тканині ембріона (Са7аїтіпі із співавт., 2004). Приклади поліпептидів РО5З включають білки Агарідорвзіє ІПайапа (ААСЗ35247, БО ІО МО: 160), Вгаввзіса пари (ХР 006293066.1, 5ЕО ІО МО: 161) і Медісадо іппсаїшіа (ХР 003624470, 5ЕО ІЮ МО: 162).
Підвищеною експресією будь-якого з 1ЕС1, 11, ГЕС2, РИБ5БЗ і АВІЗ з екзогенного полінуклеотиду переважно управляють за допомогою регульованого розвитком промотору, такого як специфічний для старіння промотор, індуцибельний промотор, або промотор, який сконструйований з метою забезпечення зниженого рівня експресії по відношенню до природного промотору, особливо в рослинах, окрім Агабідорзіз ІНаїїапа і В. пари сорт Умезіаг, щоб уникнути аномалій розвитку, які виникають в ході розвитку рослини і звичайно асоціюються з підвищеною експресією цих факторів транскрипції (Ми із співавт., 2008).
У даному документі термін "ВАВМУ ВООМ" або "ВВМ" позначає фактор транскрипції
АР2/ЕКЕ, який індукує регенерацію в умовах культури, що в нормі не підтримує регенерацію в рослинах дикого типу. Ектопічна експресія генів Вгаззіса парих ВВМ (ВоВвВМ) у В. париз і
Агарідорвзізє індукує спонтанний соматичний ембріогенез і органогенез із саджанців,
Зо вирощуваних на вільному від гормону базовому середовищі (Вошійіег із співавт., 2002). У тютюні, ектопічна експресія ВВМ є достатньою для індукції додаткової регенерації пагонів і коріння на базовому середовищі, але необхідний екзогенний цитокінін для утворення соматичного зародка (С3) (Згіпімазап із співавт., 2007). Приклади поліпептидів ВВМ включають білки Агарідорзіз Інаійапа (номер доступу МР 1972452, ЗЕО ІЮО МО: 145), маїсу (05 7579529),
Зогупит Бісоїог (номер доступу ХР 002458927) і Медісадо іпипсаїша (номер доступу
ААМУВ82334.1, 5ЕО І МО: 146).
У варіанті реалізації винаходу екзогенний полінуклеотид за винаходом, який кодує ВВМ, містить, якщо не вказано інше, одне або більше з наступного: ї) нуклеотиди, які кодують поліпептид, що містить амінокислоти, послідовність яких наведена в одній із ЗЕО ІЮ МО: 145 або 146, або його біологічно активний фрагмент або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною одній або обидвом із
ЗЕО ІЮ МО: 145 або 146, і) нуклеотиди, послідовність яких є щонайменше на 30 95 ідентичною Її), і ії) полінуклеотид, який гібридизується з одним або обома із ії) або ії) в суворих умовах.
Поліпептид АВІЗ (А. (йайапа, номер доступу МР 189108), споріднений білку МР1 маїсу, експресується з низькими рівнями у вегетативних тканинах і впливає на розвиток пластид.
Поліпептид АВІ4 А. Іпайапа, номер доступу МР 181551) належить до сімейства факторів транскрипції, які містять специфічний для рослин домен АР (РіпкКеї5іевїп із співавт., 1998) і діють нижче АВІЗ в біохімічному шляху. АВІ5 (А. Іпаійапа номер доступу МР 565840) являє собою фактор транскрипції родини БАР, який впливає на чутливість АВА і управляє експресією деяких генів І ЕА в насінні. Він пов'язаний з елементом, що реагує на АВА.
Кожний з наступних факторів транскрипції був вибраний на базі того, що вони функціонують в ході ембріогенезу в рослинах. Номери доступу наведені в Табл. 10. Гомологи кожного з них можуть бути з легкістю ідентифіковані у багатьох інші видах рослин і проаналізовані, як описано у Прикладі 10.
МУВ7З являє собою фактор транскрипції, ідентифікований у сої, який приймає участь в стресових реакціях.
БАІРБЗ являє собою фактор транскрипції в родині білка БІР, ідентифікований в Агарідорвів.
АСІ15 (безстатево- подібний 15) являє собою фактор транскрипції боксу МАО5, який бо нативно експресується в ході ембріогенезу. Крім того, АС! 15 нативно експресується в листовому примордії, верхівковому меристемі пагонів і молодих квіткових бруньках, наводячи на думку про те, що АСІ 15 може додатково функціонувати в ході розвитку після проростання.
АСІ 15 виконує роль в ембріогенезі і катаболізмі гіберелової кислоти. Він націлений на домен ВЗ факторів транскрипції, які Є ключовими регуляторами ембріогенезі.
МУВ115 і МУВ118 являють собою фактори транскрипції в родині МУВ з Агабідорвіб5, що приймає участь в ембріогенезі.
ТАММЕЇ, також відомий як ЕМВ2757, кодує білок повторення М/О, необхідний Агарідорзів для ембріонального розвитку.
МО5, також відомий як Ууи5спе!ї, є геном гомеобоксу, який управляє пулом стовбурових клітин в ембріонах. Він експресується в стовбуровій клітині, що організує центр меристему, і необхідний для утримування стовбурових клітин у недиференційованому стані. Фактор транскрипції зв'язується з мотивом ТААТ компоненту ядра.
СЕКЗ2а!1 і СЕКга?2? є факторами транскрипції щонайменше із сої.
Ацилтрансферази ацилов жирних кислот
В даному документі термін "ацилтрансфераза ацилов жирних кислот" позначає білок, здатний до перенесення ацильної групи з ацил-КоА, ФХ або ацил-АПБ, переважно ацил-КоА або ФХ, на субстрат, з метою утворення ТАГ, ДАГ або МАГ. Вказані ацилтрансферази включають ОСАТ, РОАТ, МОАТ, ОРАТ і І РААТ.
У даному документі термін "діацилгліцерол ацилтрансфераза" (ОСАТ) позначає білок, який переносить жирну ацильну групу з ацил-КоА до субстрату ДАГ, з утворенням ТАГ. Таким чином, термін "активність діацилгліцерол ацилтрансферази" позначає перенесення групи ацилу від ацил-КоА до ДАГ, з утворенням ТАГ. ОСАТ може додатково виконувати функцію МОАТ, але, в основному, функціонує, як ОСАТ, тобто, володіє більш вираженою каталітичною активністю в ролі ОЮОСАТ, ніж в ролі МОАТ, якщо активність ферменту виражена в одиницях нмоль продукту/хв/мг білка (див. наприклад, Меп із співавт., 2005). Активність ОСАТ може бути лімітуючою швидкість в процесі синтезу ТАГ у насінні (Іспіпага із співавт., 1988). ОСАТ використовує субстрат ацил-КоА як донор ацилу і переносить його в положення 51-3 ДАГ, з утворенням ТАГ. Фермент в своєму нативному стані функціонує в ендоплазматичному ретикулумі (ЕР) клітини.
Існують три відомих типи ОСАТ, що позначаються як ОСАТІ1, ОСБАТаО і ОСБАТЗ, відповідно.
Поліпептиди ЮСАТІ є мембранними білками, що звичайно містять 10 трансмембранних доменів, поліпептиди ЮОСАТ2 також є мембранними білками, але звичайно містять 2 трансмембранних домени, тоді як поліпептиди ЮСАТЗ звичайно не містять жодного і вважаються розчинними в цитоплазмі, а не інтегрованими в мембрани. Рослинні поліпептиди
ОСАТІ звичайно містять близько 510-550 залишків амінокислот, тоді як поліпептиди ОСАТ2 звичайно містять близько 310-330 залишків. ОБАТІ є основним ферментом, відповідальним за продукування ТАГ із ДАГ в більшості рослинного насіння, що розвивається, тоді як ОСАТЗ із таких видів рослин, як тунгове дерево (Мегпісіа Тогаї) і рицина (Вісіпи5 соттипів), що продукують високі кількості незвичайних жирних кислот, схоже, виконують важливу роль в акумуляції незвичайних жирних кислот у ТАГ. Підвищена експресія АІЮСАТІ в листі тютюну приводила до підвищення вмісту ТАГ у 6-7 разів (Воиміег-Маме із співавт., 2000).
Приклади поліпептидів ОБАТІ включають білки ОСАТІ Азрегоїйи5 Титідайв5 (ХР 75517241;
ЗЕБЕО І МО: 80), Агарідорзіз ІНайапа (САВ44774.1; 5ЕО ІО МО: 1), Вісіпи5 соттипів (АААІТ1479.1; 5ЕО ІО МО: 81), Метісіа гогаїї (АВС94472.1; 5ЕО ІО МО: 82), Метопіа даіатепвів (АВМ21945.1 і АВМ21946.1; 5БО ІЮ МО: 83 ії 5БО ІО МО: 84, відповідно), Епопутив аїашв (ААУЗ31083.1; 5ЕО ІО МО: 85), Саепоптабраййв еІедапе (ААЕ82410.1; 5ЕО ІЮО МО: 86), Ванив погуедісиз (МР. 445889.1; 5ЕО ІЮ МО: 87), Ното зарієпо (МР. 036211.2; 5ЕО ІО МО: 88), а також їх варіанти та/або мутанти. Приклади поліпептидів ОБАТ2 включають білки, кодовані генами раАТта Агарідорзів Інаійапа (МР 5669521; 5ЕО ІО МО: 2), Вісіпив соттипів (ААМ16324,1; 5ЕО
БО ІО МО: 3), Метісіа гогаї (АВС944741; 5ЕО ІЮО МО: 4), МопієетгеПа гатаппіапа (ААК84179,1; 5ЕО
ІО МО: 5), Ното заріепх (096РО7,2; ЗЕО І МО: 6) (058НТ5,1; 5ЕО ІЮО МО: 7), Во5 їайгив (070М728,1; 5ЕО ІЮ МО: 8), Мив тивсши5 (ААК84175,1; ЗЕО ІЮ МО: 9), а також їх варіанти та/або мутанти. Амінокислотні послідовності ЮОСАТІ Її ЮОСБАТ2 демонструють незначну гомологію.
Експресія в листі екзогенного ОСАТ2 була вдвічі ефективнішою, ніж ЮСАТІ, з точки зору підвищення вмісту масла (ТАГ). Крім того, ОСБАТ2 А. Шаїїапа виявляє більшу перевагу по відношенню до лінолеоїл-КоА і ліноленоїл-КоА як донорів ацилу, в порівнянні з олеоїл-КоА, ніж роАТІ1. Вказана перевага відносно субстрату може використовуватися для розрізнення двох класів ОСАТ, на додаток до їх амінокислотних послідовностей.
Приклади поліпептидів ОСАТЗ включають білки, кодовані генами ЮОСАТЗ арахісу (Агаспіб 60 пуродаєа, Зайа із співавт., 2006), а також їх варіантами та/або мутантами. ОСАТ володіє незначною або не володіє детектованою активністю МОАТ, наприклад, менше ніж 300 пмоль/хв/мг білка, переважно менше ніж 200 пмоль/хв/мг білка, більш переважно, менше ніж 100 пмоль/хв/мг білка.
У варіанті реалізації винаходу екзогенний полінуклеотид за винаходом, який кодує ОСАТІ1, містить одне або більше з наступного: ї) нуклеотиди, які кодують поліпептид, що містить амінокислоти, послідовність яких наведена в будь-якій із «ЕО ІО МО: 1 або 80-88, або його біологічно активний фрагмент або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною будь-якій одній або більше із БЕО ІЮО МО: 1 або 80-88, і) нуклеотиди, послідовність яких є щонайменше на 30 95 ідентичною Її), і ії) полінуклеотид, який гібридизується з одним або обома із ії) або ії) в суворих умовах.
У варіанті реалізації винаходу екзогенний полінуклеотид за винаходом, який кодує ОСАТ2, містить одне або більше з наступного ї) нуклеотиди, які кодують поліпептид, що містить амінокислоти, послідовність яких наведена в будь-якій із 5БЕО 10 МО: 2-9, або його біологічно активний фрагмент або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною будь-якій однією або більше 5ЕО ІЮ МО: 2-9, і) нуклеотиди, послідовність яких є щонайменше на 30 95 ідентичною Її), і ії) полінуклеотид, який гібридизується з одним або обома із ії) або ії) в суворих умовах.
У даному документі термін "фосфоліпід:діадилгліцерол ацилтрансфераза" (РОАТ; ЄС 2.3.1.158) або його синонім "фосфоліпід:1,2-діацил-зп-гліцерол О-ацилтрансфераза" позначає ацилтрансферазу, що переносить ацильну групу з фосфоліпіду, звичайно ФХ, в положення 51-3
ДАГ, з утворенням ТАГ. Дана реакція не пов'язана з ЮОСАТ, і в ній використовуються фосфоліпіди як донори ацилу. Існує декілька форм РОАТ в рослинних клітинах, включаючи
РОАТІ, РОАТ2 або РОАТЗ (Спозаї із співавт., 2007).
У даному документі термін "моноацилгліцерол ацилтрансфераза" або "МОАТ" позначає білок, який переносить жирну ацильну групу з ацил-КоА до субстрату МАГ, наприклад, 5п-2
МАГ, для утворення ДАГ. Таким чином, термін "активність моноацилгліцерол ацилтрансферази" щонайменше позначає перенесення ацильної групи від ацил-КоА до МАГ, для утворення ДАГ.
Зо Термін "ШМОАТ" у даному документі включає ферменти, що діють на субстрати 5п-1/3 МАГ та/або 5п-2 МАГ, з утворенням 5п-1,3 ДАГ та/або 5п-1,2/2,3-ДАГ, відповідно. У переважному варіанті реалізації МСАТ віддає перевагу субстрату 5п-2 МАГ щодо 5п-1 МАГ, або істотною мірою використовує як субстрат тільки 5п-2 МАГ. У даному документі МОАТ не включає ферментів, які переважно переносять ацильну групу до ЛізоФК відносно МАГ, такі ферменти відомі як ГРААТ. Таким чином, МОАТ переважно використовує нефосфорильовані моноацильні субстрати, навіть якщо вони також можуть володіти низькою каталітичною активністю по відношенню до ЛізоФК. Переважний МОАТ не володіє детектованою активністю ацилування
ЛізоФК. Крім того, МОАТ може виконувати функцію ЮОСАТ, але, в основному, функціонує як
МСАТ, тобто, він володіє більш вираженою каталітичною активністю в ролі МОАТ, ніж в ролі роАТ, якщо активність ферменту виражається в одиницях нмоль продукту/хв/мг білка (також див. ХУеп із співавт., 2002). Існують три відомих класи МОАТ, що позначаються, як МОАТІ,
МОАТ2 і МОАТЗ, відповідно. Приклади поліпептидів МОАТІ, МОАТ2 і МОАТЗ описані у
МО2013/096993.
У даному документі "шлях МОАТ" позначає анаболічний шлях утворення ТАГ, відмінний від шляху Кенеді, в якому ДАГ утворюється ацилуванням 5п-1 МАГ або, переважно, 5п-2 МАГ, що каталізує МОАТ. В подальшому ДАГ може бути використаний для утворення ТАГ або інших ліпідів. У М/О2012/000026 продемонстровано, по-перше, що листова тканина рослини може синтезувати МАГ із Г-3-Ф, таким чином, що МАГ доступний екзогенній МОАТ, яка експресується в листовій тканині, по-друге, що МОАТ із різних джерел може функціонувати в тканинах рослини, що вимагає успішної взаємодії з іншими факторами рослини, які беруть участь в синтезі ліпідів, і по-третє, що ДАГ, утворений під дією екзогенної МОАТ, доступний рослинній
РОАТ або екзогенній ОСАТ для продукування ТАГ. Активність МОАТ і ЮОСАТ може бути проаналізована шляхом введення конструкцій, які кодують ферменти (або ферменти- кандидати) в засспаготусез сегемізіає, штам Н1246 і демонструє акумуляцію ТАГ.
Деякі з мотивів, важливість яких для каталітичної активності ОБАТ2 продемонстрована у деяких ЮОСАТ2, також є консервативними у МОАТ ацилтрансферазах. Особливий інтерес представляє передбачуваний домен зв'язування з нейтральними ліпідами із консенсусною послідовністю РІХІХХХМ (5ЕБО ІЮ МО: 14), де кожен Х незалежно являє собою будь-яку амінокислоту, окрім проліну, і М являє собою будь-яку неполярну амінокислоту, розташовану в бо межах М-кінцевої трансмембранної ділянки, за якою слідує передбачуваний домен гліцерол/фосфоліпід ацилтрансферази. Мотив РІХІ ХХХМ (5ЕО ІЮ МО: 14) знайдений у ОСАТ2 миші (амінокислоти 81-88) і МСАТ1/2, але не в ОСАТ2 дріжджів або рослини. Він є важливим для активності ОСБАТ2 мишії. Інші мотиви послідовності ОБАТ2 та/або МОАТІ1/2 включають: 1. Високою мірою консервативний трипептид МЕР (ЗЕО ІЮ МО: 10) в більшості поліпептидів роАТ2, а також у МОАТІ і МОАТа2, наприклад, присутній як амінокислоти 139-141 в ОСАТ2 миші. Мутація даного мотиву у ЮСАТ2 дріжджів шляхом неконсервативних замін робить фермент нефункціональним. 2. Тетрапептид НРНО (5ЕО ІО МО: 11), високою мірою консервативний у МОАТ, а також у послідовностях ОСБАТАО тварин і грибів, наприклад, присутній як амінокислоти 161-164 в ОБАТ2 миші, і важливий для каталітичної активності щонайменше у ОСАТІ2 дріжджів і миші. Рослинні ацилтрансферази ОСАТЗ містять замість нього консервативну послідовність ЕРНЗ (З5ЕО ІЮ МО: 12), тому консервативні модифікації в першому і четвертому положеннях амінокислот можуть бути переносимими.
З. Довший консервативний мотив, що є частиною передбачуваного домену фосфоліпіду гліцеролу. Прикладом даного мотиву є
ЕХОЕХ(К/К) ХАХХХОХХХ(І/М) МРХХХЕО(Е/О) (5БО 10 МО: 13), який присутній як амінокислоти 304-327 в ЮСАТ2 миші. Послідовність амінокислот в даному мотиві є менш консервативною, ніж в інших, як можна було б очікувати на базі його довжини, але гомологи можуть бути розпізнані шляхом пошуку мотиву. Розташування може варіювати для більш консервативних амінокислот, тобто, можуть бути присутні додаткові Х амінокислот в межах мотиву або менша кількість Х амінокислот, в порівнянні з наведеною вище послідовністю.
Одним із важливих компонентів у синтезі гліцероліпіду з жирних кислот, естерифікованих
АЦБ або КоА, є фермент, 5п-гліцерол-3-фосфат ацилтрансфераза (СРАТ), що являє собою інший поліпептид, який приймає участь у біосинтезі неполярних ліпідів. Вказаний фермент приймає участь у різних метаболічних шляхах і здійсненні фізіологічних функцій. Він каталізує наступну реакцію: ЗР ж- жирний ацил-АПБ або -КоОА -ЛФК ж вільний-АПБ або -КоА.
Каталізована СРАТ реакція, що відбувається в трьох окремих субклітинних структурах рослини: пластида, ендоплазматичний ретикулум (ЕР) і мітохондрія. Вказані реакції каталізуються трьома різними видами ферментів ЗРАТ, розчинною формою, що локалізована в стромі
Зо пластиди, яка використовує ацил-АПБ як свій природний ацильний субстрат (РОРАТ на фії. 1), і двома мембранозв'язаними формами, локалізованими в ЕР і мітохондрії, що використовують ацил-КоА і ацил-АПБ як природні донори ацилу, відповідно (СпПеп із співавт., 2011).
У даному документі термін "гліцерол-3-фосфат ацилтрансфераза" ("ЯаРАТ"; ЄС 2.3.1.15) і його синонім "гліцерол-3-фосфат О-ацилтрансфераза" позначають білок, що ацилує гліцерол-3- фосфат (5-3-Р), з утворенням ЛізоФК та/або МАГ, причому останній продукт утворюється, якщо
СРАТ додатково володіє активністю фосфатази по відношенню до ЛізоФК. Ацильна група, яка переноситься, походить від ацил-КоА, якщо ОРАТ відноситься до ЕР-типу ОРАТ ("ацил-КоА:5п- гліцерол-3-фосфат 1-О-ацилтрансфераза", додатково позначається як "мікросомальна СРАТ") або від ацил-АЦФ, якщо СРАТ являє собою ОРАТ пластидного типу (СРАТРТ). Таким чином, термін "активність гліцерол-З3-фосфат ацилтрансферази" позначає ацилування (0-3-Р. з утворенням ЛізоФК та/або МАГ. Термін "ЯРАТ" включає ферменти, що ацилують О-3-Р з утворенням 50п-1 ЛФК та/або 5п-2 ЛФК, переважно 5п-2 ЛФК. Переважно, ОРАТ, що може надмірно експресуватися при модифікації РиїЇ, являє собою мембранозв'язану ОРАТ, яка функціонує в ЕР клітини, більш переважно, СРАТО, а пластидна сРАТ, яка пригнічується при модифікації прокаріотного шляху, є розчинною СОРАТ ("пластидна ОРАТ"). У переважному варіанті реалізації СРАТ володіє активністю фосфатази. У найбільш переважному варіанті реалізації СРАТ являє собою 5п1-2 ОРАТ, що володіє активністю фосфатази, яка продукує 5п-2
МАГ.
У даному документі термін "5п-1 гліцерол-З3-фосфат ацилтрансфераза" (5п-1 СРАТ) позначає білок, що ацилує 5п-гліцерол-3-фосфат (С-3-Р), з переважним утворенням 1-ацил-5п- гліцерол-З-фосфату (5п-1 ЛФК). Таким чином, термін "активність 51-1 гліцерол-З-фосфат ацилтрансферази" позначає ацилування 5п-гліцерол-З3-фосфату з утворенням 1-ацил-5п- гліцерол-З-фосфату (51п-1 ЛФК).
У даному документі термін "5п-2 гліцерол-З3-фосфат ацилтрансфераза" (5п-2 СОРАТ) позначає білок, що ацилує 5п-гліцерол-3-фосфат (С-3-Р) з переважним утворенням 2-ацил-5п- гліцерол-З-фосфату (5п-2 ЛФК). Таким чином, термін "активність 51-2 гліцерол-З-фосфат ацилтрансферази" позначає ацилування 5п-гліцерол-З-фосфату з утворенням 2-ацил-5п- гліцерол-З-фосфату (5п-2 ЛФК).
Родина СРАТ є великою, і всі відомі члени містять два консервативні домени, 60 ацилтрансферазний домен різС (РЕО1553; 5БО ІО МО: 15) і домен суперсімейства галогенкислоти дегалогеназа-подібної гідролази (РЕ12710; 5ЕО ІЮ МО: 16), а також їх варіанти.
На додаток до цього, щонайменше у Агарідорзіз ІНаійапа, всі ОРАТ в підкласах СРАТ4-СРАТВ містять М-кінцеву ділянку, гомологічну домену фосфосерин фосфатази (РЕ00702; 5ЕО ІЮ МО: 17), і СРАТ, що продукують МАГ як продукт, можуть бути ідентифіковані за наявністю такої гомологічної ділянки. Деякі ЗРАТ, що ендогенно експресуються в тканині листя, містять консервативну амінокислотна послідовність ЗОЇ МІСРЕСТТСКЕР (ЗЕО ІЮО МО: 18). ОРАТА і
СРАТЄ містять консервативні залишки, відомі як критичні для активності фосфатази, конкретно консервативні амінокислоти у мотиві І! (ЮХОХІТЛЛІСЛЛ; ЗЕБЕО ІЮ МО: 19) ї мотиві Ш (К-
І6/51(0/5|ХХХЦО/МІ; ЗЕО ІО МО: 20), розташовані на М-кінці (Мапа із співавт., 2010).
Гомологи Агарідорзіє СОРАТА4 (номер доступу МР 171667.1) і СОРАТб (МР 181346.1) включають ААРБО2784.1 (Агарідорвзів ІНаїійапа), ААЇ 32544.1 (Агарідорзі5 ІНаійапа), ААРОЗ413.1 (Огуга займа), АВК25381.1 (Рісєа 5іїспепвів), АСМ34546.1 (7еа тауз), ВАРО0762 1 (Агабідорвзів
Інаійапа), ВАНОО9З3.1 (Огула займа), ЕАУ84189.1 (Огула займа), ЕАМ98245.1 (Огула заїїма),
ЕА221484.1 (Огуга займа), ЕЕС71826.1 (Огуга займа), ЕЕС76137.1 (Огуга займа), ЕЕЕ59882.1 (Огула заїїма) ЕР.0О8963.1 (ЗеїІадіпейа тоеїПепаопії), ЕРО11200.1 (БеїадіпеМПа тоеїПепаоптнії),
МР 001044839.1 (Огула займа) МР 001045668.1 (Огула займа), МР 001147442.1 (7є6а тауз),
МР 001149307.1 (/Леа таув5х), МР 001168351.1 (/еа тауз), АРНО2724.1 (Вгазвзіса парив)
МР 191950.2 (Агарідорзі5 Шаїйапа), ХР 001765001.1 (РпубзсотійгеМйа раїепв), ХР 001769671.1 (Рпузсотіїеїйа раїепв5), (Мій міп'їега), ХР 002275348.1 (Мій міпієта), ХР 002276032.1 (Мб міпі'єга), ХР 002279091.1 (Мі5 міп'їтега), ХР. 002309124.1 (Роршив Міспосагра), ХР. 002309276.1 (Роршив Міспосагра) ХР 002322752.1 (Роршив Шіспосагтра), ХР 002323563.1 (Роршив
Міспосагра), ХР 002439887.1 (бБогуйит бісоїог), ХР 002458786.1 (богдпит бісоїог),
ХР 002463916.1 (Богдпит Бісоїог), ХР. 002464630.1 (бБогупит бБісоіїог), ХР. 002511873.1 (Вісіпив соттипів), ХР 002517438.1 (Нісіпиє соттипів), ХР 002520171.1 (ВНісіпиє соттипів),
АСТЗ32032.1 (Метісіа тогаї), МР 001051189.1 (Огула заїїма) АЕНО2725.1 (Вгаввзіса парив),
ХР 002320138.1 (Роршив іспосагра), ХР 002451377.1 (бБогупит бісоїог), ХР 002531350.1 (Вісіпи5 соттипів) і ХР. 002889361.1 (Агарідорвів Іугаїа).
Були виділені розчинні пластидні СРАТ (РОРАТ, також відомі як АТ5І1 в Агарідорвів
Іпаійапа), причому кодуючі їх гени клоновані з декількох видів рослин, таких як горох (Різвит
Зо займит, номер доступу: Р3ЗО706.1), шпинат (5ріпасіа оіегасеа, номер доступу: 043869.1), гарбуз (Сисипйа тозсйає, номер доступу: Р10349.1), огірок (Сиситів в5айми5, номер доступу:
О039639.1) і Агарідорвзів ІНаійапа (номер доступу: 2043307,2). Розчинна пластидна СОРАТ являє собою першу фіксовану стадію того, що відомо як прокаріотний шлях синтезу гліцероліпідів і діє тільки у пластиді (Фіг. 1). Так званий прокаріотний шлях розташований виключно у пластидах рослин і забезпечує збирання ДАГ для синтезу галактоліпідів (МГДГ і ДГМГ), що містять С16:3 жирні кислоти, естерифіковані в положенні 5п-2 гліцеролового скелету.
Консервативні мотиви та/або залишки можуть використовуватися як заснована на послідовності діагностична ознака для ідентифікації ферментів СРАТ. Альтернативно, може застосовуватися більш суворий аналіз, що базується на функції. Такий аналіз включає, наприклад, підживлення міченим гліцерол-З3-фосфатом клітин або мікросом і кількісне визначення рівнів мічених продуктів тонкошаровою хроматографією або подібним методом.
Активність СОРАТ приводить до утворення міченої ЛФК, тоді як активність СОРАТ/фосфатази приводить до утворення міченого МАГ.
В даному документі термін "ацилтрансфераза лізофосфатидинової кислоти" (І РААТ; ЄС 2.3.1.51) ії його синоніми "1-ацил-гліцерол-З3-фосфат ацилтрансфераза", "ацил-КоА:1-ацил-вп- глицерол-З-фосфат 2-О-ацилтрансфераза" і "1-ацилгліцерол-З3-фосфат О-ацилтрансфераза" позначають білок, що ацилує лізофосфатидинову кислоту (ЛФК) з утворенням фосфатидинової кислоти (ФК). Ацильну групу для перенесення одержують з ацил-КоА, якщо І РААТ являє собою
ІРААТ ЕР-ТІПА, або з ацил-АПБ, якщо І РААТ являє собою І РААТ пластидного типу (РІ РААТ).
Таким чином, термін "активність ацилтрансферази лізофосфатидинової кислоти" позначає ацилування ЛФК з утворенням ФК.
Поліпептиди покриття масляного включення
Насіння рослини і пилок акумулює ТАГ в субклітинних структурах, що мають назву масляних включень, діаметр яких загалом знаходиться в діапазоні 0,5-2,5 мкм. У даному документі "ліпідні крапельки", що також мають назву "масляних включень", являють собою багаті на ліпіди клітинні органели для зберігання або обміну нейтральних ліпідів, що в основному містять ТАГ.
Розмір ліпідних крапельок може значно варіювати, від близько 20 нм до 100 мкм. Вказані органели містять ядро ТАГ, оточене фосфоліпідним моношаром, що містить декілька інкорпорованих білків, які беруть участь в метаболізмі і зберіганні ліпідів, а також у перенесенні 60 ліпідів до інших мембран, зокрема олеозинів, якщо масляні включення походять з рослинного бо насіння або тканин квітки (Чоїїмеї із співавт., 2004). Загалом, вони містять 0,5-3,5 90 білка, тоді як решта частини представлена ліпідом. Вони є найменш щільними органелами в більшості клітин і можуть, таким чином, з легкістю бути виділені шляхом центрифугування із флотацією.
Олеозини представляють найпоширеніший (щонайменше 80 95) білок у мембрані масляних включень із насіння.
В даному документі термін "олеозин" позначає амфіфільний білок, присутній у мембрані масляних включень в запасних тканинах насіння (див., наприклад, Ниапо, 1996; І іп із співавт., 2005; Сариапо із співавт., 2007; І ці із співавт., 2009; Зпітада і Нага-Ммізпітига, 2010) ї штучно створені варіанти (див., наприклад М/О2011/053169 і УМО2011/127118).
Олеозин має низьку М.м. (15-26000), що відповідає приблизно 140-230 амінокислотних залишків, і це дозволяє їм щільно упаковуватися на поверхні масляних включень. У насінні кожного виду звичайно представлені два або більше олеозинів з різною М.м. Кожна молекула олеозину містить відносно гідрофільний, варіабельний М-кінцевий домен (наприклад, завдовжки близько 48 залишків амінокислот), центральний повністю гідрофобний домен (наприклад, завдовжки приблизно 70-80 залишків амінокислоти), що є особливо багатим на аліфатичні амінокислоти, такі як аланін, гліцин, лейцин, ізолейцин і валін, та амфіфільний с-спіральний домен розміром близько 30-40 залишків амінокислот на С-кінці або поблизу нього. Звичайно центральний гідрофобний домен містить в центрі мотив пролінового вузла розміром близько 12 залишків. Загалом, центральна ділянка гідрофобних залишків вставлена до ліпідного ядра, і амфіфільна М-кінцева ділянка та/"або амфіфільна С-кінцева ділянка розташована на поверхні масляних включень, причому позитивно заряджені залишки інкорпоровані до фосфоліпідного моношару, а негативно заряджені ділянки контактують із зовнішнім середовищем.
У даному документі термін "олеозин" включає поліолеозини, що містять декілька поліпептидів олеозину, зв'язаних разом за способом "голова до хвоста" як єдиний поліпептид (МО2007/045019), наприклад, 2х, 4х або бх пептидів олеозину, і калеозини, які зв'язують кальцій і складають мінорний білковий компонент білків, що вкривають масляні включення у насінні (Егоїззага із оспівавт., 2009), а також стеролеозини, що зв'язуються із стероїдами (М/О2011/053169). Однак, загалом, значна частина (щонайменше 80 95) олеозинів у масляних включеннях не відноситиметься до калеозинів та/або стеролеозинів. Термін "олеозин" додатково включає поліпептиди олеозину, модифіковані штучним шляхом, тобто олеозини, в яких один або більше залишків амінокислот природного олеозину штучно замінені залишками цистеїну, як описано у М/О2011/053169. Звичайно, 4-8 залишків замінені штучним шляхом, переважно 6 залишків, але може бути замінено від 2 до 14 залишків. Переважно, амфіфільні М- кінцевий і С-кінцевий домени містять заміни цистеїну. Модифікація підвищує здатність олеозинів до утворення поперечних зв'язків і підвищує термостабільність та/або стійкість білків до розкладання протеазами.
Відома значна кількість послідовностей білка олеозину і нуклеотидних послідовностей, що кодують їх, із численних видів рослин. Приклади включають, без обмежень, олеозини
Агабідрозіх, рапсу, кукурудзи, рису, арахісу, рицини, сої, льону, винограду, капусти, бавовнику, соняшнику, сорго і ячменю. Приклади олеозинів (з номерами доступу) включають олеозин
Вгазвзіса пари5 (САА57545.1; ЗЕО ІЮО МО:95), олеозин 51-1 Вгаззіса париз (АСО69504.1; 5ЕО І
МО:96), олеозин 52-1 Вгаззіса париз (АСОб69503.1; 5ЕО ІО МО:97), олеозин 53-1 Вгазвзіса пари (АССб9513.1; 5ЕО ІЮ МО:98), олеозин 54-1 Вгаззіса пари (АСОб69507.1; 5ЕО ІЮ МО:99), олеозин 55-1 Вгаззіса париз (АСОоб9511.1; 5БО ІЮО МО:100), олеозин 1 Агаспі5 пуродаєа (АА220276.1; 5ЕО ІЮ МО:101), Агаспіх пуродава олеозин 2 (ААО21500.1; 5ЕО ІЮ МО:102), олеозин З Агаспіз пуродава (ААО21501.1; БО ІЮ МО:103), олеозин 5 Агаспіє пуродаєа (АВС9б6763.1; 5ЕО ІЮ МО:104), олеозин 1 Кісіпи5 соттипіє (ЕЕБ40948.1; 5ЕО ІЮ МО':105), олеозин 2 Кісіпи5 соттипі5 (ЕЕР51616.1; 5БО ІЮ МО:106), олеозин Сіусіпе тах ізоформа а (Р29530.2; 5ЕО ІЮ МО:107), олеозин СіІусіпе тах ізоформа Б (Р29531.1; 5ЕО І МО 108), олеозин Гіпит изйагйзвітит низькомолекулярна ізоформа (АВВО1622.1, 5ЕБЕО ІЮ МО:109), олеозин Гіпит изйайбзітит високомолекулярна ізоформа (АВВО1624.1; 5ЕБЕО ІЮ МО:11090), олеозин Неїїапіпиз аппии5 (САА44224.1; 5ЕО ІЮО МО:111), олеозин 7еа тау5з (МР 001105338.1;
ЗЕО ІЮ МО:112), Вгаззіса пари5 стеролеозин (АВМ30178.1; 5ЕО ІЮ МО:113), Вгазвзіса пари стеролеозин 5101-1 (АСОоб9522.1; 5БО ІЮ МО:114), Вгаззіса пари5 стеролеозин 51 02-1 (АСОб69525.1; 5ЕО ІЮО МО:115), стеролеозин Зезатит іпаісит (ААЇ 13315.1; 5ЕО ІЮ МО 116), стеролеозин 7еа тауз (МР 001152614.1; 5БО ІО МО:117), калеозин СГО-1 Вгазвзіса пари (АСОб69529.1; 5ЕО ІЮ МО:118), Вгаззіса пари5 калеозин СІ 0-3 (АСО69527.1; 5ЕО ІЮ МО:119), калеозин 5езатит іпдісит (ААЕ13743.1; 5ЕО ІЮ МО:120), калеозин 7еа тау5 (МР 001151906.1;
ЗБО ІЮ МО:121), калеозин СіІусіпе тах (ААВ71227). Іншими функціонально еквівалентними поліпептидами ліпідної інкапсуляції є пластоглобуліни і поліпептиди білка жирових крапель міокарду (БЖКМ) (УМО2011/127118).
У варіанті реалізації винаходу екзогенний полінуклеотид за винаходом, який кодує олеозин, містить, якщо не вказано інше, одне або більше з наступного: ї) нуклеотиди, які кодують поліпептид, що містить амінокислоти, послідовність яких наведена в будь-якій із ЗЕО ІЮ МО: 95-112, або його біологічно активний фрагмент або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною будь-якій одній або більше із БЕО ІЮ МО: 95-112, і) нуклеотиди, послідовність яких є щонайменше на 30 95 ідентичною Її), і ії) полінуклеотид, який гібридизується з одним або обома із ї) або ії) в суворих умовах.
У варіанті реалізації винаходу екзогенний полінуклеотид за винаходом, який кодує стеролеозин, містить, якщо не вказано інше, одне або більше з наступного: ї) нуклеотиди, які кодують поліпептид, що містить амінокислоти, послідовність яких наведена в будь-якій із 5ЕО ІЮ МО: 113-117, або його біологічно активний фрагмент або поліпептид, амінокислотна послідовність яких є щонайменше на 30 95 ідентичною одній або більше з ЗЕО ІЮ
МО: 113-117, ії) нуклеотиди, послідовність яких є щонайменше на 30 95 ідентичною Її), і ії) полінуклеотид, який гібридизується з одним або обома із ії) або ії) в суворих умовах.
У даному документі "білок, пов'язаний з ліпідною крапелькою" або "БПЛК" позначає поліпептид, що в рослинах пов'язаний із ліпідними крапельками в тканинах або органах, окрім насіння, пильовиків і пилку, наприклад, тканинах фруктів, включаючи перикарпій і мезокарпій.
БПЛК можуть бути пов'язані з масляними включеннями в насінні, пильовиках або пилку, а також в тканинах або органах, окрім насіння, пильовиків і пилку. Вони відрізняються від олеозинів, що є поліпептидами, пов'язаними з поверхнею ліпідних крапельок в тканинах насіння, пильовиках і пилку. БПЛК у даному документі включають поліпептиди БПЛК, утворені природним шляхом в тканинах рослини, а також варіанти амінокислотної послідовності, одержані штучним шляхом.
Функція таких варіантів може бути проаналізована, як проілюстровано у Прикладі 15.
Ногпп із співавт. (2013) ідентифікували два гени БПЛК, що експресуються в перикаргпії авокадо. Амінокислотна послідовність кодованих поліпептидів авокадо БПЛКІ і БПЛК2 була на б2 95 ідентичною, а також володіла гомологією до поліпептиду, кодованого АїЗд05500
Агабрідорвзів і ЗЕРР-подібного білка гумового дерева. сідаа із співавт. (2013) ідентифікували три гени БПЛК, що експресуються в мезокарпії, але не в ядрах масляної пальми (ЕїЇаєї5 диіпеепвів) і зробили висновок про те, що гени БПЛК були специфічними для рослини і консервативними для всіх видів рослин. Поліпептиди БПЛК можуть містити додаткові домени (сідаа із співавт., (2013).
Гени, що кодують БПЛК, загалом, активуються в тканинах, що не відносяться до насіння, із рясним вмістом ліпідів, і можуть бути ідентифіковані в такий спосіб, однак вважається, що вони експресуються у всіх клітинах, що не відносяться до насіння, яке продукує масло, зокрема для тимчасового зберігання. Ногп із співавт. (2013) ілюструють філогенетичне дерево 5КРР- подібних білків у рослинах. Характерні поліпептиди БІПЛК описані у Прикладі 15 даного документа. Гомологи БПЛК в інших видах рослин можуть бути з легкістю ідентифіковані фахівцями в даній галузі.
У варіанті реалізації винаходу екзогенний полінуклеотид за винаходом, який кодує БПЛК, містить, якщо не вказано інше, одне або більше з наступного: ї) нуклеотиди, що кодують поліпептид, які містять амінокислоти, послідовність яких наведена в будь-якій із 5ЕО ІЮО МО: 237, 239 або 241, або його біологічно активний фрагмент або поліпептид, амінокислотна послідовність якого є щонайменше на 30 95 ідентичною будь-якій одній або більше із ЗЕО ІЮ МО: 237, 239 або 241, і) нуклеотиди, послідовність яких є щонайменше на 30 95 ідентичною Її), і ії) полінуклеотид, який гібридизується з одним або обома із ії) або ії) в суворих умовах.
У даному документі термін "поліпептид, що приймає участь у біосинтезі крохмалю" позначає будь-який поліпептид, зниження вмісту якого в клітині до рівнів нижче за нормальні (дикий тип) призводить до зниження рівня синтезу крохмалю і зниження рівнів крохмалю. Прикладом такого поліпептиду є АГФаза.
В даному документі термін "фосфорилаза АДФ-глюкози" або "АГфФаза" позначає фермент, що регулює біосинтез крохмалю, каталізуючи перетворення глюкози-1-фосфату і АТФ на АДф- глюкозу, яка служить будівельним блоком для полімерів крохмалю. Активна форма ферменту
АГфази складається із 2 великих і 2 маленьких субодиниць.
Фермент АдДфаза в рослинах існує, головним чином, у формі тетрамеру, що складається із 2 великих і 2 маленьких субодиниць. Хоча каталітична і регуляторна ролі цих субодиниць бо відрізняються в залежності від виду (Кипйп із співавт., 2009), в рослинах маленька субодиниця виявляє, головним чином, каталітичну активність. Молекулярна маса маленької субодиниці становить приблизно 50-55 кДа. Молекулярна маса великої субодиниці становить приблизно 55-60 кДа. Фермент рослини інтенсивно активується 3-фосфогліцератом (ФГА), продуктом фіксації монооксиду карбону; за відсутності ФГА фермент виявляє тільки близько 3 95 активності. Рослинна АГфаза також інтенсивно інгібується неорганічним фосфатом (Фн).
Навпаки, бактеріальна і водоростева АГфази існують у вигляді гомотетрамерів розміром 50 кДа.
Водоростевий фермент, подібно до його рослинного двійника, активується ФГА та інгібується
Фн, тоді як бактеріальний фермент активується фруктозо-1,6-біросфатом (ФБФ) та інгібується
АМФ і Фн.
ТАГ ліпази і бета-окиснення
У даному документі термін "поліпептид, що приймає участь в розкладанні ліпіду та/або який знижує вміст ліпіду" позначає будь-який поліпептид, що катаболізує ліпід, причому зниження вмісту поліпептиду в клітині до рівнів нижче за нормальні (дикий тип) приводить до підвищення рівня масла, наприклад, жирних кислот та/або ТАГ, у клітині, переважно клітині вегетативної частини, бульби, буряку або насінні. Приклади таких поліпептидів включають, без обмежень, ліпази або ліпазу, таку як поліпептид СОі58 (подібний до порівняльного ідентифікатору гена-58), цукрозалежну триацилгліцерол ліпазу 1 (БОР) (див., наприклад, КепПу із співавт., 2011) і ліпазу, описану у УУО 2009/027335.
У даному документі термін "ТАГ ліпаза" (ЕС.3.1.1.3) позначає білок, що гідролізує ТАГ до однієї або більше жирних кислот і будь-якого із ДАГ, МАГ або гліцеролу. Таким чином, термін "активність ТАГ ліпази" позначає гідроліз ТАГ до гліцеролу і жирних кислот.
У даному документі термін "С(оі58" позначає розчинну ацил-КоА-залежну ацилтрансферазу лізофосфатидинової кислоти, кодовану геном Аї4924160 в Агарідорвзіє ІШНайапа і його гомологами в інших рослинах, і "ІСИ р" у дріжджах і його гомологами. Рослинний ген, наприклад, локус гена Агарідорзіє АЩМд2г4160, експресується як дві альтернативні копії: довша повнорозмірна ізоформа (Аїщ924160.1) ії коротша ізоформа (АЩд24160.2), в якій відсутня частина 3 кінця (див. Уатез із співавт., 2010; пов із співавт., 2009; 05 201000221400). Обидві
ІРНК кодують білок, гомологічний людському білку СО1І-58 та іншим ортологічним членам даного сімейства а/В-Огідролази (АБГД). У варіанті реалізації білок СОІ58 (Аї4924160) містить три
Зо мотиви, що є консервативними у рослинах: мотив ліпази ХХ (ЗБО ІЮО МО: 127), моноацилтрансферази НХ(4) О (5ЕО ІЮО МО: 128), і МХ(3) НОБЕ, ймовірний мотив зв'язування з ліпідом (ЗЕБЕО ІЮ МО: 129). Білок СбІ-58 людини володіє активністю ацилтрансферази лізофосфатидинової кислоти (ГРААТ), але не активністю ліпази. | навпаки, білки рослини і дріжджів містять канонічний мотив послідовності ліпази ЗХ5ХО (ЗЕО ІЮ МО: 127), відсутній у білках хребетних (людина, миші і рибки даніо) і володіючий ліпазною і фосфоліпазною активністю (Опо5п із співавт., 2009). Хоча білки СОІ58 рослини і дріжджів, схоже, володіють детектованими рівнями активності ліпази ТАГ і фосфоліпази А, на додаток до активності І РААТ, білок людини не виявляє такої активності.
Руйнування гомологічного гена СО1І-58 в Агарідорзіз ІШайапа приводить до акумуляції крапельок нейтрального ліпіду у зрілому листі. Мас-спектроскопічний аналіз крапельок ліпіду, виділених з мутантів із втратою функції сді-58, продемонстрував, що вони містять триацилгліцероли із специфічними жирними кислотами, звичайними для листя. Листя зрілих рослин сді-58 демонструє помітне підвищення абсолютних рівнів триацилгліцеролів, які більш ніж у 10 разів перевищують рівні в рослинах дикого типу. Рівні ліпіду в запасаючому масло насінні сді-58 залишалися незмінними, і, на відміну від мутацій з ВД-окисненням, насіння сді-58 проростало і росло нормально, не вимагаючи порятунку за допомогою сахарози (датев із співавт., 2010).
Приклади нуклеотидів, що кодують поліпептиди СОоі58, включають нуклеотиди з Агаріаорвів
ІТШаїїапа (ММ 118548.1, який кодує МР 194147.2; 5БО ІЮО МО: 130), Вгаспуродіит аівїаспуоп (ХР 003578450.1; 5ЕО ІЮ МО: 131), Сіусіпе тах (ХМ 003523590.1, який кодує ХР. 003523638.1;
ЗЕО ІЮО МО: 132), 7єа тауз (ММ 001155541.1, який кодує МР 001149013.1; 5ЕО ІЮ МО: 133),
Зогупит бБісоїрт (ХМ 002460493.1, який кодує ХР 002460538.1; 5ЕО ІЮ МО: 134), Вісіпиб соттипів (ХМ 002510439.1, який кодує ХР 002510485.1; 5ЕО ІЮО МО: 135), Медісадо ігипсаїша (ХМ 003603685.1, який кодує ХР 003603733.1; 5ЕО ІЮО МО: 136) і Огула займа (який кодує
ЕА209782.1).
У варіанті реалізації винаходу генетична модифікація за винаходом пригнічує ендогенне продукування Соі58, причому СОі58 кодується одним або більше з наступного: ї) нуклеотиди, що містять послідовність, наведену в будь-якій із ФЕО ІЮ МО: 130-136, ії) нуклеотиди, що містять послідовність, яка є щонайменше на 30 95 ідентичною будь-якій 60 одній або більше із ЗЕО ІЮ МО: 130-136, і ії) полінуклеотид, який гібридизується з одним або обома із ії) або ії) в суворих умовах.
Інші ліпази, що володіють активністю ліпази відносно ТАГ, включають цукрозалежну триацилгліцерол ліпазу 1 (ЗОРІ, див., наприклад, Еазітопа із співавт., 2006; КеїПу із співавт., 2011) ії 5ОРІ1-подібні поліпептиди, знайдені в рослинних видах, а також дріжджах (поліпептид
ТОЇ 4) і тваринних клітинах, які беруть участь в розщепленні запасних ТАГ. Схоже, що 5ОРІ1 Її
ЗОРІ-подобні поліпептиди є відповідальними за початок розщеплення ТАГ у насінні після проростання (Еазітопа із співавт., 2006). Рослини з мутантом 50ОРІ, за відсутності екзогенних
МУКИ ї ОСАТІ, демонструють підвищені рівні ПНЖК в ТАГ. У даному документі "поліпептиди
ЗОРІ" включають ЗОРІ поліпептиди, 5ОР1-подібні поліпептиди і їх гомологи у рослинних видах. Розмір ЗОРІ і 5БОР1-подібних поліпептидів у рослинах становить 800-910 залишків амінокислот, причому вони містять пататин-подібний домен ацилгідролази, що може зв'язуватися з поверхнями масляних включень і переважно гідролізувати ТАГ щодо ДАГ або
МАГ. Вважається, що 5ОРІ надає перевагу гідролізу ацильної групи в положенні 51-2 ТАГ.
Агарідорзіє містить щонайменше три гени, що кодують ЗОРІ ліпази, а саме 50ОРІ (номер доступу МР 196024, нуклеотидна послідовність ЗЕ ІЮ МО: 163 і гомологи в інших видах),
ЗОРІ. (номер доступу ММ 202720 і гомологи в інших видах, КеїЇу із співавт., 2011) і АТО (АМТ933270) (Еазітопа із співавт., 2006). Особливий інтерес з точки зору зниження активності гена представляють гени БОР, що експресуються у вегетативних тканинах рослин, наприклад, у листі, стеблах і корінні. Таким чином, рівні неполярних ліпідів у вегетативних частинах рослини можуть бути підвищені шляхом зниження активності поліпептидів ЗОРІ у частинах рослини, наприклад, шляхом мутації ендогенного гена, що кодує поліпептид ЗОРІ, або введенням екзогенного гена, який кодує молекулу сайленсингової РНК, що знижує експресію ендогенного гена 5ОРІ. Таке зниження забезпечує практичну користь на урожаях бульб, таких як цукровий буряк і картопля, та у "високосахарозних" рослинах, таких як цукрова тростина і цукровий буряк.
Гени, які кодують гомологи ЗОРІ (зокрема 5ОРІ1-подібні гомологи), у рослинних видах вибору, можуть бути з легкістю ідентифіковані за гомологією до відомих послідовностей гена
ЗОРІ. Відомі нуклеотидні або амінокислотні послідовності ЗОР1 включають номери доступу: у
Вгазвіса парих, (СМО078290 (5БЕО 10 МО:164), (сМО78281, сМО078283; Сарзейа гибеїа,
Зо ХР 006287072; Тиеобгота сасао, ХР. 007028574.1; Роршив Міспосагра, ХР. 002308909 (5ЕО ІЮ
МО:166); Ргипив регзіса, ХР 007203312; Ргипи5 тите, ХР 008240737; Маїнб5 аотевіїса,
ХР 008373034; Вісіпиє соттипіх, ХР. 002530081; Медісадо ігипсаїцша, ХР 003591425 (5ЕО І0
МО:167); Зоїапит Іусорегвзісит, ХР. 004249208; Рназеоіив мицЇдагі5, ХР 007162133; Сіусіпе тах,
ХР 003554141 (5ЕО 10 МО:168); Боіапит Шбрегозит, ХР 006351284; СПіусіпе тах,
ХР 003521151; Сісег агпієїпит, ХР 004493431; Сиситів заїймив5, ХР 004142709; Сиситів теїо,
ХР 008457586; даїорна сигсаз, КОР26217; Міїі5 міпі'тега, СВІЗ0О074; Огуга заїїма, даропіса Стоир
ВАВбБ1223; Огуга заїїма, Іпаіса Стоир ЕАМ75912; Огула заїїма, даропіса Стор МР 001044325;
Зогопит Бісоїог, ХР. 002458531 (5ЕО І МО:169); Вгаспуродіит аієтаснпуоп, ХР. 003567139 (5ЕО
ІЮО МО:165); 7еа тауз, АРМ/85009; Ногдешт миЇдаге, ВАКОЗ290 (5ЕО І МО:172); Аедіорв5 їаизсепії, ЕМТ32802; Богапит бБісоїогї, ХР, 002463665; 7еа тауз, МР 001168677 (З5ЕО ІЮ МО:170);
Ногдецт мшцідагє, ВАКО1155; Аедіоре іайвсні, ЕМТО02623; Тиййсит гани, ЕМ567257;
РПпузсопійгейа раїеп5, ХР 001758169 (5БО ІЮ МО:171). Переважні послідовності БОРІ для застосування в генетичних конструкціях з метою пригнічення експресії ендогенних генів, походять із КДНК, відповідних генам, які експресуються найбільшою мірою в клітинах, вегетативних частинах рослини або насінні, в залежності від того, що підлягає модифікації.
Нуклеотидні послідовності, що є високою мірою консервативними між кКДНК, відповідними всім генам ЗБОРІ у виді рослин, є переважними, якщо бажано скоротити активність всіх членів генного сімейства в даному виді.
У варіанті реалізації винаходу генетична модифікація за винаходом пригнічує ендогенне продукування ЗОРІ, причому ЗОРІ кодується одним або більше з наступного: ї) нуклеотиди, послідовність яких наведена в будь-якій із ЗЕО ІЮ МО: 163-174, ії) нуклеотиди, послідовність яких є щонайменше на 30 95 ідентичною будь-якій однією або більше послідовностям, наведеним як ЗЕО ІЮ МО: 163-174, і ії) послідовність нуклеотидів, яка гібридизується з одним або обома із ї) або ії) в суворих умовах.
Як проілюстровано у Прикладах, зниження експресії та/або активність ТАГ ліпази 5ОРІ1 у листі рослини значно підвищувало вміст ТАГ, як із точки зору кількості ТАГ, що акумулюються, так і більш раннього початку періоду акумуляції в ході розвитку рослини, в контексті коекспресії фактору транскрипції МУКІї ї ацилтрансферази ацилов жирних кислот. Зокрема, підвищення бо спостерігалося в рослинах до цвітіння, і становило до близько 70 95 мас. (95 сухої маси) на момент початку старіння. Підвищення було відносним, в порівнянні з рівнями ТАГ, спостережуваними у відповідному листі рослин, трансформованих екзогенними полінуклеотидами, що кодують МУКІї і ацилтрансферазу ацилов жирних кислот, але без модифікації, яка знижує експресію та/або активність БОРІ1.
Крім того, зниження експресії інших генів катаболізму ТАГ у частинах рослини може підвищувати вміст ТАГ, наприклад, генів АСХ, що кодують ацил-КоА оксидази, таких як гени
Асх1 (АїШщо916760 і гомологи в інших видах рослин) або Асх2 (Аї5965110 і гомологи в інших видах рослин). Іншим поліпептидом, що приймає участь в катаболізмі ліпідів, Є РХА1, що являє собою пероксисомальний переносник АТФф-зв'язуючої касети, необхідний для імпорту жирних кислот для рД-окиснення (2оїЇтап із співавт., 2001).
Експорт жирних кислот із пластид
У даному документі термін "поліпептид, який підвищує експорт жирних кислот із пластид клітини" позначає будь-який поліпептид, що сприяє перенесенню жирних кислот із внутрішнього простору пластид (у клітинах, які містять пластиди, таких як клітина вегетативної частини, бульби, буряка або насіння рослини) за межі пластиди, тобто в будь-яку іншу частину клітини, таку як ендоплазматичний ретикулум (ЕР). Приклади таких поліпептидів включають, але не обмежуючись цим, тіоестеразу С16 або С18 жирних кислот, таку як поліпептид ЕАТА або поліпептид ЕАТВ, тіоестеразу С8-С14 жирних кислот (що додатково є поліпептидом ЕАТВ), переносник жирних кислот, такий як поліпептид АВСА9У або синтетаза довголанцюгової ацил-
КоА (ДЛАС).
У даному документі термін "тіоестераза жирних кислот" або "ГРАТ" позначає фермент, що каталізує гідроліз тіоестерного зв'язку між ацильним фрагментом і ацилпереносним білком (АПБ) в ацил-АПБ та вивільнення вільної жирної кислоти. Такі ферменти звичайно функціонують у пластидах організму, який синтезує жирні кислоти де помо. У даному документі термін "тіоестераза С16 або С18 жирної кислоти" позначає фермент, що каталізує гідроліз тіоестерного зв'язку між С16 та/або С18 ацильним фрагментом і АПБ в ацил-АПБ та вивільнення вільної С1б6 або С18 жирної кислоти у пластиді. Далі вільна жирна кислота переестерифікується до КоОА в пластидному конверті, і у такому вигляді вона транспортується із пластиди. Специфічність субстрату ферменту тіоестерази жирних кислот (БАТ) у пластиді
Зо приймає участь у визначенні спектру довжини ланцюга і ступеня насиченості жирних кислот, що експортуються із пластиди. Ферменти БАТ можуть бути розділені на два класи, на базі їх специфічності по відношенню до субстрату і нуклеотидних послідовностей, РАТА і РГАТВ (ЄС 3.1.2.14) (опе5 із співавт., 1995). Поліпептиди БРАТА віддають перевагу олеоїл-АПБ як субстрату, тоді як поліпептиди РАТВ демонструють вищу активність по відношенню до насичених ацил-АПБ з різною довжиною ланцюга, наприклад, впливаючи на пальмітоїл-АПБ з утворенням вільної пальмітинової кислоти. Приклади поліпептидів ЕРАТА, придатних відповідно до винаходу, включають, але не обмежуючись цим, поліпептиди з Агабідорвів іНаїіапа (МР 189147), Агаснпіз нуродаєа (с0324446), Неїапіпив аппиивз (ААЇ 79361), Сапнатив ііпсіогіи5 (АААЗЗО020), Могив поїабріїв (ХР 010104178.1), Вгазвзіса пари (СОХ77369.1), Вісіпи5 соттипів (ХР 002532744.1) і Сатеїййпа займа (АРОбО946.1). Приклади поліпептидів ЕАТВ, придатних відповідно до винаходу, включають, але не обмежуючись цим, поліпептиди із 7єа таувз (А. 28766), Вгазбвіса парих (АВНІ1710), Неїїапійи5 аппииз (ААХ1Т9387), Агарідорвзів Шаїїапа (АЕЕ28300), ШтрбеїІшага саїйогіса (ААС49001), Агаспіз пуродаєа (АЕН54500), Вісіпив соттипів (ЕЕР47013) и Вгаспуродіит 5уїмаїйсит (АВІ 85052.1).
Підклас поліпептидів ЕБАТВ складають тіоестерази жирних кислот, що виявляють гідролітичну активність по відношенню до насиченого ацильного фрагменту С8-С14, сполученого тіоестерним зв'язком із АПБ. Такі ферменти додатково позначають як тіоестерази середньоланцюгових жирних кислот (СЛЖК) або ферменти СЛ-ТЖК. Такі ферменти можуть додатково виявляти активність тіоестерази по відношенню до С16-АПБ, насправді, вони можуть виявляти вищу активність тіоестерази по відношенню до субстрату С1б6 ацил-АПБ, ніж до субстрату СЛЖК-АПБ, однак, вони розглядаються у даному документі як СЛЖК тіоестерази, якщо при екзогенній експресії в клітині рослини вони продукують щонайменше 0,5 95 СЛЖК у загальному вмісті жирних кислот. Приклади СЛЖК тіоестераз наведені у Прикладі 9 даного документа.
В даному документі термін "переносник жирних кислот" пов'язаний з наявністю в мембрані пластиди поліпептиду, що бере активну участь у перенесенні жирних кислот із пластиди за її межі. Приклади поліпептидів АВСАЗУ (АВС переносник А член сімейства 9), придатних відповідно до винаходу, включають, але не обмежуючись цим, поліпептиди з Агабідорвзів
Інаїіїапа (СО9БРІ Т5), Сарзеїа гибейа (ХР. 006279962.1), Агабіз аіІріпе (КЕК27923.1), Сатеїїмнпа заїїма бо (ХР 010457652.1), Вгазвіса пари5 (СОУ23040.1) і Вгазвзіса гара (ХР. 009136512.1).
У даному документі термін "ацил-КоА синтетаза" або "АС5" (ЄС 6.2.1.3) позначає поліпептид, який входить до складу сімейства лігази, що каталізує утворення жирного ацил-КоА в ході двохстадійного процесу, який відбувається через проміжне аденілування сполуки, з використанням неестерифікованої жирної кислоти, КоА і АТФ як субстратів, з утворенням естеру ацил-КоА, АМФ і пірофосфату як продуктів. У даному документі термін "синтетаза довголанцюгового ацил-КоА" (ДЛАС) позначає АС, що виявляє активність щонайменше по відношенню до субстрату С18 вільної жирної кислоти, хоча вона може володіти більш широкою активністю по відношенню до будь-якої з вільних С14-С20 жирних кислот. Ендогенні пластидні ферменти ДЛАС локалізуються у зовнішній мембрані пластиди і функціонують разом з тіоестеразою жирних кислот з метою експорту жирних кислот із пластиди (5сПпигтг із співавт., 2002). В Агарідорзі5 присутні щонайменше дев'ять ідентифікованих генів ДЛАС (ЗпосКеу із співавт., 2002). Переважними поліпептидами ДЛАС є ті, що належать до підкласу ГАС58, які в
Агарідорхіз є основними пластидними ДЛАС. Приклади поліпептидів ДЛАС, придатних відповідно до винаходу, включають, але не обмежуючись цим, поліпептиди з Агабіаорвіб Шаїйапа (0О9САРВ8) Сатеїїпа займа (ХР 010416710.1), СарзеМйа гиреМйа (ХР 006301059.1),
Вгаззіса париз (СОХ79212.1), Вгаззіса сгара (ХР 009104618.1), Со55урішт гаітопаїї (ХР 012450538.1) і Мій5 міп'тегта (ХР 002285853.1). Гомологи вищезазначених поліпептидів у інших видах можуть бути з легкістю ідентифіковані фахівцями в даній галузі.
Поліпептиди, що приймають участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластидах
Рівні неполярних ліпідів, наприклад, у вегетативних частинах рослини можуть бути додатково підвищені шляхом зниження активності поліпептидів, що приймають участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластиді в частинах рослини, наприклад, шляхом мутації ендогенного гена, який кодує такий поліпептид, або введенням екзогенного гена, який кодує молекулу сайленсингової РНК, що знижує експресію гена-мішені, який приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ), у пластиді.
В даному документі термін "поліпептид, що приймає участь у продукуванні діацилгліцеролів (ДАГ) у пластиді" позначає будь-який поліпептид у пластиді (в клітинах, що містять пластиди, таких як клітина вегетативної частини, бульби, буряка або насіння рослини), який безпосередньо приймає участь в синтезі діацилгліцеролів. Приклади таких поліпептидів включають, але не обмежуючись цим, пластидну ОРАТ, пластидну І РААТ або пластидну РАР.
СРАТ описані в іншому місці даного документа. Приклади пластидних поліпептидів СРАТ, що можуть служити мішенню для пригнічення згідно винаходу, включають, але не обмежуючись цим, поліпептиди з Агабрідорзів Інаійапа (ВААООБ575), СарзеїІа гибеМйа (ХР. 006306544.1), Сатеїїна займа (010499766.1), Вгаззіса пари (СОМУ43010.1), Вгаззіса гара (ХР 009145198.1), Неїїапіпив аппиив (АБМ16382.1) і Сів ип5піш (ВАВ79529.1). Гомологи в інших видах можуть з легкістю бути ідентифіковані фахівцями в даній галузі.
ІРААТ описані в іншому місці даного документа. Як буде зрозуміло кваліфікованому фахівцю, пластидні ГРААТ, які служать мішенню для пригнічення з метою зниження синтезу
ДАГ у пластиді, не є ендогенними І РААТ, що функціонують поза межами пластиди, наприклад, в ЕР, наприклад, описаними у даному документі як придатні для продукування ТАГ, що містять середньоланцюгові жирні кислоти. Приклади пластидних поліпептидів ГРААТ, які можуть служити мішенню для пригнічення згідно винаходу, включають, але не обмежуючись цим, поліпептиди Вгаззіса париз (АВО42862), Вгаззіса гара (ХР 009137939.1), Агарідорзів ІНаіапа (МР 194787.2), Сатеїїпа займа (ХР 010432969.1), СЧусіпе тах (ХР 006592638.1) і Боіапит їбегозит (ХР 006343651.1). Гомологи вищезазначених поліпептидів у інших видах можуть бути з легкістю ідентифіковані фахівцями в даній галузі.
В даному документі термін "фосфатаза фосфатидинової кислоти (РАР) (ЄС 3.1.3.49" позначає білок, який здійснює гідроліз фосфатної групи на 3-5п-фосфатидаті з утворенням продукування 1,2-діацил-5п-гліцериду (ДАГ) і фосфату. Приклади пластидних поліпептидів РАР, які можуть служити мішенню для пригнічення згідно винаходу, включають, але не обмежуючись цим, поліпептиди з Агабідорзіх ІНаійапа (О6МІ АБ), Сарзеїа гибейа (ХР 006288605.1), Сатеїїна займа (ХР 010452170.1), Вгаззіса пари (СОМ10405.1), Вгаззіса гара (ХР. 009122733.1), СпПусіпе тах (ХР 003542504.1) і боіапит ШБрегозит (ХР 006361792.1). Гомологи вищезазначених поліпептидів у інших видах можуть бути з легкістю ідентифіковані фахівцями в даній галузі.
Імпорт жирних кислот у пластиди
Рівні неполярних ліпідів у вегетативних частинах рослини можуть бути додатково підвищені шляхом зниження активності поліпептидів ТГД в частинах рослини, наприклад, шляхом мутації ендогенного гена, який кодує поліпептид ТГД, або введення екзогенного гена, який кодує молекулу сайленсингової РНК, що знижує експресію ендогенного гена ТГД. У даному документі бо "тригалактозилдіацилгліцерол поліпептид" (ТД, ТО) є таким, що приймає участь в перенесення ліпідів хлоропластами у ЕР (Хи із співавт., 2010) і приймає участь у формуванні білкового комплексу, який здійснює функцію пермеази для ліпідів. Чотири таких поліпептиди відомі, як формуючі або пов'язані з ТГД пермеазою, а саме ТО0-1 (номер доступу АМа919800 і гомологи в інших видах), Т50-2 (номер доступу Аї2920320 і гомологи в інших видах), ТО0-3 (номер доступу ММ-105215 і гомологи в інших видах) і Т50-4 (АїЗд06960 і гомологи в інших видах) (05 20120237949). Вважається, що поліпептиди ТО0-1, -2 їі -3 є компонентами переносника АТФ-зв'язуючої касети (АСК), пов'язаного з внутрішньою мембраною конверта хлоропласту. Поліпептиди Т50-2 і Т50-4 зв'язуються з фосфатидиновою кислотою, тоді як поліпептид Т50-3 діє, як АТФаза в стромі хлоропласту. У даному документі "ендогенний ген
ТГД" є геном, що кодує поліпептид ТГД в рослині. Мутації в гені Т2О-1 А. (йайапа спричиняли акумуляцію триацилгліцеролів, олігогалактоліпідів і фосфатидинової кислоти (ФК) (Хи із співавт., 2005). Мутації в генах ТГД або генах БОР, або, насправді, в будь-якому цільовому гені у рослині, можуть бути введені в сайт-специфічній формі за допомогою штучної цинк-пальцевої нуклеази (ЦПН), ефектора ТАЇ. (ТАГЕМ) або технології СКІ5Р (із застосуванням нуклеази Са59 типу), як відомо з рівня техніки. Переважними екзогенними генами, що кодують сайленсингові
РНК, є такі, що кодують молекулу двохланцюгової РНК, такої як шпилькова РНК або штучний прекурсор мікроР НК.
Ферменти, що модифікують жирні кислоти
В даному документі термін "єАО2" позначає пов'язану з мембраною дельта-12 десатуразу жирної кислоти, що утворює кратні зв'язки в олеїновій кислоті (С18:129) з утворенням лінолевої кислоти (С18:28912),
В даному документі термін "епоксигеназа" або "епоксигеназа жирної кислоти" позначає фермент, що вводить епоксидну групу в жирну кислоту, з одержанням в результаті епоксижирної кислоти. У переважному варіанті реалізації епоксигрупа вводиться при 12 атомі карбону на ланцюгу жирної кислоти, якщо епоксигеназа являє собою Д12-епоксигеназу, особливо ланцюгу жирної кислоти С1б6 або С18. Епоксигеназа може бути ЛУ9-епоксигеназою, д15-епоксигеназою або може здійснювати свою дію при іншому положенні в ланцюгу ацилу, як відомо з рівня техніки. Епоксигеназа може належати до класу Р450. Переважні епоксигенази належать до класу монооксигеназ, як описано у УМО98/46762. Численні епоксигенази або передбачувані епоксигенази клоновані і відомі в даній галузі. Інші приклади епоксигеназ включають білки, що містять амінокислотну послідовність, представлену у ЗЕО ІЮО МО: 21 УМО 2009/129582, поліпептиди, кодовані генами Стеріє раІєазіїпа (САА76156, І ее із співавт., 1998),
Зіокезіа Іаєміз (ААК23815) (монооксигеназний тип), Еирпогбіа Іадазсає (ААЇ 62063) (тип Р450),
СУР2О2 людини (епоксигеназа арахідонової кислоти, ШЗ7143); СУРІАТ людини (епоксигеназа арахідонової кислоти, КОЗ3191), а також їх варіанти та/або мутанти.
В даному документі термін "гідроксилаза" або "гідроксилаза жирної кислоти" позначає фермент, що вводить гідроксильну групу в молекулу жирної кислоти, з одержанням в результаті гідроксильованої жирної кислоти. У переважному варіанті реалізації гідроксильна група вводиться при 2, 12 та/або 17 атомі карбону на ланцюгу жирної кислоти С18. Переважно, гідроксильна група вводиться при 12 атомі карбону, якщо гідроксилаза являє собою А12- гідроксилазу. В іншому переважному варіанті реалізації гідроксильна група вводиться при 15 атомі карбону на ланцюгу жирної кислоти С16. Додатково, гідроксилази можуть володіти активністю ферменту, такого як десатураза жирної кислоти. Приклади генів, що кодують А12- гідроксилази, включають одержані з Вісіпиє соттипіз (ААСОО10, мап де оо 1995); Рпузагтіа
Іпанеїтеті, (АВО01458, Ваик із співавт., 2007); І ездиегеїІа Тепаїегі, (ААС32755, Вгошцп із співавт., 1998); Оайсив сагоїа, (ААКЗ30206); гідроксилази жирних кислот, що гідроксилюють кінець жирних кислот, наприклад: А, Ійайапа СУРВбБАТ (Р48422, Ф-гідроксилаза жирної кислоти); Місіа заїїма
СУРО4АТ (РО8188, оФ-гідроксилаза жирної кислоти); СУР2ЕЇ миші (Х62595, Ф-1 гідроксилаза лауринової кислоти); СУРААТ щура (М57718, о-гідроксилаза жирної кислоти), а також їх варіанти та/або мутанти.
У даному документі термін "кон'югаза" або "кон'югаза жирної кислоти" позначає фермент, здатний до утворення кон'югаційного зв'язку в адильному ланцюгу жирної кислоти. Приклади кон'югаз включають кон'югази, кодовані генами СаїЇєпаціа ойісіпаіййв (АЕ343064, Оіи із співавт., 2001); Метісіа їогаїї (ААМ87574, Буег із співавт., 2002); Рипіса дгапайшт (АМ178446, Імарисні із співавт., 2003) і Тіспозапінез Кіном/ї (АУ178444, Імариспі із співавт., 2003); а також їх варіанти та/або мутанти.
У даному документі термін "ацетиленаза" або "ацетиленаза жирної кислоти" позначає фермент, який вводить потрійний зв'язок у жирну кислоту, що в результаті приводить до утворення ацетиленвмісної жирної кислоти. В переважному варіанті реалізації потрійний зв'язок бо вводиться при 2, 6, 12 та/або 17 атомі карбону на ланцюгу жирної кислоти С18. Приклади ацетиленаз включають одержані з Неїапіпи5 аппии5 (ААО38032, АВС59684), а також їх варіанти та/або мутанти.
Приклади таких модифікуючих жирні кислоти генів включають білки у відповідності до наступних номерів доступу, що згруповані за передбачуваною функцією, і гомологи з інших видів: А12-ацетиленази АВСО0О0769, САА7б6158, ААХОЗ38036, ААХОЗ38032; Л12 кон'югази ААС42259,
АдОса42260, ААМ87574; Д12-десатурази Р4Аб6313, АВ5З18716, ААБ57577, ААЇ 61825, ААРГО4093,
ААРО4094; 12 епоксигенази ХР 001840127, САА7б156, ААК23815; А12-гідроксилази
АСЕЗ37070, ААС32755, АВО01458, ААС49010; і ферменти А12 Р450, наприклад, АЕ406732.
Супресори сайленсингу
У варіанті реалізації винаходу рекомбінантна/грансгенна клітина за винаходом може містити супресор сайленсингу.
В даному документі "супресор сайленсингу" підвищує експресію трансгена в клітині за винаходом. Наприклад, присутність супресора сайленсингу приводить до вищих рівнів поліпептиду(ів), продукованого екзогенним(и) полінуклеотидом(ами) в клітині за винаходом, у порівнянні з відповідною клітиною, що не містить супресора сайленсингу. У варіанті реалізації винаходу супресор сайленсингу переважно зв'язується з молекулою дцРНК, розмір якої становить 21 пару основ, відносно молекули ддРНК іншої довжини. Це є ознакою щонайменше супресора сайленсингу типу р19, а саме р19 і його функціональних ортологів. У іншому варіанті реалізації винаходу супресор сайленсингу переважно зв'язується з двохланцюговою молекулою
РНК з нависаючими 5' кінцями, відносно відповідної двохланцюгової молекули РНК із тупими кінцями. Це ознака супресора сайленсингу типу М2, а саме М2 ї його функціональних ортологів.
У варіанті реалізації винаходу молекула ддРНК або її процесований РНК продукт містить щонайменше 19 нуклеотидів поспіль, довжина якого переважно становить 19-24 нуклеотиди, із 19-24 парами основ поспіль у разі двохланцюгової молекули шпилькової РНК або процесованого РНК продукту, більш переважно, складається із 20, 21, 22, 23 або 24 нуклеотидів і переважно містить метильований нуклеотид, щонайменше на 95 95 ідентичний послідовності, що є комплементарною ділянці РНК-мішені, причому ділянка РНК-мішені знаходиться ї) в межах 5 нетрансльованої ділянки РНК-мішені, ії) в межах 5' половини РНК-мішені, ії) в межах кодуючої білок відкритої рамки зчитування РНК-мішені, ім) в межах 3 половини РНК-мішені або м) в межах 3' нетрансльованої ділянки РНК-мішені.
Додаткові подробиці щодо супресорів сайленсингу добре відомі з рівня техніки та описані у
УМО 2013/096992 і УМО 2013/096993.
Полінуклеотиди
Терміни "полінуклеотид" і "нуклеїнова кислота" використовуються рівнозначно. Вони позначають полімерну форму нуклеотидів будь-якої довжини, дезоксирибонуклеотидів або рибонуклеотидів або їх аналогів. Полінуклеотид за винаходом може бути геномного, кКДНК, напівсинтетичного або синтетичного походження, одноланцюговим або двохланцюговим, і внаслідок його походження або маніпуляцій з ним: (1) не пов'язаний з повнорозмірним або частиною о полінуклеотиду, з яким він пов'язаний у природі, (2) пов'язаний з іншим полінуклеотидом, ніж той, з яким він пов'язаний у природі, або (3) не зустрічається в природі.
Нижче наведені необмежуючі приклади полінуклеотидів: кодуючі або некодуючі ділянки гена або фрагмента гена, екзони, інтрони, інформаційна РНК (ІРНК), транспортна РНК (тРНК), рибосомальна РНК (рРНК), рибозими, кКДНК, рекомбінантні полінуклеотиди, плазміди, вектори, виділена ДНК з будь-якою послідовністю, виділена РНК з будь-якою послідовністю, химерна
ДНК з будь-якою послідовністю, зонди нуклеїнової кислоти і праймери. Для застосування іп мйго полінуклеотид може включати нуклеотиди, модифіковані, наприклад, за допомогою кон'югації з міткою.
В даному документі "виділений полінуклеотид" позначає полінуклеотид, відокремлений від полінуклеотидних послідовностей, з якими він пов'язаний або сполучений в природному стані, або від неприродного полінуклеотиду.
В даному документі термін "ген" розуміється в найширшому контексті і включає дезоксирибонуклеотидні послідовності, що містять транскрибовану ділянку і, за умови трансляції, ділянку кодування білка структурного гена і, зокрема, послідовності, суміжні з кодуючою ділянкою, на 5' і 3' кінцях, на відстані щонайменше близько 2 тисяч пар основ на будь-якому кінці, що беруть участь в експресії гена. В цьому відношенні, ген містить контрольні сигнали, наприклад, промотори, енхансери, сигнали термінації та/або поліаденілування, які в природі пов'язані із вказаним геном, або гетерологічні контрольні сигнали, і в цьому випадку ген позначається, як "химерний ген". Послідовності, розміщені у напрямку 5' по відношенню до кодуючої білок ділянки, а також присутні в іРНК, позначаються як 5' нетрансльовані бо послідовності. Послідовності, які розміщені у напрямі 3' або по ходу транскрипції по відношенню до кодуючої білок ділянки, а також присутні в ІРНК, позначаються, як 3' нетрансльовані послідовності. Термін "ген" включає кДНК і геномні форми гена. Геномна форма або клон гена містить кодуючу ділянку, що може перемежатися некодуючими послідовностями під назвою "Інтрони", "вставкові послідовності" або "вбудовані послідовності". Інтрони являють собою сегменти гена, що транскрибовані в ядерну РНК (яЯРНК). Інтрони можуть містити регуляторні елементи, наприклад, енхансери. Інтрони видаляються, або "відбувається вкорочення" ядерної або первинної копії; таким чином, інтрони відсутні в копії ІРНК. Ген, який містить щонайменше один інтрон, може піддаватися варіабельному сплайсингу з утворенням альтернативних ІРНК з одного транскрибованого гена і, таким чином, поліпептидних варіантів. У природному або химерному гені інтрони можуть бути відсутні. Функції іРНК в ході трансляції полягають у визначенні послідовності або порядку амінокислот у виникаючому поліпептиді. Термін "ген" включає синтетичну або химерну молекулу, яка кодує повнорозмірні білки за винаходом або їх частини, як розкрито у даному документі, і нуклеотидну послідовність, комплементарну до будь- чого із згаданого вище.
У даному документі "химерна ДНК" позначає будь-яку молекулу ДНК, що не знайдена в природі; також позначається у даному документі як "конструкція ДНК" або "генетична конструкція". Звичайно, химерна ДНК містить регуляторну і транскрибовану або кодуючу білок послідовності, що не знайдені разом у природі. Відповідно, химерна ДНК може містити регуляторні послідовності і кодуючі послідовності, що походять з різних джерел або регуляторних послідовностей, і кодуючі послідовності, що походять з того ж джерела, але організовані до певної міри відмінним чином, ніж знайдені у природі. Відкрита рамка зчитування може бути або може не бути пов'язаною з її природними регуляторними елементами, розташованими проти ходу транскрипції і по ходу транскрипції. Відкрита рамка зчитування може бути інкорпорована, наприклад, до геному рослини в неприродному розташуванні або в репліконі або векторі, в якому не знайдена в природі, наприклад, бактеріальній плазміді або вірусному векторі. Термін "химерна ДНК" не обмежується молекулами ДНК, що здатні до реплікації в хазяйському організмі, але включає ДНК, здатну до лігування в реплікон, наприклад, специфічними адаптерними послідовностями. "Трансген" являє собою ген, що введений до геному процедурою трансформації. Термін включає ген у клітині-нащадку, рослині, насінні, організмі, що не належить до людського роду, або його частині, який був введений до геному їх батьківської клітини. Такі клітини-нащадки і т.п. можуть представляти щонайменше З або 4 покоління нащадків відносно батьківської клітини, що була початково трансформована, або батьківської трансгенної рослини (яка у даному документі позначається як рослина Т0). Нащадок може бути одержаний шляхом статевого відтворення або вегетативно, наприклад, з бульб картоплі або відгілків цукрової тростини.
Терміни "генетично модифікований", "генетична модифікація" і їх варіації представляють більш широкий термін, який включає введення гена в клітину за допомогою трансформації або трансдукції, видозміну гена в клітині і генну модифікацію або модуляцію регулювання гена в клітині або нащадку будь-якої модифікованої клітини, як викладено вище. "Геномна ділянка" у даному документі позначає положення в межах генома, в якому трансген або група трансгенів (також позначається у даному документі як кластер) вставлені в клітину або її предка. Такі ділянки містять тільки нуклеотиди, введені в результаті втручання людини, наприклад, за способами, розкритими у даному документі. "Рекомбінантний полінуклеотид" за винаходом позначає молекулу нуклеїнової кислоти, яка сконструйована або модифікована за способами штучної рекомбінації. Рекомбінантний полінуклеотид може бути присутнім в клітині у модифікованій кількості або може експресуватися з модифікованою швидкістю (наприклад, у разі ІРНК), в порівнянні з його природним станом. У одному варіанті реалізації полінуклеотид введений в клітину, що від природи не містить полінуклеотиду. Звичайно екзогенна ДНК використовується як шаблон для транскрипції ІРНК, яка в подальшому транслюється в безперервну послідовність залишків амінокислот, кодуючи поліпептид за винаходом у межах трансформованої клітини. В іншому варіанті реалізації полінуклеотид є ендогенним для клітини, і його експресія модифікована рекомбінантними засобами, наприклад, екзогенна контрольна послідовність введена у напрямку відносно цільового ендогенного гена, щоб надати можливість трансформованій клітині експресувати поліпептид, кодований геном, або делеція введена до цільового гену за методами 2ЕМ, ТаїЇеп або СКІ5БРЕ.
Рекомбінантний полінуклеотид за винаходом містить полінуклеотиди, що не були відокремлені від інших компонентів клітинної або неклітинної системи експресії, в якій він присутній, і полінуклеотиди, утворені у вказаних клітинних або неклітинних системах, які згодом бо очищають щонайменше від деяких інших компонентів. Полінуклеотид може бути безперервною ділянкою нуклеотидів або може містити дві або більше суміжних ділянки нуклеотидів з різних джерел (природних та/або синтетичних), сполучених таким чином, щоб сформувати єдиний полінуклеотид. Звичайно, такі химерні полінуклеотиди містять щонайменше відкриту рамку зчитування, що кодує поліпептид за винаходом, функціонально пов'язану з промотором, придатним для управління транскрипцією відкритої рамки зчитування у цільовій клітині.
З урахуванням певних полінуклеотидів, необхідно розуміти, що 95 ідентичності, який перевищує наведені вище, охоплюватиме переважні варіанти реалізації винаходу. Таким чином, якщо це доречно, у світлі мінімальних значень 95 ідентичності, полінуклеотид переважно містить послідовність полінуклеотиду, яка щонайменше на 60 95, більш переважно щонайменше на 65 95, більш переважно щонайменше на 70 95, більш переважно щонайменше на 75 95, більш переважно щонайменше на 80 95, більш переважно щонайменше на 85 95, більш переважно щонайменше на 90 95, більш переважно щонайменше на 91 95, більш переважно щонайменше на 92 95, більш переважно щонайменше на 93 95, більш переважно щонайменше на 94 95, більш переважно щонайменше на 95 95, більш переважно щонайменше на 96 95, більш переважно щонайменше на 97 95, більш переважно щонайменше на 98 95, більш переважно щонайменше на 99 95, більш переважно щонайменше на 99,1 95, більш переважно щонайменше на 99,2 95, більш переважно щонайменше на 99,3 95, більш переважно щонайменше на 99,4 95, більш переважно щонайменше на 99,5 95, більш переважно щонайменше на 99,6 95, більш переважно щонайменше на 99,7 95, більш переважно щонайменше на 99,8 95, і навіть більш переважно щонайменше на 99,9 95 є ідентичною представленій у відповідній зЕО ІЮ МО.
Полінуклеотид за даним винаходом або придатний для застосування відповідно до даного винаходу може селективно гібридизуватися в суворих умовах з полінуклеотидом, визначеним у даному документі. В даному документі суворими умовами є: (1) застосування в ході гібридизації денатуруючого агента, такого як формамід, наприклад, 50 95 об/о0б формаміду, що містить 0,1 95, мас/об телячого сироваткового альбуміну, 0,1 Фо Фіколу, 0,1 95 полівінілпіролідону, 50 мМ натрій фосфатного буфера, рН 6,5 що містить 750 мМ Масі, 75 мМ натрій цитрату, при 42 "С; або (2) застосування 50 95, формаміду, 5 х натрій хлориду ж натрій цитрату (0,75 М Масі, 0,075
М натрій цитрату), 50 мМ натрій фосфату (рН 6,8), 0,1 95 натрій пірофосфату, 5 х розчин
Денхардта, оброблена ультразвуком ДНК сперми лосося (50 г/мл), 0,195 натрій
Зо лаурилсульфату і 10 95 декстрану сульфату при 42 "С в 0,2 х натрій хлориду «т натрій цитрату і 0,1 95 натрій лаурилсульфату, та/або (3) застосування низької іонної сили і високої температури для промивання, наприклад, 0,015 М МасСіІ/0,0015 М натрій цитрату/0,1 95 натрій лаурилсульфату при 50 "С.
Полінуклеотиди за винаходом можуть містити, в порівнянні з природними молекулами, одну або більше мутацій, що являють собою делеції, вставки або заміни нуклеотидних залишків.
Полінуклеотиди, які містять мутації відносно референтної послідовності, можуть бути природними (тобто, виділеними з природного джерела) або синтетичними (наприклад, одержані шляхом сайт-спрямованого мутагенезу або тасування ДНК в нуклеїновій кислоті, як викладено вище).
Полінуклеотиди для зниження рівнів експресії генів
РНК-інтерференція
РНК-інтерференція (РНКІ) є особливо придатною для специфічного зниження експресії гена, що веде до зменшення продукування конкретного білка, якщо ген кодує білок. Не бажаючи обмежуватися теорією, У/агегпоизе із співавт. (1998) запропонували модель механізму, за яким двохланцюгова РНК (длРНК) може застосовуватися для зниження продукування білка. Дана технологія залежить від присутності молекул длРНК, що містять послідовність, по суті ідентичну
ІРНК цільового гена або його частини. Придатним чином, длРНК може бути одержана за допомогою єдиного промотору в рекомбінантному векторі або хазяйській клітині, в яких смислові і антисмислові послідовності фланковані сторонньою послідовністю, що дозволяє смисловій і антисмисловій послідовностям гібридизуватися з утворенням молекули длРНК із сторонньою послідовністю, що утворює структуру петлі. Конструювання і одержання відповідних молекул длРНК знаходиться в межах компетенції фахівця в даній галузі, особливо з урахуванням Умаїептоизе із співавт. (1998), Зтйй із співавт. (2000), М/О 99/32619, УУО 99/53050,
УМО 99/49029 і УМО 01/34815.
В одному з прикладів здійснюють введення ДНК, що спрямовує синтез щонайменше частково двохланцюгового(их) продукту(ів) РНК, гомологічного гену-мішені, який підлягає інактивації, наприклад, такого як БОРІ, ТОО, пластидна СРАТ, пластидна І РААТ, пластидна
РАР, ген АДФ-глюкозопирофосфориллази (АГФази). Таким чином, ДНК містить смислові і антисмислові послідовності, що при транскрипції в РНК можуть гібридизуватися з утворенням бо двохланцюгової ділянки РНК. В одному варіанті реалізації смислова і антисмислова послідовності відокремлені спейсерною ділянкою, що містить інтрон, який відщеплюється при транскрипції в РНК. Показано, що таке розташування приводить до вищої ефективності сайленсингу гена (Зтійй із співавт., 2000). Двохланцюгова ділянка може містити одну або дві молекули РНК, транскрибовані з однієї або двох ділянок ДНК. Вважається, що присутність двохланцюгової молекули запускає реакцію ендогенної системи, яка руйнує двохланцюгову
РНК, а також гомологічну копію РНК, утворену геном-мішенню, ефективно знижуючи або усуваючи активність гена-мішені.
Довжина смислової і антисмислової послідовностей, які гібридизуються, повинна становити для кожної щонайменше 19 нуклеотидів поспіль, переважно щонайменше 50 нуклеотидів поспіль, білош переважно, щонайменше 100 або щонайменше 200 нуклеотидів поспіль.
Загалом, застосовується послідовність розміром 100-1000 нуклеотидів, яка відповідає ділянці
ІРНК гена-мішені Може використовуватися повнорозмірна послідовність, яка відповідає повному транскрипту гена. Ступінь ідентичності смислової послідовності цільовому транскрипту (, таким чином, також ідентичності антисмислової послідовності та послідовності, комплементарної транскрипту-мішені) повинна становити щонайменше 8595, щонайменше 90 95 або 95-100 95. Молекула РНК може, звичайно, містити сторонні послідовності, функція яких може полягати у стабілізації молекули. Молекула РНК може експресуватися під контролем промотору РНК полімерази І або РНК полімерази ІШ. Приклади останнього включають промотори тРНК або мяРНК.
Переважні молекули малої інтерферуючої РНК ("міР НК") містять нуклеотидну послідовність, що є ідентичною приблизно 19-25 суміжним нуклеотидам іРНК-мішені. Переважно, послідовність міРНК розпочинається з динуклеотиду АА, містить С в кількості приблизно 30- 70 95 (переважно, 30-60 95, більш переважно 40-60 95 і більш переважно приблизно 45-55 95), і не володіє високим ступенем ідентичності до жодної нуклеотидної послідовності в геномі організму, окрім мішені, в яку вона повинна бути введена, наприклад, як визначається стандартним пошуком ВІ А5Т.
МікроРНК
МікроРНК (скорочено мігРНК) загалом являють собою некодуючі молекули РНК завдовжки 19-25 нуклеотидів (у рослинах розмір звичайно становить приблизно 20-24 нуклеотиди), що
Зо походять з великих прекурсорів, які утворюють недосконалі структури "петля-на-стеблі". міРНК пов'язують з додатковими послідовностями на цільових транскриптах інформаційної РНК (ІРНК), що звичайно приводить до пригнічення трансляції або розкладання мішені і сайленсингу гена.
Як добре відомо з рівня техніки, на базі природних міРНК можуть бути сконструйовані штучні міРНК (шміРНК) з метою зменшення експресії будь-якого цільового гена.
Вважається, що в клітинах рослин процесинг молекул-прекурсорів міРНК значною мірою відбувається в ядрі. Процесинг пре-міРНК (що містять одну або більше локальних двохланцюгових або "шпилькових" ділянок, а також звичайний 5'"кеп" і поліаденільований хвіст
ІРНК) відбувається до коротшої молекули-прекурсора міРНК, що також містить структуру "петля-на-стеблі" або кон'югацію плечей хромосоми і має назву "пре-міРНК". У рослинах, пре- міРНК розщеплюються різними ДАЙСЕР-подібними ферментами (ДСП), утворюючи дуплекси міРНК:мМігР НК". Перед транспортом за межі ядра, такі дуплекси метилуються.
В цитоплазмі, ланцюг міРНК від спареної міРНК:міРнНК селективно інкорпорується до активного РНК-індукованого комплексу сайленсинга (РІКС) для розпізнавання мішені.
Комплекси РІКС містять конкретну підмножину білків Агаопашіє, що здійснюють специфічне по відношенню до послідовності пригнічення гена (див., наприклад, Мійаг ії Умагегпоизе, 2005;
РазадціпеїЇї із співавт., 2005; АІтеїаа і АЇІ5Піге, 2005).
Косупресія
Гени можуть пригнічувати експресію споріднених ендогенних генів та/або трансгенів, вже присутніх у геномі, причому дана ознака названа залежним від гомології сайленсингом гена. В більшості випадків залежний від гомології сайленсинг гена відноситься до одного з двох класів - функціонуючий на рівні транскрипції трансгена або діючий посттранскрипціонально.
Посттранскрипціональний залежний від гомології сайленсинг (тобто, косупресія) гена описує припинення експресії трансгена і споріднених ендогенних або вірусних генів у трансгенних рослинах. Косупресія часто, але не завжди, виникає, якщо копій трансгена багато, і, загалом, вважається такою, що запускається на рівні процесингу, локалізації та/або розкладання іРНК.
Існують різні моделі для пояснення того, яким чином здійснюється косупресія (див. Тауїог, 1997).
Косупресія включає введення додаткової копії гена або його фрагмента в рослину, у смисловій орієнтації відносно промотору, для його експресії. Розмір смислового фрагмента, 60 його відповідність ділянкам гена-мішені, і ступінь ідентичності його послідовності гену-мішені можуть бути визначені фахівцями в даній галузі В деяких випадках додаткова копія послідовності гена перешкоджає експресії рослинного гена-мішені. У УМО 97/20936 і ЕР 0465572 розкриті способи здійснення підходів косупресії.
Антисмислові полінуклеотиди
Термін "антисмисловий полінуклеотид" слід інтерпретувати як такий, що позначає молекулу
ДНК або РНК, яка є комплементарною щонайменше частини конкретної молекули ІРНК, що кодує ендогенний поліпептид, і здатна перешкоджати посттранскрипціональній події, наприклад, трансляції ІРНК. Застосування антисмислових методів добре відоме з рівня техніки (див., наприклад, с. Нагітапп апа 5. Епаге5, Мапиа! ої Апіїзепхе МеїПподоїоду, Кіпмжег (1999)).
Застосування антисмислових методів у рослинах розглянуте Воигдие (1995) і Бепіог (1998).
Воигдие (1995) наводить велику кількість прикладів того, яким чином антисмислові послідовності застосовуються в рослинних системах як спосіб інактивації гена. Воигдие також заявляє, що досягнення 100 95 інгібування будь-якої ферментної активності може не бути необхідним, оскільки часткове інгібування буде більш ніж вірогідно приводити до вимірної модифікації в системі. Зепіог (1998) вказує, що антисмислові методи на даний час є добре вивченою технікою для маніпуляції експресією гена.
В одному варіанті реалізації антисмисловий полінуклеотид гібридизується у фізіологічних умовах, тобто, антисмисловий полінуклеотид (який повністю або частково є одноланцюговим) щонайменше здатний до утворення двохланцюгового полінуклеотиду з ІРНК, кодуючою в клітині ендогенний поліпептид, наприклад, МРНК 5ОРІ, ТО0, пластидної ОРАТ, пластидної І РААТ, пластидної РАР або АГфази, за нормальних умов.
Антисмислові молекули можуть включати послідовності, що відповідають структурним генам або для послідовностей, що здійснюють контроль над експресією гена або подією вкорочення.
Наприклад, антисмислова послідовність може відповідати цільовій кодуючій ділянці ендогенного гена або 5'-нетрансльованій ділянці (НТД) або 3-НТД або їх комбінації. Вона може бути частково комплементарною інтронним послідовностям, що можуть бути вкорочені в ході або після транскрипції, переважно тільки до екзонних послідовностей гена-мішені. Приймаючи до уваги істотну загалом дивергенцію НТД, націлювання даних ділянок забезпечує високий ступінь специфічності інгібування гена.
Довжина антисмислової послідовності повинна становити щонайменше 19 нуклеотидів поспіль, переважно щонайменше 50 нуклеотидів і більш переважно щонайменше 100, 200, 500 або 1000 нуклеотидів. Може використовуватися повнорозмірна послідовність, комплементарна повнорозмірному транскрипту гена. Найбільш переважно, довжина становить 100-2000 нуклеотидів. Ступінь ідентичності антисмислової послідовності цільовому транскрипту повинна становити щонайменше 9095 і більш переважно 95-100 95. Антисмислова молекула РНК, звичайно, може містити сторонні послідовності, функція яких може полягати у стабілізації молекули.
Рекомбінантні вектори
Один варіант реалізації даного винаходу включає рекомбінантний вектор, який містить щонайменше один полінуклеотид, розкритий у даному документі, і здатний доставляти полінуклеотид в хазяйську клітину. Рекомбінантні вектори включають вектори експресії.
Рекомбінантні вектори містять гетерологічні полінуклеотидні послідовності, тобто, полінуклеотидні послідовності, які в природі не знайдені суміжно з полінуклеотидом, розкритим у даному документі, і, переважно, одержані від іншого виду. Вектор може являти собою РНК або
ДНК, і звичайно є вірусним вектором, одержаним з вірусу, або плазмідою. Плазмідні вектори звичайно містять додаткові послідовності нуклеїнової кислоти, які включені для простоти селекції, ампліфікації і трансформації касети експресії в прокаріотних клітинах, наприклад, рОс- одержані вектори, РОЕМ-одержані вектори або бінарні вектори, що містять одну або більше ділянок Т-ДНК. Додаткові послідовності нуклеїнової кислоти включають джерела реплікації для автономної реплікації вектора, гени селекційного маркера, переважно кодуючі резистентність до антибіотика або гербіциду, унікальні множинні сайти клонування, що передбачають множинні сайти для вставки послідовностей нуклеїнової кислоти або кодованих генів в конструкцію нуклеїнової кислоти, і послідовності, що збільшують ступінь трансформації прокаріотних і еукаріотних (особливо рослинних) клітин. "Функціонально пов'язаний" у даному документі позначає функціональне взаємовідношення двох або більше сегментів нуклеїнової кислоти (наприклад, ДНК). Звичайно, даний вираз позначає функціональне взаємовідношення елементу регуляції транскрипції (промотор) з транскрибованою послідовністю. Наприклад, промотор функціонально пов'язаний з кодуючою послідовністю полінуклеотиду, розкритого у даному документі, якщо він стимулює або модулює бо транскрипцію кодуючої послідовності у придатній клітині. Загалом, промоторні елементи регуляції транскрипції, які функціонально пов'язані з транскрибованою послідовністю, є фізично суміжними з транскрибованою послідовністю, тобто, вони є цис-діючими. Однак, деякі елементи регуляції транскрипції, наприклад, енхансери, не повинні бути фізично суміжними або розташованими поблизу кодуючих послідовностей, транскрипцію яких вони підсилюють.
Якщо присутні декілька промоторів, кожен промотор незалежно може бути таким же або іншим.
Крім того, рекомбінантні вектори можуть містити одну або більше послідовностей сигнального пептиду, щоб дозволити утримання експресованого поліпептиду, розкритого у даному документі, в ендоплазматичному ретикулумі (ЕР) клітини або перенесення в пластиду, та/або химерні послідовності, які приводять до експресії молекул нуклеїнової кислоти у вигляді химерних білків. Приклади придатних сигнальних сегментів включають будь-який сигнальний сегмент, здатний спрямовувати секрецію або локалізацію поліпептиду, розкритого в даному документі.
Для спрощення ідентифікації трансформантів, рекомбінантний вектор бажано повинен включати ген селекційного або придатного для скринінгу маркера. "Ген маркера" позначає ген, що надає відмінного фенотипу клітинам, які експресують ген маркера, і, таким чином, дозволяє відрізняти такі трансформовані клітини від клітин, що не містять маркера. Ген селекційного маркера забезпечує ознаку, за якою може бути здійснена "селекція" на базі резистентності до агента селекції (наприклад, гербіциду, антибіотику). Ген придатного для скринінгу маркера (або репортерний ген) забезпечує ознаку, яку можна ідентифікувати за допомогою спостереження або тестування, тобто, "скринінгу" (наприклад, ВД-глюкуронідаза, люцифераза, ЗФБ або інша ферментна активність, відсутня у нетрансформованих клітинах). Приклади селекційних маркерів для селекції трансформантів рослини включають, без обмежень, ген пу, що кодує резистентність до гігроміцину В; ген неоміцинфосфотрансферази (прії), що забезпечує резистентність до канаміцину, паромоміцину; ген глутатіон-5-трансферази з печінки щурів, що забезпечує резистентність до одержаних з глутатіону гербіцидів, наприклад, описаний в ЕР 256223; ген глутамінсинтетази, що при підвищеній експресії забезпечує резистентність до інгібіторів глутамінсинтетази, таких як фосфінотрицин, наприклад, як розкрито у УМО 87/05327; ген ацетилтрансферази бігеріотусев мігідосптотодепеб5, що забезпечує резистентність до
Зо агента селекції фосфінотрицину, наприклад, як розкрито у ЕР 275957; ген, що кодує 5- енолшикімат-3-фосфат синтетазу (ЕШФС), що забезпечує переносимість М- фосфонометилгліцину, наприклад, як розкрито Ніпспеєе із співавт. (1988); ген Баг, що забезпечує резистентність до біалафосу, наприклад, розкритий у УМО 91/02071; ген нітрилази, наприклад, рхп КіебзівєЇІа огаєпає, що забезпечує резистентність до бромоксинілу (зіаїЇКег із співавт., 1988); ген дигідрофолатредуктази (ДГФР), що забезпечує резистентність до метотрексату (ТАЙеї із співавт., 1988); ген мутанта ацетолактсинтетази (АЛС), що забезпечує резистентність до імідазолінону, сульфонілсечовини або інших хімічних речовин, що інгібують АЛС (ЕР 154204); видозмінений ген антранілатсинтетази, що забезпечує резистентність до 5-метилтриптофану; або ген далапон дегалогенази, що забезпечує резистентність до гербіциду.
Переважно, рекомбінантний вектор є стабільно інкорпорованим у геном клітини, наприклад, клітини рослини. Відповідно, рекомбінантний вектор може містити придатні елементи, що дозволяють вектору інкорпоруватися до геному або хромосоми клітини.
Вектор експресії
У даному документі "вектор експресії"! являє собою ДНК вектор, що здатний до трансформації хазяйської клітини і ефективної експресії одного або більше вказаних полінуклеотидів. Вектори експресії за даним винаходом містять регуляторні послідовності, наприклад, послідовності контролю транскрипції, послідовності контролю трансляції, джерела реплікації та інші регуляторні послідовності, які є сумісними з хазяйською клітиною і управляють експресією полінуклеотидів за даним винаходом. Зокрема, вектори експресії за даним винаходом містять послідовності контролю транскрипції. Послідовності контролю транскрипції являють собою послідовності, що управляють ініціацією транскрипції, подовженням транскрипту і закінченням транскрипції. Особливо значущими послідовностями контролю транскрипції є такі, які управляють ініціацією транскрипції, наприклад, промоторні, енхансерні, операторні і репресорні послідовності. Вибір застосовуваних регуляторних послідовностей залежить від організму-мішені, наприклад, рослини, та/або органу-мішені або цільової тканини. Такі регуляторні послідовності можуть бути одержані від будь-якого еукаріотного організму, такого як рослини або віруси рослини, або можуть бути хімічно синтезовані. Цілий ряд векторів, придатних для стабільної трансфекції рослинних клітин або для одержання трансгенних рослин, розкритий, наприклад, у Рошцм'еї5 із співавт., Сіопіпуд Месіог5: А І арогаїогу Мапиаї, 1985, 5з!,ирр. 60 1987, М/віззрасп апа Умеізврасі, Меїподз їтог Ріапі Моїесшаг Віоіоду, Асадетіс Ргез5, 1989, і
Сеїміпе єї аї., Ріапі МоїІесціаг Віоюду Мапиаї!, Кіим"ег Асадетіс Рибіїєпег5, 1990. Звичайно, вектори експресії рослин містять, наприклад, один або більше клонованих генів рослини під транскрипціональним контролем 5' і 3' регуляторних послідовностей і домінуючий селекційний маркер. Крім того, такі вектори експресії рослин можуть містити регуляторну ділянку промотору (наприклад, регуляторна ділянка, що управляє індуцибельною або конститутивною, регульованою навколишнім середовищем або стадією розвитку, клітинно- або тканиноспецифічною експресією), старт-сайт ініціації транскрипції, сайт зв'язування з рибосомою, сайт термінації транскрипції та/або сигнал поліаденілування.
Розкритий цілий ряд конститутивних промоторів, що є активними в клітинах рослин.
Придатні промотори для конститутивної експресії в рослинах включають, без обмежень, промотор 355 вірусу мозаїки цвітної капусти (СамМм), 355 вірусу мозаїки норичнику (ВМН), індукований світлом промотор маленької субодиниці (МСО) рибулозо-1,5-бисфосфат карбоксилази, рисовий промотор цитозольної триозофосфат ізомерази, промотор аденін фосфорибозилтрансферази Агабідорвзі5, промотор гена рисового актину 1, промотори манопін синтетази і октопін синтетази, промотор Ап, промотор синтетази сахарози, промотор комплексу К гена і промотор гена білка, що зв'язується з а/В хлорофілом. Ці промотори застосовувалися для створення векторів ДНК, що експресуються в рослинах, див., наприклад,
УМО 84/02913. Всі вказані промотори застосовувалися для створення різних видів експресованих у рослинах рекомбінантних ДНК векторів.
З метою експресії в початкових тканинах рослини, таких як лист, насіння, коріння або стебло, промотори, застосовувані у даному винаході, переважно демонструють відносно високу експресію у вказаних конкретних тканинах. Для досягнення даної мети можна вибирати з цілого ряду промоторів для генів з тканино- або клітинно-специфічної або -підсиленої експресією.
Приклади таких промоторів, про які повідомлялося в літературі, включають, промотор глутамінсинтетази хлоропластів 552 гороху, промотор фруктозо-1,6-біфосфатази хлоропласту пшениці, промотор ядерної фотосинтетичної 5Т-І51 картоплі, промотор серин/греонінкінази і промотор глюкоамілази (СН5) Агарідорвзів ІНайапа. Також повідомлялося, що активним у фотосинтетичний активних тканинах є промотор рибулозо-1,5-бісфосфат карбоксилази східної модрини (Іагіх Іагісіпа), промотор гена Саб сосни, Сарб, промотор гена Сар-1 пшениці,
Зо промотор гена Сар-1ї шпинату, промотор гена Сар-1К рису, промотор піруват,ортофосфат дикінази (ПФДК) 7еа тауб5, промотор гена І пср172 тютюну, промотор симпортера 5Зис2 сахарози-Нео Агарідорзів (Паїйапа і промотор для генів тилакоїдного білка мембрани шпинату (Рзаб, Рзанг, Рзає, РОС, ЕМВ, Аїрс, Агро, Саб, МБсз). Інші промотори білків, що зв'язуються з а/р хлорофілом, також можуть застосовуватися у даному винаході, наприклад, промотори гена
Ї пев і гена Р5БР білої гірчиці (5іпарів аїба).
Різноманітні промотори рослинних генів, що регулюються у відповідь на екологічні, гормональні, хімічні та/або пов'язані із розвитком сигнали, також можуть застосовуватися для експресії генів РНК-зв'язуючого білка в клітинах рослини, зокрема, промотори, регульовані (1) нагріванням, (2) світлом (наприклад, промотор Крсе5-ЗА гороху, промотор Крез5 маїсу), (3) гормонами, наприклад, абсцизинова кислота, (4) утворенням ран (наприклад, УмМипі) або (5) хімічними речовинами, такими як метилжасмонат, саліцилова кислота, стероїдні гормони, спирт, сафенери (М/О 97/06269), або додатково може бути переважним застосування (б) специфічних по відношенню до органу промоторів.
У даному документі термін "промотор, специфічний по відношенню до запасаючого органу рослини" позначає промотор, який, у порівнянні з іншими тканинами рослини, переважно спрямовує транскрипцію гена в запасаючому органі рослини. З метою експресії в акцепторних тканинах рослини, наприклад, бульби картопляної рослини, плоду помідора або насіння сої, рапсу, бавовнику, 7еа тауз, пшениці, рису і ячменю, промоторам, застосовуваним у даному винаході, переважно властива відносно висока експресія у даних конкретних тканинах. Може застосовуватися промотор ДВ-конгліциніну або інші специфічні для насіння промотори, наприклад, промотори напіну, зеїну, лініну і фазеоліну. Крім того, можуть застосовуватися специфічні по відношенню до коріння промотори. Прикладом такого промотору є промотор гена кислої хітинази. Додатково, експресія у кореневій тканині могла би бути досягнута із застосуванням специфічних по відношенню до коріння субдоменів промотору Самм 355, що були ідентифіковані.
В особливо переважному варіанті реалізації промотор спрямовує експресію у тканинах і органах, в яких має місце біосинтез ліпіду. Такі промотори можуть діяти на стадії розвитку насіння, у придатний для модифікації складу ліпіду в насінні час. Переважні промотори для специфічної експресії в насінні включають: 1) промотори генів, що кодують ферменти, які бо беруть участь у біосинтезі ліпіду і акумуляції в насінні, наприклад, десатурази і елонгази, 2)
промотори генів, що кодують запасні білки насіння, і 3) промотори генів, що кодують ферменти, які беруть участь у біосинтезі карбону і акумуляції в насінні. Придатними промоторами, специфічними по відношенню до насіння, є: промотор гена напіну олійного рапсу (05 5608152), промотор Фарм. США Місіа таба (Вашйтівїп із співавт., 1991), промотор олеозину Агабідорвів (УМО 98/45461), промотор фазеоліну РпазеоіЇи5 миЇдагіє (05 5504200), промотор Все4 Вгазвіса (МО 91/13980) або промотор легуміну В4 (Ваиштівїп еї аї!., 1992), а також промотори, що приводять до специфічної експресії в насінні однодольних, таких як маїс, ячмінь, пшениця, жито, рис і т.п.
Слід зазначити придатні промотори гена Ірі2 або Іри ячменю (М/О 95/15389 і МО 95/23230) або промотори, описані у УМО 99/16890 (промотори гена гордеїну ячменю, гена глютеліну рису, гена оризину рису, гена проламіну рису, гена гліадину пшениці, гена глютеліну пшениці, гена зеїну маїсу, гена глютеліну вівса, гена казирину сорго, гена секаліну жита). Інші промотори включають розкриті Вгошп із співавт. (1998), Рогепла із співавт. (2004), 05 20070192902 ї 05 20030159173. У варіанті реалізації специфічний для насіння промотор переважно експресується у певних частинах насіння, наприклад, сім'ядолі(ях) або ендоспермі. Приклади специфічних для сім'ядолі промоторів включають, без обмежень, промотор ЕР (ЕПегзігт еї а!., 1996), промотор легуміну гороху (Реїтіп із співавт., 2000) і промотор фітогемаглютиніну боба (Регїтіп із співавт., 2000).
Приклади специфічних для ендосперма промоторів включають, без обмежень, промотор зеїну-1 маїсу (Спікжатра із співавт., 2003), промотор глютеліну-ії рису (ЖМапд із співавт., 2003), промотор ЮО-гордеїну ячменю (Ногмаїй із співавт., 2000) і промотори високомолекулярного глютеніну пшениці (Аїмаге? із співавт., 2000). В подальшому варіанті реалізації специфічний для насіння промотор не експресується або експресується тільки на низькому рівні у зародку та/або після того, як насіння проростає.
В іншому варіанті реалізації промотор, специфічний для запасаючого органу рослини, є специфічним для плоду промотором. Приклади включають, без обмежень, промотор полігалактуронази помідора, Еб і Раз, а також промотор аміноциклопропанкарбоксилат оксидази (АЦК) яблука (огляд див. у Роїепла із співавт., 2004). У переважному варіанті реалізації промотор переважно спрямовує експресію у їстівних частинах плоду, наприклад, серцевині плоду, відносно шкірки плоду або насіння в межах плоду.
У варіанті реалізації індуцибельний промотор є системою аїс АзрегойПи5 підшап5. Приклади
Зо індуцибельних систем експресії що можуть застосовуватися замість системи Азрегайишв підшапз аїс, описані в огляді Радідат (2003) і Сотадо і Кагаїї (2009). В іншому варіанті реалізації індуцибельний промотор являє собою індукований сафенером промотор, наприклад, такий як промотор Іп2-1 або Іп2-2 маїсу (Негепеу і 5іопег, 1991), індуцибельний сафенером промотор являє собою промотор 51-27 маїсу (дерзоп із співавт., 1994) або промотор СН2/А сої (ОШтавом із співавт., 1995).
В іншому варіанті реалізації індуцибельний промотор являє собою промотор, індукований старінням, наприклад, такий як індукований старінням промотор ЗАС (пов'язаний із старінням ген) 12 ї БАС 13 Агарідорвів (Сап, 1995; Сап і Атавзіпо, 1995) і І 5054 Вгазвіса пари (Виспапап-
Умоавіоп, 1994). Такі промотори демонструють підвищену експресію в період поблизу початку старіння рослинних тканин, особливо листя.
Для експресії у вегетативних тканинах можуть застосовуватися специфічні для листя промотори, такі як промотори рибулозобіфосфат карбоксилаза (РБФК). Наприклад, гени
КВОо51, КВО52 і КВС5ЗА помідора експресуються в листі і саджанцях, що ростуть під дією світла (Меїег із співавт., 1997). Можуть застосовуватися промотори рибулозобіфосфат карбоксилази, що майже винятково експресуються у клітинах мезофілу листових пластинок і піхв листя з високими рівнями, як розкрито МаїзиокКа із співавт. (1994). Інший специфічний для листя промотор являє собою індукований світлом промотор гена уловлюючого світло білка а/р, що зв'язується із хлорофілом (див. ЗПіїпа із співавт., 1997). Споріднений туб промотор (Айптубр5) гена Агарідорвів ІНайійапа, описаний Гі із співавт. (1996), є специфічним для листя. Промотор
Айтур»5 експресується в процесі розвитку листових трихом, прилисників та епідермальних клітин по краях молодої розетки і стеблового листя, а також у незрілому насінні. Крім того, може застосовуватися листовий промотор, ідентифікований у маїсі ВизхК із співавт. (1997).
У деяких випадках, наприклад, якщо ЇЕС2 або ВВМ рекомбінантно експресується, може бути бажаним, щоб трансген не експресувався з високими рівнями. Прикладом промотору, який може застосовуватися в таких випадках, є вкорочений промотор напіну А, який зберігає специфічний для насіння характер експресії, але із зниженим рівнем експресії (Тап із співавт., 2011). 5 Нетрансльовані лідерні послідовності можуть бути одержані з промотору, вибраного для експресії послідовності гетерологічного гена полінуклеотиду за даним винаходом, або можуть бо бути гетерологічними по відношенню до ділянки кодування ферменту, що повинен продукуватися, і можуть бути специфічним чином модифіковані, при бажанні, з метою збільшення трансляції ІРНК. Огляд оптимізації експресії трансгенів див. у Коліє!Ї із співавт. (1996). Крім того, 5' нетрансльовані ділянки можуть бути одержані з РНК вірусів рослин (серед іншого, вірус мозаїки тютюну, вірус гравіювання тютюну, вірус карликової мозаїки маїсу, вірус мозаїки люцерни), з придатних еукаріотних генів, рослинних генів (лідер гена білка а/р, що зв'язується із хлорофілом, пшениці і маїсу) або із синтетичної послідовності гена. Даний винахід не обмежується конструкціями, у яких нетрансльована ділянка одержана з 5' нетрансльованої послідовності, що супроводжує послідовність промотору. Додатково, лідерна послідовність може походити від стороннього промотору або кодуючої послідовності. Лідерні послідовності, придатні за формою і вмістом для даного винаходу, включають лідер Нозр70 маїсу (05 5362865 і 5 5859347) і елемент омега вірусу мозаїки тютюну (ВМТ).
Термінація транскрипції досягається за допомогою 3' нетрансльованої послідовності ДНК, функціонально пов'язаної у векторі експресії із цільовим полінуклеотидом. 3' Нетрансльована ділянка рекомбінантної молекули ДНК містить сигнал поліаденілування, функція якого в рослинах полягає у приєднанні аденілатних нуклеотидів до 3' кінця РНК. 3' Нетрансльована ділянка може бути одержана з різних генів, які експресуються в клітинах рослини. В даному випадку звичайно використовуються 3 нетрансльовані ділянки синтетази нопаліну, З3З' нетрансльована ділянка маленької субодиниці гена КОВІЗСО гороху, 3' нетрансльована ділянка соєвого гена запасного білка 75 насіння. Крім того, придатними є 3' транскрибовані, нетрансльовані ділянки, що містять поліаденілатний сигнал індукуючих пухлину (ІС) генів плазміди Адгобасіелйт.
Рекомбінантні технології ДНК можуть застосовуватися для покращення експресії трансформованого полінуклеотиду за допомогою маніпуляції, наприклад, ефективністю, з якою транслюються утворені в результаті транскрипти, шляхом оптимізації кодонів у відповідності до виду хазяйської клітини або делеції послідовностей, що дестабілізують транскрипти, та маніпуляцій ефективністю посттрансляційних модифікацій.
Транспортні нуклеїнові кислоти
Транспортні нуклеїнові кислоти можуть застосовуватися для доставки екзогенного полінуклеотиду в клітину і містять одну, переважно, дві граничні послідовності і один або більше
Зо цільові полінуклеотиди. Транспортна нуклеїнова кислота може кодувати або не кодувати селекційний маркер. Переважно, транспортна нуклеїнова кислота формує частину бінарного вектора в клітині бактерії, причому бінарний вектор додатково містить елементи, що дозволяють реплікацію вектора у бактерії, селекцію або підтримку бактеріальних клітин, які містять бінарний вектор. При перенесенні в еукаріотну клітину, компонент транспортної нуклеїнової кислоти бінарного вектора здатний до інтеграції в геном еукаріотної клітини або придатний для експериментів з тимчасовою експресією, тільки з експресією у клітині.
В даному документі термін "позахромосомна транспортна нуклеїнова кислота" позначає молекулу нуклеїнової кислоти, що здатна до переміщення з бактерії, наприклад, виду
Адгорасієгйт, в еукаріотну клітину, наприклад, клітину листя рослини. Позахромосомна транспортна нуклеїнова кислота являє собою генетичний елемент, що відомий, як елемент, здатний до переміщення, із подальшою інтеграцією з нуклеотидною послідовністю, що міститься в його межах, до геному клітини-реципієнта. В даному відношенні, транспортна нуклеїнова кислота звичайно фланкована двома "граничними" послідовностями, хоча у деяких випадках може застосовуватися одна межа на одному кінці, а другий кінець транспортної нуклеїнової кислоти генерується випадковим чином в процесі перенесення. Цільовий полінуклеотид звичайно розташований між лівою послідовністю, подібною до граничної, і правою послідовністю, подібною до граничної, транспортної нуклеїнової кислоти.
Полінуклеотид, що міститься в межах транспортної нуклеїнової кислоти, може бути функціонально пов'язаний з численними іншими промоторними і термінаторними регуляторними елементами, що полегшують його експресію, тобто, транскрипцію та/або трансляцію полінуклеотиду. Транспортні ДНК (Т-ДНК) видів АдгобБасіегішт, наприклад,
Адгорасієгішт штеїасієпе або АдгоБбасіегішт гпігодепеб5, і створені людиною (їх варіанти/мутанти, ймовірно, являють собою краще за все описані приклади транспортних нуклеїнових кислот. Іншим прикладом є Р-ДНК ("рослинна ДНК"), що містить подібні до граничних послідовності Т-ДНК із рослин.
У даному документі "Т-ДНК" позначає Т-ДНК ОЇ плазміди Аагорасієтійшт Штегасієп5 або із плазміди Кі Адгорасіегцт пПігодепев, або їх варіанти, функція яких полягає у перенесенні ДНК в рослинні клітини. Т-ДНК може містити повнорозмірну Т-ДНК, включаючи як праву, так і ліву граничні послідовності, але необхідними є тільки мінімальні послідовності, необхідні у цисС для 60 перенесення, тобто, права Т-ДНК гранична послідовність. Т-ДНК за винаходом вставлені у них будь-де між правою і лівою граничними послідовностями (якщо вони присутні) цільового полінуклеотиду. Послідовності, що кодують фактори, необхідні в транс для перенесення Т-ДНК до клітини рослини, наприклад, гени міг, можуть бути вставлені в Т-ДНК або можуть бути присутніми на тому ж репліконі, що і Т-ДНК, або переважно знаходяться в положенні транс на сумісному репліконі в хазяїні Адгобрасієгішт. Такі "системи бінарного вектора" добре відомі з рівня техніки. У даному документі "П-ДНК" позначає транспортну нуклеїнову кислоту, виділену з генома рослини або її варіанти/мутанти, створені людиною, і містить на кожному кінці або тільки на одному кінці подібну до граничної послідовність Т-ДНК.
В даному документі "гранична" послідовність транспортної нуклеїнової кислоти може бути виділена з вибраного організму, наприклад, рослини або бактерії, або бути її варіантом/мутантом, створеним людиною. Гранична послідовність сприяє і полегшує перенесення полінуклеотиду, з яким вона пов'язана, і може полегшувати його інтеграцію до геному клітини-реципієнта. У варіанті реалізації довжина граничної послідовності становить 10- 80 пар основ. Граничні послідовності Т-ДНК видів Адговрасієгішт добре відомі з рівня техніки і включають розкриті І асгоїх із співавт. (2008).
Хоча традиційно застосовувалися тільки види Адгобасієгішт для перенесення генів у клітини рослин, на даний час ідентифікована/розроблена велика кількість систем, що функціонують подібно до видів Адгобасіегішт способом. Останнім часом декілька видів, що не відносяться до
Адгобрасієгійт, були генетично модифіковані таким чином, щоб зробити їх компетентними для перенесення гена (Спипуд із співавт., 2006; Вгооїпаеєгі5 із співавт., 2005). Це включає вид
Впі2обіцт МО В234, біпогпігобіит твеїоїї і Ме2оті2обБійт ої.
Пряме перенесення еукаріотних експресійних плазмід від бактерій еукаріотним хазяям вперше було здійснено декілька десятиліть тому шляхом злиття клітин ссавця і протопластів
Езспегіспіа соїї, що несе плазміду (5спайпег, 1980). З того часу, кількість бактерій, здатних доставляти гени в клітини ссавця, стабільно зростала (Умеіє5, 2003) завдяки відкриттям чотирьох незалежних груп (5ілетоге із співавт. 1995; Соигмаїйп із співавт., 1995; Ром'еї із співавт., 1996; Оагіі із співавт., 1997).
У даному документі терміни "трансфекція", "трансформація" і їх варіації, загалом, використовуються рівнозначно. "Трансфікованими" або ""рансформованими" клітинами можна
Зо маніпулювати з метою введення цільового(их) полінуклеотиду(ів) або одержання із них клітин- нащадків.
Рекомбінантні клітини
У винаході також розкривається рекомбінантна клітина, наприклад, рекомбінантна рослинна клітина або грибкова клітина, що є хазяйською клітиною, трансформованою одним або більше полінуклеотидів або векторів, розкритих у даному документі, або їх комбінацією. Придатні клітини за винаходом включають будь-яку клітину, яка може бути трансформована полінуклеотидом або рекомбінантним вектором за винаходом, що кодує РНК, поліпептид або фермент, розкритий у даному документі. Клітина являє собою клітину, що, таким чином, є придатною до застосування для одержання ліпіду. Рекомбінантна клітина може бути клітиною в культурі, клітиною іп мійго або в організмі, наприклад, такому як рослина, або в органі, наприклад, такому як насіння або лист. Переважно, клітина знаходиться в рослині, більш переважно, у насінні рослини. В одному варіанті реалізації рекомбінантна клітина являє собою клітину, що не є клітиною людини.
Клітини-хазяї, у які введений(і) полінуклеотид(и), можуть бути нетрансформованими клітинами або клітинами, що вже трансформовані щонайменше однією нуклеїновою кислотою.
Такі нуклеїнові кислоти можуть бути пов'язаними або не пов'язаними із синтезом ліпіду. Клітини- хазяї за даним винаходом можуть бути ендогенно (тобто, від природи) здатними до продукування поліпептиду(ів), розкритого у даному документі, коли рекомбінантна клітина, одержана з них, володіє підвищеною здатністю до продукування поліпептиду(ів) або може бути здатною до продукування вказаного поліпептиду(ів) тільки після трансформації щонайменше одним полінуклеотидом за винаходом. У варіанті реалізації рекомбінантна клітина за винаходом володіє підвищеною здатністю до продукування неполярного ліпіду, такого як ТАГ.
Клітини-хазяї за даним винаходом можуть бути будь-якою клітиною, здатною до продукування щонайменше одного білка, розкритого у даному документі, і включають клітини грибів (зокрема, дріжджів), тварин, таких як членистоногі, і рослинні клітини, такі як клітини водоростей і рослин. У переважному варіанті реалізації клітина рослини є клітиною насіння, зокрема, клітиною в сім'ядолі або ендоспермі насіння. Клітини-хазяї можуть бути організмом, придатним для процесу ферментації, наприклад, таким як Маїтом/а Іро/мііса або інші дріжджі. В одному варіанті реалізації винаходу клітина є клітиною тварини. Клітина тварини може 60 належати до будь-якого виду тварини, наприклад, клітина негуманоїдної тварини, клітина негуманоїдного хребетного, клітина негуманоїдного ссавця або клітини водних тварин, наприклад, риб або ракоподібних, безхребетних, комах і т.п. Приклади клітин водоростей, придатних як клітини-хазяї за даним винаходом, включають, наприклад, види Спі(атудотопа5 (наприклад, Спіатудотопавз геїіпНагаїй), види ЮипаїїеПйа, види Наетаїйососси5, види СпПіогейПа, види Тпгаизіоспуїгішт, види Зспі2оспуїгішт ії види МоїЇмох.
Трансгенні рослини
У винаході також розкривається рослина, що містить один або більше екзогенних полінуклеотидів або поліпептидів і одну або більше генетичних модифікацій за винаходом, клітини за винаходом, вектор за винаходом або їх комбінації. Термін "рослина" в ролі іменника позначає суцільні рослини, тоді як термін "її частина" позначає органи рослини (наприклад, листя, стебла, коріння, квітки, плід), одинарні клітини (наприклад, пилок), насіння, частини насіння, наприклад, зародок, ендосперм, щиток зародка або оболонку насіння, тканину рослини, наприклад, судинну тканину, клітини рослини і їх нащадків. У даному документі частини рослини включають клітини рослини.
У даному документі термін "в рослині", в контексті модифікації рослини означає, що модифікація відбулася щонайменше в одній частині рослини, включаючи ситуації, у яких модифікація відбулася у всій рослині, і не виключаючи ситуацій, у яких модифікація відбувається тільки в одній або декількох, але не у всіх частинах рослини. Наприклад, говорять, що тканиноспецифічний промотор експресується "в рослині", навіть якщо він може експресуватися тільки у деяких частинах рослини. Аналогічно, "поліпептид фактору транскрипції, який підвищує експресію одного або більше гліколітичних генів та/або генів біосинтезу жирних кислот у рослині" означає, що підвищена експресія присутня щонайменше в частині рослини.
У даному документі термін "рослина" застосовується в найширшому значенні, включаючи будь-який організм із царства рослин. Крім того, він включає червоні і коричневі водорості, а також зелені водорості. Він включає, без обмежень, будь-які види квіткових рослин, трави, сільськогосподарської культури або злаку (наприклад, олійна культура, маїс, соя), кормової або силосної, фруктової або овочевої рослини, трав'янистої рослини, дерев'янистої рослини або дерева. Не мається на увазі обмеження рослини якою-небудь конкретною структурою. Крім
Зо того, він позначає одноклітинну рослину (наприклад, мікроводорість). Термін "її частина" з посиланням на рослину позначає клітину рослини і її нащадка, численні клітини рослини, структуру, що присутня на будь-якій стадії розвитку рослини або тканини рослини. Такі структури включають, без обмежень, листя, стебла, квітки, плоди, горіхи, коріння, насіння, оболонку насіння, зародки. Термін "тканина рослини" включає диференційовані і недиференційовані тканини рослин, зокрема, присутні у листі, стеблах, квітках, плодах, горіхах, корінні, насінні, наприклад, зародкова тканина, ендосперм, тканина шкірки (наприклад, епідерміс, перидерма), судинна тканина (наприклад, ксилема, флоема) або донна тканина (що містить клітини паренхіми, коленхими та/або склеренхими), а також клітини в культурі (наприклад, одинарні клітини, протопласти, калюс, зародки, і т. п). Тканина рослини може знаходитися іп ріапіа, в культурі органу, культурі тканини або культурі клітин.
У даному документі термін "вегетативна тканина" або "вегетативна частина рослини" позначає будь-яку тканину рослини, орган або частину, окрім органів для статевого відтворення рослин. Зокрема, органи для статевого відтворення рослин являють собою органи, що несуть насіння, квітки, пилок, плоди і насіння. Вегетативні тканини і частини включають щонайменше листя, стебла (зокрема, стрілки і пагони, за винятком головок), бульби і коріння рослини, за винятком квіток, пилку, насіння, включаючи оболонку насіння, зародка і ендосперму, плоду, включаючи тканини мезокарпа, стручки, що несуть насіння, і голівки, що несуть насіння. В одному варіанті реалізації винаходу вегетативна частина рослини є повітряною частиною рослини. В іншому або подальшому варіанті реалізації винаходу вегетативна частина рослини є
БО зеленою частиною, наприклад, листом або стеблом. "Трансгенна рослина" або її варіації позначають рослину, що містить трансген, не знайдений у рослині дикого типу такого ж виду, підвиду або сорту. Трансгенні рослини, розкриті в контексті даного винаходу, включають рослини і їх нащадків, генетично модифікованих із застосуванням рекомбінантних методів, щоб спричинити продукування щонайменше одного поліпептиду, розкритого у даному документі, в бажаній рослині або її частині. Трансгенні частини рослини мають відповідне значення.
Терміни "насіння" і "зерно" використовуються рівнозначно у даному документі. "Зерно" позначає зріле зерно, наприклад, зібране в процесі збирання врожаю зерно, або зерно, яке знаходиться на рослині, але готове для збирання врожаю, а також може позначати зерно після бо набрякання або проростання, згідно контексту. Зріле зерно звичайно містить менш ніж приблизно 18 95 вологи. У переважному варіанті реалізації, вміст вологи в насінні знаходиться на рівні, який загалом розцінюється як безпечний для зберігання, переважно, від 5 95 до 15 95, від бо до 895, від 895 до 1095 або від 1095 до 1595. У даному документі "насіння, що розвивається" позначає насіння до стану зрілості, звичайно знайдене у репродуктивних структурах рослини після запліднення або цвітіння, але може також позначати насіння до стану зрілості, які зняте з рослини. Зріле насіння звичайно містить менш ніж приблизно 12 95 вологи.
У даному документі термін "запасаючий орган рослини" позначає частину рослини, що спеціалізується на зберіганні енергії, наприклад, у формі білків, карбогідратів, лиіпіду.
Прикладами запасаючих органів рослини являє собою насіння, плід, бульбоподібне коріння і бульби. Переважним запасаючим органом рослини за винаходом являє собою насіння.
У даному документі термін "фенотипово нормальний" позначає генетично модифіковану рослину або її частину, наприклад, трансгенну рослину, або запасаючий орган, такий як насіння, бульбу або плід за винаходом, без істотного зниження здатності до росту і відтворення, в порівнянні з немодифікованою рослиною або її частиною.
Переважно, біомаса, темпи росту, швидкість проростання, розмір запасаючого органу, розмір насіння та/або кількість життєздатного насіння, що утворилося, становить не менше 90 95 від показників рослини, що не містить вказаних генетичних модифікацій або екзогенних полінуклеотидів, при вирощуванні в ідентичних умовах. Даний термін не включає ознак рослини, які можуть відрізнятися від рослини дикого типу, але які не впливають на повноцінність рослини з точки зору комерційних цілей, наприклад, такі як фенотип балерини листя саджанця.
У варіанті реалізації генетично модифікована рослина або її частина, які є фенотипово нормальними, містять рекомбінантний полінуклеотид, що кодує пригнічуючий сайленсинг, функціонально пов'язаний із промотором, специфічним для запасаючого органу рослини, і володіють здатністю до росту або відтворення, по суті такою ж як відповідна рослина або її частина, що не містить вказаного полінуклеотиду.
У даному документі "початок цвітіння" або "настання цвітіння" з посиланням на рослину позначає час розкриття першої квітки на рослині або час початку пилення.
У даному документі термін "зав'язування насіння" з посиланням на рослину, що несе насіння, позначає час, коли перше насіння рослини досягає зрілості. Звичайно це можна
Зо визначити за кольором насіння або вмістом у ньому вологи, як добре відомо з рівня техніки.
У даному документі термін "старіння" з посиланням на суцільну рослину позначає кінцеву стадію розвитку рослини, яка слідує за завершенням росту, звичайно після того, як повітряна біомаса або висота рослини досягає максимуму. Старіння починається, коли повітряна біомаса рослини досягає максимуму, і її кількість починає зменшуватися, і загалом закінчується із загибеллю більшості тканин рослини. В ході даної стадії рослина мобілізує і рециклізує клітинні компоненти з листя та інших частин, які накопичувалися в процесі росту, в інші частини, щоб завершити репродуктивний розвиток. Старіння є складним, регульованим процесом, до якого залучена експресія нових генів або підвищена експресія деяких генів. Часто, деякі частини рослини старіють, тоді як інші частини тієї ж рослини продовжують рости. Таким чином, відносно листя рослини або іншого зеленого органу, термін "старіння" у даному документі позначає час, коли кількість хлорофілу у листі або органі починає знижуватися. Старіння звичайно супроводжується зневодненням листя або органу, здебільшого в останній стадії старіння. Старіння звичайно можна визначити за зміною кольору листя із зеленого у напрямку до жовтого і, кінець кінцем, до коричневого забарвлення після повного зневоднення.
Вважається, що клітинне старіння лежить в основі старіння рослини і органів.
Рослини, розкриті або передбачені для застосування у практиці даного винаходу, включають однодольні або дводольні. У переважних варіантах реалізації, рослини за даним винаходом є сільськогосподарськими рослинами (наприклад, злакові і зернобобові, маїс, пшениця, різні види картоплі, рис, сорго, пшоно, маніок, ячмінь), або іншими рослинами з родини бобових, такими як соя, боби або горох. Рослини можуть вирощуватися для виробництва їстівного коріння, бульб, листя, стебел, квіток або плодів. Рослини можуть бути овочевими рослинами, вегетативні частини яких використовуються в їжу. Рослини за винаходом можуть являти собою: Асгтосотіа асиієайа (макаубська пальма), Агарідорзів ІНаІйапа, Агасіпів пуродаєа (арахіс), Авігосагунт тигитиги (мурумуру), Авігосагуют мицдаге (тукума), АНаїєа дегаєпвів (аталія), АНаІєа ПпПитіїїє (американська масляна пальма), Айаїєа оїівїега (андайя),
АнаїІєа ріаїегайа (урикури), Айаїєа 5ресіоза (бабасу), Амепа займа (овес), Веїа миЇдагі5 (цукровий буряк), види Вгазвіса. такі як Вгазвіса сагіпаїа, Вгаззіса |ппсєа, Вгаззіса паробгаззіса, Вгазвіса пари (рапс), Сатеїїпа заїїма (фальшивий льон), Саппабі5 займа (конопля), Саннатив іпсіогіив (сафлор красильний), Сагуосаг Бгазіїєпве (пекві), Сосо5 писіїега (кокос), Статре абузвзіпіса бо (абісинська капуста), Сиситів тео (диня), ЕІаеї5 диіпеепві5 (африканська пальма), Сіусіпе тах
(соя), Соззурішт ПігзшШт (бавовник), види Неїїапіпйих такі як Неїйапійи5 аппии5 (соняшник),
Ногдєит упїЇдаге (ячмінь), Чдаїгорна сигсаз (лікувальний горіх), Усаппезіа ргіпсерз (ліщина арара), види Гетпа (ряска), такі як Гетпа аеєедиіпосіаї5, І етпа аізрепта, Гетпа есцадогіепвів, етпа дібба (ряска горбата), Гетпа іаропіса, Гетпа тіпог, Гетпа тіпша, Гетпа орзосига, Гетпа рашмсісовіаїа, І етпа регризіПа, І етпа іепега, І етпа ігізиїса, І етпа ішпіопітега, І етпа маїдіміапа,
Гетпа ушипдепзвів, І ісапіа гідіда (ойтика), Гіпит ив5іагїввітит (льон), Гиріпи5 апдизійоїїи5 (люпін),
Машйгійа ЛПехиоза (пальма буриті), Махітіїйана таїгра (пальма інайя), види Міхсапійив, такі як
Мізсапіпи5 х дідапіви5 і Мізсапіпиз 5іпепзі5, види Місойапа (тютюн), такі як Місойапа їіабасит або Місойапа репіпатіапа, Оєпосагрих5 Басаба (бакаба-до-азейте), Оепосагрив Баїаца (патайя),
Оеєпосагриз аївіїспив (бакаба-де-лек), види Огула (рис), такі як Огула 5заїїма і Огула діарегтіта,
Рапісит мігдааїшт (просо прутоподібне), Рагадиеїба рагаепзіз (марь), Регзеа атепсапа (авокадо), Ропдатіа ріппага (індійський бук), Рорши5 ігіспосагра, Кісіпиє5 соттипів (рицина), види Засспагит (цукрова тростина), 5езатит іпаіїсит (кунжут), Зоїапит їшрегозит (картопля), види Зогупит, такі як Зогоапит бБісоїог, Зогдпит мцЇдагє, Тпеобгота дгапайогит (какао), види
Тийоїййт, ТиїНипах Бгавзіїйепві5 (бразильська голчаста пальма), види Тгйісшт (пшениця), такі як
Тиййсит аевзіїмит, 7є6а тау5з (кукурудза), люцерна (Медісадо заїїма), жито (5есаїє сегаїє), солодка картопля (Гортоеа бБаїайшв5), маніок (Мапіпої езсціепіа), кава (види Соїеа), ананас (Апапа сотозивз), цитрусове дерево (види Сіїги5), какао (ТПеобгота сасасо), чай (Сатейа зепепвхі5), банан (види Миза), авокадо (Регхеа атегісапа), інжир (Ріси5 сазіса), гуава (Рзідійт дчиа|)ама), манго (Мапаодіїег іпаіса) олива (ОІєа ешигораєа), папайя (Сагіса рарауа), кешю (Апасагаіїт оссідепіає), макадамія (Масадатіа іпіегоугітоїїіа) і мигдаль (Ргипи5 атудаа!шв5).
Інші переважні рослини включають трави С4, наприклад, на додаток до згаданих вище,
Апагородоп адегагаі, Вошцівіоца сипірепаціа, В. агасіїє, ВисНіоє дасіуоїдеб5, 5спігаснупит зсорагішт, 5огдпавігшт пшапв, 5рогобоїиз сгуріапагив; трави С3, наприклад, ЕІути5 сападепвів, боби І езредела саріїайа і Реїаїювівєтит мПШозит, напівчагарник Авзієг агигеив; і деревні рослини, наприклад, Оцегсиз еїрзоїдаїїв і 0). тастосагра. Інші переважні рослини включають трави С3.
У переважному варіанті реалізації винаходу рослина є покритонасіннєвою рослиною.
У варіанті реалізації винаходу рослина є рослиною олійної культури, переважно сільськогосподарської олійної культури. У даному документі "рослина олійної культури" є видом
Зо рослини, застосовуваним для комерційного одержання ліпіду з насіння рослини. Рослина олійної культури може бути, наприклад, олійним рапсом (наприклад, канола), маїсом, соняшником, сафлором красильним, соєю, сорго, льоном (насіння льону) або цукровим буряком. До того ж, рослина олійної культури може бути іншим представником Вгавззіса, бавовником, арахісом, маком, бруквою, гірчицею, рициною, кунжутом, сафлором, ятрофою або горіхоносною рослиною. Рослина може продукувати високі рівні ліпіду у плоді, наприклад, олива, масляна пальма або кокосова пальма. Садовими рослинами, до яких може бути застосовано даний винахід, являє собою салат, ендивій або рослини виду Вгазв5зіса, включаючи капусту, броколі або цвітну капусту. Даний винахід може бути застосований до тютюну, гарбузів, моркви, суниці, помідора або перцю.
У переважному варіанті реалізації трансгенна рослина є гомозиготною по всіх і кожному введеному гену (трансген), таким чином, що її нащадок не відходить від бажаного фенотипу.
Крім того, трансгенна рослина може бути гетерозиготною по введеному(им) трансгену(ам), переважно однорідно гетерозиготною по трансгену, наприклад, у потомстві Е1, вирощеному з гібридного насіння. Такі рослини можуть пропонувати переваги, наприклад, силу гібрида, добре відому з рівня техніки.
Трансформація рослин
Трансгенні рослини можуть бути одержані із застосуванням методів, відомих з рівня техніки, наприклад, розкритих у загальних рисах в 5іаїег із співавт., Ріапі Віоїесппоїоду - Тние Сепеїїс
Мапіршайоп ої Ріапі5, Охіога Опімегейу Ргез5 (2003), і Спгізтои апа Кіеєеєе, Напароок ої Ріапі
ВіотесппоЇоду, Чопп УмМіеу апа 5опз (2004).
У даному документі термін "стабільно трансформуючий", "стабільно трансформований" і його варіації позначають інтеграцію полінуклеотиду в геном клітини таким чином, що він передається клітинам-нащадкам в процесі розподілу клітини, без необхідності у позитивній селекції щодо їх присутності. Стабільні трансформанти або їх нащадки можуть бути ідентифіковані будь-якими засобами, відомими з рівня техніки, наприклад, Саузерн-блотингом на хромосомній ДНК або гібридизацією геномної ДНК іп 5іш, які дозволяють здійснити їх відбір.
Опосередковане Адгорасієгцт перенесення є широко застосовуваною системою для введення генів у клітини рослини, оскільки ДНК може бути введена у клітини суцільних тканин рослини, органів рослини або експлантів у культурі тканини, для тимчасової експресії або бо стабільної інтеграції ДНК у геном рослинної клітини. Наприклад, можна застосовувати способи із зануренням квіток (у польових умовах). Застосування опосередкованих Адгобасієгійт векторів інтеграції в рослини з метою введення ДНК у клітини рослини добре відоме з рівня техніки. Ділянка ДНК для перенесення визначається граничними послідовностями, і перенесена
ДНК (Т-ДНК) звичайно вставляється в геном рослини. Даний спосіб є способом вибору внаслідок простої і надійної природи перенесення гена.
Способи прискорення, які можуть застосовуватися, включають, наприклад, балістичну трансфекцію і т.п. Одним із прикладів способу доставки трансформуючих молекул нуклеїнових кислот у клітини рослини є балістична трансфекція. Даний спосіб розглянутий Мапд із співавт.,
Рапісіє Вотрагатепі Тесппоіоду ог Сепе Тгапеїег, Охіога Ргевзв, Охіога, Епдіапі (1994).
Небіологічні частинки (мікрочастинки), що можуть бути вкриті нуклеїновими кислотами і доставлені у клітини, наприклад, незрілих ембріонів, штовхаючою силою. Приклади частинок включають такі, що складаються з вольфраму, золота, платини і т.п.
В іншому альтернативному способі пластиди можуть бути стабільно трансформованими.
Способи, розкриті для трансформації пластиди у вищих рослинах, включають доставку за допомогою пістолета частинки ДНК, що містить селекційний маркер, і націлювання ДНК на геном пластиди за допомогою гомологічної рекомбінації (05 5451513, 005 5545818, 05 5877402, 05 5932479 і МО 99/05265). Додатково, можуть застосовуватися інші способи трансформації клітини, що включають, без обмежень, введення ДНК у рослини прямим перенесенням ДНК у пилок, прямою ін'єкцією ДНК в репродуктивні органи рослини або прямою ін'єкцією ДНК в клітини незрілих зародків з подальшою регідратацією висушених зародків.
Регенерація, розвиток і культивування рослин з одиничних трансформантів протопласту рослини або з різноманітних трансформованих експлантів добре відомі з рівня техніки (Ууеі55расі із співавт., Іп: Меїпоа5 ог Ріапі МоїІесшіаг Віоіоду, Асадетіс Рге55, Зап Оіедо, Саїїї., (1988)). Така регенерація і процес росту звичайно включають стадії селекції трансформованих клітин, культивування таких індивідуалізованих клітин через звичайні стадії зародкового розвитку, включаючи стадію укоріненого сіянцю. Трансгенні зародки і насіння регенерують таким же чином. Одержані трансгенні укорінені пагони в подальшому пересаджують у придатне середовище для росту рослини, наприклад, грунт.
Розвиток або регенерація рослин, що містять чужорідний, екзогенний ген, добре відомі з
Зо рівня техніки. Переважно, рослини, що регенеруються, самозапилюються, щоб забезпечити гомозиготні трансгенні рослини. В іншому випадку, пилок, одержаний від регенеруючих рослин, схрещують з вирощеними із насіння рослинами важливих з агрономічної точки зору ліній. З іншого боку, пилок рослин таких важливих ліній використовується для запилення регенерованих рослин. Трансгенну рослину за даним винаходом, що містить бажаний полінуклеотид, культивують з застосуванням способів, добре відомих фахівцю в даній галузі.
Щоб підтвердити присутність трансгенів у трансгенних клітинах і рослинах, може бути здійснена ампліфікація полімеразною ланцюговою реакцією (ПЛР) або аналіз за методом
Саузерн-блотингу, із застосуванням методів, відомих фахівцям з рівня техніки. Продукти експресії трансгенів можуть бути знайдені будь-яким з численних шляхів, в залежності від природи продукту, які включають Нозерн-блотинг гібридизацію, Вестерн-блотинг і ферментний аналіз. Як тільки трансгенні рослини одержані, вони можуть вирощуватися для одержання тканин або частин рослини, які містять бажаний фенотип. Урожай тканини рослини або частин рослини може бути зібраний, та/або насіння може бути зібране. Насіння може служити джерелом для вирощування додаткових рослин із тканинами або частинами, що володіють бажаними характеристиками. Переважно, урожай вегетативних частин рослини збирають в той час, коли вихід неполярних ліпідів знаходиться на найвищому рівні. В одному варіанті реалізації урожай вегетативних частин рослини збирають у час, близький до цвітіння або після початку цвітіння. Переважно, частини рослини збирають в період біля початку старіння, на який звичайно вказує пожовтіння і висихання листя.
Трансгенні рослини, одержані з застосуванням Аадгорасієтійт або інших способів трансформації, звичайно містять єдиний генетичний локус на одній хромосомі. Такі трансгенні рослини можуть позначатися як гемізиготні по додатковому(им) гену(ам). Більш переважною є трансгенна рослина, гомозиготна по додатковому(им) гену(ам), тобто трансгенна рослина, що містить два додаткові гени, по одному гену в однакових локусах на кожній хромосомі із пари хромосом. Гомозиготна трансгенна рослина може бути одержана шляхом самозапліднення гемізиготної трансгенної рослини, пророщуванням частини одержаного насіння і аналізом одержаних рослин щодо присутності цільового гена.
Крім того, необхідно розуміти, що дві різні трансгенні рослини, що містять два незалежно розділені екзогенні гени або локуси, можуть бути схрещені (одержаний гібрид), з метою 60 одержання потомства, що містить обидва набори генів або локусів. Самозапилення відповідного нащадка ЕЇї може давати рослини, гомозиготні по обох екзогенних генах або локусах. Зворотне схрещування з материнською рослиною і схрещування з нетрансгенною рослиною також передбачені, як і вегетативне розмноження. Таким же чином, трансгенна рослина може бути схрещена з іншою рослиною, яка містить генетичну модифікацію, таку як мутантний ген, з ідентифікацією потомства, що містить як трансген, так ї генетичну модифікацію. Опис інших способів розведення, які звичайно застосовуються для різних ознак і сільськогосподарських культур, можна знайти у Бепг, Іп: Вгеедіпд МеШйоавз їог Сиймаг
ОемеІортепі, ММіїсох у. ед., Атегісап босієїу ої Адгопоту, Мадізоп М/ів. (1987).
ІНЛІПГ
В одному варіанті реалізації ТІ СІМО (Індуковані Націлюванням Локальні Пошкодження В
Геномах, ІНЛПГ) може застосовуватися для одержання рослин, у яких ендогенні гени містять мутацію, наприклад, гени, що кодують поліпептид 5ОРІ1 або ТГД, пластидну ОРАТ, пластидну
ІГРААТ, фосфатазу фосфатидинової кислоти (РАР) або комбінацію двох або більше із вказаних компонентів. На першій стадії введення мутацій, наприклад нових модифікацій одинарних пар основ, здійснюють в популяції рослин за допомогою обробки насіння (або пилку) хімічним мутагеном, з подальшим розведенням рослин до покоління, в якому мутації стійко успадковуватимуться. ДНК витягають і зберігають насіння всіх членів популяції, щоб створити ресурс, який може бути доступний повторно через деякий час. Для аналізу ІНЛПГ можна застосувати гетеродуплексні способи із застосуванням специфічних ендонуклеаз, з метою виявлення однонуклеотидного поліморфізму (ОНП). Як альтернатива, секвенування ДНК наступного покоління із пулів мутантних рослин можна застосовувати для ідентифікації мутацій у вибраному гені. Звичайно, досягається частота мутацій один мутант на 1000 рослин в популяції мутантних рослин. Із застосуванням даного підходу може бути здійснений скринінг багатьох тисяч рослин для ідентифікації будь-якого індивідуума з модифікацією єдиної основи, а також невеликими інсерціями або делеціями (1-30 пар основ) у будь-якому гені або конкретній ділянці генома. ІНЛПГ додатково описана у 5іаде і Кпацї (2005), і Непікоїй із співавт. (2004).
На додаток до можливості ефективного виявлення мутацій, високопродуктивна технологія
ІНЛІПГ є ідеальною для виявлення природного поліморфізму. Таким чином, детальне дослідження невідомої гомологічної ДНК, що утворює гетеродуплекс з відомою послідовністю,
Зо виявляє кількість і розташування поліморфних сайтів. Ідентифіковані нуклеотидні модифікації, а також інсерції і делеції невеликого розміру, зокрема, щонайменше деякі поліморфізми кількості повторень. Вказана ознака отримала назву Есойіїпа (Соппаї із співавт., 2004).
Редагування геному із застосуванням сайт-специфічних нуклеаз
Редагування геному із застосуванням сконструйованих нуклеаз, таких як спрямовувані РНК ендонуклеази або нуклеази ДНК, що складаються із доменів зв'язування ДНК, специфічних для послідовності, злитих із неспецифічним модулем розщеплення ДНК. Такі сконструйовані нуклеази дають можливість здійснювати ефективні і точні генетичні модифікації шляхом індукції спрямованих розривів двохланцюгової ДНК, що спонукають ендогенні клітинні механізми відновлення ДНК клітини до відновлення індукованого розриву. Такі механізми включають, наприклад, схильне до помилок негомологічне з'єднання кінців (НГЗК) ії відновлення, що спрямовується гомологією (ВСГ).
У присутності донорської плазміди з подовженими гомологічними плечима, ВСГ може приводити до введення одного або декількох трансгенів для корекції або заміни існуючих генів.
За відсутності донорської плазміди, НГЗК-опосередковане відновлення дає незначні інсерційні або делеційні мутації мішені, що спричиняють руйнування гена.
Сконструйовані нуклеази, придатні для способів за даним винаходом, включають цинк- пальцеві нуклеази (ЦПН), подібні до активатора транскрипції (ПАТ) ефекторні нуклеази (ПАТЕН) і нуклеази типу СКІЗРЕК/Са59.
Звичайно кодуючі нуклеазу гени доставляються в клітини плазмідною ДНК, вірусними векторами або транскрибованою іп мйго мРНК.
Цинк-пальцева нуклеаза (ЦПН) містить домен зв'язування з ДНК і домен розщеплення ДНК, причому домен зв'язування з ДНК складається щонайменше з одного "цинкового пальця" і функціонально пов'язаний із доменом розщеплення ДНК. Домен зв'язування з ДНК цинкового пальця розташований на М-кінці білка, а домен розщеплення ДНК розташований на С-кінці вказаного білка.
ЦПН повинна містити щонайменше один "цинковий палець". У переважному варіанті реалізації винаходу ЦПН повинна містити щонайменше три "цинкові пальці", щоб володіти достатньою специфічністю і бути придатною для спрямованої генетичної рекомбінації в клітині- або організмі-хазяїні. Звичайно, специфічність ЦПН, що містить більш ніж три "цинкові пальці", бо поступово збільшуватиметься з наявністю кожного додаткового "цинкового пальця".
Домен "цинкового пальця" може походити з будь-якого класу або виду "цинкових пальців". У конкретному варіанті реалізації винаходу домен "цинкового пальця" включає Сіб2Нівг тип "цинкового пальця", який у найбільш загальному вигляді представлений, наприклад, факторами транскрипції "цинкового пальця" ТЕША або 5р1. У переважному варіанті реалізації винаходу домен "цинкового пальця" включає три "цинкові пальці" типу Сіб2Нів». Розпізнавання ДНК та/або специфічність зв'язування ЦПН можуть бути модифіковані з метою досягнення цільової генетичної рекомбінації на якому-небудь вибраному сайті клітинної ДНК. Така модифікація може бути досягнута із застосуванням відомих методів молекулярної біології та/або хімічного синтезу (див., наприклад, Вірікома із співавт., 2002).
Домен розщеплення ДНК ЦПН одержують із класу неспецифічних доменів розщеплення
ДНК, наприклад домен розщеплення ДНК рестрикційного ферменту типу ІІ, наприклад, ЕоКіІ (Кіт із співавт., 1996). Інші придатні ендонуклеази можуть містити, наприклад, Нпаї, Ніпаї, Моа,
ВЬХСІ, ЕсоВІ, Ва! та АМІ.
Подібна до активатора транскрипції (ПАТ) ефекторна нуклеаза (ПАТЕН) містить домен зв'язування з ДНК ефектора ПАТ і домен ендонуклеази.
Ефектори ПАТ являють собою білки патогенних бактерій рослини, що вприскуються патогеном у клітину рослини, де вони переміщуються до ядра і функціонують, як фактори транскрипції для активізації специфічних генів рослини. Первинна амінокислотна послідовність ефектора ПАТ диктує нуклеотидну послідовність, з якою він зв'язується. Таким чином, для ефекторів ПАТ можуть бути передбачені сайти-мішені, і ефектори ПАТ можуть бути сконструйовані і згенеровані для цілей зв'язування з конкретними нуклеотидними послідовностями.
Злиті з ефектором ПАТ кодуючі послідовності нуклеїнових кислот є послідовностями, що кодують нуклеазу або частину нуклеази, звичайно неспецифічний домен розщеплення рестрикційної ендонуклеази типу ІІ, наприклад, РОКІ (Кіт із співавт., 1996). Інші придатні ендонуклеази можуть містити, наприклад, Ннаї, НіпапП, Моа, ВрУСіІ, ЕсоВіІ, Водії та АМ/І. Той факт, що деякі ендонуклеази (наприклад, РОКІ) функціонують тільки у вигляді димерів, може бути з вигодою застосований для підвищення специфічності ефектора ПАТ по відношенню до мішені. Наприклад, у деяких випадках кожен мономер РОКІ може бути злитий з послідовністю ефектора ПАТ, яка розпізнає іншу послідовність мішені ДНК, і тільки у випадку, коли два сайти розпізнавання знаходяться у безпосередній близькості, неактивні мономери зближуються настількию, щоб спільно утворити функціонуючий фермент. З включенням необхідності у зв'язуванні з ДНК для активізації нуклеази, може бути створений високо специфічний по відношенню до сайту рестрикційний фермент.
Специфічна для послідовності ПАТЕН може розпізнавати конкретну послідовність в межах попередньо вибраної нуклеотидної послідовності-мішені, присутньої в клітині. Таким чином, у деяких варіантах реалізації винаходу нуклеотидна послідовність-мішень може бути просканована щодо наявності сайтів для розпізнавання нуклеазою, і конкретна нуклеаза може бути вибрана на базі послідовності-мішені. В інших випадках, може бути сконструйована
ПАТЕН, націлена на конкретну клітинну послідовність.
Редагування геному із застосуванням програмованих РНК-спрямовуваних ДНК ендонуклеаз
На відміну від сайт-специфічних нуклеаз, описаних вище, система кластеризованих, коротких паліндромних повторень з регулярними проміжками (ККППРП)Сав5 пропонує альтернативу ЦПН і ПАТЕН для індукції спрямованих генетичних модифікацій за допомогою спрямовуваного РНК розщеплення ДНК.
Системи ККППРП залежать від ККППРП РНК (ккРНК) і трансактивуючої химерної РНК (траккКРНК) для здійснення специфічного для послідовності розщеплення ДНК. Існує три види систем ККППРІП/Саб5: у системах І типу Са5з9 відіграє роль спрямовуваної РНК ДНК ендонуклеази, яка розщеплює ДНК при розпізнаванні мішені ккРНК-траккРНК. Основа ККППРП
РНК парується із траккРНК з утворенням структури із двох РНК, що спрямовує Са59 ендонуклеази до комплементарних сайтів ДНК для розщеплення.
Система ККППРІП може бути доставлена у рослинні клітини шляхом сумісної доставки плазмід, що експресують ендонуклеазу Са і необхідні компоненти ккРНК. Ендонуклеаза Сав може бути перетворена на ніказу, щоб забезпечити додатковий контроль над механізмом відновлення ДНК (Сопа із співавт., 2013).
ККППРП звичайно являють собою короткі, частково паліндромні послідовності розміром 24- 40 пар основ, що містять внутрішні і кінцеві перевернені повтори розміром до 11 пар основ.
Хоча знайдені ізольовані елементи, загалом вони організовані у кластери (в кількості до близько 20 або більше на геном) фрагментів, що повторюються, розділених унікальними бо послідовностями розміром 20-58 пар основ. ККППРІП загалом є гомогенними в межах конкретного геному, і більшість з них є ідентичними. Однак, існують приклади гетерогенності, наприклад, у Агсопаєа (Моїіса із співавт., 2000).
Біомаса рослини
Підвищення загального вмісту ліпіду в біомасі рослини є еквівалентним більш високому вмісту енергії, що робить більш економічним її застосування як корму (продукту харчування) або фуражу або для продукування біологічного палива.
Основним компонентом природної біомаси рослини є карбогідрати (приблизно 7595, в перерахунку на масу сухої речовини) і лігнін (приблизно 25 95), який може варіювати в залежності від виду рослини. Вуглеводи в основному є целюлозними або геміцелюлозними волокнами, що надають міцності структурі рослини, і лігніном, що утримує волокна разом.
Біомасі рослин звичайно властива низька щільність енергії в результаті двох факторів: фізичної форми і вмісту вологи. Це надає додаткової незручності і неефективності її зберіганню і транспортуванню без будь-якої попередньої обробки. Існує цілий ряд доступних способів перетворення її на більш придатні форми, зокрема: 1) фізична попередня обробка (наприклад, помел), або 2) трансформація термічними (наприклад, окиснення, газифікація, піроліз) або хімічними (наприклад, анаеробне розщеплення, ферментація, компостування, переестерифікація) способами. Таким чином біомасу перетворюють на те, що може бути описано, як паливна біомаса.
Спалювання
Спалювання є процесом, в ході якого легсозаймистим матеріалам дозволяють горіти в присутності повітря або оксигену з вивільненням тепла. Основою процесу є окиснення.
Спалювання є найпростішим способом застосування біомаси для одержання енергії і застосовується для забезпечення теплом. Вказане тепло може безпосередньо застосовуватися численними способами: 1) нагрівання простору, 2) нагрівання води (або іншої рідини) для центрального або місцевого нагрівання або переробки тепла, 3) одержання пари для генерації електрики або рушійної сили. Якщо легкозаймистий горючий матеріал знаходиться у формі біомаси, окиснення зачіпає, в основному, атоми карбону (С) і гідрогену (Н) в целюлозі, геміцелюлозі, лігніні та інших присутніх молекулах, з утворенням діоксиду карбону (СОз) і води (НгО). Рослини за винаходом дають удосконалене паливо для спалювання завдяки
Зо підвищеному вмісту ліпідів.
Газифікація
Газифікація являє собою процес часткового окиснення, за допомогою якого джерело карбону, наприклад, біомаса рослини, розкладається на монооксид карбону (СО) і гідроген (Нг), плюс діоксид карбону (СОг) і, можливо, молекули гідргогенкарбону, наприклад, метану (СНа).
Якщо газифікація має місце при відносно низькій температурі, наприклад, від 7002С до 10002С, газоподібний продукт міститиме відносно високі рівні гідрогенкарбонів, у порівнянні з високотемпературною газифікацією. В результаті, він може застосовуватися безпосередньо для спалювання з метою одержання тепла або генерації електрики за допомогою парової турбіни або, за умови відповідного видалення газу, у двигуні внутрішнього згоряння для генерації електрики. Камера спалювання для простого парового казана може бути сполучена з газифікацією, або пристрій для одержання газу може очищуватися від гідрогенкарбонів з довшим ланцюгом (смоли), що зберігаються і спалюються в іншому місці. Система газифікації може бути тісно пов'язана з газовою турбіною комбінованого циклу для генерації електрики (КЦІГ -- комбінований цикл інтегрованої газифікації). Високотемпературна газифікація (від 1200 С до 1600 С) приводить до утворення декількох гідрогенкарбонів у газоподібному продукті і вищої частки СО і Н», відомих як синтетичний газ (сингаз або біосинтетичний газ), який може застосовуватися для синтезу гідрогенкарбонів з довшим ланцюгом, із застосуванням таких методів, як синтез Фішера-Тропша (ФТ). Якщо співвідношення Нг до СО є правильним (211), синтез ФТ може застосовуватися для перетворення синтетичного газу на високоякісне синтетичне біологічне дизельне паливо, сумісне із звичайними видами дизельного палива із скам'янілої сировини і дизельними двигунами.
Піроліз
У даному документі термін "піроліз" позначає процес, в ході якого використовується повільне нагрівання за відсутності оксигену, з метою одержання газоподібних, нафтових і вугільних продуктів з біомаси. Піроліз є термічним або термохімічним перетворенням матеріалів на базі ліпіду, особливо на базі тригліцеролу. Продукти піролізу включають газ, рідину і тверде вугілля, причому частка кожного залежить від параметрів процесу. Нижчі температури (близько 400 "С) виявляють тенденцію до утворення твердішого вугілля (повільний піроліз), тоді як дещо вищі температури (близько 500 "С) дають набагато вищу частку рідини (біонафта), за умови, що 60 тривалість обробки пари утримується на рівні до приблизно 1 секунди або менше. Температура від близько 275 "С до близько 375 "С може застосовуватися для одержання рідкої біонафти з вищим відносним вмістом гідрогенкарбонів із більшою довжиною ланцюга. Піроліз включає прямій термічної крекінг ліпідів або комбінацію термічного і каталітичного крекінгу. При температурах приблизно 400-500 "С відбувається крекінг, що дає гідрогенкарбони з коротким ланцюгом, наприклад, алкани, алкени, алкадієни, ароматичні речовини, олефіни і карбоксильну кислоту, а також монооксид карбону і діоксид карбону.
Можуть застосовуватися чотири основні типи каталізаторів, зокрема, каталізатори на базі перехідного металу, каталізатори типу молекулярного сита, активований алюмінію оксид і натрій карбонат (Мапег із співавт., 2007). Приклади представлені в 05 4102938. Алюмінію оксид (АІ25Оз), активований кислотою, є ефективним каталізатором (5 5233109). Каталізатори типу молекулярного сита є пористими, високо кристалічними структурами, що демонструють вибірковість відносно розміру, таким чином, що крізь них можуть проникати тільки молекули певних розмірів. Вони включають каталізатори на базі цеоліту, наприклад, 25М-5 або Н75ЗМ-5, що є кристалічними матеріалами, які містять АЇОх і 5іО-, та інші каталізатори на базі силіцію діоксиду-алюмінію оксиду. Активність і селективність вказаних каталізаторів залежить від кислотності, розміру отворів і форми отворів, і звичайно вони є активними при 300-500 "С.
Каталізатори на базі перехідного металу розкриті, наприклад, в Ш5 4992605. Каталізатор на базі натрій карбонату застосовували в піролізі масел (бапаїкК і АКкК5оу, 1998).
У даному документі "гідротермічна обробка", "ПТО", що додатково має назву "термічної деполімеризації" являє собою вид піролізу, в ході якого одержана з рослини речовина, конкретно карбонвмісний матеріал у одержаній з рослині речовині, вводять в реакцію з гідрогеном для одержання продукту у формі біонафти, що в основному складається з парафінових гідрогенкарбонів, разом з іншими газоподібними і твердими речовинами. Значна перевага ГТО полягає у тому, що немає необхідності сушити вегетативний рослинний матеріал перед утворенням композиції для введення в реакцію перетворення, хоча вегетативний матеріал рослини може бути попередньо висушений, щоб спростити транспортування або зберігання біомаси. Біомаса може застосовуватися безпосередньо після збирання врожаю на полі. Реактор являє собою будь-яку ємність, здатну витримувати застосовувану високу температуру і тиск та стійку до корозії. Розчинник, застосовуваний для ГТО, містить воду або
Зо повністю є водою або може містити деякі гідрогенкарбонові сполуки у формі масла. Загалом, розчинник для ГТО не вимагає додавання спиртів. Реакція перетворення може відбуватися в окиснювальному, відновлювальному або інертному оточенні. "Окиснювальний" у даному документі означає присутність повітря, "відновлювальний" означає присутність відновлювального агента, звичайно газоподібного гідрогену або метану, наприклад, 10-15 95 Нео і решта газоподібного М», та "інертний" означає присутність інертного газу, такого як нітроген або аргон. Реакцію перетворення переважно здійснюють у відновлювальних умовах. Карбонвмісні матеріали для перетворення включають целюлозу, геміцелюлозу, лігнін і білки, а також ліпіди.
Для процесу застосовують температуру перетворення від 270 "С до 400 "С і тиск від 70 до 350 бар, звичайно від 300 "С до 350 "С і тиск 100-170 бар. В результаті процесу утворюються пари органічних речовин, піролізні гази і деревне вугілля. Пари органічних речовин конденсують для одержання біонафти. Витягання біонафти може бути здійснене шляхом охолодження реактора і зниження тиску до атмосферного, що дозволяє утворення біонафти (органічна фаза) і водної фази та добування біонафти з реактора.
Вихід добутої біонафти обчислюють як відсоток від сухої маси початкової біомаси, в перерахунку на суху масу. Його обчислюють за формулою: маса біонафти х 100/суха маса вегетативних частин рослини. Маса біонафти не включає масу води або твердих речовин, що можуть бути присутні в біонафтовій суміші і з легкістю видаляються фільтрацією або іншими відомими способами.
Далі біонафту можна розділити на фракції фракційною дистиляцією, з додатковими процесами очищення або без них. Звичайно, фракції, які конденсуються при цих температурах, носять назву: близько 370 "С, мазут; близько 300 "С, дизельне масло; близько 200 "С, гас; близько 150 "С, газолін (бензин). Важчі фракції можна розщеплювати на легші, більш бажані фракції, добре відомі з рівня техніка. Дизельне паливо звичайно складається із С13-С022 гідрогенкарбонових сполук.
У даному документі "нафтове дизельне паливо" (нафтодиз) позначає дизельне паливо, одержане із скам'янілого палива, яке регламентується специфікаціями, встановленими АЗТМ 00975 у США ї ЕМ 590 у Європі. Термін "відновлюване дизельне паливо" у даному документі позначає дизельне паливо, одержане з нещодавно живої біомаси (не скам'янілого палива), що задовольняє вимогам АБТМ 0975 і не є моноалкіловими естерами. Типовими ознаками бо відновлюваного дизельного палива є: цетанове число 75-90, щільність енергії приблизно 44
МДж/кг, щільність приблизно 0,78 г/мл, вміст енергії приблизно 123 кКБТЕ/галон, рівні хлору менш ніж 10 пропроміле, точка каламутності нижча за 0 "с.
Переестерифікація "Переестерифікація" у даному документі являє собою перетворення ліпідів, головним чином, триацилгліцеролів, на метилові естери або етилові естери жирних кислот шляхом наведення в реакцію з коротколанцюговими спиртами, наприклад, метанолом або етанолом, у присутності каталізатора, наприклад, лугу або кислоти. Метанол застосовується частіше за рахунок низької вартості і доступності, однак можуть застосовуватися також етанол, пропанол або бутанол або їх суміші. Каталізатори можуть бути гомогенними каталізаторами, гетерогенними каталізаторами або ферментними каталізаторами. Гомогенні каталізатори включають сульфат заліза, і далі КОН. Гетерогенні каталізатори включають Сас, КзРох і
М/Оз5/2гО2. Ферментні каталізатори включають Момолуте 435, який одержують з Сапаїда апіагсіїса.
Переестерифікація може здійснюватися на екстрагованому маслі або, переважно, безпосередньо іп 5йш у вегетативному матеріалі рослини. Вегетативні частини рослини можна висушити і змолоти до застосування, щоб одержати композицію для реакції перетворення, але це не є необхідним. Перевага прямого перетворення на естери жирних кислот, переважно
МЕЖК, полягає в тому, що для перетворення можна застосовувати нижчу температуру і тиск, і, незважаючи на це, одержувати високий вихід продукту, наприклад, який містить щонайменше 50 95 мас. МЕЖК. Вихід витягуваної за допомогою переестерифікації біонафти обчислюють так само, як і для процесу ГТО.
Одержання неполярних ліпідів
Методи, які шаблонно практикуються в рівні технікию, можуть застосовуватися для добування, обробки, очищення і аналізу ліпідів, таких як ТАГ, продукованих клітинами, організмами або їх частинами за даним винаходом. Такі методи розкриті і до них дається пояснення у літературних джерелах, наприклад, Регеідооп Зпапіді, Сиггепі Ргоїосої5 іп ЕБоса
Апа|уїйїса! Спетівігу, доНп УМ/іІеу в 5опв, Іпс. (2001) 01.1.1-01.1.11, ї Реге?-Місй із співавт. (1998).
Одержання масла з вегетативних частин рослини або насіння
Звичайно насіння рослини варять, пресують та/або екстрагують для одержання
Зо неочищеного масла з насіння, яке надалі дегумують, рафінують, вибілюють і дезодорують.
Загалом, методи подрібнення насіння відомі з рівня техніки. Наприклад, насіння олійних культур може бути пом'якшене скропленням його водою, щоб збільшити вміст вологи, наприклад, до 8,5 Фо, і провальцьовані із застосуванням гладкого валу з щілиною 0,23-0,27 мм. В залежності від виду насіння, вода може не додаватися до подрібнення. Застосування тепла інактивує ферменти, полегшує подальше руйнування клітин, злиття крапельок ліпіду ії агломерацію частинок білка, що полегшує процес екстракції.
У варіанті реалізації винаходу велика частина масла з насіння вивільняється при проходженні через гвинтовий прес. Шрот, що виходить із гвинтового преса, далі екстрагують розчинником, наприклад гексаном, із застосуванням колонки з підведенням тепла.
Альтернативно, неочищене масло з насіння, одержане операцією пресування, може бути пропущене крізь резервуар для відстоювання, обладнаний дротяним дренажним верхом, для видалення твердих речовин, які супроводжують масло з насіння в ході операції пресування.
Освітлене масло з насіння може бути пропущене крізь планшет і рамковий фільтр для видалення будь-яких тонких частинок твердої речовини, що залишилися. При бажанні, масло з насіння, одержане в результаті процесу екстракції, може бути об'єднане з освітленим маслом з насіння для одержання суміші неочищеного масла з насіння.
Як тільки розчинник видаляють з неочищеного масла з насіння, пресовані і екстраговані частини об'єднують і обробляють звичайними процедурами обробки ліпіду (тобто дегумація, рафінування каустичною содою, вибілювання і дезодорування).
Для екстракції ліпіду з вегетативних частин рослин за винаходом застосовуються способи, аналогічні відомим з рівня техніки для екстракції масла з насіння. Один із шляхів являє собою фізичну екстракцію, що часто не включає екстракції розчинником. Екстракція за допомогою шнекового преса, як і способи екстракції за допомогою гвинтового преса і гідравлічного преса, є поширеним видом екстракції. Механічна екстракція звичайно є менш ефективною, ніж екстракція розчинником, при якій органічний розчинник (наприклад, гексан) змішують щонайменше з біомасою рослини, переважно після висушування і перемелювання біомаси.
Розчинник розчиняє ліпід у біомасі і подібному матеріалі, після чого розчин відокремлюють від біомаси механічною операцією (наприклад, за допомогою описаних вище процесів пресування).
Дана стадія відокремлення також може здійснюватися за допомогою фільтрації (наприклад, за 60 допомогою прес-фільтру або подібного пристрою) або центрифугування і т.п. В подальшому,
органічний розчинник може бути відокремлений від неполярного ліпіду (наприклад, дистиляцією). Друга стадія розділення дає неполярний ліпід з рослини і може давати повторно застосовуваний розчинник, якщо він придатний для традиційного збирання у вигляді пари. У варіанті реалізації винаходу вміст масла та/або білка в частині рослини або насіння аналізують віддзеркалювальною спектроскопією у ближній інфрачервоній ділянці, як розкрито у Нот із співавт. (2007), до екстракції.
Якщо вегетативні частини рослини не застосовуватимуться для екстракції ліпіду негайно, їх переважно переробляють, щоб максимально знизити вміст ліпіду (див., наприклад, Спгізііє, 1993), наприклад, сушінням вегетативних частин рослини.
Дегумація
Дегумація являє собою ранню стадію рафінації масел, та її основна мета полягає у видаленні з масла більшості фосфоліпідів, що можуть бути присутні в кількості приблизно 1-2 95 від загального екстрагованого ліпіду. Додавання до неочищеного масла 295 води, що звичайно містить фосфорну кислоту, при 70-80 "С приводить до відокремлення більшості фосфоліпідів, у супроводі слідових кількостей металів і пігментів. Нерозчинний матеріал, що видаляється, головним чином є сумішшю фосфоліпідів і триацилгліцеролів, і також відомий як лецитин. Дегумація може здійснюватися шляхом додавання концентрованої фосфорної кислоти до неочищеного масла з насіння, з метою переведення нездатних до гідратації фосфатидів у здатну до гідратації форму, і до незначної кількості присутніх хелатів металів. Смолу відокремлюють від масла з насіння центрифугуванням. Масло з насіння може бути рафіноване додаванням достатньої кількості розчину натрій гідроксиду для титрування всіх жирних кислот, з видаленням утвореного у такий спосіб мила.
Лужна рафінація
Лужна рафінація являє собою один із процесів очищення для обробки неочищеного масла, який іноді також називають нейтралізацією. Вона звичайно слідує за дегумацією і передує вибілюванню. Після дегумації масло з насіння може бути оброблене додаванням достатньої кількості розчину лугу, щоб відтитрувати всі жирні кислоти і фосфорні кислоти, з подальшим видаленням утвореного у такий спосіб мила. Придатні лужні матеріали включають натрій гідроксид, калію гідроксид, натрій карбонат, літію гідроксид, кальцію гідроксид, кальцію карбонат
Зо і амонію гідроксид. Даний процес звичайно здійснюється при кімнатній температурі і дозволяє видалити фракцію вільних жирних кислот. Мило видаляють центрифугуванням або екстракцією розчинником мила, і нейтралізоване масло промивають водою. При необхідності, будь-який додатковий луг у маслі може бути нейтралізований придатною кислотою, наприклад, гідрогенхлоридною кислотою або сульфурою кислотою.
Вибілювання
Вибілювання являє собою процес очищення, в ході якого масла нагрівають до 90-120 "С, витримуючи при цій температурі протягом 10-30 хвилин, в присутності вибілюючої землі (0,2- 2,0 Фо) і за відсутності кисню, шляхом проведення операції в атмосфері нітрогену, під струменем пари або у вакуумі. Дана стадія обробки масла введена з метою видалення небажаних пігментів (каротиноїди, хлорофіл, госипол і т. д), і в ході даного процесу також видаляються продукти окиснення, сліди металів, сполуки сульфуру і сліди мила.
Дезодорування
Дезодорування являє собою обробку масел і жирів при високій температурі (200-260 "С) і низькому тиску (0,1-1 мм рт. ст). Це звичайно досягається шляхом введення пари у масло з насіння із швидкістю приблизно 0,1 мл/хвилину/100 мл масла з насіння. Дезодорування може здійснюватися шляхом нагрівання масла з насіння до 260 "С під вакуумом, з повільним введенням пари у масло з насіння із швидкістю приблизно 0,1 мл/хвилину/100 мл масла з насіння. Приблизно через 30 хвилин скроплення, маслу з насіння дають остигнути під вакуумом.
Масло з насіння звичайно переносять у скляну ємність і продувають аргоном перед зберіганням при зниженій температурі. Якщо кількість масла з насіння є обмеженою, масло з насіння може бути розміщене під вакуумом, наприклад, у реакторі Парра, і нагріте до 260 "С з витримуванням протягом такого періоду часу, щоб запах був знищений. Така обробка покращує колір масла з насіння і видаляє більшість летючих речовин або пахучих сполук, включаючи будь-які вільні жирні кислоти, що залишилися, моноацилгліцероли і продукти окиснення.
Виморожування
Виморожування являє собою процес, іноді застосовуваний у комерційному виробництві масел для розділення масел і жирів на тверді (стеарин) і рідкі (олеїн) фракції шляхом кристалізації при температурах, нижчих за температуру навколишнього середовища. Вперше він був застосований до бавовняної олії з метою одержання вільного від твердих речовин продукту. Його звичайно застосовують для зменшення вмісту насичених жирних кислот в маслах.
Водорості для одержання ліпідів
За рік водорості можуть утворювати масу, що у 10-100 разів перевищує масу наземних рослин, причому їх можна вирощувати у відкритих водоймищах (таких як водоймища по типу водоводів і озер) або у фотобіореакторах. Найпоширеніші водорості, що продукують масло, загалом, можуть включати діатомові (бациляріофіти), зелені водорості (хлорофіти), зелено- блакитні водорості (ціанофіти) і коричнево-золоті водорості (хризофіти). Додатково, п'ята група, відома як гаптофітові водорості, може бути застосована. Групи включають коричневі водорості і гетероконти. Конкретні необмежуючі приклади водоростей включають Класи: Спіогорпусеає,
Еивіїдтайорпусеає, Рігутпевзіорпусеає, Васіапорпусеає. ВасіПагіорпуїез, здатні до продукування масла, включають роди АтрпПіріеига, Атрпога, Спаєїосего5, СусіоїеПа, СутрепПа,
Егадііагіа, Напі25спіа, Мамісціа, МИ25спіа, Рпаеодасіушт і ТНаїаззіозіга. Конкретні необмежуючі приклади хлорофітів, здатних до продукування масла, включають АпкКізігодезтив5, Воїгуососсив,
СпіогеПа, СПпіогососсит, Юипаїїейа, Мопогарпідішт, Оосувзіїх, Ззсепедезти5 і ТеїгазеїІтів5. В одному з аспектів хлорофіти можуть являти собою СпПіогейа або ОЮипаїїеїйНа. Конкретні необмежуючі приклади ціанофітів, здатних до продукування масла, включають О5сіПайогіа і
Зупеспососси5. Конкретний приклад хризофітів, здатних до продукування масла, включає
ВоекеїЇоміаа. Конкретні необмежуючі приклади гаптофітових водоростей включають Ізоспувів і
Ріештоснувів.
Конкретні водорості, придатні відповідно до даного винаходу, включають, наприклад, види
Спіатудотопавх, наприклад, Спіатудотопавх геїіппагайії, види ЮОипаїїєПа, наприклад, ЮОипаїїейНа запа, ЮипаїїеНа їепіоіесіа, О. асідорніа, О. І агегаіє. О.тапіта. О. рама, 0. роІтогрНа, 0. ргітоїесіа, 0. рзецйдозаїїпа, ОЮ. диаго!їесіа. 0. мігіді5, види Наетайососсив5, види СПіогеїйа такі як
СНіогеїЇа миїдагів, СпіогеПа 5зогоКіпіапа або СпіогеПа ргоїоїпесоіде5, види Тпгаивіоспуїгішт, види зеопі2госпуїйгічт, види МоїЇмох, види Маппоспіогорвіб5, Воїгуососсив Бргашйпії, який може містити більше 60 95, мас ліпіду, Рпаеодасіуїчт ігісогпшїшт, ТНаїахвіовзіга рхсендопапа, види Ізоспгувів, види Раміома, види Спіогососсит, види ЕїпПірзоїідіоп, види Меоспіогі5, види зсепедезтив.
Урожай водоростей за винаходом можна збирати за допомогою мікросит, центрифугування,
Зо флокуляції (із застосуванням наприклад, хитозану, алюмінієвого галуна і хлориду заліза) та пінної флотації. Переривання потоку діоксиду карбону може змусити водорості випасти пластівцями самі по собі, що називається "аутофлокуляцією". При пінній флотації, фермер аерує воду в піну, а потім знімає водорості з поверхні. Ультразвуковий та інші методи збирання врожаю на цей час розробляються.
Ліпід може бути екстрагований з водоростей механічним подрібненням. При висушуванні маса водоростей зберігає вміст ліпіду, який в подальшому може бути "вичавлений" за допомогою масляного преса. Крім того, осмотичний шок може бути застосований для вивільнення клітинних компонентів, наприклад, ліпіду з водоростей, а добування за допомогою ультразвуку може прискорити процеси екстракції. Хімічні розчинники (наприклад, гексан, бензен, петролейний ефір) часто застосовуються для екстракції ліпідів з водоростей.
Додатково, ферментна екстракція із застосуванням ферментів для розкладання клітинних стінок може застосовуватися для добування ліпідів з водоростей. Крім того, суперкритичний СО» може застосовуватися як розчинник. У даному способі СО перетворюють на рідину під тиском і нагрівають до точки, в якій він стає суперкритичним (володіє властивостями як рідини, так і газу), що дає йому можливість виконувати роль розчинника.
У даному документі "маслянистий організм" позначає такий, який акумулює щонайменше 20 95 сухої маси у вигляді триацилгліцеролів. У даному документі "дріжджі" включають види засспаготусе5, Засспаготусев сегемізіае, Ззасспаготусев сагібегдепзі5, види Сапаїда, види
Кіимеготусев5, види Ріспіа, види Напзепиїа, види Тгісподепта, Гіротусе5 зіагкеу і Матоміа
Іроїуііса. Переважні дріжджі включають Маїтом/іа Іроїуїїсса або інші маслянисті дріжджі і штами видів Хасспаготусев.
Застосування рослинних ліпідів
Ліпіди, одержані розкритими способами, знаходять різноманітне застосування. У деяких варіантах реалізації винаходу ліпіди застосовуються як харчові масла. В інших варіантах реалізації винаходу ліпіди рафінують і застосовують як мастило або для інших промислових цілей, наприклад, синтезу пластичних матеріалів. У деяких переважних варіантах реалізації винаходу ліпіди рафінують для виробництва біодизельного палива. Біодизельне паливо може бути одержане з масел, які одержують з рослин, водоростей і грибів за винаходом.
Застосування рослинних триацилгліцеролів для одержання біологічного палива розглянуте у бо Оштей із співавт. (2008). Одержане паливо звичайно позначається як біодизельне паливо і володіє динамічним діапазоном в'язкості 1,9-6,0 ммес" (АТМ 06751). Біоспирт можна одержати із цукрів біомаси, що не належать до ліпідів, які залишаються після екстракції ліпіду. Загальні способи одержання біологічного палива можуть бути знайдені, наприклад, у Мапйег і Вгезвіег, 2007; СгеепуеїЇ із співавт., 2010; КаптпакКаг із співавт., 2010; АЇопзо із співавт., 2010; іш із співавт., 2010а. опа і діапо, 2011; Епадаему із співавт., 2011; і Зетууаї! із співавт., 2011.
У даному винаході пропонуються способи підвищення вмісту масла у вегетативних тканинах. Рослини за даним винаходом містять підвищену кількість енергії в листі та/або стеблах, таким чином, що суцільні надземні частини рослини можна збирати і застосовувати для одержання біопалива. Крім того, рівень олеїнової кислоти є значно підвищеним, притому, що рівень поліненасиченої жирної альфа-ліноленової кислоти (АЛК) є зниженим. Таким чином, рослини, морські водорості і гриби за даним винаходом знижують витрати на виробництво біопалива.
Біодизельне паливо
Виробництво біодизельного палива або алкілових естерів є добре відомим. Існують три основні способи одержання естеру з ліпідів: 1) переестерифікація ліпіду, каталізована основою, з застосуванням спирту; 2) пряма, каталізована кислотою естерифікація ліпіду з застосуванням метанолу; і 3) перетворення ліпіду на жирні кислоти, а потім на алкілові естери за допомогою кислотного каталізу Може застосовуватися будь-який спосіб одержання алкілових естерів і гліцеролових естерів жирних кислот (в ході якого естерифікуються одна, дві або три гідроксигрупи на гліцеролі). Жирні кислоти можуть бути одержані, наприклад, гідролізом або омиленням ТАГ із застосуванням кислотних або основних каталізаторів, відповідно, або ферменту, наприклад, ліпази або естерази. Алкілові естери жирних кислот можуть бути одержані шляхом введення жирної кислоти в реакцію із спиртом у присутності кислотного каталізатора. Крім того, алкілові естери жирних кислот можуть бути одержані шляхом введення
ТАГ в реакцію із спиртом у присутності кислотного або основного каталізатора. Естери гліцеролу можуть бути одержані, наприклад, введенням гліцеролу в реакцію з алкілгалогенідом у присутності основи або з олефіном або спиртом у присутності кислотного каталізатора.
Алкілові естери можуть бути безпосередньо змішані з дизельним паливом або промиті водою або іншими водними розчинами з метою видалення різних домішок, зокрема каталізаторів,
Зо перед змішуванням.
Авіаційне паливо
Для покращення характеристик біопалива розроблені технології термічного і каталітичного розщеплення (розриву) хімічних зв'язків, що дозволяє перетворювати біонафту на біологічні альтернативи одержаному з нафта дизельному паливу та іншим видам палива, таким як реактивне паливо.
Застосування джерела середньоланцюгових жирних кислот, такого як продукується рекомбінантною еукаріотною клітиною за винаходом, трансгенним організмом, що не відноситься до людського роду, або його частиною за винаходом, трансгенною рослиною або її частиною за винаходом, насінням за винаходом або трансгенною клітиною або трансгенною рослиною або її частиною за винаходом, запобігає потребі у високих енергіях для розщеплення ланцюга жирної кислоти і одержання коротших молекул, необхідних для реактивного палива та інших видів палива з вимогами низької температури потоку. Даний спосіб включає відщеплення однієї або більше груп середньоланцюгових жирних кислотних від гліцеролів з одержанням гліцеролу і однієї або більше вільних жирних кислот. Крім того, спосіб включає відщеплення однієї або більше середньоланцюгових жирних кислот від гліцеролу і декарбоксилування однієї або більше середньоланцюгових жирних кислот з одержанням одного або більше гідрогенкарбонів для продукування реактивного пального.
Харчові (кормові) продукти
Даний винахід включає склади, що можуть застосовуватися як харчові (кормові) продукти.
Для цілей даного винаходу, "харчові (кормові) продукти" включають будь-який харчовий продукт або препарат для споживання людиною або твариною, що служить цілям живлення або утворення тканин або постачання енергією, та/або зберігає, відновлює або підтримує відповідний харчовий статус або метаболічну функцію. Харчові (кормові) продукти за винаходом включають поживні склади для немовлят та/або маленьких дітей.
Харчові (кормові) склади за винаходом включають, наприклад, клітину за винаходом, рослину за винаходом, частину рослини за винаходом, насіння за винаходом, екстракт за винаходом, продукт способу за винаходом або склад разом з придатним(и) носієм(ями). Термін "носій" використовується у найширшому значенні і включає будь-який компонент, який може мати або не має харчової цінності. Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, носій повинен бути бо придатним для застосування (або застосовуваним у достатньо низькій концентрації) в харчовому (кормовому) продукті, таким чином, що він не здійснює шкідливого впливу на організм, який споживає харчовий (кормовий) продукт.
Харчовий (кормовий) продукт за даним винаходом містить ліпід, одержаний, прямо або непрямо, із застосуванням способів, клітин або організмів, розкритих у даному документі. Крім того, склад може знаходитися у твердій або рідкій формі. Додатково, склад може містити їстівні макронутрієнти, вітаміни та/або мінерали в кількостях, бажаних для конкретного застосування.
Кількості таких інгредієнтів варіюватимуть, в залежності від того, чи призначений склад для застосування у нормальних індивідуумів або індивідуумів з особливими потребами, наприклад, індивідуумів, які страждають на метаболічні розлади і т.п.
Приклади придатних носіїв, що володіють харчовою цінністю, включають, без обмежень, макронутрієнти, наприклад, їстівні жири, карбогідрати і білки. Приклади таких їстівних жирів включають, без обмежень, кокосове масло, масло бораго, грибне масло, олію чорної смородини, соєву олію і моно- і дигліцероли. Приклади таких карбогідратів включають, без обмежень, глюкозу, їстівну лактозу і гідролізований крохмаль. Додатково, приклади білків, які можуть застосовуватися в поживному складі за винаходом, включають, без обмежень, білки сої, оброблену електродіалізом сироватку, оброблене електродіалізом зняте молоко, молочну сироватку або гідролізати вказаних білків.
Стосовно вітамінів і мінералів, наступне може бути додане до складів харчових (кормових) продуктів за даним винаходом: кальцій, фосфор, калій, натрій, хлорид, магній, марганець, залізо, мідь, цинк, селен, йод і вітаміни А, Е, 0, С і групи В. Інші такі вітаміни і мінерали також можуть бути додані.
Додатково, склад харчового (кормового) продукту за даним винаходом може бути доданий до їжі, навіть у тих випадках, коли немає необхідності в доповненні раціону. Наприклад, склад може бути доданий до їжі будь-якого типу, включаючи, без обмежень, маргарин, масло, сири, молоко, йогурт, шоколад, цукерки, легкі закуски, салатні олії, кондитерські масла, кондитерські жири, м'ясо, рибу і напої.
Додатково, ліпід, одержаний відповідно до даного винаходу, або клітини-хазяї, трансформовані таким чином, щоб містити і експресувати вказані гени, можуть застосовуватися як харчові добавки до корму для тварини, з метою зміни складу жирних кислот у тканині
Ко) тварини або молоці до більш бажаного для споживання людиною або твариною. Приклади таких тварин включають вівцю, теля, коней і т.п. Додатково, харчові (кормові) продукти за винаходом можуть застосовуватися в аквакультурі, з метою підвищення рівнів жирних кислот в організмі риби, призначеної для споживання людиною або твариною.
Переважними харчовими (кормовими) продуктами за винаходом є рослини, насіння та інші частини рослини, такі як листя, плоди і стебла, що можуть бути безпосередньо використані людиною або іншими тваринами як їжа або корм. Наприклад, тварини можуть пастися безпосередньо на таких рослинах, вирощених у полі, або одержувати більш точно відміряні кількості в процесі керованого годування. Винахід включає застосування таких рослин і частин рослини як корму, з метою підвищення рівнів поліненасичених жирних кислот в організмі людини та інших тварин.
Для споживання тваринами, які не належать до людського роду, корм може знаходитися в будь-якій придатній формі, наприклад, але не обмежуючись цим, силос, сіно або підніжний корм у полі. У варіанті реалізації винаходу корм для споживання тваринами є бобовою рослиною або її частиною, що належить до сімейства Рабасєає (або І едитіпозає), наприклад, люцерна, клівер, горох, люцерна посівна, боби, сочевиця, люпин, мескіто, кероб, соя і арахіс.
Склади
Даний винахід також включає склади, особливо фармацевтичні склади, що містять один або більше ліпідів, одержаних із застосуванням способів за винаходом.
Фармацевтичний склад може містити один або більше ліпідів, в комбінації із стандартним, відомим, нетоксичним фармацевтично прийнятним носієм, ад'ювантом або розчинником, таким як буферизований фосфатом розчин натрій хлориду, вода, етанол, поліоли, рослинні масла, зволожувач або емульсія, наприклад, емульсія вода/масло. Склад може знаходитися у рідкій або твердій формі. Наприклад, склад може знаходитися у формі таблетки, капсули, рідини для прийому всередину, порошку, мазі або крему для місцевого застосування. Належна сипкість може підтримуватися, наприклад, шляхом підтримання необхідного розміру частинок у разі дисперсій і застосуванням поверхнево-активних речовин. Крім того, може бути бажаним введення підтримуючих ізотонічність агентів, наприклад, цукрів, натрій хлориду і т.п. Крім таких інертних розбавлювачів, склад може включати допоміжні речовини, наприклад, зволожувачі, емульгатори і суспендувальні агенти, підсолоджувачі, смакові добавки і ароматизатори.
Типові дози конкретної жирної кислоти становлять від 0,1 мг до 20 г, для прийому від 1 до 5 разів на добу (до 100 г на добу) і, переважно, знаходяться в діапазоні від приблизно 10 мг до приблизно 1, 2, 5 або 10 г на добу (у вигляді однієї або декількох доз). Як відомо з рівня техніки, бажаною є доза щонайменше близько 300 мг/добу жирної кислоти, особливо поліненасиченої жирної кислоти. Однак слід розуміти, що будь-яка кількість жирної кислоти буде корисною для суб'єкта.
Можливі способи введення фармацевтичних складів за даним винаходом включають, наприклад, ентеральний і парентеральний. Наприклад, рідкий препарат можна вводити перорально. Додатково, гомогенна суміш може бути повністю диспергована у воді, змішана в стерильних умовах з фізіологічно прийнятними розбавлювачами, консервантами, буферами або пропелентами, щоб одержати спрей або засіб для інгаляцій.
Дози складу при введенні суб'єкту можуть бути визначені фахівцем, що володіє середнім рівнем кваліфікації в даній галузі, і залежать від різних факторів, таких як маса тіла, вік, загальний стан здоров'я, анамнез, імунний статус суб'єкта і т.п.
Додатково, склади за даним винаходом можуть застосовуватися для косметичних цілей.
Склади можуть бути додані до вже існуючих косметичних складів, таким чином, що суміш, або жирна кислота, одержана у відповідності до винаходу, може застосовуватися як єдиний "активний" інгредієнт у косметичному складі.
Поліпептиди
У даному документі терміни "поліпептид" і "білок" загалом використовуються рівнозначно.
Поліпептид або клас поліпептидів може бути визначений за ступенем ідентичності (90 ідентичності) його послідовності амінокислот референтній послідовності амінокислот або більшим 95 ідентичності однієї референтної послідовності амінокислот, ніж іншої. 95 ідентичності поліпептиду референтній послідовності амінокислот звичайно визначається шляхом аналізу
САР (Меейдіетап і МУсп5сп, 1970; програмне забезпечення СО) з параметрами штрафу на відкриття проміжку - 5, і штрафу на продовження проміжку - 0,3. Довжина послідовності запиту становить щонайменше 100 амінокислот, причому аналіз САР вирівнює дві послідовності протягом ділянки завдовжки щонайменше 100 амінокислот. Навіть більш переважно, довжина послідовності запиту становить щонайменше 250 амінокислот, і аналіз АР вирівнює дві послідовності протягом ділянки завдовжки щонайменше 250 амінокислот. Навіть більш переважно, аналіз САР вирівнює дві послідовності протягом їх повної довжини. Поліпептид або клас поліпептидів може володіти такою ж ферментною активністю як або відмінною активністю від або не володіти активністю референтного поліпептиду. Переважно, поліпептид володіє ферментною активністю, яка становить щонайменше 1095 від активності референтного поліпептиду.
У даному документі "біологічно активний фрагмент" є частиною поліпептиду за винаходом, яка володіє певним видом активності повнорозмірного референтного поліпептиду, наприклад, активністю МОАТ. Біологічно активні фрагменти у даному документі виключають повнорозмірний поліпептид. Біологічно активні фрагменти можуть бути частиною будь-якого розміру, до тих пір, поки вони зберігають певну активність. Переважно, біологічно активний фрагмент зберігає щонайменше 10 95 активності повнорозмірного поліпептиду.
Стосовно певного поліпептиду або ферменту, передбачається, що вищий 95 ідентичності, ніж розкритий у даному документі, включатиме переважні варіанти реалізації винаходу. Таким чином, якщо це доречно, у світлі мінімального 9» ідентичності, переважно, поліпептид/фермент містить амінокислотна послідовність, яка є щонайменше на 6095, більш переважно щонайменше на 65 95, більш переважно щонайменше на 70 95, більш переважно щонайменше на 75 95, більш переважно щонайменше на 80 95, більш переважно щонайменше на 85 95, більш переважно щонайменше на 90 95, більш переважно щонайменше на 91 95, більш переважно щонайменше на 92 95, більш переважно щонайменше на 93 95, більш переважно щонайменше на 94 95, більш переважно щонайменше на 95 95, більш переважно щонайменше на 96 95, більш переважно щонайменше на 97 95, більш переважно щонайменше на 98 95, більш переважно щонайменше на 99 95, більш переважно щонайменше на 99,1 95, більш переважно щонайменше на 99,2 95, більш переважно щонайменше на 99,3 95, більш переважно щонайменше на 99 4 95, більш переважно щонайменше на 99,5 95, більш переважно щонайменше на 99,6 95, більш переважно щонайменше на 99,7 95, більш переважно щонайменше на 99,8 95, і навіть більш переважно, щонайменше на 99,9 95 ідентичною відповідній вказаній зЕО ІЮ МО.
Мутантні амінокислотні послідовності поліпептидів, розкритих у даному документі, можуть бути одержані за допомогою введення відповідних нуклеотидних модифікацій в нуклеїнову кислоту, визначену у даному документі, або синтезом бажаного поліпептиду іп міо. Такі 60 мутанти включають, наприклад, делеції, вставки або заміни залишків у межах послідовності амінокислот. Комбінація делецій, вставок і замін може бути одержана для введення в кінцеву конструкцію, за умови, що кінцевий поліпептидний продукт володіє бажаними характеристиками.
Мутантні поліпептиди (модифіковані) можуть бути одержані із застосуванням будь-якої техніки, відомої в даній галузі, наприклад, із застосуванням стратегій спрямованої еволюції або раціонального дизайну (див. нижче). Для продуктів, одержуваних з мутантної/модифікованої
ДНК, може бути легко проведений скринінг із застосуванням способів, розкритих у даному документі, щоб визначити, чи володіють вони активністю фактору транскрипції, ацилтрансферази ацилов жирних кислот або ПМВ.
При конструюванні мутантів послідовності амінокислот, розташування сайту мутації і природа мутації залежатимуть від модифікованої характеристики (характеристик). Сайти мутації можуть бути модифіковані індивідуально або серіями, наприклад, (1) спочатку заміною консервативними альтернативами амінокислот, а потім радикальнішими варіантами, в залежності від одержаних результатів, (2) видаленням цільового залишку, або (3) вставкою інших залишків, суміжних із розміщеним сайтом.
Довжина делецій у послідовності амінокислот, загалом, варіює від приблизно 1 до 15 залишків, більш переважно, приблизно 1-10 залишків і звичайно приблизно 1-5 суміжних залишків.
В мутантах із заміною щонайменше один залишок амінокислоти в поліпептиді видалений, а інший залишок вставлений на його місце. Сайти, що представляють найбільший інтерес для мутагенезу із заміщенням з метою інактивації ферментів, включають сайти, ідентифіковані як активний) сайт(и). Іншими сайтами, що представляють інтерес, є такі, конкретні залишки яких, одержані від різних штамів або видів, є ідентичними. Вказані положення можуть бути важливі з точки зору біологічної активності. Такі сайти, особливо які знаходяться в межах послідовності щонайменше трьох інших однаково консервативних сайтів, переважно замінюються відносно консервативним чином. Такі консервативні заміни наведені у Табл. 1 під заголовком "приклади замін".
Таблиця 1
Приклади замін
Ме(ф) 77111111 бМешмабава
Рю(Р) 77 (Фу 1
Зо У переважному варіанті реалізації винаходу мутантний/варіантний поліпептид містить тільки або не більше ніж одна, дві, три або чотири консервативних модифікації амінокислот, в порівнянні з природним поліпептидом. Подробиці щодо консервативних модифікацій амінокислот наведені в Табл. 1. Як буде зрозуміло фахівцю, такі незначні модифікації можуть бути спрогнозовані на раціональній основі як не впливаючі на активність поліпептиду при експресії у рекомбінантній клітині. Мутанти з бажаною активністю можуть бути сконструйовані із застосуванням стандартних методик з рівня техніки, наприклад, випадковим мутагенезом, спрямованим мутагенезом або мутагенезом насичення у відомих цільових генах, або шляхом обробки різних генів "тасуванням" ДНК.
ПРИКЛАДИ
Приклад 1. Загальні матеріали і методи
Експресія генів у рослинних клітинах в системі тимчасової експресії
Гени експресують у клітинах рослини з застосуванням системи тимчасової експресії, по суті як розкрито Моіппеї із співавт. (2003) ї Ууоой із співавт. (2009). Бінарні вектори, що містять кодуючу ділянку, які експресуються високоактивним конститутивним промотором е355, що містить дупліковану енхансерну ділянку, вводять в Адгобасієгішт їштеїасієп5 штам АСІ1.
Химерний бінарний вектор, 355:р19, для експресії вірусного супресора сайленсингу р19 вводять в АС 1 окремо, як розкрито у УМО2010/057246. Химерний бінарний вектор, 355:М2, для експресії вірусного супресора сайленсингу М2 вводять в АСІ 1 окремо. Рекомбінантні клітини вирощують до стаціонарної фази при температурі 28 "С в середовищі Лурія-Бертані з додаванням 50 мг/л канаміцину і 50 мг/л рифампіцину. Далі бактерії гранулюють центрифугуванням при 5000 д протягом 5 хвилин при кімнатній температурі, перед ресуспендуванням до 00600 - 1,0 в інфільтраційному буфері, що містить 10 мМ мінімального ессенціального середовища, рн 5,7, 10 мМ Масіг ії 100 мкМ ацетосирингону. Далі клітини інкубують при 28 "С із струшуванням протягом З годин, після чого вимірюють 00600, і об'єм кожної культури, що містить конструкцію вірусного супресора 355:р19 або 355:М2, необхідний для досягнення кінцевої концентрації 00600 - 0,125, вміщують до свіжої пробірки. Доводять до кінцевого об'єму згаданим вище буфером. Після даного здійснюють інфільтрацію листя сумішшю культури, і рослини звичайно вирощують ще протягом 3-5 днів після інфільтрації, перед виділенням листових пластинок для одержання очищеного лізату клітин або виділення загального ліпіду.
Трансформація Вгазвіса пари
Насіння Вгаззіса пари стерилізують із застосуванням газоподібного хлору, як описано
Кеге571 із співавт. (2007), і пророщують на поживному середовищі для культури тканин.
Котиледонні черешки з ніжкою 2-4 мм виділяють, як описано Веїїде із співавт. (2013) і
Зо використовують як експланти Готують культури А. Шшптегасієп5 АСІ 1 (І а?о із співавт., 1991), що містять бінарний вектор, і котиледонні черешки інокулюють культурами, як описано Веїїде із співавт. (2013). Інфіковані котиледонні черешки культивують на середовищі МС з додаванням 1 мг/л тідіазурону (ТДЗ) ж 0.1 мг/л 1-нафталеноцтової кислоти (НОК) ж З мг/л АоМОз ж 250 мг/л цефотаксиму, 50 мг/л тиментину і 25 мг/л канаміцину та культивують протягом 4 тижнів при 24 7С з фотоперіодом світла-темряви 16 годин/8 годин, з двотижневими пасажами на таке ж середовище. Експланти із зеленим калюсом переносять в середовище для ініціації пагонів (МС т 1 мг/л кінетину ї- З мг/л АЯ9МОз ж 250 мг/л цефотаксиму ї- 50 мг/л тиментину 25 мг/л канаміцину) і культивують ще протягом 2-3 тижнів. Маленькі пагони («1 см) виділяють із стійкого калюсу і переносять в середовище для подовження пагонів (середовище МС з додаванням 0,1 мг/л гіберелової кислоти ж З мг/л АЯМОз ж 250 мг/л цефотаксиму ж 25 мг/л канаміцину) і культивують ще протягом двох тижнів. Здорові пагони з одним або двома листками відбирають і переносять в середовище для коренеутворення (1/2 МС з додаванням 1 мг/л НОК «5 20 мг/л аденіну сульфату (АДС) ж З мг/л АЯМОз ж 250 мг/л цефотаксиму) і культивують протягом 2-3 тижнів. ДНК виділяють з маленького листя стійких пагонів із застосуванням набору для виділення ДНК рослини (Віоїїпе, Олександрія, Новий Південний Уельс, Австралія), відповідно до протоколу виробника. Присутність послідовностей Т-ДНК визначають за методом ПЛР ампліфікації на геномній ДНК. Позитивні, трансгенні пагони з корінням переносять у горщики, що містять суміш для вирощування саджанців і вирощують у теплиці з денною температурою 24 "С/нічною температурою 16 "С (стандартні умови).
Аналіз ферментів очищеного лізату листя
Тканини листя Місоїйапа репіпатіапа, попередньо оброблені інфільтрацією, як викладено вище, подрібнюють у розчині, що містить 0,1 М калій фосфатного буфера (рН 7,2) і 0,33 М сахарози, з застосуванням скляного гомогенізатора. Гомогенат листя центрифугують при 20000 д протягом 45 хвилин при температурі 4 "С, після чого збирають кожен супернатант. Вміст білка в кожному супернатанті вимірюють згідно Вгаатогі (1976), за допомогою мультиміткового лічильника Умайас1420 і реактиву фарбника для аналізу білка Віо-Вай (Віо-Вай І арогаюгієв,
Геркулес, США, Каліфорнія). В аналізах ацилтрансферази використовують 100 мкг білка у відповідності до Сабо із співавт. (2007), з деякими модифікаціями. Реакційне середовище містить 100 мМ Трис-НСЇ (рН 7,0), 5 мМ Масі»г, 1 мг/мл альбуміну телячої сироватки (що не містить 60 жирних кислот), 200 мМ сахарози, 40 мМ холодного олеоїл-КоОА, 16,4 мкМ 5п-2 моноолеоїлгліцеролі "СІ (55 мКі/ммоль, Атегісап КадіоспетісаїЇ5, Сент-Луїс, США, Місурі) або 6,0 МКМ одинатрієвої солі Г"СІ|гліцерол-З-фосфату (0-3-Р) (150 мКі/ммоль, Аптегісап
Кадіоспетіса!5). Аналіз проводять через 7,5, 15 або 30 хвилин.
Аналіз ліпідів
Аналіз вмісту масла в насінні Агарідровіб
Якщо вміст масла в насінні або склад загальних жирних кислот слід визначити для насіння невеликого розміру, наприклад, насіння Агарідорвіх5, то жирні кислоти в насінні метилують напряму, без роздавлювання насіння. Насіння сушать в ексикаторі протягом 24 годин, і приблизно 4 мг насіння переносять у скляний флакон місткістю 2 мл з нагвинчувальною кришкою, із шаром Тефлону. Розчин 0,05 мг тригептадеканоїну (ТАГ з трьома С17:0 жирними кислотами) в 0,1 мл толуолу вміщують у флакон як внутрішній стандарт. Жирні кислоти насіння метилують додаванням 0,7 мл 1 н метанольного НСІ (Зиреїсо) у флакон, що містить матеріал насіння. У дробленні насіння для повного метилування немає необхідності у разі насіння невеликого розміру, наприклад, насіння Агарідорзі5. Суміш короткочасно обробляють вихровим перемішуванням та інкубують при 80 "С протягом 2 годин. Після охолодження сумішей до кімнатної температури, 0,3 мл 0,995 Масі (мас/об) і 0,1 мл гексану додають у флакон та ретельно перемішують протягом 10 хвилин у Неїдоїрп Міргатах 110. МЕЖК збирають у скляну вставку місткістю 0,3 мл і аналізують методом ГХ з плазмово-іонізаційним детектором (ПІД), як описано нижче.
Площу піку індивідуальних МЕЖК спочатку коректують на базі площі піків відомої кількості таких же МЕЖК, присутніх у комерційному стандартному СІ С-411 (МО-СНЕК РЕКЕР, ІМС., США).
СІ С-411 містить рівні кількості 31 жирної кислоти (95, мас.), в діапазоні від С8:О до С22:6. У разі жирних кислот, які не присутні в стандарті, знаходять площу піків найбільш подібного МЕЖК.
Наприклад, площу піку МЕЖК 16:149 використовують для 16:147, і площу піку МЕЖК С22:6 використовують для С22:5. Скоректовані площі піків використовують для обчислення маси кожного МЕЖК у зразку, в порівнянні з масою внутрішнього стандарту. Масло зберігається в основному у формі ТАГ, і його масу обчислюють на базі маси МЕЖК. Загальну кількість моль гліцеролу визначають шляхом обчислення кількості моль кожного МЕЖК і поділу загальної кількості моль МЕЖК на 3. Вміст ТАГ обчислюють як суму фрагментів гліцеролу і жирного
Зо ацилу, з застосуванням співвідношення: 95, мас. масла - 100 х ((41 х загальна кількість моль
МЕЖК/З) « (загальна кількість г МЕЖК - (15 х загальна кількість моль МЕЖК)))/грам насіння, де 41 ї 15 являють собою значення молекулярної маси фрагмента гліцеролу і метильної групи, відповідно.
Аналіз вмісту жирної кислоти в насінні Сатеїнпа і насінні рапсу
Для визначення складу жирних кислот в одиночному насінні більшого розміру, такому як насіння рапсу і Сатеїїпа, здійснюють пряме метилування жирних кислот у насінні, як і для насіння АгабБідорзіз, за винятком руйнування оболонок насіння. Даний спосіб дозволяє екстрагувати достатню кількість масла з насіння, щоб провести аналіз складу жирних кислот.
Для визначення складу жирних кислот загального ліпіду, екстрагованого з насіння, насіння роздавлюють, і ліпіди екстрагують за допомогою СНСІз/МеонН. Аліквоти екстрагованого ліпіду метилують і аналізують методом ГХ. Вміст загального ліпіду для об'єднаного в пул насіння рапсу (вміст масла в насінні) визначають за допомогою дворазової екстракції ліпіду із застосуванням СНСІзЗ/МеоОнН з відомої маси висушеного насіння після роздавлювання, з подальшим метилуванням аліквот ліпіду разом з 17:00 жирними кислотами як внутрішнім стандартом. У разі Сатеїйпа, ліпід з відомої кількості насіння метилують разом з відомою кількістю 17:0 жирних кислот, як і у разі аналізу масла Агабрідорзі5, і МЕЖК аналізують методом
ГХ. Для кількісного визначення ТАГ, ТАГ фракціонують з екстрагованого ліпіду із застосуванням
ТШХ і безпосередньо метилують на силіцію діоксиді із застосуванням 17:0 ТАГ як внутрішнього стандарту. Ці способи описані детальніше нижче.
Після збирання врожаю на стадії зрілості рослини, насіння Сатеїїпа або рапсу зневоднюють шляхом зберігання насіння протягом 24 годин при кімнатній температурі в ексикаторі, що містить силікагель як поглинач вологи. Вміст вологи у насінні звичайно становить 6-8 95.
Загальні ліпіди екстрагують з відомої маси зневодненого насіння шляхом подрібнення насіння за допомогою суміші хлороформу і метанолу (2/1, об/0б) в пробірці Епендорфа, з застосуванням гомогенізатора для тканин Кеїспі (частота 22/секунду протягом З хвилин) і металевої кулі. Додають один об'єм 0,1 М розчину КСІ, і суміш струшують протягом 10 хвилин.
Нижню неполярну фракцію збирають після центрифугування суміші протягом 5 хвилин при швидкості 3000 об/хв. Верхню (водну) фракцію, що залишилася, промивають двома об'ємами хлороформу при перемішуванні протягом 10 хвилин. Другу неполярну фракцію також збирають і об'єднують в пул із раніше зібраною. Розчинник випаровують з ліпідів у екстракті в потоці нітрогену, і висушений загальний ліпід розчиняють у відомому об'ємі хлороформу.
Для вимірювання кількості ліпіду в екстрагованому матеріалі, додають відому кількість 17:0-
ТАГ як внутрішній стандарт, і ліпіди з відомої кількості насіння інкубують в 1 н метанольному
НСЇІ (Зи,иреїсо) протягом 2 годин при 80 "С. Одержаний таким чином МЕЖК екстрагують гексаном і аналізують методом ГХ. Кількість окремого МЕЖК визначають на базі кількості МЕЖК 17:0
ТАГ. Масу окремих МЕЖК, після віднімання маси метильних груп, якими естерифіковані МЕЖК, переводять у моль шляхом поділу на молекулярну масу окремих МЕЖК. Загальну кількість моль всіх МЕЖК ділять на три, щоб обчислити кількість моль ТАГ, і, таким чином, гліцеролу.
Далі, кількість моль ТАГ перетворюють на масу ТАГ. В кінці, відсоток вмісту масла на базі маси насіння обчислюють з застосуванням маси насіння, припускаючи, що весь екстрагований ліпід являє собою ТАГ або еквівалент ТАГ для цілей обчислення вмісту масла. Даний спосіб базується на Гі із співавт., (2006). Інше насіння подібного розміру, окрім насіння Сатеїїйпа або рапсу, також може бути проаналізоване даним способом.
Крім того, вміст масла у насінні рапсу та іншому насінні був виміряний методами ядерного магнітного резонансу (Коз5зеї і Ргійспага, 1991), наприклад, пульсуючою хвилею ММ5 100
Міпізрес (ВгиКег Ріу Ча Зсіепійіс Іпбігитепів, Німеччина), як описано в Прикладі 14. Метод ЯМР дозволяє одночасно виміряти вміст вологи. Крім того, вміст масла у насінні можна виміряти віддзеркалювальною спектроскопією в ближньому ІЧ-діапазоні, наприклад, із застосуванням монохроматора МІКЗузіетв5 моделі 5000. Крім того, вміст вологи може бути виміряний у зразку партії насіння, за допомогою сушіння насіння в зразку протягом 18 годин при температурі приблизно 100 "С, у відповідності до і і із співавт. (2006).
Аналіз ліпідів із зразків лізату листя
Ліпіди із зразків лізату екстрагують з застосуванням суміші хлороформ/метанол/0,1 М розчин КСІ (2:1:1) і витягують. Різні класи ліпідів у зразках розділяють на пластинках Силікагель 60 для тонкошарової хроматографії (ТШХ) (МЕКСК, Дармштадт, Німеччина) (ТШХ), просочених 10 95 розчином борної кислоти. Система розчинників, застосовуваних для фракціонування ТАГ з екстракту ліпідів, являє собою хлороформ/ацетон (90:10, об/06б). Окремі класи ліпідів візуалізують за допомогою контакту пластинок з парами йоду та ідентифікують за допомогою
Зо паралельного аналізу аутентичних стандартів на такій же пластинці ТШХ. Пластинки приводять у контакт з фосфорними екранами візуалізації протягом ночі і аналізують за допомогою візуалізатора фосфору Еціййт РГА-5000 перед рідинно-сцинтиляційним підрахунком для кількісного визначення імпульсів на хвилину.
Виділення загального ліпіду і фракціонування ліпідів з вегетативних тканин.
Склад жирних кислот загального ліпіду у зразках листя та інших вегетативних тканин визначали прямим метилуванням жирних кислот у ліофілізованих зразках. Для кількісної оцінки загального ліпіду, жирні кислоти у відомій масі ліофілізованих зразків безпосередньо метилують 3 17:0 СЖК. Для визначення рівнів загального ТАГ у зразках листя, ТАГ з екстрагованого загального ліпіду фракціонують за допомогою ТШХ і метилують в присутності внутрішнього стандарту 17:0 ТАГ, унаслідок присутності в листі значних кількостей полярних ліпідів. Це здійснюють, як указано нижче. Тканини, включаючи зразки листя, ліофілізують, зважують (суха маса), і загальні ліпіди екстрагують, як описано Відп ї ОСуег (1959) або з застосуванням суміші хлороформ/метанол/0,1 М розчин КСІ (ХМК; 2:1:1) як розчинника. Загальні ліпіди витягують із зразків листя М. репіпатіапа після ліофілізації, додаючи 900 мкл суміші хлороформ/метанол (271, об/об) на зразок листя діаметром 1 см. Додають 0,8 мкг ДАГЕ на 0,5 мг маси сухого листя як внутрішній стандарт, якщо повинен бути проведений аналіз ТШХ-ПІД. Зразки гомогенізують за допомогою гомогенізатора для тканин ШТКА-ТОККАХ виробництва ІКА, після чого додають 500 мкл 0,1 М розчину КСІ. Зразки обробляють вихровим перемішуванням, центрифугують протягом 5 хвилин, і нижню фракцію збирають. Верхню фракцію, що залишилася, екстрагують повторно, додаючи 600 мкл хлороформу, обробляють вихровим перемішуванням (і центрифугують протягом 5 хвилин. Нижню фракцію витягують і об'єднують в пул з раніше зібраною. Ліпіди сушать в потоці нітрогену і ресуспендують в 2 мкл хлороформу на мг сухої маси листя. Загальні ліпіди листя М. їабасит або зразків листя витягують, як розкрито вище, з деякими модифікаціями. Якщо 4 або 6 листових дисків (кожен з площею поверхні приблизно 1 сме) об'єднують, то використовують 1,6 мл розчинника ХМК, а якщо об'єднують З або менше листових дисків, то використовують 1,2 мл ХМК. Ліофілізовані тканини листя гомогенізують в пробірці Епендорфа, що містить металеву кулю, за допомогою гомогенізатора для тканин Кеїсні (Оіадеп) протягом З хвилин при частоті 20/секунду.
Відділення нейтральних ліпідів методами ТШХ і переметилування
Відомі об'єми загальних екстрактів листя, наприклад, 30 мкл, вміщують на пластинку ТШХ силікагель 60 (1 х 20 см) (МегскК КоаА, Німеччина). Нейтральні ліпіди фракціонують на різні типи і відокремлюють від полярних ліпідів методом ТШХ в урівноваженій ємності для проявлення, що містить систему розчинників гексан/діетиловий етер (ДЕЕ)/оцтова кислота (70:30:1, об/об/об).
Смуги ТАГ візуалізують за допомогою скроплення примуліном, маркують в УФф-світлі, зішкрябають із пластини ТШХ, переносять у флакони для ГХ місткістю 2 мл і сушать за допомогою Ма. Додають 750 мкл 1 н метанольного НСІ (ЗиреїЇсо апа|їуйсаЇ, США) в кожен флакон, разом з відомою кількістю С17:0 ТАГ як внутрішнього стандарту, в залежності від кількості ТАГ у кожному зразку. Звичайно, додають 30 мкл внутрішнього стандарту для зразків із низьким вмістом ТАГ, тоді як у разі зразків з високим вмістом ТАГ застосовують до 200 мкл внутрішнього стандарту.
Зразки ліпіду для аналізу складу жирних кислот методом ГХ переметилують шляхом інкубації сумішей при 80"С протягом 2 годин у присутності метанольного НОСІ. Після охолодження зразків до кімнатної температури, реакцію зупиняють, додаючи 350 мкл него.
Метилові естери жирних кислот (МЕЖК) витягують із суміші, додаючи 350 мкл гексану, обробляючи вихровим перемішуванням і центрифугуючи із швидкістю 1700 об/хв протягом 5 хвилин. Верхню гексанову фракцію збирають і переносять у флакони для ГХ з конічними вставками місткістю 300 мкл. Після випаровування, зразки ресуспендують у 30 мкл гексану. По 1 мкл вводять у прилад для ГХ.
Кількість індивідуальних і загальних жирних кислот (ЗЖК) у ліпідних фракціях визначають за допомогою ГХ, визначаючи площу кожного піку, та обчислюючи шляхом порівняння із площею піку для відомої кількості внутрішнього стандарту. Вміст ТАГ у листі обчислюють як суму гліцерольних і жирних ацильних фрагментів у фракції ТАГ, із застосуванням співвідношення: бо мас. ТАГ - 100 х ((41 х загальна кількість моль МЕЖК/З) « (загальна кількість МЕЖК в г - (15 х загальна кількість моль МЕЖК)))/грам сухої маси листя, де 41 і 15 являють собою молекулярну масу гліцерольного фрагмента і метильної групи, відповідно.
Капілярна газорідинна хроматографія (ГХ)
МЕЖК аналізують методом ГХ з застосуванням ГХ Адіїепі Тесппоіодієх 7890А (Пало-Альто,
Каліфорнія, США), обладнаного колонкою ЗСОЕ ВРХ7О (7095 ціанопропіл полісилфенілен-
Зо силоксан) (30 м х внутрішній діаметр 0,25 мм, товщина плівки 0,25 мкм), ПІД, інжектором з розщепленням/без розщеплення та аутосемплером з інжектором Адіїепі ТесппоЇодіеє5 7693
Зеге5. Гелій використовують як газ-носій. Зразки вводять у режимі розщеплення (співвідношення 50:1) при температурі печі 150 "С. Після інжекції температуру печі утримують на рівні 150 "С протягом 1 хвилини, потім підвищують до 210 "С із швидкістю З "С/хвилину, і в кінці до 240 "С із швидкістю 50 "С/хвилину. Піки кількісно вимірюють за допомогою програмного забезпечення Адіїепі Тесппоїодіеє Спетоеїайоп (Кем В.04.03 (16), Пало-Альто, Каліфорнія,
США), на базі відповіді відомої кількості зовнішнього стандарту СІ С-411 (МиспескК) і внутрішнього стандарту С17:0-Ме.
Кількісне визначення ТАГ за допомогою Іайго5сап 1 мкл екстракту ліпіду вміщують на один Спготагоа-5іїЇ для ТШХ-ПІД Іаїгозсаптм (Мії5ибБівні
Спетіса! Меадієпсе Согрогайоп, Японія). Далі стійку Спготагод переносять в урівноважену ємність для проявлення, що містить 70 мл системи розчинників гексан/СНеіІз/2- пропанол/мурашина кислота (85:10,716:0,567:0,0567, об/об/060/06). Після інкубації протягом 30 хвилин, стійку СпготагоЯй сушать протягом З хвилин при 100 "С і негайно сканують на аналізаторі ТШХ-ПІД Іаїйгозсап МК-65 (МіїзиБізпі Спетіса! Медієпсе Согрогайоп. Японія). Площу піків внутрішнього стандарту ДАГЕ і ТАГ інтегрують за допомогою програмного забезпечення для інтеграції 5ІС-4801І (версія: 7.0-Е, БІС Зузіет іпзігитепів Со., І ТО, Японія).
Кількісне визначення ТАГ здійснюють в дві стадії. Спочатку у всіх зразках сканують ДАГЕ для корекції виходів екстракції, після чого концентровані зразки ТАГ вибирають і розбавляють.
Далі, кількість ТАГ визначають у розбавлених зразках другим скануванням відповідно до зовнішнього калібрування, використовуючи гліцеролтрилінолеат як зовнішній стандарт (Зідта-
Аагісн).
Кількісне визначення ТАГ у зразках листя за методом ГХ
Площу піку індивідуального МЕЖК спочатку коректують на базі площі піку відомих кількостей таких же МЕЖК, присутніх у комерційному стандарті І С-411 (МО-СНЕК РРЕЕР, Іпс., США).
Скоректовані значення площі піку використовують для обчислення маси кожного МЕЖК в зразку, в порівнянні з внутрішнім стандартом. Оскільки масло зберігається в основному у формі
ТАГ, кількість масла обчислюють на базі кількості МЕЖК в кожному зразку... Загальну кількість моль гліцеролу визначають, обчислюючи кількість моль МЕЖК, з подальшим поділом загальної бо кількості моль МЕЖК на 3. Кількість ТАГ обчислюють як суму гліцерольних і жирних ацильних фрагментів, з застосуванням формули: 95 мас. масла - 100 х ((41 х загальна кількість моль
МЕЖК/З) «з (загальна кількість г МЕЖК - (15 х загальна кількість моль МЕЖК)))/грам сухої маси листя, де 41 і 15 являють собою молекулярну масу гліцерольного фрагмента і метильної групи, відповідно.
Приклад 2. Збільшення вмісту ліпіду у вегетативних частинах Місоїїапа репінатіапа
Генетичну конструкцію руР3502 застосовують для одержання стабільно трансформованих рослин Місоїйапа бБепіпатіапа за допомогою протоколу опосередкованої Аагобасієгійт трансформації, як описано у М/ЛО2013/096993 для Місоїапа іарбасит. Відбирають трансгенні рослини з резистентністю до канаміцину і вирощують в теплиці до стану зрілості. Зразки листя збирають на стадії зав'язування насіння і ліофілізують. Визначають загальний вміст жирних кислот (ЗЖК) (95 від сухої маси) і склад загального ліпіду у зразках після екстракції відповідно до
Відн ї Суег (1959), а також вміст і склад фракції триацилгліцеролів (ТАГ). Дані наведені у Табл. 2 і Табл. 3. Зразок листя з найвищим вмістом масла одержаний від трансгенної рослини Ме16, вміст ЗЖК у якій склав 33 95 мас. Даний зразок містив 22,5 95 мас. ТАГ (у перерахунку на суху масу).
Спостерігається виражена кореляція між зміною складу жирних кислот і вмістом ЗЖК або
ТАГ. Рівень олеїнової кислоти (С18:11-9), підвищується із збільшенням вмісту ЗЖК і ТАГ, таким чином, що вона є переважаючою жирною кислотою в листі з високим вмістом ТАГ, наприклад, що містить 66,8 55 ЗЖК і 66,9 95 жирних кислот ТАГ у листі з найвищим вмістом ТАГ. Подібні кореляції спостерігаються для інших жирних кислот, наприклад, рівні АЛК знижуються до 4,9 Фо
ЗЖК і 3,9 95 ТАГ у листі з найвищим вмістом ТАГ. Крім того, спостерігається виражена кореляція між рівнями С16:3 і вмістом як ЗЖК, так і ТАГ, причому вміст С16:3 істотно знижується у зразках з високим вмістом ЗЖК і ТАГ.
Дві рослини з числа рослин із високим вмістом масла, Мо14 і Мо1б6, були додатково проаналізовані в ході фази старіння листя, коли листя почало жовтіти (Табл. 4 і Табл. 5).
Незважаючи на те, що зміна загального вмісту жирних кислот була незначною у зразку з найвищими показниками (32,9 95 проти 33 95), кількість ТАГ підвищилася до 32,6 95. У вказаних зразках ліпіди листя практично повністю складалися із ТАГ.
Таблиця 2
Склад і кількість загальних жирних кислот (ЗЖК) (95 від сухої маси) в листі рослин Місоїйапа репінатіапа, стабільно трансформованих Т-ДНК із конструкції руР3502. Зразки додатково містили 0,1-0,3 95 С14:0 ї 0,0-0,7 ую б207
Зразок С160 Сів С163 Сів Сів ТВО ство СТ83п 200 С220 Сг ЖК роль 1 249 09 6о 42 117 00 26 464 08 06 08 06 2 23,9. .09 120 48 134 00 2,8 391 БмБМБО,9 0,6 1,3 0,6
З 241 09 104 4,7 105 ДЖ Ю Ф:00 2,8 43, 70,9 0,6 1,2 0,5 4 240 09 100 4, 13, 00 2,5 408 10,9 0,6 1,2 0,7
Тране 7. 186 02 23 42 358 03 47 280 23 15 13 24 8 16,3. 0,6 0,7 49 629 0,7 41 6,6 1,4 0,7 0,6 (21,6 11 259. 12 2,6 32 47,3 0,8 31 13,93 13 0,7 0,1 14,7 1224,71,1 1,6 32 460 Щ 1/1 31 168.11 0,6 0,2 3,8 13. 203 06 211 47 150 -О0 2,5 334 12 0,0 0,6 12 14 156 0,5 0,6 51 644 0,6 2,7 6,5 1,68 0,9 0,7 213 15 17,7 (04 0,2 56 60, 04 2,7 7,5 2,2 12 0,9 210 16 15,3. ДЩ 0,6 0,6 5,8 668 10,6 1,7 4,9 1,7 0,8 0,7 33,0 17 2555..0,0 74 42 8,6 0,0 3, 488 0,7 0,0 0,9 1,4 18 27,0. Д БОУ9,6 5,7 2,5 6,7 2,0 51 487 БО05 0,4 0,6 2,6 19. 211 0,6 21 52 359 10 100 208 1,5 0,9 0,2 4,3 20 154 1,8 4,6 34 105ЙЖ ЮФ 000 5,6 564 068 0,5 0,8 2,3 21 16,35 (10,7 6,6 36 102 0,0 101 497 14 0,8 0,7 1,6
Коо)
Таблиця З
Склад жирних кислот і кількість ТАГ (95 від сухої маси) в листі рослин Місоїапа репіпатіагпа, стабільно трансформованих Т-ДНК із конструкції руР3502. Зразки додатково містили 0,1-0,3 90
С14:0 ї 0,0-0,7 96 б20:1 0 Вразок ство |ствл |ствіз|ство|стви 167 ство |218З. с20х0| сг2о | сг (6 ТАГ бо! |577|00 оо ве тя) 0000 |2во| оо оо оо о 12 16171 00/78/8175 001|719/|190| 000000 | ом 1316959 001|00187/|60 0000/1551 00 | 00 | 00 | ол 114 15921 00|71711/76188 00 | 21 |т182| 13 | 00 | 17 | бе 178 11731 07|02|53|644| 08 | 29 | 51 | 15 07 | 06 | 154 17111289 1,502 | 34 499) То | 26 | 93 | 13 | 07 | 08 | 97 1712 127014 |03| 34 |514| 14 | 26 | 96 | 12 | 06 | 07 | Бе 1713 1597 713 | 40 | 55172) 00 | 24 |279| 10 | 00 | 06 | 06 114 1162 06/02 | 53 |651/| 06 | 28 | 52 | 18 | 09 | 07 | 196 1715/1184 04 | 01596004 |29 | 58 | 23 | 13 | ТО | 149 1716 1159 0,702 | 59 6691 07 | 21 | 39 | 17 | 08 | 07 | 225 1171298 00100 | 42 |1351| 00 | 51 |474| 00 | 00 | 00 | ом 1718 1402/5900 | 32 |108/| 20 | 56 |324| 00 | 00 | 00 | 06 1719 246 70/07 | 68 |436| 11 | 94 | 87 | 19 | 10 | 08 | 37 1720 12311 00 | 71 | 60 |186| 00 | 76 |415| 21 | 00 | 00 | 06 і 121 128100 | 25 | бе |199| 00 |1151|277| 27 | 13 | 00 | 07
Таблиця 4
Склад і кількість (95 від сухої маси) загальних жирних кислот (ЗЖК) у листі рослин Місойапа репінатіапа, стабільно трансформованих Т-ДНК із конструкції руР3502, на стадії жовтого листя.
Зразки додатково містили 0,1-0,3 90 С14:0 ї 0,0-0,7 96 Сб20:1 , , , , 3 | С1871 зе» С18:3 , , , Чо 0 Вразою С16:0|С16:1|С16:31С18:0| С18:1 а С18:2 пЗ б20:0| 22:0 |С24:0 ЗзЖК бо" |259|09 69 42 пи) оо в ява ов ов ов ов роль сена| 2 || ово во ват ов ол ве) м) 00) ов | во
І 116 11741 06/08) 70 |647| 07 | ол | 55 19 | 00 | 06 | 325
Таблиця 5
Склад жирних кислот і кількість (905 від сухої маси) ТАГ у листі рослин Місоїапа репінатіапа, стабільно трансформованих Т-ДНК із конструкції руР3502. Зразки додатково містили 0,1-0,3 90
С14:0 ї 0,0-0,7 96 б20:1 0 Вразою ство |сівл |ствіз|ство сіви 167 |ство|СТ8 20 С24:0 96 ТАГ бо" |3ви| 0000 то то) оо2е|лов ми оо оо о роль сені М 169) 05 02 55 62606 306519 09 06 277 і 116 1173107 | 02 | 64 |633| 06 | 22 | 55 | 18 | 08 | 06 | 326
Приклад 3. Підвищення вмісту ліпідів у вегетативних частинах рослини Місоїапа їарбасит
Конструкцію руРЗ5О2 раніше застосовували для трансформації Місойапа (іабасит (МИО2013/096993). Насіння, одержане від гомозиготної рослини Т1, трансформованої Т-ДНК із руР3502, що містить високий рівень ЗЖК і ТАГ, збирають і висівають з метою одержання нового покоління рослин-нащадків Т2, однорідно гомозиготних по трансгенах. Горщики розміщують в теплиці таким чином, що зріле листя рослин частково перекривається у формі типового куполу ("купол парашута"), як це відбувалося б при вирощуванні в полі, або максимально контактують із прямим сонячним світлом (форма без куполу). Зразки листя одержують від кожної рослини, що повністю виросла, на стадії зав'язування насіння, і ліофілізують. Вміст жирних кислот визначають для фракції ТАГ (Табл. б) після екстракції відповідно до Відн і ЮОуег (1959) загальних ліпідів із зразків. Рівні ТАГ у тканині зрілого листя рослин без куполу звичайно є вищими, ніж у рослинах із куполом, з максимальним зареєстрованим вмістом ТАГ у листі 20,6 Фо від сухої маси листя.
Таблиця 6
Вміст ТАГ (95 від сухої маси) в тканині зрілого листя трансгенних рослин-нащадків Т2 (Лінія 49), трансформованих Т-ДНК руРЗ3502, в порівнянні з диким типом (дт).
Рослина Умови вирощування Вміст ТАГ Рослина Умови вирощування Вміст ТАГ дт1 Купол 0,0 дт4 Без купола 0,0 дт2 Купол 01 дт5 Без купола 0,0 дтЗ Купол 01 49,6 Без купола Б 49,1 Купол 64 49,7 Без купола 5,6 49,2 Купол 3,6 49,8 Без купола 14,7 49,3 Купол 3,7 49,9 Без купола 6,3 49,4 Купол 1,9 49,10 Без купола 6,7 49,5 Купол 22 49,11 Без купола 19,5 49,12 Без купола 16,4 49,13 Без купола 20,6 49,14 Без купола 15,7 49,15 Без купола 15,1 49,16 Без купола 6,3 49,17 Без купола 18,6
Приклад 4. Підвищення вмісту масла у вегетативних частинах однодольних рослин
Химерні конструкції ДНК розроблені таким чином, щоб підвищити вміст масла в однодольних рослинах, наприклад, рослині С4 5. Бісоїог (сорго), шляхом експресії комбінації генів, що кодують МУКІ!1, ГЕС1 7. тау5 (номер доступу ААКУ5562; 5ЕБЕО ІЮ МО: 155), ОБАТ і олеозину у трансгенних рослинах. Декілька пар конструкцій для біолістичної котрансформациї розроблені і одержані шляхом лігування-клонування рестрикційного ферменту, як указано нижче.
Генетична конструкція рОІЇ/ 136 є бінарним вектором, що містить три касети експресії однодольних, а саме ген селекційного маркера, який кодує фосфінотрицин ацетилтрансферазу (ФАТ) для селекції рослини, другу касету для експресії ОСАТ і третю для експресії олеозину.
Спочатку одержують рОР136 ампліфікацією промотору гена актину з Огула заїма (МеЕїЇгоу із співавт., 1990) та інсерції його як фрагмента тупого-СіаІ в РОКЕО4 (Соши із співавт., 2007) з одержанням рої 094. Далі одержують рої 095 шляхом інсерції версії гена олеозину 5езатит іпаїсит, кодон-оптимізованого для експресії в однодольних, у рої 094 на сайті Крпі. рої 093 одержують клонуванням версії кодон-оптимізованого для експресії в однодольних гена ОСБАТ2га
Зо треїорвів гатаппіапа (І агдігаваї! із співавт., 2008) як фрагмента Зтаї!-Крпі у вектор, що вже містить промотор гена убіхітину 7єа тауб5. Далі одержують роїЇЇ/134 клонуванням касети експресії МОЇ! ОСАТтга з рої 093 в рої 095 на сайтах Мої!. рОІІ 141 одержують інсерцією гена селекційного маркера, що кодує ФАТ, як фрагмента Ватні-засі у вектор, що містить промотор убіхітину 7. тауб5. В кінці одержують рої! 136 клонуванням касети експресії убіхітину 7. тауз:ФАТ як фрагмента тупого-Авсі в 2гаІ-Авсі ро1І096. Генетична конструкція ро!1І-136, таким чином, містить наступні касети експресії: промотор актину О. взаїїмаолеозин 5. Ііпаісит, промотор убіхітину 7. тауз:ОсАтТга М. гатаппіапа і промотор убіхітину 7. тауз:ФАТ.
Подібний вектор роІЇ/ 197, що містить МРТІІ замість ФАТ, конструюють субклонуванням касети убіхітину 7. таубз:МРТІІ з РОКМ як фрагмента НіпаПІ-таї! в сайти Авсі (тупі) і НіпапПІ руР3343. Після даного одержаний вектор, рОІї 196, розщеплюють за допомогою Ніпані (тупі) і
АдеІ. Одержаний фрагмент розміром 3358 пар основ клонують у сайти 2таІ-Аде! рої 134 з одержанням рої1-197.
Розроблений і одержаний набір конструкцій, що містять гени, які кодують УУКІЇ 7. таув (2тУуУКІ) або фактори транскрипції ГЕС1 (7ті ЕС1) під контролем різних промоторів, для біолістичної котрансформації в комбінації з роОїІ/136, з метою оцінки впливу активності промотору і специфічності по відношенню до клітини на функціонування УУКІ! або І ЕС1, або обох у разі комбінації, при експресії у вегетативних тканинах рослини С4, такої як сорго.
Вказаний окремий набір конструкцій не містить гена селекційного маркера, за винятком ро! 333, що містить МРТІЇ як селекційний маркер. Різноманітні досліджувані промотори були такими, як указано нижче. Промотор гена убіхітину 7. Мауз (ратИШБі) являє собою активний конститутивний промотор однодольних, тоді як про розширений промотор Саму 355 (е355), Що містить подвійну ділянку енхансера, повідомлялося, що він призводить до нижчих рівнів експресії трансгена (огляд у Сігіуазпапкаг і Змаїпізгее, 2009). Тоді як промотор гена фосфоєнолпіруваткарбоксилази (р2тптРЕРС) 7. таух є активним у мезофільних клітинах листя (МаїхиоКа і Міпаті, 1989), місці фотосинтезу у видах рослин С4, промотор гена маленької субодиниці 7. тауз Кибрізхсо (рат) є специфічним для шару клітин обкладинки судинних пучком (Мотига із співавт., 2000; І ергип із співавт., 1987), тобто клітин, у яких має місце фіксація карбону в рослинах С4.
Експресія гена 7. тауб5, який кодує 5ЕЕЇ цистеїнпротеазу (номер доступу Ау4і94982) ідентифікована як подібна до експресії специфічного для старіння промотору 5АС12 А. ІПаійапа в ході розвитку рослини. Таким чином, промотор розміром 1970 пар основ з гена 5ЕЕ1 (ЗЕО ІЮ
МО: 216) був додатково вибраний для контролю експресії генів, які кодують фактори транскрипції МУКИ ії ГЕС1 7. таув. Далі, промотори з гена, який кодує білок "цинкового пальця"
АІ5АР АвєіІшгориз Ійогаїї5 (Веп Заадй із співавт., 2011; номер доступу 00885219; 5ЕО ІЮО МО: 217), і промотор з чутливого до сахарози гена АгкКоЇїсС А. гпі2одепез (уУоКоуата із співавт., 1994; номер доступу 00160187; ЗЕО ІЮ МО: 218) додатково вибрані для експресії 2тМУРІ1 в тканині стебла.
Таким чином, кожен із цих промоторів індивідуально приєднують у напрямку проти ходу транскрипції до ділянок, що кодують 2ТІМУМУКІ1 або 2ті ЕС, як указано нижче.
Зо Проміжний вектор, роОІЇ/100, спочатку одержують клонуванням послідовності, які кодує ММА 1 2. таув, і ділянки термінатору транскрипції/поліаденілування, фланкованих сайтами Авсі-Мсої, у такі ж сайти в бінарному векторі руР3343. Різні версії конструкцій для експресії МУКІ1 базуються на даному векторі і одержані клонуванням різних промоторів у рОїІЇ/ 100. роОІЇ/101 одержують клонуванням фрагмента Хпо1І-За!Ї, що містить промотор е355 з подвоєною ділянкою енхансера, в сайт Хної рої 100. роОІЇ 102 одержують клонуванням фрагмента НіпаПІ-Ам'тї! гена убіхітину 7. тауб5, що містить промотор, у сайти НіпапІ-Храї рОІ-100. рОІ-103 одержують клонуванням фрагмента НіпаПІ-Мсої, що містить промотор гена РЕРС 7. Мауз, у сайти НіпапІ-Мсої рої! 100. ро!ї104 одержують клонуванням фрагмента НіпаПІ-Ам/її, що містить промотор гена 55! 7.
Маух, у сайти НіпапІ-Ампі рої 100.
Синтезований синтетичний фрагмент, що містить ділянку промотору ЗЕЕТ1 7. таух, фланкований унікальними сайтами НіпапП-ХнпоЇ. Даний фрагмент клонують в напрямку проти ходу транскрипції по відношенню до ділянки, що кодує білок МУКІЇ 7. таув, використовуючи сайти НіпаПІ-Хної в роОІї100. Результуючий вектор позначений як ро 329. Синтезована ділянка промотору АІБАР А. ІШогаїї5, що містить синтетичний фрагмент, фланкований унікальними сайтами ХпоІ-Храм. Даний фрагмент клонують в напрямку проти ходу транскрипції по відношенню до ділянки, яка кодує МУКІ1 7. тауз5, використовуючи сайти ХраІ!І-ХпоїЇ в ро1100.
Результуючий вектор позначений як рої! 330. Синтезована ділянка промотору АгКоїЇС А. ппігодепе5, що містить синтетичний фрагмент, фланкований унікальними сайтами РерОМІ-ХНОЇ.
Даний фрагмент клонують в напрямку проти ходу транскрипції по відношенню до ділянки, яка кодує УММКІ1 7. тау5, використовуючи сайти РерОМІ-ХНоЇ в рої! 100. Результуючий вектор позначений як рої 335. В кінці, бінарний вектор (роО1ІІ-333), що містить касету експресії ЗЕЕ1 7. таувз:ті ЕС1І одержують в три стадії. Спочатку, вектор експресії 355:505 конструюють ампліфікацією ділянки, що кодує ЗИ5 із фланкуючими праймерами, що містять сайти АмІї і
Крпі. Далі одержаний фрагмент клонують в сайти 5реІ-Крпі рОРЗ3343. Результуючий вектор позначений як рГМ111. Далі ділянку 355 промотору рТМ111 замінюють промотором 5ЕЕ1 7. таув. На цій стадії послідовність 5ЕЕ1 7. тауз ампліфікують із застосуванням фланкуючих праймерів, що містять унікальні сайти Ніпай ії ХпоЇ. Результуючий фрагмент розрізають придатними рестрикційними ферментами і субклонують у сайти заїІ-Ніпаш ртм111.
Результуючий вектор позначений як рої 332. Далі послідовність, що кодує 2тіЕС1,
ампліфікують із застосуванням фланкуючих праймерів, що містять сайти Моїй і ЕсоВУ.
Одержаний фрагмент субклонують у відповідні сайти рої 332 з одержанням рої 333.
Готують ДНК для біолістичної трансформації, розщеплюючи скелети векторів рої101, ро! 102, рої/103, роОїІ/104, рої 197, рої! 329, рої 330, рої! 333 їі роїІ/ 335 рестрикційними ферментами, з подальшим виділенням на гелі. Потім ДНК ро1197 змішують з ДНК ро1-101, ро!Ї/102, рої103, рої/104, рої/329, рої 330, рої/333 або рої/335 і здійснюють трансформацію експлантів 5. рісоїог за допомогою біолістично опосередкованої трансформації.
Як альтернатива, трансформацію за допомогою конструкцій для експресії таких же комбінацій генів здійснюють окремо або у формі котрансформації шляхом опосередкованої Адгобасієгійт трансформації (Сигеї із співавт., 2009; УмМи із співавт., 2014).
Трансгенні рослини регенерують і відбирають резистентні до антибіотиків. У випадку, якщо двома конструкціями котрансформують одного і того ж трансформанта, спостерігається підвищений вміст масла в тканинах трансгенних рослин, що не відносяться до насіння.
Химерні конструкції ДНК для опосередкованої Адгобасієгішт трансформації застосовуються для трансформації 7єса тауз (кукурудза), як описано соціа із співавт., (1991). Якщо коротко, експланти верхівок пагонів культивують з трансгенною Адгобасієгішт протягом двох днів перед переміщенням на солоне середовище МС, що містить канаміцин і карбеніцилін. Після декількох кол субкультивування, спонтанно формуються трансформовані пагони і коріння, та експланти переносять в грунт. Крім того, конструкції застосовуються для трансформації Ногдеит уцїЇдаге (ячмінь) і Амепа заїїма (овес) із застосуванням способів трансформації, відомих для вказаних видів. Якщо коротко, у разі ячменю застосовують культури Аадгобасіегійт для трансформації клітин у незрілих ембріонах ячменю (сорт СоЇдеп Рготізе), відповідно до опублікованих способів (Тіпдау із співавт., 1997; Вагіей із співавт., 2008) з деякими модифікаціями у тому, що ембріони завдовжки від 1,5 до 2,5 мм виділяють з незрілих зернівок і видаляють ембріональні осі. Одержані експланти культивують протягом 2-3 днів із трансгенною Адгобасієгішт, а потім культивують у темряві протягом 4-6 тижнів на середовищах, що містять тиментин і гігроміцин для генерації ембріогенного калюсу, після чого переносять у перехідні середовища в умовах слабкої освітленості на два тижні. Потім калюси переносять у регенераційні середовища, щоб дозволити регенерацію пагонів і коріння, перед перенесенням регенерованих паростків у грунт.
Зо Трансформовані рослини одержують і вирощують до стадії зрілості в теплиці.
Приклад 5. Підвищення вмісту масла у дводольних рослинах
Вміст масла у дводольних рослинах виду ТийоЇїшШт гереп5 (конюшина), бобових, звичайно застосовуваних як пасовищна культура, підвищується при експресії комбінації генів М/КІ1, ОСАТ і олеозину у вегетативних частинах. Конструкцію рОР3502 застосовують для трансформації Т. гереп5 шляхом опосередкованої Адгобасіегішт трансформації (Гагкіп із співавт., 1996). Якщо коротко, генетичну конструкцію руР3502 вводять в А. іштеїасіеп5 за допомогою стандартної процедури електропорації. Бінарний вектор додатково містив ген селекційного маркера
З55:МрНЇ в межах Т-ДНК. Трансформовані клітини Адгобрасієїйшт вирощують на твердих середовищах ЛБ з додаванням канаміцину (50 мг/л) і рифампіцину (25 мг/л) та інкубують при 28 7С протягом двох днів. Одиничну колонію використовують для ініціації свіжої культури. Після 48 годин енергійного культивування, клітини Адгобасієгійт застосовують для обробки сім'ядоль
Т. терепз (сорт. Наїга), вирізаних з набряклого насіння, як описано І агкіп із співавт. (1996). Після сумісного культивування протягом трьох днів експланти обробляють 25 мг/л канаміцину, щоб відібрати трансформовані пагони, а потім переносять в середовище для коренеутворення для формування коріння, перед перенесенням в грунт.
Шість трансформованих рослин, що містять Т-ДНК із руР3502, були одержані і перенесені в грунт в теплиці. Підвищений вміст масла спостерігався у тканині деяких з рослин, що не відноситься до насіння, причому одна рослина продемонструвала підвищення рівнів ТАГ у листі більш ніж у 4 рази. Такі рослини є придатними як корм для тварин, наприклад, шляхом вирощування рослин на пасовищах, що забезпечує харчування з підвищеним вмістом енергії на одиницю маси (щільність енергії) і приводить до підвищення темпів приросту у тварин.
Додатково, конструкцію руР3502 застосовують для трансформацію інших бобових рослин, таких як люцерна посівна (Медісадо заїїма) і люцерна усічена (Медісадо ігипсаїіа), за способом
ММгіднЕ із співавт. (2006) з одержанням трансгенних рослин із підвищеним вмістом ТАГ у вегетативних частинах. Були одержані три передбачувані трансгенні рослини М. ігипсашіа.
Трансгенні рослини придатні як пасовищна культура або як сіно або силос як джерело харчування для тварин, таких як велика рогата худоба, вівці і коні, забезпечуючи підвищену щільність енергії в кормі.
З метою підвищення вмісту масла в насінні бобових, синтезований фрагмент ДНК, що бо містить комбінацію двох химерних генів, а саме (а) першого химерного гена, який кодує УК! А.
Інаійапа, що експресується промотором запасного білка фазеоліну бета-типу Рназеоіив мпцідагів, і 5 НТУ плюс (Б) другого химерного гена, який кодує ОСАТІ А. ІПаіІйапа, що експресується промотором віциліну Рівит займит і 5 НТУ. Фрагмент ДНК вставляють у бінарний вектор рОКЕО4, що містить химерний ген, який кодує олеозин, для одержання конструкції Т-ДНК, що містить три химерні гени і ген селекційного маркера (Фіг.2), яку застосовують для трансформації І иріпи5 апоаивійоїїшв5, іншої бобової рослини, за способом, який описаний Рідеаїге із співавт. (1997). Якщо коротко, експланти верхівок пагонів Ї. апдивійоїш5 культивують з трансгенною Адгобасіеййт перед ретельним зволоженням розчином канаміцину (2 0 мг/мл) і перенесенням на регенеруюче середовище, що не містить канаміцину. Множинні пагони пазух, що розвиваються з верхівок пагонів, вирізують, вміщують на середовище, яке містить 5 0 мг/л канаміцину, і пагони, що вижили, переносять на свіже середовище, яке містить 5 0 мг/л канаміцину. Потім здорові пагони переносять в грунт. Гени на Т-ДНК експресуються в клітинах трансформованих рослин, підвищуючи вміст масла у вегетативних тканинах і насінні. Додатково застосовують специфічний для насіння промотор, що управляє геном УМУКІ!1, з метою підвищення вмісту масла у трансгенному насінні І иріпив.
Крім того, конструкцію застосовують для трансформації Сіусіпе тах, як описано 2Вапа із співавт. (1999), з одержанням трансгенних рослин сої з підвищеним вмістом ТАГ у насінні. Були одержані трансгенні рослини, що продемонстровано ПЛР на ДНК, одержаній із зразків рослин.
Рослини вирощували до стадії зрілості і збирали урожай насіння. Очікується, що вміст масла в насінні буде підвищеним за даними неруйнуючого ЯМР.
Друга генетична конструкція для підвищення вмісту масла в насінні люпину і сої сконструйована шляхом синтезу інсерції ДНК, що містить три касети експресії генів, а саме першої, містить промотор В-конгліциніну Сіусіпе тах, що експресує ОСАТ2А ОМтреїорзів гатаппіапа, другої, містить промотор КТіЗ Сіусіпе тах, що експресує МУКІ1 А. ІНаїїапа, і третьої, містить промотор Д-конгліциніну Сіусіпе тах, що експресує МОАТ2 Мив тивзсиціи5. Фрагмент
ЗБП-Ре даної інсерції клонують в бінарний вектор рОКЕО4 на сайті Рой, з одержанням рУРЗ569. Версію без гена МОАТ2 одержують, клонуючи фрагмент ЗБІИ-5улаІ меншого розміру в рОКЕО4 на сайтах ЕсоНУМ-Рзії, з одержанням руРЗ3570, Крім того, одержані версії, що містять тільки ген М/ВІ1 і тільки ген ОСАТЗ2А. Вказані бінарні вектори застосовують для трансформації
Зо Сіусіпе тах з одержанням трансгенного насіння. Вміст масла в насінні первинних трансформантів перед посівом аналізують неруйнуючим ЯМР, щоб одержати насіння 12.
Версія руР3569, придатна для трансформації люпіну, одержана ПЛР ампліфікацією касет експресії МУКІ1 ї ОСАТЗ2А в одиничному ампліконі, адаптованому за допомогою рестрикційних сайтів Мої. Фрагмент МоїЇ клонують в руР3416 на сайті РерОМІ, з одержанням бінарного вектора руРЗб678, що містить ген селекційного маркера ФАТ.
Приклад 6. Експерименти для підвищення вмісту масла у вегетативних частинах рапсу
Два бінарних вектори експресії застосовують для трансформації В. пари (сорт Оскар) з метою вивчення впливу на акумуляцію ТАГ в насінні та/або вегетативних тканинах. Спочатку конструюють плазміди руР3414 шляхом інсерції послідовності, що кодує кодон-оптимізований білок МУКІ! А. Паїіапа, в бінарний вектор 355-РОКЕО4, який містить порожню касету експресії 355. Таким чином, Т-ДНК р.ОРЗ414 містить кодон-оптимізовану версію фактору транскрипції
М/ВІТ А. ІПаїйапа під контролем конститутивного промотору 355. Тканину листя 11 незалежно трансформованих саджанців В. пари ТО, трансформованих руР3414, як описано у Прикладі 1, кожен зразок якої містить підвищені рівні ТАГ, порівнюють з рослинами, трансформованими порожнім вектором (РОКЕО4). Однак, у жодному з випадків рівень ТАГ не перевищував 1 95.
Максимальні рівні були знайдені в лінії 31, яка містила до 0,58 95 ТАГ, в перерахунку на суху масу. Вміст масла в трансгенному насінні Т1 не був істотно підвищеним, в порівнянні з насінням дикого типу (Оскар) і трансформованим порожнім контрольним вектором. Насіння Т1 трьох ліній, що демонструють найвищі рівні ТАГ у тканині листя, регенероване на середовищі МС, що містить З 9о сахарози. Не спостерігалося різниці у проростанні через 5 і 8 днів, в порівнянні з нетрансформованим контролем (Оскар).
У спробі додаткового підвищення рівнів ТАГ у вегетативних тканинах В. пари, застосовують другий вектор, руРЗ3502 (Маппегске із співавт., 2014), для трансформації В. парив (сорт Оскар).
Рівні ТАГ кількісно визначають у зразках трансгенного листя, одержаного перед цвітінням.
Однак, вміст ТАГ додатково не підвищується, і склад жирних кислот не відрізняється від нетрансформованих контрольних рослин на такій же стадії росту.
Результати експериментів із В. пари5, описаних у даному Прикладі, які забезпечують вміст
ТАГ у листі менш ніж 1 95, абсолютно суперечать наведеним у Прикладах 2 і З для видів
Місойапа, які забезпечують близько 20-3095 ТАГ. Автори винаходу ретельно вивчали ці бо результати, шукаючи пояснення різниці між видами. Ідентифіковано декілька відмінностей між видами. Одна з відмінностей, яку винахідники прийняли як забезпечуючу суттєву різницю, полягала у належності Вгазвзіса паривх до так званих видів 16:3, тоді як вид Місоїйапа відноситься до так званих видів 18:3. Це пов'язано з відносним внеском так званих прокаріотних та еукаріотних шляхів у синтез ліпіду в пластидах (Фіг. 1), і, таким чином, на думку авторів винаходу, з кількістю ДАГ, доступною для синтезу ТАГ. Це навело авторів винаходу на думку про те, що модель з модифікацією співвідношення синтезу жирних кислот через еукаріотний шлях відносно прокаріотного шляху, наприклад, зменшення акумуляцію 16:3 відносно 18:3, змінила б рівень ТАГ, які акумулюються в рослинних клітинах або фотосинтезуючих мікробних клітинах. Вони очікували, що модифікація, яка змінить баланс на користь еукаріотного шляху, забезпечуватиме перевагу з точки зору рівнів акумуляції ТАГ, особливо у так званих рослинах 16:3. Якщо коротко, для перетворення клітин "16:3" в більш подібні до клітин "18:3".
Авторами винаходу висунута гіпотеза про те, що присутність С18:1-АПБ у пластиді, яке перешкоджає інгібуванню АККази за механізмом зворотного зв'язку, могла б бути більш вираженою у рослинах 16:3 за рахунок синтезу і утримання жирних кислот у пластиді за прокаріотним шляхом. І навпаки, ними висунута гіпотеза про те, що рослини С18:3 здатні до акумуляції вищих рівнів ТАГ у вегетативних тканинах за рахунок підвищеного експорту С18:1 із пластид для постачання еукаріотного шляху. Як показано у Прикладах 2-4 даного документу, це спостерігалося у таких видах, як М. їарбасит і М. Бепіпатіапа, в яких присутнє вище співвідношення пластидних ліпідів С18:3/С16:3, відносно таких видів, як В. пари5, що містять низькі рівні С18:3 у пластидних ліпідах. Дана модель, згідно гіпотезі авторів винаходу, пояснила б, чому стабільна трансформація генами експресії МУКІ - ОСАТ «ж олеозину з вектора руР3502 приводила до високих рівнів акумуляції ТАГ та екстенсивної модифікації складу жирних кислот як у М. тарасит, так і в М. рРепінатіапа. І навпаки, трансформація таким же вектором В. пари приводила тільки до незначного підвищення акумуляції ТАГ і невеликої модифікації складу жирних кислот. Дану модель досліджували, як описано нижче.
Приклад 7. Модифікація пластидної експресії ОРАТ
Підвищена експресія пластидної СРАТ у рослинних клітинах
Цілий ряд експериментів виконувався для перевірки гіпотези про те, що присутність високоактивного прокаріотного шляху 16:3 у рослині (тобто так званій рослині 16:3)
Зо забезпечувала б значно нижчі рівні ТАГ у вегетативних тканинах при введенні комбінації генів на руРЗ502, відносно рослин 18:3. Такі експерименти описані у наступних Прикладах. Спочатку, автори винаходу оцінювали, чи може підвищена експресія пластидної СОРАТ перешкодити високому рівню акумуляції ТАГ у трансгенному М. бБепійатіапа, збільшуючи потік у прокаріотному шляху.
Кодуючу ділянку для експресії пластидної СРАТ Агарідорвзів ІНаійапа, АТ51 (Мізпіда із співавт., 1993), ампліфікують методом ОТ-ПЛР із загальної РНК А. (Паїйапа і клонують як фрагмент ЕсоВІ-РвіїЇ в бінарний вектор експресії р)РЗ3343 під контролем промотору 355, з одержанням конститутивного вектора експресії роО1І 098. Вплив підвищеної експресії пластидної
СРАТ на генетичному фоні високого вмісту масла в листі визначали шляхом інфільтрації тканини листя з високим вмістом масла химерним вектором ро!1098. Тканину листя з високим вмістом масла генерують сумісною інфільтрацією бінарними векторами експресії М/КІ1 і ОСАТ (Приклад 1) або інфільтрацією рої 098 листя рослини Місоїіапа, стабільно трансформованої Т-
ДНК із руР3502 або іншого вектора високого вмісту масла. Очікується, що вміст масла буде знижений в інфільтрованих плямах на листі, що коекспресують ген, який кодує АТе1. Це визначають методом аналізу ЗЖК і ТАГ як частки від сухої маси зразка. Додатково, це визначають шляхом спостереження за інкорпорацією міченого ацетату в жирні кислоти, продуковані мікросомами або листовими лізатами, одержаними з інфільтрованих плям на листі.
Акумуляція масла в Агарідорзів ІпаІйапа з мутантною пластидною ОРАТ
Мутант аї51 А. ІПаїїапа містить руйнівну мутацію в гені, що кодує пластидну ОРАТ, яка знижує активність пластидної ОРАТ до рівня тільки 3,8 95 від дикого типу (Кипбі із співавт., 1988). Рівні акумуляції ТАГ поза межами насіння, щонайменше у листі, стеблах і корінні, як у материнській А. ІПпайапа, так і в рослині з мутантом аїб! оцінюють і порівнюють. Т-ДНК конструкції руР3502 для підвищеної експресії комбінації генів, що кодують МУКІ!1, ОСАТ і олеозин, вводять шляхом трансформації в рослини обох генотипів. Комбінація генів у ТА-ДНК рУРЗ502 підвищує синтез жирних кислот в обох типах генетичного фону рослин. Однак, очікується, що у присутності мутанта аїб1 акумуляція ТАГ в середньому буде істотно вищою, ніж у трансгенних рослинах, одержаних від генотипу дикого типу (материнський), за рахунок зниження активності пластидної СРАТ і таким чином зменшення потоку жирних кислот в пластидний прокаріотний шлях. Співвідношення С16:3 і С18:3 жирних кислот істотно знижується бо в листі з мутантом аї51, як трансформованому, так і нетрансформованому.
Сайленсинг гена, який кодує пластидну ОРАТ в рослинних клітинах
На додаток до генетичної модифікації рослини введенням мутації в ген, що кодує пластидну
СРАТ, потік жирних кислот через прокаріотний шлях 16:3 може бути зменшений і, таким чином, підвищений вміст масла у вегетативних частинах шляхом сайленсингу пластидної СОРАТ. Це демонструється одержанням трансгенної касети, що містить конститутивний або специфічний для листя промотор, що експресує шпилькову РНК, відповідну ділянці гена, кодуючого пластидну СОРАТ вибраного виду. Як приклад, касету експресії шпилькової РНКІі одержують із застосуванням фрагменту ЗаїІ-ЕсоВУ послідовності КДНК пластидної СРАТ А. ІПаїїапа розміром 581 пара основ (ММ 179407, ЗЕО ІЮ МО: 177). Крім того, ділянка будь-якого гена, який кодує пластидну СОРАТ, послідовність якого є високою мірою ідентичною нуклеотидній послідовності
ММ 179407, можна застосовувати для конструювання гена з метою експресії шпилькової РНК для сайленсингу ендогенного гена пластидної СРАТ. Конструкція шпРНКІ, що містить фрагмент пластидної СОРАТ М. репіпатіапа розміром 732 пари основ (5ЕО ІЮО МО: 219), фланкований унікальними сайтами 5Зтаї і Казі, розроблена з метою стабільної трансформації М. їабасит.
Синтезований фрагмент пластидної СРАТ М. Бепіпатіапа субклонують у сайти Зтаї!-Каві рУРЗ303 з одержанням рої/113. Очікується, що зменшення утримання жирних кислот у пластидах приводитиме до підвищення акумуляції ТАГ, особливо при об'єднанні з компонентом "Ризі", таким як підвищена експресія фактору транскрипції, такого як МУКІ!, або компонентом "Риїї", таким як ОСАТ або РОАТ та/або знижена активність 5ОРІ1 або ТГД.
Інактивація гена, який кодує пластидну СРАТ або, більше того, будь-якого гена може бути досягнута із застосуванням способів ККППРП/Са59. Наприклад, інактивація гена, який кодує пластидну СРАТ А. Іпаіапа (номер доступу ММ 179407) може здійснюватися руйнуванням гена, опосередкованим ККППРІИП/СазУ/короткою спрямовуючої РНК (крРНК), з подальшим мутагенезом за допомогою відновлення ДНК негомологічним з'єднанням кінців (НГЗК). Перед спрямованим розщепленням ДНК, Са59 стимулює розділення ланцюгів ДНК і дозволяє КНРНК гібридизуватися із специфічною послідовністю гена-мішені завдовжки 20 нуклеотидів. Це вміщує
ДНК-мішень в активний сайт Саб59 в належній орієнтації щодо сайту зв'язування з РАМ (тандемні гуанозинові нуклеотиди). Таке розташування дозволяє окремим нуклеазним доменам
Са59 незалежно розщеплювати кожен ланцюг послідовності ДНК-мішені у точці, віддаленій на З
Зо нуклеотиди в напрямку проти ходу транскрипції щодо сайту РАМ. Далі відбувається відновлення двохланцюгового розриву ДНК шляхом схильного до помилок НГЗК, в ході якого відбуваються делеції або інсерції декількох нуклеотидів, що приводить до інактивації гена пластидною ОРАТ. Послідовності книРНК, націлені на ген СРАТ А. ІПаїїапа, ідентифіковані і відібрані із застосуванням веб-інструменту СКІ5БРКР (Хіє із співавт., 2014). Послідовність- мішень завдовжки 20 нуклеотидів може бути будь-якою послідовністю завдовжки 20 нуклеотидів у межах гена-мішені, зокрема у межах некодуючих ділянок гена, таких як промотор або інтрон, за умови, що вона є специфічною послідовністю в межах геному. Послідовність може бути вставлена до бінарного вектору, що містить касету експресії ККППРП/Саз9/кнРНК і селекційний маркер канаміцину для рослин (іапд із співавт., 2013), і трансформована в рослинні клітини шляхом опосередкованого Адгорасієегічт перетворення. Можна здійснити скринінг трансгенних рослин Т1 щодо мутацій в гені пластидної ОРАТ за методом ПЛР ампліфікації і секвенування
ДНК.
Приклад 8. Підвищення експресії тіоестерази у рослинних клітинах
Синтез жирних кислот де помо відбувається у пластидах еукаріотних клітин, де жирні кислоти синтезуються при зв'язуванні з адилпереносним білком у формі кон'югатів ацил-АПБ.
Після подовження ланцюга до ацильних груп С16:0 і С18:0, з подальшим введенням кратного зв'язку у С18:1 під час зв'язування з АПБ, жирні кислоти відщеплюються від АПБ тіоестеразами і входять в еукаріотний шлях за допомогою експорту із пластид і транспорту в ЕР, де вони приймають участь у біогенезі мембран і запасних ліпідів. У хлоропластах процес експорту включає дві стадії: по-перше, ацильні ланцюги вивільняються у формі вільних жирних кислот по дією ферментів тіоестераз (тіоестераза жирного ацилу; ТЖА), по-друге, введення в реакцію із
КоА з утворенням естерів ацил-КоА, каталізовану синтетазами довголанцюгового ацил-КоА (ДЛАС). А. ІНаійапа містить З тіоестерази жирного ацилу, які можуть розрізнятися на базі їх специфічності по відношенню до ацильного ланцюга. ЕАТА1 і РГАТА2 переважно гідролізують ненасичені ацил-АПБ, тоді як насичені ланцюги ацил-АПБ звичайно розщеплюються ЕАТВ.
З метою вивчення впливу коекспресії тіоестерази і генів, що кодують поліпептиди УУКІ! та/або ОСАТ, на вміст загальних жирних кислот, вміст ТАГ і склад жирних кислот одержують химерні гени для кожної із трьох тіоестераз А. ІПпайапа шляхом інсерції кодуючих ділянок у бінарний вектор експресії руР3343 для тимчасової експресії в клітинах листя М. Ббепіпатіапа бо промотором 355. Кодуючі білок ділянки ГАТАЇ1 А. Ійаїїапа (номер доступу МР 189147.1, 5ЕО ІЮ
МО: 202) і РАТА2 (номер доступу МР 193041.1, 5ЕО ІО МО: 203) ампліфікують із кДНК стручків із застосуванням праймерів, що містять сайти ЕсоНіІ і Рв, і далі клонують в руРЗ3343 із застосуванням таких же рестрикційних сайтів. Одержані вектори експресії позначені як ро 079 і рОІГ 080, відповідно. Кодуючу білок ділянку гена ЕАТВ А. ІНаїіапа (номер доступу МР. 1723271,
ЗЕО ІЮ МО: 204) ампліфікують із застосуванням праймерів, що містять фланковані сайти Мої! і засі, ії клонують у відповідні рестрикційні сайти руР3343 з одержанням рої 081. Конструкціями ро! 079, рої 080 і ро 081 інфільтрують тканину листя М. репіпатіапа, окремо або в комбінації з конструкціями, що містять гени фактору транскрипції МУКІ! А. Іпаїйапа (АМУ/НВІ1) (рурза14) та/лабо ЮОСАТІ ацилтрансферази (АЮСАТІ) (руРЗ3352). Для порівняння, химерні гени, що кодують РаїВі Сосо5 писіїега (СпЕеАТВІ1) (руРЗб630), РаїВ2 б. писіїега (СпЕАТВ2г) (руРЗб629) вводять у тканину листя М. рРепіпнатіапа паралельно з тіоестеразами Агабідорвзі5, щоб порівняти вплив поліпептидів РаїВ, які володіють специфічністю по відношенню до СЛЖК, з тіоестеразами
Агарідорзіх, що не володіють специфічністю по відношенню до СЛЖК. Всі експерименти з інфільтрацією включають химерний ген для експресії супресора сайленсингу р19, як описано у
Прикладі 1. Негативний контроль інфільтрують тільки Т-ДНК р19.
Спостерігався синергетичний вплив для експресії тіоестерази і підвищеної експресії МУК та/або ОСАТ на рівні ТАГ у листі М. рРепінатіапа. Експресія генів тіоестерази без генів МУК! або
ООАТ істотно підвищує рівні ТАГ вище за низький рівень у негативному контролі (тільки р19).
Наприклад, експресія тіоестерази ЕАТВ2 кокоса приводила до підвищення рівнів ТАГ у листі у 8,2 рази, в порівнянні з негативним контролем. Коекспресія фактору транскрипції УМКІ! А.
ІШаїйапа з кожною із тіоестераз додатково підвищувала рівні ТАГ, в порівнянні з контролем
АЇМУКІ1. Коекспресія кожної з тіоестераз СПЕАТВІ і СпеАТВ2 кокоса із МУКІЇ приводила до вищих рівнів ТАГ, ніж кожної з трьох тіоестераз А. ІПаїїапа із МУКІ!1. Цікаво, що протилежне спостерігалося, якщо ацилтрансфераза ЮСАТІ А. Ійаійапа коекспресувалася в комбінації з тіоестеразою і МУКІї. Це наводить на думку про кращу специфічність по відношенню до ацильного ланцюга тіоестераз А. Ійпаіапа і ацилтрансферази ОСАТІ А. ІПаїіїапа, що приводить до збільшеного потоку ацильних ланцюгів від ацил-АПБ у ТАГ. Крім того, не-СЛЖК тіоестерази були значно більш ефективними з точки зору збільшення відсотка олеїнової кислоти в загальному вмісті жирних кислот у листі. Коекспресія АЇМУКІ!Т, АЮСАТІ і АІЕАТА2 приводила до
Зо найвищого рівня ТАГ у листі, забезпечуючи рівень, що більш ніж в 1,6 разів перевищував спостережуваний при коекспресії АЇМУКІї і АШЮСАТІ без тіоестерази. Вказані експерименти підтвердили синергетичне підвищення синтезу і акумуляції масла, при коекспресії МУК! і ОСАТ, а також продемонстрували подальше синергетичне збільшення при додаванні тіоестерази до комбінації.
Три різних бінарних вектори експресії сконструйовані для оцінки впливу коекспресії генів, які кодують МУ/КІЇ, ЮСАТІ і ЕБАТА, на рівні ТАГ і склад жирних кислот у листі стабільно трансформованого М. тарбасит. Вектор роОІЇ/121 містить ген 55Щ0:АЇМУКІ! для експресії АМУКІ1 промотором ЗИ, ген 355хХАШЮЮЗАТІ для експресії АШСАТ опромотором 355 і ген епТСОР2АФАТА? для експресії АФТАТА2 промотором епТтСИОР2, що є конститутивним промотором. Вказані генетичні конструкції одержують з роО1ІЇ38, спочатку розщеплюючи ДНК за допомогою Мої! для видалення гена, який кодує олеозин 5. іпаісшит. Кодуючу білок ділянку гена
ЕАТА2 А. ІПаійапа ампліфікують і фланкують сайтами Мої! із застосуванням ДНК рої 80 як шаблону. Далі цей фрагмент вставляють в сайт Мої! рої 38. В подальшому рої 121 служить материнським вектором для рої/122, що містить додаткову касету шпилькової РНК епТСОР2:БОРІ для опосередкованого РНКІі сайленсингу ендогенного гена ОРІ у трансгенних рослинах. Щоб досягти цього, повну касету шпильки ЗОРІ М. рРепіпнатіапа виділяють з рої! 51 (Приклад 11) у вигляді фрагмента 500І-Зта! і клонують в сайт 50Ї роїІ/ 121 з одержанням ро! 122 (Фіг. 3). Третій вектор, роОІ/ 123, що містить гени 5БО:М/УКІЇ ії 355:О6АТ1 і ген шпилькової РНК епТСОР2:5ОРІ одержують таким же чином, клонуючи касету шпилькової РНК епТСИР2:5ОРІ у вигляді фрагмента 500І-5таї в сайт ОЇ ро! 36.
Якщо коротко, вектори містили комбінації генів: роОІт121: 55Ц:АМУ/ВІТ, 355:АЮСАТІ, епТСР2:АТЕАТА2. рої 122: 55Ц:АМУ/ВІТ, 355:АЮСАТІ, епТСОР2:АЇЕАТА2, епТСОР2: шпилька ЗОРІ. ро! 123: 5БЇЦ:АМУКІТ, 355:АЮСАТІ1, епТСР2:шпилька ЗОРІ.
Кожну із трьох конструкцій застосовують для одержання трансформованих рослин М. їабасит (сорт УМміІ38) шляхом опосередкованої Аадгобрасієгішт трансформації. Кожне із коекспресії тіоестерази ЕГАТА2 А. ІПпайапа або сайленсингу ендогенної ліпази ТАГ ЗОРІ в комбінації з експресією АЇМУКІ! і АЮСАТІ приводило до подальшого підвищення рівнів ТАГ, в порівнянні з експресією АЇМУКІї і АЮСАТІ за відсутності як гена тіоестерази, так і гена сайленсингу 5ОРІ. Найбільший вихід ТАГ одержують із застосуванням рої! 122 шляхом поєднаної дії всіх чотирьох химерних генів.
Необхідно відзначити, що М. репіпйатіапа є рослиною 18:3. Такі ж конструкції ро! 079, роО!Го80 і ро 081 застосовуються для трансформації А. ІйаїЇапа, рослини 16:3.
Авторами винаходу була задумана модель, що підвищує пластидний експорт жирних кислот, наприклад, зниження акумуляції ацил-АПБ у пластидах шляхом підвищення активності тіоестерази жирного ацилу, таким чином підвищуючи біосинтез жирних кислот в результаті зниження інгібування ацетил-КоА карбоксилази (АККази) за механізмом зворотного зв'язку (Апаге із співавт., 2012; Могепо-Реге із співавт., 2012). Підвищена експресія тіоестерази підвищує експорт ацильних ланцюгів із пластид в ЕР, таким чином пропонуючи ефективний зв'язок між так званими "Ризй" і "Риї!" стратегіями метаболічного конструювання.
Приклад 9. Продукування середньоланцюгових жирних кислот у вегетативних рослинних клітинах
Ессіезюп із співавт. (1996) вивчали акумуляцію С12:0 і С14:0 жирних кислот як у насінні, так і в листі трансгенних рослин Вгаззіса пари5, трансформованих конститутивно експресованим геном, що кодує тіоестеразу Саїйогпіа Вау І аиге! 12:0-АПБ (Штрвеїшіагіа саїігогпіса). У вказаному дослідженні повідомлялося про акумуляцію значних рівнів С12:0 у зрілому насінні В. пари, але тільки дуже низькі рівні С12:0 спостерігалися у тканині листя, незважаючи на високі рівні експресії і активності тіоестерази 12:0-АПБ. Такі ж результати були одержані при трансформації гена в А. ІНаїійапа (МоеїКег із співавт., 1992). Дане дослідження було розширене коекспресією
ІРААТ Сосов писіїєгта і тіоестерази ШтреїЇшіагіа саїійогпіса, що приводило до підвищення акумуляції загальної С12:О0, в також до збільшення фракції трилаурину в насінні В. пари (Кпшблоп із співавт., 1999). Таким чином, рівень техніки вказує на те, що синтез середньоланцюгових жирних кислот (СЛЖК) у вегетативних рослинних клітинах був проблематичним.
Для оцінки впливу введення тіоестераз, що володіють специфічністю по відношенню до
СЛЖК, в комбінації з іншими генами, описаними у даному документі, химерні ДНК для експресії декількох різних тіоестераз синтезовані і введені у рослинні клітини, окремо або в комбінаціях.
Кодуючі білок ділянки для тіоестераз з організмів, які доведено продукують СЛЖК (іпд із
Зо співавт., 2011), синтезують і вставляють у вигляді фрагментів ЕсоВІ в бінарний вектор рОР3343, що містить касету експресії промотору 355 (МаппегсоКе із співавт., 2013). Тіоестерази були наступними: тіоестераза Сіппатотит сатрнога 14:0-АПБ (позначена як Сіпса-ТЕ) (Юань із співавт., 1995; номер доступу О39473.1; 5ЕО ІЮ МО: 193), ацил-АПБ тіоестераза РаїВ1 Сосов5 писіїега (Соспи-ТЕ1; номер доступу АЕМ72519.1 5ЕО ІЮО МО: 194), ацил-АПБ тіоестераза Раїв2
Сосов писіїєга (Соспи-ТЕ2; номер доступу АЕМ72520.1; БЕО І МО: 195), ацил-АПБ тіоестераза
Еаїв3 Сосо5 писіїегта (Соспи-ТЕЗ; номер доступу АЕМ72521.1; 5ЕО ІЮО МО: 196), ацил-«АПБ) тіоестераза типу В Сирнєа Іапсеоіаїа (Сиріа-ТЕ) (Тортег із співавт., 1995; номер доступу
САВб6БО830.1; 5ЕО 10 МО: 197), Сирниєа мізсозіззвіта ав! (Сирмі-ТЕ; номер доступу
АЕМ72522.1; 5ЕБЕО ІЮ МО: 198) і 12:0-АПБ тіоестераза треїйІшіагіа саїйогпіса (Штбса-ТЕ) (МоєїКег із співавт., 1992; номер доступу 2041635.1; 5ЕБО ІЮ МО: 199). Всі вказані тіоестерази належать до класу РАТВ і володіють специфічністю по відношенню до СЛЖК. Додатково були клоновані кодуючі білок ділянки для І РААТ С. писіїега (Соспи-І РААТ, тип СЛЖК) (Кпшїгоп із співавт., 1995; номер доступу 042670.1; 5ЕО ІЮ МО: 200) і пластидної І РААТІ А. ІНаїІгапа (Агаїн-
РІРААТ; номер доступу АЕЕ85783.1; 5ЕО ІЮ МО: 201). Раніше було показано, що Соспи-І РААТ підвищує інкорпорацію СЛЖК в положенні 5п-2 ТАГ у насінні (Кпшї2оп із співавт., 1995), тоді як пластидну І РААТ А. ІПаїапа (Агаїн-РІ РААТ) (Кіт із співавт., 2004) застосовували як контрольну
ІЇРААТ, щоб визначити вплив будь-якої специфічності по відношенню до СЛЖК, якою Соспи-
ІГРААТ може володіти. Перша ГРААТ використовує ацил-КоА як один субстрат і в своєму природному оточенні функціонує у ЕР, тоді як остання РІ РААТ використовує ацил-АПБ як субстрат і функціонує у пластиді.
Гени тіоестерази вводять у листя Місойапа бБепіпатіапа шляхом опосередкованої
Адгорасієетит інфільтрації, як описано у Прикладі 1, разом із геном для коекспресії супресора сайленсингу р19 ії Соспи-Ї/РААТ або Агай-РІРААТ, щоб визначити, чи можуть СЛЖК продукуватися в листовій тканині М. Бепіпатіапа. Інфільтровані зони листя збирають і ліофілізують протягом п'яти днів після інфільтрації із сумішами Адгобасіегічшт, після чого визначають загальний вміст і склад жирних кислот за методом ГХ, як описано у Прикладі 1 (Табл. 7). Для даних, наведених у Табл. 7, помилка представляє стандартне відхилення для трьох інфільтрацій. Інфільтровані зони контрольного листя містили тільки слідові (« 0,1 Фо) або нульові рівні С12:0 ії С14:0 жирних кислот, тоді як С16:0 присутня в кількості 14,9 95 - 0,6 у ЗЖК бо загальних ліпідів листя. Рівні С12:0 значно підвищувалися тільки при експресії Соспи-ТЕЗ (1,2 95 т- 01) і Штрса-ТЕ (1,695 - 0,1). Експресія кожної з досліджуваних тіоестераз приводила до акумуляції С14:0 у листі М. рРепінатіапа, причому Сіпса-ТЕ давала найвищий рівень, 11,3 95 Ж 1,0, Крім того, експресія кожної з тіоестераз, за винятком Штбса-ТЕ, приводить до підвищених рівнів С16:0. Найвищий рівень акумуляції С16:0 (35,4 95 7?- 4,7) спостерігається при експресії бСоспи-ТЕ1Т. Виражений некроз інфільтрованих зон спостерігався у листі при експресії тільки генів ЕАТВ, який, схоже, корелює з рівнем продукування СЛЖК. Автори винаходу вважають, що некроз, ймовірно, виникає за рахунок вищих за оптимальні рівнів вільних жирних кислот (СЖК), а також за рахунок обширної акумуляції СЛЖК скоріше у фосфоліпідних пулах ліпіду, ніж у ТАГ.
Таблиця 7
Склад загальних жирних кислот листя (95 від загальних жирних кислот листя) для вибраних жирних кислот у листі Місоїйапа репіпатіапа, інфільтрованому різними тіоестеразами (ТЕ) і
ІГРААТ. Результати згруповані за коінфільтрованим геном (одиничні гени (окрім р19, присутнього у всіх зразках), Агаїй-І РААТ ч« різні ТЕ, Соспи-І РААТ ч« різні ТЕ). "Контроль" означає не інфільтроване листя М. репіпатіапа, тоді як "тільки р19" містить тільки ген супресора сайленсингу. 16:3 являє собою 16:3А7и10и13: 18:3 являє собою 18:38912и15, Гени ідентифіковані, як визначено у тексті. 12:0 14:0 16:0 16:3 1833
Контроль 0,20 0,1--0 14,0--0,2 8,1-0,1 57,20 тільки р19 0,20 0,1--0 14,9--0,6 7,0-0,8 53,1-0,7
Сіпса-ТЕ 0,4-0 11,3--1,0 21,9--0,7 5,0-0,2 38,5--1,0 боспи-ТЕ! 0,20 6,3--0,6 35,4-4,7 42-14 29,9-5,5
Соспи-ТЕ2 0,20 7,1-0,3 31,9-2,2 4,7-0,5 32,9--2,8
Тести Соспу-тЕЗ 1,201 7,221,3 19,6411,6 5,7-0,5 44,832,9 одинарн Сиріа-ТЕ 0,20 11-02 21,8-2,9 6,0-0,6 482531 ого гена Сирмі-ТЕ 0,20 0,6-0,1 17,3--1,3 6б,4-0,4 52,9-21
Штбса-ТЕ 1,6--0,1 1,1-0,2 14,4--0,8 6б,5-0,3 52,7-0,1
Агаїп-І РААТ 0,2-0 0,4--0,5 17,4-1,0 б,2-0,3 51,4--1,3
Соспи-ІРААТ 0,1--0,1 0,1--0 15,1-4,5 6б,7-0,5 52,2-42
Сіпса-ТЕ 0,20 7,8--0,1 24,6-0,4 5,302 39,2--1,5 боспи-ТЕ! 0,20 4,6--1,3 35,3--1,4 440,7 32,7-2,0 хАгаїн- Соспи-ТЕ2 0,20 6б,1-04 32,5--,8 4,701 34,1-0,6
ІЇРААТ Соспи-ТЕЗ 0,9--0,2 8,5--04 21,4-,9 5,6-0,2 41,7-0,6
Сиріа-ТЕ 0,20 1,0--0,1 23,442,7 5,9--0,5 47,3-1,2
Сирмі-ТЕ 0,20 0,6-0 19,0--0,2 6б,3-0,1 51,4-1,0
Штбса-ТЕ 12-02 1,101 15,4-02 6б,5-0,2 52,3--1,3
Сіпса-ТЕ 0,7-0,2 14,9--1,6 23,0-3,7 4,8--1,4 35,4-3,3 боспи-ТЕ! 0,20 5,4-0,9 40,2--2,8 3,3-0 27,8--Н11,1 уСоспи- Соспи-ТЕ2 0,20 6,6--,0 38,3--1,1 3,702 282-811
ІЇРААТ Соспи-ТЕЗ 2,0--0,3 10,9--1,0 24,4-,8 4,9--0,5 37,7-0,9
Сиріа-ТЕ 0,5--0,1 1,6--0,3 22,2-0,6 6б,0-0,3 46,9--2,0
Сирмі-ТЕ 0,5-0 1,1--0 19,6--0,8 6,0-0,2 49,8--0,3
Штбса-ТЕ 3,3-0,5 1,2-0,1 13,9--0,4 6б,4-0,2 51,3--1,7
Коінфільтрація химерним геном для експресії Агай-РІ РААТ з тіоестеразами демонструє тенденцію до зниження акумуляції як С12:0, так і С14:0О, в порівнянні з відсутністю ГРААТ, при невеликому підвищенні акумуляції С16:0. | навпаки, коінфільтрація генами для експресії Соспи-
ГРААТ або ОтБбса-ТЕ підвищує акумуляцію С12:0 до 3,3 95 - 0,5, тоді як виявлена акумуляція
С140 у зразку Сіпса-ТЕ ї- Соспуи-ЇРААТ становить 14,995 - 1,6. Найвищі рівні С16:0 спостерігалися після коекспресії Соспи-ТЕ!1 і Соспи-І РААТ (40,2 95 -- 2,8). Додавання І РААТ до кожної зони інокуляції знижує ступінь некрозу листової тканини. Несподівано було знайдено, що жирні кислоти С8:0 і С10:0 також продукувалися у рослинних клітинах в експериментах з тимчасовою експресією. Акумуляція С8:0 і С10:0 не спостерігається при експресії тільки тіоестерази. Однак, якщо експресія тіоестерази поєднується із коекспресією СирпогавВ з
Сп РААТ і АМУКІ1, виявляється присутність С8:0 в концентрації 0,27 ж 0,09 95 від загального вмісту жирних кислот у рослинних клітинах. Крім того, у разі коекспресії СиріагаїВ з Спі РААТ і
АМУКІ!, була знайдена присутність С10:0 в 0,54 хз 0,16 95 від загального вмісту жирних кислот.
Одержані результати вказують на те, що специфічність тіоестераз по відношенню до ацилу, про яку повідомлялося раніше, спостережувана при експресії в насінні, по суті зберігалася у листі М. репіпатіапа, і вказана система експресії була валідною системою для оцінки специфічності по відношенню до ацилу. Додавання пластидної РІ РААТ А. Ійпаїйапа не підвищує акумуляції СЛЖК, хоча й приводить до дещо підвищеної акумуляції С16:0 у клітинах А. Іпаїапа.
І навпаки, І РААТ б. писіїега підвищує акумуляцію в листі М. бепінатіапа, жирних кислот С12:0,
С14:0 ї С16:0, які знайдені у маслі С. писіїтега (І айгеІе5 із співавт., 2002). Це вказує на те, що природна І РААТ М. репіпатіапа не експресується з високими рівнями у листовій тканині або не володіє високою активністю по відношенню до субстратів С12:0, С14:0 і С16:0.
Продукування середньоланцюгових жирних кислот у вегетативних рослинних клітинах, що акумулюють високі рівні ТАГ
Авторами винаходу раніше було досягнуте продукування 1595 ТАГ у листі М. тарасит шляхом координованої експресії химерних генів, що кодують УУКІ!1 А. ІНайііапа, ОСАТІ А. ІНаїіапа і олеозин 5. іпаїісшт (МаппегоКе із співавт., 2014). Для оцінки можливості досягнення або підвищення акумуляції СЛЖК, що спостерігалася після експресії тіоестераз в комбінації з
ГРААТ, у рослинних клітинах, що продукують високі рівні ТАГ (МаппегсоКе із співавт., 2013), вказані гени коекспресують. Здійснюють інфільтрацію комбінаціями С12:0, С14:0 ї С16:0 тіоестерази/! РААТ з якнайкращими результатами (Соспи-І РААТ плюс тіоестераза Штбрса-ТЕ,
Сіпса-ТЕ і Соспи-ТЕ2, відповідно), із попередньо описаними комбінаціями Агафй-МУкІ! ї- ОСАТ і без них (Маппегеске із співавт., 2013). Дані проілюстровані на фіг. 4.
Акумуляція відповідних СЛЖК (С12:0 для Штбрса-ТЕ, С14:0 для Сіпса-ТЕ і С16:0 для Соспи-
ТЕ2) є систематичною і значно підвищується, в основному при додаванні Агас-МУКІЇ до комбінацій: С12:0 становить 9,5 95 - 0,9 від загальних жирних кислот листя у зразках Штрса-ТЕ - Соспи-І РААТ -- Агаїб-МУКІ1, рівень С14:0 становить 18,5 95 - 2,6 у зразках Сіпса-ТЕ 4 Соспи-
І РААТ -- Агаїй-М/ВІ!, і рівень С16:0 становить 38,3 95 - 3,0 у зразках Соспи-ТЕ2 4 Соспи-І РААТ
Зо т Агаїй-МУКІ1. Знайдено, що інфільтрація тіоестеразою плюс Агаїп-М/КІ! здійснює значно більш виражений вплив на С12:0 у присутності Штрса-ТЕ, на С14:0 у присутності Сіпса-ТЕ і на С16:0 у присутності Соспи-ТЕ2, в порівнянні з інфільтрацією тіоестеразою плюс Соспи-ГРААТ за відсутності МУКІ! (Фіг. 5). Додавання Соспи-І РААТ до сумішей тіоестерази плюс Агай-М/ВІ1 здійснювало вплив на склад жирних кислот, з відносно невеликим підвищенням С12:0 ї С14:0, спостережуваним у наборах Штрьса-ТЕ і Сіпса-ТЕ, і невеликим зниженням С16:0 у наборі Соспи-
ТЕ2. Максимальні зареєстровані рівні становили: 8,8 Фо 1,1 С12:0 у загальних жирних кислотах листя, спостережувані у зразках Штрса-ТЕ -- Агат-МУВІ! я Соспи-І РААТ, 14,1 95 - 3,5 С14:0 у зразках Сіпса-ТЕ -- Агаїп-МУВІЇ - Соспи-І РААТ і 48,6 95 - 3,7 С16:0 у зразках Соспи-ТЕ2 -- Агаїй-
МУ/ВІ1.
Цікаво, що єдиною тіоестеразою, для якої Агай-МУКІїЇ не підвищує настільки сильно акумуляцію СЛЖК, є Соспи-ТЕ2, хоча акумуляція значно зростає, як і раніше. Додавання тільки вказаного гена приводить до підвищення акумуляції С16:0О із 16,0 95 -0,4 до 37,3 95 - 0,6, тоді як подальше додавання Агаїй-МУКІї збільшує даний показник тільки до 48,6 95 - 1,7. Це може відбуватися завдяки проміжним сполукам С12:0 ї С14:0, відносно недовго існуючим в ході пластидного синтезу жирних кислот, в порівнянні з С16:0.
Інші ефекти, які були відмічені, включають підвищення рівнів С16:0 і С18:189 та зниження рівня С18:389и12и15 у присутності Агай-УУКІ1. Подальше додавання Сіпса-ТЕ і Соспи-ТЕ2 все ще додатково знижує рівні С18:3А91215, На протилежність цьому, додаткова кількість С12:0 продукується після додавання Агай-М/кКІ!ї до Штрса-ТЕ, схоже, швидше за рахунок С16:0, ніж
БО додаткової кількості С18:3291215 (Фіг. 5).
Додатково, підмножина зразків була проаналізована методом РХ-МС, з метою кращого розуміння акумуляції СЛЖК. Пластидні галактоліпіди моногалактозилдіацилгліцерол (МГДГ)., і дигалактозилдіацилгліцерол (ДГДГ) містять тільки низькі рівні С12:0 ї С14:0 і знижені рівні С16:0, в порівнянні з інфільтрацією контрольним р19. Основним видом С12:0-вмісних МГДГ у зразках
МШтрса-ТЕ є 30:3, вказуючи на те, що одна С18:3 і одна С12:0 були колокалізовані на моногалактозильному скелеті. Іншим основним видом С12:0-вмісних МГДГ є 28:0, вказуючи на те, що другою жирною кислотою є С16:0. Основними видами С14:0-вмісних МГДГ в зразках
Сіпса-ТЕ є 28:0 ії 30:0, вказуючи на те, що значна частка С14:0 в МГДГ належить ди-С14:0 або
С16:0. С12:0-вмісні і С14:0-вмісні МГДГ не були знайдені у контрольній вибірці р19. І навпаки, бо С16:0-вмісні види МГДГ демонструють тенденцію до зниження у зразках Соспи-ТЕ2. Всі основні види МГДГ у зразках дикого типу (С16:3-вмісний 34:6, С18:3-вмісний 34:6 і С18:3-вмісний 36:6) демонструють тенденцію до зниження при експресії трансгенів. Вказане зниження є найбільш вираженим у присутності комбінації МУКІ - ОСАТ.
Тільки слідові рівні С12:0-вмісних видів ДГДГ спостерігаються у зразках Штрса-ТЕ.
Основними С14:0-вмісними видами, спостережуваними у зразках Сіпса-ТЕ, є 28:0 і 30:0, обидва з яких відсутні у контролі. Крім того, вказані види спостерігаються із підвищеними рівнями у зразках Соспи-ТЕ2, але тільки із слідовими рівнями у зразках Штрса-ТЕ. Всі основні види ДГДГ у зразках дикого типу (С16:0-вмісний 34:3, С18:3З-вмісний 34:3 і С18:3-вмісний 36:6) демонструють тенденцію до зниження при експресії трансгенів. Вказане зниження є найбільш вираженим у присутності УМКІ.
Так само, вміст видів ТАГ загалом є значно підвищеним у всіх зразках, що містять УМУКІ їж роАТ, як було описано раніше (МапНегскКе еї аї., 2013) (МаппегскКе із співавт., 2013). Знайдено, що види С12:0 є переважаючими у зразку Штбрса-ТЕ з високим вмістом ТАГ, види С14:0 -- у зразку Сіпса-ТЕ з високим вмістом ТАГ, ії види С16:0 -- у зразку Соспи-ТЕ2 з високим вмістом
ТАГ. Аналіз фракції ТАГ методом РХ-МС демонструє, що С12:0-вмісний 36:00 є переважаючим видом ТАГ, вдвічі перевищуючи рівень видів ТАГ, що містять С18:3, у всіх зразках Штбрса-ТЕ, що містять фактор транскрипції УУКІ. Крім того, С14:0-вмісний 42:0, є переважаючим видом ТАГ у зразках Сіпса-ТЕ, котрансформованих І РААТ, ОСАТ, МУКІ або УУКІ - ОСАТ, хоча відповідь є значно більш вираженою у разі зразків, що містять МУКІ. Вміст декількох С16:0-вмісних видів
ТАГ є значно підвищеним як у зразках Сіпса-ТЕ із високим вмістом ТАГ (наприклад, 44:0 ї 50:3), так і в зразках Соспи-ТЕ2 (наприклад, 46:0, 48:0, 50:22 і 50:3). Повторимося, найбільш виражене підвищення рівня С16:0 спостерігається в присутності УУКІ.
Стабільна трансформація для продукування СЛЖК у вегетативних тканинах.
Одержана серія генетичних конструкцій в бінарному векторі, з метою стабільної трансформації рослин, наприклад, тютюну комбінаціями генів для продукування СЛЖК у вегетативних тканинах, щоб ідентифікувати оптимальні комбінації генів. Вказані конструкції містять ген для експресії МУКІЇ під контролем промотору 550) (див. Приклад 8, рої 121) або специфічного для старіння промотору 5БАС12, ген, що кодує ОСАТ масляної пальми (нижче), ген, що кодує ГРААТ кокоса (Соспи! РААТ, див. вище) під контролем промотору епТСИР, і
Зо декілька генів, що експресують різні тіоестерази жирного ацилу (ЕБАТВ), експресовані промотором 355 або промотором ЗАС12. Вони описані нижче.
Клонування гена, який кодує ОСАТ Еїаеєї5 диіпеепвів5 (олійна пальма)
Для початкової оцінки різних ферментів ОСАТ, зокрема характерних ферментів ОСАТІ1, роАТ2 і ОСАТЗ, послідовності-кандидати ОСАТ масляної пальми були ідентифіковані на базі опублікованої транскриптоми (Юив55егі із співавт., 2013) і кодон-оптимізовані для експресії в
Місоїапа іабасит. Далі кодуючі білок ділянки окремо клонують в бінарні вектори експресії під контролем промотору 355 для оцінки в експериментах із тимчасовою експресією у листі М. репінатіапа, як описано у Прикладі 1. Вивчені комбінації гена є такими, як указано нижче: 1 Р19 (негативний контроль) 2 Р1І9-Спі РААТАМ/ВІ1
З РІ9-Спі РААТААМ/ВІ1-АЮСАТ 4 Р1І9-Спі РААТААМ/ВІ1-ЕдраАТІ 5 РІ9-Спі РААТА-АМ/ВІТ -ЕчврСсАТа2 б РІ9-Спі РААТА-АМ/ВІТ -ЕЧрСсАТЗ 7 РІ9-СіпсагаїЇВ 8 РІ9СіпсаРаїВ--Спі РААТ-АМУ ВІТ 9 РІ9-СіпсаРаїВ--Спі РААТ-АМ/ВІТ -АЮСАТІ 10 РІ9-СіпсаБгаїВ--Спі РААТААМ/ВІ1-ЕдраАТІ1 11 РІ9СіпсаБРаїВ--Спі РААТ-АМ/ВІТ -ЕдраАТа2 12 РІ9-СіпсаБРаїВ--Спі РААТ-АМ/ВІТ -ЕдрасАТЗ
Результати для рівнів ЗЖК і ТАГ, а також рівнів загальних СЛЖК у ЗЖК або ТАГ проілюстровані на Фіг. 6. В порівнянні з АШЮСАТІ, експресія Е9ФОСАТІ приводить до більш вираженої акумуляції загальних жирних кислот і підвищених рівнів ТАГ. Загальний вміст СЛЖК у загальному вмісті жирних кислот знижується при експресії ЕФОСАТІ, в порівнянні з АЛЮСАТІ, але рівні СЛЖК, присутніх у ТАГ, залишаються такими ж (Фіг. 6).
Приготування генетичних конструкцій
Генетичні конструкції для стабільної трансформації (Табл. 8) збирають за допомогою послідовної інсерції касет генів із застосуванням сумісних сайтів рестрикційних ферментів.
Чотири генні конструкції (Табл. 8), кожна з яких містить ген, що кодує ОСАТІ масляної пальми бо (Е9ФОСАТІ), який експресується промотором 355, ген, що кодує І РААТ С. писіїега (Спі ЕААТ),
який експресується конститутивним промотором епТтСИР2, і ген, що кодує АЇМУКІ1, який експресується промотором 55) або промотором 5АС12, на додаток до однієї із серій генів, що кодують ферменти ЕАТВ
Крім того, п'ять генних конструкцій містять ген для експресії шпилькової РНК з метою зниження експресії ендогенного гена, який кодує ацил-активуючий фермент (ААФ). Шпилька сконструйована на базі подібності послідовності до ідентифікованої ААЕТ5 Агабідорвів Іугаїа (ЕРН44575.1) і гену М. бепінатіапа. Показано, що ААФ приймають участь у повторній активації
СЛЖК, їі, таким чином, подальшому подовженні. Передбачалося, що сайленсинг ААФ може підвищити акумуляцію СЛЖК. Касету шпильки конструюють у векторі РКАММІВАГ, а потім субклонують у вектор експресії руУУВвМес2 (УМапд із співавт., 2004), з експресією шпильки під контролем промотору 355.
Таблиця 8
Короткий опис зібраних генетичних конструкцій. 11111111 | Конструуця | 0011 Комбінацягенв./://:/:///:(ИС/
Конструкції з одинарнимсгеномірОй1ї15 |ЗАСТ2СійсагатВЇ //:/ 77777771 конструкції 3555:ОтБсагАТВ 355:СіпсагАтТВ 355:боспиЕАТВ2 зда12ШтрсагАТВ
ЗзАа12:СіпсагА ТВ
Конструкції з зда12:СоспиЕАТВ2 3555:ОтБсагАТВ 355:СіпсагАтТВ 355:боспигАТВ2 зда12ШтрсагАТВ
ЗзАа12:СіпсагА ТВ зда12:СоспиЕАТВ2 3555ОтбБсагАТВ - 355:прМмрААЕ п'ятьма генами 355:СбіпсагАТВ я 355:ПрМБААЕ 355:боспигАТВ2 - 355:пПрМВБААЕ
Таблиця 8
Короткий опис зібраних генетичних конструкцій. 11111111 | Конструуця | 01100 Комбінацягенв//////////////://-СШС/Є;и зда12:ШтрсагАТВ - 355:пПрМБААЕ
ЗздАа12:СіпсагАТВ - 355:прМВБААЕ зДа12:СоспигАТВ2 я 355:пПрМБААЕ 3555ОтбсагАТВ «з 355:прМИрААЕ 355:СіпсагАТВ « 355:прМБААЕ 355:боспиЕАТВ2 - 355:пПрМВБААЕ зда12:ШтрсагАТВ - 355:пПрМБААЕ
ЗздАа12:СіпсагАТВ - 355:прМВБААЕ зДа12:СоспигАТВ2 я 355:пПрМБААЕ
Вказані генетичні конструкції застосовують для одержання трансформованих рослин тютюну сортів Вісконсин 38 і лінії з високим вмістом масла, трансформованої Т-ДНК із рОР3502.
Спостерігається, що рослини, трансформовані конструкціями з одним геном ЕАТВ, який експресується промотором 355, були істотно меншими, ніж трансформовані відповідною конструкцією ЕБАТВ, що експресується промотором ЗАС12, або конструкціями із чотирма генами. Вважалося, що менший розмір рослин спричинений синтезом СЛЖК, які не інкорпорувалися ефективно у ТАГ.
Обговорення
В даному дослідженні виявлено, що продукування С12:0 у листових клітинах становить всього близько 1,6 95 від загального вмісту жирних кислот після експресії тільки Штбса-ТЕ (Табл. 7). Додавання гена для експресії Агаїйп-УМК! здійснює більш виражений вплив на акумуляцію С12:0 і С14:0 в листовій тканині, ніж додавання І РААТ кокоса (Фіг. 4 і 5). Це показує, що МУКІ1 в комбінації з тіоестеразою значно підвищує акумуляцію СЛЖК у листових клітинах, діючи синергетично. Важливо відзначити, що знайдена акумуляція більшої частини С12:0, С14:0 і С16:0 в листі у формі ТАГ, ліпіду, що не акумулюється із значними рівнями у листі дикого типу.
Дані експерименти продемонстрували, що клітини у вегетативних частинах рослин можуть бути модифіковані таким чином, щоб продукувати СЛЖК, особливо С12:0 і С14:0, у ТАГ з високими рівнями. Додатково, рівні С16:О були значно підвищеними.
Приклад 10, Вплив різних поліпептидів фактору транскрипції на акумуляцію ТАГ
В експериментах із УУКІ! і ОСАТ, про які повідомлялося раніше (Маппегеске із співавт., 2013), застосовували синтетичний ген, що кодує АЇМУК І1 А. (Паійапа (номер доступу ААР80382.1), і синтетичний ген, що кодує ЛІЮСАТІ, також із А. Іпаіапа (номер доступу ААЕ19262; 5ЕО ІО МО: 1). Для порівняння інших поліпептидів МУКІ з АЇМУКІ! щодо предмет їх здатності об'єднуватися з роАТ для підвищення вмісту масла, інші послідовності, що кодують МУКІ, були ідентифіковані і застосовані при генерації конструкцій для експресії у листі М. Брепіпатіапа. Нуклеотидні послідовності, що кодують фактори транскрипції А. (паійапа МУКІЗ (номер доступу ААМУ91814.1,
ЗЕО ІЮ МО: 205) і МУКІ4 (номер доступу МР 178088.2, ЗЕО ІЮО МО: 206) (То із співавт., 2012), синтезовані і вставлені у вигляді фрагментів ЕсОоВІ в руР3343 під контролем промотору 355.
Зо Результуючі бінарні вектори експресії позначені як рої! 027 і ро 028, відповідно. Кодуючу послідовність для МУКІТ (А5УУКІ1, ЗЕО ІЮ МО: 207) вівса (Амепа заїїма) ампліфікують методом
ПЛР із вектора, запропонованого проф. 5(еп 5іутпе (Шведський університет сільськогосподарських наук), із застосуванням фланкуючих праймерів, що містять додаткові сайти ЕсоВІ. Ампліфікований фрагмент вставляють у рУРЗ343 з одержанням рої 055.
Послідовність-кандидат МУКІЇ із 5. Бісоїог (номер доступу ХР 002450194.1, 5ЕО ІЮ МО: 208) ідентифікована пошуком ВІ А5Тр на сервері Національного центру біотехнологічної інформації (НЦБІ) із застосуванням амінокислотної послідовності МУКІЇ са тауз5 (номер доступу
МР 001137064.1, 5Е6О ІО МО: 209) як запиту. Кодуюча білок ділянка гена УУКІ15. бБісоїог (З5БМУ/ ВІТ) синтезована і вставлена у вигляді фрагмента ЕсоВіІ у руР3343 з одержанням рої 056.
Ген-кандидат, що кодує МУКІ!, ідентифікований із транскриптоми китайського сального дерева (Тіадіса зерітега; Т5УУКІ!Ї, ЗЕО ІЮ МО: 210) (Одау із співавт., подана). Кодуюча білок ділянка синтезована і вставлена у вигляді фрагмента ЕсоНіІ у роуР3343 з одержанням рої 070, Бінарні вектори руРЗ3414 ії руРЗ3352, що містять кодуючі послідовності для експресії поліпептидів М/КІ! і раАТІ А. Шаїйапа є такими, як описано Маппегске із співавт. (2013).
Плазміди, які містять послідовності, кодуючі різні МУКІ, вводять у листову тканину М. репінатіапа для тимчасової експресії із застосуванням у всіх процедурах інокуляції гена, що кодує білок вірусного супресора р19, як описано у Прикладі 1. Гени, що кодують поліпептиди
МУКІ, оцінюють окремо або в комбінації з геном ацилтрансферази ОСАТІ, причому завдання останнього полягає в забезпеченні вищого біосинтезу і акумуляції ТАГ. Позитивним контролем в даному експерименті служить комбінація генів, що кодують фактор транскрипції МУКІ1 А. ІНаїїапа і ЛІЮСАТІ. Всі процедури інфільтрації здійснюють у трьох екземплярах із застосуванням трьох різних рослин, і рівні ТАГ аналізують, як описано у Прикладі 1. Експресія більшості індивідуальних поліпептидів МУК! за відсутності екзогенно введеного ОСАТІ приводить до підвищених, але все ще низьких рівнів ТАГ (« 0,23 95, в перерахунку на суху масу) в інфільтрованих зонах листя, в порівнянні з контролем, що містив тільки конструкцію р19 (Фіг. 7).
Виключення становить Т5УУКІ1, який, сам по собі, схоже, не підвищує значно рівнів ТАГ. Крім того, відмінності у рівнях ТАГ, одержаних при експресії різних факторів транскрипції УУКІ, самі по собі не є великими. Як А5МУКІ!1, так і ББУМКІ! давали рівні ТАГ, подібні до власне АЇМУКІ1.
Аналіз складу жирних кислот ТАГ виявляє тільки незначні зміни, за винятком підвищених рівнів
С18:149 при експресії АМУКІЗ в інфільтрованих тканинах листя (Табл. 9).
Таблиця 9
Склад жирних кислот ТАГ у зразках листя М. репіпатіапа, інфільтрованих різними химерними генами для експресії МУКІ (п - 3).
Всі зразки додатково інфільтровані конструкцією Р19. Зразки ТАГ додатково містять 0,1-0,4 95
С14:0;0,5-1,2 95 С16:3; і 0,1-0,7 95 С18:1А11.
Інфільт- ровані С16:0 С16:1 С18:0 С187 С18:2 С18:3п3 С2го:0 Сго С2г2:0 С2га:о гени ин 3364 05жОА 89ж22 4706 169ж1,0 322 ж 11ж02 0815 00 0,0
МІВ 355234 07ж02 5208 54ж1,3 171ж1,0 331ж2,7 08жО1 05:06 030,0 00
МІВІЗ 2713ж1,6 0902 48ж03 102ж1,5 161-410 37812 0801 0бж0О 0102 00
МІВІй 301204 10504 5208 46ж06б 172204 3811, 08ж01 1,313 00 00
А5МУВІ 35,73, 1,704 530,7 6503 154ж04 3161, 08ж0О1 04ж0,7 03ж01 00
ОБМУВІ 374ж08 1,903 4803 70ж1,2 15203 30803 0801 0406 03ж00 0,0
Т5МУВІ 34548 00 94-82 591,7 16,050,7293-124 00 н/в 00 00 пен З1Ож2и божоО! 871,3 80ж23 249ж1,5 2214? 2001 00 Обов бохо дя т277 жо 0300 70ж01 172207 279ж09 147ж03 24ж02 03200 1101 08ж02 а "З00жО8 Обом 5904 13929 21,5ж11 21308 2801 02ж00 18ж01 1,002 дя т270ж05 0201 85202 580,7 23908 252ж1,3 3З5ЖжО1 0200 2102 1,7к02 пе 733805 11ж01 550,9 122ж16 260519 16313 22ж02 0200 12ж01 Об8жо0
А 734605 1,301 56ж04 13916 23613 15806 22ж01 0200 12ж01 божо сдкн т254ж05 02ж00 94ж01 7,7ж1,0 27,01, 221524 Зб? 02жО0 1,802 1,302
На протилежність цьому, відмінності у виходах ТАГ при експресії різних поліпептидів МУКІ є більш вираженими при коекспресії з ацилтрансферазою АЮШЮСАТІ. Це знову демонструє синергетичний вплив коекспресії М/УКІ! ії ОСАТ на біосинтез ТАГ у інфільтрованій тканині листя
М. Бепіпатіапа, як повідомляється МаппегоКе із співавт. (2013). Проміжні рівні ТАГ
Зо спостерігаються при коекспресії ОСАТІ із векторами експресії АЇМУКІЗ, АЇМУКІ4 і Т5УУКІ1, тоді як рівні, одержані з А5МУКІЇ і АМУКІЇ, є значно нижчими. Як результат, що не міг бути передбачений, найвищі виходи ТАГ одержані при коекспресії ОСАТ із 5БУМУКІ!, навіть якщо експеримент проводять на клітинах дводольних. Аналіз складу жирних кислот виявляє підвищені рівні ТАГ С18:189 ї знижені рівні С18:3А491215 (АЛК) у разі 5БУУКІЇ1, А5УМКІ! і позитивного контролю АЇМУКІЇ (Табл. 9). Однак, на відміну від АЇМУКІ!, експресія. А5УМКІ! і
ЗБУМКІЇ в обох випадках продемонструвала підвищені рівні С16:0, в порівнянні з негативним контролем р19. Цікаво, що зразки інфільтрованого АЇМУКІЗ листя продемонстрували відмінний профіль ТАГ, збагачений С18:129, тоді як С16:0 і АЛК зміни тільки злегка торкнулися.
Даний експеримент демонструє, що фактор транскрипції УУКІЇ 5. Бісоїог, 5БМ/ВІ, перевершує АЇМУКІ1 при коекспресії з ОСАТ з точки зору підвищення рівнів ТАГ у вегетативних частинах рослини. Крім того, авторами винаходу зроблений висновок про те, що фактор транскрипції з однодольної рослини, наприклад, МУКІ1, міг би належним чином функціонувати у клітині дводольної рослини, і, насправді, навіть міг би володіти перевершуючою активністю, в порівнянні з відповідним фактором транскрипції дводольної рослини. Крім того, фактор транскрипції дводольної рослини міг би належним чином функціонувати у клітині однодольної рослини.
Застосування інших факторів транскрипції
Одержані генетичні конструкції для експресії кожного з 14 різних факторів транскрипції у рослинних клітинах з метою оцінки їх здатності до функціонування в плані підвищення рівнів
ТАГ у комбінації з іншими генами, що беруть участь в біосинтезі та акумуляції ТАГ. Вказані фактори транскрипції були кандидатами як альтернативи МУКІї або для додавання до комбінацій, що містять один або більше із факторів транскрипції МУКІї, ГЕС1 ї ГЕС2, для застосування в рослинних клітинах, особливо у вегетативних частинах рослини. Їх вибір значною мірою базується на повідомленнях про їх участь в ембріогенезі (огляд у Ваша і І еріпіес (2010), а також Ікеда із співавт. (2006)), подібно до ГЕС2. Таким чином, проведені експерименти для оцінки їх функції із застосуванням системи експресії М. бепінатіапа (Приклад 1), як указано нижче.
Нуклеотидні послідовності ділянок, що кодують білок для наступних факторів транскрипції, є кодон-оптимізованими для експресії в М. бРепіпатіапа і М. їарасит, синтезовані і субклоновані у вигляді фрагментів МоїІ-Засі у відповідні сайти р.)Р3343: А. (айапа РОЗ (рої 164) (І пег55еп із співавт., 1998; номер доступу ААС35247; 5ЕО ІЮО МО:160), А. Шаїапа І ЕС. (рої 165) (Купа із співавт. 2003; номер доступу ААМ15924; 5ЕО ІЮ МО:157), А. Шаїїапа ГЕС1 (рої! 166) (І одгап із
Зо співавт., 1998; номер доступу ААС39488; 5ЕБЕО ІО МО:149), б. тах МУВ7З (ро 167) (Ци із співавт., 2014; номер доступу АВНО2868; 5ЕО ІЮ МО:221), А. ІШаїїапа Б2ІР5БЗ (рої 168) (Аїопзо із співавт., 2009; номер доступу ААМ14360; 5ЕО ІО МО:222), А. ІПпаійапа АСІ 15 (рої 169) (2пепод із співавт., 2009; номер доступу МР 196883; 5ЕО ІЮ МО:223), А. (Шайапа МУВ118 (номер доступу
АА558517; рої 170; ЗЕО ІЮ МО:224), МУВ115 (Умапд із співавт., 2002; номер доступу АА5ЗІ10103; рої! 171; ЗЕО ІО МО:225), А. ІПаййапа ТАММЕЇ (рої 172) (Матадівєпі із співавт., 2005; номер доступу ВАЕ44475; 5ЕО ІЮО МО:226), А. Іпайапа УМО (ро!1І-173) (І аих із співавт., 1996; номер доступу МР 565429; 5ЕО ІЮ МО:227), А. Іпаійапа ВВМ (ро! 174) (Вошніег із співавт., 2002; номер доступу ААМ33893, 5ЕО ІЮО МО:145), В. пари5 ОЕКга! (номер доступу АЕВ74090; ро1І 177; 5ЕО
ІЮО МО:228) и СЕК2а2 (номер доступу АЕВ74089; роїІ/ 178; 5ЕО І МО:229) (Ци із співавт. (2012с)). Крім того, кодон-оптимізована версія фактору транскрипції РНКІ А. Паїїапа, що приймає участь в адаптації до умов фосфатного голодування при високій освітленості, так само субклонована у руР3343 (рої 189) (Мії550оп із співавт. (2012); номер доступу ААМ72198; ЗЕО ІЮ
МО: 230). Вказані фактори транскрипції коротко описані в Табл. 10.
Як скринінговий тест для визначення функції вказаних факторів транскрипції, генетичні конструкції вводять у клітини листя М. репіпатіапа, як описано у Прикладі 1, із геном, що кодує роАТІ, або без нього, або з іншими комбінаціями генів, такими як кодуючі УУКІ1, ГЕС2, празОР1 або тіоестеразу ЕАТА, і визначають загальний вміст ліпіду і склад жирних кислот у клітинах листя. Фактори транскрипції, що істотно підвищують загальний вміст ліпіду, ідентифіковані і відібрані.
Для стабільної трансформації рослин із застосуванням генів, що кодують альтернативні фактори транскрипції, одержані наступні бінарні конструкції. Гени для експресії факторів транскрипції використовують промотор 550 або промотор 5БАС12. Показано, що підвищена експресія ембріогенних факторів транскрипції, таких як ГЕС і ГЕС2, індукує різні плейотропні ефекти, небажані в даному контексті, включаючи соматичний ембріогенез (ЕРеепеу із співавт. (2012); Запіо5-Мепаола із співавт. (2005); Зіопе із співавт. (2008); (опе із співавт. (2001); Зпеп із співавт. (2010)). Для мінімізації можливості негативного впливу на розвиток рослин і вихід біомаси, специфічні для тканини або стадії розвитку промотори переважно є конститутивними промоторами з точки зору управління ектопічною експресією основних регуляторів ембріогенезу. (510)
Таблиця 10
Додаткові фактори транскрипції і генетичні конструкції для їх експресії . Фактор Довжина
С Плязмда 3 ранами | бно | смиокютотю | Номердоступу
Приклад 11. Сайленсинг ТАГ ліпази в рослинах, що акумулюють високі рівні ТАГ у листовій тканині
Цукрозалежна ТАГ ліпаза 1 (БОР) продемонструвала спою роль в обігу ТАГ у не насіннєвих тканинах А. ІПаїїапа, а також в ході проростання насіння (Еазітопа із співавт., 2006; КепПу із співавт., 2011; КеПу із співавт., 2013). 5ОРІ експресується в насінні, що розвивається, а поліпептид ОРІ додатково присутній у зрілому насінні у зв'язку з масляними включеннями (але не в ролі покриття). Сайленсинг гена, який кодує БОР, приводив до невеликого, але значущого підвищення рівнів ТАГ у корінні і стеблах А. ІПаїїапа (« 0,4 95, в перерахунку на суху масу), тоді як у листовій тканині спостерігається ще менш виражене збільшення (КеїУ із співавт., 2013).
Для визначення можливості подальшого підвищення рівнів ТАГ у тканинах листя і стебла, в порівнянні з коекспресією АМУКІ!Ї ії АЮСАТІ, розроблений експеримент із сайленсингом ендогенного гена ОРІ в рослинах М. їарбасит, що є гомозиготними по Т-ДНК, яка містить гени для трансгенної експресії поліпептидів МУКІ, ОСАТІ ії олеозину (МаппегсКе із співавт., 2014).
Пошук ВГАБТ за транскриптомою М. репіпатіапа (Маїт із співавт., 2012) із застосуванням нуклеотидної послідовності АІЗОРІ як запиту ідентифікував транскрипт (Мбми5іг6385200, ЗЕО 10
МО: 173) з гомологією по відношенню до гена ЗОРІ А. Іпаїйапа. Ділянка (ЗЕО ІЮ МО: 174) розміром 713 пар основ вибрана для опосередкованого шпилькою сайленсингу гена.
Сконструйований синтетичний фрагмент розміром 3,903 тис. пар основ на базі вектора
РНЕГІГЗОАТЕТ12, який містить, у наведеному порядку, конститутивний промотор епТСОРа, фрагмент БОРІ М. репіпнатіапа розміром 713 пар основ у смисловій орієнтації, фланкований сайтами анВ1! і ак«В2, інтрон Рак, послідовність інтрону саї у зворотній орієнтації, другий фрагмент ЗОРІ М. репіпатіапа розміром 713 пар основ, рланкований сайтами акв!1 і анвг, у зворотній (антисмисловій) орієнтації, і ділянка термінатора/сайт поліаденілування ОС5 3 (Фіг. 8). Вставку субклонують у руРЗ3303 із застосуванням рестрикційних сайтів бтаї і Каві, причому одержаний вектор експресії позначений як роОІГ 051. Дана химерна ДНК містить ген селекційного маркера, що забезпечує резистентність до гігроміцину. рОІГО51 застосовують для одержання трансформованих рослин М. їтабасит шляхом опосередкованої Адгобрасієгйцт трансформації. Початкові рослинні клітини одержують від
Зо трансгенних рослин, гомозиготних по Т-ДНК руРЗ502 (МаппегекКе із співавт., 2014). Трансгенні рослини, що містять Т-ДНК із рої 051, відбирають за резистентністю до гігроміцину і переносять в грунт у теплиці або в кімнату з контрольованим середовищем для продовження росту. В ході розвитку рослини зразки листя збирають з підтверджених подвійних трансформантів (Рослини ТО) перед цвітінням, у період цвітіння і на стадії зав'язування насіння, і в кожному визначають рівень ТАГ. Трансгенні рослини, що містять тільки низькі рівні ТАГ у листі або містять ТАГ на тому ж рівні, що їі контрольні, ідентифікують за допомогою екстракції ліпіду із зразків листя і аналізу плям ТШХ та відкидають. Рівні ТАГ у популяції трансформантів, що залишилася, кількісно визначають методом ГХ, як описано у Прикладі 1. Перед цвітінням більшість із вказаних рослин демонструє значно підвищені рівні ТАГ (» 5 95 від сухої маси листя) в листовій тканині, тоді як у 4 рослинах були присутні рівні ТАГ вище 10 95 (Табл. 11).
Максимальний рівень ТАГ, спостережуваний у листі вказаних рослин, перед цвітінням, становив 11,3 95 в рослині 51-13. Для порівняння, трансгенні рослини материнської лінії М. Тарасит, що експресують АМУКІЇ, АШЮСАТІ і олеозин, демонструють рівні ТАГ приблизно 2 95 перед цвітінням і близько 6 95 в ході цвітіння (МаппегскКе із співавт., 2014). Таким чином, додавання
ЗОР'1-інгібуючої конструкції до комбінації АЇМУКІЇ плюс АІЮСАТІ є синергетичним з точки зору підвищення рівнів ТАГ у цих рослинах. Несподівано було знайдено, що вміст ТАГ у листі, зібраному з подвійних трансформантів у стадії цвітіння, був значно підвищений і становив 30,5 95, в перерахунку на суху масу (Табл. 12), що відповідає підвищенню у 5 разів відносно рослин без сайленсингу БОР1. До великого здивування авторів винаходу, рівень ТАГ досяг приголомшливого значення 70,7 о (90 від сухої маси) у зразках старіючого листя (зелених і жовтих) на стадії зав'язування насіння (Табл. 13). Застосування ЯМР для вимірювання вмісту масла в суцільному листі рослин тютюну на стадії зав'язування насіння, вміст ТАГ у деяких зелених листах, що почали старіти, становив близько 4395, а в деяких коричневих, дегідратованих листах становив 42 95. Якщо таке листя затиснути між двома коричневими паперовими фільтрами, то масло, що виділяється, вбирається в папір і робить його прозорим, тоді як для листя контрольного тютюну такого явища не спостерігалося, що пропонує простий спосіб скринінгу для виявлення рослин із високим вмістом масла.
Два первинних трансформанти (Моб1, Моб9), кожен із яких містить Т-ДНК із руРз3502 і ро1І 51 і демонструє високі рівні ТАГ, проаналізовані цифровою краплинною ПЛР (цкПЛР) із застосуванням специфічної для гена гігроміцину пари праймерів, з метою визначення кількості інсерцій Т-ДНК рої 51. Рослина, позначена як Меб61, містить одну інсерцію Т-ДНК із рої! 51, тоді як рослина Моб9 містить три інсерції Т-ДНК із рОІЇ51. Проведений повторний скринінг рослин- нащадків Т1 обох ліній методом цкПЛР з метою ідентифікації гомозиготних, гетерозиготних і нульових рослин. Рослини-нащадки рослини Моб1, що не містять інсерцій із рої 51 (нульові; всього 7) або 2 інсерції Т-ДНК (тобто, гомозиготні по вказаній Т-ДНК; всього 12) відібрані для подальшого аналізу. Крім того, рослини-нащадки лінії Моб69, що містять нульові інсерції Т-ДНК від рОЇЇ51 (нуль; всього 2) або 2 такі інсерції (всього 15) або 4 або 5 інсерцій (всього 5) зберігали для подальшого аналізу.
Таблиця 11
Рівні ТАГ і склад жирних кислот ТАГ (95 від сухої маси листя) в листовій тканині рослин М. тїарасит (Покоління ТО), що експресують трансгени М/ВІТ, ОСАТІ і олеозину та є супертрансформованими Т-ДНК, кодуючою конструкцію шпильки ЗОРІ (ро О51), в порівнянні з диким типом (нетрансформований). Зразки листя зібрані протягом вегетативної стадії (перед цвітінням). Зразки ліпіду додатково містили 0,0-0,2 95 С16:3, 0,0-0,4 95 С20:1; 0,0-0,1 96 Сб20:2п-6
Лінія С14:0 С16:0 С1671 сС18:0 Сб187 С187лаї сС18:2 С18:303 Сб20:0 0б22:0 б24:0 95 ТАГ 1 дикий 2,5 202 Б00 8,6 5,6 0,0 18,9... 442 0,0 0,0 0,0 01 тип 23-31 00 660 --БМБ00 0,0 34,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 23-29. 00 361 1,4 Би 21,0 0,8 23,3 7 2,4 1,5 1,1 2,9 57 0,1 472 093 54 192 1,9 0,0 212 21 12 1,1 3,4 23-1 02 30,8 1,9 49 А412 1,0 13,7 2,4 1,9 1,1 0,7 4,0 58 01 314 02 3,6 122 1,6 33,6 132 1,7 1,0 0,7 4,0 21 01 319. ДЦ 20 3,9 10,7 1,5 32,3 (152 1,9 1,1 0,8 4,7 23-30 02 щЦ(З41 0,7 49 БКмМ294 0,9 17,5 5,7 2,9 1,68 1,7 4,9 40 0,1 344 02 4,3 14,3 1,5 29,7.11,8 1,7 1,0 0,7 5 22 0,1 358 Щщ02 4,3 12,8 1,5 29,8 11,7 1,68 1,0 0,7 5 15 0,1 372 (о 3,9 8,6 1,7 29,3 (16,0 1,5 0,8 0,6 Б 16 0,1 ЗБ (о 3,9 13,9 1,7 28,5 13,6 1,4 0,7 0,6 5,3 25 0,1 344 02 3,9 15,4 1,68 27,6 132 1,6 0,9 0,7 5,4 65 01 26,95Д 02 3,8 19,2 1,5 35,7 91 1,7 0,8 0,6 5,5 12 02 31,7 ДФ 02 3,6 15,9 1,7 30,5 12,6 1,6 0,9 0,7 5,5 28 0,1 314 02 3,5 13,5 1,7 32,7 13,7 1,5 0,8 0,6 5,6 26 0,1 314 02 3,5 13,5 1,7 32,7 13,7 1,5 0,8 0,6 5,8 19 0,1 305 ЩД щ02 3,7 (14,9 1,6 31,7. 13,7 1,7 0,9 0,7 5,9 0,1 304 02 37 21,3 2,2 31,2 7,4 1,6 0,8 0,7 5,9 (в 0,1 375ЙДЩ 02 44 105 1,7 31,9. 10,6 1,5 0,7 0,6 6,0
Таблиця 11
Рівні ТАГ і склад жирних кислот ТАГ (95 від сухої маси листя) в листовій тканині рослин М. тїарасит (Покоління ТО), що експресують трансгени М/ВІТ, ОСАТІ і олеозину та є супертрансформованими Т-ДНК, кодуючою конструкцію шпильки ЗОРІ (ро О51), в порівнянні з диким типом (нетрансформований). Зразки листя зібрані протягом вегетативної стадії (перед цвітінням). Зразки ліпіду додатково містили 0,0-0,2 95 С16:3, 0,0-0,4 95 С20:1; 0,0-0,1 96 Сб20:2п-6 4 0,1 342 02 3,9 11,9 1,7 32,6 12,5 1,4 0,6 0,5 б 42 0,1 306 02 4,5 17,3 1,68 32,7 9,2 1,7 0,9 0,7 6,3 45 0,1 316 02 3,9 18,2 1,68 30,4 10,5 1,6 0,8 0,6 6,6 56 01 26,08 Д 02 42 г00 1,5 34,3 8,7 1,9 1,0 0,8 6,7
АЗ 01 28,5 ДЩД 02 3,8 18,6 1,6 341 9,6 1,7 0,9 0,6 7 32 0,1 28,1 0,2 3,4 (16,8 1,68 35,5 10,6 1,6 0,8 0,6 7,2 70 01 26,33 (02 3,5 25,5 1,68 31,0 8,9 1,3 0,6 0,5 7,4 69 01 30,9 ЩДЮ02 4,0 15,7 1,7 31,7.12,5 1,5 0,7 0,5 7,4 61 0,1 310 02 4,0 16,4 1,6 341 9,5 1,5 0,7 0,5 7,5 0,1 33,3 (01 3,8 11,7 1,6 31,4 14,6 1,5 0,8 0,6 7,8 53 01 33,1 01 3,8 18,2 1,9 29,85 104 1,3 0,6 0,5 8,4 18 0,1 29394 1.02 3,7 (18,4 1,7 32,8 (10,9 1,4 0,6 0,5 91 51-1 0,1 290. 12,0 3,6 171 1,6 33,8 9,9 1,4 0,7 0,5 9,2 47 0,1 305 01 42 ДФ 203 1,5 31,9 8,3 1,5 0,7 0,5 9,3 51-60 0,1 30,7 2,6 3,4 (15,8 1,9 312 11,6 1,3 0,7 0,5 102 46 0,1 248 М01 3, щ 28,8 1,6 30,3 7,9 1,3 0,6 0,5 10,2 48 01 33,1 01 3,6 16,5 1,7 304 114 1,4 0,7 0,5 10,7 51-13 101 254.ЖД 222 3,3 (23,6 1,6 32,7 8,3 1,3 0,6 04 113
Таблиця 12
Рівні ТАГ і склад ТАГ (95 від сухої маси листя) в листовій тканині рослин М. їарбасит (Покоління
ТО), що експресують трансгени МУВІТ, ОСАТІ і олеозину та є супертрансформованими Т-ДНК, кодуючою конструкцію шпильки ОРІ (рої 051). Зразки листя зібрані в період цвітіння.
Лінія С14:0 С16:0 С161 С18:0 С1871 С187а С182 С18:Зп б20:0 0220 б24:0 95 ТАГ 11 З дикий 02 14,8 0,6 8,5 9,2 0,3 20,0 445 0,6 0,3 0,4 0,3 тип 21 01 25,7 21 3,7 21,2 1,0 31,0. 11,7 1,5 0,8 0,6 8,8 56 01 33,2 1,4 4,9 20,7 1,0 26,3 74 21 1,3 0,9 9,2 65 01 24,7 1,5 3,8 28,5 1,0 29,0 7,5 1,7 0,9 0,6 12,0 42 01 34,0 1,5 4,4 16,8 1,1 29,4 7,6 2,2 1,4 11 13,1 28 01 29,5 2,4 3,5 16,4 12 28,7. 14,6 1,5 1,0 0,6 13,2 зо 01 1941 1,9 3,3 31,8 1,0 30,6 9,3 1,3 0,7 0,4 13,6 20 01 22,4 1,68 3,7 27,4 0,9 29,0. 10,6 1,7 0,9 0,7 14,6 19 01 20,9 1,7 З 28,4 1,0 31,6 10,0 1,4 0,8 0,5 15,7 12 01 24 4 1,6 3,6 221 0,9 35,1 8,9 1,4 0,8 0,5 15,8 16 01 21,5 1,68 3,4 34,9 1,0 262 7,9 1,4 0,7 0,5 16,4 57 01 25,0 1,7 41 27,7 1,0 28,4 8,4 1,6 0,9 0,6 17,2 26 01 22,5 1,6 3,5 28,4 1,1 31,2 7,6 1,7 1,0 0,7 18,0 39 01 30,0 2,2 3,7 22,7 1,6 24,3 11,6 1,5 0,9 0,7 18,1 70 01 221 21 3,6 36,3 1,0 242 7,2 1,4 0,7 0,5 18,3 01 21,4 1,68 3,7 344 1,0 27,5 6,9 1,4 0,8 0,5 1941 32 01 23,3 1,6 32 24,4 1 33,6 9,0 1,5 0,9 0,6 19,5 18 01 23,4 21 3,3 26,4 0,9 302 10, 1,4 0,7 0,5 20,6 20 (о 22,3 1,6 3,6 30,3 0,9 28,5 91 1,6 0,9 0,6 20,8 43 01 28,1 2,0 3,5 21,5 12 29,9. 102 1,5 0,9 0,6 21,2 4 01 27,9 1,9 3,7 26,3 12 262 9,3 1,5 0,8 0,5 21,8 1 01 23,8 2,0 3,7 30,2 1,1 28,1 8,0 1,4 0,7 0,5 22,3 61 01 242 2,2 4,0 32,0 1,1 25,2 7,8 1,5 0,8 0,6 23,9 (610) 01 24 4 2,2 3,7 31,0 1,1 25,4 8,6 1,5 0,8 0,6 25,0
Таблиця 12
Рівні ТАГ і склад ТАГ (95 від сухої маси листя) в листовій тканині рослин М. їарбасит (Покоління
ТО), що експресують трансгени МУВІТ, ОСАТІ і олеозину та є супертрансформованими Т-ДНК, кодуючою конструкцію шпильки ОРІ (рої 051). Зразки листя зібрані в період цвітіння. 46 01 23,3 2,0 3,7 32,9 1,0 24,0 9,2 1,6 0,9 0,7 25,7 б 01 31,5 2,6 3,5 19,5 1,6 25,5. (12,7 1,3 0,7 0,5 26,3 13 01 21,8 1,9 3,6 351 1,0 25,1 81 1,5 0,8 0,5 26,8 69 01 21,8 1,6 4,3 33,4 0,8 26,9 7,6 1,7 0,8 0,5 26,9 53 01 271 21 3,5 241 12 29,4 9,2 1,4 0,68 0,5 29,2 48 01 29,5 2,5 3,9 211 1,3 29,0 9,2 1,6 0,8 0,6 29,5 47 01 30,9 2,5 3,4 19,4 1,5 28,5. 10,6 1,3 0,8 0,5 30,5
Таблиця 13
Рівні ТАГ і склад ТАГ (95 від сухої маси листя) в листовій тканині рослин М. їарасит (Покоління
ТО), що експресують трансгени МУКІТ, ОСАТІ і олеозину та є супертрансформованими Т-ДНК, кодуючою конструкцію шпильки 5ОРІ1 (рої 051). Зразки листя зібрані у стадії зав'язування насіння. У - жовте листя, о - зелене листя.
Вміст
Зразок С14:0 С16:0 ств 163 Сів стви 162 ства 183 собою З! бою сою пЗ а11 (до см) дт 00 130 00 00 84 70 00 24,7 468 00 ДЦ 00 ЦД 00 Д.О00 2003 73 00 266 1, Щ 00 8,5 394 00 27,0 256 11 ЩД 00 Д00 Д.00 100,6 18 01 150 18 00 48 144 04 439 163 1, Дщ04 07 Д0,5ЙЖ 3
А 01 223 12 0,3 44 24,0 06 328 108 1, щД 03 Д.08 Д605Д Ф.Б552 19 01 145 15 Щ 003 30 216 0, 448 106 14 04 07 ДЩ(04 72 01 26,724 Щщ01 щ43 24,9 1,0 252 11,3 1,9 Щщ 03 10 Щ 08 96 зо 01 186 1,5 Щщ0,ж3 3,5 248 0, 389 89 14 03 07 04 99 65 01 222 14 03 35 30,9 0, ЩД291 8/1 17 0,3 щ1,0.щ.06 11,3 42 01 236 15 Щщ02 41 290 09 303 .Щ.59 20 04 13 0,8 120 32 01 213 13 03 33 214 09 40,7 7/1 17 0,3 щ1,0 06 135,7 39 01 258 1, ДЩДН03 36 272 12 272 82 20 04 14 0,9 140 01 23,0 01,5 Щщ01 3,8 280 09 326 63 18 03 10 Щ 0,6 144 13 01 269 28 Щщ01Й ДЩЮ3,7 326 11 216 76 16 03 ЩД 08 0,7 146
В45 Щщ01 234 15 Щ602 41 278 щЩД.09 322 6/1 18 0,3 Щщ1,0 06 14,6 21 01 231 16 02 35 274 08 312 82 18 03 11 0, 150 9 01 232 14 02 3,5 23,ж3 08 356 85 16 03 09 Щщ0,5 154 12 01 245 14 02 34 22,3 08 362 74 1, Щ03 11 0, 159 4 01 219 18 02 36 228 09 359 95 16 03 09 0,6 161 43 01 23,5 14 02 40 253 08 343 66 18 03 11 0,7 16,68 26 01 222 13 02 38 254 08 352 65 21 03 13 08 172 16 01 222 18 03 34 299 08 301 8/1 15 03 ЩД.09 Д 06 182 1 01 274 27 01 щж40 320 12 229 63 16 03 08 0,7 18,7 70 01 271 27 02 3,7 326 1,0 215 76 16 03 Д08 0, 190 б 01 306 26 02 3,3 13,0 14 328 129 14 02 Д Я09 06 215 47 01 280 21 02 36 18,55 1,3 332 99 1,5 ЩД02 ЦД .46я09 ЩЮ600,5 21,6 69 01 254 23 01 43 324 09 235 74 18 03 Д08 ЩД06 225 53 01 239 21 02 34 282 11 302 76 1,5 Щ 03 Д 09 Д Д.П0,5 232 46 01 259 27 02 3,7 32,0 11 228 82 16 03 Д08 0, Д хЖ240 43 01 23,7 16 02 31 226 ЩД.09 376 74 14 02 Д648 Д660,5 240 48 01 274 22 01 щ41 253,0 11 313 69 19 Щщ03 10 ДЮ ф0,7 244 28 01 23,00.14 02 3,3 248 1,0 356 73 16 03 09 06 266 1У 01 243 25 01 38 35,7 11 226 67 16 03 0,7 ДЩ 06 281 5ба 01 25,5 18 02 3,7 26, 0,9 298 73 18 Щщ03 Щ1,1 0,7 33, 57 01 251 19 Щщ02 32 201 1,0 352 100 1,5 Щщ 03 Д 09 Д.Щ0,6 354 56 02 248 14 02 41 272 Д.08 310 60 20 04 12 Щщ0, 396
Таблиця 13
Рівні ТАГ і склад ТАГ (95 від сухої маси листя) в листовій тканині рослин М. їарасит (Покоління
ТО), що експресують трансгени МУКІТ, ОСАТІ і олеозину та є супертрансформованими Т-ДНК, кодуючою конструкцію шпильки 5ОРІ1 (рої 051). Зразки листя зібрані у стадії зав'язування насіння. У - жовте листя, о - зелене листя.
Вміст
Зразок С14:0 С16:0 ств 163 Сів стви 162 ства 183 собою З! бою сою пЗ а11 (до см) 6б9М 01 24,72 02 41 320 08 243 78 1,9 ЩЮ03 ЩД09 Д.0,7 465
В8бОМ 01 24,77 2/1 02 41 320 08 244 79 1,9 Щ0З 09 Д0,7 468 61 01 266 2,77 01 36 316 11 238 74 14 03 07 Д 0,5 492 бІМ 01 2568 24 01 3, 324 11 243 69 1,5 03 0,7 ДЮ 0,5 581 (610) 01 246 24 02 36 341 1,0 244 64 1,5 Щщ03 Д0,и Д60,5 70,7
Відібрані рослини Т1 вирощували в теплиці у той же час і за тих же умов, що і контрольні рослини. Зразки тканини зеленого листя рослин Т1, зібрані перед цвітінням, сушать і визначають вміст загальних жирних кислот (ЗЖК) і ТАГ методом ГХ. Вміст ЗЖК в рослинах, що містять обидва Т-ДНК, варіює від 4,6 95 до 16,1 95, в перерахунку на суху масу, зокрема рівні
ТАГ в одному і тому ж листі варіюють від 1,2 95 до 11,8 95, в перерахунку на суху масу (Фіг. 9).
Це набагато більше, ніж у рослинах, що містять тільки Т-ДНК із роуР3502, вирощених пліч-о-пліч в однакових же умовах і проаналізованих на тій же стадії росту, що знову демонструє синергію між зниженням активності ТАГ ліпази і комбінацією М/КІїЇ плюс ЮОСАТ. У рослинах, що містять тільки Т-ДНК руР3502, присутнє від 4,2 95 до 6,8 95 ЗЖК, зокрема рівні ТАГ від 1,4 95 до 4,1 95, в перерахунку на суху масу (Фіг. 9). Вміст у рослинах дикого типу в середньому становить близько 0,8 95 ЗЖК, зокрема менш ніж 0,5 95 ТАГ, в перерахунку на суху масу. Склад жирних кислот у загальному вмісті жирних кислот і вміст ТАГ у листі кожної з ліній, Моб1 і Моб9, є подібним до їх складу в листі, що містить тільки Т-ДНК із руР3502 (материнський). В порівнянні із контрольним листям дикого типу, рослини, що містять Т-ДНК із рої 51 і руРЗ502, демонструють підвищені рівні С16:О, С18:1 ії С18:2 жирних кислот. Такий значний зсув складу жирних кислот значною мірою відбувається за рахунок С18:3, вміст якої знижується із близько 50-55 95 до близько 20-
ЗО 95, як відсоток від загального вмісту жирних кислот.
Значне підвищення рівнів ЗЖК, включаючи рівні ТАГ, між рослинами, що містять тільки Т-
ДНК рОРЗ502, і рослинами, що містять Т-ДНК із рої 51 ії руР3502, зберігається протягом розвитку рослини. Контрольні рослини, що містять тільки Т-ДНК із руР3502, містять від 7,7 95 до 17,5 95 ТАГ в ході цвітіння, тоді як в період зав'язування насіння рівні ТАГ варіюють від 14,1 95 до 20,7 95, в перерахунку на суху масу. Вміст ТАГ у листі рослин, що містять Т-ДНК руР3502 і ро! 51, варіює від 6,3 95 до 23,3 Фо в період цвітіння і від 12,6 95 до 33,6 95 в період зав'язування насіння. Були знайдені подібні зміни складу жирних кислот у фракції ТАГ для обох стадій, як було описано раніше для стадії вегетативного росту.
Крім того, знайдені підвищені рівні ТАГ також в інших вегетативних тканинах трансгенних рослин, таких як коріння і стебло. Деякі тканини коріння трансгенних рослин М. їабасит, трансформованих Т-ДНК рої 051, містять 4,4 95 ТАГ, а деякі тканини стебла містять 7,4 95 ТАГ,
Зо в перерахунку на суху масу (Фіг. 10). Рослини дикого типу і М. тарасит, що містять тільки Т-ДНК із рІРЗ3502, демонструють набагато нижчі рівні ТАГ в обох видах тканин. Додавання конструкції шпильки ЗОРІ з метою зниження експресії ендогенної ліпази ТАГ здійснює очевидний синергетичний вплив із генами, що кодують фактор транскрипції і біосинтез ТАГ (МУК! і ОСАТ), з точки зору підвищення вмісту ТАГ у стеблах і корінні. Необхідно відзначити, що нижчі рівні ТАГ в корінні є порівнянними з тканинами стебла в межах однієї і тієї ж рослини, тоді як у рослинах дикого типу і М. їабасит, що містять тільки Т-ДНК із руР3502, спостерігається зворотна тенденція. Склад ТАГ у тканинах коріння і стебла демонструє зміни вмісту С18:1 і С18:3 жирних кислот, подібні до спостережуваних раніше у трансгенній листовій тканині. Рівні С18:2 у ТАГ є зниженими у трансгенній тканині стебла, тоді як вміст С16 жирних кислот звичайно є зниженим у трансгенних тканинах коріння, в порівнянні з контролем дикого типу.
Таким чином, авторами винаходу зроблений висновок про те, що додавання екзогенного гена до комбінації М/УКІї і ЮОСАТ з метою сайленсингу ендогенного гена 5ОРІ підвищує загальний вміст жирних кислот, зокрема вміст ТАГ, на всіх стадіях росту рослини, і здійснює синергетичний вплив з УУКІЇї і ОСАТ, особливо у стеблах і корінні. Насіння Т1 трансгенних рослин вміщують на поживні середовища для тканин іп мйго при кімнатній температурі, щоб перевірити ступінь і розрахунок часу проростання. Як і раніше, проростання насіння Т1 трьох незалежно трансформованих ліній порівнюють з насінням трансгенних рослин, трансформованих Т-ДНК із руР3502. Крім того, рання сила саджанця, схоже, залишається інтактною. Це було несподіваним, з урахуванням ролі 5ОРІ1 у проростанні насіння А. ІНаїїапа і спостережуваних дефектів при проростанні мутантів БОРІ (Еазітопа із співавт., 2006). Для подолання будь-яких дефектів проростання, якщо вони виникнуть, розроблена друга конструкція, в якій інгібування ЗОРІ РНК експресується промотором, що в насінні по суті не експресується або експресується з низькими рівнями, наприклад, такого як промотор з гена фотосинтезу, наприклад, 550. Автори винаходу вважають переважним зниження ризику шкідливого впливу на проростання насіння або ранню силу саджанця, щоб уникнути конститутивного промотору для контролю експресії РНК, яка інгібує ЗОРІ, або щонайменше уникнути промотору, що експресується у насінні.
Необхідно відзначити, що рослини ТО з найвищими рівнями ТАГ вирощують в умовах високої освітленості в кімнаті з контрольованим середовищем (інтенсивність світла 500 мкмоль, світловий цикл 16 годин світла/26"С-8 годин темряви/18 "С), і вони виглядали меншими (близько 70 95 висоти відносно рослин, трансформованих Т-ДНК із рОРЗ3502), ніж контрольні рослини дикого типу. Авторами винаходу зроблений висновок про те, що комбінація трансгенів та/або генетичних модифікацій для підходів "рий", "рий", "ргоїесі" і "раскаде" є особливо сприятливою для досягнення високих рівнів ТАГ у вегетативних частинах рослини. В даному прикладі, УМКІї забезпечує "рих", ЮОСАТ забезпечує "риїї" сайленсинг 5ОРІ забезпечує "ргоїесі", і олеозин забезпечує "расКаде" ТАГ.
Приклад 12. Специфічна для старіння експресія фактору транскрипції
Повідомлялося, що ектопічна експресія основних регуляторів розвитку ембріона і насіння, наприклад ГЕС2, підвищує рівні ТАГ у не насіннєвих тканинах (Запіо5-Мепдола із співавт., 2005; зЗіосотре із співавт., 2009; Апагіапом із співавт., 2010). Однак, підвищена експресія конститутивного ГЕС2 у рослинах, трансформованих геном 355-ЕС2, приводить до небажаного плейотропного впливу на розвиток і морфологію рослини, включаючи соматичний ембріогенез і аномальні структура листя (5іопе із співавт., 2001; Запіо5-Мепдола із співавт.,
Зо 2005). Для оцінки того, чи буде обмеження експресії ЇЕС2 стадією старіння листя в ході розвитку рослини, тобто після того, як рослини повністю виросли і досягли повної біомаси, мінімізувати небажані фенотипічні ефекти, але як і раніше збільшувати рівні ліпіду в листі, розроблена і одержана химерна ДНК для експресії ГЕС2 під контролем специфічного для старіння промотору А. ІПаїіапа з гена БАС12 (37336; Сап і Атабіпо, 1995).
Для одержання генетичної конструкції, одержаний синтетичний фрагмент ДНК розміром 3,635 тис. пар основ, що містить, у вказаному порядку, специфічний для старіння промотор
ЗАСІ12 А. Паїїапа, послідовність, що кодує білок І ЕС2, і ділянку термінатора/поліаденілування гена лектину Сіусіпе тах. Вказаний фрагмент вставляють між рестрикційними сайтами 5асі і
МОЇ руРЗ303. Дана конструкція позначена як рої 049 і оцінена в листі рослин М. їарасит, стабільно трансформованих генами, що кодують поліпептиди МУКІЇ, ОСАТІ і олеозину, які містять Т-ДНК із рОРЗ502. Із застосуванням опосередкованих Адгорасієгцт способів трансформації, конструкцію роО1049 застосовують для трансформації клітин рослин М. їабасит, гомозиготних по Т-ДНК рУУРЗ502 (Приклад 3). Трансгенні рослини, що містять гени з рої 049, відбирають на базі резистентності до гігроміцину і вирощують у теплиці до стадії зрілості.
Зразки тканини трансгенного листя одержані на різних стадіях росту, включаючи старіння листя, і містять підвищені рівні ТАГ, в порівнянні з материнською лінією М. їарасит рурРз502.
Всього одержано 149 незалежних рослин ТО (тобто первинних трансформантів). Відібрані зразки верхнього зеленого листя всіх рослин і нижнього коричневого, повністю постарілого листя вибраних трансформантів на стадії зав'язування насіння в процесі розвитку рослини, і вміст ТАГ кількісно визначений за допомогою ТШХ-ГХ. Кількість інсерцій Т-ДНК рої! 49 у вибраних рослинах визначена за методом цкПЛР, із застосуванням пари праймерів, специфічних по відношенню до гена гігроміцину. Рівень ТАГ 30,2 95, в перерахунку на суху масу, спостерігається у тканині зеленого листя, зібраній на стадії зав'язування насіння. Рівні ТАГ в коричневому листі є нижчими в більшості рослин, від яких одержані зразки. Однак, три рослини (мМе32р, Мо8Б і Ме23с) продемонстрували вищі рівні ТАГ у тканині постарілого коричневого листя, ніж у зеленому листі, що росте. Вказані рослини містили 1, 2 або З інсерції Т-ДНК із рої! 49.
Проведений скринінг потомства Т1 рослин Ме23с і Ме3205 за методом цкПЛР з метою ідентифікації нульових, гетерозиготних і гомозиготних по Т-ДНК із роО1/ 049 рослин. Рослини- нащадки рослини Ме23с, що містять нуль інсерцій Т-ДНК із ро1І 049 (нульові; всього 7) або дві Т- бо ДНК інсерції Т-ДНК із рої 049 (гомозиготні; всього 4) відібрані для подальшого аналізу. Крім того, рослини-нащадки рослини Ме32р, що містять нуль інсерцій (нульові; всього 6) або дві інсерції (гомозиготні; всього 9) збережені для подальшого аналізу. Зразки тканини зеленого листя одержані перед цвітінням, і вміст ЗЖК і ТАГ визначений за методом ГХ. Рослини дикого типу і рослини, трансформовані Т-ДНК із рОРЗ502, були такими ж, як описано раніше (Приклад 11), ї були вирощені пліч-о-пліч в одній теплиці. Рівні ЗЖК перед цвітінням у листі трансформантів, що містять Т-ДНК із рої 049, варіюють від 5,2 95 до 19,5 95, в перерахунку на суху масу (Фіг. 12). Рівні ТАГ у цих же тканинах варіюють від 0,8 95 до 15,4 95, в перерахунку на суху масу. Це значно більше, ніж у рослинах, що містять тільки Т-ДНК із руР3502. Вміст ТАГ у рослинах, що містять Т-ДНК з руР3502 і ро1І 049, додатково підвищується до рівня від 38,5 95 до 34,9 95 в період цвітіння і зав'язування насіння, відповідно. Коли склад жирних кислот в загальному вмісті жирних кислот був проаналізований для листя, гомозиготного по Т-ДНК із ро! 049, спостерігалися підвищені рівні С18:2 і знижені рівні С18:3 (Фіг. 12), тоді як відсотковий вміст С16:0 ї С18:1 залишався приблизно таким же, як і в листі, трансформованому тільки Т-
ДНК із роР3502. Вказані дані демонструють, що додавання другого гена фактору транскрипції під контролем неконститутивного промотору з метою забезпечення регульованої розвитком експресії може додатково підвищувати рівні ТАГ у вегетативних тканинах рослини. Крім того, дані вказують на деяку міру експресії специфічного для старіння промотору 5АС12 у зеленій тканині до старіння листя.
Рівні ТАГ є значно підвищеними у тканині стебла, в порівнянні з рослинами М. їабасит дикого типу і трансгенними рослинами, що містять тільки Т-ДНК із р/уР3502. Деякі тканини стебла трансгенних рослин М. їабасит, трансформовані Т-ДНК із рої! 049, містять 4,9 95 ТАГ, в перерахунку на суху масу (Фіг. 11). З іншого боку, рівні ТАГ у тканині коріння демонструють більш виражену варіацію між трьома рослинами рої 049, причому деякі тканини коріння містять 3,4 95 ТАГ. Необхідно відзначити, що нижчі рівні ТАГ у корінні були порівнянними з тканиною стебла в межах тієї ж рослини, тоді як зворотна тенденція спостерігалася в рослинах дикого типу і М. їарасит, що містили тільки Т-ДНК із руР3502. Склад ТАГ у тканинах коріння і стебла демонструє зміни у вмісті жирних кислот С18:1 і С18:3, подібні до спостережуваних раніше у трансгенній листовій тканині. Рівні С18:2 у ТАГ є зниженими у трансгенній тканині стебла, тоді як вміст жирних кислот С16 звичайно є зниженим у трансгенних тканинах коріння, в порівнянні з
Зо контролем дикого типу.
Одержані відповідні генетичні конструкції що кодують інші фактори транскрипції під контролем промотору 5АС12, а саме ГЕС1, ГЕСлТІїЇКе, РОЗ, АВІЗ, АВІ4, АВІ5 та інші (Приклад 10). Наприклад, одержані додаткові конструкції для експресії фактору транскрипції однодольних
ГЕСІТ 7є6а таув (Зпеп із співавт., 2010) або ГЕС1 богуйит бБісоїог (номер доступу Сепрапк
ХМ 002452582.1) під контролем одержаного з однодольних гомолога промотору 5АС12 А.
Іаїйапа, такого як промотор 5ЕЕ1 маїсу (Корзоп із співавт., 2004). Подальші конструкції одержані для експресії факторів транскрипції під контролем регульованих розвитком промоторів, наприклад, таких, які переважно експресуються в період цвітіння (наприклад, чутливі до тривалості світлового дня промотори), фітохромних промоторів, криптохромних промоторів, або у стеблах рослини в ході вторинного росту, таких як промотор із гена СезА.
Вказані конструкції застосовуються для трансформації рослин, причому відбираються рослини, що продукують щонайменше 8 95 ТАГ у вегетативних частинах.
Рівні крохмалю і цукрів
Рівні крохмалю і розчинних цукрів вимірюють у листовій тканині, зразки якої одержані від рослин дикого типу і трансгенних рослин, що містять Т-ДНК із руР3502 або Т-ДНК з руРЗ3502 і роО1І51 або руР3502 і роО1І 049. Загалом, у листі, що містить обидва Т-ДНК, знайдена зворотна кореляція між рівнями ТАГ і крохмалю в листовій тканині, в перерахунку на суху масу (Фіг. 13). навпаки, у трансгенних рослинах рівні розчинних цукрів в листі є такими ж, як у рослинах дикого типу, наводячи на думку про відсутність значущого вузького місця у перетворенні цукрів на ТАГ.
Вплив положення листя в рослині спостерігається у рослинах дикого типу, в яких рівні крохмалю демонструють тенденцію до збільшення від нижчого до вищого положення листя. У трансгенних рослинах такий ефект відсутній.
Приклад 13. Специфічна для стебла експресія гена, який кодує фактор транскрипції
Листя рослин М. їарасит, що експресують трансгени, які кодують МУКІ1, ОСБАТ і олеозин, на стадії зав'язування насіння містять близько 16 95 ТАГ. Однак, рівні ТАГ є набагато нижчими у стеблах (1 95) і корінні (1,4 95) рослин (МаппегоекКе із співавт., 2014). Автори винаходу оцінювали, чи є нижчі рівні ТАГ у стеблах і корінні результатом слабкої промоторної активності промотору
ЗУ Кибізсо, застосовуваного для експресії гена, який кодує МУКІЇ у трансгенних рослинах.
Трансген ОСАТ у Т-ДНК руОуР3502 експресується промотором Самм355, який більш активно експресується в стеблах і корінні, і, таким чином, він навряд чи є обмежуючим фактором для акумуляції ТАГ у стеблах і корінні.
У спробі збільшити біосинтез ТАГ у тканині стебла, розроблена конструкція, в якій ген, що кодує МУКІ1, розміщений під контролем. промотору ЗОРІ А. Ійаійапа. Синтезований синтетичний фрагмент ДНК розміром 3,156 тис. пар основ, що містить промотор 5ОРІ1 А. Ійаїйапа розміром 1,5 тис. пар основ (5ЕО ІЮ МО: 175) (Кеїу із співавт., 2013), і далі ділянку, що кодує поліпептид
МУ/ВІЇ А. ІПаїїапа, і ділянку термінатора/поліаденілування лектину С. тах. Вказаний фрагмент вставлений між сайтами басі і Моїї руР3303. Результуючий вектор позначений як рої 050, і надалі застосовується для трансформації клітин рослин М. їабасит, гомозиготних по Т-ДНК із рУРЗ502, шляхом опосередкованої Аагорасієтішт трансформації. Трансгенні рослини відібрані на базі резистентності до гігроміцину, причому всього 86 незалежних трансгенних рослин вирощені в теплиці до стадії зрілості. Одержані зразки тканини трансгенного листя і стебла на стадії зав'язування насіння, яке містить вищі рівні ТАГ, ніж материнські рослини М. їабасит, трансформовані р.)Р 3502.
Приклад 14. Підвищення вмісту масла в насінні
Декілька груп повідомляли про підвищені рівні ТАГ у тканині насіння маїсу, рапсу або
Агарідорзі5 ІШаїїапа при підвищеній експресії індивідуальних генів, що кодують МУКІ! ії ОСАТІ1 (Зпеп із співавт., 2010; ім із співавт., 2010; УуезеїакКе із співавт., 2008; дако із співавт., 2001; огляд в Гій із співавт., 2012). Нещодавно, мап Егр із співавт. (2014) досліджували вплив коекспресії УК! ії ОСАТІ на вміст масла в насінні А. (Паїйапа. Абсолютні рівні ТАГ, підвищуються із 38 95 у рослинах дикого типу і контролі з порожнім вектором до 4495 у трансгенних лініях. Сайленсинг ліпази ТАГ ЗОРІ в комбінації з підвищеною експресією М/КІ і рОАТІ підвищував рівні ТАГ до 45 95. Необхідно відзначити, що, хоча виявлене збільшення середньої маси насіння, однак кількість насіння на рослину була меншою, ніж у контрольних рослинах.
Синтетичний фрагмент ДНК розміром приблизно 14,3 тис. пар основ, що містить відкриті рамки зчитування, які кодують МОАТ2 М. тивсии5, ЮОСАТІ А. ІПаїїапа, МУ/ВІЇ А. ІПаїапа і поліпептиди СРАТА А. ІПаїїапа, під контролем специфічних для насіння промоторів із генів, що кодують ЕАЕЇТ, конлінін 1 і конлінін 2, синтезований і вставлений у вигляді фрагмента Мої І- РоїЇ
Зо у рУРЗ416. Результуючий вектор позначений як ріІМ55 (Фіг. 14). Серії похідних векторів сконструйовані із рРТМ55 послідовним видаленням індивідуальних касет експресії, причому на кожній стадії застосовувалося розщеплення рестрикційним ферментом, з подальшим самолігуванням. Касету ОРАТ4 видаляють розщепленням Расі, з одержанням ртмБ56.
Подальше розщеплення 5! видаляє касету експресії МОАТ2, з утворенням рТУ57. Касету
МУКІ1 видаляють із застосуванням фланкуючих рестрикційних сайтів ОБІЇ, з одержанням ртУБв.
В кінці, касету ОСАТІ в рТУ58 обмінюють на касету МУКІЇ шляхом розщеплення 5 І і Расі, з подальшою обробкою Т4 ДНК полімеразою і лігуванням. Касету МУКІЇ вирізують з рТМ57 із застосуванням ЗБ і обробляють Т4 полімеразою. Лігування касети МУКІ з тупими кінцями в розщеплений 5ПІ-Расі скелет рГМ58 дає рТМ59. Кожен вектор містить е355 (що містить подвоєну ділянку енхансера)ген РАТ як ген селекційного маркера, забезпечуючи резистентність до ВА5ТА.
Якщо коротко, конструкції містять наступні комбінації генів: руб: РгоСпі1:"МаАТа2 я РгоСпі2г'ОСАТІ «- РгоСпі1"аРАТА я РІоБАєТ МВ; ргУБб: РгегоСпі1"МаАТа2 я РгоСпі2г'ОСАТІ я РгГогАЄЕТ М/ВІТ; ртгмУБ7: РгоСпіг:ОСАТІ я РІОБАЕТ МУ/ВІТ; ргмУБ8; РгоСпі2г:ОСАТІ1; ргМБ59: РІоБАЄТ МВ.
Конструкції рРТГМ55-рТУ59 окремо вводять до штаму Асі 1 А. Шшптптегасієп5 і застосовують для трансформації С. взаїїма (сорт Сеїїпе) методом занурення квітів, адаптованим з Гіи із співавт. (2012). Якщо коротко, нещодавно відкриті квіткові бруньки занурюють у розчин А. їшптегасієп5 на 15 секунд, загортають у плівку з пластичного матеріалу і залишають на ніч у темряві при 247С, після чого пластичний матеріал видаляють. Всього здійснюють 3-4 занурення квітів, на базі якості доступних квітів. Рослини вирощують до рівня зрілості і збирають урожай насіння Т1.
Після проростання насіння Т1 на грунті, вкорінені саджанці Т1 (7-10 днів) скроплюють 0,1 9о гербіцидом ВАЗТА (250 г/л амонію глюфосинату; Стор Зсіепсе Ріу Ца, Вікторія, Австралія) для відбору рослин, що експресують ген селекційного маркера ФАТ. Саджанці, які вижили, відокремлюють, переносять у свіжі горщики з грунтом і вирощують до стану зрілості в теплиці при 22 -:17С (день) і 18 - 17 (ніч). Урожай насіння Т2 збирають, і вміст масла (яке щонайменше на 95 95 складається із ТАГ) для З незалежних партій насіння по 50 мг від кожної 60 лінії вимірюють методом ЯМР (МОС, Охгога Іпзігитепів). Калібрувальні зразки готують із сухим папером Кітм/ре5, що містить відомі кількості масла з насіння С. заїїма, в пробірках для ЯМР діаметром 10 мм, щоб генерувати діапазон вмісту масла на базі маси паперу і масла.
Калібрувальні зразки опечатують парафільмом і перед застосуванням витримують при 40 "С у нагрівальному блоці щонайменше протягом 1 години, щоб дозволити маслу рівномірно розподілитися у тканині. Калібрувальні зразки вимірюють тричі із застосуванням зонда з магнітом на 0,55 Тесла діаметром 10 мм, функціонуючим на частоті резонансу протона 23,4
МГц протягом 16 секунд. Температуру магніту підтримують на рівні 40 "С. Зразки насіння спочатку сушать в печі при температурі 105 "С протягом ночі, щоб гарантувати вміст вологи менш ніж 5 95. Далі зразки зважують, переносять до скляної пробірки діаметром 10 мм та інкубують при 40 "С протягом 1 години перед аналізом методом ЯМР. Вміст масла вимірюють за методом ЯМР у трьох екземплярах, з калібруванням на базі масової компенсації.
Кількість вставлених копій Т-ДНК у кожній трансформованій лінії визначають цифровою ПЛР (ЦПЛР). Спочатку геномну ДНК розщеплюють за допомогою ЕсоВіІ і Ватні, щоб гарантувати фізичне розділення Т-ДНК у разі множинних інсерцій. Ген ГЕАЕМ С. взаїїма (пу) вибраний як референтний ген, і селекційний маркер вибраний як ген-мішень у реакції мультиплексної цПЛР.
Зонди мітять за допомогою НЕХ (референтного гена) або РАМ (гена-мішені). Умови ампліфікації були наступними: 95 "С протягом 10 хвилин (підвищення із швидкістю 2,5 "С/с), 39 циклів при 94 7С протягом 30 секунд (підвищення із швидкістю 2,5 "С/с) і при 61 "С протягом 1 хвилини (підвищення із швидкістю 2,5 "С/с), 98"С протягом 10 хвилин. Після ПЛР ампліфікації, флуоресценцію окремих крапельок вимірюють за допомогою пристрою для зчитування крапельок ОХ100 (ВіокКай), і кількість копій обчислюють із застосуванням програмного забезпечення Оцапіазоїї (версія 1.3.2.0, ВіоКкад).
Трансформація С. заїїма дає множинні трансгенні події, що демонструють підвищені рівні
ТАГ у сегрегованому насінні Т2, в порівнянні із нетрансформованим контролем дикого типу (Фіг. 15). Цікаво, що найвищі рівні ТАГ одержані з рТМ57, який містить гени, що кодують УМУКІ! і
ООАТІ1. Додаткова інсерція МОАТ2 (рТМ56) і МОАТ2 ї- ОРАТА (ртТмМ55) приводить до дещо нижчих рівнів ТАГ, в порівнянні з рТУ55. Визначення кількості копій виявило 1 або 2 інсерції Т-
ДНК для ліній рІМ57, що демонструють другий за величиною і найвищий вміст масла, відповідно (Табл. 14).
Зо Гомозиготні рослини Т2, трансформовані Т-ДНК із рТМО57, були додатково схрещені із рослинами С. заїїма, трансформованими генами для експресії десатураз і елонгаз жирних кислот, необхідних для синтезу і акумуляції ДГК в насінні (М/02013/185184). Семена Е1 демонструють підвищений вміст масла, за даними ЯМР, в порівнянні з насінням С. заїїма, трансформованими конструкцією ДГК і без Т-ДНК рТмМ57. Вміст ДГК у насінні визначають шляхом вимірювання рівнів ДГК у фракції ТАГ, в порівнянні із вмістом ДГК С. ваїма в материнській рослині. Загальний вміст ДГК у насінні (мг ДГК/г насіння), що містить обидві Т-
ДНК, є підвищеним відносно загального вмісту ДГК у насінні, що містить тільки конструкцію ДГК.
Таблиця 14
Вміст масла (Ос) в насінні 12 і кількість копій (цифрова ПЛР) у трансгенних трансформантах ртМБ57 с. заїїма
Лінія рТМ57 Масло з насіння (95) Кількість копій
СсмМО29-1 36,97 -
СмМоОг29-2 36,69 -
СсмМО29-3 35,16 1,02
СМо29-4 28,47 6,6
СмМоО29-5 40,60 2
СМор29-6 37,86 4,68
СМО29-7 39,17 2,94
СсМмоО29-8 39,88 0,947
СмМоО29-9 36,70 1,04
СмМОр29-10 37,19 0,935
СмМО29-11 31,20 143
СмМо29-20 33,08 б
Приклад 15. Вплив експресії білка масляних включень на акумуляцію і обіг ТАГ
Рослини М. їарасит, що трансформовані Т-ДНК руРЗ3502 та експресують трансгени, які кодують МУВІЇ, ЮСАТІ А. Ійпайапа і олеозин 5. іпаісит, містять підвищені рівні ТАГ у вегетативних тканинах. Як проілюстровано у Прикладі 11 вище, при сайленсингу ендогенного гена, який кодує ліпазу ТАГ ОРІ, в таких рослинах рівні ТАГ у листі додатково підвищуються, що вказало авторам винаходу на той факт, що відбувається значний обіг ТАГ у рослинах, які зберегли активність 5ОРІ1. Таким чином, був визначений рівень експресії трансгенів у рослинах.
Хоча гібридизація методом Нозерн-блотингу підтвердила виражену експресію УУКІ! і ОСАТІ і деяку експресію мРНК олеозину, аналіз експресії методом цифрової ПЛР ії КЗТ-ПЛР виявив тільки дуже низькі рівні транскриптів олеозину. Аналіз експресії виявив, що ген, який кодує олеозин, експресується слабко, в порівнянні з трансгенами МУК! і ОСАТІ. На базі вказаних експериментів, авторами винаходу був зроблений висновок про те, що масляні включення в листовій тканині не були повністю захищені від розщеплення ТАГ через неналежне продукування білка олеозину, кодованого Т-ДНК у руОуРЗ3502. Для підвищення стабільності акумуляції ТАГ в процесі розвитку рослини було розроблено декілька модифікацій руР3502, в яких ген олеозину був замінений. Вказані модифіковані конструкції були такими, як указано нижче. 1. руРЗ502 містить ген (у БЕО ІЮ МО: 176 наведена комплементарна йому послідовність), що кодує олеозин 5. іпаісцит, який слабко експресувався. Даний ген містить внутрішній інтрон
ИВОТ10, який може знижувати рівень експресії. Для перевірки цього, синтетичний фрагмент ДНК розміром 502 пари основ, що містить ген олеозину 5. іпаісит та не містить внутрішнього інтрону
ИВО10, був синтезований і вставлений в ру/Р3502 у вигляді фрагмента Моїй, замінюючи в руРЗ3502 ген олеозину, що містить інтрон. Результуюча плазміда позначена як рої 040. 2. Промотор маленької субодиниці (55) Кибіхсо, що управляє експресією гена олеозину в руР3502, був замінений конститутивним промотором епТСИОР2. На даний момент, фрагмент розміром 2321 пара основ, що містить промотор епТСИиР2, ділянку, що кодує білок олеозин, ділянку термінатора/поліаденілування лектину б. тах і перші 643 пари основ у напрямку по ходу транскрипції промотору 55), що управляє експресією улті!ї, синтезований і субклонований у сайти Авсі і ре! руУРЗ3502, з одержанням рої 038.
З. Подібній стратегії слідували для експресії сконструйованої версії гена олеозину 5. іпадісит, що містить 6 введених залишків цистеїну (03-3) під контролем промотору епТСОР2 (М/іпіспауаКи! із співавт., 2013). Фрагмент розміром 2298 пар основ, що містить промотор
Зо епТСИиРа, ділянку 03-3, що кодує білок олеозин, ділянку термінатора/поліаденілування лектину б. тах і перші 643 пари основ у напрямку по ходу транскрипції відносно промотору 55), що управляє експресією м/гії, синтезований і субклонований у сайти Авбсі і ре! руР3502 з одержанням рої 037. 4. Сайти МоїІ, що фланкують ген олеозину 5. іпаісит у руР3502, застосовуються для обміну кодуючої білок ділянки на ділянку, що кодує олеозин З арахісу (номер доступу ААШ21501.1) (Рагіпівбапе із співавт., 2012а; Рапіпірапе із співавт., 20125). Фрагмент розміром 528 пар основ, що містить ген олеозину 3, фланкований сайтами Мої, синтезований і субклонований у відповідний сайт руР3502. Результуючий вектор позначений як рої 041 5. Додатково, фланкований Мої! фрагмент розміром 1077 пар основ, який містить ген, що кодує стеролеозин А. ІПаїїапа (Агар-1) (номер доступу ААМ10215.1) (Чоїїмеї із співавт., 2014), синтезований і субклонований у сайт Мої! руР3502 з одержанням рої 043. 6. Поверхневий білок ліпідних крапельок Маппоспіогорзі5 осеапіс (ПБЛК) (номер доступу
АРВ75402.1) (міеіег із співавт., 2012) синтезований у вигляді МоїІ-фланкованого фрагмента розміром 504 пари основ і субклонований у сайт Мої! рОРЗ3502 з одержанням рої 044. 7. І, нарешті, калеозин А. ІШПаїїапа (СГОЗ3) (номер доступу 022788.1) (5пПітада із співавт., 2014) синтезований у вигляді фланкованого МоїїЇ фрагмента розміром 612 пар основ і субклонований у руР3502 з одержанням рої 042.
Кожну із цих конструкцій вводять у клітини листя М. репіпатіапа, як описано у Прикладі 1.
Тимчасова експресія як руРзЗ502, так і роОІІ 040 в листовій тканині М. бепіпатіапа приводить до підвищених рівнів ТАГ і подібних змін профілю жирних кислот у ТАГ, однак рої 040 підвищує рівень ТАГ більшою мірою (1,3 95 в порівнянні з 0,9 95). Кожна із конструкцій рої 037, рої 038, ро! 041, рої 042 і роОІІ 043 застосовується для стабільної трансформації рослин М. їабасит (сорт МУЗ8) за допомогою опосередкованих Аагорасієгішт способів. Трансгенні рослини відбирають на базі резистентності до канаміцину і вирощують в теплиці до стану зрілості. На різних стадіях розвитку рослини відбирають зразки трансгенної листової тканини, що містять підвищені рівні ТАГ, у порівнянні з М. їабасит дикого типу і рослинами М. їабасит, трансформованими р.)Р3502.
Клонування і характеристика поліпептидів БПЛК із Зарішт зебітега
Олеозини не експресуються з високими рівнями у не насіннєвих тканинах рослини, бо акумулюючих масло, таких як мезокарп оливи, масляної пальми і авокадо (Мигрпу, 2012).
Натомість, у даних тканинах ідентифіковані білки, пов'язані з ліпідними крапельками (БПЛК), які можуть виконувати роль, подібну до ролі олеозину в тканинах насіння (Ногп із співавт., 2013).
Таким чином, автори винаходу розглянули можливість того, що олеозин не є оптимальним пакувальним білююом для захисту акумульованого масла від ліпази ТАГ або іншого впливу цитозольних ферментів у вегетативних тканинах рослин. Таким чином, поліпептиди БПЛК були ідентифіковані і оцінені щодо підвищення акумуляції ТАГ, як указано нижче.
Плід китайського сального дерева барішт зебіїека, члена сімейства Еирпогбріасеає, представляє особливий інтерес для авторів винаходу, оскільки він містить багату на масло тканину поза межами насіння. Нещодавнє дослідження (бОімі із співавт., подано для публікації) показало, що вказана масляниста тканина під назвою жировий шар може походити із мезокарпа плоду рослини. Таким чином, авторами винаходу поставлена під сумнів транскриптома 5. веріїета через послідовності БПЛК. Порівняльний аналіз експресованих генів у тканинах оболонки фрукта і насіння виявив групу із трьох раніше ідентифікованих генів БПЛК, що експресувалися з високими рівнями у жировому шарі.
Нуклеотидні послідовності, що кодують три БІПЛК, одержані за методом ЗТ-ПЛР із застосуванням РНК, що походять із жирової тканини, і трьох пар праймерів. Послідовності праймерів базуються на послідовностях ДНК, що фланкують повну кодуючу ділянку для кожного із трьох генів. Послідовності праймера: для БПЛКІ!, 5'- ТІ ТААССАТАТОСОаСТАдАСца-3 (5ЕО
ІЮ МО: 245) и 5-ААТаААТаААСААсСААТТААСТО-3 (5ЕБО ІЮ МО: 246) АТ-37 БПЛК2, 5-
СТТТТСТСАСАСССИТАТСТОСО-3' (5ЕО ІЮ МО: 247) і -АБСАТОАТАТА СТТИаТтСОсСАСАдАдОаС-3" (ЗЕБЕО ІО МО: 248); БПЛКЗ, 5-4СпАСАсТаТАаСИатТтт-3 (5БО І МО: 249) ї 5-
АТАСАТААААТаААААСТАТТИатас-3' (ЗЕО ІЮО МО: 250).
Аналіз транскриптоми 5. 5еріїега виявив численні ортологи для кожного із генів БПЛК, зокрема вісім БПЛК!І, шість БПЛК2 і шість БПЛКЗ генів, з менш ніж 1095 дивергенцією послідовностей в межах сімейства кожного гена. Передбачувані послідовності пептиду були вирівняні, і філогенетичне дерево сконструйоване із застосуванням програмного забезпечення
Сепіоиз (Фіг. 16), разом із гомологами БПЛК з інших видів рослин, включаючи два з авокадо (Рат), один з масляної пальми, один із Райпепіит агдепіашт (Раг), два з Агарідорзів (А), п'ять із Тагахасит бБгемісогпісшатт (Тбг), три з Немєа бБгавіїепвів (НьЬг), як проілюстровано на
Фіг. 16. Філогенетичне дерево виявило, що 55 ЮАРЗ поділяє великий ступінь ідентичності амінокислотних послідовностей з поліпептидами БПЛКІ і БПЛК2О із авокадо і БПЛК з масляної пальми, тоді як поліпептиди 551 БАРІ і 55І БАР були більш дивергентними.
Генетичні конструкції для підвищеної експресії БПЛК
Для оцінки функції БПЛК із 5. зеріїега одержані вектори експресії для експресії кожного із вказаних поліпептидів під контролем промотору 355 у клітинах листя. Повнорозмірні послідовності КДНК 55І БАР вставляють у вектор призначення РООМК207 за допомогою реакцій рекомбінації, замінюючи ділянки СсавВ і Ст(К) вектора призначення фрагментами кДНК
З5І БАР. Після підтвердження за методом аналізу рестрикційного розщеплення і секвенування
ДНК, конструкції вводять до штаму АС11 Адгобасієгцт Іїитеїасієпо і застосовують для тимчасової експресії в клітинах листя М. рРепіпнатіапа і стабільної трансформації М. Табасит.
Експресія кожного з трьох генів 55І.БАР під транскрипціональним контролем промотору 355 у листі М. рРепінатіапа в комбінації з експресією 355:АЮСАТІ і 355хХАМУКІЇ дає значно вищі рівні акумуляції ТАГ, в порівнянні з клітинами, інфільтрованими генами 355:АЮ5БАТІ1 і 355:АЇМУКІЇ без конструкції БПЛК. Рівень ТАГ підвищується приблизно вдвічі, у порівнянні з рівнем ТАГ у контрольних клітинах. У клітинах, що одержують комбінацію генів, спостерігається значне підвищення рівня са-ліноленової кислоти (АЛК) і зниження рівня насичених жирних кислот, відносно контрольних клітин.
Колокалізация ЖФБ-химерних поліпептидів БПЛК із крапельками ліпіду в клітинах листя
З метою характеристики 551АР іп мімо і спостереження за їх поведінкою в динаміці, одержані експресійні конструкції для експресії химерних поліпептидів, що складаються з поліпептидів БПЛК, злитих із жовтим флуоресцентним білюом (ЖФБ). Для кожного химерного поліпептиду, ЖФБ злитий у рамці із С-кінцем 55 ЮАР. Повна відкрита рамка зчитування кожного із трьох генів БПЛК, без стоп-кодона на 3' кінці, злита із послідовністю ЖФБ і химерними генами, вставленими у РООМК207. Після підтвердження одержаних конструкцій за методом рестрикційного розщеплення і секвенування ДНК, конструкції вводять до штаму АС 1
А. їШшптеїасіеп5 і застосовують для тимчасової експресії в клітинах листя М. репіпатіапа і стабільної трансформації М. їарбасит. Через три дні після інфільтрації клітин листя конструкціями БІПЛК-ЖФЕБ, листові диски з інфільтрованих ділянок фарбують Червоним Нилом, який позитивно забарвлює ліпідні крапельки, і візуалізують під однофокусним мікроскопом, щоб бо знайти червоне фарбування (крапельки ліпіду) і флуоресценцію поліпептиду ЖФБ.
Спостерігається колокалізація БПЛК-ЖФБ з ліпідними крапельками, вказуючи на зв'язок БПЛК з ліпідними крапельками у клітинах листя.
Приклад 16. Модифікація жирних кислот у різних пулах ліпіду в листі, що акумулює високі рівні ТАГ
Авторами винаходу описане продукування підвищених рівнів ТАГ у М. їарасит шляхом коекспресії трансгенів, які кодують УМКІ! А. Іпаійапа, ОСАТІ А. ІПаїїапа і олеозин 5. іпаісит (мМаппегеке із співавт., 2014). Для вивчення можливості поєднання модифікацій жирних кислот в різних пулах ліпіду, які існують в листі, із коекспресією комбінації гена УУКІ!ї ії ОСАТІ1, здійснювали експерименти з тимчасовою експресією, щоб подивитися, чи можуть зустрічатися жирні кислоти в пулах ацил-КоА і ацил-ФХ. В одному експерименті експресію трансгена, який кодує елонгазу жирних кислот А. ІПаїйапа (Аїгбаеї), що подовжує С18:1-КОА до С20:1-КоА, поєднували з генами, які кодують МУК! і ОСАТ, з метою оцінки модифікацій в пулі ацил-КоА. В другому експерименті трансген, що кодує десатуразу 2 жирних кислот А. ІПаїїапа (АЕАО2), яка перетворює С18:1-ФХ на С18:2-ФХ за допомогою введення кратного зв'язку, поєднували з генами МУКІ! ії ОСАТ, з метою оцінки модифікацій в пулі ФХ. Вказані експерименти розроблені для оцінки доступності ацильних субстратів в ЕР рослинних клітин.
Ген, що кодує АІРАЕТ1, експресується промотором Саму355 в листі М. рРепіпнатіапа, окремо або в комбінації з МУКІ! і ОСАТІ, як описано у Прикладі 1, в трьох екземплярах. Зразки листя збирають через 5 днів після інфільтрації клітинами АдгобасіегіШт, що містять різні комбінації генів. Загальний ліпід екстрагують із зразків листя, і в кожному випадку фракцію ТАГ відокремлюють за допомогою ТШХ. Визначають склад жирних кислот для кожної фракції ТАГ і проводять кількісне визначення методом ГХ із застосуванням відомої кількості С17:0-ТАГ як внутрішнього стандарту. Як проілюстровано в Табл. 15, частка С20:1 у ТАГ значно підвищується при експресії АЇАЕЕТ1. Крім того, коекспресія МУК! ії ОСАТІ з АІЕРАЕ1 підвищує рівень продукту
С20:1, в порівнянні з контролем, тоді як загальна кількість ТАГ підвищується з 0,8 до 14,9 мкг/мг листя. Продукт С20:1 в ТАГ акумулюється з настільки високим вмістом, як 0,96 мкг на мг, в порівнянні з 0,04 мкг на мг без комбінації МУК! ії ОСАТІ1.
Таблиця 15
Модифіковані рівні жирних кислот після трансгенної експресії модифікуючих ферментів у листі М. бепіпатіапа.
Зразок С1871 (У) б20-1 (95) ТАГ (мкг/мг см). С20:1 (мкг/мг см)
Контроль 6,9 ж 1,5 0,404 0,40,3 0,01
МУ/ВІТ - ОСАТІ 17,151,0 04-02 16,3 21 0,06
АТЕАЕ1 71,03,0 47 ж31 0,8 - 0,8 0,04
МУВІТ - ОСАТІ ЯАЕАЕ 15,3 0,5 64-02 14,9 2,5 0,96
Зо Додатково, АТЕАЮ2 коекспресують промотором Саму355 в листі М. рРепіпнатіапа, окремо або в комбінації з МУКІ! ії ОСАТІ. Визначають склад жирних кислот для фракції ТАГ, і проводять кількісне визначення, як описано вище. Рівень жирної кислоти С18:2 в ТАГ значно підвищується при коекспресії АЕЕАО2 з МУК! ії ОСАТТ, з 10,7 95 до 37,9 Фо, а рівень С18:1 знижується з 19,5 95 до 7,6 95. Крім того, спостерігаються значні рівні ТАГ (13,4 мкг/мг листя) при коекспресії МУКІ ж
ОСАТІ1 «з АЕАбЗ2 у листі. Одержані результати явно демонструють, що склад і кількість жирних кислот можуть бути модифіковані додаванням ферментів модифікації жирних кислот у комбінації щонайменше з М/КІ! і ОСАТ, і таким чином їх можна застосовувати для підвищення акумуляції модифікованих жирнокислотних продуктів, що генеруються в одному або обох пулах ацил-КоА і ФХ, і, кінець кінцем, зберігання у складі ТАГ у вегетативних частинах рослини.
Приклад 17. Сайленсинг генів ТГД у рослинах
Згідно оцінкам І і-Веії55оп із співавт. (2013), в листі Агарідорзіз (рослини 16:3) приблизно 40 95 жирних кислот, синтезованих у хлоропластах, надходять до прокаріотного шляху, тоді як 60 95 експортуються для надходження до еукаріотного шляху. Після десатурації в ЕР, близько половини вказаних експортованих жирних кислот повертається до пластиди, щоб забезпечити синтез галактоліпідів для тилакоїдних мембран. У транспорті (імпорт) жирних кислот до пластиди, у вигляді ДАГ або фосфоліпідів, приймає участь ТО0О1, пермеаза-подібний білок внутрішнього хлоропластного конверта. Переносник ліпідів АВС Агабідорвіз, що містить білки
ТО, 2 і 3, ідентифікований Веппіпо із співавт. (2008 і 2009), і пізніше Козіоп із співавт. (2012).
Вказаний комплекс білка локалізований у внутрішній мембрані хлоропластного конверта, і передбачається, що він опосередкує перенесення фосфатидату крізь указану мембрану.
Поліпептид Т502 є фосфатидил-зв'язуючим білком, і ТОО3 являє собою АТФазу. Новий білок
Агарідорзіх, ТО04, ідентифікований за допомогою генетичного підходу (Хи із співавт., 2008), причому інактивація гена Т504 також блокує перенесення ліпіду 3 ЕР у пластиди. Останні біохімічні дані вказують на те, що Т504 є фосфатидат-зв'язуючим білком, розташованим у зовнішній мембрані хлоропластного конверта (Умапад і Веппіпо, 2012).
Хи із співавт. (2005) описали нещільні алелі їдаї в А. (Шаїїапа, що призводять до сповільнення росту рослини і високої частоти абортів ембріону. Листова тканина мутантів да
А. Іпаіапа містить підвищені рівні ТАГ, ймовірно у формі цитозольних масляних крапельок. Крім того, підвищені рівні ТАГ знайдені у корінні мутантів їд41. Не було знайдено відмінностей у вмісті масла в насінні. Про подібну акумуляцію ТАГ у листовій тканині повідомлялося для мутантів А. Паїїапа їдаг (Амуаї із співавт., 2006), 43 (и із співавт., 2007) і щая4 (Хи із співавт., 2008). Всі мутантні алелі ща були достатньо нещільними або значно ослаблювали розвиток рослини.
Сайленсинг ТО01
Конструкція сайленсингу, спрямована проти пластидного імпортера ТОО01, згенерована на базі повнорозмірного транскрипту мРНК, ідентифікованого у транскриптомі М. репінатіапа.
Фрагмент розміром 685 пар основ ампліфікують з кКДНК листя М. рРепіпатіапа при інкорпорації у сайт РтіїЇ на 5' кінці. Спочатку фрагмент ТО0О1 клонують в РЕМТАК/О-ТОРО (Іпмігодеп), і далі вставляють у вектор призначення РНЕГ І. ЗСОАТЕ12 за допомогою клонування ІК (Саїемау).
Одержаний вектор експресії, позначений як ро 025, тимчасово експресують в М. рбепіпатіапа, щоб оцінити вплив сайленсингу гена ТО на рівні ТАГ у листі. Конструкцію шпильки ТО01 розміщують під контролем індуцибельного промотору аЇІсСА А. підег шляхом субклонування у вигляді фрагмента Ріті І-ЕсокМ у сайти МНеї (Кленова)-510! ро1 020 (нижче). Одержаним вектором, позначеним як рої 026, супертрансформують гомозиготну лінію М. їарасит руРЗ502 з метою додаткового підвищення рівнів масла в листі.
Одержані додаткові конструкції для експресії шпилькової РНК з метою зниження експресії генів ТО0О-2, -3 і -4. Із застосуванням вказаних конструкцій одержані трансформовані рослини, і в трансформантах визначений вміст масла. Трансформовані рослини схрещені з трансформантами, одержаними із застосуванням руРЗ3502 або інших комбінацій генів, як викладено вище.
Приклад 18. Експресія комбінацій генів у картопляних бульбах
Конструкція руР 3506
Генетична конструкція, що містить три гени для експресії в картопляних бульбах, одержана і застосовується для трансформації картоплі. Вказана конструкція позначена як руРЗ3506 і базується на існуючому векторі руР3502 (М/О2013/096993) із заміною промоторів, щоб забезпечити специфічну для бульби експресію. рОРЗ5Об містить (ї) ген резистентності до канаміцину МРТІЇ під управлінням промотору 355 з подвоєною ділянкою енхансера (е355), як ген селекційного маркера, і три експресійні касети генів, що являють собою (ії) 355:АШЮСАТІ1, кодуючу ОСАТІ1 Агабрідорвзів ІНаїіапа, (ії) В33:АЇМУКІ!1, кодуючу МУКІ! Агарідорвзів ІНаїіапа, і (ім)
ВЗЗ:олеозин кунжуту, кодуючу олеозин із безате іпаісшит. Нуклеотидні послідовності, що кодують вказані поліпептиди, є такими ж, як у руР3502. Промотор пататину В33 (В33) є специфічним для бульби промотором, одержаним із боіапит фШрегобит, що був запропонований д-ром АЇізааїг Регпіє, Інститут молекулярної фізіології рослин ім. Макса Планка,
Потсдам, Німеччина. Кругова карта плазміди руРЗ3506 представлена на Фіг. 17.
Послідовність промотору пататину В33 5. шШвреговит, використана в конструкції рОРЗ3506, являє собою вкорочену версію, у якій 183 нуклеотиду видалені на 5' кінці і 261 нуклеотид видалений на 3' кінці, в порівнянні із номером доступу СепВапк Х14483. Нуклеотидна послідовність промотору пататину ВЗ3, використаного у руР3506, наведена в 5ЕО ІЮ МО: 211.
Трансформація картоплі
Саджанці картоплі (боїапит Шреговит), сорт Айапіїс, вирощені в культурі тканини, в асептичних умовах, придбані у Тооіапді ЕІйе, сертифікованого органу насіннєвої картоплі у
Вікторія, Австралія (СОНКВА). Міжвузловини стебла розрізають на шматочки завдовжки приблизно 1 см під суспензією штаму І ВА4404 Адгобрасієгійт Шптптеїасієпе, що містить руР3506.
Клітини Адгорасієгішт вирощують до ОО 0,2 і розбавляють рівним об'ємом середовища Ме.
Надлишок суспензії Адгобасіегйцт видаляють короткочасним промоканням шматочків стебла стерильним фільтрувальним папером, з подальшим перенесенням на середовище МС та інкубацією при 24 "С протягом двох днів (кокультивація). Потім міжвузловини переносять на свіже середовище МС з додаванням 200 мкг/л НОК, 2 мг/л бензиламінопурину (БАП) і 250 мг/л цефотаксиму. Селекцію трансгенних калюсів починають через 10 днів, після перенесення 60 міжвузловин на свіже середовище МС з додаванням 2 мг/л БАП, 5 мг/л ЗАЗ, 50 мг/л канаміцину і 250 мг/л цефотаксиму. Пагони, що регенерують з калюсів, вирізують і вміщують на просте середовище МС для індукції коріння, перед перенесенням до горщику діаметром 15 см, що містить грунтову суміш, і вирощуванням в теплиці до стану зрілості рослини, включаючи ріст бульби.
Екстракція ДНК і молекулярна ідентифікація трансгенних рослин за методом ПЛР
Диски діаметром близько 1 см одержують з листя картоплі від рослин у теплиці. Їх вміщують на планшет для мікротитрування з глибокими лунками і ліофілізують протягом 48 годин. Далі ліофілізовані зразки листя подрібнюють на порошок, додаючи сталеву кульку в кожну лунку, і струшують планшет в лізаторі для тканин Кеїспї (Сіадеп) з максимальною частотою 28/с протягом 2 хвилин для кожної сторони планшета для мікротитрування. 375 мкл буфера екстракції, що містить 0,1 М Трис-НСІ, рН 8,0, 0,05 М ЕДТА і 1,25 95 натрій додецилсульфату (ПДВ) додають в кожну лунку, що містить порошкоподібну листову тканину. Через 1 годину інкубації при 65 "С, 187 мкл 6 М амоній ацетату додають в кожну лунку, і суміші витримують при 4 "С протягом 30 хвилин перед центрифугуванням планшетів протягом 30 хвилин при 3000 об/хв. 340 мкл супернатанту з кожної лунки переносять на новий планшет для мікротитрування з глибокими лунками, що містить 220 мкл ізопропанолу, і витримують протягом 5 хвилин при кімнатній температурі перед центрифугуванням при 3000 об/хв протягом 30 хвилин. Осаджені гранули ДНК промивають 70 95 етанолом, сушать на повітрі і ресуспендують в 225 мкл Н2О на зразок.
По два мкл кожного препарату ДНК зразків листя додають до 20 мкл реакційної суміші ПЛР за допомогою системи ПЛР Ноїзіаг (Оіадеп). Пару олігонуклеотидних праймерів, що базуються на 5' і 3' послідовностях із гена УМУКІ! Агарідорзі5 ІНаійапа, кодон-оптимізованого для тютюну, застосовують в реакціях ПЛР. Послідовності праймерів: МІЕ-МУті-РЗ: 5-
САСТССТастТТТоСАТСАТО-3' (5ЕО ІО МО: 212) і МЕМ/п-РІ: 5-ЧАдпасСстаАаСААСАдаАсца-
З'ЇЗЕО І МО: 213). Крім того, пару олігонуклеотидних праймерів, що базуються на гені ОСАТІ1
Агарідорзів Іпаійапа, кодон-оптимізованому для тютюну, застосовують в окремій реакції ПЛР для кожного зразка ДНК. Послідовності праймерів: МеЕОСАТ-Р2: 5-Сс6:)СССАТтттасАТТСТОас-3 (ЗЕО ІВ МО: 214) і МОСАТ-РЗ: 5-СССААСССТТССОаТАТАСАТ-3 (БО 10 МО: 215).
Ампліфікацію проводять з початковим циклом при 95 "С протягом 15 хвилин, за яким слідують
Зо 40 циклів при 95 "С протягом 30 секунд, при 57 "С протягом 30 секунд і при 72 "С протягом 60 секунд. Продукти ПЛР обробляють електрофорезом на 1 95 агарозному гелі для виявлення специфічних продуктів ампліфікації
Аналіз ліпіду картопляних бульб
Тонкі скибочки бульб, зібрані з регенерованих картопляних рослин для підтверджених трансгенних рослин і нетрансформованого контролю, ліофілізують протягом 72 годин, і аналізують вміст і склад ліпіду. Загальні ліпіди екстрагуються із сухих тканин бульби із застосуванням хлороформу:метанолу:0,1 М КСІ (2:1:1 об/об/об), як указано нижче. Ліофілізовані тканини бульби спочатку гомогенізують у хлороформі:метанолі (2:11, об/0б) в пробірці
Епендорфа, що містить металеву кулю, за допомогою лізатора для тканин Кеїснпі (Оіадеп) протягом З хвилин при частоті 29/65. Після змішування кожного гомогенату з Мібгатах 10 (НеїдоІри) при 2000 об/хв протягом 15 хвилин, до кожного зразка додають 1/3 об'єму 0,1 М розчину КСІ і додатково перемішують. Після центрифугування при 10000 д протягом 5 хвилин, із кожного зразка відбирають нижню фракцію, що містить ліпіди, і повністю випаровують в потоці
Ма. Кожен препарат ліпіду розчиняють у З мкл СНСіз на мг сухої маси бульби. Аліквоти препаратів ліпіду наносять на пластину для тонкошарової хроматографії (ТШХ) (20 см х 20 см, силікагель 60, МетгсК) і елююють гексаном:діетиловим етером:оцтовою кислотою (70:30:1, об/06/06). Пластину ТШХ окроплюють примуліном і візуалізують в Уф-світлі, щоб проявити плями ліпіду. ТАГ і ФХ витягують, зшкрябуючи силіцію діоксид відповідних смуг, і перетворюють на метилові естери жирних кислот (МЕЖК), інкубуючи матеріал в 1 н метанольному НСІ (Зиреїсо, Белефонт, Пенсильванія) при 80 "С протягом 2 годин, разом з відомою кількістю тригептадеканоїну (Ми-Спек РЕЕР, Іпс., США) як внутрішній стандарт для кількісного визначення ліпіду. МЕЖК аналізують на приладі ГХ-ПІД (7890А ГУ, Адіїепі ТесппоїЇодіє5, Пало
Альто, Каліфорнія), обладнаному колонкою ВРХ70О завдовжки 30 м (внутрішній діаметр 0,25 мм, товщина плівки 0,25 мм, ЗСОЕ, Остін, США), як було описано раніше (Реїгіє із співавт., 2012).
Піки інтегрують за допомогою програмного забезпечення Адіїепі Тесппоїодіе5 Спетеайоп (версія В.04.03).
Серед приблизно 100 регенерованих індивідуальних трансгенних ліній, аналіз ліпідів, одержаних з молодих картопляних бульб діаметром приблизно 2 см виявив підвищені рівні загальних ліпідів, ТАГ і фракцій фосфоліпідів у бульбах багатьох трансгенних рослин, причому 60 спостерігається діапазон від відсутності підвищення до значного підвищення. Перший аналіз ліпідів картопляної бульби показав, що типова картопляна бульба дикого типу на ранній стадії розвитку (діаметр близько 2 см) містить близько 0,03 95 ТАГ, в перерахунку на суху масу.
Вміст загальних ліпідів був підвищений до 0,5-4,7 95 мас. (суха маса) в бульбах 21 індивідуальної трансгенної рослини, що представляє 16 незалежно трансформованих ліній (Табл. 16). Бульби лінії Моб9 продемонстрували найвищу акумуляцію ТАГ, в середньому 3,3 95, в перерахунку на суху масу. Це відповідає підвищенню приблизно у 100 разів відносно бульб дикого типу на такій же стадії розвитку. Додатково, бульби цієї ж трансгенної лінії акумулювали найвищі із спостережуваних рівнів фосфоліпідів, 1,0 95 мас. у молодих бульбах, в перерахунку на суху масу (Табл. 18). Крім того, підвищена акумуляція ліпіду супроводжувалася модифікацією складу жирних кислот у трансгенних бульбах. Трансгенні бульби систематично акумулювали вищі відсотки насичених і мононенасичених жирних кислот (МНЖК) і нижчі рівні поліненасичених жирних кислот (ПНЖК) в загальному вмісті жирних кислот і у фракції ТАГ загальних жирних кислот (Табл. 17), конкретно, знижений рівень 18:3 (АЛК), який був зменшений із близько 17 95 для дикого типу до менш ніж 10 95 у трансгенних бульбах. Рівень олеїнової кислоти (18:1) в загальному вмісті жирних кислот підвищувався із близько 1 95 для дикого типу до більш ніж 5 95 у багатьох лініях і більш ніж 15 95 у деяких бульбах. Хоча рівні пальмітинової кислоти були підвищені, рівні стеаринової кислоти (18:0) були зниженими у кращих трансгенних лініях (Табл. 16 і 17).
Трансгенні рослини картоплі утримували в теплиці, щоб дозволити безперервний ріст бульб.
Бульби більшого розміру лінії МобО містили вищі рівні ЗЖК ії ТАГ, ніж бульби діаметром приблизно 2 см.
Додатково підвищені рівні ЗЖК і ТАГ одержані у картопляних бульбах шляхом додавання химерного гена, який кодує сайленсингову РНК для зниження експресії ендогенного гена БОР, в комбінації з генами МУКИ! і ОСАТ.
Подальші комбінації генів для трансформації картоплі
Загальну РНК із свіжих картопляних бульб (Боїапит іШбрегозит 1/., сорт АйЙапіїс), що розвиваються, екстрагують за способом ТЕКІ20! (Іпмйгодеп). Вибрані ділянки кКДНК, кодуючі маленьку субодиницю АГфази картоплі і ЗОРІ, одержані за допомогою ЗТ-ПЛР із застосуванням наступних праймерів: ві-АОР51: 5-АСАЙАСАТаТСТАСАСССАСАТОИ-3 (ЗЕО ІЮ
Зо МО: 251), ві-АйРа!: 5-САСТОТСАТСССААИатаддаттас-3 (5ЕО ІЮ МО: 252); 5і-5ОРІ1-51: 5-
СстТаАспАТасААсТпААсСАСАсСАТО-3 0 (ЗБО 10 МО: 253), і 5ЕБОРІ-аї: /5-
ССАТТаттАаТтосСстТТТСАстТОо-3 (5ЕО ІЮ МО: 254). Далі продукти ПЛР очищують і лігують з рРОЕМТ Еаву.
Таблиця 16
Загальний вихід ліпіду (95 мас. від сухої маси картопляної бульби) і його жирнокислотний склад в характерних молодих бульбах картоплі, трансформованих Т-ДНК рУРЗ5БОб, до цвітіння рослин.
Бульби лінії 65 були еквівалентними бульбам дикого типу (нетрансгенним) те регрес реверс ие т ворот рен жк 42 | 02 |т1вл1|02 100158 |05|11,7 5551551|21|02 06 | 15 | 14 19 |02е|т8л|02 0015804 |129 522 59|20|02 0,7 | 15 | 15 2г72| 02 |18.9| 03 001651 05)|55 550180 |20|02 08/21 | 07 274| 02190103 00165154 |05 5701 79|16|00 05/| 11 | 06 275| 02 |178|06 1 001/64|22|04 5761117| 15100 04| 12 | 07 276|02|18,7| 04 0 00169|63|05 559 82|16|00 0410908 55|021|178|06001/64|79|05 5571 86|14|00 03107 | То 65 |02|194|04 00157 |12|05 1 536/172|09|00 00/10 | 05 69 |031|19,8| 0100152 |1651|09 532137 | 11 | 03 0406 | 47 78 |02|19,5|05 0015349 |05 547|117| 12|00 04/10 | 05 83 |02|16,7| 04001651 73|05 5621 85|17|06 05109 | 13 9511 03|210| 02 ол | 31 |152| 08 52842 | 11 |02 03107 | 30 9531 04 |214| 03 001/43| 85109 545) 74 | 13 |00 03107 | 15 ло0|04Щ|19,0| 0500154) 76 |08 5551 73| 14 | 05 05109 | 10 ло4| 02 |18.0| 02 00/61 | 05168 561) 76|23|01 0615105 (ло6| 02 |19,7| 02 | ол | 46 | 09 |10,7|541/ 57 | 17 | 0 106 | 13 | 13
Таблиця 17
Вихід ТАГ (95 мас. від сухої маси картопляної бульби) і його жирнокислотний склад у характерних молодих бульбах картоплі, трансформованих Т-ДНК руРЗ506, до цвітіння рослин зе етріеоістетррез тет вартвареосрт сееорекортя зок - - - - - - а 1 - - - - - - (с) дт 04 |134| 00 001|46|5510,51|599Щ|15,7 00100100 0,0 | 003 42 03 |154| 02100170 |06/164|525| З 26 |02|06 ти | 05 19 02е|163|о01 00721180 0,5 1|509| 36 19 /|02|04 06 08 272 00011901 00 00 |112| 98100 1|528| 44 28|00|00 00 | 02 274 04 |174| 00 00 |102| 94100 |554| 47 26|00|00 00 | 02 275 0,01179| 0000/1251 44100 1|549| 71 3200100 00 | ом 276 00171100 00199 |10,61001|550| 49 25100 |00 00 | 02 55 0,31|176| 0500185 |1251061|525| 5219100 |00 06 | 05 65 00|т181|00001|120| 00100 1|556|144 0010000 00 | 00 69 03201106 00138 |2031 10 |494| 22 13 |02|03 05 | 33 78 00719100 001|82|94100|525|84 24 |00|00 00 | 02 83 03/|164|02 00187 |111106|534| 54 26100051 0,7/|05 951 0,3 1|217| 04 ол | 36 |18,651710|501|28 1 09|02|02 03 22 952 0,6 |234| 04 00 | 51 |101| 712 |519| 53140000 05/09 953 0,3 |172| 03 00177 | 06 1116/|497| 89 2510000 ти | ол лоо 007188 0500180 |12010,8|540| 39 20100 |00 00 | 04 7104 03|177|00 00184 |06 | 110|521| 47 32|00|07 13 | 03 (710604 |г2гол1| 03100 | 54 |1565) 11 |518| 36 | 14 | 00 |00 | 04 | 07
Таблиця 18
Вихід фосфоліпідів (95 мас. від сухої маси картопляної бульби) і їх жирнокислотний склад у характерних молодих бульбах картоплі, трансформованих Т-ДНК руРЗ506, до цвітіння. зе етос свв т ват реносгот его екоро зок - - - - - - а 1 .- - - - - - (с) 42|02|212|02|00|46 0438/5781 93109001 00 117 | оз 19101 1|227|02|00|44 51 031|549|89|07|7101051| 12 | о4 272|02|210|03|00|52 | 2804/5691 93109 | 13104 | 14 | о4 274100 1229| 00100160 23100 |572| 88 | 11 | 00100 | 16 | оз 275100 |196| 0510050 12/00 |587|126| 1000100 | 14 | ом 276100 1229| 00100163 26 10015631 93|12|00100 | 15 | 03 55101 |212|04|00|5 21 001|578|114|07|00100| 710 | ом 65100|214|04|00|59 | 171 100 |532|157| 1000100 | 13 | оз 69|02|215|021|00|23 371 061|619|79|061|00104 108 | То 78 1001|221|04|00|44 27 | 04|556|122| 0800100 | 13 | ом 83022111 031|00|50 29 104|571|107|08|00104 | 1 | 05 951102 1|248| 0510026 35 10615911 76 |06|001001|06 | 06 952103 12211 0010027 2 106 |610196|07|00100109 | 06 95-3| бе |232| 05100 | 31 361 071|577|93|07|00100109 | 05 ло 100 |233| 0510046 30 | 04|572| 90 | 0800100 | ти | ом ло41001|213| 00100148 2,7 100 |583|101| 10 00100117 | ом лоб бе |232| 02 | 00 | 38 | 30 | 06 |571| 86 |07 | 71004 | 1 | ом
Після верифікації секвенуванням ДНК, клоновані продукти ПЛР безпосередньо застосовують як послідовність гена-мішені, з метою одержання конструкції шпилькової РНКІ, або зливають за допомогою ПЛР із праймерами, що перекриваються. Три фрагменти ПЛР (ЗОРІ, АГФаза, СЗБ ж АГФ) в подальшому клонують у вектор рКаппіваї, що містить специфічні рестрикційні сайти, для клонування бажаного фрагмента у смисловій і антисмисловій орієнтації.
Вибрані рестрикційні сайти являють собою Ватні і Ніпа!й для клонування фрагмента у смисловій орієнтації і Крпі ії ХноЇ для вставки фрагмента в антисмисловій орієнтації. Набори праймерів, застосовуваних для ампліфікації трьох фрагментів гена-мішені, модифікують додаванням рестрикційних сайтів, що спрямовують фрагмент в клонуючі сайти рКаппіваї).
Експресійні касети, що містять фрагмент-мішень ДНК між промотором 355 і термінатором ОС5 в рКаппіраі, вивільняють за допомогою Мої! і клонують у бінарний вектор рууВМес2г2, з гігроміцином як селекційний маркер для рослин. Такі бінарні вектори вводять до штаму АСІ1 А.
Іштеїгасієпз і застосовують для трансформації картоплі, як викладено вище.
Приклад 19. Підвищення вмісту масла в однодольних рослинах
Експресія в ендоспермі
Вміст масла в ендоспермі однодольних видів рослин Тгйсицт аеєвіїмит (пшениця) і, таким чином, у зерні рослин, підвищують експресію комбінації генів, що кодують УУКІ1, ЮОБСАТ і олеозин, в ендоспермі в ході розвитку насіння із застосуванням специфічних для ендосперми промоторів. Конструкція (позначена як рої -Епаог2) містить химерні гени: (а) промотор гена Сі
Вгаспуродішт аібіаспуоп:кодуюча білок ділянка гена 7єа тауз, що кодує поліпептид. 2тУМА (ЗЕО ІО МО: 35):ділянку термінатора/поліаденілування із гена лектину Сіусіпе тах, (5) промотор гена глютеніну Вх17 Тійісцт аевіїмит:кодуюча білок ділянка гена А. ІПаїйапа, кодуюча поліпептид АШСАТІ (5БО ІО МО: 1):ділянка термінатора/поліаденілування із гена Мо5
Адгорасієгішт іШтегїасієп5, (с) промотор гена СІйиВ4 Огула заїйма:кодуюча білок ділянка гена
Зезате іпаісут, ділянка, що кодує поліпептид олеозину:ділянку термінатора/поліаденілування із гена лектину Спіусіпе тах і (4) промотор 355:ділянка, що кодує резистентність до гігроміцину, як ген селекційного маркера. Конструкцію застосовують для трансформації незрілих ембріонів
Т. аевіїмит (сорт Ріеідег) шляхом опосередкованої Аагобасієтішт трансформації. Інокульовані незрілі ембріони піддають дії гігроміцину, щоб відібрати трансформовані пагони, а потім переносять в середовище коренеутворення для формування коріння, перед перенесенням в грунт.
Одержані тридцять трансформованих рослин, на яких зав'язалося насіння Т1 і які містять Т-
ДНК із роїІ-Епдог. Урожай зрілого насіння зібраний з усіх 30 рослин, і 6 насінин кожної родини розрізають навпіл. Половинки, що містять ембріон, зберігали для подальшого пророщування; іншу половинку, що містить здебільшого ендосперм, екстрагують і оцінюють вміст масла. Т-ДНК, вставлена в геном пшениці, все ще сегрегується у насінні Т1 вказаних рослин, тому насіння Т1 являє собою суміш гомозиготних трансформованих, гетерозиготних трансформованих і нульових по Т-ДНК. Підвищений вміст масла спостерігається в ендоспермі деяких з насінин, причому деяке насіння демонструє підвищення рівнів ТАГ більше, ніж у 5 разів. У половинках з ендоспермом шести насінин (сорт РівеІдег) дикого типу вміст ТАГ становить близько 0,47 95 мас. (діапазон від 0,37 95 до 0,60 95), порівняно із вмістом ТАГ 2,595 у деяких зернах. У деяких сімействах всі шість насінин містять понад 1,7 95 ТАГ; інші є очевидно сегрегованими між диким типом ії підвищеним вмістом ТАГ. Крім того, в ендоспермі з підвищеним вмістом ТАГ склад жирних кислот модифікують, демонструючи підвищення відсоткового вмісту олеїнової кислоти і пальмітинової кислоти та зниження відсоткового вмісту лінолевої кислоти (Табл. 19). Насіння Т1 безперешкодно проростало з тією ж швидкістю, що і насіння відповідного дикого типу, причому рослини, що представляють особини як із високим вмістом масла, так і з низьким вмістом масла із 14 родин ТО, вирощені до стану зрілості. Вказані рослини володіли повноцінною чоловічою і жіночою фертильністю.
Зерно придатне для одержання харчових продуктів для споживання людиною, або як корм для тварин, забезпечуючи зерно з підвищеним вмістом енергії на одиницю маси (щільність енергії) і даючи підвищені темпи приросту у тварин, таких як, наприклад, домашня птиця, свині, велика рогата худоба, вівці і коні.
Таблиця 19
Склад жирних кислот (95 від загальних жирних кислот) у ТАГ і загальний вміст ТАГ (95 мас. масла в половинці з ендоспермом) у трансгенному ендоспермі пшениці
Контрольї | 03 | 169 | 01 | 00 | 16 | 156 | 06
Контроль2 | 03 | 160 | 01 | 01 | 16 | 151 | 06 53 | 01 | 201 | 01 | 01 | 26 | 235 | 06 б | 01 | 191 | 01 | 01 | 28 | 242 | 06 о
Контрольї | 604 | 40 | 01 | 04 | 00 / 00 | 05 (Контроль2 | 613 | 43 | 01 | 03 | 00 | 00 | 0498
Таблиця 19
Склад жирних кислот (95 від загальних жирних кислот) у ТАГ і загальний вміст ТАГ (95 мас. масла в половинці з ендоспермом) у трансгенному ендоспермі пшениці 5,3 | 485 | 24 | 08 | 07 | 03 | 04 | 25
Додатково, конструкцію рої -Епдо2 застосовують для трансформації кукурудзи (7єа тауз) і рису (Огула заїїма), з метою одержання трансгенних рослин з підвищеним вмістом ТАГ в ендоспермі і, таким чином, у зерні.
Експресія у листі і стеблах
Серія бінарних векторів експресії розроблена для опосередкованої Аагобрасієтійт трансформації сорго (5. Бісоїої) і пшениці (Т/йісит аєвзіїмит), з метою підвищення вмісту масла у вегетативних тканинах. Початковими векторами для конструкцій є ро 093-095, рої 134 і рОІ 100-104 (див. Приклад 4). Спочатку, фрагмент ДНК, який кодує УУКІ1 7. тауз, ампліфікують методом ПЛР із застосуванням рої! 104 як шаблону і праймерів, що містять рестрикційні сайти
Крпі. Вказаний фрагмент субклонують у напрямку по ходу транскрипції відносно конститутивного промотору Асіїпй 1 Огула займа в роїІ/095, використовуючи сайт Крпі.
Результуючий вектор позначений як роОІЇ/ 154. Фрагмент ДНК, що кодує ОБАТ2а треїпорвів гатаппіапа під контролем промотору убіхітину 7. тауз (ратИШрБі), виділяють з рої! 134 у вигляді фрагмента Мої! і вставляють у сайт Мої! рОІії154, з одержанням рої 155. Експресійну касету, що складається з кодуючого ФАТ ділянки під контролем промотору ратирбі, фланкованого на 3" кінці ділянкою термінатора/поліаденілування МОБ А. їштегасіеєп5, конструюють ампліфікацією кодуючої ФАТ ділянки із застосуванням рОРЗ416 як шаблону. Розроблені праймери для інкорпорації рестрикційних сайтів Ватні і Засі на 5" ії 3" кінці, відповідно. Після подвійного розщеплення Ватні --зЗасі, фрагмент ФАТ клонують у відповідні сайти р ШБіїсазМК. Одержана проміжна сполука позначена як рої 141. Далі, касету селекційного маркера ФАТ вводять до скелету рОІЇ155. В цій точці рОІЇ/ 141 спочатку розрізають за допомогою Мої!Ї, фрагмента
Кленова ДНК полімерази І! з тупими кінцями, і далі розщеплюють за допомогою Авсі. Потім одержаний фрагмент розміром 2622 пари основ субклонують у сайти 7гаІ-Авсі рої 155, з одержанням рої156. В кінці, промотор Асійп!ї7, що управляє експресією УМКІ1 рої 156, обмінюють на промотор маленької субодиниці Кибібєсо 7. тауз (рт55І), з одержанням рОІЇ-157. Даний вектор одержаний ПЛР ампліфікацією промотору 550 7. таув, із застосуванням роОІї104 як шаблону і фланкуючих праймерів, що містять рестрикційні сайти
Авібі і РтіЇ. Далі одержаний амплікон розрізають за допомогою бре/І-Міц! ії субклонують у відповідні сайти рої 156.
Вказані вектори таким чином містили наступні касети експресії: ро1І156: промотор актину 1 0. заїїма"МуКІ1 7. тауз, промотор убіхітину 7. таує:ОсАТ2а |. гаттапіапа і промотор убіхітину 2. тауб5:ФАТ роОІЇ157: промотор 550 7. таув:Му/КІ!ї 7. тау5, промотор убіхітину 7. тауб:рОАТ2а |. гаттапіапа и убіхітину 7. тауб5:ФАТ.
Другу серію бінарних векторів експресії, що містять промотор старіння ЗЕЕЇТ 7. таувз (Корзоп із співавт., 2004, див. Приклад 4), фактор транскрипції ГЕС1 7. тауз (5Пеп із співавт., 2010) і фрагмент ЗОРІ шпРНКІ 5. Бісоїог, сконструйовано, як указано нижче. Спочатку ділянку прикріплення до матриксу (ДПМ) вводять до роОКкЕО4 шляхом розщеплення роСоОтТ за допомогою Аайепаві, і субклонування в сайти Аай-ЕсоВМ роКкЕО4. Одержаний проміжний вектор позначений як рої 158. Далі ген селекційного маркера ФАТ під контролем промотору убіхітину 7. тау5 субклонують в рої 158. На цей момент рої 141 спочатку розщеплюють МОЇ, обробляють фрагментом Кленова ДНК полімерази І! і в кінці розщеплюють Авсі. Одержаний фрагмент вставляють у сайти Авсі---га! ро 158, з одержанням рої 159. Оригінальне джерело реплікації КК2 огім у рОІ 159 замінюють джерелом КіА4 шляхом рестрикційного розщеплення руУРЗ416 за допомогою ЗмаіІно5реї, з подальшим субклонуванням у сайти Зм/аі-АмпіІ рої 159.
Одержаний вектор позначений як роїІ/160. Синтезований фрагмент "рап1 старіння однодольних" розміром 10,019 тис. пар основ, що містить наступні касети експресії: актин 1 0. займа: рСсАТІ А. ІШаїїапа, кодон-оптимізована для експресії в 7. тауб5, ЗЕЕТ 7. тау5 МВІТ 7. тауб5, ЗЕЕТ 7. тауб'Ї ЕС1 7. тауз. Даний фрагмент субклонують у вигляді фрагмента 5рве!-
ЕсокУ у сайти бреІ-5ші рої 160 з одержанням рої 161. Синтезований другий фрагмент "рагі2 старіння однодольних" розміром 7,967 тис. пар основ, що містить наступні елементи: ДПМ, убіхітин 7. тауз:шпРНКІ, фрагмент, націлений на 5. Бісоіог/5ОРІ Т. аевіїмит, порожня касета під контролем промотору актину 1 О. займа. Послідовності двох ТАГ ліпаз ЗОРІ 5. Бісоїог (номери доступу ХМ 002463620; 5БО ІЮ МО. 242 ії ХМ 002458486; 5Е6О ІО МО: 169) ї одна послідовність ЗОРІ Т. аевімит (номер доступу АКЗ34547) (5БО ІО МО: 243) одержані за методом пошуку ВГАБТ із послідовністю ОРІ А. (айапа (номер доступу ММ 120486).
Розроблена конструкція синтетичної шпильки (ЗЕО ІЮ МО: 244), що містить чотири фрагменти (67 пар основ, 90 пар основ, 50 пар основ, 59 пар основ) послідовності ХМ 002458486 5. Бісоїог, яка продемонструвала найвищий ступінь ідентичності послідовності ЗОРІ Т. аевіїмит. Крім того, включений фрагмент розміром 278 пар основ, одержаний з ліпази ЗОРІ 5. бБісоїог
ХМ 002463620, з метою підсилення ефективності сайленсингу по відношенню до обох послідовностей ЗОРІ 5. Брісоїог. Фрагмент "рагі2 старіння однодольних" субклонують у вигляді фрагмента В5імМІ-ЕсокМ у сайти ВзіммІ-Ргрі ро 161. Одержаний вектор позначений як рої! 162.
Генетичні конструкції рОІЇ 156 рої 157, рої 162 ї роОІІ 163 застосовують для трансформації
З. Бісорг і Т. аевімит із застосуванням опосередкованого Адгорасіегічшт перетворення.
Трансгенні рослини відібрані на базі резистентності до гігроміцину і містять підвищені рівні ТАГ і
ЗЖК у вегетативних тканинах, в порівнянні з нетрансформованими контрольними рослинами.
Такі рослини є придатними для харчування тварин у вигляді сіна або силосу, а також можуть застосовуватися для одержання зерна або екстракції масла.
Приклад 20. Екстракція масла і одержання біопалива
Екстракція ліпіду з листя
Урожай трансгенного листя тютюну, трансформованого Т-ДНК із руР3502, збирали з рослин, вирощених у теплиці протягом літніх місяців. Листя сушать, а потім подрібнюють до фрагментів розміром 1-3 мм перед екстракцією. Подрібнений матеріал обробляють екстракцією в апараті
Сокслета (кип'ятіння із зворотним холодильником) протягом 24 годин з вибраними розчинниками, як описано нижче. 5 г матеріалу сухого листя тютюну і 250 мл розчинника застосовують в кожному експерименті з екстракцією.
Екстракція гексаном як розчинником
Гексан звичайно знаходить комерційне застосування як розчинник для екстракції масла із пресованого насіння олійних культур, наприклад, рапсу, причому гексан екстрагує нейтральні (неполярні) ліпіди, тож у іншій ролі він застосовується вперше. Маса екстрагованого ліпіду становила 1,47 г із 5 г листового матеріалу, вихід ліпіду становив 29 95 мас. Проведений аналіз екстрагованого гексаном ліпіду в ДМСО методом 1Н ЯМР. Аналіз продемонстрував сигнали, типові для довголанцюгових жирних кислот в тригліцеролі, без ароматичних продуктів. Далі ліпід обробляють ГХМСОС з метою ідентифікації основних компонентів. Аналіз екстрагованого гексаном ліпіду методом прямої ГХУМС провести складно, оскільки температура кипіння дуже висока, і матеріал розкладається в ході аналізу ГХМО. У таких ситуаціях загальна техніка аналізу включає первинне одержання метилових естерів жирних кислот, які були одержані, як указано нижче: 18 мг ліпідного екстракту розчиняють в 1 мл толуолу, додають З мл сухого З н метанольного розчину НСЇІ і перемішують протягом ночі при 60 "С. До охолодженого флакону додають 5 мл 5 95 Масі і 5 мл гексану та струшують. Органічний шар витягують, і екстракцію повторюють ще 5 мл гексану. Об'єднані органічні фракції нейтралізують 8 мл 2 95 КНСОЗ, відокремлюють і сушать за допомогою Ма2504. Розчинник випаровують в потоці М2, після чого концентрацію доводять до 1 мг/мл в гексані для аналізу ГХУМО. Основними жирними кислотами є 16:0 (пальмітинова, 38,9 95) і 18:1 (олеїнова, 31,3 Уб).
І З6дт | 389 | 46 | 64 | 313 | 25 | 15 | 06
Екстракція ацетоном як розчинником
Ацетон застосовують як розчинник для екстракції, оскільки його властивості розчинника повинні забезпечувати екстракцію практично всього ліпіду з листя, тобто як неполярних, так і полярних ліпідів. Екстраговане ацетоном масло виглядає подібним до екстрагованого гексаном ліпіду. Маса екстрагованого ліпіду становила 1,59 г із 5 г листя тютюну, тобто 31,8 95 мас.
Проведений аналіз ліпіду в ДМСО методом 1Н ЯМР. Спостерігаються сигнали, типові для довголанцюгових жирних кислот у тригліцеролі, та сигнали ароматичних продуктів.
Екстракція гарячою водою як розчинником
Здійснена спроба екстракції гарячою водою як розчинником для екстракції, з метою визначення її придатності для одержання масла із листя тютюну. Екстрагований водою матеріал виглядає гелеподібним і желюється при охолодженні. Маса екстракту становила 1,9 г або 3895 мас. Одержаний матеріал подібний до густого гелю і, ймовірно, містить полярні сполуки з листя, такі як цукри та інші карбогідрати. Проведений аналіз матеріалу у ДМСО за методом 1Н ЯМР. Аналіз продемонстрував сигнали, типові для довголанцюгових жирних кислот у тригліцеролі, і не показав екстрагованих ароматичних продуктів. Зайвий твердий матеріал був екстрагований гексаном, даючи 2095 мас. ліпіду, що вказує на неефективність екстракції неполярних ліпідів водою.
Екстракція етанолом як розчинником
Етанол застосовували як розчинник для екстракції, з метою визначення його придатності для одержання масла з листя тютюну. Екстрагований етанолом ліпід виглядає подібним як до ліпіду, екстрагованого водою, так і до ліпіду, екстрагованого гексаном, він має жовто-червоний колір, гелеподібний зовнішній вигляд і желюється при охолоджуванні. Маса екстрагованого ліпіду становила 1,88 г із 5 г тютюну, або 37,65 мас. Крім того, етанол як розчинник екстрагував із листя тютюну деякі полярні сполуки.
Екстракція етером як розчинником
Здійснена спроба екстракції діетиловим етером як розчинником для екстракції, оскільки передбачалося, що він може екстрагувати меншу кількість домішок, ніж інші розчинники. В результаті екстракції одержано 1,4 г або 28 95 мас. Екстрагований етером ліпід подібний до матеріалу, екстрагованого гексаном, має жовтуватий колір і виглядає небагато чистішим, ніж гексановий екстракт. Незважаючи на те, що одержаний з діетиловим етером екстракт виглядає найчистішим маслом, аналіз методом ЯМР продемонстрував суміш більшої кількості органічних сполук.
Одержання біодизельного палива із рослин тютюну
Партія трансгенних рослин тютюну була вирощена протягом зими (що не є його нормальним сезоном росту), з метою оцінки продукування масла у листі протягом більш холодного сезону, з меншим ступенем природного освітлення. Листя зрілих рослин містить близько 10 95 масла, в перерахунку на суху масу; це набагато нижче, ніж у рослинах, вирощених протягом літнього періоду. Незважаючи на це, ліпід був екстрагований і перетворений на біодизельне паливо, як указано нижче. Стадії способу були наступними: (а) екстракція неочищеного ліпіду, (Б) очищення ТАГ з ліпіду, і (с) перетворення очищених ТАГ на біодизельне паливо.
Гексан (петролейний ефір 40-60С) застосовують як розчинник для екстракції, з метою одержання масла, що в основному містить неполярний ліпід. 500 г листового матеріалу тютюну
Зо сушать, зважують, а потім просочують гексаном протягом ночі при перемішуванні. Суміш фільтрують, після чого гексановий екстракт сушать за допомогою сульфату магнію і обробляють активованим вугіллям для дезодорування масла. Розчин фільтрують, причому одержана рідина, упарена на роторному випарнику, дає близько 42 грамів неочищеного масла.
Воно має жовтий/зелений колір і в'язку консистенцію при охолодженні. Частину вказаного масла використали у спробі одержати біодизельне паливо напряму, однак кількість домішок і високий вміст вільних жирних кислот призвели до утворення великої кількості мила, яке перешкоджало перебігу реакції метилування і відокремленню продукту. Таким чином, у разі одержання біодизельного палива існує необхідність у подальшому очищенні вказаного масла до реакції переестерифікації, з метою збагачення фракцією ТАГ.
Однією з проблем із вирощеним взимку зразком є присутність відносно високих рівнів вільних жирних кислот (СЖК) в екстрагованому матеріалі, що призводить до збільшення утворення мила, що перешкоджає відокремленню метилових естерів та гліцеролових продуктів.
З метою очищення ТАГ у маслі досліджені декілька систем розчинників, причому суміш гексану/етилацетату 80:20 вибрана як придатна для колонкової хроматографії. Здійснено розділення на колонці із силіцію діоксидом, із застосуванням гексану:хетилацетату (80:20).
Гідрофобні ТАГ елююються з колонки першими, у вигляді оранжевого/жовтого масла. Далі елююється темно-зелена смуга, що містить суміш розчинних у гексані компонентів з листя тютюну, включаючи хлорофіл, змішаний з деякою кількістю ТАГ і СЖК. Кінцевий продукт вимивається з колонки чистим етилацетатом і в основному являє собою СЖК.
Очищені ТАГ, збагачені окремо від СЖК і фосфатів, а також інших домішок, на цій стадії можуть бути перетворені на біодизельне паливо. Це здійснено шляхом введення ТАГ в реакцію з метанолом у присутності основного каталізатора, з одержанням метилового естеру (біодизельне паливо) і гліцеролу як побічного продукту. Альтернативний спосіб, каталізована кислотою естерифікація, може застосовуватися для введення жирних кислот в реакцію із спиртом, з одержанням біодизельного палива у присутності СЖК, з меншими вимогами до чистоти ТАГ. Інші способи, такі як реактори з фіксованим шаром, суперкритичні реактори і ультразвукові реактори дозволяють відмовитися або зменшують застосування хімічних каталізаторів, і додатково можуть застосовуватися для одержання біодизельного палива з ліпідів. Однак, способи з основним каталізом є найекономічнішими з точки зору перетворення бо очищених ТАГ, вимагаючи тільки низьких значень температури і тиску, з одержанням виходу перетворення понад 9895 за умови низької вогкості і вмісту вільних жирних кислот в початковому маслі.
Очищені ТАГ обробляють розчином метоксиду (МаоОН і метанол змішують до повного розчинення) при температурі масла 60 "С. Суміш витримують при 60 "С і перемішують протягом 2 годин, поки відбувається реакція переестерифікації. Реакційну суміш охолоджують до кімнатної температури, при цьому утворюються дві фази, причому верхній шар являє собою біодизельне паливо, а нижній шар є гліцеролом. Далі фази розділяють із застосуванням ділильної лійки, і витягують біодизельне паливо.
Гідротермічна обробка вегетативних тканин із високим вмістом масла
Інший, більш прямий підхід до перетворення вегетативних частин рослини на промислові продукти, такі як рідке пальне, полягає у гідротермічній обробці (ГТО). Її застосовують для перетворення матеріалу листя трансгенного тютюну, що містить близько 30 95 мас. ЗЖК, на відновлюване біодизельне паливо, яке може бути додане у звичайну сиру нафту на нафтопереробному заводі, з метою одержання відновлюваного дизельного палива (парафінове дизельне паливо). Нафтове дизельне паливо являє собою суміш великої кількості гідрогенкарбонових сполук, в основному алканів, і визначається як фракція на виході нафтопереробного заводу в проміжку 200-300 "С, що звичайно містить в основному С13-С22 гідрогенкарбони. При типовому перетворенні листя трансгенного тютюну за допомогою ГТО, твердий вегетативний рослинний матеріал трансгенного тютюну змішують із водою, щоб одержати концентрацію твердих речовин 16-50 95. Далі вказану суспензію піддають дії температури 270-400 "С і тиску 70-350 бар. Тривалість реакції варіює в проміжку 1-60 хвилин, причому експерименти проводилися з Маон і КОН як каталізатором і без них.
Після закінчення ГТО обробки і охолодження реакційної суміші останню розділяють на З різні продуктові потоки, а саме газ, тверді речовини і рідка біонафта. Вихід біонафти становить 25-40 965, в перерахунку на суху масу відносно кількості початкового матеріалу. На Фіг. 18 проілюстровано, що набагато більший вихід біонафти був одержаний для матеріалу листя трансгенного тютюну, в порівнянні з матеріалом листя тютюну відповідного дикого типу.
Пряме перетворення ліпіду у вегетативних частинах рослини на біодизельне паливо іп 5іїШш
В іншій серії експериментів водний компонент реакції ГО був замінений розчинником
Зо метанолом. Існує цілий ряд причин для спроби застосування метанолу, причому одна із них полягає в ідеї безпосереднього перетворення ТАГ із масла листя (іп вії), в одну стадію, з одержанням метилових естерів жирних кислот (МЕЖК) безпосередньо у ліпіді, з безпосереднім одержанням біодизельного палива. Застосовуються такі ж умови реакції і обладнання, що і в попередніх експериментах з ГТО, із заміною води метанолом, температура реакції становить 335 "С, тиск 240 бар, із застосуванням Маон як каталізатора. Вегетативні рослинні частини трансгенного тютюну дають 47 95 мас. біонафти, в перерахунку на початкову масу, тоді як тютюн дикого типу дає 35 95 мас. біонафти. Аналіз методом Н' ЯМР двох одержаних зразків біонафти продемонстрував тільки невелику кількість МЕЖК, причому аналіз методом ЯМР біонафти з трансгенного тютюну продемонстрував велику кількість МЕЖК біодизельного палива.
Кваліфікованим фахівцям в даній галузі буде зрозуміло, що можуть бути здійснені численні варіації та/або модифікації винаходу, як проілюстровано у конкретних варіантах реалізації винаходу, без виходу за межі контексту винаходу, як було детально описано. Таким чином, представлені варіанти реалізації винаходу слід в усіх відношеннях інтерпретувати як ілюстративні, але не обмежуючі.
Всі публікації, які обговорюються та/або на які присутні посилання у даному документі, включені до даного документу в повному обсязі.
Будь-яке обговорення документів, дій, матеріалів, пристроїв, виробів або подібного, включене до даного документу, служить виключно меті забезпечення контексту для даного винаходу. Це не слід інтерпретувати як згоду із тим, що будь-які або всі з цих матеріалів утворюють частину рівня техніки або являли собою загальнодоступне знання у даній галузі, що відноситься до даного винаходу, оскільки вони існували до дати пріоритету кожного з пунктів формули винаходу в даній заявці.
ПОСИЛАННЯ:
АІетаппо еї а). (2008) Ріапіа 227:853-866.
АІтвіда апа АЇїІ5Ніге (2005) ТАЕМОЗ5 Сеї! Віої. 15:251-258.
Аопзо вї а). (2009) Ріапі СеїІ 21: 1747-1761.
Аопзо вї аї. (2010) Стеєп Спет. 12:1493-1513.
Аїмаге? евї а. (2000) Тнеог. Аррі. Сепеї. 100:319-327. 60 Апагє аї а! (2012) Ргос. Маї!. Асад. сі. 0О.5.А. 109:10107-10112.
Апагіапом еї аї. (2010) Ріапі Віоїесн. У). 8:277-287.
Амаї еї а! (2006) Віоспет. бос. Тгапв. 34:395-398.
Вапіеї! єї а!. (2008) Ріапі МеїШоосв 4:22.
Ваца еї а. (2007) Ріапі 9. 50:825-838.
Ваца апа І еріпієс (2010) Ргоаг. І іріа Нев. 49: 235-249.
Вайтівіп єї аї. (1991) Мої. Сеп. Сепеї. 225:459-467.
Вайтівіп еї а. (1992) Ріапі у). 2:233-239.
Веїїде еї а). (2013) Ріапі Сеї! Тів5. Огу. Си. 001 10.1007/511240-013-0295-1.
Веп Зааєй еї а. (2011) Тгапздепіс Ве 20: 1003-1018.
Веппіпод еї а! (2008) Ргод. Гіріа Нев. 47:381-389.
Веппіпа еї а! (2009) У. Віої. Спет 284:17420-17427.
Вірікома еї а. (2002) Сепеїісв 161:1169-1175.
Віди апа Буеєг (1959) Сападіап уошгпаї ої Віоспетівігу апа Рпузіоіоду 37:911-917.
Воигане (1995) Ріапі сі. 105:125-149.
Вошійіег еї а. (2002) Ріапі Сеї! 14:1737-1749.
Вошмівє!-Маме еї а!. (2000) Еигореап доштпаї ої Віоспетівігу / РЕВ5 267:85-96.
Вгадчтога (1976) Апа!. Віоспет. 72:248-254.
Вгооїпаєтіз еї а!. (2005) Маїшге 433:629-633.
Вгошп еї аї. (1998) Ріапі у. 13:201-210.
Вгомузе сеї а!. (1986) Віоспет .) 235: 25-31.
Виспапап-У/оїїавіоп (1994) Ріапі Рпузіої. 105:839-846.
Виз»к еї а!. (1997) Ріапі 3. 11:11285-1295.
Сао еї а!. (2007) 9. ІПіріа Ве. 48:583-591.
Сарцапо еї а!. (2007) Віоїеснпої. Адм. 25:203-206.
СнНеп еї аї (2011) Ріапі Рнузіо!. 155:851-865.
Спікматкьа е! а!. (2003) Ргос. Маї). Асад. 5сі. 0О.5.А. 100:11127-11132.
СнНтізійе (1993) Адмапсез іп І ірій МеїйодоіІоду- Гло, Оу Ргез5, Оипаєє, рр195-213.
Спипа єї а. (2006) ВМО Сепотісв 7:120.
Сотаї еї а!. (2004) Ріапі У 37: 778-786.
Сопа еї а!. (2013) бсіепсе 339:819-823.
Соїгтадо апа Кагаїї (2009) Віотеснпої. Аду. 27:733-743.
Соигмаїн еї аї. (1995) І Ме 5сі. 318:1207-1212.
Соши єї аї. (2007) Тгапздепіс Вев. 16:771-781.
РапаїкК апа АКзоу (1998) Риєї! Ргосев5 Тесппої. 57: 81-92.
ОВагії єї аї. (1997) Сеї! 91:765-775. раик еї а! (2007) Ріапі 5сі. 173:43-49.
Ошетгто апа Місаца (2011) Меїаб. Епа. 13:482-491.
Оитеї еї а. (2008) Ріапі 9). 54:593-607. риззен еї аї. (2013) Ріапі Рпузіо!.162:1337-1358.
Буег еї а. (2002) Ріапі Рнувзіої. 130:2027-2038.
Еазітопоа еї аї. (2006) Ріапі Сеї! 18: 665-675.
Ессіезіюп еї а! (1996) Ріапіа 198:46-53.
ЕПегвіготє еї аї. (1996) Ріапі Мої. Вісої. 32:1019-1027.
Епааєм еї а. (2011) Віотаз5 апа Віоєпегду 35:3787-3809.
Ееепвеу еї а!. (2012) Ріапі Рпувзіої! 162: 1881-1896.
РіпКе!5івїп еї а!ї. (1998) Ріапі Сеїї 10:1043-1054.
Егоіїззага єї а. (2009) РЕМ5 Увєаві Нез 9:428-438.
Сап (1995) МоіІєсціаг спагасієгігайоп апа депеїїйс тапіршіайоп ої ріапі зепезсепсе. РНО ІНевів.
ОпіметеПу ої М/ізсопвіп, Мадізоп.
Сап апа Атавіпо (1995) бсіепсе 270:1986-1988.
Саглаїттіпі еї а!. (2004) Оєм. Сеї! 7:373-385. сСпозаї єї а!. (2007) Віоспітіса єї Віорпузіса Асіа 1771:1457-1463.
Сіпозн еї аї. (2009) Ріапі Ріузіо!. 151:869-881. сідаа єї а! (2013) Ріапі 5ідпаїїпу Вейам. в:є27141.
СіпазпапКаг апа Змаїпівзгеє, (2009) РНузіої. Мої. Віої. РіІапів 15: 287-302.
Сюопа апа Лапа (2011) Віоїеснпої. І ей. 33:71 269-1284.
Сюоціа єї аї. (1991) Ріапі Рнузіої!. 95:426-434.
Стеепмеї! єї аї. (2010) 9. ВА. 5ос. Іпіепасе 7:703-726.
Сигеї! єї аї. (2009) Ріапі Сеї! Вер. 28:429-444. 60 Негзпеу апа 5юпег (1991) Ріапі Мої. Віо!. 17:679-690.
Ніпснеєе еї а!. (1988) ВіотесппоІоду 6:915-922.
Нот еї а. (2007) ЄирПуїйса 153:27-34.
Нот єї а). (2013). Ріапі Рнувіо! 162:1926-1936.
Ногуаїн вії а!. (2000) Ргос. Маї). Асад. бсі. О0.5.А. 97:1914-1919.
Ниапа (1996) Ріапі Рпувзіої. 110:1055-1061.
Іспінага єї а! (1988) Віоспіт. Віорпувз. Асіа 958:125-129.
Ікеда еї а. (2006) РІ Віоїесй у. 23: 153-161.
Ім'ариспі еї а. (2003) у. Вісі. Спет. 278:4603-4610.
Уако еї а! (2001) Ріапі Рпузіої. 126:861-874.
Уатевз евї а!. (2010) Ргос. Маї)!. Асад. 5сі. ОБА 107:17833-17838.
Уерзоп еї а!. (1994) Ріапі Мої. Віо!. 26:1855-1866.
Уіапо, еї а!. (2013) Мисівїс Асід5 Незеагсй 41(20) е188. упо еї аї. (2011) ВМС Віоспетівігу 12:44.
Чоїїмеї єї а. (2014) Ріапі Рпузіої. Віоспет. 42:501-509. щдопез вї а!. (1995) Ріапі Сеї 7: 359-371.
Каптакаг єї аї. (2010) Віогезоцсе Тесппоіоду 101:7201-7210.
КепПу єї а!. (2011) Ріапі Рнузіої. 157: 866-875.
КепПу есеї а! (2013За) Ріапі Віоїесн. У). 11:355-361.
Кеїу єї а!. (20135) Ріапі Рпузіої. 162:1282-1289.
Кегез71 єї а. (2007) Машге Ргоїосоїв5 2:948-952.
Кіт єї аі. (1996) Ргос. Маї)!. Асад. осі. ОБА 93:1156-1160.
Кіт еї а. (2004) Ріапі Рнузіої. 134:1206-1216.
Кпиїгоп еї аї. (1995) Ріапі Ріувзіо!. 109:999-1006.
Ко?лівї еї а. (1996) Ріапі Мої. Вісі. 32:393-405.
Кинп еї а. (2009) 9. Віої. Спет. 284:34092-102.
Кипзві еї аї. (1988) Ргос. Маї)!. Асад. 5сі. 0.5.А. 85:4143-4147.
Кмопа еї аї. (2003) Ріапі Сеїї 15:5-18.
І асгоїх еї аї. (2008) Ргос. Май). Асай. 5сі.0.5.А. 105: 15429-15434.
І ахгаігаваї! єї аї. (2008) Ріапі Рнузіої. 148: 89-96.
Зо І ажіп сеї а. (1996) Тгапздепіс Нев. 5:325-335.
Ї айгеїез еї а. (2002) 9. ої Адгіс. апа Роса Спет. 50:1581-1586.
І ергип еї аї. (1987) Мисі. Асіад5 Нев. 15:4360.
І аих єї а. (1996) Оємеіортепі 122: 87-96.
Ї аго вї аї. (1991) Віо/Тесппоіоду 9:963-967.
Ї ее єї а). (1998) Зсієпсе 280:915-918.
Ї се єїа)ї., (2003) Ргос. Майї). Асад. 5сі. О.5.А. 100:2152-2158.
М-Веїззоп вї а! (2013) Тне Агабідорзі5 Воок, 2013.
Її еї а. (1996) РЕВ5 ГГ ейї. 379:117-121.
ЦП ега!. (2006) Рпуюспетівігу 67: 904-915.
Оп еї а. (2005) Ріапі Рпузіої. Віоспет. 43:770-776.
Пи еї а. (2010ба) Риє! 89:2735-2740.
Пи еї а. (20105) Ріапі Рпузіої. Віоспет. 48: 9-15.
Пи еїга! (2012а) Ргод. Гіріа Нев. 51:350-377.
Ши еїаї. (20125) Іп Міїто СеїЇшаг апа Оєму. Віої. Ріапі 48:462-468.
Ши еїаї. (2012с) У Ехр Вої 63: 3727-3740.
Ши еїгаї. (2014) ВМС Ріапі Віо!. 14: 73.
Ї оїап вї аї. (1998) Сеї! 93: 1195-1205.
ЇГ и еї а! (2007) 9. ВіоІ. Снет. 282: 35945-35953.
Ї пеге5еп еї аї. (1998) Ріапі 9. 15: 755-764.
Ї ці еї а. (2009) 9. Адгіс. Роса Спет. 57: 2308-2313.
Манег апа Вгеззівг (2007) Віогезоцгсе Тесппоіоду 98:2351-2368.
Маїзицока еї аї. (1994) РіІапі 9. 6:311-319.
МаїзцокКа апа Міпаті (1989) Єик. У. Віоспет. 181: 593-598.
МеЕїгоу еї а. (1990) Ріапі Сеї! 2: 163-171.
Меїег еї а!. (1997) РЕВ5 І ей. 415:91-95.
МіПаг апа УУатетоизе (2005). Рипсі Іпівєдг Ссепотісв 5:129-135.
Моїіса єї аї. (2000) Мої Місгобіо! 36:244-246.
Мопагагпоа еї а!. (1998) Рпуюспетівігу 49:1049-1064.
Могепо-Регег (2012) РМАБ5 109:10107-10112. 60 Ми еї а). (2008) Ріапі Рпузіої. 148:1042-1054.
Митгрпну еї а!. (2012). Ргооріазта 249:541-585.
Маїт еї а. (2012) РІ о5 Опе 7: е52717.
Меєаієтап апа УУипвсй (1970) 9. Мої! Віої. 45: 443-453.
Міїв5оп еї аї. (2012) РНузіої. Ріапіагит 144: 35-47.
Мівпіда єї а! (1993) Ріапі Мої. Віої. 21:267-277.
Мотитга еї аї. (2000) Ріапі Мої. Віої. 44: 99-106.
ОпПігодде апа Вгомузе (1995) Ріапі Сеї! 7: 957-970.
Радідат (2003) Ситт. Оріп. Ріапі Віо!. 6:169-77.
Радідат еї а. (2003) Тгапздепіс Незв. 12:101-9.
Рапнібапе евї а!. (2012а) 9. Вісі. Снет. 287:1946-1965.
Раппірапе еї а. (20126) Ріапі РНузіої!. 159:95-104.
Разаціпеїії еї а!. (2005). Сит. Оріп. Ссепеї. Оемеіор. 15:200-205.
Регег-Міспй еї а. (1998) 9У.А.О.0.5. 75:547-555.
Реттіп еї а. (2000) Мої. Вгеєд. 6:345-352.
Реїніє єї а!. (2012) Р О5 Опе 7: е35214.
РпНйїрз еї а!. (2002) доитпаї! ої Роса Сотрозйоп апа Апаїувів 12:123-142.
Рідеаїге евї аї. (1997) Мої. Вгеєд. 3:341-349.
Роїепла ві а!. (2004) Іп Міїго Сеї! Оєу. Віої. Ріапі 40:1-22.
Ромеї! єї а. (1996) Массіпе5 183, Арзігасі.
Ом еї аї. (2001) 9. Віої. Спет. 276:31561-3156.
Ворзоп еїа!. (2004) Ріапі Віотесппої ) 2:101-112.
ВоззеїЇ апа Рійснага (1991) Апаїузів ої ОіЇвеєдв, Раїв апа Райу Еоодз. ЕІземіег Зсієпсе
Рибіївпегв ПК: Гопаоп (Спарієг 2, рр.48-53).
Вовіоп еї аї (2012) 9. Віої. Спет. 287:21406-21415.
Вишизка еї аї. (2002) Ріапі Сеї! 14:1191-1206. зага еї аї. (2006) Ріапі Рпузіо!. 141:1533-1543.
Запіоз-Мепадола єї а. (2005) РЕВ5 І ей. 579:4666-4670.
Запіоз-Мепадозла єї аї. (2008) Ріапі 9. 54:608-620.
ЗсНайнпег (1980) Ргос. Маї!. Асад. сі. 0О.5.А. 77:2163-2167.
Ко) зЗеппиїтт еї аї. (2002) Ріапі Рпувіо! 129:1700-1709.
ЗсоЇїЇї єї а. (2010) Ріапі Віоїеснпої. 9. 8:912-27. зЗпеп еї аї. (2010) Ріапі Ріув. 153: 980-987. зетумаї! єї аї. (2011) Віотезошгсе Тесппоіоду 102:2151-2161.
Зепіог (1998) Віоїеєсн. Сепеї. Епдіп. Немзв. 15:79-119.
Зпеп еї а!. (2010) Ріапі Рпузіої. 153:980-987.
Зпіїпа еї а. (1997) Ріапі Рпузіої. 115:477-483.
Зпітада апа Нага-Мівпітига (2010) Віої. Рпагт. Виїї. 33:360-363.
Зпітада еї аї. (2014) Ріапі Ріувзіої. 164:105-118. зЗпоскКеу еї а!. (2002) Ріапі Рнузіої! 129:1710-1722.
Зі7гетоге єї аі. (1995) Зсієпсе 270:299-302.
ЗіІаде апа Кпаші (2005) Тгтапздепіс Вев. 14: 109-115.
Зіосотрбе вї а!. (2009) Ріапі Віоїеснпої. У. 7: 694-703.
Зтіїй єї а. (2000) Маїшиге 407:319-320.
Зотег/е еї аї. (2000) Ііріа5. п ВВ Виспапап, М/ Стиівбвет, ВІ допев, єдв, Віоспетівіу апа
Моїесшіаг Віоіоду ої Ріапів. Атегісап 5осієїу ої Ріапі РНузіоіодівів, НКоскміїе, МО, рр 456-527.
Згіпімазап еї а). (2007) Ріапіа 225:341-51. зіаїКег єї а. 1988 бсіепсе 242: 419-423.
Зіопе вї а!. (2001) Ргос. Маї). Асад. сі. 0О.5.А.98: 11806-11811.
Зіопе вї а!. (2008) Ргос. Маї). Асад. бсі. 0.5.А.105: 3151-3156.
Тап еї а. (2011) Ріапі Рпузіої. 156:1577-1588.
Тауїог (1997) Тне Ріапі Сеї! 9:1245-1249.
Тпйеї еї а. (1988) 9. Віої. Спет 263:12500-12508.
Тіпдау еї а. (1997) Ріапі 9. 11:1369-1376.
То еї а. (2012) Ріапі Сеї! 24:5007-5023.
Торієг єї а!. (1995) бсієпсе 268:681-686.
Штавом еї а!. (1995) Ріапі Рпузіої. 108:919-927. мап де І со вї а!. (1995) Ргос Маї! Асаай 5сі 0 5 А. 92:6743-6747.
Мап Ер ега!. (2014) Ріапі Рпувзіої. 165-30-36.
Маппегеке еї аї. (2013) РЕВ5 І енегї5 587:364-369. бо Маппегеке еї а. (2014). Ріапі Віоїесн. у. 12:231-239.
Мівїег еї ах. (2012) Ріапі Рпузіої. 158:1562-1569.
МоеїКег вї а!. (1992) бсівєпсе 257:72-74.
Моіппеї еї аї. (2003) Ріапі у. 33:949-956.
Мапа апа Веппіпу (2012) Ріапі У 70:614-623.
Мапа еї а. (2002) Ріапі У 32:831-843.
Мапа еї а. (2004) РМАБ5 101:3275-3280.
М/аїетоизе еї аї. (1998). Ргос. Май). Асай. 5сі. 0.5.А. 95:13959-13964.
Му/еї55 (2003) Іпі. У. Мей. Містовіої. 293:95-106.
Мезеїаке еї а!. (2008) 9. Ехр. Воїапу 59: 3543-3549.
Міпіснауаки! єї аї. (2013) Ріапі Рпузіої. 162:626-639.
Мо еї а. (2009). Ріапі Віоїеси. у. 7: 914-924.
МУТДНІ еї а!. (2006) Метоа5 Мої Віої. 343:120-135.
Ми еї а!. (2014) Іп Міїго СеїІшаг апа Оєу. ВіоіІ.-Ріапі 50:9-18.
Хівє вї а. (2014) Мої. Ріапі 7:923-926.
Хи еї а! (2010) Ріапі апа Сеї| Ріузіої. 51:1019-1028.
Хи еї а! (2005) Ріапі Сеї! 17:3094-3110.
Хи еї а! (2008) Ріапі СеїІ 20:2190-2204.
Уатасздівні еї аї. (2005) РІ Рпузіої 139: 163-173.
Уатавзгакі єї а!. (2004) Ріапі Сеї! 16:3448-3459.
Уапа еї а. (2003) Ріапіа 216:597-603.
Уапа еї аї. (2010) Ргос. Маї!. Асад. 5сі. О.5.А.107:12040-12045.
Хеп еї а). (2002) Ргос. Маї!. Асад. 5сі. 0О.5.А. 99:8512-8517.
Уеп еї аї. (2005) У. ГПріа Нев. 46: 1502-1511.
УоКоуата еї аї. (1994) Мої Сеп Сепеї 244: 15-22.
Уцап еї а. (1995) Ргос. Маї!. Асад. 5сі. 0О.5.А. 92:10639-10643. папа еї а. (1999) Ріапі СеїІ, Тіввие апа Огдап Сийиге 56:37 -46. «Ппепод єї а. (2009) РІ Рнувіої 21: 2563-2577. 2оЇтап еї а! (2001) Ріапі Рнувзіої. 127:1266-1274.
Коо) ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ «1105 Соштопмеа1єб 5сієпрітіс апа ІпдивЕеЕгіаі! ВБезеаксі
Огдапіваєсіоп «1205 СПОСОБИ ОДЕРЖАННЯ ПРОМИСЛОВИХ ПРОДУКТІВ ІЗ РОСЛИННИХ ЛІПІДІВ «1305 517481 «1505 АО 2014902617 «1515 2014-07-07 «1505 А 2015900084 «1515 2015-01-13 «1505 АО 2015900284 «1515 2015-01-30 «1605 254 «1705 РабепсІпПп версія 3.5 «2105 1 «2115 5:20 «2125 ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 1
Меє Аза Іїе гей Авр бБег Аїа сбіу Уаі ТПг ТПг Уаі ТП бій Ап щ1У 1 в; 10 15 сі1у б1у бій Рпе Уаі Авр Гей Авр Агуд гей Агуд Агуд Агуд пуб бег Агд 60 20 25 30 век Авр бБекг бек Авп обіу Гей Гей Гей бек сіу Бек Авр Авп Авп бег 35 40 45
Ркго Бек Авр Авр Уа! б1у Аї1а Рго А1ї1а Авр Уаі Агуд АвБр Агд І1е Авр 50 з9 бо зек Уаії Уаї АвБп АвБр АвБр Аза сіп сіу ТПпг Аза АБп гейш Аїа с1у Авр 65 70 75 80
Авп оАвп о сіу біу б1у Авр Ап АвБп о сіу сбіу б1у Агд с1іу с1у с1у с1іц 85 90 95 б1у Акд б1у АвБп Аза Ар Аїа ТПг Рпе ТПг Туг Агуд Рго бек Уаі1їі Рго 100 105 110
Аза Нів Агуд Агд Азїа Агуд бій бек Рго ІТецй бек бБег Авр Аїа І1е Ріє 115 120 125
Тпув біп бек Нів Аїа сіу Гей Рпе Авп Гей Сув Уа1! Уаї Уаї Іец І1е 130 135 140
Аза Уаі1і Авп бБег Агд Іїецй І1е І1е біцш АБп Гей Меє Гпув Тук сС1у Тгр 145 150 155 160
Тем І1їе Агуд ТПг Авр Рбе Тгр Рібе бег бек Агуд бек Тей Агуд АБр Тгр 165 170 175
Ркго Гей РіПе Месє Сув Сув І1е бек Іец бек І1ї1е Рпе Рго Гей Аза Аї1а 180 185 190
Зо
Рпе ТПг Уаї біцш Гув ІГеп Уаії Іец біп Гув Туг Іїе Бек бій Рго Уаї 195 200 205
Ууаї Іїе Рпе гейш Нів Іїе Ії1е Ії1е ТПг Месє ТПг біц Уаї Іец Туг Рго 210 215 220
Уаї Тук Уа1і ТПг гей Агуд Сув Авр бек Аза Ріе Іец бек бі1у Уаї ТПг 225 230 235 240
Пе Меє Ге Гецп ТпПг Сув І1їе Уа1і! Тер Геш Ппув Гецп Уа1ї! бек Туг А1а 245 250 255
Нів ТПг бек Туг Авр І1е Агд бек Ггец Аза АБп Аї1а Аза АБр Гув Аїа 260 265 270
АвпоРго біц Уаї бек Тук Тук Уаії бек Гей Ппув Бек Гей Аїа Тук Ріе 275 280 285
Меє Уаії Аїа Рго ТПг Гей Сув Тук біп Рго бек Туг Рго Агкд бек Аїа 290 295 300
Сув І1е Акд Ппув с1у Тер Уаі1і Аїа Агуд сбіп Рпе Аїа пуб Гец Уаї І1е 305 310 315 320
Рпе ТПг сі1у Рпе Мес сіу Рпе чІ1е Іїе бій сб1іп Туг І1їе Авп Рго І1е 325 330 335
Уаї Агкуд Авп Бек Гпув Нів Рго Гей Ппув с1у Авр Іецй Іецй Туг Аїа Ше 340 345 350 60 бі Акуд Уаї Гей Гпув Гей бек Уаі Рго Авп Гей Тук Уаї Тгр Іец Сув
355 3З6о 365
Меє Рпе Туг Сув Рпе Рібе Нів Гей Тер Гей Авп І1е Іец Азї1а сі Гей 370 375 380
Тец Сув Рпе с1у Авр Агуд бій Рпе Туг Ппув Авр Тер Тгр АБп Аза Гу 385 390 395 400 зек Уаії б1і1у Авр Туг Тгр Акуд Меє Тгр АБп Меє Рго Уаі1і Нів Гпув Тгр 405 410 415
Меє Уаї Акуд Нів Іїе Тук РіПе Рго Сув Гей Агуд бек Ппув І1е Рго Гу 420 425 430
ТПЕ Ггешп Аїа Іїе І1е І1е Аза Рбе Гецп Уаі бек Аїа Уаї Рпе Нів с1іци 435 440 445
Тец Сув І1їе Аза Уа1ї Рго Сув Агкд Гей Рпе Ппув Гей Тгр Аїа РіПе Іей 450 455 460 сб1у І1е Меє Рпе сіп Уа1 Рго Гей Уаі Рпе Іїе ТПг Авп Туг Іец біп 465 470 475 480 бі Агуд Рпе сіу Бек ТПг Уа1 сіу Авп Меє Іїе Рбе Тгр Робе І1е РіПе 485 490 495
Сув І1е Рпе сіу сбіп Рго Меє Сув Уаії Гей Гей Тук Тук Нів Авр Іецй 500 505 510
Зо Меє АБп Агд пув с1у бек Меє 5ег 515 520 «2105 2 «2115 314 «2125 ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 2
Меє сіу сі1у Бек Акуд сій Робе Агуд Аїа сіц біц Нів Бек Ап біп Ре 1 5 10 15
Нів Бек Іїе Іїе Аїа Мес Аза І1ї1е Тер Гец сі1у Аїа І1е Ні Рпе Авп 20 25 30
Ууаї Аїа гей Уаї Гей Сув бек Гей Іїе Робе Гец Рго Рго Бек Гей б5ег 35 40 45
Тецп Меє Уаї Геи с1у Гей Гей бек Гей Рпе Іїе Робе І1е Рго І1е Авр бо 50 Нів Агд бек Пув Тук б1у Агд Ппув Гецп Аза Агуд Тук І1їе Сув Гув Нів 65 70 75 80
Аза Сув Авп о Туг Рбе Рго Уаії бек Іец Ту Уаі сій Авр Туг сій Аї1а 85 90 95 55
Рпе біп Рго АвБп Агуд Азїа Тук Уаі Рпе сіу Тук бій Рго Нів бек Уаї 100 105 110
Тецп Ркго І1ї1е сіу Уаі Уаі1 Аїа Гей Сув Авр Гей ТПг сіу Роре Меє Рго 60 115 120 125
ІТ1е Рго АвБп І1е Гув УМаї Гей Аза бек Бек Аза І1їе РоПе Туг ТПг Рго 130 135 140
Рпе Гей Агуд Ні І1е Тер ТПг Тгр Іїец б1у Іїейп ТПг Аза Аїа бБег Аг4д 145 150 155 160
Тув Авп о Рпе ТПг бек Гей Гей Авр бек біу Тукг бек Сув Уаії Іеци Уаї 165 170 175
Рго сіу сі1у Маї біп бій ТПг Рпе Нів Меє сіп Нібв Авр Аза бій Авп 180 185 190
Уаї Рпе Гей бБег Агуд Агуд Агуд біу Рпе Уаі Агд І1е А1ї1а Меє сій сіп 195 200 205 біу бек Рго Гей Уаі Рго Уа1і1 Рпе Сув Рпе сіу сбіп Аїа Агкд Уа1ї! Туг 210 215 220
ТПув Тер Тер Ппув Рго Авр Сув Авр Гей Тук Гей пуб Гец бег Агд А1а 225 230 235 240
І1е Агуд Робе ТПг Рго І1е Сув Робе Тгр бі1у Уаії Рпе сіу Бек Рго Іец 245 250 255
Рго Сув Акуд біп Рго Меє Нів Уаії Уаї Уаї с1у Ппув Рго І1е сій Уаї 260 265 270
ТПЕ Ппув ТПг Ггец пуб Рго ТПг Авр біц біц І1е Аза Гпув Рпе НівБ 0Щ1У 275 280 285
Зо біп Тук Уаії сі Аза Гей Агуд Авр Гей Рпе бій Акуд Нів пуб бег Агд 290 295 300
Уаї с1у Тук Авр Гей сій Ггец Ггув Іїе ГІецй
З5 305 310 «2105 З «211» 340 «212» ПРТ 40 «213» Вісіпив сопшпипів «4005 З
Меє с1у бі біш Аза Авп о Нібв Ап Авп Авп Авп Авп АвБп о І1е АБп бег 1 5 10 15 45 Авп о Авр обі Тув АвБп обіц бій Ппув бек Авп Туг ТПг Уаї Уаї Авп 5ег 20 25 30
Акуд бій Гец Туг Рго ТПг АБп о І1е Роре Ні Аза Гей ІГеш Аїа Гей 5ег
І1е Тер І1е сіу бек І1е Нів Рбе АвБп Тецй Рпе Гей Гей Рпе Ії1їе 5ег 50 55 бо
Тук Гей Рпе Гей бек РіПе Рго ТПг РіПе Гец Іїец І1е Уаї с1у Рпе РіГе 65 70 75 80
Уаї Уаї ге Меє Рбе І1ї1е Рго Іїе Авр сіц Нів бек пуб Те С1у Аг4д 85 90 95 (516) Агд Геч Сув Акуд Тук УМаії Сув Агуд Нів Аїа Сув бек Нів Ропе Рго Уаї 100 105 110
ТПЕ Ге Нів Уа1! сіц Авр Месє Азп Аза Рібе Нів б5ег Авр Агд Аїа Туг 115 120 125
Уа1 Рпе сі1іу Тук бій Рко Нів бек Уаії Рре Рго Гей сіу Уаї бек Уаї 130 135 140
Тецп бек Авр Нів Рпе Аїа Уа1і Гей Рго Гей Рго Ппув Меє пув Уаї Іецй 145 150 155 160
Аза Бек Авп Аїа Уаі Рпе Агуд ТПг Рго Уаії Іецй Агуд Нів Іїе Тер ТЕГ 165 170 175
Тер Сув сі1у Гей ТПг бек Аза ТПг пуб Гу АБп о Рпе ТПг Аїа Іецй Іей 180 185 190
Аза бек сіу Тук бек Сув І1е Уаії І1е Рго сб1у с1у Уаі біп бій Тк 195 200 205
Рпе Тук Меє Ппув Нів сіу бек бій Іїе Аїа Робе Гей Гуз Аїа Агд Агд 210 215 220 б1у Рпе Уаії Акуд Уаі Аїа Меє сі Меє сіу Ппув Рго Гец Уаї Рго Уаї 225 230 235 240
Рпе Сув Ррпе біу біп бек Авп Уа! Тук Гпув Тер Тер пуб Рго АвБр 01Уу 245 250 255 біш Гей Рпе Меє Ггув Іїе Аїа Агуд Аїа Іїе Гпув Ріе бек Рго І1е Уаї
Зо 260 265 270
Рпе Тер сіу Уаії Іец б1у Бек Нів Гей Рго Гей сбіп Агд Рго Меє Нів 275 280 285
Уаї Уаї Маї с1у Ппув Рго І1е сій УМаії Ппув сбіп АвБп Рго біп Рго ТПг 290 295 300
Ууаї бій бі Уаі Бек сій Уа1і сбіп сі1у біп Рпбе Уаі! Аза Аїа Гей Гув 305 310 315 320
Авр Гей Робе біц Агуд Ні Гув Аза Агд Уаії сі1у Туг Аза Авр Гей ТЕПг 325 330 335 їеч бій І1е Гей 340 «2105 4 «2115 322 «212» ПРТ «213» Мекпісіа токаїї «4005 4
Меє сіу Меє Уаі сіш Уа1 пув Авп біш бій сій Уаї ТБг І1е Рбе Гу 1 5 10 15
Ззек б1і1у бі І1їе Тук Рго ТПг Авп І1їе Рібе сСіп бек Уаї Іецй А1їа Гей 20 25 30
А1їа І1їе Тер Гец бСіу бек Рпе Нів РПе І1е Гей Рпе Гей Уаі1і Бек 5ег 35 40 45 60 зек Іїе Рбе Тїецй Ркго Рпе бек пуб РіПе Іїецй Іїецй Уа1! І1їе с1у Іец Іей
50 55 бо
Тецп Рпе Рпе Меє Уаії Іїе Рго Іїе Авп Авр Агуд бек ГпУув Гец сіу біп 65 70 75 80
Сув Гей Рпе бБег Туг Іїе Бек Агуд Нів Уаї Сув бек Тук Рпе Рго Ше 85 90 95
ТПЕ Ге Нів Уа1! сіц Авр І1е А5хп Аза Рібе Агд б5ег Авр Агд Аїа Туг 100 105 110
Уаї Рпе с1у Тук бій Рго Нів Бек Уаі Рпе Рго Іїе сіу Уа1і Меє Пе 115 120 125
Печ бек Гецп с1у Гей І1їе Рго Гей Рго АБп І1їе Ппув Рібе ІТецй А1їа 5ег 130 135 140 зек Аїа Уаії Рпе Тук ТПг Рго Рпе Гей Агуд Нів І1е Тгр бек Тгр Сув 145 150 155 160 сб1у Гей ТПг Рго Аза ТПг Агуд Гпув Авп о Рпе Уа1 бек Гей Ггец бег б5ег 165 170 175 сбі1у Тук бек Сув Іїе Гей Уа1і Рго сіу сіу Уаі біп бій ТПг Рпе Туг 180 185 190
Меє пув біп Авр бек сіц І1їе Аїа Рбе Гец пуб Аза Агд Акд с1у РПе 195 200 205
Зо І1їе Акуд І1е Аїа Мес сіп ТПг о біу ТПг Рго Гец УМаії Рго Уа1 РПе Сув 210 215 220
Рпе сі1у біп Месє Ні ТП Рпе Гув Тер Тер ув Рго Авр с1у сі ГІец 225 230 235 240
З5
Рпе Меє пув І1е Азї1а Агуд Аза І1е Гу Рпе ТПг Рго ТПг Іїе Роіе Тгр 245 250 255 сі1у Маї Гей с1іу ТПг Рго Гей Рго Рпе Ппув Ап Рго Мес Нів Уа1ї! Уаї 260 265 270
Ууаї сб1у Агуд Рго Іїе сіц Уаї пув біп Авп Рго біп Рго ТПг Аза сіци 275 280 285 сі Маі Аї1а сбіц Уаі сбіп Акуд бійц Рбе І1е Аза бек Гей Гув АБп Гей 290 295 300
Рпе сбіц Агкуд Ні їув Аза Агуд Уа1ї сСіу Тук бек Авр Гей Ппув Гей сіц 305 310 315 320
І1е Ріе «2105 Мм5 «2115 355 «212» ПРТ «2135 Могсіекеі1а гашаппіапа «4005 5
Мен АїТа бек пув Авр сбіп Нів Гей сіп сіп пув Уаї пуб Нів ТПг Іецй 60 1 в) 10 15 бі Аза І1е Рго Бек Рго Агуд Туг Аза Рго Гей Агкуд Уаї Рго Іецй Агд 20 25 30
Акуд Агуд Гец біп Тс ІТец Азїа Уаї Іец Іїецй Тгр Сув Бек Меє Меє 5ег 35 40 45
ІТІе Сув Месє Рре І1е Рпе Рпе Рібе Іецй Сув бек Іїе Рго Уа1ї Іецй Іец 50 55 бо
Тер Рпе Рго І1їе Іїе Гецп Тук Геш ТПг Тер І1е Гей Уаї Тер Авр Іувг 65 70 75 80
Аза Рго біц АвБп о біу б1у Агуд Рго І1е Агд Тер Гей Агуд А5п Аза Аїа 85 90 95
ТЕр Тер пув Гей Робе Аза сСіу Тук Рібе Рго Аїа Ні Уаї І1ї1е ув с1и 100 105 110
Аза Авр Гец Авр Рго бек Гув АвБп о Туг І1е Рпе сі1у Туг Нів Рго Нів 115 120 125 сб1у І1е І1е бек Меє сіу Бек Рпе Сув ТПг Рпе бек ТПг Ап Аїа ТЕПг 130 135 140 с1у Рпбе Авр Авр Гей Рпе Рго с1іу І1е Агуд Рго бек Гей Гей ТПг Іец 145 150 155 160
ТПг Бек Авп Рпе Авп І1е Рго Гей Тут Агд Авр Тук ІТеп Меє Аїа Сув 165 170 175
Зо с1у Гей Сув Бек Уа1і Бек Ппув ТПг Бек Сув біп АвБп І1е Гей ТПг Гув 180 185 190 сбі1у б1у Рго с1іу Агуд Бек Іїе Аза Іїе Уаі Уаі1 сі1у с1іу Аїа бек бій
З5 195 200 205 зек Гец Авп Аза Агд Рго біу Уаії Меєсє Авр Гей Уа1 Гей пуб Агд Агд 210 215 220
Рпе с1у Рбе І1їе Ппуз Іїе Аїа Уаії сіп ТБг с1у Аза бек Ге Уа1! Рго 225 230 235 240
ТПг Іїе Бек Робе сіу біц АБп біц Гей Тує бі біп І1е сіц бек Авп 245 250 255 біц АвБп обек Ппув Гей Нів Агуд Тер біп пув пув І1їе сіп Нібв Аїа Іей 260 265 270 б1у Рпе ТПг Меє Рго Гей Рпе Нів сіу Акд біу Уаі Рпе Авп Туг Авр 275 280 285
Рпе с1у Гпец Іец Рго Нів Агуд Нів Рго І1е Туг ТПг Іїе Уа1 сС1у Гпув 290 295 300
Рго І1їе Ркго Маї Рго бек І1їе Пув Тук сб1у біп ТПг Гув АвБр біц Пе 305 310 315 320
І1е Акуд біц Тец Ні Авр бек Туг Меє Нів Азїа Уаї сіп Авр Гей Туг 325 330 335 60
Авр Агкуд Туг пув Авр о І1е Туг Аза Ппув Авр Акуд Уаі Ппув бій Гей сіц
340 345 350
Рпе Уаї січ 355 «2105 6 «211» 388 «212» ПРТ «213» Ношто варієпь «4005 6
Меє пув ТпПг гейш Іїе Аїа Аза Тук бек сіу Уаі Гец Агд С1у бій Агд 1 5 10 15 біп А1ї1а сій Аза Авр Агуд бБег біп Агуд бБег Нів сіу сіу Рго Аїа Іей зек Агд біц біу бек б1у Агд Тгр біу ТПг б1і1іу Бек бек І1е Іец 5ег 20 А1їа Ггечп сіп Авр Гецй Рре бек Уа! ТПг Ткгр Гей АвБп Агуд бек Тув Уаї бо бі гув біп Гей біп Уаі1і! Іїе бек Уаі Гей біп Ткгр Уаї Гей бек РІГе 65 70 75 80 25
Тецп Маї Гей сіу Уаі Аїа Сув Бек Аїа Іїе Гей Меєсє Туг І1е РПе Сув 85 90 95
ТПЕ Авр Сув Тер Гец І1ї1е Аза Уа1 Гей Тук Рпе ТПг Тер Гей Уа1 Ріе
Зо 100 105 110
Авр ТЕр Авп оТБг Рго Гув Гув біу б1у Агд Акд бек біп Тгр Уа1 Агд 115 120 125 35 Авп о Тер Аїа Уа1! Тгр Агуд Тук Рібе Агуд Авр Тук Рпе Рго І1е сіп Гей 130 135 140
Уаї Ппув ТпПгЕ Нів Авп Гей Гец ТПг ТПг Агуд Авп Туг І1е Рпе СсС1Уу Туг 145 150 155 160 40
Нів Рго Нів сіу І1е Меє с1у Іїеп с1у Аза Рпе Сув Авп Рре бек ТЕГ 165 170 175 бі Азїа ТПпг осі Уаї Бек Ппув Ппув Рпе Рго сіу Іїе Агуд Рго Тукг Іей 45 180 185 190
Аза Тпг Ггец Аза сб1у АвБп Рпе Акуд Меє Рго Уаі Гей Агд сіц Тук Іей 195 200 205 50 Меє бек сіу с1у І1їе Сув Рго Уаії Бек Агуд Авр ТПг І1е Авр Тук Іец 210 215 220
Тецп бек Гпув Авп сіу Бек с1іу Авп Аїа Іїе Іїе Іїе Уа1і Уаі с1у 1У 225 230 235 240 55
Аза Аза сій бек Іец бек бек Месє Рго б1у Гув АвБп Аза Уаі1 ТПг Ієц 245 250 255
Акуд Авп о Агуд пуб біу Рпе Уаї пуб Іец Аза Гей Агуд Нів с1у Аїа Авр 60 260 265 270
Тецп Маї Рго Іїе Тук Бек Рпе сіу бій Авп бій Уа1ї Тук Ппув біп Уаї 275 280 285
І1Іе Рбе біц біц бі1іу бек Тгр б1у Агд Тер Уаії сіп Ппув Ппув Рпе сіп 290 295 300
Тпув Тук І1ї1е сі1у Рпе Аїа Рго Сув Іїе Рпе Нів сіу Акд сіу Іецй РБе 305 310 315 320
Ззек Бек Авр ТПг Тгр сіу Гей УМаї Рго Тук бек Ппув Рго І1е ТПг ТПг 325 330 335
Уаї Уаї с1у бій Ркго Іїе ТБПг Іїе Рго пуб Гец біц Нів Рго ТПг сіп 340 345 350 біп Авр І1е Авр Гей Тук Нів ТПг Меє Тук Меє сіц Аза Іец Уаї Гув 355 3З6о 365
Тецп Рпе Авр Ппув Нів Ппув ТПг Ппув Рпе сіу Гей Рго біц ТПг сбіц Уаї 370 375 380
Тез бій Уаї Авп 385 «2105 7 «211» 328 «212» ПРТ «213» Ношто варієпь «4005 7
Зо Меє Аїа Нів бек Пув біп Рго бек Нів Ррпе сіп бек Гей Меє Гей Іеч 1 5 10 15 біп Тер Рго Гей бек Туг Гей Аза Іїе Рпе Тер Іїе Гей Сіп Рго Іей 20 25 30
З5
Рпе Уаї Тук Іїец ІТец Рпе ТПг бек ІТецй Тер Рго Гей Рго Уа1ї! Гей Туг
Рпе Аїа Тер Іїец Рпе ІТецй Авр Тгр Гу ТПг Рго сій Агуд с1у с1у Агд 40 50 55 бо
Акуд бБег Аїа Тр Уаі Агуд АвБп о Тгр Сув Уаї Тер ТПг Нів І1їе Агд Авр 65 70 75 80 45 Тук Рпе Рго І1їе ТПг І1е Гешп Ппувз ТПг Ппув Авр Гей бек Рго сіц Нів 85 90 95
АвпоТук Ггец Месє сі1у Маї Нів Ркго Ні б1у Гей Гей ТПг Рпе сС1іу Аї1а 100 105 110
Рпе Сув Авп Ре Суб ТПг бій Аїа ТП о б1іу Рпе бек Кпув ТПг Робе Рго 115 120 125 б1у І1е ТПг Рго Нів Гей Аза ТПг Гей бек Тер Рпе Робе пубв І1е Рго 130 135 140
Рпе Уаії Акд сіц Тук Гей Мем Аза гуз б1і1у Уаї Сув Бек Уа1і Бек сіп 145 150 155 160 (516) Рго Аїа І1їе АвБп Тукг Гей Гей бек Нів сіу ТПг сб1у Авп Гецп Уа1 01Уу 165 170 175
І1е Уаї Уаї сі1у б1у Ма1ї с1у біц Аза Іїецй біп бек Уаі Рго Авп о ТПг 180 185 190
ТПЕ ТрПг Гей Іїе їей сбіп Ппув Агуд пув с1у Рбе Уа1і! Агуд ТПг Аїа Гей 195 200 205 біп Нів сі1у Аїа Нів Гей Уа1і Рго ТПг Рпе ТПг Рбе сіу біц ТПг б1ц 210 215 220
Уаї Тук Авр біп Уаі1! Ггецй Рбе Нів Гпув Авр бБег Агд Меє Тук пув РПе 225 230 235 240 біп бек Сув Рпе Агуд Агуд Іїе Рпе сіу Рпе Тук Сув Сув Уаї РоПе Туг 245 250 255 бі1у біп бек Рпе Сув біп сіу Бек ТПг с1іу Гей Гей Рго Туг 5ег Агд 260 265 270
Рго І1їе Уаі! ТПг Уаї Уаї с1іу бій Рго Тїей Рго Гей Рго сіп Іїе с1ци 275 280 285
ТПув Ркго Бек сбіп біш Меє Уа1 Авр Ппув Тук Нів Аїа Гец Туг Меє Авр 290 295 300
А1ї1а гей Нів пуб Іец Рпе Авр біп Ні пуб ТПг Нів Тук о1у Сув бБег 305 310 315 320 бі Тпг біп пув Гей Рпе Ріе Гей
Зо 325 «2105 8 «211» 361 «212» ПРТ
З5 «2135 Вов5 бацйцгив «4005 8
Меє пув ТпПг гейш Іїе Аїа Аза Тук бек сіу Уаі Гец Агд б1у ТП щу 1 5 10 15 40 Ззек бек І1їе Гей бек Аза Гей біп Авр Тей Рібе бек Уа! ТПг Тгр Іецй 20 25 30
Авп о Агуд Аїа пув Уа1і б1іцп Гув біп Тец біп Уаії Іїе бек Уаі1і Гей сіп 45
Тер Уа1 Гей бек РіПе Гец Уаії гей сіу Уаі Аїа Сув бек Уаії І1е ГІец бо
Меє Тук ТПгЕ Рпе Сув ТБг Авр Сув Тер Гец І1е Аїа Уаї Іецп Тук РПе 50 65 70 75 80
ТПЕ Тер гейш Уаі1! Рібе Авр Тгр Авп о ТПг Рго пуб їув б1у б1у Агд Аг4д 85 90 95 55 зек біп Тер Маії Агуд Авп Тер Аїа Уаі Тгр Агуд Тук Рпе Аг9д Авр Туг 100 105 110
Рпе Рго І1е сіп Іїец Маї Ппув ТБПг Нів АвБп Гей Гей ТПг бБег Агд Авп 115 120 125 60
Тук Іїе Рпе сіу Тук Нів Рго Нів сіу І1е Месє с1у Іїецп с1у Аїа РіПе
130 135 140
Сув Авп о Рпе бБег ТПг бій Аїа ТПг бі Уа1! бек пув Гпув Рпе Рго 01У 145 150 155 160
ІТ1е Агуд Рго Туг Іец А1ї1а ТПг Іец Азїа сб1у АвБп Рпе Агуд Меє Рго Уаї 165 170 175
Тец Акд бій Тук Гей Меє бек сіу с1у Іїе Сув Ркго Уаі Авп Агд Авр 180 185 190
ТПгЕ Іїе Авр Тук Ггец Гец бек Пув Авп біу бек б1у АБп Аїа ТШе Ше 195 200 205
Іїе Уаі Уа1і! с1у сб1у Аїа Аїа сій бек ІТецй бек бек Меє Рго с1Уу Гув 210 215 220
Ап Аза Уаї ТБПг Іец Агуд АБп о Агуд Туз б1у Рпе Уаї Ппув Гей Аїа Іецй 225 230 235 240
Акуд Нів с1у Аза Авр Тец УМаї Рго ТПг Тук Бек Рпе сС1іу біц АвБп бій 245 250 255
Уаї Тук Ппув біп Уаі1 І1їе Рбе біш сбіш сіу Бек Тер б1у Агд Тгр Уаї 260 265 270 біп гув Гпув Рпе сбіп Ппув Туг Іїе сіу Робе Аза Рго Сув І1е РПпе Нів 275 280 285
Зо с1у Акуд б1у Гецп Рпе бек бек Авр ТПг Тгр с1іу Гей Уаї Рго Тукг 5ег 290 295 300
ТПув Рго І1ї1е ТПг ТПг Уаі1і Уаі1 сіу сій Рго І1е ТПг І1е Рго Агд Іец 305 310 315 320
З5 бі Агуд Рго ТпПг о біп біп Авр чІ1е Авр Гей Туг Нів Аїа Меєсє Тук Уаї 325 330 335 біп А1ї1а Гей Уаії Ппув Гей Рпе Авр сіп Нів пуб ТПг Гув Рпе сС1Уу Іецй 40 340 345 350
Рго бі ТБг бі Уаї Гей сі Уаї Авп 355 3З6о 45 «2105 19 «211» 388 «212» ПРТ «2135 Мив шивсип1ив «4005 9 50 Меє Ггув ТПг Гей Іїе Аїа А1їа Тук бек сіу Уаі Іей Агкуд с1у бій Агкд 1 5 10 15
Акуд Аза бі Аза Аза Агд бек біц АвБп оГув АвБп оГув с1у Бек Аїа Іецй 20 25 30 55 зек Агд біц сіу бек б1у Агуд Тгр біу ТПг бі1у Бек Бек Іїе Гей 5ег
А1їа гей сбіп Авр І1е Рпе бек Уа! ТПг Тер Гей Авп Агуд бек Гпув Уаї 60 50 з9 бо бі гув біп Гей біп Уаі1і! Іїе бек Уаі Гей сбіп Тер Уаї Гец бек РБПе 65 70 75 80
Тецп Маї Гей сіу Уаі Аїа Сув Бек Уаі Іїе Гей Меє Тук ТПг РПе Сув 85 90 95
ТПЕ Авр Сув Тер Гец І1е Аїа Уаі1! Гецй Туг Роре ТПг Тер еп Аїа РіГе 100 105 110
Авр Тер Авп о ТБг Рго пуб Ппув с1іу с1у Акуд Агуд бек біп Тер Уа1 Агд 115 120 125
Ап оТегр Аїа Уа! Тгр Агуд Тук Робе Агд Авр Тук Рпе Рго Іїе сіп Іец 130 135 140
Уаї Ппув ТпПгЕ Нів Авп Гей Гец ТПг ТПг Агуд Авп Туг І1е Рпе СсС1Уу Туг 145 150 155 160
Нів Рго Нів сіу І1їе Месє с1у Гей сіу Аїа Рбе Суб Авп Рпе бек ТПг 165 170 175 бі Азїа ТПпг осі Уаї Бек Ппув Ппув Рпе Рго сіу Іїе Агуд Рго Тукг Іей 180 185 190
А1їа ТПпг Гей Аза б1у АвБп Рпе Агуд Меє Ркго Уаї Гей Агд сі Тук Іецй 195 200 205
Меє бек с1у с1у Іїе Сув Рго Уаі Авп Агуд Авр ТПг І1е Ар Тукг Іецй 210 215 220
Зо
Тецп бек Гпув Авп сіу Бек сіу АБп Аїа Іїе Іїе Іїе Уа1і Уаі с1у 1У 225 230 235 240
Аза Аза сій бек Іец бек бек Месє Рго б1у Гув АвБп Аза Уаі1 ТПг Ієц
З5 245 250 255
Тув Авп Агуд пув с1у Рпе Уаі1 Ппув Гей Аїа Гей Агуд Ні сі1у А1їа Авр 260 265 270 ем Маї Рго ТПг Тук бек Рре біу бій АБп біц Уаї Тук Гув сіп Уаї 275 280 285
І1Іе Рбе біц біц бі1іу бек Тгр б1у Агд Тер Уаії сіп Ппув Ппув Рпе сіп 290 295 300
Тпув Тук І1ї1е сі1у Рпе Аїа Рго Сув Іїе Рпе Нів сіу Акд сіу Іецй РБе 305 310 315 320 зек Бек Авр ТПг Тгр б1у Гей Уаії Ркго Тук бек Ппув Рго Іїе ТПг ТЕГ 325 330 335
Уаї Уаї с1у бій Ркго Іїе ТПг Уа1 Ркго пуб Гец біц Нів Рго ТПг сіп 340 345 350 ув Авр І1е Авр Гей Туг Нів Аїа Мес Тук Меє сій Аїа Гей Уаї Гув 355 3З6о 365
Тец Рпе Авр Авп о Нів Ппув ТПг Ппув Рпе сіу Гей Рго біц ТПг сбіц Уаї 370 375 380 60
Тез бій Уаї Авп
«2105 10 «2115 3 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «4005 10
Тук Рре Рго 1 «2105 11 «2115 4 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «4005 11
Нів Рго Нів 1У 1 «2105 12 «2115 4 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «4005 12 біц Рго Нів 5Бег 1 «2105 13 «2115 24
З5 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «2205 «2215 Х «222» (2)..(2) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (5)..(5) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (6)..(6) «223» Лізин (К) або Аргінін (БВ) «2205 «2215 Х «222» (7)..(7) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (9)..(11) «223» будь-яка амінокислота 60 «220» «2215 Х
«222» (13)..(15) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (16)..(16) «223» Лейцин (І) або Валін (У) «2205 «2215 Х «2225 (19)..(21) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (24)..(24) «223» Глютамінова кислота (БЕ) або Глютамін (0) «4005 13
Акуд Хаа сіу Ріе Хаа Хаа Хаа Аїа Хаа Хаа Хаа сі1у Хаа Хаа Хаа Хаа 1 5 10 15
Уаї Ркго Хаа Хаа Хаа Рпе с1у Хаа 20 «2105 14 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «2205
Зо «2215 Х «222» (3)..(3) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х
З5 «222» (5)..(7) «223» будь-яка амінокислота «4005 14
Рпе Гей Хаа Іец Хаа Хаа Хаа Авп 1 5 «2105 15 «2115 118 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «4005 15
А1їа гей Уаї Уаії А1їа Авп о Нів біп бек Рпе Гей Авр Рго Гей Уаі1ї Іец 1 5 10 15 зек Аїа Гец ІТец Рго Агуд Гпув біу б1у Акд Уаі Агуд Рпе Уа1 Аїа Гув 20 25 30
Тпув біш Гей Рпе Тук Уа1 Рго Гей Ге с1іу Тер Гей Гей Агд Іецй Іей 35 40 45 сб1у Аї1а І1е Рпе І1ї1е Авр Агуд сій АвБп б1у Агд Гей Аїа Агд Аза А1а 50 55 бо (516) Тен Агкгуд біц Аза Уаі Акд ІТей Гей Агуд АвБр сіу с1іу Тегр Іецй Гешп Те 65 70 75 80
Рпе Рго біц біу ТПг Агуд бБег Агуд Рго бі1у Ппув Гей Гей Рго Рібе Гув 85 90 95 цув б1у Аї1а Аза Агуд Гей Аїа Гей сбіц Азї1а сіу Уаії Ркго І1е Уаї Рго 100 105 110
Ууаї Аїа І1е Агуд с1у ТЕГ 115 «2105 16 «2115 187 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «2205 «2215 Х «222» (15)..(15) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (18)..(18) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (23)..(23) «223» будь-яка амінокислота
Зо «220» «2215 Х «222» (25)..(26) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (28)..(30) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (32)..(33) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (35)..(38) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (41)..(41) «223» будь-яка амінокислота «220» «2215 Х «222» (46)..(48) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (53)..(53) «223» будь-яка амінокислота «2205 (516) «2215 Х «222» (55)..(57)
«223» будь-яка амінокислота «2215 Х «222» (61)..(61) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (67)..(67) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (72)..(72) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (74)..(77) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (79)..(79) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (114)..(114) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (127)..(128) «223» будь-яка амінокислота
Зо «220» «2215 Х «222» (136)..(136) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (139)..(142) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (144)..(144) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (150)..(150) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (164)..(165) «223» будь-яка амінокислота «220» «2215 Х «222» (167)..(172) «223» будь-яка амінокислота «4005 16
А1їа Уаї Рпе Авр Гуз Авр с1іу ТПг Гей ТБг бій Авр Авр Тпг Хаа Ріе 1 5 10 15
Гей Хаа Тук Гей Гей Ппув Хаа Ге Хаа Хаа Іец Хаа Хаа Хаа Ієцч Хаа 20 25 Зо 60
Хаа Авр Хаа Хаа Хаа Хаа сіу бек Хаа Іїеїп ТПг Гей бБег Хаа Хаа Хаа
35 40 45
Авр Гей гей біц Хаа Іецй Хаа Хаа Хаа сі1у б1у І1е Хаа Уа1і1 Те 0Щ1У 50 55 бо
Тец А1їа Хаа Агуд Туг Гей бій Хаа Гей Хаа Хаа Хаа Хаа сій Хаа А1а 65 70 75 80
Тув ТГеп Рпе сі с1і1у Рпе Іїе Ппув Рго Авр Аїа Аїа біц Іецй Іецй Гув 85 90 95 бішц Гей Нів сі Аза сіу Гей Агуд Уаі Уа1 Уа1 Гей ТПг с1у АБр Рго 100 105 110
Агуд Хаа І1їе Аїа Ппув Рго Уаі Аїа Ппув бій ІТец с1у І1їе Авр Хаа Хаа 115 120 125
Ап оУаі1 Ггец Аза ТПг біц їейп Хаа Авр бій Хаа Хаа Хаа Хаа Уа1 Хаа 130 135 140 б1у Акд І1е ТпПг с1іу Хаа гей Авр гув Аза Агуд Аїа Уаі1і сій Агд Іецй 145 150 155 160
Уаї Уаї гейш Хаа Хаа пуб Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Уаі Уаі Аза Ше 165 170 175 б1у Авр бек Аза Авп Авр Гей Рго Аїа Гей Гув 180 185
Зо «2105 17 «2115 190 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» Консервативна послідовність «4005 17
ІІе пув Аїа Уаії Уаї Рпе Авр Губв Авр б1у ТПг Гей ТПг Ар с1у сіц 1 5 10 15
Рго Рго І1їе Аїа сбіш Аза Іїе Уа! сіц Аза Аза Аїа сій ІТецй с1у Гей 20 25 30
Ркго Гей Гец Тец Рго ІТецп бій біц Уаї біцш Ггув Гей Гешй С1у Агд Щ1У 35 40 45 уаї б1ї1ш с1у Іїе бій Акуд І1е Гец Іешц б1ц с1у с1у Гей ТПг Аїа с1іц бо
Тецп Те Гей сій гейш біш сіу сій Геш Аїа Аза сіу Пув ТПг А1їа Уаї 50 65 70 75 80
Тец Маії Аї1а гей Авр сіу біц Уа1! Гец сСіу Іец І1е А1а їецп Аза Авр 85 90 95 55 пув Гей Тук Рго с1у Аїа Агуд біц Аїа Геш пув Аїа Гей Гув бій Агд 100 105 110 с1у І1е гув Уаі Аза Іїе Гей ТПг Авп б1у АвБр Агд А1ї1а АБп Аза с1и 115 120 125 60
А1їа Уа1і Ггец сіц Аза Іїец с1у Гец Аза Авр Гей Рпе Авр Уаі1і Ії1їе Уаї
130 135 140
Авр Бек Авр Авр Уаі! бі1у Ркго Уаі Ппув Рго Пув Рго бій Іїе РіПе Ієц 145 150 155 160 пу Аї1а теп сій Агуд Гей сіу Уаі Ппув Рго бій сій Уаї Пец Меє Уаї 165 170 175 б1у Авр сб1іу Уаі Авп Авр Аза Рго Аїа гей Аза Аза Аза с1Уу 180 185 190 «2105 18 «2115 15 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «4005 18 б1у Авр Іїеип Уаі Іїе Сув Рго бі с1у ТПг ТПг Сув Агд бій Рго 1 в) 10 15 «2105 19 «2115 6 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «2205
Зо «2215 Х «222» (2)..42) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х
З5 «222» (4)..(8) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (5)..(5) «223» Треонін (Т) або Валін (У) «2205 «2215 Х «222» (6)..(6) «223» Лейцин (І) або Валін (У) «4005 19
Авр Хаа Авр Хаа Хаа Хаа 1 5 «2105 20 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «2205 «2215 Х «222» (2)..42) «223» 17-20 амінокислот; де амінокислоти можуть бути будь-якими (516) амінокислотами
«2215 Х «222» (3)..(3) «223» Гліцин (сб) або Серин (5) «2205 «2215 Х «222» (4)..(4) «223» Аспарагінова кислота (0) або Серин (5) «2205 «2215 Х «222» (5)..(7) «223» будь-яка амінокислота «2205 «2215 Х «222» (8)..(8) «223» Аспарагінова кислота (0) або Аспарагін (М) «4005 20
Гув Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 1 5 «2105 21 «2115» 356 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 21
Меє Авр Тгр бій Іїе Акуд сіу бек бек Гей бі1у біп Ппув Гей Гей сіц 1 5 10 15
Рпе Авр бек біц біп б1п Агуд біп Тс Агуд Рпе Агуд Аза Туг Авр 5ег
Зо 20 25 30 бі бі Аза Аза Аїа Нів ТПг Туг Авр геш Аїа Аїа Гец пув Туг Тгр 35 с1у Рго Авр ТПг Іїе Гей АБп Рбе Рго Аїа бій ТПг Тук ТПг Гуз с1ци бо
Тец бі бій Меє сіп Акуд Уа1 ТПпг пув бі бій Тук Гей Аїа бек Іей 65 70 75 80 40
Ак Агуд біп бег бек біу Рпе бБег Агуд біу УМаії бек Ппув Туг Агд Щ1У 85 90 95
Ууаї Аза Агуд Нів Нів Нів Авп сбіу Агуд Тер біц Аза Агд І1е С1у Агд 45 100 105 110
Уаї Рпе с1у Авп Ппув Тук Гец Тук Гей с1іу ТПг Туг АБп ТПпг біп сій 115 120 125 50 сі Аза А1ї1а Аза Аїа Туг Авр Меє Аїа Аза чІ1е сій Туг Агуд с1у А1а 130 135 140
Ап Аза Уаї ТПг АвБп о РБе АвБр о І1е бБег АвБп о Туг І1е Авр Агд Гей Гув 145 150 155 160 55
Тпув Кпув бі1у Уаі Рпе Рго Рпе Рго Уаі Ап біп Аза Ап Нів сбіп бій 165 170 175 с1у І1е Гей Уаі бій Аїа пув сбіп біш Уа1 сій ТБг Агкуд біц Аза Гу (516) 180 185 190 бі бій Рго Агуд бій бі Уа1! пув біп біп Тук Уа1і сіц біц Рго Рго 195 200 205 біп б1п бій бій бій пув бій бій бі пув Аїа сій біп біп б1іц А1а 210 215 220 бі І1е Уаї сіу Тук Бек бій сі Аза Аїа Уа1 Уа1ї Авп Сув Сув І1е 225 230 235 240
Авр бек бек ТПг І1е Меє сій Меє Авр Акуд Сув б1у Авр Ап АвБп сій 245 250 255
Тец Азїа Тер Авп Рпе Сув Меє Меє Авр ТПг сіу Рпе бек Рго РіПе Іей 260 265 270
ТПЕ Авр біп Авп Гец Аза АБп обіц Авп Рго І1е біц Тук Рго сі Іецй 275 280 285
Рпе Авп біц Тец Аза Рпе бій Авр АБп І1е Авр Рпе Меє Ропе Авр Авр 290 295 300 с1у гув Нів сій Сув Гей Авп Гей бій Ап Гей Авр Сув Сув Уа1ї! Уаї 305 310 315 320 с1у Акуд бі бек Рго Рго бек бек бек бек Рго Гей бек Сув Гей 5ег 325 330 335
ТПЕгЕ Авр Бек Аїа бек бек ТПг ТПг ТБПг ТБг Тс Тс о бек Уаї Бек Сув 340 345 350
Зо
Авп оТук Гей Уаї 355 «2105 22
З5 «211» 430 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 щД 22
Меє пув Ппув Агуд Гей ТПг ТБг бек ТПг Сув бек бек бек Рго бек 5бег 40 1 в) 10 15 зек Уаії бек бек бек ТПг ТПг ТПг бек бек Рго Іїе сіп бек бій А1а 20 25 30 45 Рго Агкд Рго Пув Агуд Аїа Пув Агуд Аїа Пув Пув бек бек Рго бек 01Уу
Авр Пув бек Нів Авп о Рго ТПг о бег Рго Аза бек ТПг Агуд Агуд Бек бег з9 (210) 50
ІТІе Туг Акуд біу Уаі ТПг Агуд Ніб5 Агуд Тер ТПпгс с1у Агуд Рпе сій Аї1а 65 70 75 80
Нів Гей Тер Авр пуб бек бек Тгр Авп бек І1е біп АвБп Гпув пув Щ1У 85 90 95 пув біп Уаї Тук Геш с1у Аза Туг Авр Бек бій сбіц Аза Аза Аї1а Ні 100 105 110 (516) ТП Тук Авр Гей Аїа Аїа Гей Ппув Тук Тер біу Рго Авр ТПг І1е Гей 115 120 125
Ап оРпе Рго Аїа біцш ТПг Тук ТБПг Гуз б1п ІТеп бій бі Меє сіп Агд 130 135 140
Уаї ТЕ Ппув бій сій Туг Гец Аїа бек Гей Агуд Акуд біп бек бек с1Уу 145 150 155 160
Рпе бек Агуд біу Маії бек Ппув Туг Агкуд бі1у Уаі Аза Агу Нів Нів Нів 165 170 175
Ап о с1у Агд Тгр біц Аза Агуд І1е с1у Акд Уаі Рпе с1у Авп пув Туг 180 185 190
Тецп Тук Гей сі1у ТПг Туг Авп ТПг сбіп бій бій Аза Аза Аза Аїа Туг 195 200 205
Авр Меє Аїа Аза І1е сб1іцп Туг Агкуд б1у А1ї1а А5п Аза Уаї ТБг АБп РБре 210 215 220
Авр І1е бек Авп Туг Іїе Авр Агд Гей Пув Гув Ппув с1у Уаї Робе Рго 225 230 235 240
Рпе Рго Уаі Авп біп Аза АвБп Ні біп сбіш с1іу Іїе Гец Уаї сіц А1а 245 250 255 пув біп бій Уаі бі ТПг Агуд бій Аза Гпув бій бій Рго Агд бі бій 260 265 270
Уаї пув біп біп Тук Уа1 сій біц Рго Рго біп б1п бій бій бій Гув
Зо 275 280 285 бі бі бій пув Аїа біш біп сбіп бі Аза сій І1е Уаї сіу Тук вег 290 295 300 сі бій Аза Аза Уаії Уа1і Авп Сув Сув І1їе Авр бек бек ТПг І1е Меє 305 310 315 320 бі Меє Авр Агуд Сув б1у Авр Авп Авп бій Гей Аза Тгр АвБп РоПе Сув 325 330 335
Меє Меє Авр ТПг сіу Рібе бек Ркго Робе Гей ТПг АвБр біп АБп Те Аїа 340 345 350
Авп обіц Авп о Рго І1е біцп Тук Ркго біц Тецй Рпе АвБп бій Гей Аїа Ріе 355 360 365 бі Авр АвБп о чІ1е Авр Рпе Меє Рбе Авр Ар с1іу Ппув Нів біц Сув Іей 370 375 380
Авп оГечп сій Авп о Гец Авр Сув Сув Уаі Уа1! с1у Агд бій бек Рго Рго 385 390 395 400 зек бек бек бек Рго Гей бек Суб ІТецй бек ТПг Авр бек Аїа бек 5ег 405 410 415
ТПЕ ТпПкг Тбг ТБг ТБг Тс бек Уаї бек Сув Авп Тук Іец Уаї 420 425 430 «2105 23 60 «211» 430 «212» ПРТ
«213» Агарідорвів 1угага «4005 23
Мем гув Агуд Агуд Гей Тс ТБг бек Тбг бек бек бек бек Рго бек 5бег 1 5 10 15 зек Уаії бек бек бек ТПг ТПг ТПг бек бек Рго Іїе сіп бек бій А1а 20 25 30
Рго Агд Рго їубв Агд А1ї1а Гув Агд Аза Гу Гув бек Бек Рго Бех Щ1У 35 40 45
Авр Пув бек Нів Авп о Рго ТПг о бег Рго Аза бек ТПг Агуд Агуд Бек бег 50 55 бо
Іїе Ту Акуд біу Уаі ТПг Акуд Нібв Агуд Тер Тс б1у Агд Рбе сій А1а 65 70 75 80
Нів Гей Тер Авр пуб бек бек Тгр Авп бек І1е біп АвБп Гпув пув Щ1У 85 90 95 пув біп сб1у Аза Туг Авр бек бій біш Аза Аза АТа Нів ТПг Туг Авр 100 105 110
Тец Аї1а Аїа Гей Ппув Туг Тер с1у Рго Авр ТПг Іїе Гей Авп Рое Рго 115 120 125
А1їа сій ТБг Тук ТБ Гуз б1іш Гец біц біц Меє бі1іп Акуд Уа1і ТПг Гув 130 135 140
Зо сі бій Тук гец Аїа бек Тей Акуд Агуд біп бек бек с1у Роре бек Аг4д 145 150 155 160 сбі1у Маї Бек Ппув Туг Агуд сіу Уаі Аза Агуд Нів Нів Нів Авп сб1у Агд 165 170 175
З5
ТЕр бішц Аза Агуд І1е с1у Акуд Уаї Рбе сб1у Авп Гув Тук Гец Тукг Іей 180 185 190 бі1у Тпг Тугк АвБп ТП біп бій бій Аза Аза Аза Аїа Туг Авр Меє А1за 195 200 205
Аза Іїе сіц Туг Агкуд б1у А1ї1а АвБп Аза Уа! ТПг Ап Робе Ар І1е 5ег 210 215 220
Авп оТук Іїе Авр Агуд Гешп Ппув Ппув Ппув біу Маії Ррпе Рго Робе Рго Уаї 225 230 235 240
Ап обіп Рго Авп о Нібв біп бій Аїа І1е Гей Уаі сій Аза пув біп сій 245 250 255
І1е сбіц ТБг Агуд бі Аза Гув біц біц Рго Агд бій бі Уа1ї Гпув сіп 260 265 270 біп Тук Уа1і сій бій Рго Рго сбіп сбіц біц ув бі бій бій Гпув Аїа 275 280 285 бі бі1іп б1іп бі Аза бій Рбе Уаії с1іу Тук пув Авр біц сі1у А1їа Уаї 290 295 300 (516) Уа1 Авп Сув Сув І1їе Авр бек бек Аїа І1їе Меє сі Месє Авп Аг Сув 305 310 315 320 б1у Авр АвБп Авп обі гейш Аїа Тгр Авп Рпе Сув Меє Меє Авр бег 01У 325 330 335
Рпе Аїа Ркго Рібе Гей ТПг Авр біп Авп Гей бек Ап бій АБп Рго Те 340 345 350 бі Тук Ркго сій Гей Рпе Авхп сій Ге Аїа Рпе сій Авр АвБп І1е Авр 355 3З6о 365
Рпе Меє Рбе Авр біцш Аза Гув Авп Авр Сув ТГецп бек Гей бій Авп Гей 370 375 380
Авр Сув Сув Уаії Уа1ї б1у Акд біц бек Рго ТПг бек бБег Бек бек Рго 385 390 395 400
Тецп бек Сув РПпе бБег ТПг Авр бек Аза Бек бек ТПг ТПг ТіПг Тс Тс 405 410 415 зек Уаії бек Сув Авп о Тук Гей с1іу Гей Рібе Уаї сіу бек січ 420 425 430 «2105 24 «211» 413 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 24
Мен гув Агуд Рго Гей ТПг ТБбг Бек Рго бБекг бБекг бек бек бек ТПг 5бег 1 5 10 15
Зо зек Бек Аїа Суб І1е Гей Рго ТПг біп бек бій ТПг Рго Агуд Рго Гув 20 25 30
Акуд Аза пуб Агуд Аза Гу Кпув бек бек ІГецй Агуд Бек Авр Уа1і Гпув Рго
З5 35 40 45 біп Авп оРго ТПг обБег Рго Аза бБег ТПг Агуд Агуд бег бег І1е Туг Агд 50 55 бо сіу Маії ТПгЕ Агуд Нів Акуд Теср ТБг б1у Агуд Тук бій Аїа Нів Іецй Тер 65 70 75 80
Авр Пув бек бек Тгр АБп бек І1е біп АвБп о Гпув Ппув с1у Ппув сіп Уаї 85 90 95
Тук Ггеш с1у Аїа Туг Авр бек бій сбіц Аза Аза Аза Нів ТПг Туг Авр 100 105 110
Тец Аї1а Аїа Гей пув Тук Тер с1у Рго Авп ТПг Іїе Гец АвБп Рое Рго 115 120 125
Уаї бій ТпПг Тук ТпПгЕ пув бій Гей бі бій Меє сбіп Акд Сув ТК Гув 130 135 140 сі бій Тук гец Аїа бек Тей Акуд Агуд біп бек бек с1у Рре бек Аг4д 145 150 155 160 сбі1у Маї Бек Ппув Туг Агуд сіу Уаі Аза Агуд Нів Нів Нів Авп сб1у Агд 165 170 175 60
ТЕр бішц Аза Агуд І1е с1у Акуд Уаї Рбе сб1у Авп Гув Тук Гец Тукг Іей
180 185 190 бі1у Тпг Тугк АвБп ТП біп бій бій Аза Аза Аза Аїа Туг Авр Меє А1за 195 200 205
Аза Ії1е сіц Туг Агкуд б1у А1ї1а АвБп Аза Уа! ТПг Ап Рібе Авр І1е 01У 210 215 220
АвпоТук І1їе Авр Агд Тецй Гпув пуб пув бі1у УМаі Рпе Рго Рпе Рго Уаї 225 230 235 240 зек біп Аїа АвБп Ні біп бій Аїа Уаі гейш Аїа сій ТБг пув біп б1ц 245 250 255
Уаї бі Аза Ппув бій бій Рго ТПг бі бій Уаї їув біп Сув Уа1ї с1чи 260 265 270 пув бі бі Аза пув біш бій пув ТБ біц пув Гув біп б1п сб1іп с1и 275 280 285 уаї б1іш бі Аїа Уа1 Іїе ТБПг Сув Сув І1їе Авр бек бек бій бек Авп 290 295 300 бі Гей Аза Тер Авр Рпе Сув Меє Месє Авр бек б1у Рпе А1їа Рго РІе 305 310 315 320
Тецп ТПг Авр Бек Авп Гей бек бек бій Ап Рго Іїе сій Тукг Рго бій 325 330 335
Зо Тем Рбе АБп біц Меє с1у Рбе біц Авр Авп І1їе Авр Рпе Меє Рпе с1іи 340 345 350 бі б1у пув біп Авр Сув Гей бек Гей бій Авп Гей Авр Сув Суб Авр 355 3З6о 365
З5 сі1у Маї Уаї Уаі Уаі1і сб1у Акуд сій бек Рго ТПг бек Гей бек бек вег 370 375 380
Ркго Гей бек Суб Тецй бек ТПг Авр бек Аза бек Бек ТПг ТПг ТПг ТЕГ 40 385 390 395 400
Аза ТПг ТБг Уа! ТПг бек Уаї бек Тгр АБп Тук бек Уаї 405 410 45 «2105 25 «211» 415 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 25 50 Меє Ггув Агуд Рго Гей ТПг ТПг бек Рго бек ТПг бек бек бек ТПкг 5ег 1 5 10 15 зек Бек Аїа Суб І1е Гей Рго ТПг біп Рго бій ТПг Рго Агуд Рго Гув 20 25 30 55
Акуд Аза пуб Агуд Аза Гу Кпув бек бек І1е Рго ТПг Авр Уа1і Гпув Рго біп Авп оРго ТПг обБег Рго Аза бБег ТПг Агуд Агуд бег бег І1е Туг Агд 60 50 з9 бо сбі1у Маї ТПг Агуд Нів Агуд Тер ТпПс с1у Агуд Туг бій Аза Нів Іец Тгр 65 70 75 80
Авр Пув бек бек Тгр АБп бек І1е біп АвБп о Гпув Ппув с1у Ппув сіп Уаї 85 90 95
Тук Ггеш с1у Аїа Туг Авр бек бій сбіц Аза Аза Аза Нів ТПг Туг Авр 100 105 110
Тем Аїа Аїа Гешп Ппув Тугк Тгр б1у Рго Авр ТПг І1їе Тей АвБп Роре Рго 115 120 125
А1їа сій ТБг Тук ТБ Гуз б1іш Гец біц біц Меє бі1іп Агуд Сув ТПг Гув 130 135 140 бі бій Тук Ге Аза Бек Гей Агуд Агуд біп бек бек сіу Рібе 5ег Агд 145 150 155 160 сбі1у Маї бек Ппув Туг Агуд сіу Уаі Аза Агуд Нів Нів Нів Авп б1у Аг4д 165 170 175
ТЕр біш Аза Агуд І1е с1у Агкд Уа1 Рбе с1у Авп Гуз Тук Іецп Тук Іеєец 180 185 190 сіу ТПг Тук АвБп ТПг біп бій біц Аза Аза Аза Аїа Туг Авр Меє Аї1а 195 200 205
Аза чІ1ї1е сіц Туг Агуд б1у А1ї1а АБп Азїа Уа! ТПг Авп Рпе Авр І1їе 5ег 210 215 220
Зо
АвпоТук І1їе Авр Агд Тецй Гув Ппув пув бі1у Маії Рпе Рго Робе Рго Уаї 225 230 235 240 зек біп Аїа АБп о Нів біп сій Аїа Уаі Іешп Аї1а сіш Аза ув сбіп сіц
З5 245 250 255 уаї б1іш Аїа пув бій сій Рго ТП бій бій Уаї Ппув сбіп Сув Уа1 сіц 260 265 270 пув бій біц Рго сбіп біц Аза Пув бій бі пув Тпг бій Гув Гпув сіп 275 280 285 біп бі1іп б1іп бій Уа1і бій бі Аза Уаї Уаї ТБПг Сув Сув І1е Авр 5ег 290 295 300 зек біц бек АвБп о біц ІТецп А1їа Тгр Авр Рпе Сув Меє Меє Авр Бех Щ1У 305 310 315 320
Рпе Аїа Ркго РібПе Іїецй ТПг Авр бек Авп Гей бек бек біц АБп Рго І1е 325 330 335 бі Тук Рго сій Гей Рпе Авхп сі Меє с1іу Рпе сій Авр АвБп І1е Авр 340 345 350
Рпе Меє Рбе бій сбіц с1іу Ппув біп Авр Суб Гей бек Гей бій АБп Гей 355 3З6о 365
Авр о Сув Сув Авр біу Уаії Уаї Уаї Уаії б1у Акд сій Бек Рго ТПг 5ег 370 375 380 60
Тец бек бек бек Рго Гей бек Сув Гей бег ТПг Авр бек Аза бек 5бег
385 390 395 400
ТПЕ ТпПкг ТБбг ТБг ТБг І1е Тс бек Уаії бек Сув Авп Тук бек Уаї 405 410 415 «2105 26 «211» 285 «212» ПРТ «213» біусіпе шах «4005 26
Меє Ггув Агуд Бек Рго Аїа бек Бек Сув бек бек бек ТПг бек бек Уаї 1 5 10 15 сб1у Рпе бій Уаї Нів Нів Рго Іїе бій пув Агуд Агуд Рго Пув Нів Рго
Акуд Агуд Авп о Авп оТец Гу бек біп Гуз Сув Гув біп АБп біп ТПг ТЕГ 20 ТПпЕ б1іу б1у Акуд Агуд бек бек І1е Ту Агуд с1і1у Уа! ТПг Агд Нів Агд бо
Тер ТпПкг с1у Акуд Робе біц Аїа Нів Гей Тгр Авр Гув бек бек Тгр Авп 65 70 75 80 25
Ап отІ1е сбіп бек Гуз пув б1у Ппув біп Маї Тук Гей с1у Аїа Тук Авр 85 90 95
ТП біш бій бек Аїа Аза Агд ТПг Туг Авр їец Аїа Аза Іецй Гув Туг
Зо 100 105 110
Тер б1у пув Авр Аза ТПг Іец Авп Робе Рго І1е бій ТПг Тук ТПг Гув 115 120 125 35 Авр Геч сі бій Мес Авр пув Уаії бек Акуд бій сбіц Тук Гей Аїа 5ег 130 135 140
Тец Агуд Акуд біп бек бек сіу Рпе бек Агуд сіу І1їе бек Пув Туг Агд 145 150 155 160 40 сбі1у Маії Аза Агкуд Нів Нів Нів АвБп с1іу Агд Тер бій Аза Агд І1е 01Уу 165 170 175
Акуд Уа1 Сув б1у Авп Гу Тук Гец Тук ІГец б1у ТПг Туг Ппув ТПг сбіп 45 180 185 190 бі бі Аза Аза Уаі Аїа Туг Авр Меє Аза Аїа І1е сій Туг Акд 01Уу 195 200 205 50 Уа1 АвБп Аза Уаї ТБг Авп Рре Авр І1е бек Ап Туг Меє Авр Тув І1е 210 215 220
Туз Гув Гув Авп Авр о біп Тпг Гей біп біп біп біп ТБг біц Уаї сіп 225 230 235 240 55
ТПгЕ бі ТБг Уаї Рго Авп бек бег Авр бек бі біц Аза сіц Уаї сій 245 250 255 сбіп біп Ні ТП Тс ТБг І1е ТБг Тр Рго Рго Рго бек бій АБп Гей 60 260 265 270
Нів Меє Гей Рго сбіп біц Ні сіп Уа1і с1у с1у Тер Уаї1ї 275 280 285 «2105 27 «211» 417 «212» ПРТ «213» бСаєкорпа сикгсав «4005 Д 27
Мем гув Агуд Бек бек Аїа бБекг Бек Сув бБекг бБег бек бек бек бек бег 1 в) 10 15 зек Бек Рго бБег бек бек бек бек бек А1їа Сув Бек Аза Бек бек бег 20 25 30
Сув Гей Авр бек Уаії бек Рго Рго АвБп о Нів Нів сбіп Гей Агуд бек сіц 35 40 45
Тпув бек пув Бек Кпув Агуд Іїе Агуд пув Іїе сбіп ТБПг пув біп Авр Гу 50 з9 (210)
Сув біп ТПпг ТпПг Аза ТПг Тк ТпПг обБег Рго бек сіу сі1у б1у Агд Агд 65 70 75 80 зек Бек І1е Туг Агкуд бі1у Уаі ТБг Агуд Нів Агуд Тер ТПг о1у Агкд Ре 85 90 95 бі Аза Нів Гей Тер Авр Гпув Бек Бек Тгр Авп Авп І1е біп Авп Гув 100 105 110
Зо цув б1у Агкуд біп Уаі Тук Гей с1у Аїа Туг Авр А5Бп бій бій Аза А1їа 115 120 125
Аза Нів ТПг Туг Авр Тец Азї1а Аїа Іецйц Гув Туг Тер С1у біп Авр ТЕГ 130 135 140
З5
ТПг гей Авп Рпе Рго І1е біцш ТПг Тук бек пув біш Іепй бій сі Меє 145 150 155 160 біп Гув Меє бек пув біш бій Ту Ге Аїа Бек Гей Агуд Агд Агд 5ег 165 170 175 зек с1і1у Рбе бек Агуд бі1у Уаії бек Гув Туг Агуд с1у Уаі1і Аза Агуд Нів 180 185 190
Нів Нів Авп с1у Агуд Тер біц Аза Агуд чІ1е с1у Акуд Уаії Рпе С1У Авп 195 200 205
Тпув Тук Гей Тук Ге с1у ТПкг Туг АвБп ТПг сбіп сій бід Аза Аза А1а 210 215 220
Аза Туг Авр Месє Аза Аза І1е сіц Туг Агкуд б1у Аза АвБп Аїа Уа1! ТЕГ 225 230 235 240
Авп оРпе Авр Уаї! бек Нів Тук І1е Авр Агд Іїецп Ппув Ппув Ппув с1у І1е 245 250 255
Ркго Гец Авр Гув І1е ІТецй Рго біц ТПг Тецй бек Ппув с1іу Бек Ппув с1іц 260 265 270 (516) зек бій біц І1ї1е б1іп Агуд Тбг бек Рго Тей Рго Гей Рго бек Рго Рго 275 280 285 зек Рго бек І1е ТПг Рго Гей Нів сій бій І1е УМаї бек Рго сіп Іецй 290 295 300
Тем бій ТПЕ біц Сув Ркго біп Нів Рго Рго Сув Меє Авр ТПг Сув Тіг 305 310 315 320
Мем Іїе Уаі Меє Авр Рго Ії1е біш сій Нів біц Гец ТПг Тер бек Ре 325 330 335
Сув Гей Авр бек с1іу Гец Уа1 Рго Гей Рго Уа1і Рго Авр Гей Рго Іей 340 345 350
Аза Авп сіу Сув біц Гей Рго Авр Тец Іец Авр Авр ТПг с1іу Робе сій 355 360 365
Авр Авп о ч11е АвБр ІТец І1е Рпе АвБр Аїа Сув Сув Рпе с1у Авп Авр Аїа 370 375 380
Авп оРго Аза Авр бій АвБп о сіу Ппув бій Акуд Гей бек бек Аїа бек ТіПг 385 390 395 400 зек Рго бек Сув бек ТПг ТПг Тец ТПг бек Уаії Бек Сув Авп Тукг б5ег 405 410 415
Уаї «2105 28
Зо «211» 443 «212» ПРТ «2135» Вісіпив сошпштипів «4005 28
Мем гпув Агуд Бек Рго ТПг бек Рго Сув бБекг бБег бек бек бек бек бег
З5 1 в) 10 15
Тук Бек Бек бек бек Аза бек бек бек Сув Уаії б1у Рго Авр АБр ТПг 20 25 30 40 Рго Уаі Аїа Рго сіу бек Нів Нів Нів Нів Авр Нів Нів сіп Теч Агд зек біп Ппув бек бек Гув Агуд І1е Агд Гув Уаї Ппув Ппув пув біп сіп бо 45
Ап оНів Авп о ТІ1е Авр біп АвБп о АвБп о ТБбг АБп о ТБПг ТпПг ч1І1е ТПг Аза Рго 65 70 75 80
ТПг Бек Аза Агуд Агуд бек бек Іїе Туг Агуд сбіу Уаі ТПг Агуд Нів Аг4д 50 85 90 95
Тер ТпПкг с1у Акуд Робе біц Аїа Нів Гей Тгр Авр Гув бек бек Тгр Авп 100 105 110 55 АвБп отІ1е сіп Авп о Гув пуб с1у Агд сбіп с1іу Аїа Туг Авр АБп бій сі 115 120 125
Аза Аза Аза Нів ТПг Туг Авр їец Аза Аза їецп Гпув Туг Тер С1уУу Рго 130 135 140 60 біц Тс Тпс Гей Авп Рпе Рго Іїе сій ТПг Тук Рго Ппув біц Тец бій
145 150 155 160 бі Меє сіп Ппув Меє бек пув бій бі Туг Гей Аза бек Гей Агд Агд 165 170 175 біп бек бек сіу Рпе бек Агуд сіу Уаі Бек Ппув Туг Агд сіу Уаї Аїа 180 185 190
Акуд Нів Нів Нібв АвБп об1у Агуд Тср б1іш Аза Агуд чІ1е с1у Агуд Уа1 Ре 195 200 205 б1у Авп Гув Тук Гей Тук Гей с1у ТПг Туг Авп ТПг сіп бій сій Аїа 210 215 220
А1ї1а Аї1а Аза Туг Авр Меє Аїа Аза І1їе сій Туг Агд с1у Аза АБп А1а 225 230 235 240
Уаї ТПпг Авп Рпе Ар І1їе бек Авп Туг Іїе Авр Акд Гей Ппув Пув Гув 245 250 255 сб1у І1е Гей Гей Авр біп Іїе Гей Рго Авр біп Рго Гец Агд Гув Сув 260 265 270 зек бек біц бек бі б1п Аза сіц Азїа б1іп Аза сій Уаї сбіц Агд Іей 275 280 285
Ркго Бек Гец Рго бек бек І1ї1е Іїец Рго біп бій сбіп Авр ТПг І1їе 5ег 290 295 300
Зо Рго біп Гей біп Сув ТПкг о біп Гей Гей Рго бек Меєс Авр бек Суб ТіПг 305 310 315 320
Меє І1їе Авп Меє Авр Рго І1е бій Авр Авп біц ІТец ТПг Тер бек РІПе 325 330 335
З5
Сув Гей Авр бек с1іу Гей ТпПг Гей Рібе бек Уаі Рго б1іцп Іецй Рго Іецй 340 345 350 бі АвБп Аза Сув бій Гей Рго Авр Гей Рпе Ар Авр ТПг с1і1у Рое бій 355 3З6о 365
Авр Авп о ч11е Авр Тец І1е Рпе Авр с1іу Сув Сув Ропе с1у Авп Авр Авр 370 375 380
Авр сіу сіу біу б1у Аза Авп Нів сіп бій Рбе Месє Уаї сій бек Агд 385 390 395 400 сбі1у Сув Акуд Уаі сі1у біш Уа1 сіу Іїе бек біу бек Меє б1п сб1й с1ци 405 410 415
Авп осіу Мпув біц Меє Сув Сув бек бек бек бек Рго Бек Сув бек ТПг 420 425 430
ТПг ТпПг бек Уаї бек Сув Сув Авп Туг бек Уаї 435 440 «2105 29 «2115» 402 «212» ПРТ (516) «213» Роршіцв Егіспосагкра «4005 29
Мес Гуз Агуд бБег бБег бБег Сув Бек бек бек бек бек бек бек бек 5ег 1 5 10 15 зек Сув Уаі Аїа бек бій бек І1е Ні Гув Рго пув Аїа Гпув Агд Те 20 25 30
Акуд пув Авп обіп Гуз бек Авп о біп бі1у Гув бек біп Ап Аїа Аза Аїа 35 40 45
А1ї1а Аїа Аза Авп АБп бек Нів Авп бек с1іу Гув Агуд бек бек І1е Туг 50 55 бо
Акуд с1і1у Уаії ТБг Агуд Ні Агуд Тер Тс б1у Агд Рпе сіш Аїа Нів Іец 65 70 75 80
ТЕр Авр Гпув бек бек Тгр АвБп бБег Іїе біп АвБп о Гув КГув б1у Гув сіп 85 90 95 сб1у А1ї1а Туг Авр АБп біш бій Аза Аза Аїа Нів ТПг Туг Авр Іецй А1а 100 105 110
А1їа гей пув Туг Тгр бі1у бек біц ТП ТПг Гей АБп Рпе Рго Іїе сіц 115 120 125
ТПЕ Тук ТпПК пув бій І1е бі біц Меє сіп пув Ма! ТЕ пув сій с1ци 130 135 140
Тук Ггец Аза бек Ггец Агд Агд Сбіп бек бек біу Рре бек Агуд сіу Уаї 145 150 155 160
Зо зек Мпув Тут Агуд біу Маі Аза Агкд Нів Нів Нів АвБп с1у Агд Тер с1ц 165 170 175
Аза Агкуд ч11е с1у Акд Уа1ії Тук біу Авп Гув Тук Гей Тугк Гешй с1у ТПг
З5 180 185 190
Тук Авп ТПг сбіп бі бі Аза Аза Аза Аза Туг Авр Меє Аї1а Аза Ше 195 200 205 сіп Туг Агкуд б1у Аїа Авп Аїа Уа1і ТБг АвБп Рре Авр Уа1ї! бек Авп Туг 210 215 220
І1е біц Агкд Тец Агд Гув Гпув б1іу І1е Рго І1ї1е АвБр Агуд Іїе Гей сіп 225 230 235 240 біц біп біп Гей Гей Ап Авп о бек Уаі Авр бек бек Уаї біц Уаї сій 245 250 255
Уаї біц біп Рго ТПбг Рго Рго Рго сбіп сбіп сіп біп бі бі сбіп сій 260 265 270 біп Гуз І1е Уа1і Бек Бек бек бек біп Гей біп Сув бек біп Гей Авп 275 280 285
Ззек бек Гемй Авр б1у ТПг Рго Рго Меє Уаії! І1їе Мес Авр ТПг І1е с1ц 290 295 300 бі Нів бій Гей Аза Тер бек Рпе Сув Меє Авр бек сіу Гец бек Іей 305 310 315 320 60
ТПЕ Меє Рго Авр Гец Рго Іїец біц Авп бек Сув бій Гей Рго Авр Іей
325 330 335
Рпе Авр Нів ТПг біу Рпе бій Авр АБп І1е АвБр Гей Іїе Рпе Авр Аїа 340 345 350
Сув Сув Тук с1у Ппув біц Аза АвБп Рго Аїа сіу Тук ТПг Іеп сій Авр 355 3З6о 365
АвпобБек ТПг біу б1і1у Маі бій біц Авр Агуд Гей бек Бек Авр бек Уаї 370 375 380 век Авп о бекг Рго ТПг бек бек ТПг ТПг ТПг бек Уа1 бек Сув Авп Туг 385 390 395 400 зек Уаї «2105 30 «211» 409 «212» ПРТ «213» УїсСів уіпітега «4005 30
Меє Уаї пув Агуд бек бек Рго сіу бек бек бек бек Рго бек бек 5бег 1 5 10 15 зек ТПг бек бек Авр Аї1а Азїа б5ег Агд Рго Аї1а Рго Рго Бек б01у щу 20 25 30
Тпув Ркго Ппув Бек Агуд Пув пув бі Аза Ппув Ппув Авп о бБег Ап о б1у Авп
Зо 35 40 45 біу бек Авп о бБег Пув Авп о Гув Агуд ТПг обБег Іїе Туг Агкд сіу Уаї ТЕПг 50 55 бо пув Нів Агуд Тер ТпПс с1у Агуд Рбе бій Аїа Нів Гей Ткгр Авр Пув 5ег 65 70 75 80 зек Тер Авп Авр І1е бек АвБп їубв Агуд б1у Агд сбіп с1у Аїа Тук Туг 85 90 95
Ап о біц бі Аза Аза Аза Агуд ТБг Туг Авр теп Аза Аїа Гей Ппув Туг 100 105 110
Тер б1у Ркго ТПг ТБг Рго Тец Авп Рібе Рго ІТец б1іцп ТПг Тук сіп Гув 115 120 125
Авр Аїа сіц біц Меє біцш Гуз Месє бек Гуз біп бій Туг Гец Аїа Іей 130 135 140
Тем Агуд Агуд біп бек Авп біу Рібе бБег Агуд сіу Уаї бек Гув Нів Нів 145 150 155 160
Нів Авп с1іу Агд Тгр біц Аза Агуд І1е сб1у Агд Уаії Гей с1у Авп Гув 165 170 175
Тук Гей Тук Гей с1іу ТПг Тук Бек ТПг біп бі1ц б1ц Аза Аза Аза Аїа 180 185 190
Туг Авр Меє Аїа Аза І1е сб1іцп Туг Агкуд біу Іїей Авп Аза Уаї ТБг Авп 60 195 200 205
Рпе Авр І1е бек Авп Тук Уаії Туз Іец б1у Агд Уаі бій Аза сіп Уаї 210 215 220 біп бій Тїеп Аза сбіп біп Гей біп Рго Авп ТПг Рго І1е С1у Рго сіп 225 230 235 240
Авп обіц Ггец біп Гуз бі бій бі бі біп Гей біп бій Рго Уа1ї Іец 245 250 255
Зек бек бек біп Нів Гей Рго бек Мес Авр бек бек Аїа Месє сіц Пе 260 265 270
Меє Авр Рго Аза Авр Авр Рго Авр Гей Рго Тгр АБп Рпе Сув Аза Туг 275 280 285 зек ТПг Ггец Тец Уаії Рго Авр Уаі Рго Гей сіу пув сіу с1і1у сбіц Іей 290 295 300 зек Авр Гец Ропе Тук б1іп Ппув б1і1у Рпе бій Авр АвБп І1е Авр Тук Меє 305 310 315 320
Рпе сіц сб1у Аї1а Аза б1у АБп бій бі бі бек Авп бег Аза б1іц АвБп 325 330 335 сіу Маї пув біц Авп сіу Рбе Меє Нів сіц Гей сі Ма1ї! АвБр о1Уу Гув 340 345 350
Тец біп Авп Уаії Уаї1ї с1іу Рпе Рібе Рібе Гей бек Рпе РібПе Ріе Іецй Рго 355 3З6о 365
Зо пуб Агкуд Аї1а с1іу Іїе Агуд пув Агуд сіу Уаі Авр бек Сув Меєс сіп Іей 370 375 380
Рпе Гей Тук Рбе Уаії Рпе Гей Робе Туг Рго Рпе Гей Рго бій Уа1 5ег 385 390 395 400
Туз Рпе Гей Рпе Нів Гей бек ГІечцп Авр 405 «2105 31 «211» 420 «212» ПРТ «213» Вгаспуродіцю аі5Баспуоп «4005 31
Меє губ Агуд бек Рго Рго біп Рго бек Рго бек Рго бек бек бек Рго 1 5 10 15
Аза бек бек бек бек бек Рго бБег бек бек Авр бБег бБег Бек бБег І1є 20 25 30
Аза І1е Рго Акд їуб5 Агуд Аза Агд ТБг Аза Азї1а Аза Аза Аза с01у Щ1У 35 40 45 сб1у ув Аза Агуд Аїа Аїа Аза Аїа Гпув Агуд Рго Пув Пув Авр б1Уу Гу 50 з9 бо
Авр Бек сіу бек бек бек АвБп біу біу б1у б1у с1у с1у с1у Ппув Агд 65 70 75 80 (516) Ззек бек І1їе Туг Агуд сіу Уаі ТПг Акуд Нів Агуд Тер ТПК с1у Ак РБре 85 90 95 бі Аза Нів Гей Тер Авр пуб Авп о Сув Рпе ТПг бек Ггец біп Авп Гув 100 105 110 ув Ппув б1у Агд біп Уаі! Туг їеш сб1у А1ї1а Тугк Авр ТБг сій с1іц Аї1їа 115 120 125
Аза Аза Агуд Аїа Туг АБр Іїеп Аїа Аза Іїецй Гув Туг Тгр б1у Рго сіц 130 135 140
ТПг ТпПкЕ гей Авп Робе бег Аза Авр Авр Туг біу їув бій Агд бек с1ци 145 150 155 160
Меє сі Аза Уа1і бек Акгд біц біш Тук Гец Аїа Аза Тец Агуд Агд Аг4д 165 170 175 зек бек біу Роре бек Агуд сіу Уаії бек Гув Туг Агуд сіу Уаі Аїа Аг4д 180 185 190
Нів Нів Нів Авп б1у Агд Тер бій Аза Акуд І1е сб1у Агд Уаі Іеч с1Уу 195 200 205
Авпопув Тук Гец Тук ІТец б1у ТБг Рре АБр ТПг сіп бій бій Аза Аї1а 210 215 220
Акуд Аза Тут АвБр Тешц Аза Аза І1е сбіп Ту Акуд с1у Аза Ап Аїа Уаї 225 230 235 240
ТПЕ Ап Рпе Авр І1е бБег Агд Тукг Гей Авр біп Рго біп Іецп Іеп Сс1и
Зо 245 250 255 біп тей біп сбіп біп біп с1іу Рго сбіп Уаі Уаі1 Аза Аїа Гец сіп сій 260 265 270 сі Азїа біп Агуд Авр о Нів біп бек Авр АБп Аза Уаі сбіп бій Гей Авп 275 280 285 зек сі1у біц Аїа біп ТПг Рго сбіу б1у І1е АБр сій Рго Іїе Аїа Пе 290 295 300 б1у Авр Бек ТПг бій Авр І1е АБп ТПг бек Гей ТПг Уаї Авр АБр Ше 305 310 315 320
І1Іе сбіц біц бек ІТец Тер бек Рго Тук бій Рпе АвБр І1е Меє Аїа 0щ1У 325 330 335
Уаї Авп Уаії Бек Авп бек Мес Ав5п Гей бек біц Іец РпПе бек Авр Уаї 340 345 350
А1а Рпе сій б1і1у АБп Іїе сіу Сув Гей Рбе бій сі Сув бек с1іу І1е 355 3З6о 365
Авр Авр Сув бек бек Агуд Нів біу Аїа сС1у їеш Аза Аза Ріе СсС1Уу Іей 370 375 380
Рпе ТБПг біц б1у Авр Авр Гув Тец їув Авр Уаі бек бі Меє сіц Меє 385 390 395 400 бі Маї Авп Рго біп Аїа Авп Авр Уаі бек Сув Рго Рго Ппув Меє Ше 60 405 410 415
ТПЕ Уа1 Сув Авп «2105 32 «211» 423 «212» ПРТ «213» Ногааецют уцідаге «4005 32
Мен гпув Агуд Бек Рго Рго Рго біп Рго бек Рго бек бек бек Рго Аї1а 1 в) 10 15
Сув бек Ркго Бек Рго Бек бек Рго бБег бек бек Авр бБекг бег бек І1е 20 25 30
А1їа І1е Рго Акуд Гуз Агуд Аїа Агуд ТпПг о біп Гуз Аза сіу бек Аїа Гув 35 40 45
Аза пув Аїа Аза Рго їув Агуд Аїа Ту Гув Авр бек с1у Агд Бек ТЕПг 50 55 бо
Тув Авр бек Авр Аза бБег Аза АБп сіу Аїа Аїа Аза бек б1у Гпув Аг4д 65 70 75 80 зек Бек І1е Туг Агкуд бі1у Уаі ТБг Агуд Нів Агуд Тер ТПг о1у Агкд Ре 85 90 95 бі Аза Нів Гей Тер Авр Гпув Авп о Сув Рпе ТПг бек І1е сбіп Авп Гув 100 105 110
Зо ув Ппув б1у Агд біп Уаі! Туг їеш сб1у А1ї1а Тугк Авр ТБг сій с1іц Аї1їа 115 120 125
Аза Аза Агуд Аїа Туг АБр Іїеп Аїа Аїа Гей Ппув Туг Тер С1у Рго біц 130 135 140
З5
ТПг ТпПкЕ гей Авп Робе ТПг Уаії Авр сій Туг Аза їув б1п Агд бек с1ци 145 150 155 160
Меє сі Аза Уа1і бек Акд сбіц біш Тує ІТецй Аї1а Аза Гей Агд Агд Агд 165 170 175 зек бек біу Роре бек Агуд сіу Уаії бек Гув Туг Агуд сіу Уаі Аїа Аг4д 180 185 190
Нів Нів Нів Авп б1у Агд Тер бій Аза Агуд І1е с1у Акд Уаі! еп Щ1У 195 200 205
Авпопув Тук Гец Тук ІТец б1у ТБг Рре АБр ТПг сіп бій бій Аза Аї1а 210 215 220
Акуд Аза Тут АвБр Те Аза Аї1а І1е сій Туг Агуд сіу Аїа АБп Аїа Уаї 225 230 235 240
ТПЕ Ап Рпе Авр І1е бБег Агд Тукг Гей Авр біп Рго біп Іецп Іецй Аїа 245 250 255 біп тей бій сбіп с1у Рго біп Уа1 Уаії Рго Аїа Гей сіп сбіц сіц Іей 260 265 270 (516) сіп Нів Авр Ні біп бек Авр Авп Аїа Уа! біп сій Гей АвБп бБег 1У 275 280 285 бі Аза біп пув Рго сіу Бек Уаі Бек бій Рго Іїе Аїа Уаї Авр Авр 290 295 300
ТПЕ Авр Ап ТПг б1іу АвБр чІ1їе с1у Аїа Ркго Іїей Уаії Рре Авр бек 01Уу 305 310 315 320
Ууаї бій бій Авп Гей Тер бек Рго Сув Месє Авр Туг Авр Уа1ії АБвр Рго 325 330 335
І1е Рбе біу Рго АвБп І1е бек бек бек Меє АвБп Гей бек бій Тгр Ре 340 345 350
Авп о Авр о Рго Аза Робе біц бек Авп І1е сіу Тук Меє Рпе сій о1Уу Сув 355 360 365 зек Авр Уаії Авр Авр Сув Бек ТПг Агуд Нів с1у Аза с1у Гей бек Аї1а 370 375 380 ем біу Рпе Гешп Ппув бій бі1у Авр Авр пуб Гецп пув Авр б1у бек Авр 385 390 395 400
Меє сіп Аза бі Іїе ТБг Рго біп Аза Авп Авр Уаі! бек Сув Рго Рго 405 410 415 їпув Меє І1ї1е ТПг Уа1ї! Сув Авп 420 «2105 33
Зо «211» 443 «212» ПРТ «213» Огула вагіха «4005 33
Меє АїТа пув Агуд бек бек Рго Авр Рго Аїа бБег бек бек Рго бБег Аїа
З5 1 в) 10 15 зек бек бек Рго бек бек Рго бБег бек бек бек Бек бій Авр бек 5ег 20 25 30 40 зек Рго Меє бек Мес Рго Сув пуб Агуд Акуд А1ї1а Агуд Рго Агкд ТБбг Авр
Тпув бек ТПпг с1іу пув Аїа Ппув Агуд Рго Ппув пув бій бек пув біц Уаї з9 (210) 45
Уаї Авр Рго Бек Бек Авп біу сіу сіу сіу біу Гув Агд бек бек Ше 65 70 75 80
Туг Агуд сіу Уа1і ТБг Агуд Ні Агуд Тер Тс б1у Агд Рпе сій Аза Нів 50 85 90 95
Тец Тер Авр Гпув Авп о Сув Бек ТПг бек Гей біп Авп о пув пув пув 01У 100 105 110
Агуд біп с1у Аїа Туг Авр бек біц бій Аїа Аї1а Аза Агуд Аза Туг Авр 115 120 125
Тец Аї1а Аїа Гей пув Тук Тер с1у Рго бій ТПг Уа1ї Ггец АвБп Рое Рго 130 135 140 60
Теч б1п бій Тук бі пув бій Агуд Бек бі Меє сій сіу Уаї 5ег Агд
145 150 155 160 бі бій Тук Ге Аза Бек Гей Агуд Агуд Агуд бБег бек сіу Рібе 5ег Агд 165 170 175 сбі1у Маї Бек Ппув Туг Агуд сіу Уаі Аза Агуд Нів Нів Нів Авп сб1у Агд 180 185 190
ТЕр біш Аза Агуд І1е с1у Агд Уаі1 Гей с1і1у Авп Гуз Тук ІТецп Тук Іеєец 195 200 205 бі1у ТПпЕ Рпе Авр ТПг сбіп бій бій Аза Аїа Гпув Аїа Туг Авр Іецй А1а 210 215 220
А1ї1а чІ1е сій Туг Агкуд б1у Аїа АвБп Аїа Уа1! ТПг АБп Ропе Авр І1е 5ег 225 230 235 240
Сув Тук Гей Авр біп Рго біп Гей Геш Аїа сбіп Гей сбіп біп бій Рго 245 250 255 сіп Гей Ге Аза сіп Гей біп біп бій Рго сбіп Уаії Уаї Рго А1а Гей 260 265 270
Нів біц бій Рго біп Авр Авр Авр Агуд бег біц АБп Азї1а Уаі сбіп сі 275 280 285
Тецп бек бек бек бі Аїа Авп о ТПг о бБег Бек Авр Ап Ап о біц Рго Іей 290 295 300
Зо А1ї1а Аза Авр Авр бБег Аза сій Сув Меє Авп обіц Рго Гей Рго І1е Уаї 305 310 315 320
Авр с1у І1ї1е біц біц бек Гей Тгр бек Рго Сув Гей Авр Тук сбіц Іей 325 330 335
З5
Авр ТПг Меєсє Ркго б1у А1їа Тук Рібе бек Авп бек Меє Авп Рпе бек сіц 340 345 350
ТЕр Рпе Авп Авр біц Аза Рпе сіц сіу біу Меє бій Тук Гец Робе с1іц 355 3З6о 365 сбі1у Сув Бек Бек Іїе ТП сіц с1у с1у Авп Бек Меє Авр Ап бег 01Уу 370 375 380
Уа1ї ТпкгЕ біц Тук Авп Гей Рпе бій сбіц Сув Авп Меє Гей сі Тув Авр 385 390 395 400
ІТ1е Бек Авр Робе Тец Авр Гув Авр І1е бек Авр Рпе Гей Авр Гув Авр 405 410 415
І1е бек І1е бек Авр б1у бій Агд І1е бек Рго сіп Аза АБп АБп І1е 420 425 430 зек Сув Рго біп Гуз Меє Іїе бек Уаї Сув Авп 435 440 «2105 34 «211» 420 «212» ПРТ (516) «213» богдПит рісоїог «4005 34
Меє Авр Меє бій Акуд бек біп біп сбіп пуб бекг Рго ТПг бій бек Рго 1 5 10 15
Ркго Рго Рго бек Рго бек бек бек бек бек бек Уаі Бек Аїа Авр ТЕГ 20 25 30
Уаї Гей Рго Рго Рго сіу Пув Агуд Агд Агуд Аїа Аза ТПг ТПг А1та Гу 35 40 45
А1ї1а пув Аїа сіу Аїа пуб Рго пув Агуд Аїа Агуд пуб Авр Аза Аїа А1а 50 55 бо
Аза Аза АвБр Рго Рго Рго Рго Рго Аї1а Аї1а Аї1а Аза Аза с01Уу Ппув Агд 65 70 75 80 зек бек Уаї Туг Агкуд бі1у Уаі ТБг Агуд Нів Агуд Тер ТПг о1у Агкд Ре 85 90 95 бі Аза Нів Гей Тер Авр Гпув Нів Сув Гей Аза Аїа Гец Нібв Авп Гув 100 105 110
Тпув Кпув б1у Агкуд біп Уа1 Тук Гей с1у Аїа Туг Авр бек біц біц А1а 115 120 125
А1ї1а Аїа Акуд Аза Туг Авр Гей Аїа Аїа Гей Гуз Туг Тер с1у Рго с1іц 130 135 140
ТПЕ Ггеш гей Авп Рібпе Рго Уа! сій Авр Туг бек бек бій Меє Рго с1ци 145 150 155 160
Зо
Меє сі с1у Уаі1і Бек Акд біц бі Тук Гец Аїа бег Тец Агуд Агд Аг4д 165 170 175 зек бек біу Роре бек Агуд сіу Уаії бек Гув Туг Агуд сіу Уаі Аїа Аг4д
З5 180 185 190
Нів Нів Нів Авп б1іу Агд Тгр біц Аза Агуд І1е с1у Агуд Уаі Рпе 0Щ1У 195 200 205
Авпопув Тук Тей Тук Гей с1у ТПг Рпе Авр ТПг сіп бій сій Аїа А1а 210 215 220
Тпув Аза Туг Авр еп Аїа Аза чІ1е сій Туг Акуд сіу Уаії АвБп А1їа Уаї 225 230 235 240
ТПЕ Ап Рпе Авр І1ї1е бек Суб Тук Гей Авр Нів Рго Іецй Рпе Іецй Аїа 245 250 255 сіп Гей біп біп бій Рко біп Уаі! Уаї Рго Аїа Гей АвБп сб1іп сіц Аї1їа 260 265 270 біп Рго Авр сіп Бек бій ТПг бій ТПг І1їе Аїа сіп сій бек Уа1ї 5ег 275 280 285 зек бі Аїа Ппув ТПЕ Рго Ар Авр Авп Аза бій Рго Авр Авр АБп А1а 290 295 300 біц Рго Авр Авр І1ї1е Аїа сій Рго Гей Іїе ТПг Уа1 Авр Авр бег І1е 305 310 315 320 60 бі бій бек Гей Тер Бек Рго Сув Меє Авр Туг бій Гей Авр ТПг Меє
325 330 335 зек Агд Бек Авп Рпе біу бек бек І1е АБп Гей бек бій Тер Ропе Авп 340 345 350
Авр Аза Авр Рібе Авр бек АБп І1е бі1у Сув Гей Рпе Авр с1Уу Сув бБекг 355 3З6о 365
А1їа Уаі1 Авр біц с1і1у б1у Гув Авр біу Уаії сб1у Гей Аза Авр РПе 5ег 370 375 380
Тецп Гей бій Авр Рпе бек Гей Рпе сбіш Аїа сіу Авр біу біп Іецй Гув 385 390 395 400
Авр Уаії Гей бек Авр Меє сій сбіц с1у І1е біп Рго Рго ТПг Меє І1е 405 410 415 зек Уаї Сув Авп 420 «2105 35 «2115 395 «212» ПРТ «213» йеа шаув «4005 35
Меє сій Агуд Бек біп Агуд біп бек Рго Рго Рго Рго бек Рго бек 5бег 1 5 10 15 зек бек бек бек Уаі! бек Аза Авр ТПг Уаї Гей Уаі Рго Рго с1у ГПув
Зо 20 25 30
Агуд Агуд Агуд Аїа Аза ТПг Аза пув Аза б1у А1ї1а бій Рго АвБп о Гпув Агд 35 І1їе Агкуд Пув Авр Рго Аїа Аїа Аїа Аза Аза с1у Ппув Агуд бек бек Уаї бо
Туг Агуд сіу Уа1і ТБг Агуд Ні Агуд Тер Тс б1у Агд Рпе сій Аза Нів 65 70 75 80 40
Тец Тер Авр Гпув Нів Сув Геш Аза Аїа Гей Нів Авп о пув пув пув 01У 85 90 95
Акуд біп Уаї Тук Іец б1у А1ї1а Туг Авр бек бій бій Аза Аїа Аїа Агд 45 100 105 110
А1їа Туг Авр Гец Аїа Аза Іїецп пуб Туг Тегр б1у Рго бі ТПг Гей Іец 115 120 125 50 Авп оРпе Рго Уаі! біц Авр Тук бек бек біц Мес Рго сій Меє сій А1а 130 135 140
Уаї Бек Агуд біш бій Тук Гец Аїа бек Гей Агуд Агд Агд бек бек Ш1У 145 150 155 160 55
Рпе бек Агуд біу Маії бек Ппув Туг Агкуд бі1у Уаі Аза Агу Нів Нів Нів 165 170 175
Ап ос1у Агд Тгр біц Аза Агуд І1е б1у Акд Уаі Рпе с1у Авп Ппув Туг 60 180 185 190
Тецп Тук Геп с1у ТПг Рпе Ар ТПг сіп бій бій Аза Аза пув Аїа Туг 195 200 205
Авр тей Аїа Аза І1е б1іцп Туг Агкуд біу Маі АвБп Аза Уа1і ТПг Авп Ріє 210 215 220
Авр І1ї1е бек Сув Тук ІТец Авр Нів Рго Іец Рпе їей Аза сіп Гец сіп 225 230 235 240 сіп бій Рго біп Уаі Уаї Рго Аїа Гей АБп біп сій Рго біп Рго Авр 245 250 255 біп бек бій ТПг с1у ТПг Тпкг бій біп бій Рго бій бек бек сій Аїа 260 265 270
ТПув ТП Рго Авр сіу Бек Аза бій Рго Авр бій Авп Аза Уаї Рго Авр 275 280 285
Авр ТПг Аїа біц Ркго Іїец бек ТПг Уаі Авр Авр бБег Ії1е сіц сбіц с1Уу 290 295 300
Тецп Тер Бек Рго Сув Меє Авр Тугк бій Гей Авр ТПг Меєс бег Агд Рго 305 310 315 320
Авп о оРпе сіу бек бек Іїе Ап Гей бек біц Тгр Рпе Аїа АвБр А1а Авр 325 330 335
Рпе Авр Сув Авп о І1е б1у Сув Іїец Рпе Авр с1у Сув бБег Аїа Аїа Авр 340 345 350
Зо бі б1у бек Ппув Авр сіу Уаі1 сіу Гец Аза Авр РоПе бек Іеп Рпе сіци 355 3З6о 365
А1їа с1у Авр Уаії бСіп їецшц Гув Авр Уаі Іец бек Авр Меє бі бі Щ1У 370 375 380
І1е біп Рго Рго А1ї1а Меє Іїе бек Уаі1і Сув Авп 385 390 395 «2105 36 «211» 413 «212» ПРТ «213» Вгаспуродіцю аЗі5Баспуоп «4005 36
Меє біц Аїа Тук Сув бек ТПг Іїей Уаії Гпув Авр бій Іїей І1е АБп щ1У 1 5 10 15 сі1у б1у сі1у сіу Бек Аїа сіу сіу Меє Агуд Туг Сув біц Аза Аїа Рго 20 25 30
Акуд Уа1і бек Рго Рго Уаі А1їа І1е Гув5 бек Уаі Гпув Агуд Агд Ппув Агд 35 40 45 бі Рко Рго Аза Уа1і Бек сіу Меє ТПг ТПг Уа1! бек сіу с1у с1Уу Гув 50 з9 бо
Авр с1у Авр Пув бек Аїа б1у АБп Аї1а Азї1а А1їа Гув Агуд Бек бБег Аг4д 65 70 75 80 (516) Рпе Ак сіу Уаї Бек Агуд Нів Агуд Тер ТПг б1у Агд Рпе сіц Аїа Нів 85 90 95
Тецп Тер Авр Ппув с1у ТПкг Тер Авп Рго ТпПг біп пув пув пуб б1Уу Гув 100 105 110 сіп Маї Тук Ге с1у Аїа Туг АБп бій сб1іц бій Аза Аза Аза Агуд А1їа 115 120 125
Тук Авр гец Аза Аїа Гец пуб Тукг Тер б1іу Рго ТПг ТПг Тук ТПг Авп 130 135 140
Рпе Рго Уаї Уаії Авр Тук бій Гуз біцп Іїеп Ппув Уаі1і Меє сіп сіу Уаї 145 150 155 160 зек Агд біц біц Тук Іейп Аїа бек І1е Агуд Агд Ппув Бек Авп с1у Ре 165 170 175 зек Агуд біу Уаії бек Гпув Туг Агд біу Маі Аз1а Агуд Нів Нів Нів Авп 180 185 190 с1у Агкуд Тгр біц Аза Акуд І1е с1у Акуд УМаі Рпе с1у Авп Гув Тук Гей 195 200 205
Тук Ге с1у ТПг Тук бек ТПг сбіп сбіц біц Аза Аз1а Агуд Азїа Туг Авр 210 215 220
І1їе Аїа Аза І1е сбіцп Тук Агуд бі1у І1е АБп Аї1а Уа1і ТПг Авп Робе Авр 225 230 235 240
Тецп бек бек Туг Іїе Агд Тер Гей Пув Рго Авп бек ТПг І1е АБп ТЕПг
Зо 245 250 255
АвпоТПг Рго Аїа Аза б1цп Іеп Аїа І1е Іецп сі1у с1у с1у с1у ТПкЕ Рго 260 265 270
А1ї1а Аїа Гей Іїе ТПг Рго Рго Рго ТПг Меє Нів Уаії Рго Аг9д Іец Іецй 275 280 285
Ркго Рго Пец Уаі пув б1у Акуд сіу бек бек І1ї1е Аза Авр Авр Уаі1ї 5ег 290 295 300
Аза сіу бек Сув Уаі Рпе б1у біу Рго Бек Рго Бек Рго Бек Рго ТЕГ 305 310 315 320
ТПг Тпг Аїа Ггец бег Іец ІТец Гец Агуд бек бек Уаі Рпе сіп сіц Іей 325 330 335
Ууаї Аїа сбіп біп біп Рго Рго Бек ТПг Уаї Авр АвБр АвБр АвБр АБр Ше 340 345 350 сіу бі1у Нів Аза Аїа Уаії бБег Авр Аїа Аїа сбіп Агуд Аїа Аза сій с1іци 355 3З6о 365
Авп обіц біц бек Рре б1у бій Уаї Іешц Тук б1у Аїа с1у бі с1у сіц 370 375 380
Аза Аза ТПг Аза РіПе бек Сув бек Меє Тук бій Гей с1у Гец Авр Авр 385 390 395 400
Ап о Рпе Аїа Агуд І1е біц бій бек Іїец Тгр с1у Сув Іецй 60 405 410
«2105 37 «211» 423 «212» ПРТ «213» Вгаспуродіцю 5у1уавгісцтш «4005 37
Меє сі Аїа Тукг Сув бек бек Гей Уа1 пув Авр біц Іецп І1е АБп щу 1 5 10 15 сі1у б1у сб1у с1у Аїа сіу сіу Меє Агуд Туг Сув бій Аза Аза Рго Агд 20 25 30
Уаї Бек Рго Рго Уаі1 Аїа І1їе Гпув бек Уа1ї Пув Агд Агд їув Агд сі1ц 35 40 45
Рго Рго Аїа МУМаї бек сіу Меє ТПг ТПг Уаі1! бек с1у сі1у с1у с1у 01У 50 55 бо
Авп осіу Мпув Авр біу Авр Гув бБег Аїа б1у АБп Аї1а Аза Аза Аїа Гув 65 70 75 80
Акуд Бек бек Агуд Роре Агуд бі1у Уаії б5екг Агуд Нів Агд Тгр ТПг с1у Агд 85 90 95
Рпе сіц Аїа Нів Іецй Тгр Авр Гув б1у ТПг Тер Авп Рго ТПг сіп Гув 100 105 110
Тпув Кпув б1у Ппув біп Уаі1 Тук Гей с1у Аїа Туг Авп біц біц біц А1а 115 120 125
Зо А1ї1а Аїа Акуд Аза Туг Авр Гей Аїа Аїа Гей Гуз Туг Тер с1у Рго ТПг 130 135 140
ТПЕ Тук ТПкЕ Авп Рібе Ркго Уаі! Уаі1і Авр Тук біцш Гуз б1іцп Гей Ппув Уаї 145 150 155 160
З5
Меє сбіп сіу Уаі Бек Акуд сій бі Тук Гей Аза бек І1е Агд Агд Гу 165 170 175 век Авп біу РібПе бек Агуд сіу Уаії бек Гув Туг Агуд сіу Уаі Аїа Аг4д 180 185 190
Нів Нів Нів Авп б1іу Агд Тгр біц Аза Агуд І1е с1у Агуд Уаі Рпе 0Щ1У 195 200 205
Авп опув Тук Тей Тук Гей с1у ТПг Тук бек ТПг сбіп бій сій Аїа А1а 210 215 220
Акуд Аза Тут АБр І1е Аза Аза чІ1е сіцп Туг Акуд с1у Іїе Авп Аїа Уаї 225 230 235 240
ТПЕ Ап Рпе Авр Гец бекг бек Туг Іїе Агд Тгр ІТецй Гув Рго Авп 5бег 245 250 255
А1а Аза Ап ТБПг АБп ТОП Рго Рго Аїа Аїа Аїа Аза сій Гей Аїа І1е 260 265 270
Тец б1у сб1у Аза Рго Аїа Аза Гей Іїе Бек Рго Аза Рго Аза Рго ТЕПг 275 280 285 (516) ТПЕ Меє Акуд Уа1! Рго Агд Гей Гей Рго Рго Іїей Уаі Агд с1у Акд с1Уу 290 295 300 бі1у бек І1їе Рго Авр Авр Уа1і бек Аїа сіу сіу бек Сув Уаі Рпе 0Щ1У 305 310 315 320 зек Рго бек Рго бек Рго бек Рго ТПг ТіПг ТПг бек Аїа Гей бек Іецй 325 330 335
Тецп Гей Агкуд Бек Бек Уаі Рпе сіп сій Ггеш Уаі1 Аїа сіп сб1іп сіп Рго 340 345 350
Рго Бек І1е Уаі Авр Авр Авр Авр бі1у Уаі с1у с1у біп бій Аїа Уаї 355 3З6о 365 ек Авр Аїа Аїа біц Агуд Аї1а Аїа сбіц б1іц АБп бій бій бек Рое 01Уу 370 375 380 сі Маї Іїейп Ту сС1у Аїа сіу сбіш с1у бішц Аїа Аза Аза Аза Ріе 5ег 385 390 395 400
Сув бек Месє Тук бій Гей сіу Гей Авр Авр бек Ропе Аїа Агд І1е с1ци 405 410 415 бій бек Гей Тер о1Уу Сув Іец 420 «2105 38 «2115 399 «212» ПРТ «213» Огула вагіха
Зо «4005 38
Меє сій ТпПг Тук с1і1у Гей Уаї пув Авр бій Гец ІТей Нів с1у Іе 0Щ1У 1 5 10 15 сі1у б1у біп с1у Агд Гей Тук Сув бі Уа1і Ппув Рго ТПг Аза Аа Рго
З5 20 25 30
А1їа Уа1 І1їе ТБг Аза Аза с1у сіу сбі1у Аїа Ппув Бек Уа1і пув Агд Агд 40 цув Агуд бі Рго бек Аїа Аїа Аїа Мес бек Аза Уаі ТБПг Уаї Аї1а щ1У бо
Авп осіу пув біц Аза б1у б1у бек Авп Аїа Аза Ап Гув Агд бек б5ег 65 70 75 80 45
Акуд Рпе Агуд біу Уаі бек Агуд Ні Агд Тер ТПпг с1у Агуд Рпе сій Аїа 85 90 95
Нів Гей Тер Авр пуб біу ТПг Тер АБвп о Рго ТПг біп пув пув пув б1У 50 100 105 110 пув біп Уаї Тує Геш с1у Аза Туг АБп бій бій Авр Аїа Аза Аїа Агд 115 120 125 55 А1їа Тук Авр Тейш Аї1а Аза Гей Пув Туг Тгр б1у Рго ТПг ТПг Тук Тіг 130 135 140
Авп оРпе Рго Уаі Аїа Авр Тук біц Гуз біцш Тейп Гпув Геи Меє сіп Щ1У 145 150 155 160 60
Уаї Бек Ппув біш бій Тук Гец Аза бек І1їе Агд Агд їув5 бек АБп Ш1У
165 170 175
Рпе бек Агуд біу Маії бек Ппув Туг Агкуд бі1у Уаі Аза Агу Нів Нів Нів 180 185 190
Ап ос1у Агд Тгр біц Аза Агуд І1е б1у Акд Уаі Рпе с1у Авп Ппув Туг 195 200 205
Тецп Тук Гей сіу ТПг Тук Бек ТПг сбіп біш бій Аза Аза Агд Аїа Туг 210 215 220
Авр І1е Аїа Аза І1е б1іцп Туг Акуд б1у І1е АБп Аза Уа1і ТПг Авп Ріє 225 230 235 240
Авр Гей бек ТПг Туг Іїе Агуд Тер Гей Пув Рго Рго бек бек бек 5ег 245 250 255
Аза Аза с1у ТПг Рго Ні Нів Нів сбіу б1у сбі1у Меє Уаі1і Уа1і1 сС1у Аї1а 260 265 270
Авр Агуд Уаії Ггец Аза Рго А1ї1а сСіп бек Туг Рго Іїе Бех Аїа Аза Аї1а 275 280 285
Авр Авр Авр Уаі! Аза б1у Сув Тгр Агд Ркго Гей Рго Бек Рго Бек бег 290 295 300 зек ТПг ТПг ТБг Аза Тецй бек ІТец Іец Тецй Агуд Бек Бек Меє Ропе сіп 305 310 315 320
Зо січ Гей УМаі Аза Акуд сбіп Рго Уаі Уаї сбіц с1у Авр Авр с1і1у сіп Гей 325 330 335
А1їа Уа1 Уаї бек б1у Авр Авр Аї1а Авр Аї1а Авр Аїа Авр бБег Авр Уаї 340 345 350
З5
Тпув бій Ркго Рго Рго бій бек сій Тук с1і1у бій Уа1 Рбе Аїа 5ег Авр 355 3З6о 365 бі Азї1а Аза Аза Аза Аза Аїа Тук с1у Сув Бек Меє Тук біц Іецй Авр 40 370 375 380
Авр Бек Ріпе Аїа їец І1е АвБр Авр бек Уаі! Тгр АБп Сув Геп Ше 385 390 395 45 «2105 39 «211» 488 «212» ПРТ «213» вогодпит рісої1ог «4005 39 50 Меє біц ТрПг Тук бек Тей сбіп Маї Гпув Авр бій Гей Нів сіу с1у 01Уу 1 5 10 15
І1е с1у І1е сі1у сбі1у б1у с1у біп сб1у Іецйп Тугк Сув б1у Аза ТПг Рго 20 25 30 55
Акуд Рго Аїа Аза Рго Аї1а А1а ТПг с1у с1у сіу сі1у сі1у б1у б1у Авр сб1у А1ї1а Уаї Ппув Бек Авп Гув Агуд Бек Агуд Гув Агуд бід Рго Рго Рго 60 50 з9 бо
Ркго Рго Рго бек бек ІГец Уа! ТПг Меє бек Авп сіу с1іу МПув Авр бій 65 70 75 80
А1їа Уаі1і Аїа сіу бек б1у Авр Пув бек Аза бек Бек Авп бБег Авп Аїа 85 90 95 зек Мпув Агд бек бек Агуд Рпе Агуд сіу Уа1і Бек Агуд Нів Агд Тгр ТЕПг 100 105 110 с1у Акуд Рпе біц Аїа Нів Гей Ткгр Авр Ппув с1у ТПг Тгр АБп Рго Тіг 115 120 125 біп гув Гпув Ппув с1у Ппув біп Уа1 Тук Геш с1іу Аїа Туг АвБп біц бій 130 135 140
Авр Аза Аїа Аза Агуд Аза Туг Авр Тец Азїа Аза їей пув Тугє Тер Щ1У 145 150 155 160
Ркго ТПг ТБг Тук ТБПг АвБп о Рпе Рго Уа! Уаії Авр Ту бій Агд сій Гей 165 170 175 пув Маї Меє сіп Авп Уа1і бек пув бі бі Тук Гей Аїа бБег І1е Агд 180 185 190
Агуд пув бек Авп обіу Рре бек Агуд сіу Уа1і бек Ппув Тук Акуд сіу Уаї 195 200 205
Аза Акуд Нів Нів Нів АБп б1у Агд Тгр б1п1 Аза Агу чІ1е с1у Агк9д Уаї 210 215 220
Зо
Рпе с1у Авп Гуз Тук Тецп Тук Іец біу ТПг Тук Бек ТПг сбіп сіц сіц 225 230 235 240
Аза Аза Агуд Аїа Туг АБр І1е Аїа Аза І1е сій Туг Агуд б1у І1е Авп
З5 245 250 255
А1їа Уа1 ТБЕг Авп о Рбе АвБр Тецп бек ТПг Туг І1ї1е Агд Тгр Гей Гув Рго 260 265 270 сіу бі1у б1у Маї сій Авр бек Аїа Аїа с1у ТПг Рго ТБПг бек сі1у Уаї 275 280 285
Агуд Аза Рго сіу І1е Рго Рго Аїа бБег Іец бек Те сіп Аїа с1у Щ1У 290 295 300
Тецп Гей біп Нів Рго Нів сіу Аїа Аїа Аїа сіу Меє Ггец біп Уаї Авр 305 310 315 320
Уаї Авр Авр Гей Туг Агуд сіу біп Гей Аїа Аїа Азїа Агуд сС1у Аза Аїа 325 330 335
Тецп Рпе бек сіу с1у Іїе Авр Авр Уаі сіу Бек Уа1 Туг Аїа Аза 01Уу 340 345 350 зек Аїа сіу Рго бек Рго ТПг Аїа Гей Сув Аїа б1у Агд Рго бек Рго 355 3З6о 365 зек Рго бек Рго бек бек бек ТПг ТПг Аза Іїейп бек Гей Гей Гей Агд 370 375 380 60 зек Бек Уаії Рре біп бій Гей Уаі Аза Агуд АБп Аза сі1у с1у с1у Аї1а
385 390 395 400
Аа сбіп біп біп біп Тец Уаї Уаі Аза Авр Авр Авр с1у Аїа Уа1ї 5ег 405 410 415
Рго Аїа Авр Уаі Уаі АвБр Аї1а пув Уаі б1іц б1п Рго сій Аїа бій щу 420 425 430 бішц Тецп сб1у Акуд Нів с1у Авр сіп Гей Туг с1у Аїа Аїа Агд А1їа АБр 435 440 445 бі Авр бій Авр Аза Рпе Аїа Сув Бек Меє Туг бій Гей Авр Авр 5ег 450 455 460
Рпе Аїа Акуд Месє сіц сбіп бек Геп Тгр сбіу Сув Гей Агуд бек бек Авр 465 470 475 480
Аза Рго Авр АвБп Меє АБп АБп Іей 485 «2105 40 «211» 443 «212» ПРТ «213» вогодпит рісої1ог «4005 40
Меє сій бек Бек сіу Меє Меє Меє Уа1і Гпув бек біц І1е сіц бек Сув 1 5 10 15 бі1у Тук Ркго сіу Рго Бек бек Бек ТПг Аза Рго Аїа Аїа сСіу Уа1ї Уаї
Зо 20 25 30
І1Іе с1у сіу бек Аїа ТПг ТПг біц Агд с1у сій с1у о1у Нів Нів Нів 35 Нів Нів Нів сіп Уаі! Уаї УМаі Агуд Агд Агд Акуд Агуд бій Рго Рго Іец бо
Тец Аза Рго І1ї1е Аза сіу сіу с1у Іїе с1у Ппув Рго Гей Рго бег І1е 65 70 75 80 40
ТПг Уа1 Гпув Агуд бек бБег Агд Рпе Агуд біу Уаі б5ек Агуд Нів Агд Тгр 85 90 95
ТП б1у Акуд Рбе сіц Аза Нів Гей Тер Авр Гув АвБп бек Тгр Авп Рго 45 100 105 110
ТПг біп Акуд пув пув біу пуб біп Уаії Тук Гец б1у А1ї1а Туг АБр с1и 115 120 125 50 сій бій Аза Аза Аза Акуд Аза Туг Авр еп Аза Аїа Гец Ппув Тук Тер 130 135 140 б1у Ркго ТПг ТпПг о Тує ТПг Авп Рпе Рго Уаі Меє Авр Тук біц пув б1ци 145 150 155 160 55
Тешц Ггув І1ї1е Меє сій Ап Гей ТПг пув бі бі Тує Тец А1їа бек Іецй 165 170 175
Акуд Агуд пуб бетг бек біу Рпе бБег Агуд біу УМаії бек Ппув Туг Агд Щ1У 60 180 185 190
Ууаї Аза Агуд Нів Нів сіп Авп сбіу Агд Тер бій Аза Агу І1е с1у Агд 195 200 205
Уаї Рпе с1у Авп Ппув Тук Гец Тук Гей сіу ТПг Тук бек ТПпг біп сі 210 215 220 бі Аза Аза Агу Аза Туг Авр І1е Аїа Аза І1е сб1іцп Тук Ппув с1у Уаї 225 230 235 240
АвБп Аза Уаі ТБг Авп Рре Авр Гей Агуд бек Туг І1е ТПг Тер Геч Тув 245 250 255
Рго Бек біу Аїа Рго Аї1а Аза Рпе АвБп Рго бій Аза Аїа Гецй Іецй Меє 260 265 270 сіп Аза Азїа Рго Аїа сій сбіп Гей Гей Ні Рго Аїа сій ТПг Аза сіп 275 280 285
Меє Гей Рго Агкуд Уа1 с1іу Авп Ркго Робе Іецй Гей Авр НівБ с1у Аза Аї1а 290 295 300
Ркго Рго біу бек бек бі1у сбі1у бі1у б1у бі1іп Авр Аїа бек Меє Бек 5ег 305 310 315 320
Меє Уаї бек Рго с1у Аїа с1у сіу с1у Меє Агуд Акуд Агкуд сб1у бек 5ег 325 330 335
ТПг Аїа Гей бек Ггец Гец Іец пуб бек бек Месє Рре Агуд сіп Гей Уаї 340 345 350
Зо бі Ггув Авп бБег Авр Аїа бій сі с1іу Уаі Агуд Авр Агд бі АБр Аза 355 3З6о 365
Аза Аза Аїа Азїа Аза Аза Аза Ніб5 Рго Аї1а сб1у Рго с1у АвБр Аїа Туг 370 375 380 бі Тук Нів Авп Рпе Рпе сіп сіу бій Аїа Рго Рго Авр Меєсє Субв Авр 385 390 395 400
Пес Ріе бек бек сіу сіу біу б1у Авр Ні5з5 Аза Агуд АвБп Аїа с1у РБГе 405 410 415
Нів сіу бій І1їе Аїа Аза Сув Туг Авр Авр б1у бій с1у Гей АБр 0Щ1У 420 425 430
ТЕр Авп с1іу Рбпе сіу Авп Меєсє бек бек Гец сіп 435 440 «2105 41 «2115» 407 «212» ПРТ «213» біусіпе шах «4005 41
Меє сій ге Аїа Ркго Уаі1і Ппув Бек бій Гец бекг Рго Агд бек Нів Аг4д 1 в) 10 15
Тецп Гей Мем І1їе Авр сіу бек бі Уаі Іїе сіу ТБкг Ппув Сув Уа1ї Гув 20 25 30 (516) Агуд Агуд Агу Агуд Авр обБег бек ТПг Аїа Уа1і Іецй с1у с1у АвБп с1у сіп 35 40 45 біп б1у бій сбіп гейш бі бій біп пув біп Гей сіу с1іу біп бек ТПг 50 55 бо
А1ї1а ТПг Тпг оУа1! Гуз Агуд бек бек Агуд Рпе Акуд сіу Уаії бек Агд Нів 65 70 75 80
Акуд Тер ТБг б1і1у Агд Рпбе бій Аза Ні Іецй Тгр Авр Гпув с1у ТПг Тгр 85 90 95
АвпоРкго ТПг біп Гуз пув Кпув біу Ппув біп Уаї Тук Геш с1у Аїа Туг 100 105 110
Ап Авр бій біц Аза Аза Аза Агуд Аза Туг АБр Теп Аза Аїа Гей Гув 115 120 125
Тук Тер с1у Іїе бек ТПг Рбе ТПг Авп Рібе Рго Уа! бек Авр Тук с1и 130 135 140 пув біц І1е бій Іїе Меє Гуз ТПг Уаї ТПгЕ пув сій бій Тук Гей А1їа 145 150 155 160 зек Гей Агуд Агд Агд бек бек біу Рре бек Агуд сіу Уа1ї Бек Ппув Туг 165 170 175
Акуд с1і1у Уаі Аза Агд Ні Нів Нів Авп б1у Агд Тгр бій Аза Агд те 180 185 190 б1у Акд Уаії Рпе с1у Авп Гпув Тук Гей Тук Гей с1у ТПг Тук бек ТЕПг
Зо 195 200 205 біп 611 бій Аза Аза Агу Аза Туг Авр Ії1е Аїа Аза І1е сій Туг Агд 210 215 220 с1у І1їе АБп Аза Уаі ТБг Авп Рібе Авр Гей бек ТПг Туг І1е Агд Тер 225 230 235 240
Тец Агуд Рго с1іу ТПг Нів Рго ТПг Аза бек Нів Авр сбіп Гув Рго 5бег 245 250 255
ТПгЕ Авр Аза сбіп Рго Рпбе Азїа ТПг бБег Авп бек Меє сіп Аїа Агд Щ1У 260 265 270
Ап отІ1е сбіц Уаї бек Авп бек Авп о Гув АвБп бек Рпе Рго бек б1і1у Гув 275 280 285
Тец Авр бек ТПг пув Ппув Агуд Авр о Рпе бБег Ппув Тук Меєсє Авп Рго Іей 290 295 300 зек Рго Сув Авп оПув Рго бек бек Рго ТПг Аїа Геп сіу ІГей Гей Гей 305 310 315 320
Тпув бек бек Уаі Рпе Агуд бій Гей Меє сбіп Агуд Авп Гей Ап бег бег 325 330 335 зек біц біц Аїа біцш б1іп Уаї сіцш ІТей Ппув Тук Рго Нів біц с1у Авп 340 345 350
Авр с1і1у Уаії сіу б1у І1е Тук Авр АвБп о біц Авп о ТПг Авп Авп бек Туг 60 355 360 365
Рпе Сув бек бек Авп І1е бек Агуд Гей Рго Авп Гей біц бек бек бій 370 375 380 біц бек Ркго Гей Рго Меє Тук Нів сіу ТпПг Уа1 сіп бек Гей Тгр Авп 385 390 395 400 зек Аїа Рбе Авп Меє 5ек Авп 405 «2105 42 «211» 406 «212» ПРТ «213» біусіпе шах «4005 42
Меє сій ге Аїа Ркго Уаі1і Ппув Бек бій Гец бекг Рго Агд бек Нів Аг4д 1 5 10 15
Тец Маї І1їе І1ї1е Авр сіу Бек Авр Уаії І1е бек ТПг Гув Сув Аїа Гув 20 25 30
Ак Агуд Агуд Агуд Авр обег бек Мес Аза Уаії Іеп с1у с1у АБп с01у сіп 35 40 45 сіп б1у бі біп Гей біц бій б1іп пув біп Гей сіу сб1у біп бек ТЕГ 50 55 бо
А1їа ТПг ТБг Уаї пуб Агд бек бБег Агуд Роре Агуд бі1у Уаії бек Агуд Нів 65 70 75 80
Зо
Акуд Тер ТБ б1у Агд Рпе бій Аза Нів Іїецй Тгр Авр Гпув с1у ТПг Тгр 85 90 95
АвпоРкго ТПг біп Гуз пув Кпув біу Ппув біп Уаї Тук Геш с1у Аїа Туг
З5 100 105 110
Авп о Авр о бій біц Аза Аза Аза Агуд Аїа Туг АБр Теп Аза Аїа Гей Гув 115 120 125
Тук Тер с1у ТПг бек ТПг Рре ТПг АвБп Рпе Рго Уа! бБег Авр Тук с1и 130 135 140 пув б1п І1е сій І1їе Меє Гпув ТПг о Уаі ТПг пув сій сбіц Туг Іецй А1а 145 150 155 160 зек Гей Агуд Агд Агд бек бек біу Рре бек Агуд сіу Уа1ї Бек Ппув Туг 165 170 175
Акуд с1і1у Уаі Аза Агд Ні Нів Нів Авп б1у Агд Тгр бій Аза Агд те 180 185 190 б1у Акд Уаії Рпе с1у Авп Гпув Тук Гей Тук Гей с1у ТПг Тук бек ТЕПг 195 200 205 сіп бій бі Аза Аза Акуд Аза Туг АвБр І1е Аза Аїа І1е сій Туг Агд 210 215 220 б1у І1е АБп Аза Уа1і ТПг Ап Рпе Авр Гей бег ТПг Туг І1е Агд Тгр 225 230 235 240 60
Тец Агуд Рго сіу ТПг Нів Рго ТПг Аза Бек Нів Авр сбіп пуб Рго 5ег
245 250 255
ТПгЕ Авр Аза сіп Гец Роре Аза ТПг бег Авп бек Меє сіп ТПг Агд Щ1У 260 265 270
Ап очІ1е сбіц Уаї бек Авп бек Авп Меє Нів бек Рпе Рго Бек сіу сіц 275 280 285
Тец Авр бек ТПг пув Ппув Агуд Авр о Рпе бБег Ппув Тук Меєсє Авп Рго Іей 290 295 300 зек Рго Сув Авп оГув Рго бек бек Рго ТПг Азїа Гей сі1Уу Гей Гецй ГІец 305 310 315 320 пув бек бек Уа! Рпе Акуд бій Гей Мес сбіп Агуд Авп Гей АвБп бек 5ег 325 330 335 зек біц біц Аза Авр Уаї сій Іїец Гув Тук Рго сбіп бі с1у Авп Авр 340 345 350 сі1у Маї с1у с1у Іїе Тукг Авр Авп Авр Авп ТПг бек Авп бег Тук РіПе 355 36о0 365
Сув бек Бек Авп Іїе Бек Агд Гей Рго Ап Гей бій бек бек біц бій 370 375 380
Сув Ркго Гей Рго Меє Тук Нів сіу ТПг Меє сіп бек Гей Тгр Авп б5ег 385 390 395 400
Зо А1а Рпе Авп Меєсє 5ег Авп 405 «2105 43 «211» 418 «2125 ПРТ «213» Роришіцв Егіспосагра «4005 43
Меє сі Меє ТПг Агуд Авп Тк б1у Авр біп І1е бек Іец б1у Агд Аг4д 1 5 10 15
АкгЧд Гей Сув Меєсє І1е б1іш бій біц Агуд Агд Аза сб1у бій Аза с1У Гув 20 25 30
Сув І1е гув Агуд Агуд Агуд Агуд Авр Рго бек ТПг Рібе Аїа Іецй бек Сув 35 40 45
Ап от11е Авп Авр обіп біп бек Авр біп біп біп біп біп біп бек Гей бо 50 с1у Авр Агуд ТПг Аза Аїа Уаії Аїа ТПг ТП Уаї Ппув Акуд бек бБег Агд 65 70 75 80
Рпе Агуд сіу Уаі бек Агкуд Нів Агд Тер ТПпг с1у Агуд Рпе сій Аїа Нів 85 90 95 55
Тецп Тер Авр Ппув с1у ТПкг Тер Авп Рго ТпПг біп Агуд пуб пуб б1у Гув 100 105 110 біп б1у Аї1а Туг Авр бій бій бій Бек Аїа Аза Агуд Аза Туг Авр 'Іей 60 115 120 125
Аза Аза Ггецйц пуб Туг Тер б1у ТПг бек ТПг Рпе ТПг Авп Рпе Рго Аїа 130 135 140 зек Авр Тук біц Гуз б1п І1їе сіцш І1е Меє Гув ТПг Уа1і ТПгЕ ув с1ц 145 150 155 160 бі Тук Гей Аза Бек Гей Агуд Агуд Агуд бБег бек біу Рбе 5ег Агд Щ1У 165 170 175
Уа1ї1ї бек Ппув Тук Акуд біу Уаі Аза Агуд Нів Нів Нів АБп б1у Агд Ткгр 180 185 190 бі Аза Агуд ч1І1е с1у Акуд Уа1і Рпе с1іу Авп Пув Тук Гей Тугк Гей Щ1У 195 200 205
ТПг Тук Бек ТПг сбіп біц біц Аза Аза Ні Аза Туг АБр Ії1е Аза Аїа 210 215 220
Іїе сіц Туг Агуд бі1у І1е АБп Аїа Уа! ТПг Авп Рпе Авр Гец бек ТЕГ 225 230 235 240
Тук Іїе Акуд Тер Гец пуб Рго бій Аза бек Гец Рго Аї1а Рго сбіп ТПг 245 250 255 сіп бій бек пуб Рго Аїа бек Авр Рго Гей Рго Мес Аїа ТПг Ррпе 5ег 260 265 270
АвпоНів Гей Рго бек біцп Гпув Рго ТПг біп Гей бек Уаі Гей сіп Меє 275 280 285
Зо
Авр Ркго бек Гец Мес Авр АвБп о Гец АвБп о ТПг Рго пуб Авп о біц АвБр І1е 290 295 300
Рпе Нів Агкд пуб ТПг Те Рго Уаі! бек Рго Гей ТПг Агуд Бек бек бег 305 310 315 320 зек ТПг Аїа Іїец бек ІТецй Гей РбПе Ппув Бек бек Іїе Рібе Ппув сій Іей 325 330 335
Уа1ї біц пуб Авп Гей АБп о ТПг ТПг бек бій сій І1їе бі бій АвБп Авр 340 345 350 зек Мпув Авп о Рго Ні АБп обіу Авп Авп А5п Аїа сіу сій Аза РоПе Туг 355 3З6о 365
Авр с1у Гец бек Рго І1е Рго Ні ТПг б1у ТПг бек ТПг бій Авр Рго 370 375 380
Рпе Гей Сув бек біц біп сб1у бій ТПг Авп Тпг Гей Рго Рго Туг вег 385 390 395 400 сбі1у Меє бій сіп Бек Гей Тер АБп сіу Аїа Гей бек Меєсє Рго 5ег Агд 405 410 415
Рпе Нів «2105 44 «211» 336 60 «2125 ПРТ «213» УїсСів уіпітега
«4005 44
Меє сі Меє ТПг ТПг Уа1ї пуб Бек бій Гец сі1у Ге б1п Агд с1у Аг4д 1 5 10 15
Тем Сув ТПг АТа сій ТБг Авр Аїа тей сіц Уаї ТПг Гув Сув Уаї Тув 20 25 30
Ак Агуд Агуд Агуд Авр о Рго бек Аза Уаі! ТПг Рго с1у Сув Бек Ппув сіп 35 40 45 сбі1у б1п біп сбіп пув біп Уаі1і Гей Гей сбіп Аїа сіу біп бек ІШе ТПг 50 55 бо
Аза чІ1е Аїа ТПг ТП Меє Гуз Агуд бек бек Агуд Рпе Агуд сіу Уа1ї! 5ег 65 70 75 80
Акуд Нів Агуд Тер ТБ б1у Агуд Рбе біц Аза Нів Гей Тер Авр пув 01У 85 90 95 зек Тер Авп Уа! ТПг біп Ак Ппув пув б1і1у Ппув біп Уаї Тук Іеч 01Уу 100 105 110
Аза Туг Авр біц біц біц бек Аїа Аза Агу Аза Туг Авр Гец Аїа А1а 115 120 125
Тецшп Гпув Тук Тер с1у Рго Бек ТПг Рпе ТПг Авп Ріпе Рго Уаї 5ег Авр 130 135 140
Тук біц пув сіц І1ї1е сбіцш І1е Меє сіп с1у Гей ТПг пув біц сбіц Туг
Зо 145 150 155 160
Тец А1а бек Гей Агуд Агуд Агуд бБег бек с1іу Рпе бБег Агуд біу Уа1ї 5ег 165 170 175 пув Тут Агкуд б1іу Уаі Аза Агуд Нів Нів Нів Авп б1іу Агуд Тер сій Аї1їа 180 185 190
Акуд І1е с1у Акд Уаі Рпе б1у Авп Гуз Тук Гей Тук Ге с1у ТПкг Туг 195 200 205 зек ТПг біп біц б1ішц Аза Аза Нів Аїа Туг Авр Ії1е Аза Аза І1е с1ц 210 215 220
Тук Агкуд с1іу Іїе Авп Аза Уаі! ТБбг Авп Ррбе біц ІТецй бек ТПг Тук Уаї 225 230 235 240
Акуд Тер гец Агуд Рго Агуд А1ї1а ТПг Аза їецй ТПг Рго сбіп бій Рго Агд 245 250 255 век Авп бек І1е Мес сбіп Аза бек бек Авп Сув Гей Рго АвБп бій с1ц 260 265 270
Уаї бій Гей Бек Рпе Гей бек Рго Авп Рго Робе ТПг Уаії Авр Авр Іецй 275 280 285
Аза ТК Рго Гец Гуз біп бій Ппув Рре біп Акд сій Уаі Бек Ії1їе 5ег 290 295 300
Ркго Сув ТПг пуб бек бек бек Рго ТПг Аїа ІТецйп бек Гей Гей Нів Агд (516) 305 310 315 320 зек бек Уаії Рре Агуд біп Гей Уаії біцш Гув Авп бБег Авп бБег Іїе сіц 325 330 335 «2105 45 «211» 389 «212» ПРТ «213» біусіпе шах «4005 45
Мен Аїа Меє Меє пув сій Авп І1ї1е Іїе сіц Уаї бек Іец б1у Агд Аг4д 1 в) 10 15 біп Меє бек Меє ТП сбіц с1іу бій Рпе сбіп сіу ТБг Агуд бек Уа1ї Гув 20 25 30
Агуд Агуд Агуд Агкуд бі Уаі Аза Аїа Аїа Аза сіу бек с01у Авр Авр АвБп 35 40 45
Нів біп біп біп Гец Рго біп сіп сіц Уаії с1у бій АвБп ТПг Тк Уаї 50 55 бо
АвпоТПг ТБг пуб Агуд бек бек Агуд Роре Агуд біу Уаі Бек Агуд Нів Аг4д 65 70 75 80
Тер ТпПг с1у Агуд Туг біц Аза Нів Гец Тгр Авр Гув Гей бек Тгр Авп 85 90 95
ІТІе ТБкг біп ув Гуз Гув б1у пуб біп б1у Аї1а Туг Авр бій бій сіц 100 105 110
Зо зек Аїа Аїа Агуд Аї1а Тук Авр Гецп Аїа Аїа Гей Ппув Туг Тгр б1у Тіг 115 120 125 ек ТПг Рібре ТПг АвБп о Рпе Рго І1е б5ег Авр Туг сій пув бі І1е сіп 130 135 140
З5
І1е Меє біп Тс Меє Тпг Ггув біц бі Тук Гей Аза ТБбг Гей Агд Агд 145 150 155 160
Ппув бек бек с1іу РПпе бек Агуд сіу Уа1і Бек Ппув Туг Агуд сіу Уаї А1а 165 170 175
Акуд Нів Нів Нібв АвБп об1у Агуд Тер бій Аза Агуд І1е с1у Агкд Уаї РБе 180 185 190 с1у Авп Ппув Тук Гей Тук Гей сіу ТПг Тук бек ТПг біп бій сі Аї1а 195 200 205
Аза Агуд Аїа Туг АБр І1е Азї1а Аза чІ1е сій Туг Агуд сіу І1е Ні А1а 210 215 220
Уаї ТПпг Авп Рпе Авр Гей бек ТПг Тук Іїе пуб Тгр ІТец Гув Рго 5бег 225 230 235 240 сі1у б1у б1у ТПпг Гей біш Аза Авп Гец бі бек Нів Аза Аїа Іец сій 245 250 255
Нів біп пув Уа1і Аза бек Рго бек Авп Тут Аза Іешц ТПг бі сі 5ег 260 265 270 (516) пув бек Гец Аїа Гей Нів Авп бек РіПе Ріре бек Рго Туг бек Гей Авр 275 280 285 зек Рго Уаї пуб Нів бій Агуд Робе б1у АвБп Гув ТПг Тук біп Рпе б5ег 290 295 300 век Авп ГПув бек бек бек Рго ТПг Аїа Іїей сіу Гей Гей Гей Агкд 5ег 305 310 315 320 зек Гец Робе Агд біцш Іїейп Уаії біц Гув АвБп бек Авп Уаі бек с1у сіц 325 330 335 бі Авр Авр с1у бій Аїа ТПг Гпув Авр біп біп ТБбг сбіп І1е Аїа ТЕПг 340 345 350
Авр Авр Авр Гец біу б1у І1ї1е Рбе Робе Авр бек Рпе бБег Авр Ії1е Рго 355 360 365
Рпе УМаї Сув Авр Рго АвБп Агуд Туг Авр Тецп бій Гей біп бій Агд Авр 370 375 380
Тем Нів Бек І1е Ріе 385 «2105 46 «211» 389 «212» ПРТ «213» біусіпе шах «4005 46
Меє Уаї Меє Меє пув сій Авп І1е І1е сіц біц Гпув Іец б1у Агд 5ег 1 5 10 15
Зо біп Меє бек Меє Уаі сбішц с1іу бі Рпе сіп сіу ТБг Тгр с1у Уаї Гув 20 25 30
Аг Агуд Агуд Агд біц Уаі Аза Аза Аза Аза бек бек с1у Авр Авр Авп
З5 35 40 45
Нів Нів біп біп Гей Рго біп сіп сіц Уаї с1у бій АвБп бек бек Ше 50 55 бо зек ТПг ТПг Гув Агуд бек бек Агуд Рпе Акуд біу Уаії бек Агкуд Нів Агд 65 70 75 80
Тер ТпПкг с1у Агуд Тук біц Аза Нів Гей Тгр Авр ГТув Іецй бек Тгр Авп 85 90 95
ІТІе ТБкг біп ув Гуз Гув б1у пуб біп б1у Аї1а Туг Авр бій бій сіц 100 105 110 зек Аїа Аза Агуд Аза Туг Авр їец Аїа А1їа їей пув Туг Тер 01У Авп 115 120 125 ек ТПг Рібре ТПг АвБп о Рпе Рго І1е б5ег Авр Ту сій пув біш Іе сіц 130 135 140
І1їе Меє сіп ТПг Месє ТПг о пув бій сій Тук Гей Аї1а ТПг Гей Агд Агд 145 150 155 160
Ппув бек бек с1іу РПпе бек Агуд сіу Уа1і Бек Ппув Туг Агуд сіу Уаї А1а 165 170 175 60
Акуд Нів Нів Нібв АвБп об1у Агуд Тср б1іш Аза Агуд чІ1е с1у Агуд Уа1 Ре
180 185 190 б1у Авп Гув Тук Гей Тук Гей с1іу ТПг Тук бек ТПг сбіп біц сб1іц А1а 195 200 205
Аза Агуд Аїа Туг АБр І1е Аза Аїа І1е с1цп Туг Агуд с1у Ії1е Нів Аї1а 210 215 220
Уаї ТПпг Авп Рпе Авр Гей бек ТПг Тук Іїе пуб Тгр ІТец Гув Рго 5бег 225 230 235 240 сі1у б1у б1у ТПг Рго біш бій Авп Гей бі бек Нів Аїа Уаї Іец сій 245 250 255
Нів біп пув Гей Аїа бек Рго Бек Авп Тугк Аза Тей ТПгЕ сбіц сій 5ег 260 265 270
Тпув бек Гей Уаі Гей Рго Ап бек Рпе Іїе бек Рго Авр бБег Іецй Авр 275 280 285 зек Рго Уаї пуб Нів бій бек Роре б1у АвБп Гув ТПг Тук біп Рпе б5ег 290 295 300
Акуд Авпогпув бекг бек бек Рго ТПг Аїа Іїец бі1у Гей Гей Гей Агд 5ег 305 310 315 320 зек Гец Робе Агд біцш Іїейп Уаії біц Гув АвБп бек Авп Уаі бек с1у сіц 325 330 335
Зо сі Аза Авр сб1іу сій Уа1і ТБПг пув Авр о біп біп Рго біп Тецй А1їа 5ег 340 345 350
Авр Авр Авр Гец Авр о б1у І1е Рбе Робе Авр бек Рпе С1у Ар Ії1е Рго 355 3З6о 365
З5
Рпе УМаї Сув Авр Рго ТПг Агуд Туг АвБп Тец бій Гей біп бій Агд Авр 370 375 380
Тем Нів Бек І1е Ріе 40 385 «2105 47 «2115 392 «212» ПРТ 45 «213» Медісадо Екипсаєчіа «4005 47
Мен Аїа Меє гейш Іїе сій Авп бі Уа1! Меєсє Суб Гец б1у Гув бек сіп 1 5 10 15 50 Агдуд бек Меє Авр б1у Ппув сій УМаії Ппув б1у Аї1а Агуд Агуд Уа1і Туз Агд 20 25 30 біп Агуд Агуд Авр Аза Іїе Уа1 Рго пув Іїе с1у Авр Авр Аза АвБп Гу 55
Меє Аза сбіп пув біп Уаі1 с1іу бій Авп бек ТПг ТБг Авп оТБг бек Гув бо
Акуд Бек бек Агуд Роре Агуд бі1у Уаії б5екг Агуд Нів Агд Тгр ТПг с1у Агд (516) 65 70 75 80
Рпе сіц Аїа Нів Іецй Тгр Авр Гув5 ТІецй бек Тгр АвБп ТПг ТПг сбіп Гув 85 90 95
Тпув Кпув б1у Ппув біп б1у Аза Туг Авр бій біц бій бек Аїа Аїа Агд 100 105 110
А1їа Туг Авр Гец Аїа Аза Іїецп пуб Туг Тер б1у ТПг Бек ТПг Рпе ТЕГ 115 120 125
Авп оРпе Рго І1е бБег Авр Тук Авр Пув бій І1їе сбіц Іїе Меє Авп Тіг 130 135 140
Меє ТпПг пув бі бій Тук Гец Аїа ТПг Гей Агуд Агд Туб5 бек бек Ш1У 145 150 155 160
Рпе бБекг Агд біу Маії бек Ппув Туг Агкуд бі1у Уаі Аза Агу Нів Нів Нів 165 170 175
Ап ос1у Агд Тгр біц Аза Агуд І1е б1у Акд Уаі Рпе с1у Авп Ппув Туг 180 185 190
Тецп Тук Геп сі1у ТПг Тук Бек ТПг сбіп бій бі Аза Аз1а Агуд Азїа Туг 195 200 205
Авр чІ1е Аїа Аза І1е сій Тук Агуд с1іу І1їе Нів Аїа Уаії ТПг Авп Ріре 210 215 220 біц Гей бек бек Тук Іїе Ппув Тер Гей Ппув Рго біц ТПг ТПг ТПпгб с1и 225 230 235 240
Зо бі АБп о Нів сій бек біп І1їе Гей сбіп пув бій бек Агуд ТПг Іецй А1а 245 250 255
Ркго Рго Авп АвБп о бек ТПг Гей Гец біп бі бек Ппув Гей Гец Аїа Іей
З5 260 265 270 біп Ггув бек Рпе Рпе Іїе Рго Авп Авр Гей Авп бек ТПг біц Гпув біп 275 280 285
Сі бек бек Рпе бій Авп Гув Авп Тук Нів Рібе Гей бек Авп Гпув бег 290 295 300
ТПг Бек Рго ТПг Аїа Гец бег Гей Гей Гец Агд бек бек Гей Рпе Аг4д 305 310 315 320 біш ТГешп Гей сій Гпув Авп бек Авп Уаі бек біцш Авр бій Уаї ТПг Гув 325 330 335 бі бі1іп б1іп сбіп біп біп І1е ТПг о бБег Авр Авр сій Гец сіу с1у І1е 340 345 350
Рпе Туг Авр біу І1е Авр АБп І1їе Бек Рпе Авр Робе Авр Рго Ап 5ег 355 3З6о 365
Сув АвБп І1е біц Гей сбіп бій Акуд Авр Гецй Нів бек І1е бек Сув Гей 370 375 380
Тук біп Тук Гей Авп Рое сіу сіп 385 390 60 «2105 48
«211» 386 «212» ПРТ «213» Роришіцв Егіспосагра «4005 48
Меє Мес Меє чІ1е пув Авп обіц бій АБп Рго с1у Агд Агуд Агуд о1у Сув 1 5 10 15
І1е Аїа Авр бек біц А1ї1а сбіп Уаі Аза Агуд Сув Уаі Ггув Агд Агд Агд 20 25 30
Акуд Авр Рго Аїа І1е Уаі Аза Гец сСіу Бек Авр Авр АвБп біп бек сіп 35 40 45 біп біп Меє Рго сбіп пув біп ТПг Авр біп Тпг бБег Аза Аза ТПг ТЕП 50 55 бо
Уаї гув Агуд Бек Бек Агуд Ропе Агуд сіу Уаї бБег Агд Ні Агд Тгр ТПг 65 70 75 80 с1у Акуд Рпе біц Аїа Нів Гей Ткгр Авр пуб Гей бек Тгр Авп Уаї Тіг 85 90 95 біп гув Гпув Ппув б1у Ппув біп с1у Аїа Туг Авр бій біц біц бек А1а 100 105 110
Аза Агкуд Аїа Туг Авр Іїец Азї1а Аїа Іецй Гу Туг Тер с1у ТПг Бек ТЕПг 115 120 125
Рпе ТБПЕг Авп о Рбе Рго І1е бек Авр Тук б1іп Гув бій І1е бій І1е Меє
Зо 130 135 140 біп Тпг Уаї ТПпг пув бі бій Тує Ге Аїа Бек Гей Агуд Агд пуб бег 145 150 155 160 зек б1у Рібе бек Агуд сіу Уаії бек Пув Туг Агкуд сбіу Уаі Аїа Агуд Нів 165 170 175
Нів Нів Авп с1іу Агд Тгр біц Аза Агуд І1е с1у Агкд Уаі Рпе сС1у Авп 180 185 190
Тпув Тук Гей Тук Ге с1у ТПг Тугк Бек ТПг сбіп сій сій Аза Аїа Агд 195 200 205
Аза Туг Авр І1е Аїа Азї1а І1е сіц Туг Агкуд б1у Іїе АБп Аїа Уа1 ТЕГ 210 215 220
Авп оРпе Авр Гец бек ТПг Туг І1е Агд Тгр І1е Ппув Рго сіу Уа1 Аї1а 225 230 235 240
А1ї1а сбіп Аїа Аїа Аза АБп сій Гей сіп ТБг Уаї ТПг Авр Рго біп ТПг 245 250 255
Аза Аза ТПг Гец ТБПг Авр о ТБПг Туг ТП Рго Агд бій бі ТпкгЕ Гпув Рго 260 265 270 зек Гей Рібе Тец Рго АБп обіп Рпбе ТПг Аза Авр Туг Гей Авп бек Рго 275 280 285
Ркго Мпув Гец Авр Азїа Рпе біп АвБп АвБп І1е Рпе Уаі Авр Бек бек Авп (516) 290 295 300
Тпув ТП бек Бек Рго ТПг Аїа Гей бек Гей Гей Гей Агуд бек бек Уаї 305 310 315 320
Рпе Агд біц Іїец Уаії бій Гпув Авп бек АвБп Уаі Сув бі бі бій Тк 325 330 335
Авр с1у Авп біц І1е Гув АБп обіп Рго Меє Аї1а сіу Бек Авр Авр с1іц 340 345 350
Тук сб1іу с1у Іїе Рбе Туг Авр б1у Іїе с1у Авр І1їе Рго Рре Уа1ї! Туг 355 3З6о 365 зек Бек Авп Гув Тук бек Гей бі1у ІТецп бій бій Агуд бій Гей сбіп Ре 370 375 380
Уаї Іец 385 «2105 149 «2115 372 «212» ПРТ «2135» Вісіпив сошпштипів «4005 49
Меє сі Меє Меє Меє Уа1! пув Авп бій сій І1е бек б1у Агд Агд Аг4д 1 в) 10 15
Аза бек Уаії ТіПг біц бек б1п Аїа Тук Уаі Аз1а Агуд Сув Уа1і Гпув Агд 20 25 30
Зо Агуд Агуд Агуд Авр Азїа Аза Уаі Уаії ТПг Уа1ї с1і1у сб1у Авр Авр бек сіп зек Нів біп біп сбіп сбіп сіп біп сіп Рго бій сбіп сбіп Аїа Нів сіп бо
З5
І1е бек Аїа Аза ТПг ТПг оУаії Туз Агуд бек бек Агуд Туг Агд с1іу Уаї 65 70 75 80 зект Агуд Ні Агд Тгр ТПпг с1у Акд Рпе бій Азїа Нів Гей Тер Авр Гув 40 85 90 95
Тецп бек Тгр Авп Уаі ТПг сіп пув Ппув Ппув с1у Ппув сбіп с1у Аїа Туг 100 105 110 45 Авр бій бій бій бег Аза Аза Агуд Аїа Туг Авр ей Аза Аїа Геч Тув 115 120 125
Тук Тер с1у ТПг бек ТПг Роре ТПг Ап Рбе Рго І1е б5ег Авр Тук с1и 130 135 140 50 пув бі І1е сій І1їе Меє сіп ТПг о Уаі ТПг пув сій сбіц Туг Іецй А1а 145 150 155 160 зек Гей Агуд Агд Гув бек бек біу Рре бек Агуд сіу Уа1ї Бек Ппув Туг 55 165 170 175
Акуд с1і1у Уаі Аза Агд Ні Нів Нів Авп б1у Агд Тгр бій Аза Агд те 180 185 190 (516) с1у Акуд Маії Рпе с1у Авп Пув Тук Гей Тук Гей с1у ТПг Тук бек Тіг 195 200 205 біп 611 бій Аза Аза Агу Аза Туг АвБр Іїе Аїа Аза І1е сі Туг Агд 210 215 220 с1у І1їе АБп Аза Уаі ТБг Авп Рібе Авр Гей бек ТПг Туг І1е Агд Тер 225 230 235 240
Тец Ггув Рго сі Уаі Аїа Аїа сіп Уаі Аза Аїа Ап о сбіц Рго біп ТПг 245 250 255
Ууаї Аїа бі Бек Акуд Меє Гец Рго бБег І1їе Авп АБп Агд І1е Аїа Агд 260 265 270 бі бій бек Ппув Рго Бек Рпе Рпе бек Аїа ТПг Рго Рібе бек Гей Авр 275 280 285
Сув Тер бек Тук Рго Агд пув біп бі бі Рбе сіп Авп Агд Тс Рго 290 295 300
І1е ТПг Рко Сув бек пуб ТПг бек бек Ркго ТПг Аїа Гей бек Гей Гей 305 310 315 320
Тец Агкуд бек Бек Іїе Рпе Агкуд сій Ге Уаі1і сій пув Авп бБег Авп Уаї 325 330 335 зек біц Авр біц АБп бі сб1у бі бі ТБ Гув Авп обіп бег біп І1е 340 345 350 бі1у век Авр Авр бій Рпе сіу сіу Гей Рпе Туг сій Агд І1е С1у Авр
Зо 355 360 365
І1е Рго Ріе І1е 370 «2105 «ч6550 «211» 404 «212» ПРТ «213» УїсСів уіпітега «4005 50
Меє сіц Меє Меє Акуд Уаї Ппувз бек біц бій Авзп Тей б1у Агд Агд Аг4д 1 5 10 15
Меє Сув Уаі Аїа Авр Аїа сіц Аїа сіп сіу ТБг Агд Сув Уа1і Гув Агд 20 25 30
Акуд Агуд Агуд Авр о Рго Аза І1е Уа! ТПг Іец б1у Сув Авр Авр біп б5ег 35 40 45 біп бі1іп біп біп Гей Рго Авп о біп біп Рго Авр сіп Аїа бег Аза Аїа 50 з9 бо
ТПг Тпкг Уа1! Ппув Агуд бег бБег Акуд Рпе Агуд біу Уаії Бек Агуд Нів Аг4д 65 70 75 80
Тер ТПг с1у Акуд Рбе сбіц Аїа Нів Гей Тгр Авр Гуз РіПе бек Тгр Авп 85 90 95
Ууаї ТпПг біп пув пув пув с1у пув біп сіу Аїа Туг Авр б1п1 бій сі 100 105 110 60 зек Аїа Аза Агуд Аза Туг Авр їец Аїа А1їа їейп Ппув Туг Тгр С1у А1а
115 120 125 ек ТПг Рібре ТПг Авп о Рпе Рго Уаі! бек Авр Ту сій пув біш Іе сіц 130 135 140
І1е Меє біп бек Уаі ТПпг ув біц біцш Тук Гей Аїа Сув Гей Агд Агд 145 150 155 160
Ппув бек бек с1іу РПпе бек Агуд сіу Уа1і Бек Ппув Туг Агуд сіу Уаї А1а 165 170 175
Акуд Нів Нів Нібв АвБп об1у Агуд Тср бій Аза Агуд І1е с1у Агкд Уаї РБе 180 185 190 с1у Авп Ппув Тук Гей Тук Гей сіу ТПг Тук бек ТПг біп бій сі Аї1а 195 200 205
Аза Агуд Аїа Туг АБр І1е Азї1а Аза чІ1е сій Туг Агуд сіу І1е АБп А1а 210 215 220
Уаї ТПпг Авп Рпе Авр Гей бекг ТПг Туг І1їе Агд Тгр Тец АБп Рго Аїа 225 230 235 240
Аза Авп о Авп о Рго Уаі! Уаії Рго Нів сі бБег Агуд Аза Авп ТПг бій Рго 245 250 255 сіп Азїа Гец Аза бек бек АвБп Ріпе Уаї Гей бек бій бій бек бій Рго 260 265 270
Зо Пес Ріпе Рпе Нів бек Авп бек Рре ТПг Мес Авр Авр Тецй АБоп Рго Рго 275 280 285
Нів пув біп бій УМаії Рре бсіп ТПг пуб Ії1е Рго І1е бій Рго Сув бБег 290 295 300
З5
Ппув бек бек Бек Рго ТПг Аїа Гей сіу Гей Гей Гей Агуд бБег бек І1е 305 310 315 320
Рпе Агд біц Іїец Уаії бій Гпув Авп бБег АБп Аза Рго бій АвБр бій Тбг 325 330 335
Авр Аза сбіц Авр Тс Гув АБп обіп біп біп Уаї сіу Бек Авр Авр сіц 340 345 350
Тук б1у Іїе Рбе Туг Авр с1у І1е б1у Авр І1їе Рго Рпбе Уаї Сув Ркго 355 3З6о 365 век Авп біу Авр Агд АБп бій Тец біп бій Агкд Гей Рго Гей Рго Ре 370 375 380
ТПг Іїе Бек сбіп с1у Авп Рго Тук сіу ТБг Аза Уаї Іецй ТПг бек Меє 385 390 395 400 сіп бек І1е Авп «2105 51 «2115 378 «212» ПРТ (516) «213» Вгаспуродіцю даівваспуоп «4005 ч406м51
Меє Аїа пув біп Агуд ТБг Авр о бБег Аїа сіу ТПг Авр Аїа Аза А1а Уаї 1 5 10 15 біп Геп ТПг о пув Рго Ппув Агуд ТПг Агуд Гпув бек Уа1і1 Рго Агд Агд бій 20 25 30 зек Рго Бест Агд Агуд ТПг бек Аїа Туг Агуд бі1у Уаі ТПг Агуд Нів Агд 35 40 45
Тер ТПпг б1у Акуд Рбе сбіц Аза Нів Гецп Тер Авр Гув АБп о ТПг Тер Таг 50 55 бо біп бек біп Агуд Ппув Ппув пув с1у Агуд біп Уа1і1 Тук Гец с1у Аїа Туг 65 70 75 80 сі1іу б1у бій бій Аза Аза Аза Агу Аїа Туг Авр Гец Аїа Аїа Іецй Гу 85 90 95
Тук Тер с1у Агуд Авр ТПг Уаії Гей Авп Рібе Рго ІТецй бек Авп Туг Авр 100 105 110 бі бій Тер ув бі Меє сіц с1у сбіп Бек Агд бій сій Туг І1е с01У 115 120 125 зек Гечй Акуд Агуд пуб бек ТПг с1у Рпе бек Агуд сіу Уаї бек Тув Туг 130 135 140
Акуд с1і1у Уаії Аза Агуд Ні Нів Нів Авп б1у Гув Тгр бій Аза Агд Те 145 150 155 160
Зо б1у Акд Уаї Тук с1у Авп Ппув Тук Гей Тук Гей с1у ТПг Тук с1у ТПг 165 170 175 біп 611 бій Аза Аза Меє Аза Туг АвБр Іїе Аїа Аза І1е сіц Ні5 Агд
З5 180 185 190 сб1у Гей АвБп Аза Уаі ТПг Авп Рпе Авр Уа1і бек Агуд Туг І1е Авр Тгр 195 200 205
Нів Агд Агд Гей Сув Агуд Авр Гец б1у Авр Ап І1е І1е ТПг Рго ГІец 210 215 220
ТПЕ Авп Ркго ТПг Уаї Авр Тїец сій сіц Аза Месє Азїа б1у Авр АБр Авр 225 230 235 240
Авр с1у біп Робе Іец ІТец Рго бБег біп Азїа ТПг ТПг Рго Рго Бек ТЕПг 245 250 255 зек Бек Аїа Іец біу Гецп Гей Іец ІТец бек Рго Агуд Гей Ппув сіц Уаї 260 265 270
І1Іе сіц сіу бек б1у А1ї1а Азїа 5ег Аїа Меє Аза Аза бек ТПг бек сіц 275 280 285
Ззек бек Аїа Аїа сіу Бек Рго Рго Рго бек Тгр бек бек бек бек Сув 290 295 300 зек Рго бек Рго Рго бек Рго бек Нів бек Рго Рго бій ТПг біп сіп 305 310 315 320 60 пув біп біп сбіп біп бі Тук с1у Аїа Бек Аїа Аїа Аза А1а Агд Сув
325 330 335 зек Рпе Рго Авр Авр Уаії Сіп ТПг Тук Рпе с1іу Сув бій Авр с1у Сув 340 345 350
Аа сій Уаї Авр ТП Рре Гей Рбе сб1у Авр Іїеий бек Аїа Туг Аза Аї1а 355 3З6о 365
Рко Меє Рре біп Рпе бій Іецп Іец Авр Уаї 370 375 «2105 52 «211» 416 «212» ПРТ «213» Огула васіуа «4005 Д 52
Меє Аза ув Агуд Агкуд бег Авп о біу бій ТБг Аза Аза Аза Бек бек Авр 1 5 10 15
Авр бек бек бек біу Маії Сув сіу сіу сіу сбі1у сбі1у с1у сій Уаї с1ц 20 25 30
Рго Агд Агд Агд біп ув Агуд Рго Агуд Агуд бБег Аза Рго Агд АвБр Сув 35 40 45
Ркго Бек біп Агд бек бек Аїа Робе Агуд біу Уаі ТПг Агуд Нів Агд Тер 50 55 бо
ТП б1у Акуд Рбе біц Аза Ні Ггец Тгр Авр Гув Авп оТПг Тер АБп бій
Зо 65 70 75 80 зек біп бек Гуз пув б1у Агуд біп сб1у А1ї1а Туг Авр б01у бій бій Аї1а 85 90 95
А1ї1а Аїа Акуд Аза Туг Авр Гей Аза Аїа Гецй Ппувз Туг Текгр б1у Нів Авр 100 105 110
ТПг Уаі1 гей Авп Рібе Рго Тїец бек ТПг Туг Авр біц б1цп Іеп Гув с1и 115 120 125
Меє сі с1у біп Бек Акуд сій біц Туг І1е сб1у бек Гей Агд Агд Гув 130 135 140 зек бек біу Роре бек Агуд сіу Уаії бек Гув Туг Агуд сіу Уаі Аїа Аг4д 145 150 155 160
Нів Нів Нів Авп біу Гпув Тгр б1п Аза Агу І1ї1е с1у Акд Уаі Рое с1Уу 165 170 175
Авп опув Тук Тей Тук Гей с1у ТПг Ту Аїа ТПг сіп бій сій Аїа А1а 180 185 190
Ууаї Аза Туг Авр Іїе Аїа Аза І1е сіц Ні Акуд сіу Гец АвБп А1їа Уаї 195 200 205
ТПЕ Ап Рпе Авр І1е АБп Іецй Туг Ії1е Агд Тгр Тук Нів сі1у Бек Сув 210 215 220
Акуд бБетг бек бесг Аї1а Аї1а Аї1а Аза ТПг ТПг І1е сій Авр Авр Авр Ріє (516) 225 230 235 240
Аза сій Аїа І1ї1е Аї1а Азї1а Аза Гец біп сб1у Уаі АвБр бій біп Рго 5ег 245 250 255 зек Бек Рго Аїа ТПг ТПг Агд біп Тїец біп ТПпг Аза Авр Авр Авр Авр 260 265 270
Авр Авр Гец Уаі! Аза біп Гей Рго Рго біп Гей Агуд Рго Гей Аїа Агд 275 280 285
А1а Аза бек ТПг бек Рго Ііїіе сіу Гей Гей Гей Агуд бек Рго ТУув РіПе 290 295 300 пув бі І1е І1е сіш біп Аїа Аза Аза Аза Аїа Аїа бек бек бег 01У 305 310 315 320 зек бек бБекг бек бек бек ТПг Авр бек Рго бек бБег бБекг бек бек бег 325 330 335 зек Гей бек Рго бек Рго Гей Рго бек Рго Рго Рго сіп сіп біп Рго 340 345 350
ТПг Уа1 Ркго Ппув Авр Авр біп Туг Авп Уаі Авр Меє бек бек Уаії Аїа 355 3З6о 365
А1ї1а Аза Акуд Сув бек Рре Рго Авр Авр Уа1і біп ТПг Тук Рпе Сс1Уу Іецй 370 375 380
Авр Авр Авр біу Рпе бі1у Тук Рго біц Уаі Авр ТПг Рпе Гей Рпе С1У 385 390 395 400
Зо
Авр Гей с1у Аїа Туг Азї1а Азїа Ркго Меє Рпе сбіп Рпе бій Гей Авр Уаї 405 410 415 «2105 53
З5 «211» 440 «212» ПРТ «213» вогодпит рісої1ог «4005 53
Меє Аза Агуд Рго Акуд пуб Авп Аза с1іу ТБг Авр біц Авр АБп о Рго АвБп 40 1 в) 10 15
Аза Аза ТПг сіу Уа1ї бек Маї ТПг с1у Ппув Рго Рго пуб Гец Гув Агд 20 25 30 45 Уа1 Агуд Агд Ппув с1у бій Рго Агуд бій бек бек ТПг Рго Бек біп Агд зек Бек Аїа Туг Агуд бі1у Уаі ТПг Агуд Нів Агуд Тер ТБг б1у Агд РБе бо 50 бі Аза Ні Гей Тер Авр пуб Авр Аза Агуд Авп о сбіу бБег Агд АвБп Гу 65 70 75 80 пув б1у пув сбіп с1у Аїа Туг Авр Авр біц біц Аза Аза Аза Агу Аза 55 85 90 95
Нів Авр гей Аза Аїа Гец пуб Туг Тер біу Рго Аїа ТПг Уаї Гец Авп 100 105 110 (516) Рпе Рго їем Сув сб1у Тук Авр бій бій Гей Агкуд біц Меє сій Аїа сі1іп 115 120 125
Рго Агд біц біц Туг І1е сі1у бек ІТец Агуд Агуд Агуд Бек Бек с1у Ріе 130 135 140 зек Акад сіу Маї бек Ппув Туг Акуд сіу Уаі! Аза Агуд Нів Нів Нів Авп 145 150 155 160 б1у Акд Тгр сій Аза Агуд І1ї1е с1у Агуд Уаі Гей с1у Авп Пув ТУук Іей 165 170 175
Тук Ггеш с1іу ТБПг Робе Аза ТПг сіп сіц бі Аза Аза Уаї А1а Туг Авр 180 185 190
І1їе Аїа Аза І1е б1іцш Ні Агуд б1і1у Іїец АБп Аї1а Уаі ТПг Авп Робе Авр 195 200 205
ІТ1е бек Нів Тук Уаі АБп Нів Тер Ні Агуд Нів Сув Нів с1у Рго 5ег 210 215 220
Авр Авр бек Те бі1у Маії Уаі Уаії Авр Авр Уаі Аї1а Аза Рпе сіп Іецй 225 230 235 240
Рго Авр Авр Тец Рго бій Сув Рго Аї1а Аза Аї1а І1е сіу Уа1і сіц сіц 245 250 255
ТПг ТпкЕ сіу с1у Авр Аїа біц Рбе Ні Авп біу біц біц с1у Тук Іецй 260 265 270 біп Нів Нів ТПг бек с1іу Рго Рпе с1іу Аїа сбіп сбіп біп Гец Рго Авр
Зо 275 280 285 бі ТП сб1у Аза гейш Аїа Аза Нів сіп Меє Аза Рго Ап бБег бек А1а 290 295 Зоо
Тем Авр Мес Уаї Гей біп бек Рко Пув Рпе Ппув бій Гей Меє сіц сіп 305 310 315 320
Уаї Бек Аїа Аїа Аза Аза Аза Уаі Аза бек біц бек бек І1е С1у ЩУ 325 330 335 зек Меє бек бек бек бек Рго бек Рго бек Гей бек бек Робе бек Рго 340 345 350 зек Рго Пес біп Гей Рго бек Рго бек бек Гей бек бек Робе бек Рго 355 360 365
Ззек бек Ркго Гей біп сбіп Рго бек Рго Рго Гей біп сбіп Рго бій Ріре 370 375 380
Уаї б1іц б1у Аїа Рго Аїа А1їа Агуд Суб Бек Рпе Рго Авр Авр Уа1ї сіп 385 390 395 400
ТПЕ Рпе Рбе Авр Робе біц Авп о біц бег Авр Меєсє бек Рпе Меє Туг Аїа 405 410 415 бі Маї Авр ТПг Рпе гейш Рпе сіу Авр Гей сіу Аза Туг Аза Аїа Рго 420 425 430
І1е Рбе Нів РіПе Авр Іецй Авр Уаї 60 435 440
«2105 ч54 «211» 408 «212» ПРТ «213» йеа шаув «4005 54
Меє Аза Агуд Рго Акуд пуб Авп о біу с1у ТБг Авр біц Авр АвБр Аї1а АвБп 1 5 10 15
Аза Аза ТПг сіу Аїа ТПпг о б1у Ппув Ркго ГПув Ппув Геип Меє Гув Агуд Аїа 20 25 30
Акуд Агуд пуб бег біц бек Рго бБег Рго Агд бек бек Аза Туг Агд Щ1У 35 40 45
Уаї ТПгЕ Агуд Нів Акуд Тер ТП б1у Агуд Рпе сій Аза Нів Гей Тер Авр 50 55 бо
Ту Авр Аї1а Агуд Авп обіу бек Агуд Бек Ппув Ппув с1у Ппув біп Уаї Туг 65 70 75 80
Тец б1у Аї1а Туг Авр АвБр бій Авр Аїа Аза Аза Агуд Аза Нів Авр ' Іей 85 90 95
Аза Аза Ггецп пуб Туг Тер б1у Рго Аїа б1у ТПг Уаі Гей Авп Робе Рго 100 105 110
Тец бек с1у Ту Авр бі бій Агуд Агуд бі Меє сій с1у біп Рго Агд 115 120 125
Зо сі бій Тук Уаі Аїа бек Тей Акуд Агуд Агуд Бек бек с1у Рпбе А1а Аг4д 130 135 140 сбі1у Маї Бек Ппув Туг Агуд сіу Уаі Аза Агуд Нів Нів Нів Авп сб1у Агд 145 150 155 160
З5
ТЕр бішц Аза Агуд І1е с1у Агкуд Уаї Гец б1у Авп Гув Тук Гей Тук Іей 165 170 175 сбі1у ТПпг Тук Аза ТПг біп бій бі Аза Аїа Уаі1 Аїа Туг Авр Меє А1за 180 185 190
Аза І1їе сіц Нібв Агкуд б1у Рпе Ап Аїа Уа! ТПг АвБп Рпе Авр І1е 5ег 195 200 205
Нів Тук Іїе Авп Нів Тер Нів Агуд Нів Сув Нів сб1у Рго Сув Авр 01Уу 210 215 220 зек Гец біу Аїа Меє Авр Уаі А1їа Рго АБп Уаії бек Ггец біц Іецй Авр 225 230 235 240
Тецп Іїецп бій Сув Рго Аїа ТПг Уаії с1у Ггеш с1у Гей сіц біц Тбг Тс 245 250 255 б1у Авр Авр сій Рпе Нів Авп Агуд бій Авр Туг ІТец б1у Нів Гечип РБІе 260 265 270 сбі1у Маї біп сбіп Гей Рго Авр сі Меє сіу Рго Рго Аїа Нів біп Меє 275 280 285 (516) А1а Рго Аза бек бек Аза Гей Авр Гей Уаі! Гей сіп бек Рго Агд РІГе 290 295 300 пув бій Гей Меє сіп сбіп Уаі бек Аза Аїа сіу Аза бек біц ТБгЕ АвБп 305 310 315 320 сіу біу Бек Меє Агуд бек бек Рго Бек ТПг бек Гей Сув Бек РПпе 5ег 325 330 335
Рго Бек Ркго Гей бі Гей Рго бек Рго Рго ІТецй сбіп сбіп Рго ТПбг с1ц 340 345 350
Рпе Іїе Авр б1у Аза Рго Рго Агуд Сув Бек Рпе Рго Авр Авр Уаі1ї! сбіп 355 3З6о 365 зек Рпе Рбе Авр Рпе Гув Авп Авр АвБп Авр Меє бек Рпе Уа1! Туг Аї1а 370 375 380 бі Маї Авр ТПг Рпе гейш Рпе сіу Авр Гей сіу Аїа Туг Аїа Рго Рго 385 390 395 400
Меє Рпе Авр Рпе Авр Іецй Тук с1ци 405 «2105 щМО55 «211» 304 «212» ПРТ «213» Агарідорвів 1угага «4005 5:55
Мен АїТа пув Уа1і бек Агуд Агуд Бек Ппув пуб ТПг І1е Уаі б1ї1 АБр с1и 1 5 10 15
Зо
ІТІе Бек Авр Гув ТПг Аза бек Аза бек бій Аза Аза бек Іїе Уа1 Ріє 20 25 30
Тпув бек Гпув Агуд Пув Агуд пув бек Рго Рго Агуд Авп Аза Рго Рго біп
З5 35 40 45
Акуд Бек бек Рго Туг Агуд бі1у Уаі ТПг Агуд Нів Агуд Тер ТПг с1у Агд 50 55 бо
Тук біц Аїа Нів Гей Тгр Авр Гув Авп бек Тер АБп о біц ТП біп ТБбг 65 70 75 80
Тпув Кпув б1у Агуд біп Уа1 Туг Іїе с1у Аїа Туг Авр біц біц сбіц А1а 85 90 95
Аза Аза Агуд Аїа Туг АБр Іїеп Аїа Аза ІТецй Гпув Туг Тгр б1у Агд Авр 100 105 110
ТПЕ Ггеш гей Авп Ріпе Рго Іїец Гей Іїе Туг Авр біцш Авр Уаї Гув с1и 115 120 125
Меє сій с1у біп Бек пув бій бі Туг Іїе сіу бек Гец Агд Агд Гу 130 135 140
Ззек бек б1іу Рібе бек Агуд сіу Маї бек Пув Туг Агуд сіу Уаі Аїа Агд 145 150 155 160
Нів Нів Нів Авп б1іу Агд Тгр біц Аза Агуд І1е с1у Агуд Уаі Рпе 0Щ1У 165 170 175 60
Авпопув Тук Гец Тук ІТец б1у ТПг Ту Аза ТПпг сіп бій бій Аза Аї1а
180 185 190
І1е Аїа Туг АвБр І1е Аза Аза чІ1е сій Туг Агуд с1у Гей Ап Аїа Уаї 195 200 205
ТПЕ Ап Рпе Авр Уаї бек Агд Тукг Гей Авп Рго Авр Аї1а Аза АБр 5ег 210 215 220
ТПув Рго І1ї1е Агуд Авп Авр Рго бій бек Бек Авр Авр Ап Гув Сув Рго 225 230 235 240 пув бек бій сій І1їе І1їе бій Рго Бек ТПг бек Рго сбіц Аза І1е ТЕПг 245 250 255
ТПЕ Агуд Агуд бек Рібе Рго Авр АБр І1їе сіп ТПг Туг Рпе с1у Сув с1іп 260 265 270
Авр Бек сі1у Ппув Іец Аїа ТПг біц біц Авр Уаі Іїе Рпе с1іу с1УуУ Іец 275 280 285
АвпобБек РіПе І1е АвБп Рго б1у Робе Туг АБп бій Рпе Авр Туг с1у Рго 290 295 300 «2105 56 «211» 308 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 МЯ56
Мен АїТа пув Уа1і бек с1іу Агкд Бек Ппув Пув ТПг І1е Уаі АБр АБр с1и
Зо 1 в) 10 15
ІТІе Бек Авр Гув ТПг Аза бек Аза бек бій бек Аза бек ІїІе Аїа Гей 20 25 30
ТПг Бек Ппув Акуд Гув Агуд пуб бек Рго Рго Агкуд АБп Аїа Рго Геч сіп 35 40 45
Акуд Бек бек Рго Туг Агкуд бі1у Уаі ТПг Агуд Тер ТПпгс с1у Агуд Тук 1 50 55 бо
А1їа Нів Гей Тгр Авр Гув АвБп обекг Тгр АБп Авр ТПг о біп ТП пув Гув 65 70 75 80 б1у Акд сбіп с1у Аза Туг Ар бій бій біш Аза Аза Аза Агд Аїа Туг 85 90 95
Авр тей Аїа Аза Іецйц Гу Тук Тгр б1у Агуд Авр ТПг Гей Гей Авп Ріе 100 105 110
Рго Гпеп Ркго бек Туг Авр бій Авр Уаі Гуз біц Меє сій с1у біп 5ег 115 120 125 пув бій бій Ту Іїе сіу Бек Гей Агуд Агуд пув бек бек біу Робе 5ег 130 135 140
Акуд с1іу УМаї бек пув Туг Агуд біу Уаі Аза Агуд Нів Нів Нів АвБп 1У 145 150 155 160
Акуд Тер біц Аза Агуд І1е сб1у Акуд Уаі Рпе б1у АвБп Ппув Тук Гей Туг 60 165 170 175
Тец б1у ТПпг Туг Аза ТПг сіп сій бій Аза Аза І1їе Аза Туг АБр І1е 180 185 190
Аза Аза ч1І1е сіц Туг Агкуд б1у Гец АвБп Азї1а Уаі ТПг Авп Рпе Авр Уаї 195 200 205 зек Агуд Туг Тец Авп Рго АБп Аї1а Азїа Аза АвБр ув Аза Авр бБег Авр 210 215 220 зек Ппув Рго І1е Агуд Бек Рго бек Акуд бій Рго бій бек бек Авр Авр 225 230 235 240
Авпопув бек Рго КГув бек бій біц Уаі І1е бій Рго Бек ТПг бек Рго 245 250 255 бі Маї І1їе Рго ТПг Агуд Агуд бБесє Рпе Рго Ар Авр І1е біп ТПг Туг 260 265 270
Рпе сіу Сув біп Авр бек бі1у Гпув Те Аї1а ТПпг сій бій Авр Уа1 Те 275 280 285
Рпе Авр Сув РіПе Авп о бек Туг І1е АвБп Рго б1у Рпе Туг Авп бій Ре 290 295 300
Авр Тук 1У Ркго 305 «2105 557 «2115 303
Зо «2125 ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 57
Мен АїТа пув Уа1і бек с1іу Агкд Бек Ппув Пув ТПг І1е Уаі АБр АБр с1и 1 5 10 15
З5
ІТІе Бек Авр Гув ТПг Аза бек Аза бек бій бек Аза бек ІїІе Аїа Гей 20 25 30
ТПг Бек Гпув Агуд Гпув Агд Гув бек Рго Рго Агд АБп Аза Рго Іец сіп 35 40 45
Акуд Бек бек Рго Туг Агуд бі1у Уаі ТПг Агуд Нів Агуд Тер ТПг с1у Агд 50 55 бо
Тук біц Аїа Нів Гей Тгр Авр Гув Авп бек Тер АБп АвБр ТПг біп ТБг 65 70 75 80
Тпув Кпув б1у Агкуд біп Уа1 Тук Гей с1у Аїа Туг Авр біц біц сбіц А1а 85 90 95
Аза Аза Агуд Аїа Туг АБр Іїеп Аїа Аза ІТецй Гпув Туг Тгр б1у Агд Авр 100 105 110
ТПЕ Ггеш гей Авп Рібе Рго Тецй Рго бек Тут Авр біц Авр Уаї Гув с1и 115 120 125
Меє сій с1у біп Бек пув бій бі Туг Іїе сіу бек Гец Агд Агд Гу 130 135 140 (516) Ззек бек б1іу Рібе бек Агуд сіу Маї бек Пув Туг Агуд сіу Уаі Аїа Агд 145 150 155 160
Нів Нів Нів Авп с1іу Агд Тер бій Аза Агуд І1е сб1у Акд Уаі Рпе Аза 165 170 175
ТПЕ біп бій бій Аза Азїа І1їе А1їа Туг АвБр І1е Аїа Аїа те сі Туг 180 185 190
Акуд с1у Гец АвБп Аза Уаі! ТПг Авп Ррбе Авр Уаії бек Агуд Тукг Гей Авп 195 200 205
Рго АвБп Аїа Аза Аза АБр Гув Аза Авр бек Авр бек Кпув Рго Ііе Агд 210 215 220 зек Рго Бест Агд бій Рго бій бек бек Авр Авр Авп о ГПув бек Рго Гув 225 230 235 240 зек бій біц Маї І1е бій Рго бек ТПг бек Рго біц Уаї І1е Рго Тіг 245 250 255
Агуд Агуд бек РібПе Рго Авр Ар І1їе сіп ТПг Тукг Рпе с1іу Сув біп Авр 260 265 270 зек с1іу Мпув ІТец Аї1а ТПпг бій біц Авр Уаії І1їе Рпе Авр Суб Робе Авп 275 280 285 зек Тук І1е Авп Рго б1у Рпе Туг АБп бій Рпе Авр Туг с1у Рго 290 295 300 «2105 58
Зо «2115 332 «212» ПРТ «213» Агарідорвів 1угага «4005 58
Меє сій бій Іїе ТПг Агуд пуб бек Ппув пуб ТПг бек Уаі б1п АБп сі
З5 1 в) 10 15
ТпПг б1у Авр Авр біп бег Аза ТПг бек Уаї Уаї Уаї ув А1ї1а Гув Агд 20 25 30 40 цув Агуд Агуд бек біп Рго Агуд Авр Аза Рго Рго сіп Акуд бек бек Уаї
Нів Агуд с1іу Уа1і ТБг Агуд Ні Агуд Тер Тс б1у Агуд Тує бій Аза Нів бо 45
Тецп Тер Авр Гпув Авп бек Тер АБп обі ТПг біп бек пув Мпув б1у Агд 65 70 75 80 біп б1у Аїа Туг Авр бій бій Авр Аїа Аза Аза Агуд Аза Туг Авр 'Іей 50 85 90 95
Аза Аза Ггецйц пув Туг Ткгр б1у Агд Авр ТПг І1їе Гей Авп Ропе Рго Іецй 100 105 110 55 Сув Авп Тук біц бій Авр І1е Пув біц Месє бій бек біп бек Ппув сі1ц 115 120 125 бі Тук І1ї1е сіу Бек Гей Агуд Агуд Ппув Бек бек сіу Робе бег Агд 01Уу 130 135 140 60
Уаї Бек Ппув Туг Акуд сіу Уаі Аїа Ппув Нів Нів Ніб Авп б1у Агд Тгр
145 150 155 160 бі Аза Агкуд ч1І1е с1у Агкуд Уаі1і Рпе сіу Авп Ппув Тук Гей Тукг Гец 01У 165 170 175
ТПг Туг Аза ТПг сбіп біц біц Аза Аза І1е Аза Туг АБр Ії1е Аза Аїа 180 185 190
ІІе сіц Туг Агуд б1у Іїецй АвБп Аїа Уа! ТПг АвБп Рпе Авр І1їе 5Бег Аг4д 195 200 205
Тук Меє пув Гей Рго Уаії Рго бій Авп Рго І1е АБр Аї1а Аз1а АБп АвБп 210 215 220
Пес Гей бі бек Рго Нів бек Авр бек бек Рго Рпе І1е АБп Рго ТіПг 225 230 235 240
Нів бій бек Авр Гец бег біп бек біп бБег бек бек Авр Авр Авп Авр 245 250 255
Авр Акуд пуб ТБг Тув Тецй Гей пуб бек бек Рго Гей АБп Аїа бій сіц 260 265 270
Ууаї Іе с1у Рго Бек ТПг Рго Рго бій Іїе Аза Рго Рго Агд Агд 5бег 275 280 285
Рпе Рго біц Авр І1е біп ТПпг Тук Рпе сб1у Сув біп Авп бек с1у ГПув 290 295 300
Зо Тем ТПг ТЕ бі бій Авр Авр Уаі! І1їе Рпбе с1у Авр Гей Авр бек Ріє 305 310 315 320
Тецп ТПгЕ Рго Авр Рпе Тук бек бій Гей Авп Авр Сув 325 330
З5 «2105 59 «211» 328 «212» ПРТ «213» Тпе11цйпдієїЇїа Ба1орпіїа 40 «4005 59
Мен Аїа пув Уа1і бек сбіп Агд Бек Ппув пуб ТПг І1е Уаі АБп АБр с1и 1 5 10 15
ІТІе Бек Авр Гуз Куб Аза Уаі Аїа Уаі Аза бек Уа1і Бек Бек бек Аїа 45 20 25 30
Рпе Гец Ппув бек Гув Агуд Гув Агд Гув Тецй Рго Рго біп АвБп Аїа Рго
Рго біп Акуд бек бек бек Туг Агуд сіу Уаі! ТПг Агуд Нібв Агуд Тер ТОг 50 55 бо б1у Акуд Тук бій Аїа Нів Гей Тгр Авр ув Авп о Сув Тер АвБп о біц Тс 65 70 75 80 біп ТпЕ Ггув Ппув б1у Агуд біп Уаі Тук Ггеш с1у Аїа Туг Авр біц бій 85 90 95 біш Азї1а Аза Аза Агу Аза Туг Авр еп Аїа Аїа Гей пув Туг Трр 01У 60 100 105 110
Акуд Авр о ТБг Гец Тец АвБп о Рпе Рго Тецй Рго ТПг Ту бій бій Авр Уаї 115 120 125 пув бі Меє сі с1у Нів бек Агуд бі бі Туг Іїе сіу бек Іец Агд 130 135 140
Акуд пув бек бек біу Рпе бек Агуд біу Маї бек Ппув Туг Агд сіу Уаї 145 150 155 160
А1а Агуд Нів Нів Нів Авп с1у Агд Тер бій Аза Агд чІ1е с1у Аг Уаї 165 170 175
Рпе с1у Авп Гуз Тук Тецп Тук Іец біу ТПпг Туг Аза ТПг сбіп сіц сіц 180 185 190
Аза Аза Агуд Аїа Туг АБр І1е Аїа Аза І1е сій Туг Агуд о1у Гей Авп 195 200 205
А1їа Уа1 ТБЕгЕ Авп Рбе Авр Уаї бБег Агд Тук Гей АвБп Гей Рго бій б5ег 210 215 220 ув Авп о Рго бек Аза Аїа Аїа АБп о Нів Гей Рго Авр біц бБег Авр Туг 225 230 235 240
ТУкг Авр бек Меє Рго Уаі Агуд АБп о Рго АвБп о Нів бій Рго Агд бек Рго 245 250 255
Авр с1у біп ТБг бек бек бій Авр АвБп Авр Туг ТПг пув ТП бій сій 260 265 270
Зо
ТПгЕ гей Авр Рго сбіц Аза І1е Рго бБег Агд Агд бек Рпе Рго Авр Авр 275 280 285
ІТІе сбіп ТПг Тук Рпе б1у Сув біп Авр бек б1у Ппув Гей Аїа ТПг сіц 290 295 300 бі Авр Уаї І1їе Рпе сіу сіу Рпе Авп бек Рпе Іїе Авп Рго біу РБПе 305 310 315 320
ТУкг Авп Авр Ропе Авр Туг Аза Рго 325 «2105 60 «2115» 345 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 60
Меє Рпе Іїе Аїа Уа1 сій Уаї Бек Ркго Уаії Мес біц АвБр І1е ТПг Аг4д 1 5 10 15 біп бек Гпув Ппув ТПг бек Уаі бій АвБп бій Тпг с1у Авр Авр біп б5ег 20 25 30
Аза ТПг бек Уаї Уаї Іец Ггув Аїа їув Агд ув Агд Агуд Бек біп Рго 35 40 45
Ак Авр Аза Рго Рго біп Агуд бБег бек Уаі Нів Агуд сіу Уаі ТПг Аг4д 50 55 бо (516) Нів Агд Тер ТБПг б1у Агуд Тук бій АТїа Нів Гей Тгр Авр ГПув Ап 5ег 65 70 75 80
ТЕр Авп бій ТБг біп ТБ Гуз пув с1у Агд біп Уаї Тук ІТеп С1у Аїа 85 90 95
ТУкг Авр бій бій Авр Аза Аза Аза Агуд Аїа Туг Авр Гей Аза А1а Гей 100 105 110
Тпув Тук Тер с1у Агуд Авр ТПг Іїе Гей Авп Рпе Рго Гей Суб Авп Туг 115 120 125 бі бій Авр чІ1е пув біш Меє сій бек біп бек ув бій бій Туєк Ше 130 135 140 бі1у бек Гей Агуд Агуд Ппув бек бек с1іу Рпе бек Агкгуд біу Уаї бек Гув 145 150 155 160
Туг Акуд сіу УМаії Аїа пуб Нів Нів Нів Авп с1у Агд Тер біц Аїа Агд 165 170 175
Іїе с1у Акуд Маії Рпе с1іу Авп Ппув Тук Темп Туг Гецп с1у ТПг Туг А1а 180 185 190
ТП біп бій біц Аза Аза І1е Аза Туг АБр Іїе Аїа Аза І1е сіц Туг 195 200 205
Акуд сб1у Гей Авп Аза Уаі! ТПг Авп Робе Авр І1е бек Агуд Тук Гец Гув 210 215 220
Тецп Рко Уаії Рго бій Авп Рго Іїе Авр ТПг Аїа АБп АБп Тецп Те Сс1и
Зо 225 230 235 240 зек Рго Нів бек Авр Тецйп бек Рго Ропе І1е Гув Рго АвБп Нів сій бег 245 250 255
Авр Гей бек біп бек біп бек бек бек іш Авр Авп Авр Авр Агд Був 260 265 270
ТПЕ Ппув Гей Ггец пуб бек бек Рго Гец Уаі Аї1а сій сій Уа1і Ше ФЩ1У 275 280 285
Ркго Бек ТПг Рго Рго б1п І1їе Аза Рго Рго Агд Агуд Бек Рпе Рго сіц 290 295 300
Авр І1е сбіп ТПг Тук Рпе б1у Сув біп АБп бек с1іу Ппув Гей ТПг Аїа 305 310 315 320 бі бій Авр Авр Уаі Іїе Рпбе сіу Авр Гей Авр бек РіПе Гей ТПг Рго 325 330 335
Авр Рпе Туг бек бій Гей Авп Авр Сув 340 345 «2105 61 «2115» 299 «2125 ПРТ «213» біусіпе шах «4005 61
Меє АїТа пув Ппув бек біп Мпув Бек Гей пуб Авп Авп Авп АБп АвБп о АвБп 1 5 10 15 60
ТПг ТпПкг Агуд пуб Агуд ТБг Агуд пуб бетг Уаі Рго Агд Авр бек Рго Рго
20 25 30 біп Акуд бек бек Іїе Туг Агуд сіу Уаі ТПг Агуд Нів Агд Тер Тс о1У 35 40 45
Акуд Тук біц Аза Нів Іец Тгр Авр Гув АвБп о Сув Тгр АБп бій бек сіп 50 55 бо зек Мпув пув б1у Акд біп Уаії Тук Іец б1у Аї1а Туг АвБр АБр бій с1іц 65 70 75 80
Аза Аза Аза Агуд Аза Туг Авр Гец Аїа Аза Іїецп Гув Тугє Тер 0Ш1у сіп 85 90 95
Авр ТПг Іїе Тей Авп Рре Рго Гей бек Авп Туг біц біцш Ппув Геч Туз 100 105 110 бі Меє сій сіу сбіп Бек пув бій бі Туг Іїе сіу Бек Гей Агд Агд 115 120 125
Ппув бек бек с1іу РПпе бек Агуд сіу Уа1і Бек Ппув Туг Агуд сіу Уаї А1а 130 135 140
Акуд Нів Нів Нібв АвБп об1у Агуд Тср б1іш Аза Агуд чІ1е с1у Агуд Уа1 Ре 145 150 155 160 б1у Авп Гув Тук Гей Тук Гей сіу ТПг Туг Аза ТПг сбіп біц б1іц А1а 165 170 175
Зо А1ї1а Аї1а Аза Туг Авр Меє Аїа Аза І1їе сій Туг Агуд с1у Гей АБп А1а 180 185 190
Уаї ТПпг Авп Рпе Авр Гей бекг Агуд Туг Іїе Авп Тгр Рго Агд Рго Гу 195 200 205
З5
ТПЕ біц бій Авп Нів біп Авп о ТБПЕг Рго бек Авп біп Авп Уаії Авп бег 210 215 220
Авп Аза сій Гец біц ІТец б1у бек Аїа бек Авр бій І1е ТПг сій сіц 225 230 235 240 сбі1у Маі А1ї1а Агуд Бек Бек бій бек бій Бек Авп Рго бБег Агд Агд ТЕГ 245 250 255
Рпе Рго бій Авр І1е сбіп ТПг І1е Рпбе бій АвБп АБп о біп Авр бек 01Уу 260 265 270
ІТІе Туг І1їе біц АвБп Авр Авр ТІ1е І1е Рпе с1у Авр Геи сіу Бек Ріє 275 280 285 б1у Аза Рго Іїе Рпе Нів Рпбе бій Гей Авр Уаї 290 295 «2105 562 «2115 393 «212» ПРТ «213» Вгаспуродіцю аЗі5Баспуоп «4005 62
Меє АТа пув Рго Акуд пуб Авп о бБег Азїа Аз1а Аз1а АБп АвБп АвБп Авп о Авп 60 1 в) 10 15
Авр Ап обекг ТПг АвБп Аз1а АБп АБп Азїа Уаі Аза сій Аза Аза Аза Аї1а 20 25 30
Авр Уаі1 Агуд Аза пуб Ркго Гув Гув Агуд ТПг Агуд пув бек Уаії Рго Агд 35 40 45 біц бек Рго Бек біп Агуд бек Бек ІїІе Туг Агкуд сіу Уаї ТБПг Агд Нів 50 55 бо
Агуд Тер Тпг б1у Агкуд Рбе сій Аїа Нів Гей Тгр Авр Гуз Авп бек Тгр 65 70 75 80
Авп обіц бек біп Авп оГув Гув біу Ппув біп Уаї Тук Геш с1у Аїа Туг 85 90 95
Авр бій бій бі Аза Аза Аза Агуд Аза Туг АБр їеп Аза Аїа Гей Гув 100 105 110
Тук Тер с1у Рго Авр ТПг І1е Гей Авп Рібе Рго Іецй бек Уаії Туг Авр 115 120 125
Авр бій Ггец пув біц Меє бій сі1у біп б5есг Акд бій сій Ту ІШе Щ1У 130 135 140 зек Гечй Акуд Агуд пуб бек бек с1у Рпе бек Агуд сіу Уаї бек Тув Туг 145 150 155 160
Акуд с1і1у Уаії Аза Агд Ні Нів Нів Авп б1у Агд Тгр бій Аза Агд те 165 170 175
Зо б1у Акд Уаії Рпе с1у Авп Ппув Тук Гей Тук Гей с1у ТПг Туг Аїа ТЕПг 180 185 190 біп 611 бій Аза Аза Меє Аїа Туг Авр Меє Аїа Аза І1е сі Туг Агд
З5 195 200 205 сб1у Гей АвБп Аза Уаі ТПг Ап Рпе Авр Гей бег Агуд Туг І1е Гув5 Тгр 210 215 220
Тем Агуд Рго сіу сіу с1і1у Маії Авр б5ег Аї1а Азїа Аїа Аїа Аїа А1а Агд 225 230 235 240
АвпоРго Нів Рго Меє Іец А1ї1а сСіу Іешп Аї1а ТПпг сбіп бій бій Гей Рго 245 250 255
Аза І1ї1е Авр Нів Іец Іец Авр сіу Меєсє Азїа Рпе сіп сіп Нів с1Уу Гей 260 265 270
Нів бек бек бек Аїа Аї1а Аза Аї1а Аза Аїа сіп бій Роре Рго Гей Рго 275 280 285
Рго Аїа Гец сіу Нів Аза Рго ТПг ТПг бек Аїа Гей бБег Гей ГІецй ГІец 290 295 300 біп бек Рго Ппув Рпе Пув бій Меє І1е сб1іп Агуд ТПг бек Аїа Аї1а с1ц 305 310 315 320
ТПг ТпПкг ТБг ТБг АТа ТБг Тс Тс бБег бекг бек бек бек Рго Агд Рго 325 330 335 60
Аза Аза бек Рго біп Сув бек Робе Рго б1п Авр І1е сбіп ТПг Робе Ріє
340 345 350 сб1у Сув Авр Авр сіу Уаі1і сіу Уаі сіу Уаі1 с1у Аїа Уаї с1у Тук ТПг 355 3З6о 365
Авр Уаі1 Авр сіу Іецшп Рпе Рпе сіу Авр Іїецй бек Аза Туг Аїа Бек 5ег 370 375 380
ТПг АТа Рпе Нів Рпе сіц Гей Авр Гей 385 390 «2105 563 «2115 379 «212» ПРТ «213» Огула васіуа «4005 63
Меє АТа пув Рго Акуд пуб Авп обег ТПг ТБбг ТБг АвБп о ТБПг бек бек бег 1 5 10 15 сіу Маі Аї1а Аза Аза Аза Аїа Аїа Аза А1їа Уаї Ппув Ркго Гув Агд Тіг 20 25 30
Акуд пув бек Уаі Рго Агкуд бій бек Рго бек біп Агуд Бек Бек Уа1! Туг 35 40 45
Акуд с1і1у Уаії ТБг Агуд Ні Агуд Тер Тс б1у Агд Рпе сіш Аїа Нів Іец 50 55 бо
ТЕр Авр ув Авп обетг Тгр АвБп обіц бек біп Авп о Гув Гув б1у Гув сіп
Зо 65 70 75 80
Уаї Тук геш с1у Аза Туг Авр Ар бій сбіц Азїа Аза Аза Агуд Азїа Туг 85 90 95
Авр Геп Аїа Аза Гецй Ппув Тук Тер с1у Рго Авр ТПг Іїе Гей Авп Ріе 100 105 110
Ркго Гей бБег Аїа Тук бі с1у біш Іец Гув бій Меє сі с1у сбіп б5ег 115 120 125
Акуд бій бі Туг І1е б1у бек Гец Агуд Агуд Гув бек Бек с1у Рібе 5ег 130 135 140
Акуд с1іу УМаї бек пув Туг Агуд біу Уаі Аза Агуд Нів Нів Нів АвБп 1У 145 150 155 160
Агуд Тер біц Аза Агуд І1е б1у Акуд Уаії Рре б1у АвБп Ппув Тук Гец Туг 165 170 175
Тем біу ТПгЕ Ту Аїа ТБПг сбіп біц бій Аза Аза Меє Аїа Туг Авр Меє 180 185 190
Аза Аза чІ1е сіц Туг Акуд б1у Гец АБп Азїа Уаї ТПг Авп Рібе Авр Іей 195 200 205 зек Агуд Туг І1е Гув Тер Гей Агд Рго б1у Аза АБр с1у Аїа с1у Аї1а 210 215 220
Аза сбіп Авп о Рго Нів Ркго Меє Гец сіу Аїа Гей бек Аза сбіп Авр Іей (516) 225 230 235 240
Рго Аїа І1е АвБр ІТецшц АвБр Аї1а Месє Аза бек бек Рпе сіп Нів Ар 0Щ1У 245 250 255
Нів с1іу Аїа Аїа Азїа Аза Аза Аза сСіп Гей Іїе Рго Аза Агуд Нів 5ег 260 265 270
Тец б1у Нів ТПг Рго ТПг Тпг бек Аїа Гей бек Гей Гей Гец Сіп б5ег 275 280 285
Рго Ппув Рбпе Ппув біц Меє Іїе бій Агуд ТПг бек Аїа Аїа сій ТПгЕ Тіг 290 295 300
ТПг ТрПг бек бек ТПг ТПг ТОг обБег бек бек бек Рго бек Рго Рго сіп 305 310 315 320
Аза Тпг пув Авр о Авр об1у Азїа бек Рго біп Сув бек РПе Рго Гув5 Авр 325 330 335
І1е сбіп Тс Тук Рпе сб1у Сув Аї1а Аїа бій АБр сС1у Аза Аза с1у Аї1а 340 345 350 сі1у Тук А1ї1а Авр Уаі Авр сіу Гей Рібе Рпе сіу Авр Гей ТПг Аїа Туг 355 3З6о 365
А1їа бек Рго Аїа Рпе Ні Рпе сій Гечп Авр Іецй 370 375 «2105 64 «211» 398
Зо «2125 ПРТ «213» вогодпит рісої1ог «4005 64
Меє АТа пув Рго Акуд пуб Авп бБег Аза Аза Аза АБп АвБп АБп АвБп бег 1 5 10 15
З5 зек Бек Авп біу Аїа б1у Авр їец ТПг Рго Агуд Аїа Ппув Рго Ппув Агд 20 25 30
ТПгЕ Агуд пув бек Уаі Рго Агд сій бек Рго ТПг біп Агуд бек бек Уаї 35 40 45
Туг Агуд сіу Уа1і ТБг Агуд Ні Агуд Тер Тс б1у Агд Рпе сій Аза Нів 50 55 бо
Тем Тер Авр Гув Авп бек Тгр Авп о біц бек біп Авп Тув Ппув о1Уу Гув 65 70 75 80 біп Маї Тук Геш с1у Аїа Туг Авр АБр бій бій Аза Аза Аза Агд А1а 85 90 95
Тук Авр гец Аза Аїа Гец пуб Туг Тер б1іу Рго Авр ТПг І1е Гей Авп 100 105 110
Рпе Рго Аїа бек Аїа Ту бій сб1у біш Меє гув сіу Меє бі с1у сіп 115 120 125 зек Агд біц біц Тук І1е сі1у бек ІТец Агуд Агуд Ппув Бек Бек с1у Ріе 130 135 140 (516) зек Акад сіу Маї бек Ппув Туг Агуд сіу Уаі! Аза Агуд Нів Нів Нів Авп 145 150 155 160 б1у Акд Тгр сій Аза Агуд чІ1ї1е с1у Агуд Уаі Рпе с1іу Авп Пув ТУукг Іей 165 170 175
Тук Гецп с1у ТПг Туг Аїа ТПг сбіп бі бій Аїа Аїа Мес Аїа Тукг Авр 180 185 190
Меє Аза Аїа Іїе сій Туг Акуд сіу Гей Авп Аїа Уа! ТПг Авп Рпе Авр 195 200 205
Тецп бек Агуд Туг Іїе Ппув Тер Гей Агуд Рго сіу Аїа сіу сіу Меє А1за 210 215 220
Аза Аза Аїа Азїа Аза Аза б1іп АвБп о Рго Ні Рго Меє Ге с1іу с1Уу Іец 225 230 235 240
Аа сіп біп Гец Іец Гей Рго Рго Рго А1ї1а Авр ТПг ТПг ТПг ТК Авр 245 250 255 сі1у Аїа сб1у Аїа Аза Аза Рібе сіп Нів Авр Нів Нів с1іу Аїа с1іцп Аї1їа 260 265 270
Рпе Рго Гец Рго Рго Агуд ТПг бек Іец б1у Нів ТПг Рго ТПг ТпПг 5ег 275 280 285
А1ї1а гей бек Ггец Іец ІТец біп бек Рго Гув Рпе пув бі Меє І1е сіп 290 295 300
Акуд Тк бій бек біу ТПг ТП ТБг Тс Тс Тс ТбПг ТП бек бек Ієей
Зо 305 310 315 320 зек бек бек Рго Рго Рго ТПг Рго бек Рго бек Рго Рго Агд Агуд бег 325 330 335
Рго Аза Рго ТПг біп Рго Рго Уаі сіп Аїа Аїа Аза Акуд АБр А1їа 5ег 340 345 350
Рго Нів біп Агд б1і1у Рпе Рго біц Авр Уаії Ссіп ТПг Рпе Рбе с1у Сув 355 3З6о 365 бі Авр ТПпг Аза с1у Іїе Авр Уаі сіш Аза Ггец Роре Рпе с1у Авр Гей 370 375 380
Аза Аза Туг Аза ТПг Рго Азї1а Рібе Ніб Рпе біц Меє Авр Гей 385 390 395 «2105 65 «2115» 396 «212» ПРТ «213» йеа шаув «4005 65
Меє Аза Агуд Рго Акуд пуб Авп бБег Аза Аза Аза Аза АБп АБп АБп АвБп 1 5 10 15
Бек Авп ТПг ТБг АБп Аза с1у Авп Аїа Аїа Уаї Авр Гей Аза Аїа Агд 20 25 30
Уаї Ппув Рго Ппув Акуд ТБПг Агуд пув бек Уаі Рго Агд бій бек Рго 5бег 35 40 45 60 біп Акуд бек бек Уаі Туг Агуд сіу Уаі ТПг Агуд Нів Агд Тер Тс о1У
50 55 бо
Акуд Рбе сіц Аза Нів Іецй Тгр Авр Гув АвБп бек Тгр АБп бій бек сіп 65 70 75 80
Авпопув пув біу Ппув біп Маї Тук Іец б1у Аї1а Туг Авр Ар бій Авр 85 90 95
Аза Аза Аза Агуд Аза Туг Авр їец Азїа Аза їецп Гпув Туг Тер СШ1уУу Рго 100 105 110
Авр ТПг Іїе Гец АвБп Робе Рго Аїа бег Аїа Ту бі Аза сій Гей Гув 115 120 125 сій Меє сіц с1у біп бек Агкгуд біц бій Туг Іїе сіу бек ІТей Агд Агд 130 135 140
Ппув бек бек с1іу РПпе бек Агуд сіу Уа1і Бек Ппув Туг Агуд сіу Уаї А1а 145 150 155 160
Акуд Нів Нів Нібв АвБп об1у Агуд Тср б1іш Аза Агуд чІ1е с1у Агуд Уа1 Ре 165 170 175 б1у Авп Гув Тук Гей Тук Гей с1іу ТПг Тук с1у ТбПг сбіп біц б1іц А1а 180 185 190
А1їа Меє Аїа Туг Авр Меє Аза Аїа чІ1е сій Туг Агкуд с1у Гей Авп Аї1а 195 200 205
Зо Уа1ї1 ТрПЕ Авп Рпе Авр Тецй бБег Агуд Тук Іїе Пув Тгр Гей Агд Рго Щ1У 210 215 220
Аза с1у Аї1а Аза біп АБп о Рго Нів Рго Меє Іецй Авр с1у Гей Аїа сіп 225 230 235 240
З5 біп Гешп Гей Гей бек Рго сіц с1у ТПг Іїе Авр сіу Аїа Аза РоПе Ні 245 250 255 біп бі1іп біп Нів Авр Нів Агуд сбіп сбіп сб1іу Аїа Аза сіц Гей Рго Іей 260 265 270
Рго Рго Агуд Аїа бек ІТецй бі1у Нів ТПг Рго ТПг ТПпг б5Бег Аїа гешй 0Щ1У 275 280 285
Пес Гей Ге біп бек бек Пув Рбе Гув біц Меє І1їе сіп Агуд А1а 5ег 290 295 300
Аза Аза сій бек біу ТПг ТПг ТБг о Уа1ї ТП Тс ТбПг бБег бек бек б5ег 305 310 315 320 ек біп Рко Рго ТПЕ Рго ТПг Рго ТПг Рго бек Рго бек Рго Рго Рго 325 330 335
ТПЕ Рго Ркго Уа1! сіп Рго Аїа Агуд Авр Аза бек Рго біп Сув Бек Ріе 340 345 350
Рго біц Авр І1е біп ТПпг Рпе Рпе сб1у Сув бій Авр Уаі Аїа сі1у Уаї 355 3З6о 365 (516) сі1у Аїа сб1у Маії Авр Уаі Авр Аїа Тей Рпе Рпе с1іу Авр Гецп Аїа Аї1а 370 375 380
Тук Аїа Бек Рго Аїа Рбе Ні Рпе сіц Меєс Авр Іей 385 390 395 «2105 66 «211» 362 «212» ПРТ «213» біусіпе шах «4005 66
Меє Аїа пуб Ппув бек біп Гецп Агд ТПг біп Гув АБп АвБп Аза Тібг Авп 1 5 10 15
Авр Авр І11е АвБп Гец АБп Аза ТПг Авп о ТБг Уаії І1е ТПг пув Уаї Гув 20 25 30
Акуд ТЕ Агуд Агуд бБег Уаі Рго Агуд Авр бек Рго Рго біп Агуд бек бег 35 40 45
ІТІе Туг Акуд біу Уаі ТПг Агуд Ні Агуд Тер ТПпгс с1у Агуд Туг бій Аїа 50 55 бо
Нів Гей Тер Авр пуб Нів Суб Тгр Авп о біц бек біп АвБп Гпув пув Щ1У 65 70 75 80
Агуд біп с1у Аїа Туг Авр АБп о біц бій Аза Азїа Аза Ні Аїа Туг Авр 85 90 95
Тец Аї1а Аїа Гей пув Туг Тер с1у біп Авр ТПг І1їе Гец АвБп Рое Рго 100 105 110
Зо
Тецп бек Авп Туг Гей Авп бій Гей Ппув бі Меє сій с1іу біп 5ег Агд 115 120 125 бі бій Ту І1їе сіу Бек Гей Агуд Агуд Гпув бек бек сіу Рібе 5ег Агд 130 135 140 сб1у І1е бек Ппув Туг Агуд сіу Уаі Аза Агуд Нів Нів Нів Авп сб1у Агд 145 150 155 160
Тгр біц Аїа Акуд І1е с1у Ппув Маії Рпе с1у Авп Пув Тук Гецп Тук ГІеч 165 170 175 сбі1у ТПпг Тук Аза ТПг біп бій бій Аза Аза ТПг АїТа Туг Авр Іецй А1а 180 185 190
Аза І1їе сіц Туг Агуд б1у Гей АвБп Азїа Уа! ТПг Авп Рпе Авр Гей 5ег 195 200 205
Акуд Тут Іїе пуб Тер Гей Гув Рго АвБп АБп о ТПг Авп о бБег Авп Авп Авр 210 215 220 біп І1е бек Іїе Авп Гей ТПг Авп о чІ1е Авп Авп Авп Сув ТБг АвБп о Авп 225 230 235 240
Рпе І1їе Рго АвБп Рго Авр сіп бій сбіп бій Уаї бек Рпе Робе Нів Авп 245 250 255 біп Авр бек Гей Авп Ап ТПг Іїе Уаі бій бій Аза ТБПг Гец Уаї Рго 260 265 270 60
Нів біп Рго Агуд Рго Аїа бек Аза ТПг Ггец Аїа Іец б1іцп Іецй Іец Іецй
275 280 285 біп бек бек Ппув Рпе Ппув біц Меє Уаі бі Меє ТПг бек Уаї Аїа Авп 290 295 300
Тецп бек ТПпг сіп Меє бій бек Авр біп Гей Рго сіп Сув ТПг Робе Рго 305 310 315 320
Авр Нів І1е біп ТП Тук Рпе біц Тук б1ц Авр Бек Авп Гпув Тук сіц 325 330 335 бі б1у Авр Авр Гей Гей Рпе Ппув Рпе бек бій РібПе бек бек І1е Уаї 340 345 350
Рго Рпе Тук Нів Сув Авр сій Рре сій 5ег 355 3З6о «2105 67 «2115 370 «212» ПРТ «213» біусіпе шах «4005 67
Меє АїТа пув Ппув бек біп Гец Агуд ТПг біп ув Авп о Авп Уа! ТПг Тпс 1 5 10 15
Авп о Авр о Авр о Авп о Авп о Тец Авп о Уа! ТПг Авп о ТпПг оУа1і ТПг Тпкг Гпув Уаї 20 25 30
Тув Агуд ТпПг Агуд Агуд Бек Уаі Рго Агуд Авр бек Рго Рго біп Агд 5бег
Зо 35 40 45 зек І1їе Тут Агд біу Маї ТПг Агуд Ні Агуд Тер ТПпс с1у Агуд Тук 1 50 55 бо
А1їа Нів Гей Тер Авр пуб Нів Сув Тер Авп о біц бек біп Авп опув Гув 65 70 75 80 б1у Акд біп Уаі Тук Ггеш сіу Аза Туг Авр АвБп сбіц біц Аза Аїа А1а 85 90 95
Нів Аїа Туг Авр Гец Аїа Аза Гей пув Туг Тгр б1у біп Авр ТПг І1е 100 105 110
Тец Авп о Рпе Рго Гей бек Авп Туг Гей Авп бій Гей пув біц Меє сій 115 120 125 бі1у бі1іп бек Агд бі бій Ту Іїе сіу Бек Гец Агд Агд Гув бек бег 130 135 140 с1у Рре бек Агуд с1іу І1їе бек Гув Туг Агд сіу Уаі Аза Агуд Нів Нів 145 150 155 160
Нів Авп с1іу Агд Тгр біц Аза Агуд чІ1е с1у Ппув Уаі Рпе с1у Авп Гув 165 170 175
Тук Гей Тук Гей сіу ТПг Ту Аїа ТБПг біп біц б1ц Аза Аза ТПг Аїа 180 185 190
Туг Авр гей Аїа Аза І1е сб1іцп Туг Агкуд с1іу Гей Авп Аза Уаї ТБг Авп 60 195 200 205
Рпе Авр Гец бег Агуд Тук І1ї1е пуб Тер Гей Гув Рго Авп Авп Авп Та г 210 215 220
Ап о Авп оУаії І1їе АвБр Авр біп І1е бек Іїе А5п Гей ТПг Ап ІТ1е Авп 225 230 235 240
Авп о Авп о Авп о Авп оСув ТБПг Авп обекг РПе ТПг Рго бек Рго Ар біп сіц 245 250 255 сіп бій Азїа бек Рпе Рібе Нів АвБп о Гпув Авр бек Гей Авп АБп ТПгЕ Те 260 265 270
Ууаї бій бі Уа1і! ТПкг Ггец Уаї Рго Нів сіп Рго Агд Рго А1їа бег Аа 275 280 285
ТПг Бек Аїа Гей сіц Гец ІТец ІТец сіп бек бек Гув Рпе Гув сі Меє 290 295 300
Меє біц Меє ТПг бек Уаі! Аза АвБп Гей бек бек ТіПг біп Меє сій 5ег 305 310 315 320 біц Гей Ркго сіп Сув ТПг Рпе Рго Авр Нів Іїе сіп ТПг Тук Рое с1іц 325 330 335
Тук біц Авр бек АБп Агуд Тук бі бій с01у Авр Авр Гей Меє Рпе Тувг 340 345 350
Рпе Авп біц Рібе бек бек І1ї1е Уаі! Ркго Рпе Тугк сіп Сув Авр бій Ре 355 3З6о 365
Зо січ бег 370 «2105 68
З5 «2115» 356 «212» ПРТ «213» Медісадо Єкипсаєчіа «4005 68
Меє АїТа пув Ппув бек сбіп Мпув біп І1їе б1п Гув Авр Авр АБп Аїа 5ег 40 1 в) 10 15
Авп о Авр о Авп о Авр о Авп о Тец Авп о Рго бек АвБп о ТПг Уаі ТПг ТПг Гуз Аїа 20 25 30 45 цув Агуд ТЕ Агуд пув бек УМаі! Рго Агд ТПг о бек Рго Рго біп Агд 5ег зек І1їе Тут Агд біу Маї ТПг Агуд Ні Агуд Тер ТПпс с1у Агуд Тук 1 бо 50
А1їа Нів Ггецп Тгр Авр Гув Авп о Сув Тер Авп о біц бек біп Авп о Гув Гу 65 70 75 80 б1у Акд біп с1іу Аїа Туг Авр АБп бій бій Тпг Аза Аза Нів Аїа Туг 55 85 90 95
Авр тей Аїа Аза Іецйц Гу Туг Тер с1у біп Авр ТПг Іїе Іїе Авп Ріє 100 105 110 (516) Рго Гей бек АвБп о Тук біп пув бій Гей І1ї1е сбіц Меє сій бек біп 5ег 115 120 125
Акуд бій бі Туг І1е б1у бек Гей Агуд Агуд Гув бек Бек с1у Рпе б5ег 130 135 140
Агуд сіу Уаї бек Ппув Туг Агуд сіу Уаі Аза Агуд Нів Нів Нів Авп с1Уу 145 150 155 160
Акуд Тер біц Аза Агуд І1е сб1у Ппув Уаі Рпе б1у АвБп Ппув Тук Гей Туг 165 170 175
Тец б1у ТПпг Туг Аза ТПг сіп сій бі Аза Аза ТПг Аза Туг Авр Меє 180 185 190
Аза Аза чІ1е сіц Туг Акуд б1у Гец АБп Азїа Уаї ТПг Авп Роре Авр Гей 195 200 205 зек Агуд Тук І1е Гпув Тер Гей пуб Рго АБп АвБп Авп Авп Авп Авр Авр 210 215 220
Авп оАвп опув бек АвБп о І1їе Ап Гей Сув Авр І1е АБп бек Авп бек 5бег 225 230 235 240
Аза Авп Авр о бБег Авп бек Авп о біц біц Тецй бій Рпе бек Гей Уа1 Авр 245 250 255
Авп обіц І1е бек Іец АвБп АвБп бег І1е АвБр бій Аза ТПг Гей Уа1! сіп 260 265 270
Рго Агуд Рго ТПг бек Аза ТПг бек Аїа Іїецй бій Гей Гей Гей біп б5ег
Зо 275 280 285 зек Мпув Рпе Гуз біц Меє Уаії біц Меє Аза бек Меє ТПг бек Авп Уаї 290 295 300 зек ТПг ТБг Гей біц бек Авр біп Гей бек біп Суб Аїа Робпе Рго Авр 305 310 315 320
Авр І1е сбіп Тс Тук Рпе бій Тук біц Авп Рпе Авп Авр ТПг Меє Ієец 325 330 335 біц Авр Гей Авп бек Іїе Меє Рго ТПг Рпе Нів Туг Авр Рое сбіц 01Уу 340 345 350
Аз1а сі Уаї Геч 355 «2105 659 «2115 347 «212» ПРТ «213» сСіусіпе шах «4005 69
Меє Аїа пув сбіп біп Тбг Нів пув І1їе Авп Аза бек ТПг АБп АвБп АвБп 1 в) 10 15
І1е бек ТБПг ТПг АБп о ТПг оУаї ТПг Аїа Гуз Уаї пуб Агуд ТПг Агд Агд 20 25 30 зек Маії Рго Агд Авр бек Рго Рго біп Агуд бек бек Іїе Туг Агд Щ1У 35 40 45 60
Уаї ТПпг Агуд Нів Агуд Тер ТБг с1у Агуд Туг біц Аза Ні Іецй Тгр Авр
50 55 бо
Тув Авп оСув Тер Авп обі бек біп Авп о Гпув пув с1у Агд біп с1у А1а 65 70 75 80
Туг Авр Авр сій біц Аза Аза Аза Нів Аза Туг АБр Тецй Азї1а Аза Гей 85 90 95
Тпув Тук Тер с1у біп Авр ТПг Іїе Гей Авп Рпе Рго Гей бек ТПг Туг 100 105 110 біп АвБп бій Гей пув бі Меє сі с1у біп бек Акгд сбіц біц Тугє І1е 115 120 125 сіу бек Ггецп Агуд Ак Пув бек бек біу Рре бек Акуд біу Уаї Бек Гув 130 135 140
Туг Агуд сіу Уа1і Аза Агкуд Нів Нів Нів Авп б1у Агд Тгр б1п1 Азїа Агд 145 150 155 160
ІІе с1у Акд Уаі Рпе б1у Авп Гуз Тук ІГецйп Тук Ге с1у ТПг Туг Аї1а 165 170 175
ТП біп бій бій Аза Аза ТБПг Аза Туг Авр Месє Азїа Аї1а І1е сіи Туг 180 185 190
Акуд сб1іу Маії Авп Аза Уаі! ТП Авп Рбе АвБр ІТецй бек Агуд Тук І1їе Гув 195 200 205
Зо Тер Гецш Ппув Рго Авп о АвБп Авп АвБп о ТОПг Тпг о Уа1! Авп о бБег Авп Гечцп І1е 210 215 220
Авр Бек Авп о Рго АвБп о Сув бій ТБг Авп о Рре ТПг бек Авп бБег Авп о сіп 225 230 235 240
З5 біп бі1іп б1у Рпе Авп Рпе Рпе Авп Агуд біп бій бек Робе Авп АБп бій 245 250 255 бі Аза Азїа Меє ТПг біп Рго Агуд Рго Аїа Уаі Аза ТПг бек Аїа Іей 260 265 270 сб1у Гешп Гей Гей біп бек бек Ппув Рпе пув біц Меє Меє сіц Меє Тіг 275 280 285 зек Аїа ТПг Авр Гей бек ТПг Рго Рго бек бій бек бій Гей Рго 5ег 290 295 300
Сув ТПЕ Рпе Рго Авр Ар Іїе сіп ТПг Тук Рпе сій Сув біц Авр 5ег 305 310 315 320
Нів Агуд Тук с1і1у біц б1у Авр Авр І1е Меє Рре бек Уаі Гей Ап 0щ1У 325 330 335
Рпе Маї Ркго Ркго Меє Рпе Нів Суб Авр Авр РІе 340 345 «2105 70 «211» 351 «212» ПРТ (516) «213» сСіусіпе шах «4005 70
Меє Аїа пув сбіп біп ТБбПг Нів бі І1їе Авп Аза бек ТПг Авп Авп Авп 1 5 10 15
ІТ1е Авп ТПг Тк Гуз Тс о Уаї Тс ТБ Гуз Уаї Гпув Агуд ТПг Агуд Агд 20 25 30 зек Маії Рго Агд АвБп бек Рго Рго біп Агуд бек бек Ії1е Туг Агкд 01Уу 35 40 45
Уаї ТПгЕ Агуд Нів Акуд Тер Тк б1у Агуд Тук бій Аїа Нів Гей Тер Авр 50 55 бо
Тув Авп оСув Тер Авп обі бек біп Авп о Гпув Гуз б1у Акд б1іп сС1у Аїа 65 70 75 80
Туг Авр Авр сій біц Аза Аза Аза Нів Аза Туг АБр Тецй Азї1а Аза Гей 85 90 95
Тпув Тук Тер с1у біп Авр ТпПг Іїе Гец Авп Рібе Рго ІТецй бек ТПг Туг 100 105 110 біп АвБп бій Гей пув бі Меє сі с1у біп бек Акгд сбіц біц Тугє І1е 115 120 125 сіу бек Ггецш Агуд Ак Пув бек бек с1іу Рпе бек Агуд сіу Уаї бек Тув 130 135 140
Туг Агуд сіу Уа1і Аза Агкуд Нів Нів Нів Авп б1у Агд Тгр б1п1 Азїа Агд 145 150 155 160
Зо
ІІе с1у Акд Уаі Рпе б1у Авп Ппув Тук Гей Тук Ге с1у ТПг Туг Аї1а 165 170 175
ТП біп бій бій Аза Аза ТБПг Аза Туг Авр Месє Азїа Аї1а І1е сіи Туг
З5 180 185 190
Акуд сб1у Гей Авп Аза Уаі! ТП Авп Ррбе Авр ІТец бек Агуд Тук І1їе Гув 195 200 205
Тер Гецш Ппув Рго Авп о Авп Авп АвБп о Авп опув Уа1і Авп обБег Авп Авп Гей 210 215 220
І1е Уаї бек І1е Рго АБп Сув Аза ТПг АвБп о Рпе ТПг Рго Авп бБег Авп 225 230 235 240 біп бі1іп біп с1у Рпе Авп Рпе Рпе Авп бек біп бій бек Рібе АвБп Авп 245 250 255
Авп о біц бі Аза Аза Меє ТПг біп Рго Агд Рго Аїа Аза Аїа ТПг 5ег 260 265 270
А1їа гей сі1у Пец Іец Іїец біп бек бек Гув Рпе пув бі Меє Меє сіц 275 280 285
Меє ТПпг бек Аїа І1їе Авр Гей бек ТПг Рго Рго бек бій бек сі ГІеч 290 295 300
Ркго Рго Сув ТПг Рбе Рго Авр АвБр І1е біп ТПг Тує Рпе бій Сув с1ц 305 310 315 320 60
Авр Бек Нів Агкд Тук бі1у бій б1у Авр Авр І1е Меє Рпе бек сі Гей
325 330 335
Ап осіу РібПе Уаії Ркго Ркго Меє Рбе Нів Суб Авр АБр Рпе сій Аїа 340 345 350 «2105 71 «2115 353 «212» ПРТ «213» Роришіцв Егіспосагра «4005 71
Мен АїТа пув Гей бек сбіп Мпув Авп ТПг пуб Авп о ТБг Аза бек АБп АвБп 1 5 10 15
Авп о АвпоТВг ТБг Авп обіу Маї ТБПг Гуз Уаі пув Агуд ТБг Агуд Агд 5егс
Уаї Ркго Агуд Авр Бек Рго Рго біп Агуд бек бек І1е Туг Агд Сі1у Уаї 20 ТПЕ Агуд Нів Акуд Тегр Тк б1у Агуд Тугк бій Атїа Нів Гей Тгр Авр Гуз бо
Авп оСув Тер Авп обіц бек біп Авп о Гув Гув б1у Агд сбіп с1у Аїа Туг 65 70 75 80 25
Авр Авр сбіц біц Аза Аза Аза Нів Аїа Туг Авр Гец Аїа Аїа Іецй Гу 85 90 95
Тук Тер с1у Рго біц ТБПг І1е Гей Авп Рібе Рго Іецй бек ТПг Тук сіп
Зо 100 105 110
Авп о біц Ггец пув біц Меє бі с1у сбіп Бек Агуд бій сій Сув І1е с1У 115 120 125 35 зек Гечй Акуд Агуд пуб бек бек с1у Рпе бек Агуд сіу Уаї бек Тув Туг 130 135 140
Акуд с1і1у Уаії Аза Агд Ні Нів Нів Авп с1у Агд Тер бій Аза Агд те 145 150 155 160 40 б1у Акд Уаії Рпе с1у Авп Ппув Тук Гей Тук Гей с1у ТПг Туг Аїа ТЕПг 165 170 175 біп 611 бій Аза Аза ТПг Аїа Туг Авр Меє Аїа Аза І1е сі Туг Агд 45 180 185 190 сб1у Гей АвБп Аза Уаі ТПг Ап Рпе Авр Гей бег Агуд Туг І1е Гув5 Тгр 195 200 205 50 Тем Ппув Рго Авп обіп Авп Авп ТБг Авр АБп о Авп Авп с1іу Тецй Авр Гей 210 215 220
Рго АвБп о Рго І1е І1е б1у ТПг АвБр АвБп о бек ТПг Нів Рго Авп Рго Авп 225 230 235 240 55 біп бій Гей сіу ТпПг ТПг Рбе Гей сбіп І1їе Авп біп сбіп ТБг Тук біп 245 250 255
Ркго Бек біц ТПг ТБПг Тецйп ТПг о біп Рго Агуд Рго Аза ТПг Авп Рго бег 60 260 265 270 зек Аїа Гец сіу ІТецйп Гей Гей біп бек бек Гпув Рпе пув бі Меє Меє 275 280 285 бі Меє ТпПг Азїа Уаї ТПг Авр о Сув Рго Рго ТПг Рго Рго бек С1Уу Іей 290 295 300
Авр Ркго ТПг Рго Суб бек Рпе Гец біц Авр Уаі Ссіп ТПг Тук Робе Авр 305 310 315 320
Сув Гей Авр бек бек Авп Туг б1у Авр біп б1у Авр Авр Меєсє І1е Ріе 325 330 335 б1у Авр Гей Авп бек Рпе Уа1і Рго Рго Меє Рпе сіп Сув Авр Рое бій 340 345 350
ТЕ
«2105 72 «2115 323 «212» ПРТ «213» УїсСів уіпітега «4005 72
Меє АїТа пув Гей бек біп біп Авп о Нів Гув Авп бек Аза Авп бБег Авп 1 в) 10 15
Аза ТПг Авп Тс Тс ІТец бек Уаї ТПг Гуз УМаії Гув Агуд ТПг Агуд Гув 20 25 30
Зо ТП Маї Рго Акуд Авр бек Рго Рго біп Агуд бек бек І1е Туг Агд Щ1У
Уаї ТПпг Агуд Нів Агуд Тер ТБг с1у Агуд Туг біц Аза Ні Іецй Тгр Авр бо
З5
Тув Авп оСув Тер Авп обі бек біп Авп о Гпув пув б1у Акд біп Уаї Туг 65 70 75 80
Тец б1у Аїа Туг Нів АвБр біц сіш Аза Аза Аза Нів Аїа Туг Авр ' Іей 40 85 90 95
Аза Аза Ггецйц пув Туг Ткгр б1у Рго сіц ТПг І1їе Гей Авп Роре Рго Іей 100 105 110 45 зек ТПг Тук бій пув біц Гей пув сій Меє сбіц с1у Гей бек Акд с1ци 115 120 125 бі Тук І1ї1е сіу Бек Гей Агуд Агуд Агуд бБег бек сіу Робе бег Агд 01Уу 130 135 140 50
Уаї бек Ппув Туг Акуд сіу Уаі Аза Акуд Нів Нів Ніб Авп б1у Агд Тгр 145 150 155 160 бі Аза Агкуд ч1І1е с1у Агкуд Уаі1і Рпе сіу Авп Ппув Тук Гей Тукг Гец 01У 55 165 170 175
ТПг Тукг Аза ТПг сбіп біц бі Аза Аза ТБПг Аза Туг Авр Меє Аза Аїа 180 185 190 (516) Іїе сій Туг Агуд б1у Гей Авп Аїа Уаі ТБг Авп Рре Авр Гей бег Агд 195 200 205
Тук Іїе пув Тер Гец пуб Рго Авп о біп Авп АвБп о Рго Сув бій біп Рго 210 215 220
Авп оАвп о Рго Авп о Гей Авр бек Авп о Гей ТПг Рго АБп о Рго Авп о Нів Авр 225 230 235 240
Рпе сі1у І1е бек Рбпе Гей АвБп о Ніб Рго біп ТПг бек с1у ТПг Аза Аї1а 245 250 255
Сув Кпув Меє Меє сі Меє ТПг ТПг Аза Аїа Авр Нів Гец бег ТПг Рго 260 265 270
Рго біц бек біц Тец Рго Агуд Суб бек Рпе Рго Авр АБр Іїе сбіп ТЕГ 275 280 285
Тук Рпе бій Сув біп Авр бек сіу бек Туг біц б1іц б1у Авр Авр Уаї 290 295 300
І1їе Рпе бек бій Гец Авп бек Рпе І1їе Рго Рго Меє Рпе сіп Сув Авр 305 310 315 320
Рпе бек Аїа «2105 73 «2115 347 «212» ПРТ «213» УїсСів уіпітега
Зо «4005 73
Мен АїТа пув Гей бек біп біп Авп Нів пуб Авп бег Аза АБп бек Авп 1 5 10 15
Аза ТПг Авп Тс Тс Тец бек Уаї ТПг Гуз УМаії Гув Агуд ТПг Агуд Гув
З5 20 25 30
ТПг Уа1 Рго Агуд Авр бек Рго Рго біп Агд бек бек І1їе Туг Агд Щ1У 40 Уаї ТПгЕ Агуд Нів Акуд Тер Тк б1у Агуд Тук бій Аїа Нів Гей Тер Авр бо
Тув Авп оСув Тер Авп обі бек біп Авп о Гпув пув с1у Агд біп с1у А1а 65 70 75 80 45
Тук Нів Авр сій сбіц Аза Аза Аза Нів Аза Туг АБр Тецй Азї1а Аза Гей 85 90 95
Тпув Тук Тер с1у Рго бій ТПг Іїе Гей Авп Рпе Рго Гей бек ТПг Туг 50 100 105 110 бі гув бій Гей пув бі Меє сі с1іу Гей бБег Агд сбіц біц Тугє І1е 115 120 125 55 сіу бек Ггец Агуд Агуд Акуд бек бек біу Рре бек Акуд біу Уаї Бек Гув 130 135 140
Туг Агуд сіу Уа1і Аза Агкуд Нів Нів Нів Авп б1у Агд Тгр б1п1 Азїа Агд 145 150 155 160 60
ІІе с1у Акд Уаі Рпе б1у Авп Гуз Тук ІГецйп Тук Ге с1у ТПг Туг Аї1а
165 170 175
ТП біп бій бій Аза Аза ТБПг Аза Туг Авр Месє Азїа Аї1а І1е сіи Туг 180 185 190
Акуд сб1у Гей Авп Аза Уаі! ТП Авп Ррбе Авр ІТец бек Агуд Тук І1їе Гув 195 200 205
ТЕр Гей Ппув Рго Авп о біп АвБп о Авп Рго Сув біц біп Рго АвБп АвБп о Рго 210 215 220
Авп о Гей Авр обБег АвБп о Гей ТПг Рго АвБп о Рго АБп о Нів Ар Рпе сС1у І1е 225 230 235 240 зек Рпе Гемй Авп о Нів Рго сіп ТПг бек біу ТПг Аза Аїа Сув бек с1іц 245 250 255
Ркго Рго Пец ТПг біп ТПг Агуд Рго Рго І1е А1їа бек Бек Аїа гейш ШУ 260 265 270
Тецп Гецп Гей сіп Бек Бек Ппув Рпе Ппув бі Меє Меє сіц Меєсє ТіПг Тс 275 280 285
Аза Аза Авр Нів їГец бек ТПг Рго Рго біц бек біцш Гей Рго Агд Сув 290 295 300 ек Рпе Рго АвБр Авр І1е біп ТПг Тує Рпе бій Сув біп Авр Бех щЩ1У 305 310 315 320
Зо зек Тук біш біц б1у Авр Авр Уаії І1їе Рібе бек біц Гей Авзп бек Ріре 325 330 335
ІТ1е Рго Ркго Меє Рпе сбіп Сув Авр Рпе бег Аїа 340 345
З5 «2105 174 «2115 275 «212» ПРТ «213» Роришіцв Егіспосагра 40 «4005 74
Мен с1у Ппув ТПг Бек Ппув біп Бек Гей пуб Авп бБег Аза Авп ТПг 5ег 1 5 10 15
ІТ1е Авп Рго Аїа ТПг Гув Уаї їпув Агд ТПг Агуд Гпув Бек Уа1і Рго Аг4д 45 20 25 30
Авр Бек Рго Рго біп Агуд бек бБег І1їе Туг Агкуд сіу Уаї ТБг Агд Нів
Агуд Тер Тпг б1у Агуд Тук бій Аїа Нів Гей Тгр Авр ГПув Авп о Сув Тгр 50 55 бо
Авп обіц бек біп Авп оГув Гув б1у Агуд біп б1у Аза Туг Авр АвБр бій 65 70 75 80 бі Аза Аза сіу Нів Аїа Туг Авр Гей Аїа Аїа Гей пув Туг Трр 01У 85 90 95 біп Авр ТПг о І1їе Гей Авп Рпе Рго Гец бег ТПг Тук б1п бій сій РБе 60 100 105 110 пув бі Меє сі с1у Нів бек Ппув бі бій Ту Іїе сіу бек Іец Агд 115 120 125
Акуд пув бек бек біу Рпе бек Агуд сіу Уаї бек Ппув Туг Агд сіу Уаї 130 135 140
Аза Акуд Нів Нів Нів АБп б1у Агд Тгр б1п1 Аза Агу чІ1е с1у Агк9д Уаї 145 150 155 160
Рпе с1у Авп Пув Тук Гецп Тук Гей с1іу ТБг Туг Аза ТПг сіп січ с1ц 165 170 175
Аза Аза ТПг Аза Туг Авр Меє Аїа Аза І1е сій Туг Агуд о1у Гей Авп 180 185 190
А1їа Уа1 ТБЕг Авп о Рбе Авр Тец бег Агуд Тук бек бек Пув РПпе Ппув сіц 195 200 205
Меє гей бій Агуд ТБг бБег Аза Бек Авр Сув Рго Гей ТПг Рго Рго сіцй 210 215 220 век Авр Агд Авр Рго Рго Агуд Агд бек Рпе Рго Авр АБр Іїе сбіп ТЕГ 225 230 235 240
Тук Рпе Авр Сув біп Авр бек бек бек Тук ТПг Авр б1у Авр Ар І1е 245 250 255
І1е Рбе с1у Авр ІТец Нів бек Роре Аза бек Рго Іїе Рпе Нів Сув с1іц 260 265 270
Зо
ТІецпй Авр О1У 275 «2105 175
З5 «211» 304 «212» ПРТ «213» УїсСів уіпітега «4005 75
Меє АїТа пув ТПг бек сбіп Мпув бек біп Гув ТПг ТПпг с1у Авп бек ТЕПг 40 1 в) 10 15
Авп о Авп о Авп обіу біу бек Уаії Аїа Гуз УМаії Гув Агуд ТПг Агуд Ппув бег 20 25 30 45 Уа1 Рго Агуд Авр бек Рго Рго біп Акуд бек бек Іїе Рпе Акуд Ссіу Уаї
ТПгЕ Агуд Нів Агуд Тер ТБг б1у Агуд Туг біц Аза Нів ІТейп Тгр Авр Гув бо 50
Авп оСув Тер Авп обіц бек біп Авп о Ппув Гуз б1у Агуд сбіп Уа1 Тук Ієец 65 70 75 80 сб1у А1ї1а Туг Авр АБр біш біц Аза Аза Аїа Нів Аїа Туг Авр Іецй А1а 55 85 90 95
А1їа гей пув Туг Ткгр б1у бі1іп біц ТБг І1е Гей АвБп Рпе Рго Гей 5ег 100 105 110 (516) А1ї1а Тук сбіп бій біш Гешп пув бі Меє сбіц сі1у сбіп бек пув бі с1іц 115 120 125
Тук Іїе сіу Бек Ггец Агд Агд пуб бек бек біу Рпре бек Агуд сіу Уаї 130 135 140 зек Ппув Туг Агуд сбі1у Уаії Аза Агуд Нів Нів Нів АБп с01у Агкд Тгр с1ци 145 150 155 160
Аза Акуд ч11е сі1у Акд Уаі Рпе сбіу Авп Гув Тук Гей Тугк Гешй с1у ТПг 165 170 175
Тугк Аїа ТПг сіп сбіц бі Аза Аза ТБПг Аза Туг Авр Меє Аї1а Аза Ше 180 185 190 бі Ту Акуд с1іу Гей Авп Аза Уаі ТПг Авп Рпе Авр Гей бег Агд Туг 195 200 205
І1е Авп бБег Рго Аза Рго АБп о Рго АБп о Рго бек Авр Нів бій Гей Щ1У 210 215 220
Пен бек Рпе Гей сіп сбіп сбіп Нів сіу бек Авр Аїа ТБПг сій Гей Рго 225 230 235 240
Тец бек Нів Аза Агуд Бек Авр Сув Рго Гей ТПг Рго Рго АвБр Сбіп І1е 245 250 255 біц Меє Рго Агуд Бек Бек Рпе Рго Авр Авр І1ї1е сіп ТПг Тукг Робе Авр 260 265 270
Сув біп бій ТПг Авп о бБег Тук с1у бій бБег Авр Авр Ії1е І1е Рое 01Уу
Зо 275 280 285
Авр Гей Ппув Тук РПе бек бек Рго Меє Рпе біп Сув бій Гей Авр ТЕГ 290 295 300 «2105 76 «2115 393 «212» ПРТ «213» вогодпит рісої1ог «4005 76
Меє Аїа Бек Рго Ап Рго сбіц Аза Аїа Аза с1у Гецп сбіп ТПг Уаї А1а 1 5 10 15 уаї Аза Аза сіу сіу сіу біц сіу сіу Бек бек бек бек Те С1Уу Аїа 20 25 30
Ууаї Аїа с1у Аїа Аза Аїа Уаї бек бек бек бі1у бій Гей Уаі Рго Аг4д 35 40 45
Акуд Бек Ггец Аїа Уаі Агд ув біц Агуд Уаії Сув ТПг Аїа Ггув бій Агд 50 з9 бо
ІТ1е Бек Агкуд Месє Рго Рго Сув Аза Аїа с1іу Ппув Агкуд бек бек І1е Туг 65 70 75 80
Агуд сбіу Уаі ТБг Агуд Ні Агуд Тер Тпс с1у Агуд Тук бій Аїа Нів Іецй 85 90 95
ТЕр Авр Гпув бек ТПг Тгр АвБп обіп АвБп обіп Авп оТув Гув б1у Гув сіп 100 105 110 60 сб1у А1ї1а Туг Авр АвБр бій бій Аза Аза Аза Агу Аїа Туг АвБр Іецй А1а
115 120 125
А1їа гей пув Туг Тгр б1у А1ї1а сіу ТП біп І1е АвБп Рпе Рго Уа1ї 5ег 130 135 140
Авр Тут Аза Агд АвБр Тец бій біц Меє біп Меє І1їе бек Гпув бій Авр 145 150 155 160
Тук Ггец Уа1 бек Ггец Агуд Агд біп Гей Нібв Авп бег Агуд Тгр АБр ТПг 165 170 175 зек Гец біу Гец б1у АвБп Авр Туг Меє бек Гецп бек Сув с1у Гпув Авр 180 185 190
І1їе Меє Гей Авр с1у Ппув Рпе Аїа сіу бек Рпе сіу Гей бій Аг Гуз 195 200 205
І1е Авр Гец ТПг АвБп оТуг І1ї1е Агд Тгр Тер Гей Рго Пув Пув ТПг Агд 210 215 220 біп бек Авр ТПг бек Ппув ТПгЕ сій бі І1їе Аза Авр сіц І1е Агд А1а 225 230 235 240
І1е сій бек бек Меє біп біп ТБ біц Ркго Тук Ппув Гей Рго бек Іец 245 250 255 сб1у Геп сіу Бек Рго Бек Пув Рго Бек бек Уа1 сіу Гец бек А1їа Сув 260 265 270
Зо зек І1їе Гей бек біп бек Авр Аїа Рпе Гуз бек Рпе Гей сій Гув б5ег 275 280 285
ТПЕ Ппув Гей бек біц біц Сув ТБПг Гец бек Гув бій І1е Уа1і б1їш щу 290 295 300
З5
Тпув ТпПг Уаї Аза бек Уаі Рго Аза ТПг с1у Туг Авр ТПг с1у Аза І1е 305 310 315 320
Ап отІ1е Авп Месє АвБп о біц Тецй Гец Уаі біп Акуд Бек ТПг Тук Бек Меє 325 330 335
Аза Ркго Уаї Меєсє Ркго ТПг Рго Месє Гув ТПг ТПг Тер Бек Рго Аїа Авр 340 345 350
Рго Бек Уа1і Авр Рго Гей Рпе Тгр бек Авп Роре Уа! Гей Рго бек 5ег 355 3З6о 365 біп Рго Маії ТПг Меє Аїа ТПг І1ї1е ТПг ТПг Тс Тбс Авп бій Уаї 5екг 370 375 380 зек Бек Авр Рго Рпе біп бек біп сій 385 390 «2105 177 «211» 428 «212» ПРТ «213» Іцріпив апдивсітоїіїц5 «4005 77
Меє Аза бек бек бек бек Авр Рго сіу Ппув бек біц І1е С1у С1у щЩУ 60 1 в) 10 15
А1ї1а Аїа сій ТБг бек бі Аїа Аїа Аїа Уаі! Аїа Уаі Аза Уаї ТБг Авп 20 25 30
Авр сбіп бек Гец Іец Туг Агуд біу ІТецшп Гув Гув Аїа Ппув пув бій Агд 35 40 45 сбі1у Сув ТпПг Азїа пув бій Акуд І1їе Бек Ппув Меє Рго Рго Суб Аїа А1а 50 55 бо сі1у Ппув Агуд Бек бек І1їе Туг Акуд біу Уаі ТПг Агуд Нів Агуду Тер ТБг 65 70 75 80 б1у Акуд Тук бій Аза Нів Гей Агуд Авр Гпув бек ТПг Тер АвБп обіп Авп 85 90 95 біп Авп оГув пув с1у Ппув біп Уаі Тук Ггеш с1у Аїа Туг АвБр АБр с1и 100 105 110 біш Азї1а Аза Аза Агу Аза Туг Авр еп Аїа Аїа Гей пув Туг Трр 01У 115 120 125
Ркго сі1у ТПг Тец І1е АБп Рпе Ркго Уа! ТПг Авр Тукг ТПг Агуд АвБр Іей 130 135 140 сій бій Мес біп Авп Уаі! бек Акуд бій біц Тук Гей Аїа бек Гей Агд 145 150 155 160
Акуд пув бек бек біу Рпе бек Агуд біу І1е Бек Ппув Туг Агуд Аїа Іей 165 170 175
Зо зек Бек Агд Тгр біц Рго бек Туг бек Агкуд Рпе Аза сіу Бек Авр Туг 180 185 190
Рпе Авп бек Меєсє Ні Тук б1у Аї1а с1у Авр Авр бБег Аїа Аза сій 5ег
З5 195 200 205 бі Тук Аї1а бек с1іу Рпе Сув Іїе сій Агуд пув Іїе Авр Гецй ТПг 01Уу 210 215 220
Нів Іїе Ппув Тер Тгр сбі1у Бек Авп Тув бБег Агд біп Рго АвБр Аїа 1У 225 230 235 240
ТПг Агд Гей бек біц біц Губ5 Агуд Нів біу Рпбе Аї1а сб1у АБр І1е Сув 245 250 255 зек бій Ркго Ппув ТПг Іецп бій сбіп Ппув Уаі сбіп Рго ТПкг біц Рго Туг 260 265 270 біп Меє Рго сій Ге с1у Акуд Бек Нів Авп бій пув пуб Нів Агд бег 275 280 285 зек Аїа Уаї бек А1ї1а Іїецп бек Іїе Гей бек сбіп Бек Аїа Аїа Тук Гув 290 295 300 зек Гей біп бій пув Аза бек Ппув пув біп бій АБп бек ТПг Авр Авп 305 310 315 320
Авр бій Авп обіц Авп оГув Авп оТпг Уаї Авп оГув Тецй Авр Нів о1У Гув 325 330 335 60
А1їа Уа1 сіц пуб бек бек Авп Нібв Авр б1і1у біу Бек Авр Агуд Уа1 Авр
340 345 350
І1е сіц І1е сі1у ТПг ТПпг сбі1у Аїа Іец бек Те сбіп Агуд АБп І1е Туг 355 3З6о 365
Ркго Гей ТПг Ркго Рібе ІТецйп бек Аза Рго Іїецй Іїеп ТПг Аза Туг Авп о ТаПг 370 375 380
Уаї Авр Рго Бек Гей Уаії Авр Рго Уа1і Ггец Тгр ТПг бек Іецй Уаї Рго 385 390 395 400
Меє Гей Бек Аїа сіу Гей бек Сув Рго ТПг біп Уаі ТПг Гув ТПпг сі 405 410 415
ТПг Бек бек бек Туг ТПгЕ Іїе Рпбе сіп Рго сбіц 01Уу 420 425 «2105 78 «211» 440 «212» ПРТ «2135» Вісіпив сошпштипів «4005 78
Меє Аза бек бек бек бек Авр Рго сіу Гей Пув Рго біц Іецй б1у У 1 5 10 15 сбі1у бек б1у сіу бі Бек бек бі Аза Уаі Іїе Аза Авп Авр Ссіп Іей 20 25 30
Тецшп Гей Тук Агуд сбіп Гей Ппув Пув Рго Ппув Пув бій Агд сб1у Сув ТЕП
Зо 35 40 45
А1їа пув сбіц Агуд І1е бек Гпув Месє Рго Рго Сув ТПг Аїа с1у Ппув Агд 50 55 бо
Ззек бек І1їе Туг Агкуд сіу Уаі ТПг Агкуд Нів Агу Тер ТПс с1у Акд Туг 65 70 75 80 бі Аза Нів Гей Тер Авр Гпув Бек ТПг Тер Авп о біп Авп о біп Авп о Гув 85 90 95 пув б1у пув сбіп с1у Аїа Туг Авр АБр бій бій Аза Аза Аза Агд А1а 100 105 110
Тук Авр гец Аза Аїа Гец пуб Туг Тер б1іу Рго біу ТПг Іеп І1е Авп 115 120 125
Рпе Рго Уаії ТПг Авр Тук Бек Агд Авр Те бій сі Меє сбіп Авп Уаї 130 135 140 зек Акад біц бій Тук Гецп Аза бек Гей Агуд Агуд пуб бек бек б1іу РіПе 145 150 155 160 зек Агуд біу І1е бек Гув Туг Агд біу ІГецй бек Бек біп Тгр Авр 5ег 165 170 175 зек Рпе біу Агкд Меє Рго сіу бек біцп Тук Рпе бек Бек Іїе Авп Туг 180 185 190 сб1у А1ї1а Аза Авр Авр Рго Аїа Аза сій Бек бі Тук Уаї с1у бек Іеєец 60 195 200 205
Сув Рпе бій Агуд Ппув Іїе Авр Гей ТПг бБег Туг Іїе Агд Тер Тгр 01У 210 215 220
Рпе Авп пуб ТПг Агуд бій бек Уаі! бек Гпув бек бек Авр біц Агд Гу 225 230 235 240
Нів сіу Тук сіу біц Авр І1е бек сій Гец пуб бек бек б1п Тгр Аїа 245 250 255
Уаї біп Бек ТПК бій Рго Тук біп Меє Ркго Агуд гейш с1у Меє Рго Авр 260 265 270
Авпосіу пув пув Нів пуб Сув бек Тув І1е бек Аїа Гей Бек Іїе Іец 275 280 285 зек Нів бек Аїа Аза Тук Гпув Авп Гей біп бій пув Аїа бек пув Гув 290 295 300 біп бій Авп о Сув ТПг Авр Авп Авр обі пув бій Авп о Гпув пуб ТБг Авп 305 310 315 320
Тпув Меє Авр Тук с1у пув Аїа Уаї сіц пуб бек ТПг бек Нів Ар Щ1У 325 330 335 век Авп бій Агуд Геш сіу Аїа Аїа Гей сіу Мес бек сіу с1у Іеч 5ег 340 345 350
Тец бі1іп Агуд АБп Аза Тук біп Гей Аза Рго Рпе Гей бег Аїа Рго Іей 355 3З6о 365
Зо
Тецп ТПг АвБп о Туг Авп Аза Іїе Авр Рго Гей Уаі Авр Рго І1е Іецй Тгр 370 375 380
ТПг Бек Гей Уа1! Рго Уаї Іец Рго Аїа сіу Робе б5Бег Агуд АБп бек с1ци 385 390 395 400
Ууаї сі1у Меє с1у гейш сіп І1е Уа1і Бек Сув Нів МПув Авр Агд Авр Гу 405 410 415
Рпе Ап Гей Туг Гецй Гей бек Аїа сіу сбіу УМаї бек ТПКг Ропе Іец Іецй 420 425 430
Тецп Маї Уаї Нів Тер Акд Ріе Сув 435 440 «2105 79 «211» 428 «212» ПРТ «213» Іцріпив апдивсітоїіїц5 «4005 79
Меє Аза бек бек бек бек Авр Рго сіу Ппув бек біц І1е С1у С1у щЩУ 1 5 10 15
А1ї1а Аїа сій ТБг бек бі Аїа Аїа Аїа Уаі! Аїа Уаі Аза Уаї ТБг Авп 20 25 30
Авр сбіп бек Гец Іец Туг Агуд біу ІТецшп Гув Гув Аїа Ппув пув бій Агд 35 40 45 (516) сіу Сув ТПкгЕ Аїа Ппув бій Агуд І1е бек пуб Меє Рго Рго Сув Аза Аїа 50 55 бо сб1у гув Акуд Бек Бек ІїІе Туг Агуд сіу Уаі ТПг Агуд Нів Агд Тгр Тс 65 70 75 80 с1у Акуд Тук біц Аїа Нів тей Акуд Авр Ппув бек ТПг Тгр АБп о біп Авп 85 90 95 біп Авп оГув Ппув с1у Ппув біп Уаі Ту Ггеш с1у Аїа Туг Авр АвБр бій 100 105 110 біш Азї1а Аза Аза Агу Аза Туг Авр еп Аїа Аїа Гей пув Туг Трр 01У 115 120 125
Ркго с1іу ТПг Тец І1е АБп Рпе Ркго Уа! ТПг Авр Туг ТПг Агуд Авр Гей 130 135 140 бі бій Меє сіп Авп Уаі1і бек Агуд бі бій Тук Гей Аза бБег Іец Агд 145 150 155 160
Агуд Ппув бек бек б1іу Рре бек Агуд сіу І1їе бек Ппув Туг Агкуд Аїа Іецй 165 170 175 зек Бек Агд Тгр біц Рго бек Туг бек Агкуд Рпе Аза сіу Бек Авр Туг 180 185 190
Рпе Авп бек Меєсє Ні Тук сб1у Аї1а б1у Авр Авр б5Бег Аїа Аїа сій 5ег 195 200 205 бі Тук Аї1а бек с1іу Рпе Сув Іїе сій Агуд пув Іїе Авр Гецй ТПг 01Уу
Зо 210 215 220
Нів Іїе пув Тер Тер біу Бек Авп Гпув бБег Агуд біп Рго АвБр Аїа 0Щ1У 225 230 235 240
ТПЕгЕ Агд Гей бек бій сбіц пув Агуд Нів с1у Рбе Аїа с1у Авр І1е Сув 245 250 255 зек бій Ркго Ппув ТПг Іейп бій біп Гуз Маї біп Рго ТПг бій Рго Туг 260 265 270 біп Меє Рго сій Ге с1у Акуд Бек Нів Авп бій пув пуб Нів Агд бег 275 280 285 зек Аїа Уаї бек А1ї1а Іїецйп бек І1е Іецй бек сбіп Бек Аїа Аїа Тук Гув 290 295 300 зек Гец біп біц Гуз Аза бек пув пув біп б1й Авп бБег ТПг Авр Авп 305 310 315 320
Авр бій Авп бій Авп о пуб Авп о ТП о Уаї Авп о Туз Гей Авр Нів с1У Тув 325 330 335
А1їа Уа1 сіц пуб бек бек Авп Нібв Авр бі1у бі1у Бек Авр Агуд Уаіїі Авр 340 345 350
І1е сіц І1е сі1у ТПг ТПпг сб1у Аїа Іец бек Те сбіп Агуд АБп І1е Туг 355 3З6о 365
Ркго Гей ТПг Ркго Робе ІТецйц бек Аза Рго Іїецй Іїеп ТПг Аза Туг АБп о ТЕПг (516) 370 375 380
Уаї Авр Рго Бек Гей Уаії Авр Рго Уа1і Ггец Тгр ТПг бек Іецй Уаї Рго 385 390 395 400
Меє Гей Бек Аїа сіу Гей бек Сув Рго ТПг біп Уаі ТПг Гпув ТПг с1іц 405 410 415
ТПг Бек Бек бек Туг ТПг І1е Робе сіп Рго сбіц с01Уу 420 425 «2105 80 «2115 508 «212» ПРТ «213» Аврекдії1їцв Бшшпідаєбив «4005 80
Меє Ггув Меє бек Аїа бек Гуз ТПг Уаї ТПг бек бек Аза бБег Аїа Уаї 1 5 10 15 зек ТПг бек бек біу Агкуд Бек ТПг Рго бек Гув Геип Уаі А5Бп с1у Аї1а 20
ТПгЕ Агуд Авп осіу бек Аїа Аза Аза сіу АвБп біу бек ТПг с1у ТПг Аїа пув б1у Гпув Агуд Агуд Бек Ппув Туг Агуд Нів Уаі Аза Аза Туг Нів 5ег 25 50 55 бо біц тей Акуд Нів Бек бек Гей бек Агуд бій ТПг бек Уаї Уаї Рго 5ег 65 70 75 80
Зо Рпе Гей с1і1у Робе Агуд Авп Гей Меє Уаі І1їе Уаї Геш Уаії Аїа Меє Авп 85 90 95
Тец Акд Те Іїе Іїе бій Авп Рпе Меє Ппув Тук сіу Уаї Іец І1е Сув 100 105 110
З5
ІТІе пув Сув Ні Авр Тук Агуд Гув біп Авр Уаії Уаі Іеш с1у Бек Те 115 120 125
Тец Рпе Аїа Гей Уаії Рго Сув Нів Гей Рпе Гей Аза Туг Ії1е І1е с1ц 40 130 135 140
Тец Маі Аза Аза сбіп біп бек Ппув Ппув ТПг Уа1 с1у Акд біп Гув Гув 145 150 155 160 45 Авр Гей бек ТПг біц бій Агуд бій Агуд бій біп біп Аза Рбе Аг9д 5ег 165 170 175
ТПгЕ Тер Акуд Туг ТБг Аза Роре Рбе Нів ТПг Уаі АвБп А1їа ТПг Гей Сув 180 185 190
Тец А1їа Уаї ТПг бек Рпе Уа1 Уаї Тук Рпе Туг Іїе Авп Нів Рго 01Уу 195 200 205
ІТІе сі1у ТБПг І1е Сув біцш Гей Ні5 Аза І1е І1е Уаї Тгр Гей Гпув Авп 210 215 220
Сув бек Тук Аза Рпе ТПг Авзп Агуд Авр Гей Агуд біп Аїа Меєс Уа1ї Авр 225 230 235 240 (516) Рго Бек Аїа бій бек Аза Гей Рго сій І1е Туг бек ТПкг Сув Рго Туг 245 250 255
Рго Агд АвБп о І1е ТПг Іецйп с1у АвБп Іїецй ТПг Тук Рпе Тгр Гей Аїа Рго 260 265 270
ТПЕ Гецп Уаї Тук біп Ркго Ма! Туг Рго Агуд бек бек Нів І1їе Агд Тер 275 280 285 зек Рпе Уаії Аїа їув Агд Те Аїа біцп Рпе Рпе сіу Гей Аїа Уа1 Ріе 290 295 300
І1е Тер Гец Іец бек А1ї1а сбіп Туг Аї1а Аза Рго Уаі Гей Агд Авп бег 305 310 315 320
І1е Авр пув І1е А1ї1а Уаї Меє АвБр І1е А1їа бек Іїе Гей бій Аг9д Уаї 325 330 335
Меє Гпув Гей бек ТПг Іїе бек Ггеш Уа1! Іїе Тр Тїешц А1їа с1у Рпе РБПе 340 345 350
А1їа Геї Рпе біп бек Гей Гей Авп Аїа їеш Аїа сіц Уа1ї Меє Акд Ріре 355 3З6о 365 б1у Авр Агд бій Рпе Туг ТПг Авр Тер Тер Авп о бег Рго бег Те Щ1У 370 375 380
А1їа Тук Тер Агд бек Тгр АБп Агуд Рго Уаі! Тук Гей Рпе Меє Гуз Агд 385 390 395 400
Нів Уа1 Рпе бек Рго Гец Уа! сіу Акуд сіу Тгр бек Рго Рпе Аза Аї1а
Зо 405 410 415 зек Рпе Меє Уаї Ріре бек Гей бек Аїа Уа1ї! Гей Ні сій Меє Іецй Уаї 420 425 430 с1у І1їе Рго ТПг Нів Авп тей І1е сіу УМаі Аза Рпе Аї1а сіу Меє Меє 435 440 445
Рпе сіп Гец Рго Іїец І1е Аза Уаі! ТПг Аза Рго Рпе бій Ппув Уа1і Авп 450 455 460
Авр Аза Гец сіу Гуз І1е Маї сіу Авп бек Іїе Рбе Тгр Уаї бек РБПе 465 470 475 480
Сув Геп Уаї сіу біп Рго Гец сіу Аїа Гей Гей Тук Робе Робе Аїа Тгр 485 490 495 біп Азї1а Гуз Тук сіу Бек Уа1 бек Ппув І1е Нів Уаї 500 505 «2105 81 «2115 521 «212» ПРТ «2135» Вісіпив сошпштипів «4005 81
Меє Тпг Іїе Гей бій ТПг Рго бій ТП Гецп с1іу Уа! І1е Бек бек 5ег 1 5 10 15
Аза ТПг бек Авр Тец АБп Гей бег Іец Агуд Агуд Агд Агуд ТпПг бек Авп 20 25 30 60
Авр Бек Авр біу Аїа Іїец Азїа АвБр ІТецшц Аза бек Гпув Рпе Авр Авр Авр
35 40 45
Авр Авр Уаії Агд бек бі1ц Авр бег Аїа бій АБп І1е І1е бій Авр Рго 50 55 бо
Ууаї Аза Аза Уа1і ТПкг сіц Гец Аїа ТПг Аїа пуб бек Авп об1і1у Гпув Авр 65 70 75 80
Сув Маії Азїа Авп Бек Авп о Гпув Авр о Гпув Іїе Авр бек Нів сіу сіу бег 85 90 95 век Авр Рпе Гув Іец Аза Туг Агд Рго бек Уаі Рго Аза Нів Агуд 5ег 100 105 110 ем Ппув бі бек Рго Гей бек бек Авр Гей Іїе Рпе Тув сіп бек Нів 115 120 125
А1їа с1у Гец Рбе АвБп Тец Сув І1е Уаі Уаії Іеп Уаі Аїа Уаі1і Авп 5ег 130 135 140
Акд Гей Ії1е І1е біцш АБп о Гецп Месє Туз Тук б1у Тер Гей Іїе Ппув ТЕГ 145 150 155 160 б1у Рпе Тер РпПе бБег Бек Агуд Бек Гей Агуд Авр Тер Рго Гей РоПе Меє 165 170 175
Сув Сув Гей бек Гей Рго Уа1 Рпе Рго гейш Аїа Аїа Тук Гец Уаї сій 180 185 190
Зо пув Аїа Аїа Тук Ак Пув Туг І1їе бек Рго Рго І1іе Уа1ї І1ї1е РПе Гей 195 200 205
Нів Уаі1і Іїе Іїе ТПг бБег Аза Аза Уаї Гец Туг Рго А1ї1а бек Уаі Ше 210 215 220
З5
Тецп бек Сув бій Бек Аїа Рпе Гей бек сіу Уа1 ТПг Ггец Меєсє сій Іей 225 230 235 240
А1їа Сув Меєсє Уа! Тер Іїец Гув Гец Уаії бек Ту Аза Нів ТПг Авп Туг 245 250 255
Авр Меє Агуд Аїа І1е Аза АБр ТПг І1е Ні Гув бій Авр Аїа 5Бекг Авп 260 265 270
Ззек бек бек ТПг сбіц Тук Сув Нів Авр Уа1! бек Рре Ппув ТПг Іец А1а 275 280 285
Тук Рпе Меє Уа1ї Аїа Ркго ТПг Гей Сув Тук біп Рго бек Тук Рго Аг4д 290 295 300
ТПг Аїа Рбе Іїе Агкд Ппув біу Тер Уаі Рібе Агд біп Рпе Уаї Гув Іецй 305 310 315 320
І1е Іїе Рре ТПг б1у Рпе Меє сС1у Рпбе І1е І1е сій сбіп Туг І1їе Авп 325 330 335
Рго І1їе Уаї біп Авп бек біп Нібв Ркго Іїецй Гув с1у Авр Гей Гей Туг 340 345 350 (516) А1ї1а чІ1ї1е сій Акуд Уаї Ггешп Ппув Гей бек Уа1і Рго АБп Гей Туг Уа1! Тер 355 3З6о 365
Тец Сув Гей Рпе Тук Сув Рпе Рпе Нів Гей Тер Гей Авп І1е Уаї А1а 370 375 380 січ Гей Гец Агд Рпе с1у Авр Акуд бій Рпе Тук Ппув Авр Тер Тер Авп 385 390 395 400
А1їа пув ТПг Уаі сіц біцш Тук Тер Агкуд Меє Тгр АБп Меє Рго Уаі1ї Нів 405 410 415
Тпув Тер Меє Уаі Агу Нів Іїе Тук Рпе Рго Сув Гей Агуд Агд Гув Ше 420 425 430
Рго Акуд біу Уаі Аїа І1ї1е Уаі! І1е А1ї1а Рпе Рпе Уаі бек Аїа Уа1 Ріє 435 440 445
Нів біц Гей Сув Іїе Аїа Уаії Ркго Сув Нів Ме Рпе Ггув Гей Тер Аї1а 450 455 460
Рпе Рпе сіу І1е Мес Рпе сіп чІ1іе Рго Іїей Уаї Уаії І1їе ТПг Авп Туг 465 470 475 480
Рпе сбіп Акд Гув Рре Агуд бек бек Меє Уа1і сіу Авп Месє І1е РоПе Тгр 485 490 495
Рпе Ріпе Рбе Суб І1е Іїецп сі1у біп Ркго Меє Сув Уаї Гей Гей Тук Туг 500 505 510
Нів Авр Гей Меєсє АвБп Агд АБр б1у Авп
Зо 515 520 «2105 82 «2115 526 «212» ПРТ
З5 «213» Мекпісіа токаїї «4005 82
Меє ТПпг І1їе Рго бій ТБг Рго Авр Ап о бег ТПг АвБр Азїа ТПг ТпПгс 5ег 1 5 10 15 40 сіу б1у Аї1а бій бек бек бек Авр Гецп АБп Гей бек Гей Агуд Агд Агд 20 25 30
Акуд ТВг АТїа бек АБп о бег Авр біу Аїа Уаі Азїа б1іп їейп Аїа бек Гув 45
І1е Авр біц Іїец біц бек Авр Аза сі1у б1у сб1у сбіп Уаі1і Іїе Гпув Авр бо
Рго с1іу Аїа біц Меє Авр бек біу ТПг ІГецйп Гпув Бек Авп б1у Гпув Авр 50 65 70 75 80
Сув б1у ТпПг Уаі Гпув Авр Агд І1е бій Авп Агуд бій Авп Агд сб1у с1Уу 85 90 95 55 век Авр Уаі! Ппув Рпе ТПг Туг Агуд Рго бек Уаї Рго Аїа Нів Агуд А1а 100 105 110 теп Гпув бій Бек Рго Гей бек Бек Авр Ап І1їе РпПе пуб біп бек Нів 115 120 125 60
А1їа с1у Гец Рбе АвБп Тец Сув І1е Уаі Уаії Іеп Уаі Аїа Уаі1і Авп 5ег
130 135 140
Акд Гей Ії1е І1е біцшц АБп о І1е Месє Туз Тук б1у Тер Гей Іїе Ппув ТЕГ 145 150 155 160 б1у Рпе Тер РпПе бБег Бек Агуд Бек Гей Агуд Авр Тер Рго Гей Іец Меє 165 170 175
Сув Сув Гей ТПг Гей Рго Іїе Рпе бек гейш Аїа Аїа Тук Ггец Уаї сій 180 185 190
Тпув Те Аїа Сув Агуд Ппув Туг Іїе Бек Аїа Рго ТПг Уаї Уаї РіПе Іей 195 200 205
Нів Іїе Гей Рібе бек бек ТПг Аїа Уаї Гей Тук Рго Уаії Бек Уаі І1е 210 215 220
Тецп бек Сув бій Бек Аїа Уа1 Гей бек сіу Уаі1 Аїа Гец Меєсє Іецй РБе 225 230 235 240
А1їа Сув І1ї1е Уа! Тер Іїецй Гув Гец Уаії бек Туг Аза Нів ТПг Авп Ріє 245 250 255
Авр Меє Агуд Аїа І1е Аза АБп бек Уаі Авр ув с1у Авр Аїа Гей 5ег 260 265 270
Ап Аза бек бБекг Аза бій бек бек Нів Авр Уаі! бек РпПе Ппув бек Ієец 275 280 285
Зо Уа1ї1 Тук Рпе Меє Уаі Аза Рго ТПг Гецп Сув Тук біп Рго Бек Тукг Ркго 290 295 300
Акуд ТВг Аїа бек І1е Агд Гув біу Тгр Уаі Уаі Акд біп Рпе Уаї Гув 305 310 315 320
З5
Тецп І1їе І1е Рпе ТПг сіу Рпе Меє сіу Рпе Іїе Ії1е сіц сіп Тугє І1е 325 330 335
АвпоРго І1е Уаі! біп Авп бек біп Нів Ркго Гей Ппув с1у Авр Гей Іей 340 345 350
Тук Аїа Іїе сій Агкуд Уаї Іец пуб Гец бек Уаі! Рго Авп Гецп Тукг Уаї 355 36о0 365
Тер Гецп Сув Меє Рбпе Тукг Суб Рпе Рре Нів Гей Тгр Гей АвБп І1е Іец 370 375 380
Аа сій Гец Гец Агд Рпе б1у АвБр Агд бій Рпе Туг Кпув Авр Тер Тгр 385 390 395 400
Авп Аза Агкуд ТБПг Уаі бі бій Туг Тгр Акуд Меє Тер Авп Меє Рго Уаї 405 410 415
Нів Ппув Тер Меє Уаї Агкуд Ні Іїе Тук Рбе Рго Сув Іецп Агуд Нів Гув 420 425 430
ІТ1е Рго Акуд біу Маії А1їа Гей Іец І1е ТПг Рпе Рпе Уа1і бек Аїа Уаї 435 440 445 (516) Рпе Нів сій Гей Сув Іїе Аїа УМаї Рго Сув Нів І1їе Рпе Ппув Іеч Тгр 450 455 460
Аза Рпе І1їе сіу І1е Меє Рпе сбіп І1е Рго Іїецп Уаі сС1у І1їе ТПг Авп 465 470 475 480
Тук Геп біп Авп о Гув Ррпе Агуд бек бек Меє Уа1і сіу АвБп Меє І1е РіПе 485 490 495
Тер Рпе Іїе Рбе Суб І1е Іїец сіу сіп Рко Меє Суб Іецй Іец Іец Туг 500 505 510
Тук Нів Авр Гей Мес АвБп Агд пув с1іу ТПг ТБ бій бек Агд 515 520 525 «2105 83 «2115 523 «212» ПРТ «213» Мекпопіа даіашепвів «4005 83
Мен АїТа гей гей Авр ТПг Рго сбіп І1ї1е сіу біц І1е ТПг ТПг ТПг Аза 1 в) 10 15
ТПг ТпПкг ТБЕ І1їе Агуд Агд Агуд ТБг ТБг Уаї Гпубв Рго АвБвр Аїа с1у Ше 20 25 30 с1у Авр сб1у Геш Рпе Авр бекг бек бек бек бек Пув ТПг АвБп бек 5ег
Рпе біц Авр б1у Авр бек Гей Авп обіу Авр Рпе Авп Авр Гуз РПе Гув бо
Зо бі бі1іп І1е с1у Аза с1у Авр сій Бек Ппув Авр Авр бек пуб б1у Авп 65 70 75 80 сбі1у бі1іп Гув Іїе Авр Нів сіу сіу Уаі Ппув пув с1у Акд біц ТіПг Тс
З5 85 90 95
Уаї Уаї Нів Тук Аїа Туг Агуд Рго бек бек Рго Аїа Ні5 Агд Агд Ше 100 105 110 40 пув бій бек Рго Гей бек бек Авр Аїа І1е Рпе пув біп бек Нів Аїа 115 120 125 сб1у Гей Рпе Авп Гей Сув Іїе Уаі Уаі Гей Уаі1 Аза Уаї АвБп с1у Агд 130 135 140 45
Тецп І1ї1е І1е сій Авп Геш Меє Гпув Тук с1у Гей Гей І1е Авп 5ег Авп 145 150 155 160
Рпе Тер Рібе бек бек Агуд Бек Тец Агуд Авр Тгр Рго Гей Гей Меє Сув 50 165 170 175
Сув Гецп ТПг Рго Бек Авр Рпе Рго Гей Аїа Аза Тукг І1е Уаї сб1іц Гув 180 185 190 55 Тем Аїа Тгр Гуз Ппув Акуд І1е бек Авр Рго Уаі! Уаії І1їе ТПг ГІецй Нів 195 200 205
Ууаї Іїе І1їе ТПг ТПг ТБг Аїа Іїе Гей Тукг Рго Уа! Рпе Меє І1їе Гей 210 215 220 60
Акуд Рпе Авр бек Уаі! Уаії Іецй бек біу Маї бек Геи Меє Гей Сув Аїа
225 230 235 240
Сув І1е АвБп Тер Гей Ппув Гей Уаії Бек Рпе Уа1 Нів ТБПг Авп Туг Авр 245 250 255
Ме Агуд Бек Ггец Гей Авп о бег ТПг Авр пув біу біц Уаії бій Рго Меє 260 265 270 зек Бек Авп Месє Авр о Тук Рпе Туг Авр Уаії Авп Рпе Гпув бек Гей Уаї 275 280 285
Тук Рпе Меє Уа1ї Аїа Ркго ТПг Гей Сув Туг біп І1е бек Тук Рго Аг4д 290 295 300
ТПгЕ Аза Рпе І1їе Агуд Ппув с1іу Тгр Маії Гей Акуд біп Гецп Іїе Ппув Іеч 305 310 315 320
Ууаї Іїе Рпе ТПг сіу Рпе Месє сіу Рпе Іїе Ії1е сіц біп Тук І1е Авп 325 330 335
Ркго І1їе Уаї пуб Авп бек Агуд Нів Рго ІТецй Гув с1у Авр РПе Гей Туг 340 345 350
А1їа І1їе сіц Акд Уаї Іец Гпув Пец бек УМаії Рго Авп Гей Тук Уаії! Тгр 355 3З6о 365
Тец Сув Меє Рпе Тугк Сув Рпе Рпе Нів Гей Тер Гей Ап І1е Іецй А1а 370 375 380
Зо січ Гей Гецп Сув Рпе с1у Авр Акуд бій Рпе Тук Ппув Авр Тгр Тер Авп 385 390 395 400
Аїа сбіп ТБПг Ії1е сіц біцш Тук Тгр Агд Тецш Тгр АБп Меє Рго Уаі1ї Нів 405 410 415
З5
Тпув Тер І1е Уаі Агу Нів Гей Тук Рпе Рго Сув Іец Агуд АБп с1у Ше 420 425 430
Рго пув біу Аї1а Аза І1ї1е їейп Уаі Аза Рпе Рпе Ме бек Аїа Уа1 Ріє 435 440 445
Нів біц Гей Сув Іїе Аза Уаії Ркго Сув Нів Іїе Рпе Гпув Рпе Тер Аї1а 450 455 460
Рпе Іїе с1у І1ї1е Мес Рпе сіп Уаї Рго Іїей Уаї Гей Гей ТПг Авп Туг 465 470 475 480
Тец біп Нів Ппув Рпе біп Авп бек Меєсє Уа! сб1і1у Авп Меє І1е Рпе Тгр 485 490 495
Сув Рпе Рпе бБег Іїе Рпе сіу сіп Рго Меє Сув Уа1! Гей Гец Тукг Туг 500 505 510
Нів Авр Уа1! Меє Авп о біп Гуз б1у Ппув Бек Гув 515 520 «2105 84 «2115 517 «212» ПРТ (516) «213» УМегкпопіа да1іатепвів «4005 84
Мен АїТа гей гей Авр ТПг Рго сбіп І1ї1е сіу біц І1е ТПг ТПг ТПг Аза 1 5 10 15
ТПг ТпПкг ТБЕ Іїе Агд біп Ніб Рго Гец сіу Гпув Рго АБвр Аїа сС1у Ше 20 25 30 б1у Авр сі1у Гей РПе бек бек бек бек Бек ГПув ТПг Ап бег бек РіПе 35 40 45 січ Авр б1у Авр бек Гей Авп о біу Авр Ррбе Авп Ар Гуз РіПе пув сі1ци 50 55 бо біп І1е с1у Аза с1у Авр бій бек Ппув Ппув с1у Авп сіу Ппув І1е Авр 65 70 75 80
Нів сіу сіу УМаї пув Ппув б1у Акд сій ТБг ТБг Уаї Уаї Нів Туг Аїа 85 90 95
Тук Агуд Рго бек бек Рго Аїа Нів Агуд Агуд І1е Гу бій бек Рго Іецй 100 105 110 зек Бек Авр Аїа І1е Рпе Гпув біп бек Нів Аза сіу Гей Ропе Авп Гей 115 120 125
Сув І1їе УМаї Уаї Гей Уаі Аза Уаі1і АвБп сб1у Агд Гей І1ї1е І1е сб1цй Авп 130 135 140
Тецп Меє ув Тук с1у Гей Гей Іїе Авп Бек Ппув Рпе Тер Рібе бег 5ег 145 150 155 160
Зо
Акуд Бек Ггец Агд Авр о Тгр Рго Гец Іец Меє Сув Тер Гей ТПг Рго 5ег 165 170 175
Авр Рпе Рго Гец Аїа Аза Тук Іїе Уаї сіцш Гпув ІТейп Аза Тер Пув Гув
З5 180 185 190
Акуд І1е бек Авр Рго Уаі Уаї І1е ТПг Іец Нів Уаі Уаі І1е ТПг ТЕГ 195 200 205
ТПЕ АТїа Іїе Гей Туг Рго Іїе Рпбе Меє І1їе Гей Агуд Ррбе Авр бек Уаї1! 210 215 220
Уаї Гей Ге сіу Уа1 бек Гец Меє гей Сув Аїа Суб І1е АБвБп Тгр Іецй 225 230 235 240
Тпув ТГецп Уаї Бек Рпе Уа1 Нів ТПг Авп Туг Авр Меє Агуд бекг Іецй Іей 245 250 255
АвпобБек ТПг біу Гуз б1у бій Уаії біц Ркго Меє бек Бек Авп Меє Авр 260 265 270
Тук Рпе Тукг Авр І1їе Авп Робе Ппув бек Гец Уа! Тук Рпе Меє Уаї Аїа 275 280 285
Рго ТПг Гем Сув Тук біп І1їе бек Туг Рго Агуд ТПг Аза Рпе І1е Агд 290 295 300 пув б1у Тер Уаі Рпе Агуд сіп Гей Іїе Гпув Гей Уа1і1 І1е Рое ТПг 01Уу 305 310 315 320 60
Рпе Меє с1і1у Рпбе І1е І1е сій біп Туг І1е АвБп Рго Іїе Уаі1і Пув Авп
325 330 335 зек Агуд Нів Рго ІТец АБп о с1іу Авр Рпе Іїецй Туг Аза Іїе бій Агк9д Уаї 340 345 350
Тецшц Гпув Уаї Бек Уаі Рго Авп Гей Туг Уа1і Тер Гей Сув Меє Рпе Туг 355 3З6о 365
Сув Рпе Рпе Нів Гей Тер Гей АбБп Іїе гейш Аїа сій Гец Гец Тгр РБе 370 375 380 б1у Авр Агкд сій Рпе Туг Ппув Авр Тгр Тгр АвБп ТПг біп ТП Ше сі 385 390 395 400 бі Тук Тгр Агд Гей Тгр Авп о Меє Рго Уаії Ні Ппув Ткгр І1е Уаії Агд 405 410 415
Нів Гей Тук Рпе Рго Сув Тец Агуд Авп біу І1е Бек гув с1у Аза Аї1а 420 425 430
І1е Гец Уаії Аза Ррбе Рпе Меє бек Аїа Уаії Рпе Нів сій Гей Сув Те 435 440 445
А1їа Уа1 Ркго Сув Ні І1е їецп Ппув Роре Тгр Аїа Робе І1е сСі1у І1е Меє 450 455 460
Рпе сіп Уаї Ркго Іїец Маї Гей їец ТПг АвБп Тук Гей біп Нів Ппув Ріе 465 470 475 480
Зо сбіп Авп бек Меє Уаі с1у Авп Меє І1їе Рпе Ткгр Сув Рре Ріре бек І1е 485 490 495
Рпе сі1у біп Рко Меє Сув Уа1ї Рпе Іецй Тук Тук Нів бі Уа1і Авп сіп 500 505 510
З5 пув б1у Ппув Бек Гув 515 «2105 85 40 «2115 507 «212» ПРТ «213» Епопушив аіїабив «4005 85
Меє Аза Аза А5п Гей Авп біц Аза бек Авр Гец АвБп Ропе бек Іецп Аг4д 45 1 в) 10 15
Акуд Агуд ТБг біу б1і1у І1е бек бек ТПг ТПг оУаі1і Рго Авр бек бек 5ег 20 25 30 50 бій ТБг бек бек бек бій Аза Авр Туг Гей Авр сіу сіу Гув с1у А1а
Аза Авр Уаї пув Авр Агуд б1у Авр біу Аїа Уаі бій Рбе сбіп Авп б5ег бо 55
Меє гув Авп Уаі сій Агуд І1е бій пув Нів біц бек Агд Уаї с1Уу Гей 65 70 75 80
Авр Бек Агуд РоПе ТПг Туг Агуд Рго Бек Уаі Рго Аза Нібв Агд ТПг І1е 60 85 90 95
Тпув бій бек Рго Гей бек бек Авр Аїа Іїе Рпе Ппув біп бег Ні А1а 100 105 110 сб1у Гей Рпе Авп Гей Сув ІїІе Уа1 Уаї Ггец Уаі Аза Уаї Авп бек Аг4д 115 120 125
Тецп І1ї1е І1е сій Авп Гей Меє Гуз Тук с1у Тер гей Іїе Агд бег 01Уу 130 135 140
Рпе Тер Ре бек бек Агуд бек Темп Агуд Авр Тер Рго ІТей РіПе Меє Сув 145 150 155 160
Сув Геп ТПг Гей Рго Уаі1 Рпе Рго Гей Аїа Аза Рібе Гец Робе б1іц Гув 165 170 175
Тец А1ї1а сбіп Ппув Авп Гей Іїе бек бі Рго Уа1 Уаї Уаї Іец Іец Нів 180 185 190
І1е Маії Авп ТПг Тс Аза Азїа Уаї Іецй Тук Рго Уаі ІГеи Уа1 Ії1їе Іец 195 200 205
Акуд Сув Авр бБег Аза Рпе Меє бек біу Ма1ї ТПг Гей Меє Гей Рібе Аї1а 210 215 220
Сув І1їе Маї Тер Гей Пув Гей Уа1! бек Тук Аїа Нів ТБбг Авп Туг Авр 225 230 235 240
Меє Агуд Аїа Гей ТПг пуб бек Уаі сій пув б1у Авр ТПг Рго Іец 5ег 245 250 255
Зо зек біп Авп Месє Авр Тук бек Робе Авр Уаії АБп І1ї1е Гув Бек Гей Аї1а 260 265 270
Тук Рпе Меє Уа1ї Аїа Ркго ТПг Гей Сув Туг біп І1е бек Тук Рго Аг4д
З5 275 280 285
ТПЕ Рго Тук Уаі1і Агкд Ппув біу Тер Уаії Уаії Агкд біп Рпе Уаї Гув Іецй 290 295 300
І1їе Іїе Рбе ТПг с1у Гецп Меє сіу Рпе Ії1е І1е сіц сіп Туг І1е Авп 305 310 315 320
Рго І1їе Уаї біп Авп бек біп Нібв Ркго Тецй Гпув с1у Авп Рпе Гей Туг 325 330 335
Аа І1їе сіц Акуд Уаї Іецй Гпув Пец бек УМаії Рго Авп Гей Тук Уа1! Тгр 340 345 350
Тец Сув Меє Рпе Тук Сув Гей Рпе Нів Гей Тер Гей Ап І1е Іецй А1а 355 360 365 біш Гешп Гей Сув Рпе б1у Авр Агуд бій Рпе Тук Ппув Авр Тгр Тгр Авп 370 375 380
А1ї1а Ппув ТПг Уа1! сбіц сбіш Тук Тер Агуд Меє Тгр Авп Меє Рго Уаї Нів 385 390 395 400 пуб Тер Меє Уаі Агу Нів Іїе Тук Рпе Рго Сув Гей Агуд АБп с1у І1е 405 410 415 60
Ркго Ппув біу Уаі Аза Рпе Уаії І1е бек Рпе Гей Уаі бек Аїа Уа1 Ріє 2А1
420 425 430
Нів біц Гей Сув Іїе Аза Уаії Ркго Сув Нів І1е Рпе Гув5 Іецп Тгр Аїа 435 440 445
Рпе Рпе сіу І1е Меє Іїецй бСіп Уаії Ркго Іїецй Уаї Гей Іїе ТПг бек Туг 450 455 460
Тец біп Авп о Ппув Рпе Агуд бек бек Меє Уаі сіу Авп Меє Меє РоПе Тгр 465 470 475 480
Рпе бек Рпе Суб І1е Рпе сіу біп Ркго Меє Сув Гей Гей Гей Тук Туг 485 490 495
Нів Авр Гей Меє Авп Агуд Авп о б1у Ппув Меє сі 500 505 «2105 86 «211» 498 «212» ПРТ «213» СаепогПараїсі5 е1едапь «4005 86
Меє сбіп Меє Агуд сбіп сбіп ТБПг сб1у Агуд Агуд Агд Агуд біп Рго бек сіц 1 5 10 15
ТПг Бек Авп сіу бек Гец Аза бек бБег Агуд Агд бек бек Рпе Аїа сіп 20 25 30
Ап ос1іу Авп о бег бек Агуд Гув бБег бек біц Меє Агуд сіу Рго Сув біц
Зо 35 40 45 пув Маї Уаї Нів ТПг Аїа сбіп Авр бек Гей Рпе бек ТПг бек бег 01Уу 50 55 бо
Тер ТПг Авп Рбе Агуд сб1і1у Рре Рбе Ав5п Тей бек Іїе Гей ТГеч Іецй Уаї 65 70 75 80
Тецп бек Авп сіу Агуд Уаі Аза Гей бій Авп Уа1і Іїе пуб Туг с1у І1е 85 90 95
Тецп І1е ТПг Рго Гей біп Тер Іїе бек ТПг Ррбе Уаї б1іцп Нів Нів Туг 100 105 110 зек Іїе Тер бек Тер Рго АвБп Тец Аза Іїецй І1ї1е Гей Сув Бек Ап те 115 120 125 біп І1е Гей бек Уаі Рпе сіу Меє сіц пув І1е Те б1п1 Агд с1Уу Тгр 130 135 140 їеч бі1у АБп б1у Рпе Аїа Аїа Уа1 Рібе Туг ТПг бек Іеп Уаї І1е А1їа 145 150 155 160
Нів Гей ТПг Іїе Рго Уаї Уаї Уаї ТП Гец ТБПг Нів Гув Тегр Гув Авп 165 170 175
Ркго Гей Тер бек Уаії Уаї Меє Месє с1у Маї Тугк Уаі І1е сій Аїа Гей 180 185 190
Тпув Рпе І1ї1е бек Тук с1іу Нів Уа1і Авп Туг Тер Аїа Агд Авр Аїа Агд 60 195 200 205
Акуд пув І1е ТБ біц Тецшц Гув ТБПг біп Уаі! ТПг Авр Теп Аїа пув Гув 210 215 220
ТПЕ Сув Авр Рго Ппув біп Робе Тер Авр Гец Гу Авр бій ІГецп бек Меє 225 230 235 240
Нів біп Меє Аза Аза біп Туг Рго Аїа Авп Тїец ТПг Іецй бек АБп Пе 245 250 255
Тук Тук Рпе Меє Аза Аїа Рго ТПг Гецп Сув Тук бій Рпбе Ппув РПпе Рго 260 265 270
Акд Гей Ггец Агуд І1е Агуд Гув Нів Роре Іїецй І1е Гпув Агуд ТПг Уа1 сіц 275 280 285
Тец І1їе Рпе Гей бек Рпе Гей Іїе Аїа Аїа Гей Уа1і сіп сіп Тгр Уаї 290 295 300
Уаї Ркго ТпПг Уаі Агуд Авп о бек Меє Гпув Рго Гец бек біц Меє сі Туг 305 310 315 320 зек Агкд Сув Тец біц Агкд Гей Іїец Гу5 ІТейп Аза Іїе Рго Ап Нів Іец 325 330 335
Іїе Тер Гей Гей Рпе Рпе Тук ТПг Рпе РібБе Нів бек РПпе Гей Авп ТІецй 340 345 350
І1е Аїа біц Іїец Іїец Агкуд Рпе Аї1а АБр Акд бій Рпе Туг Агд Авр Ріє 355 3З6о 365
Зо
ТЕр АБп Аїа сій ТБПг І1е с1у Тук Рібе Тер пуб бек Тгр АБп І1е Рго 370 375 380
Ууаї Нів Агуд Рпе Аза Уаі1і Агкуд Нів Іїе Туг бек Рго Меє Меє Агд Авп 385 390 395 400
Авп оРпе бек пуб Меє бек Азїа Рібе Робе Уаії Уаії Рпе Рпе Уа1і бег Аїа 405 410 415
Рпе Рпе Нів сій Тук Гецп Уаї бек Уаії Ркго Гей Ппув Іїе Рпе Агк9д Іецй 420 425 430
ТЕр Бек Тук Тук сіу Меє Месє сіу сіп І1е Рго Іец бек І1е ІШе ТПг 435 440 445
Авр пув Уаї Уаії Агкд б1у б1у Акд ТП б1у АБп І1їе Іїе Уа1 Тер Іецй 450 455 460 зек Гец Ії1е Уаї бі1у біп Рго Іїец Аза І1е Іїеий Меє Тук о1у Нів Авр 465 470 475 480
ТЕр Туг Іїе Гей Авп Робе бСіу Уа1і! бек Аза Уаі біп АвБп біп ТПг Уаї 485 490 495 сіу І1е «2105 87 «211» 498 60 «2125 ПРТ «213» Ваєбсив5 погуедісцв
«4005 87
Мен с1у Авр Агуд сіу с1іу Аїа сіу Бек бБег Агд Агд Агд Агд ТПг щ1У 1 5 10 15 зек Ак Уаі бек Уаі сбіп сіу сіу бек біу Рго Ппув Уаі сій бій Авр 20 25 30 бі Маії Акуд сі Аза Аїа Уа1 бек Рго Авр Гей сСіу Аїа сіу сб1у Авр 35 40 45
Аза Рго Аїа Рго Аїа Рго А1ї1а Рго Аїа Ні ТПг Агуд Авр Гув Авр Агд 50 55 бо біп Тпг бек Уаі с1у Авр сіу Нів Тгр бій Гей Агкуд Сув Нів Агд Іей 65 70 75 80 біп Авр бек Гей РПе бек бек Авр бек с1іу Рпе бек Авп Туг Агд 01Уу 85 90 95
І1їе Гей Авп Тгр Сув Уаї Уаї Меє Гей І1їе Гей бек Авп Аза Акгк9д Іецй 100 105 110 зек Гец біц АвБп о Тец І1е Гпув Тук бі1у І1е Іїей Уаі Авр Рго І1е сіп 115 120 125
Уаї Уаї Бек гейш Рпе Гей пув Авр Рго Тук бек Тер Рго Аза Рго Сув 130 135 140
Тем Іїе І1е Аза бек Авп І1е Робе І1е Уаі Аза ТПг Рбе сіп І1е сі1ц
Зо 145 150 155 160
Тпув Акд Теип бек Уаі с1і1у Аїа Гей ТПг бі біп Меє сіу Гец Іец Іей 165 170 175
Нів Маії Уаї Авп тей Аїа ТПг І1е І1їе Сув Рібе Рго Аї1а Аїа Уаї А1а 180 185 190
Тец Гецп Уаї сій Бек Іїе ТПг Рго Уаі сіу Бек Гей Рібе Аїа Іецй А1а 195 200 205 зек Тук бек І1е І1е Рпе Гей Гув Іецй бек бек Туг Агуд Авр Уа1і Авп 210 215 220
Тец Тер Сув Агд біп Агуд Агуд Уаі пув Аїа пув Аїа Уаі1і бег Аїа 01Уу 225 230 235 240
Тпув Кпув Уаї Бек б1у Аїа Аза Аза сбіп Авп ТПг Уа1ї бек Туг Рго Авр 245 250 255
Авп оГечпй ТПг Туг Агуд Авр Гей Тук Тук Рібе І1е Рпбе Аза Рго ТіПг Іецй 260 265 270
Сув Тук бій Гей Авп Рпе Рго Агуд Бек Рго Агуд І1е Агд Гув Агд РБе 275 280 285
Тец Гей Агуд Агкуд Уаі гейш сіц Меє Гей Рпе Рбе ТПг біп Гец бСіп Уаї 290 295 300 с1у їешп І1їе сіп біп Тер Меє Уаі Рго ТПг Іїе сіп Авп бек Меє Гув (516) 305 310 315 320 2АА
Ркго Рпе пув Авр Меє Авр Туг бек Агуд І1е І1е сій Агд Гей Гей Гув 325 330 335
Тец А1їа Уаї Рго Авп Нів Гей Іїе Тгр гейш Іїе Рпе Рібе Тук Тгр Іецй 340 345 350
Рпе Нів бек Суб Тец АБп Аза Уаії Аза бій їейп Гей сбіп Рпе с1у Авр 355 3З6о 365
Агд бій Рбе Туг Агуд Авр Тер Тер Авп Аза бій бек Уаії ТПг Тук РіГе 370 375 380
ТЕр біп Авп Тер Авп о І1е Рго Уа1 Нів пуб Тгр Суб І1е Агуд Нів РІГе 385 390 395 400
Тук Ппув Рго Меє Гец Агд Іїец сіу бек Авп Гув Тгр Меє Аїа Агд ТЕПг 405 410 415 сбі1у Маії Рпе Тгр Аїа Бек Аїа Рпе Рпе Нів сій Тук Гец Уаї бек І1е 420 425 430
Рго Гей Агкуд Месє Рре Агуд їей Тгр Аї1а Рпе ТПг Аза Меє Меєс Аа сіп 435 440 445
Уа1ї Ркго геш Аїа Ткгр І1е Уаі АвБп Агуд Рпе Рпе сбіп сб1у АБп Тук ШУ 450 455 460
Ап Азїа Аїа Уаї! Тгр Уаії ТПпг їец І1е Іїе сіу сіп Рго Уаії А1їа Уаї 465 470 475 480
Зо
Тецп Меє Тук Уа1і Нів Авр Тукг Тук Уаі Гей Авп Туг Авр Аза Рго Уаї 485 490 495 с1у А1а
З5 «2105 88 «211» 488 «212» ПРТ 40 «213» Ношто зарієпв «4005 88
Мен с1у Авр Агуд сіу бек бБег Агуд Агуд Агуд Агуд Тс біу бек Агд Рго 1 5 10 15 45 Ззек бек Нів сбіу сбі1у сіу с1у Рго Аїа Аїа Аї1а сбіц сій сій Уа1! Агд 20 25 30
Авр Аза Аза Аза сб1у Рго Авр Уаі с1у Азї1а Аза с1у АвБр Аза Рго Аї1а
Рго Аза Рго АвБп о Гув Авр о б1у Авр Аїа сбі1у Уаії сіу Бек о1у Нів Тгр 50 55 бо біц Гей Агкуд Сув Нів Агд Гей біп Авр Бек Гей Рібе бек бБег Авр 5ег 65 70 75 80 б1у Рпе бек Авп Туг Агуд сіу Іїе Гей Авп Тгр Сув Уа1! Уаї Меє Іецй 85 90 95 (516) І1їе Гей бек АвБп Азїа Агуд Гей Рпе Гей бій АвБп Гей Іїе Ппув Тугк 01Уу 100 105 110
І1е Гец Уаї Авр Рго І1е сСіп Уаії Уаї бек Гей Рпе Гей Гпув Авр Рго 115 120 125
Тук Бек Тер Рго Аза Рго Сув ІГец Уаі Іїе Аїа Аїа АБп Уаії Рпе Аї1а 130 135 140
Ууаї Аза Аза Рпе сіп Уа1 сіц пув Агкд Гец Аїа Уаі! сС1у Аїа Гей ТЕГ 145 150 155 160 бі бі1іп Аза сі1у Гей Гей Гей Ні Уаі Аза Ап Гей Аза ТПг І1е Іей 165 170 175
Сув Рпе Рго Аза Аїа Уа1 Уа1 Гей Гей Уаі1і сій бек І1е ТПг Рго Уаї 180 185 190 бі1у бек Гей Гей Аїа Геш Меє Аза Нів ТПг Іїе Гей Рібе Гец Гув5 Іей 195 200 205
Рпе бек Туг Агуд Авр Уаії Авп бек Тер Суб Агд Агуд Аїа Агуд Аїа Гув 210 215 220
Аза Аза бек Аїа с1і1у Гпув Гув Аїа бек бек Аї1а Аза Аза Рго Нів ТЕГ 225 230 235 240
Уаї Бек Тук Рго Авр Авп Гец ТПг Туг Агуд Авр Гей Туг Тук РПе Іец 245 250 255
Рпе Аїа Ркго ТПг Іец Сув Тук біц ІТец АвБп Рпе Рго Агуд Бек Рго Аг4д
Зо 260 265 270
І1е Акуд Пув Агд Робе Іїецй Гей Агуд Агуд Іїе Гей сіц Меє Ге Рое РБПе 275 280 285
ТПЕ біп Гей сіп Уа! с1у Гешп І1е сбіп сбіп Тер Меє Уаї Рго ТПг І1е 290 295 300 біп Авп обек Меє Ппув Рго Рпе пуб Авр Мес Авр Туг бек Агд Ше Ше 305 310 315 320 біц Агд Гей Гей Гпув Ггеш Аза Уаії Рго Ав5п Нів Гей І1е Тгр Іец І1е 325 330 335
Рпе РібПе Тукг Тер Іїец Рпе Нів Бек Сув Тецй АБп Аза Уаі Аїа сі Гей 340 345 350
Меє сіп Рпе с1іу Авр Агкд біц Рпе Туг Агуд Авр Тгр Тгр АБп бек сі1ц 355 3З6о 365 зек Уаї ТБг Тук Рпе Тер сіп Авп Тер Авп о І1е Рго Уа1ї Нів Гув Тгр 370 375 380
Сув І1е Акуд Нів Рпе Тук Ппув Рго Меє гей Агуд Акгуд біу бек бек Гув 385 390 395 400
Тер Меє Аза Акуд ТПг біу Уаі Рбе Гец Аза бег Аїа Рпе Рпе Нів сіци 405 410 415
Тук Ггец Уа1 бек Уаї Рго Іїец Акуд Меє Рібе Агд Іїецй Тгр А1ї1а Рпе ТПг 60 420 425 430 сбі1у Меє Меє Аза сбіп Іїе Рго Геш Аза Тер Рпе Уа1! с1у Акд Рое РБПе 435 440 445 біп б1у Авп Ту сб1у Авп Аїа Аза Уа1і Тгр Гей бек гей І1е І1е 01Уу 450 455 460 біп Ркго Іїе Аїа Уаії Гей Меє Тук Уа1і Нів Авр Тук Тук Уаї Гей Авп 465 470 475 480
Тук біц Аза Рго Аїа Аза сій А1а 485 «2105 89 «2115 11 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «2205 «2215 Х «222» (4)..(4) «223» Треонін (ТТ) або Серин (5) «4005 89
Агуд с1іу Уаі Хаа Агкуд Ні Агуд Тгр ТПг с1у Агд 1 5 10 «2105 190 «2115 8
Зо «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «2205 «2215 Х «222» (1)..(1) «223» Фенілаланін (КЕ) або Тирозин (У) «4005 90
Хаа січ Аза Нів Гей Тер Авр Був 1 5 «2105 191 «2115 19 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «4005 131
Авр Гечп Аїа Аїа Іецй Гпувз Тує Тер Щ1У 1 5 «2105 192 «2115 8 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність бо «2205 «221» щшівс Теаєбиге
«222» (2)..42) «223» Хаа може бути будь-якою природною амінокислотою «2205 «2215 Х «222» (5)..(5) «223» Серин (5) або Аланін (А) «2205 «2215 Х «222» (8)..(8) «223» будь-яка амінокислота «4005 092 зек Хаа сіу Рпе Хаа Агуд сі1у Хаа 1 5 «2105 93 «2115 14 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «2205 «2215 Х «222» (3)..(3) «223» Гістидин (Н) або Глутамін (0) «2205 «2215 Х «222» (6)..(6) «223» Аргінін (В) або Лізин (К)
Зо «2205 «2215 Х «222» (12)..(12) «223» Аргінін (В) або Лізин (К) «2205 «221» щтівс Геабиге «222» (13)..(13) «223» Хаа може бути будь-якою природною амінокислотою «4005 93
Нів Нів Хаа Авп сіу Хаа Тгр сбіц Аза Агуд І1е с1у Хаа Уаї 1 5 10 «2105 94 «2115 19 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Консервативна послідовність «2205 «2215 Х «222» (7)..(7) «223» будь-яка амінокислота «4005 94 біп 611 бій Аза Аза Аїа Хаа Туг Авр 1 5 «2105 195 «2115 165 «2125 ПРТ (516) «213» Вгаввіса парив «4005 95
Меє с1у Іїе гейш Агуд Ппув пуб Ппув Нів бій Агуд Пув Рго бек РПпе Гу 1 5 10 15 зек Уаі Гей ТПг Аїа чІ1їе Гей Аїа ТПг Ні Аза Аза ТПг РіПе Іецй Гей 20 25 30
Тец І1ї1е Аї1а сіу Уаі Бек гей Аза с1у ТПг Аза Аза Аза Рбе І1е А1а 35 40 45
ТПЕ Меє Рго Гей Рібе Уаі! Уаї Рре бек Рго Іїе Гей Уаі Рго Аїа щЩ1У 50 55 бо
ІТ1е ТБПг ТПг б1у ІТец Іїейп ТПпг Тс сб1у Тепй Азїа Аза Аза с1у сС1у Аї1а 65 70 75 80 сб1у А1ї1а ТПпг Аза Уаї ТПг Іїе Іїе Гей Тгр Гец Туг ув Агд Аїа ТПг 85 90 95 сб1у гув Азїа Рго Рго Ппув Уа1і Гей бій Ппув Уа1 Гей пув пув І1е І1е 100 105 110
Рго с1у Аїа Аї1а Азї1а Аза Рго Аїа Аза Аза Рго с1іу Аїа Аїа Рго А1а 115 120 125
А1ї1а Аза Рго Аїа Аї1а Аза Рго Аїа Уаі Аза Рго Аїа Аза Аза Рго А1а 130 135 140
Аза Аза Рго Аза Рго їув5 Рго Аза Аза Рго Рго Аза Рго Ппув Рго Аїа 145 150 155 160
Зо
Аза Аза Рго бек І1е 165 «2105 196
З5 «2115 193 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 96
Меє Аза Авр Уаі Агуд ТПг Нів Аза Нів біп Уаі Ссіп Уаї Нів Рго Іец 40 1 в) 10 15
Акуд біп біп біц б1і1у б1у І1е пув Уаії Маї Тук Рго біп Бек с1у Рго 20 25 30 45 Ззек бек ТіПг біп Уаії Ггецшп Аїа Уаі! І1їе А1ї1а сіу Уаі Ркго Уаі1і с1у Щ1У
ТПЕ Ггеш Гей ТПг Ггец Аза сб1у Гец ТБПг Іец А1ї1а с1у Бек Уаі Те Щ1У бо 50
Пен Меє Ггец Аза Рпе Ркго Гей Рбе Гецп І1їе Рібе бек Рго Уаї І1е Уаї1! 65 70 75 80
Рго Аїа Аза Рбе Уаії І1ї1е с1у Іїец Аїа Меє ТПпг сіу Рпе Меє Аїа 5ег 55 85 90 95 сб1у Аї1а І1е сіу Гей ТПг сіу Гей бек Бек Меє бек Тгр Уаї Гей Авп 100 105 110 (516) Нів Іїе Агуд Акуд Уаі Агуд біц Агуд Меє Рго Авр бій Іец сбіц сій Аї1а 115 120 125 пув біп Агд Геш Аза Авр Меє Аїа бій Тук Уа1 с1у біп Агд Тс Гув 130 135 140
Авр Аїа с1іу біп ТПг І1їе сій біц пув Аїа Нів Авр Уаі Агкуд бій 5бег 145 150 155 160
Тпув ТП Туг Авр Уаі Агуд Авр Агуд Авр о ТпПг пув с1у Нів ТБг Аїа Тс 165 170 175 сбі1у б1у Авр Агуд Авр ТПг губ ТпПгс Тпг Агуд бій Уа1! Агд Уаї Аїа Тс 180 185 190
ТЕ
«2105 137 «211» 188 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 97
Меє Аза Авп Уаі Авр Агуд Агуд Уаі Авп Уа1і Авр Агд ТБПг АвБр Гув Щ1У 1 5 10 15
Тем біп Гецп біп Рго біп Туг бій Авр Агуд Уаі сіу Тук с1у Тук 01У 20 25 30
Тук б1у с1у Авп ТПг Авр о Тукг Ппув бек Сув біу Рго бек ТПг АБп сіп
Зо
І1Іе Уаії Аїа їецшц І1е А1а сіу Уаії Рго І1е сіу сіу бек Гей Іецй А1а бо
Тец А1ї1а сі1у Гей ТПг Гей Аза сіу Бек Уаі Іїе сіу Рібе Меє Іец 5ег 35 65 70 75 80
І1їе Рго Гей Рібе Гецй Гей Рпе бек Рго Уаі Іїе Уаі Рго Аїа А1а Гей 85 90 95 40 ТПЕ Іїе с1у їеш Аїа Уаії ТПК с1у чІїе Гешц Аїа бек с1іу Гей Рібе С1Уу 100 105 110
Тецп ТпПг с1у Гей Бек бек Уа1 бек Тгр Уаі Іецй АвБп Туг І1е Агд Щ1У 115 120 125 45
Акуд Бек Авр ТПг о Уаії Рго бій біп Тец Авр Туг Аза Ггув Агд Агкд Меє 130 135 140
Аза Авр Аїа Уаї сіу Ту Аї1а с1у сіп пув с1і1у пув бій Месє с1і1у сіп 50 145 150 155 160
Тук Уаі1і сбіп Авр Гув Аза Ні сій Аза Нібв Авр ТПг бек ІТецй ТПг ТПг 165 170 175 55 бій ТЕ АБп о б1іу пув ТБг Агуд Агуд Аза Нівз Ії1е Аїа 180 185 «2105 198 «211» 180 60 «2125 ПРТ «213» Вгаввіса парив
«4005 98
Меє Аза Авр ТПг Аза Агуд ТБг Нів Нів Авр І1е ТПг б5ег Агуд АБр сіп 1 5 10 15
Тук Рго Іїе Гей сі1у Агуд Авр Агуд Авр біп Туг Рго Туг о1у Агд 5ег 20 25 30
Авр Тут біп ТПг бек б1у бі1іп Авр Туг бек Гув ТПг Агуд біп І1е Аї1а 35 40 45 пу Азї1а Аза ТПг Аза Уаі1і ТПг Аза сіу сіу Бек Гей Ггец Уаї Іец 5ег 50 55 бо зек Гей ТПг Іец Уаї б1у ТПпг Уаії І1ї1е А1ї1а їей ТПпг Уаі Аза ТПг ТЕГ 65 70 75 80
Пес Гей Маії Іїе Рпе бек Рго І1е Гей Маі Рго Аза Іей І1е ТПг Уаї 85 90 95
А1їа Ггечп Гей Іїе ТПг с1у Рпе Гей бек бек сбіу сі1у Рпе с1у І1їе А1а 100 105 110
Авр І1ї1е ТПг Уаї Рібе бек Тгр І1е Туг їув Ту Аї1а ТПг с1у сі Нів 115 120 125
Рго сбіп біу Бек Авр Гув Гей Авр бек Азїа Агуд Меє Ггув Гешй с1у ТЕГ 130 135 140 пу Азї1а сбіп Авр чІ1е пув Авр Агуд Аїа біп Туг Тук біу біп біп Нів
Зо 145 150 155 160
ТП б1у с1у бій Нібв Авр Агд Авр Агуд ТБг Агуд б1іу Тбс Нів Нів Тпс 165 170 175
ТВг Тпг Трє Те 180 «2105 199 «2115» 210 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 99
Меє Аза Авр ТПг Нів Агуд Уаї Авр Агуд ТБг Ар Агуд Нів ІТецп сіп РПе 1 5 10 15 біп бек Рго Тук бі сіу сі1іу Акуд Уаі Бек Іїе сіп Ту сбіц с1у 1У 20 25 30 сі1у б1у Аї1а сіу с1у Тук с1іу с1у Агуд сбіу сіу сіу Тук б1у Аїа с1іц 35 40 45 сбі1у Тук Ппув Бек Меє Меє Рго сій Агуд сіу Рго бек бек ТПг біп Уаї 50 55 бо
Пен бек Рпе Гецп Уаії сіу Маї Ркго І1ї1е Уаії сіу бек Іеп ІТей Аї1а Пе 65 70 75 80
А1їа сі1у Гец Гец Іец Аза сі1у бек Уаі І1їе с1у Гей Гей Іїе бек Іе 85 90 95 60
Рго пеп Рібе Гей Гей Рре бек Рго Уаі І1їе Уаії Рго Аїа Аїа Іецй ТіПг
100 105 110
І1Іе с1у Гец Азїа Аза ТПпг сі1іу Робе Іец Аза бек сіу Меє Рпе СсС1Уу Гей 115 120 125
ТПг б1у Гей бек бек Уаї бек Тер Уаії Ггец Авп Туг Іецй Агд с1у ТПг 130 135 140
Акуд пув бек бек Уаі Рго бій біп Те б1п Тук Аза Ппув Ппув Агкд Меє 145 150 155 160
Аза Авр Аїа Уаї! сСіу Тукг А1ї1а сіу біп ув б1у Ппув с1у Меє с1у сіп 165 170 175
Нів Маії сбіп Авп Гув Аїа біп б1іш Аза Ппув біп Туг Авр І1е бек ТІув 180 185 190
ТПЕ Нів Авр ТПг ТБг ТБг Гуз с1у Нів біц ТБ Тс біп Агуд ТпПг Аза 195 200 205
А1а А1їа 210 «2105 100 «211» 149 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 100
Меє Аза АвБп осбіп ТПг Агуд ТБег Нів біп Авр І1е І1е Уаі Агуд Авр 5ег
Зо 1 в) 10 15
Акуд Ії1е ТБг Ггец Авр Агуд Авр о Нів Рго Гув ТпПг с1у Аїа сіп Меє Уаї 20 25 30 пув Маії Аїа ТПг сіу Уаі Аїа Аїа сіу сі1у Бек Гей Гей Уаї Іецй 5ег 35 40 45 сб1у Гей ТпПг Гешп Аза сіу ТПг Уаі Іїе Аїа Рпе Аза Уаї Аза ТПг Рго 50 55 бо
Пес Гей І1е І1їе Рпе бек Рго Уаі! Гей Маі Рго Аїа Уа1ї! І1е ТПг Уаї 65 70 75 80
Уаї гей Іїе Іїе ТПкг сіу Робе Гей Аза бек сбіу б1у Рпе сС1у Ше Аїа 85 90 95
А1їа І1їе ТБПг Аїа Рібе бек Тгр Гец Туг Агуд Нів Меє ТПг с1у Бех Щ1У 100 105 110 век Авр біп Гув І1е бій бек Аїа Акуд Меє Гуз Уаі сіу бек Акд 01Уу 115 120 125
Тук Авр ТПкг Ппув Тук біу біп Нів Авп І1е сі1у УМаії Нів сбіп сіп Нів 130 135 140 сіп б1іп Аза Аїа 5ег 145 «2105 101 60 «2115 137 «212» ПРТ
«213» Агаспів Пуродаєа «4005 101
Меє Аза бій Аїа Гей Туг Тук сі1у с1у Акд біп Агд біп бій сбіп Рго 1 5 10 15
Акуд Бек ТБПг біп Тїец Уаії ув Аїа ТПг ТПг Азї1а Уаі Уаі1і Аїа с01у Щ1У 20 25 30 зек Гей Гец І1е Іецшц А1їа с1у їец Уаі Іецп А1ї1а с1у ТПг Уаі1і1 ІШе .Щ1У 35 40 45
Пес ТПг ТЕ Іїе ТПг Ркго Гей Рібе Уаї І1їе Рпе бек Ркго Уаї Гей Уаї 50 55 бо
Рго Аїа Уаі Іїе ТПг Уаії Аїа Гей Гей сіу Гей сі1у Рпе Гей Аїа 5ег 65 70 75 80 сі1у б1у Рпе сіу Уаі Аїа Аза Іїе ТПг Уа1і Гей ТПг Тер І1е Туг Агд 85 90 95
Тук Уаі1 ТПкг сіу Ппув Нів Рго Рго сіу Аза АвБп біп Тецй АвБр ТПг Аїа 100 105 110
Акуд Нів пуб Гец Меєсє с1у Гув Аза Агд б1цп І1е Гув Авр Рпе с1у сіп 115 120 125 біп бі1іп ТПпг бек с1у Аїа сіп Аїа 5ег 130 135
Зо «2105 102 «2115» 150 «212» ПРТ «213» Агаспів Пуродаєа «4005 102
Меє ТпПг Авр Агу ТБг о біп Рго Нів Аза Уаї сіп Уа! Нів Трг ТПг Аї1а 1 5 10 15 б1у Акд Рпе с1іу Авр ТПг Аза Аза сіу ТПг Ап Агуд Туг Аза АвБр Агд 20 25 30 б1у Ркго Бек ТПг Бек Ппув Уаі І1їе Аїа Уаі Іїе ТПг сіу Гец Рго І1е 35 40 45 сбі1у б1у ТПпг Гей Гей Геш Рпе Аза сіу гейш Аїа Гей Аза сС1у ТПг Іецй бо
Тец б1у Геп Аза Уа1і ТПг ТПг Рго Гей Рпе Іїе Гей Ріе бек Рго Уаї 65 70 75 80 50 І1їе УМаії Ркго Аїа ТПг Іїе Уаії Уаї сіу Гей бек Уаі Аїа сіу РБПе Гей 85 90 95
ТПг Бек с1іу Аїа Сув біу ІТецйп ТПг сіу Пец бек бек Рпе бек Тгр Уаї 100 105 110 55
Меє Авп Туг Іїе Акуд сіп ТПг Нів сіу бек Уаі Рго бій сбіп Гей сіц 115 120 125
Мен Аїа пув Нів Акуд Меє Аза Авр Уаі Аза сіу Тук Уаї с1у біп Гув (516) 130 135 140
ТПЕ Ппув Авр Уаї с1у сіп 145 150 «2105 103 «211» 166 «212» ПРТ «213» Агаспів Пуродаєа «4005 103
Ме бек Авр біп ТПг Агуд ТБг с1іу Тук сіу сіу сбі1у б1у бек Ту щу 1 в) 10 15 зек бек Тук біу біу б1у сб1у ТПг Тук бі1у Бек бек Тук б1і1у ТПг 5ег 20 25 30
ТУкК Авр Рго бек ТПг АБп о біп Рго Іїе Агуд сбіп Аїа І1е Ппу5з Рпе Меє 35 40 45
ТПг Аїа бек ТПг І1їе сіу Уаії бек Рпе Іїецп Іїе Гей Бек с1іу Іец І1е 50 55 бо
Тецп ТПпг сі1у ТПпПг Уаії Іїе сіу Гей Іїе Іїе Аза ТПг Рго Гецй Іец Уаї 65 70 75 80
І1їе Рпе бек Рго І1е Гецп Уаі Рго Аїа Аїа І1е ТПг Іец А1їа Гей Аїа 85 90 95
Аза сіу с1і1у Рбе Іецй Рпе бек біу бі1у Сув б1у Уаі Аїа Аза І1е Аї1а 100 105 110
Зо А1ї1а Гей бек Тгр Гей Тук бек Тук Ма! ТЕ с1у Ппув Нів Рго Аї1а 01У 115 120 125 век Авр Агд Тец Авр Туг Аза Гуз біу Маі Іїе Аза Авр ув Аїа Аг4д 130 135 140
З5
Авр Уаі1 пув Авр Агуд Азїа Гув Авр Туг Аїа сб1у Аза с1у Агуд Аза сіп 145 150 155 160 бі б1у ТПпг Рго с1у Туг 40 165 «2105 104 «2115 176 «212» ПРТ 45 «213» Агаспів Пуродаєа «400» 104
Меє Аза ТПг Аїа ТПг Ар Агуд Аза Рго Ні біп Уаі сіп Уа1і Нів ТЕГ 1 5 10 15 50 Рго ТПг ТБг біп Агуд Уаії Авр Уаї Рго Акуд Агуд біу Тук Авр Уа1! 5ег 20 25 30 сі1у б1у б1у Іїе Ппув ТПг Гей Гей Рго бій Агуд с1іу Рго бек ТПг 5ег 55 біп І1е чІ1е Аза Уаії Гей Уаі1і сіу Уаі Рго ТПг сіу сіу ТБПг Іец Іей бо
Тецп Гей бек сіу Гей бек Гей Гей с1у ТПг Іїе Ії1е сіу Гец Аза І1е (516) 65 70 75 80
А1їа ТПг Ркго УМа1і! Рпе Іїе Рпе Рбе бек Ркго Уаі Іїе Уаії Рго А1їа Уаї 85 90 95
Уаї ТпПг Іїе с1у Ггеш Аза Уаі ТПг с1у Іїе Гей ТПг Аза с1у А1а Сув 100 105 110 сб1у Гей ТПпг сі1у Гей Меє бек Гей бек Тгр Меє І1е Авп Робе І1е Агд 115 120 125 сіп Маі Нів с1у ТПг ТБг УМаї Ркго Авр сбіп Гей Авр бек Уаї Гпув Агд 130 135 140
Акуд Меє Аза Авр Месє Аза Авр Туг Уаі б1у біп Ппув ТПг Гпув Авр Аїа 145 150 155 160 сбі1у б1іп бій чІ1е сіп ТПг пув Аза сбіп Авр Уа1і1 Ппув Агуд бек бек вег 165 170 175 «2105 105 «2115 153 «212» ПРТ «2135» Вісіпив сошпштипів «4005 105
Меє Аза АвБр Агуд Рго сіп Рго Нів сіп Уаі біп Уаі Нів Агуд Тукг Авр 1 в) 10 15
Рго ТПг ТПг б1іу Тук пув с1у біп біп пув с1у Рго Бек Аїа бек Гув 20 25 30
Зо Уаї теп Аза Уаї Геп ТПг Ррбе Гей Рго Уаї сіу сіу с1іу Гечп Іецй 5ег
Тецп бек б1у Іїе ТПг Гей ТПг АвБп ТПг Гей І1їе сіу Месє Аза І1е А1а бо
З5
ТПЕ Рго Гей Рбе Іїе Гецш Робе сіу Рго Ії1е Іїе Гей Рго Аза Аїа Уаї 65 70 75 80
Ууаї Іїе с1у Ггеш Аза Меє Мес Аїа Рбе Меє Уаії Аза сС1у А1а теп ШУ 40 85 90 95
Тецп бек бі1у Гей ТПг Бек біп бек Тгр Аїа Гец Гуз Тук Рпе Агд с1и 100 105 110 45 сіу ТБг АТїа Меє Рго бій бек Гей Авр біп Аїа Ппув Пув Агуд Меє сіп 115 120 125
Авр Меє Аїа сіу Тук УМаї сі1у Меє Ппув ТПг Ппув бій Уаї с1у сбіп Авр 130 135 140 50
І1е біп Акд ув Аїа бі1іп сій сб1Уу Гув 145 150 «2105» 106 55 «211» 138 «212» ПРТ «2135» Вісіпив сошпштипів «400» 106
Меє Аза бій Нів біп біп бек Рго Уа1і Уа1 бек Нів Агд Рго Агд Уаї 60 1 в) 10 15
Ап обіп Гец Уаї Туз Азїа сб1у ТБПг Аза Аза ТПг Аза сі1у Бек Бек ГІец 20 25 30
Тецп Рпе Гей бек с1іу Гей ТПг Гей ТПг сіу ТПг Уаї І1їе Аїа Іецй А1а 35 40 45 ем Аїа ТПг Рго Гей Меє Уаї Гей Рібе бек Рго Уаі Іецп Іецй Рго Аїа 50 55 бо
Уаї І1ї1е І1е І1їе бек Іїей І1е с1у Аї1а сіу Рпе Іїей ТПг бек с01у ШУ 65 70 75 80
Рпе сі1у Рре сі1у Аїа І1їе Гей Уаії Іецй бек Тгр І1їе Туг Агд Тук Уаї 85 90 95
ТП б1у Ппув біп Рго Рго біу Аїа сіц бек Гец Авр біп А1а Агд Іецй 100 105 110 пуб Теп Аї1а сіу пув Аїа Акуд сі Меє пув Авр Агуд Аїа біц біп РБе 115 120 125 сбі1у бі1іп Нів Уаі ТП с1іу сбіп біп ТПг бег 130 135 «2105 107 «2115 226 «212» ПРТ «213» біусіпе шах «4005 107
Зо Меє Тпг Трпг обіп Уа1ї Рго Рго Нів бек Уаії сіп Уа1! Нів Трг ТПкс Тбг 1 5 10 15
ТПЕ Нів Акуд Тугк біц Аза сіу Уа1 Уаї Рго Рго б1у А1ї1а Акд Рпе сі1ци 20 25 30
З5
ТПг Бек Тук бій Аїа сіу Уаі пув Аїа Аза бег І1е Тук Нів бек с1ци
Акуд с1у Рго ТБПг Тс бек біп Уаі Іец Аї1а Уаії гей Аза с1у Гей Рго 40 50 55 бо
Ууаї сі1у с1у Іїе гей Гей Гец Геш Аза сіу Гецп ТПг Іецп Аза с1у ТПг 65 70 75 80 45 ем ТПг б1у Гешп Аїа Уаі Аза ТБг Рго Гей Рпе Уаі Іей Роре бек Рго 85 90 95
Уаї Гей Уаі Рго Аза ТПг Уаії Аїа Іїе сіу Гец Аїа Уаі Аї1а с1у РПе 100 105 110
Тецп ТПг бек с1іу Аза Рпе сіу Гей ТПг Аїа Гей бек бек РіПе бег Тгр 115 120 125
І1е гец Авп Туг І1е Акд бій ТБг біп Рго Аза бек бій Авп Гей Аї1а 130 135 140
Аза Аза Аїа пуб Нів Ні Іейп Аїа біц Аза А1ї1а сій Тує Уа1і с01у сіп 145 150 155 160 (516) пув Тк пув бі Уаї с1у біп Пув ТПг Ппув бій Уаї сС1у б1п АБр Пе 165 170 175 біп бек гув Аза біп Авр ТПг Агуд бі Аза Аза Аза Агд АвБр Аїа Агд 180 185 190 сі Аза Аї1а Аза Агуд Авр Аїа Акуд бій Аза Аза Аза Агкуд АБр Аїа Тувг 195 200 205
Ууаї віп Аза Агуд Авр Уа1ї пув Агуд ТБг ТБг Уа! ТБПг Аза ТПг ТПг Аза 210 215 220
ТПгЕ Аї1а 225 «2105 108 «2115 223 «212» ПРТ «213» біусіпе шах «400» 108
Меє ТПг Тр оУаї Рго Ркго Нів бек Уаії сіп Уаії Нів ТПг ТПг ТркЕ Нів 1 в) 10 15
Акуд Туг бі Аза сбіу Уаї МУМаї Рго Рго А1ї1а Агд Рпе сій Аїа Рго Аг4д 20 25 30
Тук бі Аїа с1у І1їе Гпув Аза Рго бек бек І1е Туг Нів Бек бій Агд б1у Ркго ТПг ТпПг о бек біп Уаі їеш Аїа Уаі1і Уа1і1 Аза сі1у Гец Рго Уаї бо
Зо сі1у б1у І1їе Гей Гей Гей Геш Аза сіу Гей ТПг Гей Аїа с1іу Тік Іей 65 70 75 80
ТП б1у Гей Уаї Уаії Аза ТПг Рго Гец Робе І1е І1е Рпе бек Рго Уаї1ї
З5 85 90 95
Тец І1їе Рго Аза ТПг Уаі Аза І1е сіу гейш Аїа Уа1 Аза сіу РіПе Іей 100 105 110 40 ТПг Бек сіу Уа1ї Рре с1у Геп ТПг Аїа Гей бек бек Рре бек Тер І1е 115 120 125
Тец АБп Туг Іїе Агуд бій ТПг сбіп Рго Аїа бек бій Авп Гец Аїа А1а 130 135 140 45
Аза Аза пуб Нів Ні Іец Аї1а сбіц Аза Аза сбіцп Тук Уа1ї с1у сбіп Гув 145 150 155 160
ТПЕ пув бій Уа1 сі1у біп Гпув ТПг пув біц Уаії с1у б1п АБр Ше сіп 50 165 170 175 зек Мпув Аїа біп Авр ТПпг Агуд бі Аза Аза Аза Агуд АвБр Аїа Аг9д Авр 180 185 190 55 Аза Агуд сій Аза А1ї1а Аза Агуд Авр Аїа Акуд Авр Аза Ппув Уаі бій А1а 195 200 205
Акуд Авр о Уаї пуб Агуд ТПг Тпг о Уаї ТПг Аза ТПг ТпПг Аза ТПг А1а 210 215 220 60 «2105 109
«2115» 155 «212» ПРТ «213» іпиют ивісбасіввітит «4005 109
Меє Авр біп ТпПг Нів біп ТПг Туг Аза с1іу ТПг ТБг біп АвБп о Рго бег 1 5 10 15
Тук б1у сі1у сіу с1іу ТПг Меє Тук біп біп біп біп Рго Агд бек Туг 20 25 30 біп А1ї1а Уаї пув Аза Аза ТПг Аза Аза ТПг Аза сіу сіу бек Іец І1е 35 40 45
Уаї Гей Бек сіу Гей Іїе Гец ТПг Аїа ТПг Уаї І1е бек Те Ше Ше 50 55 бо
А1їа ТПг Рго ІТей Ге Маії Іїе Рбе бек Ркго Уаї Гецй Уаї Рго Аїа Іецй 65 70 75 80
І1їе ТпПг Уаї с1у Гешп Гецп Іїе ТПк с1іу Рбе Гей Аза бек с1у б1і1у РПе 85 90 95 сбі1у Маі А1ї1а Аза Уа1ї ТПг Уа1ї Гей бек Тгр Іїе Туг Агд Тук Уа1ї ТЕПг 100 105 110 сбі1у б1у Нів Рго Аїа сіу сіу Авр Бек Гей Авр біп Аїа Агд бек Гув 115 120 125
Тец А1ї1а с1у пув Аїа Агуд сій Уаі Ппув Авр Агуд Аїа бек біц Робе А1а
Зо 130 135 140 біп бі1іп Нів Уаі ТП с1іу с1у біп біп ТПг бег 145 150 155
З5 «2105 110 «211» 180 «212» ПРТ «213» іпиют ивісбасіввітит «4005 110 40 Месє Азїа АвБр Агуд ТБбг ТБг обіп Рго Ні сбіп Уаі сбіп Уаї Нів ТПг сіп 1 5 10 15
Нів Нів Тук Рго ТПг біу б1у Аїа Рбе сіу Агкд Тук біц с1у Уаї Іецй 20 25 30 45 пув б1у б1у Рго Тук Нів сбіп сбіп с1іу ТПг сіу бек сіу Рго Бек Аїа зек Мпув Уаії Іец А1їа Уаї Меє ТПг Аза Іїецй Рго І1їе сіу с1у ТПг Ієец 50 з9 бо
Тец Аї1а теп Аза с1у Іїе ТПг еп Аза сіу ТПг Меє І1е СсС1у Гей Аїа 65 70 75 80
І1їе ТПг ТБг Рго І1е Рпе Уаії І1їе Сув бек Рго Уаі Гей Уаі1ї Рго А1а 85 90 95
А1їа гей Ггец І1е с1у Рпбе А1ї1а Уа! б5ек Азїа Рпе Гей Аїа бек сбіу Меє 100 105 110 60
А1їа с1у Гецп ТПг б1у Іїецйп ТПг бБег Іец бек Тгр Рпе Аза Агуду Тукг Ієец
115 120 125 біп б1іп Аїа сіу сбіп сіу Уа1 сіу Уаії сіу Уаії Рго Авр бек Рпе Авр 130 135 140 біп А1ї1а ув Агуд Агуд Меє сіп Авр Аїа Аза сіу Тук Месє с1у біп Гув 145 150 155 160
ТПЕ пув бій Уа1ї сі1у біп біцш І1е бі1іп Агуд Ппув Бек біп Авр Уаї Гпув 165 170 175
А1їа Бек Авр Гув 180 «2105 111 «211» 181 «212» ПРТ «213» Не1іапепив аппицйв «4005 111
ТПЕ ТП Тпс ТБг Туг Авр Агуд Ні Рпе ТПг ТБПг Тк біп Рго Нів Туг 1 5 10 15
Акуд біп Авр Авр Агуд бег Агуд Тут Авр о біп біп ТПг Нів Бек біп б5ег 20 25 30
ТПг Бек Акуд ТПг Ггец Аїа І1е І1ї1е Аза Гец їец Рго Уаі сС1у с1у І1е
Тецп Іїецп с1у Геш Аза Аїа Гей ТПг Рпе Іїе сіу ТПг Гей І1е С1Уу Іей
Зо 50 з9 бо
А1їа Ггеп Аза ТПг Рго Гей Рпе Уаії І1їе Робе бек Рго І1е І1е Уаї Рго 65 70 75 80 35 А1їа Уаї Гей ТБПг І1е сі1у Гей Аза Уаі ТБг сіу Рпбе Гей Аза бек 01Уу 85 90 95
ТПЕ Рпе сіу Гей ТПг біу Тец бек бек Гецп бек Тук Гей Рпе Ап Меє 100 105 110 40
Уаї Акуд сбіп ТПг Аїа сіу бек Уаі Рго бій бек Гец Авр Тук Уаї Гув 115 120 125 сбі1у ТПпг Гей сіп Авр Аїа сіу сій Туг Аза сіу біп Гув ТПг Гув Авр 45 130 135 140
Рпе с1іу біп Гпув І1е біп бек ТПг Аза Нів бій Меє сС1у АвБр сбіп Щ1У 145 150 155 160 сіп Маії с1у УМаї Нів Аза сіп Уаії сіу сі1у с1у гув біц с01у Ага Туз 165 170 175 зек с1у Авр Агд ТЕГ 180 «2105 112 «2115» 156 «212» ПРТ «213» йеа шаув 60 «4005 112
Меє Аза Авр Нів Нів Акуд сіу Аїа ТПг сіу с1у с1у с1у с1у Тук щЩУ
1 5 10 15
Авр Гей сбіп Акуд біу бі1у б1у Меє Ні5 сб1у б1п Аза сбіп сбіп сбіп сіп 20 25 30 пув біп с1у Аїа Меє Меє ТПг Аза Гей пуб Азїа Азїа ТПг Аза Аз1а ТПг 35 40 45
Рпе сіу сіу бек Меє Іецй Уаії Іец бек б1у Тейп Іїе гейш Аїа с1у ТЕГ 50 з9 бо
Уаї І1ї1е Аза Гей ТПг Уаї Аза ТП Рго Уаі! ІТецй Уаі І1їе Робе бек Рго 65 70 75 80
Уаї Гец Маії Рго Аїа Аїа І1е Аїа еп Аїа Гей Месє Аї1а Аза с1у Ріе 85 90 95
Уаї ТПпг Бек сіу сіу Гец сіу Уаі Аза Аза Гей бек Уа1і РПпе бек Тгр 100 105 110
Меє Тук Ппув Тук Гей ТПг сі1у Ппув Нів Рго Рго Аїа Аза АБр сіп Гей 115 120 125
Авр Нів Аїа пуб Аза Агд Іїеп Аза бек Гпув Аза Агуд Авр Уаї Гув Авр 130 135 140
Аза Аза сіп Ні Агуд І1е АвБр сбіп Азїа біп с1у 5бег 145 150 155
Зо «2105 113 «211» 244 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 113
Уаї бек Ппув Рго Авр Авр Суб Агуд Агуд І1їе Уаі Авр бій ТПг І1е 5ег 1 5 10 15
Нів Рпе сіу Агкд Гец Авр Ніб Гей Уаії Авп АвБп Аїа б1у І1е Меє сіп 20 25 30
І1е бек Меєсє Рпре б1ц АБп І1е біц б1іц І1е ТПпг Агуд ТБПг Агуд Аїа Уаї 35 40 45
Ме Авр ТПг Авп Рбе Тер сіу Бек Уа1 Тукг ТіПг ТПг Агуд Аза Аза Гей з9 бо
Ркго Тук Ггец Агуд біп бек Авп біу Гу5 І1е Уаі Аїа Меє Бек бек 5ег 65 70 75 80 50 А1а Аза Тер ей ТПг Аза Рго Агуд Меє бек Рібе Туг АБп Аїа бек ТІув 85 90 95
Аза Аза Гей Гец АБп Рпе Рпе біц ТПг Іецй Агд І1е сій Ге сіу б5ег 100 105 110
Авр Уа1 Нів І1ї1е ТПг І1е УМаї ТБПг Рго б1у Тук І1е сі Бек сій Іец 115 120 125
ТП біп с1у Ппув Тук Рре бек сіу біц сбі1у біц Іец Уаї Уаї АБп сіп (516) 130 135 140
Авр І1е Агуд Авр Уаі! біп І1е сіу Азїа Рпе Рго Уаі ТПг Бек Уа1ї! 5ег 145 150 155 160 сі1у Сув Аї1а Ппув с1у Іїе Уа1 пув сіу Уа1і Сув Акд Пув біп Агд Туг 165 170 175
Уаї ТпПг біш Рго Бек Тер Рбе Ппув Уа1! ТПг Тук Іец Ткгр Гув Уаї РПе 180 185 190
Сув Рго біц Гецп Іїе бій Тгр с1у Сув Агкд Гецп Гей Рібе ІТей бек 1У 195 200 205
Нів сіу ТПг бек біц пув АвБп Аза Гей Авп Гуз Гу І1е Тей АБр Ше 210 215 220
Рго сіу Уаі Агкд бек Аза Гей Туг Рго бій бек Іїе Агуд ТПг Рго сіц 225 230 235 240
І1е пув бек бій «2105 114 «211» 349 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 114
Меє сій гей Іїе Авп Авр Рібе Гей Ав5п Гей ТПг Аза Рго Рпе Рпе ТПг 1 5 10 15
Зо Рпе Рпе с1у Гей Сув Рпе Рпе Гей Рго Рго Рпе Тук Рпе Рпе Гуз РіПе 20 25 30
Уаї біп Бек Іїе Рпе бек ТПг Іїе Рпе бек бій Авп Уа! Тук С1Уу Гув
З5
Уаї Уаї гейш Іїе ТПг сіу Аза бек бек сіу І1е с1у б1цп сбі1іп Гей Аїа бо
Тук біш Тук АТїа бек пув бі1у Аїа Сув Гец Аїа Іїейп ТПг Аз1а Агд Агд 40 65 70 75 80
Тув АвБп Агд Гей бі бі Уаі1 Аза сій І1їе Аза Акуд сіц Уаї сі1у бег 85 90 95 45 Рго Авп Уа! Уаї ТПпг Уаії Нів Аїа Авр Уа1ї! бек пуб Рго Авр Авр Сув 100 105 110
Акуд Агуд ч11е Уаії АвБр біш Тс о І1е бек Ні Рпре б1у Агд Гей Авр Нів 115 120 125 50
Тец Маії АвБп АвБп Аза сіу Іїе Меє сіп Іїе бек Меє Робе біц АБп І1е 130 135 140 бі бій І1е ТПпг Агуд ТБг Агуд Аїа Уа1і Меє Авр ТПг АБп РПе Тгр Щ1У 55 145 150 155 160
А1їа Уа1 Тук ТПг ТБг Агуд Аза Аза Іецй Рго Тук Гей Агуд біп Бек Авп 165 170 175 (516) сі1у пув І1е Маі Аїа Мес бек бек бек Аї1а Аза Тгр Гей ТПг Аїа Рго 180 185 190
Акуд Меє бек Рбпе Туг АБп Азїа бег їув Азїа Аїа Гей Гей Ап Ропе Ре 195 200 205
Сі ТЕ Ггец Агуд Іїе сій Гей сіу бек Авр Уаї Нів І1е ТПкг І1е Уаї1! 210 215 220
ТПЕ Рго сіу Тук І1їе біц бек бій Гей ТБПг біп сб1у Гуз Тук Уаї 5ег 225 230 235 240 сі1у б1п сб1у бій Ге Уаі1і Уаі1і АвБп сбіп Авр І1е Агд АвБр Уаі сіп Ше 245 250 255 б1у А1ї1а Рпе Рго Уаі ТПг бек Уаі бек с1у Акуд Аїа Пув сіу І1е Уаї 260 265 270 пув б1у Маї Сув Агуд пув бій Агуд Тує Уаії ТПг біц Ркго бек Тгр РІе 275 280 285 пув Ма1! ТПЕ Тук Гей Ткр Гпув Уа1 Робе Суб Рго сій Те І1е сій Тер 290 295 300 сбі1у Сув Акд Геи Меє Ррпе Гей бек сіу Нів біу ТПг Рго б1п1 бій Авп 305 310 315 320
А1їа гей Авп пуб Гуз І1е ІТецй Авр І1е Рго сбі1іу Уаі Агуд Бек Аїа Гей 325 330 335
Тук Рго бій Рго І1е Агд ТПг Рго бій І1їе Ппув бек сіц
Зо 340 345 «2105» 115 «211» 456 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 115
Меє Уаї Авр Гей гей Авзп бек Уа1і Меє Авзп Гец Уаії Аза Рго Рго Аза 1 5 10 15
ТП Меє Уаї Уаї Мес Аза Рре бек Тер Рго Гей ІТецй Сув Рпе І1е ТЕПбг 20 25 30
Рпе бек біц Агд ІТецй Тук Авп бек Тук Рпе Уаі ТПпг бій Авр Меє сіц 35 40 45
Авр пув Уаї Уаї Уаї І1е ТПпг сі1у Аїа бек Рго Аїа І1е с1у бій сіп бо
І1е Аїа Тук біц Тук А1їа Гув Агуд бі1у А1ї1а АБп Гей Уаі Гей Уа1 Аї1а 50 65 70 75 80
Акуд Агуд бі біп Агд тей Агуд Уа! Уаії бек АвБп АБп Аза Агд сбіп І1е 85 90 95 55 с1у Аїа АБп Ні Уаії І1їе І1е І1е Аїа А1а Авр Уаії Уаї гув бій Авр 100 105 110
Авр Сув Агуд Агуд Роре І1е ТПг біп Азїа Уаї Авп Туг Тук с1у Акд Уаї 115 120 125 60
Авр Нів Ггец Уаії Авп бек Аза бек Іец б1у Нів ТПг Рпе Тук Ропе Авр
130 135 140 біц Маї Бек Авр ТПг ТПг Уа1 Рпе Рго Нів Гей Гей Авр І1е АБп РіПе 145 150 155 160
Тер б1у Авп Уаї Тук Ркго ТПг Тук Уаі Аїа Іецй Рго Нів Гей сіп Гув 165 170 175
ТПЕ Авп с1іу Агуд І1е Уаії Уаі Авп Аза бек Уа! бій АвБп Тгр Гей Рго 180 185 190
Тецп Рго Акуд Меє бек Гей Туг Бек Аза Аїа пув Аза Аза Гец Уаії Авп 195 200 205
Рпе Тук бій ТПг Гецп Агуд Рпе бій Гей Авп б1у Авр Уаії с1у І1е ТПг 210 215 220
І1е Аїа ТПг Нів б1у Тер І1е сіу бек бій Меє бек Агуд с1у Ппув Ріе 225 230 235 240
Меє гей бі біш с1у Аїа сіц Меє сіп Тер пув бій біц Агд бій Уаї 245 250 255
Рго Аїа АвБп о біу біу Рго Гей біц біш Рпе Аї1а Ппув Меє Іїе Уа1 А1а 260 265 270 сб1у А1ї1а Сув Акуд б1у Авр Аїа Тук Уаі Ппув Рпе Рго Авп Тгр Туг Авр 275 280 285
Зо Уа1 Рре Ггецп Гей Туг Акуд Маі! Рбе ТПг Рго Ап Уа! Гей Агуд Тгр ТПг 290 295 300
Рпе пуб Гец Іец Іец бек бек біц бі1іу бек Агуд біп Бек бек Гей Уаї 305 310 315 320
З5 сі1у Маї сб1у сбіп с1у Гей Рго Рго бі бій бек бек бек біп Меє Гув 325 330 335
Тецп Меє тей сі с1іу сіу Бек Рго Агуд Уаі ТПг Аїа бек Рго Рго Агд 340 345 350
Тук ТПкгЕ Ркго бек Рго бек Рго Рго Нів Нів ТПг Аїа бек Рго Рго Агд 355 3З6о 365
Тук ТПЕ Рго бек Рго бек Рго Рго Нів Нів ТПг бек бек Рго біп Агд 370 375 380
Тук ТПкгЕ Ркго бек Рго бек Рго Рго Нів Туг ТПг бек бБег Агуд Нів Агд 385 390 395 400
Тук ТПкЕ Ркго Бек Рго бек Рго Рго Нів Туг ТПг біц бек Рго Рго Іецй 405 410 415
Тук ТпПкЕ бій бек Рго Рго Нів Тук ТПг ТПг Бек Рго Ап о Тгр Тук ТЕГ 420 425 430 біц бек Рго Рго Агуд Тукг ТПг Рго Бек Рго бек Рго Рго Агд РПе 5ег 435 440 445 (516) Агуд Рпе Авп І1е сбіп бій Гечй Ркго 450 455
«210» 116 «211» 348 «212» ПРТ «2135 Бевашиют іпаісцюш «400» 116
Меє Авр гейш Іїе Нів ТПг Рібе Гей Ав5п Гец І1е Аза Рго Рго Рпе ТПг 1 5 10 15
Рпе Рпе Рібе Гей Гецй Рпе Рпе Тей Рго Рго Рпе сіп чІ1е Рпе Гуз РіПе 20 25 30
Рпе Гец бек І1е Іец б1у ТПг Іец Рпе бек бій Авр Уаі1 Аїа с1у ГПув 35 40 45
Уаї Уаї Уаі Іїе ТПг сіу Аза бек бек сіу І1е с1у б1іц бек Іецп Аїа 50 55 бо
Тук біш Тук Аїа пув Агуд бі1у Аїа Сув Гец Уаі Іешп А1ї1а А1а Агд Аг4д 65 70 75 80 бі Агкд бек Гей біп бі Уаі1 Аїа сій Агуд Аїа Агуд Авр Гец сіу бег 85 90 95
Рго Авр Уаі! Уаї Уаії Уаі Акуд Аїа Авр Уа1! бек пув Аїа бій Авр Сув 100 105 110
Акуд пув Уаї Уаії Авр біп ТПг Мес АвБп Агуд Рпбе б1у Агд Гей Авр Нів 115 120 125
Зо
Тец Маії Авп Авп Аїа сіу Іїе Ме Бек Уа1 бек Меє Ггец сіц сіц Уаї 130 135 140 бі Авр чІ1е ТПпг с1у Туг Агуд бій Тпс Меє Ар І1е Авп Робе Тер 01У 145 150 155 160
Тук Уа1 Тук Меє ТБг Агуд Рпбе Аза Аза Рго Туг Іец Агуд АвБп бБег Агд 165 170 175 с1у Акуд І1е Уаї Уаії Пей бек бек бек бек бек Тер Меє Рго ТПг Рго 180 185 190
Акуд Меє бек Рбпе Туг АБп А1їа бег їув Азї1а Аї1а І1е Бек біп Рбе Ріє 195 200 205 бі Тс Гей Агуд Уаі бій Рбе сіу Рго Авр Іїе сіу І1е ТПг Іец Уаї 210 215 220
ТПЕ Рго сіу Рпе І1їе біц бек бій Гей ТБПг біп б1у Гув Рпе Тук Авп 225 230 235 240
Аа с1у біц Акуд Уаі І1їе Авр біп Авр Меє Агуд Авр Уаі сіп Уа1! 5ег 245 250 255
ТПЕ Трг Рго І1їе Іїей Агуд Уаі сбіц Бек Аїа Аза Агуд бек Іїе Уаі Агкд 260 265 270 зек Аїа І1е Агкд бі1у б1п Агуд Тук Уаі ТПпг бій Рго Аїа Тер Рпе Аг4д 275 280 285 60
Уаї ТпПгЕ Тук Тер Тер пув Гей Рпе Сув Рго сій Уаї Месє сі Тгр Уаї
290 295 300
Рпе Агд Гец Меє Туг Іейп Аза бек Рго б1у бій Рго бій пув бій Так 305 310 315 320
Рпе с1і1у Ппув пуб Маії Іецй Авр Тук ТПг бі1іу УМаї Ппув Бек Гей Гей Туг 325 330 335
Рго біц ТПг Уаії біп Маї Рго біц Рго Гув Авп Авр 340 345 «2105 117 «211» 350 «212» ПРТ «213» 7еа щшаув «4005 117
Меє гей сі1у Меє бек Агуд ТПг сіу Гей Аїа сіу Аї1а Аза Гей Аг9д Уаї 1 5 10 15
А1їа Гей ТПг Аїа Гецй Гей Рго Гецп Уаі Гей Рго Аї1а Тук Тук Уа1ї! Туг 20 25 30
Тпув Гей ТПг ТПпс Тук Гей Гец сіу Аїа Уаі Рпе Рго б1цп Авр Уаї Аїа 35 40 45 с1у пув Уаї Уаії гейш Іїе ТПг сіу Аїа бек бек сіу І1е с1у б1іц Нів 50 55 бо
Тец А1ї1а Тук сій Тугк Аїа пув Агуд сіу Аїа Туг Іец А1ї1а Іецп Уаї Аїа
Зо 65 70 75 80
Акуд Агуд бі Аза бек ІТец Агуд біц Уаії сб1у Авр Уаі Аїа Геи с1Уу Іец 85 90 95 сіу бек Рго сіу Уаі Гей УМаї Гей Рго Аїа Авр Уа1ї! бек Ппув Рго Аг4д 100 105 110
Авр о Сув біц біу Роре І1е Авр Авр ТПг І1е бек Тук Рпе с1у Агд Іец 115 120 125
Авр Нів Гей Уаії Авп АвБп Азїа бек Іїе Тгр біп Уа1 Сув Пув Рое сій 130 135 140 бі І1е сбіп Авр Уаі Агу Нів Гей Агуд Аїа Гей Меє Авр І1е АБп РіПе 145 150 155 160
Тер б1у Нів УМаї Туг Рго ТПг Агд Гей Аза Іїе Рго Нів Гей Агд Агд 165 170 175 зек Акад сбіу Агуд І1е Уаї сіу УМаії ТПг бек Авп бек бек Туг І1е РіПе 180 185 190
І1е с1у Агд АБп ТП Рпе Туг Авп Аза Бек ув Аза Аза Аїа Гей 5ег 195 200 205
Рпе Туг Авр ТПг Іец Агкуд Меє біц Іец б1у бек Авр І1е Агд Ії1е ТЕГ 210 215 220 бі Маї Уаї Рго сіу Уа1 Уаі1 сій Бек бій Іїе ТПкг пув б1у пув Меє (516) 225 230 235 240
Тецп ТПпг Ггув сіу с1у біш Меє пув Уаі Авр біп Авр біц Агд АБр А1а 245 250 255
І1е Гец бі1у Рго ТПг Рго Аза біц Ркго Уаії с1у Авр Рпе Аїа Агд ТЕГ 260 265 270
Уаї Уаі Агуд Авр Уа1 Сув Акуд сіу Аза Акуд Тук Уаі Рпе бій Рго Аг4д 275 280 285
Тер Тук Меє сі1у Ма1! Тук Ггеш Гец Агуд Аїа Сув Гей Рго біц Уаї Іец 290 295 300
Аза ТЕгр Авп о бБег Агд ІТец Тецп ТПг Уаі Авр ТПпг Уаі с1у Аїа Бек ТЕГ 305 310 315 320
ТПЕ Авр ТПг Гей сіу Ппув Тгр Гей Уаії біц Гец Рго бі1у Уаі Агд Аг4д 325 330 335
Уаї Уаї біп Рго Рго бек Гец Агуд Бек Рго сіц І1е Гу5 Авр 340 345 350 «210» 118 «2115» 245 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «400» 118
Меє с1у ТПг Аза ТпПг сій І1е Меє бій Агуд Авр Аїа Мес Аза ТПг Уаї 1 5 10 15
Зо
Аза Ркго Туг Аза Ркго Уаі ТПг Робе Ніб5 Агуд Агуд Аї1а Агуд Уаі1і Авр Іей 20 25 30
Авр Авр Агд Гей Рго Гув Рго Туг Меє Рго Агуд Аза Гей сбіп Аза Рго
З5 35 40 45
Авр Акуд бі Нів Рго Тук б1у ТБПг Рго б1у Нів Гув Авп Тук С1Уу Іей 50 55 бо зек Уаі Ге біп сбіп Ніз Уаі Аза Рпе Рібе Авр І1е Авр Ар АвБп 01Уу 65 70 75 80
І1е І1їе Тукг Рго Ткгр бій ТПг Туг бек б1у Гей Агуд Месє І1е с1у РБПе 85 90 95
Ап о І1е І1їе сіу бек Іїец І1ї1е І1е Аїа Азїа Уаії Іїе АвБп Гей Аїа Гей 100 105 110 зек Тут Аїа ТПг Іец Рго с1у Тгр Гей Рго Бек Рго РоПе Робе Рго І1е 115 120 125
Тук Іїе Нів Авп І1е Нів пуб бек Ппув Нів біу Бек Авр бек Агд ТПг 130 135 140
ТУук Авр Авп о сбіц біу Агуд Рбе Мес Рго Уаі1і! АБп гейш сій Гей І1е РіПе 145 150 155 160 зек пув Тугт Аїа пуб ТПг Гей Рго Авр Гув ІТецп бек Ге с1у сій ГІец 165 170 175 60
ТЕр Авр Меє ТПг сіц сбі1у біп Агд Авр Аза Тгр АБр І1ї1е Рпе сС1у Тгр
180 185 190
Рпе Аїа бек пув І1е бій Тер с1у Іец Іецй Тук Гей Гей Аїа Агд Авр 195 200 205 бі бій сб1у Рпе Гей бек пув біц Аїа І1е Агуд Агд Сув Рпе Ар 1У 210 215 220 зек Гецп Ропе сбіц Тук Сув Аї1а Гуз І1е Тук Уаі сС1у І1е АвБп бій Авр 225 230 235 240
Тпув ТПг Аза Туг Туг 245 «2105 119 «211» 244 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 119
Меє Уаії Агд сій бек Месє с1у бій сбіц бек бій Аїа Рпбе Аза ТПг ТЕГ 1 5 10 15
Аза Ркго Ггец Аза Ркго Уаі ТПпг біу бій Агуд пув Уаі1 Агуд Ап Авр Іей 20 25 30 бі бій Тпс Гей Рго Ппув Рго Туг Геш Аїа Агуд Аза Гец Уаї Аїа Рго
Авр ТПг біц Нів Рго АБп обіу бек бі с1у Нів Авр бек пув біу Меє
Зо 50 з9 бо зек Уаі ТПг біп біп Ні Уаії Аза Рре Рпбе АвБр сбіп АБп б1у Ар Щ1У 65 70 75 80 35 Іїе Уаї Тук Рго Тгр бій ТпПг Туг Аїа сб1у Рпбе Агд Авр ІТецй с1у РБГе 85 90 95
АвпоРго І1е бек бек Уаі Рпе Тгр Аї1а І1е Рпе І1е Авп Рпе Аїа Ріє 100 105 110 40 зек Тук Уаї ТіПг Іецй Ркго Бек Тгр Гей Рго Бек Рго Гей Гей Рго Уаї 115 120 125
Тук І1їе Авр Авп І1е Нів пув Аза пуб Нів біу Бек Авр бек бек ТПг 45 130 135 140
Тук Авр ТПг сій с1у Акд Тук Уаії Ркго Уаії Авп Тїец бій АБп І1е РБіГе 145 150 155 160 зек Ппув Туг Аїа Гецп ТПг Аїа Рго Ав5п Гув І1е ТПг Гей Ппув бі ТІецй 165 170 175
ТЕр Авп Гей ТПг біц б1у АБп Агкуд Месє Аза І1е АБр Рго Рпе сС1Уу Тгр 180 185 190
Тец Аз1а АБп о пув Уаі бій Тер Гей Гей Уа1 Тук Гей Ггец Аза Ту5 Авр 195 200 205 бі бі сб1у Рпе Уаії Бек пув сі Аза Уаі Акуд сіу Уаї Рібе АБр А1а (516) 210 215 220 зек Рпе Рпе біц Тук Сув Аза пуб Гув АБп о Гув бій Гпув Аїа Авр 5ег 225 230 235 240
АкЧд гув біп Авр «2105 120 «2115» 245 «212» ПРТ «213» бБевашиют іпаїсит «4005 120
Мен Аза ТПг Нів Уаі1! гей Аїа Аїа Аза Аза біц Агд АБп Азї1а Аза Гей 1 5 10 15
А1Та Рго Авр Аза Рго Гей Аїа Рго Уа! ТБПг Мес сбіц Агуд Рго Уа1і Агд
ТПЕ Авр Гей сій ТПг бек І1е Рго пуб Рго Туг Меєсє Аза Агуд сС1Уу Іецй 20
Уаї Аза Рго Авр Меє Авр Нів Рго Ап с1іу ТПг Рго сбіу Нів Уаї Нів бо
Авр Авп о Гей бек Уаі Іецй бі1іп біп Ніз Сув Аї1а Рпе Рпе Авр сбіп Авр 25 65 70 75 80
Авр Авп о с1іу І1е І1е Тук Рго Тгр біцш ТПг Тук бек с1у Гей Агд сіп 85 90 95
Зо Іїе с1у Рбе Авп Уаі! Іїе Аїа бек Гей Іїе Мес Аза І1е Уаії І1е Авп 100 105 110
Ууаї Аїа гей бек Тук Рго ТПг Гей Рго сіу Тгр І1е Рго бек Рго РІПе 115 120 125
З5
Рпе Рго І1е Тук Іїец Тук АБп І1е Ні Гув Аїа Ппув Нів с1іу Бек Авр 130 135 140 зек с1і1у ТПг Туг Авр ТПпг бій б1у Агд Тук Гей Рго Меє Ап Ропе сіц 40 145 150 155 160
Авп оГецй РібПе бек їув Нів Аза Агд ТПг Меє Рго Авр Агуд Гей ТПг Іец 165 170 175 45 сі1у бій Гецп Тер бек Меє ТПг біц Азїа АБп Агуд бій Аза Робе АБр Пе 180 185 190
Рпе сі1у Тгр І1е Аза бек Гпув Меє біцп Тер ТПг Гей Гей Тукг Іїе ГІец 195 200 205 50
Аза Акуд Авр о біп Авр обіу Рпе Гец бег їув бі1іц Аза І1е Агуд Агд Сув 210 215 220
Тук Авр сіу Бек Ггец Робе біц Тук Сув Аїа Гуз Меє бі1іп Агуд сС1у Аїа 55 225 230 235 240 бі Авр Гпув Меє Гув 245 60 «2105 121 «211» 243
«212» ПРТ «213» йеа шаув «4005 121
Меє бек Бек Тук Бек Рго Рго Рго Рго Рго Рго Агд Авр біп бек Меє 1 в) 10 15
Авр ТЕ біц Аза Рго АБп Аза Рго І1е ТПг Агд бій Агуд Агд Гей Авп 20 25 30
Рго Авр Гей біп сбіц біп Гей Рго Ппув Рго Туг Гей Аїа Агкуд Аїа ГІецй 35 40 45 бі Азїа Уаї Авр Рго Бек Нів Рго сбіп с1іу ТПг Ппув С1у Агд АБр Рго 50 з9 (210)
Акуд с1іу Меєсє бек Уаі Іец бі1іп біп Ні5 Аї1а Азї1а Рпе Рпе Авр Агд Авп 65 70 75 80 сб1у Авр сі1у Уаії Іїе Тук Рго Тгр бій ТПг Рпе сіп сіу Гей Агд А1а 85 90 95
ІІе с1у Сув бі1у Іїецйп ТПпг Уаії бек Рпре А1їа Рпе бБег Іїе Гей І1їе Авп 100 105 110
Пем Рібе Гей бек Тук Рго ТПг біп Рго б1у Тер Гей Ркго бек Рго Гей 115 120 125
Тец бек І1їе Агуд Іїе Авр Ап І1їе Нів Ппув сіу Ппув Нів біу бБег Авр 130 135 140
Зо зек біц ТПг Туг Авр ТПпг бій б1у Агд Рпе Авр Рго Бек Пув Ропе Авр 145 150 155 160
Аза І1їе Рібе бек їгув Тук б1у Агкд ТПг Ні Рго АБп Аза Іїе ТПг Аг4д
З5 165 170 175
Авр сій Гец бек бек Меє Гей біп б1у АвБп Агуд Авп о ТПг Туг Авр Ре 180 185 190 їеч бі1у Тер Ге Аїа Аїа Аїа сіу бій Тер гейш Гей Гей Тук бек Гей 195 200 205
А1їа пув Авр о пув Авр обіу Гей Гец біп Акд бій ТпПг Уаі Агуд с1Уу Іец 210 215 220
Рпе Авр сіу бек ІТецй Рпе сій Агд ІТецй бій Авр Авр Авп Авп о Гпув Гув 225 230 235 240
Гув бек 5ег «2105 122 «211» 11142 «212» ДНК «2135 Штучна послідовність «220» «223» послідовність ТДНК «4005 122
ЕссЕдЕдУЧєЄ додсаєдсаса басааасдда сдаасддаса аассосссса сдсссесеса (216) (516) аасаєссдає сасєсеааса аасусссеЕвс ссссстаддеЕ Есасссдсеса асСасаєсстд 120
Есааасасеєд аєадеЕсєсааа сеєдааддсдд дааасдасаа Ссдссадесд даєссессссад 180
ЕсасдасЧдєє деаааасддда сдссссадаа Сссааєссаєс ссасссадас сСаааєсадса 240 баадваєєсвсє сеєсааєсаає аааєааєагаає єааєааєста сеадсаддад Єдаєсдаась Зоо баєаавсаває сЕСЕСЕсаає саєєсааада арсеЕсасаєс єЕєсаааєтєда саададесее 3З6о аааєдддоадад адеЕдеЕсаєса баєсасааді аддаєссааєд Сдссасадес ссасаєдсає 420 басчдасаадс єдсдааадає аасасстаєста сСасасаасаа Сдасааєсас гадсдаєсвда 480 чЧЕадедадад ЄсудеЕсЕеЕваєє асасеЕсссєс сссссоааєсі дссасасддес ддсддсссда 540 авєєсеЕсасас ааддеєадесд саадасассд аадсддсддс адсддсадса даадаадсад 60 ааєсддеада ааддсаадас ааєддадаад асдаачаєсдд Сддадасссс ссссссасаа 6бо сдсадсааєсєс ааддссссса аддссааддс асссдсдссс сссаєсаєсд аасаєсдаадес 720 счасдеЕсаєс сссдааадса адсеЕсдЕєда ададеЕсССтдда деасеЕСсааєєт додЕССЕсСдве 78о0
БадсаадЧчдеє єЄєЧчаєсоддеа аддаасдддад адаасссадс асссаєсаєд садаадсссс 840 аадсаадеЕєс дЕєЧЕваєсе ссдсассстає ссасссссає дасддєддаа дааєссааєдс 900 адсадеЕсаас аасддсадсеє ЄссЕСсадаає ассссасаає Сссадсесессс сдеЕсдсессад 960
ССЕБЕСЕСЕСС СЕСЕЕСЕССЕ ЄСЕЄССЄСсСЄЕ даддаєддеЕєс сссаасубає єдЕєдсесаа 1020 ссЕсеЕЕсссеЕ аддасеЕссєсятє єсадсеєсссєс гадесєсаас сеЕссвдссва дссесаасаа 1080 чаагасссес ЄЕЯДаєсоддеЕса дссєддЕсаа сЕдддааєда даааасдсесс ЕСсСЕЕСЕСсаа 1140 дссЕдеЕсСдає деадсеЕддад асаєсдаацді сСддеЕаасадс дЕсадсассе седсасесаа 1200 бадсадссає аєсаєсаадса дсеЕдсадссє сЕсСсСсЕЧдадеЕ ЧдЕЄЧДсаадеЕ ссддаддаєада 1260 чабасЕвєдесє сссудаааасе сЕЄссааєсс бадсеЕсссса ЕСЕЄССсСуєЄва сдаєдаєдесс 1320 бадсаасєсс сссасасеєса дааасссссс сСададааєсс адаєдаседс сеЕєстЕаад9ад 1380 аадсаадава сЕСЕсСсСсеЕсудд дессасссссс дсаєрсеЕсьсс аадеЕссеєвсу десдесаадеся 1440 садсєдддаа десЕсаадааєд дсаєседддс сссааєсасеє аададсадса адаєсаєадд 1500 баєдадсадс адсссссеса дааєсаєаад сЕССаадудба аассЕдсесу ссссесеЕєде 1560
ЕЕсоодаєдда дЕсссаадад дасеєсаєссс аааддеЕдадс Еєсдааєсьг ссадессаєс 1620 баєдссваде аасасссссуд бадаєсадаєд ассеЕсссдуде адаадссода даадеЕсддаЧе 1680 баєдчадасьс аєсудссадає ддадаєдасе ЕсЕсСадссся сеЕрадсесьс сЕСООЧЕСЕЄ 1740 чадсЕєсада ЄЕдааєсддду ссададдбад сСадгадаада ддасасєдаа даадаєоддад 1800 аасрададса дасададудєба деЕдадсесессс ссеесаєдаа ЕЄЕЕСЕДЕССЕЕ сеЕЕсСасесьс 1860
ЄЧдеЕЧдЕЧасвд адздЕеЕсСЕдчеЕс гадеЕдсьсьд деЕСсСаєссаєса баєсааєдаєса асаасааєда 1920
Зо чдаасаадсеЕсє Єододадедаєс ддадоддеЕста ддаєсасаєда даєєсаадесд дассаддаєс 1980 басассуєвд даєсєсеЕдаде дсеодаєсаєчс деЕдадудєєаа ЕЕЕвасевду гаасоддссас 2040 аааддсстаа ддададдеЕдЕ Едадасссьс аєсудссєда ассдседдаа гаасдссасда 2100 бддаадаєаа ЄЕССаєдаає сеЕгаєсудєста сссаєдадед аааєєсдедчеєд асодеЕддваде 2160
ЧдаєдсЕвєдсЕеЕ сасестасье дссєддЕдда сеЕсСудсссвЕЕє ЕссЕсаєдду дааєсеЕсаєває 2220 сЕсСасеЕсасес аградадсеЕсе саграссеЕсес сеЕсСвассеєсдд даєєсадеЕса асасасааєдд 2280 чЕаєдаєєсса Єдаасааааа Едддааасьс сеЕдааєстьучєс ассдстааає дсаєаадасе 2340 аддеЕдааасе дЕддаасаєса гав сьс аєсеаааадс аааасєсудсс ЕсЕсСастада 2400 аєсаєаааєа бадаааааса баєсаасасьс аааєсааааає дааааєаада асеЕсесаааа 2460 аасадаасва ЄЯдЕЕеЕсааєдЕ дсааадаєта деЕсудсасаєс аадеЕсаєссд Есасаатаєд 2520
Єбасаасаад Ссаєсаадссс аасааадсва дсасдеЕсстаа асааассааа дадесссасда 2580 аааєсаєсаса аассагаадс ссаасааадс басеєдаєсаа аааааааааа сдсссаасаа 2640 адсрааасаа адсссааааа ааасеЕсссса адссесссаєс ЕєсСсСЕЕесаєсу аасаєсдааа 2700 асбаєасаса ааасаадеса дасаааєсеєс ЕсЕСЕДЯДуддсс ЄдЕсСЕЕсСсса ассесссаса 2760
ЕсасеЕсєсссе аєсуодаєсєда асдЕссвтасе сусассЕвее ссдєсдсаає даваєсдаєва 2820 дЕаєдеЕєсдсЕ даааассаає адддеЕсааса аєсдаадеса Єддаасаєдада асеЕсодеЕсса 2880 адавєвєеєссуд ададсеЕсЕеЕсеЕ адгадааадс ссаєсассад аааєєтасса дсаааасааа 2940
Єсассааєта дасЕсСсесває гаєдедссаа аєссаасаєа аєсаєсададуч асасеЕссааа Зоо
Єдаааасдвра Єдааєсуєтає гадсаааєдд Ссаддеаада саєєаааааа ассстасдєс З06о ачаєсаєєсаа сЕсСЕааааає Есдаєсадед бСддааєсдса саааааєєсу ддаєссаста 3120 басасаєсава ардссеєсаса асасеЕсддає єсЕеЕССЕСсСвудд аддсєддаає ЕСЕСсСааєста 3180 сагаєєсЧє єЕсоддссаєдс ассаасессає ЕДдДЕЄвадедеЕ аарасееєсда ЄЕседеЕсааа 3240 басаєдеЕдеЕє соосусасасеє єдеаєаадаа СЕсСсСЕсесдас сасасасаса сасасатаєа 300 басаєаєава сасасаєтає асаєсаєдса сЕсСЕсааєсдд ааааааєавгває агагавгаває 3360 агадедсавє сєеЕсСЕСвааса ассабаваєд сСЕдсдаєєда Есеєдсааааа гассдстада 3420 дЕааєдаааа агсаєсааєсса Есдсєдааає Сассссадає деЕсаадаєсє єсеЕсСааадеа 3480 ааєєсеЕвєсса аасеЕстадсе аааадессвд Сааєаастаа адааєсаарас асааєсесда 3540 ссасддаааа аааасасаєба асааасьєєду ддссссгада асссааєсає єсваєєсада З6о0 сЕаааєсадеі асаадсаєєє єсеЕсааєсаа баааєааєаа Есааєаасес аєсадеаддва З6бо
ЧдЕдаєєдаає Єгаєаасаса ЕСсЕСЄЕсСЕсаа ссаєстааа аассеЕварає ссесаааєтд 3720 (516) асаададеЕєс Саааєодода чадедевсаєс асассасаад Саддаєсаає деЕДдЕсСаєсаде 3780 бЕсасаєдса Єгасдаєаад ЕсдЕдааада Саасаєсаєе аваєаєааса асдасааєса 3840 сЕадсчдаєсу адеадсдада деЕсдЕССЄває гбасасеЕсєеєсе ЕссеЕЕСЧсаєс сдеЕСсасає9а 3900 сддсддсссу сддссдсесс аєсвасесудад ссаддаддає ддаєсдаєдс сддЕСєдада 3960 сссЕдссасс ддЕсдсеЕдас єдааседсесс ддсасуддеЕсс ЕсСсарсеєсас, доддссеЕвєдсе 4020 сдссаасеЕсеЕ десссеЕдудсессу асеЕссаассд асссудсессу ддеЕддавєдеьс сссссдаєсад 4080
Чдсаасддрад аєссаддаса дсасадасад адсддсааса ссааассссс соудсеЕгдссад 4140 аааасссдсє сссаасадда адаєддєдає дассдсадає садааааасс садаєєааєс 4200 часаааєєсдд аєсудсасааа ссадааасвра асассадаєс бадаєсадааа Есасаааєсд 4260 аадчзадеааєс аєссдасааа асесаааєта сСЕеЕсСддаасааа Есдуддаєдаєса Есгаєдааасєс 4320 ссбааєсддад ааєсаадаєд асаєсьаасу ассааассса дааааєсуєс Ессдаєсстсаа 4380 чаєєсаасада аєссааасса аадаасасає асдаааєєсду даєсдаасда ааасааааєс 4440 чаачдаєєсєвд ададаасаад даасасадаа аєсрассрдс адддассадеі асаддсдада 4500 ачаєсассад дададудєдесд дсдаєсдсєса дсдсааєдас судєєссадсс адддеЕсаасс 4560 суддаєсаасас саасаддсвра ссЕСсСсддсад аассдсуддЕ сдсесєдссЕЕс асаасасдсе 4620 чадсасдсдд ЄЕдДсадесєдс аадеддадад сасуєдчєєсд ЕєдсЕдсвдс ссуабадедсе 4680 сЕдссасЯддЕ ЕЄЕСЕСЕСсСЕаас ддадсаадсу дссудсєдеЕсс єЕссеесасес сЕЄсДєдеЕдас 4740
ЄдадЧчєесдуд сєссадеЕдссе єддеЕсаєста сасаєагааєда баасаасаає дадаасаадс 4800
ЕЕсодадеда Єсддаддудєс гаддаєсасає дадаєєсаад Єддасврадда Есгасассде 4860
Єддаєєеєєда дЕдЕдддаває чеЕдЕЧдаддеЕє аасеЕстасьє ддєаасддес асаааддесе 4920 аадчачаддЕ дЕсдадассс Есаєсддсес даассуседу аасааєдсса сдЕддаадає 4980 ааєєссаєда аєсеЕсаєсдє баєстаєдад Сдаааєсдєд Єдаєддаєдда дсодеЕдссд 5040 сЕСаЄЕсвас Есдссєддвд дасевддсесс ЕЄЕССЕваєу дддаасесає аврсевасева 5100 сеЕаєададсеЕ ЕсСсарассьє єсЕЕсЕвассе Еддаєєсаде Еаасаєсаєаа Єддеаєдаєс 5160 саєдаасааа ааєдодддааає ЄЕЄЕсдаасьс дегассдссаа аєдсаєаада Есадудєдааа 5220 сЕдЕдЧдааса баравєсеЕсєесє єсаєєваааа дсаааасєсу ссЕсСЕсаста дааєвсаєааа 5280 басадааааа сСасасаасає Єсааасаааа аєдааааєаа даассєссаа аааасадаас 5340 баєдеЕсєваає деЕднааадає бадессдсаса Ссаадесаєс ЕдеЕсасааса ЕдеЕгасааса 5400 адеЕсаєаадс ссаасаааде бадсасуєссє аааєсааасса аададессас даааасаєта 5460 саааєссасаа дсссаасааа дссассдаєс аааааааааваа аасдсссаас ааадстгааас 5520 ааадеЕссааа ааааасесеєсе саадесьсса СсеЕсссЕсса Єдаасаєєда ааастагаса 5580
Зо саааасааде садаєаааєс єЄсСЕСЕсСЕдоад ссЕДдЕСЕЄСсСсС саассєсста саєсасессс 5640 сеЕаєсоадасеЕ даасдєеєєвта сеЕгдрассєє єЕсссуаєєдса асддавраєста садрсаєдее 5700
ЧдЕдаааасва агаддудєєаа сааєсдаацчі саєсдддаатває ддаєєсьдуєс саадасеЕсес 576о0 сдададсесЕеЕ ссадгадааа дсссаєсасс адаааєєвтас гадеааааса аассассаає 5820
ЄаадчЕвЕсСьс аєсаєдсдсес аааєєсаава Сааєсасада ддаєаєсьса аагдаааасд 5880 баєдааєдеЕс аєсадесааає ддЕСаддсаа дасаєстєаааа аааєсссаса єсадасасес 5940 аасеЕєсаааа аєссдаєсад ЕдЕдддааєьд Сасаааааєє єдддаєстас гагагатаєа 6бо0о бааєдсеЕсєва саасассєду асЕсеЕсеЕсЕс дооаддссддда аєєесеааєс гасавраєсьдя 6бОовбо гЕседдссає дсассаасес асеЕдеЕсваді деЕаасасесе давєсведеЕСса аагагаєдед 6120 гЕСЧЯОєДдвава ЄЕсСЧдсасаау ааврсєсєсьсьд ассасасаса сасасасаса гагагатаєа 6180 басаєсавсаєс агасаєсаєд сасеєєстаає єдааааааса асасаєсаєсає агагадесдса 6240
ЕСЕ ессСвсаа саассаєсаєса ЕдДдЕєддсддаєс даєссдсааа аасаседсса дадсааєдаа 6300 аааєсаєааєс саседссдаа астаєсьсад аєдеЕсаадає єЕссеЕгааад гаавааєєссте 636о саааєєєсвадд ссаааадессе єЄдеЕааєаасе ааадааєсаає асасааєсес дассасоддаа 6420 аааарпасаса Саараааєсе доддсдсдссд субаєсєдудсеЕ ададсадсеЕе дссаасаєдд 6480 бддадсасда сасесесуєс басєссаада асаєсааада басадесєса даадассааа 6540 чадсвєаєєда дасесеЕссаа сааадддєаа сассдуддааа ссеЕссЕСуудда Есссаєедсс 66 садсбтаєссд ЕсасеЕссаєс ааааддасад Садаааадда аддеддсасс гасаааєдсс 6бобо аєсаєєдсда баааддааад дстаєсуєес аадаєдссес Едссдасадеі ддЕСсСссааад 6720 аєддассссс асссасдадуд адсаєсдсдд ааавадаада сдссссаасс асдсссссаа 67Во адсаадєдда Єєдаєсдсєдає аасаєддаєдуд адсасдасас ЕсЕсудЕСсас Єссаадааєса 6840
Єсааадаєас адссссадаа дассаааддд стаєсдадас ЕЕсЕеЕСсСаасаа адддеЕааєсає 6900 сдддааассе ссеЕСудаєеєс саєєдсссад ссаєсєдеЕСа сеЕЕСсаєсааа аддасадеад 6б9б6о ааавддаадд Єддсасстас аааєдссаєс аєсддсдаєаа аддаааддсе ассдеЕссаад 7020 аєдссЕСсСтЕдс сдасадеддеЕ сссааадаєсд дасссссасс сасдаддадс ассдадсддааа 7080 аадаадасдє Єссаассасу ЕСЕЄСааадс аадедчаєсд аєдедасаєс єссассдасд 7140 бааддадаєда содсасааєсс сасвраєссьс сусаадассеє ЕссЕСварає ааддаадесес 7200 аввєеєсаєсвд дададдасас дсеЕдаааєса ссадеЕсьсьс Есвасаааєс саєсєсеєсвдсд 7260 аєсдсаєддс даєсєЕсвддає єсЕдссддсд ЄгассасудЕ дасоддадаас ддадЕддсоддад 7320 адеЕєсЯдєсда ЕссЕДдасаду сЕЕсдєсдас ддаааєсдад аєсуддаєесь ЕсЕаасоддасєс 780 (516) СЕСЕЄСЕСЕС ЄодЕсСсСсдає ааєсаасєсьс сЕссддаєда єдДдЕєддадсе сссдссдасд 7440
Єгадодадаєсдд даєсєдасєсс деЕгєдеЕсаасуд аєдасуусеса додадаасадсс ааєседдссд 7500 чачаєааєсаа сододеєддеєдоас даєаасаасдо дсддсддаад аддсддсдда дааддаадад 7560 чааасдссда ЄдсгвасдеєсЕеЕ асубаєсдас суєсєсоддеЕесс адсеєсаєсду адддсдадад 7620 ачадеЕссасе бадссссудас дсааєсеєса аасададсса Єдссдддаєста ЕЕСВассьсь 7680
ЧЕдЕадеадеЕ Єсесваєсудсе дсааасадна дасесаєсає сдааааєсєт асдаадтнаєд 7740
ЧдЕєЄЯдЯдєєЧдає садаасддає єсседдЕеЕсва дЕсССсСаадаєс дсеєдсдадає сєдассдееЕее 7800
ЕсаєдеЕдеЕвдд сасассссеєе есдассесес сеЕЄЕЧддседс сЕсСвасодес дадаааєє9 7860 басеЕєсадаа агасаваєса даасседеєвда ссаєсеЕсеєсь єсаваєсаєь ассассаєда 7920 сададздЕесЕ дсасссадеє басдеєсассс Еаадудєдеєда ЕссССдсСЕСЕЄ сеаєсадЧчед 7980
ЄсасеЕсєеєдає дсессеЕСасеЕ Едсаєсуєує доостгааадчеЕе ддЕЕссеЕває дсеЕсасаста 8040 дсбаєдасає аадаєсссса дссааєдсад сеЕдасааддс сааєсссєдаа дссссстасе 8100 асдеЕсадсеє даададсесуд дсаваєєсса соддЕСсСудсьсСс сасаєєдедеЕ гаєсадссаа 8160 чЧдЕсаєссасд ЕЕСЕЯДСсСаєдЕ асасодаадчда дЕсЯОдЧдсддсС ЕсдЕСВяаєсЕ дсаааасосдд 8220
Єсаваєеєсас соодаєсеєсаєд ддаєєсаєаа сСадаасааса сСасаааєссяє аєєсдєссадва 8280 асєсааадса ЄссЕсСЕдааа ддасдаєссвєс сасаєдстає Єдааадачсу ЕсСддаадсее 8340 садеЕєсєссааа ЕсСтагаєдеЕд єддасеЕССсЯдса ЕДЕЄСТастд сеЕссеЕсСссас сЕЄєЧдЕсаа 8400 асагаєєддс ададсеЕсссєс гдсЕссоодоад аєсуєдааєе срасааадає Еддсдоддааєд 8460 сааааадедЕ додадаєсас єддадааєдЕ ддаасаєдсс ЕдЕсСаєрааа Єддаєддеес 8520 часаєаєава сЕссссдеЕдс Есдсдсадса адагбассааа дасасеЕсдсесс асгаєсаєтвд 8580 сСЕЕЕССсадеЕ сЕСсдсадеЕсС ЕсЕСаєдадс гаєдсаєсдс аддеЕссстсє сЯдєсеЕсСьсса 8640 адстаєдддас ЄЕСЕСЕСсСООЧЯ аєсасдсєєсс аддасдуссЕвє ддеЕсеЕссаєс асааастаєс 8700 басаддааад дЕсСЕдЧдсЕеЕсСа асододеЕдддда асаєдасєсьє сеЕддеЕеєсаєс ЕсСЄдсаєте 876о
Есоддасаасс дасуєсуєуєд сЕссеЕсварс ассасудассе даєдаассда аааддаєсда 8820 бдЕСсСаєдадс даєсдсдаєс дЕссааасає сеЕддсааєсаа адзсеЕссстаа даєєдааєсс 8880
ЄдЕЕдссоддЕ сЕсдсудаєда Есаєсавраєра аЕсеЕстдеєЕєд ааєсвасдеЕса адсаєдеаає 8940 ааєєсаасаєд Сааєдсаєда суєсаєєсає дадасодаєє єссаєдаєса дадессссдса 9000 аєсаєасаєс саарасдсда бадаааасаа аасасадсдс дсааассадуд асаааєтаєс 9060 чдсадсдсддЕд ЄсаєстаєдеЕ бассадаєсс седсаддудсу баєєддсвад адсадсеЕсдс 9120 саасаєдуаєд дадсасудаса сеЕсЕсуєЄсса сессаадаає ассааадаєба садесссада 9180 ачдассааадд дссасєдада сЕЕсссааса аадуддеааса Есдддааасс Ессессдадаєяе 9240
Зо ссаєєсдссса дстаєсвєдеЕс асеЕссаєсаа ааддасадса дааааддаад дсддсасста 9300 саааєдссає саєсдсудаєба ааддаааддс гаєсудєєсєсаа даєдссесьд ссдасадед9 9360
Есссааадає ддасссссас ссасдаддад сассдсддаа ааадаадасуд Ссссаассас 9420 дЕСЕєЄСсСааад саадсдддаєсе даєдедаєаа саєсддедчдад сасдасасесс Есудєсстсасьс 9480 саадаасаєс ааадасасад єсЕСадаада ссааадддсеЕ асєдадасьс сеЕСсаасааад 9540 чдасаасаєсу ддааассесс Есддаєєсса СЕдсссадсе аєсєдеЕсасе єсаєссаааад 9600 часадсадаа ааддаадуєд дсассстасаа аєдссаєсає Єдсдаєааад даааддстає 9660 сдєссаадає дссосссдссд асадсддесс сааадасдда сссссассса сддаддадсає 9720 сдєддааааа даадасуєес саассасуєс Ессааадсаа чеЕддаєсєдає деЕдаєаєсес 9780 сасеєдасуєба адддаєдасуд сасааєссса ссаєссьєсу саадассєєс сеЕСтагаєаа 9840 чддаадеЕєсає єеєсасеєсода даддасасодс Сдаааєсасс адссссссеєс гасаааєсса 9900
ЄсеЕСсСЕСсСЕСЧда даєдаєсддаа саадаєддає сСдсасудсадд ЕЄСЕССЯДдсс дсЕЄсОЯЧсо9 9960 ачаддсваєсє соддссаєсдас Едддсасаас адасааєсду сеЕдсЕСсСєдає дссдссдаєде 10020
ЕссоддсеЕдЕеЕсС адсодсаддду аддссддеЕес СЄЕСсЕеЕсудЄсаа дассдасстд Ессддєдссс 10080 бдааєдаасеі Єсаадасудад дсадсдсддс гаєсудєддсєс ддссасдасуд дасаєсЕсссе 10140 дсдсадсеєдЕ дсессдасуєеЕ дссассдаад соддааддада седдсеЕдсса єЕсодосоаад 10200 бдссоддддса ддаєсьсссд єсаєсєсасс сЕдссссвдс сдадааадса Ессаєсаєд 10260 сЕдаєдсаає дсоддсдудсед савасудсесуд асссоудсвас седсссарсс дассассаад 10320 сдааасаєсу саєсудадсда дсасудбрассс ддаєддаадс сддєсЕвдЕС даєсаддаєд 10380 аєсеЕддасда ададсаєсад дддсЕсдсдс садссудаасе дЕссдссадд сесааддсдс 10440 дсаєдсссда соддсдаддає сесудєсодєЄда сеЕсаєддсда ЄдссеЕдсеЕсЯа ссдоаасаєса 10500 бддєддаааа ЄддссусЕсЕ ЕСЕддаєєсса сСсдаседедуа ссоддсеЕдоадЕ дЕддсоддасс 10560 чдсбаєсадда сасадсдеєєсд дсргасссдед агаєсдседа ададсеЕсддс ддсдааєд9ад 10620 сЕдассдссЕ ссеЕСУдєсддсСЕЄ басддраєсу ссудсеЕсссда Ессдсадсус арсдсесессяе 10680 ассдссЕєсеЕ Єдасдадесс Ессєдааасдуд суєдаєссдес сааасаєєвд дсаасаааде 10740
ЄЕСЕєсаадає ЄдаассстдЕ ЕДДСсССсСоОдЕСЕЄ дсдаєдаєса Єсавсаєавгасє єсЕДдЕсЧаає 10800 басдєєсаадс аєдеаасаає Єаасаєдсаа Содсаєдасає басеєсаєддад асоддаєесєее 10860 аєдаєсадад Єсссдсааєсе асасаєєсаа сасусудаєбад аааасаааає асадсдсдса 10920 аасраддаєа аасраєсусу сдсддєЕдеЕса сссаєсдеєсас бадаєсдасу Ессдегасаде 10980 баааассасс ссадсасаєсе ааааасуєсс дсааєсуєдЕє аєсаадевдЕ ссаадсдєеєса 11040 (516) агєсЕдеЕсєсас ассасаасає ассседссас садссадсса асадсесссс дассоддсадс 11100
Есддсасааа аєсассасесс дасасаддса дсссаєсадеЕ сс 11142
«2105 123 «2115 16749 «2125 ДНК «2135 Штучна послідовність «2205 «223» послідовність вектора «4005 123 дсСЕЄсСсСЕсСЧЄ дсЕЄвасооде аєсдссдсос ссдаєсссдоса дсдсаєсєсдсес ссстаєссдесс (216)
ЕссСЕєДдасда чЕССЕєСсда аасодсдєдає сдеЕєсаааса ЕЄсСддсааса аадессесеса 120 ачаєєдааєс сЕдеЕсдссоду ЕСЕєЄДсЧдаєд аєсаєсаває аасеєсстує дааєстасаве 180 аадсаєдеаа сааєсаасає дсааєдсаєд асдеєсаєєса ЕдадаєдоадеЕ ЕСсСЕсСаєдаєя 240 ачадеЕсссдс ааєтаєасає єсаасасодсд асадааааса ааасасадсд сдсааастад Зоо чаєаааєсає содсдсдсоадЕ деЕСсаєссаєд Ссассадаєс дасдсссдбра сддеЕсаааас 3З6о сассссадса саєтсааааас деЕсСсодсааєсдд Єдессассаад ЕЄДсССсСЕаадс деЕСВаєтсдЕе 420
Ебасассаса абасаєссвд ссассадсса дссаасадсс ссссдассдуда садсссдддса 480 саааассасс асссдасаса ддсадсссає садесссаста дасдсесасс доддстЕдоєвд 540 сссісдссдс сдддссддсд дссдсстаєсд дсссгдсааа сдсдссадаа асдссдєссда 60 адссдЕєдеЕдс дадасассдс адссоадссддс дЕсдсддаса ссссдсддаа аасесддссс 6бо
Есасєдасад аєдадоаддсу дасудсєдаса сЕєдаддодадс счдасесассс ддасдадсоаддесдеЕ 720
Едасадаєда доддсаддсеЕ счзаєєссддс соддсдасоаєд дадссддсса дссссдсааа 78о0
Есддсдаааа содсседавєеєє басодасдадесс ссссасадає дасдсддаса адсссдддада 840
БаадеєдсссеЕ дсододеаєєда сасеєдаддд дсдсдассас Сдасадаєда ддддсдасчає 900 ссссдасасс сСдаддддсад адсдсеєдаса даєдаддддс дсасстаєтд асаєєєдадд 960 дасЕдЕСсСсас аддсадаааа Ессадсасеєс дсаад9адЕсЕ ссудсссуєсЕ Ессдодссасе 1020 дсЕаассеЕдеЕ сЕсСЕсСаассе дсЕсеЕсааас саараєстає ааассЕсуєЕ єЕсеаассад 1080 чЧдсЕдсдсссЕ дЕдсодсудєда ссдсдсасудс сдаадддддд єдсссссссе ЕсЕсСдаасесс 1140
Есссуддсссуд сЕСЕСусуЄЕ ддсадсаєса сссаєааєсд ЕддЕсЕеЕСсааа ассддсессд 1200
Єсдаєастає деЕсасасусс аасеЕссдааа асаасеЕстеєда аааадссає єЕсстсооднтаєс 1260
Зо бааддЕєсва дааєдсаадуа аасадедаає СодадеЕсСсує сеЕсудесваєава ЕрсадсеЕсессе 1320 чаддеєаєєсва аасаседнад аааададдаа ддаааєааса ааєддсєсааа асдадааєсає 1380 сассддааєсЕ даааааасед ассдааааає ассдсєдсдЕ аааадаєасу дааддааєде 1440 сЕССЕдсЕаа ддЕаєгаєаад седдЕдддад ааааєдаааа ссраваєста ааааєдасдад 1500 асадссуддЕа бааадддасс ассбаєдаєд єддаасдудда аааддасаєд асодстаєддас 1560 бддааддааа дссдсссдсЕ ссаааддесс Сдсассєєда асддсаєдає оддссдодадса 1620 аєсеЕдсесає дадеЕдаддсес даєддсдєсс сЕсддсЕСсСода ададсаєдаа даєдаасааа 1680 дсссеєдаааа даєсвтаєсддад сєдсаєдсодд адсдсаєсад дсеЕсЕвЕєсас ссаєссдаса 1740 баєсддадаєвд Ессссасасу аагадсесад асадссдссЕє адссдааєсу даєсасесас 1800 бдааєаасда Єссддссудає дсддаєєдсд ааааседудда адаадасасс ссаєсеЕсааад 1860 аєссдсдсда дссдсаєсдає єсЕссааада содаааадсс сдаададдаа ССЕЕДЕСЕСЕЄ 1920 сссасуддсда ссеЕдддадас адсаасаєсеЕ ЕсдЕдааада Еддсааадта адеЕддсеєсква 1980 гЕдаєсєєдда дадаадсудс адддсддаса адсддбаєда сасєдссьсс гЕдсдЕССЯдЕ 2040 сдаєсадоада ддасаєєдодад даадаасадеі асдеЕСдадсе асЕсеЕседас єгасеєддддва 2100
Есаадссєда сЕдддадааа аєаааавасе асасеЕстасе ддаєдаасьд сЕсСвадвасс 2160 бадаєдеддс дсаасдаєдс Еддсдасаад саддадсдса ссдасеЕссее ссодсаєсаад 2220 чес додсЕє сеЕСадудссда ддсссасддс аадтаєсьд дсаадддадєс дсеЕддсаєсес 2280 чЧЕдсадддса адаєєсоуддаа бассаадсас дадааддасд дссадасддс ссасододдасс 2340 часеЕєсаєвд ссдаєсааддЕ ддаєтаєсьд дасассаадуд сассаддсдуд ассаааєсад 2400 чааєаадддс асаєєдсссс доасаєдадсс ддддсааєссс сдсааддадда десдааєсдаає 2460 сдчасадєєсд ассддааддс асбасаддсаа даасєдаєсдд асадсододоадЕеЕсЄ сЕССДСссдад 2520 чаєдссдааа ссаєсдсаад ссдсассудус ардсудрдсдс сссудсдааас сьессадесс 2580 чЧЕСЯддсЕСсСЯда Єддсссадса адсбасддсесс аадассдадс дсдасадсддс дсаассдасс 2640 сссссрдссс бдсссдсдасс ассддессдсс деддадсдєс содсдесдесе сдаасаддвад 2700 чдсоддсаддеє єдодсдаадес даєдассаєсєс дасасодсдад даастаєдас дассаадаад 2760 сдааааассуд ссддсдадда сссддсаааа саддесадсуд аддссаадса адссдсдадєтд 2820 сЕдааасаса сдаадсадса даєсааддаа асдсадсеЕсЕ ссЕсСЧдсЕСсСЧда саєсєдсдссд 2880
Еддссоддаса сдаєдсдадс даєдссааас дасасддесс дсссгдссс деЕссассасд 2940 сдсаасаада ааассссдсд сдаддсдссд саааасаадд єсареєеєссса сдесаасаад Зоо часдєдаада Єсассбасас соддсоассдад ссдсдддсессуд асдчдаєдасда ассддсєдсдд З06о (516) садсаддедЕ Еддадсасдс даадсдсасс сстаєсддсд адссдаєсас сЕЄСасєєс 3120 басдадсЕес дссаддассе доддсеЕдудєсд аєсааєсддсес ддеаєсасас, дааддссдад 3180 чааєдсседЕ содсудсссаса ддсдасддсуд аєдуддссєса сдеЕссдасся сдЕсдддсас 3240 сЕддааєсду ЕдЕСУдСсЕДдДсСЕ дсассусесс содсдєссвдуд ассдеддсаа даааасддесс 300 сдЕєдссадуд Есссдаєсда сдаддаааєс дЕсСдЕдсЕдЕ ЕсдсЕдудсда ссасвєасасда 3360 аааєєсавсає додадаадса ссдсаадсьд Ссдссдасдда сссдасддає деЕЕсддасває 3420 сбЕСадсеєсдс ассододдадсс дсасссодсес аадссддааа ссеЕєссдудссе саєдеЕдсдда 3480
Есододаєєсса сссдсдєдаа даадеддсдс дадсаддссду дсдаадсссд сддаададеЕсд 3540 сдаддсадсу дсссддєдда асасдсссдуд дЕСсСааєдаєд ассеєддеЕдса Есдсааасдс З6о0 бадддссеЕвд ЄддоадЕсСаде ЕссддсЕдоад дудсЕсСадсад ссадсудсеЕсЕеЕ асеЕдадаєсс З6бо
ЄсЕЕссусЕс ссссдсссас єдасесдсьд судсеЕсудеЕсуЯ Еєсоддсеєдсу дсдадсодеа 3720
Єсадсеєсасс саааддсудЕ аасасддеєва сссасадаає саддоаддаєаа сдсаддааад 3780 аасаєдедад сааааддсса дсааааддсесс аддаассдсра ааааддссдс дЕсдссд9асд 3840
Есе єсСсава доасЕсСсдссс сссєдасдад саєссасаааа аєсдасдссс аадссадад 3900 бдодсдааасс сдасаддасе асааадаєсас саддсуєесс ссссеєддаад сесссссаєд 3960 сдсЕСЕССсСвд Есссдассся дссдсеєвасс ддавассьдеЕ ссуссєЕссе сссеЕєсодда 4020 адсдєЕддсдс ЕЕсСсссагад сссасудссдс аддеаєсєса дЕсСсСоддеЕдса оддЕСЯсСЕсСо9с 4080
Ессаадсєдуд дссдсдсдса сдаасссссс дЕссадсссу ассдседсде сеЕгаєссоде 4140 аастаєсдеєс ЄЕдадессаа сссудудбаада сасудасессає судссасєддс адсадссасе 4200
Чддабаасадда Єгадсададс даддеаєдна додсоудЕдсса сададеЕєссЕ даадедоаєдд 4260 ссбаассасу дсрасассад аадаасадса ЕсЕдддваєсь дсодсЕСЕДдсЕ даадссадцьє 4320 ассЕєсудаа ааададсєдуа бадсеЕсеЕсда Сссодддсааас ааассассдс Еддсадсдаде 4380 дЯчЕЕЕЕЕсвд єеЕсддсаадса дсадаєтасдуд судсадааааа ааддаєсьса адаадаєссяе 4440 гЕЧаєсЕєес сеасдуддудєс Едасдсесад Сддаасдааа асеєсасдеЕса адддасеЕєстд 4500
ЧдЕсаєдадає бассааааад даєсеЕссасс сСадассстЕвєе гддаєсєссь дсддЕсддса 4560 бдсасаєаса аасоддасудаа сддаєааасс ЕСЕсССсСасдсес сЕСЄЕсааава Ессдавєсаєя 4620 сеЕаасааасу сссССсЕСсСЕеЕСсСЕеЕС єсаддеЕсвтас ссдссаавсає ассседесаа асасєдаєсад 4680 геЕсааасеєда аддсдуддааа сдасааєсьд сгадсддаєс Есссадесас дасЯадеЕєсдесаа 4740 аасдддсдЕсС ЕдсддаєсусеЕ даадеЕсєсста сасеЕсессад адаасаддаа ссЕСсдддааєса 4800 чдаасеЕєссс агдоддадаєсса дсаасаєрада Сдасассдсуд сдсдаєвасе гаєсстсадее 4860
Єдсодсудстає аЕргсЕсСуєЕсеЕ ссаєсдсдра Сгаааєднає аасєдсдодада сессааєсає 4920
Зо ааааВгсссає сесасаааса асдєсаєдса СсасаєдеЕса аєсаєвтасає дсеЕсСаасаєа 4980 аєєсаасада аасраваєда бааєсаєсдс аадассддса асаддаєєса асссгаадаа 5040 асЕеєваєсдс сааасдсеєсдд аасдаєсасуд сгадсудаєа асааєессас асадодаєає 5100 сасєадсааа аддсассдад сеЕссрдсадеі аєсдаєдсддд ссдсааадеЕс дасдааєссе 5160 саєєадсада асеЕсаадаєд сеЕдаєссьсеЕ ддаасудєєда асеЕєдадссе дчсдсессесд 5220 ааагаадсеєсдс асаасеЕсеЕсе даєдеаасоас СодЕЧдаадеєс бассаасесс сессссадаа 5280 часЕдаддад Єсаєсєдаас сєсдаєаддсес СЕсссаасда гадеадеЕдає аддсеЕдеЕссьд 5340 аааддсаєда дЕСсСсдааада дсаєєсддааа ассссссесєс саєддаааач Еддааддсед 5400 аврєсссаєаа ЄСЕЕсСЕддад ЕСЕДЕєСсСсдд аєссаєстаа дссаадеесс аддадедеес 5460
ЄсаассвєдЧдє Єдаададдеєє дЕЕсЕсСессуд аасдадаада баддаасаад адсадсасса 5520 бдсаєаадад саадесссдає дааєссства содЕссссса ададаадесе дсаадсасса 5580 чдадаєсвадсає саададссєс Есдадсасссї ссаасдаєда сСадсаадаад дЕсЕсСсасса 5640 сссСЕсЕСвдс гааддаєдед ассадсадаа асеЕсесьсдс гадасасдад сссассадас 5700 аєдаєдеаає сЕСЕдаадаа Еддадсссвд аассааасудд Єаадсаєсає ааддеЕаддає 576о0 сЕдаєєссад ддаасааада ддеЕдааєсса дсадасесад гасададдеЕс ааддааадса 5820 ссадсадсаа даасассаєд аддаєддаас ссадсааєдЕ адеЕсСасоддсеЕ аддаєсаадс 5880
Есадсадесс Саасдадада сасадддаад Сааєссєєсса Єдсасессса даєддссаає 5940 сЕєСсСсдаада асеєддаєадд єсвассассє ЕдЕСваддсе ваєсссааєс саадесассас 6бо0о саддсадсдІ ааадаасада даааадссад аасссддсда асаададссс аасдаадаєса 6бОобо асчаєдсада дЕеЕЄдадсаад адсааддаас дадаааассс ассдаадаас адсдааадсс 6120 бдсааєсьєєс ссссссаадуа аасаадаадс ддадсдаасе сдассаєдаа ЕсСсадессссс 6180 сЯЕдЕЕсСЕсСЕ ссаааєдааа ЄдаасеЕсссе гагаєсададд аадддаєсьсо сдааддаєсад 6240
Єдоадаєєдед саєсаєсссе гасудєсадед дадасаєсас аєсааєссас ЕсдСсСЕЄсєддаа 6300 часчєдЧаєвд даасдеЕсьсс ЕсЕсеЕсСсасуд аєдсєссьсуя ЕдоддєЕддоадада ЕссаєсеЕєтв 636о чддассаседЕ соддсададдс аєсеЕссаасу агддасссєесєс сЕсваєсодса асдаєддсає 6420
ЄЕЧдЕаддадс сасссєсссвеє єЕсссасваєс сЕСсСасааєаа адсдасадає адссдодддсаа 6480 бддааєссда ддааддеЕсесс ддасаєвтасс сЕСЕдЕсЧдаа аадеЕсСЕСсаає ЕдссссЕс9 6540
ЄсСЕссСеЕдада сеЕдраєсеЕсеЕ дававєссьд дадеадасаа дчЕДдЕдЕСЧЯдєЄЯд сесссассаєд 66
ЄЕдасдаада ЄЕСЕСЕССЕЕе дссаєєсдаді суєаададас сссдсаєдаа сЕдЕссдсса 6ббвбо дЕСЕєЄвасодд счадеесьЯяе гаддеЕссесс арсеєдааєст Еєдасессає ддадаєссаад 6720 (516) дасссбадаа Єссааєсасє ссаєєсадас Сааасєтадса ЄаадсасєсеЕ єсеааєсаає 67Во аааєааєагаає сааєааєсеєса Есадеаддад Єдаєсддааєє басаарарає єсЕСЕсСтаає 6840 саєєсааада ассставраєс єсЕаааєєда саададеЕесе ааасоддооадад адеЕдеЕсаєса 6900 баєсасааде аддаєєааєсуд ЕдЕеЕсасадьс ссасаєдсає басдаєаадеі ЕдЕЧдааадає 6б9б6о аасаєстаєвта сасасаасаа Єдасааєсас сСадсдаєсда чдчеадедададч Есдєсюєтаєс 7020 асасЕсєЕеєсьс ссеесудаєсьі деЕсасаєддс ддсддсессда асеєсеЕСсасас ааддесадевд 7080 саадасассд аадеддЕдЧає адсдодсадса даадаадсад ааєсддсада ааддсаачдас 7140 ааєддадаад аєдаадчаєду Еддадавссе сеЕссссасаа сдсадсааєс ааддеЕсеєсса 7200 аддеЕєааддс асесдЕдссЕеЕ єссаєсаєсуд аасаєдаадеі сдаєдеЕсаєс сЕСЧдааадса 7260 адсЕСЧЕєда ададеесьду дсасесааєс доодЕссСЕєсСЯє бадсаадачєє Есдаєсодна 7320 аддааєдддд адааєссадеЕ аєссаєсаєд садаадесеєсс аадсаадеЕсс дЕЕДдЕСсСаєСЯ 780 ссдсасстає ссасеєсссає даєддєддаа дааєсааєдс адсадссаас аасддсадсе 7440
ЕссеЕсадаає аєсссасаає Ессадсесесь сусеЕдсесад ссЕбсесьсс ссссеЕСЕЄСЕе 7500
ЕСЕЕСсСсСЕСЕЄ даддєддеЕєс сєсаасуабає суоседсесваа ссЕсеЕЕсссе аддасессься 7560
ЄгадсееєсесС садесесаас сЕСЕсдсева дссеЕсаасаа даасасссєс ЕЄсдаєддаеєта 7620 дссЕддЕсаа сеЕдддааєда даааасудсесс ЄЕСЕЄСЕсаа дссеєдессдає деЕадеЕєддвад 7680 асаєсдаадеі ЄддеЕаасадс дЕгадсассє сеЕдбасссаа бадсадссає ассаєаадса 7740 дсЕдсадсесе сЕсССЕсЕдадеЕ Ч9ЕЕЧдЕаадьс ссдадудсада ддасгасеЕсудє Ессдаааасе 7800 сЕєсСсааєсс гадсеЕсссса ЕСЕЄСсСдЕєса Едаєдаєдсс гадсаасеісс ссравасеква 7860 чааасеєсссс бададааєсс адаєдасеєдс сЕсссаадду аадсаадаса ссссесеЕст 7920 дЕСасссєсс дсасрсеЕсеЕсс аа:зсеЕсеЕсву деЕдеаадеЕСсСеї садсєдддаа дссаадааєд 7980 чЕаєседддс сссаарассє аададсадса адаєсасадд баєдадсадс адссеЕсьсса 8040 чааєсаєаад сЕССсСаадудба аассЕдсесу ссссЕсСЕеЕєУдЄє ЕЄЕдддаєдда дЕсССсСаадад 8100 часеЕваєссс аааддеЕдадс Ессдааєсьс ссадесссаєс баєдсстаде аасассесьд 8160 бадаєадаєд ассеЕсссуддЕ адаадседда даадсеЕдддЕ баєдадасесе ассдссадає 8220 ччачаєдасе Ссеврадсссе сесадсеєсеЕс СЄЕСООЧдДЕСЕвУ дадссєсада ЕєДдааєсо99ад 8280 ссададдсад Садсадаада ддасассдаа даачаєсддад аасгсададса додгададчатга 8340
ЧдЕдадссесеЕ ЄсесЕСаєдаа Ессассадед аєсааасеЕсєе дФЕсддЕдсЕЕ Едадсагаєа 8400 асаадсаєдд басасасаду сасдєбаааса адсеєдадааа ЕЕсрасевесу адеЕсеЕдасає 8460 аассааєааа адсвадсдсеЕ десеЕсаєвтасс єсасессадеє Едсассдсаа седессдадЕсад 8520
Зо ЄдчаєдеЕсєсас сеЕсессссеЕсеЕ єСвсаєсаєсєєс аєсадсаєса басаасаває асасасооєде 8580 чаєдчадасеєсє дааасєдеЕсеЕ адсассудсаа агдеЕссеєеєсеЕ Едадддададча ЕСсСЕССЕЕСВЯ 8640 сЕдадчєєду ддЕдЕсСасає асассссссе ссаєддасес аасудєссьсу седаддадеЕєта 8700 ссссасасса саєдадаєєє єсссадасесс аасасваєда ваврсеєсьсдс, сЕєаєсдддаа 876о
ЕгЕдодєсааас ссадседаад Есадддесає аєсудаєаааа ЕЄдасасаєд ассдасесьд 8820 асгаєсаааса дасєсеЕсесс сссдаассес асссассеєєсс сеЕсеесеСсСТакє єсЕСсСтаєсадд 8880 баєвтаєваєаа садаєссуєе ссаассасес асдбасаєаа даадададає асеЕсеЕсесее 8940 ааєддассаа саєсдасааає аааасаааса ааддадсаає даєсассаса асаааєтада 9000 бгаєдаддда саааєсааєсе саєсаєссає аааєсасдеЕеє єсдеЕСасеаа азвасеЕстьЧтд 9060
Єдасдааааа дасеЕссдеєса ассадеєдесС асраааааса сСасааадасуд аєєсеааєдає 9120 дЕЄрассєЕвс сссесеЕСТає єСсСЕЄсаєсад Састаєаєаа бааасасаєд єДдЕеЕЧаєсдада 9180 сЕєЧдаааєсуд ЕсСЕадсассу сааардеєссе ЕДдЕєЄЧЄааддуд ЗДЯОЯЧЕЕСЕСЕЄ ЄЕДСсСєДДадЧі 9240 бддддєдеЕса сасасасссс сЕСваєддас Єдаасуєссяє ЄЕЕсСЕЧЧадудсє гаресвасас 9300 бдсаєдадає єЄЕсСЕСвадає саасаєсає дасеєсссада сеєсаасасса сдаєсдесас 9360 бааадастає сеЕсСЕсСасаса Єаааааааає ассеЕсудєсст баааєдсаєса ааєсадодає 9420 аааєєсаєвта Єсаєаааааа ддЕсСааєаає СЕсСОЄЧдаєса аасссаєтає єседесасьд 9480 ааадзєЕдЕсєвд сЕсЕсассда сдасаєаває деЕсассааає аєсаєсаєаа деадесдасаа 9540 ббасааєєдеЕ сасааааєаа ааааааєсає ссабраєссаа сааааааддд гассасддаса 9600 асасавеєесє сдссассдаа адеааєсаад СЕдДдЕЧасааа Еєааєтсаєсь гааєсдасааа 9660 аасаєєвєдна Єсааааєсеса сссаєдаєса сСасааєсаааа аєаасеєаааа Єгаграссааа 9720 дсаєаааєда саадаааасс Єаассаааас асаєсаааса Єсасссстраа асааадасає 9780 асаадеаааа арсесьссса аадсаєсаає аасуєддеда сасаєсадсее дсааєсааєс 9840 гЕгЕдсЕссаає ЄЕсССсСассЕсеЕ баграсседна аааадааада дааааєаааа сааєдаєєста 9900 аааавЙєсдаає Єсссдсддес ссгадааєсєї аастаєєссста Еєсадасеаа асгадсаєаа 9960 дав аассаасааа Єааєагаєсаа Сааєстаєса деаддадеда Есддааєесає 10020 аасасаєєсєєс сеЕсСеааєсає єсааадааєс СсараєсЕсє аааєсдасаа дадсеЕстааа 10080
ЄдадддададеЕ дЕсСаєсаває сасааднадуд аєсааєсдеєдЕ бавадеесса саєдсаєтас 10140 чаєаадЕеЕєдЕ дааадаєаас аєстаєсасає асаасааєда сааєсасьад сдаєсдаднеа 10200 чЧЕдададеЕсуд ЕЄсесраєсаса сЕЕссеЕссе ссдааєссдес асаєддсуддсес ддсссдасдадес 10260 сдсЕєЄсаєса сссдадссад даддаєддає сдаєдседдЕ сєдадассся дсвеассадьєе 10320 (516) дсєдасєдаа сеЕдсссддса суддеЕссЕсса СЕсССсСасудддс сЕЄДСЕСЯОсССсС аассеЕсуєсе 10380 бдадассдасес саасєдаєсс дсеЕССсСдуддеЕд даєдеЕесссс судаєсаддеаа сддаєсадаєсс 10440 аддасадсас адасададсу дсаасассаа арсссссусЕеЕ Едссадаааа сссдсеєссса 10500 асаддаадає додєдаєдасеЕ дсадаєсада аааасссада Еєсааєсддаса аасесдаєсд 10560 сасааасьрад ааасєаасас садаєссада бадаааєсас ааасєсдаада деЕааєтаєес 10620 чдасаааасес аааєсаєсеєсуд аасаааєсуд аєдасаєсса Єдааасссста ассдадааєсе 10680 аадаєдасає сеаасдаєса аасссадааа ассуєссєсу аєссаадасє аасадааєсе 10740 ааассааада асагагасда ааєсдддаєс даасдаааас ааааєсдаач асеЕсеЕдадад 10800 аасааддаас асадаааєсе ассєдсадудд ассадбрасад дсдадаадає сассаддада 10860 чаєдЕддсда ЕЕдЕСадсдс ааєдассЯдрс ссадссаддд Есаасссуда гаасассаас 10920 аддсвєассеЕс соддсадсаас сдсддЕсдсЕ дссЕстрасаа сасдсеєдадс асддсудЕєсдс 10980 адеЕєдсаадсї доадоадасасу ЕДФЕЄЕЯЧЕСООсС СосЕДДсСссуєЄ адедсесьдсе саєддаааєс 11040 гЕЕЧдЕєддЕдсС сєЕсддадсаєса баасаадсає дудасасасаса ддсасуєбааа саадеЕсдада 11100 ааєєеєвасьс сдадесесдас аєаассаава ааадеЕсадед сЕдеЕЕеЕсаєвта ссесасесад 11160 гЕєдсассус аасеЕдЕеЕсуЧєє адеЕЧчасдєьс ассЕсесстье ЕЕсСсастає Есастеадевсає 11220 басаєагаває агагаваєдеЕ дедаєдадас сЕдаааєєдеЕ Есадсассдс ааасдессьс 11280 сЕЄєДаддоада осдЕСЕССЕЕЄ єдсеєдадаєє оддодадЕдЕсСас асасассссс сЕСТаєддас 11340
ЄсаасдєссеЕ ЄдсеЕДдадуєе бассссасас сСасаєдадає єЕсЕСвадас Есааєгасває 11400 чаваєєесьс дссеЕсаєсдду ааєєддеЕєаа асссадесєда адегаддаєс асаєссддаєаа 11460 ааєєдасаса Єдаєсудасесс Едаєсаєтааа садасеєсься сссеЕсдаасс ЕсасеЕсасьє 11520
ЄссЕЕЕЕссСеЕ арссесесаєсе адеаєсаєсає ааградаєссд сЕСсСсаассає Есасдеасає 11580 аадаачадад асраЕсєЕсеЕсеЕ єсааєддасоі аасасдасаа асаааасааа саааддадеа 11640 аєдаєсасва саасаааєса даєсаєдадд дасаааєсаає ЕЄсаєсаєсьі асаааєсаєд 11700 гЕЄСсСдеєСсСасеі ааааарсєсдд єдеЕдасддааа аадасеЕссЯє сааєсадесд Есасгааааа 11760 басасааада счаєстеааєу асдеЕссассє сеЕссеЕеЕсеЕсСеЕ аєрссеЕвсаєсе адеаєсаєває 11820 аасаааєаєа Єдсдсдаєда дасеєєдааає судсеЕсадсас сдсаааєдес сеЕгЕдЕсддаад 11880 дадаадчЕєЕсеЕс ЄЕСсСЕдссодад ЧдсЕдоддаєде сасасасасс сссеЕСТтаєдда аседаасдаеЕс 11940
СЕЄЕЕЄсЕЧЧдаду ЕсваєсеЕсас аседсаєдад аЕєсеЕсеЕстад аєєссаасаєсе асдаєсеста 12000 часеЕсаасас басчдаєсуєс асгааадасе аЕсеЕсеЕсаса гасааааааа асасеЕседес 12060 сЕсаааєдса гаааєсаддд асаааєстає гаєсаєаааа ааддеЕсааса аЕєевєдедає 12120 баааєсвтаєсе арсеЕсудєсас ЕдааадеЕдьс сдсЕсЕеЕсасс дасдасабає аєдеЕсасеаа 12180
Зо асгаєсаєсає аадсадсдас ааєсасааєс деіЕсасаааає аааггааааєє асесасасес 12240 аасаааадад ддсасрасда сааєсасасьс сеЕсудєЄсасвд ааадсааєса адеЕсдєдаєа 12300 ааєєааєєвта ЄЕеЕсСааєдаса аааасаєсьд сассааааєе сасссаєдає сагаєааєаа 12360 аааєаассаа аасрарасса аадсаєсааає дасаадаааа Ессаассааа асасаєсааа 12420 баєвтасессе ааасааадас асаєаадсаа ааарсеєсьсс сааадеаєса асаасаєдаЧе 12480 дасасаєадс ЄЕдсааєсаа ЕСЕЄддСсСЕСсСсСа арсеЕссассє єЕсєсасассвд єааааадааа 12540 чадааааєсаа аасааєдаєсе гаааддсдсд ссдсубаєсвд дссададсад сЕєЄдссааса 12600 бддєддадса сдасассссс дессасесса адаасаєсаа адаєасадес Есадаадасс 12660 ааадддстає Єдадасесесе саасаааддд Саагаєсуддщ ааассеєсссєс ддаєсессаєяе 12720 дсссадсває сеЕдеЕсасесс аєссаааадда садгадаааа ддааддеєддс асссасааає 12780 дссаєсаєєд сдаєсааадда ааддссаєсу СЕСаадаєдс сеЕСЕєдссдас адеЕддесссса 12840 аадчзаєддасс сссасссасу аддадсаєсд бЄддааааада адасдеєссса ассасдесьє 12900 сааадсааде ддаєсєЕдаєдеЕ даєаасаєду Еддадсасда сасссссдєс басессаада 12960 асаєсааада басадесеса даадассааа ддоастаєсда дасеЕсєесєсаа сааадддеаа 13020 баєсдддааа ссессеЕСсуда Есссаєвдсс садссаєссд Есасеєєсаєс ааааддасад 13080 бадаааадда аддеддсасс басаааєдсс аєсаєсєдсда Єаааддааад дстаєссуєєес 13140 аадаєдссес бдссдасадеЕ ддЕсссааад аєддассссс асссасдадд адсаєсдєд9 13200 ааааадаада судсЕСсСсаасс асудєсеєсаа адсаадсоода ЕєЧдаєдеЕдає асссссасьд 13260 асдєааддда Єдасдсасаа Есссасраєс сЕсСсдсаада ссЕєссеЕсса гагааддаад 13320
ЕЕСаєєєсає сЕдддададда сасдсєдааа Ссассадесе сеЕСЕСТасаа асссаєссеся 13380 дсдаєсдсає дасдчаєсеЕсу даєєсєсвєдссдд дсдЕсастас ддаєдасоддад аасдоаєоддсд 13440 чачадеЕєсЯає счаєсеЕєсдає аддсеЕссдес дасоууддаааєс дадаєсддає єсСЕссСсаасда 13500 часеЕєсЕсєсеЕ сЕСЕДЯДУЧЄєСсСсС даєааєааєс сеЕССЕЄЕєСОда ЕдаєдеЕсдда дсеЕсссдссд 13560 асдєЕєсаддда Єсддаєєсдає єссуєсудсва асдаєдасудс Есадддааса дссааєєв9д 13620 ссддадаєаа гаасудЕдЧЕ ддсдаєааса асоддеЕдЧдеЕду аададдсддс ддадааддаа 13680 чаддааасдс сдаєдссасу ЕСсСтасдваєс дассдЕСсСддЕ ЕЄссадсєсає сддадддасда 13740 чадададесс ассгадсесс дасдсааєсої Ссааасадад ссаєдссуда Есасесаасес 13800
ЕсеЕдЕЧдвадеЕ адсеЕСьсасе дсеЕдсаааса дегадасссає саєсдаааає сегаєдааде 13860 агдЧчєЕєдЧс даєсадаасу чаєсєєсьдує сеЕадсеєсаад аєсдседсда даєсдддссдс 13920
ЕЕсЕеЕСавєдед ЕЕЯДгаваєсс сЕЕЄсдассє сеЕССЕЕсдддс ЕдссеЕЕесасу дееЕдадааає 13980 (516) бддбасеєсса дааасасаса Єсадаасстд ЕсСЯаєЄсаєсеЕс ссессаваєє аєсаєсасса 14040
ЄдасададдеЕ ЄЕсЧдсаєссса деЕЕсасуєса сссеаадудбєд ЕдаєєсссдсеЕ єЕсЕСсСваєсад 14100 дЕдЕСасЕве дасдсессеєс асеЕєдсаєьд содсоодссааа ЧЯФЕСОЯДЕСЕСЕ гаєдсессаєга 14160 сеЕадсвраєда саєаадаєсс сградссааєд садсеєдаєаа ддссааєссє даадеЕсьсся 14220 ассасдєсад сЕсдаададс Есддсаваєс ссаєдудесесдс Есссасаєєсу ЕдЕсСаєсадсе 14280 саадеваєсс асуєсеЕстдса єдеЕаєасоода адоддЕєдоадЕ ддсеЕсдЕСсСаа сЕсдсаааас 14340 бддЕСаваєс сассддаєсс асддчаєста Сааєсадааса асасаєааає сстаєсдеса 14400 чддаасесааа дсаєссєєеєсуд аааддсдаєс ЕЄсСсСтаваєдс гаєєдааада деЕдсеЕдаадс 14460 гЕЄСадЕєсСсС аааєставає чедеЕддсесе дсаєдеЕссста сЕдсеЕЕсСеЕсс сассеЕЄстоде 14520 бааасаваєсє доасададссе сеЕсЕдсеЕссд додаєсдєда аєєсссасааа даєсодедва 14580 аєдсааааад сЄдсдоддадає басеєддадаа ЄдЕддаасає дсседесЕеЕсає аааєддваєдд 14640 сЕСсСЯдасаєбає агасссєсссу ЕдсЕсдсудса дсаадасасс ааадасассс дссаєсаєса 14700
ЕЕДДСЕВЕСсСсСЕ адссесссддса дЕСсСЕсссард адстаєдсає сдсадесєссь ЕдЕСЯЄСЄСЕ 14760
Есаадсваєд дасЕСсЕЄССЕЕ додаєсаєує сеЕСадудєдес ЕЕсодддЕСЬСсС ассасааасе 14820 аєсрасадда ааддесеЕсддс Есаасоддєдда ддаасаєдає сЕсстодЕЄСсС ассеесьдса 14880 гЕсесСоддаса ассзчаєдеЕдеЕ дЕдсЕссСЕвс аєсассасда ссеЕдаєдаас сдааааддає 14940 сдаєдесаєд адсдаєсдсуд ассдеєєсааа саєєєддсаа сааадсеЕсся саадаєєдаа 15000
ЕссеЕдеЕєдсс доаєсеЕвдсда Едаєтаєсає асааєрсеєсьдя сеЕЧдааєсасу ЕЕаадсавєде 15060 ааєсааєєаас аєдеЕааєсдса Едасуаєтавєс сасддадаєдуа чЯчЕсЕЕсваєда Есададесссе 15120 чдсааєстаєас аєсеаасасу сдаєадаааа сааааєсаєад сдсдсааасе аддаєаааєєе 15180 аєсдсдсдсд дЕДЕСаєсса ЕдЕсасвада ссссєдсадуа дсдбаєсддсес гададсадсь 15240 бдссаасаєд деЕддадсасу асасеЕсесЯдєЄ срассссаад аасаєсааад асСасадеЕсСес 15300 адаадассаа аддоастаєсуд адасесесса асаааддудба аєаєсдддаа ассєссесдд 15360 авеєссаєєдс ссадсваєсе дссасеесає сааааддаса деадаааадд ааддеЕддсас 15420 сеасаааєдс саєсаєєдсуд асаааддааа додстаєсуєеЕ саадаєдссе седссдасад 15480 бддЕсСссааа даєсддасссос сасссасдад дадсаєсуєд дааааадаад асудєсєссаас 15540 сасдесссса аадсаадєсдуча асєєдаєдеЕда Єаасаєдудаєд дадсасдаса сЕСЕСдЕСТа 15600 сЕССсСаадаає ассааадаєа садесесада адассааадд дсргаєсдада сеЕЕсеЕсааса 15660 аадддєааса Єсдуддааасс ЕссЕСДдавс ссаєсдссса дсраєстдеєс асьссаєсаа 15720 ааддасадса дааааддаад дсддсассва саааєдссає саєєдсдаєа ааддаааддес 15780 баєсдеєєсаа даєдссоссд ссдасадебдд ссссааадає ддасссссас ссасддаддад 15840
Зо саєсдеЕддаа ааадаадасуд Єсссаассас дЕсСЕссааад саадедчаєсє даєдедаєває 15900 сЕСсСсасєдас дсаадддаєд асдсасааєс ссастаєссе Есдсаадасс ЄЕСсСсСЕСваєва 15960 бааддаадес сасессаєсе ддададдаса судсеЕдаааєс ассадеЕсьсе сессасааає 16020 сраєсеЕсеЕсеЕ сдадаєдаєє даасаадаєд даєєсдсасдс аддеЕсєссссу дссдасеєєд9д 16080 бддададдсеЕ аєссддсрає дасєдддсас аасадасаає сддсЕдсЕеЕсСЕ даєдссдссд 16140 єдсЕСсСуддсЕ дЕСадсдсад дддаддсессояд СЕСЕСЕсСвудЄ саадассдас седсссодеЕд 16200 сссЕдааєда асеЕссаадас даддсадсдс ддасваєсддєд дсеЕддссасдуд асдддсдеес 16260 сЕєдсдсадс ЕдЕЯДсСєСсСдас дЕєдЕСассд аадсодддаад ддасеЕддсьда стаєєддадсд 16320 аадедссддад дсаддаєсєс седеЕСсаєсьс ассеЕсдсесс бдссдадааа дсаєсссаєса 16380 бдасєдаєдс аасодсуддсду сєдсабасуус сЕдаєссудс басседссса Ессдассасе 16440 аадсдаааса Ссдсаєсдад сдадсасодєба сссддаєдда адссододеЕсСьс дЕСЯЧаєсадд 16500 аєдаєсєдда сдаададсає саддддсссд сдссадссда аседеЕеєсдсс аддсеЕсаад 16560 сдсдсаєдсс сдасуддсдад даєсєсдеЕсу Едасеєсаєдуд сдаєдссвєдс єгЕдссдааєа 16620
Есаєддєдда аааєддсесдс ЕЕЕЕСсддає ссаєсдасьд Єддссоддссд доаєдЕдасад 16680 ассдсраєса ддасаєадсу Есддссассс деЕдасаєєдс ЄдаададсеЕ ддсддсддаає 16740 дадсеЕдасс 16749 «2105 124 «2115 137 «212» ДНК «2135 Штучна послідовність «220» «223» послідовність линкера «4005 124 авєєвсаааєдс додссодсдаає ЄсдеєСсСдаєсдд аддасдсссс бассадассо дседдассес (216) сЕСССддссас сСсассасчас єССсСсСЕСОссд Єдсаєаєсдудс садссаєсдсесс содддесседса 120 часддссдса ЄЕсСааає 137 «2105 125 «211» 434
Гс10) «2125» ДНК «2135 Штучна послідовність
«223» шпРНКі «4005 125 чЧдЕЧадсааєд аассаадаєє баєсаасасс дессасеЕсссдд асадсааада даддссссссе (216) асєсеЕсєдеєва ЄоддеЕсСсасдду асаєддеЕдсесс Єсссаддудчесе ЄсСеЕЄсСЕСЄСЯ даасеЕсесає 120 дсссЕєдсда додсаєєєсаа адесаєєдсе аєєдаєсадс ЕєЧдЧдстдоада гдЧдЕссаадс 180 аддссеєдасе Єсасаєдсад аадсасадаа дадассдаад ассоддесссає сдассссюссес 240 чадчдадеддс дсааадссаа ааассссадс аасессасєсс сосссддддса ссссессодда Зоо чадеЕаєдесуд седсааааєа єдсЕеЕСсССссаад сасссададс асдсссадса деЕєЧсасесьдле 3З6о
Чдсаддассад седдаєссас аєсададасе даасастаєсдеЕ ссдадсддсеєс гбасссадеее 420 ачадсаасає ддаа 434 «2105 126 «2115 593 «2125 ДНК «2135 Штучна послідовність «2205 «223» шпРНКі «4005 126 асєдссдаєд сеЕдссаддса деасстаєдуа ЄЕЧСсСсеєЧада адсаєааєудс єСсСсЄЧдаасьс (216) сеЕсдсасссд ссдоддадаєса Сссасаєсдда аєддаєстаєд аааадессає саадсссас 120 ачадааасад аєдсеєдаєає басеєдссдсс дсассдссаа Сддаєсдаааа дсдадссасео 180 чсаєєвєддеЕсС єсаєдаадає єдасдаадаа ддасдсаєта єєЧдааєеєсдс ададааассд 240 ааадчдададс ааєєдааадс ааєдааадсд дасассасса ЄЕсСсСаддеЕсс Єдаєдаєдвад Зоо ададссааад ачасдсссве саєсдсааде агдоддеасає асдєсаєтад сааачасоаєд 3З6о аєдеЕсааасеі басеЕссдеЕда ЕаадеЕсєссся дудаєсдссааєд аєєєсддсад Едаадесаєсь 420 ссгддсдсаа ссЕссодсссодд дасдададсд саадсеєтаєє гсасаєдаєдо агсасесдоддаа 480 чаєаєєддава ссаєсдаадс ЄЕЄЕЄсСвасаає дссааєсссдда дсаєсассаа ааадссадесс 540 ссадасссса дсссссасда ссдаєссадсс ссааєстаса сссаассєсд ага 5ЗЗ
Зо «2105 127 «2115 5 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» мотив ліпази «2205 «221» щшівс Теаєбиге «2225 (2)..(2) «223» Хаа може бути будь-якою природною амінокислотою «2205 «221» щшівс Теаєбиге «222» (4)..(84) «223» Хаа може бути будь-якою природною амінокислотою «4005 127 сб1у Хаа бек Хаа Щ1У 1 в) «2105 128 «2115 О6б6 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» мотив ацилтрансферази «2205 «2215 Х «2225 (2)..(5)
Гс10) «223» будь-яка амінокислота «4005 128
Нів Хаа Хаа Хаа Хаа Авр 1 в) «2105 129 «2115 7 «2125 ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» ймовірний мотив зв'язування з ліпідом «2205 «2215 Х «2225 (2)..(84) «223» будь-яка амінокислота «4005 129
Уаї Хаа Хаа Хаа Нів с1у Ріе 1 в) «2105 130 «2115 1224 «2125 ДНК «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 130 аєддсддаад аааєсєсааа дасдааддеєд ддасссссєс ссассдсссс ддсддседає (216)
Есаєссдсед сеЕдсдЕсСддудс Сдсаасдаає дсоддссааає саачасоддаа аасЕєвєдвесво 120 сссаасссдяс сссоддсддає ссссрасдєсс ассдаєсаса сСсассдссдс сдадааасдаі 180 сЕссессссса сссссаадас дссссаєсдра саададсаад ссадтаєсдда Ессаддасса 240 ссаддеЕссса ааасєсаддсд дсЕссаддесс асдадсааєд адссасдеєса саєсаасасе Зоо
ЧдЕсасаєєвєд аєдссаадда додадссссо асасссдєсса ЄддеЕссаєда Єсасодесдсе 3З6о
Зо ЄсесааддадЕ ЄЕСЕСЕСССЯЯ Євааєєстдає дсесссєдсса деЕСЯдаєстад адедаєсдсе 420 аєєдаєсаас ЕЄєЧОЯдЧЕЧдодоа єдЧдЕєсСааді аддссодасс ссасаєсдсад аадсасадаа 480 чааасєеєдадуд саєддеЕєває сддасессссс даддаасддс дсааадссса дааєссссадес 540 аасеЕєваєеєс сасваддаса ЕСсССЕЕсЕдда дооастаєдеЕсд сеєдссаааса сдсдсєсєгаад 60 сасєсссдаас асдсссааса сссааєєстд дедододаєстд седддеЕссес адсадаадса 6бо чаєдссааасє садааєддсеЕ сассааасеєє ададсаасає ддаааддеєдс адссстааає 720 сасєссаєсддд адссааассс сассссєсад аадссддсса даддаєссадда Сссесддаді 78о0 ссаддссссд сСааасєсддса Сасаасєрдса адаєрєсддард сасаєєсода додаасе9д94 840 ссаасадаад аддаадссаа ассдссаасс даєтаєдедеЕ ассаграсеЕеєе ддсеєдсааад 900
ЧдсЕадеЕддад адеЕсаєдсеЕє дааасасаєс сссссасссдд дадсасєссдс саддаадссс 960 сЕСЕсасааа дсдсаєсада дседдааадсуд ссаасаасудє ЕсСаєссаєда ааєдааєдає 1020 бддаєдаасеі аєсааддедс ддаєддаадсд аддаааєсса Едааддессс Есдсддаааєс 1080 авєєсдддаєЕесС сасадуддеЕдд Есаєєєсвдед сЕеЕСсСасадаса асссаастдуа ЕсЕсСВЕССЕ 1140 чсадзЕдсЕвс агдсесвдссу саадееєсаса ЕсЕСаадасе ссеЕСЕСаєда ссаасаасес 1200 сЕадаєдуаєс гасдаєстєдЧає єсад 1224 «2105 131 «2115 1700 «2125 ДНК «213» Вгаспуродіцю аЗі5Баспуоп «4005 131
Ессдсдсссуд ааасдаєссс аасадаадсс ссаассссса аадссдссдс дсарєдеЕєдвад (216) чЧаєдадЕдсодод ддаааадсеє дадєдЕсСдсЄда дсссссдсбдс сдсаєсдсдсс дсдсгдссдас 120 сдєдасдадд асддсадсда ссдаддадає даддсаддсд Ессдссдссдуд ссдессдссас 180 чаєдассдад дссЕСсСддсЯдє соддсоддсссс дсссдсдддад Єссаддєддд садсоаддаєдвед 240 дссоддссодсд сеЕдсудссдда Сссссассес сассдадсдс ассаєсдссду ссдадаадсд Зоо сссссссссс дсасссаааа ссдддраєдеЕ ссаадаасаа деЕсаасаєвд дсеЕсддсьсс 3З6о асссдддеЕса ааадеєаачає доасеєсадаєс ассаадсдає дадссааддс Ссаєссаатсас 420 адеЕдчасаєєє даєсадсаадуд адааєдсссс сасссеЕєЧдеєс аєддеєссаєд деЕгаєдавдс 480 бЕСасадудадЕ ЄЕСЕССЄЕсСа даааєєсьсда сдсссЕсдса адссдЕсеЕсс дадедаєсдс 540 (516) саєсдаєсад сСсСгодсеододд дсддаєсаад бадасссдас ЕЕєСсСасссдба ааадсассда 60 ачааасеєдад дсЕсЄддеЕєса бадаєссссс ададдаасдда сдсааадсаа адаассоссад 6бо баавеєеєвава ЄЕдсссоддес асєсесесоод аддасаєдеЕє дсадсаааає асдссеєдса 720 чдсаєссєдаа сасдєдсадс асеєсаГаасссс доассоадеЕссс дссдоддЕссс саєссадааас 78о0 ачаєсаєадс єСЕЧадеддеЕ баассаадсс Ссдадсааса Сддаааддса Сдссадсдаа 840 ссаассаєдда дадсссааєсс ссасссссса аадааєссдса ададдасєсдда дЕссссд9д9аади 900 сссадаєссд дсеєсодсадчає асассаседс баддеЕссдддс Єсасаєссаа саддаєЄдаасяе 960 асєаасадаа саєдадесссу дсЕєдсеЕдас адаєсасаєе бассавасає гадсеЕдссаа 1020 адстадеЕдда дадсєдсдсеЕ Едааасасає сЕСЕеЕсЄсСсеЕвд доадодсаєсеєсд сааддааасс 1080
ЕсЕеЕсСвдсад адсдсаєссуд аседдааадеі дссдассасе Еєсасасаєуд дссаєдасва 1140 бгддаєдааа сассаддуддуд сасадсаадс асдсааддає аєдааадеьсс сегдсдааає 1200 саєсададесс ссасадддад дасаєєсвдЕ дсеЕСсаєсадає аассссєсссду ддсєссаєес 1260 часадеЕСьЕеєсС сасддсуєдсс ддаааєєьЕсе аєсєддадає дсададдадд дЕСЕсСЕсЕсе 1320
ЕссеЕдаєддс сеЕдасаєссд саєдасадса Сдаддсдсда ЄдЕсагасса асгадсоддеа 1380 бдаасасааа дсааадстає асудадссад даааєдессас аааєдесасу асеЕсассада 1440 ааєдеЕсасаа аєдеЕсассас ЕсассадеЕес сссеЕсСЕеЕсЧдЄва соосаєдаавєс деЕДдЕДааває 1500 асасудєсаєє сасасєсоосс ддсдбаєсад СасеЕссааса деЕдаєсаааас асдаєсаєває 1560 агаєсаєдсає дасеЕссессса дессоддЕЕсСеЕсС аєсаадессаа дЕсаєєдеЕда ЕсодЕддДааєд 1620 асагасеЕсєеєс садудєсаасе ЕсЧЯєдЧєЄЕеЕсдс аєднасааас баєссаєддаа сагаєсаднеа 1680 бадеЕстаєда ЄЕС єЄсСтвсс 1700 «2105 132 «2115 1484 «2125 ДНК «213» біусіпе шах «4005 132
ЧдЕсаєддаєд содсдЕСсастд сЕСддсудєЄєєЄса сСгасааєддс ддаададаєа ассаадаасд (216) асдеЕсддадеЕ аассеєссааа ассассадаа дсадссссад дчЕЄсСЕддсессеЕ счарєгдодарес 120 ссасссссас сдаєссасаєс ассдсрдссуд адаадсудсесс ЕЄЕСЕЕЕсСсуєсС деЕСаадастд 180
ЧЕсаєдеЕсса ададсаєдеЕє аасаєсддсеєс ссддесессссс сддссссааа дсдаддасдае 240
Ессдєєсаєс садсаасдад ссодсоадссса сСсаасассудс СбСасасссдас адсааасссс Зоо
Зо аєЕєсєсеєссаас дссєдЕСаєдд асеЕсасодеЕє агрдссусеЕсс асадддаеєєсс єсЕСЕСсС Са 3З6о агєвєееєдасодс дсЕЄдсЧдєсСЕ сччаєєсадад Ссассдссдс Єдаєсаасес ддаєсддвадід 420 чаєсдадсад ассеєдаєєеєс асаєдсаааа дсассдаада аассдаддса ЄдадеЕссаєссд 480 агєсЕвсєеєда додааєддада ааадссаааа асссдадсаа ЄЄссасассдя сесодасаєсс 540 сСЕСсссодсдд ссасдссдсс дссааасраєд сдсссаадса сссрдадсає дгасаасасе 60
ЕдаЕєстєдуає годаєссдсеЕ ддадассеєссає седааєсада ЄдсааадеЕсс дадсодаєсаа 6бо сааддссссдуд адсаасаєсдд аадддддсад єЕссдаасса ЕСЕЄсддддаа ссаавааєсєссса 720 сассссадаа асссдссадда ддсссаддеЕс сЕсддддеЕсс саасасадес сдсаадтата 78о0 саадсдссад дЕссддсаса сасссаассд додааасасс дасєдаадад дааєссаасає 840
Едсеєдасада сраєдеЕсєвсас сасасаєссддад сддссааадс сСадсодадад ссдсдсесаа 900 аасаваєєвс сеСЯсЕеЕсоода дсаєєвєдста ддаєдссссе ЕсЕЕсСЕСядЕ дссеєсададе 960 чдааддеЕдсс сассасеесс аєсдсаєддес сссаадассд даєдааєтає сааддесдссс 1020 аадаадсеєсд саадсасаєд ааддеЕсссає дсдаааєсає саддаєєссь саддудаєдадес 1080 асЕеєєдсдвс саєсєдасаас ссааседсся СссасеЕсадс СсЯсЕСЕває дсеЕвдЕСаа 1140 даЄЕЄСЕсас асседаєсса дасааєдаає сеЕСЕссстаа адддсєаасс єСЕДдсаєа9д 1200
ЄеЕаддеЕСсва аЕсеЕсєддсе асеєссстуєст аграєдравєєє сааравєсвс есесасетаає 1260 баааєєєсає аасеєдааєда аассасаєсує аграєсдуєесєс адсааадедуч ааєстасвда 1320 ааагаєеєсдеЕ аасадсаасе Єсаасааааа Ссдасеєсдса ддадааарсє сеессстдда 1380 ааєєдеЕєста ЄЕсСЕаааєсі єЕдЕєдсЕеЕСаєЄ аадасаєтає дасеЕсєсарсс аассааєаає 1440 єсаєдеЕсЯєс сСаддааагадеі адесадеЕсає аєсаааєстьу ссаа 1484 «2105 133 «2115» 1662 «2125 ДНК «213» йеа шаув «4005 133 ассаєасддуд сдддадссодса ссдассдаас сгаассдада дсасдадсає асссдаєсссд (210) асеЕссдасед сададсаєса дссдаддада ааадссддда дааасдсдсуд ЄдасдЕссдс 120 ссдсдссдба сдсдссдсдс сбдссдсдсес дсдасдасда сдасдассад даєддсадсс 180 (516) чадчачдаєда дасдддссеЕс сдссссаасу дссасоддсду адаєдссоодс деЕсдссдаддсд 240 ссддсдсаад соддддссдад дсдддсодсдуа дЕдеЕддссдс дсдсдссссу деддаєсссс Зоо ассеЕссасдд ассдсаєсає сдссодссдад аадсдасссс сСсасдасадс саааассдда 3З6о
Ббаєдессадуд аасдадеєсаа саєєддсссе дсессассвд дадссаааадес аачасадеЕсес 420 аддеЕсадсаа деЕдаєдаасс ааддеЕссаєс аасассдсаа сасссдаєсад сааддадаає 480 дсссссассс ЄддеЕсаєдуає ссаєддсстає ддадссссас адддадЕсссс сесссддааас 540
ЕсеЕЧсСасдсесс Еєдсаадссу СЕЕсСадодадеуд аєєдссаєсоо ассадсеєводд сєддодесдвеЕ 60
Есаадсадас сеєдасеєєсас аєдеаааадс ассдаадааа ссдаддсаєсд деЕссасадає 6бо
ЕсСЕсєссдадао адеддсодсаа додссаадаас сссадсаасс ссасаєссдсс сдодссасося 720 гЕєоддадаває аєдеЕсдседс аааасаєдсд ссааадсасс ссдаасасудє СсаасадеЕєд 78о0 агЕеЕсоЧчЧєєдд деЕССЕЧСсСвЯдУдд сЕєсСеЕСаєса дааасададс агадсеЕстда деЕддеЕсаасс 840 аадЕєссдад саасаєддаа аддсаєдсста агчааєсуєс ЄсСеЕЧоодадеЕС саасеєсасе 900 ссссаааддд Ссассадддда ассдддаєссЕ гддддеЕссад деЕСтадсаса дадатсатсасс 960 адеЕдссаддЕ ЄЕдудсасаад ЕЕЄСвасеЕдує дааєсассаа садаєдаада аєсоодсаєвд 1020 аєдасадаєє агаєднасса басудєсадсс дссааадсса деЕддададсе деЕдсЕЄсдааа 1080 басаваєєьс ссеесоддуддс асеЕсдсаадд ааассеЕсьсс Едсадедсдс дЕССЯдаєсдд 1140 ааадєдссда сртасесеєссає асаєсдддсад саачаєсддда Єдаасвсасса аддсодсесад 1200 саадсасудда аддасаєдаа адеЕсссесвдЕ даааєааєса ддадєдссдса додеЕддасає 1260 гЕєдЕдЕсса сСадасаассс ЕсСсаддуаєєс сасеЕсуддсед ЕсЕЕєСтаєдс деЕдссдаєаає 1320 сЕєСсСсаєсад гаааєддада ддаддадаєсс асаєєєссту асоддссеаає аєсеєдсодєда 1380 адеЕддсаєдеЕ СсаасаадсеЕ ЄдсЕСсаасаа садсеєсасає ааадсааада сасасчаєвд 1440 бддаааєсає Єдсссасеєсс сассаарсвд сеЕсСЧдсасасоу даєсаєдсесся єдеаєатваєс 1500 асаєаасааа Єдсасвадса єсаєєсааєд сасчаєсвєдеЕ дааадддсесеЕ дадеЕеЕсдвсає 1560
Єгадсдааєсє сгаддєсоудеЕ ЕСЕСЕССсСсСЄ СЕСЕСЕсССсСЕе Єсадедсудсе Едссадесаа 1620
Есссабасва баадссдеЕда Есаєєсаааа аааааааааа аа 1662 «2105 134 «2115 1763 «2125 ДНК «213» вогодпит рісої1ог «4005 134
Зо асєдсадаєд соадсддЕсдЕСсС додссссуддсЕ соосоддадодсу адаасддсда ассадсссде (216)
ЧЕСЕСЕДЕЄС ссЕсЕсСЕЄсСс сЕЄсааааас асоддсааааа аааадссадс садеЕсасасе 120 ассдаассда асддсеЕсддс асдсдддсас додсдсддадуа Есдсассдда ааадсасдад 180 сададсадас ссдасдсссс садассдсад дадсаєсаєс адессдаддад даддаадеде 240 чададдоаддоада аадддааасу єдсодсдссаєЄ асдсдссосд ссдссдссодс саддасдасс Зоо адчаєддсад ссдадчадає даддсдддсес Ссоддссессу сддсудеЕсдс ддссасддасд 3З6о чаддсддсдс сддсдссддс дсаадсоддодд Сссадодєдод содсодддсдесд дссдадсдсд 420 сеЕссддсдда Сссссассос сасддаєсдс ассаєсдссу сододадаадсуд дсессеЕсссдш 480 аєадесаааа сеєдддеаєде ссаддаасаа десаасаєссд дсссадсссс асссдддеса 540 ааадеаачає дадєеєсаддеєс адсдадсдає даассааддс Ссаєссаасас Сдсаасаєсєсс 60 чаєддасаадд адаасдсссс сассседдеєеє агддсессаєдд дстаєсддадс єєсасаддао9ад 6бо
ЕЕСЕЄЕСЕЄЕеЕС дааасеЕстєда сдсссеєвгдса адеЕсдЕєєєсва доадеЕЧдаєсддс саєєдаєсад 720 сЕсддссдддд дсддссСсаад садассрдас єссасаєдса ааадсассда адааасеєдад 78о0 чсаєддеЕєса бадаєєсеЕвє єдаддадсдд сдсааддсса адаассссад Сааєсесєссаєса 840 гЕгЧдсСеЕсдддеєсС асеЕссьеєвєду адддаєсасдсс дсддсааадсі асдссссааа дсассстодаа 900 сасасеЕсадс асеЕрадеЕЕс одоостддЕССЯ одссдодсссєсЕ сдєсадааас адассагбадс 960
ЕсеєдадедЧдє баассаадеє Есдадсааса Сддаааддса Едсбадеєдаа Есассєесо99 1020 чадеЕссааєє Євасссссса аададеваєс ададдаєєдуа дсссЕгдоада ЕссаддеЕсСта 1080 дЕасааадає агассадедс саддеЕседучє асасуєєсаа сеЕддеЕдаває ассаасадає 1140 саадааєсаа саєсдсєєдас адаєтасасе бассавассе гадсеЕдссаа адсгадедда 1200 чадсеЕдеЕдсе Єдааасгаєсає асЕєсєссееєс доддасасєсд сааддааасс єСЕсСССсосад 1260 бдсдсаєссдд аєсоддааадеі дссдасвтасе сЕСасасаєд деЕСаддаада Есодаєдаас 1320 бассаадддд сеЕСсадсаадс асодддааддас аєдааадеЕсєс сЕєдеЕдааає ааєсадоадед 1380 ссасададчеуд дасаєсеЕсдЕ деЕєсаєадас аасссеЕєссад ддЕсСссасьс дддсеЕдессьес 1440 басдсудєдсс деЕаасєсеЕвсеЕ ассссаааає доддаддаду дсЕєсасасе ЕсссоддеЕддс 1500 сеаасаєссд саєдаадсдуа саєдеЕссаас аассстаєсу Єдсссаасаа бадесеЕсаєвсає 1560 чаадсааада басасудаєду Еддаааєсьс сдсеЕСсСасесс сассааєссу дааараєсьд 1620 бдсссеЕсееЕсС сассаасеєсу ЕсСеЕдвавасуд даєстаєдссу Едсасасасе седсдєсеєдас 1680
Єдеаадааас аєааєдсасє аасаєсаєує ааєдесаєдна счаврссеєєва сеЕЄсЧЯЧавевес 1740 аасеЕєдсаає асдсаадаас сас 1763 60 «2105 135
«2115 1399 «2125 ДНК «2135» Вісіпив сошпштипів «4005 135 соусссЕЕсСса ссадессааєс єссавЕгєєєса сбасаєагадчед сЕССтЧсста асєсаадасе (216) аассасадсуд асдааєєсдс дЕЄваєдааа ЄсДдсЕссдЯсс сасдассдсс асзчзадсаєссе 120 адсЕссЕсаа баєсаєсаає ааєдодсддаа додддссдссд ссасаєссадс ассадсаєса 180 чдсдЕСсСадсудє садсдеєсаєд додсаааааса адассссстас ддссасстдсес ЄсеЕссЯяєс9о 240 аєсссаасеє саассдаєса саєсаєсєсдсс дссдаааадс дЕСЕЕСЕСЕСсС ссеЕСЯДЕСаад Зоо асеЕссстаєд Еєдсоддааса адедаасаса додссеЕддсс сассодддаЧчЕСсС даадчдеєдачдд 3З6о гдЧдЕсЕсСУЧЄЄ сеаааадсда сдаддсасдд СССассааса сддессасеЕсс сдасадсааа 420 чадчадчаєє сеЕсСстасасе доаєсасдудЕс сасддасбаєдд ссдсеЕсссса аддсеЕсссесс 480 гЕЕєЄСсСдсааєс сЕЧдДасусесе ЕдсЕссСЕСУЧЄ сЕСадудсеса Еєддстаєвєда Есадсесядде 540
Едвододдєддає саадесадасс єдаєєссасду сдсаададса ссдаадааас Сдаддсає494д 60
Ессаєсдассі сссседаддс СЕдодсуєЄааа дадааааасс ЄсадеаасеЕс сассеЕсасье 6бо чддасаєєсеЕє єсодадодадеа баєєдсадсе ааасаєдсас Єсаадсаєсс Єдадсасаєс 720 саасаєсєсєда ССсСсадсода асссдсрдда єсесссаєсад ааєсєдаада саааєстєдад 78о0 садсссассс ддссСсададс аасасодаад ддадсадеЕеєс єдааєсаєєє аєсдвоададеся 840 аавреєєвасес сеЕСадаадудеє баєвтададдс Ссаддесссс додддсссада сСсессдсас9с 900 аадсасасаа сеЕдстадаєє сСодсссасає ссааседудаєд адаєассааа одаддваддвад 960
Ессаааєєсдс сгасадасса ЕдеЕдсассає ассеЕсадссу ссааадсвад Еддададста 1020
ЄдсЕєЄдааає агаравсеєсс єсеЕсоддадса СЕсСддсЕСсСОуда ЕдссссЕЕсСЕ асааадсдсд 1080 бсасааєдда аадедссаас басеєсєєсава гаєдооадаєдс аадаєєддає дааєсаєсаа 1140 чададдсссааа дадсссдсаа адаєсаєдаає деЕСсСссаєдед аааєсаєтад ддЕссСсесСад 1200 дасдддсасеє ЄсдеЕсеЕссає адасаассса ассодаєеЕсс асссадседеЕ дегсагаєдсес 1260 бдссоддадає сєЕСЕСЕСасс сдаєсстдає аасддааєсєс ЕЄсСсеЕдаадда ЕсЕдаврацрсь 1320 дсагаддаад ЄЯЧЕЧЯЧЯЧЕСЕЧЕ аассасессє сеЕСЕсСаєесд ЕєдЧдЕдваєаа ЕсСЕаєстдад 1380 ааєсеєссаає ЕсСЕсЕСсаає 1399
Зо «2105 136 «2115» 1480 «2125 ДНК «213» Медісадо Єкипсаєчіа «4005 136 даЕЕддсеЕСсСа гадсеЕсссеє сасссдеЕсда ааасааааса Сагсоддадеаа сасеевсадес (216) ачаааєєсаа адсбасдсас ЄЄЧчаєсааас сааєссаєсда аааасддсда аадаааєсад 120 асааааддас дасдєсдчаєє саєсєЕссдаа асссаааадс СсСссддЕссЕс сасессдаєсєд 180 чаєєсссасе ЕЄсгассдаєс асаєсаєсдс сдссдадааа саасссссЕес ссаєсаєсаа 240 часеЕдддває дсеЕСсаададс аєдеЕсаасає аддеЕсссддс ссесссддесє ссааадесад Зоо асдЧдєсссусє єсаассадса асдадссасу СЕЄССсСЕСВяас асеЕдеєсасає єеєДдаєсадсаа 3З6о асссдаєєсеЕ сссасасесд ЕсаєддеЕєса ЄодддасасусєсеЕ дсеЕЕСЕСВдЧ ЯДЕЕССЕЕСТЄ 420
Есодсааєеес дасдсесьсу ссеЕсСЕСсСуУєЄес садааєсаєсе дсеЕдеЕєдаєс аасестдуєтд 480 чададдаєса адсадассвєд аєсєєсасаєсд саааадсасс даадааассд аддсасодсс 540 саєсдасссс сссоаддаас ддадааааагдс сааавааєсьєс ассаареєєса гаседсев9 60 асаЕєсЕеЕс одоаосодЧдЕСаєд СЕдссЕсСсаа асасоудсдсес аадсасссес адсасддраса 6бо асасеєєааєє єєодЧдеЕдодас сеЕдссдддсс Сасадаадаа асадаєсєссаа адассдадесс 720
ЕдеЕсасвєаад ЄЄЄСсСдадсаа саєддаадда адсадссссд аассаєстає дддааєсссаа 78о0
ЄЕЄєвасасся садааааєєсд ЄсададдеЕсс аддсссссдуа ддссссааса Соддсссоасаа 840 аєаєасаадеЕ дсеаддеЕсєсд десасасассс аассдддсаа ааассдаєсд асдаддааєсс 900 аадеЕСссдсвд ассдаєсаєд СЕсассасбас агсддасоадес ааадссачдед дводадчседед 960 гЕсаааасає арсеЕседсає Есоодадсавєс содсегаддаєд ссссЕвсьсс ааадеЕдсесса 1020 ачадеЕддаад деЕдсссасса саєєсаєбава єддЕсасдаа дчаєєддаєда асгаєдаад 1080 бдсссаадаа дсессдсаадс асаєдаададє сссаєдсдаа аєсаєсаддд Ессстааддс 1140 сддссаєвсеЕ дсдсеЕсаєвд асаасссаад ЕддсЕєЄссає Есадссуєує сеЕСсСаєдсевд 1200
ЄсддааддеЕєс сеЕсассссаа аєссддасаа Єдааєсеєсьс сссдаадддас Сассудєстьдс 1260
Єгаддаєєста арсеЕсудсаєс ааєссадеуЧс агаєсаарає ддессаєсаваає єсЕсЕСЕСсась 1320 бЕСсаєавгасьд аасдаадссу ЕДЕСЕСУЄес сеЕСадеЕдаад Єддаагаєаа Еддааатєаєа 1380
Єдсааєєдна аєаасааєсаа баєєдаєсьд сЕдддддаасе Еєдаддасаа ааасасасес 1440
Єддєаааарсє сЕдДдЕеЕсддсаса Едсдасааас агаєдседед 1480 бо «2105 137
«2115 1317 «2125 ДНК «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 137 чассеЕсесес ссссесссеЕсС СсеЕСССССсСЕСсС соддааааає ддаєаасьсс сасссссес (216) ссссЕсссаа сдсааасссс дсссаадаас Сссссасдда Ссссаасаас аассдсеісдс 120 асеЕєсасаас адеЕссстасе баєдаєсаєс ассаддссса дссесаєсас СссСеЕсдсесес 180 сЯсссссаса сссддсддад садасддсдд сододедаєдаа Ессссадссд дЕЄсСасетає 240 сдчадсдсса сссссадасс ссддессасдс ааассоддаад єдаасрсєсєсуде ЕСЕСЕЧЯЇЧЕС Зоо дсааєссеЕвєд єєсдЕЧодсаа дачададдаєд ЯФЕЄСССЕСсСда сссосдоабаєд асдаачає9вд 3З6о сааддаєсаа саддааааас дссасдаєда даєссаадааа саасестадс сстааєєста 420
ЧдЕССаадеєда дЕєЄЧдЧдЕєЧдає єсааададас адссдаєдає дсссаасссд ааааасаасд 480
Едсадаєсєс сдасаадааа дасадссасс аасадеЕссас ассєдаєаас аадаадсеса 540 чачдЕсЕсЧдед єдадааддаа Єсдаадааса дсдасдесда дессасссддда аддасадссс 60 бассааадчад ачасодсадаа дсаааєссєс саадстаєс сдаєааадчаа ддаассаєтд 6бо басадаєдад адчаєдеЕсеЕсс єСстаєдсаде сЕсСоддЕСЬСЕеЕ саааєсасаад ЄЕсЕДДЧєссса 720 аєаасаадад садааєдеає деЕссЕСсСдада асасаддада асссдсдаад сааааєсддад 78о0 сєЕдадасадд адасссссса асаасаєсасуд аддасдааад саадааєсеєс гасессдсса 840
Едчааєддааа ЄЄсодддаааа саааасдаад даададаааа Сдадссдадда даааддаасс 900 асгстасдаада доасааєдсеє даєсасасас саададасда ададдаадсс Ессаєеєдсаа 960 бдсеЕСсаєсуд аааєстааас даєсасваєс ссаєссстаа сдаєсєсаєд дассесасса 1020 сЕдассеєса дсассаєсаа дссасуєссе саєсааєдсс асссдаддає сасдсдеєасд 1080
ЄдаддЕссаєс сдаєдаєсад дЕдадсеЕста асдасеєеєєда деЕдадЕдаєда саєсодедаЧед 1140 чаадеЕєсеса адсесаєсаас ссссеЕсвард аааасадасс Єєаадаєсаса саааададає 1200 баааадаааа аааадесадеЕ асасєссаєс агаєсеЕсєса Еєдаадаєда даєстатваєс 1260 баєагаєєдеЕє саарадсуєє єЕесаєссасьс сеЕСваєсаає агаєсаааде ЕЄсааєс 1317 «2105 138 «2115» 1439 «2125» ДНК «213» Медісадо Єкипсаєчіа «4005 138 гЕєСаєссєєЄ асаваєєєвєд саєаєсдааа сасдсаддає ддаасаадає Сдасаасааа (216) ааєєдсаєєд єЄєєдсаваєє даааасаєда дасаассдса СдддЕссаєд Сдсессаєса 120
Єаадссасас аєсаддааас асаддеЕєдає асеєсассасс аєссаасава адаасаєсесс 180 аєдеЕдеєаадс аєєсаєбасаа асаєсасаає Сдааєссаааа ассааадааа СДЕсСЕСсссес 240
ЄаасеЕєсесе сдсассстає ссаєсєссьс аасасеєсьсс аєсеЕсдсвас. Едаасаадаве Зоо чааєєсадса дааасаасеЕсє ссеЕсеЕсссає сасаааассс дсесссадаєс аааадаассе 3З6о саєсссссаа ддсдасдсда ааассдсссс аасадддаад Єсадаасесс ссааддсаде 420 саадаасссеЕ асеоддсадчад сеЕСЕЕсСаврєс соудасссстаєе сасасєєдду асадсаааас 480 сддсадсдесд дссаассссс ааассассес сассеЕєссаса асаасддсдсес стаагсасета 540
БааєдеЕєдса дасоддеЕСсСьвдд саєєсеєсає єдсассааєсс дасассаадс сдаааєссаає 60
Есаєсаєдда ддасассеєвсд дадеЕсєсссда Садсаааасс Сбасааааавві сааєсссааас 6бо гЕдЕєдсадеЕє даааєєдаса сЕЄєЄСсССсаєсаа сдсссаасдуа дасссаааєс ссддааатсає 720 аадсадсасс доассддасасба СЕддаасєсда Сдеааасссе аєсааассаа Саадсассде 78о0 чдссдєддадеЕ ЄЄддааааса асаааааддс сСааєсдсєсдса асадддеєса асддаєдсаас 840 аааєдеЕдеЕвд адсодсеЕдаєд єддаасаєсс сЕсЧЧаєссує саєвавассс гаадеЕСсаєде 900
ЄЧдЕдссСЕЄвдд аадчаєдеЕсдд ЕсССЕДдадед додасааддасеЕ ддесеєссеЕсееЕ сеЕЕСТасто9до 960 адссдаасає ЄсадсасаєЄєд асаєєсвтаєс дЕДдУЧєЄсСЕЕсеЕ даєєсааадеі Едаасстад 1020
ЄЕсСеєЧдадаас аасаєссааєу ссааєвдеЕсеєс аадссссасе саадсєдсає адесоаааасєс 1080
Єгаєссаєвта єдсасуєдсд адедсаасса ассадестаа даааассаса асаадаєасс 1140
Єдаааєааєд дЕсСсСаєсаєс десдсаднада аагаєдудеса сассарарсе сс 1200
Єгааєаааєє агддаасаає дсртавсесьс дсдададеЕса ЕДдДЕеєссддаа адасесаєда 1260 асгачаєдеЕва аєсааєсада Есгасавава сасасасаса басасасаса гагагатваєа 1320 бадсаєєєєс сваааєсаєд саєгаєдеаає ассоосдєсаає дссасвєдеЕсеЕ асассааєда 1380 агдЧчєдЕЕс дегадессасає аареєсдеЕаає СЕСсСЕСЕСсССсСає дадаасадсу аассааєтва 1439 «2105 139 «2115» 1393
Гс10) «2125» ДНК «213» Вгаввіса парив
«4005 139 чачаєдддеєа єссстраєаад дедсадсаєс даассаєсстд саасассссу асссдсеєсс (216)
ЕЕСЕЕДЯДЕДДЕЄ сгаєаасаєс ЕДдДЕСЕСЕЕСЕ Есасесцарс СсссеЕсесьс ЄЕСЕЄСЕсСЕесСа 120 аєсеЕссссаа сдаассеєссс ЕєЄСсСаєвгасосс СссЕссссссс сссодддааає асддаєаасс 180
ЕСЕРУЧСсССсССсСЕС ЕЕССЕССССЕ аасддсааасе седсссаада асеЕссссаєд дассеєааса 240 ачааєсдсес дсасеЕєсеьсс аєддсдсадс сссадсассс дссдссодссс гасеЕсдтасд Зоо
Еєдсаєдесс додасасеєдає садасдддда ссасдааєсса Ссадсесссес сасссаєсдд 3З6о агєдсЕвесєсс єСадаєссся дЕєЄЧдеасааа ссодаддаєда асссдоддссає ссодеЕссдатга 420 адсссоддЕдЕ даддсаддаа счадаєддає сссесдаєсс асассссасо аадаєсддста 480 чддаєсаасад даадааддсу абдссаадає саадааасаа ссстаасссс аассстадее 540 сдчааєдадеЕс додссдаєссса аддадасаад гддсЕсСЕсас саєдааааає аасдссдада 60 гЕгдседсвад аааадаєєєє ваєсдчасссє ссссаєсссда Саасаадааа сссададесес 6бо гЧдЕєддеєдаа дсасеєдаад аасадсдаєсд ЄСсдддессасе Єддаадчасс дессссассаа 720 ачададаадс адааддааає сеЕєссддадс басссдасаа адааддааєсд дсассадада 78о0
Едачадаєує ЄдчасеЕСссдеєуч садссеЕсдУчє сЕЄсСсаааса саадсасьдда Ессааєааса 840 ачадсадаає деаєдеЕссеєс даааасасад дадаасссдс даадааааає ддадсаєсдва 900
Едодадасва єсбаасааєс басдаддасуд ааадсаадаа Сссссасесс сссаєссадаа 960 адсасссаса сааасаааає даєддаадад аддаєсєдадсс дасдодаадсс ассддадаєдва 1020 асЕєстаєда адагаєааєдд ЕсСЕЧдаєвтаса сСассаааєда Єдаадасчає Ессаєсдсаа 1080
ЄдсЕСсСЕєСсСдуд аааєстааас дадсастаєс сстасссааа єдаєссвтаєд даєсєсасед 1140
Єсааєсєєда ссадсаєсад саадссассєї ссесдеЕсудсс асседсєдає сасаєдадсе 1200 сдаасчавєсе сегаєдуаєда єдЕЧдаєддас дЕєЧЧаваєддуд асесссьсвда адаєдаєаєва 1260 саадддаєда ааадаааада дсаєсасасе сагаєссава ЕСсЕДдЕсСЕЧЧає ааааєдеЕдсе 1320
ЄдЕеЕсСсСсаає сраєсаєеєса Едааааасьс аЕсеЕдеЕдеЕєе аасеЕссадає гааєстаааєа 1380
Есе Саєеє дас 1393 «2105 140 «2115 1755 «2125 ДНК
Зо «213» Агарідорвіз Єпа1ііапа «4005 140 аєдаасеєсда Єдааєаасед деЕсаддсеЕєєс єсЕСЕСЕсСЕсС сесаєдаєса аааєсаєсас (216) сдсасддаєд Ссдасссссс сассассада ассдссдград асдеЕсдссода адддсасевде 120 гЕєЧдаєсьдд ссдеєссссеєс сддаєдаасєсєі сссдссуєес ааасавсьсь єсеЕсестсся 180
ЕссодсдеЕса сссссддаадс СЕЕсСассада дасаасааса дссасесссу ачассоддвас 240 аєсааєдудеєд деЕдсаєдсаа бЄаасаєсаас аасаасдаас аааасддасс ааадсессдад Зоо аавеєсєссесда дссдсассас сасчдасссас аасассаасуд адассдссдс адасддааає 3З6о часчаєєдеЕд дадддаддадча соаодєдадсдас ддсддсссас Саддсессссс даєсдасаааа 420 асаєддсеєда деааєсаєєс дадєєдссаає дссаассаєс аадасаасда Саасддедса 480 счаддсЕсдЕ сссеЕССсССсСтає дааєєсаєсьі ассадсдаєа дсаасаасста саасаасаає 540 чаєчаєдесдд Єссаададаа дастассдсс дасдссдсад ааассасасс даадаааасс 60 аєєдчададеЕє єєдддасааад дасдєссаса сСассодсоддесд Єсасааддадса Єсоаддсоддаса 6бо чдабадаєасу аддсасаєєеє аєдоадасаасє адссдсаааа дадааддсса дасссдсааа 720 чддаадасаад ЄЄваєсєддад аддесаєсдас ааадаадааа аадсадссад ддсссасчає 78о0
Есадссдсас бааадеассу дододаассасс асрастасса асеЕсссссеЕс дадесдаасає 840 чачааачадд бадаачачає даадсасаєсд асдаддсаад адсасдеЕсдсес сЕСЕСсСсдсдас 900 аддаааадса чЕдЧдЕсессеЕС ЕСЯдєддсдса Ссдаєсссаєс даддадсаас ааддсаєсас 960 саасаєддаа ддЕддсаадс бЄаддаєсуда ададесдссу дсаасааада ссеЕСстасевд 1020 чдаасЕєссдд дсасасадда ададдсєдсЕ даддсеєтаєд асаєєдсадсес саєтаааєсес 1080 ачаддаєсаа дсдсадсдас ЄаасеЕссдас аєдаасадає асааєдеєаа адсаасссес 1140 чададсссда дЕСвасстає Еддсадессс дсдааасуєс ЕсааддасдЕе Еаасааєссд 1200
ЧдЕєЄсСсадсва Єдаєдаєтад бааєаасдеєс ссадададед саааєааєде садсодЕє9д9 1260 саааасассуд сдЕсЕСсСадса єсаєсадоудда аєсддаєєсвєда дсеЕсаєседса дсаасадсад 1320 чададдбєасд ЄЕДдДЧдєЄваєса сааєддадда аасеЕсдессса ссдададьас гадодадеЕесде 1380
СбЕсааасаад аддаддааса асаасассєс сСеЕдадааасе сдссдадеса саєдасеаає 1440
ЧдЕєЄДдаєсаєс агадсеЕсдас сєЕСЕєДдаєдає ссесдесвассу ЕЄсЧдєоддааа ЕДЕсСЯОЄтаде 1500 баєддєЕдЧас аєсааддаєсе сдсааєсссє дЕсдддаасає суддЕсааєса сдассссеве 1560 асєдсеЕдсьд адаєсдсеса саасудсаада аассаєсаєе асвраєдсеса дсаєссадсаа 1620 саасадсада Ессадсадес дссдоддадда давсєвєєссду Еддсдаєьсс даасаассає 1680 (516) адсЕСсСсааса ЄдсасеЕссса соддддаадає доасодадаад дддсЕссаас ЯЕЕСсСЕСВаЄЄ 1740 бддаасдаса сеЕсад 1755
«2105 141 «2115» 2061 «2125 ДНК «213» Медісадо Єгипсаєчіа «4005 141 аєчаасеЕвсЧдеЕ баддеЕсєеєсес єСваєсссса саадаасаас асссаєссаас асаадаєсаа (216) асуадЕддасеЕс сссєЕевд деЕЄсаасссо аасдаааєссо саддссссда сдДдЕссааддва 120 чаєсасеєдсе аєдаєсеєсес єєсСЕСасаса ассссссаєс асссасссаваа ссеЕсссссає 180 сСсСЕССЕеєсСса ЄСсСтаєсєдаадс ЕЄсСссасаса аасаасааса СсСсасассас Есаачассо9дд 240 ааддадаасе асаасаасса ааасссасса сСсдддаасає сасдсаєдаа ссааааєдєд Зоо аасаасааса ассаасаадс асаассааад ссадаааасс Ссссддедуд асасесесесс 3З6о ассдассаєс аадаасасодд Єддсадсаас Ссасбсассссс саєссасассо сссассеєсає 420 садссддаад сасєсссдсда соддсддеєдає додсадсасаа дсаасаасаа сссаагсадде 480
Есаєссаєда бааааасаєу дсеЕсадааас саассассас сассадаааа саасаасаає 540 аасаасааєд ааадеєддеЕдс асдєдсдсад асассаєсас сссссасдад сассддсесса 60 садессаадес сасссдсдсес ссеЕссссаає дсаааєдеда єдадедоаєда дареєсссьса 6бо
Есддааааса аасаассасс сасаассдса дЕсдсасссд асадсаасса аасаадедес 720
ЧдЕєЧааадед сЕДдЕдсстад ааааєссдєс дасасасссдд дасааадаас Ссссаєесас 78о0 счгддЕЧдсаа сааддсаєад аєддасадчодад адасаєдаад сеЕСассеЕєвєд одаєсаасаде 840
Едеадаадад аддддсадас Єсдсааадда аддсаадессс асссдодддадда Ссасдасааа 900 чаадааааад садсбададс стаєдасссд дсадсассаа аасассдддд аасаастасес 960 асаасааавсє сЕССсСааєсадд ссаєсаєдаа ааадаадеду аадаааєдаа дсасаєдаса 1020 аддсаададе асдеЕсдсудєс асєдадаадд аааадеадесд ЯяєЕЕЕсеЕсасу аддедсаєсс 1080 аєссассдад дадесаасаад асаєсаєсаа саєсодбадає ддсаадстад даєсодаада 1140 чЧдЕєдсаддса асааадаєсе ссасссрадда ассессадса сеЕсаадаада ддсадсадад 1200 чсаєаєдаєд Єддсадсаає ааааєссада ддаседадед садесвасааа сЕсСЕдасаєд 1260 адсадаєаєд аєдеЕсаааас сабасесєдад адсадсасає бассааєєдуа Еддсдседса 1320 аадсдЕеЕєсаа аадасаєдда дсаадеєдаа сСЕдааєсаєд ЕдааєдеЕєда гаєсадссає 1380
Зо адаасєдаас аадаєсаєбад саєсаєсаас аасасеЕсссс аєссаасада асаадссаєс 1440 баєдсадсаа саааєдсаєс бааєєддсає дсасеессає Єссаасаєса асаассасає 1500 саєсаєсаса асдссаасаа саєдсадеЕса садааєстаєс сесгаєддаас єсааасьсаа 1560 аадсЕсєвєдудЕ дсааасаада асаадаєссе даєдаєсаєа деасеЕваврас гасесдстасе 1620 чаєаєєсаєс аасрасадсе адддааєаає ааграасааса сеЕсасаареє сеЕстдЧевса 1680 саааасаєса Едадеаєдда ЄссСсдссеЕсСс аєсддаєааєа деЕєсСеЕддаєс баасєстдее 1740 чдЕЄваєдоавд дЕдддадаєса ЕддєЕддЕеЕсає додаддаааєд деЕддаєаває даєсссааєд 1800 чдсвЕаєєсдсаа аєдаєддеаа ссааааєсса адаадсааса асаасеєсводда сдадчадедад 1860 аєсаааддає ЄЕддеЕваєда аааєдеЕеЕсес додастасса сеєдаєссьса Есаєсдсасад 1920 чдсадсаадда ассЕднасса Есадссасаа сааєсаєссд ЕєДдаєсаадд ассаааєс9дд 1980 дЕЄССсСаасьуд свраєсссаас асЕєдсьсса аддастасса асдеЕсеЕсест асоосссесся 2040 рЕСасЕЕсЧЄ содсаєдааєа 9д 2061 «2105 142 «2115 363 «2125 ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 142
Меє Авр Авп Рпе Гей Рго Рібе Рго бек бБег Авп Аза АвБп бек Уаії сіп 1 в) 10 15 біц Гей бек Меє Авр Рго Ап Авп Авп Агуд бег Нів Рое ТПг ТПг Уаї 20 25 30
Ркго ТПг Туг Авр Нів Нів біп Азїа біп Ркго Нів Нів Ррпе Гей Рго Рго 35 40 45
Рпе бек Тукг Рго Уаі бій біп Месє Азїа Аза Уаї Меє Авп Рго сіп Рго 50 з9 (210) (516) Уа1ї1 Тук гей бек бі Сув Тук Рго біп І1їе Рго Уаі! ТПг сбіп ТПк щ1УуУ 65 70 75 80 зек біц Рбе сіу бек Гей Уаії б1у Авп Рго Сув Гей Тгр біп бій Агд 85 90 95 сіу бі1у Рпе Гей Авр Рго Агуд Меє ТПг Ппуз Меє Аза Акуд І1е АБп Агд 100 105 110 пуб Авп Азїа Меє Меє Агуд бек Агуд Авп Авп о бег бек Рго Авп бег бег 115 120 125
Ркго Бек біц Іїец УМаії Авр бек їув Агуд біп Гей Меє Меє Гей Авп Гей 130 135 140
Тув Авп о Авп о Уаі сіп І1їе бек Авр Пув Пув Авр бек Тукг біп сбіп б5ег 145 150 155 160
ТПЕ Рпе Авр Авп пуб пуб Іец Акуд Уаі Гец Сув б1іцп Ггув сій Гей Гув 165 170 175
Авп бек Авр Уа1! сіу Бек Гей с1у Акд І1е Уаї Гей Рго Пув Агд Авр 180 185 190
Аза сій Аза АвБп о Тецй Рго ГПув Гец бек Авр Гув сі с1у Іїе Уа1 Уаї 195 200 205 біп Меє Агуд Авр Уа1і Рпе бек Меє сіп бек Тер бек РібПе Гуз Тук Гув 210 215 220
Рпе Тер бБекг Авп Авп о Гув бек Агуд Меє Тук Уаі Гей бій АвБп ТПг щ1У
Зо 225 230 235 240 бі Рпе Уаї пув біп Ап сіу Аза бій Іїе с1іу Авр Рібе Гецй ТПг І1е 245 250 255
Тук біш Авр бій бек Ппув Авп о Гец Тук Рпе Аїа Меєсє АБп со1у Авп 5ег 260 265 270 сб1у гув біп АБп бі б1у Акуд бій Авп бій бег Агд біц Агд АвБп Нів 275 280 285
Тук бішц бій АТїа Меєсє Гец Авр Туг Іїе Рго Агд АБр бі б1п сій Аза 290 295 300 зек Іїе Аїа Месє Іїецшц І1е с1у Авп Тец АБп Авр Нів Туг Рго І1їе Рго 305 310 315 320
Авп о Авр Гей Меєс Авр Тецй ТПг ТПг АвБр о Тец біп Нів Нів сбіп Аїа ТЕПг 325 330 335
Ззек бек бек Мес Рго Рго сій Авр Нів Аїа Туг Уа1і с1іу бек бек Авр 340 345 350
Авр сбіп Уаї бек Рбе АвБп Авр Робе біц Тгр Тгр 355 360 «2105» 143 «211» 280 «212» ПРТ «213» Медісадо Єкипсаєчіа 60 «4005 143
Мер бек Бек Бек Ап РіПе бек Сув Іїе Гец бБег І1е бек Гей ТПг РіПе
1 5 10 15
Рпе Іїе Гец Іїец ІТец АвБп о Гпув Уаі Авп бек Аза сій ТПг ТПг бек Ре 20 25 30 зек Іїе ТПг пуб Роре Уаї Рго Авр біп Гув АБп Гей Іїе Рпе сіп 0Щ1У 35 40 45
Авр Аїа пуб ТПг АТїа бек ТПг сіу Гпув ІГейп бій Гей бек Ппув Аїа Уаї 50 55 бо
Тпув АвБп бек Іїе с1у Агуд Аза Гей Туг Бек Аза Рго І1ї1е Нів І1е Тгр 65 70 75 80
Авр бек Пув ТПг біу Бек Уаі Аза Авп Рбе сбіп ТПг ТПг Рпе ТіПг РБре 85 90 95
ТПгЕ Іїе ТПкг АТа Рго АвБп о ТПг Туг Авп Уаі Аза Авр б1у Іїеп Аїа РіПе 100 105 110
Рпе Іїе Аїа Рго І1е АБр ТПг пуб Рго Гув бек Іїе Нів НівБ с1у щу 115 120 125
Тук Ггеш сіу УМа1! Рібе Авр бек Ппув ТПг Тук пув їГув бек І1е сіп ТПг 130 135 140
Ууаї Аїа Уаї бій Іїе Авр ТПг Рпе Туг Авп Аїа біп Тгр Авр Рго Авп 145 150 155 160
Зо Рго с1у Авп І1е бек бек ТПг с1у Акуд Нів І1е сб1у І1е Авр Уа1! Авп 165 170 175 зек І1е Ппув бек І1е бек ТПг Уаії Рго Тгр бек Гей бій Авп Авп о Гув 180 185 190
З5 пу Аз1а АвБп Уаі Аза І1їе сіу Рпе Авп сбіу Аїа ТПг Ап Уаї Іец 5ег 195 200 205
Уаї Авр Уаі бій Тук Ркго Гей Іїе Агуд Нів Тук ТПг Гец бек Нів Уаї 210 215 220
Уаї Рко Гей Ппув Авр Уаі1! Уаї Рго сій Тер Уаі Агд І1е с1у Рпе 5ег 225 230 235 240
Ззек бек ТіПг бі1у Аї1а сій Тук бек Аїа Нів Авр І1е Гей бек Тгр 5ег 245 250 255
Рпе Авр бек пуб Тец АвБп Гей біу Роре бій АБп АБп І1е Ап Аїа Авп 260 265 270
Уаї Бек Бек бек ТПг сбіп Аза А1а 275 280 «2105» 144 «211» 349 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005» 144
Меє Авр Авп Рпе Гей Рго Ре бБег бек бБег Авп Аза АвБп бек Уаії сіп 60 1 в) 10 15 біц Гей бек Меє Авр Гей Ап о ГПув Авп Агуд бег Нів Ріе бек Меє А1за 20 25 30 біп Ркго біп Нів Гей Гей Рго Рго Туг Бек Туг Уа1і Аїа Суб Рго А1а 35 40 45
Тец Авр біп ТпПг с1іу ТпПг Меє АвБп о Нів сбіп Рго Гей Нів бек бБег Авр 50 55 бо
А1Та Рпе Рго біп І1е Рго Уаі Уаії сіп Тбг сі1у с1у бій Рпбе сС1у Туг 65 70 75 80
Тецп Маї Сув Ппув Рго біу Уаі Агуд сбіп бій Акуд сіу с1і1у Рбе Іецй Авр 85 90 95
Ркго Нів бек ТПг Гуз Меє Аза Агуд І1е АБп Агуд Гпув Кпув Аїа Меє ГІец 100 105 110
Акуд Бег Агуд АвБп о АвБп о бек АвБп о Рго АвБп обекг бек Бек Авп бій Гей Уаї 115 120 125
Авр Бех Агуд Агуд біп Уаі А1їа Гец ТПг Меє ув АвБп АБп Аїа сій І1е 130 135 140
А1а Аза Акуд Гуз Авр о Рпе Тук Агуд Рпе бек бек Ропе АвБр Авп о Гув Тув 145 150 155 160
Тец Акуд Уаї Гей Гей Уа1і Ппув Нів Гей Гпув Авп бБег Авр Уаї с1і1у 5бег 165 170 175
Зо
Тец б1у Акд Іїе Уаі Гей Рго пув Агуд біш Аїа сій с1у АвБп Іецй Рго 180 185 190 біц Гей бек Авр пув біц сіу Меє Уаі гейш біц Меє Агуд Авр Уа1і Авр
З5 195 200 205 зек Уаі біп бек Тгр бек Рпе Гуз Тук Ппув Туг Тер Бек Авп Авп Гув 210 215 220 зек Акад Меє Тукг Уаі Гей сій Авп ТПг сіу бій Рпе Уаї Гпув Пув Авп 225 230 235 240 сі1у Маї Гей Меє с1у Авр Тук Гей ТПг Іїе Тук бій Авр біц бек Гув 245 250 255
Авп оГецй Тук Рібе бек І1е Агуд пуб Нів Рго Нів Ппув біп Авп Авр 01У 260 265 270
Акуд бій Авр біц бек Меє бій Уаії І1е бій Меє Авп Рпе Тук бій Авр 275 280 285
ІТІе Меє Рбе Авр Туг І1е Рго АБп Авр бій Авр Авр бег І1е А1їа Меє 290 295 300
Пес Гей б1у Авп Гей Авп бій Нів Тук Рго Тук Рго Авп Авр Гей Меє 305 310 315 320
Авр Гей ТПг Уаї Авп Тец Авр біп Нів сбіп біп Аза ТПг бек бек 5ег 325 330 335 60
Рго Рго Аїа Авр Нів Меє бек бБег Авп Авр Рпе Гей Тгр
340 345 «210» 145 «2115 584 «2125 ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005» 145
Ме Авп о бек Меє Ап Ап Тгр Гей сіу РіПе бБег Іец бек Рго Нів Авр 1 в) 10 15 біп Авп о Нів Нів Агуд ТпПг Авр оУаії Авр бек бек ТПг ТПг Агд ТБбг Аза 20 25 30
Уаї Авр Уаі Аїа сіу сіу Тук Сув Рбе Авр Гец Аїа Аза Рго 5Бег Авр 35 40 45 біц бек бек Аза Уаі біп ТПг Бек Рпе Гей бек Рго РоПе сіу Уа1ї ТЕПг 50 з9 (210)
Тем бій Азїа Рре ТПг Акуд Авр о Авп Авп о бек Нів бек Акуд Авр Тгр Авр 65 70 75 80
І1е Авп біу бі1у Аїа Сув Авп о ТБПг Тецй ТПг АБп АБп бі біп Ап с1У 85 90 95
Ркго Мпув Гец біц АвБп Рпе Гей б1іу Агд ТПг ТПг Тпс ї1І1е Туг Авп о ТПг 100 105 110
Авп обіц ТБг Уаї Уаї Авр б1у Авп б1у Авр Сув б1у сС1у С1у Авр Щ1У
Зо 115 120 125 сі1у б1у сбі1у сіу Бек Гей сіу Гей бек Меє Іїе Ппув ТПг Тгр Іец 5ег 130 135 140
Авп оНів бек Уаі! Аза АвБп Аза Авп о Нів біп Авр АБп с1у Ап с1у А1а 145 150 155 160
Акуд с1у Гец бБег Іец бек Меє Авп бек бек ТПг Бек Авр бБег Авп Авп 165 170 175
Тук Авп Авп Авп Авр Авр оУаі! Уа1і! сіп біц Гуз ТПг І1е Уаї Авр Уаї 180 185 190
Ууаї бій ТПг ТПЕ Ркго Ппув пуб ТпПг Іїе сіц бек Роре б1у б1п Агд ТПг 195 200 205 зек І1їе Тут Агд біу Маї ТПг Агуд Ні Агуд Тер ТПпс с1у Агуд Тук 1 210 215 220
А1їа Нів Гей Тгр Авр АБп бек Сув Пув Акуд бій б1у біп ТПг Аг Тув 225 230 235 240 б1у Акд біп Уаі Тук Ггеш сіу с1у Тугк Авр пув бій сіц пув Аза Аїа 245 250 255
Акуд Аза Тут Авр ІТец Азїа Аза Гец Гуз Туг Тер с1у Рго ТПг ТПг ТЕГ 260 265 270
ТПЕ Ап Рпе Рго Гец бек біц Тук біц пув бі УМаї бій сій Меє Гпув 60 275 280 285
Нів Меє ТПг Агуд біп біц Тує Уаі1 Аза бек Гец Агд Агд Гув бек бег 290 295 300 б1у Рпе бек Агуд с1іу Аїа бек Іїе Туг Агуд сіу Уаї ТПг Агуд Нів Нів 305 310 315 320 біп Нів с1у Агуд Тер біп Аза Агуд чІ1ї1е сіу Акуд Уаії Аїа с1у Авп Гув 325 330 335
Авр Гечп Туг Іей сб1у ТПг Рпе с1іу ТПг сбіп бі сій Азїа Азїа с1іц Аїа 340 345 350
Туг Авр Іїе Аза Аїа І1ї1е Гу Рбе Агуд сіу Гец бек А1їа Уаї ТПг Авп 355 3З6о 365
Рпе Авр Меєсє АвБп Агуд Туг АвБп Уа! їув Аїа Іїе Гей сіц бек Рго 5ег 370 375 380
Тецп Ркго І1ї1е сіу Бек Бек Аїа Ппув Агуд Гей Гпув Авр Уаї АвБп АБп Рго 385 390 395 400
Уа1 Ркго Аза Меє Меє І1ї1е бек Авп Авп Уа1і! бек біц бек Аза Авп Авп 405 410 415
Уаї бек б1у Тер біп АБп ТПг Аза Рре сіп Нів Нів сбіп с1іу Меє Авр 420 425 430
Тецп бек Геп Гей сбіп біп біп сбіп сій Акуд Тук Уаї б1у Тук Тук Авп 435 440 445
Зо сбі1у б1у АвБп Гей бек ТПг бій бек ТПг Агуд Уа1 Сув Робе пув біп бій 450 455 460 бі бій біп сбіп Нів Ррпе Гей Агуд Авп о бек Рго бек Нів Меєс ТПг Авп 465 470 475 480
Уаї Авр Нів Нів бек бек ТПг Бек Авр Авр бек Уа! ТПг Уаі Сув У 485 490 495
Авп оУаї Уаї бек Тук с1іу с1іу Тук біп с1у Рбе Аїа І1їе Рго Уа1і с1Уу 500 505 510
ТПг Бек Уа1 Авп Туг Авр Рго Рпе ТПг Аза Аза біцш І1е Аз1а Тукгк Авп 515 520 525
Аза Агуд Авп о Нів Туг Тук Тут Аїа біп Нів біп сбіп сбіп біп сбіп І1е 530 535 540 біп біп бек Рго сіу с1і1у Авр Рпе Рго Уаі Аза І1е бБег Авп Авп Нів 545 550 555 560 зек Бек Авп Меє Туг Рпе Нів сі1у біц с1у с1у с1у біш о1у Аїа Рго 565 570 575
ТПЕ Рре бек Уа1і Тер АБп АвБр ТПг 580 «210» 146 «211» 686 60 «2125 ПРТ «213» Медісадо Єкипсаєчіа
«400» 146
Ме АвБп Гей Ггеш сіу РібПе бек Гей бек Рго біп біц біп Нів Рго 5бег 1 5 10 15
ТЕ біп Авр біп ТБг Уаії Аза бек Агуд Рпе с1у Рібе АБп Рго Ап с1ци 20 25 30
І1е бек біу Бек Авр Уаії біп б1у Авр Нів Сув Туг Авр Гей бек 5ег 35 40 45
Нів ТПг Тс о Рго Нів Нів бек Гец Авп Гей бек Нів Рго Ріре бек І1е 50 55 бо
Тук бішц Аза Рбе Нів ТПг АвБп Авп Авп о І1е Нів ТПг Тпг о біп Авр Тгр 65 70 75 80
Тпув бій Авп о Туг Авп Авп біп Авп Гей Гей Гей с1іу ТПг бек Сув Меє 85 90 95
Авп обіп Авзп о Уаі Авп о Авп о Авп АвБп осбіп біп Азїа сбіп Рго Пув Іеч сі 100 105 110
Авп о Рпе Гей сіу біу Нів бек Робе ТПг Авр Нів біп сій Тукє 01у ШУ 115 120 125 зек Авп о бекг Тукг бек бек Гецп Нів Іецй Рго Рго Нів сіп Рго сій Аї1а 130 135 140 зек Сув біу біу б1у Авр бі1іу бек ТПг Бек Авп Авп Авп бБег Іе 0Щ1У
Зо 145 150 155 160
Тецп бек Меє Іїе Ппув ТПг Тер Гей Агуд АвБп обіп Рго Рго Рго Рго бій 165 170 175
Авп оАвп о Авп Авп АвБп о АвБп о Авп о біц бек б1іу Аїа Акуд Уаії сіп ТБбг ТІецй 180 185 190 зек Гей бек Мес бек ТПг сіу бек біп бек бек бек Бек Уа1 Рго Іец 195 200 205
Тец АвБп Аза Авп Уа1і Меє бек сіу бій Іїе бек бек бек біц Авп Гув 210 215 220 біп Ркго Рго ТПг ТпПг Аїа Уа1 Уаії гей Авр бек Авп біп ТПг бек Уаї 225 230 235 240
Ууаї бі Бек Аїа Уа1 Рго Агд Пув бек Уаі Авр ТПг Рпе б1у бі1іп Аг4д 245 250 255
ТПг Бек Іїе Туг Агуд сбі1у Маі ТПгЕ Агуд Нів Акуд Тегр ТПг о1у Агд Туг 260 265 270 бі Аза Ні Гей Тгр Авр Ап бек Сув Агуд Агуд бій с1у біп Тбг Агд 275 280 285 пув б1у Акуд сіп Уаі Тук Ггец сіу с1у Тук Авр пув біц біц Тув А1а 290 295 300
Аза Акуд Аза Туг Авр ІТец Азї1а Аїа Іецйц пуб Туг Тер с1у ТПг ТіПг Тс (516) 305 310 315 320
ТПЕ ТПЕ Ап о Рбе Рго І1е бек Нів Тук біц ув бі УМа1і бі сі Меє 325 330 335 пув Нів Меє ТПпг Агуд біп бій Ту Уаі Аїа Бек Гей Агуд Агд Гув бег 340 345 350 зек сі1у Рре бек Агуд б1у Аза бек І1е Туг Агуд с1іу Уа1і ТПг Агуд Нів 355 3З6о 365
Нів сбіп Нів с1у Агуд Тер біп Аза Агуд І1їе сб1у Агкуд Уаі Аїа с1у Авп 370 375 380
Туз Авр Тецп Тук Геи с1у ТПкг Рпе бБег ТПг сбіп сій сій Аза Аїа с1ц 385 390 395 400
А1їа Туг Авр Уаі Аза Аза І1е пуб Робе Агуд сіу Гей бек Аїа Уа! ТЕПг 405 410 415
Авп оРпе Авр Меєс бек Агуд Тук Авр Уаі! Гув ТПг Іїе Гей бій Бек б5ег 420 425 430
ТПЕ гейш Рго І1їе сіу сб1у Аї1а Аїа Гпув Агуд Гей пув Авр Меє сбіц сіп 435 440 445
Уаї біц Ггецп Авп Нів Уаії АвБп Уаії Авр І1е бек Нів Агуду ТПгЕ сій сіп 450 455 460
Авр Нів бек І1е І1е АвБп АвБп о ТПг бек Нів Гей ТПг сіц біп Аза І1е 465 470 475 480
Зо
Туг Аїа Аза ТПг Авп Аза бек Авп Тгр Ні Аза Іїецй бек Рпе сіп Нів 485 490 495 біп біп Рго Нів Нів Нів Туг Авп Аза Авп АвБп Меє біп Тецй сбіп Авп
З5 500 505 510
Тук Рго Тук с1у ТБПкг біп Тс сбіп пув Гец Тгр Сув їув бі1іп сб1и сіп 515 520 525
Авр бек Авр Авр Нів бек ТПг Туг ТПг ТБг Аза ТПг Авр І1е Нів сіп 530 535 540
Тец біп Гей с1у Авп Авп Авп Авп Авп о ТПг Нів Ап Рпе Ріе СсС1Уу Іей 545 550 555 560 біп АвБп о І1е Ме бек Меє Авр бек Аза Бек Меє Авр Авп бег бег 01Уу 565 570 575 век Авп бекг Уаі Уаї Тук сб1у сб1у б1у Авр Нів сі1у с1у Тук Шу щу 580 585 590
Авп осіу с1іу Тук Месє І1е Рго Мес Аза І1е Аза АБп Авр 01у Авп сіп 595 бо 605
Авп оРго Акуд бек АБп о АвБп о Авп Рпе сіу бій бек біш Іїе пув с1у РіПе 610 615 620 сбі1у Тук бій Авп Уаі Рпе сіу ТПг ТПг ТПг Авр Рго Туг Нів Аїа сіп 625 630 635 640 60
Аза Аза Агд АвБп о Тец Тук Тук біп Рго біп біп Гей бек Уаі Авр сіп
645 650 655 біу бек Авп Тгр Уаі Рго ТПг Аза І1їе Рго ТПг Гей Аза Рго Агд ТЕПг бо бе5 670
ТПЕ Ап о Уа1! бек Гец Сув Рго Рго РібПе ТПг Іец Іецп Нів сі1ци 675 680 685 «2105 147 «2115» 336 «2125 ДНК «2135 Штучна послідовність «2205 «223» індуцибельний промотор «4005 147
ЕсдаєсадеЕєд єдасадеЕсєсс сасеЕєдсссд сссдасаєсод саєсссдсадс сСсоаддвасадс (216)
Ессдассвад даєєддваєдс аєдсодаасс дсасдадддс ддддсддааа Ссдасасасс 120 асеЕссЕСсЕсс асдсассуєсє саададдсас дсдсасадад ссдсбасадад сададасддда 180 чдсасеЕвєеєсьд деаседеЕссо сасодддасдІ ссдсасддад адссасааас дадсддддасс 240 ссдсасуаєдс ссеЕССсССсассс саддаєсуса ЕЄссссдсаєба дссдаасаєс Сагасааада Зоо сссссааддеЕ ЕсЕСадесьс ассаасаєса Єсаасс 336 «2105 148 «2115» 2466 «2125 ДНК «2135 Штучна послідовність «2205 «223» індуктор «4005 148
Зо асдодссдаса сгадаадаад дсадаассас сСсЕсСдЕЧсасс саєдссдєраа доддсаадада (216) ачаєдеЕдаєд сеЕссададаа ссдєаасдад дссааєдада асоачаєдоаде дссасоасессяе 120 аасєдсаада додєддаасаа ддасеєдсасс сссаассддс ссадссссса ааддестсаад 180 чЧдсЕаадддеєд сеЕдсЕсСсаад адссаддасс аадааддсса ддассдссас бастсассосс 240 чадссеЕєста сЕЄсСсодседс бастаєсссса асссссдадс ссдасааєсса сддаєсдсессса Зоо ссадсдаєса асеЕсссасда ЕдсЕЕсдсса ЕЄСЕгодасес адддасесст сеЕСЄСасссяе 3З6о часчаєсеєсеЕ ЄсдасеЕсєсеєс ссаєєсстдсс ассссадсса асдссдадда Єдседссаас 420
ЧдЕдсааєсєд аєдсессаєе сссаєддадає сссдссаєссс саддсдассс ссстсасоддова 480 садсаасссд адаадссссо ссссссассд сссссссадда ссдеЕсссссє сссассасас 540
Ессссаааса сеєдаєдаєсє саєєсдєдад сссдаддаас адасстассда Єссадаєсєссс 60 чЧЕдассдаса сеаасессує Ссадсаадеє дсеЕСаддчасу дсЕСЕссСЕед дЕСЄЧСаса9до 6бо садесссссас сссссссада ааасадеЕсєсд єдсарддсеес ссдасестас сдсгадаадд 720
БаєдсваддеЕ ссассаєдас саадаассос асдаддассо ассасдассс сасддаааас 78о0 дсссЕсЕсСЕЄ дседдсеЕсас єдадсасаас сбдсссабасо ссдассадає сссесассес 840 ссассааадс ааадддссда дсддддасса аарсддеЕсста асаддаєдед саєсадоаЧчед 900
Едсаддсесуд агєадодуаєдЕСсС аассссеЕссеє ададдааддд сссЕССсСсас єдаадчаадає 960 ааддсеЕдсвд сеЕадддсасе Есассеєрдсс асусудсее ЄсдсеЕсСЕеЕСа дсддасесаа 1020 саєдсеЕсааа ддддадсєдд асеЕсаасуєс ссадсєдаєа ЕсоосЕдссда сдадсдеєсяе 1080 аєсаддсдеа асдссЕддаа Едаддсрадд саєдсасьсс адсасастас Єддааєссса 1140
ЕссеЕєсаддд Єдаєсьссдс саасаєсаєс сЕСадссеса сЕСадеЕССЯЄ дсеЕСдаєдає 1200 чаєдадсаас аєддаасода адссаддсес дасаадсеЕсєс Єсдадааєда єддадсдсесса 1260 дЕДЕєСсСсесСд адассдссраа гаддсадсес Сасассссса ддсасаадее сдссаддаєд 1320 сададаачду дсеааддсеЕвє саасаддссеЕ ссеЕддеЕддає ссусудсессес сасеЕвссдсе 1380 ччдааєєессд адасессссас ссссесаєсє дадеЕсессас аасеЕєдаєсс адеЕддсдасе 1440
Есеєдаддаас асаддеЕстас ЕСЕДЕСЕСЕС авдеЕсссддс Есдддаєсає деЕЕсдасасе 1500 сСЕДдДЕСЕДдДсССЯд ссасдсасса даддссасеЕс дЕсСоосдЯєссо аєдаддасеіс ссадассеєсяе 1560
ЕседсЕЕсСЕеЕсС сассаадаад аддеЕдссдад асссстаєса ассеЕєдаєсдд ссдддадсса 1620 ссааддсадуд Есссаєссаа Єсаададаад ЕСЕЧЯЧаєдеЕдЕ ддадсдассяє дЕЄССЕєад 1680 асеЕєседавс сьседсссда ссасдадессс сасасеєсааа СЕсСсСссаасс адсеєдсвада 1740 бдадссаєдса сЕсСаєдааса адсеЕдседсс дсссесесссеЕ седсвтасесс ЕдЕсСаадоаєд 1800 (516) ЄЕДсСЕсвсаса доасоасдєдас єсадссссад ассеЕсуєєЕ аєсадддададс Есссссадсе 1860 аддсЕєдадд сеЕдссаєсеса даддасесьс сасуєдсаса ассасеєддас Едссаадсас 1920 садссаєєса Едсаддаєєд сдЕсєдссаас саєдадсьсс Есссаєссад даєссадесяе 1980 бдадбасуєда ЄссЕсдаєдуа асасеєддсас сеЕсСддсЕдсса ЕдсЕсЕсоддс Едаєсддєдсес 2040 чадеЕссаєсдд асадддаєсс ссасессдає аєсаассаса ЕсдассеєсдЕ дассаадсес 2100 аддсЕєдава асдсеєсєсевдс ЕдДЕДЕСЕДдДсСЕ сЕСУдстаддеЕ саєсеєсьсад аддссаадаа 2160 сЕсдаєссад дсааддсеєєс єссааєдеас аддсасеЕєсс асдассссся сасеєдаддаєе 2220 чдсавєссевда єЕДадссаєд дасєдеддед сеЕСаєссасе савреєсєдсеаа ддссдсеЕсас 2280 асссеЕссссуд аєсдссеєєда ЕСсСЕєДдаєдудс садддааасу сЕСЕСЧЯсЕду абассесєсаа 2340 сЕсаддсада аседсааста седсаєсадуа дсеЕСЕСсСсадеі ЕСсСсСЕЕддссд ЄаадеЕСєДдає 2400 аєддсеЕдсеЕс ЕсдЕддсеаа ддаєссєдад аддуоадасеса асдуддааадде сдасадссєс 2460 сЕСгаа 2466 «210» 149 «211» 208 «212» ПРТ «213» Агарідорзів Єпа1ііапа «4005» 149
Меє ТПг бек бек Уаі1 Іїе Уаії Аїа сіу Аїа с1у Авр їубв АБп АБп 01У 1 5 10 15
Іїе Уаі Уаї! сбіп сбіп біп Рго Рго Сув Уаі Аїа Агд бій сіп Авр сіп 20 25 30
Тук Меє Рго Іїе Аїа АвБп Уа! Іїе Агуд І1е Месє Агд Гув ТПг Гей Рго 35 40 45 зек Нів Аїа Ту І1е бек Авр АвБр Аї1а Гув бій ТПг Іїе сіп сіц Сув 50 55 бо
Уаї бек бі Туг Іїе Бек Рбе Уаі ТПг с1іу бій Аза АвБп біц Агд Сув
Зо 65 70 75 80 біп Агд бій біп Агуд пув ТБг І1їе ТПг Аза бій Авр І1е Гей Тгр А1а 85 90 95
Меє бек пуб Гей с1у Робе Авр Авп о Тук УМаії Авр Рго Гей ТПг Уаї Ріе 100 105 110
І1е Авп Агуд Туг Агд б1п І1ї1е біц ТБПг АвБр Агуд сіу Бек Аїа Гей Агд 115 120 125 бі1у бій Ркго Рго Бек Гей Агуд біп ТПг Тук с1іу с1у АБп с1у І1е 01Уу 130 135 140
Рпе Нів біу Рго бек Нів сі1у Тїец Рго Рго Рго с1іу Рго Тук с1у Туг 145 150 155 160 сбі1у Меє Гей Авр сіп Бек Меє Уаі Меє сіу сіу с1у Агкд Тук Тук біп 165 170 175
Авп осіу бек бек б1і1у біп Авр бій бек бек Уаї сіу с1іу с1у бек 5екг 180 185 190 зек Бек І1е Авп біу Меє Рго Аїа Рпе Авр Нів Тук с1у біп Тук Гув 195 200 205 «2105 150 «2115» 236 «212» ПРТ «213» Агарідорвів 1угага 60 «4005 150
Меє сій Агуд с1у Аза Рго Рібе бек Нів Тук біп Тец Рго Гув бек Ше
1 5 10 15 зек біц Гец АвБп о Тец Авр о біп Нів бек Авп Рго Авп Рго Меє ТПг 5ег 20 25 30 зек Уаії Уаї Уаі Аза Авр Азїа б5ег Авр АБп АБп Гпув с1у Іїе Уа1 Аї1а 35 40 45 біп бі1іп біп Рго Рго Сув Меє Аза Агуд бі біп Авр біп Туг Меє Рго 50 з9 бо
І1е Аїа АвБп Уаі І1е Акуд І1е Месє Агд Гув І1їе Гей Рго Бек Нів Аїа 65 70 75 80 пув І1їе Бек Авр Авр Аїа Пув бій ТПг І1е сбіп сій Сув Уаї бек сбі1ц 85 90 95
Тук Іїе Бек Рпе Уаї ТПг с1у бій Аза Авп біц Агд Сув бі1іп Агд с1и 100 105 110 біп Акд Гув ТпПг Ії1е ТПг Аза сій Ар І1їе Гей Тгр Аїа Меєсє бек Гув 115 120 125
Тец б1у Рпе Авр Авп Тук Уа1 Авр Рго Гей ТпПг Уа1 Рбе І1е АБп Агд 130 135 140
Ту Агуд бій І1їе сіц ТБг АвБр Агуд сіу бБег Аза Тец Агд бій Рго Рго 145 150 155 160
Зо зек Гей Акуд біп Аї1а Тук сіу сб1у Авп сбіу І1е с1у Рпе Нів с1у Рго 165 170 175 зек Нів біу Тїецй Рго Рго Рго біу Рго Тук сі1у Тук с1іу Меє Гей Авр 180 185 190
З5 біп бек Меє Уаі Меє с1і1у с1і1у с1у Агуд Тук Тук біп Авп біу бек вег 195 200 205 бі1у бі1іп Авр сій бек бек Аїа сіу сіу сіу Бек бек бек бег І1е Авп 40 210 215 220 бі1у Меє Рго Аза Рпе Авр бек Тук с1у біп Тук Гув 225 230 235 45 «2105» 151 «211» 230 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 151 50 Меє біц Агуд с1у Аїа Рго Гей бек Нів Тук біп Гей Рго Ппув бек Авп 1 5 10 15 зек с1і1у Гец АвБп Тец Авр біп Нібв Авп АвБп бек Іїе Рго ТПг Меє ТЕГ 20 25 30 55 бі1у бек І1їе Бек Аїа Сув Авр Авр пуб Авп о Гув ТПг І1е Іецй Рго сіп біп біп Рго Бек Меє Рго Агуд сій біп Авр біп Туг Меєсє Рго І1е А1а 60 50 з9 бо
Ап оУа1 І1їе Акуд І1е Меє Агд Гув Іїе Гей Рго Рго Нів Аїа Гув5 І1е 65 70 75 80 зек Авр Авр Аїа Гув бій ТПг І1е біп бій Сув Уаі Бек бі Тук Те 85 90 95 зек Рпе Уаії ТПг б1у б1п Аза АвБп біц Агуд Сув біп Агуд бій біп Агд 100 105 110 пув ТПг І1е ТПг Аїа сій Авр І1е Тей Тгр Аїа Меє бек пув Те 1У 115 120 125
Рпе Авр Авр Туг Уаії б1у Рго Іїец Авп Уаі Рпе І1їе Авп Агуд Туг Аг4д 130 135 140 бі Рпе бій ТПг Авр Агуд с1іу Сув Бек Гей Агуд сіу біц бек бек РБПе 145 150 155 160
Тпув Ркго Уаії Тук с1іу сіу Бек сіу Меє с1у Рпе Нів с1іу Рго Рго Рго 165 170 175
Ркго сіу бек Тук біу Тук бі1іу Меє Іец Авр біп бек Меє Уаі Меє Щ1У 180 185 190 сіу б1у Агкуд Тук Тук Нів Авп сбіу бек б1у біп Авр сіу бек Уаї 5екг 195 200 205 сі1у б1у сбі1у сіу Бек Бек бек Бек Меє Авп сіу Меє Рго Уаї Туг Авр 210 215 220
Зо біп Тук сб1у біп Тук Гув 225 230 «2105 152
З5 «2115 252 «212» ПРТ «2135» Вісіпив сошпштипів «4005 152
Меє сій Агуд с1іу с1у Акуд Уаї Нів Агкуд Туг Агуд Агуд Ні Аза Ггув сіп 40 1 в) 10 15
Ркго ТПг Рго ТПг Тс бек Аза ТБПг Аза бек ТПг бек Рго сіу Меє 5ег 20 25 30 45 зек Уаі біп ТПг ТПг Іїе Сув Бек Авп І1е АвБп Гей Рго бек ТіПг Іецй зек Гей бек АвБп бек ТПг Аза Аза Рго біп Аїа Рго сбіп сіп сбіп сіп бо 50 теп біп Ркго бек біп Сув Гей Уаі Агуд біш біп Авр біп Туг Меє Рго 65 70 75 80
І1е Аїа АвБп Уаі І1е Агд І1е Месє Агуд Агуд І1е Гей Рго Рго Нів Аїа 55 85 90 95
Тпув І1е бек Авр Авр Аїа Гпув сій ТПг Іїе сбіп сій Сув Уаї бек бій 100 105 110 (516) ТУукг Іїе бек Рпе І1е ТПг с1іу бі1іц Аза Ап Авр Агуд Сув біп Агд с1ци 115 120 125 біп Акд Гув ТпПг Іїе ТПг АТа сій Авр Уаі1 Гей Тгр Аїа Меє сС1Уу Гув 130 135 140 ем біу Рпе Авр Авр Тугк Уа! бій Рго Гей ТПг Гей Рібе Тецй Ап Агд 145 150 155 160
Ту Агуд бій Меє сіц Авп біц Агуд бег ТБг І1е Агд АБр Рго І1е Іец 165 170 175
Тпув Акуд бек бек Уаі сіу Уа1 Уаі Авр Тук с1у Авп Гец біу Меє Авп 180 185 190
Рко РіПе Меє Рго ТПг Рпе Рго Месє І1е Рго Рго Рго сбіп с1у Тук Ре 195 200 205
Авр Бек Авп Меє Іец б1у б1у Тук Туг Агуд Авр Аза Рго Ар с1у Аї1а 210 215 220
Ззек б1у Аїа Аїа бек сіу Бек Авп Гей Аїа Аза бек бек Аза Рго Авп 225 230 235 240 зек Гец Гец Ні Рпе Авр Рго Рпе Аї1а сіп Рпе Гув 245 250 «2105 153 «211» 198 «212» ПРТ «213» біусіпе шах
Зо «4005 153
Меє Авп Меє Ап Меє Агуд сбіп біп біп Уаі Аза бек Бек Авр біп Авп 1 5 10 15
Сув век АвБп Нів Бек Аїа Аза сі1у бій бій Авп бій Сув ТБПг Уаі Агд
З5 20 25 30 бі бі1іп Авр Агуд Рпе Меє Рго Іїе Аза Авп Уа! І1е Агуд І1е Меє Аг4д 40 пув Іїе Гецй Рго Рго Нів Аза Пув І1е бек Авр АвБр Аїа Гув сій Тіг бо
І1е сбіп біц Сув Уаії бек бій Туг І1е Бек Рпе Ії1е ТПг сС1у біц А1а 65 70 75 80 45
Авп обіц Агуд Сув біп Агд бій біп Агуд Гув Тпг І1е ТПг Аза бій Авр 85 90 95
Уаї гей Тгр Аїа Меє бек пуб Гец біу Рпе Авр Авр Туг Іїе бій Рго 50 100 105 110
Тецп ТпПг Меє Тук Гей Нів Агуд Туг Агуд бі гей сій с1у Авр Агд Тс 115 120 125 55 зек Меє Акуд біу біш Рго Гей сіу Пув Агуд ТПг Уаі сій Туг Аї1а Тіг 130 135 140
Тец Азї1а ТПпг Аза Рпе Уа1ї Рго Рго Рго Рпе Нів Нів Нів Ап с1у Туг 145 150 155 160 60
Рпе сі1у Аїа Аза Меє Рго Меє сіу ТПг Тук Уаі Агуд бій ТПкг Рго Рго
165 170 175
Ап Аза Аза бек бек Нів Нів Нів Нів б1у І1ї1е Бек АБп Аїа Нів сіц 180 185 190
Рго АвБп Аїа Агд бек І1е 195 «2105 154 «211» 240 «212» ПРТ «213» Медісадо Єкипсаєчіа «4005 154
Меє сій ТП сіу сіу с1іу Робе Нів сіу Туг Агкд ГПув Тецй Рго ТПг Авп 1 в) 10 15
ТПЕгЕ Авп бек бек Аїа Уаії Аїа сб1і1у ТПг Гец пуб Іецй бек бек Уаії 5ег 20 бій Месє АБп ТПг Агуд біп біп Уа1і с1у біц біп Авп Авп АвБп сб1у Тіг бі бі1іп Авр АвБп обі Сув І1їе Уаі Агуд біш біп Авр Агуд Роре Меє Рго бо 25
І1е Аїа АвБп Уаі І1е Акуд І1е Месє Агд Гув І1їе Гей Рго Рго Нів Аїа 65 70 75 80
Тпув І1е бек Авр Авр Аїа Гпув сій ТПг Іїе сбіп сій Сув Уаї бек бій
Зо 85 90 95
Туг Іїе Бек Рпе Ії1е ТПг с1у бій Аза АвБп біц Агд Сув бі1іп Агд с1и 100 105 110 35 сіп Акуд Гпув Тс о Іїе ТБг Аза бій Авр Уаії Гей Тер Аїа Мес бек Гув 115 120 125
Тец б1у Рпе Авр Авр Туг Іїе сій Рго Гей ТпПг Меє Туг Гец Нібв Агд 130 135 140 40
Ту Агуд бій Гей сіц б1у Авр Акуд ТБг бБег Мес Агд Уаї бій Рго Іец 145 150 155 160 сб1у гув Акуд сіу Меє бій Тук с1у Авп Геш сіу сіу Рібе Уаї Рго сіп 45 165 170 175
Рпе Нів І1ї1е сі1іу Нів Рго АвБп біу біу Туг Тук с1у АБп Аїа Аїа Рго 180 185 190 50 ТПЕ Тук Меє Меє Агуд Авр б1у АвБп о Авп Авп Авп Авп Авп о Авп о Авп о Авп 195 200 205
Аза Рго АвБп Аїа Аза АБп А1ї1а Аза сСіу б1і1у бек Бек Нів Бек сбіп Аїа 210 215 220 55
Тец Аза АБп Аза бій Аза Ап о сіу Нів Нів Нів Нів Нів біп Тук Гув 225 230 235 240 «2105 155 60 «2115 278 «212» ПРТ
«213» йеа шаув «4005 155
Меє Авр бек бек бек Рпе Гец Рго Аїа Аїа сіу Аїа б1цп АБп с1у 5бег 1 5 10 15
Аза Аза сіу бі1у А1їа АБп АБп біу б1у Аїа Аза сіп сіп Ніб5 Аїа А1а 20 25 30
Рго Аїа І1е Агд біц біп Авр Агд Тїец Меє Рго І1ї1е Аїа Ав5п Уаі1і Те 35 40 45
Агкуд І1е Мес Агуд Агуд Уаї Іей Рго Аза Нів Аїа Ппув І1е бБег Авр Авр 50 55 бо
А1ї1а Ппув сій ТБг І1е сбіп сій Сув Уаії бек бій Туг Іїе бек Рібе І1е 65 70 75 80
ТП б1у бій Аза Авп біц Агд Суб біп Агд бій біп Агуд пув ТБбг тТ1е 85 90 95
ТПг Аїа бій Авр Уаї Гец Тгр Аїа Меєс бБег Агд Іїец б1у Рпе Авр Авр 100 105 110
Тук Уаі1 бій Рго Гец сіу Аїа Тук Гей Нів Агуд Туг Агд біц Робе сій 115 120 125 б1у Авр Аї1а Агкуд сіу Уа1 сіу Гей Уаі Рго сі1у Аїа Аза Рго 5ег Агд 130 135 140
Зо сіу б1у Авр Нів Нів Рко Нів бек Мес бек Рго Аїа Аїа Мес Гей Гув 145 150 155 160 зек Агуд біу Рго УМаі бек сі1у Аї1а Аза Меє Гей Рго Нів Нів Нів Нів 165 170 175
З5
Нів Нів Авр Меє сіп Месє Ніз Аза Аза Мес Тук б1у б1у ТПпг Аїа Уаї 180 185 190
Рго Рго Рго Аїа біу Рго Рго Ні Нів сіу сіу Рпе Гей Меє Рго Нів 195 200 205
Рго сбіп біу бек бек Нів Тук ІТец Рго Туг Аїа Тук бій Рго ТПг Туг 210 215 220 сіу бі1у біц Ніз Аїа Меє Аза Аза Туг Тук с1іу с1у Аїа Аза Туг А1їа 225 230 235 240
Рго с1у Авп біу біу бек б1у Авр біу бек бі1у Бек с1у б1у шу щу 245 250 255 бі1у бек Аїа бек Нів ТПг Рго сіп сіу Бек сіу сі1у Гец біц Нів Рго 260 265 270
Нів Рго Рпе Аїа Тук ув 275 «2105» 156 «2115 225 «212» ПРТ (516) «213» Агаспів Пуродаєа «4005 156
Меє сій ТП сіу сіу с1іу Робе Нів сіу Туг Агд АвБп Тецй Рго ТПг ТПг 1 5 10 15
ТПг Бек с1іу Гей пуб Пец бек Уа1і! бек біц Мес Авп Меє Агуд Аїа Уаї 20 25 30 бі Авп Авп о ТпПг о сіу бек Бек Авп Авп Авп о Нів ТБПг Авр Ар АБп бій 35 40 45
Сув Тк УМаі Агд сій біп Авр Акуд Рбе Месє Рго І1їе Аїа АвБп Уаі Пе 50 55 бо
Акуд Ії1е Месє Агуд Ту І1е Гей Рго Рго Нів Аїа Гпув Іїе Бек Авр Авр 65 70 75 80
Аза пув сіц ТБПг І1е бі1іп бій Сув Уаі бек бій Туг Іїе Бек Рое І1е 85 90 95
ТП б1у бій Аза Авп біц Агуд Сув біп Агд біц біп Агуд Гув ТПпс Ше 100 105 110
ТПг Аїа бій Авр Уаї Гецш Тгр Аїа Меєсє бек губ ІТец б1у Рпе Авр Авр 115 120 125
ТУук Іїе бій Ркго їей ТПг Меє Тук Гецп Нів Акуд Туг Агкуд бі Геч сі 130 135 140 б1у Авр Агуд ТпПг о бек Меє Агуд сіу бій Рго Гей сіу МПув Агд ТПг Уаї 145 150 155 160
Зо
Авр Тук сі1у ТБПг Іец б1у УМаії Аї1а Аза Аза бек ТПг Рпе Уа1і Рго Рго 165 170 175
Рпе Нів Іїе сі1іу Нів Нів Нів Нів Нів Рго Нів Рго Бек Бек Тук Туг
З5 180 185 190 бі1у ТПпЕ Ркго Меє с1у Ап Туг Іїе Агуд АвБр Аза Рго АвБп Аза Ссіу бег 195 200 205 40 зек Гей біп Рго Рго бек Гей Аїа Нів Аза бій Рго Ап ТПг сбіп Туг 210 215 220
Тув 225 45 «2105 157 «2115 234 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа 50 «4005 157
Меє сій Агуд сб1іу с1у Рбе Нів сіу Тук Агкд Пув Гец бек Уаі Авп Авп 1 5 10 15
ТПЕ ТПЕ Ркго Бек Рго Рго біу Гецй Аїа Аза АБп Рпе Іїец Меє Аза с1и 55 20 25 30 бі1у бек Меє Агуд Рго Рго бій Рпе Авп о біп Рго Авп о Гув ТПг бег Авп (516) сіу б1у бі бі сій Сув ТБг Уаі Агуд біц біп Авр Акуд Робе Меє Рго бо
Зоо
І1е Аїа АвБп Уаі І1е Агд І1е Месє Агуд Агуд І1е Гей Рго Аїа Нів Аїа 65 70 75 80 пув І1їе Бек Авр Авр бек Пув бій ТПг І1е сбіп сій Сув Уаї бек сбі1ц 85 90 95
Туг Іїе Бек Рпе Ії1е ТПг с1у бій Аза АвБп біц Агд Сув бі1іп Агд с1и 100 105 110 біп Акд Гув ТпПг Іїе ТПг АТа сій Авр Уаі1 Гей Тгр Аїа Меєсє бек Гув 115 120 125
Тец б1у Рпе Авр Авр Туг Іїе сій Рго Гей ТПг Гей Туг Гец Нів Агд 130 135 140
Ту Агуд бій Гей сіц сбі1у біц Акуд сіу Уаї бек Сув бек Аї1а с1у 5бег 145 150 155 160
Уаї бек Меє ТПг Авзп сіу Геш Уаї УМаії Ппув Акуд Рго АвБп б1іу ТП Меє 165 170 175
ТП бі Тук с1іу Аїа Тук біу Ркго Уаії Рго сіу І1е Ні Меє Аза сіп 180 185 190
Тук Нів Тукг Агуд Нів біп Авп осіу РіПе Уаії РібПе бек б1у АБп сій Рго 195 200 205
АвпобБек пуб Меєс бек біу бек бек бек б1у Аї1а Бек с1у Аїа Агк9д Уаї
Зо 210 215 220 бі Маї Рпе Рго ТПг сбіп сіп Нів Ппув Туг 225 230
З5 «2105 158 «2115» 231 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 158 40 Меє біц Агуд с1іу с1у Робе Нів сіу Тук Агд Пув Рібе бек Гей АвБп ТПг 1 5 10 15
ТПЕ Авп о Ркго бек біц Рго Аїа Акуд Робе Гец Месє Аїа бій с1у Бек Меє 20 25 30 45 біп теп Аза сій Рго Авп о біп ТПг Авп о Гпув ТПг Аза Авп с1іу с1у сі бі бій Сув Уаі Уаі Агд бій сбіп Авр Агуд Рпе Меє Рго І1е Аїа Авп 50 з9 бо
Ууаї І1їе Агу Іїе Меє Агуд Агуд Іїе Гей Рго Аїа Ні Аза Гув І1їе 5ег 65 70 75 80
Авр Авр бек їув бі ТПг Іїе сбіп сій Сув УМаї бек бій Туг І1е 5ег 85 90 95
Рпе І1е ТПг сб1у б1ц Аза АБп о біц Агуд Сув біп Агуд біц біп Агд Гув 100 105 110 60
ТЕ Іїе ТПг Аїа сіц Авр Уаі! Гей Тгр Аїа Меєсє бек Гув Те с1у РПе
115 120 125
Авр Авр Тут І1е біц Ркго їецй ТПг Іец Тук Гей Нів Агуд Туг Агд бій 130 135 140
Тец бі сб1у Авр Агуд сіу Уа1 сіу Туг Авп Аїа сіу бек Уаї с1у Меє 145 150 155 160
ТПг Бек сіу Меє Уаї Уаї Гпув Агуд Рго Авп сіу ТПг Меє с1у сіц Туг 165 170 175 сб1у А1ї1а Тук сіу Уаї Уа1 Рго сіу Меє Нів Меє Аїа Рго Туг Нів Туг 180 185 190
Агуд Нів сбіп Авп о б1іу Тук Аїа Тук бек б1у Авп бій Рго Авр бек Гув 195 200 205
Мен сіу с1у Рго Бек бБег Аза Аза Авп сіу бБег Агд Уаі бій Ге РПе 210 215 220
Рго ТПг біп біп Нів Гпув Туг 225 230 «2105 159 «211» 216 «212» ПРТ «2135 Рравеоїцв соссіпеце «4005 159
Меє сі Бек сіу сіу Рбе Нів сіу Тук Агкд МПув Гей Рго АБп ТПг ТПг
Зо 1 в) 10 15 зек Рго біу Тецш пуб ТІГецй бек Уаі Бек Авр Меє Авп Авп Уаї Авп ОТП г 20 25 30 век Акад біп Уаі Аїа б1у Авр Авп Ап Нів ТПг Аза Авр сій бек Авп 35 40 45 бі Сув ТП Уаі Агуд бі біп Авр Агуд Рпе Меє Рго І1е А1їа Авп Уаї 50 55 бо
І1е Агуд І1е Месє Агд Гув І1е їец Рго Рго Ні Аза Ппув Іїе Бех щУ 65 70 75 80
Авр Аза пув біц Тс І1е б1іп біц Сув УМаї бек сій Туг Іїе Бек Ріє 85 90 95
І1е ТЕ с1у біц Аза АБп бій Агуд Суб біп Агд бій біп Агд Гпув ТК 100 105 110
І1їе ТПг Аза бій Авр Уаї Гей Тгр Аїа Меє бек пуб Гечп с1у Рібе Авр 115 120 125
Авр Тук Меєсє біц Ркго Іїецй ТПг Месє Тук ІТец Нів Агуд Туг Агд сій Гей 130 135 140 бі б1у Авр Агуд ТпПг бБег Меє Агуд сіу бій бек Гей с1іу Пув Агд ТЕГ 145 150 155 160
І1Іе сіц Туг Аза Ркго Меє сіу Уаі сі1у Маії Аї1а ТПпг Аза Ррпе Уа1і Рго 60 165 170 175 зЗо02
Рго біп Робе Ніб Рго АвБп о сіу Туг Тук б1у Рго Аїа Меє с1у Аїа Туг 180 185 190
Уаї Аза Рго Рго Авп Аза Аїа бек бек Нів Нів Нів біу Меє Рго Авп 195 200 205
ТПгЕ бій Рго Авп Аза Агд бек Меє 210 215 «210» 160 «2115» 312 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «400» 160
Меє Уаії Авр бій Авп Уаї сі ТПг пуз Аза бек ТіПг Іец Уаі Аїа 5ег 1 5 10 15
Уаї Авр Нів сіу Рпе сіу бек сіу бек сіу Нів Авр Нів Нів с1Уу Іецй 20 зек Аїа бек Уаі Ркго Іїецй Гей сіу Маі АвБп Тгр пув Гпув Агд Агд Меє
Рго Агд біп Агуд Агуд бек бек бек бек Рпе АвБп Гей Гей бек Ропе Рго 25 50 з9 бо
Ркго Рго Меєсє Рго Рго І1е бек Нів Уаі! Рго ТПг Рго Гей Рго Аїа Аг4д 65 70 75 80
Зо пув І1їе Авр Рго Ак Пув Гей Акуд Рпе Гей Рпе сіп Гуз сіц Геч Гув 85 90 95
АвпобБекг Авр Уа! бек бек Гей Агуд Акуд Меє І1ї1е Гей Рго Ппув Гпув Аїа 100 105 110
З5
Аза сій Аза Нів Іец Рго Аї1а їец біцш Сув Гув бі о1у Іїе Рго І1е 115 120 125
Акуд Меє сіц Авр Тец Авр о б1у Робе Ні Уаі! Тер ТПг Рпе Гпув Туг Агд 40 130 135 140
Тук Тер Рго Авп Авп АвБп о бег Агуд Месє Туг Уаі Те сій АвБп ТПгЕ щ1У 145 150 155 160 45 Авр Рпе Уаі АвБп Аїа Нів сіу Гецп сіп Тїеш сб1у Авр Рпе І1е Меє Уаї 165 170 175
Тук біп Авр Гей Тукг бБекг Авп Авп Тут Уаі І1е біп Аза Агуд Гув Аїа 180 185 190 зек біц бі біц біц Маї Авр Уаії І1їе АБп Гей бій бій Авр Авр Уаї 195 200 205
Тук ТпПкг Авп Гей ТПг Агуд ТІ1е бій Авп о ТБг Уаї Уаї Авп Авр Іецй Іецй 210 215 220
Тец біп Авр Рпе Авп Нів Нів Авп Авп Авп Ап Ап Авп Ап бек Авп 225 230 235 240 (516) век Авп бек Авп оПпув Сув бек Тук Тук Тук Рго Уаі Іїе Авр Авр Уаї 245 250 255
ЗОЗ
ТПЕ ТпПЕ Ап о ТБг біц бек Рпе Уаї Туг Авр ТПг ТПг Аза Гец ТіПг 5ег 260 265 270
Авп оАвр о ТПг Рго Гей Авр Рпе Гей сіу сіу Нів ТПг ТПг Тпг ТК Авп 275 280 285
АвпоТук Тук бек пув Рпе б1у ТПг Рбе Авр б1у Гей сіу бек Уаї сій 290 295 300
Ап очІ1е бек Гец Авр Авр Рпе Туг 305 310 «210» 161 «2115 321 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «400» 161
Меє Ме Аза Ар бій Авп Уаї бі ТПг пув Аза бек ТПг Гей Ії1е Аї1а 1 в) 10 15 зек Уаі сіу Ні біп сб1у Нів б1у Рпе сіу бек с1іу Бек с1іу с1у Нів 20 25 30
Нів с1іу Гей бек Аза бек Уаі! Рго Гей ІТей сі1у Маії Авп бек Пув Гуз
Акуд Агуд Меєсє Рго Агуд біп Агуд Агуд бБег бек бек бек Рпе Авп Гей Іей з9 (210)
Зо зек Гей Ркго Рго Рго Меє Рго Гей бек Рго Нів Уаі Ркго ТПг Рго Гей 65 70 75 80 зек Аїа Акд їув І1е Авр Рго Агд Гув Гей Агуд Рпе Гей Рпе сіп Гув
З5 85 90 95 біц Гешп Гпув Авп о бБег Авр Уа1 бек бек Ггец Агуд Акуд Меє І1е Гей Рго 100 105 110 40 пув пув Аї1а Аза сій Аїа Нів Гей Рго Аї1а Гецп сій Сув пув б1ц 1У 115 120 125
І1е Рго І1е Акд Меє б1цп Авр Гей Авр б1у Гей Нів Уаі Тер ТПкг Ріє 130 135 140 45
Тпув Тук Агуд Туг Тер Рго Авп Авп Авп бБег Агуд Меє Тук Уаї Іец бій 145 150 155 160
АвпоТпг сб1у Авр Роре Уаі АвБп Аза Ні б1у Гей сіп Гей с1у Авр Ре 50 165 170 175
І1е Меє Уаї Тук Ігец Авр Гей Авр бБег АвБп АвБп Туг Уаі Іїе сіп Аї1а 180 185 190
Агуд пув Аза бек біц бі бій бій бій бій бій Авр Уаї ТПг І1е І1е 195 200 205 бі бій Авр Авр Уа1і Тук ТПг Авп Гей ТПг Гпув І1е біц АвБп о ТБПг Уаї 210 215 220 60
Уаї Авп Авр Гей Гей І1їе сбіп Авр Рбе Авп Нів Нібв Авп Авр Авп 5бег
225 230 235 240 век Авп Авп Авп обБег АБп АвБп Авп о І1е АБп о АвБп Авп о Гув Сув бек Туг 245 250 255
Тук Тук Ркго Уаї Іїе АвБр АвБр І1е ТПг ТБПг Авп Тс Аза бек Рпе Уаї 260 265 270
Тук Авр ТПг Тбг ТБг о Гец ТБг бБег Авп Авр о бег Рго ІТецй Авр РПе Іецй 275 280 285 сбі1у б1у Нів ТПг ТпПг Тс ТБг ТпПг Авп о ТпПг Туг Тук бек пув Рое 01Уу 290 295 300 зек Рпе біц біу Гецп сіу бек Уаі сій Авп І1е Бек Гей Авр Авр РіПе 305 310 315 320
ТУЄ
«2105 162 «2115 314 «212» ПРТ «213» Медісадо Єкипсаєчіа «4005 162
Меє Меє Меє Авр сі сіу сіц сб1у Ппув Ппув Ппув Уаї Уаї Уаї сбіп Гув 1 5 10 15
ТП біш Аїа Сув сіу Рре Месє Азїа сб1у Уаі сій Авр бій Ггецш с1у Ріе
Зо 20 25 30
Уаї Авп Уаії Гпув с1у Авр Авп Авп Авп сіу бек сбіу біп Агд І1е Нів 35 Нів Авр Нів с1у Рпбе Уаі Аза Аїа Аза Рпе сіу ТПг Уаї Нів Аг Тув бо пуб Акуд Меє Аза Агуд біп Агуд Агуд бБег бек бек бек ТПг І1е ТПг І1е 65 70 75 80 40
Нів Гей Гпув Авп о Гец Рго бек бек ТПг ТПг ТПг Тс Тс Тс ТпПгс тТопс 85 90 95
ТПг Бек Нів Уа1ї Рго І1е бек Рго Іїе Рго Рго Гей РіПе Нів бек Гец 45 100 105 110
Рго Рго Аїа Агд біц І1е Авр Ні Агд Агд Тей Агуд Рпе Гей Ропе сіп 115 120 125 50 пув бій Гецп пуб Авп бек Авр Уа1! бек бек Гец Агуд Акуд Меєс Уаї Гей 130 135 140
Рго пув пув Аїа Азїа б1іп Аза Рбе Іецй Ркго Уаії Гей бій Бек Ппув сіц 145 150 155 160 55 сб1у І1е Гей Гей Бек Меє Авр Авр Гей Авр сіу Гей Нів Уаї Тгр 5ег 165 170 175
Рпе Ппув Туг Агд Ропе Тер Рго Авп АвБп АБп о бег Агуд Меє Тук Уаі1ї Іец 60 180 185 190
Зо5 бі Авп о ТПпг о с1іу Авр Рпе Уа1 бек ТПг Нів сіу Гей Агд Робе с1у Авр 195 200 205 зек Іїе Меє Уаї Тук біп Авр Авп о біп АвБп о Нів Авп Туг Уаі1і І1е сіп 210 215 220
Аа пув пув Аїа Суб Авр біп Авр біцш Тує Меє сій бій Аїа Авп Авр 225 230 235 240
ТПЕ Іїе Авп Нів Іїе Рпе Маії АвБр Авр Тук бій Уаї АБп Гпув бек Сув 245 250 255
Рпе Авр Уаї Аза Туг Рго Аїа Месє Авп Авр ТПг бБег Меє бек Ропе Те 260 265 270
Тук Авр ТПг ТБбг І1ї1е бек АвБп Авр бек Рго ІТецй Авр Рпе Ге с1у ФУ 275 280 285 зек Меє ТПг Авп Туг бек Агуд І1е бі1у бек Уаі сій ТПг Рпе сіу б5ег 290 295 300
Ууаї бій Авп Гей бек Гей Авр Авр Рпе Туг 305 310 «2105 163 «2115 3275 «2125 ДНК «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 163
Зо даЕЕддстас аєддеЕссааа СЕЄсЧаєссєуЧЧ саасаєдада ЄсСдсасадад адаасаассяе (216)
Ббєсаєстаєда єсааєтаєвєд басаадсаас ааасассаає ссссдасбсасба сессоддсесссе 120
Ебадсасаєє деЕсаєдсвад аадеЕсадсдда ааасєсстасає дсЕсдссааас дсадсдаєєсса 180 ааєєдаасад Єдсааєстас сеЕєдааасьс саадассаса ЄдсЕдЕЄвад ааєсесадає 240 чаааасаєсє єдаєдеЕсеєвса даааєссася Єдоддаасадс дсаааассес асссаасовваа Зоо сЕвастЕєсо9 ССЕгУЧЄЕЧЧсСа єссодєдсаад ЄсдЕСасуусс аассдааааа адаааадааа 3З6о аааадаадсс деЕсаєдаєсу дссаєсссеєсддадссдадессс дадесссдасс ссдсдєсссдаєс 420 дЧдЕСассаєта єсадаєсдад ссеЕДдЕСССає сссодассдсда СсСссссаєсдс аааааєссьсс 480
ЕЕСЕЕЕЕСЕЄ васессссса, ЕсСрассесьуд арсеЕсеЕссєс ЕСЕєсСЕСВяад гаваассесьс 540
ЕдсеЕссасує сеЕсСЕссСЕСеЕЄ сЕєЄЧДеЕССаєє ссссссадає аассадссда ааасасассс 60 ааарєсаєсс єсдааєсаає аагєддасаєа адеааєдадуа ссадсдеЕсцча ЕЄсссЕєсесо 6бо аєєддассає саєстаєсає додеЕСЧдчаасс ассдссссса дадессссдаєс ссдсадаєса 720 аєдеЕсасадс ЕгаддсдеЕда ЕСЕСЕСЕСОд ЄЕСЕсСЧОЄЧСсС аєСОЧДЕЄЕСЕ гадаєстаад 78о0 сеЕдассЯсесс сассЯсссоає дссдсоддеЕсеЕ саєссєсодда асссесаадд дасєесадсд 840
ЧЕДдЧдЕсасаа ЄсаєєдссеЕє єдеЕдЕеЕсСдааа сдасасасча аєдедаааає ааададсоадаа 900 асдоасссасс ддчадчдаадеЕє сСЕодаддаає аєчасодсоода сддсЕсЕЧдас Есасддаддааа 960 бдоддсеЕсаєд сеЕдссаадає деЕсададаад дааасассаа адаєдааєда ассеєдаєсьс 1020 баєдаєдаад адсеЕддесЕсаа даасаадсьс саддадсьсс деЕСсаєсдес ссаадааддес 1080
Єсасеєсадад асаєсасуєє єсоосаєдада дсеєдаєсьду Едаддааєсі сдудєаатгаєд 1140
Єдсааєеєсдд адсеЕссаєаа аддбєадасьс саддсєєссса дасаєсаєсаа ададеасаєе 1200 чаєчаддєдЕ срасссадесе дадаасододеЕс Сосаассссд аєєссададда дсЕСЕСЕЄТта 1260 чаачадаадс ЄЕсССсСЕЕсває дсаєдаааса сддсаєдсесе сЕддсадаас дасЕсЕдссе 1320 гЕЧадеЕдЧчєд доадсЕЕСЕСсСЕ ЕЯУЧєдЧсСУЄЕЄ сасдєтдуаєд ЕдЧдЕсаддас ЕсСЕ9ДЧЯоєсєдад 1380 саєаадсеЕсЕ гассеЕсдаає ааєсодссоддЕ ЕсгадеЕдеЕєдд даєссаєсає сеЕдедседее 1440
ЧдЕддссЕСаа ддєсЕЕдудсес адаасстасад азсЕеЕсссесу адаасеєсьсеЕ дсавєєссевса 1500 сазеЕссееєс ассадсесдуд аддсдЕдЕсс єсааєсадеда аасддадеаає дасасааддд 1560 дсЕСвасасуд агаєсадаса дЕєдсааєсує аєдссгадаа ассесасаад сааєссессаса 1620 бЕСсСсаадаад сЕсСаєдасає дасаддаадд аєссссдудда Есассуєесуд сессссаада 1680 аадсаєдаас сЕССЕСсСдудєЄєд ЕСЕсаасває єсдасеЕссдс сеЕСаєдЕддЕ гагаєддаде 1740 чсадеЕдасьд сЕсссЕдеЕдс ЕСЄЕЄсСсСЕдуЧєЄ сЕСЕсСедаад сЕСаададсе аагддстааа 1800 (516) чаєсдаадед дададаєсдє ассудбаєсає ссассеЕсеєса аєсєсддаєсс адаадсаддас 1860 асбаааєсає саєссдддасу ссддєддада даєддавтадеЕсє сддаддеЕєда СсЕсСассааєд 1920 аєдсадсева аадаассудсєе сааєдеЕсаає сасеєстаєсдд єдадссаадс сааєсссьсас 1980 аєєдсеЕссає саседсдЕеЕсеЕ аааддаєста дЕссдадсеє аєддаєдднад асеЕсдсадсе 2040 аадсЕсдсдс аєсвадсддда даєддаддес ааасаєбадає дсаассадде асгададсес 2100 дЯдЕЕЕЕсСсЕсС Єсдудєддасе содсааадсьс сЕсддсЕСсСаду адедддаадд Едаєдестваса 2160 дЕєЄЯДсааєдс сеЕдссасеЕсеЕ єдсєсадсас сСсдаадаєса басааааєсс дасесаєдеЕс 2220 чадсеЕєсада аадсддсєаа ссааддаада адасдсассс дддадаадсс сссадссасга 2280 аааєсааасе дсдудадаєсда дсЕєдсусЕеЕєс даєдасеєсьдд гадсваєссе саассаєаєд 2340 сддаддссса адаааадсдс ддадададсс дссасрдсса сдЕсЕссдарс ссаєссасода 2400 бЕддсеєсаа ссассадаєсе сааєдсесса адаадааєсс саєсеЕвєддаа сдЕссевдсс 2460 ачачадаасс саасаддсеєс аседчаєдає сеадссассд асаасаассе ссасусеЕєссе 2520
Есодддсадда аєсгаадсда садеєдаааса дададсдєдуч адеєдадесс Есоодасаада 2580 асєддеЕддас сЕсСЕааєдадд аасадсеЕссе дссааєаадеЕ Єсаєєдавєс єдЕсСададе 2640 сЕєЄДдаваєсу асаєсєдсаєє ддЕСсададда Есгадсадса десссааєес єссадсадцьє 2700 ссЕССсСЕдЧєд дсЕсСусЕсас єсСсаадсссду адаєссаєбад сддсеЕсаєсс ддасаєсдаа 2760
Єсааасадса абадсаасаа ЕСЕєсддааса адсасеЕссаа дсаєаасадеі бгассдаадде 2820 чаєсєєстас адсссдадад аасдадеаас ддаєсеЕдедЕеЕ бааасудєсдЕ гаааададад 2880 аасеЕєдддаа Єдссаєсудає Єдддаассаа аасасададе сСассададад Єдсасадсес 2940 чаєаєассдд адааддадає ддаєєдеадс сссдсаєсад аасасддаада адаєдаєаас Зоо часааєдаад аадаасаєаа сддсЕсдаде сеЕддеЕвтасвд ЕЕЄСсСЕЕеСсСада адасессоаде З06о
Єгасаадаас содЕдЕСЕду гадесдеєвава дасосеЕсада дедедаєсєда єссаадедад 3120 басадаєєсє сааєсаааєсеє єдсададеес ссааадддеє гадедсасса сеЕгЕДдЕЧЯдтаєд 3180 гЕЕсЧдваєсддс єраєсуєєсу аааєєсаєсьс деЕдаааєсда аасасаєссуд гаааєссада 3240 ааагавеєсьс ссаєссаєса саааасасьс дадес 3275 «2105 164 «2115 2795 «2125 ДНК «213» Вгаввіса парив «4005 164
Зо Есссасдсес аддсєссаає Сдсаааааад даєсасбассеє сссеЕсСаєтаа аассаваассєс (216) сЕДЕДСЕЕда ЕсСЕСТаєсьє аддаадсесу бадсадеЕесєс ЕСЕДЧасадед ааєєєдаєда 120 аасааадааа ааааєдсеєда сеЕєддсссса дассссаасс ааасасасас асасасаєсаа 180 сссссаасдд асасаадсаа сдаддссаає деЕсдарссст ЕсЕСсааєсда ассаассьсс 240 аєссеЕсддсс даассаєсдс сеЕссададес сссссссдса аассаасдсес ссадссссдс Зоо сдсдассссеЕ Сссусссссс сссссасвудд ЕЄсСсеЕСасас ссаадсесдс сдЕСсСссссесс 3З6о
ЄЕгДдЕСЕСсСсСЕ дудЕєссассс ссоууодаасссс саддддаєсс Есдссудрсає сасдаєсаєс 420 дессЕЄсдЕсСс Єдааасудста сассаасдсд ааддссаадд ссдадасддс стассддбада 480 аадеЕєсєдда ддаасаєдає дсодсодсддсда сСсдасссасу аддаасдддс Ссасдссдсе 540 аачаєдеЕєдуд аєсааададас єссдаадаєд аасдадсссу асссссасдаа Сдаададевд 60 дЕсаадааса адссаасдда дсЕсСсуаєЄсає сдасдеЕСсаєд адддссєсеЕсс гададасаєєе 6бо агєЕєсеЕдна єдададседа єСсСЕєЧдсдада аассссдоддбса асасдсдесаа ссседадсесе 720 сасаадддаа ддссссасдс дссдадассс ассааададе агсасєсдаєда ддеЕсЕстаса 78о0 садсссадда Сддсссдсда сасддасасс даададсссс ссссодадда дааасссссс 840 бЕєсаєдсаєд адассадаса содсдбасдда адаасадссс бассссссад сСддаддадсео 900
ЄЕСЕСЕсСоОд99 СсСЕСЄСсССсСаєсє СодсдЕддЕС аадасодсссдд Єддаасаєаа дссаєсеєдсса 960 ачааєстаєад сеЕддеЕЕсаад сдєЕдоддЧаєсЕ дЕааєдсдеєд сододЕєдЕдоад дасааддеса 1020 бдадасссдаде Єдсададссе сееЕсдааддд сссеЕдДдсаєд сЕСЕДдсадеЕ сЕЕсдаєсад 1080 аєддодаддаа ЄЕсСЕСастас ЕдЕЧдаадсод дЕсСаєдасеіс ааддсдсадеі ссаєдадаєс 1140 сддсаєсьдс ааєддаадеє даддааєссс ассаасааєс Есасадессу дааєєєсс9дд 1200 дЧдЕСЯДасдасеі Єсдаддаєбас Есдддаєаас доасЕсдсЕса ссдасдаадс асгадссдсс 1260
ЕсоддеЕдсеЕва ассаєсссас ЕссЕССЕСас дЕЧДЧдєЄдаває ддадсодсодЕ даседсеєся 1320 гдсусСЕвЕссСс сСЕДЧСЕЕсУЧЄЕ Єдаадсесад дадсєдаєдда сєааадаєач дадсддводад 1380 агадеЕдссудє аєсаєссудсс ЕсЕсааєсьд даассддадоа ааддєддодоада Єаадесдесь 1440 асзчаддадЧчє ддадачаєду дадчеЕеєсодад деЕсдаєсьдс сдаєдаєдса дсЕсааддад 1500 сСЕДЕСЄЕааєдд ЕСсСааєсасеєє саєсдедадс саддссааєс сссасаєсоосєс СссУєєдсед 1560 сЯдЕЕсдааду асасадеЕсад адсеЕваєсддда ддеЕсдаєесд садсааадсо сддсдсаасес 1620 чдсоддачаєдд аадедаадса бадаєдеаає саадсасстад аасесдддсеЕ ЕссеЕссаада 1680 чаадеадсесє сасвраєсвєдс єсаадааєсудд дааддсдаєд ЕсасааєвдеЕ саєдссадсе 1740 асЕвеЕееєсьсС адсасесдаа даєсаєбасаа деЕсдасдаєе ЕсдЕСсСдадсе Есааааадсс 1800 (516) дссаассаад дчаадчадаєд сасссдоодад аадссаєсад ссасбсаааадс ааассдед4д99 1860 аєсдадсевд сояосЕєсЄЧдаєда деЕдЕдсаасі аассстгаасс аєаєдсденад дсеЕСсСаасада 1920 адсдсЕдада дадссудсеЕдс ЕдсЕдсЕддс асдеЕссєссе судєсеЕсаєса сдадаєсадсяе 1980
Есаасдасаа дасеєсааєдс ЕєСвадаада ассссуєсьс ддаасуєсає судстгададад 2040 аасеЕсаасьд дсесассудда сдассеєсдес ассдасадса асааєсааєаа ЕсЕССасдасд 2100 чададдаасс баадсдасад сдааасддад адсдсддада Єдадесссссд дасдаддасес 2160 чдаєддассдє Єдаєдадаас адсеЕссвдсс аасадудєєса седасеЕстує ссасодеЕсеє 2220 часдєддаса ЄЕдсдЕсЄдас аададддЕсЕ ассадсадсесс сеЕаасеЕсьсс адсоддеесся 2280 часссддЕва дЕССЯдадеЕсе гадессаада сСсдадаєссе ЕддсддсеЕса асссддададс 2340 чааєсєдаса ададддааад бадсаасаде Сссадеаває садссаседа аддеєдаєсьс 2400 сЕдсадсссд ададаасдад ЄавасудЕЕеЕсЕЕ ЧдФсЕсеЕдаасу ЕЄДдЕсадаад ададаасевд 2460 чадаєдссвд Єддадаасса дадсоддедад сеЕдссоуодада деЕдсасадає адасасассе 2520 чадчаддодада Єддаєсаасад сєсЕдЕссса ддасаєдаад аєдаєааєда Едаєсааєдає 2580 чаєдаадаад аадаасаєаа доаддсЕСсСЯдЕеЕЄ ссодудесєааад аєєсссодеЕсЕеЕ асаадаєєссяе 2640
Єдсадедсаа садаєсддсеса дасєдаєсьд аєссдадеЕда ададаєєсєсее дсесадсааа 2700 чаєсєЕєддад ЄЯЧЕЕсСЕадесд сЕЕсдсааає адсасаасса баддссдсаа дсааддедса 2760
ЄЧЕсСЧЯєЧває чдЕСЕЧдсадед астаєсдеЕєда аааєс 2795 «2105 165 «2115 2670 «2125 ДНК «213» Вгаспуродіцют дівБгаспуоп «4005 165 аєддаадаає ссододадаадс дадеассддда дсссссадда Ссдддссдєс дасдсессес (216) чдассдсддсд ЄсдсудсеЕсЄса саєдсссссд сссадсссдс сссддсдссЕ ссодддсоас9од 120 чдсдсдсдссд сеЕдеЕдеЕсЯосо саєдсдсадда дссасдссдс саасддесдс деЕсссоддсее 180 сассссадда асасссаєудд судєссссстдд асссеЕсдєбдс ЄсСЕССоЯдУуУЄЕ десеєссссад 240 аадсеєсеєссд дЕдсдсоаодЕС дсоадссддсЯяа ссддсдсдсс ддсоасбаддсс дедсаададс Зоо чдсдаєдсдсеЕ асодсддсдас деаєдадсад сдддсдсоасд ссдссаадді дсссдасада 3З6о аєдеЕСЕєдадс аддеєдаасда деЕСЕЧаєвєєвє сасдасдада адссдаєсаа дадсаддссс 420 чаддадсеєсс ддаддсодад ддаддааддда Ссдсессодда асдсддЕєдеЕс седсаєсдсдас 480
Зо часчаєсеєсд Едаддаасеє доддаасаєд Сдеааєссстд адсеЕссаєаа дддсаддсес 540 чаддеєдссса додсеЕдаєааа ачаєєссаєсс даєсдаддессс саасеєсадсе дааа9ааєдаєвд 60
ЕдеЕЧдааєстд асассдаєдс деЕсаєссссдд даададаадс СсСдссЕссдЕ ссаддааасс 6бо аддсаєдссе аєддададдас адсассассс ссаадсдддад дсдсессасс доддсессесес 720 саєдсаддєд Садсдаааас ассадесдад саєсаадсееєс гєдссеЕсддає аагсадсад9ад 78о0
Есгтадсчєєд дЕсССсСсаєсає агдсссааєє деЕєдстассс даасаєсдоасєсс єдачаєсвад 840 адсеЕєсьсєса садасесаєсе асаааєссвта садеЕсссєсу деЕаддаєаду ЕддаасеЕєее 900
ЧдсЕДдЕЧдЧасса аасодддеєсає дасеєсаєсддуді дсассссаєд асаєсадсса даєсдсааадд 960 сСЕсЕсдаддауд аєсссасаад Єаасесааса СЕсСсаададд сЕсасдаває аассддссде 1020 дЕЄєСсСЕєдоддд єсаседсесд сесесссада ааааасдадс сассеєсдссд ссеЕсаасстсас 1080 сеЕдасаєсас сасаєдеЕсдЕ баєсвєдодадеЕ дсеЕдЕаассд сеєсоосоаєЄос аєссссеєддас 1140 сЕСЕЄЕДдаауд сесаддааєє даєддсааад даєаддеЕєсд дссасаваде ЄсссеЕєссає 1200 дсдсссЕсЕЄ ссасадаєсс адаасаадді сссддадсає сааадсддсд асддадддас 1260 ччааадеЕєєдда адчаєддаєсе ассдаєдаєд саассааадч адеваєєссаа ЕдЕДЧДааєсає 1320 рЕсаєсуєса дссаадстаа ЕссЕсасаєс ссессасьсс Ессдааєдаа ддадаєседес 1380 ачаєссвтаєд дадодаєсдссЕ Єдсдддааад сссдсєсуаєс єсдсеЕЧдадає додваддеЕдаад 1440 баєсдаєдвна ассаадесеєсе адаадеєддс сеЕСССсастду даддасеЕвдс ааадеЕСдЧєте 1500 чдсЕСсСаддасе доаодадоддеЕда ЕдЕсасваєд дЕсаєсдссад саасадсадс Есадгтасевд 1560 аадзаєсаєсас аадаєссаас асаєдсадаа сеЕссаааєдуда сеЕдссааєса доадЕСааада 1620 бдсасдєддад адаадссссс адсдаєсада дсааасєсдеєд сааєєдаасе Едсаєєсддає 1680 чааєссаєвєд сододсЕсСсСсаа ссасааасчда аддссаадаа даадсасаад дадасадсадсе 1740
ЕсЕессссадуда аасасассад сааєдеєсда сеЕСсадаасас сааддаддаде асссесаєд 1800 адсЕдсаєса дЕсСЧдададаа Ессдєсадда СсеЕсессссад аадаєсасе гЕдсддесасе 1860 авеєеєсаєсса деЕсассааду басбасасдда деЕсдаєддсуд сассааасає дессесаєсає 1920 дЕєЄСсСдЕСсСаса дЕсСсасасда Єддаадедад адсдааєссад ааассаєєда ссгаааєєсса 1980 бддассадда деЕддеЕдддес ЕсЕааєдадд асеЕссаєсад сЕдаєсадеє саєсадеесе 2040 аєссадааєс Єсдадаєєда аєсєдадеес дасадуддеЕєс деассасада ддаєдасаає 2100 асаддвеаєес сассаддаєс басарсесса ааадаєссає асссааасає гадесеЕсСтада 2160 дЕсасрасас садасадаєд сасадаадьс сссдааасад адесдеЕдсаа сдссуддсаас 2220 (516) асаадсаєса сеЕдеЕсЕеЕсСеЕда адчачдаєсьд срасаассєд ададдастас сассодааєє 2280 сеасєсааєе Есудссадаад адаадаєссд ссгддЕСсСадс асаасадеєда сдсеЕдасаєд 2340 зов ассдааадсе ссегадссда адсагаєдед дасасаєсас аєсєддааєс ЕсЧдєсдаєдсс 2400 аєсеЕсадссе сеЕдасадеЕсєс Єдааддсаас ааадасдсад сеЕдасссада дааєсеЕсевдд 2460 дЕсЕСЕСсСаєд садаєсеєсадеЕ аасеЕссудсає сааєсеЕссад Еєдаєдаєаа саааддеддс 2520 бадаєєєєда аадаавссеєе еєсадеддсес дссаадессда ЕдсЕдсасад даааааседе 2580 азєдеЕСЕссЯ ЕЕсССсСдЕдадс астассдсвуд деадсасадеЕ даасаєсдсба сеЕседбрасса 2640 чаєасеааає аааєрседаєсе дсеЕєсдссаєвєє 2670 «210» 166 «211» 3884 «212» ДНК «2135 Штучна послідовність «220» «223» Роршіцв Егіспосагра «400» 166
ЧЕЕЕССЕвЕеЕС ссссаєссодс, сЕЄсдассдс аааадесаає дссададсса Ссасссссес (216) сЕєдсЕСВяає сЕЕсасуєаа ссуабаєднає асссеЕвраєсь ЕєСЕссСсааса ЄЕссСссаада 120 сЕССЯдаєсст дсасеЕсаєву ваєссасесс асссеЕссьсс ЕСЕСЕСЕссЄ Єсссдаасда 180 ааасааадес Єсаассеєвсс асєсеЕсьдеЕс соосссааадеі сеЕдеасарсс ЕсСсасееєся 240 счазеЕеЕдадЕ ЕССЕЕССЕвЧУ ааеЕсеЕдаєєе сеЕгоддУєєсу асЕсеЕдЧеЕЄЕсЄ сєсаадеддває Зоо аєсдстаєсвс аєєсодоаєддЕ дчасаєсддада сссЕсСЕсСЧУЄЄ адсеЕседсає асєдсеЕсес 3З6о чадаєддаєд бадеЕСсЕСсЕСсЕ адоддУЧчєєста додЕСсСЕдУЧЄЕ аєєсдаааась сагаєддсаа 420 дачдЕЕдоЯсСЕЕС сддсааєстсд дасєсаєаад асєссЕдЕеЕсеЕє єСЕсЧдсеДдас асадсасадда 480 аєсааааддд ЕЕдчдавсесе дсрасеЕвдеЕсС аасассеєєсьт гавєсвдеЕда гадстадесс 540 гЕЄсеЕдсаєвта ддааєсддсава ЕСсСЕЄраврєссс аєстасессса ЕСЕДЕСЕСЕСЕ асасаєсвдсс 60 аєссваєссу даоадададаса даєєсєсааєту СЕСраєсуєс сеЕсСЄСсСаєєс єсаєстєадаає 6бо сааадессссд асасасаасс сссссасаає єдеЕдЧдаааєєє даєєсствад єдассаєста 720
ЕЕЧдеЕадсеЯЕ ЄЕСасасесу ЕсЕеЕСсСУдєЄЕСсСаа дссааєсстд ЕєдЕсадасе Едадасаааа 78о0 чааддссссд сЕЄссааєста садассассс ссссочєссссд дЕсссадсса адасаєсоддвдає 840 аєаадсааєд аддссадедеЕ єдасссеЕсєеєс ааааєсуддас сеЕєсаєсдає саєєддсадд 900
Зо асааєсдсеЕс єсададесссе дЯдеЕєСсСсудсЄсааа Ссаасстсас асеєдаддааса ааааваєссте 960 саєдеЕдЧеЕвдЕ Едааєсасає єсасададее доаєдааєеєсд єддсодсстає деЕсаєсає9 1020 вЕєЄСсаєссаа ддааєсєссаса адддасаєьд дссаєдаєда сдаєааєтдс аєсеєстаєвд 1080 ааавдаєаєд сддааєудєсєєаа асеєдадддсес дааасадсде аєаддаддаа асеЕседдад 1140 аасасдаєда даассдсуєЕ дасаєсасдад дадеЕддеЕесс аєдседстеаа аагдсевєдає 1200 ааачадассс сааадаєдса Єдааєдедає сеЕСтаєдаєд аадаассаде саддаасаад 1260 сЕєсаададс Ессассассуд Есдссаадад ддаєдЕСЕса дадараєаасє сеЕсесевавд 1320 ачадссдаєс ЄЕдЕаадааа ЕСЕСОдЕаає аєдеЕдєаасс сеєдадсеєса саадддеадд 1380 сЕєсаадедс ссаадсесає аааддаасає асєдасдадд ЕСсСЕСяассса дЕсаадааєд 1440 чдЕсЕдеЕДдасеі ссдаєсеєсада ддадсеЕессдд сЕддаадааа адсеЕсєдсеЕве саєдсаєдаа 1500 асдадасаєд сЕсеЕсоддад аасадсеЕсьу сеЕсссдадесд даддаєдсеЕсс асеЕсодадсд 1560 гЕЕєЄСаєдедЯа дЕДдЕдУдєЄсаа аасассддед дадсасаадс Еваєдссссу аагааєседсяе 1620
ЧдаєЕСвадед ЄддоадЕСаає гаєдеЕдеЕсса дЕсСдсЕдсса ссадаєсуєд дссададсед 1680 саааадаеЕсєесеЕ Есдаддаєєс седдсасесу ЕСЕСЯДЕЕЕЕ ЕсЧдассааєє додеЕддаастєс 1740 бЕсасадеєд Єдаададудде саєдадасаа ддадсеЕдеЕсєс аєдаааєссу дсадеЕсдсаа 1800
ЄддаєдеЕсаа дасаєсстас аадсааєсьс асаєсеєсаад аадсеєвтаєда саєдаседае 1860 сдааєєсьсу ддаєсасаде ЕЄєдсЕеЕСассЄ аддаадсаєд адссссстад асдсесеєтаає 1920 бассеЕвасьс ссссесаєдеє ЕдЕеЕсасаєуд адсдсадеса сЕдсесЕесСЕсу гЕдссеЕСЕСссЕ 1980 ддссСЕБЕсд аадсссадда асеааєсддса ааддасадаа деЕддддаасеЕ ЕдЕДЯДССЕЄВає 2040 сасссасссе Есааєстєдда єссЕдаадаа ддаєсєдаєд сасстаєдсоа саддєддад 2100 чаєддбєадсс Єоддадасєєда ЕсСсассааєд асасааєсєда аддаассасє сааєсдессаає 2160 саєеєсєваєсуд єаадеЕсаадс дааєссссас асеєдсессає ЕдЕсЧдадасоі дааддаєаєва 2220 чЧЕсадддсає аєдоддодадеад сЕЕєдсеЕдсс аадсеседсес аєсеЕсдседа даєддадаєа 2280 ааасаєбадає дсааєсєсаддЕеЕ аседдаасеє ЯдЕсЕеЕсссає саддєддасе Єдссаадсесе 2340
КЄЕєдсЕСсаад аасоддаада ЄдаєдеЕвасе деЕсСоостаєдс сеєдссасасе сдсєссадсас 2400
Єсаааааєвта сЕсаааассс аааєсассвд дадссєсааа аддсаєсааа ссааддсада 2460 аддеЕдсасає доаодадаадсеЕ ЕссСЕєдссава ааадсеаасє деЕддсаєєда дсердсеесссе 2520 чаєчадеЕдеЕд ЄЕсСсСЕСудсЕсСЕ даассасаєд суєбадасеса аааддадедс Едадададсе 2580 дсЕдсЕдсЕЄ сеЕСсаєсдддсса адсаадсессї дсдадсасає Єдадаєстад ЕдссЕсаааа 2640 (516) адааєєссєс сеЕсодааєсу саєсдсаада даааасссаа саддсесасе єдаадаадас 2700 гЕССЕвдсСвЧд агЕдеЕсддсеЕсс аасаєєсєссає сааддадеЕєд чдЕДдЕДДЧ9дсЕду аддаасьєссяе 2760 зо9 асєддбЕадда аєсеЕдадаас асаасдсаас сгасаєсаєд аєддаадеда гадесдааєсе 2820 чааадедсад аєсеЕдааєєс Есоддасаада Сссддсдуддс сЕЄєДдаєдад дасесдсеєся 2880 дсаааєааде Ссаєсдасеє єдеЕссааадеі сеЕддаєдеЕвд аєеєсеЕдадсс ааддаааддс 2940 гЕСаєддсес аєсссаасеіс дссєддоддесє садаєддадад дсадддаєсс асасааєсад Зоо аєсєЕсаадад Єдасаасссс адасадааає Ссадааадсуд адсеєсдаєса дададаєсеє З06о адсаасадаа аєсссаседу ЕддЕЕСсСвадс аєсасадеса ссдааддада ЕсЕСЕсдсад 3120 ссеЕдааадаа Ессаєаасуд ЧФЕЕсЧЕдссдд аагаєєдеаа адааадаада ЄЕєддсасає 3180 сссааєгадда Ессаєдаєєє ддадааєтас аагадеєдаад ЕсСсСсЕДааєд ЄдДдЕЄСВаДдСсСЕе 3240 чаєєдеЕссьдд ааааддасає ддаєдсвадс ссадааєсдуч асраєдсьдс ададдаадасєс 300 часеЕссссвуд саасадаєсс ссгдсаєааа єсадссеєсса сЕСЕєЄДдаєса сасадаєдає 3360
ЕсеЕдЕСЯЄЕесС аєдасаєєса ддадаадсає деЕСЧсоодаєд дЕсВгасевсу адеЕсеЕсьсся 3420 чдсаєсаседеЕ ассаааасгає єдоддеЕддадеі Єдаєссссодуд дЕсаседеса ассаааддее 3480
ЕссдасеЕсєеєс судєсасаасе ддадеаєсає адасдадасєе гадааєстдеЕ Еравєєсвсеса 3540 гЕсЕааааає арсеЕсеЕдааа ааааєсьеєсцча СЕсСтаєсьєзуч аєсерасьсь вдесеЕсааає З6о0
Саавасєєсєєс седосочєєЕсеЕ єсасаєтаєєс сеЕЧдасасдуєє дасаєєаааа асааасеЕсеє З6бо аасаєсааєс аєссааєсад асасаєєсьс аадесааааса адасадеЕесуд аааадсааєс 3720 чддаасеЕєєсєва аааддеЕсдсеЕ сеЕгадсадед аасраєаааа аасааєсдаа адсааєссд 3780 садсдеЕсаду ссасєЕдсвдЕ ЄдеЕааасеаа ЕСЕєдЕдсдс асастаєдса асааєєдесаа 3840
Ессасаєдсе сСадаєсессад ссаасдадає ддааєєвєдас ссес 3884 «2105 167 «211» 2490 «212» ДНК «213» Медісадо Єкипсаєчіа «4005 167 аєддаєсдеєа Єаадеааєда адссассдсс дассЕссссс саассддесс сссаддаасяо (216) сЕсдсссдаа саассдсасс сададсессеєс єссгЕдсааає ссареєссаса Ессааддатає 120 сааєсаєесе ЕаасеЕстаєєе сдасєсУєсеЕ саєгадаєеєса дааааєсєсьд додасссаєтєе 180 аєаєсаєссяє Єдсаєссааа ааасссосаа дддасаєссад ссаєссаєсас сасєссєссддсес 240
Зо ЕсСсСЕєдДеЕсаа аасдеЕсасад СааєсдеЕсааа деаададссд аастсадсаєа саддадаааа Зоо гЕЄєєоддадаа асаєдаєдад аєсадсесссд асссасдада адсдддссса Єдсадссаад 3З6о аєдсеЕєдаєа аададасдас аєєсдаадасо аєчааєдаає ссчасєєєсса саваєдсадаа 420
ЕєдЧдеєсадда аєааддеєєса ададеЕсасда сассдасбадас аададдддіс ссесададає 480 арсаєсЕєс дегаєдададс ЕдаєсєЕєдеЕс адаааєстад деаасаєддед гаасссесад 540 сЕєСабааад дсаддсеєєса Едсдссдада садаєсаадуа адсасаєсда Сдадчадвеєдасд 60 аєдсадеЕєдча дааєдЧаєєвд єсаєєстсдає сссдааддадс ССЕсСсСЕссоода адаааадсесес 6бо дсЕЄєЄсСаєдс аєдааастад асасоасдЯяссс доаоададдасодд СЕССЯєссЯЄс дадсодсоадеі 720 чдсЕЄсСЕСЕвЧд дадсеЕсєеєса єдЕСОДдДсдса дссСаааасся сддсддааса Сааасесаєд 78о0 ссдаддасаа СЕсСССдДдЕссС дадсдсадда СссаєстаєрдеЕ дсеєСТтаєвдеЕ єдстастад 840
ЄсСеЕЕддсесвдуд адсеЕссааадч СЕЕСЄЕСсСедаа дасеЕсуєєдс асессдеЕсаса ЯссЕСЕСєДЧає 900 сааасдддаєд ддасссссас дассдеЕсаад адддеєсасаа саєрєєстддеєдс адессаєдвад 960 аєсадасаде Єдсадаєтає дсеЕдаддсає сеаасудадса аєсеЕсасавєе єсаадаадсе 1020 басдасаєда саддєсдадеЕ ЕСЕєдддаєс асадесесдсе ссссааддаа дсаєсдаассд 1080 ссгадаєдес Есаассасьє дасееєсассс саєдеЕєдеЕса гаєддадесдс адеЕсасадсе 1140
ЄСсСЕЕуєдсесеЕ СЕСССоОДдДЕСЕ ЕСсЕсддадудесЄ садааасєда Єддсааадда гадаадедвда 1200 чачаєєдеЕеєс сеЕсассаєсс Ессаєєтєаає сСЕЧДоддЕССвд аададддеЕєс сссасаадед 1260 сддсЯдЕсдда доадаєдудасад сеЕєддадаєс даєстасста єдаєдсадес дааадааєвд 1320 бЕСсааєдеЕса аєсасестає єдеЕсадесад дссааєссяєс аваєєсдсодсс астаєсдада 1380
Єбаааадаає ЄЕдЕасдадс Есаєддадуає ааврсеЕсудсьд ссаадсєддс Есаєседчдса 1440 чачаєддадуд Ссааасаєсу асдсааєсаа агассоддаас ЄсОЯДдДЕЕСЕСсСсС асеаддаедва 1500 сЕєдссаадс ЕДЕСсСЕдсЕєСсСа ддаседддаа даєдаєдеда садееЕдеЕсає дссеЕдсвасе 1560 сЕєдсЕСадеЕ асеЕсааааає баєссадаас ссЕєсЕваєд єддадсесса дааддсадсе 1620 аассааддда даадаєдсас Есдоддадаад сЕсСЕСсСадсса Ебааадсааа ЕсЯоєсодаасяе 1680 чадсЕєдсеЕс ЄЕЯДаєдадед ЕдДдЕєдсааєс сеЕСааєсаєа Єдадаадасе саааадааде 1740 дссдадчадад сеЕдссЕСЕдс ЕсСсСЕєСсСарудудє сЕСЕСтадса седеЕСааасє гадсосеєсса 1800 ааагвгдааєес саєссаєддаа ЄдеЕсаєсдсу сдададааєє срасаддаєс ссеЕгдаадас 1860 гЕЄСсСЕсдсад асассдседс Ессаєесесає сасуддуддеЕса деадеєссад Еддадссасд 1920 ддбаааааєс ссаадсасса ссдсадсаєд саєдаєдеаа деЕдасадеда асссддаааде 1980 чдсЕдааєєда агассеЕддас садаєсьдуає дудаєсєссЕсеЕда Едадааседс ЕЕСдодсадає 2040 (516) аєдеЕєсассу ассеєсооєсса ааасеєсадаа деЕсСдаєбассд аассааасад аддаасододва 2100 асєаавесєва дсссссдеЕда Ессссадсає сасадессса даєєаасаас ассддаєбада 2160 бдсеЕсСсдада асссадаасс сдаєсадада дааааєддса асааддеєєдЕ саєдааєдодва 2220
Есбадсаєаа ЄддеЕааседа аддеєдаєсьс сеЕдсадссвд ададааєсса Еааєсддааєсе 2280 дЕДЕєсааєд ЄЕдЕСаадаа адаадассва асассеЕссаа деЕаддадеса Едаєтаєдає 2340 адєЕдаааєєд сЕдадеЕдесеЕ ссаааєєдаа сдсссадоода аддадаєдда Едаєдседсе 2400 адсЕСсадсес садаааасудуд адаєдасдає сссдсаасад сеаддссссє ааседаааса 2460 ссадасеєсса ассстасада Єааєессьда 2490 «210» 168 «2115» 2783 «2125 ДНК «213» біусіпе шах «400» 168 аєддаєсаєа єсадеааєда ддссадесдсс дассЯссссс саассоддеЕсс єсседдсасєєс (216) сЕєддЕадда саасеЕдсееєс садддеЕсссеЕ ЕсеЕсдсааде ссаєссссаса СЄЕсгаддсас 120 сасасасєєса єЕсСосУєсЕЧЕЄ адасєсєсеЕєсс гаєаддеєєса дсдоададасЕС ддсаєссссєтес 180 аєаєсаєдудє Єдсаєсссад даасссосаа доаодасаєссда саасдаєдас аассдессдсе 240 гЕСЕєЧдеЕєда аасдаєсасас аааєдсдааа Ссаадддсед аааєддсавта гаддаддаад Зоо гЕЄєєоддадаа асаєдаєдад аадесдссссдд асссаєсдада адсдддссса Єдсадссаад 3З6о аєдсеЕєдаєа аададасаас ааачаєдааєс даассадасс сссаєсєдаєсдаєс ддааєссоадаєд 420 аддаасаадс ЕЕЄСсСаададсе ссдссассує сдасаачадуд даєсссеЕсод адасаєагааєд 480
ЕСЕ ваєдс деЕдссудаєсь гаєсадааає сСегаддеааса ЕдеЕдсаассс Едаассасас 540 аадддєаддс ЄєЄсаддедсс баааєсааєс ааддадсаса сСсдаєсдаадс аасдасссаа 60
ЕЕєЧдЧадааєдуа ЄСЕЧдЧЕЧСЧаєєс єдаєєсадад дадсстаєсає сддаадаааа дсссдсеЕсес 6бо аєдсаєдааа сеаддсаєдс аєсєдодада ассдсеЕссоас, Єдесаадчсод дадесдссесе 720 сЕєЧдДдадсесеЕ сссаєдеЕдоад Едсадссааа асасерддсбад аасасааасе саєдсстадд 78о0 аєааєєдсед деЕєЄСсаадеЕдЕ додаєссаєс асосодєсдсессд ссдЯдссдссас саддасес99 840 сседадсссс ададсссссс соаддаєєса гєддсасесає єдсаарєєє єдаєсааваєд 900
ЧаєЧдоадЧдавєєє єєдсадесєдеЕ єаадададсс асаасаєссддд дсдссдссса сСдадаєсада 960 садеЕсєдсааа Едаєдесєдад дсаєсьрааса адсаассеєса саєсеєсаада адсеЕсаєдас 1020
Зо аєдасаддса дааєсссвєдуа даєсаседеЕс сосЕсСсссаа ддаадсаєда ассдсесстада 1080
ЄдЕСЕсаасеі асеседасесс ассссаєдєуд дЕсСасаєдда деЕдсадеаас сдссеЕсСеєде 1140 дссСЕвЄЕсСсвд дссЕсЕсСеда ддсєсаадаа сСЕДдаєсддсаа аддаєадаач Еддададацсєєе 1200 дЕЄСсСсЕвасс ассссссеЕсе єаасеЕсаддс сссдаададд дсеЕссасасс адедсдссде 1260 бддадодаєд деЕадсЕеЕсдда даєєдаєста сссаєдаєдс адсеєдааада асстаєсесаає 1320 дЕСсааєсаєєсє свасадссад єсаддссаас ссссагаєсд сассасстаєсє дадаєсдааа 1380 чааєеєєдеЕдс ддасеваєдуа дддсаасеЕес дссдссаадс ЕєдсЕСаєст ЕдЕЯддадаєд 1440 чаддєдааас агаддеЕдеЕса Есааасасьд даасестЕдуєеЕ єЕєсСсаєсад Еддасеєдсе 1500 ааавЕєдеЕєвд сЕСяадассд ддааддеЕдає деЕдасеЕдеєсд Еваврєсєсссдсес аасесевдсе 1560 садеасасса аааєстасбаса даассссеєсе гаєддададс Ессааааддс адссаассаа 1620 чдададаачає деассеєддда дааассєсса дссасаааад саааєєдеда саєсдадсеє 1680 дсЕСЕєЄЧаєд адсдєсдсєєдеЕ даєеєсссаає сагаєдадаа дассааадад аасеєдсеєдад 1740 ачдадсЕдсьс сеЕдссЕСЕСа гдЧєЕсудсЄсс адсаседеса ддєЕсадедс Ессааааада 1800 авєссеЕєсЧдє ддааєсеЕдсає Едсасдадад аасеєсдассу дсЕсссеЕвда ддассетасе 1860 чаєдеЕєдссеЕ ссессаєсудса Есааддсаєс додсадеЕссса дсададссаа Еддсаааасье 1920 бддаадассс ассодсддсає асаєдаєдда адсдасадесд асєсєдааач єдДдеЕсЯЧаєсьд 1980 савесеЕсдда саадаасєдд сдддссЕсЕЕсуд аєдадааста ссЕСсадсааа саєдеЕссаЧчьсе 2040 чаєвєвєеєсьсс аааасеЕсада ддаєєдавасдуд даєсстааса ааддсеЕсадеі дадессасасе 2100 аєссаєааєд аєсеЕссадса саєадсссс аддсссасаа сасврадаєад даасеЕстьдає 2160 адсасадаає сеЕдадссаад ддаааседдс аасадуддеЕєд Есааєдеєдеєс садсасбасьє 2220 дЕдассдаад деЕдасєссєсеЕ дсадссеєдаа аддаєссаса аєддачастдеЕ дсЕЕесСааєдес 2280
ЧдЕсаадааад аадасеЕсдеєс асссеЕсаадс адсадсадес агддеЕсеЕсда аааєсасаас 2340 аєєдаадевд сЕдааєдедЕ ссаадаєдад сЄдсссадоудда аддадаєсада Едссдстгадс 2400
Есеєдсаєсьд аасасудада Єдаєдаадаа Сссаєдссад ссаддеЕсссЕ аассдасаєд 2460 ссадаєсаса асессаєєда єсаєсаєесу ддсасадаєе сдодадеаєдда Єсааадсаєє 2520 дЕЄєЄДЦасадеЕс адсодссаадеЕ ассадзеЕссеЕс сеЕССадсдас ассєсаарає єсеЕдЕСсССТа 2580
ЄЕдсссеЕсса басеЕднааає адсасеєсаєс сгадассєду ададздеЕСЕсСЕ асеЕсаєдаєяе 2640 бЕдаєдддаа бадсссасса асеЕсддеЕсєвд сеЕСасаааєд Єаасааадає ааададеЕстд 2700 басасаєааа ЄЕСсСсасдаса асаєєдасає єссеЕгдуєвта ссасеЕєсеса даєдааєсдаа 2760 агддадасає дядсЕсеЕСсава ас 2783 60 «210» 169
«2115 2724 «2125 ДНК «213» вогодпит рісої1ог «4005 169 асдчаєсдаса Есдссадсда додсдссоддЕд доддсоаєссу ссаєсддесс деЕссасдддасд (216) седддссдсд ссдассдсодсо ссдддедсвд сеЕСЕдсудсЕ ссдсддсдсд ссгдсддсас 120 сдссгддссд сддсдссссд сдссдсудсрд сссудссдсдд сддсдсддсеЕ дсасссдсдас 180 часаасасдс дсодддаєссеЕ дсеЕСдссддєсс сдсдссдаєссд сдасссссдсо дсодддссда 240 сдсддсаддд ссдддссдсд ддадсдадддеєд садсссдссо ассдссдсаа ДдЕсСсддс9а Зоо аасаєдаєдс дсдссодсдсЕ сасссасдад дадсдоддсдс асдсддсоасда даєсдсеєддвад 3З6о сдсдаддадссу ссссдсдссу содссадсдас дссдассесо асдасдадда дсЕсдЕСссдс 420 ааєаадсеєсс дсдадсеєсад дсассддсдс сасдаддадає сдсссаддада сарсусеєс 480
Едсаєдсдсуд содасседсе саддаасссс ддсаасасдс дсаассссда ассдсасааа 540 чададдсеєдс аддеєдсссад асеєсасааад даасасаєсдд аддаадсаєс басссаасод 60 аавгаєдаєсс деЕДдасгєссда СЕСадаєдад СЕдссЕСССс9Уд аададааасс содсаєєсаєд 6бо саєсєдадасаа ддсасдсссс сддсадааса дссеЕсдседс гаадесдодадда єдсееєсаєвд 720 дчдаєссеЕсеєс аєдеЕддЧєдеЕ ЄДЕєЄаааасс сСсоодсададс асбсааассссс дссааддаєса 78о0 агЕєвсєєсаддає саадеЕдеЕєду сеЕСЧаєсааєдд Сдссссасад Садсаасаад ассаєсддесе 840 чадсеєддада дсЕсЄЕсесеєда ададеддсає ссссдааасє єссессдаєса дчасоавдвасова 900 ассЕсєссстд єддессаааач аарссєдасу сааддсудсєссд ЄсСсаєдаває ааддсасеєвд 960 саддЕдсЕесЕ Едадааассяє бассадсаає Есдасаєеєсєс аадаадсста Єдасаєдасе 1020 чдаєсддавєеєс ЄЕДдДЕсЧдєЄсас соаєдЕдДЕеЕссс ссааддаадс аєдадссдсс Есдаєдсста 1080 аастаєеєсаа сассассеса ЕДЕЄСЕваєс соодадеЕдсад Єаасадсесс ссддсдсеєее 1140 ссеЕддасьсеЕ Есдаддссса адааєєдаєд дсаааадаєа дарсеЕддесєса аассаєессяе 1200 сЕССаєдсес сасєсеЕсасе аддсасадаа даасдаассд ЕєдсЕсСсаас ссодассдстс9д 1260 ачачаєддда дссгадааад сдаєєссассс асдаадсаає Едааддаасе аєссааєдед 1320 ааєсаєесєса садегаадсса адссааєсссї сасасадсеєс сдсЕдЕеЕсЄдад асгаааддаа 1380 аєсдєсаддд сЕсаєсддаду садсеЕєссдсе дссаадсесєд сеєдаасеєвдс Едадаєддаа 1440 дЕсааасава доаєсдсааєса адзеЕсеЕсоддаа сЕсддасесс сЕСваддаду асгадстааа 1500
Зо сгаєєсєдсес аадасєдода аддсчдаєдеЕс асадсеєдеЕса Єдссадссас єЕСЕсСдсодсад 1560 баєєссаада Єдарасадаа сссаєсьєсає дссдадсесс адааддседс дааєсаадче 1620 аддадаєдса сЕсдддаааа дсраєсадсс аєсадддсаа аєєдеЕдстає Едадсесєдса 1680 сЕддаєдаає деЕдсЕдсссЕ ссеЕдаассас сЕдсдЕаддс бааададдад Едсадааада 1740 чдсаєссдсає содсааддаєса ЕддЕссадса аєсаддєеєся дсссаєстад даддаєсесса 1800
ЄссеЕддааєс Ссасадсаад адааааєсса ассодеЕссєс Єєдаадаада аагдсстаса 1860
ЄсеЕссеЕсаад дасссддаду адеЕсєдседда асаєстасса дааассадва ЕссЕСадада 1920 адеЕдсасаєд ададсадсда садеєдааєсєї дададеаєєсд аєсвасасесс Есоддасаада 1980 адєЕддЕддсс сЕСЕсаєдадд дасаасссіса дссааєсааає Єсаєсадссе ЕдЕсСадаає 2040 сЕєдадаєсу асасадааєс садаасааєсе ссаєсдаддуд аадасаєаас ЄдаєсеЕєдЧед 2100 асассаааєд седдсасссє ддсадсесає дсадсдадса дадаадсаає сдасаддадс 2160
Єгддасааєс садссесада баєссаєдає ассадеассс сеадаєсддас асеЕсддссся 2220
Єсаасаадна ЄЕЯДЕЯдДУЧЄЕссС ЕдааддеЕдас сЕдДдЕсддсадс сЕдаааадає ЕдааааєдаЧе 2280 аг дЧЕєЄва аєдеЕсдєсаад даддадавасеі сеЕдсЕСЯддудє сеЕадсадедда адеедадесь 2340 сааддаєссс сссдуддаасс адаєдеЕсдаа асадсасада сддадедссеє ЄдаєдоасЧчед 2400
Єссасеєсвуд аєдаєдаєда Єдасааддаа сгбаааєдсса ЄєдЧдаєдаєда аддаастаде 2460 сссаєдадса даааєааєсяє асаасаєсад дддЕссЕсас Еддаадаааа аєсаєассає 2520 сессЕСЕссСсЕ гаааєссвєда адасдадаса аасасаааса аассадаадс Єдсаєсдаєтєє 2580
ЕеЕєдавасає дегасадаврає дсаєссуддса Єссаєстадсс бассєдаадд дЕсСсЕСсСадаа 2640 аадасадаас Єддааасаас ааадаєєссє даєдасааєє садсеєдеЕває дааєсдаєдаа 2700 дЕєдссесад дЕдсЕддсаа ссаа 2724 «2105 170 «2115» 2985 «2125 ДНК «213» йеа шаув «4005 170 сасссссссєс сссссссссс ссссссааєє єсоддддсее гарєссесьс сссссасдсс (216)
Еєдсаєсеєєс єєЧЧаєдсЧавє дсодєсссдас сСсдааддсада сассдодаддс дсдссастсда 120 сЕсадсссдос дасссссада сСссдсаассс гдсудседсеЕсС аасессдарьєс сеЕерадеес 180 (516) чдчдагєсдодадс адсадсадду СЕєСоЯОдсдоас даєдасеЕсда Єсдаєсасдаа ЕЄДДддоачЧчасьєе 240 сСЕсСЯдсСсЯссс дсодссссссс ссоасаєсдддсес дсгдаадддс ссадсссдад асгсадаасаа Зоо
ЕЕСООЧЕСЕЄ ЗОДУУЄСсСЕЕСЕ сЕсСсСЕЕСвас гассдседудє саадессаса даааєсдсвд 3З6о
ЧдсЕССсСЯдєдУдє ссааєддасо адессдддда адсдадсдсс ддссссссса ддаєссдадддес 420 чЧЕСЧасодсвд сЕдддссоасоя дадЕддсЯЄс ссодсдсбдссс сеЕсСЕссадсес сдсєдсд9асд 480 ссідсдддсд сдсдсдбасд сддссаєсєс дсдсдсдсдс адсдсддсдс сдссоадесдас 540 часЧдєсСсрдд седсассоса ддаасадсса соддсдЕСсСссс сссаєддсса гдсессссо9ас 60 ссЕсссссодд аддааасссо сддссдсдсд деЕсдсдддсд дсдсеЕсдсдс дссоддсдсад 6бо чдсадсасдад ааддссаєдс єдсаєдссдд дасдсасдад дсЕссдддсдс дсдссдссаа 720
ЧдаєдсЕСЧдас аачдчаєдеЕсьд адсаддеєсса сдаддсддає ссссасдасу аддадсессає 78о0 саддаасадд сссдаддаас Сссддадасуд дадоададдас доддеЕсдсесс доадасагс дае 840 дЕЕСЕєДДваєд соосддсдаєс сСЕЧссаддаа сЕєЧддддаас асдедсаасс сеЕдаасссса 900 саадддсадд ссададдесєс ссаадсеєсає аааддадсас ассдаададд СССсСсСтассса 960 асєаадааєд дЕдЕдсдаає сєдасассда сдадесєдсвд Еєддаадада аасеседссья 1020 бдЕессаддад ассаддсаєд ссЕсєсдоадад дасадсдсса сЕСЕсаадед дадоддЕдссес 1080 асєЕсдддЕСсеЕ ЕЕССаєдЧЕад дсдсадеЕдаа аасаєсєдуєе дадсаєаадс ЕсСссдссесд 1140 чаєстаєадса ддаєсаадсу ЕсСодДдДЕсЄССсСає сасасдуєєсу аєсудеєєдсса сссдегасаєд 1200 дссЕдадаєє дададссеєсеЕ Есасадасес аєсасадасс ЕєдсадеЕвсе Есдасаддає 1260 чадсддааєє ЄЕсЧдсадеда ЕдаддсудєдЕ сассасеєває ддеЕдсаседс асдасаєсад 1320 ссадаєдсаа аддсЕсЕеЕсда дддаєсьсас аадеаасеса асаєєсеєсаад аддсеЕсаєда 1380 саєдассодддс сдєЕдЕЄСЄвдд ддаєсассЯє ЕсдсЕСсСЕсСсСЕ адааааааєд адссассссд 1440 сеЕдссЕСсСаас бассеєдасудд сассасаєдЕ ЕДЕсСаєєсду адедсадсаа ссуссесевд 1500 бдсаєєеєссе доаодсеЕссеЕсуд аадсесадда ассдаєддса ааддаєадде Есдддсаасає 1560 сдбЕСсСссвсс саєдсассся Есдссасада Ессєдаасаа ддЕССсСсддад саєсдаадсд 1620 саддєддада дасдддадсеЕ єддадаєдда Есгасссаєд асдадасева аддадеЕвдвке 1680 бааєдеааас сасессаєсдд єдадссааас сСаасссєсас авсеєсессас Ессесссодає 1740 чааададсесє дЕсСададссе асоддадддсд сЕЕсдссоода аадсевдссс дсссвдсвєда 1800 ааєддадЧдЕє аадгаєсудає дсаассааає сссададаєс ддЕсЕЕсСсаа Еддодаддасе 1860 бдсааааєєд ЄЕсддсссадуа аєєдодададад ЄдаєдеЕдасс аєддеЕваєдс садсаасасе 1920 бдсеЕСсадбрас ЄЕдаадаєса Ессадааєсс аасасасусу дадсєссааа Єддседссаа 1980 ссааддссдс аддсдсасаєсє дддадаадсе сессдсааєс ададсдаасе дсдссаєєда 2040
Зо асеЕєдсасес дасдааєссса бадсудеЕссс ааассасааа суддаддссаа аасдаадсає 2100 чдачаддасуд дсоддсоддсЕЄє содсадддсса ссссаасстає дсссдассса адассссдад 2160 чадчдаєассд Єсаєддадсесс дсаєсадессуд ададаасесеЕ ЕєддадеЕссс ЕСЕСддаада 2220 чаєсєсвдсд ЯдЕсЯдсЕДдДсСЕЕ судєссаєдса дсааддсусеЕ дсЕсСЕБдЕеЕсд Есуддсдсасе 2280 ассаасдасє сЕсЕСЕСадс аєдеЕссдддсд садесєсссає дасодддаачесд ададеЕдадес 2340 адааассаєєсє дасссєааєсе сседдассад дчадсодаддд ссеЕСЕааєда ддасадсдеЕс 2400 сдссдасаду Ессаєсадеє єсаєссаєаа саєєдадаєе дасасадаає сСаадсаддесс 2460 сЕДдЕЯдДСсСЕЯЧсд даадудаєдаєд седсаддрає єсеЕдеЕсадаа Есвассьссс сааасудесс 2520 асдассдаас аасадсссаа дЕдЕсадсає дссаддбада Єдсасадааа аєєсеЕдддас 2580 сдадеЕсдЕдс аасасєдеЕса асассададс ЕЄсвасессс асаадсаєда сЕдЕєсСєда 2640 ачдчдадаєєсвєд седссдсссд ааадсассас Сдаєааєсдес ссасессааса ЄсСосоаааад 2700 адасдсссвд саддаєдуаєд Єаасеєдааєс додсуддааадс ЕссЕдсдссд ааддасаєдс 2760 чдасааасєдЕ дасассдєсеЕ садддссада ссдсеЕдаадд Єаасаадасд сЕСдстЕдсвд 2820 асеЕєдадсаа Єсаасааєса дсеЕЧдаєдаєс адаєссєєсеЕ єдаєєеєєсєдає даєдааадче 2880 саєеєсасаєдд гадсесаста садсаасуса деЕдсаддааа аседнасстд сеЕсдаєесаа 2940 асЕєсааада дсаєдссаєд адеадсеЕсьу Сеааєсдєтєаа басес 2985 «2105 171 «2115» 1998 «2125 ДНК «213» РПувсоштшієге11а раєгепь «4005 171 аєчааєсасе бадасасєда содссдасдсс дсдсгсададс ассссддсає сЄддассессгд (216) асЕєєддсодс ааачадеЕсЧеЕ додссЕСсСссяси дсссстасєсєсєс дссоассддає дааададсессес 120 сдєдеЕсдссс ссдсааадад дссдсадсдда асасдодаддд гаєддадаса доасдеЕєстає 180 асчгоддЕвд доасодЧдЕсСдаа сссссдааає сссадсуєсс ЄсСсЕдссадс гдссоаєсдата 240 дсаассаєдс Єсаєдадаад адсдааддса доддссссада аадсададає сдсдсасада Зоо сддаадесссс ддсссаассс аасдадддса дсЕсеЕдасає асдаддааєсд ддсесаєсдасд 3З6о чдсодсододаєдс бададаадда дсадаассдд аддааадасс садасссдса сдаєсдадвдває 420 гЕгдЧдєдсЯЄЄ соаадсеєсаа счаєссссдда ЄсдсЯяаєссЯєс содадддеєда Єдсддаддвас 480 (516) асєсЕсееєст одсастадддс сдасстадед содоєааєєсда дсаасаєдед сааєссссддаа 540 ссдсасааад дссддссаса аасссссссс сссаєссадда аагсасаєсаа сдаадесдада 60
Бассаєсєєс дадседеЕЧдеЕд єдодадсдас сСсоодасадсо Ссасасссда сдаааааасс 6бо дсЕЄЕЄваєєс аєдааасссд ссасрчддЕссс ддссдсассд сасессеєссяо дадсодсддва 720 чдсадсеЕсСеЕєд дадсЧдєсєсєса ЄСсСЕЄЧЯЧдЯЧЕЄ дЕссдаассс ЄсЯдЕссдадса Єсасессасес 78о0 ссссдадесда Ссдссоддсдс садсдесдода єсЕдеЕсагає дсесарєсдс гбдсаасьсода 840 асеЕєддасад адссссадад сЕЕссСеЕсСдаа дасассаєсдс сссссаєбдса сЕсСсеесодаа 900 аасаєдддада дсаєєєеєвсдс баєєдсдсас аддсссстда сссдаддедс сдсоасаєдваа 960 аєєддбраєдс Єдсаааддаа ааєдадасад сеЕсаєєддадуч аєєєдассвв Есаддаадсе 1020 басдаєстає седдссдсдє дсЕєддааєс сссдсаєдсе сассеєсддад асеЕсдадсесе 1080 ссдадаєдеЕе гаааєсаєеєє аасеессссс саєдеадеса ЕсЕдддадсудс адеЕсаседса 1140
ЄссеЕдсдсає ЄсссаддсесеЕ ЕСЕсдаадса саддадседа Єддсдаадда єсдааседае 1200 саасеєднас ссраєсаєес дссассссад деЕЕддссссу аддасаадда саєддаааад 1260 чачаєєддда адсоддсдаєд дсдадасддс адсссдддааа дсчдаєеєсдсс ааєдаєдсад 1320
ЄЕдааддаас ЄЯдЧЕЕеЕсСааєдЕ дааєсаєсвес аєсудсєсадсс аддсдааєсс дсагаєсаса 1380 ссаєєвесєведа ддЕссаадда ЄЕСЕЕсЯдЕеЕссСЯєЄ дсаєсаєддад дачавєсесудс сддааааєвд 1440 дсасасєсад содадаєсода ддЕсаадсас содЕдсаадс адаєдчаєсода даєдадсеесее 1500 чаадчЕЧЕєвд даєсєддстаа дсЕсСЕссдса саадаєсдддуа ааддадаєде сасдаєєдед 1560 аєдссддсса сЕсЕсдссса дЕЕсдссаад аєсаєсасда асседасадс сасадаєсьє 1620 сдсааддсад Сдасдсаадд ссдасдсрдс ассгрдддсда адстаєссадс саєссаддес 1680 аасеЕдеЕддса бадааєєсдає дсрадасдаа СдсдсєсЕсвд ааєсвєааасся Есудсаддааа 1740 дсессЕдсоЧдєд ааасададсу садсдсаасуд сададсадсс аєддеЕдчоадає дсосддчавеса 1800
Есаддаасаа адсубаєссс асссгрддаас аєсаєсдссс дададааєсс седсоуадЕєссд 1860 сеЕадаєдаад ададеЕсесєса сдаддедсдуа аєсссасаєд асддеадсда садсдасдає 1920 ааєсєддасс ааааєсадсе Ессдєддасдуд ададсаддбєд дсссдсеЕсає дсоуддассдса 1980
Есадсадсса аасесчєд 1998 «2105 172 «2115» 3439 «2125 ДНК «213» Ногааецют уцідаге
Зо «4005 172 чаєсдсадеЕє адзеЕседадсеє дсасоаєсдсд ЄсСссссессс асссесассє ссЕссссс9дб (216) седассддда сдссдсассс дссссассса сддсасддса сддсасдддс асдодддаддада 120 чаадаадаад сссадсеєсда сеЕсСсЕСсССссс десссссссє ссссессдає сссссссдаєе 180
Едсссаєєсс ссадаєссса дсасодссаєсд сссдддсдсуд саддсдссаа дссддсассдс 240 чсдсасеЕвсєсс сЕсСсСсудсссЕ дсеЕСсСсддаєсс ааддссоосдду аддедассса деЕдадсессс Зоо ссдссасдсс сдасссдаєсссд ссддессаєс ддесдсссає ддасдесаєс ассаасдадд 3З6о садсдсдЯдсддадд дадсдсссдасд ассддсесссудс ссасддсуддс доддссдддсд сеЕсдсдстдс 420 чЧдсЯдЕдсЕсСсЕ сеЕдсддсеЕсСс сеЕддсдсддс сдсддсассд ссесдссдсс дсдсгдс9асд 480 ссдсддсдсс ссгддсддсд дсссддссдс асссдсдсесса саасасдсдд дододаєссстдс 540
Еддссдсєсед содссудєсдсуа сЕСССддссдс дсоодссоосоду дддссдсоосс доаддавЕдс9асд 60 сдсдсдсдса десЕссдсссас сдссдсааде ЕСсСгсддсдсаа саєдаєсдсдс дссдсдсегса 6бо ссрасдадда деЕдддсдсас дссдсдсудда Єдсссдадсу ададасдссу сдссодсдсса 720 ссдасдссда сссссасдас даддадсссд гбдсдсаасаа дсеЕссдсдад сесаддсасс 78о0
ЧдЕСЯдссадда доаддсеЕСсСдсЕсС аддодадасаєсд СсЕсссдсає дсдсдссдас ссдсссаддва 840 ассЕєддсаа сасдеЕдсаас сссдадсссс асаадеєдад дсеЕдсададеєд сссааассса 900
Есааддааєса саєєдаддад дсаєссассс аассдаааає ддЕссдсаає Єседаєсєссад 960 асчзадеЕвбасс єсссдаддад ааасеєддсає сгаєдсаєда дасааддсає десеЕЕсддна 1020 чаєсєдссьс ассдсеааде ддаддадсес сасеЕсоддудеєс ЕЕсСсСсаєдса одаєдЕсЧЄДда 1080 ааассеЕєддЕ ададсаєаад сЕЕсСтасста ддаєвтаєсес аддаєсаадс дЕсддсдсаа 1140 бааєдеЕдсдс сасеєдесдсс асааддесає доссадаасе ддададзсеЕсеЕ єсеЕЧдаддваде 1200 часаєєссьс дааасєсьсеЕ дассаааєдд деЕдддасєстЕє ЕссеЕдвавєєє аааадаасьєе 1260
Єдасдсаєдд дасЕдЕеЕссає дасаєсаддс ассгдсадас дсааєєдада аарсегасаа 1320 дсаасеЕєаас аєсеЕСсаадад дсаєаєдаса Єдассддссу ЯдЕЕсСЕСЯЧЄЕ десвгассаєде 1380 дЕєсЕсСсаад аааасаєдад ссассеєсдає дссеЕдаасса ЕЄеєдасдеса ссеЕсасуєєс 1440
Єсаєсєддад ЄдсодеЕаасеЕ чєсЕсссЕдеЕд сЕСЕСССу асЕєсесдад дсссаддваде 1500
Єдаєддссаа адаєгадаєсс ддадааасад ЕсСссЕЕсеЕса ЕдсеЕССсарєс ЕсЧдєсЕдооасд 1560 бддаддаасуд адсеЕдаєдсеЕ дсрасасддс даєддадада Єдддадсеса дааачдедацсєєе 1620 бдсссаєдаа дсадсєдаауд дааєстаєсса асдбаааєса сЕссаградса адссаадсса 1680 аєссеєсасає ЄдсеЕСсСсаєса сєдадассаа аддадаєсає садддсеЕсає ддаддсадсье 1740 (516) ЄЕдсєдсааа дсесєдссдаа ссЕдссдада Содаадстсаа дсасаддеЕєс аассаадсес 1800 бддаасеЕєдд аєсессаєса ддаддаасад сеЕаадеЕсаєє єдсеєсаасає Еддодаадаед 1860 аєдеЕдасаає Єдсваєдсса дссасеєссвд сеЕСадтаєєс даадаєсаєса садаассстьє 1920 сдабаєєсьда дсЕссадааа дсадсаадесс адддеаддсуд аєдсасесдда даааадсесе 1980 сЕдссаєсад ддсааасєдс дсваєєдадс Еєсдсаєсада ЕдааєдеЕдеЕс дсссеЕссєда 2040 ассасаєдсд баддсєдаад адаадсдсад ааададсадс сдссссасаа ддасаєсдаєд 2100 сеасаасєтад асеЕсЕдеЕсса єссадаадда СЕСсСдЕСаєд дааєсєсаєса дсаададааа 2160 авєсааседд ЄЕСЕСЕСЧСає даддадаєдс ссасаєсьсс сасеєдеЕсаса адссаєсаад 2220 садеЕєсддадуд дассдседудд ссаєсьрааса даааєсасса ЕСсСЕССаасає адсаєасаєд 2280 асадсадеєда садеЕдааєсеЕ дададсасад асеєєдаасес аєддасдада адеддеЕддесс 2340 сЕСЕСаєдад дасадссєсуд дсеааєгааає Есаєсадсеє гЕдЕсСсСадаас сЕЄЧДЧадаєвд 2400 асссададес садаасааєсеє Єсассааадуд ддадсдаадуд Єдаваєсеєсд асассдааєга 2460
ЧдЕаасЕвєдЕсє єдсеЕддссас ссааєсуддна дададссаде Едаєааєсає ссааддссетд 2520 бгасеєссвдуд баддассеєса ддсааєсасад дЕЕСсдаєсс ссаєдавасе сседевсссга 2580 даєсСЕССавЕе ЄоОдДЕСЕСЕСсСсС дсдадеаєса соддЕССсСсСЕда аддеєдасесд сесдсадссьд 2640 аааадаєєда дааєдуаєаєсе єсаєєсааєд СЕдЕССЯдаад ддавасессс ссадсдеста 2700 сегадсоддадеЕ ЄдаассеЕсає дчдаєсеЕссас асдаддсада єдеЕддааасе дсассдассд 2760 адеЕдссЕсєва єддЕдссесу даєдасдасуд асаасуєдда асеєдааєдсс ааєдаєдаад 2820 садасвЕаєсєда Есуєсдддадає сададаєссє садеЕєдсадд азаєссадає ссудєссдсеєе 2880 ссаєддассд Есаадсеєдаа дсаадрасса сеєсдаєсада адсесссаєссє сеЕСЕЕєєдаєва 2940
ЕседЕдЕдда дасессссса дсаассаєда ссасадаааа бадеЕсддссЕеЕ дасдадссьє Зоо сЕЄСсадасає аадассддад асеєдсааада садааєдссс єдаєдадаає Сседседсвд З06о чдааєдсеЕда адсеЕдасеса дЕЕсСссдсса дгааадааєс ЕєССсСтаєсвд ЕСсСЕСадасає 3120 садаааєєду асадсадсає саадеддаєса ЕдддаєстЕдеЕ даасеЕссьдяЕ асеЕдеЕсесає 3180 веЕсЄсадаада Єдагадасає дедадссєва СЕсСсдаасда дааассддес астасесссса 3240 чЧчЕддсддадс Єдададсаєд асаєсєддаа даадсдаадс Едассадсає адаасеєдсс 300
ЄдсЕДдассда сссааєЕдеЕсЕ ЕсССЄЧУСоЧєЄвдЧд додаассєддса дЕсєдаасаа ЕсСсадсеЕєда 3360
Есеєдаєссає дссасуєдсєд сааєєсааас ссаєдеЕСсСасу аєсаааседа асеЕдеЕдеста 3420 баєдеададед ЄЕдДдЕааєсе 3439 «2105 173
Зо «211» 3470 «212» ДНК «2135 Місобіапа рБепеЕратіапа «4005 173
ЧдЕсаєсеєдає ссааасеєссе дасеЕсесеессеь ассссссодаа ЄссссасрдеЕє сссесаасааа (216)
Єссаєсєстуд ссаєсоосадеЕ дабасаєсса СЕСсСасеєдеєса ЄсассеЕссеює саєстаєсоу 120
ЄсссЕСЕЯДЕд ЄЕсСЕССаває асєдааддад аааасаєтсаа сЕЄваєдсда ЕСсЕсЧЯ сад 180 гЕЕЄСЕдУдєЄвд аврссстасаа ссссЕсЕеЕсда саєєдаєсьс деЕдддЕеЕсаса ааааасаєвд 240 ааєсєЕєваєд Єсаааасесу ассеЕссуврає сеЕСаСЕсСаа аєєдаааєсе давєсеЕсьо9 Зоо чдасаєсаадд аьгсссЕЕстьоє соодеєеєдасьс сусуссЕЕсеЕ ЕєддссаауесЕ сеЕЕДдЕСОДЕС 3З6о
ЕСсЕЧчадседа аєссссасаа СЕєЧдасаааа адааааддсе ааадсадааа Ччассдвоадаче 420
ЕЕСЕЕЕСЕЄ дасеЕсеЕсада аасеєааддера ЕЕСсСЕСЕСЕеДЧа Есеаарєссст десеаасаєся 480 даЯдєЕСааєсеі дасеЕссдєсу ааєсеЕсуєЄєда аградсесеЕевсд ЕЕсссстасе дссадаааає 540 рас ессеЕвс ссасеесссе сдасесесад аадеЕсадрас аассЕвсує сесдсваааєс 60 гЕЧдЕЧааєсаа ссЕЕсСадсееЕ ададеЕсеЕсад дгаєсеЕднає ассодаєссе сеЕсаасарсє 6бо адсстадаад сссссеЕССадуд даєсадсссс ссеЕссеЕсасе дадчаєддаєа гаадеааєсоа 720 чдастасааєє дасеЕєсеЕвеє ссаєєддасс сассасддаса сСсдддссдаа саассдсесос 78о0 бададеЕдеЕвд ЄЕСЕДЕааає сааєєєссаса аєсдаадсає сассстасесс асеЕсссєтдває 840 асаєсасеєвєд басаааєєса адааєддєсс дссасассас ссдасасссє Єдаєсєссд9аєд 900
ЧдЕєЄДдсассся сдєааєссас ааддаасасс ддсассддса асдссссссд сссссссдєе 960 чаддасдасас асдааєдеаа аааєсааддс Сдадаєддсс баєсаддадда адзеЕсеЕсодад 1020 чааєсаєдаєд адаєсеЕдсає ЕдасеЕсаєда ддадедддсс саєдседсса адаєдссада 1080 бааададасс сссааааєда аєдаддсада ЄсеЕеЕсаєдає деадааєтад Ессдаааєаа 1140 асєЕссаадад сЕссдасаєс дсаддсаада доодЕсЄссаєд адддаєаєса гаєссвєдкає 1200 чададсеєдас сЕсСЧдстадда аєсєЕсдудєаа саєдеЕднєаає ссадаасесс асаадддаад 1260 дсЕєСаєдед сссадасеєда Есааддаєта Ссасеєдаєдад дЯдЧЕЄЄСаасеіс адеЕсддадаає 1320 чабаєдсдас Єссдаєссоод аддадсессе сЕсдддаадад аадсеЕвдссЕ Есаєсдсаєда 1380 аасаадасає дссЕсСЕдуса ддасадсеЕес дссЕсЕааде ддаддедсееЕ сесеЕсаддаде 1440 вЕєЄСсСсаєдед доасуєддеєда ааасасевдЕ адаасасааа сеєдаєдссас ддаєааєвсдес 1500 бдЯдЕєсааде дЕСЧОдсЕсСсСда Есаєдедсес сасадеЕсдса асеєсдаєсеєв ддссеЕдадсе 1560 (516) ссададзсєеЕсеЕ єссдаддасе сседдсассс ЕсЕдсааєсєє єссдаєсадс сддавеєддаває 1620 гЕсвасваєс сєЕСадддадду Есаєдассса доодЕдссдса саєдадаєса дасадседса 1680 чаєдсЕдЕва судєсааєсьса сдааєааєссі сасеЕсеєссаа даадссстаєуд асаєдассдд 1740 бададеЕєсьд доадаєтассд ЕсЕдсесСдсс Саддааасає даассессса даєдсесєдаа 1800 сеЕасеєєдасе Есассєсаєд ЕЄЧдЕеЕвасаєд дадедссуре ассдудсєсесьс деЕдссьсесс 1860
ЄоддЕСЕСЕЕесС даадсеЕсаад аасеєваєдудс аааддасада адеддадаєс ЕсдсЕсСсага 1920
Єсасссасса ЄЕсСсаєсвєдуа дсссеєдаєсдс сасеЕсссадеЕ дсаєсєдссс дссдЕсодад 1980 ччаєддеєадс ЄЕддадаеєєд асєсєдссаає даєсдсадсса ааддадсесь ЕсааєдеЕсаа 2040
Єсасееєваєс деЕдадссаду сдааєссдса баєсдсесса сеЕдсєдадда Есааададсе 2100 бдсаададсе басодаддса асеЕєсдссдс саадсеЕсдсЕеЕ саасеєвасду аааєддадче 2160 чдаадсасада Єдсааєсаду баєсадаасе соодЕСЕсссс Еєдоддаддадає гадсааадсе 2220
ЄЕсЕдсеєсаа дааєдодада дчедаєдеаас СосЕдЕааєд сседссасесс гадсесадеа 2280 сесааааасс асасадаасс ссссдасесе ддадссдсаа ааадсадсаа ассааддаад 2340 ааддеєдсасе Єдддааааас ЕсЕсадссає дааадсааас ЕдеЕддааєсу адсеседсасе 2400
Єдаєдааєдс дЕсдсвавас Едааєсасає дсдеадассд ааааддадсд ссдададдадс 2460 часЕдсЕдсЕ ссасаєдудсе Еддсаадсас ЕдЕсадаєєє аасассесса даадааєєссс 2520
ЄЕСЕєддаас Єдсаєсєдсас дададаасес аасаддсесс сЕєсЄДдаадасє єссседсода 2580
ЄдєЕдсвдсеЕ Єсасаєсаєс ааддаддадсад сддЕссоддад дсдсаєдеса ассдагадесвд 2640 дсдаасдсас соддааєдсас аєдчаєддаєад Сдасадсдад ссддааааєд Єддасссвгаа 2700 гЕСЕєддаса адаєсоддуаєд дЕСсСсЕсЕедає даддасааса Есадседаса адеЕсСтаєєсда 2760 сСЕЕЕдЕССсСад аассгддааа ЕсддЕеЕссСЯддсу асєєдаасааа ддасєдаста сЕдассесаа 2820 сааєгаєсаєсє ссеЕсадаєдуд саадсадодоада ссаєеєсєсеєсс ссдадсссаа додеЕаасаас 2880 ассеЕдаєада адсесадаса садааєєєда Ссааададає єсєсадеЕсаса дддссссвдс 2940 чадеадеЕсєса адсаєвтаєду гаддсдаадд ЄдассеЕсссд садссеЕдааа ддасеаасад Зоо сддеаєєсдес Ессааєдедд єЄааддаааду адасеєдасс ссаєсдааса даадссеєда З06о бЕсадаааає аасадеЕсссу Едсаддаєдс адеЕєдсеєдад єдсдЕдсаас сЕДЧДааадесс 3120 адаааадчдад аєддаєсаєса дсеЕСадраєс доааддаєсодудЕі чдчадааєдаєд єсодосаа9д 3180 аадеадддеа аасдаадеЕсєд асєдсадсаа аааєсуєєсса Єсааєсдуаєд асддсаасда 3240 баадсаадесє аєсддавасеє дададеесад сЕсСЕЧдаєтає єссасасадуд ссаєсесддаає 3300 баєвєвееєвсає асссаааєду адсЕссьсес ададстааса сасеєсадаає Едддудєєдка 3360 аасадедсаа деадсаааєс ЕдеЕаасааає деЕсСЕадсдбса деЕсаєсассс ЕсСсСастаде 3420
Зо Єсааадєддс Єсадсєсаає Єсааасєєсад аасеЕєссдаєба аєссарвєдеЕсе 3470 «2105 174 «2115 713 «212» ДНК
З5 «213» Місосіапа рБепсраштіапа «4005 174
Едеаєдадад сеЕдассеЕєдеЕ єаддаассєс ддсаасаєсдс дсааєсссада ассссасаад (216) чдадвааддсеЕєс аєдеЕдсстад асеєдаєсаад даєссасаєсу асдаддєссс аасссадесд 120 ачааєддває дсдасеєсеєда єєсодаддад ссссссссоод аададаадсесс Сдсеееєсаєд 180 саєдааасаа дасасдсссс гддгаддаса чссЕгуусЕс гаадедддада Содсессьеса 240 чдчдадсЕвєеєсс аєдеЕдддсЧдЕ додєдааааса сссдсадаас асааассдає дссасдддаєса Зоо аєгєєдсеЕдЧєє саадеЕдеЕСсоду сеЕСЧассаєд сдссссасад Ссдсаасссдд ассесддесе 3З6о чадсеЕссада чЯяЕсЕсЕЕеесда ддасесстдуд сасеЕссссодс аассссссда сСсадессоадаєс 420 чачаєєвєєвса свтаєєсєсєсад дадоадссаєсд асссадддєд ссдсасаєда даєссадасад 480 сЕдсаддєдс ЄдЕсасдєаа ЕССсСсасдаає аассеЕсасьє Єссаадаадс ссаєдасаєд 540 асеЕддеадад ЄЄСЕЧдддддає гасеЕдсссдс сСсоаосссадда аасаєдаасс єССстадаєдсес 60
ЄЕдаасвасе Єдассесасс ЕсаєдеЕєЕдЕЕс агаєддадед ссудєсассдс Ессе дЕдсс 6бо гЕЄєсСсСЕддЕС єСЕЄСсСдаадс Єсаадаасосс асддсааадд асадаадсдда ада 713 «2105 175 «2115» 1500 «212» ДНК «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 175 счаааагаада адгадаасає асаєасаєає асасаєасає асгасаєсасає асаєасаєєсс (216) чЧЕдЕддасає сасаааєсудсс баааєдаєаа СадеЕсцчаєее сцадеЕвесває єсеЕСЯЄТтасе 120
Ессааєсааа ЄЕСЕССЕвдс ассараєсвта СЄЕСЕСсСЕеЕсасеЕ деЕдадаасає асаєсаадесає 180 агаєєддаає сасуєбаєссу ададздЕЕсеЕс дсасасеЕєссу єсварсваєс сеЕсддаваєсс 240 асасстасеєдеЕ аєсаєсаааа аєсєдааааа Сссаассадда дссссссаєс сссессадаа Зоо (516) сгаєєссуєєс арсвтаєдесу асєдессасас састаєсааа аєсаааасдад аддатгаєдае 3З6о
Єддаєсаєсс аадеЕсеЕсуєє гаєдасесьс суосеЕСасеєса сааасуаєтєса деЕЕсессасе 420 баачЕсЕеєсєда ааададессаа ЕСЕССсСааєсає аєссддсаса дЯчЕсЕЕсЕеЕСаад Едраєссаєс 480
ЕЕ ЄЕЕСЕСЕЧУЄЕ додасвсасаєдд сссааасеЕсе даєрєсдсаає асдадаєсдс 540 асадададаа сааєсєєєса Єсаєдчаєсаа ссассдсаса адсаасааас ассаассосс 60 чаєавасеЕвс доудсЕсСЕстад сасаєєдеЕса єдссадааде єадсоддааає стагаєдеєд 6бо
ЕсСааасдсад счосстаааєє даасадсдбра асєсассссу ааарєсєссаад ассасаєсдсе 720 дЕЄєсадааєє єсадаєдааа асаєсссдає дЕсссадааа сСссасдєсддд аасадсддсаа 78о0 ааєсєЕвсаєсс аасудаасеЕса єЕЕЕгЕоОдЕСЕЄ дЕєЧдваєєсьд Єдсаадессує сасддстеааєс 840 чаааавадаа аадааааааа даадссдсса сСдаєссддсса ЄЕсССсСссддсс дадесссдвадеі 900 сеЕдассссдс дЕссдсдсса ссассаєсад ассдадсестд ЕСсСЕсаєсієсд єЕгдсдаєьсс 960 сеЕаєдсаааа асссєсеЕссє єсеЕсСЕесСасеє сссссаєсеєса єсеЕСЕДЧассє сЕСсСЕСсСЕСТЄ 1020 сЕСаадєааа ссеЕСЕСЕДсСЕ ЕЄсасуєссст ЕєЕсСЕСсЕСЄсСЕву Есдаресєвессс ссадаєааєс 1080 аддеаааєаа доасрасевеєсс еєсаєєсдчаєс содЕдУЧєсьє єдеЕдеЕєдааа ЕСЕСЕДЧДОДЧЕЄ 1140
ЕЕСЕСЕУЧУЄвЧТ агЕсСЕСааадеЕ ЕСЕСЕСЕСЕС СЕСЕСЕсЧЧЄє гаседддеЕдс ЕдЕДдааааає 1200 чаєсєЕєдеЕса аадесессєс ЕсЕссаєсуда аєсдааасьс сааєсадааа ааадаєсаєа 1260 асЕЕєєсаєвта ааааааєдадч ЕСЕЧДССЕСоос; сСеаасеЕстуус дааєсдсесесс асадаєесає 1320
Єдаєсадссе аєсеЕдддсра асаааааааа дссдасасдд ЕЕсСсСадарсс саааааєсада 1380
Есаєдасесе дяеЕсЕСЕссСєсС єдсададдеЕс сСеаасаааєса басдсеЕссесе сссаєдадсєе 1440
СсСЕСЯЕЕСЕЕСЕ ЕсудєЄсассесє сдсадеЕсдаа аасасассса аарссаєсеЕс сдааєсааєва 1500 «2105 176 «2115 2871 «2125 ДНК «2135 Штучна послідовність «220» «223» Нуклеотидна послідовність, комплементарна гену ро5О0-олеозину
В Тт-ДНК роРЗ3502. В порядку (комплементарна послідовність):
Термінатор лектину Сіусіпе шах 348 нт, 3' екзон 255 нт, інтрон ВО10 304 нт, 5'екзон 213 нт, промотор 55) «4005 176
Зо дадассссгада аєссаассає ссрасеєсада стаааєтадеЕ асаадсавьеєєс єеєссаассаа (216) баааєагаєаа ЄЕааєааєсе асегадесадда деЕдаєсддаає сСгаєааєсава єЕСЕСЕСваа 120
Есаєєсааад аасссвтаврає ссесаааєсьд асаададеЕсе гаааєддоада дадедетаєс 180 аєаєсасаад бЄаддаєсаає дчеЕЧдЕеЕсасадс сссасаєдса Ссасдаєсаад Ссдсдааада 240
Баасаєстаєє аєаєаєааса аєдасаасса ссадсдаєсдд адсадесдада ассоаєссевсає Зоо
Єасасссесс єссеЕссдаєс сдеєсасаєда соддсддасссу сддссудсеєс аєсасесвад 3З6о ссаддаддає ддассдасдс сддЕсЕсрдада сссрдстасс ддєсдседас гєдаастьдсес 420 чдасасоддеЕсс ЕЄСсСаєєєсас доадссссдсс сдссаасссс дсЕсссддесуд ассссаасод 480 аєссдсеЕссо доадєддаєдеЕє єссссоассад дсаасддбад асссаддаса дсасадасад 540 адсддсааса ссаааєсссс содсЕєдссад аааасссдсо сссаасадда адчасддедає 60 часедсадасє садааагаасе садчасєааєс дасаааєссу ассоуусасааа сеадаааста 6бо асассадаєс бадаєадааа Єсасааасєсуд аададеєааєсє асєссдасааа асссаааєса 720 бєєдаасааа Єсодаєдаєа єссаєдааас сссааєссдад аассаадаєд асбаєсссаасд 78о0 аєсааассса дааааєсдеєс ЄЄСсСЯчаєссаа дассаасада асссааасса аадаасасає 840 асчаааєєдуда даєсдаасда ааасаааасс даадассссд ададаасаад даасасадаа 900 ассєвсассвдс адддассаде асаддсдада ачассассад дачаддеєЧчеЕд дсдаєєвєдесса 960 чдсдсааєдас сдєєссадсс адддеєсаасс сддасаасас саасаддсста ссессддсад 1020 баассдсуддЕ содсЕдссЕсЕ асаасасдсс дадсасдсдуд ЕєдсадеЕєдс аадсодоадаоад 1080 сасуєуєєсу ЕсоосЕдсвдс ссуабадедсесе седссасудЕ ЕЕ ЕеЕсаас ддадсаадсд 1140 дссусЕдЕЕсС ЄЕСЕСВасеіс ЕЄЕЧдєдЕДДЧас Єдадаєстьду Ессадедсее Еддєсаєста 1200 басаєсааєда Саасаасаає дадаасаадс СЕсодадеда Єсддаддадєс гаддасасає 1260 чадаєєсаад Єддасврадда Есбасассає Содддасєседа деЕдЕддаває чаЯЕДдЕДЧДадаєе 1320 ааєвєеєвасьс доасаасдудес асаааддессєї ааддададдЕ дЕєдадассс ЕсСассоддсеее 1380 чаассдсєдуд аасааєдсса сдЕддаадає аасеєссаєда аєсєсаєсде гаєстаєдад 1440
Єдаааєєдед Єдчаєдуаєдда деЕдодєдсевд сеЕСаєЄЕсСтТас ЕєдссвЕдЧдеєЯд дасевєддессс 1500
ЄЕЄССЕваєдд доадааєстає асєсстасеса сраєгададсеє сссасассєє єсеЕСеЕСсасся 1560
ЄддаєєвадеЕ саараєаєаа Еддбаєдаєс саєдаасааа ааєдддааає ЕСЕсЧЯаасте 1620
ЧдЕасєдссаа аєдсаєаада Есаддєдааа сЕдЕддааса бара єсаєсесаааа 1680 чдсааааєєьд ссЕЕсвасса дааєсаєааа сСасадааааа сСасаєсаасає Єсааагаааа 1740 аєдааааєсаа даассессаа аааагасадаас сасдсеєсаає деЕдеааадає гадессдсаса 1800 (516) Єсаадесаєс сЄдссасааса єдЕсасааса адссаєаадс ссаасаааде гадсасаєсе 1860 аааєсааасва аададессас даааасаєвта саааєсаєаа дсссаасааа деЕраєсдаєс 1920 аааааааааа аасдсссаас ааадссааас ааадсссааа ааааассссо саадессссса 1980
ЄсСЕЕсСсСЕсва Єдаасаєєда ааастараса саааасааде садасааасєс єЕСЕСЕСТ99дОЯ 2040 сесЕдеЕсСеЕвсс саассеєсста саєсасесєсс ссаєсоуадаєе даасуєеста сеЕєдвассьс 2100
ЕЕССЯєЄєдса аєдасаєєда гадсаєдЕеЕсЕ дедааааста агсадддеєєаа сааєсддаадиі 2160 саєддаасає одсдасеЕсоддеЕс саадаєсеєсс сддададсесє ссадрадааа дсссаєсасс 2220 ачаааєеєсас садегааааса аассассаає СадуєсєеЕссье аєсаєдедсес аааєсесааєа 2280 бааєсаєада дадаваєсеса ааєсдаааасуд сСасдааєсдєє аєсадеааає ддеЕСаддеаа 2340 часаєсаааа аааєсссасу Есадасаєеєс аасеЕстаааа аєєсдаєсач ЕдЕЧДЧдааєтд 2400 басаааааєє сдддаєстас багасавава Сааєдссеєса саасасевду асьсеЕсеєее 2460 чдчваддсєЕдда асЕсеЕстааєс басавсаєстьдд СЕсСеЕддссає дсассаасес асЕдеЕстаде 2520 дЕаасасеЕвс дасеЕсьдеЕса аагсасаєдед єЕссЯдрЧчсаса ЕЄЕЧдсаєсаау аарсесеєств 2580 ассаєаєаса сасасасаєса басасаєава сасасасаєеє аваєаєсаєд сасесеЕстаає 2640
Єдааааваєа агагагаває асаєсадедса СЄЕСЕСсСЕеЕСсСваа саассаєбаєса ЕДдЕсДСсЯЇауєе 2700 чаєсєдсааа аасасеєдсса дадеааєдаа ааасаєааєс сассдседаа аєсаєсєсад 2760 аєдЕсаадає сЕсССсСсСвааад Єаааєєссєвєс сааасеєстад сеааааддесе єдеЕааєсаасе 2820 ааадааєаає асасааєсссс дассасудаа аааавпдасаса ЄааєаааєсЕ д 2871 «2105 177 «2115 1578 «2125 ДНК «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 177 дЕСсасасаса саєбааасасе ссасасдссс сдссссассс аассассааа сасдсесссаа (216)
Едасесеєсас дЯяєЕсЕЕссЕсСс ЕСсСсдссдсаа ссЯдссдссЯяєЄ Сдссдссдса ассдсаассяо 120 ссЕССЯОссСад ддЕЕсСсоЯдЕсС басссасесу сессуаєсЄсдасєс ЕССссоосдда Сбадсаєссяе 180
Есадаєсаас сдсдаадаад сЕдеЕссссдс сдсесеЕсСЕссСд ЕЕСЕСДСОДсС ддсаоєтаЧьд 240
Едададссає деЕСЕЧдадсеЕє дЕеЕєЄСсСаддаса аадааєссдЯяєсс сдЯссдасддсд адсассдсессес Зоо
Есааєдаадс сдссоддеЕдад асодссдадесд адсссадсса ЄсСсссдабасе ЄссеЕсодаєд 3З6о сдсдаадсда асаадассєс ссассврддра ссаадаадда адсєдаадсе ддааддеЕсдс 420
Зо садсааасдЕ Сдсадсадда асддаачаає Єдсаєсддаа срасааааає дсадесеєесаа 480 чЕадеддадс єєЄссадддса даєдааассд Ссдсаєссааа сасрдсссддєсєс дсеЕсесесдаєс 540 чдсаєдсеЕєсеЕ ЕєдЧдєЧдеЕоддад даєссссаса сЕсссааєсс асассасааа дсадессадад 60 аассаєєєда срасвєасаєд єсеєдЕеЕсСсаєба саєсасаєсся ЄссеЕСЕєсаєє дассссаааа 6бо аєєсдвасає єддаааєдсе єсвсавсасссс ссдадссдда адасаадасс сдасадддас 720 асааєсаєсує ЧчЕсСдаєаєса аассаєсааа дЕдчаадссда ЄссоодсеЕдчЕеЕС аєсесеєстає 78о0
БЕдсЕєдаадс асааєсеєсся єєсаєаддад адаасассаа асодосдсддсеЕ доадєдаєсдвад 840
Есаєсасеєда ЄссЕСЕЄвеЧдЕ аадссдссса дсасдддаад даассссасба Сдсдсссасес 900 сдааааВвдса сасдааєсдає дасссрдадс єсдеЕсдасає даааадаааа дсааасасас 960 чаадсеЕєааа ддадаєдудсеЕ асааєдссаа ддасссддсд Есаасесаєса гєддаєсдсас 1020 саадсддедда аадддассдс ссдаасссвє ссасєдддда асодеЕсессс дсасссеєвд 1080 агдсЕсєсьесС доасадасаас аєдадаадас соддЕсдааса ЕЕСЕДдДдсЯдсЕ ссеЕддасаєа 1140 басаєссаає ЯдЧЕСЕСЕДдДсСЕЕ Едсвсаєдаса ссаєдссссос Ессассссад дЕЕдадааад 1200 аааєсддада даааадаєса дЕЕдодЕсЕеЕсС асодудсассдуд ассаєсааєє дсеЕсстедааа 1260
ЕсаасеЕєсес адасдеєсаса дсадассдсуд ададссссаа Сдаддсдааа даадсасбаса 1320 дссаадзсеЕвс драсаадесу дсдааєдаас аасасдадає сеєсааасесе дсдаєсааас 1380 асадаададд адсадаадса Есаасеєєсаа доуодЕСЕСЕСЕ деЕСсасаасся Еддааєтаде 1440
СсСЕСЕСЯЄЕСЕ адддеЕаасас ЕсЕСаааасі сагаааєсьє седссссада азс 1500 саасєдсаса гагаєсддада дадададсає єдЕСсЄсСЕсеєса ЕєсЕеЕдсаддає асасааасас 1560 ааєсааєдда ааагасес 1578 «2105 178 «2115 459 «2125 ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 178
Меє Тпг Гей ТПг Рбе бег бек бек Аза Аїа ТПг Уа1і! А1ї1а Уаі Аїа Аї1а 1 в) 10 15
Аза ТПг Уаї ТіПг бек бек Азї1а Агкуд Уаі Ркго Уаї Тугк Рго Геш Аїа 5ег 60 20 25 30 зек ТПг Ггец Агуд біу Іїецйп Уаії бек Рре Агуд їецп ТПг Аїа Ппув Ппув Іец 35 40 45
Рпе Гей Рго Рго ІТец Агуд Бек Агуд біу бі1у Уаі бек Уаі Агуд Аїа Меє 50 з9 бо зек біц Гец Уаії біп Авр ув біц бек бек Уаі Аза Аза бБег І1е Аї1а 65 70 75 80
Рпе АвБп о біц Азїа Азїа сіу сій ТП Рго бек бій Гей бек Нів бек Агд 85 90 95
ТПЕ Рпе гей Авр Аза Агд бек біц біп Авр ІТецй ІТецй бек с1у І1їе Гув 100 105 110 пув 611 Аза сій Аза с1у Акд Гей Рго Аїа Авп Уаі1 Аїа Аза сіу Меє 115 120 125 бі бій Гей Тук Тер Авп Тукг Ппув Авп Аїа Уа1і Гей бек бек С1у А1а 130 135 140 зек Агуд Аіїа Авр біцп ТПг о Уаії Уа1ї бек Авп Меє бек Уаі Аїа РоПе Авр 145 150 155 160
Агуд Меє Гей Іец сіу Маії бій Авр Рго Тук ТПБг Робе АБп Рго Туг Нів 165 170 175 пу Азї1а Уаї Акуд бій Рго Рпе Авр Туг Тук Меє Рпе Уаї Нів ТпПг Туг 180 185 190
Зо
І1е Агуд Ркго Іїец І1е Авр Рпе Губ5 АвБп бек Туг Уаі с1у АвБп Аїа 5ег 195 200 205
І1е Рбе бек біц Іец б1п Авр Гув І1е Акд сбіп сіу Нів АвБп І1е Уаї 210 215 220
Тец І1е бек АвБп Нів біп бек сбіц Аза Авр Рго Аїа Уаї І1е 5екг Ієей 225 230 235 240
Тем Гей біц Аза сіп бек Рго Рбе І1е с1іу бій АвБп І1е Ппув Сув Уаї1! 245 250 255
Аза с1у Авр Акд Уаії І1е ТПг АвБр Рго ІТецй Сув Ппув Рго РпПе бек Меє 260 265 270 б1у Акуд АБп Гей Іїе Сув Уа1 Тук бек пув пуб Нів Меє Авп Авр Авр 275 280 285
Рго біц Гец Уаі Авр Меє ув Агд Гув Азїа АБп ТПг Агуд бБег Гей Гув 290 295 300 бі Меє Азїа ТПг Меє гей Агуд бек сіу біу біп Те І1е Тгр Ше Аїа 305 310 315 320
Рго Бек біу б1у Агуд Авр Агкуд Рго Авп Рго бБехг ТПг с1у бі Тгр РіПе 325 330 335
Рго Аїа Рго Робе Авр Аза бек бек Уаі Авр Авп Меє Агуд Агд Іей Уаї 340 345 350 60 бі Нів бек с1у Аза Рго сіу Нів Іїе Тук Ркго Меєс бБекг Іец Іец Сув
355 360 365
Тук Авр Іїе Меє Рго Рго Рго Рго біп Уаі сіц Гуз б1п І1е сС1у сС1и 370 375 380
Тпув Агд Теп Уаії с1у Рпе Нів сіу ТПг с1іу Гей бек Іїе Аза Рго бій 385 390 395 400
І1е Авп Рібе бБег Авр Уа! ТПг Аза Авр Сув бій Бек Рго АвБп бій Аї1а 405 410 415 пув бі Аза Тугк Бек біп Аїа Гей Туг Ппув бек Уаі Авп біц сбіп Туг 420 425 430 січ Іїе Гец АвБп бек Аза І1е Пув Нів Агуд Агд сіу Уаі1і! бій А1їа 5ег 435 440 445
ТПг Бек Акуд Уаї бек Гец бек біп Рго Тгр Авп 450 455 «2105 179 «2115» 2455 «2125 ДНК «2135 Штучна послідовність «220» «223» Роршіцв Егіспосагра «4005 179 адеЕдсдоадеЕдч аєєдоадеЕдад дадедаадас дссдасссса даддсЕсссда дададсддса (216)
ЧдЕСЕдсадад аасаддааєс сдассасбсаєс ссссаааасс сдсдссддас ссадессассд 120
Зо ссаассаєса ассадссасс сассаасасс ааавааєсссс дсссЕсевєда вєЕсСссассас 180 аєааааасад сасасеєдсес сеЕССЕсСсасо ссасссстає сссаасааса асаасааєсаа 240
Бааадсеєсаа сЕСЕЄСЕСЕЄ сеаадссаад асаєдасєссє ссссассссє дессссесс9ає Зоо сддсассссс сасаассасс ааассудрсес сассеЕсеЕссс гадоддеЕсєсєст ааасестьдсяе 3З6о
ЄсеЕсаасссс сеЕСарасеьсь сеЕрссссевсС дЕСсСЕсадаєс саседсссда сдсессасьє 420
СЕЄЕССсСсССсСу сдеЕСССсСЕСсСЄ ЕСССсСЕСаасс єсСсасодсаає доассдаасьс дЕєСаодаєса 480 аачдаадеЕсСеЕє судсЕєсЕдсЕ даадесдасс асадсаадаа дааааасадд асссдеЕссес 540 дсСЕСЯЕСЕСсСЕ єдаєдсааса аседаасаад адесаседеЕс додааєсадда ааддааєсад 60 аадсаддааа асеЕсссеЕєса ааєдеЕсдссдд саддаасдаа адасссдсає садаастсаса 6бо ааассдсадеЕ ЄЄєдсаааде ддааєсссса асдсасаєда дассдсаєссдд даааасає9ада 720 сЕДссдсасє одаєссєтава єссСЕєедаєд Есдаоодассс деЕЄСасссєс єсасестстаєс 78о0 асааадсеєєє дадааадсса баєчдчассасс ссдаасссдда сСсаааадсає асссдєсссає 840
Єдаєєдавєс садаааєсєса гаєдесаддса аєдеЕсеЕссає ЄеЕссааєдаа асесаадада 900 адсЕєсддса доадеЕСсасаає аєєдеЕСсСссда сбСассааасса ссааассдаа дсадаєссад 960 сЕдЕСаєєдс асеЕдЕсдсеЕсє дааасаєсаа дсссеЕсасає гдссдаааас сЕЧдаєсваєд 1020
ЄЕдсєддодда бСададеЕсодєс асадаєссеєс сЕсСоосаадсс аєссадсаєд додааддааєс 1080
ЄгагаєдедеЕ арасссаааа аадсасаєда аєдаєдассс Єдаасаєєса даддадаада 1140 чаааагадсааа басссудаадеі Есдааадада СоддсЕЕсдсеЕ сЕсааддддЕ доасЕСасааа 1200 бадеЕСЕддає Єдсассааде ддєддсаддд ассуєссада ЕсссЕєдЕСа ддададедаЧе 1260 аєссддсаса сЕсСЕЯДдаєсдсе ЕСсСЕЄСсСадсад асаасаєдад ааддсеЕєсдсЕ даасаєсесьд 1320 чадсеєссадуд асаєдеЕстає ссеЕСЕддсас бастаєдсса Єдасаєсаєд ссссссссдс 1380 сЕСадудєдда аааддаааєє ддадададаа дчадеЕсаєеєсєс асеЕссаєдда дЕєддаєтає 1440 садеЕєдсасс адаааєсадс ЄссСЕСЕдаад Есасадсддс асаєсдаааає ссєдаадачдд 1500 сЕааддаддЕ асасасадад дсЕСЕдсаса адеЕсеЕдеєдас Едадсаасас ааєдеЕдськва 1560 ааєсєдсЕдЕ асаєддаааа саадддстад дддсудєссає ЕссаасеЕдес ссеЕесдеЕсас 1620 адссаєддаа Сгадссаасс ЕСЕЄССсСасас сеЕДЧдастєаддс саасадееЕсе дстаєгаєаде 1680
Есеєдсаасес сеЕддассаса асеєстадсудд ЄссЕсЄссадеЕ саадсаєдесд ссаддадаад 1740 сЕЄСЕСсСЕсСссС саєдаєдава єддавддсеєє ЕсЕСЕЧддада єдсааєссаваа дссасаадее 1800 гЕсдсЕдЕдсС свасаєссса сааадссаа аєсеЕсасаса аваєсеєєсдаа дссаааєєсса 1860
Єсеєдааасдс дадссдсеєсс ададдеєєсаа СЕсСсаддедЕ дсадаєааса дЕЕсСстсаднка 1920 (516) аасасаадад срадессдЕєсеЕ даддсдасає асаєдеаває єсссесааст єсеЕсодеЕдо9сС 1980 сдаєсасасе сеЕеЕсеЕсасас сааєтдссса арсодстасес асЕсессссс сеЕсдЕЕсасс 2040 бЕсааєаасе адаадеЕсеЕсс аєдсраєаас ассгдсасас адааднасса Едаасададе 2100 бддадсасає сЕсСуссЕЄсССЕеЕ дасвсааасаа дасЕсудсеЕсеЕ гадседссас ассавасеве 2160
Єгагаєдаєд сааєсаєдудеЕ аздзеЕсСУуєЕсес ссеЕгЧЕсесдд деЕСаааассс ааассадсса 2220 бадеЕєдссас адссааєсда дадеЕддеЕдса СУсЕСУЄЕСУ ЕЕЕЕЕЕЕЕСЕ ЕСЕСЕСтЧЄС 2280 сЕСадеЕсаса дсаассаєде Єсаасєдаас баєдсаєсєс єсаддасасс ассеЕСЕвсаад 2340 ссссддєдаєс гаассуєдеЕє єЕссдаасесе ЕсЕЕЕЕЕЕСЕ ЕСОДУОСЕСЕЄ дУдєевавсва 2400 аасдсадсад сЕсСЕдассса адессааааса аааавдаєста Сгааааааає Єдсад 2455 «2105 180 «2115» 1389 «2125 ДНК «2135 Штучна послідовність «2205 «223» бСаєкорпа сигсав «4005 180 аєчасасеЕсе сЕдсЕсеЕесс ЕєсСсасассс ссссссадаа Сасаассдодсс ассаасддссє (216) адддЕвЕсса ЕЕсСССсССсСЄСсСссС ЕсССсСЕСаєсє Ссааадсесе ФЕСЕДЧДЧЕЕсСсС ЕЄсСссЕсСЕЄЄ 120
ЕЄсЕССЕСсСсСЕЄ соосЕєдсеЕсСЕ баааєсдаді дсдсдаадда ссасрссдєссс ссдсесдсес 180
ЕсЕєсСЕеЕСсСеєСсСа асдссаасЯяє додсеЕСсасссс сссааддадда аааапяаадаадс СЄдсдадсЕссд 240
ЧдесЕЕСсСсоддсс дсдадаадчда ддаддаааач аачаєддаас адсстадсса сеЕсссдсасе Зоо
БбЕСсСсеєдсаєд ссадаасоуода асаачасссд ссдсссддаа Ссадаааада адсадаадса 3З6о чачаддеЕєдс сеЕєсаааєде єдсадсаддд асддаадаасє Сдсассадаа Ссасадааає 420 чдсадедаєас ааадеддаас ссссаасдса даададаєса Сбассдссааа Сбасддссдес 480 дсЕЄєддаєс десаєаадсеЕє додаєдессдад дасссссссдд ссЕссссаса ссассасада 540 чдсаєгєдадад адссуєссда стассасаас СЕСддЕСааа асстасасєсу сссесеводсее 60 чаєєєвсадаа арссесваєдеЕ Еддсааравс ссссЕсессс аєдаадесодда ададаадсьє 6бо садсадддес асаасассдс сссдаєсдсса аассассааа ссдаадсада сссддстасга 720 аєєдсаєєдс єдсеЕєдадаа аасааадссс бсасассодссдд адаасссдає ссасасадса 78о0 чЧаєдЧдсадад Єсаєаасада ЄссЕСССссдс аадссаєсса дсасдддаад даассесагса 840
Зо Едсдєдсасс саааавяааса саєдааєдає деЕєссеЕЧдадс ссассдадчає даадаааада 900 дсааасаєас ддадеЕсєдаа додачасддес ассссаєсаа доадддсдддЕс асдаасадед 960 бддаєєдссс саадсддеЕду бадддассудс ссадаєсаєс Едасєддада асоддеаєсса 1020 дсассаєєсвьд агдссеЕсьсс адеддаєаас аєдадааддс ЕєдсЕдааса ЕсСССОДдЕдсЕ 1080 ссЕдддсаса Есваєссаєе ддсаєсаєвта єдссаєдаса гааєдсессссо Єссссеєсад 1140 дЕдсаааадуд аааєсодада дааасчдадед ассЕсссеЕсс аєдддаєвда астаєсааєсяс 1200 чдсассдддаа ЄсадсеЕсссс Едаааєєдсд доасадеЕсдсєд ааааєссьда ададдсааад 1260 аасаєєвавєс сасаасесеєсеЕ дсаєдаєєсса деЕдасеЕдсудс аасасаасуає дсеЕрааарсь 1320 дссаєаааєд дсааасдаду дсрададдсеє Ссаасессаа СЕдЕСЕСЕСЕ дссасаасса 1380
Єддааєсаа 1389 «2105 181 «2115» 1368 «2125 ДНК «2135» Вісіпив сошпштипів «4005 181 аєчасєсеЕве ссареєсеЕвеєс ссстрасасса ссассдсста доаддсЕссдасрає ссссасєсссс (216)
Еседваєсьс сааадсессеєс Есрадесссє дЕсЕсеЕссвеЕ ЕЕссСЕсСЕрсс ЕсСессссЕЄВЯ 120 дссаєадеаа даєсоддеЕсаєс ааддеЕссссс арсеєдесссє дЕесеЕсСЕсссс ЕсСсСЕЕсСЕсес 180 аасдссааєс садеЕссссда асессссаас даєдаєсаада адаадаасаа саасаасаас 240 аададсаада адододааадед Сассссссас Ссссдсассє єссеЕєДдаєдс аадаассдаа Зоо саачдзадссдс сдсасддаас Саддааддаа дсадаєдсад ддаддеєсдес Ессааасаєєс 3З6о чдсадсадодада Єддаадааде Єсаєсддаає Сасадаааєсд садеЕсссдса аадсддаасс 420 ссааасдсаа аадааассає ассдссааає асддасеЕдеЕвд сдєстадаєс гасдеЕдсевд 480 чаєдеЕєдадуд асссЕсеЕвдеєЕ сЕЄСЕСассо сассасааад сассаадада ассаєссдчає 540 басваєагаєє сеЕддасєсаааа ЕсасаєссЯяє сссссдаєсу аєсєсаддаа ЕсСсатаєдеє 60 чдасаасаєєє сдсЕсєсссса єдаадеєдад садаадсеєсс адсаддаддеєса саасаєсаєс бо
Еєдаєдесаа ассассадас єЄдаадсадає ссадссдсса Ссдсассдес дсссдааааа 720 асаааєсссе асаєєдседа дааєєсдаєс сасаєссдсад дсдасададс Сдсаасадає 78о0 асЕСстаєдса адссаєєсад саєддоадаадд аассссасає дсдсдсасес даааааасасєс 840 (516) асдоассдаєд ЕєсСсЕЧдадсе Сассдадаєудд аадаааааад сааасаєєсду садеєсааад 900 чачаєддеєса Єдаєєєсаад додаєдддесс сааассдеЕсс ддассдсеєссс аадсддесдас 960 адддассдсс садасЕсьсеЕ дасєддадаа сддЕдЕСсСсад сасссеЕстда ЕдсесеЕсСьсса 1020
ЧЕддаєааса Єдадааддає басєдаасає ссесддсдсЕсС саддасаває єЕсЕсссаєта 1080 чдсЯдЕєдЕсає дссасудаває саєдсссссо ссассеєдадд басаааадда ааєсодадаа 1140 ачаадааєда ЄсесссЕсЕеЕса Еддадседда сгаєстаєсд сасссдааає садсеЕсссся 1200 чаааєєдсвд Єєдссєдсда адаєсаєдаа дадодассаада асдсабаєдс асаддеЕсеса 1260 баєдавєеєсьд Єдассдадса асасааєдед сЕсаааєсвд ссаєасаєдуд аааасаадда 1320 сЕададдсає саасеЕсєсвтас сдЕСЕСАЕЄсдд Есдсаассає ддадаєсад 1368 «2105 182 «2115 1344 «2125 ДНК «213» Не1іапепив аппицйв «4005 182 аєдеЕСсцдчаврєесс єЄсссуєстЕєс ЕЄСЕСССТасо сссСЕсссссс ссассдсааа ссстадддаеєс (216)
ЄСсСЕДдЧЕсЕссСЕС ЕЕсССсасевас ЕсСсасадес сСссасассєє саєссуєдса садссдсесс 120 агсЕеЕеєссоддс аєЕєєвеєєеєссдва ссрадсЯдссс сссадддсад сдаасдссдс сдсддадасд 180 бЕєЧдааддса адаадеддеЕс дЕСЧдЕсСсЕсСсС дсрасасаас сдаєсьєссдда аєссддадсьс 240 даЕсасеєсдс абасаєєсає счаєдсссстд сссдаасаад асссссссесс сдасааєсссаа Зоо ачачаддєад аадсєддадс аседссаааа сасассдссс асссаасддда ддаасестає 3З6о садаастаса ааааєдсуодс ЕЄсСссааадс ддсааєссся деЕдсадаада Саседеаєсвд 420
Есааасаєдс деЕДдеадсаєє єдаєсдааєсд ЄССЕсодаєд Сдааддадсес ссссдаасєсєс 480
Есассдваєс аєдаадстає Есдададсесе СЕсСааєсасе аваєдеЕстьду Есааааєсає 540 агєєсдеЕсСсяс єдаєсааєсєє саддоадааєсса сасдссддса асдсссссст ссссадесдаа 60 аєддаадаас аасєдаадса доаодеЕдаааає деаассссда сСсосааасса ссаасссддаа 6бо чдсачаєссад сеЕдссассус сЕгДдДСсєдсеЕє дааасаасаа асссссаває єессоадаас 720 аєааєсваєд єддсаддаддда сададссаса асдддасссєс сссдсаадсес ЄЕсссадсаєд 78о0 чддааддаасеє ЄдсЕдеЕдсЧдє асаєєсаааа ааасасаєда асчасдеєссс Єдадсесасе 840 чаєаєдаааа ддададсааа басаадаадс Ссаааадада СддсЕссЯасс сссдваддададі 900 чддаєсааааа бЄаасаєддає єдсассаадс додсддааддд асаддсссда сСсссдєссаса 960
Зо ааєсааєдде ЄЕсСсадсасс асеєсдаєдсес адсеЕСсСеЕСстдуч асаасаєдад ааддсседвед 1020 чассаєдсвд дЕДдЕЯдЧдєЯдоду Есабсаєаєсає сссесадсса басвраєдсса Едасаєсаєд 1080 сссссессессС сесаддеєда дааадаааєсе ддададаааа ч«деЕсЧдараєс сЕсЕСаєдас 1140 асєддаасає садесдсасс Едаадеєдає сЕсСсаааасу ссасеєдсесс Есдсодаєсс 1200 сссдаддадуд ссааддсаде Євсаєеєсасауд дсасесеєсаєд аєєсадесудєд сдадсаасас 1260 аасдєдссас аасссодссає аааєддадса аааддсссад аадсаєсаас ассаадеЕдеЕс 1320
ЕсаєєдЕСдс аасссдесвда ссад 1344 «2105 183 «2115 1374 «2125 ДНК «213» Медісадо Єкипсаєчіа «4005 183 аєгєдеЕсєвсасаа сассаєєвеєєеєс єЄєСЕСССЄСсСса ассдсасєсєсєс сссссссасс сааадсстса (216) равеєсьссьс сесссесьсс ЕСсСЕсСЕССЄ СсСсЕсСЕсСсСЯДЄ бассеєсесесу радесесесес 120 асЕЕсевсаєс ассеЕссдасє єааєдсааса ассеЕсеЕсссє сеЕсссдсаас аассестьода 180 асеЕеЕсьесСьс сеЕсСЯраєсу ЕсСсЕсСсСЕсСеЕЕ дсЕсСЕСяаєє сеааєааєаа аааасссааа 240 чаааєєсєсьд сеЕаасасудс ддасЕссеЕссс дЕСЕСЕссСЕсС дсасеЕвсссь сааєсдссада Зоо ааєдаасаад аєдеЕссеЕвєеєс єдддааєссаад ааддаадсад аадссддаас Сссдсссссс 3З6о астаєєдсвд аадоадаєдда адааєсдсас сссаассаєба ааадсдсадес содссааааде 420 чддачаєссса аадсачаєда даєсдеасьу Ссааасаєда ссдсеЕстаєс адаєсосата 480 ге єоодаєд єдааддадсес ЄЕС даадсасасс асааадсааа дадададссс 540 гЕєдасвасе асаєдЕеЕсвду ссааааєсає арссудєссся гбадеЕсєдарсе саасасеєсяе 60
Басдеєєддса асаєдссссе ЄЄЄсаєасаа асоддаададс аасссаадса дддасасаає 6бо аєсаєсєєда єдеЕСсСааасса ссааадсдаа дссдаєссад ссассаєсоос асссдссдсссес 720 чаааєбдсчдас єЕССасасає содссдаааас СеЕчасеєваєсд Єддсаддада гбададеЕсСаєта 78о0 ассдаєссеєс баєдсаадсс сеЕєсадсаєсс ддсаддааєс Єдаєсєдесає ссасссаааа 840 аадсасаєдс ЄєЧчаєдаєсс адсасссдса дадасдаааа даааадсааа Сасасдаадес 900 седааддааа Сддссасдсс СсСсааддадеі ддаєсасааа сааєссддає єдссссаадс 960 чаєдадсаддд аєсддассаде Едссаассссї дооддааєсдду сассддсасс сеЕесдаєсся 1020 (516) Єсееєсадесда асаасаєдсу ааддссєєдЕсС даєсаєссад дЕсСсассада єсасаєстсає 1080 ссраєддсаа бассдсдсса Єдасаєааєд сссссеЕссас гаааддеЕєда аааадаааєєс 1140 чаддадаааа дааєсасаєс асаєсаєдодад ассддсаває сасеЕєдсьсс адааасаадс 1200
Ес еЕсСсдаса Єсассдсесс Есдєдаааає ссеЕдаааадд сгааадаадс агасессдааа 1260 дссЕєДваєд аєсссудєдас гадеЕсаасає даєсдсдседуа адесєдссає асасуддсааа 1320 аааддаєсад аадсаєсаас Есссдсадеьс сссЕсдЕСсСдс адссаєддаа дсад 1374 «2105 184 «2115 1967 «2125 ДНК «213» біусіпе шах «4005 184 часЕЧдадасе даддадсодда Єссрбассссє сеЕсссасаса сссссссссє сеЕсссатраєд (216) аачааєдадс асдассудеЕє сеЕєсоддссса ссассдсдсд дсасассосс саааєсаасаа 120 частаєдеЕве аєдсеЕсеста содссодссаас аассасассс сссоасстасддс ссадддеєссяе 180
ЕСсСсСУуєЕЕСЕС СсСеЕЕСЯааас, ЕЕССЕЕСЕСС ЕССЕЕСЕЄсСЕ ЕСвасеєдсує суєссесдесс 240 гЕсЯгЕдсеЕсСсС ЕсСсаєсасес ссааддссаа аєссааадає аасаасааєс дссассссЧе Зоо сеЕссдссааа сасссссссуд ссаасардес сдсЕссоддеЕс ссдесасдса ссеЕсссесаа 3З6о сдсссддаас даасаададс СсСссадссдуд аассаддааа даадсадаад ссддассєссяо 420 десЕдсваає деЕєдсєдсад дааєддаада адсдсасааєс аассасаааа дсдсадесає 480 ссааадсдда дассссаадс саааддачає єдсаєсдеєсу аасаєдчаєсдд сеЕстаєєсодва 540
Есдсасаьєс Еєддаєдсда соодчасссєве сдЕсСсеесСаа ссасассаса аадсааадад 60 ададссЕєес дасвассасу ЕДЕЄєддЕСа дааєсасаєс суєсстЕсвад Есдаєсесаа 6бо аааєєсеЕвсає деЕєЄддсааса Єдсссссссс сассдаааєд даададааас СсСаадсад4дад 720 асасаасаєс аєсєєдаєдеЕ саааєсасса аассдаадсс даєсссадсса Ссассдсесес 78о0
ЧдсЕдсЕСсСЧдаа асасдасесс сагагассдс Сдаааасаєсд асстаєдсад саддадатсад 840 адеЕсасаасс дасссессдЕ ссааассаєє садсаєєддс аддаасстса ЕЄСДЯгЧЄєсТта 900 сЕСсСсааааад сасасдсссд асдаєсссадс єСЕєдсрадад асдаааадаа асдсааатає 960 асчадсеЕсьд ааддаааєду ссаєдсеЕсес ааддадсддда Есасааагадч ЕСЕДдДдаєсдс 1020 сссаадсддІ ддаадддаєсс дсссадаєсс ссасассдда даасдддсас сддсасссте 1080
ЄдавасеЕсєсе Єсдуєбадаса асаєдадаад ассєдеЕсдаа саєеєсьддес сассддддсса 1140
Зо Єдсасаєссє ЄЕддасдааває єдеЕдссаєда Сасааєдссс ссессастаа аддасєдадаа 1200 ачаааєєддд дадаааадаа Єбаваєссє Есаєсддадасе ддсагаєсад ЄддсЕссадс 1260 ассаадсеЕвсє єссдааасса сеєдстассад Сдааааєсся дааааддсса аддадатацсєєе 1320 сасаааадсс сєдсаєдаєє седеєдасоууда дсаасаєаає чдеЕдсЕдааає сеЕдсааєаса 1380 бдадсаааавга ддаєседаад саєсаасессс адсадеЕсесья єєдЕСасадеі саєддаадеса 1440 чаєдаааєсі дсаєрсеєсеЕсс асєдсаасєс дсеєссдаєдс адаадсаадеі басаадасеє 1500 садеЕсаааса асеЕссаасьд асеєсасееєся дадддаседс сстасврассас ассдуддеЕсасс 1560 чааєдаєєста дссЕдЕсОдда адеЕссдсаді сааасасавба ЕЕЕЕсСареЕЕ сарсесессь 1620
ЕЕсоЯСсСЕСЕв дЕсдссдеЕса Есадсаєєса асесаєстду ааєсеЕдеЕесс адеЕссадаад 1680 дЕєЄСсСааавеєс ЄдсеЕдсесвтас Едеасаддес ЄсеЕсСестадее соддЕдЕСада ЕсСЕЧ9ЧУЄЕсСЧЕ 1740
Єдасєдаєаа аасассааає ЕСЕЄсасста сааєсеЕсддєд аєсаддсеєса дстгадседаа 1800 бадаєаааає аєааседуєє ссаєеєсуврає сеЕсаадссаа сСЕЄЕдЕеЕєЄСсСса Егагадаєда 1860 асгачаєдеЕва деаєсасаєд Ессадасдудд дЕСсадеЕдаає ааасєддеЕсс аааєсдсеаає 1920 дсааааєстає ссавраєсуддЕ ааааєсаааад сеЕСтасадеє ассдєва 1967 «2105 185 «2115 1674 «2125 ДНК «213» Сакеєратив біпссогіцв «4005 185
ЕсСЕСЕСсСЕСсСесС сасасасаа сасасаааас асасастасе дсрасесеесс сеЕСЕСТтаста (216) сасеЕсеЕсссєс Есустаєдес даєсьссьсс єсеЕссесссе ссссрасессс сеЕссеесесс 120 ассасааасуд саааєсстад дає ессссс ссаєссєссасєс сЕссссссддс сессасессся 180 сссссЯдссЕс сЕссссдассс ссдсссдаєє сеЕССсСддддде СсСссасдессо сдсдсссссе 240 чдсдссддсда аєдссдссса єддсасддсуд дадассдссс асддсаасаа дсддссдаєсса Зоо ссуссуєссЕ ссеЕССССсСвдсС Едстасодсаа ссдЕСсСсСдсвд дасссддасса сддеЕсасесе 3З6о сдсасаєсса сСсдасдсссду СсСссдаасаа дассЕссЕсЕ, седдааєссса аачдчададевд 420 чаадсєддаа сасєдссааа асаєсассдсс саадсаасдуда аддадссаса Ссадаастас 480 аааваєдсад ЄЄсСЕССсСааад Єдсоддссссо сасдсадаад асассдсдеЕс десесааасаєд 540 садаєдсадсдеє ЕЄсЧдаєсууває дЯеЕеЕСЕєддає дедааддадс сдЕсЕДдааєс сеЕсассаєває 60 (516) саєдаадсса єЕсСЕсСООдаасс ЄЕЄЕсаассас сасасуєєсу деЕсааааєса гаєссддсесе 6бо
Егддеєсааєє єсаддоадааєс асасоассддс аасдсссссд ЄЕЕссоаЯдесЯдЕ аасддаадад 720 садсссаадс адддсдасаа ддсддЕсссд аєсссааасс ассааасада адсадаєсса 78о0
ЧдсЕДЯДЕваєвєд ссеЕєдаєдсе єдааасааса аасссссаса ССсСссдадаа саєааєстас 840 чЧЕЧддсадддд аєададеаає аасадасссє сеЕссдсаадс сЕсссадсає дддааддаає 900 сЕдеЕсдсдсЯя Єдсасссааа ааадсастаєд аасдаєсдеЕсєс седадсеєсдс єдадаєдааа 960 ааавдаєсаа агсасаадаад ЕСсСЕааааддад аддасоддссє ЄдсеЕсеЕсдад додасодаєся 1020 ааааєааєсає ддаєсдсудсес аадсддеЕддс адддасаддс садаєсстає сасаааєсад 1080 бод есСсудд сассдесеєда Едссасьссдуд сеЕсдасааса Єдадааддсе сдеЕддассає 1140 дсЕдЯдЕЕсдоа Єддудєсасає асаєссьста дссасаєєдеЕ дссаєдасає саєдссссосяе 1200 ссЕСсСсЕСсСаду Есдадааада ааєсддадад аачадеЕсддда ЕсЕСсСЕЕсЕеСса Еддсассодда 1260 асаєсадеєддд сассуддааає Єааєєсссаа даадстассуд ссЕсСЕвдеЕда дЕсссссддад 1320 чаддсдаадд садсеєваєсс асаддсасес саєсєдаєсссуя ЕдеЕдеЕдааса асасаадаед 1380 сеасаєсєссд сдудєбасаєдуд аддааааддд Есадаадсає саасассаад СЄдЕсСЕСЯЄв 1440
Єсасаасссє ЄдсадеЕсеєсеЕ сдзаєсадесе сеЕсдддЕЄссад аддаддєдаа адсаваєєссяе 1500 гЕєдЕсвада ЄдасаєаддЕ дсаєсадаєда сассдаадаа бадаєдсаса аасаадедає 1560 ачааачаєдеЕ аєдеЕстєааєсс аааааардеЕс сСЕСЕдсаєсеі єЄдсаааддда єсЕсСсаааас 1620 адассЕвєеєва єЕсСЕадседс адсаассаає асассаааас адудсеєсессю исься 1674 «210» 186 «2115 1893 «2125 ДНК «2135 5Бо1іапит Єирековит «400» 186 сдсасасбасс сассссассс асссссеЕрес ссдассстєєс сеЕСЕСсСЕСтаа адсесьссад (216)
ЕседеЕдЧдєда ЄдеЕДДассст сссадсудеє ссуесеЕссвеЕ сеЕсссЕССЄЮЕ сардссеесь 120
ЄссусЕссСуєЄ сЕСССЕСсСвдс асдасасєєссу аддсадесає сессаєсвєєсс аассеєдєдчеє 180 ссадсадсад Саасаассдс СсСсСсЕсСсрдса дсаасеЕссда ссстарєєсс дарєессьдс 240 гЕСЯОдЕеЕЧдЕеЕЧЧа ааєсддаддас єДдЕєЧС0дддасс содаадссдс дасдсдссЯає сЕсессоаєсоасе Зоо
Есдааддеєас деЕддааєддс адаааєчаєє даадаєдсса єдасудесеЕєс гєдсеЕєстьдад 360 адссаєдадс ЕЄєЄссодсадеЕс ссдадасссс сссдасдсас дсассддада адасесдста 420
Зо ЕСЕЧУсСсдеЕєсС ааааадссдЕ дооаадаєсєдаа аааассдссдс ЄсСсааєсєдеЕєдс єдааддвааєд 480 чадччаєєєдеЕ аєсадаасса Єсододаасдса дЕсссасааа дсддадессс сааадсавває 540 чаддссасеЕє Єдсасаасає додасЕСЕЕдва СЕсСЧСОаєсУуєд ЕЕЕЕеЕсЧдсода ЕдЕЧааддає 60 ссСЕЕсЕДдаає ЕСсСЕСдссавба Есаєааддес асеєсдєдаас сЕЕсСЕЧЧаста Єгасаадесе 6бо даєсааааєє асаєссдсса дсргадессдає сссаддадес сссасдєсдд даасаєссса 720 дЕЕЕєсСоЯодЕд ааасоддсада даадсеєсааа садддеЕчЧчаса асчєсдЕССс даєсдеЕсааас 78о0 саєсааадсд аадссдаєссс сСдсдаєтаєє дсасесеєєсда єсдааєссааа дсесссадає 840 аєєсдсеЕдада асаєсаєсеєса єдЕєдсЕдда дасададеЕса Есасеєдаєсс ЕСЕсСЕдсаад 900 ссаєсєссадса Сдддааддаа СссссЕЧдеЕЧє деЕссасссда ааааасасбає дааєсдаєдас 960 сссдаасесд ссдадаєдаа ааадададса аасасаадаа чсЕеЕсдаадда дасоддсеЕєвд 1020 сраєєсдадда дсоддаєсааа аасаасаєдуа асєдсеєссста дсоддеЕддаад адаєсаддсса 1080 часссеЕдеЕва сааасуааєсуд дсаєссадса ссаєсеєдаєд сЕсссдсдас адасаасаєд 1140 аддаддсеЕвд басаасаєдс ЕддЕдЕсСссє дудаєсасаєвєсе аєссеЕсстадс ааєсеЕсддєде 1200 саєдаваєса ЕдсссссеЕсСс сдсссадуаєє дадаааааєа Есддддадаа аададеЕєдка 1260
ЄсСЕЕсссаєд дадссддсає ассєдсддса сссааааєсуд аєсєссаєда одЕсСоОсСтдаЕ 1320 дсЕЕєддадда асссєдаддс баадаєдудєба гагасааадд сасеєесаєда сЕСЕдЕеЕаадс 1380 садсадсаса асдсдстааа ЕЄссСЕдссаса саєддсааас ааддаседаа ддсаєсааєа 1440 ссртадеЕдеЕсеЕ саєсаєсаса ассаєддсад бадсеЕєеєсесе ЕссаасеЕста ЄЕЄЕеЕєСагає 1500 сСЕКЯДЕвдссу гадссадеЕесє єдсадасдеєє єдДдЕседодсад Есасааєсаа ассасаадда 1560
Єгасасеєсас аасссеєссса сагбассасодас ЄЕддсаєдеЕдд Есадессаєд садааадчесед 1620 асасааасаа адсааєссесс даадесасад сааасаєсаас сеЕдааддаає ЕСЕсСЕсООса 1680 чадЕсадаєва авсссеЕседа сасдааєдна садеЕсСдсьсеЕ асаєєсдврась гагассааає 1740
ЧдЕсадаєсса аасЕсудєтад Єааєдаєадс СЕсСсаадтас Есаасеєсьда сЕЕсеЕсаад 1800
Єсаадедеєва дегадсваєсс гадаєсудсьд сеЕСасрсеєвдс сЕЄєДдаадед дсааєссаає 1860 сгЕЧдсєдадаа агаєаасааа Єдаєдсестд ста 1893 «2105 187 «2115» 2016 «212» ДНК (516) «213» Огула вагіуа «4005 187 чадсЕддада єЄддачаєдда дчаєддчачаєсдд дадддсдддс Ссддсасааа Ссссдаадсд (216) сеЕссддсдас сасссссаас ссадссссса стадддсраас аасссссЕсс содаєтсаде 120
БбЕСвгадаадс ЄЄсСЕєсСваєд саддсдссдс сдасссдсссс сссдссдаєссд ссоддсдоаєсддва 180 ссдссаєсссо дсссдсдссуд дсдаддсесе дсрдсесссд ссдсддсдесс сессдессгсд 240 аадссааддс содсссддадда ссддсддссс дадоадссодсу ддЕдссддесс ааддасоассд 300
ЕссеЕСсСдссеЕсС саддеєдуаєд доадссссоссс сссоссссда сдсдсдсаас дадсаададс 3З6о
Есаєєєєдса баєсадааад даадесддада аадддаадсе дссеєдсадає дссасесдсса 420 аєссадаада дсебаєсассас аассасаадд асдсддеЕсбає дсададсадд даєсссаааєд 480 сасасдасаєсє сдсдссссса аасасоддсдда сссЕдеЕссда ЄЕсУОЕЧєЄєсвд сесдаєдтгад 540 адааєссуєс гассЕсєсссу ссеЕсСаєсаса аадссдеЕсад ддаассаєреєс дасстаєсаса 60 гЧдЕЄєсддеєса даастасаєє аддсесссссд сСадассасад ааасссасбає деЕсддсаагса 6бо
Баєссаєєеєє ссаадасаєд даасадаадс Сссаасаддд ссасаасЯяєс деЕсссдаєсде 720 ссаассаєсєса дасадаадса дасссадсаа ссасрєсдсеЕс дсеЕдсеЕсдаа адаадсаасс 78о0 саєсддаєсад сдаааасаса деЕссасооєсд ссддсдасад ддссдссаса дасссссссяо 840 дсаадссаєс гадсаєддда адааасссса СЕЄдсЧдєдса сссаааааад сасаєдааєд 900 агєеЕєсседа дсеадеЕєдає аєдаададда дддсааасас сСсдсбадессд ааддааає9д 960 сСЕсвасеЕесеЕ асуєддсдудЕ Єсасадаєаа ЕсСЕддаєадс ассаадедЧчЕ ддеЕададаєс 1020
ЧдЕссддаєсс ЄЕсдасадда дааєддсаєс суддсассаєе Едаєдсаєсь дсадеЕддаса 1080 асаєдаддад дссЕСЕддад саєєстоддед сЕСсСсддудса сабаєсаєсса сесссасесдс 1140
Єссдссаєда доасваєдссе ссассасада аддеЕсдадаа ададаєсдуді дадсааад9двд 1200
Єгаваєссьс ссаєдудєдса додасЕсдеЕсад сСаассдаада дасааадьас адсдасаєта 1260 сддЕєсарас ссааааєдеЕс дасдадсдса дададаааєе сессададесса ЄЕдеасаасе 1320 садеЕСсСЧчЕєЕєда Есадеаєаає дсдсеЕСсааає сеєдсвтаєсьє гададдеЕсда ддадсадаєє 1380 саєсддасад Едссаєсєса сеЕсЕссасаас саєддсдаєд ааасессудсе ЕсССЄСВадЕе 1440 сгчсЕСЕУДЄСЄ ддаєсеЕсеса асдаадеЕсас сессаєсеєсе єсссдасаса дсадаєсдаас 1500
ЄдсеЕдссдас асдсаавсє єсссеЕддсад аасссєеЕстаа асеЕєсддднає ссеаасссає 1560 асєааєсаєд ааддддаддс ЕдЕсаседес аєдсаааєсе Єдсссаднає дчаєдасеєта 1620 сссадсєдаа Есссадссас асаєдаєдсу ЕЄСЯдЕєСаєе дЕЕеЕсдсасас, ааасаєваєс 1680 дсдЕсаваєд адсасеєсьсеЕ доддеєсадаас Сдсасадсаа сдсддесседуд дсасеЕсааєс 1740
Зо ЄддсаєдеЕвєд ЄссасодоадЕ дсаєдсесдс Саасадаада адсссаасає чсддчЧваєсеє 1800
ЧЕ сСЯ дЕсВЯаєсЕсе ЕСССЕЕЕСЕ ссЕСЕсСуУЄєсС саєдсаєава басесцчарєє 1860
Єдаєсеєссад ЯдЕЄЕдддадає асааєдудаєса аадеЕдеЕсаєд асадеЕсессе аддеЕсеЕдеЕсдс 1920 сЕСЧдаадеЕса гасссдуддсуд саасаєдеЕсСь дасєдаваєе сеЕдаєдаєує сасеЕсу єс 1980
ЄдаасеЕєссе дасуссааса ЄддЕдсеЕсдддд аєдеЕвд 2016 «2105 188 «2115» 1888 «2125 ДНК «213» вогодпит рісої1ог «4005 188 аєдсасдсдс сдссодасеЕддє соасЯаєссоадса дддддсдссо дссссдссас сдссдссесд (216)
ЕссеЕсСдссуЄ содссседодсеЕ додссеЕсдссд сдддссдсса Сссесдссдс дссоддсдадд 120 сесссасддІ сссдссдсдд ддсассссдд ссддаадсса аддссдсдєд дадддсегдсс 180 чадвададоадас доадддсссдад ддЕсссддесс аадддсдсессд СЄдсесдссес стагсаєсддадес 240 чдссдаддадда гддсдоадасс СсСЕСУОСсСддсСвЧЯ сЕСдасдаду аададсесає гєссасасбаєс Зоо ачаааддаас Єддаєааєдуа аааасссссо дсадасдссдд ссадсааєсяє додадчадеЕвд 3З6о
Баєсаєааєє асаддааєдс єдДдЕеЕєссдсаа аасддадаєс ссааєсдсаса Єдадаєсаєд 420 сСЕсЕСаааєса ЕдасудсеЕвеє дЕЕсдаєсяє дсеЕСсСвтасвдд асєдсасадаа Єссаєевасс 480
ЄЕєсСсассеє аєсасааадс єдеЕдсдадаа ссдсссдасс ассасасдеЕс сддссадаас 540 басаєсаддсес сЕСЕдоасада ЕСсСЕСаддаас, СсстаєдеЕсдд дсаасасеєсс асеЕсесесає 60 часаєддаад адаадсєдса ссадддссас аасдссдссс сдаєсдесссаа ссассадаса 6бо чаадсадаєс садсааєтає сеЕсСсСЕСсдссСс сссдаааааа ссааєсссаєбдд дассадесдаа 720 аасасадеЕее аєдеЕєдседу адчагадддЕс дссасоодаєс сасеЕєєдсаа дссаєетадс 78о0 аєдддаадаа аєсєсаєєвєд саєдесасссу ааааадсаса Сдааєсдассс ссседадста 840
ЧдЕєЧчадаєда адчадчдадаєс ааасасссда адеЕсссаадда аааьддссеЕс дсссевасЧяе 900
ЧдаєддсеЕСсСас адеЕсааєєвдд даєєдсасса адсддсддса дадассдссс аааєссстєсса 960 асаддадаає дадсасссудс дссаєссдає ссаєстєдсад Єддасааває даддаддасее 1020 сЕддадсаєд седдсдЕсєсс єдддсасаєса баєссастає саєсудстдед стаєдадавеє 1080 аєдссеЕссас сасаасадде Едадааадад аєсоддеЕдадс ададдадєдає асссеЕєсссає 1140 (516) чдчадеаддссє Єдссадсаас Єдаадаааса ааасаєсддучуд асастассдс ссагбассаад 1200 ааєдсеЕдаєд адддаадддда дстаєссаса аасасеЕседеЕ асаасесадеі ЕдЕсСааєсад 1260 басчдаєдеЕдс Єсааарсвдс гаєсеЕсвада даєсєсдєддад садсеєдсаєс ааасааєдес 1320 аєсесаєєдеЕ сасаассаєд дадчаєдааєд СрадсеЕсеЕсья садеЕсведуддЕ ссадагрсває 1380 басеЕдаадеьс ассеЕсЕеЕссад аададсадудє даасєсдссає ЄдеЕдсаарсе сассддадаа 1440 асЕсЕєдаас ЄЕсСяавсеЕсеЕ єсдаєрассас ссдасеЕстає садесаєддЕ ддадсседес 1500 аєєсдеЕсаєдс адаєссеєвєдс Єаадаадесся деЕддасаасеЕ дЕсддЕсЯддЕ саадодеЕдас 1560 бддєЕдаєєссе дсасаєгадду асссеЕсдєаа сеЕдЕсдсаєд соддЕСЯдЕСсСсу саааєсасьд 1620
ЧдЕєдсЕСадс аасуєдседуа Есддддсасьд аддааєссЯє саддеЕєдсає ссЕсеЕстдсс 1680
ЄЕдасдєсаа ЄЕсСЧОсЧосСадеі ЕдааддЕеЕєда адсдаєааає ЕдЕЕесвавст вдеЕСЕєсдесса 1740
Есаєдсасає аддсессдадеЕ сЕсЕссеЕдуус сссасаєєвесє єсЕдддадава сСаааадсадс 1800 аддадеЕсаєд асаєдсссєс адеЕсддсссє сссеЕдЕсдаа асссеЕєсода єдеЕаассвде 1860 сраєвєєєеєсьса гагагасесса сеЕдааадеі 1888 «2105 189 «2115» 2046 «2125 ДНК «213» йеа шаув «4005 189 чадчаєєсає сеЕСЧдЕдЕеЕСЯЧа сдасдсессеєсс дсссоссссу адсссссддсєс сЯдссесссдаес (216)
ЧдЕССсСЕССсСЯдса дсеЕддасеся Єдсодсстассс сссаддасдс басссссасс адддееессд 120 чаєтадчдаєЕс стадаассеє ссассдссус сЕСсСссасдс асдсдсессодсс дссддесасд 180
ЕЕсдсадддда дсдсседссс сассассдсс Сссасессдс судєсудссстд дЕгДддссЕсд 240 ссдсдддасд ссасссссдс сдсдссддсд аддсссстас ддссссдессд сдддасасьс Зоо сддссддаад ссааддссдс дсддадддсЕ дссододаддадуда дасддддесс дсодддесссд 3З6о чдссаадддсд сЕДдЕдсЕСЯдс сЕССтасаєсда ддсдссдада аддсддсддад ассаєсдаєссд 420 сЕдссеєЧдасо аддаададес сасєєсесас ассадааадуа аассддчасаа Сддаааассе 480 сссдсадаєд Ссдссадсаа сссддаддад седсаєставра ассасаддаа ЄдсодеЕЕстд 540 саааасддад асссаааєсдс асасдаддес асдсеЕсссаа асаєдаєдас сеЕсЧЯОЄЕєдває 60 сЯасдЕсссас содаєсдсаса даасссаєюєєс аассссссас сссассаєаа адсессдсда 6бо чаассЧдєєса асраєсасає аЯчеЕседдессад аассасаєса ддссессддає адасєсссадда 720
Зо аасеЕсстаєд Еєддсаасає сСеЕсСсСсСЕСсеЕеєсС саєдаєраєсоо аададааєсо ссассаддоас 78о0 сасаасдєсд ЄСсссдаєсдсс саассаєсад ссадаадсад ассадсаає гасєсдссєссд 840 сЕссссдааа ааассаассс сСсддаєстадеі даааасасад ЕЄсаєдеЕрсдс єддасдагсадвд 900 чЧЕєДдЕеЕсассуу аєссдсессд саадссассс адсасдддаа даааєсссає ссдсдаєдгас 960
Єсдааааадс агаєдааєда ЕСЕССсССсСЕдад сеЕааєсєдада Єдаададдад ассааатасе 1020 сдаадеЕсеєса аддаааєддс асєдсесєеєсвта сосодЕдддеЕЕ сасадеЕсаає Есодаєседса 1080 ссдадедЧчєд дсададассуд сссаааєссс Есаєсаддад ааєдудбасссо ддсассаєес 1140 чаєєсаєсьд садеддасаа баєдаддадд сЕсСсоддадс аєдсЕддеЕдЕ ЕСссдддсас 1200 асасаєссас сассаєсдсеЕ деЕдссаєдад дЕсаєдссьс сассасааса ддсєЕдадаад 1260 чачаєєдаєд адсададуддЕ дагаєсссес саєсдддадсад дсЕЕєдЕСаде аассдаадаа 1320 аєааасвсаєд дадасаєтас єдсєсавасс аадааєдссд аєдаддадаадч додадссасес 1380 асааасассеє Єдсасаассс адеЕсєдеЕєаас садерасааєд ЕдсЕСаааєс Едссассеве 1440 ачачаєсдєд дадсадседЕ аєссааасаає деЕсаєсєсас ЄдеЕсасаасс асоддсдаєда 1500 аєдеЕсСсадесє єсдЕсСаседа адеЕсассеєвс ссаааададс аддедаасста Есаєседедса 1560 авЕгєевєдседуа дадааасесе Едаасеєвааа ССЕЕсЕеЕсдає аєсасвадас Ессаєсааєс 1620 аєдадєддадс сеЕдЕсасеєдеЕ саєдсадаєд сЕСдссаада адеЕсСсЕдсаас СоЯсЕЧЧЄє9Уо 1680
Єсаадддєда ЄЕддсддавєсе єдсасаєасуд даєссддсадеі баседссдсесс Есаддаєєтдсе 1740 садсааєдєд седсЕдУЧєЄвд ддсассдадуч ааєссаєсад дЕЕдсарссє ЄЕС дссс9д 1800 асдеєЕсдчаєвс деЕдсадесєда адеЕддсааас дЯдЕСЕСЕСсСтає сЕсддЕеЕссЯ саєсаєдксає 1860 агасдбаддс ЄЕЯДадеЕСсаєЕ дсЕддсеЕсСса сасеЕсеЕсвду адаєаєааає чсоодеЕаддад 1920
Єгаєдадаєд Сссасадесу дсссЕсссеЕс дЕсСаваасеєсс єЕЄсдддаєсдаєба єсесссссесе 1980 бЕСсдбасаєд сасеЕсасеєда аадеєсааєсудс ааагаєсьсу ЕДЕЕссСсаде аааааааааа 2040 аааааа 2046 «2105 190 «2115 1994 «2125 ДНК «213» Ногааецют уцідаге «4005 190 чадааассаа даадсдадаа Єсддсассдс Ссссдссдсс дсосесдссдс сеЕссдесдсс (216) (516) сЯоєССЕсСсССЕ ссСссоуссдає Есдебдсссас сассассасе сеЕссЕЕсСсса ссдоадсвєадао 120 гЕсЕсСоУдДЕСЄ сеадаассяс асдсссдссс дссссаєбдса адссссдссу сесдссдсдас 180
Есдссододадд содссеєдддсесс ЄсеЕсассдас ссдссабасо адсддсдссдуд дсдддесєссс 240 чдссдЕсссад дсодсеЕдсдсс сеЕсСсоддссдс ссодсоасддад ддсоддссодда ддсдоаддссд9а494д Зоо ссссдсддсс ассддссаад ддсдссдсдс Ссдссессда сасдддддасд дасдаддвадд 3З6о
Есдсоддддсс аєсдсссстд сеЕсдасдсдс дсадсдадса ададесссдсс ссасдсдаєса 420 чддааддаадс ододадачадду аадссдсодЕєс сачасдеєсдс ЄдасаасеЕєс даааасседе 480 асеєдсааєста саадааєдсу деЕдсвтасааа асодддадассс аааєдсатає садаєсаєдс 540 бЕєсСсаасає даєддчаєєвса єсеєЧдассдясд ЄсСссдссада Сдсададаає ссаєсссасдс 60
БбЕсадссеєвса Єсасааддсесс аєсададаас сЯяасссдасса СсасасеЕссс ддссадаасі 6бо асаєсаддсес асеєддсадає єссаддаасоі сссаєсдссодд Саасасєсєссє дсаєсєссадед 720 асаєддадаа дсадсессддд садддеєсагба агдссУуєссеЕ даєдесстаає сассадасад 78о0 аадсоддаєсс адсадеЕваєє дссеЕєдссас ссдааадаад саасссоаєбда ассадсдада 840 асасадеЕєста єдЕеЕєЧдсеЕдод даєсадддеєєс ссасадасєсс ссеЕссдсаад ссаєсссадса 900
Едддаадааа ссЕсСсСЕЄвеЯдЕ дЕдсасссаа аааадсаєбає ддааєчасєсєєс ссеєдадссаа 960 бЕдадаєдаа даддаддудса аасасєсдаа дЕСЕСаадда аасддсесесу ссеЕстасоавд 1020 чдададєєсаса Сасааєсєдуа асадссссда деЕддсоддеЕад адассудєсся дассссеЕєда 1080 сЕддадааєсуд дсасссудсуд ссаєєєдаєд саєсєдсаде ддаєааваєд аддаддасеес 1140 бддадсаєеєс єддсдЕсссЕ дддсасасає аєссаєсаєс аєєєсдсваєдс гаєдадаєта 1200 бдссеєссасс асаасадаєсє дадааадада сСЕдЧдєдадса аадддедаса ЕссевсСсаєд 1260 чЧЕдЕаддсЕсє дЕСадеадсеЕ даадааасаа адсаєсддудда ЕдЕвасеєдсе сааєсєссада 1320 аєдсєдаєда дасааддоадуа аассєсссад аддсеєстьдна садеЕєЄсадеЕє дЕсЄЧдаєсаає 1380 асааєдеЕсСся саадесссдсеЕ аєсеЕссадад ассуєсддадс адздзеЕеЕссдесу аасссвєдсса 1440
Есеєсасесес дсаассаєдуа соддєдааасс аадссеЕссеєс аддсседчдає еЕссессарсес 1500
ГЕсЄесдасад адсадаєдаа сеЕдсстагадес дсаасуєєдЕ дчсЕСсЕсСвдс содддваєддасс 1560
Єгааасесєвд аєдеЕсуєсас адеЕсаддаєд аддсссєдса даєсседнаа ЧЕЕДдЕсОаад 1620
Єсдсдддаад дааааассЯдє дсдасаєдсс дссасассудє дЕссаєдсад єдасаддаад 1680
Есеєдсоддсвд ЄЕдЕСадудєс баааєсссаа агадсасудс ддаасссадс адсадаєдає 1740 чдсаєдеЕдеєес арєсЕсеЕсууєд аасадсвтасеі дссдсаєсад аєддсваєса ЕСЕддддссад 1800 аєєддеЕссад сааасасада Есддссссвд даєссеЕддса дЕСЧдЕСєдда Есааааєдсе 1860 чаваєєсесьс сєєсуєусесу ЄсеЕсасесеЄ сеЕЧСастадее ЕєдЕДДгасає асеаасесьс 1920
Зо ЕЕдсеєссааа аєседдадас асаєдасаєд абасасасад адсададссс аасаєдеЕдеЕс 1980 дессЕєсСсвдЄ Єаас 1994 «2105 191 «2115» 1936 «2125» ДНК «213» РПувсоштшієгеї1а расбепь «4005 191 чддасдадсдд адеддададс баєддадсддса дсадссддеєс ссдсгддсдає дагбаєсдЕс9ад (216)
Есгбадддсад адаадсадса єЄдссссддсс адддддддаєд даассадесдс Сассадсадес 120 ассадсддса дсддссасдс дЕСдСсСєдааа дочадсессо ассоодсеЕсса аддсаассодс 180 сЕсссдссодс аадссссдас сасдссудссд сЕдеЕсссодда сдааасдсаа сддадасадаадд 240 асдссоддодада аєдссудєдас сааєгєєсоода аааєсєдаає єссаєсуєда ааєтадед9д Зоо адеасдсддд сдассасдса додєдодссдаа дссассасад ссддЕссссад ддадассасєс 3З6о чаддассдсд сраєтаєсда сооадеЕСсасссс сасадессссд ааддаассса ассддаадаа 420 чадеЕєдаєдс аддсаассда аааддаддеєд даасссоодсс ддсЕдссдаа дсоасдседас 480 чдсодддааєда бададеЕєдеа єсдсааєссає сдадаєсдссд сСадсдадсад Сддсдсадаа 540 ааєдсдаєдуа асаєєдеЕсЧдЕ дааадссаєд сСсаассдсдс сддассддає ссеЕсссдсад 60
ЕЕєсдаддадс саєєсасаєє єддаєсдсас сасаададаа сддсддадсес дсаєдаєсас 6бо
Басасаєєвєд деЕСсадаасса ЄдеЕдсЧдЕєссЕ сеЕСССадаєсєс ссаддаассс ссассеєс99ад 720 аасеЕсааада ЕСсССссеЧдасса даєсададаад аасссдааад адддоадсасаа саєЄсаєссве 78о0 сстасссааєсс ассадассда ддсадаєссе дсрдеєсаєсдо сдсЕдеЕсдсеЕ єдадсасьсяь 840 сасссстаєсс соддсададаа сссСдасстає деддссддад асадддсєсдс дссддаєсса 900 гбЕСЕєдсааас сЕєЕеєвадеає доддсаддаає сссссдсдсда бСдсаєсссааа ааадсасасєсєс 960 сасчдаєднас сддассеЕсдс Єдаааєдааа ассааадсста асдсддаадас сЕєсЄдадасад 1020 аєдасдаєсс ЄдсеЕдадоаса дддаддесаа Сбаєсаєсдуда бадсасссад єддасодасодс 1080 чаєсдсссвд аєсссдадас саасдааєдд дЕсСССсСЕДдсас аєєесдасес деССодстЧд 1140 чадаасаєда адсудассаєс ЕдасаєєдеЕс судадсассвд сеЕсаєєсаса Едссстсаєса 1200
Єгасваєдесє єЕдадаєтає дссассессо дЕСсССсаддбас ааааддадсе аддададсда 1260 ачадсадеєад даєсеЕсадсду адеЕєддеЕста дссдєсеЕссу адсаастада сгаєдаєссс 1320 (516) аєсдсдаадс СбСадесдасда Есссааааає дсдааддасд ссЕєсесода єдсдасає9 1380 адсдаадеєса аєдасаєдса ЄаасуєдеЕва ааадаадсаа ЕЕсаєддеда ссааддеЕєде 1440
ЧдсЕдЕсадса садаєсеєсссє дадассддаа садссссддЕ Еєдаєддаад саддсдаасе 1500 чаєєдаааає аддеЕсасеЕсу аадчеЕеЕсваєд сСаааадсаєд аадсаєссьєює асЕдссееее 1560 асдсЕєдЕСва адсеЕссааду аєдеаадаає Ссадсадсдє деаєагааєддсе гасаєєсдеса 1620
Єдєдаваєеєс єЕсСсЧдаєсс десдсдасасдуд аєддссаєдс сеЕдсЕсааєс сегдеЕсСасса 1680 чдасдЕсСЕСсСад Саддааасудд Єддеасєдає єдссодєсвдЕ ссдасеєдає сеадсадсес 1740 ччавєсьдсд баседдаєаа сЕєдудєссдд сСааєсадддас сдаєссстаєс дадеЕдаддаде 1800 гЕдЕеЕЧДаєава даєсаасасе дсасеЕсвдес асааєсоддаа бадаєдсаєсе саєсаєєсає 1860 ссаадссаас асаєссеєдад Єсддадсаєса адеЕсдаадса сеЕссЕСаасе Есаєседааад 1920 чадаєєсесьс ассасду 1936 «2105 192 «2115 2260 «2125 ДНК «213» Спіашудоштопав геіпНагкаєсії «4005 192 чаачааєдсеЕ дсасдсдасе садсадсдсд сддессдссдЯа ссдссдсссу ЄссСссоадоаєд (216) сдсдсдсдєсс даассдсдсс дЕсдсссасуд соддсрдсдас сдссдссасс адесстьдссдва 120 ссдеЕсдасдсє ссадссссас садсстаадс гддсдддсдЕ дассаасдад садсадеєсса 180 аддсоддеєаає сааддддсед дЕСЯдсссадд дсаадессссс сссдасадссд дадсссдсесєс 240 чоачаєсасес срасдасаас Сасаадаадуд ссдЕсассад садсддсдЕс дсеЕддодассд Зоо аєчадаадсеє ЄдеЕсасссад деЕдсаадсса дсассссдда сааєсдссссд аассаддсд4д 3З6о
Едаасссста сассеЕссссс ЄсСЕсесСсаса сссдсстаає Єдадсссгтас аастсастаєд 420 асеЕєсддеЕСса дсодсрасудеєс дсдасссоса Ссдасесссса даассссоасда ссдоддеЕсссс 480 чдсдадсЯдєсє сдассодсУєсє саддадссдс сСддассадаа дсасаасдєєс деЕсаєсссссдр 540 счдаассасса дасодадодсс дассссудеЕд єДдсссдссса саєдседодсдд аадасдсасс 60 ссаадссддс дасоддаєсдед асссасдссд сгеддсдассд сдЕсдесасс даєссдваєде 6бо чдсаадсссЕє сессаєдддс сдсаассесе ЕСсСЕдсудрдса сеЕссаадаад сасаєддасд 720 асдсеЕссодда дсЕдааддсес дсааадаєсдда адассаассуд саадасдссд дЕсдссаєсдс 78о0 аасдсаадсеЕ даасдадддс дадсасдссса сдсддаєссдс ссссадсддес ддссдсдасс 840
Зо дсессссаасус саасчасдад Сдодсдсссу абаасеЕсєсда ссссдссдсс дЕддадсеєда 900
Едсдсаассеє додєдсадсдс дссаадсадс сдддссассо дасдсссаєд Сссаєсдссса 960 дсЕассссає даєдссдссд сссаадассд Сддасаадсс сассддсдад сдссдссеса 1020 сддссЕєЄсас доаддсуєддадс аєсеЕсссьдЕ дсдаддадсеЕ ддасудєддсд дссаєсаєсд 1080 сддссадсдуд сесддаддад ааддадсада аддсЕссддс сааддссдсд сасдасдсд4д 1140
ЄдааддадеЕс деасдсдудаєд ссдесссаадуд ссаєссадда ЕсссдссЕсс сдсдессассс 1200 чдсаадчадесє сасасадссс єддаєддсдс ааддаддсдд дадсадсадс ддсадсд9ас4д 1260 чдсадсдасад садеддсодда єсЕгдоддддс асддаддсадс адсгадсаса сдсддддссд 1320 чЧЕддсддсад сододасоддддад аддєдсеЕдЧчЕ дсоддаєдсвд дЕдссаддад садесдсєсе 1380 аєдссеєддсд дсддсудссда ссудеЕдсєда адсеЕдЕсдЕсС ддсадсадса дсододдааасьє 1440 дсдсєддсда Єддссдаада Єдаєдсдудсє доссудбасад саааєдседс єдЕСасадасає 1500 бдєсадсддс дассдсбдодд Ессдсєддда сЄдсдаддадеЕ дсдадаєсад сагаддссад 1560 чсаддаєдадЕ ЄдсоддеЕдссЯ сеЕдссдасас діссдсасадда ааддадсадд аадддсдс4да4д 1620 сЕдадсасса дддєсасеєвд доддссЕдЕдЕ гадсдєдасс ддассєдааа доаодчавваєєсвд 1680
Есеєддддадс адсеЕсдасдс асаєєсдєдуа даєсдсеЕсад дааддадсає Єдддаєдасе 1740 дЕдссдсдсу дЕдЕдсссад сасудєєдасеі доасЕсСЕдасс сдддеЕсаасс аагдсдЕєсдс 1800 чдассдєєдса асдаєдсесс гааєсадсучє дадаєддадеЕ деасдааєдс аддсаєдасд 1860 аєдассаєад асдадеЕдеЕЧда дсочдєдЕЧеає сеЕдеЕддаєсд дасасуддеєс агссааєсса 1920 гЕСсСдбассудд асагаєдасе асасаадасс дЕдЕЧдЧдадед ЕДЕЄсдєдсу сссаадасьд 1980 часдаадедд дсдсєсссда ЕдЕддадсоас доаєдсеЕсдсу ЗдЯ9ЕЕдЕдЕдЕ сеЕгдссодсаа 2040 сдсаадсадс дсддсодоєдає деЕдчаєдасеЕ сесеєдсаєсає дассоддоадЕеЕс сгассодсдад 2100 сссададсдс дсдсддадса ааадсааааа саддаасаад дадссдсдед сасааєєссд9дс 2160 чсадаєдаєд дЕДдЧдсЕдддду аєсєдасадд ададсдссаа сддсддссду дЕдстадесдс 2220
ЕЕдаасаєса Єдсдаваєсу Єдаєєднаса аасодаседс 2260 «2105 193 «2115 382 «2125 ПРТ «213» Сіппашошиют саюрпога «4005 193 (516) Месє Аза ТП ТПг обек ІТейп Аза бек Аїа Рре Сув бек Меє Гуз Аїа Уаї 1 в) 10 15
Меє гей Аза Агуд Авр с1у Акд біу Меє пуб Рго Агд бек бек Авр Іецй 20 25 30 сіп Гей Агуд Аїа с1у Авп Аїа біп ТБПг бек Гецп пув Меє І1е АБп 01У 35 40 45
ТПЕ Ппув Рпе бек Тук ТПг біц бек Гей пуб пуб ІТецй Рго Авр Тгр 5ег 50 55 бо
Меє гей Рпе Аїа Уа1ї І1їе ТПг ТПг Іїе Рбе бег Аїа Аїа бій Гув сіп 65 70 75 80
ТЕр ТпПг Ап о Гей сіц Тер Гпув Рго пуб Рго АвБп о Рго Рго біп Іецй Іецй 85 90 95
Авр Авр Нів Ріпе б1іу Рго Нів біу Іец Маі Рпе Агуд Агуд ТПг Ріе Аїа 100 105 110
І1їе Акд бек Тук біц Уаї с1у Рго Авр Акуд бек ТПг бек І1е Уа1! А1а 115 120 125
Уаї Меє Авп Нів Гей сіп сіц Аза Аїа Гей Авп Нів Аза пув бек Уаї 130 135 140 сб1у І1е Гей с1у Авр сб1іу Рпе сіу ТПг ТПг Гей сій Меє бек Гув Агд 145 150 155 160
Авр Гей І1їе Тгр Уаії Уаї Гув Агкд ТПг Ні Уаі Аза Уаі1і бій Агд Туг
Зо 165 170 175
Рго Аїа Тгр б1у Авр ТПг Уаі сіц Уаії б1іп Сув Тгр Уа1і с01у Аїа 5ег 180 185 190 с1у Авп АвБп о б1іу Агд Акуд Нів Авр Робе Гей Уаії Агд Авр Сув Ппув ТіПг 195 200 205 сбі1у бій І1ї1е Гей ТПг Агуд Сув ТпПг обБегє Гей бек Уа1 Меє Меєсє Ап ТПг 210 215 220
Акуд ТЕ Агуд Агд Тец бек Гув І1е Рго бій бій Уаі Агуд с1у бій Те 225 230 235 240 б1у Ркго Аї1а Рпе Іїе Авр Авхп Уаі Аїа Уаі ув Авр біц бій І1е Гув 245 250 255
ТПув Ркго біп Ппув Гей Авп Авр бБег ТПг Аза Авр Туг Іїе сіп сС1у 01У 260 265 270
Тем ТіБг Рго Агуд Тер Авп Авр Гей Авр І1е АвБп біп Нів Уаї Авп Авп 275 280 285
ІТІе пув Тук Уаі Авр Тгр І1е Іїец біц ТПг Уаї Рго Авр Бек І1їе Ріє 290 295 300 біц бек Нів Нів Іїе Бек бек Рпе ТПг Іїе сіц Туг Агд Агд сій Сув 305 310 315 320
ТПЕ Меє Авр бек Уаї Ггец біп бек Гей ТПг ТПг Уаї бек б1у с1у 5бег 60 325 330 335 зек біц Аїа сі1у Іец Маї Сув біц Ні Гей Гей сіп Гей сіц с1у с1У 340 345 350 зек біц Уаії Іец Агд А1ї1а Гпув ТПг біц Тер Агуд Рго Гпув Гей ТПг Авр 355 360 365 зек Рпе Агуд сіу І1е бек Уаі І1їе Рго Аїа бій бек бек Уаї 370 375 380 «2105 194 «211» 417 «212» ПРТ «2135 Сосов писітега «4005 194
Меє Уаії Аза бек Уаі Аза А1їа бек Аза Рпе Рпе Рго ТПг Рго бек Ріє 1 5 10 15 зек Бек ТПг Аїа бек А1їа Гув Аза бек їув ТПг І1е с1у бі с1у бБег 20 біц бек Гей Авр Уаі Агуд сіу Іїе Уаі Аїа Ппув Рго ТПг бек бек бег
Аза Аїа Месє сбіп с1у Гпув Маї Ппув Аїа біп А1ї1а Уаї Рго Гпув І1їе Авп 25 50 з9 бо сбі1у ТПпгЕ Гпув Уаї с1у Гей пув ТПг бі Бек біп ув Аїа біц б1іц АвБр 65 70 75 80
Зо А1а Аза Ркго бек бек Аза Рго Агуд ТПг Рібе Туг АБп біп Гей Рго Авр 85 90 95
Тер Бек Уа1! Гей Гец Аїа Аза Уа1! ТПг ТБПг І1ї1е Рпбе їеш Аза Аза с1и 100 105 110
З5
Тпув біп Тер ТПпс Гей Гей Авр Тер пув Рго Агуд Агуд Рго Авр Меє Іей 115 120 125
ТПгЕ Авр Аїа Рібе бек Гец біу Ппув І1їе Уаії біп Авр б1у Іїеп І1е РіПе 40 130 135 140
Акуд біп Авп Роре бег І1е Агуд бБег Тук б1п Ії1е сС1у Аза АвБр Агд ТЕГ 145 150 155 160 45 А1їа бек Іїе бій ТПг Гей Меє АвБп о Нів Гей біп сбіц ТПг Аїа Іечцй Авп 165 170 175
Нів Уаі Агкуд Авхп Аза сбіу Іец Гей сіу Авр біу Рпе б1у Аї1а ТПг Рго 180 185 190 біц Меє бек пув Агуд Авп Гей Іїе Тгр Уаі1і Уа1 ТПг пув Меє сСіп Уаї 195 200 205
Тец Маї бі Нів Тук Рго Бек Тгр с1у Авр Уаі1і Уа1 сій Уаї Авр ТЕПг 210 215 220
Тер Уа1 с1у Аза бек біу їув Авп сіу Мес Агд Агд АБр Тгр Нів Уаї 225 230 235 240 (516) Агуд Авр Туг Агуд Тк б1іу біп ТПг о Іїе Гей Агуд А1ї1а ТПг бек Уа1і Тгр 245 250 255
Ууаї Меє Меє Авп о Гпув Нів ТПг Агуд пуб Гей бек пув Меє Рго сій сіц 260 265 270
Уаї Агуд Аїа сій Іїе сіу Рго Тук Рпе Уаії сій Нів Аза А1ї1а І1е Уаї 275 280 285
Авр бій Авр о бБег Агд Гув ТГецп Рго Гу Тецй Авр Авр Авр ТПг Аїа Авр 290 295 300
Тук Іїе пув Тер сі1у Пец ТПг Рго Агуд Тер бег Авр Тец Авр Уаі1і Авп 305 310 315 320 біп Нів Уаї Авп Авп Уа1і Гпув Туг Іїе с1у Тер І1е Іец сій бек Аїа 325 330 335
Рго І1їе бек І1їе Геш бій Ап Нів сій Тей Аїа бек Меє ТПг Іеч с1ци 340 345 350
ТУкг Агд Акд сій Сув б1у Агуд Авр Бек Уа1! Гей сбіп бек Гей ТіПг А1а 355 3З6о 365
ІТІе Бек АвБп Авр о Сув ТПг сіу б1і1у Тей Рго сій Аза Бек Іїе сіц Сув 370 375 380 біп Ні Гей Гей сбіп Гей бій Сув с1іу Аїа біц І1е Уаі Акд с1у Аг4д 385 390 395 400
ТПг біп Тер Агуд Рго Агуд Агуд Аза бек біу Рго ТПг бек Аї1а сС1у 5бег
Зо 405 410 415
А1а
З5 «2105» 195 «211» 423 «212» ПРТ «2135 Сосов писітега «4005 195 40 Меє Уаії Аза бек Іїе Аїа А1їа бек Аза Рпе Рпе Рго ТПг Рго бек 5ег 1 5 10 15 зек бек бБекг Аза Аїа бек Аї1а пув Аза бек ув ТПг ІШе с1у бій щу 20 25 30 45
Ркго сіу Бек ІТец Авр Уаі Агуд сбіу І1е Маії Аїа Ппув Рго ТПг бек 5ег зек Аїа Аїа Месє біп б1п Гпув Уаії пув Маї біп Рго Уа1і Рго Ппув Те 50 з9 бо
Ап осіу Аїа пув Уа1ї б1у Іїешп Ппув Уаі біцп ТПпг сбіп пув Аїа Ар сіц 65 70 75 80 бій бек бек Рго бек бек Аза Ркго Агуд ТПг Рре Туг Авп біп Гей Рго 85 90 95
Авр Тер бек Уаії Іецшц Іец А1ї1а Аїа Уаії ТПпг ТПпг І1їе Рпе Гей Аза Аї1а 100 105 110 60 бі гув біп Тер ТпПг Гей гей Авр Тер пув Рго Агуд Агуд Рго Авр Меє
115 120 125
Тец Аза Авр Аза Рпе сіу Гей сіу Ппув Іїе Уаі1 сіп Авр с1у Іец Уаї 130 135 140
Рпе Ппув біп Авп Рре бек І1е Агд бек Ту бій І1е сіу Аїа АБр Агд 145 150 155 160
ТПгЕ Аїа бек І1їе бій ТПг Гей Мес АвБп о Нів Гей біп сбіц ТПг Аїа Гей 165 170 175
Авп оНів Уаї Ппув бек Аїа б1у Пец Месє с1у Авр с1іу Рбе с1у Аїа ТЕПг 180 185 190
Рго сій Меє бек пуб Агуд Авп Гецп І1їе Ткгр Уаії Уаії ТПК пув Меє Агд 195 200 205
Уаї гей І1ї1е бій Акуд Тук Рго Бек Тер с1іу Авр Уаі Уаі бій Уа1 Авр 210 215 220
ТПг Тер Уа1 с1у Рго ТПг б1у Пув Авп біу Месє Агуд Агуд АвБр Тер Нів 225 230 235 240
Уаї Агкуд Авр Нів Агкуд бек біу біп ТПг І1е Гей Агуд Аїа ТПг бек Уаї 245 250 255
Тер Уаі1 Меє Меє Авп о Гув Авп о ТПг Агуд пуб ТГец бек Гув Уаії Рго с1ци 260 265 270
Зо сі Маі Агуд Аїа сій І1їе сіу Рго Тук Рпе Уаі бій Агуд Аїа Аїа І1е 275 280 285
Уаї Авр бій Авр бек Агуд пуб Гей Рго пуб Гец АвБр б1цп АБр ТПг Тпс 290 295 300
З5
Авр Тут Іїе пуб пув б1у Гей ТПг Рго Агуд Тер с1у Авр Гец Авр Уаї 305 310 315 320
Авпобіп Нів Уаі! Авп Авп оУаї Ппув Туг І1е с1у Тгр І1е Ге сій 5ег 325 330 335
А1Та Рго І1їе бек І1е гейш сій Авп Нів бій Тей Аїа бек Меє бек Іецй 340 345 350 сі Туг Агуд Агд бій Сув б1у Акуд Авр бек Уаії Гей біп бек Гей Тіг 355 3З6о 365
А1ї1а Уа1і бек Авп Авр Тецй ТПг Авр б1у Іецп Уаі сій Бек с01у І1е сіц 370 375 380
Сув біп Нів Гей Гей біп Гей бій Сув с1у ТПг бій Гей Уаї пув с1У 385 390 395 400
Акуд ТЕ біц Тер Агуд Рго Гув Нів бек Рго Аї1а Гей с1у Ап Меє Щ1У 405 410 415
Рго ТПг Рго біу бі1у бек Аа 420 60 «2105» 196 «211» 414
«212» ПРТ «2135 Сосов писітега «400» 196
Меє Уаії Аза бек Уаі Аза А1їа бек бек бек Рпе Рібе Рго Уаії Рго 5ег 1 в) 10 15 зек бек бек бек Аїа бек Аї1а Гув Аза бек Агд сС1у І1е Рго АБр Щ1У 20 25 30
Тем Авр Уаії Агуд с1у І1їе Маії Аїа Гуз Рго Аза бек бек бек с1у Тер 35 40 45
Меє сіп Аза пув Аза бБег Аїа Агуд Аза І1ї1е Рго пуб І1е АБр АБр ТПг 50 55 бо пув Маї сбі1у Гей Агуд ТПг Авр Уаі бій бій Авр Аза Аза бег ТПг А1а 65 70 75 80
Акуд Агуд Тк бег Туг АБп обіп Гец Рго Авр Тгр бек Меє Гей Гей Аїа 85 90 95
Аза І1е Агкуд ТБг І1ї1е Рре бек Аїа Аїа б1іцп Гув біп Тгр ТПг Гей Гей 100 105 110
Авр бек пув їув Агуд б1у Аїа Авр Аїа Уаі! Аза Авр Аїа бек сіу Уаї 115 120 125 с1у пув Меє Уаії Гпув Авп сіу Гей Уаі Туг Агуд сбіп Авп Ріре бег І1е 130 135 140
Зо
Акуд Бек Тук біц І1е сб1у Маї Авр їубв5 Агуд А1ї1а бек Уаі бі Аїа Гей 145 150 155 160
Меє Авп Нів Рпе сіп сій ТБПг Бек Гей Авп Нів Сув Туз Сув Іе У
З5 165 170 175
Тецп Меє Нів сіу с1у Рпе сіу Сув ТПг Рго біц Меє ТБг Агуд Агд АвБп 180 185 190 ем І1їе Тгр Уаії Уаі Аїа Ппув Меє Іїецй Уаії Нів Уаі бій Агуд Тук Рго 195 200 205
ТЕр Тер с1у Авр Уаї Уаї біп І1е АвБп ТПг Тгр І1е бек Бек Бех щЩУ 210 215 220
Тув Авп обіу Меє с1у Агуд Авр Тгр Нів Уа1і Нів Авр Сув біп ТПг о01Уу 225 230 235 240
Тецп Ркго Іїе Меє Агу сіу ТПг Бек Уаі Тер Уа1 Меє Мес Авр Гув Нів 245 250 255
ТПгЕ Агуд Агуд Гей бек пув Тец Рго біц біц Уаі Агд Аї1а сб1п ІШе ТПг 260 265 270
Рго Рпе Рібе бек бій Агуд Авр Аїа Уаі Іецй Авр Авр Авп с1у Аг Гув 275 280 285
Тец Ркго Гпув Рпе Авр Авр Авр бБег Аза Аїа Нів Уаі1і Агуд Агд Сс1Уу Іей 290 295 300 60
ТПЕ Рго Агкуд Тер Нібв Авр Робе Авр Уаії Авп о біп Ні Уаї Авп Авп Уаї
305 310 315 320
Тпув Тук Уаї с1у Тер Іїе гей сій бек Уа1і Рго Уа1! Тер Меє Іецй Авр 325 330 335 сі1у Тук біш Уаі Аза ТПг Меє бек Гей бій Туг Агуд Акд біц Сув Агд 340 345 350
Ме Авр бек Уа1і Уа1 сіп бек Гей ТПг Аїа Уаї бек бек Авр Нів Аїа 355 3З6о 365
Авр сіу Бек Рго І1е Уаії Сув біп Ніб Іец Іїецй Агд Гей бій Авр 01У 370 375 380
ТЕ біц Іїе Уаі Акуд с1у біп ТПкгЕ біц Тер Акуд Рго пуб біп сіп А1їа 385 390 395 400
Акуд Авр Гец сіу АвБп Меє б1у Гец Нів Рго ТПг сій Бек Гув 405 410 «2105 197 «211» 419 «212» ПРТ «213» Сирпеа 1апсеоїаєса «4005 197
Меє Уаі Аза Аза Аза Аза ТПг бек Аза Рпе Рпе Рго Уаї Рго Аїа Рго 1 5 10 15 бі1у ТП бек Рго Ппув Рго сіу Ппув Бек с1у Авп Тер Рго бек бек Іей
Зо 20 25 30 ек Рго ТПг Рпе Гув Рго Ппув бек І1е Рго АБп Аїа с1іу Рпе сіп Уаї 35 цув Аїа АБп Аза бек Аза Нів Ркго ГПув А1їа Авп сіу бек Аїа Уаї Авп бо
Тецп Кпув бек сіу Бек Гей Авп ТПг біп бій Авр ТБбг бек бек бек Рго 65 70 75 80 40
Рго Рго Агд Аза РпПе ІТецй АвБп о біп Тецй Рго Авр Тгр Бек Меє Гей ГІецй 85 90 95
ТПг Аїа Іїе ТПг ТБПг Уаї Рре Уа1і Аїа Аза сіц Гуз біп Тер ТПпг Меє 45 100 105 110
Тец Авр Агуд Гпув Бек Пув Агуд Рго Авр Меє Ггец Уаі1 Авр бек Уаі с01У 115 120 125 50 Тем Ппув бек Іїе Уаі Акуд Авр с1іу Гей Уаі бек Агкуд біп бек Рре Гей 130 135 140
І1е Агд бек Тук б1іцшц І1е с1у Аї1а АБр Агуд ТПпг Аза бек Іїе сій ТЕГ 145 150 155 160 55
Тецп Меє АвБп о Нів Гей біп бій ТПг обБек Іїе Ап Нів Сув Ппув бек Іей 165 170 175 сб1у Гешп Гей Авп Авр б1іу Рпе с1іу Агуд ТПг Рго сіу Меє Сув Гув Авп 60 180 185 190
Авр Гей І1ї1е Тр Уаї Іец ТПг пув Меє біп І1е Меє Уаі Авп Агд Туг 195 200 205
Ркго ТПг Тер б1у Авр ТПг Уаії біц І1е АБп ТПг Тер Рпе бек біп б5ег 210 215 220 с1у гув І1ї1е сіу Меє Аїа бек Авр Тгр Гей Іїе бек Авр Суб АвБп ОТГ 225 230 235 240 сі1у бій І1е Гецшп Іїе Аку Аїа ТБПг бек Уаі Тгр Аїа Меє Меєсє АБп сіп 245 250 255
Тпув ТПпг Агуд Агуд Рпе бек Агуд Гей Рго Туг біц Уаі1 Агд біп сій Іей 260 265 270
ТПЕ Рго Нів Рпе Уаї Авр бек Рго Нів Уаі І1е бій Авр АБп АБр сіп 275 280 285 ув ТГеп Нів Ппув Рпе Авр Уа1 Ппув ТПг с1у Авр бек Іїе Агд пув 01У 290 295 300
Тецп ТП Рго Агуд Тер Авп Авр Гей Авр о Уаі Авп о сбіп Нів Уаї бек Авп 305 310 315 320
Уаї пув Тук Іїе с1у Тер І1е Гей сіц бек Меє Ркго І1е сі Уаї ГІеч 325 330 335 бі Тпг біп бій Гей Сув бек Гей ТПг Уа1 сій Туг Агд Акд бій Сув 340 345 350
Зо бі1у Меє Авр бек Уаі Гей бій бек Уаі ТПг Аїа Уа1 Авр Рго бек б1ци 355 3З6о 365
Авп осіу с1у Агкд бек біп Тук Ппув Нів Іец Те Агд Гей бій Ар 01У 370 375 380
ТПЕ Авр Іїе Уаї Ппув Бек Агд ТПг біц Тгр Агд Рго Гпув АБп Аза с1У 385 390 395 400
ТПЕ Авп сіу Аїа І1їе бек ТПг бек ТПг Аїа Пув ТПг бек АБп с1Уу Авп 405 410 415 зек Аїа 5ег «2105» 198 «211» 419 «212» ПРТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Спрпеа уівсовіввіщтша «400» 198
Меє Уаі Аза Аза Аза Аза ТПг бек Аза Рпе Рпе Рго Уаї Рго Аїа Рго 1 5 10 15 бі1у ТП бек Рго Пув Рго сіу Ппув Бек с1у Авп Тгр Рго бек бек Іецй 20 25 30 ек Рго ТПг Рпе Гув Рго Ппув бек І1е Рго АвБп сіу с1іу Рпе сіп Уаї 60 35 40 45 пуб Аз1а АвБп Аза бек Аїа Нів Рго Ппув Аза АвБп біу бек А1ї1а Уаіїі Авп 50 55 бо
Тецп Кпув бек сіу Бек Гей Авп ТПг біп бій Авр ТБбг бек бек бек Рго 65 70 75 80
Рго Рго Агд Аїа Рпе ІТецй АвБп о біп Гей Рго Авр Тер бек Меє Іецй Іей 85 90 95
ТПЕ Аза Іїе ТПг ТПг Уаі! Ррпе Уаі Аза Аїа сій пув біп Тер ТПг Меє 100 105 110
Тец Авр Агд Ппув Бек Пув Агуд Рго Авр Меє Іец Уаії Авр бек Уаі1 Щ1У 115 120 125
Тец Гпув бек Іїе Уаі Агуд Авр сіу Гей Уа1і бек Агкуд Нів бек Ріе б5ег 130 135 140
І1е Агкд бек Тук біцшц І1е с1у Аза Авр Агу ТПг Аїа бБег І1е сіц ТЕПг 145 150 155 160
Тецп Меє АвБп о Нів Гей біп бій ТПг ТпПг І1їе Ап о Нів Сув пуб бек Іей 165 170 175 с1у Гей Ні Авп Авр с1іу Робе б1у Агуд ТПг Рго сіу Меє Сув Пув Авп 180 185 190
Авр Гей І1ї1е Тр Уаї Іец ТПг пув Меє біп І1е Меє Уаі Авп Агд Туг 195 200 205
Зо
Ркго ТПг Тер б1у Авр ТПг Уаії біц І1е АБп ТПг Тер Рпе бек біп б5ег 210 215 220 с1у гув І1ї1е сіу Меє Аїа бек Авр Тгр Гей Іїе бек Авр Суб АвБп ОТГ 225 230 235 240 сі1у 611 І1ї1е Гей Іїе Агу Аза ТПг бек Уаі Тгр Аїа Меє Меєсє Авп сіп 245 250 255
Пув ТБг Агуд Агуд Ропе бек Агуд Гей Рго Тук бій Уаі Акуд сбіп сій Гей 260 265 270
ТПЕ Рго Нів Рпе Уаї Авр бек Рго Нів Уаі І1е бій Авр АБп АБр сіп 275 280 285
Тпув Тецп Агд Ппув Рпе Авр Уа1 Ппув ТПг с1у Авр бек Іїе Агд пув 01У 290 295 300
Тецп ТП Рго Агуд Тер Авп Авр Гей Авр о Уаі Авп о сбіп Нів Уаї бек Авп 305 310 315 320
Уаї Ппув Ту Іїе сіу Тер І1е гейш сій бек Мес Ркго І1е сій Уаї Іецй 325 330 335 сій ТБ біп бій Гей Сув бек Темп ТПг Уаі сій Туг Агкд Акуд бій Сув 340 345 350 бі1у Меє Авр бек Уаі Гей бій бек Уаі ТПг Аїа Уа1 Авр Рго бек бій 355 3З6о 365 60
Авп осіу с1у Агкд бек біп Тук Ппув Нів Іец Те Агд Гей бій Ар 01У
370 375 380
ТПЕ Авр Іїе Уаї Ппув Бек Агуд ТПг біц Тгр Агд Рго Гув АБп Аїа 0Щ1У 385 390 395 400
ТПгЕ Авп сіу Аїа І1їе бек ТПг бек ТПг Аза пуб ТПг бек АБп с1Уу Авп 405 410 415 зек Уаї 5ег «2105 199 «211» 382 «212» ПРТ «213» Отютре11ц1акіа са1іітокпіса «4005 199
Мен АзТа ТПг ТПг бек Гей Аза бек Аїа Рпе Сув бек Меєс Гув А1а Уаї 1 5 10 15
Меє теп Аза Агуд Авр сбіу Агуд біу Месє Ппув Рго Акуд бек Бек Авр ГІец 20 25 30 біп тей Акуд Аза с1у Авп Аза Рго ТПг Бек Гей пув Меє І1е АБп 01Уу 35 40 45
ТПЕ Ппув Рпе бек Тук ТПг біц бек Гей Гпув Агд Тецй Рго АвБр Тгр 5ег 50 55 бо
Меє гей Рпе Аїа Уа1ї І1їе ТПг ТПг Іїе Рбе бег Аїа Аїа бій Гув сіп
Зо 65 70 75 80
ТЕр ТпПг Ап о Гей сіц Тер Гпув Рго пуб Рго пуб ІТецй Рго біп Іецй Іецй 85 90 95
Авр Авр Нів Ріпе с1у Гешп Нів сіу Гей Уаі! Робе Агуд Агд ТПг Рібе А1а 100 105 110
І1е Агуд бек Тук біц Маї с1у Рго Авр Агуд бек ТПг бБег ІїІе Гей Аї1а 115 120 125
Уаї Меє Авп Нів Меє сіп сіц Аза ТПг Гей Авп Нів Аза пув бек Уаї 130 135 140 сб1у І1е Гей с1у Авр сб1іу Рпе сіу ТПг ТПг Гей сій Меє бек Гув Агд 145 150 155 160
Авр Гей Меєсє Тер Уаі Уаії Агуд Акд ТПг Ні Уаі Аза Уаі1і бій Агд Туг 165 170 175
Рго ТПг Тер б1у Авр ТПг Уаії сій Уаії біц Сув Тгр І1е с1у Аза 5ег 180 185 190 б1у Авп Авп сіу Меє Агуд Агуд Авр Рпе Гей Уаі Агуд Авр Сув пуб ТЕГ 195 200 205 сбі1у бій І1ї1е Гей ТПг Агуд Сув ТБпПг обБесє Гей бек Уа1! Гей Месє АБп ТЕП г 210 215 220
Акуд ТЕ Агуд Агд Тецй бек ТПг І1е Рго АБр бій Уаі Агуд с1у бій Те (516) 225 230 235 240 б1у Ркго Аїа Рпе Іїе Авр Авхп Уаі Аїа Уа1 Гпув Авр Авр бі І1е Гу 245 250 255
Тпув ТГецп біп Ппув Гей Авп Авр бБег ТПг Аза Авр Туг Іїе сіп сС1у 01У 260 265 270
Тецп ТП Рго Агуд Тер Авп Авр Гей Авр Уаі Авп о сбіп Нів Уаї АвБп Авп 275 280 285
Тем Ппув Тук УМаії Аїа Тер Маії Рбе сій ТПг Уаї Рго Авр бек І1е Ріе 290 295 300 біц бек Нів Нів Іїе бек бек Рпе ТПг Гей сій Туг Агд Агкд бій Сув 305 310 315 320
ТПгЕ Агуд Авр бек Уаії Ггец Агд бек Гей ТПг ТіПг Уаї бек б1у с1у 5бег 325 330 335 зек біц Аїа сі1у Іец Маї Сув Авр Ніб Іец Іїейп сбіп Гей бі с1у 01У 340 345 350 зек біц Уаії Іец Агд Аза Агуд ТПг біц Тер Агуд Рго Гпув Гей ТПг Авр 355 3З6о 365 зек Рпе Акуд біу І1е бек Уаі І1їе Рго Аїа бій Рго Аг4д Уаї 370 375 380 «2105 200 «211» 308
Зо «2125 ПРТ «2135 Сосов писітега «4005 200
Меє Авр Аїа бек сіу Аза бек Бек Рпе Гей Агуд біу Агд Сув Іечп с1ци 1 5 10 15
З5 зек Сув Рпе Гуз А1їа бек Рпе сіу Меє бек біп Рго Гув Авр Аза Аї1а 20 25 30 бі1у біп Рго Бек Агуд Агуд Рго Аїа Авр Аїа Авр Ар Ріе Уаї Авр Авр 35 40 45
Авр Акуд Тер І1е ТБг Уаії І1ї1е Гец бек Уаі Уаі Агкд І1е Аза Аїа Сув 50 55 бо
Рпе Гей бек Мес Мес Уаї ТПг ТПг Іїе Уа! Тер АБп Меє І1їе Меє Іецй 65 70 75 80
І1е Гей Гец Рго Тгр Рго Туг Аїа Агд І1е Агд сіп с1у Авп Гей Туг 85 90 95 бі1у Нів Уаї ТпПг с1у Акуд Меє Геи Меє Тер І1ї1е Гей с1у АвБп Рго І1е 100 105 110
ТПгЕ Іїе сій сіу бек біц Робе бек Авп ТПг Агуд Аза І1е Туг І1е Сув 115 120 125
Ап оНів Аза бБег Іец Маі Авр І1е Рбе Іїецй І1ї1е Меє Тгр Гей Ії1е Рго 130 135 140 (516) пув біу ТПкг Маї ТпПг Іїе Аїа Пув Ппув біцш Іїе І1їе Ткр Тук Рго ГІецй 145 150 155 160
Рпе сі1у біп Іїец Тук Уаї Гей Аза АвБп о Нів біп Агд Іїе Авр Агд 5ег 165 170 175
АвБп о оРго бек Аїа Аїа Іїе сій бек І1їе ув біц УМаі Аїа Агкуд А1їа Уаї 180 185 190
Уаї пув Ппув Авп Гей бек Гец Іїе Іїе Робе Рго біц б1у ТПг Агд 5ег 195 200 205
Тпув ТпПг б1у Агд Гей Гей Рго Рпе Ппув Ппув сіу Рпе І1ї1е Нів І1е А1а 210 215 220
Тец біп ТПпг Агуд Гей Рго Іїе Уаі Рго Меє Уаі1і! Ггецй ТіПг с1у ТПкг Нів 225 230 235 240
Тец Аз1а Тер Агуд Гпув Авп бек Гей Агуд Уаі Агуд Рго Аза Рго І1е ТЕПг 245 250 255
Уаї Ппув Тук Рпе бек Ркго І1е Гуз ТПг Авр Авр Тер бій біц бій Був 260 265 270
І1е Авп Нів Тук Уаії біп Меє І1е Ні Аза Іїей Туг Уа1і Авр Нів Ієец 275 280 285
Ркго біц бек біп Гу Ркго Гей Уаії бек Гпув б1у Агд Авр Аїа Бех щ1Уу 290 295 300
Агкд Бек Авп 5ег
Зо 305 «2105 201 «2115» 356 «212» ПРТ «213» Агарідорвіз Єпа1ііапа «4005 201
Меє Авр Уаі Аїа бек Аза Агуд Бек Іїе бек бек Нів Рго бек Тукг Туг 1 5 10 15 с1у Ппув Рго Іїе Сув бек бек біп бек бек Гей І1їе Акуд І1е 5ег Агд 20 25 30
Авр пув Уаї Сув Сув Рпе б1у Агд І1е бек Авп сіу Меє ТПг бек Ріє 35 40 45
ТПг ТпПкг бек Гей Ні Аза Уаі! Ркго бек біц пув Рое Меє сС1у сій ТПг бо
Акуд Агуд ТБг біу І1е біп Тер бБег АвБп Агуд бек Гей Агуд Нів Авр Рго 50 65 70 75 80
Тук Агкуд Рпе Гей Авр пуб пуб бек Рго Агд бБег бек біп Теп Аїа Аг4д 85 90 95 55 Авр І1е ТПг Уа1і! Агуд Аза Авр Гей бек с1іу Аїа А1їа ТПг Рго Авр 5ег 100 105 110 зек Рпе Рго біц Ркго бій І1ї1е Гув Іец бек бек Агуд Гей Агуд с1у І1е 115 120 125 60
Рпе Рбпе Сув Уаі Уаії Аза с1у І1е бек Аза ТПг Рпе Гей Іїе Уаі1ї Іец
130 135 140
Меє Ії1е чІ1ї1е сіу Нів Ркго Рібе Уа1і Гей Гец Робе Авр Рго Туг Агд Аг4д 145 150 155 160
Тпув Рпе Нів Нів Рпе Іїе Аїа Гпув Гей Тгр Аїа бек І1їе бек І1е Туг 165 170 175
Рко РпПе Тук пуб І1е АБп І1е сбіц сб1у Іїецй бій Авп Гей Рго бек 5бег 180 185 190
Авр ТПг Рго Аза Уа1ії Тук Уаї Бек Авп о Нів біп бек Рпе Гец Авр І1е 195 200 205
Тук ТПг Гей Гей бек Ге сіу Ппув Бек Рпе Пув РіПе І1е Бек Ппув ТПг 210 215 220 сб1у І1ї1е Рпе Уаі Іїе Рго Іїе І1ї1е сіу Тер Аїа Месє бек Меє Меє Щ1У 225 230 235 240
Уаї Уаї Рго гейш пув Агуд Мес Авр Рго Агуд бек біп Уаі Авр Сув Іецй 245 250 255
Туз Агуд Сув Меє бій Гей Гей пув Ппув с1у Аїа бек Уа1і Рпе Рпе Ріе 260 265 270
Рго біц біу ТБг Агуд бек Гув Авр о б1і1у Агкд Гей с1іу Бек Рпе Ппув Гув 275 280 285
Зо сі1у Аїа Рпе ТПг Уаі Аза Аза Ппув ТПг сіу Уаі1і Аїа Уаї Уаї Рго І1е 290 295 300
ТПгЕ Ге Меє сіу ТБПг сіу Гув Іїе Меє Рго ТПг сб1у бек б1п с1у Ше 305 310 315 320
З5
Тец АвБп Нів с1у Авп Уаі Акуд Уаії Ії1е І1е Ні Гув Рго І1е НівБ Щ0Щ1У 325 330 335 зек Мпув Аза Авр Уаії Іейп Сув АвБп о біц Аза Агуд бек Гув Іїе Аїа сіц 40 340 345 350 зек Мес Авр Ієц 355 45 «2105 202 «211» 362 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 202 50 Меє Гей пуб Гей бек Сув Авп Уа! ТПг Авр бек ТУув Те біп Агд 5ег 1 5 10 15
Тецшп Гей Рпе РпПе бБег Нів бек Туг Агуд Бек Авр Рго Уаі АБп Рпе Пе 20 25 30 55
Акуд Агуд Агуд І1е Уа1ї бек Сув бек біп ТПпг Гпув Ппув ТП с1у Гей Уаї
Рго Ггец Агуд Аїа Уаії Уаї бек Аїа Авр сбіп сіу Бек Уа1і Уаі сіп 01У 60 50 з9 бо
Тец А1ї1а ТПпг еп Аза Ар сбіп Гей Агуд Гей сіу бек Гецп ТПг бій АБр 65 70 75 80 сб1у Гей бек Тук Ппув бій Ппув Рпе Уа! Уаі Агуд бек Туєк бі Уа1 Щ1У 85 90 95 век Авп о Гпув ТПг Аза ТПпг о Уаії біц Тс І1е Аза АБп Гей Гей сбіп сіц 100 105 110
Уаї б1у Сув Авп Нів Аза сіп бек Уаії сіу Робе бек ТПг Авр с1у РіПе 115 120 125
Аа ТПг ТБг ТБг ТБ Меє Агуд пуб Іец Ні Іїейп Іїе Тгр Уа1і ТПг Аї1а 130 135 140
Акуд Меє Нів Ії1е біш І1е Тук Ппув Тук Рго Аїа Тер с1у Авр Уа1ї! Уаї 145 150 155 160 бі І1е бій ТПпс Тер Сув біп бек бі с1у Агуд І1е с1у ТБг Агд Агд 165 170 175
Авр Тер І1е Гец їув Авр бек Уаі ТПг б1у бій Уаі ТП о1у Агд Аїа 180 185 190
ТПг Бек Ппув Тер Ма! Мес Меє АБп о біп Авр ТБПг Агу Агд Гей сіп Туз 195 200 205
Уаї Бек Авр Авр Уаі1 Агуд Авр бій Тук Ггец Уаії Рбе Сув Рго біп сіц 210 215 220
Зо
Рго Агд Гец Аза Робе Рго бій біц АвБп АБп Агуд бБег Гей Ппув Ппув І1е 225 230 235 240
Ркго Мпув Гец біц Авр Рго Аїа сСіп Туг бек Меє І1ї1е с1у Гей Гпув Рго
З5 245 250 255
Акуд Агуд Аза Авр Тец Авр Меє АвБп обіп Ні Уаії Авп Авп Уа1і ТПг Туг 260 265 270
І1їе с1у Тер Уаї еп сій бек І1їе Рго сбіп сбіц Іїе Уаії Авр Тік Нів 275 280 285 бі Гей біп Уаі І1їе ТПг Гей Авр Туг Агуд Агд бій Сув біп біп Авр 290 295 300
Авр Уа1 Уаї Авр бек Іїецйп ТПг ТПг Тс Тс бек бій І1е с1у с1у ТПг 305 310 315 320
Ап осіу Бек Аїа ТПг бек б1у ТПг біп б1у Нів Авп Авр Бек біп Ре 325 330 335
Тец Нів Гей Гей Агуд Гей бек с1у Авр б1у біп бій І1їе АвБп Агкд 01Уу 340 345 350
ТПЕ ТрПкг Гей Тгр Агуд пуб Ппув Рго бек 5ег 355 3З6о «2105 203 «2115 367 60 «2125 ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа
ЗА
«4005 203
Меє Гей пув Гей бек Сув Авп Уа1і ТПг Авр Нів І1е Нів Авп Гецп РІе 1 5 10 15 век Авп бек Агуд Агуд І1їе Рпе Уаії Рго Уа1і Нів Агд сбіп Тбг Агд Рго 20 25 30
ІТ1е бек Сув Роре біп Тїецйп Гпув Гув біц Рго Іїейп Агуд Аза Іїе Гей 5ег 35 40 45
Аза Авр Нів біу Авп бек бек Уаі Агд Уаі Аза Авр ТПг Уаі Бех щУ 50 55 бо
ТПг Бек Рго Аза Авр Агд Тец Агуд Робе бі1у Агд Те Меє бій Ар Щ1У 65 70 75 80
Рпе бек Тук пув біцш Гув Рпе І1е Уаі Агуд бек Тує бі Уаі1 С1у Ше 85 90 95
Авп опув ТПг Аїа ТПг Іїе сій ТПг Іїе Аза АБп Гецй Гей сіп сій Уаї 100 105 110
А1їа Сув Авп о Нів Уаі! біп Авп Уа! біу Ррпе бек ТПг Авр с1у Рпе А1а 115 120 125
ТПг ТпПкгЕ Гей ТПг Мес Агд Гув Гей Нів Гец І1е Тгр Уаі ТПпг Аз1а Агд 130 135 140
Меє Нів Іїе бій Іїе Тук Ппув Тук Рго Аза Тгр бБег Авр Уа1 Уа1 сіц
Зо 145 150 155 160
І1е сбіц ТБг Тгр Сув біп бек біц б1у Акд І1е с1у ТПг Агуд Агд Авр 165 170 175
Ткгр чІїе Гей пув Авр Сув Аїа ТПг с1іу сіц Маї І1е сС1у Агуд Аїа Тіг 180 185 190 зек Мпув Тер Уаі Меє Меє Авп о біп Авр ТПг Агуд Агуд Гей біп Агд Уаї 195 200 205
ТПгЕ Авр бій Уа1і Агд Авр біц Тук Гец Уаї Рпе Сув Рго Рго бій Рго 210 215 220
Акуд Гей Аза Рбе Рго б1ц бій АвБп АвБп бек бек Гей Ппув Ппув І1е Рго 225 230 235 240
Тпув Те бій Авр Рго Аїа сіп Туг Бек Меєсє Гец б1у ІТецй Гув Рго Аг4д 245 250 255
Агуд Аза Ар Тей Авр Меє Ав5п о сбіп Нів Уа1і Авп АвБп Уа! ТПг Тук І1е 260 265 270 сб1у Тер Уаї Гей сі Бек Іїе Рго сіп біц І1е І1е АБр ТПгЕ Нів с1ци 275 280 285
Тец Ггув Уаї Іїе ТПг Гей Авр Туг Агуд Агуд бій Сув біп біп Авр Авр 290 295 300
І1е УМаї Авр бек Іецй ТПг ТПг бек бій ТПг Рго Авп о біц Уаї Уа1ї 5ег (516) 305 310 315 320
Тув Геп ТПг с1у ТПг Ап сбіу Бек ТПг ТПг бек бек Гув Агд біц Нів 325 330 335
Ап обіц бек Нів РіПе Іїец Ні Ії1їе Гей Агуд Гей бек бій АвБп біу сбіп 340 345 350 бі І1е АБп Агуд б1у Агуд ТБг біп Тер Агуд пув пуб бек бег Агд 355 3З6о 365 «2105 204 «211» 412 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 204
Меє Уаії Аза ТПг бек Аза ТПг бек бек Рпе Рпе Рго Уаії Рго бек 5ег 1 5 10 15 зек Гей Авр Рго АвБп обіу Ппув б1у Авп Гув І1е сіу Бек ТПг Авп Гей 20
Аза сі1у Гец Авп бек Аза Рго АвБп бек б1у Акуд Меє Ппув Уа1 Гпув Рго
Ап Азїа біп Аза Рго Рго Гпув І1е АБп о б1у Ппув Ппув Уа1і с1у Гей Рго 25 50 55 бо бі1у бек Уаі Авр І1їе Уаі Агу ТПг Авр ТПг бій ТБг бек бекг Нів Рго 65 70 75 80
Зо АТа Рго Акуд ТБг Робе І1їе Ап біп Гей Рго Авр Тгр бек Меє Іецч Гейц 85 90 95
Аза Аза І1е ТПг ТПг І1е Рпе їец Азїа Аї1а сій Гпув біп Тер Меє Меє 100 105 110
З5
Тец Авр Тгр пув Рго Агуд Агуд бБег Авр Меє Гей Уаї АвБр Рго РпПе С1У 115 120 125
І1е с1у Акд І1е Уаі бі1іп Авр с1у Іец Маі Рпе Агд біп Авп Рпе б5ег 40 130 135 140
І1е Агкд бек Тук біцш І1е с1у Аї1а АвБр Агд бек Аза бБег І1е сбіц ТЕПг 145 150 155 160 45 Уаї Мес АвБп о Нів Гей біп сбіц ТБг Аза Гей Ап Нів Уаї Ппув ТПг Аї1а 165 170 175 с1у Гешп Гей с1у Авр с1іу Рпе сіу Бек ТПг Ркго біц Меє Рпе Ппув Гув 180 185 190
Ап о Гей І1ї1е Тгр Уаії Уа1ї ТПг Акуд Меє біп Уаї Уаї Уаї Авр Гпув Туг 195 200 205
Ркго ТПг Тер б1у Авр Уаії Уаії сіц Уаії Авр ТПг Тер Уаї бек біп 5ег 210 215 220 сб1у гув Авп сіу Меє Агуд Агуд Авр Тер Гей Уаі Агуд Авр Сув АвБп ОТ 225 230 235 240 (516) сіу бій ТП Гецп ТПг Акуд Аза бек бек Уаі Ткгр Уаї Месє Меє Авп Тув 245 250 255
Тец ТПпг Агуд Агуд Гей бек Гпув Іїе Рго біш бій Уа1і Акуд сі1у сбіц І1е 260 265 270 бій Ркго Тук Рпе Уаі Авп бек Авр Рго Уаі Гей Аїа бій Авр бек Аг4д 275 280 285
Тпув ТГецп ТПг пув Іїе Авр Авр Гув ТПг Аза Авр Туг Уаі1і Агд бег 01У 290 295 300
Тецп ТП Рго Агуд Тер Бек Авр Гей Авр Уаії Авп о біп Ні Уаї Авп Авп 305 310 315 320
Уаї пув Ту Іїе сіу Тер І1е гей сій бек Аза Рго Уаі с1у Ше Меє 325 330 335 бі Акд біп Ппув Гей Ппув бек Меє ТПг Гей сій Туг Агд Акд бій Сув 340 345 350 с1у Агуд Авр бек Уаі Гей біп бек Тей ТПг Аза Уаі ТБг с1у Сув Авр 355 3З6о 365
І1е с1у АвБп Тїец Азїа ТПпг Аза с1у Авр Уаї бій Сув сбіп Нів Гей Гей 370 375 380
Акд гей біп Авр б1іу А1ї1а бій Уаї Уаі Агкуд б1у Агд ТПг бій Тер 5ег 385 390 395 400 зек Мпув ТПг Рго ТПг ТПг ТпПгс Тер б1у ТПпг Аза Рго
Зо 405 410 «2105 205 «2115» 345 «212» ПРТ «213» Агарідорвіз Єпа1ііапа «4005 205
Меє Рпе Іїе Аїа Уа1 сій Уаї Бек Ркго Уаії Мес біц АвБр І1е ТПг Аг4д 1 5 10 15 сіп бек Ппув Ппув ТПг бек Уаії бій АБп о біц ТБПг с1у Авр АвБр сіп 5ег 20 25 30
Аза ТПг бек Уаї Уаї Іецп Гпув Аїа Гув Агуд ув Агуд Агуд Бек біп Рго 35 40 45
Ак Авр Аза Рго Рго біп Агуд бБег бек Уаі Нів Агуд сіу Уаі ТПг Аг4д бо
Нів Агуд Тер ТБПг с1у Агуд Тук бій Аїа Нів Гец Тгр Авр Гув Авп бег 50 65 70 75 80
ТЕр Авп бій ТБг біп ТБ Гуз пув с1у Агд біп Уаї Тук ІТеп С1у Аїа 85 90 95 55 ТУуг Авр бій бій Авр Аза Аза А1ї1а Агуд Аїа Туг Авр їец Аза Аїа Гей 100 105 110
Тпув Тук Тер с1у Агуд Авр ТПг Іїе Гей Авп Рпе Рго Гей Суб Авп Туг 115 120 125 60 бі бій Авр чІ1е пув біш Меє сій Бек біп бек пув бій біц Тук Ше
130 135 140 бі1у бек Гей Агуд Агуд Ппув бек бек с1іу Рпе бек Агкгуд біу Уаї бек Гув 145 150 155 160
Туг Акуд сіу УМаії Аїа пуб Нів Нів Нів Авп б1у Агд Тгр бій Аїа Агд 165 170 175
ІІе с1у Акд Уаі Рпе б1у Авп Гуз Тук ІГецйп Тук Ге с1у ТПг Туг Аї1а 180 185 190
ТП біп бій сбіц Аза Аза І1е Аїа Туг АБр І1е Аза Аза І1е сіц Туг 195 200 205
Агуд сб1іу Гей Авп Аїа Уа! ТПг АвБп о Рпе Ар І1е бБег Агуд Тук Геч Тув 210 215 220
Тецп Рко Уаії Рго бій Авп Рго Іїе Авр ТПг Аїа АБп АБп ІТецп Те Сс1и 225 230 235 240 зек Рго Нів бек Авр Тецйп бек Рго Ропе І1е Гув Рго АвБп Нів сій бег 245 250 255
Авр Гей бек біп бек біп бек бек бек бій Авр Авп Авр АвБр Агд Гу 260 265 270
ТПЕ Ппув Гей Ггец пуб бек бек Рго Гец Уаі Аї1а сій сій Уа1і Ше ФЩ1У 275 280 285
Зо Рго Бек ТПг Рго Рго бій Іїе Аїа Рго Рго Агуд Агкуд бек Ропе Рго сіц 290 295 300
Авр І1е сбіп ТПг Тук Рпе б1у Сув біп АБп бек с1іу Ппув Гей ТПг Аїа 305 310 315 320
З5 бі бій Авр Авр Уаі Іїе Рпе сіу Авр Гец Авр бек Рпе Іецй ТПг Рго 325 330 335
Авр Рпе Тукг бек біц Іец Авп Авр Сув 40 340 345 «210» 206 «2115 303 «212» ПРТ 45 «213» Агарідорзів Єпа1ііапа «400» 206
Мен АїТа пув Уа1і бек с1іу Агуд Бек Ппув Пув ТПг І1е Уаі АБр АБр с1и 1 5 10 15 50 І1їе бек Авр Гув ТПг Аза бек Аза бек бій бек Аїа бек І1е Аїа Гей 20 25 30
ТПг Бек Гпув Агуд Гпув Агд Гув бек Рго Рго Агд АБп Аза Рго Іец сіп 55
Акуд Бек бек Рго Туг Агуд бі1у Уаі ТПг Агуд Нів Агуд Тер ТПг с1у Агд бо
Тук бішц Аїа Нів Гец Тгр Авр Гув Авп о бег Тгр АБп АвБр ТПг біп Тс (516) 65 70 75 80
Тпув Кпув б1у Агкуд біп Уа1 Тук Гей с1у Аїа Туг Авр біц біц сбіц А1а 85 90 95
Аза Аза Агуд Аїа Туг АБр Іїеп Аїа Аза ІТецй Гпув Туг Тгр б1у Агд Авр 100 105 110
ТПЕ Ггеш гей Авп Рібе Рго Тецй Рго бек Тут Авр біц Авр Уаї Гув с1и 115 120 125
Меє сбіц сі1у сбіп бек їув біц бій Туг Іїе с1у бек Тей Агуд Агд Гув 130 135 140 зек бек біу Роре бек Агуд сіу Уаії бек Гув Туг Агуд сіу Уаі Аїа Аг4д 145 150 155 160
Нів Нів Нів Авп с1іу Агд Тер бій Аза Агуд І1е сб1у Акд Уаі Рпе Аза 165 170 175
ТП біп бій бій Аза Аза І1е Аза Туг АвБр І1е Азїа Аї1а І1е сіи Туг 180 185 190
Акуд с1у Гец АвБп Аза Уаі! ТПг Авп Ррбе Авр Уаії бек Агуд Тукг Гей Авп 195 200 205
Рго АБп Аїа Аїа А1їа Авр Пув Аза Авр бек Авр бек Ппув Рго І1е Агд 210 215 220 зек Рго Бест Агд бій Рго бій бек бек Авр Авр Авп о ГПув бек Рго Гув 225 230 235 240
Зо зек бі біц Маї І1е бій Рго бек ТПг бек Рго біц Уаї І1е Рго ТПг 245 250 255
Акуд Агуд бек Робе Рго АвБр Авр ТІ1е біп ТПг Тук Рпе с1у Сув біп Авр
З5 260 265 270 зек с1іу Мпув Те Аї1а ТПпг бій біц Авр Уаії І1їе Рпе Авр Сув Ропе Авп 275 280 285 зек Тук Іїе АвБп Рго сіу Робпе Тук Авп бій Рре Авр Туг С1у Рго 290 295 300 «2105 207 «211» 445 «212» ПРТ «2135 Ауепа васіуа «4005 207
Мен Ггув Агуд Бек Рго Рго Рго Аза Рго Рго Аїа Аза Рго Рго Рго Рго 1 в) 10 15 біп Ркго Бек Рго Бек бек бек бек Рго Аїа Сув бек Рго бек Рго 5ег 20 25 30 зек бек бек Сув Рго бек бек бек Авр бек бек бБег Іїе Уаі І1е Рго 35 40 45
Акуд пув Агуд Азїа Агуд Тс обіп пуб Аза Аза бек с1у Ппув Рго Ппув Аїа 50 з9 (210) (516) пув Аїа бек Аїа Ппув Акуд Рго Гуз Гув Авр Аза бек Акуд бек бек Гув 65 70 75 80 бі ТпгЕ Авр Аза АБп сб1іу Аїа Аза Аза Аза Аїа сіу Пув Агд бек бег 85 90 95
Іїе Ту Акуд біу Уаі ТПг Акуд Нібв Агуд Тер Тс б1у Агд Рбе сій А1а 100 105 110
Нів Гей Тер Авр Гув Авп о Сув Ріпе ТПг бек Уаі! біп Авп о Гпув Пув Гув 115 120 125 б1у Акд біп Уаі Тук Ггеш сіу Аза Туг Авр ТПг сій Авр Аза Аїа А1а 130 135 140
Акуд Аза Тут Авр ІТец Азї1а Аза Гец Гуз Туг Тер сі1у Бек бі ТПг ІПе 145 150 155 160
Тец АвБп Рпе бек Уаі бій Авр Туг Аїа пув біц Меє Рго біц Меє сій 165 170 175
А1а Уаії бек Акуд біц біц Тук Ге Аїа Аза тей Агуд Агуд Агуд бек 5бег 180 185 190 б1у Рпе бек Агуд сіу Уа1 бек Ппув Туг Агуд сіу Уаії Аза Агд Нів Нів 195 200 205
Нів Авп с1іу Агд Тгр біц Аза Агуд І1е с1і1у Агд Уаї Іеп с1у Авп Гув 210 215 220
Тук Гей Тук Гей с1іу ТБг Роре Авр ТПг біп біц б1ш Аза Аза Гув Аїа
Зо 225 230 235 240
Туг Авр гейш Аза Аза І1е сіц Туг Агуд біу Аї1а АБп А1ї1а Уаї ТПг Авп 245 250 255
Рпе Ар І1їе бек Сув Тук Гей Авр сіп Рго біп Гей Гецп Аїа сіп Іецй 260 265 270 біп біп б1у Рго біп Уаі1і Уаі1і Рго Аїа Гей сіп сбіц біц Іец біп Нів 275 280 285
Авр Уаі1 сіп Нібв Авр Тец біп Авп Авр АБп Азї1а Уаі сбіп бій Гей Авп 290 295 300 зек сіу біц Уаії біп Меє Рго сб1у Аї1а Меє АБр сій Рго Іїе Аїа Гей 305 310 315 320
Авр Авр бек ТПг біц Сув І1е АвБп ТПг Рго Рпе сій Рпе Авр РПе 5ег 325 330 335
Уаї бі біц Авп Гей Тгр бек Рго Сув Меє Авр Туг бій Гей Авр Аїа 340 345 350
І1е Гец б1у АвБп АвБп о ТПг о бБег АвБп бек Аза АвБп Меє Ап бій Тер Ре 355 3З6о 365
Авп о Авр обект ТПг Роре біц бек Авп І1е сі1у Сув ІТейп Рпе сій с1Уу Сув 370 375 380 зек Авп І1е АвБр Авр Сув бек бек бек Гув Нів Сув Аза Авр Гей Аїа (516) 385 390 395 400
Аза Рпе Авр Рібе Ропе Гув бій б1у Авр АвБр АвБп Авр Рпе бБег Авп Меє 405 410 415 бі Меє бій І1їе ТПг Рго сбіп Аза Авп Авр Уаі1і бек Субв Рго Рго Авп 420 425 430
Авр Уа1 бек Сув Ркго Рго Гув Месє І1е ТПг Уаї Сув Авп 435 440 445 «2105 208 «211» 420 «212» ПРТ «213» вогодпит рісої1ог «4005 208
Меє Авр Меє сій Акуд бек біп біп сбіп Був бек Рго ТПг біц бек Рго 1 5 10 15
Ркго Рго Рго бек Рго бек бек бБекг бБекг Бек бек Уаі Бек Аїа Авр ТЕГ 20
Уаї Гей Рго Рго Рго сіу Пув Агуд Агуд Агуд Аїа Аза ТПг ТБПг А1та Гу
Аза пув Аїа сі1у Аїа Гув Рго Пув Агд Аї1а Агд ув Авр Аїа Аза Аї1а 25 50 55 бо
Аза Аза АвБр Рго Рго Рго Рго Рго Аї1а Аї1а Аї1а Аза Аза с01Уу Ппув Агд 65 70 75 80
Зо зек бек Уа1! Туг Агкуд сіу Уаії ТПг Акуд Нів Агуд Тер ТПК с1у Ак РБре 85 90 95 бі Аза Нів Гей Тер Авр Гпув Нів Сув Гей Аза Аїа Гец Нібв Авп Гув 100 105 110
З5
Тпув Кпув б1у Агкуд біп Уа1 Тук Гей с1у Аїа Туг Авр бек біц біц А1а 115 120 125
Аза Аза Агуд Аїа Туг АБр Іїеп Аїа Аза Іїецй Гув Туг Тгр б1у Рго сіц 40 130 135 140
ТПЕ Ггеш гей Авп Рібпе Рго Уа! сій Авр Туг бек бек бій Меє Рго с1ци 145 150 155 160 45 Меє сбіц сіу Уаї бек Акуд біц бій Тук Гецп Аза бек Те Агд Агд Аг4д 165 170 175 зек бек біу Роре бек Агуд сіу Уаії бек Гув Туг Агуд сіу Уаі Аїа Аг4д 180 185 190
Нів Нів Нів Авп б1іу Агд Тгр біц Аза Агуд І1е с1у Агуд Уаі Рпе 0Щ1У 195 200 205
Авпопув Тук Гец Тук ІТец б1у ТБг Рре АБр ТПг сіп бій бій Аза Аї1а 210 215 220
Тпув Аза Туг Авр еп Аїа Аза чІ1е сій Туг Акуд сіу Уаії АвБп А1їа Уаї 225 230 235 240 (516) ТПЕ Авп Рпе Ар І1е бек Сув Тук Гецп Авр Нів Рго Гей Ріре Гей Аїа 245 250 255 сіп Гей біп біп бій Рко біп Уаі! Уаї Рго Аїа Гей АвБп сб1іп сіц Аї1їа 260 265 270 біп Рго Авр біп бек бій ТПг бій ТБг І1е Аза сіп бій бек Уаї 5екг 275 280 285 зек біц Аїа пуб ТПг Рго Авр АБр АБп Азїа бій Рго Авр Авр Ап Аїа 290 295 300 біц Рго Авр Авр І1ї1е Аїа сій Рго Гей Іїе ТПг Уа1 Авр Авр бег І1е 305 310 315 320 бі бій бек Гей Тер Бек Рго Сув Меє Авр Туг бій Гей Авр ТПг Меє 325 330 335 зек Агд Бек Авп Рпе біу бек бек І1е АБп Гей бек бій Тер Ропе Авп 340 345 350
Авр Аза Ар Рібе Авр бек Авп І1їе сіу Сув Гей Рпе Авр с1у Сув 5ег 355 36о0 365
А1їа Уаі1 Авр біц с1і1у б1у Гув Авр біу Уаії сб1у Гей Аза Авр РПе 5ег 370 375 380
Тецп Гей бій Авр Рпе бек Гей Рпе сбіш Аїа сіу Авр біу біп Іецй Гув 385 390 395 400
Авр Уаі1і Ггец бБег Авр Меє бій біц сб1у І1е біп Рго Рго ТПг Меє те
Зо 405 410 415 зек Уаї Сув Авп 420
З5 «2105 209 «2115 395 «212» ПРТ «213» йеа шаув «4005 209 40 Меє бій Агуд бек біп Агуд біп бек Рго Рго Рго Рго бек Рго бек 5ег 1 5 10 15 зек бек бек бек Уаі! бек Аза Авр ТПг Уаї Гей Уаі Рго Рго с1у ГПув 20 25 30 45
Агуд Агуд Агуд Аїа Аза ТПг Аза пув Аза б1у А1ї1а бій Рго АвБп о Гпув Агд
І1е Акд пув Авр Рго Аї1а Аза Аї1а Азї1а А1їа с1у Ппув Агуд Бек бек Уаї 50 з9 бо
Туг Агуд сіу Уа1і ТБг Агуд Ні Агуд Тер Тс б1у Агд Рпе сій Аза Нів 65 70 75 80
Тем Тер Авр пуб Нів Сув Гей Аїа Аїа Гецй Ні Авп Пув Пув Ппув 1У 85 90 95
Акуд біп Уаї Тук Іец б1у А1ї1а Туг Авр бек бій бій Аза Аїа Аїа Агд 100 105 110 60
А1їа Туг Авр Гец Аїа Аза Іїецп пуб Туг Тегр б1у Рго бі ТПг Гей Іец
115 120 125
АвпоРпе Рго Уаі біц Авр Туг бек бек бій Меє Рго бі Меє сій Аїа 130 135 140
Уаї Бек Агуд біш бій Тук Гец Аїа бек Гей Агуд Агд Агд бек бек Ш1У 145 150 155 160
Рпе бек Агуд біу Маії бек Ппув Туг Агкуд бі1у Уаі Аза Агу Нів Нів Нів 165 170 175
Ап ос1у Агд Тгр біц Аза Агуд І1е б1у Акд Уаі Рпе с1у Авп Ппув Туг 180 185 190
Тем Тук Гецп с1у ТПг Рібе Авр ТПг сбіп сбіц бій Аза Аїа Гуз А1їа Туг 195 200 205
Авр тей Аїа Аза І1е б1іцп Туг Агкуд біу Маі АвБп Аза Уа1і ТПг Авп Ріє 210 215 220
Авр І1ї1е бек Сув Тук ІТец Авр Нів Рго Іїецй Рпе Гей Аза сіп Гей сіп 225 230 235 240 біп бій Рго сіп Уаі Уаі1і Рго Аза Гей Ап біп бій Рго біп Рго Авр 245 250 255 біп бек бій ТП с1у ТПг ТбПкг бій біп бій Рго бій бек бек біц А1а 260 265 270
Зо Пув ТБг Рго Авр сіу бек Аїа бій Рго АБр бій Авп Аза Уаї Рго Авр 275 280 285
Авр ТПг Аїа біц Ркго Іїецйп ТПг ТБПг Уаії Авр Авр б5ег ІШе бі бій щу 290 295 300
З5
Тецп Тер Бек Рго Сув Меє Авр Тугк бій Гей Авр ТПг Меє бег Агд Рго 305 310 315 320
Авп оРпе сіу бек бек І1е АвБп Гец бек бій Тер Рпе Аїа Авр Аза Авр 325 330 335
Рпе Авр Сув Авп о І1е б1у Сув Іїец Робе Авр сіу Сув бБег Аза А1а Авр 340 345 350 сі біу Бек Ппув Авр сіу Маї с1і1у Гей А1ї1а Авр Рпе бек ІТей Рпе сіц 355 3З6о 365
А1їа с1у Авр Уаії бСіп їецшц Гув Авр Уаії Гей бБег Авр Меє сіц сбіц с1У 370 375 380
І1е біп Рго Рго А1ї1а Меє Іїе бек Уаї Сув Авп 385 390 395 «2105 210 «211» 430 «212» ПРТ «2135» Тгіадіса верітега «4005 210
Ме Аза бек бек бек бек Авр Рго Уаі1 Гей пув Аїа б1іцп Іецп с1у 5бег 60 1 в) 10 15 зек сіу біу сбіу Сув бек бек біу біу б1у с1у сі Бек Бек бій Аї1а 20 25 30
Ууаї Іїе Аза Ап Авр сбіп Гец Гей Гей Туг Агкуд б1іу Тецйп Гув Пув Рго 35 40 45
Тпув Ггув бій Агуд сб1у Сув ТПг Азїа пув бій Агуд І1е бек Ппув Меє Рго 50 55 бо
Рго Сув ТПг Аза с1у Пув Ак бек бек І1е Туг Агуд сіу Уаі ТБг Агд 65 70 75 80
Нів Агуд Тер ТБПг с1у Агуд Тук бій Аза Нів Гец Тгр Авр Гув бек ТПг 85 90 95
ТЕр Авп о біп Авп обіп Авп оГув пув с1і1у Ппув біп Уаї Тук ІТеп С1у Аїа 100 105 110
Туг Авр Авр сій біц Аза Аза Аза Агуд Аїа Туг АБр Іїецй Азї1а Аза Гей 115 120 125
Тпув Тук Тер с1у Рго с1іу ТПкг Гей Іїе Авп Рпе Рго Уаї ТПг Авр Туг 130 135 140
ТПЕ Агд Авр Гей бій біц Меє сбіп Авп Меє бег Агуд біц бі Тук Геч 145 150 155 160
А1ї1а бек Гей Агуд Агд Гув5 бек бек біу Роре бек Агуд сб1у І1їе Бек Гув 165 170 175
Зо
Тук Агуд с1іу Гей бек бБекг Агд Тгр біц бБег бек Уаі б1у Акд Ме Рго 180 185 190 бі1у бек бій Тук РПе бек бек Іїе Авп Туг Уа1 Авр Авр Рго Аїа А1а
З5 195 200 205 бі бек бій Тук Уаї сіу Бек Гей Сув Рпе бій Акуд Пув І1е Авр Іей 210 215 220
ТПг Бек Тук Іїе Пув Тер Тер б1у Гецш Авп Гув ТПг Агуд біп Аза с1и 225 230 235 240 зек І1їе бек пув бек Аї1а бій біц ТП Гув Рго сі1у Сув Аїа бій Авр 245 250 255
І1Іе с1у с1у біцш ІТец Гув ТПг ТЕ біц Тер Азїа І1е сіп Рго ТПг сіц 260 265 270
Ркго Тук біп Месє Рго Агуд Гей біу Меє Рго Уаії Нів Уа1 Ппув Ппув Нів 275 280 285
Ппув бі1у бек Ппув Іїе Бек Аїа Гей бек Уа1і Гей бек біп бег Аза А1а 290 295 300
Рпе Ппув бек ТГей сбіп сбіц пув Аїа бек ГПув Гув біп бій Авп бек ТПг 305 310 315 320
Авр Авп о Авр обіц Авп обіц Авп оГув Авп ТП АвБп о ТпПг АвБп о Гпув І1е Авр 325 330 335 60
Тук б1у пув Аїа Уаії біц ТПг бек Аза бек Нібв Авр бек бек АБп с1ц
340 345 350
Акуд Рго Уаії ТПг Аза Іец бі1у Мес бек бі1у б1у Гей Бек Гей Ппув Агд 355 360 365
Ап оУа1 Тук біп їец ТПг Рго Рібе Іїец бек Аза Рго Гей Гей ТПг АвБп 370 375 380
Тук б1у ТБПЕг І1їе Авр біп Іїец Уаі1і Авр Рго І1е Іецй Тгр Аза бек Іец 385 390 395 400
Уаї Рко Уаії Гей Рго ТПг сіу Гей Бек Агуд Авп Рго біц Уа1ї ТПг Гув 405 410 415
ТЕ біц ТПг бек бек ТПг Тук ТПгЕ Рпе Рпе Агкуд Рго сіц сіц 420 425 430 «2105 211 «211» 1531 «2125 ДНК «2135 5Бо1іапит Єирековит «4005 211 гЕЄєаааєса ЄЄЧЯЇЕЕерасєє зєєссеЕсссссє ссссасадді асааааддесд ааааєссдаад (216) саачдаєсдає сСдсаадссає дсдссассас деЕсаєєдавра сЕЄєсдддаада аарсеевасе 120 басаєдеЕСЕЄ сосесаддаач Єаасасєєса СсасоосеЕстад Єсадаєсеєс єсоєссаєста 180 годсЕЄвадна ЄааєсеЕсаде гавєсесєваєе асаєдаєсає доодеЕдааєеє єдарасааає 240 аг деєса Єгаааєааає ааєєсаєса саасесєеєдасе асеЕєссадесуд асааааааєд Зоо баєєдеЕсСдвра драсссєсеЕсеЕ ЕсСоЧОєЄєдаана Сдааєсаавсе єсесеЕсасьсе дсдасааєтд 3З6о
Бааєєдесас басеЕвсаєдає аагсаєссадс дасасасаєсд сСсодссоддсаа аадсааасас 420
Зо гЕсСсСадедас аааасааєсад асєсааєсас аааастаєса ассЕсеЕсеса єаасааєааа 480 рЕсаєссста арсвавасає Есааддасаа адсасеЕсеЕвеЕ євсаваєаєаа ааааєадесяе 540
Ебадеєдасда ЄсдсадеЕдеЕє дадеЕСсадаа ассасааєсдс Сдааєсссада ааааєсстссає 60 чдсадеЕдсааа асааассеєса ааааддасає Ссадсссасба дадддддеєдс асдедасасс 6бо ссаассссад саааадаааа ссоісссЕсса асааддасає єЕгсдсуддеЕдсеЕ ааасаастес 720 аадеЕсссаєс асасаєасає сСбассасаєра асассаасаа адаасадааа аддаааддака 78о0 аасаєсаєвта аассуєсеЕсеЕ десавасЕсес адесдасаасе даєсдасдаа ассЕсессд 840
Есасасаааа ЄЄЕЄвадеда сдааасаєда сСссасадаєд асдаааєссає ссдессссоса 900
Єааєстєаавс сосеЕЧдадесу ассаєсасьс сеЕседеЕстЯає Есгасесоєс асудєтадесс 960 аєсааааааа аасасссссєс ЕссЕваєдна суєдааєсддЕ Єддаасддає ссаєстатваєа 1020 асассаасаа адаасадааа ааддааадеуд адсдаддеЕєс даддададада асссдсесаа 1080 баєсададеЕс даєсаєдедеЕ сааєеєсєваєс дасаєдассс аасеєсаас ЕдадеЕстаас 1140 сааєєссддає ааддсдадаа асаєсасадеі асєдадеЕсса даааааєсес аєдеадевед 1200 чадЕааассє садсааддас дЕЕдадесса гададдодадуад Єдсаєдедас ассссаассь 1260 садсаааада ааассєсссс Есаадаадда саєєєдсддЕ дсеааасаає сЕСВадесьс 1320 аєсасасаєа Сасасасасє асасаасассі аасааасаає адааааадда ааддеаааса 1380
Есасєаасда садеЕсдсудЕ дсааасеєдад Єдаддеааса аасадсасса асеЕвестваєвд 1440
ЧдЕсаєдеЕСаа асссааадса аааєєсссса ассеЕдеЕстас деЕдсставає асассаєдсе 1500 бдЕсасаєдс ссааадсасс аасаааваасьєс а 1531 «2105 212 «2115 20 «212» ДНК «2135 Штучна послідовність «220» «223» Олігонуклеотидний праймер «4005 212 сасЕСсЧдбєдсеЕ Есссаєсаєс 20 «2105» 213 60 «2115 20 «212» ДНК
«2135 Штучна послідовність «223» Олігонуклеотидний праймер «4005 213 чааддсєдад саасаададд 20 «2105 214 «2115 18 «2125 ДНК «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Олігонуклеотидний праймер «4005 214 часчаєвєєеєвд дасесьдс 18 «2105 215 «2115 20 «2125 ДНК «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Олігонуклеотидний праймер «4005 215 сссаасссєЕ ссубасасає 20 «2105 216 «2115 1970 «2125 ДНК «213» йеа шаув «4005 216
Зо ддабассЕвеЕс єеєССсССсСадада Сааасудєдда агадсеЕссас ааасааасач саєдаєдчессд (216) асасеєєддає досдассевєд сааєсссаад аассассдса сасоддссдсс адссдасааа 120
Баєсвсасдсс аєдсаєддодсе асоддеЕсддаа Сасассдсад сддсдддсаа сссдссдаєга 180 ссдессасдає деЕссссддаєс дсссддеЕсдс єдаграсеЕссє ддЕсеЕссвдоу асаєдсасса 240 адасааєсаа деЕдаєєсаас сеЕєааєєсаа сасаасаєсаа асаасасдсба асаєссаасео Зоо часчєдеЕєса сссагадада агассссєєс сддассстасе сссадааєда гєдссЧдєсдсс 3З6о чЧЕДдЕаєсдад саадесасесе сасеєсдааде ассссасссс ссасаєссад сасаааааєс 420 гЕСЕЧДЕЄСсСУЯЄ додсаааєсьєє деЕддсоддЕссд аасдааадаа єдстасаєаа десадстагад 480 ачаасдбєаєє аєдеЕдєааас саассдссса дсдсаааєсд Сдсдсаааса дссаєсдєссаа 540 ге додсо дсадаєсаад басааассдс асдссссдда Сааасаєсдса сааассасаа 60 сассддссас Садаєсєстаса Ессаасуєсс асаассаєсс арсссЕссст дсеЕдсасесе 6бо дсааасаадс асссссаєсєЕ сддбадсааса Ссссдссссс дасаадсесся сззаєдсадед 720 чаддсссеєсс ассдсаасає ссрадсдсбає дасдссддад аадсдасссс сбаааєаає9да 78о0
Еддсаачаєд ЄЄЧдсвададеєє єдесадссаса дссссааєссс аадаєсаєсс саадссає99 840 чассеєдаєєс басдаддсесе асаассаддс аєдасасдєс деЕСсасссас ЄсеЕсаєсоасає 900 саєсддЕСас Єсдаєстєдчас ЕЄддЕсСсСсСса ассасесасс стаддеЕєсса аадссстаад 960
ЕЕЄСЕСЧЯ ває асооєстадес асеєсеЕсадед ддадеЕеЕстає чеЕдваєсеса ЕсСссеЕДдЕСсаа 1020 асадсаєдсс аасгаадсаа асаєдаєдає асааєсаєдса аєсеаасааа аадаєаєаєд 1080 адеЕдадЕсЕеЕсС агааааааду чачачадеес саєсдаддадеі дааасеседа асасадаєсас 1140
Єдаєсаєдаса дссЕсаааад бадедеЕваєд аааєсаєсає Єдадаааєду гаєсадсасе 1200 сааєсдаєсє ссасуседЕсС ааєсдеЕсаєд адсасааєсє єсасссааад аддсасасса 1260 чсааєдеЕссд сЕсЧдсадедЕеЕ ссдадасуєеЕ дсесссассудс суссууєсьсЯ єЕсЕСЕЯДедс 1320 сЕссаєєсєсаа ЕдсддсаадеЕ ддсЕсааєсс саадсддесд Есдссессса дссссадсад 1380 саааагаєсь Есссаєдсудд ссаєдссеЕсд ааааєєддаа гадаврссеєсс адаєєсассд 1440 ссдсдЕСсСаєс Ессассасьсє єсЕСассддс ссааєсадса ЕсЕССсСЕЄссСссС сдадсесаає 1500 саєдсесаде саадсдеЕсас сааєдодасуаєс асоудЕсдЧдеєє єсоЯоссассудсє сеЕдсаєдсаа 1560 чадваввєсвд сЕссдсааді дсаааєддаа аасоддаєсса аасаассдса ссдсассаає 1620 гЕсддаасодс ддааассдада дчЕСЕДЧЕЕсСоОд ДдЕсССЯєседа аасдсдстьда ЕДдЕСЕСЄСає 1680
ЕСЕ єааєсад аєдеадесвас сєдаєсасстає сеЕаадеЕсодда сдаєсааасу асеЕдеЕдеЕсаа 1740 чЧЕдЕдаєсаа даааадсаєс даааасаааа СЕсСаєссдсса бааааадеса аааасадесдд 1800 (516) аєаасадсад дассссаєбаа бадаааааає Сассааасуд ааєсддаддадада сссаасодвсад 1860 баєаєадсад ссдуддЕдучєд ссддасаєсс дасдсєсудбєд ссадсаддес асссеЕесьсд 1920 ссеЕрасессс Есасадаасс садсааааса Есдссадесс сдссуаєсдад 1970 «2105 217 «2115 584 «2125» ДНК «213» АеТтцйгорив 11Есогаїі5 «4005 217 сссаадсссд ассдасдсас асдссассрд ссааддсесс сессаєссдс асеЕсрдсаєс (216)
ЧдЕСЯСсСЕєЄСсСЯд соабааасесєс сасоаєбадсас ссдсасдасс стадссадас ссадсдсдсс 120 сассстассу ссддсдадсуд ддсссссаєс єсдсодссадда сеЕсСссаєдсуа ддеЕссассде 180 чддассадссс басдссдаас сдадсссаєсс ссоссасссо сссассдсса адсдддассс 240
ЧдсЧдЕєддасс ЕЕЕСсССсСУУсСЕвд дсеЕддссссс ассадсудрсс асдсдддсеса асддсесесдс 300 чаааєддаєс єссасасдас ааассаааас дадаадаааа Сааасддааа ддааадааас 3З6о чддаєсдссас дсдєєссада доасадєссддсоІ аассасссдда Ссасдсссдс дсадсдадсдсд 420
ЄаассссЧдєс дЕддЯдодЧЧєЄсаа Сссоодуаєдоос содаєсєсоодда аадссасддс сЕЄсСаєаасс 480 саєсссодсс ддассдаасс ддсассдуддаа асаааргасад ддддадаааа ааадуеЕсессьс 540 чдсдаддаадд ааааддаааа деЕсдсдсдсс дЕсСсссдссс асад 5384 «2105 218 «2115 928 «2125 ДНК «213» Адкгорассегіцют гПпПілодепев5 «4005 218
Ебадсдааад даєдеЕсаааа ааддчаєдссс асааєссдддда ддадсдддді ааадсссааа (216) дЕєдодсссоос гассодасеєє соосдааадсу дсассдодсаа асчдєддачає гдсеєдсаєсес 120 аадавсасеЕве єеЕСТаєсЕЄсС єддЕсаадає дегааадсаєсе дссасааєса гаєсааєсас 180
Баасаєєдеа бєаєдеаасає адедсддааа Ссаєсстаєдс сааааєчдчаєда сассааєаає 240 адсааєааса агаєдеЕдеЕса ассЕєсесса аєсудддааса саєЕеЕсаадсу астаєсдаєде Зоо
Едааєсаааєє аєєссаааад дааасасаєдд ЯдЕСсСссдддада асссдссасба дасагсаєсдесс 3З6о
Зо аааєєсасас сСадеЕстадсд ддЕдсаааас СастаєсеЕсеЕ Ю дЯяєсеЕсСеЕдадеі ЕсСааєааааа 420 аєаааєаадс адддсдааса дсадеЕсадсесс сСаадааддаа Сддсддссає дсасдєсдсессес 480
Ебаададасс сраєааєсааа ЄЄдссадсесо СЯСссдсСЕссд десдссдасад дсссаасдаєд 540 чЧчадЕсєвадсеЕ Єдасааадса дсодссссссс дсадсасбсааа Саааддсадд сдддеЕдсдЕс 60 ссаєсаєсєсаа аддааааадс аааадссдад ассссасада ссасааасса ссаєстаєєс9дд 6бо аддасадаас стасеєсссес асдосдуддесу стадсеЕєсаа ассраасаад бааааасаає 720
Баааадсадд саддеєдеЕссс єЄсСвасассс дсасаасдад дсдасдсдда дсаєссдасад 78о0 ссдсаєссає Еааєсєаасаа асєсдеєддас ссасассваа сессаааравье єЕстаєсаєье 840 дсЕСсССсСааєсас дсеєаададсеє седдаєсаса аасадесссодд асдссєссдад Єсасдддеас 900 аадсаассвд ЕЕссСсрасьє єдЕеЕсасса 928 «2105 219 «2115 732 «2125 ДНК «2135 Штучна «2205 «223» конструкція шпРНКі, що містить фрагмент розміром 732 пари основ «4005 219 ааєдсадеЕеєсє басааадедуд адсасссааа дсадаєсдада Ссассссдса сСаасаєсддсс (216) сСЕЧЯЧЕЧЕЯду ассаваєєеє єдеЕдддаєдесд ааддаєдсеє Есдадеесьс ассасаєсає 120 ааддссавєс дЕдаасссвеє Сдассаєссас аадссеєдудсес ааааєссаває ссодсссьсса 180 сЕсдасссса ддадеЕсссса содссддсаає асаєсадеЕєє єсддеєдааає адаададаад 240 сесаадсадд дсодссаасдс сдЯссседасд єсааассасс ааадесдаадс адаєссадсд Зоо
ЧЕваєєдсеЕсС ЕДЕєЧСсЕеЕєЧда аєсдаддсас ссасбсасаєсд ссдадаасає аасссаєсдєєс 3З6о чдсаддчадчаєа дадеЕсаєсас єдаєссеЕсесє сдсаадссає сСсадсаєсддад ааддаассес 420 сЕЧсЯЕЧЕСсЕ асеєсудааааа асасасододудсЕ даєсдасссса аасссдЕсСда даадаааадд 480 ададсаааса саадаадсеє дааддчадчаєсд дссдсдссає сдаддддесдда ассаааастса 540 аєаєддаєєд сеЕсстадеда єддаададає аддссааасс седеЕсасааа адаасоаавесає 60 ссадсдссає ссдасдсссс сссаасадас аасаєдадаа додсЕсдсада асаєдсто9дде 6бо дЕСССЕДДЧдЕСсС асаєєвсаєсс єСсадсааса Ссасдссаєд асаєссаєсдес сссессдесс 720 (516) сададсєєдада аа 732
«2105 220 «2115 512 «212» ПРТ «213» Б1іаеїв диіпеепвів «4005 220
Мен Аїа Уаї Бек Гпув Авп Рго бій ТПг Ггец Аза Рго АвБр біп сій Рго 1 5 10 15 зек Мпув біц бек Авр Тецй Агуд Агд Агуд Рго А1їа бек бек Рго бБег в5ег 20 25 30
ТПг Аїа Аїа бек Рго Аза Уаі! Рго Авр бБег бек бек Агуд ТПг бек 5бег 35 40 45 зек І1їе ТПг сіу бек Тер ТПг ТПг Аїа Іїей Авр сб1у Авр бек с1у Аї1а 50 55 бо сб1у А1ї1а Уаї Агуд І1ї1е с1у Авр Рго Ппув Авр Агуд Ії1е сС1іу біц Аїа Авп 65 70 75 80
Авр Ії1е с1у біц Гуз пув Гув Аїа Сув бек сбіу бій Уа1! Рго Уаїі с1У 85 90 95
Рпе УМаії Авр Агд Рго бек Аза Ркго Уаі Нів Уаі Агуд Уа1і Уаі1і сій 5ег 100 105 110
Ркго Гей бек бек Авр ТПг І1їе Рпбе біп сіп бек Нів Аїа с1іу Іецй Іей 115 120 125
Зо Авп оГечп Сув Уа1! Уаї Уаї Гей Іїе Аїа Уа1і Авп бек Агуд Гей І1еє І1е 130 135 140 біц АвБп Гей Меє пув Тук с1іу Гей Гец І1е сіу бек б1у Рпе Рпе РІе 145 150 155 160
З5 зек Бек Агд Тец ІТец Агуд Авр Тгр Рго ІТецй ІТецп Іїе Сув Бек Гей ТЕПг 165 170 175
Тецп Рко Уаії Рпе Рго Гей сіу бек Тук Месє Уаї сбіцш Гув Іеп Аїа Туг 180 185 190
Тпув Кпув Рпе Іїе Бек бій Рго Уаі Уаії Уа1і Бек Гей Нів Уаї І1е Іей 195 200 205
Іїе Іїе Аїа ТПг І1е Меє Тук Рко Уаї Рре Уаї Іїе Гей Агкуд Сув Авр 210 215 220 зек Рго І1е Іїец бек б1у І1їе АвБп Іїец Меє Гей Рпе Уа1і Бек бек І1е 225 230 235 240
Сув Гешп Гпув Геи Уаії Бек Туг Аза Нів Аза Авп Туг Авр Гец Агд 5ег 245 250 255 зек Бек Авп о бег І1е Авр Гув біу І1е Ні Гпув Бек біп сіу Уа1 5ег 260 265 270
Рпе Ппув бек Іец Уаії Тук Рпе І1е Меєсє Аза Рго ТПг Гей Сув Тук сіп 275 280 285 (516) Рго Бек Тук Рго Агуд ТПг ТПг Сув І1їе Агкуд Ппув с1у Тер Уа1 Іїе Сув 290 295 300 біп Гей Уаї Ппув Гей Уаі Іїе Рпе ТПг сіу Уа1 Меє сіу Рпбе І1е І1е 305 310 315 320 сій біп Тук І1їе Авр Ркго І1е І1ї1е Гув АБп бек біп Нів Рго Гей Гув 325 330 335 б1у Авп Уаії Гей Авп Аїа Меє сій Агуд Уа1і Гей пуб Гец бег І1е Рго 340 345 350
ТПЕ Гей Тук Уаї Тер Гец Сув Уа1! РібПе Тук Суб ТПг Рпе Нів Іецй Тгр 355 3З6о 365
Тец АБп І1е Геш Аїа бій Ггецй Гей Сув Рпе сіу Авр Акд біц Робе Туг 370 375 380
Тув Авр Тгр Тгр АБп Аза ув ТПг І1е бій бій Туг Тгр Агд Меє Тгр 385 390 395 400
Авп оМеє Рго Уа1і Нів Ппув Тер Меє Гей Акуд Нів Уаї Тук Гечй Рго Сув 405 410 415
І1е Агуд АвБп обіу І1е Рго Ппув біу Уаі А1їа Меє Уаі Іїе Бек Рпе Ріє 420 425 430
І1е бек Аїа І1е Рпе Нів сій Іїец Су5 І1е с1у Іїе Рго Сув Нів Ше 435 440 445
Рпе пув Рбе Тгр А1ї1а Рпе І1їе сі1у І1е Меє Рпе сіп Уа1і Рго Іец Уаї
Зо 450 455 460
Іїе Гецп ТПг Гуз Тук Гецп біп Авп Гуз Рпе Гуз Бек Аїа Меє Уа1 Щ1У 465 470 475 480
Авп оМеє Іїе Рібе Тер Рпе Рпе Рбе бек І1їе Туг сбі1у біп Рго Меє Сув 485 490 495
Уаї Гей Гей Тук Тук Нів Авр Уаі Меє Авп Агд Гув Уаі! сб1у ТПпг с1ци 500 505 510 «2105 221 «2115 74 «212» ПРТ «213» біусіпе шах «4005 221
Меє Аза Авр Іїе Авр Агуд бек Рібе Авр АБп АвБп Уа! Бек Аїа Уа1ї 5ег 1 5 10 15
ТПгЕ бі пув бек бек біп Уаі! бек Авр Уаі біц Рре бек б1п1 Аза с1и 20 25 30 бі І1е Гей Іїе Аза Меє Уа1 Тукг Авп Гец Уаії сб1у 611 Агд Тер 5ег 35 40 45
Тем Іїе Аза с1у Акуд Іїе Рго біу Агуд ТПг Аїа сій бій І1е сі Був 50 55 бо
Тук Тер ТПг бек Агуд Роре бек ТПг бек біп 65 70 60 «2105 222
«211» 146 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 щЩ 222
Меє с1у Бек Гей біп Месє сіп ТПг бек Рго сій бек Авр АБп Авр Рго 1 5 10 15
Акуд Тут Аїа ТПг о Уа1і! ТПг Авр о біц Агуд Гув Агуд Гув Агуд Меє І1е 5ег 20 25 30
Авп Агуд бід бег Аза Агуд Агуд бБег Агуд Меє Агд Гпув біп пув біп Гецй 35 40 45 б1у Авр Гей Іїе Авп біц Уа1 ТПг Гей Гей пув Авп Авр АБп А1тїа Гу 50 з9 бо
І1е ТБгЕ біц біп Уаі Авр бій Аза бек Гув Гув Ту Іїе бі Меє сіц 65 70 75 80 зек Мпув Авп Авп Уа! Гей Агуд Аїа сіп Аїа бек біц Гей ТПг Авр Агд 85 90 95
Тец Агкуд Бек Гей Авп бек Уаі Гей сі Меє Уаі сій сій І1е бек 01У 100 105 110 біп Азї1а теп Авр І1їе Рго бій Іїе Рго бій бек Меє сбіп АвБп Рго Тгр 115 120 125 біп Меє Рго Сув Рго Меє сіп Рго Іїе Агуд Аїа бБег Аїа Авр Меє РіПе
Зо 130 135 140
Авр Сув 145
З5 «2105 223 «211» 268 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 223 40 Меє б1у Агуд с1у Пув Іїе сбіц І1їе Ппу5 Агд І1їе бій АБп Аза Авп бег 1 5 10 15
Акуд біп Уаї Тс Рре бек Гув Агуд Агд бек біу Гей Гей Ппув Гпув Аїа 20 25 30 45
Акуд бій Гец бек Уаі Іец Сув Авр Аї1а біп Уаі! Аза Уаі1і Іїе Уа1 Ріе зек Ппув бек біу Ппув ТГейп Рпе біц Туг бек бек ТПг сіу Меє Ггув сіп 50 з9 бо
ТПг Гей бек Агуд Тук бі1у Авп Нів біп бег бек бек А1ї1а бек Гув Аїа 65 70 75 80 січ бій Авр Суб Аїа сій УМаї Авр І1е Геш Ппув Авр біп Гей бек Гув 85 90 95
Тец біп бій Ппув Нів Гей біп Гей сбіп с1у Ппув с1у Гей Авп Рго Іей 100 105 110 60
ТПЕ Рпе пув бій Гец біп бек Гей сій біп сбіп ІТец Тук Нів Аїа Гей
115 120 125
І1е ТБг Уаї Агд біцш Агуд ув біц Агд Тецй Теп ТПг Авп біп Гей сіц 130 135 140 бі бек Агкд Гей пув біш біп Агуд Аїа бій гей бій Авп біц ТЕ Іей 145 150 155 160
Акуд Агуд біп Уаі біп біц Тец Агуд бек Робе Тецй Рго бек Рпе ТПг Нів 165 170 175
Тук Уа1 Ркго бек Тук І1е їув Сув Ропе Аза І1е Авр Рго Гув АБп Аїа 180 185 190
Тем І1їе АБп Ні Авр бек Гув Сув бек Гей біп Авп ТБПг Авр бек Авр 195 200 205
ТПгЕ ТпПгЕ Гей сіп Гец сіу Тец Рго сіу біц Аза Ні Авр Агд Агд ТПг 210 215 220
Авп о біц сб1у біц Агуд бій бек Рго бек бек Авр бек Уаі ТПг ТПг Авп 225 230 235 240
ТПг Бек Бек бій ТБПг Аза біц Акуд сб1у Авр біп бек бек Те Аїа Авп 245 250 255 зек Рго Рго біц Азїа Гув Агуд біп Агуд Рпе бек Уаї 260 265
Зо «2105 224 «211» 437 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 224
Меє біц Рпе сій бек УМаї Рпе Ппув Меє Нів Туг Рго Туг Гецп Аїа Аїа 1 5 10 15
Уаї Іїе Тук Авр Авр бек бек ТПг Іец Гув Авр Рпе Нів Рго бек Іец 20 25 30
ТПЕ Авр Авр Ре бек Сув Уаі! Нів Авп Уаї Нів Нів Гув Рго бек Меє 35 40 45
Ркго Нів ТПг Тук біц І1е Рго бек Ппув бій ТПг І1їе Агд с1і1у І1е ТЕПг з9 бо
Ркго Бек Рго Суб ТПг біцшц Аза Рбе с1у Аї1а Сув Рпе Нів с1у ТПг 5ег 65 70 75 80 50 Авп о Авр о Нів УМа1і! Рпе Рпе сіу Меє Аза Туг ТП ТПг Рго Рго ТПгЕ Те 85 90 95 біц Рко АвБп о Уаії Бек Нів Уа1 бек Нів Авр Ап ТПг Меє Тгр б1іц Авп 100 105 110
Авр біп Авп обіп біу Рпе І1е Рпе сіу ТПг бій бек ТПг Гей Авп о сіп 115 120 125
А1їа Меєсє Аза Авр бек АвБп обіп Робе Авп Меє Рго Ппув Рго Гей Гей б5ег (516) 130 135 140
Аза Авп о біц Авр ТБг І1е Меє АБп Агуд Агуд біп Авп Авп біп Уа1 Меє 145 150 155 160
ІТІе пув ТПг біц біп І1е Гпув пув Гув АБп оГув Агуд Рпе сбіп Меє Агд 165 170 175
Акуд Ії1е Сув Ппув Рго ТПг Гув пуб Аза бек І1ї1е І1е Ггув с1у біп Тгр 180 185 190
ТПЕ Рго бій бій Авр пуб Гей Гецп Уаії сіп Тїецй Уаї Авр Гей Нів С1Уу 195 200 205
ТПЕ Ппув Ппув Тер бек біп І1е Аїа пуб Меє Іїецп бі1іп с1у Агуд Уа1і1 Щ1У 210 215 220 пув біп Сув Агуд бій Агуд Тер Нів Авп о Нів Гей Агуд Рго АвБр І1е Гу 225 230 235 240
Тув Авр с1у Тер ТПг бій бій бій Авр Ії1е Іїе Гец І1е Губ5 АїТа Нів 245 250 255 пув бі І1е с1у АБп Агуд Тер Аза сій І1їе Аїа Агд Гпув Гей Рго 01Уу 260 265 270
Агуд ТпПг бій АвБп Тк І1їе Ппув Авп о Нів Тгр АБп Аза ТПг Гпув Агд Агд 275 280 285 біп Нів Бек Агуд Агуд ТПг Гпув с1у Ппув Авр бій І1е бек Гец бек Іей 290 295 300
Зо біу бек Авп ТПг Гей біп Авп о Туг Іїе Агуд Бек Уа1! ТПг Туг Авп Авр 305 310 315 320
Авр Ркго Ріпе Месє ТПг Аза АБп Аза АБп Аза АБп І1е с1у Рго Агд Авп
З5 325 330 335
Меє Акуд с1у Ппув с1іу Ппув Авп Уа1і Меє Уаї Аїа Уаї бек бій Тукг Авр 340 345 350 сі б1і1у біш Сув Ппув Тук Іїе Уаі Авр сб1у Маї Авп Авп Тецй с1у Гей 355 36о0 365 бі Авр б1у Агуд І1їе Ппув Меє Рго Бек Гей Аїа Аза Меєс бег Аїа 5ег 370 375 380 бі1у бек Аїа бек ТПг Бек сіу Бек Аїа Бек сіу бек сіу бек біу Уаї 385 390 395 400
ТпПг Меє сій Іїе Авр біц Рго Меє ТПг Авр бег Тгр Меє Уаї Меє Нів 405 410 415 сб1у Сув Авр сій Уаі Меє Меє АбБп сі Іїе Аїа Гей Гец сіц Меє І1е 420 425 430
А1а Нів с1у Ак9д Іецй 435 «2105 225 «2115 359 60 «2125 ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа
«4005 225
Меє Тук Нів біп Авп Гей І1е Бек бек ТПг Рго АвБп о біп АБп бек Авп 1 5 10 15
Рго Нів Авр Тгр АБр І1їе сіп Авп Рго Тей Рібе бек Іїе Нів Рго 5ег 20 25 30
Аза сій І1їе Ркго бек Пув Тук Ркго Роре Меє с1у І1їе ТПг Бек Сув Рго 35 40 45
АвпоТВгЕ Авп о Уа! Ре б1іцп бій Робе біп Тук Гув І1їе ТПг Авп Авр сіп 50 55 бо
Авп оРпе Рго ТПг ТБПг Туг АвБп Тс Рго Робе Рго Уаі І1їе Бек бій щу 65 70 75 80
ІТІе бек Туг Авп Меє Нів Авр Уаі! біп бій АвБп ТПпг Меє Сув с1у Туг 85 90 95
ТПЕ Аза Нів Ап о біп с1у Гешп І1е Іїе сіу Сув Нів бі Рго Уаії Іец 100 105 110
Уа1ї1 Нів Аза Уаї Уа1і бій бек біп сбіп Рпе Азп Уа! Рго сбіп бек с1ци 115 120 125
Авр І1е Авп Гец Уаі! бек біп бек біц Акуд Уаі ТПг бій Авр Гув Уаї 130 135 140
Меє Рпе Ппув ТПг Авр Нів пуб Ппув Гпув Авр І1е І1е С1у ув 1у сіп
Зо 145 150 155 160
ТЕр ТпПкгЕ Рго ТПг біц Авр біц Гей Гец Уаії Агуд Меє Уаї Ппув Бек Гув 165 170 175 сіу ТБПг Гпув Авп о Тер ТБг о бег І1їе Аїа Ппуз Меє Рпе сбіп с1у Агд Уаї 180 185 190 сб1у гув біп Сув Агуд бій Агуд Тер Агуд Ап о Нів Гей Агуд Рго АБп Пе 195 200 205
Туз Гув Авп Авр Тер Бек бій бій бій Авр біп І1е Гец І1е сСіц Уаї 210 215 220
Нів пув Іїе Уа1 с1у Авп Гув Тер ТПг біц І1е Аїа Гув Агд Гей Рго 225 230 235 240 б1у Акд Бек бій Авп І1е Уа1 Ппув Авп Нів Тер Авп Аза ТПг Гув Агд 245 250 255
Агд Гечп Нів бек Уаі Агуд ТпПг пув Агуд бек Авр Аїа Ріе бег Рго Агд 260 265 270
Авп о Авп Аза Гец біц АвБп о Туг І1е Агд бек І1е ТПг І1е АвБп Авп Авп 275 280 285
А1їа гей Мес АвБп Агуд біц Уаї Авр бек І1е ТПг Аїа Ап бек біц І1е 290 295 300
Авр Бек ТПг Агд Суб б1іц АвБп о ТІ1е Уаі Авр бій Уаї Меє Авп Гей Авп (516) 305 310 315 320 збо
Тец Нів Азїа ТПг ТПг о бек Уа1 Тук Уаії Рго біц біп А1ї1а Уаї ей ТПг 325 330 335
Тер б1у Тук Авр Ріпе ТПг Тув Сув Тук біц Рго Меє Авр Авр ТПг Тгр 340 345 350
Меє Гей Меє Ап о1у Тер Авп 355 «2105 226 «211» 386 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 226
Меє бек пуб Агуд Рго Рго Рго Авр Рго Уаі Аїа Уаі Іей Агуд о1у Нів 1 5 10 15
Акуд Нів бек Уаі! Мес Авр Уаї бек Рпе Нів Рго бек Ппув бек Іец Іей 20
Рпе ТПг біу бек Аза Авр с1у біц Іецй Агуд І1е Тгр АвБр ТПг І1е сіп
Нів Агуд Аза Уа1ї бек бек Аїа Тгр А1ї1а Ніб б5ег Агуд А1а АвБп сіу Уаї 25 50 з9 бо
Тец А1ї1а Уаї Аза Аїа Бек Рго Тгр гейш с1у бій Авр пув І1е І1е 5ег 65 70 75 80
Зо сіп б1у Агуд Авр с1у ТБг Уаї Гпув Сув Тгр Авр І1е бій АвБр 01у С(Щ1У 85 90 95
Тецп век Агуд Авр Рго Гей Гей Іїе Гей бій ТПг Сув Аїа Тукг Нів РБПе 100 105 110
З5
Сув Кпув Рпе бек Гей Уа1 Ппув Ппув Рго Пув Ап бек Гец біп сбіц А1а 115 120 125 біц бек Нів Бек Агуд сіу Сув Авр бій біп Авр сіу б1у Авр ТПг Сув 40 130 135 140
Ап оУаі1 сіп І1е А1їа АвБр Авр бБег біц Агд бек бій бій Авр Бех 0Щ1У 145 150 155 160 45 Тем Гей біп Авр Пув Авр Нів Аїа біц с1у ТПг ТПг Рбе Уаї Аїа Уаї 165 170 175 уаї с1у бі біп Ркго ТПг сіц Уа1і сій І1е Тгр Авр Тецй АБп ТПг щ1У 180 185 190
Авр пув І1е І1е біп їец Рго біп бек бек Рго Авр бій Бек Рго Авп 195 200 205
А1їа бек ТПг пув б1і1у Акд бі1у Месє Сув Мес Аза Уаї бсіп Гей РіПе Сув 210 215 220
Ркго Рго біц бек біп б1у Рпе Іец Ні Уаї Іїейп Аза с1у Тук бій Авр 225 230 235 240 (516) сіу бек І1їе Гешп Гей Тгр Авр І1е Агуд АБп Аїа Ппув І1е Рго Гей Тіг 245 250 255 зек Уаї Ппув Рбе Нів бек бій Ркго Уа! Іецй бек Гей бек Уаі Аїа 5ег 260 265 270 зек Сув Авр біу сб1у Іїе бек сіу с1у Аїа Авр Авр Пув І1е Уа1 Мес 275 280 285
Тук Авп Гей Ап о Нів бекг ТПг сіу бек Сув ТПг І1е Агд Гув сій Ше 290 295 300
ТПгЕ гейш бій Агуд Рго біу УМаі бек біу ТПг бек І1е Агд Уаі АБр Щ1У 305 310 315 320 пуб І1ї1е Аза Аза ТПг Аїа с1іу Тгр Авр Нів Агуд І1е Агд Уаї ТУуг Авп 325 330 335
Тук Агуд пув с1у Авп Аїа Тец Аза Іїе Гец пув Туг Ні5 Агд Аїа ТПг 340 345 350
Сув Авп Аїа Уаї бек Тук бек Ркго Авр Сув бій Гей Меє Аза бек Аїа 355 36о0 365 зек біц Авр Аїа ТПг Уаії Аїа Іїецйп Тер Гпув Гей Тук Рго Рго Нів ув 370 375 380 зек Гей 385 «2105 227
Зо «2115 292 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа «4005 щЩ 227
Меє сій Рго Рго сіп Нів сіп Нів Нів Нів Нібв біп Азї1а АБр сбіп сій
З5 1 в) 10 15 зек б1у Авп АвБп АБп АвБп Авп о Тув бек біу бек с1у с1у Тук ТПкг Сув 20 25 30 40 Агуд біп ТБг о бек ТПг Агуд Тер Тс Рго ТБг Тс бі сбіп І1е Тув І1е
Тешп гув біц Гей Туг Туг Авп АБп Аза Іїе Агуд бек Рго ТПг Аа Авр бо 45 біп І1е сбіп пув Іїе ТПг Аза Агд Гей Агуд біп Рбе сіу Ппув І1е б1ц 65 70 75 80 сб1у гув Авп Уаі Рпе Туг Тер Рпе сіп Авп Нів пув Аза Агд бій Агд 50 85 90 95 біп гув ув Агуд Рпе Авп сіу ТПг Авп Меє ТПг ТПг Рго бБекг бек вег 100 105 110 55 Рго Ап бек Уаї Мес Меє Аза Аза А5п Авр Нів Тук Нів Рго Іеч Іецй 115 120 125
Нів Нів Нів Нів сіу Уаії Ркго Меє сіп Агуд Рго А1їа АвБп бек Уаі1і Авп 130 135 140 60
Уаї пув Гей Авп біп Авр Нів Нів Гей Тукг Нів Нів Авп Гув Рго Туг
145 150 155 160
Ркго Бек РіПе Авп Авп о б1іу Авп Тец АвБп о Нів Аза бек бек с1у ТПг сіц 165 170 175
Сув бі1у Уаї Уаі Авп Аїа бек Авп сіу Тук Меє бек бек Нів Уа1ї! Туг 180 185 190 бі1у бек Меє сій біп Авр Сув Бек Меє Авп Туг Авп Авп Уаї с1у с1У 195 200 205 б1у Тер Аї1а Авп Меє Авр Нів Нів Туг Бек бек АТїа Рго Туг Авп Ріе 210 215 220
Рпе Авр Акуд Аїа пуб Рго Гей Рпе сіу Іїейп сбіц с1у Нів сіп бі с1ц 225 230 235 240 бі бій Сув с1у б1у Авр Аїа Тук Гей бі Нів Агуд Агд ТБг Іецй Рго 245 250 255
Тецп Рпе Рго Меє Нів сіу сій Авр Нів Іїе Авп сіу сіу бек С1у А1а 260 265 270
ІТ1е Тер пув Тук біу біп бек біц Уаі Агуд Рго Сув Аїа Бек Гей сіц 275 280 285
Теп Агд Геч Авп 290
Зо «2105 228 «211» 453 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 228
Меє Авр Гей с1іу бек Уа! ТПг б1у АвБп Уаії Авзп біу бек Рго бек Іеч 1 5 10 15 пув бі1ш Гей Агуд бі Бек пув біп Авр Агуд бек бій Робе Авр с1у бій 20 25 30
Авр Сув Гец біп біп бек бек Гпув Те Азї1а Агуд ТПг І1е Аїа бій Авр 35 40 45
Тпув Нів Гей Рго Бек Бек Туг Аза Аза Аїа Тукг бек Агуд Рго Меє 5ег з9 бо
Рпе Нів біп сбіу І1е Рго Гей Аза Агуд бек Аїа бек Гей Гей бек 5ег 65 70 75 80 50 Авр бек Агуд Акуд біп бій Нів Меє Гей бек Рібе бек Авр Пув Рго с1іц 85 90 95
Аза Рпе Авр РібПе бек пуб Тук Уаї б1у Гей Авр Авп Авп Гув Авп о бег 100 105 110
Тецп бек Рго Рпе Гей Нів сіп Гей Рго Рго Рго Тук Сув Агд ТПг Рго 115 120 125 сі1у б1у с1у Тук с1іу Бек сіу сіу Меє Меє Меє бек Месє сбіп с1Уу Гув (516) 130 135 140 б1у Рко Рпе ТПг Гей ТПг сбіп Тгр Аїа бій Гей сій сіп біп Аїа Іей 145 150 155 160
ІТІе Тук Ппув Туг І1е ТПпг Аза АвБп о Уаі! Ркго Уа1ї Рго Бек Бек Гецй Іей 165 170 175
І1е бек Ії1е біп Гуз бек Рпе Туг Рго Тугк Агуд Бек Рпе Рго Рго 5ег 180 185 190 зек Рпе сіу Тгр б1у ТПг Рпе Ніз Гей сіу Рпбе Аза сіу с1у Ппув Меє 195 200 205
Авр Рго біц Рго б1у Акд Сув Агд Агуд ТПг Авр о с1у Ппув Ппув Тер Агд 210 215 220
Сув бек ув Авр Аїа Уа1 Рго Авр сбіп Ппув Тук Сув 611 Агуд Нів Ше 225 230 235 240
Ап Агуд сб1у Агуд Ні Агуд бек Агуд Губв Рго Уаі бій Уаі сбіп Рго щЩ1У 245 250 255 біп ТП Аза Аза бек пув Аїа Аза Аза Уаі Аїа б5есг Агуд АБп ТПг Аїа 260 265 270 зек біп І1їе Рго АБп Авп Агкуд Уа! сіп Авп Уаї І1е Тук Рго бек ТПг 275 280 285
Уаї Авп Гей Рго Рго Пув біц біп Агуд АБп о Авп Авп Авп бек бек Ре 290 295 300
Зо б1у Рпе сі1іу Нів Уа1і ТПг бек Рго Бек Гей Гей ТПг бек бек Тукг Іей 305 310 315 320
Авр Рпе бек бек Авп обіп Авп о Пув Рго бі бій Гей пув бБег Авр Тгр
З5 325 330 335
ТП біп Гей бек Меєсє бек Іїе Рго Уаі Аїа бек бек бек Рго бек 5ег 340 345 350
ТПЕ Аза біп Авр Гуз ТПг ТБ Гей бек Рго Гей Агд Гей Авр Іецй Рго 355 3З6о 365
І1е сбіп бек біп біп бій ТПпг Те б1іц Аза Уаії Агд Ппув Уаі Авп ТЕГ 370 375 380
Тер Іїе Рго І1їе бБег Тгр б1у АвБп бек Ге сіу сіу Рго Гец сіу сій 385 390 395 400
Уаї гей Авп Бек ТПг ТПг бек бек Рго ТПг Гец бСіу бек бек Рго ТПг 405 410 415 сі1у Маї Гей сіп Ппув Бек ТПг Рібе Сув Бек Гей бек Авп бег бекг вег 420 425 430
Уа1ї ТПг Бек Рго Уаі Аза АвБр АвБп АБп Агуд Ап Авп Авп Уаі! Авр Туг 435 440 445
Рпе Нів Тук ТПг ТЕП 450 60 «2105 229
«211» 461 «212» ПРТ «213» Вгаввіса парив «4005 229
Меє Авр Гей с1іу бек Уа! ТПг б1у АвБп Уаії Ап біу бек Рго с1Уу ГІеч 1 5 10 15 пув бі1п Гей Агуд с1іу Бек Ппув біп Авр Агд бек біу Рпе АБр с1у с1и 20 25 30
Авр Сув Гец біп біп бек бек Гпув Те Азї1а Агуд ТПг І1е Аїа бій Авр 35 40 45
Тпув Нів Гей Рго Бек Бек Туг Аїа Аїа Тук Бек Агуд Рго Меєс бек РіПе 50 з9 бо
Нів біп с1іу Іїе Рго Пец ТПг Агуд бег Аза бек Іецй ТІецй бек бек Авр 65 70 75 80 век Агд Акуд біп біц Нів Меє Іїецй бек Рібе бБег Авр Пув Рго бій А1а 85 90 95
Рпе Авр РіПе бек пуб Тук Уаї сб1і1у ІГец Авр АвБп Авп Гув Авп бек Іецй 100 105 110 ек Рго РіПе ІТец Нів біп Гец Рго Рго Рго Туг Сув Агуд Бек Бех щу 115 120 125 сі1у б1у Тук сіу Бек сіу сіу Меє Меє Меє бек Меє сіп с1у пув 01У
Зо 130 135 140
Ркго РоПе ТПг Іец ТПг біп Тгр Аї1а сбіцш Іїейп бій сіп сбіп Аїа Гей І1е 145 150 155 160
Тук Ппув Тук Іїе ТБг Аза Авп о Уаі! Рго Уаі Ркго бек бек Гец Геч І1е 165 170 175 зек І1їе біп пуб бек Рпе Туг Рго Туг Агуд Бек Рпе Рго Рго бек 5бег 180 185 190
Рпе сі1у Тегр біу ТП Рпе Нів Іїец б1у Рпе Аїа сіу с1у Ппув Меє Авр 195 200 205
Рго біц Рго б1у Агкуд Сув Агд Агуд ТПг Авр ос1іу Ппув Ппув Тер Агд Сув 210 215 220 зек Мпув Авр Аїа Уаі Рго бій біп Гуз Тук Сув бій Агуд Нів І1е Авп 225 230 235 240
Агуд б1у Акуд Нів Агуд Бек Агуд Гпув Рго Уаі бій Уаії сбіп Рго с1у сіп 245 250 255
ТПг Аїа Аїа бек пув Аїа Уаі Аза бБег Агд АБвр ТПг Аза бек сбіп Ше 260 265 270
Ркго Бек Авп Агд Уа! біп Авп Уаії І1е Тук Рго Бек Авп Уаі1і Авп Гей 275 280 285 біп Ркго пув бій біп Агуд Авп Авп Авр Авп бек Рго Ропе с1іу Рое 01Уу (516) 290 295 300
Нів Уа1 ТПг бек бек бек ІТец Гей ТПг бек бек Туг Тецй Авр РпПпе 5ег 305 310 315 320 век Авп о біп біц Гув Рго бек біу Авп Нів Нів Авп біп бек бек Тгр 325 330 335
Рго біц біц Тец Гуз Бек Авр Тгр ТПг біп Гей бек Меє бБег Ії1е Рго 340 345 350
Уа1 А1їа Бек бек бек Рго бек бек ТПг Аза сіп Авр Гуз ТПг Аїа Гец 355 36о0 365 зек Рго Гец Агд Тец Авр Гей Рго І1е біп бек біп біп бій ТПг ГІец 370 375 380 бі бек Азї1а Агуд пув Уа1і Авп ТПг Тер І1е Рго І1їе бек Тгр С1Уу Авп 385 390 395 400 зек Гец біу біу Ркго Іїецп сбі1у біц Уаії ІТецй Авп бБег ТПг ТПг бек 5ег 405 410 415
Ркго ТПг Гпец біу бек бек Рго ТПг біу Маї Гей сіп Ппув Бек ТПг Ре 420 425 430
Сув бек Гей Бек Авп бек бек бек Уа! ТПг бек Рго І1е Аза АБр Авп 435 440 445
Авп о Агуд Авп о Авп о Авп оУаі Авр Туг Рое Нів Туг ТПг ТПг 450 455 460
Зо «2105 230 «211» 409 «212» ПРТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа
З5 «4005 230
Меє сі Аза Агуд Рго Уаі1і Нібв Агуд бек сіу бБекг Агд Авр Тей ТПг Аг4д 1 5 10 15
ТПг Бек Бек Іїе Рго бек ТПг біп Гув Рго бек Рго Уаі б1й Авр 5ег 40 20 25 30
Рпе Меє Агд бек Авр АБп Авп о бег біп Тецй Меє бек Агуд Рго Гешй Щ1У 45 сіп Тк Тук Ні Гей Гей бек бек бек АБп сіу с1у Аїа Уаії о1у Нів бо
І1е Сув Бек бек бек бек бек біу Рпре Азїа ТПг Авп Гей Нів Тукг б5ег 65 70 75 80 50
ТПг Меє Уа1 бек Нів біц пув сбіп сіп Нів Туг ТПг б1у бек бек 5бег 85 90 95
Авп о Авп Аза Уаії біп ТПг Рго бек Авп АвБп Авр бек Аза Тгр Сув Нів 55 100 105 110
Авр Бек Гей Рго біу б1у Рпе Гец Авр Рпе Нів сій ТПг Авп Рго Аїа 115 120 125 (516) І1їе біп Авп АвБп о Сув біп І1їе бій Авр сіу сб1у І1е Аїа Аїа Аза Ріе 130 135 140
Авр Авр чІ1е біп їубв Агд бек Авр Тгр Нібв бій Тгр Аїа Авр Нів Ієц 145 150 155 160
І1їе ТПг Авр Авр АвБр Рго Гей Меє бек ТіПг Авп о Тгр Авп Авр Іец Іецй 165 170 175
Тец бі1цп ТПг Авп обБег Авп бек Авр Бек Гув Авр біп Гпув ТПг Іец біп 180 185 190
І1е Рго біп Рго сбіп Іїе Уаії сбіп сіп біп Рго бек Рго бек Уа1! с1іц 195 200 205
Тец Агуд Рго Уаі Бек ТПг ТПг бек Бек Авп бБег Ап Авп с1у ТПг о1Уу 210 215 220 пу Аз1а Акуд Меє Агуд Тер ТБбг Рго бі гейш Нів сій Аза Рібе Уаї сій 225 230 235 240
А1їа Уаії Авп бек ІГец сіу сіу бек біц Акуд Аїа ТПг Рго пув сі1у Уаї 245 250 255
Тецшп Гпув І1їе Меє пув Уаі1 сіц сі1у Гей ТПг Іїе Тук Нів Уаї Ппув бег 260 265 270
Нів гей біп пув Тут Агд ТПг Аза Агуд Тут Агд Рго бій Рго бек с1ци 275 280 285
ТПг б1іу Бек Рго біц Агкд Гув Гей ТПг Рго Гец біц Ні І1е ТпПг 5ег
Зо 290 295 300
Тец Авр Іїейп Ппув с1іу с1у Іїе с1у І1їе ТПг сбіц Аза Гей Агд Іец сіп 305 310 315 320
Меє сіц Маї сіп Пув біп Ге Нів сбіц сбіп Гей бій І1е сбіп Агд Авп 325 330 335
Тец біп Гей Агуд І1е бішц бій сбіп с1у Ппув Тук Гей біп Меє Меє Ріре 340 345 350 бі Ггув біп Авп бек с1іу Гей ТПг Ппув с1у ТПг АТа бек ТіПг 5ег Авр 355 360 365 зек Аїа Аїа їув бек бій біп б1іш Авр Гув Ппув ТПг Аїа Авр бек ув 370 375 380 бі Маї Рго бій бі бій ТБкг Агуд пув Сув бій бій Гец біц бек Рго 385 390 395 400 біп Рго Ппув Агуд Рго Пув І1е Авр АвБп 405 «2105 231 «211» 685 «2125» ДНК «2135 Місобіапа рБепеЕратіапа «4005 231 ааадеєссасе ддаадаасас єсЕеЕЄсаасад Ссддааадад Ссддассєаа дссоадЕсоде (216) чЧЕСЕДЕСЕЯДЕ Єаасадсадс ЄЕЄЕЕсоЧссдддс асддесссса ссаєсссааєс сдссададаа 120 (516) Ессассадчасє гаддчдєсааа СачасссдеЕє доєдоддЧоасЯЕ ЄддсссЕврдс сЕССсесСаада 180 чадсєаадес садеЕєдеЕСсас аєсааєсдса дЕсдссдддс дсаєссддбсад Єдсасєссдсес 240 чдсододаасєдда дсастраєдса додбаєсєдад садассдаса сдассдададс ссеЕсддсдса Зоо ааєсстдеЕвд аєсаєсеєсуддеЕ дасассаада деЕдасеЕдсее сеЕсдсудєрдс асстассарєье 3З6о
Ебаассстєаа ЄЧДЕЧДСЕЄвас адеЕсддааєсдд дсаєсссадсуд сссссессддс адасодедсс 420
Баєддааєста дсаєааасає ааєсеЕсадасєс сссдсеЕСЕєЧДда дадсеЕсьсад аєсаєдддас 480 сЕсаєтадесд сааєдаєсаа ассадоадоаєд ЕЄСЕЧДддєдсса єсасаєссає саєаадсе де 540 чЧсЕєдоддоадда Єсассасоасе додаддсдсс аааддддсєсд дададссдас бассссадса 60 дЕадчеЕвеває сЕСЕсСуЧєЄвдду сагаєссара дседассєсу сеЕсеЕсеЕсьсу седсесссес 6бо садддеЕдссд дсдавреєсссе даада 685 «2105 232 «211» 824 «212» ПРТ «2135 5Бо1іапит Єирековит «4005 232
Меє АвБр І1їе бек Авп бій Азїа Гуз Маії сій Рбе І1їе бег Іїе С1Уу Рго 1 в) 10 15 зек Бек І1е Уаії б1у Акуд ТПпг І1е А1ї1а Рпе Агуд Уаі Гей Рпбе Сув Гув 20 зек І1їе бБег Агд ІТец Агуд Нів АвБп о І1е Рпе Ні Рпе Гей Іїе Тук Туг
Тецп Тук Гпув Іїе Ппув Авп Сув Гей бек Тук Тук Гей ТПг Рго Іец І1е 25 50 з9 (210) пуб Тер Рпе Нів Рго Агуд Ап Рго сіп сіу Іїе Гей Аїа Гец Уаї ТЕПг 65 70 75 80
Зо їемч Гей Аїа Рре Гей Гей Агуд Акуд Туг ТПг Авп Уаії Туз І1їе Агуд А1їа 85 90 95
Авр Меє Уаї Тук їгув Агд Гув Робе Тгр Агуд Авп Меє Меє Ггув бек Аїа 100 105 110
З5
Тецп ТПпг Тук бій бі Тер Аїа Нів Аза Аїа Ппув Меє Гей біц пув б1ц 115 120 125
ТПЕ Рго Ппув Меє Авп біц Аза сій Робе Туг Авр біцш бій Гей Уа1ї Уаї 40 130 135 140
Авпопув Гец біп біц ІТец бі1іп Ні5 Агд Агд АБп бій с1у Бек Гей Агд 145 150 155 160 45 Авр І1ї1е Меє Рібе Рпе Меє Агуд Аза Авр Гей Уаї Агуд АвБп Гецп с1у Авп 165 170 175
Мен Сув Авп Рго біп Гей Нів Ппув сіу Акд Гец Нів Уаії Ркго пув Іецй 180 185 190
ІТІе пув біц Тук І1е Авр сій Уаї бек ТПг сіп Гей Ппув Меє Уаі1ї! Сув 195 200 205
Авр Тут Авр бБег Авр біцпц І1ї1е їецшц Іїешп бі бій Ппув Гей Аїа Ропе Меє 210 215 220
Нів біц ТБг Агуд Нібв Аза Рпе сіу Агкуд ТПг Аза їецп Гей Гей Бех ЩЩ1У 225 230 235 240 (516) сіу Аїа бек Гецп с1іу Аїа Рібе Нів Уаї сіу Уаї Уаї їув ТПг Гей Уаї 245 250 255 бі Нів Гпув Геип Меє Рго Агуд Іїе Ії1е Аїа сіу бек бек Уаї с1у 5бег 260 265 270
І1їе Меє Сув бек Уаі Уаі Аза ТПг Агуд бек Тгр Рго бій Гецп біп 5ег 275 280 285
Рпе Рбе біц Авп Робе Тгр Нів Уаії Іец біп Рго Рпе сій сіп Меє с1Уу 290 295 300 сб1у І1е Гей ТПг Уаі Рпе Агуд Агуд І1їе Меє Агуд сіп с1іу Аза Уаї1ї Нів 305 310 315 320 бі І1е Акд сіп гейш біп Уаі1і Меє гей Агуд Нів Гей ТПг АвБп Авп Гей 325 330 335
ТПЕ Рпе сіп сій Аїа Туг Авр Меє ТПг с1і1у Агд Уаі Іец б1у Ше ТПг 340 345 350
Уа1ї Сув Бек Рго Акуд Пув Нів бій Рго Рго Агуд Суб Гей Авп Тукг Іецй 355 3З6о 365
ТПг Бек Ркго Нів Уаї Уаї І1е Тер бек Аза Уа! ТПг Аза бек Сув Аїа 370 375 380
Рпе Рго біу Іїецшц Рпе б1п Аза сбіп бій Геш Меє Аїа пуб Авр Агд 5ег 385 390 395 400 б1у Авп Гей Уаії Рго Тук Нів Рго Рго Рпе Нів Гей сій Рго АБр біп
Зо 405 410 415
Аза Аза Аза бек біу бек бек Аїа Агуд Агуд Тер Агуд Авр сбіу бек Іей 420 425 430 січ І1їе Авр гейш Рго Меє Меєсє сіп Гей Ппуз бій Гей Рібе Авп Уаї Авп 435 440 445
Нів Рпе Іїе Уаї бек біп Аза АБп Рго Нів Іїе Аза Рго Гей Гей Агд 450 455 460
ІІе пув біц Рре Уаі Агуд Аїа Тук б1у б1у АБп Рпе Аїа Аїа пув Іецй 465 470 475 480
А1їа Нів Гецп ТПг біц Меє бій Уаї Ппув Нів Агуд Сув Авп біп Уа1ї Іец 485 490 495 біц Гей сб1у Рпе Рго Гей Агкуд сіу Гей Аїа Гпув Гей Робе Аза сіп Авр 500 505 510
Тер бі б1у Авр Уа! ТПг Уаї Уаї Меє Рго Аїа ТПг Іец Аза сіп Туг 515 520 525
Тецп Ггув І1ї1е І1е сбіп Авп Рго Бек ТПг Гей бій Уа1і сіп пуб Аза А1а 530 535 540
Авп обіп б1у Агд Агуд Сув ТПг Тер біш Гув ТГеип бек Аїа Іїе Ггув Аїа 545 550 555 560
Ап оСув с1у І1е біцш Іец А1ї1а Гец Авр б1іп Сув Уаі Аза Іїе Гей Авп 60 565 570 575
Нів Меє Агуд Агд Гец пуб Агд бБег Аїа біц Агд Аї1а Аї1а Аї1а Аза 5ег 580 585 590 біп б1у Меє бек Бек Бек ТПг Уаі Ппув Гей Авп Аза бБег Агд Агд І1е 595 (51048) 605
Ркго Бек Тер АвБп Сув І1е Аза Агд біц АБп о бек ТПг сіу Бек Гей сіц 610 615 620 сі Авр Рпе Ніз Аїа Авр Аїа бек бек бек Гецп Нів Нів Нів АБп Аїа 625 630 635 640 б1у Акд Авп Тер Агуд Сув Авп о Авп о Ггув Ап Аза Аїа Нів Авр Нів Нів 645 650 655 бі1у бек Авр бек бій Бек бій Авп Аза Авр Ап Ап о бег Тгр ТПг Агд бо бе5 670 зек сіу біу Ркго Іїецп Меє Агуд ТПг ТПг бек Аза Авр Ггув Рпе І1їе Авр 675 680 685
Тук Уаі1 сбіп Авп Гец біц Меє Нів Ркго бек біп Агуд Бек бБег Агд Щ1У 690 695 700
Пен бек І1їе Авр Гей Авп Авп Уаі! Уаї Уаі Агуд сій Ркго Гей бек Рго 705 710 715 720 ек Рго Агд Уаі ТПг ТПг Рго А1їа Агуд Агуд бек Авр ТПг бі Рбе Авр 725 730 735
Зо біп Агуд Авр чІ1е Агу чІ1ї1е Ії1е Уаі Аїа біш с1у Авр Гей Гец сбіп ТЕПг 740 745 750 бі Агуд Тпг Авп Авп б1іу Іїе Уаі Рпе Азп Уаі1і Уаі1і Агд Агд с1у Авр
З5 755 760 765
Тецп ТПЕг Рго Бек Авп Агуд бек Гей Авр Бек бій Авп Авп бек Сув РБПе 770 775 780
Нів Авр Рго Уаі Аїа сіц Сув Уаії біп Гей бій АвБп Рго біц Гпув Авр 785 790 795 800
Меє Авр І1їе Бек бек Аза бек бій Авр сіу біц АБп Азїа Уаї Гей Авр 805 810 815 бі Маї ТПпг пув АвБп біп І1е Ше 820 «2105 233 «2115 2475 «2125 ДНК «2135 5Бо1іапит Єирековит «4005 233 аєддаєаєаа деааєдаддс бааадсадад Сссассссса сСаддассеєсс сссааєсдата (216) ддЕСсСдаасаа бадссеЕсссу аазеЕссеЕдеЕє содсаааєсаа СаєсодсудЧчЕс даддсасаас 120 авг еєсавс ссеседасаєса ЕсасеЕсддсас аадаєсаада аЕсудєсстдес агасвсасевд 180 асассеЕєєда Єсаааєддеє єсасссдсудс аасссасадуд ддасаєссадс ассадсааса 240 сЕсссадсесо ссеЕсдссдад дсдасасасу аасдсаааага ссадддсеєда гасддеєтає Зоо аачаддааає ЄЄєоодаддаа баєчаєдааа Ссодсаєсаа сссасдадда асдддасессає 3З6о (516) ЧдсЕдсдаааа Єдссоодадаа ададасассє аавгаєсдаасуд аадсададеЕс єсаєсддаєсдаа 420 чадеЕсадеЕсд баааєааасе Єсаадаассс саасасєсдєсєс дсаасдаада асссссаада 480 чаєаєтаєдеЕ ЄсесЕеЕсаєдад адсєдаєсьс деЕдадаааєс Едддєааває чдедсааєсса 540 садсесссаса адддсаддесс Ссасдедссе ааасссаєса аддадсасбає сдаєсдаддсс 60
Есаасеєсадеє Єдааааєдуає аєдечаєсає дасссадаєд адасєсссдЕс ддаддадаад 6бо сЕсдсЕссса сдсасдааас аадасардсеє ЕЄсоддсадда садсаєєсдсе єЕЄсгаадсо9ад 720
ЧасосЧєсСЕС гдддадссеє ссасдеєЕсодЧЕ ДдЕЧЯдсСтаада сасєтєдддеЕєда дсасаадсье 78о0 аєдссаадда Єааєєдседа єєСЯчадесдєс ддаєсдаєса СоаосЯассссдс адссдвсаасяо 840 сЯдЕСЕЄЯддс сеЕдадседса дадЕеЕЕеЕЕсЕСЕ дадаавєєсесе ддсаєдеЕдеЕЄ дсадссдєее 900 чаасачаєдуда деЕддааєєсеЕ аасеЕдссссс аддаддаєса Сдадасаадд ддссдсасає 960 чачаєсаддс адсЕдсаддЕ даєдеЕсасдс саєсеЕсасуда асааєсєвас єЕеЕсссаадаа 1020 дсЕбасдаєа ЄдассодеЕсу адеЕсссаддад ассасЕдеЕсє дссссссрад аааасаєдаа 1080 ссЕССсСвадає чЕеЕсддааста сеЕєдассєса ссеЕСсаєдеЕєЧд Есасаєддад ЄдсеЕдеЕдасе 1140 дсСЕЕСсСЕвдсуд сЯосЕсСсСсСвду ЕСЕДдДеЕседаа дсссаадаас Едаєддсааа ддагадааде 1200 чабЄааєсьвда ЄЕССЕваєса Ессассаєсьс сасеєсоддаас сеєдаєсаддес Едсадсеєся 1260 чдаєЕСаєСвд сЕСЧЯєЄсдаєд дадоадаєдуає адсеЕсдддада Есдаєсстасс гаєдаєдсад 1320 сеаааададс баєссаасує ааассасеЕсеЕ ассудєдадсс аддасдааєсс асагбаєвєдсе 1380 ссЕЕсасеса ддаєсааада дЕеЕсдсаада дсеЕсаєддад дсаасееєсдс Єдссаадсьє 1440 дсЕСсаєсєва сеЕдадаєдда адеЕдаадсас адаєдсааєс аддеассддда асеЕсодеЕєее 1500 сссЕєЄдадду даєсадссаа дсвавєеєсдсе саадаєєсдду ааддсдаєде сассдєвєдка 1560 аєдссадсса сЕСЕсдсеЕсСа дсасеЕсдаад аєсасасада аєсссеЕстас ЄЕЕсООдадєе 1620 сааавгадсад саааєссаадд дчаддачдаєдс ассгдоддача аассаєсадс саєсааддса 1680 ааєєдеЕддаа ЄЕДадсесвдс ЕСЕєдаєдад Сдсдсадсаа басесаасса гаєдсдатада 1740 ссааааадда дсдсддадад адсадссдсеЕ дсеЕссасаад дсаєдесаад садсасадес 1800 ааасєсааєд сЕсЄСсСсадасу бавєссьссо соддааєсдса Еєдсаадада даасесааса 1860 дасЕСсСсСЕвдд аадаадасее Есасдсудає дссЕсЕсссеЕ сЕСЕЄСсаєрса Есасааєдсяе 1920 даєсдааассї доасодсЕдсаа Єаасаадаає дссдсасаєд аєсаєсаєда гадсдасаде 1980 чадеЕСсЕдааа асдсддаєаа Єааєєсьєвєдуа асаадаєсад дЕддЕсСсаєє даєдаддаса 2040 асаєсадсвд агаадеЕстає єдасраєдна саааасссду аааєдсаєсс Ессасаасда 2100
Єсдадсадад даседаднтає Едассєсаас аасуєєднад Есадддадсес ЕСЕСЕСТСсСс 2160 адеЕссасдад Єдасаасасс Едсгаддада Єсадаєбасад аасеєсдаєса аададасаєс 2220
Зо ачааєсаєсу Єсдссдаадуд Єдаєєсасва садасеєдааа ддассаасаа єдодаєсєеєдка 2280 бЕСсааєдеЕдд бааддададу адасеєсаасс ссаєсаааса ддадеЕссвда Ессадаааасєс 2340 аасадеЕєдсеЕ ЄЕСаєдаєсс адеЕддссдаа Сдсудєдсаас Есдааааєсс Едадааддає 2400 аєддаєаєаа дЕссадсаєс адаачаєдда дааааєдсад басрадаєда адгаасаааа 2460 ааєсадаєса басаа 2475
З5 «2105 234 «2115 521 «212» ПРТ «2135 5Бо1іапит Єирековит 40 «4005 234
Меє Аза Аїа бек Іїе сіу Аїа Гей Гпув бек бек Рго бек Бек Авп Авп 1 в) 10 15
Сув І1е АБп бій Агуд Агуд Авп Авр обБег ТПг Агуд Аза Уаї бек 5ег Агд 45 20 25 30
Авп оГецй бек РіПе бек бек бек Нів Іец А1їа б1у Авр пуб Гец Меє Рго
І1е бек бек Гей Агуд Бек сбіп сіу Уаі Акуд Рбе АБп Уаі Агуд Акд 5ег 50 з9 (210) зек Гец І1е Уаії Ркго Рго Гув Аза Уаі! бек Авр бек біп Авп бег біп 65 70 75 80
ТПЕ Сув Гей Авр Рго Авр Аза бБег Агуд бек Уаії Іец Сб1у І1е І1е Іеєец 85 90 95 сі1у б1у сб1у Аза с1у ТПг Агуд Гей Тук Рго їец ТПг Гув Гув Агуд Аїа 60 100 105 110
Тпув Рго Аї1а Уаі Рго Геш сіу Аза Авп Туг Агд Гей І1е АвБр І1е Рго 115 120 125
Уаї Бек Авп Сув Гей Авп бек Авп о І1е бек Гув Іїе Тук Уаі1і Гей ТЕГ 130 135 140 біп Рпе Авп бБег Аїа Бек Гей Авп Агуд Нів Гей бег Агуд Аїа Туг А1а 145 150 155 160 век Авп Меє сіу сб1у Тук Пув Авп бій с1у Рпе Уаі сій Уаї Гей Аї1а 165 170 175
Аза сбіп біп бек Рго б1іц АБп Рго АвБр Тер Рпе сіп с1у ТПг Аа Авр 180 185 190
А1їа Уаі1 Акд біп Тук Іїецп Тер Гей Рпе сбіц бій Нів ТПг Уа1і Гей сіц 195 200 205
Тук Ггеш Іїе Гец Аїа с1і1у Авр Нів Гец Туг Агд Меє Авр Тук сій Гув 210 215 220
Рпе Іїе біп Азїа Ні Агуд бій ТПг АвБр Аза АБр І1е ТПг Уаі1і Аза Аї1а 225 230 235 240
Тем Рго Мес Авр сій Пув Агуд Аїа ТПг Азїа Рпе с1іу Темп Меєсє пув Пе 245 250 255
Авр сій біц б1у Агд І1е І1е біш Рбе Аза бій Гпув Рго біп сіу сіц 260 265 270
Зо біп Гей біп Аза Меє пув Уа1і Авр ТПг ТПг Іїе Гей с1і1у Гец Авр Авр 275 280 285
Тув Агкуд Аїа пув бій Меє Рго Рпе Іїе Аїа бек Меє сіу І1е Тук Уаї 290 295 300
І1е бек пув Авр Уаі! Меє Гей бек Іец ІТец Агуд Авр Гув Рпе Рго 1У 305 310 315 320
А1а Авп Авр Рбе сіу бек сій Маі Іїе Рго сбіу Аї1а ТПг бек Іеч 01Уу 325 330 335
Меє Агуд Уаі сбіп Аза Тук Гец Туг Авр сіу Туг Тгр б1п АБр І1е У 340 345 350
ТПгЕ Іїе бій АТа Рібе Туг АБп Аза Авп Гец сіу І1е ТП Гув Ппув Рго 355 3З6о 365
Уаї Ркго Авр Рпе бек Ріпе Тут Авр Агкуд Бех Аза Рго І1е Тугє ТПгЕ сіп 370 375 380
Рго Агкуд Тук Тец Рго Рго бек Гув Меє Іецй Авр Аза Авр Уа1 ТПг Авр 385 390 395 400 зек Уаі Іїе с1у сбіц сіу Сув Маії І1їе Пув бек Сув Ппув І1е Нів Нів 405 410 415 зек Уаії Уаї сі1у Іецй Агуд бек Суб І1е бек бій сС1у Аза Ії1е Іе сіц 420 425 430 60
Авр Бек Ггец Гец Месє сб1у А1а Авр Туг Тук бій ТПпг Авр Аїа Авр Аг4д
435 440 445
Тпув ІТеп Іїеп Аза Аїа Ппув сіу Бек Уаі Рго Іїе сС1іу І1е с1у пув Авп 450 455 460
Сув Нів Іїе пув Агуд Аїа Іїе І1їе Авр ув А5п Азїа Агуд І1е С1у АБр 465 470 475 480
Ап оУаі1! пув І1е І1е АБп Гув Авр АБп Уаі біп сій Аза Аїа Агд сіц 485 490 495
ТПЕ Авр сіу Тук РіПе І1е Гув бек сіу І1е Уа! ТПг Уаї І1е Гпув Авр 500 505 510
А1ї1а еп І1їе Рго бек с1у І1е Те Пе 515 520 «2105 235 «2115 1819 «2125 ДНК «2135 5Бо1іапит Єирековит «4005 235 стадсдаєссд саассасасс ссассасаса сеЕсСЕСТтадсра дададаєсад Єсдаєсаасаа (216) дсЕЄсєдЕеЕсаа сааєддсоддсес ЕЄссаєсддда дссссаааає сессассєсс ссссаасаає 120
Едсаєсааєд ададаадааа Сдаєссссаса сдєдсадсає ссадсадааа ЕсссеЕСсСастье 180
ЄЕсЧдєсСЕссСеЕсС аєсесдссоод адасаадссдд асдссстасає сдсссссасду сссссааддва 240
ЧдЕССЯЧаєєса аєдеЕдчадаад аадееєсаєвдч аєєдеЕдссудс стааддседеЕ ЕЄСЕЧЯдЯаєссд Зоо садаасссас адасасдссс адасссадає дсгадссодда чЕдЕеЕсессодоа аастасєсстє 3З6о ччвададєддад седддасссу асеЕєвтаєссє ссаассаааа ааададсааа дссадссдесс 420
Зо ссасстгддад саааєсаєсд ЕСсдаєсеєдчас ассссеєдсаа дсаастдссс даасадесаас 480 аєаєссаада ЄсгаєдеЕсєсе сасасаассс аассссдссо ссссдааєссду ссассеєссса 540 сдадсасаєсд ссадсаасає дддаддасас ааагасдадд дсЕЄЕЧдедда аз зссеЕвсдсяь 60 дсЕСаасааа деЕссададаа ссссдассдда Ссссадддса сддссдаєсдс сдссадасаа 6бо баєсєдеЕдЧає ЄЯдЧсЕеЕсЧдадда дсавсаседеЕс сеЕсдаасасс Евавасевдс Еддадаєсає 720 сЕдсаєсдаа Сддаєсєсаєда ааадестасс саадсссаса дадааасадча Сдсєдатвасе 78о0 ассдЕєдссд сасеєдссаає ддасдадаад сдсдссассд сасссдоддессс саєсдаадасс 840 часдаадаад дасдсаєстає єдааєссдса дадааассояс ааддададса ассодсаавдса 900 аєчааадеєдд абасвсассає єссаддсссс даєсдасаада дадссааада аасдсесесесс 960 аєєсдссадна Єддуасасаса єдеЕсаєвадс ааадасдєда ЕдЕєаадссь асеЕссдеЕдасєс 1020 аадеЕєссстуд доадссааєда ЕСЕЄсдддваде даадестаєсс седдеЕдсаас єсСсассвєд9д 1080 аєдчададеЕдс аадсеєваєсеЕ асаєдаєдоад сасеЕдддаад аєаєєсдднас саєсдаадсяе 1140 вЕСвасааєд ссааєсеєсуддуа саєсасаааа аадссудеЕдс садасесвад сеЕЕсвасдас 1200 сдаєсадссс сааєссасас ссаассєсда баєстассас саєсааааає дсеЕєдаєдсе 1260 чаєдеЕсасад агадсдсєсає єддєдааддЕ єдЕдДЕдаєса ададсеєдсаа даєсєсаєсає 1320
ЕссЧдєдуєвд дасесадаєс аєсдсаєаєса дадддадсаа Есаєадаада сссассеств 1380 аєдддддадсад аєсастаєда дасєдаєдссї дасаддааде ЄдсЕддсеЕдс ааадддсаде 1440 дЕсссааєвд дсаєсудсаа дааєєдеЕсас аєсаааадад ссаєсаєсда саадааєдесс 1500 сдбаєсаддду асааєдеЕдаа даєсаєсаас ааадасаасу Ессаадаадс додстгадддаа 1560 асачаєддає ассссаєсаа дчадедддаєс деЕсассудеЕСса Єсааддаєдс ЕсСЕеЕДдаєсесса 1620 адєЕддааєса ЄсаєсєЕдаад дааєдсуєьс саасестдуєеЕ дЕССЕССаад асеЕсеЕддста 1680 аасадссаєд аддегадааас деЕдсеЕдаасе ЕссасеЕсесс Едадседнад аааєсссадед 1740 басаєсєЕєеєс сдсваєдаса сеЕссеЕсаєва сссссасаад адаадаседудч асдсеЕдсааа 1800 ааєтаєеєсуає сегадааєсаа 1819 «2105 236 «2115 1173 «2125 ДНК «213» Заріцют верітегкиютюш 1. 60 «4005 236
Едссааєсадс садссааєсаа аасаєссаса сЯяасссссаса сдддсссссса сСсасадссдо (216)
ЕЯЧЕЕЕЕЕСсСЕС арсеЕсасесс деЕдссевсає сеЕсСсаєрсстс ЕЕсСЕССЕСЄС ЕСЕСЕДЕСЮС 120 басаєдеаєа даадсуєтад асдєсевдсд ЄЕДЕсСаасса арєсавєєсс сдссеЕсствдс 180
ЕЕСЕЄСєаає аєсаєаадаа адеЕсеєдасьс сЕеЕСЕеЕСССЄтдЕеЕ саарсЕсьде ЕСУУСсСУДдчЇсСЕКЕ 240
Баасдаєаєс содссбааадда ааєєєдааає СсСсааєссаєд дссдаєсддаа асдесаасесс Зоо дсаадаасад аєддсеаадс аддаддааса дадодседаад басєсддаде ЕЄдсасаадеи 3З6о чдасЕдсааса саєдседеду єдасссссас ааассестає деЕсваєрдсеса аааасаадес 420 чадЕСсСсаєєд аадсссододед ЄєЄЧадчассдс сСдааддсасуд дссаададсд сддЕсддвасс 480 гЧдЕЄвсаєддсь аадеЕєссаєд аєдеЕссссає сСдаддесссс аадсссдссда ассдсаадає 540
Едаєсааєсє деаадсадсс гбадасадсся Єдсдссссса дЕсЯдсдаадс адссассоадс 60 ссаадсассеЕ ссадсддссс дсдаадсссс адсоддссодсс сосдсеЕдсод сЕЄССдааде 6бо чдсадасєдсеЕ ддадедаадуд ааасеєдсаєс содддссддса адаасссстдс ассссаааєса 720
Едаасссаад дссааддадс басасассаа дсасдаасса ааадсддаас адсдесдстсдс 78о0 сЕСсдссодда содсаадссса ассаассссс адсссссссо сасдсадсесс аддессаєсає 840 дссаасадса дсеЕваєєдеЕє седаааадса саассаддса дсасссасса ссдссдадаа 900 аддаєасада чЕДдссСссстЕ аЕгєсдсссє сдєдсссасе дададааєсд ссаадеЕсдЧєе 960 баддааєдад дсассеЕдаає ссассссеЕвс сссеЕсссаає Едадсаадає дсеЕдагааає 1020 чаєєсасаає ддасаєдеЕду асадааєгааа аасссеєсоода баєваваєдуа гасеєдедсає 1080 гЕСсааддеЕеєс аадаєтасесс Есгасааєує деЕдааєєсеЕєе дЕсЕСадаєд асеЕсааєєсся 1140
ЄдЕєсСаєєса сгагаєаває ававєасасає ага 1173 «2105 237 «2115 241 «2125 ПРТ «213» Заріцют верітегкиютюш 1. «4005 237
Меє Аза Авр сб1у Авп Уаі Авп бек біп сбіц біп Месє Аїа Гув біп сій 1 в) 10 15 бі біп Агд Гей пув Тук Гей сі Рпе Уаі сіп Уа1і Аїа Аза І1е Нів
Зо 20 25 30
А1їа Уа1 Уаї ТБг Рре ТП АвБп о Гец Тук Уаії Тук Аза Ппув Авп Ппув бег 35 с1у Рго Гецш Ппув Рго сіу Маі біц ТБПг Уаі бі с1у ТБг Уаї Ппув бег з9 (210)
Уаї Уаї с1у Рго Уа1 Тук сіу Ппув Рпе Нів Авр Уаї Рго І1е сіиц Уаї 65 70 75 80 40
Тец Ггув Рпе Уаі Авр Агуд пув Іїе Авр біп бек Уа1 бек бек Гечцп Авр 85 90 95 зек Агкуд Уаії Ркго Рго Уаії Уаї пуб біп Іїецй бек Аза сбіп Аїа Ропе 5ег 45 100 105 110
Ууаї Аза Агу біш Аза Рго Уаі Аїа Аза Агуд Аїа Уаі Аїа бек сіц Уаї 115 120 125 50 сіп ТБг Азїа сбіу Уаї Ппув бій ТБг Аза бек сіу Гей Аїа Агуд ТПг Гей 130 135 140
Тук Рпе Ппув Тук біц Рго ув Аїа пув бій Гей Тук ТПг пув Тук б1іц 145 150 155 160
Рго ув Аїа біц біп Сув Аза Аїа бек Азїа Тгр Агд Гпув Гей Авп о сіп 165 170 175
Пес Рго Маії Рре Рго Нів Уаії Аїа сіп Уаі Уа1ї Меєс Рго ТПг Аїа Аї1а 60 180 185 190
Тук Сув Бек бій пув Туг АвБп о біп Аїа Уаї Іецп ТПг ТПпг Аза сій Гув 195 200 205 сбі1у Тук Акуд Уа1і Бек Бек Тук Гей Рго Рібе Уа! Рго ТПг бій Агд Ше 210 215 220
А1їа пув Гец Робе Агд АБп бій Аза Рго бій бек ТПг Рго РіПе Гей 5ег 225 230 235 240
Авп «2105 238 «2115 1252 «2125 ДНК «213» Заріцют верітегкиютюш 1. «4005 238 сбсасеЕссссс ссадсаєсад бассстаддс сссасеєстде адарєсєссесс адсгдсстда (216)
ЕсеааЕгеєвєвєє ваєсаасеся єдассдєссс ассаєсєсссаа сддсссадає ссасгсадсгас 120
ЕсеЕеЕсСссаса ссабсаєсссс даєссеєссає дассссаєсу аєасаааєсу садесдсесає 180 саассдааєс сссдааассд соддссасаад седстасаад аадсдаааад ааасодстдад 240 ааасаддаєс судєсссЕссЕ сссеЕсСЯсссс ссасссссса саадасддад ассдадаада Зоо ачаєєссеєда аєєдаадсас єсадоадесссд сСдаддаєсддсес Сдссаєсссад Ссаседаєссс 3З6о
ЧдсдЕСЕСЧдаа ЕЄСЕСвасдає басодсдаадс асаасссадда асссЕссдада Сссасеєдесєд 420 чаассдєдда доаодсдссдЕа ассассдсрад сСаддсссаде Ссассадааа гссааадасс 480 гЕССсСЕєДЧаєда єСЕЄСЕєЧдеа саєдеЕсдаса адааддсдда Сдааддааса сасаадеессд 540 аєаадсаєдс Єссасстраєє дсеаадаадд сєдсдадсса адсссасбаде ЄСоЯоЄсссаєса 60
БадссеЕєдда дааддеєсдаа ааасеєсдсдс аддаддсссду Сдсаддадда ссесдсдсгд 6бо сЕСсдсасєсс сдсддсессаса дадссдаадс асеЕсддсдєс дасссааєстє деЕдаадсе де 720
Зо асадеааасс гаассадееєс сседссаєеєс асассдеЕсас адаєдсаасс сессссасад 78о0 стасссассд дссадасаад Сасаассагра сссегаєдда сседасссдд аадддеєтатга 840 счаєсЕєсвду ЕсасеЕсдссе ЕсддЕеЕєсСсса Есдаєдасає асссаадаса сЄЕеЕсааасааа 900
ЧдЕааадсада ддадааадаа ааєдсаасса сдсасааасєс Єдаєссаєсд даєссссдасе 960 ааасоддЕєдс саєсаєдеЕсСь ааєдоодеЕдед чЕЕсдЯдєсаад багадедЧчєЕ Едсдааааєд 1020
ЄЕСЕадуддєєЄ сбасдадсссд сссдааадає дссдадааає ддаааєстдеЕ астваєста9д 1080 ав ессдя сасваєааса аєдчадсаєда агдуаєєсувба аасеєсьдсессе ЕдеЕдссеєся 1140 сдасаадтає ассаєдсееєс ває свтас гасвсасевас гддастассуд ааєсдєстса 1200 бааєєдеЕСсс садеЕдеЕстаа Єсааасаєса ссессаааає аєсаєседааа аа 1252 «2105 239 «2115 225 «2125 ПРТ «213» Заріцют верітегкиютюш 1. «4005 239
Меє сбіц ТПпг бій пув Гув І1е Рго сбіц Гешп Ппув Нів ІТей с1у РіПе Уаї 1 в) 10 15
Акуд Меє Аїа Аза І1е біп бек Гец І1е Сув Уаії Бек Авп Гей Туг Авр 20 25 30
Тук Аїа Ппув Нів Авп бек біу Рго Гей Агд бек ТПг Уаї с1у ТПг Уаї 35 40 45 бі б1у Аза Уа1і ТПг ТпПг Уа1 Уаї1ї с1у Ркго Уа1 Тук біп Гуз РпПе Гу 50 з9 (210)
Авр Гей Рго Авр Авр ІТец ІТецп Уаї! Тук Маії Авр Гпув Ппув Уаі Авр сіц 65 70 75 80 (516) сіу ТБПкг Нів Ппув Рпе Авр Гув Нів Аїа Рго Рго І1їе Аїа Гуз Ппув А1їа 85 90 95
Аза бек сіп Аза Нів бек ІТецйп Рбе Ні5 І1ї1е Аї1а Гей сій Ппув Уа1 сіц 100 105 110
Пув Гей УМаії біп бій Аза Агуд Аїа с1у с1у Рго Акуд Аїа А1їа Гей Нів 115 120 125
Рпе Уаії Аїа ТПг бій бек пув Ні ІТец А1їа Гей ТПг сбіп бек Уаї Гув 130 135 140
Тецп Тук бек Ппув Гей Авп біп Рпе Рго Уаі Іїе Нів ТПг Уаї ТЕГ Авр 145 150 155 160
Уаї ТпПг Ггеш Рго ТПг АТа ТПг Нів Тер бек Авр Пув Туг АвБп Нів ТЕПг 165 170 175
Тецп Меє Авр Гей ТПг Агуд пув с1іу Туг ТПг Іїе Рбе сіу Тукг Іецй Рго 180 185 190 ем Маї Рго Іїе Авр Авр І1е бек Пув ТПг Рпе Пув сіп бек Гпув Аїа 195 200 205 бі бій пув бій Авп Аза ТПг ТпПг о Нів Гпув бек Авр бек бБег Авр 5ег 210 215 220
Авр 225 «2105 240
Зо «2115 938 «2125 ДНК «213» Заріцют верітегкиютюш 1. «4005 240 чадеаєєсас асеЕСЕддссяе даєєдоадеЕсс дссасаааддд дсдаєссдєсєсд саасдсссса (216) сасєдеЕСссас ЄЕЗЯОСЕСЕЧЕ ЕсССсСаааєстєс аєсасеЕстьує аааєєсєдсда садсосадсд 120
ЄЕЕєСвадда ааааддеєєдс баааддааад Садссассаа ассдсадааа Сддсоаодааєс 180 сдаасссааєс саасасасад асасддеєсєса адаєдаєдає аааааасесса адгсаєстада 240 гЕседвасаа дЕддссдседа ЕстаєдеЕсЧє д9асЕСУЧЄЕЄсС ЕСвадваєсьі асдаасаєдес Зоо
Бааддаааас ЄссддеЕссас баааассадд ддсссаадсс деЕсдадесдса ссдессаааас 3З6о
Едсаасаадс ссудЕєсасу адаадеЕссу сдасуабассє ЕЄсСдаасссс сСтаааєсеєсве 420 счаєсдсааа дссдасаасс ссссаддсда деЕсддасадд сасдедссЯає сддсгддедаа 480 чдсаддсаєса адссаадсеєс дадсеєдсддс СбСадсдааасс саасаєсдссдд дассддсада 540 сдсаассаад аасассдсда адасдаєдсра гбасааадсає даасеєдасдд сссддсадсяо 60 ссрассдсааа Сасаадссдд Сддссаадсд Егасдсоддед Есдасстддс дсесаєєдаа 6бо ссадсеЕсссеЕ ссдЕссссеЕсС аадсоодсеса дасєдсааєс ссаастуссо ссеЕсдєдЧєес 720
Едадааасас ааєсаадаєдд ЄЄсЯдєсасас дааадасада ддасаєссад сддсдоаддедсга 78о0
ЕсЕдссаєєсд аєсеєсдЧдеЕєд ададчассдс сааддсдссс аасдаадасо сСааасдддес 840 сассдссссо ассаасддає сасссдссдс адсасаасад ЕЄеЕесСасєеєс лаєдавсаєттває 900
ЧдЕсадаєєда адасдссссу дадаєсеЕсда ааасседа 938 «2105 241 «2115 194 «2125 ПРТ «213» Заріцют верітегкиютюш 1. «4005 241
Меє Аза бій Бек бій Гей Авп о біп Нів ТПг Авр Меє Уаї б1і1п Авр Авр 1 в) 10 15
Авр Пув пуб Гец Гуз Тук Гей Авр Ропе Уа! біп Уаі Аза Аїа І1е Туг 60 20 25 30
Уаї Уаї Уаї Сув Рібе бек бек Іїе Тук сіц Туг Аза пув б1цй Авп 5ег 35 40 45 б1у Рко Гей Ппув Рго сіу Уаі сіп Аїа Уа1і сій Сув ТБг Уаї Ппув ТПг 50 з9 (210)
Уаї Іїе Бек Рго Уа1 Тук біц пув Рбе Агуд Авр Уа! Рго Рпе сі Іецй 65 70 75 80 ем пув Рпе Маії Авр Акуд Гуз Уа1і Авр АБп бек Гецп сіу бій Гей Авр 85 90 95
Акуд Нів Уаї Ркго бек Іїец Уаї Ппув біп А1ї1а бек бек біп Аїа Агуд Аїа 100 105 110
Ууаї Аза Бек біш Іїе сіп Нібв Аїа сіу Гей Уаі Авр Аїа ТПг Гув Авп 115 120 125
І1е Аїа пуб ТПг Меє Тук ТПг Гуз Тук б1іцп Тейп ТПг Аза Тер сіп Гей 130 135 140
Тук Сув Ппув Тук Мпув Рго Уаі Аїа пуб Агкуд Туг А1їа Уаї бек ТПг Тгр 145 150 155 160
Агдуд бек Гей АвБп обіп Гей Рго Гей Рпе Рго сбіп Аза Аза сіп І1їе А1а 165 170 175
ІТ1е Рго ТПг Аза Аза бек Тгр бек біцш Гуз Тук Авп Ппув Меє Уа1 Агд 180 185 190
Зо
Тук Так «2105 242
З5 «2115 2526 «2125 ДНК «213» вогодпит рісої1ог «4005 242 аєддасдадеЕ ссоддоадаадс дадсадссддс Ссссссадда Ссддсссдєс дасдссдссгд (216) чдассоадсддад гддсодссссу сугасеЕеєсесс сєсСсадсесдудс гДдсдодсодссЕ дсоддсоасдс 120 чдсдбасдссд ссаєсєсодсо саєдсдсадс дсоаддсдссдс соадсддсддес деЕсссддссе 180 сассссадда асасссасдд сдсссЕсстс агддесдрсс єЕсСЕссдсесссю сеЕССсССгДдадо 240 аадсеєсеєссд дсдсдсуддеЕсС дсоддодсддсЯя сссдсдсодсс ддсодсаддса дгасдадаад Зоо чдссаєдседс аєдссодддас десасдчаддіс сдддсссдсд ссдссааєсдс дсссдасаад 3З6о асдЕСсдаєс аддесессаєда ддоадасододассєс саєдасадаа адсеєдаєсад даасаддасесе 420 чаддассеєсс ддаддсодад ддаддчасоддда Ссдссдсодда асдсддеЕдеЕс седсаєсдсдас 480 часчаєсеєвєд єсаддаасеє доддаасаєд Сдсааєсссод аассссасаа дддсаддста 540 чаддеЕєсста адсеєсаєааа ддаасасасс даададдЕсс сстаєссаасо аадааєсд9ддаєд 60
Едсдааєсєд асасєдаєда деЕєЄдссаєсс ддададаадс СсСдссЕссдЕ ссаддадасс 6бо аддсаєдссо Егєддддаддас адссстасес Єгаадедчодда ЧдчЕдсеЕєсСасе доддссесесс 720 саєдсаддєд Садсдаааас ассддеЕєдад сасаадсесєс гєдссеЕсддає гагсадсаддва 78о0
ЕсаадсЧчуєєд деЕЄсСсаєсає аєдеЕссдчасс дссдссассс ддасаєсддес Єдадаєссдад 840 адсЕєсеЕєса садасеєсаєє асадассссуд садсссеєссд асаддаєддда СЄддаассссс 900 чсадедчаєда досдадесас сасеєсаєсддудІ дсассдсаєд асаєсєсадсса даєсдсааадд 960 сЕЄСсСсдаддо ассссасаад баасесааса ЕсСЕСаададд сеЕваєдасає дасеєддссдае 1020 дЕССЕєддда Єсассуєесд сесеЕсСсврада аааааєдадс сассссдесд ссеЕСсаасває 1080 сЕдасудєсдс сдсасдаєєсдЕ баєєсвєддадеі дссдесаасьд ссЕСЕЕдЕдс асеЕсссьд9 1140 сЕСЕсЕдаауд сссаддаасе даєддсдаад дчаєсадаєеєсу дсаасаваде ЄсссеЕєссає 1200 дсасссЕсвд ссасадаєсс Едаасааддє сссддадсає сааадсдссу деЕддададає 1260 (516) чдададссєду аааєддаєсеЕ дсссаєдаєд адасссаадуд азєсдеЕстаа єдеЕааассає 1320 рЕСаєєдеЕда дссааастаа ЕссЕСасарс ссесссссвсс Ессддааєдаа ададссеЕдее 1380 ачадеЕСваєд дадддсдссЕ Едсєддааад сЕсдсЕСУЯЄСсС ЕєДСсСЕЧдадає ддадаєєаад 1440 баєсдаєдна ассаааєссе ададаєєдує сеЕсссааєдуа даддасеєвдс ааааєсдеЕве 1500 чдсЕСсСаддасе доаодадддеЕда ЕдЕсассаєд деЕваєсдссда саасадсадс Есадраєсвд 1560 аадчзаєстаєес адааєсссаас асаєдсуддад сеЕссаааєдуда сеЕдссаасса аддссдсадд 1620 бдсасаєддад адаадссссс Єдсаассада дсааассдєд ссаєсдаасе єдсаєсодає 1680 чааєстаєад садеЕеєеєсааа ссасааасдд аддссааааа даадсаєдда даддасадад 1740 дсЕдсСЕЕсдс аддудаєсаєсс гаастаєдес судасссаааа сЕССсСааддад ддеассаєса 1800 бддадсєдса Єсадссдада дааєєсьсса дааєсеЕсься суддаададає Ессадсадее 1860 чдсбасеЕєсаа ссдсдсадса аддЕдсеЕдсс сЕсдседеЕсСуд дсасадссас ЕСсСЕСЕСЕСсСас 1920 саєдеЕєсдас дсааєсстєса єдасододаадеі дададедаає садааассає Єдассевєаає 1980
Есседдасса дчдадсддеЕдуа дссеЕссааєд аддасадсає сеєдсєЕдасає деЕесаєсаде 2040 бЕсаєссава ассеЕсдадає Єдасасуддаа СЕаадеаддс ссеЕдсаседеЕ ддвадоадеЕаЧе 2100 асєдсаддва ЄЕссдЕСада ассвассеєс ссаааєдаєс сасаассдаа сааєддсеса 2160 адеЕдЕеЕсасва сЕСсаддеад асдсасадаа аасеєсеЕдада ссдаддсаєба сдасаседес 2220 аасассадад ссадссаддс ЕСсссасессс асаадсаєсу сЕдЕсЕеЕСєДда аддвачаєсьд 2280 сЕдсадсссуд ааадсаєєсдс Єдасдддсаєс ссдсеЕсааса ЕсЧдєсдаааад адаєдссе вд 2340 саддсеЕсааа асдасадсудє аасєдааєсуд дссдааадсе ссеЕдсассда аасаєаєдсд 2400 чааасеЕєдед асассаєсєс адддеЕсеЕддс ассдсеЕдаад аєаасаадда гассдседас 2460
Єсаадсааєс асссассєда гаєєдавдсеє ЄЕсСЧдсадесе сдсаєсаасс Ессадседає 2520 чаєсад 2526 «2105» 243 «2115» 3099 «212» ДНК «213» Тгібіїсицю аевбсіуйт «4005 243 аєдсссдсдс сеЕдсаддеєдс деЕдсадссаа дссссассдс СсдссеЕсста Есссдасдаесс (216) сстадсссдда сссддесссгд ссссдаєсса аддссдсддс ддеЕддсссад Єдсссессесс 120 сеЕсссдссас дссдсссдсс дсссаєбддас десаєсасса асдаддсдсд савгдоддоадсд 180
Зо Ессосдаєсду дсссуєссас доадсоддсоддоад содсдсодсссу сдсеЕдсудсує дссссеЕсСго9дс 240 часЕСЯдсЕдЯ содсоддсеєдсо дсассдссос дссдссдсдс гдсдсдссдс ддсдассдасгд Зоо чдсоддсоддссЕ додсеєдсассс дсодссасаас асдсддддада Ссседсссдс сдссгсдсдесс 3З6о чЧЕСЯдсЯдсЕдс ЄдсЕдсодсод ссоасододдодс соадсдссоддоад Єдсдсдсдсд ддеЕдсадессс 420 дсестассдсс дсаадеЕєсєстд дсодаасаєд асдсдсдссу сдсссассгта сддаддадесдд 480 дсдсасдссуд сдсддаєдсо сдадсдддад асдссдсдсс дсдеєсассда сдссдассес 540
Басдасдадд адсеєсдеєдед саасаадссс сдсдадссса ддсассдссуд Ссаддаддадас 60
Есдсеєсаддуд асаєсдеЕсСьє седсаєсдсдс дссдасссдс сСсаддаассо сддасаасаєд 6бо
Едсаассссуд адсеєссасаа дЕєЧаддссд саддсдссса ааассаєсаа ддадсасасєс 720 чадчаддбєає срасеєсаасе даааасддеЕс сдсааєсссстд асссодасда дссасссссс 78о0 чаачадааас гддсаєссає дсаєсдадаса адчасаєдссеЕ ЄсСодсадаєс ддссстастд 840 ссаадсддад дсЕдссссасс содсссеЕсесс сасрдеєдоадеЕд ЕсдеЕдаааас сЕєддсадад 900 сасаадсссс сасссаддає сассссадда Ссаадсдєсд дсдсаасаає деЕдсдстасєсєс 960 дЕадссасас дадссаєддсес адаассадад азсЕсСЕсеЕсдд аддадеддса ЕсссеЕєЄЧааа 1020 гЕСЕЄеєдасс адаєдуадеЕду даєсеЕсессе дегаєстаааа дааєєеєсдас дсаєсодадсд 1080 дЧдЕєЄСсСаєдаса Ссаддсассє дсадасдсад Сєдадаааєс Єсасаадсаа ЕсСЕДДасаєсе 1140 саададдсає аєсдасаєдас єддссудуаєЕ сеЕсСЯдєЕдЕса седсудсусесС сЄссаадаааа 1200 саєдадссас сасдаєдссяє даасвтаєсеєсуд асаєсассес асдсесьсає єеЕддвадедса 1260 дЕаасеЕдсьс сссдсусЕсеЕ ЕСссєддасьс сеЕсддаддссс аддадеЕєдає ддссааадає 1320 ачаєєсоддад ааасадесеєсс ЕсЕеЕєЄСаєдсеЕ ссасєсєсєває єдоаодеЕдесодда ддаасдадсе 1380 часдсєЕдсва сасододсдссд дадчачаєдас адсеЕсадааа дедаєсєсасс саєдаадсаа 1440
ЄЕдааддаає сасеєсаасудє аааєсасесес агадсаадсс аадссааєсс Есасаєсеєдсе 1500 ссаєсаседа дассааадда даєсаєсаду дсЕсасодддад дсадсеЕсвдс Едсааадсьє 1560
ЧдсєЕдаасевд сЕдадаєдда адеЕєсаадсає аддеЕссааєс аадеЕсєссода асеЕсдддаєье 1620 ссаєсаддад даасадссаа ЯЧЕЕДЕЕсддсЕ саасаєєсдду ааддеЕдаєдеЕ дасааєсдеє 1680 аєдссадсса сасеєсдсеЕса дсаєєсдаад ассасасада асссеЕєсоаба ЕсСсСсдадсеє 1740 садааадссу саадесаддд єЄаддсдаєдс асеЕєдддааа адсесссссдс баєсадддса 1800 аасеЕдсдсва ЄЕДдадсесєдс астадаєдаа СдсддсЕдссс Есседаасса саєдсдатад 1860 сЕдаададаа дедсадааад адсадссдсЕеЕ Есасааддає асддеЕдссас аастадасес 1920 бдєссаєсва дааддаєсеєсс ассаєддаає сесаградсаа дадаааасеєс аасеЕддчеесь 1980 (516) сЕСЧдаєдадоа аааєсдсеЕсас асдеЕсссасеЕ десЕгасдадсс ассаадсадс сєддаддадасе 2040 чдсЕдддссає сегаасадааа Есассаєсес саасаєбадса Єдсаєдаєад садесдасаде 2100 чааєсєЕдада деагадассє даасесаєдд асдадаадсд деЕддсссЕсСЕ саєдадааса 2160 дссеЕСадсва агаааєссає садсеЕседеЕс садаассесд адаєєдасас адааєссада 2220 асааєєеєсас сааддудддад сдааддедає аєсудєтасас сддаасадеаа сераєєседсе 2280 чдадєсасссаа ЄЕдЧдсадада дссадеєдає аассаєссад ддссЕдсвас ЕСсссдддгад 2340 ассЕСсаддса аєссаддеЕєд сдаєссєсає дагасссстд СЕССсаддеЕс Єссасесоде 2400 сСЕбЕСсССсСасаа дсаєсаєдуає сссеєдааддеЕ дасеєєдсвдс адссудаааа даєєдадаає 2460 чабаєєеває ссааєсуєєдЕ дадааддадає дссссеЕдсад сдассасьад сдодадесєдаа 2520 ссеЕсаєддає ссЕсасадда адсадаєдсд дааасєдбас сдассдадесд ссеЕстаєдадЧе 2580 чдсЕЕсддаєд асдасудасда саасудєддаа сЕдааєдссд аєсаєдаадс астаєсьдас 2640 сседдадаєс ададаєссеєс адеЕсдсадда аасстадаєс судеЕссассєс саєддаєєсде 2700 саадсеєдаєд ааасаадсас басеєсдаєса даадсеєссає сесссесеЕсаа саєсєсвєдевЧед 2760 чадаєєссьс садсаассає даєсададаа аасадесудс ссдасдадсс ЕссесеЕсадас 2820 асаадасєдд адаєсудсааа дасадааєсдс сссдаєдада аєссадсвдс Едддаасває 2880 чаадеЕєддсеЕ садессстдс сааєааадаа СсеЕЕСсСссавфе дЕссСЕсадас адссдаааає 2940 адасадсадс аєсаадесєда гаєддадаєсі деЕдаасеЕсся дегадсдеЕєсєс адесессадаа Зоо чаєдаєаддс аєдеЕСсадсся саєеєєссудаас дадааассад Ебасстасьсс садсоддсоада З06о чдсоддададета Єдасаєсьєду аадаааєдаа дсеєдассад 3099 «2105» 244 «2115» 2198 «212» ДНК «2135 Штучна послідовність «220» «223» фрагмент шпРНКі 50РІ 5. рісої1ог «4005 244 чдсоддсоддсЧдє додсеєдсассс дсодсддасаас асдсдсддда Ссседсссдс сдссгсдсдесс (216) чЧЕСЯдсЯдсЕдЯа дЕдсадессд ссрассдссу саадссссдуд сддаасаєда сдсдсдссдас 120 дсЕСасстрас даддадеддд содсасдсддс дсоаодасдссс ддадсдсадс аасадсеєсс 180 гЕЧЕдЧСсСЕСЕЕеСсС седасеЕєеє єдаддсссас сасссаддад дассссаєсс сддааєсстьса 240
Зо Єадсаадада ааасеєсаасеЕ доаєссЕСТає деЕдсааєсся даасессаса адддсаддсе Зоо ачаддеЕєссеЕ аадсеєсаєаа аддаасасає сдаададдеЕс сссаєсссаас сСаадааєсд9ді 3З6о
ЧдЕдсдааєсє дасасеєдчаєд адеЕсдстаєє ддддададаад СЕСдссСЕссд сссаддадас 420 саддсаєсдсс Єссдддадда садссстасе сеЕсаадесодда ддєдсеЕссас годо9доддеЕсее 480 ссаєдсаддс дсадсдаааа сассддеєєда дсасаадсес седссеЕсдда єгсагсадсадда 540 ассаадаадд деЕддасссад сЕЄсСсЕсСдра сааадеддсс єсдаддааєе соддсасссса 60 дсЕєддЕаад даааєсааєса ЕСсЕССЕЕСЕЕС СсссЕСЕсадеЕ аєагаааєсадеі ЕаадеЕдаєде 6бо бааєсаднає дасьтаєааса асаєсадеЕсЧс сасааєсдєд ааааааєаає Есасаааєсає 720 агєєдеЕеєсаса бааасаасає адесаасдсаа ааааасаєда саадсдаєсдс дсаадасдаа 78о0 чаадчаєаааа ЧдчеЕєЄЧчададеа адсасаєссає ссссааєсдаа СсСсдаєсдаа саєсдсаадає 840 чаєсаєассад сасєаасасє єдЕСЄсСааєс аєаасадеаа ЄЄСвадсвда ЕсСЕЧЧаєдаає 900
Баааєсаєсаа Єдаєааааса сеаєадсааа аасаадааса аасаааєссаа аасаасаєссс 960
ГЕсваєдаєс аасадеЕстає гагсаєааєса аараєстава ссаєсасеаа аравєєсесадье 1020
Єгаааадеєва агааавраєсеє єдеЕсадааає сссааєстдс ЕєдЕааєьса єсааєаааса 1080 аааєсаєсааа Саасаадсса аадсаасааа Саасаєсааа сеєаасадааа садсааєста 1140 аєдеЕаасааа асаєсааєсса асдссаасає аасааадсудс аадаєссаєс асеЕстаєсаєа 1200 чдЕаєваєєьс сааєсаасає єсеЕсаєтаає сСЕСваааєаа басеЕсдсраде ЕсСтаєсаасяе 1260
Ессаааєдда ЄЕдастаєса ассаааєдаа сСгадссдаас аєдааєааас ааддеЕаасає 1320 чаєадаєсає деЕСсасеЕдедеЕ гаєсаєєдає сеЕсСасаєєсд дчаєєдаєвас адеЕсооддаад 1380 сЕдддЕєсда ааєсдаєаад сЕєдсдссдс адстаєсаєс аєсаєсаєрад асасасдааа 1440 бааадеааєс адаєсаєсад Есааадссає деаасасєсдд сдссаєаасс ааєссааєсаа 1500 ааавбадаєс адсеЕсааада аадаєсааад сесааааааа бааааадада ааадддеЕссе 1560 аассаадааа аєдааддада аааассадаа арсрасстдс асаадсеєєдд аєссессада 1620 ссасеєесдса саадааадсеє дддЕссассс ЕссСЕєдаєсс гдссасааєс сдаддсадаа 1680 дсЕБаєдсес аассааєсуєе Еєссассрасас срасаєддаа адассссадеі даадсасссс 1740 сасеЕсаадад гадддсЕдЕсС сеЕсссааадуд саєдссеєддеЕ сессеЕдааса ааддсаадсе 1800 бсесСЕсСссаа сСадсаасеса ЕсадедеЕсад аєссдсасас саєреєсьсаде Едааєадааа 1860 ссЕСЕЕСВяає дсасеЕссеЕеє асаадсстад даассеєсвад ссеЕдсссеєва ЄдаадеЕєсад 1920 чаєєдсасає ададаассад Есдаасьєсьс ссегдссаєд адаєєссаду асддааєсся 1980 ссрадаєддЕ дддссссааа аадесссадда ааадсасадуд аадсєдеЕвас Едсасесссаа 2040 (516) дсаєссдсдс содсодєЄдсодсс сасеєссесЯає аддеЕдадсдс ддсдсдсаєс асдсєсссдесс 2100 ачаасеЕєдс дсоддеаддсуд дасеєдсассс адсдсдасдда сдсадасддс дадсадчдаєсс 2160 ссдсдсдбдЕ ЕдЕСдсдсдуд деЕдсадссас дссоассдес 2198 «2105 245 «2115 22 «2125» ДНК «2135 Штучна «2205 «223» Олігонуклеотидний праймер «4005 245
СЕЕсСаасддає аєссоостсааа 99 22 «210» 246 «2115 23 «212» ДНК «2135 Штучна «2205 «223» Олігонуклеотидний праймер «400» 246 ааєдааєдаа саадааєстаа дЕС 23 «2105 247 «2115 22 «212» ДНК «2135 Штучна «2205 «223» Олігонуклеотидний праймер «4005 247
СсСЕЕЕссСеЕсас ассатраєсьс сд 22
Зо «2105» 248 «2115 25 «212» ДНК «2135 Штучна «2205 «223» Олігонуклеотидний праймер «4005» 248 адсаєдаєає ассеЕдеЕсдад ааадс 25 «2105» 249 «2115 18 «212» ДНК «2135 Штучна «2205 «223» Олігонуклеотидний праймер «4005 249 дсдасадеЕдеЕ адсаєсесе 18 «2105 250 «2115 25 «2125» ДНК «2135 Штучна «2205 «223» Олігонуклеотидний праймер «4005 250 абасаєбаааа Єдаааастає єдедс 25 «2105 251 «2115 23 «212» ДНК
Гс10) «2135 Штучна «2205
«223» Олігонуклеотидний праймер «4005 251 асадасаєде сргадасссад ад 23 «2105 ЩД 252 «2115 24 «212» ДНК «2135 Штучна «220» «223» Олігонуклеотидний праймер «4005 щЩД 252 сасеЕсЕСсаєс ссаадсдаад Єєдс 24 «2105 253 «2115 25 «212» ДНК «2135 Штучна «220» «223» Олігонуклеотидний праймер «4005 253 сЕдадаєдда адеЕдаадсас адаєд 25 «2105 254 «2115 21 «212» ДНК «2135 Штучна «220» «223» Олігонуклеотидний праймер «4005 254
Зо ссаєсдеЕсад СссеЕсесаде с 21

Claims (20)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Спосіб одержання вуглеводневого продукту, який включає стадії: (ї) обробки в реакторі композиції, яка містить: (а) вегетативні частини рослини, суха маса яких становить щонайменше 2 г, і в яких загальний вміст неполярних ліпідів становить щонайменше 5 95 мас., у перерахунку на суху масу, і (р) розчинник, який містить воду, спирт або і те, і інше, причому обробка включає нагрівання композиції при температурі від 270 до 400 2С і тиску від 70 до 350 бар протягом періоду від 1 до 120 хвилин в окиснювальному, відновлювальному або інертному середовищі, (і) добування вуглеводневого продукту з реактора з виходом щонайменше 35 95 мас., у перерахунку на суху масу вегетативних частин рослини, з одержанням в такий спосіб вуглеводневого продукту, де вуглеводневий продукт містить естери жирних кислот, один або декілька алканів, один або декілька алкенів або комбінацію будь-яких двох або декількох з них.
2. Спосіб за п. 1, де суха маса вегетативних частин рослини становить щонайменше 1 кг.
3. Спосіб за п. 1 або 2, де загальний вміст неполярних ліпідів у вегетативних частинах рослини становить щонайменше 10 95, щонайменше 15 95, щонайменше 20 95 або від 30 до 75 95, у перерахунку на суху масу.
4. Спосіб за будь-яким із пп. 1-3, де вегетативні частини рослини одержані з або знаходяться у листі або стеблі рослини перед цвітінням рослини, а загальний вміст неполярних ліпідів у вегетативних частинах рослини становить щонайменше 8 95, щонайменше 10 95, щонайменше 11 95, від 8 до 15 95 або від 9 до 12 95 (мас., у перерахунку на суху масу).
5. Спосіб за будь-яким із пп. 1-4, де концентрація твердих речовин у композиції становить від 5 до90 905.
6. Спосіб за будь-яким із пп. 1-5, де каталізатор містить Маон або КОН, або обидва, переважно у концентрації відО,1 до2 М.
7. Спосіб за будь-яким із пп. 1-6, де тривалість обробки становить від 1 до 60 хвилин, переважно від 10 до 60 хвилин, більш переважно від 15 до 30 хвилин.
8. Спосіб за будь-яким із пп. 1-7, де, якщо розчинник є водою, то вихід вуглеводневого продукту в результаті способу становить від щонайменше 36, 37, 38, 39 або 40 95 до щонайбільше 55 або 60 95 мас., у перерахунку на суху масу вегетативних частин рослини.
9. Спосіб за будь-яким із пп. 1-8, де, якщо розчинник містить приблизно 80 95 води, то вуглеводневий продукт містить приблизно 30 95 С13-022-вуглеводневих сполук.
10. Спосіб за будь-яким із пп. 1-9, де, якщо розчинник містить спирт, то вихід вуглеводневого продукту в результаті способу становить від щонайменше 36, 37, 38, 39 або 40 95 до щонайбільше 65 або 70 95 мас., у перерахунку на суху масу вегетативних частин рослини.
11. Спосіб за будь-яким із пп. 1-10, де, якщо розчинник містить приблизно 50 95 метанолу, то вуглеводневий продукт містить приблизно 50 95 метилових естерів жирних кислот (МЕЖК).
12. Спосіб за будь-яким із пп. 1-11, де вміст води у добутому вуглеводневому продукті становить менше ніж 15 Фо мас.
13. Спосіб за будь-яким із пп. 1-12, де композиція на стадії (ї) додатково містить каталізатор.
14. Спосіб за будь-яким із пп. 1-13, де вегетативні частини рослини на стадії (ї) (а) фізично обробляють одним або більше способами, вибраними із сушіння, рубання, нарізання, помелу, вальцювання, пресування, дроблення або перетирання.
15. Спосіб за будь-яким із пп. 1-14, де вегетативні частини рослини включають листя рослини, стебла або і те, і інше.
16. Спосіб одержання гідрогенізованого вуглеводневого продукту, який включає стадії: () одержання вуглеводневого продукту із застосуванням способу за будь-яким із пп. 1-15, і (і) гідрогенізування одержаного вуглеводневого продукту.
17. Спосіб зниження рівнів кетонів або цукрів у вуглеводневому продукті, який включає стадії: () одержання вуглеводневого продукту із застосуванням способу за будь-яким із пп. 1-15, і (ії) обробку одержаного вуглеводневого продукту гідрогеном з метою зниження рівнів кетонів або цукрів у вуглеводневому продукті.
18. Спосіб одержання синтетичного газу, який включає стадії: () одержання вуглеводневого продукту із застосуванням способу за будь-яким із пп. 1-15, і (ії) перетворення одержаного вуглеводневого продукту на синтетичний газ.
19. Спосіб одержання одного або більше з мазуту, дизельного палива, гасу або бензину, який включає стадії: () одержання вуглеводневого продукту із застосуванням способу за будь-яким із пп. 1-15, і (ії) фракціонування одержаного вуглеводневого продукту з метою одержання одного або більше з мазуту, дизельного палива, гасу або бензину.
20. Спосіб одержання промислового продукту, який включає стадії: () одержання вуглеводневого продукту із застосуванням способу за будь-яким із пп. 1-15, і (ії) перетворення одержаного вуглеводневого продукту на промисловий продукт (із застосуванням нагрівання, хімічних або ферментних засобів або будь-якої їхньої комбінації, причому промисловий продукт являє собою біологічне паливо, газоподібний монооксид карбону іабо гідроген, біоспирт, такий як етанол, пропанол або бутанол, біовугілля або комбінацію монооксиду карбону, гідрогену і біовугілля.
АС току - Геном оно ва и НАС ТИЖ руетт кад Норокаріотний шлях | Прокеріотні гапактапініди дет Аква Н вима у ен | і є Мазоннькой кагатВ н М ре мроду ме МОБАта ЩО Н м Кр Піо Ох Б и а а я КК КО ККУ У тт ДАГосер тд емо ОВОВ Н Н іже Ж ! пет ючи нннтят ат тс ана КККєтннитняя і хо БЖД і р ни он ча и хакі | вав дж ; | Букаріотні тевлкактомьлв х. "ПЕН. Тертя Ід | кожен ова Зх | І і і пиши ас кВ тв Б- ф ІК ЖК педа пов 7 (ЩЕ Ск увеля а Ко п о ЕН Н ріао5 і ІВ ятея 0000000 сети сйеХ І ни ее ов в в ная ТТ бе п пе х МШГТІККИ, і УК ПУЕ ТИ ТОПКИ ТП ШИИМІ я СИПЛМО певна каА СМ я ж ПОМ іеям пулацилекай Но щуладнанх 000555 рили КОКО КО кн 1Жв | 1 ше г апа : кв жжку ду». З їм . з ї ра В Ї Її пуста КО досто ВК НУК я - Н | Про метру жереютеме 0 реттрудть ж Аг х і поп зп нан Метт тини Що Ж міш К я ї Н ЦІ НЕК «т ку ж : сажу Ж Ї І шк МЕ і МВСКННе є і ! З : Гу не Ок Я Е щк . Щек шення ., ЩЕ не е ; мин: мини вес ки ти Й ОЙ ном З: спр З я . : ши Ации-коа в - ї ще ; ЩО ка з Шлях Канаді Гаю
Фіг. ВЕС вчена аови: НВО іона які Ст вацег лиман і 0000 Аве авт ; БО лек АвнНЬоЗ ЧЕН іугаанічеви її ; БОР РоРаВеЬРНА ше Б НИ НИ 010 дев ЄдЗА | | ши ше 1 тв вацеє Зм: МЕН ше нн шшиш 1 Вевів-Ововів ту ши ше: КО 1 тваевавоня Й ІЗ ла їх х : Й х Н ї Н НИ НЕНУ ги А ВК ЗИ | г 1 | й В і жі у о во шк с--3-. Терв АТ. о чвімя ов - фе Це і маспо з насіння люгпіну 986 пароснов.
Фіг. 2 ве сен Еко, епі ' ТЕ АВеВеВОВ ей, ТЕК догана Б нд : п атанмвкті, Ж ліва межа ТДНК м й М 7 її щи ве вис мана 7 неоміцин-канаміцин провотор «оте цВа ге М фосфютрансфераза типу -а , одаржаний із плазміди НКУ
«5 . 4 Воплі : диавтктка 20 реле | сові і й 19382 пари основ ще ВИЙ Й СУ ох щі і ТЕН Єувтейянкій дей права межа Т-ДНК У ф оеняст х ч Є а с перенос па РАС ДЕН НоВівко ВБИТО 7. | ен хо вн І зе 7 ех Кк І а . ; ше ЩЕ у ; У фрагьент м ярее дона й Її Шо ї ї ще звах ТЕВ буть ве І і ! Ім "іНтрон Ечіх і інтрон Сай (ворот ніх то фрагмент ме ою і знан зермінятов ССО
Фіг. З зуннккюккююкююкюююютттюттянятлянятятянляяяяяяяяя кн кжккккккккки тя кюютютятяя ння няття няння ля няття яті ЕНН Кн ккЖкккжюніжки тю ктютюютжття нія я пдянлля няня тати яяккккжкюкк От тетх, : х п : ! Е ї ! І й ! "Кк я КИ І Н ї В : ' Е КК ї і - БУК ;
Ма. т кппттлте няття я ТЕРАКТИ тяж яжя кт тях КНУ же і Н ї х ЗВ Н І Е КИМ й ; : Її ак х КУ ЗЕ хТЕ Н і ї ЩО (ЕЕ КЕ КТЕ кв х І ' ї за еЯ
КОД. более но сек ідиишиої пі В» Й : : і Ой Ї ОБУ 00 векселем ВАВ ККТх і Н : КОКЯЗ Н і жа ї ДААТАРААРАР АТІКА З ЗЕ ЕВ ЕМ ВВ КВАА ТКУ. і Н ї ОН Н ї ДЖЕК н с. г ; ак свіже . і : й - МЕНА ен мис в КК С ТТ З ща де - нов солона: ОКУ. й " : КОД ореол ин лляя сх КАК Н рожмУмоСу З ов У ОЗ БО І : ї їх ЗВУ М ЗЕ ЗОЗ : В ІЗ С - МЕ БЯЗЕУХ заворот їх МЖК БУ І Е пд доска ке СК с ПИ о ВЕДЕ у Ніньаав КК У ХХ я І Н Н : пек уча за о ; уко яке на ско дек Н ї са ща Є Сава со Ка СБ В ! Е : фу кккккккк АК КК КН КК Кент нт ті іі тіні ііі ііі іі ж ііі кі касу пі кі і ні ііі ее неі пінечеіві тік тт ііі пеніс коорєеюсєссюв і й Н ії жк ї і ї І
Н . 1 ня ї зви А ; ІЗ і ВІ їх манто зва : " ще ї ! ! ЗВ ; КОЩЩКДХ пфесттнлтнхкаккккккх Со орех ! ! дя зинежме І і Я Кир в я ! СБУ зеинспюютекоювюния і - Я ВОК Ми НУ сен нн о кю шк й що Н Я , ща НЯ ЕХ5 І: Зак За у Кк я ВО У і
Н . : ТК Н і 25 пррегиклагикооккунинну оф уча Кук А кт нн Й гою ХЕ ДНІХКТИСсТЕМ У ВАХ КІ, Н : і З ща Кох ; ще ! ад ОК не ск СК а ких зе Ок З оС ОО М РОВЕ яннннннн НТІВ КОЖ риття -15--а---МИН- я Н тонам т - Я оон МОКОЯ : Н : Я Я Ж о ОХ УНУ : І Н НОЯ Мая ЗМ ЗХ ОНОУ Н і ЩЕДК лоченчніваейне. «ВАКЯКНАНЕ ІВАНЕНКО «ВВЕ сені ХК ТК. Н ї хе хи є ч Я З з ї ота хі з : : сім са нм Са В ща ЄМО СМ Е 3 ї нн а КК КК КК КК КК У певно вні і і яна а : - : ГОДА дн ння подяк чннанпнт нт тт нт і Н Ї о : і шт й У зх Н КОДКХДУ, бинта У ТЛА т Ди Н На : З і і зсьт Ї й й Ук МОХ екох КЕ Н ЕВ янв нини НИ : Н ї - Ж Е СК Мови КК Сет і в ЖАК : Шен ну нн С МОВ Й Щ Ш : КЕ г. МОНАХ мм к кисті ват : Е ї КХЗМНУ МК : тоже 10000000... о 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 1 2 2 2 5 2 2 5: 55 :- - ---- « ОХ. Н КОМ ОО МОНУ 0 яотдоповля ткані ва Ат, Н ї ї У, КВК що Й : В - ї ВОК ЕК воші о, шко ух Н 38 5 т М КОКО ру дк ЕК кою фак в З в С КУ СН ї ї ЩО ВКМ фор ее ОКХ : її щит їх - ОО КСО КОНЯХ доку МОЯ КЕ Й : ї ЩА -- - - - 5 5 ЯКБИ. У ЗЯНИКУНККК «МИНЕ хИй КУ. нкоеанініня ТМОНОНю НК. ; х чи яю. панич че кв : ї Біо Сава сію са сіва сі Си СКЗ ; а: "
Фіг. 4 нн нн нн но ії
Е.О Ж. понесених п КАК Тент тт ї ї ГУщя ща - и НН і Я ! вд. - нн ага у Я кода ши - ї ДУКУВваня свв. доста ї і дав ж РІО Е КО й песо КВ ; Ї Е ! М РУ АВ оч р: і нина г - МЗАНких й й . ї ! ЯК З і п я ж ВЕРУЗ кине ав і Е НІ й У І Й ї Ех з СУКНЯ ск : оо зах ж їх (ЗВ пня шк ни ШЕ ї І "хи ; ХУрНноя . скх ск ї І | та «а МВВ ЖЕ Ж дна в МА ї : зала в нн ЕК ХККЖАХХАААААААУКККАКК З і : : : КНСННЯ Ж М ВН Н Н В Мне БЕН ев; 4: ПОН ЗМК ї їв 3- Я джжх ОЗ МОН Во. ЯНВ Мая ВИМ ЗНИК і ї деееея ? я З Я з х 4 і Н щей Я дір рек жнИ ПЕ вн у і СУЯНх сля аб СО САН СІВ СВБ Са Н ШОМЕК я рпоадаала ад таня АДАМА додаванні Ще х : їх х ІЗ ї й З. Ї : ї Се ї В що а я ЕЕ : Ж нн ! ї ІЗ СВК Ї дя КЕ. а від ствах Ї за птн 3 В. ХК І и я о 5 вже ою Е. птктнтнткткучнннжкюк- о Я Й Во КОЖ ри я т - я РІ кідКеРЕ х Кк» ВУДУНнн ех Вже осмис нен м ' о ВИНУ Жак ЗНЕХ ВИНКНННЯ ! Н КО мери й х Я со озяя ЕЕ в МОН . ВО ВУ МН ВИНЕН. їй ВОНО. МУК Н Н кі ; ен Ши «же о щижкоя для хх с. аж З і Ко сао сів сів СВ мів 38 З Н - 5 нене нт ЕНН ові нити ння НА КК КАК КК НАМ НААН КА НА КККАН Ан кккккккккьляжнн Кох Я. юю А - ЖЖ Я - л ь Н Е Я Ко Н х БУ ! ЗХ ЗИ і дав ї у З в ків 1 рекееєесоєюююсоя ння ща і ї Зоя З з я З вия! с я віз сних З
І. ВВ рекет В Поет кереюхюкюя сонне В ! Е С Ся Вій ха З
І. ХВ. пбокенчнккннкнппплляяяялннттннн ВК сосок в ЕІ рОож і: ВК сс ще долю З і Е ще ех З С виру зсоРани 1 Н - Н КК «ев ВО І Ї ЖЕН деосесессссссссогосеєєтдня МВВ Кессюєюююіювюттнниннннннннннннннннинннння ол В ї ; Н і В. ее КОНЯ. ІЗ Н х М Ве Я н "НЯ НК і | НУО ЗИ Ки. ; Ме ЗЕ ! і ЯКО. фатою оорглмя У. у МОНО» ДЕННИЙ. М нівай ба ЗВОНКА йСх. і ! Й ї ! жах же ж жи дгдкоди е сяк Я Я зак ж дл ков Н Спб сіяє сек ю сів СВО сів са Ст ! ши ФАК КАК тт тт тет ПКТ ть ак Кт токах
Фіг. 5 г Вівні ЖК (кількісно) Ж Рівні ТАК (кількісно) В и нн 5 ув вн Я 5 Ї : ах вн нкнннни НН Е ШОЕ дуети У дуття і Е КЕ п і ї ж БЕ фено ш ж ши МНЕ її МОЗ фони ї Іжа пеуврхх В шина ди я ї Е й І в Фередне здо ВАНИЙ Я ВЗЯВ. «Середні ОВО ! значення Ж сао. Н.Й Й НВ Я Я В значення | і уст не нини и шк щі не 8 ше АВАНС. І ІІВВУК но - у І -
І. 7 х Ж | КО Е ї В Е ою РНБО М ЖЖ Я СМС СМ ! ВХ - А п нм ик Ї ЖЕ з хаб 5 й рда че і ПО одиничне . ш ІЗ й а ї У Е Загальні СПЖК у ЗЖК "Ше Загальні СПЖК у ТАГ ШЕ і З ДК) срогееееоутттттяттттттнт тт я АНТ у туучнт тт ттятнтя В ра рент ! КО дру ння Поошо ен ня и ік Ж НЕ; вини ш ж ш ШЕ ся нин ш ши я ПОЯВОЮ рон ВН г: ВМ сення З ї -Б.5 В зюжЩце 000Ж ВР фе ВВ сш ШІ п и сли ники них що Жозе зв КН ей Ж мо шен т ше В ве ние ово ве АТ я ою Я ек як як КО ЯК І. і якої. шия. м щ й 3 з 3 5 5 в 7 5 8 35 35 В ха ж я 5 й й й 5 Ха і ВО ПИ ОК нин ОК КК
Фіг. 6 ' КЗ КЕ: Мнений
Ба. : Е: 15 пен нн щч | Бе і їж Н Ше ше ння сн рі нини шини ще шин я ГЕ Я ДЗ А АННИ ПА ЗАЩЩКСС: ЩІК к шк шк ші шелі Н ІЗ ж ск ще ХЕ М. «5 оз с яй С ШЕ Ше Шо ША: св ке ще шинок ни: вим и ШИ: З. СВ ЕЕ. В Я 5 зад 1. я рон дк тр ей пойбЯен В У-ЯВ Б З З Я ОС і не 5 Як се ах хх щ иа А І НЕ че - о не и М Й с КИ МИ КЕ ме ее с І ДЕ І ИН і как ше : Я у «а я 2 я
Фіг. 7 інтрюм сей ЇУВюротним) фовгжант КВ А вві фрагмент КБУ Е | І НОВЕ у ї Н рН - ШчЧН . 3 Н т - промотор ептсЦ | Рак інтрон | (0011 тернінатор осі ; І і Е | Ці ; За іш і і В же ї | дал ізн) їм Ж , зв х у І 1 з і : їх Й чі х : У і і ЩЕ ! КІ і і Н Н | і
Е. | й і І й : Н і ОК, кокон ОМВК і У Ї Я
Фіг. 8 120 - , ів ше шк. Ї Ї В В в ща В са СЕ ШЕ ж ше шшш ВО ші ж щу Еш ше Я и шк: КЕ ЩЕ Е | пиши нини к Я Ш 5 5 8 В 8 В В З Б я В В В В 5 ! ж Шк ще ще: ши шк ше ше ше ще Шк о ве Я З ж шк Ши ще шк а В ВВ Б ї МУ жк Б КжО Же в Ві ЖК БЖ я ще Б Б 85 5 8 я | ишинишии Енн инніи. т Б З в 8 В З Б Б. В В Б Ух в ж В ще ШО Б Б Ж с В ВК 5 Б Б В а ше В Се 5 8 В З В Б Б Б В - Кк шк У мк 5 в Бя 3 БЖоО ВК що 8 В 8 8 35 5 Б ЖОВ ! ши шшшш шшшши ші ща М В щ Б В Б Ж Б В Я 88 В БЕ 8 5 5 ОО Го ков ше ше не Ши шк НЕ В ША ЩЕ Що ШЕ І ши ше ше ше ше ШЕ ЩЕ В і сш ж ше ші ще ше щі ШЕ ї З 5 Б ДО сіяв Я У Я В Я В ВІ Я В.В о. В Я В Я В Б В В М В, во ки НА ие А ни НИК ВОдК ОК о б З ся З ! шк ки о ер и в в г -
ж п.
Фіг. 9
Ї одн Я Я о оо тонути ! і «В ненні ще шш роб ВТ
Ко. т ї В і: В - нн ва ВВ З о ЗХ о Корінь. ші Й "ЩО 015 з стебло дн А щі Ї й | ; ши Б в БЕ В а а я в ни ще ще й окосту КК» о шк МИ в «В В. дії дб дії АК Ояв я «в а г ке ме " г г Раш ж
Фіг. 10 Пе ТТ і Й і І | і ше ! Ск по о МИ і Н А Ех В о | В Б. ! ШИ Ей в. З
В. шк шщ і ні пн шо ее ТТ БО ш щ ще ШІ щ щ ше шщ щ : | шщ ЩІ в "и. ще "І шщщ. шщ що В НИ еще йо порно ВЕН скоуллнннк Н ШИК КИЛИМ дк ПИТИ Ди і ТИНИ: ТИХ ; дк дів дії віра хт ринаЮгі різ5от З-яІ Ве 0 ЗІЗ
Фіг. 11 ай з | 80 ва ТАГ Не -е бик Ж. що | м М й ее б Ї пиши Е ОС В 3588 ов, і її БО В В Б 8 1 - Б 5 Б Е ши щшеь ши. 7 юд4 Би ння В нн В ВИ НЯ ! 1, Екшн шен . - че -вз з в В я Б Я БО З З ХЕ В зве Її: хх 5 и В 5 УЗН - зва В шиї ВИ ОЦ 00 зва ж - В 8 Я щ ВШ в Б щ В ж Б Б Б я В в В: г то ши ! ни ше пепсин шини 04 КГ 1 од ж Ж Яни А 83 З Б В БЕ Б В Б Ж БОБ ж ВО . я БЕ Б ня в В Б Б В Б БЮ ВО, вав я як шо й «й. ЩЕ -й їй . В що Е щ З й ще й ве Щі я Щі - З - ши ; Я й В В й во -к Я М ще жо. з и ек ЗА НК НК шо дяк й 3 на о м и м ше м в І и Шк Му . ІЗ -
Фіг. 12 Зх я | 55 з і В й | в ча ; шо си я Я шк М я ж І В Ж шк Б В бю ко п, З ЕЕ я фу: ВК я ЗБ Б же ВЕ « Е я в дк: ВУ щш шщ ов. К каш ше Е БЕ. ' 1 Ве що ю- Я Е | БУ зах 2 я б ж ще Т ко, сі В 1 В М ї Я я я В У і Етз з. : 334 ВВ З і зв щі В ії а і : Б ув й їх ВИ КЕ т ; тя ще ш ше ше | ФО Кя ше шщ |! сі Зв з с. С с. що ни ши и п В В ак ше ши ши ше ШИ Вміст ТАГ у писті (5 СМ А М коереве НЯ рія: же роя ВОНО в
Фіг. 13
Іряав двув вято віда-джерело 1 несміцин-канаміции йог ЧІ | фосфотрансфераза титу МЕ вет хм у ня ще одержаний із пмиазміди НК ша Ши й і у я То. ве тм вх й "В. права межа Т-ДНК ва з о МАВ Нет ліва межа Т-ДНК сс ж ЩІ ак Вт душ пеооха Й задає пари основ 77 рменнючмомть ТЕЙ Зітуачасти ху ШРОТ ЕНХАНОВР: пах ьеняе денні | АЙ 7 еко вовче ЕНХАНСЕР лих вай ЛЕ мк во АМОВ ВАВ цк в | ше МАН мняз-кву м і т жи ! казни ЧЕН Кір Я 0 авювоваті ДЕАНУТРАТЕ г тен міншв-слій Е Ро пив ЕНХАНСЕР тв езнає
Фіг. 14 ! СЕН пн нн п пи п МХ- 5 ' - - Ж - я | тт и У Ед нн пи нн С вані | їв -х. ж за пн нини пон - Е КЗ
Бо . Ж з5 Я й х с ШИ шо й они ШИ ; г з жк І а ЗИ ї ж
«В. і ше нн а нн п а щ , З За В-Н-- ТТ за фр нн тн танка петнтнннннноях
! . нин нини еру серпи вростиімнягі ждикий тик 55).
Фіг. 15 папа ддртттнт нт тн нт ння прроорацннцчкюнююнмючхюон ор ККХАЄ вій БА 4 АВ ЖеРУХОІВ і крат уХОЗІ й плекс ссесссвссвссессссо3 БАЖАВ РЕВТУ В ! ЦЕАР- КЕ ян ї 1 4ЗАРЗАЕ У ЖІ х- дель уУХВаВ ше п Кун нанняттттттттнттттетння ВАЖКІ КВУ фе Е Мер АВОВУБОЗ, Рат МАРІЯ І нн І КІ крат зечиоВ у Блуаек в й : шари тУукиЗ и комет я т стерня ДЕР ДОА в іЗавоитивЗ Е аа я ПАХ ЖК МЕ пн Її дів НЕМВК інЕм ЕНМБах ПМ Кт тя я я лляне ,унннкктннттнтннтнтнтннннннннкннннннн ТВВБЕО, ВКІАСЕН Я ее ве ЗБОВЕ яв, Не ВОвЕ ! уреетхетесесесвегеввсеввоваевасєс ння ниттнтттетттетттннннннн ТОВЩА ВВ, ТУ ї ! понят птн ВЕН ЯЦВВ, ТІ Коопшшя пен онко ттттттт-- ВВЕ ВЯВВ ТО ! У тт ДОК ОСТ МЕ ррдккюсююююк нн ВУ ЕВКВЯ, ВЕ р мшАВІ-РУХОВЯ Г візакч нжлода й рок лт-тжеВх в ав у-вУДОЮВ коза -яувоя КЕР -Веви Ем ву В вОдез-куУтОВЕ во фіг. 16 ЩІ щі ТЕН Ада МОВ Музи их ій ; пом г РНА РКО Саму. шо с о зве теенннн - Віва щежа Т-ДНК ТЕК Адпв-НУВ воші ми Я ВК «ні З в неоміцин-канаміцин «4 тре Її фосротранофераза тилу ІВ дай рОАТЯ о Ки шо х З - адержаний із плазміди КК - плов гу вно саму ХИ ПИ 14773 пари основ - і -- ще а ! ше та . - іс т прана межа Т-ДНК РОЗІ картоляк ть і ще Р й ув що - | я 4 ТЕН сбва- ес і - МНЕ я КК 5 «И----- ОВ ієвон 7 Ве шк гай тА Зачньомавк Й ; я Ж щк | й ; ТВА утва вести КО 35 картелі
Фіг. 17
UAA201701018A 2014-07-07 2015-07-07 Спосіб одержання вуглеводневого продукту UA124137C2 (uk)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2014902617A AU2014902617A0 (en) 2014-07-07 Increasing oil content in cells
AU2015900084A AU2015900084A0 (en) 2015-01-13 Increasing oil content in cells
AU2015900284A AU2015900284A0 (en) 2015-01-30 Increasing oil content in cells
PCT/AU2015/050380 WO2016004473A1 (en) 2014-07-07 2015-07-07 Processes for producing industrial products from plant lipids

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA124137C2 true UA124137C2 (uk) 2021-07-28

Family

ID=53539558

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201701018A UA124137C2 (uk) 2014-07-07 2015-07-07 Спосіб одержання вуглеводневого продукту

Country Status (17)

Country Link
US (4) US10472587B2 (uk)
EP (2) EP2966157B1 (uk)
JP (2) JP6882160B2 (uk)
CN (1) CN106852158A (uk)
AU (2) AU2015286221B2 (uk)
BR (2) BR112016030971B1 (uk)
CA (2) CA2954203C (uk)
CL (2) CL2017000049A1 (uk)
ES (1) ES2969618T3 (uk)
HR (1) HRP20240128T1 (uk)
MX (2) MX2017000109A (uk)
MY (1) MY178434A (uk)
NZ (1) NZ727699A (uk)
PH (2) PH12016502588A1 (uk)
RU (2) RU2743384C2 (uk)
UA (1) UA124137C2 (uk)
WO (1) WO2016004473A1 (uk)

Families Citing this family (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX350779B (es) 2000-01-19 2017-09-18 Dsm Ip Assets B V * Procedimiento de extraccion sin solvente.
EP2576801B1 (en) 2010-06-01 2019-10-02 DSM IP Assets B.V. Extraction of lipid from cells and products therefrom
AR098890A1 (es) 2013-12-20 2016-06-22 Dsm Ip Assets Bv Proceso para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas
US11124736B2 (en) 2013-12-20 2021-09-21 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
AR098896A1 (es) 2013-12-20 2016-06-22 Dsm Ip Assets Bv Proceso para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas
NZ721409A (en) 2013-12-20 2022-10-28 Dsm Ip Assets Bv Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
KR102435269B1 (ko) 2013-12-20 2022-08-22 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 미생물 세포로부터의 미생물 오일의 수득 방법
ES2969618T3 (es) 2014-07-07 2024-05-21 Nuseed Global Innovation Ltd Procesos para producir productos industriales de lípidos vegetales
WO2017011707A1 (en) 2015-07-14 2017-01-19 Synthetic Genomics, Inc Microorganisms having increased lipid productivity
US10689676B2 (en) 2015-11-02 2020-06-23 Synthetic Genomics, Inc. Algal mutants with increased lipid productivity
CA3010724A1 (en) * 2016-01-07 2017-07-13 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Plants with modified traits
FR3052459B1 (fr) * 2016-06-13 2020-01-24 Bio-Think Melange destine a alimenter une chaudiere ou un moteur diesel comprenant des esters et des alcanes particuliers
EP4032965A1 (en) 2016-06-16 2022-07-27 Nuseed Nutritional Australia Pty Ltd Elite event canola ns-b50027-4
EP3472280A4 (en) 2016-06-16 2019-11-27 Nuseed Pty Ltd IN-BREEDING TRANSGENIC RAPSLINIA NS-B50027-4 AND SEED THEREOF
CN106207179A (zh) * 2016-07-07 2016-12-07 陕西科技大学 一种koh活化柚子皮制备钠离子电池用负极材料的方法
FI128345B (en) * 2016-08-05 2020-03-31 Neste Oyj Method for cleaning the feed
EP3507370A4 (en) 2016-09-02 2020-06-24 Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation PLANTS WITH MODIFIED TRAITS
US10596487B2 (en) * 2017-09-27 2020-03-24 Rj Lee Group, Inc. Methods and apparatus for clarification of pyrolysis oils
CN109722455B (zh) * 2017-10-31 2022-03-11 中国科学院天津工业生物技术研究所 微生物发酵生产谷内酯的方法、工程菌及应用
CN108037236B (zh) * 2017-11-21 2023-03-03 中国科学院西北生态环境资源研究院 火炬排放中甲烷转化率定量分析气体收集实验装置
CN108070603B (zh) * 2017-12-28 2021-06-08 洛阳健特药业有限公司 一种提高油用牡丹籽含油率的转基因方法
US11913006B2 (en) * 2018-03-16 2024-02-27 Nuseed Global Innovation Ltd. Plants producing modified levels of medium chain fatty acids
CN108624600B (zh) * 2018-05-22 2021-06-18 昆明理工大学 锌指转录因子基因RkMsn4的用途
CN108587916B (zh) * 2018-05-23 2021-09-14 昆明理工大学 一种共培养单针藻在中性条件下快速絮凝的方法
EP3844293A4 (en) 2018-08-30 2022-06-08 Checkerspot, Inc. HYDROFORMYLATED TRIGLYCERIDES AND THEIR USES
CN109486838B (zh) * 2018-12-21 2021-09-17 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 一种调控植物类黄酮合成的转录因子基因及其用途
BR112021015352A2 (pt) 2019-02-11 2021-10-05 Checkerspot, Inc. Composições de óleo de triglicerídeo
CN110257444B (zh) * 2019-03-08 2023-04-25 海南大学 一种在植物细胞中生产中链脂肪酸的方法
CN110106019A (zh) * 2019-05-20 2019-08-09 无限极（中国）有限公司 一种利用裂壶藻生产复合型多不饱和脂肪酸油脂的方法
CN110295153A (zh) * 2019-07-05 2019-10-01 中国农业大学 一种甘油-3-磷酸酰基转移酶的编码基因及其应用
EP4077439A4 (en) 2019-12-18 2023-12-13 Checkerspot, Inc. USES OF MICROBE-DERIVED MATERIALS IN POLYMER APPLICATIONS
FI130917B1 (en) * 2019-12-20 2024-05-28 Neste Oyj Flexible integrated production facility system and procedure
CN111690423B (zh) * 2020-06-11 2021-12-14 陕西东鑫垣化工有限责任公司 一种煤炭的分质清洁利用工艺
US11578278B2 (en) 2020-08-01 2023-02-14 Honeywell International Inc. Renewable transportation fuel process with thermal oxidation system
US11578020B2 (en) * 2020-08-04 2023-02-14 Honeywell International Inc. Naphtha complex with thermal oxidation system
US20220040629A1 (en) * 2020-08-04 2022-02-10 Honeywell International Inc. Pitch destruction processes using thermal oxidation system
CN112111289B (zh) * 2020-09-12 2021-09-28 辽宁索能环保能源科技有限公司 一种基于分子闪解陆地和海洋有机固废的方法
CN112239493B (zh) * 2020-11-17 2022-04-08 西南大学 蜡梅CpWRI-L4基因及其编码的蛋白与应用
US11614732B2 (en) * 2021-04-23 2023-03-28 LegacySecure, Inc. System and method for collection and management of data from sensory arrays
EP4208528A4 (en) 2021-09-17 2023-10-11 Checkerspot, Inc. HIGH OLEIC OIL COMPOSITIONS AND THEIR USES
WO2023091669A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Checkerspot, Inc. Recycled polyurethane formulations
WO2023102069A1 (en) 2021-12-01 2023-06-08 Checkerspot, Inc. Polyols, polyurethane dispersions, and uses thereof
CN115747184B (zh) * 2022-08-04 2024-09-13 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种提高微藻中链甘油三酯产率的方法
US11845971B1 (en) 2023-05-04 2023-12-19 King Faisal University Generation of methane from digestion of marine brown algae
CN117448475B (zh) * 2023-07-03 2024-09-27 广东省农业科学院作物研究所 一种花生油酸和亚油酸含量相关qtl的kasp分子标记及应用
CN116982559B (zh) * 2023-09-27 2023-12-29 中国科学院昆明植物研究所 一种樱草试管开花诱导培养方法
CN118006702A (zh) * 2024-03-05 2024-05-10 葳龙生物科技(浙江)有限公司 一种草铵膦的生物合成方法

Family Cites Families (169)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4102938A (en) 1977-03-02 1978-07-25 Kalur Vijaya Chandra Rao Production of hydrocarbons by thermolysis of vegetable oils
JPH0714349B2 (ja) 1983-01-17 1995-02-22 モンサント カンパニ− 植物細胞での発現に適したキメラ遺伝子
US5504200A (en) 1983-04-15 1996-04-02 Mycogen Plant Science, Inc. Plant gene expression
DE3587718T2 (de) 1984-03-06 1994-08-04 Mgi Pharma Inc Herbizide Resistenz in Pflanzen.
US5420034A (en) 1986-07-31 1995-05-30 Calgene, Inc. Seed-specific transcriptional regulation
JPS61221299A (ja) * 1985-03-28 1986-10-01 昭和炭酸株式会社 動植物材料から有機質成分を抽出・分離する方法
GB8511587D0 (en) * 1985-05-08 1985-06-12 Shell Int Research Producing hydrocarbon-containing liquids
ZA871352B (en) 1986-02-27 1987-08-12 The General Hospital Corporation Plant cells resistant to herbicidal glutamine synthetase inhibitors
MA20977A1 (fr) 1986-05-19 1987-12-31 Ciba Geigy Ag Plantes tolerant les herbicides contenant le gene de gluthathione S-Transferase
CN87100603A (zh) 1987-01-21 1988-08-10 昂科公司 抗黑素瘤疫苗
US4948811A (en) 1988-01-26 1990-08-14 The Procter & Gamble Company Salad/cooking oil balanced for health benefits
US4992605A (en) 1988-02-16 1991-02-12 Craig Wayne K Production of hydrocarbons with a relatively high cetane rating
US5932479A (en) 1988-09-26 1999-08-03 Auburn University Genetic engineering of plant chloroplasts
US5034323A (en) 1989-03-30 1991-07-23 Dna Plant Technology Corporation Genetic engineering of novel plant phenotypes
EP0814166A3 (en) 1989-08-09 1998-05-13 DeKalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed fertile monocot plants and cells thereof
GB2237815B (en) 1989-11-06 1994-01-05 Univ Singapore Production of synthetic crude petroleum
ATE205530T1 (de) 1990-03-16 2001-09-15 Calgene Llc Neue sequenzen vorzugsweise exprimiert während der frühen keimentwicklung und darauf bezogene methoden
US5451513A (en) 1990-05-01 1995-09-19 The State University of New Jersey Rutgers Method for stably transforming plastids of multicellular plants
US5877402A (en) 1990-05-01 1999-03-02 Rutgers, The State University Of New Jersey DNA constructs and methods for stably transforming plastids of multicellular plants and expressing recombinant proteins therein
US6483008B1 (en) 1990-08-15 2002-11-19 Calgene Llc Methods for producing plants with elevated oleic acid content
US5500361A (en) 1991-11-15 1996-03-19 E. I. Du Pont De Nemours And Company β-ketoacyl-ACP synthetase II genes from plants
US5593874A (en) 1992-03-19 1997-01-14 Monsanto Company Enhanced expression in plants
US5362865A (en) 1993-09-02 1994-11-08 Monsanto Company Enhanced expression in plants using non-translated leader sequences
US5807893A (en) 1993-11-18 1998-09-15 Voelker; Toni Alois Plant thioesterases and use for modification of fatty acid composition in plant seed oils
GB9324707D0 (en) 1993-12-02 1994-01-19 Olsen Odd Arne Promoter
GB9403512D0 (en) 1994-02-24 1994-04-13 Olsen Odd Arne Promoter
US5545818A (en) 1994-03-11 1996-08-13 Calgene Inc. Expression of Bacillus thuringiensis cry proteins in plant plastids
GB9515941D0 (en) 1995-08-03 1995-10-04 Zeneca Ltd DNA constructs
GB9524938D0 (en) 1995-12-06 1996-02-07 Zeneca Ltd Modification of starch synthesis in plants
US7109392B1 (en) 1996-10-09 2006-09-19 Cargill, Incorporated Methods for increasing oleic acid content in seeds from transgenic plants containing a mutant delta 12 desaturase
US5977436A (en) 1997-04-09 1999-11-02 Rhone Poulenc Agrochimie Oleosin 5' regulatory region for the modification of plant seed lipid composition
US6432684B1 (en) 1997-04-11 2002-08-13 Abbott Laboratories Human desaturase gene and uses thereof
US7589253B2 (en) 1997-04-15 2009-09-15 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Fatty acid epoxygenase genes from plants and uses therefor in modifying fatty acid metabolism
KR100711074B1 (ko) 1997-04-15 2007-04-26 커먼웰쓰 사이언티픽 앤드 인더스트리얼 리서치 오가니제이션 식물의 지방산 에폭시게나제 유전자 및 이의 용도
JP2002504819A (ja) 1997-06-05 2002-02-12 カルジーン エルエルシー ジアシルグリセロールトランスフェラーゼタンパク質
AU8583798A (en) 1997-07-23 1999-02-16 Centro De Investigacion Y De Estudios Avanzados Del I.P.N. Improved plastid transformation of higher plants and production of trans genic plants with herbicide resistance
US5912416A (en) 1997-08-05 1999-06-15 California Oils Corporation Safflower products with very high levels of unsaturated fatty acids
WO1999016890A2 (en) 1997-09-30 1999-04-08 The Regents Of The University Of California Production of proteins in plant seeds
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
CA2513336A1 (en) 1998-03-20 1999-09-30 Benitec Australia Ltd. Control of gene expression in a non-human eukaryotic cell, tissue or organ
JP2002528048A (ja) 1998-03-20 2002-09-03 イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー リムナンテス属油の遺伝子
EP2267138B1 (en) 1998-04-08 2016-06-08 Commonwealth Scientific and Industrial Research Organization Methods and means for obtaining modified phenotypes
US6344548B1 (en) 1998-06-24 2002-02-05 The Regents Of The University Of California Diacylglycerol o-acyltransferase
CA2330363C (en) 1998-06-24 2009-10-20 The Regents Of The University Of California Diacylglycerol o-acyltransferase
US7135617B2 (en) 1998-07-02 2006-11-14 Calgene Llc Diacylglycerol acyl transferase proteins
JP4514952B2 (ja) 1998-07-02 2010-07-28 カルジーン エルエルシー ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼタンパク質
CA2334044C (en) 1998-08-20 2014-03-25 E.I. Du Pont De Nemours And Company Genes for plant fatty acid modifying enzymes associated with conjugated double bond formation
US6100077A (en) 1998-10-01 2000-08-08 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Isolation of a gene encoding diacylglycerol acyltransferase
CA2351589C (en) 1998-12-02 2010-08-10 E. I. Du Pont De Nemours And Company Plant diacylglycerol acyltransferases
WO2000032793A2 (en) 1998-12-04 2000-06-08 Calgene Llc Plant cell derived diacylglycerol acyltransferases
AU779969B2 (en) 1998-12-17 2005-02-24 National Research Council Of Canada Diacylglycerol acyltransferase gene from plants
US7015373B1 (en) 1998-12-17 2006-03-21 National Research Council Of Canada Diacylglycerol acyltransferase gene from plants
BR0009510A (pt) 1999-04-01 2002-04-23 Basf Plant Science Gmbh Enzima, sequência de nucleotìdeos, construção de gene, vetor, organismo ou célula transgênica, processo para a produção de triacilglicerol, triacilgliceróis, e, uso de uma sequência de nucleotìdeos
AUPQ005299A0 (en) 1999-04-29 1999-05-27 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Novel genes encoding wheat starch synthases and uses therefor
CA2372632C (en) 1999-05-04 2011-02-15 Basil S. Shorrosh Plant acyltransferases
DE19950589A1 (de) 1999-10-20 2001-05-23 Gvs Ges Fuer Erwerb Und Verwer Elongasepromotoren für gewebespezifische Expression von Transgenen in Pflanzen
US6326193B1 (en) 1999-11-05 2001-12-04 Cambria Biosciences, Llc Insect control agent
AUPQ574200A0 (en) 2000-02-21 2000-03-16 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Starch branching enzyme
US6492577B1 (en) 2000-03-16 2002-12-10 The Regents Of The University Of California Leafy cotyledon2 genes and their uses
DE60142734D1 (de) 2000-04-18 2010-09-16 Commw Scient Ind Res Org Verfahren zur modifizierung des baumwollölgehaltes
US6914170B2 (en) 2000-07-06 2005-07-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for regulating beta-oxidation in plants
US7888499B2 (en) 2000-11-09 2011-02-15 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization Barley with reduced SSII activity and starch containing products with a reduced amylopectin content
US6998516B2 (en) 2001-02-12 2006-02-14 Monsanto Technology Llc Transformation and regeneration of sunflower cotyledons
AUPR324101A0 (en) 2001-02-21 2001-03-15 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Novel gene and uses therefor to modify pasture qualities of crops
US20030161831A1 (en) 2001-02-23 2003-08-28 Sylvaine Cases Mono-and diacylglycerol acyltransferases and methods of use thereof
US7045326B2 (en) 2001-02-23 2006-05-16 The Regents Of The University Of California Mono- and diacylglycerol acyltransferases and methods of use thereof
US7230160B2 (en) 2001-03-08 2007-06-12 Michigan State University Lipid metabolism regulators in plants
ES2312620T3 (es) 2001-06-06 2009-03-01 BIORIGINAL FOOD & SCIENCE CORP. Secuencias especificas de la semilla de lino (linum usitatissiumum l.).
US7446188B2 (en) 2001-12-21 2008-11-04 Michigan State University Plant cyclopropane fatty acid synthase genes, proteins, and uses thereof
DE60335708D1 (de) 2002-03-16 2011-02-24 Univ York E exprimieren
US7566813B2 (en) 2002-03-21 2009-07-28 Monsanto Technology, L.L.C. Nucleic acid constructs and methods for producing altered seed oil compositions
AUPS219802A0 (en) 2002-05-09 2002-06-06 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Barley with altered branching enzyme activity and starch and starch containing products with a reduced amylopectin content
CA2490771A1 (en) 2002-06-21 2003-12-31 Monsanto Technology Llc Thioesterase-related nucleic acid sequences and methods
CA2492205A1 (en) 2002-07-31 2004-02-05 Monsanto Technology, Llc Diacylglycerol acyltransferase nucleic acid sequences and associated products
MXPA05001829A (es) 2002-08-12 2005-05-27 Monsanto Technology Llc Metodos para aumentar el contenido de aceite de las plantas.
US7122367B2 (en) 2003-06-03 2006-10-17 Board Of Trustees Operating Michigan State University Diacylglycerol acyltransferase genes, proteins, and uses thereof
AU2004252186B8 (en) 2003-06-30 2010-06-24 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Wheat with altered branching enzyme activity and starch and starch containing products derived therefrom
US7267976B2 (en) 2003-07-02 2007-09-11 E.I. Du Pont De Nemours And Company Acyltransferases for alteration of polyunsaturated fatty acids and oil content in oleaginous yeasts
CN1886507B (zh) 2003-10-27 2010-12-29 联邦科技产业研究组织 淀粉中具有增加了直链淀粉含量的水稻及水稻制品
WO2005063988A1 (en) 2003-12-23 2005-07-14 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Alteration of oil traits in plants
US7579529B2 (en) 2004-02-02 2009-08-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. AP2 domain transcription factor ODP2 (ovule development protein 2) and methods of use
CA2497087A1 (en) 2004-03-09 2005-09-09 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Novel genes encoding proteins involved in proanthocyanidin synthesis
US8049069B2 (en) 2004-03-31 2011-11-01 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Genes involved in plant fibre development
RU2261264C1 (ru) * 2004-04-09 2005-09-27 Общество с ограниченной ответственностью "АМЕРОЛ" Способ получения нефтепродуктов
CA2563875C (en) 2004-04-22 2015-06-30 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Synthesis of long-chain polyunsaturated fatty acids by recombinant cells
ES2529572T3 (es) 2004-04-22 2015-02-23 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Síntesis de ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga por células recombinantes
WO2006007432A2 (en) 2004-06-16 2006-01-19 Basf Plant Science Gmbh Nucleic acid molecules encoding wrinkled1-like polypeptides and methods of use in plants
JP2006096961A (ja) * 2004-09-30 2006-04-13 Sapporo Breweries Ltd 植物性スフィンゴ糖脂質含有油の製造方法
US8685679B2 (en) 2004-11-04 2014-04-01 E I Du Pont De Nemours And Company Acyltransferase regulation to increase the percent of polyunsaturated fatty acids in total lipids and oils of oleaginous organisms
US7993686B2 (en) 2004-12-30 2011-08-09 Commonwealth Scientific And Industrial Organisation Method and means for improving bowel health
US7700139B2 (en) 2004-12-30 2010-04-20 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization Method and means for improving bowel health
US7932440B2 (en) 2005-09-08 2011-04-26 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Cotton variety
WO2007045019A2 (en) 2005-10-19 2007-04-26 Agriculture Victoria Services Pty Ltd Polyoleosins
US8269082B2 (en) 2005-10-20 2012-09-18 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Cereals with altered dormancy
EP1806398A1 (en) 2006-01-04 2007-07-11 Monsanto S.A.S. Fad-2 mutants and high oleic plants
AU2007220007B2 (en) 2006-03-01 2013-02-21 E.I. Du Pont De Nemours And Company Compositions related to the quantitative trait locus 6 (QTL6) in maize and methods of use
GB2436068A (en) 2006-03-18 2007-09-19 Ernest Mark Talbot Surgical contact lens
EP1837397A1 (en) 2006-03-21 2007-09-26 Monsanto S.A.S. FAD-2 mutants and high oleic plants
WO2007141257A1 (en) 2006-06-06 2007-12-13 Total Raffinage Marketing Lysophosphatidic acid acyltransferase genes and uses thereof
US20090163729A1 (en) 2006-06-22 2009-06-25 The Board Of Trustees Operating Michigan State University Compositions and methods for using acyltransferases for altering lipid production on the surface of plants
CA2657326C (en) 2006-07-13 2015-02-10 National Research Council Of Canada Acyl-coa-dependent diacylglycerol acyltransferase 1 (dgat1 ) gene from tropaeolum majus, protein encoded thereby and uses thereof
US8530724B2 (en) 2006-07-14 2013-09-10 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Altering the fatty acid composition of rice
CN101578363A (zh) 2006-08-29 2009-11-11 联邦科学技术研究组织 脂肪酸的合成
US20090061492A1 (en) 2006-11-15 2009-03-05 The Board Of Trustees For Michigan State University System Method for producing biodiesel
US20080289248A1 (en) 2007-05-23 2008-11-27 Southern Illinois University Carbondale Immobilized esterification catalysts for producing fatty acid alkyl esters
US20110065158A1 (en) * 2006-12-08 2011-03-17 The University Of York Regulation of plant metabolism
EP1944375A1 (en) 2007-01-11 2008-07-16 Monsanto S.A.S. FAD2 mutants and high oleic acid plants
AU2007203279A1 (en) 2007-01-11 2008-07-31 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Novel gene encoding MYB transcription factor involved in proanthocyamidin synthesis
CA2678915C (en) 2007-03-28 2019-04-09 Ls9, Inc. Enhanced production of fatty acid derivatives
NZ554114A (en) 2007-04-23 2010-01-29 Agres Ltd Plants with an increased ratio of oleosin to TAG synthesising enzymes
MX2009012596A (es) 2007-05-24 2009-12-08 Du Pont Genes de diacilglicerol aciltransferasa de yarrowia lipolytica para la produccion mejorada de lipidos de almacenamiento de semillas y para los perfiles alterados de acidos grasos en el frijol de soya.
US8847010B2 (en) 2007-06-15 2014-09-30 Biotechnology Foundation, Inc. Engineered tobacco biomass with increased oil production
WO2008157827A2 (en) 2007-06-21 2008-12-24 Michigan State University Modified composition of plant extracellular lipids using acyltransferases and fatty acid omega-oxidases
JP4957661B2 (ja) 2007-07-25 2012-06-20 トヨタ自動車株式会社 バイオマスを原料とする液化燃料油の製造方法
CA2697953A1 (en) 2007-08-28 2009-03-05 Basf Plant Science Gmbh Lmp of oilseed
EA025360B1 (ru) 2007-11-27 2016-12-30 Коммонвелт Сайентифик Энд Индастриал Рисерч Органайзейшн Растения с модифицированным метаболизмом крахмала
JP5554246B2 (ja) 2007-12-21 2014-07-23 ナショナル リサーチ カウンシル オブ カナダ 藻類由来のジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ２遺伝子およびそれによってコードされるタンパク質
CA2722276A1 (en) 2008-04-25 2009-10-29 Commonwealth Scientific Industrial Research Organisation Recombinant cells and methods for hydroxylating fatty acids
CA2722275A1 (en) 2008-04-25 2009-10-29 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Polypeptides and methods for producing triacylglycerols comprising modified fatty acids
CA2990650C (en) 2008-05-23 2021-02-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel dgat genes for increased seed storage lipid production and altered fatty acid profiles in oilseed plants
CA2722458C (en) 2008-05-23 2018-03-27 E. I. Du Pont De Nemours And Company Dgat genes from yarrowia lipolytica combined with plastidic phosphoglucomutase down regulation for increased seed storage lipid production and altered fatty acid profiles in oilseed plants
EP2620501A3 (en) 2008-05-23 2013-10-02 E. I. du Pont de Nemours and Company DGAT genes from oleaginous organisms for increased seed storage lipid production and altered fatty acid profiles in oilseed plants
GB0810111D0 (en) 2008-06-04 2008-07-09 Univ York Aquatic plant
CA2653883C (en) 2008-07-17 2022-04-05 Colin Leslie Dow Jenkins High fructan cereal plants
ES2603530T3 (es) 2008-07-21 2017-02-28 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Aceite de semilla de algodón mejorado y usos
AU2009273755A1 (en) 2008-07-21 2010-01-28 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Improved vegetable oils and uses therefor
US8629251B2 (en) 2008-07-22 2014-01-14 Board Of Trustees Of Michigan State University Specific detection and quantification of phosphatidic acid using an Arabidopsis trigalactosyldiacylglycerol-4 (TGD4) protein
US8110656B2 (en) 2008-07-22 2012-02-07 Board Of Trustees Of Michigan State University Compositions and methods of a phosphatidic acid binding protein
CN102186676B (zh) 2008-10-20 2014-12-03 普拉斯蒂派克包装公司 具有改进的附着力和再循环能力的数字印刷塑料容器
US8809559B2 (en) 2008-11-18 2014-08-19 Commonwelath Scientific And Industrial Research Organisation Enzymes and methods for producing omega-3 fatty acids
US8507754B2 (en) 2009-01-31 2013-08-13 University Of North Texas Engineering lipids in vegetative tissues of plants
US20100257639A1 (en) 2009-02-26 2010-10-07 Robert Edward Bruccoleri Methods and compositions for altering sugar beet or root crop storage tissue
CA2769311C (en) 2009-07-30 2021-06-01 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Barley comprising reduced levels of starch synthase iia (ssiia) and uses thereof
EP2491119B1 (en) * 2009-10-20 2016-06-08 Bayer CropScience NV Methods and means to alter lipid biosynthesis by targeting multiple enzymes to suborganelle domains
CA2778150C (en) 2009-10-30 2022-07-26 Agresearch Limited Modified neutral lipid encapsulating proteins and uses thereof
US8987551B2 (en) 2009-10-30 2015-03-24 Agresearch Limited Modified oil encapsulating proteins and uses thereof
WO2011082253A2 (en) 2009-12-30 2011-07-07 Board Of Trustees Of Michigan State University A method to produce acetyldiacylglycerols (ac-tags) by expression ofan acetyltransferase gene isolated from euonymus alatus (burning bush)
KR20120125610A (ko) * 2009-12-30 2012-11-16 싸이넥시스, 인크. 시클로스포린 유사체
WO2011127118A1 (en) 2010-04-06 2011-10-13 Algenetix, Inc. Methods of producing oil in non-plant organisms
EP2556132B1 (en) 2010-04-07 2017-08-09 Licella Pty Limited Methods for biofuel production
JP5764339B2 (ja) 2010-05-06 2015-08-19 花王株式会社 チオエステラーゼ及びそれを用いた脂肪酸又は脂質の製造方法
JP6293481B2 (ja) 2010-06-28 2018-03-14 コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガナイゼーション 脂質を生成する方法
AU2011274308B2 (en) * 2010-07-01 2015-02-26 Ignite Resources Pty Ltd Ballistic heating process
US8657999B2 (en) 2010-07-28 2014-02-25 General Electric Company Methods for preparing fuel compositions from renewable sources, and related systems
US20120055077A1 (en) 2010-09-02 2012-03-08 Savage Phillip E Method of producing an upgraded bio-oil
US9585413B2 (en) 2010-11-04 2017-03-07 Arista Cereal Technology Pty Limited Food ingredients produced from high amylose wheat
US8704020B2 (en) * 2010-12-13 2014-04-22 Exxonmobil Research And Engineering Company Catalytic hydrothermal treatment of biomass
MY163490A (en) * 2011-01-05 2017-09-15 Licella Pty Ltd Processing of organic matter
US20120191005A1 (en) 2011-01-22 2012-07-26 Emil Naumovich Sobol Diagnostic and Feedback Control for Efficacy and Safety of Laser Application for Tissue Reshaping and Regeneration
WO2013003608A1 (en) 2011-06-28 2013-01-03 Brookhaven Science Associates, Llc Modified plants with increased oil content
WO2013022353A1 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Agresearch Limited Methods for increasing co2 assimilation and oil production in photosynthetic organisms
WO2013033369A2 (en) * 2011-08-31 2013-03-07 Tyton Biosciences Engineered plant biomass for biodiesel and bioethanol production
EP2773183B1 (en) 2011-11-04 2024-10-09 Arista Cereal Technologies Pty Ltd High amylose wheat - ii
ES2625272T3 (es) 2011-12-22 2017-07-19 E. I. Du Pont De Nemours And Company Utilización del promotor de la sacarosa sintasa de soja para incrementar el contenido en lípidos de las semillas vegetales
US8809026B2 (en) 2011-12-27 2014-08-19 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Processes for producing lipids
CA2860416C (en) 2011-12-27 2024-04-30 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Production of dihydrosterculic acid and derivatives thereof
US10822615B2 (en) 2011-12-27 2020-11-03 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Simultaneous gene silencing and suppressing gene silencing in the same cell
UA119739C2 (uk) * 2011-12-27 2019-08-12 Коммонвелт Сайнтіфік Енд Індастріел Рісерч Організейшн Метод отримання ліпідів
WO2013103369A1 (en) 2012-01-06 2013-07-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for the expression of a sequence in a reproductive tissue of a plant
JP6458218B2 (ja) 2012-04-25 2019-01-30 コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガナイゼーション 高オレイン酸油
PL2861059T3 (pl) 2012-06-15 2017-10-31 Commw Scient Ind Res Org Wytwarzanie długołańcuchowych wielonienasyconych kwasów tłuszczowych w komórkach roślinnych
US20140031573A1 (en) * 2012-07-02 2014-01-30 Brookhaven Science Associates, Llc Enhancing Oil Accumulation in Vegetative Tissue of Plants
US9657304B2 (en) 2012-07-10 2017-05-23 Board Of Trustees Of Michigan State University Genetically engineered plants with increased vegetative oil content
US10006039B2 (en) 2012-10-04 2018-06-26 Board Of Trustees Of Michigan State University Production of oil in vegetative tissues
PL2914726T3 (pl) 2012-10-30 2019-06-28 Agresearch Limited Udoskonalone polinukleotydy acylotransferazy, polipeptydy i sposoby stosowania
NZ706832A (en) 2012-10-30 2019-04-26 Agresearch Ltd Enhanced acyltransferase polynucleotides, polypeptides, and methods of use
AU2013340444B2 (en) 2012-10-30 2019-08-29 Agresearch Limited Novel acyltransferase polynucleotides, polypeptides, and methods of use
US10253325B2 (en) * 2012-12-19 2019-04-09 Boston Medical Center Corporation Methods for elevating fat/oil content in plants
ES2969618T3 (es) 2014-07-07 2024-05-21 Nuseed Global Innovation Ltd Procesos para producir productos industriales de lípidos vegetales

Also Published As

Publication number Publication date
RU2017102934A (ru) 2018-08-07
JP2017529060A (ja) 2017-10-05
CN106852158A (zh) 2017-06-13
EP4303288A2 (en) 2024-01-10
JP2021121200A (ja) 2021-08-26
US20200080022A1 (en) 2020-03-12
CA2954203C (en) 2023-12-05
EP2966157C0 (en) 2023-11-01
CA3216668A1 (en) 2016-01-14
US11365369B2 (en) 2022-06-21
US20160002566A1 (en) 2016-01-07
EP4303288A3 (en) 2024-03-06
RU2743384C2 (ru) 2021-02-17
MY178434A (en) 2020-10-13
CL2019000616A1 (es) 2019-07-26
AU2015286221A1 (en) 2017-01-12
CA2954203A1 (en) 2016-01-14
EP2966157B1 (en) 2023-11-01
BR112016030971B1 (pt) 2022-09-27
RU2021103505A (ru) 2021-10-28
WO2016004473A1 (en) 2016-01-14
AU2015286221B2 (en) 2022-05-19
US11814600B2 (en) 2023-11-14
BR122020005879B1 (pt) 2022-09-27
US10472587B2 (en) 2019-11-12
ES2969618T3 (es) 2024-05-21
US20240263100A1 (en) 2024-08-08
CL2017000049A1 (es) 2017-09-08
MX2020004734A (es) 2020-08-13
MX2017000109A (es) 2017-05-23
PH12019502112A1 (en) 2020-06-15
BR112016030971A2 (pt) 2018-07-17
EP2966157A1 (en) 2016-01-13
JP6882160B2 (ja) 2021-06-02
AU2022218528A1 (en) 2022-09-08
PH12016502588A1 (en) 2017-04-24
JP7410080B2 (ja) 2024-01-09
NZ727699A (en) 2024-07-26
RU2017102934A3 (uk) 2019-07-26
HRP20240128T1 (hr) 2024-04-12
US20220364014A1 (en) 2022-11-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA124137C2 (uk) Спосіб одержання вуглеводневого продукту
JP7097805B2 (ja) 脂質製造のための工程
US20240200087A1 (en) Plants with modified traits
US20230348926A1 (en) Plants with modified traits
US20240271149A1 (en) Plants producing modified levels of medium chain fatty acids
AU2018201932A1 (en) Plants producing modified levels of medium chain fatty acids